TW201946935A - 抗ｋｌｋ５抗體及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

本發明提供抗KLK5抗體及其使用方法。

Description

抗KLK5抗體及其使用方法
本發明係關於抗KLK5抗體及其使用方法。
人激肽釋放酶相關肽酶(KLK)係在多種組織，諸如前列腺、卵巢、乳房、睾丸、腦及皮膚中表現之胰(凝乳)蛋白酶樣絲胺酸蛋白酶。KLK屬於clan PA(S)胰凝乳蛋白酶樣絲胺酸蛋白酶家族S1A之亞群。有15個人KLK基因位於染色體19q13.4上且構成人基因組中之最大連續絲胺酸蛋白酶群。該等基因一般由五個編碼外顯子及在一些情況下一個或兩個5’非編碼外顯子構成，編碼激肽釋放酶相關肽酶KLK1至KLK15。所有KLK基因皆編碼含224-237個殘基之胰凝乳蛋白酶或胰蛋白酶樣催化結構域的單鏈前原蛋白質，且在KLK4至KLK15間有約40%胺基酸序列一致性。KLK1以及其相近同源物KLK2及KLK3形成其自身之分化體，KLK4、5及7屬於另一亞群，而KLK6與KLK13及KLK14共有較高相似性。參見 Debela等人，Biol Chem 389,623-632(2008)。
KLK5看來在人皮膚中，尤其是在皮膚之上棘層及顆粒細胞層中表現量最大，其中膠質細胞經歷終末分化並轉化成扁平的磚塊狀結構，該等結構形成角質層、最外層表皮層及與外部環境之屏障。參見 Debela等人，J Mol Biol ,373,1017-1031(2007)；及Tan等人，J Med Chem.2015年1月22日；58(2)：598-612(2014)。據描述，KLK5在皮膚病症諸如內瑟頓氏症候群(Netherton Syndrome)中起病理學作用。參見 Furio等人，PLOS Genet 11(9),e1005389(2015)。內瑟頓氏症候群係由編碼絲胺酸蛋白酶抑制劑第5型Kazal(SPINK5)之SPINK5 基因中的功能喪失性突變引起。參見 Descargues等人，Nat Genet.2005年1月；37(1)：56-65 (2004)。經顯示，SPINK5可抑制KLK絲胺酸蛋白酶家族之若干成員(例如KLK5及KLK7)。參見 Wang等人，Exp Dermatol.7月；23(7)：524-6(2014)。內瑟頓氏症候群中不存在SPINK5引起未受抵抗之KLK活性。由於KLK5係表皮中蛋白質水解之調控劑，故KLK5活性過高被認為係內瑟頓氏症候群之病理生理學中的關鍵要素。去除KLK5及KLK7將解除內瑟頓氏症候群樣表型之致命作用。參見 Briot等人，J Exp Med.,5月11日；206(5)：1135-47(2009)；Furio等人，J Exp Med.,3月10日；211(3)：499-513(2014)；及Kasparek等人，PLoS Genet.2017年1月17日；13(1)：e1006566(2017)。內瑟頓氏症候群係具有多種影響之複雜全身性疾病，當前尚無令人滿意的針對此疾病之治療方法。
哮喘係與遺傳及環境兩個風險因素有關的一種臨床異質性病症。由哮喘雙胞胎研究得到的遺傳力估計值在35%至80%間變化，指示遺傳風險之重要作用。參見例如 Ullemar等人，Allergy 71,230-238(2016)。已進行若干針對哮喘及哮喘相關表型之大規模GWAS，且所鑑別之許多基因座，諸如靠近ORMDL3、IL13、IL1RL1 及TSLP 基因之該等基因座已在多個研究群體中得到證實。參見例如 Bonnelykke等人，Nat Genet 46,51-55(2014)。近期的研究鑑別出在KLK4/5基因座處之SNP，其防止有關低骨膜蛋白或低第2型炎症性哮喘之風險。在該研究中發現KLK5含量在重度哮喘患者之支氣管肺泡灌洗液中較高，由此證明KLK5在支氣管阻塞及哮喘發病中起到作用的假說。
儘管在諸如內瑟頓氏症候群及哮喘之類疾病的領域取得一定進步，但仍然需要鑑別靶且開發能夠補充或增強現有療法之功效之手段。
本文提供抗KLK5抗體及其使用方法。
本文亦提供一種結合至KLK5之經分離抗體，其中該抗體包括(a)含SEQ ID NO：28之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含選自由SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：45及SEQ ID NO：54組成之群之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含選自由SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：69及SEQ ID NO：72組成之群之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：96之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：109之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：127之胺基酸序列的HVR-L3。
在一些實施例中，該抗體包括(a)含選自由SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：22及SEQ ID NO：24組成之群之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含選自由SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52及SEQ ID NO：53組成之群之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含選自由SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：69及SEQ ID NO：72組成之群之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含選自由SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：87及SEQ ID NO：91組成之群之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含選自由SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101及SEQ ID NO：105組成之群之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含選自由SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：119及SEQ ID NO：122組成之群之胺基酸序列的HVR-L3。
在該等抗體中任一種之一些實施例中，該抗體包括(i)(a)含SEQ ID NO：17之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：35之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：82之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：101之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：115之胺基酸序列的HVR-L3；(ii)(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：87之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：119之胺基酸序列的HVR-L3；或(iii)(a)含SEQ ID NO：24之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：72之胺基酸序列的 HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：91之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：122之胺基酸序列的HVR-L3。
在該等抗體中任一種之一些實施例中，該抗體包含a)SEQ ID NO：202之VH序列及SEQ ID NO：140之VL序列；b)SEQ ID NO：225之VH序列及SEQ ID NO：151之VL序列；或c)SEQ ID NO：257之VH序列及SEQ ID NO：162之VL序列。
在該等抗體中任一種之一些實施例中，該抗體包含a)SEQ ID NO：201之VH序列及SEQ ID NO：139之VL序列；b)SEQ ID NO：221之VH序列及SEQ ID NO：149之VL序列；或c)SEQ ID NO：248或SEQ ID NO：254之VH序列及SEQ ID NO：160之VL序列。
本文還提供一種結合至KLK5之經分離抗體，其中該抗體包含a)與SEQ ID NO：201之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：139之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；b)與SEQ ID NO：221之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：149之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；或c)與SEQ ID NO：248或SEQ ID NO：254之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列，及與SEQ ID NO：160之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列。
本文亦提供一種結合至KLK5之經分離抗體，其中該抗體包括(i)(a)含SEQ ID NO：14之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：32之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：62之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：79之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：112之胺基酸序列的HVR-L3；(ii)(a)含SEQ ID NO：15之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：33之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：80之胺基酸序列的HVR-L1； (e)含SEQ ID NO：100之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：113之胺基酸序列的HVR-L3；(iii)(a)含SEQ ID NO：16之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：34之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：81之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：114之胺基酸序列的HVR-L3；(iv)(a)含SEQ ID NO：18之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：39之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：66之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：83之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：102之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：116之胺基酸序列的HVR-L3；(v)(a)含SEQ ID NO：19之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：40之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：67之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：84之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：103之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：117之胺基酸序列的HVR-L3；(vi)(a)含SEQ ID NO：20之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：33之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：68之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：85之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：103之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3；(vii)(a)含SEQ ID NO：21之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：41之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：86之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：104之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3；(viii)(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：46之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：88之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：120之胺基酸序列的HVR-L3；(ix)(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：70之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：89之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3；或(x)(a)含SEQ ID NO：23之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：47之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：71之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：90之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：106之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：121之胺基酸序列的HVR-L3。
在一些實施例中，該抗體包含選自由以下組成之群的VH序列：SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：203、SEQ ID NO：204、SEQ ID NO：205、SEQ ID NO：206、SEQ ID NO：226、SEQ ID NO：227及SEQ ID NO：228；以及選自由以下組成之群的VL序列：SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：153及SEQ ID NO：154。
在一些實施例中，該抗體包含(a)SEQ ID NO：170之VH序列及SEQ ID NO：131之VL序列；(b)SEQ ID NO：171之VH序列及SEQ ID NO：132之VL序列；(c)SEQ ID NO：172之VH序列及SEQ ID NO：133之VL序列；(d)SEQ ID NO：203之VH序列及SEQ ID NO：141之VL序列；(e)SEQ ID NO：204之VH序列及SEQ ID NO：142之VL序列；(f)SEQ ID NO：205之VH序列及SEQ ID NO：143之VL序列；(g)SEQ ID NO：206之VH序列及SEQ ID NO：144之VL序列；(h)SEQ ID NO：226之VH序列及SEQ ID NO：152之VL序列；(i)SEQ ID NO：227之VH序列及SEQ ID NO：153之VL序列；或(j)SEQ ID NO：228之VH序列及SEQ ID NO：154之VL序列。
本文亦提供一種結合至KLK5之經分離抗體，其中該抗體包含(a)與 SEQ ID NO：170之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：131之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；(b)與SEQ ID NO：171之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：132之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；(c)與SEQ ID NO：172之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：133之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；(d)與SEQ ID NO：203之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：141之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；(e)與SEQ ID NO：204之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：142之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；(f)與SEQ ID NO：205之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：143之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；(g)與SEQ ID NO：206之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：144之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；(h)與SEQ ID NO：226之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：152之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；(i)與SEQ ID NO：227之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：153之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；或(j)與SEQ ID NO：228之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：154之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列。
在該等抗體中任一種之一些實施例中，該抗體係IgG1或IgG4。
在該等抗體中任一種之一些實施例中，如藉由下文實例中所描述之一或多種方法所量測，該抗體使KLK5之生物活性抑制至少50%。在一些實施例中，該一或多種方法係選自由以下組成之群：重組KLK5直接活性檢定、偶合的前KLK1螢光肽檢定、偶合的前KLK7螢光肽檢定、前KLK1 LC/MS檢定、 前KLK7 LC/MS檢定及Ki(app) 檢定。在一些實施例中，該生物活性係KLK5之絲胺酸蛋白酶活性。
在該等抗體中任一種之一些實施例中，該抗體係單株抗體。
在該等抗體中任一種之一些實施例中，該抗體係人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體。
在該等抗體中任一種之一些實施例中，該抗體係結合KLK5之抗體片段。
本文還提供一種當結合至KLK5時形成熱力學抗原決定基之抗體，如藉由氫交換質譜法所量測，其包含選自由以下組成之群之序列中的一或多個：SEQ ID NO：316、SEQ ID NO：317、SEQ ID NO：318及SEQ ID NO：319。
本文亦提供一種與本文所述抗體中之任一種競爭結合的抗體。
本文亦提供一種與本文所述抗體中之任一種結合至相同抗原決定基的抗體。
本文亦提供一種編碼本文所述抗體中之任一種的經分離核酸。
本文亦提供一種包含本文所述之核酸的宿主細胞。
本文亦提供一種產生抗體之方法，該方法包括培養本文所述之宿主細胞，由此產生該抗體。
本文亦提供一種包含本文所述之抗體的免疫偶聯物。
本文亦提供一種醫藥調配物，其包含本文所述之抗體及醫藥學上可接受之載劑。
本文亦提供用作藥物的如本文所述之抗體。
本文亦提供用於治療選自由以下組成之群的疾病的如本文所述之抗體：內瑟頓氏症候群、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬、嗜酸性球性食管炎及紅斑痤瘡。在一些實施例中，該疾病係選自由以下組成之群：內瑟頓氏症候群、哮 喘、異位性皮炎、牛皮癬、紅斑痤瘡及嗜酸性球性食管炎。在一些實施例中，該哮喘係選自由以下組成之群：變應性哮喘、過敏性哮喘、非過敏性哮喘、運動誘發之哮喘、阿司匹林敏感性/加重性哮喘、輕度哮喘、中度至重度哮喘、未用皮質類固醇治療之哮喘、慢性哮喘、耐皮質類固醇性哮喘、皮質類固醇難治性哮喘、新診斷且未治療之哮喘、抽菸引起之哮喘、不受皮質類固醇控制之哮喘、T輔助淋巴細胞第2型(Th2)或高第2型(Th2)或第2型(T2)驅動之哮喘、嗜酸性球性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性球性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驅動之哮喘、低骨膜蛋白性哮喘及低嗜酸性球性哮喘。在一些實施例中，該哮喘係低TH2性哮喘。
亦提供用於抑制KLK5之生物活性的如本文所述之抗體。
亦提供如本文所述之抗體在製造藥物中的用途。在一些實施例中，該藥物係用於治療選自由以下組成之群的疾病：內瑟頓氏症候群、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬及紅斑痤瘡。在一些實施例中，該疾病係選自由以下組成之群：內瑟頓氏症候群、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬、紅斑痤瘡及嗜酸性球性食管炎。在一些實施例中，該哮喘係選自由以下組成之群：變應性哮喘、過敏性哮喘、非過敏性哮喘、運動誘發之哮喘、阿司匹林敏感性/加重性哮喘、輕度哮喘、中度至重度哮喘、未用皮質類固醇治療之哮喘、慢性哮喘、耐皮質類固醇性哮喘、皮質類固醇難治性哮喘、新診斷且未治療之哮喘、抽菸引起之哮喘、不受皮質類固醇控制之哮喘、T輔助淋巴細胞第2型(Th2)或高第2型(Th2)或第2型(T2)驅動之哮喘、嗜酸性球性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性球性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驅動之哮喘、低骨膜蛋白性哮喘及低嗜酸性球性哮喘。在一些實施例中，該哮喘係低TH2性哮喘。
亦提供如本文所述之抗體在製造用於抑制KLK5之生物活性之藥物中的用途。
亦提供一種治療患有疾病之個體之方法，其中該疾病係選自由以下組成之群：內瑟頓氏症候群、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬及紅斑痤瘡，該方法包括向該個體投與有效量的本文所述之抗體。在一些實施例中，該疾病係選自由以下組成之群：內瑟頓氏症候群、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬、紅斑痤瘡及嗜酸性球性食管炎。在一些實施例中，該哮喘係選自由以下組成之群：變應性哮喘、過敏性哮喘、非過敏性哮喘、運動誘發之哮喘、阿司匹林敏感性/加重性哮喘、輕度哮喘、中度至重度哮喘、未用皮質類固醇治療之哮喘、慢性哮喘、耐皮質類固醇性哮喘、皮質類固醇難治性哮喘、新診斷且未治療之哮喘、抽菸引起之哮喘、不受皮質類固醇控制之哮喘、T輔助淋巴細胞第2型(Th2)或高第2型(Th2)或第2型(T2)驅動之哮喘、嗜酸性球性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性球性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驅動之哮喘、低骨膜蛋白性哮喘及低嗜酸性球性哮喘。在一些實施例中，該哮喘係低Th2性哮喘。
亦提供一種抑制個體體內KLK5之生物活性的方法，該方法包括向該個體投與有效量的本文所述之抗體以抑制KLK5之生物活性。
本文亦提供一種特異性結合至人KLK5之抗體，其中根據標準蛋白酶編號，該抗體結合至人KLK5上包含一或多個選自由以下組成之群之胺基酸殘基的抗原決定基：Pro130、Ser131、Ala132、Gly133、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177、Asp178、Gly184、Asp185、Lys186、Ala186A、Arg188、Asn223、Arg224、Pro225及Lys233。在一些實施例中，根據標準蛋白酶編號，該抗體結合至人KLK5上包含一或多個選自由以下組成之群之胺基酸殘基的抗原決定基：Pro130、Ser131、Ala132、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177、Asp178、Arg224及Lys233。在一些實施例中，根據標準蛋白酶編號， 該抗體結合至人KLK5上包含一或多個選自由以下組成之群之胺基酸殘基的抗原決定基：Pro130、Ser131、Ala132、Gly133、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177及Lys233。在一些實施例中，根據標準蛋白酶編號，該抗體結合至人KLK5上包含一或多個選自由以下組成之群之胺基酸殘基的抗原決定基：Ser131、Ala132、Gly133、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Pro173、Arg174、Gly184、Asp185、Lys186、Ala186A、Arg188、Asn223、Arg224及Pro225。
本文亦提供一種當結合至人KLK5時引起人KLK5之構象變化的抗體，其中該構象變化以別構作用引起受質結合位點及/或人KLK5活性位點之破壞。
圖1A-1N 顯示在直接檢定中使用螢光肽受質對每種KLK5抑制劑進行之評價。將5nM重組人KLK5與0.19-100nM KLK5抑制劑一起預培育30分鐘，隨後添加50μM Boc-VPR-AMC。每102秒使用PHERAstar® Plus讀取器，使用340nm激發/460nm發射模組檢查盤，持續30-60分鐘。KLK5抑制劑之結果描繪如下：圖1A： Spink9.SRE.Fc(Spink9)，圖1B： mAb1108，圖1C： 3-3F5，圖1D： 10C8，圖1E： 9B6，圖1F ：9F2，圖1G ：9H3，圖1H ：9H5，圖1I ：8B7，圖1J ：2B11，圖1K ：8F5，圖1L ：10C5，圖1M ：10H3及圖1N ：2-3F4。
圖2A-2N 顯示在前KLK7偶合檢定中對KLK5抑制劑之評價。將5nM重組人KLK5與0.19-100nM抗KLK5抑制劑一起預培育30分鐘，隨後添加125nM前KLK7及100μM suc-LLVY-AMC。24小時後，每102秒獲取螢光讀數，持續30-60分鐘，並藉由對最後5個讀數求平均值來計算RFU終點值。KLK5抑制劑之結果描繪如下：圖2A： Spink9.SRE.Fc，圖2B： mAb1108，圖2C： 3-3F5，圖2D ：10C8，圖2E ：9B6，圖2F ：9F2，圖2G ：9H3，圖2H ：9H5，圖2I ：8B7，圖2J ：2B11，圖2K ：8F5，圖2L ：10C5，圖2M ：10H3及圖2N ：2-3F4。
圖3A-3N 顯示在前KLK1偶合檢定中對KLK5抑制劑之評價。將0.5nM重組人KLK5與0.019-10nM抗KLK5抑制劑一起預培育30分鐘，隨後添加31.25nM前KLK1及50μM PFR-AMC。每102秒使用PHERAstar® Plus讀取器，使用340nm激發/460nm發射模組檢查盤，持續120分鐘。KLK5抑制劑之結果描繪如下：圖3A： Spink9.SRE.Fc，圖3B： mAb1108，圖3C： 3-3F5，圖3D ：10C8，圖3E： 9B6，圖3F ：9F2，圖3G ：9H3，圖3H ：9H5，圖3I ：8B7，圖3J ：2B11，圖3K ：8F5，圖3L ：10C5，圖3M ：10H3及圖3N ：2-3F4。
圖4A-4N 顯示藉由監測KLK5源性裂解產物肽量測對重組KLK5蛋白質水解前KLK7之抑制作用的LC/MS檢定之結果。將SPINK9.SRE.Fc、mAb1108及12種選定抗體與KLK5一起預培育，隨後將5nM KLK5與15nM前KLK7一起培育兩小時。KLK5抑制劑之結果描繪如下：圖4A ：SPINK9.SRE.Fc，圖4B ：mAb1108，圖4C ：10C8，圖4D： 9B6，圖4E： 2B11，圖4F ：9F2，圖4G ：2-3F4，圖4H ：10H3，圖4I ：9H3，圖4J ：8B7，圖4K ：8F5，圖4L ：3-3F5，圖4M ：10C5及圖4N ：9H5。
圖5A-5N 顯示藉由監測KLK5源性裂解產物肽量測對重組KLK5蛋白水解前KLK1之抑制作用的LC/MS檢定之結果。將SPINK9.SRE.Fc、mAb1108及12種選定抗體與KLK5一起預培育，隨後將0.5nM KLK5與300nM前KLK1一起培育20分鐘(圖5A-N)。KLK5抑制劑之結果描繪如下：圖5A ：SPINK9.SRE.Fc，圖5B ：mAb1108，圖5C ：10C8，圖5D： 9B6，圖5E： 2B11，圖5F ：9F2，圖5G ：2-3F4，圖5H ：10H3，圖5I ：9H3，圖5J ：8B7，圖5K ：8F5，圖5L ：3-3F5，圖5M ：10C5及圖5N ：9H5。
圖6A-6N 顯示KLK5抑制劑針對KLK7活性之特異性。將5nM重 組人KLK7與0.19-100nM抗KLK5抑制劑一起預培育30分鐘，隨後添加100μM suc-LLVY-AMC。每102秒使用PHERAstar® Plus讀取器，使用340nm激發/460nm發射模組檢查盤，持續75分鐘。IC50 值概述於表6中。KLK5抑制劑之結果描繪如下：圖6A： Spink9.SRE.Fc，圖6B ：mAb1108，圖6C ：3-3F5，圖6D ：10C8，圖6E ：9B6，圖6F ：9F2，圖6G ：9H3，圖6H ：9H5，圖6I ：2B11，圖6J ：8B7，圖6K ：8F5，圖6L ：10C5，圖6M ：10H3及圖6N ：2-3F4。
圖7A-7N 顯示KLK5抑制劑針對KLK1活性之特異性。將3nM重組人KLK1與0.19-100nM抗KLK5抑制劑一起預培育30分鐘，隨後添加100μM PFR-AMC。每102秒使用PHERAstar® Plus讀取器，使用340nm激發/460nm發射模組檢查盤，持續60分鐘。IC50 值概述於表7中。KLK5抑制劑之結果描繪如下：圖7A ：Spink9.SRE.Fc，圖7B ：mAb1108，圖7C ：3-3F5，圖7D ：10C8，圖7E ：9B6，圖7F ：9F2，圖7G ：9H3，圖7H ：9H5，圖7I ：8B7，圖7J ：2B11，圖7K ：8F5，圖7L ：10C5，圖7M ：10H3及圖7N ：2-3F4。
圖8A-8N 顯示KLK5抑制劑針對KLK4活性之特異性。將2nM重組人KLK4與0.19-100nM抗KLK5抑制劑一起預培育30分鐘，隨後添加50μM Boc-VPR-AMC。每102秒使用PHERAstar® Plus讀取器，使用340nm激發/460nm發射模組檢查盤，持續60分鐘。IC50 值概述於表8中。KLK5抑制劑之結果描繪如下：圖8A ：Spink9.SRE.Fc，圖8B ：mAb1108，圖8C ：3-3F5，圖8D ：10C8，圖8E ：9B6，圖8F ：9F2，圖8G ：9H3，圖8H ：9H5，圖8I ：8B7，圖8J ：2B11，圖8K ：8F5，圖8L ：10C5，圖8M ：10H3及圖8N ：2-3F4。
圖9A-9N 顯示KLK5抑制劑針對胰蛋白酶活性之特異性。將0.25nM自牛胰臟分離之胰蛋白酶與0.19-100nM抗KLK5抑制劑一起預培育30分鐘，隨後添加50μM Boc-VPR-AMC。每102秒使用PHERAstar® Plus讀取器，使用340nm激發/460nm發射模組檢查盤，持續60分鐘。選定抗體(圖9C-N )之IC50 值概述於表9中。KLK5抑制劑之結果描繪如下：圖9A ：Spink9.SRE.Fc，圖9B ：mAb1108，圖9C ：3-3F5，圖9D ：10C8，圖9E ：9B6，圖9F ：9F2，圖9G ：9H3，圖9H ：9H5，圖9I ：8B7，圖9J ：2B11，圖9K ：8F5，圖9L ：10C5，圖9M ：10H3及圖9N ：2-3F4。
圖10A-10AB 顯示藉由測定Kiapp 來分析KLK5抑制劑效力。將各種濃度(0.5、0.25、0.125及0.0625nM)之KLK5與0.0019-10nM抗KLK5抑制劑一起預培育30分鐘，隨後添加300μM Z-VPR-pNA。在Versamax可調微量盤讀取器中讀取盤，且每102秒取得在405nm下之量測值，持續3小時。所得Kiapp 值概述於表10中。KLK5抑制劑之結果描繪如下(各別左圖顯示在各種KLK5濃度(0.5、0.25、0.125及0.0625nM)下KLK5抑制劑之IC50 值；各別右圖顯示隨KLK5濃度變化測定並作圖的IC50 值)：圖10A 及圖10B ：Spink9.SRE.Fc，圖10C 及圖10D ：mAb1108，圖10E 及圖10F ：3-3F5，圖10G 及圖10H ：10C8，圖10I 及圖10J ：9B6，圖10K 及圖10L ：9F2，圖10M 及圖10N ：9H3，圖10O 及圖10P ：9H5，圖10Q 及圖10R ：8B7，圖10S 及圖10T ：2B11，圖10U 及圖10V ：8F5，圖10W 及圖10X ：10C5，圖10Y 及圖10Z ：10H3，圖10AA 及圖10AB ：2-3F4。
圖11 顯示概述如圖1-10中評價並顯示之IC50 值的表。
圖12A 及12B.圖12A 顯示藉由氫交換量測法鑑別的當與每一抗體形成複合物時受影響之序列區域，該等序列區域(帶下劃線)係：區域1(56-68,pHexp 8.0)、區域2(107-124,pHexp 6.0)、區域3(184-195,pHexp 8.0)、區域4(232-246,pHexp 6.0)，有效時間校正使用pHref =7.5。圖12B 顯示代表性肽與圖12A中帶下劃線之各序列區域的實際氫交換資料。
圖13A 及13B.圖13A 顯示抗KLK5抗體純系14C8、14E12、8E11、8G10、9B6、2-3F4、10C5、2B11、10H3、9H3、8B7、9H5、9F2、10C8、8F5、 3-3F5、9E3、10D10、12B3、1D10之輕鏈可變序列的比對。圖13B 顯示抗KLK5抗體純系14C8、14E12、8E11、8G10、9B6、2-3F4、10C5、2B11、10H3、9H3、8B7、9H5、9F2、10C8、8F5、3-3F5、9E3、10D10、12B3、1D10之重鏈可變序列的比對。亦顯示根據Kabat編號之CDR區。
圖14A 及14B.圖14A 顯示抗KLK5抗體純系10C5及六個人類化10C5純系之輕鏈可變序列的比對。圖14B 顯示抗KLK5抗體純系10C5及28個人類化10C5純系之重鏈可變序列的比對。以黑色突出顯示之胺基酸殘基係變化之殘基。亦顯示根據Kabat編號之CDR區。
圖15A 及15B.圖15A 顯示抗KLK5抗體純系9H5及四個人類化9H5純系之輕鏈可變序列的比對。圖15B 顯示抗KLK5抗體純系9H5及17個人類化9H5純系之重鏈可變序列的比對。以黑色突出顯示之胺基酸殘基係變化之殘基。亦顯示根據Kabat編號之CDR區。
圖16A 及16B.圖16A 顯示抗KLK5抗體純系3-3F5及五個人類化3-3F5純系之輕鏈可變序列的比對。圖16B 顯示抗KLK5抗體純系3-3F5及27個人類化3-3F5純系之重鏈可變序列的比對。以黑色突出顯示之胺基酸殘基係變化之殘基。亦顯示根據Kabat編號之CDR區。
圖17 顯示在基於A549細胞之IL-8分泌檢定中對KLK5抑制劑之評價。KLK5誘導之IL-8分泌量(灰色星形)設定為100%殘留活性，而單獨緩衝液(饑餓培養基)(灰色圓形)設定為0%殘留活性。示出Spink5.Fc(黑色圓形且帶黑色點劃線)、人類化3,3F5(黑色菱形且帶實心黑線)抗KLK5抗體、人類化9H5抗KLK5抗體(空心灰色正方形且帶實心灰色線)及人類化10C5抗KLK5抗體(黑色空心圓形且帶灰色點劃線)之劑量反應曲線。所示資料係至少三次獨立實驗之平均值±標準偏差。
圖18A 及18B.圖18A 顯示人KLK5與KLK5-10C5 Fab複合物之覆 蓋圖。圖18B 顯示人KLK5與10C5 Fab之間之界面。人KLK5之胺基酸殘基編號係基於蛋白酶之標準編號。參見 Debela等人，J Mol Biol ,373,1017-1031(2007)。Fab片段中胺基酸殘基之編號係基於Kabat。
圖19A 及19B.圖19A 顯示人KLK5與KLK5-9H5 Fab複合物之覆蓋圖。圖19B 顯示人KLK5與9H5 Fab之間之界面。人KLK5中胺基酸殘基之編號係基於蛋白酶之標準編號。Fab片段中胺基酸殘基之編號係基於Kabat。
圖20A 及20B.圖20A 顯示人KLK5與KLK5-3-3F5 Fab複合物之覆蓋圖。圖20B 顯示人KLK5與3-3F5 Fab之間之界面。人KLK5中胺基酸殘基之編號係基於蛋白酶之標準編號。Fab片段中胺基酸殘基之編號係基於Kabat。
 相關申請案之交叉引用
本申請案依據35 U.S.C.§119(e)主張2018年3月14日提交的美國臨時專利申請案系列第62/643,034號之權益，該案之完整內容以引用的方式併入本文中。
序列表
本申請案含有經EFS-Web提交並以全文引用之方式併入本文中的序列表。該ASCII複本於2019年3月11日創建，命名為P34707-WO_SL.txt且大小為424,525個位元組。
I.定義
術語「抗KLK5抗體」及「結合至KLK5之抗體」係指能夠以足夠親和力結合KLK5之抗體，由此該抗體可用作靶向KLK5之診斷劑及/或治療劑。在一個實施例中，如例如藉由放射免疫檢定(RIA)所量測，抗KLK5抗體與不相關肽(除KLK5外的多肽)之結合程度係該抗體與KLK5之結合的不到約10%。在一些實施例中，結合至KLK5之抗體的解離常數(Kd)
Figure TW201946935A_D0001
1μM，
Figure TW201946935A_D0002
100nM，
Figure TW201946935A_D0003
10 nM，
Figure TW201946935A_D0004
1nM，
Figure TW201946935A_D0005
0.1nM，
Figure TW201946935A_D0006
0.01nM，或
Figure TW201946935A_D0007
0.001nM(例如10-8 M或更低，例如10-8 M至10-13 M，例如10-9 M至10-13 M)。在一些實施例中，結合至KLK5之抗體的IC50 值(使酶反應速率降低50%所需的抑制劑，例如抗體或其片段之濃度)
Figure TW201946935A_D0008
1μM，
Figure TW201946935A_D0009
100nM，
Figure TW201946935A_D0010
10nM，
Figure TW201946935A_D0011
1nM，
Figure TW201946935A_D0012
0.1nM，
Figure TW201946935A_D0013
0.01nM，或
Figure TW201946935A_D0014
0.001nM(例如10-8 M或更低，例如10-8 M至10-13 M，例如10-9 M至10-13 M)。在一些實施例中，抗KLK5抗體結合至KLK5中在不同物種KLK多肽間保守之結合區(例如抗原決定基)。
術語「抗體」在本文中係以最廣泛意義使用且涵蓋各種抗體結構，包括但不限於單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)及抗體片段，只要其展現所希望之抗原結合活性即可。
如參考抗體、結合多肽、聚核苷酸或小分子所使用之術語「經分離」係已與其天然環境之組分分離的物質。在一些實施例中，如藉由例如電泳法(例如SDS-PAGE、等電聚焦(IEF)、毛細管電泳)或層析法(例如離子交換或反相HPLC)所測定，抗體、結合多肽、聚核苷酸或小分子係純化至超過95%或99%純度。關於評估抗體純度之方法的評述，參見例如Flatman等人，J.Chromatogr.B 848：79-87(2007)。
如本文所使用，術語「單株抗體」係指由基本上同源之抗體群體獲得的抗體，亦即，構成該群體之各個抗體除例如含有天然存在之突變或在製造單株抗體製劑期間產生的可能變異體抗體外皆一致及/或結合相同結合區(例如抗原決定基)，此類變異體一般以極少量存在。與典型地包括針對不同抗原決定子(抗原決定基)之不同抗體的多株抗體製劑相對，單株抗體製劑之每一單株抗體係針對抗原上之單一抗原決定子。因此，修飾語「單株」指示抗體係自基本上同源之抗體群體獲得的性質，且不應解釋為需要藉由任何特定方法製造該抗體。舉例而言，本文所述之單株抗體可以藉由多種技術製造，包括但不限於融 合瘤法、重組DNA法、噬菌體呈現法，及利用含有人免疫球蛋白基因座之全部或一部分之轉殖基因動物的方法、用於製造單株抗體之此類方法及其他示例性方法。
「阻斷抗體」或「拮抗劑抗體」係抑制或降低所結合抗原之生物活性的抗體。較佳的阻斷抗體或拮抗劑抗體基本上或完全抑制抗原之生物活性。
術語「嵌合」抗體係指重鏈及/或輕鏈之一部分來源於一種特定來源或物種，而該重鏈及/或輕鏈之其餘部分來源於不同來源或物種的抗體。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「完全抗體」在本文中可互換使用，意思指結構基本上類似於天然抗體結構或具有含Fc區之重鏈的抗體(例如抗KLK5抗體)。
「人類抗體」係這樣一種抗體，其具有的胺基酸序列對應於由人類或人類細胞產生或來源於利用人類抗體譜系或其他人類抗體編碼序列之非人類來源之抗體之胺基酸序列。該關於人類抗體之定義明確地排除包含非人類抗原結合殘基之人類化抗體。
「人類化」抗體係指包含來自非人類HVR之胺基酸殘基以及來自人類FR之胺基酸殘基的嵌合抗體。在一些實施例中，人類化抗體將包含基本上所有的至少一個且典型地兩個可變結構域，其中所有或基本上所有HVR(例如CDR)均與非人類抗體之HVR對應且所有或基本上所有FR對應於人類抗體之FR。人類化抗體可以視情況包含來源於人類抗體之抗體恆定區的至少一部分。抗體，例如非人類抗體之「人類化形式」係指經歷人類化之抗體。
「天然抗體」係指具有變化之結構的天然存在之免疫球蛋白分子。舉例而言，天然IgG抗體係約150,000道爾頓之雜四聚醣蛋白，由二硫鍵鍵結之兩條一致輕鏈及兩條一致重鏈構成。自N末端至C末端，每一重鏈具有可變區(VH)，亦稱為可變重鏈結構域或重鏈可變結構域，繼而為三個恆定結構域(CH1、 CH2及CH3)。類似地，自N末端至C末端，每一輕鏈具有可變區(VL)，亦稱為可變輕鏈結構域或輕鏈可變結構域，繼而為恆定輕鏈(CL)結構域。抗體之輕鏈可基於其恆定結構域之胺基酸序列而歸為兩種類型中之一種，稱為κ及λ。
抗體之「類別」係指其重鏈所具有的恆定結構域或恆定區之類型。有五個主要抗體類別：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且該等類別中有若干類別可進一步細分成子類(同型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。對應於不同類別免疫球蛋白之重鏈恆定結構域分別稱為α、δ、ε、γ及μ。
「抗體片段」係指不為完整抗體之分子，其包含完整抗體中結合完整抗體所結合之抗原的一部分。抗體片段之實例包括但不限於Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2 、雙功能抗體、線性抗體、單鏈抗體分子(例如scFv)及由抗體片段形成之多特異性抗體。
與參考抗體「結合至相同抗原決定基之抗體」係指在競爭檢定中將參考抗體與其結合搭配物(例如抗原)之結合阻斷50%或更高百分比的抗體，及反之，參考抗體在競爭檢定中將該抗體與其結合搭配物之結合阻斷50%或更高百分比。
術語「熱力學抗原決定基」例如在使用氫交換質譜法進行抗原決定基定位之情形中係指蛋白質中主鏈結構動力學或解摺疊之局部自由能響應於特定結合事件而改變，諸如變得由抗體結合的部分。結構抗原決定基可以或可以不部分地或完全地包含在熱力學抗原決定基內。
如本文所使用，術語「高變區」或「HVR」係指抗體可變結構域中具有高變序列(「互補決定區」或「CDR」)及/或形成結構確定之環(「高變環」)及/或含有抗原接觸殘基(「抗原接觸」)的每一區域。一般而言，抗體包含六個HVR：三個位於VH中(H1、H2、H3)，且三個位於VL中(L1、L2、L3)。本文中之例示性HVR包括： (a)在胺基酸殘基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)及96-101(H3)處出現之高變環(Chothia及Lesk,J.Mol.Biol. 196：901-917(1987))；(b)在胺基酸殘基24-34(L1)、50-56(L2)、89-97(L3)、31-35b(H1)、50-65(H2)及95-102(H3)處出現之CDR(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第5版Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991))；(c)在胺基酸殘基27c-36(L1)、46-55(L2)、89-96(L3)、30-35b(H1)、47-58(H2)及93-101(H3)處出現之抗原接觸(MacCallum等人，J.Mol.Biol. 262：732-745(1996))；及(d)(a)、(b)及/或(c)之組合，包括HVR胺基酸殘基46-56(L2)、47-56(L2)、48-56(L2)、49-56(L2)、26-35(H1)、26-35b(H1)、49-65(H2)、93-102(H3)及94-102(H3)。
除非另外指示，否則可變結構域中HVR殘基及其他殘基(例如FR殘基)在本文中係根據上述Kabat等人，例如圖13-16中以及下文序列表中所述進行編號。除非另外指示，否則CDR係根據上述Kabat等人測定。
術語「可變區」或「可變結構域」係指參與抗體與抗原之結合的抗體重鏈或輕鏈之結構域。天然抗體之重鏈及輕鏈之可變結構域(分別為VH及VL)一般具有類似結構，其中每一結構域包含四個保守構架區(FR)及三個高變區(HVR)。(參見例如Kindt等人，Kuby Immunology ，第6版，W.H.Freeman and Co.，第91頁(2007)。)單一VH或VL結構域足以賦予抗原結合特異性。此外，結合特定抗原之抗體可使用來自結合該抗原之抗體的VH或VL結構域，分別篩選互補VL或VH結構域之文庫來進行分離。參見例如Portolano等人，J.Immunol. 150：880-887(1993)；Clarkson等人，Nature 352：624-628(1991)。
術語「Fc區」在本文中用於定義含有至少一部分恆定區的免疫球蛋白重鏈之C末端區域。該術語包括天然序列Fc區及變異體Fc區。在一個實施 例中，人IgG重鏈Fc區自Cys226或自Pro230延伸至重鏈之羧基末端。然而，Fc區之C末端離胺酸(Lys447)可能存在或可能不存在。除非本文另外具體說明，否則Fc區或恆定區中胺基酸殘基之編號係根據EU編號系統，又稱為EU索引，如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991中所述。
「構架」或「FR」係指不為高變區(HVR)殘基之可變結構域殘基。可變結構域之FR一般由四個FR結構域組成：FR1、FR2、FR3及FR4。因此，HVR及FR序列一般按以下順序出現於VH(或VL)中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
出於本文之目的，「接受體人類構架」係包含來源於人類免疫球蛋白構架或人類共同構架(如以下所定義)之輕鏈可變結構域(VL)構架或重鏈可變結構域(VH)構架之胺基酸序列的構架。「來源於」人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之接受體人類構架可包含人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之胺基酸序列，或其可含有胺基酸序列變化。在一些實施例中，胺基酸變化之數目為10個或10個以下、9個或9個以下、8個或8個以下、7個或7個以下、6個或6個以下、5個或5個以下、4個或4個以下、3個或3個以下、或2個或2個以下。在一些實施例中，VL接受體人類構架序列與VL人類免疫球蛋白構架序列或人類共同構架在序列上一致。
「人類共同構架」係代表所選人類免疫球蛋白VL或VH構架序列中最常出現之胺基酸殘基的構架。一般而言，人類免疫球蛋白VL或VH序列選自可變結構域序列亞群。一般而言，該序列亞群係如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第五版，NIH Publication 91-3242,Bethesda MD(1991)，第1-3卷中之亞群。在一個實施例中，對於VL，該亞群係如上述Kabat等人中之亞群κI。在一個實施例中，對於VH，該亞群係如上述Kabat等人中之 亞群III。
「親和力」或「結合親和力」係指一個分子(例如抗體、結合多肽、聚核苷酸、小分子)之單一結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間非共價相互作用之總和的強度。除非另作指示，否則如本文所使用，「結合親和力」係指反映結合對成員(例如抗體、結合多肽、聚核苷酸、小分子中任一種與抗原)之間之1：1相互作用的固有結合親和力。分子X對其搭配物Y之親和力一般可以由解離常數(Kd)表示。可以利用此項技術中已知之常用方法，包括本文所述之方法量測親和力。用於量測結合親和力的具體說明性且示例性實施例描述於本文中。
「親和力成熟」之抗體係指在一或多個高變區(HVR)中具有一或多種變化之抗體，與不具有此等變化之親本抗體相比，此類變化引起該抗體對抗原之親和力的改善。
「結合區」係KLK5抗體選擇性結合之結合搭配物(例如抗原)的部分。對於結合多肽結合搭配物，線性結合區可為具有約4-15個(例如4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個)胺基酸殘基的肽部分。非線性構象結合區可包含多肽序列中在結合多肽結合搭配物之三維(3D)結構中緊密鄰近的殘基。
「效應功能」係指可歸於抗體Fc區之生物活性，其隨抗體同型而變化。抗體效應功能之實例包括：C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)下調；及B細胞活化。
除非另作指示，否則如本文所使用，術語「KLK5」及「激肽釋放酶-5」係指來自任何脊椎動物來源，包括哺乳動物諸如靈長類動物(例如人類)及囓齒動物(例如小鼠及大鼠)之任何天然KLK5。該術語涵蓋「全長」未加工之KLK5以及由在細胞中加工得到之任何KLK5形式。該術語亦涵蓋KLK5之天然存在之變異體，例如剪接變異體或對偶基因變異體。在一些實施例中，例示性人類 KLK5之胺基酸序列係UNIPROT Q9Y337。在一些實施例中，例示性人類KLK5之胺基酸序列係選自由以下組成之群：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7及SEQ ID NO：8。在一些實施例中，例示性人類KLK5之胺基酸序列係UNIPROT Q9Y337(G55,D153變異體)之胺基酸殘基23-293(除去信號肽)且顯示於SEQ ID NO：2中。在一些實施例中，例示性人類KLK5之胺基酸序列係SEQ ID NO：4中所示G55,N153變異體之胺基酸殘基23-293(除去信號肽)。在一些實施例中，例示性人類KLK5之胺基酸序列係SEQ ID NO：6中所示R55,N153變異體之胺基酸殘基23-293(除去信號肽)。在一些實施例中，例示性人類KLK5之胺基酸序列係SEQ ID NO：8中所示R55,D153變異體之胺基酸殘基23-293(除去信號肽)。
本段在下文中之編號係關於全長未加工之KLK5。在一些實施例中，人類KLK5之胺基酸序列包含在153位處之胺基酸N。在一些實施例中，人類KLK5之胺基酸序列包含在153位處之胺基酸D。在一些實施例中，人類KLK5之胺基酸序列包含在55位處之胺基酸G。在一些實施例中，人類KLK5之胺基酸序列包含在55位處之胺基酸R。在一些實施例中，人類KLK5之胺基酸序列包含在55位處之胺基酸G及在153位處之胺基酸N。在一些實施例中，人類KLK5之胺基酸序列包含在55位處之胺基酸G及在153位處之胺基酸D。在一些實施例中，人類KLK5之胺基酸序列包含在55位處之胺基酸R及在153位處之胺基酸N。在一些實施例中，人類KLK5之胺基酸序列包含在55位處之胺基酸R及在153位處之胺基酸D。
本段在下文中之編號係關於全長未加工之KLK5。在一些實施例中，人類KLK5之核酸序列包含編碼在153位處之N的序列。在一些實施例中，人類KLK5之核酸序列包含編碼在153位處之D的序列。在一些實施例中，人類KLK5之核酸序列包含編碼在55位處之G的序列。在一些實施例中，人類KLK5 之核酸序列包含編碼在55位處之R的序列。在一些實施例中，人類KLK5之核酸序列包含編碼在55位處之G及在153位處之N的序列。在一些實施例中，人類KLK5之核酸序列包含編碼在55位處之G及在153位處之D的序列。在一些實施例中，人類KLK5之核酸序列包含編碼在55位處之R及在153位處之N的序列。在一些實施例中，人類KLK5之核酸序列包含編碼在55位處之R及在153位處之D的序列。
除非另作指示，否則如本文所使用，術語「SPINK5」及「Kazal第5型絲胺酸蛋白酶抑制劑」係指來自任何脊椎動物來源，包括哺乳動物諸如靈長類動物(例如人類)及囓齒動物(例如小鼠及大鼠)之任何天然SPINK5。該術語涵蓋「全長」未加工之SPINK5以及由在細胞中加工得到之任何SPINK5形式。該術語亦涵蓋SPINK5之天然存在之變異體，例如剪接變異體或對偶基因變異體。在一些實施例中，例示性人類SPINK5之胺基酸序列係UNIPROT Q9NQ38且顯示於SEQ ID NO：9中。在一些實施例中，例示性人類SPINK5之胺基酸序列係UNIPROT Q9NQ38之胺基酸殘基23-1064(除去信號肽)且顯示於SEQ ID NO：10中。
如本文所使用，術語「SPINK融合多肽」係指SPINK多肽或其片段(例如SPINK多肽(例如SPINK5及/或SPINK9)之某些結構域)直接地或間接地連接至另一多肽(例如非SPINK多肽)的融合多肽。
如本文所使用，術語「SPINK Fc融合多肽」係指SPINK多肽或其片段(例如SPINK多肽(例如SPINK5及/或SPINK9)之某些結構域)直接地或間接地連接至Fc區的融合多肽。在一些實施例中，Fc區係選自由IgG1 Fc區、IgG2a Fc區及IgG4 Fc區組成之群。在一些實施例中，Fc區係IgG2a Fc區。在一些實施例中，IgG2a Fc區係小鼠IgG2a Fc區。在一些實施例中，Fc區係IgG1 Fc區。在一些實施例中，IgG1 Fc區係人類IgG1 Fc區。在一些實施例中，Fc區係IgG4 Fc區。在一些實施例中，IgG4 Fc區係人類IgG4 Fc區。在一些實施例中，SPINK多肽或其片段係人類SPINK多肽或其片段。在一些實施例中，SPINK多肽或其片段係小鼠SPINK多肽或其片段。應瞭解，本文提供不影響SPINK多肽、SPINK結構域或SPINK Fc融合多肽之功能及/或活性的SPINK多肽、SPINK結構域或Fc之微小序列變異，諸如插入、缺失、取代，尤其是保守胺基酸取代。在一些實施例中，本文所提供之SPINK Fc融合多肽可結合至KLK5，由此可導致KLK5之抑制。在一些實施例中，SPINK多肽或其片段係SPINK 9。在一些實施例中，SPINK Fc融合多肽係SPINK9.SRE.Fc(SEQ ID NO：320)。
除非另作指示，否則如本文所使用，術語「多肽」係指來自任何脊椎動物來源，包括哺乳動物諸如靈長類動物(例如人類)及囓齒動物(例如小鼠和大鼠)的任何天然所關注多肽(例如KLK5或SPINK5)。該術語涵蓋「全長」未加工之多肽以及由在細胞中加工得到的任何多肽形式。該術語還涵蓋該多肽之天然存在之變異體，例如剪接變異體或對偶基因變異體。
