CN111868241A - 抗klk5抗体和使用方法 - Google Patents

抗klk5抗体和使用方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111868241A
CN111868241A CN201980018872.1A CN201980018872A CN111868241A CN 111868241 A CN111868241 A CN 111868241A CN 201980018872 A CN201980018872 A CN 201980018872A CN 111868241 A CN111868241 A CN 111868241A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
amino acid
acid sequence
hvr
antibody
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201980018872.1A
Other languages
English (en)
Inventor
C·P·C·基乌
H·Y·赫尔南德斯-巴里
D·B·伊亚
M·H·A·伊斯梅利
J·T·柯尔柏
W·Y·林
K·洛耶
J·苏达姆苏
Y·孙
B·T·沃尔特斯
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
F Hoffmann La Roche AG
Original Assignee
F Hoffmann La Roche AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by F Hoffmann La Roche AG filed Critical F Hoffmann La Roche AG
Publication of CN111868241A publication Critical patent/CN111868241A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6871—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting an enzyme
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/6445—Kallikreins (3.4.21.34; 3.4.21.35)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供抗KLK5抗体及其使用方法。

Description

抗KLK5抗体和使用方法
相关申请的交叉引用
本发明依据35U.S.C.§119(e)要求2018年3月14日提交的美国临时专利申请系列号62/643,034的权益，所述文献的完整内容通过引用方式并入本文。
序列表
本申请含有已经通过EFS-Web提交并因而通过引用方式完整并入的序列表。所述ASCII副本创建于2019年3月11日，命名为P34707-WO_SL.txt，并且大小为424,525字节。
技术领域
本发明涉及抗KLK5抗体及其使用方法。
背景技术
人激肽释放酶相关肽酶(KLKs)是在多种组织如前列腺、卵巢、乳腺、睾丸、脑和皮肤中表达的(糜)-胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶。KLKs属于PA(S)家系(clan)糜蛋白酶样丝氨酸蛋白酶家族S1A的亚组。15个人KLK基因位于染色体19q13.4上并构成人类基因组中的最大邻接丝氨酸蛋白酶簇。这些基因，通常由五个编码性外显子及在一些情况下一个或两个5’非编码性外显子组成，编码激肽释放酶相关肽酶KLK1至KLK15。全部KLK基因均编码含有224-237个残基的胰凝乳蛋白酶样催化结构域或胰蛋白酶样催化结构域的单链前原蛋白，KLK4至KLK15之间的氨基酸序列同一性为大约40％。KLK1及其密切同源物KLK2和KLK3形成其自身的进化枝，KLK4、5和7属于另一个亚组，而KLK6与KLK13和KLK14共有更多相似性。参见Debela等人,Biol Chem 389,623-632(2008)。
KLK5似乎在人皮肤中最丰富地表达，尤其在皮肤的上棘层中和颗粒层中，其中角质形成细胞经历终末分化并转化成扁平的砖样结构，后者形成角质层(最外表皮层和外部环境屏障)。参见Debela等人,J Mol Biol,373,1017-1031(2007)；和T等人,J MedChem.2015 Jan 22；58(2):598-612(2014)。据称KLK5在皮肤病如Netherton综合征中发挥病理学作用。参见Furio等人,PLOS Genet 11(9),e1005389(2015)。Netherton综合征由编码丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型5的SPINK5基因(SPINK5)中的功能丧失型突变引起。参见Descargues等人,Nat Genet.2005 Jan；37(1):56-65(2004)。已经显示SPINK5抑制KLK丝氨酸蛋白酶家族的几个成员(例如KLK5和KLK7)。参见Wang等人,Exp Dermatol.Jul；23(7):524-6(2014)。SPINK5在Netherton综合征中的不存在导致无对抗的KLK活性。认为KLK5过度活性是Netherton综合征病理生理学的关键要素，因为KLK5是表皮中蛋白酶解的调节物。消除KLK5和KLK7拯救了致死性Netherton综合征样表型。参见Briot等人,J Exp Med.5月11日；206(5):1135-47(2009)；Furio等人,J Exp Med.3月10日；211(3):499-513(2014)；和Kasparek等人,PLoS Genet.2017年1月17日；13(1):e1006566(2017)。Netherton综合征是复杂全身性疾病，具有多种影响，目前对其不可获得令人满意的治疗。
哮喘是与遗传风险因子和环境风险因子两者相关的临床上异质性病症。来自哮喘双生子研究的遗传度评估值从35％至80％变动，表明了遗传风险的重要作用。参见，Ullemar等人,Allergy 71,230-238(2016)。已经对哮喘和哮喘相关表型实施了几个大规模GWAS，并且已经在多个研究群体中确认许多已鉴定的基因座，如ORMDL3、IL13、IL1RL1和TSLP基因附近的那些基因座。参见，例如，Nat Genet 46,51-55(2014)。最近研究在KLK4/5基因座鉴定到一个对低骨膜蛋白，或低2型炎症哮喘风险有防护性的SNP。在相同研究中，发现KLK5水平在重度哮喘患者支气管肺泡灌洗液中升高，这支持KLK5在支气管阻塞和哮喘发病机制中发挥作用的假设。
尽管多种疾病(如Netherton综合征和哮喘)领域取得进展，仍需要鉴定可以补充或增强现有疗法有效性的靶标及开发这样的手段。
发明简述
本文提供抗KLK5抗体及其使用方法。
本文还提供一种与KLK5结合的分离的抗体，其中抗体包含(a)包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含选自SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:69和SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:96的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:109的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:127的氨基酸序列的HVR-L3。
在一些实施方案中，抗体包含(a)包含选自SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:22和SEQ IDNO:24的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含选自SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含选自SEQID NO:65、SEQ ID NO:69和SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含选自SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:87和SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含选自SEQ ID NO:99、SEQID NO:101和SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含选自SEQ ID NO:115、SEQID NO:119和SEQ ID NO:122的氨基酸序列的HVR-L3。
在抗体之任一者的一些实施方案中，抗体包含(i)(a)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列的HVR-L3；(ii)(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列的HVR-L3；或(iii)(a)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ IDNO:122的氨基酸序列的HVR-L3。
在抗体之任一者的一些实施方案中，抗体包含a)SEQ ID NO:202的VH序列和SEQID NO:140的VL序列；b)SEQ ID NO:225的VH序列和SEQ ID NO:151的VL序列；或c)SEQ IDNO:257的VH序列和SEQ ID NO:162的VL序列。
在抗体之任一者的一些实施方案中，抗体包含a)SEQ ID NO:201的VH序列和SEQID NO:139的VL序列；b)SEQ ID NO:221的VH序列和SEQ ID NO:149的VL序列；或c)SEQ IDNO:248的VH序列或SEQ ID NO:254，和SEQ ID NO:160的VL序列。
本文还提供一种与KLK5结合的分离的抗体，其中抗体包含a)与SEQ ID NO:201的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:139的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；b)与SEQ ID NO:221的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:149的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；或c)与SEQID NO:248或SEQ ID NO:254的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ IDNO:160的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列。
本文还提供一种与KLK5结合的分离的抗体，其中抗体包含(i)(a)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ IDNO:62的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列的HVR-L3；(ii)(a)包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列的HVR-L3；(iii)(a)包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ IDNO:81的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列的HVR-L3；(iv)(a)包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列的HVR-L3；(v)(a)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ IDNO:67的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQID NO:103的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列的HVR-L3；(vi)(a)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3；(vii)(a)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ IDNO:86的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3；(viii)(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列的HVR-L3；(ix)(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ IDNO:70的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3；或(x)(a)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:121的氨基酸序列的HVR-L3。
在一些实施方案中，抗体包含选自SEQ ID NO:170、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:226、SEQID NO:227和SEQ ID NO:228的VH序列，和选自SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:152、SEQID NO:153和SEQ ID NO:154的VL序列。
在一些实施方案中，抗体包含(a)SEQ ID NO:170的VH序列和SEQ ID NO:131的VL序列；(b)SEQ ID NO:171的VH序列和SEQ ID NO:132的VL序列；(c)SEQ ID NO:172的VH序列和SEQ ID NO:133的VL序列；(d)SEQ ID NO:203的VH序列和SEQ ID NO:141的VL序列；(e)SEQ ID NO:204的VH序列和SEQ ID NO:142的VL序列；(f)SEQ ID NO:205的VH序列和SEQ IDNO:143的VL序列；(g)SEQ ID NO:206的VH序列和SEQ ID NO:144的VL序列；(h)SEQ ID NO:226的VH序列和SEQ ID NO:152的VL序列；(i)SEQ ID NO:227的VH序列和SEQ ID NO:153的VL序列；或(j)SEQ ID NO:228的VH序列和SEQ ID NO:154的VL序列。
本文还提供一种与KLK5结合的分离的抗体，其中抗体包含(a)与SEQ ID NO:170的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:131的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；(b)与SEQ ID NO:171的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:132的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；(c)与SEQ IDNO:172的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:133的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；(d)与SEQ ID NO:203的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:141的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；(e)与SEQ ID NO:204的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:142的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；(f)与SEQ ID NO:205的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:143的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；(g)与SEQ ID NO:206的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ IDNO:144的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；(h)与SEQ ID NO:226的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:152的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；(i)与SEQ ID NO:227的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:153的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；或(j)与SEQ ID NO:228的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:154的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列。
在抗体之任一者的一些实施方案中，抗体是IgG1或IgG4。
在抗体之任一者的一些实施方案中，抗体抑制KLK5的生物学活性至少50％，如通过如下文实施例中描述的一种或多种方法所测量。在一些实施方案中，一种或多种方法选自重组KLK5直接活性分析、偶联pro-KLK1荧光肽分析、偶联pro-KLK7荧光肽分析、pro-KLK1LC/MS分析、pro-KLK7 LC/MS分析和Ki(app)分析。在一些实施方案中，生物学活性是KLK5的丝氨酸蛋白酶活性。
在抗体之任一者的一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。
在抗体之任一者的一些实施方案中，抗体是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
在抗体之任一者的一些实施方案中，抗体是结合KLK5的抗体片段。
本文还提供一种与KLK5结合时形成热动力表位的抗体，所述热动力表位包含选自以下序列中一者或多者：SEQ ID NO:316、SEQ ID NO:317、SEQ ID NO:318和SEQ ID NO:319，如通过氢交换质谱法所测量。
本文还提供与本文所述任何抗体竞争结合的抗体。
本文还提供与本文所述任何抗体结合相同的表位的抗体。
本文还提供编码本文所述任何抗体的分离的核酸。
本文还提供包含本文所述核酸的宿主细胞。
本文还提供一种产生抗体的方法，包括培养本文所述的宿主细胞，从而产生抗体。
本文还提供包含本文所述抗体的免疫缀合物。
本文还提供包含本文所述抗体和可药用载体的药物制剂。
本文还提供如本文所述的抗体用作药物。
本文还提供如本文所述的抗体用于治疗疾病，所述疾病选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病和酒渣鼻(rosacea)。在一些实施方案中，疾病选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、酒渣鼻和嗜酸粒细胞性食管炎。在一些实施方案中，哮喘选自特应性哮喘、变应性哮喘、非变应性哮喘、锻炼所致哮喘、阿司匹林敏感/加重性哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未经皮质类固醇治疗的哮喘(corticosteroid
Figure BDA0002677912730000061
asthma)、慢性哮喘、皮质类固醇耐药性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断且未治疗过的哮喘、因吸烟所致的哮喘、皮质类固醇无法控制的哮喘、辅助T细胞淋巴细胞2型(Th2)或高2型(Th2)、或2型(T2)驱动的哮喘、嗜酸粒细胞性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性粒细胞性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驱动的哮喘、低骨膜蛋白性哮喘和低嗜酸性粒细胞性哮喘。在一些实施方案中，哮喘是低TH2性哮喘。
还提供如本文所述的抗体用于抑制KLK5的生物学活性。
还提供如本文所述的抗体在制造药物中的用途。在一些实施方案中，药物用于治疗选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病和酒渣鼻的疾病。在一些实施方案中，疾病选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、酒渣鼻和嗜酸粒细胞性食管炎。在一些实施方案中，哮喘选自特应性哮喘、变应性哮喘、非变应性哮喘、锻炼所致哮喘、阿司匹林敏感/加重性哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未经皮质类固醇治疗的哮喘、慢性哮喘、皮质类固醇耐药性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断且未治疗过的哮喘、因吸烟所致的哮喘、皮质类固醇无法控制的哮喘、辅助T细胞淋巴细胞2型(Th2)或高2型(Th2)、或2型(T2)驱动的哮喘、嗜酸粒细胞性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性粒细胞性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驱动的哮喘、低骨膜蛋白性哮喘和低嗜酸性粒细胞性哮喘。在一些实施方案中，哮喘是低TH2性哮喘。
还提供本文所述的抗体在制造抑制KLK5的生物学活性的药物中的用途。
还提供一种用于治疗患有疾病的个体的方法，其中疾病选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病和酒渣鼻，所述方法包含向该个体施用有效量的本文所述的抗体。在一些实施方案中，疾病选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、酒渣鼻和嗜酸粒细胞性食管炎。在一些实施方案中，哮喘选自特应性哮喘、变应性哮喘、非变应性哮喘、锻炼所致哮喘、阿司匹林敏感/加重性哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未经皮质类固醇治疗治疗的哮喘、慢性哮喘、皮质类固醇耐药性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断且未治疗过的哮喘、因吸烟所致的哮喘、皮质类固醇无法控制的哮喘、辅助T细胞淋巴细胞2型(Th2)或高2型(Th2)、或2型(T2)驱动的哮喘、嗜酸粒细胞性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性粒细胞性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驱动的哮喘、低骨膜蛋白性哮喘和低嗜酸性粒细胞性哮喘。在一些实施方案中，哮喘是低Th2性哮喘。
还提供一种抑制个体中KLK5的生物学活性的方法，所述方法包含向个体施用有效量的本文所述的抗体，以抑制KLK5的生物学活性。
本文还提供一种与人KLK5特异性结合的抗体，其中抗体与人KLK5上的表位结合，根据标准蛋白酶编号，所述表位包含一个或多个选自Pro130、Ser131、Ala132、Gly133、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177、Asp178、Gly184、Asp185、Lys186、Ala186A、Arg188、Asn223、Arg224、Pro225和Lys233的氨基酸残基。在一些实施方案中，该抗体与人KLK5上的表位结合，根据标准蛋白酶编号，所述表位包含一个或多个选自Pro130、Ser131、Ala132、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177、Asp178、Arg224和Lys233的氨基酸残基。在一些实施方案中，该抗体与人KLK5上的表位结合，根据标准蛋白酶编号，所述表位包含一个或多个选自Pro130、Ser131、Ala132、Gly133、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177和Lys233的氨基酸残基。在一些实施方案中，该抗体与人KLK5上的表位结合，根据标准蛋白酶编号，所述表位包含一个或多个选自Ser131、Ala132、Gly133、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Pro173、Arg174、Gly184、Asp185、Lys186、Ala186A、Arg188、Asn223、Arg224和Pro225的氨基酸残基。
本文还提供与人KLK5结合时导致人KLK5构象变化的抗体，其中构象变化变构地导致人KLK5的底物结合位点和/或活性部位的破坏。
附图简述
图1A-1N显示在直接分析中使用荧光肽底物对每种KLK5抑制剂的评估。在添加50μM Boc-VPR-AMC之前，将5nM重组人KLK5和0.19-100nM KLK5抑制剂预温育30分钟。使用
Figure BDA0002677912730000081
Plus读数仪，使用340nm激发/460nm发射模块，每102秒检查平板，持续30-60分钟。如下描述KLK5抑制剂的结果：图1A：Spink9.SRE.Fc(Spink9)，图1B：mAb1108，图1C：3-3F5，图1D：10C8，图1E：9B6，图1F：9F2，图1G：9H3，图1H：9H5，图1I：8B7，图1J：2B11，图1K：8F5，图1L：10C5，图1M：10H3，和图1N：2-3F4。
图2A-2N显示在pro-KLK7偶联分析中对KLK5抑制剂的评估。在添加125nM pro-KLK7和100μM suc-LLVY-AMC之前，将5nM重组人KLK5和0.19-100nM抗KLK5抑制剂预温育30分钟。在24小时后，每102秒进行荧光读数，持续30-60分钟，并且通过平均最后5个读数，计算RFU终点值。如下描述KLK5抑制剂的结果：图2A：Spink9.SRE.Fc，图2B：mAb1108，图2C：3-3F5，图2D：10C8，图2E：9B6，图2F：9F2，图2G：9H3，图2H：9H5，图2I：8B7，图2J：2B11，图2K：8F5，图2L：10C5，图2M：10H3，和图2N：2-3F4。
图3A-3N显示在原KLK1偶联分析中对KLK5抑制剂的评估。在添加31.25nM pro-KLK1和50μM PFR-AMC之前，将0.5nM重组人KLK5和0.019-10nM KLK5抑制剂预温育30分钟。使用
Figure BDA0002677912730000091
Plus读数仪，使用340nm激发/460nm发射模块，每102秒检查平板，持续120分钟。如下描述KLK5抑制剂的结果：图3A：Spink9.SRE.Fc，图3B：mAb1108，图3C：3-3F5，图3D：10C8，图3E：9B6，图3F：9F2，图3G：9H3，图3H：9H5，图3I：8B7，图3J：2B11，图3K：8F5，图3L：10C5，图3M：10H3，和图3N：2-3F4。
图4A-4N显示LC/MS分析的结果，所述分析测定通过监测KLK5衍生的剪切产物肽，测量重组KLK5对pro-KLK7的蛋白酶解的抑制。SPINK9.SRE.Fc、mAb1108和12种选定抗体和KLK5的预温育后，进行5nM KLK5与15nM pro-KLK7的两小时温育。如下描述KLK5抑制剂的结果：图4A：SPINK9.SRE.Fc，图4B：mAb1108，图4C：10C8，图4D：9B6，图4E：2B11，图4F：9F2，图4G：2-3F4，图4H：10H3，图4I：9H3，图4J：8B7，图4K：8F5，图4L：3-3F5，图4M：10C5，和图4N：9H5。
图5A-5N显示LC/MS分析的结果，所述分析测定通过监测KLK5衍生的剪切产物肽，测量重组KLK5对pro-KLK1的蛋白酶解的抑制。SPINK9.SRE.Fc、mAb1108和12种选定抗体与KLK5预温育后，进行0.5nM KLK5与300nM pro-KLK1的20分钟温育(图5A-N)。如下描述KLK5抑制剂的结果：图5A：SPINK9.SRE.Fc，图5B：mAb1108，图5C：10C8，图5D：9B6，图5E：2B11，图5F：9F2，图5G：2-3F4，图5H：10H3，图5I：9H3，图5J：8B7，图5K：8F5，图5L：3-3F5，图5M：10C5，和图5N：9H5。
图6A-6N显示KLK5抑制剂对KLK7活性的特异性。在添加100μM suc-LLVY-AMC之前，将5nM重组人KLK7和0.19-100nM抗KLK5抑制剂预温育30分钟。使用
Figure BDA0002677912730000092
Plus读数仪，使用340nm激发/460nm发射模块，每102秒检查平板，持续75分钟。表6中总结了IC50值。如下描述KLK5抑制剂的结果：图6A：Spink9.SRE.Fc，图6B：mAb1108，图6C：3-3F5，图6D：10C8，图6E：9B6，图6F：9F2，图6G：9H3，图6H：9H5，图6I：2B11，图6J：8B7，图6K：8F5，图6L：10C5，图6M：10H3和图6N：2-3F4。
图7A-7N显示KLK5抑制剂对KLK1活性的特异性。在添加100μM PFR-AMC之前，将3nM重组人KLK1和0.19-100nM抗KLK5抑制剂预温育30分钟。使用
Figure BDA0002677912730000093
Plus读数仪，使用340nm激发/460nm发射模块，每102秒检查平板，持续60分钟。表7中总结了IC50值。如下描述KLK5抑制剂的结果：图7A：Spink9.SRE.Fc，图7B：mAb1108，图7C：3-3F5，图7D：10C8，图7E：9B6，图7F：9F2，图7G：9H3，图7H：9H5，图7I：8B7，图7J：2B11，图7K：8F5，图7L：10C5，图7M：10H3和图7N：2-3F4。
图8A-8N显示KLK5抑制剂对KLK4活性的特异性。在添加50μM Boc-VPR-AMC之前，将2nM重组人KLK4和0.19-100nM抗KLK5抑制剂预温育30分钟。使用
Figure BDA0002677912730000101
Plus读数仪，使用340nm激发/460nm发射模块，每102秒检查平板，持续60分钟。表8中总结了IC50值。如下描述KLK5抑制剂的结果：图8A：Spink9.SRE.Fc，图8B：mAb1108，图8C：3-3F5，图8D：10C8，图8E：9B6，图8F：9F2，图8G：9H3，图8H：9H5，图8I：8B7，图8J：2B11，图8K：8F5，图8L：10C5，图8M：10H3和图8N：2-3F4。
图9A-9N显示KLK5抑制剂对胰蛋白酶活性的特异性。在添加50μM Boc-VPR-AMC之前，将0.25nM分离自牛胰的胰蛋白酶和0.19-100nM抗KLK5抑制剂预温育30分钟。使用
Figure BDA0002677912730000102
Plus读数仪，使用340nm激发/460nm发射模块，每102秒检查平板，持续60分钟。表9中总结了选定抗体(图9C-N)的IC50值。如下描述KLK5抑制剂的结果：图9A：Spink9.SRE.Fc，图9B：mAb1108，图9C：3-3F5，图9D：10C8，图9E：9B6，图9F：9F2，图9G：9H3，图9H：9H5，图9I：8B7，图9J：2B11，图9K：8F5，图9L：10C5，图9M：10H3和图9N：2-3F4。
图10A-10AB显示通过测定Kiapp分析KLK5抑制剂功效。在添加300μM Z-VPR-pNA之前，将KLK5在多种浓度(0.5、0.25、0.125和0.0625nM)和0.0019-10nM抗KLK5抑制剂预温育30分钟。在Versamax可调式酶标仪中读取平板，每102秒取得405nm处的量值，持续3小时。表10中总结了导出的Kiapp值。如下描述KLK5抑制剂的结果(相应的左小图显示各种KLK5浓度(0.5、0.25、0.125和0.0625nM)时KLK5抑制剂的IC50值；相应的右小图显示测定的和作为KLK5浓度的函数作图得出的IC50值)：图10A和图10B：Spink9.SRE.Fc，图10C和图10D：mAb1108，图10E和图10F：3-3F5，图10G和图10H：10C8，图10I和图10J：9B6，图10K和图10L：9F2，图10M和图10N：9H3，图10O和图10P：9H5，图10Q和图10R：8B7，图10S和图10T：2B11，图10U和图10V：8F5，图10W和图10X：10C5，图10Y和图10Z：10H3，图10AA和图10AB：2-3F4。
图11显示的表格总结了如图1-图10中评估和所示的IC50值。
图12A和图12B：图12A显示依据氢交换量值鉴定的与每种抗体复合时受影响的序列区域，这些序列区域(加下划线)是：区域1(56-68，pHexp 8.0)、区域2(107-124，pHexp6.0)、区域3(184-195，pHexp 8.0)、区域4(232-246，pHexp 6.0)，有效时间校正使用pHref＝7.5。图12B显示图12A中加下划线的每个序列区域的代表性肽的实际氢交换数据。
图13A和图13B：图13A显示抗KLK5抗体克隆14C8、14E12、8E11、8G10、9B6、2-3F4、10C5、2B11、10H3、9H3、8B7、9H5、9F2、10C8、8F5.3-3F5、9E3、10D10、12B3、1D10的轻链可变序列的比对结果。图13B显示抗KLK5抗体克隆14C8、14E12、8E11、8G10、9B6、2-3F4、10C5、2B11、10H3、9H3、8B7、9H5、9F2、10C8、8F5.3-3F5、9E3、10D10、12B3、1D10的重链可变序列的比对结果。还显示根据Kabat编号的CDR区。
图14A和图14B：图14A显示抗KLK5抗体克隆10C5和六个人源化10C5克隆的轻链可变序列的比对结果。图14B显示抗KLK5抗体克隆10C5和28个人源化10C5克隆的重链可变序列的比对结果。以黑色突出显示的氨基酸残基是改变的残基。还显示根据Kabat编号的CDR区。
图15A和图15B：图15A显示抗KLK5抗体克隆9H5和四个人源化9H5克隆的轻链可变序列的比对结果。图15B显示抗KLK5抗体克隆9H5和17个人源化9H5克隆的重链可变序列的比对结果。以黑色突出显示的氨基酸残基是改变的残基。还显示根据Kabat编号的CDR区。
图16A和图16B：图16A显示抗KLK5抗体克隆3-3F5和五个人源化3-3F5克隆的轻链可变序列的比对结果。图16B显示抗KLK5抗体克隆3-3F5和27个人源化3-3F5克隆的重链可变序列的比对结果。以黑色突出显示的氨基酸残基是改变的残基。还显示根据Kabat编号的CDR区。
图17显示，基于A549细胞的IL-8分泌分析中对KLK5抑制剂的评估。KLK5诱导的IL-8分泌水平(灰色星)设定在100％残余活性，同时缓冲液(饥饿培养基)单独(灰色圆圈)设定在0％残余活性。显示了Spink5.Fc(黑色圆圈和点黑线)、人源化3.3F5(黑色菱形和实黑线)抗KLK5抗体、人源化9H5抗KLK5抗体(灰色空正方形和灰色实线)和人源化10C5抗KLK5抗体(黑色空心圆圈和灰色点线)的剂量反应曲线。显示的数据是至少三次独立实验的均数±标准差。
图18A和图18B：图18A显示人KLK5与KLK5-10C5 Fab复合物的叠置。图18B显示人KLK5和10C5 Fab之间的界面。人KLK5的氨基酸残基编号基于蛋白酶的标准编号。参见Debela等人,J Mol Biol,373,1017-1031(2007)。Fab片段的氨基酸残基的编号基于Kabat。
图19A和图19B：图19A显示人KLK5与KLK5-9H5 Fab复合物的叠置。图19B显示人KLK5和9H5 Fab之间的界面。人KLK5的氨基酸残基编号基于蛋白酶的标准编号。Fab片段的氨基酸残基的编号基于Kabat。
图20A和图20B：图20A显示人KLK5与KLK5-3-3F5 Fab复合物的叠置。图20B显示人KLK5和3-3F5 Fab之间的界面。人KLK5的氨基酸残基编号基于蛋白酶的标准编号。Fab片段的氨基酸残基的编号基于Kabat。
本发明实施方案的详细描述
I.定义
如本文所用的术语“抗KLK5抗体”和“与KLK5结合的抗体”指这样的抗体，所述抗体能够以足够亲和力结合KLK5，从而抗体可用作靶向KLK5的诊断药和/或治疗药。在一些实施方案中，抗KLK5抗体与不相关多肽(除KLK5之外的多肽)结合的程度小于该抗体与KLK5结合的约10％，如通过放射免疫测定(RIA)所测量。在一些实施方案中，与KLK5结合的抗体具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM、或≤0.001nM(例如10-8M或更小、例如从10-8M至10-13M、例如从10-9M至10-13M)的解离常数(Kd)。在一些实施方案中，与KLK5结合的抗体具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM、或≤0.001nM(例如10-8M或更小、例如从10-8M至10-13M、例如从10-9M至10-13M)的IC50值(降低酶促反应速率达50％所需要的抑制剂(例如，抗体或其片段)的浓度)。在一些实施方案中，抗KLK5抗体与在不同物种的KLK多肽之间保守的KLK5结合区(例如，表位)结合。
术语“抗体”在本文中以最广意义使用并且涵盖多种抗体结构物，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们显示出所需的抗原结合活性即可。
涉及抗体、结合性多肽、多核苷酸或小分子时使用的术语“分离”是指，已经与其自然环境中的组分相分离。在一些实施方案中，将抗体、结合性多肽、多核苷酸或小分子纯化至大于95％或99％纯度，如通过例如电泳(例如，SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳法)或色谱(例如，离子交换或反相HPLC)所确定。关于评估抗体纯度的方法的综述，参见，例如，Flatman等人,J.Chromatogr.B 848:79-87(2007)。
如本文中所用的术语“单克隆抗体”指从基本上均一的抗体群体获得的抗体，即，构成该群体的各个抗体是相同的和/或结合相同的结合区(例如，表位)，除了可能的变体抗体之外(例如，含有天然存在突变或在产生单克隆抗体制备物期间出现)，这类变体通常以微小的量存在。另外，与一般包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物相反，单克隆抗体制备物中的每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。因此，修饰语“单克隆的”指示该抗体从基本上均一的抗体群体获得的特征，并且不得解释为要求通过任何特定方法产生该抗体。例如，可以通过多种技术产生本文所述的单克隆抗体，所述技术包括但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法、和利用含有全部或部分的人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，如用于产生单克隆抗体的这类方法和其他示例性方法。
“阻断性抗体”或“抗体拮抗剂”是抑制或减少与之结合的抗原的生物学活性的一种抗体。优选的阻断性抗体或拮抗药抗体基本上或彻底地抑制抗原的生物学活性。
术语“嵌合”抗体指一种抗体，其中重链和/或轻链的一部分衍生自特定来源或物种，而重链和/或轻链的剩余部分衍生自不同来源或物种。
术语“全长抗体”、“完好抗体”和“完整抗体”在本文中可互换地用来指一种抗体(例如，抗KLK5抗体)，所述抗体具有基本上与天然抗体结构相似的结构或具有含有Fc区的重链。
“人抗体”是这样一种抗体，其具有对应于如下抗体的氨基酸序列，所述抗体是人或人细胞产生的抗体、或从利用人抗体库或其他人抗体编码序列的非人来源衍生的抗体。人抗体的这种定义特别排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。
“人源化”抗体指包含来自非人类HVR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基的嵌合抗体。在一些实施方案中，人源化抗体将包含至少1个和一般2个可变结构域的基本上全部，其中全部或基本上全部的HVR(例如，CDR)与非人抗体的对应并且全部或基本上全部的FR与人抗体的对应。人源化抗体任选地可以包含从人抗体衍生的抗体恒定区的至少一部分。抗体例如非人抗体的“人源化形式”，指已经历过人源化的抗体。
“天然抗体”指具有各种结构的天然存在的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗体是由二硫键结合的两条相同轻链和两条相同重链组成的约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白。从N端至C端，每条重链具有一个可变区(VH)，也称作可变重结构域或重链可变结构域，随后是三个恒定结构域(CH1、CH2和CH3)。类似地，从N端至C端，每条轻链具有一个可变区(VL)，也称作可变轻链域或轻链可变结构域，随后一个恒定轻链(CL)结构域。抗体的轻链可以基于其恒定域的氨基酸序列而划分成两种类型之一，称作κ(κ)和λ(λ)。
抗体的“类别”指由其重链拥有的恒定结构域或恒定区的类型。存在五大类的抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些类别中的几种可以进一步划分成亚类(同种型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于不同类别免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称作α、δ、ε、γ和μ。
“抗体片段”指不同于完整抗体的分子，所述分子包括完整抗体的一部分，该部分结合完整抗体所结合的抗原。抗体片段的例子包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab’-SH、F(ab')2；双体抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；和从抗体片段形成的多特异性抗体。
“与参考抗体结合相同表位的抗体”或“与相同结合区结合的抗体”指，在竞争分析中阻断参考抗体与其结合配偶体(例如，抗原)结合达50％或更多的抗体，并且反过来，参考抗体在竞争分析中阻断该抗体与其结合配偶体原结合达50％或更多。
术语“热动力表位”，例如在使用氢交换质谱法进行的表位作图情况下，指蛋白质的那些部分，响应于特定结合事件(如，被抗体结合)，所述部分的主链结构动力学或解折叠的局部自由能发生改变。结构性表位可以，或可以不，部分或完全地包含于热动力表位中。
如本文所用，术语“高变区”或“HVR”指抗体可变结域的下述每个区域，所述区域在序列上高变(“互补决定区”或“CDR”)和/或形成结构上确定的环(“高变环”)，和/或含有抗原接触残基(“抗原触点”)。通常，抗体包含六个HVR：VH中三个(H1、H2、H3)和VL中三个(L1、L2、L3)。本文中的示例性HVR包括：
(a)出现在第26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)氨基酸残基处的高变环(Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))；
(b)出现在第24-34(L1)、50-56(L2)、89-97(L3)、31-35b(H1)、50-65(H2)和95-102(H3)氨基酸残基处的CDR(Kabat等人,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991))；
(c)出现在第27c-36(L1)、46-55(L2)、89-96(L3)、30-35b(H1)、47-58(H2)和93-101(H3)氨基酸残基处的抗原触点(MacCallum等人,J.Mol.Biol.262:732-745(1996))；和
(d)(a)、(b)和/或(c)的组合，包括HVR氨基酸残基46-56(L2)、47-56(L2)、48-56(L2)、49-56(L2)、26-35(H1)、26-35b(H1)、49-65(H2)、93-102(H3)和94-102(H3)。
除非另外说明，否则本文中HVR残基和可变结构域中的其他残基(例如，FR残基)根据Kabat等人上引文编号，例如，如图13-16以及下文序列表格中所述。除非另外说明，否则CDR根据Kabat等人上引文确定。
术语“可变区”或“可变结构域”指抗体重链或轻链中参与抗体结合抗原的结构域。天然抗体重链和轻链的可变结构域(分别是VH和VL)通常具有相似的结构，每个结构域包含四个保守的构架区(FR)和三个高变区(HVR)。(参见，例如，Kindt等人,Kuby Immunology,第6版,W.H.Freeman and Co.,第91页(2007))。单个VH结构域或VL结构域可能足以赋予抗原结合特异性。另外，结合特定抗原的抗体可以利用来自结合该抗原的抗体的VH或VL结构域筛选互补性VL结构域或VH结构域的文库，来进行分离。参见，例如，Portolano等人,J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等人,Nature 352:624-628(1991)。
术语“Fc区”在本文中用来限定免疫球蛋白重链的含有至少一部分恒定区的C端区域。该术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。在一个实施方案中，人IgG重链Fc区从Cys226或从Pro230延伸至重链的羧基端。然而，Fc区的C端赖氨酸(Lys447)可以存在或可以不存在。除非本文中另外说明，否则Fc区或恒定区中的氨基酸残基的编号根据如Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest(有免疫学意义的蛋白质的序列),第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991中所述的EU编号体系，也称作EU index。
“构架”或“FR”指除高变区(HVR)残基之外的可变结构域残基。可变结构域的FR通常由以下四个FR结构域组成：FR1、FR2、FR3和FR4。因此，HVR序列和FR序列通常按以下序列出现在VH(或VL)中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
出于本文目的，“受体人类构架”是这样的构架，其包含从如下文定义的人免疫球蛋白构架或人共有构架衍生的轻链可变结构域(VL)构架或重链可变结构域(VH)构架的氨基酸序列。“衍生自”人免疫球蛋白构架或人共有构架的受体人类构架可以包含与其相同的氨基酸序列，或它可以含有氨基酸序列变化。在一些实施方案中，氨基酸变化的数目是10个或更小、9或更小、8或更小、7或更小、6或更小、5或更小、4或更小、3或更小、或2或更小。在一些实施方案中，VL受体人类构架在序列上与VL人免疫球蛋白构架序列或人共有构架序列相同。
“人共有构架”是这样的构架，它代表在选择的一系列人免疫球蛋白VL或VH构架序列中最常出现的氨基酸残基。通常，选择的人免疫球蛋白VL或VH构架序列来自可变结构域序列的亚组。通常，序列亚组是如Kabat等人,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,第五版,NIH Publication 91-3242,Bethesda MD(1991),第1-3卷中描述的亚组。在一个实施方案中，对于VL，该亚组是如Kabat等人上引文中描述的亚组κI。在一个实施方案中，对于VH，该亚组是如Kabat等人上引文中描述的亚组III。
“亲和力”或“结合亲和力”指分子(例如，抗体，结合性多肽、多核苷酸、小分子)的单一结合位点及其结合配偶物(例如，抗原)之间非共价相互作用的总计强度。除非另外指出，否则如本文所用，“结合亲和力”指反映结合对子的成员(例如，抗体、结合性多肽、多核苷酸，小分子中任一者和抗原)之间1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶物Y的亲和力可以通常由解离常数(Kd)代表。亲和力可以由本领域已知的常见方法测量，包括本文所述的那些方法。在下文中描述用于测量结合亲和力的具体示意性和示例性实施方案。
“亲和力成熟的”抗体指在一个或多个高变区(HVR)中存在一个或多个改变的抗体，其中与不拥有这些改变的亲本抗体相比，这类改变导致抗体对抗原的亲和力改善。
“结合区”是与KLK5抗体选择性结合的结合配偶体(例如，抗原)的部分。对于结合性多肽的结合配偶体，线性结合区可以是约4-15(例如，4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15)个氨基酸残基的肽部分。非线性的构象结合区可以包含在结合性多肽的结合配偶体的三维(3D)结构中紧靠在一起的多肽序列的残基。
“效应子功能”指随抗体同种型变动的归因于抗体Fc区的那些生物学活性。抗体效应子功能的例子包括：C1q结合和补体依赖的细胞毒性(CDC)；Fc受体结合作用；抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬；下调细胞表面受体(例如，B细胞受体)；和B细胞活化。
如本文所用，术语“KLK5”和“激肽释放酶-5”，除非另外说明，否则指来自任何脊椎动物来源的任何天然KLK5，其中所述脊椎动物来源包括哺乳动物如灵长类(例如，人类)和啮齿类(例如，小鼠和大鼠)。本术语涵盖“全长”、未加工的KLK5以及因细胞中加工而产生的任何形式的KLK5。本术语还涵盖天然存在的KLK5变体，例如，剪接变体或等位变体。在一些实施方案中，示例性人KLK5的氨基酸序列是UNIPROT Q9Y337。在一些实施方案中，示例性人KLK5的氨基酸序列选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。在一些实施方案中，示例性人KLK5的氨基酸序列是UNIPROT Q9Y337(G55，D153变体)的氨基酸残基23-293(扣除信号肽)并且在SEQID NO:2中显示。在一些实施方案中，示例性人KLK5的氨基酸序列是SEQ ID NO:4中所示G55,N153变体的氨基酸残基23-293(扣除信号肽)。在一些实施方案中，示例性人KLK5的氨基酸序列是SEQ ID NO:6中所示R55,N153变体的氨基酸残基23-293(扣除信号肽)。在一些实施方案中，示例性人KLK5的氨基酸序列是在SEQ ID NO:8中显示的R55,D153变体的氨基酸残基23-293(扣除信号肽)。
以下这个段落中的编号涉及全长未加工的KLK5。在一些实施方案中，人KLK5的氨基酸序列包含位置153处的氨基酸N。在一些实施方案中，人KLK5的氨基酸序列包含位置153处的氨基酸D。在一些实施方案中，人KLK5的氨基酸序列包含位置55处的氨基酸G。在一些实施方案中，人KLK5的氨基酸序列包含位置55处的氨基酸R。在一些实施方案中，人KLK5的氨基酸序列包含位置55处的氨基酸G和位置153处的氨基酸N。在一些实施方案中，人KLK5的氨基酸序列包含位置55处的氨基酸G和位置153处的氨基酸D。在一些实施方案中，人KLK5的氨基酸序列包含位置55处的氨基酸R和位置153处的氨基酸N。在一些实施方案中，人KLK5的氨基酸序列包含位置55处的氨基酸R和位置153处的氨基酸D。
