JP7229171B2 - 安定な抗体製剤 - Google Patents

Description

本出願は、２０１８年３月２３日にＰＣＴ国際特許出願として出願され、２０１７年４月６日に出願された米国仮特許出願第６２／４８２，２７０号の優先権を主張し、その開示はその全体で参照により本明細書に組み込まれる。

発明の分野
本発明は、治療用抗体製剤の分野に関する。より具体的には、本発明は、ヒトのプログラム死－１（ＰＤ－１）タンパク質に特異的に結合するヒト抗体を含む医薬製剤の分野に関する。

治療用巨大分子（例えば、抗体）は、それらの分子を患者への投与に適したものにするだけでなく、保存およびその後の使用中にそれらの安定性を維持するようにも製剤化される必要がある。例えば、液体溶液中の治療用抗体は、溶液が適切に製剤化されない限り、分解、凝集または望ましくない化学的修飾を受けやすい。液体製剤中の抗体の安定性は、製剤に使用される賦形剤の種類だけでなく、賦形剤の相互の量および割合にも依存する。さらに、液体抗体製剤を調製する場合、安定性以外の考察事項も考慮する必要がある。このような追加の考察事項の例には、溶液の粘度、および所定の製剤により対応できる抗体の濃度、および製剤の視覚的品質または魅力が含まれる。したがって、治療用抗体を製剤化する場合、安定性を維持し、適切な濃度の抗体を含み、および適切な粘度ならびに製剤を患者に便利に投与できる他の特性を有する製剤に到達するために細心の注意を払わなければならない。

ヒトのプログラム死－１タンパク質（ＰＤ－１）に対する抗体は、適切な製剤を必要とする治療上関連する巨大分子の一例である。抗ＰＤ－１抗体は、がん（例、肺がん、黒色腫、および脳がん）およびウイルス感染および自己免疫疾患の治療に臨床的に有用である。例示的な抗ＰＤ－１抗体は、とりわけ、特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５、特許文献６、特許文献７、特許文献８、特許文献９、特許文献１０、特許文献１１、特許文献１２、特許文献１３、特許文献１４、特許文献１５、特許文献１６、および特許文献１７に記載されている。特許文献１８には、抗ＰＤ－１抗体の凍結乾燥製剤が記載されている。

米国特許第７１０１５５０号 米国特許第７５９５０４８号 米国特許第７４８８８０２号 米国特許第７５６３８６９号 米国特許第８００８４４９号 米国特許第８１６８７５７号 米国特許第８２１６９９６号 米国特許出願公開第２０１１／０００８３６９号 米国特許出願公開第２０１３／００１７１９９号 米国特許出願公開第２０１３／００２２５９５号 国際公開第２００６／１２１１６８号 国際公開第２００９／１１４３３５号 国際公開第２０１２／１４５４９３号 国際公開第２０１３／０１４６６８号 国際公開第２００９／１０１６１１号 欧州特許第２２６２８３７号 欧州特許第２５０４０２８号 米国出願公開第２０１４／０２３４２９６号

抗ＰＤ－１抗体は公知であるが、十分に安定であり、患者への投与に適した抗ＰＤ－１抗体を含む新規医薬製剤が当該技術分野において依然として必要である。

本発明は、ヒトプログラム死－１タンパク質（ＰＤ－１）に特異的に結合するヒト抗体を含む安定な医薬製剤を提供することにより、前述の必要性を満たす。

一態様では、（ｉ）ヒトのプログラム死タンパク質（ＰＤ－１）に特異的に結合するヒト抗体；（ｉｉ）緩衝液；（ｉｉｉ）有機共溶媒；（ｉｖ）安定剤；および（ｖ）粘度調整剤を含む、低粘度の安定な液体医薬製剤が提供される。

様々な実施形態では、抗体は、約５±０．７５ｍｇ／ｍＬから約２５０±３７．５ｍｇ／ｍＬの濃度で提供される。一実施形態では、抗体は、１２．５ｍｇ／ｍＬ±１．８５ｍｇ／ｍＬ、または約１２．５ｍｇ／ｍＬの濃度で提供される。一実施形態では、抗体は、２５ｍｇ／ｍＬ±３．７５ｍｇ／ｍＬ、または約２５ｍｇ／ｍＬの濃度で提供される。別の実施形態では、抗体は、５０ｍｇ／ｍＬ±７．５ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬの濃度で提供される。別の実施形態では、抗体は、１００ｍｇ／ｍＬ±１５ｍｇ／ｍＬ、または約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で提供される。一実施形態では、抗体は、１５０ｍｇ／ｍＬ±２２．５ｍｇ／ｍＬ、または約１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で提供される。別の実施形態では、抗体は、１７５ｍｇ／ｍＬ±２６．２５ｍｇ／ｍＬ、または約１７５ｍｇ／ｍＬの濃度で提供される。別の実施形態では、抗体は、２００ｍｇ／ｍＬ±３０ｍｇ／ｍＬ、または約２００ｍｇ／ｍＬの濃度で提供される。

特定の実施形態では、製剤は、その全体が本明細書に組み込まれている米国特許出願公開第２０１５／０２０３５７９号に開示されている抗ＰＤ－１抗体のいずれか１つを含む。特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、（ａ）配列番号３、配列番号４および配列番号５の配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１、２および３（ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに（ｂ）配列番号６、配列番号７および配列番号８の配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１、２および３（ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。一実施形態では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む。一実施形態では、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗体は、配列番号９および１１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗体は、配列番号１に対して９０％の配列同一性を有するＨＣＶＲを含む。一実施形態では、抗体は、配列番号２に対して９０％の配列同一性を有するＬＣＶＲを含む。一実施形態では、抗体は、配列番号１に対して９０％の配列同一性を有するＨＣＶＲ、および配列番号２に対して９０％の配列同一性を有するＬＣＶＲを含む。

一実施形態では、液体製剤のｐＨは、ｐＨ６．０±０．５、ｐＨ６．０±０．４、ｐＨ６．０±０．３、ｐＨ６．０±０．２、ｐＨ６．０±０．１、ｐＨ６．０±０．０５、ｐＨ６．０±０．０１、またはｐＨ６．０である。一実施形態では、液体製剤のｐＨは約ｐＨ６．０±０．３である。

一実施形態では、緩衝液はヒスチジンを含む。特定の実施形態では、ヒスチジン緩衝液は、５ｍＭ±１ｍＭから５０ｍＭ±１０ｍＭ、好ましくは５ｍＭ±１ｍＭから２５ｍＭ±５ｍＭの濃度である。一実施形態では、ヒスチジン緩衝液は、１０ｍＭ±２ｍＭまたは約１０ｍＭの濃度である。一実施形態では、ヒスチジン緩衝液は、２０ｍＭ±４ｍＭまたは約２０ｍＭの濃度である。一実施形態では、ヒスチジン緩衝液は、４０ｎＭ±８ｍＭまたは約４０ｎＭの濃度である。特定の実施形態では、ヒスチジン緩衝液は、Ｌ－ヒスチジンおよびＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物を含む。一実施形態では、Ｌ－ヒスチジンは、２ｍＭ±０．４ｍＭから２５ｍＭ±５ｍＭ、好ましくは４ｍＭ±０．８ｍＭから２０ｍＭ±４ｍＭの濃度である。一実施形態では、Ｌ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物は、２ｍＭ±０．４ｍＭから２５ｍＭ±５ｍＭ、好ましくは４ｍＭ±０．８ｍＭから２０ｍＭ±４ｍＭの濃度である。一実施形態では、緩衝液は、４．８ｍＭ±０．９６ｍＭの濃度のＬ－ヒスチジン、および５．２ｍＭ±１．０４ｍＭの濃度のＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物を含む。一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭ±２ｍＭの濃度のヒスチジンを含み、ヒスチジンは、４．８ｍＭ±０．９６ｍＭの濃度のＬ－ヒスチジンおよび５．２ｍＭ±１．０４ｍＭの濃度のＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物を含む。

特定の実施形態では、有機共溶媒は、ポリオキシエチレン部分を含む非イオン性ポリマーである。一実施形態では、有機溶媒は界面活性剤である。一部の実施形態では、有機共溶媒は、ポリソルベート、ポロキサマー１８８およびポリエチレングリコール３３５０のいずれか１つまたはそれ以上である。一実施形態では、有機共溶媒はポリソルベート８０である。一実施形態では、有機共溶媒はポリソルベート２０である。

一実施形態では、有機共溶媒は、約０．０１％±０．００５％から約１％±０．５％「重量対体積」または「ｗ／ｖ」の濃度であり、例えば、０．１ｇ／ｍｌ＝１０％であり、０．０１ｇ／ｍｌ＝１％である。特定の実施形態では、有機溶媒は、０．０５％±０．０２５％から０．５％±０．２５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベートである。一実施形態では、有機共溶媒はポリソルベート８０であり、０．２％±０．１％ｗ／ｖ、または約０．２％の濃度である。別の実施形態では、有機共溶媒はポリソルベート８０であり、０．１％±０．０５％ｗ／ｖ、または約０．１％ｗ／ｖの濃度である。一実施形態では、有機共溶媒はポリソルベート２０であり、０．２％±０．１％ｗ／ｖ、または約０．２％の濃度である。別の実施形態では、有機共溶媒はポリソルベート２０であり、０．１％±０．０５％ｗ／ｖまたは約０．１％ｗ／ｖの濃度である。

特定の実施形態では、安定剤は糖である。一実施形態では、糖はスクロースである。様々な実施形態において、安定剤は、１％±０．２％ｗ／ｖから２０％±４％ｗ／ｖ、５％±１％ｗ／ｖから１５％±３％ｗ／ｖ、または１％±０．２％から１０％±２％ｗ／ｖの濃度である。一実施形態では、安定剤は、５％±１％ｗ／ｖまたは約５％ｗ／ｖの濃度のスクロースである。別の実施形態では、安定剤は、９％±１．８％ｗ／ｖまたは約９％ｗ／ｖの濃度のスクロースである。別の実施形態では、安定剤は、１０％±２％ｗ／ｖまたは約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロースである。

一実施形態では、粘度調整剤はアミノ酸である。一実施形態では、粘度調整剤はＬ－プロリンである。特定の実施形態では、粘度調整剤は、１％±０．２％から５％±１％ｗ／ｖの濃度である。一実施形態では、粘度調整剤は、１．５％±０．３％または約１．５％の濃度のプロリンである。一実施形態では、粘度調整剤は、３％±０．６％、または約３％の濃度のプロリンである。

特定の実施形態では、２５℃での液体医薬製剤の粘度は、約１５ｃＰｏｉｓｅ±１０％未満またはそれに等しい。特定の実施形態では、２５℃での粘度は、１．０ｃＰｏｉｓｅ±１０％から２０ｃＰｏｉｓｅ±１０％の間である。特定の実施形態では、液体医薬製剤の粘度は１５ｃＰｏｉｓｅ以下である。特定の実施形態では、液体医薬製剤の粘度は２０ｃＰｏｉｓｅ以下である。特定の実施形態では、液体医薬製剤の粘度は１０ｃＰｏｉｓｅ以下である。特定の実施形態では、２５℃での粘度は、５ｃＰｏｉｓｅ±１０％、６．０ｃＰｏｉｓｅ±１０％、７．０ｃＰｏｉｓｅ±１０％、７．１ｃＰｏｉｓｅ±１０％、７．２ｃＰｏｉｓｅ±１０％、７．９ｃＰｏｉｓｅ±１０％、８．３ｃＰｏｉｓｅ±１０％、９．０ｃＰｏｉｓｅ±１０％、９．６ｃＰｏｉｓｅ±１０％、１０．０ｃＰｏｉｓｅ±１０％、１０．６ｃＰｏｉｓｅ±１０％、１１．４ｃＰｏｉｓｅ±１０％、１１．６ｃＰｏｉｓｅ±１０％、１１．８ｃＰｏｉｓｅ±１０％、１２．０ｃＰｏｉｓｅ±１０％、１３．０ｃＰｏｉｓｅ±１０％、１４．０ｃＰｏｉｓｅ±１０％、１５．０ｃＰｏｉｓｅ±１０％、または１６ｃＰｏｉｓｅ±１０％である。

一態様では、（ｉ）ヒトＰＤ－１に特異的に結合する５±０．７５ｍｇ／ｍｌから２５０±３７．５ｍｇ／ｍｌのヒト抗体；（ｉｉ）０ｍＭから４０±８ｍＭのヒスチジン緩衝液；（ｉｉｉ）０％から０．５％±０．２５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；（ｉｖ）０％から１５％±３％（ｗ／ｖ）のスクロース；および（ｖ）０から５％±１％のプロリンを約５．３～約６．７のｐＨで含む低粘度の安定な液体医薬製剤が提供され、抗ＰＤ－１抗体は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、それによりＨＣＶＲ／ＬＣＶＲの組み合わせは、重鎖および軽鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含み、それぞれ配列番号３－４－５／配列番号６－７－８のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、それぞれ配列番号１および配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。特定の実施形態では、抗ＰＤ１抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４アイソタイプからなる群から選択されるＦｃ領域を含む。一実施形態では、抗体はヒトＩｇＧ４アイソタイプを含む。一実施形態では、抗体は、配列番号９および１１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；ならびに配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗体は１４３ｋＤａ±５ｋＤａの分子量を有する。

特定の実施形態では、（ｉ）ヒトＰＤ－１に特異的に結合する５±０．７５ｍｇ／ｍｌから２５０±３７．５ｍｇ／ｍｌのヒト抗体；（ｉｉ）０ｍＭから４０±８ｍＭのヒスチジン緩衝液；（ｉｉｉ）０％から０．５％±０．２５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；（ｉｖ）０％から１５％±３％（ｗ／ｖ）のスクロース；ならびに（ｖ）０から５％±１％のプロリンを約５．３～約６．７のｐＨで含む、安定な低粘度の液体医薬製剤が提供され、抗ＰＤ－１抗体はＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含み、ＨＣＶＲは配列番号１に対して９０％の配列同一性を有し、および／またはＬＣＶＲは配列番号２に対して９０％の配列同一性を有する。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号９および１１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；ならびに配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

特定の実施形態では、（ｉ）ヒトＰＤ－１に特異的に結合する５±０．７５ｍｇ／ｍｌから２５０±３７．５ｍｇ／ｍｌのヒト抗体；（ｉｉ）０ｍＭから４０±８ｍＭのヒスチジン緩衝液；（ｉｉｉ）０％から０．５％±０．２５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；（ｉｖ）０％から１５％±３％（ｗ／ｖ）のスクロース；および（ｖ）０～５％±１％のプロリンを約５．３から約６．７のｐＨで含む、安定な低粘度の液体医薬製剤が提供され、抗ＰＤ－１抗体はＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含み、ＨＣＶＲは５つ以下のアミノ酸置換を有する配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＬＣＶＲは２つ以下のアミノ酸置換を有する配列番号２のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号９および１１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

特定の実施形態では、前述の態様のいずれかの製剤は、以下からなる群から選択される属性を有する：（ｉ）製剤は、本明細書に記載されるように、２５℃、５℃、－２０℃、－３０℃および－８０℃での長期保存に対して安定である；（ｉｉ）製剤は、本明細書に記載されるように、撹拌ストレスに対して安定である；（ｉｉｉ）製剤は低粘度（２０ｃＰｏｉｓｅ未満、好ましくは１５ｃＰｏｉｓｅ未満の粘度）である；（ｉｉｉ）製剤は、本明細書に記載されるように、製剤賦形剤濃度で最大±５０％変動においてさえ安定である；（ｉｖ）製剤は、生理的条件に対して等浸透圧である；（ｖ）製剤は、静脈内送達装置および手順に対して安定であり、適合性がある；ならびに（ｖｉ）製剤は、ガラスバイアルまたは充填済みシリンジでの長期保存に対して安定である。

この態様の特定の実施形態では、（ｉ）ヒトＰＤ－１に特異的に結合する５±０．７５ｍｇ／ｍｌから２５０±３７．５ｍｇ／ｍｌのヒト抗体；（ｉｉ）５ｍＭ±１ｍＭから２０±４ｍＭのヒスチジン緩衝液；（ｉｉｉ）０．０５％±０．０２５％から０．３％±０．１５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；（ｉｖ）１％±０．２％から１０％±２％（ｗ／ｖ）のスクロース；ならびに（ｖ）１％±０．２％から５％±１％のプロリンを約６．０のｐＨで含む安定な液体製剤が提供され、抗体は配列番号１／２のアミノ酸配列対を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを含む。一実施形態では、この態様の安定な液体製剤は、１５ｃＰ未満の粘度を有する。一実施形態では、９０％以上の抗体が、１４３ｋＤａ±１ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、医薬製剤は、２０ｃＰ未満、１５ｃＰ未満、または１０ｃＰ未満の粘度を有する。一実施形態では、９６％を超える抗体が、１２か月間、５℃で保存した場合、天然の立体構造を有する。一実施形態では、少なくとも９７％またはそれ以上の抗体は、－８０℃、－３０℃、および／または－２０℃で６か月保存した場合、天然の立体構造を有する。

この態様の一実施形態では、安定な液体製剤は、（ｉ）２５±３．７５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体；（ｉｉ）１０±２ｍＭのヒスチジン緩衝液；（ｉｉｉ）０．２％±０．１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；（ｉｖ）１．５％±０．３％（ｗ／ｖ）のプロリン；および（ｖ）５±１％（ｗ／ｖ）スクロースを６．０±０．３のｐＨで含み、抗体は配列番号１／２のアミノ酸配列対を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを含む。

この態様の一実施形態では、安定な液体製剤は、（ｉ）２５±３．７５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体；（ｉｉ）４．８ｍＭ±０．９６ｍＭのＬ－ヒスチジン；（ｉｉｉ）５．２ｍＭ±１．０４ｍＭのＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物；（ｉｖ）０．２％±０．１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；（ｖ）１．５％±０．３％（ｗ／ｖ）のプロリン；および（ｖｉ）５％±１％（ｗ／ｖ）のスクロースを６．０±０．３のｐＨで含み、抗体は配列番号１／２のアミノ酸配列対を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを含む。

この態様の一実施形態では、安定な液体製剤は、（ｉ）５０±７．５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体；（ｉｉ）１０±２ｍＭのヒスチジン緩衝液；（ｉｉｉ）０．２％±０．１％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０；（ｉｖ）１．５％±０．３％（ｗ／ｖ）のプロリン；および（ｖ）５％±１％（ｗ／ｖ）のスクロースを６．０±０．３で含み、抗体は配列番号１／２のアミノ酸配列対を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを含む。この特定の製剤の一実施形態では、粘度は１０ｃＰｏｉｓｅ未満である。