相對於參考多肽序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」定義為在對準參考多肽序列與候選序列且必要時引入空位以達成最大序列一致性百分比之後，且在不將任何保守型取代視為序列一致性之一部分的情況下，候選序列中與參考多肽序列中之胺基酸殘基一致的胺基酸殘基之百分比。可以此項技術內之多種方式，例如使用公開可得之電腦軟體，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體，達成比對以測定胺基酸序列一致性百分比。熟習此項技術者可確定適於比對序列之參數，包括在所比較之序列之全長內達成最大對準所需的任何演算法。然而，出於本文之目的，使用序列比較電腦程式ALIGN-2來產生胺基酸序列一致性%值。ALIGN-2序列比較電腦程式係由Genentech,Inc.創作，且源程式碼已與使用說明書一起在美國版權局(U.S.Copyright Office)(Washington D.C.,20559)存檔，在該版權局其以美國版權登記號 TXU510087登記。ALIGN-2程式可自Genentech,Inc.(South San Francisco,California)公開獲得，或可自源程式碼編譯。ALIGN-2程式應經編譯以供在UNIX操作系統(包括數位UNIX V4.0D)上使用。所有序列比較參數均由ALIGN-2程式設定且不變。
在採用ALIGN-2進行胺基酸序列比較之情況下，如下計算給定胺基酸序列A對於、與、或相對於給定胺基酸序列B之胺基酸序列一致性%(或者可稱為給定胺基酸序列A具有或包含對於、與或相對於給定胺基酸序列B之某一胺基酸序列一致性%)：100×X/Y其中X係在A與B之程式比對中由序列比對程式ALIGN-2評為一致匹配的胺基酸殘基數目，且其中Y係B中胺基酸殘基總數。應瞭解，若胺基酸序列A之長度不等於胺基酸序列B之長度，則A與B之胺基酸序列一致性百分比將不等於B與A之胺基酸序列一致性百分比。除非另作明確規定，否則本文中使用之所有胺基酸序列一致性百分比值均如前一段中所述使用ALIGN-2電腦程式獲得。
「聚核苷酸」或「核酸」在本文中可互換使用，指任何長度之核苷酸的聚合物，且包括DNA及RNA。核苷酸可以為脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、經修飾之核苷酸或鹼基，及/或其類似物，或者可以藉由DNA或RNA聚合酶，或藉由合成反應併入聚合物中的任何受質。聚核苷酸可以包含經修飾之核苷酸，諸如甲基化核苷酸及其類似物。若存在，則針對核苷酸結構之修飾可以在聚合物組裝之前或之後進行。核苷酸序列可以間雜有非核苷酸組分。聚核苷酸可以在合成後，諸如藉由偶聯標記進一步進行修飾。其他類型之修飾包括例如「戴帽」；一或多個天然存在之核苷酸經類似物取代；核苷酸間修飾，諸如具有不帶電荷之鍵聯(例如甲基膦酸酯、磷酸三酯、胺基磷酸酯、胺基甲酸酯等)之修飾及具有帶電荷之鍵聯(例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)之修飾；含有側 接部分，諸如蛋白質(例如核酸酶、毒素、抗體、信號肽、聚L-離胺酸等)等之修飾；具有插入劑(例如吖啶、補骨脂素等)之修飾；含有螯合劑(例如金屬、放射性金屬、硼、氧化性金屬等)之修飾；含有烷化劑之修飾；具有經修飾鍵聯(例如α異頭核酸等)之修飾；以及聚核苷酸之未修飾形式。另外，最初存在於糖中的任何羥基均可以例如經膦酸酯基、磷酸酯基置換；經標準保護基保護；或經過活化以與另外的核苷酸形成另外的鍵聯；或者可以偶聯至固體或半固體載體。5'及3'末端OH可以經磷酸化或者經胺或具有1至20個碳原子之有機戴帽基團部分取代。其他羥基亦可衍生化成標準保護基。聚核苷酸亦可含有此項技術中一般已知的核糖或脫氧核糖之類似物形式，包括例如2'-O-甲基-、2'-O-烯丙基、2'-氟-或2'-疊氮基-核糖、碳環糖類似物、α-異頭碳、差向異構糖(諸如阿拉伯糖、木糖或來蘇糖)、哌喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖、無環類似物，及無鹼基核苷類似物諸如甲基核糖苷。一或多個磷酸二酯鍵可以經替代性連接基團置換。該等替代性連接基團包括但不限於，磷酸酯經P(O)S(「硫代磷酸酯」)、P(S)S(「二硫代磷酸酯」)、(O)NR2 (「胺基磷酸酯」)、P(O)R、P(O)OR'、CO或CH2 (「甲縮醛」)置換的實施例，其中每個R或R'獨立地係H或視情況含有醚(-O-)鍵聯、芳基、烯基、環烷基、環烯基或芳烷基的經取代或未經取代之烷基(1-20個C)。聚核苷酸中的所有鍵聯未必係相同的。前述說明適用於本文提到的所有聚核苷酸，包括RNA及DNA。
「經分離」聚核苷酸或核酸係指已與天然環境組分分離之分子。經分離核酸包括這樣一種核酸分子，其包含在通常含有該核酸分子之細胞中，但該核酸分子存在於染色體外或不同於其天然染色體位置之染色體位置處。
「編碼抗KLK5抗體之經分離核酸」係指編碼抗體重鏈及輕鏈(或其片段)之一或多個核酸分子，包括在單一載體或獨立載體中之該(該等)核酸分子，及存在於宿主細胞中一或多個位置處的該(該等)核酸分子。
如本文所使用，術語「KLK5基因組序列」係指KLK5基因之cDNA及/或基因組形式，其可包括內含子以及上游及下游調控序列。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及「宿主細胞培養物」可互換使用且指引入了外源核酸之細胞，包括該等細胞之子代。宿主細胞包括「轉型株」及「經轉型細胞」，其包括原代轉型細胞及來源於其之子代，不管傳代次數如何。子代之核酸含量與母細胞可能不完全相同，而且可含有突變。本文包括在針對原始轉型細胞篩選或選擇時具有相同功能或生物活性之突變子代。
如本文所使用，術語「載體」係指能夠傳播所連接之另一核酸的一個核酸分子。該術語包括呈自我複製型核酸結構形式之載體以及併入其所引入之宿主細胞之基因組中的載體。某些載體能夠引導其可操作地連接之核酸之表現。此等載體在本文中稱為「表現載體」。
如本文所使用，「參考樣品」、「參考細胞」、「參考組織」、「對照樣品」、「對照細胞」或「對照組織」係指用於比較目的之樣品、細胞、組織、標準或含量。在一個實施例中，參考樣品、參考細胞、參考組織、對照樣品、對照細胞或對照組織係自同一個體之身體(例如組織或細胞)之健康及/或未患病部分得到。舉例而言，鄰近患病細胞或組織之健康及/或未患病細胞或組織(例如鄰近腫瘤之細胞或組織)。在另一個實施例中，參考樣品係自同一個體之身體的未處理組織及/或細胞獲得。在又另一個實施例中，參考樣品、參考細胞、參考組織、對照樣品、對照細胞或對照組織係自另一個體之身體(例如組織或細胞)之健康及/或未患病部分得到。在甚至另一個實施例中，參考樣品、參考細胞、參考組織、對照樣品、對照細胞或對照組織係自另一個體之身體之未處理組織及/或細胞得到。
如本文所使用，術語「樣品」係指得自或來源於所關注個體的含有細胞及/或其他分子實體的調配物，其係例如基於物理、生物化學、化學及/或生 理學特徵表徵及/或鑑別。舉例而言，短語「疾病樣品」及其變化形式係指自所關注個體獲得的預期或已知含有待表徵之細胞及/或分子實體的任何樣品。樣品包括但不限於原代或經培養細胞或細胞株、細胞上清液、細胞溶解產物、血小板、血清、血漿、玻璃體液、淋巴液、滑膜液、濾泡液、精液、羊膜液、乳汁、白血球、血液來源之細胞、尿液、腦脊髓液、唾液、痰液、淚液、汗液、黏液、腫瘤溶解產物及組織培養基、組織提取物諸如均質化組織、腫瘤組織、細胞提取物及其組合。
「組織樣品」或「細胞樣品」意謂自個體組織獲得的一系列類似細胞。組織或細胞樣品之來源可為固體組織，如來自新鮮、冷凍及/或保藏之器官、組織樣品、活檢樣品及/或吸出物之固體組織；血液或任何血液成分，諸如血漿；體液，諸如腦脊髓液、羊膜液、腹膜液或間質液；來自個體妊娠或發育中之任何時間的細胞。組織樣品亦可為原代或經培養細胞或細胞株。視情況，該組織或細胞樣品係自患病組織/器官獲得。該組織樣品可含有在自然界未天然與該組織混合之化合物，諸如防腐劑、抗凝血劑、緩衝劑、固定劑、養分、抗生素或類似物。
藥劑，例如醫藥調配物之「有效量」係指在必需劑量下且持續必需時間有效達成所需治療結果之量。
「個體」係哺乳動物。哺乳動物包括但不限於，馴養動物(例如牛、綿羊、貓、狗及馬)、靈長類動物(例如人類及非人類靈長類動物，諸如猴)、兔及囓齒動物(例如小鼠及大鼠)。在一些實施例中，該個體係人類。
如本文所使用，術語「患者」係指動物，諸如哺乳動物。在一個實施例中，患者係指人類。
術語「醫藥調配物」係指呈允許所含活性成分之生物活性有效且不含對打算投與該調配物之個體有不可接受毒性之額外組分之形式的製劑。
「醫藥學上可接受之載劑」係指醫藥調配物中除活性成分之外的對個體無毒之成分。醫藥學上可接受之載劑包括但不限於緩衝劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。
如本文所使用，術語「高Th2性哮喘」係指展現較高的一或多種Th2細胞相關細胞介素，例如IL13、IL4、IL9、IL5含量或展現Th2細胞介素相關炎症的哮喘。在一些實施例中，術語高Th2性哮喘可與高嗜酸性球性哮喘互換使用。在一些實施例中，該高Th2性哮喘係Th2驅動之哮喘。在一些實施例中，已確定該哮喘患者呈嗜酸性球炎症陽性(Eosinophilic Inflammation Positive，EIP)。參見例如國際專利申請公開案第WO 2015/061441號，其以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，已確定相較於對照或參考水準，該個體具有升高的至少一種嗜酸性球標誌基因含量。參見WO2015/061441。在一些實施例中，高Th2性哮喘係高骨膜蛋白性哮喘。在一些實施例中，個體具有高血清骨膜蛋白。在一些實施例中，個體係十八歲或更大年齡。在一些實施例中，已確定相較於對照或參考水準，該個體具有較高的血清骨膜蛋白含量。在一些實施例中，對照或參考水準係在群體中的中等骨膜蛋白含量。在一些實施例中，已確定個體具有20ng/ml或更高量的血清骨膜蛋白。在一些實施例中，已確定個體具有25ng/ml或更高量的血清骨膜蛋白。在一些實施例中，已確定個體具有50ng/ml或更高量的血清骨膜蛋白。在一些實施例中，血清骨膜蛋白之對照或參考水準係20ng/ml、25ng/ml或50ng/ml。在一些實施例中，該哮喘係高嗜酸性球性哮喘。在一些實施例中，已確定相較於對照或參考水準，該個體具有升高的嗜酸性球計數。在一些實施例中，對照或參考水準係在群體中的中等量。在一些實施例中，已確定該個體具有150個或更高的嗜酸性球計數/μl血液。在一些實施例中，已確定該個體具有200個或更高的嗜酸性球計數/μl血液。在一些實施例中，已確定該個體具有250個或更高的嗜酸性球計數/μl血液。在一些實 施例中，已確定該個體具有300個或更高的嗜酸性球計數/μl血液。在一些實施例中，已確定該個體具有350個或更高的嗜酸性球計數/μl血液。在一些實施例中，已確定該個體具有400個或更高的嗜酸性球計數/μl血液。在一些實施例中，已確定該個體具有450個或更高的嗜酸性球計數/μl血液。在一些實施例中，已確定該個體具有500個或更高的嗜酸性球計數/μl血液。在一些較佳實施例中，已確定該個體具有300個或更高的嗜酸性球計數/μl血液。在一些實施例中，嗜酸性球係周圍血液嗜酸性球。在一些實施例中，嗜酸性球係痰液嗜酸性球。在一些實施例中，個體展現升高的FeNO(呼出硝酸分率)水準及/或升高的IgE含量。舉例而言，在一些情況下，個體展現之FeNO水準高於以下任一種：約5ppb(十億分率)、10ppb、15ppb、20ppb、25ppb、30ppb、35ppb、40ppb、45ppb、50ppb、60ppb、70ppb、80ppb、90ppb及100ppb。在一些情況下，個體之IgE含量高於50IU/ml。
如本文所使用，術語「低Th2性哮喘」、「非高Th2性哮喘」、「低第2型性哮喘」、「低T2性哮喘」、「非嗜酸性球性哮喘」、「少顆粒球性哮喘」或「少炎性細胞性哮喘」係指展現較低的一或多種Th2細胞相關細胞介素，例如IL13、IL4、IL9、IL5含量，或展現非Th2細胞介素相關炎症的哮喘。在一些實施例中，術語低Th2性哮喘可與低嗜酸性球性哮喘互換使用。在一些實施例中，已確定該哮喘患者呈嗜酸性球炎症陰性(Eosinophilic Inflammation Negative，EIN)。參見例如WO 2015/061441。在一些實施例中，低Th2性哮喘係Th17驅動之哮喘。在一些實施例中，低Th2性哮喘係低骨膜蛋白性哮喘。在一些實施例中，個體係十八歲或更大年齡。在一些實施例中，已確定相較於對照或參考水準，該個體具有降低的血清骨膜蛋白含量。在一些實施例中，對照或參考水準係在群體中的中等骨膜蛋白含量。在一些實施例中，已確定個體具有低於20ng/ml的血清骨膜蛋白。在一些實施例中，該哮喘係低嗜酸性球性哮 喘。在一些實施例中，已確定相較於對照或參考水準，該個體具有降低的嗜酸性球計數。在一些實施例中，對照或參考水準係在群體中的中等量。在一些實施例中，已確定該個體具有少於150個嗜酸性球計數/μl血液。在一些實施例中，已確定該個體具有少於100個嗜酸性球計數/μl血液。在某些較佳實施例中，已確定該個體具有少於300個嗜酸性球計數/μl血液。
「治療(Treatment)」(及變化形式諸如「治療(treat/treating)」)係指試圖改變所治療個體或細胞之自然過程的臨床干預。所希望之治療作用包括以下一或多種：預防疾病發生或復發；減輕症狀；減少疾病之任何直接或間接病理後果；使疾病狀態穩定(亦即，不惡化)；降低疾病進展速率；改善或緩和疾病狀態；使存活期相較於未接受治療時之預期存活期延長；以及改善預後。
術語「藥品說明書」用於指示市售治療產品包裝中慣常包括之說明書，其含有關於適應症、用法、劑量、投藥、組合療法、禁忌症之資訊及/或關於使用該等治療產品之注意事項。
除非本文另外指示或上下文明顯矛盾，否則在描述本文中之實施例的上下文中，使用的術語「一個(種)(a/an)」及「該」以及類似術語應解釋為涵蓋單數及複數。除非另外說明，否則術語「包含」、「具有」、「包括」及「含有」應解釋為開放式術語(亦即，意謂「包括(但不限於)」)。應瞭解，本文所提供之態樣及實施例包括「由該等態樣及實施例組成」及/或「基本上由該等態樣及實施例組成」。
熟習此項技術者應瞭解，本文中提到「約」一個值或參數包括(且描述)針對該值或參數本身之實施例。舉例來說，提到「約X」之說明包括說明「X」。
如本文所使用，短語「基本上不同」表示兩個數字值(一般一個與分子相關且另一個與參考/比較分子相關)之間之差異程度足夠高，使得熟習此項技術者在由該等值(例如Kd值)度量之生物特徵的上下文內認為該兩個值之間的差 異具有統計學顯著性。取決於參考/比較分子之值，該兩個值之間的差異可例如大於約10%，大於約20%，大於約30%，大於約40%，及/或大於約50%。
II.組成物及方法
在一個態樣中，本發明部分地基於發現抑制KLK5之生物活性的KLK5抗體。在一些實施例中，提供結合至KLK5之抗體。在一些實施例中，提供一種結合至KLK5之經分離抗體，亦即，抗KLK5抗體。在一些實施例中，該抗KLK5抗體抑制KLK5之生物活性。在一些實施例中，該抗KLK5抗體基本上或完全地抑制KLK5之生物活性。在一些實施例中，KLK5之生物活性係絲胺酸蛋白酶活性。在一些實施例中，KLK5之生物活性係胰蛋白酶樣絲胺酸蛋白酶活性。在一些實施例中，KLK5之生物活性係KLK5促進之人類平滑肌細胞增殖及收縮。在一些實施例中，KLK5之生物活性係KLK5誘導的炎性細胞介素、趨化因子及黏附分子之上皮表現。在一些實施例中，KLK5之生物活性係KLK5誘導的嗜中性球趨化性細胞介素之上皮產生及嗜中性球流入肺組織中。在一些實施例中，使KLK5之生物活性抑制至少約40%、50%、60%、70%、80%、90%及/或更高百分比中之任一個。在一些實施例中，使KLK5之生物活性抑制約40%、50%、60%、70%、80%、90%及/或更高百分比中之任一個。在一些實施例中，使KLK5之生物活性抑制在40-50%、50-60%、60-70%、70-80%、80-90%及/或90-100%之間之任一百分比。
在抗KLK5抗體中任一種之一些實施例中，抗KLK5抗體基本上或完全地抑制SPINK5與KLK5之結合。在一些實施例中，使SPINK5與KLK5之結合抑制至少約40%、50%、60%、70%、80%、90%及/或更高百分比中之任一個。在一些實施例中，使SPINK5與KLK5之結合抑制約40%、50%、60%、70%、80%、90%及/或更高百分比中之任一個。在一些實施例中，SPINK5與KLK5之結合抑制在40-50%、50-60%、60-70%、70-80%、80-90%及/或90-100%之間之 任一百分比。
在抗KLK5抗體中任一種之一些實施例中，抗KLK5抗體之IC50 值小於約1000nM、500nM、100nM、50nM、10nM、5nM、1nM、500pM、100pM、50pM、10pM、5pM及/或1pM中之任一個。在一些實施例中，抗KLK5抗體之IC50 值小於1000nM、500nM、100nM、50nM、10nM、5nM、1nM、500pM、100pM、50pM、10pM、5pM及/或1pM中之任一個。在一些實施例中，抗KLK5抗體之IC50 值在約50μM-1μM、1μM-500nM、500nM-100nM、100nM-10nM、10nM-1nM、1000pM-500pM、500pM-200pM、200pM-150pM、150pM-100pM、100pM-10pM及/或10pM-1pM中任一個之間。
本文所提供之抗體可用於例如診斷或治療選自由以下組成之群的疾病：內瑟頓症候群、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬及紅斑痤瘡。在一些實施例中，該疾病係選自由以下組成之群：內瑟頓氏症候群、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬、紅斑痤瘡及嗜酸性球性食管炎。在一些實施例中，該哮喘係伴隨可能危及生命的使症狀惡化(加重或爆發)之急性事件的持續性慢性重度哮喘。在一些實施例中，該哮喘係異位性(又稱為過敏性)哮喘、非過敏性哮喘(例如通常由感染呼吸道病毒(例如流感、副流感、鼻病毒、人間質肺病毒及呼吸道合胞病毒)或吸入刺激物(空氣污染物、煙霧、柴油機顆粒、揮發性化學試劑及室內或室外氣體或甚至寒冷乾燥空氣)引起)。在一些實施例中，哮喘係間歇性或運動誘發之哮喘；由急性或長期直接或二手暴露於「菸」(典型地為香菸、雪茄、菸斗)、吸入或「抽電子菸」(菸草、大麻或其他此類物質)引起之哮喘；或由近期攝入阿司匹林(aspirin)或相關NSAIDS引發之哮喘。在一些實施例中，哮喘係輕度或皮質類固醇無反應性哮喘、新診斷且未治療之哮喘，或先前不需要長期使用吸入性局部或全身性類固醇控制症狀(咳嗽、喘息、呼吸急促/氣促或胸痛)。在一些實施例中，哮喘係慢性、耐皮質類固醇性哮喘、皮質類固醇難治性哮喘、不受皮質類 固醇或其他慢性哮喘控制藥物控制之哮喘。在一些實施例中，哮喘係中度至重度哮喘。在一些實施例中，哮喘係高Th2性哮喘。在一些實施例中，哮喘係重度哮喘。在一些實施例中，哮喘係變應性哮喘、過敏性哮喘、非過敏性哮喘(例如由感染及/或呼吸道合胞病毒(RSV)引起)、運動誘發之哮喘、阿司匹林敏感性/加重之哮喘、輕度哮喘、中度至重度哮喘、皮質類固醇無反應性哮喘、慢性哮喘、皮質類固醇抗性哮喘、皮質類固醇難治性哮喘、新診斷且未治療之哮喘、吸菸引起之哮喘、皮質類固醇無法控制之哮喘。在一些實施例中，哮喘係T輔助淋巴細胞第2型(Th2)或高第2型(Th2)或第2型(T2)驅動之哮喘。在一些實施例中，哮喘係嗜酸性球性哮喘。在一些實施例中，哮喘係過敏性哮喘。在一些實施例中，已確定個體患者呈嗜酸性球炎症陽性(EIP)。參見WO2015/061441。在一些實施例中，哮喘係高骨膜蛋白性哮喘(例如骨膜蛋白含量係每毫升血清至少約20ng、25ng或50ng中之任一種)。在一些實施例中，哮喘係高嗜酸性球性哮喘(例如每毫升血液至少約150個、200個、250個、300個、350個、400個嗜酸性球計數中之任一種)。在一些實施例中，該哮喘係低Th2性哮喘或非Th2驅動之哮喘。在一些實施例中，已確定個體患者呈嗜酸性球炎症陰性(EIN)。參見WO2015/061441。在一些實施例中，哮喘係低骨膜蛋白性哮喘(例如骨膜蛋白含量低於每毫升血清約20ng)。在一些實施例中，哮喘係低嗜酸性球性哮喘(例如低於每毫升血液約150個嗜酸性球計數或低於每毫升血液約100個嗜酸性球計數)。
A.例示性抗KLK5抗體
本文提供結合至KLK5之經分離抗體。在一個實施例中，該抗體使KLK5之生物活性抑制至少50%。KLK5係在人皮膚中，尤其是在皮膚上棘層及顆粒細胞層中表現之胰(凝乳)蛋白酶樣絲胺酸蛋白酶。已知KLK5在皮膚病症諸如內瑟頓症候群中起病理學作用。
例示性天然存在的帶有信號肽(胺基酸1-22)之人KLK5前驅蛋白質序列提供於SEQ ID NO：1中。對應於SEQ ID NO：1之胺基酸23-293的相應成熟KLK5蛋白質序列提供於SEQ ID NO：2中。含胺基酸交換R55及N153之一或兩個的帶信號肽之人KLK5前驅蛋白質的例示性變異體分別提供於SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7及SEQ ID NO：8。
在某些實施例中，抗KLK5抗體具有呈任何組合的以下特徵中之一或多種：a)使KLK5之生物活性抑制至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或100%；b)抑制KLK5之絲胺酸蛋白酶活性；c)特異性結合至人KLK5；d)具有小於10nM、小於5nM、小於3nM、小於2nM、小於1nM、小於0.5nM、小於0.1nM之IC50 值；及/或e)具有小於500pM、小於200pM、小於100pM、小於50pM、小於25pM、小於10pM、小於5pM、小於1pM之IC50 值。
抗體8G10、9B6、2-3F4、10C5、2B11、10H3、9H3、8B7、9H5、9F2、10C8、8F5、3-3F5及其他實施例
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)包含選自SEQ ID NO：14-24中任一個之胺基酸序列的HVR-H1；(b)包含選自SEQ ID NO：32-53中任一個之胺基酸序列的HVR-H2；(c)包含選自SEQ ID NO：62-72中任一個之胺基酸序列的HVR-H3；(d)包含選自SEQ ID NO：79-91中任一個之胺基酸序列的HVR-L1；(e)包含選自SEQ ID NO：99-106中任一個之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)包含選自SEQ ID NO：112-122中任一個之胺基酸序列的HVR-L3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(a)包含選自SEQ ID NO：14-24中任一個之胺基酸序列的HVR-H1；(b)包含選自SEQ ID NO：32-53中任一個之胺基酸序列的HVR-H2；(c)包含選自SEQ ID NO：62-72中任一個之胺基酸序列的HVR-H3。在一個實施例中，該抗體包括含選自SEQ ID NO：62-72中任一個之胺基酸序列的HVR-H3。在另一個實施例中，該抗體包括含選自SEQ ID NO：62-72中任一個之胺基酸序列的HVR-H3及含選自SEQ ID NO：112-122中任一個之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括含選自SEQ ID NO：62-72中任一個之胺基酸序列的HVR-H3、含選自SEQ ID NO：112-122中任一個之胺基酸序列的HVR-L3及含選自SEQ ID NO：32-53中任一個之胺基酸序列的HVR-H2。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含選自SEQ ID NO：14-24中任一個之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含選自SEQ ID NO：32-53中任一個之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含選自SEQ ID NO：62-72中任一個之胺基酸序列的HVR-H3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(a)包含選自SEQ ID NO：79-91中任一個之胺基酸序列的HVR-L1；(b)包含選自SEQ ID NO：99-106中任一個之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)包含選自SEQ ID NO：112-122中任一個之胺基酸序列的HVR-L3。在一個實施例中，該抗體包括(a)含選自SEQ ID NO：79-91中任一個之胺基酸序列的HVR-L1；(b)包含選自SEQ ID NO：99-106中任一個之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)包含選自SEQ ID NO：112-122中任一個之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列的VH結構域：(i)包含選自SEQ ID NO：14-24中任一個之胺基酸序列的HVR-H1、(ii)包含選自SEQ ID NO：32-53中任一個之胺基酸序列的HVR-H2及(iii)包含選自SEQ ID NO：62-72中任一個之胺基酸序列的HVR-H3；以及(b)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列的VL結構域：(i)包含選自SEQ ID NO：79-91中任一個之胺基酸序列的HVR-L1、(ii)包含選自SEQ ID NO：99-106中任一個之胺基酸序列的HVR-L2及(c)包含選自SEQ ID NO：112-122中任一個之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含選自SEQ ID NO：14-24中任一個之胺基酸序列的HVR-H1；(b)包含選自SEQ ID NO：32-53中任一個之胺基酸序列的HVR-H2；(c)包含選自SEQ ID NO：62-72中任一個之胺基酸序列的HVR-H3；(d)包含選自SEQ ID NO：79-91中任一個之胺基酸序列的HVR-L1；(e)包含選自SEQ ID NO：99-106中任一個之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)包含選自SEQ ID NO：112-122中任一個之胺基酸序列的HVR-L3。
在以上任一實施例中，抗KLK5抗體係人類化的。在一個實施例中，抗KLK5抗體包含如以上任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含與選自SEQ ID NO：170-257中任一個之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中任一個之序列一致性的重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，與選自SEQ ID NO：170-257中任一個之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%中任一個一致性的VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO：170-257中任一個中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。 在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含選自SEQ ID NO：170-257中任一個之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)包含選自SEQ ID NO：14-24中任一個之胺基酸序列的HVR-H1；(b)包含選自SEQ ID NO：32-53中任一個之胺基酸序列的HVR-H2；(c)包含選自SEQ ID NO：62-72中任一個之胺基酸序列的HVR-H3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含與選自SEQ ID NO：131-161中任一個之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，與選自SEQ ID NO：131-162中任一個之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5之能力。在某些實施例中，在選自SEQ ID NO：131-162中任一個之胺基酸序列中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含具有選自SEQ ID NO：131-162中任一個之胺基酸序列的VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR序列：(a)包含選自SEQ ID NO：79-91中任一個之胺基酸序列的HVR-L1；(b)包含選自SEQ ID NO：99-106中任一個之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)包含選自SEQ ID NO：112-122中任一個之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含如以上所提供之任何實施例中之VH及如以上所提供之任何實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：170及SEQ ID NO：131之VH及VL序列， 包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：171及SEQ ID NO：132之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：172及SEQ ID NO：133之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：201及SEQ ID NO：139之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：203及SEQ ID NO：141之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：204及SEQ ID NO：142之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：205及SEQ ID NO：143之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：206及SEQ ID NO：144之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：221及SEQ ID NO：149之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：226及SEQ ID NO：152之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：227及SEQ ID NO：153之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：228及SEQ ID NO：154之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：248及SEQ ID NO：160之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供與本文所提供之抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗KLK5抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供與抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗體，其包含具有選自SEQ ID NO：170-257中任一個之胺基酸序列的VH序列。在某些實施例中，提供一種當結合至KLK5時產生熱力學抗原決定基之抗體，如藉由氫交換質譜法所量測，其包含選自由以下組成之 群之序列中的一或多個：SEQ ID NO：316、SEQ ID NO：317、SEQ ID NO：318及SEQ ID NO：319。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含具有選自SEQ ID NO：288-306中任一個之胺基酸序列的HC序列。在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含具有選自SEQ ID NO：265-280中任一個之胺基酸序列的LC序列。
在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：288及SEQ ID NO：265之HC及LC序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：289及SEQ ID NO：266之HC及LC序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：290及SEQ ID NO：267之HC及LC序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：292及SEQ ID NO：269之HC及LC序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：293及SEQ ID NO：269之HC及LC序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：294及SEQ ID NO：270之HC及LC序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：295及SEQ ID NO：271之HC及LC序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：296及SEQ ID NO：272之HC及LC序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：297及SEQ ID NO：273之HC及LC序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：299及SEQ ID NO：275之HC及LC序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：300及SEQ ID NO：275之HC及LC序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：301及SEQ ID NO：276之HC 及LC序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：302及SEQ ID NO：277之HC及LC序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：303及SEQ ID NO：278之HC及LC序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：305及SEQ ID NO：280之HC及LC序列，包括該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：306及SEQ ID NO：280之HC及LC序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
本文提供這樣一類抗體，其包括含根據圖14A、15A及/或16A中所描繪之Kabat編號之HVR1-LC、HVR2-LC及HVR3-LC序列的輕鏈可變結構域，及含根據圖14B、15B及/或16B中所描繪之Kabat編號之HVR1-HC、HVR2-HC及HVR3-HC序列的重鏈可變結構域。在一些實施例中，該抗體包括含HVR1-LC、HVR2-LC及HVR3-LC序列的輕鏈可變結構域及如圖14A、15A及/或16A中所描繪之FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC及/或FR4-LC序列。在一些實施例中，該抗體包括含HVR1-HC、HVR2-HC及HVR3-HC序列之重鏈可變結構域及如圖14B、15B及/或16B中所描繪之FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC及/或FR4-HC序列。
在另一態樣中，提供與本文所提供之抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗KLK5抗體。
在某些實施例中，提供一種當結合至KLK5時產生熱力學抗原決定基之抗KLK5抗體，如藉由氫交換質譜法所量測，其包含選自由以下組成之群之序列中的一或多個：SEQ ID NO：316、SEQ ID NO：317、SEQ ID NO：318及SEQ ID NO：319。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體係單株抗體，包括嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。在一個實施例中，抗KLK5抗體係人 類化的。在一個實施例中，抗KLK5抗體包含如以上任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。在一個實施例中，抗KLK5抗體係抗體片段，例如Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2 片段。在另一個實施例中，該抗體係全長抗體，例如完整IgG1抗體或完整IgG4抗體，或如本文所定義之其他抗體類別或同型。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體可以併入如以下所描述的任何特徵之一或其組合。
抗體10C5、9H5、3-3F5及其他實施例
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：28之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：45或SEQ ID NO：54之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：69或SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：96之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：109之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：127之胺基酸序列的HVR-L3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：24之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52或SEQ ID NO：53之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：69或SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：87或SEQ ID NO：91之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101或SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：119 或SEQ ID NO：122之胺基酸序列的HVR-L3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR：(a)含SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：24之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52或SEQ ID NO：53之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：69或SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3。在一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：69或SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：69或SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3及含SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：119或SEQ ID NO：122之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：69或SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3；含SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：119或SEQ ID NO：122之胺基酸序列的HVR-L3；及含SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52或SEQ ID NO：53之胺基酸序列的HVR-H2。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：24之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52或SEQ ID NO：53之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：69或SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(a)含SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：87 或SEQ ID NO：91之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101或SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：119或SEQ ID NO：122之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列的VH結構域：(i)含SEQ ID NO：17之胺基酸序列的HVR-H1、(ii)含SEQ ID NO：35之胺基酸序列的HVR-H2及(iii)含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的HVR-H3；以及(b)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列的VL結構域：(i)含SEQ ID NO：82之胺基酸序列的HVR-L1、(ii)含SEQ ID NO：101之胺基酸序列的HVR-L2及(c)含SEQ ID NO：115之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含SEQ ID NO：17之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：35之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：82之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：101之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：115之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列的VH結構域：(i)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1、(ii)含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2及(iii)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3；以及(b)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列的VL結構域：(i)含SEQ ID NO：87之胺基酸序列的HVR-L1、(ii)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2及(c)含SEQ ID NO：119之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2；(c) 含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：87之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：119之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列的VH結構域：(i)含SEQ ID NO：24之胺基酸序列的HVR-H1、(ii)含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的HVR-H2及(iii)含SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3；以及(b)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列的VL結構域：(i)含SEQ ID NO：91之胺基酸序列的HVR-L1、(ii)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2及(c)含SEQ ID NO：122之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含SEQ ID NO：24之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：91之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：122之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含具有SEQ ID NO：202之重鏈可變結構域(VH)序列。在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含具有SEQ ID NO：140之輕鏈可變結構域(VL)序列。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含選自SEQ ID NO：173-201中任一個之重鏈可變結構域(VH)序列。在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含選自SEQ ID NO：134-139及SEQ ID NO：321中任一個之輕鏈可變結構域(VL)序列。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含與SEQ ID NO：201之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、 99%或100%中任一個之序列一致性的重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%中任一個之一致性的VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：201中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：201中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：17之胺基酸序列的HVR-H1、(b)含SEQ ID NO：35之胺基酸序列的HVR-H2及(c)含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的HVR-H3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：139之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：139中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：139中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR序列：(a)含SEQ ID NO：82之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：101之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：115之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含如以上所提供之任何實施例中之VH及如以上所提供之任何實施例中之VL。在一個實施 例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：201及SEQ ID NO：139之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供與本文所提供之抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗KLK5抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種與包含SEQ ID NO：201之VH序列及SEQ ID NO：139之VL序列的抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗體。在某些實施例中，提供一種當結合至KLK5時產生熱力學抗原決定基之抗體，如藉由氫交換質譜法所量測，其包含選自由以下組成之群之序列中的一或多個：SEQ ID NO：316、SEQ ID NO：317、SEQ ID NO：318及SEQ ID NO：319。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含具有SEQ ID NO：225之重鏈可變結構域(VH)序列。在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含具有SEQ ID NO：151之輕鏈可變結構域(VL)序列。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含選自SEQ ID NO：207-224中任一個之重鏈可變結構域(VH)序列。在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含選自SEQ ID NO：145-150中任一個之輕鏈可變結構域(VL)序列。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含與SEQ ID NO：221之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中任一個之序列一致性的重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%中任一個之一致性的VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：221中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：221中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一 個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1、(b)含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2及(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：149之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：149中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：149中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR序列：(a)含SEQ ID NO：87之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：119之胺基酸序列的HVR-L3。在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含如以上所提供之任何實施例中之VH及如以上所提供之任何實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：221及SEQ ID NO：149之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供與本文所提供之抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗KLK5抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種與包含SEQ ID NO：221之VH序列及SEQ ID NO：149之VL序列的抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗體。在某些實施例中，提供一種當結合至KLK5時產生熱力學抗原決定基之抗體，如藉由氫交換質譜法所量測，其包含選自由以下組成之群之序列中的一或多個：SEQ ID NO：316、SEQ ID NO：317、SEQ ID NO：318及SEQ ID NO：319。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含具有SEQ ID NO：257之重鏈可變結構域(VH)序列。在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含具有SEQ ID NO：162之輕鏈可變結構域(VL)序列。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含選自SEQ ID NO：229-256中任一個之重鏈可變結構域(VH)序列。在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含選自SEQ ID NO：155-161中任一個之輕鏈可變結構域(VL)序列。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含與SEQ ID NO：248之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中任一個之序列一致性的重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%中任一個之一致性的VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：248中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：248中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：24之胺基酸序列的HVR-H1、(b)含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的HVR-H2及(c)含SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：160之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列 之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：160中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：160中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR序列：(a)含SEQ ID NO：91之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：122之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含如以上所提供之任何實施例中之VH及如以上所提供之任何實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：248及SEQ ID NO：160之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供與本文所提供之抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗KLK5抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種與包含SEQ ID NO：248之VH序列及SEQ ID NO：160之VL序列的抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗體。
