TW201621319A - Ck-mb的測定方法以及ck-mb測定用套組 - Google Patents
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Abstract
本發明的課題在於提供規避CK-BB的影響、特異地測定CK-MB的方法。即,本發明是有關於「一種測定試樣中的CK-MB的方法,其包含下述步驟:使試樣、對於CK-MB的第1抗體、對於與第1抗體所識別的表位不同的CK-MB的第2抗體、識別肌酸激酶的B次單元的胺基酸序列的自N末端起第1~100個胺基酸的區域的抗CK-B抗體反應的步驟(步驟1)、測定由該反應產生的光學變化的步驟(步驟2)、基於步驟2中所得的結果,求出該試樣中的CK-MB的量的步驟(步驟3);及一種其中所使用的套組;以及一種規避CK-MB測定中的CK-BB的影響的方法,其特徵在於藉由該抗CK-B抗體對試樣進行處理」。
Description
本發明是有關於一種肌酸激酶MB型同功酶的測定方法(CK-MB的測定方法)及其中所使用的套組。
肌酸激酶(以下簡稱為「CK」)是骨格肌、心肌、平滑肌、腦等中所含的酶,起到與細胞的能量代謝相關的重要作用。
CK是包含兩個次單元的二聚體的蛋白質,其次單元存在有M型(muscle type,M)與B型(brain type,B)兩種。而且,CK根據次單元的組合而存在有在骨格肌中多的CK-MM、在心肌中多的CK-MB、在腦中多的CK-BB這三種同功酶。其中,CK-MB的心肌特異性高,若產生心肌傷害則CK-MB自心肌細胞中逸出,流出至血中。因此,CK-MB作為心肌病(心肌梗塞)標記而在臨床檢查中成為重要的項目。
CK-MB的定量測定存在有測定「酶活性」的免疫抑制法或測定「蛋白量」的乳膠比濁法、電化學發光免疫測定法等,除此以外,同功酶分析的手法已知有「電泳法」。
其中,免疫抑制法由於使用通用自動分析裝置而進行測
定,因此被通常使用,但若在樣品中包含CK-BB等,則亦測定該些的活性,因此存在對於CK-MB測定的特異性低,無法獲得正確的CK-MB測定值等問題。電化學發光免疫測定法是可並不受到CK-BB的影響地特異地測定CK-MB的方法,但存在需要特別的測定機器、所使用的試劑昂貴等問題。而且,電泳法缺乏迅速性、定量性差等,因此不能利用於定量CK-MB的目的。
另一方面,作為測定蛋白質量的方法的乳膠比濁法是藉由CK-MB使用特異的單株抗體的免疫學的手法,而將CK-MB定量為蛋白量的方法。本方法可使用通用自動分析裝置而測定,與測定酶活性的免疫抑制法相比而言精度高,且CK-MB的特異性優異,是可正確地監測CK-MB的逸出量的方法。
然而,實際上若藉由現有的乳膠比濁法測定共存有CK-BB的樣品的CK-MB值,則存在亦測定了CK-BB(出現偽高值),無法獲得正確的CK-MB的測定值的情況。認為其原因在於:所使用的抗CK-MB抗體的一部分與試樣中的CK-BB鍵結(交叉)。
因此,為了規避該問題,開發了即不鍵結CK-MM亦不鍵結CK-BB的抗CK-MB單株抗體,提出了使用其的乳膠比濁法(專利文獻1)。該方法使第1抗CK-MB抗體、第2抗CK-MB抗體與試樣中的CK-MB反應,測定由抗原抗體反應所產生的凝聚的增加的方法,所述第1抗CK-MB抗體固定化於乳膠粒子上且具有所述特異性,所述第2抗CK-MB抗體可鍵結於與固定化於乳膠粒子上的所述第1抗CK-MB抗體不同的表位、且具有所述特異性。
然而,實際上在藉由該方法而測定CK-MB的情況下,依然存在獲得偽高值的情況。
而且,作為其他利用乳膠比濁法的測定方法,存在有使用固定化有特異地鍵結在CK-MB上的單株抗體的乳膠粒子、固定化有特異地鍵結在CK-BB上的單株抗體的乳膠粒子的方法(專利文獻2)。該方法藉由製備乳膠粒子的粒徑而規避CK-MB的測定中的CK-BB的影響。然而,即使是該方法亦無法充分規避CK-MB的測定中的CK-BB的影響。
[現有技術文獻]
[專利文獻]
[專利文獻1]日本專利第2774875號公報
[專利文獻2]日本專利特開2013-125005號公報
如上所述,現有的利用測定蛋白質量的CK-MB測定法難以規避CK-BB的影響而特異地測定CK-MB。認為其原因大概在於:抗CK-MB抗體的特異性並不充分,不僅僅CK-MB,而且CK-BB亦若干交叉(出現偽高值)。
因此本發明的課題是鑒於如上所述的狀況而成者,提供規避CK-BB的影響,特異地測定CK-MB的方法。
本發明是以解決所述課題為目的而成者,包含以下構
成。
(1)一種試樣中的CK-MB的測定方法,其包含下述步驟:1)使試樣、對於CK-MB的第1抗體、對於與第1抗體所識別的表位不同的CK-MB的第2抗體、識別CK的B次單元的胺基酸序列的自N末端起第1~100個胺基酸的區域的抗CK-B抗體反應的步驟(步驟1)、2)測定由於該反應而產生的光學變化的步驟(步驟2)、3)基於步驟2中所得的結果,求出該試樣中的CK-MB的量的步驟(步驟3)。
(2)一種規避CK-MB測定中的CK-BB的影響的方法,其特徵在於:藉由識別CK的B次單元的胺基酸序列的自N末端起第1~100個胺基酸的區域的抗CK-B抗體而對試樣進行處理。
(3)一種CK-MB測定用套組,其包含:對於CK-MB的第1抗體、對於與第1抗體所識別的表位不同的CK-MB的第2抗體、識別CK的B次單元的胺基酸序列的自N末端起第1~100個胺基酸的區域的抗CK-B抗體。
本發明者等人發現在現有的測定蛋白質量的方法的CK-MB的測定系統共存識別CK的B次單元的特定區域的抗體(本發明的抗CK-B抗體),結果可規避試樣中的CK-BB的影響而高精度且高感度地測定CK-MB,從而完成本發明。
