RU2523393C1 - Тест-полоска для высокочувствительного иммунохроматографического анализа - Google Patents
Тест-полоска для высокочувствительного иммунохроматографического анализа Download PDFInfo
- Publication number
- RU2523393C1 RU2523393C1 RU2013111991/15A RU2013111991A RU2523393C1 RU 2523393 C1 RU2523393 C1 RU 2523393C1 RU 2013111991/15 A RU2013111991/15 A RU 2013111991/15A RU 2013111991 A RU2013111991 A RU 2013111991A RU 2523393 C1 RU2523393 C1 RU 2523393C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- membrane
- test strip
- sample
- bsa
- substance
- Prior art date
Links
Images
Abstract
Изобретение относится к иммунологии, аналитической биохимии и диагностике и представляет собой тест-полоску для высокочувствительного иммунохроматографического анализа. В основе метода лежит контакт мембранной тест-полоски с анализируемой жидкой пробой и инициируемое этим контактом движение по мембранам тест-полоски реагентов, которые содержатся в пробе или нанесены на мембрану и в ходе взаимодействий в порах мембраны или на ее поверхности формируют иммунные комплексы. Интенсивность окраски метки, связавшейся в аналитической зоне, детектируется визуально. Предложенная система предназначена для иммунохроматографического определения в жидких пробах антител или антигенов. Отличительной особенностью предлагаемого способа проведения иммунохроматографического анализа является то, что мультимембранный композит тест-полоски содержит дополнительную мембрану с нанесенным на нее веществом, медленно растворяющимся в воде, например бычьим сывороточным альбумином (БСА), которая прикрепляется к тест-полоске сразу за мембраной с нанесенным коллоидным конъюгатом. Фронт жидкой пробы, преодолевая мембрану с коллоидным золотом, конъюгированным с реагентом для связывания аналита, останавливается, попадая на мембрану с БСА, до тех пор, пока БСА не растворится. В течение этого времени проба инкубируется с коллоидным конъюгатом, что приближает реакцию связывания аналита к положению равновесия и, таким образом, приводит к снижению предела обнаружения анализа. 2 ил., 1 пр.
Description
Изобретение относится к иммунологии, аналитической биохимии и диагностике и представляет собой тест-полоску для высокочувствительного иммунохроматографического анализа.
Иммунохимический анализ может быть реализован в различных форматах. Однако, поскольку для массовых обследований первоочередное значение имеют скорость и производительность тестирования, в данной ситуации несомненными преимуществами обладает иммунохроматографический анализ, для которого все необходимые реагенты предварительно нанесены на мембранные компоненты тест-полоски и ее контакт с тестируемой пробой непосредственно инициирует движение фронта жидкости по мембранам, протекание специфических реакций и формирование иммунных комплексов, которые благодаря включению в их состав окрашенного маркера могут детектироваться визуально или с помощью оптического детектора (Рис.1). Проба, потенциально содержащая анализируемое соединение (аналит), под действием капиллярных сил перемещается вдоль тест-полоски. При этом она вначале взаимодействует с окрашенными частицами (коллоидное золото или иной маркер), на поверхности которых адсорбирован компонент, предназначенный для связывания с аналитом. Затем фронт жидкости преодолевает аналитическую (тестовую) зону, которая представляет собой участок мембраны со вторым компонентом для связывания аналита. Степень связывания маркера в тестовой зоне и, соответственно, интенсивность окрашивания мембраны определяются концентрацией аналита в пробе (Raphael С. Wong l Harley Y. Tse (Editors) Lateral Flow Immunoassay. Springer, New York, 2009.).
