TW201120042A - N-((1R,2S,5R)-5-(tert-butylamino)-2-((S)-3-(7-tert-butylpyrazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-ylamino)-2-oxopyrrolidin-1-yl)cyclohexyl)acetamide, a dual modulator of chemokine receptor activity, crystalline forms and processes - Google Patents

N-((1R,2S,5R)-5-(tert-butylamino)-2-((S)-3-(7-tert-butylpyrazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-ylamino)-2-oxopyrrolidin-1-yl)cyclohexyl)acetamide, a dual modulator of chemokine receptor activity, crystalline forms and processes Download PDF

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TW201120042A TW099134977A TW99134977A TW201120042A TW 201120042 A TW201120042 A TW 201120042A TW 099134977 A TW099134977 A TW 099134977A TW 99134977 A TW99134977 A TW 99134977A TW 201120042 A TW201120042 A TW 201120042A
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Percy H Carter
Robert J Cherney
Victor W Rosso
Jun Li
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Bristol Myers Squibb Co
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Description

201120042 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明提供N-((lR，2S，5R)-5-(第三-丁基胺基）_2_((S)_3_ (7-第三-丁基吡唑并[i，5-a][i，3,5]三畊_4_基胺基）_2-氧代吡 洛院-1-基）環己基）乙醯胺’或其醫藥學上可接受之鹽、溶 劑合物或前藥’其具有出乎意料之合乎需要的雙重活性。 亦提供本發明之晶形。含有其之醫藥組合物及其作為藥劑 治療發炎性疾病、過敏性疾病、自體免疫性疾病、代謝性 疾病、癌症及/或心血管疾病之使用方法亦為本發明之目 標。本發明亦提供製備式⑴化合物，包括N_((1r，2s,5r)_ 5-(第三-丁基胺基）-2-((S)-3-(7-第三-丁基吡唑并[l，5-a] [1，3,5]三畊-4-基胺基）_2_氡代D比咯烷_丨_基）環己基）乙醯胺 之方法：
如本文中所述。本文中亦提 供適用作$方法之中間物之化合物。本文中亦提供活性化 醫藥組合物及其用途。 合物之代謝物、 【先前技術】 150926.doc 201120042 趨化激素為分子量為6-15 kDa之.趨化性細胞激素’其由 多種細胞釋放用以吸引及活化巨嗟細胞、了及B淋巴細胞、 嗜伊紅血球、嗜鹼性球及嗜中性球以及其他細胞類型（於 Charo 等人，五咕.丄她义，354:610·621 (2006);
Luster，Ww 五《客· */.从以，338:436-445 (1998) ; &Rollins， 5/οσί/，90:909-928 (1997)中評述）。視胺基酸序列中頭兩個 半胱胺酸由單一胺基酸分離（CXC)抑或相鄰（CC)而定’有 兩種主要趨化激素類別，CXC及CC。CXC趨化激素’諸如 介白素8(IL-8)、嗜中性球活化蛋白2(NAP-2)及黑素瘤生長 刺激活性蛋白（MGSA)主要對嗜中性球及T淋巴細胞具有趨 化性，而 CC趨化激素，諸*RANTES、ΜΙΡ·1α、MIP_1P、 單核細胞趨化蛋白（MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4及 MCP-5)及嗜酸性粒細胞趨化激素（eotaxin)(_1及_2)對巨噬 細胞、T淋巴細胞、嗜伊紅灰球、樹突狀細胞及嗜驗性球 以及其他細胞類型具有趨化性。亦存在不屬於任一主要趨 化激素子族之趨化激素，淋巴細胞趨化激素-1 (lymphotactin_ 1)、淋巴細胞趨化激素-2(皆為C趨化激素）及弗拉塔飢 (fractalkine)(—種 CX3C趨化激素）。 趨化激素結合於屬於G蛋白偶聯七跨膜域蛋白家族的特 定細胞表面受體（於Horuk, 尸厂，15.159-165 (1994)中評述），該等受體稱為「趨化激素受體」。在結合 同源配位體時，趨化激素受體經由相關三聚G蛋白轉導細 胞内信號，引起細胞内釣濃度快速增加、細胞升》狀改變、 細胞黏附分子表現增加、去顆粒作用及促進細胞遷移以及 150926.doc 201120042 其他反應。有至少十種人類趨化激素受體以以下特徵性模 式結合CC趨化激素或對CC趨化激素產生反應（於ziotnik等 人，12:121 (2000)中評述）：CCR-1(或「CKR-1」 或「CC-CKR-1」）[MIP-la、MCP-3、MCP-4、RANTES] (Ben-Barruch 等人 ’ Ce//，72:415-425 (1993)，及 Luster， TVew 五叹 乂 Med.，338:436-445 (1998)) ; CCR-2A及CCR-2B (或「CKR-2A」/「CKR-2B」或「CC-CKR-2A」/「CC-CKR-2B」） [MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4、MCP-5](Charo等人， /Voc. iVai/. jcai Sci·. ^/以，91:2752-2756 (1994)及 Luster, 五《尽· / Med.，338:436-445 (1998)) ; CCR-3(或「CKR-3」 或「CC-CKR-3」）[嗜酸性粒細胞趨化因子-l、嗜酸性粒細 胞趨化因子-2、RANTES、MCP-3、MCP-4](Combadiere 等 人，/. 5io/· C/iem·，270:16491-16494 (1995)，及 Luster, 五《g. J. MeA，338:436-445 (1998)) ; CCR-4(或「CKR-4」 或「CC-CKR-4」）[TARC、MDC](Power 等人，J. Biol. C/zem.，270:19495-19500 (1995)，及 Luster, iVew 五《g. J. Mei, 338:436-445 (1998)) ; CCR-5(或「CKR-5」或「CC-CKR-5」） [MIP-la、RANTES、MIP-ip](Samson等人，出oc/zewbir;/， 35:3362-3367 (1996)); CCR-6(或「CKR-6」或「CC-CKR-6」） [LARC](Baba 等人，J_ Biol. Chem., 272:14893-14898 (1997)) ; CCR-7(或「CKR-7」或「CC-CKR-7」）[ELC] (Yoshie等人，·/· Z^wAroc. 5/o/·，62:634-644 (1997)) ; CCR-8 (或「CKR-8」或「CC-CKR-8」）[I_3〇9](Napolitano等人， 乂 /w霸《〇/·, 157:2759-2763 (1996)) ; CCR-10(或「CKR-10」 150926.doc 201120042 或「CC-CKR-10」）[MCP-1、MCP-3](Bonini 等人，DAM Ce"价〇/·，16:1249-1256 (1997));及 CCR-11 [MCP-1、 MCP-2 及 MCP-4](Schweickart 等人，J. 厂 C/zem·，275: 9550 (2000))。 除哺乳動物趨化激素受體以外，已顯示哺乳動物細胞巨 大病毒、：庖療病毒及痘病毒在感染細胞中表現具有趨化激 素受體之結合特性的蛋白質（於Wells等人，Cwrr. Opk. 5/oiec/2·，8:741-748 (1997)中評述）。人類CC趨化激素，諸 如RANTES及MCP-3，可經由此等病毒編碼之受體引起快 速鈣移動。受體表現可藉由導致對正常免疫系統監視及對 感染之反應造成破壞而許可感染。此外，人類趨化激素受 體，諸如 CXCR4、CCR-2、CCR-3、CCR-5及 CCR-8可充當 微生物，例如人類免疫缺乏病毒（HIV)感染哺乳動物細胞 之共受體。 趨化激素及其同源受體為以下疾病中所涉及之重要介 體：發炎性、感染性及免疫調節性病症及疾病，包括哮喘 及過敏性疾病；以及自體免疫性病變，諸如類風濕性關節 炎及多發性硬化症；及代謝性疾病，諸如動脈粥樣硬化及 糖尿病（於 Charo 等人，TVew J. Med., 354:610-621 (2006) ； Gao, Z.等人，C/zew. ，103:3 73 3 (2003);
Carter, P.H., Curr. Opin. Chem. Biol., 6:510 (2002) i Trivedi等人，d心.及epor/·? C/zew·，35:191 (2000);
Saunders等人，Drwg Dbc. 4:80 (1999) ; Premack等 人，TVaiwre Mec/z’c/«e，2:11 74 (1996)中評述）。舉例而言， 150926.doc 201120042 趨化激素單核細胞化學引誘劑- l(MCP-l)及其受體CC趨化 激素受體2(CCR-2)在吸引白血球至發炎部位及隨後活化此 等細胞中起關鍵作用。當趨化激素MCP-1結合於CCR-2 時，其誘導細胞内妈濃度快速增加、細胞黏附分子表現增 加、及促進白血球遷移。藉由使用經遺傳修飾之小鼠進行 實驗，已證明MCP-1/CCR-2相互作用的重要性。Mcpq 小鼠在若干不同類型的免疫激發後無法使單核細胞募集至 發炎部位（Lu，B.等人，J.五:φ· Λ/χ 187:601 (1998))。同 樣’ CCR-2 -/-小鼠在用各種外源藥劑激發時無法募集單核 細胞或產生干擾素γ ;此外，CCR-2缺失型小鼠之白血球不 會回應於MCP-1而遷移（Boring，L.等人，J. c/h. /«ve以.， 100:2552 (1997))，從而表明MCP-1/CCR-2相互作用的特異 性。兩個其他團隊獨立報導使用不同CCR-2 -/-小鼠品系獲 得之相同結果（Kuziel，W.A.等人，户晴.#如/. 以. ί/Μ，94:12053 (1997)，及 Kurihara，T.等人，J.五 186:1757 (1997))。MCP-1 -/-及 CCR-2 -/-動物的生存力及 一般正常健康狀況值得注意，因為破壞MCP-1/CCR-2相互 作用並未誘發生理危機。總而言之，此等資料可得出以下 結論：阻斷MCP-1/CCR-2作用之分子將適用於治療許多發 炎性及自體免疫性病症（於Feria，M.等人，五印〇以乃 户价心，16:49 (2006);及Dawson，J.等人，細咖” 77ιπ 7^geis，7··35 (2003)中評述）。如下所述，此假設現 已在許多不同動物疾病模型中得到驗證。 已知類風濕性關節炎患者體内之MCP-1受到上調（Koch， 150926.doc 201120042 A.等人，乂 C7z_n. 90:772-779 (1992))。此外，若干 臨床前研究已證明拮抗MCP-1/CCR-2相互作用在治療類風 濕性關節炎中之潛在治療價值。最近顯示編碼MCP-1之 DNA疫苗可改善大鼠之慢性多佐劑誘發之關節炎（Youssef, S.等人，/. C7k. 106:361 (2000))。同樣，可經由 向患有膠原蛋白誘發之關節炎（Ogata, Η.等人，J. ， 182:106 (1997))，或鏈球菌細胞壁誘發之關節炎 (Schimmer，R.C.等人，J. iwwwwo/.，160:1466 (1998))的大 鼠直接投與MCP-1之抗體來控制疾病症狀。可能最重要的 是，顯示MCP-1之肽拮抗劑MCP-l(9-76)在MRL-lpr小鼠關 節炎模型中防止疾病發作並減少疾病症狀（視投藥時間而 定）（Gong，J.-H.等人，五xp. Mel，186:131 (1997))。此 外，已表明在齧齒動物關節炎模型中投與小分子CCR-2拮 抗劑可降低臨床得分（Brodmerkel, C.M.等人，J. •Zmmwwo/·， 175:5370 (2005);及Xia， Μ.等人，美國公開案第 2006/0069123號）。投與抗CCR-2抗體視投藥時間而定對鼠 類 CIA 具有不同作用（Bruhl，Η.等人，J. 172:890 (2004))。最近使用CCR-2 小鼠進行之研究已表明在特定 實驗情形中缺失CCR-2可加劇齧齒動物關節炎模型之病情 (Quinones, M.P·等人，J. C7/«. 113:856 (2004);
Quinones, M.P.^ A 5 J. Mol. Med., 84:503 (2006)) ° 已知動脈粥樣硬化病變中之MCP-1受到上調，且已顯示 可經由使用治療劑治療來降低MCP-1之循環含量（Rezaie-Majd，Α·等人，77zrom6· Fiasc. 5ίσ/·，22:1194- 150926.doc -10- 201120042 1 199 (2002))。若干關鍵研究已證明拮抗MCP-1/CCR-2相 互作用在治療動脈粥樣硬化中之潛在治療價值。舉例而 言，當MCP-1 小鼠與LDL受體缺乏小鼠雜交時，觀測到 主動脈脂質沈積降低83%(Gu, L.等人，Mo/.
Cell, 2:275 (1998))。類似地’當自過度表現人類脂蛋白元B之小鼠遺 傳切除MCP-1時，相對於MCP-1 +/+叩⑹對照小鼠，可防 止所得小鼠形成動脈粥樣硬化病變（G〇snng, j.等人，j C7k. 103:773 (1999))。同樣，當CCR-2 ·/·小鼠與 脂蛋白元E -/-小鼠雜交時，觀測到動脈粥樣硬化病變發生 率顯者降低（Boring, L.專人，394:894 (1998); Dawson，T_C.等人，Ji/zerosc/erohs，143:205 (1999))。最 後’當向脂蛋白元E -/-小鼠投與編碼ccR-2之肽拮抗劑之 基因時’則病變尺寸降低且斑塊穩定性增加（Ni，w等人， 103:2096-2101 (2001))。自 CCR-2 -/-小鼠移植 骨髓至ApoE3-Leiden小鼠中可抑制早期動脈粥樣化形成 (Gmo，L 專 k，Arterioscler. Thromb. Vase. Biol·, 23，ΑΠ (2003)) ’但對晚期病變之作用最小（Gu〇，j等人，
Arterioscler. Thromb. Vase. Bio!·，25:UH4 (2005))。 患有2型糖尿病之患者通常展現胰島素抗性，其為該疾 病之一種標誌特徵。胰島素抗性亦與一組稱為「代謝症候 群」或「症候群X」之異常相關，該等異常包括肥胖症、 動脈粥樣硬化、高血壓及血脂異常（於Eckel等人，。此以， 365:1415 (2005)中評述）。已認識到發炎在加劇2型糖尿病 及「症候群X」病變之疾病過程中起作用（於Chen, Η. 150926.doc 201120042 P/zarwaco/ogz.ca/ 53:469 (2006) ; Neels等人’·/· C/ίπ. /nvesi.，116:33 (2006) ; Danadona 等人，«/.
Cardiol., 90:27G-33G (2002) ； Pickup# Λ * Diabetologia, 41:1241 (199 8)中評述）。認為MCP-1在肥胖症誘導之胰島 素抗性中起作用。傳統上，人類前脂肪細胞組成性表現 MCP-1 (Gerhardt, Mol. Cell. Endocrinology, 175:81 (2001))° CCR-2表現於脂肪細胞上；在活體外向分化之脂肪細胞添 加MCP-1減少胰島素刺激之葡萄糖吸收及若干脂肪形成基 因（LpL、脂素（adipsin)、GLU-4)、P2、β3-腎上腺素激導 性受體及ΡΡΑΙΙγ 之表現（Sartipy，Ρ.等人，/Voc. Λ^τ/7.
Sci. 96:6902 (1999))。患有2型糖尿病之患者的循環 MCP-1含量高於無糖尿病對照組（Nomura，S·等人，C//«. /mw⑽ 〇/.，121:43 7 (2000))，且 MCP-1 自脂肪組織之釋 放可藉由用抗糖尿病療法（諸如二曱雙胍或噻唑啶二酮）進 行治療而降低（Bruun，J.M·等人，J. Clin. Endocrinol. MeiM·，90:2282 (2005))。同樣，MCP-1亦在鼠類肥胖症實 驗模型中過度表現，且主要由脂肪組織產生（Sartipy等 A » Proc. Natl. Acad. Sci. tASZ， 100:7265 (2003))。在月巴胖 小鼠中，在發生胰島素抗性之前及同時發生MCP-1表現 (Xu，H.等人，·/· C"«· /πναί.，112:1821 (2003))。另一項研 究顯示在小鼠性腺周邊脂肪組織中MCP-1之表現與體重正 相關（Weisberg等人，J. /«vew.，112:1796 (2003))。與 此等資料一致，办/办小鼠中胰島素抗性之發展可經由遺 傳缺失MCP-1或藉由基因誘導之顯性負性肽之表現而改善 150926.doc 12 201120042 (Kanda，Η.等人，j· C7M. /«ve".，116:1494 (2006))。亦可 證明以下邏輯聯繫：脂肪組織中MCP-1之過度表現促進姨 島素抗性（Kamei, N.等人，乂 价〇/. Chem., 281:26602 (2006) )。亦出現一種顯示在办/办小鼠中遺傳缺失]viCP-1 不影響胰島素抗性之矛盾結果（Chow，F.Y.等人， 仏·以以o/ogk，50:471 (2007))。與關於MCP-1之資料一致， 使用CCR-2(MCP-1受體）進行之直接研究顯示其在形成肥 胖症及肥胖症誘導之胰島素抗性中起作用。在野生型 (Tsou，C.L.等人，/· cm /«vesi·, 117:902 (2007))及 ApoE -/-小鼠（Tacke，F.等人 ’ J. C7h. /«ναί.，117:185 (2007) )中，維持高脂肪飲食均增加循環CCR-2+,炎性單 核細胞之數目。遺傳缺失CCR-2減少鼠類脂肪組織中已活 化巨噬細胞之數目（Lumeng，C.N.等人，D/心e如，56:16 (2007)) ’但不影響認為維持「苗條」狀態之M2脂肪巨噬 細胞群體（Lumeng，C.N.等人，J· Cm /«vesi.，117:175 (2007))。遺傳缺失CCR-2減少飲食誘導之肥胖症且在飲食 誘導之肥胖症模型中提高騰島素敏感性（Weisberg，S.P.等 人，·/. /nvew·，116:115 (2006); Cornelius, P.等人， PCT公開案第WO 2006/013427 A2號），其視實驗條件而定 * (Chen，A.等人，仍以.心义，13:13 1 1 (2005))。在此相同模 型中投與小分子CCR-2拮抗劑亦提高胰島素敏感性 (Wei sb er g，S.P.等人，X C7z.«. Jwvesi.，116:115 (2006))。 兩項研究描述CCR-2在高血壓誘導之血管發炎、重塑及 肥大中之重要作用（Bush，E.等人，紿謂·0„，36:36〇 150926.doc -13. 201120042 (2000) ; Ishibashi，Μ.等人，Czrc. Λα., 94:1203 (2004))。 已知人類多發性硬化症中MCP-1受到上調，且已顯示使 用干擾素β-lb之有效療法降低周邊血液單核細胞中MCP-1 之表現，表明MCP-1在疾病進展中起作用（Iarlori, C.等 人，J. TVewroz'mmwwo/·, 123:170-179 (2002))。其他研究表 明拮抗MCP-1/CCR-2相互作用在治療多發性硬化症中之潛 在治療價值；所有此等研究已在實驗性自體免疫性腦脊髓 炎（EAE)、多發性硬化症之習知動物模型中得以證明。向 患有EAE之動物投與MCP-1之抗體顯著減少疾病復發 (Kennedy, K_J.等人，J. 92:98 (1998))。此 外，兩個報導顯示CCR-2 -/-小鼠能抵抗EAE(Fife，B.T.等 人，J. Exp. Mei/·, 192:899 (2000) ; Izikson，L.等人，</. 五;Md·，192:1075 (2000))。隨後之報導藉由檢查CCR-2 缺失在來自不同品系小鼠中之作用對此等初始觀測結果進 一步研究（Gaupp， S·等人，Jm. J. Ραί/ζο/., 162:139 (2003))。值得注意的是，投與小分子CCR-2拮抗劑亦削弱 C57BL/6小鼠之疾病進展（Brodmerkel, C.M.等人，J. /mmwwo厂，175:5370 (2005)) ° 已知在肺移植後產生阻塞性細支氣管炎症候群之患者中 MCP-1受到上調（Reynaud-Gaubert，M·等人，J. Zwng 7><3τυρ/α«ί.，21:721-730 (2002) ; Belperio，J.等人，《/. Cm 108:547-5 5 6 (2001))。在阻塞性細支氣管炎症候群 鼠類模型中，投與針對MCP-1之抗體使氣管阻塞減輕；同 樣在此相同模型中，CCR-2 -/-小鼠能抵抗氣管阻塞 150926.doc -14- 201120042 (Belperio，J.專人，j. Twve"., 108:547-556 (2001))。 此等資料表明拮抗MCP-l/CCR-2可能對治療移植後之器官 排斥反應有益。此外，研究顯示破壞MCP-1/CCR-2轴能夠 延長騰島移植物之存活期（Lee, I.等人，J. /wwwwo/.， 171.6929 (2003) ; Abdi，R.等人，J. 172:767 (2004))。在大鼠移植物模型中，顯示ccR-2及MCP-1在移 植物中受到上調’產生移植物血管病變（H〇riguchi，κ•等 人，乂 i/ea" Ζμ% 7>α似21:1090 (2002))。在另一項 研九中’抗MCP-1基因療法減輕移植物血管病變（§ajura, 專 k ’ Arterioscler. Thromb. Vase. Biol., 24:1886 (2004))。一種研究描述藉由阻斷MCP-1來抑制實驗性靜脈 移植物新生内膜形成（Tatewaki，H.等人，J. Arf， 45:1236 (2007))。 其他研究已證明拮抗MCP-l/CCR-2相互作用在治療哮喘 中之潛在治療價值。