TW201334696A

TW201334696A - 以假單胞菌防治植物病原微生物之方法與取自假單胞菌之物質及組成物

Info

Publication number: TW201334696A
Application number: TW102106852A
Authority: TW
Inventors: Ratnakar Asolkar; Ana Lucia Cordova-Kreylos; Carly Todd
Original assignee: Marrone Bio Innovations Inc
Priority date: 2012-02-28
Filing date: 2013-02-27
Publication date: 2013-09-01
Also published as: UY34645A; EP2820140A4; CA2865237A1; JP2015511586A; EP2820140B1; US9918479B2; US20150030577A1; CA2865237C; WO2013130680A1; CN104254611A; AR090186A1; EP2820140A1

Abstract

本發明提供取自假單胞菌之化合物及組成物，具體而言，該化合物及組成物係取自螢光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)或保護假單胞菌(Pseudomonas protegens)，且更具體而言，化合物及組成物係取自一菌株，其具有富微生物抗性之假單胞菌ATCC 55799之識別特性，且所謂抗微生物性質尤其是指抗菌性質。

Description

以假單胞菌防治植物病原微生物之方法與取自假單胞菌之物質及組成物

本發明係關於用以防治植物病原微生物之組成物及方法，特別是防治細菌及真菌之組成物及方法，且詳言之是關於取自假單胞菌種(Pseudomonas sp)之組成物及方法，更具體而言是取自保護假單胞菌(Pseudomonas protegens)者。

植物病原體對農業生產為害甚大。植物之疾病成因包括細菌、真菌及病毒。

多數細菌性植物疾病可結合宿主抗性、種植實務、化學及生物方法加以防治。

研究已證實若干假單胞菌品種具有生物防治性質(見例如，Dowling與O’Gara於1994年對殺菌抗菌性質之討論、Keel等人於1992年對抗菌性質之討論、2011授予Ramette等人之美國專利第5,622,846號、第5,552,315號)。然而，至今對於病原體防治機制並無明確了解。某些理論包括增加宿主植物抗性、與植物病原體競爭或製造對抗植物病原體之化合物。

從水樣本中分離出的假單胞菌品種CL145A已經證實具有防治軟體動物的能力(見，例如，2001年2月27日核准予Molloy,D.P.之美國專利第6,194,194號，以及美國專利申請公開案第20100266717號)。

本發明提供分離自假單胞菌(Pseudomonas sp.)之化合物及組成物，更詳言之，係分離自具有抗微生物性質之假單胞菌種株，更詳言之，係分離自具有抗細菌性質及抗真菌性質之假單胞菌種株。

在一特定實施例中，此等取自假單胞菌種之化合物具有以下特性：(a)可取自一假單胞菌種，特別是可取自一能夠產生至少一可防治斑貽貝、條紋貽貝及黃金貽貝之化合物之假單胞菌種；(b)調控一或多種植物病原微生物；以及(c)其分子量及HPLC滯留時間係選自包含以下項目之群組：(i)分子量為約300-380，且更具體而言，約324，如以液相層析質譜法(LC/MS)所測定者，其在一逆相C-18 HPLC(Phenomenex,Luna 5μ C18(2)100 A,100 x 4.60 mm)柱上利用水-乙腈(CH3CN)以一梯度溶劑系統於每分鐘0.5毫升流速及210 nm之紫外線偵測所測得之HPLC滯留時間為約12-22分鐘，更具體而言為約17分鐘，且再具體而言為約17.50分鐘(0-20分鐘90-0%乙腈水溶液；20-24分鐘100%乙腈；24-27分鐘0-90%乙腈水溶液；27-30分鐘90%乙腈水溶液)，且紫外線吸收於214、252、312nm；(ii)分子量為約300-360，且更具體而言，約314，如以LC/MS 所測定者；其以一梯度溶劑系統(0-20分鐘90-0%乙腈水溶液；20-24分鐘100%乙腈；24-27分鐘0-90%乙腈水溶液；27-30分鐘90%乙腈水溶液)於每分鐘0.5毫升流速測得之HPLC滯留時間為約10-20分鐘，更具體而言為約15分鐘，且再具體而為約15.23分鐘，且紫外線吸收於299、311、325 nm；(iii)分子量為約580-680，且更具體而言，約627，如以LC/MS所測定者；其HPLC滯留時間為約8-20分鐘，更具體而言為約14分鐘，且再具體而為約14-24分鐘，且紫外線吸收於299、311、325 nm；(iv)分子量為約350-425且更具體而言，約386，如以LC/MS所測定者；其在一逆相C-18 HPLC(Phenomenex,Luna 5μ C18(2)100 A,100 x 4.60 mm)柱上利用水-乙腈(CH3CN)以一梯度溶劑系統於每分鐘0.5毫升流速及210 nm之紫外線偵測所測得之HPLC滯留時間為約6-16分鐘，更具體而言為約9分鐘，且再具體而為約9.06分鐘(0-20分鐘90-0%乙腈水溶液；20-24分鐘100%乙腈；24-27分鐘0-90%乙腈水溶液；27-30分鐘90%乙腈水溶液)，且紫外線吸收於221、267、361 nm。

在一更特定實施例中，該植物病原微生物為植物病原體細菌或植物病原體真菌。在一更特定實施例中，植物病原體細菌為以下至少一者中之一員：芽孢桿菌種(Bacillus sp.)(如，Bacillus subtilus、Bacillus cereus)、黃單胞菌種(Xanthomonas sp.)(Xanthomonas acernea、Xanthomonas albilineans、Xanthomonas alfalfae ssp.jlfalfa、Xanthomonas alfalfae ssp.citrumelonis、葡萄酒黃單胞菌Xanthomonas ampelina、榛子枯萎病菌Xanthomonas arboricola pv.corylina、Xanthomonas arboricola pv.juglandis、Xanthomonas arboricola pv.pruni、Xanthomonas axonopodis、 Xanthomonas axonopodis pv.alfalfa、Xanthomonas axonopodis pv.allii、Xanthomonas axonopodis pv.anacardii、Xanthomonas axonopodis pv.begonia、Xanthomonas axonopodis pv.citri、Xanthomonas axonopodis pv.citrumelo、Xanthomonas axonopodis pv.dieffenbachiae、Xanthomonas axonopodis pv.glycines、Xanthomonas axonopodis pv.malvacearum、Xanthomonas axonopodis pv.manihotis、Xanthomonas axonopodis pv.phaseoli、Xanthomonas axonopodis pv.poinsettiicola、Xanthomonas axonopodis pv.vasculorum、Xanthomonas axonopodis pv.vesicatoria、Xanthomonas axonopodis pv.vitians、Xanthomonas begoniae、Xanthomonas campestris、Xanthomonas campestris pv.alfalfa、Xanthomonas campestris pv.alfalfa、Xanthomonas campestris pv.armoraciae、Xanthomonas campestris pv.Begonia、Xanthomonas campestris pv.campestris、Xanthomonas campestris pv.Carotae、Xanthomonas campestris pv.coriandri、Xanthomonas campestris pv.Corylina、Xanthomonas campestris pv.cucurbitae、Xanthomonas campestris pv.dieffenbachiae、Xanthomonas campestris pv.hederae、Xanthomonas campestris pv.hyacinthi、Xanthomonas campestris pv.incanae、Xanthomonas campestris pv.juglandis、Xanthomonas campestris pv.malvacearum、Xanthomonas campestris pv.Mangiferaeindicae、Xanthomonas campestris pv.musacearum、Xanthomonas campestris pv.Oryzae、Xanthomonas campestris pv.Oryzicola、Xanthomonas campestris pv.Papavericola、Xanthomonas campestris pv.pelargonii、Xanthomonas campestris pv.Phaseoli、Xanthomonas campestris pv.poinsettiicola、Xanthomonas campestris pv.Pruni、Xanthomonas campestris pv. raphani、Xanthomonas campestris pv.Translucens、Xanthomonas campestris pv.vasculorum、Xanthomonas campestris pv.Vesicatoria、Xanthomonas campestris pv.vitians、Xanthomonas campestris pv.Zinnia、Xanthomonas citri、Xanthomonas citri ssp.citri、Xanthomonas citri ssp.malvacearum、Xanthomonas cucurbitae、Xanthomonas euvesicatoria、Xanthomonas fragariae、Xanthomonas fuscans ssp.fuscans、Xanthomonas gardneri、Xanthomonas hortorum、Xanthomonas hortorum pv.carotae、Xanthomonas hortorum pv.hederae、Xanthomonas hortorum pv.Pelargonii、Xanthomonas hyacinthi、Xanthomonas maltophilia、Xanthomonas manihotis、Xanthomonas oryzae、Xanthomonas oryzae pv.oryzae、Xanthomonas oryzae pv.oryzicola、Xanthomonas perforans、Xanthomonas populi、Xanthomonas translucens pv.cerealis、Xanthomonas translucens pv.graminis、Xanthomonas translucens pv.secalis、Xanthomonas translucens pv.translucens、Xanthomonas translucens pv.undulosa、Xanthomonas vasculorum、Xanthomonas vasicola pv.holcicola、Xanthomonas vesicatoria、Xanthomonas vesicatoria pv.vesicatoria)、放射線菌種(Streptomyces)(如，Streptomyces scabie、Streptomyces acidiscabies、Streptomyces turgidiscabies、Streptomyces ipomoeae、Streptomyces alkaliscabies)、軟腐菌種(Erwinia)，(如，Erwinia carotovora、Erwinia amylovora、Erwinia ananas、Erwinia chrysanthemi、Erwinia aroideae、Erwinia carneigieana、Erwinia cypripedi、Erwinia herbicola、Erwinia nimmipressuralis、Erwinia pyrifoliae、Erwinia rhapontici，Erwinia rubrifaciens、Erwinia salicis、Erwinia tracheiphila)或葡萄孢菌種(Botrytis sp.)(如，Botrytis cinerea、Botrytis acalda、Botrytis allii[botrytis rot]、Botrytis byssoidea[mycelial neck rot]、Botrytis convolute、Botrytis alliptica、Botrytis paeoniae、Botrytis porri、Botrytis squamosal、Botrytis tulipae)。在一特定實施例中，植物病原體真菌包括但不限於，單絲殼菌種(Sphaerotheca sp.)(Sphaerotheca delphinii、Sphaerotheca fuliginea、Sphaerotheca fusca、Sphaerotheca macularis、Sphaerotheca mors-uvae、Sphaerotheca pannosa、Sphaerotheca pannosa var.rosae、Sphaerotheca phytoptophila)。

本發明亦提供包含此等化合物之組成物，且進一步提供取得此等化合物之方法。在一特定實施例中，此等化合物之取得方法可為：(a)培養一可防治斑貽貝、條紋貽貝及黃金貽貝之假單胞菌種培養物，所用培養條件足以在該被培養之培養物中產生上開化合物；以及(b)從步驟(a)之該被培養之培養物中分離出該化合物。

本發明更提供一種以一用量之細胞懸浮液或完全細胞培養液在一位置調控至少一種植物病原微生物之方法，其中該細胞懸浮液或完全細胞培養液中包含取自一假單胞菌種之細胞，其中該假單胞菌種可產生一或多種能夠防治斑貽貝、條紋貽貝及黃金貽貝之物質，或從之取得之上清液、濾液、細胞組分、一或多種代謝物、一或多種化合物及/或萃取物，其可有效調控該植物病原微生物者。本發明亦提供一用量細胞懸浮液或完全細胞培養液之使用，該細胞懸浮液或完全細胞培養液包含取自一假單胞菌種之細胞，其中該假單胞菌種可產生一或多種能夠防治斑貽貝、條紋貽貝及黃金貽貝之物質，或從之取得之上清液、濾液、細胞組分、一或多種代謝物、一或多種化合物及/或萃取物，以調製成一用來調控一或多種植物病原微生物之組成物。