この態様の一実施形態では、安定な液体製剤は、（ｉ）５０±７．５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体；（ｉｉ）４．８ｍＭ±０．９６ｍＭのＬ－ヒスチジン；（ｉｉｉ）５．２ｍＭ±１．０４ｍＭのＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物；（ｉｖ）０．２％±０．１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；（ｖ）１．５％±０．３％（ｗ／ｖ）のプロリン；および（ｖｉ）５％±１％（ｗ／ｖ）のスクロースを６．０±０．３のｐＨで含み、抗体は配列番号１／２のアミノ酸配列対を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを含む。

一実施形態では、安定な液体製剤は、（ｉ）１００±１５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体；（ｉｉ）１０±２ｍＭのヒスチジン緩衝液；（ｉｉｉ）０．２％±０．１％（ｗ／ｖ）（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；（ｉｖ）１．５％±０．３％（ｗ／ｖ）のプロリン；および（ｖ）５％±１％（ｗ／ｖ）のスクロースを６．０±０．３のｐＨで含み、抗体は配列番号１／２のアミノ酸配列対を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを含む。この特定の製剤の一実施形態では、粘度は１０ｃＰｏｉｓｅ未満である。

この態様の一実施形態では、安定な液体製剤は、（ｉ）１００±１５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体；（ｉｉ）４．８ｍＭ±０．９６ｍＭのＬ－ヒスチジン；（ｉｉｉ）５．２ｍＭ±１．０４ｍＭのＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物；（ｉｖ）０．２％±０．１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；（ｖ）１．５％±０．３％（ｗ／ｖ）のプロリン；および（ｖｉ）５％±１％（ｗ／ｖ）のスクロースを６．０±０．３のｐＨで含み、抗体は配列番号１／２のアミノ酸配列対を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを含む。

一実施形態では、安定な液体製剤は、（ｉ）１５０±２２．５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体；（ｉｉ）１０±２ｍＭのヒスチジン緩衝液；（ｉｉｉ）０．２％±０．１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；（ｉｖ）１０％±２％（ｗ／ｖ）のスクロース；および（ｖ）１．５％±０．３％（ｗ／ｖ）のプロリンを６．０±０．３のｐＨで含み、抗体は配列番号１／２のアミノ酸配列対を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを含む。この特定の製剤の一実施形態では、粘度は、２０ｃＰｏｉｓｅ未満、好ましくは１５ｃＰｏｉｓｅ未満である。

この態様の一実施形態では、安定な液体製剤は、（ｉ）１５０±２２．５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体；（ｉｉ）４．８ｍＭ±０．９６ｍＭのＬ－ヒスチジン；（ｉｉｉ）５．２ｍＭ±１．０４ｍＭのＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物；（ｉｖ）０．２％±０．１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；（ｖ）１．５％±０．３％（ｗ／ｖ）のプロリン；および（ｖｉ）５％±１％（ｗ／ｖ）のスクロースを６．０±０．３のｐＨで含み、抗体は配列番号１／２のアミノ酸配列対を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを含む。

この態様の一実施形態では、安定な液体製剤は、（ｉ）１７５±２６．２５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体；（ｉｉ）１０±２ｍＭのヒスチジン緩衝液；（ｉｉｉ）０．２％±０．１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；（ｉｖ）５％±１％（ｗ／ｖ）のスクロース；および（ｖ）１．５％±０．３％（ｗ／ｖ）のプロリンを６．０±０．３のｐＨで含み、抗体は配列番号１／２のアミノ酸配列対を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを含む。この特定の製剤の一実施形態では、粘度は、２０ｃＰｏｉｓｅ未満、好ましくは１５ｃＰｏｉｓｅ未満である。

この態様の一実施形態では、安定な液体製剤は、（ｉ）１７５±２６．２５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体；（ｉｉ）４．８ｍＭ±０．９６ｍＭのＬ－ヒスチジン；（ｉｉｉ）５．２ｍＭ±１．０４ｍＭのＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物；（ｉｖ）０．２％±０．１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；（ｖ）１．５％±０．３％（ｗ／ｖ）のプロリン；および（ｖｉ）５％±１％（ｗ／ｖ）のスクロースを６．０±０．３のｐＨで含み、抗体は配列番号１／２のアミノ酸配列対を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを含む。

この態様の一実施形態では、安定な液体製剤は、（ｉ）２００±３０．００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体；（ｉｉ）１０±２ｍＭのヒスチジン緩衝液；（ｉｉｉ）０．２％±０．１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；（ｉｖ）５％±１％（ｗ／ｖ）のスクロース；および（ｖ）１．５％±０．３％（ｗ／ｖ）のプロリンを６．０±０．３のｐＨで含み、抗体は配列番号１／２のアミノ酸配列対を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを含む。この特定の製剤の一実施形態では、粘度は２０ｃＰｏｉｓｅ未満である。

この態様の一実施形態では、安定な液体製剤は、（ｉ）２００±３０．００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体；（ｉｉ）４．８ｍＭ±０．９６ｍＭのＬ－ヒスチジン；（ｉｉｉ）５．２ｍＭ±１．０４ｍＭのＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物；（ｉｖ）０．２％±０．１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；（ｖ）１．５％±０．３％（ｗ／ｖ）プロリン；および（ｖｉ）５％±１％（ｗ／ｖ）のスクロースを６．０±０．３のｐＨで含み、抗体は配列番号１／２のアミノ酸配列対を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを含む。

一実施形態では、製剤を４５℃で２８日間保存した後、９０％以上の抗体が天然であり、３５％以上の抗体が主要電荷形態のものである。一実施形態では、製剤を２５℃で３か月間保存した後、９４％を超える抗体が天然であり、４４％以上の抗体が主要電荷形態のものである。一実施形態では、製剤を５℃で１２か月間保存した後、９６％を超える抗体が天然であり、５０％を超える抗体が主要電荷形態のものである。一実施形態では、製剤を－２０℃で１２か月間保存した後、９６％を超える抗体が天然であり、４０％を超える抗体が主要電荷形態のものである。一実施形態では、製剤を－３０℃で１２か月間保存した後、９６％を超える抗体が天然であり、４０％を超える抗体が主要電荷形態のものである。一実施形態では、製剤を－８０℃で１２か月間保存した後、９６％を超える抗体が天然であり、４０％を超える抗体が主要電荷形態のものである。一実施形態では、９６％を超える抗体が、１２か月間、５℃で保存した場合に天然の立体構造を有する。一実施形態において、少なくとも９７％またはそれ以上の抗体は、－８０℃、－３０℃、および／または－２０℃で６か月保存した場合、天然の立体構造を有する。

一態様において、本発明は、（ｉ）最大１００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体；（ｉｉ）２ｍＭ±０．４ｍＭから２０ｍＭ±４ｍＭのヒスチジン緩衝液；（ｉｉｉ）最大２０％±４％（ｗ／ｖ）のスクロース；ならびに（ｉｖ）最大０．２％±０．１％ｗ／ｖのポリソルベートを６．０±０．３のｐＨで含む安定な液体製剤を提供する。一実施形態では、安定な液体製剤は、２５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体を含む。一実施形態では、安定な液体製剤は、５０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体を含む。一実施形態では、安定な液体製剤は、７５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体を含む。一実施形態では、安定な液体製剤は、１０ｍＭ±２ｍＭのヒスチジン緩衝液を含む。一実施形態では、安定な液体製剤は５％のスクロースを含む。一実施形態では、安定な液体製剤は６％のスクロースを含む。一実施形態では、安定な液体製剤は９％のスクロースを含む。一実施形態では、安定な液体製剤は１０％のスクロースを含む。一実施形態では、安定な液体製剤は０．１％のポリソルベートを含む。一実施形態では、ポリソルベートは、ポリソルベート８０またはポリソルベート２０である。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１／２のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを含む。

一態様では、前述の態様のいずれかの安定な液体医薬製剤が容器に提供される。一実施形態では、容器はポリカーボネートバイアルである。一実施形態では、容器はガラスバイアルである。一実施形態では、ガラスバイアルは、フルオロカーボン被覆ブチルゴム栓を備えたタイプ１のホウケイ酸ガラスバイアルである。一実施形態では、容器は微量注入器である。一実施形態では、容器はシリンジである。一実施形態では、容器は、充填済みのシリンジである。一実施形態では、シリンジは、フルオロカーボン被覆プランジャーを含む。特定の実施形態では、シリンジは、２７Ｇ針、フルオロカーボン被覆ブチルゴム栓、およびラテックスを含まない非細胞傷害性ゴム先端キャップを備えた１０億あたり約５００部未満のタングステンを含む１ｍＬまたは２．２５ｍＬの長さのガラス製シリンジである。一実施形態では、シリンジは、２７Ｇ薄壁針、ＦＬＵＲＯＴＥＣ被覆４０２３／５０ゴム栓、およびＦＭ２７ゴム先端キャップを備えた１ｍＬの長さのガラスシリンジである。一実施形態では、シリンジは、針が取り付けられた１ｍＬ、２ｍＬ、３ｍＬ、５ｍＬまたは１０ｍＬのプラスチックシリンジである。

一態様では、前述の態様のいずれか１つの安定な医薬組成物、容器、および説明書を含むキットが提供される。一実施形態では、容器はガラスバイアルである。一実施形態では、容器は充填済みのシリンジである。一実施形態では、シリンジは、２７Ｇ薄壁針、ＦＬＵＲＯＴＥＣ被覆４０２３／５０ゴム栓、およびＦＭ２７ゴム先端キャップを備えた１ｍＬまたは２．２５ｍＬ長のガラスシリンジである。一実施形態では、シリンジは、針が取り付けられた１ｍＬ、２ｍＬ、３ｍＬ、５ｍＬまたは１０ｍＬのプラスチックシリンジである。

特定の実施形態では、本発明は、（ｉ）ヒトＰＤ－１に特異的に結合する５±０．７５ｍｇ／ｍｌから２５０±３７．５ｍｇ／ｍｌのヒト抗体；（ｉｉ）５ｍＭ±１ｍＭから２０±４ｍＭのヒスチジン緩衝液；（ｉｉｉ）０．０５％±０．０２５％から０．３％±０．１５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；（ｉｖ）１％±０．２％から１０％±２％（ｗ／ｖ）のスクロース；および（ｖ）１％±０．２％から５％±１％のプロリンを６．０±０．３のｐＨで含む、安定な液体医薬製剤を含む充填済みのシリンジを提供し、抗体は、配列番号１／２のアミノ酸配列対を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを含み、製剤は以下からなる群から選択される属性を有する：（ｉ）９８％以上の抗体が５℃で１２か月間保存された後、天然型である；（ｉｉ）５３％以上の抗体が、５℃で１２か月間保存された後、主要電荷変異体である；（ｉｉｉ）９７％以上の抗体が２５℃で６か月間保存された後、天然の形態である；（ｉｖ）製剤は、撹拌ストレスに対して安定であり、９８％以上の抗体が、充填済みのシリンジ中で１２０分間の撹拌ストレス後、天然の形態である；（ｖ）９０％を超える抗体が１４３ｋＤａ±１ｋＤａの分子量を有する；（ｖｉ）医薬製剤は、２０ｃＰ未満、１５ｃＰ未満、または１０ｃＰ未満の粘度を有する；（ｖｉｉ）９６％を超える抗体が、５℃で１２か月間保存すると、天然の立体構造を有する；ならびに（ｖｉｉｉ）少なくとも９７％またはそれ以上の抗体が、－８０℃、－３０℃および／または－２０℃で６か月間保存すると、天然の立体構造を有する。

特定の実施形態では、本発明は、（ｉ）ヒトＰＤ－１に特異的に結合する、５±０．７５ｍｇ／ｍｌから２５０±３７．５ｍｇ／ｍｌのヒト抗体；（ｉｉ）５ｍＭ±１ｍＭから２０±４ｍＭのヒスチジン緩衝液；（ｉｉｉ）０．０５％±０．０２５％から０．３％±０．１５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；（ｉｖ）１％±０．２％から１０％±２％（ｗ／ｖ）のスクロース；および（ｖ）１％±０．２％から５％±１％のプロリンをｐＨ６．０±０．３で含む安定な液体医薬製剤を含むガラスバイアルを提供し、抗体は、配列番号１／２のアミノ酸配列対を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを含み、製剤は、以下からなる群から選択される属性を有する：（ｉ）製剤は、ガラスバイアル中で保存およびストレスに対して安定である；（ｉｉ）製剤は、ＩＶ送達装置で安定であり、使用に適合する；（ｉｉｉ）製剤は、当該技術分野において公知である標準希釈剤（例えば、０．９％塩化ナトリウムまたは５％デキストロース）による希釈に対して化学的および物理的に安定である；（ｉｖ）製剤は、ガラスまたはポリマープラスチック（ポリ塩化ビニル、フタレート、ポリオレフィンまたはポリプロピレン）で作製されたＩＶバッグに対して安定である；（ｖ）製剤は、標準的な輸液ポンプ（例えば、ペリスタリックポンプ、液体置換ポンプ）と互換性がある；（ｖｉ）抗体の９０％以上が１４３ｋＤａ±１ｋＤａの分子量を有する；（ｖｉｉ）医薬製剤は、２０ｃＰ未満、１５ｃＰ未満、または１０ｃＰ未満の粘度を有する；（ｖｉｉｉ）１２か月間、５℃で保存すると、９６％を超える抗体が天然の立体構造を有する；ならびに（ｉｘ）少なくとも９７％またはそれ以上の抗体が、－８０℃、－３０℃、および／または－２０℃で６か月間保存すると、天然の立体構造を有する。

他の実施形態は、次の詳細な説明の概説から明らかになる。

４５℃で２８日間インキュベートされた１５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１の安定性におけるｐＨの影響を示す表である。^ａＳＥ－ＵＰＬＣおよびＣＥＸ－ＵＰＬＣの「出発原料」の結果は、すべての製剤についての出発原料の平均値である。 ３つの製剤Ｆ１、Ｆ２およびＦ３の保存安定性を示す図である。Ｆ１は、ｐＨ６．０で２１０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１、１０ｍＭのヒスチジンおよび３％のプロリンを含む；Ｆ２は、ｐＨ６．０で２１０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１、１０ｍＭのヒスチジン、および３％のスクロースを含む；ならびにＦ３は、ｐＨ６．０で２１０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１、１０ｍＭのヒスチジンおよび５％のスクロースを含む。保存安定性は、－８０℃（Ａ）、－３０℃（Ｂ）および－２０℃（Ｃ）で最大９か月間保存したときに生成される高分子量種（ＨＭＷ）％によって測定され、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって分析される。 図２Ａの続き。 図２Ｂの続き。 ３つの製剤Ｆ１、Ｆ２およびＦ３の保存安定性を示す図である。Ｆ１は、ｐＨ６．０で１５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１、１０ｍＭのヒスチジン、９％のスクロースおよび０．２％のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含む；Ｆ２は、ｐＨ６．０で１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１、１０ｍＭのヒスチジン、３％のプロリンおよび０．２％のＰＳ８０を含む；ならびにＦ３は、ｐＨ６．０で１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１、１０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、１．５％のプロリンおよび０．２％のＰＳ８０を含む。保存安定性は、－８０℃（Ａ）、－３０℃（Ｂ）および－２０℃（Ｃ）で最大６か月間保存したときに生成される高分子量種（ＨＭＷ）％によって測定され、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって分析される。 図３Ａの続き。 図３Ｂの続き。 賦形剤および粘度調整剤を添加した１５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１の粘度を示す表である。 図５は、４５℃で１４日間インキュベートされた１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１の安定性における粘度調整剤の影響を示す表である。^ａｐＨ、ＳＥ－ＵＰＬＣ、およびＣＥＸ－ＵＰＬＣの「出発原料」の結果は、すべての製剤についての出発原料の平均値である。

本方法を説明する前に、本発明は特定の方法、および記載された実験条件に限定されず、このような方法および条件は変化することを理解されたい。本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書において使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的としており、限定することを意図しないこともまた理解されたい。

別段の定義がない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で使用されるとき、用語「約」とは、特定の列挙された数値または値の範囲に関して使用される場合、数値が列挙された値から１％以下しか変化しないことを意味する。例えば、本明細書で使用されるとき、「約１００」という表現には、９９と１０１、およびその間のすべての値（例、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４など）が含まれる。本明細書に記載されるものと類似または同等の任意の方法および材料を本発明の実施または試験に使用することができるが、好ましい方法および材料をここで説明する。本明細書において言及されるすべての刊行物は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。

本明細書で使用するとき、「医薬製剤」という表現は、少なくとも１つの活性成分（例えば、ヒトまたは非ヒト動物において生物学的効果を発揮することができる、小分子、高分子、化合物など）と、および活性成分または１つもしくはそれ以上の追加の不活性成分と組み合わせた場合に、ヒトまたは非ヒト動物への治療的投与に適した少なくとも１つの不活性成分との組み合わせを意味する。用語「製剤」とは、本明細書で使用するとき、他には特に明記しない限り「医薬製剤」を意味する。本発明は、少なくとも１つの治療用ポリペプチドを含む医薬製剤を提供する。本発明の特定の実施形態によれば、治療用ポリペプチドは、ヒトのプログラム死－１（ＰＤ－１）タンパク質に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。より具体的には、本発明には、（ｉ）ヒトＰＤ－１に特異的に結合するヒト抗体、（ｉｉ）ヒスチジン緩衝液；（ｉｉｉ）非イオン性界面活性剤である有機共溶媒；（ｉｖ）炭水化物である安定剤；および、場合により（ｖ）アミノ酸である粘度調整剤を含む医薬製剤が含まれる。本発明に含まれる具体的な例示的成分および製剤について、以下で詳細に説明する。

ＰＤ－１に特異的に結合する抗体
本発明の医薬製剤は、ヒトＰＤ－１に特異的に結合するヒト抗体またはその抗原結合断片を含む。本明細書で使用するとき、用語「ＰＤ－１」は、ヒトのプログラム死－１タンパク質を意味する。ヒトＰＤ－１に対する抗体は、例えば、米国特許／公開番号第８００８４４９号、同第８１６８７５７号、同第２０１１／０００８３６９号、同第２０１３／００１７１９９号、同第２０１３／００２２５９５号、同第２０１５／０２０３５７９号、ならびに国際公開２００６／１２１１６８号、同第２００９／１１４３３５号、同第２０１２／１４５４９３号、同第２０１３／０１４６６８号、同第２００９／１０１６１１号、同第２０１５／１１２８００号、欧州特許第２２６２８３７号、および同第２５０４０２８号に記載されている。

