TW201900210A

TW201900210A - 安定之抗體配製物

Info

Publication number: TW201900210A
Application number: TW107111582A
Authority: TW
Inventors: 青燕胡; 定江劉
Original assignee: 美商再生元醫藥公司
Priority date: 2017-04-06
Filing date: 2018-04-02
Publication date: 2019-01-01
Also published as: EP3606504A1; US20190040137A1; EP3606504B1; EA201992377A1; KR102667484B1; CA3059087A1; MX2019011207A; CN110709062B; JP2020516608A; TWI795396B; US20230183348A1; RS64680B1; SG10202111008QA; AR111455A1; BR112019020246A2; CO2019011021A2; EP4249512A2; JP7229171B2; PT3606504T; US11603407B2

Abstract

本發明係提供包括專一與人類預定死亡-1蛋白(PD-1)結合之人類抗體的安定醫藥配製物。在特定的實施例中，此等配製物除了抗-PD-1抗體之外係含有緩衝劑、胺基酸、非離子界面活性和糖類。本發明之醫藥配製物在壓力和儲存後展現實質程度的抗體安定性。

Description

安定之抗體配製物

本發明係關於治療性抗體配製物之領域。更特言之，本發明係關於包括專一與人類預定死亡(programmed death)-1(PD-1)蛋白結合之人類抗體的醫藥配製物領域。

治療性大分子(例如，抗體)不僅必須以適合投予病患的方式配製，還需在儲存和後續使用期間維持其安定性。例如，液體溶液之治療抗體除非經適當的配製，否則易於降解、聚集或不欲的化學修飾。液體配製物之抗體的安定性不僅係依配製物中所用的賦形劑種類而定，亦須依賦形劑彼此間相對的量和比例而定。再者，在製備一液體抗體配製物時，除了安定性之外必須有其他的考量。此等另外的考量包括溶液的黏度及一特定配製物可容納的抗體濃度，以及調配物的視覺品質或外觀。因此，在調配一治療抗體時，必須審慎讓配製物保持安定、含有適當濃度抗體及具有適合的黏度以及其他能使配製物方便投予病患的性質。

人類預定死亡蛋白-1(PD-1)之抗體為一需要適當配製之治療上相關大分子的實例。抗-PD-1抗體在臨床上可用於治療癌症(例如肺癌、黑色素瘤和腦癌)及病毒感染和自體免疫疾病。例示的抗-PD-1抗體，除了其他以外，係描述於美國專利/公開案號7101550、7595048、7488802、7563869、8008449、8168757、8216996、20110008369、20130017199、20130022595，及在WO2006121168、WO2009114335、WO2012145493、WO2013014668、WO2009101611、EP2262837和EP2504028中。US20140234296描述了凍乾的抗-PD-1抗體配製物。

雖然抗-PD-1抗體已為所知，但對於包括抗-PD-1抗體且夠安定及適合投予病患之新穎的醫藥配製物在本項技術中仍有需求。

本發明係藉由提供包括專一與人類預定死亡-1蛋白(PD-1)結合抗體之安定醫藥配製物來滿足前述需求。

在一方面，係提供低黏度的安定液體醫藥配製物，其包括：(i)專一與人類預定死亡蛋白(PD-1)結合之人類抗體；(ii)緩衝劑；(iii)有機共溶劑；(iv)安定劑；及(v)黏度調節劑。

在各種實施例中，此抗體係以從約5±0.75mg/mL至約250±37.5mg/mL的濃度來提供。在一實施例中，此抗體係以12.5mg/mL±1.85mg/mL，或約12.5mg/mL的濃度來提供。在一實施例中，此抗體係以25mg/mL±3.75mg/mL，或約25mg/mL的濃度來提供。在另外的實施例中，此抗體係以50mg/mL±7.5mg/mL，或約50mg/mL的濃度來提供。在另外的實施例中，此抗體係以100mg/mL±15mg/mL，或約100mg/mL的濃度來提供。在一實施例中，此抗體係以150mg/mL±22.5mg/mL，或約150mg/mL的濃度來提供。在另外的實施例中，此抗體係以175mg/mL±26.25mg/mL，或約175mg/mL的濃度來提供。在另外的實施例中，此抗體係以200mg/mL±30mg/mL，或約200mg/mL的濃度來提供。

在特定的實施例中，此配製物係包括美國專利公開案第20150203579號中所揭示的任一抗-PD-1抗體，該專利係以全文引用的方式併入本文中。在特定的實施例中，此抗-PD-1抗體係包括(a)一包含重鏈互補決定區1、2和3(HCDR1-HCDR2-HCDR3)之重鏈可變區(HCVR)，而該互補決定區各自係分別包括SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5序列，及(b)一包含輕鏈互補決定區1、2和3(LCDR1-LCDR2-LCDR3)之輕鏈可變區(LCVR)，而該互補決定區各自係分別包括SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8序列。在一實施例中，此抗體係包括一包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的HCVR，及一包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的LCVR。在一實施例中，此抗體係包括一包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列的重鏈，及一包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列的輕鏈。在一實施例中，此抗體係包括一包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列的重鏈及一包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列的輕鏈。在一實施例中，此抗體係包括一包含由下列組成之群的胺基酸序列中選出的重鏈：SEQ ID NO：9和11，及一包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列的輕鏈。在一實施例中，此抗體係包括與SEQ ID NO：1具有90%序列相同性的HCVR。在一實施例中，此抗體係包括與SEQ ID NO：2具有90%序列相同性的LCVR。在一實施例中，此抗體係包括與SEQ ID NO：1具有90%序列相同性的HCVR及與SEQ ID NO：2具有90%序列相同性的LCVR。

在一實施例中，此液體配製物的pH為pH 6.0±0.5、pH 6.0±0.4、pH 6.0±0.3、pH 6.0±0.2、pH 6.0±0.1、pH 6.0±0.05、pH 6.0±0.01或pH 6.0。在一實施例中，此液體配製物的pH為約pH 6.0±0.3。

在一實施例中，緩衝劑係包括組胺酸。在特定的實施例中，此組胺酸緩衝劑的濃度係從5mM±1mM至50mM±10mM，較佳地從5mM±1mM至25mM±5mM。在一實施例中，此組胺酸緩衝劑的濃度為10mM±2mM或約10mM。在一實施例中，此組胺酸緩衝劑的濃度為20mM±4mM或約20mM。在一實施例中，此組胺酸緩衝劑的濃度為40nM±8mM或約40nM。在特定的實施例中，此組胺酸緩衝劑係包括L-組胺酸和L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物。在一實施例中，L-組胺酸的濃度係從2mM±0.4mM至25mM±5mM，較佳地從4mM±0.8mM至20mM±4mM。在一實施例中，L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物的濃度係從2mM±0.4mM至25mM±5mM，較佳地從4mM±0.8mM至20mM±4mM。在一實施例中，此緩衝劑係包括濃度4.8mM±0.96mM之L-組胺酸及濃度5.2mM±1.04mM之L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物。在一實施例中，此緩衝劑係包括濃度10mM±2mM之組胺酸，其中該組胺酸係包括濃度4.8mM±0.96mM之L-組胺酸及濃度5.2mM±1.04mM之L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物。

在特定的實施例中，此有機共溶劑為一含有聚氧乙烯部分之非離子共聚物。在一實施例中，此有機溶劑為一界面活性劑。在某些實施例中，此有機共溶劑為任何一或多種聚山梨醇酯、泊洛沙姆(poloxamer)188 和聚乙二醇3350。在一實施例中，此有機共溶劑為聚山梨醇酯80。在一實施例中，此有機共溶劑為聚山梨醇酯20。

在一實施例中，此有機共溶劑濃度係從約0.01%±0.005%至約1%±0.5%「重量體積比」或「w/v」，其中，例如0.1g/ml=10%而0.01g/ml=1%。在特定的實施例中，此有機溶劑為濃度從0.05%±0.025%至0.5%±0.25%(w/v)之聚山梨醇酯。在一實施例中，此有機共溶劑為濃度0.2%±0.1%w/v，或約0.2%之聚山梨醇酯80。在另外的實施例中，此有機共溶劑為濃度0.1%±0.05%w/v或約0.1%w/v之聚山梨醇酯80。在一實施例中，此有機共溶劑為濃度0.2%±0.1%w/v，或約0.2%之聚山梨醇酯20。在另外的實施例中，此有機共溶劑為濃度0.1%±0.05%w/v或約0.1%w/v之聚山梨醇酯20。

在特定的實施例中，此安定劑為糖類。在一實施例中，此糖類為蔗糖。在各種實施例中，此安定劑的濃度係從1%±0.2%w/v至20%±4%w/v，從5%±1%w/v至15%±3%w/v，或從1%±0.2%至10%±2%w/v。在一實施例中，此安定為濃度5%±1%w/v或約5%w/v之蔗糖。在另外的實施例中，此安定劑為濃度9%±1.8%w/v或約9%w/v之蔗糖。在另外的實施例中，此安定劑為濃度10%±2%w/v或約10%w/v之蔗糖。

在一實施例中，此黏度調節劑為胺基酸。在一實施例中，此黏度調節劑為L-脯胺酸。在特定的實施例中，此黏度調節劑的濃度係從1%±0.2%至5%±1%w/v。在一實施例中，此黏度調節劑為濃度1.5%±0.3%或約1.5%之脯胺酸。在一實施例中，此黏度調節劑為濃度3%±0.6%，或約3%之脯胺酸。

在特定的實施例中，此液體醫藥配製物的黏度在25℃時係低於或等約15cPoise±10%。在特定的實施例中，25℃時的黏度係介於1.0cPoise±10%至20cPoise±10%之間。在特定的實施例中，此液體醫藥配製物的黏度為15cPoise。在特定的實施例中，此液體醫藥配製物的黏度係20cPoise。在特定的實施例中，此液體醫藥配製物的黏度係10cPoise。在特定的實施例中，25℃時的黏度為5cPoise±10%、6.0cPoise±10%、7.0cPoise±10%、7.1cPoise±10%、7.2cPoise±10%、7.9cPoise±10%、8.3 cPoise±10%、9.0cPoise±10%、9.6cPoise±10%、10.0cPoise±10%、10.6cPoise±10%、11.4cPoise±10%、11.6cPoise±10%、11.8cPoise±10%、12.0cPoise±10%,13.0cPoise±10%、14.0cPoise±10%、15.0cPoise±10%或16cPoise±10%。

在一方面，係提供低黏度的安定液體醫藥配製物，其包括：(i)從5±0.75mg/ml至250±37.5mg/ml之專一與人類PD-1結合的人類抗體；(ii)從0mM至40±8mM組胺酸緩衝劑；(iii)從0%至0.5%±0.25%(w/v)聚山梨醇酯80；(iv)從0%至15%±3%(w/v)蔗糖；及(v)從0至5%±1%脯胺酸，pH從約5.3至約6.7；其中該抗-PD-1抗體係包括一重鏈可變區(HCVR)及一輕鏈可變區(LCVR)使得該HCVR/LCVR組合係包括重鏈和輕鏈互補決定區(HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3)，而該互補決定區係分別包括SEQ ID NO：3-4-5/SEQ ID NO：6-7-8之胺基酸序列。在一實施例中，此抗-PD-1抗體係包括一重鏈可變區(HCVR)和輕鏈可變區(LCVR)，其分別係包括SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2之胺基酸序列。在特定的實施例中，此抗-PD1抗體係包括由下列組成之群中選出的Fc區：人類IgG1、IgG2、IgG3和IgG4同型。在一實施例中，此抗體係包括一人類IgG4同型。在一實施例中，此抗體係包括一包含由SEQ ID NO：9和11組成之群中選出的胺基酸序列之重鏈；及一包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列的輕鏈。在一實施例中，此抗體係包括一包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列的重鏈，及一包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列的輕鏈。在一實施例中，此抗體係包括一包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列的重鏈及一包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列的輕鏈。在一實施例中，此抗體係具有143kDa±5kDa之分子量。

在特定的實施例中，係提供安定的低黏度液體醫藥配製物，其包括：(i)從5±0.75mg/ml至250±37.5mg/ml之專一與人類PD-1結合的人類抗體；(ii)從0mM至40±8mM組胺酸緩衝劑；(iii)從0%至0.5%±0.25%(w/v)聚山梨醇酯80；(iv)從0%至15%±3%(w/v)蔗糖；及(v)從0至5%±1%脯胺酸，pH從約5.3至約6.7；其中該抗-PD-1抗體係包括一HCVR和一LCVR，其中該HCVR與SEQ ID NO：1具有90%序列相同性，及/或該LCVR與SEQ ID NO：2具有90%序列相同性。在一實施例中，此抗-PD-1抗體係包括一包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的HCVR，及一包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的LCVR。在一實施例中，此抗-PD-1抗體係包括一包含由SEQ ID NO：9和11組成之群中選出的胺基酸序列之重鏈；及一包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列的輕鏈。

在特定的實施例中，係提供安定的低黏度液體醫藥配製物，其包括：(i)從5±0.75mg/ml至250±37.5mg/ml之專一與人類PD-1結合的人類抗體；(ii)從0mM至40±8mM組胺酸緩衝劑；(iii)從0%至0.5%±0.25%(w/v)聚山梨醇酯80；(iv)從0%至15%±3%(w/v)蔗糖；及(v)從0至5%±1%脯胺酸，pH從約5.3至約6.7；其中此抗-PD-1抗體係包括一HCVR和一LCVR，其中該HCVR係包括具有不超過5個胺基酸取代之SEQ ID NO：1胺基酸序列，及其中該LCVR係包括具有不超過2個胺基酸取代之SEQ ID NO：2胺基酸序列。在一實施例中，此抗-PD-1抗體係包括一包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的HCVR及一包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的LCVR。在一實施例中，此抗-PD-1抗體係包括一包含由SEQ ID NO：9和11組成之群中選出的胺基酸序列之重鏈；及一包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列的輕鏈。

在特定的實施例中，任何前術方面的配製物係具有由下列組成之群中選出的屬性：(i)此配製物，如文中所述，於25℃、5℃、-20℃、-30℃和-80℃長期儲存下為安定的；(ii)此配製物對於如文中所述攪動壓力為安定的；(iii)此配製物為低黏度(黏度低於20cPoise，較佳地低於15cPoise)；(iii)此配製物，如文中所述，即使具有高達±50%之配製物賦形劑的變動仍為安定的；(iv)此配製物，對生理狀態為等滲的；(v)此配製物對靜脈內遞送裝置及過程為安定且相容的；及(vi)此配製物長期儲存於玻璃小瓶或預充填注射器中為安定的。

在本方面的特定實施例中，係提供安定的液體配製物，其包括：(i)從5±0.75mg/ml至250±37.5mg/ml之專一與人類PD-1結合的人類抗體；(ii)從5mM±1mM至20±4mM組胺酸緩衝劑；(iii)從0.05%±0.025%至0.3%±0.15%(w/v)聚山梨醇酯80；(iv)從1%±0.2%至10%±2%(w/v)蔗糖；及(v)從1%±0.2%至5%±1%脯胺酸，pH約6.0，其中此抗體係包括一包含SEQ ID NO：1/2之胺基酸序列對的HCVR/LCVR。在一實施例中，此方面的安定液體配製物係具有低於15cP的黏度。在一實施例中，90%的抗體係具有143kDa±1kDa的分子量。在一實施例中，此配製物係具有低於20cP，低於15cP或低於10cP之黏度。在一實施例中，於5℃儲存12個月後，超果6%的抗體仍具有原態構形。在一實施例中，於-80℃、-30℃及/或-20℃儲存6個月後，至少97%或更多的抗體仍具有原態構形。

在本方面之一實施例中，此安定的液體配製物係包括(i)25±3.75mg/mL的抗-PD-1抗體；(ii)10±2mM組胺酸緩衝劑；(iii)0.2%±0.1%(w/v)聚山梨醇酯80；(iv)1.5%±0.3%(w/v脯胺酸；及(v)5%±1%(w/v)蔗糖，pH為6.0±0.3，其中此抗體係包括一包含SEQ ID NO：1/2之胺基酸序列對的HCVR/LCVR。

在本方面之一實施例中，此安定的液體配製物係包括(i)25±3.75mg/mL的抗-PD-1抗體；(ii)4.8mM±0.96mML-組胺酸；(iii)5.2mM±1.04mM L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物；(iv)0.2%±0.1%(w/v)聚山梨醇酯80；(v)1.5%±0.3%(w/v)脯胺酸；及(vi)5%±1%(w/v)蔗糖，pH為6.0±0.3，其中該抗體係包括一包含SEQ ID NO：1/2之胺基酸序列對的HCVR/LCVR。

在本方面之一實施例中，此安定的液體配製物係包括(i)50±7.5mg/mL的抗-PD-1抗體；(ii)10±2mM組胺酸緩衝劑；(iii)0.2%±0.1%(w/v)聚山梨醇酯80；(iv)1.5%±0.3%(w/v)脯胺酸；及(v)5%±1%(w/v)蔗糖，pH為6.0±0.3，其中該抗體係包括一包含SEQ ID NO：1/2之胺基酸序列對的HCVR/LCVR。在此特別配製物之一實施例中，黏度係低於10cPoise。

