CN112312910A - 人整合素α4β7拮抗剂 - Google Patents

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M·A·斯文森
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钟诚
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Abstract

本发明公开了α4β7整合素的小分子拮抗剂，以及使用其治疗多种特定疾病或病状的方法。

Description

人整合素α4β7拮抗剂
相关申请
本申请要求2018年4月12日提交的美国临时专利申请第62/656,742号的优先权。
背景技术
异二聚体整合素家族受体响应于外来和内在信号而调节细胞形状和细胞对细胞外基质的粘附。
整合素信号传导控制细胞存活、细胞周期进程、细胞分化和细胞迁移。
整合素受体可独特地双向地向细胞发信号，既可“由内向外(inside-out)”又可“由外向内(outside-in)”。因此，所述整合素受体通过将力从细胞外基质传输至细胞骨架来介导细胞迁移并且调节细胞骨架组织以实现细胞迁移期间所需的形状变化。
整合素表达于大部分人类细胞的表面上。其病变造成一组不同的人类疾病，包括血小板病症、动脉粥样硬化、癌症、骨质疏松、纤维化、肾脏的糖尿病神经病变、黄斑变性以及各种自体免疫和慢性炎症疾病。
整合素形成两条不同链的异二聚体：α(阿尔法)和β(贝塔)亚基。α4β7整合素在淋巴细胞上表达并且负责T细胞通过与粘膜地址素细胞粘附分子(mucosal addressin celladhesion molecule，MAdCAM)结合而归巢到肠相关淋巴组织中，所述MAdCAM存在于粘膜淋巴器官的高内皮微静脉上。
特异性整合素配体相互作用的抑制剂作为用于治疗各种自体免疫疾病的抗炎剂已显示有效。例如，对α4β7表现出高结合亲和力的单克隆抗体已表现出对胃肠自身炎症性/自体免疫性疾病(诸如克罗恩病(Crohn's disease)和溃疡性结肠炎)的治疗益处。
整合素作为药物靶标的作用已长期受到公认，并且美国食品和药物管理局(Foodand Drug Administration)已审批通过总共六种可注射整合素抑制剂，用以治疗各种治疗适应症：炎症性肠病
Figure BDA0002782961440000023
Figure BDA0002782961440000024
多发性硬化症
Figure BDA0002782961440000025
牛皮癣
Figure BDA0002782961440000026
和急性冠状动脉综合征
Figure BDA0002782961440000027
然而，经口的生物可利用整合素抑制剂在治疗上很少获得成功。
在二十四种已知的整合素异二聚体中，至少一半与炎症、纤维化、肿瘤学和血管疾病有关。因此，需要新类别的整合素抑制剂。
发明内容
在某些实施方案中，本发明涉及一种式I化合物：
Figure BDA0002782961440000021
其中：
R1为H、烷基、亚烷基-环烷基、杂环基、亚烷基-O-烷基、芳基、杂芳基或亚烷基-CF3；
R2为杂环基；
R3为
Figure BDA0002782961440000022
R4为H或(C1-C6)-烷基；
Ra为H、烷基、环烷基、CN或-O-烷基；
Rb为H、芳基、杂环基、-O-环烷基、-O-芳基或-O-杂环基；
Rc为H、烷基、环烷基、杂环基或亚烷基-CF3；
Rd为芳基、杂芳基、杂环基、-O-环烷基、-O-芳基或-O-杂环基；
Re为芳基、杂芳基或杂环基；
或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，本发明涉及一种治疗选自由炎症性肠病、回肠肛管吻合术、嗜酸性食道炎、胰腺炎、胰岛素依赖型糖尿病、乳腺炎、胆囊炎、胆管炎、胆管周围炎、慢性支气管炎、慢性鼻窦炎、哮喘和移植物抗宿主疾病、慢性肺部炎症性疾病、HIV和血液肿瘤组成的组的疾病或病状的方法，所述方法包括以下步骤：向对其有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述化合物中的任一者。
附图说明
图1为概述示例性化合物对α4β7整合素的体外抑制的表格。
具体实施方式
在某些实施方案中，本发明涉及拮抗α4β7整合素的化合物。所述化合物将可用于治疗炎症性肠病、回肠肛管吻合术、嗜酸性食道炎、胰腺炎、胰岛素依赖型糖尿病、乳腺炎、胆囊炎、胆管炎、胆管周围炎、慢性支气管炎、慢性鼻窦炎、哮喘、移植物抗宿主疾病、慢性肺部炎症性疾病、HIV或血液肿瘤。
定义
为方便起见，在本发明的进一步描述之前，此处收集本说明书、实施例和随附权利要求中所用的某些术语。这些定义应根据本公开的其余部分来阅读并且如本领域技术人员所理解。除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语均具有与本领域普通技术人员通常所理解相同的含义。
为了使本发明更易于理解，在下文和在整个说明书中定义某些术语和短语。
冠词“一个(a)”和“一种(an)”在本文用于指一个/种或多于一个/种(即，指至少一个/种)所述冠词的语法对象。通过实例，“一个要素”意指一个要素或多于一个要素。
如在本说明书和权利要求中所使用，短语“和/或”应理解为意指如此连接的要素中的“任一者或两者”，即，要素在一些情况下结合存在，而在其他情况下分离存在。应以相同方式解释通过“和/或”列出的多个要素，即，如此连接的要素中的“一个或多个”。除通过“和/或”句式特别指出的要素外，其他要素可任选存在，无论其与那些特别指出的要素相关还是不相关。因此，作为非限制性实例，“A和/或B”的提法，当与诸如“包括”的开放式用语结合使用时，在一个实施方案中，可仅指A(任选地包括除B以外的要素)；在另一个实施方案中，可仅指B(任选地包括除A以外的要素)；在又另一个实施方案中，可指A和B两者(任选地包括其他要素)；等等。
如本文在说明书和权利要求中所使用，“或”应理解为具有与如上文所定义的“和/或”相同的含义。例如，当分隔一系列中的项目时，应将“或”或“和/或”解释为包括性的，即，包括多个或一系列要素中的至少一个，并且还包括超过一个，并且任选地包括另外的未列出项目。术语只有在明确指示相反含义时(诸如“只有一个”或“恰好一个”)，或当用于权利要求中时(“由……组成”)，将指包括多个或一系列要素中的恰好一个要素。一般而言，如本文中所使用的术语“或”仅在其之前有排他性术语(诸如“任一”、“一个”、“只有一个”或“恰好一个”)时应解释为指示排他性替代物(即，“一个或另一个而非两者”)。当用于权利要求中时，“基本上由……组成”将具有其如用于专利法律领域的一般含义。
如本文在说明书和权利要求中所使用，关于一系列一个或多个要素的短语“至少一个”应理解为意指选自一系列要素中的任何一个或多个要素中的至少一个要素，但不必包括一系列要素内特别列出的每一要素中的至少一者并且不排除一系列要素中的要素的任何组合。此定义还允许除短语“至少一个”所指的一系列要素内特别指出的要素之外的要素任选存在，无论其与那些特别指出的要素相关还是不相关。因此，作为非限制性实例，“A和B中的至少一个”(或等效地“A或B中的至少一个”或等效地“A和/或B中的至少一个”)可在一个实施方案中指至少一个(任选地包括多于一个)A并且不存在B(并且任选地包括除B之外的要素)；在另一个实施方案中指至少一个(任选地包括多于一个)B并且不存在A(并且任选地包括除A之外的要素)；在又另一个实施方案中指至少一个(任选地包括多于一个)A和至少一个(任选地包括多于一个)B(并且任选地包括其他要素)；等等。
还应理解，除非明确指示相反含义，否则在本文中所要求保护的包括多于一个步骤或操作的任何方法中，所述方法的步骤或操作的顺序不必受限于所述的所述方法的步骤或操作的顺序。
在权利要求中以及在以上说明书中，诸如“包含”、“包括”、“携有”、“具有”、“含有”、“涉及”、“持有”、“由……构成”等的所有过渡短语均应理解为开放式，即意指包括但不限于。如美国专利局专利审查程序手册(United States Patent Office Manual ofPatent Examining Procedures)章节2111.03中所阐述，只有“由……组成”和“基本上由……组成”的过渡短语可各自为封闭或半封闭式过渡短语。
本发明的组合物中包含的某些化合物可以特定几何形式或立体异构形式存在。另外，本发明的聚合物也可为光学活性的。本发明涵盖在本发明范围内的所有此类化合物，包括顺式和反式异构体、R-和S-对映异构体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体、其外消旋混合物以及其其他混合物。诸如烷基的取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有此类异构体以及其混合物旨在包括在本发明中。
例如，如果期望本发明化合物的特定对映异构体，则其可通过不对称合成或通过用手性助剂提取来制备，其中分离所得非对映异构混合物并且裂解助剂基团以提供纯的期望对映异构体。可选地，当分子含有碱性官能团(诸如氨基)或酸性官能团(诸如羧基)时，用适当的光学活性酸或碱形成非对映异构盐，接着拆分由此通过本领域中熟知的分步结晶或层析手段形成的非对映异构体，并且随后回收纯对映异构体。
本文描绘的结构还意在包括仅在存在一个或多个同位素富集的原子时不同的化合物。例如，通过用氘或氚置换氢或用13C或14C富集的碳置换碳产生的化合物属于本发明的范围内。
如本文所使用的短语“药学上可接受的赋形剂”或“药学上可接受的载剂”意指参与将目标化学物质从身体的一个器官或部分运载或运输至身体的另一器官或部分的药学上可接受的材料、组合物或媒介物，诸如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料。各载剂必须在与配制物的其他成分相容、对患者无害并且实质上为非致热的意义上是“可接受”的。可充当药学上可接受的载剂的材料的一些实例包括：(1)糖，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；(4)粉末状黄蓍；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，诸如可可脂和栓剂蜡；(9)油，诸如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇，诸如丙二醇；(11)多元醇，诸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)褐藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；以及(21)其他在药物配制物中使用的无毒可相容物质。在某些实施方案中，本发明的药物组合物为非致热的，即，在施用给患者时不引起显著温度升高。
术语“药学上可接受的盐”是指化合物的相对无毒的无机和有机酸加成盐。这些盐可在化合物的最终分离和纯化期间就地制备，或通过单独地使呈游离碱形式的纯化化合物与合适的有机或无机酸反应并且分离由此形成的盐来制备。代表性盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘酸盐、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖酸盐和月桂基磺酸盐等。(参见，例如，Berge等人(1977)“Pharmaceutical Salts”，J.Pharm.Sci.66:1-19。)
在其他情况下，可用于本发明方法的化合物可含有一个或多个酸性官能团，并且因此能够与药学上可接受的碱形成药学上可接受的盐。在这些情况下，术语“药学上可接受的盐”是指化合物的相对无毒的无机和有机碱加成盐。这些盐同样可在化合物的最终分离和纯化期间就地制备，或通过单独地使呈游离酸形式的纯化化合物与合适的碱(诸如药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)、氨或药学上可接受的有机伯胺、仲胺或叔胺反应来制备。代表性碱盐或碱土盐包括锂盐、钠盐、钾盐、钙盐、镁盐和铝盐等。可用于形成碱加成盐的代表性有机胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等(参见，例如，Berge等人，同上)。
关于治疗使用的化合物的“治疗有效量”(或“有效量”)是指制剂中化合物的量，其在作为期望剂量方案的一部分施用(至哺乳动物，优选人)时根据用于待治疗的病症或病状的临床上可接受的标准或美观性目的(例如，在适用于任何医学治疗的合理益处/风险比率下)缓解症状，改善病状，或减缓疾病病状的发作。
术语“预防性或治疗性”治疗是本领域中公认的并且包括向宿主施用一种或多种主题组合物。如果其在临床上表现出不期望的病状(例如，宿主动物的疾病或其他不期望的状态)之前施用，那么治疗是预防性的(即，其防止宿主罹患不期望的病状)，而如果其在表现出不期望的病状之后施用，那么治疗是治疗性的(即，其旨在减轻、改善或稳定现有不期望的病状或其副作用)。
术语“患者”是指需要特定治疗的哺乳动物。在某些实施方案中，患者为灵长类、犬科、猫科或马科动物。在某些实施方案中，患者为人。
脂族链包括以下定义的烷基、烯基和炔基的类别。直脂族链限于非支化碳链部分。如本文所用，术语“脂族基团”是指直链、支链或环状脂族烃基并且包括饱和和不饱和脂族基团，诸如烷基、烯基或炔基。
“烷基”是指具有指定碳原子数的完全饱和环状或非环状、支化或非支化碳链部分，或在无指定的情况下具有最多30个碳原子。例如，具有1至8个碳原子的烷基是指诸如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基和辛基的部分以及为这些部分的位置异构体的那些部分。具有10至30个碳原子的烷基包括癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基、二十一烷基、二十二烷基、二十三烷基和二十四烷基。在某些实施方案中，直链或支链烷基在其主链中具有30个或更少的碳原子(例如，对于直链，C1-C30，对于支链，C3-C30)，并且更优选地具有20个或更少的碳原子。烷基可以是取代或未取代的。
如本文所用，术语“亚烷基”是指具有指定数目的碳(例如，2至12个碳原子)的烷基，其在其最长碳链上含有与化合物的其余部分连接的两个连接点。亚烷基的非限制性实例包括亚甲基-(CH2)-、亚乙基-(CH2CH2)-、亚正丙基-(CH2CH2CH2)-、亚异丙基-(CH2CH(CH3))-等。亚烷基可为环状或非环状、支化或非支化碳链部分，并且可任选地被一个或多个取代基取代。
“环烷基”意指各自具有3至12个碳原子的单环或双环或桥接或螺环或多环饱和碳环。同样，优选的环烷基在其环结构中具有3-10个碳原子，并且更优选地在环结构中具有3-6个碳。环烷基可以是取代或未取代的。
除非另外指定碳数目，否则如本文所用的“低级烷基”意指如上文所定义但在其主链结构中具有1至10个碳、更优选地1至6个碳原子的烷基，诸如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。同样地，“低级烯基”和“低级炔基”具有类似链长。在整个申请案中，优选的烷基为低级烷基。在某些实施方案中，本文中指代为烷基的取代基是低级烷基。
“烯基”是指具有指定碳原子数的任何环状或非环状、支化或非支化不饱和碳链部分，或如果未指定对碳原子数的限制，则具有最多26个碳原子；并且在所述部分中具有一个或多个双键。具有6至26个碳原子的烯基通过以下例示：呈其各种异构形式的己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基、十一烯基、十二烯基、十三烯基、十四烯基、十五烯基、十六烯基、十七烯基、十八烯基、十九烷基、二十烯基、二十一烯基、二十二烯基、二十三烯基和二十四烯基，其中不饱和键可位于所述部分中的任何位置并且双键可具有(Z)或(E)构型。
“炔基”是指烯基范畴内的烃基部分，但在所述部分中具有一个或多个三键。
术语“烷硫基”是指具有与其连接的硫部分的如上文所定义的烷基。在某些实施方案中，“烷硫基”部分由以下中的一个表示：-(S)-烷基、-(S)-烯基、-(S)-炔基和-(S)-(CH2)m-R1，其中m和R1在下文定义。代表性烷硫基包括甲硫基、乙硫基等。如本文所用的术语“烷氧基(alkoxyl)”或“烷氧基(alkoxy)”是指如下文所定义的具有与其连接的氧部分的烷基。代表性烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、叔丁氧基等。“醚”是通过氧共价连接的两个烃。因此，使烷基成为醚的所述烷基的取代基是或类似于烷氧基，诸如可由-O-烷基、-O-烯基、-O-炔基、-O-(CH2)m-R10中的一个表示，其中m和R10在下文描述。
术语“胺”和“氨基”是本领域公认的并且是指未取代和取代的胺，例如可由下式表示的部分：
Figure BDA0002782961440000101
其中R11、R12和R13各自独立地表示氢、烷基、烯基、-(CH2)m-R10，或R11和R12与其所连接的N原子共同形成环结构中具有4至8个原子的杂环；R10表示烯基、芳基、环烷基、环烯基、杂环基或聚环基；并且m为零或在1至8范围内的整数。在某些实施方案中，R11或R12中只有一个可为羰基，例如R11、R12和氮一起不形成酰亚胺。在甚至更多某些实施方案中，R11和R12(以及任选的R13)各自独立地表示氢、烷基、烯基或-(CH2)m-R10。因此，如本文所用的术语“烷基胺”意指如上文所定义的具有与其连接的取代或未取代的烷基的胺基团，即R11和R12中的至少一个为烷基。在某些实施方案中，氨基或烷基胺是碱性的，意指其具有pKa>7.00的共轭酸，即这些官能团的质子化形式具有高于约7.00的相对于水的pKa。
如本文所用，术语“酰胺”是指基团
Figure BDA0002782961440000102
其中各R14独立地表示氢或烃基，或两个R14与其所连接的N原子共同形成在环结构中具有4至8个原子的杂环。
如本文所用，术语“芳基”包括3至12元取代或未取代的单环芳族基团，其中环的各原子为碳(即，碳环芳基)或其中一个或多个原子为杂原子(即，杂芳基)。优选地，芳基包括5至12元环，更优选地6至10元环。术语“芳基”还包括具有两个或更多个环的多环系统，其中两个或更多个碳为两个邻接环共用，其中至少一个环为芳族，例如其他环可为环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。碳环芳基包括苯、萘、菲、酚、苯胺等。杂芳基包括取代或未取代的芳族3至12元环结构，更优选地5至12元环，更优选地5至10元环，其环结构包括1至4个杂原子。杂芳基包括，例如，吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、三唑、吡唑、吡啶、吡嗪、哒嗪和嘧啶等。芳基和杂芳基可为单环、双环或多环。
如本文所用的术语“卤代基”、“卤化物”或“卤素”意指卤素并且包括例如并且不限于呈放射性和非放射性形式的氟、氯、溴、碘等。在一个优选实施方案中，卤代基选自由氟、氯和溴组成的组。
术语“杂环基(heterocyclyl)”或“杂环基团(heterocyclic group)”是指3至12元环结构，更优选地5至12元环，更优选地5至10元环，其环结构包括1至4个杂原子。杂环可为单环、双环、螺环或多环。杂环基包括，例如，噻吩、噻蒽、呋喃、哌喃、异苯并呋喃、苯并吡喃、氧杂蒽、吩恶噻、吡咯、咪唑、吡唑、异噻唑、异噁唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、吲哚嗪、异吲哚、吲哚、吲唑、嘌呤、喹嗪、异喹啉、喹啉、酞嗪、萘啶、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、喋啶、咔唑、咔啉、啡啶、吖啶、嘧啶、菲咯啉、吩嗪、吩吡嗪、吩噻嗪、呋咱、吩噁嗪、吡咯烷、氧杂环戊烷、硫杂环戊烷、噁唑、哌啶、哌嗪、吗啉、内酯、内酰胺(诸如氮杂环丁酮和吡咯烷酮)、磺内酰胺、磺内酯等。杂环可在一个或多个位置处被如上所述的以下取代基取代，例如卤素、烷基、芳烷基、烯基、炔基、环烷基、羟基、氨基、硝基、硫氢基、亚氨基、酰氨基、磷酸酯基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、羰基、羧基、甲硅烷基、氨磺酰基、亚磺酰基、醚、烷硫基、磺酰基、酮、醛、酯、杂环基、芳族或杂芳族部分、-CF3、-CN等。
术语“羰基”是本领域公认的并且包括可由下式表示的部分：
Figure BDA0002782961440000121
其中X'为键或表示氧或硫，并且R15表示氢、烷基、烯基、-(CH2)m-R10或药学上可接受的盐，R16表示氢、烷基、烯基或-(CH2)m-R10，其中m和R10如上文所定义。当X'为氧并且R15或R16不是氢时，所述式表示“酯”。当X'为氧并且R15如上文所定义时，所述部分在本文称为羧基，并且特定地，当R15为氢时，所述式表示“羧酸”。当X'为氧并且R16为氢时，所述式表示“甲酸酯基”。一般而言，当上式的氧原子被硫置换时，所述式表示“硫羰基”基团。当X'为硫并且R15或R16不为氢时，所述式表示“硫酯”基团。当X'为硫并且R15为氢时，所述式表示“硫代羧酸”基团。当X'为硫并且R16为氢时，所述式表示“硫代甲酸酯(thioformate)”基团。另一方面，当X'为键并且R15不为氢时，上式表示“酮”基团。当X'为键并且R15为氢时，上式表示“醛”基团。
如本文所用，术语“取代的”预期包括有机化合物的所有可允许取代基。在一个广泛方面中，可允许取代基包括有机化合物的非环状和环状、支化和非支化、碳环和杂环、芳族和非芳族取代基。例示性取代基包括例如上文所述的那些取代基。对于适当的有机化合物，可允许取代基可以是一个或多个并且相同或不同。出于本发明的目的，诸如氮的杂原子可具有氢取代基和/或本文所描述的满足杂原子价数的有机化合物的任何可允许取代基。本发明并不旨在以任何方式受有机化合物的可允许取代基限制。应理解，“取代”或“被……取代”包括暗示的限制条件，即此类取代符合取代原子和取代基的允许价数，并且取代产生稳定化合物，例如其不自发进行转换(transformation)，诸如通过重排、环化、消除等。
如本文所用，术语“硝基”意指-NO2；术语“卤素”指代-F、-Cl、-Br或-I；术语“硫氢基”意指-SH；术语“羟基””意指-OH；术语“磺酰基”意指-SO2-；术语“叠氮基”意指-N3；术语“氰基”意指-CN；术语“异氰酸基”意指-NCO；术语“硫氰基”意指-SCN；术语“异硫氰基”意指-NCS；并且术语“氰氧基”意指-OCN。
术语“氨磺酰基”是本领域公认的并且包括可由下式表示的部分：
Figure BDA0002782961440000131
其中R11和R12如上文所定义。
术语“硫酸酯基”是本领域公认的并且包括可由下式表示的部分：
Figure BDA0002782961440000132
其中R15如上文所定义。
术语“磺酰胺”是本领域公认的并且包括可由下式表示的部分：
Figure BDA0002782961440000133
其中R11和R16如上文所定义。
术语“磺酸酯基”是本领域公认的并且包括可由下式表示的部分：
Figure BDA0002782961440000134
其中R54为电子对、氢、烷基、环烷基或芳基。
如本文所用的术语“亚砜”或“亚磺酰基”是指可由下式表示的部分：
Figure BDA0002782961440000135
其中R17选自由以下组成的组：氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳烷基或芳基。
术语“尿素”是本领域公认的并且可由通式表示
Figure BDA0002782961440000141
其中各R18独立地表示氢或诸如烷基的烃基，或任何出现的R18与另一者和插入的原子一起构成在环结构中具有4至8个原子的杂环。
如本文所用，各表述(例如，烷基、m、n等)的定义在其在任何结构中出现超过一次时旨在独立于其在别处同一结构中的定义。
如本文所用的术语“前药”涵盖在生理学条件下转化为治疗活性剂的化合物。用于制备前药的常用方法将包括在生理学条件下水解以展现所需分子的所选部分。在其他实施方案中，前药通过宿主动物的酶活性转化。
出于本发明的目的，化学元素根据化学与物理手册(Handbook of Chemistry andPhysics)(CAS版本，第67版，1986-87)内封的元素周期表识别。
示例性化合物
在某些实施方案中，本发明涉及一种式I化合物：
Figure BDA0002782961440000142
其中：
R1为H、烷基、亚烷基-环烷基、杂环基、亚烷基-O-烷基、芳基、杂芳基或亚烷基-CF3；
R2为杂环基；
R3为
Figure BDA0002782961440000151
R4为H或(C1-C6)-烷基；
Ra为H、烷基、环烷基、CN或-O-烷基；
Rb为H、烷基、芳基、杂芳基、杂环基、-O-环烷基、-O-芳基或-O-杂环基；
Rc为H、烷基、环烷基、杂环基或亚烷基-CF3；
Rd为芳基、杂芳基、杂环基、-O-环烷基、-O-芳基或-O-杂环基；并且
Re为芳基、杂芳基或杂环基；
或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中R1为烷基。在某些实施方案中，R1为甲基、乙基、异丙基、正丙基、异丁基、正丁基或叔丁基。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中R1为亚烷基-环烷基。在一些实施方案中，亚烷基-环烷基为亚甲基-环丙基。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中R1为杂环基。在一些实施方案中，R1为取代的杂环基。在一些实施方案中，R1为含N杂环基。在一些实施方案中，R1为取代的含N杂环基。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中R1为-亚烷基-O-烷基。在一些实施方案中，R1为亚甲基-O-甲基。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中R1为芳基。在一些实施方案中，R1为苯基。在一些实施方案中，R1为未取代的苯基。在一些实施方案中，R1为取代的苯基。在一些实施方案中，取代的苯基被一个或多个选自烷基和卤素的取代基取代。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中R1为亚烷基-CF3。在一些实施方案中，R1为亚甲基-CF3。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中R2为杂环基。在某些实施方案中，R2为取代的杂环基。在某些实施方案中，R2为含N杂环基。在某些实施方案中，含N杂环基为6至12元杂环基。在一些实施方案中，R2被一个或多个选自氨基、烷基和烷氧基的取代基取代，其中烷基或烷氧基被吗啉代、环状氨基或非环氨基取代，并且其中所述烷基、烷氧基、吗啉代、环状氨基或非环氨基部分任选地被一个或多个烷氧基或氟取代。
在某些实施方案中，R2为未取代的吡啶酮基(pyridinonyl)。在某些实施方案中，R2为取代的吡啶酮基。在一些实施方案中，取代的吡啶酮基被一个或多个选自以下的取代基取代：烷基、环烷基、杂环烷基、卤素、芳基、杂芳基和CF3。
在一些实施方案中，R2选自
Figure BDA0002782961440000161
Figure BDA0002782961440000171
在一些实施方案中，R2选自
Figure BDA0002782961440000172
Figure BDA0002782961440000181
Figure BDA0002782961440000191
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中R3为
Figure BDA0002782961440000192
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中R4为H。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中R4为(C1-C6)-烷基。在一些实施方案中，R4为甲基、乙基、异丙基、正丙基、异丁基、正丁基或叔丁基。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Ra为H。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Ra为烷基。在一些实施方案中，Ra为甲基。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Ra为环丙基。在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Ra为CN。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Ra为-O-烷基。在一些实施方案中，Ra为-OMe。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Rb为H。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Rb为烷基。在一些实施方案中，Rb为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基。在一些实施方案中，Rb为叔丁基。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Rb为芳基。在一些实施方案中，Rb为取代的芳基。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Rb为杂芳基。在一些实施方案中，Rb为取代的杂芳基。在一些实施方案中，取代的芳基或取代的杂芳基被一个或多个选自以下的取代基取代：烷基、卤素、OH、-O-烷基、CN、环烷基或杂环烷基。在一些实施方案中，Rb为取代的芳基。在一些实施方案中，Rb选自
Figure BDA0002782961440000201
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Rb为杂环基。在一些实施方案中，Rb为取代的杂环基。在一些实施方案中，取代的杂环基被一个或多个选自烷基、OH和-O-烷基的取代基取代。在一些实施方案中，Rb选自
Figure BDA0002782961440000202
在一些实施方案中，Rb选自
Figure BDA0002782961440000203
Figure BDA0002782961440000211
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Rb为-O-环烷基。在一些实施方案中，Rb为-O-环丁基。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Rb为-O-芳基。在一些实施方案中，Rb为-O-苯基。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中R3为
Figure BDA0002782961440000212
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中R3为
Figure BDA0002782961440000213
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中R3为
Figure BDA0002782961440000214
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Rc为H。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Rc为烷基。在一些实施方案中，Rc为甲基或乙基。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Rc为环烷基。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Rc为杂环基烷基。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Rc为卤素。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Rc为CF3。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Rd为芳基。在一些实施方案中，Rd为取代的芳基。在一些实施方案中，取代的芳基被一个或多个选自以下的取代基取代：烷基、环烷基、杂环基烷基、卤素、OH、OMe、CF3和CN。在一些实施方案中，Rd选自
Figure BDA0002782961440000221
Figure BDA0002782961440000222
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Rd为杂环基。在一些实施方案中，Rd为取代的杂环基。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Rd为杂芳基。在一些实施方案中，Rd为取代的杂芳基。在一些实施方案中，取代的杂环基或取代的杂芳基被一个或多个选自烷基和环烷基的取代基取代。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Rd为
Figure BDA0002782961440000223
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Rd选自
Figure BDA0002782961440000231
Figure BDA0002782961440000232
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Re为芳基。在一些实施方案中，Re为苯基。在一些实施方案中，Re为取代的苯基。在一些实施方案中，取代的苯基为烷基取代的苯基。
在一些实施方案中，Re为
Figure BDA0002782961440000233
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Re为杂芳基。
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中Re为杂环基。
在一些实施方案中，Re为取代的吡咯烷基。在一些实施方案中，Re为烷基取代的吡咯烷基。在一些实施方案中，Re为
Figure BDA0002782961440000234
在某些实施方案中，本发明涉及前述化合物中的任一者，其中所述化合物为药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，本发明涉及选自由以下组成的组的化合物：
Figure BDA0002782961440000235
Figure BDA0002782961440000241
Figure BDA0002782961440000251
Figure BDA0002782961440000261
在某些实施方案中，本发明涉及选自由以下组成的组的化合物：
Figure BDA0002782961440000262
Figure BDA0002782961440000271
Figure BDA0002782961440000281
Figure BDA0002782961440000291
在某些实施方案中，本发明涉及选自由以下组成的组的化合物：
Figure BDA0002782961440000292
Figure BDA0002782961440000301
Figure BDA0002782961440000311
Figure BDA0002782961440000321
在某些实施方案中，本发明涉及选自由以下组成的组的化合物：
Figure BDA0002782961440000322
Figure BDA0002782961440000331
Figure BDA0002782961440000341
在某些实施方案中，本发明涉及选自由以下组成的组的化合物：
Figure BDA0002782961440000342
Figure BDA0002782961440000351
Figure BDA0002782961440000361
Figure BDA0002782961440000371
在某些实施方案中，本发明涉及选自由以下组成的组的化合物：
Figure BDA0002782961440000372
Figure BDA0002782961440000381
在某些实施方案中，本发明涉及选自由以下组成的组的化合物：
Figure BDA0002782961440000382
Figure BDA0002782961440000391
在某些实施方案中，本发明涉及选自由以下组成的组的化合物：
Figure BDA0002782961440000392
Figure BDA0002782961440000401
Figure BDA0002782961440000411
Figure BDA0002782961440000421
Figure BDA0002782961440000431
在某些实施方案中，本发明涉及选自由以下组成的组的化合物：
Figure BDA0002782961440000432
在某些实施方案中，本发明涉及选自由以下组成的组的化合物：
Figure BDA0002782961440000433
Figure BDA0002782961440000441
在一些实施方案中，本发明涉及选自由以下组成的组的化合物：
Figure BDA0002782961440000442
在一些实施方案中，本发明涉及选自由以下组成的组的化合物：
Figure BDA0002782961440000443
Figure BDA0002782961440000451
Figure BDA0002782961440000461
Figure BDA0002782961440000471
在一些实施方案中，本发明涉及选自由以下组成的组的化合物：
Figure BDA0002782961440000481
Figure BDA0002782961440000491
Figure BDA0002782961440000501
示例性药物组合物
在某些实施方案中，本发明涉及一种药物组合物，其包含前述化合物中的任一者和药学上可接受的载剂。
可通过在药学上可接受的载剂或稀释剂的存在下向患者施用有效量的活性化合物或其药学上可接受的盐来治疗患者(包括但不限于人)。活性材料可以液体或固体形式通过任何适当的途径施用，例如经口、肠胃外、静脉内、皮内、皮下、经直肠或局部施用。
药物组合物中活性化合物的浓度将取决于药物的吸收、失活和排泄速率以及本领域技术人员已知的其他因素。应注意，剂量值还将随待缓解的病状的严重程度而变化。应进一步理解，对任何特定受试者而言，特定剂量方案应根据个体需要和施用组合物或监督组合物施用的人员的专业判断而随时间调整，并且本文所阐述的浓度范围仅为示例性的，而不旨在限制所要求保护的组合物的范畴或实践。活性成分可一次性施用，或可分成多个较小剂量以不同时间间隔施用。
在某些实施方案中，活性化合物的施用模式为口服。口服组合物将通常包括惰性稀释剂或可食用载剂。其可封装于明胶胶囊中或压缩成片剂。出于口服治疗性施用的目的，活性化合物可与赋形剂合并，并且以片剂、糖锭或胶囊的形式使用。可包括药学上相容的粘合剂和/或佐剂材料作为组合物的一部分。
片剂、丸剂、胶囊、糖锭等可含有以下成分或具有类似性质的化合物中的任一者：粘合剂，诸如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，诸如淀粉或乳糖；崩解剂，诸如褐藻酸、淀粉羟基乙酸钠(Primogel)或玉米淀粉；润滑剂，诸如硬脂酸镁或Sterotes；助滑剂，诸如胶态二氧化硅；甜味剂，诸如蔗糖或糖精；或调味剂，诸如胡椒薄荷、水杨酸甲酯或橙味调味剂。当剂量单位形式为胶囊时，除以上类型的材料外，其还可含有液体载剂，诸如脂肪油。另外，单位剂型可含有修改剂量单位的物理形式的各种其他材料，例如糖包衣、虫胶或其他肠溶剂。
化合物可作为酏剂、混悬剂、糖浆、薄片(wafer)、咀嚼胶等的组分施用。除活性化合物之外，糖浆可含有作为甜味剂的蔗糖或甜味料以及某些防腐剂、染料和着色剂以及调味剂。
化合物或其药学上可接受的盐还可与不损害期望作用的其他活性材料或与补充期望作用的材料混合，诸如抗生素、抗真菌剂、抗炎剂或其他抗病毒剂，包括但不限于核苷化合物。用于肠胃外、皮内、皮下或局部应用的溶液或悬浮液可包括以下组分：无菌稀释剂，诸如注射用水、盐水溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗菌剂，诸如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，诸如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，诸如乙二胺四乙酸；缓冲剂，诸如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；以及张力调节剂，诸如氯化钠或右旋糖。肠胃外制剂可封装于由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。
如果静脉内施用，那么载剂包括生理盐水和磷酸盐缓冲盐水(PBS)。
在某些实施方案中，用将防止化合物从身体快速除去的载剂制备活性化合物，诸如控释配制物，包括但不限于植入物和微胶囊化递送系统。可使用可生物降解、生物相容聚合物，诸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。例如，可使用包覆肠溶衣的化合物以防止被胃酸裂解。用于制备此类配制物的方法对于本领域技术人员而言将是显而易见的。合适的材料还可经过市售购得。
脂质体悬浮液(包括但不限于靶向具有针对病毒抗原的单克隆抗体的感染细胞的脂质体)也是优选的药学上可接受的载剂。可根据本领域技术人员已知的方法制备这些脂质体悬浮液，例如，如美国专利第4,522,811号(以引用的方式并入)中所描述。例如，脂质体配制物可通过将适当脂质(诸如硬脂酰基磷脂酰基乙醇胺、硬脂酰基磷脂酰基胆碱、花生酰(arachadoyl)磷脂酰基胆碱和胆固醇)溶解于随后蒸发的无机溶剂中来制备，留下容器表面上的干燥脂质薄膜。随后将活性化合物的水溶液引入容器中。随后用手旋动容器以使脂质材料从容器的侧面脱离并且使脂质聚集物分散，从而形成脂质体悬浮液。
示例性方法
在某些实施方案中，本发明涉及一种治疗选自由以下组成的组的疾病或病状的方法：炎症性肠病、回肠肛管吻合术、嗜酸性食道炎、胰腺炎、胰岛素依赖型糖尿病、乳腺炎、胆囊炎、胆管炎、胆管周围炎、慢性支气管炎、慢性鼻窦炎、哮喘、移植物抗宿主疾病、慢性肺部炎症性疾病、HIV和血液肿瘤，所述方法包括以下步骤：向对其有需要的受试者施用治疗有效量的前述化合物中的任一者。
在某些实施方案中，疾病或病状为炎症性肠病。在某些实施方案中，炎症性肠病为结肠炎、克罗恩病、回肠炎、乳糜泻、非热带性口炎性腹泻、与血清阴性关节病相关的肠病、胃肠炎或结肠袋炎。
在某些实施方案中，疾病或病状为结肠炎；并且结肠炎为溃疡性结肠炎、显微结肠炎(microscopic colitis)或胶原性结肠炎。
在某些实施方案中，疾病或病状为结肠袋炎；并且结肠袋炎为直肠结肠切除术的结果。
在某些实施方案中，疾病或病状为胃肠炎。在某些实施方案中，胃肠炎为嗜酸性胃肠炎。
在某些实施方案中，疾病或病状为嗜酸性食道炎。
在某些实施方案中，疾病或病状为慢性肺部炎症性疾病。在某些实施方案中，慢性肺部炎症性疾病为间质纤维化。在某些实施方案中，间质纤维化为过敏性肺炎、胶原蛋白疾病或结节病。
在某些实施方案中，疾病或病状为血液肿瘤。在某些实施方案中，血液肿瘤选自由以下组成的组：急性淋巴细胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)、非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma)和多发性骨髓瘤。
在某些实施方案中，本发明涉及前述方法中的任一者，其中受试者为哺乳动物。在某些实施方案中，本发明涉及前述方法中的任一者，其中受试者为人。
范例
现已大体描述本发明，参考以下实施例将更容易理解本发明，所述实施例仅出于说明本发明的某些方面和实施方案的目的被包括在内并且不旨在限制本发明。
实施例1.用于合成α4β7抑制剂的通用方案
通用程序
铃木偶联(Suzuki Coupling)
Figure BDA0002782961440000541
在90℃下在N2气氛下将芳基溴(1当量)、硼酸(2当量)、PdCl2(dppf)(0.05当量)和K3PO4(2当量)在DME和H2O(10:1比率)中的混合物搅拌30分钟。混合物经硅藻土过滤，在真空中浓缩并且通过硅胶柱纯化，得到期望产物。
酰胺键形成
Figure BDA0002782961440000551
在室温下将酰胺(1当量)、酸(1当量)、EDCI(1.5当量)、HOBt(1.5当量)和DIEA(3.0当量)在DMF中的混合物搅拌过夜。在真空中移除溶剂并且通过硅胶柱纯化残余物以提供期望产物。
酯水解
Figure BDA0002782961440000552
在室温下用含LiOH-H2O(7当量)的MeOH:H2O(3:1比率)处理酯2小时。用1N HCl将溶液调节至pH＝5～6。在真空中移除溶剂，并且通过制备型HPLC条件纯化残余物。
分析方法
LCMS分析方法
使用LC/MS条件分析最终化合物，用UV检测器在214nm和254nm处监测，并且用质谱法在ESI+电离模式中扫描110-800amu。
LC/MS A：柱：XBridge C18，4.6×50mm，3.5μm；流动相：A水(10mM碳酸氢铵)，BCH3CN；梯度：在1.4min内B为5％-95％，随后保持1.6min；流动速率：1.8mL/min；烘箱温度50℃。
LC/MS B：柱：SunFire C18，4.6×50mm，3.5μm；流动相：A水(0.01％TFA)，B CH3CN；梯度：在1.5min内B为5％-95％，随后保持1.5min；流动速率：2.0mL/min；烘箱温度50℃。
LC/MS C：柱：XBridge C18，4.6×50mm，3.5μm；流动相：A水(10mM碳酸氢铵)，BCH3CN；梯度：在1.5min内B为5％-95％，随后保持1.5min；流动速率：1.8mL/min；烘箱温度50℃。
LC/MS D：柱：Poroshell 120 EC-C138，4.6×30mm，2.7μm；流动相：A水(0.01％TFA)，B CH3CN(0.01％TFA)；梯度：在1.2min内B为5％-95％，随后保持1.8min；流动速率：2.2mL/min；烘箱温度50℃。
制备型HPLC方法
将粗样品溶解于MeOH中并且使用Gilson 215仪器通过制备型HPLC纯化，检测波长214nm：
制备型HPLC A：柱：XBridge C18，21.2*250mm，10μm；流动相：A水(10mM碳酸氢铵)，B CH3CN；梯度洗脱如本文中所示；流动速率：20mL/min。
制备型HPLC B：柱：XBridge C18，21.2*250mm，10μm；流动相：A水(10mM甲酸)，BCH3CN；梯度洗脱如本文中所示；流动速率：20mL/min。
制备型手性SFC方法
使用SFC-80(Thar，Waters)仪器通过手性制备型SFC将外消旋和/或非对映异构产物分离成个别对映异构体，检测波长214nm：
制备型手性SFC A：柱：(R,R)-Whelk-O1，20*250mm，5μm(Decial)，柱温：35℃，流动相：CO2/甲醇(0.2％甲醇氨)＝60/40，流动速率：80g/min，背压：100巴(bar)。
制备型手性SFC B：柱：AD 20*250mm，10μm(Daicel)，柱温：35℃，流动相：CO2/甲醇(0.2％甲醇氨)＝60/40，流动速率：80g/min，背压：100巴。
制备型手性SFC C：柱：AS 20*250mm，10μm(Daicel)，柱温：35℃，流动相：CO2/甲醇(0.2％甲醇氨)＝60/40，流动速率：80g/min，背压：100巴。
制备型手性SFC D：柱：OD 20*250mm，5μm(Daicel)，柱温：35℃，流动相：CO2/甲醇(0.2％甲醇氨)＝60/40，流动速率：80g/min，背压：100巴。
制备型手性SFC E：柱：(S,S)-Whelk-O1，20*250mm，5μm(Decial)，柱温：35℃，流动相：CO2/甲醇(0.2％甲醇氨)＝60/40，流动速率：80g/min，背压：100巴。
制备型手性SFC F：柱：OZ 20*250mm，5μm(Daicel)，柱温：35℃，流动相：CO2/甲醇(0.2％甲醇氨)＝60/40，流动速率：80g/min，背压：100巴。
分析制备型SFC方法
使用SFC-80(Thar，Waters)仪器通过手性SFC分析手性产物，检测波长214nm：
手性SFC A：柱：(R,R)-Whelk-O1，4.6*100mm，5μm(Decial)，柱温：40℃，流动相：CO2/甲醇(0.2％甲醇氨)，等度洗脱如本文中所示，流动速率：4g/min，背压：120巴。
手性SFC B：柱：AD 4.6*100mm，5μm(Daicel)，柱温：40℃，流动相：CO2/甲醇(0.2％甲醇氨)，等度洗脱如本文中所示，流动速率：4g/min，背压：120巴。
手性SFC C：柱：AS 4.6*100mm，5μm(Daicel)，柱温：40℃，流动相：CO2/甲醇(0.2％甲醇氨)，等度洗脱如本文中所示，流动速率：4g/min，背压：120巴。
实施例2.制备中间体
(R)-2-溴-4-甲基戊酸
Figure BDA0002782961440000581
在0℃下将NaNO2(62.7g，909mmol)在H2O(200mL)中的溶液添加到含化合物D-亮氨酸(75.0g，572mmol)的HBr(6.0M，850mL)中。在20℃下搅拌反应物14小时。合并两批反应物，并且随后用乙酸乙酯(1.5L×2)萃取反应混合物，用NaCl饱和水溶液(1.0L×2)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下浓缩，得到呈红色油状物的化合物(R)-2-溴-4-甲基戊酸(230g，粗产物)。NMR(400MHz CDCl3)11.18(br,1H),4.30(t,J＝7.6Hz,1H),1.94(t,J＝7.2Hz,2H),1.80-1.87(m,1H),0.93-0.99(m,6H)。
(S)-4-甲基-2-(2-氧代吡嗪-1(2H)-基)戊酸
Figure BDA0002782961440000582
在N2下在25℃下将化合物吡嗪-2(1H)-酮(11.0g，114mmol)、Mg(Ot-Bu)2(39.0g，229mmol)和t-BuOK(13.5g，120mmol)在THF(220mL)中的溶液搅拌20分钟。并且随后将化合物(R)-2-溴-4-甲基戊酸(33.5g，172mmol)逐滴添加到混合物中。在25℃下搅拌反应物20小时。将HCl(3.0M，153mL)逐滴添加到混合物中。有机相用盐水(100mL)洗涤，并且浓缩。通过SFC(仪器：Thar SFC80制备型SFC；柱：ChiralpakAD-H 250*30mm内径(i.d.)5u；流动相：A，CO2，以及B，IPA(0.1％NH3H2O)；梯度：B％＝35％；流动速率：75g/min；波长：220nm；柱温：40℃；系统背压：100巴；循环时间：13min；注射量：每次注射105mg)纯化混合物，得到呈黄色固体的(S)-4-甲基-2-(2-氧代吡嗪-1(2H)-基)戊酸(15.0g，61.7％收率，99.0％纯度)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.96(d,J＝5.6Hz,1H),7.58(d,J＝4.8Hz,1H),7.30(d,J＝4.4Hz,1H),5.14-5.21(m,1H),1.84-1.92(m,2H),1.17-1.26(m,1H),0.82-0.84(m,6H)。
4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸
Figure BDA0002782961440000591
向KOtBu(24.8g，221mmol)和Mg(Ot-Bu)2(71.7g，421mmol)在THF(300mL)中的混合物中添加吡啶-2(1H)-酮(20.0g，210mmol)。搅拌混合物10分钟。在N2下将化合物(R)-2-溴-4-甲基戊酸(61.5g，315mmol)逐滴添加至反应混合物，随后在25℃下搅拌40小时。将反应物冷却至0℃并且逐滴添加HCl(3.0M)以将混合物调节至pH＝3。随后，分离混合物并且在真空中浓缩有机层。通过过滤收集白色固体产物，用EA(100mL×2)和水(100mL×2)洗涤，得到呈灰白色固体的化合物4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(27.0g，60.7％收率，99.0％纯度)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.06(br,1H),7.65(d,J＝6.8Hz,1H),7.39-7.43(m,1H),6.38(d,J＝8.8Hz,1H),6.26-6.23(m,1H),5.32-5.36(m,1H),2.06-2.01(m,1H),1.85-1.88(m,1H),1.30-1.20(m,1H),0.86-0.83(m,6H)。
(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸
Figure BDA0002782961440000601
在N2下向KOtBu(21.6g，192mmol)和Mg(Ot-Bu)2(62.5g，367mmol)在THF(300mL)中的溶液中添加化合物4-甲基吡啶-2(1H)-酮(20.0g，183mmol)。搅拌反应混合物10分钟。将(R)-2-溴-4-甲基戊酸(53.6g，275mmol)逐滴添加至反应混合物。随后，在25℃下搅拌所得反应混合物40小时。将反应混合物冷却至0℃并且添加HCl(3.0M)以将混合物调节至pH＝3。使用旋转蒸发器浓缩有机层并且通过过滤收集灰白色固体产物。将水(50mL)添加至固体并且将其搅拌2小时。过滤反应混合物。收集滤饼，得到呈灰白色固体的(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(21.0g，51.1％收率，99.5％纯度，99.0％ee)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.00(br,1H),7.52(d,J＝6.8Hz,1H),6.19(s,1H),6.10(d,J＝6.8Hz,1H),5.30-5.33(m,1H),2.12(s,3H),1.99-2.03(m,1H),1.82-1.86(m,1H),1.24-1.26(m,1H),0.84(d,J＝6.8Hz,6H)。
(S)-4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊酸
Figure BDA0002782961440000602
向(R)-2-溴-4-甲基戊酸(238mg，1.2mmol)在无水THF(10mL)中的溶液中添加(t-BuO)2Mg(425mg，2.5mmol)并且在N2气氛下在30℃下搅拌溶液1小时。随后添加4-(三氟甲基)吡啶-2-醇(200mg，1.2mmol)和t-BuOK(134mg，1.2mmol)，并且在N2气氛下在70℃下搅拌反应混合物16小时。将混合物冷却至室温并且用稀HCl(4M)溶液酸化至pH＝5。在真空中移除溶剂，并且通过制备型HPLC B(30-60％MeCN)纯化残余物以提供呈白色固体的期望产物(S)-4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊酸(150mg)。收率44％(98％纯度，UV＝214nm，ESI 278(M+H)+)。
步骤1：3-甲氧基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000611
在室温下将4-甲基吡啶-2(1H)-酮(350mg，3.2mmol)、2-溴-3-甲氧基丙酸甲酯(690mg，3.5mmol)和K2CO3(880mg，6.4mmol)在DMF(10mL)中的混合物搅拌18小时。在真空中移除溶剂并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 1:1)纯化残余物，得到呈无色油状物的产物3-甲氧基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酸甲酯(200mg)。收率28％(97％纯度，UV＝214nm，ESI 226(M+H)+)。
步骤2：3-甲氧基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酸
Figure BDA0002782961440000612
在室温下用含LiOH-H2O(180mg，4.4mmol)的THF(8mL)和H2O(2mL)将3-甲氧基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酸甲酯(200mg，0.89mmol)处理18小时。反应物用1NHCl酸化至pH＝3。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC B纯化残余物，得到呈白色固体的期望产物3-甲氧基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酸(95mg)。收率50％(93％纯度，UV＝214nm，ESI 212(M+H)+)。
合成2-(5-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-2-苯基乙酸
步骤1：2-(5-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-2-苯乙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000621
在室温下将5-甲基-2-吡啶酮(1.463g，13.40mmol)、α-溴苯乙酸甲酯(2.291g，10.00mmol)和碳酸钾(1.852g，13.40mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(40mL)中的混合物搅拌过夜。在真空中浓缩混合物并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 1:1)纯化残余物，得到呈淡褐色油状物的期望产物2-(5-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-2-苯乙酸甲酯(2.5g)。收率68％(97％纯度，UV＝214nm，ESI 258(M+H)+)。
步骤2：2-(5-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-2-苯基乙酸
Figure BDA0002782961440000622
在室温下用含LiOH-H2O(2.3g，54mmol)的甲醇(134mL)和水(27mL)将2-(5-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-2-苯乙酸甲酯(2.5g，9.6mmol)处理16小时。反应物用1N盐酸酸化至pH＝3。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC B(30-65％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望产物2-(5-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-2-苯基乙酸(2.32g)。收率84％(100％纯度，UV＝254nm，ESI 244(M+H)+)。
合成(S)-3-(2-溴吡啶-4-基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸乙酯
Figure BDA0002782961440000631
(S,E)-N-((2-溴吡啶-4-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
Figure BDA0002782961440000632
在N2下在20℃下向2-溴异烟醛(68.0g，365mmol)和化合物(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(48.7g，402mmol)在THF(400mL)中的混合物中一次性添加Ti(OEt)4(125g，548mmol，113mL)。在35℃下搅拌混合物1小时。将水(200mL)和EtOAc(200mL)添加到混合物中并且搅拌5分钟。过滤混合物并且用EtOAc(200mL)洗涤滤饼。将合并的有机层用水(200mL)和盐水(200mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并且在真空中浓缩，得到呈黄色固体的化合物(S,E)-N-((2-溴吡啶-4-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(90.0g，粗产物)。
(R,E)-N-((2-溴吡啶-4-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺。
Figure BDA0002782961440000633
以类似方式，使100g的2-溴异烟醛与(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺反应以提供100克的(R,E)-N-((2-溴吡啶-4-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺。
(R)-3-(2-溴吡啶-4-基)-3-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)丙酸乙酯
Figure BDA0002782961440000641
在N2下在20℃下向Zn(142g，2.18mol)在THF(900mL)中的混合物中一次性添加CuCl(46.2g，466mmol)。在60℃下搅拌混合物1小时。将反应混合物冷却至20-30℃，并且在N2下在20-30℃下向混合物中装入2-溴乙酸乙酯(129g，778mmol)。在50-60℃下搅拌混合物1小时。在N2下在0-10℃下将(S,E)-N-((2-溴吡啶-4-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(90g，311mmol)在无水THF(50mL)中的溶液添加到反应混合物中。将MTBE(500mL)和含柠檬酸(10g)的水(200mL)溶液添加到混合物中。用MTBE(500mL和300mL)萃取水层。合并的有机相用盐水(500mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并且在真空中浓缩，得到呈黄色油状物的(R)-3-(2-溴吡啶-4-基)-3-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)丙酸乙酯(80.0g，粗产物)。
(S)-3-(2-溴吡啶-4-基)-3-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)丙酸乙酯
Figure BDA0002782961440000642
以类似方式，将45g×3的(R,E)-N-((2-溴吡啶-4-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺进行反应以提供200克的(S)-3-(2-溴吡啶-4-基)-3-(((R)-异丙基亚磺酰基)氨基)丙酸乙酯。
(R)-3-氨基-3-(2-溴吡啶-4-基)丙酸乙酯
Figure BDA0002782961440000651
在20℃下向化合物(R)-3-(2-溴吡啶-4-基)-3-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)丙酸乙酯(80.0g，212mmol)在EtOAc(150mL)中的混合物中一次性添加HCl/EtOAc(4.00M，212mL)。在20℃下搅拌混合物1小时。添加水(400mL)并且分离水层。用Na2CO3将水层调节至pH＝8-9，并且用EtOAc(400mL，250mL)萃取两次。用盐水(200mL)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩，得到呈黄色油状物的化合物(R)-3-氨基-3-(2-溴吡啶-4-基)丙酸乙酯(55.0g，粗产物)。
(S)-3-氨基-3-(2-溴吡啶-4-基)丙酸乙酯
Figure BDA0002782961440000652
以类似方式，将150g的(S)-3-(2-溴吡啶-4-基)-3-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)丙酸乙酯进行反应以提供90克的(S)-3-氨基-3-(2-溴吡啶-4-基)丙酸乙酯。
(R)-3-(2-溴吡啶-4-基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸乙酯
Figure BDA0002782961440000653
在25℃下向(R)-3-氨基-3-(2-溴吡啶-4-基)丙酸乙酯(55.0g，201mmol)在THF(550mL)中的混合物中一次性添加Na2CO3(42.6g，402mmol)在H2O(550mL)中的混合物。在25℃下搅拌混合物，随后将(Boc)2O(48.3g，221mmol，50.8mL)添加至混合物。在25℃下搅拌混合物1小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝3/1，Rf＝0.5)显示反应完成。将水(400mL)和CH2Cl2(400mL)添加到混合物中。分离混合物并且用CH2Cl2(400mL×2)萃取水溶液。合并的有机相用盐水(400mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过柱层析法(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1至3/1)纯化残余物，得到呈黄色固体的粗产物(R)-3-(2-溴吡啶-4-基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸乙酯(30g)，其通过SFC进一步分离得到灰白色固体(21g，97％纯度)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.32-8.33(m,1H),7.44(s,1H),7.20(d,J＝5.2Hz,1H),5.75(s,1H),5.05(s,1H),4.03-4.18(m,2H),2.83(d,J＝3.6Hz,2H),1.45(m,9H),3.19-3.21(m,3H)。
(S)-3-(2-溴吡啶-4-基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸乙酯
Figure BDA0002782961440000661