本文提供這樣一類抗體，其包括含根據圖14A、15A及/或16A中所描繪之Kabat編號之HVR1-LC、HVR2-LC及HVR3-LC序列的輕鏈可變結構域，及含根據圖14B、15B及/或16B中所描繪之Kabat編號之HVR1-HC、HVR2-HC及HVR3-HC序列的重鏈可變結構域。在一些實施例中，該抗體包括含HVR1-LC、HVR2-LC及HVR3-LC序列的輕鏈可變結構域及如圖14A、15A及/或16A中所描繪之FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC及/或FR4-LC序列。在一些實施例中，該抗體包括含HVR1-HC、HVR2-HC及HVR3-HC序列之重鏈可變結構域及如圖14B、15B及/或16B中所描繪之FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC及/或FR4-HC序列。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體係單株抗體，包括嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。在一個實施例中，抗KLK5抗體係人類化的。在一個實施例中，抗KLK5抗體包含如以上任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在一個實施例中，抗KLK5抗體係抗體片段，例如Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2 片段。在另一個實施例中，該抗體係全長抗體，例如完整IgG1抗體或完整IgG4抗體，或如本文所定義之其他抗體類別或同型。
本文亦提供一種特異性結合至人KLK5之抗體，其中根據標準蛋白酶編號，該抗體結合至人KLK5上包含一或多個選自由以下組成之群之胺基酸殘基的抗原決定基：Pro130、Ser131、Ala132、Gly133、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177、Asp178、Gly184、Asp185、Lys186、Ala186A、Arg188、Asn223、Arg224、Pro225及Lys233。在一些實施例中，根據標準蛋白酶編號，該抗體結合至人KLK5上包含一或多個選自由以下組成之群之胺基酸殘基的抗原決定基：Pro130、Ser131、Ala132、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177、Asp178、Arg224及Lys233。在一些實施例中，根據標準蛋白酶編號，該抗體結合至人KLK5上包含一或多個選自由以下組成之群之胺基酸殘基的抗原決定基：Pro130、Ser131、Ala132、Gly133、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177及Lys233。在一些實施例中，根據標準蛋白酶編號，該抗體結合至人KLK5上包含一或多個選自由以下組成之群之胺基酸殘基的抗原決定基：Ser131、Ala132、Gly133、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Pro173、Arg174、Gly184、Asp185、Lys186、Ala186A、 Arg188、Asn223、Arg224及Pro225。
本文亦提供一種當結合至人KLK5時引起人KLK5之構象變化的抗體，其中該構象變化以別構作用引起受質結合位點及/或人KLK5活性位點之破壞。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體可以併入如以下所描述的任何特徵之一或其組合。
抗體8G10及其他實施例
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：14之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：32之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：62之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：79之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：112之胺基酸序列的HVR-L3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(a)含SEQ ID NO：14之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：32之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：62之胺基酸序列的HVR-H3。在一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：62之胺基酸序列的HVR-H3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：62之胺基酸序列的HVR-H3及含SEQ ID NO：112之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：62之胺基酸序列的HVR-H3、含SEQ ID NO：112之胺基酸序列的HVR-L3及含SEQ ID NO：32之胺基酸序列的HVR-H2。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：14之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：32之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：62之胺基酸序列的HVR-H3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(a)含SEQ ID NO：79之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：112之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：79之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：112之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列的VH結構域：(i)含SEQ ID NO：14之胺基酸序列的HVR-H1、(ii)含SEQ ID NO：32之胺基酸序列的HVR-H2及(iii)含SEQ ID NO：62之胺基酸序列的HVR-H3；以及(b)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列的VL結構域：(i)含SEQ ID NO：79之胺基酸序列的HVR-L1、(ii)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2及(c)含SEQ ID NO：112之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含SEQ ID NO：14之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：32之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：62之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：79之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：112之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含與SEQ ID NO：170之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中任一個之序列一致性的重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%中任一個之一致性的VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中， SEQ ID NO：170中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：170中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：14之胺基酸序列的HVR-H1、(b)含SEQ ID NO：32之胺基酸序列的HVR-H2及(c)含SEQ ID NO：62之胺基酸序列的HVR-H3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：131之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：131中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：131中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR序列：(a)含SEQ ID NO：79之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：112之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含如以上所提供之任何實施例中之VH及如以上所提供之任何實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：170及SEQ ID NO：131之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供與本文所提供之抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗KLK5抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種與包含SEQ ID NO：170之VH序列及SEQ ID NO：131之VL序列的抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗體。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體係單株抗體，包括嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。在一個實施例中，抗KLK5抗體係人類化的。在一個實施例中，抗KLK5抗體包含如以上任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在一個實施例中，抗KLK5抗體係抗體片段，例如Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2 片段。在另一個實施例中，該抗體係全長抗體，例如完整IgG1抗體或完整IgG4抗體，或如本文所定義之其他抗體類別或同型。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體可以併入如以下所描述的任何特徵之一或其組合。
抗體9B6及其他實施例
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：15之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：33之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：80之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：100之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：113之胺基酸序列的HVR-L3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(a)含SEQ ID NO：15之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：33之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的HVR-H3。在一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的HVR-H3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的HVR-H3及含SEQ ID NO：113之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實 施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的HVR-H3、含SEQ ID NO：113之胺基酸序列的HVR-L3及含SEQ ID NO：33之胺基酸序列的HVR-H2。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：15之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：33之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的HVR-H3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(a)含SEQ ID NO：80之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：100之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：113之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：80之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：100之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：113之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列的VH結構域：(i)含SEQ ID NO：15之胺基酸序列的HVR-H1、(ii)含SEQ ID NO：33之胺基酸序列的HVR-H2及(iii)含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的HVR-H3；以及(b)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列的VL結構域：(i)含SEQ ID NO：80之胺基酸序列的HVR-L1、(ii)含SEQ ID NO：100之胺基酸序列的HVR-L2及(c)含SEQ ID NO：113之胺基酸序列的HVR-L3。在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含SEQ ID NO：15之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：33之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：80之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：100之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：113之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含與SEQ ID NO：171之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、 99%或100%中任一個之序列一致性的重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%中任一個之一致性的VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：171中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：171中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：15之胺基酸序列的HVR-H1、(b)含SEQ ID NO：33之胺基酸序列的HVR-H2及(c)含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的HVR-H3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：132之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：132中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：132中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR序列：(a)含SEQ ID NO：80之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：100之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：113之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含如以上所提供之任何實施例中之VH及如以上所提供之任何實施例中之VL。在一個實施 例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：171及SEQ ID NO：132之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供與本文所提供之抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗KLK5抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種與包含SEQ ID NO：171之VH序列及SEQ ID NO：132之VL序列的抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗體。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體係單株抗體，包括嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。在一個實施例中，抗KLK5抗體係人類化的。在一個實施例中，抗KLK5抗體包含如以上任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在一個實施例中，抗KLK5抗體係抗體片段，例如Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2 片段。在另一個實施例中，該抗體係全長抗體，例如完整IgG1抗體或完整IgG4抗體，或如本文所定義之其他抗體類別或同型。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體可以併入如以下所描述的任何特徵之一或其組合。
抗體2-3F4及其他實施例
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：16之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：34之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：81之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：114之胺基酸序列的HVR-L3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(a)含SEQ ID NO：16之胺基酸序列的 HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：34之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的HVR-H3。在一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的HVR-H3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的HVR-H3及含SEQ ID NO：114之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的HVR-H3、含SEQ ID NO：114之胺基酸序列的HVR-L3及含SEQ ID NO：34之胺基酸序列的HVR-H2。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：16之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：34之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的HVR-H3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(a)含SEQ ID NO：81之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：114之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：81之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：114之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列的VH結構域：(i)含SEQ ID NO：16之胺基酸序列的HVR-H1、(ii)含SEQ ID NO：34之胺基酸序列的HVR-H2及(iii)含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的HVR-H3；以及(b)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列的VL結構域：(i)含SEQ ID NO：81之胺基酸序列的HVR-L1、(ii)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2及(c)含SEQ ID NO：114之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含SEQ ID NO：16之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：34之胺基酸序列的HVR-H2；(c) 含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：81之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：114之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含與SEQ ID NO：172之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中任一個之序列一致性的重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%中任一個之一致性的VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：172中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：172中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：16之胺基酸序列的HVR-H1、(b)含SEQ ID NO：34之胺基酸序列的HVR-H2及(c)含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的HVR-H3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：133之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：133中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：133中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中， VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR序列：(a)含SEQ ID NO：81之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：114之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含如以上所提供之任何實施例中之VH及如以上所提供之任何實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：172及SEQ ID NO：133之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供與本文所提供之抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗KLK5抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種與包含SEQ ID NO：172之VH序列及SEQ ID NO：133之VL序列的抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗體。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體係單株抗體，包括嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。在一個實施例中，抗KLK5抗體係人類化的。在一個實施例中，抗KLK5抗體包含如以上任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在一個實施例中，抗KLK5抗體係抗體片段，例如Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2 片段。在另一個實施例中，該抗體係全長抗體，例如完整IgG1抗體或完整IgG4抗體，或如本文所定義之其他抗體類別或同型。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體可以併入如以下所描述的任何特徵之一或其組合。
抗10C5及其他實施例
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：17之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：35之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：65 之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：82之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：101之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：115之胺基酸序列的HVR-L3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(a)含SEQ ID NO：17之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：35之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的HVR-H3。在一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的HVR-H3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的HVR-H3及含SEQ ID NO：115之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的HVR-H3、含SEQ ID NO：115之胺基酸序列的HVR-L3及含SEQ ID NO：35之胺基酸序列的HVR-H2。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：17之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：35之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的HVR-H3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(a)含SEQ ID NO：82之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：101之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：115之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：82之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：101之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：115之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列的VH結構域：(i)含SEQ ID NO：17之胺基酸序列的HVR-H1、(ii)含SEQ ID NO：35之胺基酸序列的HVR-H2及(iii)含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的HVR-H3；以及(b)含至少一個、至少兩個或全 部三個選自以下之VL HVR序列的VL結構域：(i)含SEQ ID NO：82之胺基酸序列的HVR-L1、(ii)含SEQ ID NO：101之胺基酸序列的HVR-L2及(c)含SEQ ID NO：115之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含SEQ ID NO：17之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：35之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：82之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：101之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：115之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含與SEQ ID NO：201之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中任一個之序列一致性的重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%中任一個之一致性的VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：201中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：201中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：17之胺基酸序列的HVR-H1、(b)含SEQ ID NO：35之胺基酸序列的HVR-H2及(c)含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的HVR-H3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：139之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的 VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：139中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：139中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR序列：(a)含SEQ ID NO：82之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：101之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：115之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含如以上所提供之任何實施例中之VH及如以上所提供之任何實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：201及SEQ ID NO：139之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供與本文所提供之抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗KLK5抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種與包含SEQ ID NO：201之VH序列及SEQ ID NO：139之VL序列的抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗體。在某些實施例中，提供一種當結合至KLK5時產生熱力學抗原決定基之抗體，如藉由氫交換質譜法所量測，其包含選自由以下組成之群之序列中的一或多個：SEQ ID NO：316、SEQ ID NO：317、SEQ ID NO：318及SEQ ID NO：319。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體係單株抗體，包括嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。在一個實施例中，抗KLK5抗體係人類化的。在一個實施例中，抗KLK5抗體包含如以上任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含一或多個選自以下之重鏈構 架序列的VH結構域：(a)SEQ ID NO：333之重鏈構架區1(HC-FR1)；(b)SEQ ID NO：334之重鏈構架區2(HC-FR2)；(c)SEQ ID NO：335之重鏈構架區3(HC-FR3)；以及(d)SEQ ID NO：336之重鏈構架區4(HC-FR4)。
在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：333之HC-FR1的VH結構域。在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：334之HC-FR2的VH結構域。在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：335之HC-FR3的VH結構域。在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：336之HC-FR4的VH結構域。
在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含一或多個選自以下之輕鏈構架序列的VL結構域：(a)SEQ ID NO：329之輕鏈構架區1(LC-FR1)；(b)SEQ ID NO：330之輕鏈構架區2(LC-FR2)；(c)SEQ ID NO：331之輕鏈構架區3(LC-FR3)；以及(d)SEQ ID NO：332之輕鏈構架區4(LC-FR4)。
在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：329之LC-FR1的VL結構域。在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：330之LC-FR2的VL結構域。在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：331之LC-FR3的VL結構域。在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：332之LC-FR4的VL結構域。
在一個實施例中，抗KLK5抗體係抗體片段，例如Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2 片段。在另一個實施例中，該抗體係全長抗體，例如完整IgG1抗體或完整IgG4抗體，或如本文所定義之其他抗體類別或同型。
本文亦提供一種特異性結合至人KLK5之抗體，其中根據標準蛋白酶編號，該抗體結合至人KLK5上包含一或多個選自由以下組成之群之胺基酸殘基的抗原決定基：Pro130、Ser131、Ala132、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、 Ile176、Asp177、Asp178、Arg224及Lys233。在一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：17之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：35之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：82之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：101之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：115之胺基酸序列的HVR-L3。在一個實施例中，該抗體包含SEQ ID NO：201及SEQ ID NO：139中之VH及VL序列。
本文亦提供一種當結合至人KLK5時引起人KLK5之構象變化的抗體，其中該構象變化以別構作用引起受質結合位點及/或人KLK5活性位點之破壞。在一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：17之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：35之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：82之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：101之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：115之胺基酸序列的HVR-L3。在一個實施例中，該抗體包含SEQ ID NO：201及SEQ ID NO：139中之VH及VL序列。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體可以併入如以下所描述的任何特徵之一或其組合。
抗2B11及其他實施例
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：18之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：39之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：66之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：83之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：102之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：116之胺基酸序列的HVR-L3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩 個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(a)含SEQ ID NO：18之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：39之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：66之胺基酸序列的HVR-H3。在一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：66之胺基酸序列的HVR-H3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：66之胺基酸序列的HVR-H3及含SEQ ID NO：116之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：66之胺基酸序列的HVR-H3、含SEQ ID NO：116之胺基酸序列的HVR-L3及含SEQ ID NO：39之胺基酸序列的HVR-H2。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：18之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：39之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：66之胺基酸序列的HVR-H3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(a)含SEQ ID NO：83之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：102之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：116之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：83之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：102之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：116之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列的VH結構域：(i)含SEQ ID NO：18之胺基酸序列的HVR-H1、(ii)含SEQ ID NO：39之胺基酸序列的HVR-H2及(iii)含SEQ ID NO：66之胺基酸序列的HVR-H3；以及(b)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列的VL結構域：(i)含SEQ ID NO：83之胺基酸序列的HVR-L1、(ii)含SEQ ID NO：102之胺基酸序列的HVR-L2及(c)含SEQ ID NO：116之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含SEQ ID NO：18 之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：39之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：66之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：83之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：102之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：116之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含與SEQ ID NO：203之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中任一個之序列一致性的重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%中任一個之一致性的VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：203中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：203中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：18之胺基酸序列的HVR-H1、(b)含SEQ ID NO：39之胺基酸序列的HVR-H2及(c)含SEQ ID NO：66之胺基酸序列的HVR-H3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：141之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：141中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含 SEQ ID NO：141中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR序列：(a)含SEQ ID NO：83之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：102之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：116之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含如以上所提供之任何實施例中之VH及如以上所提供之任何實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：203及SEQ ID NO：141之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供與本文所提供之抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗KLK5抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種與包含SEQ ID NO：203之VH序列及SEQ ID NO：141之VL序列的抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗體。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體係單株抗體，包括嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。在一個實施例中，抗KLK5抗體係人類化的。在一個實施例中，抗KLK5抗體包含如以上任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在一個實施例中，抗KLK5抗體係抗體片段，例如Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2 片段。在另一個實施例中，該抗體係全長抗體，例如完整IgG1抗體或完整IgG4抗體，或如本文所定義之其他抗體類別或同型。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體可以併入如以下所描述的任何特徵之一或其組合。
抗10H3及其他實施例
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：19之胺基酸序列 的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：40之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：67之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：84之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：103之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：117之胺基酸序列的HVR-L3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(a)含SEQ ID NO：19之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：40之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：67之胺基酸序列的HVR-H3。在一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：67之胺基酸序列的HVR-H3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：67之胺基酸序列的HVR-H3及含SEQ ID NO：117之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：67之胺基酸序列的HVR-H3、含SEQ ID NO：117之胺基酸序列的HVR-L3及含SEQ ID NO：40之胺基酸序列的HVR-H2。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：40之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：67之胺基酸序列的HVR-H3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(a)含SEQ ID NO：84之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：103之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：117之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：84之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：103之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：117之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列的VH結構域：(i)含SEQ ID NO：19之胺基酸序列的HVR-H1、(ii)含SEQ ID NO：40之胺基酸序列的HVR-H2及(iii) 含SEQ ID NO：67之胺基酸序列的HVR-H3；以及(b)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列的VL結構域：(i)含SEQ ID NO：84之胺基酸序列的HVR-L1、(ii)含SEQ ID NO：103之胺基酸序列的HVR-L2及(c)含SEQ ID NO：117之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含SEQ ID NO：19之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：40之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：67之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：84之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：103之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：117之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含與SEQ ID NO：204之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中任一個之序列一致性的重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%中任一個之一致性的VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：204中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：204中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：19之胺基酸序列的HVR-H1、(b)含SEQ ID NO：40之胺基酸序列的HVR-H2及(c)含SEQ ID NO：67之胺基酸序列的HVR-H3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：142之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有 至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：142中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：142中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR序列：(a)含SEQ ID NO：84之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：103之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：117之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含如以上所提供之任何實施例中之VH及如以上所提供之任何實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：204及SEQ ID NO：142之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供與本文所提供之抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗KLK5抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種與包含SEQ ID NO：204之VH序列及SEQ ID NO：142之VL序列的抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗體。在某些實施例中，提供一種當結合至KLK5時產生熱力學抗原決定基之抗體，如藉由氫交換質譜法所量測，其包含選自由以下組成之群之序列中的一或多個：SEQ ID NO：316、SEQ ID NO：317、SEQ ID NO：318及SEQ ID NO：319。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體係單株抗體，包括嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。在一個實施例中，抗KLK5抗體係人類化的。在一個實施例中，抗KLK5抗體包含如以上任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在一個實施例中，抗KLK5抗體係抗體片段，例如Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2 片段。在另一個實施例中，該抗體係全長抗體，例如完整IgG1抗體或完整IgG4抗體，或如本文所定義之其他抗體類別或同型。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體可以併入如以下所描述的任何特徵之一或其組合。
抗體9H3及其他實施例