在本方面之一實施例中，此安定的液體配製物係包括(i)50±7.5mg/mL的抗-PD-1抗體；(ii)4.8mM±0.96mM L-組胺酸；(iii)5.2mM±1.04mM L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物；(iv)0.2%±0.1%(w/v)聚山梨醇酯80；(v)1.5%±0.3%(w/v)脯胺酸；及(vi)5%±1%(w/v)蔗糖，pH為6.0±0.3，其中該抗體係包括一包含SEQ ID NO：1/2之胺基酸序列對的HCVR/LCVR。

在一實施例中，此安定的液體配製物係包括(i)100±15mg/mL的抗-PD-1抗體；(ii)10±2mM組胺酸緩衝劑；(iii)0.2%±0.1%(w/v)(w/v)聚山梨醇酯80；(iv)1.5%±0.3%(w/v)脯胺酸；及(v)5%±1%(w/v)蔗糖，pH為6.0±0.3，其中該抗體係包括一包含SEQ ID NO：1/2之胺基酸序列對的HCVR/LCVR。在該特別配製物之一實施例中，黏度係低於10cPoise。

在本方面之一實施例中，此安定的液體配製物係包括(i)100±15mg/mL的抗-PD-1抗體；(ii)4.8mM±0.96mM L-組胺酸；(iii)5.2mM±1.04mM L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物；(iv)0.2%±0.1%(w/v)聚山梨醇酯80；(v)1.5%±0.3%(w/v)脯胺酸；及(vi)5%±1%(w/v)蔗糖，pH為6.0±0.3，其中該抗體係包括一包含SEQ ID NO：1/2之胺基酸序列對的HCVR/LCVR。

在一實施例中，此安定的液體配製物係包括(i)150±22.5mg/mL的抗-PD-1抗體；(ii)10±2mM組胺酸緩衝劑；(iii)0.2%±0.1%(w/v)聚山梨醇酯80；(iv)10%±2%(w/v)蔗糖；及(v)1.5%±0.3%(w/v)脯胺酸，pH為6.0±0.3，其中該抗體係包括一包含SEQ ID NO：1/2之胺基酸序列對的HCVR/LCVR。在此特別配製物之一實施例中，黏度係低於20cPoise，較佳地低於15cPoise。

在本方面之一實施例中，此安定的液體配製物係包括(i)150±22.5mg/mL的抗-PD-1抗體；(ii)4.8mM±0.96mM L-組胺酸；(iii)5.2mM±1.04mM L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物；(iv)0.2%±0.1%(w/v)聚山梨醇酯80；(v)1.5%±0.3%(w/v)脯胺酸；及(vi)5%±1%(w/v)蔗糖，pH為6.0±0.3，其中該抗體係包括一包含SEQ ID NO：1/2之胺基酸序列對的HCVR/LCVR。

在本方面之一實施例中，此安定的液體配製物係包括(i)175±26.25mg/mL的抗-PD-1抗體；(ii)10±2mM組胺酸緩衝劑；(iii)0.2%±0.1%(w/v)聚山梨醇酯80；(iv)5%±1%(w/v)蔗糖；及(v)1.5%±0.3%(w/v)脯胺酸，pH為6.0±0.3，其中該抗體係包括一包含SEQ ID NO：1/2之胺基酸序列對的HCVR/LCVR。在此特別配製物之一實施例中，黏度係低於20cPoise，較佳地低於15cPoise。

在本方面之一實施例中，此安定的液體配製物係包括(i)175±26.25mg/mL的抗-PD-1抗體；(ii)4.8mM±0.96mM L-組胺酸；(iii)5.2mM±1.04mM L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物；(iv)0.2%±0.1%(w/v)聚山梨醇酯80；(v)1.5%±0.3%(w/v)脯胺酸；及(vi)5%±1%(w/v)蔗糖，pH為6.0±0.3，其中該抗體係包括一包含SEQ ID NO：1/2之胺基酸序列對的HCVR/LCVR。

在本方面之一實施例中，此安定的液體配製物係包括(i)200±30.00mg/mL的抗-PD-1抗體；(ii)10±2mM組胺酸緩衝劑；(iii)0.2%±0.1%(w/v)聚山梨醇酯80；(iv)5%±1%(w/v)蔗糖；及(v)1.5%±0.3%(w/v)脯胺酸，pH為6.0±0.3，其中該抗體係包括一包含SEQ ID NO：1/2之胺基酸序列對的HCVR/LCVR。在此特別配製物之一實施例中，黏度係低於20cPoise。

在本方面之一實施例中，此安定的液體配製物係包括(i)200±30.00mg/mL的抗-PD-1抗體；(ii)4.8mM±0.96mM L-組胺酸；(iii)5.2mM±1.04mM L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物；(iv)0.2%±0.1%(w/v)聚山梨醇酯80；(v)1.5%±0.3%(w/v)脯胺酸；及(vi)5%±1%(w/v)蔗糖，pH為6.0±0.3，其中此抗體係包括一包含SEQ ID NO：1/2之胺基酸序列對的HCVR/LCVR。

在一實施例中，配製物於45°儲存28天後，90%的抗體仍為原態，且35%的抗體為主電荷形式。在一實施例中，配製物於25°儲存3個月後，>94%的抗體仍為原態，而44%的抗體為主電荷形式。在一實施例中，配製物於5°儲存12個月後，>96%的抗體仍為原態，而>50%的抗體為主電荷形式。在一實施例中，配製物於-20°儲存12個月後，>96%的抗體仍為原態而>40%的抗體為主電荷形式。在一實施例中，配製物於-30°儲存12個月後，>96%的抗體仍為本體，而>40%的抗體為主要帶電形式。在一實施例中，配製物於-80°儲存12個月後，>96%的抗體仍為原態，而>40%的抗體為主電荷形式。在一實施例中，大於96%的抗體於5°儲存12個月後仍為原態構形。在一實施例中，至少97%或更多的抗體在-80℃、-30℃及/或-20℃儲存6個月後，仍具有原態構形。

在一方面，本發明係提供安定的液體調配物，其包括：(i)至高100mg/mL的抗-PD-1抗體；(ii)從2mM±0.4mM至20mM±4mM組胺酸緩衝劑；(iii)至高20%±4%(w/v)蔗糖；及(iv)至高0.2%±0.1%w/v聚山梨醇酯，pH 6.0±0.3。在一實施例中，此安定的液體調配物係包括25mg/mL的抗-PD-1抗體。在一實施例中，此安定的液體調配物係包括50mg/mL的抗-PD-1抗體。在一實施例中，此安定的液體調配物係包括75mg/mL的抗-PD-1抗體。在一實施例中，此安定的液體調配物係包括10mM±2mM組胺酸緩衝劑。在一實施例中，此安定的液體調配物係包括5%蔗糖。在一實施例中，此安定的液體調配物係包括6%蔗糖。在一實施例中，此安定的液體調配物係包括9%蔗糖。在一實施例中，此安定的液體調配物係包括10%蔗糖。在一實施例中，此安定的液體調配物係包括0.1%聚山梨醇酯。在一實施例中，此聚山梨醇酯為聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯20。在一實施例中，此抗-PD-1抗體係包括SEQ ID NO：1/2之HCVR/LCVR。

在一方面，任何前述方面的安定液體醫藥配製物係以置於容器中來提供。在一實施例中，此容器為聚碳酸酯小瓶。在一實施例中，此容器為玻璃小瓶。在一實施例中此玻璃小瓶為附有塗覆氟碳化物之丁基橡膠塞蓋的第1類硼矽玻璃小瓶。在一實施例中，此容器為微量輸注裝置。在一實施例中，此容器為注射器。在一實施例中，此容器為預充填注射器。在一實施例中，此注射器係包括一塗覆氟碳化物的柱塞。在特定的實施例中，此注射器為1mL或2.25mL配置一27-G針、塗覆氟碳化物的丁基橡膠塞蓋及不含乳膠、無毒的橡膠外蓋，含有低約500ppb(十億分之一)鎢的長玻璃注射器。在一實施例中，此注射器為配置有27-G薄管注射針、塗覆FLUROTEC的4023/50橡膠塞蓋及FM 27橡膠外蓋之長玻璃注射器。在一實施例中，此注射器為1mL、2mL、3mL、5mL、或10mL裝有注射針之塑膠注射器。

在一方面，係提供一包括任一前述方面之醫藥組成物、容器及說明書的套組。在一實施例中，此容器為玻璃小瓶。在一實施例中，此容器為預充填的注射器。在一實施例中，此注射器為配置有27-G薄管注射針、塗覆FLUROTEC的4023/50橡膠塞蓋及FM 27橡膠外蓋之1mL或2.25mL長玻璃注射器。在一實施例中，此注射器為1mL、2mL、3mL、5mL或10mL裝有注射針之塑膠注射器。

在特定的實施例中，本發明係提供一包括安定的液體醫藥配製物之預充填注射器，而該安定的液體醫藥配製物係包括：(i)從5±0.75mg/ml至250±37.5mg/ml之專一與人類PD-1結合之人類抗體；(ii)從5mM±1mM至20±4mM組胺酸緩衝劑；(iii)從0.05%±0.025%至0.3%±0.15%(w/v)聚山梨醇酯80；(iv)從1%±0.2%至10%±2%(w/v)蔗糖；ru6(v)從1%±0.2%至5%±1%脯胺酸，pH為6.0±0.3，其中該抗體係包括一包含SEQ ID NO：1/2之胺基酸序列對的HCVR/LCVR；其中該配製物係具有由下列組成之群中選出的屬性：(i)於5°儲存12個月後，98%的抗體仍為原態形式；(ii)於5°儲存12個月後，53%的抗體為主電荷變體；(iii)於25°儲存6個月後，97%的抗體仍為原態形式；(iv)此調配物對攪動壓力為安定的，其中98%的抗體於預充填注射器中的攪動壓力下儲存12個月後仍為原態形式；(v)超過90%的抗體具有143kDa±1kDa之分子量；(vi)此醫藥配製物具有低於20cP，低於15cP或低於10cP之黏性；(vii)於5°儲存12個月後，大於96%的抗體仍具有原態構形；及(viii)於-80℃、-30℃及/或-20℃儲存6個月後，至少97%或更多的抗體仍具有原態構形。

在特定的實施例中，本發明係提供一包括安定的液體醫藥配製物之玻璃小瓶，而該安定的液體醫藥配製物係包括：(i)從5±0.75mg/ml至250±37.5mg/ml之專一與人類PD-1結合的人類抗體；(ii)從5mM±1mM至20±4mM組胺酸緩衝劑；(iii)從0.05%±0.025%至0.3%±0.15%(w/v)聚山梨醇酯80；(iv)從1%±0.2%至10%±2%(w/v)蔗糖；及(v)從1%±0.2%至5%±1%脯胺酸，pH為6.0±0.3，其中此抗體係包括一包含SEQ ID NO：1/2之胺基酸序列對的HCVR/LCVR；其中該配製物係具有由下列組成之群中選出的屬性：(i)在玻璃小瓶中對儲存和壓力為安定的；(ii)此配製物對於IV遞送裝置之使用為安定及相容的；(iii)此配製物對於以本項技術中已知的標準稀釋液之稀釋為化學上及物理上安定的(例如，0.9%氯化鈉或5%葡萄糖)；(iv)此配製物對於玻璃或聚合塑膠所製之IV袋為安定的(例如，聚乙烯氯化物、鄰苯二甲酸酯、聚稀烴或聚丙烯)；(v)此配製物與標準的輸注幫浦為相容的(例如蠕動幫浦、液體置換幫浦)；(vi)90%的抗體具有143kDa±1kDa之分子量；(vii)此醫藥配製物具有低於20cP，低於15cP或低於10cP之黏度；(viii)於5°儲存12個月後，大於96%的抗體仍具有原態構形；及(ix)於-80℃、-30℃及/或-20℃儲存6個月後，至少97%或更多的抗體仍具有原態構形。

從審視隨後的詳細說明，其他的實施例將變得顯而易見。

圖1係顯示pH對150mg/mL mAb1在45℃培養28天之安定性效應的表格。^aSE-UPLC和CEX-UPLC「起始物」結果為所有配製物之起始物的平均值。

圖2係顯示F1、F2和F3三種配製物之儲存安定性，其中F1係包括210mg/mL mAb1、10mM組胺酸和3%脯胺酸，pH 6.0；F2係包括210mg/mL mAb1、10mM組胺酸和3%蔗糖，pH 6.0；及F3係包括210mg/mL mAb1、10mM組胺酸和5%蔗糖，pH 6.0。儲存安定性係藉由於-80℃(A)、-30℃(B)和-20℃(C)儲存至高9個月後所產生的高分子量物之%來測量並以粒徑排阻層析(SEC)分析。

圖3係顯示F1、F2和F3三種配製物之儲存安定性，其中F1係包括150mg/mL mAb1、10mM組胺酸、9%蔗糖和0.2%聚山梨醇酯80(PS80)，pH 6.0；F2係包括175mg/mL mAb1、10mM組胺酸、3%脯胺酸和0.2%PS80，pH 6.0；及F3係包括175mg/mL mAb1、10mM組胺酸、5%蔗糖、1.5%脯胺酸和0.2%PS80，pH 6.0。儲存安定性係藉由-80℃(A)、-30℃(B)和-20℃(C)儲存至高6個月後所產生的高分子量物(HMW)之%來測量並以粒徑排阻層析(SEC)分析。

圖4係顯示添加賦形劑和黏度調節劑之150mg/mL mAb1的黏度。

圖5為顯示黏度調節劑對於175mg/mL mAb1於45℃培養 14天之安定性的效應。^apH,SE-UPLC和CEX-UPLC「起始物」結果為所有配製物之起始物的平均值。

在描述本發明之前，應了解，本發明不限於所述的特定方法和實驗條件，因為此等方法和條件可改變。亦應了解，文中所用的術語僅作為描述特定實施例之目的，且不希望受限，因為本發明之範圍將僅受限於所附的申請專利範圍。

除非另有說明，否則所有文中所用的技術和科學術語係具有如本發明所屬技術之一般技術者所正常理解之相同意義。如文中所用，術語「大約」當用於有關特定引述的數值或數值範圍時，係指該值可從該引述值做不大於1%的變化。例如，如文中所用，「約100」一詞係包括99和101及所有介於之間的值(例如99.1、99.2、99.3、99.4等)。雖然在施行或試驗本發明時可使用任何該等與文中所述的方法和物質類似或相當者，但較佳的方法和物質為目前所述。本說明書中所提及的所有刊物係以全文引用的方式併入本文中。

如文中所用，「醫藥配製物」係指至少一種活性成份(例如能在人類或非人類動物中施予一生物效應之小分子、大分自、化合物等)，及至少一種非活性成份之組合物，其當與活性成分或一或多種另外的非活性成分組合時，係適用於治療上投予一人類或非人類動物。除非另有指出，否則術語「配製物」，如文中所用，係指「醫藥配製物」。本發明係提供包括至少一種治療多肽的醫藥配製物。根據本發明之特定的實施例，治療多肽為一專一與人類預定死亡-1(PD-1)蛋白結合之抗體，或其抗原結合片段。更特言之，本發明係包括醫藥配製物，其係包含：(i)專一與PD-1結合之人類抗體；(ii)組胺酸緩衝劑；(iii)非離子界面活性劑之有機共溶劑；(iv)碳水活化合物之安定劑；及視需要(v)胺基酸之黏度調節劑。包括在本發明內的特定例示組份和配製物係詳述如下。

專一與PD-1結合之抗體

本發明之醫藥配製物可包括一專一與人類PD-1結合之人類抗體或其抗原結合片段。如文中所用，術語「PD-1」係指人類預定死亡-1蛋白。抗人類PD-1之抗體係描述於，例如美國專利/公開案號8008449、8168757、20110008369、20130017199、20130022595、20150203579，及於WO2006121168、WO2009114335、WO2012145493、WO2013014668、WO2009101611、WO2015112800、EP2262837和EP2504028中。

術語「抗體」，如文中所用，希望係指包含藉由雙硫鍵相連接的四條多肽鏈(二條重(H)鏈和二條輕(L)鏈)之免疫球蛋白分子以及其多聚體(例如IgM)；然而，僅由重鏈(亦即缺乏輕鏈)組成的免疫球蛋白分子亦涵蓋在術語「抗體」之定義中。各重鏈係包括一重鏈可變區(文中縮寫為HCVR或V_H)及一重鏈恆定區。重鏈恆定區係包括三個區，C_H1、C_H2和C_H3區。各輕鏈係包括一輕鏈可變區(文中縮寫為LCVR或V_L)及一輕鏈恆定區。輕鏈恆定區係包括一個區(CL1)。V_H和V_L區可進一步細分為高變區，稱為互補決定區(CDR)，其間散佈著較保守性區域，稱為框架區(FR)。各V_H和V_L係由三個CDR和四個FR所組成，以下列順序由胺基端排列至羧基端：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。