以下这个段落中的编号涉及全长未加工的KLK5。在一些实施方案中，人KLK5的核酸序列包含在位置153编码N的序列。在一些实施方案中，人KLK5的核酸序列包含在位置153编码D的序列。在一些实施方案中，人KLK5的核酸序列包含在位置55编码G的序列。在一些实施方案中，人KLK5的核酸序列包含在位置55编码R的序列。在一些实施方案中，人KLK5的核酸序列包含在位置55编码G和在位置153编码N的序列。在一些实施方案中，人KLK5的核酸序列包含在位置55编码G和在位置153编码D的序列。在一些实施方案中，人KLK5的核酸序列包含在位置55编码R和在位置153编码N的序列。在一些实施方案中，人KLK5的核酸序列包含在位置55编码R和在位置153编码D的序列。
如本文所用，术语“SPINK5”和“丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal 5型”，除非另外说明，否则指来自任何脊椎动物来源的任何天然SPINK5，其中所述脊椎动物来源包括哺乳动物如灵长类(例如，人类)和啮齿类(例如，小鼠和大鼠)。本术语涵盖“全长”、未加工的SPINK5以及因细胞中加工而产生的任何形式的SPINK5。本术语还涵盖天然存在的SPINK5变体，例如，剪接变体或等位变体。在一些实施方案中，示例性人SPINK5的氨基酸序列是UNIPROTQ9NQ38并且在SEQ ID NO:9中显示。在一些实施方案中，示例性人SPINK5的氨基酸序列是UNIPROT Q9NQ38的氨基酸残基23-1064(扣除信号肽)并且在SEQ ID NO:10中显示。
如本文所用的术语“SPINK融合多肽”指其中SPINK多肽或其片段(例如，SPINK多肽(例如，SPINK5和/或SPINK9)的某些结构域)直接或间接与另一种多肽(例如，非SPINK多肽)连接的融合多肽。
如本文所用的术语“SPINK Fc融合多肽”指其中SPINK多肽或其片段(例如，SPINK多肽(例如，SPINK5和/或SPINK9)的某些结构域)直接或间接与Fc区连接的融合多肽。在一些实施方案中，Fc区选自IgG1 Fc区、IgG2a Fc区和IgG4 Fc区。在一些实施方案中，Fc区是IgG2a Fc区。在一些实施方案中，IgG2a Fc区是小鼠IgG2a Fc区。在一些实施方案中，Fc区是IgG1 Fc区。在一些实施方案中，IgG1 Fc区是人IgG1 Fc区。在一些实施方案中，Fc区是IgG4 Fc区。在一些实施方案中，IgG4 Fc区是人IgG4 Fc区。在一些实施方案中，SPINK多肽或其片段是人SPINK多肽或其片段。在一些实施方案中，SPINK多肽或其片段是小鼠SPINK多肽或其片段。可以理解，本文中提供不影响SPINK多肽、SPINK结构域或SPINK Fc融合多肽的功能和/或活性的SPINK多肽、SPINK结构域或Fc的微小序列变异，如插入、缺失、置换、尤其保守性氨基酸置换。在一些实施方案中，本文提供的SPINK Fc融合多肽可以与KLK5结合，这可以导致抑制KLK5。在一些实施方案中，SPINK多肽或其片段是SPINK9。在一些实施方案中，SPINK Fc融合多肽是SPINK9.SRE.Fc(SEQ ID NO:320)。
如本文所用的术语“多肽”，除非另外说明，否则指来自任何脊椎动物来源的任何天然目的多肽(例如，KLK5或SPINK5)，其中所述脊椎动物来源包括哺乳动物如灵长类(例如，人类)和啮齿类(例如，小鼠和大鼠)。本术语涵盖“全长”、未加工的多肽以及因细胞中加工而产生的任何形式的多肽。本术语还涵盖天然存在的多肽变体，例如，剪接变体或等位变体。
相对于参比多肽序列的“百分比(％)氨基酸序列同一性”定义为，将所述序列比对并根据需要引入空位以实现最大百分比序列同一性之后，不将任何保性置换视为序列同一性的部分，候选序列中与参比多肽序列中氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。为了确定氨基酸序列同一性百分数的比对可以按本领域能力范围内的多种方式实现，例如，使用可公开获得的计算机软件如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适宜参数，包括为实现正在比较的序列在全长范围内最大比对所需要的任何算法。然而，出于本文目的，使用序列比较计算机程序ALIGN-2产生氨基酸序列同一性％值。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech，Inc.授权，并且源代码已经随用户文档提交至华盛顿特区20559的美国版权局，以美国版权登记号TXU510087登记。ALIGN-2程序从Genentech,Inc.,加利福尼亚州South San Francisco可公开获得或可以从源代码汇编。应当汇编ALIGN-2程序以在UNIX操作系统(包括数字式UNIX V4.0D)上使用。全部序列比较参数由ALIGN-2程序设定并且不变动。
在使用ALIGN-2比较氨基酸序列的情况下，如下计算给定氨基酸序列A相对、与或针对给定氨基酸序列B(这可以备选地描述为：相对、与或针对给定氨基酸序列B具有或包含某个氨基酸序列同一性％的给定氨基酸序列A)的氨基酸序列同一性％：
100乘以分数X/Y
其中X是由序列比对程序ALIGN-2在该程序的A和B比对结果中评定为相同匹配的氨基酸残基的数目，并且其中Y是B中氨基酸残基的总数。将可以理解在氨基酸序列A的长度不等于氨基酸序列B的长度时，A相对于B的氨基酸序列同一性％将不等于B相对于A的氨基酸序列同一性％。除非另外特别声明，否则本文所用的全部氨基酸序列同一性％值如紧接前段中所述那样使用ALIGN-2计算机程序获得。
如本文中可互换使用的“多核苷酸”或“核酸”指任何长度的核苷酸聚合物，并且包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修饰的核苷酸或碱基、和/或其类似物、或可以由DNA或RNA聚合酶或通过合成反应掺入聚合物的任何底物。多核苷酸可以包含修饰的核苷酸，如甲基化核苷酸及其类似物。如果存在，可以在聚合物装配之前或之后赋予对核苷酸结构的修饰。核苷酸的序列可以被非核苷酸组分打断。可以在合成后进一步修饰多核苷酸，如通过与标记物缀合。其他类型的修饰包括，例如，“加帽”、用类似物置换一个或多个天然存在的核苷酸，核苷酸间修饰，例如，具有不带电荷连接(例如，甲基膦酸酯、磷酸三酯、磷酰胺化物、氨基甲酸酯等)和具有带电荷连接(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)的那些、含有侧挂部分(如，例如，蛋白质(例如，核酸酶、毒素、抗体、信号肽、聚-L-赖氨酸等))的那些，具有嵌入剂(例如，吖啶、补骨脂素等)的那些、含有螯合剂(例如，金属、放射性金属、硼，氧化的金属，等)的那些、含有烷基化剂的那些、具有修饰的连接的那些(例如，α异头核酸等)，以及未修饰形式的多核苷酸。另外，可以将通常存在于糖中的任何羟基取代(例如，用膦酸酯基团、磷酸酯基团取代)、用标准保护基保护、或激活以制备与其它核苷酸的其它连接，或可以使其与固态或半固态支持物缀合。5'端和3’端OH可以磷酸化或用1至20个碳原子的胺或有机加帽基团部分取代。其他羟基也可以衍生化为标准保护基。多核苷酸还可以含有本领域通常已知的核糖或脱氧核糖的类似形式，例如，包括2'-O-甲基-、2'-O-烯丙基、2'-氟-或2'-叠氮基-核糖、碳环状糖类似物、α-异头糖、差向异构糖如阿拉伯糖、木糖或来苏糖、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖、无环类似物和无碱基核苷类似物如甲基核苷。一个或多个磷酸二酯键可以由备选性连接基团替换。这些备选性连接基团包括，但不限于这样的实施方案，其中磷酸酯由P(O)S(“硫代酯”)、P(S)S(“二硫代酯”)、(O)NR2(“酰胺化物”)、P(O)R、P(O)R、P(O)OR'、CO或CH2(“甲缩醛”)替换，其中每个R或R'独立地是H或取代或未取代的烷基(1-20个C)，所述烷基任选含有醚(-O-)键、芳基、链烯基、环烷基、环烯基或araldyl。多核苷酸中的键并不需要全部是相同的。前述说明适用于本文提及的全部多核苷酸，包括RNA和DNA。
“分离的”多核苷酸或核酸指已经与其自然环境的组分分离的分子。分离的核酸包括在通常含有该核酸分子的细胞内包含的该核酸分子，但是该核酸分子存在于染色体外或与其天然染色体位置不同的染色体位置处。
“编码抗KLK5抗体的分离核酸”指编码抗体重链和轻链(或其片段)的一个或多个核酸分子，包括在单一载体或分开的载体中的这类核酸分子和在宿主细胞中于一个或多个位置处存在的这类核酸分子。
如本文所用的术语“KLK5基因组序列”指KLK5基因的cDNA和/或其基因组形式，其可以包括内含子以及上游和下游调节序列。
术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用并且指已经向其中引入了外源核酸的细胞，包括这类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化的细胞”，其包括原代转化细胞和从其衍生的后代，而无论传代次数是多少。后代可以在核酸内容方面不与亲本细胞完全相同，反而可以含有突变。本文中包括突变子代，所述突变子代具有与在最初转化的细胞中筛选或选择的功能或生物学活性相同的功能或生物学活性。
如本文所用，术语“载体”指能够扩增与其连接的另一核酸的核酸分子。该术语包括，作为自我复制型核酸结构的载体、以及并入已经引入了该载体的宿主细胞的基因组内的载体。某些载体能够指导与它们有效连接的核酸表达。此类载体在本文中称作“表达载体”。
如本文所用，“参比样品”、“参比细胞”、“参比组织”、“对照样品”、“对照细胞”或“对照组织”指用于比较目的的样品、细胞、组织、标准品或水平。在一个实施方案中，从相同受试者的身体的健康和/或不患病部分(例如，组织或细胞)获得参比样品、参比细胞、参比样品、对照样品、对照细胞或对照组织。例如，与患病细胞或组织毗邻的健康和/或不患病细胞或组织(例如，与肿瘤毗邻的细胞或组织)。在另一个实施方案中，从相同受试者的身体的未治疗组织和/或细胞获得参比样品。在一个实施方案中，从另一位受试者的身体的健康和/或不患病部分(例如，组织或细胞)获得参比样品、参比细胞、参比样品、对照样品、对照细胞或对照组织。在一个实施方案中，从另一位受试者的身体的未治疗的组织和/或细胞获得参比样品、参比细胞、参比样品、对照样品、对照细胞或对照组织。
如本文所用，术语“样品”指从目的受试者获得或衍生的制品，所述制品含有例如基于物理特征、生物化学特征、化学特征和/或生理学特征待表征和/或鉴定的细胞实体和/或其他分子实体。例如，短语“疾病样品”及其变型指从目的受试者获得的任何样品，所述的目的受试者预期或已知含有待表征的细胞实体和/或分子实体。样品包括但不限于原代或培养的细胞或细胞系、细胞上清液、细胞裂解物、血小板、血清、血浆、玻璃体液、淋巴液、滑液、滤泡液、精液、羊水、乳、全血、血液衍生的细胞、尿、脑脊液、唾液、痰、泪、汗液、黏液、肿瘤裂解物和组织培养物、组织提取物如均化的组织、肿瘤组织、细胞提取物及其组合。
“组织样品”或“细胞样品”意指一组从受试者的组织获得的相似细胞。组织或细胞样品的来源可以是来自新鲜、冷冻和/或保存的器官的实体组织、组织样品、活检样品和/或抽吸物；血液或任何血液成分(如血浆)；体液如脑脊液、羊水、腹膜液或间质液；来自受试者的任何妊娠或发育时间的细胞。组织样品也可以是原代或培养的细胞或细胞系。任选地，从疾病组织/器官获得组织或细胞样品。组织样品可以含有在自然界中不与组织天然混合的化合物如防腐剂、抗凝血剂、缓冲剂、固定剂、营养物、抗生素等。
药剂(例如，药物制剂)的“有效量”指，按照必需的剂量和时间段，有效实现所需治疗结果的量。
“受试者”是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯化动物(例如，奶牛、绵羊、猫、犬和马)、灵长类(例如，人和非人灵长类如猴)、兔和啮齿类(例如，小鼠和大鼠)。在一些实施方案中，受试者是人。
如本文所用，术语“患者”指动物，如哺乳动物。在一个实施方案中，患者指人。
术语“药物制剂”指一种制备物，所述制备物处于这类形式从而允许其中所含的有效成分的生物学活性有效，并且不含有对于将会施用该制剂的受试者不可接受地有毒的额外组分。
“可药用载体”指药物制剂中除有效成分之外的对受试者无毒的成分。可药用载体包括但不限于缓冲剂、辅料、稳定剂或防腐剂。
如本文所用，术语“高Th2哮喘”指显示高水平的一种或多种Th2细胞相关的细胞因子(例如，IL13、IL4、IL9、IL5)或显示Th2细胞因子相关炎症的哮喘。在一些实施方案中，术语“高Th2性哮喘”可以与高嗜酸性粒细胞性哮喘可互换使用。在一些实施方案中，高Th2性哮喘是Th2驱动的哮喘。在一些实施方案中，已经确定哮喘患者为嗜酸粒细胞性炎症阳性(EIP)。参见，例如，国际专利申请出版物公开号WO 2015/061441，所述文献通过引用方式完整并入本文。在一些实施方案中，已经确定，与对照或参比水平相比，受试者具有升高水平的至少一个嗜酸粒细胞性特征标识基因(signature gene)。参见WO2015/061441。在一些实施方案中，高Th2性哮喘是高骨膜蛋白性哮喘。在一些实施方案中，受试者具有高的血清骨膜蛋白。在一些实施方案中，受试者为十八岁或以上。在一些实施方案中，已经确定，与对照或参比水平相比，受试者具有升高水平的血清骨膜蛋白。在一些实施方案中，对照水平或参比水平是群体中骨膜蛋白的中位水平。在一些实施方案中，已经确定受试者具有20ng/ml或更高的血清骨膜蛋白。在一些实施方案中，已经确定受试者具有25ng/ml或更高的血清骨膜蛋白。在一些实施方案中，已经确定受试者具有50ng/ml或更高的血清骨膜蛋白。在一些实施方案中，血清骨膜蛋白的对照或参比水平是20ng/ml、25ng/ml或50ng/ml。在一些实施方案中，哮喘是高嗜酸性粒细胞性哮喘。在一些实施方案中，已经确定，与对照或参比水平相比，受试者具有升高的嗜酸性粒细胞计数。在一些实施方案中，该对照或参比水平是群体的中位水平。在一些实施方案中，已经确定受试者具有150或更高的嗜酸性粒细胞计数/μl血液。在一些实施方案中，已经确定受试者具有200或更高的嗜酸性粒细胞计数/μl血液。在一些实施方案中，已经确定受试者具有250或更高的嗜酸性粒细胞计数/μl血液。在一些实施方案中，已经确定受试者具有300或更高的嗜酸性粒细胞计数/μl血液。在一些实施方案中，已经确定受试者具有350或更高的嗜酸性粒细胞计数/μl血液。在一些实施方案中，已经确定受试者具有400或更高的嗜酸性粒细胞计数/μl血液。在一些实施方案中，已经确定受试者具有450或更高的嗜酸性粒细胞计数/μl血液。在一些实施方案中，已经确定受试者具有500或更高的嗜酸性粒细胞计数/μl血液。在一些优选的实施方案中，已经确定受试者具有300或更高的嗜酸性粒细胞计数/μl血液。在一些实施方案中，嗜酸性粒细胞是外周血嗜酸性粒细胞。在一些实施方案中，嗜酸性粒细胞是痰嗜酸性粒细胞。在一些实施方案中，受试者显示升高水平的FeNO(呼出气一氧化氮)和/或升高水平的IgE。例如，在一些情况下，受试者显示高于以下任一者的FeNO水平：约5ppb(每十亿份)、10ppb、15ppb、20ppb、25ppb、30ppb、35ppb、40ppb、45ppb、50ppb、60ppb、70ppb、80ppb、90ppb和100ppb。在一些情况下，受试者具有高于50IU/ml的IgE水平。
如本文所用，术语“低Th2性哮喘”、“非高Th2性哮喘”、“低2型性哮喘”、“低T2性哮喘”、“非嗜酸粒细胞性哮喘”、“粒细胞缺乏性哮喘(pauci-granulocytic asthma)”或“炎症细胞缺乏性哮喘(pauci-inflammatory asthma)”指，显示低水平的一种或多种Th2细胞相关细胞因子(例如，IL13、IL4、IL9、IL5)或显示非Th2细胞因子相关炎症的哮喘。在一些实施方案中，术语低Th2性哮喘可以与低嗜酸性粒细胞性哮喘可互换使用。在一些实施方案中，已经确定哮喘患者为嗜酸粒细胞性炎症阴性(EIN)。参见，例如，WO 2015/061441。在一些实施方案中，低Th2性哮喘是Th17驱动的哮喘。在一些实施方案中，低Th2性哮喘是低骨膜蛋白性哮喘。在一些实施方案中，受试者为十八岁或以上。在一些实施方案中，已经确定，与对照或参比水平相比，受试者具有降低水平的血清骨膜蛋白。在一些实施方案中，对照水平或参比水平是群体中骨膜蛋白的中位水平。在一些实施方案中，已经确定受试者具有小于20ng/ml的血清骨膜蛋白。在一些实施方案中，哮喘是低嗜酸性粒细胞性哮喘。在一些实施方案中，已经确定，与对照或参比水平相比，受试者具有降低的嗜酸性粒细胞计数。在一些实施方案中，该对照或参比水平是群体的中等水平。在一些实施方案中，已经确定受试者具有小于150的嗜酸性粒细胞计数/μl血液。在一些实施方案中，已经确定受试者具有小于100的嗜酸性粒细胞计数/μl血液。在某些优选实施方案中，已经确定受试者具有小于300的嗜酸性粒细胞计数/μl血液。
如本文所用，术语“治疗”(及语法变型如“治疗”或“治疗着”)指意欲改变正在接受治疗的受试者或细胞的天然过程的临床干预。想要的治疗效果包括以下一者或多者：防止疾病出现或复发、减轻症状、减小疾病的任何直接或间接病理学后果、使疾病状态稳定(即，不恶化)、降低病情进展速率、或缓和疾病状态、与未接受治疗时预期的生存期相比延长生存期、和预后的改善。
术语“药品说明书”用来指治疗产品的商业包装中习惯性包括的说明书，所述说明书含有关于适应症、用法，剂量、施用、联合疗法、禁忌症和/或涉及此类治疗产品用法之警告的信息。
除非本文另外说明或明确与语境矛盾，否则术语“a(一个)”和“an(一个)”和“the(该)”及相似术语的应用，在描述本文实施方案的语境下，应解释为涵盖单数和复数。除非另外指出，否则术语“包含”、“具有”、“包括”和“含有”应解释为开放式术语(即，意指“包括但不限于”)。可以理解，本文提供的方面和实施方案包括“由方面和实施方案组成”和/或“基本上由方面和实施方案组成”。
如本领域技术人员理解，对“约”某个值或参数的提及包括(并且描述)涉及该值或参数本身的实施方案。例如，提及“约X”的描述包括对“X”的描述。
术语“实质上不同”指，两个数值(通常，一个数值与分子相关并且另一个数值与参比/对比分子相关)之间差异程度足够高，从而本领域技术人员将认定两个值之间的差异在用所述值度量的生物学特征(例如，Kd值)的情境下有统计显著性。所述两个值之间的差异可以例如大于约10％、大于约20％、大于约30％、大于约40％、和/或大于约50％，随参比/比较分子的值变化而变化。
II.组合物和方法
在一个方面，本发明部分地基于发现抑制KLK5的生物学活性的KLK5抗体。在一些实施方案中，提供与KLK5结合的抗体。在一些实施方案中，提供与KLK5结合的分离的抗体，即抗KLK5抗体。在一些实施方案中，抗KLK5抗体抑制KLK5的生物学活性。在一些实施方案中，抗KLK5抗体基本上或完全抑制KLK5的生物学活性。在一些实施方案中，KLK5的生物学活性是丝氨酸蛋白酶活性。在一些实施方案中，KLK5的生物学活性是胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶活性。在一些实施方案中，KLK5的生物学活性是KLK5引发的人平滑肌细胞增殖和收缩。在一些实施方案中，KLK5的生物学活性是炎性细胞因子、趋化因子和黏附分子的KLK5诱导的上皮表达。在一些实施方案中，KLK5的生物学活性是KLK5诱导的嗜中性粒细胞趋化性细胞因子的上皮产生和嗜中性粒细胞流入肺组织。在一些实施方案中，抑制KLK5的生物学活性达至少约40％、50％、60％、70％、80％、90％中任意者和/或更多。在一些实施方案中，抑制KLK5的生物学活性达约40％、50％、60％、70％、80％、90％中任意者和/或更多。在一些实施方案中，对KLK5的生物学活性的抑制介于40-50％、50-60％、60-70％、70-80％、80-90％和/或90-100％中任一者之间。
在任何KLK5抗体的一些实施方案中，抗KLK5抗体基本上或完全地抑制SPINK5与KLK5结合。在一些实施方案中，抑制SPINK5与KLK5的结合达至少约40％、50％、60％、70％、80％、90％中任意者和/或更多。在一些实施方案中，抑制SPINK5与KLK5的结合达约40％、50％、60％、70％、80％、90％中任意者和/或更多。在一些实施方案中，对SPINK5与KLK5的结合的抑制介于40-50％、50-60％、60-70％、70-80％、80-90％和/或90-100％中任一者之间。
在任何抗KLK5抗体的一些实施方案中，抗KLK5抗体具有小于约1000nM、500nM、100nM、50nM、10nM、5nM、1nM、500pM、100pM、50pM、10pM、5pM和/或1pM中任何者的IC50值。在一些实施方案中，抗KLK5抗体具有小于1000nM、500nM、100nM、50nM、10nM、5nM、1nM、500pM、100pM、50pM、10pM、5pM和/或1pM中任何者的IC50值。在一些实施方案中，抗KLK5抗体具有介于约50μM–1μM、1μM–500nM、500nM–100nM、100nM–10nM、10nM–1nM、1000pM–500pM、500pM–200pM、200pM–150pM、150pM–100pM、100pM–10pM和/或10pM–1pM中任何者的IC50值。
本文提供的抗体是有用的，例如用于诊断或治疗选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病和酒渣鼻的疾病。在一些实施方案中，疾病选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、酒渣鼻和嗜酸粒细胞性食管炎。在一些实施方案中，哮喘是持续性慢性重度哮喘伴随可能威胁生命的症状恶化急性事件(加重或骤发)。在一些实施方案中，哮喘是特应性(也称作变应性)哮喘、非变应性哮喘(例如，经常由呼吸道病毒(例如，流感、副流感、鼻病毒、人偏肺病毒和呼吸道合胞体病毒)感染或吸入的刺激物(大气污染物、烟雾、柴油粒子、挥发性化学品和室内或户外气体、或甚至因干冷空气)触发)。在一些实施方案中，哮喘是间歇性或锻炼所致哮喘、由急性或慢性一手或二手“烟”暴露(一般是香烟、雪茄、烟斗)、吸入或“蒸发”(烟草、大麻或其他这类物质)引起的哮喘、或由最近摄入阿司匹林或相关NSAIDS触发的哮喘。在一些实施方案中，哮喘是轻度的或未经皮质类固醇治疗的哮喘、新诊断且未治疗过的哮喘、或先前不需要长期使用吸入型局部用或全身性类固醇控制症状(咳嗽、喘鸣、气短/呼吸困难、或胸痛)。在一些实施方案中，哮喘是慢性、皮质类固醇耐药性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、皮质类固醇或其他慢性哮喘控制药物无法控制的哮喘。在一些实施方案中，哮喘是中度至重度哮喘。在一些实施方案中，哮喘是高Th2性哮喘。在一些实施方案中，哮喘是重度哮喘。在一些实施方案中，哮喘是特应性哮喘、变应性哮喘、非变应性哮喘(例如，归因感染和/或呼吸道合胞体病毒(RSV))、锻炼所致哮喘、阿司匹林敏感/加重型哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未用过皮质类固醇的哮喘、慢性哮喘、皮质类固醇耐药性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断且未治疗过的哮喘、因吸烟所致的哮喘、皮质类固醇无法控制的哮喘。在一些实施方案中，哮喘是辅助T细胞淋巴细胞2型(Th2)或2型(Th2)高、或2型(T2)驱动的哮喘。在一些实施方案中，哮喘是嗜酸粒细胞性哮喘。在一些实施方案中，哮喘是变应性哮喘。在一些实施方案中，已经确定受试者为嗜酸粒细胞性炎症阳性(EIP)。参见WO2015/061441。在一些实施方案中，哮喘是高骨膜蛋白型哮喘(例如，具有至少约20ng/mL、25ng/mL或50ng/mL血清的骨膜蛋白水平)。在一些实施方案中，哮喘是高嗜酸性粒细胞型哮喘(例如，至少约150、200、250、300、350、或400嗜酸性粒细胞计数/ml血液)。在一些实施方案中，哮喘是低Th2性哮喘或非Th2驱动的哮喘。在一些实施方案中，已经确定受试者为嗜酸粒细胞性炎症阴性(EIN)。参见WO2015/061441。在一些实施方案中，哮喘是低骨膜蛋白性哮喘(例如，具有小于约20ng/mL血清的骨膜蛋白水平)。在一些实施方案中，哮喘是低嗜酸性粒细胞性哮喘(例如，小于约150嗜酸性粒细胞计数/μl血液或小于约100嗜酸性粒细胞计数/μl血液)。
A示例性抗KLK5抗体
本文提供与KLK5结合的分离的抗体。在一个实施方案中，该抗体抑制KLK5的生物学活性至少50％。KLK5是一种在人皮肤中、尤其在皮肤的上棘层中和颗粒层中表达的(糜)-胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶。已知KLK5在皮肤病如Netherton综合征中发挥病理学作用。
SEQ ID NO:1中提供示例的天然存在的人KLK5前体蛋白序列，具有信号肽(氨基酸1-22)。SEQ ID NO:2中提供与SEQ ID NO:1的氨基酸23-293对应的相应成熟KLK5蛋白质序列。在SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8中分别提供带信号肽的示例性人KLK5前体蛋白的变体，所述变体含有氨基酸交换R55和N153中一者或两者。
在某些实施方案中，抗KLK5抗体具有以下一个或多个特征之任何组合：
a)抑制KLK5的生物学活性至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、或100％；
b)抑制KLK5的丝氨酸蛋白酶活性；
c)与人KLK5特异性结合；
d)具有小于10nM、小于5nM、小于3nM、小于2nM、小于1nM、小于0.5nM、小于0.1nM的IC50值；和/或
e)具有500pM、小于200pM、小于100pM、小于50pM、小于25pM、小于10pM、小于5pM、小于1pM的IC50值。
抗体8G10、9B6、2-3F4、10C5、2B11、10H3、9H3、8B7、9H5、9F2、10C8、8F5、3-3F5和其 他实施方案
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)包含选自SEQ ID NOs:14–24中任一者的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含选自SEQ ID NOs:32–53中任一者的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含选自SEQ ID NOs:62–72中任一者的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含选自SEQ ID NOs:79–91中任一者的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含选自SEQ ID NOs:99–106中任一者的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含选自SEQ ID NOs:112–122中任一者的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)包含选自SEQ ID NOs:14–24中任一者的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含选自SEQ ID NOs:32–53中任一者的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含选自SEQ ID NOs:62–72中任一者的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施方案中，抗体包含：包含选自SEQ ID NOs:62–72中任一者的氨基酸序列的HVR-H3。在另一个实施方案中，抗体包含：包含选自SEQ IDNOs:62–72中任一者的氨基酸序列的HVR-H3和包含选自SEQ ID NOs:112–122中任一者的氨基酸序列的HVR-L3。在又一个实施方案中，抗体包含：包含选自SEQ ID NOs:62–72中任一者的氨基酸序列的HVR-H3、包含选自SEQ ID NOs:112–122中任一者的氨基酸序列的HVR-L3，和包含选自SEQ ID NOs:32–53中任一者的氨基酸序列的HVR-H2。在又一个实施方案中，抗体包含(a)包含选自SEQ ID NOs:14–24中任一者的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含选自SEQID NOs:32–53中任一者的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含选自SEQ ID NOs:62–72中任一者的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(a)包含选自SEQ ID NOs:79–91中任一者的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含选自SEQ ID NOs:99–106中任一者的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含选自SEQ IDNOs:112–122中任一者的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含选自SEQ ID NOs:79–91中任一者的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含选自SEQ ID NOs:99–106中任一者的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含选自SEQ ID NOs:112–122中任一者的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)VH结构域，所述VH结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)包含选自SEQ ID NOs:14–24中任一者的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含选自SEQ ID NOs:32–53中任一者的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含选自SEQ ID NOs:62–72中任一者的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL结构域，所述VL结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(i)包含选自SEQ ID NOs:79–91中任一者的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含选自SEQ ID NOs:99–106中任一者的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含选自SEQ ID NOs:112–122中任一者的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)包含选自SEQ ID NOs:14–24中任一者的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含选自SEQ ID NOs:32–53中任一者的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含选自SEQ ID NOs:62–72中任一者的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含选自SEQID NOs:79–91中任一者的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含选自SEQ ID NOs:99–106中任一者的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含选自SEQ ID NOs:112–122中任一者的氨基酸序列的HVR-L3。
在以上实施方案的任一项中，抗KLK5抗体是人源化的。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含如以上实施方案的任一项中的HVR，并且还包含受体人类构架，例如，人免疫球蛋白构架或人共有构架。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含与选自SEQ ID NO:170-257中任一者的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性中任何同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施方案中，与选自SEQ IDNO:170–257中任一者的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性中任何同一性的VH序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:170–257之任一者中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含选自SEQ ID NO:170–257之任一者的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含选自SEQ ID NOs:14–24中任一者的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含选自SEQ ID NOs:32–53中任一者的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含选自SEQ ID NOs:62–72中任一者的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含与选自SEQ ID NO:131–161之任一者的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施方案中，与选自SEQ ID NO:131–162中任一者的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的VL序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在选自SEQ IDNO:131–162之任一者的氨基酸序列中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含选自SEQ ID NO:131–162之任一者的氨基酸序列的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含选自SEQ ID NOs:79–91中任一者的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含选自SEQ ID NOs:99–106中任一者的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含选自SEQ ID NOs:112–122中任一者的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含如上文提供的任一个实施方案中的VH和如上文提供的任一个实施方案中的VL。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:170和SEQ ID NO:131中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:171和SEQ ID NO:132中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:172和SEQ ID NO:133中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:201和SEQ ID NO:139中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:203和SEQ ID NO:141中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:204和SEQ ID NO:142中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:205和SEQ ID NO:143中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:206和SEQ ID NO:144中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:221和SEQ ID NO:149中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:226和SEQ ID NO:152中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:227和SEQ ID NO:153中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:228和SEQ ID NO:154中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:248和SEQ ID NO:160中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在再一方面中，提供一种KLK5抗体，所述抗体结合至与本文提供的抗KLK5抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供一种与如下抗KLK5抗体结合相同表位的抗体，所述抗KLK5抗体包含选自SEQ ID NO:170–257之任一者的氨基酸序列的VH序列。在某些实施方案中，提供一种抗体，其中与KLK5结合时，所述抗体导致包含选自以下序列中一者或多者的热动力表位：SEQ ID NO:316、SEQ ID NO:317、SEQ ID NO:318和SEQ ID NO:319，如通过氢交换质谱法所测量。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中所述抗体包含选自SEQ ID NO:288–306之任一者的氨基酸序列的HC序列。在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中所述抗体包含选自SEQ ID NO:265–280之任一者的氨基酸序列的LC序列。
在一个实施方案中，抗体包含分别在SEQ ID NO:288和SEQ ID NO:265中的HC和LC序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:289和SEQ ID NO:266中的HC和LC序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:290和SEQ ID NO:267中的HC和LC序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:292和SEQ ID NO:269中的HC和LC序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:293和SEQ ID NO:269中的HC和LC序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:294和SEQ ID NO:270中的HC和LC序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:295和SEQ ID NO:271中的HC和LC序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:296和SEQ ID NO:272中的HC和LC序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:297和SEQ ID NO:273中的HC和LC序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:299和SEQ ID NO:275中的HC和LC序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:300和SEQ ID NO:275中的HC和LC序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:301和SEQ ID NO:276中的HC和LC序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:302和SEQ ID NO:277中的HC和LC序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:303和SEQ ID NO:278中的HC和LC序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:305和SEQ ID NO:280中的HC和LC序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:306和SEQ ID NO:280中的HC和LC序列，包括这些序列的翻译后修饰。
本文提供包含轻链可变结构域和重链可变结构域的抗体，所述轻链可变结构域包含如图14A、图15A和/或图16A中所示的根据Kabat编号的HVR1-LC、HVR2-LC和HVR3-LC序列，所述重链可变结构域包含如图14B、图15B和/或图16B中所示的根据Kabat编号的HVR1-HC、HVR2-HC和HVR3-HC序列。在一些实施方案中，抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含如图14A、图15A和/或图16A中所示的HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列、和FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列。在一些实施方案中，抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含如图14B、图15B和/或图16B中所示的HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列、和FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列。
在再一方面中，提供一种抗KLK5抗体，所述抗体结合至与本文提供的抗KLK5抗体相同的表位。
在又一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中与KLK5结合时，所述抗体导致包含选自以下序列中一者或多者的热动力表位：SEQ ID NO:316、SEQ ID NO:317、SEQ ID NO:318和SEQ ID NO:319，如通过氢交换质谱法所测量。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一项的抗KLK5抗体是单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一个实施方案中，抗KLK5抗体是人源化的。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含如以上实施方案的任一项中的HVR，并且还包含受体人类构架，例如，人免疫球蛋白构架或人共有构架。在一个实施方案中，抗KLK5抗体是抗体片段，例如，Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体(diabody)或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，抗体是全长抗体，例如，完整IgG1抗体或完整IgG4抗体，或如本文定义的其他抗体类别或同种型。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一者的抗KLK5抗体可以并入单独或组合的、如下文所述的任何特征。
抗体10C5、9H5、3-3F5和其他实施方案
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:45或SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:69或SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:96的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:109的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:127的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ IDNO:52或SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:69或SEQID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:87或SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:101或SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:119或SEQ ID NO:122的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ IDNO:52或SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:69或SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施方案中，抗体包含：包含SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:69或SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3。在另一个实施方案中，该抗体包含：包含SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:69或SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQ IDNO:115、SEQ ID NO:119或SEQ ID NO:122的氨基酸序列的HVR-L3。在又一个实施方案中，该抗体包含：包含SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:69或SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:119或SEQ ID NO:122的氨基酸序列的HVR-L3，和包含SEQ IDNO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ IDNO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52或SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-H2。在又一个实施方案中，抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ IDNO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52或SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:69或SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:87或SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:101或SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:119或SEQ ID NO:122的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)VH结构域，所述VH结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL结构域，所述VL结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)VH结构域，所述VH结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL结构域，所述VL结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)VH结构域，所述VH结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL结构域，所述VL结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：具有SEQ ID NO:202的重链可变结构域(VH)序列。在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：具有SEQ ID NO:140的轻链可变结构域(VL)序列。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：选自SEQ ID NOs:173–201之任一者的重链可变结构域(VH)序列。在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：选自SEQ IDNOs:134–139和SEQ ID NO:321之任一者的轻链可变结构域(VL)序列。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含与SEQ ID NO:201的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性中任何同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性中任一者的VH序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:201中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:201中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:139的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:139中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ IDNO:139中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含如上文提供的任一个实施方案中的VH和如上文提供的任一个实施方案中的VL。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:201和SEQ ID NO:139中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在一些实施方案中，提供一种抗KLK5抗体，所述抗体结合至与本文提供的抗KLK5抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供一种与如下抗KLK5抗体结合相同的表位的抗体，所述抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:201的VH序列和SEQ ID NO:139的VL序列。在某些实施方案中，提供一种抗体，其中与KLK5结合时，所述抗体导致包含选自以下序列中一者或多者的热动力表位：SEQ ID NO:316、SEQ ID NO:317、SEQ ID NO:318和SEQ ID NO:319，如通过氢交换质谱法所测量。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：具有SEQ ID NO:225的重链可变结构域(VH)序列。在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：具有SEQ ID NO:151的轻链可变结构域(VL)序列。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：选自SEQ ID NOs:207–224之任一者的重链可变结构域(VH)序列。在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：选自SEQ IDNOs:145–150之任一者的轻链可变结构域(VL)序列。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含与SEQ ID NO:221的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性中任何同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性中任一者的VH序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:221中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:221中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:149的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:149中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ IDNO:149中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含如上文提供的任一个实施方案中的VH和如上文提供的任一个实施方案中的VL。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:221和SEQ ID NO:149中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在一些实施方案中，提供一种抗KLK5抗体，所述抗体结合至与本文提供的抗KLK5抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供一种与如下抗KLK5抗体结合相同的表位的抗体，所述抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:221的VH序列和SEQ ID NO:149的VL序列。在某些实施方案中，提供一种抗体，其中与KLK5结合时，所述抗体导致包含选自以下序列中一者或多者的热动力表位：SEQ ID NO:316、SEQ ID NO:317、SEQ ID NO:318和SEQ ID NO:319，如通过氢交换质谱法所测量。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：具有SEQ ID NO:257的重链可变结构域(VH)序列。在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：具有SEQ ID NO:162的轻链可变结构域(VL)序列。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：选自SEQ ID NOs:229–256之任一者的重链可变结构域(VH)序列。在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：选自SEQ IDNOs:155–161之任一者的轻链可变结构域(VL)序列。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含与SEQ ID NO:248的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性中任何同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性中任何同一性的VH序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:248中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:248中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:160的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:160中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ IDNO:160中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含如上文提供的任一个实施方案中的VH和如上文提供的任一个实施方案中的VL。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:248和SEQ ID NO:160中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在一些实施方案中，提供一种抗KLK5抗体，所述抗体结合至与本文提供的抗KLK5抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供一种与如下抗KLK5抗体结合相同的表位的抗体，所述抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:248的VH序列和SEQ ID NO:160的VL序列。