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：20之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：33之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：68之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：85之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：103之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(a)含SEQ ID NO：20之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：33之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：68之胺基酸序列的HVR-H3。在一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：68之胺基酸序列的HVR-H3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：68之胺基酸序列的HVR-H3及含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：68之胺基酸序列的HVR-H3、含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3及含SEQ ID NO：33之胺基酸序列的HVR-H2。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：20之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：33之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：68之胺基酸序列的HVR-H3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩 個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(a)含SEQ ID NO：85之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：103之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：85之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：103之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列的VH結構域：(i)含SEQ ID NO：20之胺基酸序列的HVR-H1、(ii)含SEQ ID NO：33之胺基酸序列的HVR-H2及(iii)含SEQ ID NO：68之胺基酸序列的HVR-H3；以及(b)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列的VL結構域：(i)含SEQ ID NO：85之胺基酸序列的HVR-L1、(ii)含SEQ ID NO：103之胺基酸序列的HVR-L2及(c)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含SEQ ID NO：20之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：33之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：68之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：85之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：103之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含與SEQ ID NO：205之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中任一個之序列一致性的重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%中任一個之一致性的VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：205中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例 中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：205中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：20之胺基酸序列的HVR-H1、(b)含SEQ ID NO：33之胺基酸序列的HVR-H2及(c)含SEQ ID NO：68之胺基酸序列的HVR-H3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：143之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：143中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：143中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR序列：(a)含SEQ ID NO：85之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：103之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含如以上所提供之任何實施例中之VH及如以上所提供之任何實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：205及SEQ ID NO：1143之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供與本文所提供之抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗KLK5抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種與包含SEQ ID NO：205之VH序列及SEQ ID NO：143之VL序列的抗KLK5抗體結合至相同抗 原決定基之抗體。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體係單株抗體，包括嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。在一個實施例中，抗KLK5抗體係人類化的。在一個實施例中，抗KLK5抗體包含如以上任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在一個實施例中，抗KLK5抗體係抗體片段，例如Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2 片段。在另一個實施例中，該抗體係全長抗體，例如完整IgG1抗體或完整IgG4抗體，或如本文所定義之其他抗體類別或同型。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體可以併入如以下所描述的任何特徵之一或其組合。
抗體8B7及其他實施例
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：21之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：41之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：86之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：104之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(a)含SEQ ID NO：21之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：41之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3。在一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3及含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：68之胺基酸序列的HVR-H3、含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3及含SEQ ID NO：41之胺基酸序列的HVR-H2。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：21之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：41之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(a)含SEQ ID NO：86之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：104之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：86之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：104之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列的VH結構域：(i)含SEQ ID NO：21之胺基酸序列的HVR-H1、(ii)含SEQ ID NO：41之胺基酸序列的HVR-H2及(iii)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3；以及(b)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列的VL結構域：(i)含SEQ ID NO：86之胺基酸序列的HVR-L1、(ii)含SEQ ID NO：104之胺基酸序列的HVR-L2及(c)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含SEQ ID NO：21之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：41之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：86之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：104之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含與SEQ ID NO：206之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、 99%或100%中任一個之序列一致性的重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%中任一個之一致性的VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：206中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：206中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：21之胺基酸序列的HVR-H1、(b)含SEQ ID NO：41之胺基酸序列的HVR-H2及(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：144之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：144中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：144中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR序列：(a)含SEQ ID NO：86之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：104之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含如以上所提供之任何實施例中之VH及如以上所提供之任何實施例中之VL。在一個實施 例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：206及SEQ ID NO：144之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供與本文所提供之抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗KLK5抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種與包含SEQ ID NO：206之VH序列及SEQ ID NO：144之VL序列的抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗體。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體係單株抗體，包括嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。在一個實施例中，抗KLK5抗體係人類化的。在一個實施例中，抗KLK5抗體包含如以上任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在一個實施例中，抗KLK5抗體係抗體片段，例如Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2 片段。在另一個實施例中，該抗體係全長抗體，例如完整IgG1抗體或完整IgG4抗體，或如本文所定義之其他抗體類別或同型。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體可以併入如以下所描述的任何特徵之一或其組合。
抗體9H5及其他實施例
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：87之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：119之胺基酸序列的HVR-L3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的 HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3。在一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3及含SEQ ID NO：119之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3、含SEQ ID NO：119之胺基酸序列的HVR-L3及含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(a)含SEQ ID NO：87之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：119之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：87之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：119之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列的VH結構域：(i)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1、(ii)含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2及(iii)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3；以及(b)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列的VL結構域：(i)含SEQ ID NO：87之胺基酸序列的HVR-L1、(ii)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2及(c)含SEQ ID NO：119之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2；(c) 含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：87之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：119之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含與SEQ ID NO：221之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中任一個之序列一致性的重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%中任一個之一致性的VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：221中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：221中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1、(b)含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2及(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：149之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：149中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：149中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中， VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR序列：(a)含SEQ ID NO：87之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：119之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含如以上所提供之任何實施例中之VH及如以上所提供之任何實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：221及SEQ ID NO：149之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供與本文所提供之抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗KLK5抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種與包含SEQ ID NO：221之VH序列及SEQ ID NO：149之VL序列的抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗體。在某些實施例中，提供一種當結合至KLK5時產生熱力學抗原決定基之抗體，如藉由氫交換質譜法所量測，其包含選自由以下組成之群之序列中的一或多個：SEQ ID NO：316、SEQ ID NO：317、SEQ ID NO：318及SEQ ID NO：319。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體係單株抗體，包括嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。在一個實施例中，抗KLK5抗體係人類化的。在一個實施例中，抗KLK5抗體包含如以上任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含一或多個選自以下之重鏈構架序列的VH結構域：(a)SEQ ID NO：341之重鏈構架區1(HC-FR1)；(b)SEQ ID NO：342之重鏈構架區2(HC-FR2)；(c)SEQ ID NO：343之重鏈構架區3(HC-FR3)；以及(d)SEQ ID NO：344之重鏈構架區4(HC-FR4)。
在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：341之HC-FR1的VH結構域。在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：342之HC-FR2 的VH結構域。在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：343之HC-FR3的VH結構域。在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：344之HC-FR4的VH結構域。
在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含一或多個選自以下之輕鏈構架序列的VL結構域：(a)SEQ ID NO：337之輕鏈構架區1(LC-FR1)；(b)SEQ ID NO：338之輕鏈構架區2(LC-FR2)；(c)SEQ ID NO：339之輕鏈構架區3(LC-FR3)；以及(d)SEQ ID NO：340之輕鏈構架區4(LC-FR4)。
在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：337之LC-FR1的VL結構域。在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：338之LC-FR2的VL結構域。在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：339之LC-FR3的VL結構域。在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：340之LC-FR4的VL結構域。
在一個實施例中，抗KLK5抗體係抗體片段，例如Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2 片段。在另一個實施例中，該抗體係全長抗體，例如完整IgG1抗體或完整IgG4抗體，或如本文所定義之其他抗體類別或同型。
本文亦提供一種特異性結合至人KLK5之抗體，其中根據標準蛋白酶編號，該抗體結合至人KLK5上包含一或多個選自由以下組成之群之胺基酸殘基的抗原決定基：Pro130、Ser131、Ala132、Gly133、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177及Lys233。在一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：87之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：119之胺基酸序列的HVR-L3。在一個實施例中，該抗體包含SEQ ID NO：221 及SEQ ID NO：149中之VH及VL序列。
本文亦提供一種當結合至人KLK5時引起人KLK5之構象變化的抗體，其中該構象變化以別構作用引起受質結合位點及/或人KLK5活性位點之破壞。在一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：87之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：119之胺基酸序列的HVR-L3。在一個實施例中，該抗體包含SEQ ID NO：221及SEQ ID NO：149中之VH及VL序列。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體可以併入如以下所描述的任何特徵之一或其組合。
抗體9F2及其他實施例
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：46之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：88之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：120之胺基酸序列的HVR-L3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：46之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3。在一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3及含SEQ ID NO：120之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實 施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3、含SEQ ID NO：120之胺基酸序列的HVR-L3及含SEQ ID NO：46之胺基酸序列的HVR-H2。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：46之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(a)含SEQ ID NO：88之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：120之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：88之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：120之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列的VH結構域：(i)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1、(ii)含SEQ ID NO：46之胺基酸序列的HVR-H2及(iii)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3；以及(b)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列的VL結構域：(i)含SEQ ID NO：88之胺基酸序列的HVR-L1、(ii)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2及(c)含SEQ ID NO：120之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：46之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：88之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：120之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含與SEQ ID NO：226 之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中任一個之序列一致性的重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%中任一個之一致性的VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：226中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：226中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1、(b)含SEQ ID NO：46之胺基酸序列的HVR-H2及(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：152之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：152中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：152中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR序列：(a)含SEQ ID NO：88之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：120之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含如以上所 提供之任何實施例中之VH及如以上所提供之任何實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：226及SEQ ID NO：152之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供與本文所提供之抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗KLK5抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種與包含SEQ ID NO：226之VH序列及SEQ ID NO：152之VL序列的抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗體。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體係單株抗體，包括嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。在一個實施例中，抗KLK5抗體係人類化的。在一個實施例中，抗KLK5抗體包含如以上任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在一個實施例中，抗KLK5抗體係抗體片段，例如Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2 片段。在另一個實施例中，該抗體係全長抗體，例如完整IgG1抗體或完整IgG4抗體，或如本文所定義之其他抗體類別或同型。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體可以併入如以下所描述的任何特徵之一或其組合。
抗10C8及其他實施例
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：70之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：89之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩 個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：70之胺基酸序列的HVR-H3。在一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：70之胺基酸序列的HVR-H3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：70之胺基酸序列的HVR-H3及含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：70之胺基酸序列的HVR-H3、含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3及含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：70之胺基酸序列的HVR-H3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(a)含SEQ ID NO：89之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：89之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列的VH結構域：(i)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1、(ii)含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2及(iii)含SEQ ID NO：70之胺基酸序列的HVR-H3；以及(b)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列的VL結構域：(i)含SEQ ID NO：89之胺基酸序列的HVR-L1、(ii)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2及(c)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含SEQ ID NO：22 之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：70之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：89之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含與SEQ ID NO：227之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中任一個之序列一致性的重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%中任一個之一致性的VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：227中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：227中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1、(b)含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2及(c)含SEQ ID NO：70之胺基酸序列的HVR-H3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：153之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：153中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含 SEQ ID NO：153中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR序列：(a)含SEQ ID NO：89之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含如以上所提供之任何實施例中之VH及如以上所提供之任何實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：227及SEQ ID NO：153之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供與本文所提供之抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗KLK5抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種與包含SEQ ID NO：227之VH序列及SEQ ID NO：153之VL序列的抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗體。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體係單株抗體，包括嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。在一個實施例中，抗KLK5抗體係人類化的。在一個實施例中，抗KLK5抗體包含如以上任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在一個實施例中，抗KLK5抗體係抗體片段，例如Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2 片段。在另一個實施例中，該抗體係全長抗體，例如完整IgG1抗體或完整IgG4抗體，或如本文所定義之其他抗體類別或同型。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體可以併入如以下所描述的任何特徵之一或其組合。
抗體8F5及其他實施例
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：23之胺基酸序列 的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：47之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：71之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：90之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：106之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：121之胺基酸序列的HVR-L3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(a)含SEQ ID NO：23之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：47之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：71之胺基酸序列的HVR-H3。在一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：71之胺基酸序列的HVR-H3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：71之胺基酸序列的HVR-H3及含SEQ ID NO：121之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：70之胺基酸序列的HVR-H3、含SEQ ID NO：121之胺基酸序列的HVR-L3及含SEQ ID NO：47之胺基酸序列的HVR-H2。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：23之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：47之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：71之胺基酸序列的HVR-H3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(a)含SEQ ID NO：90之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：106之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：121之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：90之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：106之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：121之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列的VH結構域：(i)含SEQ ID NO：23之胺基酸序列的HVR-H1、(ii)含SEQ ID NO：47之胺基酸序列的HVR-H2及(iii) 含SEQ ID NO：71之胺基酸序列的HVR-H3；以及(b)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列的VL結構域：(i)含SEQ ID NO：90之胺基酸序列的HVR-L1、(ii)含SEQ ID NO：106之胺基酸序列的HVR-L2及(c)含SEQ ID NO：121之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含SEQ ID NO：23之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：47之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：71之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：90之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：106之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：121之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含與SEQ ID NO：228之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中任一個之序列一致性的重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%中任一個之一致性的VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：228中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：228中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：23之胺基酸序列的HVR-H1、(b)含SEQ ID NO：47之胺基酸序列的HVR-H2及(c)含SEQ ID NO：71之胺基酸序列的HVR-H3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：154之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有 至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：154中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：154中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR序列：(a)含SEQ ID NO：90之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：106之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：121之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含如以上所提供之任何實施例中之VH及如以上所提供之任何實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：228及SEQ ID NO：154之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供與本文所提供之抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗KLK5抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種與包含SEQ ID NO：228之VH序列及SEQ ID NO：154之VL序列的抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗體。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體係單株抗體，包括嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。在一個實施例中，抗KLK5抗體係人類化的。在一個實施例中，抗KLK5抗體包含如以上任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在一個實施例中，抗KLK5抗體係抗體片段，例如Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2 片段。在另一個實施例中，該抗體係全長抗體，例如完整IgG1抗體或完整IgG4抗體，或如本文所定義之其他抗體類別或同型。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體可以併入如以下所描述的任何特徵之一或其組合。
抗體3-3F5及其他實施例
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：24之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：91之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：122之胺基酸序列的HVR-L3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(a)含SEQ ID NO：24之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3。在一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3及含SEQ ID NO：122之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括含SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3、含SEQ ID NO：122之胺基酸序列的HVR-L3及含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的HVR-H2。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：24之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的HVR-H2；以及(c)含SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3。
在一個態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(a)含SEQ ID NO：91之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：122之胺基酸序列的HVR-L3。在另一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：91之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：122之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列的VH結構域：(i)含SEQ ID NO：24之胺基酸序列的HVR-H1、(ii)含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的HVR-H2及(iii)含SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3；以及(b)含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列的VL結構域：(i)含SEQ ID NO：91之胺基酸序列的HVR-L1、(ii)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2及(c)含SEQ ID NO：122之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包括(a)含SEQ ID NO：24之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：91之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：122之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其包含與SEQ ID NO：248之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中任一個之序列一致性的重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%中任一個之一致性的VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：248中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：248中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)含SEQ ID NO：24之胺基酸序列的HVR-H1、(b)含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的HVR-H2及(c)含SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：160之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗KLK5抗體保持結合至KLK5的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO：160中總計1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失係在HVR外之區域(亦即，在FR中)發生。視情況，抗KLK5抗體包含SEQ ID NO：160中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR序列：(a)含SEQ ID NO：91之胺基酸序列的HVR-L1；(b)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(c)含SEQ ID NO：122之胺基酸序列的HVR-L3。
在另一態樣中，提供一種抗KLK5抗體，其中該抗體包含如以上所提供之任何實施例中之VH及如以上所提供之任何實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體包含分別為SEQ ID NO：248及SEQ ID NO：160之VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供與本文所提供之抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗KLK5抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種與包含SEQ ID NO：248之VH序列及SEQ ID NO：160之VL序列的抗KLK5抗體結合至相同抗原決定基之抗體。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體係單株抗體，包括嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。在一個實施例中，抗KLK5抗體係人 類化的。在一個實施例中，抗KLK5抗體包含如以上任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含一或多個選自以下之重鏈構架序列的VH結構域：(a)SEQ ID NO：349之重鏈構架區1(HC-FR1)；(b)SEQ ID NO：350之重鏈構架區2(HC-FR2)；(c)SEQ ID NO：351之重鏈構架區3(HC-FR3)；以及(d)SEQ ID NO：352之重鏈構架區4(HC-FR4)。
在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：349之HC-FR1的VH結構域。在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：350之HC-FR2的VH結構域。在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：351之HC-FR3的VH結構域。在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：352之HC-FR4的VH結構域。
在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含一或多個選自以下之輕鏈構架序列的VL結構域：(a)SEQ ID NO：345之輕鏈構架區1(LC-FR1)；(b)SEQ ID NO：346之輕鏈構架區2(LC-FR2)；(c)SEQ ID NO：347之輕鏈構架區3(LC-FR3)；以及(d)SEQID NO：348之輕鏈構架區4(LC-FR4)。
在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：345之LC-FR1的VL結構域。在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：346之LC-FR2的VL結構域。在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：347之LC-FR3的VL結構域。在一個實施例中，抗KLK5抗體包括含SEQ ID NO：348之LC-FR4的VL結構域。
在一個實施例中，抗KLK5抗體係抗體片段，例如Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2 片段。在另一個實施例中，該抗體係全長抗體，例如完整IgG1抗體或完整IgG4抗體，或如本文所定義之其他抗體類別或同型。
本文亦提供一種特異性結合至人KLK5之抗體，其中根據標準蛋白 酶編號，該抗體結合至人KLK5上包含一或多個選自由以下組成之群之胺基酸殘基的抗原決定基：Ser131、Ala132、Gly133、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Pro173、Arg174、Gly184、Asp185、Lys186、Ala186A、Arg188、Asn223、Arg224及Pro225。在一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：24之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：91之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：122之胺基酸序列的HVR-L3。在一個實施例中，該抗體包含SEQ ID NO：248及SEQ ID NO：160中之VH及VL序列。
本文亦提供一種當結合至人KLK5時引起人KLK5之構象變化的抗體，其中該構象變化以別構作用引起受質結合位點及/或人KLK5之活性位點之破壞。在一個實施例中，該抗體包括(a)含SEQ ID NO：24之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：91之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：122之胺基酸序列的HVR-L3。在一個實施例中，該抗體包含SEQ ID NO：248及SEQ ID NO：160中之VH及VL序列。
在另一態樣中，根據以上任一實施例之抗KLK5抗體可以併入如以下所描述的任何特徵之一或其組合。
2.抗體親和力
在抗KLK5抗體中任一種之一些實施例中，該抗KLK5抗體與KLK5之結合親和力(解離常數Kd)
Figure TW201946935A_D0015
1μM，
Figure TW201946935A_D0016
100nM，
Figure TW201946935A_D0017
10nM，
Figure TW201946935A_D0018
1nM，
Figure TW201946935A_D0019
0.1nM，
Figure TW201946935A_D0020
0.01nM，或
Figure TW201946935A_D0021
0.001nM(例如10-8 M或更低，例如10-8 M至10-13 M，例如10-9 M至10-13 M)。
在一個實施方案中，Kd係藉由放射性標記抗原結合檢定(RIA)量測。在一個實施例中，RIA係以所關注抗體之Fab型式及其抗原進行。舉例而言，藉由在未標記抗原滴定系列存在下使Fab與最小濃度的(125 I)標記之抗原平衡，接著用塗佈抗Fab抗體之盤捕捉經結合抗原來量測Fab對抗原之溶液結合親和力(參見例如Chen等人，J.Mol.Biol. 293：865-881(1999))。為確定檢定條件，用含5μg/ml捕捉抗Fab抗體(Cappel Labs)之50mM碳酸鈉(pH 9.6)將MICROTITER® 多孔盤(Thermo Scientific)塗佈過夜，隨後在室溫(約23℃)下用含2%(w/v)牛血清白蛋白之PBS阻斷二至五小時。在非吸附盤(Nunc #269620)中，將100pM或26pM[125 I]-抗原與所關注Fab之連續稀釋液混合(例如與Presta等人，Cancer Res. 57：4593-4599(1997)中之抗VEGF抗體Fab-12評估相符)。接著培育所關注Fab過夜；不過，培育可以持續更長時間(例如約65小時)以確保達到平衡。此後，將混合物轉移至捕捉盤中，在室溫下進行培育(例如1小時)。接著移除溶液並用含0.1%聚山梨醇酯20(TWEEN-20® )之PBS洗滌盤八次。當盤乾燥時，添加150微升/孔閃爍體(MICROSCINT-20TM ；Packard)，並在TOPCOUNTTM γ計數器(Packard)上對盤計數十分鐘。選擇提供小於或等於20%最大結合之每一Fab的濃度用於競爭性結合檢定中。