在一特定實施例中，該化合物或代謝物可包括但不限於：(I)上開化合物；(II)一種化合物，(i)其分子量為約1280-1310，如以液相層析質譜法(LC/MS)所測定者；(ii)其1H NMR值為δ 9.25,8.36,8.06,7.82,7.71,7.52,7.45,6.82,6.36,6.08,5.42,5.39,5.30,5.14,4.68,4.42,4.31,4.16,4.11,4.07,3.95-3.86,3.83,3.72,3.66,3.53,3.48,3.37,3.17,3.06,2.56,2.53,2.45,2.32,2.21,2.02,1.96,1.84,1.72,1.65,1.61,1.51,1.48-1.37,1.32,1.12,0.94,0.91,0.68；且(c)其高壓液相層析(HPLC)滯留時間為約50-55分鐘on a逆相C-18 HPLC柱using a水-乙腈梯度溶劑系統(0-10分鐘；30-40%乙腈水溶液，10-20分鐘；40-60%乙腈水溶液，20-60分鐘；60-80%乙腈水溶液，60-65分鐘；80-100%乙腈水溶液)at每分鐘2.5毫升流速及210 nm之紫外線偵測；(III)一種化合物，(i)其分子量為約1310-1335，如以LC/MS所測定者；(ii)其在一逆相C-18 HPLC柱上利用水-乙腈以一梯度溶劑系統於每分鐘2.5毫升流速及210 nm之紫外線偵測所測得之HPLC滯留時間為約55-60分鐘(0-10分鐘30-40%乙腈水溶液；10-20分鐘40-60%乙腈水溶液；20-60分鐘60-80%乙腈水溶液；60-65分鐘80-100%乙腈水溶液)；(IV)一種化合物，(i)其分子量為約540-550，如以LC/MS所測定者；(ii)其在一逆相C-18 HPLC柱上利用水-乙腈以一梯度溶劑系統於每分鐘10毫升流速及210 nm之紫外線偵測所測得之HPLC滯留時間為約50-55分鐘(0-10分鐘35-45%乙腈水溶液；10-20分鐘45-60%乙腈水溶液； 20-50分鐘60-85%乙腈水溶液；50-60分鐘85-100%乙腈水溶液；60-70分鐘100%乙腈)；(V)化合物，為一種內酯，且其羥基化不飽和脂肪酸內酯結構包含至少一為5員γ-內酯之內酯部分、至少一不飽和部分以及至少一醇基團；核心結構之分子量從285至約310；至少15個碳及至少3個氧；(VI)一化合物，其結構為

其中：X各自獨立為--O、--NR1，或--S，其中R1為--H或C1-C6烷基；n=0至15，R2至R4各自獨立為--H、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環、取代雜環、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、鹵素、胺基、氨基、羧基、--C(O)H、醯基、氧醯基、氨基甲酸酯、磺醯基、磺醯胺，或硫醯基；m=雙鍵或三鍵；(VII)一化合物，其羥基化不飽和脂肪酸結構包含至少一羧酸部分、至少一不飽和部分及至少一醇基團；核心結構之分子量從285至約310；至少15個碳及至少3個氧；(VIII)一化合物，其結構為

其中：X各自獨立為--OH、--NR1，或--S，其中R1為--H或C1-C6烷基；n=0至15，R2至R4各自獨立為--H、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環、取代雜環、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、鹵素、胺基、氨基、羧基、--C(O)H、醯基、氧醯基、氨基甲酸酯、磺醯基、磺醯胺，或硫醯基；m=雙鍵、三鍵；(IX)一化合物，其結構為

或一可接受鹽或其立體異構物，其中：X各自獨立為--OH、--NR1，或--S，其中R1為--H或C1-C6烷基；n=0至15，R2，R3各自獨立為--H、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環、取代雜環、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、鹵素、胺基、氨基、羧基、--C(O)H、醯基、氧醯基、氨基甲酸酯、磺醯基、磺醯胺，或硫醯基；m=雙鍵、三鍵；(X)一化合物，其結構為

或一可接受鹽或其立體異構物，其中：X各自獨立為--OH、--NR1，或--S，其中R1為--H或C1-C6烷基；n=0至15，R2，R3各自獨立為--H、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、芳基，取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環、取代雜環、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、鹵素、胺基、氨基、羧基、--C(O)H、醯基、氧醯基、氨基甲酸酯、磺醯基、磺醯胺，或硫醯基；m=0至15，

(XI)一化合物，其結構為

或一可接受鹽或其立體異構物，其中：X各自獨立為--OH、--NR1，或--S，其中R1為--H或C1-C6烷基；n=0至15，R2至R4各自獨立為--H、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環、取代雜環、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、鹵素、胺基、氨基、羧基、--C(O)H、醯基、氧醯基、氨基甲酸酯、磺醯基、磺醯胺，或硫醯基；m=雙鍵、三鍵；(XII)一化合物，其結構為

其中R1為--H或C1-C6烷基；n=0至15，R2至R4各自獨立為--H、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環、取代雜環、環烷基，取代環烷基、烷氧基、取代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、鹵素、胺基、氨基、羧基、--C(O)H、醯基、氧醯基、氨基甲酸酯、磺醯基、磺醯胺，或硫醯基；m=0至15；(XIII)一選自由γ-十二內酯、δ-十三內酯、piliferolide A及α-庚基-γ-丁酸內酯所構成群組之內酯；以及(XIV)一假蒟亭鹼(sarmentine)類似物，其係選自由N- 環戊烷基癸醯胺、N-(癸醯基)吡咯啶、N-(癸醯基)哌啶、N-(癸醯基)六甲烯亞胺、N-環戊烷基癸烯醯胺、(N-(癸烯醯基)吡咯啶、N-(癸烯醯基)哌啶、N-(癸烯醯基)六甲烯亞胺及N-(癸烯醯基)哌啶所構成之群組；(XV)11-羥基-12-烯-硬脂酸；(XVI)9-十六碳烯酸；以及(XVII)蓖麻油酸。

在一特定實施例中，上開物質可施用於一植物或土壤。

此外，上開物質可與一抗菌素同時施用，特別是一可對抗土傳細菌之抗菌素。在一相關概念中，本發明提供一種包含上開物質與另一可對抗土傳細菌之抗菌素之組合。此等組合也可為組成物。在一相關概念中，本發明亦提供此等物質及抗菌素於調製此等組合之使用。在又一相關概念中，本發明亦提供此等組合於防治土傳細菌之使用。

用於以上組成物或方法或以上化合物或代謝物之假單胞菌可取自由以下假單胞菌所構成之群組：Pseudomonas protegens、Pseudomonas saponiphila、Pseudomonas ficuserectae、Pseudomonas congelans、Pseudomonas tremae、Pseudomonas caricapapayae、Pseudomonas mandelii、Pseudomonas savastanoi、Pseudomonas syringae、Pseudomonas chlororaphis subsp.piscium、Pseudomonas cannabina、Pseudomonas marginalis、Pseudomonas simiae、Pseudomonas avellanae、Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantiaca、Pseudomonas chlororaphis subsp.chlororaphis、Pseudomonas frederiksbergensis、Pseudomonas amygdali、Pseudomonas extremaustralis、 Pseudomonas kilonensis、Pseudomonas lini、Pseudomonas Antarctica、Pseudomonas corrugata、Pseudomonas poae、Pseudomonas grimontii、Pseudomonas brassicacearum subsp.Neoaurantiaca、Pseudomonas meridian、Pseudomonas trivialis、Pseudomonas veronii、Pseudomonas lundensis、Pseudomonas salomonii、Pseudomonas rhodesiae、Pseudomonas arsenicoxydans、Pseudomonas thivervalensis、Pseudomonas deceptionensis、Pseudomonas palleroniana、Pseudomonas chlororaphis subsp.aureofaciens、Pseudomonas costantinii、Pseudomonas lurida、Pseudomonas migulae、Pseudomonas orientalis、Pseudomonas extremorientalis、Pseudomonas mediterranea、Pseudomonas brassicacearum subsp.brassicacearum、Pseudomonas abietaniphila、Pseudomonas baetica、Pseudomonas brenneri、Pseudomonas psychrophila、Pseudomonas jessenii、Pseudomonas fragi、Pseudomonas tolaasii、Pseudomonas proteolytica、Pseudomonas taetrolens、Pseudomonas mohnii、Pseudomonas moorei、Pseudomonas moraviensis、Pseudomonas gessardii、Pseudomonas cichorii、Pseudomonas libanensis、Pseudomonas benzenivorans、Pseudomonas panacis、Pseudomonas umsongensis、Pseudomonas reinekei、Pseudomonas fluorescens、Pseudomonas agarici、Pseudomonas lutea、Pseudomonas mucidolens、Pseudomonas azotoformans、Pseudomonas viridiflava、Pseudomonas koreensis、Pseudomonas kuykendallii、Pseudomonas synxantha、Pseudomonas segetis、Pseudomonas marincola、Pseudomonas cedrina subsp.cedrina、Pseudomonas graminis、Pseudomonas vancouverensis、Pseudomonas cedrina subsp.fulgida、 Pseudomonas plecoglossicida、Pseudomonas cuatrocienegasensis、Pseudomonas taiwanensis、Pseudomonas putidaPseudomonas rhizosphaerae、Pseudomonas anguilliseptica、Pseudomonas monteilii、Pseudomonas fuscovaginae、Pseudomonas mosselii、Pseudomonas taeanensis、Pseudomonas asplenii、Pseudomonas entomophila、Pseudomonas cremoricolorata、Pseudomonas parafulva、Pseudomonas alcaliphila、Pseudomonas oleovorans subsp.lubricantis、Pseudomonas borbori、Pseudomonas composti、Pseudomonas toyotomiensis、Pseudomonas batumici、Pseudomonas flavescens、Pseudomonas vranovensis、Pseudomonas punonensis、Pseudomonas balearica、Pseudomonas indoloxydans、Pseudomonas guineae、Pseudomonas japonicaPseudomonas stutzeri、Pseudomonas seleniipraecipitans、Pseudomonas peli、Pseudomonas fulva、Pseudomonas argentinensis、Pseudomonas xanthomarina、Pseudomonas pohangensis、Pseudomonas oleovorans、Pseudomonas mendocina、Pseudomonas luteola、Pseudomonas straminea、Pseudomonas caeni、Pseudomonas aeruginosa、Pseudomonas tuomuerensis、Pseudomonas azotifigens、Pseudomonas indica、Pseudomonas oryzihabitans、Pseudomonas otitidis、Pseudomonas psychrotolerans、Pseudomonas zeshuii、Pseudomonas resinovorans、Pseudomonas oleovorans subsp.oleovorans、Pseudomonas thermotolerans、Pseudomonas bauzanensis、Pseudomonas duriflava、Pseudomonas pachastrellae、Pseudomonas citronellolis、Pseudomonas alcaligenes、Pseudomonas xinjiangensis、Pseudomonas delhiensis、Pseudomonas sabulinigri、Pseudomonas litoralis、Pseudomonas pelagia、Pseudomonas linyingensis、Pseudomonas knackmussii、Pseudomonas panipatensis、Pseudomonas nitroreducens、Pseudomonas nitritireducens、Pseudomonas jinjuensis,Pseudomonas pertucinogena、Pseudomonas xiamenensis、Pseudomonas cissicola、Pseudomonas halophile、Pseudomonas boreopolis、Pseudomonas geniculate、Pseudomonas beteli、Pseudomonas hibiscicola、Pseudomonas pictorum、Pseudomonas carboxydohydrogena。在一特定實施例中，該假單胞菌為Pseudomonas protogens或Pseudomonas fluorescens。在另一特定實施例中，該假單胞菌為一具有Pseudomonas ATCC 55799之識別特性之假單胞菌品種。

在另一特定實施例中，該假單胞菌種或菌株可具有以下識別特性：(i)酸性及鹼性磷酸脂酶、亮胺酸芳基醯胺酶及奈酚-A5-BI-磷酸水解酶之酵素活性；(ii)可抵抗四環素、紅黴素、鏈黴素、青黴素、安黴素、氯黴素及頭孢呋辛；(iii)一16S rRNA序列包含SEQ ID NO：3中所提出之正向序列、一SEQ ID NO：4中所提出之反向序列以及一SEQ ID NO：5中所提出之相同序列；(iv)含有脂肪酸17：0,3OH,16：0,1：0,3OH及(v)產生藤黃綠膿菌素及2,4-二乙醯間苯三酚。