用語「抗体」は、本明細書で使用するとき、一般的に、ジスルフィド結合によって相互接続された４つのポリペプチド鎖である２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む免疫グロブリン分子、ならびにその多量体（例えば、ＩｇＭ）を指すことが意図される；しかしながら、重鎖のみからなる免疫グロブリン分子（すなわち軽鎖を欠く）はまた「抗体」という用語の定義に包含される。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＨＣＶＲまたはＶ_Ｈと略す）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＬＣＶＲまたはＶ_Ｌと略す）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域にさらに細分化される。各Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌは、以下：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順番で、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成される。

他には特に明記しない限り、用語「抗体」は、本明細書で使用するとき、完全な抗体分子およびその抗原結合断片を包含することが理解されるものである。抗体の「抗原結合部分」または「抗原結合断片」（または単に「抗体部分」または「抗体断片」）という用語は、本明細書で使用するとき、ヒトＰＤ－１またはそのエピトープに特異的に結合する能力を保持する抗体の１つまたはそれ以上の断片を指す。

「単離抗体」は、本明細書で使用するとき、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことを意図する（例えば、ヒトＰＤ－１に特異的に結合する単離された抗体は、ヒトＰＤ－１以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。

「特異的に結合する」などの用語は、抗体またはその抗原結合断片が、生理学的条件下で比較的安定な抗原と複合体を形成することを意味する。特異的結合は、少なくとも約１×１０^－８Ｍまたはそれ以上の解離定数によって特徴付けることができる。２つの分子が特異的に結合するかどうかを決定する方法は、当該技術分野において周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などが含まれる。しかしながら、ヒトＰＤ－１に特異的に結合する単離された抗体は、他の種由来のＰＤ－１分子（オルソログ）などの他の抗原に対して交差反応性を有する。本発明との関連において、ヒトＰＤ－１に結合する多重特異性（例えば、二重特異性）抗体ならびに１つまたはそれ以上の追加の抗原は、ヒトＰＤ－１に「特異的に結合する」とみなされる。さらに、単離された抗体は、他の細胞物質または化学物質を実質的に含まない。

本発明の医薬製剤に含まれる例示的な抗ヒトＰＤ－１抗体は、米国特許出願公開第２０１５／０２０３５７９号および国際公開第２０１５／１１２８００号に記載されており、それらの開示はその全体が参照により組み込まれる。

本発明の特定の実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、配列番号４のＨＣＤＲ２、および配列番号５のＨＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１のＨＣＶＲを含む。

本発明の特定の実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－１またはその抗原結合断片は、配列番号６の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２のＬＣＶＲを含む。

本発明の特定の実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－１またはその抗原結合断片は、配列番号１に対して９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するＨＣＶＲを含む。

本発明の特定の実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－１またはその抗原結合断片は、配列番号２に対して９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するＬＣＶＲを含む。

本発明の特定の実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－１またはその抗原結合断片は、５つ以下のアミノ酸置換を有する配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲを含む。

本発明の特定の実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－１またはその抗原結合断片は、２つ以下のアミノ酸置換を有する配列番号２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む。

配列同一性は、当該技術分野において公知である任意の方法（例えば、ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、およびＢＬＡＳＴ）によって測定される。

本発明はまた、抗ＰＤ－１抗体を含む製剤を含み、抗ＰＤ－１抗体は、１つまたはそれ以上の保存的アミノ酸置換を有する本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかの変異体を含む。例えば、本発明は、本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかに対して、例えば、１０もしくはそれ未満、８もしくはそれ未満、６もしくはそれ未満、４もしくはそれ未満などの保存的アミノ酸置換を有する、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＰＤ－１抗体を含む製剤を含む。

特定の実施形態では、抗ＰＤ１抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４アイソタイプからなる群から選択されたＦｃ領域を含む。

本明細書の実施例で使用される非限定的であり、例示的な抗体は「ｍＡｂ１」と称される。この抗体は、米国特許出願公開第２０１５／０２０３５７９号においてＨ２Ｍ７７９８ＮまたはＨ４Ｈ７７９８Ｎとも称され、「ＲＥＧＮ２８１０」または「セミプリマブ」としても公知である。ｍＡｂ１（Ｈ４Ｈ７７９８Ｎ）は、配列番号１／２を有するＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対、および配列番号３－４－５／配列番号６－７－８により表されるＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３ドメインを含む。

本発明の特定の実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－１またはその抗原結合断片は、配列番号９の重鎖および配列番号１０の軽鎖を含む。

抗体の産生中にアミノ酸の末端切断が起こり得ることは当該技術分野において周知である（例えば、Ｗａｎｇら、２００７年、Ｊ．Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃｉ．、９６巻：１－２６頁を参照されたい）。したがって、特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は重鎖および軽鎖を含み、重鎖は配列番号１１のアミノ酸配列を含む。配列番号１１は重鎖アミノ酸配列を含み、Ｃ末端リジンは、配列番号９のアミノ酸配列に存在しない。特定の実施形態では、本開示の製剤は、抗ＰＤ－１抗体の約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９８％またはそれ以上を含有し、Ｃ末端リジンは存在しない。

本発明の医薬製剤内に含まれる抗体またはその抗原結合断片の量は、製剤の所望の特定の特性、ならびに製剤を使用することが意図される特定の状況および目的に応じて変動させることができる。特定の実施形態では、医薬製剤は、５±０．７５ｍｇ／ｍＬから２５０±３７．５ｍｇ／ｍＬの抗体；１０±１．５ｍｇ／ｍＬから２４０±３６ｍｇ／ｍＬの抗体；２０±３．０ｍｇ／ｍＬから２３０±３４．５ｍｇ／ｍＬの抗体；２５±３．７５ｍｇ／ｍＬから２４０±３６ｍｇ／ｍＬの抗体；５０±７．５ｍｇ／ｍＬから２３０±３４．５ｍｇ／ｍＬの抗体；６０±９ｍｇ／ｍＬから２４０±３６ｍｇ／ｍＬの抗体；７０±１０．５ｍｇ／ｍＬから２３０±３４．５ｍｇ／ｍＬの抗体；８０±１２ｍｇ／ｍＬから２２０±３３ｍｇ／ｍＬの抗体；９０±１３．５ｍｇ／ｍＬから２１０±３１．５ｍｇ／ｍＬの抗体；１００±１５ｍｇ／ｍＬから２００±３０ｍｇ／ｍＬの抗体；１１０±１６．５ｍｇ／ｍＬから１９０±２８．５ｍｇ／ｍＬの抗体；１２０±１８ｍｇ／ｍＬから１８０±２７ｍｇ／ｍＬの抗体；１３０±１９．５ｍｇ／ｍＬから１７０±２５．５ｍｇ／ｍＬの抗体；１４０±２１ｍｇ／ｍＬから１６０±２４ｍｇ／ｍＬの抗体；１５０±２２．５ｍｇ／ｍＬの抗体；または１７５±２６．２５ｍｇ／ｍｌを含有する液体製剤である。例えば、本発明の製剤は、ヒトＰＤ－１に特異的に結合する、約５ｍｇ／ｍＬ；約１０ｍｇ／ｍＬ；約１５ｍｇ／ｍＬ；約２０ｍｇ／ｍＬ；約２５ｍｇ／ｍＬ；約３０ｍｇ／ｍＬ；約３５ｍｇ／ｍＬ；約４０ｍｇ／ｍＬ；約４５ｍｇ／ｍＬ；約５０ｍｇ／ｍＬ；約５５ｍｇ／ｍＬ；約６０ｍｇ／ｍＬ；約６５ｍｇ／ｍＬ；約７０ｍｇ／ｍＬ；約７５ｍｇ／ｍＬ；約８０ｍｇ／ｍＬ；約８５ｍｇ／ｍＬ；約９０ｍｇ／ｍＬ；約９５ｍｇ／ｍＬ；約１００ｍｇ／ｍＬ；約１０５ｍｇ／ｍＬ；約１１０ｍｇ／ｍＬ；約１１５ｍｇ／ｍＬ；約１２０ｍｇ／ｍＬ；約１２５ｍｇ／ｍＬ；約１３０ｍｇ／ｍＬ；約１３５ｍｇ／ｍＬ；約１４０ｍｇ／ｍＬ；約１４５ｍｇ／ｍＬ；約１５０ｍｇ／ｍＬ；約１５５ｍｇ／ｍＬ；約１６０ｍｇ／ｍＬ；約１６５ｍｇ／ｍＬ；約１７０ｍｇ／ｍＬ；約１７５ｍｇ／ｍＬ；約１８０ｍｇ／ｍＬ；約１８５ｍｇ／ｍＬ；約１９０ｍｇ／ｍＬ；約１９５ｍｇ／ｍＬ；約２００ｍｇ／ｍＬ；約２０５ｍｇ／ｍＬ；約２１０ｍｇ／ｍＬ；約２１５ｍｇ／ｍＬ；約２２０ｍｇ／ｍＬ；約２２５ｍｇ／ｍＬ；約２３０ｍｇ／ｍＬ；約２３５ｍｇ／ｍＬ；約２４０ｍｇ／ｍＬ；約２４５ｍｇ／ｍＬ；または約２５０ｍｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合断片を含むことができる。

賦形剤およびｐＨ
本発明の医薬製剤は、１つまたはそれ以上の賦形剤を含む。用語「賦形剤」とは、本明細書で使用するとき、所望の粘稠度、粘度または安定化効果を提供するために製剤に添加される任意の非治療薬を意味する。

特定の実施形態では、本発明の医薬製剤は、例えば、ボルテックスなどのラフな取り扱いまたは撹拌の条件下でヒトＰＤ－１抗体を安定化するタイプおよび量の少なくとも１つの有機共溶媒を含む。一部の実施形態では、「安定化する」とは、ラフな取り扱いの過程で、抗体の総量（モル基準で）の３％を超える凝集抗体の形成を防止することを意味する。一部の実施形態では、ラフな取り扱いは、抗体および有機共溶媒を含む溶液を約６０分または約１２０分間ボルテックスすることである。

特定の実施形態では、有機共溶媒は、アルキルポリ（エチレンオキシド）などの非イオン性界面活性剤である。本発明の製剤に含めることができる特定の非イオン性界面活性剤には、例えば、ポリソルベート、例えばポリソルベート２０、ポリソルベート２８、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０、ポリソルベート８１、ポリソルベート８５；ポロキサマー、例えばポロキサマー１８１、ポロキサマー１８８、ポロキサマー４０７；またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれる。ポリソルベート２０は、ＴＷＥＥＮ ２０、ソルビタンモノラウレート、およびポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートとしても公知である。ポロキサマー１８８は、ＰＬＵＲＯＮＩＣ Ｆ６８としても公知である。

本発明の医薬製剤内に含まれる非イオン性界面活性剤の量は、製剤の所望の特定の性質、ならびに製剤を使用することが意図された特定の状況および目的に応じて変動させることができる。特定の実施形態では、製剤は、０．０１％±０．００５％から０．５％±０．２５％の界面活性剤を含有させることができる。例えば、本発明の製剤は、約０．００５％；約０．０１％；約０．０２％；約０．０３％；約０．０４％；約０．０５％；約０．０６％；約０．０７％；約０．０８％；約０．０９％；約０．１％；約０．１１％；約０．１２％；約０．１３％；約０．１４％；約０．１５％；約０．１６％；約０．１７％；約０．１８％；約０．１９％；約０．２０％；約０．２１％；約０．２２％；約０．２３％；約０．２４％；約０．２５％；約０．２６％；約０．２７％；約０．２８％；約０．２９％；約０．３０％；約０．３５％；約０．４０％；約０．４５％；約０．４６％；約０．４７％；約０．４８％；約０．４９％；約０．５０％；約０．５５％；または約０．５７５％のポリソルベート２０またはポリソルベート８０を含ませることができる。

本発明の医薬製剤はまた、熱ストレスの条件下でヒトＰＤ－１抗体を安定化させるタイプおよび量の１つまたはそれ以上の安定剤を含ませることができる。一部の実施形態では、「安定化する」とは、抗体および熱安定剤を含む溶液が約４５℃で最大約２８日間維持された場合、約９１％を超える抗体が天然の立体構造で維持されることを意味する。一部の実施形態では、「安定化する」とは、抗体および熱安定剤を含む溶液が約４５℃で約２８日間維持された場合、約６％未満の抗体が凝集することを意味する。本明細書で使用するとき、「天然の」とは、サイズ排除による抗体の主要な形態を意味し、これは一般的に抗体の無傷の単量体である。用語「天然の」とはまた、抗体の非凝集および非分解形態を指す。

特定の実施形態では、熱安定剤はスクロースなどの糖であり、製剤内に含まれるその量は、製剤が使用される特定の状況および意図された目的に応じて変化させることができる。特定の実施形態では、製剤は、約１％から約１５％の糖；約２％から約１４％の糖；約３％から約１３％の糖；約４％から約１２％の糖；約５％から約１２％の糖；約６％から約１１％の糖；約７％から約１０％の糖；約８％から約１１％の糖；または約９％から約１１％の糖を含有させることができる。例えば、本発明の医薬製剤は、４％±０．８％、５％±１％；６％±１．２％；７％±１．４％；８％±１．６％；９％±１．８％；１０％±２％；１１％±２．２％；１２％±２．４％；１３％±２．６％；または約１４％±２．８％砂糖（例、スクロース）を含ませることができる。

本発明の医薬製剤はまた、安定したｐＨを維持し、ヒトＰＤ－１抗体を安定化するのに役立つ緩衝液または緩衝系を含ませることができる。本明細書で使用される「緩衝液」という用語は、安定したｐＨを維持するか、または溶液のｐＨの変化に抵抗する薬学的に許容される緩衝液を指す。好ましい実施形態では、緩衝液はヒスチジンを含む。本開示の文脈において、「ヒスチジン緩衝液」または「ヒスチジンを含む緩衝液」は、アミノ酸ヒスチジンを含む緩衝液である。ヒスチジン緩衝液の例には、塩化ヒスチジン、酢酸ヒスチジン、リン酸ヒスチジン、および硫酸ヒスチジンが含まれる。好ましい実施形態では、ヒスチジン緩衝液は、Ｌ－ヒスチジンおよびＬ－ヒスチジン塩酸塩（例えば、一水和物として）を規定の量および比率で溶解させることによって調製される。一実施形態では、ヒスチジン緩衝液は、Ｌ－ヒスチジン（遊離塩基、固体）を希釈塩酸で滴定することにより調製される。用語「ヒスチジン」とは、本開示を通じて「ヒスチジン緩衝液」と交換可能に使用される。一部の実施形態では、「安定化する」によって意味されるものは、抗体および緩衝液を含む溶液が約４５℃で最大約２８日間維持される場合、４．５％未満±０．５％の抗体が凝集することである。一部の実施形態では、「安定化する」によって意味されるものは、抗体および緩衝液を含む溶液が約３７℃で最大約２８日間維持される場合、抗体の３％±０．５％未満または２．５％±０．５％未満が凝集することである。一部の実施形態では、「安定化する」によって意味されるものは、抗体および緩衝液を含む溶液が約４５℃で最大約２８日間維持される場合、サイズ排除クロマトグラフィーによって決定したとき、抗体の少なくとも９３％±０．５％または少なくとも９４％±０．５％が天然の立体構造であることを意味する。一部の実施形態では、「安定化する」によって意味されるものは、抗体および緩衝液を含む溶液が約３７℃で最大約２８日間維持される場合、サイズ排除クロマトグラフィーによって決定したとき、抗体の少なくとも９４％±０．５％または少なくとも９５％±０．５％が天然の立体構造であることを意味する。「天然の」または「天然の立体構造」とは、凝集または分解されていない抗体画分を意味する。これは一般的に、サイズ排除クロマトグラフィーアッセイなどの、抗体実体の相対サイズを測定するアッセイによって決定される。非凝集および非分解抗体は、天然の抗体と同等である画分で溶出し、一般的には主要な溶出画分である。凝集した抗体は、天然の抗体よりもサイズが大きいことを示す画分で溶出する。分解された抗体は、天然の抗体よりもサイズが小さいことを示す画分で溶出する。

いくつかの実施形態では、「安定化する」とは、抗体および緩衝液を含む溶液が約４５℃で最大約２８日間維持された場合、陽イオン交換クロマトグラフィーによって決定したときに少なくとも３５％±０．５％の抗体がその主要電荷形態であることを意味する。一部の実施形態では、「安定化する」とは、抗体および緩衝液を含む溶液が約３７℃で最大約２８日間維持された場合、陽イオン交換クロマトグラフィーによって決定したときに少なくとも４６％±０．５％または少なくとも３９％±０．５％の抗体がその主要電荷形態であることを意味する。「主電荷」または「主要電荷形態」とは、一般的に、片側のより多くの「塩基性」ピークと反対側のより多くの「酸性」ピークが隣接している、主ピークのイオン交換樹脂から溶出する抗体の画分を意味する。

本発明の医薬製剤は、約５．２から約６．４のｐＨを有することができる。例えば、本発明の製剤は、約５．５；約５．６；約５．７；約５．８；約５．９；約６．０；約６．１；約６．２；約６．３；約６．４；または約６．５のｐＨを有することができる。一部の実施形態では、ｐＨは６．０±０．４、６．０±０．３；６．０±０．２；６．０±０．１；約６．０；または６．０である。