藉由本發明可規避(抑制)CK-MB的測定中的試樣中
所共存的CK-BB對測定值的影響(出現偽高值),可更高精度、高感度地進行CK-MB的測定。而且,藉由本發明的方法,可利用通用自動分析裝置而測定CK-MB蛋白量,因此無需特別的機器。
另外,本發明的抗CK-B抗體可規避CK-MB測定中的CK-BB的影響。因此,本發明提供規避CK-MB測定時的CK-BB的影響的方法。
圖1是在實施例2中,使用MAb to CK-BB(梅里第安生命科學公司(Meridian Life Science,Inc.)製造)作為抗CK-B抗體而所得的電泳圖。
圖2是在實施例2中,使用CKBB單株抗體(羅氏醫療診斷設備股份有限公司(Roche Diagnostics K.K.)製造)作為抗CK-B抗體而所得的電泳圖。
本發明的測定CK-MB的方法是「一種測定試樣中的CK-MB的方法,其包含下述步驟:(1)使試樣、對於CK-MB的第1抗體、對於與第1抗體所識別的表位不同的CK-MB的第2抗體、識別CK的B次單元的胺基酸序列的自N末端起第1~100個胺基酸的區域的抗CK-B抗體反應的步驟(步驟1)、(2)測定由於該反應而產生的光學變化的步驟(步驟2)、
(3)基於步驟2中所得的結果,求出該試樣中的CK-MB的量的步驟(步驟3)」。
亦即,本發明的方法是在測定使用兩種抗CK-MB抗體的CK-MB的方法中,加入本發明的抗CK-B抗體,藉此規避CK-BB的影響,其結果可特異地測定CK-MB的方法。
關於本發明可規避CK-BB的影響的測定原理,本發明者等如下所述地推測。
CK-MB是M次單元與B次單元的異二聚體。CK-BB是B次單元的同二聚體。
在試樣中CK-MB與CK-BB共同存在的情況下,若該試樣與本發明的抗CK-B抗體接觸,則本發明的抗CK-B抗體與該試樣中的CK-MB的B次單元及CK-BB的B次單元鍵結。繼而,CK-BB的B次單元上所鍵結的本發明的抗CK-B抗體抑制第1抗體或第2抗體與CK-BB鍵結。而且,其結果藉由本發明的測定CK-MB的方法,可規避試樣中所存在的CK-BB的影響,特異且高精度地測定CK-MB。
本發明的對於CK-MB的第1抗體(以下有時僅僅略稱為「第1抗體」)可列舉識別CK-MB的M次單元與B次單元之兩者的抗體。
本發明的對於CK-MB的第2抗體(以下有時僅僅略稱為「第2抗體」)可列舉識別CK-MB的M次單元與B次單元之兩者、與第1抗體所識別的表位不同的抗體。
本發明的抗CK-B抗體可列舉識別CK的B次單元的胺基酸序列的自N末端起第1(亦即N末端胺基酸)~100個胺基酸的區域的抗體。亦即,僅如下抗體可達成本發明的效果,所述抗體為識別CK的B次單元的抗B次單元抗體、且識別B次單元的自N末端起第1~100個胺基酸的區域中的特定區域的抗體。
另外,本發明的抗CK-B抗體進一步較佳的是可識別天然(Native)的CK的B次單元的胺基酸序列的自N末端起第1~100個胺基酸的區域的三維結構(立體結構)的抗體。
CK的B次單元的胺基酸序列的自N末端起第1~100個胺基酸的區域的胺基酸序列具體而言是序列號1所表示的胺基酸序列。
另外,CK的B次單元的所有胺基酸序列是公知的(NCBI參考序列(Reference Sequence):NP_001814.2、本說明書的序列號2)。
以下,有時將本發明的第1抗體、本發明的第2抗體、本發明的抗CK-B抗體匯總簡稱為「本發明的抗體」。
本發明的抗體若分別具有所述性質即可,可為市售品亦可為藉由常用方法而適宜製備者,分別可為單株抗體亦可為多株抗體。
在本發明的抗體為單株抗體的情況下,其來源並無特別限定,市售品、或藉由利用細胞融合技術或基因重組技術等的自身公知的方法[歐洲免疫學雜誌(Eur.J immunol),6,511(1976)]
等而產生的具有如上所述的性質的抗體均可使用。
在本發明的抗體為多株抗體的情況下,其來源並無特別限定,例如可列舉源自兔、大鼠、小鼠、綿羊、山羊、馬等的具有所述性質的多株抗體。可使用市售品、或藉由例如「免疫學實驗入門、第2版、松橋直等人、學會出版中心股份有限公司、1981」等中所記載的方法而獲得者。
而且,本發明的抗體中亦包含藉由木瓜酶等進行部分分解而所得的Fab片段、藉由胃蛋白酶等進行部分分解而所得的(Fab')2片段、對(Fab')2片段進行還原處理而所得的Fab'等所謂的抗體片段。
本發明的抗體可藉由如上所述的自身公知的方法而製成,亦可使用市售品。
第1抗體及第2抗體的市售品可自作為抗CK-MB抗體而市售者中選擇所識別的表位相互不同的抗體而使用,並無特別限定。
本發明的抗CK-B抗體的市售品可自作為抗CK-B抗體或抗CK-BB抗體而市售者中選擇識別CK的B次單元的胺基酸序列的自N末端起第1~100個胺基酸的區域的抗體而使用。此種市售品例如可列舉梅里第安生命科學公司(Meridian Life Science,Inc.)製造的MAb to CK-BB、羅氏醫療診斷設備股份有限公司製造的CKBB單株抗體、BiosPacific,Inc.製造的CK-BB單株抗體、Fitzgerald I.I.製造的CKBB抗體等。
第1抗體及第2抗體亦可固定化(承載)於不溶性載體上而使用。若使用包含固定化有第1抗體的乳膠粒子及固定化有第2抗體的乳膠粒子作為構成試劑的市售的套組則簡便。此種市售的套組例如可列舉L-type wako CK-MB mass(和光純藥工業股份有限公司製造)等。