圖1顯示分類群-A鄰接樹演進關係，說明CL145A(MBI-401)與假單胞菌品種之關係；圖2顯示分類群-A鄰接樹演進關係s，說明CL145A(MBI-401)與NCBI BLAST搜尋所得對螢光假單胞菌及保護假單胞菌之最佳匹配之關係；圖3顯示藤黃綠膿菌素(1)及DAPG(2)之結構；圖4顯示取得MBI-401部位之通用方案(細胞萃取)與生物分析結果；圖5顯示以逆相HPLC所分析之活性部位1、2及3與原始萃取物之比較；圖6顯示活性部位F1之ESI MS分析；圖7顯示活性部位F2之ESI MS分析；圖8顯示活性部位F3之ESI MS分析；圖9顯示取自上清液萃取之原始萃取物(SN-XAD)之ESI MS；圖10顯示MBI-401對受白粉病感染之黃瓜植物之效用。

除非另有明確說明，否則本文提及數值範圍時，應知介於其間，介於該範圍上下限間之各數值，至下限單位之十分之一者，及其他提及之值或介於該範圍中之值均屬本發明之範疇。此等較小範圍之上下限可獨立被包含於該較小範圍中且亦屬本發明之範圍，然另有明文排除者除外。若所述範圍包含上限及/或下限，則不含該上限或下限之範圍亦包含於本發明之範疇中。

除非另有定義，本文中所有技術及科學術語均與本發明所屬技藝中具有一般技能之人士所知者相同。雖然本文以較佳方法及材料為例說明，但任何與本文所述者相似或相等之方法及材料亦可用於本發明之實施或測試。

應知在本說明書及所附申請專利範圍中，除非前後文另有指稱，否則單數型態之冠詞「一」及「該」包含複數參照。例如，「一物質」亦包含「複數物質」。

如在此定義，「防治貽貝」意指殺死或破壞貽貝之卵、幼體、幼蟲及後期幼蟲，使其無法於一特定地點繁衍。

如在此定義，「調控」一語意指改變植物病原微生物感染之數量或植物病原微生物感染散佈之比例，或殺死或毒害一地點之植物病原微生物。「調控植物病原微生物感染」亦包含調控該感染之效應，其包括但不限於疾病嚴重度、傳染、對植物及根部組織之傷害，以及對植物果實、種子等等之傷害。

如在此定義，「取自」及「得自」意指從一特定來源直接分離或取得或者具有從一特定來源分離或取得之物質或有機體之識別特性。此等用語於本文中交替使用。

如在此定義，「取自一假單胞菌種」意指一包含假單胞菌種細胞之細胞培養液、一包含假單胞菌種細胞之細胞懸浮液，以及細胞組分、上清液、濾液、萃取物或化合物。該萃取物不僅可取自細胞懸浮液或完全細胞培養液，亦可取自該完全細胞培養液或細胞懸浮液之濾液、上清液或部分。

如在此定義，一「分離出之化合物」實質上不含其他化合物或物質，如，以分析方法判定至少約20%純，較佳者為至少約40%純，更佳者為約60%純，又更佳者為約80%純，最佳者為約90%純，且甚至最佳者為約95%純，所述分析方法包括但不限於色析法、電泳法。

物質

用於上開組成物及方法之物質可取自假單胞菌種或菌株。如在此定義，「取自」或「得自」意指一化合物可自細胞懸浮液、完全細胞培養液、濾液、上清液、部分或萃取物中分離出或由其產生。由細胞懸浮液、完全細胞培養液、濾液、上清液、部分或萃取物所「產生之」化合物亦可稱為「代謝物」。所述萃取物不僅可取自細胞懸浮液或完全細胞培養液，亦可取自該完全細胞培養液或細胞懸浮液之濾液、上清液或部分。

在一特定實施例中，該物質可取自一假單胞菌種或一假單胞菌種之菌株，其可產生能夠防治斑貽貝、條紋貽貝及黃金貽貝之化合物者。所述假單胞菌種包括但不限於Pseudomonas protegens、Pseudomonas saponiphila、Pseudomonas ficuserectae、Pseudomonas congelans、Pseudomonas tremae、Pseudomonas caricapapayae、Pseudomonas mandelii、Pseudomonas savastanoi、Pseudomonas syringae、Pseudomonas chlororaphis subsp.piscium、Pseudomonas cannabina、Pseudomonas marginalis、Pseudomonas simiae、Pseudomonas avellanae、Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantiaca、Pseudomonas chlororaphis subsp.chlororaphis、Pseudomonas frederiksbergensis、Pseudomonas amygdali、Pseudomonas extremaustralis、Pseudomonas kilonensis、Pseudomonas lini、Pseudomonas Antarctica、Pseudomonas corrugata、Pseudomonas poae、Pseudomonas grimontii、Pseudomonas brassicacearum subsp.Neoaurantiaca、Pseudomonas meridian、Pseudomonas trivialis、Pseudomonas veronii、Pseudomonas lundensis、 Pseudomonas salomonii、Pseudomonas rhodesiae、Pseudomonas arsenicoxydans、Pseudomonas thivervalensis、Pseudomonas deceptionensis、Pseudomonas palleroniana、Pseudomonas chlororaphis subsp.aureofaciens、Pseudomonas costantinii、Pseudomonas lurida、Pseudomonas migulae、Pseudomonas orientalis、Pseudomonas extremorientalis、Pseudomonas mediterranea、Pseudomonas brassicacearum subsp.brassicacearum、Pseudomonas abietaniphila、Pseudomonas baetica、Pseudomonas brenneri、Pseudomonas psychrophila、Pseudomonas jessenii、Pseudomonas fragi、Pseudomonas tolaasii、Pseudomonas proteolytica、Pseudomonas taetrolens、Pseudomonas mohnii、Pseudomonas moorei、Pseudomonas moraviensis、Pseudomonas gessardii、Pseudomonas cichorii、Pseudomonas libanensis、Pseudomonas benzenivorans、Pseudomonas panacis、Pseudomonas umsongensis、Pseudomonas reinekei、Pseudomonas fluorescens、Pseudomonas agarici、Pseudomonas lutea、Pseudomonas mucidolens、Pseudomonas azotoformans、Pseudomonas viridiflava、Pseudomonas koreensis、Pseudomonas kuykendallii、Pseudomonas synxantha、Pseudomonas segetis、Pseudomonas marincola、Pseudomonas cedrina subsp.cedrina、Pseudomonas graminis、Pseudomonas vancouverensis、Pseudomonas cedrina subsp.fulgida、Pseudomonas plecoglossicida、Pseudomonas cuatrocienegasensis、Pseudomonas taiwanensis、Pseudomonas putida、Pseudomonas rhizosphaerae、Pseudomonas anguilliseptica、Pseudomonas monteilii、Pseudomonas fuscovaginae、Pseudomonas mosselii、Pseudomonas taeanensis、Pseudomonas asplenii、 Pseudomonas entomophila、Pseudomonas cremoricolorata、Pseudomonas parafulva、Pseudomonas alcaliphila、Pseudomonas oleovorans subsp.lubricantis、Pseudomonas borbori、Pseudomonas composti、Pseudomonas toyotomiensis,Pseudomonas batumici、Pseudomonas flavescens、Pseudomonas vranovensis、Pseudomonas punonensis、Pseudomonas balearica、Pseudomonas indoloxydans、Pseudomonas guineae、Pseudomonas japonica、Pseudomonas stutzeri、Pseudomonas seleniipraecipitans、Pseudomonas peli、Pseudomonas fulva、Pseudomonas argentinensis、Pseudomonas xanthomarina、Pseudomonas pohangensis、Pseudomonas oleovorans、Pseudomonas mendocina、Pseudomonas luteola、Pseudomonas straminea、Pseudomonas caeni、Pseudomonas aeruginosa、Pseudomonas tuomuerensis、Pseudomonas azotifigens、Pseudomonas indica、Pseudomonas oryzihabitansPseudomonas otitidis、Pseudomonas psychrotolerans、Pseudomonas zeshuii、Pseudomonas resinovorans、Pseudomonas oleovorans subsp.oleovorans、Pseudomonas thermotolerans、Pseudomonas bauzanensis、Pseudomonas duriflava、Pseudomonas pachastrellae、Pseudomonas citronellolis、Pseudomonas alcaligenes、Pseudomonas xinjiangensis、Pseudomonas delhiensis、Pseudomonas sabulinigri、Pseudomonas litoralis、Pseudomonas pelagia、Pseudomonas linyingensis、Pseudomonas knackmussii、Pseudomonas panipatensis、Pseudomonas nitroreducens、Pseudomonas nitritireducens、Pseudomonas jinjuensis、Pseudomonas pertucinogena、Pseudomonas xiamenensis、Pseudomonas cissicola、Pseudomonas halophile、Pseudomonas boreopolis、 Pseudomonas geniculate、Pseudomonas beteli、Pseudomonas hibiscicola、Pseudomonas pictorum、Pseudomonas carboxydohydrogena。所述假單胞菌種也可具有以下識別特性：(i)酸性及鹼性磷酸脂酶、亮胺酸芳基醯胺酶及奈酚-A5-BI-磷酸水解酶之酵素活性；(ii)可抵抗四環素、紅黴素、鏈黴素、青黴素、安黴素、氯黴素及頭孢呋辛；(iii)一16S rRNA序列包含SEQ ID NO：3中所提出之正向序列、一SEQ ID NO：4中所提出之反向序列以及一SEQ ID NO：5中所提出之相同序列；(iv)含有脂肪酸17：0,3OH,16：0,1：0,3OH及(v)產生藤黃綠膿菌素及2,4-二乙醯間苯三酚。

該化合物之分子量及HPLC留滯時間可為：(i)分子量為約300-380，且更具體而言，約324，如以液相層析質譜法(LC/MS)所測定者，其在一逆相C-18 HPLC(Phenomenex,Luna 5μ C18(2)100 A,100 x 4.60 mm)柱上利用水-乙腈(CH3CN)以一梯度溶劑系統(0-20分鐘90-0%乙腈水溶液；20-24分鐘100%乙腈；24-27分鐘0-90%乙腈水溶液；27-30分鐘90%乙腈水溶液)於每分鐘0.5毫升流速及210 nm之紫外線偵測所測得之HPLC滯留時間為約12-22分鐘，更具體而言為約17分鐘，且再具體而言為約17.50分鐘，且紫外線吸收於212、252、312 nm；(ii)分子量為約300-360，且更具體而言，約314，如以LC/MS 所測定者；其在一逆相C-18 HPLC(Phenomenex,Luna 5μ C18(2)100 A,100 x 4.60 mm)柱上利用水-乙腈(CH3CN)以一梯度溶劑系統每分鐘0.5毫升流速測得之HPLC滯留時間為約10-20分鐘，更具體而言為約15分鐘，且再具體而為約15.23分鐘(0-20分鐘90-0%乙腈水溶液；20-24分鐘100%乙腈；24-27分鐘0-90%乙腈水溶液；27-30分鐘90%乙腈水溶液)於，且紫外線吸收於299、311、325 nm；(iii)分子量為約580-680，且更具體而言，約627，如以LC/MS所測定者；其在一逆相C-18 HPLC(Phenomenex,Luna 5μ C18(2)100 A,100 x 4.60 mm)柱上利用水-乙腈(CH3CN)以一梯度溶劑系統(0-20分鐘90-0%乙腈水溶液；20-24分鐘100%乙腈；24-27分鐘0-90%乙腈水溶液；27-30分鐘90%乙腈水溶液)每分鐘0.5毫升流速測得之HPLC滯留時間為約14分鐘，且再具體而為約14.24分鐘，且紫外線吸收於299、311、325 nm；(iv)分子量為約350-425且更具體而言，約386，如以LC/MS所測定者；其在一逆相C-18 HPLC(Phenomenex,Luna 5μ C18(2)100 A,100 x 4.60 mm)柱上利用水-乙腈(CH3CN)以一梯度溶劑系統(0-20分鐘90-0%乙腈水溶液；20-24分鐘100%乙腈；24-27分鐘0-90%乙腈水溶液；27-30分鐘90%乙腈水溶液)於每分鐘0.5毫升流速及210 nm之紫外線偵測所測得之HPLC滯留時間為約6-16分鐘，更具體而言為約9分鐘，且再具體而為約9.06分鐘，且紫外線吸收於221、267、361 nm。