除非另有特別指出，否則術語「抗體」，如文中所用，應了解係涵蓋完整的抗體分子以及其抗原結合片段。術語抗體之「抗原結合部分」或「抗原結合片段」(或簡稱為「抗體部分」或「抗體片段」)，如文中所用，係指一或多種保留與人類PD-L1或其表位專一結合能力之抗體的片段。

「分離的抗體」，如文中所用，希望係指一抗體其實質上無具有不同抗原專一性之其他抗體(例如，專一與人類PD-L1結合之分離的抗體或其片段為實質上無專一結合人類PD-L1以外的抗原之抗體)。

術語「專一結合」或其類似術語係指抗體或其抗原結合片段與抗原形成一在生理條件下相當安定的複合物。專一結合其特徵為平衡解離常數至少約1x10^-8M或更大。測定二種分子是否為專一結合之方法已為本項技術所熟知並包括，例如平衡透析、表面電漿共振及類似方法。然而，專一與人類PD-L1結合之分離的抗體係具有與其他抗原的交叉反應性，例如來自其他物種的PD-1分子(同源物)。在本發明內容中，與人類PD-L1以及一或多種另外的抗原結合之多專一性(例如，雙專一性)抗體被視為「專一結合」人類PD-1。再者，分離的抗體為實質上無其他的細胞物質或化學物。

可包括在本發明之醫藥配製物中的例示抗-人類PD-1抗體係陳述於專利申請公開案US20150203579和WO2015112800中，該等揭示係以全文引用的方式併入本文中。

根據本發明之特定的實施例，抗人類PD-1抗體或其抗原結合片段係包括一SEQ ID NO：3之重鏈互補決定區(HCDR)1、一SEQ ID NO：4之HCDR2，及一SEQ ID NO：5之HCDR3。在特定的實施例中，抗人類PD-1抗體或其抗原結合片段係包括一SEQ ID NO：1之HCVR。

根據本發明之特定的實施例，抗-人類PD-1或其抗原結合片段係包括一SEQ ID NO：6之輕鏈互補決定區(LCDR)1，一SEQ ID NO：7之LCDR2及一SEQ ID NO：8之LCDR3。在特定的實施例中，此抗人類PD-1抗體或其抗原結合片段係包括一SEQ ID NO：2之LCVR。

根據本發明之特定的實施例，此抗-人類PD-1或其抗原結合片段係包括與SEQ ID NO：1具有90%、95%、98%或99%序列相同性的HCVR。

根據本發明之特定的實施例，此抗-人類PD-1或其抗原結合片段係包括與SEQ ID NO：2具有90%、95%、98%或99%序列相同性的LCVR。

根據本發明之特定的實施例，此抗-人類PD-1或其抗原結合片段係包括一HCVR，而該HCVR係包含具有不大於5個胺基酸取代的SEQ ID NO：1之胺基酸序列。

根據本發明之特定的實施例，此抗-人類PD-1或其抗原結合片段係包括一LCVR，而該LCVR係包含具有不大於2個胺基酸取代的SEQ ID NO：2之胺基酸序列。

序列相同性可藉由本項技術中已知的任何方法來測量(例如，GAP、BESTFIT和BLAST)。

本發明亦包括包含抗-PD-1抗體之配製物，其中該抗-PD-1抗體係包括具有一或多個保守性胺基酸取代之任何文中所揭示的HCVR、LCVR及/或CDR胺基酸序列之變體。例如，本發明係包括包含抗-PD-1抗體之配製物，而該抗-PD-1抗體係具有，相對於文中所揭示的HCVR、LCVR及/或CDR胺基酸序列，帶有例如10個或更少，8個或更少，6個或更少，4個或更少等保守性胺基酸取代之HCVR、LCVR及/或CDR胺基酸序列。

在特定的實施例中，此抗-PD1抗體係包括一個由人類IgG1、IgG2、IgG3和IgG4同型組成之群中選出的Fc區。

用於文中實例中的非限定例示性抗體係稱為「mAb1」。此抗體亦在US 20150203579提及，稱為H2M7798N或H4H7798N，以及亦稱為「REGN2810」或「cemiplimab」。mAb1(H4H7798N)係包括具有SEQ ID NO：1/2，及以SEQ ID NO：3-4-5/SEQ ID NO：6-7-8表示之HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3區的HCVR/LCVR胺基酸序列對。

根據本發明之特定的實施例，此抗-人類PD-1或其抗原結合片段係包括SEQ ID NO：9之重鏈及SEQ ID NO：10之輕鏈。

如本項技術中已熟知的，在製造抗體期間可發生胺基酸的終端裂解(參見，例如Wang et al 2007,J.Pharma.Sci.96：1-26)。因此，在特定的實施例中，此抗-PD-1抗體係包括一重鏈和一輕鏈，其中該重鏈係包括一SEQ ID NO：11之胺基酸序列。SEQ ID NO：11係包括其中從SEQ ID NO：9胺基酸列C-端缺少離胺酸之重鏈胺基酸序列。在特定的實施例中，本揭示文之配製物係含有約50%，約60%，約70%，約80%，約90%，約95%，約98%或更多其中C-端缺少離胺酸之抗-PD-1抗體。

包含在本發明醫藥配製物中的抗體或其抗原結合片段之量，可依照配製物所欲的特定性質，以及配製物所希望使用的特定環境和目的而變。在特定的實施例中，此醫藥配製物為液體配製物，其可含有5±0.75mg/mL至250±37.5mg/mL的抗體；10±1.5mg/mL至240±36mg/mL的抗體；20±3.0mg/mL至230±34.5mg/mL的抗體；25±3.75mg/mL至240±36mg/mL的抗體；50±7.5mg/mL至230±34.5mg/mL的抗體；60±9 mg/mL至240±36mg/mL的抗體；70±10.5mg/mL至230±34.5mg/mL的抗體；80±12mg/mL至220±33mg/mL的抗體；90±13.5mg/mL至210±31.5mg/mL的抗體；100±15mg/mL至200±30mg/mL的抗體；110±16.5mg/mL至190±28.5mg/mL的抗體；120±18mg/mL至180±27mg/mL的抗體；130±19.5mg/mL至170±25.5mg/mL的抗體；140±21mg/mL至160±24mg/mL的抗體；150±22.5mg/mL的抗體；或175±26.25mg/ml。例如，本發明配製物可包括約5mg/mL；約10mg/mL；約15mg/mL；約20mg/mL；約25mg/mL；約30mg/mL；約35mg/mL；約40mg/mL；約45mg/mL；約50mg/mL；約55mg/mL；約60mg/mL；約65mg/mL；約70mg/mL；約75mg/mL；約80mg/mL；約85mg/mL；約90mg/mL；約95mg/mL；約100mg/mL；約105mg/mL；約110mg/mL；約115mg/mL；約120mg/mL；約125mg/mL；約130mg/mL；約135mg/mL；約140mg/mL；約145mg/mL；約150mg/mL；約155mg/mL；約160mg/mL；約165mg/mL；約170mg/mL；約175mg/mL；約180mg/mL；約185mg/mL；約190mg/mL；約195mg/mL；約200mg/mL；約205mg/mL；約210mg/mL；約215mg/mL；約220mg/mL；約225mg/mL；約230mg/mL；約235mg/mL；約240mg/mL；約245mg/mL；或約250mg/mL專一與人類PD-1結合之抗體或其抗原結合片段。

賦形劑和pH

本發明之醫藥配製物係包含一或多種賦形劑。術語「賦形劑」如文中所用，係指任何加到配製物中提供所欲的均一性、黏度或安定效用之非治療性試劑。

在特定的實施例中，本發明之醫藥配製物係包含至少一種類型及量之在初步處理或攪動的條件下，例如迴旋震盪下安定人類PD-1抗體的有機共溶劑。在某些實施例中，所謂的「安定」為在初步處理期間防止總抗體量(或以莫耳濃度為基準)超過3%聚集的抗體。在某些實施例中，初步處理為迴旋震盪含有抗體及有機共溶劑之溶液歷時約60分鐘或約120分鐘。

在特定的實施例中，此有機共溶劑為一非離子界面活性劑，例如烷基聚(氧化乙烯)。可包括在本發明醫藥配製物中的特定非離子界面活性劑包括，例如聚山梨醇酯，例如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯28、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯81、and聚山梨醇酯85；泊洛沙姆(poloxamer)，例如泊洛沙姆181、泊洛沙姆188、泊洛沙姆407；或聚乙二醇(PEG)。聚山梨醇酯20亦稱為TWEEN 20、山梨醇酐單月桂酸酯及聚氧乙烯山梨醇酐單月桂酸酯。泊洛沙姆188亦稱為PLURONIC F68。

包含在本發明醫藥配製物內之非離子界面活性劑的量可依照所欲的配製物之特定性質，以及配製物所希望使用的特定環境和目的而變。在特定的實施例中，配製物可含有0.01%±0.005%至0.5%±0.25%界面活性劑。例如，本發明之醫藥配製物可包含約0.005%；約0.01%；約0.02%；約0.03%；約0.04%；約0.05%；約0.06%；約0.07%；約0.08%；約0.09%；約0.1%；約0.11%；約0.12%；約0.13%；約0.14%；約0.15%；約0.16%；約0.17%；約0.18%；約0.19%；約0.20%；約0.21%；約0.22%；約0.23%；約0.24%；約0.25%；約0.26%；約0.27%；約0.28%；約0.29%；約0.30%；約0.35%；約0.40%；約0.45%；約0.46%；約0.47%；約0.48%；約0.49%；約0.50%；約0.55%；或約0.575%聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。

本發明之醫藥配製物亦可包括一或多種類型和量之於熱壓力條件下安定人類PD-1抗體的安定劑。在某些實施例中，所謂的「安定」為當含有抗體和熱安定劑的溶液保持在45℃高達約28天時，有大於約91%的抗體維持在原態構形。在某些實施例中，所謂的「安定」為當含有抗體和熱安定劑的溶液保持在45℃高達約28天時，有低於約6%的抗體聚集。如文中所用，「原態」係指藉由粒徑排阻，主要的抗體形式一般為完整的抗體單體。術語「原態」亦指非聚集和非降解的抗體形式。

在特定的實施例中，熱安定劑為糖類，例如蔗糖，包含在配製物內的量可依照配製物所希望使用的特定環境和目的而變。在特定的實施例中，配製物可含有約1%至約15%的糖；約2%至約14%的糖；約3%至約13%的糖；約4%至約12%的糖；約5%至約12%的糖；約6%至約11% 的糖；約7%至約10%的糖；約8%至約11%的糖；或約9%至約11%的糖。例如，本發明之醫藥配製物可包括4%±0.8%；5%±1%；6%±1.2%；7%±1.4%；8%±1.6%；9%±1.8%；10%±2%；11%±2.2%；12%±2.4%；13%±2.6%；或約14%±2.8%的糖(例如蔗糖)。

本發明之醫藥配製物亦包括緩衝劑或緩衝系統，其係作為維持安定的pH並幫助安定人類PD-1抗體。術語「緩衝劑」如文中所用係指維持溶液之安定pH或抵抗pH變化之醫藥上可接受的緩衝劑。在較佳的實施例中，此緩衝劑係包括組胺酸。在本揭示文之內文中，「組胺酸緩衝劑」或「包括組胺酸之緩衝劑」為包括胺基酸組胺酸之緩衝劑。組胺酸緩衝劑之實例包括組胺酸氯化物、組胺酸乙酸鹽、組胺酸磷酸鹽及組胺酸硫酸鹽。在一較佳的實施例中，此組胺酸緩衝劑係藉由將L-組胺酸和L-組胺酸鹽酸鹽(例如單水合物)以一定義量和比例溶解所製備。在一實施例中，此組胺酸緩衝劑係藉由以稀鹽酸滴定L-組胺酸(游離鹼，固體)所製備。術語「組胺酸」在整篇揭示文中與「組胺酸緩衝劑」可交換使用。在某些實施例中，所謂的「安定」為當含有抗體和緩衝劑的溶液保持在45℃高達約28天時其中有低於4.5%±0.5%的抗體聚集。在某些實施例中，所謂的「安定」為當含有抗體和緩衝劑的溶液保持在37℃高達約28天時其中有低於3%±0.5%或低於2.5%±0.5%的抗體聚集。在某些實施例中，所謂的「安定」為當含有抗體和緩衝劑的溶液保持在45℃高達約28天時，如粒徑排阻層析所測其中有至少93%±0.5%或至少94%±0.5%的抗體為其原態構形。在某些實施例中，所謂的「安定」為當含有抗體和緩衝劑的溶液保持在37℃高達約28天時，如粒徑排阻層析所測其中有至少94%±0.5%或至少95%±0.5%的抗體為其原態構形。所謂的「原態」或「原態構形」為不聚集或降解的抗體溶離份。其一般係藉由測量抗體實體的相對大小之分析所測，例如粒徑排阻層析。非聚集和非降解的抗體係以等同原態抗體之溶離份溶離出，且一般為主要的溶離份。聚集的抗體係以顯示大於原態抗體之大小的溶離份溶離。降解的抗體係以顯示小於原態抗體之大小的溶離份溶離。

在某些實施例中，所謂的「安定」為當含有抗體和緩衝劑的溶液保持在45℃高達約28天時，如陽離子交換層析所測其中有至少35%± 0.5%的抗體為其主電荷形式。在某些實施例中，所謂的「安定」為當含有抗體和緩衝劑的溶液保持在37℃高達約28天時，如陽離子交換層析所測其中有至少46%±0.5%或至少39%±0.5%的抗體為其主電荷形式。所謂的「主電荷」或「主電荷形式」為以主波峰從離子交換樹脂溶離的抗體溶離份，其一般在兩側中一側為較「鹼性」的波峰而另一側為較「酸性」的波峰。

本發明之醫藥配製物可具有從約5.2至約6.4之pH。例如，本發明之配製物可具有約5.5；約5.6；約5.7：約5.8；約5.9；約6.0；約6.1；約6.2；約6.3；約6.4；或約6.5之pH。在某些實施例中，pH為6.0±0.4；6.0±0.3；6.0±0.2；6.0±0.1；約6.0；或6.0。

在某些實施例中，此緩衝劑或緩衝劑系統係包括至少一緩衝劑，具有完全或部分重疊的pH 5.5-7.4範圍之緩衝範圍。在特定的實施例中，此緩衝劑係包括一組胺酸緩衝劑。在特定的實施例中，此組胺酸緩衝劑係以5mM±1mM至15mM±3mM；6mM±1.2mM至14mM±2.8mM；7mM±1.4mM至13mM±2.6mM；8mM±1.6mM至12mM±2.4mM；9mM±1.8mM至11mM±2.2mM；10mM±2mM；或約10mM的濃度存在。在特定的實施例中，此緩衝劑系統係包括10mM±2mM之組胺酸，pH為6.0±0.3。在較佳的實施例中，此組胺酸緩衝劑係包括L-組胺酸和L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物。在一實施例中，此組胺酸緩衝劑係包括濃度4.8mM±0.96mM之L-組胺酸。在一實施例中，此組胺酸緩衝劑係包括濃度5.2mM±1.04mM之L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物。在一實施例中，此組胺酸緩衝劑係包括濃度4.8mM±0.96mM之L-組胺酸及濃度5.2mM±1.04mM之L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物。

本發明之醫藥配製物亦可包括一或多種用以維持降低的黏度或降低含高濃度抗-PD-1抗體藥物(例如，一般150mg/ml的抗體)之配製物黏度的賦形劑。在特定的實施例中，此黏度調節劑為一胺基酸。在一實施例中，此胺基酸為脯胺酸。在一實施例中，本發明之醫藥配製物係含有脯胺酸，較佳地為濃度1%、1.5%、2%、2.5%、3%、3.5%、4%、4.5%或5%之L-脯胺酸。術語「脯胺酸」與「L-脯胺酸」在整篇揭示文中可交換使用。在某些實施例中，此配製物係包括足以將液體配製物之黏度維持在低於20±3cPoise，低於15±2.25cPoise，或低於11±1.65cPoise之量的脯胺酸。在某些實施例中，此配製物係包括足以將黏度維持在或低於15±2.25cPoise之量的脯胺酸。在特定的實施例中，配製物可含有約1%至約5%脯胺酸；約2%至約4%脯胺酸；或約3%脯胺酸。例如，本發明之醫藥配製物可包括1%±0.2%；1.5%±0.3%；2%±0.4%；2.5%±0.5%；3%±0.6%；3.5%±0.7%；4%±0.8%；4.5%±0.9%；或約5%±1%脯胺酸。