一部の実施形態では、緩衝液または緩衝系は、ｐＨ５．５～７．４の範囲と完全にまたは部分的に重複する緩衝範囲を有する少なくとも１つの緩衝液を含む。特定の実施形態では、緩衝液はヒスチジン緩衝液を含む。特定の実施形態では、ヒスチジン緩衝液は、５ｍＭ±１ｍＭから１５ｍＭ±３ｍＭ；６ｍＭ±１．２ｍＭから１４ｍＭ±２．８ｍＭ；７ｍＭ±１．４ｍＭから１３ｍＭ±２．６ｍＭ；８ｍＭ±１．６ｍＭから１２ｍＭ±２．４ｍＭ；９ｍＭ±１．８ｍＭから１１ｍＭ±２．２ｍＭ；１０ｍＭ±２ｍＭ；または約１０ｍＭの濃度で存在する。特定の実施形態では、緩衝系は、ｐＨ６．０±０．３で、１０ｍＭ±２ｍＭのヒスチジンを含む。好ましい実施形態では、ヒスチジン緩衝液は、Ｌ－ヒスチジンおよびＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物を含む。一実施形態では、ヒスチジン緩衝液は、４．８ｍＭ±０．９６ｍＭの濃度のＬ－ヒスチジンを含む。一実施形態では、ヒスチジン緩衝液は、５．２ｍＭ±１．０４ｍＭの濃度のＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物を含む。一実施形態では、ヒスチジン緩衝液は、４．８ｍＭ±０．９６ｍＭの濃度のＬ－ヒスチジンおよび５．２ｍＭ±１．０４ｍＭの濃度のＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物を含む。

本発明の医薬製剤はまた、高濃度の抗ＰＤ－１抗体原薬（例えば、一般的には１５０ｍｇ／ｍｌ以上の抗体）を含有する製剤の粘度を低下させた状態を維持するか、または高濃度の抗ＰＤ－１抗体原薬を含有する製剤の粘度を低下させるのに役立つ１つまたはそれ以上の賦形剤を含みえる。特定の実施形態では、粘度調整剤はアミノ酸である。一実施形態では、アミノ酸はプロリンである。一実施形態では、本発明の医薬製剤は、プロリン、好ましくはＬ－プロリンとして、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％または５％の濃度で含む。用語「プロリン」は、本開示を通して「Ｌ－プロリン」と交換可能に使用される。一部の実施形態では、製剤は、液体製剤の粘度を２０±３ｃＰｏｉｓｅ未満、１５±２．２５ｃＰｏｉｓｅ未満、または１１±１．６５ｃＰｏｉｓｅ未満に維持するのに十分な量のプロリンを含む。一部の実施形態では、製剤は、粘度を１５±２．２５ｃＰｏｉｓｅでまたはそれ未満に維持するのに十分な量のプロリンを含む。特定の実施形態では、製剤は、約１％から約５％のプロリン；約２％から約４％のプロリン；または約３％のプロリンを含有させることができる。例えば、本発明の医薬製剤は、１％±０．２％；１．５％±０．３％；２％±０．４％；２．５％±０．５％；３％±０．６％；３．５％±０．７％；４％±０．８％；４．５％±０．９％；または約５％±１％のプロリンを含ませることができる。

抗体精製プロセス中に、適切な賦形剤濃度、抗体濃度、ｐＨなどを達成するために、ある緩衝液を別の緩衝液と交換することが望ましいかまたは必要である。緩衝液交換は、例えば、半透性の接線流ろ過膜を使用する、例えば、限外濾過／透析濾過（ＵＦ／ＤＦ）によって達成することができる。しかしながら、このような技術の使用は、ギブス・ドナン効果［Ｂｏｌｔｏｎら、２０１１年、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２７巻（１号）：１４０－１５２頁］を引き起こす可能性がある。タンパク質濃縮中の膜の製品側での正電荷の蓄積は、正イオンが膜の反対側に優先的に移動することにより電気的に相殺される。この現象の潜在的な結果は、特定の成分（例、ヒスチジン、Ｌ－プロリンなど）の最終濃度が、ＵＦ／ＤＦ工程中に正に帯電した抗体タンパク質に対して、正に帯電したダイアフィルトレーション緩衝液賦形剤の静電反発により、これらの成分の意図された目標濃度よりも低い。したがって、本発明は、例えば、ヒスチジンおよび／またはＬ－プロリンの濃度が、ギブス・ドナン効果のために本明細書に列挙された量または範囲と異なる製剤を含む。

体積排除は、溶液の総体積のかなりの部分が、溶質、特にこの空間から溶媒を除いてタンパク質などの大きな分子に取り込まれる高濃縮試料の挙動を示す。次に、これは、他の溶質を溶解するために利用できる溶媒の総量を減少させ、限外ろ過膜全体で不均等な分配が生じさせることができる。したがって、本発明は、例えば、ヒスチジンおよび／またはＬ－プロリンの濃度が、体積排除効果のために本明細書に列挙された量または範囲から変動させることができる製剤を含む。

本発明の製剤の製造中に、製剤の組成の変動が生じさせることができる。これらの変動には、活性成分の濃度、賦形剤の濃度、および／または製剤のｐＨが含まれる。これらのパラメーターのいずれかの変更が、医薬品の安定性または効力に潜在的に影響を及ぼす可能性があるため、規定の範囲内での組成の変動が抗体の安定性または効力に影響を及ぼすかどうかを評価するために、実証済みの許容範囲（ＰＡＲ）研究を実施した。したがって、本発明は、安定であり、効力を保持し、賦形剤濃度が最大５０％変動する抗ＰＤ－１抗体を含む製剤を含む。例えば、本明細書に含まれるのは、抗ＰＤ－１抗体製剤であり、上記製剤の安定性および効力は、抗体、スクロース、ヒスチジン緩衝液および／またはポリソルベートの濃度の±１０％、±２０％、±３０％、±４０％または±５０％の変動による影響を受けない。

医薬製剤の安定性および粘度
本発明の医薬製剤は、典型的には、高レベルの安定性を示す。用語「安定な」とは、医薬製剤に関して本明細書で使用するとき、医薬製剤内の抗体が、規定の条件下で保存後に許容可能な程度の化学構造または生物学的機能を保持することを意味する。製剤は、そこに含まれる抗体が、規定量の時間の保存後にその化学構造または生物学的機能の１００％を維持しない場合であっても、安定している。特定の状況下では、規定量の時間の保存後の約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％もしくは約９９％の抗体の構造または機能の維持が、「安定」とみなされる。

安定性は、とりわけ、規定温度で規定量の時間での保存後に製剤に残る天然の抗体のパーセンテージを決定することによって測定することができる。天然の抗体のパーセンテージは、とりわけ、サイズ排除クロマトグラフィー（例えば、サイズ排除超高速液体クロマトグラフィー［ＳＥ－ＵＰＬＣ］）によって決定することができ、そのため、天然とは非凝集および非分解を意味する。「許容される程度の安定性」とは、本明細書においてその語句が使用される場合、所定の温度で規定量の時間、保存した後、製剤中に抗体の天然型の少なくとも９０％が検出することができることを意味する。特定の実施形態では、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の抗体の天然型が、規定温度で規定量の時間、保存後に製剤において検出することができる。その後に安定性が測定される規定量の時間は、少なくとも１４日、少なくとも２８日、少なくとも１か月、少なくとも２か月、少なくとも３か月、少なくとも４か月、少なくとも５か月、少なくとも６か月、少なくとも７か月、少なくとも８か月、少なくとも９か月、少なくとも１０か月、少なくとも１１か月、少なくとも１２か月、少なくとも１８か月、少なくとも２４か月、またはそれ以上である。安定性を評価する際に医薬製剤が保存される規定温度は、約－８０℃～約４５℃の任意の温度であり、例えば、約－８０℃、約－３０℃、約－２０℃、約０℃、約４℃～８℃、約５℃、約２５℃、約３５℃、約３７℃、または約４５℃での保存である。例えば、５℃で６か月間保存した後、ＳＥ－ＵＰＬＣで約９５％、９６％、９７％、または９８％を超える天然の抗体が検出された場合、医薬製剤は安定であるとみなされる。２５℃で６か月間保存した後、ＳＥ－ＵＰＬＣで約９５％、９６％、９７％、または９８％を超える天然の抗体が検出された場合、医薬製剤はまた安定であるとみなすことができる。４５℃で２８日間保存した後、ＳＥ－ＵＰＬＣで約８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％または９６％を超える天然の抗体が検出された場合、医薬製剤はまた安定であるとみなすことができる。－２０℃で１２か月間保存した後、ＳＥ－ＵＰＬＣで約９６％、９７％、または９８％を超える天然の抗体が検出された場合、医薬製剤はまた安定であるみなすことができる。－３０℃で１２か月間保存した後、ＳＥ－ＵＰＬＣで約９６％、９７％、または９８％を超える天然の抗体が検出された場合、医薬製剤はまた安定であるみなすことができる。－８０℃で１２か月間保存した後、ＳＥ－ＵＰＬＣで約９６％、９７％、または９８％を超える天然の抗体が検出された場合、医薬製剤はまた安定であるみなすことができる。

安定性は、とりわけ、規定温度で規定量の時間保存された後、製剤内の凝集体に形成される抗体のパーセンテージを決定することにより測定することができ、安定性は形成される凝集体のパーセンテージに反比例する。凝集した抗体のパーセンテージは、とりわけ、サイズ排除クロマトグラフィー（例えば、サイズ排除超高速液体クロマトグラフィー［ＳＥ－ＵＰＬＣ］）によって決定することができる。「許容される程度の安定性」とは、本明細書においてその語句が使用される場合、抗体の最大５％が、所定の温度で規定量の時間、保存した後、製剤において検出される凝集形態（高分子量－ＨＭＷ－形態とも呼ばれる）であることを意味する。特定の実施形態では、許容される程度の安定性とは、最大約５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、または０．１％の抗体が、所定の温度で規定量の時間、保存後に製剤中の凝集体において検出することができることを意味する。その後に安定性が測定される規定量の時間は、少なくとも２週間、少なくとも２８日、少なくとも１か月、少なくとも２か月、少なくとも３か月、少なくとも４か月、少なくとも５か月、少なくとも６か月、少なくとも７か月、少なくとも８か月、少なくとも９か月、少なくとも１０か月、少なくとも１１か月、少なくとも１２か月、少なくとも１８か月、少なくとも２４か月、またはそれを以上である。安定性を評価する際に医薬製剤が保存される温度は、約－８０℃～約４５℃の任意の温度であり、例えば、約－８０℃、約－３０℃、約－２０℃、約０℃、約４℃～８℃、約５℃、約２５℃、約３５℃、約３７℃、または約４５℃での保存である。５℃で１２か月間保存した後、少なくとも約２％、１％、０．５％、または０．１％未満の抗体が凝集形態で検出された場合、医薬製剤はまた安定であるとみなされる。２５℃で３か月間保存した後、少なくとも約４％、３％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満の抗体が凝集形態で検出された場合、医薬製剤はまた安定であるとみなすことができる。４５℃で２８日間保存した後、少なくとも約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、または０．５％未満の抗体が凝集形態で検出された場合、医薬製剤はまた安定であるとみなすことができる。－２０℃、－３０℃、または－８０℃で３か月間保存した後、約３％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満の抗体が凝集形態で検出された場合、医薬製剤はまた安定であるとみなすことができる。

安定性は、とりわけ、抗体の主要画分（「主要電荷形態」）よりもイオン交換中のより酸性画分（「酸性形態」）に移動する抗体のパーセンテージを決定することによって測定することができ、安定性は酸性型の抗体の分率に反比例する。理論に拘束されることを望まないが、抗体の脱アミド化は、非脱アミド化抗体に比べて、抗体をより負に帯電させるようにするため、より酸性になることがある（例えば、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｎ．、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅａｍｉｄａｔｉｏｎ、ＰＮＡＳ、２００２年４月１６日、９９巻（８号）：５２８３－５２８８頁を参照されたい）。「酸性型」抗体のパーセンテージは、とりわけ、イオン交換クロマトグラフィー（例えば、陽イオン交換超高速液体クロマトグラフィー［ＣＥＸ－ＵＰＬＣ］）によって決定することができる。「許容される程度の安定性」とは、本明細書においてその語句が使用される場合、抗体の最大４５％が、規定温度で規定量の時間、保存した後、製剤において検出されるより酸性の形態であることを意味する。特定の実施形態では、許容される程度の安定性とは、最大約４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、または０．１％の抗体が、所定の温度で規定量の時間、保存後に製剤において酸性型で検出することができることを意味する。一実施形態では、許容される程度の安定性とは、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満の抗体が、所定の温度で規定量の時間、保存後に製剤において酸性型で検出することができることを意味する。その後に安定性が測定される規定量の時間は、少なくとも１４日、少なくとも２８日、少なくとも１か月、少なくとも２か月、少なくとも３か月、少なくとも４か月、少なくとも５か月、少なくとも６か月、少なくとも７か月、少なくとも８か月、少なくとも９か月、少なくとも１０か月、少なくとも１１か月、少なくとも１２か月、少なくとも１８か月、少なくとも２４か月、またはそれ以上である。安定性を評価する際に医薬製剤が保存される定義された温度は、約－８０℃～約４５℃の任意の温度であり、例えば、約－８０℃、約－３０℃、約－２０℃、約０℃、約４℃～８℃、約５℃、約２５℃、または約４５℃での保存である。例えば、－８０℃、－３０℃、または－２０℃で３か月保存した後、約３０％、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満の抗体がより酸性の形態である場合、医薬品製剤は安定であるとみなされる。５℃で６か月保存した後、約３２％、３１％、３０％、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満の抗体がより酸性の形態である場合、医薬品製剤はまた安定であるとみなすことができる。２５℃で６か月保存した後、約４３％、４２％、４１％、４０％、３９％、３８％、３７％、３６％、３５％、３４％、３３％、３２％、３１％、３０％、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満の抗体がより酸性の形態である場合、医薬品製剤はまた安定であるとみなすことができる。４５℃で２８日保存した後、約４９％、４８％、４７％、４６％、４５％、４４％、４３％、４２％、４１％、４０％、３９％、３８％、３７％、３６％、３５％、３４％、３３％、３２％、３１％、３０％、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満の抗体がより酸性の形態である場合、医薬品製剤はまた安定であるとみなすことができる。

他の方法を使用して、本発明の製剤の安定性、例えば、熱安定性を決定するための示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、機械的安定性を決定するための制御された撹拌、および溶液の濁度を決定するための約３５０ｎｍまたは約４０５ｎｍでの吸光度を評価する。例えば、本発明の製剤は、約５℃から約２５℃で６か月またはそれ以上保存後、製剤のＯＤ_４０５の変化が時間ゼロでの製剤のＯＤ_４０５から約０．０５未満（例えば０．０４、０．０３、０．０２、０．０１、またはそれ未満）である場合に安定であるとみなされる。

抗体の生物学的活性またはその標的に対する結合親和性の測定はまた、安定性を評価するために使用される。例えば、本発明の製剤は、例えば、５℃、２５℃、４５℃などで規定量の時間（例えば、１～１２か月）保存した後、製剤内に含まれる抗ＰＤ－１抗体が、上記保存前の抗体の結合親和性の少なくとも９０％、９５％、またはそれ以上でＰＤ－１に結合する場合、安定であるとみなされる。結合親和性は、例えば、ＥＬＩＳＡまたは表面プラズモン共鳴によって決定される。生物学的活性は、例えば、ＰＤ－１を発現する細胞と、抗ＰＤ－１抗体を含む製剤とを接触させるなどのＰＤ－１活性アッセイによって決定される。このような細胞への抗体の結合は、例えば、ＦＡＣＳ分析を介して、直接測定される。あるいは、ＰＤ－１システムの下流の活性は、抗体の存在下で測定され、抗体の非存在下でのＰＤ－１システムの活性と比較される。一部の実施形態では、ＰＤ－１は細胞に対して内因性である。他の実施形態では、ＰＤ－１は細胞内で異所的に発現される。

製剤中の抗体の安定性を評価するための追加の方法は、以下に提示される実施例において実証される。

本発明の液体医薬製剤は、特定の実施形態では、低から中程度の粘度レベルを示す。本明細書で使用される「粘度」は、「動粘度」または「絶対粘度」である。「動粘度」は、重力の影響下での流体の抵抗流の尺度である。等しい体積の２つの流体が同一の毛細管粘度計に置かれ、重力によって流れることができる場合、粘性流体は、粘性の低い流体よりも毛細管を通って流れるのに時間がかかる。例えば、ある流体がその流れを完了するのに２００秒かかり、別の流体が４００秒かかる場合、２番目の流体の粘度は、動粘度スケールで１番目の流体の２倍である。「絶対粘度」は、時として動的粘度または単純粘度とも呼ばれ、動粘度と流体密度の積である（絶対粘度＝動粘度×密度）。動粘度の次元はＬ^２／Ｔであり、Ｌは長さ、Ｔは時間である。一般的に、動粘度はセンチストークス（ｃＳｔ）で表される。動粘度のＳＩ単位はｍｍ^２／ｓ（１ｃＳｔ）である。絶対粘度は、センチポアズ（ｃＰ）の単位で表される。絶対粘度のＳＩ単位は、ミリパスカル秒（ｍＰａ－ｓ）であり、１ｃＰ＝１ｍＰａ－ｓである。

本明細書で使用するとき、本発明の流体製剤に関して低レベルの粘度は、約２０ｃＰｏｉｓｅ（ｃＰ）未満の絶対粘度を示す。例えば、本発明の流体製剤は、標準粘度測定技術を使用して測定したときに、製剤が約２０ｃＰ、約１９ｃＰ、約１８ｃＰ、約１５ｃＰ、約１２ｃＰ、約１０ｃＰ、約９ｃＰ、約８ｃＰまたはそれ未満の絶対粘度を示す場合、「低粘度」を有するとみなされる。本明細書で使用するとき、本発明の流体製剤に関して中程度の粘度は、約３５ｃＰ～約２０ｃＰの絶対粘度を示す。例えば、本発明の流体製剤は、標準粘度測定技術を使用して測定したときに、製剤が約３４ｃＰ、約３３ｃＰ、約３２ｃＰ、約３１ｃＰ、約３０ｃＰ、約２９ｃＰ、約２８ｃＰ、約２７ｃＰ、約２６ｃＰ、約２５ｃＰ、約２４ｃＰ、約２３ｃＰ、約２２ｃＰ、約２１ｃＰ、約２０ｃＰ、約１９ｃＰ、１８ｃＰ、約１７ｃＰ、約１６ｃＰ、または約１５．１ｃＰの絶対粘度を示す場合、「中程度の粘度」を有するとみなされる。

以下の実施例に示されるように、本発明者らは、高濃度の抗ヒトＰＤ－１抗体（例えば、約５０ｍｇ／ｍｌから最大２５０ｍｇ／ｍＬまで）を含む低粘度液体製剤が、約１％から約５％のプロリン、および約５％のスクロースとともに抗体を製剤化することによって得ることができるという驚くべき発見をした。このような製剤は、取り扱い中のストレスに対して、および４５℃から－８０℃の温度（本明細書に示される）での保存に対して安定であり、低粘度を有する（７から１５ｃＰの範囲の粘度を有する）。