此外，該物質可為如胜肽、蛋白質及/或內酯等化合物。此等物質之範例可見於美國專利申請公開案第20100266717號，該案之內容於此合併參照，且包括但不限於： (I)一化合物，(a)其分子量為約1280-1310，如以液相層析質譜法(LC/MS)所測定者；(b)其1H NMR值為δ 9.25,8.36,8.06,7.82,7.71,7.52,7.45,6.82,6.36,6.08,5.42,5.39,5.30,5.14,4.68,4.42,4.31,4.16,4.11,4.07,3.95-3.86,3.83,3.72,3.66,3.53,3.48,3.37,3.17,3.06,2.56,2.53,2.45,2.32,2.21,2.02,1.96,1.84,1.72,1.65,1.61,1.51,1.48-1.37,1.32,1.12,0.94,0.91,0.68；(c)其在一逆相C-18 HPLC柱上利用水-乙腈以一梯度溶劑系統(0-10分鐘30-40%乙腈水溶液；10-20分鐘40-60%乙腈水溶液；20-60分鐘60-80%乙腈水溶液；60-65分鐘80-100%乙腈水溶液)於每分鐘2.5毫升流速及210 nm之紫外線偵測所測得之高壓液相層析(HPLC)滯留時間為約50-55分鐘；(II)一化合物，(a)其分子量為約1310-1335，更具體而言，約1321，如以LC/MS所測定者；(b)其在一逆相C-18 HPLC柱上利用水-乙腈以一梯度溶劑系統(0-10分鐘30-40%乙腈水溶液；10-20分鐘40-60%乙腈水溶液；20-60分鐘60-80%乙腈水溶液；60-65分鐘80-100%乙腈水溶液)於每分鐘2.5毫升流速及210 nm之紫外線偵測所測得之HPLC滯留時間為約55-60分鐘；(III)一化合物，(a)其分子量為約540-550，如以LC/MS所測定者；(b)其在一逆相C-18 HPLC柱上利用水-乙腈以一梯度溶劑系統(0-10分鐘35-45%乙腈水溶液；10-20分鐘45-60%乙腈水溶液；20-50分鐘60-85%乙腈水溶液；50-60分鐘85-100%乙腈水溶液；60-70分鐘100%乙腈)於每分鐘10毫升流速及210 nm之紫外線偵測所測得之HPLC滯留時間為約50-55分鐘。

在一特定實施例中，該化合物可取自螢光假單胞菌或保護假單胞菌，且特別是取自具有ATCC 55799識別特性之假單胞菌品種，且所述假單胞菌品種之羥基化不飽和脂肪酸內酯結構包含至少一為5員γ-內酯之內酯部分、至少一不飽和部分及至少一醇基團；核心結構之分子量從285至約310；至少15個碳及至少3個氧原子。在一更為特定之實施例中，該化合物之結構可為

其中：X各自獨立為--O、--NR1，或--S，其中R1為--H或C1-C6烷基；n=0至15，R2至R4各自獨立為--H、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環、取代雜環、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、鹵素、胺基、氨基、羧基、--C(O)H、醯基、氧醯基、氨基甲酸酯、磺醯基、磺醯胺，或硫醯基；m=雙鍵或三鍵。在又一特定實施例中，Y及M為氧，A及X為碳且n為2或3，R為一C7或C8烷基且z為0，其中當n為2且R為一C7烷基時，R連附於A。

在一特定實施例中，該化合物為A

在又一特定實施例中，該化合物可取自螢光假單胞菌或保護假單胞菌品種且其特色為具有一羥基化不飽和脂肪酸結構，此結構包含至少一羧酸部分、至少一不飽和部分及至少一醇基團；核心結構分子量從285至約310；至少15個碳及至少3個氧。

在一更特定實施例中，本發明之化合物結構為

其中：X各自獨立為--OH、--NR1，或--S，其中R1為--H或C1-C6烷基；n=0至15，R2至R4各自獨立為--H、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環、取代雜環、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、鹵素、胺基、氨基、羧基、--C(O)H、醯基、氧醯基、氨基甲酸酯、磺醯基、磺醯胺，或硫醯基；m=雙鍵、三鍵，分子量為約285至約310。

在一最特定實施例中，該化合物為11-羥基-12-烯-硬脂酸，且其結構為

其他化合物可見於美國專利申請公開案第20100266717號，且包括但不限於：(a)一選自由γ-十二內酯、δ-十三內酯、piliferolide A及α-庚基-γ-丁酸內酯所構成群組之內酯；(b)一選自由N-環戊烷基癸醯胺，N-(癸醯基)吡咯啶、N-(癸醯基)哌啶、N-(癸醯基)六甲烯亞胺、N-環戊烷基癸烯醯胺、(N-(癸烯醯基)吡咯啶、N-(癸烯醯基)哌啶、N-(癸烯醯基)六甲烯亞胺及N-(癸烯醯基)哌啶所構成群組之假蒟亭鹼類似物；及(c)11-羥基-12-烯-硬脂酸。

除美國專利申請公開案第20100266717號中所揭露之化合物外，該物質可為一化合物，(a)其具有殺螺活性；(b)其分子量為約230-270，如以液相層析質譜法(LC/MS)所測定者；且(c)其在一逆相C-18 HPLC柱上利用水-乙腈(CH3CN)以一梯度溶劑系統(0-20分鐘90-0%乙腈水溶液；20-24分鐘100%乙腈；24-27分鐘0-90%乙腈水溶液；27-30分鐘90%乙腈水溶液)於每分鐘0.5毫升流速及210 nm之紫外線偵測所測得之高壓液相層析(HPLC)滯留時間為約16-25分鐘，且一實施例中之化合物可為一不飽和脂肪酸。

在一更特定實施例中，本發明之化合物包括但不限於：(A)一化合物，其結構為

或一可接受鹽或其立體異構物，其中：X各自獨立為--OH、--NR1，或--S，其中R1為--H或C1-C6烷基；n=0至15，R2、R3各自獨立為--H、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環、取代雜環、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、鹵素、胺基、氨基、羧基、--C(O)H、醯基、氧醯基、氨基甲酸酯、磺醯基、磺醯胺，或硫醯基；m=雙鍵、三鍵。

(B)一化合物，其結構為

或一可接受鹽或其立體異構物，其中：X各自獨立為--OH、 --NR1，或--S，其中R1為--H或C1-C6烷基；n=0至15，R2、R3各自獨立為--H、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環、取代雜環、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、鹵素、胺基、氨基、羧基、--C(O)H、醯基、氧醯基、氨基甲酸酯、磺醯基、磺醯胺，或硫醯基；m=0至15，在一最特定實施例中，該化合物為9-十六碳烯酸

在一特定實施例中，該化合物可取自螢光假單胞菌或保護假單胞菌，且其特徵為具有一羥基化不飽和脂肪酸結構，此結構包含至少一羧酸部分、至少一不飽和部分及至少一醇基團；核心結構分子量從280至約320；至少15個碳及至少3個氧。

或一可接受鹽或其立體異構物，其中：X各自獨立為--OH、--NR1，或--S，其中R1為--H或C1-C6烷基；n=0至15，R2至R4各自獨立為--H、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環、取代雜環、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、鹵素、胺基、氨基、羧基、--C(O)H、醯基、氧醯基、氨基甲酸酯、磺醯基、磺醯胺，或硫醯基；m=雙鍵、三鍵。

(B)一化合物，其結構為

其中R1為--H或C1-C6烷基；n=0至15，R2至R4各自獨立為--H、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環、取代雜環、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、鹵素、胺基、氨基、羧基、--C(O)H、醯基、氧醯基、氨基甲酸酯、磺醯基、磺醯胺，或硫醯基；m=0至15。

在一特定實施例中，該化合物為蓖麻油酸

製造方法

如上所述，該化合物及組成物可取自一具有上述假單胞菌種或菌株識別特性之有機體。本發明之方法包含培養此等有機體並隨選地藉由從此等有機體之細胞分離出所述化合物以取得目標化合物。

詳言之，係利用此技藝中已知方法於營養培養基中培養有機體。有機體之培養方式可為搖瓶培養、於實驗室或工業發酵器中以適合培養基與有利細胞生長之條件進行小規模或大規模發酵(包括但不限於連續發酵、批次發酵、饋料批次發酵或固態發酵)。適用於培養之營養培養基包含碳源和氮源以及無機鹽，培養程序可如此技藝中已知者。適合之培養基可經商業管道購得或依據公開之配方製備。特定實施例可見於以下範例及美國專利第6,194,194號。

培養後將細胞濃縮並懸浮於緩衝液中以取得所需之細胞懸浮液。在一實施例中，係使用死細胞懸浮液。可利用以下至少一種方式殺死細胞懸浮液中之活體細胞：照射、加熱、乾燥，或以其他化學或物理方式處理細胞。死細胞懸浮液不需具有對抗貽貝類之活性。

在一特定實施例中，係從懸浮液萃取出可調控且特別是毒殺植物病原微生物之物質。可利用層析法將萃取物分為小部分。利用此技藝中已知之方法分析層析部分對於如野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris)、辣椒斑點病黃單胞菌(Xanthomomnas vesicatoria)、仙人掌桿菌(Bacillus cereus)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)等細菌之毒性；以下範例說明一特定實施例。可利用相同或不同層析法重複此程序一或多次。