本文提供包含轻链可变结构域和重链可变结构域的抗体，所述轻链可变结构域包含如图14A、图15A和/或图16A中所示的根据Kabat编号的HVR1-LC、HVR2-LC和HVR3-LC序列，所述重链可变结构域包含如图14B、图15B和/或图16B中所示的根据Kabat编号的HVR1-HC、HVR2-HC和HVR3-HC序列。在一些实施方案中，抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含如图14A、图15A和/或图16A中所示的HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列、和FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列。在一些实施方案中，抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含如图14B、图15B和/或图16B中所示的HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列、和FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一项的抗KLK5抗体是单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一个实施方案中，抗KLK5抗体是人源化的。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含如以上实施方案的任一项中的HVR，并且还包含受体人类构架，例如，人免疫球蛋白构架或人共有构架。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体是抗体片段，例如，Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体(diabody)或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，该抗体是全长抗体，例如，完整IgG1抗体或完整IgG4抗体，或如本文定义的其他抗体类别或同种型。
本文还提供一种与人KLK5特异性结合的抗体，其中抗体与人KLK5上的表位结合，根据标准蛋白酶编号，所述表位包含一个或多个选自Pro130、Ser131、Ala132、Gly133、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177、Asp178、Gly184、Asp185、Lys186、Ala186A、Arg188、Asn223、Arg224、Pro225和Lys233的氨基酸残基。在一些实施方案中，该抗体与人KLK5上的表位结合，根据标准蛋白酶编号，所述表位包含一个或多个选自Pro130、Ser131、Ala132、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177、Asp178、Arg224和Lys233的氨基酸残基。在一些实施方案中，该抗体与人KLK5上的表位结合，根据标准蛋白酶编号，所述表位包含一个或多个选自Pro130、Ser131、Ala132、Gly133、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177和Lys233的氨基酸残基。在一些实施方案中，该抗体与人KLK5上的表位结合，根据标准蛋白酶编号，所述表位包含一个或多个选自Ser131、Ala132、Gly133、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Pro173、Arg174、Gly184、Asp185、Lys186、Ala186A、Arg188、Asn223、Arg224和Pro225的氨基酸残基。
本文还提供与人KLK5结合时导致人KLK5的构象变化的抗体，其中构象变化变构地导致人KLK5的底物结合位点和/或活性部位的破坏。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一者的抗KLK5抗体可以并入单独或组合的任何下文所述特征。
抗体8G10和其他实施方案
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQID NO:112的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施方案中，该抗体包含：包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3。在另一个实施方案中，该抗体包含：包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列的HVR-L3。在又一个实施方案中，该抗体包含：包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列的HVR-L3和包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2。在又一个实施方案中，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)VH结构域，所述VH结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL结构域，所述VL结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含与SEQ ID NO:170的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性中任何者的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性中任一者的VH序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:170中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:170中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，该VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:131的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:131中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ IDNO:131中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含如上文提供的任一个实施方案中的VH和如上文提供的任一个实施方案中的VL。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:170和SEQ ID NO:131中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在一些实施方案中，提供一种抗KLK5抗体，所述抗体结合至与本文提供的抗KLK5抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供一种与如下抗KLK5抗体结合相同的表位的抗体，所述抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:170的VH序列和SEQ ID NO:131的VL序列。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一项的抗KLK5抗体是单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一个实施方案中，抗KLK5抗体是人源化的。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含如以上实施方案的任一项中的HVR，并且还包含受体人类构架，例如，人免疫球蛋白构架或人共有构架。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体是抗体片段，例如，Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体(diabody)或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，该抗体是全长抗体，例如，完整IgG1抗体或完整IgG4抗体，或如本文定义的其他抗体类别或同种型。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一者的抗KLK5抗体可以并入单独或组合的任何下文所述的特征。
抗体9B6和其他实施方案
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQID NO:113的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施方案中，该抗体包含：包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3。在另一个实施方案中，该抗体包含：包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列的HVR-L3。在又一个实施方案中，该抗体包含：包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列的HVR-L3和包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2。在又一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)VH结构域，所述VH结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL结构域，所述VL结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含与SEQ ID NO:171的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性中任何者的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性中任一者的VH序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:171中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:171中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:132的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:132中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ IDNO:132中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含如上文提供的任一个实施方案中的VH和如上文提供的任一个实施方案中的VL。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:171和SEQ ID NO:132中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在一些实施方案中，提供一种抗KLK5抗体，所述抗体结合至与本文提供的抗KLK5抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供一种与如下抗KLK5抗体结合相同的表位的抗体，所述抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:171的VH序列和SEQ ID NO:132的VL序列。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一项的抗KLK5抗体是单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一个实施方案中，抗KLK5抗体是人源化的。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含如以上实施方案的任一项中的HVR，并且还包含受体人类构架，例如，人免疫球蛋白构架或人共有构架。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体是抗体片段，例如，Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体(diabody)或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，该抗体是全长抗体，例如，完整IgG1抗体或完整IgG4抗体，或如本文定义的其他抗体类别或同种型。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一者的抗KLK5抗体可以并入单独或组合的任何如下文所述的特征。
抗体2-3F4和其他实施方案
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQID NO:114的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施方案中，该抗体包含：包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-H3。在另一个实施方案中，该抗体包含：包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列的HVR-L3。在又一个实施方案中，该抗体包含：包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列的HVR-L3和包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-H2。在又一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)VH结构域，所述VH结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL结构域，所述VL结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含与SEQ ID NO:172的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性中任何者的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性中任一者的VH序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:172中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:172中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，该VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:133的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:133中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ IDNO:133中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，该VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ IDNO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含如上文提供的任一个实施方案中的VH和如上文提供的任一个实施方案中的VL。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:172和SEQ ID NO:133中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在再一方面，提供一种抗KLK5抗体，所述抗体结合至与本文提供的抗KLK5抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供一种与如下抗KLK5抗体结合相同的表位的抗体，所述抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:172的VH序列和SEQ ID NO:133的VL序列。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一项的抗KLK5抗体是单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一个实施方案中，抗KLK5抗体是人源化的。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含如以上实施方案的任一项中的HVR，并且还包含受体人类构架，例如，人免疫球蛋白构架或人共有构架。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体是抗体片段，例如，Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体(diabody)或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，该抗体是全长抗体，例如，完整IgG1抗体或完整IgG4抗体，或如本文定义的其他抗体类别或同种型。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一者的抗KLK5抗体可以并入单独或组合的任何下文所述特征。
抗体10C5和其他实施方案
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQID NO:115的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施方案中，该抗体包含：包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3。在另一个实施方案中，该抗体包含：包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列的HVR-L3。在又一个实施方案中，该抗体包含：包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列的HVR-L3和包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2。在又一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)VH结构域，所述VH结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL结构域，所述VL结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含与SEQ ID NO:201的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性中任何者的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性中任一者的VH序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:201中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:201中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，该VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:139的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:139中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ IDNO:139中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含如上文提供的任一个实施方案中的VH和如上文提供的任一个实施方案中的VL。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:201和SEQ ID NO:139中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在再一方面，提供一种抗KLK5抗体，所述抗体结合至与本文提供的抗KLK5抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供一种与如下抗KLK5抗体结合相同的表位的抗体，所述抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:201的VH序列和SEQ ID NO:139的VL序列。在某些实施方案中，提供一种抗体，其中与KLK5结合时，所述抗体导致包含选自以下序列中一者或多者的热动力表位：SEQ ID NO:316、SEQ ID NO:317、SEQ ID NO:318和SEQ ID NO:319，如通过氢交换质谱法所测量。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一项的抗KLK5抗体是单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一个实施方案中，抗KLK5抗体是人源化的。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含如以上实施方案的任一项中的HVR，并且还包含受体人类构架，例如，人免疫球蛋白构架或人共有构架。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含：包含一个或多个如下重链构架序列的VH结构域，所述重链构架序列选自(a)SEQ ID NO:333的重链构架区1(HC-FR1)，(b)SEQ ID NO:334的重链构架区2(HC-FR2)，(c)SEQ ID NO:335的重链构架区3(HC-FR3)，和(d)SEQ IDNO:336的重链构架区4(HC-FR4)。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:333的HC-FR1的VH结构域。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:334的HC-FR2的VH结构域。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:335的HC-FR3的VH结构域。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:336的HC-FR4的VH结构域。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含一个或多个如下轻链构架序列的VL结构域，所述轻链构架序列选自(a)SEQ ID NO:329的轻链构架区1(LC-FR1)，(b)SEQ ID NO:330的轻链构架区2(LC-FR2)，(c)SEQ ID NO:331的轻链构架区3(LC-FR3)，和(d)SEQ IDNO:332的轻链构架区4(LC-FR4)。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:329的LC-FR1的VL结构域。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:330的LC-FR2的VL结构域。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:331的LC-FR3的VL结构域。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:332的LC-FR4的VL结构域。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体是抗体片段，例如，Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体(diabody)或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，该抗体是全长抗体，例如，完整IgG1抗体或完整IgG4抗体，或如本文定义的其他抗体类别或同种型。
本文还提供一种与人KLK5特异性结合的抗体，其中抗体与人KLK5上的表位结合，根据标准蛋白酶编号，所述表位包含一个或多个选自Pro130、Ser131、Ala132、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177、Asp178、Arg224和Lys233的氨基酸残基。在一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含在SEQ ID NO:201和SEQ IDNO:139中的VH和VL序列。
本文还提供与人KLK5结合时导致人KLK5构象变化的抗体，其中构象变化变构地导致人KLK5的底物结合位点和/或活性部位破坏。在一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含在SEQ ID NO:201和SEQ ID NO:139中的VH和VL序列。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一者的抗KLK5抗体可以并入单独或组合的任何下文所述特征。
抗体2B11和其他实施方案
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQID NO:116的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H3。在另一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列的HVR-L3。在又一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列的HVR-L3和包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H2。在又一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)VH结构域，所述VH结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL结构域，所述VL结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含与SEQ ID NO:203的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性中任何者的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性中任一者的VH序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:203中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:203中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:141的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:141中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ IDNO:141中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含如上文提供的任一个实施方案中的VH和如上文提供的任一个实施方案中的VL。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:203和SEQ ID NO:141中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在再一方面，提供一种KLK5抗体，所述抗体结合至与本文提供的抗KLK5抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供一种与如下抗KLK5抗体结合相同的表位的抗体，所述抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:203的VH序列和SEQ ID NO:141的VL序列。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一项的抗KLK5抗体是单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一个实施方案中，抗KLK5抗体是人源化的。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含如以上实施方案的任一项中的HVR，并且还包含受体人类构架，例如，人免疫球蛋白构架或人共有构架。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体是抗体片段，例如，Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体(diabody)或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，该抗体是全长抗体，例如，完整IgG1抗体或完整IgG4抗体，或如本文定义的其他抗体类别或同种型。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一者的抗KLK5抗体可以并入单独或组合的任何下文所述的特征。
抗体10H3和其他实施方案
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQID NO:117的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-H3。在另一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列的HVR-L3。在又一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列的HVR-L3和包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H2。在又一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)VH结构域，所述VH结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL结构域，所述VL结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含与SEQ ID NO:204的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性中任何者的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性中任一者的VH序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:204中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:204中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:142的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:142中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ IDNO:142中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含如上文提供的任一个实施方案中的VH和如上文提供的任一个实施方案中的VL。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:204和SEQ ID NO:142中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在再一方面，提供一种抗KLK5抗体，所述抗体结合至与本文提供的抗KLK5抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供一种与如下抗KLK5抗体结合相同的表位的抗体，所述抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:204的VH序列和SEQ ID NO:142的VL序列。在某些实施方案中，提供一种抗体，其中与KLK5结合时，所述抗体导致包含选自以下序列中一者或多者的热动力表位：SEQ ID NO:316、SEQ ID NO:317、SEQ ID NO:318和SEQ ID NO:319，如通过氢交换质谱法所测量。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一项的抗KLK5抗体是单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一个实施方案中，抗KLK5抗体是人源化的。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含如以上实施方案的任一项中的HVR，并且还包含受体人类构架，例如，人免疫球蛋白构架或人共有构架。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体是抗体片段，例如，Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体(diabody)或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，该抗体是全长抗体，例如，完整IgG1抗体或完整IgG4抗体，或如本文定义的其他抗体类别或同种型。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一者的抗KLK5抗体可以并入单独或组合的任何下文所述特征。
抗体9H3和其他实施方案
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3。在另一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3。在又一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3和包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2。在又一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)VH结构域，所述VH结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL结构域，所述VL结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含与SEQ ID NO:205的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性中任何者的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性中任一者的VH序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:205中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:205中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:143的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:143中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ IDNO:143中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含如上文提供的任一个实施方案中的VH和如上文提供的任一个实施方案中的VL。在一个实施方案中，该抗体分别包含SEQ ID NO:205和SEQ ID NO:1143中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在再一方面，提供一种抗KLK5抗体，所述抗体结合至与本文提供的抗KLK5抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供一种与如下抗KLK5抗体结合相同的表位的抗体，所述抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:205的VH序列和SEQ ID NO:143的VL序列。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一项的抗KLK5抗体是单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一个实施方案中，抗KLK5抗体是人源化的。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含如以上实施方案的任一项中的HVR，并且还包含受体人类构架，例如，人免疫球蛋白构架或人共有构架。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体是抗体片段，例如，Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体(diabody)或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，该抗体是全长抗体，例如，完整IgG1抗体或完整IgG4抗体，或如本文定义的其他抗体类别或同种型。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一者的抗KLK5抗体可以并入单独或组合的任何下文所述特征。
抗体8B7和其他实施方案
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施方案中，抗体包含了包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3。在另一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3。在又一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3和包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的HVR-H2。在又一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQID NO:41的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)VH结构域，所述VH结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL结构域，所述VL结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含与SEQ ID NO:206的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性中任何者的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性中任一者的VH序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:206中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:206中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，该VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:144的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:144中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ IDNO:144中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，该VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ IDNO:104的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含如上文提供的任一个实施方案中的VH和如上文提供的任一个实施方案中的VL。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:206和SEQ ID NO:144中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在再一方面，提供一种抗KLK5抗体，所述抗体结合至与本文提供的抗KLK5抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供一种与如下抗KLK5抗体结合相同的表位的抗体，所述抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:206的VH序列和SEQ ID NO:144的VL序列。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一项的抗KLK5抗体是单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一个实施方案中，抗KLK5抗体是人源化的。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含如以上实施方案的任一项中的HVR，并且还包含受体人类构架，例如，人免疫球蛋白构架或人共有构架。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体是抗体片段，例如，Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体(diabody)或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，该抗体是全长抗体，例如，完整IgG1抗体或完整IgG4抗体，或如本文定义的其他抗体类别或同种型。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一者的抗KLK5抗体可以并入单独或组合的任何下文所述特征。
抗体9H5和其他实施方案