在抗體純化的過程中，其可能希望或需要交換緩衝劑用以達到適當的賦形劑濃度、抗體濃度、pH等。緩衝劑交換可藉由超過濾/透析(UF/DF)，使用例如半透性切向流過濾膜來進行。然而，使用此等技術具有造成Gibbs-Donnan效應之可能[Bolton et al.,2011,Biotechnol.Prog.27(1)：140-152]。於蛋白濃縮期間在膜的產物側建立的陽性電荷藉由優先將陽離子移動到膜的反側抵銷電荷。由於在UF/DF步驟期間陽性電荷透析緩衝賦形劑對陽性電荷抗體蛋白的靜電排斥，此現象的潛在後果為特定的組份(例如，組胺酸，L-脯胺酸等)之最終濃度可能低於這些組份的希望目標濃度。因此，本發明係包括其中，例如組胺酸及/或L-脯胺酸之濃度，由於Gibbs-Donnan效應，係在文中所述的量或範圍內變動。

體積排阻係描述其中溶質，特別是大分子，例如蛋白係佔大部分的溶液總體積之高濃縮樣本，從該空間排阻溶劑的行為。此舉因而降低了可供溶解其他溶質之溶劑的總量，其可能造成跨越超過濾膜之非均等分溶。因此，本發明係包括其中，由於Gibbs-Donnan效應，例如組胺酸及/或L-脯胺酸之濃度可在文中所述的量或範圍內變動之配製物。

在製造本發明配製物期間，配製物的組成為可變的。這些變化可包括活性成份的濃度、賦形劑的濃度及/或配製物的pH。因為任何這些參數的變化可能潛在影響藥物產品的安定性或效力，進行確定可接受範圍(PAR)研究用以評估組成份的變異性在定義的範圍內是否會影響抗體的安定性或效力。因此，本發明係包括安定且保有功效之具有至高50%賦形劑濃度變化之包含抗-PD-1抗體的配製物。例如，文中係包括抗-PD-1抗體配製物，其中該配製物的安定性和效力不受±10%、±20%、±30%、±40%或±50%的抗體、蔗糖、組胺酸緩衝劑及/或聚山梨醇酯濃度變化之影響。

醫藥配製物之安定性和黏度

本發明之醫藥配製物典型地係展現高度安定性。術語「安定的」如文中所用就醫藥配製物係指醫藥配製物中的抗體於定義的條件下儲存後，保留可接受程度的化學結構或生物功能。配製物即使在儲存了一段定義的時間後，其內的抗體無法維持100%之其化學結構或生物功能，可能仍為安定的。在特定的環境下，儲存一段定義的時間後，維持約90%，約95%，約96%，約97%，約98%或約99%的抗體結構或功能則可認為是「安定的」。

安定性，除了其他之外，可藉由在一定義溫度儲存一段定義時間後測定留在配製物中原態抗體之百分比來測量。原態抗體的百分比，除了其他之外，可藉由粒徑排阻層析(例如粒徑排阻超效液相層析[SE-UPLC])來測定，而原態係指無聚集且無降解。「可接受的安定性程度」，如該此語詞用於文中係指在一特定溫度儲存一段定義時間後，在配製物中可偵測到至少90%的原態抗體形式。在特定的實施例中，在一定義溫度儲存一段定義時間後，在配製物中可偵測到至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的原態抗體形式。在一定義時間後測量安定性，可在至少14天，至少28天，至少1個月，至少2個月，至少3個月，至少4個月，至少5個月，至少6個月，至少7個月，至少8個月，至少9個月，至少10個月，至少11個月，至少12個月，至少18個月，至少24個月或更久測量。在評估安定性時，醫藥配製物可儲存的定義溫度可為從約-80℃至約45℃之任何溫度，例如儲存在約-80℃，約-30℃，約-20℃，約0℃，約4°-8℃，約5℃，約25℃，約35℃，約37℃，或約45℃。例如，例如，若在5℃儲存6個月後，以SE-UPLC偵測到大於約95%、96%、97%或98%的原態抗體，則此一醫藥配製物可視為安定的。若在25℃儲存6個月後，以SE-UPLC偵測到大於約95%、96%、97%或98%的原態抗體，則此一醫藥配製物亦可視為安定的。若在45℃儲存28天後，以SE-UPLC偵測到大於約89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%或96%的原態抗體，則此一醫藥配製物亦可視為安定的。若在-20℃儲存12個月後，以SE-UPLC偵測到大於約96%、97%或98%的原態抗體，則此一醫藥配製物亦可視為安定的。若在-30℃儲存12個月後，以SE-UPLC偵測到大於約96%、97%或98%的原態抗體，則此一醫藥配製物亦可視為安定的。若在-80℃儲存12個月後，以SE-UPLC偵測到大於約96%、97%或98%的原態抗體，則此一醫藥配製物亦可視為安定的。

安定性，除了其他之外，可藉由在一定義溫度儲存一段定義時間後測定配製物中形成聚集物之抗體的百分比來測量，其中安定性係與所形成的聚集物百分比成反比。聚集的抗體之百分比，除了其他之外，可藉由粒徑排阻層析(例如粒徑排阻超效液相層析[SE-UPLC])來測定。「可接受的安定性程度」如用於文中該詞語係指在一定的溫度儲存一段定義時間後，在配製物中偵測到最多5%的抗體為聚集形式(亦指高分子量-HMW-形式)。在特定的實施例中，可接受的安定性程度係指在一定的溫度儲存一段定義時間後，在配製物中可偵測到最多約5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的抗體聚集物。一段定義時間後測量安定性，該段定義時間可為至少2週，至少28天，至少1個月，至少2個月，至少3個月，至少4個月，至少5個月，至少6個月，至少7個月，至少8個月，至少9個月，至少10個月，至少11個月，至少12個月，至少18個月，至少24個月或更久。在評估安定性時醫藥配製物可儲存的溫度可為從約-80℃至約45℃之任何溫度，例如儲存在約-80℃，約-30℃，約-20℃，約0℃，約4°-8℃，約5℃，約25℃，約35℃，約37℃或約45℃。例如，若在5℃儲存12個月後，偵測到低於約2%、1%、0.5%或0.1%的抗體聚集形式，則該醫藥配製物可視為安定的。若在25℃儲存3個月後，偵測到低於約4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的抗體聚集形式，則該醫藥配製物亦可視為安定的。若在45℃儲存28天後，偵測到低於約10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或0.5%的抗體聚集形式，則該醫藥配製物亦可視為安定的。若在-20℃、-30℃或-80℃儲存3個月後，偵測到低於約3%、2%、1%、0.5%的0.1%的抗體聚集形式，則該醫藥配製物亦可視為安定的。

安定性，除了其他之外，可藉由在離子交換期間測定移動到酸性溶離份(「酸性形式」)之抗體的百分比多於主要溶離份的抗體(「主電荷形式」)來測定，其中安定性係與酸性形式抗體的溶離份成反比。不希望受限於理論，抗體的脫醯胺作用可能使抗體變得更帶負電且因此相對於非-脫醯胺的抗體則更具酸性(參見，例如Robinson,N.,Protein Deamidation,PNAS,April 16,2002,99(8)：5283-5288)。「酸化」抗體的百分比，除了其他之外，可藉由離子交換層析來測定(例如陽離子交換超效液相層析[CEX-UPLC])。「可接受的安定性程度」如用於文中該詞語係指在在一定義溫度儲存一段定義時間後，在配製物中偵測到最多45%較酸性形式的抗體。在特定的實施例中，可接受的安定性程度係指在一定的溫度儲存一段定義時間後，在配製物中偵測到最多約40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的酸性形式抗體。在一實施例中，可接受的安定性程度係指在一定的溫度儲存一段定義時間後，在配製物中可偵測到低於30%、25%、20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的酸性形式抗體。一段定義時間後測量安定性，該段定義時間可為至少2週，至少28天，至少1個月，至少2個月，至少3個月，至少4個月，至少5個月，至少6個月，至少7個月，至少8個月，至少9個月，至少10個月，至少11個月，至少12個月，至少18個月，至少24個月或更久。在評估安定性時醫藥配製物可儲存的溫度可為從約-80℃至約45℃之任何溫度，例如儲存在約-80℃，約-30℃，約-20℃，約0℃，約4°-8℃，約5℃，約25℃，或約45℃。例如，若於-80℃、-30℃或-20℃儲存3個月後，偵測到低於約30%、29%、28%、27%、26%、25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的酸性形式抗體，則該醫藥配製物可視為安定的。若於5℃儲存6個月後，可偵測到低於約32%、31%、30%、29%、28%、27%、26%、25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的酸性形式抗體，則該醫藥配製物亦可視為安定的。若於25℃儲存6個月後，可偵測到低於約43%、 42%、41%、40%、39%、38%、37%、36%、35%、34%、33%、32%、31%、30%、29%、28%、27%、26%、25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的酸性形式抗體，則該醫藥配製物亦可視為安定的。若於45℃儲存28天後，可偵測到低於約49%、48%、47%、46%、45%、44%、43%、42%、41%、40%、39%、38%、37%、36%、35%、34%、33%、32%、31%、30%、29%、28%、27%、26%、25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的酸性形式抗體，則該醫藥配製物亦可視為安定的。

可用於評估本發明配製物之安定性的其他方法，例如用以測定熱安定性之差示掃描量熱法(DSC)，用以測定機制安定性之控制攪拌，及用以測定溶液分布之約350mm或約405nm的吸收度。例如，若於約5℃至約25℃儲存6個月後，與時間零的配製物OD₄₀₅相比，配製物的OD₄₀₅變化係低於約0.05(例如，0.04、0.03、0.02、0.01或更少)，則本發明配製物可視為安定的。

測量抗體的生物活性或抗體與其目標的結合親和力亦可用來評估安定性。例如，若於5℃、25℃、45℃等儲存一段定義時間(例如1至12個月)後，此包含在配製物中的抗-PD-1抗體係以儲存前至少90%、95%或更大的抗體結合親和力與PD-1結合，則本發明配製物可視為安定的。結合親和力可藉由，例如ELISA或表面電漿共振來測定。生物活性可藉由PD-1活性分析來測定，例如將一表現PD-1的細胞與包括抗PD-1抗體的配製物接觸。可例如，經由FACS分析直接測量抗體與此一細胞的結合。另一種選擇，可在抗體的存在下測量PD-1系統之下游活性，並與在缺乏抗體下的PD-1系統活性相比較。在某些實施例中，PD-1對該細胞可能為內生性的。在其他的實施例中，此PD-1可異位表現在該細胞中。

評估配製物中抗體之安定性的另外方法係展現於下示之實例中。

本發明之液體醫藥配製物，在特定的實施例中，可具有低度至中度的黏度。「黏度」如文中所用可為「動力黏度」或「絕對黏度」。「動力黏度」為在重力影響下的阻力液流。當二個等體積的液流放置在相同毛細管黏度中並隨重力流動，則黏稠液流比低黏稠液流花費較久時間流經毛細管，若一液流花費200秒完成其流程而另一液流花費400秒，則就動力黏度標度，後者液流為前者液流二倍黏稠。「絕對黏度」有時候稱為動態黏度或簡單黏度，為動力黏度和流體密度之乘積(絕對黏度=動力黏度x密度)。動力黏度的大小為L²/T，其中L為長度而T為時間。一般，動力黏度係以厘斯托克斯(centistokes)(cSt)表示。動力黏度的SI單位為mm²/s，其為1cSt。絕對黏度係以厘泊(centipoise)(cP)表示。絕對黏度的SI單位為毫帕斯卡-秒(milliPascal-second)(mPa-s)，其中1cP=1mPa-s。

如文中所用，低度的黏度，就本發明之流體配製物而言，係具有低於約20cPoise(cP)之絕對黏度。例如，若當使用標準的黏度測量技術測量時，配製物具有約20cP，約19cP，約18cP，約15cP，約12cP，約10cP，約9cP，約8cP或更低的絕對黏度，則本發明之流體配製物將視為具有「低黏度」。如文中所用，中度的黏度，就本發明之流體配製物而言，係具有約35cP至約20cP之間的絕對黏度。例如，若當使用標準的黏度測量技術測量時，配製物具有約34cP，約33cP，約32cP，約31cP，約30cP，約29cP，約28cP，約27cP，約26cP，約25cP，約24cP，約23cP，約22cP，約21cP，約20cP，約19cP，18cP，約17cP，約16cP，或約15.1cP的絕對黏度，則本發明之流體配製物將視為具有「中度黏度」。

如下列實例所示，本發明人有驚人的發現，藉由以從約1%至約5%的脯胺酸及約5%的蔗糖配製抗體，則可得到包括高濃度(例如，從約50mg/ml至高250mg/mL)抗人類PD-1抗體之低黏度流體配製物。此配製物在範圍45℃至-80℃之溫度中(顯示於文中)於處理及儲存期間對壓力為安定的且具有低黏度(具有範圍從7至15cP之黏度)。

例示的配製物

根據本發明之一方面，此醫藥配製物為安定、低黏度、一般生理上等張的液體配製物，其係包括：(i)濃度至高250mg/mL±45mg/mL 之專一與人類PD-1結合的人類抗體(例如，H4H7798N)；(ii)在約pH 6.0±0.3提供充分緩衝之組胺酸緩衝劑系統；(iii)保護抗體結構完整性之有機共溶劑；(iv)糖類的熱安定劑；及(iv)胺基酸之黏度調節劑，其係用於保持可管理的黏度供以方便量皮下給藥注射。

根據一實施例，此安定、低黏度的醫藥配製物係包括：(i)濃度至高200mg/ml±30mg/mL之專一與人類PD-1結合的人類IgG4抗體，且該抗體係包括一SEQ ID NO：3之HCDR1，一SEQ ID NO：4之HCDR2，一SEQ ID NO：5之HCDR3，一SEQ ID NO：6之LCDR1，一SEQ ID NO：7之LCDR2，及一SEQ ID NO：8之LCDR3；(ii)10mM±2mM之組胺酸緩衝劑，其係於pH 6.0±0.3緩衝；(iii)0.2%w/v±0.1%w/v之聚山梨醇酯80；(iv)5%±1%w/v之蔗糖；及(v)1.5%(w/v)±0.3%之L-脯胺酸。

根據一實施例，此安定、低黏度的醫藥配製物係包括：(i)濃度175mg/ml±26.25mg/mL之專一與人類PD-1結合的人類IgG4抗體，且該抗體係包括SEQ ID NO：3之HCDR1，SEQ ID NO：4之HCDR2，SEQ ID NO：5之HCDR3，SEQ ID NO：6之LCDR1，SEQ ID NO：7之LCDR2，及SEQ ID NO：8之LCDR3；(ii)10mM±2mM之組胺酸緩衝劑，其係於pH 6.0±0.3緩衝；(iii)0.2%w/v±0.1%w/v之聚山梨醇酯80；(iv)5%±1%w/v之蔗糖；及(v)1.5%(w/v)±0.3%之L-脯胺酸。

根據一實施例，此安定、低黏度的醫藥配製物係包括：(i)濃度150mg/ml±22.5mg/mL之專一與人類PD-1結合的人類IgG4抗體，且該抗體係包括SEQ ID NO：3之HCDR1，SEQ ID NO：4之HCDR2，SEQ ID NO：5之HCDR3，SEQ ID NO：6之LCDR1，SEQ ID NO：7之LCDR2，及SEQ ID NO：8之LCDR3；(ii)10mM±2mM之組胺酸緩衝劑，其係於pH 6.0±0.3緩衝；(iii)0.2%w/v±0.1%w/v之聚山梨醇酯80；(iv)5%±1%w/v之蔗糖；及(v)1.5%(w/v)±0.3%之L-脯胺酸。

根據一實施例，此安定、低黏度的醫藥配製物係包括：(i)濃度100mg/mL±15mg/mL之專一與人類PD-1結合的人類IgG4抗體，且該抗體係包括SEQ ID NO：3之HCDR1，SEQ ID NO：4之HCDR2，SEQ ID NO：5之HCDR3，SEQ ID NO：6之LCDR1，SEQ ID NO：7之LCDR2，及 SEQ ID NO：8之LCDR3；(ii)10mM±2mM之組胺酸緩衝劑，其係於pH 6.0±0.3緩衝；(iii)5%w/v±1%w/v之蔗糖；(iv)0.2%w/v±0.1%之聚山梨醇酯80；及1.5%(w/v)±0.3%之L-脯胺酸。

根據一實施例，此安定、低黏度的醫藥配製物係包括：(i)濃度50mg/mL±7.5mg/mL之專一與人類PD-1結合的人類IgG4抗體，且該抗體係包括SEQ ID NO：3之HCDR1，SEQ ID NO：4之HCDR2，SEQ ID NO：5之HCDR3，SEQ ID NO：6之LCDR1，SEQ ID NO：7之LCDR2，及SEQ ID NO：8之LCDR3；(ii)10mM±2mM之組胺酸緩衝劑，其係於pH 6.0±0.3緩衝；(iii)5%w/v±1%w/v之蔗糖；(iv)0.2%w/v±0.1%之聚山梨醇酯80；及1.5%(w/v)±0.3%之L-脯胺酸。