在經卵白蛋白激發之小鼠中使用中和 抗體螯合MCP-1致使支氣管過度反應及發炎顯著減少 (Gonzalo，J.-A.等人，j 188:157 (1998))。已證 明可經由投與MCP-1之抗體來減少經曼森氏住血吸蟲 mansom·)卵激發之小鼠之過敏性氣管發炎 (Lukacs，N.W.等人，J. /所所“⑽厂，158:4398 (1997))。與此 一致，MCP-1 -/-小鼠顯示對曼森氏住血吸蟲卵激發之反應 減少（Lu, B.等人 ’ J· 187:601 (1998))。 其他研究已證明拮抗MCP_1/CCR_2相互作用在治療腎病 中之潛在治療知值。在絲球體腎炎鼠類模型中投與Mcp_ 1 150926.doc 15 201120042 之抗體使絲球體新月體形成及i型膠原蛋白沈積顯著減少 (Lloyd，C.M.等人’ 乂 Exp. Med.，185:1371 (1997))。此 外’具有誘導性腎毒性血清腎炎之MCP-1 -/-小鼠顯示顯著 低於其MCP-1 +/+對應物之腎小管損傷（Tesch，GH等人， ·/. C7z«. /«ναί·，103:73 (1999))。 右干研究已證明枯抗MCP-1/CCR-2相互作用在治療全身 性紅斑狼瘡中之潛在治療價值。在全身性紅斑狼瘡鼠類模 型中’ CCR-2 -/-小鼠相對於其WT對應物展現存活期延長 及腎病減少（Perez de Lema, G.等人，乂知· Soc. 16:3592 (2005))»此等資料與關於在狼瘡症齧齒動物模型 中對遺傳缺失MCP-l(Shimizu，S.等人，及 (Oxford)，43:1121 (2004); Tesch，G.H.等人，J.五印.Md， 190:1813 (1999))或投與 CCR-2肽拮抗劑（Hasegawa，Η·等 人，48:2555 (2003))進行之最近研究中所 發現的改良疾病之活性一致。 觀測到相對於未患病回腸’在克羅恩氏病（Cr〇hn，s)患者 之小腸中CCR-2+固有層淋巴細胞顯著增加3〇倍（c〇nn〇r, S.J.等人，Gwi，53:1287 (2004))。亦注意到，相對於對照 組’在患有活動性克羅恩氏病之患者中循環CCRj+Z CD14+/CD56+單核細胞子集擴大。若干齧齒動物研究已證 明拮抗MCP-1/CCR-2相互作用在治療克羅恩氏病/結腸炎 中之潛在治療價值。防止CCR-2 -/-小鼠受到聚葡萄糖硫酸 納誘導之結腸炎的影響（Andres，P G·等人，j 麗„〇/ , 164:63 03 (2000))。投與CCR-2、CCR-5及CXCR3之小分子 150926.doc •16· 201120042 拮抗劑（鼠類結合親和力分別=24、23 6及3 69 nM)亦防止受 聚葡萄糖硫酸鈉誘導之結腸炎影響（Tokuyama，H.等人， 7«i. /wmw/io/·，17:1023 (2005))。最後，MCP-1 -/-小氣在半 抗原誘導之結腸炎模型中顯示實質上減少之結腸損傷（在 宏觀及組織學層面）(Khan，W.I.等人，Jm. /. Gastrointest. Liver Physiol., 291:G803 (2006)) 0 兩個報導描述MCP-1在患有發炎性腸病患者之腸道上皮 細胞及腸黏膜中過度表現（Reinecker，H.C.等人， 108:40 (1995);及 Grimm，M.C.等人’乂 Leukoc. Biol., 59:804 (1996)) ° 一項研究描述MCP-1基因之啟動子多形現象與硬皮病 (多發性硬化症）相關（Karrer，S.等人，J· Derwaio/.， 124:92 (2005))。在組織纖維化之相關模型中，抑制CCR-2/ MCP-1軸減少以下之纖維化：皮膚（Yamamoto, T.等人’ 乂 iwve"· Derwaio/·, 121:510 (2003) ; Ferreira, A.M.等人，·/. 126:1900 (2006));肺（Okuma，Τ·等人， J. Pathol., 204:594 (2004) ； Gharaee-Kermani, M.等人， 24:266 (2003));腎（Kitagawa，K.等人，dm. J· PaMo/.，165:237 (2004) ; Wada，T.等人，乂 dm·
Wep/zro/., 15:940 (2004));心臟（Hayashidani，S·等人’ Cz>cM/a"⑽，108:2134 (2003));及肝（Tsuruta, S.等人，/狀 ·/· Mo/· MeA，14:837 (2004))。 其他研究已證明拮抗MCP-1/CCR-2相互作用在治療肺泡 炎中之潛在治療價值。當使用針對大鼠MCP-1 (JE)產生之 150926.doc 201120042 抗體靜脈内治療患有IgA免疫複合性肺損傷之大鼠時，肺 泡炎症狀得到部分緩解（jones，M L等人，义 149:2147 (1992))。 若干研究已顯示拮抗MCP-1/CCR-2相互作用在治療癌症 中之潛在治療價值（於Craig，M.j.等人，C㈣ Λβν.，25:611 (2006); Conti，I.等人，Sew/rtars in Cancer 出14:149 (2004) ; Giles，R.等人，Cwr· Dr叹
Targdi，6:659 (2006)中評述）。當用抗MCP-1抗體治療帶有 人類乳癌細胞之免疫缺乏小鼠時，觀測到對肺微小轉移灶 之抑制及存活期延長（Salcedo，R.等人，β/00< 96:34-40 (2000))。使用人類臨床腫瘤試樣，發現CCR_2表現與前列 腺癌進展相關（Lu，Y.等人，J. Ce//, 5/oc/2em., 101:676 (2007))。已在活體外顯示MCP-1表現介導前列腺癌細胞生 長及侵入（Lu，Y·等人，/Voiiwe，66:1311 (2006));此外， 由前列腺癌細胞表現之MCP-1誘導人類骨髓祖細胞之骨骼 再吸收（Lu，Y.等人，Cancer 67:3646 (2007)) 〇 多項研究已描述拮抗MCP-1/CCR-2相互作用在治療再狹 窄中之潛在治療價值。在人類中，MCP-1含量與再狹窄風 險直接相關（Cipollone，F_等人，Jrier/osc/er. 772romi)· Kasc. 別〇/_，21:327 (2001))。缺乏CCR-2或MCP-1之小鼠顯示動 脈損傷後内膜面積及内膜/中膜比降低（相對於同窩出生野 生型仔畜）（Roque，M.等人，Jrierz.osc/er. Thromb. Vase. 如〇/·，22:554 (2002) ; Schober，A.等人，Circ. 95:1125 (2004); Kim，W.J.等人，价oc/zem. /Jes. 150926.doc -18· 201120042
Cowmtm·，310:936 (2003))。在小鼠中，將MCP-1之顯性負 性抑制劑轉染於骨骼肌中（Egashira, K.等人，C〖rC. 90 = 1167 (2002))亦減少動脈損傷後之内膜增生。在靈長類 動物中使用中和抗體阻斷CCR-2減少裝入血管支架後之新 生内膜增生（Horvath，C.等人，90:488 (2002))。 兩個報導描述在具有誘導型腦外傷之大鼠中MCP-1過度 表現（King, J.S.等人，J. 56:127 (1994)， 及 Berman, J.W.等人，J, 156:3017 (1996))。此 外’研究顯示部分防止CCR-2 -/-(Dimitrijevic，O.B.等人， 加38:1345 (2007))及 MCP-1 -/-小鼠（Hughes, P.M.等 人 ’ 乂 Cerd. 5/ooi/F沁w MeiM·，22:308 (2002))受局部缺 血/再灌注損傷影響。 已知單核細胞/巨嗟細胞在神經痛之發展中起重要作用 (Liu, T·等人’尸心„，86:25 (2000))。與此觀念一致，最近 已描述CCR-2在治療發炎性疼痛及神經痛中之潛在作用。 CCR-2 -/-小鼠相對於其WT對應物顯示對發炎性疼痛之反 應改變，包括足底内福馬林（formalin)注射後疼痛行為減 少及足底内CFA注射後機械性異常疼痛略微減輕（Abbadie， 專 k，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 100:7947 (2003)) 〇 ^ 外，CCR-2 -/-小鼠在坐骨神經損傷後不顯示顯著機械性異 常疼痛。同樣，經口投與小分子CCR-2拮抗劑後使機械性 異常疼痛降低至損傷前程度之約80%(Abbadie, C.等人， PCT公開案第 WO 2004/110376號）。 一項研究描述MCP-1在缺血性心肌症中之關鍵作用 150926.doc -19- 201120042 (Frangogiannis，N.G.等人，1 15:584 (2007))。 另一項研究描述在抑制MCP-1後實驗性心臟衰竭減輕 (Hayashidani，S.等人，108:2134 (2003))。 其他研究已提供證據表明MCP-1在上文未提及之各種疾 病病況中過度表現。此等報導提供相關證據表明MCP-1拮 抗劑可為適用於該等疾病之治療劑。另一項研究表明 MCP-1在齧齒動物心臟同種異體移植物中過度表現，表明 MCP-1在移植物動脈硬化發病機制中起作用（Russell，M.E. 等人，Proc. Sci. tAS儿 90:6086 (1993))。已注 意到在患有特發性肺纖維化之患者之肺内皮細胞中MCP-1 過度表現（Antoniades, H.N. 89:5371 (1992))。類似地，注意到在患有牛皮癬之患 者之皮膚中MCP-1過度表現（Deleuran，Μ·等人，·/· Dermaio/. *Scz··, 13:228 (1996)，及 Gillitzer，R.等人，/· 101:127 (1993));亦已報導以 CCR-2+細 胞為主之相關研究結果（Vestergaard, C.等人，jcia Derm. 84:353 (2004))。最後，最近報導顯示在患有HIV-1 相關性癡呆患者之腦及腦脊髓液中MCP-1過度表現 (Garzino-Demo, A.，PCT公開案第 WO 99/46991號）。 此外，已顯示CCR-2多形現象至少在一個患者子集中與 類肉瘤病相關（Spagnolo，P.等人 ’ J. CWi. Care
Mei，168:1 162 (2003))。 亦應注意涉及CCR-2為一些HIV病毒株之共受體（Doranz， B.J.等人，Cd/，85:1 149 (1996))。亦已確定使用 CCR-2作 150926.doc -20- 201120042 為HIV共受體可能與疾病進展相關（Connor, R I等人，j Md., 185:621 (1997))。此研究結果與以下最近研究 結果一致：在人類群體中存在CCR_2突變體CCR2_64I與 HIV發作延遲正相關（Smith, M.W.等人，277:959 (1997))。儘管MCP-1不牽涉於此等過程中，但在HIV感染 患者中經由結合於CCR-2起作用之MCP-1拮抗劑可能對於 延遲疾病進展至AIDS起有益治療作用。 應注思CCR-2亦為人類趨化激素MCP-2、MCP-3及MCP-4 之受體（Luster, 五《g. 乂 Med.，338:436-445 (1998))。因 為本文中所述之新型式（I)化合物藉由結合於CCR—2受體來 拮抗MCP-1，故此等式（I)化合物亦可能為CCR_2所介導之 MCP-2、MCP-3及MCP-4作用之有效拮抗劑。因此，當本 文中提及「拮抗MCP-1」時，則假定其等同於「拮抗對 CCR-2之趨化激素刺激」。 因此’調節趨化激素活性之化合物可顯示在治療發炎性 疾病、過敏性疾病、自體免疫性疾病、代謝性疾病、癌症 及/或心血管疾病中之廣泛效用。pct公開案第w〇 2005/021500 A1號（以引用的方式併入本文中及歸屬於本申 请者）、第 WO 2008/014381 A1號、第 w〇 2008/014360 A1 號及第WO 2008/014361 A1號揭示經由CCR-2調節MCP-1、 MCP-2、MCP-3及MCP-4活性之化合物。參考文獻亦揭示 製備此等化合物之各種方法，包括包含引入並隨後移除保 護基之多步驟合成。 需要發現相較於已知趨化激素調節劑具有改良之藥理學 150926.doc 21 201120042 特徵的新型化合物。舉例 要發現相較於對單獨 CCR-2具有選擇性、相對於瓜5主要對咖2具有選擇 性、相對於CCR-2主要對CCR-5具有選摆w ^ ^ ^ 、,選擇性、或其他G蛋白 偶聯又體（亦即5HT2A受體），具有等效雙重ccr如抑制 =性之新型化合物。亦需要發現具有等效雙重π·抑 制活性及以下一或多種有利特徵之化合物： (a) 醫藥特性（亦即溶解度參 之適用性）； /幻生對持續釋放調配物 (b) 劑量要求（例如較低劑量及/或每日_次仏藥）. :減小血液濃度峰谷特徵的因素(亦即清二：或分佈 ⑷增加受體處活性藥物濃度之因素（亦即蛋白質任人、 分佈體積）； σ ⑷降低臨床藥物-藥物相互作用傾向之因素(細胞色辛 抑制或誘導，諸如，參看^叫 的方式併入本文中），·及 、晴ί不利副作用可能性之因素（例如除G蛋白偶聯受體 以夕之樂理學選擇性、可能之化學或代謝反應性 ⑽穿透、離子通道選擇性)。特別需要發現具有上述藥理 學特徵之合意組合的化合物。 有这樂理 =技術：亦需要提供製備該等化合物之新型及/或改 二r大揚二寺方法之特徵可為(但不限於):a)易於改適用 於較大規模生產’諸如試驗性工廠規模或製造規模…方 150926.doc •22- 201120042 法步驟及/或技術使得能夠改良中間物及/或最終化合物之 純度（包括對掌性純度）、穩定性及/或操作便利性；及/戍C) 方法步驟較少。 【發明内容】 本發明提供一種新穎拮抗劑：N-((lR，2S，5R)-5-(第三-丁 基胺基）-2-((S)-3-(7-第三-丁基吡唑并[i，5_a][i，3,5] = p井·心 基胺基）-2-氧代。比咯烷_；!_基）環己基）乙醯胺，或其醫藥學 上可接受之鹽、溶劑合物或前藥，其具有出乎意料之等效 雙重CCR-2及CCR-5受體抑制活性。此外，本發明呈示等 效雙重CCR-2/5活性與合意藥理學特徵之新穎且出乎意料 :組合。亦提供本發明之結晶及代謝物形式。含有其之醫 藥、且σ物及其作為藥劑治療發炎性疾病、過敏性疾病、自 體免疫性疾病、代謝性疾病、癌症及/或心血管疾病之使 亦為本發明之目標。本發明亦提供製備式（I)化合 Γ_’ 包括 N_((1R，2S，5R)I(第三·丁基胺基㈣ S)-3-(7-第 其:坐并[1’5~3][1’3,5]三〇井-4-基胺基）-2-氧代〇比咯炫-1-基）環己基）乙醯胺之方法：
150926.doc 产 •23· 6¾ 6¾201120042 其中R 、R8、R9、Ri〇及如本文中所述。本文中亦提 供適用作該方法之中間物之化合物β 本發明亦提供N-((lR，2S，5R)-5-(第三-丁基胺基）·2-((8)_ 3_(7-第三·丁基°比唑并n，5-a][l，3,5]三畊·4-基胺基）-2_氧代 吡咯烷基）環己基）乙醯胺、N-((lR，2S，5R)-5-(第三-丁基 胺基）-2-(⑻-3-(7_(2_經基，卜二曱基_乙基）吼唑并μ剣 [1，3’5]三畊-4-基胺基）_2_氧代D比咯烷_丨_基）環己基）乙醯 胺、或醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物或前藥的用途，其 係用於製造用於治療發炎性疾病、過敏性疾病、自體免疫 性疾病、代謝性疾病、癌症及/或心血管疾病之藥物。 本發明亦提供活性化合物、或其醫藥學上可接受之鹽或 前藥之代謝物·，其醫藥組合物；及使用該等代謝物治:發 炎性疾病、過敏性疾病、自體免疫性疾病、代謝性疾病、 癌症及/或心血管疾病’尤其糖尿病、多發性硬化症、克 羅恩氏病及/或動脈粥樣硬化之方法。 因此’本文中揭示趨化激素活性之新穎調節劑，或 =學上可m或前藥’其具有合意藥理學特徵之出 意料的組合。 丁 本發明提供包含㈣學上可接受之载劑及治療有 至少-種本發明化合物或其醫藥學 式的醫藥組合物。 m，』樂形 本發明亦提供治療發炎性疾病、過敏性疾病、 性疾病、代謝性疾病、癌症及/或心血管疾病，尤其= 150926.doc •24· 201120042 病、多發性硬化症、克羅恩氏病及/或動脈粥樣硬化之方 法，其包含向需要該治療之主體投與治療有效量之至少— 種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽或前藥形式。 本發明提供製備本文中所揭示之化合物之方法及其適用 中間物。 本發明提供本發明化合物之用途，其係用於治療中。 本务明提供本發明化合物之用途，其係用於製造用於治 療發炎性疾病、過敏性疾病、自體免疫性疾病、代謝性疾 病、癌症及/或心血管疾病之藥物。 【實施方式】 本發明提供一種新穎拮抗劑：n_((ir,2s，5r)_5_(第三-丁 基胺基）-2-((S)-3-(7-第三.丁基D比吐并。井_4_ 基胺基）-2-氧代料炫小基）環己基）乙_，或其醫藥學 上可接受之鹽、溶劑合物或前藥，其具有出乎意料之等效 雙重CCR-2及CCR-5受體抑制活性。&外纟發明提供合 意藥理學特徵之新穎組合。亦提供本發明之晶形及代謝 物。含有其之醫藥組合物及其作為藥劑治療發炎性疾病、 過敏性疾病、自體免疫性疾』、代謝性疾病、癌症及/或 心血f疾病之使用方法亦為本發明之目標。本發明亦提供 製備式⑴化合物，包括N_((1R，2S，5R)_5_(第三_丁基胺基）_ 2-((S)-3-(7·第三·丁基㈣扣㈣^化⑭基胺基卜 2_氧代吡咯烷-1-基）環己基）乙醯胺之方法： 150926.doc •25· 201120042
Rt
R〆 \r9 其中 R1、R8、R9、Rio及 ©如本文中所述。本文中亦提 供適用作該方法之中間物之化合物。 N-((lR，2S，5R)-5-(第三-丁 基胺基）_2-((S)-3-(7-第三-丁基 。比唑并[l，5-a][l，3,5]三啡_4_基胺基）·2-氧代吡咯烷-1-基）環 己基）乙醯胺出乎意料地顯示等效雙重CCR-2/5受體抑制活 性。 此外 ’ N-((lR，2S，5R)-5-(第三-丁基胺基）-2-((S)-3-(7-第 三-丁基吡唑并[l，5-a][l,3,5]三畊-4-基胺基）-2-氧代吡咯 烷-1-基）環己基）乙醯胺顯示等效雙重CCR-2/5受體抑制活 性與藥理學特徵（包括令人驚訝的高度口服生物可用性與 關於其向度有效並具有極佳安全性準則之指示的組合）的 合意組合。
已知趨化激素受體調節劑，諸如PCT公開案第WO 2004/071460 A1 號及第 WO 2005/021500 A1 號（美國專利第 7，163,937號，2007年1月16日頒予，歸屬於本申請者）中所 揭示者如藉由其CCR-2或CCR-5結合能力（一種功效量度） 所量測並不十分有效’及/或如藉由hERG及Na+離子通道 150926.doc -26- 201120042 研究所量測之離子通道選擇性所指示其缺少適當安全性準 則。 其他已知趨化激素受體調節劑，諸如pct公開案第w〇 2008/014381 A1 號、第 WO 2008/014360 A1 號及第 w〇 2008/014361 A1號中所揭示者為CCR_2受體活性之選擇性 拮抗劑或選擇性部分促效劑/拮抗劑。然而，此等己知調 節劑如其CCR-2及CCR-5結合能力所量測主要顯示ccr°_2 活性且不為等效雙重拮抗劑。 其他已知趨化激素受體調節劑，諸如Carter等人 2008年8 月 17 日）中所揭示者為 雙重CCR-2/5調節劑，但如藉由hERG&Na+離子通道研究 量測之離子通道選擇性所指示缺少適當安全性準則。九 相比之下，如本文在下文題為「比較藥理學特徵」之章 節中提供之資料所說明，N_((1R，2S，5R)_5_(第三-丁基2 基）-2-((S)-3-(7-第三-丁基吼唾并三喷心基胺 基）-2-氧代吡咯烷基）環己基）乙醯胺令人驚訝地展現等 效 CCR-5 及 CCR-2 結合能力。此外，n_((1r，2s，5r)_5•(第 三丁基胺基）-2·((δ)-3·(7-第三-丁基。比唾并[^仙^^三 基胺基）_2_氧代料烧小基）環己基）乙酿胺顯示令人 驚言牙的高度膜參透性’且仍保持等效CCR_2/5雙重結合能 力以及極佳離子通道選擇性。 因此，本發明提供具有等效咖_2及咖_5結合能力之 新型趨化激素調節劑’且改良藥理學特徵，該等特徵預期 適用於治療發炎性疾病、過敏性疾病、自體免疫性疾病、 150926.doc -27- 201120042 代谢性疾病、癌症及/或心血管疾病。 實施例 在一實施例中’本發明係關於N-((ir,2S，5R)-5-(第三-丁 基胺基）-2-((8)-3-(7-第三-丁基。比唑并[1，5_&][1，3,5]三4-4-基胺基）-2·氧代吡咯烷_ι_基）環己基）乙醯胺：
