BR112020018571A2 - Anticorpos isolados que se ligam a klk5, anticorpo que forma um epítopo termodinâmico quando ligado a klk5, anticorpos, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, método para produzir um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, usos do anticorpo, método para tratar um paciente tendo uma doença, método para inibir a atividade biológica de klk5 em um indivíduo, anticorpo que especificamente se liga a klk5 humano - Google Patents

Anticorpos isolados que se ligam a klk5, anticorpo que forma um epítopo termodinâmico quando ligado a klk5, anticorpos, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, método para produzir um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, usos do anticorpo, método para tratar um paciente tendo uma doença, método para inibir a atividade biológica de klk5 em um indivíduo, anticorpo que especificamente se liga a klk5 humano Download PDF

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Benjamin T. Walters
Hilda Y. Hernandez-Barry
David B. Iaea
Moulay Hicham Alaoui Ismaili
James T. Koerber
Wei Yu Lin
Kelly Loyet
Jawahar Sudhamsu
Yonglian Sun
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Abstract

anticorpos isolados que se ligam a klk5, anticorpo que forma um epítopo termodinâmico quando ligado a klk5, anticorpos, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, método para produzir um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, usos do anticorpo, método para tratar um paciente tendo uma doença, método para inibir a atividade biológica de klk5 em um indivíduo, anticorpo que especificamente se liga a klk5 humano. a invenção fornece anticorpos anti-klk5 e métodos de uso destes.

Description

“ANTICORPOS ISOLADOS QUE SE LIGAM A KLK5, ANTICORPO QUE FORMA UM EPÍTOPO TERMODINÂMICO QUANDO LIGADO A KLK5, ANTICORPOS, ÁCIDO NUCLEICO ISOLADO, CÉLULA HOSPEDEIRA, MÉTODO PARA PRODUZIR UM ANTICORPO, IMUNOCONJUGADO, FORMULAÇÃO FARMACÊUTICA, USOS DO ANTICORPO, MÉTODO PARA TRATAR UM PACIENTE TENDO UMA DOENÇA, MÉTODO PARA INIBIR A ATIVIDADE BIOLÓGICA DE KLK5 EM UM INDIVÍDUO, ANTICORPO QUE ESPECIFICAMENTE SE LIGA A KLK5 HUMANO”
REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS
[0001] Este pedido reivindica o benefício sob o título 35 do Código dos E.U.A., §119 (e), para o Pedido de Patente Provisório dos EUA de nº de série 62/643.034, depositado em 14 de março de 2018, todo o conteúdo do qual é incorporado neste documento por referência.
LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS
[0002] O presente pedido contém uma Listagem de Sequências submetida eletronicamente via EFS-Web e é incorporada neste documento por referência em sua totalidade. A referida cópia ASCII, criada em 11 de março de 2019, é denominada P34707-WO_SL.txt e tem o tamanho de 424.525 bytes.
CAMPO DA INVENÇÃO
[0003] A presente invenção refere-se a anticorpos anti-KLK5 e métodos de uso destes.
ANTECEDENTES
[0004] As peptidases humanas relacionadas à calicreína (KLKs) são proteases de serina do tipo (quimo)tripsina que são expressas em uma variedade de tecidos, tais como próstata, ovário, mama, testículo, cérebro e pele. KLKs pertencem a um subgrupo da família S1A da serina protease similar à quimiotripsina do clã PA(S). Os 15 genes KLK humanos estão localizados no cromossomo 19q13.4 e constituem o maior agrupamento contíguo da serina protease no genoma humano. Esses genes, geralmente compostos de cinco éxons codificadores e, em alguns casos, um ou dois éxons não codificadores 5', codificam as peptidases relacionadas à calicreína KLK1 a KLK15. Todos os genes KLK codificam pré-pró-proteínas de cadeia única contendo um domínio catalítico semelhante a quimotripsina ou tripsina de 224-237 resíduos com uma identidade de sequência de aminoácidos de aproximadamente 40% entre KLK4 a KLK15. KLK1 e seus homólogos próximos KLK2 e KLK3 formam um clado próprio, KLK4, 5 e 7 pertencem a outro subgrupo, enquanto KLK6 compartilha mais similaridade com KLK13 e KLK14. Vide Debela et al., Biol Chem 389, 623- 632 (2008).
[0005] KLK5 parece ser mais abundantemente expresso na pele humana, especificamente nas camadas espinosas e granulares superiores da pele, onde os queratinócitos sofrem diferenciação terminal e são transformados em estruturas achatadas parecidas com tijolos que formam o estrato córneo, a camada epidérmica mais externa e a barreira para o ambiente externo. Vide Debela et al., J Mol Biol, 373, 1017-1031 (2007); e Tan et al., J Med Chem., 22 de janeiro de 2015; 58(2):598-612 (2014). KLK5 é descrito por desempenhar papéis patológicos em doenças de pele, tais como a síndrome de Netherton.
Vide Furio et al., PLOS Genet 11(9), e1005389 (2015). A síndrome de Netherton é causada por mutações da perda de função no gene SPINK5, que codifica o inibidor da serina protease do tipo Kazal 5 (SPINK5). Vide Descargues et al., Nat Genet., janeiro de 2005; 37(1):56-65 (2004). SPINK5 demonstrou inibir vários membros da família da serina protease KLK (por exemplo, KLK5 e KLK7). Vide Wang et al., Exp Dermatol., julho; 23(7):524-6 (2014). A ausência de SPINK5 na síndrome de Netherton resulta em atividades de KLKs sem oposição. A hiperatividade de KLK5 é considerada um elemento chave na fisiopatologia da síndrome de Netherton, pois KLK5 é um regulador da proteólise na epiderme. A ablação de KLK5 e KLK7 resgata a letalidade do fenótipo similar à síndrome de Netherton. Vide Briot et al., J Exp Med., 11 de maio; 206(5):1135-47 (2009); Furio et al., J Exp Med., 10 de março; 211(3):499- 513 (2014); e Kasparek et al., PLoS Genet., 17 de janeiro de 2017; 13(1):e1006566 (2017). A síndrome de Netherton é uma doença sistêmica complexa com múltiplos efeitos para a qual atualmente não existe tratamento satisfatório.
[0006] A asma é uma doença clinicamente heterogênea associada a fatores de risco genéticos e ambientais. As estimativas de herdabilidade de estudos com gêmeos asmáticos variam de 35% a 80%, indicando um papel importante para o risco genético. Vide, por exemplo, Ullemar et al., Allergy 71, 230-238 (2016). Vários GWAS em grande escala foram realizados para asma e fenótipos relacionados à asma, e muitos dos loci identificados, tais como aqueles próximos aos genes ORMDL3, IL13, IL1RL1 e TSLP, foram confirmados em múltiplas populações de estudo. Vide, por exemplo, Bonnelykke et al., Nat Genet 46, 51-55 (2014). Estudos recentes identificaram um SNP no locus KLK4/5 que é protetor para o risco relacionado à baixa periostina, ou asma de baixa inflamação tipo 2. No mesmo estudo, os níveis de KLK5 estavam elevados no lavado broncoalveolar de pacientes com asma grave, apoiando a hipótese de que KLK5 desempenha um papel na obstrução brônquica e na patogênese da asma.
[0007] Apesar dos avanços no campo de doenças, tais como a síndrome de Netherton e asma, continua a ser necessário identificar alvos e desenvolver meios que possam complementar ou aperfeiçoar a eficácia das terapias existentes.
DESCRIÇÃO RESUMIDA
[0008] São fornecidos aqui os anticorpos anti-KLK5 e métodos de uso destes.
[0009] É ainda fornecido neste documento um anticorpo isolado que se liga a KLK5, em que o anticorpo compreende (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:28; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:45 e SEQ ID NO:54; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:69 e SEQ ID NO:72; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:96; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:109; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:127.
[0010] Em algumas modalidades, o anticorpo compreende (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:22 e SEQ ID NO:24; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:52 e SEQ ID NO:53; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:69 e SEQ ID NO:72; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:87 e SEQ ID NO:91; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:99, SEQ ID NO:101 e SEQ ID NO:105; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:119 e SEQ ID NO:122.
[0011] Em algumas modalidades de qualquer um dos anticorpos, o anticorpo compreende (i) (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:17; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:82; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:101; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:115; (ii) (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:87; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:119; ou (iii) (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:24; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:72; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:91; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:122.
[0012] Em algumas modalidades de qualquer um dos anticorpos, o anticorpo compreende (a) uma sequência de VH da SEQ ID NO:202 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:140; (b) uma sequência de VH da SEQ ID NO:225 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:151; ou (c) uma sequência de VH da SEQ ID NO:257 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:162.
[0013] Em algumas modalidades de qualquer um dos anticorpos, o anticorpo compreende (a) uma sequência de VH da SEQ ID NO:201 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:139; (b) uma sequência de VH da SEQ ID NO:221 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:149; ou (c) uma sequência de VH da SEQ ID NO:248 ou SEQ ID NO:254, e uma sequência de VL da SEQ ID NO:160.
[0014] É ainda fornecido neste documento um anticorpo isolado que se liga a KLK5, em que o anticorpo compreende (a) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:201 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:139; (b) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:221 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:149; ou (c) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:248 ou SEQ ID NO:254, e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:160.
[0015] É ainda fornecido neste documento um anticorpo isolado que se liga a KLK5, em que o anticorpo compreende (i) (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:14; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:32; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:79; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:112; (ii) (a) HVR- H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:15; (b) HVR- H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33; (c) HVR- H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; (d) HVR- L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:80; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:100; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:113; (iii) (a) HVR- H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:16; (b) HVR- H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:34; (c) HVR-
H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:64; (d) HVR-
L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:81; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:114; (iv) (a) HVR-
H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:18; (b) HVR-
H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:39; (c) HVR-
H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:66; (d) HVR-
L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:83; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:102; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:116; (v) (a) HVR-
H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:19; (b) HVR-
H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:40; (c) HVR-
H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:67; (d) HVR-
L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:84; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:103; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:117; (vi) (a) HVR-
H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:20; (b) HVR-
H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33; (c) HVR-
H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:68; (d) HVR-
L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:85; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:103; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118; (vii) (a) HVR-
H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:21; (b) HVR-
H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:41; (c) HVR-
H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69; (d) HVR-
L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:86; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:104; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118; (viii) (a)
HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:46; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:88; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:120; (ix) (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:70; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:89; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118; ou (x) (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:23; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:47; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:71; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:90; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:106; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121.
[0016] Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma sequência de VH selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:170, SEQ ID NO:171, SEQ ID NO:172, SEQ ID NO:203, SEQ ID NO:204, SEQ ID NO:205, SEQ ID NO:206, SEQ ID NO:226, SEQ ID NO:227 e SEQ ID NO:228, e uma sequência de VL selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:131, SEQ ID NO:132, SEQ ID NO:133, SEQ ID NO:141, SEQ ID NO:142, SEQ ID NO:143, SEQ ID NO:144, SEQ ID NO:152, SEQ ID NO:153 e SEQ ID NO:154.
[0017] Em algumas modalidades, o anticorpo compreende (a)
uma sequência de VH da SEQ ID NO:170 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:131; (b) uma sequência de VH da SEQ ID NO:171 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:132; (c) uma sequência de VH da SEQ ID NO:172 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:133; (d) uma sequência de VH da SEQ ID NO:203 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:141; (e) uma sequência de VH da SEQ ID NO:204 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:142; (f) uma sequência de VH da SEQ ID NO:205 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:143; (g) uma sequência de VH da SEQ ID NO:206 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:144; (h) uma sequência de VH da SEQ ID NO:226 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:152; (i) uma sequência de VH da SEQ ID NO:227 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:153; ou (j) uma sequência de VH da SEQ ID NO:228 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:154.
[0018] É ainda fornecido neste documento um anticorpo isolado que se liga a KLK5, em que o anticorpo compreende (a) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:170 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:131; (b) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:171 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:132; (c) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:172 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:133; (d) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:203 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:141; (e) uma sequência de VH tendo pelo menos
95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:204 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:142; (f) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:205 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:143; (g) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:206 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:144; (h) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:226 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:152; (i) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:227 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:153; ou (j) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:228 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:154.
[0019] Em algumas modalidades de qualquer um dos anticorpos, o anticorpo é uma IgG1 ou IgG4.
[0020] Em algumas modalidades de qualquer um dos anticorpos, o anticorpo inibe a atividade biológica de KLK5 em pelo menos 50%, conforme medido por um ou mais métodos, como descrito nos Exemplos abaixo no presente documento. Em algumas modalidades, um ou mais métodos são selecionados a partir do grupo que consiste em um ensaio de atividade direta com KLK5 recombinante, um ensaio acoplado de peptídeo fluorescente com pró-KLK1, um ensaio acoplado de peptídeo fluorescente com pró-KLK7, um ensaio de LC/MS pró-KLK1, um ensaio de LC/MS pró-KLK7 e um ensaio de Ki(app). Em algumas modalidades, a atividade biológica é a atividade da serina protease de KLK5.
[0021] Em algumas modalidades de qualquer um dos anticorpos, o anticorpo é um anticorpo monoclonal.
[0022] Em algumas modalidades de qualquer um dos anticorpos, o anticorpo é um anticorpo humano, humanizado ou quimérico.
[0023] Em algumas modalidades de qualquer um dos anticorpos, o anticorpo é um fragmento de anticorpo que se liga a KLK5.
[0024] É fornecido adicionalmente aqui um anticorpo que forma um epítopo termodinâmico quando ligado a KLK5 compreendendo uma ou mais das sequências selecionadas a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:316, SEQ ID NO:317, SEQ ID NO:318 e SEQ ID NO:319, conforme medido por espectrometria de massa de troca de hidrogênio.
[0025] É fornecido adicionalmente neste documento um anticorpo que compete pela ligação com qualquer um dos anticorpos descritos neste documento.
[0026] É fornecido adicionalmente aqui um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo como qualquer um dos anticorpos descritos aqui.
[0027] É fornecido adicionalmente neste documento um ácido nucleico isolado que codifica qualquer um dos anticorpos descritos neste documento.
[0028] É fornecida adicionalmente neste documento uma célula hospedeira compreendendo o ácido nucleico descrito neste documento.
[0029] É fornecido adicionalmente neste documento um método para produzir um anticorpo que compreende cultivar a célula hospedeira descrita neste documento, de modo que o anticorpo seja produzido.
[0030] É fornecido adicionalmente neste documento um imunoconjugado compreendendo o anticorpo descrito neste documento.
[0031] É fornecida adicionalmente neste documento uma formulação farmacêutica compreendendo o anticorpo descrito neste documento e um transportador farmaceuticamente aceitável.
[0032] É fornecido adicionalmente neste documento o anticorpo conforme descrito neste documento para uso como um medicamento.
[0033] É fornecido adicionalmente neste documento o anticorpo conforme descrito neste documento para uso no tratamento de uma doença selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase e rosácea. Em algumas modalidades, a doença é selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase, rosácea e esofagite eosinofílica. Em algumas modalidades, a asma é selecionada a partir do grupo que consiste em asma atópica, asma alérgica, asma não alérgica, asma induzida por exercícios, asma exacerbada/sensível à aspirina, asma leve, asma moderada a grave, asma virgem de corticosteroide, asma crônica, asma resistente a corticosteroides, asma refratária a corticosteroides, asma recém-diagnosticada e não tratada, asma devido ao tabagismo, asma não controlada por corticosteroides, asma induzida por linfócito T auxiliar do tipo 2 (Th2), tipo 2 (Th2) alto ou tipo 2 (T2), asma eosinofílica, asma com alto teor de periostina, asma com alto teor de eosinófilos, asma com baixo teor de Th2 ou asma não induzida por Th2, asma com baixo teor de periostina e asma com baixo teor de eosinófilos. Em algumas modalidades, a asma é asma com baixo teor de TH2.
[0034] É fornecido adicionalmente o anticorpo como aqui descrito para uso na inibição da atividade biológica de KLK5.
[0035] É fornecido adicionalmente o uso do anticorpo como descrito neste documento para fabricação de um medicamento. Em algumas modalidades, o medicamento é para tratar uma doença selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase e rosácea. Em algumas modalidades, a doença é selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase, rosácea e esofagite eosinofílica. Em algumas modalidades, a asma é selecionada a partir do grupo que consiste em asma atópica, asma alérgica, asma não alérgica, asma induzida por exercícios, asma exacerbada/sensível à aspirina, asma leve, asma moderada a grave, asma virgem de corticosteroide, asma crônica, asma resistente a corticosteroides, asma refratária a corticosteroides, asma recém-diagnosticada e não tratada, asma devido ao tabagismo, asma não controlada por corticosteroides, asma induzida por linfócito T auxiliar do tipo 2 (Th2), tipo 2 (Th2) alto ou tipo 2 (T2), asma eosinofílica, asma com alto teor de periostina, asma com alto teor de eosinófilos, asma com baixo teor de Th2 ou asma não induzida por Th2, asma com baixo teor de periostina e asma com baixo teor de eosinófilos. Em algumas modalidades, a asma é asma com baixo teor de TH2.
[0036] É fornecido adicionalmente o uso do anticorpo descrito neste documento para fabricação de um medicamento para inibir a atividade biológica de KLK5.
[0037] É fornecido adicionalmente um método para tratar um paciente tendo uma doença, em que a doença é selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase e rosácea, compreendendo administrar ao paciente uma quantidade eficaz do anticorpo descrito no presente documento. Em algumas modalidades, a doença é selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase, rosácea e esofagite eosinofílica. Em algumas modalidades, a asma é selecionada a partir do grupo que consiste em asma atópica, asma alérgica, asma não alérgica, asma induzida por exercícios, asma exacerbada/sensível à aspirina, asma leve, asma moderada a grave, asma virgem de corticosteroide, asma crônica, asma resistente a corticosteroides, asma refratária a corticosteroides, asma recém-diagnosticada e não tratada, asma devido ao tabagismo, asma não controlada por corticosteroides, asma induzida por linfócito T auxiliar do tipo 2 (Th2), tipo 2 (Th2) alto ou tipo 2 (T2), asma eosinofílica, asma com alto teor de periostina, asma com alto teor de eosinófilos, asma com baixo teor de Th2 ou asma não induzida por Th2, asma com baixo teor de periostina e asma com baixo teor de eosinófilos. Em algumas modalidades, a asma é asma com baixo teor de TH2.
[0038] É fornecido adicionalmente um método para inibir a atividade biológica de KLK5 em um paciente, que compreende administrar ao paciente uma quantidade eficaz do anticorpo descrito neste documento para inibir a atividade biológica de KLK5.
[0039] É fornecido adicionalmente neste documento um anticorpo que especificamente se liga a KLK5 humano, em que o anticorpo se liga a um epítopo em KLK5 humano compreendendo um ou mais resíduos de aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em Pro130, Ser131, Ala132, Gly133, Val162, Leu163, Ser164, Gln165, Lys166, Arg167, Glu169, Asp170, Ala171, Tyr172, Pro173, Arg174, Gln174A, Ile176, Asp177, Asp178, Gly184, Asp185, Lys186, Ala186A, Arg188, Asn223, Arg224, Pro225 e Lys233, de acordo com a numeração de protease padrão. Em algumas modalidades, o anticorpo se liga a um epítopo em KLK5 humano compreendendo um ou mais resíduos de aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em Pro130, Ser131, Ala132, Val162, Leu163, Ser164, Gln165, Lys166, Arg167, Glu169, Asp170, Ala171, Tyr172, Pro173, Arg174, Gln174A, Ile176, Asp177, Asp178, Arg224 e Lys233, de acordo com a numeração de protease padrão.
Em algumas modalidades, o anticorpo se liga a um epítopo em KLK5 humano compreendendo um ou mais resíduos de aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em Pro130, Ser131, Ala132, Gly133, Val162, Leu163, Ser164, Gln165, Lys166, Arg167, Glu169, Asp170, Ala171, Tyr172, Pro173, Arg174, Gln174A, Ile176, Asp177 e Lys233, de acordo com a numeração de protease padrão. Em algumas modalidades, o anticorpo se liga a um epítopo em KLK5 humano compreendendo um ou mais resíduos de aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em Ser131, Ala132, Gly133, Leu163, Ser164, Gln165, Lys166, Arg167, Glu169, Asp170, Ala171, Pro173, Arg174, Gly184, Asp185, Lys186, Ala186A, Arg188, Asn223, Arg224 e Pro225 de acordo com a numeração de protease padrão.
[0040] É fornecido adicionalmente neste documento um anticorpo que, quando ligado a KLK5 humano, resulta em uma mudança conformacional do KLK5 humano, em que a mudança conformacional resulta, de forma alostérica, na interrupção do sítio de ligação do substrato e/ou do sítio ativo do KLK5 humano.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[0041] As Figura 1A-1N mostram a avaliação de cada um dos inibidores de KLK5 usando substrato de peptídeo fluorescente no ensaio direto.
5 nM de KLK5 humano recombinante e 0,19-100 nM de inibidores de KLK5 foram pré-incubados por 30 minutos antes da adição de 50 μM de Boc-VPR- AMC. As placas foram examinadas a cada 102 s por 30-60 minutos usando um leitor PHERAstar® Plus usando um módulo de excitação de 340 nm/emissão de 460 nm. Os resultados para os inibidores de KLK5 são descritos da seguinte forma: Figura 1A: Spink9.SRE.Fc (Spink9), Figura 1B: mAb1108, Figura 1C: 3-3F5, Figura 1D: 10C8, Figura 1E: 9B6, Figura 1F: 9F2, Figura 1G: 9H3, Figura 1H: 9H5, Figura 1I: 8B7, Figura 1J: 2B11, Figura 1K: 8F5, Figura 1L: 10C5, Figura 1M: 10H3 e Figura 1N: 2-3F4.
[0042] As Figura 2A-2N mostram a avaliação de inibidores de
KLK5 em ensaio acoplado com pró-KLK7. 5 nM de KLK5 humano recombinante e 0,19-100 nM de inibidores de anti-KLK5 foram pré-incubados por 30 minutos antes da adição de 125 nM de pró-KLK7 e 100 μM de suc- LLVY-AMC. Após 24 horas, as leituras fluorescentes foram feitas a cada 102 s por 30-60 min e o valor de resultado de RFU foi calculado pela média das últimas 5 leituras. Os resultados para os inibidores de KLK5 são descritos da seguinte forma: Figura 2A: Spink9.SRE.Fc, Figura 2B: mAb1108, Figura 2C: 3-3F5, Figura 2D: 10C8, Figura 2E: 9B6, Figura 2F: 9F2, Figura 2G: 9H3, Figura 2H: 9H5, Figura 2I: 8B7, Figura 2J: 2B11, Figura 2K: 8F5, Figura 2L: 10C5, Figura 2M: 10H3 e Figura 2N: 2-3F4.
[0043] As Figura 3A-3N mostram a avaliação de inibidores de KLK5 em ensaio acoplado com pró-KLK1. 0,5 nM de KLK5 humano recombinante e 0,019-10 nM de inibidores de KLK5 foram pré-incubados por 30 minutos antes da adição de 31,25 nM de pró-KLK1 e 50 μM de PFR-AMC. As placas foram examinadas a cada 102 s por 120 minutos usando um leitor PHERAstar® Plus usando um módulo de excitação de 340 nm/emissão de 460 nm. Os resultados para os inibidores de KLK5 são descritos da seguinte forma: Figura 3A: Spink9.SRE.Fc, Figura 3B: mAb1108, Figura 3C: 3-3F5, Figura 3D: 10C8, Figura 3E: 9B6, Figura 3F: 9F2, Figura 3G: 9H3, Figura 3H: 9H5, Figura 3I: 8B7, Figura 3J: 2B11, Figura 3K: 8F5, Figura 3L: 10C5, Figura 3M: 10H3 e Figura 3N: 2-3F4.
[0044] As Figuras 4A-4N mostram os resultados de um ensaio de LC/MS medindo a inibição da proteólise de pró-KLK7 por KLK5 recombinante monitorando os peptídeos produtos de clivagem derivados de KLK5. Uma pré-incubação de SPINK9.SRE.Fc, mAb1108 e os 12 anticorpos selecionados e KLK5 precedeu uma incubação de duas horas de 5 nM de KLK5 com 15 nM de pró-KLK7. Os resultados para os inibidores de KLK5 são descritos da seguinte forma: Figura 4A: SPINK9.SRE.Fc, Figura 4B:
mAb1108, Figura 4C: 10C8, Figura 4D: 9B6, Figura 4E: 2B11, Figura 4F: 9F2, Figura 4G: 2-3F4, Figura 4H: 10H3, Figura 4I: 9H3, Figura 4J: 8B7, Figura 4K: 8F5, Figura 4L: 3-3F5, Figura 4M: 10C5 e Figura 4N: 9H5.
[0045] As Figuras 5A-4N mostram os resultados de um ensaio de LC/MS medindo a inibição da proteólise de pró-KLK1 por KLK5 recombinante monitorando os peptídeos produtos de clivagem derivados de KLK5. Uma pré-incubação de SPINK9.SRE.Fc, mAb1108 e 12 anticorpos selecionados e KLK5 precedeu uma incubação de 20 minutos de 0,5 nM de KLK5 com 300 nM de pró-KLK1 (Figura 5A-N). Os resultados para os inibidores de KLK5 são descritos da seguinte forma: Figura 5A: SPINK9.SRE.Fc, Figura 5B: mAb1108, Figura 5C: 10C8, Figura 5D: 9B6, Figura 5E: 2B11, Figura 5F: 9F2, Figura 5G: 2-3F4, Figura 5H: 10H3, Figura 5I: 9H3, Figura 5J: 8B7, Figura 5K: 8F5, Figura 5L: 3-3F5, Figura 5M: 10C5, e Figura 5N: 9H5.
[0046] As Figuras 6A-6N mostram a especificidade de inibidores de KLK5 na atividade de KLK7. 5 nM de KLK7 humano recombinante e 0,19- 100 nM de inibidores de anti-KLK5 foram pré-incubados por 30 minutos antes da adição de 100 μM de suc-LLVY-AMC. As placas foram examinadas a cada 102 s por 75 minutos usando um leitor PHERAstar® Plus usando um módulo de excitação de 340 nm/emissão de 460 nm. Os valores de IC 50 estão resumidos na Tabela 6. Os resultados para os inibidores de KLK5 são descritos da seguinte forma: Figura 6A: Spink9.SRE.Fc, Figura 6B: mAb1108, Figura 6C: 3-3F5, Figura 6D: 10C8, Figura 6E: 9B6, Figura 6F: 9F2, Figura 6G: 9H3, Figura 6H: 9H5, Figura 6I: 2B11, Figura 6J: 8B7, Figura 6K: 8F5, Figura 6L: 10C5, Figura 6M: 10H3 e Figura 6N: 2-3F4.
[0047] As Figuras 7A-7N mostram a especificidade dos inibidores de KLK5 na atividade de KLK1. 3 nM de KLK1 humano recombinante e 0,19-100 nM de inibidores de anti-KLK5 foram pré-incubados por 30 minutos antes da adição de 100 μM de PFR-AMC. As placas foram examinadas a cada
102 s por 60 minutos usando um leitor PHERAstar® Plus usando um módulo de excitação de 340 nm/emissão de 460 nm. Os valores de IC 50 estão resumidos na Tabela 7. Os resultados para os inibidores de KLK5 são descritos da seguinte forma: Figura 7A: Spink9.SRE.Fc, Figura 7B: mAb1108, Figura 7C: 3-3F5, Figura 7D: 10C8, Figura 7E: 9B6, Figura 7F: 9F2, Figura 7G: 9H3, Figura 7H: 9H5, Figura 7I: 8B7, Figura 7J: 2B11, Figura 7K: 8F5, Figura 7L: 10C5, Figura 7M: 10H3 e Figura 7N: 2-3F4.
[0048] As Figuras 8A-8N mostram a especificidade dos inibidores de KLK5 na atividade de KLK4. 2 nM de KLK4 humano recombinante e 0,19-100 nM de inibidores de anti-KLK5 foram pré-incubados por 30 minutos antes da adição de 50 μM de Boc-VPR-AMC. As placas foram examinadas a cada 102 s por 60 minutos usando um leitor PHERAstar ® Plus usando um módulo de excitação de 340 nm/emissão de 460 nm. Os valores de IC 50 estão resumidos na Tabela 8. Os resultados para os inibidores de KLK5 são descritos da seguinte forma: Figura 8A: Spink9.SRE.Fc, Figura 8B: mAb1108, Figura 8C: 3-3F5, Figura 8D: 10C8, Figura 8E: 9B6, Figura 8F: 9F2, Figura 8G: 9H3, Figura 8H: 9H5, Figura 8I: 8B7, Figura 8J: 2B11, Figura 8K: 8F5, Figura 8L: 10C5, Figura 8M: 10H3 e Figura 8N: 2-3F4.
[0049] As Figura 9A-9N mostram a especificidade dos inibidores de KLK5 na atividade da tripsina. 0,25 nM de tripsina isolada de pâncreas bovino e 0,19-100 nM de inibidores de anti-KLK5 foram pré-incubados por 30 minutos antes da adição de 50 μM de Boc-VPR-AMC. As placas foram examinadas a cada 102 s por 60 minutos usando um leitor PHERAstar ® Plus usando um módulo de excitação de 340 nm/emissão de 460 nm. Os valores de IC50 para os anticorpos selecionados (Figura 9C-N) estão resumidos na Tabela
9. Os resultados para os inibidores de KLK5 são descritos da seguinte forma: Figura 9A: Spink9.SRE.Fc, Figura 9B: mAb1108, Figura 9C: 3-3F5, Figura 9D: 10C8, Figura 9E: 9B6, Figura 9F: 9F2, Figura 9G: 9H3, Figura 9H: 9H5,
Figura 9I: 8B7, Figura 9J: 2B11, Figura 9K: 8F5, Figura 9L: 10C5, Figura 9M: 10H3 e Figura 9N: 2-3F4.
[0050] As Figuras 10A-10AB mostram a análise da potência do inibidor de KLK5 por determinação de Kiapp. KLK5 em várias concentrações (0,5, 0,25, 0,125 e 0,0625 nM) e 0,0019-10 nM de inibidores de anti-KLK5 foram pré-incubados por 30 minutos antes da adição de 300 μM de Z-VPR- pNA. As placas foram lidas em um leitor de microplacas sintonizável Versamax com medições em 405 nm tomadas a cada 102 segundos durante 3 horas. Os valores derivados de Kiapp estão resumidos na Tabela 10. Os resultados para os inibidores de KLK5 são descritos como segue (os respectivos painéis esquerdos mostram valores de IC50 de inibidores de KLK5 em várias concentrações de KLK5 (0,5, 0,25, 0,125 e 0,0625 nM); os respectivos painéis direitos mostram valores de IC50 determinados e representados graficamente como uma função da concentração de KLK5): Figura 10A e Figura 10B: Spink9.SRE.Fc, Figura 10C e Figura 10D: mAb1108, Figura 10E e Figura 10F: 3-3F5, Figura 10G e Figura 10H: 10C8, Figura 10I e Figura 10J: 9B6, Figura 10K e Figura 10L: 9F2, Figura 10M e Figura 10N: 9H3, Figura 10O e Figura 10P: 9H5, Figura 10Q e Figura 10R: 8B7, Figura 10S e Figura 10T: 2B11, Figura 10U e Figura 10V: 8F5, Figura 10W e Figura 10X: 10C5, Figura 10Y e Figura 10Z: 10H3, Figura 10AA e Figura 10AB: 2-3F4.
[0051] A Figura 11 mostra uma tabela que sumariza os valores de IC50 como avaliado e mostrado nas Figuras 1-10.
[0052] Figura 12A e 12B. A Figura 12A mostra as regiões de sequência que são identificadas por medições de troca de hidrogênio a serem afetadas quando em complexo com cada anticorpo, essas regiões de sequência (sublinhadas) são: região 1 (56-68, pHexp 8.0), região 2 (107-124, pHexp 6,0), região 3 (184-195, pHexp 8,0), região 4 (232-246, pHexp 6,0), a correção de tempo efetiva usa pHref = 7,5. A Figura 12B mostra os dados reais de troca de hidrogênio para um peptídeo representativo para cada região de sequência sublinhada na Figura 12A.
[0053] Figura 13A e 13B. A Figura 13A mostra o alinhamento das sequências variáveis da cadeia leve de clones do anticorpo anti-KLK5 14C8, 14E12, 8E11, 8G10, 9B6, 2-3F4, 10C5, 2B11, 10H3, 9H3, 8B7, 9H5, 9F2, 10C8, 8F5,3 -3F5, 9E3, 10D10, 12B3, 1D10. A Figura 13B mostra o alinhamento das sequências variáveis da cadeia pesada de clones do anticorpo anti-KLK5 14C8, 14E12, 8E11, 8G10, 9B6, 2-3F4, 10C5, 2B11, 10H3, 9H3, 8B7, 9H5, 9F2, 10C8, 8F5,3 -3F5, 9E3, 10D10, 12B3, 1D10. Também são mostradas as regiões CDR de acordo com a numeração de Kabat.
[0054] Figura 14A e 14B. A Figura 14A mostra o alinhamento das sequências variáveis da cadeia leve do clone 10C5 do anticorpo anti-KLK5 e seis clones 10C5 humanizados. A Figura 14B mostra o alinhamento das sequências variáveis da cadeia pesada do clone 10C5 do anticorpo anti-KLK5 e 28 clones 10C5 humanizados. Os resíduos de aminoácidos destacados em preto são os resíduos que foram alterados. Também são mostradas as regiões CDR de acordo com a numeração de Kabat.
[0055] Figura 15A e 15B. A Figura 15A mostra o alinhamento das sequências variáveis da cadeia leve do clone 9H5 do anticorpo anti-KLK5 e quatro clones 9H5 humanizados. A Figura 15B mostra o alinhamento das sequências variáveis da cadeia pesada do clone 9H5 do anticorpo anti-KLK5 e 17 clones 9H5 humanizados. Os resíduos de aminoácidos destacados em preto são os resíduos que foram alterados. Também são mostradas as regiões CDR de acordo com a numeração de Kabat.
[0056] Figura 16A e 16B. A Figura 16A mostra o alinhamento das sequências variáveis da cadeia leve do clone 3-3F5 do anticorpo anti-KLK5 e cinco clones 3-3F5 humanizados. A Figura 16B mostra o alinhamento das sequências variáveis da cadeia pesada do clone 3-3F5 do anticorpo anti-KLK5 e 27 clones 3-3F5 humanizados. Os resíduos de aminoácidos destacados em preto são os resíduos que foram alterados. Também são mostradas as regiões CDR de acordo com a numeração de Kabat.
[0057] A Figura 17 mostra a avaliação de inibidores de KLK5 no ensaio de secreção de IL-8 baseado em células A549. O nível de secreção de IL-8 induzida por KLK5 (estrela cinza) foi estabelecido em 100% da atividade residual, enquanto o tampão (meio de estarvação) sozinho (círculo cinza) foi estabelecido em 0% de atividade residual. As curvas de resposta à dose são mostradas para Spink5.Fc (círculo preto e linha preta pontilhada), anticorpo anti-KLK5 de 3.3F5 humanizado (diamante preto e linha preta sólida), anticorpo anti-KLK5 de 9H5 humanizado (quadrado cinza aberto e linha cinza sólida), e anticorpo anti-KLK5 de 10C5 humanizado (círculo preto aberto e linha cinza pontilhada). Os dados mostrados são a média ± do desvio padrão de pelo menos três experimentos independentes.
[0058] Figura 18A e 18B. A Figura 18A mostra uma sobreposição de KLK5 humano com complexo Fab KLK5-10C5. A Figura 18B mostra a interface entre KLK5 humano e Fab 10C5. A numeração dos resíduos de aminoácidos de KLK5 humano é baseada na numeração padrão para proteases. Vide Debela et al., J Mol Biol, 373, 1017-1031 (2007). A numeração dos resíduos de aminoácidos dos fragmentos Fab é baseada em Kabat.
[0059] Figura 19A e 19B. A Figura 19A mostra uma sobreposição de KLK5 humano com complexo Fab KLK5-9H5. A Figura 19B mostra a interface entre KLK5 humano e Fab 9H5. A numeração dos resíduos de aminoácidos de KLK5 humano é baseada na numeração padrão para proteases. A numeração dos resíduos de aminoácidos dos fragmentos Fab é baseada em Kabat.
[0060] Figura 20A e 20B. A Figura 20A mostra uma sobreposição de KLK5 humano com complexo Fab KLK5-3-3F5. A Figura 20B mostra a interface entre KLK5 humano e Fab 3-3F5. A numeração dos resíduos de aminoácidos de KLK5 humano é baseada na numeração padrão para proteases. A numeração dos resíduos de aminoácidos dos fragmentos Fab é baseada em Kabat.
DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES DA INVENÇÃO I. DEFINIÇÕES
[0061] Os termos "anticorpo anti-KLK5" e "um anticorpo que se liga ao KLK5" referem-se a um anticorpo que é capaz de se ligar ao KLK5 com afinidade suficiente, de tal modo que o anticorpo seja útil como um agente de diagnóstico e/ou terapêutico para direcionar o KLK5. Em algumas modalidades, a extensão da ligação de um anticorpo anti-KLK5 a um polipeptídeo não relacionado (polipeptídeo diferente de KLK5) é inferior a cerca de 10% da ligação do anticorpo a KLK5, conforme medido, por exemplo, por um radioimunoensaio (RIA). Em certas modalidades, um anticorpo que se liga a KLK5 tem uma constante de dissociação (Kd) de ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0,1 nM, ≤ 0,01 nM, ou ≤ 0,001 nM (por exemplo, 10-8 M ou menos, por exemplo, de 10-8 M a 10-13 M, por exemplo, de 10-9 M a 10-13 M). Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga a KLK5 tem um valor de IC 50 (concentração de um inibidor, por exemplo, um anticorpo ou fragmento do mesmo, necessária para reduzir a taxa de uma reação enzimática em 50%) de ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0,1 nM, ≤ 0,01 nM ou ≤ 0,001 nM (por exemplo, 10 -8 M ou menos, por exemplo, de 10 -8 M a 10 -13 M, por exemplo, de 10 -9 M a 10 -13 M). Em algumas modalidades, um anticorpo anti-KLK5 se liga a uma região de ligação (por exemplo, um epítopo) de KLK5 que é conservada entre diferentes espécies de polipeptídeos KLK.
[0062] O termo “anticorpo” é usado neste documento no sentido mais amplo e abrange várias estruturas de anticorpo, incluindo, mas não limitados a, anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos), e fragmentos de anticorpo, contanto que eles exibam a atividade de ligação ao antígeno desejada.
[0063] O termo "isolado", conforme usado em referência a anticorpo, polipeptídeo de ligação, polinucleotídeo ou molécula pequena, é aquele que foi separado de um componente de seu ambiente natural. Em algumas modalidades, um anticorpo, polipeptídeo de ligação, polinucleotídeo ou molécula pequena é purificado com pureza superior a 95% ou 99%, conforme determinado por, por exemplo, eletroforese (por exemplo, SDS- PAGE, focalização isoelétrica (IEF), eletroforese capilar) ou cromatografia (por exemplo, troca iônica ou HPLC de fase reversa). Para revisão dos métodos para avaliação da pureza do anticorpo, vide, por exemplo, Flatman et al., J.
Chromatogr. B 848: 79-87 (2007).
[0064] O termo "anticorpo monoclonal", tal como usado neste documento, refere-se a um anticorpo obtido a partir de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, ou seja, os anticorpos individuais compreendendo a população são idênticos e/ou se ligam à mesma região de ligação (por exemplo, epítopo), exceto para possíveis variantes de anticorpos, por exemplo, contendo mutações de ocorrência natural ou surgindo durante a produção de uma preparação de anticorpo monoclonal, tais variantes geralmente estando presentes em quantidades menores. Em contraste às preparações de anticorpo policlonal, que normalmente incluem diferentes anticorpos direcionados contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticorpo monoclonal de uma preparação de anticorpo monoclonal é direcionado contra um único determinante em um antígeno. Assim, o modificador "monoclonal" indica o caráter do anticorpo como sendo obtido de uma população substancialmente homogênea de anticorpos, e não deve ser interpretado como exigindo a produção do anticorpo por qualquer método específico. Por exemplo, os anticorpos monoclonais descritos neste documento podem ser feitos por uma variedade de técnicas, incluindo, mas não se limitando a, método de hibridoma, métodos de DNA recombinante, métodos de exibição de fago e métodos que usam animais transgênicos contendo todos ou parte dos loci de imunoglobulina humana, tais métodos e outros métodos exemplares para a produção de anticorpos monoclonais.
[0065] Um anticorpo “bloqueador” ou um anticorpo “antagonista” é aquele que inibe ou reduz a atividade biológica do antígeno ao qual se liga.
Os anticorpos bloqueadores ou antagonistas preferidos inibem substancialmente ou completamente a atividade biológica do antígeno.
[0066] O termo anticorpo “quimérico” refere-se a um anticorpo em que uma porção da cadeia pesada e/ou leve é derivada de uma fonte ou espécie em particular, enquanto o restante da cadeia pesada e/ou leve é derivada a partir de uma diferente fonte ou espécie.
[0067] Os termos "anticorpo de comprimento total", "anticorpo intacto" e "anticorpo inteiro" são usados aqui indistintamente para referirem-se a um anticorpo (por exemplo, um anticorpo anti-KLK5) tendo uma estrutura substancialmente semelhante a uma estrutura de anticorpo nativo ou tendo cadeias pesadas que contêm uma região Fc.
[0068] Um "anticorpo humano" é aquele que possui uma sequência de aminoácidos que corresponde à de um anticorpo produzido por um humano ou uma célula humana ou derivado de uma fonte não humana que usa repertórios de anticorpos humanos ou outras sequências que codificam anticorpos humanos. Esta definição de um anticorpo humano exclui especificamente um anticorpo humanizado compreendendo resíduos de ligação ao antígeno não humanos.
[0069] Um anticorpo "humanizado" refere-se a um anticorpo quimérico compreendendo resíduos de aminoácidos de HVRs não humanas e resíduos de aminoácidos de FRs humanas. Em certas modalidades, um anticorpo humanizado compreenderá substancialmente todos de pelo menos um e, normalmente, dois domínios variáveis, nos quais todas ou substancialmente todas as HVRs (por exemplo, CDRs) correspondem a tais de um anticorpo não humano e todas ou substancialmente todas as FRs correspondem a tais de um anticorpo humano. Um anticorpo humanizado pode compreender opcionalmente pelo menos uma porção de uma região constante de anticorpo derivada de um anticorpo humano. Uma "forma humanizada" de um anticorpo, por exemplo, um anticorpo não humano, refere-se a um anticorpo que passou por humanização.
[0070] "Anticorpos nativos" referem-se a moléculas da imunoglobulina de ocorrência natural com estruturas variadas. Por exemplo, os anticorpos IgG nativos são glicoproteínas heterotetraméricas de cerca de
150.000 daltons, compostas por duas cadeias leves idênticas e duas cadeias pesadas idênticas que estão ligadas por dissulfeto. Do terminal N ao C, cada cadeia pesada tem uma região variável (VH), também denominada domínio variável pesado ou domínio variável da cadeia pesada, seguido por três domínios constantes (CH1, CH2 e CH3). Da mesma forma, do terminal N ao C, cada cadeia leve tem uma região variável (VL), também denominada domínio variável leve ou domínio variável da cadeia leve, seguido por um domínio leve constante (CL). A cadeia leve de um anticorpo pode ser atribuída a um dos dois tipos, chamados kappa (κ) e lambda (λ), com base na sequência de aminoácidos de seu domínio constante.
[0071] A “classe” de um anticorpo refere-se ao tipo de domínio constante ou região constante possuído pela sua cadeia pesada. Existem cinco classes principais de anticorpos: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, e vários destes podem ser ainda divididos em subclasses (isotipos), por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2. Os domínios constantes da cadeia pesada que correspondem às diferentes classes de imunoglobulinas são chamados α, δ, ε, γ e μ, respectivamente.
[0072] Um "fragmento de anticorpo" refere-se a uma molécula diferente de um anticorpo intacto que compreende uma porção de um anticorpo intacto que se liga ao antígeno ao qual o anticorpo intacto se liga. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem, mas não estão limitados a Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab') 2; diacorpos; anticorpos lineares; moléculas de anticorpo de cadeia simples (por exemplo, scFv); e anticorpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticorpos.
[0073] Um "anticorpo que se liga ao mesmo epítopo" ou um "anticorpo que se liga à mesma região de ligação" como um anticorpo de referência refere-se a um anticorpo que bloqueia a ligação do anticorpo de referência ao seu parceiro de ligação (por exemplo, um antígeno) em um ensaio de competição em 50% ou mais, e inversamente, o anticorpo de referência bloqueia a ligação do anticorpo ao seu parceiro de ligação em um ensaio de competição em 50% ou mais.
[0074] O termo "epítopo termodinâmico", por exemplo, no contexto do mapeamento de epítopos usando espectrometria de massa de troca de hidrogênio, refere-se às porções de uma proteína cuja dinâmica estrutural da espinha dorsal ou energia livre local de desdobramento são alteradas em resposta a um evento de ligação específico, tal como ser ligado por um anticorpo. O epítopo estrutural pode ou não estar parcialmente ou totalmente contido no epítopo termodinâmico.
[0075] O termo "região hipervariável" ou "HVR", conforme usado neste documento, refere-se a cada uma das regiões de um domínio variável de anticorpo que são hipervariáveis em sequência ("regiões determinantes de complementaridade" ou "CDRs") e/ou formam alças estruturalmente definidas ("alças hipervariáveis”) e/ou contêm os resíduos que entram em contato com o antígeno (“contatos ao antígeno”). Geralmente, os anticorpos compreendem seis HVRs: três na VH (H1, H2, H3) e três na VL (L1, L2, L3). HVRs exemplificares do presente documento incluem: (a) alças hipervariáveis que ocorrem nos resíduos de aminoácidos 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (H2) e 96- 101 (H3) (Chothia e Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)); (b) CDRs que ocorrem nos resíduos de aminoácidos 24-34 (L1), 50-56 (L2), 89-97 (L3), 31-35b (H1), 50-65 (H2) e 95-102 (H3) (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5ª edição, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)); (c) contatos de antígeno que ocorrem nos resíduos de aminoácidos 27c-36 (L1), 46-55 (L2), 89-96 (L3), 30-35b (H1), 47-58 (H2) e 93- 101 (H3) (MacCallum et al., J. Mol. Biol., 262:732-745 (1996)); e (d) combinações de (a), (b) e/ou (c), incluindo os resíduos de aminoácidos de HVR 46-56 (L2), 47-56 (L2), 48-56 (L2), 49-56 (L2), 26-35 (H1), 26-35b (H1), 49-65 (H2), 93-102 (H3) e 94-102 (H3).