根據另一實施例，Kd係使用BIACORE® 表面電漿共振檢定量測。舉例而言，在25℃下，用固定抗原CM5晶片，在約10個反應單元(RU)下，使用BIACORE® -2000或BIACORE® -3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)進行檢定。在一個實施例中，根據供應商之說明，用N -乙基-N’ -(3-二甲基胺基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)及N -羥基琥珀醯亞胺(NHS)使羧甲基化之葡聚糖生物感測器晶片(CM5,BIACORE,Inc.)活化。用10mM乙酸鈉(pH 4.8)將抗原稀釋至5μg/ml(約0.2μM)，隨後以5微升/分鐘流速注射以達到約10個反應單元(RU)之偶合蛋白。在注射抗原之後，注射1M乙醇胺以阻斷未反應基團。對於動力學量測， 在25℃下，以約25μl/min流速將Fab之兩倍連續稀釋液(0.78nM至500nM)注入含0.05%聚山梨醇酯20(TWEEN-20TM )界面活性劑之PBS(PBST)中。使用簡單的一對一朗繆爾結合模型(one-to-one Langmuir binding model)(BIACORE® 評價軟體3.2版)，藉由同時擬合締合及解離感測圖來計算締合速率(kon )及解離速率(koff )。平衡解離常數(Kd)係以koff /kon 比率計算。參見例如Chen等人，J.Mol.Biol. 293：865-881(1999)。若以上表面電漿共振檢定測定締合速率超過106 M-1 s-1 ，則該締合速率可以藉由使用螢光猝滅技術測定，該技術以分光計，諸如裝備停流儀之分光光度計(Aviv Instruments)或帶有經攪拌比色杯之8000系列SLM-AMINCOTM 分光光度計(ThermoSpectronic)量測在25℃下，在遞增濃度之抗原存在下含20nM抗-抗原抗體(Fab形式)之PBS(pH 7.2)之螢光發射強度的增加或降低(激發=295nm；發射=340nm；16nm帶通)。
3.抗體片段
在一些實施例中，本文所提供之抗KLK5抗體係抗體片段。抗體片段包括但不限於Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2 、Fv及scFv片段，以及下文所述之其他片段。關於某些抗體片段之評述，參見Hudson等人，Nat.Med. 9：129-134(2003)。關於scFv片段之評述，參見例如Pluckthün,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies ，第113卷，Rosenburg及Moore編，(Springer-Verlag,New York)，第269-315頁(1994)；另參見WO 93/16185；及美國專利第5,571,894號及第5,587,458號。關於包含救助受體結合抗原決定基殘基並具有較高活體內半衰期之Fab及F(ab')2 片段的論述，參見美國專利第5,869,046號。
雙功能抗體係具有兩個抗原結合位點之抗體片段，其可以為二價或雙特異性的。參見例如EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人，Nat.Med. 9：129-134(2003)；及Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448(1993)。三功能抗體及四功能抗體亦描述於Hudson等人，Nat.Med. 9：129-134 (2003)中。
單結構域抗體係包含抗體之所有或一部分重鏈可變結構域或所有或一部分輕鏈可變結構域的抗體片段。在某些實施例中，單結構域抗體係人類單結構域抗體(Domantis,Inc.,Waltham,MA；參見例如美國專利第6,248,516 B1號)。
如本文所描述，抗體片段可藉由各種方法製備，包括但不限於完整抗體之蛋白水解消化以及藉由重組宿主細胞(例如大腸桿菌或噬菌體)產生。
4.嵌合抗體及人類化抗體
在一些實施例中，本文所提供之抗KLK5抗體係嵌合抗體。某些嵌合抗體在例如美國專利第4,816,567號；及Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA ,81：6851-6855(1984))中有描述。在一個實例中，嵌合抗體包含非人類可變區(例如來源於小鼠、大鼠、倉鼠、兔或如猴之類非人類靈長類動物的可變區)及人類恆定區。在另一實例中，嵌合抗體係「類別轉換」抗體，其中類別或子類已由親本抗體之類別或子類改變。嵌合抗體包括其抗原結合片段。
在某些實施例中，嵌合抗體係人類化抗體。典型地，使非人類抗體人類化以降低對人類之免疫原性，同時保留親本非人類抗體之特異性及親和力。一般而言，人類化抗體包含一或多個可變結構域，其中HVR(例如CDR)(或其部分)來源於非人類抗體，且FR(或其部分)來源於人類抗體序列。人類化抗體視情況另包含人類恆定區之至少一部分。在一些實施例中，人類化抗體中的一些FR殘基經來自非人類抗體(例如得到HVR殘基之抗體)的相應殘基取代，例如以恢復或改善抗體特異性或親和力。
人類化抗體及其製備方法評述於例如Almagro及Fransson,Front.Biosci. 13：1619-1633(2008)中，且進一步描述於例如Riechmann等人，Nature 332：323-329(1988)；Queen等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 86：10029-10033(1989)；美國專利第5,821,337號、第7,527,791號、第6,982,321號及第7,087,409 號；Kashmiri等人，Methods 36：25-34(2005)(描述特異性決定區(SDR)移植)；Padlan,Mol.Immunol. 28：489-498(1991)(描述「重整表面」)；Dall’Acqua等人，Methods 36：43-60(2005)(描述「FR改組」)；及Osbourn等人，Methods 36：61-68(2005)及Klimka等人，Br.J.Cancer ,83：252-260(2000)(描述用於FR改組之「導引選擇」法)。
可以用於人類化之人類構架區包括但不限於：使用「最佳擬合」法選擇之構架區(參見例如Sims等人，J.Immunol. 151：2296(1993))；來源於具有特定亞組之輕鏈或重鏈可變區的人類抗體之共同序列的構架區(參見例如Carter等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA ,89：4285(1992)；及Presta等人，J.Immunol. ,151：2623(1993))；人類成熟(體細胞突變)構架區或人類生殖系構架區(參見例如Almagro及Fransson,Front.Biosci. 13：1619-1633(2008))；以及由篩選FR文庫得到之構架區(參見例如Baca等人，J.Biol.Chem. 272：10678-10684(1997)及Rosok等人，J.Biol.Chem. 271：22611-22618(1996))。
5.人類抗體
在一些實施例中，本文所提供之抗KLK5抗體係人類抗體。人類抗體可以使用此項技術中已知之各種技術製造。人類抗體大體上描述於van Dijk及van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol. 5：368-74(2001)，及Lonberg,Curr.Opin.Immunol. 20：450-459(2008)中。
人類抗體可以藉由過向轉殖基因動物投與免疫原來製備，該轉殖基因動物經修飾成響應於抗原攻擊而產生完整人類抗體或具有人類可變區之完整抗體。此類動物典型地含有置換內源性免疫球蛋白基因座或存在於染色體外或隨機整合至動物染色體中的全部或一部分人類免疫球蛋白基因座。在此類轉殖基因小鼠中，內源性免疫球蛋白基因座一般係不活化的。關於由轉殖基因動物獲得人類抗體之方法的評述，參見Lonberg,Nat.Biotech. 23：1117-1125(2005)。 亦參見例如美國專利第6,075,181號及第6,150,584號，其描述XENOMOUSETM 技術；美國專利第5,770,429號，其描述HUMAB®技術；美國專利第7,041,870號，其描述K-M MOUSE®技術；及美國專利申請公開案第US 2007/0061900號，其描述VELOCIMOUSE®技術。來自由該等動物產生之完整抗體的人類可變區可以例如藉由與不同人類恆定區組合進行進一步修飾。
人類抗體亦可藉由基於融合瘤之方法製備。已描述用於產生人類單株抗體之人類骨髓瘤及小鼠-人類異源骨髓瘤細胞株。(參見例如KozborJ.Immunol. ,133：3001(1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications ，第51-63頁(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；及Boerner等人，J.Immunol. ,147：86(1991)。)經由人類B細胞融合瘤技術產生之人類抗體亦描述於Li等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA ,103：3557-3562(2006)中。其他方法包括例如美國專利第7,189,826號(描述自融合瘤細胞株產生單株人類IgM抗體)及Ni,Xiandai Mianyixue ,26(4)：265-268(2006)(描述人類-人類融合瘤)中所描述之該等方法。人類融合瘤技術(三源融合瘤技術)亦描述於Vollmers及Brandlein,Histology and Histopathology ,20(3)：927-937(2005)，以及Vollmers及Brandlein,Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology ,27(3)：185-91(2005)中。
亦可藉由分離選自人類源性噬菌體呈現文庫之Fv純系可變結構域序列來產生人類抗體。接著，此類可變結構域序列可以與所希之的人類恆定結構域組合。下文描述自抗體文庫選擇人類抗體之技術。
6.文庫來源之抗體
抗KLK5抗體可以藉由篩選組合文庫中具有一或多種所希望活性之抗體來分離。舉例而言，此項技術中已知用於產生噬菌體呈現文庫及篩選該等文庫中具有所希望結合特徵之抗體的多種方法。此等方法評述於例如 Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology 178：1-37(O’Brien等人編，Human Press,Totowa,NJ,2001)中，且進一步描述於例如McCafferty等人，Nature 348：552-554；Clackson等人，Nature 352：624-628(1991)；Marks等人，J.Mol.Biol. 222：581-597(1992)；Marks及Bradbury,Methods in Molecular Biology 248：161-175(Lo編，Human Press,Totowa,NJ,2003)；Sidhu等人，J.Mol.Biol. 338(2)：299-310(2004)；Lee等人，J.Mol.Biol. 340(5)：1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34)：12467-12472(2004)；及Lee等人，J.Immunol.Methods 284(1-2)：119-132(2004)中。
在某些噬菌體呈現方法中，藉由聚合酶鏈反應(PCR)分別選殖VH及VL基因之譜系並在噬菌體文庫中隨機重組，接著可如Winter等人，Ann.Rev.Immunol. ,12：433-455(1994)中所述篩選抗原結合噬菌體。噬菌體典型地以單鏈Fv(scFv)片段或Fab片段形式呈現抗體片段。來自經免疫來源之文庫提供抗免疫原之高親和力抗體而無需構建融合瘤。作為替代，如Griffiths等人，EMBO J, 12：725-734(1993)中所述，可對天然譜系(例如來自人類)進行選殖以提供針對多種非自身抗原及自身抗原的單一抗體來源，無需進行任何免疫接種。最後，如Hoogenboom及Winter,J.Mol.Biol. ,227：381-388(1992)所述，亦可藉由自幹細胞選殖未重排之V基因區段並使用含有隨機序列之PCR引子編碼高度可變之CDR3區且完成活體外重排來合成產生天然文庫。描述人類抗體噬菌體文庫之專利公開案包括例如：美國專利第5,750,373號，以及美國專利公開案第2005/0079574號、第2005/0119455號、第2005/0266000號、第2007/0117126號、第2007/0160598號、第2007/0237764號、第2007/0292936號及第2009/0002360號。
自人類抗體文庫分離之抗體或抗體片段在本文中被視為人類抗體或人類抗體片段。
6.多特異性抗體
在一些實施例中，本文提供之抗KLK5抗體係多特異性抗體，例如雙特異性抗體。多特異性抗體係對至少兩個不同位點具有結合特異性之單株抗體。在某些實施例中，一種結合特異性係針對KLK5且另一種係針對任何其他抗原。在某些實施例中，雙特異性抗體可結合至KLK5之兩個不同抗原決定基。雙特異性抗體亦可用於將細胞毒性劑侷限於表現KLK5之細胞。雙特異性抗體可以製備成全長抗體或抗體片段形式。
用於製備多特異性抗體之技術包括但不限於具有不同特異性之兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對之重組共表現(參見Milstein及Cuello,Nature 305：537(1983))、WO 93/08829及Traunecker等人，EMBO J. 10：3655(1991))；及「孔中節(knob-in-hole)」工程改造(參見例如美國專利第5,731,168號)。多特異性抗體亦可藉由以下方式製備：工程改造靜電牽引作用以製備抗體Fc雜二聚體分子(WO 2009/089004A1)；使兩種或兩種以上抗體或片段交聯(參見例如美國專利第4,676,980號，及Brennan等人，Science ,229：81(1985))；使用白胺酸拉鏈產生雙特異性抗體(參見例如Kostelny等人，J.Immunol. ,148(5)：1547-1553(1992))；使用「雙功能抗體」技術製備雙特異性抗體片段(參見例如Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA ,90：6444-6448(1993))；及使用單鏈Fv(sFv)二聚體(參見例如Gruber等人，J.Immunol. ,152：5368(1994))；及製備三特異性抗體，如例如Tutt等人，J.Immunol. 147：60(1991)中所述。
本文亦包括具有三個或更多個功能性抗原結合位點的工程改造之抗體，包括「Octopus抗體」(參見例如US 2006/0025576A1)。
本文之抗體或片段亦包括含結合至KLK5以及另一不同抗原之抗原結合位點的「雙效FAb」或「DAF」(參見例如US 2008/0069820)。
7.抗體變異體
在一些實施例中，涵蓋本文所提供之抗KLK5抗體之胺基酸序列變異體。舉例而言，可能需要改善抗體之結合親和力及/或其他生物學特性。抗體之胺基酸序列變異體可藉由將適當修飾引入編碼該抗體之核苷酸序列中或藉由肽合成來製備。此等修飾包括例如在抗體之胺基酸序列內進行殘基之缺失及/或插入及/或取代。可以進行缺失、插入及取代的任何組合以獲得最終構築體，只要最終構築體具有所希望之特徵，例如抗原結合。
a)取代、插入及缺失變異體
在某些實施例中，提供具有一或多個胺基酸取代之抗KLK5抗體變異體。用於進行取代突變誘發的所關注位點包括HVR及FR。保守取代顯示於表1 中「較佳取代」之標題下。更多實質改變提供於表1 中「例示性取代」之標題下，且如以下參照胺基酸側鏈類別進一步描述。可將胺基酸取代引入所關注抗體中且篩選具有所需活性，例如保留/改善之抗原結合、降低之免疫原性或改善之ADCC或CDC的產物。
胺基酸可以根據常見側鏈特性進行分組： (1)疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性：Asp、Glu；(4)鹼性：His、Lys、Arg；(5)影響鏈取向的殘基：Gly、Pro；(6)芳族：Trp、Tyr、Phe。
非保守性取代將需要將該等類別之一之成員換成另一類別。
一類取代變異體涉及取代親本抗體(例如人類化或人類抗體)之一或多個高變區殘基。一般而言，選擇用於進一步研究之所得變異體相對於親本抗體將在某些生物特性方面具有改變(例如改善)(例如增加之親和力、降低之免疫原性)及/或將基本上保留親本抗體之某些生物特性。一種例示性取代變異體係親和力成熟抗體，其可例如使用基於噬菌體呈現之親和力成熟技術，諸如本文所述之技術便利地產生。簡言之，使一或多個HVR殘基突變且在噬菌體上呈現變異體抗體，並針對特定生物活性(例如結合親和力)進行篩選。
可在HVR中進行改變(例如取代)例如以改善抗體親和力。該等改變可在HVR「熱點」，亦即，由在體細胞成熟過程期間經歷高頻率突變之密碼子所編碼的殘基(參見例如Chowdhury,Methods Mol.Biol. 207：179-196(2008))及/或接觸抗原之殘基中進行，並測試所得變異體VH或VL之結合親和力。藉由構築二級文庫並自該等二級文庫再選擇來進行親和力成熟已描述於例如Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology 178：1-37(O'Brien等人編，Human Press,Totowa,NJ,(2001))中。在親和力成熟之一些實施例中，藉由多種方法之任 一種(例如易錯PCR、鏈改組或寡核苷酸引導之突變誘發)將多樣性引入選用於成熟之可變基因中。接著，產生二級文庫。接著，篩選文庫以鑑別具有所需親和力之任何抗體變異體。引入多樣性之另一方法涉及HVR引導之方法，其中使若干HVR殘基(例如一次4-6個殘基)隨機化。參與抗原結合之HVR殘基可例如使用丙胺酸掃描突變誘發或建立模型來具體地鑑別。尤其常以CDR-H3及CDR-L3為靶。
在某些實施例中，取代、插入或缺失可在一或多個HVR內發生，只要此等改變基本上不降低抗體結合抗原之能力即可。舉例而言，可在HVR中進行基本上不降低結合親和力之保守性改變(例如，如本文所提供之保守性取代)。該等改變可例如在HVR中之抗原接觸殘基之外進行。在以上提供之變異VH及VL序列之某些實施例中，每一HVR未改變或含有不超過一個、兩個或三個胺基酸取代。
用於鑑別抗體中可作為突變誘發靶之殘基或區域的一種有用方法稱為「丙胺酸掃描突變誘發」，如Cunningham及Wells(1989)Science ,244：1081-1085所述。在該方法中，鑑別一個殘基或一組靶殘基(例如帶電殘基，諸如arg、asp、his、lys及glu)且藉由帶中性或負電荷之胺基酸(例如丙胺酸或聚丙胺酸)置換以確定抗體與抗原之相互作用是否受影響。可在對初始取代展現功能敏感性的胺基酸位置引入其他取代。替代地或另外，利用抗原-抗體複合物之晶體結構鑑別抗體與抗原之間的接觸點。此等接觸殘基及鄰近殘基可作為取代候選物之靶或排除在取代候選物之外。可篩選變異體以確定其是否含有所需特性。
胺基酸序列插入物包括長度範圍係一個殘基至含有一百個或更多殘基之多肽之胺基及/或羧基末端融合物，以及具有單個或多個胺基酸殘基之序列內插入物。末端插入之實例包括具有N末端甲硫胺醯基殘基之抗體。抗體分子之其他插入變異體包括抗體之N末端或C末端與酶(例如對於ADEPT而言)或增 加抗體之血清半衰期之多肽的融合物。
b)糖基化變異體
在某些實施例中，對本文所提供之抗KLK5抗體進行改變以增加或減小抗體糖基化之程度。在抗體上添加或缺失糖基化位點可以藉由改變胺基酸序列以產生或移除一或多個糖基化位點來便利地達成。
在抗體包含Fc區之情況下，可以改變與其連接之碳水化合物。由哺乳動物細胞產生的天然抗體典型地包含分支之雙觸角(biantennary)寡醣，其一般藉由N-鍵聯連接至Fc區CH2結構域之Asn297。參見例如Wright等人，TIBTECH 15：26-32(1997)。寡糖可以包括各種碳水化合物，例如甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸，以及連接至雙觸角寡醣結構之「主幹」中之GlcNAc的岩藻糖。在一些實施例中，可以對本發明抗體中之寡醣進行修飾以產生具有某些改善之特性的抗體變異體。
在一個實施例中，提供具有缺乏與Fc區連接(直接或間接)之岩藻糖之碳水化合物結構的抗KLK5抗體變異體。舉例而言，此類抗體中岩藻糖之量可以為1%至80%、1%至65%、5%至65%或20%至40%。如例如WO 2008/077546中所述，如藉由MALDI-TOF質譜所量測，藉由相對於連接至Asn 297之所有糖結構(例如複合、雜交及高甘露糖結構)的總和計算Asn297處糖鏈內岩藻糖之平均量來測定岩藻糖之量。Asn297係指大致位於Fc區中297位(Fc區殘基之Eu編號)處的天冬醯胺殘基；不過，歸因於抗體中之微小序列變化，Asn297亦可能位於297位上游或下游約±3個胺基酸處，亦即，介於294位與300位之間。此等岩藻糖基化變異體可以具有改善之ADCC功能。參見例如美國專利公開案第US 2003/0157108號(Presta,L.)；US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。涉及「去岩藻糖基化」或「缺乏岩藻糖」之抗體變異體之公開案的實例包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614； US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki等人，J.Mol.Biol. 336：1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng. 87：614(2004)。能夠產生去岩藻糖化抗體之細胞株的實例包括缺乏蛋白質岩藻糖化之Lec13 CHO細胞(Ripka等人，Arch.Biochem.Biophys. 249：533-545(1986)；Presta,L之美國專利申請案第US 2003/0157108 A1號；及Adams等人之WO 2004/056312 A1，尤其實例11)；及基因敲除細胞株，諸如α-1,6-岩藻糖基轉移酶基因FUT8 基因敲除之CHO細胞(參見例如Yamane-Ohnuki等人，Biotech.Bioeng. 87：614(2004)；Kanda,Y.等人，Biotechnol.Bioeng. ,94(4)：680-688(2006)；及WO2003/085107)。
另外提供具有對分之寡醣的抗KLK5抗體變異體，例如其中連接至抗體Fc區之雙觸角寡醣經GlcNAc對分。此類抗體變異體可以具有減少之岩藻糖化及/或改善之ADCC功能。該等抗體變異體之實例描述於例如WO 2003/011878(Jean-Mairet等人)、美國專利第6,602,684號(Umana等人)及US 2005/0123546(Umana等人)中。亦提供寡醣中至少1個半乳糖殘基連接至Fc區的抗體變異體。此類抗體變異體可以具有改善之CDC功能。此等抗體變異體描述於例如WO 1997/30087(Patel等人)；WO 1998/58964(Raju,S.)；及WO 1999/22764(Raju,S.)中。
c)Fc區變異體
在一些實施例中，可以將一或多個胺基酸修飾引入本文所提供之抗KLK5抗體的Fc區中，由此產生Fc區變異體。Fc區變異體可包括在一或多個胺基酸位置處包含胺基酸修飾(例如取代)之人類Fc區序列(例如人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)。
在一些實施例中，本發明涵蓋具有一些但非所有效應功能之抗體變異體，該等效應功能使其成為合乎應用需要之候選物，在該等應用中，抗體之活體內半衰期很重要，而某些效應功能(諸如補體及ADCC)係不必要或有害的。可以進行活體外及/或活體內細胞毒性檢定以確定CDC及/或ADCC活性之降低/耗盡。舉例而言，可以進行Fc受體(FcR)結合檢定，以確保抗體缺乏FcγR結合能力(由此可能缺乏ADCC活性)，但保留FcRn結合能力。介導ADCC之原代細胞NK細胞僅表現Fc(RIII，而單核細胞表現Fc(RI、Fc(RII及Fc(RIII。造血細胞上FcR之表現概括於Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol. 9：457-492(1991)第464頁之表3中。用於評估所關注分子之ADCC活性的非限制性實例描述於美國專利第5,500,362號中(參見例如Hellstrom,I.等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 83：7059-7063(1986))及Hellstrom,I等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 82：1499-1502(1985)；5,821,337(參見Bruggemann,M.等人，J.Exp.Med. 166：1351-1361(1987))中。或者，可以使用非放射性檢定方法(參見例如，有關流動式細胞測量術的ACTITM 非放射性細胞毒性檢定(CellTechnology,Inc.Mountain View,CA)；及CytoTox 96® 非放射性細胞毒性檢定(Promega,Madison,WI))。可用於此類檢定的效應細胞包括周圍血液單核細胞(PBMC)及自然殺手(NK)細胞。替代地或另外，可在活體內，例如在動物模型中，諸如在Clynes等人，Proc.Nat 'l Acad.Sci.USA 95：652-656(1998)中揭示之動物模型中，評估所關注分子之ADCC活性。亦可進行C1q結合檢定以確定抗體無法與C1q結合並因此缺乏CDC活性。參見例如WO 2006/029879及WO 2005/100402中之C1q及C3c結合ELISA。為了評估補體活化，可以進行CDC檢定(參見例如Gazzano-Santoro等人，J.Immunol.Methods 202：163(1996)；Cragg,M.S.等人，Blood 101：1045-1052(2003)；以及Cragg,M.S.及M.J.Glennie,Blood 103：2738-2743(2004))。亦可使用此項技術中已知之方法進行FcRn結合及活體內清除率/半衰期測定(參見例如Petkova,S.B.等人，Int'l. Immunol. 18(12)：1759-1769(2006))。
效應功能降低之抗體的非限制性實例包括Fc區殘基238、265、269、270、297、327及329中之一或多個具有取代的抗體(美國專利第6,737,056號)。該等Fc突變體包括在胺基酸位置265、269、270、297及327中之兩個或更多個處具有取代之Fc突變體，包括殘基265及297取代為丙胺酸的所謂「DANA」Fc突變體(美國專利第7,332,581號)。
與FcR之結合得到改善或減弱的某些抗體變異體已有描述。(參見例如美國專利第6,737,056號；WO 2004/056312；及Shields等人，J.Biol.Chem. 9(2)：6591-6604(2001)。)
在某些實施例中，抗體變異體包含具有改善ADCC之一或多個胺基酸酸取代，例如在Fc區位置298、333及/或334(殘基之EU編號)處有取代之Fc區。
在一些實施例中，例如美國專利第6,194,551號、WO 99/51642及Idusogie等人，J.Immunol. 164：4178-4184(2000)中所述，在Fc區中產生改變，致使C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)改變(亦即，改善或削弱)。
在US2005/0014934A1(Hinton等人)中已描述半衰期增加且與新生兒Fc受體(FcRn)之結合得到改善的抗體，FcRn負責將母體IgG轉移至胎兒中(Guyer等人，J.Immunol. 117：587(1976)及Kim等人，J.Immunol. 24：249(1994))。該等抗體包含具有改善Fc區與FcRn之結合之一或多個取代的Fc區。此類Fc變異體包括在以下Fc區殘基中之一或多個處具有取代的Fc變異體：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如Fc區殘基434之取代(美國專利第7,371,826號)。
關於Fc區變異體之其他實例，另參見Duncan及Winter,Nature 322：738-40(1988)；美國專利第5,648,260號；美國專利第5,624,821號；及WO 94/29351。
d)半胺胺酸工程改造之抗體變異體
在一些實施例中，可能需要產生半胱胺酸工程改造之抗KLK5抗體，例如THIOMABTM 抗體，其中抗體之一或多個殘基經半胱胺酸殘基取代。在特定實施例中，經取代殘基存在於抗體之可及位點處。藉由用半胱胺酸取代該等殘基，反應性硫醇基由此定位於抗體之可及位點處且可以用於將抗體與其他部分，諸如藥物部分或連接子-藥物部分結合以產生如本文中進一步描述的免疫偶聯物。在某些實施例中，以下任一個或多個殘基可用半胱胺酸取代：輕鏈之V205(Kabat編號)；重鏈之A118(EU編號)；及重鏈Fc區之S400(EU編號)。半胱胺酸工程改造之抗體可以如例如美國專利第7,521,541號中所述產生。
e)抗體衍生物
在一些實施例中，本文所提供之抗KLK5抗體可進行進一步修飾以含有此項技術中已知且易於獲得的額外非蛋白質部分。適於使抗體衍生化之部分包括但不限於水溶性聚合物。水溶性聚合物之非限制性實例包括但不限於聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、聚-1,3-二氧雜環戊烷、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/順丁烯二酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或無規共聚物)及葡聚糖或聚(n-乙烯吡咯啶酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛因其於水中之穩定性而可能在製造時具有優勢。聚合物可以具有任何分子量，且可以為分支或未分支的。連接至抗體之聚合物的數目可變化，且若連接一種以上聚合物，則該等聚合物可為相同或不同分子。一般而言，用於衍生化之聚合物的數目及/或類型可基於以下考慮來確定：包括但不限於待改善抗體之特殊特性或功能、抗體衍生物是否將在指定條件下 用於療法等。
在一些實施例中，提供抗KLK5抗體與可藉由曝露於輻射來選擇性加熱之非蛋白部分的偶聯物。在一個實施例中，該非蛋白質部分係碳奈米管(Kam等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102：11600-11605(2005))。該輻射可具有任一波長，且包括但不限於不損傷普通細胞但能將非蛋白部分加熱至殺死抗體-非蛋白部分近側細胞之溫度的波長。
B.重組方法及組成物
抗KLK5抗體可使用如美國專利第4,816,567號中所述之重組方法及組成物製造。在一個實施例中，提供編碼本文所述之抗KLK5抗體之經分離核酸。該核酸可編碼構成抗體VL之胺基酸序列及/或構成抗體VH之胺基酸序列(例如抗體之輕鏈及/或重鏈)。在另一實施例中，提供包含該核酸之一或多種載體(例如表現載體)。在又一實施例中，提供一種包含該核酸之宿主細胞。在一個此類實施例中，宿主細胞包含(例如已經以下轉型)：(1)包含編碼構成抗體VL之胺基酸序列及構成抗體VH之胺基酸序列之核酸的載體，或(2)包含編碼構成抗體VL之胺基酸序列之核酸的第一載體，及包含編碼構成抗體VH之胺基酸序列之核酸的第二載體。在一個實施例中，宿主細胞係真核細胞，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴系細胞(例如Y0、NS0、Sp20細胞)。在一個實施例中，提供一種製備抗KLK5抗體之方法，其中該方法包括在適於表現該抗體之條件下培養如上文所提供的包含編碼該抗體之核酸的宿主細胞，及視情況自該宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收該抗體。
對於重組產生抗KLK5抗體，對例如以上所述的編碼抗體之核酸進行分離，並將其插入一或多個載體中以進一步在宿主細胞中選殖及/或表現。此核酸可以使用習知程序(例如藉由使用能夠特異性結合至編碼抗體重鏈及輕鏈之基因的寡聚核苷酸探針)容易地分離並測序。
適於選殖或表現抗體編碼載體之宿主細胞包括本文所述之原核或真核細胞。舉例而言，抗體可在細菌中產生，特別是在不需要糖基化及Fc效應功能時。關於在細菌中表現抗體片段及多肽，參見例如美國專利第5,648,237號、第5,789,199號及第5,840,523號。(亦參見Charlton,Methods in Molecular Biology,第248卷 (B.K.C.Lo編，Humana Press,Totowa,NJ,2003)，第245-254頁，其描述大腸桿菌中抗體片段之表現。)表現之後，可自細菌細胞糊之可溶部分中分離抗體且可進一步純化。
除原核生物外，真核微生物諸如絲狀真菌或酵母係適於抗體編碼載體之選殖或表現宿主，包括糖基化路徑已經「人類化」，使得產生具有部分或完全人類糖基化模式之抗體的真菌及酵母菌株。參見Gerngross,Nat.Biotech. 22：1409-1414(2004)及Li等人，Nat.Biotech. 24：210-215(2006)。
適於表現糖基化抗體之宿主細胞亦可自多細胞生物體(無脊椎動物及脊椎動物)獲得。無脊椎動物細胞之實例包括植物及昆蟲細胞。已鑑別出可以與昆蟲細胞聯合使用，特別是用於轉染草地黏蟲(Spodopterafrugiperda )細胞的眾多桿狀病毒株。
植物細胞培養物亦可用作宿主。參見例如美國專利第5,959,177號、第6,040,498號、第6,420,548號、第7,125,978號及第6,417,429號(描述用於在轉殖基因植物中產生抗體之PLANTIBODIESTM 技術)。
脊椎動物細胞亦可用作宿主。舉例而言，可以使用適於懸浮生長的哺乳動物細胞株。有用哺乳動物宿主細胞株之其他實例係經SV40轉型之猴腎CV1細胞株(COS-7)；人胚腎細胞株(293或293細胞，如例如Graham等人，J.Gen Virol. 36：59(1977)中所述)；幼倉鼠腎細胞(BHK)；小鼠塞托利細胞(mouse sertoli cell)(TM4細胞，如例如Mather,Biol.Reprod. 23：243-251(1980)中所述)；猴腎細胞(CV1)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76)；人子宮頸癌細胞(HELA)；犬腎細胞 (MDCK；布法羅大鼠肝細胞(BRL 3A)；人肺細胞(W138)；人肝細胞(Hep G2)；小鼠乳房腫瘤(MMT 060562)；TRI細胞，如例如Mather等人，Annals N.Y.Acad.Sci. 383：44-68(1982)中所述；MRC 5細胞；及FS4細胞。其他有用的哺乳動物宿主細胞株包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包括DHFR- CHO細胞(Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216(1980))；及骨髓瘤細胞株，諸如Y0、NS0及Sp2/0。關於適於產生抗體之某些哺乳動物宿主細胞株的評述，參見例如Yazaki及Wu,Methods in Molecular Biology，第248卷 (B.K.C.Lo編，Humana Press,Totowa,NJ)，第255-268頁(2003)。
C.檢定
本文所提供之抗KLK5抗體可藉由此項技術中已知之各種檢定，針對其物理/化學特性及/或生物活性進行鑑別、篩選或表徵。
1.結合檢定及其他檢定
在一個態樣中，本發明之抗體係例如藉由已知方法，諸如ELISA、BIACore®、FACS或西方墨點法(Western blot)等針對其抗原結合活性進行測試。
在另一態樣中，可使用競爭檢定來鑑別與任一本文所述之抗體競爭結合至KLK5之抗體。在某些實施例中，此類競爭抗體結合至與任一本文所述抗體所結合相同之抗原決定基(例如線性或構象抗原決定基)。有關定位抗體所結合之抗原決定基的詳細示例性方法提供於Morris(1996)「Epitope Mapping Protocols」,Methods in Molecular Biology 第66卷(Humana Press,Totowa,NJ)中。
在一個例示性競爭檢定中，在包含結合至KLK5之第一經標記抗體(例如任一本文所述之抗體)及有待測試與該第一抗體競爭結合至KLK5之能力之第二未標記抗體的溶液中培育固定之KLK5。第二抗體可以存在於融合瘤上清液中。作為對照，在包含第一經標記抗體但不含第二未標記抗體之溶液中共培育固定之KLK5。在允許第一抗體結合至KLK5之條件下培育之後，移除過量的 未結合抗體，且量測與固定之KLK5締合之標記的量。若測試樣品中與固定之KLK5締合之標記的量相對於對照樣品基本上降低，則此指示第二抗體與第一抗體競爭結合至KLK5。參見Harlow及Lane(1988)Antibodies：A Laboratory Manual 第14章(Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY)。
2.活性檢定
在一個態樣中，提供用於鑑別具有生物活性之抗KLK5抗體的檢定。生物活性可包括例如抑制KLK5。在一個實施例中，該等抗KLK5抗體抑制KLK5之絲胺酸蛋白酶活性。亦提供在活體內及/或在活體外具有此生物活性之抗體。
在一些實施例中，測試該等抗KLK5抗體之此類生物活性。在一些實施例中，該生物活性係藉由一或多種選自由以下組成之群的方法測試：直接活性檢定、螢光肽檢定、LC/MS檢定及Ki(app) 檢定。在一些實施例中，該生物活性係藉由一或多種選自由以下組成之群的方法量測：重組KLK5直接活性檢定、偶合的前KLK1螢光肽檢定、偶合的前KLK7螢光肽檢定、前KLK1 LC/MS檢定、前KLK7 LC/MS檢定及Ki(app) 檢定。在一些實施例中，IC50 值係藉由上文所描述且在以下實例中詳細描述的檢定量測。
D.免疫偶聯物
本發明亦提供包含本文所提供之抗KLK5抗體與一或多種細胞毒性劑偶聯的免疫偶聯物，該等細胞毒性劑諸如化學治療劑或藥物、生長抑制劑、毒素(例如蛋白質毒素；細菌、真菌、植物或動物來源之酶活性毒素；或其片段)或放射性同位素。
在一個實施例中，免疫偶聯物係抗體-藥物偶聯物(ADC)，其中抗體偶聯至一或多種藥物，包括但不限於類美登素(maytansinoid)(參見美國專利第5,208,020號、第5,416,064號及歐洲專利EP 0 425 235 B1)；奧瑞他汀(auristatin)， 諸如單甲基奧瑞他汀藥物部分DE及DF(MMAE及MMAF)(參見美國專利第5,635,483號及第5,780,588號及第7,498,298號)；海兔毒素(dolastatin)；卡奇黴素(calicheamicin)或其衍生物(參見美國專利第5,712,374號、第5,714,586號、第5,739,116號、第5,767,285號、第5,770,701號、第5,770,710號、第5,773,001號及第5,877,296號；Hinman等人，Cancer Res. 53：3336-3342(1993)；及Lode等人，Cancer Res. 58：2925-2928(1998))；蒽環黴素(anthracycline)，諸如道諾黴素(daunomycin)或小紅莓(doxorubicin)(參見Kratz等人，Current Med.Chem. 13：477-523(2006)；Jeffrey等人，Bioorganic & Med.Chem.Letters 16：358-362(2006)；Torgov等人，Bioconj.Chem. 16：717-721(2005)；Nagy等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97：829-834(2000)；Dubowchik等人，Bioorg.& Med.Chem.Letters 12：1529-1532(2002)；King等人，J.Med.Chem. 45：4336-4343(2002)；及美國專利第6,630,579號)；甲胺喋呤(methotrexate)；長春地辛(vindesine)；紫杉烷(taxane)，諸如多西他賽(docetaxel)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、拉羅他賽(larotaxel)、特西他賽(tesetaxel)及奧塔他賽(ortataxel)；單端孢烯(trichothecene)；及CC1065。
在另一個實施例中，免疫偶聯物包含如本文所述之抗體與酶活性毒素或其片段的偶聯物，該毒素或其片段包括但不限於，白喉(diphtheria)A鏈、白喉毒素之非結合活性片段、外毒素(exotoxin)A鏈(來自綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa))、篦麻毒素A鏈、相思子毒素(abrin)A鏈、莫迪素(modeccin)A鏈、α-帚麴菌素(alpha-sarcin)、油桐(Aleurites fordii)蛋白、石竹素(dianthin)蛋白、洋商陸(Phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII及PAP-S)、苦瓜(momordica charantia)抑制劑、麻瘋樹毒蛋白(curcin)、巴豆毒素(crotin)、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制劑、白樹素(gelonin)、有絲分裂素(mitogellin)、侷限麴菌素(restrictocin)、酚黴素(phenomycin)、伊諾黴素(enomycin)及單端孢烯。
在另一個實施例中，免疫偶聯物包含如本文所述之抗體與放射性原 子偶聯形成的放射性偶聯物。多種放射性同位素可用於製造放射性偶聯物。實例包括At211 、I131 、I125 、Y90 、Re186 、Re188 、Sm153 、Bi212 、P32 、Pb212 及Lu之放射性同位素。當使用放射性偶聯物進行偵測時，其可包含用於閃爍攝影研究之放射性原子，例如tc99m或I123；或用於核磁共振(NMR)成像(又稱為磁共振成像，mri)之自旋標記，諸如碘-123、碘-131、銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓、錳或鐵。
抗體與細胞毒性劑之偶聯物可以使用多種雙官能蛋白質偶合劑製備，該等雙官能蛋白質偶合劑係諸如N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、琥珀醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(SMCC)、亞胺基硫雜環戊烷(IT)、醯亞胺酯之雙官能衍生物(諸如二亞胺代己二酸二甲酯鹽酸鹽(dimethyl adipimidate HCl))、活性酯(諸如二琥珀醯亞胺基辛二酸酯)、醛(諸如戊二醛)、雙疊氮基化合物(諸如雙(對疊氮基苯甲醯基)己二胺)、雙重氮衍生物(諸如雙(對重氮苯甲醯基)-乙二胺)、二異氰酸酯(諸如2,6-二異氰酸甲苯酯)及雙活性氟化合物(諸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。舉例而言，蓖麻毒素免疫毒素可以如Vitetta等人，Science ,238：1098(1987)中所述來製備。碳-14標記之1-異硫氰酸基苯甲基-3-甲基二伸乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)係用於偶聯放射性核苷酸與抗體的一種示例性螯合劑。參見WO94/11026。連接子可以為有助於細胞毒性藥物在細胞中釋放之「可裂解連接子」。舉例而言，可使用酸不穩定性連接子、肽酶敏感性連接子、光不穩定性連接子、二甲基連接子或含二硫鍵之連接子(Chari等人，Cancer Res. 52：127-131(1992)；美國專利第5,208,020號)。
本文中之免疫偶聯物或ADC清楚地涵蓋但不限於以交聯劑製備之偶聯物，該等交聯劑包括但不限於，BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC及磺基-SMPB， 以及SVSB(琥珀醯亞胺基-(4-乙烯基碸)苯甲酸酯)，此等交聯劑係可商購的(例如購自Pierce Biotechnology,Inc.,Rockford,IL.,U.S.A)。
E.用於診斷及偵測之方法及組成物
在一些實施例中，任何本文所提供之抗KLK5抗體均可用於偵測生物樣品中KLK5之存在。如本文所使用，術語「偵測」涵蓋定量或定性偵測。在一些實施例中，生物樣品包含細胞或組織，諸如皮膚表皮、肺實質、支氣管上皮下膜。在一些實施例中，生物樣品包含支氣管肺泡灌洗液。
在一個實施例中，提供一種用於診斷或偵測方法中之抗KLK5抗體。在另一態樣中，提供一種偵測生物樣品中KLK5之存在的方法。在某些實施例中，該方法包括使生物樣品與如本文所述之抗KLK5抗體在允許該抗KLK5抗體與KLK5結合之條件下接觸，及偵測在該抗KLK5抗體與KLK5之間是否形成複合物。此方法可為活體外或活體內方法。在一個實施例中，使用抗KLK5抗體來選擇適合於利用抗KLK5抗體之療法中的個體，例如其中KLK5係用於選擇患者之生物標記物。
可使用本發明之抗KLK5抗體診斷的例示性病症包括內瑟頓氏症候群、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬及紅斑痤瘡。在一些實施例中，該疾病係選自由以下組成之群：內瑟頓氏症候群、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬、紅斑痤瘡及嗜酸性球性食管炎。在一些實施例中，該哮喘係選自由以下組成之群：變應性哮喘、過敏性哮喘、非過敏性哮喘、運動誘發之哮喘、阿司匹林敏感性/加重性哮喘、輕度哮喘、中度至重度哮喘、未用皮質類固醇治療之哮喘、慢性哮喘、耐皮質類固醇性哮喘、皮質類固醇難治性哮喘、新診斷且未治療之哮喘、抽菸引起之哮喘、不受皮質類固醇控制之哮喘、T輔助淋巴細胞第2型(Th2)或高第2型(Th2)或第2型(T2)驅動之哮喘、嗜酸性球性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性球性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驅動之哮喘、低骨膜蛋白性哮喘及低嗜 酸性球性哮喘。在一些實施例中，該哮喘係低TH2性哮喘。
在某些實施例中，提供經標記之抗KLK5抗體。標記包括但不限於直接偵測之標記或部分(諸如螢光標記、發色標記、電子緻密標記、化學發光標記及放射性標記)，以及經由例如酶反應或分子相互作用間接偵測之部分，諸如酶或配體。例示性標記包括但不限於放射性同位素32 P、14 C、125 I、3 H及131 I；螢光團，諸如稀土螯合物或螢光素(fluorescein)及其衍生物；若丹明(rhodamine)及其衍生物；丹醯基(dansyl)；傘酮(umbelliferone)；螢光素酶，例如螢火蟲螢光素酶及細菌螢光素酶(美國專利第4,737,456號)；螢光素(luciferin)；2,3-二氫酞嗪二酮；辣根過氧化酶(HRP)；鹼性磷酸酶；β-半乳糖苷酶；葡糖澱粉酶；溶菌酶；醣氧化酶，例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶及葡萄糖-6-磷酸脫氫酶；雜環氧化酶，諸如尿酸酶及黃嘌呤氧化酶，以及使用過氧化氫氧化染料前驅物之酶諸如HRP、乳過氧化酶或微過氧化酶；生物素/抗生物素蛋白；自旋標記；噬菌體標記；穩定自由基，及類似物。
F.醫藥調配物
本文所述之抗KLK5抗體之醫藥調配物係藉由將具有所需純度之該抗體與一或多種可選醫藥學上可接受之載劑(Remington's Pharmaceutical Sciences 第16版，Osol,A.編(1980))混合來製備，其係呈凍乾調配物或水溶液形式。醫藥學上可接受之載劑在所用劑量及濃度下一般對接受者無毒，且包括但不限於：緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如氯化十八烷基二甲基苯甲基銨；氯化六羥季銨；氯化苯甲烴銨(benzalkonium chloride)；苄索氯銨(benzethonium chloride)；苯酚；丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(少於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸 如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；醣，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽平衡離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；及/或非離子型界面活性劑，諸如聚乙二醇(PEG)。本文中的例示性醫藥學上可接受之載劑包括間質性藥物分散劑，諸如可溶性中性活性玻尿酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人可溶性PH-20玻尿酸酶糖蛋白，諸如rHuPH20(HYLENEX® ,Baxter International,Inc.)。某些例示性sHASEGP及使用方法，包括rHuPH20，描述於美國專利公開案第2005/0260186號及第2006/0104968號中。在一個態樣中，sHASEGP與一或多個額外葡萄糖胺聚糖酶(glycosaminoglycanase)，諸如硫酸軟骨素酶組合。
例示性凍乾抗體調配物在美國專利第6,267,958號中有描述。水性抗體調配物包括美國專利號6,171,586及WO2006/044908中描述的調配物，後一種調配物包括組胺酸-乙酸鹽緩衝液。
視所治療之特定適應症的需要，本文中之調配物亦可含有超過一種活性成分，較佳地具有不會相互不利地影響之互補活性的調配物。
可以例如藉由凝聚技術或藉由界面聚合將活性成分覆埋在所製備之微囊中，例如分別覆埋在膠狀藥物遞送系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米粒子及奈米膠囊)中或在巨乳液中的羥甲基纖維素或明膠微囊及聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊。此等技術揭示於Remington’s Pharmaceutical Sciences， 第16版，Osol,A.編(1980)中。
可以製備持續釋放製劑。持續釋放製劑之適合實例包括含有抗體之固體疏水聚合物的半滲透性基質，該等基質呈成形物品，例如薄膜或微囊之形式。
意圖用於在活體內投與之調配物一般係無菌的。可以例如藉由無菌 過濾膜過濾容易地實現滅菌。
G.治療方法及組成物
任何本文所提供之抗KLK5抗體均可用於治療方法中。
在一個態樣中，提供一種用作藥物之抗KLK5抗體。在其他態樣中，提供一種用於治療選自由以下組成之群之疾病的抗KLK5抗體：內瑟頓氏症候群、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬及紅斑痤瘡。在一些實施例中，該疾病係選自由以下組成之群：內瑟頓氏症候群、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬、紅斑痤瘡及嗜酸性球性食管炎。在一些實施例中，該哮喘係選自由以下組成之群：變應性哮喘、過敏性哮喘、非過敏性哮喘、運動誘發之哮喘、阿司匹林敏感性/加重性哮喘、輕度哮喘、中度至重度哮喘、未用皮質類固醇治療之哮喘、慢性哮喘、耐皮質類固醇性哮喘、皮質類固醇難治性哮喘、新診斷且未治療之哮喘、抽菸引起之哮喘、不受皮質類固醇控制之哮喘、T輔助淋巴細胞第2型(Th2)或高第2型(Th2)或第2型(T2)驅動之哮喘、嗜酸性球性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性球性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驅動之哮喘、低骨膜蛋白性哮喘及低嗜酸性球性哮喘。在一些實施例中，該哮喘係低TH2性哮喘。
在某些實施例中，提供一種用於治療方法中之抗KLK5抗體。在某些實施例中，本發明提供一種用於治療患有疾病之個體之方法中的抗KLK5抗體，其中該疾病係選自由以下組成之群：內瑟頓氏症候群、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬及紅斑痤瘡，該方法包括向該個體投與有效量的抗KLK5抗體。在一個此類實施例中，該方法進一步包括向該個體投與有效量之至少一種額外治療劑(例如，如下文所述)。在一些實施例中，提供一種用於抑制KLK5之生物活性的抗KLK5抗體。在一些實施例中，提供一種用於抑制個體體內KLK5之生物活性之方法中的抗KLK5抗體，該方法包括向該個體投與有效抑制KLK5之生物活性的抗KLK5抗體。根據上述任何實施例，「個體」較佳為人類。在一些實施例中，該疾病係選自由以下組成之群：內瑟頓氏症候群、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬、紅斑痤瘡及嗜酸性球性食管炎。在一些實施例中，該哮喘係選自由以下組成之群：變應性哮喘、過敏性哮喘、非過敏性哮喘、運動誘發之哮喘、阿司匹林敏感性/加重性哮喘、輕度哮喘、中度至重度哮喘、未用皮質類固醇治療之哮喘、慢性哮喘、耐皮質類固醇性哮喘、皮質類固醇難治性哮喘、新診斷且未治療之哮喘、抽菸引起之哮喘、不受皮質類固醇控制之哮喘、T輔助淋巴細胞第2型(Th2)或高第2型(Th2)或第2型(T2)驅動之哮喘、嗜酸性球性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性球性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驅動之哮喘、低骨膜蛋白性哮喘及低嗜酸性球性哮喘。在一些實施例中，該哮喘係低TH2性哮喘。
在另一態樣中，本發明提供抗KLK5抗體在製造或製備藥物中之用途。在一個實施例中，該藥物係用於治療疾病，其中該疾病係選自由以下組成之群的疾病：內瑟頓氏症候群、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬及紅斑痤瘡。在另一實施例中，該藥物係用於治療疾病之方法中，其中該疾病係選自由以下組成之群：內瑟頓氏症候群、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬及紅斑痤瘡，該方法包括向患有該疾病之個體投與有效量的該藥物。在一個此類實施例中，該方法進一步包括向該個體投與有效量之至少一種額外治療劑(例如，如下文所述)。在另一實施例中，該藥物係用於抑制KLK5之生物活性。在另一實施例中，該藥物係用於抑制個體體內KLK5之生物活性的方法中，該方法包括向該個體投與有效抑制KLK5之生物活性之量的該藥物。根據上述任何實施例，「個體」可為人類。在一些實施例中，該疾病係選自由以下組成之群：內瑟頓氏症候群、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬、紅斑痤瘡及嗜酸性球性食管炎。在一些實施例中，該哮喘係選自由以下組成之群：變應性哮喘、過敏性哮喘、非過敏性哮喘、運動誘發之哮喘、阿司匹林敏感性/加重性哮喘、輕度哮喘、中度至重度哮喘、未用皮質類固醇治療之哮喘、慢性哮喘、耐皮質類固醇性哮喘、皮質類固醇難治性哮 喘、新診斷且未治療之哮喘、抽菸引起之哮喘、不受皮質類固醇控制之哮喘、T輔助淋巴細胞第2型(Th2)或高第2型(Th2)或第2型(T2)驅動之哮喘、嗜酸性球性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性球性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驅動之哮喘、低骨膜蛋白性哮喘及低嗜酸性球性哮喘。在一些實施例中，該哮喘係低TH2性哮喘。
在另一態樣中，本發明提供一種用於治療疾病之方法，其中該藥物係選自由以下組成之群：內瑟頓氏症候群、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬及紅斑痤瘡。在一些實施例中，該疾病係選自由以下組成之群：內瑟頓氏症候群、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬、紅斑痤瘡及嗜酸性球性食管炎。在一個實施例中，該方法包括向患有該內瑟頓氏症候群、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬或紅斑痤瘡之個體投與有效量之抗KLK5抗體。在一個此類實施例中，該方法進一步包括向該個體投與有效量之至少一種如以下所述之額外治療劑。根據上述任何實施例，「個體」可為人類。在一些實施例中，該哮喘係選自由以下組成之群：變應性哮喘、過敏性哮喘、非過敏性哮喘、運動誘發之哮喘、阿司匹林敏感性/加重性哮喘、輕度哮喘、中度至重度哮喘、未用皮質類固醇治療之哮喘、慢性哮喘、耐皮質類固醇性哮喘、皮質類固醇難治性哮喘、新診斷且未治療之哮喘、抽菸引起之哮喘、不受皮質類固醇控制之哮喘、T輔助淋巴細胞第2型(Th2)或高第2型(Th2)或第2型(T2)驅動之哮喘、嗜酸性球性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性球性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驅動之哮喘、低骨膜蛋白性哮喘及低嗜酸性球性哮喘。在一些實施例中，該哮喘係低TH2性哮喘。
在另一態樣中，本發明提供一種用於抑制個體體內KLK5之生物活性的方法。在一個實施例中，該方法包括向該個體投與有效量之抗KLK5抗體以抑制KLK5之生物活性。在一個實施例中，「個體」係人類。
在另一態樣中，本發明提供包含任何本文所提供之抗KLK5抗體的 醫藥調配物，其例如係用於上述治療方法中之任一種中。在一個實施例中，醫藥調配物包含本文所提供之抗KLK5抗體中的任一種及醫藥學上可接受之載劑。在另一個實施例中，醫藥調配物包含本文所提供之抗KLK5抗體中的任一種及至少一種如下文所述之額外治療劑。
