TW201625672A

TW201625672A - 升糖素及ｇｌｐ－１受體之共促效劑

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Publication number: TW201625672A
Application number: TW104134741A
Authority: TW
Inventors: 保羅Ｅ凱林頓; 巧臨鄧; 瑞維納格恩; 安納丹帕拉尼; 湯馬士喬瑟夫圖克; 成威吳; 伊莉莎貝塔比安奇; 費德里卡奧微托; 安東內羅佩西
Original assignee: 默沙東藥廠
Priority date: 2014-10-24
Filing date: 2015-10-22
Publication date: 2016-07-16
Also published as: CL2017000982A1; KR20170073638A; NI201700048A; CA2964379C; DOP2017000102A; GT201700085A; TN2017000148A1; SG11201703238TA; EP3825324A1; BR112017008160A2; PE20180158A1; WO2016065090A1; MA55068A; MD20170055A2; US20170360893A1; KR101996739B1; AU2015335828B2; US20160114000A1; BR112017008160A8; CN107108715A

Abstract

本發明描述升糖素之胜肽類似物，其業經修飾以抵抗藉由二肽基肽酶IV(dipeptidyl peptidase IV；DPP-IV)之裂解及失活作用，並可增加該胜肽類似物之活體內半衰期，同時使胜肽類似物在升糖素樣肽1(GLP-1)受體及升糖素(GCG)受體處具有相對平衡之促效劑活性，及一種此等GLP-1受體/GCG受體共促效劑於治療代謝疾病(諸如糖尿病、非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease；NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(non-alcoholic steatohepatitis；NASH)及肥胖)之用途。

Description

升糖素及GLP-1受體之共促效劑

以電子方式提交的序列表之引用

本申請案之序列表通過EFS網站以檔案名稱「23848_US_PSP-2_SEQLIST_13AUG2015.txt」，創建日期2015年8月13日及大小13.5Kb之ASCII格式化序列表電子提交。此通過EFS網站提交的序列表為本說明書之一部分且以其全文引用的方式併入本文中。

本發明係關於升糖素之胜肽類似物，其經過修飾以抗藉由二肽基肽酶IV(DPP-IV)裂解及失活及增加胜肽類似物之活體內半衰期，同時使胜肽類似物在升糖素樣肽1(GLP-1)受體及升糖素(GCG)受體處具有相對平衡之促效劑活性，及一種此等GLP-1受體/GCG受體共促效劑於治療代謝疾病(諸如糖尿病、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)及肥胖)之用途。

前升糖素原為一種158個胺基酸的前驅多肽，其在不同組織中經處理以形成許多種不同的升糖素原衍生肽，包括升糖素、升糖素樣肽-1(GLP-1)、升糖素樣肽-2(GLP-2)及調酸素(OXM)，其等涉及包括葡萄糖體內平衡、胰島素分泌、胃排空及腸道生長以及食物攝入之調節之多種生理功能。升糖素為對應於前升糖素原之胺基酸33至61之29個胺基酸肽，而GLP-1係作為對應於前升糖素原之胺基酸72至108之37個胺基酸肽產生。GLP-1(7-36)醯胺或GLP-1(7-37)酸為GLP-1之生物有效形式，其等展現在GLP-1受體處基本上等效活性。

在低血糖期間，當在血液葡萄糖水平下降低於正常水平時，升糖素傳遞訊號讓肝臟分解肝糖且釋放葡萄糖，使得血液葡萄糖水平提高至正常水平。低血糖係罹患因糖尿病引起之高血糖(經提高之血液葡萄糖水平)之患者中胰島素療法之常見副作用。因此，升糖素在葡萄糖調節中之最公認作用係抵抗胰島素之作用並維持血液葡萄糖水平。

GLP-1具有相較於升糖素不同的生物活性。其作用包括刺激胰島素合成及分泌、抑制升糖素分泌及抑制食物攝入。已證實GLP-1可降低糖尿病中之高血糖。腸促胰島素分泌肽-4為衍生自蜥蜴毒之與GLP-1共有約50%胺基酸同一性之胜肽，其係活化GLP-1受體及亦已證實可降低糖尿病中之高血糖。

亦有證據證實GLP-1及腸促胰島素分泌肽-4可減少食物攝入及促使體重減輕，一種將不僅有益於糖尿病而且有益於罹患肥胖之患者的效果。罹患肥胖之患者具有更高糖尿病、高血壓、高血脂、心血管疾病及肌肉骨骼疾病風險。

升糖素為結構上有關於GLP-1之胜肽激素，其通過刺激肝糖分解作用及糖生成作用快速增加血液葡萄糖之能力得到很好認可(Jiang & Zhang,Am.J.Physio.l Endocrinol.Metab.284：E671-E678(2003))。瞭解較少的是升糖素藥理學長期性效應，其特徵在於增加生熱作用、飽腹感、脂肪分解、脂肪酸氧化及生酮作用(Habegger等人，Nat.Rev.Endocrinol.6：689-697(2010))。在數十年前首先報告升糖素之重複投藥達成嚙齒動物代謝之改善，伴隨著體重減輕(Salter,Am.J.Clin.Nutr.8：535-539(1960))。然而，高血糖，尤其在胰島素抵抗狀態諸如T2DM之內在性風險使得此等觀察轉化為人類研究複雜化。

激素調酸素(OXM，升糖素-37)為腸及中樞神經系統(CNS)中前升糖素原處理之轉譯後產物且係由腸中的L細胞回應於食物攝入而分泌。在1983年發現，OXM參與食物攝入及能量消耗之調控(Jarrouse等人，Endocrinol.115：102-105(1984)；Schjoldager等人，Eur.J.Clin.Invest.,18：499-503(1988))。大鼠中中樞或周邊投與OXM引起短期食物攝入減少且對胃排空影響最小(Dakin等人，Endocrinology,142：4244-4250(2001)，Dakin等人，Endocrinology,145：2687-2695(2004))。大鼠中重複腦室內投與OXM導致相較於配對飼養的動物核心溫度提高及體重增加減少，表明對熱量攝入及能量消耗均有影響(Dakin等人，Am.J.Physiol.Endocrinol.Metab.,283：E1173-E1177(2002))。

在相關研究中，周邊投與OXM劑量相依地抑制空腹誘發之食物攝入及黑暗期食物攝入，然不像GLP-1，其對胃排空無影響。OXM亦降低空腹葛瑞林(ghrelin)水平而增大弓狀核(ARC)中之c-fos免疫反應性。重複七天IP投與OXM引起大鼠中體重增加速率及肥胖症減小(參見Dakin等人，Endocrinology,145：2687-2695(2004))。

小鼠中OXM作用之研究已證實，雖然OXM可活化升糖素(GCG)及GLP-1受體，但OXM之降食慾作用僅需要GLP-1受體，此乃因在升糖素受體基因敲除小鼠中icv OXM抑制食物攝入。然而，在GLP-1受體基因敲除小鼠中完全無OXM之降食慾效應。另外，是腸促胰島素分泌肽-4而非OXM調節小鼠中之能量消耗。因此，OXM當在以藥理學濃度使用時於GLP-1受體處顯示為弱促效劑(參見Baggio等人，Gastroenterol.127：546-58(2004))。亦發現OXM可改善投餵高脂肪飲食之小鼠中之葡萄糖耐受不良(Dakin等人，Am.J.Physiol.Endocrinol.Metab.294：E142-E147(2008)及獨立於GLP-1受體增加小鼠中之內在性心跳速率(Sowden等人，Am.J.Physiol.Regul.Integr.Comp.Physiol.292：R962-R970(2007)。OXM亦已顯示可差別性地影響GLP-1受體β抑制蛋白募集及通過Galpha之訊號傳遞(Jorgensen等人，J.Pharma.Exp.Therapeut.322：148-154(2007))及在周邊注射OXM後差別性地影響下丘腦神經元活化(Choudhri等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.350：298-306(2006))。

在人類中，在正常體重的健康個體中單次90分鐘靜脈內輸注OXM使得飢餓得分及自助餐食物攝入減小約19%。累積十二小時熱量攝入減少約11%，未報告噁心或食物可口性改變(Cohen等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.,88：4696-4701(2003)；Lykkegaard等人，ADA Scientific Sessions，摘要#1506-P(2003))。近來，肥胖健康自願者(BMI為約33)經四週時間餐前注射OXM導致在治療第一天熱量攝入顯著減小(約25%)，整個研究過程維持這種減小(在四週後減小35%)(Wynne等人，Diabetes 54：2390-2395(2005))。研究結束時在經治療之個體中觀測到穩健體重減輕(1.9%，經安慰劑校正)。血漿OXM濃度類似於輸注研究中所觀測到的血漿OXM濃度(峰值濃度為約950pM)。不存在任何快速耐受性(tachyphylaxis)及輕度及暫時性噁心之低發病率(約3%)，不管為OXM之不良活體內穩定性(血漿t1/2<12分鐘)所必需的相對高劑量使得此激素成為就人類驗證及具吸引力的耐受性譜而言數個肥胖標靶中之一個。

OXM具有極短的半衰期且藉由細胞表面二肽基肽酶IV快速失活(DPP-IV)(Zhu等人，J.Biol.Chem.278：22418-22423(2002)。然而，DPP-IV抑制劑在臨床中對體重具有中性作用，表明可能需要OXM之超生理水平(900至1000pM)以達成人類體重減輕。用於引起人類體重減輕之OXM胜肽類似物為經公開之國際申請案號WO03/022304、WO2004/062685、WO2006/134340及WO2010/096052之標的。

最近，兩篇獨立且同時之論文報告一種相對平衡之GLP-1受體/GCG受體共促效劑之用途，其作為相對於純GLP1R促效劑於治療嚙齒動物肥胖同時改良血糖控制上具有提高之藥效及安全性(Day等人，Nat.Chem.Biol.5：749-757(2009)；Pocai等人，Diabetes 58：2258-2266(2009))。具相關意義的是，與調酸素(OXM)協作，其為升糖素之內源性前驅物，係餐後由空迴腸之L細胞連同GLP-1一起分泌(Holst,Regul.Pept.93：45-51(2000)；Drucker,Nat.Clin.Pract.Endocrinol.Metab.1：22-31(2005)。

經修飾在GLP-1受體及GCG受體處具有各種程度之活性之升糖素胜肽類似物及衍生物係揭示於經公開之國際申請案號WO2008/1010017、WO2009/155258、WO2011/075393、WO2012/177444及WO2012/177443中。其中報告所揭示升糖素胜肽類似物中之一些在GLP-1受體及GCG受體處均具有活性；然而，仍需要在GLP-1受體及GCG受體處具有相對平衡之活性或效力之共促效劑胜肽。

本發明提供為升糖素(GCG)受體及升糖素樣肽1(GLP-1)受體之促效劑且在兩種受體處具有相對平衡之活性或效力之胜肽。天然升糖素通常具有天然GLP-1在GLP-1受體處之約1%活性。然而，本發明之GCG受體/GLP-1受體共促效劑胜肽在GCG受體及GLP-1受體處具有相對平衡之活性或效力。在特定態樣中，GCG受體/GLP-1受體共促效劑胜肽具有在GCG受體處約0.02至約1.04nM之EC₅₀及具有在GLP-1受體處約0.03至約1.3nM之EC₅₀。在特定態樣中，GCG受體/GLP-1受體共促效劑胜肽具有約0.88至約1.25、約0.90至約1.25、約0.90至約1.10、約0.90至約1.00或約1.0±0.12之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀之比。本文中之胜肽適用於治療代謝疾病，諸如(但不限於)糖尿病(例如，1型糖尿病、2型糖尿病或妊娠型糖尿病)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)及/或肥胖。

在一通用實施例中，本發明之GCG受體/GLP-1受體共促效劑胜肽包含天然人類升糖素之胺基酸序列(SEQ ID NO：1)，但在該胺基酸序列中，在位置2之L-絲胺酸係經D-絲胺酸、L-丙胺酸、α-胺基異丁酸(Aib)或1-胺基-環丁羧酸置換；在位置10之酪胺酸係經以下置換：(i)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之L-離胺酸或(ii)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之對胺基甲基苯丙胺酸；且可包含上至六次其他胺基酸取代；其中該等GCG受體/GLP-1受體共促效劑胜肽具有在GCG受體及GLP-1受體處相對平衡之活性，及視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基，其限制條件為該胜肽不具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。

在特定實施例中，本發明提供一種包含以下胺基酸序列之胜肽HX₂QGTX₆TSDX₁₀SX₁₂YLX₁₅X₁₆RX₁₈AQDFVQWLX₂₇DT(SEQ ID NO：20)

其中X₂為D-絲胺酸、L-丙胺酸、α-胺基異丁酸(Aib)或1-胺基-環丁羧酸；X₆為L-苯丙胺酸、對氟苯丙胺酸或蘇-β-苯基絲胺酸；X₁₀為L-離胺酸或對胺基甲基苯丙胺酸；X₁₂為L-離胺酸或L-白胺酸；X₁₅為L-麩胺酸或L-白胺酸；X₁₆為L-丙胺酸、Aib、L-麩胺酸或L-纈胺酸；X₁₈為L-丙胺酸或L-精胺酸；X₂₇為L-白胺酸、甲硫胺酸碸或L-正白胺酸；在位置10之胺基酸係經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基；及該胜肽視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基；其限制條件為該胜肽不具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。

在特定實施例中，該胜肽具有SEQ ID NO：7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18或19之胺基酸序列。

在特定實施例中，該胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑且具有約0.88至約1.25、約0.90至約1.25、約0.90至約1.10、約0.90至約1.00或約1.0±0.12之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀之比。

在特定實施例中，該胜肽為升糖素受體或GLP-1受體之共促效劑且具有0.88、0.89、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99、1.00、1.01、1.02、1.03、1.04、1.05、1.06、1.07、1.08、1.09或1.10之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀之比。

本發明進一步提供一種組合物，其包含具有以下胺基酸序列之胜肽HX₂QGTX₆TSDX₁₀SX₁₂YLX₁₅X₁₆RX₁₈AQDFVQWLX₂₇DT(SEQ ID NO：20)

其中X₂為D-絲胺酸、L-丙胺酸、α-胺基異丁酸(Aib)或1-胺基環丁羧酸；X₆為L-苯丙胺酸、對氟苯丙胺酸或蘇-β-苯基絲胺酸；X₁₀為L-離胺酸或對胺基甲基苯丙胺酸；X₁₂為L-離胺酸或L-白胺酸；X₁₅為L-麩胺酸或L-白胺酸；X₁₆為L-丙胺酸、Aib、L-麩胺酸或L-纈胺酸；X₁₈為L-丙胺酸或L-精胺酸；X₂₇為L-白胺酸、甲硫胺酸碸或L-正白胺酸；在位置10之胺基酸係經γ-麩胺酸間隔基(γE)或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基連接至棕櫚醯基；該胜肽視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基；及醫藥上可接受之載劑；其限制條件為該胜肽不具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。

在特定實施例中，該胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑且具有約0.88至約1.25、約0.90至約1.25、約0.90至約1.10、約0.90至約1.00或約1.0±0.12之升糖素受體處之EC₅₀對GLP-1受體處之EC₅₀之比。

在特定實施例中，該胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑且具有0.88、0.89、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99、1.00、1.01、1.02、1.03、1.04、1.05、1.06、1.07、1.08、1.09或1.10之升糖素受體處之EC₅₀對GLP-1受體處之EC₅₀之比。

本發明進一步提供一種醫藥組合物，其包含具有以下胺基酸序列之胜肽HX₂QGTX₆TSDX₁₀SX₁₂YLX₁₅X₁₆RX₁₈AQDFVQWLX₂₇DT(SEQ ID NO：20)

其中X₂為D-絲胺酸、L-丙胺酸、α-胺基異丁酸(Aib)或1-胺基環丁羧酸；X₆為L-苯丙胺酸、對氟苯基丙胺酸或蘇-β-苯基絲胺酸；X₁₀為L-離胺酸或對胺基甲基苯丙胺酸；X₁₂為L-離胺酸或L-白胺酸；X₁₅為L-麩胺酸或L-白胺酸；X₁₆為L-丙胺酸、Aib、L-麩胺酸或L-纈胺酸；X₁₈為L-丙胺酸或L-精胺酸；X₂₇為L-白胺酸、甲硫胺酸碸或L-正白胺酸；在位置10之胺基酸係經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基；該胜肽視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基；及醫藥上可接受之載劑；其限制條件為該胜肽不具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。

在特定實施例中，該胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑且具有0.88、0.89、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99、1.00、1.01、1.02、1.03、1.04、1.05、1.06、1.07、1.08、1.09或1.10之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀ 之比。