及其醫藥學上可接受之鹽。 另一實施例為N-((lR，2S，5R)-5-(第三-丁基胺基）-2-((S)-3-(7-第三-丁基〇比唑并[i，5_a;||；l，3,5]三畊-4-基胺基）-2-氧代 吡咯烷-1 -基）環己基）乙醯胺之晶形。 另一實施例為义（（111，28,511)-5-(第三-丁基胺基）-2-((5)-3-(7-第三-丁基〇比唑并[i，5-a][1，3,5]三畊-4-基胺基）-2-氧代 吡咯烷-1-基）環己基）乙醯胺之晶形，其中該晶形包含N-1 及/或P-1晶形。 另一實施例為小（（111,23,51〇-5-(第三-丁基胺基）_2-((8)_ 3-(7-第三-丁基》比唑并[1，5-&][1，3,5]三畊-4-基胺基）_2-氧代 吡咯烷-1-基）環己基）乙醯胺之晶形’其中該晶形包含Nq 150926.doc -28- 201120042 晶形。 另一實施例為>^-((111,23,511)-5-(第三-丁基胺基）-2-((8)-3_(7_第三-丁基吼唑并[l,5-a][l，3,5]三井-4-基胺基）-2-氧代 吡咯烷-1-基）環己基）乙醯胺之晶形’其中該晶形包含呈實 質上純形式之N-1及/或P-1晶形。 另一實施例為义(（111，28,511)-5-(第三-丁基胺基）-2-((8). 3_(7-第三-丁基吡唑并[l，5_ani，3,5]三畊_4_基胺基）-2-氧代 °比咯烷-1-基）環己基）乙醯胺之晶形，其中該晶形包含呈實 質上純形式之N-1晶形。 另一實施例為N-1晶形，其特徵在於實質上等於以下之 早位晶胞參數： 晶胞尺寸： a=7.3085(6) b=16.257(1) c=22.688(2) α° = 90 β° = 90 γ° = 90 空間群Ρ2Α2, 分子/單位晶胞（Ζ) : 1 密度計算值g-cnT3: 1.194 其中該晶體係在約-70°C之溫度下。 另一實施例為特徵在於（或具有）實質上與圖1 一致之粉 末x射線繞射圖之N-2晶形。 150926.doc -29- 201120042 另一實施例為特徵在於（或具有）實質上與圖2中所示一 致之差示掃描熱量測定熱分析圖，在高於約2〇5。(：下具有 吸熱轉變之N-2晶形。 另一實施例特徵在於（或具有）與圖3中所示一致之熱解 重量分析曲線。 另一實施例為斗（（111，28,511)-5-(第三-丁基胺基）-2-((3)-3_(7_第三-丁基吡唑并[1，5_3][1，3,5]三畊_4_基胺基）_2_氧代 。比嘻院-1-基）環己基）乙醯胺之晶形，其包含晶形，其 特徵在於表1中所見之單位晶胞參數；及/或實質上與圖1 一致之粉末X射線繞射圖。 另一實施例為包含N_((1R，2S，5R)_5·(第三_丁基胺基）_2_ ((S)-3-(7-第三-丁基。比唑并三畊_4基胺基 氧代°比咯烷-1-基）環己基）乙醯胺及其醫藥學上可接受之鹽 之醫藥組合物。 另一實施例為包含Ν_((1ΙΙ，2!5,5Κ)_5_(第三·丁基胺基）_2· (()、3 (7 第—-丁基。比嗤并[1，54][1，3,5]三畊_4_基胺基）_2_ 氡代。比咯烷-1·•基）環己基）乙醯胺、其醫藥學上可接受之鹽 及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。 另一實施例為包含N_((1R，2S，5R)_5_(第三·丁基胺基 氧代m小基）環己基）乙醯胺、其醫藥學上可接受之鹽 及至少一種其他治療劑的醫藥組合物。 、、另一實施例為調節趨化激素或趨化激素受體活性之方 法’其包含向有需要之患者投與治療有效量之 150926.doc 201120042 ((lR，2S，5R)-5-(第三-丁 基胺基）_2_((8)_3·(7_第三丁 基吡唑 并[1，5-3][1，3,5]三畊_4_基胺基）-2_氧代。比咯烷_1_基）環己 基）乙醯胺及其醫藥學上可接受之鹽。 另一實施例為調節CCR_2及CCR_5受體活性之方法，其 包含向有需要之患者投與治療有效量之N_((1R，2S，5R)_5_ (第三-丁基胺基）-2_((S)_3_(7_第三-丁基吼唑并n，5_a] [1，3’5]二畊-4-基胺基）_2_氧代吡咯烷_丨_基）環己基）乙醯胺 及其醫藥學上可接受之鹽。 另一貫施例為調節由CCR-2及CCR-5受體介導之]\^?- 1 ' MCP-2、MCP-3、MCP-4、MCP-5、MIP-la、MIP-lb及 RANTES活性之方法，其包含向有需要之患者投與治療有 效量之]^-((1尺，28,511)-5-(第三-丁基胺基）_2-((8)-3-(7-第三- 丁基吡唑并[l，5-a][l，3,5]三畊_4_基胺基）_2_氧代吡咯烷-!_ 基）環己基）乙醯胺及其醫藥學上可接受之鹽。 另一實施例為調節MCP-1活性之方法，其包含向有需要 之患者投與治療有效量之N_((1R，2S，5R)_5_(第三丁基胺 基）-2-((S)-3-(7-第三-丁基。比唑并三畊_4基胺 基）-2-氧代吼咯烷_ι_基）環己基）乙醯胺及其醫藥學上可接 受之鹽。 另貫知例為治療病症之方法，其包含向有需要之患者 投與治療有效量之N-((lR，2S，5R)-5-(第三-丁基胺基）_2· (⑻-3-(7_第三·丁基0比。坐并三喷冰基胺基）2_ 氧代°比咯烷-1-基）環己基）乙醯胺及其醫藥學上可接受之 鹽，該病症係選自糖尿病、肥胖症、代謝症候群、中風、 150926.doc -31 · 201120042 神經痛、缺血性心肌症、牛皮癬、高血壓、硬皮病、骨關 即κ、動脈瘤、發熱、心血管疾$、克羅恩氏病、充血性 心臟哀竭、自體免疫性疾病、HIV感染、Hiv相關性癡 呆牛皮癖、特發性肺纖維化、移植物動脈硬化、物理或 化學誘導之腦外傷、發炎性腸病、肺泡炎、結腸炎、全身 性紅斑狼瘡、腎毒性血清腎炎、絲球體腎炎、哮喘、多發 性硬化症'動脈粥樣硬化、血管炎、易損斑塊、類風濕性 關節炎、再狹窄、靜脈新生内膜增生、透析移植物新生内 膜增生、動靜脈瘺内膜增生、器官移植、慢性同種異體移 植腎病變及癌症。 另 實施例為治療病症之方法，其包含向有需要之患者 投與治療有效量之N_((1R，2S，5R)_5_(第三-丁基胺基）_2_ ((S)-3-(7-第三-丁基 n比唑并[1，5_a][1，3,5]三畊_4_基胺基）_2_ 氧代°比咯烷-l-基）環己基）乙醯胺及其醫藥學上可接受之 鹽，其中該病症係選自糖尿病 '肥胖症、克羅恩氏病、牛 皮癬、特發性肺纖維化、移植物動脈硬化、物理或化學誘 導之腦外傷、發炎性腸病、肺泡炎、結腸炎、全身性紅斑 狼瘡、腎毒性血清腎炎、絲球體腎炎、哮喘、多發性硬化 症、動脈粥樣硬化、及類風濕性關節炎、再狹窄、器官移 植、癌症、靜脈新生内膜增生、透析移植物新生内膜增生 及動靜脈瘺新生内膜增生。 另一實施例為治療病症之方法，其包含向有需要之患者 投與治療有效量之N-((lR，2S，5R)-5-(第三-丁基胺基）_2_ ((S)-3-(7 -第三-丁基 η比吐并[i，5-a][l，3,5]三嗜-4-基胺基）_2_ 150926.doc •32· 201120042 氧代°比11 各烧-1-基）環己基）乙醯胺及其醫藥學上可接受之 鹽’其中該病症係選自糖尿病、肥胖症、克羅恩氏病、全 身丨生、.·χ斑狼瘡、絲球體腎炎、多發性硬化症、動脈粥樣硬 化、再狹窄、器官移植、靜脈新生内膜增生、透析移植物 新生内膜增生及動靜脈瘺新生内膜增生。 另一實施例為治療病症之方法，其包含向有需要之患者 投與治療有效量之N_((1R，2S，5R)_5_(第三_ 丁基胺基）_2_ (⑻-3-(7-第三-丁基。比唑并井冰基胺基 氧代吡咯烷-1-基）環己基）乙醯胺及其醫藥學上可接受之 鹽，其中s亥病症係選自多發性硬化症、動脈粥樣硬化、克 羅恩氏病、糖尿病、靜脈新生内膜增生、透析移植物新生 内膜增生及動靜脈瘺新生内膜增生。 另一實施例為治療病症之方法，其包含向有需要之患者 投與治療有效量之N_((1R，2S，5R)_5_(第三_ 丁基胺基 (⑻-3-(7-第三-丁基π比嗤并n，5_a][l，3,5；i三畊_4_基胺基 各院小基）環己基）乙«及其學上可接受之 鹽，其中該病症係選自再狹窄、器官移植、癌症、靜脈新 生内膜增生、透析移植物新生内膜增生及動靜脈瘺新生内 膜增生。 另實把例為治療糖尿病之方法，其包含向有需要之患 者投與治療有效量之N_((1R，2S，5R)_5_(第三·丁基胺基）_2_ (_( ) (7第二-丁基°比唾并三呼-4-基胺基）-2- 氧代比。各燒小基）環己基）乙酿胺及其醫藥學上可接受之 I50926.doc •33· 201120042 另一實施例為、治療克羅恩氏病之方法，其包含向有需要 之患者投與治療有效量之t N_((1R，2S,5R)_5_(第三·丁基胺 基）-2-((S)-3-(7_ 第三.丁基 „比咕并 π，5&][ι，3,5^井 _4_ 基胺 基）-2-氧代。比咯烷基）環己基）乙醯胺及其醫藥學上可接 受之鹽。 另一實施例為治療多發性硬化症之方法，其包含向有需 要之患者投與治療有效量之N_((1R,2S，5R)_5_(第三-丁基胺 基）·2-(⑻-3-(7-第三-丁基吼。坐并 基）-2-氧代吡咯烷_；!_基）環己基）乙醯胺及其醫藥學上可接 受之鹽。 另一實施例為治療動脈粥樣硬化之方法，其包含向有需 要之患者投與治療有效量之n_((1r,2S，5 · 基⑽·3例三· 丁基。^并Π，5部，3, 基）-2-氧代。比咯烷_1_基）環己基）乙醯胺及其醫藥學上 受之鹽。 μ 另一實施例為治療再狹窄之方法，其包含向有需要之患 者投與治療有效量之N_((1R，2S，5R)_5_(第三·丁基 叫3-(7.第三_丁基。比唾扣义耶丄^喷冰基胺基）々· 氧代°比咯烷-1-基）環己基）乙醯胺及其醫藥學上可接受之 鹽。 另—實施例為治療器官移植之方法，其包含向有需要之 患者投與治療有效量之N_((1 R，2S，5R)_5•(第三_ 丁基胺基）_ =(⑻-3·(7-第三·丁基。比唾并[以-耶义化^基胺基卜 2氧代吡咯烷-1·基）環己基）乙醢胺及其醫藥學上可接受之 150926.doc -34- 201120042 轉。 另實鈿例為治療癌症，例如乳癌、肝癌、前列腺癌及 黑素瘤之方法，其包含向有需要之患者投與治療有效量之 N-((lR，2S，5R)-5_(第三 _丁基胺基）_2_((s)_3(7 第三 _丁基吼 嗤并[l，5-a][l，3,5]三呼_4_基胺基）2_氧代吡咯烧小基）環己 基）乙醯胺及其醫藥學上可接受之鹽。 另實把例為治療靜脈新生内膜增生之方法，其包含向 有品要之患者投與治療有效量之n_((1r，2s，5r)_5_(第三-丁 基月女基⑻.3-(7-第三-丁基°比。坐并[l，5-a][l，3,5]三。井-4- 基胺基）-2-氧代D比咯烷_丨_基）環己基）乙醯胺及其醫藥學上 可接受之鹽。 另貫施例為治療透析移植物新生内膜增生之方法，其 I含向有茜要之患者投與治療有效量之n_((1r，2S,5r)_5_ (第—_ 丁基胺基）-2-((S)-3_(7-第三-丁基吼唑并[I,5-a] [1 ’3’5]二畊基胺基）-2_氧代°比咯烷-1 -基）環己基）乙醯胺 及其醫藥學上可接受之鹽。 另實她例為治療動靜脈瘺新生内膜增生之方法，其包 含向有需要之患者投與治療有效量2N_((1R，2s，5R) 5_a 二-丁基胺基）·2-((δ)-3-(7-第三-丁基吡唑并[l,5-a][l，3,5]三 崎_4_基胺基）-2·氧代吼洛烧-卜基）環己基）乙醯胺及其醫藥 學上可接受之鹽。 另一實施例為治療發炎性疾病、過敏性疾病、自體免疫 t疾病代°射性疾病及/或心血管疾病之方法，其包含向 有需要之患者投與治療有效量之N-((IR，2S，5R)-5·(第三-丁 150926.doc -35· 201120042 基胺基）-2-((S)-3-(7 -第三-丁基《•比 〇坐并[i，5-a][i，3,5]三畊-4- 基胺基）-2-氧代吼咯烷_丨_基）環己基）乙醯胺及其醫藥學上 可接受之鹽。 另一實施例為治療至少部分由CCR-2及CCR-5介導之疾 病之方法’其包含向有需要之患者投與治療有效量之 N-((1R，2S，;5R)·5-(第三-丁基胺基）_2_((s)-3_(7_ 第三-丁基吡 唑并[l’5-a][l，3,5]三畊-4-基胺基）_2-氧代。比咯烷·丨_基）環己 基）乙醯胺及其醫藥學上可接受之鹽。 另一實施例為N-((lR，2S，5R)-5-(第三-丁基胺基）_2_((8)_ 3-(7-第三-丁基。比。坐并[仏耶义”三呼冰基胺基^-氧代 比各烧1-基）環己基）乙醯胺及其醫藥學上可接受之鹽在製 備用於治療以下疾病之藥物中的使用方m病、肥胖 症、代謝症候群、中風、神經痛、缺血性心肌症、牛皮 癣、高血壓、硬皮病、骨關節炎、動脈瘤、發熱、心血管 疾病、克羅恩氏病、充血性心臟衰竭、自體免疫性疾病、 感& HIV相關性癡呆、牛皮癬、特發性肺纖維化、 移植物動脈硬化、物理或化學誘導之腦外傷、發炎性腸 病、肺泡炎、結腸炎、全身性紅斑狼瘡、腎毒性血清腎 人：、’糸球體腎炎、哮喘、多發性硬化症、動脈粥樣硬化、 血官炎、易損斑塊、類風濕性關節炎、再狹窄、靜脈新生 内臈增生、透析移植物新生内膜增生、動靜脈瘺内膜增 生、器官移植、慢性同種異體移植腎病變、癌症、靜脈新 生内膜增生、透析移植物新生内膜增生、及動靜脈痛新生 内膜增生。 150926.doc -36- 201120042 在另一實施例中’本發明係關於N-((lR，2S，5R)-5-(第三_ 丁基胺基）-2-((S)-3-(7-(2-羥基-1，丨_二曱基-乙基）π比唑并 [l，5-a][l，3,5]三畊-4-基胺基）-2-氧代比咯烷_丨_基）環己基） 乙酿胺：
OH
>( j其醫藥學上可接受之鹽。含有其之醫藥組合物及其作為 樂劑治療發炎性疾病、過敏性疾病、自體免疫性疾病、代 謝r生疾病、癌症及/或心血f疾病之使用方法亦為本發 之一實施例。 方法實施例 在第—實施例中’本發明提供製備式I化合物或其鹽形 式之方法： 7
150926.doc •37- 201120042 其包含： 1) 使式I-cc之腙化合物轉化為式之化合物；及 2) 使式I-bb之化合物與式〗_aa之化合物偶合，其中：
Rl獨立地為氫或選自节倾基、第三·丁氧基裁基、 苐基曱氧幾基、节基及對甲氧基节基之胺保護基；
Rs及R9獨立地為氫或Ci_6烷基； R>2 1 為=〇 ; HET為視情況經取代 < 具有i少一個氮雜原子之3至 14員雜環基或雜芳基雙環；及 LG為-ORu ’其中尺“為匕6烷基、苯基、具有一或多 個選自N、S或〇之原子之5至7員雜芳基，或3至7員環烷 基，其中全部均視情況經丨至3個選自_素、Cl或Ci_6烷 基之基團取代。 在第二實施例中，本發明提供式I化合物為1^_ ((lR，2S，5R)-5-(第三·丁基胺基）_2 (⑻_3_(7第三丁基。比。坐 并[l，5-a][l，3,5]三畊_4·基胺基）_2_氧代D比咯烷_丨、基）環己 基）乙醒胺之方法。 在第三實施例中，本發明提供製備式丨化合物之方法， 其中式I-bb化合物為下式化合物： 〇X)
在第四實施例中’本發明提供製備式ut(合物之方法， 150926.doc -38- 201120042 其中偶合經由酸性處理，隨後添加鹼來進行。 在第五實施例中’本發明提供製備式〗化合物之方法， 中s文性處理中之酸係選自檸;檬酸、酒石酸、乙醇酸及鹽 酸。 在第六實施例令’本發明提供製備式以匕合物之方法， 其中鹼係選自 K2HP04、Na2HP04、NaHC〇3及 KHC03。 在第七實施例中’本發明提供製備式合物之方法， 其中使式Ι-cc之腙化合物轉化為式化合物包含使式丨^ 知化合物與醯化劑、親核試劑及/或三級胺鹼在溶劑中反 應隧後（1)在第二種三級胺鹼存在下使用醇或（ϋ)使用醇 鹽進行攔截以形成式I-bb化合物。 在第八實施例中，本發明提供醯化劑係選自氧氯化磷、 乙二醯氯、亞硫醯氣及光氣，較佳為氧氯化磷之方法。 在第九實施例中，本發明提供三級胺鹼係選自三乙胺、 -一異丙基-N-乙基胺、三正丙基胺、N_甲基嗎啉及丨，4_ 二氮雙環[2.2.2]辛烷，較佳為沁沁二異丙基^乙基胺之方 法。 在第十實施例中，本發明提供親核試劑係選自二曱基4_ 胺基吨。定、二曱基苯胺、。比咬及二曱基η比咬，較佳為二曱 基4-胺基°比。定之方法。 在第十一實施例中’本發明提供反應中所用之親核試劑 之量為2.0至4.0當量，較佳為3.0當量之方法。 在第十二實施例中，本發明提供醇或醇鹽係選自苯酚、 五氟苯酚、甲醇、乙醇、曱醇鈉及苯酚鈉，較佳為苯酚之 150926.doc -39- 201120042 方法。 在第十三實施例中，本發明提供第_ --^ u 弟一種二級胺鹼係選自 二乙胺、N-N-二異丙基·N_乙基 一正丙基胺、N-甲基 嗎啉及1,4-二氮雙環[2 2 2]辛烧，
乙基胺之方法。 &佳树二異丙基I 在第十四實施例中，本發明提供溶㈣選自乙腈、 曱烷及純氧氯化磷之方法。 在第十五實施例中，本發明提供 丨、久愿及攔截在環境溫度 至70 C範圍内之溫度下進行之方法。 在第十六實施例中，本發明提供式^化合物為下式化 合物之方法：
在第十七實施例中，本發明提供式^之腙化合物係藉 由包含以下之方法製備的方法：使式⑷之腙化合物θ r21 H2N R22—R23 I-dd 與原曱酸酯在酸存在下在高溫下反應產生式I _ c c之腙化合 物；其中R2丨為=〇; Rn為-NH-NH2;且Ru為氰基烷基；1 R22與R23可一起形成5至8員環，其中該環可視情況經 多個選自胺基、烷基、芳基或雜芳基之取代基取代且可視 情況含有1、2、3或4個獨立地選自由N、s或〇組成之群之 150926.doc *40- 201120042 雜原子。 一在第十八實施例巾’本發明提供原甲酸酯係選自原甲酸 一甲3曰、原甲酸二乙酯及原曱酸三丙s旨，較佳為原甲萨： 甲酯之方法。 义— 在第十九實施例中，本發明提供酸係選自乙酸、三氣乙 酸、鹽酸及曱烧磺酸，較佳為乙酸之方法。 在第二十實施例中，本發明提供反應在贼至啊 佳40°C至75°C範圍内之溫度下進行之方法。 在第一十實施例中，本發明提供式化合物係選自 下式化合物之方法： H2N 人 N-彳 / H2N^N^N·^—L·-
HzN 或 。 在第二十二實施例中’本發明提供式I-dd之腙化合物係 藉由包含以下之方法製備之方法：使式^化合物（R23=〇) 與式I-ff之卡畊化合物： h2n
1 R 22
Iff 在溶劑中在驗存在下缩人
卞牡卜难。產生式I-dd之腙化合物；其中R 為=0且R22及R23如上文中所述。 在第，一十二貫施例中 丙醇、1-丙醇及甲醇， 在第一十四貫施例中 ，本發明提供溶劑係選自乙醇、2-較佳為乙醇之方法。 ，本發明提供鹼係選自乙酸鈉、乙 I50926.doc •41 - 201120042 夂鉀—乙胺及二異丙基-tv-乙基胺，較佳為乙酸鈉 之方法。 在第二十五實施例中，本發明提供縮合在2〇。〇至6〇艽， 較佳25°C至551範圍内之溫度下進行之方法。 在第二十六實施例中，本發明提供式㈣之卡_化合物 為半卡畊鹽酸鹽之方法。 在第二十七實施例中，本發明提供幻…之化合物為特 戊醯基乙腈之方法。 在第二十八實施例中，本發明提供製備N-((1R，2S，5R)-5-(第三-丁基胺基）_2_((s)_3_(7•第三·丁基。比唑并 [1，3,5]三__4·基胺基）_2_氧代0比咯烧小基）環己基）匕酿胺 之方法，其包含以下流程中所述之方法：
本發明在不悖離其精神或基本屬性下可以其他特定形式 實施。因此’以上實施例不應視為具有限制性。本發明之 任何及所有實施例可與任何其他實施例聯合以描述其他實 施例。實施例之各要素（例如較佳或特定態樣）為其自 150926.doc -42· 201120042 只例此外，一貫施例之任何要素意欲與任何實施例 可及所有其他要素組合以描述其他實施例。此外，本 :明：蓋本文中所述之本發明之不同實施例、實施例部 刀 义義、描述及實例之組合。 定義 乂下為本說明書及隨附申請專利範圍中使用之術語的定 義。除非另外指示，否則本文中所提供之基g^術語之初 始疋義適用於本說明書及申請專利範圍通篇中之個別或作 為另一基團之一部分的彼基團或術語。 術°。烧基」係指具有1至12個碳原子，較佳1至6個碳 原子之直鏈或分支鏈烴基。在符號「c」後出現下標形式 之數字時，該下標更明確定義特定基團可含有之碳原子 數。舉例而言「Cue烷基」係指具有1至6個碳原子之直鏈 及分支鏈烷基，諸如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁 基、第三-丁基、正戊基等。下標「〇」係指一鍵。因此， 術語羥基（C〇_2)烷基或（C〇·2)羥基烷基包括羥基、羥基曱基 及羥基乙基。烷基可經1至3個選自以下之基團取代：（Cl 6) 烷基、（C2-6)烯基、羥基、鹵素、氰基、硝基、cf3、0(Cu6 烷基）、OCF3、C(=0)H、¢:(=0)((^.6 烷基）' co2h、 CC^Cw 烷基）、NHCOJCk 烷基）、-SCCk 烷基）、NH2、 NHCCu 烷基）、N(Cn6 烷基）2、N(CH3)3+、SOKCw 烷基）、 (：(=0)((：!—4伸烷基）NH2、（:(=0)((:,.4伸烷基）NH(烷基）、 C( = 〇)(Ci-4伸烧基）N(C】-4烧基）2、C3-7環烧基、苯基、苄 基、苯基乙基、苯氧基、苄氧基、萘基、4至7員雜環基、 150926.doc -43- 201120042 及/或5至6員雜芳基。當經取代之烷基經芳基、雜環基、 裱烷基或雜芳基取代時，該等環狀系統如下文所定義且因 此可具有0、1、2或3個亦如下文所定義之取代基。 當術語「烷基」與另一基團一起使用時，諸如在「芳基 烷基」中，此聯合更明確定義經取代之烷基可含有之至少 個取代基。舉例而S，「彡基院基」係指至少一個取代 基為芳基如上文所定義之經取代烷基，諸如苄基。因此， 術語方基（C〇_4)烷基包括具有至少一個芳基取代基之經取 代低碳烷基且亦包括芳基直接鍵結至另一基團，亦即芳基 (C〇)烷基。 & 術語「烯基」係指具有2至12個碳原子及至少一個雙鍵 之直鏈或分支鏈烴基。具有2至6個碳原子且具有—個雙鍵 之烯基最佳。烯基可如上文關於烷基所述經取代。 術語「炔基」係指具有2至12個碳原子及至少一個參鍵 之直鏈或分支鏈烴基。具有2至6個碳原子且具有一個參鍵 之炔基最佳。块基可如上文關於烧基所述經取代。 術語「伸烷基」係指具有i至12個碳原子，較佳i至8個 碳原子之二價直鏈或分支鏈烴基，例如卜CH2_}n，其中”為 1至12 ’較佳為1至8。低碳伸烷基，亦即具有1至2個碳原 子之伸烷基最佳。術語「伸烯基」及「伸炔基」分別指如 上文所定義之烯基及炔基之二價基團。伸烯基可如上文關 於烧基所述經取代。 術語「烧氧基」指氧原子經烷基取代，如上文所定義。 舉例而言’術語「烷氧基」包括基團_〇_Cl6烷基。 150926.doc •44· 201120042 當提及烷氧基、硫烷基或胺基烷基時使用下標時，下標 係指該基團除雜原子外亦可含有之碳原子數。 應瞭解所有基團之選擇，包括例如烷氧基、硫烷基及胺 基烷基可由熟習此項技術者進行以提供穩定化合物。 術語「羰基」係指二價羰基_C( = 〇)_。 術語「醯基」係指羰基連接至有機基團，更特定言之基 團C( = 〇)Re，以及二價基團_c(=〇)Re連接至有機基團。基 團Re可選自如本文中所定義之烷基、烯基 '炔基、環烷 基、雜環基、芳基或雜芳基，或適當時選自相應二價基 團’例如伸烧基。 術語「環烧基」係指具有3至9個，較佳3至7個碳原子之 完全飽和及部分不飽和烴環（且因此包括「環烯基環」）。 術語「環烷基」包括具有〇、1、2或3個選自以下之取代基 之該等環：（C〗_4)烷基、（C2_4)烯基、鹵素、羥基、氰基、 硝基、CF3、0(C丨-4 烷基）、〇CF3、C(=0)H、CPOXCm 烷 基）、C02H、CCMCm烷基）、NHCOJCw烷基）、SCCw烧 基）、NH2、NH(Ci.4 烧基）、N(C〗_4 烧基）2、N(Ci-4 燒基）3+、 烷基）、¢:(=0)((:,-4伸烷基）nh2、cpoxcu伸垸 基）NH(烷基）、及/或(:(=0)((^-4伸烷基）N(Ci·4烷基術語 「環烧基」亦包括稍合有第二環（例如包括苯環、雜環基 環或雜芳基環）或具有3至4個碳原子之碳-碳橋之該等環。 術語「鹵基」或「鹵素」係指氣、溴、氟及蛾。 術語「鹵烷基」意謂具有一或多個鹵基取代基之經取代 烧基。舉例而言，基」包括單氟曱基、二氟曱基及 150926.doc •45- 201120042 三氟*曱基。 術語ii炫·氧基」意謂具有一或多個画基取代基之烧氧 基。舉例而言「㈣氧基」包括H 術語「雜原子」包括氧、硫及氮。 術5吾芳基」係指笨基、聯苯基、第基、丨_蔡基及2_萘 基術”〇芳基」包括具有0、1、2或3個選自以下之取代 基之該等n4)烧基、（C2.4)稀基、_素、經基、氰 基确基、CF3、〇(ci-4 烷基）、〇CF3、C(=0)H、 c( OKCu院基）、c〇2H、c〇yC】4院基广 NHC〇yC"烧 基）、s(cv4烷基）、NH2、NH(Ci 4烷基）、N(c㈠烷基、 零卜4烷基）3、S〇2(Ci 4烷基）、4伸烷基）NH2、 c( OXC,·4伸烧基）NH(院基）、及/或4伸烷 基）N(C〗.4烧基）2。 術語「雜環基」4「雜環」係指具有m個雜原子之 取代及未經取代之非芳族（可為部分或完全飽和）3至15 環。該等環可為3至7員單環基、員雙環基及1〇至 員二壤基。含雜原子之各雜環基環可含有_個氧原子 硫原子及/或！至4個氮原子’其限制條件為各環中雜原 之總數為4個或4個以下，且進—步限制條件為各環含有 少一個碳原子。完成雙環基及三環基之稠合環可僅含有$ 原子且可為飽和、部分飽和或不飽和的。氮原子及硫原： 可視情況經氧化且氮原子可視情況經四級錄化。雜環基； 在任何可用氮原子或碳原子處連接。