[0076] Salvo indicação em contrário, os resíduos de HVR e outros resíduos no domínio variável (por exemplo, resíduos de FR) são numerados aqui de acordo com Kabat et al., supra, por exemplo, conforme estabelecido nas Figuras 13-16, bem como na Tabela de Sequências abaixo neste documento. Salvo indicação em contrário, as CDRs são determinadas de acordo com Kabat et al., supra.
[0077] O termo "região variável" ou "domínio variável" refere-se ao domínio de um anticorpo da cadeia pesada ou leve que está envolvido na ligação do anticorpo e um antígeno. Os domínios variáveis da cadeia pesada e da cadeia leve (VH e VL, respectivamente) de um anticorpo nativo geralmente têm estruturas semelhantes, com cada domínio compreendendo quatro regiões estruturais conservadas (FRs) e três regiões hipervariáveis (HVRs). (Vide, por exemplo, Kindt et al., Kuby Immunology, 6ª edição, WH REeeman e Co., página 91 (2007)). Um único domínio VH ou VL pode ser suficiente para conferir especificidade de ligação ao antígeno. Além disso, os anticorpos que se ligam a um antígeno específico podem ser isolados usando um domínio VH ou VL de um anticorpo que se liga ao antígeno para rastrear uma biblioteca de domínios VL ou VH complementares, respectivamente. Vide, por exemplo, Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991).
[0078] O termo “região Fc” é usado neste documento para definir uma região do terminal C de uma cadeia pesada de imunoglobulina que contém pelo menos uma porção da região constante. O termo inclui regiões Fc de sequência nativa e regiões Fc variantes. Em uma modalidade, uma região Fc da cadeia pesada da IgG humana se estende de Cys226, ou de Pro230, até o terminal carboxila da cadeia pesada. No entanto, a lisina do terminal C (Lys447) da região Fc pode ou não estar presente. A menos que especificado de outra forma neste documento, a numeração de resíduos de aminoácidos na região Fc ou região constante está de acordo com o sistema de numeração da UE, também chamado de índice UE, conforme descrito em Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5ª Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991.
[0079] “Região estrutural” ("framework") ou “FR” referem-se aos resíduos de domínio variável diferentes dos resíduos de região hipervariável (HVR). A FR de um domínio variável consiste geralmente em quatro domínios FR: FR1, FR2, FR3 e FR4. Por conseguinte, as sequências de HVR e FR geralmente aparecem na seguinte sequência na VH (ou VL): FR1-H1(L1)-FR2- H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
[0080] Uma “estrutura aceitadora humana” para os fins descritos no presente documento, é uma estrutura que compreende a sequência de aminoácidos de uma estrutura de domínio variável da cadeia leve (VL) ou uma estrutura de domínio variável da cadeia pesada (VH) derivada de uma estrutura de imunoglobulina humana ou de uma estrutura de consenso humana, conforme definido abaixo. Uma estrutura aceitadora humana “derivada de” uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humano pode compreender sua mesma sequência de aminoácidos, ou pode conter alterações na sequência de aminoácidos. Em algumas modalidades, o número de alterações de aminoácidos são 10 ou menos, 9 ou menos, 8 ou menos, 7 ou menos, 6 ou menos, 5 ou menos, 4 ou menos, 3 ou menos, ou 2 ou menos. Em algumas modalidades, a estrutura aceitadora humana de VL é idêntica em sequência à sequência de estrutura de imunoglobulina humana de VL ou sequência de estrutura de consenso humana.
[0081] Uma "região estrutural de consenso humana" é uma região estrutural que representa os resíduos de aminoácidos mais comuns em uma seleção de sequências de regiões estruturais de VL ou VH da imunoglobulina humana. Geralmente, a seleção de sequências de VL ou VH da imunoglobulina humana é a partir de um subgrupo de sequências de domínio variável. Geralmente, o subgrupo de sequências é um subgrupo conforme em Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Quinta Edição, NIH Publication 91-3242, Bethesda, MD, (1991), volumes 1 a 3. Em uma modalidade, para a VL, o subgrupo é o subgrupo kappa I, conforme em Kabat et al., supra. Em uma modalidade, para a VH, o subgrupo é o subgrupo kappa III, conforme em Kabat et al., supra.
[0082] "Afinidade" ou "afinidade de ligação" referem-se à força da soma total de interações não covalentes entre um único sítio de ligação de uma molécula (por exemplo, anticorpo, polipeptídeo de ligação, polinucleotídeo, molécula pequena) e seu parceiro de ligação (por exemplo, um antígeno). A menos que indicado de outra forma, tal como usado neste documento,
"afinidade de ligação" refere-se à afinidade de ligação intrínseca que reflete uma interação 1:1 entre membros de um par de ligação (por exemplo, qualquer um de anticorpo, polipeptídeo de ligação, polinucleotídeo, molécula pequena e o antígeno). A afinidade de uma molécula X para seu parceiro Y pode geralmente ser representada pela constante de dissociação (Kd). A afinidade pode ser medida por métodos comuns conhecidos na técnica, incluindo aqueles descritos no presente documento. Modalidades ilustrativas e exemplos específicos para medir a afinidade de ligação encontram-se descritos a seguir.
[0083] Um anticorpo de "afinidade amadurecida" refere-se a um anticorpo com uma ou mais alterações em uma ou mais regiões hipervariáveis (HVRs), comparado a um anticorpo progenitor que não possui tais alterações, resultando em um aprimoramento na afinidade do anticorpo para antígeno.
[0084] Uma "região de ligação" é a porção do parceiro de ligação (por exemplo, um antígeno) ao qual um anticorpo KLK5 seletivamente se liga.
Para um parceiro de ligação do polipeptídeo de ligação, uma região de ligação linear pode ser uma porção de peptídeo de cerca de 4-15 (por exemplo, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15) resíduos de aminoácido. Uma região de ligação conformacional não linear pode compreender resíduos de uma sequência de polipeptídeos trazida para a vizinhança próxima na estrutura tridimensional (3D) do parceiro de ligação do polipeptídeo de ligação.
[0085] “Funções efetoras” referem-se às atividades biológicas atribuíveis à região Fc de um anticorpo, que variam com o isotipo do anticorpo.
Exemplos de funções efetoras de anticorpo incluem: ligação de C1q e citotoxicidade dependente do complemento (CDC); ligação ao receptor Fc; citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpos (ADCC); fagocitose; regulação negativa de receptores de superfície celular (por exemplo, receptor de células B); e ativação de células B.
[0086] Os termos “KLK5” e "Calicreína-5", tal como usados neste documento, referem-se a qualquer KLK5 nativo de qualquer fonte de vertebrado, incluindo mamíferos, tais como primatas (por exemplo, humanos) e roedores (por exemplo, camundongos e ratos), a menos que indicado de outra forma. O termo abrange KLK5 não processado de "comprimento total", bem como qualquer forma de KLK5 que resulte do processamento na célula. O termo também abrange variantes de ocorrência natural de KLK5, por exemplo, variantes de splicing ou variantes alélicas. Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos de um KLK5 humano exemplar é Q9Y337 da UNIPROT. Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos de um KLK5 humano exemplar é selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7 e SEQ ID NO:8. Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos de um KLK5 humano exemplar é os resíduos de aminoácidos 23- 293 (menos o peptídeo sinal) de Q9Y337 da UNIPROT (G55, variante D153) e é mostrada na SEQ ID NO:2. Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos de um KLK5 humano exemplar são os resíduos de aminoácidos 23-293 (menos o peptídeo sinal) da variante G55, N153 mostrada na SEQ ID NO:4. Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos de um KLK5 humano exemplar são os resíduos de aminoácidos 23-293 (menos o peptídeo sinal) da variante R55, N153 mostrada na SEQ ID NO:6. Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos de um KLK5 humano exemplar são os resíduos de aminoácidos 23-293 (menos o peptídeo sinal) da variante R55, D153 mostrada na SEQ ID NO:8.
[0087] A numeração neste parágrafo abaixo refere-se a KLK5 não processado de comprimento total. Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos do KLK5 humano compreende o aminoácido N na posição 153. Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos do KLK5 humano compreende o aminoácido D na posição 153. Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos do KLK5 humano compreende o aminoácido G na posição 55. Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos do KLK5 humano compreende o aminoácido R na posição 55. Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos do KLK5 humano compreende o aminoácido G na posição 55 e o aminoácido N na posição 153. Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos do KLK5 humano compreende o aminoácido G na posição 55 e o aminoácido D na posição 153. Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos do KLK5 humano compreende o aminoácido R na posição 55 e o aminoácido N na posição 153. Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos do KLK5 humano compreende o aminoácido R na posição 55 e o aminoácido D na posição 153.
[0088] A numeração neste parágrafo abaixo refere-se a KLK5 não processado de comprimento total. Em algumas modalidades, a sequência de ácido nucleico do KLK5 humano compreende uma sequência que codifica um N na posição 153. Em algumas modalidades, a sequência de ácido nucleico do KLK5 humano compreende uma sequência que codifica um D na posição 153. Em algumas modalidades, a sequência de ácido nucleico do KLK5 humano compreende uma sequência que codifica um G na posição 55.
Em algumas modalidades, a sequência de ácido nucleico do KLK5 humano compreende uma sequência que codifica um R na posição 55. Em algumas modalidades, a sequência de ácido nucleico do KLK5 humano compreende uma sequência que codifica um G na posição 55 e um N na posição 153. Em algumas modalidades, a sequência de ácido nucleico do KLK5 humano compreende uma sequência que codifica um G na posição 55 e um D na posição 153. Em algumas modalidades, a sequência de ácido nucleico do KLK5 humano compreende uma sequência que codifica um R na posição 55 e um N na posição 153. Em algumas modalidades, a sequência de ácido nucleico do KLK5 humano compreende uma sequência que codifica um R na posição 55 e um D na posição 153.
[0089] Os termos "SPINK5" e "inibidor da serina protease do tipo Kazal 5", conforme usados neste documento, referem-se a qualquer SPINK5 nativo de qualquer fonte de vertebrados, incluindo mamíferos, tais como primatas (por exemplo, humanos) e roedores (por exemplo, camundongos e ratos), exceto quando indicado. O termo abrange SPINK5 não processado de "comprimento total", bem como qualquer forma de SPINK5 que resulte do processamento na célula. O termo também abrange variantes de ocorrência natural de SPINK5, por exemplo, variantes de splicing ou variantes alélicas. Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos de um SPINK5 humano exemplar é Q9NQ38 da UNIPROT e é mostrada na SEQ ID NO:9. Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos de um SPINK5 humano exemplar são os resíduos de aminoácidos 23-1064 (menos o peptídeo sinal) de Q9NQ38 da UNIPROT e é mostrada na SEQ ID NO:10.
[0090] O termo "polipeptídeo de fusão SPINK", conforme usado neste documento, refere-se a um polipeptídeo de fusão no qual um polipeptídeo SPINK ou um fragmento do mesmo (por exemplo, certos domínios do polipeptídeo SPINK (por exemplo, SPINK5 e/ou SPINK9) está ligado, diretamente ou indiretamente, a outro polipeptídeo (por exemplo, polipeptídeo não SPINK).
[0091] O termo "polipeptídeo de fusão SPINK de Fc", conforme usado neste documento, refere-se a um polipeptídeo de fusão no qual um polipeptídeo SPINK ou um fragmento do mesmo (por exemplo, certos domínios do polipeptídeo SPINK (por exemplo, SPINK5 e ou SPINK9) está ligado, diretamente ou indiretamente, a uma região Fc. Em algumas modalidades, a região Fc é selecionada a partir do grupo que consiste em uma região Fc de IgG1, região Fc de IgG2a e região Fc de IgG4. Em algumas modalidades, a região Fc é uma região Fc de IgG2a. Em algumas modalidades, a região Fc de
IgG2a é uma região Fc de IgG2a de camundongo. Em algumas modalidades, a região Fc é uma região Fc de IgG1. Em algumas modalidades, a região Fc de IgG1 é uma região Fc de IgG1 humana. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região Fc de IgG4. Em algumas modalidades, a região Fc de IgG4 é uma região Fc de IgG4 humana. Em algumas modalidades, o polipeptídeo SPINK ou um fragmento do mesmo é um polipeptídeo SPINK humano ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, o polipeptídeo SPINK ou um fragmento do mesmo é um polipeptídeo SPINK de camundongo ou um fragmento do mesmo. Entende-se que variações menores de sequência, tais como inserções, deleções, substituições, especialmente substituições conservativas de aminoácidos do polipeptídeo SPINK, dos domínios SPINK ou da Fc, que não afetam a função e/ou atividade do polipeptídeo SPINK, dos domínios SPINK ou do polipeptídeo de fusão SPINK de Fc, são fornecidas neste documento. Em algumas modalidades, o polipeptídeo de fusão SPINK de Fc fornecido aqui pode se ligar a KLK5, o que pode levar à inibição de KLK5.
Em algumas modalidades, o polipeptídeo SPINK ou um fragmento do mesmo é SPINK 9. Em algumas modalidades, o polipeptídeo de fusão SPINK de Fc é SPINK9.SRE.Fc (SEQ ID NO:320).
[0092] O termo "polipeptídeo", conforme usado neste documento, refere-se a qualquer polipeptídeo nativo de interesse (por exemplo, KLK5 ou SPINK5) de qualquer fonte de vertebrados, incluindo mamíferos, tais como primatas (por exemplo, humanos) e roedores (por exemplo, camundongos e ratos), a menos que indicado de outra forma. O termo abrange polipeptídeo não processado de "comprimento total", bem como qualquer forma do polipeptídeo que resulte do processamento na célula. O termo também abrange variantes de ocorrência natural do polipeptídeo, por exemplo, variantes de splicing ou variantes alélicas.
[0093] "Porcentagem (%) de identidade de sequência de aminoácidos" em relação a uma sequência de polipeptídeos de referência é definida como a porcentagem de resíduos de aminoácidos em uma sequência candidata que são idênticos aos resíduos de aminoácidos na sequência de polipeptídeos de referência, após o alinhamento das sequências e introdução dos espaçamentos, se necessário, para atingir a porcentagem máxima de identidade de sequência, e não considerando quaisquer substituições conservativas como parte da identidade de sequência.
O alinhamento para fins de determinação da porcentagem de identidade de sequência de aminoácidos pode ser alcançado de várias maneiras dentro da especialidade na técnica, por exemplo, usando software de computador disponível ao público, tal como o software BLAST, BLAST-2, ALIGN ou Megalign (DNASTAR). Os técnicos no assunto podem determinar parâmetros apropriados para o alinhamento de sequências, incluindo quaisquer algoritmos necessários para alcançar o alinhamento máximo ao longo de todo o comprimento das sequências sendo comparadas.
Para os propósitos deste documento, no entanto, os valores da %
de identidade de sequência de aminoácidos são gerados usando o programa de computador de comparação de sequência ALIGN-2. O programa de computador para comparação de sequências ALIGN-2 foi criado pela
Genentech, Inc., e o código-fonte foi depositado com documentação do usuário no Copyright Office dos EUA, Washington DC, 20559, em que está registrado sob o registro de direitos autorais dos EUA de nº TXU510087. O programa
ALIGN-2 está disponível publicamente na Genentech, Inc., sul de São
Francisco, Califórnia, ou pode ser compilado a partir do código-fonte.
O programa ALIGN-2 deve ser compilado para uso em um sistema operacional
UNIX, incluindo UNIX V4.0D digital.
Todos os parâmetros de comparação de sequência são ajustados pelo programa ALIGN-2 e não variam.
Em situações em que se usa ALIGN-2 para comparações de sequências de aminoácidos, a
% da identidade de sequência de aminoácidos de uma determinada sequência de aminoácidos A para, com, ou contra uma determinada sequência de aminoácidos B (que pode alternativamente ser formulada como uma determinada sequência de aminoácidos A que tem ou compreende uma determinada % da identidade de sequência de aminoácidos para, com, ou contra uma determinada sequência de aminoácidos B) é calculada como se segue: 100 vezes a fração X/Y - em que X é o número de resíduos de aminoácidos pontuados como correspondências idênticas pelo programa de alinhamento de sequência ALIGN-2 no alinhamento desse programa de A e B, e em que Y é o número total de resíduos de aminoácidos em B. Será apreciado que em que o comprimento da sequência de aminoácidos A não é igual ao comprimento da sequência de aminoácidos B, a % da identidade de sequência de aminoácidos de A a B não será igual à % da identidade de sequência de aminoácidos de B a A. os valores da identidade de sequência de aminoácidos usados neste documento são obtidos conforme descrito no parágrafo imediatamente anterior usando o programa de computador ALIGN-2.
[0094] "Polinucleotídeo" ou "ácido nucleico", conforme usado indistintamente aqui, referem-se a polímeros de nucleotídeos de qualquer comprimento e incluem DNA e RNA. Os nucleotídeos podem ser desoxirribonucleotídeos, ribonucleotídeos, nucleotídeos ou bases modificados e/ou seus análogos, ou qualquer substrato que pode ser incorporado em um polímero por DNA ou RNA polimerase, ou por uma reação sintética. Um polinucleotídeo pode compreender nucleotídeos modificados, tais como nucleotídeos metilados e seus análogos. Se presente, a modificação à estrutura do nucleotídeo pode ser transmitida antes ou depois da montagem do polímero. A sequência de nucleotídeos pode ser interrompida por componentes não nucleotídicos. Um polinucleotídeo pode ser modificado posteriormente após a síntese, tal como por conjugação com um marcador. Outros tipos de modificações incluem, por exemplo, "caps", substituição de um ou mais dos nucleotídeos de ocorrência natural por um análogo, modificações internucleotídicas, tais como, por exemplo, aquelas com ligações não carregadas (por exemplo, metilfosfonatos, fosfotriésteres, fosfoamidatos, carbamatos, etc.) e com ligações carregadas (por exemplo, fosforotioatos, fosforoditioatos, etc.), aquelas contendo frações pendentes, tais como, por exemplo, proteínas (por exemplo, nucleases, toxinas, anticorpos, peptídeos sinaiw, poli-L-lisina, etc.), aquelas com intercaladores (por exemplo, acridina, psoraleno, etc.), aquelas contendo quelantes (por exemplo, metais, metais radioativos, boro, metais oxidativos, etc.), aquelas contendo alquiladores, aquelas com ligações modificadas (por exemplo, ácidos nucleicos alfa anoméricos, etc.), bem como formas não modificadas do(s) polinucleotídeo(s).
Além disso, qualquer um dos grupos hidroxila normalmente presentes nos açúcares podem ser substituídos, por exemplo, por grupos fosfonato, grupos fosfato, protegidos por grupos de proteção padrão ou ativados para preparar ligações adicionais a nucleotídeos adicionais, ou podem ser conjugados a suportes sólidos ou semissólidos. O terminal OH 5 'e 3' pode ser fosforilado ou substituído por aminas ou frações de grupo de cobertura orgânica de 1 a 20 átomos de carbono. Outras hidroxilas também podem ser derivadas em grupos de proteção padrão. Os polinucleotídeos também podem conter formas análogas de açúcares ribose ou desoxirribose que são geralmente conhecidos na técnica, incluindo, por exemplo, 2'-O-metil−, 2'-O-alila, 2'-fluoro- ou 2'-azido- ribose, análogos de açúcar carbocíclicos, açúcares α-anoméricos, açúcares epiméricos, tais como arabinose, xiloses ou lixoses, açúcares piranose, açúcares furanose, sedoeptuloses, análogos acíclicos e análogos de nucleosídeos abásicos, tais como ribosídeo de metila. Uma ou mais ligações fosfodiéster podem ser substituídas por grupos de ligação alternativos. Estes grupos de ligação alternativos incluem, mas não estão limitados a, modalidades em que o fosfato é substituído por P(O)S ("tioato"), P(S)S ("ditioato"), "(O)NR2 ("amidato"), P(O)R, P(O)OR', CO ou CH2 ("formacetal"), em que cada R ou R' é independentemente H ou alquila (1-20 C) substituída ou não substituída opcionalmente contendo uma ligação éter (-O-), arila, alquenila, cicloalquila, cicloalquenila ou araldila. Nem todas as ligações em um polinucleotídeo precisam ser idênticas. A descrição anterior se aplica a todos os polinucleotídeos referidos neste documento, incluindo RNA e DNA.
[0095] Um polinucleotídeo “isolado” refere-se a uma molécula de ácido nucleico que foi separada de um componente do seu ambiente natural.
Um ácido nucleico isolado inclui uma molécula de ácido nucleico contida em células que normalmente contêm a molécula de ácido nucleico, mas a molécula de ácido nucleico está presente de forma extracromossômica ou em uma localização cromossômica diferente da sua localização cromossômica natural.
[0096] “Ácido nucleico isolado que codifica um anticorpo anti- KLK5” refere-se a uma ou mais moléculas de ácido nucleico que codificam o anticorpo das cadeias pesadas e leves (ou fragmentos do mesmo), incluindo tal(is) molécula(s) de ácido nucleico em um único vetor ou em vetores separados, e tal(is) molécula(s) de ácido nucleico presentes em um ou mais locais em uma célula hospedeira.
[0097] O termo "sequência genômica de KLK5", como usado neste documento, refere-se ao cDNA e/ou à forma genômica do gene KLK5, que pode incluir íntrons, bem como sequências regulatórias a montante e a jusante.
[0098] Os termos “célula hospedeira”, “linhagem celular hospedeira”, e “cultura de células hospedeiras” são usados indiferentemente e referem-se às células hospedeiras nas quais o ácido nucleico exógeno foi introduzido, incluindo a progênie de tais células. As células hospedeiras incluem “transformantes” e “células transformadas”, que incluem a célula primária transformada e a progênie derivada da mesma sem ter em conta o número de passagens. A progênie pode não ser completamente idêntica no conteúdo de ácido nucleico a uma célula-mãe, mas pode conter mutações. A progênie mutante que tem a mesma função ou atividade biológica conforme rastreada ou selecionada na célula originalmente transformada estão incluídas neste documento.
[0099] O termo “vetor”, conforme usado no presente documento, refere-se a uma molécula de ácido nucleico capaz de propagar um outro ácido nucleico ao qual ela está ligada. O termo inclui o vetor como uma estrutura de ácido nucleico de autorreplicação, bem como o vetor incorporado no genoma de uma célula hospedeira na qual foi introduzido. Certos vetores são capazes de direcionar a expressão de ácidos nucleicos aos quais estão operativamente ligados. Tais vetores são aqui referidos como “vetores de expressão”.
[00100] Uma "amostra de referência", "célula de referência", "tecido de referência", "amostra de controle", "célula de controle" ou "tecido de controle", como aqui usado, refere-se a uma amostra, célula, tecido, padrão ou nível que são usados para fins de comparação. Em uma modalidade, uma amostra de referência, célula de referência, tecido de referência, amostra de controle, célula de controle ou tecido de controle são obtidos a partir de uma parte saudável e/ou não doente do corpo (por exemplo, tecido ou células) do mesmo paciente. Por exemplo, células saudáveis e/ou não doentes ou tecido adjacente às células ou tecido doentes (por exemplo, células ou tecido adjacente a um tumor). Em outra modalidade, uma amostra de referência é obtida a partir de um tecido não tratado e/ou célula do corpo do mesmo paciente. Em ainda outra modalidade, uma amostra de referência, célula de referência, tecido de referência, amostra de controle, célula de controle ou tecido de controle são obtidos a partir de uma parte saudável e/ou não doente do corpo (por exemplo, tecidos ou células) de outro paciente. Em ainda outra modalidade, uma amostra de referência, célula de referência, tecido de referência, amostra de controle, célula de controle ou tecido de controle são obtidos a partir de um tecido não tratado e/ou célula do corpo de outro paciente.
[00101] O termo "amostra", conforme usado neste documento, refere-se a uma formulação que é obtida ou derivada de um paciente de interesse que contém uma entidade celular e/ou outra molecular que deve ser distinguida e/ou identificada, por exemplo, com base em características físicas, bioquímicas, químicas e/ou fisiológicas. Por exemplo, a frase "amostra de doença" e variações da mesma referem-se a qualquer amostra obtida a partir de um paciente de interesse que seria esperado ou que contenha a entidade celular e/ou molecular que deve ser distinguida. As amostras incluem, mas não estão limitadas a, células primárias ou em cultura ou linhagens celulares, sobrenadantes celulares, lisados celulares, plaquetas, soro, plasma, fluido vítreo, fluido linfático, fluido sinovial, fluido folicular, fluido seminal, fluido amniótico, leite, sangue total, células derivadas do sangue, urina, líquido cefalorraquidiano, saliva, expectoração, lágrimas, transpiração, muco, lisados tumorais, meio de cultura de tecidos, extratos de tecidos, tais como tecido homogeneizado, tecido tumoral, extratos celulares e suas combinações.
[00102] Por "amostra de tecido" ou "amostra de célula" entende- se uma coleção de células semelhantes obtidas a partir de um tecido de um paciente. A fonte da amostra de tecido ou célula pode ser tecido sólido a partir de um órgão fresco, congelado e/ou preservado, amostra de tecido, biópsia e/ou aspirado; sangue ou quaisquer constituintes de sangue, tais como plasma; fluidos corporais, tais como fluido cefalorraquidiano, fluido amniótico, fluido peritoneal ou fluido intersticial; células de qualquer momento da gestação ou desenvolvimento do paciente. A amostra de tecido também pode ser células primárias ou em cultura ou linhagens celulares. Opcionalmente, a amostra de tecido ou célula é obtida a partir de um tecido/órgão doente. A amostra de tecido pode conter compostos que não são misturados naturalmente com o tecido na natureza, tais como conservantes, anticoagulantes, tampões, fixadores, nutrientes, antibióticos ou similares.
[00103] Uma "quantidade eficaz" de um agente, por exemplo, uma formulação farmacêutica, refere-se a uma quantidade eficaz, em dosagens e por períodos de tempo necessários, para atingir o resultado terapêutico desejado.
[00104] Um “paciente” é um mamífero. Os mamíferos incluem, mas não estão limitados a, animais domesticados (por exemplo, vacas, ovelhas, gatos, cães e cavalos), primatas (por exemplo, primatas humanos e não humanos, tais como macacos), coelhos e roedores (por exemplo, camundongos e ratos). Em algumas modalidades, o paciente é um humano.
[00105] O termo "paciente", conforme usado neste documento, refere-se a um animal, tal como um mamífero. Em uma modalidade, o paciente refere-se a um humano.
[00106] O termo "formulação farmacêutica" refere-se a uma preparação que está em uma tal forma que permite que a atividade biológica de um ingrediente ativo nela contido seja eficaz, e que não contém componentes adicionais que são inaceitavelmente tóxicos para um paciente ao qual a formulação seria administrada.
[00107] Um “transportador farmaceuticamente aceitável” refere-se a um ingrediente em uma formulação farmacêutica, diferente de um ingrediente ativo, que não é tóxico a um paciente. Um transportador farmaceuticamente aceitável inclui, mas não está limitado a um tampão, excipiente, estabilizador ou conservante.
[00108] O termo "asma com alto teor de Th2", tal como usado neste documento, refere-se à asma que exibe níveis elevados de uma ou mais citocinas relacionadas a células Th2, por exemplo, IL13, IL4, IL9, IL5 ou que exibe inflamação associada a citocinas Th2. Em algumas modalidades, o termo asma com alto teor de Th2 pode ser usado alternadamente com asma com alto teor de eosinófilos. Em algumas modalidades, a asma com alto teor de Th2 é asma induzida por Th2. Em algumas modalidades, o paciente com asma foi determinado como sendo positivo para inflamação eosinofílica (EIP). Vide, por exemplo, a Publicação do Pedido de Patente Internacional de nº WO 2015/061441, que é incorporada neste documento por referência em sua totalidade. Em algumas modalidades, o paciente foi determinado como tendo níveis elevados de pelo menos um dos genes de assinatura eosinofílica em comparação com um nível de controle ou de referência. Vide WO2015/061441.
Em algumas modalidades, a asma com alto teor de Th2 é asma com alto teor de periostina. Em algumas modalidades, o paciente tem periostina sérica elevada. Em algumas modalidades, o paciente tem dezoito anos ou mais. Em algumas modalidades, o paciente foi determinado como tendo um nível elevado de periostina sérica em comparação com nível de controle ou de referência.
Em algumas modalidades, o nível de controle ou de referência é o nível mediano de periostina em uma população. Em algumas modalidades, o paciente foi determinado como tendo 20 ng/ml ou mais de periostina sérica. Em algumas modalidades, o paciente foi determinado como tendo 25 ng/ml ou mais de periostina sérica. Em algumas modalidades, o paciente foi determinado como tendo 50 ng/ml ou mais de periostina sérica. Em algumas modalidades, o nível de controle ou de referência de periostina sérica é de 20 ng/ml, 25 ng/ml ou 50 ng/ml. Em algumas modalidades, a asma é asma com alto teor de eosinófilos. Em algumas modalidades, o paciente foi determinado como tendo uma contagem elevada de eosinófilos em comparação com um nível de controle ou de referência. Em algumas modalidades, o nível de controle ou de referência é o nível mediano de uma população. Em algumas modalidades, o paciente foi determinado como tendo 150 ou mais de contagem de eosinófilos/μl de sangue. Em algumas modalidades, o paciente foi determinado como tendo 200 ou mais de contagem de eosinófilos/μl de sangue. Em algumas modalidades, o paciente foi determinado como tendo 250 ou mais de contagem de eosinófilos/μl de sangue. Em algumas modalidades, o paciente foi determinado como tendo 300 ou mais de contagem de eosinófilos/μl de sangue. Em algumas modalidades, o paciente foi determinado como tendo 350 ou mais de contagem de eosinófilos/μl de sangue. Em algumas modalidades, o paciente foi determinado como tendo 400 ou mais de contagem de eosinófilos/μl de sangue. Em algumas modalidades, o paciente foi determinado como tendo 450 ou mais de contagem de eosinófilos/μl de sangue. Em algumas modalidades, o paciente foi determinado como tendo 500 ou mais de contagem de eosinófilos/μl de sangue. Em algumas modalidades preferidas, o paciente foi determinado como tendo 300 ou mais de contagem de eosinófilos/μl de sangue. Em algumas modalidades, os eosinófilos são eosinófilos do sangue periférico. Em algumas modalidades, os eosinófilos são eosinófilos de expectoração. Em algumas modalidades, o paciente exibe um nível elevado de FeNO (ácido nítrico exalado fracionado) e/ou nível elevado de IgE. Por exemplo, em alguns casos, o paciente exibe um nível de FeNO acima de qualquer um de cerca de 5 ppb (partes por bilhão), 10 ppb, 15 ppb, 20 ppb, 25 ppb, 30 ppb, 35 ppb, 40 ppb, 45 ppb, 50 ppb, 60 ppb, 70 ppb, 80 ppb, 90 ppb e 100 ppb. Em alguns casos, o paciente tem um nível de IgE acima de 50 IU/ml.
[00109] Os termos "asma com baixo teor de Th2", "asma sem alto teor de Th2", "asma do tipo 2 baixo", "asma com baixo teor de T2", "asma não eosinofílica", "asma pauci-granulocítica" ou "asma pauci-inflamatória", como usados neste documento, referem-se à asma que exibe baixos níveis de uma ou mais citocinas relacionadas às células Th2 para, por exemplo, IL13, IL4, IL9, IL5, ou que exibe inflamação não associada à citocinas Th2. Em algumas modalidades, o termo asma com baixo teor de TH2 pode ser usado alternadamente com asma com baixo teor de eosinófilos. Em algumas modalidades, o paciente com asma foi determinado como sendo negativo para inflamação eosinofílica (EIN). Vide, por exemplo, WO 2015/061441. Em algumas modalidades, a asma com baixo teor de TH2 é asma induzida por Th17. Em algumas modalidades, a asma com baixo teor de TH2 é asma com baixo teor de periostina. Em algumas modalidades, o paciente tem dezoito anos ou mais. Em algumas modalidades, o paciente foi determinado como tendo um nível reduzido de periostina sérica em comparação com um nível de controle ou de referência. Em algumas modalidades, o nível de controle ou de referência é o nível mediano de periostina em uma população. Em algumas modalidades, o paciente foi determinado como tendo menos de 20 ng/ml de periostina sérica. Em algumas modalidades, a asma é asma com baixo teor de eosinófilos. Em algumas modalidades, o paciente foi determinado como tendo uma contagem de eosinófilos reduzida em comparação com um nível de controle ou de referência. Em algumas modalidades, o nível de controle ou de referência é o nível médio de uma população. Em algumas modalidades, o paciente foi determinado como tendo menos de 150 de contagem de eosinófilos/μl de sangue. Em algumas modalidades, o paciente foi determinado como tendo menos de 100 de contagem de eosinófilos/μl de sangue. Em certas modalidades preferidas, o paciente foi determinado como tendo menos de 300 de contagem de eosinófilos/μl de sangue.
[00110] "Tratamento" (e variações como "tratar" ou "tratando") refere-se à intervenção clínica na tentativa de alterar o curso natural do paciente ou célula sendo tratados. Os efeitos desejáveis do tratamento incluem um ou mais de prevenção da ocorrência ou recorrência da doença, alívio dos sintomas, diminuição de quaisquer consequências patológicas diretas ou indiretas da doença, estado de doença estabilizado (ou seja, sem agravamento), diminuição da taxa de progressão da doença, melhora ou paliação do estado da doença, prolongando a sobrevida em comparação à sobrevida esperada se não há o recebimento do tratamento e prognóstico aprimorado.
[00111] O termo "bula" é usado para referir-se a instruções normalmente incluídas em embalagens comerciais de produtos terapêuticos, que contêm informações sobre as indicações, uso, dosagem, administração, terapia combinada, contra-indicações e/ou advertências relativas ao uso de tais produtos terapêuticos.
[00112] O uso dos termos "um(a)" e "o(a)" e termos semelhantes no contexto da descrição de modalidades neste documento devem ser interpretados para abranger o singular e o plural, a menos que indicado de outra forma neste documento ou claramente contradito pelo contexto. Os termos "compreendendo", "tendo", "incluindo" e "contendo" devem ser interpretados como termos abertos (ou seja, significando "incluindo, mas não limitado a"), a menos que seja indicado de outra forma. Entende-se que os aspectos e modalidades fornecidos neste documento incluem "consistindo" e/ou "consistindo essencialmente em".
[00113] Como é entendido por um técnico no assunto, a referência a "cerca de" um valor ou parâmetro no presente documento inclui (e descreve) modalidades que são direcionadas a esse valor ou parâmetro per se.
Por exemplo, a descrição referente a "cerca de X" inclui a descrição de "X".
[00114] A frase "substancialmente diferente" refere-se a um grau suficientemente alto de diferença entre dois valores numéricos (geralmente um associado a uma molécula e o outro associado a uma molécula de referência/comparação), de tal modo que um técnico no assunto consideraria a diferença entre os dois valores como sendo de significância estatística dentro do contexto da característica biológica medida pelos referidos valores (por exemplo, valores de Kd). A diferença entre os referidos dois valores pode ser, por exemplo, superior a cerca de 10%, superior a cerca de 20%, superior a cerca de 30%, superior a cerca de 40% e/ou superior a cerca de 50% como uma função do valor para a molécula de referência/comparação.
II. COMPOSIÇÕES E MÉTODOS
[00115] Em um aspecto, a invenção é baseada, em parte, na descoberta de anticorpos KLK5 que inibem a atividade biológica de KLK5. Em algumas modalidades, são fornecidos anticorpos que se ligam a KLK5. Em algumas modalidades, é fornecido um anticorpo isolado que se liga a KLK5, ou seja, um anticorpo anti-KLK5. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-KLK5 inibe a atividade biológica de KLK5. Em algumas modalidades, o anticorpo anti- KLK5 inibe substancialmente ou completamente a atividade biológica de KLK5.
Em algumas modalidades, a atividade biológica de KLK5 é a atividade da serina protease. Em algumas modalidades, a atividade biológica de KLK5 é a atividade da serina protease tríptica. Em algumas modalidades, a atividade biológica de KLK5 é a proliferação e contração de células de músculo liso humano promovidas por KLK5. Em algumas modalidades, a atividade biológica de KLK5 é a expressão epitelial induzida por KLK5 de citocinas inflamatórias, quimiocinas e moléculas de adesão. Em algumas modalidades, a atividade biológica de KLK5 é a produção de epitélio induzida por KLK5 de citocinas quimiotáticas de neutrófilos e influxo de neutrófilos nos tecidos pulmonares. Em algumas modalidades, a atividade biológica de KLK5 é inibida em pelo menos cerca de 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% e/ou mais. Em algumas modalidades, a atividade biológica de KLK5 é inibida por cerca de 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% e/ou mais. Em algumas modalidades, a atividade biológica de KLK5 é inibida por entre qualquer um de 40-50%, 50-60%, 60-
70%, 70-80%, 80-90% e/ou 90-100%.
[00116] Em algumas modalidades de qualquer um dos anticorpos anti-KLK5, o anticorpo anti-KLK5 inibe substancialmente ou completamente a ligação de SPINK5 a KLK5. Em algumas modalidades, a ligação de SPINK5 a KLK5 é inibida por pelo menos cerca de 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% e/ou mais. Em algumas modalidades, a ligação de SPINK5 a KLK5 é inibida por cerca de 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% e/ou mais. Em algumas modalidades, a ligação de SPINK5 a KLK5 é inibida por entre qualquer um de 40-50%, 50-60%, 60-70%, 70-80%, 80-90% e/ou 90-100%.
[00117] Em algumas modalidades de qualquer um dos anticorpos anti-KLK5, o anticorpo anti-KLK5 tem um valor de IC50 inferior a cerca qualquer um de 1000 nM, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 10 nM, 5 nM, 1 nM, 500 pM, 100 pM, 50 pM, 10 pM, 5 pM e/ou 1 pM. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-KLK5 tem um valor de IC50 inferior a qualquer um de 1000 nM, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 10 nM, 5 nM, 1 nM, 500 pM, 100 pM, 50 pM, 10 pM, 5 pM e/ou 1 pM. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-KLK5 tem um valor de IC50 entre cerca de qualquer de 50 μM − 1 μM, 1 μM − 500 nM, 500 nM − 100 nM, 100 nM − 10 nM, 10 nM − 1 nM, 1000 pM − 500 pM, 500 pM − 200 pM, 200 pM − 150 pM, 150 pM − 100 pM, 100 pM − 10 pM, e/ou 10 pM − 1 pM.
[00118] Os anticorpos fornecidos aqui são úteis, por exemplo, para o diagnóstico ou tratamento de doenças selecionadas a partir do grupo que consiste em síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase e rosácea. Em algumas modalidades, a doença é selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase, rosácea e esofagite eosinofílica. Em algumas modalidades, a asma é asma grave crônica persistente com eventos agudos de agravamento dos sintomas (exacerbações ou crises) que podem ser fatais. Em algumas modalidades, a asma é asma atópica (também conhecida como alérgica), asma não alérgica
(por exemplo, frequentemente desencadeada por infecção com um vírus respiratório (por exemplo, influenza, parainfluenza, rinovírus, metapneumovírus humano e vírus sincicial respiratório) ou por irritantes inalados (poluentes do ar, poluição atmosférica, partículas de diesel, produtos químicos voláteis e gases internos ou externos, ou mesmo por ar frio e seco). Em algumas modalidades, a asma é intermitente ou induzida por exercício, asma devido à exposição primária ou secundária aguda ou crônica à "fumaça" (normalmente cigarros, charutos, cachimbos), inalação ou "vaporização" (tabaco, maconha ou outras tais substâncias), ou asma desencadeada pela ingestão recente de aspirina ou AINEs relacionados. Em algumas modalidades, a asma é leve ou asma sem tratamento prévio com corticosteroides, asma recém-diagnosticada e não tratada, ou sem necessidade prévia do uso crônico de esteróides tópicos ou sistêmicos inalados para controlar os sintomas (tosse, chiado, falta de ar/perda de ar ou dor no peito). Em algumas modalidades, a asma é crônica, asma resistente a corticosteroides, asma refratária a corticosteroides, asma não controlada com corticosteroides ou outros medicamentos controladores de asma crônica. Em algumas modalidades, a asma é asma moderada a grave.
Em algumas modalidades, a asma é asma com alto teor de Th2. Em algumas modalidades, a asma é asma grave. Em algumas modalidades, a asma é asma atópica, asma alérgica, asma não alérgica (por exemplo, devido a infecção e/ou vírus sincicial respiratório (RSV)), asma induzida por exercício, asma exacerbada/sensível à aspirina, asma leve, asma moderada a grave, asma sem tratamento prévio com corticosteróides, asma crônica, asma resistente a corticosteróides, asma refratária a corticosteróides, asma diagnosticada recentemente e não tratada, asma devido ao tabagismo, asma não controlada com corticosteróides. Em algumas modalidades, a asma é asma induzida por linfócito T auxiliar do tipo 2 (Th2), tipo 2 (Th2) alto ou tipo 2 (T2). Em algumas modalidades, a asma é asma eosinofílica. Em algumas modalidades, a asma é asma alérgica. Em algumas modalidades, o paciente foi determinado como sendo positivo para inflamação eosinofílica (EIP). Vide WO2015/061441. Em algumas modalidades, a asma é asma com alto teor de periostina (por exemplo, tendo um nível de periostina de pelo menos cerca de 20 ng/mL, 25 ng/mL ou 50 ng/mL de soro). Em algumas modalidades, a asma é asma com alto teor de eosinófilos (por exemplo, pelo menos cerca de 150, 200, 250, 300, 350, 400 de contagens de eosinófilos/ml de sangue). Em algumas modalidades, a asma é asma com baixo teor de Th2 ou asma não induzida por Th2. Em algumas modalidades, o paciente foi determinado como sendo negativo para Inflamação Eosinofílica (EIN). Vide WO2015/061441. Em algumas modalidades, a asma é asma com baixo teor de periostina (por exemplo, tendo um nível de periostina inferior a cerca de 20 ng/mL de soro).
Em algumas modalidades, a asma é asma com baixo teor de eosinófilos (por exemplo, menos de cerca de 150 contagens de eosinófilos/μl de sangue ou menos de cerca de 100 contagens de eosinófilos/μl de sangue).
A. ANTICORPOS ANTI-KLK5 EXEMPLARES
[00119] São fornecidos aqui anticorpos isolados que se ligam a KLK5. Em uma modalidade, o anticorpo inibe a atividade biológica de KLK5 em pelo menos 50%. KLK5 é uma serina protease do tipo (quimo)tripsina que é expressa na pele humana, especificamente nas camadas espinosas e granulares superiores da pele. KLK5 é conhecido por desempenhar papéis patológicos em doenças de pele, tais como a síndrome de Netherton.
[00120] Uma sequência de proteína precursora KLK5 humana de ocorrência natural exemplar, com peptídeo sinal (aminoácidos 1-22), é fornecida na SEQ ID NO:1. A sequência de proteína KLK5 madura correspondente aos aminoácidos 23-293 da SEQ ID NO:1 é fornecida na SEQ ID NO:2. Variantes exemplares de proteínas precursoras KLK5 humanas com peptídeos sinais contendo uma ou ambas as trocas de aminoácidos R55 e
N153 são fornecidas na SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7 e SEQ ID NO:8, respectivamente.
[00121] Em certas modalidades, um anticorpo anti-KLK5 tem uma ou mais das seguintes características, em qualquer combinação: a) inibe a atividade biológica de KLK5 em pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou 100%; b) inibe a atividade da serina protease de KLK5; c) especificamente se liga a KLK5 humano; d) tem um valor de IC50 inferior a 10 nM, inferior a 5 nM, inferior a 3 nM, inferior a 2 nM, inferior a 1 nM, inferior a 0,5 nM, inferior a 0,1 nM; e/ou e) tem um valor de IC50 inferior a 500 pM, inferior a 200 pM, inferior a 100 pM, inferior a 50 pM, inferior a 25 pM, inferior a 10 pM, inferior a 5 pM, inferior a 1 pM.
ANTICORPO 8G10, 9B6, 2-3F4, 10C5, 2B11, 10H3, 9H3, 8B7, 9H5, 9F2, 10C8, 8F5, 3-3F5 E OUTRAS MODALIDADES
[00122] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 14 a 24; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 32 a 53; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 62 a 72; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 79 a 91; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 99 a 106; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 112 a
122.
[00123] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 14 a 24; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 32 a 53; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 62 a 72. Em uma modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 62 a 72. Em outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 62 a 72 e HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 112 a 122. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 62 a 72, HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 112 a 122, e HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 32 a 53.
Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 14 a 24; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 32 a 53; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 62 a 72.
[00124] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 79 a 91; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 99 a 106; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 112 a 122. Em uma modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 79 a 91; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 99 a 106; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 112 a
122.
[00125] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido e compreende (a) um domínio VH compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (i) HVR- H1 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 14 a 24, (ii) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 32 a 53, e (iii) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 62 a 72; e (b) um domínio VL compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (i) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 79 a 91, (ii) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 99 a 106, e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 112 a 122. Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 14 a 24; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 32 a 53; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 62 a 72; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 79 a 91; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 99 a 106; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 112 a 122.
[00126] Em qualquer das modalidades acima, um anticorpo anti- KLK5 é humanizado. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 compreende HVRs como em qualquer uma das modalidades anteriores e compreende ainda uma estrutura aceitadora humana, por exemplo, uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana.
[00127] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 170 a 257. Em certas modalidades, uma sequência de VH tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 170 a 257 contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos,
inseridos e/ou deletados em qualquer uma das SEQ ID NOs: 170 a 257. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti- KLK5 compreende a sequência de VH selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 170 a 257, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de: (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 14 a 24; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 32 a 53; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 62 a 72.
[00128] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 131 a 161. Em certas modalidades, uma sequência de VL tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer um da SEQ ID NOs: 131 a 162 contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 que compreende essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 131 a 162. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VL da sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 131 a 162, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, a VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 79 a 91; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 99 a 106; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 112 a 122.
[00129] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima e um VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:170 e SEQ ID NO:131, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:171 e SEQ ID NO:132, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:172 e SEQ ID NO:133, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:201 e SEQ ID NO:139, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:203 e SEQ ID NO:141, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:204 e SEQ ID NO:142, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:205 e SEQ ID NO:143, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:206 e SEQ ID NO:144, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:221 e SEQ ID NO:149, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:226 e SEQ ID NO:152, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:227 e SEQ ID NO:153, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:228 e SEQ ID NO:154, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:248 e SEQ ID NO:160, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
[00130] Em um outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 fornecido aqui.
Por exemplo, em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 compreendendo uma sequência de VH da sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 170 a 257. Em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que, quando ligado a KLK5, resulta em um epítopo termodinâmico compreendendo uma ou mais das sequências selecionadas a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:316, SEQ ID NO:317, SEQ ID NO:318, e SEQ ID NO:319, conforme medido por espectrometria de massa de troca de hidrogênio.
[00131] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende uma sequência HC da sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 288 a
306. Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende uma sequência LC da sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 265 a 280.