本發明進一步提供一種包含天然人類升糖素之胺基酸序列的胜肽，其具有以SEQ ID NO：1顯示之胺基酸序列但其中在位置2之L-絲胺酸經D-絲胺酸置換；在位置10之酪胺酸係經以下置換：(i)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之L-離胺酸或(ii)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之對胺基甲基苯丙胺酸；且上至六次其他胺基酸之取代；其中該胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑且具有約0.88至約1.25、約0.90至約1.25、約0.90至約1.10、約0.90至約1.00或約1.0±0.12之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀之比，及其中該胜肽視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基，其限制條件為該胜肽不具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。

在特定態樣中，在位置16之絲胺酸係經D-丙胺酸或L-丙胺酸置換，在位置18之精胺酸係經L-丙胺酸置換，在位置27之甲硫胺酸係經L-白胺酸置換，在位置29之天冬醯胺酸係經L-白胺酸置換，或其組合。

在特定態樣中，在位置16之絲胺酸係經D-丙胺酸或L-丙胺酸置換，在位置18之精胺酸係經L-丙胺酸置換，在位置27之甲硫胺酸係經L-白胺酸置換，及在位置29之天冬醯胺酸係經L-白胺酸置換。

本發明進一步提供一種組合，其包含(i)具有天然人類升糖素之胺基酸序列之胜肽，其如以SEQ ID NO：1顯示但其中在位置2之L-絲胺酸係經D-絲胺酸置換；在位置10之酪胺酸係經以下置換：(i)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之L-離胺酸或(ii)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之對胺基甲基苯丙胺酸；且上至六次其他胺基酸之取代；其中該胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑且具有約0.88至約1.25、約0.90至約1.25、約0.90至約1.10、約0.90至約1.00或1.0±0.12之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀之比，及其中該胜肽視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基，及(ii)醫藥上可接受之載劑；其限制條件為該胜肽不具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。

在特定態樣中，在位置16之絲胺酸係經L-丙胺酸置換，在位置18之精胺酸係經L-丙胺酸置換，在位置27之甲硫胺酸係經L-白胺酸置換，在位置28之天冬醯胺酸係經L-天冬胺酸置換，或其組合。

本發明進一步提供一種醫藥組合物，其包含(i)具有天然人類升糖素之胺基酸序列之胜肽，其如以SEQ ID NO：1顯示但其中在位置2之L-絲胺酸經D-絲胺酸置換；在位置10之酪胺酸係經以下置換：(i)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之L-離胺酸或(ii)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之對胺基甲基苯丙胺酸；且上至六次其他胺基酸之取代；其中該胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑且具有約0.88至約1.25、約0.90至約1.25、約0.90至約1.10、約0.90至約1.00或約1.0±0.12之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀之比，及其中該胜肽視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基，及(ii)醫藥上可接受之載劑；其限制條件為該胜肽不具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。

本發明進一步提供一種治療患者之代謝疾病的方法，該方法包括對該患者投與有效量之前述胜肽中任一項之胜肽以治療該患者之代謝疾病。

本發明進一步提供治療患者之代謝疾病的方法，該方法包括對該患者投與有效量之前述組合物之組合物以治療該患者之代謝疾病。

在特定態樣中，該代謝疾病為糖尿病、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、或肥胖。

在特定態樣中，該糖尿病為I型糖尿病、II型糖尿病或妊娠型糖尿病。

在特定態樣中，該患者具有多於一種代謝疾病，例如，糖尿病及NASH、NAFLD或肥胖；肥胖及NASH或NAFLD；糖尿病、NASH及肥胖；糖尿病、NAFLD及肥胖；或糖尿病及肥胖。

本發明進一步提供一種任何一種上述胜肽於製造用於治療代謝疾病的藥物之用途。

本發明進一步提供一種任何一種上述組合物於製造用於治療代謝疾病的藥物之用途。

在特定態樣中，該代謝疾病為糖尿病、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)或肥胖。

在特定態樣中，該藥物係用於治療多於一種代謝疾病，例如，糖尿病及NASH、NAFLD或肥胖；肥胖及NASH或NAFLD；糖尿病、NASH及肥胖；糖尿病、NAFLD及肥胖；或糖尿病及肥胖。

在本文中所揭示化合物之特定態樣中，C端保護基可為醯胺或酯。例如，C端胺基酸之羧酸係經電荷中性基諸如醯胺或酯置換。

進一步提供一種治療患者或個體之代謝疾病之方法，該方法包括：對該患者或個體投與有效量之任何一種上述包含共促效劑胜肽之組合物及對該患者或個體投與有效量之包含胰島素或胰島素類似物之組合物以治療該患者或個體之代謝疾病。

在特定態樣中，該包含共促效劑胜肽之組合物係在投與包含胰島素或胰島素類似物之組合物之時間之前之時間投與。在另一態樣中，該包含胰島素或胰島素類似物之組合物係在投與包含共促效劑胜肽之組合物之時間之前之時間投與。在又一態樣中，該包含共促效劑胜肽之組合物係在投與包含胰島素或胰島素類似物之組合物之相同時間投與。

在特定態樣中，該胰島素類似物為地特胰島素、甘精胰島素、諾和平胰島素、榖離胰島素或離脯胰島素。

本發明進一步提供一種組合物，其包含任何一種上述胜肽；胰島素或胰島素類似物；及醫藥上可接受之載劑。

本發明進一步提供一種包含任何一種上述胜肽；胰島素或胰島素類似物；及醫藥上可接受之載劑之組合物於治療代謝疾病之用途。

在特定態樣中，該代謝疾病為糖尿病、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)或肥胖。在其他態樣中，該糖尿病為I型糖尿病、II型糖尿病或妊娠型糖尿病。

本發明進一步提供一種包含任何一種上述胜肽；胰島素或胰島素類似物；及醫藥上可接受之載劑之組合物於製造用於治療代謝疾病的藥物之用途。

在特定態樣中，該代謝疾病為糖尿病、非酒精性脂肪肝病 (NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)或肥胖。在其他態樣中，該糖尿病為I型糖尿病、II型糖尿病或妊娠型糖尿病。

在另一實施例中，本發明之GCG受體/GLP-1受體共促效劑胜肽由天然人類升糖素之胺基酸序列(SEQ ID NO：1)組成，但其中在位置2之L-絲胺酸係經D-絲胺酸、L-丙胺酸、α-胺基異丁酸(Aib)或1-胺基環丁羧酸置換；在位置10之酪胺酸係經以下置換：(i)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之L-離胺酸或(ii)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之對胺基甲基苯丙胺酸；且可包含上至六次其他胺基酸之取代；其中GCG受體/GLP-1受體共促效劑胜肽在GCG受體及GLP-1受體處具有相對平衡活性，且視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基，其限制條件為該胜肽不具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。

在特定實施例中，本發明提供一種由以下胺基酸序列組成之胜肽HX₂QGTX₆TSDX₁₀SX₁₂YLX₁₅X₁₆RX₁₈AQDFVQWLX₂₇DT(SEQ ID NO：20)

其中X₂為D-絲胺酸、L-丙胺酸、α-胺基異丁酸(Aib)或1-胺基環丁羧酸；X₆為L-苯丙胺酸、對氟苯丙胺酸或蘇-β-苯基絲胺酸；X₁₀為L-離胺酸或對胺基甲基苯丙胺酸；X₁₂為L-離胺酸或L-白胺酸；X₁₅為L-麩胺酸或L-白胺酸；X₁₆為L-丙胺酸、Aib、L-麩胺酸或L-纈胺酸；X₁₈為L-丙胺酸或L-精胺酸；X₂₇為L-白胺酸、甲硫胺酸碸或L-正白胺酸；在位置10之胺基酸係經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基；及該胜肽視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基；其限制條件為該胜肽不具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。

在特定實施例中，該胜肽具有SEQ ID NO：7、8、9、10、12、 13、14、15、16、17、18或19之胺基酸序列。

在特定實施例中，該胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑且具有0.88、0.89、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99、1.00、1.01、1.02、1.03、1.04、1.05、1.06、1.07、1.08、1.09或1.10之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀之比。

本發明進一步提供一種組合物，其由以下組成：具有以下胺基酸序列之胜肽HX₂QGTX₆TSDX₁₀SX₁₂YLX₁₅X₁₆RX₁₈AQDFVQWLX₂₇DT(SEQ ID NO：20)

其中X₂為D-絲胺酸、L-丙胺酸、α-胺基異丁酸(Aib)或1-胺基環丁羧酸；X₆為L-苯丙胺酸、對氟苯丙胺酸或蘇-β-苯基絲胺酸；X₁₀為L-離胺酸或對胺基甲基苯丙胺酸；X₁₂為L-離胺酸或L-白胺酸；X₁₅為L-麩胺酸或L-白胺酸；X₁₆為L-丙胺酸、Aib、L-麩胺酸或L-纈胺酸；X₁₈為L-丙胺酸或L-精胺酸；X₂₇為L-白胺酸、甲硫胺酸碸或L-正白胺酸；在位置10之胺基酸係經γ-麩胺酸間隔基(γE)或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基；該胜肽視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基；及醫藥上可接受之載劑；其限制條件為該胜肽不具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。

本發明進一步提供一種醫藥組合物，其由以下組成：具有以下胺基酸序列之胜肽HX₂QGTX₆TSDX₁₀SX₁₂YLX₁₅X₁₆RX₁₈AQDFVQWLX₂₇DT(SEQ ID NO：20)

其中X₂為D-絲胺酸、L-丙胺酸、α-胺基異丁酸(Aib)或1-胺基環丁羧酸；X₆為L-苯丙胺酸、對氟苯丙胺酸或蘇-β-苯基絲胺酸；X₁₀為L-離胺酸或對胺基甲基苯丙胺酸；X₁₂為L-離胺酸或L-白胺酸；X₁₅為L-麩胺酸或L-白胺酸；X₁₆為L-丙胺酸、Aib、L-麩胺酸或L-纈胺酸；X₁₈為L-丙胺酸或L-精胺酸；X₂₇為L-白胺酸、甲硫胺酸碸或L-正白胺酸；在位置10之胺基酸係經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基；該胜肽視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基；及醫藥上可接受之載劑；其限制條件為該胜肽不具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。

本發明進一步提供一種由天然人類升糖素之胺基酸序列組成之胜肽，其具有以SEQ ID NO：1顯示之胺基酸序列但其中在位置2之L-絲胺酸經D-絲胺酸置換；在位置10之酪胺酸係經(i)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之L-離胺酸或(ii)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之對胺基甲基苯丙胺酸置換；且上至六次其他胺基酸之取代；其中該胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑且具有約0.88至約1.25、約0.90至約1.25、約0.90至約1.10、約0.90至約1.00或約1.0±0.12之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀之比，及其中該胜肽視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基；其限制條件為該胜肽不具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。

本發明進一步提供一種組合物，其由以下組成：(i)由天然人類升糖素之胺基酸序列組成之胜肽，其以SEQ ID NO：1顯示但其中在位置2之L-絲胺酸經D-絲胺酸置換；在位置10之酪胺酸係經(i)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之L-離胺酸或(ii)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之對胺基甲基苯丙胺酸置換；且上至六次其他胺基酸之取代；其中該胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑且具有約0.88至約1.25、約0.90至約1.25、約0.90至約1.10、約0.90至約1.00或約1.0±0.12之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀之比，及其中該胜肽視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基，及(ii)醫藥上可接受之載劑；其限制條件為該胜肽不具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。

本發明進一步提供一種醫藥組合物，其由以下組成：(i)由天然人類升糖素之胺基酸序列組成之胜肽，其如以SEQ ID NO：1顯示但其中在位置2之L-絲胺酸經D-絲胺酸置換；在位置10之酪胺酸係經(i)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之L-離胺酸或(ii)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之對胺基甲基苯丙胺酸置換；且多達六次其他胺基酸之取代；其中該胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑且具有約0.88至約1.25、約0.90至約1.25、約0.90至約1.10、約0.90至約1.00或約1.0±0.12之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀之比，及其中該胜肽視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基，及(ii)醫藥上可接受之載劑；其限制條件為該胜肽不具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。

本發明進一步提供一種治療患者之肥胖代謝疾病的方法，該方法係由對患者投與有效量之前述胜肽中任一項之胜肽以治療該患者之代謝疾病組成。

本發明進一步提供治療患者之肥胖代謝疾病的方法，該方法係由對患者投與有效量之前述組合物之組合物以治療該患者之代謝疾病組成。

本發明進一步提供一種任何一種上述胜肽於製造用於治療肥胖代謝疾病的藥物之用途。

本發明進一步提供一種任何一種上述組合物於製造用於治療肥胖代謝疾病的藥物之用途。

在本文中所揭示之化合物之特定態樣中，該C端保護基可為醯胺或酯。例如，C端胺基酸之羧酸係經電荷中性基諸如醯胺或酯置換。

進一步提供一種治療患者或個體之代謝疾病之方法，該方法由以下組成：對該患者或個體投與有效量之任何一種上述由共促效劑胜肽組成之組合物及對該患者或個體投與有效量之由胰島素或胰島素類似物組成之組合物以治療該患者或個體之代謝疾病。

在特定態樣中，該由共促效劑胜肽組成之組合物係在投與由胰島素或胰島素類似物組成之組合物之時間之前之時間投與。在另一態樣中，該由胰島素或胰島素類似物組成之組合物係在投與由共促效劑胜肽組成之組合物之時間之前之時間投與。在又一態樣中，該由共促效劑胜肽組成之組合物係在投與由胰島素或胰島素類似物組成之組合物之相同時間投與。

本發明進一步提供一種由任何一種上述胜肽；胰島素或胰島素類似物；及醫藥上可接受之載劑組成之組合物。

本發明進一步提供一種由任何一種上述胜肽；胰島素或胰島素類似物；及醫藥上可接受之載劑組成之組合物於治療代謝疾病之用途。

本發明進一步提供一種由任何一種上述胜肽；胰島素或胰島素類似物；及醫藥上可接受之載劑組成之組合物於製造用於治療代謝疾病的藥物之用途。

定義

如本文中所使用之術語「約」意指大於或小於所述數值或數值範圍10%，但非旨在僅指定任何數值或數值範圍於此更寬泛的定義。前面由術語「約」修飾之各數值或數值範圍亦旨在包含所述絕對值或數值範圍之實施例。

術語「個體」意在包括人類及伴侶或家養動物(諸如狗、貓、馬及類似)。因此，該等包含化合物或一或多種如本文中所揭示之共促效劑胜肽之組合物亦適用於治療或預防貓及狗中之肥胖及與肥胖相關之疾病。因此，術語「哺乳動物」包括人類及伴侶動物(諸如貓及狗)。

如本文中所使用，術語「醫藥上可接受之載劑」包括適於投與給個體之任何載劑，例如任何標準醫藥載劑，包括(但不限於)磷酸鹽緩衝鹽水溶液、水、乳液(諸如油/水或水/油乳液)及各種類型之潤濕劑。該術語亦包含美國聯邦政府之管理機構核准或在美國藥典中列出用於動物(包括人類)中之任何試劑。一般而言，「醫藥上可接受之載劑」意指不干擾聯邦或州政府之管理機構核准或在美國藥典或其他一般公認藥典中列出用於動物且更特定言之人類中之活性成分之生物活性之有效性之非毒性物質。術語「載劑」係指可併與投與治療稀釋劑、佐劑、賦形劑或媒劑及包括(但不限於)此等如水及油類之無菌液體。該載劑之特徵將取決於投藥途徑。

如本文中所使用，術語「醫藥上可接受之鹽」係指保留母體化合物之生物活性且在生物學上或其他方面不係非所需之化合物之鹽。本文中所揭示之許多化合物可藉由存在的胺基及/或羧基或與其類似的基團形成酸式鹽及/或鹼式鹽。可自無機及有機鹼製備醫藥上可接受之鹼加成鹽。衍生自無機鹼之鹽包括(僅舉例而言)鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銨鹽、鈣鹽及鎂鹽。衍生自有機鹼之鹽包括(但不限於)一級、二級及三級胺之鹽。