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQID NO:119的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施方案中，抗体包含了包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3。在另一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列的HVR-L3。在又一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列的HVR-L3和包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2。在又一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)VH结构域，所述VH结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL结构域，所述VL结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含与SEQ ID NO:221的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性中任何者的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性中任一者的VH序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:221中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:221中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:149的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:149中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ IDNO:149中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含如上文提供的任一个实施方案中的VH和如上文提供的任一个实施方案中的VL。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:221和SEQ ID NO:149中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在再一方面，提供一种KLK5抗体，所述抗体结合至与本文提供的抗KLK5抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供一种与如下抗KLK5抗体结合相同的表位的抗体，所述抗体包含SEQ ID NO:221的VH序列和SEQ ID NO:149的VL序列。在某些实施方案中，提供一种抗体，其中与KLK5结合时，所述抗体导致包含选自以下序列中一者或多者的热动力表位：SEQ ID NO:316、SEQ ID NO:317、SEQ ID NO:318和SEQ ID NO:319，如通过氢交换质谱法所测量。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一项的抗KLK5抗体是单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一个实施方案中，抗KLK5抗体是人源化的。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含如以上实施方案的任一项中的HVR，并且还包含受体人类构架，例如，人免疫球蛋白构架或人共有构架。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含一个或多个如下重链构架序列的VH结构域，所述重链构架序列选自(a)SEQ ID NO:341的重链构架区1(HC-FR1)，(b)SEQ ID NO:342的重链构架区2(HC-FR2)，(c)SEQ ID NO:343的重链构架区3(HC-FR3)，和(d)SEQ IDNO:344的重链构架区4(HC-FR4)。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:341的HC-FR1的VH结构域。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:342的HC-FR2的VH结构域。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:343的HC-FR3的VH结构域。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:344的HC-FR4的VH结构域。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含一个或多个如下轻链构架序列的VL结构域，所述轻链构架序列选自(a)SEQ ID NO:337的轻链构架区1(LC-FR1)，(b)SEQ ID NO:338的轻链构架区2(LC-FR2)，(c)SEQ ID NO:339的轻链构架区3(LC-FR3)，和(d)SEQ IDNO:340的轻链构架区4(LC-FR4)。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:337的LC-FR1的VL结构域。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:338的LC-FR2的VL结构域。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:339的LC-FR3的VL结构域。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:340的LC-FR4的VL结构域。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体是抗体片段，例如，Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体(diabody)或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，该抗体是全长抗体，例如，完整IgG1抗体或完整IgG4抗体，或如本文定义的其他抗体类别或同种型。
本文还提供一种与人KLK5特异性结合的抗体，其中抗体与人KLK5上的表位结合，根据标准蛋白酶编号，所述表位包含一个或多个选自Pro130、Ser131、Ala132、Gly133、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177和Lys233的氨基酸残基。在一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含在SEQ ID NO:221和SEQ ID NO:149中的VH和VL序列。
本文还提供与人KLK5结合时导致人KLK5构象变化的抗体，其中构象变化变构地导致人KLK5的底物结合位点和/或活性部位破坏。在一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含在SEQ ID NO:221和SEQ ID NO:149中的VH和VL序列。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一者的抗KLK5抗体可以并入单独或组合的任何下文所述特征。
抗体9F2和其他实施方案
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQID NO:120的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施方案中，抗体包含了包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3。在另一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列的HVR-L3。在又一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列的HVR-L3和包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的HVR-H2。在又一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQID NO:46的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)VH结构域，所述VH结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL结构域，所述VL结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含与SEQ ID NO:226的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性中任何者的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性中任一者的VH序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:226中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:226中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:152的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:152中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ IDNO:152中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，该VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ IDNO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含如上文提供的任一个实施方案中的VH和如上文提供的任一个实施方案中的VL。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:226和SEQ ID NO:152中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在再一方面，提供一种抗KLK5抗体，所述抗体结合至与本文提供的抗KLK5抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供一种与如下抗KLK5抗体结合相同的表位的抗体，所述抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:226的VH序列和SEQ ID NO:152的VL序列。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一项的抗KLK5抗体是单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一个实施方案中，抗KLK5抗体是人源化的。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含如以上实施方案的任一项中的HVR，并且还包含受体人类构架，例如，人免疫球蛋白构架或人共有构架。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体是抗体片段，例如，Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体(diabody)或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，该抗体是全长抗体，例如，完整IgG1抗体或完整IgG4抗体，或如本文定义的其他抗体类别或同种型。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一者的抗KLK5抗体可以并入单独或组合的如下文所述任何特征。
抗体10C8和其他实施方案
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-H3。在另一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3。在又一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3和包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2。在又一个实施方案中，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)VH结构域，所述VH结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL结构域，所述VL结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含与SEQ ID NO:227的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性中任何者的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性中任一者的VH序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:227中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:227中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，该VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:153的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:153中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ IDNO:153中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，该VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ IDNO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含如上文提供的任一个实施方案中的VH和如上文提供的任一个实施方案中的VL。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:227和SEQ ID NO:153中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在再一方面，提供一种抗KLK5抗体，所述抗体结合至与本文提供的抗KLK5抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供一种与如下抗KLK5抗体结合相同的表位的抗体，所述抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:227的VH序列和SEQ ID NO:153的VL序列。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一项的抗KLK5抗体是单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一个实施方案中，抗KLK5抗体是人源化的。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含如以上实施方案的任一项中的HVR，并且还包含受体人类构架，例如，人免疫球蛋白构架或人共有构架。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体是抗体片段，例如，Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体(diabody)或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，该抗体是全长抗体，例如，完整IgG1抗体或完整IgG4抗体，或如本文定义的其他抗体类别或同种型。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一者的抗KLK5抗体可以并入单独或组合的任何如下文所述特征。
抗体8F5和其他实施方案
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQID NO:121的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-H3。在另一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQ ID NO:121的氨基酸序列的HVR-L3。在又一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:121的氨基酸序列的HVR-L3和包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-H2。在又一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:121的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:121的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)VH结构域，所述VH结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL结构域，所述VL结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:121的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:121的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含与SEQ ID NO:228的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性中任何者的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性中任一者的VH序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:228中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:228中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，该VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:154的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:154中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ IDNO:154中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，该VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ IDNO:106的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:121的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含如上文提供的任一个实施方案中的VH和如上文提供的任一个实施方案中的VL。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:228和SEQ ID NO:154中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在再一方面，提供一种抗KLK5抗体，所述抗体结合至与本文提供的抗KLK5抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供一种与如下抗KLK5抗体结合相同的表位的抗体，所述抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:228的VH序列和SEQ ID NO:154的VL序列。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一项的抗KLK5抗体是单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一个实施方案中，抗KLK5抗体是人源化的。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含如以上实施方案的任一项中的HVR，并且还包含受体人类构架，例如，人免疫球蛋白构架或人共有构架。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体是抗体片段，例如，Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体(diabody)或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，该抗体是全长抗体，例如，完整IgG1抗体或完整IgG4抗体，或如本文定义的其他抗体类别或同种型。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一者的抗KLK5抗体可以并入单独或组合的任何如下文所述特征。
抗体3-3F5和其他实施方案
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQID NO:122的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3。在另一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列的HVR-L3。在又一个实施方案中，该抗体包含了包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列的HVR-L3和包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-H2。在又一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)VH结构域，所述VH结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL结构域，所述VL结构域包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其包含与SEQ ID NO:248的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性中任何者的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性中任一者的VH序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:248中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:248中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，该VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:160的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列，相对于参考序列，含有置换(例如，保守性置换)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留与KLK5结合的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:160中置换、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、插入或缺失出现在HVR外部的区域内(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ IDNO:160中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，该VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ IDNO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一个方面，提供一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含如上文提供的任一个实施方案中的VH和如上文提供的任一个实施方案中的VL。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:248和SEQ ID NO:160中的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在再一方面，提供一种抗KLK5抗体，所述抗体结合至与本文提供的抗KLK5抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供一种与如下抗KLK5抗体结合相同的表位的抗体，所述抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:248的VH序列和SEQ ID NO:160的VL序列。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一项的抗KLK5抗体是单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一个实施方案中，抗KLK5抗体是人源化的。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含如以上实施方案的任一项中的HVR，并且还包含受体人类构架，例如，人免疫球蛋白构架或人共有构架。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含一个或多个如下重链构架序列的VH结构域，所述重链构架序列选自(a)SEQ ID NO:349的重链构架区1(HC-FR1)，(b)SEQ ID NO:350的重链构架区2(HC-FR2)，(c)SEQ ID NO:351的重链构架区3(HC-FR3)，和(d)SEQ IDNO:352的重链构架区4(HC-FR4)。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:349的HC-FR1的VH结构域。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:350的HC-FR2的VH结构域。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:351的HC-FR3的VH结构域。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:352的HC-FR4的VH结构域。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含一个或多个如下轻链构架序列的VL结构域，所述轻链构架序列选自(a)SEQ ID NO:345的轻链构架区1(LC-FR1)，(b)SEQ ID NO:346的轻链构架区2(LC-FR2)，(c)SEQ ID NO:347的轻链构架区3(LC-FR3)，和(d)SEQ IDNO:348的轻链构架区4(LC-FR4)。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:345的LC-FR1的VL结构域。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:346的LC-FR2的VL结构域。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:347的LC-FR3的VL结构域。在一个实施方案中，抗KLK5抗体包含了包含SEQ ID NO:348的LC-FR4的VL结构域。
在一个实施方案中，抗KLK5抗体是抗体片段，例如，Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体(diabody)或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，该抗体是全长抗体，例如，完整IgG1抗体或完整IgG4抗体，或如本文定义的其他抗体类别或同种型。
本文还提供一种与人KLK5特异性结合的抗体，其中抗体与人KLK5上的表位结合，根据标准蛋白酶编号，所述表位包含一个或多个选自Ser131、Ala132、Gly133、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Pro173、Arg174、Gly184、Asp185、Lys186、Ala186A、Arg188、Asn223、Arg224和Pro225的氨基酸残基。在一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含在SEQ ID NO:248和SEQ ID NO:160中的VH和VL序列。
本文还提供与人KLK5结合时导致人KLK5构象变化的抗体，其中构象变化变构地导致人KLK5的底物结合位点和/或活性部位破坏。在一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含在SEQ ID NO:248和SEQ ID NO:160中的VH和VL序列。
在又一个方面，根据以上实施方案中任一者的抗KLK5抗体可以并入单独或组合的任何如下文所述特征。
2.抗体亲和力
在任何抗KLK5抗体的一些实施方案中，抗KLK5抗体对KLK5具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM、或≤0.001nM(例如，10-8M或更小，例如从10-8M至10-13M，例如，从10-9M至10-13M)的结合亲和力(解离常数Kd)。
在一个实施方案中，通过放射标记抗原结合分析试验(RIA)测量Kd。在一个实施方案中，用目的抗体的Fab形式及其抗原进行RIA。例如，通过以下方式测量Fab对抗原的溶液结合亲和力：在未标记抗原的滴定系列存在下用最低浓度的(125I)标记抗原平衡Fab，随后用抗Fab抗体包被的平板捕获结合的抗原(参见，例如，Chen等人,J.Mol.Biol.293:865-881(1999))。为了建立该分析的条件，将
Figure BDA0002677912730000731
多孔板(Thermo Scientific)用50mM碳酸钠(pH 9.6)中的5μg/ml抗Fab捕获抗体(Cappel Labs)包被过夜并随后用PBS中的2％(w/v)牛血清白蛋白在室温(大约23℃)封闭二至五小时。在不吸附性平板(Nunc#269620)中，将100pM或26pM[125I]-抗原与目的Fab的连续稀释物(例如，与Presta等人,CancerRes.57:4593-4599(1997)中评估抗VEGF抗体Fab-12一致)混合。随后将目的Fab温育过夜；然而，温育可以持续较长时间(例如，约65小时)以确保达到平衡。此后，将混合物转移至捕获平板以便在室温温育(例如，1小时)。随后移除溶液并将平板用PBS中的0.1％聚山梨醇酯
Figure BDA0002677912730000732
洗涤8次。当平板已经干燥时，添加150μl/孔闪烁体(MICROSCINT-20TM；Packard)，并且将平板在TOPCOUNT TMγ计数器(Packard)上计数10分钟。选择产生小于或等于20％最大结合作用的每种Fab的浓度用于竞争性结合分析试验中。
根据另一个实施方案，使用
Figure BDA0002677912730000733
表面等离子体共振分析试验测量Kd。例如，使用
Figure BDA0002677912730000734
或
Figure BDA0002677912730000735
(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)的分析在25℃采用固定化抗原CM5芯片以约10个响应单位(RU)进行。在一个实施方案中，根据供应商说明书，以盐酸N-乙基-N'-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化葡聚糖生物传感器芯片(CM5，BIACORE，Inc.)。将抗原用10mM乙酸钠，pH 4.8稀释至5μg/ml(约0.2μM)，随后以5μl/分钟的流速注射上样以实现偶联蛋白的大约10个响应单位(RU)。注射抗原后，注入1M乙醇胺以封闭未反应的基团。对于动力学测量，在25℃以大约25μl/分钟的流速注入含0.05％聚山梨醇酯20(TWEEN-20TM)表面活性剂的PBS(PBST)中的Fab二倍连续稀释物(0.78nM至500nM)。使用简单一对一Langmuir结合模型(
Figure BDA0002677912730000737
Figure BDA0002677912730000736
评估软件3.2版)，通过同时拟合缔合和解离传感图(sensorgram)，计算缔合速率(kon)和解离速率(koff)。平衡解离常数(Kd)作为比率koff/kon计算。参见，例如，Chen等人,J.Mol.Biol.293:865-881(1999)。如果通过以上表面等离子体共振测定法显示缔合速率超过106M-1s-1，则可以使用荧光猝灭技术测定缔合速率，其中在如光谱仪(如配备停流(stop-flow)的分光光度计(Aviv Instruments)或具有搅拌型比色皿的8000-系列SLM-AMINCO TM分光光度计(ThermoSpectronic))中，在渐增浓度的所测量抗原的存在下，在25℃测量在PBS，pH 7.2中的20nM抗抗原抗体(Fab形式)的荧光发射强度(激发＝295nm；发射＝340nm，16nm带通)的增加或减少。
3.抗体片段
在一些实施方案中，本文提供的抗KLK5抗体是抗体片段。抗体片段包括但不限于Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv和scFv片段和下文描述的其他片段。关于某些抗体片段的综述，参见Hudson等人,Nat.Med.9:129-134(2003)。关于scFv片段的综述，参见例如Pluckthün,引自The Pharmacology of Monoclonal Antibodies(单克隆抗体药理学),第113卷,Rosenburg和Moore编著,(Springer-Verlag,New York,第269-315页(1994))；还参见WO 93/16185；和美国专利号5,571,894和5,587,458。关于包含救援受体(salvagereceptor)结合表位残基和具有增加的体内半衰期的Fab和F(ab')2片段的讨论，参见美国专利号5,869,046。
双体抗体是具有两个抗原结合位点的抗体片段，其可以是双价或双特异性的。参见例如，EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人,Nat.Med.9:129-134(2003)；和Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)。三体抗体和四体抗体也在Hudson等人,Nat.Med.9:129-134(2003)中描述。
单结构域抗体是包含抗体的全部或一部分重链可变结构域或全部或一部分轻链可变结构域的抗体片段。在某些实施方案中，单结构域抗体是人单结构域抗体(Domantis,Inc.,Waltham,MA；参见，例如美国专利号6,248,516B1)。
抗体片段可以通过多种技术产生，所述多种技术包括但不限于蛋白酶解消化完整抗体以及由重组宿主细胞产生(例如，大肠杆菌或噬菌体)，如本文所述。
4.嵌合抗体和人源化抗体
在一些实施方案中，本文提供的抗KLK5抗体是嵌合抗体。某些嵌合抗体例如在美国专利号4,816,567；和Morrison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))中描述。在一个例子中，嵌合抗体包含非人可变区(例如，源自小鼠、大鼠、仓鼠、兔或非人灵长类如猴的可变区)和人恒定区。在又一个例子中，嵌合抗体是“类转换”抗体，其中类或亚类已经相对亲本抗体发生改变。嵌合抗体包括其抗原结合片段。
在某些实施方案中，嵌合抗体是人源化抗体。一般，将非人抗体人源化以降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。通常，人源化抗体包含其中HVR(例如，CDR)(或其部分)衍生自非人抗体并且FR(或其部分)衍生自人抗体序列的一个或多个可变结构域。人源化抗体任选地也可以包含人恒定区的至少一部分。在一些实施方案中，将人源化抗体中的一些FR残基置换为来自非人抗体(例如，HVR残基所源自的抗体)的相应残基，例如，以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
人源化抗体和制造它们的方法综述在例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)中，并且例如还在Riechmann等人,Nature 332:323-329(1988)；Queen等人,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 86:10029-10033(1989)；美国专利号5,821,337、7,527,791、6,982,321和7,087,409；Kashmiri等人,Methods 36:25-34(2005)(描述特异性决定区(SDR)移植)；Padlan,Mol.Immunol.28:489-498(1991)(描述“表面重塑”)；Dall'Acqua等人,Methods 36:43-60(2005)(描述“FR改组”)；和Osbourn等人,Methods 36:61-68(2005)和Klimka等人,Br.J.Cancer,83:252-260(2000)(描述针对FR改组的“导向选择”方案)中。
可以用于人源化的人构架区包括但不限于：使用“最佳配合”法选择的构架区(参见，例如，Sims等人,J.Immunol.151:2296(1993))；从具有特定亚组的轻链可变区或重链可变区的人抗体的共有序列衍生的构架区(参见，例如，Carter等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89:4285(1992)；和Presta等人,J.Immunol.,151:2623(1993))；人成熟(体细胞突变)构架区或人种系构架区(参见，例如，Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))；和从筛选FR文库衍生的构架区(参见，例如，Baca等人,J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)和Rosok等人,J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。
5.人抗体
在一些实施方案中，本文提供的抗KLK5抗体是人抗体。可以使用本领域已知的多种技术产生人抗体。人抗体总体上在van Dijk和van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001)和Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20:450-459(2008)中进行了描述。
可以通过施用免疫原至转基因动物制备人抗体，其中所述转基因动物已经被修饰成响应于抗原攻击而产生完整人抗体或具有人可变区的完整抗体。这类动物一般含有替换内源免疫球蛋白基因座或在染色体外存在或随机整合入动物染色体的全部或部分人免疫球蛋白基因座。在这类转基因小鼠中，内源免疫球蛋白基因座通常已经失活。关于从转基因动物获得人抗体的方法的综述，参见Lonberg,Nat.Biotech.23:1117-1125(2005)。还参见，例如，描述XENOMOUSETM技术的美国专利号6,075,181和6,150,584；描述
Figure BDA0002677912730000751
技术的美国专利号5,770,429；描述K-M
Figure BDA0002677912730000753
技术的美国专利号7,041,870，和描述Veloci
Figure BDA0002677912730000752
技术的美国专利申请公开号US 2007/0061900)。可以进一步修饰来自这类动物产生的完整抗体的人可变区，例如，通过与不同的人恒定区组合。
也可以通过基于杂交瘤的方法产生人抗体。已经描述了用于产生人单克隆抗体的人骨髓瘤细胞系和小鼠-人杂合骨髓瘤细胞系。(参见，例如，Kozbor J.Immunol.,133:3001(1984)；Brodeur等人,Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications(单克隆抗体生产技术及应用),第51-63页(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；和Boerner等人,J.Immunol.,147:86(1991))。Li等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)中还描述了借助人B细胞杂交瘤技术产生的人抗体。额外的方法包括例如在美国专利号7,189,826(描述从杂交瘤细胞系产生单克隆人IgM抗体)和Ni,XiandaiMianyixue,26(4):265-268(2006)(描述人-人杂交瘤)中描述的那些。人杂交瘤技术(三体瘤技术)还在Vollmers和Brandlein,Histology and Histopathology,20(3):927-937(2005)以及Vollmers和Brandlein,Methods and Findings in Experimental andClinical Pharmacology,27(3):185-91(2005)中描述。
也可以通过分离从人衍生的噬菌体展示文库中选择的Fv克隆可变结构域序列，产生人抗体。这类可变结构域序列随后可以与所需的人恒定结构域组合。下文描述用于从抗体文库选出人抗体的技术。
6.文库衍生的抗体
可以通过对组合文库筛选具有所需一种活性或多种活性的抗体，分离抗KLK5抗体。例如，本领域已知用于产生噬菌体展示文库并对这类文库筛选具有所需结合特征的抗体的多种方法。这类方法例如综述于Hoogenboom等人，引自Methods in MolecularBiology 178:1-37(O'Brien等人编著,Human Press,Totowa,NJ,2001)中并且例如还在McCafferty等人,Nature348:552-554；Clackson等人,Nature 352:624-628(1991)；Marks等人,J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Marks和Bradbury,引自Methods in MolecularBiology 248:161-175(Lo编著,Human Press,Totowa,NJ,2003)；Sidhu等人,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee等人,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34):12467-12472(2004)；和Lee等人,J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004)中描述。
在某些噬菌体展示法中，VH基因和VL基因库分别由聚合酶链反应(PCR)克隆并且在噬菌体文库中随机重组，随后可以对所述噬菌体文库筛选结合抗原的噬菌体，如Winter等人,Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)中所述。噬菌体一般将抗体片段展示为单链Fv(scFv)片段或展示为Fab片段。来自已免疫接种来源的文库提供针对免疫原的高亲和力抗体，无需构建杂交瘤。备选地，可以(例如，从人)克隆天然库以在不进行任何免疫的情况下，提供针对广泛类型非自身抗原的抗体和针对自身抗原的抗体的单一来源，如Griffiths等人,EMBO J,12:725-734(1993)所述。最后，也可以通过从干细胞克隆未重排的V-基因区段并使用含有随机序列的PCR引物以编码高度可变的CDR3区并实现体外重排，合成地产生幼稚文库(
Figure BDA0002677912730000761
library)，如Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)所述。描述人抗体噬菌体文库的专利公布例如包括：美国专利号5,750,373和美国专利公开号2005/0079574、2005/0119455、2005/0266000、2007/0117126、2007/0160598、2007/0237764、2007/0292936和2009/0002360。
从人抗体文库分离的抗体或抗体片段被视为本文中的人抗体或人抗体片段。
6.多特异性抗体
在一些实施方案中，本文提供的抗KLK5抗体是多特异性抗体，例如，双特异性抗体。多特异性抗体是对至少两个不同位点具有结合特异性的单克隆抗体。在某些实施方案中，所述结合特异性之一针对KLK5，并且另一种特异性针对任何其他抗原。在某些实施方案中，双特异性抗体可以与KLK5的两个不同表位结合。也可以利用双特异性抗体使细胞毒药物局限于表达KLK5的细胞。双特异性抗体可以作为全长抗体或抗体片段制备。
用于产生多特异性抗体的技术包括但不限于重组共表达具有不同特异性的两个免疫球蛋白重链-轻链对(参见Milstein和Cuello,Nature 305:537(1983))、WO 93/08829和Traunecker等人,EMBO J.10:3655(1991))和“结-扣”(knob-in-hole)工程化(例如，参见美国专利号5,731,168)。也可以通过以下方式产生多特异性抗体：工程化静电转向效应用于产生抗体Fc-异二聚体分子(WO 2009/089004A1)；交联两个或更多个抗体或片段(例如，参见美国专利号4,676,980，和Brennan等人,Science,229:81(1985))；使用亮氨酸拉链以产生双特异性抗体(例如，参见J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992))；使用“双体抗体(diabody)”技术以产生双特异性抗体片段(例如，参见Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993))；和使用单链Fv(sFv)二聚体(例如，参见Gruber等人,J.Immunol.,152:5368(1994))；以及制备三特异性抗体，如在例如Tutt等人,J.Immunol.147:60(1991)中所述那样。
本文中还包括具有三个或更多个功能性抗原结合位点的工程化抗体，包括“章鱼抗体(Octopus antibody)”(参见，例如US 2006/0025576A1)。
本文的抗体或片段还包括“双重功能FAb”或“DAF”，其包含与KLK5以及另一种不同抗原结合的抗原结合位点(例如参见，US 2008/0069820)。
7.抗体变体
在一些实施方案中，考虑本文提供的抗KLK5抗体的氨基酸序列变体。例如，可能期望改善抗体的结合亲和力和/或其他生物学特性。可以通过向编码抗体的核苷酸序列引入适宜修饰或通过肽合成，制备抗体的氨基酸序列变体。此类修饰包括例如，从抗体的氨基酸序列内部缺失残基和/或将残基插入所述氨基酸序列中和/或置换所述氨基酸序列中的残基。可以产生缺失、插入和置换的任意组合以获得最终构建体，只要所述最终构建体拥有想要的特征，例如抗原结合作用即可。
a)置换、插入和缺失变体
在一些实施方案中，提供具有一个或多个氨基酸置换的抗KLK5抗体变体。用于置换诱变的目的位点包括HVR和FR。表1中在“优选置换”的标题下显示保守性置换。表1中在“示例性置换”标题下显示更实质性的变化，并且下文参考氨基酸侧链类别对此进一步描述。可以将氨基酸置换引入目的抗体并且筛选产物的所需活性，例如，保留/改善的抗原结合、降低的免疫原性、或改善的ADCC或CDC。
表1
Figure BDA0002677912730000781
Figure BDA0002677912730000791
氨基酸可以根据常见的侧链特性分组：
(1)疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
(2)中性亲水：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
(3)酸性：Asp、Glu；
(4)碱性：His、Lys、Arg；
(5)影响链方向的残基：Gly、Pro
(6)芳香族：Trp、Tyr、Phe。
非保守性置换需要将这些类别之一的成员交换为另一个类别的成员。
一个置换变体类型涉及置换亲本抗体(例如，人源化或人抗体)的一个或多个高变区残基。通常，经选择用于进一步研究的所得变体将相对于亲本抗体在某些生物学特性方面(例如，增加的亲和力、降低的免疫原性)具有修饰(例如，改善)和/或将基本上保留亲本抗体的某些生物学特性。示例性置换变体是亲和力成熟抗体，所述抗体可以例如，使用基于噬菌体展示的亲和力成熟技术如本文所述的那些技术，便利地产生。简而言之，将一个或多个HVR残基突变并且将变体抗体在噬菌体上展示并筛选特定生物学活性(例如结合亲和力)。
可以在HVR中做出改变(例如，置换)，例如以改善抗体亲和力。这类改变可以在HVR“热点”中做出，所述“热点”是在体细胞成熟过程期间以高频率经历突变的密码子所编码的残基(参见，例如，Chowdhury,Methods Mol.Biol.207:179-196,2008)和/或接触抗原的残基，同时对所产生的变体VH或VL测试结合亲和力。已经例如在Hoogenboom等人,引自Methods in Molecular Biology 178:1-37(O'Brien等人编著,Human Press,Totowa,NJ,2001)中描述了通过构建二级文库并从中重新选择来实现亲和力成熟。在亲和力成熟的一些实施方案中，通过多种方法(例如，易错PCR、链改组或寡核苷酸定向诱变)的任一种，将多样性引入所选择用于成熟的可变基因中。随后产生二级文库。随后筛选该文库以鉴定具有所需亲和力的任何抗体变体。另一种引入多样性的方法涉及HVR指导的方案，其中将几个HVR残基(例如，一次4-6个残基)进行随机化。可以特别地鉴定参与抗原结合的HVR残基，例如，使用丙氨酸扫描法诱变或建模。特别地经常靶向CDR-H3和CDR-L3。
在某些实施方案中，置换、插入或缺失可以在一个或多个HVR内部出现，只要这类改变不实质降低抗体结合抗原的能力。例如，可以在HVR中做出不实质降低结合亲和力的保守性改变(例如，如本文中提供的保守性置换)。这类改变可以例如是在HVR中的抗原接触残基外部。在上文提供的变体VH和VL序列的某些实施方案中，每个HVR或者不予改变或含有不多于一个、两个或三个氨基酸置换。
一种用于鉴定可以被靶向诱变的抗体残基或区域的有用方法称作“丙氨酸扫描法诱变法”，如Cunningham和Wells(1989)Science,244:1081-1085所述。在这种方法中，鉴定一个残基或一组靶残基(例如，带电荷残基如arg、asp、his、lys和glu)并且用中性或带负电荷的氨基酸(例如，丙氨酸或聚丙氨酸)替换以确定抗体与抗原的相互作用是否受影响。可以在对于初始置换显示功能敏感的氨基酸位置处引入其他置换。备选地或另外，测定抗原-抗体复合物的晶体结构以鉴定抗体和抗原之间的接触点。可以将这类接触残基和邻近残基作为置换候选物进行打靶或消除。可以筛选变体以确定它们是否含有所需的特性。
氨基酸序列插入包括长度从一个残基至含有成百个或更多个残基的多肽的氨基端和/或羧基端融合，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的例子包括具有N末端甲硫氨酰基残基的抗体。抗体分子的其他插入变体包括抗体的N末端或C末端与酶(例如，针对ADEPT的酶)或增加该抗体血清半衰期的多肽融合。
b)糖基化变体
在某些实施方案中，改变本文提供的抗KLK5抗体以增加或减少抗体发生糖基化的程度。可以通过改变氨基酸序列从而创造或移除一个或多个糖基化位点，便利地实现对抗体添加或删除糖基化位点。
在抗体包含Fc区的情况下，可以改变与之连接的糖。哺乳动物细胞产生的天然抗体一般包含分枝的双天线状低聚糖，所述低聚糖通常借助N联连接至Fc区的CH2结构域的Asn297。例如参见，Wright等人,TIBTECH 15:26-32(1997)。低聚糖可以包括各种糖，例如，甘露糖、N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)、半乳糖和唾液酸，以及与双天线状低聚糖结构的“茎部”中GlcNAc连接的岩藻糖。在一些实施方案中，可以修饰本发明抗体中的低聚糖以产生某些特性改善的抗体变体。