在使第1抗體及第2抗體固定化於不溶性載體上而使用的情況下,所使用的不溶性載體若為通常在該領域中所使用的載體,則可使用任意者,例如可列舉以如下物質為材料而製備者作為較佳的不溶性載體:聚苯乙烯、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚丙烯醯胺、聚甲基丙烯酸縮水甘油酯、聚丙烯、聚氯乙烯、聚乙烯、聚氯碳酸酯、矽酮樹脂、矽酮橡膠等合成高分子化合物,多孔性玻璃、毛玻璃、氧化鋁、矽膠、活性碳、金屬氧化物等無機物質等。而且,該些載體可以乳膠粒子、顆粒、管、圓盤狀片、微粒子等多種多樣的形態而使用。
所述不溶性載體中,乳膠粒子是人工載體,自容易根據目的而對載體表面進行化學處理、且難以產生非特異反應等方面而言特佳。其材質並無特別限定,若為通常在該領域中使用者,則並無特別限定,例如可列舉聚苯乙烯乳膠粒子等苯乙烯系乳膠粒子、丙烯酸系乳膠粒子等作為較佳者。另外,該些乳膠粒子中藉由未使用乳化劑的乳化聚合而所得的聚苯乙烯乳膠粒子等具有如下的性質,因此特佳:表面的疏水性強,因此順利地吸附蛋白質或肽,且基於表面的負電荷彼此的斥力,即使無乳化劑亦可在
溶液中穩定地分散。而且,亦可視需要而使用各種改性乳膠粒子(例如於所述聚苯乙烯中導入有羧基的羧酸改性乳膠粒子)、磁性乳膠粒子(含有磁性粒子的乳膠粒子)等。
使第1抗體固定化的乳膠粒子與使第2抗體固定化的乳膠粒子的材質若為如上所述者,則可相同,亦可分別不同。
而且,本發明的乳膠粒子可使用市售者,每單位重量的表面積大的乳膠粒子可效率良好地對抗體進行致敏,因此較佳。具體而言可列舉通常為0.05μm~2.4μm、較佳的是0.05μm~1.0μm、更佳的是0.05μm~0.50μm的平均粒徑的乳膠粒子。
使第1抗體固定化的乳膠粒子與使第2抗體固定化的乳膠粒子可為相同粒徑者,亦可將選自所述範圍中的平均粒徑不同的乳膠粒子組合使用。
而且,使第1抗體固定化的乳膠粒子可為相同的粒徑亦可不同。使第2抗體固定化的乳膠粒子可為相同的粒徑亦可不同。
將第1抗體及第2抗體固定化於不溶性載體上的方法可藉由使各抗體與不溶性載體接觸而成,可利用自身公知的固定化方法,例如藉由共價鍵而固定化的方法、使其物理性吸附而固定化的方法等固定化方法。
不溶性載體上所承載的第1抗體的量、及不溶性載體上所承載的第2抗體的量根據其載體而不同,以相對於1g載體而言通常成為0.5mgAb~2000mgAb、較佳的是2mgAb~500mgAb的方式而進行製備。在載體為乳膠粒子的情況下,相對於1g乳膠
粒子而言通常為0.5mgAb~2000mgAb、較佳的是2mgAb~500mgAb。
固定化有第1抗體的不溶性載體與固定化有第2抗體的不溶性載體可分別為僅僅固定化有第1抗體的不溶性載體及僅僅固定化有第2抗體的不溶性載體,亦可為將第1抗體與第2抗體固定化於相同的不溶性載體上的不溶性載體。
在本發明中,第1抗體與第2抗體亦可鍵結於不溶性載體上而使用,但本發明的抗CK-B抗體並不鍵結於不溶性載體上而使用。例如在使用乳膠粒子作為不溶性載體而實施本發明的CK-MB測定法的情況下,藉由試樣中的CK-MB、固定化於乳膠上的第1抗體、固定化於乳膠上的第2抗體而形成交聯結構,產生光學變化。其中,本發明的抗CK-B抗體雖然鍵結於試樣中的CK-MB的B次單元上,但並不參與交聯結構的形成。
本發明的測定CK-MB的方法的步驟1是使含有CK-MB的試樣、第1抗體、第2抗體、本發明的抗CK-B抗體反應的步驟。
於步驟1中,最終獲得含有試樣、第1抗體、第2抗體、本發明的抗CK-B抗體的溶液即可,但本發明的抗CK-B抗體較佳的是於使試樣與第1抗體及第2抗體的至少一種接觸、反應之前加入。換而言之,較佳的是先使試樣與本發明的抗CK-B抗體接觸,然後使其與第1抗體、第2抗體接觸。
於步驟1中,本發明的第1抗體、第2抗體、及本發明的抗CK-B抗體以使其懸浮於緩衝液等溶液中而以溶液的形態使
用的情況較多。用以製備此種試劑溶液的緩衝液通常若為在該領域中所使用者,則並無特別限定,可列舉通常於pH為5.0~10.0、較佳為pH為6.5~8.5的中性附近具有緩衝作用的緩衝液。具體而言,例如可列舉HEPES緩衝劑、硼酸、托立斯緩衝劑、磷酸緩衝劑、佛蘿那緩衝劑、古德緩衝劑(Good's buffers)等。而且,該些緩衝液的緩衝劑濃度自通常為10mM~1000mM、較佳的是10mM~300mM的範圍適宜選擇。
而且,在使用包含固定化有第1抗體或第2抗體的乳膠粒子作為構成試劑的如上所述的市售的套組的情況下,亦可於該套組中使用隨附的緩衝液。
在藉由後述的含有本發明的抗CK-B抗體的第1試劑與含有第1抗體及第2抗體的第2試劑的雙試劑系進行測定的情況下,至於第1試劑的pH,若考慮穩定性,則較佳的是pH為6.0~8.0左右。至於第2試劑的pH,考慮穩定性,亦與第1試劑同樣地pH為6.0~8.0左右。
於如上所述的緩衝液中懸浮本發明的抗CK-B抗體而成的試劑溶液中的本發明的抗CK-B抗體的濃度,若為在混合試樣與含有本發明的抗CK-B抗體的溶液時成為目標的濃度範圍內的濃度即可。例如為0.1μg Ab/mL~200μg Ab/mL、較佳的是0.5μg Ab/mL~50μg Ab/mL、更佳的是1μg Ab/mL~40μg Ab/mL、進一步更佳的是1μg Ab/mL~20μg Ab/mL即可。亦即,下限值為0.1μg Ab/mL、較佳的是0.5μg Ab/mL、更佳的是1μg Ab/mL。而且,
其上限值為200μg Ab/mL、較佳的是50μg Ab/mL、更佳的是40μg Ab/mL、進一步更佳的是20μg Ab/mL。
而且,於如上所述的緩衝液中懸浮第1抗體或/及第2抗體而成的試劑溶液中的第1抗體或/及第2抗體的濃度因所測定的CK-MB的濃度而異,通常為0.4μg/mL~4200μg/mL、較佳的是2μg/mL~4200μg/mL、更佳的是2μg/mL~420μg/mL。