組成物

組成物可包含假單胞菌株之完整培養液、液體培養物，或懸浮液，如具有假單胞菌識別特性之菌種可選自包含以下項目之群組：Pseudomonas protegens、Pseudomonas saponiphila、Pseudomonas ficuserectae、Pseudomonas congelans、Pseudomonas tremae、Pseudomonas caricapapayae、Pseudomonas mandelii、Pseudomonas savastanoi、Pseudomonas syringae、Pseudomonas chlororaphis subsp.piscium、Pseudomonas cannabina、Pseudomonas marginalis、Pseudomonas simiae、Pseudomonas avellanae、Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantiaca、Pseudomonas chlororaphis subsp.chlororaphis、Pseudomonas frederiksbergensis、Pseudomonas amygdali、Pseudomonas extremaustralis、Pseudomonas kilonensis、Pseudomonas lini、 Pseudomonas Antarctica、Pseudomonas corrugata、Pseudomonas poae、Pseudomonas grimontii、Pseudomonas brassicacearum subsp.Neoaurantiaca、Pseudomonas meridian、Pseudomonas trivialis、Pseudomonas veronii、Pseudomonas lundensis、Pseudomonas salomonii、Pseudomonas rhodesiae、Pseudomonas arsenicoxydans、Pseudomonas thivervalensis、Pseudomonas deceptionensis、Pseudomonas palleroniana、Pseudomonas chlororaphis subsp.aureofaciens、Pseudomonas costantinii、Pseudomonas lurida、Pseudomonas migulae、Pseudomonas orientalis、Pseudomonas extremorientalis、Pseudomonas mediterranea、Pseudomonas brassicacearum subsp.brassicacearum、Pseudomonas abietaniphila、Pseudomonas baetica、Pseudomonas brenneri、Pseudomonas psychrophila、Pseudomonas jessenii、Pseudomonas fragi、Pseudomonas tolaasii、Pseudomonas proteolytica、Pseudomonas taetrolens、Pseudomonas mohnii、Pseudomonas moorei、Pseudomonas moraviensis、Pseudomonas gessardii、Pseudomonas cichorii、Pseudomonas libanensis、Pseudomonas benzenivorans、Pseudomonas panacis、Pseudomonas umsongensis、Pseudomonas reinekei、Pseudomonas fluorescens、Pseudomonas agarici、Pseudomonas lutea、Pseudomonas mucidolens、Pseudomonas azotoformans、Pseudomonas viridiflava、Pseudomonas koreensis、Pseudomonas kuykendallii、Pseudomonas synxantha、Pseudomonas segetis、Pseudomonas marincola、Pseudomonas cedrina subsp.cedrina、Pseudomonas graminis、Pseudomonas vancouverensis、Pseudomonas cedrina subsp.fulgida、Pseudomonas plecoglossicida、Pseudomonas cuatrocienegasensis、Pseudomonas taiwanensis、Pseudomonas putidaPseudomonas rhizosphaerae、Pseudomonas anguilliseptica、Pseudomonas monteilii、Pseudomonas fuscovaginae、Pseudomonas mosselii、Pseudomonas taeanensis、Pseudomonas asplenii、Pseudomonas entomophila、Pseudomonas cremoricolorata、Pseudomonas parafulva、Pseudomonas alcaliphila、Pseudomonas oleovorans subsp.lubricantis、Pseudomonas borbori、Pseudomonas composti、Pseudomonas toyotomiensis、Pseudomonas batumici、Pseudomonas flavescens、Pseudomonas vranovensis、Pseudomonas punonensis、Pseudomonas balearica、Pseudomonas indoloxydans、Pseudomonas guineae、Pseudomonas japonicaPseudomonas stutzeri、Pseudomonas seleniipraecipitans、Pseudomonas peli、Pseudomonas fulva、Pseudomonas argentinensis、Pseudomonas xanthomarina、Pseudomonas pohangensis、Pseudomonas oleovorans、Pseudomonas mendocina、Pseudomonas luteola、Pseudomonas straminea、Pseudomonas caeni、Pseudomonas aeruginosa、Pseudomonas tuomuerensis、Pseudomonas azotifigens、Pseudomonas indica、Pseudomonas oryzihabitans、Pseudomonas otitidis、Pseudomonas psychrotolerans、Pseudomonas zeshuii、Pseudomonas resinovorans、Pseudomonas oleovorans subsp.oleovorans、Pseudomonas thermotolerans、Pseudomonas bauzanensis、Pseudomonas duriflava、Pseudomonas pachastrellae、Pseudomonas citronellolis、Pseudomonas alcaligenes、Pseudomonas xinjiangensis、Pseudomonas delhiensis、Pseudomonas sabulinigri、Pseudomonas litoralis、Pseudomonas pelagia、Pseudomonas linyingensis、Pseudomonas knackmussii、Pseudomonas panipatensis、 Pseudomonas nitroreducens、Pseudomonas nitritireducens、Pseudomonas jinjuensis、Pseudomonas pertucinogena、Pseudomonas xiamenensis、Pseudomonas cissicola、Pseudomonas halophile、Pseudomonas boreopolis、Pseudomonas geniculate、Pseudomonas beteli、Pseudomonas hibiscicola、Pseudomonas pictorum、Pseudomonas carboxydohydrogena。在一特定實施例中，所述假單胞菌種為保護假單胞菌或螢光假單胞菌，且更具體而言，具有ATCC之識別特性(見美國專利第6,194,194號)，以及上清液、濾液、部分、萃取物或化合物，包括代謝物，取自上述假單胞菌種之菌株或取自上述項目之組合，其特別具抗菌活性者。

上開組成物可經任何方式調製而成。非限定性之劑型範例包括，但不限於，可乳化濃縮物(EC)、可濕性粉末(WP)、可溶液體(SL)、浮質、超低容量濃縮溶液(ULV)、可溶粉末(SP)、微膠囊體、水分散細粒、可流動劑(FL)、微乳化液(ME)、奈米乳化液(NE)等等。在所述之任何劑型中，活性成分之比例範圍為0.01%至99.99%。

組成物之型態可為液體、膠體或固體。固體組成物之製備法為將一固態載體懸浮於活性成分溶液中，並於溫和條件下使懸浮液乾燥，如在室溫下蒸發或65℃以下之真空蒸發。一組成物可包含包覆於膠體內之活性成分。欲製備此種包覆於膠體內之材料，可將凝膠劑(如明膠、纖維素，或木質素)混合一培養物或活體或死亡假單胞菌之懸浮液或假單胞菌培養物或懸浮液之無細胞濾液或細胞組分，或用於本發明方法之抗菌化合物溶液中之噴乾或凍乾培養物、細胞或細胞組分；並將該劑製成凝膠。

所述組成物可另包含一界面活性劑，其目的為控制乳化、分散、潤濕、延展、整合、分解，穩定活性成分，並改善流動性或防腐。在一特定實施例中，所述界面活性劑為非植物毒性非離子界面活性劑，較佳者係屬於EPA列表之4B類。於另一特定實施例中，該非離子界面活性劑為聚氧乙烯(20)單月桂酸酯。界面活性劑於整體製劑中之濃度可為0.1-35%，較佳之範圍為5-25%。分散及乳化劑之選擇，如非離子、陰離子、兩性及陽離子分散及乳化劑，及其用量，係取決於組成物之性質及界面活性劑促進本發明組成物分散之能力。

所述組成物也可包括但不限於胺基苷抗菌素，其包括若干對植物、真菌及動物細胞有毒性之分子者(如卡那黴素、新黴素、慶大黴素、衍生物G418及巴龍黴素)(Nap等人，1992年)以及細菌性新黴素磷酸轉移酶II及氣花青素，氣色菌素，3,6-二羥基-苯并異噁唑，以及單環內醯胺SB-26.180。

使用

如上所述，上開組成物及物質可用於調控植物、其種子、根部、果實、葉、莖、塊莖中植物病原微生物感染之量，且尤其可預防或抑制及/或預防該植物病原微生物傳染，特別是，土傳疾病及/或降低該土傳疾病感染於該植物中散佈之比率及/或程度。再次，所述植物包括但不限於水果(如，草莓、藍莓、黑莓、桃及其他具有硬核之肉質果)、蔬菜(如，番茄、南瓜、椒、茄子、洋芋、胡蘿蔔)，或穀類作物(如，大豆、小麥、稻米、玉米、高粱)、樹、花、觀賞植物、灌木(如，棉、玫瑰)、球莖植物(如，洋蔥、大蒜)或藤蔓(如，葡萄藤)、草皮、塊莖(如洋芋、胡蘿蔔、甜菜)。或者，該組成物可用於調控土傳疾病於該植物中之傳染量，且尤其可預防或抑制該土傳疾病傳染及/或降低該土傳疾病感染於該植物中散佈之比率及/或程度。再次，所述植物包括但不限於(如，草莓)、蔬菜(如，番茄、南瓜、椒、茄子)，或穀類作物(如，大豆、小麥、稻米、玉米)、樹、花、觀賞植物，灌木(如，棉、玫瑰)、球莖植物(如，洋蔥、大蒜)或藤蔓(如，葡萄藤)。土傳疾病包括，但不限於，由如Xanthomonas campestris、Xanthomomnas vesicatoria、Bacillus cereus、Botrytis cinerea及Bacillus subtilis、Erwinia,S.fulginea等土傳微生物傳染所導致者。

本發明亦包含以有效抗微生物(如抗細菌、抗真菌)防治量施用含抗微生物(如抗細菌、抗真菌)活性代謝物之上清液、濾液或萃取物，或產自或取自假單胞菌之上清液、濾液或萃取物之化合物，或施用上述之組合。菌株或上清液或濾液或萃取物、代謝物及/或化合物可單獨施用，或與另一殺蟲物質結合施用，其施用應為可達成蟲害防治或殺蟲之有效量。所謂有效量意指微生物細胞、上清液、濾液或萃取物、代謝物及/或化合物之量，其單獨或與另一殺蟲物質結合時足以產生調控蟲害感染效用之量。決定有效比率之因素包括出現之害蟲種類、害蟲生長階段、害蟲密度，以及如溫度、風速、雨、日間時間及季節等環境因素。在一特定實例中，處於有效範圍中之用量係經實驗室或田野測試後決定。

範例

以下將透過非限制性範例說明本發明之組成物及方法。此等範例僅為各種實施例之說明，且不應對所請發明構成有關材料、條件、重量比、程序參數即在此所述其他項目之限制。

範例1：假單胞菌品種CL145A(ATCC 55799)之分析

經以一多相方案調查有機體之表現型及遺傳型特徵後進一步確認假單胞菌株CL145A(ATCC 55799)之特性。CL145A原屬之螢光假單胞菌類型於2011年經重新分類為一新假單胞菌類型，且現經正式承認為保護假單胞菌。本發明研究結果顯示CL145A較匹配保護假單胞菌，而非螢光假單胞菌。

近年對於假單胞菌種類之分類研究發現名為保護假單胞菌之新種類。保護假單胞菌包括若干原先被歸類為螢光假單胞菌之品種，包括品種CHA0、PF、PGNL1、PGNR 1、PGNR 2、PGNR 3，PGNR 4、PINR 3及Pf1。重新分類之依據可見於Ramette等人(2011)之說，且於2012年經正式驗證(Euzeby，2012年)。基於此新資訊，CL145A之最佳匹配為保護假單胞菌。MBI-401現確認為保護假單胞菌品種CL145A(CL145A)。

CL145A之辨識方式為利用多項方法調查表現型及遺傳型特徵，以及確認2,4-二乙醯間苯三酚與藤黃綠膿菌素此兩種代謝物之存在。藤黃綠膿菌素及2,4-二乙醯間苯三酚為區分螢光假單胞菌與保護假單胞菌兩者之中心特徵。不會產生此二化合物之分離物，或僅產生其中一種化合物者，仍稱為螢光假單胞菌，而會產生兩種化合物之螢光假單胞菌則已被重新歸類為Ramette等人(2011)所稱之保護假單胞菌。

1.1生物化學特徵、生理學特徵及新陳代謝特徵之分析

對保護假單胞菌品種CL145A(ATCC 55799)進行生物化學測試以確認分離菌之特徵並為後續追蹤建立基線。在此特性確認方法中，分別以16℃及37℃為溫度條件測試CL145A之生長，並進行API ZYM及API 20NE分析以達成酵素活性之半定量(API ZYM)和格蘭氏陰性非腸桿菌之識別(API 20NE)。亦就脂肪酸特性資料與MALDI-TOF特性資料加以確認。

1.1.1於16℃及37℃之生長狀態

假單胞菌種可適應多種生長溫度，根據研究，28℃為許多菌種的最適溫度，而有些菌種則適合4℃至45℃之生長環境。螢光假單胞菌無法於41℃下生長，但有些菌株可在低至4℃之溫度中生長(Palleroni，2005年)。

於磷酸鹽緩衝液中製備CL145A之稀釋細胞懸浮液。將此懸浮液接種至瓊脂盤上，並以16℃及37℃培養一夜。培養器設定於適當溫度並在進行培養前先平衡一夜。CL145A於兩種溫度下均生長良好。

1.1.2. API ZYM

API ZYM可實現酵素活性之快速半量化。檢驗於MBI之場地進行，遵循製造商指示(Biomerieux)。將CL145A(ATCC 55799)甘油菌液接種於將一日PDA盤，以25℃培養一夜。根據製造商指示，將成長於盤中之菌落接種至API ZYM試紙，以30℃培養48.5小時。結果示於下表1。

結果顯示CL145A(ATCC 55799)對酸性及鹼性磷酸脂酶、亮胺酸芳基醯胺酶及奈酚-AS-BI-磷酸水解酶具有強烈之酵素活性。其他所有酵素測試則均呈陰性結果。

1.1.3. API 20NE

以API 20NE進行酵素活性之半量化及格蘭氏陰性非腸桿菌之鑑別。檢驗於MBI之場地進行，遵循製造商指示(Biomerieux)。將CL145A(ATCC 55799)甘油菌液接種於將一日PDA盤，以25℃培養一夜。根據製造商指示，將成長於盤中之菌落接種至API 20NE試紙，以30℃培養48.5小時。結果示於表2。

符號：+(陽性)、-(陰性)、±(弱)

保護假單胞菌不會還原硝酸鹽。此外，Ramette等人(2011年)指出保護假單胞菌可消化N-乙醯基-D-葡萄糖胺，而螢光假單胞菌則不能。API 20 NE結果顯示CL145A可吸收N-乙醯基-D-葡萄糖胺。CL145A及保護假單胞菌均有吸收苯基醋酸鹽之能力(螢光假單胞菌不能)。CL145A於API ZYM測試中展現陰性葡萄糖醛酸酶活性。保護假單胞菌無法吸收D-葡萄糖醛酸，而螢光假單胞菌可吸收D-葡萄糖醛酸。