在一些实施方案中，提供具有糖结构的抗KLK5抗体变体，所述糖结构缺少与Fc区(直接或间接)连接的岩藻糖。例如，这种抗体中岩藻糖的量可以是1％至80％、1％至65％、5％至65％、或20％至40％。通过以下方式确定岩藻糖的量：通过MALDI-TOF质谱法所测量，相对于与Asn297连接的全部糖结构(例如复杂结构、杂合结构和高甘露糖结构)的总和，计算Asn 297处糖链内部岩藻糖的平均量，例如，如WO 2008/077546中所述。Asn297指位于Fc区内约位置297处的天冬酰胺残基(Fc区残基的Eu编号)；然而，Asn297也可以位于位置297的上游或下游±3个氨基酸位置，即，位置294和位置300之间，原因在于抗体中的微小序列变异。这类岩藻糖基化变体可以具有改善的ADCC功能。参见，例如，美国专利公开号US2003/0157108(Presta,L.)；US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。与“去岩藻糖化”或“缺乏岩藻糖的”抗体变体相关的出版物的例子包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki等人,J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等人,Biotech.Bioeng.87:614(2004)。能够产生去岩藻糖化抗体的细胞系的例子包括蛋白质岩藻糖化缺陷的Lec13 CHO细胞(Ripka等人,Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；美国专利申请号US2003/0157108A1，Presta,L；和WO 2004/056312A1，Adams等人,特别地在实施例11)中，和敲除细胞系，如α-1,6-岩藻糖基转移酶基因FUT8敲除的CHO细胞(参见，例如，Yamane-Ohnuki等人,Biotech.Bioeng.87:614(2004)；Kanda,Y.等人,Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006)；和WO2003/085107)。
还可以为抗KLK5抗体变体提供双分低聚糖，例如，其中与抗体Fc区连接的双天线状低聚糖由GlcNAc对分。这类抗体变体可以具有减少的岩藻糖基化和/或改善的ADCC功能。这类抗体变体的例子例如在WO 2003/011878(Jean-Mairet等人)；美国专利号6,602,684(Umana等人)；和US 2005/0123546(Umana等人)中描述。也提供与Fc区连接的低聚糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体变体。这类抗体变体可以具有改善的CDC功能。这类抗体变体例如在WO 1997/30087(Patel等人)；WO 1998/58964(Raju,S.)；和WO 1999/22764(Raju,S)中描述。
c)Fc区变体
在一些实施方案中，可以将一个或多个氨基酸修饰引入本文提供的抗KLK5抗体的Fc区中，因而产生Fc区变体。Fc区变体可以包含人Fc区序列(例如，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区)，所述的人Fc区序列在一个或多个氨基酸位置处包含氨基酸修饰(例如，置换)。
在一些实施方案中，本发明构思了拥有一些但非全部效应子功能的抗体变体，这使所述抗体变体成为下述应用的有利候选物，其中抗体的体内半衰期重要，而某些效应子功能(如补体和ADCC)是不必要或有害的。可以实施体外和/或体内细胞毒性分析以证实CDC和/或ADCC活性降低/耗尽。例如，可以实施Fc受体(FcR)结合分析试验，以确保抗体缺少FcγR结合作用(因此可能缺少ADCC活性)，但是保留FcRn结合能力。介导ADCC的主要细胞，NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)的第464页上的表3中总结了造血细胞上的FcR表达。评估目的分子的ADCC活性的体外测定法的非限制性例子在美国专利号5,500,362(参见，例如，Hellstrom,I.等人,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 83:7059-7063(1986))和Hellstrom,I等人,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 82:1499-1502(1985)；5,821,337(参见Bruggemann,M.等人,J.Exp.Med.166:1351-1361(1987))中描述。备选地，可以使用非放射性分析方法(参见，例如，用于流式细胞术的ACTITM非放射性细胞毒性分析(CellTechnology,Inc.MountainView,CA；和CytoTox
Figure BDA0002677912730000821
非放射性细胞毒性分析(Promega,Madison,WI))。用于此类分析的效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。备选或另外，可以在体内，例如，在动物模型中，如在Clynes等人,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 95:652-656(1998)公开中的动物模型中，评估目的分子的ADCC活性。也可以实施C1q结合分析以证实抗体不能结合C1q并因此缺少CDC活性。参见，例如，WO 2006/029879和WO 2005/100402中的C1q和C3c结合性ELISA。为了评估补体激活，可以进行CDC分析(参见，例如，Gazzano-Santoro等人,J.Immunol.Methods 202:163(1996)；Cragg,M.S.等人,Blood 101:1045-1052(2003)；和Cragg,M.S.和M.J.Glennie,Blood 103:2738-2743(2004))。也可以使用本领域已知的方法确定FcRn结合作用和体内清除率/半寿期(参见，例如，Petkova,S.B.等人，Int’l.Immunol.18(12):1759-1769(2006))。
效应子功能减少的抗体可以包括置换了一个或多个如下Fc区残基的那些：238、265、269、270、297、327和329(美国专利号6,737,056)。这类Fc突变体包括在氨基酸位置265、269、270、297和327的两个或更多个位置处具有置换的Fc突变体，包括残基265和297置换成丙氨酸的所谓“DANA”Fc突变体(美国专利号7,332,581)。
描述了具有FcR结合作用改善或削弱的某些抗体变体。(参见，例如，美国专利号6,737,056；WO 2004/056312，和Shields等人,J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001))。
在某些实施方案中，抗体变体包含具有改善ADCC的一个或多个氨基酸置换(例如，在Fc区的位置298、333和/或334处的置换)(残基的EU编号)的Fc区。
在一些实施方案中，在Fc区内做出改变，所述改变导致变更(即改善或削弱)的C1q结合作用和/或补体依赖细胞毒性(CDC)，例如，如美国专利号6,194,551、WO 99/51642和Idusogie等人,J.Immunol.164:4178-4184(2000)中所述。
在US2005/0014934A1(Hinton等人)中描述了半寿期增加和新生Fc受体(FcRn)结合作用改善的抗体，所述新生Fc受体负责转移母源IgG至胎儿(Guyer等人,J.Immunol.117:587(1976)和Kim等人,J.Immunol.24:249(1994))。这些抗体包含其中具有一个或多个置换的Fc区，其中所述置换改善Fc区与FcRn的结合。这类Fc变体包括在如下一个或多个Fc区残基处具有置换的那些：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如，Fc区残基434置换(美国专利号7,371,826)。
还见涉及Fc区变体其他例子的Duncan和Winter,Nature 322:738-40(1988)；美国专利号5,648,260；美国专利号5,624,821；和WO 94/29351。
d)半胱氨酸工程化抗体变体
在一些实施方案中，可能想要产生半胱氨酸工程化的抗KLK5抗体，例如，“THIOMABTM抗体”，其中所述抗体的一个或多个残基用半胱氨酸残基置换。在具体的实施方案中，置换的残基出现在抗体的可及位点处。通过用半胱氨酸置换这些残基，因而将反应性巯基安置在抗体的可及位点处并且可以用来使抗体缀合至其他部分，如药物部分或接头-药物部分以产生免疫缀合物，如本文中进一步所述。在某些实施方案中，可以用半胱氨酸置换以下残基的任何一个或多个：轻链的V205(Kabat编号)；重链的A118(EU编号)；和重链Fc区的S400(EU编号)。可以例如美国专利号7,521,541中所述那样产生半胱氨酸工程化的抗体。
e)抗体衍生物
在一些实施方案中，可以进一步修饰本文提供的抗KLK5抗体以含有本领域已知并易于可获得的额外的非蛋白质部分。适于抗体衍生化的部分包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性例子包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二噁烷、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或无规共聚物)、和葡聚糖或聚(N-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如，丙三醇)、聚乙烯醇和它们的混合物。聚乙二醇丙醛可以具有制造方面的优点，原因在于其在水中的稳定性。这种聚合物可以具有任何分子量，并可以是分枝或不分枝的。与抗体连接的聚合物的数目可以变动，并且如果连接多于一个聚合物，它们可以是相同或不同的分子。通常，用于衍生化的聚合物的数目和/或类型可以基于以下考虑事项确定，包括但不限于待改善的抗体特定特性或功能、抗体衍生物是否将用于限定情况下的疗法中等。
在一些实施方案中，提供了抗KLK5抗体和非蛋白质部分的缀合物，其中所述非蛋白质部分可以通过暴露于辐射而选择性加热。在一个实施方案中，非蛋白质部分是碳纳米管(Kam等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102:11600-11605(2005))。辐射可以具有任何波长，并包括，但不限于这样的波长，所述波长不伤害普通细胞，但是使非蛋白质部分加热至杀伤临近于抗体-非蛋白质部分的细胞的温度。
B.重组方法和组合物
可以使用重组方法和组合物产生抗KLK5抗体，例如，如美国专利号4,816,567中所述。在一个实施方案中，提供了编码本文所述的抗KLK5抗体的分离的核酸。这种核酸可以编码构成抗体VL的氨基酸序列和/或构成抗体VH的氨基酸序列(例如，抗体的轻链和/或重链)。在又一个实施方案中，提供一种或多种包含这种核酸的载体(例如，表达载体)。在又一个实施方案中，提供包含这种核酸的宿主细胞。在这样一个实施方案中，宿主细胞包含以下载体(例如，已经用其转化)：(1)包含核酸的载体，所述核酸编码构成抗体的VL的氨基酸序列和构成抗体的VL的氨基酸序列，或(2)包含核酸的第一载体，所述核酸编码构成抗体的VL的氨基酸序列，和包含核酸的第二载体，所述核酸编码构成抗体的VH的氨基酸序列。在一个实施方案中，宿主细胞是真核的，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如，Y0、NS0、Sp20细胞)。在一个实施方案中，提供一种产生抗KLK5抗体的方法，其中所述方法包括在适于表达抗体条件下培养如上文提供的宿主细胞，所述宿主细胞包含编码抗体的核酸，和任选地从宿主细胞(或宿主细胞培养基)回收抗体。
为了重组产生抗KLK5抗体，将编码抗体的核酸(例如，如上文所述)分离并插入一种或多种载体中用于宿主细胞中进一步克隆和/或表达。可以使用常规方法(例如，通过使用能够与编码抗体重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)，轻易地分离这种核酸并将其测序。
克隆或表达编码抗体的载体的合适宿主细胞包括本文所述的原核或真核细胞。例如，可以在细菌中产生抗体，尤其当不需要糖基化和Fc效应子功能时。对于细菌中表达抗体片段和多肽，参见，例如，美国专利号5,648,237、5,789,199和5,840,523。还参见Charlton,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编著,Humana Press,Totowa,NJ,2003)，第245-254页，其描述在大肠杆菌中表达抗体片段。在表达后，可以将抗体从细菌细胞糊状物分离于可溶性级分中并且可以进一步纯化抗体。
除原核生物之外，真核微生物如丝状真菌或酵母是编码抗体的载体的合适克隆宿主或表达宿主，包括其糖基化途径已经“人源化”的真菌和酵母菌株，导致产生具有部分或完全人类糖基化模式的抗体。参见Nat.Biotech.22:1409-1414,2004和Li等人Nat.Biotech.24:210-215,2006。
表达糖基化抗体的合适宿主细胞还源自多细胞生物(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的例子包括植物细胞和昆虫细胞。已经鉴定了可以与昆虫细胞一起使用、尤其用于转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞的许多杆状病毒毒株。
也可以利用植物细胞培养物作为宿主。参见，例如，美国专利号5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978和6,417,429(描述在转基因植物中产生抗体的PLANTIBODIESTM技术)。
也可以使用脊椎动物细胞作为宿主。例如，适应于悬浮培养的哺乳动物细胞系可以有用。有用的哺乳动物宿主细胞系的其他例子是由SV40转化的猴肾CV1系(COS-7)；人胚肾系(如Graham等人,J.Gen Virol.36:59(1977)中所述的293或293T细胞)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠sertoli细胞(如在例如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中所述的TM4细胞)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK；布法罗大鼠肝脏细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝脏细胞(Hep G2)；小鼠乳腺瘤细胞(MMT 060562)；TRI细胞，如在例如Mather等人,Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中所述；MRC5细胞和FS4细胞。其他有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；和骨髓瘤细胞系如Y0、NS0和Sp2/0。关于适于产生抗体的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见，例如，Yazaki和Wu,Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo编著,Humana Press，Totowa，NJ)，第255-268页(2003)。
C.测定法
可以通过本领域已知的多种测定法，鉴定、筛选或表征本文提供的抗KLK5抗体的物理/化学特性和/或生物学活性。
1.结合分析试验和其他分析试验
在一个方面，例如，通过已知的方法如ELISA、
Figure BDA0002677912730000851
FACS或蛋白质印迹法等，测试本发明抗体的抗原结合活性。
在另一个方面，竞争分析试验可以用来鉴定与本文所述任何抗体竞争结合于KLK5的抗体。在某些实施方案中，这种竞争性抗体与本文所述任何抗体结合相同的表位(例如，线性表位或构象表位)。用于作图与抗体结合的表位的详细示例性方法在Morris(1996)“Epitope Mapping Protocols(表位作图法)”,引自Methods in Molecular Biology第66卷(Humana Press,Totowa,NJ)中提供。
在示例性竞争分析中，将固定化的KLK5在溶液中温育，所述溶液包含与KLK5结合的第一标记抗体(例如，本文所述的任何抗体)和正在测试与第一抗体竞争结合至KLK5的能力的第二未标记抗体。第二抗体可以存在于杂交瘤上清液中。作为对照，将固定的KLK5在包含第一标记抗体但是不包含第二未标记抗体的溶液中温育。在允许第一抗体与KLK5结合的条件下温育后，移除过多的未结合的抗体，并且测量与固定的KLK5结合的标记物的量。如果与固定的KLK5结合的标记物的量在测试样品中相对于对照样品中实质降低，则这表示第二抗体正在与第一抗体竞争结合至KLK5。参见Harlow和Lane(1988)Antibodies:ALaboratory Manual(抗体实验室手册)第14章(Cold Spring Harbor Laboratory，ColdSpring Harbor，NY)。
2.活性分析试验
在一个方面，提供了用于鉴定具有生物学活性的抗KLK5抗体的分析试验。生物学活性可以包括，例如抑制KLK5。在一个实施方案中，抗KLK5抗体抑制KLK5的丝氨酸蛋白酶活性。还提供在体内和/或在体外具有这类生物学活性的抗体。
在一些实施方案中，对抗KLK5抗体测试这类生物学活性。在一些实施方案中，通过一种或多种选自直接活性分析、荧光肽分析、LC/MS分析和Ki(app)分析的方法，测试生物学活性。在一些实施方案中，通过一种或多种选自重组KLK5直接活性分析、偶联pro-KLK1荧光肽分析、偶联pro-KLK7荧光肽分析、pro-KLK1 LC/MS分析、pro-KLK7 LC/MS分析和Ki(app)分析的方法，测量生物学活性。在一些实施方案中，通过上文所述及下文实施例中详述的分析，测量IC50值。
D.免疫缀合物
本发明也提供免疫缀合物，所述免疫缀合物包含本文提供的抗KLK5抗体，所述抗体与一种或多种细胞毒性剂如化疗药或药物、生长抑制剂、毒素(例如，细菌源、真菌源、植物源或动物源的蛋白质毒素、酶活性毒素)或放射性同位素缀合。
在一个实施方案中，免疫缀合物是抗体-药物缀合物(ADC)，其中抗体与一种或多种药物缀合，所述药物包括但不限于类美登素(maytansinoid)(参见美国专利号5,208,020、5,416,064和欧洲专利EP 0 425 235 B1)；澳瑞司他汀如单甲基澳瑞司他汀药物部分DE和DF(MMAE和MMAF)(参见美国专利号5,635,483和5,780,588和7,498,298)；多拉斯他丁(dolastatin)；加利车霉素或其衍生物(参见美国专利号5,712,374、5,714,586、5,739,116、5,767,285、5,770,701、5,770,710、5,773,001和5,877,296；Hinman等人,CancerRes.53:3336-3342(1993)；和Lode等人,Cancer Res.58:2925-2928(1998))；蒽环类如柔红霉素或多柔比星(参见Kratz等人,Current Med.Chem.13:477-523(2006)；Jeffrey等人,Bioorganic&Med.Chem.Letters 16:358-362(2006)；Torgov等人,Bioconj.Chem.16:717-721(2005)；Nagy等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97:829-834(2000)；Dubowchik等人,Bioorg.&Med.Chem.Letters 12:1529-1532(2002)；King等人,J.Med.Chem.45:4336-4343(2002)；和美国专利号6,630,579)；甲氨蝶呤；长春地辛；紫杉烷如多西紫杉醇、紫杉醇、拉罗他赛(larotaxel)、替司他赛(tesetaxel)和ortataxel；单端孢霉烯族化合物；和CC1065。
在另一个实施方案中，免疫缀合物包含与酶活性毒素或其片段缀合的如本文所述的抗体，所述酶活性毒素或其片段包括但不限于白喉毒素A链、白喉毒素的无结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa))、蓖麻毒蛋白A链、相思豆毒蛋白A链、蒴莲根毒蛋白A链、α-帚曲菌素、油桐(Aleurites fordii)蛋白、香石竹毒蛋白、垂序商陆(Phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII和PAP-5)、苦瓜(momordica charantia)抑制蛋白、麻疯树毒蛋白、巴豆毒蛋白、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制蛋白、多花白树毒蛋白、丝林霉素(mitogellin)、局限曲菌素、酚霉素、伊诺霉素和单端孢霉烯类。
在另一个实施方案中，免疫缀合物包含与放射性原子缀合以形成放射缀合物的如本文所述的抗体。多种放射性同位素可用于产生放射缀合物。例子包括At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素。当放射缀合物用于检测时，它可以包含用于闪烁研究的放射性原子，例如TC99m或I123，或核磁共振(NMR)成像(也称作磁共振成像，MRI)的自旋标记物，再次如碘-123、碘-131、铟-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、钆、锰或铁。
可以使用多种双官能蛋白质偶联剂产生抗体和细胞毒性剂的缀合物，所述双官能蛋白质偶联剂如N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯(SMCC)、亚氨基硫烷(IT)、亚氨酯的双官能衍生物(如己二亚氨酸二甲基酯盐酸盐)、活性酯(如辛二酸二琥珀酰亚胺酯)、醛(如戊二醛)、双-叠氮化合物(如双(对-叠氮苯甲酰基)己二胺)、双-重氮衍生物(如双-(对-重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(如2,6-二异氰酸甲苯酯)和双活性氟化合物(如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。例如，可以如Vitetta等人,Science 238:1098(1987)中所述，制备蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳-14-标记的1-异硫氰酸根合苄基-3-甲基二乙三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于放射性核苷酸与抗体缀合的示例性螯合剂。参见WO94/11026。接头可以是促进细胞毒药物在细胞中释放的“可切割接头”。例如，可以使用酸不稳定接头、肽酶敏感接头、光不稳定接头、二甲基接头或含有二硫键的接头(Chari等人,Cancer Res.52:127-131(1992)；美国专利号5,208,020)。
免疫缀合物或ADC在本文中明确地被考虑，但不限于采用交联剂试剂制备的缀合物，所述交联剂试剂包括但不限于可商业获得的BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC、和磺基-SMPB、和SVSB(琥珀酰亚胺基-(4-乙烯砜)苯甲酸酯)(例如，来自Pierce Biotechnology,Inc.,Rockford,IL.,U.S.A)。
E.用于诊断和检测的方法和组合物
在一些实施方案中，本文提供的任何抗KLK5抗体可用于检测生物样品中KLK5的存在。如本文所用，术语“检测”涵盖定量或定性检测。在一些实施方案中，生物样品包括细胞或组织，如皮肤表皮、肺实质、支气管上皮下层。在一些实施方案中，生物样品包括支气管肺泡灌洗液。
在一个实施方案中，提供在诊断或检测方法中使用的抗KLK5抗体。在又一个方面，提供一种检测KLK5在生物样品中存在的方法。在某些实施方案中，该方法包括：使生物样品与如本文所述的抗KLK5抗体在允许抗KLK5抗体与KLK5结合的条件下接触，并且检测抗KLK5抗体和KLK5之间是否形成复合物。这种方法可以是体外或体内方法。在一个实施方案中，抗KLK5抗体用来选择符合抗KLK5抗体治疗条件的受试者，例如其中KLK5是选择患者的生物标记物。
可以使用本发明抗KLK5抗体诊断的示例性病症包括Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病和酒渣鼻。在一些实施方案中，疾病选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、酒渣鼻和嗜酸粒细胞性食管炎。在一些实施方案中，哮喘选自特应性哮喘、变应性哮喘、非变应性哮喘、锻炼所致哮喘、阿司匹林敏感/加重性哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未经皮质类固醇治疗的哮喘、慢性哮喘、皮质类固醇耐药性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断且未治疗过的哮喘、因吸烟所致的哮喘、皮质类固醇无法控制的哮喘、辅助T细胞淋巴细胞2型(Th2)或高2型(Th2)、或2型(T2)驱动的哮喘、嗜酸粒细胞性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性粒细胞性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驱动的哮喘、低骨膜蛋白性哮喘和低嗜酸性粒细胞性哮喘。在一些实施方案中，哮喘是低TH2性哮喘。
在某些实施方案中，提供标记的抗KLK5抗体。标记物包括但不限于，直接可以检测的标记物或部分(如荧光、发色、电子致密、化学发光和放射性的标记)，以及间接检测(例如借助酶促反应或分子相互作用)的部分，如酶或配体。示例性标记物包括但不限于放射性同位素32P、14C、125I、3H和131I、荧光团如稀土元素螯合物或荧光素及其衍生物、罗丹明及其衍生物、丹磺酰、伞形酮、萤光素酶例如萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶(美国专利号4,737,456)、萤光素、2,3-二氢二氮杂萘二酮、辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、溶菌酶、糖氧化酶例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、杂环氧化酶如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶，其与利用过氧化氢来氧化色素前体的酶如HRP、乳过氧化物酶或微过氧化物酶偶联，生物素/抗生物素蛋白、自旋标记物、噬菌体标记物、稳定自由基等。
F.药物制剂
通过以下方式制备冻干制剂或水溶液剂形式的如本文所述的抗KLK5抗体的药物制剂：将具有所需纯度的这种抗体与一种或多种任选的可药用载体混合(Remington'sPharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编著(1980))。可药用载体总体上在所用的剂量和浓度对接受者无毒，并且包括但不限于：缓冲剂如磷酸盐、柠檬酸和其他有机酸；抗氧化剂(包括抗坏血酸和甲硫氨酸)；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；对羟苯甲酸烷基酯，如对羟苯甲酸甲酯或丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他糖包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂如EDTA；糖如蔗糖、甘露糖、海藻糖或山梨糖；成盐反离子如钠；金属络合物(例如，Zn-蛋白质络合物)和/或非离子表面活性剂如聚乙二醇(PEG)。本文中的示例性可药用载体还包括间质药物分散剂如可溶性中性活性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如，人可溶性PH-20透明质酸酶糖蛋白，如rHuPH20(
Figure BDA0002677912730000891
Baxter International,Inc.)。在美国专利公开号2005/0260186和2006/0104968中描述了某些示例性sHASEGP和使用方法，包括rHuPH20。在一个方面，sHASEGP与一种或多种额外的糖胺聚糖酶如软骨素酶组合。
示例性冻干抗体制剂在美国专利号6,267,958中描述。水性抗体制剂包括在美国专利号6,171,586和WO2006/044908中描述的那些制剂，后一类制剂包含组氨酸-乙酸盐缓冲剂。
本文中的制剂也可以根据正在治疗的特定适应症需要而含有多于一种活性成分，优选地是具有无相互不利影响的互补活性的那些活性成分。
活性成分可以包埋于例如分别通过凝聚技术或界面聚合制备的微胶囊(例如，羟甲基纤维素微胶囊或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)、胶态药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球体、微乳液、纳米粒子和纳米胶囊)或粗乳液中。此类技术在Remington's Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编著(1980)中公开。
可以制备持续释放制品。持续释放制品的合适实例包括含有抗体的固态疏水性聚合物半通透性基质，所述基质处于成型制品(例如，薄膜或微胶囊)形式。
待用于体内施用的制剂通常是无菌的。可以例如通过借助无菌滤膜过滤，容易地实现无菌性。
G.治疗方法和组合物
本文提供的任何抗KLK5抗体可以用于治疗方法中。
在一个方面，提供了抗KLK5抗体作为药物使用。在其他方面，提供抗KLK5抗体用于治疗疾病，所述疾病选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病和酒渣鼻。在一些实施方案中，疾病选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、酒渣鼻和嗜酸粒细胞性食管炎。在一些实施方案中，哮喘选自特应性哮喘、变应性哮喘、非变应性哮喘、锻炼所致哮喘、阿司匹林敏感/加重性哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未经皮质类固醇治疗的哮喘、慢性哮喘、皮质类固醇耐药性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断且未治疗过的哮喘、因吸烟所致的哮喘、皮质类固醇无法控制的哮喘、辅助T细胞淋巴细胞2型(Th2)或高2型(Th2)、或2型(T2)驱动的哮喘、嗜酸粒细胞性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性粒细胞性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驱动的哮喘、低骨膜蛋白性哮喘和低嗜酸性粒细胞性哮喘。在一些实施方案中，哮喘是低TH2性哮喘。
在某些实施方案中，提供抗KLK5抗体用于治疗方法中。在某些实施方案中，本发明提供抗KLK5抗体用于在治疗患有疾病的个体的方法中使用，其中疾病选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病和酒渣鼻，所述方法包括向该个体施用有效量的抗KLK5抗体。在一个这种实施方案中，该方法还包括向该个体施用有效量的至少一种额外治疗药，例如，如下文描述的治疗药。在一些实施方案中，提供抗KLK5抗体用于抑制KLK5的生物学活性的用途。在一些实施方案中，提供抗KLK5抗体在抑制个体中KLK5的生物学活性的方法中使用，所述方法包括向该个体施用有效量的抗KLK5抗体，以抑制KLK5的生物学活性。根据以上实施方案中任一个实施方案的“个体”优选地是人。在一些实施方案中，疾病选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、酒渣鼻和嗜酸粒细胞性食管炎。在一些实施方案中，哮喘选自特应性哮喘、变应性哮喘、非变应性哮喘、锻炼所致哮喘、阿司匹林敏感/加重性哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未经皮质类固醇治疗的哮喘、慢性哮喘、皮质类固醇耐药性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断且未治疗过的哮喘、因吸烟所致的哮喘、皮质类固醇无法控制的哮喘、辅助T细胞淋巴细胞2型(Th2)或高2型(Th2)、或2型(T2)驱动的哮喘、嗜酸粒细胞性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性粒细胞性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驱动的哮喘、低骨膜蛋白性哮喘和低嗜酸性粒细胞性哮喘。在一些实施方案中，哮喘是低TH2性哮喘。
在又一个方面，本发明提供抗KLK5抗体在制造或制备药物中的用途。在一个实施方案中，该药物用于治疗疾病，其中疾病选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病和酒渣鼻。在又一个实施方案中，该药物用于治疗疾病的方法中，其中疾病选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病和酒渣鼻，所述方法包括向患有所述疾病的个体施用有效量的药物。在一个这种实施方案中，该方法还包括向该个体施用有效量的至少一种额外治疗药，例如，如下文描述的治疗药。在又一个实施方案中，该药物用于抑制KLK5的生物学活性。在又一个实施方案中，该药物用于抑制个体中KLK5的生物学活性的方法中，所述方法包括向该个体施用有效量的药物以抑制KLK5的生物学活性。根据以上实施方案中任一个实施方案的“个体”可以是人。在一些实施方案中，疾病选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、酒渣鼻和嗜酸粒细胞性食管炎。在一些实施方案中，哮喘选自特应性哮喘、变应性哮喘、非变应性哮喘、锻炼所致哮喘、阿司匹林敏感/加重性哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未经皮质类固醇治疗的哮喘、慢性哮喘、皮质类固醇耐药性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断且未治疗过的哮喘、因吸烟所致的哮喘、皮质类固醇无法控制的哮喘、辅助T细胞淋巴细胞2型(Th2)或高2型(Th2)、或2型(T2)驱动的哮喘、嗜酸粒细胞性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性粒细胞性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驱动的哮喘、低骨膜蛋白性哮喘和低嗜酸性粒细胞性哮喘。在一些实施方案中，哮喘是低TH2性哮喘。
在又一个方面，本发明提供一种用于治疗疾病的方法，其中疾病选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病和酒渣鼻。在一些实施方案中，疾病选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、酒渣鼻和嗜酸粒细胞性食管炎。在一个实施方案中，该方法包括向患有疾病如Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、或酒渣鼻的个体施用有效量的抗KLK5抗体。在这样一个实施方案中，该方法还包括向该个体施用有效量的如下文描述的至少一种额外治疗药。根据以上实施方案中任一个实施方案的“个体”可以是人。在一些实施方案中，哮喘选自特应性哮喘、变应性哮喘、非变应性哮喘、锻炼所致哮喘、阿司匹林敏感/加重性哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未经皮质类固醇治疗的哮喘、慢性哮喘、皮质类固醇耐药性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断且未治疗过的哮喘、因吸烟所致的哮喘、皮质类固醇无法控制的哮喘、辅助T细胞淋巴细胞2型(Th2)或高2型(Th2)、或2型(T2)驱动的哮喘、嗜酸粒细胞性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性粒细胞性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驱动的哮喘、低骨膜蛋白性哮喘和低嗜酸性粒细胞性哮喘。在一些实施方案中，哮喘是低TH2性哮喘。
在又一个方面，本发明提供一种用于抑制个体中KLK5的生物学活性的方法。在一个实施方案中，该方法包括向该个体施用有效量的抗KLK5抗体以抑制KLK5的生物学活性。在一个实施方案中，“个体”是人。
在又一个方面，本发明提供了包含本文提供的任何抗KLK5抗体的药物制剂，例如，用于前述任一治疗方法中。在一个实施方案中，药物制剂包含本文提供的任何抗KLK5抗体和可药用载体。在另一个实施方案中，药物制剂包含本文提供的任何抗KLK5抗体和至少一种额外的治疗药，例如，如下文描述。
本发明的抗体可以在疗法中单独或与其他药物组合使用。例如，本发明的抗体可以与至少一种额外治疗药共施用。在一些实施方案中，额外治疗药是IL-13轴结合拮抗剂、IL-5轴结合拮抗剂、IL-33轴结合拮抗剂、M1 prime拮抗剂、IgE拮抗剂、TRPA1拮抗剂、CRTH2拮抗剂、气管扩张剂或哮喘症状控制药物、免疫调节剂、皮质类固醇、Th2途径抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂或磷酸二酯酶抑制剂。在一些实施方案中，IL-13轴结合拮抗剂是抗IL-13抗体。在一些实施方案中，抗IL-13抗体是lebrikizumab。在一些实施方案中，IL-5轴结合拮抗剂是IL-5结合拮抗剂或IL-5受体结合拮抗剂。在一些实施方案中，IL-33轴结合拮抗剂是IL-33结合拮抗剂或ST2结合拮抗剂。在一些实施方案中，IL-33结合拮抗剂是抗IL-33抗体。在一些实施方案中，M1 prime拮抗剂是quilizumab。
上文所示的这类联合疗法涵盖联合施用(其中在相同或分开的制剂中包含两种或更多种治疗剂)，和分开施用，在这种情况下，本发明抗体的施用可以在施用一种或多种额外的治疗药之前、同时和/或之后进行。在一个实施方案中，抗KLK5抗体的施用和额外治疗药的施用彼此相隔约一个月内，或约一周、两周或三周内，或约一、两、三、四、五或六日内进行。本发明的抗体也可以与放射疗法组合使用。
本发明的抗体(和任何额外的治疗药)可以通过任何合适的手段施用，所述的合适手段包括肠胃外、肺内和鼻内以及(如果需要局部治疗)病灶内施用。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。给药可以通过任何合适的途径进行，例如通过注射，如静脉内或皮下注射，这部分地取决于施用是否为短暂或长期。本文中考虑各种给药方案，包括但不限于单次或在各种时间点多次施用、推注施用和脉冲输注。
本发明的抗体将以符合良好医学规范的方式配制、定剂量和施用。在这种情况下考虑的因素包括正在治疗的具体病症、正在治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床状况、病症原因、药剂递送部位、施用方法，施用方案、和医疗执业者已知的其他因素。抗体不需要，但是可以任选地，与目前用来预防或治疗所讨论病症的一种或多种药物一起配制。这类其他药物的有效量取决于该制剂中存在的抗体的量、疾病类型或疗法、和上文讨论的其他因素。这些药物通常以与本文所述相同的剂量并且采用本文所述的施用途径使用，或以约1％至99％的本文所述剂量使用，或以经验地/临床上确定适宜的任何剂量和任何途径使用。
对于预防或治疗疾病，本发明抗体的适宜剂量(当单独或与一种或多种其他额外治疗药组合使用时)将取决于待治疗疾病的类型、抗体的类型、疾病的严重性和过程、抗体是否出于预防或治疗目的施用、先前疗法、患者的临床史和对抗体的反应、以及主治医师的判断。将抗体适当地按一次或经过一系列治疗施用至患者。取决于疾病的类型和严重性，约1μg/kg至15mg/kg(例如0.1mg/kg-10mg/kg)抗体可以是向患者施用的起始候选剂量，无论是否例如通过一个或多个分施用或通过连续输注来施用。取决于上文提到的因素，一个常见的每日剂量可能是从约1μg/kg至100mg/kg或更多。对于在几日或更长时间范围内重复施用，取决于病状，治疗通常将持续直至对疾病症状的所需抑制作用出现。抗体的一个示例性剂量将处于约0.05mg/kg至约10mg/kg范围内。因此，可以向患者施用一剂或多剂的约0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg(或其任意组合)。这类剂量可以间歇地施用，例如，每周或每三周(例如，从而，患者接受约两剂至约二十剂或例如约六剂抗体)。可以施用较高的初始负荷剂量，随后是一个或多个较低剂量。
可以理解，替代抗KLK5抗体或加上抗KLK5抗体，可以使用本发明的免疫缀合物实施上述任何制剂或治疗方法。
H.制造品
在本发明的另一个方面，提供一种制造品，所述制造品含有上文描述的可用于治疗、预防和/或诊断病症的物质。该制造品包括容器和在该容器上或与之结合的标签或药品说明书。合适的容器包括例如瓶、小药瓶、注射器、静脉内输液袋等。容器可以从多种材料如玻璃或塑料形成。该容器容纳了本身可以或与另一种组合物组合时可以有效治疗、预防和/或诊断病症的组合物，并且可以具有无菌接入口(例如该容器可以是有皮下注射针头可穿透的瓶塞的静脉内输液袋或小药瓶)。组合物中的至少一种活性物质是本发明的抗体。标签或药品说明书说明该组合物用于治疗选择的病状。另外，制造品可以包含(a)其中含有组合物的第一容器，其中所述组合物包含本发明的抗体；和(b)其中含有组合物的第二容器，其中所述组合物包含其他细胞毒性剂或治疗药。在本发明的这个实施方案中制造品还可以包含指示组合物可以用来治疗特定病状的药品说明书。备选或额外地，该制造品可以还包含第二(或第三)容器，其包含可药用缓冲剂，如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、Ringer溶液和葡萄糖溶液。它可以还包括从商业和用户观点看期望的其他材料，包括其他缓冲剂、稀释剂、滤器、针头和注射器。
可以理解，替代抗KLK5抗体或加上抗KLK5抗体，上述制造品中任一者可以包含本发明的免疫缀合物。
III.实施例
以下是本发明方法和组合物的实施例。应当理解，鉴于上文提供的一般性描述，可以实施多种其他实施方案。
实施例1-材料和方法
抗KLK5抗体生成
用人KLK5免疫接种新西兰白兔并使用涉及已公开文献的改良方案分离单个B细胞，例如，参见Offner等人,Offner等人,PLoS ONE 9(2),2014。这种改良的工作流程包括将IgG+huKLK5+B细胞直接FACS分选入单个孔。通过ELISA分析对B细胞培养上清液与人KLK5和无关对照蛋白的结合。将KLK5特异性B细胞裂解并且立即在-80℃冷冻储存直至分子克隆。把来自兔B细胞的每种单克隆抗体的可变区(VH和VL)从提取的mRNA克隆入表达载体，如先前所描述，例如，参见Offner等人,PLoS ONE 9(2),2014。将各个重组兔抗体在Expi293细胞中表达并随后用蛋白A纯化。纯化的抗KLK5抗体随后经历功能活性分析和动力学筛选。
大鼠以相似方式和免疫接种并且使用修饰的融合配偶体生成杂交瘤(例如，参见Price等人,J Immunol Methods 31；343(1):28-41(2009))。优化多种条件以能够实现将各个IgG+huKLK5+杂交瘤分选入单个孔，接着是分选后的再培养。通过ELISA分析所得的杂交瘤上清液，并且使用蛋白A纯化阳性样品供后续功能性和动力学表征。
BIAcoreTM实验
通过BIAcoreTMT200仪测定这节中抗体的结合亲和力。简而言之，根据供应商说明，用1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)试剂活化BIAcoreTM研究级CM5芯片。将山羊抗人Fc IgG与芯片偶联，以实现每个流动池中的大约10,000响应单位(RU)。用1M乙醇胺封闭未反应的偶联基团。对于动力学测量，捕获抗体以实现大约300RU。将人KLK5的10倍连续稀释物在37℃以30μL/分钟的流速于HBS-P缓冲液中注射。使用1:1Langmuir结合模型(BIAcoreTMT200评估软件版本2.0)，计算缔合速率(ka)和解离速率(kd)。将平衡解离常数(KD)计算为kd/ka比。
确定KLK5抑制的分析试验
使用重组KLK5直接活性分析试验，测量抗KLK5抗体对人KLK5的抑制。将重组人KLK5(Genentech)在直接分析缓冲液(75mM Tris(pH 8.0)，150mM NaCl和0.01％
Figure BDA0002677912730000951
20)中稀释至5nM并且在384孔分析平板中(384孔小体积，黑色，圆底，Corning，目录号4514)与抗KLK5抗体合并。在磷酸盐样品缓冲液(70mM磷酸钠(pH 6)，200mM NaCl和0.01％
Figure BDA0002677912730000953
20)或柠檬酸盐/Tris样品缓冲液(10mM柠檬酸，30mM Tris(pH 6)和0.01％
Figure BDA0002677912730000952
20)中提供抗体。在适宜的样品缓冲液中或在直接分析缓冲液中制得抗体稀释物。将平板在环境温度温育30分钟。将荧光肽底物Boc-VPR-AMC(Bachem，货号I-1120)直接添加到分析平板。孔内终浓度是50μM Boc-VPR-AMC、5nM重组人KLK5和0.19-100nM抗KLK5抗体。使用
Figure BDA0002677912730000954
Plus读数仪，使用340nm激发/460nm发射模块，每102秒检查平板，持续30-60分钟。通过线性范围内读数的线性回归，计算反应速率(表述为RFU)，一般始于204秒并持续直至分析结束为止。分别使用仅缓冲液和100nM最终SPINK9.SRE.Fc(Genentech)作为100％和0％活性对照。从抗KLK5抗体的各自曲线的四参数拟合，测定其IC50值。
使用偶联pro-KLK7荧光肽分析试验，测量抗KLK5抗体对人KLK5的抑制。稀释重组人KLK5(Genentech)至5nM，如果抗体样品处于柠檬酸盐/Tris样品缓冲液中则稀释在pro-KLK7柠檬酸盐/Tris偶联缓冲液(50mM Tris(pH 7.5)，150mM NaCl和0.01％
Figure BDA0002677912730000955
20)中，或者如果抗体样品处于磷酸盐样品缓冲液中则稀释在pro-KLK7磷酸偶联缓冲液(50mMTris(pH 8.0)，150mM NaCl和0.01％
Figure BDA0002677912730000961
20)中。稀释的KLK5随后在384孔分析平板中(384孔小体积，黑色，圆底，Corning，目录号4514)与抗KLK5抗体合并。按照用于KLK5直接分析试验的方式，制得抗体稀释物。将平板在环境温度温育30分钟。将荧光肽底物suc-LLVY-AMC(Bachem，货号I-1395)和pro-KLK7(Genentech)直接添加至分析平板并且在环境温度温育。孔内终浓度是100μM suc-LLVY-AMC、125nM pro-KLK7、5nM重组人KLK5和0.19-100nM抗KLK5抗体。在24小时后，每102秒进行荧光读数，持续30-60分钟，并且通过平均最后5个读数，计算RFU终点值。分别使用仅缓冲液和100nM最终SPINK9.SRE.Fc(Genentech)作为100％和0％活性对照。从抗KLK5抗体的各自曲线的四参数拟合测定其IC50值。
使用LC/MS(pro-KLK7 LC/MS分析)，通过KLK5衍生的剪切肽检测，利用pro-KLK7分析试验，测定抗KLK5抗体的IC50值。通过液相色谱偶联的质谱法，检测来自酶KLK5和底物pro-KLK7之间反应的产物肽EEAQGDK。全部化合物均用50mM碳酸氢铵液(粉末/已认证，Fisher Chemical,A643-500)稀释，分析中的终浓度为5nM KLK5(Genentech)和范围从0.02至65nM的抗体，稀释于96孔板(Bio-Rad，Hard-Shell 96孔PCR平板，低矮型，薄壁，带裙边，蓝色/透明#HSP9631)中。将平板温育在室温30分钟。随后，向酶+抑制剂添加15nM底物pro-KLK7(Genentech)。在2小时后，使用0.5μL甲酸(99.5+％，OptimaTMLC/MS级，FisherChemical，A117-10X1AMP)，使反应猝灭。在
Figure BDA0002677912730000962
6500LC-MS/MS质谱仪(Sciex，Framingham，MA)中，使用以下的质量组合，检测肽：Q1，388.7m/z和Q3，319.0m/z。使用合成性KLK7肽校准曲线，测量所生成肽的量。使用Prism6软件(GraphPad Software,La Jolla,CA)，测定IC50值。
使用偶联pro-KLK1荧光肽分析，测量抗KLK5抗体对人KLK5的抑制。将重组人KLK5(Genentech)在pro-KLK1偶联分析缓冲液(100mM Tris(pH 8.5)和0.01％
Figure BDA0002677912730000963
20)中稀释至0.5nM并且在384孔分析平板中(384孔小体积，黑色，圆底，Corning，目录号4514)中与抗KLK5抗体合并。按照用于KLK5直接分析的方式，制得抗体稀释物。将平板在环境温度温育30分钟。将荧光肽底物PFR-AMC(Bachem，货号I-1295)和pro-KLK1(Genentech)直接添加至分析平板并且在环境温度温育。孔内终浓度是50μM PFR-AMC、31.25nM pro-KLK1、0.5nM重组人KLK5和0.19-100nM抗KLK5抗体。使用
Figure BDA0002677912730000964
Plus读数仪，使用340nm激发/460nm发射模块，每102秒检查平板，持续120分钟。通过围绕如下时间的读数进行平均，计算RFU终点值，其中，所述时间为由无抑制剂对照的RFU vs.时间曲线的拐点所指示的时间。分别使用仅缓冲液和100nM最终SPINK9.SRE.Fc(Genentech)作为100％和0％活性对照。从抗KLK5抗体的各自曲线的四参数拟合测定其IC50值。
使用LC/MS(pro-KLK1 LC/MS分析试验)，通过KLK5衍生的剪切肽检测，利用pro-KLK1分析试验，测定抗KLK5抗体的IC50值。通过液相色谱偶联的质谱法，检测来自酶KLK5和底物pro-KLK1之间反应的产物肽APPIQSR。全部化合物均用50mM碳酸氢铵液(粉末/已认证，Fisher Chemical,A643-500)稀释，分析中的终浓度为0.5nM KLK5(Genentech)和范围从0.01至29nM的抗体，稀释于96孔板(Bio-Rad，Hard-Shell 96孔PCR平板，低矮型，薄壁，带裙边，蓝色/透明#HSP9631)中。将平板温育在室温60分钟。随后，向酶+抑制剂添加300nM底物pro-KLK1(Genentech)。在20分钟后，使用0.5μL甲酸(99.5+％，OptimaTMLC/MS级，FisherChemical，A117-10X1AMP)，使反应猝灭。在
Figure BDA0002677912730000971
6500LC-MS/MS质谱仪(Sciex，Framingham，MA)中，使用以下的质量组合，检测肽：Q1，384.7m/z和Q3，600.3m/z。使用峰面积和Prism6软件(GraphPad Software,La Jolla,CA)，测定IC50值。
使用Z-VPR-pNA作为底物，在室温于96孔半区平板(白色带透明平底，Corning#3884)中进行Ki(app)分析。在分析缓冲液(100mM Tris，pH 8.0，100mM NaCl，0.01％
