TW202202499A - 一種atx抑制劑及其製備方法和應用 - Google Patents

一種atx抑制劑及其製備方法和應用 Download PDF

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Abstract

本發明屬於藥物化學技術領域，涉及一種ATX抑制劑及其製備方法和應用。具體而言，本發明的ATX抑制劑為具備式I’結構的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物。相對於現有的ATX抑制劑GLPG-1690，本發明的ATX抑制劑具有更高的抑制活性，同時具有優異的藥效、體外/體內藥代動力學性質和安全性，臨床應用前景高。

Description

一種ATX抑制劑及其製備方法和應用
本發明要求2020年7月9日在中國提交的，名稱為“一種ATX抑制劑及其製備方法和應用”、申請號為202010658085.8的發明專利申請和2021年3月23日在中國提交的，名稱為“一種ATX抑制劑及其製備方法和應用”、申請號為202110308656.X的發明專利申請的優先權，通過引用的方式將該專利申請的全部內容併入本文。
本發明屬於藥物化學領域，具體涉及一種ATX抑制劑及其製備方法。
Autotaxin(ATX，又稱ENPP2[外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶2]或溶血磷脂酶D)是外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶(ENPP)家族中的一員。ATX能夠將溶血磷脂醯膽鹼(LPC)轉化為生物活性的溶血磷脂酸(LPA)。LPA由一個甘油鏈、一個磷酸基和一個長度及飽和度不同的脂肪醯基鏈組成。LPA一旦生成，能夠通過六個細胞表面特異的受體蛋白(LPA1-6)，即G蛋白偶聯受體媒介發揮其生物學活性。許多證據表明ATX是血液中LPA的主要來源。ATX-LPA信號途徑參與細胞存活、遷移和增殖，從而與許多嚴重疾病有著重要聯繫，如纖維化疾病(主要是特發性肺纖維化，IPF)、癌症、增殖性疾病、炎症性疾病、自身免疫疾病、心血管疾病、神經變性疾病等。事實上，ATX的過度表達經常出現在癌症組織中，如乳腺癌、結腸直腸癌和膠質母細胞瘤等。
目前，GLPG-1690對ATX有抑制作用，已進入臨床III期試驗階段，用於治療特發性肺纖維化(IPF)。一些證據表明，通過調節肺上皮細胞、成纖維細胞和平滑肌細胞的生物學，ATX/LPA信號在各種肺部疾病中發揮作用。
然而，GLPG-1690對ATX雖然有抑制活性，但是其抑制活性並不是很高，因此，仍需開發更多的對ATX具有更高抑制活性的抑制劑。
發明要解決的問題：為了解決上述技術問題，本發明提供了一類新的雜芳環類化合物，其對ATX具有很高的抑制活性，同時具有優異的藥效、體外/體內藥代動力學性質和安全性，臨床應用前景高。
用於解決問題的方案：為了解決上述技術問題，本發明提供了以下技術方案。
一種具備式I’結構的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物：
Figure 02_image003
其中， n為0至5中的任一整數； 若存在，每一個R1 各自獨立地選自氫、氘、氰基、鹵素、胺基、羥基、-COOH、-CHO、-NO2 、C1-6 烷基胺基、C1-6 烷氧基和未取代或被選自氰基、胺基、羥基、鹵素、C1-6 烷基和C1-6 烷氧基的取代基所取代的C1-6 烷基、C3-7 環烷基和3-7元雜環烷基； R2 選自氫、氘、鹵素、氰基、胺基、羥基、-COOH、-CHO、-NO2 、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 烷基胺基、-C(=O)NH2 、-NH(C=O)CH3 和3-7元雜環烷基； R3 選自氫、氘、C1-6 烷基、C3-7 環烷基和被選自氰基、胺基、羥基、鹵素、C1-6 烷基和C1-6 烷氧基的取代基所取代的C1-6 烷基、C3-7 環烷基和3-7元雜環烷基； 環B為下列結構的任一種：
Figure 02_image005
、
Figure 02_image007
和
Figure 02_image009
； R4 選自氫、氘、鹵素、氰基、羥基、胺基、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 烷基胺基、C3-7 環烷基和3-7元雜環烷基； X1 、X2 、X3 和X4 各自獨立地為N或CR5 ； R5 選自氫、氘、鹵素、C1-6 烷基和被選自氰基、胺基、羥基、鹵素、C1-6 烷基和C1-6 烷氧基的取代基所取代的C1-6 烷基、C3-7 環烷基和3-7元雜環烷基； 環A選自取代或未取代的C6-10 芳基和5-10元雜芳基，所述取代是被1至3個選自羥基、胺基、鹵素、氰基、C1-6 烷基、C1-6 鹵代烷基、C3-7 環烷基、3-7元雜環烷基、C1-6 烷基胺基、C1-6 烷氧基的取代基所取代； R6 為-L1 -L2 -W1 ； L1 選自化學鍵、C1-3 伸烷基、-O-、-C(=O)-、-C(=O)C(R8 )2 -、-C(=O)O-、-C(=O)NH-、-OC(=O)-、-NH-、-SO2 -、-NHSO2 -、-SO2 NH-；其中，R8 為氫或C1-6 烷基； L2 選自化學鍵、-O-、-C(=O)-、-C(=O)CH2 -、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-C(=O)NH-、-NR7 -、-NHCH2 -、-SO2 -、-NR7 SO2 -、-SO2 NR7 -、-C(=O)NR7 -和-NR7 C(=O)-；其中，R7 為氫或C1-6 烷基； W1 為取代或未取代的下列基團：氫、氘、胺基、氰基、C1-6 烷基、鹵素、羥基、C1-6 烷氧基、C1-6 烷基胺基、羧基、C6-10 芳基、5-10元雜芳基、C3-7 環烷基或3-7元雜環烷基；所述取代是被1或2個選自氧代、羥基、胺基、羥甲基、胺基甲基、氰基、C1-6 烷基、C1-6 烷基-C(=O)O-和鹵素的取代基所取代。
進一步地，上述式I’化合物為具備式I結構的化合物，
Figure 02_image011
其中，n、R1 、R2 、R3 、R4 、R6 、X1 、X2 、X3 和環A如式I’中所定義。
更進一步地，上述式I’化合物為具備式I-1結構的化合物，
Figure 02_image013
其中，n、R1 、R2 、R3 、R4 、R6 和環A如式I’中所定義。
進一步地，上述式I’化合物為具備式II結構的化合物，
Figure 02_image015
其中，n、R1 、R2 、R3 、R4 、R6 、X1 、X2 、X3 和環A如式I’中所定義。
更進一步地，上述式I’化合物為具備式II-1結構的化合物，
Figure 02_image017
其中，n、R1 、R2 、R3 、R4 、R6 和環A如式I’中所定義。
進一步地，上述式I’化合物為具備式III結構的化合物，
Figure 02_image019
其中，n、R1 、R2 、R3 、R4 、R6 、X1 、X2 、X3 和環A如式I’中所定義。
更進一步地，上述式I’化合物為具備式III-1結構的化合物，
Figure 02_image021
其中，n、R1 、R2 、R3 、R4 、R6 和環A如式I’中所定義。
本發明還提供了下列化合物： (1)2-((2-乙基-6-(4-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)苯基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (2)2-((2-乙基-6-(6-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (3)2-((2-乙基-6-(5-氟-6-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (4)2-((2-乙基-6-(5-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (5)2-((2-乙基-6-(6-2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)噠嗪-3-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (6)2-((2-乙基-6-(6-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-甲基吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (7)2-((2-乙基-6-(5-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (8)2-((2-乙基-6-(5-(3-羥基氮雜環丁烷-1-羰基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (9)2-((2-乙基-6-(5-(1-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (10)2-((2-乙基-6-(3-氟-5-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (11)(S )-2-((2-乙基-6-(5-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (12)2-((2-乙基-6-(5-(2-(3-(羥甲基)氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (13)(R )-2-((2-乙基-6-(5-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (14)2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-基)-N-((5-氧代吡咯烷-2-基)甲基)乙醯胺； (15)5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-N-(2-氮雜螺[3.3]庚烷-6-基)吡嗪-2-甲醯胺； (16)2-((2-乙基-6-(5-氟-6-(3-羥基氮雜環丁烷-1-羰基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (17)2-((5-(2-(1,1-二氧化異噻唑烷-2-基)嘧啶-5-基)-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (18)2-((5-(2-(1,1-二氧化異噻唑烷-2-基)嘧啶-5-基)-2-乙基吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (19)2-((6-(5-(1,1-二氧化異噻唑烷-2-基)吡嗪-2-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (20)N -(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N -甲基甲磺醯胺； (21)2-((5-(2-(1,1-二氧化-1,2-噻嗪烷-2-基)嘧啶-5-基)-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (22)N -(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-2-羥基乙-1-磺醯胺； (23)2-(乙基(2-乙基-5-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (24)2-(乙基(2-乙基-5-(2-(3-(羥甲基)氮雜環丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (25)1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)胺基)-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-5-基)嘧啶-2-基)氮雜環丁烷-3-基乙酸酯； (26)2-(乙基(2-乙基-5-(2-(4-羥基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (27)(S )-2-(乙基(2-乙基-5-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈； (28)(R )-2-(乙基(2-乙基-5-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈；和 (29)2-(乙基(2-乙基-5-(2-嗎啉基嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈。
本發明還提供了一種藥物組合物，其包含上述具備式I’、式I、式I-1、式II、式II-1、式III或式III-1結構的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物。
本發明還提供了一種藥物製劑，其包括上述具有式I’、式I、式I-1、式II、式II-1、式III或式III-1結構的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物或者上述藥物組合物，所述製劑為片劑、膠囊劑、注射劑、顆粒劑、粉劑、栓劑、丸劑、乳膏劑、糊劑、凝膠劑、散劑、口服溶液、吸入劑、混懸劑、乾懸劑、貼劑、洗劑中的任一種。
本發明還提供了上述具有式I’、式I、式I-1、式II、式II-1、式III或式III-1結構的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，或者上述藥物組合物或者藥物製劑，其用於預防和/或治療具有ATX表達增加的病理學特徵的相關疾病；優選的，所述具有ATX表達增加的病理學特徵的相關疾病包括：癌症、纖維化疾病、代謝疾病、骨髓增生異常症候群、呼吸系統疾病、心血管疾病、自身免疫性疾病、炎症、皮膚學疾病、神經系統疾病或疼痛；更優選的，所述具有ATX表達增加的病理學特徵的相關疾病為肺纖維化、腎纖維化或肝纖維化。
本發明還提供給了上述具有式I’、式I、式I-1、式II、式II-1、式III或式III-1結構的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，或者上述藥物組合物或者藥物製劑在製備用於預防和/或治療具有ATX表達增加的病理學特徵的相關疾病的藥物中的應用；優選的，所述具有ATX表達增加的病理學特徵的相關疾病包括：癌症、纖維化疾病、代謝疾病、骨髓增生異常症候群、呼吸系統疾病、心血管疾病、自身免疫性疾病、炎症、皮膚學疾病、神經系統疾病或疼痛；更優選的，所述具有ATX表達增加的病理學特徵的相關疾病為肺纖維化、腎纖維化或肝纖維化。
本發明還提供了一種預防和/或治療具有ATX表達增加的病理學特徵的相關疾病的方法，其包括下列步驟：將治療有效量的上述具有式I’、式I、式I-1、式II、式II-1、式III或式III-1結構的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，或者上述藥物組合物或者藥物製劑施用於對其有需求的患者。
發明的效果：本發明的化合物相對於現有的ATX抑制劑GLPG-1690，具有更高的抑制活性，同時具有優異的藥效、體外/體內藥代動力學性質和安全性，臨床應用前景高。
在進一步描述本發明之前，應當理解，本發明不限於本文中所述的特定實施方案；還應該理解，本文中所使用的術語僅用於描述而非限制特定實施方案。
[術語定義]
除非另有說明，下列術語的含義如下。
術語“C1-6 烷基”單獨或者以組合方式表示包含1-6個、特別是1-4個碳原子的飽和直鏈或支鏈的烷基，包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、第二丁基、異丁基、第三丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、正己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基、3,3,-二甲基-2-丁基等。優選地，“C1-6 烷基”是甲基、乙基、異丙基、第三丁基中的任一種。
術語“C1-3 伸烷基”單獨或者以組合方式表示包含1-3個碳原子的飽和直鏈或支鏈的伸烷基，包括伸甲基(-CH2 -)、伸乙基(-CH2 CH2 -)、伸正丙基(-CH2 CH2 CH2 -)和伸異丙基(-(CH3 )2 C-)等。
術語“C3-7 環烷基”單獨或者以組合方式表示具有3-7個、特別是3-6個碳原子的飽和環烷基，包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基等。特別的“C3-7 環烷基”是環丙基、環戊基、環己基等。
術語“C1-6 烷氧基”單獨或者以組合方式表示基團C1-6 烷基-O-，其中“C1-6 烷基”如以上所定義。
術語“鹵素”單獨或者以組合方式表示氟、氯、溴或碘，特別的是氟、氯或溴。
術語“胺基”單獨或者以組合方式表示一級胺基(-NH2 )、二級胺基(-NH-)或三級胺基(
Figure 02_image023
)。
術語“C1-6 烷基胺基”，也叫“C1-6 烷胺基”單獨或者以組合方式表示如上所定義的“胺基”，其中胺基上的氫原子被至少一個C1-6 烷基所取代，其中“C1-6 烷基”如以上所定義。相應地，“C1-6 烷基胺基”包括甲基胺基，乙基胺基，丙基胺基，異丙基胺基，正丁基胺基，異丁基胺基，2-丁基胺基，第三丁基胺基，正戊基胺基、2-戊基胺基、3-戊基胺基、2-甲基-2-丁基胺基、3-甲基-2-丁基胺基、3-甲基-1-丁基胺基、2-甲基-1-丁基胺基、正己基胺基、2-己基胺基、3-己基胺基、2-甲基-2-戊基胺基、3-甲基-2-戊基胺基、4-甲基-2-戊基胺基、3-甲基-3-戊基胺基、2-甲基-3-戊基胺基、2,3-二甲基-2-丁基胺基、3,3-二甲基-2-丁基胺基等。特別的，“C1-6 烷基胺基”是甲基胺基、乙基胺基、異丙基胺基、第三丁基胺基等。在本發明中，所述C1-6 烷基胺基可進一步任選被本領域常見的取代基團所取代。
術語“羰基”，又稱“-C(=O)-”，是指二價的基團，其僅由一個碳原子和一個氧原子構成，碳原子和氧原子之間通過雙鍵連接，並且自身結構中的碳原子還分別通過單鍵連接至其他兩個片段。
術語“雜環烷基”，又稱“雜環基”，指由碳原子與氮、氧或硫等雜原子組成的飽和或部分不飽和(包含1或2個雙鍵)的非芳香環狀基團，此環狀基團可以是單環或雙環基團，在本發明中，雜環烷基中碳原子個數為2-11個，雜原子個數優選1、2、3或4，雜環烷基中的氮、碳或硫原子可任選地被氧化。“雜環烷基”上的氫原子獨立任選地被一個或多個本發明所描述的取代基所取代。“雜環烷基”可以通過環上任意的環原子連結到母體分子上。術語“3-6元雜環烷基”和“3-7元雜環烷基”分別是指包含3-6個和3-7個碳原子和雜原子或雜原子基團的飽和或部分不飽和單環或多環雜環烷基，所述雜原子或雜原子基團選自N、O、S(O)m (其中m是0至2中的任一整數)；例如吖丙啶基、吖丁啶基、氧雜環丁基、四氫吡咯基、氧代吡咯烷基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、哌啶基、嗎啉基、哌嗪基、硫代嗎啉基、四氫吡喃基、1,1-二氧化硫代嗎啉基和
Figure 02_image025
等。
術語“芳基”表示任何穩定的6-10元單環或雙環芳香族基團，包括苯基、萘基、四氫萘基、2,3-二氫化茚基或聯苯基等。“芳基”上的氫原子獨立任選地被一個或多個本發明所描述的取代基所取代。
術語“雜芳基”表示環上的碳原子被至少一個選自硫、氧或氮的雜原子置換形成的芳香環基團，此芳香環基團可以是5-7元單環或7-12雙環基團。在本發明中，雜芳基中雜原子個數優選1、2、3或4，例如噻吩基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、吡啶-2(1H)-酮基、吡啶-4(1H)-酮基、吡咯基、吡唑基、噻唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、咪唑基、四氮唑基、異噻唑基、噁唑基、異噁唑基、噻二唑基、噁二唑基、萘基、苯并噻吩基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、喹啉基、異喹啉基、喹唑啉基等。“雜芳基”上的氫原子獨立任選地被一個或多個本發明所描述的取代基所取代。
術語“C6-10 芳基”表示具有6-10個碳原子的芳基，其中“芳基”如以上所定義。
術語“5-10元雜芳基”表示具有5-10個原子的芳雜基，其中“雜芳基”如以上所定義。
術語“氰基”單獨或者以組合方式表示基團-CN。
術語“羧基”單獨或者以組合方式表示基團-COOH。
術語“羥基”單獨或者以組合方式表示基團-OH。
術語“立體異構體”包含所有的同分異構形式，包括對映異構體、非對映異構體和幾何異構體(順反異構體)。因此，本發明中所設計的化合物的單個立體化學異構體或其對映異構體、非對映異構體、或幾何異構體(或順反異構體)的混合物都屬於本發明的範圍。
術語“藥學上可接受的鹽”表示本發明的化合物以它們的藥用鹽的形式存在，包括酸加成鹽和鹼加成鹽。在本發明中，藥學上可接受的無毒的酸加成鹽表示本發明中的化合物與有機或無機酸形成的鹽，有機或無機酸包括但不限於鹽酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸、磷酸、硝酸、高氯酸、乙酸、草酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、苯磺酸、甲磺酸、水楊酸、琥珀酸、檸檬酸、乳酸、丙酸、苯甲酸、對甲苯磺酸、蘋果酸等。藥學上可接受的無毒的鹼加成鹽表示本發明中的化合物與有機或無機鹼所形成的鹽，包括但不限於鹼金屬鹽，例如鋰、鈉或鉀鹽；鹼土金屬鹽，例如鈣或鎂鹽；有機鹼鹽，例如通過與含N基團的有機鹼形成的銨鹽或N+ (C1-6 烷基)4 鹽。
術語“溶劑化物”表示一個或多個溶劑分子與本發明中的化合物所形成的締合物。形成溶劑化物的溶劑包括但不限於水、甲醇、乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、N,N -二甲基甲醯胺、二甲亞碸等。
術語“水合物”是指水與本發明中的化合物形成的締合物。
術語“前藥”表示作為本發明的化合物的化學衍生物，該衍生物在體內通過發生化學反應轉換成通式I所表示的化合物。
術語“同位素衍生物”表示通式I中的氫原子被1-6個氘原子所取代得到的同位素衍生物、通式I中的碳原子被1-3個碳14原子所取代得到的同位素衍生物。
以上對本發明的涉及的術語進行了定義，本領域技術人員還可以結合現有技術對以上術語進行理解，以下基於本發明的內容以及對術語的定義進一步進行描述。
[通式化合物]
一種具備式I’結構的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物：
Figure 02_image027
n為0至5中的任一整數； 若存在，每一個R1 各自獨立地選自氫、氘、氰基、鹵素、胺基、羥基、-COOH、-CHO、-NO2 、C1-6 烷基胺基、C1-6 烷氧基和未取代或被選自氰基、胺基、羥基、鹵素、C1-6 烷基和C1-6 烷氧基的取代基所取代的C1-6 烷基、C3-7 環烷基和3-7元雜環烷基； R2 選自氫、氘、鹵素、氰基、胺基、羥基、-COOH、-CHO、-NO2 、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 烷基胺基、-C(=O)NH2 、-NH(C=O)CH3 和3-7元雜環烷基； R3 選自氫、氘、C1-6 烷基、C3-7 環烷基和被選自氰基、胺基、羥基、鹵素、C1-6 烷基和C1-6 烷氧基的取代基所取代的C1-6 烷基、C3-7 環烷基和3-7元雜環烷基； 環B為下列結構的任一種：
Figure 02_image005
、
Figure 02_image007
和
Figure 02_image009
； R4 選自氫、氘、鹵素、氰基、羥基、胺基、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 烷基胺基、C3-7 環烷基和3-7元雜環烷基； X1 、X2 、X3 和X4 各自獨立地為N或CR5 ； R5 選自氫、氘、鹵素、C1-6 烷基和被選自氰基、胺基、羥基、鹵素、C1-6 烷基和C1-6 烷氧基的取代基所取代的C1-6 烷基、C3-7 環烷基和3-7元雜環烷基； 環A選自取代或未取代的C6-10 芳基和5-10元雜芳基，所述取代是被1至3個選自羥基、胺基、鹵素、氰基、C1-6 烷基、C1-6 鹵代烷基、C3-7 環烷基、3-7元雜環烷基、C1-6 烷基胺基、C1-6 烷氧基的取代基所取代； R6 為-L1 -L2 -W1 ； L1 選自化學鍵、C1-3 伸烷基、-O-、-C(=O)-、-C(=O)C(R8 )2 -、-C(=O)O-、-C(=O)NH-、-OC(=O)-、-NH-、-SO2 -、-NHSO2 -、-SO2 NH-；其中，R8 為氫或C1-6 烷基； L2 選自化學鍵、-O-、-C(=O)-、-C(=O)CH2 -、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-C(=O)NH-、-NR7 -、-NHCH2 -、-SO2 -、-NR7 SO2 -、-SO2 NR7 -、-C(=O)NR7 -和-NR7 C(=O)-；其中，R7 為氫或C1-6 烷基； W1 為取代或未取代的下列基團：氫、氘、胺基、氰基、C1-6 烷基、鹵素、羥基、C1-6 烷氧基、C1-6 烷基胺基、羧基、C6-10 芳基、5-10元雜芳基、C3-7 環烷基或3-7元雜環烷基；所述取代是被1或2個選自氧代、羥基、胺基、羥甲基、胺基甲基、氰基、C1-6 烷基、C1-6 烷基-C(=O)O-和鹵素的取代基所取代。