總之，CL145A(亦稱為ATCC 55799或MBI-401)之許多共有表現型特性均與螢光假單胞菌不同，而更近似於保護假單胞菌。然而，僅靠表現型特徵並不易鑑別假單胞菌，必須仰賴DNA相關方法進行最終辨識。

1.1.4.抗生素抗性特徵

將一瓶甘油泡製CL145A平均分配於Mueller-Hinton瓊脂培養皿上(每盤100μl)，利用一無菌細胞推刮器推勻於培養皿。而後將抗菌素紙錠連同一空白無菌盤放置於培養皿上。將培養皿於25℃在黑暗中培養72小時。結果示於表3。

抗菌素抗性測試結果顯示CL145A可抗四環素、紅黴素、鏈黴素、青黴素、安黴素、氯黴素及頭孢呋辛，如圖3所示，CL145A之生長並未受抗菌素妨礙；但CL145A對卡那黴素、氧四環素、環丙沙星、見大黴素、必達黴素、亞胺硫黴素及磺胺甲噁唑-甲氧芐啶具有敏感性，因其於培養後72小時顯示生長受到抑制。

1.1.5.脂肪酸甲基酯組成物之分析(FAME分析)

將培養24小時之CL145A菌落連同培養基交由Microbial ID,Inc.(美國紐澤西紐沃克)進行脂肪酸甲基酯(FAME)特徵判定。發現之主要脂肪酸列於表4。

CL145A之FAME特性符合資料庫中之一Pseudomonas putida生物型A品種，顯示最高相似指數(0.730)。次三項最符合者為螢光假單胞菌生物型A、生物型B及生物型G，相似度均在0.700以下。

1.2. 16S rRNA基因擴增與定序

1.2.1 CL145A(ATCC 55799)之DNA提取

將保護假單胞菌品種CL145A(ATCC 55799)割劃入新鮮洋芋葡萄糖培養皿中，待其生長2-3天或直到展現足夠生物量為止。以無菌環將一菌環量之細菌懸浮於DNA提取緩衝液中(包含於MoBio Ultra Clean Microbial DNA Extraction Kit中，型號12224-50，美國加州卡爾斯巴德)。利用MoBio超潔淨微生物DNA提取組依據製造商指示提取DNA。藉由將一5 μL等份置於1%瓊脂糖凝膠上檢驗DNA提取物之質與量。

1.2.2 16S rRNA基因自CL145A(ATCC 55799)之PCR擴增

將1.5 ul之DNA提取物CL145A(ATCC 55799)與20 μL無核酸無菌水、25 μL之GoTaq Green Mastermix(Promega)、μL之正向引物(FD1，5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)(SEQ ID NO：1)以及1.5 μL之逆向引物(RD1，5’-AAGGAGGTGATCCAGCC-3’)(SEQ ID NO：2)混合以進行16s rRNA基因擴增之PCR反應。將熱循環儀聚合酶連鎖反應器設定為以下條件以供PCR反應進行：95℃下10分鐘(初始變質)，94℃下30次45秒循環，55℃下45秒以及72℃下2分鐘，而後為72℃下5分鐘(最終延伸)以及最後保溫於10℃。藉由將一5 μL等份置於1%瓊脂糖凝膠上評估PCR產物之規模及質和量，並將產物表現條帶與一生物量階(Hi-Lo mass ladder，Bionexus，美國加州奧克蘭)比較。

1.2.3 16S rRNA定序

利用MoBio之PCR清理組(型號12500-50)遵循製造商指示，將多餘引物、核甘酸、酵素及模板自PCR產物中去除。使用上述引物直接為清理後之PCR產物定序。

1.2.4資料分析

利用生物編輯軟體(http：//www.mbio.ncsu.edu/BioEdit/bioedit.html)將正向與反向序列對齊，並產生相同序列以供與序列資料庫進一步比對。系統發生相鄰者之識別最初是以BLASTN(Altschul等人，1997年)程式依據包含模式菌株與正式公布原核生物名稱及未經培養之單型代表物之資料庫執行(Kim等人，2012年)。選出前三十高分之序列利用整體排比演算法進行雙序列相似度計算(Myer與Miller，1988年)，EzTaxon-e server即曾採用此法(http：//eztaxon-e.ezbiocloud.net/；Kim等人，2012年)。

1.2.5結果

利用正向(SEQ ID NO：3)與反向(SEQ ID NO：4)序列產生1445鹼基對相同序列(SEQ ID NO：5)。

利用EzTaxon-e server將CL145A(ATCC 55799)之16S rRNA基因相同序列與可得之模式菌株序列比對。

Ex-Taxon-e server之搜尋與比對結果顯示CL145A(亦稱為ATCC 55799或MBI-401)與保護假單胞菌CHA0T最相似，與螢光假單胞菌關聯最小。保護假單胞菌CHA0T為Ramette等人所稱之模式菌株(2011年)。

將序列下載入MEGA5，並利用MUSCLE對齊。建立鄰接樹以顯示CL145A與假單胞菌屬模式菌株之關係(圖1)。從鄰接樹明顯可見CL145A為一保護假單胞菌品種，而螢光假單胞菌則落在樹上較遠之分枝上。

以Neighbor-Joining方法(Saitou與Nei，1997年)推知演進歷史。取以兩千個複製所推得之靴帶一致樹(Felsenstein，1985年)代表受分析分類群之演進歷史。將對應少於50%靴帶複製物中複製部分之分枝折疊。分枝旁標示靴帶測試中相關分類群聚集之複製樹(2000複製)之百分比(Felsenstein，1985年)。此樹依比例繪製，分枝長度單位與推斷系統發生樹時用以標示演進距離者相同。採用Jukes-Cantor法(Jukes與Candor，1969年)計算演進距離，演進距離以每一位置鹼基取代之數量為單位。分析涉及21個核甘酸序列。包含之密碼子位置為1st+2nd+3rd+Noncoding。去除每一序列對中之所有模糊位置。最終之資料組中共有1505個位置。於MEGA5中進行演進分析(Tamura等人，2011年)。

此外，利用NCBI BLAST進行細菌域之代表物比對，並將檢索範圍限定於參考序列資料庫。為確認NCBI BLAST之最佳配適實係出於假單胞菌分離株被誤稱為螢光假單胞菌之故，將螢光假單胞菌之最佳配適(品種LMG 5167、Pf-101、Pf-68、CPF-10、7-1及LC-G-2)與保護假單胞菌在Ez-Taxon中比較，已確定其在NCBI BLAST資料庫並非遭到錯誤命名。將序列匯入MEGA5，aligned by MUSCLE against CL145A(MBI-401)及保護假單胞菌CHA0T和螢光假單胞菌DSM 50080T。建立系統發生樹以評估分類(圖2)。圖2之系統發生樹說明假單胞菌品種LMG 5167、Pf-101、Pf-68、CPF-10、7-1及LC-G-2皆符合保護假單胞菌模式菌株(CHA0T)，且這些品種於系統發生樹中皆屬於保護假單胞菌品種。反之，螢光假單胞菌模式菌株(DSMT)與保護假單胞菌模式菌株(CHA0T)並不在同一群組，兩個菌種分別位於系統發生樹之不同分枝。以Neighbor-Joining方法(Saitou 與Nei，1987年)推知演進歷史。取以兩千個複製所推得之靴帶一致樹(Felsenstein，1985年)代表受分析類群之演進歷史。將對應少於50%靴帶複製物中複製部分之分枝折疊。分枝旁標示靴帶測試中相關分類群聚集之複製樹(2000複製)之百分比(Felsenstein，1985年)。

此樹依比例繪製，分枝長度單位與推斷系統發生樹時用以標示演進距離者相同。採用Jukes-Cantor法(Jukes與Candor，1969年)計算演進距離，演進距離以每一位置鹼基取代之數量為單位。分析涉及14個核甘酸序列。包含之密碼子位置為1st+2nd+3rd+Noncoding。去除每一序列對中之所有模糊位置。最終之資料組中共有1515個位置。於MEGA5中進行演進分析(Tamura等人，2011年)。

1.3藤黃綠膿菌素與2,4-二乙醯間苯三酚之產生

據Ramette等人之說(2011年)，除了遺傳型及表現型特性描述資料之外，藤黃綠膿菌素及2,4-二乙醯間苯三酚(DAPG)此兩種次級代謝物之產生為區分保護假單胞菌與螢光假單胞菌品種之最大特徵。已知螢光假單胞菌模式菌株Pf-5會產生藤黃綠膿菌素及DAPG者兩種次級代謝物，故以此品種為陽性對照組。

以含2%甘油(PhGly)之藤黃綠膿菌素產生培養液培養CL145A及Pf-5菌株，如Wang等人所述(2011年)。每公升培養基包含：3公克NH4NO3、1公克酵母提取物、1公克KH2PO4、2公克NaCl、0.5公克MgSO4及1毫升微量礦物溶液。於裝有50毫升培養基之250毫升Erlenmeyer燒瓶進行發酵。以25℃及200 rpm培養48小時。CL145A與Pf-5(NRRL B-23932)同時發酵並於48小時後收穫。由於藤黃綠膿菌素並無商業可得標準，故以 Pf-5為內部標準。

發酵培養液之萃取係利用Amberlite XAD-7樹脂(Asolkar等人，2006年)，藉由以225 rpm轉速將全細胞培養液(WCB)與樹脂在室溫下搖動兩小時。以紗布過濾收集樹脂及細胞群，並用去離子(DI)水清洗以去除鹽類。接著將樹脂和細胞群連同紗布浸入丙酮/甲醇1(1：1)中1小時，之後過濾溶劑並利用旋轉蒸發器於真空條件下乾燥，取得原始萃取物。將如此取得之原始萃取物溶解於甲醇中，得一已知濃度(10 mg/mL)，繼而以液相層析質譜法(LCMS)進行分析。

於Thermo Finnigan LCQ Deca XP Plus電噴灑(ESI)儀器之全掃描模式(m/z 100-1500 Da)中以正負離子化模式以及LCQ DECA XPplus質譜儀(美國加州聖瓊斯Thermo Electron Corp.)進行原始萃取物樣本之質譜分析。Thermo高效液相色譜(HPLC)儀器配備有Finnigan Surveyor PDA plus偵測器、自動採樣器、MS泵及4.6 mm x 100 mm Luna C18 5 μm柱(Phenomenex)。溶劑系統包含水(溶劑A)及乙腈(溶劑B)。流動相開始於10%溶劑B且於20分鐘內線性增加至100%溶劑B，而後保持4分鐘，最後於3分鐘內回到10%溶劑B並保持3分鐘。流速為0.5 mL/min。注射量為10 μL且樣本在自動採樣器內保持於室溫。樣本中標的化合物之質譜分析係依以下條件執行：氮氣之噴霧氣及輔助氣流速分別固定為30及15 arb。電噴灑離子化之設定噴灑電壓為5000 V，毛細電壓為35.0 V。毛細溫度設定為400℃。以Xcalibur軟體分析資料。此分析中之目標化合物為藤黃綠膿菌素(1)及DAPG(2)，與內部參照標準化合物進行紫外線吸收特徵、滯留時間(RT)及分子量比較以確定其特性。

藤黃綠膿菌素(1)及DAPG(2)為螢光假單胞菌Pf-5之次級代謝物(Ramette等人，2011年)。由於藤黃綠膿菌素並無標準樣本，故以Pf-5之原始萃取物鑑別藤黃綠膿菌素於CL145A原始萃取物中之產生。藤黃綠膿菌素之RT為11：30分鐘，在正離子化模式中分子質量為272.02，且紫外線吸收最大於206、254及308 nm。MS中之同位素分裂形式證實分子中存在有兩個氯原子。2,4-二乙醯間苯三酚(2)之標準樣本購自Santa Cruz Biotechnology(CAS 2161-86-6)，其RT為13.99分鐘，分子量為210.14，且紫外線吸收最大於204、268及320 nm。檢測成長於含甘油發酵培養基中之CL145A原始萃取物，確定化合物1與2之產生，其RT各為11：30及13：96分鐘，其紫外線及質量分裂形式與標準化合物完全相同。藤黃綠膿菌素及DAPG之結構示於圖3。