例示的な製剤
本発明の一態様によれば、医薬製剤は、安定であり、低粘度の、一般的に生理学的に等張性な液体製剤であり、これは、（ｉ）最大２５０ｍｇ／ｍＬ±４５ｍｇ／ｍＬの濃度で、ヒトＰＤ－１に特異的に結合するヒト抗体（例えば、Ｈ４Ｈ７７９８Ｎ）；（ｉｉ）約ｐＨ６．０±０．３で十分な緩衝を提供するヒスチジン緩衝液系；（ｉｉｉ）抗体の構造的完全性を保護する有機共溶媒；（ｉｖ）糖である熱安定剤；および（ｉｖ）アミノ酸である粘度調整剤を含み、皮下投与に便利な体積で注射用に粘度を管理する状態に保つのに役立つ。

一実施形態によれば、安定な低粘度医薬製剤は、（ｉ）ヒトＰＤ－１に特異的に結合し、最大２００ｍｇ／ｍＬ±３０ｍｇ／ｍＬの濃度で、配列番号３のＨＣＤＲ１、配列番号４のＨＣＤＲ２、配列番号５のＨＣＤＲ３、配列番号６のＬＣＤＲ１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含むヒトＩｇＧ４抗体；（ｉｉ）ｐＨ６．０±０．３で緩衝する、１０ｍＭ±２ｍＭのヒスチジン緩衝液；（ｉｉｉ）０．２％ｗ／ｖ±０．１％ｗ／ｖのポリソルベート８０；（ｉｖ）５％ｗ／ｖ±１％ｗ／ｖのスクロース；および（ｖ）１．５％（ｗ／ｖ）±０．３％のＬ－プロリンを含む。

一実施形態によれば、安定な低粘度医薬製剤は、（ｉ）ヒトＰＤ－１に特異的に結合し、１７５ｍｇ／ｍＬ±２６．２５ｍｇ／ｍＬの濃度で、配列番号３のＨＣＤＲ１、配列番号４のＨＣＤＲ２、配列番号５のＨＣＤＲ３、配列番号６のＬＣＤＲ１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含むヒトＩｇＧ４抗体；（ｉｉ）ｐＨ６．０±０．３で緩衝する、１０ｍＭ±２ｍＭのヒスチジン緩衝液；（ｉｉｉ）０．２％ｗ／ｖ±０．１％ｗ／ｖのポリソルベート８０；（ｉｖ）５％ｗ／ｖ±１％ｗ／ｖのスクロース；および（ｖ）１．５％（ｗ／ｖ）±０．３％のＬ－プロリンを含む。

一実施形態によれば、安定な低粘度医薬製剤は、（ｉ）ヒトＰＤ－１に特異的に結合し、１５０ｍｇ／ｍＬ±２２．５ｍｇ／ｍＬの濃度で、配列番号３のＨＣＤＲ１、配列番号４のＨＣＤＲ２、配列番号５のＨＣＤＲ３、配列番号６のＬＣＤＲ１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含むヒトＩｇＧ４抗体；（ｉｉ）ｐＨ６．０±０．３で緩衝する、１０ｍＭ±２ｍＭのヒスチジン緩衝液；（ｉｉｉ）０．２％ｗ／ｖ±０．１％ｗ／ｖのポリソルベート８０；（ｉｖ）５％ｗ／ｖ±１％ｗ／ｖのスクロース；および（ｖ）１．５％（ｗ／ｖ）±０．３％のＬ－プロリンを含む。

一実施形態によれば、安定な低粘度医薬製剤は、（ｉ）ヒトＰＤ－１に特異的に結合し、１００ｍｇ／ｍＬ±１５ｍｇ／ｍＬの濃度で、配列番号３のＨＣＤＲ１、配列番号４のＨＣＤＲ２、配列番号５のＨＣＤＲ３、配列番号６のＬＣＤＲ１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含むヒトＩｇＧ４抗体；（ｉｉ）ｐＨ６．０±０．３で緩衝する、１０ｍＭ±２ｍＭのヒスチジン緩衝液；（ｉｉｉ）５％ｗ／ｖ±１％ｗ／ｖのスクロース；（ｉｖ）０．２％ｗ／ｖ±０．１％ｗ／ｖのポリソルベート８０；および１．５％（ｗ／ｖ）±０．３％のＬ－プロリンを含む。

一実施形態によれば、安定な低粘度医薬製剤は、（ｉ）ヒトＰＤ－１に特異的に結合し、５０ｍｇ／ｍＬ±７．５ｍｇ／ｍＬの濃度で、配列番号３のＨＣＤＲ１、配列番号４のＨＣＤＲ２、配列番号５のＨＣＤＲ３、配列番号６のＬＣＤＲ１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含むヒトＩｇＧ４抗体；（ｉｉ）ｐＨ６．０±０．３で緩衝する、１０ｍＭ±２ｍＭのヒスチジン緩衝液；（ｉｉｉ）５％ｗ／ｖ±１％ｗ／ｖのスクロース；（ｉｖ）０．２％ｗ／ｖ±０．１％ｗ／ｖのポリソルベート８０；および１．５％（ｗ／ｖ）±０．３％のＬ－プロリンを含む。

一実施形態によれば、安定な低粘度医薬製剤は、（ｉ）ヒトＰＤ－１に特異的に結合し、２５ｍｇ／ｍＬ±３．７５ｍｇ／ｍＬの濃度で、配列番号３のＨＣＤＲ１、配列番号４のＨＣＤＲ２、配列番号５のＨＣＤＲ３、配列番号６のＬＣＤＲ１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含むヒトＩｇＧ４抗体；（ｉｉ）ｐＨ６．０±０．３で緩衝する、１０ｍＭ±２ｍＭのヒスチジン緩衝液；（ｉｉｉ）５％ｗ／ｖ±１％ｗ／ｖのスクロース；（ｉｖ）０．２％ｗ／ｖ±０．１％ｗ／ｖのポリソルベート８０；および１．５％（ｗ／ｖ）±０．３％のＬ－プロリンを含む。

本発明によって包含される医薬製剤の追加の非限定的な例は、以下に提示される実施例を含む、本明細書の他の場所に記載されている。

容器および投与方法
本発明の医薬製剤は、医薬品および他の治療用組成物の保存に適した任意の容器内に含まれる。例えば、医薬製剤は、バイアル、アンプル、シリンジ、カートリッジ、またはボトルなどの規定容積を有する密封および滅菌されたプラスチックまたはガラス容器内に含まれる。例えば、透明および不透明（例えば、アンバー）ガラスまたはプラスチックバイアルを含む、様々なタイプのバイアルを使用して、本発明の製剤を含めることができる。同様に、任意のタイプのシリンジを使用して、本発明の医薬製剤を含めるかまたは投与することができる。

本発明の医薬製剤は、「通常のタングステン」シリンジまたは「低タングステン」シリンジ内に含まれる。当業者に理解されるように、ガラスシリンジを製造するプロセスは、一般的に、ガラスを突き刺すように機能する高温タングステン棒の使用を伴い、それにより液体がシリンジから引き出され、排出される穴を作製する。このプロセスは、シリンジの内面に微量のタングステンの堆積をもたらす。後続の洗浄および他の処理工程を使用して、シリンジ内のタングステンの量を減らすことができる。本明細書で使用するとき、用語「通常のタングステン」とは、シリンジが１０億分の５００部（５００ｐｐｂ）より多いかまたはそれに等しいタングステンを含むことを意味する。用途「低タングステン」とは、シリンジが５００ｐｐｂ未満のタングステンを含むことを意味する。例えば、本発明による低タングステンシリンジは、約４９０、４８０、４７０、４６０、４５０、４４０、４３０、４２０、４１０、３９０、３５０、３００、２５０、２００、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０またはそれより少ないｐｐｂのタングステンを含むことができる。

シリンジで使用されるゴム製プランジャー、およびバイアルの開口部を閉じるために使用されるゴム栓は、シリンジまたはバイアルの医薬内容物の汚染を防ぐため、またはそれらの安定性を保つために被覆される。したがって、特定の実施形態によれば、本発明の医薬製剤は、被覆プランジャーを含むシリンジ内、または被覆ゴム栓で密封されたバイアル内に含まれる。例えば、プランジャーまたは栓は、フルオロカーボンフィルムで被覆される。本発明の医薬製剤を含有するバイアルおよびシリンジとともに使用するのに適した被覆された栓またはプランジャーの例は、例えば、米国特許第４，９９７，４２３号；同第５，９０８，６８６号；同第６，２８６，６９９号；同第６，６４５，６３５号；同第７，２２６，５５４号に言及され、それらの内容は全体として参照により本明細書に組み込まれる。本発明との関連で使用することができる特定の例示的な被覆ゴム栓およびプランジャーは、Ｗｅｓｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｌｉｏｎｖｉｌｌｅ，ＰＡ）から入手可能な商品名「ＦｌｕｒｏＴｅｃ（登録商標）」で市販されている。ＦｌｕｒｏＴｅｃ（登録商標）は、医薬品がゴム表面に付着するのを最小限にするかまたは防ぐために使用されるフルオロカーボン被覆の例である。

本発明の特定の実施形態によれば、医薬製剤は、フルオロカーボン被覆されたプランジャーを含む低タングステンシリンジ内に含まれる。

医薬製剤は、注射（例えば、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内など）などの非経口経路、または経皮、粘膜、鼻、肺もしくは経口投与によって患者に投与することができる。多数の再利用可能なペンまたは自己シリンジ送達装置を使用して、本発明の医薬製剤を皮下送達することができる。例としては、限定されないが、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．，Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ，ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｂｅｒｇｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、およびＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（ｓａｎｏｆｉ－ａｖｅｎｔｉｓ，Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられる。本発明の医薬組成物の皮下送達における用途を有する使い捨てペンまたは自動シリンジ送達装置の例としては、限定されないが、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（ｓａｎｏｆｉ－ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）自動シリンジ（Ａｍｇｅｎ，Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ，ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ，Ｌ．Ｐ．）、およびＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ，Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ，ＩＬ）が挙げられる。

本発明の医薬製剤を送達させるための微量注入器の使用はまた本明細書において企図される。本明細書で使用するとき、用語「微量注入器」とは、長期間（例えば、約１０、１５、２０、２５、３０分またはそれ以上）にわたって治療製剤の大容量（例えば、最大約２．５ｍＬまたはそれ以上）をゆっくりと投与するように設計された皮下送達装置を意味する。例えば、米国特許第６，６２９，９４９号；米国特許第６，６５９，９８２号；およびＭｅｅｈａｎら、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ４６巻：１０７－１１６頁（１９９６年）を参照されたい。微量注入器は、高濃度（例：約１００、１２５、１５０、１７５、２００ｍｇ／ｍＬまたはそれ以上）内で含まれる大用量の治療用タンパク質または粘性溶液の送達に特に有用である。

特定の実施形態において、前述の態様のいずれかの安定な液体医薬製剤は、滅菌ガラスバイアルに含まれ、ＩＶ注射として投与される。

一実施形態では、容器は２０ｍＬのタイプ１透明ホウケイ酸ガラスバイアルである。特定の実施形態では、容器は、ＦｌｕｒｏＴｅｃ（登録商標）被覆を有するクロロブチル栓を備えた２ｍＬ、５ｍＬまたは１０ｍＬのタイプ１ホウケイ酸塩ガラスバイアルである。

一実施形態では、約２５ｍｇ／ｍＬまたは５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１を含む本発明の液体医薬製剤は静脈内投与され、ガラスバイアルに含まれる。

特定の実施形態では、本発明は、本明細書に記載される液体製剤のいずれかを含む自動シリンジを提供する。一部の実施形態では、本発明は、約６．０のｐＨで約５０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬまたは約１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１、約１０ｍＭのヒスチジン、約５％のスクロース、約１．５％のプロリンおよび約０．２％のポリソルベート８０を含む安定な液体製剤を含む自動シリンジを提供する。

特定の実施形態では、本発明は、本明細書に記載される液体製剤のいずれかを含む充填済みのシリンジを提供する。一部の実施形態では、本発明は、約６．０のｐＨで約５０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬまたは約１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１、約１０ｍＭのヒスチジン、約５％のスクロース、約１．５％のプロリンおよび約０．２％のポリソルベート８０を含む安定な液体製剤を含む充填済みのシリンジを提供する。特定の実施形態では、シリンジは、２７ゲージの薄壁針、フルオロカーボン被覆されたゴムプランジャーおよびゴム針シールドで充填された１ｍＬまたは２．２５ｍＬ長のガラスシリンジである

一実施形態では、約１７５ｍｇ／ｍＬ±２６．２５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１を含有する液体医薬製剤は、充填済みのシリンジ中に最大約２ｍＬの容積で投与される。特定の実施形態では、シリンジは、２７ゲージの薄壁針、フルオロカーボン被覆したゴムプランジャーおよびゴム針シールドで充填された１ｍＬまたは２．２５ｍＬ長のガラスシリンジである。一実施形態では、シリンジは、２７ゲージ針、ＦＭ２７ゴム針シールド、およびＦＬＵＲＯＴＥＣ（登録商標）被覆された４０２３／５０ゴムプランジャーで充填されたＯＭＰＩの１ｍＬ長ガラスシリンジである。

一実施形態では、約１５０ｍｇ／ｍＬ±２２．５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体を含有する液体医薬製剤は、充填済みのシリンジ中に最大約２ｍＬの容積で投与される。特定の実施形態では、シリンジは、２７ゲージの薄壁針、フルオロカーボン被覆したゴムプランジャーおよびゴム針シールドで充填された１ｍＬまたは２．２５ｍＬ長のガラスシリンジである。一実施形態では、シリンジは、２７ゲージ針、ＦＭ２７ゴム針シールド、およびＦＬＵＲＯＴＥＣ（登録商標）被覆された４０２３／５０ゴムプランジャーで充填されたＯＭＰＩの１ｍＬ長ガラスシリンジである。

医薬品製剤の治療用途
本発明の医薬製剤は、とりわけ、ＰＤ－１によって媒介される疾患または障害を含む、ＰＤ－１活性に関連する任意の疾患または障害の治療、予防または改善に有用である。本発明の医薬製剤の投与によって治療または予防することができる例示的であり、非限定的な疾患および障害には、ウイルス感染、自己免疫疾患、および様々ながん、例えば、脳がん、肺がん、前立腺がん、結腸直腸がん、頭頸部がん、皮膚がん、様々な血液がん、および子宮内膜がんが含まれる。

以下の実施例は、本発明の方法および組成物を作成および使用するやり方の完全な開示および説明を当業者に提供するために提示され、発明者らがかれらの発明とみなすものの範囲を限定することを意図しない。使用された数値（例えば、量、温度など）に関して正確性を確実にするための努力が行われたが、いくつかの実験誤差および偏差を考慮する必要がある。特に明記しない限り、部（ｐａｒｔ）はモル部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏度であり、圧力は大気圧または大気圧付近である。

抗ＰＤ－１抗体製剤の開発
製剤化活動の目標は、以下の属性を有する製剤を開発することであった：
・静脈内注射により２５０ｍｇまたはそれ以上の用量を送達するのに十分な濃度の抗ＰＤ－１抗体を含む液体製剤；
・静脈内注射用に一般的に使用される希釈剤、例えば、０．９％塩化ナトリウム注射液または５％デキストロース注射液で希釈したときに安定しているほぼ等浸透圧の製剤；
・パッケージングとして１型透明ガラスバイアルおよび標準的な血清栓と互換性があり、安定な製剤；ならびに
・長期安定性を支持する滅菌医薬品（ＤＰ）溶液；
〇取り扱いおよび熱ストレスを供されたときに抗体の高分子量（ＨＭＷ）種を最小限にする製剤；
〇熱ストレスに供されたときに抗体荷電種の相対分布の変化を最小限にする製剤；
〇取り扱いおよび熱ストレスに供されたときに生物活性を維持する製剤。

製剤開発を通じて、抗体製剤を開発しおよび最適化するために、ならびに医薬品の安定性における潜在的な現実世界のストレスの影響を評価するために、３つの主要なタンパク質ストレス条件（取り扱い、製造、出荷、保存、およびラベル付け中に抗体医薬品が供されない極端な取り扱い条件を表す）を採用した。これらのストレス条件は次のとおりである：
・室温でのタンパク質溶液の撹拌（ボルテックス）。ガラスバイアルにおけるボルテックスは、タンパク質の取り扱いおよび製造中に生じる撹拌を超えた。
・タンパク質溶液を高温（３７℃、４０℃、または４５℃）でインキュベートし、提案されたＤＰ保存条件（２℃～８℃）と比較した。
・タンパク質を複数回の凍結融解サイクルに供する。タンパク質は、ＤＰの製造中に少なくとも１回の凍結融解サイクルを受けるため、複数回の凍結融解サイクルは、タンパク質が受けると予想される実際のストレスをシミュレートし、それを超える。

初期製剤開発作業の４つの主要な目標があった：
１．緩衝液およびｐＨの選択：緩衝液およびｐＨの選択は、タンパク質の安定性に大きな影響を与える可能性があるため、最適な緩衝液種およびｐＨを決定することは重要なプロセスである。これらのセクションでは、抗体の最適な緩衝液およびｐＨを選択するための理論的根拠を示す研究が提示される。
２．界面活性剤または有機共溶媒の選択：撹拌時のタンパク質の沈殿または凝集を防ぐために、通常、ポリソルベートなどの界面活性剤または有機共溶媒を必要とする。可溶性タンパク質は、取り扱い、ろ過、混合、製造、出荷、および投与時に撹拌に供される。単純な緩衝液中の抗体原薬を過剰に撹拌すると、目に見えて濁る場合がある。したがって、タンパク質の取り扱いと撹拌に対する安定化が重要であると判断された。
３．安定化／等張化賦形剤の同定／選択：糖、塩、およびアミノ酸の添加が、熱ストレスに対する抗体の安定性を改善し、ＤＰの有効期限を増加させる能力について調べた。これらの熱安定剤を含めることの理論的根拠、ならびに最終的な製剤における最適な濃度を特定する研究が本明細書に提示される。
４．抗体濃度の選択：選択された賦形剤を含む医薬品の安定性における抗体濃度の影響を調べた。