[00132] Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências HC e LC na SEQ ID NO:288 e SEQ ID NO:265, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências HC e LC na SEQ ID NO:289 e SEQ ID NO:266, respectivamente, incluindo modificações pós- traducionais dessas sequências. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências HC e LC na SEQ ID NO:290 e SEQ ID NO:267, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências HC e LC na SEQ ID NO:292 e SEQ ID NO:269, respectivamente, incluindo modificações pós- traducionais dessas sequências. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências HC e LC na SEQ ID NO:293 e SEQ ID NO:269, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências HC e LC na SEQ ID NO:294 e SEQ ID NO:270, respectivamente, incluindo modificações pós- traducionais dessas sequências. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências HC e LC na SEQ ID NO:295 e SEQ ID NO:271, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências HC e LC na SEQ ID NO:296 e SEQ ID NO:272, respectivamente, incluindo modificações pós- traducionais dessas sequências. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências HC e LC na SEQ ID NO:297 e SEQ ID NO:273,
respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências HC e LC na SEQ ID NO:299 e SEQ ID NO:275, respectivamente, incluindo modificações pós- traducionais dessas sequências. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências HC e LC na SEQ ID NO:300 e SEQ ID NO:275, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências HC e LC na SEQ ID NO:301 e SEQ ID NO:276, respectivamente, incluindo modificações pós- traducionais dessas sequências. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências HC e LC na SEQ ID NO:302 e SEQ ID NO:277, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências HC e LC na SEQ ID NO:303 e SEQ ID NO:278, respectivamente, incluindo modificações pós- traducionais dessas sequências. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências HC e LC na SEQ ID NO:305 e SEQ ID NO:280, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências HC e LC na SEQ ID NO:306 e SEQ ID NO:280, respectivamente, incluindo modificações pós- traducionais dessas sequências.
[00133] São fornecidos aqui anticorpos que compreendem um domínio variável da cadeia leve compreendendo a sequência HVR1-LC, HVR2- LC e HVR3-LC de acordo com a numeração de Kabat, conforme representado nas Figuras 14A, 15A e/ou 16A, e um domínio variável da cadeia pesada compreendendo a sequência HVR1-HC, HVR2-HC e HVR3-HC de acordo com a numeração de Kabat, conforme representado nas Figuras 14B, 15B e/ou 16B. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia leve compreendendo a sequência HVR1-LC, HVR2-LC e/ou HVR3- LC e a sequência FR1-LC, FR2-LC, FR3-LC e/ou FR4-LC, como representado nas Figuras 14A, 15A e/ou 16A. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia pesada compreendendo a sequência HVR1-HC, HVR2-HC e/ou HVR3-HC e a sequência FR1-HC, FR2- HC, FR3-HC e/ou FR4-HC, como representado nas Figuras 14B, 15B e/ou 16B.
[00134] Em um outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 fornecido aqui.
[00135] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido que, quando ligado a KLK5, resulta em um epítopo termodinâmico compreendendo uma ou mais das sequências selecionadas a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:316, SEQ ID NO:317, SEQ ID NO:318 e SEQ ID NO:319, conforme medido por espectrometria de massa de troca de hidrogênio.
[00136] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima é um anticorpo monoclonal, incluindo um anticorpo quimérico, humanizado ou humano. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é humanizado. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 compreende HVRs como em qualquer uma das modalidades anteriores e compreende ainda uma estrutura aceitadora humana, por exemplo, uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é um fragmento de anticorpo, por exemplo, um fragmento Fv, Fab, Fab', scFv, diacorpo ou F(ab')2. Em outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo de comprimento total, por exemplo, um anticorpo IgG1 intacto, ou um anticorpo IgG4 intacto ou outra classe ou isotipo de anticorpo, tal como aqui definido.
[00137] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima pode incorporar qualquer uma das características, isoladamente ou em combinação, conforme descrito abaixo.
ANTICORPO 10C5, 9H5, 3-3F5 E OUTRAS MODALIDADES
[00138] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:28; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:45 ou SEQ ID NO:54; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:69 ou SEQ ID NO:72; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:96; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:109; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:127.
[00139] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:22 ou SEQ ID NO:24; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:52 ou SEQ ID NO:53; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:69 ou SEQ ID NO:72; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:87 ou SEQ ID NO:91; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99, SEQ ID NO:101 ou SEQ ID NO:105; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:119 ou SEQ ID NO:122.
[00140] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:22 ou SEQ ID NO:24; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:52 ou SEQ ID NO:53; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:69 ou SEQ ID NO:72. Em uma modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:69 ou SEQ ID NO:72. Em outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:69, ou SEQ ID NO:72 e HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:119 ou SEQ ID NO:122. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:69 ou SEQ ID NO:72, HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:119, ou SEQ ID NO:122, e HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:52 ou SEQ ID NO:53. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:22 ou SEQ ID NO:24; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:52 ou SEQ ID NO:53; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:69 ou SEQ ID NO:72.
[00141] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:87 ou SEQ ID NO:91; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99, SEQ ID NO:101 ou SEQ ID NO:105; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:119 ou SEQ ID NO:122.
[00142] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido e compreende (a) um domínio VH compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (i) HVR- H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:17, (ii) HVR- H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35, e (iii) HVR- H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65; e (b) um domínio VL compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (i) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:82, (ii) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:101, e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:115.
[00143] Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:17; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:82; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:101; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:115.
[00144] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido e compreende (a) um domínio VH compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (i) HVR-
H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22, (ii) HVR- H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42, e (iii) HVR- H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69; e (b) um domínio VL compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (i) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:87, (ii) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105, e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:119.
[00145] Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:87; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:119.
[00146] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido e compreende (a) um domínio VH compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (i) HVR- H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:24, (ii) HVR- H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52, e (iii) HVR- H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:72; e (b) um domínio VL compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (i) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:91, (ii) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99, e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:122.
[00147] Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:24; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:72; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:91; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:122.
[00148] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) tendo a SEQ ID NO:202. Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia leve (VL) tendo a SEQ ID NO:140.
[00149] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 173 a 201. Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia leve (VL) selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 134 a 139 e SEQ ID NO:321.
[00150] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:201. Em certas modalidades, uma sequência de VH tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos,
inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:201. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VH na SEQ ID NO:201, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de: (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:17, (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35, e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65.
[00151] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:139. Em certas modalidades, uma sequência de VL tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:139. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VL na SEQ ID NO:139, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:82; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:101; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:115.
[00152] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima e um VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:201 e SEQ ID NO:139, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
[00153] Em um outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 fornecido aqui.
Por exemplo, em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 compreendendo uma sequência de VH da SEQ ID NO:201 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:139. Em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que, quando ligado a KLK5, resulta em um epítopo termodinâmico compreendendo uma ou mais das sequências selecionadas a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:316, SEQ ID NO:317, SEQ ID NO:318, e SEQ ID NO:319, conforme medido por espectrometria de massa de troca de hidrogênio.
[00154] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) tendo a SEQ ID NO:225. Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia leve (VL) tendo a SEQ ID NO:151.
[00155] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 207 a 224. Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia leve (VL) selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 145 a 150.
[00156] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:221. Em certas modalidades, uma sequência de VH tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:221. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VH na SEQ ID NO:221, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de: (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22, (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42, e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69.
[00157] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:149. Em certas modalidades, uma sequência de VL tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos,
inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:149. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VL na SEQ ID NO:149, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:87; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:119. Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima e um VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:221 e SEQ ID NO:149, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
[00158] Em um outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 fornecido aqui.
Por exemplo, em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 compreendendo uma sequência de VH da SEQ ID NO:221 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:149. Em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que, quando ligado a KLK5, resulta em um epítopo termodinâmico compreendendo uma ou mais das sequências selecionadas a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:316, SEQ ID NO:317, SEQ ID NO:318, e SEQ ID NO:319, conforme medido por espectrometria de massa de troca de hidrogênio.
[00159] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) tendo a SEQ ID NO:257. Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia leve (VL) tendo a SEQ ID NO:162.
[00160] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 229 a 256. Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia leve (VL) selecionada a partir de qualquer uma das SEQ ID NOs: 155 a 161.
[00161] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:248. Em certas modalidades, uma sequência de VH tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:248. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VH na SEQ ID NO:248, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de: (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:24, (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52, e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:72.
[00162] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:160. Em certas modalidades, uma sequência de VL tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:160. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VL na SEQ ID NO:160, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:91; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:122.
[00163] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima e um VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:248 e SEQ ID NO:160, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
[00164] Em um outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 fornecido aqui.
Por exemplo, em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 compreendendo uma sequência de VH da SEQ ID NO:248 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:160.
[00165] São fornecidos aqui anticorpos que compreendem um domínio variável da cadeia leve compreendendo a sequência HVR1-LC, HVR2- LC e HVR3-LC de acordo com a numeração de Kabat, conforme representado nas Figuras 14A, 15A e/ou 16A, e um domínio variável da cadeia pesada compreendendo a sequência HVR1-HC, HVR2-HC e HVR3-HC de acordo com a numeração de Kabat, conforme representado nas Figuras 14B, 15B e/ou 16B. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia leve compreendendo a sequência HVR1-LC, HVR2-LC e/ou HVR3- LC e a sequência FR1-LC, FR2-LC, FR3-LC e/ou FR4-LC, como representado nas Figuras 14A, 15A e/ou 16A. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia pesada compreendendo a sequência HVR1-HC, HVR2-HC e/ou HVR3-HC e a sequência FR1-HC, FR2- HC, FR3-HC e/ou FR4-HC, como representado nas Figuras 14B, 15B e/ou 16B.
[00166] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima é um anticorpo monoclonal, incluindo um anticorpo quimérico, humanizado ou humano. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é humanizado. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 compreende HVRs como em qualquer uma das modalidades anteriores e compreende ainda uma estrutura aceitadora humana, por exemplo, uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana.
[00167] Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é um fragmento de anticorpo, por exemplo, um fragmento Fv, Fab, Fab', scFv, diacorpo ou F(ab')2. Em outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo de comprimento total, por exemplo, um anticorpo IgG1 intacto, ou um anticorpo IgG4 intacto ou outra classe ou isotipo de anticorpo, tal como aqui definido.
[00168] É fornecido adicionalmente neste documento um anticorpo que especificamente se liga a KLK5 humano, em que o anticorpo se liga a um epítopo em KLK5 humano compreendendo um ou mais resíduos de aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em Pro130, Ser131, Ala132, Gly133, Val162, Leu163, Ser164, Gln165, Lys166, Arg167, Glu169, Asp170, Ala171, Tyr172, Pro173, Arg174, Gln174A, Ile176, Asp177, Asp178, Gly184, Asp185, Lys186, Ala186A, Arg188, Asn223, Arg224, Pro225 e Lys233, de acordo com a numeração de protease padrão. Em algumas modalidades, o anticorpo se liga a um epítopo em KLK5 humano compreendendo um ou mais resíduos de aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em Pro130, Ser131, Ala132, Val162, Leu163, Ser164, Gln165, Lys166, Arg167, Glu169, Asp170, Ala171, Tyr172, Pro173, Arg174, Gln174A, Ile176, Asp177, Asp178, Arg224 e Lys233, de acordo com a numeração de protease padrão.
Em algumas modalidades, o anticorpo se liga a um epítopo em KLK5 humano compreendendo um ou mais resíduos de aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em Pro130, Ser131, Ala132, Gly133, Val162, Leu163, Ser164, Gln165, Lys166, Arg167, Glu169, Asp170, Ala171, Tyr172, Pro173, Arg174, Gln174A, Ile176, Asp177 e Lys233, de acordo com a numeração de protease padrão. Em algumas modalidades, o anticorpo se liga a um epítopo em KLK5 humano compreendendo um ou mais resíduos de aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em Ser131, Ala132, Gly133, Leu163, Ser164, Gln165, Lys166, Arg167, Glu169, Asp170, Ala171, Pro173, Arg174, Gly184, Asp185, Lys186, Ala186A, Arg188, Asn223, Arg224 e Pro225 de acordo com a numeração de protease padrão.
[00169] É fornecido adicionalmente neste documento um anticorpo que, quando ligado a KLK5 humano, resulta em uma mudança conformacional do KLK5 humano, em que a mudança conformacional resulta, de forma alostérica, na interrupção do sítio de ligação do substrato e/ou do sítio ativo do KLK5 humano.
[00170] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima pode incorporar qualquer uma das características, isoladamente ou em combinação, conforme descrito abaixo.
ANTICORPO 8G10 E OUTRAS MODALIDADES
[00171] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:14; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:32; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:79; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:112.
[00172] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:14; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:32; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62. Em uma modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62. Em outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62 e HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:112. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62, HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:112, e HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:32. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:14; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:32; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62.
[00173] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:79; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:112. Em uma modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:79; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:112.
[00174] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido e compreende (a) um domínio VH compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (i) HVR- H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:14, (ii) HVR- H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:32, e (iii) HVR- H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62; e (b) um domínio VL compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (i) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:79, (ii) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99, e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:112. Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:14; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:32; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:79; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:112.
[00175] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:170. Em certas modalidades, uma sequência de VH tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:170. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VH na SEQ ID NO:170, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de: (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:14, (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:32, e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62.
[00176] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:131. Em certas modalidades, uma sequência de VL tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:131. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VL na SEQ ID NO:131, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:79; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:112.
[00177] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima e um VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:170 e SEQ ID NO:131, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
[00178] Em um outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 fornecido aqui.
Por exemplo, em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 compreendendo uma sequência de VH da SEQ ID NO:170 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:131.
[00179] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima é um anticorpo monoclonal, incluindo um anticorpo quimérico, humanizado ou humano. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é humanizado. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 compreende HVRs como em qualquer uma das modalidades anteriores e compreende ainda uma estrutura aceitadora humana, por exemplo, uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana.
[00180] Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é um fragmento de anticorpo, por exemplo, um fragmento Fv, Fab, Fab', scFv, diacorpo ou F(ab')2. Em outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo de comprimento total, por exemplo, um anticorpo IgG1 intacto, ou um anticorpo IgG4 intacto ou outra classe ou isotipo de anticorpo, tal como aqui definido.
[00181] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima pode incorporar qualquer uma das características, isoladamente ou em combinação, conforme descrito abaixo.
ANTICORPO 9B6 E OUTRAS MODALIDADES
[00182] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:15; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:80; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:100; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:113.
[00183] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:15; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63. Em uma modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63. Em outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63 e HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:113. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63, HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:113, e HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:15; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63.
[00184] Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:80; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:100; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:113. Em uma modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:80; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:100; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:113.
[00185] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido e compreende (a) um domínio VH compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (i) HVR- H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:15, (ii) HVR- H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33, e (iii) HVR- H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; e (b) um domínio VL compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (i) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:80, (ii) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:100, e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:113. Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:15; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:80; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:100; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:113.
[00186] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:171. Em certas modalidades, uma sequência de VH tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:171. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VH na SEQ ID NO:171, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de: (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:15, (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33, e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63.
[00187] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:132. Em certas modalidades, uma sequência de VL tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:132. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VL na SEQ ID NO:132, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:80; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:100; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:113.
[00188] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima e um VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:171 e SEQ ID NO:132, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
[00189] Em um outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 fornecido aqui.
Por exemplo, em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 compreendendo uma sequência de VH da SEQ ID NO:171 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:132.
[00190] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima é um anticorpo monoclonal, incluindo um anticorpo quimérico, humanizado ou humano. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é humanizado. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 compreende HVRs como em qualquer uma das modalidades anteriores e compreende ainda uma estrutura aceitadora humana, por exemplo, uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana.
[00191] Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é um fragmento de anticorpo, por exemplo, um fragmento Fv, Fab, Fab', scFv, diacorpo ou F(ab')2. Em outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo de comprimento total, por exemplo, um anticorpo IgG1 intacto, ou um anticorpo IgG4 intacto ou outra classe ou isotipo de anticorpo, tal como aqui definido.
[00192] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima pode incorporar qualquer uma das características, isoladamente ou em combinação, conforme descrito abaixo.
ANTICORPO 2-3F4 E OUTRAS MODALIDADES
[00193] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:16; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:34; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:64; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:81; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:114.
[00194] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:16; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:34; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:64. Em uma modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:64. Em outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:64 e HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:114. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:64, HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:114 e HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:34. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:16; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:34; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:64.
[00195] Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:81; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:114. Em uma modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:81; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:114.
[00196] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido e compreende (a) um domínio VH compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (i) HVR- H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:16, (ii) HVR- H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:34, e (iii) HVR- H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:64; e (b) um domínio VL compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (i) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:81, (ii) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99, e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:114. Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:16; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:34; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:64; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:81; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:114.
[00197] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:172. Em certas modalidades, uma sequência de VH tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:172. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VH na SEQ ID NO:172, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de: (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:16, (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:34, e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:64.
[00198] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:133. Em certas modalidades, uma sequência de VL tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:133. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VL na SEQ ID NO:133, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:81; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:114.
[00199] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima e um VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:172 e SEQ ID NO:133, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
[00200] Em um outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 fornecido aqui.
Por exemplo, em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 compreendendo uma sequência de VH da SEQ ID NO:172 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:133.
[00201] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima é um anticorpo monoclonal, incluindo um anticorpo quimérico, humanizado ou humano. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é humanizado. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 compreende HVRs como em qualquer uma das modalidades anteriores e compreende ainda uma estrutura aceitadora humana, por exemplo, uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana.
[00202] Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é um fragmento de anticorpo, por exemplo, um fragmento Fv, Fab, Fab', scFv, diacorpo ou F(ab')2. Em outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo de comprimento total, por exemplo, um anticorpo IgG1 intacto, ou um anticorpo IgG4 intacto ou outra classe ou isotipo de anticorpo, tal como aqui definido.
[00203] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima pode incorporar qualquer uma das características, isoladamente ou em combinação, conforme descrito abaixo.
ANTICORPO 10C5 E OUTRAS MODALIDADES
[00204] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:17; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:82; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:101; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:115.
[00205] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:17; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65. Em uma modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65. Em outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65 e HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:115. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65, HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:115, e HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:17; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65.
[00206] Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:82; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:101; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:115. Em uma modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:82; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:101; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:115.
[00207] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido e compreende (a) um domínio VH compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (i) HVR- H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:17, (ii) HVR- H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35, e (iii) HVR- H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65; e (b) um domínio VL compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (i) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:82, (ii) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:101, e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:115. Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:17; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:82; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:101; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:115.
[00208] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:201. Em certas modalidades, uma sequência de VH tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:201. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VH na SEQ ID NO:201, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de: (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:17, (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35, e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65.
[00209] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:139. Em certas modalidades, uma sequência de VL tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:139. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VL na SEQ ID NO:139, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:82; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:101; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:115.
[00210] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima e um VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:201 e SEQ ID NO:139, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
[00211] Em um outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 fornecido aqui.
Por exemplo, em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 compreendendo uma sequência de VH da SEQ ID NO:201 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:139. Em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que, quando ligado a KLK5, resulta em um epítopo termodinâmico compreendendo uma ou mais das sequências selecionadas a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:316, SEQ ID NO:317, SEQ ID NO:318, e SEQ ID NO:319, conforme medido por espectrometria de massa de troca de hidrogênio.
[00212] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima é um anticorpo monoclonal, incluindo um anticorpo quimérico, humanizado ou humano. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é humanizado. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 compreende HVRs como em qualquer uma das modalidades anteriores e compreende ainda uma estrutura aceitadora humana, por exemplo, uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana.
[00213] Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VH compreendendo uma ou mais sequências estruturais da cadeia pesada selecionadas a partir de (a) uma região estrutural da cadeia pesada 1 (HC-FR1) da SEQ ID NO:333, (b) uma região estrutural da cadeia pesada 2 (HC-FR2) da SEQ ID NO:334, (c) uma região estrutural da cadeia pesada 3 (HC-FR3) da SEQ ID NO:335, e (d) uma região estrutural da cadeia pesada 4 (HC-FR4) da SEQ ID NO:336.
[00214] Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VH compreendendo uma HC-FR1 da SEQ ID NO:333. Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VH compreendendo uma HC-FR2 da SEQ ID NO:334. Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VH compreendendo uma HC- FR3 da SEQ ID NO:335. Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VH compreendendo uma HC-FR4 da SEQ ID NO:336.
[00215] Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VL compreendendo uma ou mais sequências estruturais da cadeia leve selecionadas a partir de (a) uma região estrutural da cadeia leve 1 (LC- FR1) da SEQ ID NO:329, (b) uma região estrutural da cadeia leve 2 (LC-FR2) da SEQ ID NO:330, (c) uma região estrutural da cadeia leve 3 (LC-FR3) da
SEQ ID NO:331, e (d) uma região estrutural da cadeia leve 4 (LC-FR4) da SEQ ID NO:332.
[00216] Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VL compreendendo uma LC-FR1 da SEQ ID NO:329. Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VL compreendendo uma LC-FR2 da SEQ ID NO:330. Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VL compreendendo uma LC-FR3 da SEQ ID NO:331. Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VL compreendendo uma LC-FR4 da SEQ ID NO:332.
[00217] Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é um fragmento de anticorpo, por exemplo, um fragmento Fv, Fab, Fab', scFv, diacorpo ou F(ab')2. Em outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo de comprimento total, por exemplo, um anticorpo IgG1 intacto, ou um anticorpo IgG4 intacto ou outra classe ou isotipo de anticorpo, tal como aqui definido.
[00218] É ainda fornecido neste documento um anticorpo que se liga especificamente a KLK5 humano, em que o anticorpo se liga a um epítopo em KLK5 humano compreendendo um ou mais resíduos de aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em Pro130, Ser131, Ala132, Val162, Leu163, Ser164, Gln165, Lys166, Arg167, Glu169, Asp170, Ala171, Tyr172, Pro173, Arg174, Gln174A, Ile176, Asp177, Asp178, Arg224 e Lys233, de acordo com a numeração de protease padrão. Em uma modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:17; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:82; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:101; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:115. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:201 e SEQ ID NO:139
[00219] É fornecido adicionalmente neste documento um anticorpo que, quando ligado a KLK5 humano, resulta em uma mudança conformacional do KLK5 humano, em que a mudança conformacional resulta, de forma alostérica, na interrupção do sítio de ligação do substrato e/ou do sítio ativo do KLK5 humano. Em uma modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR- H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:17; (b) HVR- H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35; (c) HVR- H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65; (d) HVR- L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:82; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:101; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:115. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:201 e SEQ ID NO:139.
[00220] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima pode incorporar qualquer uma das características, isoladamente ou em combinação, conforme descrito abaixo.
ANTICORPO 2B11 E OUTRAS MODALIDADES
[00221] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:18; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:39; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:66; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:83; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:102; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:116.
[00222] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:18; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:39; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:66. Em uma modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:66. Em outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:66 e HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:116. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:66, HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:116, e HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:39. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:18; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:39; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:66.
[00223] Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:83; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:102; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:116. Em uma modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:83; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:102; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:116.
[00224] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido e compreende (a) um domínio VH compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (i) HVR- H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:18, (ii) HVR- H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:39, e (iii) HVR- H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:66; e (b) um domínio VL compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (i) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:83, (ii) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:102, e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:116. Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:18; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:39; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:66; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:83; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:102; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:116.
[00225] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:203. Em certas modalidades, uma sequência de VH tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:203. Em determinadas modalidades,
as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VH na SEQ ID NO:203, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de: (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:18, (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:39, e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:66.
[00226] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:141. Em certas modalidades, uma sequência de VL tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:141. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VL na SEQ ID NO:141, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:83; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:102; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:116.
[00227] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido,
em que o anticorpo compreende um VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima e um VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:203 e SEQ ID NO:141, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
[00228] Em um outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 fornecido aqui.
Por exemplo, em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 compreendendo uma sequência de VH da SEQ ID NO:203 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:141.
[00229] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima é um anticorpo monoclonal, incluindo um anticorpo quimérico, humanizado ou humano. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é humanizado. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 compreende HVRs como em qualquer uma das modalidades anteriores e compreende ainda uma estrutura aceitadora humana, por exemplo, uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana.
[00230] Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é um fragmento de anticorpo, por exemplo, um fragmento Fv, Fab, Fab', scFv, diacorpo ou F(ab')2. Em outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo de comprimento total, por exemplo, um anticorpo IgG1 intacto, ou um anticorpo IgG4 intacto ou outra classe ou isotipo de anticorpo, tal como aqui definido.
[00231] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima pode incorporar qualquer uma das características, isoladamente ou em combinação, conforme descrito abaixo. ANTICORPO 10H3 E OUTRAS MODALIDADES
[00232] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:19; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:40; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:67; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:84; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:103; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:117.
[00233] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:19; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:40; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:67. Em uma modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:67. Em outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:67 e HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:117. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:67, HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:117, e HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:40. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:40; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:67.
[00234] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:84; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:103; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:117. Em uma modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:84; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:103; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:117.
[00235] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido e compreende (a) um domínio VH compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (i) HVR- H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:19, (ii) HVR- H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:40, e (iii) HVR- H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:67; e (b) um domínio VL compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (i) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:84, (ii) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:103, e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:117. Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:19; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:40; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:67; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:84; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:103; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:117.
[00236] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH)
tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:204. Em certas modalidades, uma sequência de VH tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:204. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VH na SEQ ID NO:204, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de: (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:19, (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:40, e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:67.
[00237] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:142. Em certas modalidades, uma sequência de VL tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:142. Em determinadas modalidades,
as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VL na SEQ ID NO:142, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, a VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:84; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:103; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:117.
[00238] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima e um VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:204 e SEQ ID NO:142, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
[00239] Em um outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 fornecido aqui.
Por exemplo, em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 compreendendo uma sequência de VH da SEQ ID NO:204 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:142. Em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que, quando ligado a KLK5, resulta em um epítopo termodinâmico compreendendo uma ou mais das sequências selecionadas a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:316, SEQ ID NO:317, SEQ ID NO:318, e SEQ ID NO:319, conforme medido por espectrometria de massa de troca de hidrogênio.
[00240] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima é um anticorpo monoclonal, incluindo um anticorpo quimérico, humanizado ou humano. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é humanizado. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 compreende HVRs como em qualquer uma das modalidades anteriores e compreende ainda uma estrutura aceitadora humana, por exemplo, uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana.
[00241] Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é um fragmento de anticorpo, por exemplo, um fragmento Fv, Fab, Fab', scFv, diacorpo ou F(ab')2. Em outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo de comprimento total, por exemplo, um anticorpo IgG1 intacto, ou um anticorpo IgG4 intacto ou outra classe ou isotipo de anticorpo, tal como aqui definido.
[00242] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima pode incorporar qualquer uma das características, isoladamente ou em combinação, conforme descrito abaixo.
ANTICORPO 9H3 E OUTRAS MODALIDADES
[00243] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:20; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:68; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:85; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:103; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118.
[00244] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:20; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:68. Em uma modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:68. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:68 e HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:68, HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118, e HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:20; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:68.
[00245] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:85; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:103; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118. Em uma modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:85; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:103; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118.
[00246] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido e compreende (a) um domínio VH compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (i) HVR- H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:20, (ii) HVR- H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33, e (iii) HVR- H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:68; e (b) um domínio VL compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (i) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:85, (ii) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:103, e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118. Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:20; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:68; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:85; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:103; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118.
[00247] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:205. Em certas modalidades, uma sequência de VH tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:205. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VH na SEQ ID NO:205, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de: (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:20, (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33, e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:68.
[00248] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:143. Em certas modalidades, uma sequência de VL tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:143. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VL na SEQ ID NO:143, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:85; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:103; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118.
[00249] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima e um VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:205 e SEQ ID NO:1143, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
[00250] Em um outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 fornecido aqui.
Por exemplo, em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 compreendendo uma sequência de VH da SEQ ID NO:205 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:143.
[00251] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima é um anticorpo monoclonal, incluindo um anticorpo quimérico, humanizado ou humano. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é humanizado. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 compreende HVRs como em qualquer uma das modalidades anteriores e compreende ainda uma estrutura aceitadora humana, por exemplo, uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana.
[00252] Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é um fragmento de anticorpo, por exemplo, um fragmento Fv, Fab, Fab', scFv, diacorpo ou F(ab')2. Em outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo de comprimento total, por exemplo, um anticorpo IgG1 intacto, ou um anticorpo IgG4 intacto ou outra classe ou isotipo de anticorpo, tal como aqui definido.
[00253] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima pode incorporar qualquer uma das características, isoladamente ou em combinação, conforme descrito abaixo.
ANTICORPO 8B7 E OUTRAS MODALIDADES
[00254] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:21; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:41; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:86; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:104; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118.
[00255] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:21; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:41; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69. Em uma modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69. Em outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69 e HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:68, HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118, e HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:41. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:21; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:41; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69.
[00256] Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:86; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:104; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118. Em uma modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:86; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:104; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118.
[00257] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido e compreende (a) um domínio VH compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (i) HVR- H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:21, (ii) HVR- H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:41, e (iii) HVR- H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69; e (b) um domínio VL compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (i) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:86, (ii) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:104, e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118. Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:21; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:41; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:86; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:104; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118.
[00258] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:206. Em certas modalidades, uma sequência de VH tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:206. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VH na SEQ ID NO:206, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de: (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:21, (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:41, e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69.
[00259] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:144. Em certas modalidades, uma sequência de VL tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:144. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VL na SEQ ID NO:144, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:86; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:104; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118.
[00260] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima e um VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:206 e SEQ ID NO:144, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
[00261] Em um outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 fornecido aqui.
Por exemplo, em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 compreendendo uma sequência de VH da SEQ ID NO:206 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:144.
[00262] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima é um anticorpo monoclonal, incluindo um anticorpo quimérico, humanizado ou humano. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é humanizado. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 compreende HVRs como em qualquer uma das modalidades anteriores e compreende ainda uma estrutura aceitadora humana, por exemplo, uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana.
[00263] Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é um fragmento de anticorpo, por exemplo, um fragmento Fv, Fab, Fab', scFv, diacorpo ou F(ab')2. Em outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo de comprimento total, por exemplo, um anticorpo IgG1 intacto, ou um anticorpo IgG4 intacto ou outra classe ou isotipo de anticorpo, tal como aqui definido.
[00264] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima pode incorporar qualquer uma das características, isoladamente ou em combinação, conforme descrito abaixo.
ANTICORPO 9H5 E OUTRAS MODALIDADES
[00265] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:87; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:119.
[00266] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69. Em uma modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69. Em outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69 e HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:119. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69, HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:119, e HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69.
[00267] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas, ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:87; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:119. Em uma modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:87; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:119.
[00268] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido e compreende (a) um domínio VH compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (i) HVR- H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22, (ii) HVR- H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42, e (iii) HVR- H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69; e (b) um domínio VL compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (i) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:87, (ii) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105, e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:119. Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:87; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:119.
[00269] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:221. Em certas modalidades, uma sequência de VH tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:221. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VH na SEQ ID NO:221, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de: (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22, (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42, e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69.
[00270] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:149. Em certas modalidades, uma sequência de VL tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:149. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VL na SEQ ID NO:149, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:87; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:119.
[00271] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima e um VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:221 e SEQ ID NO:149, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
[00272] Em um outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 fornecido aqui.
Por exemplo, em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 compreendendo uma sequência de VH da SEQ ID NO:221 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:149. Em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que, quando ligado a KLK5, resulta em um epítopo termodinâmico compreendendo uma ou mais das sequências selecionadas a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:316, SEQ ID NO:317, SEQ ID NO:318, e SEQ ID NO:319, conforme medido por espectrometria de massa de troca de hidrogênio.
[00273] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima é um anticorpo monoclonal, incluindo um anticorpo quimérico, humanizado ou humano. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é humanizado. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 compreende HVRs como em qualquer uma das modalidades anteriores e compreende ainda uma estrutura aceitadora humana, por exemplo, uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana.
[00274] Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VH compreendendo uma ou mais sequências estruturais da cadeia pesada selecionadas a partir de (a) uma região estrutural da cadeia pesada 1 (HC-FR1) da SEQ ID NO:341, (b) uma região estrutural da cadeia pesada 2 (HC-FR2) da SEQ ID NO:342, (c) uma região estrutural da cadeia pesada 3 (HC-FR3) da SEQ ID NO:343, e (d) uma região estrutural da cadeia pesada 4 (HC-FR4) da SEQ ID NO:344.
[00275] Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VH compreendendo uma HC-FR1 da SEQ ID NO:341. Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VH compreendendo uma HC-FR2 da SEQ ID NO:342. Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VH compreendendo uma HC- FR3 da SEQ ID NO:343. Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VH compreendendo uma HC-FR4 da SEQ ID NO:344.
[00276] Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VL compreendendo uma ou mais sequências estruturais da cadeia leve selecionadas a partir de (a) uma região estrutural da cadeia pesada 1 (LC- FR1) da SEQ ID NO:337, (b) uma região estrutural da cadeia pesada 2 (LC- FR2) da SEQ ID NO:338, (c) uma região estrutural da cadeia pesada 3 (LC-
FR3) da SEQ ID NO:339, e (d) uma região estrutural da cadeia pesada 4 (LC- FR4) da SEQ ID NO:340.
[00277] Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VL compreendendo uma LC-FR1 da SEQ ID NO:337. Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VL compreendendo uma LC-FR2 da SEQ ID NO:338. Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VL compreendendo uma LC-FR3 da SEQ ID NO:339. Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VL compreendendo uma LC-FR4 da SEQ ID NO:340.
[00278] Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é um fragmento de anticorpo, por exemplo, um fragmento Fv, Fab, Fab', scFv, diacorpo ou F(ab')2. Em outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo de comprimento total, por exemplo, um anticorpo IgG1 intacto, ou um anticorpo IgG4 intacto ou outra classe ou isotipo de anticorpo, tal como aqui definido.
[00279] É fornecido adicionalmente aqui um anticorpo que se liga especificamente a KLK5 humano, em que o anticorpo se liga a um epítopo em KLK5 humano compreendendo um ou mais resíduos de aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em Pro130, Ser131, Ala132, Gly133, Val162, Leu163, Ser164, Gln165, Lys166, Arg167, Glu169, Asp170, Ala171, Tyr172, Pro173, Arg174, Gln174A, Ile176, Asp177 e Lys233, de acordo com a numeração de protease padrão. Em uma modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:87; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:119. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e
VL na SEQ ID NO:221 e SEQ ID NO:149.
[00280] É fornecido adicionalmente neste documento um anticorpo que, quando ligado a KLK5 humano, resulta em uma mudança conformacional do KLK5 humano, em que a mudança conformacional resulta, de forma alostérica, na interrupção do sítio de ligação do substrato e/ou do sítio ativo do KLK5 humano. Em uma modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR- H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR- H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42; (c) HVR- H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69; (d) HVR- L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:87; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:119. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:221 e SEQ ID NO:149.
[00281] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima pode incorporar qualquer uma das características, isoladamente ou em combinação, conforme descrito abaixo.
ANTICORPO 9F2 E OUTRAS MODALIDADES
[00282] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:46; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:88; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:120.
[00283] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:46; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69. Em uma modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69 e HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:120. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69, HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:120, e HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:46. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:46; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69.
[00284] Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:88; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:120. Em uma modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:88; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:120.
[00285] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido e compreende (a) um domínio VH compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (i) HVR- H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22, (ii) HVR- H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:46, e (iii) HVR- H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69; e (b) um domínio VL compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (i) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:88, (ii) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105, e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:120. Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:46; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:88; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:120.
[00286] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:226. Em certas modalidades, uma sequência de VH tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:226. Em determinadas modalidades,
as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VH na SEQ ID NO:226, incluindo modificações pós-transducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de: (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22, (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:46, e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69.
[00287] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:152. Em certas modalidades, uma sequência de VL tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:152. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VL na SEQ ID NO:152, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:88; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:120.
[00288] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido,
em que o anticorpo compreende um VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima e um VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:226 e SEQ ID NO:152, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
[00289] Em um outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 fornecido aqui.
Por exemplo, em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 compreendendo uma sequência de VH da SEQ ID NO:226 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:152.
[00290] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima é um anticorpo monoclonal, incluindo um anticorpo quimérico, humanizado ou humano. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é humanizado. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 compreende HVRs como em qualquer uma das modalidades anteriores e compreende ainda uma estrutura aceitadora humana, por exemplo, uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana.
[00291] Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é um fragmento de anticorpo, por exemplo, um fragmento Fv, Fab, Fab', scFv, diacorpo ou F(ab')2. Em outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo de comprimento total, por exemplo, um anticorpo IgG1 intacto, ou um anticorpo IgG4 intacto ou outra classe ou isotipo de anticorpo, tal como aqui definido.
[00292] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima pode incorporar qualquer uma das características, isoladamente ou em combinação, conforme descrito abaixo. ANTICORPO 10C8 E OUTRAS MODALIDADES
[00293] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:70; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:89; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118.
[00294] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:70. Em uma modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:70. Em outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:70 e HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:70, HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118, e HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:70.
[00295] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:89; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118. Em uma modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:89; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118.
[00296] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido e compreende (a) um domínio VH compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (i) HVR- H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22, (ii) HVR- H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42, e (iii) HVR- H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:70; e (b) um domínio VL compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (i) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:89, (ii) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105, e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118. Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:70; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:89; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118.
[00297] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH)
tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:227. Em certas modalidades, uma sequência de VH tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:227. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VH na SEQ ID NO:227, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de: (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22, (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42, e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:70.
[00298] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:153. Em certas modalidades, uma sequência de VL tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:153. Em determinadas modalidades,
as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VL na SEQ ID NO:153, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:89; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118.
[00299] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima e um VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:227 e SEQ ID NO:153, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
[00300] Em um outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 fornecido aqui.
Por exemplo, em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 compreendendo uma sequência de VH da SEQ ID NO:227 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:153.
[00301] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima é um anticorpo monoclonal, incluindo um anticorpo quimérico, humanizado ou humano. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é humanizado. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 compreende HVRs como em qualquer uma das modalidades anteriores e compreende ainda uma estrutura aceitadora humana, por exemplo, uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana.
[00302] Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é um fragmento de anticorpo, por exemplo, um fragmento Fv, Fab, Fab', scFv, diacorpo ou F(ab')2. Em outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo de comprimento total, por exemplo, um anticorpo IgG1 intacto, ou um anticorpo IgG4 intacto ou outra classe ou isotipo de anticorpo, tal como aqui definido.
[00303] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima pode incorporar qualquer uma das características, isoladamente ou em combinação, conforme descrito abaixo.
ANTICORPO 8F5 E OUTRAS MODALIDADES
[00304] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:23; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:47; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:71; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:90; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:106; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121.
[00305] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:23; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:47; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:71. Em uma modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:71. Em outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:71 e HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:70, HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121, e HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:47. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:23; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:47; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:71.
[00306] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:90; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:106; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121. Em uma modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:90; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:106; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121.
[00307] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido e compreende (a) um domínio VH compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (i) HVR- H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:23, (ii) HVR- H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:47, e (iii) HVR- H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:71; e (b) um domínio VL compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (i) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:90, (ii) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:106, e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121. Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:23; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:47; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:71; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:90; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:106; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121.
[00308] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:228. Em certas modalidades, uma sequência de VH tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:228. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VH na SEQ ID NO:228, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de: (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:23, (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:47, e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:71.
[00309] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:154. Em certas modalidades, uma sequência de VL tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:154. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VL na SEQ ID NO:154, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:90; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:106; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121.
[00310] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima e um VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:228 e SEQ ID NO:154, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
[00311] Em um outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 fornecido aqui.
Por exemplo, em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 compreendendo uma sequência de VH da SEQ ID NO:228 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:154.
[00312] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima é um anticorpo monoclonal, incluindo um anticorpo quimérico, humanizado ou humano. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é humanizado. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 compreende HVRs como em qualquer uma das modalidades anteriores e compreende ainda uma estrutura aceitadora humana, por exemplo, uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana.
[00313] Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é um fragmento de anticorpo, por exemplo, um fragmento Fv, Fab, Fab', scFv, diacorpo ou F(ab')2. Em outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo de comprimento total, por exemplo, um anticorpo IgG1 intacto, ou um anticorpo IgG4 intacto ou outra classe ou isotipo de anticorpo, tal como aqui definido.
[00314] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima pode incorporar qualquer uma das características, isoladamente ou em combinação, conforme descrito abaixo.
ANTICORPO 3-3F5 E OUTRAS MODALIDADES
[00315] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:24; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:72; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:91; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:122.
[00316] Em um aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:24; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:72. Em uma modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:72. Em outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:72 e HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:122. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:72, HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:122, e HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:24; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52; e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:72.
[00317] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:91; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:122. Em uma modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:91; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:122.
[00318] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido e compreende (a) um domínio VH compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VH selecionadas a partir de (i) HVR- H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:24, (ii) HVR- H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52, e (iii) HVR- H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:72; e (b) um domínio VL compreendendo pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências HVR de VL selecionadas a partir de (i) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:91, (ii) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99, e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:122. Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 compreendendo (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:24 (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:72; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:91; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:122.
[00319] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido compreendendo uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:248. Em certas modalidades, uma sequência de VH tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:248. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VH na SEQ ID NO:248, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de: (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:24, (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52, e (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:72.
[00320] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia leve (VL) tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:160. Em certas modalidades, uma sequência de VL tendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções relativas à sequência de referência, mas um anticorpo anti-KLK5 compreendendo essa sequência retém a capacidade de se ligar a KLK5. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:160. Em determinadas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-KLK5 compreende a sequência de VL na SEQ ID NO:160, incluindo modificações pós-traducionais dessa sequência. Em uma modalidade particular, o VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir de (a) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:91; (b) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (c) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:122.
[00321] Em outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o anticorpo compreende um VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima e um VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:248 e SEQ ID NO:160, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais dessas sequências.
[00322] Em um outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 fornecido aqui.
Por exemplo, em certas modalidades, é fornecido um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo como um anticorpo anti-KLK5 compreendendo uma sequência de VH da SEQ ID NO:248 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:160.
[00323] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima é um anticorpo monoclonal, incluindo um anticorpo quimérico, humanizado ou humano. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é humanizado. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 compreende HVRs como em qualquer uma das modalidades anteriores e compreende ainda uma estrutura aceitadora humana, por exemplo, uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana.
[00324] Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VH que compreende uma ou mais sequências estruturais da cadeia pesada selecionadas a partir de (a) uma região estrutural da cadeia pesada 1 (HC-FR1) da SEQ ID NO:349, (b) uma região estrutural da cadeia pesada 2 (HC-FR2) da SEQ ID NO:350, (c) uma região estrutural da cadeia pesada 3 (HC-FR3) da SEQ ID NO:351, e (d) uma região estrutural da cadeia pesada 4 (HC-FR4) da SEQ ID NO:352.
[00325] Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VH compreendendo uma HC-FR1 da SEQ ID NO:349. Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VH compreendendo uma HC-FR2 da SEQ ID NO:350. Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VH compreendendo uma HC- FR3 da SEQ ID NO:351. Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VH compreendendo uma HC-FR4 da SEQ ID NO:352.
[00326] Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VL que compreende uma ou mais sequências estruturais da cadeia leve selecionadas a partir de (a) uma região estrutural da cadeia pesada 1 (LC- FR1) da SEQ ID NO:345, (b) uma região estrutural da cadeia pesada 2 (LC- FR2) da SEQ ID NO:346, (c) uma região estrutural da cadeia pesada 3 (LC- FR3) da SEQ ID NO:347, e (d) uma região estrutural da cadeia pesada 4 (LC- FR4) da SEQ ID NO:348.
[00327] Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VL compreendendo uma LC-FR1 da SEQ ID NO:345. Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VL compreendendo uma LC-FR2 da SEQ ID NO:346. Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VL compreendendo uma LC-FR3 da SEQ ID NO:347. Em uma modalidade, o anticorpo anti-KLK5 compreende um domínio VL compreendendo uma LC-FR4 da SEQ ID NO:348.
[00328] Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é um fragmento de anticorpo, por exemplo, um fragmento Fv, Fab, Fab', scFv, diacorpo ou F(ab')2. Em outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo de comprimento total, por exemplo, um anticorpo IgG1 intacto, ou um anticorpo IgG4 intacto ou outra classe ou isotipo de anticorpo, tal como aqui definido.
[00329] É ainda fornecido neste documento um anticorpo que especificamente se liga a KLK5 humano, em que o anticorpo se liga a um epítopo em KLK5 humano compreendendo um ou mais resíduos de aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em Ser131, Ala132, Gly133, Leu163, Ser164, Gln165, Lys166, Arg167, Glu169, Asp170, Ala171,
Pro173, Arg174, Gly184, Asp185, Lys186, Ala186A, Arg188, Asn223, Arg224 e Pro225 de acordo com a numeração de protease padrão. Em uma modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:24 (b) HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:72; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:91; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:122. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:248 e SEQ ID NO:160.
[00330] É fornecido adicionalmente neste documento um anticorpo que, quando ligado a KLK5 humano, resulta em uma mudança conformacional do KLK5 humano, em que a mudança conformacional resulta, de forma alostérica, na interrupção do sítio de ligação do substrato e/ou do sítio ativo do KLK5 humano. Em uma modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR- H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:24 (b) HVR- H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52; (c) HVR- H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:72; (d) HVR- L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:91; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:122. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências de VH e VL na SEQ ID NO:248 e SEQ ID NO:160.
[00331] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-KLK5 de acordo com qualquer uma das modalidades acima pode incorporar qualquer uma das características, isoladamente ou em combinação, conforme descrito abaixo.
2. AFINIDADE DE ANTICORPO
[00332] Em algumas modalidades de qualquer um dos anticorpos anti-KLK5, o anticorpo anti-KLK5 tem uma afinidade de ligação (constante de dissociação Kd) para KLK5 de ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0,1 nM, ≤ 0,01 nM, ou ≤ 0,001 nM (por exemplo, 10-8 M ou menos, por exemplo, de 10-8 M a 10-13 M, por exemplo, de 10-9 M a 10-13 M).