根據一實施例，此安定、低黏度的醫藥配製物係包括：(i)濃度25mg/mL±3.75mg/mL之專一與人類PD-1結合的人類IgG4抗體，且該抗體係包括SEQ ID NO：3之HCDR1，SEQ ID NO：4之HCDR2，SEQ ID NO：5之HCDR3，SEQ ID NO：6之LCDR1，SEQ ID NO：7之LCDR2，及SEQ ID NO：8之LCDR3；(ii)10mM±2mM之組胺酸緩衝劑，其係於pH 6.0±0.3緩衝；(iii)5%w/v±1%w/v之蔗糖；(iv)0.2%w/v±0.1%之聚山梨醇酯80；及1.5%(w/v)±0.3%之L-脯胺酸。

本發明所涵蓋的醫藥配製物之另外的非限定實例係說明於文中的他處，包括下文所示的操作實例。

容器和給藥方法

本發明之醫藥配製物可裝在任何適合儲存藥物和其他治療組成物之容器中。例如，此醫藥配製物可裝在具有一定義體積之密封和無菌的塑膠或玻璃容器中，例如小瓶、安瓶、注射器、藥匣或瓶子中。可使用不同類型的小瓶來裝填本發明之配製物，包括，例如透明和不透明(例如琥珀色)玻璃或塑膠小瓶。同樣地，可使用任何類型的注射器來裝填或投予本發明之醫藥配製物。

本發明之醫藥配製物可裝在「一般的鎢」注射器或「低鎢」注射器內。本項技術之一般技術者應了解，製造玻璃注射器的程序一般係包括使用熱鎢棒刺穿玻璃藉此創造出一個可從注射器抽取和排出液體的洞。此過程造成微量的鎢蓄積在注射器的內部表面。可使用後續的清洗和其他處理步驟來降低注射器中鎢的量。如文中所用，術語「一般的鎢」係指注射器含有大於或等於500(ppb)的鎢。術語「低鎢」係指注射器含有低於500ppb的鎢。例如，低鎢注射器，根據本發明，可含有低於約490、480、470、460、450、440、430、420、410、390、350、300、250、200、150、100、90、80、70、60、50、40、30、20、10或更少ppb的鎢。

用於注射器的橡膠柱塞及用於封閉小瓶開口的橡膠塞可經塗膜用以防止注射器或小瓶的醫藥內容物沾染，或保有其安定性。因此，本發明之醫藥配製物，根據特定的實施例，可裝在包括一塗膜的柱塞之注射器內，或以塗膜橡膠塞密封的小瓶內。例如，柱塞或塞蓋可塗覆上氟碳化物膜。用於裝載本發明醫藥配製物之小瓶和注射器的塗膜塞蓋或柱塞之實例係於美國專利號4,997,423；5,908,686；6,286,699；6,645,635；及7,226,554中提及，該文之內容係以全文引用的方式併入本文中。可用於本發明內文中之特別的例示塗膜塞蓋和柱塞為市面上可從West Pharmaceutical Services,Inc.(Lionville,PA)購得商標名稱「FluroTec®」。FluroTec®為一塗覆氟碳化物用於減少或防止藥物產品黏附在橡膠表面之實例。

根據本發明之特定的實施例，醫藥配製物可裝在包括一塗覆氟碳化物柱塞之低鎢注射器中。

醫藥配製物可藉由非經腸路徑，例如注射投予一病患(例如皮下、靜脈內、肌肉內、腹膜內等等)或經皮、黏膜、鼻內、肺部或口服給藥。許多可再使用的注射筆或自動注射器遞送裝置可用於皮下遞送本發明之醫藥配製物。實例包括(但不限於)AUTOPEN^TM(Owen Mumford,Inc.,Woodstock,UK)、DISETRONIC^TM筆(Disetronic Medical Systems,Bergdorf,Switzerland)、HUMALOG MIX 75/25^TM筆、HUMALOG^TM筆、HUMALIN 70/30^TM筆(Eli Lilly and Co.,Indianapolis,IN)、NOVOPEN^TM I,II和III(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark)、NOVOPEN JUNIOR^TM(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark)、BD^TM筆(Becton Dickinson,Franklin Lakes,NJ)、OPTIPEN^TM、OPTIPEN PRO^TM、OPTIPEN STARLET^TM和OPTICLIK^TM(sanofi-aventis,Frankfurt,Germany)。適用於皮下遞送本發明醫藥組成物之拋棄型注射筆或自動注射器遞送裝置的實例包括(但不限於)SOLOSTAR^TM筆(sanofi-aventis)、FLEXPEN^TM(Novo Nordisk)和KWIKPEN^TM(Eli Lilly)、SURECLICK^TM自動注射器(Amgen,Thousand Oaks,CA)、PENLET^TM(Haselmeier,Stuttgart,Germany)、EPIPEN(Dey,L.P.)和HUMIRA^TM筆(Abbott Labs,Abbott Park,IL)。

文中亦涵蓋使用微型輸注器遞送本發明之醫藥配製物。如文中所用，術語「微型輸注器」係指設計用來在一段長的時間內(例如，約10、15、20、25、30分鐘或更久)緩慢投予大量(例如，至高約2.5mL或更多)的治療配製物之皮下遞送裝置。參見，例如U.S.6,629,949；US 6,659,982；及Meehan et al.,J.Controlled Release 46：107-116(1996)。微型輸注器特別可用於遞送其內包含大劑量治療蛋白之高濃度(例如，約100、125、150、175、200mg/mL或更高)或黏稠溶液。

在特定的實施例中，任何前述方面之安定的液體醫藥配製物係裝在一無菌的玻璃小瓶中並以IV輸注給藥。

在一實施例中，該容器為20mL第1類透明硼矽玻璃小瓶。在特定的實施例中，該容器為2mL、5mL或10mL具有FluroTec^®塗膜之氯丁基塞蓋的第1類硼矽玻璃小瓶。

在一實施例中，包括約25mg/mL或50mg/mL的mAb1之本發明之液體醫藥配製物係以靜脈內給藥且可裝在玻璃小瓶中。

在特定的實施例中，本發明係提供包括任何文中所述的液體配製物之自動注射器。在某些實施例中，本發明係提供包括一安定的液體配製物之自動注射器，而該安定的液體配製物係包含約50mg/mL，約100mg/mL，約150mg/mL或約175mg/mL的mAb1，約10mM的組胺酸，pH約6.0，約5%蔗糖，約1.5%脯胺酸和約0.2%聚山梨醇酯80。

在特定的實施例中，本發明係提供包括任何文中所述的液體配製物之預充填注射器。在某些實施例中，本發明係提供包括一安定的液體配製物之預充填注射器，而該安定的液體配製物係包含約50mg/mL，約100mg/mL，約150mg/mL或約175mg/mL的mAb1，約10mM的組胺酸，pH約6.0，約5%蔗糖，約1.5%脯胺酸和約0.2%聚山梨醇酯80。在特定的實施例中，此注射器為裝有27-號尺度薄壁針、塗覆氟碳化物的橡膠柱塞和橡膠針罩之1mL或2.25mL的長玻璃注射器。

在一實施例中，含有約175mg/mL±26.25 mg/mL mAb1之液體醫藥配製物係以大約至高2mL之預充填注射器來投予。在特定的實施例中，此注射器為裝有27-號尺度薄壁針、塗覆氟碳化物的橡膠柱塞和橡膠針罩之1mL或2.25mL的長玻璃注射器。在一實施例中，此注射器為裝有27-號尺度針、FM27橡膠針罩和塗覆FLUROTEC®的4023/50橡膠柱塞之OMPI 1mL的長玻璃注射器。

在一實施例中，含有約150mg/mL±22.5mg/mL抗-PD-1抗體之液體醫藥配製物係以大約至高2mL之預充填注射器來投予。在一實施例中，此注射器為裝有27-號尺度薄壁針、塗覆氟碳化物的橡膠柱塞和橡膠針罩之1mL或2.25mL的長玻璃注射器。在一實施例中，此注射器為裝有27-號尺度針、FM27橡膠針罩和塗覆FLUROTEC®的4023/50橡膠柱塞之OMPI 1mL的長玻璃注射器。

醫藥配製物之治療用途

本發明之醫藥配製物，除了其他之外，可用於治療、預防或改善任何與PD-1活性有關的疾病或病症，包括由PD-1所媒介的疾病或病症。可藉由投予本發明醫藥配製物治療或預防的例示非限定疾病或病症包括病毒感染、自體免疫疾病和各種癌症，例如腦癌、肺癌、前列腺癌、大腸直腸癌、頭頸癌、皮膚癌、各種血液癌症及子宮內膜癌。

實例

提出下列實例用以提供本項技術之一般技術者如何製造及使用本發明方法和組合物之完整揭示和說明，且不希望限制發明者所認為之發明範圍。雖已盡力確保所用的相關數字(例如量、溫度等)之正確性，但仍應考量某些實驗誤差和偏差。除非另有指出，否則份數為重量份，分子量為平均分子量，溫度係以攝氏度數表示，而壓力為或接近大氣壓。

實例1：開發抗-PD-1抗體配製物

配製活動之目標為開發具有下列屬性之配製物： ●具有足以藉由靜脈輸注遞送250mg或更多劑量之抗-PD-1抗體濃度的液體配製物；●以常用的稀釋液，例如，用於輸注之0.9%氯化鈉注射液或5%葡萄糖注射液稀釋後為安定的、近乎等張之配製物；●在第1類透明玻璃小瓶及標準漿液塞蓋包裝中為相容及安定的配製物；及●支持長期安定性之無菌藥物產品(DP)溶液；○在進行處理和熱壓力下，將抗體高分子量(HMW)物類減至最小的配製物；○當受到熱壓力時，在相對的抗體帶電種類分布之變化上降至最小的配製物；及○在進行處理和熱壓力下，保持生物活性的配製物。

在整個配製物開發中，使用三種主要的蛋白壓力條件(代表極端的處理條件，超過此條件抗體藥物產品將無法承受處理、製造、運送、儲存和上標籤)來開發及最佳化抗體配製物並評估潛在的現實世界壓力對藥物產品安定性的效應。這些壓力條件包括：

●於室溫攪動(迴旋震盪)蛋白溶液。迴旋震盪玻璃小瓶超出在蛋白處理和製造期間所發生的攪動。

●相對於預期DP儲存條件(2℃-8℃)，於升高的溫度下(37℃、40℃或45℃)培養蛋白溶液。

●將蛋白進行多個冷凍解凍循環。因為蛋白在DP製造期間將至少經歷一個冷凍解凍循環，所以多個冷凍解凍循環係刺激並超過蛋白預期經歷的實際壓力。

最初的配製物開發工作有4個主要目標：

1.選擇緩衝劑和pH：緩衝劑和pH之選擇可能對蛋白的安定性具有大的效應，因此決定最適的緩衝劑類別和pH為一重要程序。展現這些部分的研究係驗證選擇最適用於抗體之緩衝劑和pH之基本理由。

2.選擇界面活性劑或有機共溶劑：界面活性劑或有機共溶劑，例如聚山梨醇酯典型地為在攪動時防止蛋白沉澱或聚集之需要。可溶性蛋白當處理、過濾、混合、製造、運送和投藥時可能會攪動。在簡單緩衝溶液中的抗體藥物物質可能因過度攪動而看起來混濁。因此，確定使蛋白在處理和攪動下安定為重要的。

3.鑑別/選擇安定/補益的賦形劑：檢測糖類、鹽類和胺基酸之添加對於其改善抗體對熱壓力之安定性及增加DP保存期限之能力。文中亦提出納入這些熱安定劑以及鑑別最終配製物中之最適濃度的基本理由。

4.選擇抗體的濃度：檢測抗體濃度對藥物產品與選擇的賦形劑之安定性效應。

最初的配製物開發活動係使用5-50mg/mL的抗-PD-1抗體並於抗-PD-1抗體之液體配製物中包括篩選的有機共溶劑、熱安定劑和緩衝劑來進行，用以鑑別與蛋白相容並增進其安定性的賦形劑，同時維持近乎生理滲透壓和低黏度供靜脈內和皮下注射。亦檢測緩衝條件用以決定最大化蛋白安定性之最佳pH(描述於文中的實例4、6和7)。

此最初的配製物開發工作的結果係用來開發適合第1期臨床研究之最初配製物。第1期配製物亦提供最適化後期臨床和商業配製物之參考。

從最初配製物開發得知，後期配製物開發活動係包括最適化pH、界面活性劑濃度和鑑別在高和低蛋白濃度下(至高175mg/mL mAb1)增進蛋白安定性之安定劑(描述於實例5、8、9和10中)。

整個配製物的開發，係就壓力和儲存安定性評估配製物。用於配製物開發研究中評估安定性之方法係描述於文中的實例3中。實例11和12係描述配製物的儲存和壓力安定性。

實例13係描述當賦形劑在特定的範圍內變化時，配製物的安定性。

這些研究所產生的結果係用來開發適合靜脈內(IV)或皮下給藥(SC)之臨床使用的安定液體配製物。實例14係描述用於文中配製物之容器。實例15、16和17係描述配製物在玻璃容器、預充填注射器和靜脈遞送裝置中之相容性和安定性。此等調配物符合配製物開發所定義之目標： ●此等開發的配製物係適合開發的劑量；●與生理條件等張的滲壓性；○50mg/mL配製物的滲透壓為大約318mOsm/kg；●支持液體狀態之長期穩定性的無菌DP溶液；○在2-8℃長期儲存後，最少的HMW抗體形成；○在2-8℃長期儲存後，帶電類抗體的相對分布極少到無發生變化；及○在加速儲存和壓力條件下，及於5℃儲存12個月後，在抗體DP中觀察最少的可見顆粒形成。

從文中的說明將可明瞭其他的配製物屬性。

抗-PD-1抗體：抗-PD-1抗體係描述US20150203579中，其係以全文併入文中。用於下列實例中的例示抗體為全長的人類抗-PD-1抗體H4H7798N(亦揭示於US20150203579，稱為「REGN2810」或「cemiplimab」)，其係包括一包含SEQ ID NO：9胺基酸序列之重鏈及一包含SEQ ID NO：10胺基酸序列之輕鏈；一包括SEQ ID NO：1/2之HCVR/LCVR胺基酸序列對；及包括SEQ ID NO：3-8之重鏈和輕鏈CDR序列；且文中係稱為「mAb1」。

實例2：例示的配製物

在特定的實施例中，mAb1係配製為含有5mg/ml±0.75mg/ml至250mg/ml±45.0mg/ml mAb1、10mM±2mM組胺酸緩衝劑、0.2%±0.1%w/v聚山梨醇酯、1%±0.2%至10%±2%w/v蔗糖及1%±0.02%至5%±1%w/v脯胺酸，pH 6.0±0.3之水性緩衝配製物。

例示的配製物包括：

●安定低黏度之醫藥配製物係包括：25mg/ml±3.75mg/mL mAb1、10±2mM組胺酸緩衝劑、0.2%±0.1%w/v聚山梨醇酯80、5%±1%w/v蔗糖及1.5%±0.3%w/vL-脯胺酸，pH 6.0±0.3。

●安定低黏度之醫藥配製物係包括：50mg/ml±7.5mg/mL mAb1、10±2mM組胺酸緩衝劑、0.2%±0.1%w/v聚山梨醇酯80、5%±1%w/v蔗糖及1.5%±0.3%w/v L-脯胺酸，pH 6.0±0.3。

●安定低黏度之醫藥配製物係包括：150±23mg/mL mAb1、10±2mM組胺酸緩衝劑、0.2%±0.1%w/v聚山梨醇酯80、5%±1%w/v蔗糖及1.5%±0.3%w/v L-脯胺酸，pH 6.0±0.3。

●安定低黏度之醫藥配製物係包括：175±27mg/mL mAb1、10±2mM組胺酸緩衝劑、0.2%±0.1%w/v聚山梨醇酯80、5%±1%w/v蔗糖及1.5%±0.3%w/v L-脯胺酸，pH 6.0±0.3。

實例3：用於評估配製物安定性之方法

應用下列分析來評估配製物安定性：

●以肉眼檢查顏色和外觀

●pH

●以405nm增加的OD或以散射濁度測定法測量濁度

●以流式顯微影像(MFI)(提報為所得到的顆粒劑)及光阻法(HIAC)進行顆粒物質分析

●逆相-超效液相層析(RP-UPLC)之蛋白濃度

●粒徑排阻-超效液相層析(SE-UPLC)，或還原或非還原微晶片毛細電泳十二烷基硫酸鈉(MCE-SDS)PAGE所測之純度

●陽離子交換層析-超效液相層析(CEX-UPLC)，或成像毛細管等電聚焦電泳(iCIEF)之電荷變體分析

●生物分析之效力：使用一生物分析測定各樣本之相對效力並定義為：(IC₅₀參照樣本/IC₅₀樣本)*100%。所測量的儲存安定性樣本之效力必須在所測量的參照標準效力之50%至150%內。