初期製剤開発活動は、５～５０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体を使用して実施され、抗ＰＤ－１抗体の液体製剤中の有機共溶媒、熱安定剤、および緩衝液のスクリーニングを行って、静脈内および皮下注射で生理的浸透圧および低粘度を維持しながら、タンパク質との適合性がありおよびその安定性を高める賦形剤を同定した。最大のタンパク質安定性のための最適なｐＨを決定するために、緩衝液条件もまた調べた（本明細書の実施例４、６および７に記載される）。

この初期製剤開発作業の結果を使用して、第１相臨床研究に適した初期製剤を開発した。第１相製剤はまた、後期臨床および市販製剤を最適化するための参照を提供した。

初期製剤開発から得られた知識を用いて、後期製剤開発活動は、低いおよび高いタンパク質濃度（最大１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１）でタンパク質安定性を高める賦形剤を同定するためのｐＨ、界面活性剤濃度、および安定剤の最適化を伴った（実施例５、８、９、および１０に記載される）。

製剤開発を通じて、製剤はストレスおよび保存安定性について評価された。製剤開発研究において安定性を評価するために使用される方法は、本明細書の実施例３に記載されている。実施例１１および１２は、製剤の保存およびストレス安定性を記載している。

実施例１３は、賦形剤が特定の範囲内で変化したときの製剤の安定性を記載している。

これらの研究から得られた結果を使用して、静脈内投与（ＩＶ）または皮下投与（ＳＣ）のいずれかのための臨床使用に適した安定な液体製剤を開発した。実施例１４は、本明細書の製剤に使用される容器を記載している。実施例１５、１６、および１７は、ガラスバイアル、充填済みのシリンジ、および静脈内送達装置における製剤の適合性および安定性を記載している。このような製剤は、製剤開発のために定義された目的を満たした：
・開発された製剤は、開発された用量に適している；
・生理的状態に対して等浸透圧である張度；
○５０ｍｇ／ｍＬ製剤の浸透圧は約３１８ｍＯｓｍ／ｋｇであった；
・液体状態での長期安定性を支持する滅菌ＤＰ溶液；
○抗体ＨＭＷ種の形成は、２～８℃で長期保存時に最小限に抑えられた；
○２～８℃で長期保存すると、抗体荷電種の相対分布においてほとんどまたはまったく変化が生じなかった；および
○加速保存およびストレス条件下、および５℃で１２か月保存すると、抗体ＤＰにおいて視認できない粒子の形成が最小限に観察された。

製剤の他の属性は、本明細書の記載から明らかである。
抗ＰＤ－１抗体：抗ＰＤ－１抗体は、米国特許出願公開第２０１５／０２０３５７９号に記載されており、その全体が本明細書に組み込まれる。以下の実施例において使用される例示的な抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖；配列番号１／２を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対；ならびに配列番号３～８を含む重鎖および軽鎖のＣＤＲ配列を含む完全ヒト抗ＰＤ－１抗体Ｈ４Ｈ７７９８Ｎ（米国特許出願公開第２０１５／０２０３５７９号に開示され、「ＲＥＧＮ２８１０」または「セミプリマブ」として公知である）である。本明細書では「ｍＡｂ１」と称する。

例示的な製剤
特定の実施形態では、ｍＡｂ１は、５ｍｇ／ｍｌ±０．７５ｍｇ／ｍｌから２５０ｍｇ／ｍｌ±４５．０ｍｇ／ｍｌのｍＡｂ１、１０ｍＭ±２ｍＭヒスチジン緩衝液、０．２％±０．１％ｗ／ｖポリソルベート、１％±０．２％から１０％±２％ｗ／ｖスクロース、および１％±０．０２％から５％±１％ｗ／ｖプロリンを含有する水性緩衝製剤、ｐＨ６．０±０．３として製剤化された。

例示的な製剤は、以下を含む：
・２５ｍｇ／ｍｌ±３．７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１、１０±２ｍＭのヒスチジン緩衝液、０．２％±０．１％ｗ／ｖのポリソルベート８０、５％±１％ｗ／ｖのスクロース、および１．５％±０．３％ｗ／ｖのＬ－プロリンをｐＨ６．０±０．３で含む安定な低粘度医薬製剤。
・５０ｍｇ／ｍｌ±７．５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１、１０±２ｍＭのヒスチジン緩衝液、０．２％±０．１％ｗ／ｖのポリソルベート８０、５％±１％ｗ／ｖのスクロース、および１．５％±０．３％ｗ／ｖのＬ－プロリンをｐＨ６．０±０．３で含む安定な低粘度医薬製剤。
・１５０±２３ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１、１０±２ｍＭのヒスチジン緩衝液、０．２％±０．１％ｗ／ｖのポリソルベート８０、５％±１％ｗ／ｖのスクロース、および１．５％±０．３％ｗ／ｖのＬ－プロリンをｐＨ６．０±０．３で含む安定な低粘度医薬製剤。
・１７５±２７ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１、１０±２ｍＭのヒスチジン緩衝液、０．２％±０．１％ｗ／ｖのポリソルベート８０、５％±１％ｗ／ｖのスクロース、および１．５％±０．３％ｗ／ｖのＬ－プロリンをｐＨ６．０±０．３で含む安定な低粘度医薬製剤。

製剤の安定性を評価するために使用される方法
製剤の安定性を評価するために、以下のアッセイを適用した：
・目視検査による色および外観
・ｐＨ
・４０５ｎｍでのＯＤの増加によってまたは比濁法によって測定された濁度
・マイクロフローイメージング（ＭＦＩ）（そのようにして得られた粒子数として報告される）、および光蔽（ＨＩＡＣ）によって実行される粒子状物質分析
・逆相超高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＵＰＬＣ）によるタンパク質濃度
・サイズ排除－超高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）、または還元および非還元マイクロチップキャピラリー電気泳動ドデシル硫酸ナトリウム（ＭＣＥ－ＳＤＳ）ＰＡＧＥによる純度
・陽イオン交換クロマトグラフィー－超高速液体クロマトグラフィー（ＣＥＸ－ＵＰＬＣ）、またはイメージングキャピラリー等電点電気泳動（ｉＣＩＥＦ）による電荷変異体分析
・バイオアッセイによる効力：各試料の相対的効力は、バイオアッセイを使用して決定され、次のように定義される：（ＩＣ_５０参照試料／ＩＣ_５０試料）×１００％。保存安定性試料の測定された効力は、参照標準の測定された効力の５０％から１５０％の範囲内でなければならない。

製剤の物理的安定性は、色、外観、ｐＨ、濁度、およびタンパク質濃度などの特性を指す。溶液中に視認できる微粒子の存在は、目視検査によって検出することができた。溶液は、透明からわずかに乳白色であり、本質的に視認できる微粒子がなく、無色から淡黄色の場合、目視検査に合格した。さらに、４０５ｎｍのＯＤで測定した濁度を使用して、溶液中の微粒子を検出することもできた。４０５ｎｍでのＯＤの増加は、微粒子の存在、乳光の増加、または試験品の色の変化を示す。ＭＦＩは、サイズが２μｍ以上である目に見えない微粒子の測定に使用された。ｍＡｂ１のタンパク質濃度は、ＲＰ－ＵＰＬＣアッセイによって測定され、出発物質に対するタンパク質回収率として報告された。ＲＰ－ＵＰＬＣアッセイにおいて、ｍＡｂ１は単一ピークとしてＲＰカラムから溶出された。タンパク質濃度は、ｍＡｂ１標準を使用して作成された検量線と比較することにより、ｍＡｂ１の総ピーク面積から決定された。回収率は、開始タンパク質濃度に対する測定タンパク質濃度に基づいて計算された。

化学的安定性とは、タンパク質の共有結合修飾形態（例えば、共有結合凝集体、切断産物、または電荷変異体形態）および非共有結合修飾形態（例えば、非共有結合凝集体）の形成を指す。高分子量および低分子量の分解産物は、ＳＥ－ＵＰＬＣ法およびＭＣＥ－ＳＤＳ法によってネイティブｍＡｂ１から分離することができた。ＳＥ－ＵＰＬＣ法およびＭＣＥ－ＳＤＳ法において分解したｍＡｂ１のパーセンテージは、すべてのｍＡｂ１ピークの合計面積に対するすべての非ネイティブピークの面積の比率から計算された。ｍＡｂ１の電荷変異体形態は、ＣＥＸ－ＵＰＬＣおよびｉＣＩＥＦを用いて分解された。ＣＥＸ－ＵＰＬＣ法では、メインピークの保持時間よりも早い保持時間を有するピークは、「酸性」ピークとしてラベル付けされる；メインピークの保持時間よりも遅い保持時間を有するピークは、「塩基性」ピークとしてラベル付けされた。ｉＣＩＥＦ法では、メインピークのｐＩよりも低いｐＩにフォーカスされたピークは、「酸性」ピークとラベル付けされ、メインピークのｐＩよりも高いｐＩにフォーカスされたピークは、「塩基性」ピークとラベル付けされた。

様々な緩衝液およびｐＨの影響
ｍＡｂ１の熱安定性における緩衝液およびｐＨの影響は、様々なｐＨ範囲の一連の緩衝液系において２８日間、４５℃で５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１をインキュベートすることによって液体製剤において調べられた。次のｐＨおよび緩衝液系を研究した：酢酸（ｐＨ４．５、５．０、５．５）、ヒスチジン（ｐＨ５．５、６．０、６．５）、およびリン酸（ｐＨ６．０、６．５、７．０）。ＳＥ－ＵＰＬＣ分析の結果に基づいて、ヒスチジン緩衝液においてｐＨ６．０～６．５の間でｍＡｂ１を製剤化した場合、最大のタンパク質安定性が観察された（表１）。

ＣＥＸ－ＵＰＬＣ分析の結果に基づいて、ヒスチジン緩衝液中でｐＨ５．５～６．０の間、または酢酸緩衝液中でｐＨ５．０～５．５の間でｍＡｂ１を製剤化した場合、最大タンパク質安定性が観察された。これらの分析はまた、凝集（すなわち、ＨＭＷ種の形成）、断片化（すなわち、ＬＭＷ種の形成）、および電荷変異体の形成が主な分解経路であることを明らかにした。ヒスチジン緩衝液は、ＨＭＷおよびＬＭＷ種の形成および電荷変異体の形成に関してタンパク質の安定化の最良の全体レベルを提供するため、製剤化緩衝液として選択された。主要な分解経路であるＨＭＷ種および電荷変異体の形成がこのｐＨで最小化されたため、製剤化にはｐＨ６．０が選択された。これらの結果に基づいて、ｍＡｂ１製剤化にはｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジン緩衝液が選択された。

ヒスチジン緩衝液中でのｐＨスクリーニング
ｍＡｂ１の熱安定性における緩衝液およびｐＨの影響は、高濃度液体製剤化において調べられた。１５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１は、ｐＨ５．３、５．５、５．８、６．０、および６．３での一連のヒスチジン緩衝液中で、熱安定剤の有無により４５℃で２８日間インキュベートされた。ＳＥ－ＵＰＬＣ分析の結果に基づく９％スクロースでは、ヒスチジン緩衝液中でｐＨ５．８～６．３の間でｍＡｂ１を製剤化した場合に最大のタンパク質安定性が観察された（図１）。ＣＥＸ－ＵＰＬＣ分析の結果に基づいて、ヒスチジン緩衝液中にｍＡｂ１をｐＨ５．３～６．０の間で製剤化した場合、タンパク質の最大安定性が観察された（表２）。

これらの分析はまた、凝集（すなわち、ＨＭＷ種の形成）および電荷変異体の形成が主な分解経路であることを明らかにした。主要な分解経路であるＨＭＷ種および電荷変異体の形成がこのｐＨで最小化されたため、ＤＰ製剤用にｐＨ６．０が選択された。これらの結果に基づいて、ｍＡｂ１の高濃度ＤＰ製剤用にｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジン緩衝液が選択された。

撹拌ストレスに対する保護剤の選択
界面活性剤および有機共溶媒などの安定剤が抗体製剤にしばしば添加されて、撹拌によって誘発される凝集からタンパク質を保護する。５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１の撹拌ストレス安定性および熱安定性における有機共溶媒および界面活性剤の影響は、液体製剤において調べられた。以下の共溶媒および界面活性剤を評価した：０．１％ポリソルベート２０、０．１％ポリソルベート８０、１．０％ＰＥＧ３３５０。撹拌ストレス安定性研究の結果を表３に要約している。

ｍＡｂ１は、有機共溶媒または界面活性剤の非存在下で１２０分間ボルテックスすることにより撹拌した場合に不安定であった。共溶媒または界面活性剤の非存在下でのボルテックスによる撹拌後、溶液は濁り、濁度の実質的な増加を示し、ＳＥ－ＵＰＬＣで決定した場合、凝集体の１５．３％が増加し、およびＲＰ－ＵＰＬＣによってタンパク質回収の２４％が損失した（表３）。１２０分のボルテックス後、１％ＰＥＧ３３５０はｍＡｂ１の十分な安定化を提供しなかった。１％ＰＥＧ３３５０の存在下では、溶液は濁り、濁度の増加を示した（表３）。対照的に、０．１％ポリソルベート２０および０．１％ポリソルベート８０はともに、ｍＡｂ１を同程度まで撹拌により誘導された不安定性から保護した（表３）。

しかしながら、０．１％ポリソルベート８０を含む製剤は、４５℃でインキュベートした場合、０．１％ポリソルベート２０を含む製剤と比較して減少した量の凝集体を示した（表４）。０．１％ポリソルベート８０がｍＡｂ１ ＤＰ製剤用の界面活性剤として選択された。これは、タンパク質を撹拌ストレスに対して安定化し、ポリソルベート２０よりもタンパク質の熱安定性へのネガティブな影響（ＳＥ－ＵＰＬＣ分析とＣＥＸ－ＵＰＬＣ分析の両方で決定した）が少なく、モノクローナル抗体製剤における使用の安全な歴史があるためである。

熱ストレスに対する保護剤の選択
スクロースなどの安定剤は、液体製剤中のタンパク質の熱安定性を高めるために抗体製剤にしばしば添加される。液体製剤中の５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１は、５％スクロースで製剤化し、加速条件下でインキュベートした場合、安定性の向上を示した（表４）。

４５℃で２９日間のインキュベーション後、スクロースを含まない対照製剤の２．８％増加と比較して、５％スクロースを含む製剤ではＨＭＷ種の相対量が１．７％増加した。このため、熱安定剤としてスクロースが選択された。製剤を等張にし、熱安定性を最大化するために、ｍＡｂ１製剤のスクロース濃度を１０％に増加させた。

安定剤の最適化
熱安定剤を最適化する目的は、最大２００ｍｇ／ｍＬの抗体濃度を支持するＤＰ製剤を開発するために使用することができる安定化成分を同定することであった。初期製剤では１０％のスクロースが選択された。１０％スクロースでは、ｍＡｂ１の粘度は２０℃で約２０ｃＰであり、堅牢な後期製品および市販製品には高すぎると考えられることが見出された。したがって、好ましい安定性と低粘度の両方を示す、改良されたｍＡｂ１製剤が必要とされた。

低濃度製剤開発中に、ｍＡｂ１の熱安定剤としてスクロースが選択された。高濃度製剤の開発では、２５℃（表５）および４０℃で１か月間の１５０および１７５ｍｇ／ｍＬ濃度のｍＡｂ１の安定性および粘度について、様々な濃度のスクロースおよびＬ－プロリンを評価した。ＨＭＷ種の形成は、製剤を４０℃で２８日間インキュベートした場合、スクロース濃度の増加とともに減少した。３％Ｌ－プロリンは、５％スクロースと同様の安定化を提供し、最大安定化は９％スクロースで観察された。

９％スクロースは、３％Ｌ－プロリンと比較してわずかに良好な安定化を提供したが、製剤粘度もまた増加させた。１７５ｍｇ／ｍＬの場合、９％のスクロースを含むｍＡｂ１製剤は粘度が２７センチポアズであり、これは製造および投与の課題を生じさせた。３％のプロリンを含む１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１製剤は粘度が約２０センチポアズであり、現在の製造プロセスで管理することができた。

しかしながら、－２０℃、－３０℃および－８０℃での保存安定性に基づいて、３％プロリンを含む製剤はスクロースを含む製剤ほど安定ではないことが見出された（図２）。図２に示されるように、製剤Ｆ３（５％スクロースを含む）は－２０℃、－３０℃、および－８０℃で３％以下のＨＭＷ種で安定であった。

ｍＡｂ１の安定化におけるＬ－プロリンの影響は、５０ｍｇ／ｍＬ製剤を用いて調べられた。４５℃で２８日間インキュベートした後、Ｌ－プロリンを含む製剤は、Ｌ－プロリンを含まない製剤と比較してＨＭＷ種のレベルが低いことを示し、これは、Ｌ－プロリンが５０ｍｇ／ｍＬの濃度で抗体を安定化させることを示した（表６）。さらに、Ｌ－プロリンが抗体タンパク質構造に与える影響を生物物理学的手法（フーリエ変換赤外分光法、ＣＤ分光法、蛍光発光分光法、および示差走査熱量測定法）で調べた。結果は、Ｌ－プロリンが抗体の二次および三次構造を乱さないことを示した。

高濃度（１５０および１７５ｍｇ／ｍＬ）のｍＡｂ１の熱安定性における異なる安定剤の影響を液体製剤においてさらに調べた。評価した安定剤は、９％（ｗ／ｖ）スクロース、３％（ｗ／ｖ）Ｌ－プロリン、および１．５％（ｗ／ｖ）Ｌ－プロリンを伴う５％（ｗ／ｖ）スクロースであった。加速安定性研究の結果を表７に要約している。

４０℃で２８日間のインキュベーション後、９％スクロースが最良の安定化を提供し、高濃度製剤の中で最高の粘度を有した。５％スクロース／１．５％Ｌ－プロリン製剤は、４０℃で２８日後の安定性では２番目にランクされた。２５℃で３か月のインキュベーション後、ｍＡｂ１の安定性は、調べたすべての製剤でほぼ同じであったが、しかしながら、５％スクロース／１．５％Ｌ－プロリンを含む製剤は、他の２つの製剤よりもわずかに優れていた。しかしながら、－２０℃、－３０℃、および－８０℃でのインキュベーションでは、５％および９％のスクロースが３％プロリンよりも良好な安定性を提供した（図３）。５％スクロース／１．５％Ｌ－プロリンを含む１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１の粘度は、２０℃で１４ｃＰの粘度を有した。等張液を生成し、安定性と粘度の間で最良なバランスを実現する製剤を提供するために、５％スクロース／１．５％Ｌ－プロリンを抗体後期ＤＰ製剤の開発に選択した。