[00333] Em uma modalidade, a Kd é medida por um ensaio de ligação ao antígeno radiomarcado (RIA). Em uma modalidade, um RIA é realizada com a versão Fab de um anticorpo de interesse e seu antígeno. Por exemplo, a afinidade de ligação de solução de Fabs para o antígeno é medida equilibrando Fab com uma concentração mínima de antígeno marcado com 125I na presença de uma série de titulação de antígeno não marcado, então capturando o antígeno ligado com uma placa revestida com anticorpo anti-Fab (vide, por exemplo, Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)). Para estabelecer as condições para o ensaio, placas multipoços MICROTITER® (Thermo Scientific) são revestidas durante a noite com 5 μg/ml de um anticorpo anti-Fab de captura (Cappel Labs) em carbonato de sódio a 50 mM (pH 9,6), e subsequentemente bloqueadas com 2% (p/v) de albumina de soro bovino em PBS durante duas a cinco horas à temperatura ambiente (aproximadamente 23°C). Em uma placa não adsorvente (Nunc #269620), 100 pM ou 26 pM de antígeno com 125I são misturados com diluições em séries de um Fab de interesse (por exemplo, consistente com a avaliação do anticorpo anti-VEGF, Fab-12, Presta et al., Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)). O Fab de interesse é então incubado durante a noite; no entanto, a incubação pode continuar por um período mais longo (por exemplo, cerca de 65 horas) para garantir que o equilíbrio seja alcançado. Depois disso, as misturas são transferidas para a placa de captura para incubação em temperatura ambiente (por exemplo, por uma hora). A solução é então removida e a placa lavada oito vezes com polissorbato 20 (TWEEN-20®) a 0,1% em PBS. Quando as placas estiverem secas, são adicionados150 μl/poço de cintilante (MICROSCINT-20 TM;
Packard), e as placas são contadas em um contador gama TOPCOUNT TM (Packard) por dez minutos. As concentrações de cada Fab que são menos de ou igual a 20% da ligação máxima são escolhidas para uso em ensaios de ligação competitivos.
[00334] De acordo com outra modalidade, a Kd é medida usando um ensaio de ressonância de plasmon de superfície BIAcore®. Por exemplo, um ensaio usando um BIACORE®-2000 ou BIACORE®-3000 (BIACORE, Inc., Piscataway, NJ) é realizado a 25 °C com chips de antígeno CM5 imobilizados em ~10 unidades de resposta (UR). Em uma modalidade, os chips biossensores de dextrano carboximetilado (CM5, BIACORE, Inc.) são ativados com cloridrato de N-etil-N’-(3-dimetilaminopropil)-carbodiimida (EDC) e N- hidroxisuccinimida (NHS) de acordo com as instruções do fornecedor. O antígeno é diluído com 10 mM de acetato de sódio, pH 4,8, para 5 μg/ml (~ 0,2 μM) antes da injeção a um quociente de vazão de 5 μl/minuto para alcançar aproximadamente 10 unidades de resposta (UR) de proteína acoplada. Após a injeção do antígeno, etanolamina de 1M é injetada para bloquear os grupos não reagidos. Para medições cinéticas, diluições em série de duas vezes de Fab (0,78 nM a 500 nM) são injetadas em PBS com surfactante polissorbato 20 a 0,05% (TWEEN-20TM) (PBST) a 25 °C a um quociente de vazão de aproximadamente 25 μl/min. As taxas de associação (kon) e as taxas de dissociação (koff) são calculadas usando um modelo de ligação Langmuir simples um-para-um (Evaluation Software da BIACORE®versão 3.2) ajustando simultaneamente os sensorgramas de associação e dissociação. A constante de dissociação de equilíbrio (KD) é calculada como a razão koff/kon. Vide, por exemplo, Chen et al., J. Mol. Biol., 293:865-881 (1999). Se a taxa "on" exceder 106 M-1 s-1 pelo ensaio de ressonância de plasmon de superfície acima, então a taxa on pode ser determinada usando uma técnica de extinção de fluorescência que mede o aumento ou diminuição na intensidade de emissão de fluorescência (excitação = 295 nm ; emissão = 340 nm, passagem de banda de 16 nm) a 25 °C de um anticorpo anti-antígeno a 20 nM (forma Fab) em PBS, pH 7,2, na presença de concentrações crescentes de antígeno, conforme medido em um espectrômetro, tal como um espectrofotômetro equipado válvula stop-flow (Aviv Instruments) ou um espectrofotômetro SLM-AMINCO TM da série 8000 (ThermoSpectronic) com uma cubeta agitada.
3. FRAGMENTOS DE ANTICORPO
[00335] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-KLK5 fornecido neste documento é um fragmento de anticorpo. Os fragmentos de anticorpo incluem, mas não estão limitados a, fragmentos de Fab, Fab’, Fab’- SH, F(ab’)2, Fv e scF e outros fragmentos descritos abaixo. Para uma revisão de certos fragmentos de anticorpo, vide Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003). Para uma revisão dos fragmentos scFv, vide, por exemplo, Pluckthün, em The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg e Moore eds., (Springer-Verlag, Nova Iorque), pp. 269-315 (1994); vide também WO 93/16185; e Patentes dos EUA de nºs 5.571.894 e 5.587.458. Para a discussão dos fragmentos Fab e F(ab')2 compreendendo resíduos de epítopo de ligação ao receptor de salvamento e tendo meia-vida in vivo aumentada, vide Patente dos EUA de nº 5.869.046.
[00336] Os diacorpos são fragmentos de anticorpo com dois locais de ligação ao antígeno que podem ser bivalentes ou biespecíficos. Vide, por exemplo, EP 404.097; WO 1993/01161; Hudson et al., Nat. Med. 9: 129-134 (2003); e Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993).
Triacorpos e tetracorpos também são descritos em Hudson et al., Nat. Med., 9:129-134 (2003).
[00337] Os anticorpos de domínio único são fragmentos de anticorpos que compreendem toda ou uma porção do domínio variável da cadeia pesada ou toda ou uma porção do domínio variável da cadeia leve de um anticorpo. Em certas modalidades, um anticorpo de domínio único é um anticorpo de domínio único humano (Domantis, Inc., Waltham, MA; vide, por exemplo, Patente dos EUA de nº 6.248.516 B1).
[00338] Os fragmentos de anticorpo podem ser feitos através de várias técnicas, incluindo, mas não se limitando a, digestão proteolítica de um anticorpo intacto, bem como a produção por células hospedeiras recombinantes (por exemplo, E. coli ou fago), como descrito neste documento.
4. ANTICORPOS QUIMÉRICOS E HUMANIZADOS
[00339] Em certas modalidades, um anticorpo anti-KLK5 fornecido neste documento é um anticorpo quimérico. Certos anticorpos quiméricos são descritos, por exemplo, na Patente dos EUA de nº 4.816.567; e Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)). Em um exemplo, um anticorpo quimérico compreende uma região variável não humana (por exemplo, uma região variável derivada de um camundongo, rato, hamster, coelho ou primata não humano, tal como um macaco) e uma região constante humana. Em um outro exemplo, um anticorpo quimérico é um anticorpo de “classe trocada” em que a classe ou a subclasse foi alterada a partir do anticorpo parental. Os anticorpos quiméricos incluem fragmentos de ligação ao antígeno.
[00340] Em certas modalidades, um anticorpo quimérico é um anticorpo humanizado. Normalmente, um anticorpo não humano é humanizado para reduzir a imunogenicidade a seres humanos, embora mantendo a especificidade e afinidade do anticorpo não humano parental. Geralmente, um anticorpo humanizado compreende um ou mais domínios variáveis nos quais HVRs, por exemplo, CDRs (ou porções das mesmas) são derivadas de um anticorpo não humano e FRs (ou porções das mesmas) são derivadas de sequências de anticorpos humanos. Um anticorpo humanizado opcionalmente também compreenderá pelo menos uma porção de uma região constante humana. Em algumas modalidades, alguns resíduos de FR em um anticorpo humanizado são substituídos por resíduos correspondentes de um anticorpo não humano (por exemplo, o anticorpo a partir do qual os resíduos de HVR são derivados), por exemplo, para restaurar ou aprimorar a especificidade ou afinidade do anticorpo.
[00341] Anticorpos humanizados e métodos para fabricá-los são revisados, por exemplo, em Almagro e Fransson, REont. Biosci. 13:1619-1633 (2008), e são descritos adicionalmente, por exemplo, em Riechmann et al., Nature, 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EUA, 86:10029-10033 (1989); Patentes dos EUA de nºs 5.821.337, 7.527.791,
6.982.321 e 7.087.409; Kashmiri et al., Methods, 36:25-34 (2005) (descrevendo enxerto de região determinante de especificidade (SDR)); Padlan, Mol.
Immunol., 28:489-498 (1991) (descrevendo "ressurgimento"); Dall'Acqua et al., Methods, 36:43-60 (2005) (descrevendo "embaralhamento de FR"); e Osbourn et al., Methods, 36:61-68 (2005) e Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) (descrevendo a abordagem de "seleção guiada" para embaralhamento de FR).
[00342] As regiões estruturais humanas que podem ser usadas para humanização incluem, mas não estão limitadas a: regiões estruturais selecionadas usando o método de "melhor ajuste" (vide, por exemplo, Sims et al., J. Immunol. 151: 2296 (1993)); regiões estruturais derivadas da sequência de consenso de anticorpos humanos de um subgrupo particular de regiões variáveis da cadeia leve ou pesada (vide, por exemplo, Carter et al., Proc. Natl.
Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); e Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)); regiões estruturais humanas maduras (mutadas somaticamente) ou regiões estruturais da linha germinativa humana (vide, por exemplo, Almagro e Fransson, Front. Biosci. 13: 1619-1633 (2008)); e regiões estruturais derivadas de bibliotecas de FR de triagem (vide, por exemplo, Baca et al., J. Biol. Chem.
272:10678-10684 (1997) e Rosok et al., J. Biol. Chem. 271: 22611-22618 (1996)).
5. ANTICORPOS HUMANOS
[00343] Em certas modalidades, um anticorpo anti-KLK5 fornecido neste documento é um anticorpo humano. Os anticorpos humanos podem ser produzidos usando várias técnicas conhecidas na técnica. Os anticorpos humanos são descritos geralmente em van Dijk e van de Winkel, Curr. Opin.
Pharmacol. 5:368-74 (2001) e Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20: 450-459 (2008).
[00344] Os anticorpos humanos podem ser preparados por administrar um imunógeno a um animal transgênico que foi modificado para produzir anticorpos humanos intactos ou anticorpos intactos com regiões variáveis humanas em resposta ao desafio antigênico. Tais animais normalmente contêm todos ou uma parte dos loci da imunoglobulina humana, que substituem os loci da imunoglobulina endógena, ou que estão presentes de forma extracromossômica ou integrados aleatoriamente nos cromossomos do animal. Em tais camundongos transgênicos, o locus endógeno da imunoglobulina geralmente foi inativado. Para uma revisão de métodos para obter anticorpos humanos a partir de animais transgênicos, vide Lonberg, Nat.
Biotech. 23:1117-1125 (2005). Vide também, por exemplo, as patentes dos EUA de nº 6.075.181 e 6.150.584, que descrevem a tecnologia XENOMOUSE TM; patente dos EUA de nº 5.770.429, que descreve a tecnologia HUMAB®; Patente dos EUA de nº 7.041.870, que descreve a tecnologia K-M MOUSE® e Publicação de Pedido de Patente dos EUA de nº 2007/0061900, que descreve a tecnologia ELOCIMOUSE®). As regiões variáveis humanas de anticorpos intactos geradas por tais animais podem ser adicionalmente modificadas, por exemplo, através da combinação com uma região constante humana diferente.
[00345] Os anticorpos humanos também podem ser produzidos por métodos à base de hibridoma. Linhagens celulares de mieloma humano e de heteromieloma de camundongo-humano para a produção de anticorpos monoclonais humanos foram descritas. (Vide, por exemplo, Kozbor J.
Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., Nova Iorque, 1987); e Boerner et al., J. Immunol., 147:86 (1991)). Anticorpos humanos gerados por meio de tecnologia de hibridoma de células B humanas também são descritos em Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006).
Métodos adicionais incluem aqueles descritos, por exemplo, na Patente dos EUA de nº 7.189.826 (descrevendo a produção de anticorpos IgM humanos monoclonais a partir de linhagens celulares de hibridoma) e em Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4): 265-268 (2006) (descrevendo hibridomas humano-humano).
A tecnologia de hibridoma humano (tecnologia Trioma) é também descrita em Vollmers e Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) e Vollmers e Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005).
[00346] Os anticorpos humanos também podem ser gerados isolando sequências de domínio variável de clone Fv selecionadas a partir de bibliotecas de exibição de fago derivadas de humanos. Tais sequências de domínio variável podem então ser combinadas com um domínio constante humano desejado. As técnicas para a seleção de anticorpos humanos a partir de bibliotecas de anticorpos são descritas abaixo.
6. ANTICORPOS DERIVADOS DE BIBLIOTECA
[00347] Os anticorpos anti-KLK5 podem ser isolados por triagem de bibliotecas combinatórias para anticorpos com a atividade ou atividades desejadas. Por exemplo, são conhecidos na técnica uma variedade de métodos para gerar bibliotecas de exibição de fagos e rastrear tais bibliotecas quanto a anticorpos que possuam as características de ligação desejadas. Tais métodos são revisados, por exemplo, em Hoogenboom et al., em Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001) e adicionalmente descrito, por exemplo, no McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991); Marks et al., J. Mol.
Biol. 222:581-597 (1992); Marks and Bradbury, em Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J.
Mol. Biol. 338(2):299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5):1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34):12467-12472 (2004); e Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2):119-132 (2004).
[00348] Em certos métodos de exibição de fago, repertórios de genes de VH e VL são clonados separadamente por reação em cadeia da polimerase (PCR) e recombinados aleatoriamente em bibliotecas de fago, que podem então ser rastreados para fago de ligação ao antígeno, conforme descrito em Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994). Os fagos apresentam normalmente fragmentos de anticorpo, tanto como fragmentos Fv de cadeia única (scFv) ou como fragmentos Fab. Bibliotecas de fontes imunizadas fornecem anticorpos de alta afinidade ao imunógeno sem a necessidade de construir hibridomas. Alternativamente, o repertório virgem pode ser clonado (por exemplo, de humano) para fornecer uma única fonte de anticorpos para uma ampla faixa de antígenos não próprios e também próprios sem qualquer imunização, conforme descrito por Griffiths et al., EMBO J, 12:725 -734 (1993). Finalmente, bibliotecas não expostas também podem ser produzidas sinteticamente pela clonagem de segmentos do gene V não rearranjados de células-tronco e usando iniciadores de PCR contendo sequência aleatória para codificar as regiões CDR3 altamente variáveis e realizar rearranjo in vitro, conforme descrito por Hoogenboom e Winter, J. Mol. Biol., 227:381-388 (1992). As publicações de patentes que descrevem as bibliotecas de fagos de anticorpos humanos incluem, por exemplo: Patente dos
EUA de nº 5.750.373 e Publicações de Patente dos EUA de nºs 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 e 2009/0002360.
[00349] Anticorpos ou fragmentos de anticorpo isolados de bibliotecas de anticorpos humanos são considerados anticorpos humanos ou fragmentos de anticorpo humanos no presente documento.
6. ANTICORPOS MULTIESPECÍFICOS
[00350] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-KLK5 fornecido neste documento é um anticorpo multiespecífico, por exemplo, um anticorpo biespecífico. Anticorpos multiespecíficos são anticorpos monoclonais que têm especificidades de ligação para pelo menos dois locais diferentes. Em certas modalidades, uma das especificidades de ligação é para KLK5 e a outra é para qualquer outro antígeno. Em certas modalidades, os anticorpos biespecíficos podem se ligar a dois epítopos diferentes de KLK5. Os anticorpos biespecíficos também podem ser usados para localizar agentes citotóxicos para células que expressam KLK5. Os anticorpos biespecíficos podem ser preparados como anticorpos de comprimento total ou fragmentos de anticorpo.
[00351] As técnicas para a produção de anticorpos multiespecíficos incluem, mas não estão limitados a, coexpressão recombinante de dois pares da cadeia pesada-cadeia leve de imunoglobulina com especificidades diferentes (vide Milstein e Cuello, Nature 305:537 (1983)), WO 93/08829, e Traunecker et al., EMBO J. 10:3655 (1991)), e engenharia de "knob-in-hole" (vide, por exemplo, Patente dos EUA de nº 5.731.168). Os anticorpos multiespecíficos também podem ser produzidos modificando efeitos de direção eletrostática para a produção de moléculas heterodiméricas de anticorpos Fc (WO 2009/089004A1); reticulando dois ou mais anticorpos ou fragmentos (vide, por exemplo, Patente dos EUA de nº 4.676.980, e Brennan et al., Science, 229:81 (1985)); usando zíperes de leucina para produzir anticorpos biespecíficos (vide, por exemplo, Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)); usando tecnologia de "diacorpos" para fazer fragmentos de anticorpo biespecífico (vide, por exemplo, Hollinger et al., Proc.
Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)); e usando dímeros Fv (sFv) de cadeia simples (vide, por exemplo, Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)); e a preparação de anticorpos triespecíficos conforme descrito, por exemplo, em Tutt et al., J. Immunol. 147:60 (1991).
[00352] Os anticorpos modificados com três ou mais locais de ligação ao antígeno funcionais, incluindo “Anticorpos octupus,” são também incluídos neste documento (vide, por exemplo, US 2006/0025576A1).
[00353] O anticorpo ou fragmento deste documento também inclui um "FAb de ação dupla" ou "DAF" que compreende um sítio de ligação ao antígeno que se liga a KLK5, bem como outro antígeno diferente (vide US 2008/0069820, por exemplo).
7. VARIANTES DE ANTICORPO
[00354] Em certas modalidades, variantes de sequências de aminoácidos dos anticorpos anti-KLK5 fornecidos neste documento são contempladas. Por exemplo, pode ser desejável aprimorar a afinidade de ligação e/ou outras propriedades biológicas do anticorpo. As variantes da sequência de aminoácidos de um anticorpo podem ser preparadas através da introdução de modificações apropriadas na sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo ou por síntese peptídica. Tais modificações incluem, por exemplo, deleções e/ou inserções e/ou substituições de resíduos nas sequências de aminoácidos do anticorpo. Qualquer combinação de deleção, inserção e substituição pode ser feita para chegar ao construto final, desde que o construto final possua as características desejadas, por exemplo, ligação ao antígeno.
a) VARIANTES DE SUBSTITUIÇÃO, INSERÇÃO E EXCLUSÃO
[00355] Em algumas modalidades, são fornecidas variantes de anticorpo anti-KLK5 tendo uma ou mais substituições de aminoácidos. Locais de interesse para a mutagênese de substituição incluem as HVRs e FRs. As substituições conservativas são mostradas na Tabela 1, sob o título "substituições preferidas". Alterações mais substanciais são fornecidas na Tabela 1 sob o título de "substituições exemplares" e conforme descrito abaixo em referência às classes da cadeia lateral de aminoácidos. As substituições de aminoácidos podem ser introduzidas em um anticorpo de interesse e os produtos selecionados para uma atividade desejada, por exemplo, ligação ao antígeno retida/aprimorada, imunogenicidade diminuída ou ADCC ou CDC aprimoradas.
TABELA 1 Resíduo Original Substituições Exemplares Substituições Preferidas Ala (A) Val; Leu; Ile Val Arg (R) Lys; Gln; Asn Lys Asn (N) Gln; His; Asp, Lys; Arg Gln Asp (D) Glu; Asn Glu Cys (C) Ser; Ala Ser Gln (Q) Asn; Glu Asn Glu (E) Asp; Gln Asp Gly (G) Ala Ala His (H) Asn; Gln; Lys; Arg Arg Leu; Val; Met; Ala; Phe; Ile (I) Leu Norleucina Norleucina; Ile; Val; Met; Leu (L) Ile Ala; Phe Lys (K) Arg; Gln; Asn Arg Met (M) Leu; Phe; Ile Leu Phe (F) Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr Tyr
Resíduo Original Substituições Exemplares Substituições Preferidas Pro (P) Ala Ala Ser (S) Thr Thr Thr (T) Val; Ser Ser Trp (W) Tyr; Phe Tyr Tyr (Y) Trp; Phe; Thr; Ser Phe Ile; Leu; Met; Phe; Ala; Val (V) Leu Norleucina
[00356] Os aminoácidos podem ser agrupados de acordo com as propriedades de cadeia lateral comuns: (1) hidrofóbico: Norleucina, Met, Ala, Val, Leu, Ile; (2) hidrofílicos neutros: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) acidífero: Asp, Glu; (4) básico: His, Lys, Arg; (5) resíduos que influenciam a orientação da cadeia: Gly, Pro; e (6) aromático: Trp, Tyr, Phe.
[00357] As substituições não conservativas implicarão a troca de um membro de uma destas classes por outra classe.
[00358] Um tipo de variante de substituição envolve a substituição de um ou mais resíduos da região hipervariável de um anticorpo parental (por exemplo, um anticorpo humanizado ou humano). Geralmente, a(s) variante(s) resultante(s) selecionada(s) para estudo posterior terão modificações (por exemplo, aprimoramentos) em certas propriedades biológicas (por exemplo, afinidade aumentada, imunogenicidade reduzida) em relação ao anticorpo parental e/ou terão substancialmente retido certas propriedades biológicas do anticorpo parental. Uma variante de substituição exemplar é um anticorpo maturado por afinidade, que pode ser gerado convenientemente, por exemplo,
usando técnicas de maturação por afinidade à base de exibição de fagos, tais como aquelas descritas neste documento. Em suma, um ou mais resíduos de HVR são mutados e os anticorpos de variantes exibidos no fago e rastreados para uma atividade biológica específica (por exemplo, afinidade de ligação).
[00359] Alterações (por exemplo, substituições) podem ser feitas em HVRs, por exemplo, para aprimorar a afinidade de anticorpos. Tais alterações podem ser feitas em "pontos de acesso" de HVR, ou seja, resíduos codificados por códons que sofrem mutação em alta frequência durante o processo de maturação somática (vide, por exemplo, Chowdhury, Methods Mol.
Biol. 207:179-196 (2008)), e/ou resíduos que são colados em contato com o antígeno, com a variante de VH ou VL resultante sendo testada quanto à afinidade de ligação. A maturação por afinidade através da construção e resseleção de bibliotecas secundárias foi descrita, por exemplo, em Hoogenboom et al., em Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)). Em algumas modalidades de maturação por afinidade, a diversidade é introduzida nos genes variáveis escolhidos para a maturação por qualquer um de uma variedade de métodos (por exemplo, por PCR propenso a erros, embaralhamento de cadeias, ou mutagênese dirigida por oligonucleotídeos). É então criada uma biblioteca secundária. A biblioteca é então rastreada para identificar as variantes de anticorpo com a afinidade desejada. Outro método para introduzir diversidade envolve abordagens direcionadas a HVR, nas quais vários resíduos de HVR (por exemplo, 4 a 6 resíduos de cada vez) são randomizados. Os resíduos de HVR envolvidos na ligação ao antígeno podem ser especificamente identificados, por exemplo, usando modelagem ou mutagênese de varredura de alanina. CDR-H3 e CDR-L3 em particular são frequentemente direcionadas.
[00360] Em certas modalidades, substituições, inserções ou deleções podem ocorrer dentro de uma ou mais HVRs, desde que tais alterações não reduzam substancialmente a capacidade do anticorpo de se ligar ao antígeno. Por exemplo, alterações conservativas (por exemplo, substituições conservativas como fornecidas neste documento) que não reduzem substancialmente a afinidade de ligação podem ser feitas em HVRs.
Tais alterações podem, por exemplo, estar fora dos resíduos que entram em contato com o antígeno nas HVRs. Em certas modalidades da variante de sequências de VH e VL fornecidas acima, cada HVR é inalterada, ou não contém mais do que uma, duas ou três substituições de aminoácidos.
[00361] Um método útil para identificação de resíduos ou regiões de um anticorpo que pode ser direcionado para mutagênese é chamado "mutagênese de varredura de alanina", como descrito por Cunningham e Wells, (1989), Science, 244:1081-1085. Neste método, um resíduo ou grupo de resíduos alvo (por exemplo, resíduos carregados, tais como arg, asp, his, lys e glu) são identificados e substituídos por um aminoácido neutro ou carregado negativamente (por exemplo, alanina ou polialanina) para determinar se a interação do anticorpo com o antígeno é afetada. Substituições adicionais podem ser introduzidas nas localizações de aminoácidos demonstrando sensibilidade funcional às substituições iniciais. Alternativamente, ou adicionalmente, é fornecida uma estrutura cristalina de um complexo antígeno- anticorpo para identificar pontos de contato entre o anticorpo e o antígeno. Tais resíduos de contato e resíduos vizinhos podem ser direcionados ou eliminados como candidatos à substituição. As variantes podem ser rastreadas para determinar se elas contêm as propriedades desejadas.
[00362] As inserções da sequência de aminoácidos incluem fusões com terminais amino e/ou carboxila variando em comprimento de um resíduo a polipeptídeos contendo cem ou mais resíduos, bem como inserções de intrasequências de resíduos de aminoácidos únicos ou múltiplos. Exemplos de inserções terminais incluem um anticorpo com um resíduo metionila com terminal N. Outras variantes de inserção da molécula de anticorpo incluem a fusão ao terminal N ou C do anticorpo a uma enzima (por exemplo, para ADEPT) ou um polipeptídeo que aumenta a meia-vida sérica do anticorpo.
b) VARIANTES DE GLICOSILAÇÃO
[00363] Em certas modalidades, o anticorpo anti-KLK5 fornecido neste documento é alterado para aumentar ou diminuir a extensão em que o anticorpo é glicosilado. A adição ou deleção de locais de glicosilação a um anticorpo pode ser convenientemente realizada alterando a sequência de aminoácidos de tal modo que um ou mais locais de glicosilação sejam criados ou removidos.
[00364] Quando o anticorpo compreende uma região Fc, o carboidrato a ela ligado pode ser alterado. Os anticorpos nativos produzidos por células de mamíferos compreendem, normalmente, um oligossacarídeo biantennário ramificado que geralmente é ligado por uma ligação N a Asn297 do domínio CH2 da região Fc. Vide, por exemplo, Wright et al., TIBTECH, 15:26-32 (1997). O oligossacarídeo pode incluir vários carboidratos, por exemplo, manose, N-acetil glucosamina (GlcNAc), galactose e ácido siálico, bem como uma fucose ligada a um GlcNAc na "haste" da estrutura do oligossacarídeo biantenário. Em algumas modalidades, modificações do oligossacarídeo em um anticorpo da invenção podem ser feitas a fim de criar variantes de anticorpos com certas propriedades aprimoradas.
[00365] Em algumas modalidades, as variantes de anticorpo anti- KLK5 são fornecidas tendo uma estrutura de carboidrato que carece de fucose ligada (diretamente ou indiretamente) a uma região Fc. Por exemplo, a quantidade de fucose em tal anticorpo pode ser de 1% a 80%, de 1% a 65%, de 5% a 65% ou de 20% a 40%. A quantidade de fucose é determinada calculando a quantidade média de fucose dentro da cadeia de açúcar em Asn297, em relação à soma de todas as glicoestruturas ligadas a Asn 297 (por exemplo, estruturas complexas, híbridas e de alta manose), conforme medido por espectrometria de massa MALDI-TOF, como descrito em WO 2008/077546, por exemplo. Asn297 refere-se ao resíduo de asparagina localizado próximo da posição 297 na região Fc (numeração da UE dos resíduos da região Fc); no entanto, Asn297 também pode estar localizado cerca de ± 3 aminoácidos a montante ou a jusante da posição 297, ou seja, entre as posições 294 e 300, devido a pequenas variações de sequência em anticorpos. Tais variantes de fucosilação podem ter aprimorado a função de ADCC. Vide, por exemplo, Publicação de Patente dos EUA de nºs. US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd).
Exemplos de publicações relacionadas a variantes de anticorpo "defucosilados" ou "deficientes em fucose" incluem: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki et al., J. Mol. Biol., 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng. 87:614 (2004). Exemplos de linhagens celulares capazes de produzir anticorpos desfucosilados incluem células CHO Lec13 deficientes em fucosilação de proteínas (Ripka et al., Arch.
Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); Patente dos EUA de nº 2003/0157108 A1; e WO 2004/056312 A1, Adams et al., especialmente no Exemplo 11), e linhagens celulares de nocaute, tais como o gene alfa-1,6-fucosiltransferase, FUT8, células CHO de nocaute (vide, por exemplo, Yamane-Ohnuki et al., Biotech, Bioeng. 87:614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94 (4):680-688 (2006); e WO2003/085107).
[00366] As variantes de anticorpo anti-KLK5 são ainda fornecidas com oligossacarídeos bissectados, por exemplo, nos quais um oligossacarídeo biantenário ligado à região Fc do anticorpo é bissectado por GlcNAc. Tais variantes de anticorpos podem ter fucosilação reduzida e/ou função de ADCC aprimorada. Exemplos de tais variantes de anticorpos são descritos, por exemplo, em WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); Patente dos EUA de nº
6.602.684 (Umana et al.); e US 2005/0123546 (Umana et al.) Variantes de anticorpos com pelo menos um resíduo de galactose no oligossacarídeo ligado à região Fc também são fornecidas. Tais variantes de anticorpos podem ter uma função CDC aprimorada. Tais variantes de anticorpos são descritas, por exemplo, em WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); e WO 1999/22764 (Raju, S.).
c) VARIANTES DA REGIÃO FC
[00367] Em algumas modalidades, uma ou mais modificações de aminoácidos podem ser introduzidas na região Fc do anticorpo anti-KLK5 fornecido neste documento, gerando assim uma variante da região Fc. A variante da região Fc pode compreender uma sequência da região Fc humana (por exemplo, uma região Fc de IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4 humana) compreendendo uma modificação de aminoácido (por exemplo, uma substituição) em uma ou mais posições de aminoácidos.
[00368] Em algumas modalidades, a invenção contempla uma variante de anticorpo que possui algumas, mas não todas as funções efetoras, o que a torna uma candidata desejável para aplicações em que a meia-vida do anticorpo in vivo é importante, embora certas funções efetoras (tais como complemento e ADCC) são desnecessárias ou deletérias. Os ensaios de citotoxicidade in vitro e/ou in vivo podem ser conduzidos para confirmar a redução/depleção das atividades de CDC e/ou ADCC. Por exemplo, os ensaios de ligação ao receptor Fc (FcR) podem ser realizados para garantir que o anticorpo não possua ligação a FcγR (portanto, provavelmente sem atividade de ADCC), mas mantém a capacidade de ligação a FcRn. As células primárias para mediar ADCC, células NK, expressam Fc (apenas RIII, enquanto os monócitos expressam Fc(RI, Fc(RII e Fc(RIII. A expressão de FcR em células hematopoiéticas está resumida na Tabela 3 na página 464 de Ravetch e Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991). Exemplos não limitativos de ensaios in vitro para avaliar a atividade de ADCC de uma molécula de interesse são descritos na Patente dos EUA de nº 5.500.362 (vide, por exemplo, Hellstrom, I.
et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059- 7063 (1986)) e Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985); 5.821.337 (vide Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)). Alternativamente, métodos de ensaios não radioativos podem ser empregados (vide, por exemplo, ensaio de citotoxicidade não radioativo ACTI™ para citometria de fluxo (CellTechnology, Inc. Mountain View, CA; e ensaio de citotoxicidade não radioativo CytoTox 96® (Promega, Madison, WI). As células efetoras úteis para tais ensaios incluem células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e células Natural Killer (NK). Alternativamente, ou adicionalmente, a atividade de ADCC da molécula de interesse pode ser avaliada in vivo, por exemplo, em um modelo animal tal como o divulgado em Clynes et al,. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998). Os ensaios de ligação a C1q também podem ser realizados para confirmar que o anticorpo é incapaz de se ligar a C1q e, portanto, carece de atividade CDC. Vide, por exemplo, ELISA de ligação a C1q e C3c em WO 2006/029879 e WO 2005/100402. Para avaliar a ativação do complemento, um ensaio de CDC pode ser realizado (vide, por exemplo, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, MS et al., Blood 101:1045-1052 (2003); e Cragg, MS e MJ Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)). A ligação a FcRn e as determinações de eliminação/meia-vida in vivo também podem ser realizadas usando métodos conhecidos na técnica (vide, por exemplo, Petkova, SB et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)).
[00369] Anticorpos com função efetora reduzida incluem aqueles com substituição de um ou mais dos resíduos da região Fc 238, 265, 269, 270,
297, 327 e 329 (Patente dos EUA de nº 6.737.056). Tais mutantes Fc incluem mutantes Fc com substituições em duas ou mais posições de aminoácidos 265, 269, 270, 297 e 327, incluindo o denominado mutante Fc "DANA" com substituição dos resíduos 265 e 297 por alanina (Patente dos EUA de nº
7.332.581).
[00370] Certas variantes de anticorpo com ligação aprimorada ou diminuída a FcRs são descritas. (Vide, por exemplo, Patente dos EUA de nº
6.737.056; WO 2004/056312 e Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2):6591-6604 (2001)).
[00371] Em certas modalidades, uma variante de anticorpo compreende uma região Fc com uma ou mais substituições de aminoácidos que aprimoram a ADCC, por exemplo, substituições nas posições 298, 333 e/ou 334 da região Fc (numeração da UE de resíduos).
[00372] Em algumas modalidades, são feitas alterações na região Fc que resultam na ligação a C1q alterada (ou seja, aprimorada ou diminuída) e/ou Citotoxicidade Dependente do Complemento (CDC), por exemplo, conforme descrito na Patente dos EUA de nº 6.194.551, WO 99/51642 e Idusogie et al., J. Immunol. 164:4178-4184 (2000).
[00373] Anticorpos com meia-vida aumentada e ligação aprimorada ao receptor Fc neonatal (FcRn), que é responsável pela transferência de IgGs maternas para o feto (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) e Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)), são descritos em US2005/0014934A1 (Hinton et al.). Esses anticorpos compreendem uma região Fc com uma ou mais substituições na mesma que aprimoram a ligação da região Fc ao FcRn. Tais variantes Fc incluem aquelas com substituições em um ou mais dos resíduos da região Fc: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 ou 434, por exemplo, substituição do resíduo 434 da região Fc (Patente dos EUA de nº.
7.371.826).
[00374] Vide também Duncan & Winter, Nature 322: 738-40 (1988); Patente dos EUA de nº 5.648.260; Patente dos EUA de nº 5.624.821; e WO 94/29351, em relação a outros exemplos de variantes da região Fc.
d) VARIANTES DE ANTICORPO MANIPULADAS COM CISTEÍNA
[00375] Em algumas modalidades, pode ser desejável criar anticorpos anti-KLK5 modificados com cisteína, por exemplo, anticorpos THIOMAB™, nos quais um ou mais resíduos de um anticorpo são substituídos por resíduos de cisteína. Em modalidades particulares, os resíduos substituídos ocorrem em locais acessíveis do anticorpo. Substituindo esses resíduos por cisteína, os grupos tiol reativos são posicionados em locais acessíveis do anticorpo e podem ser usados para conjugar o anticorpo a outras frações, tais como frações de fármacos ou frações de ligantes e fármacos, para criar um imunoconjugado, conforme descrito mais adiante. Em certas modalidades, qualquer um ou mais dos seguintes resíduos podem ser substituídos por cisteína: V205 (numeração Kabat) da cadeia leve; A118 (numeração UE) da cadeia pesada; e S400 (numeração da UE) da região Fc da cadeia pesada. Os anticorpos projetados com cisteína podem ser gerados conforme descrito, por exemplo, na Patente dos EUA de nº 7.521.541.
e) DERIVADOS DE ANTICORPO
[00376] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-KLK5 fornecido neste documento pode ser modificado adicionalmente para conter frações não proteicas adicionais que são conhecidas na técnica e prontamente disponíveis. As frações adequadas para derivatização do anticorpo incluem, mas não estão limitadas a, polímeros solúveis em água. Exemplos não limitativos de polímeros solúveis em água incluem, mas não estão limitados a, polietilenoglicol (PEG), copolímeros de etilenoglicol/propilenoglicol, carboximetilcelulose, dextrano, álcool polivinílico, polivinilpirrolidona, poli-1,3-
dioxolano, poli-1,3,6-trioxano, copolímero de etileno/anidrido maleico, poliaminoácidos (homopolímeros ou copolímeros aleatórios) e dextrano ou poli(n-vinil pirrolidona) olietilenoglicol, homopolímeros de propropilenoglicol, copolímeros de óxido de prolipropileno/óxido de etileno, polióis polioxietilados (por exemplo, glicerol), álcool polivinílico e misturas dos mesmos. O propionaldeído de polietilenoglicol pode ter vantagens na fabricação devido à sua estabilidade na água. O polímero pode ter qualquer peso molecular e pode ser ramificado ou não ramificado. O número de polímeros ligados ao anticorpo pode variar, e se mais de um polímero estiver ligado, eles podem ser moléculas iguais ou diferentes. Em geral, o número e/ou tipo de polímeros usados para derivatização podem ser determinados com base em considerações que incluem, mas não estão limitadas a, as propriedades ou funções particulares do anticorpo a ser aprimorado, se o derivado de anticorpo será usado em uma terapia sob condições definidas, etc.
[00377] Em outra modalidade, os conjugados do anticorpo anti- KLK5 e fração não proteica que podem ser seletivamente aquecidos por exposição à radiação são fornecidos. Em um exemplo, a fração não proteica é um nanotubo de carbono (Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 102:11600- 11605 (2005)). A radiação pode ter qualquer comprimento de onda, e inclui, mas não está limitada a, comprimentos de onda que não prejudicam as células comuns, mas que aquecem a fração não proteica, a uma temperatura na qual as células proximais à fração não proteica de anticorpo são mortas.
B. MÉTODOS RECOMBINANTES E COMPOSIÇÕES
[00378] Os anticorpos Anti-KLK5 podem ser produzidos utilizando métodos recombinantes e composições, por exemplo, como descrito na Patente dos EUA de nº 4.816.567. Em uma modalidade, o ácido nucleico isolado que codifica um anticorpo anti-KLK5 descrito neste documento é fornecido. Tal ácido nucleico pode codificar uma sequência de aminoácidos compreendendo a VL e/ou uma sequência de aminoácidos compreendendo a VH do anticorpo (por exemplo, as cadeias leves e/ou pesadas do anticorpo).
Em uma modalidade adicional, um ou mais vetores (por exemplo, vetores de expressão) compreendendo tal ácido nucleico são fornecidos. Em outra modalidade, uma célula hospedeira compreendendo tal ácido nucleico é fornecida. Em uma tal modalidade, uma célula hospedeira compreende (por exemplo, foi transformada com): (1) um vetor que compreende um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a VL do anticorpo e uma sequência de aminoácidos compreendendo a VH do anticorpo, ou (2) um primeiro vetor que compreende um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos compreendendo a VL do anticorpo e um segundo vetor que compreende um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos compreendendo a VH do anticorpo. Em um aspecto, a célula hospedeira é eucariótica, por exemplo, uma célula de ovário de hamster chinês (CHO) ou célula linfoide (por exemplo, célula Y0, NS0, Sp20). Em uma modalidade, um método para preparar um anticorpo anti-KLK5 é fornecido, em que o método compreende cultivar uma célula hospedeira compreendendo um ácido nucleico que codifica o anticorpo, conforme fornecida acima, sob condições adequadas para a expressão do anticorpo e, opcionalmente, recuperar o anticorpo a partir da célula hospedeira (ou meio de cultura da célula hospedeira).
[00379] Para a produção recombinante de um anticorpo anti- KLK5, o ácido nucleico que codifica um anticorpo, por exemplo, como descrito acima, é isolado e inserido em um ou mais vetores para posterior clonagem e/ou a expressão em uma célula hospedeira. Tal ácido nucleico pode ser facilmente isolado e sequenciado usando procedimentos convencionais (por exemplo, pelo uso de sondas de oligonucleotídeo que são capazes de especificamente se ligar aos genes que codificam as cadeias pesadas e leves do anticorpo).
[00380] Células hospedeiras adequadas para clonagem ou expressão de vetores que codificam anticorpos incluem células procarióticas ou eucarióticas descritas neste documento. Por exemplo, os anticorpos podem ser produzidos em bactérias, em particular quando a glicosilação e a função efetora de Fc não são necessárias. Para a expressão de fragmentos de anticorpo e polipeptídeos em bactérias, vide, por exemplo, as Patentes dos EUA de nºs 5.648.237, 5.789.199 e 5.840.523. (Vide também Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (BKC Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254, descrevendo a expressão de fragmentos de anticorpo em E. coli). Após a expressão, o anticorpo pode ser isolado a partir da pasta celular bacteriana em uma fração solúvel e pode ser ainda purificado.
[00381] Além de procariotas, micróbios eucarióticos, tais como fungos filamentosos ou leveduras, são hospedeiros de clonagem ou expressão adequados para vetores que codificam anticorpos, incluindo estirpes de fungos e leveduras cujas vias de glicosilação foram "humanizadas", resultando na produção de um anticorpo com um padrão de glicosilação parcialmente ou totalmente humano. Vide Gerngross, T.U., Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004), e Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006).
[00382] As células hospedeiras adequadas para a expressão de anticorpo glicosilado são também derivadas a partir de organismos multicelulares (invertebrados e vertebrados). Exemplos de células de invertebrados incluem células de plantas e insetos. Numerosas estirpes de baculovirais foram identificadas, as quais podem ser usadas em conjunto com células de inseto, particularmente para transfecção de células de Spodoptera frugiperda.
[00383] As culturas de células vegetais também podem ser usadas como hospedeiros. Vide, por exemplo, as Patentes dos EUA de nºs
5.959.177, 6.040.498, 6.420.548, 7.125.978 e 6.417.429 (descrevendo a tecnologia PLANTIBODIESTM para produzir anticorpos em plantas transgênicas).
[00384] As células de vertebrados podem também ser usadas como hospedeiras. Por exemplo, linhagens celulares de mamífero que são adaptadas para crescer em suspensão podem ser úteis. Outros exemplos de linhagens celulares hospedeiras de mamífero úteis são a linhagem CV1 de rim de macaco transformada por SV40 (COS-7); linhagem de rim embrionário humano (células 293 ou 293, como descrito, por exemplo, em Graham et al., J.
Gen Virol. 36:59 (1977)); células de rim de hamster bebê (BHK); células de Sertoli de camundongo (células TM4 conforme descrito, por exemplo, em Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)); células de rim de macaco (CV1); Células de rim de macaco verde africano (VERO-76); células de carcinoma cervical humano (HELA); células renais caninas (MDCK; células de fígado de rato búfalo (BRL 3A); células de pulmão humano (W138); células de fígado humano (Hep G2); tumor mamário de camundongo (MMT 060562); células TRI, conforme descrito, por exemplo, em Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci.
383:44-68 (1982); células MRC 5; e células FS4. Outras linhagens celulares hospedeiras de mamíferos úteis incluem células de ovário de hamster chinês (CHO), incluindo células DHFR-CHO (Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)) ; e linhagens celulares de mieloma, tais como Y0, NS0 e Sp2/0. Para uma revisão de certas linhagens celulares hospedeiras de mamíferos adequadas para a produção de anticorpos, vide, por exemplo, Yazaki e Wu, A.M., Methods in Molecular Biology, Vol. 248, (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003).
C. ENSAIOS
[00385] Os anticorpos anti-KLK5 fornecidos neste documento podem ser identificados, rastreados ou distinguidos por suas propriedades físicas/químicas e/ou atividades biológicas por vários ensaios conhecidos na técnica.
1. ENSAIOS DE LIGAÇÃO E OUTROS ENSAIOS
[00386] Em um aspecto, um anticorpo da presente invenção é testado quanto à sua atividade de ligação ao antígeno, por exemplo, por métodos conhecidos, tais como ELISA, BIACore®, FACS, Western blot, etc.
[00387] Em outro aspecto, ensaios de competição, podem ser usados para identificar um anticorpo que compete com qualquer dos anticorpos descritos neste documento para a ligação a KLK5. Em certas modalidades, tal anticorpo de competição se liga ao mesmo epítopo (por exemplo, um epítopo linear ou conformacional) que é ligado por qualquer um dos anticorpos descritos neste documento. Métodos exemplares detalhados para mapeamento de um epítopo ao qual um anticorpo se liga são fornecidos em Morris (1996) “Epitope Mapping Protocols,” em Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ).
[00388] Em um ensaio de competição exemplar, KLK5 imobilizado é incubado em uma solução compreendendo um primeiro anticorpo marcado que se liga a KLK5 (por exemplo, qualquer um dos anticorpos descritos neste documento) e um segundo anticorpo não marcado que está sendo testado quanto à sua capacidade de competir com o primeiro anticorpo para ligação a KLK5. O segundo anticorpo pode estar presente em um sobrenadante de hibridoma. Como um controle, KLK5 imobilizado é incubado em uma solução compreendendo o primeiro anticorpo marcado, mas não o segundo anticorpo não marcado. Após incubação em condições permissivas para a ligação do primeiro anticorpo a KLK5, o excesso de anticorpo não ligado é removido e a quantidade de marcador associada a KLK5 imobilizado é medida. Se a quantidade de marcador associada a KLK5 imobilizado for substancialmente reduzida na amostra de teste em relação à amostra de controle, isso indica que o segundo anticorpo está competindo com o primeiro anticorpo pela ligação a KLK5. VideHarlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual cap.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).
2. ENSAIOS DE ATIVIDADE
[00389] Em um aspecto, os ensaios são fornecidos para a identificação de anticorpos anti-KLK5 tendo atividade biológica. A atividade biológica pode incluir, por exemplo, a inibição de KLK5. Em uma modalidade, os anticorpos anti-KLK5 inibem a atividade da serina protease de KLK5. Os anticorpos tendo tal atividade biológica in vivo e/ou in vitro também são fornecidos.
[00390] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-KLK5 são testados para tal atividade biológica. Em algumas modalidades, a atividade biológica é testada por um ou mais métodos selecionados a partir do grupo que consiste em um ensaio de atividade direta, ensaio de peptídeo fluorescente, ensaio de LC/MS e ensaio de Ki(app). Em algumas modalidades, a atividade biológica é medida por um ou mais métodos selecionados a partir do grupo que consiste em um ensaio de atividade direta de KLK5 recombinante, ensaio acoplado de peptídeo fluorescente com pró-KLK1, ensaio acoplado de peptídeo fluorescente com pró-KLK7, um ensaio de LC/MS com pró-KLK1, um ensaio de LC/MS com pró-KLK7 e um ensaio de Ki(app). Em algumas modalidades, os valores de IC50 são medidos pelos ensaios descritos neste documento acima e em detalhes nos Exemplos abaixo.
D. IMUNOCONJUGADOS
[00391] A invenção também fornece imunoconjugados compreendendo um anticorpo anti-KLK5 fornecido neste documento conjugado a um ou mais agentes citotóxicos, tais como agentes quimioterápicos ou fármacos, agentes inibidores de crescimento, toxinas (por exemplo, toxinas de proteínas, toxinas enzimaticamente ativas de origem bacteriana, fúngica,
vegetal ou animal, ou fragmentos das mesmas) ou isótopos radioativos.
[00392] Em uma modalidade, um imunoconjugado é um conjugado anticorpo-fármaco (ADC) em que um anticorpo é conjugado a um ou mais fármacos, incluindo, mas não se limitando a, um maitansinoide (vide Patentes dos EUA de nº 5.208.020, 5.416.064 e Patente Europeia EP 0 425 235 B1); uma auristatina, tal como frações de fármaco de monometilauristatina DE e DF (MMAE e MMAF) (vide Patentes dos EUA de nºs 5.635.483 e
5.780.588, e 7.498.298); uma dolastatina; uma caliqueamicina ou derivado da mesma (vide Patentes dos EUA de nºs 5.712.374, 5.714.586, 5.739.116,
5.767.285, 5.770.701, 5.770.710, 5.773.001 e 5.877.296; Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993); e Lode et al., Cancer Res. 58:2925-2928 (1998)); uma antraciclina, tal como daunomicina ou doxorrubicina (vide Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med.