配製物的物理安定性係指例如顏色、外觀、pH、濁度和蛋白濃度之性質。溶液中可見粒子的存在可藉由肉眼檢查來偵測。若溶液為澄清至些微乳白，基本上無可見粒子且為無色至淡黃色，則其係通過肉眼檢查。此外，以OD於405nm測量濁度，亦可用來偵測溶液中的顆粒。405nm增加之OD可能表示有顆粒存在，乳白色增加或檢測項目的顏色變化。MFI係用來測量大小2μm之微可見顆粒。mAb1的蛋白濃度係以RP-UPLC分析來測量並以相對於起始物之蛋白回收百分比表示。在RP-UPLC分析中，mAb1係從RP管柱溶離出為單一波峰。蛋白濃度係從mAb1總波峰面積，藉由將其與使用mAb1標準所產生的校正曲線相比較所測量。回收的百分比係以相對於起始蛋白濃度所測量的蛋白濃度為基準來計算。

化學安定性係指蛋白的共價修飾形式(例如，共價聚集物、裂解產物或電荷變體形式)及非共價修飾形式(例如非共價聚集物)。較高和較低分子量的降解產物可藉由SE-UPLC和MCE-SDS法與原態mAb1的分離。SE-UPLC和MCE-SDS方法中降解的mAb1百分比係從非原態波峰之面積與總mAb1波峰面積的比率來計算。mAb1之電荷變體形式係使用CEX-UPLC和iCIEF來解析。在CEX-UPLC法中，滯留時間比主要波峰更早的波峰係標示為「酸性」波峰；滯留時間比主要波峰更晚的波峰係標示為「鹼性」波峰。在iCIEF法中，波峰集中在pI低於主要波峰者係標示為「酸性」波峰，而該等集中在pI高於主要波峰者係標示為「鹼性」波峰。

實例4：不同緩衝劑和pH之效應

緩衝劑和pH對mAb1之熱安定性的效應係於液體配製物中，藉由於一系列不同pH範圍的緩衝系統中將5mg/mL mAb1在45℃培養28天進行檢測。研究下列pH和緩衝系統：乙酸鹽(pH 4.5、5.0、5.5)，組胺酸(pH 5.5、6.0、6.5)和磷酸鹽(pH 6.0、6.5、7.0)。以SE-UPLC分析之結果為基準，當mAb1調配於pH 6.0至6.5間之組胺酸緩衝劑中時(表1)，觀察到最大蛋白安定性。

^a為相對於起始物之純度的相對變化。在所有的配製物中，起始物(無培養)以SE-UPLC所測含有97.2%原態波峰，及以CEX-UPLC所測含有49.0%主要波峰。

CEX=陽離子交換；DS=藥物物質；HMW=高分子量；LMW=低分子量；OD=光學密度；RP=逆相；SE=粒徑排阻；UPLC=超效液相層析

以來自CEX-UPLC分析的結果為基準，當mAb1調配於pH介於6.0至6.5間之組胺酸緩衝劑中或pH介於5.0至5.5間之乙酸鹽緩衝劑中時，觀察到最大蛋白安定性。這些分析亦顯示聚集物(亦即，形成HMW物)、片段(亦即，形成LMW類)，及形成電荷變體為主要的降解路徑。選擇組胺酸緩衝劑作為配製物的緩衝劑，因為就形成HMW和LMW類和形成電荷變體而言，組胺酸緩衝劑提供最佳的整體蛋白安定程度。選擇6.0作為配製物的pH係因為形成HMW物和電荷變體之主要的降解路徑，在此pH下可減至最少。基於這些結果，mAb1配製物選擇pH 6.0之10mM組胺酸緩衝劑。

實例5：組胺酸緩衝劑之PH篩選

於高濃度液體配製物中檢測緩衝劑和pH對mAb1之熱安定性的效應。具有或不具有熱安定劑下於範圍在pH 5.3、5.5、5.8、6.0和6.3之一系列組胺酸緩衝劑中將150mg/mL mAb1於45℃培養28天。以來自SE-UPLC分析的結果為基準，當mAb1調配於pH 5.8至6.3間之組胺酸緩衝劑中時(圖1)，含9%蔗糖，觀察到最大蛋白安定性。以來自CEX-UPLC分析的結果為基準，當mAb1調配於pH 5.3至6.0間之組胺酸緩衝劑中時(表2)，觀察到最大蛋白安定性。

^a為相對於起始物之純度的相對變化。在所有的配製物中，起始物(無培養)以SE-UPLC所測含有94.0%原態波峰，及以CEX-UPLC所測含有48.7%主要波峰。

^b樣本膠化。未進行進一步的分析。NA=不適用

CEX陽離子交換；HMW高分子量；LMW低分子量；OD光學密度；RP逆相；SE粒徑排阻；UPLC超效液相層析

這些分析亦顯示聚集物(亦即，形成HMW物)及形成電荷變體為主要的降解路徑。選擇6.0作為DP配製物的pH係因為形成HMW物和電荷變體之主要的降解路徑，在此pH下可減至最少。基於這些結果，mAb1高濃度DP配製物選擇pH 6.0之10mM組胺酸緩衝劑。

實例6：選擇抗攪動壓力之保護劑

安定劑，例如界面活性劑和有機共溶劑通常係加到抗體配置物中保護蛋白免於因攪動引起的聚集作用。檢測有機共溶劑和界面活性劑對5mg/mL mAb1之液體配製物的攪動壓力安定性和熱安定性壓力效應。評估下列有機共溶劑和界面活性劑：0.1%聚山梨醇酯20、0.1%聚山梨醇酯80和1.0%PEG3350。攪動壓力安定性的結果係彙整於表3中。

^a為相對於起始物之純度的相對變化。在所有5種的配製物中，起始物(無培養)以SE-UPLC所測含有98.2%原態波峰，及以CEX-UPLC所測含有49.1%主要波峰。

^b此配製物亦含有5%蔗糖。

在缺乏有機共溶劑或界面活性劑下，當以迴旋震盪攪動120min後mAb1為不穩定的。在缺乏有機共溶劑或界面活性劑下，以迴旋震盪攪動後，溶液變得混濁，在濁度上展現實質上增加，及以SE-UPLC測定聚集物增加15.3%，以及RP-UPLC所測蛋白回收有24%漏失(表3)。1%PEG3350並未提供mAb1在迴旋震盪120min後充分的安定性。在1%PEG3350的存在下，溶液變得混濁，及展現濁度增加(表3)。相反的，0.1%聚山梨醇酯20和0.1%聚山梨醇酯80二者使mAb1免於因攪動引發的不安定達到相同的程度床3)。

然而，當於45℃培養時，含有0.1%聚山梨醇酯80之配製物，相較於含有0.1%山梨醇酯20的配製物係具有降低量的聚集物(表4)。選擇0.1%聚山梨醇酯80作為mAb1 DP配製物的界面活性劑係因為其使得蛋白對攪動壓力安定，對蛋白熱安定性比聚山梨醇酯20具有較低的負面效應(如SE-UPLC和CEX-UPLC分析所測)，且在單株抗體配製物之使用上具有安全史。

實例7：選擇抗熱壓力之保護劑

安定劑，例如蔗糖通常係加到抗體配製物中用以增加液體配製物中蛋白的熱安定性。當以5%蔗糖調配並於加速的條件下培養時，五(5)mg/mL mAb1之液體配製物展現增進的安定性(表4)。

^b此配製物亦含有5%蔗糖

在45℃培養29天後，相較於無蔗糖的對照配製物中HMW物增加2.8%，含5%蔗糖的配製物增加了1.7%。基於該理由，選擇蔗糖作為熱安定劑。為了使配製物等張並使熱安定性最大化，將mAb1配製物之蔗糖濃度增加至10%。

實例8：安定劑之最適化

最適化熱安定劑的目標為鑑別可用於開發支撐至高200mg/mL抗體濃度之DP配製物的組份。在最初的配製物中選擇10%蔗糖。發現，含10%蔗糖，mAb1的黏度在20℃為約20cP且就擴大的後期和商業產品被認為太高了。因此，需要具有有利安定性和較低的黏度之經修改的mAb1配製物。

在低濃度配製物開發期間選擇蔗糖作為mAb1之熱安定劑。就高濃度配製物的開發，係評估不同濃度的蔗糖和L-脯胺酸對150和175mg/mL濃度之mAb1於25℃(表5)和40℃歷時1個月的安定性和黏度。當配製物於40℃培養28天時，HMW物的形成隨著增加的蔗糖濃度降低。3%L-脯胺酸提供類似5%蔗糖之安定性，且在9%的蔗糖觀察到最大的安定性。

雖然9%蔗糖，相較於3%L-脯胺酸，提供些微較佳的安定性，但其亦增加了配製物的黏度。含9%蔗糖之175mg/mL,mAb1配製物具有27厘泊(centipoise)的黏度，其在製造和給藥上具有挑戰。含3%脯胺酸之175mg/mL mAb1配製物具有大約20厘泊的黏度，其就目前的製造程序為可應付的。

^apH、SE-UPLC和CEX-UPLC「起始物」結果為起始配製物的平均值

然而，以儲存在-20℃、-30℃和-80℃之安定性為基準，發現，含3%脯胺酸之配製物並不如含蔗糖之配製物穩定(圖2)。如圖2所示，配製物F3(含5%蔗糖)在-20℃、-30℃和-80℃下為穩定的，含有3%HMW物。

以50mg/mL配製物檢測L-脯胺酸在安定mAb1之效應。於45℃培養28天後，相較於無L-脯胺酸之配製物，含L-脯胺酸之配製物顯示較低量的HMW物，其顯示L-脯胺酸穩定了濃度50mg/mL之抗體(表6)。此外，以生物物理技術檢測L-脯胺酸對抗體蛋白結構的影響(傅立葉轉換紅外線光譜儀、圓偏光二色光譜、螢光發射光譜和差示掃描量熱法)。結果顯示，L-脯胺酸並不會擾亂抗體的二級和三級結構。

^a)為相對於起始物之純度變化。在所有3種的配製物中，起始物(無培養)以SE-UPLC所測含有98.5%單體波峰，及以CEX-UPLC所測含有49.1%主體波峰。。

CEX陽離子交換；DS藥物物質；HMW高分子量；LMW低分子量；OD光學密度；RP逆相；SE粒徑排阻；UPLC超效液相層析

以液體配製物進一步檢測不同安定劑對高濃度(150和175mg/mL)mAb1之熱安定性的效應。評估的安定劑為9%(w/v)蔗糖、3%(w/v)L-脯胺酸和帶有1.5%(w/v)L-脯胺酸之5%(w/v)蔗糖。加速安定性研究之結果係彙整於表7中。

^a為相對於起始物之純度變化。在所有3種的配製物中，起始物(無培養)以SE-UPLC所測含有97.3%原態波峰，及以CEX-UPLC所測含有49.6%主體波峰。

於40℃培養28天後，9%蔗糖提供最佳的安定且在高濃度配製物中具有最高的黏度。於40℃下28天後，5%蔗糖/1.5%L-脯胺酸配製物之安定性排名第二。於25℃培養3個月後，在所有檢測的配製物中mAb1的安定性幾乎相同；然而，含5%蔗糖/1.5%L-脯胺酸之配製物比其他二種配製物稍佳。然而，在-20℃、-30℃和-80℃培養後，5%和9%之蔗糖比3%脯胺酸提供更佳的安定性(圖3)。含5%蔗糖/1.5%L-脯胺酸之175mg/mL mAb1在20℃具有14cP的黏度。為了提供得到等張溶液和達到安定性與黏度間最佳平衡的配製物，選擇5%蔗糖/1.5%L-脯胺酸供開發抗體晚期DP配製物。

實例9：黏度調節劑之選擇

蛋白配製物之黏度係隨蛋白濃度增加而呈現指數性增加。在開發配製物時，在20℃時黏度開始超過約10至15cP，必須考量配製物的黏度：此舉僅是因為黏度與經由預充填注射器(PFS)或其他針劑遞送裝置之注射容易性相關；更重要地維持合理的黏度對於開發遞送裝置，例如自動注射器乃為關鍵。以具有下列可能黏度調節劑，脯胺酸、精胺酸HCl、組胺酸HC、乙酸鎂和NaCl之液體配製物檢測賦形劑對配製物黏度的效應。圖4係彙整含黏度調節劑之150mg/mL mAb1的黏度。精胺酸HCl、組胺酸HCl、乙酸鎂和NaCl在25-100mM時，降低了150mg/mL mAb1配製物的黏度。

亦檢測黏度調節劑對mAb1配製物之安定性的影響。製備含黏度調節劑，例如精胺酸HCl、組胺酸HCl、乙酸鎂和NaCl之150mg/mL mAb1配製物並於45℃培養28天。結果係顯示於圖5中。已發現，當mAb1在無黏度調節劑下調配時，觀察到最大的蛋白安定性；所有的這些黏度調節劑鹽類對mAb1安定性有負面影響。因此，鹽類不納入最終的配製物中。

L-脯胺酸，作為一安定劑，對於50mg/mL或更高的抗體濃度，使溶液黏度最小化。就有或無蔗糖之含有不同量L-脯胺酸的高濃度抗體之加速安定性研究結果係彙整於表7中。於25℃培養3個月後，相較於其他二種配製物，就有關HMW物的形成，含5%蔗糖/1.5%L-脯胺酸之配製物提供些微改善的安定性。於40℃培養28天後，含9%蔗糖之配製物提供最佳的安定性，且含5%蔗糖/1.5%L-脯胺酸之配製物排名第二。含9%蔗糖之175mg/mL抗體配製物具有20cP的黏度，而含5%蔗糖/1.5%L-脯胺酸之175mg/mL配製物在20℃係具有14cP的黏度。在升高的蛋白濃度以及安定抗體上，於配製物中添加L-脯胺酸對於降低黏度為重要的。

總言之，選擇5%蔗糖/1.5%L-脯胺酸用於50mg/mL和高濃度抗體配製物。在所有受試的抗體濃度中(至高175mg/mL)，此賦形劑組合達成了具有可接受安定性和黏度之等張配製物。

實例10：聚山梨醇酯(PS)濃度之最適化

在配製物開發期間，當攪動無界面活性劑的mAb1配製物時，觀察到較高級分子量物類的形成及濁度增加。藉由添加聚山梨醇酯80(PS 80)使蛋白對攪動安定化。在高濃度mAb1液體配製物開發期間，當高級分子量物類增加時，觀察到對攪動的不安定性。進行一研究來測定保護175mg/mL mAb1免於攪動所引發的不安定所需之最少聚山梨醇酯80的量。本研究中配製物係含有5%蔗糖和1.5%L-脯胺酸，而得以用更代表性的最終配製物之配製物組成物研究聚山梨醇酯80的效應。包括在本研究中的標稱聚山梨醇酯80濃度為0%、0.02%、0.04%、0.06%、0.08%、0.1%、0.15% 和0.2%(w/v)。在缺乏聚山梨醇酯80下，在以迴旋震盪攪動後溶液變得混濁且濁度實質增加。在攪動120分鐘後，觀察到聚山梨醇酯80濃度依賴的降低%HMW之量。發現，0.15-0.2%聚山梨醇酯80之濃度係足以使150mg/mL和175mg/mL mAb1對攪動引發的聚集作用安定(表8)。添加0.2%(w/v)(標稱值)聚山梨醇酯80，在攪動120分鐘後，完全防止HMW物形成。

表9係詳列在攪動後(迴旋震盪120分鐘)，聚山梨醇酯80濃度對175mg/mL mAb1之安定性的效應。

^a為相對於起始物之純度的相對變化。在所有配製物中，起始物(無培養)以SE-UPLC所測含有97.4%原態波峰，及以CEX-UPLC所測含有48.2%主體波峰。

CEX陽離子交換；HMW高分子量；LMW低分子量；NA未提供；OD光學密度；RP逆相；SE粒徑排阻；UPLC超效液相層析

0.2%(w/v)聚山梨醇酯80保護mAb1免於攪動引發的不安定性之能力係以另外的50mg/mL最終配製物之研究來確認(表10)。

^a為相對於起始物之純度的相對變化。在所有5種的配製物中，起始物(無培養)以SE-UPLC所測含有98.5%單體波峰，及以CEX-UPLC所測含有52.8%主體波峰。

CEX陽離子交換；DS藥物物質；HMW高分子量；LMW低分子量；NA未提供；OD光學密度；RP逆相；SE粒徑排阻；UPLC超效液相層析

以這些結果為基準，選擇0.2%(w/v)聚山梨醇酯80作為介面活性劑，因為其提供了足以在攪動壓力下防止HMW物形成之安定性。

實例11：例示配製物之儲存和壓力安定性

玻璃小瓶中50mg/mL和175mg/mL mAb1配製物之儲存安定性係如表11和表12所示，及二種配製物之加速和壓力安定性數據係分別如表13和表14所示。探討安定性研究顯示，玻璃小瓶中的50mg/mL和175mg/mL mAb1配製物，當儲存於2℃至8℃時，至少24個月為安定的。此外，50mg/mL mAb1配製物在加速和壓力條件下亦展現優越的安定性。當於25℃儲存至少3個月及40℃儲存至少7天，配製物為安定的，其顯示50mg/mL配製物與最初容器封蓋組份之相容性。當以SE-UPLC或CEX-UPLC及iCIEF測量時，並未觀察到顏色或外觀、濁度、微粒物質、pH、蛋白濃度、純度的明顯改變，且在這些條件下仍保有效力。