粘度調整剤の選択
タンパク質製剤の粘度は、タンパク質濃度が増加するにつれて指数関数的に増加した。粘度が２０℃で約１０～１５ｃＰを超え始めると、製剤の開発時に製剤の粘度を考慮する必要がある。これは単に、粘度が充填済みのシリンジ（ＰＦＳ）または他の針に基づく送達装置を介した注射のし易さと相関しているためである；さらに重要なことに、適度に低い粘度を維持することは、自動シリンジなどの送達装置の開発に重要である。製剤の粘度における賦形剤の影響は、次の潜在的な粘度調整剤、プロリン、アルギニンＨＣｌ、ヒスチジンＨＣｌ、酢酸マグネシウムおよびＮａＣｌを含む液体製剤において調べられた。図４は、粘度調整剤を含む１５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１の粘度を要約している。２５～１００ｍＭのアルギニンＨＣｌ、ヒスチジンＨＣｌ、酢酸マグネシウム、およびＮａＣｌは、１５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１製剤の粘度を低下させた。

ｍＡｂ１製剤の安定性における粘度調整剤の影響もまた調べた。アルギニンＨＣｌ、ヒスチジンＨＣｌ、酢酸マグネシウムおよびＮａＣｌなどの粘度調整剤を含む１５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１製剤を調製し、４５℃で２８日間インキュベートした。結果を図５に示す。ｍＡｂ１を粘度調整剤なしで製剤化した場合、最大のタンパク質安定性が観察されることがわかった。これらの粘度調整塩はすべて、ｍＡｂ１の安定性に負に影響を及ぼした。したがって、塩を最終製剤に含めなかった。

安定剤としてのＬ－プロリンは、５０ｍｇ／ｍＬまたはそれを上回る抗体濃度に対して溶液粘度を最小化した。様々な量のＬ－プロリンを含む高濃度抗体の加速安定性試験の結果は、スクロースの有無で表７に要約されている。２５℃で３か月のインキュベーション後、５％スクロース／１．５％Ｌ－プロリンを含む製剤は、ＨＭＷ種の形成に関して他の２つの製剤と比較してわずかに改善された安定性を提供した。４０℃で２８日間インキュベートした後、９％スクロースを含む製剤が最良の安定性を提供し、５％スクロース／１．５％Ｌ－プロリン製剤を含む製剤が２番目にランク付けされた。９％スクロースを含む製剤は１７５ｍｇ／ｍＬの抗体で２０ｃＰの粘度を有し、５％スクロース／１．５％Ｌ－プロリンを含む１７５ｍｇ／ｍＬの製剤の粘度は２０℃で１４ｃＰの粘度を有する。Ｌ－プロリンを製剤に添加することは、高いタンパク質濃度での粘度の低下、および抗体の安定化に重要であった。

要約すると、５０ｍｇ／ｍＬおよび高濃度の抗体製剤の両方について、５％スクロース／１．５％Ｌ－プロリンが選択された。この賦形剤の組み合わせにより、試験されたすべての抗体濃度（最大１７５ｍｇ／ｍＬ）で許容可能な安定性および粘度を有する等張製剤が実現した。

ポリソルベート（ＰＳ）濃度の最適化
製剤開発中に、ｍＡｂ１製剤を界面活性剤なしで撹拌した場合、より高次の分子量種の形成および濁度の増加が観察された。ポリソルベート８０（ＰＳ８０）の添加により、タンパク質を撹拌に対して安定化した。高濃度ｍＡｂ１液体製剤の開発中、撹拌に対する不安定性が高次分子量種の増加として観察された。撹拌による不安定性から最大１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１を保護するために必要とされるポリソルベート８０の最小量を決定するための研究が行われた。この研究における製剤は、５％スクロースおよび１．５％Ｌ－プロリンを含み、そのためポリソルベート８０の影響は、最終製剤をより代表する製剤組成を用いて研究することができた。本研究に含まれるみかけのポリソルベート８０濃度は、０％、０．０２％、０．０４％、０．０６％、０．０８％、０．１％、０．１５％、および０．２％（ｗ／ｖ）であった。ポリソルベート８０が存在しない場合、溶液は濁り、ボルテックスによる撹拌後に濁度の実質的な増加が示された。１２０分間の撹拌後、ＨＭＷ％の量でポリソルベート８０濃度依存性の減少が観察された。０．１５～０．２％ポリソルベート８０の濃度は、１５０ｍｇ／ｍＬおよび１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１を撹拌による凝集に対して安定化するのに十分であることがわかった（表８）。０．２％（ｗ／ｖ）（みかけの値）ポリソルベート８０の添加により、１２０分間の撹拌後のＨＭＷ種の形成が完全に妨げられた。

表９は、撹拌（１２０分間のボルテックス）後の１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１の安定性におけるポリソルベート８０濃度の影響を詳述している。

撹拌誘発不安定性からｍＡｂ１を保護する０．２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０の能力は、５０ｍｇ／ｍＬの最終製剤を用いた別の研究により確認された（表１０）。

これらの結果に基づいて、撹拌ストレス下でのＨＭＷ種の形成を妨げるのに十分な安定化を提供したため、０．２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０が界面活性剤として選択された。

例示的な製剤の保存およびストレス安定性
ガラスバイアル中の５０ｍｇ／ｍＬおよび１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１製剤の保存安定性を表１１および表１２に示し、２つの製剤からの加速およびストレス安定性データをそれぞれ表１３および表１４に示す。安定性研究試験は、ガラスバイアル内の５０ｍｇ／ｍＬおよび１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１製剤が、２℃～８℃で保存した場合、少なくとも２４か月間安定であることを示した。さらに、５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１製剤はまた、加速およびストレス条件下で優れた安定性を示した。製剤は、２５℃で少なくとも３か月、４０℃で少なくとも７日間、保存した場合に安定であり、５０ｍｇ／ｍＬの製剤と主要な容器閉鎖コンポーネントとの適合性を示した。ＳＥ－ＵＰＬＣまたはＣＥＸ－ＵＰＬＣおよびｉＣＩＥＦによって測定された色または外観、濁度、粒子状物質、ｐＨ、タンパク質濃度、純度に目立った変化は観察されず、これらの条件下で効力は維持された。

ヒスチジン緩衝液、スクロースおよびポリソルベートを含むｍＡｂ１製剤の安定性
表１５～２４は、ｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジン緩衝液、スクロースおよびポリソルベートを含む例示的なｍＡｂ１製剤の保存安定性を要約している。

表２５～２７は、例示的な製剤のストレス安定性を要約している。

実証済みの許容範囲（ＰＡＲ）研究
ｍＡｂ１医薬品（ＤＰ）の製造中に、ＤＰの組成の変動が生じる。これらの変動には、活性成分の濃度、賦形剤の濃度、および／または製剤のｐＨが含まれた。これらのパラメーターのいずれかを変更すると、医薬品の安定性または効力に影響を与える可能性があるため、規定の範囲内で、ＤＰ組成の変動がｍＡｂ１ ＤＰの安定性または効力に影響を及ぼすかどうかを評価するために、実証済みの許容範囲（ＰＡＲ）研究を実施した。

２つの実験計画法（ＤＯＥ）研究を使用して、各製剤パラメーターの影響ならびに製剤安定性に対する相互作用を評価した。
・ｍＡｂ１ ＤＰ安定性に影響を与える重要な製剤パラメーターを同定するための、加速およびストレス安定性評価を伴う一部実施要因計画プレＰＡＲ研究；
・プレＰＡＲ研究から同定された重要な製剤パラメーターを含む完全実施要因計画ＰＡＲ研究であり、製剤パラメーターの許容範囲を示すための長期の有効期限安定性を含めた。

プレＰＡＲ研究設計
製品の品質に重要である可能性があるＤＰ組成物の重要なおよび／または相互作用する製剤パラメーターを評価するために、一部実施要因ＤＯＥは、タンパク質の濃度（±１０％）、緩衝液および安定剤の濃度（±２０％）、界面活性剤の濃度（±５０％）、およびｐＨ（±０．３単位）を含むすべての製剤パラメーターの変更による製剤の加速およびストレス安定性を調べるために適用された。試験された製剤パラメーター範囲は、仕様の許容基準および製造経験と同等かまたはそれよりも広くなるように定義された。本研究は、２＾（６－２）解像度ＩＶ一部実施要因実験を使用した統計ソフトウェアで設計された。表２９に示されるように、４つの標的製剤を中心点として、研究は２０回の実行を含んだ。

加速条件およびストレス条件（２５℃、３７℃、凍結／解凍［Ｆ／Ｔ］および撹拌）での２０個の製剤すべてを特徴付け、物理的／化学的特性および安定性、例えば、視覚検査、ｐＨ、濁度、浸透圧、伝導率、純度、タンパク質濃度および回収率、電荷変異体分析、および視認できない粒子分析について評価した。

プレＰＡＲ研究の結果
２０種の製剤はすべて、撹拌またはＦ／Ｔストレス後に変化を示さなかった。２５℃および３７℃のインキュベーションの結果を回帰モデル（標準最小二乗パーソナリティおよび効果レバレッジ強調を使用したＪＭＰ適合モデル）で分析した。重要な品質属性に対するすべての実験製剤の主要変数および相互作用変数の統計分析により、ｐＨ、タンパク質濃度、およびスクロース濃度が製品の品質にとって重要であることが明らかになった。影響を受ける２つの製品品質属性は、ＨＭＷ種および酸性電荷変異体であった。試験される範囲内のヒスチジン、プロリンまたはポリソルベート８０濃度を含む他の製剤パラメーターは、製品の品質に統計的に有意な影響を及ぼさないことがわかった。加速条件下では、製剤の安定性に影響を与える二次的またはより高次的な相互作用はなかった。プレＰＡＲ研究の結果は、ｐＨ、ｍＡｂ１濃度、およびスクロース濃度がｍＡｂ１製剤の安定性に重要であり、５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１製剤の重要な製剤パラメーターとみなされることを示した。

ｐＨ、ｍＡｂ１濃度およびスクロース濃度が重要な製剤パラメーターとして同定されたが、品質属性におけるこれら３つの要因の影響は最小限であった。統計分析に基づいて、５．７～６．３のｐＨ範囲、４５～５５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１、および／または４～６％のスクロースの変化は、ＨＭＷ種と酸性電荷変異体の形成に１５％未満の影響を与えた可能性がある。

推奨されるＤＰ保存条件での長期保存安定性への影響を確認するために、以下の３つの重要な製剤パラメーター：ｐＨ、ｍＡｂ１濃度、およびスクロース濃度を、長期保存安定性を伴うＰＡＲ研究でさらに評価した。

ＰＡＲ研究設計
様々なｐＨ（±０．３単位）、タンパク質濃度（±１０％）、およびスクロース濃度（±２０％）を有する製剤の長期の有効期限保存安定性を調べるために、完全要因ＤＯＥ設計が適用され、８回の実験作業をもたらした（表３０）。基準製剤（製剤３、表３０の標的製剤）を中心点製剤として含めた。

全要因研究設計により、すべての主要な効果項目ならびに相互作用項目の推定が可能になる。試験された製剤パラメーターの範囲は、仕様の許容基準および製造経験と同等またはそれ以上と定義されており、プレＰＡＲ調査と同じままであった。

実験製剤の安定性は、それらのみかけの濃度（Ｆ３）ですべての製剤成分を含むｐＨ６．０での参照製剤の安定性と比較された。ＰＡＲの研究は、代表的な商業製造プロセスで製造されたｍＡｂ１ ＤＳロットを使用した。ＤＰ製剤は、２０ｍｍのＦｌｕｒｏＴｅｃ（登録商標）被覆されたＷｅｓｔ Ｓ２－４５１ ４４３２／５０ ＧＲＹ Ｂ２－４０栓（市販のＤＰ表示）を備えた１０ｍＬのＳｃｈｏｔｔタイプ１のホウケイ酸ガラスバイアルに充填され、２～８℃で長期保存安定性が評価された。表３１の分析計画に従って、製剤を研究した。

ＰＡＲ研究の結果
ＨＭＷ種形成への影響
９つの製剤すべてについて、２～８℃で最大１２か月までＳＥ－ＵＰＬＣによって測定されたＨＭＷ％の有意な増加はなかった。すべての値は、上限仕様を十分に下回っており、経時的なＨＭＷ％の有意な増加は観察されなかった。

２～８℃での５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１ ＤＰのＨＭＷ種の形成は、非常に遅いことがわかった。最大１２か月間、９つの製剤におけるＨＭＷ％の相対量の最大変化は約０．２％であった。ＨＭＷ％の変化は最小であり、モノマー濃度は一定とみなすことができるため、モノマーからＨＭＷ種への凝集はゼロ次反応として単純化され得た。したがって、単純化された線形モデルを使用して、ＨＭＷ％安定性データを分析した。経時的にＨＭＷ％を線形に適合させることにより、各製剤についてＨＭＷ種形成率が導き出された。

回帰モデル（標準最小二乗パーソナリティおよび効果レバレッジ強調を用いたＪＭＰ適合モデル）を使用して、主要因子ならびにすべての相互作用項目に対して速度を分析した。結果の回帰モデルは統計的に有意であり、Ｒ^２は０．７４であった。ｍＡｂ１濃度、ｐＨ、および時間は統計的に有意であったが、ＨＭＷ％種形成への影響は統計的に有意ではなく、最大０．１％しか寄与しなかった。

したがって、これらの因子、ｐＨ５．７～６．３、ｍＡｂ１濃度４５～５５ｍｇ／ｍＬ、およびスクロース濃度４～６％は、２～８℃でＨＭＷ％安定性と実際的な関連性がなかった。

１２か月時点までの９つの製剤すべてにおけるＨＭＷ％は、規定の４％の許容基準限界を十分に下回り、したがって放出および有効期限仕様の範囲内であった。さらに、線形モデルは、２℃～８℃で２４か月の有効期限保存後、０．６％～０．８％の範囲のＨＭＷ％もまた仕様限界を十分に下回ることが予測された。

長期保存安定性データに基づいて、研究範囲内の重要な製剤パラメーターの変動は、ｍＡｂ１製剤の安定性に有意な影響を及ぼさないことがわかった。５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１製剤は、試験された製剤組成範囲内のＨＭＷ種形成に関して堅牢であった。

酸性電荷変異体形成への影響
９つの製剤すべてについて、２～８℃で１２か月まで測定された酸性電荷変異体％において有意な増加はなかった。すべての値は、仕様の上限を下回っており、経時的な酸性電荷変異体％の有意な増加は観察されなかった。

ｍＡｂ１製剤は、試験された製剤組成範囲内の酸性電荷変異体形成に関して頑強であると考えられた。

一般的品質属性への影響
ｐＨ、ｍＡｂ１濃度、およびスクロースの影響、ならびに外観、ｐＨ、濁度、視認できない粒子、タンパク質回収、ＳＥＣによるモノマー％およびＬＭＷ％、ｉＣＩＥＦによる主要電荷変異体％および基本電荷変異体％、および生物活性を含む他のＤＰ一般的品質属性における保存時間を調査した。すべての値は、仕様の範囲内であり経時的な有意な変化およびＰＡＲ製剤間の差異は観察されなかった。
・目視検査または濁度測定（４０５ｎｍでのＯＤおよび比濁法）のいずれかにより、沈殿物または視認できる微粒子は検出されなかった；
・タンパク質回収における統計的に有意な変化は観察されなかった（ＲＰ－ＵＰＬＣ）；
・製剤のｐＨは安定していた；
・視認できない微粒子の有意な増加はなく、ＰＡＲ研究製剤間で視認できない微粒子数に有意な差は観察されなかった。
〇ＨＩＡＣによって測定された視認できない微粒子について、すべての値はＵＳＰ＜７８８＞で設定された許容限界を下回り、製剤間で視認できない粒子の有意な変動は観察されなかった；
〇さらに、視認できない粒子はまたＭＦＩによって測定された。製剤間で視認できない粒子の有意な変動は観察されなかった。
・バイオアッセイの結果は、保存中のすべての製剤について仕様限界内であった。

結果は、研究範囲内の重要な製剤パラメーター（ｐＨ、ｍＡｂ１濃度、およびスクロース濃度）の変動がｍＡｂ１製剤の安定性に有意な影響を及ぼさないことを実証している。５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１製剤は、試験した製剤の組成範囲内の一般的な品質属性に関して堅牢である。

ＰＡＲ製剤の安定性における凍結および融解の影響
２回の凍結および解凍サイクルの後に調べた５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１製剤の物理的および化学的安定性は、重要な製剤パラメーターの変動、すなわち、基準ｍＡｂ１に対してａ±０．３ｐＨ単位変化、ｍＡｂ１濃度におけるａ±１０％の変動、および／またはスクロースにおけるａ±２０％の変動によって影響を受けなかった。

以下の効果が観察された：
・目視検査または濁度測定（ＯＤ４０５ｎｍ）のいずれかによっても沈殿物は検出されなかった。
・タンパク質の喪失は観察されなかった（ＲＰ－ＵＰＬＣ）。
・製剤のｐＨは一定のままであった。
・研究製剤間の光遮蔽（ＨＩＡＣ）またはマイクロフローイメージング（ＭＦＩ）によって決定される、視認できない粒子数に有意な差は観察されなかった。２サイクルのＦ／Ｔ後、視認できない粒子がわずかに増加したが、ＤＰを充填する前に０．２２μｍフィルターでろ過することによって除去することができた。
・２回の凍結および融解サイクル後のすべての製剤において、ＳＥ－ＵＰＬＣで決定された、目立った純度の変化は観察されなかった。
・２回の凍結および融解サイクル後のすべての製剤において、ｉＣＩＥＦによって決定された、電荷変異体の分布に目立った変化は観察されなかった。
・バイオアッセイの結果は、２サイクルの凍結および解凍に供されたすべての製剤において、ｍＡｂ１活性が維持されていることを示した。

結論
実験計画（ＤＯＥ）に基づくプレＰＡＲおよびＰＡＲ研究を使用して、製剤パラメーターの影響、ならびに製剤安定性における相互作用を評価した。加速安定性およびストレス安定性を用いたプレＰＡＲ研究は、ｐＨ、ｍＡｂ１濃度、およびスクロース濃度が重要な製剤パラメーターとして同定された。長期の有効期限安定性を含む完全な要因によるＰＡＲ研究は、範囲研究内で重要な製剤パラメーターの変動がｍＡｂ１ ＤＰ品質に影響を及ぼさないことを示した。