可自醫藥上可接受之無毒性鹼或酸(包括無機或有機鹼及無機或有機酸)製備醫藥上可接受之鹽。衍生自無機鹼之鹽包括鋁鹽、銨鹽、鈣鹽、銅鹽、三價鐵鹽、二價鐵鹽、鋰鹽、鎂鹽、三價錳鹽、二價錳鹽、鉀鹽、鈉鹽、鋅鹽及類似。尤佳為銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鉀鹽及鈉鹽。衍生自醫藥上可接受的有機無毒性鹼之鹽包括以下物質之鹽：一級、二級及三級胺、經取代之胺(包括天然存在之經取代之胺)、環狀胺、及鹼性離子交換樹脂，諸如精胺酸、甜菜鹼、咖啡因、膽鹼、N,N'-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙胺基乙醇、2-二甲胺基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基-嗎啉、N-乙基哌啶、葡醣胺、葡萄糖胺、組胺酸、海巴明(hydrabamine)、異丙胺、離胺酸、甲基葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、聚胺樹脂、普魯卡因(procaine)、嘌呤、可可鹼(theobromine)、三乙胺、三甲胺、三丙胺、緩血酸胺(tromethamine)及類似。術語「醫藥上可接受之鹽」進一步包括所有可接受之鹽，諸如乙酸鹽、乳糖醛酸鹽、苯磺酸鹽、月桂酸鹽、苯甲酸鹽、蘋果酸鹽、碳酸氫鹽、馬來酸鹽、硫酸氫鹽、扁桃酸鹽、酒石酸氫鹽、甲磺酸鹽、硼酸鹽、甲基溴化物、溴化物、甲基硝酸鹽、乙二胺四乙酸鈣、甲基硫酸鹽、樟腦磺酸鹽、黏酸鹽、碳酸鹽、萘磺酸鹽、氯化物、硝酸鹽、克拉維酸鹽、N-甲基葡糖胺、檸檬酸鹽、銨鹽、二鹽酸鹽、油酸鹽、乙二胺四乙酸鹽、草酸鹽、乙二磺酸鹽、雙羥萘酸鹽(pamoate)(恩貝酸鹽(embonate))、依託酸鹽(estolate)、棕櫚酸鹽、乙磺酸鹽、泛酸鹽、富馬酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、葡庚糖酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、葡萄糖酸鹽、水楊酸鹽、麩胺酸鹽、硬脂酸鹽、乙醇醯對胺基苯胂酸鹽、硫酸鹽、甲基間苯二酚鹽、次乙酸鹽、海卓胺、琥珀酸鹽、氫溴酸鹽、單寧酸鹽、鹽酸鹽、酒石酸鹽、羥萘酸鹽、茶氯酸鹽、碘化物、甲苯磺酸鹽、羥乙基磺酸鹽、三乙碘化物、乳酸鹽、丙酸鹽、戊酸鹽及類似，其可用作用於改良溶解度或水解特性之劑型或可用於持續釋放型或前藥調配物中。應明瞭，如本文中所使用，所提及之本文中所揭示之共促效劑胜肽亦意在包括包含一或多種共促效劑胜肽及一或多種醫藥上可接受之鹽之實施例。

如本文中所使用，術語「治療」包括預防特定病症或病狀，或緩解與特定病症或病狀相關聯之症狀及/或預防或消除該等症狀。例如，如本文中所使用，術語「治療糖尿病」一般將指在正常水平方向上改變血液葡萄糖水平及可包括根據給定情況增加或降低血液葡萄糖水平。

如本文中所使用，「有效」量或「治療上有效量」意指足以顯示有意義的患者效益，即，治療、治癒、預防或改善相關醫學病狀，或提高治療、治癒、預防或改善此等病狀之速率之醫藥組合物或方法之各活性組分的總量。其係指一或多種無毒但足以提供所需效應之共促效劑胜肽之量。例如，一種所需效應將係預防或治療高血糖，例如，如藉由改變血液葡萄糖水平更接近正常水平測量，或藉由引起體重減輕及/或預防體重增加來治療肥胖，例如，如藉由減少體重，或防止或減少體重增加，或使身體脂肪分佈正常化測量。「有效」之量將根據個體改變，取決於個體之年齡及一般健康狀態、投藥模式及類似。因此，並非總能指定精確「有效量」。然而，可由一般技術者使用慣常實驗來確定任何個別情況中之適宜「有效」量。當應用於單獨投與之個別活性成分時，該術語僅指該成分。當應用於組合時，該術語係指不論組合以連續或同時投與產生治療效應之活性成分之組合量。

術語「非經腸」意指不通過消化道而是藉由一些其他途徑，例如，皮下、肌肉內、脊柱內或靜脈內。

如本文中所使用，術語「胜肽」包含3個或更多個胺基酸且通常少於100個胺基酸之鏈，其中該等胺基酸為天然或編碼或非天然或非編碼胺基酸。非天然胺基酸係指非天然於活體內存在但可併入本文中所述之胜肽結構中之胺基酸。「非編碼」如本文中所用係指不為任何以下20種胺基酸之L-異構體之胺基酸：Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、He、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp、Tyr。「編碼」如本文中所用係指為任何以下20種胺基酸之L-異構體之胺基酸：Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、He、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp、Tyr。在一些實施例中，本文中所述之胜肽及胜肽變體之長度與SEQ ID NO：1(其為29個胺基酸長)約相同，例如，25至35個胺基酸長。例示性長度包括29個、30個、31個、32個、33個、34個、35個、36個、37個、38個、39個、40個、41個、42個、43個、44個、45個、46個、47個、48個、49個或50個胺基酸長。

通常，多肽及蛋白質具有的聚合物長度係長於「胜肽」之聚合物長度。

類似地，本文中提及「位置28」時意指升糖素類似物之對應位置29，其中一個胺基酸係新增至SEQ ID NO：1之N端前面。如本文中所使用，「胺基酸修飾」係指(i)SEQ ID NO：1之一胺基酸改由一不同胺基酸(天然或編碼或非編碼或非天然胺基酸)取代或替換，(ii)新增一胺基酸(天然或編碼或非編碼或非天然胺基酸)至SEQ ID NO：1或(iii)刪除SEQ ID NO：1之一或多個胺基酸。

胺基酸「修飾」係指插入、刪除或一個胺基酸改由另一胺基酸取代。在一些實施例中，胺基酸取代或替換為保守性胺基酸取代，例如，位置2、5、7、10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、21、24、27、28或29中一或多個位置處之胺基酸之保守性取代。如本文中所使用，術語「保守性胺基酸取代」係一個胺基酸改由另一具有類似性質，例如，尺寸、電荷、疏水性、親水性及/或芳香性之胺基酸替換，且包括以下五類基團中一類基團中之交換：

I. 小脂族、非極性或小極性殘基：Ala、Ser、Thr、Pro、Gly；

II. 極性、帶負電荷之殘基及其醯胺及酯：Asp、Asn、Glu、Gln、半胱胺酸及高半胱胺酸；

III. 極性、帶正電荷之殘基：His、Arg、Lys；鳥胺酸(Orn)

IV. 大脂族非極性殘基：Met、Leu、He、Val、Cys、正白胺酸(Nle)、高半胱胺酸

V. 大芳族殘基：Phe、Tyr、Trp、乙醯基苯丙胺酸。

在一些實施例中，胺基酸取代不是保守性胺基酸取代，例如，為非保守性胺基酸取代。

如本文中所使用，術語「帶電荷之胺基酸」或「帶電荷之殘基」係指包含在生理pH之水溶液中帶負電荷(即，去質子化)或帶正電荷(即，質子化)之側鏈之胺基酸。例如，帶負電荷之胺基酸包括天冬胺酸、麩胺酸、半胱胺酸、高半胱胺酸及高麩胺酸，而帶正電荷之胺基酸包括精胺酸、離胺酸及組胺酸。帶電荷之胺基酸包括20種編碼胺基酸中之帶電荷之胺基酸以及非典型或非天然或非編碼之胺基酸。

如本文中所使用，術語「酸性胺基酸」係指包含第二酸性部分(除了胺基酸之羧酸之外)(包括(例如)羧酸基或磺酸基)之胺基酸。

如本文中所使用，術語「醯化胺基酸」係指為非天然胺基酸至天然胺基酸之包含醯基之胺基酸，而不論其製造方法(例如，在併入胺基酸至胜肽中之前醯化，或在併入胜肽中之後醯化)。

如本文中所使用，術語「烷基化胺基酸」係指為非天然胺基酸至天然胺基酸之包含烷基之胺基酸，而不論其製造方法。因此，本發明之醯化胺基酸及烷基化胺基酸為非編碼胺基酸。

如本文中所使用，分子對第一受體相對對第二受體之術語「選擇性」係指以下比：分子在第二受體處之EC₅₀除以分子在第一受體處之EC₅₀。例如，具有第一受體處之1nM之EC₅₀及第二受體處之100nM之EC₅₀之分子具有對第一受體相對對第二受體100倍之選擇性。

如本文中所使用，術語「天然升糖素」係指由SEQ ID NO：1之序列組成之胜肽及術語「天然GLP-1」為指定GLP-1(7-36)醯胺、GLP-1(7-37)酸或此兩化合物之混合物之一般術語。

如本文中所使用，分子之「升糖素效力」或「相較於天然升糖素之效力」係指分子在升糖素受體處之EC₅₀除以天然升糖素在升糖素受體處之EC₅₀之反比。

如本文中所使用，分子之「GLP-1效力」或「相較於天然GLP-1之效力」係指分子在GLP-1受體處之EC₅₀除以天然GLP-1在GLP-1受體處之EC₅₀之反比。

圖1表示經媒劑對照或日劑量之SEQ ID NO：6至11之胜肽處理之飲食誘發性肥胖(DIO)小鼠之累積體重變化(公克)之圖，如實例18中所詳細地描述。

圖2表示經日劑量之SEQ ID NO：6至11之胜肽處理之DIO小鼠之相對經媒劑處理之對照組之累積體重變化(%)之圖，如實例19中所詳細地描述。

圖3表示經媒劑對照或經一劑量之SEQ ID NO：6至11之胜肽處理之DIO小鼠之食物攝入之累積變化(表示為相對第0天之食物攝入之變化百分比)之圖，如實例20中所詳細地描述。

圖4表示經媒劑對照或經一劑量之SEQ ID NO：6至11之胜肽處理之DIO小鼠之基礎葡萄糖(mg/dL)之圖，如實例21中所詳細地描述。

本發明提供在GLP-1受體(GLP-1)及升糖素(GCG)受體處均展現活性之胜肽及胜肽變體。在此點上，本發明提供GLP-1受體/GCG受體共促效劑胜肽。在例示性實施例中，相較於天然人類升糖素(SEQ ID NO：1)，當前所揭示之胜肽及胜肽變體在GCG受體及GLP-1受體處展現相對平衡之活性或效力。

在例示性實施例中，本文中所描述之胜肽及胜肽變體相對於天然升糖素或天然GLP-1展現在性質上之其他改善，諸如，穩定性提高，溶解度增大，體循環中半衰期延長，作用發生延遲，作用持續時間延長，峰值受抑制(例如，平均峰值血漿濃度相對地減小)，及抗蛋白酶(諸如DPP-IV)性改良。

亦涵蓋任何本文中所揭示胜肽序列之共軛物、融合蛋白及多聚物。

升糖素為結構上有關於GLP-1之胜肽激素，其通過刺激肝糖分解作用及糖生成作用快速增加血液葡萄糖之能力得到很好認可。雖然在超過60年前首先報告升糖素之投與可產生在嚙齒動物代謝之改善，包括體重之減輕(Salter,Am.J.Clin.Nutr.8：535-539(1960))，但此等結果尚不能轉化為在用於治療人類之療法中使用升糖素，尤其由於高血糖之內在性風險的緣故，尤其胰島素抵抗2型糖尿病患者中。

相對於純GLP-1受體促效劑，將平衡GCG受體/GLP-1受體共促效劑用於治療嚙齒動物肥胖中，藥效及安全性提高，同時改善血糖控制(Day等人，Nat.Chem.Biol.5：749-757(2009)；Pocai等人，Diabetes 58：2258-2266(2009))。調酸素(OXM)為升糖素之內源性前驅物，其係由空迴腸之L細胞連同GLP-1一起餐後分泌，且已顯示為GLP-1受體及升糖素受體處之平衡共促效劑，但其效力相對地低(Holst,Regul.Pept.93：45-51(2000)；Drucker,J.Nat.Clin.Pract.Endocrinol.Metab.1：22-31(2005)；Baldissera等人，Regul.Pept.21：151-166(1988)；Gros等人，Endocrinol.133：631-638(1993)；Pocai等人，同前)。肥胖個體之4週臨床研究證實，重複皮下投與OXM具有良好耐受性且引起顯著量的體重減輕，同時食物攝入減少(Wynne等人，Diabetes 54：2390-2395(2005))。

While Day等人，Peptide Sci.98：443-450(2012)報告GLP-1受體平衡在使用一類此兩種受體之鼠科受體效力不同之共促效劑胜肽預防肥胖小鼠中GCG受體介導之高血糖上具有重要意義，其等沒有揭示具有本文中所揭示共促效劑胜肽之平衡效力或活性之共促效劑胜肽。

相反地，本發明之GCG受體/GLP-1受體共促效劑胜肽在GCG受體及GLP-1受體處具有相對平衡之活性或效力。本發明提供包含天然人類升糖素之胺基酸序列的胜肽，其具有以SEQ ID NO：1顯示之胺基酸序列但其中在位置2之L-絲胺酸經D-絲胺酸置換；在位置10之酪胺酸係經以下置換：(i)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之L-離胺酸或(ii)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之對胺基甲基苯丙胺酸；且上至六次其他胺基酸之取代；其中該胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑且具有約0.88至約1.25、約0.90至約1.25、約0.90至約1.10、約0.90至約1.00或約1.0±0.12之升糖素受體處之EC₅₀與 GLP-1受體處之EC₅₀之比，及其中該胜肽視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基；其限制條件為該胜肽不具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。在特定態樣中，該胜肽具有0.88、0.89、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99、1.00、1.01、1.02、1.03、1.04、1.05、1.06、1.07、1.08、1.09或1.10之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀之比。

本發明進一步提供包含以下胺基酸序列之胜肽HX₂QGTX₆TSDX₁₀SX₁₂YLX₁₅X₁₆RX₁₈AQDFVQWLX₂₇DT(SEQ ID NO：20)

其中X₂為D-絲胺酸、L-丙胺酸、α-胺基異丁酸(Aib)或1-胺基環丁羧酸；X₆為L-苯丙胺酸、對氟苯丙胺酸或蘇-β-苯基絲胺酸；X₁₀為L-離胺酸或對胺基甲基苯丙胺酸；X₁₂為L-離胺酸或L-白胺酸；X₁₅為L-麩胺酸或L-白胺酸；X₁₆為L-丙胺酸、Aib、L-麩胺酸或L-纈胺酸；X₁₈為L-丙胺酸或L-精胺酸；X₂₇為L-白胺酸、甲硫胺酸碸或L-正白胺酸；在位置10之胺基酸係經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基；及該胜肽視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基；其限制條件為該等胜肽不包括具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列之胜肽。該等胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑且具有約0.88至約1.25、約0.90至約1.25、約0.90至約1.10、約0.90至約1.00或約1.0±0.12之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀之比。該等胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑且具有0.88、0.89、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99、1.00、1.01、1.02、1.03、1.04、1.05、1.06、1.07、1.08、1.09或1.10之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀之比。

本發明進一步提供包含以下胺基酸序列或由該胺基酸序列組成之胜肽HX₂QGTX₆TSDX₁₀SX₁₂YLX₁₅X₁₆RX₁₈AQDFVQWLX₂₇DT(SEQ ID NO：20)

本發明之胜肽之實例顯示於表1中。

如實例中所顯示，本發明之GCG受體/GLP-1受體共促效劑胜肽具有GCG受體處之約0.02至約1.04nM之EC₅₀及GLP-1受體處之約0.03至約1.3nM之EC₅₀。在特定態樣中，該等GCG受體/GLP-1受體共促效劑胜肽具有約0.88至約1.25、約0.90至約1.25、約0.90至約1.10、約0.90至約1.00或約1.0±0.12之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀之比。因此，本發明提供具有抗GLP-1受體及GCG受體之相對平衡促效劑活性或效力且展現針對體重減輕同時降低與GCG受體活化相關聯之高血糖風險之最佳治療特性的胜肽。

本發明提供組合物，其包含一或多種包含天然人類升糖素之胺基酸序列之胜肽，其具有以SEQ ID NO：1顯示之胺基酸序列但其中在位置2之L-絲胺酸經D-絲胺酸置換；在位置10之酪胺酸係經以下置換：(i)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之L-離胺酸或(ii)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之對胺基甲基苯丙胺酸；且上至六次其他胺基酸之取代；其中該胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑且具有約0.88至約1.25、約0.90至約1.25、約0.90至約1.10、約0.90至約1.00或約1.0±0.12之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀之比，及其中該胜肽視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基，及醫藥上可接受之載劑，或由其等組成；其限制條件為該胜肽不具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。在特定態樣中，該等胜肽具有0.88、0.89、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99、1.00、1.01、1.02、1.03、1.04、1.05、1.06、1.07、1.08、1.09或1.10之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀之比。

其中X₂為D-絲胺酸、L-丙胺酸、α-胺基異丁酸(Aib)或1-胺基環丁羧酸；X₆為L-苯丙胺酸、對氟苯丙胺酸或蘇-β-苯基絲胺酸；X₁₀為L-離胺酸或對胺基甲基苯丙胺酸；X₁₂為L-離胺酸或L-白胺酸；X₁₅為L-麩胺酸或L-白胺酸；X₁₆為L-丙胺酸、Aib、L-麩胺酸或L-纈胺酸；X₁₈為L-丙胺酸或L-精胺酸；X₂₇為L-白胺酸、甲硫胺酸碸或L-正白胺酸；在位置10之胺基酸係經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基；及該胜肽視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基；其限制條件為該等胜肽不包括具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列之胜肽，及醫藥上可接受之載劑。該等胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑且具有約0.88至約1.25、約0.90至約1.25、約0.90至約1.10、約0.90至約1.00或約1.0±0.12之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀之比。該等胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑且具有0.88、0.89、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99、1.00、1.01、1.02、1.03、1.04、1.05、1.06、1.07、1.08、1.09或1.10之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀之比。