在本發明的一些優選的實施方案中，n為0至2中的任一整數，優選n為1；若存在，每一個R1 各自獨立地選自氫、氰基和鹵素，優選鹵素，更優選氟。
在本發明的一些優選的實施方案中，其特徵在於，R2 為氰基。
在本發明的一些優選的實施方案中，R3 為C1-6 烷基，優選甲基或乙基。
在本發明的一些優選的實施方案中，R4 選自氫、氘、甲基、乙基、異丙基和環丙基，優選乙基。
在本發明的一些優選的實施方案中，X1 、X2 、X3 和X4 各自獨立地為N或CR5 ，R5 選自氫、氘、鹵素、甲基和鹵代甲基，優選氫。
在本發明的一些優選的實施方案中，環A選自伸苯基、伸吡啶基、伸吡嗪基、伸噠嗪基、伸嘧啶基、伸吡唑基、伸咪唑基、伸噁唑基、伸異噁唑基、伸噻唑基、伸噻二唑基和伸噁二唑基。
在本發明的一些更優選的實施方案中，環A選自下列結構的任一種：
Figure 02_image030
、
Figure 02_image032
、
Figure 02_image034
、
Figure 02_image036
、
Figure 02_image038
、
Figure 02_image040
、
Figure 02_image042
、
Figure 02_image044
、
Figure 02_image046
、
Figure 02_image048
、
Figure 02_image050
、
Figure 02_image052
、
Figure 02_image054
、
Figure 02_image056
、
Figure 02_image058
、
Figure 02_image060
、
Figure 02_image062
、
Figure 02_image064
、
Figure 02_image066
、
Figure 02_image068
和
Figure 02_image070
， 優選下列結構中的任一種：
Figure 02_image030
、
Figure 02_image032
、
Figure 02_image034
、
Figure 02_image036
、
Figure 02_image038
和
Figure 02_image040
。
在本發明的一些優選的實施方案中，環A被1至3個，優選1個取代基所取代，所述取代基各自獨立地選自羥基、胺基、鹵素、氰基和C1-6 烷基，優選鹵素和C1-6 烷基，更優選氟和甲基。
在本發明的一些優選的實施方案中，L1 選自化學鍵、-CH2 -、-CH(CH3 )-、-C(CH3 )2 -、-C(=O)-、-SO2 -、-C(=O)CH2 -和-C(=O)NH-，優選化學鍵、-CH2 -、-C(CH3 )2 -和-C(=O)CH2 -。
在本發明的一些優選的實施方案中，L2 選自化學鍵、-NH-、-C(=O)-、-SO2 -、-NHCH2 -、-C(=O)CH2 -、-C(=O)NH-、-NHSO2 -和-N(CH3 )SO2 -，優選化學鍵、-C(=O)-、-NHCH2 -、-C(=O)NH-、-NHSO2 -和-N(CH3 )SO2 -。
在本發明的一些優選的實施方案中，W1 為取代或未取代的下列基團：C1-6 烷基、C6-10 芳基、5-10元雜芳基、C3-7 環烷基或3-7元雜環烷基，所述取代是被1或2個選自氧代、羥基、胺基、羥甲基、胺基甲基、鹵素、氰基、C1-6 烷基-C(=O)O-和C1-6 烷基的取代基所取代。
在本發明的一些更優選的實施方案中，W1 為未取代或被1或2個選自羥基、胺基、羥甲基、胺基甲基和C1-6 烷基-C(=O)O-的取代基所取代的C1-6 烷基、C3-7 環烷基或3-7元雜環烷基。
在本發明的一些更優選的實施方案中，W1 為未取代或被1或2個選自羥基、胺基、羥甲基、胺基甲基和乙醯氧基的取代基所取代的下列基團：甲基、乙基、正丙基、異丙基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、吖丙啶基、吖丁啶基、四氫吡咯基、氧代吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、氧雜環丁基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、四氫吡喃基、1,1-二氧硫代嗎啉基、2-氮雜螺[3.3]庚基、1,1-二氧化異噻唑烷基或1,1-二氧化-1,2-噻嗪烷基，優選為甲基、氧代吡咯烷基、2-氮雜螺[3.3]庚基、1,1-二氧化異噻唑烷基、1,1-二氧化-1,2-噻嗪烷基或被選自羥基、羥甲基和乙醯氧基的取代基所取代的乙基、吖丁啶基、環丁基、四氫吡咯基或哌啶基。
在本發明的一些優選的實施方案中，在式I’化合物中， n為1； R1 為氟； R2 為氰基； R3 為甲基或乙基； 環B為下列結構的任一種：
Figure 02_image005
、
Figure 02_image007
和
Figure 02_image009
； R4 為乙基； X1 、X2 、X3 和X4 各自獨立地為N或CH； 環A選自下列結構的任一種：
Figure 02_image030
、
Figure 02_image032
、
Figure 02_image034
、
Figure 02_image036
、
Figure 02_image038
和
Figure 02_image040
； 環A未取代或被1個氟或甲基所取代； R6 為-L1 -L2 -W1 ； L1 選自化學鍵、-CH2 -、-C(CH3 )2 -和-C(=O)CH2 -； L2 選自化學鍵、-C(=O)-、-NHCH2 -、-C(=O)NH-、-NHSO2 -和-N(CH3 )SO2 -； W1 為下列基團中的任一種： CH3 -、
Figure 02_image082
、
Figure 02_image084
、
Figure 02_image086
、
Figure 02_image088
、
Figure 02_image090
、
Figure 02_image092
、
Figure 02_image094
、
Figure 02_image096
、
Figure 02_image098
、
Figure 02_image100
和
Figure 02_image102
。
在本發明的一些優選的實施方案中，上述式I’化合物為具備式I結構的化合物，
Figure 02_image011
其中，n、R1 、R2 、R3 、R4 、R6 、X1 、X2 、X3 和環A如式I’中所定義。
在本發明的一些更優選的實施方案中，上述式I’化合物為具備式I-1結構的化合物，
Figure 02_image013
其中，n、R1 、R2 、R3 、R4 、R6 和環A如式I’中所定義。
在本發明的一些優選的實施方案中，上述式I’化合物為具備式II結構的化合物，
Figure 02_image015
其中，n、R1 、R2 、R3 、R4 、R6 、X1 、X2 、X3 和環A如式I’中所定義。
在本發明的一些更優選的實施方案中，上述式I’化合物為具備式II-1結構的化合物，
Figure 02_image017
其中，n、R1 、R2 、R3 、R4 、R6 和環A如式I’中所定義。
在本發明的一些優選的實施方案中，上述式I’化合物為具備式III結構的化合物，
Figure 02_image019
其中，n、R1 、R2 、R3 、R4 、R6 、X1 、X2 、X3 和環A如式I’中所定義。
在本發明的一些更優選的實施方案中，上述式I’化合物為具備式III-1結構的化合物，
Figure 02_image021
其中，n、R1 、R2 、R3 、R4 、R6 和環A如式I’中所定義。
另外，本發明還提供了下列化合物：
Figure 02_image110
Figure 02_image112
Figure 02_image114
Figure 02_image116
Figure 02_image118
Figure 02_image120
Figure 02_image122
Figure 02_image124
Figure 02_image126
Figure 02_image128
Figure 02_image130
Figure 02_image132
Figure 02_image134
Figure 02_image136
Figure 02_image138
Figure 02_image140
Figure 02_image142
Figure 02_image144
Figure 02_image146
Figure 02_image148
Figure 02_image150
Figure 02_image152
Figure 02_image154
Figure 02_image156
Figure 02_image158
Figure 02_image160
Figure 02_image162
Figure 02_image164
Figure 02_image166
。
[製備方法]
本發明還提供了上述式I化合物的一種典型的合成方法，以進一步描述本發明的技術方案，所述合成方法包括以下步驟： 步驟1：化合物1與相應醛和1,1,3,3-四甲基丁基異腈在氯化鎂催化下反應生成中間體2； 步驟2：中間體2在甲酸中加熱去保護得中間體3； 步驟3：任選的，中間體3與相應鹵代烴經親核取代反應得中間體4； 步驟4：中間體4通過水解得中間體5； 步驟5：中間體5與中間體6在鹼性條件下發生親核取代反應得中間體7； 其中，中間體6由化合物11通過兩步反應製得：先由化合物11與硫脲通過關環得中間體12；中間體12在亞硝酸第三丁酯和氯化銅的作用下得中間體6； 步驟6：中間體7與中間體10通過Suzuki偶聯反應得中間體8； 作為另一種可以替換的技術方案，中間體8也可通過中間體7先生成硼酸試劑13，再由中間體13與中間體14(X可為Cl、Br、I)經過Suzuki反應製得； 步驟7：中間體8通過水解得中間體9； 步驟8：中間體9與胺進行縮合反應得式I化合物，或式I的帶第三丁氧羰基保護的產物，其進一步在三氟乙酸條件下脫保護可得式I化合物。 所述合成路線如下所示：
Figure 02_image168
其中，R1 -R6 ，X1 -X3 ，L1 ，n，A的定義與上述相同，R9 為甲基或乙基。
本發明還提供了上述式II化合物(其中X1 為N)的一種典型的合成方法，以進一步描述本發明的技術方案，所述合成方法包括以下步驟： 步驟1：化合物1與雙氧水在三氟乙酸溶液中反應生成中間體2； 步驟2：中間體2與三甲基氰矽烷在鹼性條件下反應得中間體3； 步驟3：任選的，中間體3與相應的取代的肼在鹼性條件下關環得中間體4； 步驟4：中間體4與中間體12在鹼性條件下發生親核取代反應得中間體5； 其中，中間體12由化合物10通過兩步反應製得：先由化合物10與硫脲通過關環得中間體11；中間體11在亞硝酸第三丁酯和氯化銅的作用下得中間體12； 步驟5：中間體5與相應的鹵代烴發生親核取代反應得中間體6； 步驟6：中間體6與中間體9通過Suzuki偶聯反應得式II化合物，或式II的帶第三丁氧羰基保護的產物，其進一步在三氟乙酸條件下脫保護可得式II化合物； 其中，中間體9由化合物7通過兩步反應製得：先由化合物7與相應的胺通過親核取代反應得中間體8；中間體8在催化劑下生成硼酸試劑得中間體9。 所述合成路線如下所示：
Figure 02_image170
其中，R1 -R6 ，X2 -X3 ，n，A的定義與上述相同。
本發明還提供了上述式III化合物(其中X1 為N)的一種典型的合成方法，以進一步描述本發明的技術方案，所述合成方法包括以下步驟： 步驟1：化合物1與化合物2在鹼性條件下關環生成中間體3； 步驟2：中間體3發生硝化反應得中間體4； 步驟3：中間體4在三氯氧磷條件下發生氯代反應得中間體5； 步驟4：中間體5發生還原反應得中間體6； 步驟5：中間體6與中間體14在鹼性條件下發生親核取代反應得中間體7； 其中，中間體14由化合物12通過兩步反應製得：先由化合物12與硫脲通過關環得中間體13；中間體13在亞硝酸第三丁酯和氯化銅的作用下得中間體14； 步驟6：中間體7與相應的鹵代烴發生親核取代反應得中間體8； 步驟7：中間體8與中間體11通過Suzuki偶聯反應得式III化合物，或式III的帶第三丁氧羰基保護的產物，其進一步在三氟乙酸條件下脫保護可得式I化合物； 其中，中間體11由化合物9通過兩步反應製得：先由化合物9與相應的胺通過親核取代反應得中間體10；中間體10在催化劑下生成硼酸試劑得中間體11。 所述合成路線如下所示：
Figure 02_image172
其中，R1 -R6 ，X2 -X3 ，n，A的定義與上述相同。
[藥物組合物]
術語“藥物組合物”是指可以用作藥物的組合物，其包含藥物活性成分(API)以及可選的一種或多種藥學上可接受載體。術語“藥學上可接受的載體”是指與藥物活性成分相容並且對受試者無害的藥用輔料，包括(但不限於)稀釋劑(或稱填充劑)、黏合劑、崩解劑、潤滑劑、潤濕劑、增稠劑、助流劑、矯味劑、矯嗅劑、防腐劑、抗氧化劑、pH調節劑、溶劑、助溶劑、表面活性劑等。
本發明提供了一種藥物組合物，其包含上述具備式I’、式I、式I-1、式II、式II-1、式III或式III-1結構的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物。
在本發明的一些實施方案中，上述藥物組合物還包含藥學上可接受的載體。
[藥物製劑]
本發明還提供了一種藥物製劑，其包含上述具有式I’、式I、式I-1、式II、式II-1、式III或式III-1結構的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物或者上述的藥物組合物，所述製劑為片劑、膠囊劑、注射劑、顆粒劑、粉劑、栓劑、丸劑、乳膏劑、糊劑、凝膠劑、散劑、口服溶液、吸入劑、混懸劑、乾懸劑、貼劑、洗劑中的任一種。
[醫藥用途]
無論是上述具有式I’、式I、式I-1、式II、式II-1、式III或式III-1結構的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，還是上述藥物組合物或者藥物製劑，都能夠用作預防和治療具有ATX表達增加的病理學特徵的相關疾病；優選地，所述具有ATX表達增加的病理學特徵的相關疾病包括：癌症、纖維化疾病、代謝疾病、骨髓增生異常症候群、呼吸系統疾病、心血管疾病、自身免疫性疾病、炎症、皮膚學疾病、神經系統疾病或疼痛；更優選地，所述具有ATX表達增加的病理學特徵的相關疾病為肺纖維化、腎纖維化或肝纖維化。
另外，本發明還提供了上述具有式I’、式I、式I-1、式II、式II-1、式III或式III-1結構的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，以及上述的藥物組合物或者藥物製劑在製備用於預防和/或治療具有ATX表達增加的病理學特徵的相關疾病的藥物中的應用，優選的，所述具有ATX表達增加的病理學特徵的相關疾病包括：癌症、纖維化疾病、代謝疾病、骨髓增生異常症候群、呼吸系統疾病、心血管疾病、自身免疫性疾病、炎症、皮膚學疾病、神經系統疾病或疼痛，更優選的，所述具有ATX表達增加的病理學特徵的相關疾病為肺纖維化、腎纖維化或肝纖維化。
[治療方法]
本發明提供了一種預防和/或治療具有ATX表達增加的病理學特徵的相關疾病的方法，其包括下列步驟：將有效量的上述具有式I’、式I、式I-1、式II、式II-1、式III或式III-1結構的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，或者上述藥物組合物或者藥物製劑施用於對其有需求的患者。
術語“治療有效量”是指能夠誘發細胞、組織、器官或生物體(例如患者)產生生物或醫學反應的藥物活性成分的劑量。
術語“施用”是指將藥物活性成分(比如本發明的化合物)或包含藥物活性成分的藥物組合物(例如本發明的藥物組合物)應用於患者或其細胞、組織、器官、生物流體等部位，以便使藥物活性成分或藥物組合物與患者或其細胞、組織、器官、生物流體等部位接觸的過程。常見的施用方式包括(但不限於)口服施用、皮下施用、肌內施用、腹膜下施用、眼部施用、鼻部施用、舌下施用、直腸施用、陰道施用等。
術語“對其有需求”是指醫生或其他護理人員對患者需要或者將要從預防和/或治療過程中獲益的判斷，該判斷的得出基於醫生或其他護理人員在其專長領域中的各種因素。
術語“患者”(或稱受試者)是指人類或非人類的動物(例如哺乳動物)。
下面的實施例可以對本發明做進一步的描述，然而，這些實施例不應作為對本發明的範圍的限制。
本發明中使用的縮寫如下：
AcOH：乙酸；HCOOH：甲酸；I2 ：碘；t-BuONO：亞硝酸第三丁酯；CuCl2 ：氯化銅；n-BuOH：正丁醇；MgCl2 ：氯化鎂；NaH：氫化鈉；CH3 I：碘甲烷；Pd(dppf)Cl2 ：[1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀；Pd(PPh3 )4 ：四(三苯基膦)鈀；KOAc：醋酸鉀；B2 (Pin)2 ：聯硼酸頻那醇酯；CDCl3 ：氘代氯仿；dioxane：1,4-二氧六環；CO2 ：二氧化碳；conc. H2 SO4 ：濃硫酸；DCM：二氯甲烷；DIEA：N ,N -二異丙基乙胺；DMF：N,N -二甲基甲醯胺；DMSO：二甲亞碸；DMSO-d 6 ：氘代二甲亞碸；EtOH：乙醇；g：克；HATU：2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N ,N ,N ',N' -四甲基脲六氟磷酸酯；Hz：赫茲；h：小時；IC50 ：半數最大抑制濃度；LiOH：氫氧化鋰；MeOH：甲醇；mg：毫克；mL：毫升；mmol：毫莫耳；MHz：兆赫茲；NaOH：氫氧化鈉；NMR：核磁共振；M：莫耳/升；PBS：磷酸緩衝鹽溶液；TLC：薄層層析；μM：微莫耳/升；µg：微克；µL：微升；δ：化學位移。
以下描述本發明實施例中通用試驗條件：
首先，實施例中的反應一般在氮氣保護下進行。
進一步地，中間體和最終產物通過層析管柱、製備層析板和ICSO快速製備層析系統分離純化。
進一步地，LC-MS液相層析質譜儀使用Waters公司ACQUITY Arc 配備QDa Detector。質譜(MS)採用ESI源，僅指示母體分子的分子量M，通常彙報[M+H]+ 。注射體積是通過樣品濃度來確定；流速為：0.8 mL/min；HPLC的峰值是通過在220 nm和254 nm處的UV-Vis波長來記錄讀取的。流動相為0.01%甲酸的超純水溶液(流動相A)和0.01%甲酸的乙腈溶液(流動相B)。梯度洗脫條件如下表1和表2所示：
表1：梯度洗脫條件1
時間(min) A(H2 O，0.01%HCOOH) B(CH3 CN，0.01%HCOOH)
0.0-0.3 95-85 5-15
0.3-3.2 85-20 15-80
3.2-3.8 20-5 80-95
3.8-3.81 5-95 95-5
3.81-4.0 95 5
表2：梯度洗脫條件2
時間(min) A(H2 O，0.01%HCOOH) B(CH3 CN，0.01%HCOOH)
0.00-5.90 95-5 5-95
5.90-5.91 5-95 95-5
5.91-6.00 95 5
進一步地，NMR譜圖採用Varian 400MHz核磁共振譜儀獲得數據，常以CDCl3 ，DMSO-d 6 作為溶劑，以ppm報告化學位移。各種峰的描述如下：s (單峰)，d (雙峰)，t (三重峰)，q (四重峰)，m (多重峰)，dd (雙二重峰)。偶合常數使用Hz表示。
實施例 1 ：2-((2-乙基-6-(4-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)苯基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物1)
Figure 02_image174
步驟1a：製備2-胺基-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image176
步驟1a的具體方式：室溫下，在3-(4-氟苯基)-3-氧代丙腈 (6.0 g，36.78 mmol) 的乙醇 (72 mL) 溶液中加入吡啶 (2.97 mL，36.78 mmol)。將混合物在70℃下攪拌15分鐘後冷卻至室溫。然後緩慢滴加硫脲 (5.61 g，73.56 mmol) 和碘 (9.33 g，6.78 mmol) 的EtOH (36 mL) 溶液。室溫攪拌一小時後，加入1M的Na2 S2 O3 (36 mL) 淬滅反應。過濾，用水洗滌濾餅，乾燥得白色固體2-胺基-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (4.2 g)。
步驟1b：製備2-氯-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image178
步驟1b的具體方式：室溫下，向氯化銅 (3.09 g，23.0 mmol) 的乙腈溶液 (42 mL) 加入亞硝酸第三丁酯 (3.57 g，34.6 mmol)。將混合物在室溫下攪30分鐘，然後加入2-胺基-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (4.2 g，19.15 mmol)，室溫攪拌1小時。加入1M HCl (63 mL) 淬滅反應，用乙酸乙酯萃取 (100 mL×2)。合併有機相，用飽和食鹽水 (100 mL) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到粗產品。粗產品經過快速管柱層析純化得白色固體2-氯-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (4.8 g)。
步驟1c：製備6-溴-2-乙基-N -(2,4,4-三甲基戊-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-胺
Figure 02_image180
步驟1c的具體方式：將5-溴吡啶-2-胺 (4.0 g，23.1 mmol)、丙醛 (4.4 mL，25.4 mmol)、1,1,3,3-四甲基丁基異氰 (4.0 mL，57.8 mmol)和氯化鎂 (220 mg，2.31 mmol) 溶於正丁醇 (40 mL)中，加熱至130℃攪拌反應3小時。冷卻後，將反應液濃縮，加水稀釋 (30 mL)。水相用乙酸乙酯萃取 (80 mL×3)，將合併的有機相用飽和食鹽水(30 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮得棕色固體6-溴-2-乙基-N -(2,4,4-三甲基戊烷-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-胺 (8.8 g)。
步驟1d：製備N -(6-溴-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)甲醯胺
Figure 02_image182
步驟1d的具體方式：將6-溴-2-乙基-N -(2,4,4-三甲基戊烷-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-胺 (8.1 g，23.0 mmol) 溶於甲酸 (30 mL)，回流2小時。待反應液冷卻，旋乾，加入甲基第三丁基醚 (30 mL)。攪拌15分鐘後過濾，濾餅用甲基第三丁基醚(10 mL)洗滌，真空乾燥得灰白色固體N -(6-溴-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)甲醯胺 (5.45 g)。
步驟1e：製備N -(6-溴-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)-N -甲基甲醯胺
Figure 02_image184
步驟1e的具體方式：零度下，氮氣氛圍中向N -(6-溴-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)甲醯胺 (6 g，22.4mmol) 的DMF溶液 (50 mL)分批加入60% 氫化鈉 (1.3 g，33.6 mmol)。反應液在室溫下攪拌1小時後加入碘甲烷 (4.8 g，33.6 mmol)。混合物在室溫下繼續反應3小時後加水 (50 mL) 淬滅，用乙酸乙酯萃取 (100 mL×3)，合併的有機相用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮減壓濃縮得到粗產品。粗產品通過快速管柱層析純化得灰色固體N -(6-溴-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)-N -甲基甲醯胺 (5 g)。
步驟1f：製備6-溴-2-乙基-N -甲基咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-胺
Figure 02_image186