而且,於如上所述的緩衝液中懸浮固定化有第1抗體及第2抗體的不溶性載體而成的試劑溶液中的各不溶性載體的含量因所使用的載體的種類而異,通常為0.001w/v%~10w/v%、較佳的是0.005w/v%~5w/v%。在載體為乳膠粒子的情況下,通常為0.1w/v%~10w/v%、較佳的是0.2w/v%~5w/v%。
另外,含有本發明的抗體的溶液中亦可進一步包含增感劑、界面活性劑、防腐劑(例如疊氮化鈉、水楊酸、苯甲酸等)、穩定劑(例如白蛋白、球蛋白、水溶性明膠、界面活性劑、糖類等)、賦活劑、共存物質的影響規避劑等其他在該領域中所使用者,且其並不阻礙與共存的試劑的穩定性、阻礙抗原抗體反應。而且,該些試劑類等的濃度範圍等亦可適宜選擇在自身公知的該測定方法中所通常使用的濃度範圍等而使用。
步驟1中,使試樣與本發明的抗CK-B抗體接觸、反應時的本發明的抗CK-B抗體在反應液中的濃度若為可抑制、規避抗CK-MB抗體與試樣中的CK-BB鍵結的反應而規避CK-MB測定中的CK-BB的影響的量即可。例如若為0.1μg/mL Ab/mL~200
μg/mL Ab/mL、較佳的是0.5μg/mL Ab/mL~50μg/mL Ab/mL、更佳的是1μg Ab/mL~40μg Ab/mL、進一步更佳的是進一步更佳的是1μg Ab/mL~20μg Ab/mL即可。亦即,下限值為0.1μg Ab/mL、較佳的是0.5μg Ab/mL、更佳的是1Ab/mL。而且其上限值為200μg Ab/mL、較佳的是50μg Ab/mL、更佳的是40μg Ab/mL、進一步更佳的是20μg Ab/mL。
而且,於步驟1中使試樣、第1抗體、第2抗體接觸反應時的第1抗體及第2抗體的反應起始時在反應液中的濃度因試樣中的CK-MB的濃度而異,並無特別限定,通常為0.1μg Ab/mL~1000μg Ab/mL、較佳的是0.5μg Ab/mL~1000μg Ab/mL、更佳的是0.5μg Ab/mL~100μg Ab/mL。
而且,在使用乳膠粒子作為不溶性載體的情況下,於步驟1中使試樣、第1抗體固定化乳膠、第2抗體固定化乳膠接觸、反應時的反應液中的乳膠的濃度為0.01w/v%~3w/v%,較佳的是0.01w/v%~1.2w/v%。
而且,本發明的抗CK-B抗體、及第1抗體與第2抗體在該反應時的pH若為並不抑制抗原抗體反應的範圍則並無特別限定,可列舉通常為6.0~10.0、較佳為6.0~8.0的範圍;反應時的溫度亦若為並不抑制抗原抗體反應的範圍則並無特別限定,可列舉通常為10℃~50℃、較佳為20℃~40℃的範圍。而且,其反應時間因所使用的本發明的抗體以及pH及溫度等反應條件而異,分別對應地反應1分鐘~60分鐘、較佳的是1分鐘~15分鐘
左右即可。
該步驟1的具體的方法例如可列舉以下的方法。
(i)分別製備含有本發明的抗CK-B抗體的溶液、含有第1抗體與第2抗體的溶液,以本發明的抗CK-B抗體溶液、含有第1抗體與第2抗體的溶液的順序與試樣混合的方法(雙試劑系);(ii)分別製備含有本發明的抗CK-B抗體的溶液、含有第1抗體的溶液、含有第2抗體的溶液,將試樣與含有本發明的抗CK-B抗體的溶液混合後,依序混合含有第1抗體的溶液、含有第2抗體的溶液的方法(含有第1抗體的溶液與含有第2抗體的溶液,先加入哪個均可)、(iii)製備含有第1抗體、第2抗體、本發明的抗CK-B抗體的溶液,將試樣與該溶液混合,使該些成分一次性起作用的方法。
於以上中,若考慮進行使用自動分析機的測定的情況或作業效率,則較佳的是藉由(i)的方法,使含有CK-MB的試樣與本發明的抗CK-B抗體反應後,使其與第1抗體及第2抗體反應。
另外,亦可使試樣中的共存物質的影響規避劑等的試樣的預處理液比本發明的抗體更先與試樣接觸。
而且,於構成CK-MB測定用市售套組的試劑類的任意者中,亦可以成為所述任意狀態的方式使本發明的抗CK-B抗體存在而使用,所述CK-MB測定用市售套組使用通常在臨床檢查的領域中所使用的抗CK-MB抗體。
本發明的測定CK-MB的方法的步驟2是測定由於步驟
1的反應而產生的光學變化的步驟。
於該步驟2中,依照自身公知的使用抗CK-MB抗體的測定法,進行由反應所產生的光學變化的測定即可。
該光學變化可列舉吸光度變化、濁度變化、或散射光強度變化等。
所謂「光學變化的測定」是測定由免疫凝聚所產生的光學變化,具體而言可列舉免疫透射比濁法(immunoturbidimetry)、免疫散射比濁法(immunonephelometry)等免疫凝聚法等。該些測定方法依據自身公知的方法而進行即可,例如在免疫透射比濁法的情況下,依據「金原出版股份有限公司 臨床檢查法概要 第30版 第853頁~第854頁」等中所記載的方法而進行即可;例如在使用免疫散射比濁法的情況下,依據「金原出版股份有限公司 臨床檢查法概要 第30版 第851頁~第853頁等」等中所記載的方法而進行即可。
其中較佳的是利用免疫透射比濁法的測定,特別是使用乳膠粒子的乳膠比濁法於測定感度高、可使用通用的自動分析裝置而測定、簡便、且可更享受本發明的效果的方面而言較佳。
藉由乳膠比濁法而實施本發明的測定法的情況下,除了使本發明的抗CK-B抗體與試樣接觸混合以外,依據利用自身公知的乳膠比濁法測定CK-MB的方法的測定條件(例如測定波長等)、或測定操作法而實施即可。
進行利用乳膠比濁法的CK-MB的測定的情況下用以測
定吸光度的測定波長通常為340nm~880nm、較佳的是540nm~800nm。於藉由雙波長而測定的情況下,於主波長為540nm附近、副波長為800nm附近進行測定即可。
本發明的光學變化例如可如下所述地求出。
(1)在第1抗體固定化不溶性載體與第2抗體固定化不溶性載體與CK-MB的反應起始後,以適當的間隔進行兩次反應液的光學測定,將其測定值的差作為光學變化(終點法)。