Основное преимущество иммунохроматографии заключается в скорости (время анализа 10-15 мин) и методической простоте анализа (анализ инициируется контактом тест-полоски с пробой и не требует от оператора никаких дополнительных действий). Однако, в силу того, что реакции проходят в проточном режиме, равновесие между иммунореагентами зачастую не достигается и значительная часть аналита не успевает связаться с коллоидным носителем, как следствие, предел обнаружения понижается. Для решения данной проблемы используется прединкубация пробы с коллоидным конъюгатом, которая может быть реализована несколькими способами: либо коллоидный конъюгат смешивается с пробой в отдельной емкости, инкубируется и затем наносится на тест-полоску, либо используется особая конструкция кассеты, в которую упаковывается тест-полоска, предусматривающая возможность предварительного смешения реагентов и дополнительных манипуляций для приведения реагентов в контакт с рабочей мембраной теста. Второй способ используется, например, в тест-системе ImmunoCAP™ Rapid (Phadia АВ) для серодиагностики аллергии на пыльцу растений (http://www.phadia.com/Global/A%20Document%20Library/Allergy/Promotion%20Material/IC%20Rapid/ImmunoCAP_Rapid_Test_Procedure_US.pdf). Данная тест-система снабжена специальной кассетой с двумя емкостями, в одной из которых смешивается проба с коллоидным конъюгатом и инкубируется в течение 5 мин, а во вторую емкость по истечении 5 мин добавляется смывающий раствор, который протекает через зону со смешанными конъюгатом и пробой и вместе с ними протекает дальше через рабочую мембрану.
В настоящей заявке предлагается альтернативный способ обеспечения прединкубации реагентов, для обеспечения которого не требуется ни использования специальных кассет, ни дополнительных манипуляционных стадий. Данный способ предполагает использование дополнительной стекловолоконной мембраны, которая находится в мультимембранном композите тест-полоски сразу после мембраны с нанесенным коллоидным конъюгатом и перед рабочей мембраной. На данную дополнительную мембрану наносится концентрированный раствор бычьего сывороточного альбумина (БСА) (>10% по массе) и затем высушивается. Когда жидкая проба последовательно диффундирует через мембраны тест-полоски, она сначала попадает на подложку с коллоидным конъюгатом, инициируя реакцию аналита с иммобилизованным на поверхности коллоидных частиц компонентом для связывания данного аналита, затем фронт жидкости попадает на мембрану с высушенным БСА и замедляется, так как БСА забивает поры мембраны. В то время пока фронт жидкости медленно растворяет высушенный БСА происходит инкубация пробы с конъюгатом, после растворения БСА и освобождения пор мембраны жидкость продолжает течение и инициирует последующие стадии иммунохроматографического анализа.
Предложенный подход был реализован заявителями в системе для серодиагностики туберкулеза с использованием антигена 38 кДа (Ag78, antigen 5, PhoS, Rv0934) M tuberculosis. Ниже представлено описание способа получения тест-полосок и проведения иммунохроматографического анализа, а также полученные результаты.
Пример
Для формирования тест-системы использовали набор мембран «mdi Easypack» фирмы «Advanced Microdevices» (Индия), включающий рабочую мембрану CNPC-SN12 L2-P25 (размер пор 15 мкм), мембрану под конъюгат PT-R5, мембрану для нанесения образца GFB-R4, адсорбирующую мембрану АР 045, для нанесения БСА использовалась мембрана PT-R5.
На мембраны были нанесены следующие реагенты:
1. Белок А из Staphylococcus aureus, производства ООО «Имтек» (Россия).
2. Конъюгат коллоидного золота со средним диаметром частиц 30 нм и рекомбинантного антигена 38 кДа М. tuberculosis (Rv0934), фирмы «Arista Biologicals Inc.» (США), кат. № AGMTB-0220.
3. Моноклональные антитела НТМ81 против рекомбинантного антигена 38 кДа М. tuberculosis, Центр молекулярной диагностики и терапии, Москва (Россия).
Для формирования аналитической зоны использовали белок А, контрольной зоны - Моноклональные антитела НТМ81 против рекомбинантного антигена 38 кДа М. tuberculosis. На 1 см полосы наносили 2 мкл раствора белка А (10,0 мг/мл в 50 мМ фосфатном буфере, pH 7,4) и 2 мкл раствора антител (0,5 мг/мл в том же буфере). Конъюгат коллоидного золота с антигеном наносили в разведении, соответствующем D520=3,0, в объеме 8 мкл на 1 см полосы. Раствор БСА наносили из концентрации 10% по массе в объеме 6 мкл на 1 см полосы на мембрану длиной 5 мм. Для нанесения реагентов использовали диспенсер «IsoFlow» фирмы «Imagene Technology» (США). После нанесения реагентов мембраны высушивали не менее 24 ч в помещении с контролируемыми температурой и влажностью. Листы мембран с нанесенными иммунореагентами нарезали на индивидуальные тест-полоски шириной 3,5 мм.