步驟1f的具體方式：向N -(6-溴-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)-N -甲基甲醯胺 (4.5 g，16.0 mmol) 的甲醇溶液 (25 mL) 加入10M的氫氧化鈉溶液 (24 mL，240 mmol)。反應液在室溫下攪拌3小時後濃縮，加入乙酸乙酯(100 mL)稀釋，有機相用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得灰白色固體6-溴-2-乙基-N -甲基咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-胺 (4.1 g)。
步驟1g：製備2-((6-溴-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image188
步驟1g的具體方式：零度下，氮氣氛圍中向6-溴-2-乙基-N -甲基咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-胺 (2.5 g，9.84 mmol) 的DMF溶液 (30 mL) 溶液加入60%氫化鈉 (0.79 g，19.67 mmol)。將混合物在室溫下攪拌30分鐘，然後緩慢加入2-氯-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (4.8 g，20.11 mmol) 的DMF溶液 (10 mL)。混合物在80℃下攪拌4小時後用飽和氯化銨水溶液淬滅，並用乙酸乙酯(80 mL×3)萃取。將合併的有機相用飽和食鹽水(100 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到粗產品。粗產品經過快速管柱層析純化得黃色固體2-((6-溴-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈 (2.6 g)。
步驟1h：製備2-(4-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)苯基)乙酸甲酯
Figure 02_image190
步驟1h的具體方式：氮氣氛圍中，向2-((6-溴-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (100 mg，0.219 mmol) 和2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苯基)乙酸甲酯 (79 mg，0.285 mmol )的DMF溶液 (5 mL) 加入[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀 (18 mg，0.022 mmol) 和磷酸鉀 (93 mg，0.438 mmol)。混合物在85℃攪拌4小時後加水(10 mL)稀釋，並用乙酸乙酯萃取 (15 mL×3)。將合併的有機相用飽和食鹽水(20 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到粗產品。粗產品經過快速管柱層析純化得棕色固體2-(4-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)苯基)乙酸甲酯 (68 mg)。
步驟1i：製備2-(4-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)苯基)乙酸
Figure 02_image192
步驟1i的具體方式：向2-(4-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)苯基)乙酸甲酯 (68 mg，0.129 mmol) 的四氫呋喃 (3 mL) 和水 (1 mL) 溶液加入氫氧化鈉 (16 mg，0.387 mmol)。混合物在室溫攪拌4小時後用1M鹽酸溶液調節pH至3~4，用乙酸乙酯(10 mL×3)萃取。將合併的有機相用飽和食鹽水(10 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得棕色固體2-(4-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)苯基)乙酸 (55 mg)。
步驟1j：製備2-((2-乙基-6-(4-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)苯基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image194
步驟1j的具體方式：向 2-(4-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)苯基)乙酸 (55 mg，0.11 mmol) 和氮雜環丁烷-3-醇 (24 mg，0.32 mmol) 的DMF溶液 (2 mL) 加入DIEA (42 mg，0.324 mmol) 和HATU (62 mg，0.162 mmol)。混合物在室溫下攪拌2小時後加水(10 mL)稀釋，並用乙酸乙酯萃取 (10 mL×3)。將合併的有機相用飽和食鹽水洗滌 (10 mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到粗產品。粗產品經過快速管柱層析純化得白色固體2-((2-乙基-6-(4-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)苯基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (25.4 mg)。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ): δ 8.72 (br. s, 1 H), 8.09-8.06 (m, 2 H), 7.89 (d,J = 8.8 Hz, 1 H), 7.80 (d,J = 9.2 Hz, 1 H), 7.72 (d,J = 8.0 Hz, 2 H), 7.42 (d,J = 8.8 Hz, 2 H), 7.34 (d,J = 8.0 Hz, 2 H), 4.46-4.41 (m, 1 H), 4.36 (d,J = 7.8 Hz, 1 H), 4.04-3.99 (m, 1 H), 3.91-3.88 (m, 1 H), 3.65 (s, 3 H), 3.58-3.54 (m, 1 H), 3.47 (s, 2 H), 2.75-2.70 (q,J = 7.6 Hz, 2 H), 1.38 (t,J = 7.6 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 567。
實施例 2 ：2-((2-乙基-6-(6-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物2)
Figure 02_image196
步驟2a：製備2-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)吡啶-2-基)乙酸乙酯
Figure 02_image198
步驟2a的具體方式：氮氣保護下，向2-(5-溴吡啶-2-基)乙酸乙酯 (200 mg，0.82 mmol)，聯硼酸頻那醇酯 (229 mg，0.90 mmol)，醋酸鉀 (120 mg，1.23 mmol)的1,4-二氧六環溶液 (2 mL) 加入[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀 (58 mg，0.08 mmol)。將混合物加熱到85℃攪拌2小時後，加水(15 mL)稀釋，用乙酸乙酯(20 mL×2)萃取。將合併的有機相用飽和食鹽水 (15 mL) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到棕色油狀物2-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)吡啶-2-基)乙酸乙酯(171 mg)。
步驟2b：製備2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡啶-2-基)乙酸乙酯
Figure 02_image200
步驟2b的具體方式：將2-((6-溴-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (100 mg，0.22 mmol)和2-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)吡啶-2-基)乙酸乙酯 (55 mg，0.26 mmol) 按照實施例1步驟1h的方法製備得棕色固體2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡啶-2-基)乙酸乙酯 (60 mg)。
步驟2c：製備2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡啶-2-基)乙酸
Figure 02_image202
步驟2c的具體方式：將2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡啶-2-基)乙酸乙酯 (50 mg，0.09 mmol) 和氫氧化鈉 (11 mg，0.27 mmol)按照實施例1步驟1i的方法製備得到棕色固體2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡啶-2-基)乙酸 (45 mg)。
步驟2d：製備2-((2-乙基-6-(6-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image204
步驟2d的具體方式：將2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡啶-2-基)乙酸 (45 mg，0.09 mmol)和氮雜環丁烷-3-醇 (20 mg，0.27 mmol) 按照實施例1步驟1j的方法製備得到白色固體(2-((2-乙基-6-(6-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (28.9 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 8.68 (d,J = 2.0 Hz, 1 H), 8.15 (dd,J = 8.8, 5.4 Hz, 2 H), 7.92 (s, 1 H), 7.81 (dd,J = 8.1, 2.2 Hz, 1 H), 7.74 (d,J = 9.4 Hz, 1 H), 7.51 (dd,J = 9.4, 1.4 Hz, 1 H), 7.46 (d,J = 8.2 Hz, 1 H), 7.20–7.15 (m, 2 H), 4.71-4.65 (m, 1 H), 4.54-4.48 (m, 1 H), 4.29-4.24 (m, 1 H), 4.16-4.13 (m, 1 H), 3.91–3.88 (m, 1 H), 3.70 (s, 2 H), 3.68 (s, 3 H), 3.17 (br. s, 1 H), 2.80 (q,J = 7.4 Hz, 2 H), 1.40 (t,J = 7.6 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 568。
實施例 3 ：2-((2-乙基-6-(5-氟-6-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物3)
Figure 02_image206
步驟3a：製備1-(第三丁基) 3-乙基 2-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)丙二酸酯
Figure 02_image208
步驟3a的具體方式：在零度下氮氣氛圍中，將60%氫化鈉 (893 mg，22.3 mmol) 分批加入丙二酸第三丁基乙酯 (3.5 g，18.6 mmol) 的乾燥DMF溶液 (30 mL)。混合物繼續在零度下攪拌半小時後，加入5-溴-2,3-二氟吡啶 (3 g，15.5 mmol)，然後將反應液在80℃下攪拌3小時。反應加水(35 mL)淬滅，用乙酸乙酯(30 mL×3)萃取，然後將合併的有機相用飽和食鹽水(10 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得棕色油狀物1-(第三丁基) 3-乙基 2-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)丙二酸酯 (3 g)。
步驟3b：製備2-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)乙酸乙酯
Figure 02_image210
步驟3b的具體方式：零度下，向1-(第三丁基) 3-乙基 2-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)丙二酸酯 (3 g，8.30 mmol) 的二氯甲烷溶液 (5 mL) 加入三氟乙酸 (5 mL)。混合物室溫下繼續攪拌2小時，濃縮，加水稀釋 (15 mL)，用乙酸乙酯萃取 (30 mL×3)。將合併的有機相用飽和食鹽水(10 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到粗產品。粗產品經過管柱層析分離純化得黃色油狀物2-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)乙酸乙酯 (1.2 g)。
步驟3c：製備2-(3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)吡啶-2-基)乙酸乙酯
Figure 02_image212
步驟3c的具體方式：氮氣保護下，向2-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)乙酸乙酯 (100 mg，0.38 mmol)，聯硼酸頻那醇酯 (115 mg，0.46 mmol)，醋酸鉀 (56 mg，0.57 mmol) 的1,4-二氧六環溶液 (2 mL) 加入[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀 (29 mg，0.04 mmol)。將混合物加熱到85℃攪拌3小時後，加水(15 mL)稀釋，用乙酸乙酯(20 mL×2)萃取。將合併的有機相用飽和食鹽水 (15 mL) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到棕色固體2-(3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)吡啶-2-基)乙酸乙酯 (100 mg)。
步驟3d：製備2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-3-氟吡啶-2-基)乙酸乙酯
Figure 02_image214
步驟3d的具體方式：將2-((6-溴-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (100 mg，0.22 mmol) 和2-(3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)吡啶-2-基)乙酸乙酯 (100 mg，0.33 mmol) 按照實施例1步驟1h的方法製備得棕色固體2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-3-氟吡啶-2-基)乙酸乙酯 (50 mg)。
步驟3e：製備2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-3-氟吡啶-2-基)乙酸
Figure 02_image216
步驟3e的具體方式：將2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-3-氟吡啶-2-基)乙酸乙酯 (50 mg，0.09 mmol) 和氫氧化鈉 (11 mg，0.27 mmol)按照實施例1步驟1i的方法製備得棕色固體2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-3-氟吡啶-2-基)乙酸 (45 mg)。
步驟3f：製備2-((2-乙基-6-(5-氟-6-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image218
步驟3f的具體方式：將2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-3-氟吡啶-2-基)乙酸 (45 mg，0.08 mmol) 和氮雜環丁烷-3-醇 (10 mg，0.13 mmol) 按照實施例1步驟1j的方法製備得白色固體 2-((2-乙基-6-(5-氟-6-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈 (18 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 8.54 (s, 1 H), 8.17-8.13 (m, 2 H), 7.92 (s, 1 H), 7.75 (d,J = 8.0 Hz, 1 H), 7.52 (dd,J = 8.0 Hz, 2.0 Hz, 2 H), 7.17 (t,J = 8.0 Hz, 2 H), 4.70 (d,J = 4.0 Hz, 1 H), 4.49 (t,J = 8.0 Hz, 1 H), 4.32-4.28 (m, 1 H), 4.14 (dd,J = 8.0, 4.0 Hz, 1 H), 3.91 (dd,J = 8.0, 4.0 Hz, 1 H), 3.76 (s, 2 H), 3.72 (d ,J = 8.0 Hz, 1 H), 3.68 (s, 3 H), 2.80 (q,J = 8.0 Hz, 2 H), 1.39 (t,J = 8.0 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 586。
實施例 4 ： 2-((2-乙基-6-(5-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物4)
Figure 02_image220
步驟4a：製備1-(第三丁基) 3-乙基 2-(5-溴吡嗪-2-基)丙二酸酯
Figure 02_image222
步驟4a的具體方式：將2,5-二溴吡嗪 (1 g，4.20 mmol) 和丙二酸第三丁基乙酯 (870 mg，4.62 mmol) 按照實施例3步驟3a的方法製備得黃色固體1-(第三丁基) 3-乙基 2-(5-溴吡嗪-2-基)丙二酸酯 (1.5 g)。
步驟4b：製備2-(5-溴吡嗪-2-基)乙酸乙酯
Figure 02_image224
步驟4b的具體方式: 將1-(第三丁基) 3-乙基 2-(5-溴吡嗪-2-基)丙二酸酯 (1.5 g，4.35 mmol) 按照實施例3步驟3b的方法製備得黃色油狀物2-(5-溴吡嗪-2-基)乙酸乙酯(400 mg)。
步驟4c：製備(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑[1,2-a ]吡啶-6-基)硼酸
Figure 02_image226
步驟4c的具體方式：將2-((6-溴-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (100 mg，0.22 mmol) 和聯硼酸頻那醇酯 (67 mg，0.26 mmol) 按照實施例3步驟3c的方法製備得棕色油狀物(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑[1,2-a ]吡啶-6-基)硼酸 (100 mg)。
步驟4d：製備2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-基)乙酸乙酯
Figure 02_image228
步驟4d的具體方式：將(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑[1,2-a ]吡啶-6-基)硼酸 (100 mg，0.22 mmol) 和2-(5-溴吡嗪-2-基)乙酸乙酯 (87 mg，0.36 mmol) 按照實施例1步驟1h的方法製備得棕色固體2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡嗪-6-基)嘧啶-2-基)乙酸乙酯 (50 mg)。
步驟4e：製備2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-基)乙酸
Figure 02_image230
步驟4e的具體方式：將2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡嗪-6-基)嘧啶-2-基)乙酸乙酯 (50 mg，0.09 mmol) 和氫氧化鈉 (11 mg，0.27 mmol)按照實施例1步驟1i的方法製備得棕色固體2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-基)乙酸 (40 mg)。
步驟4f：製備2-((2-乙基-6-(5-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image232
步驟4f的具體方式：將2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-基)乙酸(40 mg，0.08 mmol)和氮雜環丁烷-3-醇 (18 mg，0.23 mmol) 按照實施例1步驟1j的方法製備得灰白色固體 (2-((2-乙基-6-(5-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (7 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 8.91 (s, 1 H), 8.66 (s, 1 H), 8.56 (s, 1 H), 8.15 (dd,J = 8.8, 5.2 Hz, 2 H), 7.94 (d,J = 9.6 Hz, 1 H), 7.86 (d,J = 8.8 Hz, 1 H), 7.18 (t,J = 8.6 Hz, 2 H), 4.75-4.71 (m, 1 H), 4.58-4.51 (m, 1 H), 4.34-4.27 (m, 1 H), 4.23-4.17 (m, 1 H), 3.95-3.89 (m, 1 H), 3.73 (s, 2 H), 3.70 (s, 3 H), 2.82 (q,J = 7.7 Hz, 2 H), 1.40 (t,J = 7.4 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 569。
實施例 5 ： 2-((2-乙基-6-(6-2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)噠嗪-3-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物5)
Figure 02_image234
步驟5a：製備1-(第三丁基) 3-乙基2-(6-氯噠嗪-3-基)丙二酸酯
Figure 02_image236
步驟5a的具體方式：將3,6-二氯噠嗪 (1 g，6.70 mmol) 和丙二酸第三丁基乙酯 (1.3 g，6.70 mmol) 按照實施例3步驟3a的方法製備得黃色液體1-(第三丁基) 3-乙基2-(6-氯噠嗪-3-基)丙二酸酯(1.0 g)。
步驟5b：製備2-(6-氯噠嗪-3-基)乙酸乙酯
Figure 02_image238
步驟5b的具體方式: 將1-(第三丁基) 3-乙基2-(6-氯噠嗪-3-基)丙二酸酯 (1.0 g，3.33 mmol) 按照實施例3步驟3b的方法製備得黃色油狀物2-(6-氯噠嗪-3-基)乙酸乙酯(400 mg)。
步驟5c：製備2-(6-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)噠嗪-3-基)乙酸乙酯
Figure 02_image240
步驟5c的具體方式：將2-((6-溴-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (100 mg，0.22 mmol) 和2-(6-氯噠嗪-3-基)乙酸乙酯 (60 mg，0.30 mmol) 按照實施例1步驟1h的方法製備得棕色固體2-(6-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)噠嗪-3-基)乙酸乙酯 (90 mg)。
步驟5d：製備2-(6-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)噠嗪-3-基)乙酸
Figure 02_image242
步驟5d的具體方式：向2-(6-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)噠嗪-3-基)乙酸乙酯(90 mg，0.166 mmol) 的四氫呋喃 (1 mL) 和水 (0.2 mL) 溶液加入一水合氫氧化鋰 (10 mg，0.250 mmol)。混合物在室溫攪拌2小時後用油泵減壓濃縮得棕色固體2-(6-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)噠嗪-3-基)乙酸 (100 mg)。