雜環基環可含有〇’ 卜2或3個選自以下之取代基：（Ci_4说基、％•⑽基 150926.doc -46- 201120042 素、羥基、氰基、硝基、cf3、〇(CK4烷基）、0CF3、 C(=0)H、ChOXCM 烷基）、co2H、co2(c】.4 烷基）、 nhco2(c丨·4院基）、s(cN4烧基）、丽2、NH(Cl_4院基）、 Ν(<^.4烷基）2、n(c〗-4烷基）3+、sojCw烷基）、c(=o)(cN4 伸院基）NH2、（:(=0)((^-4伸烷基）NH(烷基）、及/或 ¢:(=0)((^-4伸烷基）n(C〗_4烷基h。例示性雜環基包括氮雜 % 丁烧基、。比洛烧基、氧雜環丁烧基、D米唾琳基、鳴。坐n定 基、異噁唑啉基、噻唑啶基、異噻唑啶基、四氫呋喃基、 哌啶基、哌畊基、2_氧代哌畊基、2_氧代哌啶基、2_氧代 吡咯烷基、2-氧代氮呼基、氮呼基、4_哌啶酮基、四氫哌 喃基、嗎啉基、噻嗎啉基、噻嗎啉基亞碾、噻嗎啉基砜、 二氧雜環戊&、嗝啶基、四氫q小二氧代噻吩基及其 類似基團。 術語「雜芳基」係指在至少一個環中具有…個選自 〇、之雜原子之經取代及未經取代之芳族3至14員 環。該等環可為5或6員單環基、員雙環基及Μ" 貝三環基。含雜原子之各雜芳基環可含有⑷個氧原 硫原子及7或1至4個氮原子，其限制條件為各環中雜原子 之總數為4個或4個以下且各環具有至少—個碳原子。 雙:基或三環基之稠合環可僅含有碳原子且可為飽 ^和或不飽和的。氮原子及硫原子氛 原子可視情況經四級録化。雙環或三環雜芳基須=: -個完全芳族環’但其他稠合 " 基可在任何環之任何可用氮片… 戈非方知。雜芳 订了用氮原子或石炭原子處連接 I50926.doc -47· 201120042 環系統可含有〇、1、2或3個選自以下之取代基：（Cl·4)烷 基、（C2-4)烯基、鹵素、羥基、氰基、硝基、CF3、CHCm 烷基）、OCF3、C(=0)H、C(=0)(C卜4 烷基）、C02H、 C02(C,.4^ ^ ) ' NHC02(C,.4^ ^ ) ' S(C,-4^ 1- ) ' NH2 ' NHCCm 烷基）、Νβυ 烷基）2、NCCu 烷基）3+、SCMCm 烷 基）、CPOXCu伸烷基）NH2、0(=0)((:,.4伸烷基）NH(烷 基）、及/或C(=0)(CN4伸烷基烷基）2。 例示性雜芳基包括η比洛基、〇比嗤基、α比唾琳基、β米坐 基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、噻二唑基、異噻唑基、 呋喃基、噻吩基、噁二唑基、吡啶基、吡畊基、嘧啶基、 嚷呼基、三畊基、吲哚基、苯并噻唑基、苯并間二氧雜環 戊烯基、苯并噁唑基、苯并噻吩基、喹啉基、四氫異喹啉 基、異喹啉基、苯并咪唑基、苯并哌喃基、吲哚畊基、苯 并呋喃基、色酮基、香豆素基、苯并哌喃基、啐啉基、喹 喏啉基、吲唑基、吡咯幷吡啶基、呋喃幷吡啶基'二氫異 吲哚基、四氫喹啉基及其類似基團。特定雜芳基包括例如 6位經取代之喹唑啉_4_基及6_三氟甲基_喹唑啉_4_基。 田-基團視情況Μ取代時，其應包括經取代及未經取代 之基團。 本文所述之化合物可具有不對稱中心、H經不對; 代之原子之本發明化合物可以光學活性或外消旋形 離。此項技術中熟知如何製備光學活性形式，諸如藉， 析外消旋形式或藉由以光學活性起始物f合成。本^, 述之化合物中亦可存在烯烴、C=N雙鍵及其類似物之, 150926.doc •48- 201120042 幾何異構體，且所有該等 描述本發明化合物之順式及^構體均涵盖於本發明中。 體之混合物或個別異構形式其η 化學或異構體形式，否則預”槿除非㈣不特定立體 異構體、外消旋形式及所有幾何異性、非對映 :文令所揭示化合物之一種對映異構 r體Γ顯示優越活性。因此，所有立體化學均視為本發 明之一部分。當需I Η4 -r -v* 要夺，可糟由使用對掌性管柱進行之 HPLC或如Young，s D等人，細奶㈣w々咖⑻ cw—，⑽咖5 (1995)中所述藉由使用諸如掉腦 酸氣化物之解㈣進行解析來達成外毅物質之分離。 ^吾I藥學上可接受」在本文中用於指在可靠醫學判 斷祀#内、適合與人類及動物之組織接觸而無過多毒性、 ㈣ '過敏反應或其他問題或併發症’與合理益處/風險 比相稱的彼等化合物、物質、组合物及/或劑型。 如本文所用之「醫藥學上可接受之鹽」係指所揭示化合 行生物其中母體化合物藉由製備其酸鹽或鹼鹽而被 改質。醫藥學上可接受之鹽之實例包括（但T限於）鹼性殘 基（諸如胺）之無機酸鹽或有機酸鹽；酸性殘基（諸如羧酸） 之鹼金屬鹽或有機鹽，·及其類似物。醫藥學上可接受之鹽 包括例如由無毒性無機或有機酸形成的母體化合物之習知 無毒鹽或四級銨鹽。舉例而言，該等習知無毒鹽包括自諸 如鹽酸、苯磺酸、氫溴酸、硫酸、胺磺酸、磷酸、硝醆及 其類似物之無機酸獲得之鹽；及由以下製備之鹽：有機 150926.doc • 49- 201120042 酸’諸如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、 蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、雙羥萘酸、順丁烯 二酸、羥基順丁烯二酸、苯乙酸、麩胺酸、苯甲酸、水揚 酸、對胺基苯磺酸、2_乙醯氧基苯曱酸、反丁烯二酸、曱 苯磺酸、曱烷磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羥乙基磺酸及其 類似物。 本發明之醫藥學上可接受之鹽可藉由習知化學方法由4 有鹼性或酸性部分之母體化合物合成。一般而言’該等男 可藉由使此等化合物之游離酸或游離鹼形式與化學計量$ 量的適當鹼或酸於水或有機溶劑中或於兩者之混合物中万 應來製備；一般而言，如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙痒 或乙腈之非水性介質較佳。適合鹽之清單見於心阳叹丨⑽, 户W崎_，第17版，Μ·叫 C〇mPany’ East〇n，pA，第1418頁〇985)中其揭示内容以 引用的方式併入本文中。 因為已知前藥增強藥物之許多合意品質(例如溶解性、 生物可用性、製造等）’所以本發明化合物可以前藥形式 傳遞。因此，本發明意欲涵蓋本發明所主張之化合物之前 u傳遞方法及含有其之組合物。「前藥」意欲包括當 將“樂投與哺乳動物個料活體㈣放本發明之活性母 體藥物的任何共價鍵結之載體。藉由改質化合物中所存在 :官能基使得該等改質在常規操作中或在活體内裂解成母 ==製備本發明!藥。前藥包括絲、胺基或錢 " i Y7基團’使得當將本發明前藥投與哺乳動物個 150926.doc •50· 201120042 體時其裂解從而分別形成游離羥基、游離胺基或游離硫氫 基之本發明化合物。前藥之實例包括（但不限於）本發明化 。物中之醇及胺官能基的乙酸酯、甲酸酯及苯曱酸酯衍生 物0 ，氡疋化S物」及「穩定結構」意欲指足夠穩固從而可 又自反應③合物分離至適用純度及調配成有效治療劑之 化合物。本發明意欲包含穩定化合物。 m療有效量」意欲包括有效抑制CCR_2及或有 效治療或預防本文中所认 旦 所哪述之病症之單獨本發明化合物之 量’或所主張化合物之細人—旦 物之，，且0之量，或本發明化合物與其他 活性成分之組合之量。 如本文中所使用，「治療」涵蓋治療哺乳動物、尤立人 類之疾病病況’且包括：⑷預防疾病病況在哺乳動物中發 生，尤其當該哺乳動物易患該疾病病況但尚未診斷出q 該疾病病況時；（b)抑制 呵出心上 疾病病况，亦即遏止其發展；及/ 或⑷緩解疾病病況，亦即使該疾病病況消退。 本文中用以命名特定晶形之名稱，例如，
不應視為關於任何1他呈古 J 物質且有… 或相同物理及化學特徵之 文甲提供之表微資訊解釋的識別^名僅為應根據亦於本 开^發Γ提供作為新賴物質，特定言之呈醫藥學上可接, 二之（〇R，2S，5R)-5-(第三·丁基胺基)-2-((S)-3-(7 第一又 丁基吡⑦并 n，5_a]n，3—第二· 其暴胺基）-2-氧代。比嗜掠ί 基)¼己基)乙醯胺之游 各烷-1- 日日形。在某些較佳實施例 150926.doc .51 - 201120042 中，游離鹼之晶形呈實質上純之形式。游離鹼之較佳實施 例在貫例中揭不為Μ-1晶形。此外，咸信游離鹼可以p_i晶 形及/或N- 1與P-1晶形之組合形式存在。 如本文所用之「多晶形物」係指具有相同化學組成但形 成曰曰體之分子、原子及/或離子之空間排列不同之晶形。 如本文所用之「溶劑合物」係指另外含有一或多種溶劑 之分子併入結晶結構中之分子、原子及/或離子之晶形。 溶劑合物中之溶劑分子可以規則排列及/或無序排列形式 存在。溶劑合物可包含化學計量或非化學計量之量的溶劑 刀子舉例而5，具有非化學計量之量之溶劑分子的溶劑 合物可因溶劑合物之溶劑部分損失而產生。 本發明意欲包括本發明化合物中出現之原子的所有同位 素。同位素包括原子數相同、但質量數不同之彼等原子。 作為一般實例而並非限制’氫同位素包括沉及氣。碳同位 素包括〗3C及】4C。麵/g]私主^ 、，二同位素標記之本發明化合物一般可 由熟習此項技術者已知習 曰 、 之S知技術或錯由與本文所述類似
之方法使用適當經同位音^S 田乂丨J位素私5己之试劑替代否則使用之 標記之試劑來製備。 如本文所用之「非日拟 x ^ 非日日形」係指分子、原子及/或離子之 非釔晶固體形式❶非晶 Μ小，肩不確疋的χ射線 圖0 如本文所用之「實質上純」在關於晶形使用時 合物之重量計，該化合物純度大於90 wt%，包括 wt% ' 91 wt% . 92 wt°/ 超過 90 2 Wt/〇、93 Wt%、94 wt%、95 wt%、％ 150926.doc -52- 201120042 以及包括等於約1〇〇 之其他形式及/或其 雜質。舉例而言， wt0/〇、97 wt%、98 wt0/〇及 99 wt0/〇， wt°/〇化合物I。其餘物質包含該化合物 製備中所產生的反應雜質及/或處理 N-((lR，2S，5R)-5-(第三-丁基胺基）-2-((S)_3_(7_ 第三丁美〇比 0坐并[l，5-a][l，3,5]二p井-4-基胺基）-2 -氧代„比。各烧_1_基）環己 基）乙醯胺游離鹼或鹽之晶形可視為實質上純，因此如藉 由此時已知及此項技術中一般接受之方式所量測，其純度 大於90 wt%，其中剩餘少於10 wt%之物質包含其他升^之 N-((lR，2S，5R)-5-(第三-丁基胺基）-2-((S)-3-(7-第三-丁基吡 。坐并[1，5-&][1，3,5]二°井-4 -基胺基）-2 -氧代η比略烧_ι_基）環己 基）乙醯胺游離驗或鹽，及/或反應雜質及/或處理雜質。 可提供具有實質上純相均質性之晶形樣品，表示存在伯 優勢量之單一晶形及視情況存在之少量一或多種其他晶 形。可藉由諸如粉末X射線繞射（PXRD)或固態核磁共振光 谱（SSNMR)之技術來確定樣品中是否存在多於一種晶形。 舉例而言，將實驗測得之PXRD圖與模擬PXRD圖進行比 較’所出現之額外峰即指示樣品中存在多於一種.晶形。模 擬PXRD可由單晶X射線資料計算得到。參看smith，D. Κ.， 「A FORTRAN Program for Calculating X-Ray P〇W(jer
Diffraction Patterns,」Lawrence Radiation Laboratory Livermore，California，UCRL-7196 (1963 年 4 月）。 較佳地，若實驗測得PXRD圖中出現模擬PXRD圖中原本 不存在之額外峰所產生之面積佔總峰面積小於1〇%，較佳 小於5% ’且更佳小於2%時，則表示該晶形具有實質上純 150926.doc -53- 201120042 相^質性。具有以下實質上純相均質性之晶形最佳，其中 在實驗測得PXRD圖中出現模擬PXRD圖中原本不存在之額 外峰所產生之面積佔總峰面積小於1 〇 %。 製備晶形之程序在此項技術中已知。晶形可由多種方法 製備，包括例如由適合溶劑結晶或再結晶、昇華、自溶體 生長、自另一相固態轉換、自超臨界流體結晶及射流噴 霧:自溶劑混合物進行晶形之結晶或再結晶之技術包括例 如蒸發溶劑、降低溶劑混合物溫度、對分子及/或鹽之過 飽和溶劑混合物進行晶體接種、冷康乾燥溶劑混合物、及 添加反溶劑（反萃溶劑）至溶劑混合物中。 可使用單晶X射線繞射來表徵及辨別晶形，該單晶X射線 繞射基於在固定分析溫度下對一種晶形之 位晶胞量測。在S咖等人，第3章，
Determination: A Practical Guide, Macmillan Co.s New
York (1968)中提供單位晶胞之詳細描述。或者，可根據所 觀測到之原子分數座標來表徵晶格内原子空間關係之獨特 排列。表徵結晶結構之另一方式為粉末乂射線繞射分析， 其中將實驗性或所觀測到之繞射曲線與代表純粉末材料之 模擬曲線進行比較，兩者均在相同分析溫度下進行，且以 一系列2Θ值來表徵標的晶形之量測值。 可使用其他方式來表徵該晶形，諸如固態核磁共振 (SSNMR)、差示掃描熱量測定及熱解重量分析。亦可組合 使用此等參數來表徵標的晶形。 如本文所用藉由TGA表徵之術語「可忽略之重量損失 150926.doc •54· 201120042 表明存在純（非溶劑化）之晶體形式。 在本發明之-實施例中’提供呈實質上純形式之 N-((lR，2S，5R)-5-(第三-丁基胺基）_2•(⑻_3(7第三-丁義比 嗤并U，5-a]n，3,5]三14-基胺基）_2_氧代料统小基 基)乙醯胺游離鹼或鹽之晶形。在匕晶形可用於醫藥組合物 中’該等醫藥組合物視情況可包括_或多種選自例如由以 下組成之群的其他組分：賦形劑、載劑，及一種具有不同 刀子結構之其他醫藥活性成分或活性化學實體。 較佳地，晶形具有實質上純相均質性，如在實驗測得之 PXRD圖中模擬PXRD圖中所不存在之額外峰所產生之面積 佔總岭面積小於10%，較佳小於5%，且更佳小於2%所指 示。最佳為具有以下實質上純相均質性之晶形，其中在實 驗測得之PXRD圖中模擬PXRD圖令所不存在之額外峰所產 生之面積佔總峰面積小於1 %。 在另一貫施例中，提供基本上由N-((lR，2S,5R)-5-(第三-丁基胺基）-2-((S)-3-(7-第三-丁基吡唑并[1，5_a][1，3,5]三 畊-4-基胺基）-2-氧代吡咯烷_丨_基）環己基）乙醯胺游離鹼或 鹽之晶形組成之組合物。此實施例之組合物可以該晶形在 組合物中之重量計包含至少9〇 wt%之該晶形。 可藉由此項技術中已知之分析技術（諸如層析法、核磁 共振光譜法、質譜法或紅外光譜法）確定是否存在反應雜 質及/或處理雜質。 B曰形可由夕種方法製備，包括例如自適合溶劑結晶或再 結晶、昇華、自熔體生長、由另一相固態轉換、自超臨界 150926.doc -55- 201120042 流體結晶及射流喷霧。自溶劑混合物進行晶形之結晶哎再 結晶之技術包括例如蒸發溶劑、降低溶劑混合物溫度、對 分子及/或鹽之過飽和溶劑混合物進行晶體接種、冷凍乾 燥溶劑混合物及添加反溶劑（反萃溶劑）至溶劑混合物中。 可使用高產量結晶技術製備晶形，包括多晶形物。 藥物晶體（包括多晶形物）、其製備方法及藥物晶體之表 敬於 B巧 n，S.KH Solid-State Chemistry Drugs , 版，SSCI，West Lafayette，Indiana. (1999)中論述。 就使用溶劑之結晶技術而言，溶劑之選擇通常視一或多 種因素而定’諸如化合物之溶解度、結晶技術及溶劑之蒸 虱壓。可使用溶劑之組合；例如可使該化合物溶解於第一 溶劑中得到溶液，隨後添加反溶劑以降低該化合物於該溶 液中之溶解度並提供晶體形《。「反溶劑」為化合物於其 中具有低溶解度之溶劑。用於製借晶體之適合溶劑包括極 性及非極性溶劑。 在-種製備晶體之方法中，將N_((1R，2S，5R)_5_(第三-丁 基胺基）_2·叫3_(7m。㈣并 基胺基）-2-氧代D比嘻院小基）環己基）乙酿胺游離驗或鹽於 適：溶劑中懸浮及’或攪拌以提供漿料，可加熱漿料以促 進’合解。如本文所用之術語「毁料」意謂亦可含有額外量 之固體從而在指定溫度下提供異質混合物之飽和溶液。適 合於此方面之溶劑包括例如極 性溶劑以及其兩種或兩種以上之混合物，如本文中= 示0 150926.doc • 56 - 201120042 可將晶種添加至任何結晶混合物中以促進結晶。如熟習 此項技術者所明瞭，可使用接種作為控制特定晶形生長之 方式或控制結晶產物粒度分佈之方式。因&，所需晶種量 之計算視可用晶種之尺寸及平均產物粒子之所要尺寸而 定’如例如MUllin，j.W.等人，rPr〇grammed c〇〇iing 〇f batch cryStallizers，」c/2酬^㈣， 26:369-377(1971)中所述。—般而·r，需要小尺寸之晶種 以有效控制批料中晶體之生長。小尺寸晶種可藉由筛分、 研磨大晶體或使大晶體微米尺寸化’或使溶液微結晶而產 生。應庄思研磨晶體或使其微米尺寸化不會導致所要晶體 形式在結晶度方面產生任何變化（亦即，變為非晶形或另 一多晶形物）。 冷卻之混合物可在真空下過濾，且可用適合溶劑（諸如 冷再結晶溶劑）洗滌經分離之固體，且在氮淨化下乾燥得 到所要晶形。可藉由適合光譜技術或分析技術，諸如 SSNMR、DSC、PXRD或其類似技術分析該等經分離之固 體以確保形成產物之較佳晶形。通常所產生所得晶形之量 以在結晶程序中最初使用之>^-((1尺，25,511)-5-(第三_丁基胺 基）-2-((S)-3-(7-第三-丁基他唑并三畊_4•基胺 基）-2-氧代吡咯烷_丨_基）環己基）乙醯胺游離鹼或鹽的重量 計大於約70 wt%分離產率，但較佳大於9〇 wt%。必要時， 可將產物共研磨或使其穿過篩網以使產物去塊。 可自製備 >^-((111，23,511)-5-(第三_丁基胺基）_2_((8)_3_(7_ 第三-丁基吡唑并[l，5-a][l，3,5]三畊_4_基胺基）_2_氧代吡咯 150926.doc -57- 201120042 垸]-基）環己基）乙醯胺游離驗或鹽之最終方法步驟之反應 介質直接製備晶形。其可例如藉由在最終方法步驟中使用 化合物可自其中結晶之溶劑或溶劑混合物而達成。或者， 可藉由蒸顧或溶劑添加技術獲得㈣。用⑥此目的之適合 溶劑包括任何本文所述之彼等溶劑，包括f子性極性溶劑 (諸如醇）及非質子性極性溶劑（諸如酮）。 作為一般指導原則，可將反應混合物過濾以移除任何不 需要之雜質、無機鹽及其類似物’隨後用反應或結晶溶劑 進行洗滌。可將所得溶液.漢縮以移除過量溶劑或氣態組 分。若使用蒸餾，則所收集餾出物之最終量會視方法因 素，包括例如容器尺寸、攪拌能力及其類似因素而變化。 作為一般指導原則，可將反應溶液蒸餾至最初體積之約 1/10，隨後進行溶劑置換。可根據標準處理技術對該反應 進行取樣及檢測以測定反應程度及產物之wt%。必要時， 可添加或移除其他反應溶劑以使反應濃度最佳化。較佳將 最終濃度調整為約50 wt%，在此濃度下通常產生漿液。 較佳將溶劑直接添加至反應容器中而不蒸镏反應混合 物。用於此目的之較佳溶劑為如上所述與溶劑交換相關， 可能最終參與晶格中之溶劑。儘管最終濃度可視所要純 度、回收率及其類似因素而變化，但溶液中游離鹼之最終 濃度較佳為約4%至約7%。在添加溶劑後，可授拌該反應 混合物且同時升溫。舉例說明，可攪拌反應混合物約1小 時同時升溫至約70°C。較佳將反應物趁熱過濾並用反應溶 劑、所添加溶劑或其組合洗滌。可將晶種添加至任何結晶 150926.doc •58- 201120042 溶液中以起始結晶。 可經由使用一般技術者已知之各種分析技術將本文中所 述之各種晶形彼此區分。該等技術包括（但不限於）粉末X射 線繞射（PXRD)、差示掃描熱量測定（DSC)及/或熱解重量分 析（TGA)。或者，可使用單晶x射線繞射來表徵及辨別晶 形，該單晶X射線繞射基於在固定分析溫度下對指定晶形 之單一晶體進行單位晶胞量測。在Stout等人，第3章， X~Ray Structure Determination: A Practical Guide Macmillan Co.，New York (1968)中提供單位晶胞之詳細描 述。特定言之，可根據所觀測到之原子分數座標表徵晶格 内原子空間關係之獨特排列。表徵結晶結構之另一方式為 粉末X射線繞射分析’其中將所觀測到之繞射曲線與由單
晶結構資料產生之模擬曲線進行比較。標的晶形之粉末X 射線繞射量測值表徵為一系列20值（通常為四個或四個以 上）。 可使用其他方式來表徵晶开》，諸如固態核磁共振 (SSNMR)光譜法、差示掃描熱量測定（DSC)、測溫法及對 結晶或非晶形形態學之大體檢查。亦可組合使用此等參數 來表徵標的晶形。 一般技術者應瞭解，視所使用量測條件而定，可能獲得 具有量測誤差之X射線繞射圖。詳言之，通常已知χ射線繞 射圖之強度可視所使用量測條件及晶體之形狀或形態而波 動。應進一步理解，相對強度亦可視實驗條件而變化，且 因此不應考慮強度之確切等級。此外，習知χ射線繞射圖 150926.doc -59· 201120042 繞射角之量測誤差通常為約〇 勹Π U.2 2Θ值或更低，較佳為約 0· 1 ° 2Θ值（如下文中所論述）， J五應關於上述繞射角來考慮 該量測誤差度。因此，應睁艇太路aH +曰_ 〜喈解本發明之晶體形式不限於提 供X射線繞射圖與本文所揭示隨附圖式中所描述之χ射線繞 射圖完全相同之晶體形式。提供與隨附圖式中所揭示者實 質上相同之X射線繞射圖之晶體形式屬於本發明之範嘴 内。確定X射線繞射圖實質相問夕士 口貝Μ相问之月匕力在—般技術者之能 力範圍内。 合成 流程1 :製備腙I-dd Ο R3 Nee H2N ^22 一^23 l-dd H2N r2 l-ff 鹼 使式I-ff之卡畊（諸如半卡哜鹽酸鹽）與式丨_“之化合物（諸 如特戊醯基乙腈）在溶劑（例如乙醇、2_丙醇、i-丙醇及甲 醇，較佳為乙醇）中在鹼（例如乙酸鈉、乙酸鉀 '三乙胺及 二異丙基-JV-乙基胺，較佳為乙酸鈉）存在下在2〇_6〇t 範圍内，較佳在25-55¾範圍内之溫度下縮合以提供式1-(1(1 之月示化合物，其中r2丨為=〇 ; r22為_NH-NH2 ;且R23為氰基 烧基；或R22與R23可一起形成5至8員環，其中該環可視情 況經一或多個選自胺基、烷基、芳基或雜芳基之取代基取 代且可視情況含有i、2、3或4個獨立地選自由n、8或〇組 成之群之雜原子。 流程2 :製備式i_cc之腙 150926.doc •60- 201120042
R21 卜dd l-cc
使’式I-dd之腙化合物，諸如 與原甲酸酯（例如原甲酸三曱酯、原甲酸三乙酯及原甲酸 二丙酯，車父佳為原甲酸三曱酯、原曱酸酯），在酸（例如乙 酸、三氟乙酸、鹽酸及甲烷磺酸，較佳為乙酸）存在下， 在高溫（諸如40-90。(：，較佳為40_75。〇下反應以產生式^“ 之腙化合物，其中R21=〇aR22及R23如上文所述。
流程3 :化合物l-cc之轉化 使式I-cc之腙化合物轉化為式之化合物其中 為-OR〗6 ’其中烷基、苯基、具有一或多個選自 N、S或Ο之原子之5至7員雜芳基、或3至7員環烷基，其全 部視情況經1至3個選自鹵素、eh或c]_6烷基之基團取代， 其中該轉化係藉由使式〗_cc之腙化合物（例如7_第三-丁 土 3H比坐并[1，5-3][1，3,5]二〇井-4-酉同）與醯化劑、親核試劑 (諸如二甲基4-胺基吡啶（DMAP))及/或三級胺鹼在溶劑（例 如乙腈、二氯甲烷及純氧氯化磷）中反應，隨後⑴在第二 種二級胺鹼存在下使用醇或（ii)使用醇鹽來攔截以形成式 I-bb化合物。可使用之醯化劑之實例為氧氣化磷（p〇cij、 乙二醯氯、亞硫醯氯及光氣。較佳醯化劑為ρ〇α广三 150926.doc •61 201120042 胺、二異丙基-iv-乙基胺（DIEA)、三正丙基胺、N_曱 基嗎琳及丨，4-二氮雙環[2.2.2]辛烷（DABCO)為可用於轉化 之二級胺驗之實例。較佳三級胺鹼為DIEA。一般而言， 反應中所使用之親核試劑之量為2·〇至4 〇當量，較佳為3 〇 當量。轉化中可使用之醇或醇鹽之實例為苯酚、五氟苯 紛、甲醇、乙醇、曱醇鈉及苯酚鈉，其中苯酚為較佳醇。 一般而言’在環境溫度至70°c範圍内之溫度下進行反應及 攔截。 流程4 :製備式I化合物或其鹽