(2)將第1抗體固定化不溶性載體與第2抗體固定化不溶性載體與CK-MB的反應起始後的反應液的光學變化率(特別是其最大變化率)作為吸光度變化(比率法)。
吸光度變化、濁度變化、或散射光強度變化的測定當然可藉由手工作業而進行,但本發明的方法可應用於使用自動分析裝置的測定系統中,因此可使用自動分析裝置、分光光度計等生化通用機或雷射濁度計等比濁測定用專用機等而進行測定,詳細而言可依照各機器的指南。
關於使用手工作業或自動分析裝置而進行測定的情況下的試劑類的組合,並無特別限定,可根據所應用的自動分析裝置的環境、其他主要因素等而適宜進行。
在利用例如藉由乳膠比濁法而測定CK-MB的方法,使用市售的套組與通用自動分析裝置而實施本發明的測定CK-MB的方法的步驟2的情況下,套組的構成試劑的任意者中含有本發明的抗CK-B抗體而使用即可。而且,除了使本發明的抗CK-B抗
體與其他抗體同時或者先於其他抗體與試樣接觸、反應以外,依照套組中所隨附的操作說明書,且進行使用自動分析裝置的通常的CK-MB的測定即可。
本發明的測定CK-MB的方法的步驟3是「基於步驟2中所得的結果而求出CK-MB的量的步驟」。
例如,將步驟2中所測定的光學變化量應用於例如預先使用CK-MB濃度已知的標準溶液等作為試樣,藉由同樣的測定方法而求出的表示CK-MB濃度與光學變化量的關係的校準曲線中,藉此而算出試樣中的CK-MB量即可。
若以所述(i)的方法(製備含有本發明的抗CK-B抗體的溶液、含有第1抗體與第2抗體的溶液,以本發明的抗CK-B抗體溶液、含有第1抗體與第2抗體的溶液的順序與試樣混合的方法)、且藉由使用乳膠粒子的免疫透射比濁法進行測定的方法為例,對本發明的CK-MB的測定法(步驟1~步驟3)進行具體的表示,則例如如下所示。
首先,使例如血液、血清、血漿等需測定CK-MB的試樣、與含有0.1μg Ab/mL~200μg Ab/mL本發明的抗CK-B抗體的第一試劑接觸混合,在通常為10℃~50℃、較佳為20℃~40℃下進行通常為1分鐘~60分鐘、較佳為1分鐘~15分鐘、更佳為5分鐘左右的反應。其次,將該反應液、與含有固定化於乳膠粒子上的第1抗體與固定化於乳膠粒子上的第2抗體的第2試劑混合,於通常為10℃~50℃、較佳的是20℃~40℃下,進行通常為1分
鐘~60分鐘、較佳為1分鐘~15分鐘、更佳為5分鐘左右的反應。以例如為340nm~880nm、較佳的是540nm~800nm的測定波長測定其結果所產生的抗原抗體反應所引起的反應液的吸光度變化。另外,例如預先使用濃度已知的CK-MB標準品作為試樣而同樣地進行測定,製作表示CK-MB濃度與吸光度的關係的校準曲線。而且,將使用需測定CK-MB的試樣而所得的測定值應用於該校準曲線中求出CK-MB的濃度,藉此對試樣中的CK-MB進行定量。
本發明的規避CK-MB測定中的CK-BB的影響的方法可列舉:於含有CK-MB的試樣中加入本發明的抗CK-B抗體,對該試樣進行處理的方法。此時所使用的試劑及處理方法的具體例可列舉測定於所述試樣中的CK-MB的方法之欄中所記載者。
本發明的CK-MB測定用套組若為包含含有第1抗體、第2抗體、本發明的抗CK-B抗體的試劑作為構成試劑者即可。關於各自的構成要素的較佳態樣、具體例及濃度等,於所述的與本發明的測定CK-MB的方法相關的說明中有所記載。
而且,該包含第1抗體、第2抗體、本發明的抗CK-B抗體的試劑可為在適當的緩衝液中懸浮本發明的抗體或第1抗體固定化不溶性載體、第2抗體固定化不溶性載體、本發明的抗CK-B抗體等而成的懸浮液等溶液狀態的試劑,或者將其凍結而成的凍結品或凍結乾燥而成的凍結乾燥品。該目的中所使用的緩衝劑等的具體例、其pH及濃度如上所述。
而且,該些套組中所含的試劑中亦可進一步包含通常在該領域中所使用的試劑類,例如緩衝劑、增感劑、界面活性劑、防腐劑(例如疊氮化鈉、水楊酸、苯甲酸等)、穩定劑(例如白蛋白、球蛋白、水溶性明膠、界面活性劑、糖類等)、賦活劑、共存物質的影響規避劑等其他在該領域中所使用者,且其並不阻礙與共存的試劑的穩定性、阻礙抗原抗體反應。而且,該些試劑類等的濃度範圍等亦可適宜選擇在自身公知的該測定方法中所通常使用的濃度範圍等而使用。
而且,在該套組包含數種試液的情況下,於各試液中亦含有為了測定測定對象成分而所需的試劑類,該些試劑類以在將各試液混合的時間點使目標成分測定的反應起始的方式而適宜分散於各試液的任意者中而含有即可。構成該些試液的試劑類的使用濃度自通常在該領域中使用的範圍中適宜選擇即可。
另外,在該套組中亦可組合在測定CK-MB時所使用的校準曲線製作用CK-MB標準品。該標準可使用市售的標準品,亦可使用依照公知的方法而製造者。
另外,本發明的套組亦預先包含測定CK-MB的方法的說明書等。所謂該「說明書」是表示該方法的特徵、原理、操作順序、判定順序等藉由文章或圖表等而實質性記載的該套組的操作說明書、隨附文書、或小冊子(leaflet)等。
本發明的套組的具體的實施態樣例如可列舉如下所述的構成:
(1)以包含本發明的抗CK-B抗體而成的第1試劑、包含第1抗體與第2抗體而成的第2試劑作為構成試劑者、(2)以包含本發明的抗CK-B抗體而成的第1試劑、包含第1抗體而成的第2試劑、包含第2抗體而成的第3試劑作為構成試劑者、或(3)以包含第1抗體、第2抗體、本發明的抗CK-B抗體而成的試劑為構成試劑者。
本發明的試樣若為包含CK-MB的試樣即可,具體而言例如可列舉血液、血漿、血清、關節液、胸膜液、淋巴液、骨髓液等體液或尿、大便、唾液等,其中可列舉血清、血漿等作為較佳者。
以下列舉實施例對本發明加以更具體的說明,但本發明並不受該些任何限定。
[實施例]
實施例1.