本發明進一步提供一種包含天然人類升糖素之胺基酸序列的胜肽，其具有以SEQ ID NO：1顯示之胺基酸序列但其中在位置2之L-絲胺酸經D-絲胺酸置換；在位置10之酪胺酸係(i)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之L-離胺酸或(ii)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之對胺基甲基苯丙胺酸置換；且上至六次其他胺基酸之取代；其中該胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑且具有約0.88至約1.25、約0.90至約1.25、約0.90至約1.10、約0.90至約1.00或約1.0±0.12之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀之比，及其中該胜肽視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基；其限制條件為該胜肽不具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。

本發明進一步提供一種組合物，其包含(i)具有天然人類升糖素之胺基酸序列或由其組成之胜肽，其如以SEQ ID NO：1顯示但其中在位置2之L-絲胺酸經D-絲胺酸置換；在位置10之酪胺酸係經(i)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之L-離胺酸或(ii)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之對胺基甲基苯丙胺酸置換；且上至六次其他胺基酸之取代；其中該胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑且具有約0.88至約1.25、約0.90至約1.25、約0.90至約1.10、約0.90至約1.00或約1.0±0.12之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀之比，及其中該胜肽視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基，及(ii)醫藥上可接受之載劑；其限制條件為該胜肽不具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。

本發明進一步包括組合物，其包含一或多種顯示於表1中之胜肽及醫藥上可接受之載劑或由其組成。

醫藥組合物

進一步提供醫藥組合物，其包含治療上有效量之一或多種本文中所揭示之用於治療個體代謝疾病之共促效劑胜肽。該等疾病包括(但不限於)肥胖、代謝症候群或症候群X、II型糖尿病、糖尿病併發症(諸如視網膜病)、高血壓、血脂異常、心血管疾病、膽結石、骨關節炎、及特定形式之癌症。本文中之與肥胖相關之疾病係與肥胖相關聯，由肥胖引起，或自肥胖產生。

「肥胖」為存在過多身體脂肪之病狀。肥胖之操作定義係以身體質量指數(BMI)為基礎，計算為每平方米高之體重(kg/m²)。「肥胖」係指其他方面健康個體具有大於或等於30kg/m²之身體質量指數(BMI)之病狀，或罹患至少一種共病症之個體具有大於或等於27kg/m²之BMI之病狀。「肥胖個體」為具有大於或等於30kg/m²之身體質量指數(BMI)之其他方面健康個體或具有大於或等於27kg/m²之BMI之罹患至少一種共病症之個體。「處在肥胖風險之個體」為具有25kg/m²至小於30kg/m²之BMI之其他方面健康個體或具有25kg/m²至小於27kg/m²之BMI之罹患至少一種共病症之個體。

亞洲人中，與肥胖相關聯之增加之風險發生在較小身體質量指數(BMI)。在亞洲國家(包括日本)，「肥胖」係指罹患至少一種需要減輕體重或將藉由減輕體重改良之肥胖誘發性或肥胖相關共病症之個體具有大於或等於25kg/m²之BMI之病狀。在亞洲國家(包括日本)，「肥胖個體」係指罹患至少一種需要減輕體重或將藉由減輕體重改良之肥胖誘發性或肥胖相關共病症之具有大於或等於25kg/m²之BMI之個體。在亞洲國家，「處在肥胖風險之個體」為具有大於23kg/m²至小於25kg/m²之BMI之個體。

如本文中所使用，術語「肥胖」意在包括所有上述肥胖定義。

肥胖誘發性或肥胖相關共病症包括(但不限於)糖尿病、非胰島素相依2型糖尿病、受損葡萄糖耐受性、受損空腹葡萄糖、胰島素抵抗症候群、血脂異常、高血壓、高尿酸血症、痛風、冠狀動脈疾病、心肌梗塞、心絞痛、睡眠呼吸暫停症候群、Pickwickian症候群、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、脂肪肝；腦梗塞、腦血栓、暫時性腦缺血、骨科疾病、變形性關節炎、腰痛、月經病及不孕症。特定言之，共病症包括：高血壓、高血脂、血脂異常、葡萄糖耐受不良、心血管疾病、睡眠呼吸暫停、糖尿病及其他肥胖相關病狀。

(肥胖及肥胖相關疾病之)「治療」係指投與本發明之化合物以減輕或維持肥胖個體之體重。治療之一種結果可係相對緊接於投與本發明之化合物之前之個體體重減輕肥胖個體之體重。治療之另一結果可係防止先前由於飲食、運動或藥物療法減輕的體重之體重再增加。治療之另一結果可係降低肥胖相關疾病之發生率及/或嚴重度。該治療可適宜地導致個體攝入食物或熱量減少，包括有此需要的患者之總食物攝入減少，或飲食之特定組分諸如碳水化合物或脂肪之攝入減少；及/或抑制營養吸收；及/或抑制代謝速率降低；及體重減輕。該治療亦可導致代謝速率改變，諸如，代謝速率增加，而非抑制降低代謝速率或在其之外；及/或最小化通常由體重減輕產生之代謝抗性。

(肥胖及肥胖相關疾病之)「預防」係指投與本發明之化合物以減輕或維持處在肥胖風險之個體之體重。預防之一種結果可係相對緊接於投與本發明之化合物之前之個體體重減輕處在肥胖風險之個體之體重。預防之另一結果可係防止先前由於飲食、運動或藥物療法減輕的體重之體重再增加。預防之另一結果可係若在肥胖發生之前對處在肥胖風險之個體投與治療則預防肥胖發生。預防之另一結果可係若在肥胖發生之前對處在肥胖風險之個體投與治療則降低肥胖相關疾病之發生率及/或嚴重度。除此之外，若開始對已經肥胖的個體進行治療，則此治療可防止肥胖相關疾病之發生、進展或嚴重化，該等疾病諸如(但不限於)動脈硬化、II型糖尿病、多囊性卵巢疾病、心血管疾病、骨關節炎、皮膚疾病、高血壓、胰島素抵抗、高膽固醇血症、高三酸甘油脂血症及膽石病。

本文中之肥胖相關疾病係與肥胖相關聯，由肥胖引起，或自肥胖產生。肥胖相關疾病之實例包括飲食過度及貪食症、高血壓、糖尿病、提高之血漿胰島素濃度及胰島素抵抗、血脂異常、高血脂、子宮內膜癌、乳癌、前列腺癌及結腸癌、骨關節炎、阻塞性睡眠呼吸暫停、膽石病、膽結石、心臟病、心律異常及心律不整、心肌梗塞、充血性心臟衰竭、冠心病、猝死、中風、多囊性卵巢疾病、顱咽管瘤、普瑞德-威利症候群(Prader-Willi Syndrome)、佛洛里氏症候群(Frohlich's syndrome)、缺乏GH之個體、正常變異矮身材、特納氏症候群(Turner's syndrome)及顯示降低之代謝活性或休息時能量消耗之減少為總無脂質量之百分率的其他病理病狀，例如，罹患急性淋巴母細胞性白血病之兒童。肥胖相關疾病之其他實例為代謝症候群(亦稱為症候群X)、胰島素抵抗症候群、性功能及生育功能障礙(諸如不孕症、男性性腺功能低下症及女性多毛症)、胃腸蠕動障礙(諸如肥胖相關胃食道逆流)、呼吸系統疾病(諸如肥胖-低通氣症候群(Pickwickian症候群))、心血管疾病、發炎(諸如全身性血管發炎)、動脈硬化、高膽固醇血症、高尿酸血症、下背疼痛、膽囊疾病、痛風及腎癌。本發明之化合物亦適用於降低肥胖之繼發結果之風險，諸如，降低左心室肥大之風險。

術語「糖尿病」如本文中所使用包括胰島素依賴性糖尿病(IDDM，亦稱為I型糖尿病)及非胰島素依賴性糖尿病(NIDDM，亦稱為II型糖尿病)。I型糖尿病(或胰島素依賴性糖尿病)係由絕對缺乏胰島素(為調節葡萄糖利用之激素)造成。II型糖尿病(或胰島素獨立性糖尿病)(即，非胰島素依賴性糖尿病)通常在面對正常或甚至提高的胰島素水平時發生且顯示為組織無法適宜地回應胰島素之結果。大多數II型糖尿病亦為肥胖。本發明之化合物適用於治療I型及II型糖尿病。該等化合物尤其可有效治療II型糖尿病。本發明之化合物亦適用於治療及/或預防妊娠型糖尿病。

美國專利第6,852,690號(其以全文引用之方式併入本文中)揭示增進營養素代謝之方法，該方法包括對非糖尿病患者投與包含營養上有效量之一或多種營養素或其任何組合及一或多種促胰島素胜肽之調配物。本文中所揭示之共促效劑胜肽係促胰島素的且可投與給具有葡萄糖代謝紊亂(諸如胰島素抵抗)但無顯性糖尿病之患者以及因任何原因而無法通過消化道接受營養素之患者。此等患者包括手術患者、昏迷患者、在休克中之患者、罹患胃腸疾病之患者、罹患消化激素疾病之患者及類似。特定言之，肥胖患者、動脈粥樣硬化患者、血管疾病患者、罹患妊娠型糖尿病之患者、罹患肝病諸如肝硬化之患者、罹患肢端肥大症之患者、具有糖皮質激素過量諸如皮質固醇處理或庫欣氏病(Cushings disease)之患者、具有諸如將在創傷、事故及手術及類似後產生之經活化反向調節激素之患者、罹患高三酸甘油脂血症之患者及罹患慢性胰臟炎之患者可依本發明輕易且適宜地營養化而患者不會發生低或高血糖。特定言之，此類患者之投與旨在提供一種儘量快速地遞送營養及熱量需求給患者同時維持其血漿葡萄糖低於約160至180毫克/分升血液葡萄糖之所謂的腎臨限值之療法。雖然不具有僅低於腎臨限值之葡萄糖水平之正常患者亦可如上所述依本發明處理，但葡萄糖代謝紊亂之患者，諸如血漿葡萄糖水平僅高於腎臨限值之高血糖患者亦尋求適於其病狀之療法。特定言之，此等在間隙時間間隔具有低於腎臨限值之程度之高血糖之患者可依任何一種以下療程接受營養素加上促胰島素胜肽之組合治療。亦可使用本文中所揭示之胜肽類似物來治療未罹患該高血糖之正常患者。

本文中所揭示之共促效劑胜肽當與醫藥上可接受之載劑組合時可呈醫藥組合物使用。此等組合物包含治療上有效量之一或多種本文中所揭示之共促效劑胜肽及醫藥上可接受之載劑。此類組合物(除了本文中所揭示之共促效劑胜肽及載劑之外)亦可包含稀釋劑、填充劑、鹽、緩衝劑、穩定劑、增溶劑及相關技術中已知之其他物質。包含本文中所揭示之共促效劑胜肽之組合物若需要則可呈鹽之形式投與，條件係該等鹽係醫藥上可接受的。可使用熟習合成有機化學技術者已知的標準程序來製備鹽。本文中所揭示之共促效劑胜肽可呈多聚物(例如，異二聚物或同型二聚物)或與自身或其他胜肽之錯合物。因此，本發明之醫藥組合物可包含呈此多聚或錯合形式之一或多種本文中所揭示之共促效劑胜肽。

該藥理學組合物可包含一或多種本文中所揭示之共促效劑胜肽；一或多種本文中所揭示之共促效劑胜肽及一或多種其他的用於治療代謝疾病之藥劑；或該包含一或多種本文中所揭示之共促效劑胜肽之藥理學組合物可與該包含用於治療代謝疾病之藥劑之藥理學組合物同時使用。此等疾病包括(但不限於)肥胖、代謝症候群或症候群X、II型糖尿病、糖尿病併發症、高血壓、血脂異常、心血管疾病、膽結石、骨關節炎及特定形式之癌症。

當藥理學組合物包含另一用於治療代謝疾病之藥劑或治療包括包含用於治療代謝疾病之藥劑之第二藥理學組合物時，該藥劑包括(但不限於)大麻素(CB1)受體拮抗劑、升糖素樣肽1(GLP-1)受體促效劑、升糖素受體拮抗劑、脂酶抑制劑、瘦素、四氫利潑斯汀(tetrahydrolipstatin)、2-4-二硝基酚、阿卡波糖(acarbose)、西布曲明(sibutramine)、芬特明(phentamine)、脂肪吸收阻斷劑、辛伐他汀(simvastatin)、美伐他汀(mevastatin)、愛西提米(ezetimibe)、阿托伐他汀(atorvastatin)、西他列汀(sitagliptin)、二甲雙胍(metformin)、奧利司他(orlistat)、Qnexa、托吡酯(topiramate)、納曲酮(naltrexone)、安非他酮(bupriopion)、芬他命(phentermine)、氯沙坦(losartan)、氯沙坦與氫氯噻嗪(hydrochlorothiazide)、及類似。