以类似方式，将90g的(S)-3-氨基-3-(2-溴吡啶-4-基)丙酸乙酯进行反应以提供40克的(S)-3-(2-溴吡啶-4-基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸乙酯。
3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000662
步骤1：3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440000671
在25℃下向在EtOH(414mL，2.30×按体积计)中的5-溴烟醛(180g)中添加丙二酸(100g)和NH4OAc(157g)。将混合物加热至75-80℃并且搅拌4小时。过滤混合物并且用冷EtOH(180mL)洗涤所得固体两次。浓缩滤液，得到呈白色固体的3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸(246g，粗产物)。1H NMR400 MHz CDCl3δ8.62-8.58(m,2H),8.10(s,1H),4.28(s,1H),2.69(s,1H),2.50(s,1H)。
合成3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000672
在0℃下向含3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸(50.0g，1.00×按重量计)的MeOH(800mL，16.0×按体积计)中添加SOCl2(36.4g，0.73×按重量计)。将混合物加热至10-20℃并且在10-20℃下搅拌16小时。浓缩混合物得到粗产物。向粗材料中添加水(500mL)和CH2Cl2(500mL，10.0×按体积计)。分离所得相，并且用CH2Cl2(250mL)萃取水溶液两次。将NaHCO3添加到水层中以调节pH＝8-9，并且用CH2Cl2(500mL)和CH2Cl2(250mL)萃取五次。合并有机层，经Na2SO4干燥并且浓缩，得到呈黄色固体的3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸甲酯(23.6g，40.2％收率，89.9％纯度)。1H NMR:400MHz CDCl3δ8.56(d,J＝4.0Hz,1H),8.51(d,J＝4.0Hz,1H),7.91(t,J＝2.0Hz,1H),4.46(t,J＝8.0Hz,1H),3.69(s,3H),2.66(d,J＝8.0Hz,1H),1.81(s,2H)。
合成3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000681
在10-20℃下向在THF(234mL)中的3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸甲酯(23.4g)中添加Na2CO3(19.1g，0.82×按重量计)在水(234mL)中的溶液。将Boc2O(21.7g)添加至混合物，随后在10-20℃下搅拌16小时。将水(234mL)和CH2Cl2(234mL)添加到混合物中。分离相并且用CH2Cl2(234mL)萃取水溶液两次。合并有机物并且浓缩以提供3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯。通过SFC纯化得到呈灰白色固体的两种立体异构体A1(97.6％纯度)和A2(97.0％纯度)，其通过1H NMR、LCMS确认。
化合物A1 1H NMRδ8.58(d,J＝4.0Hz,1H),8.49(d,J＝4.0Hz,1H),7.79(d,J＝4.0Hz,1H),5.69(s,1H),5.11(s,1H),3.66(s,3H),2.87(d,J＝8.0Hz,2H),1.43(s,9H)。
化合物A2 1H NMRδ5.58(d,J＝4.0Hz,1H),8.49(d,J＝4.0Hz,1H),7.79(d,J＝4.0Hz,1H),5.70(s,1H),5.11(s,1H),3.66(s,3H),2.87(d,J＝8.0Hz,2H),1.43(s,9H)。
合成(S)-3-氨基-3-(2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯
步骤1：(S)-3-氨基-3-(3-溴苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000682
在0℃下向(S)-3-氨基-3-(3-溴苯基)丙酸(150mg，0.62mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中逐滴添加SOCl2(2mL)。将溶液加热至65℃并且搅拌16小时。在真空中移除溶剂，并且将残余物溶解于NaHCO3溶液中。用EtOAc(30mL×2)萃取溶液。在减压下浓缩合并的有机层，得到呈无色油状物的粗产物(S)-3-氨基-3-(3-溴苯基)丙酸甲酯(150mg)。收率95％(86％纯度，UV＝214nm，ESI 258(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤2：(S)-3-氨基-3-(2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000691
在微波中在100℃下在N2气氛下将(S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酸甲酯(150mg，0.58mmol)、邻甲苯基硼酸(118mg，0.87mmol)、PdCl2(dppf)(22mg，0.029mmol)和K2CO3(240mg，1.74mmol)在1,4-二噁烷(3mL)和H2O(0.5mL)中的混合物搅拌1小时。混合物经硅藻土过滤，并且在减压下浓缩滤液。通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝3:1)纯化残余物以提供呈白色固体的期望产物(S)-3-氨基-3-(2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(110mg)。收率72％(92％纯度，UV＝254nm，ESI 270(M+H)+)。
实施例3.制备本发明的代表性化合物
制备((3S)-3-(3',5'-二甲基-[3,4'-联吡啶]-5-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸(化合物1-D1和1-D2)
步骤1：(S)-(5-(1-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲氧基-3-氧代丙基)吡啶-3-基)硼酸
Figure BDA0002782961440000692
在95℃下将甲基(S)-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯(300mg，0.83mmol)、B2(Pin)2(254mg，1.00mmol)、PdCl2(dppf)(59mg，0.08mmol)和KOAc(325mg，3.32mmol)在二噁烷(5mL)中的混合物搅拌3小时。在真空中浓缩溶剂并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 1:2)纯化残余物，得到呈黄色油状物的期望产物(S)-(5-(1-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲氧基-3-氧代丙基)吡啶-3-基)硼酸(200mg)。收率74％(75％纯度，UV＝254nm，ESI 325(M+H)+)。
步骤2：(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3',5'-二甲基-[3,4'-联吡啶]-5-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000701
在100℃下将(S)-(5-(1-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲氧基-3-氧代丙基)吡啶-3-基)硼酸(200mg，0.62mmol)、4-溴-3,5-二甲基吡啶(230mg，1.23mmol)、PdCl2(dppf)(88mg，0.12mmol)和K2CO3(510mg，3.69mmol)在二噁烷(5mL)和H2O(1mL)中的混合物搅拌3小时。添加水(20mL)并且用EtOAc(20mL×3)萃取溶液。在真空中浓缩合并的有机相并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 5:4)纯化残余物，得到呈黄色油状物的期望产物(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3',5'-二甲基-[3,4'-联吡啶]-5-基)丙酸甲酯(300mg)。收率63％(92％纯度，UV＝254nm，ESI386(M+H)+)。
步骤3：(S)-3-氨基-3-(3',5'-二甲基-[3,4'-联吡啶]-5-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000702
在室温下用4N HCl/二噁烷(3mL)将(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3',5'-二甲基-[3,4'-联吡啶]-5-基)丙酸酯(300mg，0.77mmol)处理2小时。在真空中移除溶剂以提供呈黄色油状物的期望产物(S)-3-氨基-3-(3',5'-二甲基-[3,4'-联吡啶]-5-基)丙酸甲酯(350mg，粗产物)。(64％纯度，UV＝254nm，ESI 286(M+H)+)。
步骤4：(3S)-3-(3',5'-二甲基-[3,4'-联吡啶]-5-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000711
在室温下将(S)-3-氨基-3-(3',5'-二甲基-[3,4'-联吡啶]-5-基)丙酸甲酯(250mg，0.87mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(196mg，0.87mmol)、EDCI(249mg，1.3mmol)、HOBt(176mg，1.3mmol)和DIEA(335mg，2.6mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。在真空中移除溶剂并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 1:1)纯化残余物以提供呈棕色油状物的期望产物(3S)-3-(3',5'-二甲基-[3,4'-联吡啶]-5-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(300mg)。收率70％(94％纯度，UV＝254nm，ESI 491(M+H)+)。
步骤5：((3S)-3-(3',5'-二甲基-[3,4'-联吡啶]-5-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440000712
在室温下用含LiOH-H2O(72mg，1.83mmol)的MeOH(3mL)和H2O(1mL)将(3S)-3-(3',5'-二甲基-[3,4'-联吡啶]-5-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(300mg，0.61mmol)处理2小时。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(30-80％MeCN)纯化残余物，得到呈黄色固体的化合物B1(50mg)和B2(55mg)。
化合物B1 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.40min，ESI 477(M+H)+。
1H-NMR(500MHz,MeOD)δ8.61(d,J＝2.1Hz,1H),8.34(d,J＝8.3Hz,2H),8.24(d,J＝1.9Hz,1H),7.58(d,J＝7.3Hz,2H),6.25-6.23(m,2H),5.69(dd,J＝9.6,6.6Hz,1H),5.40(t,J＝7.0Hz,1H),2.83(d,J＝7.1Hz,2H),2.19(s,3H),2.05(s,3H),1.94-1.92(m,5H),1.51-1.40(m,1H),0.98-0.95(m,6H)。
化合物B2 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.43min，ESI 477(M+H)+。1H-NMR(500MHz,MeOD)δ8.67(d,J＝1.7Hz,1H),8.36(s,2H),8.32(d,J＝1.6Hz,1H),7.73(d,J＝1.9Hz,1H),7.63(d,J＝7.1Hz,1H),6.37(s,1H),6.30(dd,J＝7.2,1.8Hz,1H),5.69(dd,J＝9.3,6.8Hz,1H),5.36(t,J＝7.1Hz,1H),2.88-2.84(m,2H),2.23(s,3H),2.08(s,6H),1.85-1.81(m,2H),1.32-1.31(m,1H),0.91-0.88(m,6H)。
制备(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
步骤1：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000731
在室温下将(S)-4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊酸(150mg，0.54mmol)、(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(169mg，0.59mmol)、HATU(246mg，0.65mmol)和DIEA(0.2mL)在DMF(5mL)中的混合物搅拌过夜。在真空中浓缩混合物并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 1:1)纯化残余物，得到呈黄色固体的期望产物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(200mg)。收率68％(100％纯度，UV＝214nm，ESI 544(M+H)+)。
步骤2：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440000732
在室温下用含LiOH-H2O(74mg，1.84mmol)的MeOH(3mL)和H2O(1mL)将(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(200mg，0.37mmol)处理2小时。用1NHCl将反应混合物酸化至pH 4～5。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(30-60％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸(130mg，67％收率)。通过制备型手性SFC A分离非对映异构混合物，得到呈白色固体的化合物C1(40mg)和C2(20mg)。
化合物C1 LC/MS B：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝2.01min，ESI 530(M+H)+。
1H-NMR(500MHz,MeOD)δ8.59(d,J＝2.0Hz,1H),8.26(d,J＝1.7Hz,1H),7.99(d,J＝7.3Hz,1H),7.68(t,J＝1.9Hz,1H),7.25-7.19(m,1H),7.16(d,J＝7.6Hz,2H),6.83(s,1H),6.57(dd,J＝7.7,2.0Hz,1H),5.78-5.68(m,1H),5.39(t,J＝7.4Hz,1H),2.91-2.80(m,2H),2.02(s,6H),1.90-1.80(m,2H),1.38-1.33(m,1H),0.98-0.88(m,6H)。手性SFC A(15％MeOH)：ee 100％，Rt＝2.49min。
化合物C2 LC/MS B：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.98min，ESI 530(M+H)+。1H-NMR(500MHz,MeOD)δ8.55(d,J＝2.0Hz,1H),8.17(d,J＝1.8Hz,1H),7.95(d,J＝7.3Hz,1H),7.59(s,1H),7.19(t,J＝7.5Hz,1H),7.16-7.12(m,2H),6.71(s,1H),6.53(dd,J＝7.3,2.0Hz,1H),5.72(dd,J＝9.2,6.9Hz,1H),5.41(t,J＝7.0Hz,1H),2.85(t,J＝15.6Hz,2H),2.04-1.92(m,5H),1.85(s,3H),1.55-1.42(m,1H),0.98-0.86(m,6H)。手性SFC A(15％MeOH)：ee 98％，Rt＝3.59min。
制备化合物D1和D2
步骤1：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000741
在室温下将(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(100mg，0.27mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊酸(97mg，0.35mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(77mg，0.40mmol)、1-羟基苯并三唑(40mg，0.30mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.22mL，1.35mmol)在DMF(5mL)中的混合物搅拌16小时。在真空中浓缩混合物并且通过制备型TLC(石油醚:EtOAc 1:2)纯化残余物，得到呈无色油状物的期望产物(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((R)-4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(54mg，收率23％)(Rf＝0.75，76％纯度，UV＝254nm，ESI 544(M+H)+)和呈无色油状物的(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(31mg，收率17％)(Rf＝0.71，86％纯度，UV＝254nm，ESI 544(M+H)+)。
步骤2：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((2R)-4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)哌啶-1-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000751
在氢气气氛下在40℃下将(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((R)-4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(54mg，0.099mmol)和钯/活性炭(11mg，10％，0.0099mmol)在无水乙醇(15mL)中的混合物搅拌过夜。过滤混合物并且在真空中浓缩滤液，得到呈无色油状物的期望产物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((2R)-4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)哌啶-1-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(63mg)。收率95％(92％纯度，UV＝254nm，ESI 548(M+H)+)。
步骤3：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((2R)-4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)哌啶-1-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440000761
在室温下用含LiOH-H2O(51mg，1.22mmol)的甲醇(9.6mL)和水(0.61mL)将(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((2R)-4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)哌啶-1-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(67mg，0.12mmol)处理2小时。反应物用1N盐酸酸化至pH＝3。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC B(30-65％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望化合物D1(9mg)和D2(4mg)。
化合物D1 LC/MS E：98％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.74min，ESI 534(M+H)+，1H-NMR(500MHz,MeOD)δ:8.55(d,J＝1.5Hz,1H),8.23(d,J＝1.5Hz,1H),7.64(t,J＝1.8Hz,1H),7.20(t,J＝7.5Hz,1H),7.14(d,J＝7.5Hz,2H),5.40(t,J＝7.0Hz,1H),5.23(dd,J＝9.0,6.5Hz,1H),3.59-3.55(m,1H),3.33-3.28(m,1H),2.96-2.87(m,2H),2.84-2.79(m,1H),2.66(ddd,J＝17.5,6.0,1.5Hz,1H),2.50(dd,J＝17.3,10.8Hz,1H),2.14-2.11(m,1H),2.00(d,J＝6.0Hz,6H),1.86(ddd,J＝26.0,12.0,5.0Hz,1H),1.74-1.68(m,1H),1.63-1.58(m,1H),1.47-1.41(m,1H),0.92(d,J＝6.5Hz,3H),0.89(d,J＝7.0Hz,3H)。
化合物D2 LC/MS E：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.76min，ESI 534(M+H)+，1H-NMR(500MHz,MeOD)δ:8.55(d,J＝2.0Hz,1H),8.23(d,J＝1.5Hz,1H),7.64(t,J＝1.8Hz,1H),7.20(t,J＝7.5Hz,1H),7.14(d,J＝7.5Hz,2H),5.40(t,J＝7.0Hz,1H),5.23(dd,J＝9.0,6.5Hz,1H),3.46-3.42(m,1H),3.39-3.34(m,1H),2.90-2.85(m,3H),2.71-2.66(m,1H),2.46(dd,J＝17.0,10.3Hz,1H),2.19-2.15(m,1H),2.00(d,J＝7.5Hz,6H),1.83-1.76(m,1H),1.72-1.66(m,1H),1.61-1.55(m,1H),1.43-1.37(m,1H),0.91(d,J＝6.5Hz,3H),0.87(d,J＝6.5Hz,3H)。
制备化合物E
步骤1：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((2S)-4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)哌啶-1-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000771
在氢气气氛下在40℃下将(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(31mg，0.057mmol)和钯/活性炭(10％，11mg，0.0099mmol)在无水乙醇(15mL)中的混合物搅拌过夜。过滤混合物并且在真空中浓缩滤液，得到呈无色油状物的期望产物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((2S)-4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)哌啶-1-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(23mg)。收率74％(92％纯度，UV＝254nm，ESI 548(M+H)+)。
步骤2：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((2S)-4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)哌啶-1-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440000772
在室温下用含LiOH-H2O(10mg，0.25mmol)的甲醇(4mL)和水(1mL)将(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((2R)-4-甲基-2-(2-氧代-4-(三氟甲基)哌啶-1-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(23mg，0.042mmol)处理2小时。反应物用1N盐酸酸化至pH＝3。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC B(30-65％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望化合物E(2mg)。
化合物E LC/MS E：98％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.72min，ESI 534(M+H)+；1H 1H-NMR(500MHz,MeOD)δ:8.55(d,J＝1.5Hz,1H),8.23(d,J＝1.5Hz,1H),7.64(t,J＝1.8Hz,1H),7.20(t,J＝7.5Hz,1H),7.14(d,J＝7.5Hz,2H),5.40(t,J＝7.0Hz,1H),5.23(dd,J＝9.0,6.5Hz,1H),3.59-3.55(m,1H),3.33-3.28(m,1H),2.96-2.87(m,2H),2.84-2.79(m,1H),2.66(ddd,J＝17.5,6.0,1.5Hz,1H),2.50(dd,J＝17.3,10.8Hz,1H),2.14-2.11(m,1H),2.00(d,J＝6.0Hz,6H),1.86(ddd,J1＝26.0,12.0,5.0Hz,1H),1.74-1.68(m,1H),1.63-1.58(m,1H),1.47-1.41(m,1H),0.92(d,J＝6.5Hz,3H),0.89(d,J＝7.0Hz,3H)。
制备化合物F
步骤1：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-2-苯基乙酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000781
在室温下将2-(5-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-2-苯基乙酸(478mg，1.96mmol)、(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(300mg，0.94mmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(764mg，2.01mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.93mL，5.61mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中的混合物搅拌66小时。在真空中浓缩混合物并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 2:1)纯化残余物，得到呈黄色固体的期望产物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-2-苯基乙酰氨基)丙酸甲酯(200mg)。收率42％(100％纯度，UV＝214nm，ESI 510(M+H)+)。
步骤2：(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((R)-2-(5-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-2-苯基乙酰氨基)丙酸和(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((S)-2-(5-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-2-苯基乙酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440000791
在室温下用含LiOH-H2O(394mg，9.4mmol)的甲醇(10mL)和水(1mL)将(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-2-苯基乙酰氨基)丙酸甲酯(200mg，0.39mmol)处理16小时。反应物用1N HCl酸化至pH＝3。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(30-65％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望产物(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((S)-2-(5-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-2-苯基乙酰氨基)丙酸(86mg，43％收率)(100％纯度，UV＝254nm，ESI 496(M+H)+)和(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((R)-2-(5-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-2-苯基乙酰氨基)丙酸(81mg，41％收率)(100％纯度，UV＝254nm，ESI 496(M+H)+)。
步骤3：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((2R)-2-(5-甲基-2-氧代哌啶-1-基)-2-苯基乙酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440000792
在氢气气氛下在40℃下将(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((R)-2-(5-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-2-苯基乙酰氨基)丙酸(76mg，0.15mmol)和钯/活性炭(10％，16mg，0.015mmol)在无水乙醇(50mL)中的混合物搅拌过夜。过滤混合物并且在真空中浓缩滤液，并且随后通过制备型HPLC A(30-65％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望产物化合物F(56mg)。
化合物F LC/MS B：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.60min，ESI 500(M+H)+。
1H-NMR(500MHz,MeOD)δ8.53(dd,J＝5.0,2.0Hz,1H),8.22(t,J＝2.3Hz,1H),7.56(dt,J＝11.0,2.0Hz,1H),7.29-7.23(m,3H),7.19(t,J＝7.5Hz,1H),7.14-7.11(m,4H),6.28(d,J＝30.0Hz,1H),5.50-5.46(m,1H),3.05(dd,J＝12.0,11.0Hz,1H),2.94-2.78(m,3H),2.54-2.41(m,2H),1.97(t,J＝2.8Hz,6H),1.82-1.70(m,2H),1.57-1.31(m,1H),0.85(dd,J＝21.3,6.8Hz,3H)。
制备化合物G
步骤1：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((2S)-2-(5-甲基-2-氧代哌啶-1-基)-2-苯基乙酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440000801
在氢气气氛下在40℃下将(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((S)-2-(5-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-2-苯基乙酰氨基)丙酸(81mg，0.16mmol)和钯/活性炭(17mg，10％，0.016mmol)在无水乙醇(50mL)中的混合物搅拌16小时。过滤混合物并且在真空中浓缩滤液，并且随后通过制备型HPLC A(30-65％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望化合物G(41mg)。
化合物G LC/MS B：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.57min，ESI 500(M+H)+。
1H-NMR(500MHz,MeOD)δ8.60(d,J＝1.5Hz,1H),8.22(d,J＝1.5Hz,1H),7.67(t,J＝2.3Hz,1H),7.42-7.36(m,3H),7.32(t,J＝7.5Hz,2H),7.19(dd,J＝8.8,1.5Hz,1H),7.13(d,J＝7.5Hz,2H),6.32(d,J＝14.5Hz,1H),5.52(t,J＝7.3Hz,1H),3.02(t,J＝11.3Hz,1H),2.86-2.83(m,3H),2.41(q,J＝4.5Hz,2H),2.00(d,J＝4.5Hz,6H),1.78-1.69(m,2H),1.48-1.31(m,1H),0.83(dd,J＝16.8,6.8Hz,3H)。
制备化合物H1和H2
步骤1：3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)-3-(3-甲氧基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000811
在室温下将3-甲氧基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酸(95mg，0.45mmol)、3-氨基-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(130mg，0.45mmol)、HOBT(91mg，0.675mmol)、EDCI(130mg，0.675mmol)和DIEA(145mg，1.13mmol)在DMF(5mL)中的混合物搅拌18小时。在真空中移除溶剂并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 3:1)纯化残余物，得到呈黄色固体的产物3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)-3-(3-甲氧基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酰氨基)丙酸甲酯(150mg)。收率70％(78％纯度，UV＝254nm，ESI 477(M+H)+)。
步骤2：3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)-3-(3-甲氧基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440000821
在室温下用含LiOH-H2O(66mg，1.6mmol)的THF(8mL)和H2O(1mL)将3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)-3-(3-甲氧基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酰氨基)丙酸甲酯(150mg，0.32mmol)处理2小时。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC B(30-70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物H1(10mg)和H2(30mg)。
化合物H1 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.64min，ESI 463(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.60(d,J＝7.1Hz,1H),7.39(t,J＝7.6Hz,1H),7.31(d,J＝7.8Hz,1H),7.13-7.09(m,1H),7.05(d,J＝7.8Hz,3H),6.99(d,J＝7.5Hz,1H),6.30(s,1H),6.20(dd,J＝7.2,1.8Hz,1H),5.71(dd,J＝7.6,5.1Hz,1H),5.38(t,J＝6.9Hz,1H),3.92(ddd,J＝16.0,10.8,6.4Hz,2H),3.34(s,3H),2.86(d,J＝7.1Hz,2H),2.18(s,3H),1.97(s,3H),1.93(s,3H)。
化合物H2 LC/MS A：98％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.66min，ESI 463(M+H)+。1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.63(d,J＝7.1Hz,1H),7.41(t,J＝7.6Hz,1H),7.36(d,J＝7.9Hz,1H),7.15(s,1H),7.10(dt,J＝16.6,6.2Hz,3H),7.01(d,J＝7.4Hz,1H),6.35(s,1H),6.24(dd,J＝7.2,1.9Hz,1H),5.73(dd,J＝6.7,4.9Hz,1H),5.37(t,J＝6.8Hz,1H),3.92(dd,J＝10.6,6.8Hz,1H),3.82-3.79(m,1H),3.20(s,3H),2.83-2.78(m,2H),2.23-2.19(m,3H),1.99(d,J＝3.5Hz,6H)。
制备化合物I
步骤1：(S)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)-3-(2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000831
在室温下将(S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酸(100mg，0.38mmol)、(S)-3-氨基-3-(2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(104mg，0.38mmol)、EDCI(145mg，0.76mmol)、HOBt(103mg，0.76mmol)和DIEA(129mg，1.0mmol)在DCM(5mL)中的混合物搅拌16小时。在真空中移除溶剂并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝1:1)纯化残余物以提供呈棕色油状物的期望产物(S)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)-3-(2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(75mg)。收率39％(85％纯度，UV＝254nm，ESI 512.1(M+H)+)。
步骤2：(S)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)-3-(2'-甲基联苯-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440000832
在室温下用含LiOH-H2O(25.2mg，0.6mmol)的MeOH(3mL)和H2O(1mL)将(S)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)-3-(2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(75mg，0.15mmol)处理2小时。用1N HCl将溶液调节至pH＝5～6。在真空中移除溶剂，并且通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望产物(S)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)-3-(2'-甲基联苯-3-基)丙酸(30mg)。
化合物I LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.69min，ESI 498.1(M+H)+。
1H-NMR(500MHz,MeOD)δ8.45(s,1H),8.28-8.26(m,1H),7.88-7.86(m,1H),7.72(d,J＝8.0Hz,1H),7.61-7.57(m,1H),7.43(t,J＝15.5Hz,1H),7.37(d,J＝7.5Hz,1H),7.34(s,1H),5.29-7.19(m,5H),5.74(m,1H),5.77-5.74(m,1H),5.41(t,J＝15Hz,1H),2.93-2.83(m,2H),2.26(s,3H),2.02-1.92(m,2H),1.47-1.41(m,1H),0.95-0.91(m,6H)。
制备化合物J1
步骤1：(S)-3-((R)-2-羟基-4-甲基戊酰氨基)-3-(2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000841
在室温下将(S)-3-氨基-3-(2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(250mg，0.93mmol)、(R)-2-羟基-4-甲基戊酸(123mg，0.93mmol)、EDCI(382mg，2.0mmol)、HOBt(270mg，2.0mmol)和DIPEA(258mg，2.0mmol)在DCM(5mL)中的混合物搅拌16小时。在真空中移除溶剂并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝2:1)纯化残余物以提供呈无色油状物的期望产物(S)-3-((R)-2-羟基-4-甲基戊酰氨基)-3-(2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(160mg)。收率45％(97％纯度，UV＝254nm，ESI 384.1(M+H)+)。
步骤2：(S)-3-((R)-4-甲基-2-(甲基磺酰氧基)戊酰氨基)-3-(2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000851
向(S)-3-((R)-2-羟基-4-甲基戊酰氨基)-3-(2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(130mg，0.34mmol)在DCM(10mL)中的溶液中逐滴添加TEA(101mg，1.0mmol))和甲磺酰氯(46mg，0.4mmol)，并且在室温下搅拌3小时。添加水(10mL)，并且用DCM(10mL×3)萃取溶液。在减压下浓缩合并的有机相，得到呈无色油状物的粗产物(S)-3-((R)-4-甲基-2-(甲基磺酰氧基)戊酰氨基)-3-(2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(323mg)。收率62％(100％纯度，UV＝254nm，ESI 462.1(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤3：(3S)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)-3-(2'-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000852
向(S)-3-((R)-4-甲基-2-(甲基磺酰氧基)戊酰氨基)-3-(2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(130mg粗产物)在MeCN(10mL)中的溶液中添加K2CO3(69mg，0.5mmol)和吡啶-2(1H)-酮(38mg，0.4mmol)。在80℃下搅拌混合物16小时并且过滤。在减压下浓缩滤液，并且通过制备型HPLC A(40～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物J1a(30mg)和J1b(40mg)。
化合物J1a：(100％纯度，UV＝254nm，ESI 461.1(M+H)+)。
化合物J1b：(100％纯度，UV＝254nm，ESI 461.1(M+H)+)。
步骤4：化合物J1
Figure BDA0002782961440000861
在室温下用含LiOH-H2O(25.2mg，0.6mmol)的MeOH(3mL)和H2O(1mL)将化合物J1a(30mg，0.065mmol)处理2小时。用1N HCl将溶液调节至pH＝5～6。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望产物化合物J1(20mg)。
化合物J1 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.62min，ESI 447.1(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.76(m,J＝7.0,1.7Hz,1H),7.51(m,1H),7.42(t,J＝7.6Hz,1H),7.37(d,J＝7.8Hz,1H),7.32(s,1H),7.24-7.18(m,5H),6.56(d,J＝9.2Hz,1H),6.42(t,J＝6.2Hz,1H),5.78-5.75(m,1H),5.37(t,J＝7.3Hz,1H),2.90-2.79(m,2H),2.26(s,3H),1.92-1.76(m,2H),1.44-1.23(m,1H),0.91-089(m,6H)。
步骤5：化合物J2
Figure BDA0002782961440000871
在室温下用含LiOH-H2O(25.2mg，0.6mmol)的MeOH(3mL)和H2O(1mL)将化合物J2a(40mg，0.087mmol)处理2小时。用1NHCl将溶液调节至pH＝5～6。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望产物化合物J2(7mg)。
化合物J2 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.66min，ESI 447.1(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.83-7.68(m,1H),7.63-7.55(m,1H),7.38(s,1H),7.31-7.09(m,6H),7.08-6.66(m,3H),5.41(t,J＝6.7Hz,1H),5.33-5.25(m,1H),2.92-2.72(m,2H),2.20(s,1H),2.13(s,2H),1.99-1.82(m,2H),1.73-1.66(m,1H),1.06-0.87(m,6H)。
制备化合物K
步骤1：(S)-3-(2',6'-二氟联苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000872
在110℃下在微波中在N2气氛下将(S)-3-(3-溴苯基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(100mg，0.2mmol)、2,6-二氟苯基硼酸(47mg，0.3mmol)、Pd(dppf)Cl2(15mg，0.02mmol)和K2CO3(83mg，0.6mmol)在1,4-二噁烷(3mL)和H2O(0.5mL)中的混合物搅拌1小时。反应物经硅藻土过滤并且在减压下浓缩滤液。通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 1:3)纯化残余物，得到呈无色油状物的期望产物(S)-甲基(S)-3-(2',6'-二氟联苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(60mg)。收率58％(93％纯度，UV＝214nm，ESI 534(M+H)+)。
步骤2：(S)-3-(2',6'-二氟联苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440000881
在室温下用LiOH-H2O(14mg，0.33mmol)和H2O(0.5mL)将含(S)-3-(2',6'-二氟联苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(60mg，0.11mmol)的THF(5mL)处理16小时。用HCl(1M)酸化混合物直至pH＝5。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC B(30～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望产物(S)-3-(2',6'-二氟联苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)丙酸(15mg)。
化合物K LC/MS B：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.87min，ESI 520(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.45(s,1H),8.27(dd,J＝8.1,1.2Hz,1H),7.92-7.82(m,1H),7.72(d,J＝8.1Hz,1H),7.59(t,J＝7.3Hz,1H),7.51-7.33(m,5H),7.17-7.01(m,2H),5.77(dd,J＝10.0,6.5Hz,1H),5.47-5.39(m,1H),2.92-2.78(m,2H),2.12-1.89(m,2H),1.46-1.41(m,1H),0.95-0.93(m,6H)。
制备化合物L
步骤1：(S)-3-(3-溴苯基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000891
在室温下将(S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酸(860mg，3.3mmol)、(S)-3-氨基-3-(3-溴苯基)丙酸甲酯盐酸盐(980mg，3.3mmol)、EDCI(1.15g，6mmol)、HOBt(810mg，6mmol)和DIEA(1.29g，10mmol)在DCM(20mL)中的溶液搅拌12小时。将溶液用H2O(10mL×2)和盐水(10mL)洗涤。有机层经Na2SO4干燥并且过滤。在真空中移除滤液并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝2:1)纯化残余物，得到呈无色油状物的期望产物(S)-3-(3-溴苯基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(1.5g)。收率62％(97％纯度，UV＝214nm，ESI 500.1(M+H)+)。
步骤2：(S)-3-(2'-氰基联苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000892
在90℃下在N2气氛下将(S)-3-(3-溴苯基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(100mg，0.2mmol)、2-氰苯基硼酸(59mg，0.4mmol)、PdCl2(dppf)(7mg，0.01mmol)和K3PO4(85mg，0.4mmol)在5mL的DME和0.5mL的H2O中的混合物搅拌30分钟。混合物经硅藻土过滤。在真空中移除滤液并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝1:1)纯化残余物，得到呈无色油状物的期望产物(S)-3-(2'-氰基联苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(30mg)。收率29％(60％纯度，UV＝214nm，ESI 523(M+H)+)。
步骤3：(S)-3-(2'-氰基联苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440000901
在室温下用含LiOH-H2O(7mg，0.17mmol)的3mL的THF和1mL的H2O将(S)-3-(2'-氰基联苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(30mg，0.057mmol)处理1小时。用TFA将溶液调节至pH＝3～4。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(33-70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望产物(S)-3-(2'-氰基联苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)丙酸(11mg)。
化合物L LC/MS B：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.81min，ESI 509.3(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.44(s,1H),8.26(d,J＝8.0Hz,1H),7.87-7.85(m,2H),7.78-7.75(m,1H),7.72(d,J＝8.1Hz,1H),7.64-7.47(m,7H),5.77(dd,J＝10.4,6.0Hz,1H),5.47(t,J＝7.1Hz,1H),3.07-2.72(m,2H),2.09-1.88(m,2H),1.53-1.28(m,1H),0.96-0.92(m,6H)。
制备化合物M
步骤1：(S)-3-(2'-氟-6'-甲氧基联苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000911
在100℃下在微波中在N2气氛下将(S)-3-(3-溴苯基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(120mg，0.24mmol)、2-氟-6-甲氧基苯基硼酸(62mg，0.36mmol)、Pd(dppf)Cl2(18mg，0.024mmol)和K2CO3(100mg，0.72mmol)在1,4-二噁烷(3mL)和H2O(0.5mL)中的混合物搅拌1小时。添加水(15mL)，并且用EtOAc(20mL×3)萃取溶液。在真空中浓缩合并的有机相。通过硅胶柱(石油醚:EtOAc1:2)纯化所得残余物，得到呈无色油状物的期望产物(S)-3-(2'-氟-6'-甲氧基联苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(100mg)。收率76％(100％纯度，UV＝214nm，ESI 546(M+H)+)。
步骤2：(S)-3-(2'-氟-6'-甲氧基联苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440000912
在室温下用含LiOH-H2O(23mg，0.54mmol)的THF(10mL)和H2O(0.5mL)将(S)-3-(2'-氟-6'-甲氧基联苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(100mg，0.18mmol)处理16小时。用HCl(1M)酸化混合物直至pH＝5。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC B(30～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的产物(S)-3-(2'-氟-6'-甲氧基联苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)丙酸(40mg)。
化合物M LC/MS B：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.86min，ESI 532(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.45(s,1H),8.26(dd,J＝8.1,1.1Hz,1H),7.93-7.79(m,1H),7.72(d,J＝8.0Hz,1H),7.63-7.55(m,1H),7.44-7.25(m,5H),6.92(d,J＝8.4Hz,1H),6.81(t,J＝8.6Hz,1H),5.77(dd,J＝10.1,6.4Hz,1H),5.47-5.32(m,1H),3.79(s,3H),2.95-2.71(m,2H),2.13-1.85(m,2H),1.58-1.33(m,1H),0.94-0.92(m,6H)。
制备化合物M1
步骤1：(S)-3-(3-溴苯基)-3-(叔丁氧羰基氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000921
在0℃下向(S)-3-氨基-3-(3-溴苯基)丙酸甲酯(6g，23mmol)和三乙胺(9.65mL，69mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(5g，23mmol)并且在20℃下搅拌反应物16小时。添加水并且用DCM(70mL×2)萃取溶液。有机相用盐水洗涤，经Na2SO4干燥。过滤混合物并且在真空中浓缩滤液。通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝10:1)纯化残余物，得到呈白色固体的期望产物(S)-3-(3-溴苯基)-3-(叔丁氧羰基氨基)丙酸甲酯(7g)。收率84％(92％纯度，UV＝214nm，ESI 258(MH-Boc)+)。
步骤2：(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-(哌啶-1-基)苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000931
在N2下在120℃将(S)-3-(3-溴苯基)-3-(叔丁氧羰基氨基)丙酸甲酯(300mg，0.84mmol)、哌啶(143mg，1.68mmol)、Cs2CO3(822mg，2.52mmol)、Pd(OAC)2(19mg，0.084mmol)和XPhos(81mg，0.17mmol)在甲苯(4mL)中的混合物搅拌16小时。混合物经硅藻土过滤，并且在真空中浓缩滤液。通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝2:1)纯化残余物，得到(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-(哌啶-1-基)苯基)丙酸甲酯(200mg)。收率66％(92％纯度，UV＝214nm，ESI263(MH-Boc)+)。
步骤3：(S)-3-氨基-3-(3-(哌啶-1-基)苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000932
在室温下用含HCl(1mL)的二噁烷(5mL)将(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-(哌啶-1-基)苯基)丙酸甲酯(200mg，0.55mmol)处理1小时。在真空中移除溶剂以提供呈黄色油状物的粗产物(S)-3-氨基-3-(3-(哌啶-1-基)苯基)丙酸甲酯(145mg)。收率100％(98％纯度，UV＝254nm，ESI 263(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤4：(S)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)-3-(3-(哌啶-1-基)苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000933
在室温下将(S)-3-氨基-3-(3-(哌啶-1-基)苯基)丙酸甲酯(145mg，0.55mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酸(144mg，0.55mmol)、EDCI(159mg，0.83mmol)、HOBt(112mg，0.83mmol)和DIPEA(214mg，1.66mmol)在DMF(10mL)中的混合物搅拌4小时。将混合物倒入10mL的水中并且用DCM(30mL×3)萃取溶液。有机层用盐水洗涤并且经Na2SO4干燥，过滤。在真空中浓缩滤液。通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝1:1)纯化残余物以提供呈浅橙色油状物的期望产物(S)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)-3-(3-(哌啶-1-基)苯基)丙酸甲酯(224mg)。收率80％(95％纯度，UV＝254nm，ESI 505(M+H)+)。
步骤5：(S)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)-3-(3-(哌啶-1-基)苯基)丙酸
Figure BDA0002782961440000941
在室温下用含LiOH(1M在H2O中，0.6mL)的THF(2mL)将(S)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)-3-(3-(哌啶-1-基)苯基)丙酸甲酯(224mg，0.44mmol)处理2小时。用1M HCl将混合物调节至pH＝5～6。在真空中移除溶剂，并且通过制备型HPLC A(30-70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望产物(S)-3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)-3-(3-(哌啶-1-基)苯基)丙酸(44mg)。
化合物M1：LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.62min，ESI 491(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.43(s,1H),8.26(d,J＝6.8Hz,1H),7.85(dd,J＝11.2,4.2Hz,1H),7.71(d,J＝8.1Hz,1H),7.58(t,J＝7.5Hz,1H),7.21(t,J＝7.9Hz,1H),6.99(s,1H),6.92-6.81(m,2H),5.75(dd,J＝10.1,6.3Hz,1H),5.29(t,J＝7.4Hz,1H),3.20-3.11(m,4H),2.75-2.79(m,2H),1.98-2.03(m,,2H),1.78-1.67(m,4H),1.60-1.62(m,2H),1.50-1.37(m,1H),0.99-0.91(m,6H)。
制备化合物M2和M2a
步骤41：3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(2-邻甲苯基吡啶-4-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000951
在100℃下在微波中在N2气氛下将3-(2-溴吡啶-4-基)-3-(叔丁氧羰基氨基)丙酸甲酯(600mg，1.71mmol)、邻甲苯基硼酸(267mg，1.97mmol)、Pd(dppf)Cl2(63mg，0.086mmol)和K2CO3(692mg，5.13mmol)在1,4-二噁烷(4mL)和H2O(0.5mL)中的混合物搅拌1.5小时。经硅藻土过滤，并且在减压下浓缩滤液得到残余物，其通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 1:3)纯化，得到呈无色油状物的期望产物3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(2-邻甲苯基吡啶-4-基)丙酸甲酯(500mg)。收率72％(74％纯度，UV＝214nm，ESI 371(M+H)+)。
步骤2：3-氨基-3-(2-邻甲苯基吡啶-4-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000952
向3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(2-邻甲苯基吡啶-4-基)丙酸甲酯(500mg，1.35mmol)在DCM(6mL)中的溶液中添加含HCl的1,4-二噁烷(4M，2mL)，并且在室温下搅拌溶液4小时。在真空中移除溶剂，得到呈黄色固体的粗产物3-氨基-3-(2-邻甲苯基吡啶-4-基)丙酸甲酯盐酸盐(400mg)。收率99％(83％纯度，UV＝214nm，ESI 271(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤3：3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)-3-(2-邻甲苯基吡啶-4-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440000961