Figure BDA0002677912730000972
20)中稀释抑制剂样品至3x终浓度。分别使用仅缓冲液和100nM最终SPINK9.SRE.Fc(Genentech)作为100％和0％活性对照。将抑制剂样品或对照样品(20μL)添加至平板，然后添加在分析缓冲液中的20μL KLK5(Genentech)，终浓度0.5、0.25、0.125和0.0625nM。在30分钟后，将分析缓冲液中的20μL Z-VPR-pNA底物(California Peptide,#876-08，配制为DMSO中的30mM母液)按终浓度300μM添加。在一些初始分析中，通过以下方式升高DMSO终浓度至10％：在DMSO中使底物的初始稀释度至3mM，之后在分析缓冲液中稀释至900μM(即，3x最终稀释度)。在添加底物后，在Versamax可调式酶标仪中读取平板，每102秒取405nm处的量值，持续3小时。通过4182-10710秒范围内的线性回归，计算反应速率(表述为μAU/秒)。反应速率相对于0％和100％活性对照的值归一化并用4参数公式拟合以计算IC50值。在双价抑制剂的情况下，原始IC50值乘以二。该IC50值随后对KLK5酶浓度作图，从y-截距值产生Ki(app)。此外，如果抑制剂足够强力，则可以通过将曲线的斜率与理论值0.5比较，判断酶和抑制剂的组合纯度。
确定抗体选择性的分析试验
在室温于384孔平板(黑色，低体积圆底，Corning#4514)中以15μL最终反应体积进行KLK1选择性分析试验。在分析缓冲液(75mM Tris，pH 8.0，150mM NaCl，0.01％
Figure BDA0002677912730000986
20)中稀释抑制剂样品至3x终浓度。分别使用缺少抑制剂的反应和缺少酶的反应作为100％和0％活性对照。将抑制剂样品或对照样品(5μL)添加至平板，然后添加在分析缓冲液中的5μL KLK1(R&D Systems，2337-SE，批号NLY0315111，根据R&D Systems方案活化)，终浓度3nM。在30分钟后，将分析缓冲液中的5μL H-Pro-Phe-Arg-AMC乙酸盐(Bachem I-1295，水中10mM储存液)按终浓度100μM添加。在添加底物后，使用光学模块FI 340 460，在
Figure BDA0002677912730000981
酶标仪中读取平板，其中增益值设定成85％。每102秒取量值，持续1小时。通过204-918秒范围内的线性回归，计算反应速率(表述为RFU/秒)。反应速率相对于0％和100％活性对照的值归一化并用4参数公式拟合以计算IC50值。在双价抑制剂的情况下，原始IC50值乘以二。
在室温于384孔平板(黑色，低体积圆底，Corning#4514)中以15μL最终反应体积进行KLK4选择性分析试验。在分析缓冲液(75mM Tris，pH 8.0，150mM NaCl，0.01％
Figure BDA0002677912730000982
20)中稀释抑制剂样品至3x终浓度。分别使用缺少抑制剂的反应和缺少酶的反应作为100％和0％活性对照。将抑制剂样品或对照样品(5μL)添加至平板，然后添加在分析缓冲液中的5μL KLK4(R&D Systems，1719-SE，批号MSY0116011，根据R&D Systems方案活化)，终浓度2nM。在30分钟后，将分析缓冲液中的5μL Boc-Val-Pro-Arg-AMC(Bachem I-1120，水中31.3mM储存液)按终浓度50μM添加。在添加底物后，使用光学模块FI 340 460，在
Figure BDA0002677912730000983
酶标仪中读取平板，其中增益设定成85％。每102秒取量值，持续1小时。通过510-3570秒范围内的线性回归，计算反应速率(表述为RFU/秒)。反应速率相对于0％和100％活性对照的值归一化并用4参数公式拟合以计算IC50值。在双价抑制剂的情况下，原始IC50值乘以二。
在室温于384孔平板(黑色，低体积圆底，Corning#4514)中以15μL最终反应体积进行胰蛋白酶选择性分析试验。在分析缓冲液(75mM Tris，pH 8.0，150mM NaCl，0.01％
Figure BDA0002677912730000985
20)中稀释抑制剂样品至3x终浓度。分别使用缺少抑制剂的反应和缺少酶的反应作为100％和0％活性对照。将抑制剂样品或对照样品(5μL)添加至平板，然后添加在分析缓冲液中的5μL胰蛋白酶(Sigma Aldrich T8003，批号SLBM2321V，1mM HCl中的42.0μM储存液)，终浓度0.25nM。在30分钟后，将分析缓冲液中的5μL Boc-Val-Pro-Arg-AMC(Bachem I-1120，水中31.3mM储存液)按终浓度50μM添加。在添加底物后，使用光学模块FI 340 460，在
Figure BDA0002677912730000984
酶标仪中读取平板，其中增益设定成85％。每102秒取量值，持续1小时。通过204-3570秒范围内的线性回归，计算反应速率(表述为RFU/秒)。反应速率相对0％和100％活性对照的值归一化并用4参数公式拟合以计算IC50值。在双价抑制剂的情况下，原始IC50值乘以二。
在室温于384孔平板(黑色，低体积圆底，Corning#4514)中以15μL最终反应体积进行KLK7选择性分析试验。在分析缓冲液(75mM Tris，pH 8.0，150mM NaCl，0.01％
Figure BDA0002677912730000991
20)中稀释抑制剂样品至3x终浓度。分别使用缺少抑制剂的反应和缺少酶的反应作为100％和0％活性对照。将抑制剂样品或对照样品(5μL)添加至平板，然后添加在分析缓冲液中的5μL KLK7(Genentech)，终浓度5nM。在30分钟后，将分析缓冲液中的5μL Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC(Bachem I-1395，水中25mM储存液)按终浓度100μM添加。在添加底物后，使用光学模块FI 340 460(AMC模块)，在
Figure BDA0002677912730000992
酶标仪中读取平板，其中增益设定成85％。每102秒取量值，持续1小时15分钟。通过2040-4488秒范围内的线性回归，计算反应速率(表述为RFU/秒)。反应速率相对0％和100％活性对照的值归一化并用4参数公式拟合以计算IC50值。
Figure BDA0002677912730000993
实验
Pre MCA
Figure BDA0002677912730000994
模块：在30分钟后，将分析缓冲液中的5μL Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC(Bachem I-1395，水中25mM储存液)按终浓度100μM添加。在添加底物后，使用光学模块FI 340 460(AMC模块)，在
Figure BDA0002677912730000995
酶标仪中读取平板，其中增益设定成85％。每102秒取量值，持续1小时15分钟。通过2040-4488秒范围内的线性回归，计算反应速率(表述为RFU/秒)。反应速率相对0％和100％活性对照的值归一化并用4参数公式拟合以计算IC50值。
Post MCA
Figure BDA0002677912730000996
模块：在30分钟后，将分析缓冲液中的5μL Mca-RPKPVE-Nval-WRK(Dnp)-NH2生荧光性MMP底物(R&D Systems ES002，DMSO中4.3mM储存液)按终浓度10μM添加。在添加底物后，使用光学模块FI 320 405(MCA模块)，在
Figure BDA0002677912730000997
酶标仪中读取平板，其中增益设定成85％。每102秒取量值，持续1小时15分钟。通过204-1020秒范围内的线性回归，计算反应速率(表述为RFU/秒)。反应速率相对0％和100％活性对照的值归一化并用4参数公式拟合以计算IC50值。
Wasatch实验
基于阵列的SPR成像系统(CarterraTM，USA)用来对一组288个单克隆抗体进行表位分拣(epitope bin)。将纯化的抗体按10μg/ml稀释于10mM乙酸钠缓冲液pH 4.5中。使用胺偶联法，使用连续流微量点样器(CarterraTM，USA)，将抗体直接固定到SPR传感器CMD 200M芯片(XanTec Bioanalytics GmbH，德国)上，以产生288个抗体的阵列。为了分析，IBISMX96SPRi(CarterraTM,USA)用来评估分析物与固定化配体的结合。为了动力学分析，将人、食蟹猴和鼠KLK5从0至300nM按3倍稀释度注射3分钟，随后解离时间为10分钟。将人KLK1、KLK4和KLK7按单一浓度500nM注射，以确保抗体的特异性。为了针对SPINK9-Fc-SRE进行表位分拣，首先将人KLK5在100nM注射4分钟并且随后第二次注射10μg/ml的SPINK9-Fc-SRE持续4分钟。循环之间用10mM甘氨酸pH 1.5，使表面再生。在25℃于运行缓冲液HBS-T缓冲液(0.01M HEPES pH 7.4，0.15M NaCl，0.05％表面活性剂P20)中进行该实验。使用Scrubber2.0(BioLogicTM软件)处理动力学数据并且使用Wasatch分拣软件工具(CarterraTM，USA)处理表位分拣数据。
氢交换质谱法
表2中列出实验起始材料组成。用2H2O(重水)配制两种标记用溶液，所述溶液具有pH 6.0或8.0，并由按照适宜比率组合的无水磷酸二氢钠和磷酸氢二钠脱水物的混合物组成(以在总浓度10mM实现所称氘活性)，含140mM NaCl。使用LEAP机器人平台，将起始材料(表2)用标记用溶液大约1:10稀释并温育多个时间，之后用猝灭缓冲液(4M GdmCl，0.5MTCEP，200mM柠檬酸)1:1稀释至最终pH为2.5，并且随后迅速配制用于质量测量。将猝灭的材料注入在线流动系统，在此处所述材料使用胃蛋白酶消化，与阱柱结合的同时交换缓冲液，通过反相色谱分离，并通过电喷雾引入气相，其中评估各个肽的载氘量。
表2
Figure BDA0002677912730001001
在pH 6.0或8.0，将样品标记0.5、5.0、56.0和600.0分钟。纳入独立实验重复；在显示的曲线上，误差线代表量值范围，其平均数由图12B中的标记显示。特征抽象化和数据分析涉及定制自有软件。
在参比pH的有效标记时间由实验性pH和实际标记时间限定：teff＝t实验*10^(pH参比-pH实验)。图12B中的参比pH是6.0。为了修正因2H2O而出现的熟知质子活性偏置，通过以下关系将pH量值与此处提及的pH值进行关联：
pH＝pH测量+([2H2O/2H2O+1H2O]*0.4)。
初步实验中测定衍生自KLK5的实验肽的序列和保留时间，在所述初步实验中，遵循上文描述的相同方案工作流程，但采用1H2O溶剂中的标记用缓冲液。这提供了起始质量，其中可以从所述起始质量确定标记实验期间每种肽中所含氘的量；另外，这些实验通过MS利用串联-MS进行从头测序。
IL-8分泌分析
IL-8由几种类型细胞响应于炎性刺激而分泌。KLK5刺激A459细胞，导致IL-8分泌。腺癌性人肺泡基底上皮细胞构成A549细胞系。用含有RPMI、10％FBS、L-谷氨酰胺和补充青霉素和链霉素的培养基，培养A549细胞。将细胞按50,000个细胞/孔铺种入TC处理的96孔板(Corning，目录号3997)并且接受血清饥饿18小时，之后进行KLK5攻击。将人KLK5首先在室温与KLK5抑制剂或饥饿培养基温育1小时，之后添加至平板(200nM孔内浓度)，在37℃于湿润环境中5％CO2存在下保持24小时。还向每个孔添加内毒素抑制剂(1μM)。在温育后，收集细胞上清液并立即分析或储存在-20℃。将细胞上清液在样品稀释剂(PBS/0.5％BSA/0.05％聚山梨醇酯-20/5mM EDTA/0.25％CHAPS/0.2％BGG/10ppM Proclin)中连续稀释，供在IL-8夹心ELISA中使用标准方案分析，所述标准方案以小鼠抗人IL-8单克隆抗体用于捕获(R&D Systems，目录号MAB208)和生物素酰化小鼠抗人IL-8单克隆抗体用于检测(R&DSystems，目录号BAF208)。相对于KLK5单独处理时的100％活性和相对于饥饿培养基单独处理时的0％活性，将IL-8浓度归一化，从而分析KLK5的细胞刺激活性。使用4-参数拟合，以GraphPad Prism软件确定IC50值。
KLK5和Fab表达、纯化和结晶
重组人KLK5残基I67-S293(SEQ ID NO:328)在杆状病毒表达系统中表达为遍在蛋白的C端融合物，其中肠激酶剪切位点构建在遍在蛋白和KLK5之间。共表达Sf9细胞与EndoH连同1mg/mL Kifunensine。在HiTrapTM肝素柱上纯化蛋白质。将柱用25mM TRIS pH 7.5洗涤5个CV(柱体积)，并且随后用0-750mM NaCl经20个CV的梯度洗脱。随后将所得到的蛋白质汇集物进一步在S200上在25mM Tris pH 7.5，300mM NaCl中通过SEC纯化。随后使用肠激酶切去遍在蛋白，并且将样品再次通过SEC进一步纯化。质谱和SDS PAGE揭示了纯的KLK5样品，其经证实有活性。如所述，表达和纯化包含重链和轻链的Fab片段。参见Carter等人,Biotechnology 10(2),163-167(1992)。随后将KLK5与每种Fab，即10C5、9H5和3-3F5分别混合，并且通过在25mM HEPES pH 7.2，100mM NaCl中SEC纯化复合物。3种Fab-KLK5复合物的结晶条件如下：3-3F5复合物–15％PEG 4K，0.1M MgCl2，0.1M柠檬酸钠pH 5.0；10C5复合物：20％PEG4K，0.2M硫酸铵，25％甘油；9H5复合物：15％PEG4K，10％异丙醇，0.1M HEPES pH7.5。当蛋白质复合物中的赖氨酸残基甲基化时仅获得10C5复合物和9H5复合物的晶体。参见Walter等人,Structure,14(11),1617-1622(2006)。
数据采集和结构解析
根据标准方法，在高级光源(Berkeley，CA)或高级光子源(Argonne,IL)，使用多种同步加速器X射线辐射，在100开尔文在低温冷却条件下采集X射线衍射数据。使用数据处理软件XDS处理和缩减衍射图像。参见Kabsch W,Acta Crystallogr D Biol Crystallogr,66(Pt 2),125-132(2010)。使用分子置换技术连同程序PHASER，生成模型。人TIGIT(参见Debala等人,J Mol Biol,373:1017-1031(2007))和Fab抗体模型(参见Nakamura等人,CellHost Microbe,14(1),93-103(2013))的结构用作检索模型。结构使用程序COOT进行迭代模型修正，并且使用Phenix.refine程序或BUSTER程序进行精细化。将模型精细化到可接受的R值及R-free值和Ramachandran统计量(由Molprobity计算)。可以在图18-图20和表5-表13中找到与每种Fabs，即10C5、9H5和3-3F5，复合的KLK5的晶体结构以及相互作用和表位的详情。
实施例2-抗KLK5抗体的人源化
通过用如本文上述的人KLK5免疫接种动物，获得540个单克隆抗KLK5抗体的集合。由于该集合含有具有高度可变特征的抗KLK5抗体，故针对所需特征(如，某个IC50值和对人KLK5的选择性)筛选抗体。这种筛选揭示了对人KLK5具有低亲和力、对人KLK5无选择性和/或功能活性不足的多种抗体。例如，一些获得的抗KLK5抗体是部分抑制剂，即抑制作用≤50％(例如，克隆12B3、1D10)或抑制作用≤90％(例如，克隆14C8、14E12、8E11)。一些所获得的抗KLK5抗体仅在本文所述的分析试验之一中抑制人KLK5(例如克隆9E3、10D10)。基于抗体特征，仅选出了13种抗KLK5抗体(克隆8G10、9B6、2-3F4、10C5、2B11、10H3、9H3、8B7、9H5、9F2、10C8、8F5、3-3F5)。随后选择三种具有最高抑制性活性的抗KLK5抗体(克隆9H5、10C5、3-3F5)用于人源化。
兔单克隆抗体9H5、10C5和3-3F5如下文描述那样人源化。残基编号根据Kabat等人Sequences of proteins of immunological interest,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.1991进行。
在9H5、10C5和3-3F5人源化期间构建的变体以人IgG1形式进行了评估。在各种受体构架中移植来自每种兔抗体的高变区(即，VL结构域中的位置24-34(L1)、50-56(L2)和89-97(L3)，和VH结构域中的26-35(H1)、50-65(H2)和95-102(H3))。具体而言，对于9H5，将VL CDR移植入KV1D-39*01并将VH CDR移植入HV3-53*01。对于10C5，将VL CDR移植入KV1-8*01并将VH CDR移植入HV3-64*01。对于3-3F5，将VL CDR移植入KV1-8*01并将VH CDR移植入HV3-23*01。来自兔抗体的全部VL和VH Vernier位置也被移植入其相应的人种系构架中。在Vernier位置具有全部兔氨基酸的移植物被称作L1H1(hu9H5.L1H1、hu10C5.L1H1和hu3-3F5.L1H1)(图14-图16)。
如本文上述，使用BIAcoreTMT200仪测定这节中抗体的结合亲和力。将人源化9H5、10C5和3-3F5形式L1H1(hu9H5.L1H1、hu10C5.L1H1和hu3-3F5.L1H1)抗体的结合亲和力与其嵌合亲本克隆比较。将版本L1H1抗体的兔Vernier位置转换回人类残基，以评估每个兔Vernier位置对hKLK5结合亲和力的贡献。
对于9H5，产生三条额外轻链(L2：L1+Ala43，L3：L1+Tyr49，和L4：L1+Ala43+Tyr49(CDR移植物))和十六条额外重链(H2：H1+Ala24，H3：H1+Trp47，H4：H1+Val48，H5：H1+Ser49，H6：H1+Phe67，H7：H1+Asn73，H8：H1+Leu78，H9：H1+Tyr91，H10：H1+Gln105，H11：在Vernier位置中无兔残基(CDR移植物)，H12：H1+Asp61+Ser62+Val63+Gly65，H13：CDR移植物Asp61+Ser62+Val63+Gly65，H14：CDR移植物+Tyr47+Gly49，H15：H14+Gln2，H16：H14+Asn72+Thr73+Asn74+Leu75，和H17：H14+Phe62)(图15)。基于对上述变体抗体的结合亲和力评估(数据未显示)，确定重链(H14)上的Tyr47和Gly49是关键的兔Vernier残基。嵌合9H5以1.9E-10M的KD结合，而hu9H5.L4H14以6.9E-10M的KD结合。
对于10C5，产生四种额外轻链变体L2-L5(L2：L1+Ile2，L3：L1+Ala43，L4：L1+Ile2+Ala43(CDR移植物)，L5：CDR移植物+Ser77+Pro80，L6：CDR移植物+Ser77+Pro80+Glu103+Val105+Val106)和二十七种额外重链变体H2至H28(H2：H1+Ala24，H3：H1+Tyr47，H4：H1+Val48，H5：H1+Ser49，H6：H1+Phe67，H7：H1+Asn73，H8：H1+Leu78，H9：H1+Tyr91，H10：H1+Gln105，H11：H1+Asn61+Ser62+Val63+Gly65，H12：在Vernier位置无兔残基(CDR移植物)，H13：CDR移植物+Asn61+Ser62+Val63+Gly65，H14：CDR移植物+Trp47+Gly49，H15：H14+Gln2，H16：H14+Asn72+Leu73+Asn74+Thr75，H17：H14+Phe62，H18：H14+Asn72+Thr73+Asn74+Leu75，H19：H14+Asn72，H20：H14+Asn74，H21：H14+Asn72+Asn74，H22：H14+Ile48，H23：H14+Ser67，H24：H22+Ser67，H25：H14+Thr73，H26：H14+Thr78，H27：H25+Thr78，H28：H22+Ser67+Thr73+Thr78)(图14)。基于对上述变体抗体的结合亲和力评估(数据未显示)，确定重链(H28)上的Trp47、Ile48、Gly49、Ser67、Thr73和Val78是关键的兔Vernier残基。嵌合10C5以1.65E-11M的KD结合，hu10C5.L5H28以5.70E-11M的KD结合。
对于3-3F5，产生四种额外轻链变体L2-L5(L2：L1+Ile2，L3：L1+Ala43，L4：L1+Ile2+Ala43(CDR移植物)，L5：CDR移植物+Ser77+Pro80)和二十六种额外重链变体H2至H27(H2：H1+Ala24，H3：H1+Val48，H4：H1+Ser49，H5：H1+Phe67，H6：H1+Asn73，H7：H1+Leu78，H8：H1+Tyr91，H9：H1+Arg105，H10：H1+Phe58，H11：H1+Asp61+Ser62+Val63，H12：CDR移植物+Phe58，H13：CDR移植物+Phe58+Asp61+Ser62+Val63，H14：CDR移植物+Gly49，H15：H14+Phe58，H16：H14+Gln2，H17：H14+Asn72+Thr73+Asn74+Leu75，H18：H14+Phe62，H19：H18+Val24，H20：H18+Ile48，H21：H18+Ser67，H22：H18+Ile48+Ser67，H23：H18+Thr73，H24：H18+Val78，H25：H18+Thr73+Val78，H26：H18+Il48+Ser67+Thr73+Val78，H27：CDR移植物+Ala24+Ile48+Gly49+Phe58+Phe62+Ser67，H28：H19+Phe58+Thr73+Thr78)(图16)。基于对上述变体抗体的结合亲和力评估(数据未显示)，确定重链(H28)上的Val24、Gly49、Thr73和Val78是关键的兔Vernier残基。嵌合3-3F5以<1E-12M的KD结合(KD低于仪器检测限10E-6s-1)，而hu3-3F5.L5H19以4.1E-12M的KD并且hu3-3F5.L5H25以9.1E-12M的KD结合。
如本文上述，对hu9H5.L4H14、hu10C5.L5H28、hu3-3F5.L5H19、hu3-3F5.L5H25及其嵌合对应物测试其结合人KLK5的能力。表3中显示人源化抗体的结合属性。
表3
Figure BDA0002677912730001041
实施例3-IC50值评估和抗KLK5抗体的特异性
使用荧光肽底物评估KLK5抑制剂IC50值
使用酶学分析试验，评估Spink9.SRE.Fc、mAb1108或12种选定抗体抑制人KLK5对底物Boc-VPR-AMC进行蛋白酶解的能力。在这项分析中，荧光发生性肽3-mer肽底物含有高度荧光的7-氨基4-甲基香豆素(AMC)基团，其可以通过共振能量转移至叔丁氧羰基(Boc)被猝灭。人KLK5对肽底物的剪切产生增加的荧光信号，并且对KLK5的抑制或其不存在将导致荧光信号猝灭。结果表述为最大KLK5活性百分数(％对照)。图1中显示一式两份重复的单个实验轮次的结果。Spink9.SRE.Fc的计算IC50值(图1A)是1.23nM并且12种选定抗体的IC50值范围(图1C-N)是0.89至1.32nM。Spink0.SRE.Fc以及全部12种选定抗体充分抑制KLK5活性，尽管mAb1108(图1B)仅展示约20％的KLK5活性抑制作用。图11中展示来自曲线拟合的IC50值(列1)。
使用偶联大分子底物活性评估KLK5抑制剂IC50值
如图1中展示，Spink9.SRE.Fc以及鉴定的12种抗KLK5抗体是KLK5活性的强力抑制剂，如使用基于肽的底物所监测的。为了进一步评估这些抑制剂的抑制性质，利用大分子底物pro-KLK7(图2)和pro-KLK1(图3)与KLK特异性荧光肽底物组合，开发了两种分析试验。
在图2中，使用偶联酶学分析试验，评估了Spink9.SRE.Fc、mAb1108或12种选定的抗KLK5抗体抑制KLK5介导的pro-KLK7活化的能力。在这项分析中，将人KLK5与人pro-KLK7温育，导致剪切、释放KLK7的前原结构域(pro-domain)和KLK7活化。活化的人KLK7可以蛋白酶解KLK7特异性底物Suc-LLVY-AMC，导致增加的荧光信号。人KLK5对pro-KLK7的剪切产生活性KLK7和增加的荧光信号，而对KLK5的抑制或其不存在则导致荧光信号猝灭。结果表述为人KLK5最大活性的百分数(％对照)。图2中显示一式两份重复的单个实验轮次的结果。
类似于使用基于肽的底物的数据(图1)，Spink9.SRE.Fc(图2A)是KLK5活化pro-KLK7的强力抑制剂，IC50值为2.07nM。此外，mAb1108(图2B)具有1.21nM的IC50值，而12种选定的抗KLK5抗体的IC50值范围(图2C-N)是0.58至1.53nM。在KLK5 pro-KLK7偶联分析中，全部抑制剂，Spink9.SRE.Fc以及抗体，均充分地抑制KLK5活性。图11中展示来自曲线拟合的IC50值(列2)。
在图3中，使用偶联酶学分析试验，评估了Spink9.SRE.Fc、mAb1108或12种选定的抗KLK5抗体抑制KLK5介导的pro-KLK1活化的能力。在这项分析中，将人KLK5与人pro-KLK1温育，导致剪切、释放KLK1的前原结构域和KLK1活化。活化的人KLK1可以蛋白酶解KLK1特异性底物PFR-AMC，导致增加的荧光信号。人KLK5对pro-KLK1的剪切产生活性KLK1和增加的荧光信号，而对KLK5的抑制或其不存在则导致荧光信号猝灭。结果表述为人KLK5最大活性的百分数(％对照)。图3中显示一式两份重复的单个实验轮次的结果。Spink9.SRE.Fc的IC50值(图3A)是0.325nM并且12种选定的抗KLK5抗体的IC50范围(图2C-N)是0.074至0.151nM。Spink0.SRE.Fc以及全部12种选定的抗KLK5抗体充分地抑制KLK5活性，尽管mAb1108(图1B)仅展示约40％的KLK5活性抑制作用。图11中展示来自曲线拟合的IC50值(列3)。
通过LC/MS检测KLK5衍生的剪切肽用于IC50值测定
使用LC/MS分析试验监测KLK5衍生的剪切产物肽，评估Spink9.SRE.Fc、mAb1108或12种选定的抗KLK5抗体抑制重组KLK5蛋白酶解pro-KLK7或pro-KLK1的能力。对于两项试验，人KLK5对前原肽KLK7或KLK1的剪切产生特异性MS信号并且抑制KLK5活性导致可度量的肽信号下降。图4中显示针对pro-KLK7的单个实验的结果并且它们表述为前原肽KLK7的面积。Spink9.SRE.Fc的计算IC50值(图4A)是1.13nM，对于MAb1108(图4B)而言为1.86nM，并且12种选定的抗KLK5抗体的IC50值范围(图4C-N)是0.31至1.72nM。Spink9.SRE.Fc以及全部12种选定的抗KLK5抗体充分抑制KLK5活性，并且mAb1108(图4B)展示约80％的KLK5活性抑制作用。图11中展示来自曲线拟合的IC50值(列4)。图5显示针对pro-KLK1的三次实验的结果并且它们表述为前原肽KLK1的面积。Spink9.SRE.Fc的IC50值(图5A)是0.58nM，对于MAb1108(图5B)而言为0.34nM，并且12种选定的抗KLK5抗体的IC50值范围(图5C-N)是0.08至0.48nM。Spink9.SRE.Fc以及全部12种选定的抗KLK5抗体充分抑制KLK5活性，尽管mAb1108(图5B)展示约40％的KLK5活性抑制作用。图11中展示来自曲线拟合的IC50值(列5)。
KLK5抗体的特异性
为了评估图1-图5中表征的抗KLK5抗体的特异性，针对激活的人KLK7(图6)、人KLK1(图7)、人KLK4(图8)和胰蛋白酶(图9)分析了12个抗KLK5抗体，依据对特异性荧光肽底物的剪切来监测。由于这12种抗KLK5抗体被生成以选择性与KLK5相互作用，预计这些分子不应当抑制其他KLK(图6-图9)或胰蛋白酶(图9)。
在图6中，使用酶学分析试验，评估Spink9.SRE.Fc、mAb1108或12种选定的抗KLK5抗体抑制人KLK7对底物Suc-LLVY-AMC进行蛋白酶解的能力。人KLK7对肽底物的剪切产生增加的荧光信号，对KLK7的抑制或其不存在则导致荧光信号猝灭。结果表述为KLK7最大活性的百分数(％对照)。图6中显示重复的单个实验轮次的结果。直至100nM，Spink9.SRE.Fc(图6A)和mAb1108(图6B)不抑制KLK7。如图6中所见，直至100nM，12种选定的抗KLK5抗体(图6C-N)也不抑制KLK7活性。图11中展示来自曲线拟合的IC50值(列6)。
在图7中，使用酶学分析试验，评估Spink9.SRE.Fc、mAb1108或12种选定的抗KLK5抗体抑制人KLK1对底物PFR-AMC进行蛋白酶解的能力。人KLK1对肽底物的剪切产生增加的荧光信号，对KLK1的抑制或其不存在则导致荧光信号猝灭。结果表述为KLK1最大活性的百分数(％对照)。图7中显示重复的单个实验轮次的结果。直至100nM，Spink9.SRE.Fc(图7A)和mAb1108(图7B)不抑制KLK1。如图7中所见，直至100nM，12种选定的抗KLK5抗体(图7C-N)也不抑制KLK1活性。图11中展示来自曲线拟合的IC50值(列7)。
在图8中，使用酶学分析试验，评估Spink9.SRE.Fc、mAb1108或12种选定的抗KLK5抗体抑制人KLK4对底物Boc-VPR-AMC进行蛋白酶解的能力。人KLK4对肽底物的剪切产生增加的荧光信号，对KLK4的抑制或其不存在则导致荧光信号猝灭。结果表述为最大KLK4活性的百分数(％对照)。图8中显示重复的单个实验轮次的结果。直至100nM，Spink9.SRE.Fc(图8A)和mAb1108(图8B)不抑制KLK4。如图8中所见，直至100nM，12种选定的抗KLK5抗体(图8C-N)也不抑制KLK4活性。图11中展示来自曲线拟合的IC50值(列8)。
在图9中，使用酶学分析试验，评估Spink9.SRE.Fc、mAb1108或12种选定抗体抑制牛胰蛋白酶对底物Boc-VPR-AMC进行蛋白酶解的能力。胰蛋白酶对肽底物的剪切产生增加的荧光信号，对胰蛋白酶的抑制或其不存在则导致荧光信号猝灭。结果表述为最大胰蛋白酶活性的百分数(％对照)。图9中显示重复的单个实验轮次的结果。直至100nM，Spink9.SRE.Fc(图9A)和mAb1108(图9B)不抑制胰蛋白酶。如图9中所见，直至100nM，12种选定抗体(图9C-N)也不抑制胰蛋白酶活性。图11中展示来自曲线拟合的IC50值(列9)。
综上，这些使用KLK7(图6和表6)、KLK1(图7和表7)、KLK4(图8和表8)和胰蛋白酶(图9和表9)的研究显示，Spink9.SRE.Fc、mAb1108或12种选定抗体与KLK5特异性相互作用并仅抑制其活性。
依据Kiapp对抗体排序
在直接分析试验(图1)或偶联分析试验(图2-图5)中表征12种选定抗体时，观察到选定的抗体对KLK5具有与Spink9.SRE.Fc相似或更大的抑制性功效。但是，几种抗体在每种分析中都具有相似IC50值(表1-表5)，这使得难以对这些抗体的功效进行排序。
在图10中，使用酶学分析试验，评估Spink9.SRE.Fc、mAb1108或12种选定抗体抑制人KLK5在多种浓度对底物z-VPR-pNA进行蛋白酶解的能力。在这项分析中，生色性3-mer肽底物含有被末端氨基酸猝灭的对硝基苯胺(pNA)基团。人KLK5对生色性肽底物的剪切产生增加的405nm吸光度，对KLK5的抑制或其不存在则导致低的405nm吸光度。结果表述为最大KLK5活性的百分数(％对照)。
测定在多种KLK5浓度时Spink9.SRE.Fc的IC50值(图10A)并且将其作为KLK5浓度的函数作图(图10B)，其中Kiapp值作为y-截距测定。从这项分析中，Spink9.SRE.Fc的Kiapp值是1.28nM。还对mAb1108(图10C-D)以及12种选定抗体(图10E-AB)进行这项分析，其中mAb1108具有Kiapp值1.53nM，所述12种选定抗体具有小于0.01nM至6.35nM的Kiapp值范围。图11(列10)中展示来自这项分析的Kiapp值。
实施例4-采用Wasatch的动力学分析和表位分拣(Epitope binning)
表4中显示最强力抗体亚组的针对人KLK5的表位分拣结果和解离速率。观察到对小鼠和食蟹猴KLK5的可变结合水平。重要地，未观察到与人KLK1、人KLK4或人KLK7结合，从而证实这些抗体有特异性。大多数克隆(8E11和8G10例外)与SPINK9竞争结合人KLK5，表明它们与SPINK9结合相同表位(即，活性部位)，或变构改变人KLK5从而使得SPINK9不能再结合。
表4
Figure BDA0002677912730001081
Figure BDA0002677912730001091
实施例5-借助氢交换质谱法的表位作图
如本文中完成的氢交换测量法测量结合于主链酰胺残基的质子与结合于溶剂分子的质子的交换。当氕化(1H)样品稀释入氘化溶剂时，可以通过质谱法测量质子和氘核之间的质量差异。依赖氘化溶剂(2H2O)中一系列渐增的温育时间，可以测量交换速率。以这种方式，经过三个独立实验测量了与三种抗KLK5抗体(10C5、10H3和9H5)之一复合的KLK5(SEQID NO:353)，并且随后与在单独KLK5上进行实验获得的结果比较。随后进行质量差异的示差分析，并且重叠肽用来缩小范围到在全部三种抗KLK5抗体(10C5、10H3和9H5)之间共有的共同热动力表位上(图12A)。术语“热动力表位”，指蛋白质的那些部分，其主链结构动力学或解折叠过程的局部自由能响应于特定结合事件(如，被抗体结合)而发生改变。结构性表位可以包含于热动力表位内部。
数据的解释使用N-2规则，其中每种肽不能在前两个位点上携带氘(原因在于回复交换)。此外，当存在许多独特的重叠肽时，该信息可以用来缩小范围到每种肽内部那些受影响的残基上。经鉴定其间包含共同热动力表位的KLK5四个序列区域是：LRPNQL(图12B，区域1)、QGVKSI(图12B，区域2)、KRCEDAYPRQIDDT(图12B、区域3)和DYPCARPNRPGVY(图12B、区域4)，在所有三种受检抗体之间共同的一个结构性表位包含于这些区域中。
虽然已经出于清晰理解的目的，以举例说明和实例方式某种程度地详细描述前述发明，但是这些说明和例子不应当解释为限制本发明的范围。本文中引用的全部专利和科学文献的公开内容通过引用方式明确地完整并入。
实施例6–在基于细胞的IL-8分泌分析试验中评估KLK5抑制剂IC50值
KLK5刺激A549细胞分泌IL-8。在基于A549细胞的IL-8分泌分析试验中评估Spink5.Fc、Spink9.SRE.Fc、或人源化抗KLK5抗体3-3F5、9H5或10C5抑制KLK5诱导的IL-8分泌的能力。在这个分析中，血清饥饿的A549细胞经200nM KLK5(单独KLK5或与抑制剂预温育1小时的KLK5)刺激24小时。用夹心ELISA测量IL-8浓度并且测定抑制剂的IC50。结果表述为最大KLK5活性的百分数，并且图17中显示至少三个独立实验的均数±标准差。全部抑制剂均充分抑制KLK5诱导的IL-8分泌，达到单独缓冲液(饥饿培养基)的5％水平范围内，这属于分析试验误差范围内。全部抑制剂均显示了强力抑制KLK5诱导的IL-8分泌，并且至少三个独立实验的平均IC50如下：Spink5.Fc(21nM)；10C5(28nM)；9H5(15nM)；3-3F5(1.2nM)。当KLK5与360nM Spink9.SRE.Fc温育时观察到的残留活性是2％(数据未显示)。
实施例7–与人KLK5结合的10C5、9H5和3-3F5的结构
对于本文所述的晶体结构实验，使用人KLK5残基I67-S293(SEQ ID NO:328)。实施例7中所用且如相应的图18-图20和表5-表13中所示的人KLK5的氨基酸残基编号，基于蛋白酶的标准编号。参见Debela等人,J Mol Biol,373,1017-1031(2007)。实施例7中所用且如相应的图18-图20和表5-表13中所示的Fab片段的氨基酸残基编号，基于Kabat。
与人KLK5结合的10C5的结构
10C5 Fab/KLK5复合物结构显示，10C5与KLK5结合导致了构象变化，所述构象变化变构地导致破坏KLK5的底物结合位点以及活性部位，包括催化三联体，使得该蛋白酶不能结合底物并丧失活性。KLK5中被10C5 fab识别的最明显元件是涵盖残基163-174A的螺旋。紧随螺旋之后由残基173-174A构成的环/转角因抗体结合作用向上翻转，这导致与220s环以及90s环(标准蛋白酶Convention)中的残基发生空间冲突，所述环对于切割肽的活性部位中的底物结合以及催化三联体的定位是重要的(图18A)。
在KLK5和10C5 Fab之间被掩埋的表面区域是约
Figure BDA0002677912730001101
在10C5 fab轻链中，CDR-L1残基Q24-S34接触KLK5中的残基S131、A132、S164和R167；来自CDR-L2的Y50接触KLK5中的R167；CDR-L3接触KLK5中的A132、L163、S164、Q165、K166、E169、I176、D177和D178。在10C5重链中，CDRH1残基S31-T35仅接触KLK5中的D170；CDRH2残基Y50-A63接触KLK5中的残基K166、E169、D170、A171、Y172、P173、R174、Q174A和I176；在CDRH3中，E95-Y100c接触KLK5中的残基S164、K166、R167和D170(表5-表7、图18B)。
分别在SEQ ID NO:322和SEQ ID NO:323中描述了用于与人KLK5结晶的10C5 FabHC和LC的序列。
表5
Figure BDA0002677912730001111
表6
Figure BDA0002677912730001112
表7
Figure BDA0002677912730001113
与人KLK5结合的9H5的结构
9H5 Fab/KLK5复合物结构显示，类似于10C5 fab，9H5与KLK5结合导致构象变化，所述构象变化导致变构破坏KLK5的底物结合位点以及活性部位，包括催化三联体，使得该蛋白酶不能结合底物并丧失活性。KLK5中被9H5 fab识别的最明显元件是涵盖残基163-174A的螺旋。紧随螺旋之后由残基173-174A构成的环/转角因抗体结合作用向上翻转，这导致与220s环以及90s环(标准蛋白酶Convention)中的残基发生空间冲突，所述环对于切割肽的活性部位中的底物结合以及催化三联体定位重要。总体而言，与10C5结合KLK5相比，KLK5蛋白的更多部分在9H5:KLK5复合物晶体结构中被扰乱，并且可能是Fab结合和所引起的构象变化的直接结果(图19A)。
在KLK5和9H5 Fab之间的被掩埋的表面区域是约
Figure BDA0002677912730001122
在9H5轻链中，CDRL1残基Q24-S34接触KLK5中的残基S131、A132、G133、L163、S164、R167；在CDRL2中，残基S50-S56不接触KLK5中的任何残基；在CDRL3中，残基H89-T97接触KLK5中的残基A132、S164、Q165、K166、E169、Q174A、I176和D177。在9H5重链中，CDRH1残基S31-S35不接触KLK5；在CDRH2中，残基F50-A63接触KLK5中的残基K166、E169、D170、Y172、P173、R174、Q174A和I176；在CDRH3中，残基D95-I102接触KLK5中的残基K166、R167和D170(表8-表10、图19B)。
分别在SEQ ID NO:324和SEQ ID NO:325中描述了用于与人KLK5结晶的9H5 FabHC和LC的序列。
表8
Figure BDA0002677912730001121
表9
Figure BDA0002677912730001131
表10
Figure BDA0002677912730001132
与人KLK5结合的3F5.5 Fab的结构
3-3F5 Fab/KLK5复合物结构显示，3-3F5与KLK5结合导致轻微构象变化，尽管不如在与KLK5复合的10C5或9H5中所观察到那样明显。底物识别袋被改变，其中，KLK5中的Asp189(其形成盐桥并因而识别蛋白酶解之前带正电荷的P1-残基(Arg/Lys))变得无序。KLK5中的催化三联体似乎完好，不过fab结合作用使得催化袋更开放，导致KLK5丧失催化活性。140s环和70s环在晶体结构中被扰乱(图20A)。
在KLK5和3F5.5 Fab之间的被掩埋的表面区域是约
Figure BDA0002677912730001133
在3-3F5轻链中，CDRL1残基Q24-A34接触KLK5中的S131、A132和G133；在CDRL2中，残基D50-S56不接触KLK5中的任何残基；在CDRL3中，残基Q89-I97接触KLK5中的残基S164、Q165、K166和E169。在3F5.5重链中，CDRH1残基D31-E46根本不与KLK5相互作用，CDRH2也是如此；在CDRH3中，残基D95-G100i接触KLK5中的残基L163、S164、K166、R167、D170、G184、D185、K186、A187、N224、R225和P225(表11-表13、图20B)。
分别在SEQ ID NO:326和SEQ ID NO:327中描述了用于与人KLK5结晶的3-3F5 FabHC和LC的序列。
表11
Figure BDA0002677912730001141
表12
Figure BDA0002677912730001142
表13
Figure BDA0002677912730001143
序列表
Figure BDA0002677912730001151
Figure BDA0002677912730001161
Figure BDA0002677912730001171
Figure BDA0002677912730001181
Figure BDA0002677912730001191
Figure BDA0002677912730001201
Figure BDA0002677912730001211
Figure BDA0002677912730001221
Figure BDA0002677912730001231
Figure BDA0002677912730001241
Figure BDA0002677912730001251
Figure BDA0002677912730001261
Figure BDA0002677912730001271
Figure BDA0002677912730001281
Figure BDA0002677912730001291
Figure BDA0002677912730001301
Figure BDA0002677912730001311
Figure BDA0002677912730001321
Figure BDA0002677912730001331
Figure BDA0002677912730001341
Figure BDA0002677912730001351
Figure BDA0002677912730001361
Figure BDA0002677912730001371
Figure BDA0002677912730001381
Figure BDA0002677912730001391
Figure BDA0002677912730001401
Figure BDA0002677912730001411
Figure BDA0002677912730001421
Figure IDA0002677912780000011
Figure IDA0002677912780000021
Figure IDA0002677912780000031
Figure IDA0002677912780000041
Figure IDA0002677912780000051
Figure IDA0002677912780000061
Figure IDA0002677912780000071
Figure IDA0002677912780000081
Figure IDA0002677912780000091
Figure IDA0002677912780000101
Figure IDA0002677912780000111
Figure IDA0002677912780000121
Figure IDA0002677912780000131
Figure IDA0002677912780000141
Figure IDA0002677912780000151
Figure IDA0002677912780000161
Figure IDA0002677912780000171
Figure IDA0002677912780000181
Figure IDA0002677912780000191
Figure IDA0002677912780000201
Figure IDA0002677912780000211
Figure IDA0002677912780000221
Figure IDA0002677912780000231
Figure IDA0002677912780000241
Figure IDA0002677912780000251
Figure IDA0002677912780000261
Figure IDA0002677912780000271
Figure IDA0002677912780000281
Figure IDA0002677912780000291
Figure IDA0002677912780000301
Figure IDA0002677912780000311
Figure IDA0002677912780000321
Figure IDA0002677912780000331
Figure IDA0002677912780000341
Figure IDA0002677912780000351
Figure IDA0002677912780000361
Figure IDA0002677912780000371
Figure IDA0002677912780000381
Figure IDA0002677912780000391
Figure IDA0002677912780000401
Figure IDA0002677912780000411
Figure IDA0002677912780000421
Figure IDA0002677912780000431
Figure IDA0002677912780000441
Figure IDA0002677912780000451
Figure IDA0002677912780000461
Figure IDA0002677912780000471
Figure IDA0002677912780000481
Figure IDA0002677912780000491
Figure IDA0002677912780000501
Figure IDA0002677912780000511
Figure IDA0002677912780000521
Figure IDA0002677912780000531
Figure IDA0002677912780000541
Figure IDA0002677912780000551
Figure IDA0002677912780000561
Figure IDA0002677912780000571
Figure IDA0002677912780000581
Figure IDA0002677912780000591
Figure IDA0002677912780000601
Figure IDA0002677912780000611
Figure IDA0002677912780000621
Figure IDA0002677912780000631
Figure IDA0002677912780000641
Figure IDA0002677912780000651
Figure IDA0002677912780000661
Figure IDA0002677912780000671
Figure IDA0002677912780000681
Figure IDA0002677912780000691
Figure IDA0002677912780000701
Figure IDA0002677912780000711
Figure IDA0002677912780000721
Figure IDA0002677912780000731
Figure IDA0002677912780000741
Figure IDA0002677912780000751
Figure IDA0002677912780000761
Figure IDA0002677912780000771
Figure IDA0002677912780000781
Figure IDA0002677912780000791
Figure IDA0002677912780000801
Figure IDA0002677912780000811
Figure IDA0002677912780000821
Figure IDA0002677912780000831
Figure IDA0002677912780000841
Figure IDA0002677912780000851
Figure IDA0002677912780000861
Figure IDA0002677912780000871
Figure IDA0002677912780000881
Figure IDA0002677912780000891
Figure IDA0002677912780000901
Figure IDA0002677912780000911
Figure IDA0002677912780000921
Figure IDA0002677912780000931
Figure IDA0002677912780000941
Figure IDA0002677912780000951
Figure IDA0002677912780000961
Figure IDA0002677912780000971
Figure IDA0002677912780000981
Figure IDA0002677912780000991
Figure IDA0002677912780001001
Figure IDA0002677912780001011
Figure IDA0002677912780001021
Figure IDA0002677912780001031
Figure IDA0002677912780001041
Figure IDA0002677912780001051
Figure IDA0002677912780001061
Figure IDA0002677912780001071
Figure IDA0002677912780001081
Figure IDA0002677912780001091
Figure IDA0002677912780001101
Figure IDA0002677912780001111
Figure IDA0002677912780001121
Figure IDA0002677912780001131
Figure IDA0002677912780001141
Figure IDA0002677912780001151
Figure IDA0002677912780001161
Figure IDA0002677912780001171
Figure IDA0002677912780001181
Figure IDA0002677912780001191
Figure IDA0002677912780001201
Figure IDA0002677912780001211
Figure IDA0002677912780001221
Figure IDA0002677912780001231
Figure IDA0002677912780001241
Figure IDA0002677912780001251
Figure IDA0002677912780001261
Figure IDA0002677912780001271
Figure IDA0002677912780001281
Figure IDA0002677912780001291
Figure IDA0002677912780001301
Figure IDA0002677912780001311
Figure IDA0002677912780001321
Figure IDA0002677912780001331
Figure IDA0002677912780001341