步驟5e：製備2-((2-乙基-6-(6-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)噠嗪-3-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image244
步驟5e的具體方式：將2-(6-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)噠嗪-3-基)乙酸(90 mg，0.175 mmol)和HATU(80 mg，0.211 mmol) 的DMF 溶液在0℃下攪拌0.5小時， 隨後向其中加入氮雜環丁烷-3-醇 (18 mg，0.23 mmol)。 混合物在室溫下攪拌1小時後加水(10 mL)稀釋，並用乙酸乙酯(10 mL×3)萃取。將合併的有機相用飽和食鹽水(10 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到粗產品。粗產品經過快速管柱層析純化得白色固體2-((2-乙基-6-(6-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)噠嗪-3-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(15.0 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 8.78 (s, 1 H), 8.16-8.12 (m, 2 H), 7.84-7.75 (m, 4 H), 7.18 (t,J= 8.0 Hz, 2 H), 4.69 (br. s, 1 H), 4.59 (t,J= 8.0 Hz, 1 H), 4.28-4.18 (m, 2 H), 3.92-3.91 (m, 1 H), 3.88 (s, 2 H), 3.69 (s, 3 H), 2.80 (q,J= 8.0 Hz, 2 H), 1.40 (t,J= 8.0 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 569。
實施例 6 ： 2-((2-乙基-6-(6-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-甲基吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物6)
Figure 02_image246
步驟6a：製備1-(第三丁基) 3-乙基2-(5-溴-6-甲基吡啶-2-基)丙二酸酯
Figure 02_image248
步驟6a的具體方式：將3-溴-6-氟-2-甲基吡啶 (0.5 g，2.63 mmol) 和丙二酸第三丁基乙酯 (1.5 mL，7.89 mmol) 按照實施例3步驟3a的方法製備得黃色固體1-(第三丁基) 3-乙基2-(5-溴-6-甲基吡啶-2-基)丙二酸酯 (0.3 g)。
步驟6b：製備2-(5-溴-6-甲基吡啶-2-基)乙酸乙酯
Figure 02_image250
步驟6b的具體方式: 將1-(第三丁基) 3-乙基2-(5-溴-6-甲基吡啶-2-基)丙二酸酯 (0.3 g，1.58 mmol) 按照實施例3步驟3b的方法製備得黃色油狀物2-(5-溴-6-甲基吡啶-2-基)乙酸乙酯(100 mg)。
步驟6c：製備(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑[1,2-a ]吡啶-6-基)硼酸
Figure 02_image252
步驟6c的具體方式：將2-((6-溴-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (200 mg，0.44 mmol) 和聯硼酸頻那醇酯 (134 mg，0.52 mmol) 按照實施例3步驟3c的方法製備得棕色油狀物(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑[1,2-a ]吡啶-6-基)硼酸 (200 mg)。
步驟6d：製備2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酸乙酯
Figure 02_image254
步驟6d的具體方式：將(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑[1,2-a ]吡啶-6-基)硼酸(90 mg，0.21 mmol) 和2-(5-溴-6-甲基吡啶-2-基)乙酸乙酯 (66 mg，0.26 mmol) 按照實施例1步驟1h的方法製備得棕色固體2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酸乙酯 (27 mg)。
步驟6e：製備2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酸
Figure 02_image256
步驟6e的具體方式：將2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酸乙酯 (27 mg，0.05 mmol) 和氫氧化鈉 (8.0 mg，0.20 mmol)按照實施例1步驟1i的方法製備得棕色固體2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酸 (25.6 mg)。
步驟6f：製備2-((2-乙基-6-(6-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-甲基吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image258
步驟6f的具體方式：將2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酸(25.6 mg，0.05 mmol)和氮雜環丁烷-3-醇 (7 mg，0.1 mmol) 按照實施例1步驟1j的方法製備得灰白色固體 2-((2-乙基-6-(6-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-甲基吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (6.2 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 8.12 (dd,J =8.8, 5.4 Hz, 2 H), 7.73 - 7.64 (m, 2 H), 7.52 - 7.47 (m, 1 H), 7.32 - 7.26 (m, 2 H), 7.17 - 7.13 (m, 2 H), 4.70 - 4.64 (m, 1 H), 4.56 - 4.49 (m, 1 H), 4.28 - 4.24 (m, 1 H), 4.17 - 4.13 (m, 1 H), 3.90 - 3.86 (m, 1 H), 3.66 (s, 2 H), 3.64 (s, 3 H), 2.79 (q,J =7.6 Hz, 2 H), 2.46 (s, 3 H), 1.39 (t,J =7.60 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 582。
實施例 7 ： 2-((2-乙基-6-(5-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物7)
Figure 02_image260
步驟7a：製備2-溴-5-(溴甲基)吡啶
Figure 02_image262
步驟7a的具體方式：將2-溴-5-甲基吡啶(0.5 g，2.91 mmol)溶於5 mL四氯化碳中，然後加入偶氮二異丁腈(48 mg，0.29 mmol)和NBS (0.67 g，3.78 mmol)，氮氣保護下，加熱到70℃反應3小時。反應液濃縮，管柱層析純化方法製備得無色油狀物2-溴-5-(溴甲基)吡啶 (0.4 g)。
步驟7b：製備2-(6-溴吡啶-3-基)乙腈
Figure 02_image264
步驟7b的具體方式: 將2-溴-5-(溴甲基)吡啶(300 mg，1.2 mmol)溶於5 mL乙腈中，加入四丁基氰化銨(320 mg，1.2 mmol)，室溫反應2小時。將反應液濃縮，加入20mL 水，乙酸乙酯萃取(50 mL×3)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。將濃縮的反應液管柱層析純化得無色油狀物2-(6-溴吡啶-3-基)乙腈(200 mg)。
步驟7c：製備2-(6-溴吡啶-3-基)乙酸甲酯
Figure 02_image266
步驟7c的具體方式：將2-(6-溴吡啶-3-基)乙腈 (200 mg，1.02 mmol) 溶於3 mL甲醇中，氮氣保護下加入二氯亞碸(0.4 mL，5.10 mmol)，室溫反應5小時。加入20mL水，乙酸乙酯萃取(50 mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。將濃縮的反應液管柱層析純化得無色油狀物2-(6-溴吡啶-3-基)乙酸甲酯(200 mg)。
步驟7d：製備2-(6-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡啶-3-基)乙酸甲酯
Figure 02_image268
步驟7d的具體方式：將(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)硼酸 (150 mg，0.36 mmol) 和2-(6-溴吡啶-3-基)乙酸甲酯 (98 mg，0.43 mmol) 按照實施例1步驟1h的方法製備得棕色固體2-(6-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡啶-3-基)乙酸甲酯(70 m)。
步驟7e：製備2-(6-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡啶-3-基)乙酸
Figure 02_image270
步驟7e的具體方式：將2-(6-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡啶-3-基乙酸甲酯 (70 mg，0.13 mmol) 與氫氧化鈉 (16 mg，0.40 mmol)按照實施例1步驟1i的方法製備得棕色固體2-(6-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡啶-3-基)乙酸 (68 mg)。
步驟7f：製備2-((2-乙基-6-(5-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image272
步驟7f的具體方式：將2-(6-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡啶-3-基)乙酸(66 mg，0.13mmol)和氮雜環丁烷-3-醇 (14 mg，0.2 mmol) 按照實施例1步驟1j的方法製備得灰白色固體 2-((2-乙基-6-(5-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (6.3 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) : δ 8.53 (d,J =8.5 Hz, 2 H), 8.17 (dd,J =8.5, 5.4 Hz, 2 H), 7.87 (d,J =8.8 Hz, 1 H), 7.78 (d,J =7.7 Hz, 1 H), 7.69 (dd,J =19.1, 8.8 Hz, 2 H), 7.19 (t,J =8.6 Hz, 2 H), 4.75 - 4.61 (m, 1 H), 4.44 - 4.39 (m, 1 H), 4.31 - 4.26 (m, 1 H), 4.08 - 4.06 (m, 1 H), 3.92 - 3.88 (m, 1 H), 3.70 (s, 3 H), 3.50 (s, 2 H), 2.79 (q,J =7.6 Hz, 2 H), 1.40 (t,J =7.2 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 568。
實施例 8 ： 2-((2-乙基-6-(5-(3-羥基氮雜環丁烷-1-羰基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物8)
Figure 02_image274
步驟8a：製備甲基5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-羧酸甲酯
Figure 02_image276
步驟8a的具體方式：將3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)硼酸 (210 mg，0.50 mmol) 和5-溴吡嗪-2-羧酸甲酯 (216 mg，1.0 mmol) 按照實施例1步驟1h的方法製備得棕色固體甲基5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-羧酸甲酯 (143 mg)。
步驟8b：製備5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-羧酸
Figure 02_image278
步驟8b的具體方式：室溫下，將甲基5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-羧酸甲酯(143 mg，0.28 mmol) 與氫氧化鈉 (24 mg，0.60 mmol)按照實施例1步驟 1i的方法製備得棕色固體5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-羧酸 (139 mg)。
步驟8c：製備2-((2-乙基-6-(5-(3-羥基氮雜環丁烷-1-羰基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image280
步驟8c的具體方式：室溫下，將5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-羧酸(46 mg，0.092 mmol) 與氮雜環丁烷-3-醇 (14 mg，0.2 mmol)按照實施例1 步驟1j的方法製備得白色固體2-((2-乙基-6-(5-(3-羥基氮雜環丁烷-1-羰基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (14.2 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) : δ 9.34 (s, 1 H), 8.97 (s, 1 H), 8.66  (s, 1 H), 8.17 (dd,J = 8.8, 5.6 Hz, 2 H), 7.95 (d,J = 9.6 Hz, 1 H), 7.79 (d,J = 9.6 Hz, 1 H), 7.20 (t,J = 8.8 Hz, 2 H), 4.99 - 4.94 (m, 1 H), 4.80 - 4.79 (m, 1 H), 4.58 - 4.51 (m, 2 H), 4.13 (dd,J = 12.0, 3.2 Hz, 1 H), 3.73 (s, 3 H), 2.82 (q,J =7.6 Hz, 2 H), 1.42 (t,J = 7.6 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 555。
實施例 9 ：2-((2-乙基-6-(5-(1-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物9)
Figure 02_image282
步驟9a：製備2-(5-溴吡嗪-2-基)-2-甲基丙酸乙酯
Figure 02_image284
步驟9a的具體方式：在零度下氮氣氛圍中，將60%氫化鈉 (69 mg，1.73 mmol) 分批加入2-(5-溴吡嗪-2-基)乙酸乙酯 (200 mg，0.82 mmol) 的乾燥DMF溶液 (5 mL)。混合物繼續在零度下攪拌半小時後，加入碘甲烷 (244 mg，1.73 mmol)，然後將反應液在室溫下攪拌2小時。反應加水(15 mL)淬滅，用乙酸乙酯(20 mL×3)萃取，然後將合併的有機相用飽和食鹽水(10 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得粗產品。粗產品通過快速管柱層析純化得黃色油狀液體2-(5-溴吡嗪-2-基)-2-甲基丙酸乙酯(120 mg)。
步驟9b：製備2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-基)-2-甲基丙酸乙酯
Figure 02_image286
步驟9b的具體方式：將(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)硼酸 (100 mg，0.24 mmol) 和2-(5-溴吡嗪-2-基)-2-甲基丙酸乙酯 (97 mg，0.36 mmol) 按照實施例1步驟 1h的方法製備得棕色固體2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-基)-2-甲基丙酸乙酯(100 mg)。
步驟9c：製備2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-基)-2-甲基丙酸
Figure 02_image288
步驟9c的具體方式：室溫下，將2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-基)-2-甲基丙酸乙酯(100 mg，0.18 mmol) 與一水合氫氧化鋰(15 mg，0.35 mmol)按照實施例5步驟5d的方法製備得棕色固體2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-基)-2-甲基丙酸(110 mg)。
步驟9d：製備2-((2-乙基-6-(5-(1-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image290
步驟9d的具體方式：室溫下，將2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-基)-2-甲基丙酸 (100 mg，0.18 mmol) 與氮雜環丁烷-3-醇 (27 mg，0.37 mmol)按照實施例5步驟5e的方法製備得白色固體2-((2-乙基-6-(5-(1-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (45 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 8.95 (s, 1 H), 8.63 (s, 1 H), 8.58  (s, 1 H), 8.16 (dd,J = 8.8, 5.6 Hz, 2 H), 7.90 (d,J = 9.6 Hz, 1 H), 7.76 (d,J =9.2 Hz, 1 H), 7.20 (t,J = 8.8 Hz, 2 H), 4.50-4.48 (m, 1 H), 4.24-4.19(m, 1 H), 3.91-3.80 (m, 2 H), 3.70 (s, 3 H), 3.40-3.30 (m, 1 H), 2.81 (q,J =7.6 Hz, 2 H), 1.63 (s, 6 H), 1.42 (t,J = 7.6 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 597。
實施例 10 ：2-((2-乙基-6-(3-氟-5-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物10)
Figure 02_image292
步驟10a：製備5-(溴甲基)-2-氯-3-氟吡啶
Figure 02_image294
步驟10a的具體方式：將2-氯-3-氟-5-甲基吡啶(1.0 g，6.90 mmol)溶於10 mL四氯化碳中，然後加入偶氮二異丁腈(113 mg，0.69 mmol)和NBS (1.35 g，7.59 mmol)，氮氣保護下，加熱到70℃反應3小時。反應液濃縮，管柱層析純化方法製備得無色油狀物5-(溴甲基)-2-氯-3-氟吡啶 (0.45 g)。
步驟10b：製備2-(6-氯-5-氟吡啶-3-基)乙腈
Figure 02_image296
步驟10b的具體方式: 將5-(溴甲基)-2-氯-3-氟吡啶(450 mg，2.0 mmol)溶於5 mL乙腈中，加入四丁基氰化銨(644 mg，2.4 mmol)，室溫反應2小時。將反應液濃縮，加入20mL水，乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。將濃縮的反應液管柱層析純化得無色油狀物2-(6-氯-5-氟吡啶-3-基)乙腈(275 mg)。
步驟10c：製備2-(6-氯-5-氟吡啶-3-基)乙酸甲酯
Figure 02_image298
步驟10c的具體方式：將2-(6-氯-5-氟吡啶-3-基)乙腈 (275 mg，1.62 mmol) 溶於3 mL甲醇中，氮氣保護下加入二氯亞碸(0.6 mL，8.10 mmol)，室溫反應5小時。加入20mL 水，乙酸乙酯萃取(50 mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。將濃縮的反應液管柱層析純化得無色油狀物2-(6-氯-5-氟吡啶-3-基)乙酸甲酯 (253 mg)。
步驟10d：製備2-(6-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-5-氟吡啶-3-基乙酸甲酯
Figure 02_image300
步驟10d的具體方式：(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)硼酸 (351mg，0.83 mmol) 和2-(6-氯-5-氟吡啶-3-基)乙酸甲酯 (253 mg，1.25 mmol) 按照實施例1步驟1h的方法製備得棕色固體2-(6-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-5-氟吡啶-3-基乙酸甲酯(110 mg)。
步驟10e：製備2-(6-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)- 5-氟吡啶-3-基)乙酸
Figure 02_image302
步驟10e的具體方式：將2-(6-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-5-氟吡啶-3-基乙酸甲酯 (110 mg，0.20 mmol) 與氫氧化鈉 (16 mg，0.40 mmol)按照實施例1步驟1i的方法製備得棕色固體2-(6-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-5-氟吡啶-3-基)乙酸 (106 mg)。
步驟10f：製備2-((2-乙基-6-(3-氟-5-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡啶-2-基)咪唑[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image304
步驟10f的具體方式：將2-(6-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-5-氟吡啶-3-基)乙酸 (106 mg，0.2 mmol) 與氮雜環丁烷-3-醇 (27 mg，0.37 mmol)按照實施例1步驟1j的方法製備得灰白色固體 2-((2-乙基-6-(3-氟-5-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡啶-2-基)咪唑[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (29.4 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 8.48 (s, 1H), 8.37 (s, 1 H), 8.19 - 8.16 (dd,J = 8.8，5.2 Hz, 2 H), 8.05 (d,J = 9.6 Hz, 1 H), 7.72 (d,J = 9.2 Hz, 1 H), 7.57 (d,J = 12.0 Hz, 1 H), 7.19 (t,J = 8.8 Hz, 2 H), 4.74 (br. s, 1 H), 4.45 (t,J = 8.4 Hz, 1 H), 4.32 - 4.28 (m, 1 H), 4.14 - 4.09 (m, 1 H), 3.95 - 3.90 (m, 1 H), 3.70 (s, 3 H), 2.81 (q,J = 7.6 Hz, 2 H), 2.52 (s, 2 H), 1.41 (t,J = 7.6 Hz, 3 H).