在室温下将(S)-4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(110mg，0.53mmol)、3-氨基-3-(2-邻甲苯基吡啶-4-基)丙酸甲酯盐酸盐(173mg，0.64mmol)、HOBt(87mg，0.64mmol)、EDCI(123mg，0.64mmol)和DIEA(273mg，2.12mmol)在DCM(20mL)中的混合物搅拌16小时。将混合物倒入水中并且用EtOAc(20mL×2)萃取溶液，合并的有机层经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液得到残余物，其通过快速柱层析法(0％～80％EtOAc/石油醚)纯化，获得呈无色油状物的期望产物3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)-3-(2-邻甲苯基吡啶-4-基)丙酸甲酯(200mg)。收率82％(91％纯度，UV＝214nm，ESI 462(M+H)+)。
步骤4：3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)-3-(2-邻甲苯基吡啶-4-基)丙酸
Figure BDA0002782961440000971
在室温下用含LiOH-H2O(54mg，1.29mmol)的THF(10mL)和H2O(1mL)将3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)-3-(2-邻甲苯基吡啶-4-基)丙酸甲酯(200mg，0.43mmol)处理16小时。用HCl(1M)酸化混合物直至pH＝5。在减压下浓缩溶液得到残余物，其通过制备型HPLC A纯化，得到呈白色固体的化合物M2(90mg)和M2a(50mg)。
化合物M2 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.53min，ESI 448(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.57(d,J＝5.2Hz,1H),7.75(dd,J＝6.9,1.6Hz,1H),7.55-7.27(m,7H),6.57(d,J＝8.8Hz,1H),6.42(t,J＝6.3Hz,1H),5.78(t,J＝8.1Hz,1H),5.35(t,J＝7.0Hz,1H),2.97-2.79(m,2H),2.30(s,3H),1.89(t,J＝7.6Hz,2H),1.37-1.35(m,1H),0.93-0.90(m,6H)。
步骤5：化合物M2a
化合物M2(50mg)通过制备型手性SFC E分离成呈白色固体的M2a(6mg)和M2b(12mg)。
M2a LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.49min，ESI 448(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.57(d,J＝5.1Hz,1H),7.75(dd,J＝7.0,1.8Hz,1H),7.60-7.25(m,7H),6.57(d,J＝9.0Hz,1H),6.42(m,1H),5.78(t,J＝8.1Hz,1H),5.35(t,J＝7.1Hz,1H),3.00-2.75(m,2H),1.89(t,J＝7.6Hz,2H),1.37-1.35(m,1H),0.93-0.90(m,6H)。
制备化合物N1和N2
步骤1：3-环丁氧基苯甲醛
Figure BDA0002782961440000981
在微波中在120℃下在N2气氛下将3-羟基苯甲醛(488mg，4.0mmol)、溴环丁烷(1.08mg，8.0mmol)和K2CO3(1.11mg，8.0mmol)、NaI(120mg，0.8mmol)在DMF(20mL)中的溶液搅拌3小时。用EtOAc(12mL)和水(6mL)稀释混合物。分离有机相并且经Na2SO4干燥。过滤混合物并且在减压下浓缩滤液得到残余物，其通过硅胶柱(5～10％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈浅橙色油状物的期望产物3-环丁氧基苯甲醛(550mg)。收率61％(90％纯度，UV＝214nm，ESI177(M+H)+)。
步骤2：3-氨基-3-(3-环丁氧基苯基)丙酸
Figure BDA0002782961440000982
在95℃下在密封管中将3-环丁氧基苯甲醛(550mg，3.12mmol)、丙二酸(487mg，4.68mmol)、NH4OAc(481mg，6.24mmol)在EtOH(12mL)中的混合物搅拌3小时。在真空中浓缩混合物并且通过硅胶柱(10～50％MeOH/DCM)纯化，得到呈无色油状物的期望产物3-氨基-3-(3-环丁氧基苯基)丙酸(257mg)。收率35％(100％纯度，UV＝254nm，ESI 236(M+H)+)。
步骤3：3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-环丁氧基苯基)丙酸
Figure BDA0002782961440000991
在室温下向3-氨基-3-(3-环丁氧基苯基)丙酸(257mg，1.09mmol)和TEA(165mg，1.63mmol)在DCM(12mL)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(250mg，1.15mmol)。在室温下搅拌溶液1小时。在真空中移除溶剂并且通过硅胶柱(5％～10％EtOAc/石油醚)纯化残余物以提供呈无色油状物的期望产物3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-环丁氧基苯基)丙酸(361mg)。收率98％(91％纯度，UV＝214nm，ESI280(MH-Bu)+)。
步骤4：3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-环丁氧基苯基)丙酸苄酯
Figure BDA0002782961440000992
在室温下将3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-环丁氧基苯基)丙酸(360mg，1.07mmol)、BnBr(183mg，1.07mmol)和K2CO3(298mg，2.14mmol)在DMF(10mL)中的溶液搅拌过夜。用DCM(18mL)和水(5mL)稀释混合物。分离有机相并且经Na2SO4干燥。过滤混合物并且浓缩滤液，得到棕色油状物，其通过硅胶快速(5％～10％EtOAc/石油醚)纯化以提供呈无色油状物的期望产物3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-环丁氧基苯基)丙酸苄酯(386mg)。收率85％(91％纯度，UV＝214nm，ESI 326(MH-Boc)+)。
步骤5：3-氨基-3-(3-环丁氧基苯基)丙酸苄酯
Figure BDA0002782961440001001
在室温下用含TFA(1mL)的DCM(3mL)将3-氨基-3-(3-环丁氧基苯基)丙酸苄酯(340mg，0.8mmol)处理0.5小时。在真空中移除溶剂以提供呈黄色油状物的粗产物3-氨基-3-(3-环丁氧基苯基)丙酸苄酯(218mg)。收率84％(97％纯度，UV＝254nm，ESI 326(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤6：3-(3-环丁氧基苯基)-3-((S)-4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸苄酯
Figure BDA0002782961440001002
在室温下将3-氨基-3-(3-环丁氧基苯基)丙酸苄酯(109mg，0.33mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(77mg，0.36mmol)、EDCI(96mg，0.50mmol)、HOBt(68mg，0.50mmol)和DIEA(86mg，0.67mmol)在DCM(6mL)中的混合物搅拌4小时。混合物用DCM(10mL)和5mL的水稀释。分离有机相并且经Na2SO4干燥。过滤混合物，并且在减压下浓缩滤液得到橙色油状物，其通过硅胶柱(5～30％EtOAc/石油醚)纯化以提供呈无色油状物的期望产物3-(3-环丁氧基苯基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸苄酯(151mg)。收率87％(81％纯度，UV＝254nm，ESI 517(M+H)+)。
步骤7：化合物N1和N2
Figure BDA0002782961440001011
在室温下在H2气氛下将含3-(3-环丁氧基苯基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸苄酯(150mg，0.29mmol)和Pd/C(10％，30mg)的EtOAc(18mL)搅拌过夜。混合物通过硅藻土垫过滤并且在减压下浓缩滤液。通过制备型HPLC B(30-70％MeCN)纯化残余物以提供呈白色固体的期望化合物N1(15mg)和N2(10mg)。
化合物N1 LC/MS B：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝9.01min，ESI 45127(M+H)+。
1H-NMR(500MHz,MeOD)δ7.74(dd,J＝7.0,1.5Hz,1H),7.52-7.48(m,1H),7.16(t,J＝7.5Hz,1H),6.84(d,J＝6.0Hz,1H),6.74(m,1H),6.68(dd,J＝7.0,1.5Hz,1H),6.55(dd,J＝9.5,0.5Hz,1H),6.41-6.39(m,1H),5.78(t,J＝8.0Hz,1H),5.30(t,J＝7.0Hz,1H),4.62(t,J＝7.5Hz,1H),2.79(d,J＝7.5Hz,2H),2.44-2.40(m,2H),2.09-2.04(m,2H),2.09-2.04(m,2H),1.95-1.92(m,2H),1.82(m,1H),1.70(m,1H),1.48-1.44(m,1H),1.03-0.96(m,6H)。
化合物N1 LC/MS B：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝9.26min，ESI 45127(M+H)+。
1H-NMR(500MHz,MeOD)δ7.74(dd,J＝7.0,1.5Hz,1H),7.54-7.51(m,1H),7.23(t,J＝7.5Hz,1H),6.91(s,1H),6.83(s,1H),6.74(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),6.68(d,J＝9.0Hz,1H),6.41-6.39(m,1H),5.76(m,1H),5.28(t,J＝8.0Hz,1H),4.69(t,J＝7.0Hz,1H),2.78(m,2H),2.50-2.45(m,2H),2.15-2.11(m,2H),1.88-1.84(m,3H),1.76-1.74(m,H),1.36-1.34(m,1H),1.03-0.96(m,6H)。
制备化合物O2和O4
步骤1：(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)(dioxaborolan-2-yl)苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001021
将(S)-3-(3-溴苯基)-3-(叔丁氧羰基氨基)丙酸甲酯(537mg，1.5mmol)、双(频哪醇合)二硼(765mg，3.0mmol)和KOAc(442mg，4.5mmol)在二噁烷(20mL)中的溶液用鼓泡氮气脱气，添加PdCl2(dppf)(54mg，0.037mmol)并且在80℃下搅拌反应物3小时。混合物用EtOAc(12mL)稀释并且通过硅藻土垫过滤。在减压下浓缩滤液，得到棕色油状物，其通过硅胶柱(5～10％EtOA/石油醚)纯化，得到呈白色固体的(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)丙酸甲酯(565mg)。收率93％(92％纯度，UV＝214nm，ESI306(MH-Boc)+)。
步骤2：(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001022
在N2气氛下在微波中85℃下将(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)丙酸甲酯(405mg，1.0mmol)、4-溴-3,5-二甲基-1H-吡唑(350mg，2.0mmol)、PEPPSI-IPr(34mg，0.05mmol)和K2CO3(276mg，2.0mmol)在二噁烷(20mL)和H2O(4mL)中的混合物搅拌4小时。添加水(8mL)，并且用EtOAc(20mL×3)萃取溶液。在真空中浓缩合并的有机相并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝2:3)纯化残余物，得到呈浅橙色油状物的期望产物(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)丙酸甲酯(240mg)。收率64％(100％纯度，UV＝254nm，ESI 374(M+H)+)。
步骤3：(S)-3-氨基-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001031
在室温下将(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)丙酸甲酯(112mg，0.3mmol)用含TFA(0.5mL)的DCM(2mL)处理1小时。在真空中移除溶剂以提供呈黄色油状物的粗产物(S)-3-氨基-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)丙酸甲酯(79mg)。收率96％(98％纯度，UV＝254nm，ESI 274(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤4：(S)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3-((S)-4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001032
将(S)-3-氨基-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)丙酸甲酯(78mg，0.28mmol)、4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(63mg，0.30mmol)、EDCI(82mg，0.43mmol)、HOBt(58mg，0.43mmol)和DIEA(110mg，0.85mmol)在DCM(6mL)中的混合物在室温搅拌4小时。用DCM(10mL)和5mL水稀释混合物。有机相经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩滤液，得到橙色油状物，其通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝10:1～4:1)纯化，得到呈浅橙色油状物的期望化合物O1(51mg)和O2(70mg)。收率91％(95％纯度，UV＝254nm，ESI 465(M+H)+)。
步骤5：化合物O2
Figure BDA0002782961440001041
在室温用含LiOH(1M在H2O中，0.6mL)的THF(2mL)处理O1(50mg，0.11mmol)过夜。混合物用1M HCl调节至pH＝5～6，并且在真空中移除溶剂。通过制备型HPLC A(30-64％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物O1(37mg)和O2(15mg)。
化合物O2 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝7.27min，ESI 451(M+H)+。
1H-NMR(500MHz,MeOD)δ7.75(dd,J＝7.0,1.5Hz,1H),7.50-7.53(m,1H),7.39-7.42(m,1H),7.31-7.30(m,2H),7.20(d,J＝7.0Hz,1H),6.56(d,J＝9.0Hz,1H),6.44-6.41(m,1H),5.75(dd,J＝7.0,9.5Hz,1H),5.35(t,J＝7.0Hz,1H),2.87-2.77(m,2H),2.27(s,6H),1.88-1.84(m,2H),1.37-1.32(m,1H),0.92-0.89(m,6H)。
步骤6：化合物O4
Figure BDA0002782961440001051
在室温下用含LiOH(1M在H2O中，0.6mL)的THF(2mL)处理化合物O2(70mg，0.15mmol)过夜。用1M HCl将混合物调节至pH＝5～6，并且在真空中移除溶剂。通过制备型HPLC A(30-64％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物O3(35mg)和O4(26mg)。
化合物O4 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝7.26min，ESI 451(M+H)+。
1H-NMR(500MHz,MeOD)δ7.75(dd,J＝7.0,1.5Hz,1H),7.50-7.53(m,1H),7.38-7.42(m,1H),7.31-7.30(m,2H),7.21(d,J＝6.5Hz,1H),6.56(d,J＝9.0Hz,1H),6.44-6.41(m,1H),5.75(dd,J＝7.0,9.5Hz,1H),5.35(t,J＝7.0Hz,1H),2.88-2.78(m,2H),2.27(s,6H),1.88-1.84(m,2H),1.37-1.32(m,1H),0.92-0.89(m,6H)。
制备化合物P2
步骤1：6-羟基-2'-甲基联苯-3-甲醛
Figure BDA0002782961440001052
在N2气氛下在微波中110℃下将3-溴-4-羟基苯甲醛(2g，9.9mmol)、邻甲苯基硼酸(2g，15mmol)、PdCl2(dppf)(364mmg，0.5mmol)和K2CO3(4.1g，29.8mmol)在9mL 1,4-二噁烷和0.9mLH2O中的混合物搅拌1小时。经硅藻土过滤混合物。在真空中移除滤液，并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝3:1)纯化残余物，得到呈棕色固体的期望产物6-羟基-2'-甲基联苯-3-甲醛(1.5g)。收率71％(62％纯度，UV＝214nm，ESI 213(M+H)+)。
步骤2：三氟甲磺酸5-甲酰基-2'-甲基联苯-2-基酯
Figure BDA0002782961440001061
在0℃下向6-羟基-2'-甲基联苯-3-甲醛(600mg，2.83mmol)在20mL吡啶中的溶液中添加三氟甲磺酸酐(957mg，3.39mmol)。使溶液升温至室温并且在室温下搅拌16小时。在真空中移除溶剂，并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝5:1)纯化残余物，得到呈无色油状物的期望产物三氟甲磺酸5-甲酰基-2'-甲基联苯-2-基酯(650mg)，收率67％(89％纯度，UV＝214nm，ESI 345(M+H)+)。
步骤3：6-环丙基-2'-甲基联苯-3-甲醛
Figure BDA0002782961440001062
在100℃下将三氟甲磺酸5-甲酰基-2'-甲基联苯-2-基酯(650mg，1.89mmol)、环丙基硼酸(811mg，9.44)、Pd(PPh3)2Cl2(133mg，0.19mmol)和KF(329mg，5.66mmol)在5mL甲苯和0.5mL H2O中的混合物搅拌16小时。经硅藻土过滤混合物。在真空中移除滤液并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝5:1)纯化残余物，得到呈黄色油状物的期望产物6-环丙基-2'-甲基联苯-3-甲醛(380mg)。收率85％(87％纯度，UV＝214nm，ESI 237(M+H)+)。
步骤4：3-氨基-3-(6-环丙基-2'-甲基联苯-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440001071
在85℃下将6-环丙基-2'-甲基联苯-3-甲醛(350mg，1.48mmol)、丙二酸(185mg，1.78mmol)和乙酸铵(571mg，7.41mmol)在EtOH(5mL)中的混合物搅拌16小时。过滤混合物并且在减压下浓缩滤液，得到粗产物3-氨基-3-(6-环丙基-2'-甲基联苯-3-基)丙酸(400mg)。收率91％(46％纯度，UV＝214nm，ESI 296(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤5：3-氨基-3-(6-环丙基-2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001072
在0℃下向3-氨基-3-(6-环丙基-2'-甲基联苯-3-基)丙酸(400mg，1.74mmol)在20mL无水甲醇中的溶液中逐滴添加二氯化硫(sulfurous dichloride)(25mL)。将溶液加热至75℃，并且在75℃下搅拌2小时。在真空中移除溶剂，得到粗产物3-氨基-3-(6-环丙基-2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(400mg)。收率85％(42％纯度，UV＝214nm，ESI 310(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤6：3-(6-环丙基-2'-甲基联苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001081
在室温下将3-氨基-3-(6-环丙基-2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(400mg，1.15mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(290mg，1.38mmol)、EDCI(483mg，2.31mmol)、HOBt(234mg，1.73mmol)和DIEA(598mg，4.62mmol)在25mL DCM中的溶液搅拌16小时。在真空中移除溶剂并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝2:1)纯化残余物，得到呈棕色油状物的期望化合物P1(180mg)和P2(140mg)。(ESI 501(M+H)+)。
步骤7：3-(6-环丙基-2'-甲基联苯-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440001082
在室温下用含LiOH-H2O(35mg，0.84mmol)的6mL THF和2mL H2O处理P2(140mg，0.28mmol)3小时。用TFA将溶液调节至pH＝3～4。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(33-70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的产物3-(6-环丙基-2'-甲基联苯-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸(47mg)。
化合物P2 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.69min，ESI 487.2(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.76(dd,J＝9.0,3.7Hz,1H),7.52-7.49(m,1H),7.32-7.19(m,4H),7.15(dd,J＝10.2,7.0Hz,1H),7.09-7.03(m,1H),6.88(d,J＝8.1Hz,1H),6.55(d,J＝9.1Hz,1H),6.41(t,J＝6.8Hz,1H),5.76-5.72(m,1H),5.30(t,J＝7.2Hz,1H),2.86-2.68(m,2H),2.11(d,J＝6.3Hz,3H),1.94-1.77(m,2H),1.60-1.46(m,1H),1.41-1.24(m,1H),0.92-0.86(m,6H),0.83-0.71(m,2H),0.69-0.59(m,2H)。
制备化合物Q2
步骤1：3-氨基-3-(3-溴-4-甲基苯基)丙酸
Figure BDA0002782961440001091
向3-溴-4-甲基苯甲醛(6.0g，30.1mmol)在EtOH(50mL)中的溶液中添加丙二酸(3.1g，30.1mmol)和NH4OAc(4.6g，60.2mmol)。将混合物加热至80℃并且搅拌16小时。在减压下浓缩混合物，得到呈白色固体的粗产物3-氨基-3-(3-溴-4-甲基苯基)丙酸(7.4g)，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。(11％纯度，UV＝214nm，ESI 258(M+H)+)。
步骤2：3-氨基-3-(3-溴-4-甲基苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001092
在0℃下向3-氨基-3-(3-溴-4-甲基苯基)丙酸(7.4g，28.8mmol)在MeOH(50mL)中的溶液中逐滴添加SOCl2(5mL，20.6mmol)，并且在80℃下搅拌反应混合物2小时。添加水(50mL)并且用EtOAc(50mL×3)萃取溶液。合并的有机相用NaHCO3饱和水溶液(20mL×2)和盐水(20mL)洗涤。有机相经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩，得到残余物，其通过硅胶柱(EtOAc)纯化，得到呈无色油状物的期望产物3-氨基-3-(3-溴-4-甲基苯基)丙酸甲酯(2.5g)。收率33％，两个步骤(90％纯度，UV＝214nm，ESI 272(M+H)+)。
步骤3：3-氨基-3-(2',6-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001101
在N2气氛下在微波中将3-氨基-3-(3-溴-4-甲基苯基)丙酸甲酯(350mg，1.29mmol)和邻甲苯基硼酸(263mg，1.94mmol)、PdCl2(dppf)(94mg，0.13mmol)和K2CO3(535mg，3.87mmol)在二噁烷(3mL)和H2O(0.6mL)中的混合物加热至110℃维持1小时。添加水(10mL)并且用EtOAc(20mL×3)萃取溶液。在减压下浓缩合并的有机相得到残余物，其通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 1:1)纯化，得到呈无色油状物的期望产物3-氨基-3-(2',6-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸甲酯(280mg)。收率77％(70％纯度，UV＝254nm，ESI 284(M+H)+)。
步骤4：3-(2',6-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001102
在室温下将3-氨基-3-(2',6-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸甲酯(130mg，0.46mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(96mg，0.46mmol)、HOBt(74mg，0.55mmol)、EDCI(105mg，0.55mmol)和DIEA(178mg，1.38mmol)在DCM(10mL)中的混合物搅拌16小时。在减压下浓缩混合物，得到残余物，其通过制备型TLC(石油醚:EtOAc 1:1)纯化，获得呈无色油状物的期望产物3-(2',6-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(150mg)。收率63％(86.83％纯度，UV＝214nm，ESI 475(M+H)+)。
步骤5：3-(2',6-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440001111
在室温下将3-(2',6-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(150mg，0.32mmol)用含LiOH-H2O(67mg，1.60mmol)的THF(10mL)和H2O(2mL)处理0.5小时。用HCl(1M)将混合物酸化至pH＝5～6。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物Q1(24mg)和Q2(20mg)。
化合物Q2 LC/MS B：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.91min，ESI 461(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD-d4)δ7.80-7.72(m,1H),7.52-7.49(m,1H),7.30-7.19(m,5H),7.08-7.04(m,2H),6.55(d,J＝9.1Hz,1H),6.41(t,J＝10.0Hz,1H),5.77-5.72(m,1H),5.31(t,J＝7.2Hz,1H),2.84-2.70(m,2H),2.07-1.98(m,6H),1.88-1.75(m,2H),1.37-1.32(m,1H),0.90-0.88(m,6H)。
制备化合物R1和R2
步骤1：3-氨基-3-(3-叔丁基苯基)丙酸
Figure BDA0002782961440001121
在80℃下将3-叔丁基苯甲醛(500mg，3.08mmol)、丙二酸(285mg，3.7mmol)和乙酸铵(962mg，9.25mmol)在EtOH(15mL)中的混合物搅拌16小时。过滤混合物，并且在减压下浓缩滤液。通过制备型HPLC B(20～50％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望产物3-氨基-3-(3-叔丁基苯基)丙酸(65mg)。收率9％(90％纯度，UV＝214nm，ESI 222(M+H)+)。
步骤2：3-(3-叔丁基苯基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440001122
在室温下将3-氨基-3-(3-叔丁基苯基)丙酸(59mg，0.27mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(70mg，0.33mmol)、EDCI(128mg，0.67mmol)、HOBt(46mg，0.34mmol)和DIEA(103mg，0.8mmol)在DCM(15mL)中的溶液搅拌1小时。将混合物倒入30mL水中，并且溶液用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液，并且通过制备型HPLC A(30～65％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望化合物R1(19mg)和R2(13mg)。
化合物R1 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.58min，ESI 413(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.73(dd,J＝6.9,1.7Hz,1H),7.50-7.46(m,1H),7.33(s,1H),7.27(d,J＝8.0Hz,1H),7.21(t,J＝7.7Hz,1H),7.10(d,J＝7.5Hz,1H),6.54(d,J＝9.1Hz,1H),6.39-6.36(m,1H),5.79(dd,J＝9.1,7.0Hz,1H),5.34(t,J＝7.3Hz,1H),2.79(dd,J＝11.8,5.1Hz,2H),1.99-1.87(m,2H),1.54-1.37(m,1H),1.27(s,9H),1.03-0.89(m,6H)。
化合物R2 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.63min，ESI 413(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.76(dd,J＝7.0,1.8Hz,1H),7.52-7.50(m,1H),7.42(s,1H),7.33(d,J＝7.9Hz,1H),7.28(t,J＝7.7Hz,1H),7.17(d,J＝7.5Hz,1H),6.57(d,J＝8.4Hz,1H),6.43-6.41(m,1H),5.77(dd,J＝9.2,6.9Hz,1H),5.33(t,J＝7.3Hz,1H),2.88-2.69(m,2H),1.91-1.79(m,2H),1.41-1.35(m,1H),1.35(s,9H),0.98-0.91(m,6H)。
制备化合物S1和S2
步骤1：3-氨基-3-(3-苯氧基苯基)丙酸
Figure BDA0002782961440001131
在80℃下将3-苯氧基苯甲醛(1g，5mmol)、丙二酸(467mg，6.1mmol)和乙酸铵(1.6g，15.1mmol)在EtOH(10mL)中的混合物搅拌16小时。过滤混合物并且在减压下浓缩。通过制备型HPLC B(20～50％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望产物3-氨基-3-(3-苯氧基苯基)丙酸(300mg)。收率23％(90％纯度,UV＝214nm,ESI 258(M+H)+)。
步骤2：3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)-3-(3-苯氧基苯基)丙酸
Figure BDA0002782961440001141
在室温下将3-氨基-3-(3-苯氧基苯基)丙酸(49mg，0.19mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(50mg，0.24mmol)、EDCI(92mg，0.48mmol)、HOBt(48mg，0.36mmol)和DIEA(93mg，0.72mmol)在DCM(10mL)中的溶液搅拌1小时。将混合物倒入30mL水中，并且用EtOAc(30mL×2)萃取溶液。合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液，并且残余物通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化，得到呈白色固体的期望化合物S1(6.6mg)和S2(1mg)。
化合物S1 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.58min，ESI 449(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.69(dd,J＝7.0,1.6Hz,1H),7.47-7.45(m,1H),7.34(t,J＝8.0Hz,2H),7.27(t,J＝7.9Hz,1H),7.13-7.04(m,2H),6.99-6.91(m,3H),6.82(dd,J＝8.1,1.7Hz,1H),6.53(d,J＝8.7Hz,1H),6.37(t,J＝6.8Hz,1H),5.76(t,J＝8.1Hz,1H),5.31(t,J＝7.2Hz,1H),2.90-2.65(m,2H),1.93(t,J＝7.6Hz,2H),1.46-1.41(m,1H),0.97-0.93(m,6H)。
化合物S2 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.84min，ESI 449(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.61(dd,J＝7.0,1.8Hz,1H),7.41-7.37(m,1H),7.27-7.21(m,3H),7.04-6.98(m,2H),6.94-6.84(m,3H),6.79(dd,J＝8.2,1.7Hz,1H),6.44(d,J＝9.1Hz,1H),6.30(t,J＝6.9,1H),5.62(dd,J＝9.6,6.6Hz,1H),5.17(t,J＝7.3Hz,1H),2.74-2.32(m,2H),1.77-1.55(m,2H),1.33-1.03(m,1H),0.80-0.77(m,6H)。
制备化合物T2
步骤1：33-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440001151
在80℃下将5-溴烟醛(3g，16.1mmol)、丙二酸(1.7g，16.1mmol)和乙酸铵(2.6g，33.9mmol)在EtOH(10mL)中的混合物搅拌3小时。过滤混合物并且在减压下浓缩滤液，得到呈白色固体的粗产物3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸(1.7g)。收率43％(UV＝214nm，ESI245(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤2：3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001152
在0℃下向3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸(1.7g，6.9mmol)在20mL甲醇中的溶液中添加SOCl2(3mL)。在室温下搅拌溶液15小时。在真空中移除溶剂，并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝1:2)纯化残余物，得到呈无色油状物的期望产物3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸甲酯(1.2g)，收率67％(94％纯度，UV＝214nm，ESI 259(M+H)+)。
步骤3：3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001161
在N2下在微波中110℃下将3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸甲酯(200mg，0.77mmol)、2,6-二甲基苯基硼酸(174mg，1.16mmol)、PdCl2(dppf)(28mg，0.039mmol)和K2CO3(320mg，2.32mmol)在2mL1,4-二噁烷和0.1mL H2O中的混合物搅拌1小时。经硅藻土过滤混合物。在真空中移除滤液，并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝1:2)纯化残余物，得到呈无色油状物的期望产物3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(200mg)。收率91％(90％纯度，UV＝214nm，ESI 285(M+H)+)。
步骤4：3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001162
在室温下将3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(100mg，0.35mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(88mg，0.42mmol)、EDCI(135mg，0.7mmol)、HOBt(71mg，0.53mmol)和DIEA(136mg，1.06mmol)在DCM(15mL)中的混合物搅拌1小时。在减压下移除溶剂，并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝1:1)纯化残余物，得到期望产物3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(100mg)。收率60％(97％纯度，UV＝214nm，ESI 476(M+H)+)。
步骤5：3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440001171
在室温下将3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(100mg，0.21mmol)用含LiOH-H2O(26mg，0.63mmol)的6mL THF和2mL H2O处理1小时。用TFA将溶液调节至pH＝3～4。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(33-70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物T1(43mg)和T2(38mg)。
化合物T1 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.57min，ESI 462(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.53(d,J＝2.1Hz,1H),8.18(d,J＝1.9Hz,1H),7.70(dd,J＝7.0,1.6Hz,1H),7.53(t,J＝1.9Hz,1H),7.43-7.40(m,1H),7.20(t,J＝7.6Hz,1H),7.15-7.10(m,2H),6.44(d,J＝9.1Hz,1H),5.79-5.65(m,1H),5.42(t,J＝7.2Hz,1H),2.88(d,J＝7.2Hz,2H),1.98(s,3H),1.94(t,J＝7.4Hz,2H),1.87(s,3H),1.48-1.42(m,1H),0.98-0.95(m,6H)。
化合物T2 LC/MS A：99％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.59min，ESI 462(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.59(d,J＝2.1Hz,1H),8.26(d,J＝1.9Hz,1H),7.76(dd,J＝7.0,1.7Hz,1H),7.68(t,J＝2.0Hz,1H),7.53-7.50(m,1H),7.26-7.19(m,1H),7.23-7.15(m,2H),6.56(d,J＝8.4Hz,1H),6.43-6.40(m,1H),5.80-5.70(m,1H),5.38(t,J＝7.3Hz,1H),2.96-2.85(m,2H),2.02(s,6H),1.91-1.75(m,2H),1.35-1.30(m,1H),0.91-0.88(m,6H)。
制备化合物T2a和T2b
T2混合物通过制备型手性SFC D进一步分离，得到呈白色固体的非对映异构化合物T2a(8mg)和T2b(7.5mg)。
化合物T2a LC/MS A：99％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.56min，ESI 462(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.59(d,J＝2.0Hz,1H),8.26(d,J＝1.8Hz,1H),7.76(dd,J＝6.9,1.7Hz,1H),7.68(t,J＝2.0Hz,1H),7.53-7.50(m 1H),7.26-7.19(m,1H),7.23-7.15(m,2H),6.56(d,J＝9.1Hz,1H),6.43-6.40(m,1H),5.75(t,J＝8.1Hz,1H),5.38(t,J＝7.3Hz,1H),2.97-2.86(m,2H),2.02(s,6H),1.83(t,J＝7.4Hz,2H),1.36-1.30(m,1H),0.91-0.88(m,6H)。
化合物T2b LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.49min，ESI 462(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.52(s,1H),8.18(s,1H),7.69(dd,J＝7.0,1.8Hz,1H),7.50(s,1H),7.43-7.39(m,1H),7.20(t,J＝7.6Hz,1H),7.15-7.09(m,2H),6.45(d,J＝9.1Hz,1H),6.36-6.33(m,1H),5.73(t,J＝8.0Hz,1H),5.42(t,J＝7.0Hz,1H),2.91(d,J＝7.1Hz,2H),1.97(s,3H),1.96-1.92(m,2H),1.87(s,3H),1.49-1.43(m,1H),0.98-0.95(m,6H)。
制备化合物U2
步骤1：2-溴-4,4,4-三氟丁酸
Figure BDA0002782961440001191
在0℃下向2-氨基-4,4,4-三氟丁酸(1.0g，6.4mmol)在HBr(40％水溶液，6mL)中的溶液中逐滴添加NaNO2(0.66g，9.6mmol)在H2O(4mL)中的溶液。在室温下搅拌反应混合物16小时。用EtOAc(20mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩滤液，得到呈橙色固体的粗产物2-溴-4,4,4-三氟丁酸(1g)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤2：4,4,4-三氟-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)丁酸
Figure BDA0002782961440001192
在30℃下在N2气氛下将2-溴-4,4,4-三氟丁酸(1g，4.5mmol)和(t-BuO)2Mg(1.02g，6mmol)在无水THF(20mL)中的混合物搅拌3小时，并且接着添加吡啶-2-醇(336mg，3mmol)和t-BuOK(340mg，3.06mmol)。在70℃下在N2下搅拌反应混合物16小时。将混合物冷却至室温并且用HCl(4M)酸化直至pH＝5。在减压下浓缩溶液，得到残余物。通过反相快速层析法(0％～60％MeOH/H2O(5％TFA))纯化以提供期望产物(4,4,4-三氟-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)丁酸(130mg)。收率23％(96％纯度，UV＝214nm，ESI 236(M+H)+)。
步骤3：3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4,4,4-三氟-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)丁酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001201
在室温下将(4,4,4-三氟-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)丁酸(130mg，0.55mmol)、3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(140mg，0.5mmol)、HOBt(81mg，0.6mmol)、EDCI(115mg，0.6mmol)和DIEA(258mg，2mmol)在DCM(10mL)中的混合物搅拌16小时。将混合物倒入水中并且用DCM(30mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩滤液以得到残余物，其通过快速柱层析法(0％～80％EtOAc/石油醚)纯化，得到期望产物3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4,4,4-三氟-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)丁酰氨基)丙酸甲酯(160mg)。收率64％(92％纯度，UV＝214nm，ESI 502(M+H)+)。
步骤4：3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4,4,4-三氟-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)丁酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440001202
在室温下将3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4,4,4-三氟-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)丁酰氨基)丙酸甲酯(160mg，0.32mmol)用含LiOH-H2O(40mg，0.96mmol)的THF(6mL)和H2O(1mL)处理16小时。用HCl(1M)酸化混合物直至pH＝5。在减压下浓缩混合物，得到残余物，其通过制备型HPLC B(30～70％MeCN)纯化，得到呈白色固体的化合物U1(34mg)和U2(12mg)。
化合物U2 LC/MS B：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.50min，ESI 488(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.58(d,J＝1.7Hz,1H),8.25(d,J＝1.6Hz,1H),7.73(d,J＝5.5Hz,1H),7.68(s,1H),7.59-7.51(m,1H),7.23-7.14(m,3H),6.58(d,J＝9.1Hz,1H),6.45(t,J＝6.4Hz,1H),5.71(d,J＝5.3Hz,1H),5.44(t,J＝7.1Hz,1H),3.15(m,1H),3.06-2.93(m,1H),2.88(d,J＝6.8Hz,2H),2.01(s,6H)。
制备化合物V2
步骤1：2-溴-3-环丙基丙酸
Figure BDA0002782961440001211
在0℃下向(2-氨基-3-环丙基丙酸(300mg，2.32mmol)在HBr(40％水溶液，4mL)中的溶液中逐滴添加NaNO2(321mg，4.65mmol)在H2O(4mL)中的溶液。在室温下搅拌反应混合物16小时。用EtOAc(30mL×2)萃取溶液，并且合并的有机层经Na2SO4干燥并且过滤。在真空中浓缩滤液以提供呈黄色油状物的粗产物2-溴-3-环丙基丙酸(447mg)。收率100％。粗产物直接用于下一步骤。
步骤2：3-环丙基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酸
Figure BDA0002782961440001212
向(2-溴-3-环丙基丙酸(740mg，3.85mmol)在无水THF(20mL)中的溶液中添加(t-BuO)2Mg(1.32g，7.71mmol)并且在N2气氛下在30℃下搅拌溶液1小时。随后添加吡啶-2-醇(366mg，3.85mmol)和t-BuOK(431mg，3.85mmol)，并且在70℃下在N2下搅拌反应混合物16小时。将混合物冷却至室温并且用HCl(4M)溶液酸化至pH＝5。在减压下浓缩溶剂，得到残余物，其通过反相快速层析法(0％～80％MeOH/H2O(5％NH4HCO3))纯化以提供呈白色固体的期望产物3-环丙基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酸(83mg)。收率10％(98％纯度，UV＝214nm，ESI 208(M+H)+)。
步骤3：3-(3-环丙基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001221
在室温下将3-环丙基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酸(83mg，0.40mmol)、3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(114mg，0.40mmol)、HATU(228mg，0.60mmol)和DIEA(155mg，1.20mmol)在DCM(10mL)中的混合物搅拌2小时。将混合物倒入10mL水中并且用DCM(30mL×3)萃取溶液。有机相经Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩滤液以提供黄色油状物，其通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝1:1)纯化以提供呈黄色油状物的期望产物3-(3-环丙基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(200mg)。收率88％(95％纯度，UV＝254nm，ESI 474(M+H)+)。
步骤4：3-((S)-3-环丙基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440001231
在室温下将3-(3-环丙基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(200mg，0.42mmol)用含LiOH(1M在H2O中，0.6mL)的THF(2mL)处理2小时。用1M HCl将混合物调节至pH＝5～6，并且在真空中移除溶剂。通过制备型HPLCB(30-70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望化合物V1(23.6mg)和V2(30.4mg)。
化合物V2 LC/MS A：98％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.52min，ESI 460(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.59(s,1H),8.24(s,1H),7.77(dd,J＝7.0,1.7Hz,1H),7.67(s,1H),7.51(t,J＝8.8,6.7,1.9Hz,1H),7.24-7.12(m,3H),6.55(d,J＝8.9Hz,1H),6.41(t,J＝6.8Hz,1H),5.62(t,J＝7.8Hz,1H),5.41(t,J＝7.3Hz,1H),3.00-2.83(m,2H),2.00(s,3H),1.99(s,3H),1.88-1.94(m,1H),1.84-1.76(m,1H),0.53(s,1H),0.33-0.35(m,1H),0.23-0.27(m,1H),0.02-0.04(m,2H)。
制备化合物W1和W2
步骤1：3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001241
在室温下将3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(100mg，0.35mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(94mg，0.42mmol)、EDCI(135mg，0.7mmol)、HOBt(71mg，0.53mmol)和DIEA(136mg，1.06mmol)在DCM(15mL)中的混合物搅拌1小时。在减压下移除溶剂，并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝1:1)纯化残余物，得到期望产物3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(100mg)。收率58％(96％纯度，UV＝214nm，ESI 490(M+H)+)。
步骤2：3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440001242
在室温下将3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(100mg，0.20mmol)用含LiOH-H2O(26mg，0.6mmol)的6mL THF和2mLH2O处理1小时。用TFA将溶液调节至pH＝3～4。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(33-70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物W1(28mg)和W2(27mg)。
化合物W1 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.58min，ESI 475.8(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.53(d,J＝1.9Hz,1H),8.17(d,J＝1.6Hz,1H),7.57(d,J＝7.1Hz,1H),7.53(t,J＝1.9Hz,1H),7.21-7.11(m,3H),6.27(s,1H),6.23(dd,J＝7.1,1.8Hz,1H),5.70(t,J＝8.0Hz,1H),5.41(t,J＝7.2Hz,1H),2.87(d,J＝7.2Hz,2H),2.19(s,3H),1.98(s,3H),1.91(dd,J＝18.5,11.1Hz,2H),1.86(s,3H),1.46-1.43(m,1H),0.98-0.94(m,6H)。
化合物W2 LC/MS A：99％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.61min，ESI 475.8(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.59(d,J＝1.8Hz,1H),8.24(d,J＝1.6Hz,1H),7.67(t,J＝1.9Hz,1H),7.63(d,J＝7.2Hz,1H),7.25-7.12(m,3H),6.38(s,1H),6.31(dd,J＝7.1,1.8Hz,1H),5.70(t,J＝8.1Hz,1H),5.37(t,J＝7.2Hz,1H),2.88-2.85(m,2H),2.24(s,3H),2.02(s,6H),1.81(t,J＝7.6Hz,2H),1.33-1.31(m,1H),0.90-0.88(m,6H)。
制备化合物W1a和W1b
步骤1：(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001251
在N2气氛下在80℃下将(S)-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯(3.0g，8.38mmol)、(2,6-二甲基苯基)硼酸(2.5g，16.78mmol)、Pd(PPh3)4(969mg，0.84mmol)和K2CO3(2.3mg，16.76mmol)在THF(20mL)和H2O(2mL)中的混合物搅拌16小时。将混合物倒入水中并且用EtOAc(30mL×2)萃取溶液。合并的有机相经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液，并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝4:1)纯化残余物，得到呈黄色油状物的期望产物(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(2.7g)。收率63％(73％纯度，UV＝214nm，ESI 385.1(M+H)+)。
步骤2：(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001261
向(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(2.7g，7.03mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加含HCl的二噁烷(4M，5mL)。在室温下搅拌溶液2小时。添加NaHCO3饱和水溶液(20mL)，并且用EtOAc(30mL×2)萃取溶液。合并的有机相经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液以提供呈黄色油状物的粗产物(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(1.9g)。收率95％(68％纯度，UV＝214nm，ESI285.1(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤3：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001262
在室温下将(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(1.5g，5.28mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(1.4g，6.34mmol)、HOBt(1.06g，7.92mmol)、EDCI(1.5g，7.92mmol)和DIEA(2.04g，15.85mmol)在DCM(30mL)中的混合物搅拌2小时。将混合物倒入水中，并且用EtOAc(30mL×2)萃取溶液。合并的有机相经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液，得到呈黄色油状物的粗产物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(3.95g)。收率52％(52％纯度，UV＝214nm，ESI 490.1(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤4：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440001271
在室温下将(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(3.95g，8.08mmol)用含LiOH-H2O(1.02g，24.23mmol)的THF(10mL)和H2O(2mL)处理2小时。用HCl(1M)酸化混合物直至pH＝5。在真空中移除溶剂并且残余物通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化，得到呈白色固体的化合物W1a(380mg)和W1b(453mg)。
化合物W1a LC/MS B：99％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.59min，ESI 476.2(M+H)+。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.53(s,1H),8.20(s,1H),7.58(d,J＝7.1Hz,1H),7.54(s,1H),7.21(t,J＝7.5Hz,1H),7.14(t,J＝6.6Hz,2H),6.32-6.15(m,2H),5.70(t,J＝8.0Hz,1H),5.43(t,J＝7.3Hz,1H),2.94(d,J＝7.3Hz,2H),2.19(s,3H),1.98(s,3H),1.92(t,J＝7.4Hz,2H),1.87(s,3H),1.47(t,J＝6.9Hz,1H),1.40-1.40(m,1H),0.95-0.92(m,6H)。
化合物W1b LC/MS B：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.62min，ESI 476.3(M+H)+。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.54(s,1H),8.22(s,1H),7.62(s,1H),7.59(d,J＝7.1Hz,1H),7.20-7.12(m,3H),6.34(s,1H),6.26(dd,J＝7.1,1.5Hz,1H),5.65(t,J＝8.1Hz,1H),5.34(t,J＝7.3Hz,1H),2.89(dd,J＝17.3,7.4Hz,2H),2.19(s,3H),1.97(s,6H),1.78-1.75(m,2H),1.32-1.25(m,1H),0.87-0.80(m,6H)。
制备化合物W2a和W2b
步骤1：(R)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001281
在N2气氛下在80℃下将(R)-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-(叔丁氧羰基氨基)丙酸甲酯(3.0g，8.38mmol)、2,6-二甲基苯基硼酸(2.5g，16.78mmol)、Pd(PPh3)4(969mg，0.84mmol)和K2CO3(2.3g，16.76mmol)在THF(20mL)和H2O(2mL)中的混合物搅拌16小时。将混合物冷却至室温并且倒入水中。用EtOAc(30mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过快速柱(0％～20％EtOAc/石油)纯化以提供呈黄色油状物的期望产物(R)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(2.7g)。收率63％(73.57％纯度，UV＝214nm，ESI 385(M+H)+)。
步骤2：(R)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001291
向(R)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(2.7g，7mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，5mL)，并且在室温下搅拌溶液2小时。将混合物倒入NaHCO3饱和水溶液(20mL)中并且用EtOAc(30mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩滤液以提供呈黄色油状物的粗产物(R)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(1.9g)。收率95％(68.19％纯度，UV＝214nm，ESI 285(M+H)+)。粗产物不经进一步纯化即直接用于下一步骤。
步骤3：(3R)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001292