CEX陽離子交換；DS藥物物質；HMW高分子量；iCIEF成像毛細管等電聚焦電泳；LMW低分子量；MFI流式顯微影像；單體、完整抗體；NR不需要；OD光學密度；RP逆相；SE粒徑排阻；UPLC超效液相層析

CEX陽離子交換；DS藥物物質；HMW高分子量；iCIEF成像毛細管等電聚焦電泳，LMW低分子量；MFI流式顯微影像；單體、完整抗體；NR，不需要；OD光學密度；RP逆相；SE粒徑排阻；UPLC超效液相層析

實例12：包括組胺酸緩衝劑、蔗糖和聚山梨醇酯之mAb1配製物的安定性

表15-24係彙整包括10mM組胺酸緩衝劑pH 6.0、蔗糖和聚山梨醇酯之例示的mAb1配製物的儲存安定性。

CEX=陽離子交換；HMW=高分子量；iCIEF=成像毛細管等電聚焦電泳；LMW=低分子量；MCE-SDS=微晶片毛細管電泳-十二烷基硫酸鈉；MFI=流式顯微影像；NR=不需要；OD=光學密度；RH=相對溼度；RP=逆相；SE=粒徑排阻；UPLC=超效液相層析

表25-27係彙整例示配製物之壓力安定性。

實例13：確定可接受範圍(PAR)研究

在製造mAb1藥物產品期間(DP)，DP的組成可變動。這些變動可包括活性成份的濃度、賦形劑的濃度及/或配製物的pH。因為任何這些參數的變動可能潛在地影響藥物產品的安定性或效力，因此進行確定可接受範圍(PAR)研究來評估DP組成物在定義範圍內的變動是否會影響mAb1 DP之安定性或效力。

使用二種實驗設計(DOE)研究來評估各配製物參數以及交互作用對配製物安定的效應：●部分因子設計前-PAR(Pre-PAR)研究，係以加速和壓力安定性評估來鑑別可能影響mAb1 DP安定性之重要配製物參數； ●全因子設計PAR研究，包括從Pre-PAR研究所鑑別出的重要配製物參數，其係以長時的保存期安定性來驗證配製物參數的可接受範圍。

前-PAR研究設計

為了評估對產品品質可能為重要的DP組成物之關鍵及/或交互作用的配製物參數，施行一部分因子DOE，藉由改變所有配製物參數來檢測配製物之加速和壓力安定性，包括蛋白濃度(±10%)、緩衝劑和安定劑濃度(±20%)、界面活性劑濃度(±50%)和pH(±0.3單位)。受試的配製物參數範圍係定義為等於或大於規格允收標準和製造經驗。此研究係以統計軟體使用2^(6-2)解析IV部分因子實驗所設計。結合四個目標配製物作為中心點，此研究係包括如表29中所示之20個運作。

將所有20個配製物於加速條件和壓力條(25℃、37℃、冷凍/解凍[F/T]及攪動)定性並評估物理/化學性質和安定性，包括肉眼檢查、pH、濁度、滲透信、導電性、純度、蛋白濃度和回收、電荷變體分析及微可見粒子分析。

前-PAR研究結果

所有20種配製物在攪動或F/T壓力後並無顯示變化。以回歸模型分析25℃和37℃培養的結果(JMP擬合模型，含標準最小平方品格和效應槓桿加強)。所有實驗配製物的主要和交互作用變數對重要品質屬性之統計分析顯示，pH、蛋白濃度和蔗糖濃度對產品品質至為重要。受影響的二種產品質屬性為HMW物和酸性電荷變體。其他的配製物參數，包括在受試範圍內之組胺酸、脯胺酸或聚山梨醇酯80濃度，發現對於產品品質並不具有統計上顯著的影響。在加速的條件下，並無影響配製物安定性之二級或更高的交互作用。前-PAR研究結果顯示，pH、mAb1濃度和蔗糖濃度對於mAb1配製物安定性為關鍵，且被視為50mg/mL mAb1配製物之關鍵配製物參數。

雖然pH、mAb1濃度和蔗糖濃度經鑑定為重要配製物參數，但這三個因子的影響對於品質屬性影響小。以統計分析為基準，5.7-6.3之pH範圍變化、45-55mg/mL的mAb1及/或4-6%的蔗糖對於形成HMW物和酸性電荷變體可能具有<15%的影響。

為了確認在建議的DP儲存條件下對長期儲存安定性的影響，係以一長期儲存安定性之PAR研究進一步評估下列三個重要配製物參數：pH、mAb1濃度和蔗糖濃度。

PAR研究設計

施行一全因子DOE設計，以變動的pH(±0.3單位)、蛋白濃度(±10%)和蔗糖濃度(±20%)來檢驗配製物之長期保存期的儲存安定性，其產生8個實驗運作項(表30)；納入參照配製物(配製物3，表30之目標配製物)作為中心點配製物。

全因子研究設計能估算所有主要效應項以及交互作用項。受試的配製物參數範圍，定義為等於或大於規格允收標準和製造經驗，仍與前-PAR研究相同。

將實驗配製物的安定性與pH 6.0含所有其標稱濃度之配製物組份(F3)的參照配製物之安定性相比。PAR研究係使用以代表性商業製造過程之批量製造的mAb1 DS。將DP配製物填入具有20mm塗覆FluroTec®之West S2-451 4432/50 GRY B2-40塞蓋的10mL Schott第1類硼矽玻璃小瓶(商業DP代表)，並於2-8℃評估長期儲存安定性。根據表31中的分析計畫來研究配製物。

PAR研究結果 對HMW物形成之效應

當以SE-UPLC測量全部9種配製物於2-8℃歷時高達12個月，%HMW並不具有意義的增加。全部的數值皆在上限規範以下，且並未觀察到%HMW隨時間顯著增加。

就50mg/mL mAb1 DP在2-8℃時發現HMW物的形成極緩慢。歷時高達12個月，在9種配製物中最大的%HMW相對量變化為~0.2%。因為%HMW的變化很小，且單體濃度應可視為固定，由單體聚集成HMW物應可簡化為零級反應。因此，使用簡化的線性模型來分析%HMW安定性數據。藉由線性擬合隨時間而變的%HMW，從各配製物衍算出HMW物的形成速率。

針對主要因子以及所有交互作用項目，使用回規模型(JMP擬合模型，含標準最小平方品格和效應槓桿加強)分析速率。所產生的回歸模型為統計上顯著的，其中0.74.mAb1濃度之R²、pH和時間為統計上顯著的，但對%HMW物形成的效應為統計上不顯著的，僅貢獻至高0.1%。

因此，這些因子，5.7-6.3之pH、45-55mg/mL之mAb1濃度和之4-6%蔗糖濃度，對於2-8℃之%HMW安定性並無實際相關。

在所有9種配製物至高12-個月的時間點，%HMW係在定義的允納標準限度4%以下，且因此係在保存期規範之放行和期限內。此外，線性模型預期在2℃-8℃之24個月保存期後，範圍從0.6%至0.8%之%HMW，亦應在規範限度以下。

以長期儲存安定性數據為基準，發現研究範圍內之主要配製物參數的變異對mAb1配製物並無顯著影響。50mg/mL mAb1配製物就有關HMW物的形成上，在受試的配製物組成範圍內為穩健的。

對酸性電荷變體形成之效應

當測量全部9種配製物於2-8℃歷時高達12個月，%酸性電荷變體並不具有意義的增加。全部的數值皆在上限規範以下，且並未觀察到%酸性電荷變體隨時間顯著增加。

就有關酸性電荷變體的形成上，在受試的配製物組成範圍內mAb1配製物被視為穩健的。

對一般品質屬性之效應

研究pH、mAb1濃度和蔗糖以及儲存時間對其他DP一般品質屬性之效應，包括以SEC所測之外觀、pH、濁度、微可見顆粒、蛋白回收、%單體和%LMW，及以iCIEF所測之%主體和%鹼性電荷和生物活性。所有的數值係在規範內，且並未觀察到隨時間而變的有意義變化或PAR配製物間的差異：●以肉眼檢查或濁度測量皆未偵測到沉澱或可見顆粒(405nm之OD及散射濁度測量)；●在蛋白回收上並未觀察到統計上顯著的變化(RP-UPLC)；●配製物的pH為穩定的；●微可見顆粒上並無有意義的增加，且在PAR研究配製物間的微可見顆粒計數上並未觀察到有意義的差異。

○就HIAC所測之微可見顆粒，所有的數值皆在USP<788>設定的允納限制以下，且在配製物間的微可見顆粒上並未觀察到有意義的變異。

○此外，亦以MFI測量微可見顆粒。並在配製物間的微可見顆粒上並未觀察到有意義的變異。

●就所有的配製物在儲存期間，生物分析結果係在規範限制內。

此等結果係驗證，在研究範圍內的重要配製物參數(pH、mAb1濃度和蔗糖濃度)之變異對mAb1配製物安定性不具有顯著的影響。就有關一般品質屬性在受試配製物組成的範圍內，50mg/mLmAb1配製物為穩健的。

冷凍和解凍對PAR配製物安定性之效應

50mg/mL mAb1配製物之物理和化學安定性，係檢測在二個冷凍和解凍循環後，不受重要配製物參數之變化影響，亦即相對於參照mAb1，±0.3pH單位變化，mAb1濃度±10%變化，及/或蔗糖±20%變化。

觀察下列效應： ●以肉眼檢查或濁度測量皆未偵測到沉澱(405nm之OD及散射濁度測量)；●並未觀察到蛋白漏失(RP-UPLC)；●配製物的pH能保持固定；●以光阻法(HIAC)或流式顯微影像(MFI)所測在研究配製物間之微可見顆粒計數上並未觀察到有意義的差異。在2個F/T循環後，微可見顆粒有些微增加，其可在填充DP前藉由經0.22μm過濾器過濾來移除。

●2個冷凍和解凍循環後，如SE-UPLC所測，所有配製物在純度上並未觀察到可察覺的變化；●2個冷凍和解凍循環後，如iCIEF所測，所有配製物在電荷變體分佈上並未觀察到可察覺的變化。

●此生物分析結果驗證，所有配製物在進行2個冷凍和解凍循環後仍維持mAb1活性。

結論

將前-PAR和PAR研究為主的實驗設計(DOE)用來評估配製物參數以及交互作用對配製物安定性的效應。使用加速和安定性之前-PAR研究鑑別出pH、mAb1濃度和蔗糖濃度為重要的配製物參數。全因子PAR研究以長期保存期安定性驗證了重要配製物參數中的變異，在範圍研究內，並不會影響mAb1 DP的品質。

特言之，於5℃儲存12個月之50mg/mL mAb1 DP的安定性和效力在±10%的蛋白濃度變化，±20%蔗糖的變化、L-脯胺酸及/或組胺酸濃度，及/或±50%聚山梨醇酯80濃度變化，及/或±0.3pH單位變化下，並不受影響。

PAR研究驗證了mAb1配製物的穩健性。整體而言，前-PAR和PAR研究之結果支持mAb1配製物在研究範圍內之組成變異，在建議的儲存條件(2至8℃)下應不會對mAb1 DP安定性有不良影響。

50mg/mL mAb1 FDS樣本在2個冷凍和解凍循環後(-30℃冷凍和室溫解凍)為穩定的。相對於對照的mAb1 FDS(50mg/mL)，mAb1 FDS對冷凍/解凍壓力的安定性在±10%的蛋白濃度變化，±20%蔗糖的變化及/或±0.3pH單位變化下，並不受影響。這些冷凍/解凍研究之結果提供了支持50mg/mL mAb1 FDS可在mAb1 DP製造期間冷凍和解凍而對FDS安定性無不良影響。

實例14：容器

以玻璃小瓶開發mAb1配製物(用於靜脈輸注之遞送)。希望用於之後臨床開發和產品商業化之mAb1藥物產品的容器亦為預充填注射器，其係以供自行注射或併入自動注射器裝置中供自行注射之單通道注射器來呈現。

實例15：mAb1配製物於玻璃小瓶中的安定性

表32-35係彙整例示mAb1配製物於10mL玻璃小瓶中之安定性。

CEX陽離子交換；DS藥物物質；HMW高分子量；iCIEF成像毛細管等電聚焦電泳，LMW低分子量；MFI流式顯微影像；NR，不需要；OD光學密度；RP逆相；SE粒徑排阻；UPLC超效液相層析

CEX陽離子交換；DS藥物物質；HMW高分子量；iCIEF成像毛細管等電聚焦電泳，LMW低分子量；MFI流式顯微影像；NR不需要；OD光學密度；RP逆相；SE粒徑排阻；UPLC超效液相層析

發現二種不同填充量的配製物對於壓力(40℃/75%RH)為穩定的(數據未顯示)。

實例16：之Ab1配製物於預充填注射器中的安定性

表36-38係彙整高濃度mAb1配製物於預充填注射器中的安定性。

實例17：mAb1配製物在靜脈內(IV)遞送裝置中的相容性

就相容性評估，係將50mg/mL mAb1配製物加到含有0.9%氯化鈉注射液或5%葡萄糖注射液之100mL IV袋中，評估在靜脈內遞送時mAb1是否為穩定的。就支撐病患體重的變動性，本研究中係檢測二種混合物濃度1.0mg/mL mAb1和25mg/mL mAb1，用以反映低給劑和高給劑狀況。在相容性研究期間係使用下列IV混合物組份：

●藥物產品

○50mg/mL mAb1 DP

●稀釋劑

○0.9%氯化鈉注射液

○5%葡萄糖注射液

●IV袋

○預充填0.9%氯化鈉注射液之聚氯化乙烯(PVC)與鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)所製造的IV袋

○預充填5%葡萄糖注射液注射液之聚氯化乙烯(PVC)與DEHP所製造的IV袋

○預充填0.9%氯化鈉注射液之聚稀烴(PO)所製造的IV袋

○預充填5%葡萄糖注射液之聚稀烴(PO)所製造的IV袋

○預充填0.9%氯化鈉注射液之聚丙烯所製造的IV袋

○預充填5%葡萄糖注射液之聚丙烯所製造的IV袋

●IV幫浦

○蠕動幫浦

○流體置換幫浦

●IV輸注套組

○PVC與DEHP所製造之IV套組

○PVC與對鄰苯二甲酸二辛酯(DEHT)所製造之IV套組

○PVC與偏苯三酸三辛酯(TOTM)所製造之IV套組

○聚乙烯襯裡之PVC所製造的IV套組

○聚胺基甲酸酯所製造之IV套組

●過濾器

○0.2μm聚醚碸內置式過濾器

○1.2μm聚醚碸內置式過濾器

○5μm聚醚碸內置式過濾器

○15μm聚醚碸內置式過濾器

用於本研究之DP為使用代表性DP商業製程之GMP所製造。含有混合物的IV袋最初係在5℃置放24小時；然後將IV袋於25℃培養至少8小時。培養後，將各輸注套組與IV袋連接，引入混合物並於周圍室溫保持1小時。然後將各混合物經由個別的輸注套組以25mL/h和500mL/h的速率抽送。

用於評估混合物相容性之方法：使用下列分析評估mAb1混合物與用於IV遞送裝置之物質的相容性：

●肉眼檢查之顏色和外觀

●pH

●於405nm之增加的光學密度(OD)所測量的濁度

●以光阻法(HIAC)於混合物上進行微可見分析

●以逆相超效液相層析(RP-UPLC)所測之mAb1的蛋白濃度

●SE-UPLC所測之純度

●CEX-UPLC之電荷變體分析

●生物分析所測之效力：使用生物分析測定各樣本之相對效力並如下定義：(IC₅₀參照樣本/IC₅₀樣本)*100%。所測量的儲存安定性樣本之效力必須在所測的參照標準效力之50-150%以內。

結果和結論：以0.9%氯化鈉注射液或5%葡萄糖(dextrose)注射液稀釋至濃度1.0mg/mL或25mg/mL的50mg/mL mAb1配製物在所有受試的條件下於所提出的劑量範圍內及給藥條件下，在物理上和化學上皆為安定的。這些資料支持下列有關mAb1 DP之劑量製備和IV給藥的結論：

●由PVC與DEHP、PO以及聚丙烯所製造的0.9%氯化鈉注射液和5%葡萄糖注射液IV袋與mAb1 IV給藥為相容的。

●mAb1 DP可於含0.9%氯化鈉注射液或5%葡萄糖注射液之PVC、PO或聚丙烯IV袋中稀釋低至1.0mg/mL的濃度供IV給藥。

●mAb1 DP可於含0.9%氯化鈉注射液或5%葡萄糖注射液之PVC、PO或聚丙烯IV袋中稀釋高達25.0mg/mL的濃度供IV給藥。

●mAb1與0.9%氯化鈉或5%葡萄糖之混合物在PVC、PO或聚丙烯IV袋中於5℃培養24小時及於25℃培養8小時後，仍為穩定的。稀釋的mAb1 DP可在製備的6小時內給藥。