本發明之抗體可單獨或與其他藥劑組合用於療法中。舉例而言，本發明之抗體可與至少一種額外治療劑共投與。在一些實施例中，該額外治療劑係IL-13軸結合拮抗劑、IL-5軸結合拮抗劑、IL-33軸結合拮抗劑、M1主要拮抗劑(prime antagonist)、IgE拮抗劑、TRPA1拮抗劑、CRTH2拮抗劑、支氣管擴張劑或哮喘症狀控制藥、免疫調節劑、皮質類固醇、Th2路徑抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑或磷酸二酯酶抑制劑。在一些實施例中，IL-13軸結合拮抗劑係抗IL-13抗體。在一些實施例中，抗IL-13抗體係利布奇珠單抗(lebrikizumab)。在一些實施例中，IL-5軸結合拮抗劑係IL-5結合拮抗劑或IL-5受體結合拮抗劑。在一些實施例中，IL-33軸結合拮抗劑係IL-33結合拮抗劑或ST2結合拮抗劑。在一些實施例中，IL-33結合拮抗劑係抗IL-33抗體。在一些實施例中，M1主要拮抗劑係奎利珠單抗(quilizumab)。
以上所述之該等組合療法涵蓋組合投藥(其中兩種或兩種以上治療劑係包括在同一或單獨調配物中)及分開投藥，在此情形中，本發明抗體之投與可在該一或多種額外治療劑投與之前、同時及/或之後發生。在一個實施例中，抗KLK5抗體之投與及額外治療劑之投與係在彼此間隔約一個月內，或在約一週、兩週或三週內，或在約一天、兩天、三天、四天、五天或六天內發生。本發明之抗體亦可與放射療法組合使用。
本發明之抗體(及任何額外治療劑)可藉由任何適合手段投與，包括非經腸、肺內及鼻內，及必要時包括局部治療、病灶內投藥。非經腸輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投與。部分取決於投藥之短期或長期性， 可藉由任何適合途徑，例如藉由注射，諸如靜脈內或皮下注射給藥。本文涵蓋多種給藥時程，包括但不限於單次投藥或在多個時間點多次投與、快速注射及脈衝輸注。
本發明之抗體將以與優良醫療規範相符之方式調配、定劑量及投與。在此情形中考慮的因素包括所治療之特定病症、所治療之特定哺乳動物、各個患者之臨床狀況、病症之起因、藥劑之遞送部位、投與方法、投與時程及從業醫生已知之其他因素。抗體不必但視情況與一或多種當前用於預防或治療所關注病症之藥劑一起調配。該等其他藥劑之有效量取決於調配物中存在之抗體之量、病症或治療之類型以及以上論述之其他因素。該等藥劑一般以相同劑量且利用本文所述之投與途徑使用，或以本文所述劑量之約1%至99%使用，或憑經驗/臨床上確定為適當的任何劑量及任何途徑使用。
為預防或治療疾病，本發明抗體之適當劑量(當單獨使用或與一或多種其他額外治療劑組合使用時)將取決於待治療疾病之類型、抗體類型、疾病之嚴重程度及病程、投與抗體係達成預防抑或治療目的、先前療法、患者之臨床病史及對抗體之反應，以及主治醫師之判斷。抗體適於一次性或經一系列治療投與患者。取決於疾病之類型及嚴重程度，抗體可以例如約1μg/kg至15mg/kg(例如0.1mg/kg-10mg/kg)之初始候選劑量投與患者，例如藉由一或多次分開投藥抑或藉由連續輸注投與。取決於上文所提及之因素，一種典型日劑量可在約1μg/kg至100mg/kg或更高劑量之範圍內。對於歷經數天或更長時間之重複投與，取決於病狀，治療一般會持續直至出現所希望的疾病症狀抑制。該抗體之一種例示性劑量將在約0.05mg/kg至約10mg/kg範圍內。因此，可向患者投與約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg(或其任何組合)的一或多次劑量。該等劑量可間歇地投與，例如隔週或隔三週(例如以使得患者接受約二至約二十或例如約六次劑量的抗體)。最初可以投與較高負荷劑量，隨後投與一次 或多次較低劑量。
應瞭解，以上任何調配物或治療方法可使用本發明之免疫偶聯物作為抗KLK5抗體之替代或補充來進行。
H.製品
在本發明之另一態樣中，提供一種含有可用於治療、預防及/或診斷上文所描述之病症之材料的製品。該製品包括容器及在該容器上或與該容器相關聯的標籤或藥品說明書。適合容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。該等容器可以由諸如玻璃或塑膠之類多種材料形成。該容器僅容納組成物或容納組成物與有效治療、預防及/或診斷病狀之另一組成物的組合，且可以具有無菌接取口(例如該容器可以為具有可由皮下注射針刺穿之塞子的靜脈內溶液袋或小瓶)。該組成物中之至少一種活性劑係本發明之抗體。標籤或藥品說明書指示該組成物用於治療所選病狀。此外，該製品可包括(a)內含組成物之第一容器，其中該組成物包含本發明之抗體；及(b)內含組成物之第二容器，其中該組成物包含另一種細胞毒性劑或其他治療劑。本發明該實施例中之製品可以另外包含藥品說明書，該藥品說明書指示組成物可以用於治療特定病狀。替代地或另外，該製品可以另外包括含醫藥學上可接受之緩衝液，諸如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸鹽緩衝生理食鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)及右旋糖溶液之第二(或第三)容器。其可以另外包括由商業及使用者觀點看所希望的其他物質，包括其他緩衝液、稀釋劑、過濾器、針及注射器。
應瞭解，以上任何製品均可包括本發明之免疫偶聯物作為抗KLK5抗體之替代或補充來進行。
III.實例
以下係本發明之方法及組成物的實例。應瞭解，根據以上提供之大體說明，可以實施各種其他實施例。
實例1-材料與方法
產生抗KLK5抗體
用人KLK5對新西蘭白兔(New Zealand White rabbit)進行免疫接種並使用與公開之文獻，例如參見Offner等人，PLoS ONE 9(2),2014有關的經修改方案分離出單個B細胞。該經修改之操作流程包括將IgG+ huKLK5+ B細胞直接FACS分選至單個孔中。利用ELISA檢定B細胞培養物上清液與人KLK5及不相關對照蛋白質之結合。將KLK5特異性B細胞溶解並立即在-80℃下冷凍儲存以待進行分子選殖。如先前所描述，例如參見Offner等人，PLoS ONE 9(2),2014，將來自兔B細胞之每一單株抗體的可變區(VH及VL)選殖至由所提取之mRNA得到的表現載體中。在Expi293細胞中表現各個重組兔抗體且隨後用蛋白質A純化。接著，對純化的抗KLK5抗體進行功能活性檢定及動力學篩選。
以類似方式對大鼠進行免疫接種，並使用經修飾之融合搭配物產生融合瘤(參見例如Price等人，J Immunol Methods 31；343(1)：28-41(2009))。對各種條件進行優化以便能將各個IgG+huKLK5+融合瘤分選至單個孔中，在分選後，接著再進行培養。利用ELISA檢定由此得到的融合瘤上清液，並使用蛋白質A純化陽性樣品，隨後進行功能及動力學表徵。
BIAcore TM 實驗
在本節中利用BIAcoreTM T200機器測定抗體之結合親和力。簡言之，根據供應商之說明書，用1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺(EDC)及N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)試劑活化BIAcoreTM 研究級CM5晶片。使山羊抗人Fc IgG與該等晶片偶合以達成每個流槽中約10,000個反應單元(RU)。用1M乙醇胺阻斷未反應之偶合基團。對於動力學量測，捕捉抗體以達成約300RU。在37℃下，以30μL/min流速將人KLK5之十倍連續稀釋液注入HBS-P緩衝液中。使用1：1朗格繆爾結合模型(Langmuir binding model)(BIAcoreTM T200評價軟體2.0 版)計算締合速率(ka)及解離速率(kd)。平衡解離常數(KD)係以kd/ka比率計算。
用於測定KLK5抑制之檢定
使用重組KLK5直接活性檢定量測抗KLK5抗體對人KLK5之抑制作用。在直接檢定緩衝液(75mM Tris(pH 8.0)、150mM NaCl及0.01% TWEEN® 20)中將重組人KLK5(Genentech)稀釋至5nM並在384孔檢定盤(384孔低容積黑色圓底盤；Corning，目錄號4514)中將其與抗KLK5抗體組合。抗體係於磷酸鹽樣品緩衝液(70mM磷酸鈉(pH 6)、200mM NaCl及0.01% TWEEN® 20)或檸檬酸鹽/Tris樣品緩衝液(10mM檸檬酸、30mM Tris(pH 6)及0.01% TWEEN® 20)中供應。在適當樣品緩衝液中或在直接檢定緩衝液中製備抗體稀釋液。在環境溫度下，將盤培育30分鐘。將螢光肽受質Boc-VPR-AMC(Bachem，產品號I-1120)直接添加至檢定盤中。最終孔中濃度係50μM Boc-VPR-AMC、5nM重組人KLK5及0.19-100nM抗KLK5抗體。每102秒使用PHERAstar® Plus讀取器，使用340nm激發/460nm發射模組檢查盤，持續30-60分鐘。藉由在典型地自204秒開始直至檢定結束之線性範圍內對讀數進行線性回歸來計算反應速率(以RFU表示)。單獨緩衝液及100nM最終SPINK9.SRE.Fc(Genentech)分別用作100%及0%活性對照。藉由針對各別曲線之四參數擬合，測定抗KLK5抗體之IC50 值。
使用偶合的前KLK7螢光肽檢定量測抗KLK5抗體對人KLK5之抑制作用。若抗體樣品係在檸檬酸鹽/Tris樣品緩衝液中，則在前KLK7檸檬酸鹽/Tris偶合緩衝液(50mM Tris(pH 7.5)、150mM NaCl及0.01% TWEEN® 20)中將重組人KLK5(Genentech)稀釋至5nM，或若抗體樣品係在磷酸鹽樣品緩衝液中，則在前KLK7磷酸鹽偶合緩衝液(50mM Tris(pH 8.0)、150mM NaCl及0.01% TWEEN® 20)中將重組人KLK5(Genentech)稀釋至5nM。接著，在384孔檢定盤(384孔低容積黑色圓底盤，Corning，目錄號4514)將稀釋過的KLK5與抗KLK5抗體組合。如關於直接KLK5檢定所描述來製備抗體稀釋液。在環境溫度下， 將盤培育30分鐘。將螢光肽受質suc-LLVY-AMC(Bachem，產品編號I-1395)及前KLK7(Genentech)直接添加至檢定盤中並在環境溫度下培育。最終孔中濃度係100μM suc-LLVY-AMC、125nM前KLK7、5nM重組人KLK5及0.19-100nM抗KLK5抗體。24小時後，每102秒獲取螢光讀數，持續30-60分鐘，並藉由對最後5個讀數求平均值來計算RFU終點值。單獨緩衝液及100nM最終SPINK9.SRE.Fc(Genentech)分別用作100%及0%活性對照。藉由針對各別曲線之四參數擬合，測定抗KLK5抗體之IC50 值。
使用前KLK7檢定，藉由KLK5源性裂解肽偵測，使用LC/MS(前KLK7 LC/MS檢定)測定抗KLK5抗體之IC50 值。藉由質譜法結合液相層析法偵測由酶KLK5與受質前KLK7之間反應得到的產物肽EEAQGDK。用50mM碳酸氫銨緩衝液(粉末/檢驗合格，Fisher Chemical,A643-500)稀釋所有化合物，且在檢定中在96孔盤(Bio-Rad，硬殼96孔PCR盤，小型面、薄壁、有緣且藍色/透明#HSP9631)中稀釋至最終濃度為5nM KLK5(Genentech)且抗體在0.02至65nM範圍內。在室溫下，將盤培育30分鐘。隨後，將15nM受質前KLK7(Genentech)添加至酶與抑制劑之組合中。2小時後，使用0.5μL甲酸(99.5+%,OptimaTM LC/MS級，Fisher Chemical,A117-10X1AMP)淬滅反應。使用以下質量之組合偵測肽：在QTRAP® 6500 LC-MS/MS質譜儀(Sciex,Framingham,MA)中，Q1，388.7m/z及Q3，319.0m/z。使用合成KLK7肽校準曲線量測所產生之肽的數量。使用Prism 6軟體(GraphPad Software,La Jolla,CA)測定IC50 值。
使用偶合的前KLK1螢光肽檢定量測抗KLK5抗體對人KLK5之抑制作用。在前KLK1偶合檢定緩衝液(100mM Tris(pH 8.5)及0.01% TWEEN® 20)中將重組人KLK5(Genentech)稀釋至0.5nM並在384孔檢定盤(384孔低容積黑色圓底盤；Corning，目錄號4514)中將其與抗KLK5抗體組合。如關於直接KLK5檢定所描述來製備抗體稀釋液。在環境溫度下，將盤培育30分鐘。將螢光肽受 質PFR-AMC(Bachem，產品編號I-1295)及前KLK1(Genentech)直接添加至檢定盤中並在環境溫度下培育。最終孔中濃度係50μM PFR-AMC、31.25nM前KLK1、0.5nM重組人KLK5及0.19-100nM抗KLK5抗體。每102秒使用PHERAstar® Plus讀取器，使用340nm激發/460nm發射模組檢查盤，持續120分鐘。藉由對由無抑制劑對照之RFU-時間曲線之拐點所指定的時間周圍之讀數求平均值來計算終點RFU值。單獨緩衝液及100nM最終SPINK9.SRE.Fc(Genentech)分別用作100%及0%活性對照。藉由針對各別曲線之四參數擬合，測定抗KLK5抗體之IC50 值。
使用前KLK1檢定，藉由KLK5源性裂解肽偵測，使用LC/MS(前KLK1 LC/MS檢定)測定抗KLK5抗體之IC50 值。藉由質譜法結合液相層析法偵測由酶KLK5與受質前KLK1之間反應得到的產物肽APPIQSR。用50mM碳酸氫銨緩衝液(粉末/檢驗合格，Fisher Chemical,A643-500)稀釋所有化合物，且在檢定中在96孔盤(Bio-Rad，硬殼96孔PCR盤，小型面、薄壁、有緣且藍色/透明#HSP9631)中稀釋至最終濃度為0.5nM KLK5(Genentech)且抗體在0.01至29nM範圍內。在室溫下，將盤培育60分鐘。隨後，將300nM受質前KLK1(Genentech)添加至酶與抑制劑之組合中。20分鐘後，使用0.5μL甲酸(99.5+%,OptimaTM LC/MS級，Fisher Chemical,A117-10X1AMP)淬滅反應。使用以下質量之組合偵測肽：在QTRAP® 6500 LC-MS/MS質譜儀(Sciex,Framingham,MA)中，Q1，384.7m/z及Q3，600.3m/z。使用峰面積及Prism 6軟體(GraphPad Software,La Jolla,CA)測定IC50 值。
在室溫下，在96孔半區盤(白色透明，平底盤，Corning #3884)中，使用Z-VPR-pNA作為受質執行Ki(app) 檢定。在檢定緩衝液(100mM Tris pH 8.0、100mM NaCl、0.01% TWEEN® 20)中將抑制劑樣品稀釋至3倍最終濃度。單獨緩衝液及100nM最終SPINK9.SRE.Fc(Genentech)分別用作100%及0%活性對 照。將抑制劑或對照樣品(20μL)添加至該盤中，隨後添加20μL在檢定緩衝液中最終濃度為0.5、0.25、0.125及0.0625nM之KLK5(Genentech)。30分鐘後，添加20μL在檢定緩衝液中最終濃度為300μM之Z-VPR-pNA受質(California Peptide，# 876-08，在DMSO中製備的30mM儲備溶液)。在一些初始檢定中，藉由在DMSO中將受質最初稀釋至3mM，隨後在檢定緩衝液中稀釋至900μM(亦即，3倍最終濃度)，使最終DMSO濃度增加至10%。在添加受質後，在Versamax可調微量盤讀取器中讀取盤，且每102秒取得在405nm下之量測值，持續3小時。藉由在4182-10710秒範圍內進行線性回歸來計算反應速率(以μAU/s表示)。針對0%及100%活性對照之值使反應速率正規化並與4參數方程擬合以計算IC50 值。在二價抑制劑之情況下，將原始IC50 值乘以2。接著，將IC50 值相對於KLK5酶濃度作圖，由y截距值得到Ki(app)。此外，若抑制劑足夠強效，則可藉由比較該曲線之斜率與理論值0.5來判讀酶與抑制劑之組合純度。
用於測定抗體選擇性之檢定
在室溫下，在384孔盤(黑色、低容積圓底盤，Corning # 4514)中進行KLK1選擇性檢定，其中最終反應體積係15μL。在檢定緩衝液(75mM Tris pH 8.0、150mM NaCl、0.01% TWEEN® 20)中將抑制劑樣品稀釋至3倍最終濃度。不含抑制劑之反應及不含酶之反應分別用作100%及0%活性對照。將抑制劑或對照樣品(5μL)添加至該盤中，隨後添加5μL在檢定緩衝液中最終濃度為3nM的KLK1(R&D Systems，2337-SE，批號NLY0315111；根據R&D systems方案活化)。30分鐘後，添加5μL在檢定緩衝液中最終濃度為100μM之H-Pro-Phe-Arg-AMC乙酸鹽(Bachem I-1295，10mM於水中之儲備溶液)。添加受質後，在PHERAstar® 微量盤讀取器中使用光學模組FI 340 460且增益設定為85%，讀取該盤。每102秒取得量測值，持續1小時。藉由在204-918秒範圍內進行線性回歸來計算反應速率(以RFU/s表示)。針對0%及100%活性對照之值使 反應速率正規化並與4參數方程擬合以計算IC50 值。在二價抑制劑之情況下，將原始IC50 值乘以2。
在室溫下，在384孔盤(黑色、低容積圓底盤，Corning # 4514)中進行KLK4選擇性檢定，其中最終反應體積係15μL。在檢定緩衝液(75mM Tris pH 8.0、150mM NaCl、0.01% TWEEN® 20)中將抑制劑樣品稀釋至3倍最終濃度。不含抑制劑之反應及不含酶之反應分別用作100%及0%活性對照。將抑制劑或對照樣品(5μL)添加至該盤中，隨後添加5μL在檢定緩衝液中最終濃度為2nM的KLK4(R&D Systems，1719-SE，批號MSY0116011；根據R&D systems方案活化)。30分鐘後，添加5μL在檢定緩衝液中最終濃度為50μM之Boc-Val-Pro-Arg-AMC(Bachem I-1120，31.3mM於水中之儲備溶液)。添加受質後，在PHERAstar® 微量盤讀取器中使用光學模組FI 340 460且增益設定為85%，讀取該盤。每102秒取得量測值，持續1小時。藉由在510-3570秒範圍內進行線性回歸來計算反應速率(以RFU/s表示)。針對0%及100%活性對照之值使反應速率正規化並與4參數方程擬合以計算IC50 值。在二價抑制劑之情況下，將原始IC50 值乘以2。
在室溫下，在384孔盤(黑色、低容積圓底盤，Corning # 4514)中進行胰蛋白酶選擇性檢定，其中最終反應體積係15μL。在檢定緩衝液(75mM Tris pH 8.0、150mM NaCl、0.01% TWEEN® 20)中將抑制劑樣品稀釋至3倍最終濃度。不含抑制劑之反應及不含酶之反應分別用作100%及0%活性對照。將抑制劑或對照樣品(5μL)添加至盤中，隨後添加5μL在檢定緩衝液中最終濃度為0.25nM之胰蛋白酶(Sigma Aldrich T8003，批號SLBM2321V；42.0μM於1mM HCl中之儲備溶液)。30分鐘後，添加5μL在檢定緩衝液中最終濃度為50μM之Boc-Val-Pro-Arg-AMC(Bachem I-1120，31.3mM於水中之儲備溶液)。添加受質後，在PHERAstar® 微量盤讀取器中使用光學模組FI 340 460且增益設定為85%， 讀取該盤。每102秒取得量測值，持續1小時。藉由在204-3570秒範圍內進行線性回歸來計算反應速率(以RFU/s表示)。針對0%及100%活性對照之值使反應速率正規化並與4參數方程擬合以計算IC50 值。在二價抑制劑之情況下，將原始IC50 值乘以2。
在室溫下，在384孔盤(黑色、低容積圓底盤，Corning # 4514)中進行KLK7選擇性檢定，其中最終反應體積係15μL。在檢定緩衝液(75mM Tris pH 8.0、150mM NaCl、0.01% TWEEN® 20)中將抑制劑樣品稀釋至3倍最終濃度。不含抑制劑之反應及不含酶之反應分別用作100%及0%活性對照。將抑制劑或對照樣品(5μL)添加至該盤中，隨後添加在檢定緩衝液中最終濃度為5nM之5μL KLK7(Genentech)。30分鐘後，添加5μL在檢定緩衝液中最終濃度為100μM之Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC(Bachem I-1395，25mM於水中之儲備溶液)。添加受質後，在PHERAstar® 微量盤讀取器中使用光學模組FI 340 460(AMC Module)且增益設定為85%，讀取該盤。每102秒取得量測值，持續1小時15分鐘。藉由在2040-4488秒範圍內進行線性回歸來計算反應速率(以RFU/s表示)。針對0%及100%活性對照之值使反應速率正規化並與4參數方程擬合以計算IC50 值。
PHERAstar ® 實驗
MCA PHERAstar® 模組前：30分鐘後，添加5μL在檢定緩衝液中最終濃度為100μM之Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC(Bachem I-1395，25mM於水中之儲備溶液)。添加受質後，在PHERAstar® 微量盤讀取器中使用光學模組FI 340 460(AMC Module)且增益設定為85%，讀取該盤。每102秒取得量測值，持續1小時15分鐘。藉由在2040-4488秒範圍內進行線性回歸來計算反應速率(以RFU/s表示)。針對0%及100%活性對照之值使反應速率正規化並與4參數方程擬合以計算IC50 值。
MCA PHERAstar® 模組後：30分鐘後，添加5μL在檢定緩衝液中最 終濃度為10μM之Mca-RPKPVE-Nval-WRK(Dnp)-NH2螢光MMP受質(R&D Systems ES002，4.3mM於DMSO中之儲備溶液)。添加受質後，在PHERAstar® 微量盤讀取器中使用光學模組FI 320 405(MCA Module)且增益設定為85%，讀取該盤。每102秒取得量測值，持續1小時15分鐘。藉由在204-1020秒範圍內進行線性回歸來計算反應速率(以RFU/s表示)。針對0%及100%活性對照之值使反應速率正規化並與4參數方程擬合以計算IC50 值。
Wasatch實驗
使用基於陣列之SPR成像系統(CarterraTM ,USA)對一組288種單株抗體進行抗原決定基分組。在10mM乙酸鈉緩衝液pH 4.5中將純化之抗體稀釋至10μg/ml。使用胺偶合，使用連續流動式微量點樣器(Continuous Flow Microspotter；CarterraTM ,USA)將抗體直接固定至SPR sensorprism CMD 200M晶片(XanTec Bioanalytics GmbH,Germany)上以產生由288種抗體構成之陣列。對於分析，使用IBIS MX96 SPRi(CarterraTM ,USA)評價分析物與固定之配體的結合。對於動力學分析，經3分鐘注入自0至300nM的人、食蟹獼猴及鼠類KLK5之3倍稀釋液，隨後為10分鐘之解離期。注入500nM單一濃度之人KLK1、KLK4及KLK7以確保抗體之特異性。對於針對SPINK9-Fc-SRE之抗原決定基分組，先經4分鐘注入100nM人KLK5，隨後再經4分鐘注入10μg/ml SPINK9-Fc-SRE。在每個循環之間用10mM甘胺酸pH1.5使表面再生。在25℃下，在操作緩衝液HBS-T緩衝液(0.01M HEPES pH 7.4、0.15M NaCl、0.05%表面活性劑P20)中執行實驗。使用Scrubber 2.0(BioLogicTM 軟體)處理動力學資料並使用Wasatch分組軟體工具(CarterraTM ,USA)處理抗原決定基分組資料。
氫交換質譜法
實驗性起始物質組成列於表2中。用2 H2 O(重水)製備pH值為6.0或8.0之兩種標記溶液以獲得總濃度為10mM之指定氘活性及140mM NaCl，該等 標記溶液由以適當比例組合的無水磷酸二氫鈉及脫水磷酸氫二鈉組成。使用跳躍機器人技術平台(leap robotics platform)，用標記溶液以約1：10稀釋起始物質(表2)並培育不同時間，隨後用淬滅緩衝液(4M GdmCl、0.5M TCEP、200mM檸檬酸)以1：1最終稀釋至pH 2.5，且接著迅速準備用於質量量測。將淬滅之物質注入線上流動式系統，在其中使用胃蛋白酶消化該物質，進行緩衝液交換，同時使其結合至捕獲柱，藉由反相層析法分離，並藉由電噴霧引入氣相中，在此情況下評估各個肽所攜帶之氘的量。
在pH 6.0或8.0下，標記樣品，保持0.5、5.0、56.0及600.0分鐘。包括獨立實驗重複樣品；在所示曲線上，誤差條表示量測值之範圍，其平均值以標記顯示於圖12B 中。特徵提取及資料分析涉及定製內部軟體。
藉由實驗性pH及實際標記時間來確定在參考pH下之有效標記：t eff =t exp ＊10^(pH ref -pH exp )。圖12B 中之參考pH值係6.0。為校正熟知的由2 H2 O引起之質子活度偏移，以下關係將pH量測值與本文提及之pH值相關聯：pH=pH量測 +([2 H2 O/2 H2 O+1 H2 O]*0.4)。
在初始實驗中確定來源於KLK5之實驗肽的序列及滯留時間，在該等實驗中遵循與上述相同之程序操作流程，但利用在1 H2 O溶劑中之標記緩衝液。由此提可以供在標記實驗期間用於測定每種肽中所含氘量的起始質量；另外，該等實驗利用串聯MS，藉由MS進行從頭測序。
IL-8分泌檢定
若干細胞類型響應於炎性刺激而分泌IL-8。KLK5刺激A459細胞， 引起IL-8分泌。腺癌人肺泡基底上皮細胞構成A549細胞株。用含有RPMI、10% FBS、L-麩醯胺酸且補充有青黴素及鏈黴素之培養基培養A549細胞。將細胞以50,000個細胞/孔塗鋪於TC處理之96孔盤(Corning，目錄號3997)中並使其血清饑餓18小時，隨後用KLK5激發。先將人KLK5與KLK5抑制劑或饑餓培養基一起在室溫下培育1小時，隨後將其添加至盤(200nM孔中濃度)中，在潮濕環境中在37℃且在5% CO2 存在下保持24小時。另外，向各孔中添加內毒素抑制劑(1μM)。培育後，收集細胞上清液並立即分析或在-20℃下儲存。在樣品稀釋劑(PBS/0.5% BSA/0.05%聚山梨醇酯-20/5mM EDTA/0.25% CHAPS/0.2% BGG/10ppM Proclin)中連續稀釋細胞上清液，以在IL-8夾心ELISA中，使用標準方案，利用捕捉用小鼠抗人IL-8單株抗體(R&D Systems，目錄號MAB208)及偵測用生物素化小鼠抗人IL-8單株抗體(R&D Systems，目錄號BAF208)進行分析。藉由針對單獨KLK5處理之100%及單獨饑餓培養基處理之0%使IL-8濃度正規化以分析KLK5之細胞刺激活性。利用GraphPad Prism軟體，使用4參數擬合測定IC50 值。
KLK5及Fab表現、純化及結晶
在桿狀病毒表現系統中以工程改造成在泛素與KLK5之間具有腸激酶裂解位點的C末端融合物形式表現重組人KLK5殘基I67-S293(SEQ ID NO：328)。在1mg/mL幾夫鹼(Kifunensine)存在下，將Sf9細胞與EndoH共表現。在HiTrapTM 肝素管柱上純化蛋白質。用5CV(管柱體積)之25mM TRIS pH 7.5洗滌管柱，且接著經20CV梯度之0-750mM NaCl溶離。接著，在25mM Tris pH 7.5、300mM NaCl中，藉由SEC，經S200對所得蛋白質池進一步純化。接著使用腸激酶裂解泛素，且樣品再次藉由SEC進一步純化。質譜法及SDS PAGE揭示純KLK5樣品，經證實，該樣品具有活性。表現包括重鏈及輕鏈之Fab片段且如所述進行純化。參見Carter等人，Biotechnology 10(2),163-167(1992)。接著， 將KLK5分別與以下Fab混合：10C5、9H5及3-3F5，並在25mM HEPES pH 7.2、100mM NaCl中，藉由SEC純化該複合物。該3種Fab-KLK5複合物之結晶條件如下：3-3F5複合物：15% PEG 4K、0.1M MgCl2、0.1M檸檬酸鈉pH 5.0；10C5複合物：20% PEG4K、0.2M硫酸銨、25%甘油；9H5複合物：15% PEG4K、10%異丙醇、0.1M HEPES pH 7.5。當使該等蛋白質複合物中之離胺酸殘基甲基化時，僅獲得10C5及9H5複合物之晶體。參見Walter等人，Structure ,14(11),1617-1622(2006)。
資料收集及結構解析
根據標準方法，在100開爾文(Kelvin)之低溫冷卻條件下，使用各種同步X射線輻射，在高級光源(Advanced Light Source；Berkeley,CA)或高級光子源(Advanced Photon Source，Argonne,IL)下收集X射線繞射資料。使用資料處理軟體XDS處理並縮減繞射圖像。參見Kabsch W,Acta Crystallogr D Biol Crystallogr ,66(Pt 2),125-132(2010)。使用分子置換技術，利用程式PHASER生成模型。使用人TIGIT之結構(參見Debala等人，J Mol Biol ,373：1017-1031(2007))及Fab抗體模型(參見Nakamura等人，Cell Host Microbe ,14(1),93-103(2013))作為研究模型。使用程式COOT以迭代方式對該等結構進行數輪模型調整並使用Phenix.reiine或BUSTER程式進行精修。針對可接受之R及R自由值以及拉氏統計學(Ramachandran statistics)(由Molprobity計算)精修模型。KLK5分別與Fab 10C5、9H5及3-3F5之複合物的晶體結構，以及相互作用及抗原決定基之詳情可見於圖18-20及表5-13中。
實例2-抗KLK5抗體之人類化
藉由如上文所述，用人KLK5對動物免疫接種，獲得一組540種單株抗KLK5抗體。由於該組含有的抗KLK5抗體具有高度可變之特徵，故針對所希望之特徵，諸如某些IC50 值及針對人KLK5之選擇性篩選該等抗體。該篩 選揭示對人KLK5具有低親和力且對人KLK5無選擇性及/或功能活性不足之大量抗體。舉例而言，所得抗KLK5抗體中有一些係部分抑制劑，亦即，抑制作用
Figure TW201946935A_D0025
50%(例如純系12B3、1D10)或抑制作用
Figure TW201946935A_D0026
90%(例如純系14C8、14E12、8E11)。所得抗KLK5抗體中有一些在本文所述之檢定中僅抑制人KLK5(例如純系9E3、10D10)。基於特徵，僅選出13種抗KLK5抗體(純系8G10、9B6、2-3F4、10C5、2B11、10H3、9H3、8B7、9H5、9F2、10C8、8F5、3-3F5)。接著，選出具有最高抑制活性之三種抗KLK5抗體(純系9H5、10C5、3-3F5)進行人類化。
如下文所述，使兔單株抗體9H5、10C5及3-3F5人類化。殘基編號係根據Kabat等人，Sequences of proteins of immunological interest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md(1991)。
評估在9H5、10C5及3-3F5人類化期間構築的呈人IgG1形式之變異體。將該等兔抗體各自之高變區(即，VL結構域中之位置24-34(L1)、50-56(L2)及89-97(L3)，以及VH結構域中之26-35(H1)、50-65(H2)及95-102(H3))移植至各種受體構架中。確切地說，對於9H5，將VL CDR移植至KV1D-39*01中並將VH CDR移植至HV3-53*01中。對於10C5，將VL CDR移植至KV1-8*01中並將VH CDR移植至HV3-64*01中。對於3-3F5，將VL CDR移植至KV1-8*01中並將VH CDR移植至HV3-23*01中。另外，將兔抗體中之所有VL及VH Vernier位置移植至其各別人生殖系構架中。在Vernier位置中具有所有兔胺基酸之移植物稱為L1H1(hu9H5.L1H1、hu10C5.L1H1及hu3-3F5.L1H1)(圖14-16 )。
如上文所述，使用BIAcoreTM T200測定本節中抗體之結合親和力。將L1H1型人類化9H5、10C5及3-3F5(hu9H5.L1H1、hu10C5.L1H1及hu3-3F5.L1H1)抗體之結合親和力與其嵌合親本純系相比較。使L1H1型抗體之兔Vernier位置變回人殘基以評價各兔Vernier位置對針對hKLK5之結合親和力的貢獻。
對於9H5，製備三條額外輕鏈(L2：L1+Ala43，L3：L1+Tyr49及L4：L1+Ala43+Tyr49(CDR移植物))及十六條額外重鏈(H2：H1+Ala24，H3：H1+Trp47，H4：H1+Val48，H5：H1+Ser49，H6：H1+Phe67，H7：H1+Asn73，H8：H1+Leu78，H9：H1+Tyr91，H10：H1+Gln105，H11：在Vernier位置中不含兔殘基(CDR移植物)，H12：H1+Asp61+Ser62+Val63+Gly65，H13：CDR移植物+Asp61+Ser62+Val63+Gly65，H14：CDR移植物+Tyr47+Gly49，H15：H14+Gln2，H16：H14+As.n72+Thr73+Asn74+Leu75及H17：H14+Phe62)(圖15 )。基於對上述變異體抗體之結合親和力評價(資料未顯示)，確定重鏈(H14)上之Tyr47及Gly49係關鍵兔Vernier殘基。嵌合9H5以1.9E-10 M之KD結合，而hu9H5.L4H14以6.9E-10 M之KD結合。
對於10C5，製備四種額外輕鏈變異體L2-L5(L2：L1+Ile2，L3：L1+Ala43，L4：L1+Ile2+Ala43(CDR移植物)，L5：CDR移植物+Ser77+Pro80，L6：CDR移植物+Ser77+Pro80+Glu103+Val105+Val106)及二十七種額外重鏈變異體H2至H28(H2：H1+Ala24，H3：H1+Tyr47，H4：H1+Val48，H5：H1+Ser49，H6：H1+Phe67，H7：H1+Asn73，H8：H1+Leu78，H9：H1+Tyr91，H10：H1+Gln105，H11：H1+Asn61+Ser62+Val63+Gly65，H12：在Vernier位置中不含兔殘基(CDR移植物)，H13：CDR移植物+Asn61+Ser62+Val63+Gly65，H14：CDR移植物+Trp47+Gly49，H15：H14+Gln2，H16：H14+Asn72+Leu73+Asn74+Thr75，H17：H14+Phe62，H18：H14+Asn72+Thr73+Asn74+Leu75，H19：H14+Asn72，H20：H14+Asn74，H21：H14+Asn72+Asn74，H22：H14+Ile48，H23：H14+Ser67，H24：H22+Ser67，H25：H14+Thr73，H26：H14+Thr78，H27：H25+Thr78，H28：H22+Ser67+Thr73+Thr78)(圖14 )。基於對上述變異體抗體之結合親和力評價(資料未顯示)，確定重鏈(H28)上之Trp47、Ile48、Gly49、Ser67、Thr73及Val78係關鍵兔Vernier殘基。嵌合10C5以1.65E-11 M之KD結合，而hu10C5.L5H28 以5.70E-11 M之KD結合。
對於3-3F5，製備四種額外輕鏈變異體L2-L5(L2：L1+Ile2，L3：L1+Ala43，L4：L1+Ile2+Ala43(CDR移植物)，L5：CDR移植物+Ser77+Pro80)及二十六種額外重鏈變異體H2至H27(H2：H1+Ala24，H3：H1+Val48，H4：H1+Ser49，H5：H1+Phe67，H6：H1+Asn73，H7：H1+Leu78，H8：H1+Tyr91，H9：H1+Arg105，H10：H1+Phe58，H11：H1+Asp61+Ser62+Val63，H12：CDR移植物+Phe58，H13：CDR移植物+Phe58+Asp61+Ser62+Val63，H14：CDR移植物+Gly49，H15：H14+Phe58，H16：H14+Gln2，H17：H14+Asn72+Thr73+Asn74+Leu75，H18：H14+Phe62，H19：H18+Val24，H20：H18+Ile48，H21：H18+Ser67，H22：H18+Ile48+Ser67，H23：H18+Thr73，H24：H18+Val78，H25：H18+Thr73+Val78，H26：H18+Il48+Ser67+Thr73+Val78，H27：CDR移植物+Ala24+Ile48+Gly49+Phe58+Phe62+Ser67，H28：H19+Phe58+Thr73+Thr78)(圖16 )。基於對上述變異體抗體之結合親和力評價(資料未顯示)，確定重鏈(H28)上之Val24、Gly49、Thr73及Val78係關鍵兔Vernier殘基。嵌合3-3F5以KD<1E-12 M(KD低於該儀器之偵測限10E-6 s-1 )結合，而hu3-3F5.L5H19以4.1E-12 M之KD結合且hu3-3F5.L5H25以9.1E-12 M之KD結合。
如上文所述，測試hu9H5.L4H14、hu10C5.L5H28、hu3-3F5.L5H19、hu3-3F5.L5H25及其嵌合對應物結合人KLK5之能力。人類化抗體之結合特性顯示於表3 中。
實例3-抗KLK5抗體之IC 50 值及特異性之評價
使用螢光肽受質評價KLK5抑制劑之IC 50 值
使用酶檢定評估Spink9.SRE.Fc、mAb1108或12種選定抗體抑制人KLK5使受質Boc-VPR-AMC蛋白水解的能力。在該檢定中，該三聚體螢光肽受質含有高螢光性7-胺基4-甲基香豆素(AMC)基團，其係藉由共振能量轉移至第三丁氧羰基(Boc)猝滅。人KLK5裂解該肽受質使得螢光信號增加且KLK5之抑制或不存在使螢光信號猝滅。結果表示為最大KLK5活性之百分比(%對照)。一式兩份執行之單一實驗的結果顯示於圖1 中。Spink9.SRE.Fc(圖1A )之IC50 計算值係1.23nM且該12種選定抗體(圖1 C-N )之IC50 值範圍係0.89至1.32nM。Spink0.SRE.Fc以及全部12種選定抗體完全地抑制KLK5活性，不過mAb1108(圖1B )僅對KLK5活性展示約20%抑制作用。由曲線擬合得到的IC50 值呈現於圖11 (第1行)中。
使用偶合的高分子受質活性評價KLK5抑制劑之IC 50 值
如圖1 中所展示，如使用肽基受質所監測，Spink9.SRE.Fc以及所標識的12種抗KLK5抗體係強效KLK5活性抑制劑。為進一步評價該等抑制劑之抑制特徵，開發出利用高分子受質前KLK7(圖2 )及前KLK1(圖3 )與KLK特異性螢光肽受質之組合的兩種檢定。
在圖2 中，使用偶合的酶檢定評估Spink9.SRE.Fc、mAb1108或12種選定抗KLK5抗體抑制KLK5介導之前KLK7活化的能力。在該檢定中，將人KLK5與人前KLK7一起培育，引起裂解，釋放出KLK7前結構域並使KLK7活化。活化之人KLK7可使KLK7特異性受質Suc-LLVY-AMC蛋白水解，使得螢光信號增加。人KLK5裂解前KLK7產生活性KLK7且使螢光信號增加，而KLK5之抑制或不存在使螢光信號猝滅。結果表示為最大人KLK5活性之百分比(%對照)。一式兩份執行之單一實驗的結果顯示於圖2 中。
與使用肽基受質得到之資料(圖1 )類似，Spink9.SRE.Fc(圖2A )係KLK5活化前KLK7之強效抑制劑，且IC50 值係2.07nM。另外，mAb1108(圖2B )之IC50 值係1.21nM，而該12種選定抗KLK5抗體(圖2 C-N )之IC50 值範圍係0.58至1.53nM。在KLK5前KLK7偶合檢定中，所有抑制劑，即Spink9.SRE.Fc以及抗體完全地抑制KLK5活性。由曲線擬合得到的IC50 值呈現於圖11 (第2行)中。
在圖3 中，使用偶合的酶檢定評估Spink9.SRE.Fc、mAb1108或12種選定抗KLK5抗體抑制KLK5介導之前KLK1活化的能力。在該檢定中，將人KLK5與人前KLK1一起培育，引起裂解，釋放出KLK7前結構域並使KLK1活化。活化之人KLK1可使KLK1特異性受質PFR-AMC蛋白水解，使得螢光信號增加。人KLK5裂解前KLK1產生活性KLK1且使螢光信號增加，而KLK5之抑制或不存在使螢光信號猝滅。結果表示為最大人KLK5活性之百分比(%對照)。一式兩份執行之單一實驗的結果顯示於圖3 中。Spink9.SRE.Fc(圖3A )之IC50 值係0.325nM且該12種選定抗KLK5抗體(圖2 C-N )之IC50 值範圍係0.074至0.151nM。Spink0.SRE.Fc以及全部12種選定抗KLK5抗體完全地抑制KLK5活性，不過mAb1108(圖1B )僅對KLK5活性展示約40%抑制作用。由曲線擬合得到的IC50 值呈現於圖11 (第3行)中。
藉由LC/MS偵測KLK5源性裂解肽以測定IC 50 值
使用LC/MS檢定監測KLK5源性裂解產物肽，評估Spink9.SRE.Fc、mAb1108或12種選定抗KLK5抗體抑制重組KLK5對前KLK7或前KLK1之蛋白水解的能力。對於兩種檢定，人KLK5裂解前肽KLK7或KLK1產生特定MS信號且抑制KLK5活性使得肽信號明顯減弱。針對前KLK7之單一實驗的結果顯示於圖4 中且其係以前肽KLK7之面積表示。Spink9.SRE.Fc(圖4A )之IC50 計算值係1.13nM，MAb1108(圖4B )之IC50 計算值係1.86nM且該12種選定抗KLK5 抗體(圖4 C-N )之IC50 值範圍係0.31至1.72nM。Spink9.SRE.Fc以及全部12種選定抗KLK5抗體完全地抑制KLK5活性，且mAb1108(圖4B )對KLK5活性展示出約80%抑制作用。由曲線擬合得到的IC50 值呈現於圖11 (第4行)中。圖5 顯示針對前KLK1之三次實驗的結果且其係以前肽KLK1之面積表示。Spink9.SRE.Fc(圖5A )之IC50 值係0.58nM，MAb1108(圖5B )之IC50 值係0.34nM且該12種選定抗KLK5抗體(圖5 C-N )之IC50 值範圍係0.08至0.48nM。Spink9.SRE.Fc以及全部12種選定抗KLK5抗體完全地抑制KLK5活性，不過mAb1108(圖5B )對KLK5活性展示約40%抑制作用。由曲線擬合得到的IC50 值呈現於圖11 (第5行)中。
KLK5抗體之特異性
為評價圖1-5 中表徵之抗KLK5抗體之特異性，如藉由特異性螢光肽受質之裂解監測，檢定針對活化之人KLK7(圖6 )、人KLK1(圖7 )、人KLK4(圖8 )及胰蛋白酶(圖9 )的該12種抗KLK5抗體。由於產生的該12種抗KLK5抗體與KLK5選擇性相互作用，故預期該等分子不應當抑制其他KLK(圖6-9 )或胰蛋白酶(圖9 )。
在圖6 中，使用酶檢定評估Spink9.SRE.Fc、mAb1108或12種選定抗KLK5抗體抑制人KLK7使受質Suc-LLVY-AMC蛋白水解的能力。人KLK7裂解該肽受質使得螢光信號增加且KLK7之抑制或不存在使得螢光信號猝滅。結果表示為最大KLK7活性之百分比(%對照)。一式兩份執行之單一實驗的結果顯示於圖6 中。Spink9.SRE.Fc(圖6A )及mAb1108(圖6B )在高達100nM下不抑制KLK7。如圖6 中所見，該12種選定抗KLK5抗體(圖6C-N )在高達100nM下亦不抑制KLK7活性。由曲線擬合得到的IC50 值呈現於圖11 (第6行)中。
在圖7 中，使用酶檢定評估Spink9.SRE.Fc、mAb1108或12種選定抗KLK5抗體抑制人KLK1使受質PFR-AMC蛋白水解的能力。人KLK1裂解該 肽受質使得螢光信號增加且KLK1之抑制或不存在使得螢光信號猝滅。結果表示為最大KLK1活性之百分比(%對照)。一式兩份執行之單一實驗的結果顯示於圖7 中。Spink9.SRE.Fc(圖7A )及mAb1108(圖7B )在高達100nM下不抑制KLK1。如圖7 中所見，該12種選定抗KLK5抗體(圖7C-N )在高達100nM下亦不抑制KLK1活性。由曲線擬合得到的IC50 值呈現於圖11 (第7行)中。
在圖8 中，使用酶檢定評估Spink9.SRE.Fc、mAb1108或12種選定抗KLK5抗體抑制人KLK4使受質Boc-VPR-AMC蛋白水解的能力。人KLK4裂解該肽受質使得螢光信號增加且KLK4之抑制或不存在使得螢光信號猝滅。結果表示為最大KLK4活性之百分比(%對照)。一式兩份執行之單一實驗的結果顯示於圖8 中。Spink9.SRE.Fc(圖8A )及mAb1108(圖8B )在高達100nM下不抑制KLK4。如圖8 中所見，該12種選定抗KLK5抗體(圖8C-N )在高達100nM下亦不抑制KLK4活性。由曲線擬合得到的IC50 值呈現於圖11 (第8行)中。
在圖9 中，使用酶檢定評估Spink9.SRE.Fc、mAb1108或12種選定抗體抑制牛胰蛋白酶使受質Boc-VPR-AMC蛋白水解的能力。胰蛋白酶裂解該肽受質使得螢光信號增加且胰蛋白酶之抑制或不存在使得螢光信號猝滅。結果表示為最大胰蛋白酶活性之百分比(%對照)。一式兩份執行之單一實驗的結果顯示於圖9 中。Spink9.SRE.Fc(圖9A )及mAb1108(圖9B )在高達100nM下不抑制胰蛋白酶。如圖9 中所見，該12種選定抗體(圖9C-N )在高達100nM下亦不抑制胰蛋白酶活性。由曲線擬合得到的IC50 值呈現於圖11(第9行)中。
總體而言，使用KLK7(圖6及表6)、 KLK1(圖7及表7) 、KLK4(圖8及表8 )及胰蛋白酶(圖9及表9 )之該等研究顯示，Spink9.SRE.Fc、mAb1108或該12種選定抗體與KLK5特異性相互作用且僅抑制KLK5活性。
根據Ki app 對抗體分級
在直接檢定(圖1 )或偶合檢定(圖2-5 )中表徵該12種選定抗體時，觀 察到該等選定抗體對KLK5之抑制效力類似於或高於Spink9.SRE.Fc。然而，該等抗體中有一些在各檢定中具有類似IC50 值(表1-5 )，使得很難對抗體之效力進行分級。
在圖10 中，使用酶檢定評估Spink9.SRE.Fc、mAb1108或12種選定抗體抑制人KLK5在各種濃度下使受質z-VPR-pNA蛋白水解的能力。在該檢定中，該三聚體發色肽受質含有對硝基苯胺(pNA)基團，該基團藉由末端胺基酸猝滅。KLK5裂解發色肽受質在405nm下引起吸光度增加且KLK5抑制或不存在則在405nm下引起低吸光度。結果表示為最大KLK5活性之百分比(%對照)。
測定在各種KLK5濃度下Spink9.SRE.Fc(圖10A )之IC50 值且繪製其隨KLK5濃度變化之曲線(圖10B )，其中Kiapp 值係以y截距測定。自該分析可知，Spink9.SRE.Fc之Kiapp 值係1.28nM。亦對mAb1108(圖10 C-D )及該12種選定抗體(圖10 E-AB )進行此分析，mAb1108之Kiapp 值係1.53nM，且該12種選定抗體之Kiapp 值範圍係小於0.01nM至6.35nM。由該分析得到的Kiapp 值呈現於圖11 (第10行)中。
實例4-動力學分析及利用Wasatch進行抗原決定基分組
表4 中顯示抗原決定基分組以及一小組最強效抗體針對人KLK5之解離速率的結果。觀察與小鼠及食蟹獼猴KLK5之結合的不同水準。重要的是，未觀察到與人KLK1、人KLK4或人KLK7之結合，證實該等抗體係特異性的。除8E11及8G10外的大部分純系與SPINK9競爭結合至人KLK5，表明其與SPINK9結合同一抗原決定基(亦即，活性位點)或以別構方式改變人KLK5，使得SPINK9不再結合。
實例5-藉由氫交換質譜法進行抗原決定基定位
本文所實行的氫交換量測法將度量結合至主鏈醯胺殘基之質子與結合至溶劑分子之質子的交換。當在氘化溶劑中稀釋質子化(1 H)樣品時，可藉由質譜法量測質子與氘核之間的質量差異。在氘化溶劑(2 H2 O)中溫育一系列遞增之時間後，可量測交換速率。以此方式，在三個獨立實驗中量測KLK 5(SEQ ID NO：353)與三種抗KLK5抗體(10C5、10H3及9H5)之一形成的複合物，且接著將其與藉由僅對KLK5進行實驗所獲得的結果相比較。接著，進行質量差異之差示分析並利用重疊肽縮小至全部三種抗KLK5抗體(10C5、10H3及9H5)之間共有之共同熱力學抗原決定基(圖12 A )。術語「熱力學抗原決定基」係指蛋白質中主鏈結構動力學或解摺疊之局部自由能響應於特定結合事件，諸如變得經抗體結合而改變的部分。結構抗原決定基可包含在熱力學抗原決定基內。
資料闡釋使用N-2規則，根據該規則，每個肽因回復交換而無法在前兩個位點處攜帶氘。此外，當存在許多獨特的重疊肽時，可使用此資訊將該等重疊肽縮小至各肽內的受影響殘基。所鑑別的在其間包含共同熱力學抗原決定區的KLK5之四個序列區係LRPNQL(圖12 B ，區域1)、QGVKSI(圖12 B ，區域2)、KRCEDAYPRQIDDT(圖12 B ，區域3)及DYPCARPNRPGVY(圖12 B ，區域4)，全部三種測試抗體之間的共同結構抗原決定基係包含在該等區域內。
雖然上文已出於清楚理解之目的，藉助於說明及實例略為詳細地描 述了本發明，但不應將該等描述及實例解釋為限制本發明之範圍。本文引用的所有專利及科學文獻之揭示內容皆以全文引用的方式清楚地併入本文中。
實例6-在基於細胞之IL-8分泌檢定中評價KLK5抑制劑IC50值
KLK5刺激A549細胞分泌IL-8。在基於A549細胞之IL-8分泌檢定中評價Spink5.Fc、Spink9.SRE.Fc或人類化抗KLK5抗體3-3F5、9H5或10C5抑制KLK5誘導之IL-8分泌的能力。在該檢定中，用200nM KLK5刺激血清饑餓之A549細胞24小時(單獨KLK5或與抑制劑一起預培育1小時之KLK5)。用夾心ELISA量測IL-8濃度並測定抑制劑之IC50值。結果表示為最大KLK5活性之百分比且至少三次獨立實驗之平均值±標準偏差顯示於圖17 中。所有抑制劑將KLK5誘導之IL-8分泌完全地抑制於單獨緩衝液(饑餓培養基)水準之5%範圍內，其係在該檢定之誤差範圍內。所有抑制劑均顯示對KLK5誘導之IL-8分泌的抑制作用且至少三次獨立實驗之平均IC50值如下：Spink5.Fc(21nM)；10C5(28nM)；9H5(15nM)；3-3F5(1.2nM)。當將KLK5與360nM Spink9.SRE.Fc一起培育時觀察到2%之殘留活性(資料未示出)。
實例7-10C5、9H5及3-3F5結合至人KLK5之結構
對於本文所述之晶體結構實驗，使用人KLK5殘基I67-S293(SEQ ID NO：328)。在本實例7中使用且在相應圖18-20 及表5-13 中顯示的人KLK5之胺基酸殘基的編號係基於蛋白酶之標準編號。參見Debela等人，J Mol Biol ,373,1017-1031(2007)。在本實例7中使用且在相應圖18-20 及表5-13 中顯示的Fab片段之胺基酸殘基的編號係基於Kabat。
10C5結合至人KLK5之結構
10C5 Fab/KLK5複合物結構顯示，10C5與KLK5之結合引起構象變化，以別構方式破壞受質結合位點以及包括催化三聯體在內之KLK5活性位點，使蛋白酶無法結合受質並喪失活性。由10C5 fab所識別的KLK5之最獨特元件 係涵蓋殘基163-174A之螺旋。緊跟著該螺旋的由殘基173-174A構成之環/轉角因抗體結合而向上翻轉，由此與220s環以及90s環(標準蛋白酶慣例)中之殘基發生空間衝突，該等殘基對於受質結合以及催化三聯體在裂解肽之活性位點中的定位至關重要(圖18A )。
KLK5與10C5 Fab之間之包埋表面積係約860Å2 。在10C5 fab輕鏈CDR-L1中，殘基Q24-S34接觸KLK5中之殘基S131、A132、S164及R167；來自CDR-L2之Y50接觸KLK5中之R167；CDR-L3接觸KLK5中之A132、L163、S164、Q165、K166、E169、I176、D177及D178。在10C5重鏈CDRH1中，殘基S31-T35僅接觸KLK5中之D170；在CDRH2中，殘基Y50-A63接觸KLK5中之殘基K166、E169、D170、A171、Y172、P173、R174、Q174A及I176；在CDRH3中，E95-Y100c接觸KLK5中之殘基S164、K166、R167及D170(表5-7，圖18B )。
用於與人KLK5形成結晶之10C5 Fab HC及LC之序列分別描繪於SEQ ID NO：322及SEQ ID NO：323中。
9H5結合至人KLK5之結構
9H5 Fab/KLK5複合物結構顯示，與10C5 fab類似，9H5與KLK5之結合引起構象變化，以別構方式破壞受質結合位點以及包括催化三聯體在內之KLK5活性位點，使蛋白酶無法結合受質並喪失活性。由9H5 fab所識別的KLK5之最獨特元件係涵蓋殘基163-174A之螺旋。緊跟著該螺旋的由殘基173-174A構成之環/轉角因抗體結合而向上翻轉，由此與220s環以及90s環(標準蛋白酶慣例)中之殘基發生空間衝突，該等殘基對於受質結合以及催化三聯體在裂解肽之活性位點中的定位至關重要。總的說來，相較於10C5與KLK5之結合，較多KLK5蛋白質在9H5：KLK5複合物晶體結構中失序，且可能為引起Fab結合及誘導構象變化之直接結果(圖19A )。
KLK5與9H5 Fab之間之包埋表面積係805Å2 。在9H5輕鏈CDRL1中，殘基Q24-S34接觸處胺基KLK5中之S131、A132、G133、L163、S164、R167；在CDRL2中，殘基S50-S56不接觸KLK5中之任何殘基；在CDRL3中，殘基H89-T97接觸KLK5中之殘基A132、S164、Q165、K166、E169、Q174A、 I176及D177。在9H5重鏈CDRH1中，殘基S31-S35不接觸KLK5；在CDRH2中，殘基F50-A63接觸KLK5中之殘基K166、E169、D170、Y172、P173、R174、Q174A及I176；在CDRH3中，殘基D95-I102接觸KLK5中之殘基K166、R167及D170(表8-10，圖19B )。
用於與人KLK5形成結晶之9H5 Fab HC及LC之序列分別描繪於SEQ ID NO：324及SEQ ID NO：325中。
3F5.5 Fab結合至人KLK5之結構
3-3F5 Fab/KLK5複合物結構顯示，3-3F5與KLK5結合引起微小構象變化，不過沒有關於10C5或9H5與KLK5之複合物所觀察到的那麼劇烈。受質識別袋亦變化，其中KLK5中之Asp 189(其形成鹽橋且由此在蛋白水解前識別帶正電的P1-殘基(Arg/Lys))變得異常。KLK5中之催化三聯體看起來係完整的，不過fab結合使催化袋更敞開，使得KLK5喪失其催化活性。140s環及70s環在晶體結構中變得無序(圖20A )。
KLK5與3F5.5 Fab之間之包埋表面積係956Å2 。在3-3F5輕鏈CDRL1中，殘基Q24-A34接觸KLK5中之S131、A132及G133；在CDRL2中，殘基D50-S56不接觸KLK5中之任何殘基；在CDRL3中，殘基Q89-I97接觸KLK5中之殘基S164、Q165、K166及E169。在3F5.5重鏈CDRH1中，殘基D31-E46完全不與KLK5中相互作用，CDRH2亦然；在CDRH3中，殘基D95-G100i接觸KLK5中之殘基L163、S164、K166、R167、D170、G184、D185、K186、A187、N224、R225及P225(表11-13，圖20B )。
用於與人KLK5形成結晶之3-3F5 Fab HC及LC之序列分別描繪於SEQ ID NO：326及SEQ ID NO：327中。
<110> 美商建南德克公司
<120> 抗KLK5抗體及其使用方法
<130> P34707-AR
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Ser或Asp
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<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Thr或Ser
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
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<211> 17
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
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<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Ser或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (14)..(14)
<223> Trp、Ser或Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Ala或Val
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<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Ser或Gly
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
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<210> 42
<211> 16
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
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<210> 43
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
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<210> 44
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Ser或Asp
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<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Trp、Ser或Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (14)..(14)
<223> Ala或Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (16)..(16)
<223> Ser或Gly
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 50
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<210> 51
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 52
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Trp或Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Asn或Asp