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 586。
實施例 11 ：(S )-2-((2-乙基-6-(5-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物11)
Figure 02_image306
步驟11a：製備(S )-2-((2-乙基-6-(5-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image308
步驟11a的具體方式：將2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-基)乙酸 (40 mg，0.08 mmol)和(S )-3-吡咯烷醇(8.14 mg，0.093 mmol) 按照實施例1步驟1j的方法製備得灰白色固體(S)-2-((2-乙基-6-(5-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(20.5 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 8.90 (s, 1 H), 8.66 (s, 1 H), 8.55 (s, 1 H), 8.17 (dd,J = 8.4, 5.6 Hz, 2 H), 7.90 (d,J = 9.2 Hz, 1 H), 7.77 (d,J = 9.2 Hz, 1 H), 7.19 (t,J = 8.4 Hz, 2 H), 4.63 - 4.48 (m, 1 H), 3.94 (s, 2 H), 3.86 - 3.73 (m, 2 H), 3.71 (s, 3 H), 3.69-3.63 (m, 2 H), 2.81 (q,J = 7.6 Hz, 2 H), 2.02-1.99 (m, 2 H), 1.40 (t,J = 7.6 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 583。
實施例 12 ：2-((2-乙基-6-(5-(2-(3-(羥甲基)氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物12)
Figure 02_image310
步驟12a：製備2-((2-乙基-6-(5-(2-(3-(羥甲基)氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image312
步驟12a的具體方式：將2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-基)乙酸(40 mg，0.08 mmol)和3-(羥甲基)氮雜環丁烷鹽酸鹽(11.55 mg，0.093 mmol) 按照實施例1步驟1j的方法製備得灰白色固體2-((2-乙基-6-(5-(2-(3-(羥甲基)氮雜環丁烷-1-基)-2-氧代乙基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (12.5 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ):δ 8.91 (s, 1 H), 8.66 (s, 1 H), 8.55 (s, 1 H), 8.17 (dd,J = 8.4, 5.6 Hz, 2 H), 7.90 (d,J = 9.2 Hz, 1 H), 7.76 (d,J = 9.2 Hz, 1 H), 7.19 (t,J = 8.4 Hz, 2 H), 4.41 - 4.30 (m,1 H), 4.17 - 4.07 (m, 2 H), 3.88 - 3.79 (m, 3 H), 3.73 (s,2 H), 3.70 (s, 3 H), 2.90 - 2.86 (m, 1 H), 2.82 (q,J = 7.6 Hz, 2 H), 1.41 (t,J = 7.60 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 583。
實施例 13 ： (R )-2-((2-乙基-6-(5-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物13)
Figure 02_image314
步驟13a：製備(R )-2-((2-乙基-6-(5-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image316
步驟13a的具體方式：將2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-基)乙酸(40 mg，0.08 mmol)和(R)-吡咯烷丁-3-醇 (14 mg，0.16 mmol) 按照實施例1步驟1j的方法製備得灰白色固體(R)-2-((2-乙基-6-(5-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (16 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ  8.90 (s, 1 H), 8.67 (s, 1 H), 8.55 (s, 1 H), 8.17 (dd,J = 8.4, 5.6 Hz, 2 H), 7.90 (d,J = 9.2 Hz, 1 H), 7.78 - 7.76 (m, 1 H), 7.19 (t,J = 8.4 Hz, 2 H), 4.61 - 4.52 (m, 1 H), 3.94 (s, 2 H), 3.86 - 3.73 (m, 2 H), 3.73 (s, 3 H), 3.69-3.63 (m, 2 H), 2.81 (q,J = 7.6 Hz, 2 H), 2.13 - 1.97 (m, 2 H), 1.41 (t,J = 7.6 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 583。
實施例 14 ： 2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-基)-N -((5-氧代吡咯烷-2-基)甲基)乙醯胺(化合物14)
Figure 02_image318
步驟14a：製備2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-基)-N -((5-氧代吡咯烷-2-基)甲基)乙醯胺
Figure 02_image320
步驟14a的具體方式：將2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-基)乙酸(40 mg，0.08 mmol)和5-(胺基甲基)吡咯烷-2-酮 (18 mg，0.16 mmol) 按照實施例1步驟1j的方法製備得灰白色固體 2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-基)-N -((5-氧代吡咯烷-2-基)甲基)乙醯胺 (20 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 8.83-8.79 (m, 1 H), 8.62 - 8.51 (m, 2 H), 8.16 (dd,J = 8.5, 5.4 Hz, 2 H), 7.89 (d,J = 9.3 Hz, 1 H), 7.75 (d,J = 7.5 Hz, 1 H), 7.70 - 7.55 (m, 1 H), 7.18 (t,J = 8.6 Hz, 2 H), 6.93 - 6.79 (m, 1 H), 3.91-3.90 (m, 1 H), 3.77 (s, 2 H), 3.71 (s, 3 H), 3.59 - 3.49 (m, 1 H), 3.26-3.16 (m, 1 H), 2.81 (q,J = 7.6 Hz, 2 H), 2.32 - 2.17 (m, 2 H), 1.84 - 1.73 (m, 2 H), 1.41 (t,J = 7.6 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 610。
實施例 15 ： 5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-N -(2-氮雜螺[3.3]庚烷-6-基)吡嗪-2-甲醯胺(化合物15)
Figure 02_image322
步驟15a：製備6-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-甲醯胺)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸第三丁酯
Figure 02_image324
步驟15a的具體方式：將5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-羧酸 (40 mg，0.08 mmol) 和 6-胺基-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-羧酸第三丁酯 (34 mg，0.16 mmol)按照實施例1步驟1j的方法製備得灰白色固體6-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-甲醯胺)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸第三丁酯 (32 mg)。
步驟15b：製備5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-N -(2-氮雜螺[3.3]庚烷-6-基)吡嗪-2-甲醯胺
Figure 02_image326
步驟15b的具體方式：向6-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)吡嗪-2-甲醯胺)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸第三丁酯(32 mg，0.046 mmol)的二氯甲烷(1 ml)溶液中加入三氟乙酸(2 ml)，室溫攪拌1小時後用飽和碳酸氫鈉水溶液淬滅，並用二氯甲烷(10 mL×3)。萃取將合併的有機相用飽和食鹽水(20 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到粗產品。粗產品經過快速管柱層析純化得白色固體5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-N -(2-氮雜螺[3.3]庚-6-基)吡嗪-2-甲醯胺 (10.4 mg)。
1 H NMR (400 MHz, DMSOd6 ): δ 9.38 (s, 1H), 8.91 (s, 1 H), 8.68 (s, 1 H), 8.19 - 8.16 (m, 2 H), 7.94 (d,J = 9.2 Hz, 1 H), 7.81 (t,J = 10.0 Hz, 1 H), 7.20 (t,J = 8.8 Hz, 2 H), 4.50 - 4.44 (m, 1 H), 3.82 (s, 2 H), 3.73 (s, 3 H), 3.70 (s, 2 H), 2.81 (q,J = 7.6 Hz, 2 H), 2.79 - 2.74 (m, 2 H), 2.27 - 2.19 (m, 2 H), 1.42 (t,J = 7.6 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 594。
實施例 16 ： 2-((2-乙基-6-(5-氟-6-(3-羥基氮雜環丁烷-1-羰基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物16)
Figure 02_image328
步驟16a：製備(5-氟-6-(甲氧羰基)吡啶-3-基)硼酸
Figure 02_image330
步驟16a的具體方式：將5-溴-3-氟吡啶甲酸甲酯 (100 mg，0.429 mmol) 和聯硼酸頻那醇酯 (130 mg，0.52 mmol)按照實施例2步驟2a的方法製備得黑色油狀物 (5-氟-6-(甲氧羰基)吡啶-3-基)硼酸 (140 mg)。
步驟16b：製備5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-3-氟吡啶甲酸甲酯
Figure 02_image332
步驟16b的具體方式：將(5-氟-6-(甲氧羰基)吡啶-3-基)硼酸 (85 mg，0.43 mmol) 和2-((6-溴-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(391 mg，0.86 mmol)按照實施例1步驟1h的方法製備得黃色固體5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-3-氟吡啶甲酸甲酯 (150 mg)。
步驟16c：5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-3-氟吡啶甲酸
Figure 02_image334
步驟16c的具體方式：將5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-3-氟吡啶甲酸甲酯(150 mg，0.28 mmol)與氫氧化鈉(24 mg，0.60 mmol)按照實施例1步驟1i的方法製備得白色固體5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-3-氟吡啶甲酸(191 mg)。
步驟16d：製備2-((2-乙基-6-(5-氟-6-(3-羥基氮雜環丁烷-1-羰基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image336
步驟16d的具體方式：5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)-3-氟吡啶甲酸(146 mg，0.28 mmol)與氮雜環丁烷-3-醇 (27 mg，0.37 mmol)按照實施例1步驟1j的方法製備得白色固體2-((2-乙基-6-(5-氟-6-(3-羥基氮雜環丁烷-1-羰基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(甲基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(65.8 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 8.59 (s, 1 H), 8.15 - 8.11 (m, 2 H), 8.00 (s, 1 H), 7.80 (d,J = 9.2 Hz, 1 H), 7.66 (d,J = 10.4 Hz, 1 H), 7.52 (d,J = 8.8 Hz, 1 H), 7.16 (t,J = 8.8 Hz, 2 H), 4.74 (s, 1 H), 4.60 - 4.56 (m, 1 H), 4.51 - 4.46 (m,, 1 H), 4.27 - 4.23 (m, 1 H), 4.11 - 4.07 (m, 1 H), 3.68 (s, 3 H), 2.79(q,J = 7.6 Hz, 2 H), 1.39 (t,J = 7.6 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 572。
實施例 17 ： 2-((5-(2-(1,1-二氧化異噻唑烷-2-基)嘧啶-5-基)-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物17)
Figure 02_image338
步驟17a：製備2-溴-5-氟-1-羥基吡啶-1-鎓
Figure 02_image340
步驟17a的具體方式：室溫下，在2-溴-5-氟吡啶 (50.0 g，36.78 mmol) 的三氟乙酸 (400 mL) 溶液中加入雙氧水 (80 mL)。將混合物在85℃下攪拌10小時後冷卻至室溫，加入硫代硫酸鈉 (120 g) 淬滅，並過濾。母液用氫氧化鈉水溶液調節pH至7-8，用二氯甲烷(800 ml x 3)萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮得灰色固體2-溴-5-氟-1-羥基吡啶-1-鎓 (50 g)。
步驟17b：製備6-溴-3-氟-2-氰基吡啶
Figure 02_image342
步驟1b的具體方式：室溫下，向2-溴-5-氟-1-羥基吡啶-1-鎓 (50 g，0.25 mol) 的乙腈溶液 (400 mL) 加入三乙胺 (126 g，1.25 mol)和三甲基氰矽烷 (125 g，1.25 mol)。將混合物加熱至90℃反應12小時，然後濃縮，粗產品經過快速管柱層析純化得類白色固體6-溴-3-氟-2-氰基吡啶 (22 g)。
步驟17c：製備5-溴-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-胺
Figure 02_image344
步驟17c的具體方式：向6-溴-3-氟-2-氰基吡啶 (22 g，0.11 mol)和乙肼草酸鹽 (25 g，0.16 mol)的二甲基亞碸(110 ml)溶液中加入碳酸鉀 (53 g，0.38 mol)，反應加熱至110℃反應2h。將反應液冷卻至室溫，用乙酸乙酯(800 ml)稀釋，有機相分別用水(200 ml x 3)，飽和食鹽水(200 ml)洗，乾燥，過濾濃縮。粗產品經過快速管柱層析純化得黃色固體5-溴-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-胺(3.2 g)。
步驟17d：製備2-((5-溴-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image346
步驟17d的具體方式：零度下，氮氣氛圍中向5-溴-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-胺(3.2 g，13 mmol) 的DMF溶液 (30 mL)分批加入60% 氫化鈉 (1.1 g，26.4 mmol)。反應液在0℃下攪拌15分鐘後分批加入2-氯-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (3.4 g，14.5 mmol)。混合物在室溫下繼續反應1小時後加水 (60 mL) 淬滅，並過濾。濾餅用乙酸乙酯(20 mL×3)洗滌，然後乾燥得黃色固體2-((5-溴-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(6 g)。
步驟17e：製備2-((5-溴-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image348
步驟17e的具體方式：零度下，氮氣氛圍中向2-((5-溴-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (6 g，13.6 mmol) 的DMF溶液 (50 mL)分批加入60% 氫化鈉 (1.4 g，33.9 mmol)。反應液在室溫下攪拌0.5小時後加入碘乙烷 (4.2 g，27.1 mmol)。混合物在室溫下繼續反應3小時後加水 (200 mL) 淬滅，用乙酸乙酯萃取 (100 mL×3)，合併的有機相用飽和食鹽水洗滌 (50 mL)，乾燥，過濾後減壓濃縮得到粗產品。粗產品通過快速管柱層析純化得黃色固體2-((5-溴-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(5.5 g)。
步驟17f：製備2-(5-溴嘧啶-2-基)異噻唑烷1,1-二氧化物
Figure 02_image350
步驟17f的具體方式：氮氣氛圍中，向3-氯丙烷-1-磺醯胺 (1.85 g，7.87 mmol) 和2,5-二溴嘧啶 (954 mg，6.05 mmol )的第三丁醇溶液(10 mL)加入三(二亞苄基丙酮)二鈀 (277 mg，0.30 mmol)，2-(二第三丁基膦)聯苯 (180 mg，0.61 mmol)，4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽 (350 mg，0.61 mmol) 和碳酸銫 (3.94 g，12.11mmol)。混合物在100℃攪拌4小時後加水(40 mL)和乙酸乙酯(3 mL)稀釋並在室溫下攪拌10分鐘後過濾，用水洗滌濾餅，然後用乙酸乙酯/石油醚(1:5，10 mLx2)洗滌濾餅，乾燥得2-(5-溴嘧啶-2-基)異噻唑烷1,1-二氧化物(1.5 g)。
步驟17g：製備(2-(1,1-二氧化異噻唑烷-2-基)嘧啶-5-基)硼酸
Figure 02_image352
步驟17g的具體方式：氮氣保護下，向2-(5-溴嘧啶-2-基)異噻唑烷1,1-二氧化物 (5 g，18.0 mmol)，聯硼酸頻那醇酯 (5.0 g，19.8 mmol)，醋酸鉀 (5.3 g，54.1 mmol)的1,4-二氧六環溶液 (50 mL) 加入[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀 (661 mg，0.9 mmol)。將混合物加熱到85℃攪拌2小時後，加水(80 mL)稀釋，用乙酸乙酯萃取 (100 mL×2)。將合併的有機相用飽和食鹽水 (100 mL) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到棕色油狀物(2-(1,1-二氧化異噻唑烷-2-基)嘧啶-5-基)硼酸 (5 g)。
步驟17h：製備2-((5-(2-(1,1-二氧化異噻唑烷-2-基)嘧啶-5-基)-2-乙基-2H -吡唑啉[4,3-b ]吡啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image354
步驟17h的具體方式：氮氣氛圍中，向2-((5-溴-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b]吡啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (5 g，10.6 mmol) 和(2-(1,1-二氧化異噻唑烷-2-基)嘧啶-5-基)硼酸(3.1 g，12.8 mmol )的1,4-二氧六環溶液 (50 mL) 和水(7 ml)中加入[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀 (389 mg，0.53 mmol) 和磷酸鉀 (2.3 g，17.0 mmol)。混合物在75℃攪拌2小時後加水(50 mL)稀釋，並用乙酸乙酯萃取 (50 mL×3)。將合併的有機相用飽和食鹽水(100 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到粗產品。粗產品經過快速管柱層析純化得棕色固體2-(4-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)苯基)乙酸甲酯 (4.5 g)。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ): δ 9.26 (s, 2 H), 8.20 (d,J = 9.2 Hz, 1 H), 8.13 (dd,J = 8.8, 5.2 Hz, 2 H), 7.70 (d,J = 9.2 Hz, 1 H), 7.17 (t,J = 8.4 Hz, 2 H), 4.50 - 4.65 (m, 1 H), 4.44 (q,J = 7.2 Hz, 2 H), 4.12 (t,J = 6.4 Hz, 2 H), 3.98-3.84 (m, 1 H), 3.50 (q,J = 7.2 Hz, 2 H), 2.57-2.51 (m, 2 H), 1.68 (t,J = 7.2 Hz, 3 H), 1.48 (t,J = 7.2 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 590。
實施例 18 ：2-((5-(2-(1,1-二氧化異噻唑烷-2-基)嘧啶-5-基)-2-乙基吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物18)
Figure 02_image356
步驟18a：製備2-乙基吡唑并[1,5-a ]嘧啶-5(4H )-酮
Figure 02_image358
步驟18a的具體方式：室溫下，向3-乙基-1H -吡唑-5-胺 (5 g，45 mmol) 和1,3-二甲基嘧啶-2,4 (1H , 3H )-二酮 (7.6 g，54 mmol)的乙醇 (50 mL) 溶液中加入乙醇鈉 (9.2 g，135 mmol)。將混合物在90℃下攪拌5小時後冷卻至室溫，濃縮後加入稀鹽酸(2M)調節pH至2-3。過濾，濾餅乾燥得白色固體2-乙基吡唑并[1,5-a ]嘧啶-5(4H )-酮 (5 g)。