●Diluted mAb1可使用標準的輸注幫浦給藥。

●Diluted mAb1可以含DEHP之PVC、含TOTM之PVC、聚丙烯或聚胺基甲酸酯所組成的輸注套組給藥。

●mAb1可配合內置式0.2μm-5μm聚醚碸過濾器使用。

●稀釋的mAb1可用範圍從25至500mL/小時之速率給藥。

本發明不限於文中所述的特定實施例之範圍。實際上，除了該等文中所述之外，由前述說明及伴隨的圖示，本發明之各種修改對於熟習本項技術者將變得顯而易見。此等修改希望落在所附的申請專利之範圍中。

<110> 美商再生元醫藥公司胡青燕劉定江

<120> 安定之抗體配製物

<130> 10171WO01

<150> 62/482,270

<151> 2017-04-06

<160> 11

<170> FastSEQ for Windows Version 4.0

<210> 1

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 1

<210> 2

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 2

<210> 3

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 3

<210> 4

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 4

<210> 5

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 5

<210> 6

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 6

<210> 7

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 7

<210> 8

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 8

<210> 9

<211> 444

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> aa 1-117：HCVR aa 118-444：HC恆定區

<400> 9

<210> 10

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> aa 1-107：LCVR aa 108-214：LC恆定區

<400> 10

<210> 11

<211> 443

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HC(減去C-端離胺酸)

<400> 11

Claims

一種液體醫藥配製物，其係包括：(a)專一與人類預定死亡-1(PD-1)結合之抗體，其中該抗體係在SEQ ID NO：1之重鏈可變區(HCVR)內包括三個重鏈互補決定區(CDR)(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，及在SEQ ID NO：2之輕鏈可變區(LCVR)內包括三個輕鏈CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)；(b)包含組胺酸之緩衝劑；(c)包含聚山梨醇酯之有機溶劑；(d)包含糖的安定劑；及(e)包含胺基酸之黏度調節劑；其中該配製物係具有6.0±0.3之pH。
如請求項1之醫藥配製物，其中該抗體濃度係從5mg/mL±0.75mg/mL至250mg/mL±37.5mg/mL。
如請求項2之醫藥配製物，其中該抗體濃度為25mg/mL±3.75mg/mL。
如請求項2之醫藥配製物，其中該抗體濃度為50mg/mL±7.5mg/mL。
如請求項2之醫藥配製物，其中該抗體濃度為150mg/mL±22.5mg/mL。
如請求項2之醫藥配製物，其中該抗體濃度為175mg/mL±26.25mg/mL。
如請求項1至6中任一項之醫藥配製物，其中此組胺酸緩衝劑濃度係從5mM±1mM至20mM±4mM。
如請求項7之醫藥配製物，其中該組胺酸緩衝劑濃度為10mM±2mM。
如請求項7或8之醫藥配製物，其中該組胺酸緩衝劑係包括L-組胺酸和L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物。
如請求項9之醫藥配製物，其中該L-組胺酸濃度為4.8mM±0.96mM，而該L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物濃度為5.2mM±1.04mM。
如請求項1至10中任一項之醫藥配製物，其中該聚山梨醇酯濃度係從0.01%±0.005%至0.5%±0.25%w/v。
如請求項11之醫藥配製物，其中該聚山梨醇酯濃度為0.1%±0.05%w/v。
如請求項11之醫藥配製物，其中該聚山梨醇酯濃度為0.2%±0.1%w/v。
如請求項11至13中任一項之醫藥配製物，其中該有機溶劑為聚山梨醇酯80。
如請求項11至14中任一項之醫藥配製物，其中該安定劑為蔗糖且該蔗糖濃度係從0%至20%±4%w/v。
如請求項15之醫藥配製物，其中該蔗糖濃度係從1%±0.2%至10%±2%w/v。
如請求項16之醫藥配製物，其中該蔗糖濃度為5%±1%w/v。
如請求項17之醫藥配製物，其中該黏度調節劑為脯胺酸。
如請求項18之醫藥配製物，其中該脯胺酸濃度係從0至5%±1%w/v。
如請求項19之醫藥配製物，其中該脯胺酸濃度為1.5%±0.3%w/v。
如請求項18之醫藥配製物，其係包括：(a)175mg/mL±26.25mg/mL抗體，(b)從5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸緩衝劑，(c)從0.1%±0.05%至0.5%±0.25%w/v聚山梨醇酯，(d)從1%±0.2%至10%±2%w/v蔗糖，及(e)從1%±0.2%至5%±1%w/v脯胺酸；pH為6.0±0.3。
如請求項21之醫藥配製物，其係包括：(a)175mg/mL±26.25mg/mL抗體，(b)10mM±2mM組胺酸緩衝劑，(c)0.2%±0.1%w/v聚山梨醇酯(d)5%±1%w/v蔗糖，及(e)1.5%±0.3%w/v脯胺酸；pH為6.0±0.3。
如請求項22之醫藥配製物，其係包括：(a)175mg/mL±26.25mg/mL抗體，(b)4.8mM±0.96mM L-組胺酸，(c)5.2mM±1.04mM L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物，(d)0.2%±0.1%w/v聚山梨醇酯，(e)5%±1%w/v蔗糖，及(f)1.5%±0.3%w/v脯胺酸；pH為6.0±0.3。
如請求項18之醫藥配製物，其係包括：(a)150mg/mL±22.5mg/mL抗體，(b)5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸緩衝劑，(c)0.1%±0.05%至0.5%±0.25%w/v聚山梨醇酯，(d)1%±0.2%至10%±2%w/v蔗糖，及(e)1%±0.2%至5%±1%w/v脯胺酸；pH為6.0±0.3。
如請求項24之醫藥配製物，其係包括：(a)150mg/mL±22.5mg/mL抗體，(b)10mM±2mM組胺酸緩衝劑，(c)0.2%±0.1%w/v聚山梨醇酯，(d)5%±1%w/v蔗糖，及(e)1.5%±0.3%w/v脯胺酸，pH為6.0±0.3。
如請求項25之醫藥配製物，其係包括：(a)150mg/mL±22.5mg/mL抗體，(b)4.8mM±0.96mM L-組胺酸，(c)5.2mM±1.04mM)L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物，(d)0.2%±0.1%w/v聚山梨醇酯，(e)5%±1%w/v蔗糖，及(f)1.5%±0.3%w/v脯胺酸； pH為6.0±0.3。
如請求項18之醫藥配製物，其係包括：(a)50mg/mL±7.5mg/mL抗體，(b)5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸緩衝劑，(c)0.1%±0.05%至0.5%±0.25%w/v聚山梨醇酯，(d)1%±0.2%至10%±2%w/v蔗糖，及(e)1%±0.2%至5%±1%w/v脯胺酸，pH為6.0±0.3。
如請求項27之醫藥配製物，其係包括：(a)50mg/mL±7.5mg/mL抗體，(b)10mM±2mM組胺酸緩衝劑，(c)0.2%±0.1%w/v聚山梨醇酯，(d)5%±1%w/v蔗糖，及(e)1.5%±0.3%w/v脯胺酸，pH為6.0±0.3。
如請求項28之醫藥配製物，其係包括：(a)50mg/mL±7.5mg/mL抗體，(b)4.8mM±0.96mM L-組胺酸，(c)5.2mM±1.04mM L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物，(d)0.2%±0.1%w/v聚山梨醇酯，(e)5%±1%w/v蔗糖，及(f)1.5%±0.3%w/v脯胺酸；pH為6.0±0.3。
如請求項18之醫藥配製物，其係包括：(a)25mg/mL±3.75mg/mL抗體，(b)5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸緩衝劑，(c)0.1%±0.05%至0.5%±0.25%w/v聚山梨醇酯(d)1%±0.2%至10%±2%w/v蔗糖，及(e)1%±0.2%至5%±1%w/v脯胺酸， pH為6.0±0.3。
如請求項30之醫藥配製物，其係包括：(a)25mg/mL±3.75mg/mL抗體，(b)10mM±2mM組胺酸緩衝劑，(c)0.2%±0.1%w/v聚山梨醇酯，(d)5%±1%w/v蔗糖，及(e)1.5%±0.3%w/v脯胺酸，pH為6.0±0.3。
如請求項31之醫藥配製物，其係包括：(a)25mg/mL±3.75mg/mL抗體，(b)4.8mM±0.96mM L-組胺酸，(c)5.2mM±1.04mM L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物，(d)0.2%±0.1%w/v聚山梨醇酯，(e)5%±1%w/v蔗糖，及(f)1.5%±0.3%w/v脯胺酸；pH為6.0±0.3。
如請求項1至32中任一項之醫藥配製物，其中該配製物係具有低於20cP之黏度。
如請求項1至33中任一項之醫藥配製物，其中在45℃下28天後，至少90%的抗體具有原態(native)構形。
如請求項1至34中任一項之醫藥配製物，其中在45℃下28天後，至少35%的抗體為抗體之主電荷變體。
如請求項1至35中任一項之醫藥配製物，其中在25℃下3個月後，至少94%的抗體具有原態構形。
如請求項1至36中任一項之醫藥配製物，其中在25℃下3個月後，至少44%的抗體為抗體之主電荷變體。
如請求項1至37中任一項之醫藥配製物，其中在5℃下12個月後，至少96%的抗體具有原態構形。
如請求項1至38中任一項之醫藥配製物，其中在5℃下12個月後，至少45%的抗體為抗體之主電荷變體。
如請求項1至39中任一項之醫藥配製物，其中在-20℃、-30℃及/或-80℃下12個月後，至少96%的抗體具有原態構形。
如請求項1至40中任一項之醫藥配製物，其中在-20℃、-30℃及/或-80℃下12個月後，至少40%的抗體為抗體之主電荷變體。
一種醫藥配製物，其係包括：(a)175mg/mL±26.25mg/mL之專一與PD-1結合的抗體，其中該抗體係包括一SEQ ID NO：1之HCVR及一SEQ ID NO：2之LCVR，(b)10mM±2mM組胺酸緩衝劑，pH 6.0±0.3，(c)0.2%±0.1%w/v聚山梨醇酯80，(d)5%±1%w/v蔗糖；及(e)1.5%±0.3%w/v脯胺酸；其中：(i) 90%的抗體具有143kDa±1kDa之分子量；(ii)醫藥配製物具有低於20cP之黏度；及(iii)在-80℃、-30℃及/或-20℃儲存6個月後，至少97%或更多的抗體係具有原態構形。
如請求項42之醫藥配製物，其係由下列所組成：(a)175mg/mL±26.25mg/mL的抗體，(b)4.8mM±0.96mM L-組胺酸(c)5.2mM±1.04mM L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物，(d)0.2%±0.1%w/v聚山梨醇酯80，(e)5%±1%w/v蔗糖；及(f)1.5%±0.3%w/v脯胺酸，為pH 6.0±0.3之水中溶液。
一種醫藥配製物，其係包括：(a)150mg/mL±22.5mg/mL之專一與PD-1結合的抗體，其中該抗體係包括一SEQ ID NO：1之HCVR及一SEQ ID NO：2之LCVR，(b)10mM±2mM組胺酸緩衝劑，pH 6±0.3，(c)0.2%±0.1%w/v聚山梨醇酯80，(d)5%±1%w/v蔗糖；及(e)1.5%±0.3%w/v脯胺酸；其中：(i) 90%的抗體具有143kDa±1kDa之分子量； (ii)該醫藥配製物具有低於15cP之黏度；及(iii)在-80℃、-30℃及/或-20℃儲存6個月後，至少97%或更多的抗體具有原態構形。
如請求項44之醫藥配製物，其係由下列所組成：(a)150mg/mL±22.5mg/mL的抗體，(b)4.8mM±0.96mM L-組胺酸，(c)5.2mM±1.04mM L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物，(d)0.2%±0.1%w/v聚山梨醇酯80，(e)5%±1%w/v蔗糖；及(f)1.5%±0.3%w/v脯胺酸，為pH 6.0±0.3之水中溶液。
一種醫藥配製物，其係包括：(a)50mg/mL±7.5mg/mL之專一與PD-1結合的抗體，其中該抗體係包括一SEQ ID NO：1之HCVR及一SEQ ID NO：2之LCVR，(b)10mM±2mM組胺酸緩衝劑，pH 6±0.3，(c)0.2%±0.1%w/v聚山梨醇酯80，(d)1.5%±0.3%w/v脯胺酸，及(e)5%±1%w/v蔗糖；其中：(i) 90%的抗體具有143kDa±1kDa之分子量；(ii)在5℃下儲存12個月後，大於96%的抗體具有原態構形；及(iii)該醫藥配製物具有低於15cP之黏度。
如請求項46之醫藥配製物，係由下列所組成：(a)50mg/mL mL±7.5mg/mL的抗體，(b)4.8mM±0.96mM L-組胺酸，(c)5.2mM±1.04mM L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物，(d)0.2%±0.1%w/v聚山梨醇酯80，(e)5%±1%w/v蔗糖；及(f)1.5%±0.3%w/v脯胺酸，為pH 6.0±0.3之水中溶液。
一種醫藥配製物，其係包括：(a)25mg/mL±3.75mg/mL之專一與PD-1結合的抗體，其中該抗體係包括一SEQ ID NO：1之HCVR及一SEQ ID NO：2之LCVR，(b)10mM±2mM組胺酸緩衝劑，pH 6.0±0.3，(c)0.2%±0.1%w/v聚山梨醇酯80，(d)5%±1%w/v蔗糖；及(e)1.5%±0.3%w/v脯胺酸；其中：(i) 90%的抗體具有143kDa±1kDa之分子量； (ii)醫藥配製物具有低於10cP之黏度；及(iii)在5℃下儲存12個月後，至少96%的抗體具有原態構形。
如請求項48之醫藥配製物，係由下列所組成：(a)25mg/mL±3.75mg/mL的抗體，(b)4.8mM±0.96mM L-組胺酸，(c)5.2mM±1.04mM L-組胺酸單鹽酸鹽單水合物，(d)0.2%w/v±0.1%聚山梨醇酯80，(e)5%w/v±1%蔗糖；及(f)1.5%w/v±0.3%脯胺酸，為pH 6.0±0.3之水中溶液。
如請求項1至49中任一項之醫藥配製物，其中該抗體係包括SEQ ID NO：3之HCDR1，SEQ ID NO：4之HCDR2，SEQ ID NO：5之HCDR3，SEQ ID NO：6之LCDR1，SEQ ID NO：7之LCDR2，及SEQ ID NO：8之LCDR3。
如請求項50之醫藥配製物，其中該抗體係包括SEQ ID NO：1之HCVR及SEQ ID NO：2之LCVR。
如請求項1至51中任一項之醫藥配製物，其中該抗體係包括與SEQ ID NO：1具有90%序列相同性之HCVR。
如請求項1至51中任一項之醫藥配製物，其中該抗體係包括與SEQ ID NO：2具有90%序列相同性之LCVR。
如請求項1至51中任一項之醫藥配製物，其中該抗體係包括與SEQ ID NO：1具有90%序列相同性之HCVR，及與SEQ ID NO：2具有90%序列相同性之LCVR。
如請求項1至51中任一項之醫藥配製物，其中該抗體係包括一重鏈及輕鏈，其中該重鏈係包括由SEQ ID NO：9和11組成之群中選出的胺基酸序列。
如請求項1至51中任一項之醫藥配製物，其中該抗體係包括一重鏈及輕鏈，其中該重鏈係包括SEQ ID NO：9之胺基酸序列。
如請求項1至51中任一項之醫藥配製物，其中該抗體係包括一重鏈及輕鏈，其中該重鏈係包括SEQ ID NO：11之胺基酸序列。
如請求項1至51中任一項之醫藥配製物，其中該抗體係包括一重鏈及輕鏈，其中該輕鏈係包括SEQ ID NO：10之胺基酸序列。
如請求項1至51中任一項之醫藥配製物，其中該抗體係包括一重鏈/輕鏈，而該重鏈/輕鏈係包含由SEQ ID NO：9/10和11/10組成之群中選出的胺基酸序列。
如請求項1至51中任一項之醫藥配製物，其中該抗體係包括一包含SEQ ID NO：9/10之胺基酸序列的重鏈/輕鏈。
如請求項1至51中任一項之醫藥配製物，其中該抗體係包括一包含SEQ ID NO：11/10之胺基酸序列的重鏈/輕鏈。
如請求項1至61中任一項之醫藥配製物，其中該配製物係裝在容器中。
如請求項62之醫藥配製物，其中該容器為小瓶。
如請求項63之醫藥配製物，其中該小瓶為10mL第1類透明玻璃小瓶。
如請求項62之醫藥配製物，其中該容器為注射器。
如請求項65之醫藥配製物，其中該注射器為低鎢玻璃。
如請求項62之醫藥配製物，其中該容器為預充填注射器。
如請求項62之醫藥配製物，係裝在自動注射器中。
一種套組，其係包括如請求項1至61中任一項之醫藥配製物、容器及說明書。
如請求項69之套組，其中該容器為玻璃小瓶。
如請求項69之套組，其中該容器為預充填注射器。
如請求項96之套組，其中該容器為自動注射器。