在室温下将(R)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(100mg，0.31mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(84mg，0.37mmol)、EDCI(120mg，0.62mmol)、HOBt(63mg，0.47mmol)和DIEA(121mg，0.94mmol)在DCM(15mL)中的混合物搅拌1小时。在减压下移除溶剂，并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝1:2)纯化残余物，得到呈无色油状物的期望产物(3R)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(100mg)。收率66％(76％纯度，UV＝214nm，ESI 490(M+H)+)。
步骤4：(3R)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440001301
在室温下将(3R)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(100mg，0.20mmol)用含LiOH-H2O(26mg，0.6mmol)的6mL THF和2mL H2O处理3小时。用TFA将溶液调节至pH＝3～4。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(33-70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物W2a(31mg)和W2b(22mg)。
化合物W2a LC/MS A：99％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.57min，ESI 476(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.52(d,J＝1.9Hz,1H),8.19(d,J＝1.6Hz,1H),7.57(d,J＝7.1Hz,1H),7.53(t,J＝1.9Hz,1H),7.23-7.10(m,3H),6.26(d,J＝10.2Hz,1H),6.23(dd,J＝7.1,1.9Hz,1H),5.72-5.66(m,1H),5.42(t,J＝7.2Hz,1H),2.93(d,J＝7.2Hz,2H),2.19(s,3H),1.97(s,3H),1.94-1.89(m,2H),1.86(s,3H),1.52-1.37(m,1H),0.98-0.87(m,6H)。
化合物W2b LC/MS A：99％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.60min，ESI 476(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.58(s,1H),8.26(s,1H),7.67(t,J＝1.9Hz,1H),7.63(d,J＝7.1Hz,1H),7.27-7.10(m,3H),6.38(s,1H),6.31(dd,J＝7.2,1.9Hz,1H),5.70(t,J＝8.1Hz,1H),5.38(t,J＝7.4Hz,1H),2.99-2.83(m,2H),2.24(s,3H),2.02(s,5H),1.89-1.74(m,2H),1.35-1.30(m,1H),0.90-0.87(m,6H)。
制备化合物X1和X2
步骤1：3-(5-溴吡啶-3-基)-3-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001311
在室温下向3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸甲酯(300mg，1.16mmol)和Et3N(351mg，3.48mmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(278mg，1.27mmol)，并且在室温下搅拌溶液16小时。在真空中浓缩混合物，得到粗产物，其通过制备型TLC(EtOAc:石油醚1:1)纯化以提供呈无色油状物的期望产物3-(5-溴吡啶-3-基)-3-(叔丁氧羰基氨基)丙酸甲酯(301mg)。收率72％(100％纯度，UV＝214nm，ESI 359(M+H)+)。
步骤2：3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-((S)-3-甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001312
在N2下在120℃下将3-(5-溴吡啶-3-基)-3-(叔丁氧羰基氨基)丙酸甲酯(260mg，0.73mmol)、(S)-3-甲基吗啉(147mg，1.46mmol)、Pd(OAc)2(17mg，0.073mmol)、X-Phos(65mg，0.146mmol)和Cs2CO3(714mg，2.19mmol)在甲苯(3mL)中的溶液搅拌16小时。将混合物冷却至室温并且经硅藻土过滤。在减压下浓缩滤液，并且残余物通过快速柱层析法(0％～60％EtOAc/石油)纯化以提供呈黄色油状物的期望产物3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-((S)-3-甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸甲酯(162mg)。收率52％(90％纯度，UV＝214nm，ESI 280(M+H)+)。
步骤3：3-氨基-3-(5-((S)-3-甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸甲酯盐酸盐
Figure BDA0002782961440001321
向3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-((S)-3-甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸甲酯(162mg，0.43mmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加含HCl的二噁烷(4M，2mL)，并且在室温下搅拌溶液16小时。在真空中移除溶剂以提供呈黄色固体的粗产物3-氨基-3-(5-((S)-3-甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(119mg)，其不经进一步纯化即直接用于下一步骤。收率99％(92.24％纯度，UV＝214nm，ESI 280(M+H)+)。
步骤4：(S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酸甲酯
Figure BDA0002782961440001322
在35℃下将喹唑啉-4(3H)-酮(1.0g，6.85mmol)、(S)-2-氨基-4-甲基戊酸甲酯盐酸盐(1.49g，8.22mmol)、DBU(1.57g，10.3mmol)和HATU(3.38g，8.9mmol)在THF(20mL)中的混合物搅拌16小时。将混合物倒入水中并且用EtOAc(30mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过快速柱(0％～25％EtOAc/石油)纯化以提供呈无色油状物的期望产物(S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酸甲酯(612mg)。收率33％(88.42％纯度，UV＝214nm，ESI 275(M+H)+)。
步骤5：(S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酸
Figure BDA0002782961440001331
在室温下将(S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酸甲酯(612mg，2.23mmol)用含LiOH-H2O(281mg，6.69mmol)的THF(6mL)和H2O(1mL)处理3小时。将混合物倒入水中并且用EtOAc(20mL×2)萃取溶液。用HCl(1M)将水相酸化至pH＝3，并且随后用EtOAc(20mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液，得到呈无色油状物的粗产物(S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酸(494mg)。收率85％(100％纯度，UV＝214nm，ESI 261(M+H)+)。粗产物不经进一步纯化即直接用于下一步骤。
步骤6：3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)-3-(5-((S)-3-甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001332
在室温下将3-氨基-3-(5-((S)-3-甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(119mg，0.43mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酸(168mg，0.645mmol)、HOBt(87mg，0.645mmol)、EDCI(123mg，0.645mmol)和DIEA(166mg，1.29mmol)在DMF(6mL)中的混合物搅拌16小时。将混合物倒入水中并且用EtOAc(20mL×2)萃取溶液，合并的有机层经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过制备型TLC(EtOAc)纯化以提供呈无色油状物的期望产物3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)-3-(5-((S)-3-甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸甲酯(40mg)。收率18％，两个步骤(96％纯度，UV＝214nm，ESI 522(M+H)+)。
步骤7：3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)-3-(5-((S)-3-甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440001341
在室温下将3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)-3-(5-((S)-3-甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸甲酯(40mg，0.077mmol)用含LiOH-H2O(10mg，0.231mmol)的THF(6mL)和H2O(1mL)处理2小时。用HCl(1M)将混合物酸化至pH＝5。在真空中移除溶剂，并且通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物X1(2.3mg)和X2(8.7mg)。
化合物X1 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.40min，ESI 508(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.41(d,J＝3.7Hz,1H),8.25(d,J＝6.8Hz,1H),8.03(s,1H),7.97(s,1H),7.86(dd,J＝11.1,4.2Hz,1H),7.71(d,J＝8.1Hz,1H),7.59(t,J＝7.2Hz,1H),7.27(s,1H),5.69(dd,J＝10.0,6.4Hz,1H),5.37(t,J＝7.2Hz,1H),3.94-3.60(m,5H),3.09-3.03(m,2H),2.97-2.79(m,2H),2.22-1.96(m,2H),1.68-1.46(m,1H),1.07-0.78(m,9H)。
化合物X2 LC/MS B：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.36min，ESI 508(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.44(s,1H),8.27(d,J＝6.9Hz,1H),8.11(s,1H),8.02(s,1H),7.87(t,J＝7.0Hz,1H),7.73(d,J＝8.0Hz,1H),7.60(t,J＝7.2Hz,1H),7.36(s,1H),5.72(dd,J＝10.4,5.9Hz,1H),5.36(t,J＝6.8Hz,1H),4.08-3.63(m,5H),3.30-3.09(m,2H),2.81(s,2H),2.17-1.88(m,2H),1.44(s,1H),1.14(d,J＝6.6Hz,3H),1.07-0.78(m,9H)。
制备化合物Y1、Y2和Y4
步骤1：4,5-二甲基吡啶-2-醇
Figure BDA0002782961440001351
在0℃下向4,5-二甲基吡啶-2-胺(1.0g，8.2mmol)在HCl(4N，12mL)中的溶液中添加NaNO2(1.13g，16.4mmol)在H2O(4mL)中的溶液。在室温下搅拌反应混合物16小时并且在真空中浓缩以得到粗产物，其通过反相层析法(0％～40％MeOH/H2O(5％TFA))纯化以提供呈白色固体的期望产物4,5-二甲基吡啶-2-醇(466mg)。收率46％(96.34％纯度，UV＝214nm，ESI 124(M+H)+)。
步骤2：(S)-2-(4,5-二甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸
Figure BDA0002782961440001352
向(R)-2-溴-4-甲基戊酸(500mg，2.56mmol)在无水THF(20mL)中的溶液中添加(t-BuO)2Mg(581mg，3.42mmol)，并且在30℃下在N2气氛下搅拌溶液3小时。随后添加4,5-二甲基吡啶-2-醇(210mg，1.71mmol)和t-BuOK(195mg，1.74mmol)，并且在70℃下在N2下搅拌反应混合物16小时。将混合物冷却至室温并且用HCl(1M)酸化至pH＝5。在减压下浓缩溶液，得到残余物，其通过反相快速层析法(0％～60％MeOH/H2O(5％TFA))纯化以提供呈白色固体的期望产物(S)-2-(4,5-二甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(169mg)。收率42％(96％纯度，UV＝214nm，ESI 238(M+H)+)。
步骤3：(3R)-3-(2-(4,5-二甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001361
在室温下将(S)-2-(4,5-二甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(89mg，0.375mmol)、(R)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(70mg，0.25mmol)、HOBt(51mg，0.37mmol)、EDCI(72mg，0.37mmol)和DIEA(97mg，0.75mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌2小时。将混合物倒入水中并且用EtOAc(30mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液得到残余物，其通过快速柱层析法(0％～80％EtOAc/石油)纯化以提供呈无色油状物的期望产物(3R)-3-(2-(4,5-二甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(92mg)。收率74％(86.01％纯度，UV＝214nm，ESI 504(M+H)+)。
步骤4：(3R)-3-(2-(4,5-二甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440001371
在室温下将(3R)-3-(2-(4,5-二甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(92mg，0.18mmol)用含LiOH-H2O(23mg，0.54mmol)的THF(6mL)和H2O(1mL)处理5小时。用HCl(1M)将混合物酸化至pH＝5。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物Y1(24.7mg)和Y2(22.1mg)。
化合物Y1 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.58min，ESI 490(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.51(s,1H),8.18(s,1H),7.50(s,1H),7.40(s,1H),7.20(t,J＝7.6Hz,1H),7.13(t,J＝7.7Hz,2H),6.30(s,1H),5.68(dd,J＝9.0,7.0Hz,1H),5.42(t,J＝7.1Hz,1H),2.91(d,J＝7.1Hz,2H),2.15(s,3H),2.02(s,3H),1.96(d,J＝7.9Hz,3H),1.95-1.87(m,2H),1.85(s,3H),1.47-1.40(m,1H),0.97-0.94(m,6H)。
化合物Y2 LC/MS A：97％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.60min，ESI 490(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.58(s,1H),8.26(s,1H),7.66(t,J＝1.9Hz,1H),7.46(s,1H),7.27-7.18(m,1H),7.16(d,J＝7.6Hz,2H),6.41(s,1H),5.67(t,J＝8.0Hz,1H),5.38(t,J＝7.3Hz,1H),2.97-2.86(m,2H),2.20(s,3H),2.09(s,3H),2.02(s,6H),1.82(t,J＝7.5Hz,2H),1.36-1.28(m,1H),0.90-0.87(m,6H)。
步骤5：(3S)-3-(2-(4,5-二甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001381
在室温下将(S)-2-(4,5-二甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(89mg，0.375mmol)、(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(70mg，0.25mmol)、HOBt(51mg，0.375mmol)、EDCI(72mg，0.375mmol)和DIEA(97mg，0.75mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌2小时。将混合物倒入水中并且用EtOAc(30mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液得到残余物，其通过快速柱层析法(0％～80％EtOAc/石油)纯化以提供呈无色油状物的期望产物(3S)-3-(2-(4,5-二甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(85mg)。收率68％(93.96％纯度，UV＝214nm，ESI 504(M+H)+)。
步骤6：(3S)-3-(2-(4,5-二甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440001382
在室温下将(3S)-3-(2-(4,5-二甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(92mg，0.18mmol)用含LiOH-H2O(23mg，0.54mmol)的THF(6mL)和H2O(1mL)处理5小时。用HCl(1M)将混合物酸化至pH＝5。在真空中移除溶剂，并且残余物通过制备型HPLC A(30-70％MeCN)纯化，得到呈白色固体的化合物Y3(14.9mg)和Y4(20.8mg)。
化合物Y4 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.60min，ESI 490(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.59(s,1H),8.26(s,1H),7.66(t,J＝1.8Hz,1H),7.46(s,1H),7.28-7.11(m,3H),6.41(s,1H),5.67(t,J＝8.0Hz,1H),5.38(t,J＝7.3Hz,1H),2.95-2.71(m,2H),2.20(s,3H),2.09(s,3H),2.02(s,6H),1.84(t,J＝7.5Hz,2H),1.37-1.28(m,1H),0.90-0.87(m,6H)。
制备化合物Z
步骤1：甲基(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001391
在N2气氛下在微波、110℃下将(S)-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-(叔丁氧羰基氨基)丙酸甲酯(1.0g，2.79mmol)、2,6-二甲基苯基硼酸(628mg，4.19mmol)、Pd(dppf)Cl2(164mg，0.22mmol)和K2CO3(963mg，7.0mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和H2O(2mL)中的混合物搅拌4小时。将混合物倒入水中并且用EtOAc(30mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过快速柱层析法(0％～45％EtOAc/石油)纯化以提供呈淡黄色油状物的期望产物(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(987mg)。收率82％(88％纯度，UV＝214nm，ESI 385(M+H)+)。
步骤2：(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯盐酸盐
Figure BDA0002782961440001401
向(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(410mg，1.07mmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，2mL)，并且在室温下搅拌溶液2小时。在减压下浓缩混合物以提供呈白色固体的粗产物(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(303mg)，其不经进一步纯化即直接用于下一步骤。收率99％(90.38％纯度，UV＝214nm，ESI 285(M+H)+)。
步骤3：(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((R)-2-羟基-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001402
在室温下将(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(303mg，1.07mmol)、(R)-2-羟基-4-甲基戊酸(169mg，1.28mmol)、HOBt(217mg，1.61mmol)、EDCI(308mg，1.61mmol)和DIEA(690mg，5.35mmol)在DMF(6mL)中的混合物搅拌16小时。将混合物倒入水中并且用EtOAc(20mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过快速柱层析法(0％～85％EtOAc/石油)纯化以提供呈无色油状物的期望产物(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((R)-2-羟基-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯(340mg)。收率80％(90％纯度，UV＝214nm，ESI 399(M+H)+)。
步骤4：(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((R)-4-甲基-2-(甲基磺酰氧基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001411
在0℃下向(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((R)-2-羟基-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯(340mg，0.85mmol)和Et3N(258mg，2.55mmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加MsCl(116mg，1.02mmol)。在室温下搅拌溶液16小时。将混合物倒入水中并且用DCM(20mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液得到残余物，其通过快速柱层析法(0％～60％EtOAc/石油)纯化以提供呈淡黄色油状物的期望产物(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((R)-4-甲基-2-(甲基磺酰氧基)戊酰氨基)丙酸甲酯(337mg)。收率83％(95％纯度，UV＝214nm，ESI 477(M+H)+)。
步骤5：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-碘-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001412
在85℃下将(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((R)-4-甲基-2-(甲基磺酰氧基)戊酰氨基)丙酸甲酯(337mg，0.71mmol)、NaI(319mg，2.13mmol)和K2CO3(490mg，3.55mmol)在MeCN(20mL)中的混合物搅拌20小时。将混合物冷却至室温并且过滤。在减压下浓缩滤液得到残余物，其通过快速柱层析法(0％～40％EtOAc/石油)纯化以提供呈淡黄色油状物的期望产物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-碘-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯(233mg)。收率64％(96％纯度，UV＝214nm，ESI 509(M+H)+)。
步骤6：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(1-氧代-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440001421
向3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(135mg，0.92mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加NaH(60％在油中，37mg，0.92mmol)，并且在室温下在N2气氛下搅拌溶液0.5小时。随后在室温下逐滴添加(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-碘-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯(233mg，0.46mmol)在DMF(2mL)中的溶液，并且在室温下再搅拌反应混合物1小时。用HCl(1M)溶液淬灭反应混合物。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的产物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(1-氧代-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)戊酰氨基)丙酸(52.7mg)。
化合物Z LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.67min，ESI 514(M+H)+
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.59-8.56(m,1H),8.25-8.18(m,1H),7.97-7.84(m,1H),7.73-7.58(m,1H),7.49(q,J＝7.7Hz,1H),7.40-7.00(m,5H),5.49-5.32(m,2H),3.76-3.42(m,2H),3.17-2.78(m,4H),2.01-1.95(m,5H),1.87-1.66(m,3H),1.65-1.43(m,1H),1.07-0.89(m,6H)。
制备化合物AA1和AA2
步骤1：4-甲基-2-(1-氧代异吲哚啉-2-基)戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440001431
向异吲哚啉-1-酮(120mg，0.90mmol)在MeCN(10mL)中的溶液中添加Cs2CO3(652mg，2.0mmol)和2-碘-4-甲基戊酸乙酯(540mg，2.0mmol)。在85℃下搅拌混合物12小时并且过滤。在压力下浓缩滤液，并且残余物通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝3:1)纯化，得到呈无色油状物的期望产物4-甲基-2-(1-氧代异吲哚啉-2-基)戊酸乙酯(120mg)。收率50％(95％纯度，UV＝254nm，ESI 276.1(M+H)+)。
步骤2：4-甲基-2-(1-氧代异吲哚啉-2-基)戊酸
Figure BDA0002782961440001432
在室温下将4-甲基-2-(1-氧代异吲哚啉-2-基)戊酸乙酯(120mg，0.44mmol)用含LiOH-H2O(82mg，2.0mmol)的MeOH(4mL)和H2O(1mL)处理2小时。在真空中移除溶剂，并且用H2O(10mL)稀释残余物。用1N HCl将溶液调节至pH＝6。通过过滤收集固体以提供呈白色固体的标题化合物4-甲基-2-(1-氧代异吲哚啉-2-基)戊酸(95mg)。收率81％(100％纯度，UV＝254nm，ESI 248.1(M+H)+)。
步骤3：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(1-氧代异吲哚啉-2-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001441
在室温下将4-甲基-2-(1-氧代异吲哚啉-2-基)戊酸(95mg，0.38mmol)、(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(114mg，0.4mmol)、EDCI(153mg，0.8mmol)、HOBt(108mg，0.8mmol)和DIEA(129mg，1.0mmol)在DCM(5mL)中的混合物搅拌16小时。在真空中移除溶剂，并且残余物通过硅胶柱(石油:EtOAc＝2:1)纯化以提供呈无色油状物的期望产物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(1-氧代异吲哚啉-2-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(65mg)。收率35％(97％纯度，UV＝254nm，ESI 514.1(M+H)+)。
步骤4：化合物AA1和AA2
Figure BDA0002782961440001442
在室温下将(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(1-氧代异吲哚啉-2-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(65mg，0.13mmol)用含LiOH-H2O(25.2mg，0.6mmol)的MeOH(3mL)和H2O(1mL)处理2小时。用1N HCl将溶液调节至pH＝5～6。在真空中移除溶剂，并且通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物AA1(13mg)和AA2(12mg)。
化合物AA1 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.61min，ESI 500.3(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.55(s,1H),8.14(s,1H),7.69(d,J＝7.6Hz,1H),7.62(t,J＝7.4Hz,1H),7.59-7.45(m,3H),7.16(t,J＝7.6Hz,1H),7.09(d,J＝7.6Hz,1H),7.00(d,J＝7.5Hz,1H),5.42(t,J＝7.3Hz,1H),5.05(t,J＝7.9Hz,1H),4.64(d,J＝17.7Hz,1H),4.51(d,J＝17.7Hz,1H),2.92(t,J＝8.0Hz,2H),1.93(s,3H),1.89-1.85(m,2H),1.67(s,3H),1.54-1.49(m,1H),1.03-0.97(m,6H)。
化合物AA2 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.63min，ESI 500.3(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.59(s,1H),8.26(s,1H),7.80(d,J＝7.6Hz,1H),7.71-7.56(m,3H),7.52(t,J＝7.3Hz,1H),7.26-7.19(m,1H),7.16(d,J＝7.5Hz,2H),5.42(t,J＝7.4Hz,1H),5.06(t,J＝7.9Hz,1H),4.77(d,J＝17.8Hz,1H),4.52(d,J＝17.7Hz,1H),2.97-2.87(m,2H),2.02(s,6H),1.78(t,J＝7.5Hz,2H),1.39-1.34(m,1H),0.95-0.93(m,6H)。
制备化合物AB2
步骤1：2-溴-4-甲酰基苯甲腈
Figure BDA0002782961440001451
在-78℃向3-溴-4-腈基苯甲酸甲酯(500mg，1.97mmol)在25mL中的溶液中逐滴添加DIBAL-H(1M在甲苯中，2.56mL，2.56mmol)。在-78℃下搅拌混合物4小时。用MeOH(10mL)淬灭溶液。在室温下搅拌混合物10分钟，并且用酒石酸钾钠饱和水溶液处理。用DCM(30mL×2)萃取混合物。有机层经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液，并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝5:1)纯化残余物，得到呈棕色固体的期望产物2-溴-4-甲酰基苯甲腈(240mg)。收率58％(97％纯度，UV＝214nm，ESI 210(M+H)+)。
步骤2：5-甲酰基-2'-甲基联苯-2-腈
Figure BDA0002782961440001461
在N2气氛下在85℃下将2-溴-4-甲酰基苯甲腈(210mg，1mmol)、邻甲苯基硼酸(272mg，2mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(70mg，0.1mmol)和K2CO3(415mg，3mmol)在甲苯(5mL)、乙醇(1mL)和H2O(1mL)中的混合物搅拌过夜。添加水并且溶液用DCM(30mL×2)萃取。在减压下浓缩合并的有机层，并且残余物通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝5:1)纯化，得到呈棕色固体的期望产物5-甲酰基-2'-甲基联苯-2-腈(250mg)，收率99％(100％纯度，UV＝214nm，ESI 222(M+H)+)。
步骤3：3-氨基-3-(6-氰基-2'-甲基联苯-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440001462
在85℃下将5-甲酰基-2'-甲基联苯-2-腈(250mg，1.1mmol)、丙二酸(141mg，1.4mmol)和乙酸铵(435mg，5.6mmol)在EtOH(5mL)中的混合物搅拌16小时。过滤混合物，并且在减压下浓缩滤液，得到呈棕色油状物的粗产物3-氨基-3-(6-氰基-2'-甲基联苯-3-基)丙酸(120mg)。收率38％(19％纯度，UV＝214nm，ESI 281(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤4：3-氨基-3-(6-氰基-2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001471
在0℃下向3-氨基-3-(6-氰基-2'-甲基联苯-3-基)丙酸(120mg，0.43mmol)在15mL甲醇中的溶液中逐滴添加SOCl2(2mL)。使溶液升温至室温并且搅拌2小时。在真空中移除溶剂，得到呈棕色油状物的粗产物3-氨基-3-(6-氰基-2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(100mg)。收率70％(28％纯度，UV＝214nm，ESI 295(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤5：3-(6-氰基-2'-甲基联苯-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001472
在室温下将3-氨基-3-(6-氰基-2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(100mg，0.3mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(76mg，0.36mmol)、EDCI(116mg，0.6mmol)、HOBt(61mg，0.45mmol)和DIEA(156mg，1.21mmol)在15mL DCM中的混合物搅拌16小时。在真空中移除溶剂，并且通过硅胶柱(乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈棕色油状物的期望产物3-(6-氰基-2'-甲基联苯-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(70mg)。收率48％(50％纯度，UV＝214nm，ESI 486(M+H)+)。
步骤6：3-(6-氰基-2'-甲基联苯-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440001481
在室温下将3-(6-氰基-2'-甲基联苯-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(70mg，0.14mmol)用含LiOH-H2O(18mg，0.43mmol)的3mL THF和1mLH2O处理1小时。用TFA将溶液调节至pH＝3～4。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(33-70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物AB1(8.8mg)和AB2(8.4mg)。
化合物AB2 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.59min，ESI 472(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.82(d,J＝8.1Hz,1H),7.74(d,J＝5.6Hz,1H),7.57-7.55(m,1H),7.53-7.50(m,1H),7.42(d,J＝1.6Hz,1H),7.41-7.34(m,2H),7.31(dd,J＝10.7,5.3Hz,1H),7.21(d,J＝6.8Hz,1H),6.56(d,J＝8.4Hz,1H),6.43-6.40(m,1H),5.75(t,J＝8.1Hz,1H),5.36(t,J＝7.2Hz,1H),2.93-2.73(m,2H),2.18(s,3H),1.85(t,J＝7.5Hz,2H),1.36-1.31(m,1H),0.91-0.89(m,6H)。
制备化合物AC2
步骤1：6-甲氧基-2'-甲基联苯-3-甲醛
Figure BDA0002782961440001482
在微波中在110℃下将3-溴-4-甲氧基苯甲醛(200mg，0.93mmol)、邻甲苯基硼酸(190mg，1.4mmol)、PdCl2(dppf)(34mg，0.05mmol)和K2CO3(386mg，2.79mmol)在1,4-二噁烷(2mL)和H2O(0.2mL)中的混合物搅拌1小时。添加水并且用EtOAc(30mL×2)萃取溶液。在减压下浓缩合并的有机层，并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝5:1)纯化残余物，得到呈无色油状物的期望产物6-甲氧基-2'-甲基联苯-3-甲醛(245mg)。收率99％(96％纯度，UV＝214nm，ESI 227(M+H)+)。
步骤2：3-氨基-3-(6-甲氧基-2'-甲基联苯-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440001491
在85℃下将6-甲氧基-2'-甲基联苯-3-甲醛(245mg，1.08mmol)、丙二酸(100mg，1.3mmol)和乙酸铵(563mg，5.41mmol)在EtOH(10mL)中的混合物搅拌20小时。过滤混合物，并且在减压下浓缩滤液，得到呈棕色油状物的粗产物3-氨基-3-(6-甲氧基-2'-甲基联苯-3-基)丙酸(70mg)。收率23％(22％纯度，UV＝214nm，ESI 269(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤3：3-氨基-3-(6-甲氧基-2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001492
在0℃下向3-氨基-3-(6-甲氧基-2'-甲基联苯-3-基)丙酸(70mg，0.25mmol)在10mL甲醇中的溶液中逐滴添加SOCl2(2mL)。在65℃下搅拌溶液3小时。在真空中移除溶剂，得到呈棕色油状物的粗产物3-氨基-3-(6-甲氧基-2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(80mg)。收率97％(27％纯度，UV＝214nm，ESI 283(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤4：3-(6-甲氧基-2'-甲基联苯-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001501
在室温下将3-氨基-3-(6-甲氧基-2'-甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(80mg，0.27mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(67mg，0.32mmol)、EDCI(102mg，0.53mmol)、HOBt(54mg，0.4mmol)和DIEA(104mg，0.8mmol)在10mL DCM中的混合物搅拌16小时。在真空中移除溶剂，并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝1:1)纯化残余物，得到呈无色油状物(70mg)的期望化合物AC1(40mg)和AC2(30mg)。收率60％(90％纯度，UV＝214nm，ESI491(M+H)+)。
步骤5：化合物AC2
Figure BDA0002782961440001502
在室温下将AC1(30mg，0.06mmol)用含LiOH-H2O(8mg，0.18mmol)的3mL THF和1mLH2O处理1小时。用TFA将溶液调节至pH＝3～4。在真空中移除溶剂，并且通过制备型HPLC A(33-70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望产物AC2(10mg)。
化合物AC2 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.60min，ESI 477(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.64(dd,J＝6.9,1.6Hz,1H),7.39-7.35(m,1H),7.26(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),7.12-7.03(m,3H),7.00-6.99(m,2H),6.87(d,J＝8.5Hz,1H),6.42(d,J＝8.6Hz,1H),6.27(dd,J＝6.8,5.7Hz,1H),5.62(dd,J＝9.4,6.8Hz,1H),5.15(t,J＝6.8Hz,1H),3.61(s,3H),2.54(d,J＝6.8Hz,2H),1.97(s,3H),1.72(d,J＝32.4Hz,2H),1.22(br,1H),0.78-0.76(m,6H)。
制备化合物AD1和AD2
步骤1：3-(3-溴-4-甲基苯基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001511
向3-氨基-3-(3-溴-4-甲基苯基)丙酸甲酯(1.8g，6.6mmol)和Et3N(2.0g，19.8mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(1.2g，5.28mmol)。在室温下搅拌反应混合物16小时。在减压下浓缩混合物得到粗产物，其通过硅胶柱(20％EtOAc/石油醚)纯化以提供呈白色固体的期望产物3-(3-溴-4-甲基苯基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯(2.0g)。收率81％(96％纯度，UV＝214nm，ESI 272(MH-Boc)+)。
步骤2：3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4-甲基-3-吗啉代苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001512
在N2下将3-(3-溴-4-甲基苯基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯(550mg，1.5mmol)、吗啉(261mg，3.0mmol)、Pd(OAc)2(34mg，0.15mmol)、X-Phos(143mg，0.30mmol)和Cs2CO3(1.5g，4.5mmol)在甲苯(10mL)中的混合物加热至120℃并且搅拌16小时。通过硅藻土垫过滤混合物并且在减压下浓缩滤液，得到粗产物，其通过硅胶柱(15％EtOAc/石油醚)纯化以提供呈白色固体的期望产物3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4-甲基-3-吗啉代苯基)丙酸甲酯(200mg)。收率34％(89％纯度，UV＝254nm，ESI 379(M+H)+)。
步骤3：3-氨基-3-(4-甲基-3-吗啉代苯基)丙酸甲酯盐酸盐
Figure BDA0002782961440001521
向3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4-甲基-3-吗啉代苯基)丙酸甲酯(130mg，0.34mmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加含HCl的二噁烷(4M)(1mL)并且在室温下搅拌溶液1小时。在减压下浓缩混合物以提供呈白色固体的粗产物3-氨基-3-(4-甲基-3-吗啉代苯基)丙酸甲酯盐酸盐(95mg)，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。收率99％(80％纯度，UV＝254nm，ESI 279(M+H)+)。
步骤4：4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)-3-(4-甲基-3-吗啉代苯基)丙酸酯
Figure BDA0002782961440001522
在室温下将3-氨基-3-(4-甲基-3-吗啉代苯基)丙酸甲酯盐酸盐(95mg，0.30mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酸(79mg，0.30mmol)、HOBt(53mg，0.39mmol)、EDCI(69mg，0.39mmol)和DIEA(116mg，0.90mmol)在DCM(10mL)中的混合物搅拌16小时。在减压下浓缩混合物得到残余物，其通过制备型TLC(石油醚:EtOAc 1:1)纯化，获得呈无色油状物的期望产物3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)-3-(4-甲基-3-吗啉代苯基)丙酸甲酯(100mg)。收率73％(98％纯度，UV＝254nm，ESI 521(M+H)+)。
步骤5：3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)-3-(4-甲基-3-吗啉代苯基)丙酸
Figure BDA0002782961440001531
在室温下将3-((S)-4-甲基-2-(4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)戊酰氨基)-3-(4-甲基-3-吗啉代苯基)丙酸甲酯(100mg，0.19mmol)用含LiOH-H2O(24mg，0.57mmol)的THF(5mL)和H2O(2mL)处理1小时。用HCl(1M)将混合物酸化至pH＝5～6，并且在减压下移除溶剂。通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望化合物AD1(29mg)和AD2(13mg)。
化合物AD1 LC/MS C：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.54min，ESI 507(M+H)+
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.41(s,1H),8.28(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),7.88-7.82(m,1H),7.70(d,J＝5.0Hz,1H),7.58(t,J＝7.6Hz,1H),7.07(d,J＝7.8Hz,1H),6.97(s,1H),6.94(d,J＝7.7Hz,1H),5.75(dd,J＝9.4,6.9Hz,1H),5.32(t,J＝7.3Hz,1H),3.76-3.69(m,4H),2.77(dd,J＝10.5,6.0Hz,6H),2.22(s,3H),2.11-2.02(m,2H),1.60-1.52(m,1H),1.05-0.98(m,6H)。
化合物AD2 LC/MS B 100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.76min，ESI 507(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.45(s,1H),8.28(d,J＝7.1Hz,1H),7.89-7.83(m,1H),7.72(d,J＝8.1Hz,1H),7.59(t,J＝7.6Hz,1H),7.16(d,J＝7.8Hz,1H),7.08(s,1H),7.01(d,J＝7.7Hz,1H),5.75(dd,J＝10.0,6.4Hz,1H),5.31(t,J＝7.1Hz,1H),3.88-3.81(m,4H),2.95-2.89(m,4H),2.79-2.74(m,2H),2.30(s,3H),2.07-1.92(m,2H),1.48-1.43(m,1H),0.98-0.95(m,6H)。
制备化合物AE1和AE2
步骤1：6-甲基-5-邻甲苯基烟酸甲酯
Figure BDA0002782961440001541
将5-溴-6-甲基烟酸甲酯(460mg，2.0mmol)、邻甲苯基硼酸(544mg，4.0mmol)和K2CO3(553mg，4.0mmol)在二噁烷(12mL)和水(3mL)中的溶液用鼓泡氮气脱气，添加PdCl2(PPh3)2(70mg，0.1mmol)并且随后在100℃下搅拌反应物1小时。用EtOAc(18mL)和水(5mL)稀释混合物。有机相经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩滤液，得到棕色油状物，其通过硅胶柱(石油醚/EtOAc＝10:1～5:1)纯化以提供呈黄色固体的期望期望产物6-甲基-5-邻甲苯基烟酸甲酯(410mg)。收率85％(98％纯度，UV＝214nm，ESI 242(M+H)+)。
步骤2：(6-甲基-5-邻甲苯基吡啶-3-基)甲醇
Figure BDA0002782961440001551
在-78℃下向6-甲基-5-邻甲苯基烟酸甲酯(591mg，2.45mmol)在甲苯(16mL)中的溶液中逐滴添加DIBL-H(1M在甲苯中，7.35ml，7.35mmol)。在-78℃下搅拌混合物1小时。在-10℃下用Na2SO4-10H2O淬灭混合物并且在室温下搅拌溶液0.5小时，将混合物从盐中滤出并且用MeCN洗涤。在减压下浓缩滤液，得到呈黄色固体的粗产物(6-甲基-5-邻甲苯基吡啶-3-基)甲醇(490mg)。收率90％(85％纯度，UV＝214nm，ESI 214(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤3：6-甲基-5-邻甲苯基烟醛
Figure BDA0002782961440001552
向(6-甲基-5-邻甲苯基吡啶-3-基)甲醇(490mg，2.32mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加PCC(750mg，3.48mmol)，并且在室温下搅拌溶液1小时。用EtOAc(12mL)和水(6mL)稀释混合物。有机层经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液，得到棕色油状物，其通过硅胶柱(DCM/MeOH＝20:1～2:1)纯化以提供呈橙色固体的期望产物6-甲基-5-邻甲苯基烟醛(448mg)。收率91％(99％纯度，UV＝214nm，ESI212(M+H)+)。
步骤4：3-氨基-3-(6-甲基-5-邻甲苯基吡啶-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440001561
将6-甲基-5-邻甲苯基烟醛(254mg，1.2mmol)、丙二酸(187mg，1.8mmol)、NH4OAc(185mg，2.4mmol)在EtOH(16mL)中的混合物加热至回流过夜。在真空中移除溶剂，并且通过硅胶柱(DCM:MeOH＝8:1～1:1)纯化残余物以提供呈棕色固体的粗产物3-氨基-3-(6-甲基-5-邻甲苯基吡啶-3-基)丙酸(155mg)。收率31％(91％纯度，UV＝254nm，ESI 271(M+H)+)。
步骤5：3-氨基-3-(6-甲基-5-邻甲苯基吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001562
在室温下向3-氨基-3-(6-甲基-5-邻甲苯基吡啶-3-基)丙酸(128mg.0.31mmol)在MeOH(5mL)中的混合物中添加SOCl2(184mg，1.55mmol)。在室温下搅拌混合物1小时。溶液用NaHCO3饱和溶液调节至pH＝7～8，并且用EtOAc(30mL×2)萃取溶液。在减压下浓缩有机层，得到油状物，其通过硅胶柱(DCM:MeOH＝20:1～2:1)纯化以提供呈绿色油状物的期望产物3-氨基-3-(6-甲基-5-邻甲苯基吡啶-3-基)丙酸甲酯(41mg)。收率47％(99％纯度，UV＝254nm，ESI 284(M+H)+)。
步骤6：3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)-3-(6-甲基-5-邻甲苯基吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001571
在室温下将3-氨基-3-(6-甲基-5-邻甲苯基吡啶-3-基)丙酸甲酯(41mg，0.14mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(34mg，0.15mmol)、EDCI(41mg，0.21mmol)、HOBt(29mg，0.21mmol)和DIEA(56mg，0.43mmol)在DCM(5mL)中的混合物搅拌0.5小时。用DCM(10mL)和5mL水稀释混合物。有机相经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液得到棕色油状物，其通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 1:10)纯化以提供呈无色油状物的期望产物3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)-3-(6-甲基-5-邻甲苯基吡啶-3-基)丙酸甲酯(53mg)。收率75％(99％纯度，UV＝254nm，ESI 490(M+H)+)。
步骤5：化合物AE1和AE2
Figure BDA0002782961440001572
在室温下将3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)-3-(6-甲基-5-邻甲苯基吡啶-3-基)丙酸酯(53mg，0.108mmol)用含LiOH(1M在H2O中，0.54mL)的THF(2mL)处理1小时。用1M HCl将混合物调节至pH＝5～6，并且在真空中移除溶剂。通过制备型HPLC A(30-64％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物AE1(14mg)和AE2(11mg)。
化合物AE1 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝8.25min，ESI 476(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.40(s,1H),7.57(t,J＝6.9Hz,1H),7.45(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),7.38-7.24(m,3H),7.05(dd,J＝26.6,7.4Hz,1H),6.29(d,J＝8.8Hz,1H),6.25(dd,J＝7.1,1.9Hz,1H),5.70-5.65(m,1H),5.38(dd,J＝15.1,7.7Hz,1H),2.99-2.78(m,2H),2.21(dd,J＝13.4,2.6Hz,6H),2.10-1.89(m,5H),1.45-1.42(m,1H),0.97-0.94(m,6H)。
化合物AE2-P2 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝8.44min，ESI 476(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.46(d,J＝1.7Hz,1H),7.63(dd,J＝7.0,5.5Hz,1H),7.58-7.53(m,1H),7.42-7.23(m,3H),7.12(dd,J＝10.8,7.3Hz,1H),6.38(s,1H),6.31(d,J＝7.1Hz,1H),5.69(q,J＝7.7Hz,1H),5.34-5.32(m,1H),3.02-2.76(m,2H),2.27(s,3H),2.23(s,3H),2.05(s,3H),1.91-1.71(m,2H),1.43-1.22(m,1H),0.98-0.75(m,6H)。
制备化合物AF1和AF2
步骤1：5-溴-6-碘烟酸甲酯
Figure BDA0002782961440001581
在室温下将5-溴-6-氯烟酸甲酯(3.2g，0.013mol)、碘三甲基硅烷(2.57g，0.013mol)和NaI(5.8g，0.039mol)在MeCN(50mL)中的混合物搅拌16小时。用2N NaOH溶液将混合物调节至pH＝8并且用EtOAc(50mL×2)萃取溶液。在减压下浓缩合并的有机层，得到呈白色固体的粗产物5-溴-6-碘烟酸甲酯(290mg)。收率100％(43％纯度，UV＝254nm，ESI341.9(M+H)+)。
步骤2：5-溴-6-甲基烟酸甲酯
Figure BDA0002782961440001591
在75℃下将5-溴-6-碘烟酸甲酯(5.2g，0.015mol)、2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三硼杂环己烷(trioxatriborinane)(50％在THF中，6.4mL，0.045mol)、PdCl2(dppf)(1.11g，1.52mmol)和K2CO3(6.3g，0.046mol)在1,4-二噁烷(80mL)中的混合物搅拌16小时。添加水(50mL)，并且用EtOAc(60mL×2)萃取溶液。在减压下浓缩合并的有机层，并且通过快速柱层析法(20％EtOAc/石油醚)纯化残余物以提供呈白色固体的期望产物5-溴-6-甲基烟酸甲酯(1.67g)。收率48％(92％纯度，UV＝254nm，ESI 230(M+H)+)。
步骤3：(S)-6-甲基-5-(3-甲基吗啉代)烟酸甲酯
Figure BDA0002782961440001592
在N2气氛下将5-溴-6-甲基烟酸甲酯(1.6g，6.95mmol)、(S)-3-甲基吗啉(2.1g，20.85mmol)、RuPhos-Pd-G2(270mg，0.35mmol)和Cs2CO3(6.8g，20.85mmol)在甲苯(10mL)中的混合物加热至110℃并且搅拌24小时。通过硅藻土垫过滤混合物并且在减压下浓缩滤液，得到粗产物，其通过硅胶柱(20％EtOAc/石油醚)纯化以提供呈白色固体的期望产物(S)-6-甲基-5-(3-甲基吗啉代)烟酸甲酯(290mg)。收率17％(43％纯度，UV＝254nm，ESI 251(M+H)+)。
步骤4：(S)-(6-甲基-5-(3-甲基吗啉代)吡啶-3-基)甲醇
Figure BDA0002782961440001601
在-78℃下向(S)-6-甲基-5-(3-甲基吗啉代)烟酸甲酯(290mg，1.16mmol)在DCM(10mL)中的溶液中逐滴添加DIBAL-H(1M在己烷中，3.5mL，3.5mmol)，并且在室温下搅拌反应溶液16小时。缓慢添加水(5mL)并且搅拌混合物10分钟。通过硅藻土垫过滤混合物，并且在减压下浓缩滤液以提供呈无色油状物的粗产物(S)-(6-甲基-5-(3-甲基吗啉代)吡啶-3-基)甲醇(220mg)，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。收率86％(60％纯度，UV＝254nm，ESI 223(M+H)+)。
步骤5：(S)-6-甲基-5-(3-甲基吗啉代)烟醛
Figure BDA0002782961440001602
向(S)-(6-甲基-5-(3-甲基吗啉代)吡啶-3-基)甲醇(220mg，0.99mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加PCC(320mg，1.49mmol)并且在室温下搅拌溶液2小时。通过硅藻土垫过滤混合物并且在减压下浓缩滤液以提供粗产物，其通过制备型TLC(石油醚:EtOAc 1:1)纯化以提供呈无色油状物的期望产物(S)-6-甲基-5-(3-甲基吗啉代)烟醛(150mg)。收率69％(44％纯度，UV＝254nm，ESI 221(M+H)+)。
步骤6：3-氨基-3-(6-甲基-5-((S)-3-甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440001611
向(S)-6-甲基-5-(3-甲基吗啉代)烟醛(130mg，0.59mmol)在EtOH(10mL)中的溶液中添加丙二酸(92mg，0.89mmol)和NH4OAc(136mg，1.77mmol)。将混合物加热至60℃并且搅拌16小时。在减压下浓缩混合物，得到呈白色固体的粗产物3-氨基-3-(6-甲基-5-((S)-3-甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸(164mg)，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。收率100％(21％纯度，UV＝214nm，ESI 280(M+H)+)。
步骤7：3-氨基-3-(6-甲基-5-((S)-3-甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001612
在0℃下向3-氨基-3-(6-甲基-5-((S)-3-甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸(164mg，0.59mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中逐滴添加SOCl2(1mL)，并且在室温下搅拌溶液2小时。添加水(20mL)并且用EtOAc(20mL×3)萃取溶液。有机层用NaHCO3饱和水溶液(10mL×2)和盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过制备型TLC(石油醚:EtOAc 1:1)纯化，得到呈白色固体的期望产物3-(2',6-二甲基-3-氨基-3-(3-溴-4-甲基苯基)丙酸甲酯(50mg)。收率29％，两个步骤(76％纯度，UV＝254nm，ESI 294(M+H)+)。
步骤8：3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)-3-(6-甲基-5-((S)-3-甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001621