可分開或呈與如本文中所述之共促效劑胜肽組合之相同醫藥組合物投與之其他活性成分之實例包括(但不限於)：(1)其他二肽基肽酶-IV(DPP-4)抑制劑(例如，西他列汀(sitagliptin)、阿洛利汀(alogliptin)、利拉利汀(linagliptin)、維格列汀(vildagliptin)、沙西列汀(saxagliptin)及奧格列汀(omarigliptin))；(2)胰島素敏化物，包括(i)PPARγ促效劑，諸如格列酮類(glitazones)(例如吡格列酮(pioglitazone)、AMG 131、MBX2044、米格列酮(mitoglitazone)、洛貝格列酮(lobeglitazone)、IDR-105、羅格列酮(rosiglitazone)及巴格列酮(balaglitazone))及其他PPAR配體，包括(1)PPARα/γ雙重促效劑(例如，ZYH2、ZYH1、GFT505、西格列扎(chiglitazar)、莫格列扎(muraglitazar)、阿格列扎(aleglitazar)、索格列扎(sodelglitazar)及那格列扎(naveglitazar))；(2)PPARα促效劑，諸如非諾貝特酸(fenofibric acid)衍生物(例如，吉非羅齊(gemfibrozil)、氯貝特(clofibrate)、環丙貝特(ciprofibrate)、非諾貝特(fenofibrate)、苯扎貝特(bezafibrate))；(3)選擇性PPARγ調節劑(SPPARγM)，(例如，諸如，彼等揭示於WO 02/060388、WO 02/08188、WO 2004/019869、WO 2004/020409、WO 2004/020408及WO 2004/066963中者)；及(4)PPARγ局部促效劑；(ii)雙胍類，諸如二甲雙胍及其醫藥上可接受之鹽，特定言之，鹽酸二甲雙胍及其延遲釋放調配物，諸如Glumetza^TM、Fortamet^TM及GlucophageXR^TM；及(iii)蛋白質酪胺酸磷酸酶-1B(PTP-1B)抑制劑(例如，ISIS-113715及TTP814)；(3)胰島素或胰島素類似物(例如，地特胰島素、榖離胰島素、德穀胰島素(insulin degludec)、甘精胰島素、離脯胰島素及各自的可吸入調配物)；(4)瘦素及瘦素衍生物及促效劑；(5)澱粉樣肽及澱粉樣肽類似物(例如，普蘭林肽(pramlintide))；(6)磺醯脲及非磺醯脲胰島素促分泌劑(例如，甲苯磺丁脲(tolbutamide)、格列苯脲(glyburide)、格列吡嗪(glipizide)、格列美脲(glimepiride)、米格列奈(mitiglinide)、美格替耐(meglitinides)、那替格列(nateglinide)及瑞格列奈(repaglinide))；(7)α-葡糖苷酶抑制劑(例如，阿卡波糖、伏格列波糖(voglibose)及米格列醇(miglitol))；(8)升糖素受體拮抗劑(例如，諸如，彼等揭示於WO 98/04528、WO 99/01423、WO 00/39088及WO 00/69810中者)；(9)腸促胰島素擬似物，諸如GLP-1、GLP-1類似物、衍生物及擬似物；及GLP-1受體促效劑(例如，杜拉魯肽(dulaglutide)、索馬魯肽(semaglutide)、阿必魯肽(albiglutide)、艾塞那肽(exenatide)、利拉魯肽(liraglutide)、利西拉肽(lixisenatide)、他司魯肽(taspoglutide)、 CJC-1131及BIM-51077，包括其鼻內、經皮及每週一次調配物)；(10)降LDL膽固醇藥劑，諸如(i)HMG-CoA還原酶抑制劑(例如，辛伐他汀(simvastatin)、洛伐他汀(lovastatin)、普伐他汀(pravastatin)、西立伐他汀(crivastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、匹伐他汀(pitavastatin)及羅蘇伐他汀(rosuvastatin))，(ii)膽酸螯合劑(例如，考來替蘭(colestilan)、考來替德(colestimide)、鹽酸考來維侖(colesevalam hydrochloride)、考來替泊(colestipol)、考來烯胺(cholestyramine)及交聯葡聚糖之二烷基胺基烷基衍生物)，(iii)膽固醇吸收之抑制劑(例如，愛西提米)及(iv)醯基CoA：膽固醇醯基轉移酶抑制劑(例如，阿伐麥布(avasimibe))；(11)升HDL藥物(例如，菸酸及菸鹼酸受體促效劑及其延遲釋放形式；MK-524A，其為菸酸延遲釋放及DP-1拮抗劑MK-524之組合)；(12)抗肥胖化合物；(13)旨在用於發炎病狀中之藥劑，諸如阿斯匹靈(aspirin)、非類固醇消炎藥劑或NSAID、糖皮質激素及選擇性環氧合酶-2或COX-2抑制劑；(14)抗高血壓藥劑，諸如ACE抑制劑(例如，賴諾普利(lisinopril)、依那普利(enalapril)、雷米普利(ramipril)、卡托普利(captopril)、喹那普利(quinapril)及坦多普利(tandolapril))、A-II受體阻斷劑(例如，氯沙坦、坎地沙坦(candesartan)、厄貝沙坦(irbesartan)、奧美沙坦酯(olmesartan medoxomil)、纈沙坦(valsartan)、替米沙坦(telmisartan)及依普羅沙坦(eprosartan))、腎素抑制劑(例如，阿利吉侖(aliskiren))、β阻斷劑及鈣通道阻斷劑；(15)葡萄糖激酶活化劑(GKA)(例如，AZD6370)；(16)11β-羥基類固醇1型脫氫酶之抑制劑(例如，諸如，彼等揭示於美國專利第6,730,690號中者及LY-2523199)； (17)CETP抑制劑(例如，安塞匹布(anacetrapib)及托塞匹布(torcetrapib))；(18)果糖1,6-二磷酸酶之抑制劑(例如，諸如，彼等揭示於美國專利號6,054,587；6,110,903；6,284,748；6,399,782；及6,489,476中者)；(19)乙醯基CoA羧化酶-1或2(ACC1或ACC2)之抑制劑；(20)AMP活化之蛋白質激酶(AMPK)活化劑；(21)G蛋白偶聯受體之其他促效劑：(i)GPR-109，(ii)GPR-119(例如，MBX2982及PSN821)，及(iii)GPR-40(例如，TAK875、5-[4-[[(1R)-4-[6-(3-羥基-3-甲基丁氧基)-2-甲基吡啶-3-基]-2,3-二氫-1H-茚-1-基]氧基]苯基]異噻唑-3-醇1-氧化物、5-(4-((3-(2,6-二甲基-4-(3-(甲基磺醯基)丙氧基)苯基)苯基)甲氧基)苯基)異、5-(4-((3-(2-甲基-6-(3-羥基丙氧基)吡啶-3-基)-2-甲基苯基)甲氧基)苯基)異噻唑-3-醇1-氧化物及5-[4-[[3-[4-(3-胺基丙氧基)-2,6-二甲基苯基]苯基]甲氧基]苯基]異噻唑-3-醇1-氧化物)；(22)SSTR3拮抗劑(例如，諸如，彼等揭示於WO 2009/001836中者)；(23)神經介素U受體促效劑(例如，諸如，彼等揭示於WO 2009/042053中者，包括(但不限於)神經介素S(NMS))；(24)SCD抑制劑；(25)GPR-105拮抗劑(例如，諸如，彼等揭示於WO 2009/000087中者)；(26)SGLT抑制劑(例如，ASP1941、SGLT-3、艾帕列淨(empagliflozin)、格列吡嗪(dapagliflozin)、坎格列淨(canagliflozin)、BI-10773、PF-04971729、瑞格列淨(remogloflozin)、TS-071、托格列淨(tofogliflozin)、伊格列淨(ipragliflozin)及LX-4211)； (27)醯基輔酶A：二醯基甘油醯基轉移酶1及2(DGAT-1及DGAT-2)之抑制劑；(28)脂肪酸合成酶之抑制劑；(29)醯基輔酶A：單醯基甘油醯基轉移酶1及2(MGAT-1及MGAT-2)之抑制劑；(30)TGR5受體(亦稱為GPBAR1、BG37、GPCR19、GPR131及M-BAR)之促效劑；(31)迴腸膽酸轉運體抑制劑；(32)PACAP、PACAP擬似物及PACAP受體3促效劑；(33)PPAR促效劑；(34)蛋白質酪胺酸磷酸酶-1B(PTP-1B)抑制劑；(35)IL-1b抗體(例如，XOMA052及卡那單抗(canakinumab))；及(36)甲磺酸溴隱亭(bromocriptine mesylate)及其快速釋放調配物。

尤其關注鹽酸二甲雙胍、吡格列酮、羅格列酮、辛伐他汀、阿托伐他汀或磺醯脲。

可與如本文中所揭示之化合物組合之抗肥胖化合物包括托吡酯；唑尼沙胺(zonisamide)；納曲酮；芬他命；丁胺苯丙酮；丁胺苯丙酮及納曲酮之組合；丁胺苯丙酮及唑尼沙胺之組合；托吡酯及芬他命之組合；芬氟拉明(fenfluramine)；右芬氟拉明(dexfenfluramine)；西布曲明(sibutramine)；脂酶抑制劑，諸如奧利司他及西替利司他(cetilistat)；黑素皮質素受體促效劑，特定言之，黑素皮質素-4受體促效劑；CCK-1促效劑；黑色素聚集激素(MCH)受體拮抗劑；神經胜肽Y₁或Y₅拮抗劑(諸如MK-0557)；CB1受體反向促效劑及拮抗劑(諸如利莫那班(rimonabant)及塔拉那班(taranabant))；β₃腎上腺素能受體促效劑；胃飢素(ghrelin)拮抗劑；蛙皮素(bombesin)受體促效劑(諸如蛙皮素受體亞型-3促效劑)；及5-羥基色胺-2c(5-HT2c)促效劑，諸如氯卡色林(lorcaserin)。關於對可與本發明之化合物組合之抗肥胖化合物之評論，可參見Chaki等人，「Recent advances in feeding suppressing agents：potential therapeutic strategy for the treatment of obesity,」Expert Opin.Ther.Patents,11：1677-1692(2001)；Spanswick及Lee,「Emerging antiobesity drugs,」Expert Opin.Emerging Drugs,8：217-237(2003)；Fernandez-Lopez等人，「Pharmacological Approaches for the Treatment of Obesity,」Drugs,62：915-944(2002)；及Gadde等人，「Combination pharmaceutical therapies for obesity,」Exp.Opin.Pharmacother.,10：921-925(2009)。

在本發明之另一態樣中，揭示一種醫藥組合物，其包含一或多種以下藥劑：(a)如本文中所揭示之化合物，例如，一或多種如本文中所揭示之共促效劑，其中各共促效劑可獨立地為包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列之胜肽，其限制條件為該胜肽不具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列；(b)一或多種選自由以下組成之群之化合物：(1)其他二肽基肽酶-IV(DPP-4)抑制劑；(2)胰島素敏化物，包括(i)PPARγ促效劑，諸如格列酮類(例如AMG 131、MBX2044、米格列酮、洛貝格列酮、IDR-105、吡格列酮、羅格列酮及巴格列酮)及其他PPAR配體，包括(1)PPAeα/γ雙重促效劑，諸如ZYH1、YYH2、西格列扎、GFT505、莫格列扎、阿格列扎、索格列扎及那格列扎，(2)PPARα促效劑，諸如非諾貝特酸衍生物(例如，吉非羅齊、氯貝特、環丙貝特、非諾貝特及苯扎貝特)，(3)選擇性PPARγ調節劑(SPPARγM)，及(4)PPARγ局部促效劑；(ii)雙胍，諸如二甲雙胍及其醫藥上可接受之鹽，特定言之，鹽酸二甲雙胍及其延遲釋放調配物，諸如Glumetza®、Fortamet®及GlucophageXR®；(iii)蛋白質酪胺酸磷酸酶-1B(PTP-1B)抑制劑，諸如ISI-113715及TTP814；(3)磺醯脲及非磺醯脲胰島素促分泌劑(例如，甲苯磺丁脲、格列苯脲、格列吡嗪、格列美脲、米格列奈及美格列脲，諸如那替格列及瑞格列奈)；(4)α-葡糖苷酶抑制劑(例如，阿卡波糖、伏格列波糖及米格列醇)；(5)升糖素受體拮抗劑；(6)降LDL膽固醇藥劑，諸如(i)HMG-CoA還原酶抑制劑(例如，洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀、匹伐他汀及羅舒伐他汀)，(ii)膽酸螯合劑(例如，考來替蘭、考來烯胺、考來替德、鹽酸考來維侖、考來替泊及交聯聚葡萄糖之二烷基胺基烷基衍生物)，(iii)膽固醇吸收之抑制劑(例如，愛西提米)，及(iv)醯基CoA：膽固醇醯基轉移酶抑制劑(例如，阿伐麥布)；(7)升HDL藥物，諸如菸酸或其鹽及其延遲釋放形式；MK-524A，其為菸酸延遲釋放及DP-1拮抗劑MK-524之組合；及菸鹼酸受體促效劑；(8)抗肥胖化合物；(9)旨在用於發炎病狀之藥劑，諸如阿斯匹靈、非類固醇消炎藥劑(NSAID)、糖皮質激素及選擇性環氧合酶-2(COX-2)抑制劑；(10)抗高血壓藥劑，諸如ACE抑制劑(例如，依那普利、賴諾普利、雷米普利、卡托普利、喹那普利及坦多普利)、A-II受體阻斷劑(例如，氯沙坦、坎地沙坦、厄貝沙坦、奧美沙坦酯、纈沙坦、替米沙坦及依普羅沙坦)、腎素抑制劑(例如，阿利吉侖)、β阻斷劑(例如，鈣通道阻斷劑)； (11)葡萄糖激酶活化劑(GKA)(例如，AZD6370)；(12)11β-羥基類固醇1型脫氫酶之抑制劑(例如，諸如，彼等揭示於美國專利號6,730,690；WO 03/104207；及WO 04/058741中者)；(13)膽固醇基酯轉移蛋白質(CETP)之抑制劑(例如，托塞匹布及MK-0859)；(14)果糖1,6-二磷酸酶之抑制劑(例如，諸如，彼等揭示於美國專利號6,054,587；6,110,903；6,284,748；6,399,782；及6,489,476中者)；(15)乙醯基CoA羧化酶-1或2(ACC1或ACC2)之抑制劑；(16)AMP活化之蛋白質激酶(AMPK)活化劑；(17)G蛋白偶聯受體之促效劑；(i)GPR-109，(ii)GPR-119(例如，MBX2982及PSN821)，及(iii)GPR-40(例如，TAK875、5-[4-[[(1R)-4-[6-(3-羥基-3-甲氧丁氧基)-2-甲基吡啶-3-基]-2,3-二氫-1H-茚-1-基]氧基]苯基]異噻唑-3-醇1-氧化物、5-(4-((3-(2,6-二甲基-4-(3-(甲基磺醯基)丙氧基)苯基)苯基)甲氧基)苯基)異、5-(4-((3-(2-甲基-6-(3-羥基丙氧基)吡啶-3-基)-2-甲基苯基)甲氧基)苯基)異噻唑-3-醇1-氧化物及5-[4-[[3-[4-(3-胺基丙氧基)-2,6-二甲基苯基]苯基]甲氧基]苯基]異噻唑-3-醇1-氧化物)；(18)SSTR3拮抗劑(例如，諸如，彼等揭示於WO 2009/011836中者)；(19)神經介素U受體促效劑(例如，諸如，彼等揭示於WO2009/042053中者，包括(但不限於)神經介素S(NMS))；(20)硬脂醯基-輔酶A△-9去飽和酶(SCD)之抑制劑；(21)GPR-105拮抗劑(例如，諸如，彼等揭示於WO 2009/000087中者)；(22)葡萄糖吸收之抑制劑，諸如鈉-葡萄糖轉運體(SGLT)抑制劑及其各種同功異型物，諸如SGLT-1；SGLT-2(例如，ASP1941、TS071、BI10773、托格列淨、LX4211、坎格列淨、格列吡嗪及瑞格列淨(remogliflozin)；及SGLT-3)；(23)醯基輔酶A：二醯基甘油醯基轉移酶1及2(DGAT-1及DGAT-2)之抑制劑；(24)脂肪酸合成酶之抑制劑；(25)醯基輔酶A：單醯基甘油醯基轉移酶1及2(MGAT-1及MGAT-2)之抑制劑；(26)TGR5受體(亦稱為GPBAR1、BG37、GPCR19、GPR131及M-BAR)之促效劑；(28)甲磺酸溴隱亭及其快速釋放調配物，及(29)IL-1b抗體(例如，XOMA052及卡那單抗)；及(c)醫藥上可接受之載劑。

當在本發明之共促效劑胜肽併與一或多種其他藥物、胜肽或蛋白質同時使用時，可提供除本發明之共促效劑胜肽外尚包含該等其他藥物、胜肽或蛋白質之醫藥組合物。因此，本發明之醫藥組合物包括彼等除本發明之共促效劑胜肽外亦包含一或多種其他活性成分者。

對個體投與包含一或多種本文中所揭示之共促效劑胜肽之醫藥組合物之方法包括(但不限於)皮內、肌肉內、腹膜內、靜脈內、皮下、鼻內、硬膜外及口腔途徑。該等組合物可藉由任何適宜途徑，例如藉由輸注或快速注射，藉由通過上皮或皮膚黏膜襯(例如，口腔黏膜、直腸及腸黏膜及類似)、眼及類似吸收投與且可連同其他生物活性藥劑一起投與。投與可為全身或局部。此外，可有利地藉由任何適宜途徑，包括室內及鞘內注射投與該組合物至中樞神經系統中。室內注射可藉由連接至儲存槽(例如，Ommaya儲存槽)之室內導管促進。亦可藉由使用吸入器或噴霧器及用霧化劑調配採用肺部投與。亦可希望局部投與一或多種本文中所揭示之共促效劑胜肽至需要治療之區域；此可藉由例如(但不限於)在手術中局部輸注、局部施用、藉由注射、借助於導管、借助於栓劑或借助於植入物來達成。

各種遞送系統係已知的且可用於投與本文中所揭示之共促效劑胜肽，包括(但不限於)呈脂質體、微粒、微膠囊；小室(minicells)；聚合物；膠囊；錠劑；及類似之封裝。在一個實施例中，本文中所揭示之共促效劑胜肽可呈囊泡，特定言之脂質體遞送。呈脂質體之本文中所揭示之共促效劑胜肽可除了其他醫藥可接受之載劑外與呈聚集形式(諸如含在水溶液中之膠束、不溶性單層、液體結晶或片狀層)存在之兩性物質(諸如脂質)組合。用於脂質體調配之適宜脂質包括(但不限於)單甘油酯、二甘油酯、硫苷脂(sulfatides)、溶血卵磷脂、磷脂、皂素、膽酸及類似。此等脂質體調配物之製備係在本技術之技能水平內，如例如美國專利第4,837,028號及美國專利第4,737,323號中所揭示。在又另一實施例中，本文中所揭示之共促效劑胜肽可在可控式釋放系統包括(但不限於)：遞送泵(參見，例如，Saudek等人，New Engl.J.Med.321：574(1989)及半滲透聚合材料(參見，例如，Howard等人，J.Neurosurg.71：105(1989))中遞送。另外，該可控式釋放系統可接近治療標靶(例如，腦)放置，因此僅需要一部分全身劑量。參見，例如，Goodson,Medical Applications of Controlled Release,1984.(CRC Press,Bocca Raton,Fla.)中。