Иммунохроматографический анализ проводили при комнатной температуре. Тест-полоску погружали в пробу на 1 мин в вертикальном положении, а затем извлекали и помещали на горизонтальную поверхность. Детекцию связывания коллоидного золота осуществляли через 10 мин визуально.
Мембрана с нанесенным БСА задерживала фронт диффундирующей жидкости примерно на 1 мин, в то время как без дополнительной мембраны фронт жидкости после попадания на мембрану с коллоидным конъюгатом достигал аналитической зоны за 10 с и вследствие меньшего времени взаимодействия реагентов интенсивность окраски аналитической зоны была существенно ниже (Рис.2): приблизительно в 6 раз, что позволяет детектировать (пропорционально - в 6 раз) меньшие концентрации антител.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Рис.1. Принцип иммунохроматографического анализа для серодиагностики. 1 - мембрана, адсорбирующая образец; 2 - частицы коллоидного золота; 3 - реагент для связывания антител: антивидовые антитела, белок A, белок G или др.; 4 - пластиковая основа; 5 - рабочая мембрана; 6 - конечная адсорбирующая мембрана; 7 - антиген, иммобилизованный в аналитической зоне; 8 - антивидовые антитела, иммобилизованные в контрольной зоне.
Рис.2. Тестирование сыворотки крови больного туберкулезом в стандартной комплектации тест-системы (А) и в комплектации с нанесенным раствором 10% БСА (Б) (Стрелкой указано положение аналитической зоны).
Claims (1)
- Тест-полоска для высокочувствительного иммунохроматографического анализа, представляющая собой мембрану, на которую наносят антиген или антигены и частицы коллоидного золота, конъюгированные с реагентом для связывания аналита, отличающаяся тем, что для замедления вымывания коллоидного золота, конъюгированного с реагентом для связывания аналита, и увеличения длительности взаимодействия пробы с реагентом для связывания аналита в систему дополнительно включена стекловолоконная мембрана с нанесенным на нее бычьим сывороточным альбумином, прикрепленная к тест-полоске сразу за мембраной с нанесенным коллоидным золотом, конъюгированным с реагентом для связывания аналита.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013111991/15A RU2523393C1 (ru) | 2013-03-19 | 2013-03-19 | Тест-полоска для высокочувствительного иммунохроматографического анализа |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013111991/15A RU2523393C1 (ru) | 2013-03-19 | 2013-03-19 | Тест-полоска для высокочувствительного иммунохроматографического анализа |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2523393C1 true RU2523393C1 (ru) | 2014-07-20 |
Family
ID=51217704
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013111991/15A RU2523393C1 (ru) | 2013-03-19 | 2013-03-19 | Тест-полоска для высокочувствительного иммунохроматографического анализа |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2523393C1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU168868U1 (ru) * | 2016-06-08 | 2017-02-21 | Федеральное государственное автономное учреждение "Научный центр здоровья детей" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГАУ "НЦЗД" Минздрава России) | Диагностическая тест система для первичной диагностики патологии молочной железы при наличии выделений из соска |
RU202193U1 (ru) * | 2020-06-09 | 2021-02-05 | Федеральное государственное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук" (ФИЦ Биотехнологии РАН) | Устройство для иммунохроматографической высокочувствительной и внелабораторной детекции фитопатогенной бактерии Clavibacter michiganensis, основанное на повышении интенсивности регистрируемого колориметрического сигнала за счет каталитических свойств наномаркера |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030027222A1 (en) * | 2001-07-23 | 2003-02-06 | Bagaria Padma S. | Test device for detecting human blood and method of use |
RU2242762C2 (ru) * | 2002-10-31 | 2004-12-20 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Изделие и способ для многопрофильного иммуноанализа сывороток |