在室温下将3-氨基-3-(6-甲基-5-((S)-3-甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸甲酯(50mg，0.17mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(49mg，0.22mmol)、HOBt(34mg，0.26mmol)、EDCI(49mg，0.26mmol)和DIEA(66mg，0.51mmol)在DCM(10mL)中的混合物搅拌16小时。在减压下浓缩混合物得到残余物，其通过制备型TLC(石油醚:EtOAc 1:1)纯化，获得呈无色油状物的期望产物3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)-3-(6-甲基-5-((S)-3-甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸甲酯(60mg)。收率71％(58％纯度，UV＝254nm，ESI 499(M+H)+)。
步骤9：化合物AF1、AF2和AF3
Figure BDA0002782961440001622
在室温下将甲基3-((S)-3-((S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)-3-(6-甲基-5-((S)-3-甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸甲酯(60mg，0.12mmol)用含LiOH-H2O(15mg，0.36mmol)的THF(5mL)和H2O(2mL)处理1小时。用HCl(1M)将混合物酸化至pH＝5～6。在减压下移除溶剂，并且通过制备型HPLC B(30～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物AF1(4mg)、AF2(2mg)和AF3(2mg)。
化合物AF1 LC/MS A 97％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.26min，ESI 485(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.14(s,1H),7.60(t,J＝7.8Hz,1H),7.48(d,J＝4.6Hz,1H),6.43(d,J＝12.6Hz,1H),6.31(d,J＝7.0Hz,1H),5.68-5.66(m,1H),5.32(s,1H),3.92-3.71(m,3H),3.42-3.35(m,1H),3.20-3.15(m,1H),2.89-2.73(m,3H),2.69-2.66(m,0.5H),2.58-2.55(m,0.5H),2.47(s,3H),2.24(d,J＝4.1Hz,3H),2.01-1.86(m,2H),1.48-1.43(m,1H),0.99-0.96(m,6H),0.72(d,J＝6.1Hz,1.5H),0.63(d,J＝6.1Hz,1.5H)。
化合物AF2 LC/MS A 100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.27min，ESI 485(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.21(d,J＝1.7Hz,1H),7.63(d,J＝7.3Hz,2H),6.41(s,1H),6.32(d,J＝5.6Hz,1H),5.70-5.65(m,1H),5.30(t,J＝7.1Hz,1H),3.94-3.77(m,3H),3.43(m,1H),3.30(m,1H),2.97-2.71(m,4H),2.53(s,3H),2.25(s,3H),1.87-1.82(m,2H),1.39-1.33(m,1H),0.95-0.91(m,6H),0.80(d,J＝6.2Hz,3H)。
化合物AF3 LC/MS A：96％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.28min，ESI 485(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.21(s,1H),7.66-7.59(m,2H),6.40(s,1H),6.32(d,J＝7.2Hz,1H),5.72-5.69(m,1H),5.29(t,J＝7.1Hz,1H),3.94-3.76(m,3H),3.40(m,1H),3.30(m,1H),2.97-2.73(m,4H),2.53(s,3H),2.25(s,3H),1.87-1.80(m,2H),1.38-1.32(m,1H),0.94-0.91(m,6H),0.79(d,J＝6.1Hz,3H)。
制备化合物AG1b
步骤1：(S)-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-(叔丁氧羰基氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001641
在N2下在120℃下将(S)-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-(叔丁氧羰基氨基)丙酸甲酯(300mg，0.84mmol)、(S)-2-甲基哌啶(166mg，1.68mmol)、Pd(OAc)2(19mg，0.084mmol)、Xphos(80mg，0.168mmol)和Cs2CO3(822mg，2.52mmol)在甲苯(2mL)中的混合物搅拌16小时。经硅藻土过滤混合物并且在真空中浓缩滤液。通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝1:1)纯化残余物，得到呈黄色油状物的期望产物(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(30mg)。收率10％(98％纯度，UV＝214nm，ESI 378(M+H)+)。
步骤2：(S)-3-氨基-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001642
在室温下用含HCl(1mL)的二噁烷(5mL)将(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(50mg，0.13mmol)处理1小时。在真空中移除溶剂以提供呈黄色油状物的粗产物(S)-3-氨基-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(37mg)。收率100％(98％纯度，UV＝214nm，ESI 278(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤3：(3S)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001651
在室温下将(S)-3-氨基-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(37mg，0.13mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(29mg，0.13mmol)、HOBt(27mg，0.20mmol)、EDCI(38mg，0.20mmol)和DIEA(52mg，0.40mmol)在DCM(5mL)中的混合物搅拌2小时。将混合物倒入10mL水中并且用DCM(30mL×3)萃取溶液。有机相经Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩滤液。通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝1:1)纯化残余物以提供呈黄色油状物的期望产物(3S)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(40mg)。收率63％(95％纯度，UV＝254nm，ESI 483(M+H)+)。
步骤4：(S)-3-((S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440001652
在室温下用含LiOH(1M在H2O中，0.6mL)的THF(2mL)将(3S)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(40mg，0.08mmol)处理2小时。用1M HCl将混合物调节至pH＝5～6，并且在真空中移除溶剂。通过制备型HPLC A(30-70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望化合物AG1a(7.4mg)和呈白色固体的AG1b(10.0mg)。
化合物AG1b LC/MS A：98％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.57min，ESI 469(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.09(d,J＝2.7Hz,1H),7.93(d,J＝1.4Hz,1H),7.61(d,J＝7.1Hz,1H),7.35(s,1H),6.38(s,1H),6.30(dd,J＝7.2,1.8Hz,1H),5.70(dd,J＝9.3,6.8Hz,1H),5.26(t,J＝7.3Hz,1H),4.10(s,1H),3.39(d,J＝12.3Hz,1H),3.00-3.04(m,1H),2.76-2.89(m,2H),2.23(s,3H),1.95-1.57(m,9H),1.42-1.28(m,1H),1.07(d,J＝6.7Hz,3H),0.90-0.93(m,6H)。
制备化合物AG2b
步骤1：(R)-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-(叔丁氧羰基氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001661
在N2在120℃下将(R)-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-(叔丁氧羰基氨基)丙酸甲酯(300mg，0.84mmol)、(S)-2-甲基哌啶(166mg，1.68mmol)、Pd(OAc)2(19mg，0.084mmol)、Xphos(80mg，0.168mmol)和Cs2CO3(822mg，2.52mmol)在甲苯(2mL)中的混合物搅拌16小时。经硅藻土过滤混合物并且在真空中浓缩滤液。通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝1:1)纯化残余物，得到(R)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(30mg)。收率10％(98％纯度，UV＝214nm，ESI 378(M+H)+)。
步骤2：(R)-3-氨基-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001671
在室温下用含HCl(1mL)的二噁烷(5mL)将(R)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(50mg，0.13mmol)处理1小时。在真空中移除溶剂以提供呈黄色油状物的粗产物(R)-3-氨基-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(37mg)。收率100％(98％纯度，UV＝214nm，ESI 278(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤3：(3R)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001672
在室温下将(R)-3-氨基-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(37mg，0.13mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(29mg，0.13mmol)、HOBt(27mg，0.20mmol)、EDCI(38mg，0.20mmol)和DIEA(52mg，0.40mmol)在DCM(5mL)中的混合物搅拌2小时。将混合物倒入10mL水中并且用DCM(30×3)萃取溶液。有机相经Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩滤液。通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝1:1)纯化残余物以提供呈黄色油状物的期望产物(3R)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(40mg)。收率63％(95％纯度，UV＝254nm，ESI483(M+H)+)。
步骤4：(3R)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440001681
在室温下用含LiOH(1M在H2O中，0.6mL)的THF(2mL)将(3R)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(40mg，0.08mmol)处理2小时。用1M HCl将混合物调节至pH＝5～6，并且在真空中移除溶剂。通过制备型HPLC A(30-70％MeCN)纯化所得残余物，得到呈白色固体的期望化合物AG2a(1.3mg)和AG2b(5.6mg)。
化合物AG2b LC/MS A：98％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.58min，ESI 469(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.11(d,J＝2.7Hz,1H),7.95(s,1H),7.64(d,J＝7.1Hz,1H),7.38(s,1H),6.43-6.25(m,2H),5.70(t,J＝8.0Hz,1H),5.29(t,J＝7.3Hz,1H),4.11(s,1H),3.42(d,J＝12.4Hz,1H),3.04(t,J＝11.7Hz,1H),2.82-2.86(m,2H),2.25(s,3H),1.98-1.58(m,8H),1.41-1.31(m,1H),1.09(d,J＝6.7Hz,3H),0.95-0.91(m,6H)。
制备化合物AH1
步骤1：(R)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸苄酯盐酸盐
Figure BDA0002782961440001691
向(R)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸苄酯(150mg，0.33mmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，2mL)并且在室温下搅拌溶液1小时。在减压下浓缩混合物以提供呈淡黄色油状物的粗产物(R)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸苄酯盐酸盐(117mg)，其不经进一步纯化即直接用于下一步骤。收率99％(97％纯度，UV＝214nm，ESI 361(M+H)+)。
步骤2：(3R)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸苄酯
Figure BDA0002782961440001692
在室温下将(R)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸苄酯盐酸盐(117mg，0.325mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(71mg，0.34mmol)、HOBt(66mg，0.49mmol)、EDCI(94mg，0.49mmol)和DIEA(126mg，0.98mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌3小时。将混合物倒入水中并且用EtOAc(20mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过制备型TLC(EtOAc:石油醚＝1:1)纯化，获得呈无色油状物的期望产物(3R)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸苄酯(80mg)。收率44％(70％纯度，UV＝214nm，ESI 552(M+H)+)。
步骤3：(3R)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代哌啶-1-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440001701
向(3R)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸苄酯(80mg，0.145mmol)在THF(6mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，40mg)，并且在H2气氛下在室温下搅拌溶液16小时。经硅藻土过滤混合物，并且在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化以提供呈白色固体的期望产物(3R)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代哌啶-1-基)戊酰氨基)丙酸(26.2mg)。
化合物AH1 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.58min，ESI 466(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.57(d,J＝5.6Hz,1H),8.25(s,1H),7.67-7.59(m,1H),7.27-7.07(m,3H),5.42(t,J＝7.0Hz,1H),5.31-5.19(m,1H),3.32-3.09(m,2H),2.98-2.86(m,2H),2.56-2.21(m,2H),2.06-1.95(m,6H),1.91-1.36(m,7H),1.09-0.83(m,6H)。
制备化合物AH2
步骤1：3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440001702
向5-溴烟醛(20.0g，107.5mmol)在EtOH(100mL)中的溶液中添加丙二酸(11.2g，107.5mmol)和NH4OAc(16.6g，215.0mmol)。将混合物加热至80℃并且搅拌16小时。在减压下浓缩混合物，得到呈白色固体的粗产物3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸(26.3g)，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。(ESI 245(M+H)+)。
步骤2：3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001711
在0℃下向3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸(26.3g，107.3mmol)在MeOH(50mL)中的溶液中逐滴添加SOCl2(8mL)，并且在80℃下搅拌反应混合物2小时。添加水(50mL)并且用EtOAc(50mL×3)萃取溶液。合并的有机相用NaHCO3饱和水溶液(20mL×2)和盐水(20mL)洗涤。有机相经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过硅胶柱(5％MeOH/EtOAc)纯化，得到呈无色油状物的期望产物3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸甲酯(10g)。收率36％，两个步骤(73％纯度，UV＝214nm，ESI 260(M+H)+)。
步骤3：3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001712
向3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸甲酯(5.0g,19.3mmol)和Et3N(5.8g，57.9mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(4.3g，19.3mmol)。在室温下搅拌反应混合物16小时。在减压下浓缩混合物，得到残余物，其通过硅胶柱(35％EtOAc/石油醚)纯化以提供呈无色油状物的期望产物3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯(5.1g)。收率74％(86％纯度，UV＝214nm，ESI 361(M+H)+)。
步骤4：3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440001721
向3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯(5.1g，14.2mmol)在THF(20mL)中的溶液中添加含LiOH-H2O(1.2g,28.4mmol)的水(5mL)。在室温下搅拌混合物1小时。用HCl(1M)将混合物酸化至pH＝6～7。用EtOAc(20mL×5)萃取混合物。合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩，得到呈无色油状物的粗产物3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸(4.2g)，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。收率86％(98％纯度，UV＝214nm，ESI 347(M+H)+)。
步骤5：3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸苄酯
Figure BDA0002782961440001722
向3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸(4.2g，12.2mmol)在DMF(20mL)中的溶液中添加K2CO3(3.4g,24.4mmol)和(溴甲基)苯(2.5g，14.6mmol)。在室温下搅拌混合物16小时。添加水(100mL)并且用EtOAc(30mL×3)萃取溶液。合并的有机相用盐水(20mL)洗涤并且经Na2SO4干燥。过滤混合物并且在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过硅胶柱(35％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈无色油状物的产物3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸苄酯(4.2g)。收率79％(83％纯度，UV＝214nm，ESI 436(M+H)+)。
步骤6：3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸苄酯
Figure BDA0002782961440001731
在微波中在N2气氛下将3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸苄酯(4.3g，9.9mmol)、(2,6-二甲基苯基)硼酸(1.78g，11.9mmol)、PdCl2(dppf)(724mg，0.99mmol)和K2CO3(2.7g，19.8mmol)在二噁烷(10mL)和H2O(2mL)中的混合物加热至110℃维持1小时。添加水(20mL)并且用EtOAc(20mL×3)萃取溶液。在减压下浓缩合并的有机相，得到残余物，其通过硅胶柱(35％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈棕色油状物的期望产物3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸苄酯(3.1g)。收率70％(94％纯度，UV＝214nm，ESI 461(M+H)+)。通过制备型手性HPLC将外消旋产物分离成呈白色固体的(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸苄酯(1.3g)和(R)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸苄酯(1.3g)。
步骤7：(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸苄酯盐酸盐
Figure BDA0002782961440001732
向(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸苄酯(150mg，0.33mmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，2mL)并且在室温下搅拌溶液1小时。在减压下浓缩混合物以提供呈淡黄色油状物的粗产物(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸苄酯盐酸盐(117mg)，其不经进一步纯化即直接用于下一步骤。预期收率99％(97.70％纯度，UV＝214nm，ESI 361(M+H)+)。
步骤8：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸苄酯
Figure BDA0002782961440001741
在室温下将(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸苄酯盐酸盐(117mg，0.325mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(71mg，0.34mmol)、HOBt(66mg，0.49mmol)、EDCI(94mg，0.49mmol)和DIEA(126mg，0.98mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌3小时。将混合物倒入水中并且用EtOAc(20mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过制备型TLC(EtOAc:石油＝1:1)纯化，获得呈无色油状物的期望产物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸苄酯(103mg)。收率57％(83％纯度，UV＝214nm，ESI552(M+H)+)。
步骤9：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代哌啶-1-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440001742
向(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸苄酯(103mg，0.19mmol)在THF(6mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，50mg)并且在H2气氛下在室温下搅拌混合物24小时。经硅藻土过滤混合物，并且在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过制备型HPLC A(30～70MeCN)纯化以提供呈白色固体的期望产物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代哌啶-1-基)戊酰氨基)丙酸(38.8mg)。
化合物AH2 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.58min，ESI 466(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.57(dd,J＝6.2,2.1Hz,1H),8.24(d,J＝1.9Hz,1H),7.67-7.59(m,1H),7.24-7.18(m,1H),7.15(d,J＝7.4Hz,2H),5.41(t,J＝6.9Hz,1H),5.32-5.20(m,1H),3.30-3.20(m,2H),2.91(dd,J＝7.0,4.9Hz,2H),2.52-2.23(m,2H),2.02(s,3H),2.01(d,J＝3.0Hz,3H),1.92-1.56(m,6H),1.55-1.41(m,1H),0.99-0.90(m,6H)。
制备化合物AI
步骤1：(R)-2-溴戊酸
Figure BDA0002782961440001751
在N2气氛下在0℃下向(R)-2-氨基戊酸(2.0g,17.1mmol)在含40％HBr的H2O(10mL)中的溶液中逐滴添加含NaNO2(1.89g，27.4mmol)的H2O(8mL)溶液。在室温下搅拌反应混合物16小时。用EtOAc(20mL×2)萃取混合物。合并的有机层用盐水(20mL)洗涤并且经Na2SO4干燥。过滤混合物并且在减压下浓缩滤液，得到呈棕色油状物的粗产物(R)-2-溴戊酸(2.5g)，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。收率81％
步骤2：(S)-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸
Figure BDA0002782961440001761
向(R)-2-溴戊酸(1.45g，8.02mmol)在无水THF(15mL)中的溶液中添加(t-BuO)2Mg(1.56g，9.16mmol)。在N2气氛下在30℃下搅拌混合物3小时。随后，将4-甲基吡啶-2-醇(500mg，4.58mmol)和t-BuOK(524mg，34.67mmol)添加至反应混合物。随后，在N2气氛下在70℃下搅拌混合物16小时。将混合物冷却至室温并且用HCl(1M)酸化至pH＝3～4。混合物用EtOAc(20mL×5)萃取并且合并的有机层经Na2SO4干燥。过滤混合物并且在减压下浓缩滤液并且通过反相快速层析法(0％～60％MeOH/H2O(5％TFA))纯化以提供期望产物(S)-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(110mg)。收率11％(94％纯度，UV＝214nm，ESI 210(M+H)+)。
步骤3：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001762
在室温下将(S)-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(65mg，0.31mmol)、(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(83mg，0.26mmol)、HOBt(42mg，0.31mmol)、EDCI(59mg，0.31mmol)和DIEA(101mg，0.78mmol)在DCM(10mL)中的混合物搅拌16小时。在减压下浓缩混合物，得到残余物，其通过制备型TLC(石油醚:EtOAc 1:1)纯化，获得呈无色油状物的期望产物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(70mg)。收率57％(100％纯度，UV＝214nm，ESI 476(M+H)+)。
步骤4：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440001771
在室温下用含LiOH-H2O(19mg，0.45mmol)的THF(4mL)和H2O(2mL)将(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(70mg，0.15mmol)处理1小时。用HCl(1M)将混合物酸化至pH＝5～6。在减压下移除溶剂，并且通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物AI1(16.7mg)和AI2(16.8mg)。
化合物AI1 LC/MS A 100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.54min，ESI 462(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.53(d,J＝1.7Hz,1H),8.19(d,J＝1.4Hz,1H),7.57(d,J＝7.1Hz,1H),7.54(s,1H),7.21(t,J＝7.5Hz,1H),7.13(t,J＝6.6Hz,2H),6.26(s,1H),6.23(dd,J＝7.1,1.8Hz,1H),5.57(dd,J＝8.8,7.1Hz,1H),5.42(t,J＝7.2Hz,1H),2.93(d,J＝7.2Hz,2H),2.19(s,3H),2.14-2.04(m,1H),1.97(s,3H),1.96-1.88(m,1H),1.87(s,3H),1.37-1.27(m,2H),0.98(t,J＝7.4Hz,3H)。
化合物AI2 LC/MS A 100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.57min，ESI 462(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.59(d,J＝1.9Hz,1H),8.26(d,J＝1.7Hz,1H),7.68(t,J＝1.9Hz,1H),7.63(d,J＝7.1Hz,1H),7.26-7.19(m,1H),7.16(d,J＝7.5Hz,2H),6.38(s,1H),6.31(dd,J＝7.2,1.8Hz,1H),5.56(dd,J＝8.9,6.9Hz,1H),5.39(t,J＝7.3Hz,1H),2.96-2.87(m,2H),2.24(s,3H),2.05-1.93(m,7H),1.90-1.79(m,1H),1.31-1.12(m,2H),0.90(t,J＝7.4Hz,3H)。
制备化合物AJ1a和AJ1b
步骤1：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((2R)-4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代哌啶-1-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440001781
向W1a(60mg，0.13mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，50mg)并且在H2气氛下在40℃下搅拌混合物48小时。经硅藻土过滤混合物，并且在减压下浓缩滤液以得到残余物，其通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化以提供呈白色固体的期望产物AJ1a(23.6mg)。
化合物AJ1a LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.64min，ESI 480(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.57(s,1H),8.25(s,1H),7.57(dd,J＝3.9,2.1Hz,1H),7.22(t,J＝7.5Hz,1H),7.19-7.13(m,2H),5.42(t,J＝7.0Hz,1H),5.26(t,J＝7.9Hz,1H),3.42-3.34(m,1H),3.16(m,1H),2.94(dd,J＝6.8,1.9Hz,2H),2.49-2.29(m,1H),2.02(s,3H),2.00(d,J＝2.8Hz,3H),1.98-1.61(m,5H),1.56-1.13(m,2H),0.96-0.91(m,9H)。
步骤2：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((2S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代哌啶-1-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440001791
向W1b(30mg，0.06mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，50mg)并且在40℃下在H2气氛下搅拌20小时。经硅藻土过滤混合物，并且在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化以提供呈白色固体的期望产物AJ1b(9.1mg)。
化合物AJ1b LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.62min，ESI 480(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.58(s,1H),8.25(s,1H),7.66(s,1H),7.25-7.19(m,1H),7.16(d,J＝7.5Hz,2H),5.42(t,J＝6.9Hz,1H),5.27-5.23(m,1H),3.50-3.36(m,1H),3.31-3.20(m,1H),2.98-2.88(m,2H),2.14-2.04(m,1H),2.01(d,J＝6.9Hz,6H),1.94-1.88(m,2H),1.74-1.34(m,4H),1.08-1.00(m,3H),0.96-0.83(m,6H)。
制备化合物AK1和AK2
步骤1：(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-(2,2-二甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001801
在N2气氛下在120℃下将(S)-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-(叔丁氧羰基氨基)丙酸甲酯(150mg，0.42mmol)、2,2-二甲基吗啉(96mg，0.84mmol)、Pd(OAc)2(9mg，0.04mmol)、X-Phos(40mg，0.08mmol)和Cs2CO3(408mg，1.25mmol)在甲苯(2mL)中的混合物搅拌16小时。将混合物冷却至室温并且过滤。在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过制备型TLC(EtOAc:石油醚＝1:2)纯化，获得呈无色油状物的期望产物(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-(2,2-二甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸甲酯(88mg)。收率54％(21％纯度，UV＝214nm，ESI 394(M+H)+)。
步骤2：(S)-3-氨基-3-(5-(2,2-二甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸甲酯盐酸盐
Figure BDA0002782961440001802
向甲基(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-(2,2-二甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸甲酯(88mg，0.22mmol)在DCM(3mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，10mL)，并且在室温下搅拌溶液3小时。在减压下浓缩混合物以提供呈淡黄色固体的粗产物(S)-3-氨基-3-(5-(2,2-二甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(80mg)，其不经进一步纯化即直接用于下一步骤。收率100％(79％纯度，UV＝214nm，ESI 294(M+H)+)。
步骤3：(3S)-3-(5-(2,2-二甲基吗啉代)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001811
在室温下将(S)-3-氨基-3-(5-(2,2-二甲基吗啉代)吡啶-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(80mg，0.24mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(65mg，0.29mmol)、HOBt(49mg，0.36mmol)、EDCI(93mg，0.49mmol)和DIEA(125mg，0.97mmol)在DCM(15mL)中的混合物搅拌16小时。在减压下浓缩混合物，得到粗产物，其通过制备型TLC(EtOAc)纯化，得到呈无色油状物的期望产物(3S)-3-(5-(2,2-二甲基吗啉代)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(68mg)。收率56％(69％纯度，UV＝214nm，ESI 499(M+H)+)。
步骤4：(3S)-3-(5-(2,2-二甲基吗啉代)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440001812
在室温下用含LiOH-H2O(18mg，0.42mmol)的THF(6mL)和H2O(1mL)将(3S)-3-(5-(2,2-二甲基吗啉代)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(68mg，0.14mmol)处理2小时。用HCl(1M)将混合物酸化至pH＝5。在真空中移除溶剂，并且通过制备型HPLC A(30％～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望化合物AK1(20.9mg)和AK2(13.6mg)。
化合物AK1 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.49min，ESI 485(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.08(d,J＝2.3Hz,1H),7.94(s,1H),7.60(d,J＝7.2Hz,1H),7.28(s,1H),6.36(s,1H),6.28(dd,J＝7.1,1.8Hz,1H),5.69(dd,J＝9.3,6.8Hz,1H),5.33(t,J＝7.2Hz,1H),3.95-3.82(m,2H),3.18-3.11(m,2H),3.06-2.99(m,2H),2.83(d,J＝7.3Hz,2H),2.22(s,3H),1.98-1.83(m,2H),1.49-1.43(dtm,1H),1.32(s,6H),0.99-0.96(m,6H)。
化合物AK2 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.52min，ESI 485(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.14(d,J＝2.5Hz,1H),8.01(s,1H),7.63(d,J＝7.1Hz,1H),7.37(s,1H),6.40(s,1H),6.31(dd,J＝7.1,1.8Hz,1H),5.69(dd,J＝9.1,7.0Hz,1H),5.28(t,J＝7.3Hz,1H),3.98-3.79(m,2H),3.24-3.17(m,2H),3.08(s,2H),2.91-2.79(m,2H),2.25(s,3H),1.93-1.75(m,2H),1.40-1.35(m,1H),1.34(s,6H),0.94-0.90(m,6H)。
制备化合物AL1和AL2
步骤1：2-(5,5-二甲基-2-氧代哌啶-1-基)-4-甲基戊酸
Figure BDA0002782961440001821
向5,5-二甲基哌啶-2-酮(100mg，0.79mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加NaH(60％在油中，158mg，3.95mmol)并且在120℃下搅拌2小时。随后，添加2-碘-4-甲基戊酸乙酯(320mg，1.19mmol)并且在室温下搅拌溶液2小时。用MeOH淬灭反应并且在减压下浓缩。通过制备型HPLC B(20～50％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望产物2-(5,5-二甲基-2-氧代哌啶-1-基)-4-甲基戊酸(38mg)。收率20％(100％纯度，UV＝254nm，ESI 242(M+H)+)。
步骤2：(3S)-3-(2-(5,5-二甲基-2-氧代哌啶-1-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001831
在室温下将2-(5,5-二甲基-2-氧代哌啶-1-基)-4-甲基戊酸(38mg，0.16mmol)、(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(56mg，0.18mmol)、HOBt(26mg，0.19mmol)、EDCI(36mg，0.19mmol)和DIEA(62mg，0.48mmol)在DCM(5mL)中的混合物搅拌16小时。在减压下浓缩混合物，得到残余物，其通过制备型TLC(石油醚:EtOAc 1:1)纯化，获得呈无色油状物的期望产物(3S)-3-(2-(5,5-二甲基-2-氧代哌啶-1-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(50mg)。收率63％(94％纯度，UV＝254nm，ESI 508(M+H)+)。
步骤3：(3S)-3-(2-(5,5-二甲基-2-氧代哌啶-1-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440001832
在室温下用含LiOH-H2O(21mg，0.5mmol)的THF(5mL)和H2O(1mL)将(3S)-3-(2-(5,5-二甲基-2-氧代哌啶-1-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(50mg，0.1mmol)处理1小时。用HCl(1M)将混合物酸化至pH＝5～6，并且在减压下移除溶剂。通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的产物(3S)-3-(2-(5,5-二甲基-2-氧代哌啶-1-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸(35mg)。收率72％(100％纯度，UV＝254nm，ESI 494(M+H)+)。通过制备型手性SFC F将非对映异构体(3S)-3-(2-(5,5-二甲基-2-氧代哌啶-1-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸分离成两种呈白色固体的化合物AL1(10mg)和AL2(11mg)。
化合物AL1 LC/MS B 99％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.66min，ESI 494(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.46(s,1H),8.12(s,1H),7.55(s,1H),7.13-6.98(m,3H),5.27(t,J＝6.9Hz,1H),5.18-5.08(m,1H),3.02(d,J＝12.2Hz,1H),2.91(dd,J＝25.8,9.8Hz,1H),2.84-2.70(m,2H),2.46-2.25(m,2H),1.90(s,3H),1.89(s,3H),1.62-1.45(m,3H),1.45-1.34(m,1H),1.35-1.27(m,1H),0.91(d,J＝1.2Hz,6H),0.83-0.71(m,6H)。
化合物AL2 LC/MS B 99％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.66min，ESI 494(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.57(s,1H),8.24(s,1H),7.62(s,1H),7.23-7.14(m,3H),5.43(t,J＝6.9Hz,1H),5.25(dd,J＝8.4,7.1Hz,1H),3.06(dd,J＝19.3,9.8Hz,1H),2.97(d,J＝12.2Hz,1H),2.92(d,J＝6.8Hz,2H),2.42-2.25(m,2H),2.02(s,3H),2.01(s,3H),1.76-1.66(m,1H),1.64-1.58(m,1H),1.58-1.47(m,2H),1.46-1.41(m,1H),1.05-0.86(m,9H),0.77(s,3H)。
制备化合物AM
步骤1：4-甲基-2-(甲基磺酰氧基)戊酸酯
Figure BDA0002782961440001851
在0℃下向2-羟基-4-甲基戊酸乙酯(5.0g，31.2mmol)和Et3N(6.3g，62.4mmol)在DCM(20mL)中的溶液中逐滴添加MsCl(4.3g，37.4mmol)。在室温下搅拌反应混合物2小时。将混合物倒入水中并且用EtOAc(20mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩滤液，得到呈棕色油状物的粗产物4-甲基-2-(甲基磺酰氧基)戊酸乙酯(7.2g)。收率95％(68％纯度，UV＝214nm，ESI 239(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤2：2-碘-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440001852
向4-甲基-2-(甲基磺酰氧基)戊酸乙酯(2.0g,8.4mmol)在MeCN(80mL)中的溶液中添加K2CO3(3.5g，25.2mmol)和NaI(2.5g，16.8mmol)。在80℃下搅拌反应混合物16小时。将混合物倒入水中并且用EtOAc(20mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩滤液，得到呈黄色油状物的粗产物2-碘-4-甲基戊酸乙酯(1.8g)。收率79％。粗产物直接用于下一步骤。
步骤3：4-甲基-2-(2-氧代-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440001853
向3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮(500mg，3.4mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加60％NaH(163mg，6.8mmol)并且在120℃下搅拌1小时，随后冷却至室温并且添加2-碘-4-甲基戊酸乙酯(1.0g，3.4mmol)。在室温下搅拌反应混合物1小时。将混合物倒入水中并且用EtOAc(20mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过快速柱层析法(0％～10％EtOAc/石油醚)纯化，获得呈白色固体的期望产物4-甲基-2-(2-氧代-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)戊酸酯(370mg)。收率38％(89％纯度，UV＝214nm，ESI 290(M+H)+)。
步骤4：4-甲基-2-(2-氧代-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)戊酸
Figure BDA0002782961440001861
在室温下用含LiOH-H2O(74mg，1.77mmol)的THF(6mL)和H2O(1mL)将4-甲基-2-(2-氧代-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)戊酸酯(170mg，0.59mmol)处理16小时。用HCl(1M)将混合物酸化直至pH＝3。用EtOAc(20mL×2)萃取水溶液，并且合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩滤液，得到呈无色油状物的粗产物4-甲基-2-(2-氧代-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)戊酸(150mg)。收率95％(97％纯度，UV＝214nm，ESI 262(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤5：(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001862
向甲基(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(70mg，0.18mmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，2mL)，并且在室温下搅拌溶液2小时。在真空中移除溶剂以提供呈白色固体的粗产物(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(50mg)。收率99％(88％纯度，UV＝214nm，ESI 285(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤6：3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸酯
Figure BDA0002782961440001871
在室温下将(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(50mg，0.18mmol)、4-甲基-2-(2-氧代-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)戊酸(56mg，0.22mmol)、HOBt(30mg，0.22mmol)、EDCI(60mg，0.22mmol)和DIEA(93mg，0.72mmol)在DCM(10mL)中的混合物搅拌3小时。将混合物倒入水中并且用DCM(20mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过快速柱层析法(0％～70％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈无色油状物的期望产物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(70mg)。收率75％(93％纯度，UV＝214nm，ESI 528(M+H)+)。
步骤7：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440001881
在室温下用含LiOH-H2O(16mg，0.39mmol)的THF(6mL)和H2O(1mL)将(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(70mg，0.13mmol)处理4小时。用HCl(1M)将混合物酸化直至pH＝5。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望产物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-氧代-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸(16mg)。
化合物AM LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.67min，ESI 514(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.58(s,0.5H),8.48(s,0.5H),8.25(s,0.5H),8.19(s,0.5H),7.67(s,0.5H),7.45(s,0.5H),7.31-6.77(m,7H),5.67-5.52(m,2H),3.00-2.77(m,4H),2.77-2.58(m,2H),2.05-1.87(m,8H),1.35(s,1H),0.96-0.75(m,6H)。
制备化合物AN1和AN2
步骤1：(S)-5-(1-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲氧基-3-氧代丙基)吡啶-3-基硼酸
Figure BDA0002782961440001882
在N2气氛下在105℃下将(S)-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-(叔丁氧羰基氨基)丙酸甲酯(600mg，1.68mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-辛甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(850mg，3.36mmol)、Pd(dppf)Cl2(61mg，0.084mmol)和KOAc(3300mg，3.36mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物搅拌16小时。将混合物冷却至室温并且经硅藻土过滤。在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过反相柱(0％～50％MeOH/H2O(TFA5％))纯化，得到呈无色油状物的期望产物(S)-5-(1-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲氧基-3-氧代丙基)吡啶-3-基硼酸(350mg)。收率64％(82.10％纯度，UV＝214nm，ESI 325(M+H)+)。
步骤2：(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-(2-氯-6-甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001891
在80℃下在微波中在N2气氛下将甲基2-溴-1-氯-3-甲基苯(100mg，0.49mmol)、(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(199mg，0.49mmol)、PdCl2(dppf)(30mg，0.04mmol)和K2CO3(138mg，1.0mmol)在二噁烷(3mL)和H2O(0.4mL)中的混合物搅拌50分钟。添加水(20mL)，并且用EtOAc(10mL×3)萃取溶液。合并的有机相在真空中浓缩并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 2:1)纯化，得到呈无色油状物的期望产物(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-(2-氯-6-甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(120mg)。收率51％(85％纯度，UV＝214nm，ESI 405.1(M+H)+)。
步骤3：(S)-3-氨基-3-(5-(2-氯-6-甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001892
向(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-(2-氯-6-甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(120mg，0.30mmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加含HCl的二噁烷(4M，2mL)并且在室温下搅拌2小时。在真空中移除溶剂以提供呈白色固体的粗产物(S)-3-氨基-3-(5-(2-氯-6-甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(110mg)。(82％纯度，UV＝214nm，ESI 305.1(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤4：(3S)-3-(5-(2-氯-6-甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001901
在室温下将(S)-3-氨基-3-(5-(2-氯-6-甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(110mg，0.36mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(81mg，0.36mmol)、HOBt(81mg，0.6mmol)、EDCI(115mg，0.6mmol)和DIEA(93mg，0.72mmol)在DCM(10mL)中的混合物搅拌5小时。添加水，并且用DCM(20mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过快速柱(10％～90％EtOAc/石油)纯化，得到呈无色油状物的期望产物(3S)-3-(5-(2-氯-6-甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(105mg)。收率49％(83％纯度，UV＝214nm，ESI510.2(M+H)+)。
步骤5：(3S)-3-(5-(2-氯-6-甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440001911
在室温下用含LiOH-H2O(42mg，1.0mmol)的THF(6mL)和H2O(1mL)将(3S)-3-(5-(2-氯-6-甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(105mg，0.21mmol)处理4小时。用HCl(1M)将溶液酸化直至pH＝5，并且在真空中移除溶剂，并且通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物AN1(22mg)和AN2(23mg)。
化合物AN1 LC/MS 100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.77min，ESI 496.3(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.56(s,1H),8.24(s,1H),7.65-7.47(m,2H),7.42-7.21(m,3H),6.28(s,1H),6.25-6.19(m,1H),5.74-5.64(m,1H),5.45-5.41(m,1H),2.91(d,J＝7.0Hz,2H),2.19(d,J＝7.1Hz,3H),1.94-1.86(m,4H),1.48-1.42(m,1H),0.978-0.88(m,6H)。
化合物AN2 LC/MS 100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.82min，ESI 496.3(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.65-8.56(m,1H),8.34-8.25(m,1H),7.80-7.70(m,1H),7.64-7.62(m,1H),7.41-7.38(m,1H),7.30(t,J＝19.1Hz,2H),6.39(s,1H),6.32-6.30(m,1H),5.72-5.68(m,1H),5.42-5.37(m,1H),3.01-2.74(m,2H),2.21(d,J＝30.5Hz,3H),2.10(s,3H),1.88-1.72(m,2H),1.35-1.30(m,1H),0.91-0.88(m,6H)。
制备化合物AO1和AO2
步骤1：(4-氟-2,6-二甲基苯基)硼酸
Figure BDA0002782961440001921
在-78℃下在N2气氛下向2-溴-5-氟-1,3-二甲基苯(2g，9.9mmol)在THF(20mL)中的溶液中逐滴添加n-BuLi(2.5M在己烷中，6mL，14.8mmol)。在-78℃下搅拌反应混合物30分钟。添加硼酸三异丙酯(5.58g，29.7mmol)。将混合物升温至室温并且搅拌1小时。添加HCl(5M，20mL)并且在室温下搅拌混合物10分钟。用EtOAc(30mL×2)萃取混合物。用HCl(5M)将水相酸化直至pH＝1并且用EtOAc(30mL×2)萃取溶液。合并的有机相经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液，得到粗产物(4-氟-2,6-二甲基苯基)硼酸(500mg)。收率30％(86％纯度，UV＝214nm，ESI 167.2(M+H)+。粗产物直接用于下一步骤。
步骤2：(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(5-(4-氟-2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001922
在微波下在110℃下在N2气氛下将(4-氟-2,6-二甲基苯基)硼酸(171mg，1.02mmol)、(S)-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯(120mg，0.34mmol)、Pd(dppf)Cl2(20mg，0.027mmol)和K2CO3(117mg，0.85mmol)在1,4-二噁烷(3mL)和H2O(0.5mL)中的混合物搅拌3小时。将混合物倒入水中并且用EtOAc(30mL×2)萃取溶液。合并的有机相经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 2:1)纯化残余物，得到呈无色油状物的期望产物(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(5-(4-氟-2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(150mg)。收率76％(68％纯度，UV＝214nm，ESI 403.2(M+H)+)。
步骤3：(S)-3-氨基-3-(5-(4-氟-2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001931