Chem. Letters 16:358-362 (2006); Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005); Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002); King et al., J. Med.
Chem. 45:4336-4343 (2002); e Patente dos EUA de nº 6.630.579); metotrexato; vindesina; um taxano, tal como docetaxel, paclitaxel, larotaxel, tesetaxel e ortataxel; um tricoteceno; e CC1065.
[00393] Em outra modalidade, um imunoconjugado compreende um anticorpo, como descrito neste documento, conjugado a uma toxina enzimaticamente ativa ou fragmento da mesma, incluindo, mas não se limitando a, cadeia A da difteria, fragmentos ativos não ligantes da toxina da difteria, cadeia A da exotoxina (da Pseudomonas aeruginosa), cadeia A da ricina, cadeia A de abrina, cadeia A da modecina, alfa-sarcina, proteínas fordii de Aleurites, proteínas dianthin, proteínas Phytolaca americana (PAPI, PAPII e PAP-S), inibidor da momordica charantia, curcina, crotina, inibidor da sapaonaria officinalis, gelonina, mitogelina, restringocina, fenomicina,
enomicina e os tricotecenos.
[00394] Em outra modalidade, um imunoconjugado compreende um anticorpo, conforme descrito neste documento, conjugado a um átomo radioativo para formar um radioconjugado. Uma variedade de isótopos radioativos está disponível para a produção de radioconjugados. Os exemplos incluem At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 e isótopos radioativos de Lu. Quando o radioconjugado é usado para detecção, ele pode compreender um átomo radioativo para estudos cintilográficos, por exemplo, tc99m ou I123, ou um marcador de rotação para imagem de ressonância magnética nuclear (RMN) (também conhecida como imagem de ressonância magnética, irm), tal como iodo -123 novamente, iodo-131, índio- 111, flúor-19, carbono-13, nitrogênio-15, oxigênio-17, gadolínio, manganês ou ferro.
[00395] Conjugados de um anticorpo e agente citotóxico podem ser feitos usando uma variedade de agentes de acoplamento de proteína bifuncional, tais como propionato de N-succinimidil-3- (2-piridilditio) (SPDP), ciclohexano-1-carboxilato de succinimidil-4- (N-maleimidometil) (SMCC), iminotiolano (IT), derivados bifuncionais de imidoésteres (tais como adipimidato de dimetila HCl), ésteres ativos (tais como suberato de disuccinimidila), aldeídos (tais como glutaraldeído), compostos bis-azido (tais como bis (p- azidobenzoil) hexanodiamina), derivados de bis-diazônio (tais como bis-(p- diazôniobenzoil) -etilenodiamina), di-isocianatos (tais como tolueno 2,6-di- isocianato) e compostos de flúor bis-ativos (tais como 1,5-difluoro-2, 4- dinitrobenzeno). Por exemplo, uma imunotoxina de ricina pode ser preparada, como descrito em Vitetta et al., Science 238:1098 (1987). O ácido 1- isotiocianatobenzil-3-metildietileno triaminapenta-acético (MX-DTPA) marcado com carbono 14 é um agente quelante exemplar para a conjugação do radionucleotídeo ao anticorpo. Vide WO94/11026. O ligante pode ser um
"ligante clivável", facilitando a liberação de um fármaco citotóxico na célula. Por exemplo, um ligante lábil a ácido, ligante sensível à peptidase, ligante fotolábil, ligante de dimetila ou ligante contendo dissulfeto (Chari et al., Cancer Res.
52:127-131 (1992); Patente dos EUA de nº 5.208.020) podem ser usados.
[00396] Os imunuoconjugados ou ADCs deste documento contemplam expressamente, mas não estão limitados a, tais conjugados preparados com reagentes de reticulação incluindo, mas não se limitando a, BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, sulfo-EMCS, sulfo-GMBS, sulfo-KMUS, sulfo-MBS, sulfo-SIAB, sulfo-SMCC e sulfo-SMPB, e SVSB (succinimidil-(4-vinilsulfona) benzoato), que são comercialmente disponíveis (por exemplo, da Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., EUA).
E. MÉTODOS E COMPOSIÇÕES PARA DIAGNÓSTICO E DETECÇÃO
[00397] Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos anti-KLK5 fornecidos neste documento é útil para detectar a presença de KLK5 em uma amostra biológica. O termo "detecção", conforme usado neste documento, abrange a detecção quantitativa ou qualitativa. Em algumas modalidades, uma amostra biológica compreende uma célula ou tecido, tal como epiderme da pele, parênquima pulmonar, subepitélio brônquico. Em algumas modalidades, uma amostra biológica compreende lavagem alveolar brônquica.
[00398] Em uma modalidade, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 para uso em um método de diagnóstico ou detecção. Em um aspecto adicional, é fornecido um método de detecção da presença de KLK5 em uma amostra biológica. Em certas modalidades, o método compreende colocar a amostra biológica em contato com um anticorpo anti-KLK5, conforme descrito neste documento, sob condições permissivas para a ligação do anticorpo anti-KLK5 a KLK5 e detectar se um complexo é formado entre o anticorpo anti-KLK5 e
KLK5. Tal método pode ser um método in vitro ou in vivo. Em uma modalidade, um anticorpo anti-KLK5 é usado para selecionar pacientes elegíveis para terapia com um anticorpo anti-KLK5, por exemplo, onde KLK5 é um biomarcador para seleção de pacientes.
[00399] Distúrbios exemplares que podem ser diagnosticados usando um anticorpo anti-KLK5 da invenção incluem síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase e rosácea. Em algumas modalidades, a doença é selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase, rosácea e esofagite eosinofílica.
Em algumas modalidades, a asma é selecionada a partir do grupo que consiste em asma atópica, asma alérgica, asma não alérgica, asma induzida por exercícios, asma exacerbada/sensível à aspirina, asma leve, asma moderada a grave, asma virgem de corticosteroide, asma crônica, asma resistente a corticosteroides, asma refratária a corticosteroides, asma recém-diagnosticada e não tratada, asma devido ao tabagismo, asma não controlada por corticosteroides, asma induzida por linfócito T auxiliar do tipo 2 (Th2), tipo 2 (Th2) alto ou tipo 2 (T2), asma eosinofílica, asma com alto teor de periostina, asma com alto teor de eosinófilos, asma com baixo teor de Th2 ou asma não induzida por Th2, asma com baixo teor de periostina e asma com baixo teor de eosinófilos. Em algumas modalidades, a asma é asma com baixo teor de TH2.
[00400] Em certas modalidades, são fornecidos anticorpos anti- KLK5 marcados. Os marcadores incluem, mas não estão limitados a, marcadores ou frações que são detectados diretamente (tais como fluorescente, cromóforo, elétron-denso, quimioluminescente e marcadores radioativos), bem como frações, tais como enzimas ou ligantes, que são detectados indiretamente, por exemplo, por meio de uma reação enzimática ou interação molecular. Marcadores exemplares incluem, mas não estão limitados a, os radioisótopos 32P, 14C, 125I, 3H, and 131I, fluoróforos, tais como quelatos de terras raras ou fluoresceína e seus derivados, rodamina e seus derivados, dansil, umbeliferona, luceriferases, por exemplo, luciferase do vagalume e luciferase bacteriana (Patente dos EUA de nº 4.737.456), luciferina, 2,3-di-hidroftalazinedionas, peroxidase de rábano (HRP), fosfatase alcalina, β-galactosidase, glucoamilase, lisozima, sacarídeo oxidases, por exemplo, glicose oxidase, galactose oxidase e glicose-6-fosfato desidrogenase, enzima heterocíclica oxidase, tal como uricase e xantina oxidase, acoplada a uma enzima que emprega peróxido de hidrogênio para oxidar um precursor de corante, tal como HRP, lactoperoxidase ou microperoxidase, biotina/avidina, marcadores de rotação, marcadores de bacteriófago, radicais livres estáveis e similares.
F. FORMULAÇÕES FARMACÊUTICAS
[00401] As formulações farmacêuticas de um anticorpo anti-KLK5 como descrito neste documento são preparadas por mistura, tal anticorpo tendo o grau desejado de pureza com um ou mais transportadores farmaceuticamente aceitáveis opcionais (Remington's Pharmaceutical Sciences 16ª edição, Osol, A. Ed. (1980)), na forma de formulações liofilizadas ou soluções aquosas. Os transportadores farmaceuticamente aceitáveis são geralmente não tóxicos para os destinatários nas dosagens e concentrações empregues e incluem, mas não estão limitados a: tampões, tais como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes (tais como cloreto de octadecildimetilbenzilamónio; cloreto de hexametónio; cloreto de benzalcónio; cloreto de benzetónio; fenol, álcool butílico ou benzílico; alquilparabenos, tais como parabeno de metila ou propila; catecol; resorcinol; ciclohexanol; 3-pentanol; e m-cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular (inferior a cerca de 10 resíduos); proteínas, tais como albumina sérica, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos, tais como polivinilpirrolidona; aminoácidos, tais como glicina, glutamina, asparagina,
histidina, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos, incluindo glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes, tais como EDTA; açúcares, tais como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contraíons formadores de sal, tais como sódio; complexos de metal (por exemplo, complexos de Zn-proteína); e/ou surfactantes não iônicos, tais como polietilenoglicol (PEG). Os transportadores farmaceuticamente aceitáveis exemplares incluem ainda agentes de dispersão de fármacos instersticiais, tais como glicoproteinas hialuronidase solúveis ativas em meio neutro (sHASEGP), por exemplo, glicoproteínas hialuronidase PH-20 solúveis humanas, tais como rHuPH20 (HYLENEX®, Baxter International, Inc.). Certos exemplos de sequências e métodos de uso, incluindo rHuPH20, são descritos nas Publicações de Patente dos EUA de nº 2005/0260186 e 2006/0104968. Em um aspecto, um sHASEGP é combinado com uma ou mais glicosaminoglicanases adicionais, tais como condroitinases.
[00402] Formulações de anticorpos liofilizados exemplares são descritos na Patente dos EUA de nº 6.267.958. As formulações de anticorpo aquosas incluem aquelas descritas na Patente dos EUA de nº 6.171.586 e WO2006/044908, as últimas formulações incluindo um tampão de acetato de histidina.
[00403] A formulação deste documento também pode conter mais de um ingrediente ativo conforme necessário para a indicação particular a ser tratada, de preferência, aqueles com atividades complementares que não afetam adversamente uns aos outros.
[00404] Os ingredientes ativos podem ser aprisionados em microcápsulas preparadas, por exemplo, por técnicas de coacervação ou por polimerização interfacial, por exemplo, hidroximetilcelulose ou microcápsulas de gelatina e microcápsulas de poli-(metilmetacilato), respectivamente, em sistemas de distribuição de fármacos coloidais (por exemplo, lipossomas,
microesferas de albumina, microemulsões, nanopartículas e nanocápsulas) ou em macroemulsões. Tais técnicas são divulgadas em Remington's Pharmaceutical Sciences, 16ª edição, Osol, A. Ed. (1980).
[00405] Preparações de liberação sustentada podem ser preparadas. Exemplos adequados de preparações de liberação sustentada incluem matrizes semipermeáveis de polímeros hidrofóbicos sólidos contendo o anticorpo, cujas matrizes estão na forma de artigos moldados, por exemplo, películas ou microcápsulas.
[00406] As formulações a serem usadas para administração in vivo são geralmente estéreis. A esterilidade pode ser prontamente realizada, por exemplo, por filtração através de membranas de filtração estéreis.
G. MÉTODOS RECOMBINANTES E COMPOSIÇÕES
[00407] Qualquer um dos anticorpos anti-KLK5 fornecidos neste documento podem ser usados em métodos terapêuticos.
[00408] Em um aspecto, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 para uso como um medicamento. Em outros aspectos, um anticorpo anti-KLK5 é fornecido para uso no tratamento de uma doença selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase e rosácea. Em algumas modalidades, a doença é selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase, rosácea e esofagite eosinofílica. Em algumas modalidades, a asma é selecionada a partir do grupo que consiste em asma atópica, asma alérgica, asma não alérgica, asma induzida por exercícios, asma exacerbada/sensível à aspirina, asma leve, asma moderada a grave, asma virgem de corticosteroide, asma crônica, asma resistente a corticosteroides, asma refratária a corticosteroides, asma recém-diagnosticada e não tratada, asma devido ao tabagismo, asma não controlada por corticosteroides, asma induzida por linfócito T auxiliar do tipo 2 (Th2), tipo 2 (Th2) alto ou tipo 2 (T2), asma eosinofílica, asma com alto teor de periostina, asma com alto teor de eosinófilos, asma com baixo teor de Th2 ou asma não induzida por Th2, asma com baixo teor de periostina e asma com baixo teor de eosinófilos. Em algumas modalidades, a asma é asma com baixo teor de TH2.
[00409] Em certas modalidades, é fornecido um anticorpo anti- KLK5 para uso em um método de tratamento. Em certas modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti-KLK5 para uso em um método para tratar um paciente tendo uma doença, em que a doença é selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase e rosácea, compreendendo administrar ao paciente uma quantidade eficaz do anticorpo anti-KLK5. Em uma dessas modalidades, o método compreende ainda administrar ao paciente uma quantidade eficaz de pelo menos um agente terapêutico adicional, por exemplo, como descrito abaixo.
Em algumas modalidades, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 para uso na inibição da atividade biológica de KLK5. Em algumas modalidades, é fornecido um anticorpo anti-KLK5 para uso em um método para inibir atividade biológica de KLK5 em um paciente, compreendendo administrar ao paciente um anticorpo anti-KLK5 eficaz para inibir a atividade biológica de KLK5. Um "paciente" de acordo com qualquer uma das modalidades acima é de preferência um humano. Em algumas modalidades, a doença é selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase, rosácea e esofagite eosinofílica. Em algumas modalidades, a asma é selecionada a partir do grupo que consiste em asma atópica, asma alérgica, asma não alérgica, asma induzida por exercícios, asma exacerbada/sensível à aspirina, asma leve, asma moderada a grave, asma virgem de corticosteroide, asma crônica, asma resistente a corticosteroides, asma refratária a corticosteroides, asma recém-diagnosticada e não tratada, asma devido ao tabagismo, asma não controlada por corticosteroides, asma induzida por linfócito T auxiliar do tipo 2 (Th2), tipo 2 (Th2) alto ou tipo 2 (T2), asma eosinofílica, asma com alto teor de periostina, asma com alto teor de eosinófilos, asma com baixo teor de Th2 ou asma não induzida por Th2, asma com baixo teor de periostina e asma com baixo teor de eosinófilos. Em algumas modalidades, a asma é asma com baixo teor de TH2.
[00410] Em um aspecto adicional, a invenção fornece o uso de um anticorpo anti-KLK5 na fabricação ou preparação de um medicamento. Em uma modalidade, o medicamento é para o tratamento de uma doença, em que a doença é selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase e rosácea. Em uma outra modalidade, o medicamento é para uso em um método para tratar uma doença, em que a doença é selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase e rosácea, compreendendo administrar a um paciente tendo a referida doença um quantidade do medicamento. Em uma dessas modalidades, o método compreende ainda administrar ao paciente uma quantidade eficaz de pelo menos um agente terapêutico adicional, por exemplo, como descrito abaixo.
Em uma outra modalidade, o medicamento é para inibir a atividade biológica de KLK5. Em uma outra modalidade, o medicamento é para uso em um método para inibir a atividade biológica de KLK5 em um paciente, compreendendo administrar ao paciente uma quantidade eficaz do medicamento para inibir a atividade biológica de KLK5. Um “paciente”, de acordo com qualquer uma das modalidades acima, pode ser um mamífero, de preferência, um humano. Em algumas modalidades, a doença é selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase, rosácea e esofagite eosinofílica. Em algumas modalidades, a asma é selecionada a partir do grupo que consiste em asma atópica, asma alérgica, asma não alérgica, asma induzida por exercícios, asma exacerbada/sensível à aspirina, asma leve,
asma moderada a grave, asma virgem de corticosteroide, asma crônica, asma resistente a corticosteroides, asma refratária a corticosteroides, asma recém- diagnosticada e não tratada, asma devido ao tabagismo, asma não controlada por corticosteroides, asma induzida por linfócito T auxiliar do tipo 2 (Th2), tipo 2 (Th2) alto ou tipo 2 (T2), asma eosinofílica, asma com alto teor de periostina, asma com alto teor de eosinófilos, asma com baixo teor de Th2 ou asma não induzida por Th2, asma com baixo teor de periostina e asma com baixo teor de eosinófilos. Em algumas modalidades, a asma é asma com baixo teor de TH2.
[00411] Em um aspecto adicional, a invenção fornece um método para tratar uma doença, em que a doença é selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase e rosácea. Em algumas modalidades, a doença é selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase, rosácea e esofagite eosinofílica. Em uma modalidade, o método compreende administrar a um paciente tendo tal síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase ou rosácea uma quantidade eficaz de um anticorpo anti- KLK5. Em uma dessas modalidades, o método compreende ainda administrar ao paciente uma quantidade eficaz de pelo menos um agente terapêutico adicional, por exemplo, conforme descrito abaixo. Um “paciente”, de acordo com qualquer uma das modalidades acima, pode ser um mamífero, de preferência, um humano. Em algumas modalidades, a asma é selecionada a partir do grupo que consiste em asma atópica, asma alérgica, asma não alérgica, asma induzida por exercícios, asma exacerbada/sensível à aspirina, asma leve, asma moderada a grave, asma virgem de corticosteroide, asma crônica, asma resistente a corticosteroides, asma refratária a corticosteroides, asma recém-diagnosticada e não tratada, asma devido ao tabagismo, asma não controlada por corticosteroides, asma induzida por linfócito T auxiliar do tipo 2 (Th2), tipo 2 (Th2) alto ou tipo 2 (T2), asma eosinofílica, asma com alto teor de periostina, asma com alto teor de eosinófilos, asma com baixo teor de Th2 ou asma não induzida por Th2, asma com baixo teor de periostina e asma com baixo teor de eosinófilos. Em algumas modalidades, a asma é asma com baixo teor de TH2.
[00412] Em um aspecto adicional, a invenção fornece um método para inibir a atividade biológica de KLK5 em um paciente. Em uma modalidade, o método compreende administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-KLK5 para inibir a atividade biológica de KLK5. Em uma modalidade, um "paciente" é um humano.
[00413] Em um aspecto adicional, a invenção fornece formulações farmacêuticas compreendendo qualquer um dos anticorpos anti-KLK5 fornecidos neste documento, por exemplo, para uso em qualquer um dos métodos terapêuticos acima. Em uma modalidade, uma formulação farmacêutica compreende qualquer um dos anticorpos anti-KLK5 fornecidos no presente documento e um transportador farmaceuticamente aceitável. Em outra modalidade, uma formulação farmacêutica compreende qualquer um dos anticorpos anti-KLK5 fornecidos neste documento e pelo menos um agente terapêutico adicional, por exemplo, conforme descrito abaixo.
[00414] Os anticorpos da invenção podem ser usados sozinhos ou em combinação com outros agentes em uma terapia. Por exemplo, um anticorpo da invenção pode ser coadministrado com pelo menos um agente terapêutico adicional. Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é um antagonista de ligação ao eixo IL-13, um antagonista de ligação ao eixo IL-5, um antagonista de ligação ao eixo IL-33, um antagonista principal M1, um antagonista IgE, um antagonista TRPA1, um antagonista CRTH2, um broncodilatador ou medicamento controlador de sintomas de asma, um imunomodulador, um corticosteroide, um inibidor da via Th2, um inibidor da tirosina quinase ou um inibidor da fosfodiesterase. Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao IL-13 é um anticorpo anti-IL-13. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-IL-13 é lebrikizumab. Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao eixo IL-5 é um antagonista de ligação ao IL-5 ou um antagonista de ligação ao receptor IL-5. Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao eixo IL-33 é um antagonista de ligação ao IL-33 ou um antagonista de ligação ao ST2. Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao IL-33 é um anticorpo anti-IL-33. Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao PD -1 é quilizumab.
[00415] Tais terapias de combinação observadas acima abrangem a administração combinada (onde dois ou mais agentes terapêuticos estão incluídos nas mesmas formulações ou em formulações separadas) e administração separada, em cujo caso, a administração do anticorpo da invenção pode ocorrer antes, simultaneamente e/ou depois da administração do agente ou agentes terapêuticos adicionais. Em uma modalidade, a administração do anticorpo anti-KLK5 e a administração de um agente terapêutico adicional ocorrem dentro de cerca de um mês, ou dentro de uma, duas ou três semanas, ou dentro de um, dois, três, quatro, cinco ou seis dias, de cada uma. Os anticorpos da invenção também podem ser usados em combinação com terapia de radiação.
[00416] Um anticorpo da invenção (e qualquer agente terapêutico adicional) pode ser administrado por qualquer meio adequado, incluindo parenteral, intrapulmonar e intranasal e, se desejado para tratamento local, administração intralesional. As infusões parenterais incluem administração intramuscular, intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal ou subcutânea. A dosagem pode ser por qualquer via adequada, por exemplo, por injeções, tais como injeções intravenosas ou subcutâneas, dependendo em parte se a administração é breve ou crônica. Vários esquemas de dosagem incluindo, entre outros, administrações únicas ou múltiplas ao longo de vários períodos de tempo, administração em bolus e infusão de pulsos são contemplados neste documento.
[00417] Os anticorpos da invenção seriam formulados, doseados e administrados de uma forma consistente com as boas práticas médicas. Os fatores a serem considerados neste contexto incluem o distúrbio específico sendo tratado, o mamífero específico sendo tratado, a condição clínica do paciente individual, a causa do distúrbio, o local de liberação do agente, o método de administração, o agendamento da administração, e outros fatores conhecidos pelos médicos. O anticorpo não precisa ser mas é opcionalmente formulado com um ou mais agentes atualmente usados para prevenir ou tratar o distúrbio em questão. A quantidade eficaz de tais outros agentes depende da quantidade de anticorpo presente na formulação, do tipo de distúrbio ou tratamento e de outros fatores discutidos acima. Essas são geralmente usadas nas mesmas dosagens e com vias de administração descritas neste documento, ou cerca de 1 a 99% das dosagens descritas aqui, ou em qualquer dosagem e por qualquer via que seja empiricamente/clinicamente determinada como apropriada.
[00418] Para a prevenção ou tratamento da doença, a dosagem apropriada de um anticorpo da invenção (quando usado sozinho ou em combinação com um ou mais outros agentes terapêuticos adicionais) dependerá do tipo de doença a ser tratada, o tipo de anticorpo, a gravidade e curso da doença, se o anticorpo é administrado para fins preventivos ou terapêuticos, terapia anterior, histórico clínico do paciente e resposta ao anticorpo, e a critério do médico assistente. O anticorpo é adequadamente administrado ao paciente de uma vez ou durante uma série de tratamentos.
Dependendo do tipo e da gravidade da doença, cerca de 1 μg/kg a 15 mg/kg (por exemplo, 0,1 mg/kg-10 mg/kg) de anticorpo pode ser uma dosagem candidata inicial para administração ao paciente, seja, por exemplo, por uma ou mais administrações separadas, ou por infusão contínua. Uma dosagem diária típica pode variar de cerca de 1 μg/kg a 100 mg/kg ou mais, dependendo dos fatores mencionados acima. Para administrações repetidas por vários dias ou mais, dependendo da condição, o tratamento geralmente é mantido até que ocorra a supressão desejada dos sintomas da doença. Uma dosagem exemplar do anticorpo estaria na faixa de cerca de 0,05 mg/kg a cerca de 10 mg/kg. Assim, uma ou mais doses de cerca de 0,5 mg/kg, 2,0 mg/kg, 4,0 mg/kg ou 10 mg/kg (ou qualquer combinação das mesmas) podem ser administradas ao paciente. Tais doses podem ser administradas intermitentemente, por exemplo, a cada semana ou a cada três semanas (por exemplo, de tal modo que o paciente receba de cerca de duas a cerca de vinte ou, por exemplo, cerca de seis doses do anticorpo). Pode ser administrada uma dose inicial mais alta, seguida por uma ou mais doses mais baixas.
[00419] Entende-se que qualquer uma das formulações ou métodos terapêuticos acima podem ser realizados usando um imunoconjugado da invenção no lugar de ou em adição a um anticorpo anti-KLK5.
H. ARTiGOS DE FABRICAÇÃO
[00420] Em outro aspecto da invenção, é fornecido um artigo de fabricação contendo materiais úteis para o tratamento, prevenção e/ou diagnóstico dos distúrbios descritos acima. O artigo de fabricação compreende um recipiente, um rótulo ou bula no recipiente ou associado a ele. Recipientes adequados incluem, por exemplo, garrafas, frascos, seringas, sacos IV de solução, etc. Os recipientes podem ser formados a partir de uma variedade de materiais, tais como vidro ou plástico. O recipiente contém uma composição que é por si só ou combinada com outra composição eficaz para tratar, prevenir e/ou diagnosticar a condição e pode ter uma porta de acesso estéril (por exemplo, o recipiente pode ser um saco de solução intravenosa ou um frasco tendo uma rolha perfurável por uma agulha de injeção hipodérmica). Pelo menos um agente ativo na composição é um anticorpo da invenção. O rótulo ou a bula indicam que a composição é usada para tratar a condição de escolha. Além disso, o artigo de fabricação pode compreender (a) um primeiro recipiente com uma composição contida no mesmo, em que a composição compreende um anticorpo da invenção; e (b) um segundo recipiente com uma composição contida no mesmo, em que a composição compreende um outro agente citotóxico ou terapêutico. O artigo de fabricação nessa modalidade da invenção pode ainda compreender uma bula indicando que as composições podem ser usadas para tratar uma condição particular. Alternativamente, ou adicionalmente, o artigo de fabricação pode compreender ainda um segundo (ou terceiro) recipiente compreendendo um tampão farmaceuticamente aceitável, tal como água bacteriostática para injeção (BWFI), solução salina tamponada com fosfato, solução de Ringer e solução de dextrose. Pode ainda incluir outros materiais desejáveis do ponto de vista comercial e do usuário, incluindo outros tampões, diluentes, filtros, agulhas e seringas.
[00421] Entende-se que qualquer um dos artigos de fabricação acima pode incluir um imunoconjugado da invenção no lugar de ou em adição a um anticorpo anti-KLK5.
III. EXEMPLOS
[00422] A seguir estão exemplos de métodos e composições da invenção. Entende-se que várias outras modalidades podem ser praticadas, dada a descrição geral fornecida acima.
EXEMPLO 1 - MATERIAL E MÉTODOS GERAÇÃO DE ANTICORPOS ANTI-KLK5
[00423] Coelhos brancos da Nova Zelândia foram imunizados com KLK5 humano e células B individuais foram isoladas usando um protocolo modificado relacionado com a literatura publicada, por exemplo, vide Offner et al., PLoS ONE 9(2), 2014. Este fluxo de trabalho modificado incluiu a classificação FACS direta de células B IgG+huKLK5+ em poços individuais. Os sobrenadantes da cultura de células B foram testados por ELISA quanto à ligação a KLK5 humano e a uma proteína de controle irrelevante. As células B específicas de KLK5 foram lisadas e imediatamente congeladas a -80 °C para armazenamento até clonagem molecular. As regiões variáveis (VH e VL) de cada anticorpo monoclonal de células B de coelho foram clonadas em vetores de expressão de mRNA extraído, conforme descrito anteriormente, por exemplo, vide Offner et al., PLoS ONE 9(2), 2014. Anticorpos de coelho recombinantes individuais foram expressos em células Expi293 e subsequentemente purificados com proteína A. Anticorpos anti-KLK5 purificados foram então submetidos a ensaios de atividade funcional e triagem cinética.
[00424] Os ratos foram imunizados de uma maneira semelhante e os hibridomas foram gerados usando um parceiro de fusão modificado (por exemplo, vide Price et al., J Immunol Methods 31; 343(1): 28-41 (2009)). Várias condições foram otimizadas para permitir a classificação de hibridomas IgG + huKLK5 + individuais em poços individuais, seguido por cultura adicional após a classificação. Os sobrenadantes de hibridoma resultantes foram testados por ELISA e as amostras positivas foram purificadas usando proteína A para subsequente distinção funcional e cinética.
EXPERIMENTOS BIACORE™
[00425] A afinidade de ligação dos anticorpos nesta seção foi determinada pela máquina BIAcore™ T200. Em suma, os chips CM5 de grau de pesquisa BIAcore™ foram ativados com reagentes de 1-etil-3-(3- dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) e N-hidroxisuccinimida (NHS), de acordo com as instruções do fornecedor. IgGs Fc anti-humanos de cabra foram acoplados aos chips para atingir aproximadamente 10.000 unidades de resposta (UR) em cada célula de fluxo. Os grupos de acoplamento que não reagiram foram bloqueados com 1M de etanolamina. Para medições cinéticas, os anticorpos foram capturados para alcançar aproximadamente 300 UR.
Diluições em série de dez vezes de KLK5 humano foram injetadas em tampão HBS-P a 37 °C com um quociente de vazão de 30 μL/min. As taxas de associação (ka) e as taxas de dissociação (kd) foram calculadas usando um modelo de ligação Langmuir 1:1 (Software de avaliação BIAcore™ T200 versão
2.0). A constante de equilíbrio de dissociação (Kd) é calculada como a razão kd/ka.
ENSAIOS PARA DETERMINAÇÃO DA INIBIÇÃO DE KLK5
[00426] A inibição de KLK5 humano por anticorpos anti-KLK5 foi medida usando um ensaio de atividade direta com KLK5 recombinante. KLK5 humano recombinante (Genentech) foi diluído para 5 nM em tampão de ensaio direto (75 mM de Tris (pH 8,0), 150 mM de NaCl e TWEEN® 20 a 0,01%) e combinado com anticorpos anti-KLK5 em uma placa de ensaio de 384 poços (384 poços com baixo volume, pretos, com fundo redondo, Corning, Catálogo nº 4514). Os anticorpos foram fornecidos em tampão de amostra de fosfato (70 mM de fosfato de sódio (pH 6), 200 mM de NaCl e TWEEN® 20 a 0,01%) ou tampão de amostra de citrato/Tris (10 mM de ácido cítrico, 30 mM de Tris (pH 6) e TWEEN® 20 a 0,01%). As diluições de anticorpos foram feitas no tampão de amostra apropriado ou em tampão de ensaio direto. As placas foram incubadas por 30 minutos à temperatura ambiente. Substrato de peptídeo fluorescente, Boc-VPR-AMC (Bachem, Parte nº I-1120) foi adicionado diretamente à placa de ensaio. As concentrações finais no poço foram de 50 μM de Boc-VPR-AMC, 5 nM de KLK5 humano recombinante e 0,19-100 nM de anticorpos anti-KLK5. As placas foram examinadas a cada 102 s por 30-60 minutos usando um leitor PHERAstar® Plus usando um módulo de excitação de 340 nm/emissão de 460 nm. A taxa de reação (expressa como RFU) foi calculada por regressão linear de leituras na faixa linear, normalmente começando em 204 s e continuando até o final do ensaio. Tampão sozinho e 100 nM de SPINK9.SRE.Fc final (Genentech) foram usados como 100% e 0% de controles de atividade, respectivamente. O valor de IC50 dos anticorpos anti-KLK5 foram determinados a partir de um ajuste de quatro parâmetros para suas respectivas curvas.
[00427] A inibição de KLK5 humano por anticorpos anti-KLK5 foi medida usando um ensaio acoplado de peptídeo fluorescente com pró-KLK7.
KLK5 humano recombinante (Genentech) foi diluído para 5 nM em tampão de citrato acoplado com pró-KLK7/Tris (50 mM de Tris (pH 7,5), 150 mM de NaCl e TWEEN® 20 a 0,01%), se as amostras de anticorpos estavam em tampão de amostra citrato/Tris ou tampão de fosfato acoplado com pró-KLK7 (50 mM de Tris (pH 8,0), 150 mM de NaCl e TWEEN® 20 a 0,01%), se as amostras de anticorpos estavam em tampão de amostra de fosfato. O KLK5 diluído foi então combinado com anticorpos anti-KLK5 em uma placa de ensaio de 384 poços (384 poços com baixo volume, pretos, com fundo redondo, Corning, Catálogo nº 4514). As diluições de anticorpos foram feitas conforme descrito para o ensaio direto com KLK5. As placas foram incubadas por 30 minutos à temperatura ambiente. Substrato de peptídeo fluorescente, suc-LLVY-AMC (Bachem, Parte nº I-1395) e pró-KLK7 (Genentech) foram adicionados diretamente à placa de ensaio e incubados à temperatura ambiente. As concentrações finais no poço foram de 100 μM de suc-LLVY-AMC, 125 nM de pró-KLK7, 5 nM de KLK5 humano recombinante e 0,19-100 nM de anticorpos anti-KLK5. Após 24 horas, as leituras fluorescentes foram feitas a cada 102 s por 30-60 min e o valor de resultado de RFU foi calculado pela média das últimas 5 leituras. Tampão sozinho e 100 nM de SPINK9.SRE.Fc final (Genentech) foram usados como 100% e 0% de controles de atividade, respectivamente. O valor de IC50 dos anticorpos anti-KLK5 foram determinados a partir de um ajuste de quatro parâmetros para suas respectivas curvas.
[00428] O valor de IC50 dos anticorpos anti-KLK5 foi determinado usando um ensaio com pró-KLK7 por detecção de peptídeo de clivagem derivado de KLK5 usando LC/MS (ensaio de LC/MS com pró-KLK7). O peptídeo produto EEAQGDK da reação entre a enzima KLK5 e o substrato pró- KLK7 foi detectado por espectrometria de massa acoplada a cromatografia líquida. Todos os compostos foram diluídos com tampão de bicarbonato de amônio de 50 mM (Pó/Certificado, Fisher Chemical, A643-500) com concentrações finais no ensaio em 5 nM de KLK5 (Genentech) e anticorpos variando de 0,02 a 65 nM, diluídos em placas de 96 poços (Bio-Rad, placas de PCR de 96 poços Hard-Shell, com perfis baixos, paredes finas, contornados, azuis/transparentes #HSP9631). As placas foram incubadas à temperatura ambiente por 30 minutos. Em seguida, 15 nM de substrato de pró-KLK7 (Genentech) foram adicionados à enzima mais inibidores. Após 2 horas, a reação foi extinta usando 0,5 μL de ácido fórmico (99,5+%, Optima™ Grau LC/MS, Fisher Chemical, A117-10X1AMP). O peptídeo foi detectado usando a combinação das seguintes massas: Q1, 388,7 m/z e Q3, 319,0 m/z, em um espectrômetro de massa QTRAP® 6500 de LC-MS/MS (Sciex, Framingham, MA). A quantificação do peptídeo gerado foi medida usando uma curva de calibração de peptídeo KLK7 sintético. Os valores de IC50 foram determinados usando o software Prism 6 (GraphPad Software, La Jolla, CA).
[00429] A inibição de KLK5 humano por anticorpos anti-KLK5 foi medida usando um ensaio acoplado de peptídeo fluorescente com pró-KLK1.
KLK5 humano recombinante (Genentech) foi diluído para 0,5 nM em tampão de ensaio acoplado com pró-KLK1 (100 mM de Tris (pH 8,5) e TWEEN® 20 a 0,01%) e combinado com anticorpos anti-KLK5 em uma placa de ensaio de 384 poços (384 poços de baixo volume, pretos, com fundo redondo, Corning, Catálogo nº 4514). As diluições de anticorpos foram feitas conforme descrito para o ensaio direto com KLK5. As placas foram incubadas por 30 minutos à temperatura ambiente. Substrato de peptídeo fluorescente, PFR-AMC (Bachem, Parte nº I-1295) e pró-KLK1 (Genentech) foram adicionados diretamente à placa de ensaio e incubados à temperatura ambiente. As concentrações finais no poço foram de 50 μM de PFR-AMC, 31,25 nM de pró- KLK1, 0,5 nM de KLK5 humano recombinante e 0,19-100 nM de anticorpos anti-KLK5. As placas foram examinadas a cada 102 s por 120 minutos usando um leitor PHERAstar® Plus usando um módulo de excitação de 340 nm/emissão de 460 nm. Os valores dos resultados de RFU foram calculados pela média das leituras em torno de um tempo ditado pelo ponto de inflexão de um gráfico de RFU em relação ao tempo para os controles sem inibidor.
Tampão sozinho e 100 nM de SPINK9.SRE.Fc final (Genentech) foram usados como 100% e 0% de controles de atividade, respectivamente. Os valores de IC50 dos anticorpos anti-KLK5 foram determinados a partir de um ajuste de quatro parâmetros para suas respectivas curvas.
[00430] Os valores de IC50 dos anticorpos anti-KLK5 foram determinados usando um ensaio com pró-KLK1 por detecção de peptídeo de clivagem derivado de KLK5 usando LC/MS (ensaio de LC/MS com pró-KLK1).
O peptídeo produto APPIQSR da reação entre a enzima KLK5 e o substrato pró-KLK1 foi detectado por espectrometria de massa acoplada a cromatografia líquida. Todos os compostos foram diluídos com tampão de bicarbonato de amônio de 50 mM (Pó/Certificado, Fisher Chemical, A643-500) com concentrações finais no ensaio em 0,5 nM de KLK5 (Genentech) e anticorpos variando de 0,01 a 29 nM, diluídos em placas de 96 poços (Bio-Rad, placas de PCR de 96 poços Hard-Shell, com perfis baixos, paredes finas, contornados, azuis/transparentes #HSP9631). As placas foram incubadas à temperatura ambiente por 60 minutos. Posteriormente, 300 nM de substrato de pró-KLK1 (Genentech) foram adicionados à enzima mais inibidores. Após 20 minutos, a reação foi extinta usando 0,5 μL de ácido fórmico (99,5+%, Optima™ Grau LC/MS, Fisher Chemical, A117-10X1AMP). O peptídeo foi detectado usando a combinação das seguintes massas: Q1, 384,7 m/z e Q3, 600,3 m/z, em um espectrômetro de massa QTRAP® 6500 de LC-MS/MS (Sciex, Framingham, MA). O valor de IC50 foram determinados usando áreas de pico e software Prism 6 (GraphPad Software, La Jolla, CA).
[00431] O ensaio de Ki(app) usando Z-VPR-pNA como substrato foi realizado à temperatura ambiente em uma placa de meia área de 96 poços (brancos com fundo plano transparente, Corning # 3884). As amostras do inibidor foram diluídas para 3x a concentração final em tampão de ensaio (100 mM de Tris, pH 8,0, 100 mM de NaCl, TWEEN® 20 a 0,01%). Tampão sozinho e 100 nM de SPINK9.SRE.Fc final (Genentech) foram usados como 100% e 0% de controles de atividade, respectivamente. Amostras de inibidor ou controle (20 μL) foram adicionadas à placa seguidas por 20 μL de KLK5 (Genentech) em tampão de ensaio nas concentrações finais de 0,5, 0,25, 0,125 e 0,0625 nM. Após 30 minutos, 20 μL de substrato de Z-VPR-pNA (California Peptide, # 876-08, preparado como uma solução estoque de 30 mM em DMSO) em tampão de ensaio foram adicionados a uma concentração final de 300 μM. Em alguns ensaios iniciais, a concentração final de DMSO foi aumentada para 10% fazendo uma diluição inicial do substrato para 3 mM em DMSO antes da diluição para 900 μM (ou seja, 3x final) no tampão de ensaio.
Após a adição do substrato, a placa foi lida em um leitor de microplacas sintonizável Versamax com medições em 405 nm feitas a cada 102 segundos por 3 horas. As taxas de reação (expressas como μAU/s) foram calculadas por regressão linear na faixa de 4182-10710 segundos. As taxas de reação foram normalizadas para os valores dos controles de atividade de 0% e 100% e ajustadas com uma equação de 4 parâmetros para calcular os valores de IC50.
No caso de um inibidor bivalente, o valor bruto de IC50 foi multiplicado por dois.
O valor de IC50 foi então traçado em relação à concentração da enzima KLK5, produzindo o Ki(app) do valor de interceptação y. Além disso, se o inibidor fosse potente o suficiente, a pureza combinada da enzima e do inibidor poderia ser avaliada comparando a inclinação do gráfico com o valor teórico de 0,5.
ENSAIOS PARA DETERMINAÇÃO DA SELETIVIDADE DO ANTICORPO
[00432] O ensaio de seletividade de KLK1 foi realizado à temperatura ambiente em uma placa de 384 poços (preta, com fundo redondo de baixo volume, Corning # 4514) com um volume de reação final de 15 μL. As amostras do inibidor foram diluídas para 3x a concentração final em tampão de ensaio (75 mM de Tris, pH 8,0, 150 mM de NaCl, TWEEN® 20 a 0,01%). As reações sem inibidor e as reações sem enzima foram usadas como controles de atividade de 100% e 0%, respectivamente. Amostras de inibidor ou controle (5 μL) foram adicionadas à placa seguidas por 5 μL de KLK1 (R&D Systems, 2337-SE, Lote NLY0315111, ativado de acordo com o protocolo de sistemas R&D) em tampão de ensaio a uma concentração final de 3 nM. Após 30 minutos, 5 μL de sal de acetato H-pró-Phe-Arg-AMC (Bachem I-1295, 10 mM de solução estoque em água) em tampão de ensaio foram adicionados a uma concentração final de 100 μM. Após adição do substrato, a placa foi lida em um leitor de microplacas PHERAstar® usando módulo óptico FI 340 460 com aumento ajustado para 85%. As medições foram feitas a cada 102 segundos por 1 hora. As taxas de reação (expressas como RFU/s) foram calculadas por regressão linear na fdaixa de 204-918 segundos. As taxas de reação foram normalizadas para os valores dos controles de atividade de 0% e 100% e ajustadas com uma equação de 4 parâmetros para calcular os valores de IC50.
No caso de inibidores bivalentes, o valor bruto de IC50 foi multiplicado por dois.
[00433] O ensaio de seletividade de KLK4 foi realizado à temperatura ambiente em uma placa de 384 poços (pretos, com fundo redondo com baixo volume, Corning # 4514) com um volume de reação final de 15 μL.
As amostras do inibidor foram diluídas para 3x a concentração final em tampão de ensaio (75 mM de Tris, pH 8,0, 150 mM de NaCl, TWEEN® 20 a 0,01%). As reações sem inibidor e as reações sem enzima foram usadas como controles de atividade de 100% e 0%, respectivamente. Amostras de inibidor ou controle (5 μL) foram adicionadas à placa seguidas por 5 μL de KLK4 (R&D Systems, 1719-SE, lote MSY0116011, ativado de acordo com o protocolo de sistemas R&D) em tampão de ensaio a uma concentração final de 2 nM. Após 30 minutos, 5 μL de Boc-Val-pró-Arg-AMC (Bachem I-1120, 31,3 mM de solução estoque em água) em tampão de ensaio foram adicionados a uma concentração final de 50 μM. Após adição do substrato, a placa foi lida em um leitor de microplacas PHERAstar® usando módulo óptico FI 340 460 com aumento ajustado para 85%. As medições foram feitas a cada 102 segundos por 1 hora. As taxas de reação (expressas como RFU/s) foram calculadas por regressão linear na faixa de 510-3570 segundos. As taxas de reação foram normalizadas para os valores dos controles de atividade de 0% e 100% e ajustadas com uma equação de 4 parâmetros para calcular os valores de IC50.
No caso de inibidores bivalentes, o valor bruto de IC50 foi multiplicado por dois.
[00434] O ensaio de seletividade de tripsina foi realizado à temperatura ambiente em uma placa de 384 poços (pretos, com fundo redondo com baixo volume, Corning # 4514) com um volume de reação final de 15 μL.
As amostras do inibidor foram diluídas para 3x a concentração final em tampão de ensaio (75 mM de Tris, pH 8,0, 150 mM de NaCl, TWEEN® 20 a 0,01%). As reações sem inibidor e as reações sem enzima foram usadas como controles de atividade de 100% e 0%, respectivamente. Amostras de inibidor ou controle (5 μL) foram adicionadas à placa seguidas por 5 μL de tripsina (Sigma Aldrich T8003, Lote SLBM2321V, 42,0 μM de solução estoque em 1 mM de HCl) em tampão de ensaio a uma concentração final de 0,25 nM. Após 30 minutos, 5 μL de Boc-Val-pró-Arg-AMC (Bachem I-1120, 31,3 mM de solução estoque em água) em tampão de ensaio foram adicionados a uma concentração final de 50 μM. Após adição do substrato, a placa foi lida em um leitor de microplacas PHERAstar® usando módulo óptico FI 340 460 com aumento ajustado para 85%. As medições foram feitas a cada 102 segundos por 1 hora. As taxas de reação (expressas como RFU/s) foram calculadas por regressão linear na faixa de 204-3570 segundos. As taxas de reação foram normalizadas para os valores dos controles de atividade de 0% e 100% e ajustadas com uma equação de 4 parâmetros para calcular os valores de IC50. No caso de inibidores bivalentes, o valor bruto de IC50 foi multiplicado por dois.
[00435] O ensaio de seletividade de KLK7 foi realizado à temperatura ambiente em uma placa de 384 poços (preta, com fundo redondo de baixo volume, Corning # 4514) com um volume de reação final de 15 μL. As amostras do inibidor foram diluídas para 3x a concentração final em tampão de ensaio (75 mM de Tris, pH 8,0, 150 mM de NaCl, TWEEN® 20 a 0,01%). As reações sem inibidor e as reações sem enzima foram usadas como controles de atividade de 100% e 0%, respectivamente. Amostras de inibidor ou controle (5 μL) foram adicionadas à placa seguidas por 5 μL de KLK7 (Genentech) em tampão de ensaio a uma concentração final de 5 nM. Após 30 min, 5 μL de Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC (Bachem I-1395, 25 mM de solução estoque em água) em tampão de ensaio foram adicionados a uma concentração final de 100 μM. Após adição do substrato, a placa foi lida em um leitor de microplacas PHERAstar® usando módulo óptico FI 340 460 (Módulo AMC) com aumento ajustado para 85%. As medições foram feitas a cada 102 segundos por 1 hora e 15 minutos. As taxas de reação (expressas como RFU/s) foram calculadas por regressão linear na faixa de 2040 a 4488 segundos. As taxas de reação foram normalizadas para os valores dos controles de atividade de 0% e 100% e ajustadas com uma equação de 4 parâmetros para calcular os valores de IC50.