包含一或多種該等本文中所揭示之可有效治療特定病症或病狀之共促效劑胜肽之組合物之量將視病症或病狀性質而定，且可依標準臨床技術由平均技術者來判定。此外，可選擇性地採用體外分析以幫助確定最佳的劑量範圍。調配物中所用精確劑量亦取決於投藥途徑及疾病或病症之總體嚴重性，且應根據醫師之判斷及每位患者的情況而定。最終，主治醫師將決定用於治療各個別患者之組合物的量。一開始時，主治醫師將投與低劑量之組合物並觀察患者的反應。可投與更大劑量之組合物直到患者獲得最佳治療效應，此時，無需進一步增加劑量。一般而言，日劑量範圍位於約0.001mg至約100mg/kg哺乳動物體重，較佳0.01mg至約50mg/kg，且最佳0.1至10mg/kg之範圍內，呈單一或分次給藥。另一方面，在一些情況中可視需要使用此等限值之外的劑量。然而，就靜脈內投與包含一或多種本文中所揭示之共促效劑胜肽之組合物而言之適宜劑量範圍一般為約5至500微克(μg)活性化合物/公斤(Kg)體重。就鼻內投與而言之適宜劑量範圍一般為約0.01pg/kg體重至1mg/kg體重。有效劑量可從衍生自活體外或動物模式測試系統之劑量-反應曲線外推得到。栓劑一般包含在0.5重量%至10重量%範圍內之活性成分；口服調配物較佳包含10%至95%活性成分。最終，主治醫師將決定使用本發明之包含一或多種本文中所揭示之共促效劑胜肽之組合物之療法之適宜持續時間。劑量亦可根據個別患者之年齡、體重及反應改變。

進一步提供一種醫藥包裝或套組，其包含一或多個填充醫藥組合物之一或多種成分及本文中所揭示之共促效劑胜肽之容器。該(等)容器可視需要隨附呈由管理藥品或生物產品之製造、使用或銷售之政府機構所規定之形式之注意事項，該注意事項反映已獲該製造、使用或銷售機構批准用於人類投藥。

因此，本發明進一步提供一種醫藥組合物，其包含(i)由天然人類升糖素之胺基酸序列組成之胜肽，其具有以SEQ ID NO：1顯示之胺基酸序列但其中在位置2之L-絲胺酸經D-絲胺酸置換；在位置10之酪胺酸係經以下置換：(i)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之L-離胺酸，(ii)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之對胺基甲基苯丙胺酸；且上至六次其他胺基酸之取代；其中該胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑且具有約0.88至約1.25、約0.90至約1.25、約0.90至約1.10、約0.90至約1.00或約1.0±0.12之升糖素受體處之EC₅₀與GLP-1受體處之EC₅₀之比，及其中該胜肽視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基，及(ii)醫藥上可接受之載劑；其限制條件為該胜肽不具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。

本發明進一步提供一種治療患者之肥胖代謝疾病之方法，該方法包括對患者投與有效量之上述胜肽中任一者之胜肽以治療患者之代謝疾病。

本發明進一步提供一種治療患者之肥胖代謝疾病之方法，該方法包括對患者投與有效量之上述組合物之組合物以治療患者之代謝疾病。

在特定態樣中，該代謝疾病為糖尿病、非酒精性脂肪肝病 (NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)或肥胖。

進一步提供一種治療患者或個體之代謝疾病之方法，該方法包括：對患者或個體投與有效量之任何一種上述包含共促效劑胜肽之組合物及對患者或個體投與有效量之包含胰島素或胰島素類似物之組合物以治療患者或個體之代謝疾病。

在特定態樣中，該包含供促效劑胜肽之組合物係在投與包含胰島素或胰島素類似物之組合物之時間之前之時間投與。在另一態樣中，該包含胰島素或胰島素類似物之組合物係在投與包含共促效劑胜肽之組合物之時間之前之時間投與。在又一態樣中，該包含共促效劑胜肽之組合物係在投與包含胰島素或胰島素類似物之組合物之相同時間投與。

在特定態樣中，該患者具有多於一種代謝疾病，例如，糖尿病及NASH、NAFLD或肥胖；肥胖及NASH或NAFLD；糖尿病、NASH 及肥胖；糖尿病、NAFLD及肥胖；或糖尿病及肥胖。

本發明進一步提供一種包含任何一種上述胜肽；胰島素或胰島素類似物；及醫藥上可接受之載劑之組合物。

以下實例旨在增進本發明的進一步瞭解。

實例1

用於合成共此促效劑胜肽1：His¹-D-Ser²-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Lys¹⁰(γGlu-C₁₆)-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ala-Arg-Ala-Ala-Gln-Asp-Phe²²-Val²³-Gln-Trp-Leu-Leu-Asp-Thr-CONH₂(SEQ ID NO：6)之程序如下。

於Rink-amide PEG-PS樹脂，Champion(Biosearch Technologies,150μmol，負載量0.28mmol/g)在Symphony Protein Technologies Inc設備上合成胜肽。

將所有胺基酸以0.3M濃度溶解於0.3M HOBt(羥基苯并三唑)含在DMF中之溶液。以過量5倍的活化胺基酸於無胺基樹脂上進行醯化反應1小時。用等莫耳量之HATU(六氟磷酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)- N,N,N',N'-四甲基脲鎓)及2倍莫耳過量的含在NMP中之DIEA(二異丙基乙胺)溶液2M活化該等胺基酸。

自His¹至Trp²⁵進行45分鐘的雙重醯化反應。藉由逆相HPLC使用製備型Waters Delta-PakTM C-4濾筒(40×200mm，15μm，300Å)及使用用作洗脫劑之(A)含在水中之0.1% TFA及(B)含在乙腈中之0.1% TFA來純化粗胜肽(130mg，含於3ml DMSO中)。使用以下洗脫劑B梯度：在5min內，30%B至30%B，在20min內，60%B至60%B，至80%B，流速80mL/min，波長214nm。產率21%，純度95%。

最終胜肽係於Acquity UPLC Waters層析儀，具有BEH300 C4 Acquity Waters 2.1×100mm,1.7μm上於45℃下使用H₂O、0.1% TFA(A)及CH₃CN、0.1% TFA(B)作為溶劑表徵及亦藉由電噴霧質譜法於Acquity SQ檢測器上表徵(Mw實測值：3695.60Da；Mw預期值：3696.12Da)。

實例2

用於合成共此促效劑胜肽2：His¹-D-Ser²-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Lys¹⁰(γGlu-C₁₆)-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Val-Arg-Ala-Ala-Gln-Asp-Phe²²-Val²³-Gln-Trp-Leu-Leu-Asp-Thr-CONH₂₍SEQ ID NO：7)之程序如下。

如前面針對SEQ ID NO：6/實例1所報告合成胜肽

藉由逆相HPLC使用製備型Waters Delta-PakTM C-4濾筒(40×200mm，15μm，300Å)及使用用作洗脫劑之(A)含在水中之0.1% TFA及(B)含在乙腈中之0.1% TFA來純化粗胜肽(130mg，含於3ml DMSO中)。使用以下洗脫劑B梯度：在5min內，30%B至30%B，在20min內，50%B至50%B，至80%B，流速80mL/min，波長214nm。產率16%，純度95%。

最終胜肽係於Acquity UPLC Waters層析儀，具有BEH300 C4 Acquity Waters 2.1×100mm,1.7μm上於45℃下使用H₂O、0.1% TFA(A)及CH₃CN、0.1% TFA(B)作為溶劑表徵及亦藉由電噴霧質譜法於Acquity SQ檢測器上表徵(Mw實測值：3723.70Da；Mw預期值：3724.18Da)。

實例3

用於合成共促效劑胜肽3：His¹-D-Ser²-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Lys¹⁰(γGlu-γGlu-C₁₆)-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Val-Arg-Ala-Ala-Gln-Asp-Phe²²-Val²³-Gln-Trp-Leu-Leu-Asp-Thr-CONH₂(SEQ ID NO：8)之程序如下。

如前面針對共促效劑胜肽1所報告合成胜肽。藉由逆相HPLC使用製備型Waters Delta-PakTM C-4濾筒(40×200mm，15μm，300Å)及使用用作洗脫劑之(A)含在水中之0.1% TFA及(B)含在乙腈中之0.1% TFA來純化粗胜肽(130mg，含於3ml DMSO中)。使用以下洗脫劑B梯度：在5min內，30%B至30%B，在20min內，30%B至60%B，至80%B，流速80mL/min，波長214nm。產率20%，純度>90%。

最終胜肽係於Acquity UPLC Waters層析儀，具有BEH300 C4 Acquity Waters 2.1×100mm,1.7μm上於45℃下使用用作溶劑之H₂O、0.1% TFA(A)及CH₃CN、0.1% TFA(B)及以下梯度：在4min內，從35%變為65%B，流速0.4mL/min表徵。藉由電噴霧質譜法於Acquity SQ檢測器上表徵胜肽(Mw實測值：3852.80Da；Mw預期值：3853.29Da)。

實例4

用於合成共此促效劑胜肽4：His¹-Aib²-Val-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Lys¹⁰(γGlu-γGlu-C₁₆)-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp¹⁵-Aib¹⁶-Arg-Ala-Ala-Gln-Asp-Phe²²-Val²³-Gln-Trp²⁵-Leu-Nle-Asp-Thr-CONH₂(SEQ ID NO：9)之程序如下。

藉由標準固相胜肽合成法(SPPS)使用Fmoc/t-Bu化學品來合成胜肽。於Rink-amide PEG-PS樹脂，Champion(Biosearch Technologies,0.28mmol/g)在Symphony(Protein Technologies)胜肽合成儀上進行組合。

將所有胺基酸以0.3M濃度溶於0.3M HOBt(羥基苯并三唑)含在DMF中之溶液中。用過量5倍的活化胺基酸於無胺基樹脂上進行45min的醯化反應。用等莫耳量的HATU(六氟磷酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓)及2倍莫耳過量的含在NMP中之DIEA(二異丙基乙胺)溶液2M活化該等胺基酸。自His¹至Trp²⁵進行雙重醯化反應。在固相上進行胜肽組合中，側鏈保護基為：對於Asp、γGlu、Ser、Thr及Tyr，第三丁基；對於Gln及His，三苯基甲基；對於Lys、Trp，第三丁氧基羰基；及對於Arg，2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺醯基。在位置10之Lys呈Dde-Lys(Fmoc)-OH引入以達成剛好在ε-胺基脫去Fmoc保護基後組合Lys¹⁰之後側鏈衍生化。運用連接子及脂肪酸藉由人工偶聯兩個Fmoc-Glu-OtBu殘基衍生化Dde-Lys¹⁰側鏈及用DIPC及HOAt活化棕櫚酸。藉由以2%肼含在DMF中之溶液處理移去Dde保護基及序列組合體繼續引入殘基1至9。在室溫用88% TFA、5%苯酚、2%三異丙基矽烷及5%水處理無水胜肽-樹脂2h以自樹脂脫去保護基並裂解。過濾溶液以移去樹脂及粗胜肽溶液沉澱於冷甲基第三丁基醚(對於50mL甲基第三丁基醚，約4mL胜肽溶液)中。於冷甲基第三丁基醚中再懸浮/洗滌/離心胜肽丸粒2次。於真空下乾燥胜肽丸粒且接著溶解於水/乙腈中然後凍乾。

藉由逆相HPLC使用製備型Waters Delta-PakTM C-4濾筒(40×200mm，15μm，300Å)及使用用作洗脫劑之(A)含在水中之0.1% TFA及(B)含在乙腈中之0.1% TFA來純化粗胜肽(130mg，含於3ml DMSO中)。使用以下洗脫劑B梯度：在5min內，30%B至30%B，在20min 內，30%B至50%B，至80%B，流速80mL/min，波長214nm。產率20%，純度>90%。

最終胜肽係於Acquity UPLC Waters層析儀，BEH300 C4 Acquity Waters 2.1×100mm,1.7μm上於45℃下使用作為溶劑之H₂O、0.1% TFA(A)及CH₃CN、0.1% TFA(B)及以下梯度：在1min內，35%至35%，在4min內，35%B至65%B，流速0.4mL/min表徵。藉由電噴霧質譜法於Acquity SQ檢測器上表徵胜肽(Mw實測值：Da 3807.9；Mw預期值：Da 3808.29)。

實例5

用於合成共此促效劑胜肽5：His¹-D-Ser²-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Lys¹⁰(γGlu-γGlu-C₁₆)-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ala-Arg-Ala-Ala-Gln-Asp-Phe²²-Val²³-Gln-Trp-Leu-Leu-Asp-Thr-CONH₂(SEQ ID NO：10)之程序如下。

藉由標準固相胜肽合成法(SPPS)使用Fmoc/t-Bu化學品來合成胜肽。於Rink-amide PS樹脂(150μmol，負載量0.47mmol/g)在APEX396胜肽合成儀上進行組合。

將所有胺基酸以0.5M濃度溶於0.5M HOBt(羥基苯并三唑)含在DMF中之溶液。用過量5倍的活化胺基酸於無胺基樹脂上進行45min的醯化反應。用等莫耳量之HATU(六氟磷酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓)及2倍莫耳過量的含在NMP中之DIEA(二異丙基乙胺)溶液2M活化該等胺基酸。

於His¹、D-Ser²、Phe²²、Val²³上進行雙重醯化反應。在固相上進行胜肽組合中，側鏈保護基為：對於Asp、Ser、D-Ser、Thr及Tyr，第三丁基；對於Gln及His，三苯基甲基；對於Lys、Trp，第三丁氧基羰基；及對於Arg，2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺醯基。藉由正交Alloc(烯丙基氧基羰基)保護基保護在位置10之Lys。

N端殘基經醯化為Boc-His(Trt)-OH。在固相上進行胜肽組合結束時，自Lys¹⁰移去Alloc保護基及藉由人工偶聯Fmoc-Glu-OtBu基團進行側鏈衍生化及用DIPC及HOAt活化棕櫚酸。於室溫用88% TFA、5%苯酚、2%三異丙基矽烷及5%水處理無水胜肽-樹脂2h以自樹脂脫去保護基並裂解。過濾溶液以移去樹脂及在冷甲基第三丁基醚(對於50mL甲基第三丁基醚，約4mL胜肽溶液)中沉澱粗胜肽溶液。在冷甲基第三丁基醚中再懸浮/洗滌/離心胜肽丸粒2次。於真空下乾燥胜肽丸粒且接著溶解於水/乙腈中然後凍乾。

藉由逆相HPLC使用製備型Waters Delta-PakTM C-4濾筒(40×200mm，15μm，300Å)及使用用作洗脫劑之(A)含在水中之0.1% TFA及(B)含在乙腈中之0.1% TFA來純化粗胜肽(130mg，含於3ml DMSO中)。使用以下洗脫劑B梯度：在5min內，35%B至35%B，在20min內，35%B至55%B，至80%B，流速80mL/min，波長214nm。產率30%，純度95%。

最終胜肽係於Acquity UPLC Waters層析儀，BEH300 C4 Acquity Waters 2.1×100mm,1.7μm上於45℃下使用H2O、0.1% TFA(A)及CH3CN、0.1% TFA(B)作為溶劑及藉由電噴霧質譜法於Acquity SQ檢測器上表徵。(Mw實測值：3824.4Da；Mw預期值：3825.24Da)。

實例6

比較共促效劑胜肽6：His¹-D-Ser²-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Lys¹⁰(γGlu-γGlu-C₁₆)-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Arg-Ala-Ala-Gln-Asp-Phe²²-Val²³-Gln-Trp-Leu-Leu-Asp-Thr-CONH₂(SEQ ID NO：11)具有如美國公開專利案第20120288511號中之SEQ ID NO：66或美國公開專利案第20140221283號中之SEQ ID NO：19之相同胺基酸序列，不過，在SEQ ID NO：66及SEQ ID NO：19中，Lys¹⁰係共軛至γGlu-C₁₆。美國公開申請案號20120288511及20140221283係以其全文方式併入本文中及共促效劑胜肽6係基本上如本文中所述合成。

實例7

用於合成共此促效劑胜肽7：Ac-His¹-Ala²-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Lys¹⁰(γGlu-γGlu-C₁₆)-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp¹⁵-Glu¹⁶-Arg-Ala-Ala-Gln-Asp-Phe²²-Val²³-Gln-Trp²⁵-Leu-Leu-Asp-Thr-CONH₂(SEQ ID NO：12)之程序如下。

如前面針對共促效劑胜肽1所報告於Rink-amide PEG-AM樹脂(Chemimpex,0.47mmol/g)上合成胜肽。在固相上進行胜肽組合結束時用乙酸酐醯化N端殘基。

藉由逆相HPLC使用製備型Waters Delta-PakTM C-4濾筒(40×200mm，15μm，300Å)及使用用作洗脫劑之(A)含在水中之0.1% TFA及(B)含在乙腈中之0.1% TFA來純化粗胜肽(130mg，含於3ml DMSO中)。使用以下洗脫劑B梯度：在5min內，25%B至25%B，在20min內，25%B至55%B，至80%B，流速80mL/min，波長214nm。產率27%，純度>90%。

最終胜肽係於Acquity UPLC Waters層析儀，具有BEH300 C4 Acquity Waters 2.1×100mm,1.7μm上於45℃下使用作為溶劑之H₂O、0.1% TFA(A)及CH₃CN、0.1% TFA(B)及以下梯度：在1min內，30%至30%，在4min內，30% B至70% B，流速0.4mL/min表徵。藉由電噴霧質譜法於Acquity SQ檢測器上表徵胜肽(Mw實測值：3909.31Da；Mw預期值：3907.8Da)。