使用作為市售的CK-MB測定套組的L-type wako CK-MB mass(和光純藥工業股份有限公司製造),依照套組的隨附文書的記載而如下所述地進行測定。
所述套組是在使用分別固定化有表位相互不同的兩種抗CK-MB抗體的乳膠粒子,藉由乳膠比濁法而測定CK-MB的方法中使用的套組。
(1)CK-BB試樣的製備
將源自人腦的純化CK-BB(梅里第安生命科學公司(Meridian Life Science,Inc.))以成為400ng/mL及2000ng/mL的方式而添加於人血清中,製成CK-BB試樣。
(2)第1試劑的製備
於套組中隨附的緩衝液中加入市售的小鼠抗CK-BB單株抗體MAb to CK-BB(梅里第安生命科學公司(Meridian Life Science,Inc.)製造)、或CKBB單株抗體(羅氏醫療診斷設備股份有限公司製造)作為抗CK-B抗體,製備濃度為0μg/mL、1.25μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL的含有抗體的緩衝液(第1試劑)。
另外,混合CK-BB試樣與第1試劑時的反應溶液中的抗CK-B抗體的濃度分別為0μg/mL、1.2μg/mL、2.3μg/mL、4.9μg/mL、9.4μg/mL、18.8μg/mL、37.5μg/mL、75μg/mL、150μg/mL。
(3)第2試劑
使用套組中隨附的乳膠試液作為第2試劑。乳膠試液含有分別固定化有所識別的表位相互不同的兩種抗CK-MB抗體的兩種乳膠粒子。
(4)CK-MB的測定(兩點終點法)
使用日立7170自動分析裝置(日立高新技術股份有限公司製造)而進行以下的測定。
亦即,在10μL所述(1)中所製備的CK-BB試樣中混合150μL所述(2)中所製備的第1試劑,於37℃下保溫5分鐘
後,添加50μL第2試劑而進一步進行5分鐘保溫。在添加第2試劑後,測定自30秒後至5分鐘後為止的660nm的吸光度變化。
作為對照,使用不含抗CK-B抗體的緩衝液作為第1試劑,除此以外使用相同的試劑、測定機器,藉由相同的方法進行相同試樣中的CK-MB的測定。
(5)結果
將使用含有MAb to CK-BB作為抗CK-B抗體的第1試劑的情況的結果示於表1中。
而且,於表1中一併表示使用400ng/mL及2000ng/mL的CK-BB試樣進行CK-MB的測定而所得的測定值(CK-MB測定)、使用該試樣進行CK-MB測定而所得的CK-MB測定值相對於測定中所使用的CK-BB試樣的濃度的比率(CK-BB交叉率)。
於本實施例中測定不含CK-MB的試樣中的CK-MB值。然而,根據表1,例如使用含有400ng/mL的CK-BB的試樣,使用不含抗CK-B抗體(MAb to CK-BB)的第1試劑而進行CK-MB
的測定的情況下(抗CK-B抗體的添加濃度為0μg/mL的情況),獲得18.6ng/mL的測定值。在該試樣中包含400ng/mL的CK-BB,因此於該測定中以18.6(ng/mL)/400(ng/mL)×100≒約4.6%的交叉率而測量CK-BB(偽高值)。同樣地,使用含有2000ng/mL的CK-BB的試樣,使用不含抗CK-B抗體(MAb to CK-BB)的第1試劑而進行CK-MB的測定的情況下的交叉率為5.3%。
相對於此,若使用含有抗CK-B抗體(MAb to CK-BB)的第1試劑而進行CK-MB的測定,則CK-BB的交叉率顯著降低。例如在使用400ng/mL的試樣、2000ng/mL的試樣的任意情況下的CK-BB交叉率均為0.8%,所述CK-BB交叉率是使用含有5μg/mL的抗CK-B抗體(MAb to CK-BB)的第1試劑而進行CK-MB的測定的情況下的CK-BB交叉率。亦即,若使用含有抗CK-B抗體(MAb to CK-BB)的第1試劑而進行CK-MB的測定,則與使用不含抗CK-B抗體(MAb to CK-BB)的第1試劑而進行CK-MB的測定的情況相比而言,可顯著抑制CK-BB對於CK-MB測定值的影響。
同樣地,將使用含有CKBB單株抗體作為抗CK-B抗體的第1試劑的情況的結果示於表2中。
根據表2的結果可知:在使用含有抗CK-B抗體(CKBB單株抗體)的第1試劑而進行CK-MB的測定的情況下,與使用不含抗CK-B抗體(CKBB單株抗體)的第1試劑而進行CK-MB的測定的情況相比而言,可顯著抑制CK-BB的影響。
根據以上可判斷:藉由在現有的利用乳膠比濁法的CK-MB的測定系統中加入抗CK-B抗體(CKBB單株抗體),可規避試樣中所存在的CK-BB的影響,對CK-MB進行特異性高的測定。
而且,雖然未表示資料,但使用含有BiosPacific,Inc.製造的CK-BB單株抗體、或Fitzgerald I.I.製造的CKBB抗體的第1試劑作為抗CK-B抗體,除此以外藉由與所述同樣的方法而進行CK-MB的測定。其結果,與使用不含該些抗體的第1試劑而進行CK-MB的測定的情況相比而言,可顯著地抑制CK-BB的影響。因此可判斷:藉由於現有的利用乳膠比濁法使得CK-MB的測定系統中加入該些CK-B抗體(BiosPacific,Inc.製造的CK-BB單株抗
體或Fitzgerald I.I.製造的CKBB抗體),可規避在試樣中所存在的CK-MB的影響,對CK-MB進行特異性高的測定。