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<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Trp、Ser或Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (14)..(14)
<223> Ala或Val
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 57
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Phe或Ala
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<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Gly或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Phe或Val
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<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Tyr、Trp或Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Ser、Asp或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Trp、Ser或Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (14)..(14)
<223> Ala或Val
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<221> MOD_RES
<222> (16)..(16)
<223> Ser或Gly
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成肽
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 65
Figure TW201946935A_D0167
<210> 66
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 66
Figure TW201946935A_D0168
<210> 67
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 67
Figure TW201946935A_D0169
<210> 68
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 68
Figure TW201946935A_D0170
<210> 69
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 69
Figure TW201946935A_D0171
<210> 70
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 70
Figure TW201946935A_D0172
<210> 71
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 71
Figure TW201946935A_D0173
<210> 72
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 72
Figure TW201946935A_D0174
Figure TW201946935A_D0175
<210> 73
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 73
Figure TW201946935A_D0176
<210> 74
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 74
Figure TW201946935A_D0177
<210> 75
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 75
Figure TW201946935A_D0178
<210> 76
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 76
Figure TW201946935A_D0179
<210> 77
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 77
Figure TW201946935A_D0180
<210> 78
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 78
Figure TW201946935A_D0181
<210> 79
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 79
Figure TW201946935A_D0182
<210> 80
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 80
Figure TW201946935A_D0183
<210> 81
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 81
Figure TW201946935A_D0184
<210> 82
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 82
Figure TW201946935A_D0185
<210> 83
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 83
Figure TW201946935A_D0186
<210> 84
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 84
Figure TW201946935A_D0187
<210> 85
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 85
Figure TW201946935A_D0188
<210> 86
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 86
Figure TW201946935A_D0189
<210> 87
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 87
Figure TW201946935A_D0190
<210> 88
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 88
Figure TW201946935A_D0191
<210> 89
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 89
Figure TW201946935A_D0192
<210> 90
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 90
Figure TW201946935A_D0193
<210> 91
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 91
Figure TW201946935A_D0194
<210> 92
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 92
Figure TW201946935A_D0195
<210> 93
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 93
Figure TW201946935A_D0196
<210> 94
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 94
Figure TW201946935A_D0197
<210> 95
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 95
Figure TW201946935A_D0198
<210> 96
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Glu或Gln
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Ser或Gly
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Asn或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Glu、Tyr或Ala
<220>
<221> MOD_RES
<222> (11)..(11)
<223> Ser或Ala
<400> 96
Figure TW201946935A_D0199
<210> 97
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 97
Figure TW201946935A_D0200
<210> 98
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 98
Figure TW201946935A_D0201
<210> 99
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 99
Figure TW201946935A_D0202
<210> 100
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 100
Figure TW201946935A_D0203
<210> 101
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 101
Figure TW201946935A_D0204
<210> 102
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 102
Figure TW201946935A_D0205
<210> 103
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 103
Figure TW201946935A_D0206
<210> 104
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 104
Figure TW201946935A_D0207
<210> 105
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 105
Figure TW201946935A_D0208
<210> 106
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 106
Figure TW201946935A_D0209
<210> 107
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 107
Figure TW201946935A_D0210
<210> 108
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 108
Figure TW201946935A_D0211
<210> 109
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Tyr、Ser或Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Thr或Asp
<400> 109
Figure TW201946935A_D0212
<210> 110
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 110
Figure TW201946935A_D0213
<210> 111
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 111
Figure TW201946935A_D0214
<210> 112
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 112
Figure TW201946935A_D0215
<210> 113
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 113
Figure TW201946935A_D0216
<210> 114
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 114
Figure TW201946935A_D0217
<210> 115
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 115
Figure TW201946935A_D0218
<210> 116
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 116
Figure TW201946935A_D0219
<210> 117
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 117
Figure TW201946935A_D0220
<210> 118
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 118
Figure TW201946935A_D0221
<210> 119
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 119
Figure TW201946935A_D0222
<210> 120
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 120
Figure TW201946935A_D0223
Figure TW201946935A_D0224
<210> 121
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 121
Figure TW201946935A_D0225
<210> 122
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 122
Figure TW201946935A_D0226
<210> 123
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 123
Figure TW201946935A_D0227
<210> 124
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 124
Figure TW201946935A_D0228
<210> 125
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 125
Figure TW201946935A_D0229
<210> 126
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 126
Figure TW201946935A_D0230
<210> 127
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Ala、His或Gln
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Gly或Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Phe、Tyr或Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Gly、Thr或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Ser或His
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Ser或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Gly或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Glu或Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Val、Thr或ile
<400> 127
Figure TW201946935A_D0231
<210> 128
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 128
Figure TW201946935A_D0232
Figure TW201946935A_D0233
<210> 129
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 129
Figure TW201946935A_D0234
Figure TW201946935A_D0235
<210> 130
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 130
Figure TW201946935A_D0236
<210> 131
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 131
Figure TW201946935A_D0237
<210> 132
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 132
Figure TW201946935A_D0238
Figure TW201946935A_D0239
<210> 133
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 133
Figure TW201946935A_D0240
Figure TW201946935A_D0241
<210> 134
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 134
Figure TW201946935A_D0242
<210> 135
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 135
Figure TW201946935A_D0243
<210> 136
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 136
Figure TW201946935A_D0244
Figure TW201946935A_D0245
<210> 137
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 137
Figure TW201946935A_D0246
<210> 138
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 138
Figure TW201946935A_D0247
<210> 139
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 139
Figure TW201946935A_D0248
Figure TW201946935A_D0249
<210> 140
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Tyr或Ile
<220>
<221> MOD_RES
<222> (43)..(43)
<223> Pro或Ala
<220>
<221> MOD_RES
<222> (77)..(77)
<223> Cys或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (80)..(80)
<223> Ser或Pro
<220>
<221> MOD_RES
<222> (106)..(106)
<223> Glu或Lys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (108)..(108)
<223> Glu或Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (109)..(109)
<223> Ile或Val
<400> 140
Figure TW201946935A_D0250
<210> 141
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 141
Figure TW201946935A_D0251
<210> 142
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 142
Figure TW201946935A_D0252
Figure TW201946935A_D0253
<210> 143
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 143
Figure TW201946935A_D0254
Figure TW201946935A_D0255
<210> 144
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 144
Figure TW201946935A_D0256
<210> 145
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 145
Figure TW201946935A_D0257
Figure TW201946935A_D0258
<210> 146
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 146
Figure TW201946935A_D0259
Figure TW201946935A_D0260
<210> 147
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 147
Figure TW201946935A_D0261
<210> 148
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 148
Figure TW201946935A_D0262
<210> 149
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 149
Figure TW201946935A_D0263
Figure TW201946935A_D0264
<210> 150
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 150
Figure TW201946935A_D0265
Figure TW201946935A_D0266
<210> 151
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (43)..(43)
<223> Arg或Ala
<220>
<221> MOD_RES
<222> (49)..(49)
<223> Phe或Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (106)..(106)
<223> Glu或Lys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (108)..(108)
<223> Glu或Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (109)..(109)
<223> Val或Ile
<400> 151
Figure TW201946935A_D0267
Figure TW201946935A_D0268
<210> 152
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 152
Figure TW201946935A_D0269
Figure TW201946935A_D0270
<210> 153
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 153
Figure TW201946935A_D0271
<210> 154
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 154
Figure TW201946935A_D0272
<210> 155
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 155
Figure TW201946935A_D0273
Figure TW201946935A_D0274
<210> 156
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 156
Figure TW201946935A_D0275
<210> 157
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 157
Figure TW201946935A_D0276
<210> 158
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 158
Figure TW201946935A_D0277
Figure TW201946935A_D0278
<210> 159
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 159
Figure TW201946935A_D0279
Figure TW201946935A_D0280
<210> 160
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 160
Figure TW201946935A_D0281
<210> 161
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 161
Figure TW201946935A_D0282
<210> 162
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Tyr或Ile
<220>
<221> MOD_RES
<222> (43)..(43)
<223> Pro或Ala
<220>
<221> MOD_RES
<222> (77)..(77)
<223> Cys或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (80)..(80)
<223> Ser或Pro
<220>
<221> MOD_RES
<222> (106)..(106)
<223> Glu或Lys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (108)..(108)
<223> Glu或Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (109)..(109)
<223> Val或Ile
<400> 162
Figure TW201946935A_D0283
Figure TW201946935A_D0284
<210> 163
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 163
Figure TW201946935A_D0285
<210> 164
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 164
Figure TW201946935A_D0286
Figure TW201946935A_D0287
<210> 165
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 165
Figure TW201946935A_D0288
Figure TW201946935A_D0289
<210> 166
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 166
Figure TW201946935A_D0290
<210> 167
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 167
Figure TW201946935A_D0291
<210> 168
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 168
Figure TW201946935A_D0292
Figure TW201946935A_D0293
<210> 169
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 169
Figure TW201946935A_D0294
Figure TW201946935A_D0295
<210> 170
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 170
Figure TW201946935A_D0296
Figure TW201946935A_D0297
<210> 171
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 171
Figure TW201946935A_D0298
<210> 172
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 172
Figure TW201946935A_D0299
<210> 173
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 173
Figure TW201946935A_D0300
Figure TW201946935A_D0301
<210> 174
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 174
Figure TW201946935A_D0302
Figure TW201946935A_D0303
<210> 175
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 175
Figure TW201946935A_D0304
Figure TW201946935A_D0305
<210> 176
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 176
Figure TW201946935A_D0306
<210> 177
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 177
Figure TW201946935A_D0307
<210> 178
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 178
Figure TW201946935A_D0308
Figure TW201946935A_D0309
<210> 179
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 179
Figure TW201946935A_D0310
Figure TW201946935A_D0311
<210> 180
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 180
Figure TW201946935A_D0312
Figure TW201946935A_D0313
<210> 181
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 181
Figure TW201946935A_D0314
<210> 182
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 182
Figure TW201946935A_D0315
<210> 183
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 183
Figure TW201946935A_D0316
<210> 184
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 184
Figure TW201946935A_D0317
Figure TW201946935A_D0318
<210> 185
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 185
Figure TW201946935A_D0319
Figure TW201946935A_D0320
<210> 186
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 186
Figure TW201946935A_D0321
<210> 187
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 187
Figure TW201946935A_D0322
<210> 188
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 188
Figure TW201946935A_D0323
<210> 189
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 189
Figure TW201946935A_D0324
Figure TW201946935A_D0325
<210> 190
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 190
Figure TW201946935A_D0326
Figure TW201946935A_D0327
<210> 191
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 191
Figure TW201946935A_D0328
Figure TW201946935A_D0329
<210> 192
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 192
Figure TW201946935A_D0330
<210> 193
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 193
Figure TW201946935A_D0331
<210> 194
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 194
Figure TW201946935A_D0332
Figure TW201946935A_D0333
<210> 195
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 195
Figure TW201946935A_D0334
Figure TW201946935A_D0335
<210> 196
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 196
Figure TW201946935A_D0336
Figure TW201946935A_D0337
<210> 197
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 197
Figure TW201946935A_D0338
<210> 198
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 198
Figure TW201946935A_D0339
<210> 199
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 199
Figure TW201946935A_D0340
Figure TW201946935A_D0341
<210> 200
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 200
Figure TW201946935A_D0342
Figure TW201946935A_D0343
<210> 201
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 201
Figure TW201946935A_D0344
Figure TW201946935A_D0345
<210> 202
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Val或Gln
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)..(24)
<223> Val或Ala
<220>
<221> MOD_RES
<222> (47)..(47)
<223> Trp或Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (48)..(48)
<223> Ile或Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (49)..(49)
<223> Gly或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (62)..(62)
<223> Ser或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (63)..(63)
<223> Trp、Ser或Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (64)..(64)
<223> Ala或Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (66)..(66)
<223> Ser或Gly
<220>
<221> MOD_RES
<222> (68)..(68)
<223> Ser或Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (73)..(73)
<223> Asp或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (74)..(74)
<223> Thr、Leu或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (75)..(75)
<223> Ser或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (76)..(76)
<223> Lys、Thr或Leu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (79)..(79)
<223> Val或Leu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (95)..(95)
<223> Phe或Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (112)..(112)
<223> Pro或Gln
<400> 202
Figure TW201946935A_D0346
Figure TW201946935A_D0347
<210> 203
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 203
Figure TW201946935A_D0348
Figure TW201946935A_D0349
<210> 204
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 204
Figure TW201946935A_D0350
Figure TW201946935A_D0351
<210> 205
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 205
Figure TW201946935A_D0352
<210> 206
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 206
Figure TW201946935A_D0353
<210> 207
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 207
Figure TW201946935A_D0354
Figure TW201946935A_D0355
<210> 208
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 208
Figure TW201946935A_D0356
Figure TW201946935A_D0357
<210> 209
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 209
Figure TW201946935A_D0358
Figure TW201946935A_D0359
<210> 210
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 210
Figure TW201946935A_D0360
<210> 211
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 211
Figure TW201946935A_D0361
<210> 212
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 212
Figure TW201946935A_D0362
<210> 213
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 213
Figure TW201946935A_D0363
Figure TW201946935A_D0364
<210> 214
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 214
Figure TW201946935A_D0365
Figure TW201946935A_D0366
<210> 215
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 215
Figure TW201946935A_D0367
<210> 216
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 216
Figure TW201946935A_D0368
<210> 217
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 217
Figure TW201946935A_D0369
<210> 218
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 218
Figure TW201946935A_D0370
Figure TW201946935A_D0371
<210> 219
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 219
Figure TW201946935A_D0372
Figure TW201946935A_D0373
<210> 220
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 220
Figure TW201946935A_D0374
Figure TW201946935A_D0375
<210> 221
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 221
Figure TW201946935A_D0376
<210> 222
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 222
Figure TW201946935A_D0377
<210> 223
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 223
Figure TW201946935A_D0378
Figure TW201946935A_D0379
<210> 224
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 224
Figure TW201946935A_D0380
Figure TW201946935A_D0381
<210> 225
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Val或Gln
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)..(24)
<223> Val或Ala
<220>
<221> MOD_RES
<222> (47)..(47)
<223> Tyr或Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (48)..(48)
<223> Ile或Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (49)..(49)
<223> Gly或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (61)..(61)
<223> Ser或Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (62)..(62)
<223> Trp,Ser或Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (63)..(63)
<223> Ala或Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (65)..(65)
<223> Ser或Gly
<220>
<221> MOD_RES
<222> (67)..(67)
<223> Ser或Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (72)..(72)
<223> Asp或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (73)..(73)
<223> Thr或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (74)..(74)
<223> Ser或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (75)..(75)
<223> Lys或Leu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (78)..(78)
<223> Val或Leu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (94)..(94)
<223> Phe或Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (111)..(111)
<223> Pro或Gln
<400> 225
Figure TW201946935A_D0382
<210> 226
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 226
Figure TW201946935A_D0383
Figure TW201946935A_D0384
<210> 227
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 227
Figure TW201946935A_D0385
Figure TW201946935A_D0386
<210> 228
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 228
Figure TW201946935A_D0387
Figure TW201946935A_D0388
<210> 229
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 229
Figure TW201946935A_D0389
<210> 230
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 230
Figure TW201946935A_D0390
<210> 231
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 231
Figure TW201946935A_D0391
Figure TW201946935A_D0392
<210> 232
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 232
Figure TW201946935A_D0393
Figure TW201946935A_D0394
<210> 233
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 233
Figure TW201946935A_D0395
Figure TW201946935A_D0396
<210> 234
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 234
Figure TW201946935A_D0397
<210> 235
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 235
Figure TW201946935A_D0398
<210> 236
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 236
Figure TW201946935A_D0399
Figure TW201946935A_D0400
<210> 237
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 237
Figure TW201946935A_D0401
Figure TW201946935A_D0402
<210> 238
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 238
Figure TW201946935A_D0403
Figure TW201946935A_D0404
<210> 239
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 239
Figure TW201946935A_D0405
<210> 240
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 240
Figure TW201946935A_D0406
<210> 241
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 241
Figure TW201946935A_D0407
<210> 242
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 242
Figure TW201946935A_D0408
Figure TW201946935A_D0409
<210> 243
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 243
Figure TW201946935A_D0410
Figure TW201946935A_D0411
<210> 244
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 244
Figure TW201946935A_D0412
<210> 245
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 245
Figure TW201946935A_D0413
<210> 246
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 246
Figure TW201946935A_D0414
<210> 247
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 247
Figure TW201946935A_D0415
Figure TW201946935A_D0416
<210> 248
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 248
Figure TW201946935A_D0417
Figure TW201946935A_D0418
<210> 249
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 249
Figure TW201946935A_D0419
Figure TW201946935A_D0420
<210> 250
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 250
Figure TW201946935A_D0421
<210> 251
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 251
Figure TW201946935A_D0422
<210> 252
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 252
Figure TW201946935A_D0423
Figure TW201946935A_D0424
<210> 253
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 253
Figure TW201946935A_D0425
Figure TW201946935A_D0426
<210> 254
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 254
Figure TW201946935A_D0427
Figure TW201946935A_D0428
<210> 255
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 255
Figure TW201946935A_D0429
<210> 256
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 256
Figure TW201946935A_D0430
<210> 257
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Val或Gln
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Val或Leu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)..(24)
<223> Val或Ala
<220>
<221> MOD_RES
<222> (48)..(48)
<223> Ile或Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (49)..(49)
<223> Gly或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (58)..(58)
<223> Trp或Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (61)..(61)
<223> Asp或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (62)..(62)
<223> Trp、Ser或Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (63)..(63)
<223> Ala或Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (67)..(67)
<223> Ser或Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (72)..(72)
<223> His、Asn或Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (73)..(73)
<223> Thr或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (74)..(74)