當於適合藤黃綠膿菌素及DAPG產生之優化培養基、溫度及震盪條件下生長時，CL145A會產生此二種次級代謝物。根據藤黃綠膿菌素特定質譜圖形、滯留時間及紫外線光譜波鋒位置可確定藤黃綠膿菌素之存在。DAPG之存在則透過與商業標準比對而判定。

以培養基FM3及DM7進行批次培養並以上述方法分析產物。於一般商業製造發酵條件下，此等培養基中並未測得藤黃綠膿菌素及DAPG。

1.4結論

MBI-401經辨識確定為保護假單胞菌品種CL145A。以往研究將此微生物認定為螢光假單胞菌(Pf)。其類別變更係基於16S rRNA基因序列之相異和藤黃綠膿菌素與DAPG之產生，以及其他生物化學特性，而將數個原先屬於螢光假單胞菌類別之品種另行歸屬於新類別。基於上述發展，CL145A現被歸類於新形成之保護假單胞菌族群。此報告中之資料在16s rRNA序列相似性、生物化學特徵及次級代謝物產生方面均支持此一結論。

範例2.假單胞菌部分之製備

利用以下程序自從假單胞菌CL145A(ATCC 55799)之細胞及上清液提取化合物：將取自10-L發酵假單胞菌CL145A(ATCC 55799)且於FM2生長培養基中生長之細胞菌體懸浮於稀釋緩衝液，並藉由以225 rpm轉速將細胞懸浮液與Amberlite XAD-7樹脂在室溫下搖動兩小時加以提取(Asolkar等人，2006年)。以紗布過濾收集樹脂及細胞群，並用去離子水清洗以去除鹽類。接著將樹脂和細胞群連同紗布浸入丙酮中兩小時，之後濾除丙酮，並利用旋轉蒸發器於真空條件下乾燥以取得原始萃取物。而後利用反向C18真空層析(H2O/CH3OH；梯度90：20至0：100%)將原始萃取物分為六部份(見圖4之概要說明)。

2.1活性部位/原始萃取物之分析

細胞粗產物與活性部位F1、F2及F3之對照如圖5所示。以配備有Finnigan Surveyor PDA plus偵測器、自動採樣器、MS泵及4.6 mm x 100 mm Luna C18 5 μm柱之Thermo高效液相色譜(HPLC)儀器(Phenomenex)對這些部分進行分析。溶劑系統包含水(溶劑A)及乙腈(溶劑B)。流動相開始於10%溶劑B且於20分鐘內線性增加至100%溶劑B，而後保持4分鐘，最後於3分鐘內回到10%溶劑B並保持3分鐘。流速為0.5 mL/min。注射量為10 μL且樣本在自動採樣器內保持於室溫。活性部位之進一步特性描述/分析顯示於圖6、7及8。具體而言，係將此等部分利用ESI-LCMS分析，於Thermo Finnigan LCQ Deca XP Plus電噴灑(ESI)儀器之全掃描模式(m/z 100-1500 Da)中以正負離子化模式於LCQ DECA XPplus質譜儀(美國加州聖瓊斯Thermo Electron Corp.)上以及配備有Finnigan Surveyor PDA plus偵測器、自動採樣器、MS泵及4.6 mm x 100 mm Luna C18 5 μm柱之Thermo高效液相色譜(HPLC)儀器(Phenomenex)上進行。溶劑系統包含水(溶劑A)及乙腈(溶劑B)。流動相開始於10%溶劑B且於20分鐘內線性增加至100%溶劑B，而後保持4分鐘，最後於3分鐘內回到10%溶劑B並保持3分鐘。流速為0.5 mL/min。注射量為10 μL且樣本在自動採樣器內保持於室溫。質譜分析係依以下條件執行：氮氣之噴霧氣及輔助氣流速分別固定為30及15 arb。電噴灑離子化之設定噴灑電壓為5000 V，毛細電壓為35.0 V。毛細溫度設定為400℃。以Xcalibur軟體分析資料。

部分F1、F2、F3以及SN原始萃取物之分析係利用ESI-LCMS，於Thermo Finnigan LCQ Deca XP Plus電噴灑(ESI)儀器之全掃描模式(m/z 100-1500 Da)中以正負離子化模式在LCQ DECA XPplus質譜儀(美國加州聖瓊斯Thermo Electron Corp.)上進行。化合物之質譜分析係依以下條件執行：氮氣之噴霧氣及輔助氣流速分別固定為30及15 arb。電噴灑離子化之設定噴灑電壓為5000 V，毛細電壓為35.0 V。毛細溫度設定為400℃。以Xcalibur軟體分析資料。

範例3：抗微生物測試：瓊脂皿上之生長抑制

以甘油保存單胞菌品種CL145A材料於PDA盤上於越過該盤直徑之位置接種一直條。將品種CL145A於25℃培養24小時。經過24小時培養後，將以下菌株垂直於CL145A接種，盡可能靠近但不接觸CL145A：野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris)、辣椒斑點病黃單胞菌(Xanthomonas vesicatoria)、惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)、仙人掌桿菌(Bacillus cereus)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)及紫丁香假單胞菌(Pseudomonas syringae)。將此皿於25℃再培養48小時。觀察鄰近CL145A處有無缺乏生長之情形以判定抗化活性。受抑制之分離株不會朝向CL145處生長；野油菜黃單胞菌、辣椒斑點病黃單胞菌及枯草芽孢桿菌在培養皿上之成長受到顯著抑制。惡臭假單胞菌完全不受抑制。仙人掌桿菌所受之抑制最小。紫丁香假單胞菌生長狀況不佳，但是否因CL145A造成抑制則不確定。

範例4：以瓊脂紙錠分析進行細胞部分之抗微生物測試

將植物病原體置於PDA上並以25℃培養至直到足夠生物質量生長於培養皿表面為止，通常為24-48小時。而後於1 mL之無菌水中接種一菌環先前在PDA皿中生長之測試微生物。將菌落再次懸浮於無菌水中，並將200 μL之病原體再懸浮液分散於PDA盤上，靜置10-15分鐘使之吸收。為就葡萄孢菌(Botrytis cinerea)進行測試，將一叢真菌放置於PDA盤中央，於25℃靜置培養24小時。將無菌濾紙錠放入瓊脂並將以10 mg/mL濃度製備於甲醇中之各樣本滴於紙錠上。將培養皿於25℃培養48小時。48小時候，觀察濾紙錠周圍之抑制區域，顯示病原體對樣本之抗性。濾紙錠周圍之抑制區域即表示抑制性。以CL145A萃取物及部分對以下進行測試：(A)野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris)、(B)樹生黃單胞桿菌(Xanthomonas arboricola)、(C)辣椒斑點病黃單胞菌(Xanthomonas vesicatoria)、(D)枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、(E)瘡痂病鏈黴菌(Steptomyces scabiei)、(F)軟腐菌(Erwinia carotovora)、(G)仙人掌桿菌(Bacillus cereus)及(H、I)葡萄孢菌(Botrytis cinerea)。結果歸納於表5。

這些研究之結果顯示CL145A完全細胞培養液、細胞、萃取物及部分對多種植物疾病相關微生物均展現抗化活性。不同部分對於不同微生物展現活性，顯示Pf145A有能力產生具有不同抗菌活性之多種代謝物。上清液與完全細胞培養液均具有活性，表示活性代謝物在性質上可為胞外或與細胞相連。然而，部分3對所有受試微生物均具有對抗活性。

範例5：MBI-401對受白粉病感染黃瓜植物之影響

以MBI-401完全細胞培養液(n=7)及上清液(n=7)對兩週大之黃瓜植物(C.sativus)進行徹底噴灑(至溶液幾乎低落葉面之溢流點)，以水為陰性對照組(n=6)。利用手持式加壓噴灑器噴灑以模擬溫室蔬菜生產系統中使用之商業殺菌處理。用量為每一植物3 mL。待植物乾後接種S.fulginea之孢子懸浮液，促使其罹患白粉病。將孢子懸浮液噴灑於處理及未處理植物上之變異點。每一植物使用2 mL之孢子懸浮液噴灑量。於約22℃(形成孢子之溫度範圍為15℃至30℃)培養經處理及未處理植物，直到清水對照組疾病嚴重度達到至少90%，更理想者為100%，約7至14天。評估所有經處理及未處理植物10 DAT上受菌落覆蓋之葉面積百分比以判定疾病嚴重度。

結果示於圖10。全細胞液及上清液處理之植物，相較於未處理之植物(約90%嚴重度)，其疾病嚴重度(約15-20%)大幅降低(p<0.005，ANOVA)。

本發明可在不脫離以其精神或必要特徵之原則下以其他形式或方式實施。因此本說明書之揭露在任何方面僅屬說明性質而非限制性質，且所有達成相等意義或範圍之變化俱應包含於本發明之範疇。

本說明書中引述各種參考文獻，其各自以完整內容為本文所合併參照。

參考文獻

Altschul, S. F., Madden, T. L., Schaeffer, A. A., Zhang, J., Zhang, Z., Miller, W. & Lipman, D. J. (1997). Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs. Nucleic Acids Res 25, 3389-3402.

Asolkar RN, Jensen PR, Kauffman CA, Fenical W. 2006. Daryamides A-C, Weakly Cytotoxic Polyketides from a Marine-Derived Actinomycete of the Genus Streptomyces Strain CNQ-085. Journal of Natural Products 69:1756-1759.

Brenner et al. Editors, Garrity G. M. Ed-in-Chief. Springer Jukes T.H. and Cantor C.R. (1969). Evolution of protein molecules. In Munro HN, editor, Mammalian Protein Metabolism, pages 21-132. Academic Press, New York.

Dowling and O’Gara, 1994, TIBTECH 12:133-141 for discussion of antifungal and antibacterial properties.

Euzeby, J. (2012). List of new names and mew combinations previously effectively, but not validly, published. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology. 62, pages 1443-1445.

Felsenstein J. (1985). Confidence limits on phylogenies: An approach using the bootstrap. Evolution. 39, pages 783-791.

Keel et al., 1992, Mol. Plant-Microbe Interactions 5:4-13.

Kim, O.S., Cho, Y.J., Lee, K., Yoon, S.H., Kim, M., Na, H., Park, S.C., Jeon, Y.S., Lee, J.H., Yi, H., Won, S., Chun, J. (2012). Introducing EzTaxon-e: a prokaryotic 16S rRNA Gene sequence database with phylotypes that represent uncultured species. Int J Syst Evol Microbiol 62, 716-721.

Myers, E. W. & Miller, W. (1988). Optimal alignments in linear space. Comput Appl Biosci 4, 11-17.

Palleroni, N. J. (2005). Genus Pseudomonas. In: Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology. 2nd Ed. Volume Two.:The Proteobacteria Part B The Γproteobacteria. Pages 323-379.

Ramette, A., Frapoli, M., Fischer-Le Saux, M., Gruffaz, C., Meyer, J-M., Defago, G., Sutra, L and Moenne-Loccoz, Y. (2011). Pseudomonas protegens sp. Nov., widespread plant-protecting bacteria producing the biocontrol compounds 2,4-diacetylphloroglucinol and pyoluteorin. Systematic and Applied Microbiology. 34, pages 180 - 188.

Saitou N. and Nei M. (1987). The neighbor-joining method: A new method for reconstructing phylogenetic trees. Molecular Biology and Evolution. 4, pages 406-425.

Tamura K., Peterson D., Peterson N., Stecher G., Nei M., and Kumar S. (2011). MEGA5: Molecular Evolutionary Genetics Analysis using Maximum Likelihood, Evolutionary Distance, and Maximum Parsimony Methods. Molecular Biology and Evolution (In Press).

US Patent No. 5,622,846, 5,552,315 Wang, W., Dong, H., Zhang, J., Xu, Y., and Xang, X. (2011). Chapter 5. The production, separation and stability of pyoluteorin: a biological perspective. In: Pesticides in the Modern world - Pests control and pesticides exposure and toxicity assessment. Margarita Stoytcheva, Ed. 614 pages. Published by InTech.