EXPERIMENTOS PHERASTAR®
[00436] Módulo Pré-MCA PHERAstar®: Após 30 min, 5 μL de Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC (Bachem I-1395, 25 mM de solução estoque em água) em tampão de ensaio foram adicionados a uma concentração final de 100 μM. Após adição do substrato, a placa foi lida em um leitor de microplacas PHERAstar® usando módulo óptico FI 340 460 (Módulo AMC) com aumento ajustado para 85%. As medições foram feitas a cada 102 segundos por 1 hora e 15 minutos. As taxas de reação (expressas como RFU/s) foram calculadas por regressão linear na faixa de 2040 a 4488 segundos. As taxas de reação foram normalizadas para os valores dos controles de atividade de 0% e 100% e ajustadas com uma equação de 4 parâmetros para calcular os valores de IC50.
[00437] Módulo Pós-MCA PHERAstar®: Após 30 min, 5 μL de substrato de MMP fluorogênico Mca-RPKPVE-Nval-WRK (Dnp) -NH2 (R&D Systems ES002, solução estoque de 4,3 mM em DMSO) em tampão de ensaio foram adicionados a uma concentração final de 10 μM. Após adição do substrato, a placa foi lida em um leitor de microplacas PHERAstar® usando módulo óptico F 320 405 (Módulo MCA) com aumento ajustado para 85%. As medições foram feitas a cada 102 segundos por 1 hora e 15 minutos. As taxas de reação (expressas como RFU/s) foram calculadas por regressão linear na faixa de 204 a 1020 segundos. As taxas de reação foram normalizadas para os valores dos controles de atividade de 0% e 100% e ajustadas com uma equação de 4 parâmetros para calcular os valores de IC50.
EXPERIMENTOS WASATCH
[00438] Um sistema de imagem SPR baseado em matrizes (Carterra™, EUA) foi usado para escanear epítopos em um painel de 288 anticorpos monoclonais. Os anticorpos purificados foram diluídos a 10 μg/ml em tampão de acetato de sódio de 10 mM, pH 4,5. Usando acoplamento de amina, os anticorpos foram imobilizados diretamente em um chip SPR sensorprism CMD 200M (XanTec Bioanalytics GmbH, Germany) usando um
Microspotter de Fluxo Contínuo (Carterra™, EUA) para criar uma matriz de 288 anticorpos. Para análise, o SPRi IBIS MX96 (Carterra™, EUA) foi usado para avaliar a ligação dos analitos aos ligantes imobilizados. Para análises cinéticas, KLK5 humano, cyno e murino foram injetados por 3 minutos de 0 a 300 nM a uma diluição de 3 vezes seguida por um período de dissociação de 10 minutos.
KLK1, KLK4 e KLK7 humanos foram injetados em uma única concentração de 500 nM para garantir as especificidades dos anticorpos. Para escaneamento de epítopos contra SPINK9-Fc-SRE, KLK5 humano foi primeiro injetado por 4 minutos a 100 nM e foi seguido por uma segunda injeção de 4 minutos de SPINK9-Fc-SRE a 10 μg/ml. A superfície foi regenerada com 10 mM de glicina, pH 1,5 entre os ciclos. O experimento foi realizado a 25 °C em um tampão de corrida de tampão HBS-T (0,01 M de HEPES, pH 7,4, 0,15 M de NaCl, surfactante P20 a 0,05%). Os dados cinéticos foram processados usando Scrubber 2.0 (BioLogic™ Software) e os dados de escaneamento de epítopos foram processados usando a ferramenta de software de escaneamento Wasatch (Carterra™, EUA).
ESPECTROMETRIA DE MASSA DE TROCA DE HIDROGÊNIO
[00439] As composições experimentais do material inicial estão listadas na Tabela 2. Duas soluções de marcação foram preparadas com 2H2O (água pesada) tendo um pH de 6,0 ou 8,0 e consistindo em uma mistura de fosfato de sódio monobásico anidro e fosfato de sódio dibásico de-hidratado combinados em uma razão apropriada para atingir a atividade de deutério declarada em uma concentração total de 10 mM com 140 mM de NaCl. Os materiais iniciais (Tabela 2) foram diluídos aproximadamente 1:10 com soluções de marcação usando uma plataforma robótica Leap e incubados por vários tempos antes de serem diluídos 1:1 com tampão de extinção (4M de GdmCl, 0,5 M de TCEP, 200 mM de ácido cítrico), para um pH final de 2,5, e então preparados rapidamente para medição de massa. O material extinto foi injetado em um sistema de fluxo online onde foi digerido usando pepsina, o tampão foi trocado enquanto ligado a uma coluna de armadilha, separado por cromatografia de fase reversa e introduzido na fase gasosa por eletropulverização, onde os peptídeos individuais são avaliados quanto à quantidade de deutério.
TABELA 2 Composição Exp. do Material Inicial Mab: Razão de Amostra [Mab] μM [KLK5] μM KLK5 KLK5.10C5 0,70 23,10 33,00 KLK5.10H3 0,65 20,98 33,00 KLK5.9H5 0,55 18,07 33,00 KLK5 0,00 0,00 33,00
[00440] Em pH 6,0 ou 8,0, as amostras foram marcadas para 0,5, 5,0, 56,0 e 600,0 minutos. Replicados experimentais independentes foram incluídos; nos gráficos mostrados, as barras de erro representam a faixa de medidas, cuja média é mostrada pelos marcadores na Figura 12B. A abstração de recursos e a análise de dados envolveram um software interno personalizado.
[00441] O tempo de marcação eficaz em um pH de referência foi definido pelo pH experimental e pelo tempo de marcação real: teff = texp ∗ 10 ^(pHref - pHexp). O pH de referência na Figura 12B é 6,0. Para corrigir um desvio de atividade de prótons bem conhecido que ocorre como um resultado de 2H2O, a seguinte relação conecta as medições de pH com os valores de pH referidos neste documento: pH = pHmedida+([2H2O/2H2O+1H2O]*0,4).
[00442] A sequência e o tempo de retenção de peptídeos experimentais derivados de KLK5 foram determinados em experimentos iniciais, onde o mesmo fluxo de trabalho do procedimento descrito acima foi seguido, mas com um tampão de marcação em solvente 1H2O. Isto fornece uma massa inicial a partir da qual pode ser determinada a quantidade de deutério contida em cada peptídeo durante os experimentos de marcação; além disso, esses experimentos usam tandem-MS para sequenciamento de novo por MS.
ENSAIO DE SECREÇÃO DE IL-8
[00443] A IL-8 é secretada por vários tipos de células em resposta a estímulos inflamatórios. O KLK5 estimula as células A459, resultando na secreção de IL-8. As células epiteliais basais alveolares humanas adenocarcinômicas constituem a linhagem celular A549. As células A549 foram cultivadas com meio contendo RPMI, 10% de FBS, L-glutamina e suplementadas com penicilina e estreptomicina. As células foram colocadas em placas de 96 poços tratadas com TC (Corning, Cat.#3997) a 50.000 células por poço e privadas de soro por 18 horas antes do desafio com KLK5. KLK5 humano foi primeiro incubado com inibidores de KLK5 ou meio de estarvação por 1 hora à temperatura ambiente antes da adição à placa (concentração de 200 nM no poço) por 24 horas a 37° C em um ambiente úmido na presença de CO2 a 5%. Inibidor de endotoxina (1 μM) também foi adicionado a cada poço.
Após a incubação, os sobrenadantes celulares foram coletados e analisados imediatamente ou armazenados a -20° C. Os sobrenadantes celulares foram diluídos em série em diluente de amostra (PBS/0,5% de BSA/0,05% de polissorbato-20/5mM de EDTA/0,25% de CHAPS/0,2% de BGG/10ppM de Proclin) para análise em um ELISA sanduíche com IL-8 usando um protocolo padrão com anticorpo monoclonal de camundongo IL-8 anti-humano para captura (R&D Systems, Cat # MAB208) e anticorpo monoclonal de camundongo IL-8 anti-humano biotinilado para detecção (R&D Systems, Cat # BAF208). A atividade de estimulação celular de KLK5 foi analisada normalizando as concentrações de IL-8 para 100% para o tratamento com KLK5 sozinho e para 0% para o tratamento apenas com meio de estarvação.
Os valores de IC50 foram determinados usando um ajuste de 4 parâmetros com software GraphPad Prism.
EXPRESSÃO, PURIFICAÇÃO E CRISTALIZAÇÃO DE KLK5 E FAB
[00444] Resíduos KLK5 humanos recombinantes I67-S293 (SEQ ID NO:328) foram expressos em um sistema de expressão de baculovírus conforme uma fusão do terminal c de ubiquitina com um sítio de clivagem de Enterokinase modificado entre ubiquitina e KLK5. As células Sf9 foram coexpressas com EndoH com 1 mg/mL de Kifunensina. A proteína foi purificada em uma coluna de heparina HiTrap™. A coluna foi lavada com 25 mM de TRIS, pH 7,5, para 5 VC (volumes da coluna) e depois eluída com 0- 750 mM de NaCl ao longo de um gradiente de 20 VC. O grupo de proteínas resultante foi então purificado adicionalmente em S200 por SEC em 25 mM de Tris, pH 7,5, 300 mM de NaCl. A ubiquitina foi então clivada usando Enterokinase e a amostra posteriormente purificada por SEC novamente. A espectrometria de massa e SDS PAGE revelaram uma amostra de KLK5 pura, que foi confirmada como ativa. Fragmentos Fab incluindo cadeias pesadas e leves foram expressos e purificados como descrito. Vide Carter et al., Biotechnology 10(2), 163-167 (1992). KLK5 foi então misturado com cada um dos Fabs separadamente, 10C5, 9H5 e 3-3F5, e o complexo foi purificado por SEC em 25 mM de HEPES, pH 7,2, 100 mM de NaCl. As condições de cristalização para os 3 complexos Fab-KLK5 foram as seguintes: Complexo 3- 3F5 - 15% de PEG4K, 0,1 M de MgCl2, 0,1 M de Citrato de Na, pH 5,0; Complexo 10C5: 20% de PEG4K, 0,2M de Sulfato de Amônio, 25% de Glicerol; Complexo 9H5: 15% de PEG4K, 10% de Isopropanol, 0,1 M de HEPES, pH 7,5. Cristais para os complexos 10C5 e 9H5 foram obtidos somente quando os resíduos de lisina nos complexos proteicos foram metilados. Vide Walter et al.,
Structure, 14(11), 1617-1622 (2006).
COLETA DE DADOS E SOLUÇÃO DE ESTRUTURA
[00445] Os dados de difração de raios-X foram coletados sob condições de resfriamento criogênico a 100 Kelvin usando várias radiações de raios-X síncrotron na Fonte de Luz Avançada (Berkeley, CA) ou Fonte Avançada de Fótons (Argonne, IL) de acordo com métodos padrão. As imagens de difração foram processadas e reduzidas usando o software de processamento de dados XDS. Vide Kabsch W, Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 66(Pt 2), 125-132 (2010). Os modelos foram gerados usando a técnica de substituição molecular com o programa PHASER. A estrutura de TIGIT humano (vide Debala et al., J Mol Biol, 373: 1017-1031 (2007)) e o modelo de anticorpo Fab (vide Nakamura et al., Cell Host Microbe, 14(1), 93- 103 (2013)) foram usados como modelos de pesquisa. As estruturas passaram por rodadas iterativas de ajuste do modelo usando o programa COOT e refinamento usando os programas Phenix.refine ou BUSTER. Os modelos foram refinados para valores livres de R e R aceitáveis e estatísticas de Ramachandran (calculadas por Molprobity). As estruturas cristalinas de KLK5 complexadas com cada um dos Fabs, 10C5, 9H5 e 3-3F5, bem como os detalhes das interações e epítopos podem ser encontrados nas Figuras 18-20 e Tabelas 5-13.
EXEMPLO 2 - HUMANIZAÇÃO DE ANTICORPOS ANTI-KLK5
[00446] Por imunização de animais com KLK5 humano, como descrito acima, foi obtido um conjunto de 540 anticorpos monoclonais anti- KLK5. Como este conjunto continha anticorpos anti-KLK5 com características altamente variáveis, os anticorpos foram rastreados quanto às características desejadas, como certos valores de IC50 e seletividade para KLK5 humano. Esta triagem revelou um grande número de anticorpos com baixa afinidade para KLK5 humano, nenhuma seletividade em relação ao KLK5 humano e/ou atividade funcional insuficiente. Por exemplo, alguns dos anticorpos anti-KLK5 obtidos eram inibidores parciais, ou seja, inibição em ≤ 50% (por exemplo, clones 12B3, 1D10) ou inibição em ≤ 90% (por exemplo, clones 14C8, 14E12, 8E11). Alguns dos anticorpos anti-KLK5 obtidos inibiram KLK5 humano apenas em um dos ensaios descritos neste documento (por exemplo, clones 9E3, 10D10). Somente 13 anticorpos anti-KLK5 foram selecionados com base em suas características (clones 8G10, 9B6, 2-3F4, 10C5, 2B11, 10H3, 9H3, 8B7, 9H5, 9F2, 10C8, 8F5, 3-3F5). Os três anticorpos anti-KLK5 com as atividades inibitórias mais altas (clones 9H5, 10C5, 3-3F5) foram então selecionados para humanização.
[00447] Os anticorpos monoclonais de coelho 9H5, 10C5 e 3-3F5 foram humanizados conforme descrito abaixo. Os números dos resíduos estão de acordo com Kabat et al., Sequences of protein of immunological interest, 5th Ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991).
[00448] Variantes construídas durante a humanização de 9H5, 10C5 e 3-3F5 foram avaliadas na forma de IgG1 humana. Regiões hipervariáveis de cada um dos anticorpos de coelho (nomeadamente as posições 24-34 (L1), 50-56 (L2) e 89-97 (L3) no domínio VL, e 26-35 (H1), 50- 65 (H2) e 95-102 (H3) no domínio VH) foram enxertadas em várias estruturas aceitadoras. Especificamente, para 9H5, CDRs de VL foram enxertadas em KV1D-39*01 e CDRs de VH foram enxertadas em HV3− 53*01. Para 10C5, CDRs de VL foram enxertadas em KV1-8*01 e CDRs de VH foram enxertadas em HV3-64*01. Para 3-3F5, CDRs de VL foram enxertadas em KV1-8*01 e CDRs de VH foram enxertadas em HV3-23*01. Todas as posições Vernier de VL e VH de anticorpos de coelho também foram enxertadas em suas respectivas estruturas de linhagem germinativa humana. Os enxertos com todos os aminoácidos de coelho nas posições Vernier são referidos como L1H1 (hu9H5.L1H1, hu10C5.L1H1 e hu3-3F5.L1H1) (Figuras 14-16).
[00449] A afinidade de ligação dos anticorpos nesta seção foi determinada pela máquina BIAcore™ T200, conforme descrito acima. A afinidade de ligação dos anticorpos 9H5, 10C5 e 3-3F5 humanizados da versão L1H1 (hu9H5.L1H1, hu10C5.L1H1 e hu3-3F5.L1H1) foi comparada aos seus clones parentais quiméricos. As posições Vernier de coelho de anticorpos da versão L1H1 foram convertidas de volta em resíduos humanos para avaliar a contribuição das posições Vernier de cada coelho para a afinidade de ligação a hKLK5.
[00450] Para 9H5, três cadeias leves adicionais (L2: L1+Ala43, L3: L1+Tyr49, e L4: L1 + Ala43 + Tyr49 (enxerto de CDR)) e dezesseis cadeias pesadas adicionais (H2: H1+Ala24, H3: H1+Trp47, H4: H1+Val48, H5: H1+Ser49, H6: H1+Phe67, H7: H1+Asn73, H8: H1+Leu78, H9: H1+Tyr91, H10: H1 + Gln105, H11: nenhum resíduo de coelho nas posições Vernier (enxerto de CDR), H12: H1+Asp61+Ser62+Val63+Gly65, H13: Enxerto de CDR+Asp61+Ser62+Val63+Gly65, H14: Enxerto de CDR+Tyr47+Gly49, H15: H14+Gln2, H16: H14+Asn72+Thr73+Asn74+Leu75, e H17: H14+Phe62) foram feitas (Figura 15). Tyr47 e Gly49 na cadeia pesada (H14) foram determinados como sendo os resíduos Vernier chaves de coelho com base na avaliação da afinidade de ligação das variantes de anticorpos descritas acima (dados não mostrados). 9H5 quimérico ligado com uma KD de 1,9E-10 M, enquanto hu9H5.L4H14, ligado com uma KD de 6,9E-10 M.
[00451] Para 10C5, quatro variantes adicionais da cadeia leve L2- L5 (L2: L1+Ile2, L3: L1+Ala43, L4: L1+Ile2+Ala43 (enxerto de CDR), L5: Enxerto de CDR+Ser77+Pro80, L6: Enxerto de CDR+Ser77+Pro80+Glu103+Val105+Val106) e vinte e sete variantes adicionais da cadeia pesada H2-H28 (H2: H1+Ala24, H3: H1+Tyr47, H4: H1+Val48, H5: H1+Ser49, H6: H1+Phe67, H7: H1+Asn73, H8: H1+Leu78, H9: H1+Tyr91, H10: H1+Gln105, H11: H1+Asn61+Ser62+Val63+Gly65, H12:
nenhum resíduo de coelho nas posições Vernier (enxerto de CDR), H13: Enxerto de CDR+Asn61+Ser62+Val63+Gly65, H14: Enxerto de CDR+Trp47+Gly49, H15: H14+Gln2, H16: H14+Asn72+Leu73+Asn74+Thr75, H17: H14+Phe62, H18: H14+Asn72+Thr73+Asn74+Leu75, H19: H14+Asn72, H20: H14+Asn74, H21: H14+Asn72+Asn74, H22: H14+Ile48, H23: H14+Ser67, H24: H22+Ser67, H25: H14+Thr73, H26: H14+Thr78, H27: H25+Thr78, H28: H22+Ser67+Thr73+Thr78) foram feitas (Figura 14). Trp47, Ile48, Gly49, Ser67, Thr73 e Val78 na cadeia pesada (H28) foram determinados como sendo os resíduos Vernier chaves de coelho com base na avaliação da afinidade de ligação das variantes de anticorpos descritas acima (dados não mostrados).
10C5 quimérico ligado com uma KD de 1,65E-11 M, enquanto hu10C5.L5H28, ligado com uma KD de 5,70E-11 M.
[00452] Para 3-3F5, quatro variantes adicionais da cadeia leve L2- L5 (L2: L1+Ile2, L3: L1+Ala43, L4: L1+Ile2+Ala43 (enxerto de CDR), L5: Enxerto de CDR+Ser77+Pro80) e vinte e seis variantes adicionais da cadeia pesada H2-H27 (H2: H1+Ala24, H3: H1+Val48, H4: H1+Ser49, H5: H1+Phe67, H6: H1+Asn73, H7: H1+Leu78, H8: H1+Tyr91, H9: H1+Arg105, H10: H1+Phe58, H11: H1+Asp61+Ser62+Val63, H12: Enxerto de CDR+Phe58, H13: Enxerto de CDR+Phe58+Asp61+Ser62+Val63, H14: Enxerto de CDR+Gly49, H15: H14+Phe58, H16: H14+Gln2, H17: H14+Asn72+Thr73+Asn74+Leu75, H18: H14+Phe62, H19: H18+Val24, H20: H18+Ile48, H21: H18+Ser67, H22: H18+Ile48+Ser67, H23: H18+Thr73, H24: H18+Val78, H25: H18+Thr73+Val78, H26: H18+Il48+Ser67+Thr73+Val78, H27: Enxerto de CDRs+Ala24+Ile48+Gly49+Phe58+Phe62+Ser67, H28: H19+Phe58+Thr73+Thr78) foram feitas (Figura 16). Val24, Gly49, Thr73 e Val78 na cadeia pesada (H28) foram determinados como sendo os resíduos Vernier chaves de coelho com base na avaliação da afinidade de ligação das variantes de anticorpos descritas acima (dados não mostrados). 3-3F5 quimérico ligado com uma KD de <1E-12 M (KD está abaixo do limite de detecção de 10E-6 s-1 para o instrumento), enquanto hu3-3F5.L5H19 ligado com uma KD de 4,1E-12 M e hu3-3F5.L5H25 ligado com uma KD de 9,1E-12 M.
[00453] O hu9H5.L4H14, hu10C5.L5H28, hu3-3F5.L5H19, hu3- 3F5.L5H25 e suas contrapartes quiméricas foram testados quanto à sua capacidade de se ligar a KLK5 humano conforme descrito acima. As propriedades de ligação para os anticorpos humanizados são mostradas na Tabela 3.
TABELA 3 Ligante Amostra ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) KLK5 9H5 7,05E+5 1,37E-4 1,93E-10 humano hu9H5.L4H14 8,10E+5 5,62E-4 6,94E-10 KLK5 10C5 1,78E+7 2,92E-4 1,65E-11 humano hu10C5.L5H28 1,90E+7 1,08E-3 5,70E-11 KLK5 3-3F5 2,93E+7 <1,00E-5 <1,00E-12 humano hu3- 4,84E+7 2,01E-4 4,14E-12 3F5.L5H19 hu3- 2,57E+7 2,35E-4 9,14E-12 3F5.L5H25 EXEMPLO 3 - AVALIAÇÃO DOS VALORES DE IC50 E ESPECIFICIDADE DE ANTICORPOS ANTI-KLK5 AVALIAÇÃO DOS VALORES DE IC50 DO INIBIDOR DE KLK5 USANDO SUBSTRATOS DE
PEPTÍDEO FLUORESCENTE
[00454] A capacidade de Spink9.SRE.Fc, mAb1108 ou 12 anticorpos selecionados de inibir a proteólise do substrato, Boc-VPR-AMC, por KLK5 humano foi avaliada usando um ensaio enzimático. Neste ensaio, o substrato de peptídeo fluorogênico de três meros contém um grupo 7-amino4- metilcumarina (AMC) altamente fluorescente que é extinto por transferência de energia de ressonância para a t-Butiloxicarbonila (Boc). A clivagem do substrato de peptídeo por KLK5 humano resultou em um sinal fluorescente aumentado e a inibição ou ausência de KLK5 resultou em um sinal fluorescente extinto. Os resultados foram expressos como uma porcentagem da atividade máxima de KLK5 (% de controle). Os resultados de um único experimento executado em duplicata são mostrados na Figura 1. O valor de IC50 calculado para Spink9.SRE.Fc (Figura 1A) foi de 1,23 nM e a faixa de valores de IC50 para os 12 anticorpos selecionados (Figuras 1C-N) foi de 0,89 a 1,32 nM.
Spink0.SRE.Fc, bem como todos os 12 anticorpos selecionados inibiram totalmente a atividade de KLK5, embora mAb1108 (Figura 1B) tenha demonstrado apenas ~ 20% de inibição da atividade de KLK5. Os valores de IC50 a partir dos ajustes da curva são apresentados na Figura 11 (Coluna 1).
AVALIAÇÃO DOS VALORES DE IC50 DO INIBIDOR DE KLK5 USANDO ATIVIDADE DE
SUBSTRATO MACROMOLECULAR ACOPLADO
[00455] Como demonstrado na Figura 1, Spink9.SRE.Fc, bem como os 12 anticorpos anti-KLK5 identificados, são inibidores potentes da atividade de KLK5 conforme monitorado usando um substrato à base de peptídeo. Para avaliar ainda mais os perfis inibitórios desses inibidores, dois ensaios foram desenvolvidos usando substratos macromoleculares, pró-KLK7 (Figura 2) e pró-KLK1 (Figura 3), em combinação com substratos de peptídeo fluorescente específicos de KLK.
[00456] Na Figura 2, a capacidade de Spink9.SRE.Fc, mAb1108 ou 12 anticorpos anti-KLK5 selecionados de inibir a ativação mediada por KLK5 de pró-KLK7 foi avaliada usando um ensaio enzimático acoplado. Neste ensaio, KLK5 humano é incubado com pró-KLK7 humano resultando na clivagem, liberação do pró-domínio de KLK7 e ativação de KLK7. KLK7 humano ativado pode proteolisar um substrato específico de KLK7, Suc-LLVY- AMC, resultando em um sinal fluorescente aumentado. A clivagem de pró-
KLK7 por KLK5 humano resulta em KLK7 ativo e um sinal fluorescente aumentado, enquanto a inibição ou ausência de KLK5 resultou em um sinal fluorescente extinto. Os resultados foram expressos como uma porcentagem da atividade máxima de KLK5 humano (% de controle). Os resultados de um único experimento executado em duplicata são mostrados na Figura 2.
[00457] Similar aos dados usando o substrato à base de peptídeo (Figura 1), Spink9.SRE.Fc (Figura 2A) foi um inibidor potente de ativação de pró-KLK5 KLK7 com um valor de IC50 de 2,07 nM. Além disso, mAb1108 (Figura 2B) tinha um valor de IC50 de 1,21 nM, enquanto a faixa de valores de IC50 para os 12 anticorpos anti-KLK5 selecionados (Figuras 2C-N) foi de 0,58 a 1,53 nM. No ensaio acoplado com KLK5 pró-KLK7, todos os inibidores, Spink9.SRE.Fc, bem como os anticorpos, inibiram totalmente a atividade de KLK5. Os valores de IC50 a partir dos ajustes da curva são apresentados na Figura 11 (Coluna 2).
[00458] Na Figura 3, a capacidade de Spink9.SRE.Fc, mAb1108 ou 12 anticorpos anti-KLK5 selecionados de inibir a ativação mediada por KLK5 de pró-KLK1 foi avaliada usando um ensaio enzimático acoplado. Neste ensaio, KLK5 humano é incubado com pró-KLK1 humano resultando na clivagem, liberação do pró-domínio de KLK7 e ativação de KLK1. O KLK1 humano ativado pode proteolisar um substrato específico de KLK1, PFR-AMC, resultando em um sinal fluorescente aumentado. A clivagem de pró-KLK1 por KLK5 humano resultou em KLK1 ativo e um sinal fluorescente aumentado, enquanto a inibição ou ausência de KLK5 resultou em um sinal fluorescente extinto. Os resultados foram expressos como uma porcentagem da atividade máxima de KLK5 humano (% de controle). Os resultados de um único experimento executado em duplicata são mostrados na Figura 3. O valor de IC50 para Spink9.SRE.Fc (Figura 3A) foi de 0,325 nM e a faixa de IC50 para os 12 anticorpos anti-KLK5 selecionados (Figuras 2C-N) foi de 0,074 a 0,151 nM.
Spink0.SRE.Fc, bem como todos os 12 anticorpos anti-KLK5 selecionados inibiram totalmente a atividade de KLK5, embora mAb1108 (Figura 1B) tenha demonstrado apenas ~ 40% de inibição da atividade de KLK5. Os valores de IC50 a partir dos ajustes da curva são apresentados na Figura 11 (Coluna 3).
DETECÇÃO DE PEPTÍDEO DE CLIVAGEM DERIVADO DE KLK5 POR LC/MS PARA DETERMINAÇÃO DO VALOR DE IC50
[00459] A capacidade de Spink9.SRE.Fc, mAb1108 ou 12 anticorpos anti-KLK5 selecionados de inibir a proteólise de pró-KLK7 ou pró- KLK1 por KLK5 recombinante foi avaliada usando um ensaio de LC/MS que monitora os peptídeos de produtos de clivagem derivados de KLK5. Para ambos os ensaios, a clivagem do pró-peptídeo KLK7 ou KLK1 por KLK5 humano resultou em um sinal de MS específico e a inibição da atividade de KLK5 resultou em uma diminuição mensurável do sinal de peptídeo. Os resultados de uma única experiência para pró-KLK7 são mostrados na Figura 4 e eles são expressos como área do pró-peptídeo KLK7. O valor de IC50 calculado para Spink9.SRE.Fc (Figura 4A) foi de 1,13 nM, para MAb1108 (Figura 4B) foi de 1,86 nM, e a faixa de valores de IC50 para os 12 anticorpos anti-KLK5 selecionados (Figuras 4C-N) foi de 0,31 a 1,72 nM. Spink9.SRE.Fc, bem como todos os 12 anticorpos anti-KLK5 selecionados, inibiu totalmente a atividade de KLK5 e mAb1108 (Figura 4B) demonstrou ~ 80% de inibição da atividade de KLK5. Os valores de IC50 a partir dos ajustes da curva são apresentados na Figura 11 (Coluna 4). A Figura 5 mostra os resultados de três experimentos para pró-KLK1 e eles são expressos como área do pró-peptídeo KLK1. O valor de IC50 para Spink9.SRE.Fc (Figura 5A) foi de 0,58 nM, para MAb1108 (Figura 5B) foi de 0,34 nM e a faixa de valores de IC50 para os 12 anticorpos anti-KLK5 selecionados (Figuras 5C-N) foi de 0,08 a 0,48 nM. Spink9.SRE.Fc, bem como todos os 12 anticorpos anti-KLK5 selecionados, inibiram totalmente a atividade de KLK5, embora mAb1108 (Figura 5B) tenha demonstrado ~ 40% de inibição da atividade de KLK5. Os valores de IC50 a partir dos ajustes da curva são apresentados na Figura 11 (Coluna 5).
ESPECIFICIDADE DE ANTICORPOS KLK5
[00460] Para avaliar a especificidade, os anticorpos anti-KLK5 distinguidos nas Figuras 1-5, os 12 anticorpos anti-KLK5 foram ensaiados contra KLK7 humano ativado (Figura 6), KLK1 humano (Figura 7), KLK4 humano (Figura 8) e tripsina (Figura 9) monitorados pela clivagem de substratos de peptídeo fluorescente. Como esses 12 anticorpos anti-KLK5 foram gerados para seletivamente interagir com KLK5, foi antecipado que essas moléculas não deveriam inibir outos KLKs (Figuras 6-9) ou tripsina (Figura 9).
[00461] Na Figura 6, a capacidade de Spink9.SRE.Fc, mAb1108 ou 12 anticorpos anti-KLK5 selecionadosde inibir a proteólise do substrato, Suc-LLVY-AMC, por KLK7 humano foi avaliada usando um ensaio enzimático.
A clivagem do substrato de peptídeo por KLK7 humano resultou em um sinal fluorescente aumentado e a inibição ou ausência de KLK7 resultou em um sinal fluorescente extinto. Os resultados foram expressos como uma porcentagem da atividade máxima de KLK7 (% de controle). Os resultados de um único experimento executado em duplicata são mostrados na Figura 6.
Spink9.SRE.Fc (Figura 6A) e mAb1108 (Figura 6B) não inibiram KLK7 até 100 nM. Como visto na Figura 6, os 12 anticorpos anti-KLK5 selecionados (Figuras 6C-N) também não inibem a atividade de KLK7 até 100 nM. Os valores de IC50 a partir dos ajustes da curva são apresentados na Figura 11 (Coluna 6).
[00462] Na Figura 7, a capacidade de Spink9.SRE.Fc, mAb1108 ou 12 anticorpos anti-KLK5 selecionados de inibir a proteólise do substrato, PFR-AMC, por KLK1 humano foi avaliada usando um ensaio enzimático. A clivagem do substrato de peptídeo por KLK1 humano resultou em um sinal fluorescente aumentado e a inibição ou ausência de KLK1 resultou em um sinal fluorescente extinto. Os resultados foram expressos como uma porcentagem da atividade máxima de KLK1 (% de controle). Os resultados de um único experimento executado em duplicata são mostrados na Figura 7.
Spink9.SRE.Fc (Figura 7A) e mAb1108 (Figura 7B) não inibiram KLK1 até 100 nM. Como visto na Figura 7, os 12 anticorpos anti-KLK5 selecionados (Figuras 7C-N) também não inibem a atividade de KLK1 até 100 nM. Os valores de IC50 a partir dos ajustes da curva são apresentados na Figura 11 (Coluna 7).
[00463] Na Figura 8, a capacidade de Spink9.SRE.Fc, mAb1108 ou 12 anticorpos anti-KLK5 selecionados de inibir a proteólise do substrato, Boc-VPR-AMC, por KLK4 humano foi avaliada usando um ensaio enzimático. A clivagem do substrato de peptídeo por KLK4 humano resultou em um sinal fluorescente aumentado e a inibição ou ausência de KLK4 resultou em um sinal fluorescente extinto. Os resultados foram expressos como uma porcentagem da atividade máxima de KLK4 (% de controle). Os resultados de um único experimento executado em duplicata são mostrados na Figura 8.
Spink9.SRE.Fc (Figura 8A) e mAb1108 (Figura 8B) não inibiram KLK4 até 100 nM. Como visto na Figura 8, os 12 anticorpos anti-KLK5 selecionados (Figuras 8C-N) também não inibem a atividade de KLK4 até 100 nM. Os valores de IC50 a partir dos ajustes da curva são apresentados na Figura 11 (Coluna 8).
[00464] Na Figura 9, a capacidade de Spink9.SRE.Fc, mAb1108 ou 12 anticorpos selecionados de inibir a proteólise do substrato, Boc-VPR- AMC, por tripsina bovina foi avaliada usando um ensaio enzimático. A clivagem do substrato de peptídeo pela tripsina resultou em um sinal fluorescente aumentado e a inibição ou ausência de tripsina resultou em um sinal fluorescente extinto. Os resultados foram expressos como uma porcentagem da atividade máxima de tripsina (% de controle). Os resultados de um único experimento executado em duplicata são mostrados na Figura 9.
Spink9.SRE.Fc (Figura 9A) e mAb1108 (Figura 9B) não inibiram a tripsina até
100 nM. Como visto na Figura 9, os 12 anticorpos selecionados (Figura 9C-N) também não inibem a atividade da tripsina até 100 nM. Os valores de IC50 a partir dos ajustes da curva são apresentados na Figura 11 (Coluna 9).
[00465] Tomados em conjunto, esses estudos usando KLK7 (Figura 6 e Tabela 6), KLK1 (Figura 7 e Tabela 7), KLK4 (Figura 8 e Tabela 8) e tripsina (Figura 9 e Tabela 9) mostram que Spink9.SRE.Fc, mAb1108 ou os 12 anticorpos selecionados especificamente interagem e inibem somente a atividade de KLK5.
CLASSIFICAÇÃO DE ANTICORPOS POR KIAPP
[00466] Na distinção dos 12 anticorpos selecionados nos ensaios diretos (Figura 1) ou acoplados (Figuras 2-5), foi observado que os anticorpos selecionados têm potência inibitória semelhante ou maior do que Spink9.SRE.Fc para KLK5. No entanto, vários dos anticorpos têm valores de IC50 semelhantes em cada um dos ensaios (Tabelas 1-5) o que torna difícil avaliar a potência dos anticorpos.
[00467] Na Figura 10, a capacidade de Spink9.SRE.Fc, mAb1108 ou 12 anticorpos selecionados de inibir a proteólise do substrato, z-VPR-pNA, por KLK5 humano em várias concentrações foi avaliada usando um ensaio enzimático. Neste ensaio, o substrato de peptídeo cromogênico de três meros contém um grupo p-nitroanilida (pNA) que é extinto pelo aminoácido terminal. A clivagem do substrato de peptídeo cromogênico por KLK5 resultou em um absorbância aumentada em 405 nm e a inibição ou ausência de KLK5 resultou em uma absorbância baixa em 405 nm. Os resultados foram expressos como uma porcentagem da atividade máxima de KLK5 (% de controle).
[00468] Os valores de IC50 de Spink9.SRE.Fc em várias concentrações de KLK5 (Figuras 10A) são determinados e representados graficamente como uma função da concentração de KLK5 (Figuras 10B) em que o valor de Ki app é determinado como a interceptação y. A partir dessa análise, o valor de Kiapp para Spink9.SRE.Fc é de 1,28 nM. Esta análise também foi realizada para mAb1108 (Figuras 10 C-D) que tem um valor de Kiapp de 1,53 nM, bem como os 12 anticorpos selecionados (Figuras 10 E-AB), que têm uma faixa de valores de Kiapp de menos de 0,01 nM a 6,35 nM. Os valores de Kiapp desta análise são apresentados na Figura 11 (Coluna 10).
EXEMPLO 4 - ANÁLISE CINÉTICA E ESCANEAMENTO DE EPÍTOPOS COM WASATCH
[00469] Os resultados do escaneamento de epítopos e taxas de dissociação contra KLK5 humano para um subconjunto dos anticorpos mais potentes são mostrados na Tabela 4. Níveis variáveis de ligação foram observados para KLK5 de camundongo e cyno. É importante ressaltar que nenhuma ligação foi observada para KLK1 humano, KLK4 humano ou KLK7 humano, confirmando que esses anticorpos são específicos. A maioria dos clones, exceto para 8E11 e 8G10, compete com SPINK9 pela ligação ao KLK5 humano, sugerindo que eles se ligam ao mesmo epítopo (ou seja, o sítio ativo) em SPINK9 ou alteram alostericamente KLK5 humano de modo que SPINK9 não possa mais se ligar.
TABELA 4 ID do clone Competição de SPINK9 kd do KLK5 humano (S/N) (1/s) 14C8 S 3,76E-04 14E12 S 4,14E-04 2B11 S 5,74E-04 8B7 S 5,47E-04 8E11 N 2,02E-04 8F5 S 3,16E-04 8G10 N 2,45E-04 9B6 S 1,78E-04 9F2 S 3,39E-04 9H3 S 1,43E-04
ID do clone Competição de SPINK9 kd do KLK5 humano (S/N) (1/s) 9H5 S 3,67E-04 10C5 S 1,26E-04 10C8 S 6,16E-05 10H3 S 5,89E-04
2.3F4 S 1,84E-04 SPINK9-SRE-Fc S 4,70E-04 EXEMPLO 5 - MAPEAMENTO DE EPÍTOPO POR ESPECTROMETRIA DE MASSA DE TROCA
DE HIDROGÊNIO
[00470] As medições de troca de hidrogênio, conforme completadas neste documento, medem a troca de prótons ligados aos resíduos de amida da cadeira principal com aqueles ligados às moléculas do solvente.
Quando uma amostra protiada (1H) é diluída em solvente deuterado, a diferença de massa entre um próton e deutério pode ser medida por espectrometria de massa. Após uma série de tempos de incubação crescentes em solvente deuterado (2H2O), a taxa de troca pode ser medida. Desta forma, KLK 5 (SEQ ID NO:353) complexado a um dos três anticorpos anti-KLK5 (10C5, 10H3 e 9H5) ao longo de três experimentos separados foi medido e depois comparado com os resultados obtidos na realização do experimento em KLK5 sozinho. Uma análise diferencial das diferenças de massa foi então realizada e os peptídeos sobrepostos usados para estreitar em um epítopo termodinâmico comum foram compartilhados entre todos os três anticorpos anti-KLK5 (10C5, 10H3 e 9H5) (Figura 12 A). O termo "epítopo termodinâmico" refere-se às porções de uma proteína cuja dinâmica estrutural da cadeia principal, ou energia livre local de desdobramento, é alterada em resposta a um evento de ligação específico, como tornar-se ligado por um anticorpo. O epítopo estrutural pode estar contido no epítopo termodinâmico.
[00471] A interpretação dos dados usou a regra de N-2, segundo a qual cada peptídeo não pode transportar deutério nos dois primeiros locais devido à troca reversa. Além disso, quando há muitos peptídeos sobrepostos únicos, esta informação pode ser usada para restringir os resíduos afetados dentro de cada peptídeo. As quatro regiões de sequência de KLK5 identificadas como compreendendo um epítopo termodinâmico comum são LRPNQL (Figura 12 B, Região 1), QGVKSI (Figura 12 B, Região 2), KRCEDAYPRQIDDT (Figura 12 B, Região 3) e DYPCARPNRPGVY (Figura 12 B, Região 4), um epítopo estrutural comum entre todos os três anticorpos testados está contido nessas regiões.
[00472] Embora a invenção anterior tenha sido descrita com algum detalhe por meio de ilustração e exemplo para fins de clareza de compreensão, as descrições e exemplos não devem ser interpretados como limitando o escopo da invenção. As divulgações de toda a literatura científica e de patente citadas neste documento estão expressamente incorporadas em sua totalidade por referência.
EXEMPLO 6 - AVALIAÇÃO DOS VALORES DE IC50 DO INIBIDOR KLK5 EM UM ENSAIO DE SECREÇÃO DE IL-8 BASEADO EM CÉLULAS
[00473] KLK5 estimula as células A549 a secretar IL-8. A capacidade de Spink5.Fc, Spink9.SRE.Fc ou anticorpos anti-KLK5 humanizados 3-3F5, 9H5 ou 10C5 para inibir a secreção de IL-8 induzida por KLK5 foi avaliada no ensaio de secreção de IL-8 baseado em células A549.
Neste ensaio, células A549 privadas de soro foram estimuladas com 200 nM de KLK5 por 24 h (KLK5 sozinho ou KLK5 pré-incubado com inibidores por 1 hora). A concentração de IL-8 foi medida com um ELISA sanduíche e IC50s dos inibidores foram determinados. Os resultados foram expressos como uma porcentagem da atividade máxima de KLK5 e as médias + dos desvios padrão de pelo menos três experimentos independentes são mostradas na Figura 17.
Todos os inibidores inibiram totalmente a secreção de IL-8 induzida por KLK5 em 5% do nível do tampão sozinho (meio de estarvação), o que estava dentro do erro do ensaio. Todos os inibidores mostraram inibição potente da secreção de IL-8 induzida por KLK5 e os IC50s médios para pelo menos três experimentos independentes foram os seguintes: Spink5.Fc (21 nM); 10C5 (28 nM); 9H5 (15 nM); 3-3F5 (1,2 nM). A atividade residual observada quando KLK5 é incubado com 360 nM de Spink9.SRE.Fc é de 2% (dados não mostrados).
EXEMPLO 7 - ESTRUTURA DE 10C5, 9H5 E 3-3F5 LIGADOS A KLK5 HUMANO
[00474] Para experimentos de estrutura cristalina descritos neste documento, foram usados os resíduos I67-S293 de KLK5 humano (SEQ ID NO:328). A numeração dos resíduos de aminoácidos de KLK5 humano usados neste Exemplo 7 e conforme mostrado nas Figuras 18-20 e Tabelas 5-13 correspondentes é baseada na numeração padrão para proteases. Vide Debela et al., J Mol Biol, 373, 1017-1031 (2007). A numeração dos resíduos de aminoácidos dos fragmentos Fab usados neste Exemplo 7 e conforme mostrado nas Figuras 18-20 e Tabelas 5-13 correspondentes é baseada em Kabat.
A ESTRUTURA DE 10C5 LIGADO A KLK5 HUMANO
[00475] A estrutura do complexo Fab/KLK5 10C5 mostra que a ligação de 10C5 a KLK5 resulta em alterações conformacionais que resultam alostericamente na interrupção do sítio de ligação do substrato, bem como do sítio ativo de KLK5, incluindo a tríade catalítica, tornando a protease incapaz de se ligar aos substratos e perdendo atividade. O elemento mais distinto de KLK5 que é reconhecido pelo fab 10C5 é a hélice que abrange os resíduos 163- 174A. A alça/volta imediatamente após a hélice, composta pelos resíduos 173- 174A, é invertida pela ligação ao anticorpo que resulta em um choque estérico com resíduos na alça 220s, bem como na alça 90s (convenção de protease padrão), que são importante para a ligação ao substrato, bem como o posicionamento da tríade catalítica no sítio ativo que cliva os peptídeos (Figura 18A).
[00476] A área de superfície enterrada entre KLK5 e Fab 10C5 é de ~ 860 Å2. Na cadeia leve do fab 10C5, CDR-L1, os resíduos Q24-S34 são colocados em contato com os resíduos S131, A132, S164 e R167 em KLK5; Y50 do CDR-L2 é colocado em contato com R167 em KLK5; CDR-L3 é colocado em contato com A132, L163, S164, Q165, K166, E169, I176, D177 e D178 em KLK5. Na cadeia pesada 10C5, CDRH1, os resíduos S31-T35 são colocados em contato com somente D170 em KLK5; CDRH2, resíduos Y50- A63 são colocados em contato com os resíduos K166, E169, D170, A171, Y172, P173, R174, Q174A e I176 em KLK5; CDRH3, E95-Y100c é colocado em contato com os resíduos S164, K166, R167 e D170 em KLK5 (Tabelas 5-7, Figura 18B).
[00477] As sequências do Fab 10C5 de HC e LC usadas para a cristalização com KLK5 humano estão representadas na SEQ ID NO:322 e SEQ ID NO:323, respectivamente.
TABELA 5 Resíduos de Resíduos de Resíduos de Resíduos de interface na interface em interface na interface em cadeia KLK5 cadeia leve 10C5 KLK5 pesada 10C5 (numeração (numeração de (numeração (numeração padrão de Kabat) padrão de de Kabat) protease) protease) Ser 31 Ser 164 Glu 27 Pro 130 Gly 33 Lys 166 Ser 28 Ser 131 Tyr 50 Arg 167 Ser 30 Ala 132 Thr 52 Glu 169 Glu 32 Val 162 Ser 52A Asp 170 Tyr 50 Leu 163 Asn 53 Ala 171 Gly 91 Ser 164
Resíduos de Resíduos de Resíduos de Resíduos de interface na interface em interface na interface em cadeia KLK5 cadeia leve 10C5 KLK5 pesada 10C5 (numeração (numeração de (numeração (numeração padrão de Kabat) padrão de de Kabat) protease) protease) Tyr 54 Tyr 172 Phe 92 Gln 165 Val 56 Pro 173 Gly 93 Lys 166 Ser 57 Arg 174 Ser 94 Arg 167 Tyr 58 Gln 174A Ser 95 Glu 169 Tyr 59 Ile 176 Val 97 Gln 174A Lys 64 Arg 224 Ile 176 Glu 95 Asp 177 Pro 97 Asp 178 Gly 100 Lys 233 Tyr 100A Tyr 100C
TABELA 6 Ligações de hidrogênio
Resíduo Resíduo Comprimento Resíduo Comprimento de da Resíduo de ligação de de ligação cadeia cadeia de KLK5 (Angstrom) KLK5 (Angstrom) pesada leve Tyr 50 Glu 169 Tyr 50 Arg 167 2,8 2,6 [OH] [OE2] [OH] [NH1] Ser 52A Asp 170 Phe 92 Gln 165 2,6 2,9 [OG] [OD1] [O] [N] Ser 52A Asp 170 Phe 92 Lys 166 3,4 3,2 [N] [OD2] [O] [N] Tyr 58 Arg 174 Ser 95 Asp 178 3,8 3,7 [OH] [O] [OG] [N]
Ligações de hidrogênio Resíduo Resíduo Comprimento Resíduo Comprimento de da Resíduo de ligação de de ligação cadeia cadeia de KLK5 (Angstrom) KLK5 (Angstrom) pesada leve Gln Ser 57 Ser 94 Glu 169 2,6 174A 2,7 [O] [N] [OE1] [NE2] Tyr 58 Ile 176 3,0 [OH] [N] TABELA 7 Pontes de sal Comprimento Resíduo de Resíduo de de ligação cadeia pesada KLK5 (Angstrom) Glu 95 [OE1] 2,3 Lys 166 [NZ] Glu 95 [OE1] 3,4 Lys 166 [NZ] A ESTRUTURA DE 9H5 LIGADO A KLK5 HUMANO
[00478] A estrutura do complexo Fab/KLK5 9H5 mostra que a ligação de 9H5 a KLK5 resulta em mudanças conformacionais, semelhantes a fab 10C5, resultando em ruptura alostérica do sítio de ligação ao substrato, bem como do sítio ativo de KLK5, incluindo a tríade catalítica, tornando o protease incapaz de se ligar a substratos e perdendo atividade. O elemento mais distinto de KLK5 que é reconhecido pelo fab 9H5 é a hélice que abrange os resíduos 163-174A. A alça/volta imediatamente após a hélice, composta pelos resíduos 173-174A, é invertida pela ligação ao anticorpo que resulta em um choque estérico com resíduos na alça 220s, bem como na alça 90s (convenção de protease padrão), que são importantes para a ligação ao substrato, bem como o posicionamento da tríade catalítica no sítio ativo que cliva os peptídeos. No geral, mais da proteína KLK5 é desordenada na estrutura cristalina do complexo 9H5:KLK5, em comparação com KLK5 ligado a 10C5, e é provavelmente um resultado direto da ligação ao Fab e das mudanças conformacionais induzidas (Figura 19A).