具体的には、５℃で１２か月間保存した５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１ ＤＰの安定性および効力は、タンパク質濃度のａ±１０％変動、スクロース、Ｌ－プロリンおよび／もしくはヒスチジン濃度のａ±２０％変動、および／またはポリソルベート８０濃度のａ±５０％変動、ならびに／またはａ±０．３ｐＨ単位変動の影響を受けなかった。

ｍＡｂ１製剤の堅牢性は、ＰＡＲ研究によって実証された。全体として、プレ－ＰＡＲおよびＰＡＲ研究の結果は、研究された範囲内でのｍＡｂ１製剤の組成の変動が、推奨される保存条件（２～８℃）でのｍＡｂ１ ＤＰの安定性に悪影響を及ぼさないことを支持した。

５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１ ＦＤＳ試料は、２サイクルの凍結および解凍（－３０℃の凍結および室温解凍）の後、安定していた。凍結／解凍ストレスに対するｍＡｂ１ ＦＤＳの安定性は、ｍＡｂ１濃度のａ±１０％の変化、スクロースのａ±２０％の変化、および／または対照ｍＡｂ１ ＦＤＳ（５０ｍｇ／ｍＬ）に対するａ±０．３ｐＨ単位の変化の影響を受けなかった。これらの凍結／解凍研究の結果は、５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１ ＦＤＳが、ＦＤＳの安定性に悪影響を及ぼすことなくｍＡｂ１ ＤＰの製造中に凍結および解凍できることを支持した。

容器
ｍＡｂ１製剤は、ガラスバイアル（静脈内注射による送達用）で開発された。後の臨床開発および製品の商業化を意図したｍＡｂ１医薬品用の容器はまた充填済みのシリンジであり、これは、自己注射用のスタンドアロンシリンジとして提示され、または自己投与用の自動シリンジ装置に組み込まれた。

ガラスバイアル中のｍＡｂ１製剤の安定性
表３２～３５は、１０ｍＬのガラスバイアル中の例示的なｍＡｂ１製剤の安定性を要約している。

異なる充填体積での２つの製剤は、ストレスに対して安定であることが見出された（４０℃／７５％ＲＨ）（データは示していない）。

充填済みのシリンジにおけるｍＡｂ１製剤の安定性
表３６～３８は、予め充填されたシリンジにおける高濃度ｍＡｂ１製剤の安定性を要約している。

静脈内（ＩＶ）送達装置におけるｍＡｂ１製剤の適合性
適合性評価のために、５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１製剤を、０．９％塩化ナトリウム注射液または５％デキストロース注射液のいずれかを含む１００ｍＬのＩＶバッグに添加し、静脈内送達時にｍＡｂ１が安定であるかどうかを評価した。患者の体重の変動を支持するために、この研究において、２つの混合物濃度である１．０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１および２５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１を調べて、低いおよび高い用量条件を反映させた。適合性研究において、次のＩＶ混合物コンポーネントを使用した：
・医薬品
〇５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１ ＤＰ
・希釈剤
〇０．９％塩化ナトリウム注射
〇５％デキストロース注射
・ＩＶバッグ
〇ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）で作製され、０．９％塩化ナトリウム注射で予め充填されたフタル酸ジ（２－エチルヘキシル）（ＤＥＨＰ）を含むＩＶバッグ
〇ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）で作製され、５％デキストロース注射で事前に充填されたＤＥＨＰを含むＩＶバッグ
〇０．９％塩化ナトリウム注射で予め充填されたポリオレフィン（ＰＯ）製のＩＶバッグ
〇５％デキストロース注射で予め充填されたポリオレフィン（ＰＯ）製のＩＶバッグ
〇０．９％塩化ナトリウム注射で予め充填されたポリプロピレン製のＩＶバッグ
〇０．９％塩化ナトリウム注射で予め充填されたポリプロピレン製のＩＶボトル
・ＩＶポンプ
〇蠕動ポンプ
〇流体置換ポンプ
・ＩＶ注射セット
〇ＤＥＨＰを含むＰＶＣ製のＩＶセット
〇ジオクチルテレフタレート（ＤＥＨＴ）を含むＰＶＣ製のＩＶセット
〇トリオクチルトリメリテート（ＴＯＴＭ）を含むＰＶＣ製のＩＶセット
〇ポリエチレンライニングＰＶＣ製のＩＶセット
〇ポリウレタン製のＩＶセット
・フィルター
〇０．２μｍポリエーテルスルホンインラインフィルター
〇１．２μｍポリエーテルスルホンインラインフィルター
〇５μｍポリエーテルスルホンインラインフィルター
〇１５μｍポリエーテルスルホンインラインフィルター

この研究で使用されたＤＰは、代表的なＤＰ商業製造プロセスを使用して製造されたＧＭＰであった。混合物を含むＩＶバッグは、最初は５℃で２４時間保持された。次に、バッグは、２５℃で少なくとも８時間インキュベートされた。これらのインキュベーション後、各注射セットをＩＶバッグに接続し、混合物でプライムし、周囲室温で１時間保持した。次に、各混合物を、２５ｍＬ／ｈおよび５００ｍＬ／ｈの速度でそれぞれの注射セットにポンプで送り込んだ。

混合物適合性を評価するために使用される方法：ｍＡｂ１混合物とＩＶ送達装置で使用される材料との適合性は、以下のアッセイを使用して評価された：
・目視検査による色および外観
・ｐＨ
・４０５ｎｍでの光学密度（ＯＤ）の増加によって測定される濁度
・光蔽（ＨＩＡＣ）による混合物の目視できない微粒子分析
・逆相超高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＵＰＬＣ）によるｍＡｂ１のタンパク質濃度
・ＳＥ－ＵＰＬＣによる純度
・ＣＥＸ－ＵＰＬＣによる電荷変異体分析
・バイオアッセイによる効力：各試料の相対的効力は、バイオアッセイを使用して決定され、（ＩＣ_５０参照試料／ＩＣ_５０試料）×１００％として定義される。保存安定性試料の測定された効力は、参照標準の測定された効力の５０～１５０％以内でなければならない。

結果および結論：０．９％塩化ナトリウム注射液または５％デキストロース注射液のいずれかで１．０ｍｇ／ｍＬまたは２５ｍｇ／ｍＬの濃度のいずれかに希釈された５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１製剤は、提案された用量範囲と投与条件内で試験したすべての条件下で物理的および化学的に安定であった。これらのデータは、ｍＡｂ１ ＤＰの用量調製およびＩＶ投与に関する以下の結論を支持した：
・０．９％塩化ナトリウム注射液および５％デキストロース注射液ＩＶバッグはＰＶＣ製であり、ＤＥＨＰ、ＰＯ、およびポリプロピレンを加えたものであって、ｍＡｂ１ ＩＶ投与に適合可能であった。
・ｍＡｂ１ ＤＰは、ＩＶ投与用に０．９％塩化ナトリウムまたは５％デキストロースのいずれかを含むＰＶＣ、ＰＯ、またはポリプロピレンＩＶバッグ中で１．０ｍｇ／ｍＬの低濃度に希釈された。
・ｍＡｂ１ ＤＰは、ＩＶ投与用に０．９％塩化ナトリウムまたは５％デキストロースのいずれかを含むＰＶＣ、ＰＯ、またはポリプロピレンＩＶバッグ中で２５．０ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈された。
・０．９％塩化ナトリウムまたは５％デキストロースのいずれかのｍＡｂ１混合物は、ＰＶＣ、ＰＯまたはポリプロピレンＩＶバッグ中で、５℃で最大２４時間および２５℃で８時間のインキュベーション後、安定であった。希釈されたｍＡｂ１ ＤＰは、調製から６時間以内に投与された。
・希釈されたｍＡｂ１は、標準の注射ポンプを使用して投与された。
・希釈されたｍＡｂ１は、ＤＥＨＰを含むＰＶＣ、ＴＯＴＭ、ポリエチレン、またはポリウレタンを含むＰＶＣのいずれかで構成される注射セットで投与された。
・ｍＡｂ１は、インライン０．２μｍ～５μｍのポリエーテルスルホンフィルターの使用に適合可能であった。
・希釈されたｍＡｂ１は、２５～５００ｍＬ／時の範囲の速度で投与された。

本発明は、本明細書に記載される具体的な実施形態によって範囲が限定されるものではない。実際、本明細書に記載されているものに加えて、本発明の様々な修飾が、前述の説明および添付の図面から当業者に明らかになる。このような修飾は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図されている。

Claims (48)

1. （ａ）ヒトのプログラム死－１（ＰＤ－１）に特異的に結合する抗体であって、配列番号１の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および配列番号２の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む抗体；
   （ｂ）ヒスチジンを含む緩衝液；
   （ｃ）ポリソルベートを含む有機溶媒；
   （ｄ）スクロース；ならびに
   （ｅ）プロリン
   を含む安定な液体医薬製剤であって、６．０±０．３のｐＨを有する前記安定な液体医薬製剤。
2. 抗体濃度が、５ｍｇ／ｍＬ±０．７５ｍｇ／ｍＬから２５０ｍｇ／ｍＬ±３７．５ｍｇ／ｍＬである、請求項１に記載の医薬製剤。
3. 抗体濃度が２５ｍｇ／ｍＬ±３．７５ｍｇ／ｍＬである、請求項２に記載の医薬製剤。
4. 抗体濃度が５０ｍｇ／ｍＬ±７．５ｍｇ／ｍＬである、請求項２に記載の医薬製剤。
5. 抗体濃度が１５０ｍｇ／ｍＬ±２２．５ｍｇ／ｍＬである、請求項２に記載の医薬製剤。
6. 抗体濃度が１７５ｍｇ／ｍＬ±２６．２５ｍｇ／ｍＬである、請求項２に記載の医薬製剤。
7. ヒスチジン緩衝液濃度が、５ｍＭ±１ｍＭから２０ｍＭ±４ｍＭである、請求項１～６のいずれか一項に記載の医薬製剤。
8. ヒスチジン緩衝液濃度が１０ｍＭ±２ｍＭである、請求項７に記載の医薬製剤。
9. ヒスチジン緩衝液が、Ｌ－ヒスチジンおよびＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物から調製される、請求項７または８に記載の医薬製剤。
10. ヒスチジン緩衝液が、４．８ｍＭ±０．９６ｍＭのＬ－ヒスチジンおよび５．２ｍＭ±１．０４ｍＭのＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物から調製される、請求項９に記載の医薬製剤。
11. ポリソルベート濃度が、０．０１％±０．００５％から０．５％±０．２５％ｗ／ｖである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の医薬製剤。
12. ポリソルベート濃度が０．１％±０．０５％ｗ／ｖである、請求項１１に記載の医薬製剤。
13. ポリソルベート濃度が０．２％±０．１％ｗ／ｖである、請求項１１に記載の医薬製剤。
14. 有機溶媒がポリソルベート８０である、請求項１１～１３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
15. スクロース濃度が、１％±０．２％から２０％±４％ｗ／ｖである、請求項１～１４のいずれか一項に記載の医薬製剤。
16. スクロース濃度が、１％±０．２％から１０％±２％ｗ／ｖである、請求項１５に記載の医薬製剤。
17. スクロース濃度が５％±１％ｗ／ｖである、請求項１６に記載の医薬製剤。
18. プロリン濃度が１％±０．２％から５％±１％ｗ／ｖである、請求項１～１７のいずれか一項に記載の医薬製剤。
19. プロリン濃度が１．５％±０．３％ｗ／ｖである、請求項１８に記載の医薬製剤。
20. 製剤が２５℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、請求項１～１９のいずれか一項に記載の医薬製剤。
21. （ａ）１７５ｍｇ／ｍＬ±２６．２５ｍｇ／ｍＬの抗体、
    （ｂ）１０ｍＭ±２ｍＭのヒスチジン緩衝液、
    （ｃ）０．２％±０．１％ｗ／ｖのポリソルベート、
    （ｄ）５％±１％ｗ／ｖのスクロース、および
    （ｅ）１．５％±０．３％ｗ／ｖのプロリン
    を水中に含み、
    ここで、
    （ｉ）抗体の９０％以上が１４３ｋＤａ±１ｋＤａの分子量を有し；および／または、
    （ｉｉ）医薬製剤が２５℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、
    請求項１に記載の医薬製剤。
22. ヒスチジン緩衝液が、４．８ｍＭ±０．９６ｍＭのＬ－ヒスチジンおよび５．２ｍＭ±１．０４ｍＭのＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物から調製される、請求項２１に記載の医薬製剤。
23. （ａ）１７５ｍｇ／ｍＬの抗体、
    （ｂ）０．７４ｍｇ／ｍＬのＬ－ヒスチジン、
    （ｃ）１．１ｍｇ／ｍＬのＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物、
    （ｄ）２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート、
    （ｅ）５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、および
    （ｆ）１５ｍｇ／ｍＬのプロリン
    を含む、請求項２１に記載の医薬製剤。
24. （ａ）１５０ｍｇ／ｍＬ±２２．５ｍｇ／ｍＬの抗体、
    （ｂ）１０ｍＭ±２ｍＭのヒスチジン緩衝液、
    （ｃ）０．２％±０．１％ｗ／ｖのポリソルベート、
    （ｄ）５％±１％ｗ／ｖスクロース、および
    （ｅ）１．５％±０．３％ｗ／ｖプロリン
    を水中に含み、
    ここで、
    （ｉ）抗体の９０％以上が１４３ｋＤａ±１ｋＤａの分子量を有し；および／または、
    （ｉｉ）医薬製剤が２５℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、
    請求項１に記載の医薬製剤。
25. ヒスチジン緩衝液が、４．８ｍＭ±０．９６ｍＭのＬ－ヒスチジンおよび５．２ｍＭ±１．０４ｍＭのＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物から調製される、請求項２４に記載の医薬製剤。
26. （ａ）１５０ｍｇ／ｍＬの抗体、
    （ｂ）０．７４ｍｇ／ｍＬのＬ－ヒスチジン、
    （ｃ）１．１ｍｇ／ｍＬのＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物、
    （ｄ）２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート、
    （ｅ）５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、および
    （ｆ）１５ｍｇ／ｍＬのプロリン
    を含む、請求項２４に記載の医薬製剤。
27. （ａ）５０ｍｇ／ｍＬ±７．５ｍｇ／ｍＬの抗体、
    （ｂ）１０ｍＭ±２ｍＭのヒスチジン緩衝液、
    （ｃ）０．２％±０．１％ｗ／ｖのポリソルベート、
    （ｄ）５％±１％ｗ／ｖスクロース、および
    （ｅ）１．５％±０．３％ｗ／ｖのプロリン
    を水中に含み、
    ここで、
    （ｉ）抗体の９０％以上が１４３ｋＤａ±１ｋＤａの分子量を有し；および／または、
    （ｉｉ）医薬製剤が２５℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、
    請求項１に記載の医薬製剤。
28. ヒスチジン緩衝液が、４．８ｍＭ±０．９６ｍＭのＬ－ヒスチジンおよび５．２ｍＭ±１．０４ｍＭのＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物から調製される、請求項２７に記載の医薬製剤。
29. （ａ）５０ｍｇ／ｍＬの抗体、
    （ｂ）０．７４ｍｇ／ｍＬのＬ－ヒスチジン、
    （ｃ）１．１ｍｇ／ｍＬのＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物、
    （ｄ）２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート、
    （ｅ）５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、および
    （ｆ）１５ｍｇ／ｍＬのプロリン
    を含む、請求項２７に記載の医薬製剤。
30. （ａ）２５ｍｇ／ｍＬ±３．７５ｍｇ／ｍＬの抗体、
    （ｂ）１０ｍＭ±２ｍＭのヒスチジン緩衝液、
    （ｃ）０．２％±０．１％ｗ／ｖのポリソルベート、
    （ｄ）５％±１％ｗ／ｖスクロース、および
    （ｅ）１．５％±０．３％ｗ／ｖプロリン
    を水中に含み、
    ここで、
    （ｉ）抗体の９０％以上が１４３ｋＤａ±１ｋＤａの分子量を有し；および／または、
    （ｉｉ）医薬製剤が２５℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、
    請求項１に記載の医薬製剤。
31. ヒスチジン緩衝液が、４．８ｍＭ±０．９６ｍＭのＬ－ヒスチジンおよび５．２ｍＭ±１．０４ｍＭのＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物から調製される、請求項３０に記載の医薬製剤。
32. （ａ）２５ｍｇ／ｍＬの抗体、
    （ｂ）０．７４ｍｇ／ｍＬのＬ－ヒスチジン、
    （ｃ）１．１ｍｇ／ｍＬのＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物、
    （ｄ）２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート、
    （ｅ）５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、および
    （ｆ）１５ｍｇ／ｍＬのプロリン
    を含む、請求項３０に記載の医薬製剤。
33. 抗体が、配列番号３のＨＣＤＲ１、配列番号４のＨＣＤＲ２、配列番号５のＨＣＤＲ３、配列番号６のＬＣＤＲ１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含む、請求項１～３２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
34. 抗体が重鎖および軽鎖を含み、重鎖が配列番号９および１１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
35. 抗体が重鎖および軽鎖を含み、重鎖が配列番号９のアミノ酸配列を含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
36. 抗体が重鎖および軽鎖を含み、重鎖が配列番号１１のアミノ酸配列を含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
37. 抗体が重鎖および軽鎖を含み、軽鎖が配列番号１０のアミノ酸配列を含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
38. 抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖；または、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
39. 抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
40. 抗体が、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
41. 製剤が皮下投与または静脈内投与に適している、請求項１～４０のいずれか一項に記載の医薬製剤。
42. 容器に含まれる、請求項１～４１のいずれか一項に記載の医薬製剤。
43. 容器がバイアルである、請求項４２に記載の医薬製剤。
44. バイアルが１０ｍＬのＩ型透明ガラスバイアルである、請求項４３に記載の医薬製剤。
45. 容器がシリンジである、請求項４２に記載の医薬製剤。
46. シリンジが低タングステンガラスである、請求項４５に記載の医薬製剤。
47. 容器が充填済みのシリンジである、請求項４２に記載の医薬製剤。
48. 容器が自動インジェクターである、請求項４２に記載の医薬製剤。

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