CL145A(ATCC 55799)FD1正向序列(SEQ ID NO：3)

CL145A(ATCC 55799)RD1反向序列(SEQ ID NO：4)

CL145A(ATCC 55799)相同序列(SEQ ID NO：5)

Claims

一種分離出之化合物，其具有以下特性：(a)取自一假單胞菌種，該假單胞菌種可產生至少一種能夠防治斑貽貝、條紋貽貝及黃金貽貝之化合物；(b)調控一地點中之一或多種植物病原微生物感染；以及(c)其分子量及HPLC滯留時間係選自包含以下項目之群組：(i)分子量為約300-380，如以液相層析質譜法(LC/MS)所測定者，利用一以水與乙腈(CH3CN)調製之梯度溶劑系統(0-20分鐘90-0%乙腈水溶液；20-24分鐘100%乙腈；24-27分鐘0-90%乙腈水溶液；27-30分鐘90%乙腈水溶液)，設定為0.5 mL/min流速及210 nm之紫外線偵測，於一逆相C-18 HPLC(Phenomenex,Luna 5μ C18(2)100 A,100 x 4.60 mm)柱所測得之HPLC滯留時間為約12-22分鐘，且紫外線吸收於212、252、312 nm；(ii)分子量為約300-360，如以LC/MS所測定者；利用一以水與乙腈(CH3CN)調製之梯度溶劑系統(0-20分鐘90-0%乙腈水溶液；20-24分鐘100%乙腈；24-27分鐘0-90%乙腈水溶液；27-30分鐘90%乙腈水溶液)，設定為0.5 mL/min流速及210 nm之紫外線偵測，於一逆相C-18 HPLC(Phenomenex,Luna 5μ C18(2)100 A,100 x 4.60 mm)柱所測得之HPLC滯留時間為約10-20分鐘，且紫外線吸收於299、311、325 nm；(iii)分子量為約580-680，如以LC/MS所測定者；利用一以水與乙腈(CH3CN)調製之梯度溶劑系統(0-20分鐘90-0%乙腈水溶液；20-24分鐘100%乙腈；24-27分鐘0-90%乙腈水溶液；27-30分鐘90%乙腈水溶液)，設定為0.5 mL/min流速及210 nm之紫外線偵測，於一逆相C-18 HPLC(Phenomenex,Luna 5μ C18(2)100 A,100 x 4.60 mm)柱所測得之HPLC 滯留時間為約8-20分鐘，且紫外線吸收於299、311、325 nm；(iv)分子量為約350-425，如以LC/MS所測定者；利用一以水與乙腈(CH3CN)調製之梯度溶劑系統(0-20分鐘90-0%乙腈水溶液；20-24分鐘100%乙腈；24-27分鐘0-90%乙腈水溶液；27-30分鐘90%乙腈水溶液)，設定為0.5 mL/min流速及210 nm之紫外線偵測，於一逆相C-18 HPLC(Phenomenex,Luna 5μ C18(2)100 A,100 x 4.60 mm)柱所測得之HPLC滯留時間為約6-16分鐘，且紫外線吸收於221、267、361 nm。
如申請專利範圍第1項所述之化合物，其中該化合物係取自保護假單胞菌(Pseudomonas protegens)。
如申請專利範圍第1項所述之化合物，其中該化合物係取自一具有假單胞菌ATCC 55799識別特性之保護假單胞菌種。
如申請專利範圍第1項所述之化合物，其中該化合物可調控一或多種植物病原微生物，其中該植物病原微生物為植物病原細菌或植物病原真菌。
如申請專利範圍第1項所述之化合物，其中該化合物可調控一或多種植物病原微生物，所述植物病原微生物為芽孢桿菌種(Bacillus sp.)、軟腐菌種(Erwinia sp.)、放射線菌種(Streptomyces sp.)、葡萄孢菌種(Botrytis sp.)及黃單胞菌種(Xanthomonas sp.)中至少一者之一員。
如申請專利範圍第1項所述之化合物，其中該化合物可調控一或多種植物病原微生物，所述植物病原微生物係選自由枯草芽孢桿菌(Bacillus subtillus)、仙人掌桿菌(Bacillus cereus)、野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris)、樹生黃單胞桿菌(Xanthamonas arboricola)、辣椒斑點病黃單胞菌(Xanthamonas vesicatoria)、瘡痂病鏈黴菌(Streptomyces scabie)、葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、軟腐菌(Erwinia carotovora)及瓜類白粉菌(Sphaerotheca fulginea)所構成之群組。
一種組成物，其包含申請專利範圍第1項之一或多種化合物及一載體。
一種用以製造申請專利範圍第1項之化合物之方法，包含：(a)培養一假單胞菌品種之培養物，其中該假單胞菌品種在足已使該受培養之培養物中產生申請專利範圍第1項化合物之條件下可產生至少一能夠防治斑貽貝、條紋貽貝及黃金貽貝之化合物；以及(b)將該化合物自步驟(a)所述受培養之該培養物中分離出來。
一種於一需要調控之地點調控一或多種植物病原微生物之方法，其係包含將一量之一細胞懸浮液或完全細胞培養液或自其所取得且有效於調控該植物病原微生物之上清液、濾液、細胞組分、一或多種代謝物、一或多種化合物及/或萃取物放入該地點，其中該細胞懸浮液或完全細胞培養液中包含取自一假單胞菌種之細胞，所述假單胞菌種可產生一或多種能夠防治斑貽貝、條紋貽貝及黃金貽貝之物質。
如申請專利範圍第9項所述之方法，其中該細胞懸浮液包含保護假單胞菌(Pseudomonas protegens)或螢光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)或其突變體品種之細胞，所述突變體品種係指具有保護假單胞菌或螢光假單胞菌之識別特性者。
如申請專利範圍第9項所述之方法，其中該物質係取自一假單胞菌品種，該假單胞菌品種具有假單胞菌ATCC 55799之識別特性。
如申請專利範圍第9項所述之方法，其中該化合物係選自由以下項目所構成之群組： (a)申請專利範圍第1項之化合物；(b)一化合物，(i)其分子量為約1280-1310，如以液相層析質譜法(LC/MS)所測定者；(ii)其1H NMR值為δ 9.25、8.36,8.06,7.82,7.71,7.52,7.45,6.82,6.36,6.08,5.42,5.39,5.30,5.14,4.68,4.42,4.31,4.16,4.11,4.07,3.95-3.86,3.83,3.72,3.66,3.53,3.48,3.37,3.17,3.06,2.56,2.53,2.45,2.32,2.21,2.02,1.96,1.84,1.72,1.65,1.61,1.51,1.48-1.37,1.32,1.12,0.94,0.91,0.68；以及(iii)其利用一以水與乙腈調製之梯度溶劑系統(0-10分鐘30-40%乙腈水溶液；10-20分鐘40-60%乙腈水溶液；20-60分鐘60-80%乙腈水溶液；60-65分鐘80-100%乙腈水溶液)，設定為2.5 mL/min流速及210 nm之紫外線偵測，於一逆相C-18 HPLC柱所測得之高壓液相層析(HPLC)滯留時間為約50-55分鐘；(c)一化合物，(i)其分子量為約540-550，如以LC/MS所測定者；(ii)其利用一以水與乙腈調製之溶劑系統(0-10分鐘35-45%乙腈水溶液；10-20分鐘45-60%乙腈水溶液；20-50分鐘60-85%乙腈水溶液；50-60分鐘85-100%乙腈水溶液；60-70分鐘100%乙腈)，設定為10 mL/min流速及210 nm之紫外線偵測，於一逆相C-18 HPLC柱所測得之HPLC滯留時間為約50-55分鐘；(d)化合物，其為一內酯，且具有一羥基化不飽和脂肪酸內酯結構，該結構包含至少一為5員γ-內酯之內酯部分、至少一不飽和部分及至少一醇基團；核心結構之分子量從285至約310；至少15個碳及至少3個氧；(e)一化合物，其結構為其中：X各自獨立為--O、--NR1，或--S，其中R1為--H或C1-C6烷基；n=0至15，R2至R4各自獨立為--H、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環、取代雜環、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、鹵素、胺基、氨基、羧基、--C(O)H、醯基、氧醯基、氨基甲酸酯、磺醯基、磺醯胺，或硫醯基；m=雙鍵或三鍵；(f)一化合物，其具有一羥基化不飽和脂肪酸結構，該結構包含至少一羧酸部分、至少一不飽和部分及至少一醇基團；核心結構之分子量從285至約310；至少15個碳及至少3個氧；(g)一化合物，其結構為其中：X各自獨立為--OH、--NR1，或--S，其中R1為--H或C1-C6烷基；n=0至15，R2至R4各自獨立為--H、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環、取代雜環、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、鹵素、胺基、氨基、羧基、--C(O)H、醯基、氧醯基、氨基甲酸酯、磺醯基、磺醯胺，或硫醯基；m=雙鍵、三鍵；(h)一化合物，其結構為或一可接受鹽或其立體異構物，其中：X各自獨立為--OH、--NR1，或--S，其中R1為--H或C1-C6烷基；n=0至15，R2、R3各自獨立為--H、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環、取代雜環、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、鹵素、胺基、氨基、羧基、--C(O)H、醯基、氧醯基、氨基甲酸酯、磺醯基、磺醯胺，或硫醯基；m=雙鍵、三鍵；(i)一化合物，其結構為或一可接受鹽或其立體異構物，其中：X各自獨立為--OH、--NR1，或--S，其中R1為--H或C1-C6烷基；n=0至15，R2、R3各自獨立為--H、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環、取代雜環、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、鹵素、胺基、氨基、羧基、--C(O)H、醯基、氧醯基、氨基甲酸酯、磺醯基、磺醯胺，或硫醯基；m=0至15；(j)一化合物，其結構為或一可接受鹽或其立體異構物，其中：X各自獨立為--OH、--NR1，或--S，其中R1為--H或C1-C6烷基；n=0至15，R2至R4各自獨立為--H、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環、取代雜環、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、鹵素、胺基、氨基、羧基、--C(O)H、醯基、氧醯基、氨基甲酸酯、磺醯基、磺醯胺，或硫醯基；m=雙鍵、三鍵；(k)一化合物，其結構為其中R1為--H或C1-C6烷基；n=0至15，R2至R4各自獨立為--H、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環、取代雜環、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、鹵素、胺基、氨基、羧基、--C(O)H、醯基、氧醯基、氨基甲酸酯、磺醯基、磺醯胺，或硫醯基；m=0至15；(1)一選自由以下項目所構成群組之內酯：γ-十二內酯、δ-十三內酯、piliferolide A及α-庚基-γ-丁酸內酯；以及(m)一假蒟亭鹼(sarmentine)類似物，其係選自由N-環戊烷基癸醯胺、N-(癸醯基)吡咯啶、N-(癸醯基)哌啶、N-(癸醯基)六甲烯亞胺、N-環戊烷基癸烯醯胺、N-(癸烯醯基)吡咯啶、N-(癸烯醯基)哌啶、N-(癸烯醯基)六甲烯亞胺及N-(癸烯醯基)哌啶所構成之群組；(n)11-羥基-12-烯-硬脂酸；(o)9-十六碳烯酸；以及(p)蓖麻油酸。
如申請專利範圍第9項所述之方法，其中該物質係施用於一植物。
如申請專利範圍第9項所述之方法，其中該方法進一步包含施用另一抗微生物劑。
如申請專利範圍第9項所述之方法，其中該植物病原微生物係為芽孢桿菌種(Bacillus sp.)、軟腐菌種(Erwinia sp.)、放射線菌種(Streptomyces sp.)、葡萄孢菌種(Botrytis sp.)及黃單胞菌種(Xanthomonas sp.)中至少一者之一員。
一種細胞懸浮液或完全細胞培養液之使用方法，該細胞懸浮液或完全細胞培養液包含取自一假單胞菌種之細胞，其中該假單胞菌種產生一或多種能夠防治斑貽貝、條紋貽貝及黃金貽貝之物質，或上清液、濾液，細胞組分、一或多種代謝物、一或多種化合物及/或從之取得之萃取物以配製成一組成物，用以調控植物病原微生物。