實例8

用於合成共此促效劑胜肽8：His¹-D-Ser²-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Lys¹⁰(γGlu-γGlu-C₁₆)-Ser-Lys-Tyr-Leu-Glu¹⁵-Ala¹⁶-Arg-Ala-Ala-Gln-Asp-Phe²²-Val²³-Gln-Trp²⁵-Leu-Leu-Asp-Thr-CONH₂(SEQ ID NO：13)之程序如下。

藉由標準固相胜肽合成法(SPPS)使用Fmoc/t-Bu化學品來合成胜肽。於Rink-amide PEG-AM樹脂(Chemimpex,0.47mmol/g)或Rink-amide PEG-PS樹脂，Champion(Biosearch Technologies,0.28mmol/g)在Overture胜肽合成儀上進行組裝。使用HATU/DIPEA作為活化劑及45分鐘反應時間來進行醯化。於所有序列上進行雙重醯化反應。藉由正交Alloc(烯丙基氧基羰基)保護基保護在位置10之Lys。N端殘基經保護為Boc。在固相上進行胜肽組裝結束時，自Lys¹⁰移去Alloc保護基及藉由人工偶聯Fmoc-Glu-OtBu基團進行側鏈衍生化及用DIPC及HOAt活化棕櫚酸。於室溫用88% TFA、5%苯酚、2%三異丙基矽烷及5%水處理無水胜肽-樹脂2h以自樹脂脫去保護基並裂解。過濾溶液以移去樹脂及於冷甲基第三丁基醚(對於50mL甲基第三丁基醚，約4mL胜肽溶液)中沉澱粗胜肽溶液。在冷甲基第三丁基醚中再懸浮/洗滌/離心胜肽丸粒2次。於真空下乾燥胜肽丸粒且接著溶解於水/乙腈中然後凍乾。

藉由逆相HPLC使用製備型Waters Delta-PakTM C-4濾筒(40×200mm，15μm，300Å)及使用用作洗脫劑之(A)含在水中之0.1% TFA及(B)含在乙腈中之0.1% TFA來純化粗胜肽(130mg，含於3ml DMSO中)。使用以下洗脫劑B梯度：在5min內，35%B至35%B，在20min內，35%B至55%B，至80%B，流速80mL/min，波長214nm，產率20%，純度>90%。最終胜肽係於Acquity UPLC Waters層析儀，具有BEH300 C4 Acquity Waters 2.1×100mm,1.7μm上於45℃下使用H₂O、0.1% TFA(A)及CH3CN、0.1% TFA(B)作為溶劑來表徵。藉由電噴霧質譜法於Acquity SQ檢測器上表徵胜肽(Mw實測值：3839.10Da；Mw預期值：3839.26Da)。

實例9

用於合成共此促效劑胜肽9：His¹-D-Ser²-Val-Gly-Thr-pFF⁶-Thr- Ser-Asp-Lys¹⁰(γGlu-γGlu-C₁₆)-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp¹⁵-Glu¹⁶-Arg-Ala-Ala-Gln-Asp-Phe²²-Val²³-Gln-Trp²⁵-Leu-Leu-Asp-Thr-CONH₂(SEQ ID NO：14)之程序如下。

如前面針對共促效劑胜肽4所報告合成該胜肽。於His¹、D-Ser²、Val³、Gly⁴、Thr⁵、Thr⁷、Phe²²、Val²³上進行雙重醯化反應。藉由人工偶聯組合Fmoc-對氟苯丙胺酸-COOH(Fmoc-pFF-OH)，用DIPC及HOAt活化。

藉由逆相HPLC使用製備型Waters Delta-PakTM C-4濾筒(40×200mm，15μm，300Å)及使用用作洗脫劑之(A)含在水中之0.1% TFA及(B)含在乙腈中之0.1% TFA來純化粗胜肽(130mg，含於3ml DMSO中)。使用以下洗脫劑B梯度：在5min內，30%B至30%B，在20min內，30%B至50%B，至80%B，流速80mL/min，波長214nm。產率為10%，及純度大於90%。最終胜肽係於Acquity UPLC Waters層析儀，BEH300 C4 Acquity Waters 2.1×100mm,1.7μm上於45℃下使用H₂O、0.1% TFA(A)及CH₃CN、0.1% TFA(B)作為溶劑來表徵。藉由電噴霧質譜法於Acquity SQ檢測器上表徵胜肽(Mw實測值：3900.80Da；Mw預期值：3901.26Da)。

實例10

用於合成共此促效劑胜肽10：His¹-D-Ser²-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Lys¹⁰(γGlu-γGlu-C₁₆)-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp¹⁵-Glu¹⁶-Arg-Ala-Ala-Gln-Asp-Phe²²-Val²³-Gln-Trp²⁵-Leu-Met₂(O)-Asp-Thr-CONH₂(SEQ ID NO：15)之程序如下。

如前面針對共促效劑胜肽4所報告合成該胜肽。於His¹、D-Ser²、Gln³、Gly⁴、Thr⁵、Phe⁶、Thr⁷、Phe²²、Val²³上進行雙重醯化反應。藉由人工偶聯組合Fmoc-甲硫胺酸碸-COOH，用DIPC及HOAt活化。藉由逆相HPLC使用製備型Waters Delta-PakTM C-4濾筒(40×200mm, 15μm,300Å)及使用用作洗脫劑之(A)含在水中之0.1% TFA及(B)含在乙腈中之0.1% TFA來純化粗胜肽(130mg，含於3ml DMSO中)。使用以下洗脫劑B梯度：：在5min內，30%B至30%B，在20min內，30%B至50%B，至80%B，流速80mL/min，波長214nm。產率為15%，及純度為>90%純度。最終胜肽係於Acquity UPLC Waters層析儀，BEH300 C4 Acquity Waters 2.1×100mm,1.7μm上於45℃下使用H₂O、0.1% TFA(A)及CH₃CN、0.1% TFA(B)作為溶劑來表徵。藉由電噴霧質譜法於Acquity SQ檢測器上表徵胜肽(Mw實測值：3932.70Da；Mw預期值：3933.31Da)。

實例11

用於合成共此促效劑胜肽11：His¹-D-Ser²-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Lys¹⁰(γGlu-γGlu-C₁₆)-Ser-Leu-Tyr-Leu-Asp-Glu¹⁶-Arg-Ala¹⁸-Ala-Gln-Asp-Phe²²-Val²³-Gln-Trp²⁵-Leu-Leu-Asp-Thr-NH₂(SEQ ID NO：16)之程序如下。

合成以在固體擔體上組裝線性胜肽序列開始，接著在位置10用γ麩胺酸-γ麩胺酸-棕櫚酸之三基團序列支化離胺酸。接著在TFA溶液中裂解完成的肽基樹脂。於RP-HPLC純化後，自0.15mmol樹脂提供15mg標題化合物。

於CEM Liberty胜肽合成儀(CEM Corp.Matthews,NC)上使用標準固相Fmoc/t-Bu化學品。第一胺基酸蘇胺酸呈Fmoc-Thr(tBu)負載於MBHA聚苯乙烯樹脂(負載量為0.21mmol/g，自Midwest Biotech.IN,批號S16130獲得)上。在位置6及7施加偽脯胺酸二肽Fmoc-PheThr(φMe,φMe)。藉由ivDde基[1-(4,4-二甲基-2,6-二側氧基亞環己-1-基)異戊醯基]保護位置10離胺酸側鏈。其他標準側鏈保護基如下：對於麩醯胺酸，三苯基甲基；對於色胺酸及組胺酸，三丁氧基羰基；對於麩胺酸、γ-麩胺酸、天冬胺酸、絲胺酸及D-絲胺酸、蘇胺酸及酪胺酸，第三丁基；對於精胺酸，pbf基(2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺醯基)。用5至6當量胺基酸於無胺基樹脂上進行醯化。在所有位置中施用單偶聯，但不包括位置Arg¹⁷、Ala¹⁹及Thr²⁹，於該等之處施用雙重偶聯。用等莫耳量的HATU[六氟磷酸2-(1H-9-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基鋁]於2等莫耳量的DIEA(N,N-二異丙基乙胺)之存在下活化Fmoc-胺基酸。於含在DMF中之20%哌啶中使Fmoc脫去保護基。在5%肼DMF溶液中人工達成於離胺酸10上移去ivDde，每次1分鐘共2次。在10等莫耳量的DIPC(N,N'-二異丙基碳化二亞胺)及HOAt(1-羥基-7-氮雜苯并三唑)之存在下將棕櫚酸人工結合至該序列45min。

藉由TFA溶液(88% TFA/5%苯酚/2%三異丙基矽烷/5%水)裂解完成的樹脂3小時。在裂解期間，過濾樹脂及每小時補充TFA溶液。接著將TFA溶液合併及在旋轉蒸發器上將該等TFA溶液濃縮。為沉澱胜肽，將50ml冰冷乙醚添加至殘餘TFA。藉由離心粒化所沉澱的胜肽，接著用冰冷乙醚洗滌該等丸粒兩次以移除有機清除劑。乾燥最終丸粒，再懸浮於含在水中之30%乙酸中，然後冷凍乾燥。將經乾燥之粗胜肽再溶解於水/乙腈中。接著，第二次冷凍乾燥該粗胜肽以移除因色胺酸殘基不完全脫羧而產生之雜質。

藉由逆相HPLC使用具有水/乙腈梯度之Phenomenex Jupiter C4濾筒(250×21.2mm，10μ，300A，目錄號00G-4168-P0-AX)在0.1%三氟乙酸之存在下純化粗胜肽。藉由LCMS表徵經純化之胜肽。對經純化胜肽測得之單同位素質量為3868.98Da(序列預測質量為3868.3Da)。

基於以下獲得LC-MS：UPLC-MS系統(Waters ACQUITY)；濾筒：Waters BEH 130 C18 Acquity 1.0×50mm,1.7um；梯度：在1.6min內，10% B至99% B線性梯度，在0.4min內返回至1% B。A/B緩衝液系統(A=0.1% TFA，含於水中；B=0.1% TFA，含於乙腈中)；流速：0.3ml/min；溫度：50℃；UV波長：215nm；注射體積：0.5μl；質量掃描：500至1500m/z，0.2s；電壓：毛細管(Kv)-3.25；濃縮(V)-27；萃取(V)-3；RF透鏡(V)-0.3；氣體流速(L/hr)：去溶劑化-597；錐形區-30；溫度(℃)：源溫度-100；去溶劑化溫度-350。

實例12

用於合成共此促效劑胜肽12：His¹-D-Ser²-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-pAF¹⁰(γGlu-γGlu-C₁₆)-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp¹⁵-Ala¹⁶-Arg-Ala-Ala-Gln-Asp-Phe²²-Val²³-Gln-Trp²⁵-Leu-Leu-Asp-Thr-CONH₂(SEQ ID NO：17)(其中pAF為對胺基甲基苯丙胺酸)之程序如下。

如前面針對共促效劑胜肽4所報告合成胜肽。於His¹、D-Ser²、Val³、Gly⁴、Thr⁵、Phe⁶、Thr⁷、Phe²²、Val²³上進行雙重醯化反應。在位置10中，藉由人工偶聯組合經Dde正交保護之Fmoc-對胺基甲基苯丙胺酸-COOH(參見實例15)，用DIPC及HOAt活化。在組裝結束時，藉由2%肼含在DMF中之溶液處理移去Dde保護基及用連接子及脂肪酸藉由人工偶聯兩個Fmoc-Glu-OtBu基團達成側鏈衍生化且用DIPC及HOAt活化棕櫚酸。

藉由逆相HPLC使用製備型Waters Delta-PakTM C-4濾筒(40×200mm,15μm,300Å)及使用用作洗脫劑之(A)含在水中之0.1% TFA及(B)含在乙腈中之0.1% TFA來純化粗胜肽(130mg，含於3ml DMSO中)。使用以下洗脫劑B梯度：在5min內，30%B至30%B，在20min內，30%B至55%B，至80%B，流速80mL/min，波長214nm。產率10%，純度>90%。

最終胜肽係於Acquity UPLC Waters層析儀，具有BEH300 C4 Acquity Waters 2.1×100mm,1.7μm上於45℃下使用作為溶劑之H₂O、0.1% TFA(A)及CH₃CN、0.1% TFA(B)及以下梯度：在4min內，35% B至55% B，流速0.4mL/min表徵。藉由電噴霧質譜法於Acquity SQ檢測器上表徵胜肽(Mw實測值：3873.10Da；Mw預期值：3873.28Da)

實例13

用於合成共此促效劑胜肽13：His¹-胺基-1-環丁烷²-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Lys¹⁰(γGlu-γGlu-C₁₆)-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp¹⁵-Glu¹⁶-Arg-Ala-Ala-Gln-Asp-Phe²²-Val²³-Gln-Trp²⁵-Leu-Leu-Asp-Thr-CONH₂(SEQ ID NO：18)之程序如下。

如前面針對SEQ ID NO：9/實例4所報告合成該胜肽。於His¹、D-Ser²、Gln³、Gly⁴、Thr⁵、Phe⁶、Thr⁷、Phe²²、Val²³上進行雙重醯化反應。藉由人工偶聯來組合Fmoc-胺基-1-環丁羧酸，用DIPC及HOAt活化。

藉由逆相HPLC使用製備型Waters Delta-PakTM C-4濾筒(40×200mm,15μm,300Å)及使用用作洗脫劑之(A)含在水中之0.1% TFA及(B)含在乙腈中之0.1% TFA來純化粗胜肽(130mg，含於3ml DMSO中)。使用以下洗脫劑B梯度：在5min內，35%B至35%B，在20min內，35%B至50%B，至80%B，流速80mL/min，波長214nm。最終胜肽係於Acquity UPLC Waters層析儀，BEH300 C4 Acquity Waters 2.1×100mm,1.7μm上於45℃下使用H₂O、0.1% TFA(A)及CH₃CN、0.1% TFA(B)作為溶劑來表徵。產率為18%，及純度>90%。藉由電噴霧質譜法於Acquity SQ檢測器上表徵胜肽(Mw實測值：3893.40Da；Mw預期值：3893.31Da)。

實例14

用於合成共此促效劑胜肽14：His¹-D-Ser-Gln-Gly-Thr-tβP-Thr-Ser-Asp-Lys¹⁰(γGlu-γGlu-C₁₆)-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp¹⁵-Glu¹⁶-Arg-Ala-Ala-Gln-Asp-Phe²²-Val²³-Gln-Trp²⁵-Leu-Leu-Asp-Thr-CONH₂(SEQ ID NO：19)，其中tβP=蘇-β-苯基絲胺酸)之程序如下。

如前面針對共促效劑胜肽4所報告合成胜肽。於His¹、D-Ser²、Gln³、Gly⁴、Thr⁵、Phe⁶、Thr⁷、Phe²²、Val²³上進行雙重醯化反應。藉由人工偶聯組合tβP，用DIPC及HOAt活化。

藉由逆相HPLC使用製備型Waters Delta-PakTM C-4濾筒(40×200mm,15μm,300Å)及使用用作洗脫劑之(A)含在水中之0.1% TFA及(B)含在乙腈中之0.1% TFA來純化粗胜肽(130mg，含於3ml DMSO中)，其中，由於合成中使用的外消旋tβP所致，存在兩種異構體。使用以下洗脫劑B梯度：在5min內，35%B至35%B，在20min內，35%B至45%B，至80%B，流速80mL/min，波長214nm。在製備型操作中以不同洗脫次數分離此兩異構體。在Acquity UPLC Waters層析儀，具有BEH300 C18 Acquity Waters 2.1×100mm,1.7μm上於45℃下使用作為溶劑之H₂O、0.1% TFA(A)及CH₃CN、0.1% TFA(B)及以下梯度：在20min內，20% B至60% B，流速0.4mL/min上判別具有更短滯留時間t=12.45之最具親水性之異構體為編號L-005472682。亦藉由電噴霧質譜法於Acquity SQ檢測器上表徵產物，產率12%，純度>90%(Mw實測值：3899.3Da；Mw預期值：3899.27Da)。

實例15

Fmoc-4-(Dde-胺基甲基)-苯丙胺酸之合成如下。

在DCM/TFA 2/1中攪拌Fmoc-4-(Boc-胺基甲基)-苯丙胺酸1小時。於減壓下移除溶劑及用乙醚處理殘餘物以獲得白色固體。將所獲得的粗料溶於EtOH(19mM)中，及將DIPEA(5eq)及雙甲酮(1.1eq)添加至反應混合物。3小時後，於60℃下，用TFA酸化該溶液至PH 4。於減壓下移除溶劑及用AcOEt處理殘餘物且用HCl 1N洗滌。用鹽水洗滌有機相及於Na₂SO₄上乾燥。於減壓下移除溶劑及獲得呈黃色固體之最終產物。