步驟18b：製備2-乙基-3-硝基吡唑并[1,5-a ]嘧啶-5(4H )-酮
Figure 02_image360
步驟18b的具體方式：零度下，向2-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5(4H )-酮 (5 g，0.25 mol) 的濃硫酸溶液 (20 mL) 中緩慢滴加濃硝酸(2.2 ml)。將混合物在0℃下繼續反應2小時，然後反應液緩慢加入冰水中淬滅，過濾，乾燥得淡黃色固體2-乙基-3-硝基吡唑并[1,5-a ]嘧啶-5(4H )-酮 (5 g)。
步驟18c：製備5-氯-2-乙基-3-硝基吡唑[1,5-a ]嘧啶
Figure 02_image362
步驟18c的具體方式：向2-乙基-3-硝基吡唑并[1,5-a ]嘧啶-5(4H )-酮 (5 g，24 mol)的三氯氧磷 (30 ml)溶液中加入N ,N -二甲基苯胺 (4.4 g，36 mol)，反應加熱至90℃反應2h。將反應液冷卻至室溫，並將其濃縮，加水淬滅，並用乙酸乙酯(100 ml)萃取，有機相分別用1 M碳酸氫鈉溶液(40 ml)洗滌，飽和食鹽水(40 ml)洗滌，乾燥，過濾濃縮得黃色固體5-氯-2-乙基-3-硝基吡唑[1,5-a]嘧啶(4.5 g)。
步驟18d：製備5-氯-2-乙基吡唑[1,5-a ]嘧啶-3-胺
Figure 02_image364
步驟18d的具體方式：向5-氯-2-乙基-3-硝基吡唑[1,5-a ]嘧啶(4.5 g，13 mmol) 的乙醇溶液 (40 mL)中加入鐵粉 (1.1 g，26.4 mmol)和飽和氯化銨溶液(20 ml)。將反應液加熱至45℃，反應2小時後過濾濃縮。殘留物用乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，合併的有機相用飽和食鹽水洗滌，乾燥，濃縮得到粗產品。粗產品通過快速管柱層析純化得黃色固體5-氯-2-乙基吡唑[1,5-a]嘧啶-3-胺 (3 g)。
步驟18e：製備2-((5-氯-2-乙基吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image366
步驟18e的具體方式：零度下，氮氣氛圍中向5-氯-2-乙基吡唑[1,5-a ]嘧啶-3-胺(3.0 g，15 mmol) 的THF溶液 (30 mL)分批加入60% 氫化鈉 (1.2 g，30.1 mmol)。反應液在0℃下攪拌15分鐘後分批加入2-氯-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (4.3 g，18.4 mmol)。混合物在90℃下繼續反應6小時後冷卻至室溫，加水 (60 mL) 淬滅，用乙酸乙酯萃取 (30 mL×3)，合併的有機相用鹽水洗滌 (50 mL)，乾燥，過濾濃縮減壓濃縮得到粗產品。粗產品通過快速管柱層析純化得黃色固體2-((5-氯-2-乙基吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(600 mg)。
步驟18f：製備2-((5-氯-2-乙基吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image368
步驟18f的具體方式：零度下，氮氣氛圍中向2-((5-氯-2-乙基吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (600 mg，1.5 mmol) 的DMF溶液 (6 mL)加入碳酸銫 (733 mg，2.2 mmol)。反應液在室溫下攪拌十分鐘後加入碘乙烷 (305 mg，1.9 mmol)。混合物在室溫下繼續反應2小時後加水 (20 mL) 淬滅，用乙酸乙酯萃取 (20 mL×3)，合併的有機相用鹽水洗滌 (20 mL)，乾燥，過濾後減壓濃縮得到粗產品。粗產品通過快速管柱層析純化得黃色固體2-((5-氯-2-乙基吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(400 mg)。
步驟18g：製備2-((5-(2-(1,1-二氧化異噻唑烷-2-基)嘧啶-5-基)-2-乙基吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image370
步驟18g的具體方式：氮氣氛圍中，將2-((5-氯-2-乙基吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (122 mg，0.258 mmol) 和(2-(1,1-二氧化異噻唑烷-2-基)嘧啶-5-基)硼酸 (94 mg，0.388 mmol ) 按照實施例17步驟17h的方法製備得黃色固體2-((5-(2-(1,1-二氧化異噻唑烷-2-基)嘧啶-5-基)-2-乙基吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (108 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 9.27 (s, 2 H), 8.72 (d,J =7.6 Hz, 1 H), 8.16 (dd,J = 8.8, 5.6 Hz, 2 H), 7.26 (br. s., 1 H), 7.18 (t,J = 8.8 Hz, 2 H), 4.36-4.32 (m, 1 H), 4.13 (t,J = 6.4 Hz, 2 H), 3.95-3.83 (m, 1 H), 3.51 (t,J = 7.2 Hz, 2 H), 2.90 - 2.80 (m, 2 H), 2.59-2.54 (m, 2 H), 1.47 - 1.34 (m, 6 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 590。
實施例 19 ： 2-((6-(5-(1,1-二氧化異噻唑烷-2-基)吡嗪-2-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物19)
Figure 02_image372
步驟19a：製備2-(5-溴吡嗪-2-基)異噻唑烷1,1-二氧化物
Figure 02_image374
步驟19a的具體方式：氮氣氛圍中，將2,5-二溴吡嗪 (900 mg，3.82 mmol) 和3-氯丙烷-1-磺醯胺 (400 mg，2.54 mmol ) 按照實施例17步驟17f的方法製備得棕色固體2-(5-溴吡嗪-2-基)異噻唑烷1,1-二氧化物(364 mg)。
步驟19b：製備2-((6-(5-(1,1-二氧化異噻唑烷-2-基)吡嗪-2-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image376
步驟19b的具體方式：氮氣氛圍中，將2-(5-溴吡嗪-2-基)異噻唑烷1,1-二氧化物 (170 mg，0.614 mmol) 和(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)硼酸 (400 mg，0.921 mmol ) 按照實施例17步驟17h的方法製備得白色固體2-((6-(5-(1,1-二氧化異噻唑烷-2-基)吡嗪-2-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(74.8 mg)。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.76 (s, 1 H), 8.67 (s, 1 H), 8.52 (s, 1 H), 8.18-8.15 (m, 2 H), 7.84 (d,J = 9.2 Hz, 1 H), 7.74 (d,J = 9.2 Hz, 1 H), 7.20 (t,J = 8.4 Hz, 2 H), 4.35-4.26 (m, 1 H), 4.08-4.03 (m, 3 H), 3.48 (t,J = 7.2 Hz ,2 H), 2.81-2.76 (m, 2 H), 2.66-2.59 (m, 2 H), 1.44 (t,J = 7.2 Hz, 3 H)，1.38 (t,J = 7.6 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 589。
實施例 20 ：N -(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N -甲基甲磺醯胺(化合物20)
Figure 02_image378
步驟20a：製備N -(5-溴嘧啶-2-基)-N -甲基甲磺醯胺
Figure 02_image380
步驟20a的具體方式：氮氣氛圍中，將N -甲基甲磺醯胺 (77 mg，0.707 mmol) 和2,5-二溴嘧啶 (200 mg，0.848 mmol ) 按照實施例17步驟17f的方法製備得N -(5-溴嘧啶-2-基)-N -甲基甲磺醯胺 (114 mg)。
步驟20b：製備N -(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N -甲基甲磺醯胺
Figure 02_image382
步驟20b的具體方式：氮氣氛圍中，將N -(5-溴嘧啶-2-基)-N -甲基甲磺醯胺 (70 mg，0.263 mmol) 和(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)硼酸 (172 mg，0.395 mmol ) 按照實施例17步驟17h的方法製備得棕色固體N -(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N -甲基甲磺醯胺 (45 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 8.77 (s, 2 H), 8.16 (dd,J =8.8, 5.6 Hz, 2 H), 7.92 (br. s, 1 H), 7.80 (d,J =9.2 Hz, 1 H), 7.48 (dd,J =9.2, 1.2 Hz, 1 H), 7.19 (t,J =8.8 Hz, 2 H), 4.26 - 4.21 (m, 1 H), 4.10-4.05 (m, 1 H), 3.60 (s, 3 H), 3.53 (s, 3 H), 2.81 (q,J =7.6 Hz, 2 H), 1.44 (t,J =7.6 Hz, 3 H), 1.38 (t, J =7.2 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 577。
實施例 21 ：2-((5-(2-(1,1-二氧化-1,2-噻嗪烷-2-基)嘧啶-5-基)-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物21)
Figure 02_image384
步驟21a：製備2-(5-溴嘧啶-2-基)-1,2-噻嗪烷1,1-二氧化物
Figure 02_image386
步驟21a的具體方式：室溫下，氮氣氛圍中，將1,2-噻嗪烷1,1-二氧化物 (300 mg，2.22 mmol) 和2,5-二溴嘧啶 (792 mg，3.33 mmol) 按照實施例17步驟17f的方法製備得類棕色固體2-(5-溴嘧啶-2-基)-1,2-噻嗪烷1,1-二氧化物(500 mg)。
步驟21b：製備(2-(1,1-二氧化-1,2-噻嗪烷-2-基)嘧啶-5-基)硼酸
Figure 02_image388
步驟21b的具體方式：氮氣氛圍中，向2-(5-溴嘧啶-2-基)-1,2-噻嗪烷1,1-二氧化物 (200 mg，0.68 mmol) 和聯硼酸頻那醇酯(191 mg，0.75mmol ) 按照實施例17步驟17g的方法製備得到(2-(1,1-二氧化-1,2-噻嗪烷-2-基)嘧啶-5-基)硼酸(176 mg)。
步驟21c：製備2-((5-(2-(1,1-二氧化-1,2-噻嗪烷-2-基)嘧啶-5-基)-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image390
步驟21c的具體方式：氮氣氛圍中，將(2-(1,1-二氧化-1,2-噻嗪烷-2-基)嘧啶-5-基)硼酸(175 mg，0.68 mmol) 和2-((5-溴-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (320 mg，0.68 mmol ) 按照實施例17步驟17h的方法製備得類白色固體2-((5-(2-(1,1-二氧化-1,2-噻嗪烷-2-基)嘧啶-5-基)-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (60 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 9.30 (s, 2 H), 8.22 (d,J = 9.2 Hz, 1 H), 8.12 (dd,J = 8.4, 5.2 Hz, 2 H), 7.72 (d,J = 9.2 Hz, 1 H), 7.19-7.15 (m, 2 H), 4.63 - 4.49 (m, 1 H), 4.44 (q,J = 7.2 Hz, 2 H), 4.38 - 4.32 (m, 2 H), 3.93-3.89 (m, 1 H), 3.39 - 3.30 (m, 2 H), 2.38 - 2.30 (m, 2 H), 1.89 - 1.80 (m, 2 H), 1.68 (t,J = 7.2 Hz, 3 H), 1.47 (t,J = 7.2 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 604。
實施例 22 ： N -(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-2-羥基乙-1-磺醯胺(化合物22)
Figure 02_image392
步驟22a：製備2-(苄氧基)乙-1-磺酸
Figure 02_image394
步驟22a的具體方式：室溫下，在亞硫酸鈉(3.62 g，28.67 mmol)的水溶液(170 mL)中加入((2-溴乙氧基)甲基)苯(5 g，23.36 mmol)。將混合物在100℃下攪拌6小時，濃縮得到白色固體。然後向白色固體中加入甲醇(170 mL)，將混合物加熱至50 ℃攪拌20分鐘，過濾，濾液濃縮得白色固體2-(苄氧基)乙-1-磺酸(6.8 g)。
步驟22b：製備2-(苄氧基)乙-1-磺醯氯
Figure 02_image396
步驟22b的具體方式：室溫下，氮氣氛圍中，將DMF (163 mg，2.3 mmol) 和氯化亞碸(5.1 mL，90.81 mmol)加入到2-(苄氧基)乙-1-磺酸(5.0 g，23.14 mmol)的四氫呋喃溶液 (20 mL)中。將混合物在65℃下攪5小時。過濾，濾液濃縮得黃色油狀2-(苄氧基)乙-1-磺醯氯(5.6 g)。
步驟22c：製備2-(苄氧基)-N -(5-溴嘧啶-2-基)乙-1-磺醯胺
Figure 02_image398
步驟22c的具體方式：室溫下，將5-溴吡啶-2-胺 (6.0 g，34.69 mmol)和三乙胺 (6.4 mL，46.15 mmol)加入到2-(苄氧基)乙-1-磺醯氯(5.4 g，23.08 mmol)的四氫呋喃溶液(50 mL)中，加熱至80℃攪拌反應10小時。冷卻後，加水稀釋 (50 mL)。水相用乙酸乙酯萃取 (80 mL×3)，將合併的有機相用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮得粗產品。粗產品通過快速管柱層析純化得白色固體2-(苄氧基)-N -(5-溴嘧啶-2-基)乙-1-磺醯胺 (560 mg)。
步驟22d：製備2-(苄氧基)-N -(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙-1-磺醯胺
Figure 02_image400
步驟22d的具體方式：氮氣氛圍中，將(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)硼酸 (985 mg，2.26 mmol) 和2-(苄氧基)-N -(5-溴嘧啶-2-基)乙-1-磺醯胺 (371 mg，1.51 mmol ) 按照實施例17步驟17h的方法製備得棕色固體2-(苄氧基)-N -(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙-1-磺醯胺 (530 mg)。
步驟22e：製備N -(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-2-羥基乙-1-磺醯胺
Figure 02_image402
步驟22e的具體方式：向2-(苄氧基)-N -(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙-1-磺醯胺 (530 mg，0.777 mmol) 加入三氟乙酸 (5 mL)。混合物在微波中加熱到90 ℃後攪拌1小時。然後用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至8~9，用乙酸乙酯萃取 (10 mL×3)。將合併的有機相用飽和食鹽水(10 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得棕色固體N -(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)胺基)-2-乙基咪唑并[1,2-a ]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-2-羥基乙-1-磺醯胺(25.6 mg)。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ): δ 8.82 (s, 2 H), 8.17-8.13 (m, 2 H), 7.95 (br. s, 1 H), 7.81 (d,J = 9.2 Hz, 1 H), 7.47 (d,J = 9.2 Hz, 1 H), 7.19 (t,J = 8.4 Hz, 2 H), 4.27-4.18 (m, 1 H), 4.12-4.06 (m, 3 H), 3.86-3.85 (m, 2 H), 2.81 (q,J = 7.2 Hz, 2 H), 1.44 (t,J = 7.2 Hz, 3 H), 1.39 (t,J = 7.2 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 593。
實施例 23 ： 2-(乙基(2-乙基-5-(2-(3-羥基氮雜環丁-1-基)嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物23)
Figure 02_image404
步驟23a：製備1-(5-溴嘧啶-2-基)氮雜環丁烷-3-醇
Figure 02_image406
步驟23a的具體方式：室溫下，在2,5-二溴嘧啶 (440 mg，1.85 mmol) 的DMF (5 mL) 溶液中加入氮雜環丁烷-3-醇 (149 mg，2.03 mmol) 和碳酸鉀(511 mg，3.7mmol)。將混合物在80℃下攪拌1h。加入50 mL水，過濾，濾餅旋乾得類白色固體1-(5-溴嘧啶-2-基)氮雜環丁烷-3-醇(360 mg)。
步驟23b：製備(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)嘧啶-5-基)硼酸
Figure 02_image408
步驟23b的具體方式：氮氣氛圍中，將1-(5-溴嘧啶-2-基)氮雜環丁烷-3-醇 (100 mg，0.43 mmol) 和聯硼酸頻那醇酯 (121 mg，0.48 mmol ) 按照實施例17步驟17g的方法製備得到(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)嘧啶-5-基)硼酸 (85 mg)。
步驟23c：製備2-(乙基(2-乙基-5-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image410
步驟23c的具體方式：氮氣氛圍中，將(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)嘧啶-5-基)硼酸 (85 mg，0.43 mmol) 和2-((5-溴-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (205 mg，0.43 mmol ) 按照實施例17步驟17h的方法製備得白色固體2-(乙基(2-乙基-5-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(38 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 9.02 (s, 2 H), 8.14-8.11 (m, 3 H), 7.64 (d,J = 9.2 Hz, 1 H), 7.20-7.15 (m, 2 H), 4.86-4.82 (m, 1 H), 4.51-4.47 (m, 2 H), 4.42 (q,J = 7.2 Hz, 2 H), 4.11-4.08 (m, 2 H), 3.91-3.87 (m, 1 H), 2.28-2.24 (m, 1 H), 1.67 (t,J = 7.2 Hz, 3 H), 1.48 (t,J = 7.2 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 542。
實施例 24 ： 2-(乙基(2-乙基-5-(2-(3-(羥甲基)氮雜環丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物24)
Figure 02_image412
步驟24a：製備(1-(5-溴嘧啶-2-基)氮雜環丁烷-3-基)甲醇
Figure 02_image414
步驟24a的具體方式：室溫下，向5-溴-2-氯嘧啶 (500 mg，2.58 mmol) 的DMF溶液 (5 mL)中加入氮雜環丁烷-3-基甲醇鹽酸鹽 (368 mg，2.97 mmol)和三乙胺 (1.1 mL，7.75 mmol)。將混合物在60℃下攪拌4小時。冷卻後，將反應液濃縮，加水稀釋 (60 mL)。水相用乙酸乙酯萃取 (20 mL×3)，將合併的有機相用飽和食鹽水(30 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮。粗品用快速管柱層析法分離純化得黃色固體(1-(5-溴嘧啶-2-基)氮雜環丁烷-3-基)甲醇 (618 mg)。
步驟24b：製備(2-(3-(羥甲基)氮雜環丁烷-1-基)嘧啶-5-基)硼酸
Figure 02_image416
步驟24b的具體方式：將(1-(5-溴嘧啶-2-基)氮雜環丁烷-3-基)甲醇 (500 mg，1.70 mmol)和聯硼酸頻那醇酯 (781 mg，2.21 mmol) 按照實施例17步驟17g的方法製備得(2-(3-(羥甲基)氮雜環丁烷-1-基)嘧啶-5-基)硼酸 (529 mg)。
步驟24c：製備2-(乙基(2-乙基-5-(2-(3-(羥甲基)氮雜環丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image418
步驟24c的具體方式：將2-((5-溴-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (100 mg，0.21 mmol)和(2-(3-(羥甲基)氮雜環丁烷-1-基)嘧啶-5-基)硼酸 (133 mg，0.32 mmol) 按照實施例17步驟17h的方法製備得白色固體2-(乙基(2-乙基-5-(2-(3-(羥甲基)氮雜環丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (40 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 9.00 (s, 2 H), 8.13-8.10 (m, 3 H), 7.62 (d,J = 8.8 Hz, 1 H), 7.16 (m, 2 H), 4.65-3.76 (m, 10 H), 2.95 (br. s., 1 H), 1.41-1.69 (m, 6 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 556。
實施例 25 ： 1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)胺基)-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-5-基)嘧啶-2-基)氮雜環丁烷-3-基乙酸酯(化合物25)
Figure 02_image420