RU58717U1 (ru) * | 2003-06-06 | 2006-11-27 | Эдвантидж Дайэгностикс Корпорейшн | Диагностическая испытательная полоска |
RU2360252C1 (ru) * | 2008-04-09 | 2009-06-27 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" ("РосНИПЧИ "Микроб") | Диагностикум и тест-система для определения активности антирабических сывороток и препарата гетерологичного антирабического иммуноглобулина in vitro методом дот-иммуноанализа |
-
2013
- 2013-03-19 RU RU2013111991/15A patent/RU2523393C1/ru active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030027222A1 (en) * | 2001-07-23 | 2003-02-06 | Bagaria Padma S. | Test device for detecting human blood and method of use |
RU2242762C2 (ru) * | 2002-10-31 | 2004-12-20 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Изделие и способ для многопрофильного иммуноанализа сывороток |
RU58717U1 (ru) * | 2003-06-06 | 2006-11-27 | Эдвантидж Дайэгностикс Корпорейшн | Диагностическая испытательная полоска |
RU2360252C1 (ru) * | 2008-04-09 | 2009-06-27 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" ("РосНИПЧИ "Микроб") | Диагностикум и тест-система для определения активности антирабических сывороток и препарата гетерологичного антирабического иммуноглобулина in vitro методом дот-иммуноанализа |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU168868U1 (ru) * | 2016-06-08 | 2017-02-21 | Федеральное государственное автономное учреждение "Научный центр здоровья детей" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГАУ "НЦЗД" Минздрава России) | Диагностическая тест система для первичной диагностики патологии молочной железы при наличии выделений из соска |
RU202193U1 (ru) * | 2020-06-09 | 2021-02-05 | Федеральное государственное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук" (ФИЦ Биотехнологии РАН) | Устройство для иммунохроматографической высокочувствительной и внелабораторной детекции фитопатогенной бактерии Clavibacter michiganensis, основанное на повышении интенсивности регистрируемого колориметрического сигнала за счет каталитических свойств наномаркера |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2018204793B2 (en) | Signal amplification in lateral flow and related immunoassays | |
JP3753741B2 (ja) | 定量的免疫クロマトグラフィー測定法 | |
JP4934147B2 (ja) | 迅速診断のためのテスト装置 | |
US20120308444A1 (en) | Lateral Flow Immunoassay for Detecting Cardiac Troponin I and Myoglobin | |
JP6417725B2 (ja) | 分析対象物の検出方法 | |
JP5753942B2 (ja) | 赤血球含有サンプル中の対象物を検出するためのイムノクロマトグラフィー用テストストリップおよびイムノクロマトグラフィーを利用した検出方法 | |
KR20060109595A (ko) | 개선된 측면 이동 면역분석법과 이를 위한 디바이스 | |
CN111077309B (zh) | 利用俘获缀合物的免疫测定 | |
CN107430120B (zh) | 免疫检测方法和用于其的测试条 | |
US20140087365A1 (en) | Immunochromatographic detection method capable of determining sample without specimen as improperly operated sample and test strip used therewith | |
TW201541079A (zh) | 免疫層析分析裝置、免疫層析分析方法以及免疫層析分析套組 | |
JP6399632B2 (ja) | 赤血球含有サンプル中の対象物を検出するためのイムノクロマトグラフィー用テストストリップ、および該テストストリップを使用するイムノクロマトグラフィー | |
WO2015166790A1 (ja) | クレアチンキナーゼmbアイソザイムの測定方法及びそれに用いられるキット | |
RU2523393C1 (ru) | Тест-полоска для высокочувствительного иммунохроматографического анализа | |
JP4653574B2 (ja) | ヘモグロビンA1cの測定方法 | |
JP5723484B2 (ja) | 赤血球含有サンプル中の対象物を検出するためのイムノクロマトグラフィー用テストストリップおよびイムノクロマトグラフィーを利用した検出方法 | |
JP2020020724A (ja) | イムノクロマト用試験片及びイムノクロマト検出キット | |
WO2017078170A1 (ja) | Ck19に特異的なモノクローナル抗体およびこれを産生するハイブリドーマ、癌の検出キット、癌の検出方法および癌の転移の判定方法 | |
KR20210064268A (ko) | 면역 크로마토그래피용 시험편 | |
RU2530560C2 (ru) | Метод получения межмолекулярных конъюгатов для иммунохроматографического опредеелния специфических антител | |
CN107209179B (zh) | 用于检测含红细胞的样品中的对象物的免疫色谱用测试条、及使用该测试条的免疫色谱 | |
JP6464308B1 (ja) | イムノクロマト用試験片 | |
JP2018025426A (ja) | イムノクロマトグラフィー検出キット | |
RU2545909C2 (ru) | Способ иммунохроматографического определения специфических антител | |
JP2020052028A (ja) | イムノクロマト用試験片 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD4A | Correction of name of patent owner |