Claims (43)

1.一种与KLK5结合的分离的抗体，其中抗体包含：
(a)包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含选自SEQ ID NO:38、SEQ IDNO:45和SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含选自SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:69和SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:96的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:109的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:127的氨基酸序列的HVR-L3。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中抗体包含：
(a)包含选自SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含选自SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含选自SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:69和SEQID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含选自SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:87和SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含选自SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含选自SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:119和SEQ ID NO:122的氨基酸序列的HVR-L3。
3.根据权利要求1或2中任一项所述的抗体，其中抗体包含：
(i)(a)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列的HVR-L3；
(ii)(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列的HVR-L3；或
(iii)(a)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列的HVR-L3。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体，其中抗体包含a)SEQ ID NO:202的VH序列和SEQ ID NO:140的VL序列；b)SEQ ID NO:225的VH序列和SEQ ID NO:151的VL序列；或c)SEQID NO:257的VH序列和SEQ ID NO:162的VL序列。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的抗体，其中抗体包含a)SEQ ID NO:201的VH序列和SEQ ID NO:139的VL序列；b)SEQ ID NO:221的VH序列和SEQ ID NO:149的VL序列；或c)SEQID NO:248或SEQ ID NO:254的VH序列和SEQ ID NO:160的VL序列。
6.与KLK5结合的分离的抗体，其中抗体包含a)与SEQ ID NO:201的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:139的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；b)与SEQ ID NO:221的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ IDNO:149的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；或c)与SEQ ID NO:248或SEQ IDNO:254的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:160的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列。
7.一种与KLK5结合的分离的抗体，其中抗体包含：
(i)(a)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列的HVR-L3；
(ii)(a)包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列的HVR-L3；
(iii)(a)包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列的HVR-L3；
(iv)(a)包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列的HVR-L3；
(v)(a)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列的HVR-L3；
(vi)(a)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3；
(vii)(a)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3；
(viii)(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列的HVR-L3；
(ix)(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的HVR-L3；或
(x)(a)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:121的氨基酸序列的HVR-L3。
8.根据权利要求7所述的抗体，其中抗体包含选自SEQ ID NO:170、SEQ ID NO:171、SEQID NO:172、SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:226、SEQ ID NO:227和SEQ ID NO:228的VH序列，和选自SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ IDNO:152、SEQ ID NO:153和SEQ ID NO:154的VL序列。
9.根据权利要求7或8中任一项所述的抗体，其中抗体包含(a)SEQ ID NO:170的VH序列和SEQ ID NO:131的VL序列；(b)SEQ ID NO:171的VH序列和SEQ ID NO:132的VL序列；(c)SEQ ID NO:172的VH序列和SEQ ID NO:133的VL序列；(d)SEQ ID NO:203的VH序列和SEQ IDNO:141的VL序列；(e)SEQ ID NO:204的VH序列和SEQ ID NO:142的VL序列；(f)SEQ ID NO:205的VH序列和SEQ ID NO:143的VL序列；(g)SEQ ID NO:206的VH序列和SEQ ID NO:144的VL序列；(h)SEQ ID NO:226的VH序列和SEQ ID NO:152的VL序列；(i)SEQ ID NO:227的VH序列和SEQ ID NO:153的VL序列；或(j)SEQ ID NO:228的VH序列和SEQ ID NO:154的VL序列。
10.与KLK5结合的分离的抗体，其中抗体包含(a)与SEQ ID NO:170的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:131的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；(b)与SEQ ID NO:171的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQID NO:132的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；(c)与SEQ ID NO:172的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:133的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；(d)与SEQ ID NO:203的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:141的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；(e)与SEQ ID NO:204的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:142的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；(f)与SEQ ID NO:205的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:143的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；(g)与SEQ ID NO:206的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:144的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；(h)与SEQ ID NO:226的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:152的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；(i)与SEQ ID NO:227的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ IDNO:153的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；或(j)与SEQ ID NO:228的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:154的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的抗体，其中抗体是IgG1或IgG4。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的抗体，其中抗体抑制KLK5的生物学活性至少50％，如通过选自重组KLK5直接活性分析，偶联pro-KLK1荧光肽分析、偶联pro-KLK7荧光肽分析、pro-KLK1 LC/MS分析、pro-KLK7 LC/MS分析和Ki(app)分析的一种或多种方法所测量。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的抗体，其中生物学活性是KLK5的丝氨酸蛋白酶活性。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的抗体，其中抗体是单克隆抗体。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的抗体，其中抗体是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的抗体，其中抗体是结合KLK5的抗体片段。
17.与KLK5结合时导致热动力表位的抗体，其中，如通过氢交换质谱法所测量，所述热动力表位包含选自以下序列中的一者或多者：SEQ ID NO:316、SEQ ID NO:317、SEQ ID NO:318和SEQ ID NO:319。
18.与根据权利要求1-16中任一项所述的抗体竞争结合的抗体。
19.与根据权利要求1-16中任一项所述的抗体结合相同表位的抗体。
20.分离的核酸，编码根据权利要求1-16中任一项所述的抗体。
21.宿主细胞，包含根据权利要求20所述的核酸。
22.产生抗体的方法，包括培养根据权利要求21所述的宿主细胞，从而产生抗体。
23.免疫缀合物，包含根据权利要求1-16中任一项所述的抗体。
24.药物制剂，包含根据权利要求1-16中任一项所述的抗体和可药用载体。
25.根据权利要求1-16中任一项所述的抗体用作药物。
26.根据权利要求1-16中任一项所述的抗体用于治疗选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸粒细胞性食管炎和酒渣鼻的疾病。
27.根据权利要求26所述的抗体，其中哮喘选自特应性哮喘、变应性哮喘、非变应性哮喘、锻炼所致哮喘、阿司匹林敏感/加重性哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未经皮质类固醇治疗的哮喘、慢性哮喘、皮质类固醇耐药性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断且未治疗过的哮喘、因吸烟所致的哮喘、皮质类固醇无法控制的哮喘、辅助T细胞淋巴细胞2型(Th2)或高2型(Th2)、或2型(T2)驱动的哮喘、嗜酸粒细胞性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性粒细胞性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驱动的哮喘、低骨膜蛋白性哮喘和低嗜酸性粒细胞性哮喘。
28.根据权利要求27所述的抗体，其中哮喘是低TH2性哮喘。
29.根据权利要求1-16中任一项所述的抗体用于抑制KLK5的生物学活性。
30.根据权利要求1-16中任一项所述的抗体的用途，用于制造药物。
31.根据权利要求30所述的用途，其中药物用于治疗选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸粒细胞性食管炎和酒渣鼻的疾病。
32.根据权利要求31所述的用途，其中哮喘选自特应性哮喘、变应性哮喘、非变应性哮喘、锻炼所致哮喘、阿司匹林敏感/加重性哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未经皮质类固醇治疗的哮喘、慢性哮喘、皮质类固醇耐药性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断且未治疗过的哮喘、因吸烟所致的哮喘、皮质类固醇无法控制的哮喘、辅助T细胞淋巴细胞2型(Th2)或高2型(Th2)、或2型(T2)驱动的哮喘、嗜酸粒细胞性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性粒细胞性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驱动的哮喘、低骨膜蛋白性哮喘和低嗜酸性粒细胞性哮喘。
33.根据权利要求32所述的用途，其中哮喘是低TH2性哮喘。
34.根据权利要求1-16中任一项所述的抗体用途，用于制造抑制KLK5的生物学活性的药物。
35.治疗患有疾病的个体的方法，其中疾病选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸粒细胞性食管炎和酒渣鼻，所述方法包括向个体施用有效量的根据权利要求1-16中任一项所述的抗体。
36.根据权利要求35所述的方法，其中哮喘选自特应性哮喘、变应性哮喘、非变应性哮喘、锻炼所致哮喘、阿司匹林敏感/加重性哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未经皮质类固醇治疗的哮喘、慢性哮喘、皮质类固醇耐药性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断且未治疗过的哮喘、因吸烟所致的哮喘、皮质类固醇无法控制的哮喘、辅助T细胞淋巴细胞2型(Th2)或高2型(Th2)、或2型(T2)驱动的哮喘、嗜酸粒细胞性哮喘、高骨膜蛋白性哮喘、高嗜酸性粒细胞性哮喘、低Th2性哮喘或非Th2驱动的哮喘、低骨膜蛋白性哮喘和低嗜酸性粒细胞性哮喘。
37.根据权利要求36所述的方法，其中哮喘是低Th2性哮喘。
38.抑制个体中KLK5的生物学活性的方法，包含向个体施用有效量的根据权利要求1-16中任一项所述的抗体，以抑制KLK5的生物学活性。
39.与人KLK5特异性结合的抗体，其中抗体与人KLK5上的表位结合，根据标准蛋白酶编号，所述表位包含一个或多个选自Pro130、Ser131、Ala132、Gly133、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177、Asp178、Gly184、Asp185、Lys186、Ala186A、Arg188、Asn223、Arg224、Pro225和Lys233的氨基酸残基。
40.根据权利要求39所述的抗体，其中抗体与人KLK5上的表位结合，根据标准蛋白酶编号，所述表位包含一个或多个选自Pro130、Ser131、Ala132、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177、Asp178、Arg224和Lys233的氨基酸残基。
41.根据权利要求39所述的抗体，其中抗体与人KLK5上的表位结合，根据标准蛋白酶编号，所述表位包含一个或多个选自Pro130、Ser131、Ala132、Gly133、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177和Lys233的氨基酸残基。
42.根据权利要求39所述的抗体，其中抗体与人KLK5上的表位结合，根据标准蛋白酶编号，所述表位包含一个或多个选自Ser131、Ala132、Gly133、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Pro173、Arg174、Gly184、Asp185、Lys186、Ala186A、Arg188、Asn223、Arg224和Pro225的氨基酸残基。
43.与人KLK5结合时导致人KLK5构象变化的抗体，其中构象变化变构地导致人KLK5的底物结合位点和/或活性部位破坏。
CN201980018872.1A 2018-03-14 2019-03-14 抗klk5抗体和使用方法 Pending CN111868241A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862643034P 2018-03-14 2018-03-14
US62/643,034 2018-03-14
PCT/US2019/022192 WO2019178316A1 (en) 2018-03-14 2019-03-14 Anti-klk5 antibodies and methods of use