實施例2
根據實施例1的結果可確認實施例1中所使用的抗CK-B抗體(本發明的抗CK-B抗體)規避利用乳膠比濁法的CK-MB測定時的CK-BB的影響,因此藉由以下方法確認該些抗體的抗原性。
(1)西方墨點法
將2μL的0.1mg/mL的源自人腦的純化CK-BB(梅里第安生命科學公司(Meridian Life Science,Inc.))塗覆於SuperSepTM(電泳用凝膠、和光純藥工業股份有限公司,5%~20%的梯度凝膠)上,進行SDS-PAGE電泳(恆定電流為25mA)。其次,藉由半乾墨點法將電泳後的餾份轉印於PVDF膜片上。
於PBS-T(含TweenTM 20的磷酸鹽緩衝生理鹽水、pH為7.4、和光純藥工業股份有限公司)中,以成為4w/v%的濃度的方式溶解Block Ace(DS Pharma Biomedical Co.,Ltd.製造)而製成結塊液。於該結塊液中浸漬所述轉印後的PVDF膜片,於室溫下進行1小時的結塊處理。其次,按照各餾份的每個區帶切斷PVDF膜片,分別浸於新的結塊液中。
其次,作為CK的B次單元的所有胺基酸序列(序列號1)中的分別以200aa-300aa(自N末端起第200~300個胺基酸的胺基酸序列部分)為抗原(識別)的抗CK-B抗體、以350aa-C末端(自N末端起第350~C末端胺基酸的胺基酸序列部分)為抗原
的抗CK-B抗體、以165aa-357aa(自N末端起第165~357個胺基酸的胺基酸序列部分)為抗原的CK-B抗體、或以1aa-100aa(自N末端起第1~100個胺基酸的胺基酸序列部分)為抗原的抗CK-B抗體,將四種市售的兔抗CK-BB多株抗體(均由Abcam plc製造)分別添加於浸有PVDF膜片的結塊液中,於室溫下進行2小時處理。
其次,進一步將與實施例1中所使用者相同的抗CK-B抗體(Mab to CK-BB或CK-BB單株抗體、本發明的抗CK-B抗體)添加於所述浸有膜片的結塊液中,於4℃下徹夜浸漬。其次,將結塊液交換為充分量的PBS-T而將膜片於PBS-T中浸漬10分鐘後,交換為新的BPS-T,藉由該方法對膜片進行三次清洗。其後,在新的結塊液中浸漬膜片,將多株兔抗小鼠免疫球蛋白(Polyclonal Rabbit Anti-Mouse Immunoglobulins)/HRP(DAKO A/S)加入至結塊液中而在室溫下進行1小時浸漬。其次,藉由充分量的PBS-T對膜片進行清洗,藉由ECLTM Prime西方墨點檢測試劑(Western Blotting Detection Reagent)(過氧化酶的化學發光基質、GE醫療(GE Healthcare)製造)使其發光,使用LAS4000(富士軟片股份有限公司製造),以10秒的曝光時間進行檢測。
(2)結果
將使用MAb to CK-BB作為本發明的抗CK-B抗體而所得的結果表示於圖1中,將使用CK-BB單株抗體作為本發明的抗CK-B抗體的結果表示於圖2中。
於圖1及圖2中,用箭頭表示CK-BB的電泳餾份的位置。
而且,於圖1及圖2中,「未添加」是表示「未進行使用兔抗CK-B抗體的電泳餾份的預處理」的情況。
進一步而言,例如「200-300」是表示「先使以CK的B次單元的自N末端起第200~300個胺基酸的胺基酸序列部分為抗原的兔抗CK-B抗體與電泳餾份反應,其後進一步與本發明的抗CK-B抗體[MAb to CK-BB(圖1)或CKBB單株抗體(圖2)]反應的情況」的結果。
「350-C」是表示「先使以CK的B次單元的自N末端起第350個~C末端胺基酸的胺基酸序列部分為抗原的兔抗CK-B抗體與電泳餾份反應,其後進一步與本發明的抗CK-B抗體[MAb to CK-BB(圖1)或CKBB單株抗體(圖2)]反應的情況」的結果。
「165-357」是表示「先使以CK的B次單元的自N末端起第165~357個胺基酸的胺基酸序列部分為抗原的兔抗CK-B抗體與電泳餾份反應,其後進一步與本發明的抗CK-B抗體[MAb to CK-BB(圖1)或CKBB單株抗體(圖2)]反應的情況」的結果。
「1-100」是表示「先使以CK的B次單元的自N末端起第1~100個胺基酸的胺基酸序列部分為抗原的兔抗CK-B抗體與電泳餾份反應,其後進一步與本發明的抗CK-B抗體[MAb to
CK-BB(圖1)或CKBB單株抗體(圖2)]反應的情況」的結果。
根據圖1及圖2可知:僅僅在「1-100」的情況下,亦即「先使以CK的B次單元的自N末端起第1~100個胺基酸的胺基酸序列部分為抗原的兔抗CK-B抗體與電泳餾份反應,其後進一步與本發明的抗CK-B抗體[MAb to CK-BB(圖1)或CKBB單株抗體(圖2)]反應的情況」,餾份染色的程度顯著減少。
其表示所使用的兔抗CK-B抗體(以CK的B次單元的自N末端起第1~100個胺基酸的胺基酸序列部分為抗原的兔抗CK-B抗體)與本發明的抗CK-B抗體(MAb to CK-BB及CKBB單株抗體)相對於抗原(CK的B次單元的自N末端起第1~100個胺基酸的胺基酸序列部分)而競爭。
根據以上可知:本發明的抗CK-B抗體(MAb to CK-BB及CKBB單株抗體)是識別CK的B次單元的第1~100個胺基酸的區域的抗體。
比較例1.