最終化合物係於Acquity UPLC Waters層析儀，具有BEH300 C18 Acquity Waters 2.1×100mm,1.7μm上於45℃下使用作為溶劑之H₂O、0.1% TFA(A)及CH₃CN、0.1% TFA(B)及以下梯度：在1min內，10% B至10% B，在4min內，10% B至90% B，流速0.4mL/min表徵。藉由電噴霧質譜法於Acquity SQ檢測器上表徵經保護之胺基酸(Mw實測值：581.5Da；Mw預期值：580.67Da)。

實例16

cAMP方案如下。

將胜肽溶解於100% DMSO中及連續稀釋以產生出11點滴定。接著將胜肽溶液轉移至384孔分析板中(150nL/孔)。將表現人類GLP-1R或人類GCGR之分析備用冷凍細胞懸浮於由DMEM/F12培養基(GIBCO)、10% FBS(GIBCO)、1×P/S(GIBCO)、800μg/mL遺傳黴素(Geneticin)(GIBCO)及300μg/mL潮黴素(Hygromycin)(Invitrogen)組成之生長培養基中。接著在由PBS(GIBCO)、7.5% BSA(Perkin Elmer)、100μM RO 20-1724(Sigma)及20%人類血清(MP Biomedical)組成之分析緩衝液中稀釋該等細胞。隨後將細胞懸浮液(15μL)添加至裝納胜肽溶液之分析板(對於人類GCGR，30,000個細胞/孔；對於GLP1R，20,000個細胞/孔)。於室溫在黑暗中培養該等細胞1小時。使用HitHunterTM cAMPXS套組(DiscoverX)測定cAMP之產生。接著將ED緩衝液(20μL)添加至各孔及於室溫在黑暗中培養該等板1小時。隨後，將EA緩衝液(20μL)添加至各孔，及於室溫在黑暗中培養該等板1至18小時。使用EnVision Multilabel板讀數器(Perkin Elmer)測量發光。使用ADA資料分析軟體計算得EC₅₀值。結果顯示於表2中。

實例17

在抗肥胖化合物之藥效之研究中，一直以來使用飲食誘發性肥胖(DIO)小鼠作為人類的替代。在肥胖化合物之研究中自此等小鼠獲得之結果可轉化為人類(參見，例如，Nilsson等人.Acta Pharmacologia Sinica 33：173-181(2012)，其以其全文引用的方式併入本文中)。因此，對於測試旨在治療肥胖之化合物之藥效，DIO小鼠為人類的有用替代。

為實例18、19、20及21中之研究，將飲食誘發性肥胖(DIO)小鼠(品系C57B16/NTac；高脂肪飲食20週，約47g)分成每組八隻小鼠之組及在投與胜肽之前匹配各組之初始平均體重、食物攝入及基礎葡萄糖水平。各組小鼠每天皮下注射某一劑量之共促效劑胜肽或媒劑對照持續7至10天。此研究中測試的胜肽為劑量自3nmol/kg至25nmol/kg改變之共促效劑胜肽1、2、3、4、5及6(分別為SEQ ID NO：6、7、8、9、10及11)。處理期間週期性地測量體重、食物攝入及基礎葡萄糖水平。所有胜肽具有相比擬的藥物動力學性質及類似血漿蛋白質結合。

實例18

在維持以高脂肪飲食達20週及具有約47公克之初始體重之飲食誘發性肥胖(DIO)小鼠(品系C57B16/NTac)中測試本發明之某些胜肽之活體內效應。小鼠每天投與媒劑對照或某一劑量之胜肽持續九天。此研究中之胜肽包括以9nmol/kg之劑量投與之SEQ ID NO：6、7、8、9、10及11之胜肽。SEQ ID NO：9之胜肽係以9及25nmol/kg之劑量投與。研究中除第3天外每天測量累積體重改變(公克)。結果顯示於圖1中及表示為平均值±SEM。此研究中測試的各胜肽證實研究過程中相較於小鼠媒劑處理組之顯著(p<0.05相對媒劑，2因子ANOVA)體重減輕。在研究的第9天，投與9nmol/kg之SEQ ID NO：7及9之胜肽之小鼠展現約3公克之體重減輕，而25nmol/kg劑量之SEQ ID NO：9之胜肽導致10.5公克之體重減輕。投與9nmol/kg之SEQ ID NO：8及6之胜肽之小鼠分別展現8及10.5公克之體重減輕。投與9nmol/kg之SEQ ID NO：10及11之胜肽之小鼠分別展現約13公克之體重減輕。

實例19

第二研究中，在DIO小鼠(品系C57B16/NTac)中，各胜肽之劑量不同，SEQ ID NO：6至11之胜肽各以劑量9nmol/kg投與。此外，SEQ ID NO：8之胜肽係以15nmol/kg投與，而SEQ ID NO：10及11之胜肽係以3nmol/kg投與。每天測量體重持續八天及體重改變表示為相對媒劑之百分比(圖2)。與投與9nmol/kg劑量之SEQ ID NO：6或8之胜肽之小鼠(分別展現約20%或17%體重減輕)相比，投與9nmol/kg劑量之SEQ ID NO：7或9之胜肽之小鼠展現約5%體重減輕。投與15nmol/kg劑量之SEQ ID NO：8之胜肽之小鼠展現約25%之體重減輕。投與3nmol/kg劑量之SEQ ID NO：10之胜肽之小鼠展現約17%之體重減輕，而投與3nmol/kg劑量之SEQ ID NO：11之胜肽之小鼠未展現體重減輕療效。

實例20

如圖3中所顯示，除了SEQ ID NO：7之胜肽外投與9nmol/kg之SEQ ID NO：6至11之胜肽之DIO小鼠(品系C57B16/NTac)在給藥8天後展現累積食物攝入顯著減少(*p<0.05，**p<0.01***p<0.001相對媒劑，1因子ANOVA，鄧恩(Dunn)多重比較法)。投與3nmol/kg之SEQ ID NO：10之胜肽之小鼠亦展現食物攝入顯著受到抑制，而投與3nmol/kg之SEQ ID NO：11之胜肽之小鼠未展現食物攝入改變。

實例21

除了累積體重改變外，整個研究中週期性地測量DIO小鼠(品系C57B16/NTac)之周圍葡萄糖水平。如圖4中所顯示，投與25nmol/kg劑量之SEQ ID NO：9之胜肽之小鼠證實相較於經媒劑處理之對照小鼠到第二天給藥周圍葡萄糖顯著減少(-75 mg/dL，***p<0.001相對媒劑，2因子ANOVA，鄧恩多重比較法)。投與9nmol/kg之SEQ ID NO：10及11之胜肽之小鼠證實周圍葡萄糖類似減少。投與9nmol/kg之SEQ ID NO：6之胜肽之小鼠證實到第7天給藥周圍葡萄糖顯著減少(-60mg/dL，*p<0.05相對媒劑)。投與9nmol/kg之SEQ ID NO：8之胜肽之小鼠證實到第9天周圍葡萄糖顯著減少(-72mg/dL，**p<0.01相對媒劑，2因子ANOVA)。投與9nmol/kg之SEQ ID NO：7或9之胜肽之小鼠未顯示給藥9天後周圍葡萄糖顯著改變。

雖然本文中參考所述實施例來描述本發明，但應明瞭本發明不限於此。具有一般技術且受到本文中教示者將瞭解本發明範疇中之其他修改及實施例。因此，本發明僅受限於本文中隨附之申請專利範圍。

<110> 美商默沙東藥廠伊莉莎貝塔比安奇保羅 E 凱林頓鄧巧臨瑞維納格恩費德里卡奧微托安納丹帕拉尼安東內羅佩西湯馬士喬瑟夫圖克成威吳

<120> 升糖素及GLP-1受體之共促效劑

<130> 23848

<150> 62/068,157

<151> 2014-10-24

<150> 62/208,869

<151> 2015-08-24

<160> 35

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 29

<212> PRT

<213> 現代人

<400> 1

<210> 2

<211> 30

<212> PRT

<213> 現代人

<400> 2

<210> 3

<211> 37

<212> PRT

<213> 現代人

<400> 3

<210> 4

<211> 39

<212> PRT

<213> 鈍尾蜥蜴

<400> 4

<210> 5

<211> 33

<212> PRT

<213> 現代人

<400> 5

<210> 6

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽1

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> C端醯胺

<400> 6

<210> 7

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽2

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> C端醯胺

<400> 7

<210> 8

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽3

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> C端醯胺

<400> 8

<210> 9

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽4

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=α-胺基異丁酸(Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(16)

<223> Xaa可為任何天然胺基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (27)..(27)

<223> Xaa=正白胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> C端醯胺

<400> 9

<210> 10

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽5

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> C端醯胺

<400> 10

<210> 11

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽6

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> C端醯胺

<400> 11

<210> 12

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽7

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> N端乙醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> C端醯胺

<400> 12

<210> 13

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽8

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> C端醯胺

<400> 13

<210> 14

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽9

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa=對氟苯丙胺酸(pFF)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> C端醯胺

<400> 14

<210> 15

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽10

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (27)..(27)

<223> Xaa=甲硫胺酸碸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> C端醯胺

<400> 15

<210> 16

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽11

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> C端醯胺

<400> 16

<210> 17

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽12

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之對胺基甲基苯丙胺酸(pAF)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> C端醯胺

<400> 17

<210> 18

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽13

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=1-胺基-1-環丁羧酸酯

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> C端醯胺

<400> 18

<210> 19

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽14

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa=蘇-β-苯丙胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> C端醯胺

<400> 19

<210> 20

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽15

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> 可選之N端乙醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸、L-丙胺酸、aib或1-胺基環丁羧酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa=L-苯丙胺酸、對氟苯丙胺酸或蘇-β-苯丙胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸或經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16 之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> Xaa=經γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸、經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸或經γ-Glue γ-Glu間隔基共軛至C16之pAF

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (12)..(12)

<223> Xaa=L-離胺酸或L-白胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (15)..(15)

<223> Xaa=L-麩胺酸、L-白胺酸或L-天冬胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(16)

<223> Xaa=aib、L-丙胺酸、L-麩胺酸或L-纈胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (18)..(18)

<223> Xaa=L-丙胺酸或L-精胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (27)..(27)

<223> Xaa=L-白胺酸、甲硫胺酸碸或L-正白胺酸(Nle)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> 可選之C端醯胺或酯

<400> 20

<210> 21

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 比較胜肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> C端醯胺化

<400> 21

<210> 22

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽16

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> 可選之C端醯胺或酯

<400> 22

<210> 23

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽17

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> 可選之C端醯胺或酯

<400> 23

<210> 24

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽18

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> 可選之C端醯胺或酯

<400> 24

<210> 25

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽19

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=α-胺基異丁酸(aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(16)

<223> Xaa=α-胺基異丁酸(aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (27)..(27)

<223> Xaa=L-正白胺酸(Nle)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> 可選之C端醯胺或酯

<400> 25

<210> 26

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽20

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> 可選之C端醯胺或酯

<400> 26

<210> 27

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽21

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> 可選之C端醯胺或酯

<400> 27

<210> 28

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽22

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> N端乙醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> 可選之C端醯胺或酯

<400> 28

<210> 29

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽23

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> 可選之C端醯胺或酯

<400> 29

<210> 30

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽24

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa=對氟苯丙胺酸(pFF)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> 可選之C端醯胺或酯

<400> 30

<210> 31

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽25

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (27)..(27)

<223> Xaa=甲硫胺酸碸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> 可選之C端醯胺或酯

<400> 31

<210> 32

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽26

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> 可選之C端醯胺或酯

<400> 32

<210> 33

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽27

<220>

<221> MISC_FEATU

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATUR

<222> (10)..(10)

<223> Xaa=經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之對胺基甲基苯丙胺酸(9pAF)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> 可選之C端醯胺或酯

<400> 33

<210> 34

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽28

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=1-胺基-1-環丁羧酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> 可選之C端醯胺或酯

<400> 34

<210> 35

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共促效劑胜肽29

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=D-絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa=蘇-β-苯基絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經γ-Glu γ-Glu間隔基共軛至C16之離胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> 可選之C端醯胺或酯

<400> 35

Claims

一種胜肽，其包含以下胺基酸序列HX₂QGTX₆TSDX₁₀SX₁₂YLX₁₅X₁₆RX₁₈AQDFVQWLX₂₇DT(SEQ ID NO：20)其中X₂為D-絲胺酸、L-丙胺酸、α-胺基異丁酸(Aib)或1-胺基環丁羧酸；X₆為L-苯丙胺酸、對氟苯丙胺酸或蘇-β-苯基絲胺酸；X₁₀為L-離胺酸或對胺基甲基苯丙胺酸；X₁₂為L-離胺酸或L-白胺酸；X₁₅為L-麩胺酸、L-白胺酸或L-天冬胺酸X₁₆為L-丙胺酸、Aib、L-麩胺酸或L-纈胺酸；X₁₈為L-丙胺酸或L-精胺酸；X₂₇為L-白胺酸、甲硫胺酸碸或L-正白胺酸；在位置10之胺基酸係藉由γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基；及，該胜肽視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基；其限制條件為該胜肽不具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。
如請求項1之胜肽，其中該胜肽具有SEQ ID NO：7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18或19之胺基酸序列。
如請求項1之胜肽，其中該胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑，且在升糖素受體之EC₅₀與在GLP-1受體之EC₅₀之比例具有約0.88至約1.25、約0.90至約1.25、約0.90至約1.10、約0.90至約1.00或約1.0±0.12。
如請求項1之胜肽，其中該胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑，且在升糖素受體之EC₅₀與在GLP-1受體之EC₅₀之比例具有0.88、0.89、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、 0.97、0.98、0.99、1.00、1.01、1.02、1.03、1.04、1.05、1.06、1.07、1.08、1.09或1.10。
一種包含天然人類升糖素之胺基酸序列的胜肽，其具有示於SEQ ID NO：1之胺基酸序列但其中在位置2之L-絲胺酸係經D-絲胺酸置換；在位置10之酪胺酸係經以下置換：(i)經γ-麩胺酸間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽間隔基共軛至棕櫚醯基之L-離胺酸或(ii)經γ-麩胺酸(γE)間隔基或γ-麩胺酸-γ-麩胺酸二肽(γEγE)間隔基共軛至棕櫚醯基之對胺基甲基苯丙胺酸；且至高六次其他胺基酸之取代；其中該胜肽為升糖素受體及GLP-1受體之共促效劑且在升糖素受體之EC₅₀與在GLP-1受體之EC₅₀之比例具有約0.88至約1.25、約0.90至約1.25、約0.90至約1.10、約0.90至約1.00或約1.0±0.12，且其中該胜肽視需要包含若存在則結合至該胜肽之C端羧基之保護基。
如請求項5之胜肽，其中在位置16之絲胺酸係經L-丙胺酸置換。
如請求項5之胜肽，其中在位置18之精胺酸係經L-丙胺酸置換。
如請求項5之胜肽，其中在位置27之甲硫胺酸係經L-白胺酸置換。
如請求項5之胜肽，其中在位置28之天冬醯胺酸係經L-天冬胺酸置換。
如請求項5之胜肽，其中在位置16之絲胺酸係經L-丙胺酸置換，在位置18之精胺酸係經L-丙胺酸置換，在位置27之甲硫胺酸係經L-白胺酸置換，及在位置28之天冬醯胺酸係經L-天冬胺酸置換。
一種組合物，其包含如請求項1至10中任一項之胜肽及醫藥上可接受之載劑。
一種組合物，其包含如請求項1至10中任一項之胜肽；胰島素或胰島素類似物；及醫藥上可接受之載劑。
如請求項12之組合物，其中該胰島素類似物為地特胰島素(insulin detemir)、甘精胰島素(insulin glargine)、諾和平胰島素(insulin levemir)、榖離胰島素(insulin glulisine)或離脯胰島素(insulin lispro)。
一種如請求項1至10中任一項之胜肽之用途，其用於製造用以治療罹患代謝疾病之患者或個體的藥物。
一種如請求項11之組合物之用途，其用於製造用於治療患者或個體之代謝疾病的藥物。
如請求項15之用途，其中該藥物係併與胰島素或胰島素類似物組合使用。
如請求項16之用途，其中該藥物係在投與胰島素或胰島素類似物之前的時間投與。
如請求項16之用途，其中該胰島素或胰島素類似物係在投與該藥物之前的時間投與。
如請求項16之用途，其中該藥物係在投與胰島素或胰島素類似物之相同時間投與。
如請求項16之用途，其中該胰島素類似物為地特胰島素、甘精胰島素、諾和平胰島素、榖離胰島素或離脯胰島素。
如請求項12之組合物之用途，其用於製造用於治療代謝疾病之藥物。
如請求項14至21中任一項之用途，其中該代謝疾病為糖尿病、非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease；NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(non-alcoholic steatohepatitis；NASH)或肥胖。
如請求項22之用途，其中該糖尿病為I型糖尿病、II型糖尿病或妊娠型糖尿病。