步驟25a：製備1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)胺基)-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-5-基)嘧啶-2-基)氮雜環丁烷-3-基乙酸酯
Figure 02_image422
步驟25a的具體方式：將2-(乙基(2-乙基-5-(2-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (200 mg，0.37 mmol) 和三乙胺 (112 mg，1.11 mmol)的二氯甲烷 (3 mL)溶液中，氮氣保護下，在0℃條件下加入乙醯氯 (58 mg，0.74 mmol)。混合物在室溫下攪拌1小時後加水(20 mL)稀釋，並用二氯甲烷(30 mL×2)萃取。將合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到粗產品，管柱層析純化得類白色固體1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)胺基)-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-5-基)嘧啶-2-基)氮雜環丁烷-3-基乙酸酯(100 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 9.02 (s, 2 H), 8.18 - 8.09 (m, 3 H), 7.64 (d,J = 9.3 Hz, 1 H), 7.20 - 7.14 (m, 2 H), 5.38-5,34 (m, 1 H), 4.57 - 4.52 (m, 3 H), 4.41 (q,J = 7.1 Hz, 2 H), 4.19 - 4.15 (m, 2 H), 3.90 - 3.86 (m, 1 H), 2.14 (s, 3 H), 1.66 (t,J = 7.4 Hz, 3 H), 1.47 (t,J = 7.1 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 584。
實施例 26 ： 2-(乙基(2-乙基-5-(2-(4-羥基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物26)
Figure 02_image424
步驟26a：製備1-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-4-醇
Figure 02_image426
步驟26a的具體方式：將2,5-二溴嘧啶 (440 mg，1.85 mmol)，4-羥基哌啶 (206 mg，2.03 mmol) 和碳酸鉀(511 mg，3.7mmol)按照實施例23步驟23a的方法製備得類白色固體1-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-4-醇(350 mg)。
步驟26b：製備(2-(4-羥基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)硼酸
Figure 02_image428
步驟26b的具體方式：氮氣氛圍中，將1-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-4-醇 (110 mg，0.43 mmol) 和聯硼酸頻那醇酯 (130 mg，0.51 mmol )按照實施例23步驟23b的方法製備得到(2-(4-羥基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)硼酸 (95 mg)。
步驟26c：製備2-(乙基(2-乙基-5-(2-(4-羥基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image430
步驟26c的具體方式：氮氣氛圍中，將(2-(4-羥基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)硼酸(95 mg，0.43 mmol) 和2-((5-溴-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(205 mg，0.43 mmol) 按照實施例23步驟23c的方法製備得類白色固體2-(乙基(2-乙基-5-(2-(4-羥基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(50 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 9.00 (s, 2 H), 8.17 - 8.07 (m, 3 H), 7.64 (d,J = 9.3 Hz, 1 H), 7.19 - 7.15 (m, 2 H), 4.55 - 4.35 (m, 5 H), 4.03 - 3.85 (m, 2 H), 3.47 - 3.41 (m, 2 H), 2.00 - 1.95 (m, 2 H), 1.66 (t,J = 7.2 Hz, 3 H), 1.59 - 1.52 (m, 2 H), 1.47 (t,J = 7.2 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 570。
實施例 27 ： (S )-2-(乙基(2-乙基-5-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物27)
Figure 02_image432
步驟27a：製備(S )-1-(5-溴嘧啶-2-基)吡咯烷-3-醇
Figure 02_image434
步驟27a的具體方式：室溫下，將2,5-二溴嘧啶(1 g，4.2 mmol)的DMF溶液(8 mL)中加入(S )-吡咯烷-3-醇(0.4 g，4.7 mmol)按照實施例23步驟23a的方法製備得到白色固體(S )-1-(5-溴嘧啶-2-基)吡咯烷-3-醇(800 mg)。
步驟27b：製備(S )-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)嘧啶-5-基)硼酸
Figure 02_image436
步驟27b的具體方式：氮氣氛圍中，將(S )-1-(5-溴嘧啶-2-基)吡咯烷-3-醇(200 mg，0.82 mmol )和聯硼酸頻那醇酯(230 mg，0.9 mmol)按照實施例23步驟23b的方法製備得黑色固體(S )-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)嘧啶-5-基)硼酸 (400 mg)。
步驟27c：製備(S )-2-(乙基(2-乙基-5-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image438
步驟27c的具體方式：氮氣氛圍中，將(S )-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)嘧啶-5-基)硼酸 (200 mg，0.96 mmol) 和2-((5-溴-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (200 mg，0.42 mmol ) 按照實施例23步驟23c的方法製備得白色固體(S )-2-(乙基(2-乙基-5-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (100 mg)。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ): δ 9.04 (br. s, 2 H), 8.16-8.11 (m, 3 H), 7.65 (d,J = 8.8 Hz, 1 H), 7.19 (t,J = 8.8 Hz, 2 H), 4.66 (s, 1 H), 4.61-4.45 (m, 1H), 4.44 - 4.39 (m, 2 H), 4.01-3.92 (m, 1H), 3.85-3.81 (m, 2 H), 3.78-3.73 (m, 2 H), 2.24 - 2.10 (m, 2 H), 1.78 (d,J = 2.8 Hz, 1 H), 1.68 (t,J = 7.2 Hz, 3 H), 1.49 (t,J = 7.2 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 556。
實施例 28 ： (R )-2-(乙基(2-乙基-5-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物28)
Figure 02_image440
步驟28a：製備(R )-1-(5-溴嘧啶-2-基)吡咯烷-3-醇
Figure 02_image442
步驟28a的具體方式：室溫下，將5-溴-2-氯嘧啶 (500 mg，2.10 mmol) 和(R )-吡咯烷-3-醇 (210 mg，2.42 mmol) 按照實施例23步驟23a的方法製備得白色固體(R )-1-(5-溴嘧啶-2-基)吡咯烷-3-醇 (472 mg)。
步驟28b：製備(R )-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)嘧啶-5-基)硼酸
Figure 02_image444
步驟28b的具體方式：將(R )-1-(5-溴嘧啶-2-基)吡咯烷-3-醇 (200 mg，0.82 mmol) 和聯硼酸頻那醇酯 (312 mg，1.23 mmol) 按照實施例23步驟23b的方法製備得(R )-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)嘧啶-5-基)硼酸 (171 mg)。
步驟28c：製備(R )-2-(乙基(2-乙基-5-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image446
步驟28c的具體方式：將2-((5-溴-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (100 mg，0.21 mmol)和(R )-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)嘧啶-5-基)硼酸 (67 mg，0.32 mmol) 按照實施例23步驟23c的方法製備得白色固體(R )-2-(乙基(2-乙基-5-(2-(3-羥基吡咯烷-1-基)嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (56 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 9.03 (s, 2 H), 8.25 - 7.98 (m, 3 H), 7.64 (d,J = 9.0 Hz, 1 H), 7.17 (t,J = 8.4 Hz, 2 H), 4.65 (br. s., 1 H), 4.53 (br. s., 1 H), 4.40 (d,J = 7.0 Hz, 2 H), 3.90 - 3.64 (m, 5 H), 2.19 - 2.05 (m, 2 H), 1.67 (t,J = 7.1 Hz, 3 H), 1.47 (t,J = 7.1 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 556。
實施例 29 ： 2-(乙基(2-乙基-5-(2-嗎啉基嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(化合物29)
Figure 02_image448
步驟29a：製備4-(5-溴嘧啶-2-基)嗎啉
Figure 02_image450
步驟29a的具體方式：室溫下，將5-溴-2-氯嘧啶 (500 mg，2.10 mmol) 和嗎啉 (200 mg，2.3 mmol) 按照實施例23步驟23a的方法製備得白色固體4-(5-溴嘧啶-2-基)嗎啉 (400 mg)。
步驟29b：製備(2-嗎啉基嘧啶-5-基)硼酸
Figure 02_image452
步驟29b的具體方式：將(4-(5-溴嘧啶-2-基)嗎啉 (200 mg，0.82 mmol) 和聯硼酸頻那醇酯 (312 mg，1.23 mmol) 按照實施例23步驟23b的方法製備得(2-嗎啉基嘧啶-5-基)硼酸 (180 mg)。
步驟29c：製備2-(乙基(2-乙基-5-(2-嗎啉基嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈
Figure 02_image454
步驟29c的具體方式：將2-((5-溴-2-乙基-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)(乙基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (100 mg，0.21 mmol) 和(2-嗎啉基嘧啶-5-基)硼酸 (84 mg，0.40 mmol) 按照實施例23步驟23c的方法製備得白色固體2-(乙基(2-乙基-5-(2-嗎啉基嘧啶-5-基)-2H -吡唑并[4,3-b ]吡啶-3-基)胺基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈 (60 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 9.03 (s, 2 H), 8.15 –8.11 (m, 3 H), 7.64 (d,J = 9.2 Hz, 1 H), 7.17 (t,J = 8.4 Hz, 2 H), 4.40 (q,J = 7.2 Hz, 2 H), 3.91-3.88 (m., 5 H), 3.79-3.77 (m,5 H), 1.66 (t,J = 7.2 Hz, 3 H), 1.47 (t,J = 7.2 Hz, 3 H)。
MS實測值(ESI+ )[(M+H)+ ]: 556。
以下具體描述了生物學實施資料，以進一步闡述本發明技術方案。
實驗例 1 ：ATX酶活性抑制試驗
實驗步驟：
受試化合物用DMSO溶解成20 mM儲備液，用DMSO進行4倍梯度稀釋，起始濃度為20 μM，共8個濃度梯度。使用Echo550儀器將20 nL稀釋後的化合物轉移到384-孔板，並向孔中加入5 μL使用4×Tris-HCl反應緩衝液配置的ATX酶溶液，然後將384-孔板1000 rpm離心1分鐘並在室溫預孵育15分鐘。隨後向每孔加入5 μL的上述4×反應緩衝液配製的16:0-LPC和10 μL使用同樣反應緩衝液配置的含有2×Amplex UltraRed試劑、膽鹼氧化酶和辣根過氧化物酶(HRP)的檢測液，然後將384-孔板1000 rpm離心1分鐘。使用Synergy 2儀器讀取激發光530nm，發射光590nm的螢光信號。根據螢光比值計算化合物對酶反應的抑制率，用GraphPad Prism 5軟體分析計算出化合物的IC50 。
檢測結果：
按上述方法測定本發明的實施例1至實施例29所涉及的化合物以及GLPG-1690對於抑制ATX的活性，結果總結在表3中。
表3：實施例化合物的活性資料
實施例 IC50 (μM) 實施例 IC50 (μM)
1 0.030 2 0.029
3 0.0052 4 0.021
5 0.048 6 0.029
7 0.025 8 0.0044
9 0.028 10 0.018
11 0.025 12 0.019
13 0.013 14 0.042
15 0.040 16 0.039
17 0.0074 18 0.015
19 0.017 20 0.045
21 0.011 23 0.011
24 0.011 25 0.012
26 0.0055 27 0.0046
28 0.0038 29 0.023
GLPG1690 0.112    
結論：由表3可知，本發明中的實施例化合物對ATX酶抑制活性均優於GLPG1690。
實驗例 2 ：大鼠藥代動力學試驗
對本發明中多個實施例的化合物進行SD大鼠的代謝動力學實驗，分別採取單次靜脈注射 (IV，劑量2mg/kg) 和單次口服給藥 (PO，劑量10mg/kg)，分別於給藥前及給藥後5分鐘、15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、4小時、8小時、12小時和24小時採血測定血漿中待測化合物的濃度。對照化合物及本發明中實施例17、26、28和29在大鼠血漿中的藥代動力學資料如表4-8所示。
結果顯示，實施例17、26、28和29在大鼠中單次靜脈注射和單次口服給藥後的體內暴露量均高於GLPG1690，且清除率更低。
表4：對照化合物GLPG1690的大鼠體內PK參數
  IV (2 mg/kg) PO (10 mg/kg)
Tmax (h) / 1.0
Cmax (ng/mL) 8337 512
AUClast (ng/mL*h) 4460 2675
AUCINF (ng/mL*h) 4465 2699
t1/2 (h) 1.5 4.0
Cl_F_pred (L/h/kg) 0.45 3.93
F 12%
表5：實施例17化合物的大鼠體內PK參數
  IV (2 mg/kg) PO (10 mg/kg)
Tmax (h) / 4.0
Cmax (ng/mL) 2541 1028
AUClast (ng/mL*h) 4683 9027
AUCINF (ng/mL*h) 4725 9178
t1/2 (h) 4.0 3.7
Cl_F_pred (L/h/kg) 0.43 1.09
F 38.5%
表6：實施例26化合物的大鼠體內PK參數
  IV (2 mg/kg) PO (10 mg/kg)
Tmax (h) / 4.0
Cmax (ng/mL) 3070 663
AUClast (ng/mL*h) 7504 6227
AUCINF (ng/mL*h) 8169 6724
t1/2 (h) 9.3 5.8
Cl_F_pred (L/h/kg) 0.25 1.5
F 16.6%
表7：實施例28化合物的大鼠體內PK參數
  IV (2 mg/kg) PO (10 mg/kg)
Tmax (h) / 4.0
Cmax (ng/mL) 4377 1718
AUClast (ng/mL*h) 13935 18035
AUCINF (ng/mL*h) 14136 18583
t1/2 (h) 4.1 4.2
Cl_F_pred (L/h/kg) 0.14 0.6
F 25.9%
表8：實施例29化合物的大鼠體內PK參數
  IV (2 mg/kg) PO (10 mg/kg)
Tmax (h) / 3.3
Cmax (ng/mL) 3476 847
AUClast (ng/mL*h) 6835 7784
AUCINF (ng/mL*h) 7220 9148
t1/2 (h) 8.2 9.2
Cl_F_pred (L/h/kg) 0.29 1.1
F 11.2%
實驗例 3 ： 中國倉鼠卵巢細胞體外微核試驗
考察實施例26化合物和GLPG1690在加或不加外源性代謝活化系統(β-萘黃酮和苯巴比妥誘導的大鼠肝臟S9)條件下誘導中國倉鼠卵巢細胞(CHO-WBL)形成微核的能力，評價其致染色體斷裂/誘導非整倍體的潛力。
微核主試驗將CHO-WBL細胞暴露於受試物的至少3個濃度下，同時設立溶媒和陽性對照，每個劑量組均設2孔細胞。在非活化測試系統中，給藥時間為3和24小時，在S9活化測試系統中，受試物暴露時間為3小時。
受試物測試的上限取決於它在培養基中的溶解度，但總的來說不會超過最大濃度1 mM 或0.5 mg/mL，取較低者。選擇微核頻率分析的最高劑量時，該受試物劑量組與相應溶媒對照組相比細胞毒性應不超過50%太多。若最高濃度不受限於細胞毒性，為了達到培養基中溶解度上限，可以測試多個含有可見沉澱的劑量，且選作微核分析的最高劑量組培養基中可見少量可識別的沉澱。
在試驗有效前提下，根據以下標準評估試驗結果：
1. 陽性
若受試物同時滿足以下標準，可認為該受試物為陽性： 在一個或多個濃度組中觀察到微核細胞頻率顯著性增加。 在一個或多個濃度組中觀察到微核細胞頻率超出試驗室陰性歷史資料範圍。 微核頻率的增加具有劑量效應關係。
2. 陰性
若以上三點均不符合，可認為該受試物為陰性。
代謝活化給藥 3 小時系列 非代謝活化給藥 3 小時系列
  % 含微核的雙核細胞   % 含微核的雙核細胞
劑量(μg/ml) 0 劑量(μg/ml) 0
DMSO(陰性對照) 1.85 DMSO(陰性對照) 1.75
劑量(μg/ml) 5 劑量(μg/ml) 0.3
環磷醯胺一水合物(陽性對照，%含微核的雙核細胞) 20.8 絲裂黴素C(陽性對照，%含微核的雙核細胞) 11.85
實施例26劑量(μg/ml) 3 6 12 20 實施例26劑量(μg/ml) 3 6 12 25
實施例26結果(%含微核的雙核細胞) 1.65 1.65 1.75 1.60 實施例26結果(%含微核的雙核細胞) 1.85 1.80 1.70 1.50
GLPG1690劑量(μg/ml) 2 5 10 30 GLPG1690劑量(μg/ml) 2 5 10 30
GLPG1690結果(%含微核的雙核細胞) 1.55 1.65 1.70 1.85 GLPG1690結果(%含微核的雙核細胞) 1.90 1.85 1.65 1.85
非代謝活化給藥 24 小時系列 非代謝活化給藥 24 小時系列
  % 含微核的雙核細胞   % 含微核的雙核細胞
劑量(μg/ml) 0 劑量(μg/ml) 0
DMSO (陰性對照) 1.85 DMSO (陰性對照) 1.85
劑量(μg/ml) 0.1 劑量(μg/ml) 0.1
絲裂黴素C (陽性對照，% 含微核的雙核細胞) 19.5 絲裂黴素C (陽性對照，% 含微核的雙核細胞) 22.8
實施例26劑量(μg/ml) 1 3 6 9 GLPG1690劑量(μg/ml) 2 4 6 7 8
實施例26結果(% 含微核的雙核細胞) 1.90 1.65 1.85 1.80 GLPG1690結果(% 含微核的雙核細胞) 1.95 1.65 1.60 4.85 14.4
與平行溶媒對照組相比，實施例26化合物各給藥系列中所分析的濃度含有微核的雙核細胞頻率未見顯著增加。也未見微核率有劑量效應關係。而陽性對照(環磷醯胺一水合物和絲裂黴素C)含有微核的雙核細胞頻率均顯著增加，證明了實驗系統的有效性。實施例26化合物在CHO-WBL細胞中誘導微核細胞的潛能為陰性。
與平行溶媒對照組相比，GLPG1690在非代謝活化給藥24小時系列中所分析的AKEX0070濃度為7和8 µg/mL時含有微核的雙核細胞頻率顯著增加，且可見微核率增加有劑量效應關係。而陽性對照(環磷醯胺一水合物和絲裂黴素C)含有微核的雙核細胞頻率均顯著增加，證明了實驗系統的有效性。GLPG1690在CHO-WBL細胞中誘導微核細胞的潛能為陽性。
基於以上結果，GLPG1690具有遺傳毒性，實施例26化合物具有比GLPG1690更優的安全性。
實驗例 4 ： CYP抑制試驗
CYP450酶單濃度點抑制試驗：用體系為320 μL的人肝微粒體(對於3A4亞型，終濃度為0.05 mg/mL)進行直接抑制溫孵，體系含NADPH(終濃度1.3 mM)、10 μM化合物、陽性抑制劑(酮康唑0.1 μM)、陰性對照(0.1%DMSO的BPS)和混合探針受質(咪達唑侖5 μM)，溫孵5 min後終止反應。通過測定代謝物的相對生成量計算酶相對活性。
按上述方法，對照化合物GLPG1690及本發明中實施例17、23、26、27化合物在10μM下CYP450酶單點抑制資料如下表所示。結果顯示，實施例17、23、26、27對3A4亞型的抑制活性低於GLPG1690，臨床中藥物-藥物相互作用的風險更低。
化合物 3A4亞型
GLPG1690 73.5
實施例17 18.6
實施例23 39.0
實施例26 31.1
實施例27 47.7
實驗例 5 ： hERG抑制試驗
快速啟動人延遲整流外向鉀電流(IKr )主要由hERG離子通道媒介，參與人類心肌細胞複極化。藥物阻斷這一電流將導致臨床上出現QT間期延長症候群，易誘發急性心律失常甚至猝死。本研究應用手動膜片鉗的方法在轉染hERG鉀通道的穩定細胞株上測試多個實施例化合物對hERG鉀電流的作用，從而確定受試物是否對hERG離子通道具有抑制作用。
實驗方法：採用全細胞膜片鉗技術記錄hERG 電流。取細胞懸液加於小培養皿中，置於倒置顯微鏡載物臺上。待細胞貼壁後，用細胞外液灌流，推薦流速為1–2 mL/min。玻璃微電極由微電極拉制儀兩步拉制，充灌電極內液後其入水電阻值為2-5 MΩ。建立全細胞記錄模式後，保持鉗制電位為-80 mV。給予去極化電壓至+60 mV持續850 ms，然後複極化至-50 mV維持1275 ms引出hERG尾電流。這樣一組脈衝程序每15秒鐘重複一次，貫穿整個實驗。電流穩定後採用從低濃度到高濃度胞外連續灌流給藥的方式。從低濃度開始，持續灌流至藥效穩定，然後進行下一濃度的灌流。本實驗將分別測試各濃度供試品和陽性對照對hERG尾電流的阻斷效應(N≥2)。隨後通過PatchMaster軟體進行刺激發放及信號採集；膜片鉗放大器放大信號。使用FitMaster，EXCEL，Graphpad Prism和SPSS 21.0等進行進一步資料分析和曲線擬合。在數據處理中，判斷對hERG的阻斷效應時，將尾電流的峰值和其基線進行校正。用尾流的抑制率(inhibition rate，IR)表示不同濃度下各化合物的作用。 IR=100%×(給藥前尾電流峰值-給藥後尾電流峰值)/給藥前尾電流峰值。 IC50 數值由Hill方程進行擬合所得(如果適用)，若受試物所有濃度的最大抑制率小於50%，則不計算IC50 數值。