使式I-bb之化合物（例如^ )與以如WO 2008/014381 A1中所述類似之方式製備之式^⑽化合物偶 合，其中：心獨立地為氫或選自苄氧羰基（Cbz)、第三-丁 氧基碳基（BOC)、葬基曱氡羰基（fm〇C)、苄基（Bn)、及對 曱氧基苄基（PMB)之胺保護基，較佳為氫；以及心獨立地 為氫或C〗·6烷基；尺^為=0 ; HET為視情況經取代之具有至 150926.doc •62· 201120042 少-個氮雜原子、較佳總共兩個至四個雜原子、尤其四個 氮原子之3至14員雜環基雙環或雜芳基雙環；且[ο 為-〇Rl6’其中Rl6為Cm烷基、苯基、具有一或多個選自 N、S或Ο之原子之5至7員雜芳基、或3至7員環烷基，其全 部視情況經1至3個選自鹵素、（：1?3或(：：1_6烷基之基團取代； 以獲得相應式I化合物，例如N_((1R，2S，5R)_5_(第三-丁基 胺基）-2-((S)-3-(7-第三-丁基。比唑并[15_a][1,3,5]三畊·心基 胺基）-2-氧代°比洛燒_1_基）環己基）乙酿胺，或其鹽。偶合 可藉由此項技術中通常已知之偶合方法；或者經由酸性處 理並隨後添加鹼來進行。酸性處理中可使用之酸之實例為 檸檬酸、酒石酸、乙醇酸及鹽酸。可添加之鹼之實例為 K2HP04、Na2HP04、NaHC〇3及 KHC03。 特定言之 ’ N-((lR，2S，5R)-5-(第三-丁 基胺基）_2_((s)_3-(7-第三-丁基吡唑并三畊_4_基胺基>2_氧代吡 σ各烧-1 -基）環己基）乙醯胺可根據以下流程製備：
對於本發明之方法，起始物質可購得或可由一般技術者 150926.doc -63 - 201120042 容易地製備。一般技術者可容易地選擇適當的溶劑、.w 度、、愿力、具有所要基團之起始物質及其他反應條件 方法可擴大規模以製備較大量之式〗化合物 業製造設施製備。 ”如使用商 實例 以下實例說明本發明化合物及起始物質之實施例，且不 欲限制申請專利範圍之範嘴。 適當時，反應在無水氮（或氩）氛圍下進行。對於無水反 應，使用來自EM之DRISOLV®溶劑。對於其他反應:利用 試劑級或HPLC級溶劑。除非另有說明，否則所有可購得 之試劑以接收時原樣使用。 使用Shimadzu HPLC/Waters ZQ單四極質譜儀混合系統 獲得LC/MS量測值。由正性模式電喷霧電離報導相關峰之 資料。通常在指定溶劑中，利用Bruker或JE〇L 4〇〇 “沿及 600 MHz儀器獲得NMR(核磁共振）譜。使用溶劑共振作為 内標，以ppm為單位報導自四曱基矽燒之所有化學位移。 4 NMR頻譜資料通常如下報導：化學位移、多重性（s =單 峰、br s=寬單峰，d=雙重峰，dd=兩個雙重峰、t=三重 峰、q=四重峰、sep=七重峰、m=多重性、app=明顯）、偶 合常數（Hz)、及整合。 熟習此項技術者應可辨識本文中所利用之標準縮寫。為 便於參考’縮寫包括（但不一定限於）：Hg=采；_.=飽 和；HPLC=高效液相層析；Ap=面積百分比；KF=卡爾_費 雪（Karl-Fischer); RT=室溫（除非另有說明，否則室溫為約 150926.doc -64- 201120042 22C之溫度）；mmol =毫莫耳；HRMS=高解析度質譜；t = 攝氏度；kg-公斤；g=公克；mg=毫克；卜公升；虹（或 ml)=毫升；h或hr=小時；M=莫耳濃度；N=當量濃度； min=分鐘；MHz=百萬赫；v/v=體積/體積比；％w/w；=重量/ 重量百分比；wt%=重量百分比；nm=奈米；L〇D=乾燥失 重。 「a」、「P」、「R」及「S」為熟習此項技術者熟悉之立體 化學命名。 實例1 N-((lR，2S，5R)-5-(第三-丁基胺基）_2_((3)·3_(7_第三 _ 丁基 〇比 唑并[l，5-a][l，3,5]三畊-4-基胺基）-2-氧代吡咯烷_丨·基）環己 基）乙醯胺
實例1，步驟1 :在22-25t下，向3 L圓底燒瓶中添加半 卡畊鹽酸鹽（100.0 g，0.89莫耳）、特戊醯基乙腈（112 2 g， 〇.89莫耳）及乙醇（1 L)。添加完成後，使反應混合物冷卻 至12-15°C且添加無水乙酸鈉（73.5 g，0.89莫耳）。添加無 150926.doc -65- 201120042 水乙酸鈉會吸熱’ #而使溫度升至22奶。將反應混合 物維持在22.25。(：且_6()_9()分鐘4時之後，藉由HpLc 分析反應混合物，指示完成腙中間物之形成。 實例1，步驟2 :隨後將反應混合物加熱至“至”艺，且 在5-10分鐘時間内添加原甲酸三甲酯（475 7 g，4 48莫 耳）。使反應混合物冷卻至40_45t：，且隨後在152〇分鐘時 間内添加乙酸（53,8 g，〇·89莫耳）。添加完成後，在2〇_25 分鐘時間内使溫度升高至70士；rc。達到指定溫度後，攪拌 反應混合物18-20 hr。在此時段結束時，藉由HpLC分析反 應混合物，指示完成吡唑并三畊之形成。 貫例1，步驟3 ·在50-55°C下，在減壓（約5-1〇 mm Hg)下 濃縮來自實例1步驟2之吡唑并[1，5_&][1，3,5]三畊產生殘餘 物。向殘餘物中添加四氫呋喃（THF，2 L)及丙酮（2 L)，且 在5 0 - 5 5 C下稅拌所得混合物9 0分鐘。此時之後，經由布 氏漏斗（Buckner funnel)過渡反應混合物以移除所產生之氣 化鈉（NaCl)及乙酸鈉（NaOAc)沈澱《在50-55°C下在減壓（約 400-450 mm Hg)下濃縮所得濾液至乾燥產生殘餘物。將殘 餘物溶解於原曱酸2-曱酯（2-曱基THF，450 mL)中，且在 22-25°C下攪拌所得混合物2個小時。在此時段結束時，過 濾反應混合物且隨後依次使用2-甲基THF(100 mL)、第三-丁基甲基醚（MTBE，200 mL)噴霧洗滌。在45-5(TC下在減 壓下（約400-450 mm Hg)乾燥所得產物得到7-第三-丁基吡 唑并[l,5-a][l，3,5]三畊-4(3H)-酮（107.0 g，62.1% w/w， HPLC純度：在220 nm下為99.2 AP)。以較大規模重複步驟 150926.doc -66- 201120042 1至3產生以公斤計之量之7-第三-丁基吡唑并[l，5-a][l，3,5] 三畊-4(3H)-酮。 貫例1 ’步驟4 :向玻璃内襯反應器中添加7-第三-丁基 吡唑并[l，5-ani，3,5]三畊-4(3H)-酮（1_〇 kg，5.2莫耳）、二 曱基4-胺基吼啶（L27 kg，1〇 4莫耳）、乙腈（1〇 L)及二異丙 基乙基胺（0.672 kg，5.2莫耳）。在環境溫度下在氮氛圍下 搜摔所得聚料不少於1 5分鐘之時間直至形成澄清溶液。將 澄清溶液緩慢添加至含有乙腈（6 〇 L)及氧氣化磷（p〇cl3， 0·822 kg，5.3莫耳）之第二玻璃内襯反應器中。添加完成 後’在低於3 5。(：下授拌所得混合物2小時。此時段結束 時’藉由HPLC分析反應物，指示反應完成。添加苯盼 (0.64 kg ’ 0.8莫耳）及二異丙基乙基胺（〇 87 kg)且在環境溫 度下搜拌所付反應混合物不少於1 hr。此時之後，藉由 HPLC分析反應混合物，指示完成反應。向反應混合物中 依次添加2-甲基-THF(20 L)及水（10 L)。分離有機相與水 相，且丟棄水相。用檸檬酸-鹽水溶液（5 wt% , i 〇 L)洗滌 有機相，且再次分離所得有機相與水相，並丟棄水相。再 重複以上擰檬酸-鹽水溶液洗滌兩次。檸檬酸_鹽水溶液洗 務完成後’添加磷酸氫二鉀溶液（P0taSsium ph〇Sph()ric base s〇luti〇n，k2HP〇4 ’ 7 5 wt%，1〇 。分離有機相與 水相，且丟棄水相。再重複以上液洗滌一次直 至pH值為約8。 實例1，步驟5 :將N-[2-(3-胺基-2-氧代-吡咯烷_丨_基）_5_ 第二丁基胺基_環己基]-乙醯胺（以如美國公開案第 150926.doc -67- 201120042 2008/0027083 A1號中所述之類似方式匍供 n 、製備’ 1.05 kg)添加 至實例1步驟4之鹼性有機相中。添加完点 又便’在環境溫度 下攪拌反應混合物16小時。此時段結戾眭 _ , 果時’精由HPLC分
析反應混合物’指示反應完成。依次向及A J久應混合物中添加 水（20 L)及乙酸（H〇Ac’ 0_406 kg)，且分離所得有機層及 水層。以2-甲細F(10 L)萃取水層。合併有機層且添加 HOAc(0.406 kg)。用水（1〇 L)洗滌所得混合物且分離所得 有機層與水層。再次以2-曱基THF(l〇 L)萃取此水層。再 次合併水層且添加二氣曱烧（DCM，15 L)。添加氫氧化鈉 (NaOH，10 N ’ 1.04 L)以調整pH值至約13 〇。添加完成 後，再次分離有機層與水層並搁置富含產物之〇(：1^層。再 使用二氣曱烧（10 L)萃取水層。合併DCM富集有機層並用 水（10 L)洗滌。在真空中濃縮所得富含產物之dCM溶液至 最小體積。添加乙酸乙酯（EtOAc)且連續蒸餾出殘餘DcM 及水’產生漿料（最終體積為約5 L)。添加MTBE(15 L)且 攪拌所得漿料不少於1 hr。此時之後，過濾漿料且再用 MTBE(5 L)洗滌濕濾餅。在55^下在真空中乾燥濕濾餅直 至LODSO.5 wt°/〇 ’得到實例1之非晶形游離鹼（〇 9 kg，55 M0/。產率，HPLC純度：99.5 AP)。4 NMR (600.13 MHz, DMSO-d6) δ 1.04 (s, 9H), 1.34 (s, 9H), 1.58 (m, 3H), 1.64 (m, 2H), 1.81 (s, 3H), 2.05 (m, 1H), 2.12 (m5 1H), 2.36 (m, 1H)，2.93 (br s，1H)，3.48 (m, 2H)，3.84 (m，1H)，4.26 (br s， 1H)，4_86 (t，J=8_9 Hz，1H)，6.39 (s，1H)，8.07 (s，1H)，8.94 (br s，1H); 13C NMR (125.8 MHz, DMSO-d6) δ 21.3, 23.3, 150926.doc -68· 201120042 25.9，29.3，30.0, 32.2，32.6，35.5，43.1，46.5，47.7, 50.7, 51.7, 52.5, 92.3, 148.7, 148.8, 152.9, 167.3, 168.5, 171.2 ; C25H4QN802 之 HRMS 計算值：（M+l) 485.3274,實驗值 485.3343 ° 實例2 經氚標記之1^-((111，23,511)-5-(第三-丁基胺基）-2-((8)-3-(7-第二-丁基。比0坐并[l，5-a][l,3,5]二p井-4-基胺基）-2 -氧代π比b各 烷-1-基）環己基）乙醯胺
實例3 經氘標記之]^-((111,28,511)-5-(第三-丁基胺基）-2-((8)-3-(7-第三-丁基吼唑并[l，5-a][l,3,5]三畊-4-基胺基）-2-氧代D比咯 烷-1-基）環己基）乙醯胺
實例4 經碳 14標記之N-((lR，2S，5R)-5-(第三-丁 基胺基）-2-((S)-3-(7-第三-丁基吡唑并[l，5-a][l，3,5]三畊基胺基）-2-氧代吡 150926.doc -69· 201120042 咯烷-1-基）環己基）乙醯胺
實例5 N-((lR，2S，5R)-5-(第三-丁 基胺基）-2-((S)-3-(7-第三-丁基吼 0坐并[l，5-a][l，3,5]S _-4-基胺基）-2-氧代吼p各烧-1-基）環己 基）乙醯胺之N-1晶體形式 N-((lR，2S，5R)-5-(第三-丁 基胺基）-2-((S)-3-(7-第三-丁基 吡唑并[l，5-a][l,3,5]三畊-4-基胺基）-2-氧代吡咯烷-1-基）環 己基）乙酿胺之游離驗晶體形式，包括其鹽形式及溶劑合 物，如下所述製備及表徵。 表徵晶形之程序 單晶資料 利用 Bruker-Nonius(Bruker AXS，Inc·, 5465 East Cheryl
Parkway Madison，WI 53711 USA)CAD4系列繞射計收集資 料。經由對具有25高角度反射之實驗繞射計設置進行最小 平方分析獲得單位晶胞參數。強度係使用Θ-2Θ可變掃推技 術，使用Cu Κα輻射（λ=1.5418 A)在恆定溫度下量測並僅針 對勞命兹偏光因數（Lorentz-polarization factor)進行校正。 在一半掃描時間之掃描極點下收集背景計數。或者，以
Bruker-Nonius Kappa CCD 2000 系統使用 Cu Κα 輕射 150926.doc •70- 201120042 (λ-1.541 8 A)收集早晶資料。使用Collect程式套件中之 HKL2000套裝軟體（Otwinowski, Z.等人之 Mzcrowo/ecw/ar Ογβ"叹Carter, W.C_ ; Jr.等人編，Academic，NY, publ.，第276卷，第307-326頁（1997))進行所測得強度資料 之索引及處理。（Collect Data收集及處理使用者介面：
Collect:資料收集軟體，r. Hooft，Nonius B.V.，1998.)。或 者利用Bruker-AXS APEX2 CCD系統使用Cu Κα輻射 (λ=1·5418 Α)收集單晶資料。使用ΑΡΕΧ2套裝軟體/程式套 件（APEX2資料收集及處理使用者介面：APEX2使用者手 冊，vl.27; Bruker AXS, Inc·, 5465 East Cheryl Parkway
Madison, WI 5371 1 US A)進行所測得強度資料之索引及處 理。 有指示時’在資料收集期間於0xford.凍系統（〇xf〇rd
Cryosystems Cryostream冷卻器：Cosier，J.等人，乂 jp〆· 19:105 (1986))之冷流中冷卻晶體。 藉由直接法解析結構並使用具有少量局部修改之 SDP(SDP，結構測定套裝’ Enraf_N〇nius, Bohemia Νγ 1Π16。SDP軟體中之散射因數，包括广及广獲自結晶學國 際表（International Tables for Crystallography), Kynoch
Press, Birmingham, England,第 IV 卷，表 2.2A 及 2.3.1 (1974))套裝軟體或結晶學套裝MAXUS(maXus解析及精算 軟體套件：Mackay，S.等人，maxus :由繞射資料解析及 精算晶體結構之電腦程式或SHELXTL4)基於所觀測到之反 射進行精算。經由全矩陣最小平方法精算所獲得之原子參 150926.doc 201120042 數（座標及溫度因數）。在精算中最小化之函數為、(|F。卜 |Fcl)2 ’ R定義為Σ IIFoHFcll/Σ |F〇|，而、=〜（|[。|-|?£:|)2/：^ |F〇| ] ’其中w為基於所觀測強度之誤差的適當加權函 數。在精算之所有階段檢查差圖（Difference map)。將氮引 至具有各向同性溫度因數之理想位置，但氫參數不變化。 X射線粉末繞射資料（PXRD) 使用Bruker C2 GADDS獲得PXRD資料。輻射為Cu (40 KV，50 mA)。樣品-谓測器距離為15 cm。將粉末樣 πσ置於直控為1 mm或低於1 mm之密封玻璃毛細管中；在 資料收集期間旋轉毛細管。就3$2Θ^35。收集資料，樣品暴 露時間為至少2〇〇〇秒。整合所得二維繞射弧以產生傳統— 維PXRD圖’其中步長為〇〇2度20，在3至35度20範圍内。 將約200 mg裝填於phUips粉末父射線繞射（pXRD)樣品固持 器中。樣品轉移至Philips MPD單元（45 KV，40 mA，Cu Κα)。在室溫下在2至32 2Θ範圍内收集資料（連續掃描模 式，掃描速率0.03度/秒，自動發散及抗散射狹縫，接收狹 縫：〇·2 mm，樣品旋轉器：開）。 差示掃描熱量測定（DSC) 在丁A INSTRUMENTS® Q1000 或 2920 型中進行 Dsc 實 驗。將樣品（約2-6 mg)在鋁盤中稱重且精確至百分之一毫 克記錄並轉移至DSC中。以5 mL/min用氮氣淨化儀器。在 至溫與300。(：之間以1〇。0 /min之加熱速率收集資料。繪製 曲線’其中吸熱峰指向下方。 熱解重量分析（TGA) 150926.doc •72- 201120042 在 ΤΑ INSTRUMENTS® Q500 或 2950 型中進行 TGA 實 驗。將樣品（約10-30 mg)置於預先配衡之鉑盤中。藉由儀 器精確量測樣品重量且精確至千分之一毫克記錄。以1 〇〇 mL/min用氮氣對爐進行淨化。在室溫與3〇〇。匸之間以 10°C/min之加熱速率收集資料。 晶形之製備及分析 該實例之單位晶胞資料及其他特性提供於表1中。單位 晶胞參數獲自單晶X射線結晶學分析。對單位晶胞之詳細 說明可見於 Stout 寺人 ’ iSVrMciwre ^
Pracika/ Macmillan (1968)之第 3章中。 最後’圖I呈示實例5之XRPD圖。圖2及3分別揭示實例5 之DSC及TGA分析。 晶形製備、XRD、DSC及TGA表徵 實例5，N-1晶形，游離鹼 自乙酸乙酯及]\4丁6£中結晶]^-((111，28,511)-5-(第三-丁基 胺基）-2-((S)-3-(7-第三-丁基吡唑并[丨，5_a][1，3,5]三啫_4_基 胺基）-2-氧代吡咯烷_丨_基）環己基）乙醯胺之晶形。晶形 N-1為純（無水分子或溶劑分子）形式之n_((ir,2S，5R)-5-(第 二-丁 基胺基）-2-((S)-3-(7 -第三-丁基。比 坐并[1，5_3][1，3,5]三 畊-4-基胺基）-2-氧代吡咯烷_ι_基）環己基）乙醯胺。晶形Ν_ 1之特徵在於XRD圖匹配由單晶結構資料產生之模擬圖。 晶形N-1之特徵在於通常在約205t：下開始熔融/分解吸熱 之DSC熱分析圖。晶形N_i之特徵在於tga熱曲線在高達 約210°C下具有重量損失。 150926.doc -73- 201120042 表1 單位晶胞參數 化合物 實例5 結構 驗 晶形 N-1 T -70 a(A) 7.3085(6) b(A) 16.257(1) C(A) 22.688(2) α° 90 β° 90 γ° 90 ν(Α3) 2695.4(4) Ζ, 1 Vm 673 Sg P2,2,2, Dcalc 1.194 表1中所使用之變數如下定義： T=結晶學資料之溫度，以攝氏度表示（RT為約+22°C之 室溫） V=單位晶胞體積 Ζ·=每一不對稱單元中藥物分子之數目 Vm=V(單位晶胞）/(每個晶胞中之Ζ藥物分子） sg=空間群 dcalc=晶體密度計算值 比較藥理學特徵 對實例 1 與 WO 2005/021500 Al、WO 2008/014381 A1 及 150926.doc -74- 201120042 WO 2008/014360 A1中可見之化合物之藥理學特徵進行比 較的檢測法及資料提供於下文中。 人類周邊血液單核細胞結合 亦參見· Yoshimura·# 人，乂 /所历“⑽厂，145:292 (1990)。 使用125I-人類MCP-1作為示蹤配位體，使用人類周邊血液 單核細胞（hPBMC)建立人類CCR_2結合檢測法。使用標準 方案以 Ficoll-Hypaque(Mediatech CELLGRO®)自人類 leukopak(Biological Specialty Inc.)分離 hPBMC。洗滌經分 離之hPBMC並於結合緩衝液（rpmi-1640，0.1% BSA ’ 20 mM Hepes，pH 7.4)中稀釋至 lxl〇7/ml。125i_mcjm (NEN/Perkin Elmer)於結合緩衝液中稀釋至〇45 nM。將化 合物於結合緩衝液中稀釋3倍至結合檢測法中所用之最終 濃度。使用96孔過濾板（Millipore)進行結合檢測法。如下 評估總125I-MCP-1結合：向總體積為15〇 之各反應物中 添加5xl05個細胞、0.15 nM 125I-MCP-1及化合物，使得最 終濃度在0至100 nM範圍内。將板在室溫下培育3〇分鐘， 隨後使用真空歧管過濾（Millip〇re)用RPMI-1640、〇.1〇/。 BSA、0.4 M NaCh 20 mM Hepes(pH 7.4)洗滌三次。洗條 後’將板在室溫下風乾60分鐘。此後向各孔中添加25 μ1 Microscint 20。將板密封且於Triiux上計數丨分鐘。在3〇〇 nM冷MCP-l(PeproTech Inc.)存在下測定非特異性結合。特 異性125I-MCP-1計算為總結合與非特異性結合之間的差。 所有條件均測試兩次。IC50定義為使特異性結合降低5〇0/〇 所需之競爭化合物的濃度。 150926.doc -75- 201120042 T細胞CCR-5結合檢測法所用之程序類似於用於hPBMC CCR-2結合檢測法之程序，例外為使用人類周邊T細胞作 為CCR-5來源（參見下文）且使用125Ι-ΜΙΡ-1β作為示蹤劑 (Amersham)。 分離周邊T細胞 最近報導指示在個體之間，τ細胞上之CCR-5表現明顯 不同（Desmetz, C.等人，「The strength of the chemotactic response to a CCR-5 binding chemokine is determined by the level of cell surface CCR-5 density」，Immunology, 1 19(4):551-561 (2006))。因此，預先篩選具有CCR-5之高T 細胞表現之血液供者。首先藉由標準方案以Ficoll-Hypaque自人類全血分離hPBMC。隨後在用抗CCR-5抗體 加抗CD4抗體或抗CD8抗體進行染色後，使用流動式細胞 測量術分析量測T細胞上之CCR-5表現。要求>5%周邊T細 胞（CD4+及CD8+)表現CCR-5之彼等血液供者再提供血液以 供分離PBMC，且隨後使用標準E花環叢集（E-rosetting)技 術分離T細胞，該技術依賴於T細胞結合於綿羊紅血球 (RBC)之獨特能力。 CCR-2趨化性 使用人類單核細胞株THP-1進行人類CCR-2趨化性檢測 法。首先在37°C下在不含酚紅、不含BSA之RPMI-1640(pH 7.4)中用螢光染料鈣黃綠素AM(Calcein-AM)標記THP-1細 胞30分鐘，同時每15分鐘輕缓混合。接著洗滌經標記之細 胞且以lxl05/ml再懸浮於趨化性缓衝液（不含酚紅之RPMI- 150926.doc -76- 201120042 1640，0.1% BSA，pH 7 4)中。將測試化合物於趨化性緩 衝液中稀釋使得最終檢測濃度在〇 〇丨ηΜ至1 μΜ範圍内。 將配位體MCP-l(pepr〇Tech Inc.)在趨化性緩衝液中稀釋至 20 nM。為進行檢測，將等體積測試化合物稀釋液與等體 積經標記THP-1細胞混合（混合物1 )，且將等體積測試化合 物稀釋液與等體積經稀釋MCP-丨配位體混合（混合物2)。將 兩種犯合物在3 7 C下獨立培育1 〇分鐘，隨後輕緩混合。隨 後於趨化性板（Becton Dickinson)中藉由將50 μΐ混合物1置 於頂部腔室中且將225 μΐ混合物2置於底部腔室中來量測 MCP-1誘導之趨化性。將板用蓋子覆蓋並在37t下培育3〇 分鐘。30分鐘後，於CYTOFLUOR®上對板進行讀取。所 有條件均測試兩次。為進行訊雜比測定，將單獨5 〇 y經標 記丁^^-丨細胞^乂:^^孔丨置於頂部腔室中且將單獨^旦…配 位體MCP-1置於底部腔室中（最終濃度為1〇 nM) ^由分級濃 度之測試化合物達成之抑制計算為不含化合物之Mcp_丨對 照物之百分比。IC50定義為達成細胞趨化性5〇%抑制所需 之測試化合物濃度。 CCR-5趨化性 採用與以上所闡述類似之程序，例外為使用經分離之周 邊T細胞作為表現CCR-5之細胞且ΜΙΡ-1β(50 nM， PeproTechlnc.)為配位體。 hERG通量 使穩定表現hERG通道之HEK293細胞於恆溫箱中在補充 有10% Sigma胎牛血清、非必需胺基酸、2 mML-麩醯胺酸 150926.doc -77- 201120042 及500 pg/ml G418之杜爾貝科氏改良伊格氏培養基 (Dulbecco’s Modified Eagle’s Media)中生長（37°C ，50/〇 C02)。使用細胞解離緩衝液自燒瓶中提取細胞，隨後將細 胞以每孔（20 μ1)2χ104個細胞之密度塗鋪於384孔 CORNING®聚D-離胺酸塗覆之黑色/透明板中之10%血清培 養基中，且在37°C下於5% C02恆溫箱中培育15-24小時， 直至獲得匯合之細胞單層。 於100% DMSO中製備2 mM BTC-AM染料儲備液 (Molecular Probes, Eugene，OR)且隨後在檢測當天以1:1添 加至含10%(w/v)氧化異丙烯酸（pluronic acid)之DMSO中。 隨後將染料於hERG外部EP緩衝液（140 mM NaC卜4.0 mM KC卜 1.8 mM CaCl2，1.0 mM MgCl2，10 mM HEPES(pH 7.3)及l〇 mM葡萄糖；所有緩衝液組分獲自Sigma Chemical)中稀釋。將此BTC染料混合物（30 μΐ)添加至細胞 中且產生2.5 μΜ之最終負載濃度。將細胞在2rC下培育45 分鐘。 測試化合物於60 μΐ 10 mM DMSO中稀釋。隨後化合物 於3 84孔板之第uo行及第u_2〇行中以i:2比率於dms〇中 連續稀釋。藉由自DMSO連續稀釋板取2.5 μΐ產生檢測即用 板’其係在Velocity 11 BIOCEL®上製備。藉由添加48 μΐ ΕΡ'緩衝液且隨後豨釋產生含水板，30-45分鐘後於FLIPR® 上對檢測法進行讀取。負載染料後’向三個重複板（1〇 μ1) 之細胞中添加水性稀釋之化合物，產生80 μΜ至〇.156 ηΜ 之十點濃度範圍。檢測法中之最終DMSO濃度為1%。在 150926.doc •78- 201120042