藉由以下方法對識別CK的B次單元的「自N末端起第1~100個胺基酸的區域」以外的區域的抗體是否可規避CK-MB的測定中的CK-BB的影響進行調查。
(1)CK-BB試樣的製備
使用與實施例1相同的CK-BB試樣。
(2)第1試劑的製備
於套組(L-type wako CK-MB mass)所隨附的緩衝液中加入
下述的分別識別不同領域的市售的抗CK-B抗體,分別製備濃度為5μg/mL的含有抗體的緩衝液(第1試劑)。各抗體的「抗原」基於各抗體的隨附文書的關於抗原區域的記載。
抗體a:識別CK的B次單元的自N末端起第200~300個胺基酸的胺基酸序列的抗CK-B抗體(兔抗CK-BB多株抗體、Abcam plc製造)
抗體b:識別CK的B次單元的自N末端起第350個~C末端胺基酸的胺基酸序列的抗CK-B抗體(兔抗CK-BB多株抗體、Abcam plc製造)
抗體c:識別CK的B次單元的自N末端起第165~357個胺基酸的胺基酸序列的抗CK-B抗體(兔抗CK-BB多株抗體、Abcam plc製造)
抗體d:MAb to CK-BB(梅里第安生命科學公司(Meridian Life Science,Inc.)製造、實施例1中所使用的本發明的抗CK-B抗體)。
(3)第2試劑
使用與實施例1中所使用的相同的套組所隨附的乳膠試液作為第2試劑。
(4)CK-MB的測定(兩點終點法)
使用與實施例1中所使用的相同的機器,藉由相同的方法而進行CK-MB的測定。
(5)結果
將結果示於表3中。
而且,於表3中一併表示使用400ng/mL及2000ng/mL的CK-BB試樣進行CK-MB的測定而所得的測定值(CK-MB測定)、使用該試樣進行CK-MB測定而所得的CK-MB測定值相對於測定中所使用的CK-BB試樣的濃度的比率(CK-BB交叉率)。
根據表3可知:在使用含有抗體a~抗體c的第1試劑而進行CK-MB的測定的情況下,與使用未含有抗體a~抗體c的第1試劑而進行CK-MB的測定的情況相比,與CK-BB的交叉率基本無變化。僅僅在使用含有抗體d(本發明的抗CK-B抗體)的第1試劑而進行CK-MB的測定的情況下,與CK-BB的交叉率顯著降低。
根據以上可知:識別CK的B次單元的自N末端起第1~100個胺基的區域以外的區域的抗體(抗體a~抗體c)無法抑制CK-BB對CK-MB的測定系統的影響。
實施例3
使用與實施例1中所使用的相同的市售的CK-MB測定套組L-type wako CK-MB mass(和光純藥工業股份有限公司),依照套組的隨附文書所記載的方法而進行以下的測定。
(1)利用本發明的方法的CK-MB的測定
1)測定試樣
使用自維爾-日東紡醫療股份有限公司或國際生物股份有限公司購入的血清中的確認包含CK-BB的人血清作為測定試樣。
2)第1試劑的製備
於套組所隨附的緩衝液中加入本發明的抗CK-B抗體(Mab to CK-BB或CK-BB單株抗體),製備濃度為5μg/mL的含有抗體的緩衝液(第1試劑)。
另外,將測定試樣與第1試劑混合時的反應溶液中的本發明的抗CK-B抗體的濃度為4.7μg/mL。
3)第2試劑
與實施例1相同地使用套組所隨附的乳膠試液作為第2試劑。
4)CK-MB的測定(兩點終點法)
使用萊博斯派特(LABOSPECT)008自動分析裝置(日立高新技術股份有限公司製造)而進行測定。在7μL所述1)的含有CK-MB的試樣中混合100μL所述2)中所製備的第1試劑,在37℃下進行5分鐘保溫後,添加33μL第2試劑而進一步進行5分鐘保溫。添加乳膠試液後,測定自30秒後至5分鐘後為止的660nm的吸光度變化。
作為對照,使用不含本發明的抗CK-B抗體的緩衝液,除此以外使用相同的試劑、測定機器,藉由相同的方法進行相同試樣中的CK-MB的測定。
(2)利用現有法(電化學發光免疫測定法)的CK-MB的測定
使用相同試樣中的CK-MB,使用利用電化學發光免疫測定法的CK-MB測定用套組ECLusys試劑CK-MBII(羅氏診斷產品股份有限公司製造),使用科瓦斯(cobas)8000(羅氏診斷產品股份有限公司製造)而進行測定。
(3)結果
將結果示於下述表4中。
於表4中,在獲得CK-MB蛋白量的參考標準值為「5.0ng/mL(根據「臨床檢查法概要」第33版)」以下的CK-MB值的情況下,附以陰影進行表示。
根據表4可知:藉由本發明的方法而所得的測定值(「添
加Mab to CK-BB」或「添加CKBB單株抗體」),與藉由未共存本發明的抗CK-B抗體而進行的現有的乳膠比濁法而所得的測定值(「未添加抗BCK-B抗體」)相比而言,利用現有的電化學發光免疫測定法的測定值與截止判定完全一致,藉由本發明的方法而所得的測定值的可靠度高。
[產業上之可利用性]
本發明的測定CK-MB的方法即使在試樣中共存CK-BB,亦可規避其影響,可特異地測定CK-MB。而且,本發明的測定CK-MB的方法亦可應用於通用自動分析裝置中,因此於在臨床檢查領域中可用於CK-MB的測定的方面而言有用。
<110> 和光純藥工業股份有限公司
<120> CK-MB的測定方法
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<211> 381
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
Claims (12)
- 一種試樣中的CK-MB的測定方法,其包含下述步驟:(1)使試樣、對於肌酸激酶MB型同功酶(以下簡稱為「CK-MB」)的第1抗體、對於與第1抗體所識別的表位不同的CK-MB的第2抗體、識別肌酸激酶的B次單元的胺基酸序列的自N末端起第1~100個胺基酸的區域的抗CK-B抗體反應的步驟(步驟1)、(2)測定由於該反應而產生的光學變化的步驟(步驟2)、(3)基於步驟2中所得的結果,求出該試樣中的CK-MB的量的步驟(步驟3)。
- 如申請專利範圍第1項所述的方法,其中,步驟1是藉由在使試樣與該抗CK-B抗體反應後,使第1抗體及第2抗體反應而進行。
- 如申請專利範圍第1項所述的方法,其中,該抗CK-B抗體所識別區域具有序列號1所表示的胺基酸序列。
- 如申請專利範圍第1項所述的方法,其中,所述光學變化是吸光度變化、濁度變化、或散射光強度變化。
- 如申請專利範圍第1項所述的方法,其中,所述第1抗體及/或所述第2抗體固定化於不溶性載體上。
- 如申請專利範圍第1項所述的方法,其中,所述不溶性載體是乳膠粒子。
- 一種CK-MB的測定方法中的肌酸激酶BB型同功酶影響的 規避方法,其特徵在於:藉由識別肌酸激酶的B次單元的胺基酸序列的自N末端起第1~100個胺基酸的區域的抗CK-B抗體而對試樣進行處理。
- 一種CK-MB測定用套組,其包含:對於CK-MB的第1抗體、對於與第1抗體所識別的表位不同的CK-MB的第2抗體、識別肌酸激酶的B次單元的胺基酸序列的自N末端起第1~100個胺基酸的區域的抗CK-B抗體。
- 如申請專利範圍第8項所述的套組,其包括:包含該抗CK-B抗體的第1試劑、包含第1抗體與第2抗體的第2試劑。
- 如申請專利範圍第8項所述的套組,其中,該抗CK-B抗體所識別的區域具有序列號1所表示的胺基酸序列。
- 如申請專利範圍第8項所述的套組,其中,所述第1抗體及/或所述第2抗體固定化於不溶性載體上。
- 如申請專利範圍第11項所述的套組,其中,所述不溶性載體是乳膠粒子。
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