[00479] A área de superfície enterrada entre KLK5 e 9H5 Fab é 805 Å2. Na cadeia leve de 9H5, CDRL1, os resíduos Q24-S34 são colocados em contato com os resíduos S131, A132, G133, L163, S164, R167 em KLK5; CDRL2, resíduos S50-S56 não são colocados em contato com nenhum resíduo em KLK5; CDRL3, resíduos H89-T97 são colocados em contato com resíduos A132, S164, Q165, K166, E169, Q174A, I176 e D177 em KLK5. Na cadeia pesada de 9H5, CDRH1, os resíduos S31-S35 não são colocados em contato com KLK5; CDRH2, os resíduos F50-A63 são colocados em contato com os resíduos K166, E169, D170, Y172, P173, R174, Q174A e I176 em KLK5; CDRH3, os resíduos D95-I102 são colocados em contato com os resíduos K166, R167 e D170 em KLK5 (Tabelas 8-10, Figura 19B).
[00480] As sequências do Fab 9H5 de HCe LC usadas para a cristalização com KLK5 humano estão representadas na SEQ ID NO:324 e SEQ ID NO:325, respectivamente.
TABELA 8 Resíduos de Resíduos de Resíduos de Resíduos de interface na interface em interface na interface em cadeia pesada KLK5 cadeia leve 9H5 KLK5 9H5 (numeração (numeração de (numeração (numeração de padrão de Kabat) padrão de Kabat) protease) protease) Ser 31 Ser 164 Gln 27 Pro 130 Gly 33 Lys 166 Ser 28 Ser 131 Ser 35 Arg 167 Ser 30 Ala 132 Phe 50 Glu 169 Tyr 32 Gly 133
Resíduos de Resíduos de Resíduos de Resíduos de interface na interface em interface na interface em cadeia pesada KLK5 cadeia leve 9H5 KLK5 9H5 (numeração (numeração de (numeração (numeração de padrão de Kabat) padrão de Kabat) protease) protease) Gly 52 Asp 170 His 89 Val 162 Ser 53 Ala 171 Gln 90 Leu 163 Gly 54 Tyr 172 Asp 91 Ser 164 Phe 56 Pro 173 Tyr 92 Gln 165 Tyr 58 Arg 174 Thr 93 Lys 166 Lys 64 Gln 174A Ser 94 Arg 167 Asp 95 Ile 176 Ser 95 Glu 169 Val 97 Asp 177 Asn 95A Gln 174A Gly 98 Thr 97 Ile 176 Ser 100B Asp 177 Leu 100C Lys 233
TABELA 9 Ligações de hidrogênio Resíduo Resíduo Comprimento Resíduo Comprimento de da Resíduo de ligação de de ligação cadeia cadeia de KLK5 (Angstrom) KLK5 (Angstrom) pesada leve Ser 53 Asp 170 Tyr 92 Gln 165 2,3 3,2 [N] [OD2] [O] [N] Ser 53 Asp 170 Tyr 92 Lys 166 3,5 2,8 [N] [O] [O] [N] Ser 53 Asp 170 Ser 30 Ala 132 2,2 3,1 [OG] [OD2] [OG] [O] Ser 53 Asp 170 Thr 93 Glu 169 3,7 2,9 [OG] [O] [OG1] [OE1]
Ligações de hidrogênio Resíduo Resíduo Comprimento Resíduo Comprimento de da Resíduo de ligação de de ligação cadeia cadeia de KLK5 (Angstrom) KLK5 (Angstrom) pesada leve Gly 54 Asp 170 Ser 95 Glu 169 3,5 3,4 [N] [OD2] [OG] [OE1] Gly 54 Asp 170 Ser 94 Glu 169 2,8 3,0 [N] [O] [N] [OE2] Tyr 58 Ile 176 Ser 95 3,1 3,6 Ile 176 [O] [OH] [O] [OG] Gly 98 Arg 167 Asn 95A Asp 177 3,6 2,5 [O] [NH2] [ND2] [OD1] Tyr 58 Ile 176 2,7 [OH] [N] TAbELA 10 Pontes de sal Comprimento Resíduo de Resíduo de de ligação cadeia pesada KLK5 (Angstrom) Asp 95 [OD1] 2,5 Lys 166 [NZ] Asp 95 [OD2] 3,7 Lys 166 [NZ] A ESTRUTURA DO FAB 3F5.5 LIGADO A KLK5 HUMANO
[00481] A estrutura do complexo Fab/KLK5 3-3F5 mostra que a ligação de 3-3F5 a KLK5 resulta em leves mudanças conformacionais, embora não tão drásticas conforme observado com os complexos 10C5 ou 9H5 com KLK5. A bolsa de reconhecimento do substrato é alterada, onde o Asp 189 em KLK5 (que forma uma ponte de sal e, assim, reconhece o resíduo P1 carregado positivamente (Arg/Lys) antes da proteólise) torna-se desordenado. A tríade catalítica em KLK5 parece intacta, embora a ligação ao fab torne a bolsa catalítica mais aberta, resultando na perda da atividade catalítica de KLK5. A alça 140s e alça 70s estão desordenadas na estrutura cristalina (Figura 20A).
[00482] A área de superfície enterrada entre KLK5 e 3F5.5 Fab é 956 Å2. Na cadeia leve 3-3F5, CDRL1, os resíduos Q24-A34 são colocados em contato com S131, A132 e G133 em KLK5; CDRL2, resíduos D50-S56 não são colocados em contato com nenhum resíduo em KLK5; CDRL3, resíduos Q89- I97 são colocados em contato com os resíduos S164, Q165, K166 e E169 em KLK5. Na cadeia pesada 3F5.5, os resíduos D31-E46 de CDRH1 não interagem com KLK5, nem CDRH2; CDRH3, resíduos D95-G100i são colocados em contato com resíduos L163, S164, K166, R167, D170, G184, D185, K186, A187, N224, R225 e P225 em KLK5 (Tabelas 11-13, Figura 20B).
[00483] As sequências do Fab 3-3F5 de HC e LC usadas para a cristalização com KLK5 humano estão representadas na SEQ ID NO:326 e SEQ ID NO:327, respectivamente.
TABELA 11 Resíduos de Resíduos de Resíduos de Resíduos de interface na interface em interface na interface em cadeia pesada KLK5 cadeia leve 3- KLK5 3-3F5 (numeração 3F5 (numeração (numeração (numeração de padrão de de Kabat) padrão de Kabat) protease) protease) Asp 31 Leu 163 Ile 2 Ser 131 Trp 47 Ser 164 Ser 28 Ala 132 Gly 52 Lys 166 Ile 29 Gly 133 Ser 53 Arg 167 Gly 30 Ser 164 Ser 54 Glu 169 Asn 31 Gln 165 Val 56 Asp 170 Ala 32 Lys 166 Trp 58 Ala 171 Asp 50 Arg 167
Resíduos de Resíduos de Resíduos de Resíduos de interface na interface em interface na interface em cadeia pesada KLK5 cadeia leve 3- KLK5 3-3F5 (numeração 3F5 (numeração (numeração (numeração de padrão de de Kabat) padrão de Kabat) protease) protease) Asp 95 Pro 173 Gly 68 Glu 169 Arg 96 Arg 174 Gln 89 Asp 170 Asp 97 Gly 184 Gln 90 Tyr 98 Asp 185 Gly 91 Gly 99 Lys 186 Asp 92 Tyr 100 Ala 186A Ser 93 Arg 100A Arg 188 His 94 Ala 100B Asn 223 Asn 95 Asp 100C Arg 224 Ile 97 Ala 100E Pro 225 Thr 100F Ser 100G Met 100I
TABELA 12 Ligações de hidrogênio Resíduo Resíduo Comprimento Resíduo Comprimento de da Resíduo de ligação de de ligação cadeia cadeia de KLK5 (Angstrom) KLK5 (Angstrom) pesada leve Ser 53 Asp 170 Ser 28 Ser 131 3,0 2,9 [N] [OD1] [OG] [OG] Ser 54 Asp 170 Asp 92 Gln 165 3,0 3,7 [N] [OD1] [OD1] [N] Ser 54 Asp 170 Asp 92 Gln 165 2,8 3,1 [OG] [OD1] [O] [N]
Ligações de hidrogênio Resíduo Resíduo Comprimento Resíduo Comprimento de da Resíduo de ligação de de ligação cadeia cadeia de KLK5 (Angstrom) KLK5 (Angstrom) pesada leve Asp 170 Asp 92 Lys 166 Gly 99 [N] 3,1 3,0 [OD2] [O] [N] Ser 53 Asp 170 Asn 31 Ala 132 3,1 3,6 [N] [OD2] [N] [O] Ser 53 Asp 170 Asn 95 Gln 165 3,0 3,1 [OG] [OD2] [ND2] [OE] Ala 100B Asn 223 2,8 [N] [OD1] Thr 100F Arg 167 3,9 [O] [NH1] Arg 96 Arg 167 2,8 [O] [NH1] Ser 100G Arg 167 2,8 [OG] [NH2] Tyr 100 Asp 185 2,9 [OH] [N] Tyr 100 Lys 186 3,7 [OH] [N] Arg 100A Lys 186 2,8 [O] [NZ] Tyr 100 Asn 223 3,0 [O] [ND2]
TABELA 13 Pontes de sal Comprimento Resíduo de Resíduo de de ligação cadeia pesada KLK5 (Angstrom)
Pontes de sal Comprimento Resíduo de Resíduo de de ligação cadeia pesada KLK5 (Angstrom) His 94 [NE2] 2,8 Glu 169 [OE1] His 94 [NE2] 3,9 Glu 169 [OE2]
TABELA DE SEQUÊNCIAS SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO KLK5 MATARPPWMWVLCALITALLLGVTEHVLANNDVSCDHPSNTVPSGSNQDLGAGAGE 1
DARSDDSSSRIINGSDCDMHTQPWQAALLLRPNQLYCGAVLVHPQWLLTAAHCRKK Q9Y337 VFRVRLGHYSLSPVYESGQQMFQGVKSIPHPGYSHPGHSNDLMLIKLNRRIRPTKD G55, VRPINVSSHCPSAGTKCLVSGWGTTKSPQVHFPKVLQCLNISVLSQKRCEDAYPRQ
IDDTMFCAGDKAGRDSCQGDSGGPVVCNGSLQGLVSWGDYPCARPNRPGVYTNLCK D153 FTKWIQETIQANS humano (incl. peptíde o sinal (sublinh ado)) KLK5 VTEHVLANNDVSCDHPSNTVPSGSNQDLGAGAGEDARSDDSSSRIINGSDCDMHTQ 2
PWQAALLLRPNQLYCGAVLVHPQWLLTAAHCRKKVFRVRLGHYSLSPVYESGQQMF G55, QGVKSIPHPGYSHPGHSNDLMLIKLNRRIRPTKDVRPINVSSHCPSAGTKCLVSGW D153 GTTKSPQVHFPKVLQCLNISVLSQKRCEDAYPRQIDDTMFCAGDKAGRDSCQGDSG
GPVVCNGSLQGLVSWGDYPCARPNRPGVYTNLCKFTKWIQETIQANS humano (forma madura) KLK5 MATARPPWMWVLCALITALLLGVTEHVLANNDVSCDHPSNTVPSGSNQDLGAGAGE 3
DARSDDSSSRIINGSDCDMHTQPWQAALLLRPNQLYCGAVLVHPQWLLTAAHCRKK G55, VFRVRLGHYSLSPVYESGQQMFQGVKSIPHPGYSHPGHSNNLMLIKLNRRIRPTKD N153 VRPINVSSHCPSAGTKCLVSGWGTTKSPQVHFPKVLQCLNISVLSQKRCEDAYPRQ
IDDTMFCAGDKAGRDSCQGDSGGPVVCNGSLQGLVSWGDYPCARPNRPGVYTNLCK humano FTKWIQETIQANS (incl. peptíde o sinal (sublinh ado))
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO KLK5 VTEHVLANNDVSCDHPSNTVPSGSNQDLGAGAGEDARSDDSSSRIINGSDCDMHTQ 4
PWQAALLLRPNQLYCGAVLVHPQWLLTAAHCRKKVFRVRLGHYSLSPVYESGQQMF G55, QGVKSIPHPGYSHPGHSNNLMLIKLNRRIRPTKDVRPINVSSHCPSAGTKCLVSGW N153 GTTKSPQVHFPKVLQCLNISVLSQKRCEDAYPRQIDDTMFCAGDKAGRDSCQGDSG
GPVVCNGSLQGLVSWGDYPCARPNRPGVYTNLCKFTKWIQETIQANS humano (forma madura) KLK5 MATARPPWMWVLCALITALLLGVTEHVLANNDVSCDHPSNTVPSGSNQDLGAGARE 5
DARSDDSSSRIINGSDCDMHTQPWQAALLLRPNQLYCGAVLVHPQWLLTAAHCRKK R55, VFRVRLGHYSLSPVYESGQQMFQGVKSIPHPGYSHPGHSNNLMLIKLNRRIRPTKD N153 VRPINVSSHCPSAGTKCLVSGWGTTKSPQVHFPKVLQCLNISVLSQKRCEDAYPRQ
IDDTMFCAGDKAGRDSCQGDSGGPVVCNGSLQGLVSWGDYPCARPNRPGVYTNLCK humano FTKWIQETIQANS (incl. peptíde o sinal (sublinh ado)) KLK5 VTEHVLANNDVSCDHPSNTVPSGSNQDLGAGAREDARSDDSSSRIINGSDCDMHTQ 6
PWQAALLLRPNQLYCGAVLVHPQWLLTAAHCRKKVFRVRLGHYSLSPVYESGQQMF R55, QGVKSIPHPGYSHPGHSNNLMLIKLNRRIRPTKDVRPINVSSHCPSAGTKCLVSGW N153 GTTKSPQVHFPKVLQCLNISVLSQKRCEDAYPRQIDDTMFCAGDKAGRDSCQGDSG
GPVVCNGSLQGLVSWGDYPCARPNRPGVYTNLCKFTKWIQETIQANS humano (forma madura) KLK5 MATARPPWMWVLCALITALLLGVTEHVLANNDVSCDHPSNTVPSGSNQDLGAGARE 7
DARSDDSSSRIINGSDCDMHTQPWQAALLLRPNQLYCGAVLVHPQWLLTAAHCRKK R55, VFRVRLGHYSLSPVYESGQQMFQGVKSIPHPGYSHPGHSNDLMLIKLNRRIRPTKD D153 VRPINVSSHCPSAGTKCLVSGWGTTKSPQVHFPKVLQCLNISVLSQKRCEDAYPRQ
IDDTMFCAGDKAGRDSCQGDSGGPVVCNGSLQGLVSWGDYPCARPNRPGVYTNLCK humano FTKWIQETIQANS (incl. peptíde o sinal (sublinh ado))
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO KLK5 VTEHVLANNDVSCDHPSNTVPSGSNQDLGAGAREDARSDDSSSRIINGSDCDMHTQ 8
PWQAALLLRPNQLYCGAVLVHPQWLLTAAHCRKKVFRVRLGHYSLSPVYESGQQMF R55, QGVKSIPHPGYSHPGHSNDLMLIKLNRRIRPTKDVRPINVSSHCPSAGTKCLVSGW D153 GTTKSPQVHFPKVLQCLNISVLSQKRCEDAYPRQIDDTMFCAGDKAGRDSCQGDSG
GPVVCNGSLQGLVSWGDYPCARPNRPGVYTNLCKFTKWIQETIQANS humano (forma madura) SPINK5 MKIATVSVLLPLALCLIQDAASKNEDQEMCHEFQAFMKNGKLFCPQDKKFFQSLDG 9
IMFINKCATCKMILEKEAKSQKRARHLARAPKATAPTELNCDDFKKGERDGDFICP Q9NQ3 DYYEAVCGTDGKTYDNRCALCAENAKTGSQIGVKSEGECKSSNPEQDVCSAFRPFV 8 RDGRLGCTRENDPVLGPDGKTHGNKCAMCAELFLKEAENAKREGETRIRRNAEKDF
CKEYEKQVRNGRLFCTRESDPVRGPDGRMHGNKCALCAEIFKQRFSEENSKTDQNL humano GKAEEKTKVKREIVKLCSQYQNQAKNGILFCTRENDPIRGPDGKMHGNLCSMCQAY
FQAENEEKKKAEARARNKRESGKATSYAELCSEYRKLVRNGKLACTRENDPIQGPD (incl. GKVHGNTCSMCEVFFQAEEEEKKKKEGKSRNKRQSKSTASFEELCSEYRKSRKNGR peptíde LFCTRENDPIQGPDGKMHGNTCSMCEAFFQQEERARAKAKREAAKEICSEFRDQVR
NGTLICTREHNPVRGPDGKMHGNKCAMCASVFKLEEEEKKNDKEEKGKVEAEKVKR o sinal EAVQELCSEYRHYVRNGRLPCTRENDPIEGLDGKIHGNTCSMCEAFFQQEAKEKER (sublinh AEPRAKVKREAEKETCDEFRRLLQNGKLFCTRENDPVRGPDGKTHGNKCAMCKAVF
QKENEERKRKEEEDQRNAAGHGSSGGGGGNTQDECAEYREQMKNGRLSCTRESDPV ado)) RDADGKSYNNQCTMCKAKLEREAERKNEYSRSRSNGTGSESGKDTCDEFRSQMKNG
KLICTRESDPVRGPDGKTHGNKCTMCKEKLEREAAEKKKKEDEDRSNTGERSNTGE RSNDKEDLCREFRSMQRNGKLICTRENNPVRGPYGKMHINKCAMCQSIFDREANER KKKDEEKSSSKPSNNAKDECSEFRNYIRNNELICPRENDPVHGADGKFYTNKCYMC RAVFLTEALERAKLQEKPSHVRASQEEDSPDSFSSLDSEMCKDYRVLPRIGYLCPK
DLKPVCGDDGQTYNNPCMLCHENLIRQTNTHIRSTGKCEESSTPGTTAASMPPSDE SPINK5 KNEDQEMCHEFQAFMKNGKLFCPQDKKFFQSLDGIMFINKCATCKMILEKEAKSQK 10
RARHLARAPKATAPTELNCDDFKKGERDGDFICPDYYEAVCGTDGKTYDNRCALCA humano ENAKTGSQIGVKSEGECKSSNPEQDVCSAFRPFVRDGRLGCTRENDPVLGPDGKTH (forma GNKCAMCAELFLKEAENAKREGETRIRRNAEKDFCKEYEKQVRNGRLFCTRESDPV
RGPDGRMHGNKCALCAEIFKQRFSEENSKTDQNLGKAEEKTKVKREIVKLCSQYQN madura) QAKNGILFCTRENDPIRGPDGKMHGNLCSMCQAYFQAENEEKKKAEARARNKRESG
KATSYAELCSEYRKLVRNGKLACTRENDPIQGPDGKVHGNTCSMCEVFFQAEEEEK KKKEGKSRNKRQSKSTASFEELCSEYRKSRKNGRLFCTRENDPIQGPDGKMHGNTC SMCEAFFQQEERARAKAKREAAKEICSEFRDQVRNGTLICTREHNPVRGPDGKMHG NKCAMCASVFKLEEEEKKNDKEEKGKVEAEKVKREAVQELCSEYRHYVRNGRLPCT RENDPIEGLDGKIHGNTCSMCEAFFQQEAKEKERAEPRAKVKREAEKETCDEFRRL LQNGKLFCTRENDPVRGPDGKTHGNKCAMCKAVFQKENEERKRKEEEDQRNAAGHG SSGGGGGNTQDECAEYREQMKNGRLSCTRESDPVRDADGKSYNNQCTMCKAKLERE AERKNEYSRSRSNGTGSESGKDTCDEFRSQMKNGKLICTRESDPVRGPDGKTHGNK CTMCKEKLEREAAEKKKKEDEDRSNTGERSNTGERSNDKEDLCREFRSMQRNGKLI CTRENNPVRGPYGKMHINKCAMCQSIFDREANERKKKDEEKSSSKPSNNAKDECSE FRNYIRNNELICPRENDPVHGADGKFYTNKCYMCRAVFLTEALERAKLQEKPSHVR ASQEEDSPDSFSSLDSEMCKDYRVLPRIGYLCPKDLKPVCGDDGQTYNNPCMLCHE
NLIRQTNTHIRSTGKCEESSTPGTTAASMPPSDE Sequências HVR-H1 HVR-H1 DYNMA 11 14C8 HVR-H1 DYYMA 12 14E12
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO HVR-H1 SSYWIC 13 8E11 HVR-H1 TSYWIC 14 8G10 HVR-H1 NYGVT 15 9B6 HVR-H1 NYGVS 16
2.3F4 HVR-H1 SYGVT 17 10C5, hu10C5- H1 a hu10C5- H28 HVR-H1 NYGVS 18 2B11 HVR-H1 TFAIN 19 10H3 HVR-H1 GYGVS 20 9H3 HVR-H1 NYGVT 21 8B7 HVR-H1 SYGVS 22 9F2, 10C8, 9H5, hu9H5- H1 a hu9H5- H17 HVR-H1 SYPIS 23 8F5
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO HVR-H1 DYGVS 24 3-3F5, hu3- 3F5-H1 a hu3- 3F5- H27 HVR-H1 NNYVNFVMC 25 9E3 HVR-H1 DNYVMS 26 10D10 HVR-H1 GGGIY 27 12B3, 1D10 HVR-H1 X1YGVX2, em que X1 é S ou D, X2 é T ou S 28 10C5, hu10C5- H1 a hu10C5- H28, 9H5, hu9H5- H1 a hu9H5- H17, 3- 3F5, hu3- 3F5-H1 a hu3- 3F5- H27 (consen so) Sequências HVR-H2
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO HVR-H2 TISYDAGRTYYRDSVKG 29 14C8 HVR-H2 SISYDGDTTYYRDSVKG 30 14E12 HVR-H2 CVYGLDVNIYYASWTK 31 8E11 HVR-H2 CVYGLDVNIYYASWTE 32 8G10 HVR-H2 FIGSGGSAYYASWAKS 33 9B6, 9H3 HVR-H2 FIGYGGSTYYASWAKS 34
2.3F4 HVR-H2 YITSNYGVSYYASWAKS 35 10C5, hu10C5- H1 a hu10C5- H10, hu10C5- H12, hu10C5- H14 a hu10C5- H16, hu10C5- H18 a hu10C5- H28 HVR-H2 YITSNYGVSYYANSVKG 36 hu10C5- H11, hu10C5- H13
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO HVR- YITSNYGVSYYASFAKS 37 H2.hu10 C5.H17 HVR-H2 YITSNYGVSYYAX1X2X3KX4, em que X1 é S ou N, X2 é W, S ou F, 38 hu10C5- X3 é A ou V, X4 é S ou G H1 a hu10C5- H28 (consen so) HVR-H2 YIGSAGSTYYATWAKS 39 2B11 HVR-H2 AIGRGGSAYYASWAKS 40 10H3 HVR-H2 FIGSSGSAYYASWAKS 41 8B7 HVR-H2 FIGSGGFAYYASWAKS 42 10C8, 9H5, hu9H5- H1 a hu9H5- H10, hu9H5- H12, hu9H5- H14 a hu9H5- H16 HVR-H2 FIGSGGFAYYADSVKG 43 hu9H5- H11, hu9H5- H13
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO HVR- FIGSGGFAYYASFAKS 44 H2.hu9 H5.H17 HVR-H2 FIGSGGFAYYAX1X2X3KX4, em que X1 é S ou D, X2 é W, S ou F, 45 hu9H5- X3 é A ou V, X4 é S ou G H1 a hu9H5- H17 (consen so) HVR-H2 FIGSGGSPYYASWAKS 46 9F2 HVR-H2 YITSEYGVAYYATWAES 47 8F5 HVR-H2 AIGSSGVAWYANWAKG 48 3-3F5, hu3- 3F5-H1 a hu3- 3F5-H9, hu3- 3F5- H14, hu3- 3F5- H16, hu3- 3F5- H17
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO HVR-H2 AIGSSGVAFYANWAKG 49 hu3- 3F5- H10, hu3- 3F5- H12, hu3- 3F5- H15 HVR-H2 AIGSSGVAWYADSVKG 50 hu3- 3F5- H11, HVR-H2 AIGSSGVAFYADSVKG 51 hu3- 3F5- H13 HVR-H2 AIGSSGVAWYANFAKG 52 hu3- 3F5- H18 a hu3- 3F5- H26 HVR-H2 AIGSSGVAFYANFAKG 53 hu3- 3F5- H27
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO HVR-H2 AIGSSGVAX1YAX2X3X4KG, em que X1 é W ou F, X2 é N ou D, X3 54 hu3- é W, S ou F, X4 é A ou V 3F5-H1 a hu3- 3F5- H27 (consen so) HVR-H2 SIDPGDDSTDYASWAT 55 9E3 HVR-H2 CIDPGDDSTYYASWAT 56 10D10 HVR-H2 SIYPDHGSVDYANWVNG 57 12B3 HVR-H2 YIYPDHGSADYATWVNG 58 1D10 HVR-H2 X1IGSX2GX3AX4YAX5X6X7KX8, em que X1 é F ou A, X2 é G ou S, 59 9H5, X3 é F ou V, X4 é Y, W ou F, X5 é S, D ou N, X6 é W, S hu9H5- ou F, X7 é A ou V, X8 é S ou G H1 a hu9H5- H17, 3- 3F5, hu3- 3F5-H1 a hu3- 3F5- H27 (consen so) Sequências HVR-H3 HVR-H3 GIFNYGTDYFDY 60 14C8 HVR-H3 DGTIPAGSWFAY 61 14E12
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO HVR-H3 GGGSADFGFDL 62 8E11, 8G10 HVR-H3 DDVGGGKSLDI 63 9B6 HVR-H3 LCGVDCADALDS 64
2.3F4 HVR-H3 ENPDYGYAYDA 65 10C5, hu10C5- H1 a hu10C5- H28 HVR-H3 AAYSAGSADAEDI 66 2B11 HVR-H3 ENAGSGWGELDI 67 10H3 HVR-H3 DNVGGDMSLDI 68 9H3 HVR-H3 DDVGGGKSLDI 69 8B7, 9F2, 9H5, hu9H5- H1 a hu9H5- H17 HVR-H3 DDVGGGRSLDI 70 10C8 HVR-H3 ENPTYGYAYDA 71 8F5
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO HVR-H3 DRDYGYRADDATSGMDL 72 3-3F5, hu3- 3F5-H1 a hu3- 3F5- H27 HVR-H3 GDAGTSYSFNF 73 9E3 HVR-H3 GDAAASYSFNF 74 10D10 HVR-H3 ESGGSYYDL 75 12B3 HVR-H3 ETGGSWYDL 76 1D10 Sequências HVR-L1 HVR-L1 RASEDIYSGLA 77 14C8 HVR-L1 LASKNIYRNLA 78 14E12 HVR-L1 QASENIYSLLA 79 8E11, 8G10 HVR-L1 QASQNIGDYLS 80 9B6 HVR-L1 QASEDIGSYCS 81
2.3F4 HVR-L1 QASESISNELS 82 10C5, hu10C5- L1 a hu10C5- L6 HVR-L1 QASQSISNYVA 83 2B11
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO HVR-L1 QASESISSDLA 84 10H3 HVR-L1 QASQNINNYLS 85 9H3 HVR-L1 QASQSIGSYLS 86 8B7 HVR-L1 QASQSISSYLS 87 9H5, hu9H5- L1 a hu9H5- L4 HVR-L1 QASQSISNYLS 88 9F2 HVR-L1 QASQSISTYLS 89 10C8 HVR-L1 QASESIGNELS 90 8F5 HVR-L1 QASESIGNALA 91 3-3F5, hu3- 3F5-L1 a hu3- 3F5-L5 HVR-L1 QASESISRYLS 92 9E3 HVR-L1 QASESISTYLS 93 10D10 HVR-L1 QASQSISTYLA 94 12B3 HVR-L1 QASQSISSYLA 95 1D10
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO HVR-L1 QASX1SIX2X3X4LX5, em que X1 é E ou Q, X2 é S ou G, X3 é N 96 10C5, ou S, X4 é E, Y ou A, X5 é S ou A hu10C5- L1 a hu10C5- L6, 9H5, hu9H5- L1 a hu9H5- L4, 3- 3F5, hu3- 3F5-L1 a hu3- 3F5-L5 (consen so) Sequências HVR-L2 HVR-L2 GATTLHD 97 14C8 HVR-L2 DASRLQD 98 14E12 HVR-L2 DASDLAS 99 8E11, 8G10,
2.3F4, 9E3, 10D10, 3-3F5, hu3- 3F5-L1 a hu3- 3F5-L5 HVR-L2 SASTLAS 100 9B6
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO HVR-L2 YASTLAS 101 10C5, hu10C5- L1 a hu10C5- L6 HVR-L2 RASTLAS 102 2B11 HVR-L2 AASTLAS 103 10H3, 9H3 HVR-L2 DASNLAS 104 8B7 HVR-L2 SASTLAS 105 9F2 10C8 9H5, hu9H5- L1 a hu9H5- L4 HVR-L2 QASTLAS 106 8F5 HVR-L2 KTSTLAS 107 12B3 HVR-L2 KASTLAS 108 1D10
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO HVR-L2 X1ASX2LAS, em que X1 é Y, S ou D, X2 é T ou D 109 10C5, hu10C5- L1 a hu10C5- L6 9H5, hu9H5- L1 a hu9H5- L4, 3- 3F5, hu3- 3F5-L1 a hu3- 3F5-L5 (consen so) Sequências HVR-L3 HVR-L3 HQGLSFPYT 110 14C8 HVR-L3 QQYHDYPYT 111 14E12 HVR-L3 QATAYGSSGNA 112 8E11, 8G10 HVR-L3 HQDYTSNDVENT 113 9B6 HVR-L3 QQDYTGNNVDNT 114
2.3F4 HVR-L3 AQGFGSSGVENV 115 10C5, hu10C5- L1 a hu10C5- L6
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO HVR-L3 HQGYSSSNVDNI 116 2B11 HVR-L3 QQGYTWNNVDNV 117 10H3 HVR-L3 HQDYTSNNVDNT 118 9H3, 8B7, 10C8 HVR-L3 HQDYTSSNVDNT 119 9H5, hu9H5- L1 a hu9H5- L4 HVR-L3 HQDYTSNSVDNT 120 9F2 HVR-L3 AQGFSSSGVENV 121 8F5 HVR-L3 QQGDSHNNVDNI 122 3-3F5, hu3- 3F5-L1 a hu3- 3F5-L5 HVR-L3 QQDYSRSNIVNS 123 9E3 HVR-L3 QQDYSSSNIVNS 124 10D10 HVR-L3 QQGYSGSSVENT 125 12B3 HVR-L3 QQGYSGSNVENT 126 1D10
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO HVR-L3 X1QX2X3X4X5X6X7VX8NX9, em que X1 é A, H ou Q, X2 é G ou D, 127 10C5, X3 é F, Y ou D, X4 é G, T ou S, X5 é S ou H, X6 é S ou hu10C5- N, X7 é G ou N, X8 é E ou D, X9 é V, T ou I L1 a hu10C5- L6 9H5, hu9H5- L1 a hu9H5- L4, 3- 3F5, hu3- 3F5-L1 a hu3- 3F5-L5 (consen so) Sequências de VL (HVRs sublinhadas) VL DIQMTQSPASLSASLGETVTIQCRASEDIYSGLAWYQQKPGKSPQLLIYGATTLHD 128 14C8 GVPSRFSGSGSGTQYSLKISSMHSEDEGIYFCHQGLSFPYTFGAGTKLELK VL DIQMTQSPASLSASLGETVTIECLASKNIYRNLAWYQQKPGKSPQFLISDASRLQD 129 14E12 GVPSRFTGSDSGSQYSLKINSLQSEDVATYFCQQYHDYPYTFGAGTKLELK VL 8E11 DVVMTQTASPVSAAVGGTVTIKCQASENIYSLLAWYQQKPGQPPKVLIYDASDLAS 130
GVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCQATAYGSSGNAFGGGTEVVVK VL DVVMTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASENIYSLLAWYQQKPGQPPKVLIYDASDLAS 131 8G10 GVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCQATAYGSSGNAFGGGTEVVVK VL 9B6 NIVMTQTPASVEVAVGGTVVIKCQASQNIGDYLSWYQQKPGQRPKLLIYSASTLAS 132
GVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCHQDYTSNDVENTFGGGTEVVVK VL AYYMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQASEDIGSYCSWYQQKPGQPPKLLIYDASDLAS 133
2.3F4 GVPSRFKGSGSGTDFTLTISGVQCDDAATYYCQQDYTGNNVDNTFGGGSEVVVK VL AYDMTQTPASLEAAVGGTVTINCQASESISNELSWYQQKPGQPPDLLIYYASTLAS 134 10C5 GVPSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCAQGFGSSGVENVFGGGTEVVVK VL AYRMTQSPSSFSASTGDRVTITCQASESISNELSWYQQKPGKPPKLLIYYASTLAS 135 hu10C5- GVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDFATYYCAQGFGSSGVENVFGGGTKVEIK L1
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO VL AIRMTQSPSSFSASTGDRVTITCQASESISNELSWYQQKPGKPPKLLIYYASTLAS 136 hu10C5- GVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDFATYYCAQGFGSSGVENVFGGGTKVEIK L2 VL AYRMTQSPSSFSASTGDRVTITCQASESISNELSWYQQKPGKAPKLLIYYASTLAS 137 hu10C5- GVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDFATYYCAQGFGSSGVENVFGGGTKVEIK L3 VL AIRMTQSPSSFSASTGDRVTITCQASESISNELSWYQQKPGKAPKLLIYYASTLAS 138 hu10C5- GVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDFATYYCAQGFGSSGVENVFGGGTKVEIK L4 VL AIRMTQSPSSFSASTGDRVTITCQASESISNELSWYQQKPGKAPKLLIYYASTLAS 139 hu10C5- GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCAQGFGSSGVENVFGGGTKVEIK L5 VL AX1RMTQSPSSFSASTGDRVTITCQASESISNELSWYQQKPGKX2PKLLIYYASTLA 140 SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISX3LQX4EDFATYYCAQGFGSSGVENVFGGGTX5VX6 10C5, X7K hu10C5- em que X1 é Y ou I, X2 é P ou A, X3 é C ou S, X4 é S ou L1 a P, X5 é E ou K, X6 é E ou V, X7 é I ou V hu10C5- L6 (consen so) VL 2B11 AYYMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASQSISNYVAWYQQKPGQPPKLLIYRASTLAS 141
GVSSRFSGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCHQGYSSSNVDNIFGGGTEVVVK VL AYEMTQTPASVEVAVGGTVTINCQASESISSDLAWYQQKPGQRPKLLIYAASTLAS 142 10H3 GVPSRFKGSGSGTEFTLSISGVQCADAATYYCQQGYTWNNVDNVFGGGTEVVVK VL 9H3 DIVMTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASQNINNYLSWYQQKPGQPPKQLIYAASTLAS 143
GVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCHQDYTSNNVDNTFGGGTEVVVK VL 8B7 NIVMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQASQSIGSYLSWYQQKPGQPPKLLIYDASNLAS 144
GVPSRFKGSGSGTQFTLSISDLECADAATYYCHQDYTSNNVDNTFGGGTEVVIK VL 9H5 NIVMTQTPASVEAAVGGTVTINCQASQSISSYLSWYQQKSGQRPKLLIFSASTLAS 145
GVPSRFTGSGSGTQFTLTISDLQCADAATYYCHQDYTSSNVDNTFGGGTEVVVK VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSISSYLSWYQQKPGKRPKLLIFSASTLAS 146 hu9H5- GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQDYTSSNVDNTFGGGTKVEIK L1 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSISSYLSWYQQKPGKAPKLLIFSASTLAS 147 hu9H5- GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQDYTSSNVDNTFGGGTKVEIK L2
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSISSYLSWYQQKPGKRPKLLIYSASTLAS 148 hu9H5- GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQDYTSSNVDNTFGGGTKVEIK L3 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYSASTLAS 149 hu9H5- GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQDYTSSNVDNTFGGGTKVEIK L4 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYSASTLAS 150 hu9H5- GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQDYTSSNVDNTFGGGTEVVVK L5 VL 9H5, DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSISSYLSWYQQKPGKX1PKLLIX2SASTLA 151 hu9H5- SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQDYTSSNVDNTFGGGTX3VX4X5
K L1 a em que X1 é R ou A, X2 é F ou Y, X3 é E ou K, X4 é E ou hu9H5- V, X5 é V ou I L5 (consen so) VL 9F2 NIVMTQTPASVEVAVGGTVIIKCQASQSISNYLSWYHQKSGQRPRLLIYSASTLAS 152
GVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCHQDYTSNSVDNTFGGGTEVVVK VL NIVMTQTPASVEVAMGGTVIIKCQASQSISTYLSWYQQKPGQPPKLLIYSASTLAS 153 10C8 GVSSRFEGSGSGTQFTLTISGVQCADAATYYCHQDYTSNNVDNTFGGGTEVVVK VL 8F5 AYDLTQTPASVEAAVGGTVTINCQASESIGNELSWYQQKSGQPPKLLIYQASTLAS 154
GVPSRFKGSGSGTDFTLTISDLECADAATYYCAQGFSSSGVENVFGGGTEVVVK VL 3- AYDMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASESIGNALAWYQQKPGQPPKLLIYDASDLAS 155 3F5 GVPSRFKGSGSGTQFTLTISGVECADAATYYCQQGDSHNNVDNIFGGGTEVVVK VL hu3- AYRMTQSPSSFSASTGDRVTITCQASESIGNALAWYQQKPGKPPKLLIYDASDLAS 156 3F5-L1v GVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDFATYYCQQGDSHNNVDNIFGGGTKVEIK VL hu3- AIRMTQSPSSFSASTGDRVTITCQASESIGNALAWYQQKPGKPPKLLIYDASDLAS 157 3F5-L2 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDFATYYCQQGDSHNNVDNIFGGGTKVEIK VL hu3- AYRMTQSPSSFSASTGDRVTITCQASESIGNALAWYQQKPGKAPKLLIYDASDLAS 158 3F5-L3 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDFATYYCQQGDSHNNVDNIFGGGTKVEIK VL hu3- AIRMTQSPSSFSASTGDRVTITCQASESIGNALAWYQQKPGKAPKLLIYDASDLAS 159 3F5-L4 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDFATYYCQQGDSHNNVDNIFGGGTKVEIK VL hu3- AIRMTQSPSSFSASTGDRVTITCQASESIGNALAWYQQKPGKAPKLLIYDASDLAS 160 3F5-L5 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGDSHNNVDNIFGGGTKVEIK VL hu3- AIRMTQSPSSFSASTGDRVTITCQASESIGNALAWYQQKPGKAPKLLIYDASDLAS 161 3F5-L6 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGDSHNNVDNIFGGGTEVVVK
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO VL 3- AX1RMTQSPSSFSASTGDRVTITCQASESIGNALAWYQQKPGKX2PKLLIYDASDLA 162 SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISX3LQX4EDFATYYCQQGDSHNNVDNIFGGGTX5VX6 3F5, X 7K hu3- 3F5-L1 em que X1 é Y ou I, X2 é P ou A, X3 é C ou S, X4 é S ou a hu3- P, X5 é E ou K, X6 é E ou V, X7 é V ou I 3F5-L6 (consen so) VL 9E3 AIEMTQTPSSASEPVGGTVTIKCQASESISRYLSWYQQKPGQPPKLLIYDASDLAS 163
GVSSRFKGSGSGTQFTLIISDVECADAATYYCQQDYSRSNIVNSFGGGTEVVVK VL AYDMTQTPSSASEPVGGTVTIKCQASESISTYLSWYQQKPGQPPKLLIYDASDLAS 164 10D10 GVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVECADAATYYCQQDYSSSNIVNSFGGGTEVVVK VL 12B3 AYDMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQASQSISTYLAWYQQKPGQRPNLLIYKTSTLAS 165
GVPSRFRGSGSGTQFTLTISGVECADAATYYCQQGYSGSSVENTFGGGTEVVVK VL AYDMTQTPVSVEAAVGGTVTIKCQASQSISSYLAWYQQKPGQPPKLLIYKASTLAS 166 1D10 GVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSGSNVENTFGGGTEVVVK Sequências de VH (HVRs sublinhadas) VH EVQLVESGGGLVQPGRSLKLSCTASGFTFSDYNMAWVRQAPKGGLEWVTTISYDAG 167 14C8 RTYYRDSVKGRFTISRDNAKRTLSLQMDSLRSEDTATYYCATGIFNYGTDYFDYWG
QGVMVTVSS VH EVQLVESGGGLVRPGRSLRLSCAASGFTFSDYYMAWVRQAPTKGLEWVASISYDGD 168
TTYYRDSVKGRFTISRDNARSSLYLQMDSLRSDDTANYFCTTDGTIPAGSWFAYWG 14E12 QGTLVTVSS VH QEQLEESGGDLVKPEGSLTLTCTASGFSFSSSYWICWVRQAPGKGLEWIACVYGLD 169 8E11 VNIYYASWTKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCARGGGSADFGFDLWGP
GTLVTVSS VH QSLEESGGDLVKPEGSLTLTCTASGFSFSTSYWICWVRQAPGKGLEWIACVYGLDV 170 8G10 NIYYASWTEGRFTISKTSSTTVTLQVTSLTAADTATYFCARGGGSADFGFDLWGPG
TLVTVSS VH 9B6 QSVKESEGGLFKPTDNLTLTCTVSGFSLSNYGVTWVRQAPGNGLEYIGFIGSGGSA 171
YYASWAKSRSTITRNTNLNTVTLKMTSLTAADTATYFCARDDVGGGKSLDIWGPGT
LVTVSS VH QSVEESRGGLIKPTDTLTLTCTASGFSLSNYGVSWVRQAPGNGLEYIGFIGYGGST 172
2.3F4 YYASWAKSRSTITRNTNLNTVTLQMTSLTAADTATYFCARLCGVDCADALDSWGPG
TLVTVSS VH QSLEESGGGLVKPTDTLTLTCTVSGFSLSSYGVTWVRQAPGRGLEWIGYITSNYGV 173 10C5 SYYASWAKSRSTITRNTNLNTVTLKMTSLTAADTATYFCARENPDYGYAYDAWGPG
TLVTVSV SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWIGYITSNYG 174 hu10C5- VSYYASWAKSRSTISRDTSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYFCARENPDYGYAYDAWGP
GTTVTVSS H1 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWIGYITSNYG 175 hu10C5- VSYYASWAKSRSTISRDTSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYFCARENPDYGYAYDAWGP
GTTVTVSS H2 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEYIGYITSNYG 176 hu10C5- VSYYASWAKSRSTISRDTSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYFCARENPDYGYAYDAWGP
GTTVTVSS H3 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWVGYITSNYG 177 hu10C5- VSYYASWAKSRSTISRDTSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYFCARENPDYGYAYDAWGP
GTTVTVSS H4 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWISYITSNYG 178 hu10C5- VSYYASWAKSRSTISRDTSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYFCARENPDYGYAYDAWGP
GTTVTVSS H5 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWIGYITSNYG 179 hu10C5- VSYYASWAKSRFTISRDTSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYFCARENPDYGYAYDAWGP
GTTVTVSS H6 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWIGYITSNYG 180 hu10C5- VSYYASWAKSRSTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYFCARENPDYGYAYDAWGP
GTTVTVSS H7 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWIGYITSNYG 181 hu10C5- VSYYASWAKSRSTISRDTSKNTLYLQMGSLRAEDMAVYFCARENPDYGYAYDAWGP
GTTVTVSS H8 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWIGYITSNYG 182 hu10C5- VSYYASWAKSRSTISRDTSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARENPDYGYAYDAWGP
GTTVTVSS H9 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWIGYITSNYG 183 hu10C5- VSYYASWAKSRSTISRDTSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYFCARENPDYGYAYDAWGQ
GTTVTVSS H10 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWIGYITSNYG 184 hu10C5- VSYYANSVKGRSTISRDTSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYFCARENPDYGYAYDAWGP
GTTVTVSS H11
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEYVSYITSNYG 185 hu10C5- VSYYASWAKSRFTISRDNSKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCARENPDYGYAYDAWGQ
GTTVTVSS H12 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEYVSYITSNYG 186 hu10C5- VSYYANSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCARENPDYGYAYDAWGQ
GTTVTVSS H13 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWVGYITSNYG 187 hu10C5- VSYYASWAKSRFTISRDNSKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCARENPDYGYAYDAWGQ
GTTVTVSS H14 VH EQQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWVGYITSNYG 188 hu10C5- VSYYASWAKSRFTISRDNSKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCARENPDYGYAYDAWGQ
GTTVTVSS H15 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWVGYITSNYG 189 hu10C5- VSYYASWAKSRFTISRNLNTNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCARENPDYGYAYDAWGQ
GTTVTVSS H16 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWVGYITSNYG 190 hu10C5- VSYYASFAKSRFTISRDNSKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCARENPDYGYAYDAWGQ
GTTVTVSS H17 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWVGYITSNYG 191 hu10C5- VSYYASWAKSRFTISRNTNLNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCARENPDYGYAYDAWGQ
GTTVTVSS H18 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWVGYITSNYG 192 hu10C5- VSYYASWAKSRFTISRNNSKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCARENPDYGYAYDAWGQ
GTTVTVSS H19 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWVGYITSNYG 193 hu10C5- VSYYASWAKSRFTISRDNNKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCARENPDYGYAYDAWGQ
GTTVTVSS H20 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWVGYITSNYG 194 hu10C5- VSYYASWAKSRFTISRNNNKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCARENPDYGYAYDAWGQ
GTTVTVSS H21 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWIGYITSNYG 195 hu10C5- VSYYASWAKSRFTISRDNSKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCARENPDYGYAYDAWGQ
GTTVTVSS H22
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWVGYITSNYG 196 hu10C5- VSYYASWAKSRSTISRDNSKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCARENPDYGYAYDAWGQ
GTTVTVSS H23 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWIGYITSNYG 197 hu10C5- VSYYASWAKSRSTISRDNSKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCARENPDYGYAYDAWGQ
GTTVTVSS H24 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWVGYITSNYG 198 hu10C5- VSYYASWAKSRFTISRDTSKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCARENPDYGYAYDAWGQ
GTTVTVSS H25 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWVGYITSNYG 199 hu10C5- VSYYASWAKSRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARENPDYGYAYDAWGQ
GTTVTVSS H26 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWIGYITSNYG 200 hu10C5- VSYYASWAKSRSTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARENPDYGYAYDAWGQ
GTTVTVSS H27 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWIGYITSNYG 201 hu10C5- VSYYASWAKSRSTISRDTSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARENPDYGYAYDAWGQ
GTTVTVSS H28 VH EX1QLVESGGGLVQPGGSLRLSCAX2SGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEX3X4X5YITS 202 NYGVSYYAX6X7X8KX9RX10TISRX11X12X13X14NTX15YLQMGSLRAEDMAVYX16CA 10C5, RENPDYGYAYDAWGX17GTTVTVSS hu10C5- H1 a em que X1 é V ou Q, X2 é V ou A, X3 é W ou Y, X4 é I ou hu10C5- V, X5 é G ou S, X6 é S ou N, X7 é W, S ou F, X8 é A ou H28 V, X9 é S ou G, X10 é S ou F, X11 é D ou N, X12 é T, L ou (consen N, X13 é S ou N, X14 é K, T ou L, X15 é V ou L, X16 é F so) ou Y, X17 é P ou Q VH QSVKESEGGLFKPTDTLTLTCTVSGFSLINYGVSWVRQAPGKGLEWIGYIGSAGST 203 2B11 YYATWAKSRATITRNTNLNTVTLKMTSLTAADTATYFCARAAYSAGSADAEDIWGP
GTLVTVSS VH QSVKESEGGLIKPTDTLTLTCTVSGFSLSTFAINWVRQAPGNGLEWIGAIGRGGSA 204
YYASWAKSRSTITKNTNLNTVTLKMTRPTAADTATYFCARENAGSGWGELDIWGPG 10H3
TLVTVSS VH 9H3 QSVKESEGGLFKPTDTLTLTCTVSGFSLSGYGVSWVRQAPGKGLEYIGFIGSGGSA 205
YYASWAKSRSTITRNTNLNTVTLKMTRLTAADTATYFCARDNVGGDMSLDIWGPGT LVTVSS SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO VH 8B7 QSVKESEGGLFKPTDNLTLTCTVSGFSLSNYGVTWVRQAPGNGLEYIGFIGSSGSA 206
YYASWAKSRSTITRNTNLNTVTLKMTSLTAADTATYFCARDDVGGGKSLDIWGPGT
LVTVSS VH 9H5 QSVKESEGGLFKPTDNLTLTCTVSGFSLSSYGVSWVRQAPGNGLEYIGFIGSGGFA 207
YYASWAKSRSTITRNTNLNTVTLKMTSLTAADTATYFCARDDVGGGKSLDIWGPGT
VVTVSV VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEYIGFIGSGGF 208 hu9H5- AYYASWAKSRSTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARDDVGGGKSLDIWGPG
TLVTVSS H1 VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEYIGFIGSGGF 209 hu9H5- AYYASWAKSRSTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARDDVGGGKSLDIWGPG
TLVTVSS H2 VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEWIGFIGSGGF 210 hu9H5- AYYASWAKSRSTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARDDVGGGKSLDIWGPG
TLVTVSS H3 VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEYVGFIGSGGF 211 hu9H5- AYYASWAKSRSTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARDDVGGGKSLDIWGPG
TLVTVSS H4 VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEYISFIGSGGF 212 hu9H5- AYYASWAKSRSTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARDDVGGGKSLDIWGPG
TLVTVSS H5 VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEYIGFIGSGGF 213 hu9H5- AYYASWAKSRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARDDVGGGKSLDIWGPG
TLVTVSS H6 VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEYIGFIGSGGF 214 hu9H5- AYYASWAKSRSTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARDDVGGGKSLDIWGPG
TLVTVSS H7 VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEYIGFIGSGGF 215 hu9H5- AYYASWAKSRSTISRDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCARDDVGGGKSLDIWGPG
TLVTVSS H8 VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEYIGFIGSGGF 216 hu9H5- AYYASWAKSRSTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDVGGGKSLDIWGPG
TLVTVSS H9 VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEYIGFIGSGGF 217 hu9H5- AYYASWAKSRSTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARDDVGGGKSLDIWGQG
TLVTVSS H10
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEYIGFIGSGGF 218 hu9H5- AYYADSVKGRSTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARDDVGGGKSLDIWGPG
TLVTVSS H11 VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEWVSFIGSGGF 219 hu9H5- AYYASWAKSRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDVGGGKSLDIWGQG
TLVTVSS H12 VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEWVSFIGSGGF 220 hu9H5- AYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDVGGGKSLDIWGQG
TLVTVSS H13 VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEYVGFIGSGGF 221 hu9H5- AYYASWAKSRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDVGGGKSLDIWGQG
TLVTVSS H14 VH EQQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEYVGFIGSGGF 222 hu9H5- AYYASWAKSRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDVGGGKSLDIWGQG
TLVTVSS H15 VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEYVGFIGSGGF 223 hu9H5- AYYASWAKSRFTISRNTNLNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDVGGGKSLDIWGQG
TLVTVSS H16 VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEYVGFIGSGGF 224 hu9H5- AYYASFAKSRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDVGGGKSLDIWGQG
TLVTVSS H17 VH 9H5, QSVKESEGGLFKPTDNLTLTCTVSGFSLSSYGVSWVRQAPGNGLEYIGFIGSGGSP 225 hu9H5- YYASWAKSRSTITRNTNLNTVTLKMTSLTAADTATYFCARDDVGGGKSLDIWGPGT
LVTVSS H1 a hu9H5- H17 (consen so) VH 9F2 QSVKESEGGLFKPTDNLTLTCTVSGFSLSSYGVSWVRQAPGNGLEYIGFIGSGGFA 226
YYASWAKSRSTITRNTNLNTVTLKMTSLTAADTATYFCARDDVGGGRSLDIWGPGT
VVTVSS VH QSVKESEGGLFKPTDTLTLTCTVSGFSLSSYPISWVRQAPGNGLEWIGYITSEYGV 227 10C8 AYYATWAESRSTITRNTNLNTVTLKMTSLTAADTATYFCVRENPTYGYAYDAWGPG
TLVTVSS SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO VH 8F5 QSVKESEGGLFKPTDTLTLTCTVSGFSLNDYGVSWVRQAPGNGLEWIGAIGSSGVA 228
WYANWAKGRSTITRNTNLNTVTLKMASLTAADTATYFCARDRDYGYRADDATSGMD
LWGPGTLVTVSS VH 3- EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWIGAIGSSGV 229 3F5 AWYANWAKGRSTISRHTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGPGTLVTVSS VH hu- EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWIGAIGSSGV 230 3F5-H1 AWYANWAKGRSTISRHTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGPGTLVTVSS VH hu3- EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWVGAIGSSGV 231 3F5-H2 AWYANWAKGRSTISRHTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGPGTLVTVSS VH hu3- EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWISAIGSSGV 232 3F5-H3 AWYANWAKGRSTISRHTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGPGTLVTVSS VH hu3- EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWIGAIGSSGV 233 3F5-H4 AWYANWAKGRFTISRHTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGPGTLVTVSS VH hu3- QSVKESEGGLFKPTDNLTLTCTVSGFSLSSYGVSWVRQAPGNGLEYIGFIGSGGSP 234 3F5-H5 YYASWAKSRSTITRNTNLNTVTLKMTSLTAADTATYFCARDDVGGGKSLDIWGPGT
LVTVSS VH hu3- QSVKESEGGLFKPTDNLTLTCTVSGFSLSSYGVSWVRQAPGNGLEYIGFIGSGGFA 235 3F5-H6 YYASWAKSRSTITRNTNLNTVTLKMTSLTAADTATYFCARDDVGGGRSLDIWGPGT
VVTVSS VH hu3- EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWIGAIGSSGV 236 3F5-H7 AWYANWAKGRSTISRHNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGPGTLVTVSS VH hu3- EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWIGAIGSSGV 237 3F5-H8 AWYANWAKGRSTISRHTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGPGTLVTVSS VH hu3- EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWIGAIGSSGV 238 3F5-H9 AWYANWAKGRSTISRHTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGPGTLVTVSS VH hu3- EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWIGAIGSSGV 239 3F5- AWYANWAKGRSTISRHTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGRGTLVTVSS H10 VH hu3- EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWIGAIGSSGV 240 3F5- AFYANWAKGRSTISRHTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGPGTLVTVSS H11
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO VH hu3- EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWIGAIGSSGV 241 3F5- AWYADSVKGRSTISRHTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGPGTLVTVSS H12 VH hu3- EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWVSAIGSSGV 242 3F5- AFYANWAKGRFTISRHNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGRGTLVTVSS H13 VH hu3- EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWVSAIGSSGV 243 3F5- AFYADSVKGRFTISRHNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGRGTLVTVSS H14 VH hu3- EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWVGAIGSSGV 244 3F5- AWYANWAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGRGTLVTVSS H15 VH hu3- EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWVGAIGSSGV 245 3F5- AFYANWAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGRGTLVTVSS H16 VH hu3- EQQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWVGAIGSSGV 246 3F5- AWYANWAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGRGTLVTVSS H17 VH hu3- EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWVGAIGSSGV 247 3F5- AWYANWAKGRFTISRNTNLNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGRGTLVTVSS H18 VH hu3- EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWVGAIGSSGV 248 3F5- AWYANFAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGRGTLVTVSS H19 VH hu3- EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWVGAIGSSGV 249 3F5- AWYANFAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGRGTLVTVSS H20 VH hu3- EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWIGAIGSSGV 250 3F5- AWYANFAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGRGTLVTVSS H21 VH hu3- EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWIGAIGSSGV 251 3F5- AWYANFAKGRSTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGRGTLVTVSS H22
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO VH hu3- EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWVGAIGSSGV 252 3F5- AWYANFAKGRFTISRDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGRGTLVTVSS H23 VH hu3- EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWVGAIGSSGV 253 3F5- AWYANFAKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGRGTLVTVSS H24 VH hu3- EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWVGAIGSSGV 254 3F5- AWYANFAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGRGTLVTVSS H25 VH hu3- EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWIGAIGSSGV 255 3F5- AWYANFAKGRSTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGRGTLVTVSS H26 VH hu3- EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWIGAIGSSGV 256 3F5- AFYANFAKGRSTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGRGTLVTVSS H27 VH 3- EX1QLX2ESGGGLVQPGGSLRLSCAX3SGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWX4X5AIGS 257 3F5, SGVAX6YAX7X8X9KGRX10TISRX11X12X13X14NTX15YLQMNSLRAEDTAVYX16CAR DRDYGYRADDATSGMDLWGX17GTLVTVSS hu3- em que X1 é V ou Q, X2 é V ou L, X3 é V ou A, X4 é I ou 3F5-H1 V, X5 é G ou S, X6 é W ou F, X7 é N ou D, X8 é W, S ou a hu3- F, X9 é A ou V, X10 é S ou F, X11 é H, N ou D, X12 é T ou 3F5- N, X13 é S ou N, X14 é K ou L, X15 é V ou L, X16 é F ou H27 Y, X17 é P ou R (consen so) VH 9E3 QEQLEESGGGLVKPGASLTLTCTVSGFSLTNNYVNFVMCWVRQAPGKGLEWIASID 258
PGDDSTDYASWATGRFTISKASSTTVTLQVTSLTAADTATYFCARGDAGTSYSFNF
WGPGTLVTVS VH QEQLVESGGGLVKPGASLTLTCTASGFSLTDNYVMSWVRQAPGKGLEWIACIDPGD 259 10D10 DSTYYASWATGRFTISRASSTTVTLQVTSLTAADTATYFCARGDAAASYSFNFWGP
GTLVTVSS VH QSLEESGGGLVKPGGTLTLTCKASGIDFNGGGIYWVRQAPGKGLEWIASIYPDHGS 260 12B3 VDYANWVNGRFTISLDNAQNTVFLQLTSLTVADTATYFCARESGGSYYDLWGPGTL
VTVSS VH QSLEESGGGLVKPGGTLTLTCTASGFDFNGGGIYWVRQAPGKGLEWIAYIYPDHGS 261 1D10 ADYATWVNGRFTISLDNAQNTVFLQMTSLTVADTATYFCARETGGSWYDLWGPGTL
VTVSS Sequências LC
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO LC DIQMTQSPASLSASLGETVTIQCRASEDIYSGLAWYQQKPGKSPQLLIYGATTLHD 262 14C8 GVPSRFSGSGSGTQYSLKISSMHSEDEGIYFCHQGLSFPYTFGAGTKLELKRADAA
PTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDS
KDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC LC DIQMTQSPASLSASLGETVTIECLASKNIYRNLAWYQQKPGKSPQFLISDASRLQD 263 14E12 GVPSRFTGSDSGSQYSLKINSLQSEDVATYFCQQYHDYPYTFGAGTKLELKRADAA
PTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDS
KDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC LC DVVMTQTASPVSAAVGGTVTIKCQASENIYSLLAWYQQKPGQPPKVLIYDASDLAS 264 8E11 GVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCQATAYGSSGNAFGGGTEVVVKRAD
AAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQ
DSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC LC DVVMTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASENIYSLLAWYQQKPGQPPKVLIYDASDLAS 265 8G10 GVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCQATAYGSSGNAFGGGTEVVVKRAD
AAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQ
DSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC LC 9B6 NIVMTQTPASVEVAVGGTVVIKCQASQNIGDYLSWYQQKPGQRPKLLIYSASTLAS 266
GVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCHQDYTSNDVENTFGGGTEVVVKRA DAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTD
QDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC LC AYYMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQASEDIGSYCSWYQQKPGQPPKLLIYDASDLAS 267