CyBio液體處理器上製備檢測即用含水板並進行稀釋。 在使用氯雷射之488 nm線激發染料之FLipR@ 384 (Molecular Devices’ Sunnyvale，CA)上對負載染料之細胞 進行讀取。使用540±30 nm帶通濾波器過濾發射光。藉由 每孔添加 20 μΐ 含有 66 mM mM Ti2S〇^Ep 緩 衝液（Sigma/Aldrich)刺激hERG通道開放。對於各板，每秒 收集資料持續12秒之時間，此時添加含有T1+之刺激物緩 衝液。每秒進行資料收集持續48秒，且隨後繼續每三秒進 行收集再持續2分鐘。 自空白及全體孔測定檢測法之動態範圍。全體孔（第2 i 行及第22行）定義板之最大hERG活化（不存在測試化合 物）’而空白孔（第23行及第24行）定義100% hERG抑制。空 白孔含有400 nM標準hERG抑制劑多非利特 (dofetilideKFicker等人，1998)或E-403 1。使用線上几巧⑽ 軟體首先針對細胞/信號變化、陰性對照（空白）背景對各樣 品孔之原始資料點進行校正，並針對陽性對照（全體）進行 校正。隨後使用 Excel Fk(ID Business Solutions Limited, Surrey，UK)以單點邏輯方程式 y=a+((B-A)/1+((C/X)aD))) (其中A=最大抑制）擬合關KhER(} T1+通量資料之測試化合 物濃度反應曲線。藉由擬合關於指定測試化合物條件下 Tl+通量之最大螢光變化幅度對資料進行分析。由三個重 複孔之平均值計算化合物之效能（IC5G值）。 納通道，位點2結合檢測法 亦參見：Catterall，W.A·等人 召 b/· C/2em.，256:8922 150926.doc -79- 201120042 (1981)。標準結合緩衝液含有5〇1111^1^?£8、5〇111?^丁1^-HCl(pH 7.4)、130 mM 氣化膽鹼、5.4 mM KC1、0.8 mM MgCl2、5·5 mM葡萄糖、40 pg/mL LqT。藉由向於標準結 合緩衝液中含有5 nM [3H]-_毒素（batrachotoxin)及所需濃 度之欲測試化合物之反應混合物中添加突觸體（由韋斯大 鼠（Wi star rat)品系製備）起始結合反應。隨後混合樣品且在 37°C下培育60分鐘。藉由添加含有50 mM HEPES、50 mM Tris-HCl(pH 7.4)、1.8 mM CaCl2、0.8 mM MgCl2 及 1 mg/mL牛血清白蛋白之冰冷洗滌緩衝液終止反應》即刻收 集突觸體至玻璃纖維過濾器上且用洗滌緩衝液洗滌3次。 使用液體閃爍光譜儀對過濾器上保留之[3H]-蟾毒素放射性 進行計數。 並行人工膜滲透性檢測法（PAMPA) 並行人工膜滲透性檢測法（PAMPA)由稱為胃腸道（GIT)脂 質之經特別調配之基於卵磷脂的脂質組合組成。使用GIT 脂質在類似於Caco-2檢測法中所使用之夾層板總成中形成 膜。如藉由已知在人類中被動吸收之標準化合物所量測， GIT脂質與活體内膜組合物及效能十分類似。PAMPA廣泛 用作活體外模型以供對所發現化合物進行滲透性筛選。使 用化合物穿過PAMPA膜之速率來測定滲透性係數（Pc) ’其 可能與化合物之活體内被動滲透性相關。 在頂膜及基側膜pH值為7.4之pH值相關環境中研究特定 化合物之滲透性係數（Pc)。所有實驗均進行三次測定。 將測試化合物（100% DMSO中之10 mM儲備液）以1:1 〇〇稀 150926.doc • 80 · 201120042 釋於pH 7.4供者孔緩衝液（pION目錄號110151)中，提供100 μΜ檢測溶液，其中DMSO為1 %。將於供者孔緩衝液中稀 釋之化合物轉移至Whatman UNIFILTER®板且過濾，隨後 分配200 μΐ至檢測板之供者孔（pION目錄號110163)中。藉 由以移液管吸取4 μΐ脂質溶液（pION目錄號11 01 69)至過濾 板（¥评11目錄號1 3503)上來形成？八]\/^八膜。使用？117.4之 200 μΐ受者孔緩衝液（pION目錄號110139)覆蓋膜。將 PAMPA檢測板（供者側及受者側）組合且在室溫下培育4小 時。隨後將板拆開並注滿分光光度計板（VWR目錄號 655801)(每孔 150 μΐ)。於 SPECTRAMAX® UV 板讀取器中 對供者板、受者板、參考板及空白板進行讀取。藉由pi ON 軟體獲取資料，該軟體分析光譜並得出Pc值。 hERG膜片鉗 使用全細胞膜片鉗直接量測穩定表現所選殖hERG鉀通 道α次單元之HEK-293細胞中之hERG電流。在室溫下於pH 7.4之水性緩衝液中對化合物進行測試。在-80 mW至+20 mV之保持電位下施加重複測試脈衝（0.05 Hz)並在測試脈 衝後藉由使電壓步進至-65 mV引出尾電流。藉由量測峰值 尾電流之抑制來計算化合物之作用。 鈉通道膜片钳 使用全細胞膜片鉗直接量測表現人類心臟鈉通道SCN5 A 之HEK-293細胞中之向内鈉電流。在不含蛋白質之水性緩 衝液中對化合物進行測試。為測定穩態抑制，使用以下電 壓方案每5秒引出鈉電流：細胞保持在-90 mV之電位下且 150926.doc •81- 201120042 歷時60 ms步進至-20 mV。 °藉由量測在測 mV期間對峰值電流之抑制來計算作用 測試脈衝達到-20 。藉由在1 Hz及4
Hz之頻率下進行刺激來評估抑制之速率相關性。 大鼠中之單劑量藥物動力學 使用雄性史泊格多利大鼠（Sprague Dawley rat)(25〇 3〇〇 g)進行藥物動力學研究。在PO給藥前使大鼠禁食隔夜並在 給藥後4 h餵食。自頸靜脈收集血液樣品（約〇3 mL)至含 hEDTA之管中且隨後在4。〇下離心（15〇〇_2〇〇〇xg)以獲得血 漿。在口服生物可用性研究中’使2組動物（每組N=23)經 由頸靜脈進行靜脈内（IV)輸注（歷經10 min)或藉由口服管 飼法接受測試化合物。在給藥後〇丨7(僅對於IV)、〇 25、 h獲得連續血_液樣品。將 〇_5、0.75、1 ' 2、4、6、8及 24 藉由在4C下離心（1500-2000xg)獲得之血漿樣品儲存 在-20°C下，直至藉由LC/MS/MS進行分析。 猴中之單劑量藥物動力學 以交叉設計在雄性食蟹猴中評估各種測試化合物之藥物 動力學。在PO給藥前使猴禁食隔夜並在給藥後4 h餵食。 使1組1 -3隻動物（3至5 kg)藉由經由股靜脈進行IV輸注（歷 經10 min)及藉由口服管飼法接受化合物，其中在治療之間 進行1週清除。在給藥後0.17(僅IV)、0,25 ' 0.5、0.75、 1、2、4、6、8及24 h自股動脈收集連續血液樣品（約〇 3 mL)且在4°C下離心（1500-2000xg)獲得血漿。將樣品儲存 在-20°C下直至藉由LC/MS/MS進行分析。 藥物動力學檢測法之資料分析 150926.doc -82- 201120042 藉由對血漿濃度相對於時間資料進行非隔室分析 (Kinetica軟體’版本4.2，innaphase Corporation, Philadelphia, PA)獲得藥物動力學參數。由實驗觀測直接記錄峰值濃度 (Cmax)及Cmax時間。使用線性及對數梯形總和來計算自時 間0至末次取樣時間之曲線下面積（AUC(〇-T))。在IV投藥 後估算總血漿清除率（CLTp)、穩態分佈體積（Vss)、表觀消 除半衰期（T1/2)及平均滯留時間（MRT)。使用最少3個時間 點以可定量濃度進行T1/2估算。絕對口服生物可用性（1?)估 算為經口及IV給藥後劑量校正AUC值之比率。 CCR-2鈣移動 使用人類單核細胞株ΤΗΡ-1單核細胞株建立人類CCR-2 介導之細胞内鈣通量檢測法。首先藉由將ΤΗΡ-1細胞再懸 浮於含有 4 μΜ flUO-3(M〇lecular pr〇bes)及 1_25 mM 丙磺舒 (Probenecid)之葡萄糖及HEPES緩衝之PBS(pH 7.4)中使其 負載螢光團且隨後在3 7 C下培育6 0分鐘。洗務一次移除過 量fluo-3後’將細胞再懸浮於具有1 25 mM丙磺舒之洗務緩 衝液（含有無酚紅RPMI)中，且以每孔2xl〇5接種於％孔板 中將板置於FLIPR®-1 (Molecular Devices)中，其使用氬 離子雷射激發細胞並自動添加測試化合物及人類MCp_工， 同時監測螢光變化。向各孔中添加濃度在〇至1〇〇 nM範圍 内之測试化合物稀釋液或單獨之緩衝液，離心且培育1〇分 鐘。隨後添加重組人類MCP-l(PeproTech Inc.)至1〇 nMi 最終濃度。監測螢光位移並自動計算基底峰值偏移（base_ to-peak excursion)。所有條件均測試兩次。由分級濃度之 150926.doc •83- 201120042 化合物達成之抑制計算為不含化合物之MCP-1對照物之百 分比。 CCR-5鈣移動 採用與以上所述之CCR-2鈣移動類似之程序，例外為 ΜΙΡ-1β(50 nM)為配位體，且細胞株為HT1080/CCR-5，其 中内源性CCR-5藉由基因表現隨機活化（RAGE)技術上調。 CCR-2 GTP-yS 交換 使用由HT1080人類細胞株製備之膜來測定[35S]-GTPYS 與CCR-2的MCP-1依賴性結合，其中藉由RAGE技術 (Athersys)上調内源性CCR-2。各反應物（200 μΙ〇含有20 mM Na-HEPES、10 mM MgCl2、50 mM NaCl、0.1% BSA (Sigma)、1% DMSO及 10 μΜ GDP(pH 7.4)。藉由使MCP-1 濃度自1 pM變為1 μΜ來測定MCP-1依賴性[35S]-GTPYS結 合之EC50。在室溫下培育反應物90分鐘，且在Millipore MAFC 96孔過濾板上收集[35S]-GTPYS/Gai複合物。在相同 條件下以1 nM MCP-1測定測試化合物對[35S]-GTPyS與 CCR-2膜之MCP-1依賴性結合的抑制。使用來自Graphpad Prism 4之配位體結合軟體分析資料。 CCR-5 GTP-yS 交換 採用與以上所闡述之CCR-2 GTP-YS交換程序類似之程 序，例外為MIP-lcx/LD78p為配位體，且細胞株為CCR-5/ HT1080。使用MIP-la/LD78p作為CCR-5配位體，因為其提 供比MIP-Ιβ大之訊雜比。 CCR-2全血整合素（CDllb)上調 150926.doc • 84· 201120042 使用人類全企建立CCR-2依賴性CD 11 b上調檢測法。在 37°C下使用實例i之濃度範圍預培育全血（1〇〇 μ1)1〇分鐘。 隨後向除未經刺激之對照反應物以外之各反應物中添加人 類重組MCP-l(l〇 μ1，1〇〇 ηΜ)至10 ηΜ之最終濃度。在 37 C下培育反應物3〇分鐘。培育後，添加1 m丨冰冷facS (具有10% FBS之PBS)緩衝液，且在1500 rpm下離心樣品5 分鐘，且再懸浮於50 μ1 FACS緩衝液中。隨後細胞在黑暗 中在冰上與20 μΐ抗CD14-FITC/抗CDllb-PE溶液一起培育 20分鐘’隨後向各反應物中添加1 mi ix FACS溶胞溶液 (Becton Dickinson)。隨後在黑暗中在冰上培育樣品3〇分 名里。固定及紅血球溶解後，將細胞離心並再懸浮於2 〇 〇 W FACS溶胞溶液中。在染色卜丨、時内使用FACSCalibur^動 式細胞儀猎由流動式細胞測量術分析樣品。使用 CellQuestPro軟體進行資料獲取及分析。使用連續閘控策 略（sequential gating strategy)來分析 CD14high CDllb+單核 細胞群體。為進行分析，CD 1 lb量測為中值螢光強度 (MFI) ° CCR-5全血CDllb上調 採用與以上所闡述之CCR-2全血CD lib上調程序類似之 程序’例外為使用ΜΙΡ-1β(50 nM)作為配位體。 發現以下關於比較化合物之資料（參看W〇 2008/014381 Al、WO 2008/014360 A1 及 W0 2008/014361 A1)。比較資 料顯不出乎意料的等效雙重CCR-2及CCR-5受體抑制性與 合意藥理學特徵之組合。 150926.doc -85· 201120042 表2 比較性活體外資料 I化合物 CCR-2結合 IC5〇(nM) CCR-5結合 IC5〇(nM) hERG 通量 ic5〇 (nM) Na+通道結合 (抑制％) PAMPA I 滲透性 (nm/sec) 實例12as WO 2005/021500 0.27 (；) 未獲得 2,800 未獲得 未獲得 實例12aj WO 2005/021500 0.43±0.06 (2) 未獲得 770 未獲得 未獲得 實例2k WO 2005/021500 0.7±0.3 (23) 2·3±1·8 51,000 97% > 10,000 nM 529±157 ⑼ 實例12bd WO 2005/021500 1.15士0.07 (2) 未獲得 >80,000 54% > 10,000 nM 392 實例8a WO 2005/021500 1.83±0.80 (72) 未獲得 >80,000 3%，10,000 nM 33% > 30,000 nM 94±58 (10) 實例8e WO 2005/021500 2.20±0.03 (2) 未獲得 >80,000 6%，10,000 nM 2±2 (2) 實例9c WO 2005/021500 0.96±0.26(19) 未獲得 >80,000 48% > 10,000 nM 75%，30,000 nM 145±71 (8) 實例1 WO 2008/014381 1.4土0.5 ⑽ 23.6±12.0 >80,000 0% > 10,000 nM ； 21% > 30,000 nM 443±114 (8) 實例1 WO 2008/014360 2.74±1.34(15) 6.3±1.5 >80,000 13% > 10,000 nM 32% > 30,000 nM 560±86 (5) 實例1 本發明 6.2 士 2.7 3.6±1.8 >80,000 46% > 30,000 nM 336 150926.doc -86- 201120042 表3 其他比較性活體外資料 化合物 CCR-2 趨化性 IC5〇(nM) CCR-5 趨化性 IC5〇 (nM) hERG 膜片鉗 (抑制％) Na+通道 膜片鉗 (抑制％) 實例2k 美國專利第 7163937號 0.24±0.16(72) 未獲得 83% > 10,000 nM 52% > 10,000 nM 90%，30,000 nM 實例8a WO 2005/021500 2.63±1.24 (4) 未獲得 4% > 10,000 nM 22%，10,000 nM 49% > 30,000 nM 實例9c WO 2005/021500 0.21 未獲得 4% > 10,000 nM 19% > 10,000 nM 39% > 30,000 nM 實例1 WO 2008/014381 0.71±0.16(22) 未獲得 33% > 10,000 nM 61% > 30,000 nM 17% > 10,000 nM 19% > 30,000 nM 實例1 WO 2008/014360 0.8±0.5 {16) 1.1±0.7 12%，10,000 nM 19%，30,000 nM 29%，30,000 nM 實例1 本發明 0,8 士 0.8 1.1士0.6 1.2%，10,000 nM 9.2% > 30,000 nM 15-20% > 10,000 nM 13-16% > 30,000 nM 表4 其他比較性活體外資料 化合物 CCR-2 Ca2+ 通量IC50 (nM) CCR-5 2+通量 IC5〇(nM) CCR-2 GTP-yS IC5〇(nM) CCR-5 GTP-yS IC5〇(nM) 實例2k 美國專利第 7163937號 未獲得 未獲得 未獲得 未獲得 實例1 WO 2008/014381 0.9 24.0 5 111.0 實例1 WO 2008/014360 0.8 士 0.6 5.9±3.3 3.5±1.9 5.4士3_2 實例1 本發明 2.9士1.5 2.0士1.4 3.5 士 1.9 6.1 士 1.2 150926.doc •87- 201120042 表5 其他比較性活體外資料 化合物 實例2k 美國專利第7，163,937號 CCR-2 CDllbIC5〇(nM) CCR-5 CDllbIC5〇(nM) 4.7±0.9 4.3士4.4 實例1 0.77±0.40 未獲得 WO 2008/014381 實例1 2.6±2.2 34.7±11.0 WO 2008/014360 實例1 4.8 5.7 本發明 表6 大鼠中之比較性活體内藥物動力學資料 化合物 劑量IV7PO(mg/kg) Cl(mL/min/kg) F% 口服 AUC(nM*h) 實例2k WO 2005/021500 2.5/25 40 68 9294 實例8a WO 2005/021500 6/72 42 1.4 690 實例9c WO 2005/021500 4/43 54 14 1855 實例1 WO 2008/014381 2/10 43 51 3794 實例1 WO 2008/014360 2/10 25 79 10169 實例1 本發明 2/10 49.7 94 6500 150926.doc -88- 201120042 表7 猴中之比較性活體内藥物動力學資料 化合物 劑量IV/PO (mg/kg) Cl (mL/min/kg) F% σ 服 AUC (nM*h) 實例2k WO 2005/021500 1/1.4 25 46 862 實例8a WO 2005/021500 1/11 14 9.4 1896 實例9c WO 2005/021500 1/10 12 26 6763 實例1 WO 2008/014381 1/1.3 23 47 836 實例1 WO 2008/014360 1/1 12 95 2352 實例1 本發明 1/1 16.4 63 1300 令人驚訝的是，發現本發明之實例1如藉由其CCR-2及 CCR-5結合能力所量測，針對CCR-2或CCR-5之活性無優 勢差別，而是替代地為等效雙重拮抗劑，且具有有益藥理 學特徵。參看表2至5。舉例而言，參看表5，其中實例1針 對 CCR-2 及 CCR-5 等效，而 WO 2008/014381 及 WO 2008/014360之實例1針對CCR-2之活性佔優勢。 效用 使用熟習此項技術者已知之檢測法顯示該等實例之化合 物為趨化激素受體活性之調節劑。在此章節中描述該等檢 測法且給出其參考文獻。在本文中在上文題為「比較性藥 150926.doc • 89· 201120042 理學特徵」之章節中描述更多檢測法。藉由在此等檢測法 中顯示具有MCP-1拮抗性之活性，預期該等實例之化合物 適用於治療與趨化激素及其同源受體相關之人類疾病。此 等檢測法令之活性定義為當在特定檢測法中量測時，化合 物顯示30 μΜ或低於30 μΜ濃度之IC5〇。 拮抗MCP-1誘導之鈣流入 (Sullivan等人，Mei/zo心 Mo/·別〇/·，114:125-133 (1999)) 實例中所述之至少一種化合物在本文中所述之拮抗 MCP-1誘導之鈣流入檢測法中具有活性。 使用發光C a指不染料FI u 〇 - 3量測两移動。在3 7 下將 細胞以每毫升8xl05個細胞於含有〇.1〇/。牛血清白蛋白、2〇 mM HEPES緩衝劑、5 mM葡萄糖、1%胎牛血清、4 μΜ Fluo-3 AM及2.5 mM丙磺舒之磷酸鹽緩衝生理食鹽水中培 育60分鐘。該等鈣檢測法中所用之細胞可包括如Weiner等 人，乂 心，36:89-97 (1980)所述之經分離之 人類單核細胞’或表現内源性CCR_2受體之細胞株，諸如 THP-1及MonoMac-6。隨後在含有0.1%牛血清白蛋白、2〇 mM HEPES、5 mM葡萄糖及2.5 mM丙磺舒之磷酸鹽緩衝 生理食鹽水中洗滌細胞三次。