向(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(5-(4-氟-2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(150mg，0.37mmol)在DCM(2mL)中的溶液中添加含HCl的二噁烷(4M，1mL)。在室温下搅拌溶液1小时。添加NaHCO3饱和水溶液(20mL)并且用EtOAc(30mL×2)萃取溶液。合并的有机相经NaSO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液以提供呈无色油状物的粗产物(S)-3-氨基-3-(5-(4-氟-2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(110mg)。收率99％(81％纯度，UV＝214nm，ESI 303.2(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤4：(3S)-3-(5-(4-氟-2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001932
在室温下将(S)-3-氨基-3-(5-(4-氟-2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(110mg，0.36mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(81mg，0.36mmol)、HOBt(59mg，0.43mmol)、EDCI(83mg，0.43mmol)和DIEA(94mg，0.72mmol)在DMF(6mL)中的混合物搅拌2小时。将混合物倒入水中并且用EtOAc(30mL×2)萃取溶液。合并的有机相经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液，得到呈黄色油状物的粗产物(3S)-3-(5-(4-氟-2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(117mg)。收率63％(26％纯度，UV＝214nm，ESI 508.3(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤5：(S)-3-(5-(4-氟-2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((R)-4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440001941
在室温下用含LiOH-H2O(29mg，0.69mmol)的THF(6mL)和H2O(1mL)将(3S)-3-(5-(4-氟-2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(117mg，0.23mmol)处理1.5小时。用HCl(1M)将混合物酸化直至pH＝5。在真空中移除溶剂，并且通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物AO1(4mg)和AO2(5mg)。
化合物AO1 LC/MS C：99％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.58min，ESI 494.0(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.53(s,1H),8.17(s,1H),7.57(d,J＝7.1Hz,1H),7.49(s,1H),6.96-6.84(m,2H),6.29(s,1H),6.25(d,J＝7.1Hz,1H),5.68(t,J＝8.1Hz,1H),5.40(t,J＝7.0Hz,1H),2.89(s,2H),2.19(s,3H),1.98(s,3H),1.93(t,J＝7.5Hz,2H),1.86(s,3H),1.47-1.42(m,1H),1.03-0.85(m,6H)。
化合物AO2 LC/MS C：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.61min，ESI 494.0(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.60(s,1H),8.25(s,1H),7.72-7.57(m,2H),6.93(d,J＝9.6Hz,2H),6.41(s,1H),6.34(d,J＝7.0Hz,1H),5.71-5.61(m,1H),5.37(t,J＝6.9Hz,1H),2.85(s,2H),2.25(s,3H),2.02(s,5H),1.92-1.75(m,2H),1.46-1.26(m,1H),0.97-0.87(m,6H)。
制备化合物AP1和AP2
步骤1：2-溴-1-甲氧基-3-甲基苯
Figure BDA0002782961440001951
在0℃向2-溴-3-甲基酚(500mg，2.7mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加NaH(60％在油中，82mg，3.4mmol)。在0℃搅拌混合物30分钟。随后添加碘甲烷(761mg，5.4mmol)。将反应混合物升温至室温并且搅拌12小时。将混合物倒入水中并且用EtOAc(20mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过快速柱(0％～10％EtOAc/石油)纯化以提供呈无色油状物的期望产物2-溴-1-甲氧基-3-甲基苯(420mg)。
步骤2：(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-(2-甲氧基-6-甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001961
将2-溴-1-甲氧基-3-甲基苯(85mg)、(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(199mg，0.49mmol)、PdCl2(dppf)(30mg，0.04mmol)和K2CO3(138mg，1.0mmol)在二噁烷(3mL)和H2O(0.4mL)中的混合物在N2气氛下于微波中在80℃搅拌50分钟。添加水(20mL)，并且用EtOAc(10mL×3)萃取溶液。在减压下浓缩合并的有机相，并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 2:1)纯化残余物，得到呈无色油状物的期望产物(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-(2-甲氧基-6-甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(110mg)。收率44％(61％纯度，UV＝214nm，ESI 401.1(M+H)+)。
步骤3：(S)-3-氨基-3-(5-(2-甲氧基-6-甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001962
向(S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(5-(2-甲氧基-6-甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(110mg，0.27mmol)在DCM(3mL)中的溶液中添加含HCl的二噁烷(4M，2mL)，并且在室温下搅拌溶液2小时。在真空中移除溶剂以提供呈白色固体的粗产物(S)-3-氨基-3-(5-(2-甲氧基-6-甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(90mg)。(74％纯度，UV＝214nm，ESI 301.1(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤4：(3S)-3-(5-(2-甲氧基-6-甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440001971
在室温下将(S)-3-氨基-3-(5-(2-甲氧基-6-甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(90mg，0.36mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(81mg，0.36mmol)、HOBt(81mg，0.6mmol)、EDCI(115mg，0.6mmol)和DIEA(93mg，0.72mmol)在DCM(10mL)中的混合物搅拌5小时。将混合物倒入水中，并且用DCM(20mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过快速柱(10％～50％EtOAc/石油)纯化，得到呈无色油状物的期望产物(3S)-3-(5-(2-甲氧基-6-甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(72mg)。收率52％(67％纯度，UV＝214nm，ESI 506.2(M+H)+)。
步骤5：(3S)-3-(5-(2-甲氧基-6-甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440001972
在室温下用含LiOH-H2O(42mg，1.0mmol)的THF(6mL)和H2O(1mL)将(3S)-3-(5-(2-甲氧基-6-甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(72mg，0.14mmol)处理4小时。用HCl(1M)将混合物酸化直至pH＝5并且在减压下浓缩。通过制备型HPLC A(30～70％MecN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物AP1(17mg)和AP2(36mg)。
化合物AP1：LC/MS 100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.73min ESI492.3(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.46(d,J＝2.0Hz,1H),8.21(d,J＝1.7Hz,1H),7.64-7.48(m,2H),7.29(t,J＝8.0Hz,1H),6.92(d,J＝8.1Hz,2H),6.29(s,1H),6.25-6.21(m,1H),5.71(t,J＝8.1Hz,1H),5.42(t,J＝7.3Hz,1H),3.68(s,3H),2.92(d,J＝7.3Hz,2H),2.18(s,3H),2.03-1.73(m,5H),1.47-1.42(m,1H),1.01-0.83(m,6H)。
化合物AP2：LC/MS 100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.59min，ESI 492.3(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.52(d,J＝1.9Hz,1H),8.27(d,J＝1.7Hz,1H),7.70(t,J＝1.9Hz,1H),7.63(d,J＝7.2Hz,1H),7.30(t,J＝8.0Hz,1H),6.95(d,J＝8.5Hz,2H),6.38(s,1H),6.32-6.30(m,1H),5.72-5.69(m,1H),5.39(t,J＝7.3Hz,1H),3.72(s,3H),2.98-2.73(m,2H),2.24(s,3H),2.08(s,3H),1.88-1.67(m,2H),1.40-1.21(m,1H),1.01-0.83(m,6H)。
制备化合物AQ1b
步骤1：(R)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)丙酸乙酯
Figure BDA0002782961440001991
在微波下在110℃下在N2气氛下将(R)-3-(2-溴吡啶-4-基)-3-(叔丁氧羰基氨基)丙酸乙酯(250mg，0.67mmol)、2,6-二甲基苯基硼酸(201mg，1.34mmol)、Pd(dppf)Cl2(40mg，0.054mmol)和K2CO3(232mg，1.68mmol)在1,4-二噁烷(3mL)和H2O(0.5mL)中的混合物搅拌2小时。将混合物倒入水中并且用EtOAc(20mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过快速柱层析法(0％～40％EtOAc/石油)纯化，获得呈黄色油状物的期望产物(R)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)丙酸乙酯(270mg)。收率52％(51％纯度，UV＝214nm，ESI 399(M+H)+)。
步骤2：(R)-3-氨基-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)丙酸乙酯盐酸盐
Figure BDA0002782961440001992
向(R)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)丙酸乙酯(270mg，0.346mmol)在DCM(2mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，2mL)并且在室温下搅拌溶液1小时。在真空中浓缩混合物以提供呈黄色油状物的粗产物(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(200mg)，其不经进一步纯化即直接用于下一步骤。预期收率99％(31％纯度，UV＝214nm，ESI 299(M+H)+)。
步骤3：(3R)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸乙酯
Figure BDA0002782961440002001
在室温下将(R)-3-氨基-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)丙酸乙酯盐酸盐(200mg，0.67mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(181mg，0.81mmol)、HOBt(135mg，1.0mmol)、EDCI(191mg，1.0mmol)和DIEA(258mg，2.0mmol)在DMF(5mL)中的混合物搅拌2小时。将混合物倒入水中并且用EtOAc(20mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过快速柱层析法(0％～50％EtOAc/石油)纯化以提供呈淡黄色油状物的期望产物(3R)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸乙酯(183mg)。收率54％，三个步骤(93％纯度，UV＝214nm，ESI 504(M+H)+)。
步骤4：(3R)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440002002
在室温下用含LiOH-H2O(46mg，1.09mmol)的THF(6mL)和H2O(1mL)将(3R)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸乙酯(183mg，0.36mmol)处理1.5小时。用HCl(1M)将混合物酸化至pH＝5。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物AQ1a(40.2mg)和AQ1b(48.4mg)。
化合物AQ1b LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.56min，ESI 476(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.60(d,J＝5.2Hz,1H),7.62(d,J＝7.1Hz,1H),7.44(dd,J＝5.3,1.6Hz,1H),7.33(s,1H),7.29-7.20(m,1H),7.15(d,J＝7.6Hz,2H),6.38(s,1H),6.31(dd,J＝7.1,1.7Hz,1H),5.71(t,J＝8.1Hz,1H),5.34(t,J＝7.1Hz,1H),2.99-2.80(m,2H),2.24(s,3H),2.01(s,6H),1.84(t,J＝7.6Hz,2H),1.38-1.32(m,1H),0.98-0.84(m,6H)。
制备化合物AQ2b
步骤1：(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)丙酸乙酯
Figure BDA0002782961440002011
在微波下在110℃、N2气氛下将(S)-3-(2-溴吡啶-4-基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸乙酯(300mg，0.81mmol)、(2,6-二甲基苯基)硼酸(181mg，1.22mmol)、Pd(dppf)Cl2(47mg，0.07mmol)和K2CO3(278mg，2.03mmol)在1,4-二噁烷(3mL)和H2O(0.5mL)中的混合物搅拌2小时。将混合物倒入水中并且用EtOAc(30mL×2)萃取溶液。合并的有机相经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 3:1)纯化残余物，得到呈黄色油状物的期望产物(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)丙酸乙酯(265mg)。收率82％(83％纯度，UV＝214nm，ESI 399.1(M+H)+)。
步骤2：(S)-3-氨基-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)丙酸乙酯
Figure BDA0002782961440002021
向(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)丙酸乙酯(265mg，0.67mmol)在DCM(2mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，1mL)。在室温下搅拌溶液1小时。添加NaHCO3饱和水溶液(20mL)并且用EtOAc(30mL×2)萃取溶液。合并的有机相经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液以提供呈黄色油状物的粗产物(S)-3-氨基-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)丙酸乙酯(240mg)。收率99％(72％纯度，UV＝214nm，ESI299.0(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤3：(3S)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸乙酯
Figure BDA0002782961440002022
在室温下将(S)-3-氨基-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)丙酸乙酯(240mg，0.81mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(180mg，0.81mmol)、HOBt(130mg，0.96mmol)、EDCI(185mg，0.96mmol)和DIEA(208mg，1.61mmol)在DMF(8mL)中的混合物搅拌2小时。添加水(20mL)并且用EtOAc(30mL×2)萃取溶液。在减压下浓缩合并的有机相并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 2:1)纯化残余物，得到呈黄色油状物的期望产物(3S)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸乙酯(233mg)。收率57％(11％纯度，UV＝214nm，ESI 504.1(M+H)+)。
步骤4：(3S)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440002031
在室温下用含LiOH-H2O(58mg，1.39mmol)的THF(6mL)和H2O(1mL)将(3S)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸乙酯(233mg，0.46mmol)处理1.5小时。用HCl(1M)将混合物酸化直至pH＝5。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物AQ2a(26mg)和AQ2b(15mg)。
化合物AQ2b LC/MS A：98％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.55min，ESI 476.2(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.59(d,J＝5.2Hz,1H),7.62(d,J＝7.2Hz,1H),7.44(dd,J＝5.3,1.5Hz,1H),7.33(s,1H),7.27-7.07(m,3H),6.38(s,1H),6.31(dd,J＝7.1,1.7Hz,1H),5.70(t,J＝8.0Hz,1H),5.34(t,J＝7.1Hz,1H),3.00-2.74(m,2H),2.24(s,3H),2.01(s,6H),1.84(t,J＝7.5Hz,2H),1.38-1.32(m,1H),0.98-0.83(m,6H)。
制备化合物AR1和化合物AR2
步骤1：2-(4-溴-5-氟-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002041
在85℃下将4-溴-5-氟吡啶-2-醇(442mg，2.31mmol)、2-碘-4-甲基戊酸乙酯(937mg，3.47mmol)和K2CO3(958mg，6.94mmol)在MeCN(10mL)中的混合物搅拌过夜并且过滤。在真空中浓缩滤液，并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝4:1)纯化残余物，得到呈无色油状物的期望产物2-(4-溴-5-氟-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(402mg)。收率52％(97％纯度，UV＝214nm，ESI 334.0(M+H)+)。
步骤2：2-(5-氟-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002042
在75℃、N2气氛下将2-(4-溴-5-氟-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(402mg，1.21mmol)、2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三硼杂环己烷(913mg，3.62mmol)、PdCl2(dppf)(88mg，0.12mmol)和K2CO3(500mg，3.62mmol)在6mL 1,4-二噁烷中的混合物搅拌过夜。过滤。在真空中浓缩滤液，并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝3:1)纯化残余物得到呈无色油状物的期望产物2-(5-氟-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(299mg)，收率92％(90％纯度，UV＝214nm，ESI 270.1(M+H)+)。
步骤3：2-(5-氟-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸
Figure BDA0002782961440002051
在室温下用含LiOH-H2O(61mg，1.44mmol)的3mL THF和0.5mL H2O将2-(5-氟-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(299mg，1.11mmol)处理2小时。用TFA将溶液调节至pH＝5～6。在真空中移除溶剂，得到呈黄色油状物的粗产物2-(5-氟-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(300mg)。收率100％(75％纯度，UV＝214nm，ESI 242.2(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤4：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-氟-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440002052
在室温下将2-(5-氟-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(100mg，0.41mmol)、(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(118mg，0.41mmol)、HATU(189mg，0.5mmol)和DIEA(107mg，0.83mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌1小时。将混合物倒入30mL水中，并且用EtOAc(30mL×2)萃取溶液。合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥。过滤。在减压下浓缩滤液，得到粗产物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-氟-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯(220mg)。收率100％。(85％纯度，UV＝214nm，ESI 508.3(M+H)+)。
步骤5：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-氟-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440002061
在室温下用含LiOH-H2O(27mg，0.65mmol)的3mL THF和0.5mL H2O将(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-氟-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯(220mg，0.43mmol)处理1小时。用TFA将溶液调节至pH＝3～4。在真空中移除溶剂，并且通过制备型HPLC A(33-70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物AR1(41mg)和AR2(47mg)。
化合物AR1 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.65min，ESI 494.2(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.54(s,1H),8.18(s,1H),7.68(d,J＝5.7Hz,1H),7.55(s,1H),7.20-7.18(m,1H),7.14-7.11(m,2H),6.32(d,J＝7.2Hz,1H),5.67(t,J＝7.9Hz,1H),5.41(t,J＝7.2Hz,1H),2.89(d,J＝7.2Hz,2H),2.19(s,3H),1.98(s,3H),1.94-1.89(m,2H),1.88(s,3H),1.47-1.44(m,1H),0.99-095(m,6H)。
化合物AR2 LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.68min，ESI 494.2(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.59(s,1H),8.25(s,1H),7.74(d,J＝5.8Hz,1H),7.67(s,1H),7.28-7.19(m,1H),7.16-7.15(m,2H),6.43(d,J＝7.1Hz,1H),5.74-5.58(m,1H),5.38(t,J＝7.3Hz,1H),2.90-2.86(m,2H),2.24(s,3H),2.02(s,6H),1.86-1.72(m,2H),1.41-1.20(m,1H),0.91-0.88(m,6H)。
制备化合物AS2
步骤1：3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丁酸乙酯
Figure BDA0002782961440002071
向2-溴-3-甲基丁酸乙酯(200mg，0.96mmol)和4-甲基吡啶-2-醇(105mg，0.96mmol)在甲苯(2mL)中的溶液中添加Cs2CO3(626mg，1.92mmol)并且在110℃下搅拌反应物16小时。向混合物中添加碳酸钠饱和水溶液(30mL)并且用EtOAc(20mL×2)萃取溶液。有机相用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且过滤。在真空中浓缩滤液。通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝2:1)纯化残余物以提供呈黄色油状物的期望产物3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丁酸乙酯(200mg)。收率46％(98％纯度，UV＝214nm，ESI 238(M+H)+)。
步骤2：3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丁酸
Figure BDA0002782961440002072
在室温下用含LiOH(1M在H2O中，0.6mL)的THF(5mL)将3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丁酸乙酯(200mg，0.93mmol)处理2小时。用1M HCl将混合物调节至pH＝5～6。在真空中移除溶剂以提供呈白色固体的粗产物3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丁酸(194mg)。收率100％(98％纯度，UV＝214nm，ESI 210(M+H)+)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤3：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丁酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440002081
在室温下将3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丁酸(100mg，0.48mmol)、(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(136mg，0.48mmol)、HOBT(97mg，0.72mmol)、EDCI(138mg，0.72mmol)和DIEA(186mg，1.44mmol)在DCM(5mL)中的混合物搅拌2小时。将混合物倒入10mL水中并且用DCM(30mL×3)萃取溶液。有机相经Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩滤液。通过硅胶柱(石油醚:EtOAc＝1:1)纯化残余物以提供呈黄色油状物的期望产物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丁酰氨基)丙酸甲酯(100mg)。收率44％(95％纯度，UV＝254nm，ESI 476(M+H)+)。
步骤4：(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((S)-3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丁酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440002082
在室温下用含LiOH(1M在H2O中，0.6mL)的THF(5mL)将(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丁酰氨基)丙酸甲酯(100mg，0.21mmol)处理2小时。用1M HCl将混合物调节至pH＝5～6，在真空中移除溶剂，并且通过制备型HPLC B(30-70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望化合物AS1(17mg)和AS2(20mg)。
化合物AS2 LC/MS A:98％纯度,UV＝214nm,Rt＝1.55min,ESI 462(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.63(d,J＝2.0Hz,1H),8.27(d,J＝1.9Hz,1H),7.80(d,J＝7.2Hz,1H),7.71(t,J＝2.0Hz,1H),7.28-7.12(m,3H),6.44-6.30(m,2H),5.38(t,J＝7.4Hz,1H),5.23(d,J＝11.1Hz,1H),2.88-2.95(m,2H),2.42-2.22(m,4H),1.99(s,3H),1.97(s,3H),0.86(d,J＝6.5Hz,3H),0.74(d,J＝6.6Hz,3H)。
制备化合物AT1b
步骤1：(2R,3S)-2-溴-3-甲基戊酸
Figure BDA0002782961440002091
在0℃下向((2R,3S)-2-氨基-3-甲基戊酸(1.0g，7.6mmol)在HBr(40％在水中，8mL)中的溶液中逐滴添加含NaNO2(0.78g，11.4mmol)的H2O(4mL)溶液。在室温下搅拌反应混合物16小时。用EtOAc(20mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩滤液，得到呈橙色油状物的粗产物(2R,3S)-2-溴-3-甲基戊酸(1.1g)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤2：(2S,3S)-3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸
Figure BDA0002782961440002092
在N2气氛下在30℃下将(2R,3S)-2-溴-3-甲基戊酸(1.1g，5.7mmol)和(t-BuO)2Mg(1.29g，7.6mmol)在无水THF(20mL)中的混合物搅拌3小时，并且随后添加4-甲基吡啶-2-醇(420mg，3.8mmol)和t-BuOK(430mg，3.88mmol)。在70℃下在N2下搅拌反应混合物16小时。将混合物冷却至室温并且用HCl(4M)酸化直至pH＝5。在减压下浓缩溶液，得到残余物，其通过反相快速柱层析法(0％～60％MeOH/H2O(5％TFA))纯化以提供呈橙色油状物的期望产物(2S,3S)-3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(100mg)。收率20％(97％纯度，UV＝214nm，ESI 224(M+H)+)。
步骤3：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440002101
在室温下将(2S,3S)-3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(100mg，0.45mmol)、(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(140mg，0.5mmol)、HOBt(73mg，0.54mmol)、EDCI(100mg，0.54mmol)和DIEA(230mg，1.8mmol)在DCM(10mL)中的混合物搅拌3小时。将混合物倒入水中并且用DCM(30mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液，得到残余物，其通过快速柱层析法(0％～80％EtOAc/石油醚)纯化以提供呈无色油状物的期望产物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(150mg)。收率68％(93％纯度，UV＝214nm，ESI 490(M+H)+)。
步骤4：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440002111
在室温下用含LiOH-H2O(39mg，0.93mmol)的THF(6mL)和H2O(1mL)将(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(150mg，0.31mmol)处理2小时。用HCl(1M)将混合物酸化直至pH＝5。在减压下浓缩溶液，得到残余物，其通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化，得到呈白色固体的化合物AT1a(17mg)和AT1b(17mg)。
化合物AT1b LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.69min，ESI 476(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.62(s,0.5H),8.59(s,0.6H),8.26(s,4H),7.78(d,J＝7.2Hz,0.6H),7.70(s,0.6H),7.67(s,0.4H),7.63(d,J＝7.2Hz,0.4H),7.27-7.10(m,3H),6.39(s,1H),6.32(d,J＝7.1Hz,1H),5.72-5.29(m,2H),3.02-2.74(m,2H),2.24(s,3H),2.18-1.85(m,1H),2.01(s,H),1.99(s,3H),1.43-1.07(m,1H),1.02-0.95(m,,1H),0.91-0.57(m,6H)。
制备化合物AT2b
步骤1：(2R,3R)-2-溴-3-甲基戊酸
Figure BDA0002782961440002112
在0℃下向(2R,3R)-2-氨基-3-甲基戊酸(1.0g，7.6mmol)在HBr(40％在水中，8mL)中的溶液中逐滴添加含NaNO2(0.78g，11.4mmol)的H2O(4mL)溶液。在室温下搅拌反应混合物16小时。溶液用EtOAc(30mL×2)萃取，并且合并的有机层经Na2SO4干燥并且过滤。在减压下浓缩滤液，得到呈红色油状物的粗产物(2R,3R)-2-溴-3-甲基戊酸(1.41g)，其不经进一步纯化即直接用于下一步骤。收率95％。
步骤2：(2S,3R)-3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸
Figure BDA0002782961440002121
向(2R,3R)-2-溴-3-甲基戊酸(1.37g，5.81mmol)在无水THF(20mL)中的溶液中添加(t-BuO)2Mg(1.97g，11.62mmol)并且在N2气氛下在30℃下搅拌溶液3小时。随后添加4-甲基吡啶-2-醇(546mg，5.0mmol)和t-BuOK(664mg，5.93mmol)，并且在70℃下在N2下搅拌反应混合物16小时。将混合物冷却至室温并且用稀HCl(4M)溶液酸化至pH＝5。在减压下浓缩溶剂，得到残余物，其通过反相柱层析法(0％～80％MeOH/H2O(5％NH4HCO3))纯化以提供呈黄色油状物的期望产物(2S,3R)-3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(68mg)。收率4％(94％纯度，UV＝214nm，ESI 224(M+H)+)。
步骤3：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((3R)-3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440002122
在室温下将(2S,3R)-3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(68mg，0.30mmol)、(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(102mg，0.36mmol)、HOBt(61mg，0.45mmol)、EDCI(86mg，0.45mmol)和DIEA(116mg，0.9mmol)在DCM(8mL)中的混合物搅拌2小时。将混合物倒入水中，并且用DCM(20mL×2)萃取溶液。合并的有机层经Na2SO4干燥，并且过滤。在减压下浓缩滤液，得到呈黄色油状物的粗产物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((3R)-3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(90mg)，其不经进一步纯化即直接用于下一步骤。收率68％(68％纯度，UV＝214nm，ESI 490(M+H)+)。
步骤4：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((3R)-3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440002131
在室温下用含LiOH-H2O(23mg，0.54mmol)的THF(6mL)和H2O(1mL)将(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((3R)-3-甲基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(90mg，0.18mmol)处理1.5小时。用HCl(1M)将混合物酸化至pH＝5。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(30～70％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物AT2a(30.9mg)和AT2b(25.6mg)。
AT2b LC/MS A：100％纯度，UV＝214nm，Rt＝1.72min，ESI 476(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.62(d,J＝1.8Hz,1H),8.25(d,J＝1.7Hz,1H),7.78(d,J＝7.2Hz,1H),7.70(t,J＝1.9Hz,1H),7.25-7.19(m,1H),7.16(d,J＝7.6Hz,2H),6.38(s,1H),6.31(dd,J＝7.2,1.8Hz,1H),5.41-5.28(m,2H),2.96-2.85(m,2H),2.23(s,3H),2.20-2.13(m,1H),1.99(s,3H),1.97(s,3H),1.20-1.15(m,1H),1.02-0.96(m,1H),0.88-0.76(m,6H)。
制备化合物AU1和AU2
步骤1：5-((二甲基氨基)甲基)吡啶-2(1H)-酮
Figure BDA0002782961440002141
在室温下将6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲醛(2g，16.2mmol)、二甲胺(2M在THF中，4mL)在DCM(10mL)中的混合物搅拌30分钟。接着逐份添加NaBH(OAc)3(5.2g，24.39mmol)并且在室温下搅拌过夜。在真空中浓缩溶剂并且通过combiflash(洗脱剂A：水10mM NH4HCO3，洗脱剂B：MeOH，梯度A->B 0～100％)纯化残余物，得到呈黄色油状物的期望产物5-((二甲基氨基)甲基)吡啶-2(1H)-酮(1g)。收率41％(ESI 153(M+H)+)
步骤2：2-(5-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002142
在70℃下将5-((二甲基氨基)甲基)吡啶-2(1H)-酮(500mg，3.28mmol)、K2CO3(1.36g，9.86mmol)和4-甲基-2-(甲基磺酰氧基)戊酸乙酯(1.17g，4.93mmol)在CH3CN(20ml)中的混合物搅拌过夜。在真空中浓缩溶剂并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 1:2)纯化残余物，得到呈黄色油状物的期望产物2-(5-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(300mg)。收率31％(ESI 295(M+H)+)。
步骤3：2-(5-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸
Figure BDA0002782961440002151
在室温下用含LiOH-H2O(120mg，3.02mmol)的甲醇(2mL)和水(1mL)将2-(5-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(300mg，1.02mmol)处理2小时。反应物用1N盐酸酸化至pH＝3。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(30-80％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望产物2-(5-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(100mg)。收率37％(ESI 267(M+H)+)。
步骤4：(3S)-3-(2-(5-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440002152
在室温下将(2-(5-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(100mg，0.375mmol)、(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(117mg，0.413mmol)、HATU(142.5mg，0.375mmol)和DIEA(0.5mL)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。在真空中移除溶剂并且通过combiflash(洗脱剂A：水10mM NH4HCO3，洗脱剂B：MeOH，梯度A->B 0～100％)纯化残余物，得到呈黄色固体的期望产物(3S)-3-(2-(5-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(80mg)。收率41％(ESI 533(M+H)+)。
步骤5：(S)-3-((S)-2-(5-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440002161
在室温下用含LiOH-H2O(18mg，0.45mmol)的甲醇(2mL)和水(1mL)将3-(2-(5-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸酯(80mg，0.15mmol)处理3小时。用1NHCl将反应混合物酸化至pH 4～5。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(30-60％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的非对映异构产物AU1(18.3mg)和AU2(22.3mg)。
化合物AU1 ESI 519(M+H)+
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.57(t,J＝13.2Hz,1H),8.21(t,J＝8.7Hz,1H),7.91(d,J＝2.3Hz,1H),7.88-7.86(m,1H),7.65(t,J＝1.9Hz,1H),7.53(dd,J＝9.4,2.5Hz,1H),7.26-7.18(m,1H),7.14(d,J＝8.4Hz,2H),6.55(d,J＝9.3Hz,1H),5.76(t,J＝8.0Hz,1H),5.34(dd,J＝8.4,5.9Hz,1H),4.01(d,J＝13.2Hz,1H),3.86(d,J＝13.3Hz,1H),2.87(dd,J＝14.9,8.6Hz,1H),2.77(dd,J＝14.9,5.8Hz,1H),2.70(s,6H),2.05-1.88(m,8H),1.48-1.38(m,1H),0.99-0.91(m,6H)。
化合物AU2 ESI 519(M+H)+
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.58(d,J＝2.1Hz,1H),8.24(dd,J＝14.9,1.9Hz,1H),7.80(d,J＝2.4Hz,1H),7.64(t,J＝1.9Hz,1H),7.57(dd,J＝9.3,2.5Hz,1H),7.22(dd,J＝8.4,6.6Hz,1H),7.16(d,J＝7.6Hz,2H),6.60(d,J＝9.3Hz,1H),5.57(ddd,J＝18.8,9.4,5.5Hz,2H),4.23(d,J＝13.3Hz,1H),3.84(d,J＝13.3Hz,1H),2.81(s,6H),2.73(dd,J＝15.3,4.4Hz,1H),2.60(dd,J＝15.3,11.0Hz,1H),2.07-2.00(m,7H),1.58(dt,J＝13.5,6.8Hz,1H),1.48(td,J＝13.3,6.6Hz,1H),0.93-0.84(m,6H)。
制备化合物AV1和化合物AV2
步骤1：2-氧代-2,3-二氢吡啶-4-甲醛
Figure BDA0002782961440002171
在N2气氛下将4-甲基吡啶-2-醇(3g，27.5mmol)和SeO2(4g，35.8mmol)在二噁烷(40ml)中的混合物回流过夜并且过滤。在真空中移除滤液并且通过硅胶柱(DCM:MeOH＝1:10)纯化残余物，得到呈黄色油状物的期望产物(300mg)。收率9％(ESI 124(M+H)+)
步骤2：4-((二甲基氨基)甲基)吡啶-2(1H)-酮
Figure BDA0002782961440002172
在室温下将2-氧代-2,3-二氢吡啶-4-甲醛(300mg，2.4mmol)、二甲胺(2M在THF中，6mL)在DCM(5ml)中的混合物搅拌30分钟。随后逐滴添加NaBH(OAc)3(775.6mg，3.65mmol)并且在室温下搅拌过夜。在真空中浓缩溶剂并且通过combiflash(洗脱剂A：水10mM NH4HCO3，洗脱剂B：MeOH，梯度A->B 0～100％)纯化残余物，得到呈黄色油状物的期望产物4-((二甲基氨基)甲基)吡啶-2(1H)-酮(150mg)。收率41％(ESI 153(M+H)+)。
步骤3：2-(4-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002181
在70℃下将4-((二甲基氨基)甲基)吡啶-2(1H)-酮(150mg，0.98mmol)、K2CO3(408.5mg，2.96mmol)和4-甲基-2-(甲基磺酰氧基)戊酸乙酯(350mg，1.47mmol)在CH3CN(5mL)中的混合物搅拌过夜。在真空中浓缩溶剂并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 1:2)纯化残余物，得到呈黄色油状物的期望产物2-(4-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(100mg)。收率35％(ESI 295(M+H)+)。
步骤4：2-(4-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸
Figure BDA0002782961440002182
在室温下用含LiOH-H2O(40mg，1.01mmol)的甲醇(2mL)和水(1mL)将2-(4-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(100mg，0.33mmol)处理2小时。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(30％-80％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的期望产物2-(4-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(80mg)。收率90％(ESI 267(M+H)+)。
步骤5：(S)-3-((S)-2-(4-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440002191
在室温下将(2-(4-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(80mg，0.30mmol)、(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(85mg，0.3mmol)、HATU(125.4mg，0.33mmol)和DIEA(0.3mL)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。在真空中移除溶剂并且通过combiflash(洗脱剂A：水10mM NH4HCO3，洗脱剂B：MeOH，梯度A->B 0～100％)纯化残余物，得到期望产物(S)-3-((S)-2-(4-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(80mg)。收率50％(ESI 533(M+H)+)。
步骤6：(S)-3-((S)-2-(4-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440002192
在室温下用含LiOH-H2O(18mg，0.45mmol)的甲醇(2mL)和水(1mL)将(S)-3-((S)-2-(4-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(80mg，0.15mmol)处理3小时。用1NHCl将反应混合物酸化至pH 4～5。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(30％-60％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的非对映异构产物AV1(14mg)和AV2(17mg)。
化合物AV1 ESI 519(M+H)+
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.68(s,1H),8.41(s,1H),7.96(s,1H),7.88(d,J＝7.2Hz,1H),7.26(t,J＝7.6Hz,1H),7.18(dd,J＝7.2,3.8Hz,2H),6.60(s,1H),6.53-6.38(m,1H),5.70(dd,J＝10.1,6.0Hz,1H),5.46(t,J＝7.2Hz,1H),4.24-4.12(m,2H),3.02(t,J＝15.9Hz,2H),2.92(s,6H),2.10-1.81(m,8H),1.56-1.43(m,1H),0.99(dd,J＝14.8,6.6Hz,6H)。
化合物AV2 ESI 519(M+H)+
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.72(s,1H),8.46(s,1H),7.97(s,1H),7.88(d,J＝7.2Hz,1H),7.31-7.24(m,1H),7.20(d,J＝7.6Hz,2H),6.68(d,J＝1.6Hz,1H),6.49(dd,J＝7.2,2.0Hz,1H),5.73(dd,J＝10.1,6.1Hz,1H),5.39(t,J＝7.3Hz,1H),4.26-4.10(m,2H),3.10-2.88(m,8H),2.04(s,6H),1.97-1.80(m,2H),1.39-1.30(m,1H),0.97-0.80(m,6H)。
制备化合物AW1和AW2
步骤1：5-(2-甲氧基乙烯基)吡啶-2(1H)-酮
Figure BDA0002782961440002201
在室温下将(甲氧基甲基)三苯基氯化鏻(12.5g，36.6mmol)、t-BuOK(6.83g，61mmol)在二噁烷(60mL)中的混合物搅拌15分钟。随后添加含6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲醛(3g，24.4mmol)的20mL THF。在室温下将混合物搅拌16小时。向反应混合物中添加80mL水。用EtOAc(80mL×2)萃取混合物并且在真空中浓缩水相。通过combiflash(洗脱剂A：水10mM NH4HCO3，洗脱剂B：MeOH，梯度A->B 0～100％)纯化残余物，得到呈红色油状物的期望产物5-(2-甲氧基乙烯基)吡啶-2(1H)-酮(1.3g)。收率35％(ESI 152.2(M+H)+)。
步骤2：2-(6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)乙醛
Figure BDA0002782961440002211
在70℃下用HCOOH(20mL)将5-(2-甲氧基乙烯基)吡啶-2(1H)-酮(1.2g，7.95mmol)处理2小时。在真空中移除溶剂以提供呈红色油状物的粗产物2-(6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)乙醛(0.8g，粗产物)。(ESI138.3(M+H)+)。
步骤3：5-(2-(二甲基氨基)乙基)吡啶-2(1H)-酮
Figure BDA0002782961440002212
在室温下将甲基2-(6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)乙醛(750mg，5.47mmol)、AcOH(394mg，6.56mmol)和二甲胺(40％在水中)(1.23g，10.94mmol)在DCM(10mL)和MeOH(2.5mL)中的混合物搅拌30分钟并且添加NaBH(OAc)3(2.32g，10.94mmol)。在室温下搅拌混合物过夜。在真空中移除溶剂并且通过硅胶柱(DCM:MeOH 2:1)纯化残余物以提供呈黄色油状物的期望产物5-(2-(二甲基氨基)乙基)吡啶-2(1H)-酮(500mg)。收率55％(ESI 167.2(M+H)+)。
步骤4：2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002213
在70℃下将甲基5-(2-(二甲基氨基)乙基)吡啶-2(1H)-酮(500mg，3mmol)、4-甲基-2-(甲基磺酰氧基)戊酸乙酯(1.07g,4.5mmol)和K2CO3(828mg，6mmol)在MeCN(15mL)中的混合物搅拌过夜。在真空中移除溶剂并且通过硅胶柱(DCM:MeOH 1:2)纯化残余物以提供呈白色固体的期望产物甲基2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(100mg)。收率11％(ESI 309.2(M+H)+)。
步骤5：2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸
Figure BDA0002782961440002221
在室温下用含LiOH-H2O(54mg，1.28mmol)的EtOH(3mL)和H2O(1mL)将2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(100mg，0.32mmol)处理2小时。用1N HCl将反应混合物酸化至pH 4～5。在真空中移除溶剂并且通过combiflash(洗脱剂A：水10mM NH4HCO3，洗脱剂B：MeOH，梯度A->B 0～100％)纯化残余物，得到呈白色固体的产物2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(70mg)。收率78％(ESI281.2(M+H)+)。
步骤6：(S)-3-((S)-2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440002222
在室温下将2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(70mg，0.25mmol)、(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(107mg，0.375mmol)、HATU(143mg，0.375mmol)和DIEA(129mg，1mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。在真空中移除溶剂并且通过combiflash(洗脱剂A：水10mM NH4HCO3，洗脱剂B：MeOH，梯度A->B 0～100％)纯化残余物，得到呈油状固体的期望产物(S)-3-((S)-2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(50mg)。收率37％(ESI 548.3(M+H)+)。
步骤7：(S)-3-((S)-2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440002231
在室温下用含LiOH-H2O(15mg，0.36mmol)的EtOH(2mL)和H2O(0.5mL)将(S)-3-((S)-2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(50mg，0.09mmol)处理2小时。用1N HCl将反应混合物酸化至pH 4～5。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A(30％-60％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的产物AW1(7.4mg)和AW2(20mg)。
化合物AW1 ESI 533.3(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.50(d,J＝1.7Hz,1H),8.21(d,J＝1.6Hz,1H),7.76(d,J＝2.1Hz,1H),7.62-7.52(m,2H),7.21(dd,J＝8.2,6.8Hz,1H),7.15(d,J＝7.6Hz,2H),6.59(d,J＝9.3Hz,1H),5.64(dd,J＝10.7,5.2Hz,1H),5.25(t,J＝5.8Hz,1H),3.43-3.36(m,1H),3.31-3.25(m,1H),2.99-2.85(m,2H),2.86-2.77(m,6H),2.70(ddd,J＝35.4,15.0,5.8Hz,2H),2.14-2.05(m,1H),2.05-1.86(m,7H),1.51-1.40(m,1H),0.96(dd,J＝19.2,6.6Hz,6H)。
化合物AW2 ESI 533.3(M+H)+。1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.54(d,J＝2.1Hz,1H),8.23(d,J＝1.9Hz,1H),7.67(d,J＝2.1Hz,1H),7.61(t,J＝2.0Hz,1H),7.55(dd,J＝9.3,2.5Hz,1H),7.26-7.18(m,1H),7.16(d,J＝7.6Hz,2H),6.60(d,J＝9.3Hz,1H),5.64(dd,J＝9.4,6.3Hz,1H),5.37(dd,J＝8.8,4.7Hz,1H),3.44-3.36(m,1H),3.31-3.26(m,1H),2.94(ddd,J＝14.5,9.5,5.1Hz,1H),2.89-2.77(m,7H),2.70-2.62(m,1H),2.54(dd,J＝15.0,8.9Hz,1H),2.09-1.94(m,7H),1.94-1.85(m,1H),1.49-1.32(m,1H),0.93(dd,J＝11.1,6.6Hz,6H)。
制备化合物BA1和BA2((3S)-3-(2-(4-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸))
步骤1：2-(4-溴-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002241
在80℃下将4-溴吡啶-2(1H)-酮(1.2g，6.94mmol)、K2CO3(1.92g，13.88mmol)和4-甲基-2-(甲基磺酰氧基)戊酸乙酯(1.98g，8.33mmol)在CH3CN(20ml)中的混合物搅拌过夜。在真空中浓缩溶剂并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 1:1)纯化残余物，得到呈黄色油状物的2-(4-溴-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(1.6g)。收率73％(ESI 316.1(M+H)+)。
步骤2：2-(4-(2-(苄氧羰基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002251
在N2气氛下在90℃下将2-(4-溴-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(1.6g，5.0mmol)、N-[2-(三氟硼氢基(boranuidyl))乙基]氨基甲酸苄酯钾(1.71g，6mmol)、Pd(dppf)Cl2(366mg，0.5mmol)和Na2CO3(1.06g，10mmol)在1,4-二噁烷(20mL)和H2O(10mL)中的混合物搅拌4小时。完成后，浓缩反应物，并且通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水/0.01％TFA，B：MeOH，0-100％)上纯化，得到呈黄色油状物的2-(4-(2-(苄氧羰基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(700mg)。收率35％(ESI 415.1(M+H)+)。