<223> Ser或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (75)..(75)
<223> Lys或Leu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (78)..(78)
<223> Val或Leu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (94)..(94)
<223> Phe或Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (117)..(117)
<223> Pro或Arg
<400> 257
Figure TW201946935A_D0431
Figure TW201946935A_D0432
<210> 258
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 258
Figure TW201946935A_D0433
<210> 259
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 259
Figure TW201946935A_D0434
<210> 260
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 260
Figure TW201946935A_D0435
Figure TW201946935A_D0436
<210> 261
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 261
Figure TW201946935A_D0437
Figure TW201946935A_D0438
<210> 262
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 262
Figure TW201946935A_D0439
Figure TW201946935A_D0440
<210> 263
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 263
Figure TW201946935A_D0441
Figure TW201946935A_D0442
<210> 264
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 264
Figure TW201946935A_D0443
Figure TW201946935A_D0444
<210> 265
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 265
Figure TW201946935A_D0445
Figure TW201946935A_D0446
<210> 266
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 266
Figure TW201946935A_D0447
Figure TW201946935A_D0448
<210> 267
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 267
Figure TW201946935A_D0449
Figure TW201946935A_D0450
<210> 268
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 268
Figure TW201946935A_D0451
Figure TW201946935A_D0452
<210> 269
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 269
Figure TW201946935A_D0453
Figure TW201946935A_D0454
<210> 270
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 270
Figure TW201946935A_D0455
Figure TW201946935A_D0456
<210> 271
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 271
Figure TW201946935A_D0457
Figure TW201946935A_D0458
<210> 272
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 272
Figure TW201946935A_D0459
Figure TW201946935A_D0460
<210> 273
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 273
Figure TW201946935A_D0461
Figure TW201946935A_D0462
<210> 274
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 274
Figure TW201946935A_D0463
Figure TW201946935A_D0464
<210> 275
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 275
Figure TW201946935A_D0465
Figure TW201946935A_D0466
<210> 276
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 276
Figure TW201946935A_D0467
Figure TW201946935A_D0468
<210> 277
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 277
Figure TW201946935A_D0469
Figure TW201946935A_D0470
<210> 278
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 278
Figure TW201946935A_D0471
Figure TW201946935A_D0472
Figure TW201946935A_D0473
<210> 279
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 279
Figure TW201946935A_D0474
Figure TW201946935A_D0475
<210> 280
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 280
Figure TW201946935A_D0476
Figure TW201946935A_D0477
<210> 281
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 281
Figure TW201946935A_D0478
Figure TW201946935A_D0479
<210> 282
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 282
Figure TW201946935A_D0480
Figure TW201946935A_D0481
<210> 283
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 283
Figure TW201946935A_D0482
Figure TW201946935A_D0483
<210> 284
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 284
Figure TW201946935A_D0484
Figure TW201946935A_D0485
<210> 285
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 285
Figure TW201946935A_D0486
Figure TW201946935A_D0487
Figure TW201946935A_D0488
Figure TW201946935A_D0489
<210> 286
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 286
Figure TW201946935A_D0490
Figure TW201946935A_D0491
Figure TW201946935A_D0492
<210> 287
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 287
Figure TW201946935A_D0493
Figure TW201946935A_D0494
Figure TW201946935A_D0495
Figure TW201946935A_D0496
<210> 288
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 288
Figure TW201946935A_D0497
Figure TW201946935A_D0498
Figure TW201946935A_D0499
<210> 289
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 289
Figure TW201946935A_D0500
Figure TW201946935A_D0501
Figure TW201946935A_D0502
<210> 290
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 290
Figure TW201946935A_D0503
Figure TW201946935A_D0504
Figure TW201946935A_D0505
<210> 291
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 291
Figure TW201946935A_D0506
Figure TW201946935A_D0507
Figure TW201946935A_D0508
<210> 292
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 292
Figure TW201946935A_D0509
Figure TW201946935A_D0510
Figure TW201946935A_D0511
Figure TW201946935A_D0512
<210> 293
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 293
Figure TW201946935A_D0513
Figure TW201946935A_D0514
Figure TW201946935A_D0515
<210> 294
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 294
Figure TW201946935A_D0516
Figure TW201946935A_D0517
Figure TW201946935A_D0518
Figure TW201946935A_D0519
<210> 295
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 295
Figure TW201946935A_D0520
Figure TW201946935A_D0521
Figure TW201946935A_D0522
<210> 296
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 296
Figure TW201946935A_D0523
Figure TW201946935A_D0524
Figure TW201946935A_D0525
<210> 297
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 297
Figure TW201946935A_D0526
Figure TW201946935A_D0527
Figure TW201946935A_D0528
<210> 298
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 298
Figure TW201946935A_D0529
Figure TW201946935A_D0530
Figure TW201946935A_D0531
<210> 299
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 299
Figure TW201946935A_D0532
Figure TW201946935A_D0533
Figure TW201946935A_D0534
Figure TW201946935A_D0535
<210> 300
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 300
Figure TW201946935A_D0536
Figure TW201946935A_D0537
Figure TW201946935A_D0538
<210> 301
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 301
Figure TW201946935A_D0539
Figure TW201946935A_D0540
Figure TW201946935A_D0541
<210> 302
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 302
Figure TW201946935A_D0542
Figure TW201946935A_D0543
Figure TW201946935A_D0544
<210> 303
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 303
Figure TW201946935A_D0545
Figure TW201946935A_D0546
Figure TW201946935A_D0547
<210> 304
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 304
Figure TW201946935A_D0548
Figure TW201946935A_D0549
Figure TW201946935A_D0550
Figure TW201946935A_D0551
<210> 305
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 305
Figure TW201946935A_D0552
Figure TW201946935A_D0553
Figure TW201946935A_D0554
<210> 306
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 306
Figure TW201946935A_D0555
Figure TW201946935A_D0556
Figure TW201946935A_D0557
<210> 307
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 307
Figure TW201946935A_D0558
Figure TW201946935A_D0559
Figure TW201946935A_D0560
<210> 308
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 308
Figure TW201946935A_D0561
Figure TW201946935A_D0562
Figure TW201946935A_D0563
<210> 309
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 309
Figure TW201946935A_D0564
Figure TW201946935A_D0565
Figure TW201946935A_D0566
<210> 310
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 310
Figure TW201946935A_D0567
Figure TW201946935A_D0568
Figure TW201946935A_D0569
<210> 311
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 311
Figure TW201946935A_D0570
Figure TW201946935A_D0571
<210> 312
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 312
Figure TW201946935A_D0572
Figure TW201946935A_D0573
Figure TW201946935A_D0574
<210> 313
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 313
Figure TW201946935A_D0575
Figure TW201946935A_D0576
<210> 314
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 314
Figure TW201946935A_D0577
Figure TW201946935A_D0578
<210> 315
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 315
Figure TW201946935A_D0579
Figure TW201946935A_D0580
<210> 316
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 316
Figure TW201946935A_D0581
<210> 317
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 317
Figure TW201946935A_D0582
<210> 318
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 318
Figure TW201946935A_D0583
<210> 319
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 319
Figure TW201946935A_D0584
<210> 320
<211> 299
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 320
Figure TW201946935A_D0585
Figure TW201946935A_D0586
Figure TW201946935A_D0587
<210> 321
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 321
Figure TW201946935A_D0588
Figure TW201946935A_D0589
<210> 322
<211> 224
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 322
Figure TW201946935A_D0590
Figure TW201946935A_D0591
<210> 323
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 323
Figure TW201946935A_D0592
Figure TW201946935A_D0593
<210> 324
<211> 223
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 324
Figure TW201946935A_D0594
Figure TW201946935A_D0595
<210> 325
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 325
Figure TW201946935A_D0596
Figure TW201946935A_D0597
<210> 326
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 326
Figure TW201946935A_D0598
Figure TW201946935A_D0599
<210> 327
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 327
Figure TW201946935A_D0600
Figure TW201946935A_D0601
<210> 328
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 328
Figure TW201946935A_D0602
Figure TW201946935A_D0603
Figure TW201946935A_D0604
<210> 329
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Tyr或Ile
<400> 329
Figure TW201946935A_D0605
<210> 330
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Pro或Ala
<400> 330
Figure TW201946935A_D0606
<210> 331
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Cys或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)..(24)
<223> Ser或Pro
<400> 331
Figure TW201946935A_D0607
<210> 332
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Glu或Lys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Glu或Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Ile或Val
<400> 332
Figure TW201946935A_D0608
<210> 333
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Val或Gln
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)..(24)
<223> Val或Ala
<400> 333
Figure TW201946935A_D0609
<210> 334
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Trp或Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Ile或Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (14)..(14)
<223> Gly或Ser
<400> 334
Figure TW201946935A_D0610
<210> 335
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Ser或Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Asp或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Thr、Leu或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Ser或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Lys、Thr或Leu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Val或Leu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Phe或Tyr
<400> 335
Figure TW201946935A_D0611
<210> 336
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Pro或Gln
<400> 336
Figure TW201946935A_D0612
<210> 337
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 337
Figure TW201946935A_D0613
<210> 338
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Arg或Ala
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Phe或Tyr
<400> 338
Figure TW201946935A_D0614
<210> 339
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 339
Figure TW201946935A_D0615
<210> 340
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Glu或Lys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Glu或Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Val或Ile
<400> 340
Figure TW201946935A_D0616
<210> 341
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Val或Gln
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)..(24)
<223> Val或Ala
<400> 341
Figure TW201946935A_D0617
<210> 342
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Tyr或Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Ile或Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (14)..(14)
<223> Gly或Ser
<400> 342
Figure TW201946935A_D0618
<210> 343
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Ser或Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Asp或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Thr或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Ser或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Lys或Leu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Val或Leu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Phe或Tyr
<400> 343
Figure TW201946935A_D0619
<210> 344
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Pro或Gln
<400> 344
Figure TW201946935A_D0620
<210> 345
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Tyr或Ile
<400> 345
Figure TW201946935A_D0621
<210> 346
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Pro或Ala
<400> 346
Figure TW201946935A_D0622
<210> 347
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Cys或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)..(24)
<223> Ser或Pro
<400> 347
Figure TW201946935A_D0623
<210> 348
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Glu或Lys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Glu或Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Val或Ile
<400> 348
Figure TW201946935A_D0624
<210> 349
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Val或Gln
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Val或Leu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)..(24)
<223> Val或Ala
<400> 349
Figure TW201946935A_D0625
<210> 350
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Ile或Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (14)..(14)
<223> Gly或Ser
<400> 350
Figure TW201946935A_D0626
<210> 351
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Ser或Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> His、Asn或Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Thr或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Ser或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Lys或Leu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Val或Leu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Phe或Tyr
<400> 351
Figure TW201946935A_D0627
<210> 352
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Pro或Arg
<400> 352
Figure TW201946935A_D0628
<210> 353
<211> 275
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 353
Figure TW201946935A_D0629
Figure TW201946935A_D0630
<210> 354
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 354
Figure TW201946935A_D0631
<210> 355
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<400> 355
Figure TW201946935A_D0632
<210> 356
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> NorVal
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Lys(Dnp)
<400> 356
Figure TW201946935A_D0633

Claims (43)

  1. 一種結合至KLK5之經分離抗體，其中該抗體包括：(a)含SEQ ID NO：28之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含選自由SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：45及SEQ ID NO：54組成之群之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含選自由SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：69及SEQ ID NO：72組成之群之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：96之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：109之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：127之胺基酸序列的HVR-L3。
  2. 如申請專利範圍第1項之抗體，其中該抗體包括：(a)含選自由SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：22及SEQ ID NO：24組成之群之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含選自由SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52及SEQ ID NO：53組成之群之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含選自由SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：69及SEQ ID NO：72組成之群之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含選自由SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：87及SEQ ID NO：91組成之群之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含選自由SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101及SEQ ID NO：105組成之群之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含選自由SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：119及SEQ ID NO：122組成之群之胺基酸序列的HVR-L3。
  3. 如申請專利範圍第1項或第2項中任一項之抗體，其中該抗體包括：(i)(a)含SEQ ID NO：17之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：35之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：82之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：101之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：115之胺基酸序列的HVR-L3； (ii)(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：87之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：119之胺基酸序列的HVR-L3；或(iii)(a)含SEQ ID NO：24之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：72之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：91之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：122之胺基酸序列的HVR-L3。
  4. 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項之抗體，其中該抗體包含a)SEQ ID NO：202之VH序列及SEQ ID NO：140之VL序列；b)SEQ ID NO：225之VH序列及SEQ ID NO：151之VL序列；或c)SEQ ID NO：257之VH序列及SEQ ID NO：162之VL序列。
  5. 如申請專利範圍第1項至第4項中任一項之抗體，其中該抗體包含a)SEQ ID NO：201之VH序列及SEQ ID NO：139之VL序列；b)SEQ ID NO：221之VH序列及SEQ ID NO：149之VL序列；或c)SEQ ID NO：248或SEQ ID NO：254之VH序列及SEQ ID NO：160之VL序列。
  6. 一種結合至KLK5之經分離抗體，其中該抗體包含a)與SEQ ID NO：201之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：139之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；b)與SEQ ID NO：221之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：149之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；或c)與SEQ ID NO：248或SEQ ID NO：254之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：160之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列。
  7. 一種結合至KLK5之經分離抗體，其中該抗體包括： (i)(a)含SEQ ID NO：14之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：32之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：62之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：79之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：112之胺基酸序列的HVR-L3；(ii)(a)含SEQ ID NO：15之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：33之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：80之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：100之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：113之胺基酸序列的HVR-L3；(iii)(a)含SEQ ID NO：16之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：34之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：81之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：114之胺基酸序列的HVR-L3；(iv)(a)含SEQ ID NO：18之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：39之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：66之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：83之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：102之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：116之胺基酸序列的HVR-L3；(v)(a)含SEQ ID NO：19之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：40之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：67之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：84之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：103之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：117之胺基酸序列的HVR-L3；(vi)(a)含SEQ ID NO：20之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：33之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：68之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：85之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：103之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3； (vii)(a)含SEQ ID NO：21之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：41之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：86之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：104之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3；(viii)(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：46之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：88之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：120之胺基酸序列的HVR-L3；(ix)(a)含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：42之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：70之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：89之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：105之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的HVR-L3；或(x)(a)含SEQ ID NO：23之胺基酸序列的HVR-H1；(b)含SEQ ID NO：47之胺基酸序列的HVR-H2；(c)含SEQ ID NO：71之胺基酸序列的HVR-H3；(d)含SEQ ID NO：90之胺基酸序列的HVR-L1；(e)含SEQ ID NO：106之胺基酸序列的HVR-L2；以及(f)含SEQ ID NO：121之胺基酸序列的HVR-L3。
  8. 如申請專利範圍第7項之抗體，其中該抗體包含選自由以下組成之群的VH序列：SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：203、SEQ ID NO：204、SEQ ID NO：205、SEQ ID NO：206、SEQ ID NO：226、SEQ ID NO：227及SEQ ID NO：228；及選自由以下組成之群的VL序列：SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：153及SEQ ID NO：154。
  9. 如申請專利範圍第7項或第8項中任一項之抗體，其中該抗體包含(a) SEQ ID NO：170之VH序列及SEQ ID NO：131之VL序列；(b)SEQ ID NO：171之VH序列及SEQ ID NO：132之VL序列；(c)SEQ ID NO：172之VH序列及SEQ ID NO：133之VL序列；(d)SEQ ID NO：203之VH序列及SEQ ID NO：141之VL序列；(e)SEQ ID NO：204之VH序列及SEQ ID NO：142之VL序列；(f)SEQ ID NO：205之VH序列及SEQ ID NO：143之VL序列；(g)SEQ ID NO：206之VH序列及SEQ ID NO：144之VL序列；(h)SEQ ID NO：226之VH序列及SEQ ID NO：152之VL序列；(i)SEQ ID NO：227之VH序列及SEQ ID NO：153之VL序列；或(j)SEQ ID NO：228之VH序列及SEQ ID NO：154之VL序列。
  10. 一種結合至KLK5之經分離抗體，其中該抗體包含(a)與SEQ ID NO：170之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：131之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；(b)與SEQ ID NO：171之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：132之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；(c)與SEQ ID NO：172之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：133之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；(d)與SEQ ID NO：203之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：141之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；(e)與SEQ ID NO：204之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：142之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；(f)與SEQ ID NO：205之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：143之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；(g)與SEQ ID NO：206之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：144之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；(h)與SEQ ID NO：226之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：152之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；(i)與SEQ ID NO：227之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：153之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；或(j)與SEQ ID NO：228之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列及與SEQ ID NO：154之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列。
  11. 如申請專利範圍第1項至第10項中任一項之抗體，其中該抗體係IgG1或IgG4。
  12. 如申請專利範圍第1項至第11項中任一項之抗體，其中如藉由一或多種選自由以下組成之群的方法所量測，該抗體使KLK5之生物活性抑制至少50%：重組KLK5直接活性檢定、偶合的前KLK1螢光肽檢定、偶合的前KLK7螢光肽檢定、前KLK1 LC/MS檢定、前KLK7 LC/MS檢定及K i(app) 檢定。
  13. 如申請專利範圍第1項至第12項中任一項之抗體，其中該生物活性係KLK5之絲胺酸蛋白酶活性。
  14. 如申請專利範圍第1項至第13項中任一項之抗體，其中該抗體係單株抗體。
  15. 如申請專利範圍第1項至第14項中任一項之抗體，其中該抗體係人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體。
  16. 如申請專利範圍第1項至第15項中任一項之抗體，其中該抗體係結合KLK5之抗體片段。
  17. 一種當結合至KLK5時形成熱力學抗原決定基之抗體，如藉由氫交換質譜法所量測，其包含選自由以下組成之群之序列中的一或多個：SEQ ID NO：316、SEQ ID NO：317、SEQ ID NO：318及SEQ ID NO：319。
  18. 一種與如申請專利範圍第1項至第16項中任一項之抗體競爭結合的抗體。
  19. 一種與如申請專利範圍第1項至第16項中任一項之抗體結合至相同抗原決定基的抗體。
  20. 一種編碼如申請專利範圍第1項至第16項中任一項之抗體的經分離核酸。
  21. 一種宿主細胞，包含如申請專利範圍第20項之核酸。
  22. 一種產生抗體之方法，包括培養如申請專利範圍第21項之宿主細胞，由此產生該抗體。
  23. 一種包含如申請專利範圍第1項至第16項中任一項之抗體的免疫偶聯物。
  24. 一種醫藥調配物，包含如申請專利範圍第1項至第16項中任一項之抗體及醫藥學上可接受之載劑。
  25. 如申請專利範圍第1項至第16項中任一項之抗體，其係用作藥物。
  26. 如申請專利範圍第1項至第16項中任一項之抗體，其係用於治療選自由以下組成之群的疾病：內瑟頓氏症候群(Netherton Syndrome)、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬、嗜酸性球性食管炎及紅斑痤瘡。
  27. 如申請專利範圍第26項之抗體，其中該哮喘係選自由以下組成之群：變應性哮喘、過敏性哮喘、非過敏性哮喘、運動誘發之哮喘、阿司匹林敏感性/加重性哮喘、輕度哮喘、中度至重度哮喘、未用皮質類固醇治療之哮喘、慢性哮喘、耐皮質類固醇性哮喘、皮質類固醇難治性哮喘、新診斷且未治療之哮喘、抽菸引起之哮喘、不受皮質類固醇控制之哮喘、T輔助淋巴細胞第2型(Th2)或高第2型(Th2)或第2型(T2)驅動之哮喘、嗜酸性球性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性球性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驅動之 哮喘、低骨膜蛋白性哮喘及低嗜酸性球性哮喘。
  28. 如申請專利範圍第27項之抗體，其中該哮喘係低TH2性哮喘。
  29. 如申請專利範圍第1項至第16項中任一項之抗體，其係用於抑制KLK5之生物活性。
  30. 一種如申請專利範圍第1項至第16項中任一項之抗體的用途，其係用於製造藥物。
  31. 如申請專利範圍第30項之用途，其中該藥物係用於治療選自由以下組成之群的疾病：內瑟頓氏症候群、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬、嗜酸性球性食管炎及紅斑痤瘡。
  32. 如申請專利範圍第31項之用途，其中該哮喘係選自由以下組成之群：變應性哮喘、過敏性哮喘、非過敏性哮喘、運動誘發之哮喘、阿司匹林敏感性/加重性哮喘、輕度哮喘、中度至重度哮喘、未用皮質類固醇治療之哮喘、慢性哮喘、耐皮質類固醇性哮喘、皮質類固醇難治性哮喘、新診斷且未治療之哮喘、抽菸引起之哮喘、不受皮質類固醇控制之哮喘、T輔助淋巴細胞第2型(Th2)或高第2型(Th2)或第2型(T2)驅動之哮喘、嗜酸性球性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性球性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驅動之哮喘、低骨膜蛋白性哮喘及低嗜酸性球性哮喘。
  33. 如申請專利範圍第32項之用途，其中該哮喘係低TH2性哮喘。
  34. 一種如申請專利範圍第1項至第16項中任一項之抗體的用途，其係用於製造供抑制KLK5之生物活性用的藥物。
  35. 一種治療患有疾病之個體之方法，其中該疾病係選自由以下組成之群：內瑟頓氏症候群、哮喘、異位性皮炎、牛皮癬、嗜酸性球性食管炎及紅斑痤瘡，該方法包括向該個體投與有效量的如申請專利範圍第1項至第16項中任一項之抗體。
  36. 如申請專利範圍第35項之方法，其中該哮喘係選自由以下組成之群：變應性哮喘、過敏性哮喘、非過敏性哮喘、運動誘發之哮喘、阿司匹林敏感性/加重性哮喘、輕度哮喘、中度至重度哮喘、未用皮質類固醇治療之哮喘、慢性哮喘、耐皮質類固醇性哮喘、皮質類固醇難治性哮喘、新診斷且未治療之哮喘、抽菸引起之哮喘、不受皮質類固醇控制之哮喘、T輔助淋巴細胞第2型(Th2)或高第2型(Th2)或第2型(T2)驅動之哮喘、嗜酸性球性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性球性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驅動之哮喘、低骨膜蛋白性哮喘及低嗜酸性球性哮喘。
  37. 如申請專利範圍第36項之方法，其中該哮喘係低Th2性哮喘。
  38. 一種抑制個體體內KLK5之生物活性的方法，包括向該個體投與有效量的如申請專利範圍第1項至第16項中任一項之抗體以抑制KLK5之生物活性。
  39. 一種特異性結合至人KLK5之抗體，其中根據標準蛋白酶編號，該抗體結合至人KLK5上包含一或多個選自由以下組成之群之胺基酸殘基的抗原決定基：Pro130、Ser131、Ala132、Gly133、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177、Asp178、Gly184、Asp185、Lys186、Ala186A、Arg188、Asn223、Arg224、Pro225及Lys233。
  40. 如申請專利範圍第39項之抗體，其中根據標準蛋白酶編號，該抗體結合至人KLK5上包含一或多個選自由以下組成之群之胺基酸殘基的抗原決定基：Pro130、Ser131、Ala132、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177、Asp178、Arg224及Lys233。
  41. 如申請專利範圍第39項之抗體，其中根據標準蛋白酶編號，該抗體 結合至人KLK5上包含一或多個選自由以下組成之群之胺基酸殘基的抗原決定基：Pro130、Ser131、Ala132、Gly133、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177及Lys233。
  42. 如申請專利範圍第39項之抗體，其中根據標準蛋白酶編號，該抗體結合至人KLK5上包含一或多個選自由以下組成之群之胺基酸殘基的抗原決定基：Ser131、Ala132、Gly133、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Pro173、Arg174、Gly184、Asp185、Lys186、Ala186A、Arg188、Asn223、Arg224及Pro225。
  43. 一種當結合至人KLK5時引起人KLK5之構象變化的抗體，其中該構象變化以別構作用引起受質結合位點及/或人KLK5活性位點之破壞。
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