將細胞再懸浮於含有〇.5%午 血清白蛋白、20 mM HEPES及2.5 mM丙磺舒之磷酸鹽緩衝 生理食鹽水中至最終濃度每毫升2-4xl〇6個細胞。將細胞 塗鋪於96孔黑壁微檢測板（每孔1〇〇 μι)中且將板以200 X g 離心5分鐘。向孔中添加各種濃度之化合物（每孔50 μΐ)， 且在5分鐘後，每孔添加5〇 μΐ MCP-1得到10 ηΜ之最終濃 150926.doc -90· 201120042 度。藉由使用螢光成像板讀取器偵測鈣移動。使用氬雷射 (488 nm)激發細胞單層，且量測細胞締合之螢光3分鐘（頭 90秒每秒量測，且接下來9〇秒每1〇秒量測）。以任意螢光 單位產生數據，且測定各孔螢光變化之最大-最小差異。 相對於單獨使用MOM時之反應，計算與化合物相關：抑 制作用。 哺乳動物趨化激素受體提供干擾或促進哺乳動物（諸如 人類）之免疫細胞功能之目#。抑制或促進趨化激素受體 功能之化合物特別適用於調節免疫細胞功能，以達成治療 目的。因A，本發明係關於適用於預防及，或治療以；各 種不同疾病之化合物：«性、感染性及免疫調節性病症 及疾病’包括哮喘及過敏性疾病；致病性微生物(其定義 包括病毒）感染；以及自體务成 自體免疫性病變，諸如類風濕性關 即炎及動脈粥樣硬化。 > j仅興抑制哺乳動物％儿菽京雙體（例如人 類趨化激素受體）之一戋多種.处夕士政 …Λ, 種功旎之本發明化合物來抑制 (亦即減少或預防)發炎或感染 炎性過程，諸如白血料出㈣ J —或多種發 曰血竦滲出、黏附、趨化性、 酶、組織胺外釋）或發炎性介體釋放得到抑制。 ° 素S’二進:乳動物趨化激素受體(例如人類趨化激 ,、）或夕種功能之本發明化合物在投與 增強）免疫或發炎性反應， 收導或 ^ , 血球滲出、黏附、掮π 性、外釋(例如酶、組織胺外1趨化 發炎性過程得财益·。兴輕^介體釋放，致使 有邊。舉例而言，嗜伊紅 150926.doc •91 · 201120042 集以對抗寄生蟲感染。此外’若預期傳遞足量化合物經由 誘導趨化激素受體内化而引起細胞上之受體表現損失，戍 以致使細胞遷移導向錯誤之方式傳遞化合物，則預期促進 哺乳動物趨化激素受體之一或多種功能之本發明化合物亦 可用於治療上述發炎性、過敏性及自體免疫性疾病。 除諸如人類之靈長類動物外’多種其他哺乳動物可根據 本發明之方法來治療。舉例而言，可治療包括（但不限於） 牛、綿羊、山羊、馬 '狗、貓、天竺鼠、大鼠或其他牛 類、綿羊類、馬類、犬類、貓類、齧齒動物或鼠類物種的 哺乳動物。然而’該方法亦可在諸如禽類物種之其他物種 中實施。用以上方法治療之個體為需要調節趨化激素受體 活性之哺乳動物（雄性或雌性）。如本文所用之「調節」意 欲涵蓋拮抗作用、促效作用、部分拮抗作用及/或部分促 效作用。 基於螢光成像板讀取器（FLIPR®)之功能檢測法 將HT1080細胞（純系3559.1.6)以每孔10000個細胞（30微 升）塗鋪於384孔板（黑色/透明底BIOCOAT® PDL, Beckton Dickinson)中且每孔裝入30微升Fluo-4 AM螢光染料（藉由 將1 mg Fluo-4 AM溶解於440微升DMS0中且用1 〇〇微升氧 化異丙烯溶液稀釋’隨後再用1 〇 mL亨克氏緩衝液（Hanks buffer)稀釋來製備）。在3rc及5% c〇2下培育細胞3〇 min ’隨後洗滌三次且懸浮於檢測緩衝液（2〇 mM HEPES， 1.2 mM CaCl2，5 mM MgCh，2.5 mM 丙績舒，〇.5〇/0 BSA ’ lx亨克氏溶液）中。測試物品於DMSO中連續稀釋， 150926.doc •92· 201120042 且隨後用檢測緩衝液以1:1 〇稀釋，隨後添加至細胞中（每孔 1 〇微升）。使用FLIPR®，對板之通量誘導（亦即促效劑活 性）進行讀取（1〇_7〇 sec)。隨後進一步向細胞中裝入促效劑 溶液（每孔30微升’藉由將30微升1〇〇毫莫耳濃度Μΐρ_ΐβ於 1〇〇 mL檢測緩衝液中稀釋來製備，此方案於檢測法中傳遞 最終濃度為5 nM之MIP-Ιβ)且使用FLIPR®對板進行讀取歷 時1分1里。相對於0.4% DM SO/緩衝液陰性對照物測定測試 物品之拮抗活性。 活體内檢測法及功效 於下文所述之活體内檢測法中評估]^-((1尺，28,511)-5-(第 二-丁 基胺基）-2-((S)-3-(7-第三-丁基 η比嗤并[1,5-3][1,3,5]三 °井-4-基胺基）-2-氧代吼咯烷-1-基）環己基）乙醯胺（亦稱為 「實例1」）。 hCCR-2 KI小鼠中48小時巯基乙酸鹽（TG)誘發之腹膜炎模型 方法 對hCCR-2 KI小鼠（C57BL/6-SVJ129)腹膜内注射1 mi巯 基乙酸鹽（TG)(Hardy Diagnostics)。對於各研究，每組使 用八隻雄性小鼠。在TG注射前1小時經口給予實例1。所 使用之媒劑為含0·01 N HC1之水。TG注射後四十八小時， 藉由注射5 ml PBS/10 mM EDTA/100/。BSA至腹膜腔中進行 腹膜灌洗。 對於48小時TG腹膜炎研究，每天給予實例1兩次，第一 次給藥在TG注射前一小時進行。藉由細胞計數器獲得經 分離細胞之總腹膜細胞計數。進行細胞離心塗片（cyt〇spin) 150926.doc •93· 201120042 以測定差異白血球計數。使用Wright-Giemsa Stain(Sigma-Aldrich)對細胞進行染色歷時3分鐘，且隨後用去離子水沖 洗5分鐘。基於每個樣品計數總共200個細胞來計算差異計 數。各研究結束時亦在EDTA中自後眼眶竇收集血液用於 測定藥物濃度。 為進行流動式細胞測量術分析，用FACS缓衝液 (PBS/0.5% BS A)洗滌腹膜滲出細胞（1 X 106) —次且再懸浮於 FACS緩衝液中。細胞在冰上與Fc阻斷抗體（BD Pharmingen) —起培育15 min，.隨後添加以下抗體（BD Pharmingen) : PE與抗F4/80之結合物，FITC與抗Ly6C之結 合物及Alexa 647與抗hCCR-2之結合物。在冰上45 min 後，於冰上利用BD CYTOFIX®固定細胞15 min，用FACS 緩衝液洗滌兩次，且再懸浮於200 μΐ FACS緩衝液中。獲 得各樣品之細胞事件（40,000)且使用FloJo軟體分析資料 (TreeStar)。設置FSC/SSC閘以包括所有單核細胞（低SSC， 較高FSC)，同時於分析中排除粒細胞。隨後分析此閘控群 體之Ly6C (FITC)、F4/80 (PE)表現。藉由將利用細胞計數 器獲得之總腹膜細胞計數與來自流動式細胞測量術利用 F4/80 +細胞鑑別之單核細胞/巨噬細胞百分比相乘來測定腹 膜單核細胞/巨噬細胞數。使用配對雙尾t試驗法將顯著性 設定為p值低於0.05來分析平均值之間差異的統計顯著 性。 結果 於hCCR-2 KI小鼠TG腹膜炎模型中評估實例1以測定其 150926.doc -94- 201120042 抑制單核細胞/巨噬細胞浸潤之EC50。向小鼠投與疏基乙 酸鹽’並以10、50或160 mg/kg BID經口給予實例1。tg治 療後四十八小時，進行腹膜灌洗以藉由流動式細胞測量術 進行細胞浸潤分析。 觀測到對單核細胞/巨噬細胞浸潤之劑量依賴性抑制。 10、50及160 mg/kg之劑量分別得到25%、54%及63%之抑 制。在使用多個劑量之四個單獨研究中，所達到之最大抑 制為約70%，且藉由此分析所估算之抑制單核細胞/巨噬細 胞浸潤之平均EC50為4.9 nM，其與實例1抑制小鼠 MCP-1結合於表現人類CCR-2之細胞（hPBMC)的活體外 IC5〇(5.8±2.3 nM)充分相關。 為在hCCR-2 KI小鼠中之48小時硫基乙酸鹽腹膜炎模型 中評估實例1在活體内對受體之佔用程度，量測實例1及小 鼠MCP-1之血漿含量。關於此估算須說明：僅考慮ccR_2 及其主要配位體MCP-1。在競爭性抑制劑存在下配位體之 受體佔用率由Gaddum方程式定義： [RL]_ 1 [R] ι + Ικ,/ΜΟ+Ιι]/^) 由於實例1為MCP-1結合於CCR-2之競爭性抑制劑，故小 鼠MCP-1/CCR-2受體複合物及實例1/CCR_2受體複合物之 量皆可使用血漿中小鼠MCP-1及未結合蛋白質之實例！之 血清含量來測定。小鼠MCP-1結合於hCCR-2之Kd為0.91 +/· 〇·〇8 nM(n=8)’其係於冷競爭配位體結合實驗中使用 丄-人類MCP-1來測得。實例1結合於hCCR-2之平均&為 150926.doc -95· 201120042 2.0 nM。使用上述方程式形式來測定小鼠MCP-1/CCR-2受 體複合物之分率。為測定實例1/CCR-2複合物之分率，如 下再定義方程式： 最後，游離CCR-2之量由下式測定： [CCR-2]total=[CCR-2]free+[小鼠 MCP-l/CCR-2]+[實例 1/CCR-2] 如表8所示，第48小時對單核細胞/巨噬細胞浸潤至腹膜 中之抑制百分比反映實例1/CCR-2受體複合物之百分比。 表8 在48小時TG腹膜炎模型中測定hCCR-2 KI小鼠血液中實例 1之活體内受體佔用率 劑量 mg/kg 血毁中 小氣 MCP-1 之 濃度(nM) 血漿中 游離實例1 之濃度(nM) (CCR-2結合 之IC90倍數） 小鼠 MCP-1 結合之 CCR-2 之 百分比 實例1 結合之 CCR-2 之 百分比 游離 CCR-2 之 百分比 對單核細胞/ 巨嗤細胞 浸潤之抑制 百分比a 200a 0.068 136.4 0.11 98.45 1.44 71 160 0.046 62.0 0.16 96.72 3.12 63 50 0.048 16.6 0.56 88.74 10.69 54 10 0.021 1.9 1.17 48.15 50.68 25 0 0.022 0.0 2.36 0.00 97.64 0 不同研究之劑量係選自表中之其他劑量以提供最大抑制 實例。此劑量提供hCCR-2 KI結合IC90之1·9倍之游離血漿 濃度。 總而言之，此等結果清楚表明實例1為單核細胞/巨噬細 150926.doc -96- 201120042 胞浸潤之有效阻斷劑，装ΡΓ 具bC5〇為約4.9 ηΜ。實例1對單核 細胞/巨噬細胞浸潤之最大女 — 联大抑制可猎由使用此化合物獲得 98.5% CCR-2佔用銮 ^、去 α、 羊而達成。值得注意的是該等研究在 CCR_2缺乏小鼠中顯示類似的單核細胞/巨噬細胞浸潤之降 低（約 70-80%)。 . 可用趨化激素受體功能抑制劑治療之人類或其他物種之 疾病或病狀包括（但不限於）：發炎性或過敏性疾病及病 狀，包括呼吸過敏性疾病，諸如哮喘 '過敏性鼻炎、過敏 性肺病、過敏性肺炎、嗜伊紅血球性蜂寓組織炎（例如威 爾氏症候群（Well’s syndrome))、嗜伊紅血球性肺炎（例如 呂佛勒氏症候群（LoeffIeris syndrome)、慢性嗜伊紅血球性 肺炎）、嗜伊紅血球性筋膜炎（例如休曼氏症候群 (Shulman’s syndrome))、遲發型過敏反應、間質性肺病 (ILD)(例如特發性肺纖維化’或ILD伴發類風濕性關節 炎、全身性紅斑狼瘡、僵直性脊椎炎、全身性硬化症、休 格連氏症候群（Sj5gren，s syndrome)、多發性肌炎或皮肌 炎）；全身性過敏症或過敏反應、藥物過敏（例如對青黴素 (penicillin)、頭孢菌素（cephalosporin)過敏）、歸因於攝入 受污染色胺酸之嗜伊紅血球增多-肌痛症候群、昆蟲螫咬 過敏；自體免疫性疾病，諸如類風濕性關節炎、牛皮癬性 關節炎、多發性硬化症、全身性紅斑狼瘡、重症肌無力、 月乂'年發作型糖尿病；絲球體腎炎、自體免疫性甲狀腺 炎、貝切特氏病（Behcet’s disease);移植物排斥反應（例如 在移植中），包括同種異體移植物排斥反應或移植物抗宿 I50926.doc •97- 201120042 主疾病；發炎性腸病，諸如克羅恩氏病及潰瘍性結腸炎； 脊柱關節病；硬皮症；牛皮癣（包括τ細胞介導之牛皮癬） 及發炎性皮膚病，諸如皮炎、濕疹、異位性皮炎、過敏性 接觸性皮炎、蓴麻療；血管炎（例如壞死性血管炎、皮膚 性血管炎及過敏性血管炎）；嗜伊紅血球性肌炎、嗜伊紅 血球性筋膜炎；伴有白血球浸潤皮膚或器官之癌症。可治 療需抑制不合需要之發炎性反應之其他疾病或病狀，包括 (但不限於）血管炎、易損斑塊、靜脈新生内膜增生再灌注 損傷、透析移植物新生内膜增生、動靜脈瘺内膜增生、動 脈粥樣硬化、某些血液科惡性疾病、細胞激素誘導之毒性 (例如敗血性休克、内毒素休克）、多發性肌炎、皮肌炎。 可用趨化激素受體功能抑制劑治療之人類或其他物種之感 染性疾病或病狀包括（但不限於）HIV。 可用趨化激素受體功能促進劑治療之人類或其他物種之 疾病或病狀包括（但不限於）：免疫抑制，諸如在患有免疫 缺乏症候群（諸如AIDS或其他病毒感染）之個體，進行會引 起免疫抑制之輻射療法、化學療法、自體免疫性疾病療法 或藥物療法（例如皮質類固醇療法）之個體中；歸因於先天 性丈體功能缺乏或其他誘因之免疫抑制；及感染性疾病， 諸如寄生蟲疾病，包括（但不限於）蠕蟲（helminth)感染，諸 如線蟲（nematode)(圓蟲）；（鞭蟲症（Trichuriasis)、蟯蟲病 (Enterobiasis) ' 蛔蟲病（Aseariasis)、鉤蟲（H〇〇kw〇rm)、桿 線蟲病（Strongyloidiasis)、旋毛蟲病（Trichin〇sis)、絲蟲病 (filariasis));吸蟲（tremat〇des)(蛭（fiukes)(血吸蟲病 I50926.doc • 98 · 201120042 (Schistosomiasis)、肝吸蟲病（Clonorchiasis));條蟲 (cestodes)(帶蠕蟲）（胞蟲病（Echinococcosis)、牛帶縧蟲病 (Taeniasis saginata)、囊蟲病（Cysticercosis));内臟續蟲、 内臟幼蟲移行症（visceral larva migraines)(例如虫回蟲屬 (Toxocara))、嗜伊紅血球性胃腸炎（例如胃線蟲屬（Anisaki sp·)、海豹線蟲屬（phocanema sp·))、皮膚幼蟲移行症 (cutaneous larva migraines)(巴西鉤 口線蟲（Ancylostona braziliense)、犬鉤蟲（Ancylostoma caninum))。本發明化合 物相應地適用於預防及治療多種發炎性、感染性及免疫調 節性病症及疾病。 此外’若預期傳遞足量化合物經由誘導趨化激素受體内 化而引起細胞上之受體表現損失，或以致使細胞遷移導向 錯誤之方式傳遞化合物，則亦可預期趨化激素受體功能促 效劑可用於治療上述發炎性、過敏性及自體免疫性疾病。 在另一態樣中，本發明可用以評估G蛋白偶聯受體之假 定特異性促效劑或拮抗劑。本發明係關於此等化合物之用 途，其係用於預備及執行調節趨化激素受體活性之化合物 的篩選檢測法。此外，本發明化合物適用於確立或確定其 他化合物與趨化激素受體之結合位點，例如藉由競爭性抑 制或作為檢測法中之對照物來比較其已知活性與具有未知 活性之化合物。當開發新的檢測法或方案時，可使用本發 明之化合物測試其有效性。特定言之，該等化合物可以商 用套組形式提供例如用於涉及上述疾病之醫藥研究。本發 明化合物亦適用於評估趨化激素受體之假定特異性調節 150926.doc -99- 201120042 齊J此外，可利用本發明化合物來檢驗認為並非為趨化激 素受體之G蛋白偶聯受體之特異性，其藉由使用本發明化 合物作為不結合之化合物的實例或作為對此等受體具有活 性之化合物之結構變異體，此可幫助界定特異性相互作用 位點。 本文所揭不之化合物適用於治療或預防選自以下之病 症：類風濕性關節ϋ關節炎、敗血性休克、動脈粥樣 硬化、動脈瘤、發熱、心血管作用、血液動力休克、敗血 症侯群缺血後再灌注損傷、癌疾、克羅恩氏病、發炎性 腸病、分枝桿菌感染、腦膜炎、牛皮癬' 充血性心臟衰 竭、纖維變性病、惡病質、移植物排斥反應、自體免疫性 疾病、皮膚發炎性疾病、多發性硬化症、輻射損傷、高氧 肺泡損傷（hyperoxic aWeolar injury)、HIV、mv癡呆非 胰島素依賴性糖尿病、哮喘、過敏性鼻炎、異位性皮炎、 特發性肺纖維化、大皰性類天疱瘡、蠕蟲型寄生蟲感染、 過敏性結腸炎、濕疹、結膜炎、移植、家族性嗜伊紅血球 增多症、嗜伊紅血球性蜂窩組織炎、嗜伊紅血球性肺炎、 嗜伊紅血球性筋膜炎、嗜伊紅血球性胃腸炎、藥物誘發之 嗜伊紅血球增多症、囊腫性纖維化、徹奇_斯全司症候群 (Churg-Strauss syndrome)、淋巴瘤、霍奇金氏病 (Hodgkin's disease)、結腸癌、費爾蒂症候群（Fehy,s syndrome)、類肉瘤病、葡萄膜炎、阿茲海默氏病 (Alzheimer)、絲球體腎炎、及全身性紅斑狼瘡、食道鱗狀 細胞癌、神經痛及肥胖症。 150926.doc -100· 201120042 在另-態樣中，化合物適用於治療或預防選自以下之發 炎性病症：類風濕性關節炎、骨關節彡、動脈粥樣硬化、 動脈瘤、發熱、心血管作用、克羅恩氏病、發炎性腸病、 牛皮癬、充血性心臟衰竭、多發性硬化症、自體免疫性疾 病、皮膚發炎性疾病》 在另療、樣中’化合物用於治療或預防選自以下之發炎 性病症：類風濕性關節炎、骨關節炎、動脈粥樣硬化、克 羅恩氏病、發炎性腸病及多發性硬化症。 在另一態樣中，本文所揭示之實例可適用於治療多種癌 症，包括（但不限於）以下： 癌瘤，包括膀胱癌（包括加速膀胱癌及轉移性膀胱癌）、 乳癌、結腸癌（包括結腸直腸癌）、腎癌、肝癌、肺癌（包括 小細胞肺癌與非小細胞肺癌及肺腺癌）、#巢癌、前列腺 癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、淋巴系統癌、直腸癌、喉 癌、騰腺癌（包括外分泌騰腺癌）、食道癌、胃癌、膽囊 癌、子宮頸癌、曱狀腺癌及皮膚癌（包括鱗狀細胞癌）； 淋巴系造血性腫瘤，包括白血病、急性淋巴細胞性白血 病急性淋巴母細胞性白血病、B細胞淋巴瘤、T細胞淋巴 瘤、隹奇金氏淋巴瘤 '非霍奇金氏淋巴瘤、毛細胞淋巴 瘤、組織細胞淋巴瘤及伯基特氏淋巴瘤（Burketts lymphoma)； 骨趙系造血性腫瘤’包括急性骨髓性白血病及慢性骨髓 性白血病、骨髓發育不良症候群、骨髓性白血病及前髓細 胞性白血病； 150926.doc • 101 - 201120042 中樞神經系統及周邊神經系統之腫瘤，包括星形細胞 瘤、神經母細胞瘤、神經膠質瘤及神經鞘瘤； 間葉細胞起源之腫瘤’包括纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤及骨 肉瘤；及 其他腫瘤’包括黑素瘤、著色性乾皮病、角質棘皮瘤、 精原細胞瘤、甲狀腺濾泡癌及畸胎癌。 在另f⑯例中，本文揭示治療癌症之方法，其中癌症 係選自乳癌、肝癌、前列腺癌及黑素瘤。此外，本文所揭 示之化合物可適用於治療印巢癌，及多發性骨髓瘤。 本發明提供治療多種非癌性增殖疾病之方法。 說明預防及治療以下疾病之組合療法：發炎性、减染性 及免疫調節性病症及疾病，包括哮喘及過敏性疾病』及 自體免疫）·生病史’諸如類風濕性關節炎及動脈粥樣硬化； 及上述病變’其係藉由將本發明化合物與已知用於該等用 途之其他化合物組合來達成。舉例而言，在治療或預防發 炎中，本發明化合物可與以下藥物聯合使用：消炎劑或止 痛劑，諸如鴉片促效劑、脂肪加氧酶抑制劑、環加氧酶_2 抑制？ί]諸如’I白素-1抑制劑之介白素抑制劑、腫瘤壞死 因子抑制劑、NMDA拮抗劑、-氧化氣抑制劑或一氧化氮 合成之抑制劑、非類固醇消炎劑、磷酸二酯酶抑制劑、或 細胞激素抑制消炎劑例如與以下化合物··諸如乙醯胺苯酚 (acetaminophen)、阿司匹靈（aspirin)、可待因（c〇deine)、 备、太尼（fentaynl)、布洛芬（ibUprofen)、吲哚美辛 〇domethacin)、酮咯酸（ket〇r〇iac)、嗎啡鹼⑽响以）、 150926.doc •102· 201120042 萘普生（naproxen)、非那西汀（phenacetin)、°比羅昔康 (piroxicam)、類固醇止痛劑、舒芬太尼（sufentanyl)、蘇林 酸（sunlindac)、干擾素α及其類似物。類似地，本發明化合 物可與以下藥劑一起投與：疼痛舒解劑；增效劑，諸如咖 啡鹼、Η2拮抗劑、聚二曱矽氧烷（simethicone)、氫氧化铭 或氫氧化鎂；解充血劑’諸如苯基腎上腺素、苯基丙醇 胺、假麻黃鹼（pseudophedrine)、羥間唾琳 (oxymetazoline) 腎上腺素（ephinephrine) ' 萘 β坐林 (naphazoline)、賽洛。坐琳（xyi〇metaz〇iine)、環己丙甲胺 (propylhexedrine)或左去氧麻黃素（lev〇des〇xy_ ephedrine);及止咳劑（antitussive)，諸如可待因、氫可酮 (hydr〇Codone)、卡拉美芬（caramiphen)、噴托維林 (carbetapentane)或右曱嗎喃（dextramethorphan广利尿劑； 及鎮靜性或非鎮靜性抗組織胺劑。同樣，本文所揭示之化 合物可與用於治療/預防/抑制或改善本發明化合物適用之 疾病或病狀之其他藥物組合。該等其他藥物可以其常用途 徑及常用量與本發明化合物同時或依次投與。當化合物與 -或多種其他藥物同時使用日夺，可使用除本發明化合物外 亦含有該等其他藥物之醫藥組合物。因此，醫藥組合物包 括除本發明化合物外亦含有_或多種其他活性成分之彼等 組合物。 