2.3F4 GVPSRFKGSGSGTDFTLTISGVQCDDAATYYCQQDYTGNNVDNTFGGGSEVVVKRA
DAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTD
QDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC LC AYDMTQTPASLEAAVGGTVTINCQASESISNELSWYQQKPGQPPDLLIYYASTLAS 268 10C5 GVPSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCAQGFGSSGVENVFGGGTEVVVKRA
DAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTD
QDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC LC AIRMTQSPSSFSASTGDRVTITCQASESISNELSWYQQKPGKAPKLLIYYASTLAS 269 10C5-L5 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCAQGFGSSGVENVFGGGTKVEIKRT
VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE huKapp
QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC a LC AYYMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASQSISNYVAWYQQKPGQPPKLLIYRASTLAS 270 2B11 GVSSRFSGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCHQGYSSSNVDNIFGGGTEVVVKRA
DAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTD QDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO LC AYEMTQTPASVEVAVGGTVTINCQASESISSDLAWYQQKPGQRPKLLIYAASTLAS 271 10H3 GVPSRFKGSGSGTEFTLSISGVQCADAATYYCQQGYTWNNVDNVFGGGTEVVVKRA
DAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTD
QDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC LC 9H3 DIVMTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASQNINNYLSWYQQKPGQPPKQLIYAASTLAS 272
GVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCHQDYTSNNVDNTFGGGTEVVVKRA DAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTD
QDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC LC 8B7 NIVMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQASQSIGSYLSWYQQKPGQPPKLLIYDASNLAS 273
GVPSRFKGSGSGTQFTLSISDLECADAATYYCHQDYTSNNVDNTFGGGTEVVIKRA DAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTD
QDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC LC 9H5 NIVMTQTPASVEAAVGGTVTINCQASQSISSYLSWYQQKSGQRPKLLIFSASTLAS 274
GVPSRFTGSGSGTQFTLTISDLQCADAATYYCHQDYTSSNVDNTFGGGTEVVVKRA DAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTD
QDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC LC 9H5- DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYSASTLAS 275 L4 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQDYTSSNVDNTFGGGTKVEIKRT
VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE huKapp
QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC a LC 9F2 NIVMTQTPASVEVAVGGTVIIKCQASQSISNYLSWYHQKSGQRPRLLIYSASTLAS 276
GVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCHQDYTSNSVDNTFGGGTEVVVKRA DAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTD
QDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC LC NIVMTQTPASVEVAMGGTVIIKCQASQSISTYLSWYQQKPGQPPKLLIYSASTLAS 277 10C8 GVSSRFEGSGSGTQFTLTISGVQCADAATYYCHQDYTSNNVDNTFGGGTEVVVKRA
DAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTD
QDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC LC 8F5 AYDLTQTPASVEAAVGGTVTINCQASESIGNELSWYQQKSGQPPKLLIYQASTLAS 278
GVPSRFKGSGSGTDFTLTISDLECADAATYYCAQGFSSSGVENVFGGGTEVVVKRA DAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTD
QDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC LC 3- AYDMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASESIGNALAWYQQKPGQPPKLLIYDASDLAS 279 3F5 GVPSRFKGSGSGTQFTLTISGVECADAATYYCQQGDSHNNVDNIFGGGTEVVVKRA
DAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTD QDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO LC 3- AIRMTQSPSSFSASTGDRVTITCQASESIGNALAWYQQKPGKAPKLLIYDASDLAS 280 3F5-L5 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGDSHNNVDNIFGGGTKVEIKRT
VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE huKapp
QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC a LC 9E3 AIEMTQTPSSASEPVGGTVTIKCQASESISRYLSWYQQKPGQPPKLLIYDASDLAS 281
GVSSRFKGSGSGTQFTLIISDVECADAATYYCQQDYSRSNIVNSFGGGTEVVVKRA DAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTD
QDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC LC AYDMTQTPSSASEPVGGTVTIKCQASESISTYLSWYQQKPGQPPKLLIYDASDLAS 282 10D10 GVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVECADAATYYCQQDYSSSNIVNSFGGGTEVVVKRA
DAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTD
QDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC LC AYDMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQASQSISTYLAWYQQKPGQRPNLLIYKTSTLAS 283 12B3 GVPSRFRGSGSGTQFTLTISGVECADAATYYCQQGYSGSSVENTFGGGTEVVVKRA
DAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTD
QDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC LC AYDMTQTPVSVEAAVGGTVTIKCQASQSISSYLAWYQQKPGQPPKLLIYKASTLAS 284 1D10 GVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSGSNVENTFGGGTEVVVKRA
DAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTD
QDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC Sequências HC HC EVQLVESGGGLVQPGRSLKLSCTASGFTFSDYNMAWVRQAPKGGLEWVTTISYDAG 285 14C8 RTYYRDSVKGRFTISRDNAKRTLSLQMDSLRSEDTATYYCATGIFNYGTDYFDYWG
QGVMVTVSSASTKGPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLS SGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPT IKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQIS WFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPI ERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTE LNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRT
PGK HC EVQLVESGGGLVRPGRSLRLSCAASGFTFSDYYMAWVRQAPTKGLEWVASISYDGD 286 14E12 TTYYRDSVKGRFTISRDNARSSLYLQMDSLRSDDTANYFCTTDGTIPAGSWFAYWG
QGTLVTVSSASTKGPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLS SGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPT IKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQIS WFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPI ERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTE LNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRT PGK SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO HC QEQLEESGGDLVKPEGSLTLTCTASGFSFSSSYWICWVRQAPGKGLEWIACVYGLD 287 8E11 VNIYYASWTKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCARGGGSADFGFDLWGP
GTLVTVSSASTKGPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSS GVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTI KPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISW FVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIE RTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTEL NYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTP
GK HC QSLEESGGDLVKPEGSLTLTCTASGFSFSTSYWICWVRQAPGKGLEWIACVYGLDV 288 8G10 NIYYASWTEGRFTISKTSSTTVTLQVTSLTAADTATYFCARGGGSADFGFDLWGPG
TLVTVSSASTKGPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSG VHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIK PCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWF VNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIER TISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELN YKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPG
K HC 9B6 QSVKESEGGLFKPTDNLTLTCTVSGFSLSNYGVTWVRQAPGNGLEYIGFIGSGGSA 289
YYASWAKSRSTITRNTNLNTVTLKMTSLTAADTATYFCARDDVGGGKSLDIWGPGT LVTVSSASTKGPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGV HTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKP CPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFV NNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERT ISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNY
KNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK HC QSVEESRGGLIKPTDTLTLTCTASGFSLSNYGVSWVRQAPGNGLEYIGFIGYGGST 290
2.3F4 YYASWAKSRSTITRNTNLNTVTLQMTSLTAADTATYFCARLCGVDCADALDSWGPG
TLVTVSSASTKGPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSG VHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIK PCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWF VNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIER TISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELN YKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPG K SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO HC QSLEESGGGLVKPTDTLTLTCTVSGFSLSSYGVTWVRQAPGRGLEWIGYITSNYGV 291 10C5 SYYASWAKSRSTITRNTNLNTVTLKMTSLTAADTATYFCARENPDYGYAYDAWGPG
TLVTVSSASTKGPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSG VHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIK PCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWF VNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIER TISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELN YKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPG
K HC EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWIGYITSNYG 292 10C5- VSYYASWAKSRSTISRDTSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARENPDYGYAYDAWGQ
GTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS H28
GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCD hIgG1
KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNW N297G
YVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPEN NYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
GK HC EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWIGYITSNYG 293 10C5- VSYYASWAKSRSTISRDTSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARENPDYGYAYDAWGQ
GTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS H28
GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGP hIgG4
PCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVD S228P
GVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYK
TTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK HC QSVKESEGGLFKPTDTLTLTCTVSGFSLINYGVSWVRQAPGKGLEWIGYIGSAGST 294 2B11 YYATWAKSRATITRNTNLNTVTLKMTSLTAADTATYFCARAAYSAGSADAEDIWGP
GTLVTVSSASTKGPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSS GVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTI KPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISW FVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIE RTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTEL NYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTP GK SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO HC QSVKESEGGLIKPTDTLTLTCTVSGFSLSTFAINWVRQAPGNGLEWIGAIGRGGSA 295 10H3 YYASWAKSRSTITKNTNLNTVTLKMTRPTAADTATYFCARENAGSGWGELDIWGPG
TLVTVSSASTKGPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSG VHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIK PCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWF VNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIER TISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELN YKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPG
K HC 9H3 QSVKESEGGLFKPTDTLTLTCTVSGFSLSGYGVSWVRQAPGKGLEYIGFIGSGGSA 296
YYASWAKSRSTITRNTNLNTVTLKMTRLTAADTATYFCARDNVGGDMSLDIWGPGT LVTVSSASTKGPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGV HTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKP CPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFV NNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERT ISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNY
KNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK HC 8B7 QSVKESEGGLFKPTDNLTLTCTVSGFSLSNYGVTWVRQAPGNGLEYIGFIGSSGSA 297
YYASWAKSRSTITRNTNLNTVTLKMTSLTAADTATYFCARDDVGGGKSLDIWGPGT LVTVSSASTKGPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGV HTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKP CPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFV NNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERT ISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNY
KNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK HC 9H5 QSVKESEGGLFKPTDNLTLTCTVSGFSLSSYGVSWVRQAPGNGLEYIGFIGSGGFA 298
YYASWAKSRSTITRNTNLNTVTLKMTSLTAADTATYFCARDDVGGGKSLDIWGPGT VVTVSSASTKGPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGV HTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKP CPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFV NNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERT ISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNY KNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO HC EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEYVGFIGSGGF 299 9H5- AYYASWAKSRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDVGGGKSLDIWGQG
TLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG H14
VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDK hIgG1
THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWY N297G
VDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
K HC EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEYVGFIGSGGF 300 9H5- AYYASWAKSRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDVGGGKSLDIWGQG
TLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG H14
VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPP hIgG4
CPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDG S228P
VEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT
TPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK HC 9F2 QSVKESEGGLFKPTDNLTLTCTVSGFSLSSYGVSWVRQAPGNGLEYIGFIGSGGSP 301
YYASWAKSRSTITRNTNLNTVTLKMTSLTAADTATYFCARDDVGGGKSLDIWGPGT LVTVSSASTKGPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGV HTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKP CPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFV NNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERT ISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNY
KNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK HC QSVKESEGGLFKPTDNLTLTCTVSGFSLSSYGVSWVRQAPGNGLEYIGFIGSGGFA 302 10C8 YYASWAKSRSTITRNTNLNTVTLKMTSLTAADTATYFCARDDVGGGRSLDIWGPGT
VVTVSSASTKGPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGV HTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKP CPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFV NNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERT ISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNY KNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO HC 8F5 QSVKESEGGLFKPTDTLTLTCTVSGFSLSSYPISWVRQAPGNGLEWIGYITSEYGV 303
AYYATWAESRSTITRNTNLNTVTLKMTSLTAADTATYFCVRENPTYGYAYDAWGPG TLVTVSSASTKGPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSG VHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIK PCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWF VNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIER TISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELN YKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPG
K HC 3- QSVKESEGGLFKPTDTLTLTCTVSGFSLNDYGVSWVRQAPGNGLEWIGAIGSSGVA 304 3F5 WYANWAKGRSTITRNTNLNTVTLKMASLTAADTATYFCARDRDYGYRADDATSGMD
LWGPGTLVTVSSASTKGPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSG SLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPR GPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDV QISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLP APIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNG KTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSF
SRTPGK HC 3- EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWVGAIGSSGV 305 3F5- AWYANFAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS H19
GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVE hIgG1
PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPE N297G
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKS
LSLSPGK HC 3- EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWVGAIGSSGV 306 3F5- AWYANFAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS H19
GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVE hIgG4
SKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQF S228P
NWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSS IEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP ENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSL SLGK SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO HC 9E3 QEQLEESGGGLVKPGASLTLTCTVSGFSLTNNYVNFVMCWVRQAPGKGLEWIASID 307
PGDDSTDYASWATGRFTISKASSTTVTLQVTSLTAADTATYFCARGDAGTSYSFNF WGPGTLVTVSSASTKGPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGS LSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRG PTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQ ISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPA PIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGK TELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFS
RTPGK HC QEQLVESGGGLVKPGASLTLTCTASGFSLTDNYVMSWVRQAPGKGLEWIACIDPGD 308 10D10 DSTYYASWATGRFTISRASSTTVTLQVTSLTAADTATYFCARGDAAASYSFNFWGP
GTLVTVSSASTKGPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSS GVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTI KPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISW FVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIE RTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTEL NYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTP
GK HC QSLEESGGGLVKPGGTLTLTCKASGIDFNGGGIYWVRQAPGKGLEWIASIYPDHGS 309 12B3 VDYANWVNGRFTISLDNAQNTVFLQLTSLTVADTATYFCARESGGSYYDLWGPGTL
VTVSSASTKGPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVH TFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPC PPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVN NVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTI SKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYK
NTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK HC QSLEESGGGLVKPGGTLTLTCTASGFDFNGGGIYWVRQAPGKGLEWIAYIYPDHGS 310 1D10 ADYATWVNGRFTISLDNAQNTVFLQMTSLTVADTATYFCARETGGSWYDLWGPGTL
VTVSSASTKGPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVH TFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPC PPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVN NVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTI SKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYK
NTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK Regiões constantes huKapp RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESV 311 a TEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO hIgG1 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV 312 N297 LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPC
PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVH NAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKG QPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV
LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK hIgG1 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV 313 G297 LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPC
PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVH NAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKG QPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV
LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK hIgG4 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV 314 S228 LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAP
EFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS
DGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK hIgG4 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV 315 P228 LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAP
EFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS
DGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK Sequências Diversas Região LRPNQL 316 1 do Epítopo termodi nâmico de KLK5 Região QGVKSI 317 2 do Epítopo termodi nâmico de KLK5
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO Região KRCEDAYPRQIDDT 318 3 do Epítopo termodi nâmico de KLK5 Região DYPCARPNRPGVY 319 4 do Epítopo termodi nâmico de KLK5 Hu IESAKQTKQMVDCSHYKKLPPGQQRFCHREYDPICGSDGKTYKNDCFFCSK 320 SPINK9 VKKTDGTLKFVHFGKCGNSVTDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT (I20- LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYR C86. VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP C22S.H PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS 48R. FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK M49E); Fc de IgG1 humana E356.M 358 VL AIRMTQSPSSFSASTGDRVTITCQASESISNELSWYQQKPGKAPKLLIYYASTLAS 321 hu10C5- GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCAQGFGSSGVENVFGGGTEVVVK L6 Fab de EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVTWVRQAPGKGLEWIGYITSNYG 322
HC VSYYASWAKSRSTISRDTSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARENPDYGYAYDAWGQ
GTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS 10C5
GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCD humaniz ado
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO Fab de AIRMTQSPSSFSASTGDRVTITCQASESISNELSWYQQKPGKAPKLLIYYASTLAS 323
LC GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCAQGFGSSGVENVFGGGTKVEIKRT
VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE 10C5
QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC humaniz ado Fab de EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEYVGFIGSGGF 324 HC 9H5 AYYASWAKSRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDVGGGKSLDIWGQG
TLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG humaniz
VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCD ado Fab de DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYSASTLAS 325 LC 9H5 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQDYTSSNVDNTFGGGTKVEIKRT
VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE humaniz
QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC ado Fab de EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLNDYGVSWVRQAPGKGLEWVGAIGSSGV 326 HC 3- AWYANFAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDYGYRADDATSGM
DLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS 3F5
GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNT humaniz
KVDKKVEPKSCD ado Fab de AIRMTQSPSSFSASTGDRVTITCQASESIGNALAWYQQKPGKAPKLLIYDASDLAS 327 LC 3- GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGDSHNNVDNIFGGGTKVEIKRT
VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE 3F5
QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC humaniz ado Experim IINGSDCDMHTQPWQAALLLRPNQLYCGAVLVHPQWLLTAAHCRKKVFRVRLGHYS 328 entos de LSPVYESGQQMFQGVKSIPHPGYSHPGHSNDLMLIKLNRRIRPTKDVRPINVSSHC
PSAGTKCLVSGWGTTKSPQVHFPKVLQCLNISVLSQKRCEDAYPRQIDDTMFCAGD estrutur
KAGRDSCQGDSGGPVVCNGSLQGLVSWGDYPCARPNRPGVYTNLCKFTKWIQETIQ a
ANS cristalin a de KLK5 humano Sequências Estruturais
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO FR-L1 AX1RMTQSPSSFSASTGDRVTITC 329 10C5 em que X1 é Y ou I (consen so) FR-L2 WYQQKPGKX1PKLLIY 330 10C5 em que X1 é P ou A (consen so) FR-L3 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISX1LQX2EDFATYYC 331 10C5 em que X1 é C ou S, X2 é S ou P (consen so) FR-L4 FGGGTX1VX2X3K 332 10C5 em que X1 é E ou K, X2 é E ou V, X3 é I ou V (consen so) FR-H1 EX1QLVESGGGLVQPGGSLRLSCAX2SGFSLS 333 10C5 em que X1 é V ou Q, X2 é V ou A (consen so) FR-H2 WVRQAPGKGLEX1X2X3 334 10C5 em que X1 é W ou Y, X2 é I ou V, X3 é G ou S (consen so) FR-H3 RX1TISRX2X3X4X5NTX6YLQMGSLRAEDMAVYX7CAR 335 10C5 em que X1 é S ou F, X2 é D ou N, X3 é T, L ou N, X4 é S ou N, X5 é K, T ou L, X6 é V ou L, X7 é F ou Y (consen so) FR-H4 WGX1GTTVTVSS 336 10C5 em que X1 é P ou Q (consen so) FR-L1 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC 337 9H5
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO FR-L2 WYQQKPGKX1PKLLIX2 338 9H5 em que X1 é R ou A, X2 é F ou Y (consen so) FR-L3 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC 339 9H5 FR-L4 WVRQAPGKGLEX1X2X3 340 9H5 em que X3 é E ou K, X4 é E ou V, X5 é V ou I (consen so) FR-H1 EX1QLVESGGGLIQPGGSLRLSCAX2SGFSLS 341 9H5 em que X1 é V ou Q, X2 é V ou A (consen so) FR-H2 WVRQAPGKGLEX1X2X3 342 9H5 em que X1 é Y ou W, X2 é I ou V, X3 é G ou S (consen so) FR-H3 RX1TISRX2X3X4X5NTX6YLQMNSLRAEDTAVYX7CAR 343 9H5 em que X1 é S ou F, X2 é D ou N, X3 é T ou N, X4 é S ou N, X5 (consen é K ou L, X6 é V ou L, X7 é F ou Y so) FR-H4 WGX1GTLVTVSS 344 9H5 em que X1 é P ou Q (consen so) FR-L1 AX1RMTQSPSSFSASTGDRVTITC 345 3-3F5 em que X1 é Y ou I (consen so) FR-L2 WYQQKPGKX1PKLLIY 346 3-3F5 em que X1 é P ou A (consen so)
SEQ NOME SEQUÊNCIA ID
NO FR-L3 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISX1LQX2EDFATYYC 347 3-3F5 em que X1 é C ou S, X2 é S ou P (consen so) FR-L4 FGGGTX1VX2X3K 348 3-3F5 em que X1 é E ou K, X2 é E ou V, X3 é V ou I (consen so) FR-H1 EX1QLX2ESGGGLVQPGGSLRLSCAX3SGFSLN 349 3-3F5 em que X1 é V ou Q, X2 é V ou L, X3 é V ou A (consen so) FR-H2 WVRQAPGKGLEWX1X2 350 3-3F5 em que X1 é I ou V, X2 é G ou S (consen so) FR-H3 RX1TISRX2X3X4X5NTX6YLQMNSLRAEDTAVYX7CAR 351 3-3F5 em que X1 é S ou F, X2 é H, N ou D, X3 é T ou N, X4 é S ou N, (consen X5 é K ou L, X6 é V ou L, X7 é F ou Y so) FR-H4 WGX1GTLVTVSS 352 3-3F5 em que X1 é P ou R (consen so) Experim NNDVSCDHPSNTVPSGSNQDLGAGAGEDARSDDSSSRIINGSDCDMHTQPWQAALL 353 entos LRPNQLYCGAVLVHPQWLLTAAHCRKKVFRVRLGHYSLSPVYESGQQMFQGVKSIP
HPGYSHPGHSNDLMLIKLNRRIRPTKDVRPINVSSHCPSAGTKCLVSGWGTTKSPQ humano
VHFPKVLQCLNISVLSQKRCEDAYPRQIDDTMFCAGDKAGRDSCQGDSGGPVVCNG s KLK5
SLQGLVSWGDYPCARPNRPGVYTNLCKFTKWIQETIQANSGNSDYKDDDDK HDX

Claims (43)

REIVINDICAÇÕES
1. ANTICORPO ISOLADO QUE SE LIGA A KLK5, caracterizado pelo anticorpo compreender: (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:28; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:45 e SEQ ID NO:54; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:69 e SEQ ID NO:72; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:96; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:109; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:127.
2. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo anticorpo compreender: (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:22 e SEQ ID NO:24; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:52 e SEQ ID NO:53; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:69 e SEQ ID NO:72; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:87 e SEQ ID NO:91; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:99, SEQ ID NO:101 e SEQ ID NO:105; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:119 e SEQ ID NO:122.
3. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizado pelo anticorpo compreender: (i) (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:17; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:82; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:101; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:115; (ii) (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:87; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:105; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:119; ou (iii) (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:24; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:72; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:91; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:99; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:122.
4. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo anticorpo compreender (a) uma sequência de VH da SEQ ID NO:202 e uma sequência de VL da SEQ ID
NO:140; (b) uma sequência de VH da SEQ ID NO:225 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:151; ou (c) uma sequência de VH da SEQ ID NO:257 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:162.
5. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo anticorpo compreender (a) uma sequência de VH da SEQ ID NO:201 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:139; (b) uma sequência de VH da SEQ ID NO:221 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:149; ou (c) uma sequência de VH da SEQ ID NO:248 ou SEQ ID NO:254, e uma sequência de VL da SEQ ID NO:160.
6. ANTICORPO ISOLADO QUE SE LIGA A KLK5, caracterizado pelo anticorpo compreender (a) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:201 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:139; (b) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:221 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:149; ou (c) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:248 ou SEQ ID NO:254, e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:160.
7. ANTICORPO ISOLADO QUE SE LIGA A KLK5, caracterizado pelo anticorpo compreender: (i) (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:14; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:32; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:79; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:99; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:112;
(ii) (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:15; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:80; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:100; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:113;
(iii) (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:16; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:34; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:64; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:81; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:99; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:114;
(iv) (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:18; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:39; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:66; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:83; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:102; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:116;
(v) (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:19; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:40; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:67; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:84; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:103; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:117;
(vi) (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:20; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:68; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:85; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:103; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:118;
(vii) (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:21; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:41; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:86; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:104; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:118;
(viii) (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:46; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:88; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:105; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:120;
(ix) (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:42; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:70; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:89; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:105; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118; ou (x) (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:23; (b) HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:47; (c) HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:71; (d) HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:90; (e) HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:106; e (f) HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121.
8. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo anticorpo compreender uma sequência de VH selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:170, SEQ ID NO:171, SEQ ID NO:172, SEQ ID NO:203, SEQ ID NO:204, SEQ ID NO:205, SEQ ID NO:206, SEQ ID NO:226, SEQ ID NO:227 e SEQ ID NO:228, e uma sequência de VL selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:131, SEQ ID NO:132, SEQ ID NO:133, SEQ ID NO:141, SEQ ID NO:142, SEQ ID NO:143, SEQ ID NO:144, SEQ ID NO:152, SEQ ID NO:153 e SEQ ID NO:154.
9. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 8, caracterizado pelo anticorpo compreender (a) uma sequência de VH da SEQ ID NO:170 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:131; (b) uma sequência de VH da SEQ ID NO:171 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:132; (c) uma sequência de VH da SEQ ID NO:172 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:133; (d) uma sequência de VH da SEQ ID NO:203 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:141; (e) uma sequência de VH da SEQ ID NO:204 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:142; (f) uma sequência de VH da SEQ ID NO:205 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:143; (g) uma sequência de VH da SEQ ID NO:206 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:144; (h) uma sequência de VH da SEQ ID NO:226 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:152; (i) uma sequência de VH da SEQ ID NO:227 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:153; ou (j) uma sequência de VH da SEQ ID NO:228 e uma sequência de VL da SEQ ID NO:154.
10. ANTICORPO ISOLADO QUE SE LIGA A KLK5, caracterizado pelo anticorpo compreender (a) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:170 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:131; (b) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:171 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:132; (c) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:172 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:133; (d) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:203 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:141; (e) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:204 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:142; (f) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:205 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:143; (g) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:206 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:144; (h) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:226 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:152; (i) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:227 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:153; ou (j) uma sequência de VH tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:228 e uma sequência de VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:154.
11. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo anticorpo ser IgG1 ou IgG4.
12. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo anticorpo inibir a atividade biológica de KLK5 em pelo menos 50%, conforme medido por um ou mais métodos selecionados a partir do grupo que consiste em um ensaio de atividade direta com KLK5 recombinante, um ensaio acoplado de peptídeo fluorescente com pró-KLK1, um ensaio acoplado de peptídeo fluorescente com pró-KLK7, um ensaio de LC/MS com pró-KLK1, um ensaio de LC/MS com pró-KLK7 e um ensaio de Ki(app).
13. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pela atividade biológica ser a atividade da serina protease de KLK5.
14. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo anticorpo ser um anticorpo monoclonal.
15. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo anticorpo ser um anticorpo humano, humanizado ou quimérico.
16. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo anticorpo ser um fragmento de anticorpo que se liga a KLK5.
17. ANTICORPO QUE FORMA UM EPÍTOPO TERMODINÂMICO QUANDO LIGADO A KLK5, caracterizado por compreender uma ou mais das sequências selecionadas a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:316, SEQ ID NO:317, SEQ ID NO:318 e SEQ ID NO:319, conforme medido por espectrometria de massa de troca de hidrogênio.
18. ANTICORPO, caracterizado por competir pela ligação com o anticorpo conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 16.
19. ANTICORPO, caracterizado por se ligar ao mesmo epítopo como o anticorpo conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 16.
20. ÁCIDO NUCLEICO ISOLADO, caracterizado por codificar o anticorpo conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 16.
21. CÉLULA HOSPEDEIRA, caracterizada por compreender o ácido nucleico conforme definido na reivindicação 20.
22. MÉTODO PARA PRODUZIR UM ANTICORPO, caracterizado por compreender cultivar a célula hospedeira, conforme definida na reivindicação 21, de modo que o anticorpo seja produzido.
23. IMUNOCONJUGADO, caracterizado por compreender o anticorpo conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 16.
24. FORMULAÇÃO FARMACÊUTICA, caracterizada por compreender o anticorpo conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, e um transportador farmaceuticamente aceitável.
25. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado por ter uso como um medicamento.
26. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado por ter uso no tratamento de uma doença selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase, esofagite eosinofílica e rosácea.
27. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pela asma ser selecionada a partir do grupo que consiste em asma atópica, asma alérgica, asma não alérgica, asma induzida por exercícios, asma exacerbada/sensível à aspirina, asma leve, asma moderada a grave, asma virgem de corticosteroide, asma crônica, asma resistente a corticosteroides, asma refratária a corticosteroides, asma recém-diagnosticada e não tratada, asma devido ao tabagismo, asma não controlada por corticosteroides, asma induzida por linfócito T auxiliar do tipo 2 (Th2), tipo 2 (Th2) alto ou tipo 2 (T2), asma eosinofílica, asma com alto teor de periostina, asma com alto teor de eosinófilos, asma com baixo teor de Th2 ou asma não induzida por Th2, asma com baixo teor de periostina e asma com baixo teor de eosinófilos.
28. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pela asma ser asma com baixo teor de TH2.
29. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado por ser para uso na inibição da atividade biológica de KLK5.
30. USO DO ANTICORPO, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado por ser para fabricação de um medicamento.
31. USO, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo medicamento ser para tratar uma doença selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase, esofagite eosinofílica e rosácea.
32. USO, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pela asma ser selecionada a partir do grupo que consiste em asma atópica, asma alérgica, asma não alérgica, asma induzida por exercícios, asma exacerbada/sensível à aspirina, asma leve, asma moderada a grave, asma virgem de corticosteroide, asma crônica, asma resistente a corticosteroides, asma refratária a corticosteroides, asma recém-diagnosticada e não tratada, asma devido ao tabagismo, asma não controlada por corticosteroides, asma induzida por linfócito T auxiliar do tipo 2 (Th2), tipo 2 (Th2) alto ou tipo 2 (T2), asma eosinofílica, asma com alto teor de periostina, asma com alto teor de eosinófilos, asma com baixo teor de Th2 ou asma não induzida por Th2, asma com baixo teor de periostina, e asma com baixo teor de eosinófilos.
33. USO, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pela asma ser asma com baixo teor de TH2.
34. USO DO ANTICORPO, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado por ser para fabricação de um medicamento para inibir a atividade biológica de KLK5.
35. MÉTODO PARA TRATAR UM PACIENTE TENDO UMA DOENÇA, caracterizado pela doença ser selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de Netherton, asma, dermatite atópica, psoríase, esofagite eosinofílica e rosácea, compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do anticorpo, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 16.
36. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pela asma ser selecionada a partir do grupo que consiste em asma atópica, asma alérgica, asma não alérgica, asma induzida por exercícios, asma exacerbada/sensível à aspirina, asma leve, asma moderada a grave, asma virgem de corticosteroide, asma crônica, asma resistente a corticosteroides, asma refratária a corticosteroides, asma recém-diagnosticada e não tratada, asma devido ao tabagismo, asma não controlada por corticosteroides, asma induzida por linfócito T auxiliar do tipo 2 (Th2), tipo 2 (Th2) alto ou tipo 2 (T2), asma eosinofílica, asma com alto teor de periostina, asma com alto teor de eosinófilos, asma com baixo teor de Th2 ou asma não induzida por Th2, asma com baixo teor de periostina e asma com baixo teor de eosinófilos.
37. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pela asma ser asma com baixo teor de TH2.
38. MÉTODO PARA INIBIR A ATIVIDADE BIOLÓGICA DE KLK5 EM UM INDIVÍDUO, caracterizado por compreender administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do anticorpo, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, para inibir a atividade biológica de KLK5.
39. ANTICORPO QUE ESPECIFICAMENTE SE LIGA A KLK5 HUMANO, caracterizado pelo anticorpo se ligar a um epítopo em KLK5 humano compreendendo um ou mais resíduos de aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em Pro130, Ser131, Ala132, Gly133, Val162, Leu163, Ser164, Gln165, Lys166, Arg167, Glu169, Asp170, Ala171, Tyr172, Pro173, Arg174, Gln174A, Ile176, Asp177, Asp178, Gly184, Asp185, Lys186, Ala186A, Arg188, Asn223, Arg224, Pro225 e Lys233, de acordo com a numeração de protease padrão.
40. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo anticorpo se ligar a um epítopo em KLK5 humano compreendendo um ou mais resíduos de aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em Pro130, Ser131, Ala132, Val162, Leu163, Ser164, Gln165, Lys166, Arg167, Glu169, Asp170, Ala171, Tyr172, Pro173, Arg174, Gln174A, Ile176, Asp177, Asp178, Arg224 e Lys233, de acordo com a numeração de protease padrão.
41. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo anticorpo se ligar a um epítopo em KLK5 humano compreendendo um ou mais resíduos de aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em Pro130, Ser131, Ala132, Gly133, Val162, Leu163, Ser164, Gln165, Lys166, Arg167, Glu169, Asp170, Ala171, Tyr172, Pro173, Arg174, Gln174A, Ile176, Asp177 e Lys233, de acordo com a numeração de protease padrão.
42. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo anticorpo se ligar a um epítopo em KLK5 humano compreendendo um ou mais resíduos de aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em Ser131, Ala132, Gly133, Leu163, Ser164, Gln165, Lys166, Arg167, Glu169, Asp170, Ala171, Pro173, Arg174, Gly184, Asp185, Lys186, Ala186A, Arg188, Asn223, Arg224 e Pro225, de acordo com a numeração de protease padrão.
43. ANTICORPO, que quando ligado ao KLK5 humano resulta em uma mudança conformacional do KLK5 humano, caracterizado pela mudança conformacional resultar, de forma alostérica, na interrupção do sítio de ligação do substrato e/ou do sítio ativo do KLK5 humano.
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