步骤3：2-(4-(2-氨基乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002252
在50℃下用TFA(10mL)将2-(4-(2-(苄氧羰基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(0.7g，1.7mmol)处理4小时。在真空中移除溶剂，并且通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化残余物以提供呈红色油状物的2-(4-(2-氨基乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(0.4g)。收率84％(ESI 281.2(M+H)+)。
步骤4：2-(4-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002261
向2-(4-(2-氨基乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(400mg，1.43mmol)在MeOH(10mL)中的混合物中添加HCHO(37％在H2O中，1mL)并且在室温下搅拌5分钟。添加NaBH(OAc)3(1.21g，5.72mmol)并且在室温下搅拌1小时。在真空中移除溶剂并且通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化残余物以提供呈黄色油状物的2-(4-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(400mg)。收率91％(ESI309.2(M+H)+)。
步骤5：2-(4-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸
Figure BDA0002782961440002262
在室温下用含LiOH-H2O(218mg，5.2mmol)的MeOH(4mL)和H2O(1mL)将2-(4-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(400mg，1.3mmol)处理1小时。用1NHCl将混合物酸化至pH 4～5。在真空中浓缩混合物并且通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水/0.01％TFA，B：MeOH，0～100％)上纯化残余物，得到呈白色固体的2-(4-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(310mg)。收率85％(ESI 281.2(M+H)+)。
步骤6：(3S)-3-(2-(4-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440002271
在室温下将2-(4-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(230mg，0.82mmol)、(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(284mg，1mmol)、HATU(467mg，1.23mmol)和DIEA(423mg，3.28mmol)在DMF(5mL)中的混合物搅拌1小时。混合物通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化，得到呈黄色油状物的产物(3S)-3-(2-(4-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(200mg)。收率45％(ESI 547.2(M+H)+)。
步骤7：(3S)-3-(2-(4-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440002272
在室温下用含LiOH单水合物(62mg，1.48mmol)的MeOH(4mL)和H2O(1mL)将(3S)-3-(2-(4-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(200mg，0.37mmol)处理2小时。用1NHCl将反应混合物酸化至pH 4～5。在真空中移除混合物并且通过制备型HPLC A纯化残余物，得到呈白色固体的非对映异构产物BA1(48.9mg)和BA2(53.6mg)。
化合物BA1 ESI 533.3(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.48(d,J＝2.1Hz,1H),8.20(d,J＝1.9Hz,1H),7.70(d,J＝7.2Hz,1H),7.58(t,J＝2.0Hz,1H),7.25-7.19(m,1H),7.17-7.11(m,2H),6.59(s,1H),6.50-6.45(m,1H),5.71-5.60(m,1H),5.19(t,J＝5.2Hz,1H),3.38-3.27(m,1H),3.32-3.28(m,1H),3.03-2.87(m,2H),2.78(s,6H),2.64-2.58(m,2H),2.07-2.00(m,2H),2.00(d,J＝7.0Hz,6H),1.48-1.42(m,1H),0.97-0.87(m,6H)。
化合物BA2 ESI 533.3(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.51(d,J＝1.9Hz,1H),8.20(d,J＝1.8Hz,1H),7.71(d,J＝7.2Hz,1H),7.59(s,1H),7.24-7.18(m,1H),7.15(d,J＝8.6Hz,2H),6.59(s,1H),6.52(d,J＝7.1Hz,1H),5.65-5.59(m,1H),5.19(s,1H),3.44(d,J＝7.4Hz,1H),3.34(s,1H),2.96(s,2H),2.80(s,6H),2.67-2.62(m,2H),2.03-1.97(m,8H),1.53-1.39(m,1H),0.95-0.91(m,6H)。
制备化合物BB1和BB2((3S)-3-(2-(5-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸)
步骤1：5-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)吡啶-2(1H)-酮
Figure BDA0002782961440002281
在室温下将6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲醛(153mg，1.24mmol)和3,3-二氟氮杂环丁烷盐酸盐(193mg，1.49mmol)在MeOH(3mL)中的混合物搅拌30分钟。添加NaBH3CN(231mg，3.73mmol)并且在室温下搅拌1小时。在真空中移除溶剂以提供呈白色固体的粗产物5-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)吡啶-2(1H)-酮(248mg)，其未经进一步纯化即使用。(ESI201.1(M+H)+)。
步骤2：2-(5-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002291
在80℃下将5-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)吡啶-2(1H)-酮(248mg，1.24mmol)、4-甲基-2-(甲基磺酰氧基)戊酸乙酯(443mg，1.86mmol)和K2CO3(514mg，3.72mmol)在MeCN(5mL)中的混合物搅拌过夜。过滤混合物并且用MeCN(5mL)洗涤。在真空中浓缩滤液并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 2:1)纯化残余物，得到呈无色油状物的2-(5-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(150mg)。收率36％(ESI 343.1(M+H)+)。
步骤3：2-(5-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸
Figure BDA0002782961440002292
在室温下用含LiOH-H2O(28mg，0.66mmol)的THF(3mL)和H2O(0.5mL)将2-(5-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(151mg，0.44mmol)处理30分钟。用1N HCl将混合物酸化至pH 4～5。将混合物在真空中浓缩以提供呈白色固体的2-(5-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(138mg)，其不经进一步纯化即使用。收率100％(ESI 315.1(M+H)+)。
步骤4：(3S)-3-(2-(5-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440002301
在室温下将2-(5-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(138mg，0.44mmol)、(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(125mg，0.44mmol)、HATU(200mg，0.53mmol)和DIEA(171mg，1.32mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌30分钟。将混合物倒入水(10mL)中并且用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过硅胶柱(DCM:MeOH 10:1)纯化残余物，得到呈黄色油状物的(3S)-3-(2-(5-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(86mg)。收率34％(ESI 581.3(M+H)+)。
步骤5：(3S)-3-(2-(5-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440002311
在室温下用含LiOH单水合物(9mg 0.22mmol)的THF(3mL)和H2O(0.5mL)将(3S)-3-(2-(5-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(86mg，0.15mmol)处理1小时。将反应混合物用1NHCl水溶液酸化至pH 4～5，在真空中浓缩并且通过制备型HPLC A纯化，得到呈白色固体的非对映异构产物BB1(10mg)和BB2(20mg)。
化合物BB1 ESI 567.3(M+H)+。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.51(s,1H),8.18(s,1H),7.66(s,1H),7.55(s,1H),7.44(dd,J＝9.3,2.3Hz,1H),7.23-7.15(m,1H),7.14-7.11(m,2H),6.44(d,J＝9.3Hz,1H),5.72(dd,J＝9.5,6.6Hz,1H),5.41(t,J＝7.3Hz,1H),3.66-3.44(m,6H),2.92(d,J＝7.3Hz,2H),2.08-1.76(m,8H),1.53-1.32(m,1H),1.02-0.89(t,J＝12.0Hz,6H)。
化合物BB22 ESI 567.3(M+H)+。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.58(d,J＝1.8Hz,1H),8.26(s,1H),7.67(d,J＝7.2Hz,2H),7.51(dd,J＝9.3,2.3Hz,1H),7.25-7.18(m,1H),7.15(d,J＝7.4Hz,2H),6.54(d,J＝9.3Hz,1H),5.72(t,J＝8.1Hz,1H),5.40(t,J＝7.4Hz,1H),3.71-3.54(m,6H),2.94-2.88(m,2H),2.01(s,6H),1.83(t,J＝7.5Hz,2H),1.36-1.29(m,1H),0.89(dd,J＝6.5,4.3Hz,6H)。
制备化合物BC1和BC2((3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(2-(5-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸)
步骤1：(3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(2-(5-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440002321
在室温下将2-(5-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(100mg，0.38mmol)、(S)-3-氨基-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸甲酯(99mg，0.35mmol)、EDCI(81mg，0.42mmol)、HOBt(57mg，0.42mmol)和DIEA(136mg，1.05mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌4小时。将混合物倒入水(10mL)中并且用EtOAc(20mL×3)萃取。将有机层用盐水(10mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过反相HPLC在C18/40g柱(A：10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化残余物，得到呈无色油状物的非对映异构产物P1(20mg)和P2(35mg)。总收率28％(ESI 532.2(M+H)+)。
步骤2a：(3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(2-(5-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸(BC1)
Figure BDA0002782961440002322
在室温下用含LiOH-H2O(8mg，0.19mmol)的甲醇(2mL)和水(0.5mL)将(3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(2-(5-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯(20mg，0.038mmol)处理1小时。用1N HCl将反应混合物酸化至pH4～5。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A纯化残余物，得到呈白色固体的BC1(10mg)。
化合物BC1 ESI 518.2(M+H)+
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.89(d,J＝2.3Hz,1H),7.51(dd,J＝9.3,2.5Hz,1H),7.42-7.30(m,2H),7.14-7.07(m,4H),6.99(d,J＝7.4Hz,1H),6.55(d,J＝9.3Hz,1H),5.77(dd,J＝9.5,6.6Hz,1H),5.33(dd,J＝9.1,5.3Hz,1H),3.97(d,J＝13.2Hz,1H),3.79(d,J＝13.2Hz,1H),2.84-2.72(m,2H),2.66(s,6H),2.02-1.88(m,8H),1.49-1.36(m,1H),0.96(d,J＝6.5Hz,6H)。
步骤2b：(3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(2-(5-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸(BC22)
Figure BDA0002782961440002331
在室温下用含LiOH-H2O(14mg，0.34mmol)的甲醇(4mL)和水(1mL)将(3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(2-(5-((二甲基氨基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯(35mg，0.067mmol)处理1小时。用1N HCl将反应混合物酸化至pH4～5。在真空中移除溶剂并且通过制备型HPLC A纯化残余物，得到呈白色固体的产物BC2(10mg)。
化合物BC2 ESI 518.2(M+H)+
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.80(d,J＝2.4Hz,1H),7.56(dd,J＝9.3,1.8Hz,1H),7.43(t,J＝7.6Hz,1H),7.34(d,J＝7.8Hz,1H),7.15-7.09(m,4H),7.03(d,J＝7.5Hz,1H),6.58(d,J＝9.3Hz,1H),5.55(dd,J＝11.2,3.9Hz,1H),5.49(dd,J＝8.5,5.6Hz,1H),4.22(d,J＝13.3Hz,1H),3.79(d,J＝13.3Hz,1H),2.79(s,6H),2.68(dd,J＝15.1,4.0Hz,1H),2.54(dd,J＝15.1,11.3Hz,1H),2.07-2.03(m,1H),2.00(d,J＝7.7Hz,6H),1.58-1.49(m,2H),0.92(t,J＝5.9Hz,6H)。
制备BD1和BD2((3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-((3-氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸)
步骤1：2-(5-甲酰基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002341
在80℃下将6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲醛(400mg，3.2mmol)、4-甲基-2-(甲基磺酰氧基)戊酸乙酯(1g，4.2mmol)和K2CO3(1.1g，8mmol)在MeCN(10mL)中的混合物搅拌过夜。过滤混合物，用ACN(5mL)洗涤。在真空中浓缩滤液，并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 4:1)纯化以提供呈无色油状物的2-(5-甲酰基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(650mg)。收率70％(ESI 266.3(M+H)+)。
步骤2：2-(5-((3-氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002351
在室温下将2-(5-甲酰基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(300mg，1.13mmol)和3-氟氮杂环丁烷盐酸盐(251mg，2.26mmol)在DCE(4mL)中的混合物搅拌30分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(959mg，4.52mmol)并且在室温下搅拌过夜。将混合物在真空中浓缩，并且通过硅胶柱(DCM:MeOH 10:1)纯化，得到呈无色油状物的2-(5-((3-氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(264mg)。收率72％(ESI 325.2(M+H)+)。
步骤3：2-(5-((3-氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸
Figure BDA0002782961440002352
在室温下用含LiOH-H2O(171mg，4mmol)的EtOH(4mL)和H2O(1mL)将2-(5-((3-氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(264mg，0.81mmol)处理2小时。用1NHCl将混合物酸化至pH4～5。在真空中浓缩混合物，并且通过硅胶柱(DCM:MeOH10:1)纯化，得到呈白色固体的2-(5-((3-氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(217mg)。收率90％(ESI 297.1(M+H)+)。
步骤4：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-((3-氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440002361
向2-(5-((3-氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(217mg，0.73mmol)和(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(208mg，0.73mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加EDCI(154mg，0.81mmol)、HOBT(109mg，0.81mmol)和DIEA(282mg，2.19mmol)。在室温下将反应混合物搅拌过夜。浓缩反应混合物，并且通过反相HPLC在C18/80g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化，得到呈褐色固体的(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-((3-氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯(288mg)。收率70％(ESI 563.2(M+H)+)。
步骤5：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-((3-氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440002362
在室温下用含LiOH-H2O(38mg，0.9mmol)的甲醇(3mL)和水(1mL)将(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-((3-氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯(100mg，0.18mmol)处理2小时。用1NHCl将反应混合物酸化至pH 4～5。在真空中移除溶剂，并且通过反相HPLC在C18/80g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：ACN，0～60％)上纯化残余物，得到呈白色固体的非对映异构产物BD1(33mg)和BD2(35mg)。
化合物BD1 ESI 549.3(M+H)+
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.53(d,J＝2.0Hz,1H),8.19(d,J＝1.8Hz,1H),7.73(s,1H),7.59(t,J＝1.9Hz,1H),7.45-7.35(m,1H),7.21-7.19(m,1H),7.17-7.09(m,2H),6.47(d,J＝9.3Hz,1H),5.74-5.65(m,1H),5.47-5.35(m,1H),5.19-5.02(m,1H),3.79-3.66(m,2H),3.65-3.58(m,2H),3.54-3.41(m,2H),2.95-2.81(m,2H),2.05-1.81(m,8H),1.55-1.33(m,1H),0.97-0.88(m,6H)。
化合物BD2 ESI 549.3(M+H)+
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.59(d,J＝1.9Hz,1H),8.26(d,J＝1.7Hz,1H),7.67(d,J＝2.1Hz,2H),7.56(d,J＝9.3Hz,1H),7.30-7.09(m,3H),6.57(d,J＝9.3Hz,1H),5.62(t,J＝7.5Hz,1H),5.52-5.35(m,1H),5.29-5.15(m,1H),4.22-4.06(m,2H),4.01-3.79(m,4H),2.90-2.67(m,2H),2.09-1.87(m,7H),1.68-1.62(m,1H),1.55-1.33(m,1H),0.91(d,J＝6.5Hz,6H)。
制备化合物BE1和BE2((3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(2-(3-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸)
步骤1：2-(3-溴-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002371
在80℃下将3-溴吡啶-2(1H)-酮(1g，5.78mmol)、K2CO3(1.6g，11.56mmol)和4-甲基-2-(甲基磺酰氧基)戊酸乙酯(1.65g，6.94mmol)在CH3CN(20mL)中的混合物搅拌过夜。在真空中浓缩溶剂，并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 1:1)纯化，得到呈白色固体的2-(3-溴-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(1.6g)。收率88％(ESI 316.1(M+H)+)。
步骤2：2-(3-(2-(苄氧羰基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002381
在110℃下将2-(3-溴-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(1g，3.17mmol)、N-[2-(三氟硼氢基)乙基]氨基甲酸苄酯钾(1.08g，3.8mmol)、Pd(dppf)Cl2(36mg，0.16mmol)、Cs2CO3(2g，6.34mmol)和RuPhos(144mg，0.32mmol)在1,4-二噁烷(20mL)和H2O(10mL)中的混合物搅拌2小时。完成后，浓缩反应物，并且通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水/0.01％TFA，B：MeOH，0～100％)上纯化，得到呈黄色油状物的2-(3-(2-(苄氧羰基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(1.1g)。收率84％(ESI 415.2(M+H)+)。
步骤3：2-(3-(2-氨基乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002382
在50℃下用TFA(20mL)将2-(3-(2-(苄氧羰基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(1.07g，2.58mmol)处理4小时。在真空中移除溶剂，并且通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化残余物以提供呈黄色油状物的2-(3-(2-氨基乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(0.6g)。收率83％(ESI281.2(M+H)+)。
步骤4：2-(3-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002391
向2-(3-(2-氨基乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(600mg，2.14mmol)在MeOH(10mL)中的混合物添加HCHO(37％在H2O中，1mL)。在室温下将混合物搅拌5分钟。添加NaBH(OAc)3(1.81g，8.56mmol)并且在室温下搅拌1小时。在真空中移除溶剂，并且通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化残余物以提供呈黄色油状物的2-(3-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(600mg)。收率91％(ESI 309.2(M+H)+)。
步骤5：2-(3-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸
Figure BDA0002782961440002392
在室温下用含LiOH单水合物(328mg，7.8mmol)的EtOH(4mL)和H2O(1mL)将2-(3-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(600mg，1.95mmol)处理1小时。用1NHCl水溶液将混合物酸化至pH 4～5。在真空中浓缩混合物，并且通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水/0.01％TFA，B：MeOH，0～100％)上纯化残余物，得到呈白色固体的2-(3-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(500mg)。收率92％(ESI281.2(M+H)+)。
步骤6：(3S)-3-(2-(3-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440002401
在室温下将2-(3-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(150mg，0.54mmol)、(S)-3-氨基-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(229mg，0.81mmol)、EDCI(206mg，1.08mmol)、HOBt(146mg，1.08mmol)和DIEA(279mg，2.16mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌1小时。通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化混合物，得到呈黄色油状物的(3S)-3-(2-(3-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(130mg)。收率44％(ESI 546.3(M+H)+)。
步骤7：(3S)-3-(2-(3-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440002411
在室温下用含LiOH单水合物(40mg，0.96mmol)的MeOH(4mL)和H2O(1mL)将(3S)-3-(2-(3-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基丙酸甲酯(130mg，0.24mmol)处理1小时。用1N HCl将反应混合物酸化至pH 4～5。在真空中移除混合物，并且通过制备型HPLC A纯化残余物，得到呈白色固体的非对映异构产物BE1(40mg)和BE2(36.4mg)。
化合物BE1 ESI 532.3(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.52-7.50(m,1H),7.49-7.43(m,1H),7.36(t,J＝7.6Hz,1H),7.27(d,J＝7.8Hz,1H),7.18-7.13(m,1H),7.09(d,J＝7.5Hz,2H),6.97(d,J＝7.5Hz,1H),6.89(s,1H),6.23(t,J＝6.9Hz,1H),5.66(s,1H),5.07(t,J＝5.2Hz,1H),3.42-3.35(m,1H),3.17-3.08(m,1H),3.06-2.97(m,1H),2.83-2.75(m,7H),2.67-2.63(m,1H),2.53-2.50(m,1H),2.09-2.02(m,2H),1.97(s,3H),1.92(s,3H),1.42-1.39(m,1H),0.95(t,J＝7.0Hz,6H)。
化合物BE2 ESI 532.3(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.65-7.62(m,1H),7.58-7.52(m,1H),7.40(t,J＝7.6Hz,1H),7.32(d,J＝7.8Hz,1H),7.17-7.05(m,4H),7.02(d,J＝7.5Hz,1H),6.45(t,J＝6.9Hz,1H),5.77-5.73(m,1H),5.02(t,J＝4.8Hz,1H),3.52(t,J＝8.9Hz,1H),3.11-3.07(m,2H),2.88-2.78(m,1H),2.66(s,6H),2.52-2.46(m,2H),2.11-2.07(m,1H),2.06-2.01(m,4H),1.99(s,3H),1.49-1.36(m,1H),0.93-0.87(m,6H)。
制备化合物BF1和BF2((3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(5-(吗啉代甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸)
步骤1：4-甲基-2-(5-(吗啉代甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002421
在室温下将2-(5-甲酰基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(300mg，1.13mmol)和吗啉(147mg，1.70mmol)在DCE(5mL)中的混合物搅拌30分钟。添加NaBH(OAc)3(715mg，3.39mmol)并且在室温下搅拌1小时。在真空中移除溶剂，并且通过硅胶柱(DCM:MeOH2:1)纯化残余物以提供呈黄色油状物的4-甲基-2-(5-(吗啉代甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸乙酯(150mg)。收率39％(ESI 337.2(M+H)+)。
步骤2：4-甲基-2-(5-(吗啉代甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸
Figure BDA0002782961440002422
在室温下用含LiOH-H2O(56mg，1.34mmol)的THF(3mL)和H2O(0.5mL)将4-甲基-2-(5-(吗啉代甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸乙酯(150mg，0.45mmol)处理2小时。用1NHCl将混合物酸化至pH＝4～5。在真空中浓缩混合物，并且通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化残余物以提供呈白色固体的4-甲基-2-(5-(吗啉代甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(110mg)。收率80％(ESI 309.3(M+H)+)。
步骤3：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(5-(吗啉代甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440002431
在室温下将4-甲基-2-(5-(吗啉代甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酸(90mg，0.29mmol)、(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(100mg，0.35mmol)、EDCI(83mg，0.44mmol)、HOBt(59mg，0.44mmol)和DIEA(113mg，0.88mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌1小时。将混合物倒入水(10mL)中并且用EtOAc(20mL×3)萃取。将有机层用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过硅胶柱(DCM:MeOH 10:1)纯化残余物，得到呈黄色油状物的(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(5-(吗啉代甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯)(70mg)。收率25％(ESI 575.1(M+H)+)。
步骤4：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(5-(吗啉代甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440002441
在室温下用含LiOH-H2O(15mg，0.36mmol)的THF(3mL)和H2O(0.5mL)将(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(5-(吗啉代甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)戊酰氨基)丙酸甲酯(70mg，0.12mmol)处理2小时。用1N HCl将反应混合物酸化至pH 4～5。在真空中移除溶剂，并且通过制备型HPLC A纯化残余物，得到呈白色固体的非对映异构产物BF1(30.1mg)和BF2(33.4mg)。
化合物BF1 ESI 561.0(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.53(d,J＝2.1Hz,1H),8.20(d,J＝1.8Hz,1H),7.70(d,J＝2.1Hz,1H),7.58(d,J＝1.9Hz,1H),7.49(dd,J＝9.3,2.3Hz,1H),7.21(t,J＝7.5Hz,1H),7.16-7.06(m,2H),6.48(d,J＝9.3Hz,1H),5.74(t,J＝8.1Hz,1H),5.45-5.26(m,1H),3.72(t,J＝4.3Hz,4H),3.46(s,2H),2.92(t,J＝7.8Hz,2H),2.59(s,4H),1.99-1.92(m,5H),1.89(s,3H),1.47-1.42(m,1H),0.97(t,J＝6.3Hz,6H)。
化合物BF2 ESI 561.1(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.59(d,J＝2.1Hz,1H),8.26(d,J＝1.9Hz,1H),7.71(d,J＝2.3Hz,1H),7.67(t,J＝2.0Hz,1H),7.57(dd,J＝9.3,2.4Hz,1H),7.25-7.19(m,1H),7.16(d,J＝7.5Hz,2H),6.57(d,J＝9.3Hz,1H),5.64(t,J＝7.7Hz,1H),5.53-5.50(m,1H),3.86-3.71(m,5H),3.62(d,J＝13.3Hz,1H),2.91-2.79(m,5H),2.74(dd,J＝15.1,9.4Hz,1H),2.02(d,J＝2.9Hz,6H),1.97-1.91(m,1H),1.75-1.65(m,1H),1.45-1.40(m,1H),0.92(dd,J＝6.6,2.9Hz,6H)。
制备化合物BG1和BG2((3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸)
步骤1：2-(5-(((R)-3-氟吡咯烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002451
在室温下将2-(5-甲酰基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(300mg，1.13mmol)、(R)-3-氟吡咯烷盐酸盐(284mg，2.26mmol)和三乙胺(0.31mL，2.26mmol)在DCE(10mL)中的混合物搅拌30分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(959mg，4.52mmol)并且在室温下搅拌过夜。在真空中浓缩混合物，并且通过硅胶柱(DCM:MeOH 10:1)纯化，得到呈无色油状物的2-(5-(((R)-3-氟吡咯烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(237mg)。收率62％(ESI 339.2(M+H)+)。
步骤2：2-(5-(((R)-3-氟吡咯烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸
Figure BDA0002782961440002452
在室温下用含LiOH-H2O(237mg，5.65mmol)的EtOH(6mL)和H2O(0.6mL)将2-(5-(((R)-3-氟吡咯烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(426mg，1.13mmol)处理2小时。用1NHCl将混合物酸化至pH 4～5。在真空中浓缩混合物，并且通过硅胶柱(DCM:MeOH 10:1)纯化残余物，得到呈白色固体的2-(5-(((R)-3-氟吡咯烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(348mg)。收率99％(ESI 311.1(M+H)+)。
步骤3：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-(((R)-3-氟吡咯烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440002461
在环境温度下向2-(5-(((R)-3-氟吡咯烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(200mg，0.64mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的搅拌溶液中添加1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(247mg，1.29mmol)、1-羟基苯并三唑(174mg，1.29mmol)和三乙胺(0.36mL，2.58mmol)。在环境温度下将混合物搅拌30分钟。添加(S)-3-氨基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(183mg，0.64mmol)，并且在环境温度下搅拌15分钟，随后加热至50℃维持3小时。完成后，浓缩混合物，并且通过反相在C18/80g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化，得到呈褐色固体的(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-(((R)-3-氟吡咯烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯(285mg)。收率77％(ESI 577.0(M+H)+)。
步骤4：(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-(((R)-3-氟吡咯烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440002471
在室温下用含LiOH-H2O(134mg，3.20mmol)的MeOH(6mL)和H2O(0.3mL)将(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-(((R)-3-氟吡咯烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯(285mg，0.64mmol)处理2小时。用1NHCl将混合物酸化至pH 4～5。在真空中浓缩混合物，并且通过制备型HPLC A(30-60％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的产物BG1(66mg)和呈淡黄色固体的BG2(78mg)。
化合物BG1 ESI 563.0(M+H)+。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.51(d,J＝2.0Hz,1H),8.17(d,J＝2.0Hz,1H),7.77(d,J＝2.0Hz,1H),7.59(t,J＝2.0Hz,1H),7.52-7.43(m,1H),7.19(t,J＝7.5Hz,1H),7.12-7.04(m,2H),6.48-6.38(m,1H),5.73-5.63(m,1H),5.36-5.29(m,1H),5.26-5.21(m,1H),3.80(d,J＝13.0Hz,1H),3.72(d,J＝13.0Hz,1H),3.21-3.13(m,1H),3.12-3.01(m,2H),2.92-2.79(m,3H),2.32-2.07(m,2H),1.97-1.93(m,5H),1.89(s,3H),1.46-1.40(m,1H),0.95-0.91(m,6H)。
化合物BG2 ESI 563.1(M+H)+。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.56(d,J＝1.5Hz,1H),8.23(d,J＝2.0Hz,1H),7.71(d,J＝2.0Hz,1H),7.64(t,J＝1.5Hz,1H),7.61-7.52(m,1H),7.20-7.16(m,1H),7.14(t,J＝7.5Hz,2H),6.57(d,J＝9.0Hz,1H),5.57-5.54(m,2H),5.34(d,J＝53.0Hz,1H),4.16(d,J＝13.0Hz,1H),3.84(d,J＝13.0Hz,1H),3.46(s,1H),3.40-3.33(m,2H),3.92-3.25(m,1H),2.75-2.72(m,1H),2.61-2.58(m,1H),2.38-2.23(m,2H),2.00(d,J＝3.0Hz,6H),1.97(t,J＝7.5Hz,1H),1.62-1.57(m,1H),1.48-1.43(m,1H),0.90(d,J＝6.5Hz,6H)。
制备化合物BH1和BH2((3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(2-(5-(((R)-3-氟吡咯烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸)
步骤1：(3S)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)-3-(2-(5-(((R)-3-氟吡咯烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440002481
在56℃下将2-(5-(((R)-3-氟吡咯烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(950mg，3.06mmol)、(S)-3-氨基-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(979mg，3.06mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(1.17g，6.12mmol)、1-羟基苯并三唑(827mg，6.12mmol)和三乙胺(3.40mL，24.49mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中的混合物搅拌过夜。在真空中移除溶剂，并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 1:1)纯化残余物，得到呈褐色固体的(3S)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)-3-(2-(5-(((R)-3-氟吡咯烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯(1.6g)。收率83％(ESI 576.2(M+H)+)。
步骤2：(3S)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)-3-(2-(5-(((R)-3-氟吡咯烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440002491
在室温下用含LiOH-H2O(1.18g，28.00mmol)的MeOH(30mL)和H2O(3mL)将(3S)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)-3-(2-(5-(((R)-3-氟吡咯烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯(1.6g，2.80mmol)处理16小时。完成后，用1N HCl将反应混合物酸化至pH 4～5。在真空中移除溶剂，并且通过制备型HPLC A(30-60％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的非对映异构产物BH1(568mg)和BH2(586mg)。
化合物BH1 ESI 562.3(M+H)+。1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.75(d,J＝2.0Hz,1H),7.50-7.47(m,1H),7.36(t,J＝7.5Hz,1H),7.29(d,J＝8.0Hz,1H),7.11(t,J＝7.5Hz,1H),7.05(d,J＝10.5Hz,3H),6.97(d,J＝7.0Hz,1H),6.48(d,J＝9.5Hz,1H),5.75(t,J＝7.5Hz,1H),5.35-5.31(m,1H),5.23-5.20(m,1H),3.69-3.65(m,2H),3.14-2.94(m,3H),2.86-2.76(m,2H),2.74-2.69(m,1H),2.30-2.17(m,1H),2.14-2.03(m,1H),1.96-1.92(m,5H),1.88(s,3H),1.47-1.39(m,1H),0.95-0.93(m,6H)。
化合物BH2 ESI 562.2(M+H)+。1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.72(d,J＝2.0Hz,1H),7.59-7.54(m,1H),7.41(t,J＝7.5Hz,1H),7.34(d,J＝7.5Hz,1H),7.12(t,J＝7.5Hz,2H),7.07(d,J＝6.0Hz,2H),7.02(d,J＝7.5Hz,1H),6.56(d,J＝9.0Hz,1H),5.54-5.50(m,2H),5.32-5.48(m,1H),4.13(d,J＝13.5Hz,1H),3.81(d,J＝13.0Hz,1H),3.42(d,J＝3.0Hz,1H),3.37-3.33(m,2H),3.26-3.22(m,1H),2.72-2.68(m,1H),2.56-2.52(m,1H),2.36-2.22(m,2H),2.00-1.94(m,7H),1.60-1.54(m,1H),1.49-1.44(m,1H),0.89-0.85(m,6H)。
制备化合物BI1和BI2((3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(2-(4-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸)
步骤1：(3S)-3-(2-(4-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸乙酯
Figure BDA0002782961440002501
在40℃下将2-(4-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(182mg，0.65mmol)、(S)-3-氨基-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸乙酯(150mg，0.5mmol)、EDCI(191mg，1mmol)、HOBt(135mg，1mmol)和DIEA(258mg，7mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌4小时。通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化混合物，得到呈黄色油状物的(3S)-3-(2-(4-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸乙酯(140mg)。收率50％(ESI 560.3(M+H)+)。
步骤2：(3S)-3-(2-(4-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440002511
在室温下用含LiOH-H2O(32mg，0.75mmol)的EtOH(3mL)和H2O(1mL)将(3S)-3-(2-(4-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸乙酯(140mg，0.25mmol)处理2小时。用1N HCl将反应混合物酸化至pH 4～5。在真空中移除溶剂，并且通过制备型HPLC A(30-60％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的非对映异构产物BI1(44mg)和BI2(44mg)。
化合物BI1 ESI 532.3(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.65(d,J＝7.2Hz,1H),7.37(t,J＝7.6Hz,1H),7.27(d,J＝7.8Hz,1H),7.17-7.07(m,3H),7.04(s,1H),6.99(d,J＝7.5Hz,1H),6.59(s,1H),6.44(d,J＝7.1Hz,1H),5.69-5.64(m,1H),5.13(s,1H),3.31-3.21(m,2H),3.01-2.85(m,2H),2.73(s,6H),2.60-2.57(m,2H),2.05-2.01(m,2H),1.98(s,6H),1.48-1.42(m,1H),0.97-0.94(m,6H)。
化合物BI2 ESI 532.2(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.69(d,J＝7.2Hz,1H),7.38(t,J＝7.6Hz,1H),7.29(d,J＝7.8Hz,1H),7.18-7.03(m,4H),6.99(d,J＝7.5Hz,1H),6.58(s,1H),6.50(d,J＝6.7Hz,1H),5.65(s,1H),5.15(s,1H),3.39(s,1H),3.29(s,1H),2.94(s,2H),2.77(s,6H),2.58-2.53(m,2H),2.01(d,J＝11.7Hz,8H),1.46(s,1H),0.94-0.90(m,6H)。
制备化合物BJ1和BJ2((3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(2-(5-((3-氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸)
步骤1：乙基(3S)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)-3-(2-(5-((3-氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸乙酯
Figure BDA0002782961440002521
向2-(5-((3-氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(100mg，0.33mmol)和(S)-3-氨基-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸乙酯(99mg，0.33mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加EDCI(95mg，0.5mmol)、HOBT(68mg，0.5mmol)和DIEA(129mg，1mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌16小时。在真空中浓缩反应混合物，并且通过反相HPLC在C18/80g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化残余物，得到呈褐色固体的(3S)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)-3-(2-(5-((3-氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸乙酯(70mg)。收率37％(ESI 576.3(M+H)+)。
步骤2：(3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(2-(5-((3-氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440002522
在环境温度下用含LiOH-H2O(38mg，0.9mmol)的甲醇(2mL)和水(1mL)将(3S)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)-3-(2-(5-((3-氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸乙酯(70mg，0.12mmol)处理2小时。用1N HCl将反应混合物酸化至pH 4～5。在真空中移除溶剂，并且通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：ACN，0～60％)上纯化残余物，得到呈白色固体的非对映异构产物BJ1(24mg)和BJ2(30mg)。
化合物BJ1 ESI 548.3(M+H)+
1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.70(s,1H),7.45-7.26(m,3H),7.15-6.94(m,5H),6.47(d,J＝9.3Hz,1H),5.76(t,J＝8.0Hz,1H),5.38(t,J＝7.3Hz,1H),5.16(d,J＝57.3Hz,1H),3.82-3.66(m,2H),3.57-3.53(m,2H),3.47-3.37(m,2H),2.84-2.81(m,2H),1.94(m,8H),1.50-1.37(m,1H),0.97(t,J＝6.7Hz,6H)。
化合物BJ2 ESI 548.3(M+H)+
1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.67(d,J＝2.3Hz,1H),7.55-7.51(m,1H),7.44(t,J＝7.6Hz,1H),7.36(d,J＝7.8Hz,1H),7.18-7.00(m,5H),6.56(d,J＝9.3Hz,1H),5.59(t,J＝7.6Hz,1H),5.49-5.41(m,1H),5.27-5.24(m,1H),4.09-4.05(m,2H),3.96-3.75(m,4H),2.71-2.67(m,2H),2.04-1.88(m,7H),1.66-1.58(m,1H),1.44-1.38(m,1H),0.91-0.88(m,6H)。
制备化合物BK1和BK2((3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸)
步骤1：(3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440002541
在室温下将2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(80mg，0.29mmol)、(S)-3-氨基-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸甲酯(96mg，0.34mmol)、EDCI(109mg，0.57mmol)、HOBt(77mg，0.57mmol)和DIEA(185mg，1.43mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌4小时。浓缩混合物，并且通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mMNH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化，得到呈黄色油状物的(3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯(140mg)。收率50％(ESI 546.3(M+H)+)。
步骤2：(3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440002542
在室温下用含LiOH-H2O(54mg，1.28mmol)的THF(6mL)和H2O(1mL)将(3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯(140mg，0.26mmol)处理2小时。用1N HCl将反应混合物酸化至pH 4～5。在真空中移除溶剂，并且通过制备型HPLC A纯化残余物，得到呈白色固体的非对映异构产物BK1(25.2mg)和BK2(37.3mg)。
化合物BK1 ESI 532.2(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.72(d,J＝2.1Hz,1H),7.56(dd,J＝9.4,2.3Hz,1H),7.40(t,J＝7.6Hz,1H),7.30(d,J＝7.8Hz,1H),7.16-6.98(m,5H),6.61(d,J＝9.3Hz,1H),5.66(dd,J＝10.6,5.4Hz,1H),5.16(t,J＝5.3Hz,1H),3.37-3.35(m,1H),3.22-3.14(m,1H),2.95-2.80(m,2H),2.71(s,6H),2.62(m,2H),2.08-1.94(m,8H),1.50-1.40(m,1H),0.95(dd,J＝19.9,6.6Hz,6H)。
化合物BK2 ESI 532.3(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.67(s,1H),7.54(d,J＝9.3Hz,1H),7.41(t,J＝7.6Hz,1H),7.32(d,J＝7.8Hz,1H),7.14-7.08(m,4H),7.02(d,J＝7.5Hz,1H),6.61(d,J＝9.3Hz,1H),5.68-5.59(m,1H),5.38-5.31(m,1H),3.36-3.33(m,1H),3.28-3.25(m,1H),2.95-2.90(m,1H),2.85-2.81(m,7H),2.61(dd,J＝14.8,4.2Hz,1H),2.52-2.47(m,1H),2.05-1.94(m,7H),1.91-1.81(m,1H),1.43-1.41(m,1H),0.92(t,J＝7.2Hz,6H)。
制备化合物BL1和BL2((3S)-3-(2-(5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸)
步骤1：5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)吡啶-2(1H)-酮
Figure BDA0002782961440002551
在室温下将甲基2-(6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)乙醛(1.0g，7.29mmol)和氮杂环丁烷(416mg，7.30mmol)在MeOH(10mL)中的混合物搅拌30分钟。添加NaBH(OAc)3(4.6g，21.9mmol)并且在室温下搅拌1小时。在真空中移除溶剂，并且通过硅胶柱(DCM:MeOH 2:1)纯化残余物以提供呈黄色油状物的5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)吡啶-2(1H)-酮(800mg)。收率62％(ESI 179.1(M+H)+)。
步骤2：2-(5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002561
在80℃下将5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)吡啶-2(1H)-酮(800mg，4.49mmol)、4-甲基-2-(甲基磺酰氧基)戊酸乙酯(2.2g，6.74mmol)和K2CO3(1.8g，13.47mmol)在MeCN(40mL)中的混合物搅拌过夜。将混合物过滤并且用ACN(5mL)洗涤。在真空中浓缩滤液，并且通过反相HPLC在C18/80g柱(A：水/0.01％TFA，B：MeOH，0～100％)上纯化残余物以提供呈无色油状物的2-(5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(600mg)。收率42％(ESI 321.2(M+H)+)。
步骤3：2-(5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸
Figure BDA0002782961440002562
在室温下用含LiOH-H2O(394mg，9.40mmol)的THF(10mL)和H2O(2mL)将2-(5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(600mg，1.88mmol)处理1小时。用1N HCl将混合物酸化至pH＝4～5。在真空中浓缩混合物，并且通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化残余物，得到呈红色固体的2-(5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(150mg)。收率27％(ESI293.2(M+H)+)。