可與本發明化合物組合、單獨或於同一醫藥組合物中投 與之其他活性成分的實例包括(但不限於)：⑷整合素拮抗 d 4如選擇素（seIectin)、1(：鳩及Vla_4之括抗劑；⑻ 150926.doc 201120042 類固醇，諸如倍氣米松（beclomethasone)、甲潑尼龍 (methylprednisolone)、倍他米松（betamethasone)、潑尼松 (prednisone)、地塞米松（dexamethasone)及氫化可的松 (hydrocortisone) ; (c)免疫抑制劑，諸如環孢素 (cyclosporin)、他克莫司（tacrolimus)、雷帕黴素 (rapamycin)及其他FK-506型免疫抑制劑；（d)抗組織胺劑 (H1組織胺拮抗劑），諸如溴芬尼拉明 (bromopheniramine)、氣芬尼拉明（chlorpheniramine)、右 氣菲安明（dexchlorpheniramine)、曲普利咬（triprolidine)、 氯馬斯丁（clemastine)、苯海拉明（diphenhydramine)、二苯 拉林（diphenylpyraline)、曲 0比那明（tripelennamine)、經 p井（hydroxyzine)、甲地拉喷（methdilazine)、普敏太定 (promethazine)、異 丁 畊（trimeprazine)、阿紮他定 (azatadine)、二苯環庚咬（cyproheptadine)、安塔洛林 (antazoline)、芬尼拉明、吡拉明（pyrilamine)、阿司咪唑 (astemizole)、特非那定（terfenadine)、洛拉他定 (loratadine)、 西替利°井（cetirizine)、 非索非那定 (fexofenadine)、 去羧乙 氧基氯雷他定 (descarboethoxyloratadine)及其類似物；（e)非類固醇平喘 藥，諸如b2促效劑（特布他林（terbutaline)、間經異丙腎上 腺素（metaproterenol)、非諾特羅（fenoterol)、新異丙腎上 腺素（isoetharine)、舒喘寧（albuteral)、比托特羅 (bitolterol)、及 °比布特羅（pirbuterol))、茶驗 (theophylline)、色甘酸鈉（cromolyn sodium)、阿托品 -104- 150926.doc 201120042 (atropine)、異丙托溴銨（ipratropium bromide)、白三烯拮 抗 (糸魯司特（zafirlukast) ' 孟魯司特（montelukast)、普 余司特（pranlukast)、伊拉司特（iraiukast)、泊比司特 (pobilukast)、SKB-l〇2,203)、白三烯生物合成抑制劑 (leukotriene biosynthesis inhibitor)(齊留通（zileuton)、 BAY-1005) ; (f)非類固醇消炎劑（NSAID)，諸如丙酸衍生 物（阿明洛芬（alminoprofen)、苯 °惡洛芬（benxaprofen)、布 氣酸（bucloxic acid)、卡洛芬（carprofen)、芬布芬 (fenbufen)、菲諾洛芬（fenoprofen)、氟洛芬（fluprofen)、氟 比洛芬（flurbiprofen)、布洛芬、°引哚洛芬（indoprofen)、酮 洛芬（ketoprofen)、米洛芬（miroprofen)、萘普生 (naproxen)、奥沙普 p井（oxaprozin)、°比洛芬（pirprofen)、普 拉洛芬（pranoprofen)、舒洛芬（suprofen)、α塞洛芬酸 (tiaprofenic acid)、及硫 °惡洛芬（tioxaprofen))、乙酸衍生物 (°引D朵美辛（indomethacin)、阿西美辛（acemetacin)、阿氣芬 酸（alclofenac)、環氯茚酸（clidanac)、雙氣芬酸 (diclofenac)、芬氯酸（fenclofenac)、芬克洛酸（fenclozic acid)、芬替酸（fentiazac)、呋羅芬酸（furofenac)、異丁芬 酸（ibufenac)、伊索克酸（isoxepac)、噁平酸（oxpinac) ' 舒 林酸、硫平酸（tiopinac)、托美丁（tolmetin)、齊多美辛 (zidometacin)、及佐美酸（zomePirac))、芬那酸衍生物 (fenamic acid derivative^氟滅酸（flufenamic acid)、曱氣滅 酸（meclofenamic acid)、曱滅酸（mefenamic acid)、尼氟滅 酸（niflumic acid)及托芬那酸（t〇lfenamic acid))、聯苯基羧 150926.doc • 105- 201120042 酸衍生物（二氟尼柳（diflunisal)及氟苯柳（flufenisal))、昔康 (oxicams)(伊索昔康（isoxicam)、°比羅昔康、舒多昔康 (sudoxicam)及替諾昔康（tenoxican))、水揚酸鹽（乙醢基水 楊酸、柳氮績胺。比17定）及二氫°比嗤酮（pyrazolone)(阿紮丙宗 (apazone)、苯 0比派隆（bezpiperylon)、非普拉宗 (feprazone)、莫非保松（mofebutazone)、經基保泰松 (oxyphenbutazone)、苯基 丁氮酮（phenylbutazone)) ; (g)環 加氧酶-2(COX-2)抑制劑；（h)IV型填酸二酯酶（PDE-IV)抑 制劑；⑴趨化激素受體之其他拮抗劑；（j)降膽固醇劑，諸 如HMG-CoA還原酶抑制劑（洛伐他汀（l〇vastatin)、辛伐他 汀（simvastatin)、普伐他汀（pravastatin)、氟伐他汀 (fluvastatin)、阿托伐他汀（atorvastatin)、及其他抑制素）、 錯隔劑（sequestrant)(消膽胺（cholestyramine)及考來替潑 (colestipol))、於酸（nicotonic acid)、非諾貝特酸衍生物 (fenofibric acid derivative)(吉非羅齊（gemHbrozil)、安妥 明（cloHbrat)、非諾貝特（fenofibrate)及苯紮貝特 (benzaHbrate))、及普羅布可（probucol) ; (k)抗糖尿病劑， 諸如胰島素、績醯腺（sulfonylureas)、雙胍（biguanides)(二 曱雙胍）、a-葡糠苷酶抑制劑（醣祿）及格列酮（glitazone)(曲 格列酮（troglitazone)M 8比格列酮（pioglitazone)) ; (1)干擾素 製劑（干擾素a-2a、干擾素-2B、干擾素α-Ν3、干優素 β-la、干擾素β-lb、干擾素γ-lb) ; (m)抗病毒化合物，諸 如依法韋舍（efavirenz)、奈韋拉平（nevirapine)、茚地那韋 (indinavir)、更昔洛韋（ganciclovir)、拉米夫定 150926.doc • 106 · 201120042 (lamivudine)、泛昔洛韋（famcicl〇vir)、及紮西他濱 (zalcitabine) ; (0)其他化合物，諸如5·胺基水楊酸’
穴月1J 藥，抗代謝物，諸如硫唑嘌呤（323讣丨〇{)1>丨1^)及6疏基嗳 呤，及細胞毒性癌症化學治療劑。本發明化合物與第二舌 性成分之重量比可變化且將視各成分之有效劑量而定。 般而5，將使用各者之有效劑量。因此，例如當化人 物與NSAID組合時，本發明化合物與NSAID之重量比一般 在約100:1至約1:1〇〇0，或者約2〇〇:1至約1:2〇〇之範圍内。 本發明化合物與其他活性成分之組合一般亦在上述範圍 内，但在各情況下應使用各活性成分之有效劑量。 在治療癌症時，化學治療劑及/或其他治療（例如輻射療 法）之組合通常有利。第二（或第三）藥劑可能與初始治療劑 具有相同或不同作用機制。I用細胞毒性藥物組合可能尤 ,、適用其中所投與之兩種或兩種以上藥物以不同方式戋 於：胞週期不同階段中起㈣，及/或其中兩種或兩種： 上藥物具有重疊毒性或副作用，及/或其中所組合之各藥 物在治療患者所表現之特定疾病病況巾顯示功效。 因此，本文所揭示之化合物（或本文所揭示之其他調配 物）可與適用於治療癌症或其他增殖疾病之其他抗癌劑及 細胞毒性劑及治療組合投與。本文之本發明另外包含本文 化合物(或本文所揭示之其他調配物)之用途，其係用於製 備用於治療癌症之藥物’及/或其包含將本文化合物與關 於該等化合物與治療癌症之其他抗癌劑或細胞毒性劑及治 療組合使用之說明書包襄在一起。本發明另外包含化合： 150926.doc •107- 201120042 與一或多種其他藥劑以套組形式組合，例如其中將其包裝 在一起或置於各別包裝中以套組形式一起出售或將 其包裝以供調配在一起。 第二（或更多）抗癌劑可選自以下任—或多者： 烷基化劑（包括氮芥、磺酸烷酯、硝基脲、伸乙亞胺衍 生物及三氮烯”抗金管生成劑（包括基質金屬蛋白酶抑制 劑）；抗代謝物（包括腺苷去胺酶抑制劑、葉酸拮抗劑、嘌 呤類似物及嘧啶類似物）；抗生素或抗體（包括單株抗體= CTLA-4抗體、蒽環黴素（anthracycline));芳香酶抑制劑； 細胞週期反應調節劑；酶；法呢基蛋白質轉移酶抑制 劑； 激素及抗激素劑及類固醇（包括合成類似物、糖皮質激 素、雌激素/抗雌激素[例如SERM]、雄激素/抗雄激素、助 孕素、孕酮受體促效劑及促黃體素釋放[LHRH]促效劑及 拮抗劑），胰島素樣生長因子（IGF)/胰島素樣生長因子受體 (IGFR)系統調節劑（包括iGFR1抑制劑）；整合素信號傳導 抑制劑；激酶抑制劑（包括多激酶抑制劑及/或Src激酶或 Src/abl之抑制劑、細胞週期素依賴性激酶[cdk]抑制劑、 panHer、Her-Ι及Her-2抗體、VEGF抑制劑（包括抗VEGF抗 體）、EGFR抑制劑、有絲分裂原活化蛋白[MAp]抑制劑、 MEK抑制劑、Aurora激酶抑制劑、pDGF抑制劑及其他酪 胺酸激酶抑制劑或絲胺酸/蘇胺酸激酶抑制劑； 微管破壞劑’諸如海鞘素（ecteinascidin)或其類似物及衍 生物；微管穩定劑，諸如紫杉烷（taxane);及天然存在之 150926.doc •108· 201120042 埃博黴素（ep〇thiIone)及其合成及半合成類似物； 微管結合 '去穩定劑（包括長春花生物驗（vinca alkaloid));及 拓撲異構酶抑制劑；異戊二婦基蛋白質轉移酶抑制劑； 始配位錯合，’·信號轉導抑制劑；及用作抗癌劑及細胞毒 性，之其他藥劑，諸如生物反應調節劑、生長因子及免疫 調節劑。 此外，本發明化合物可與因具有處理與上述病狀相關之 ㈣用之㈣適用性而選擇之其他治療劑一起調配或共投 與本發明化合物可與預防。惡心、過敏及胃刺 激之樂劑’諸如止吐藥及Hl及&抗组織胺劑-起調配。 當與本發明化合物組合使用時’上述其他治療劑例如可 Ut^„#4(Physicians，Desk Keyence, PDR)t|,a, 或由，、.、S此項技#者以其他方式確定之量使用。 該等化合物以治療有效量投與哺乳動物。「产療 量」意謂當單獨或與另-治療劑組合投與哺乳動：時有L 預防或改善疾病病況或疾病進展之本發明化合物的量。 劑量及調配物 本發明化合物可以諸如錠劑、膠囊(各包括持 定時釋放調配物）、丸劑、散劑、:戍 〆 4 @丁劑、縣 洋液、糖t及乳液之口服劑型投與。纟亦可以靜: 注或輸注)、腹膜内、皮下或肌肉内形式投與，其所有 使用-般熟習醫藥技術者所熟知之劑型。其可單獨Μ : 但-般將連同基於所選投藥途徑及標準醫藥規範所=之 150926.doc -109- 201120042 醫藥載劑一起投與。 本發明化合物之給藥方案當然將視已知因素而定，諸如 特定藥劑之藥物動力學特徵及其投藥模式及途徑，·接受者 之物種、年齡、性別、健康狀況、醫學病狀及體重；症狀 之性質及程度；並行治療之種類；治療頻率；投藥途徑； 患者之腎功能及肝功能；及所要作用。醫師或獸醫可確定 及規定預防、逆轉或遏止病症進展所需之藥物的有效量。 作為一般指導原則，當為獲得指定作用而使用時，各活 性成分之每日口服劑量將在每天每公斤體重約〇 〇〇ι至 1000毫克之間，或在每天每公斤體重約〇〇1至丨⑼毫克之 間，或者每天每公斤體重約10至20毫克之間之範圍内。 靜脈内投藥時在恆定速率輸注期間劑量將在每分鐘每公斤 體重約1至約10毫克範圍内。本發明化合物可以單次每曰 劑量投與，或總每日劑量可以每日兩次、三次或四次之分 次劑量投與。在-實施例中，活性成分之每日口服劑量在 3與600 mg之間，每曰投與一次或以分開劑量每日投與兩 次。或者，活性成分可以每日兩次投與1〇_2〇 ^^之劑量投 與或每日一次投與4〇至1〇〇 mg之劑量投與。或者，活性成 分可每天兩次投與12.5 mg2劑量或每天一次投與Μ 之 劑量。或者，活性成分可以每天一次或兩次投與3、1〇、 30、100、3〇〇及6〇〇 mg之劑量投與。 本發明化合物可以鼻内形式經由局部使用適合鼻内媒 劑、或經由經皮途徑使用經皮皮膚貼片來投與。當以經皮 傳遞系統形式投與時，劑量投與在整個給藥方案中當然將 150926.doc • 110- 201120042 為連續而非間歇性的。 化合物通常與關於預定投藥形式(亦即口服錠劑、膠 囊、驰劑、糖聚及其類似物）適當選擇且與習知醫藥規範 相-致之適合醫藥稀釋劑、賦形誠㈣（在本文中統稱 為醫藥載劑）混合投與。 舉例而言’對於以錠劑或膠囊形式經口投藥，活性藥物 組分可與以下口服、無毒、醫藥學上可接受之惰性載劑組 合：諸如乳糖、澱粉、蔗糖、葡萄糖、曱基纖維素、硬脂 酸鎮、破酸二妈、硫_、甘露糖醇、山梨糖醇及其類似 物，對於以液體形式經口投藥，口服藥物組分可與以下任 何口服、無毒、醫藥學上可接受之惰性載劑組合：諸如乙 醇、甘油、水及其類似物《此外，需要或必要時亦可將 適合黏合劑、潤滑劑、崩解劑及著色劑併入混合物中。適 合黏合劑包括澱粉；明膠；天然糖，諸如葡萄糖或^乳 糖；玉米甜味劑；天然及合成膠，諸如阿拉伯膠 (acacia)、黃蓍膠（tragacanth)或海藻酸鈉；羧甲基纖維 素，聚乙一醇’躐；及其類似物。此等劑型中所使用之濁 滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸 鈉、氣化鈉及其類似物。崩解劑包括（但不限於）澱粉、曱 基纖維素、瓊脂、膨潤土、三仙膠（xanthan gum)及其類似 物。 本發明化合物亦可以脂質體傳遞系統之形式來投與，諸 如單層小微脂粒、單層大微脂粒及多層微脂粒。脂質體可 由諸如膽固醇、硬脂醯胺或磷脂醯膽鹼之多種麟脂形成。 150926.doc -111 - 201120042 本發明化合物亦可與作為靶向藥物載體之可溶聚合物偶 合。該等聚合物可包括聚乙烯吡咯啶酮、哌喃共聚物、聚 羥丙基曱基丙烯醯胺-苯酚、聚羥乙基天冬醯胺苯酚或聚 環氧乙烷-經棕櫚醯基殘基取代之聚離胺酸。此外，本發 明化合物可與以下適用於達成藥物之控制釋放的一類生物 可降解聚合物偶合：例如聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸與聚 乙醇酸之共聚物、聚ε-已内酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、 聚縮醛、聚二氫哌喃、聚氰基丙烯酸酯，及水凝膠之交聯 或兩性嵌段共聚物。 適合投與之劑型（醫藥組合物）在每劑量單位中可含有約 1毫克至約100毫克之活性成分。在此等醫藥組合物中，活 性成分之存在量以組合物之總重量計一般為約〇 5_95重量 %。 明膠膠囊可含有活性成分及諸如乳糖、澱粉、纖維素衍 生物、硬脂酸鎂、硬脂酸及其類似物之粉末狀載劑。可使 用類似稀釋劑來製造壓製錠劑。.錠劑與膠囊皆可製造為持 續釋放產物以提供藥物在數小時時間内之連續釋放。壓製 錠劑可經糖衣包覆或薄膜包覆以掩蓋任何令人不快之味道 且保護錠劑免受大氣影響，或經腸溶衣包覆以使其在胃腸 道中選擇性崩解。 經口投與之液體劑型可含有著色劑及調味劑以增加患者 接受性。 —般而言，水、適合油、生理食鹽水、右旋糖（葡萄糖） 水溶液及相關糖溶液及二醇（諸如丙二醇或聚乙二醇）為用 150926.doc 201120042 於非經腸溶液之適合載劑。 u 、非岌腸投與之溶液可含有 活性成刀之水可溶性鹽、適合穩 从隨〇〇 又d 且必要時含有緩衝 1L:::之抗氧化劑(諸如亞硫酸氯納、亞硫酸 m為適合穩定劑。亦使用檸檬酸及盆趟及 ㈣A納鹽。另外，非經腸溶液可含有防腐劑，諸如氣化 本甲烴敍、對經基苯甲酸甲酯或對經基笨甲酸丙酿及氣丁 醇。 適合醫藥载劑描述於仏峋心心骑⑽^ ⑽⑽’ Mack Pubhshing Company(此領域中之標準參考 本文）中。 人 用於投與本發明化合物之代表性適用醫藥劑型可如下說 明： 膠囊 一可藉由各用1GG毫克粉末狀活性成分、15()毫克乳糖、％ 爱克纖維素及6毫克硬脂酸鎂填充標準兩片式硬明膠膠囊 來製備大量單位膠囊。 軟明膠膠囊 卜。製備活性成分於可消化油（諸如大豆油、棉籽油或橄 ^ ) Φ 'B A 从 之此&物’且糟助於正排量式泵將其注入明膠中 1形成含有100毫克活性成分之軟明膠膠囊。膠囊應經洗 蘇及乾燥。 錠劑 藉由習知程序製備錠劑，使得劑量單位為1 〇〇毫克活性 成分、0_2毫克膠狀二氧化矽、5毫克硬脂酸鎂、275毫克 1509264 •113- 201120042 微晶纖維素、11毫克澱粉及98.8毫克乳糖。可塗覆適當包 衣以增加適口性或延遲吸收。 注射劑 適合藉由注射投與之非經腸組合物可藉由在1〇體積％丙 二醇及水中攪拌丨.5 wt%活性成分來製備。應使用氣化鈉 使溶液等張並滅菌。 懸浮液 可製備水性懸浮液用於經口投與，使得各5 mL含有丨〇〇 mg細粉狀活性成分、2〇〇 mg羧甲基纖維素納、$ mg苯甲 酉文納1.0 g山梨糖醇溶液U.S.P.及0.025 mL香草精 (vanillin)。 若將本發明化合物與其他抗凝血劑組合，則例如每日劑 量可為每公斤患者體重約H1〇〇毫克之幻化合物及約丄 至7.5毫克之第二抗凝血劑。對於錠劑劑丨，本發明化合 物之存在量一般可為每劑量單位含約5至10毫克，且第二 抗凝血劑之存在量為每劑量單位含約丨至5毫克。 若將兩種或兩種以上前述第二治療劑與實例之化合物 起投與，則#於當組合投與時治療劑之加成或協同作用 八里每曰y里及典型劑型中各組分之量相對於藥劑單獨 與時之常用劑量一般可減少。 特別在以單一劑量單位形式提供時，在組合之活性成」 之間可能存在化學相互作用。m λ {立作用因此，當將本發明化合物』 f二治療劑組合於單-劑量單位中時，其經調配以使W 官將活性成分組合於單一劑量單位中，但使活性成分以 150926.doc •114* 201120042 的實體接觸最小（亦即減少）。舉例而言，一種活性成分可 經腸溶包衣包覆。藉由將一種活性成分用腸溶包衣包覆， 可能不僅使組合之活性成分之間的接觸最小，而且亦可能 控制一種此等組分在胃腸道中之釋放使得—種此等組分不 在胃中釋放而在腸中釋放。一種活性成分亦可用在整個胃 腸道中實現持續釋放且亦用以使組合之活性成分之間的實 體接觸最小的物質包覆。此外，持續釋放之組分可另外經 腸溶包衣包覆使得僅在腸中釋放此組分。又一方法將涉及 調配組合產物，其中一種組分經持續及/或腸溶釋放聚合 物包覆，且另一種組分亦經聚合物（諸如低黏度級羥丙基 甲基纖維素（HPMC)或此項技術中已知之其他適當材料）包 覆以進一步隔離活性組分。聚合物包衣用以形成與其他組 分之相互作用的另一障壁。 使本發明組合產物之組分（以單一劑型投與抑或以分開 形式但以相同方式同時投與）之間的接觸最小之此等以及 八他方式將在提供本發明後為熟習此項技術者所顯而易 知。 卜本文揭示之某些化合物可以其他化合物之代謝物 形式適用。因此’在一實施例中’化合物可以實質上純化 口物形式適用’該化合物亦可隨後併入醫藥組合物中；或 可=在投與彼化合物之前藥後產生之代謝物形式適用。在 貫&例中’化合物可以適用於治療本文所述之病症之代 謝物形式適用。 本文所用之「實質上純」意欲包括純度大於約90 150926.doc •115· 201120042 ，包括約 90。/〇、91〇/0、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、99%及 100%之化合物。 舉例而言，本文所揭示之化合物可為實質上純的，其純 度大於約90%(以重量計），其中其餘小於約i 〇%之物質包 含化合物之其他代謝物、化合物之前藥及/或由其製備產 生之反應雜質及/或處理雜質。 顯然’鑒於上述教示可能對本發明進行多種修改及變 化。因此應理解’在隨附申請專利範圍之範疇内，本發明 可以不同於本文中明確描述之其他方式實施。 【圖式簡單說明】 圖 1揭示 N-((lR，2S，5R)-5-(第三-丁基胺基）-2-((S)-3-(7-第 三-丁基〇比唑并[l，5-a][l，3,5]三畊-4-基胺基）-2-氧代吡咯 烧-1-基）環己基）乙醯胺之實驗及模擬粉末圖。 圖 2揭示 N-((lR，2S，5R)-5-(第三-丁基胺基）-2-((S)-3-(7-第 三-丁基。比唑并[l，5_a][l，3,5]三喷-4-基胺基）-2-氧代。比咯 炫-1·基）環己基）乙醯胺，游離鹼晶形N-1之差示掃描熱量 測定分析。 圖 3揭示 n_((1R，2S，5R)-5-(第三-丁 基胺基）-2-((S)-3-(7-第 三-丁基"比唑并[l，5-a][l,3,5]三畊-4-基胺基）-2-氧代吡咯 烧-1·基）環己基）乙醯胺，游離鹼晶形Ν·1之熱解重量分 析。 150926.doc •116-

Claims (1)

  1. 201120042 七、申請專利範圍： 1. 一種化合物，其具有下式：
    或其鹽。 2. 如請求項1之化合物，其為該化合物之晶形。 3. 如請求項2之晶形，其中該晶形包含N-1晶形。 4. 如請求項3之晶形，其中該晶形N-1呈實質上純之形式。 5. 如請求項3之晶形，其中該N-1晶形之特徵為實質上等於 以下之單位晶胞參數： 晶胞尺寸· a=7.3085(6) b=16.257(1) c=22.688(2) α°=90 β° = 90 γ° = 90 空間群卩之口山 150926.doc 201120042 分子/單位晶胞（z): 1 密度計算值g-cm·3 : 1.194 其中該晶體係在約-70°C之溫度下。 6.如請求項3之晶形，其特徵為實質上與，中所示—致之 粉末X射線繞射圖。 7·如請求項3之曰曰曰形，其特徵為實質上與圓2中戶斤示一致之 差示掃描熱量測定熱分析圖’其在高於約2〇rc下出現 吸熱轉變。 8.如請求項3之晶形 量分析曲線。 其特徵為與圖3中所示一致之熱解重 9. 一種醫藥組合物，其包含如請求項丨之化合物。 10. 如請求項9之醫藥組合物，其另外包含醫藥學上可接受 之載劑。 Π.如請求項9之醫藥組合物，其另外包含至少一種其他治 療劑。 12. —種調節CCR_2&CCR_5受體活性之方法，其包含向有 需要之患者投與治療有效量之如請求項丨之化合物。 13. —種治療病症之方法，其包含向有需要之患者投與治療 有效量之如請求項1之化合物，該病症係選自糖尿病' 肥胖症、代謝症候群、中風、神經痛、缺血性心肌症、 牛皮癬、高也壓、硬皮病、骨關節炎、動脈瘤、發熱、 心血管疾病、克羅恩氏病（Ce〇hn，s disease)、充血性心臟 衰竭、自體免疫性疾病、HIV感染、HIV相關性癡呆、 牛皮癖、特發性肺纖維化、移植物動脈硬化、物理或化 150926.doc 201120042 學誘導之腦外傷、發炎性腸病、肺泡炎、結腸炎、全身 性紅斑狼瘡、腎毒性血清腎炎、絲球體腎炎、哮喘、多 發性硬化症、動脈粥樣硬化、血管炎、易損斑塊、類風 濕性關節炎、再狹窄、靜脈新生内膜增生、透析移植物 新生内膜增生、動靜脈瘺内膜增生、器官移植、慢性同 種異體移植腎病變、癌症、靜脈新生内膜增生、透析移 植物新生内膜增生、及動靜脈瘺新生内膜增生。 14. 一種製備式I化合物或其鹽形式之方法，
    其包含： 1) 使式Ι-cc之腙化合物轉化為式I-bb之化合物；及 2) 使式I-bb之化合物與式卜⑽之化合物偶合；其中： R〗獨立地為氫或選自苄氧羰基、第三_丁氧基羰基、 苐基甲氧羰基、苄基及對，氧基苄基之胺保護基； Rs及R_9獨立地為氫或C16院基； 汉2 Ϊ為=〇 ; HET為視情況經取代之具有至少—個氮雜原子之3至 14員雜環基或雜芳基雙環；及 150926.doc 201120042 LG為-〇R16 ’其中1116為CN6烷基、苯基、具有一或 多個選自N、S或〇之原子之5至7員雜芳基，或3至7員 環烷基’其中全部均視情況經1至3個選自函素、 或Ci·6烧基之基團取代。 15. 一種製備 1^_((111，28,511)-5-(第三_丁基胺基）_2-((8)-3-(7_ 第三-丁基。比唑并[15-^1,3,5]三畊-4-基胺基）-2-氧代•比 略燒-1 -基）環己基）乙醯胺之方法，其包含以下流程中所 闡述之方法： 16.
    一種化合物，其具有下式··
    150926.doc
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