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111868241A true CN111868241A (zh) 2020-10-30

Family

ID=66175479

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201980018872.1A Pending CN111868241A (zh) 2018-03-14 2019-03-14 抗klk5抗体和使用方法

Country Status (20)

Country Link
US (1) US20200040103A1 (zh)
EP (1) EP3765606A1 (zh)
JP (2) JP7422671B2 (zh)
KR (1) KR20200130823A (zh)
CN (1) CN111868241A (zh)
AR (1) AR114281A1 (zh)
AU (1) AU2019235881A1 (zh)
BR (1) BR112020018571A2 (zh)
CA (1) CA3091836A1 (zh)
CL (1) CL2020002333A1 (zh)
CR (1) CR20200404A (zh)
IL (1) IL277212A (zh)
MA (1) MA52014A (zh)
MX (1) MX2020009465A (zh)
PE (1) PE20210629A1 (zh)
PH (1) PH12020551336A1 (zh)
RU (1) RU2020133229A (zh)
SG (1) SG11202008049XA (zh)
TW (1) TW201946935A (zh)
WO (1) WO2019178316A1 (zh)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2020349509A1 (en) 2019-09-18 2022-03-31 Genentech, Inc. Anti-KLK7 antibodies, anti-KLK5 antibodies, multispecific anti-KLK5/KLK7 antibodies, and methods of use
GB202001447D0 (en) * 2020-02-03 2020-03-18 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
EP4263611A1 (en) * 2020-12-18 2023-10-25 Bioardis LLC Cea6 binding molecules and uses thereof
WO2022192647A1 (en) 2021-03-12 2022-09-15 Genentech, Inc. Anti-klk7 antibodies, anti-klk5 antibodies, multispecific anti-klk5/klk7 antibodies, and methods of use
WO2023158431A1 (en) * 2022-02-18 2023-08-24 Adlai Nortye Usa Inc. Anti-tnfr2 antibody and application thereof
WO2024091870A2 (en) * 2022-10-24 2024-05-02 Phanes Therapeutics, Inc. Anti-egfrviii antibodies and uses thereof

Family Cites Families (96)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
JP2919890B2 (ja) 1988-11-11 1999-07-19 メディカル リサーチ カウンスル 単一ドメインリガンド、そのリガンドからなる受容体、その製造方法、ならびにそのリガンドおよび受容体の使用
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
CA2405246A1 (en) 1990-12-03 1992-06-11 Genentech, Inc. Enrichment method for variant proteins with alterred binding properties
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
CA2103059C (en) 1991-06-14 2005-03-22 Paul J. Carter Method for making humanized antibodies
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
CA2116774C (en) 1991-09-19 2003-11-11 Paul J. Carter Expression in e. coli antibody fragments having at least a cysteine present as a free thiol. use for the production of bifunctional f(ab') 2 antibodies
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
CA2129663C (en) 1992-02-06 2005-07-05 James S. Huston Biosynthetic binding protein for cancer marker
NZ258392A (en) 1992-11-13 1997-09-22 Idec Pharma Corp Chimeric and radiolabelled antibodies to the b lymphocyte cellsurface antigen bp35 (cd-20) and their use in the treatment of b cell lymphona
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
AU691811B2 (en) 1993-06-16 1998-05-28 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
DE69830315T2 (de) 1997-06-24 2006-02-02 Genentech Inc., San Francisco Galactosylierte glykoproteine enthaltende zusammensetzungen und verfahren zur deren herstellung
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
WO1999022764A1 (en) 1997-10-31 1999-05-14 Genentech, Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
DK1034298T3 (da) 1997-12-05 2012-01-30 Scripps Research Inst Humanisering af murint antistof
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
JP2002510481A (ja) 1998-04-02 2002-04-09 ジェネンテック・インコーポレーテッド 抗体変異体及びその断片
ATE458007T1 (de) 1998-04-20 2010-03-15 Glycart Biotechnology Ag Glykosylierungs-engineering von antikörpern zur verbesserung der antikörperabhängigen zellvermittelten zytotoxizität
ES2694002T3 (es) 1999-01-15 2018-12-17 Genentech, Inc. Polipéptido que comprende una región Fc de IgG1 humana variante
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
CA2704600C (en) 1999-04-09 2016-10-25 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. A method for producing antibodies with increased adcc activity
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
DE60022369T2 (de) 1999-10-04 2006-05-18 Medicago Inc., Sainte Foy Verfahren zur regulation der transkription von fremden genen in gegenwart von stickstoff
JP4668498B2 (ja) 1999-10-19 2011-04-13 協和発酵キリン株式会社 ポリペプチドの製造方法
US20030180714A1 (en) 1999-12-15 2003-09-25 Genentech, Inc. Shotgun scanning
ATE344801T1 (de) 1999-12-29 2006-11-15 Immunogen Inc Doxorubicin- und daunorubicin-enthaltende, zytotoxische mittel und deren therapeutische anwendung
AU2001247616B2 (en) 2000-04-11 2007-06-14 Genentech, Inc. Multivalent antibodies and uses therefor
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
HU231090B1 (hu) 2000-10-06 2020-07-28 Kyowa Kirin Co., Ltd. Antitest-kompozíciót termelő sejt
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US7041870B2 (en) 2000-11-30 2006-05-09 Medarex, Inc. Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
CA2838062C (en) 2001-08-03 2015-12-22 Roche Glycart Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
HUP0600342A3 (en) 2001-10-25 2011-03-28 Genentech Inc Glycoprotein compositions
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
JPWO2003085118A1 (ja) 2002-04-09 2005-08-11 協和醗酵工業株式会社 抗体組成物の製造方法
AU2003236020B2 (en) 2002-04-09 2009-03-19 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Cell with depression or deletion of the activity of protein participating in GDP-fucose transport
BR0309145A (pt) 2002-04-09 2005-02-01 Kyowa Hakko Kogyo Kk Células das quais o genoma é modificado
US20040259150A1 (en) 2002-04-09 2004-12-23 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Method of enhancing of binding activity of antibody composition to Fcgamma receptor IIIa
JPWO2003084569A1 (ja) 2002-04-09 2005-08-11 協和醗酵工業株式会社 抗体組成物含有医薬
WO2003084570A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Medicament contenant une composition d'anticorps appropriee au patient souffrant de polymorphisme fc$g(g)riiia
EP1513879B1 (en) 2002-06-03 2018-08-22 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
TWI335821B (en) 2002-12-16 2011-01-11 Genentech Inc Immunoglobulin variants and uses thereof
US20050079574A1 (en) 2003-01-16 2005-04-14 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
DE10344799A1 (de) * 2003-09-26 2005-04-14 Ganymed Pharmaceuticals Ag Identifizierung von Oberflächen-assoziierten Antigenen für die Tumordiagnose und -therapie
US20080241884A1 (en) 2003-10-08 2008-10-02 Kenya Shitara Fused Protein Composition
EP1705251A4 (en) 2003-10-09 2009-10-28 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd PROCESS FOR PRODUCING ANTIBODY COMPOSITION BY RNA INHIBITION OF FUNCTION OF $ G (A) 1,6-FUCOSYLTRANSFERASE
WO2005044859A2 (en) 2003-11-05 2005-05-19 Glycart Biotechnology Ag Cd20 antibodies with increased fc receptor binding affinity and effector function
SI1725249T1 (sl) 2003-11-06 2014-04-30 Seattle Genetics, Inc. Spojine monometilvalina, sposobne konjugacije na ligande
JPWO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2007-06-28 協和醗酵工業株式会社 抗体組成物を含有する医薬
WO2005078123A1 (en) * 2004-02-18 2005-08-25 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with kallikrein 5 (klk5)
AU2005230848B9 (en) 2004-03-31 2011-06-02 Genentech, Inc. Humanized anti-TGF-beta antibodies
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
ES2403055T3 (es) 2004-04-13 2013-05-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Anticuerpos anti-P-selectina
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
WO2006034488A2 (en) 2004-09-23 2006-03-30 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
EP2465870A1 (en) 2005-11-07 2012-06-20 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus VH/VL hypervariable sequences
US20070237764A1 (en) 2005-12-02 2007-10-11 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
CA2651567A1 (en) 2006-05-09 2007-11-22 Genentech, Inc. Binding polypeptides with optimized scaffolds
US10118970B2 (en) 2006-08-30 2018-11-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
DK2235064T3 (en) 2008-01-07 2016-01-11 Amgen Inc A process for the preparation of heterodimeric Fc molecules using electrostatic control effects
CA2924873A1 (en) 2013-10-23 2015-04-30 Genentech, Inc. Methods of diagnosing and treating eosinophilic disorders

Also Published As

Publication number Publication date
JP2024054130A (ja) 2024-04-16
WO2019178316A1 (en) 2019-09-19
MX2020009465A (es) 2020-10-22
JP2021518105A (ja) 2021-08-02
RU2020133229A3 (zh) 2022-04-14
AU2019235881A1 (en) 2020-09-17
IL277212A (en) 2020-10-29
EP3765606A1 (en) 2021-01-20
JP7422671B2 (ja) 2024-01-26
PE20210629A1 (es) 2021-03-23
US20210301032A1 (en) 2021-09-30
CL2020002333A1 (es) 2021-01-15
CA3091836A1 (en) 2019-09-19
AR114281A1 (es) 2020-08-12
SG11202008049XA (en) 2020-09-29
MA52014A (fr) 2021-01-20
KR20200130823A (ko) 2020-11-20
CR20200404A (es) 2020-11-12
RU2020133229A (ru) 2022-04-14
PH12020551336A1 (en) 2021-12-13
TW201946935A (zh) 2019-12-16
US20200040103A1 (en) 2020-02-06
BR112020018571A2 (pt) 2020-12-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11926674B2 (en) Anti-Jagged2 antibodies and methods of use
US9879094B2 (en) Nucleic acid molecules encoding for BACE1 antibodies
JP7422671B2 (ja) 抗ｋｌｋ５抗体及び使用方法
US20150274812A1 (en) Anti-influenza b virus hemagglutinin antibodies and methods of use
JP2023100992A (ja) ２種以上の抗ｃ５抗体の組み合わせおよび使用方法
KR102193080B1 (ko) 항-jagged 항체 및 사용 방법
JP2018520658A (ja) ヒト化抗エボラウイルス糖タンパク質抗体及びその使用
CN114096562A (zh) 抗原结合分子、药物组合物和方法
US12037412B2 (en) Anti-KLK5 antibodies and methods of use
US11827717B2 (en) Anti-MASP-1 antibodies and methods of use

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40038936

Country of ref document: HK