步骤4：(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸乙酯
Figure BDA0002782961440002571
向(S)-3-氨基-3-(3-溴苯基)丙酸乙酯(200mg，0.54mmol)、(4-氟-2,6-二甲基苯基)硼酸(110mg，0.65mmol)和K2CO3(224mg，1.62mmol)在含二噁烷(6mL)的H2O(1.5mL)中的混合物中添加PdCl2(dppf)(40mg，0.054mmol)。将混合物在氮气气氛下加热至110℃维持2小时。添加水(20mL)并且用EtOAc(20mL×3)萃取溶液。在真空中浓缩合并的有机相，并且通过硅胶柱(15％EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到呈无色油状物的(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸乙酯(190mg)。收率80％(ESI 316.1[M-100+H]+)。
步骤5：(S)-3-氨基-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸乙酯
Figure BDA0002782961440002572
向(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸乙酯(90mg，0.29mmol)在DCM(3mL)中的混合物中添加HCl-二噁烷(4M，1mL)。在室温下搅拌混合物2小时并且在真空中浓缩，得到呈白色固体的(S)-3-氨基-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸乙酯(68mg)，其不经进一步纯化即使用。收率99％(ESI 316.1[M+H]+)。
步骤6：(3S)-3-(2-(5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸乙酯
Figure BDA0002782961440002581
在室温下将2-(5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(53mg，0.18mmol)、(S)-3-氨基-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸乙酯(68mg，0.22mmol)、EDCI(52mg，0.27mmol)、HOBt(36mg，0.27mmol)和DIEA(70mg，0.54mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌6小时。在真空中浓缩混合物，并且通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化残余物，得到呈黄色油状物的(3S)-3-(2-(5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸酯(50mg)。收率47％(ESI 590.2(M+H)+)。
步骤8：(3S)-3-(2-(5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440002591
在室温下用含LiOH-H2O(11mg，0.255mmol)的THF(4mL)和H2O(1mL)将(3S)-3-(2-(5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸甲酯(50mg，0.085mmol)处理3小时。用1N HCl将反应混合物酸化至pH 4～5。在真空中移除溶剂，并且通过制备型HPLC A纯化残余物，得到呈白色固体的非对映异构产物BL1(7.5mg)和BL2(10.5mg)。
化合物BL1 ESI 562.2(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.64(d,J＝2.1Hz,1H),7.52(dd,J＝9.4,2.4Hz,1H),7.42(t,J＝7.6Hz,1H),7.35(d,J＝7.8Hz,1H),7.09(s,1H),7.01(d,J＝7.5Hz,1H),6.85(dd,J＝9.6,2.6Hz,2H),6.61(d,J＝9.3Hz,1H),5.63(dd,J＝10.4,5.2Hz,1H),5.22(t,J＝5.5Hz,1H),4.02-4.01(m,2H),3.89(q,J＝8.5Hz,2H),3.40-3.35(m,2H),2.78-2.75(m,2H),2.67(d,J＝5.6Hz,2H),2.33-2.27(m,2H),2.11-1.94(m,8H),1.49-1.37(m,1H),0.95(dd,J＝17.8,6.6Hz,6H)。
化合物BL2 ESI 562.2(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.55(d,J＝2.1Hz,1H),7.48(dd,J＝9.3,2.4Hz,1H),7.43(t,J＝7.6Hz,1H),7.35(d,J＝7.8Hz,1H),7.11(s,1H),7.02(d,J＝7.5Hz,1H),6.85(d,J＝9.7Hz,2H),6.60(d,J＝9.3Hz,1H),5.63(dd,J＝8.5,7.0Hz,1H),5.41(dd,J＝10.0,3.9Hz,1H),4.17-3.99(m,4H),3.48-3.35(m,2H),2.82-2.60(m,3H),2.55-2.38(m,3H),2.04-1.94(m,7H),1.85-1.76(m,1H),1.52-1.36(m,1H),0.94-0.89(m,6H)。
制备化合物BM1和BM2((3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸)
步骤1：(E)-2-甲氧基-5-(2-甲氧基乙烯基)-4-甲基吡啶
Figure BDA0002782961440002601
在室温下将(甲氧基甲基)三苯基氯化鏻(8.5g，24.8mmol)和t-BuOK(4.6g，41.3mmol)在THF(40mL)中的混合物搅拌20分钟。添加在10mL THF中的6-甲氧基-4-甲基烟醛(2.5g，16.5mmol)，并且在室温下将混合物搅拌2小时。将反应混合物倒入40mL水中，并且用EtOAc(50mL×2)萃取。在真空中浓缩有机相，并且通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mMNH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化残余物，得到呈无色油状物的(E)-2-甲氧基-5-(2-甲氧基乙烯基)-4-甲基吡啶(1.8g)。收率61％(ESI 180.1(M+H)+)。
步骤2：2-(6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)乙醛
Figure BDA0002782961440002602
在室温下用TFA(20mL)将(E)-2-甲氧基-5-(2-甲氧基乙烯基)-4-甲基吡啶(1.8g，10mmol)处理4小时。在真空中移除溶剂以提供呈红色油状物的2-(6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)乙醛(1.5g，粗产物)，其不经进一步纯化即使用。(ESI 166.1(M+H)+)。
步骤3：2-(6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)-N,N-二甲基乙胺
Figure BDA0002782961440002611
在室温下将2-(6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)乙醛(1.45g，8.78mmol)、二甲胺(在THF中，17.5mL，35.72mmol)和Achoo(0.8g，13.2mmol)在DCE(30mL)中的混合物搅拌15分钟。添加NaBH(OAc)3(3.71g，17.5mmol)并且在室温下搅拌3小时。在真空中移除溶剂，并且通过硅胶柱(DCM:MeOH 10:1)纯化残余物以提供呈黄色油状物的2-(6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)-N,N-二甲基乙胺(850mg)。收率50％(ESI 195.1(M+H)+)。
步骤4：5-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-甲基吡啶-2-醇
Figure BDA0002782961440002612
在75℃下将2-(6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)-N,N-二甲基乙胺(850mg，4.38mmol)在HBr/AcOH(20mL)中的混合物加热16小时。在真空中移除溶剂，并且通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化残余物以提供呈红色固体的5-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-甲基吡啶-2-醇(650mg)。收率82％(ESI 181.1(M+H)+)。
步骤5：2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002613
在80℃下将5-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-甲基吡啶-2-醇(650g，3.6mmol)、4-甲基-2-(甲基磺酰氧基)戊酸乙酯(1.71g，7.2mmol)和K2CO3(1.49g，10.8mmol)在MeCN(20mL)中的混合物搅拌过夜。在真空中移除溶剂，并且通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mMNH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化残余物以提供2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(500mg)。收率43％(ESI 323.2(M+H)+)。
步骤6：2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸
Figure BDA0002782961440002621
在室温下用含LiOH-H2O(260mg，6.2mmol)的MeOH(10mL)和H2O(2mL)将2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(500mg，1.55mmol)处理2小时。将混合物用1N HCl酸化至pH 4～5，并且通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mMNH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化，得到呈白色固体的2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(420mg)。收率92％(ESI 295.2(M+H)+)。
步骤7：(3S)-3-(2-(3-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-甲基-6-氧代环己-2,4-二烯基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440002631
在40℃下将2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(100mg，0.34mmol)、(S)-3-氨基-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(101mg，0.34mmol)、EDCI(130mg，0.68mmol)、HOBt(92mg，0.68mmol)和DIEA(175mg，1.36mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌2小时。浓缩混合物，并且通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mMNH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化，得到呈红色油状物的(3S)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)-3-(2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯(130mg)。收率67％(ESI 574.2(M+H)+)。
步骤8：(3S)-3-(2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440002632
在室温下用含LiOH-H2O(39mg，0.92mmol)的MeOH(3mL)和H2O(1mL)将(3S)-3-(2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(130mg，0.23mmol)处理2小时。用1NHCl将反应混合物酸化至pH4～5。在真空中移除溶剂，并且通过制备型HPLC A(30-60％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的非对映异构产物BM1(36.9mg)和BM2(42.3mg)。
化合物BM1 ESI 546.2(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.52(s,1H),7.40(t,J＝7.6Hz,1H),7.32(d,J＝7.7Hz,1H),7.17-7.11(m,1H),7.08(d,J＝7.5Hz,2H),7.05(s,1H),7.00(d,J＝7.5Hz,1H),6.38(s,1H),5.65(t,J＝8.1Hz,1H),5.37(t,J＝6.7Hz,1H),5.18(d,J＝57.3Hz,1H),4.01(d,J＝9.4Hz,2H),3.80-3.55(m,2H),3.05(s,2H),2.78(d,J＝6.7Hz,2H),2.66-2.61(m,2H),2.25(s,3H),2.00-1.87(m,8H),1.42-1.38(m,1H),0.95-0.91(m,6H)。
化合物BM2 ESI 546.2(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.56(s,1H),7.42(t,J＝7.6Hz,1H),7.34(d,J＝7.8Hz,1H),7.12(m,J＝18.3,11.4,6.5Hz,4H),7.02(d,J＝7.5Hz,1H),6.46(s,1H),5.62(t,J＝7.7Hz,1H),5.41-5.37(m,1H),3.32-3.26(m,1H),3.24-3.12(m,1H),3.00-2.87(m,2H),2.84(s,6H),2.63-2.58(m,1H),2.58-2.45(m,1H),2.28(s,3H),2.05-1.90(m,7H),1.83-1.70(m,1H),1.49-1.29(m,1H),0.91-0.86(m,6H)。
制备化合物BN1和BN2((3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸)
步骤1：5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)吡啶-2(1H)-酮
Figure BDA0002782961440002641
在室温下将2-(6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)乙醛(1.5g，11mmol)、AcOH(0.8g，13.2mmol)和3-氟氮杂环丁烷盐酸盐(1.47g，13.2mmol)在MeOH(30mL)中的混合物搅拌30分钟。添加NaBH(OAc)3(4.66g，22mmol)并且在室温下搅拌3小时。在真空中移除溶剂，并且通过反相HPLC在C18/120g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化残余物以提供呈黄色油状物的5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)吡啶-2(1H)-酮(2g，粗产物)。(ESI 197.2(M+H)+)。
步骤4：2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002651
在110℃下将5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)吡啶-2(1H)-酮(1.9g，9.7mmol)、4-甲基-2-(甲基磺酰氧基)戊酸乙酯(3.45g，14.5mmol)和Cs2CO3(9.5g，29.1mmol)在甲苯(40mL)中的混合物搅拌过夜。在真空中移除溶剂，并且通过反相HPLC在C18/120g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化残余物以提供呈黄色油状物的2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(650mg)。收率20％(ESI 339.1(M+H)+)。
步骤5：2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸
Figure BDA0002782961440002652
在室温下用含LiOH-H2O(322mg，7.68mmol)的MeOH(10mL)和H2O(2.5mL)将2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(650mg，1.92mmol)处理2小时。用1NHCl将混合物酸化至pH＝4～5，通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化，得到呈白色固体的2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(350mg)。收率59％(ESI 311.2(M+H)+)。
步骤6：(3S)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)-3-(2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440002661
在45℃下将2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(120mg，0.39mmol)、(S)-3-氨基-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(133mg，0.47mmol)、EDCI(150mg，0.78mmol)、HOBt(105mg，0.78mmol)和DIEA(201mg，1.56mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌2小时。通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化混合物，得到呈油状物的(3S)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)-3-(2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯(120mg)。收率52％(ESI 576.2(M+H)+)。
步骤7：(3S)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)-3-(2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440002671
在室温下用含LiOH-H2O(34mg，0.8mmol)的MeOH(4mL)和H2O(1mL)将(3S)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)-3-(2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯(120mg，0.2mmol)处理2小时。用1NHCl将反应混合物酸化至pH 4～5。在真空中移除溶剂，并且通过制备型HPLC A(30-60％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的非对映异构产物BN1(30mg)和BN2(34.9mg)。
化合物BN1 ESI 562.0(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.59(d,J＝2.0Hz,1H),7.46-7.42(m,1H),7.40(t,J＝7.6Hz,1H),7.31(d,J＝7.8Hz,1H),7.17-7.12(m,1H),7.11-7.06(m,2H),7.04(s,1H),7.01(d,J＝7.5Hz,1H),6.54(d,J＝9.3Hz,1H),5.68(t,J＝8.1Hz,1H),5.28(t,J＝6.2Hz,1H),5.16-5.11(m,1H),4.04-4.00(m,2H),3.78-3.61(m,2H),3.22-3.06(m,2H),2.78-2.69(m,2H),2.65-2.59(m,2H),1.97-1.93(m,8H),1.45-1.39(m,1H),0.95-0.92(m,6H)。
化合物BN2 ESI 562.0(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.55(s,1H),7.48-7.45(m,1H),7.43(t,J＝7.6Hz,1H),7.34(d,J＝7.8Hz,1H),7.12-7.08(m,4H),7.04(d,J＝7.5Hz,1H),6.59(d,J＝9.3Hz,1H),5.66-5.61(m,1H),5.40-5.36(m,1H),5.37-5.19(m,1H),4.31(d,J＝42.0Hz,2H),3.95(d,J＝10.3Hz,2H),3.32(s,2H),2.79-2.63(m,3H),2.56-2.51(m,1H),2.04-1.91(m,7H),1.86-1.72(m,1H),1.41-1.38(m,1H),0.92-0.88(m,6H)。
制备化合物BO1和BO2((3S)-3-(2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸)
步骤1：(E)-2-甲氧基-5-(2-甲氧基乙烯基)-4-(三氟甲基)吡啶
Figure BDA0002782961440002681
在0℃下向(甲氧基甲基)三苯基氯化鏻(1.0g，2.95mmol)在THF(13.406mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(376mg，3.35mmol)。在0℃下搅拌反应物1小时之后，添加6-甲氧基-4-(三氟甲基)烟醛(550mg，2.68mmol)在THF(6.5mL)中的溶液。将反应物在室温下搅拌过夜并且用NH4Cl溶液淬灭。将混合物萃取(EtOAc×3)，浓缩并且通过硅胶层析法(0-100％乙酸乙酯：己烷)纯化以提供(E)-2-甲氧基-5-(2-甲氧基乙烯基)-4-(三氟甲基)吡啶(450mg)。收率72％(ESI 234.2(M+H)+)。
步骤2：2-(6-甲氧基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙醛
Figure BDA0002782961440002682
向(E)-2-甲氧基-5-(2-甲氧基乙烯基)-4-(三氟甲基)吡啶(450mg，1.930mmol)在DCM(29.689mL)中的溶液中添加TFA(0.595mL，7.72mmol)和水(0.591mL，32.8mmol)。将反应物在45℃下搅拌18小时。将反应物用DCM稀释并且用NaHCO3淬灭。将混合物用水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩以提供2-(6-甲氧基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙醛(343mg)，其不经进一步纯化即使用。收率81％(ESI 220.18(M+H)+)。
步骤3：2-(6-甲氧基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-N,N-二甲基乙-1-胺
Figure BDA0002782961440002691
向2-(6-甲氧基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙醛(0.34g，1.6mmol)在DCE(7.8mL)中的溶液中添加二甲胺(3.9mL，7.8mmol)和乙酸(0.05mL，0.78mmol)并且搅拌1小时。向溶液中添加三乙酰氧基硼氢化钠(0.6g，3.1mmol)。将反应物搅拌12小时，随后浓缩并且通过硅胶层析法(0-35％DCM(1％TEA):MeOH 0-30％)纯化以提供2-(6-甲氧基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-N,N-二甲基乙-1-胺(305mg)。收率79％(ESI 249.27(M+H)+)。
步骤4：5-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-(三氟甲基)吡啶-2(1H)-酮
Figure BDA0002782961440002692
将HBr(33％在乙酸中)(4.04mL，24.57mmol)添加至2-(6-甲氧基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-N,N-二甲基乙-1-胺(0.305g，1.229mmol)并且在压力容器中加热至75℃。4小时后，移除溶剂，并且通过硅胶层析法(0-25％DCM:MeOH，1％TEA作为改性剂)纯化残余物以提供5-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-(三氟甲基)吡啶-2(1H)-酮(219mg)。收率76％(ESI 235.15(M+H)+)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.56(s,1H),6.85(s,1H),2.76(m,2H),2.61(m,1H),2.37(m,6H)。
步骤5：2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002701
在85℃下将5-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-(三氟甲基)吡啶-2(1H)-酮(685mg，2.92mmol)、K2CO3(1.60g，11.55mmol)和4-甲基-2-(甲基磺酰氧基)戊酸乙酯(1.60g，6.70mmol)在CH3CN(60mL)中的混合物搅拌过夜。在真空中浓缩溶剂，并且通过硅胶柱(DCM:MeOH 2:1)纯化残余物，得到呈褐色油状物的2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(390mg)。收率35％(ESI 377.2(M+H)+)。1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.84(s,1H),6.68(s,1H),5.51(dd,J＝11.0,5.0Hz,1H),4.23(q,J＝7.0Hz,2H),2.77(t,J＝8.0Hz,2H),2.53(t,J＝8.0Hz,2H),2.33(s,6H),2.18-2.12(m,1H),2.08-2.02(m,1H),1.46-1.38(m,1H),1.27(t,J＝7.0Hz,3H),0.97(t,J＝7.0Hz,6H)。
步骤6：2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸
Figure BDA0002782961440002702
在室温下用含LiOH单水合物(435mg，10.36mmol)的EtOH(10mL)和H2O(1mL)将2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(390mg，1.0mmol)处理1小时。用1N HCl水溶液将混合物酸化至pH 4～5。在真空中浓缩混合物，并且通过硅胶柱(MeOH:EtOAc 1:2)纯化，得到呈油状物的2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(358mg)。收率99％(ESI 349.1(M+H)+)。
步骤7：(3S)-3-(2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440002711
在室温下将2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(167mg，0.25mmol)、(S)-3-氨基-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(167mg，0.52mmol)、EDCI(196mg，1.01mmol)、HOBt(135mg，1.00mmol)和DIEA(0.83mL，5.00mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌9小时。浓缩混合物，并且通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～92％)上纯化，得到呈褐色固体的(3S)-3-(2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(99mg)。收率64％(ESI 614.2(M+H)+)。
步骤8：(3S)-3-(2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440002721
在室温下用含LiOH单水合物(68mg，1.62mmol)的MeOH(10mL)和H2O(0.1mL)将(3S)-3-(2-(5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(99mg，0.16mmol)处理20小时。用1N HCl将反应混合物酸化至pH 4～5。在真空中浓缩混合物，并且通过制备型HPLC A纯化，得到呈白色固体的非对映异构产物BO1(26mg)和BO2(28mg)。
化合物BO1 ESI 600.2(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.89(s,1H),7.36(t,J＝8.0Hz,1H),7.31(d,J＝8.0Hz,1H),7.10(t,J＝7.5Hz,1H),7.05(m,3H),6.96(d,J＝8.0Hz,1H),6.80(s,1H),5.70(t,J＝8.0Hz,1H),5.35(t,J＝7.5Hz,1H),3.07-3.00(m,2H),2.95-2.90(m,2H),2.74-2.69(m,8H),1.98(t,J＝7.5Hz,2H),1.95(s,3H),1.87(s,3H),1.47-1.39(m,1H),0.96(d,J＝6.5Hz,3H),0.94(d,J＝6.5Hz,3H)。
化合物BO2 ESI 600.2(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.84(s,1H),7.41(t,J＝7.5Hz,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),7.12(t,J＝7.5Hz,2H),7.07(d,J＝7.5Hz,2H),7.02(d,J＝7.0Hz,1H),6.89(s,1H),5.62(t,J＝8.0Hz,1H),5.48-5.45(m,1H),3.27-3.22(m,1H),3.20-3.15(m,1H),2.97(t,J＝7.0Hz,2H),2.79(s,6H),2.67-2.63(m,1H),2.58-2.53(m,1H),2.00-1.94(m,7H),1.74-1.68(m,1H),1.43-1.35(m,1H),0.90-0.88(m,6H)。
制备化合物BP1和BP2((3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)-3-(2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸)
步骤1：6-羟基-4-甲基烟醛
Figure BDA0002782961440002731
在100℃下将6-甲氧基-4-甲基烟醛(5g，33mmol)在HBr/AcOH(50mL)中的混合物加热4小时。在真空中移除溶剂，并且通过硅胶柱(EtOAc:MeOH 4:1)纯化残余物以提供呈红色固体的6-羟基-4-甲基烟醛(6g，粗产物)。(ESI 138.1(M+H)+)。
步骤2：(E)-5-(2-甲氧基乙烯基)-4-甲基吡啶-2-醇
Figure BDA0002782961440002732
在0℃下在N2气氛下向(甲氧基甲基)三苯基氯化鏻(10.3g，30mmol)在THF(40mL)中的混合物中逐滴添加LiHMDS(38mL，50mmol)并且在0℃下搅拌20分钟。添加6-羟基-4-甲基烟醛(2.74g，20mmol)，并且在室温下将混合物搅拌3小时。将反应混合物冷却至0℃并添加40mL水，并且在0℃下搅拌10分钟。浓缩混合物，并且通过反相HPLC在C18/120g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化，得到呈红色油状物的(E)-5-(2-甲氧基乙烯基)-4-甲基吡啶-2-醇(1.5g)。收率45％(ESI 166.1(M+H)+)。
步骤3：2-(6-羟基-4-甲基吡啶-3-基)乙醛
Figure BDA0002782961440002733
在室温下用TFA(15mL)将(E)-5-(2-甲氧基乙烯基)-4-甲基吡啶-2-醇(1.5g，9.1mmol)处理3小时。在真空中移除溶剂以提供呈红色油状物的2-(6-羟基-4-甲基吡啶-3-基)乙醛(2.2g，粗产物)，其不经进一步纯化即使用。(ESI 152.2(M+H)+)。
步骤4：5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-4-甲基吡啶-2-醇
Figure BDA0002782961440002741
在室温下将2-(6-羟基-4-甲基吡啶-3-基)乙醛(2g，13.2mmol)、3-氟氮杂环丁烷盐酸盐(2.2g，19.8mmol)在MeOH(20mL)中的混合物搅拌30分钟。添加NaBH(OAc)3(5.6g，26.4mmol)并且在室温下搅拌2小时。在真空中移除溶剂，并且通过硅胶柱(DCM:MeOH 2:1)纯化残余物以提供呈黄色油状物的5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-4-甲基吡啶-2-醇(1g)。收率36％(ESI 211.1(M+H)+)。
步骤5：2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002742
在85℃下将甲基5-(2-(二甲基氨基)乙基)吡啶-2(1H)-酮(1g，4.76mmol)、4-甲基-2-(甲基磺酰氧基)戊酸乙酯(1.36g，5.71mmol)和K2CO3(1.97g，14.28mmol)在MeCN(20mL)中的混合物搅拌过夜。在真空中移除溶剂，并且通过硅胶柱(DCM:MeOH 1:2)纯化残余物以提供呈白色固体的2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(500mg)。收率30％(ESI 353.2(M+H)+)。
步骤6：2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸
Figure BDA0002782961440002751
在室温下用含LiOH-H2O(298mg，7.1mmol)的MeOH(10mL)和H2O(2.5mL)将2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(500mg，1.42mmol)处理2小时。将混合物用1NHCl酸化至pH 4～5，通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化，得到呈白色固体的2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(360mg)。收率78％(ESI 325.1(M+H)+)。
步骤7：(3S)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)-3-(2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯
Figure BDA0002782961440002752
在室温下将2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(150mg，0.46mmol)、(S)-3-氨基-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)丙酸甲酯(130mg，0.46mmol)、EDCI(177mg，0.92mmol)、HOBt(124mg，0.92mmol)和DIEA(237mg，1.84mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌2小时。浓缩混合物，并且通过反相HPLC在C18/40g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化，得到呈黄色油状物的(3S)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)-3-(2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯(200mg)。收率74％(ESI 590.2(M+H)+)。
步骤8：(3S)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)-3-(2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸
Figure BDA0002782961440002761
在室温下用含LiOH-H2O(57mg，1.36mmol)的MeOH(4mL)和H2O(1mL)将(3S)-3-(2',6'-二甲基联苯-3-基)-3-(2-(5-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)丙酸甲酯(200mg，0.34mmol)处理2小时。用1N HCl将反应混合物酸化至pH 4～5。在真空中移除溶剂，并且通过制备型HPLC A(30-60％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的产物BP1(77mg)和BP2(80mg)。
化合物BP1 ESI 576.2(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.52(s,1H),7.40(t,J＝7.6Hz,1H),7.32(d,J＝7.7Hz,1H),7.17-7.11(m,1H),7.08(d,J＝7.5Hz,2H),7.05(s,1H),7.00(d,J＝7.5Hz,1H),6.38(s,1H),5.65(t,J＝8.1Hz,1H),5.37(t,J＝6.7Hz,1H),5.18(d,J＝57.3Hz,1H),4.01(d,J＝9.4Hz,2H),3.80-3.55(m,2H),3.05(s,2H),2.78(d,J＝6.7Hz,2H),2.66-2.61(m,2H),2.25(s,3H),2.00-1.87(m,8H),1.42-1.39(m,1H),0.95-0.92(m,6H)。
化合物BP2 ESI 576.2(M+H)+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.46(d,J＝4.0Hz,1H),7.43(d,J＝7.6Hz,1H),7.35(d,J＝7.9Hz,1H),7.14-7.10(m,2H),7.10(d,J＝6.9Hz,2H),7.04(d,J＝7.5Hz,1H),6.46(s,1H),5.62(t,J＝7.8Hz,1H),5.45-5.41(m,1H),5.31(d,J＝57.6Hz,1H),4.31(s,2H),3.93(s,2H),3.30-3.17(m,2H),2.84(d,J＝15.8Hz,1H),2.73-2.61(m,2H),2.62-2.53(m,1H),2.26(s,3H),2.01(d,J＝2.0Hz,6H),1.93-1.89(m,1H),1.82-1.73(m,1H),1.39-1.35(m,1H),0.91-0.88(m,6H)。
制备化合物BQ1和BQ2((3S)-3-(2-(3-(二氟甲基)-5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸)
步骤1：5-溴-3-(二氟甲基)-2-甲氧基吡啶
Figure BDA0002782961440002771
在0℃下在N2下向5-溴-2-甲氧基烟醛(10.0g，46.3mmol)在无水DCM(100mL)中的混合物中添加DAST(29.8g，185.2mmol)并且在0℃下搅拌2天。将反应物用100mL饱和NaHCO3溶液淬灭。用DCM(100mL×3)萃取水层。将合并的有机层用NaHCO3(饱和，100mL)和盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩，得到呈黄色油状物的5-溴-3-(二氟甲基)-2-甲氧基吡啶(11.0g)。收率100％(ESI 238.1(M+H)+)。
步骤2：5-溴-3-(二氟甲基)吡啶-2-醇
Figure BDA0002782961440002781
在室温下将5-溴-3-(二氟甲基)-2-甲氧基吡啶(11.0g，46.2mmol)在HBr(33％在乙酸中，100mL)中的混合物搅拌5小时并且随后在40℃下搅拌75分钟。将混合物浓缩并倒入100mL饱和NaHCO3溶液中并且用DCM萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并且在真空中浓缩，得到呈白色固体的5-溴-3-(二氟甲基)吡啶-2-醇(8.5g)，其不经进一步纯化即使用。收率73.2％(ESI 226.0(M+H)+)。
步骤3：2-(5-溴-3-(二氟甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002782
在80℃下将5-溴-3-(二氟甲基)吡啶-2-醇(7.0g，31.2mmol)、4-甲基-2-((甲基磺酰基)氧基)戊酸乙酯(14.0g，37.4mmol)和K2CO3(14.0g，62.5mmol)在ACN(100mL)中的混合物搅拌过夜。将混合物过滤并且用ACN(20mL)洗涤。在真空中浓缩滤液，并且通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 4:1)纯化残余物以提供呈白色固体的2-(5-溴-3-(二氟甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(10.0g)。收率80.3％(ESI 366.0(M+H)+)。
步骤4：2-(5-烯丙基-3-(二氟甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002791
在100℃下将2-(5-溴-3-(二氟甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(6.0g，16.2mmol)、烯丙基三丁基锡烷(7.0g，19.2mmol)、CsF(5.0g，32.4mmol)、Pd(dba)3(720mg，1.62mmol)和PCy3(450mg，0.135mmol)在二噁烷(100mL)中的混合物搅拌过夜。将混合物倒入水(200mL)中，用EtOAc(100mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过硅胶柱(石油醚:EtOAc 4:1)纯化残余物，得到呈白色固体的2-(5-烯丙基-3-(二氟甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(3.0g)。收率71.6％(ESI 328.1(M+H)+)。
步骤5：2-(3-(二氟甲基)-2-氧代-5-(2-氧代乙基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002792
向乙基2-(5-烯丙基-3-(二氟甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4(3.0g，9.1mmol)在THF/H2O(2/1，100mL)中的混合物中添加K2OsO4(33.7mg，0.09mmol)，并且在室温下搅拌1小时。添加NaIO4(3.9，18.3mmol)并且将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物倒入水(200mL)中并且用EtOAc(100mL×3)萃取。将合并的有机层经盐水(200mL)洗涤并且经Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩，得到呈黄色油状物的2-(3-(二氟甲基)-2-氧代-5-(2-氧代乙基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(3.0g，粗产物)，其不经进一步纯化即使用。(ESI 330.1(M+H)+)。
步骤6：2-(3-(二氟甲基)-5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BDA0002782961440002801
在室温下将2-(3-(二氟甲基)-2-氧代-5-(2-氧代乙基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(3.0g，9.1mmol)、二甲胺(2M在THF中，14mL，28mmol)在DCE(50ml)中的混合物搅拌30分钟。逐份添加NaBH(OAc)3(3.8g，18.2mmol)，并且在室温下将反应物搅拌过夜。在真空中浓缩溶剂，并且通过反相HPLC在C18/120g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化残余物，得到呈黄色油状物的2-(3-(二氟甲基)-5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(2.0g)。收率33.6％(ESI 359.2(M+H)+)。
步骤7：2-(3-(二氟甲基)-5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸
Figure BDA0002782961440002802
在室温下用含LiOH-H2O(40mg，1.01mmol)的THF(20mL)和水(10mL)将2-(3-(二氟甲基)-5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(2.0g，5.5mmol)的混合物处理2小时。在真空中移除溶剂，并且通过反相HPLC在C18/120g柱(A：水10mM NH4HCO3，B：MeOH，0～100％)上纯化残余物，得到呈白色固体的2-(3-(二氟甲基)-5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(1.2g)。收率85.6％(ESI331.1(M+H)+)。
步骤8：(3S)-3-(2-(3-(二氟甲基)-5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸乙酯
Figure BDA0002782961440002811
在室温下将2-(3-(二氟甲基)-5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(120mg，0.36mmol)、(S)-3-氨基-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸乙酯(137mg，0.43mmol)、TCFH(151.2mg，0.54mmol)和NMI(149mg，1.8mmol)在MeCN(5mL)中的混合物搅拌1小时。在真空中移除溶剂，并且通过硅胶柱(DCM:MeOH 10:1)纯化残余物，得到呈黄色固体的(3S)-3-(2-(3-(二氟甲基)-5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸乙酯(140mg)。收率61％(ESI 628(M+H)+)。
步骤12：(3S)-3-(2-(3-(二氟甲基)-5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸
Figure BDA0002782961440002821
在室温下用含LiOH-H2O(46.8mg，1.1mmol)的EtOH(3mL)和H2O(1mL)将(3S)-3-(2-(3-(二氟甲基)-5-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酰氨基)-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)丙酸乙酯(140mg，0.22mmol)处理2小时。用1NHCl将反应混合物酸化至pH4～5。在真空中移除溶剂，并且通过制备型HPLC A(30-60％MeCN)纯化残余物，得到呈白色固体的非对映异构产物BQ1(11mg)和BQ2(14mg)。
化合物BQ1 ESI 600.2(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.89(d,J＝15.3Hz,2H),7.39(t,J＝7.6Hz,1H),7.31(d,J＝7.8Hz,1H),7.05(s,1H),7.00-6.96(m,1H),6.74-6.64(m,3H),5.67-5.58(m,1H),5.21(t,J＝5.9Hz,1H),3.23-3.15(m,6.4Hz,1H),3.04-2.86(m,3H),2.76(s,6H),2.68-2.59(m,2H),2.03-1.93(m,8H),1.45(s,1H),0.96-0.92(m,6H)。
化合物BQ2 ESI 600.3(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.84(d,J＝10.8Hz,2H),7.42(t,J＝7.6Hz,1H),7.33(d,J＝7.8Hz,1H),7.08(s,1H),7.01(d,J＝7.5Hz,1H),6.89-6.60(m,3H),5.65-5.58(m,1H),5.38-5.32(m,1H),3.45-3.36(m,1H),3.27-3.19(m,1H),3.00-2.81(m,8H),2.64-2.58(m,1H),2.50-2.42(m,1H),2.05-1.98(m,7H),1.85-1.78(m,1H),1.48-1.39(m,1H),0.96-0.89(m,6H)。
实施例4：用于α4β7结合的化合物的荧光偏振测定
使用荧光偏振(Fluorescence Polarization，FP)测定通过与荧光素标记肽CRSDTLCGE{Lys(FITC)}的结合竞争测量化合物活性。在测定中，将6.5nM整合素a4b7与测试化合物一起在2mM氯化锰、0.1mM氯化钙、20mM HEPES缓冲液(pH 7.3)、150mM氯化钠、0.01％Triton X-100、2％DMSO和3nM荧光素标记肽中孵育。在384孔板中进行测定，在添加荧光素标记肽之前，在22℃下将整合素蛋白质与测试化合物一起预孵育15分钟。在添加荧光素标记肽之后，测定在22℃下孵育1小时并且测量荧光偏振。通过非线性回归、四参数曲线拟合确定IC50值。
以引用方式并入
本文引用的所有美国专利以及美国和PCT专利申请公布均据此以引用方式并入。
等效物
本领域技术人员将认识到或能够仅使用常规实验确定本文所述的本发明的特定实施方案的许多等效物。此类等效物旨在由以下权利要求所涵盖。

Claims (104)

1.一种由式(I)表示的化合物：
Figure FDA0002782961430000011
其中：
R1为H、烷基、亚烷基-环烷基、杂环基、亚烷基-O-烷基、芳基、杂芳基或亚烷基-CF3；
R2为杂环基；
R3为
Figure FDA0002782961430000012
R4为H或(C1-C6)-烷基；
Ra为H、烷基、环烷基、CN或-O-烷基；
Rb为H、烷基、芳基、杂芳基、杂环基、-O-环烷基、-O-芳基或-O-杂环基；
Rc为H、烷基、环烷基、杂环基或亚烷基-CF3；
Rd为芳基、杂芳基、杂环基、-O-环烷基、-O-芳基或-O-杂环基；并且
Re为芳基、杂芳基或杂环基；
或其药学上可接受的盐。
2.如权利要求1所述的化合物，其中R1为烷基。
3.如权利要求2所述的化合物，其中烷基为甲基、乙基、异丙基、正丙基、异丁基、正丁基或叔丁基。
4.如权利要求1所述的化合物，其中R1为亚烷基-环烷基。
5.如权利要求4所述的化合物，其中亚烷基-环烷基为亚甲基-环丙基。
6.如权利要求1所述的化合物，其中R1为杂环基。
7.如权利要求6所述的化合物，其中杂环基为含N杂环基。
8.如权利要求6或7所述的化合物，其中杂环基为取代的杂环基。
9.如权利要求1所述的化合物，其中R1为-亚烷基-O-烷基。
10.如权利要求9所述的化合物，其中-亚烷基-O-烷基为-亚甲基-O-甲基。
11.如权利要求1所述的化合物，其中R1为芳基。
12.如权利要求11所述的化合物，其中芳基为苯基。
13.如权利要求12所述的化合物，其中苯基为未取代的苯基。
14.如权利要求12所述的化合物，其中苯基为取代的苯基。
15.如权利要求14所述的化合物，其中取代的苯基被一个或多个选自烷基和卤素的取代基取代。
16.如权利要求1所述的化合物，其中R1为亚烷基-CF3。
17.如权利要求16所述的化合物，其中亚烷基-CF3为亚甲基-CF3。
18.如权利要求1至17中任一项所述的化合物，其中R2为杂环基。
19.如权利要求18所述的化合物，其中杂环基为取代的杂环基。
20.如权利要求18或19所述的化合物，其中杂环基为含N杂环基。
21.如权利要求20所述的化合物，其中所述含N杂环基为6至12元杂环基。
22.如权利要求19至21中任一项所述的化合物，其中R2被一个或多个选自氨基、烷基和烷氧基的取代基取代，其中烷基或烷氧基被吗啉代、环状氨基或非环氨基取代，并且其中所述烷基、烷氧基、吗啉代、环状氨基或非环氨基部分任选地被一个或多个烷氧基或氟取代。
23.如权利要求21所述的化合物，其中R2为未取代的吡啶酮基。
24.如权利要求21所述的化合物，其中R2为取代的吡啶酮基。
25.如权利要求24所述的化合物，其中取代的吡啶酮基被一个或多个选自以下的取代基取代：烷基、环烷基、杂环烷基、卤素、芳基、杂芳基和CF3。
26.如权利要求18所述的化合物，其中R2选自
Figure FDA0002782961430000031
Figure FDA0002782961430000041
27.如权利要求18所述的化合物，其中R2选自
Figure FDA0002782961430000042
Figure FDA0002782961430000051
Figure FDA0002782961430000061
28.如权利要求1至27中任一项所述的化合物，其中R3为
Figure FDA0002782961430000062
29.如权利要求28所述的化合物，其中Ra为甲基、环丙基、CN或-OMe。
30.如权利要求1至29中任一项所述的化合物，其中Rb为烷基、芳基、杂环基、杂芳基、-O-环烷基、-O-芳基或-O-杂芳基。
31.如权利要求30所述的化合物，其中Rb为烷基。
32.如权利要求31所述的化合物，其中烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基。
33.如权利要求32所述的化合物，其中烷基为叔丁基。
34.如权利要求30所述的化合物，其中Rb为芳基或杂芳基。
35.如权利要求34所述的化合物，其中Rb为取代的芳基。
36.如权利要求34所述的化合物，其中Rb为取代的杂芳基。
37.如权利要求35或36所述的化合物，其中取代的芳基或取代的杂芳基被一个或多个选自以下的取代基取代：烷基、卤素、OH、-O-烷基、CN、环烷基和杂环烷基。
38.如权利要求34所述的化合物，其中Rb选自
Figure FDA0002782961430000071
39.如权利要求30所述的化合物，其中Rb为杂环基。
40.如权利要求39所述的化合物，其中杂环基为取代的杂环基。
41.如权利要求40所述的化合物，其中取代的杂环基被一个或多个选自烷基、环烷基、OH和-O-烷基的取代基取代。
42.如权利要求41所述的化合物，其中Rb选自
Figure FDA0002782961430000072
43.如权利要求39所述的化合物，其中Rb选自
Figure FDA0002782961430000081
Figure FDA0002782961430000082
44.如权利要求30所述的化合物，其中Rb为-O-环烷基。
45.如权利要求44所述的化合物，其中-O-环烷基为-O-环丁基。
46.如权利要求30所述的化合物，其中Rb为-O-芳基。
47.如权利要求46所述的化合物，其中-O-芳基为-O-苯基。
48.如权利要求1至27中任一项所述的化合物，其中R3为
Figure FDA0002782961430000083
49.如权利要求48所述的化合物，其中Rc为烷基、环烷基、(杂环基)烷基、卤素或CF3。
50.如权利要求49所述的化合物，其中烷基为甲基或乙基。
51.如权利要求49所述的化合物，其中Rc为CF3。
52.如权利要求1至27中任一项所述的化合物，其中R3为
Figure FDA0002782961430000091
53.如权利要求48至52中任一项所述的化合物，其中Rd为芳基、杂芳基或杂环基。
54.如权利要求53所述的化合物，其中Rd为芳基。
55.如权利要求54所述的化合物，其中芳基为取代的芳基。
56.如权利要求55所述的化合物，其中取代的芳基被一个或多个选自以下的取代基取代：烷基、环烷基、(杂环基)烷基、卤素、OH、OMe、CF3和CN。
57.如权利要求54所述的化合物，其中Rd选自
Figure FDA0002782961430000092
58.如权利要求53所述的化合物，其中Rd为杂环基。
59.如权利要求58所述的化合物，其中杂环基为取代的杂环基。
60.如权利要求53所述的化合物，其中Rd为杂芳基。
61.如权利要求60所述的化合物，其中杂芳基为取代的杂芳基。
62.如权利要求61所述的化合物，其中Rd为
Figure FDA0002782961430000101
63.如权利要求59或61所述的化合物，其中取代的杂环基或取代的杂芳基被一个或多个选自烷基和环烷基的取代基取代。
64.如权利要求53所述的化合物，其中Rd选自
Figure FDA0002782961430000102
65.如权利要求1至27中任一项所述的化合物，其中R3为
Figure FDA0002782961430000103
66.如权利要求65所述的化合物，其中Re为芳基。
67.如权利要求66所述的化合物，其中芳基为苯基。
68.如权利要求67所述的化合物，其中苯基为取代的苯基。
69.如权利要求68所述的化合物，其中取代的苯基为烷基取代的苯基。
70.如权利要求69所述的化合物，其中Re为
Figure FDA0002782961430000104
71.如权利要求65所述的化合物，其中Re为杂环基。
72.如权利要求71所述的化合物，其中杂环基为取代的吡咯烷基。
73.如权利要求72所述的化合物，其中取代的吡咯烷基为烷基取代的吡咯烷基。
74.如权利要求73所述的化合物，其中Re为
Figure FDA0002782961430000111
75.如权利要求1至74中任一项所述的化合物，其中R4为H。
76.如权利要求1至74中任一项所述的化合物，其中R4为(C1-C6)-烷基。
77.如权利要求76所述的化合物，其中R4为甲基、乙基、异丙基、正丙基、异丁基、正丁基或叔丁基。
78.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0002782961430000112
Figure FDA0002782961430000121
Figure FDA0002782961430000131
Figure FDA0002782961430000141
79.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0002782961430000151
Figure FDA0002782961430000152
Figure FDA0002782961430000161
Figure FDA0002782961430000171
Figure FDA0002782961430000181
80.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0002782961430000191
Figure FDA0002782961430000192
Figure FDA0002782961430000201
Figure FDA0002782961430000211
81.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0002782961430000212
Figure FDA0002782961430000221
Figure FDA0002782961430000231
Figure FDA0002782961430000241
82.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0002782961430000242
Figure FDA0002782961430000251
Figure FDA0002782961430000261
Figure FDA0002782961430000271
83.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0002782961430000272
Figure FDA0002782961430000281
84.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0002782961430000282
Figure FDA0002782961430000291
85.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0002782961430000292
Figure FDA0002782961430000293
Figure FDA0002782961430000301
Figure FDA0002782961430000311
Figure FDA0002782961430000321
Figure FDA0002782961430000331
86.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0002782961430000332
87.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0002782961430000341
Figure FDA0002782961430000342
88.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0002782961430000343
89.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0002782961430000351
Figure FDA0002782961430000352
Figure FDA0002782961430000361
Figure FDA0002782961430000371
Figure FDA0002782961430000381
90.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0002782961430000391
Figure FDA0002782961430000392
Figure FDA0002782961430000401
Figure FDA0002782961430000411
Figure FDA0002782961430000421
91.一种药物组合物，其包含如权利要求1至90中任一项所述的化合物；以及药学上可接受的赋形剂。
92.一种治疗选自由炎症性肠病、回肠肛管吻合术、嗜酸性食道炎、胰腺炎、胰岛素依赖型糖尿病、乳腺炎、胆囊炎、胆管炎、胆管周围炎、慢性支气管炎、慢性鼻窦炎、哮喘、移植物抗宿主疾病、慢性肺部炎症性疾病、HIV和血液肿瘤组成的组的疾病或病状的方法，包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的如权利要求1至90中任一项所述的化合物。
93.如权利要求92所述的方法，其中所述疾病或病状为炎症性肠病。
94.如权利要求93所述的方法，其中所述炎症性肠病为结肠炎、克罗恩病、回肠炎、乳糜泻、非热带性口炎性腹泻、与血清阴性关节病相关的肠病、胃肠炎或结肠袋炎。
95.如权利要求94所述的方法，其中所述疾病或病状为结肠炎；并且所述结肠炎为溃疡性结肠炎、显微结肠炎或胶原性结肠炎。
96.如权利要求94所述的方法，其中所述疾病或病状为结肠袋炎；并且所述结肠袋炎为直肠结肠切除术的结果，
97.如权利要求92所述的方法，其中所述疾病或病状为胃肠炎。
98.如权利要求97所述的方法，其中胃肠炎为嗜酸性胃肠炎。
99.如权利要求92所述的方法，其中所述疾病或病状为嗜酸性食道炎。
100.如权利要求92所述的方法，其中所述疾病或病状为慢性肺部炎症性疾病。
101.如权利要求100所述的方法，其中所述慢性肺部炎症性疾病为间质纤维化。
102.如权利要求101所述的方法，其中所述间质纤维化为过敏性肺炎、胶原蛋白疾病或结节病。
103.如权利要求92所述的方法，其中所述疾病或病状为血液肿瘤。
104.如权利要求103所述的方法，其中所述血液肿瘤选自由以下组成的组：急性淋巴细胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤和多发性骨髓瘤。
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