Figure 02_image456
，其中： y：I/Icontrol ；max：為100%；min：為0%；[drug]：供試品濃度；nH ：Hill斜率；IC50 ：測試物的最大半數抑制濃度
按上述方法，對照化合物及本發明中實施例17、26、27和29對hERG電流抑制作用的IC50 數據如下表所示。結果顯示，對照化合物GLPG1690和實施例17、26、27和29對hERG電流抑制作用均大於30 μM，均無抑制作用。
化合物 hERG IC50 [μM]
GLPG1690 ＞30
實施例17 ＞30
實施例26 ＞30
實施例27 ＞30
實施例29 ＞30
實驗例 6 ： 3A4時間依賴性抑制試驗
CYP450酶3A4亞型睾酮受質時間依賴性抑制實驗(IC50 shift)：用體系為100 μL的人肝微粒體(終濃度為0.2 mg/mL)加或不加NADPH預孵育30 min後再補加20 μL NADPH進行抑制溫孵，體系NADPH終濃度1.3 mM。化合物系列濃度從100 μM起始，3倍稀釋共8個濃度點(包含0濃度點)。陽性抑制劑為米非司酮，系列濃度從10 μM起始，3倍稀釋共8個濃度點(包含0濃度點)。探針受質為睾酮，濃度50 μM。體系溫孵10 min後終止反應。通過測定代謝物的相對生成量計算化合物對酶抑制率的IC50 ，通過加與不加NADPH孵育組的IC50 結果計算IC50 shift值。
按上述方法，本發明中實施例4、17、23、26、27、28和29化合物對CYP450酶3A4時間依懶性抑制數據如下表所示。結果顯示，實施例4、17、23、26、27、28和29化合物對CYP3A4的時間依賴性抑制作用均弱於GLPG1690，臨床中藥物-藥物相互作用的風險更低。
化合物 IC50 shift
實施例4 1.04
實施例17 IC50 ＞100 μM/ IC50 ＞ 100μM
實施例23 IC50 ＞100 μM/ IC50 ＞ 100μM
實施例26 1.09
實施例27 0.63
實施例28 1.28
實施例29 IC50 ＞100 μM/ IC50 ＞ 100μM
GLPG1690 1.64
進一步地，本領域技術人員理解，前述涉及的式I’、式I、式I-1、式II、式II-1、式III或式III-1所示化合物、式I’、式I、式I-1、式II、式II-1、式III或式III-1所示化合物不同的實現方式以及式I’、式I、式I-1、式II、式II-1、式III或式III-1所示化合物的具體實施例所涉及的全部化合物，均可以被製成對應的異構體、溶劑化物、水合物、前藥、穩定的同位素衍生物及藥學上可接受的鹽。優選地，所述化合物被製成藥學上可接受的衍生物，所述衍生物為前藥、鹽、酯、醯胺、酯類的鹽、醯胺類的鹽、代謝產物中的任一種。
進一步地，藥學上可接受的鹽包括通過用無機酸(例如鹽酸、氫溴酸、硫酸或者磷酸)，或者用有機酸(例如乙酸、丙酸、琥珀酸、苯甲酸、對胺基苯磺酸、2-乙醯氧基-苯甲酸、肉桂酸、苦杏仁酸、水楊酸、乙醇酸、乳酸、草酸、蘋果酸、馬來酸、丙二酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、對甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸或苯磺酸)使本發明涉及的任一化合物成鹽獲得的常規非毒性鹽。對於合適的藥用鹽的綜述可以參考Berge S.M等，J.Pharm.Sci.1977，66，1-19；Gould P.L.Int.J.Pharm 1986，33，201-277以及Bighley等，藥學技術百科全書，Marcel Dekker Inc，紐約1996，第13卷，第453-497頁。
進一步地，穩定的同位素衍生物，可以將同位素引入本發明涉及的任一化合物中，引入的同位素可以是2 H，3 H，13 C，14 C，15 N，17 O，18 O，31 P，32 P，35 S，18 F，36 Cl，具體的同位素衍生物可以通過常規技術製備。
進一步地，其作為實際產品還可以被製成片劑、膠囊劑、注射劑、顆粒劑、粉劑、栓劑、丸劑、乳膏劑、糊劑、凝膠劑散劑、口服溶液、吸入劑、混懸劑、乾懸劑、貼劑、洗劑中的任一種。
進一步地，在上述基礎上，還可以與以下任一物質形成混合物：藥學上可接受的載體或者輔劑或者賦形劑。
本發明所涉及的全部化合物及包含本發明化合物的混合物、組合物等，可以經任一給藥途徑給予到生物體內。給藥途徑可以是口服給藥，靜脈注射，肌肉注射，皮下注射，直腸給藥，陰道給藥，舌下含化，鼻腔吸入，口腔吸入，滴眼，也可局部或全身經皮給藥。
本發明所涉及的全部化合物及包含本發明化合物的混合物、組合物等，可以配製成單一劑量，其中含有本發明的活性化合物以及載體、賦形劑等，給藥劑型可以是片劑，膠囊劑，注射劑，顆粒劑，粉劑，栓劑，丸劑，乳膏劑，糊劑，凝膠劑，散劑，口服溶液，吸入劑，混懸劑，乾懸劑，貼劑，洗劑等。這些劑型中可以含有藥物製劑常用的成分，例如稀釋劑，吸收劑，潤濕劑，黏合劑，崩解劑，著色劑，pH調節劑，抗氧劑，抑菌劑，等滲調節劑，抗黏劑等。
上述各類劑型的合適配方可從公開途徑獲得，例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第21版，Lippincott Williams & Wilkins於2006年出版和Rowe, Raymond C. Handbook  of Pharmaceutical Excipients, Chicago, Pharmaceutical Press於2005年出版.因此本領域的技術人員可以容易的製備。
根據不同個體所患疾病的性質，強度，患者的年齡、性別、體重，給藥途徑等因素，可以選擇不同的給藥劑量，本發明的化合物的給藥劑量可以為每日0.01至500mg/kg，優選每日劑量為1-100mg/kg，可單次或多次給藥。
本領域技術人員理解，作為本發明的所涉及的全部化合物及包含本發明化合物的混合物、組合物等，其典型的應用為醫學應用，特別是用於預防或治療哺乳動物具有ATX表達增加的病理學特徵的疾病，具體的適應症如下：
癌症、纖維化疾病、代謝疾病、骨髓增生異常症候群、呼吸系統疾病、心血管疾病、自身免疫性疾病、炎症、皮膚學疾病、神經系統疾病或疼痛。
以上對本發明的具體實施例進行了描述。需要理解的是，本發明並不局限於上述特定實施方式，本領域技術人員可以在申請專利範圍內做出各種變形或修改，這並不影響本發明的實質內容。
Figure 110125107-A0101-11-0001-2
無。

Claims (25)

  1. 式I’化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，
    Figure 03_image003
    其中， n為0至5中的任一整數； 若存在，每一個R1 各自獨立地選自氫、氘、氰基、鹵素、胺基、羥基、-COOH、-CHO、-NO2 、C1-6 烷基胺基、C1-6 烷氧基和未取代或被選自氰基、胺基、羥基、鹵素、C1-6 烷基和C1-6 烷氧基的取代基所取代的C1-6 烷基、C3-7 環烷基和3-7元雜環烷基； R2 選自氫、氘、鹵素、氰基、胺基、羥基、-COOH、-CHO、-NO2 、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 烷基胺基、-C(=O)NH2 、-NH(C=O)CH3 和3-7元雜環烷基； R3 選自氫、氘、C1-6 烷基、C3-7 環烷基和被選自氰基、胺基、羥基、鹵素、C1-6 烷基和C1-6 烷氧基的取代基所取代的C1-6 烷基、C3-7 環烷基和3-7元雜環烷基； 環B為下列結構的任一種：
    Figure 03_image005
    、
    Figure 03_image007
    和
    Figure 03_image009
    ； R4 選自氫、氘、鹵素、氰基、羥基、胺基、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C1-6 烷基胺基、C3-7 環烷基和3-7元雜環烷基； X1 、X2 、X3 和X4 各自獨立地為N或CR5 ； R5 選自氫、氘、鹵素、C1-6 烷基和被選自氰基、胺基、羥基、鹵素、C1-6 烷基和C1-6 烷氧基的取代基所取代的C1-6 烷基、C3-7 環烷基和3-7元雜環烷基； 環A選自取代或未取代的C6-10 芳基和5-10元雜芳基，所述取代是被1至3個選自羥基、胺基、鹵素、氰基、C1-6 烷基、C1-6 鹵代烷基、C3-7 環烷基、3-7元雜環烷基、C1-6 烷基胺基、C1-6 烷氧基的取代基所取代； R6 為-L1 -L2 -W1 ； L1 選自化學鍵、C1-3 伸烷基、-O-、-C(=O)-、-C(=O)C(R8 )2 -、-C(=O)O-、-C(=O)NH-、-OC(=O)-、-NH-、-SO2 -、-NHSO2 -和-SO2 NH-；其中，R8 為氫或C1-6 烷基； L2 選自化學鍵、-O-、-C(=O)-、-C(=O)CH2 -、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-C(=O)NH-、-NR7 -、-NHCH2 -、-SO2 -、-NR7 SO2 -、-SO2 NR7 -、-C(=O)NR7 -和-NR7 C(=O)-；其中，R7 為氫或C1-6 烷基； W1 為取代或未取代的下列基團：氫、氘、胺基、氰基、C1-6 烷基、鹵素、羥基、C1-6 烷氧基、C1-6 烷基胺基、羧基、C6-10 芳基、5-10元雜芳基、C3-7 環烷基或3-7元雜環烷基；所述取代是被1或2個選自氧代、羥基、胺基、羥甲基、胺基甲基、氰基、C1-6 烷基、C1-6 烷基-C(=O)O-和鹵素的取代基所取代。
  2. 如請求項1化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於， n為0至2中的任一整數，優選n為1； 若存在，每一個R1 各自獨立地選自氫、氰基和鹵素，優選鹵素，更優選氟。
  3. 如請求項1或2所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，R2 為氰基。
  4. 如請求項1至3中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，R3 為C1-6 烷基，優選甲基或乙基。
  5. 如請求項1至4中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，環B為下列結構的任一種：
    Figure 03_image005
    、
    Figure 03_image007
    和
    Figure 03_image009
    ； X1 、X2 、X3 、X4 各自獨立地為N或CR5 ； R5 選自氫、氘、鹵素、甲基和鹵代甲基，優選氫； R4 選自氫、氘、甲基、乙基、異丙基和環丙基，優選乙基。
  6. 如請求項1至5中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於， 環A選自伸苯基、伸吡啶基、伸吡嗪基、伸噠嗪基、伸嘧啶基、伸吡唑基、伸咪唑基、伸噁唑基、伸異噁唑基、伸噻唑基、伸噻二唑基和伸噁二唑基； 優選地，環A選自下列結構的任一種：
    Figure 03_image030
    、
    Figure 03_image032
    、
    Figure 03_image034
    、
    Figure 03_image036
    、
    Figure 03_image038
    、
    Figure 03_image040
    、
    Figure 03_image042
    、
    Figure 03_image044
    、
    Figure 03_image046
    、
    Figure 03_image048
    、
    Figure 03_image050
    、
    Figure 03_image052
    、
    Figure 03_image054
    、
    Figure 03_image056
    、
    Figure 03_image058
    、
    Figure 03_image060
    、
    Figure 03_image062
    、
    Figure 03_image064
    、
    Figure 03_image066
    、
    Figure 03_image068
    和
    Figure 03_image070
    ， 更優選地，環A選自下列結構中的任一種：
    Figure 03_image030
    、
    Figure 03_image032
    、
    Figure 03_image034
    、
    Figure 03_image036
    、
    Figure 03_image038
    和
    Figure 03_image040
    。
  7. 如請求項6所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，環A被1至3個，優選1個取代基所取代，所述取代基各自獨立地選自羥基、胺基、鹵素、氰基和C1-6 烷基，優選鹵素和C1-6 烷基，更優選氟和甲基。
  8. 如請求項1至7中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，L1 選自化學鍵、-CH2 -、-CH(CH3 )-、-C(CH3 )2 -、-C(=O)-、-SO2 -、-C(=O)CH2 -和-C(=O)NH-，優選化學鍵、-CH2 -、-C(CH3 )2 -和-C(=O)CH2 -。
  9. 如請求項1至8中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，L2 選自化學鍵、-NH-、-C(=O)-、-SO2 -、-NHCH2 -、-C(=O)CH2 -、-C(=O)NH-、-NHSO2 -和-N(CH3 )SO2 -，優選化學鍵、-C(=O)-、-NHCH2 -、-C(=O)NH-、-NHSO2 -和-N(CH3 )SO2 -。
  10. 如請求項1至9中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，W1 為取代或未取代的下列基團：C1-6 烷基、C6-10 芳基、5-10元雜芳基、C3-7 環烷基或3-7元雜環烷基，所述取代是被1或2個選自氧代、羥基、胺基、羥甲基、胺基甲基、鹵素、氰基、C1-6 烷基-C(=O)O-和C1-6 烷基的取代基所取代。
  11. 如請求項10所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，W1 為未取代或被1或2個選自羥基、胺基、羥甲基、胺基甲基和C1-6 烷基-C(=O)O-的取代基所取代的C1-6 烷基、C3-7 環烷基或3-7元雜環烷基。
  12. 如請求項11所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，W1 為未取代或被1或2個選自羥基、胺基、羥甲基、胺基甲基和乙醯氧基的取代基所取代的下列基團：甲基、乙基、正丙基、異丙基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、吖丙啶基、吖丁啶基、四氫吡咯基、氧代吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、氧雜環丁基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、四氫吡喃基、1,1-二氧硫代嗎啉基、2-氮雜螺[3.3]庚基、1,1-二氧化異噻唑烷基或1,1-二氧化-1,2-噻嗪烷基，優選為甲基、氧代吡咯烷基、2-氮雜螺[3.3]庚基、1,1-二氧化異噻唑烷基、1,1-二氧化-1,2-噻嗪烷基或被選自羥基、羥甲基和乙醯氧基的取代基所取代的乙基、吖丁啶基、環丁基、四氫吡咯基或哌啶基。
  13. 如請求項1至12中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於， n為1； R1 為氟； R2 為氰基； R3 為甲基或乙基； 環B為下列結構的任一種：
    Figure 03_image005
    、
    Figure 03_image007
    和
    Figure 03_image009
    ； R4 為乙基； X1 、X2 、X3 和X4 各自獨立地為N或CH； 環A選自下列結構的任一種：
    Figure 03_image030
    、
    Figure 03_image032
    、
    Figure 03_image034
    、
    Figure 03_image036
    、
    Figure 03_image038
    和
    Figure 03_image040
    ； 環A未取代或被1個氟或甲基所取代； R6 為-L1 -L2 -W1 ， L1 選自化學鍵、-CH2 -、-C(CH3 )2 -和-C(=O)CH2 -； L2 選自化學鍵、-C(=O)-、-NHCH2 -、-C(=O)NH-、-NHSO2 -和-N(CH3 )SO2 -； W1 為下列基團中的任一種： CH3 -、
    Figure 03_image082
    、
    Figure 03_image084
    、
    Figure 03_image086
    、
    Figure 03_image088
    、
    Figure 03_image090
    、
    Figure 03_image092
    、
    Figure 03_image094
    、
    Figure 03_image096
    、
    Figure 03_image098
    、
    Figure 03_image100
    和
    Figure 03_image102
    。
  14. 如請求項1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，所述化合物為具備式I結構的化合物，
    Figure 03_image011
    其中，n、R1 、R2 、R3 、R4 、R6 、X1 、X2 、X3 和環A如請求項1所定義。
  15. 如請求項1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，所述化合物為具備式I-1結構的化合物
    Figure 03_image013
    其中，n、R1 、R2 、R3 、R4 、R6 和環A如請求項1所定義。
  16. 如請求項1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，所述化合物為具備式II結構的化合物，
    Figure 03_image015
    其中，n、R1 、R2 、R3 、R4 、R6 、X1 、X2 、X3 和環A如請求項1所定義。
  17. 如請求項1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，所述化合物為具備式II-1結構的化合物，
    Figure 03_image017
    其中，n、R1 、R2 、R3 、R4 、R6 和環A如請求項1所定義。
  18. 如請求項1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，所述化合物為具備式III結構的化合物，
    Figure 03_image019
    其中，n、R1 、R2 、R3 、R4 、R6 、X1 、X2 、X3 和環A如請求項1所定義。
  19. 如請求項1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，所述化合物為具備式III-1結構的化合物，
    Figure 03_image021
    其中，n、R1 、R2 、R3 、R4 、R6 和環A如請求項1所定義。
  20. 下列化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物：
    Figure 03_image110
    、
    Figure 03_image112
    、
    Figure 03_image114
    、
    Figure 03_image116
    、
    Figure 03_image118
    、
    Figure 03_image120
    、
    Figure 03_image122
    、
    Figure 03_image124
    、
    Figure 03_image126
    、
    Figure 03_image128
    、
    Figure 03_image130
    、
    Figure 03_image132
    、
    Figure 03_image134
    、
    Figure 03_image136
    、
    Figure 03_image138
    、
    Figure 03_image140
    、
    Figure 03_image142
    、
    Figure 03_image144
    、
    Figure 03_image146
    、
    Figure 03_image148
    、
    Figure 03_image150
    、
    Figure 03_image152
    、
    Figure 03_image154
    、
    Figure 03_image156
    、
    Figure 03_image158
    、
    Figure 03_image160
    、
    Figure 03_image162
    、
    Figure 03_image164
    、
    Figure 03_image166
    。
  21. 一種藥物組合物，其包含如請求項1至20中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物。
  22. 一種藥物製劑，其包含如請求項1至20中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物或者如請求項15所述的藥物組合物；優選地，所述製劑為片劑、膠囊劑、注射劑、顆粒劑、粉劑、栓劑、丸劑、乳膏劑、糊劑、凝膠劑、散劑、口服溶液、吸入劑、混懸劑、乾懸劑、貼劑、洗劑中的任一種。
  23. 如請求項1至20中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物或者如請求項21所述的藥物組合物或者如請求項22所述的藥物製劑在製備用於預防和/或治療具有ATX表達增加的病理學特徵的相關疾病的藥物中的應用；優選地，所述具有ATX表達增加的病理學特徵的相關疾病包括：癌症、纖維化疾病、代謝疾病、骨髓增生異常症候群、呼吸系統疾病、心血管疾病、自身免疫性疾病、炎症、皮膚學疾病、神經系統疾病或疼痛；更優選地；所述具有ATX表達增加的病理學特徵的相關疾病為肺纖維化、腎纖維化或肝纖維化。
  24. 如請求項1至20中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物或者如請求項21所述的藥物組合物或者如請求項22所述的藥物製劑，其用於預防和/或治療具有ATX表達增加的病理學特徵的相關疾病；優選地，所述具有ATX表達增加的病理學特徵的相關疾病包括：癌症、纖維化疾病、代謝疾病、骨髓增生異常症候群、呼吸系統疾病、心血管疾病、自身免疫性疾病、炎症、皮膚學疾病、神經系統疾病或疼痛；更優選地，所述具有ATX表達增加的病理學特徵的相關疾病為肺纖維化、腎纖維化或肝纖維化。
  25. 一種預防和/或治療具有ATX表達增加的病理學特徵的相關疾病的方法，其包括下列步驟：將有效量的如請求項1至20中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物或者如請求項21所述的藥物組合物或者如請求項22所述的藥物製劑施用於對其有需求的患者。
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