KR20120102052A - 케모카인 수용체 활성의 이중 조절제인 Ｎ-((1Ｒ,2Ｓ,5Ｒ)-5-(ｔｅｒｔ-부틸아미노)-2-((Ｓ)-3-(7-ｔｅｒｔ-부틸피라졸로〔1,5-ａ〕〔1,3,5〕트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드, 결정질 형태 및 방법 - Google Patents

케모카인 수용체 활성의 이중 조절제인 Ｎ-((1Ｒ,2Ｓ,5Ｒ)-5-(ｔｅｒｔ-부틸아미노)-2-((Ｓ)-3-(7-ｔｅｒｔ-부틸피라졸로〔1,5-ａ〕〔1,3,5〕트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드, 결정질 형태 및 방법 Download PDF

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퍼시 에이치. 카터
로버트 제이. 체르니
빅터 더블유. 로쏘
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Abstract

본 발명은 뜻밖의 이중 CCR-2 및 CCR-5 수용체 활성을 갖는 신규 길항제: N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염, 용매화물 또는 전구약물을 제공한다. 결정질 형태, 대사물, 그를 함유하는 제약 조성물, 및 염증성 질환, 알레르기성 질환, 자가면역 질환, 대사 질환, 암 및/또는 심혈관 질환 치료용 작용제로서의 그의 사용 방법이 또한 개시된다. 또한, 본 개시내용은 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드를 비롯한 본원에 제공된 화학식 I의 화합물의 제조 방법을 제공한다. 방법에 유용한 중간체인 화합물이 또한 본원에 제공된다.
<화학식 I>

Description

케모카인 수용체 활성의 이중 조절제인 Ｎ-((1Ｒ,2Ｓ,5Ｒ)-5-(ｔｅｒｔ-부틸아미노)-2-((Ｓ)-3-(7-ｔｅｒｔ-부틸피라졸로〔1,5-ａ〕〔1,3,5〕트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드, 결정질 형태 및 방법 {N-((1R,2S,5R)-5-(TERT-BUTYLAMINO)-2-((S)-3-(7-TERT-BUTYLPYRAZOLO[1,5-A][1,3,5]TRIAZIN-4-YLAMINO)-2-OXOPYRROLIDIN-1-YL)CYCLOHEXYL)ACETAMIDE, A DUAL MODULATOR OF CHEMOKINE RECEPTOR ACTIVITY, CRYSTALLINE FORMS AND PROCESSES}
본 발명은 뜻밖의 바람직한 이중 활성을 갖는 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 용매화물 또는 전구약물을 제공한다. 본 발명의 결정질 형태가 또한 제공된다. 염증성 질환, 알레르기성 질환, 자가면역 질환, 대사 질환, 암 및/또는 심혈관 질환의 치료를 위한 작용제로서 그를 함유하는 제약 조성물 및 그의 사용 방법이 또한 본 발명의 목적이다. 본 개시내용은 또한 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드를 비롯한 하기 화학식 I의 화합물의 제조 방법을 제공한다:
<화학식 I>
Figure pct00001
상기 식에서,
R1, R8, R9, R10 및
Figure pct00002
는 본원에 기재된 바와 같다. 방법의 유용한 중간체인 화합물이 또한 본원에 제공된다. 활성 화합물의 대사물, 제약 조성물, 및 그의 용도가 또한 본원에 제공된다.
관련 기술의 설명
케모카인은 분자량 6 내지 15 kDa의 화학주성 시토카인으로서, 매우 다양한 세포에 의해 방출되어 다른 세포 유형 중 대식세포, T 및 B 림프구, 호산구, 호염구 및 호중구를 유인하여 활성화시킨다 (문헌 [Charo at al., New Eng. J. Med., 354:610-621 (2006)]; [Luster, New Eng. J. Med., 338:436-445 (1998)]; 및 [Rollins, Blood, 90:909-928 (1997)]에서 검토됨). 아미노산 서열 중 처음 2개의 시스테인이 단일 아미노산에 의해 분리되어 있는지 (CXC) 또는 인접해 있는지 (CC)에 따라 케모카인에는 2개의 주요 부류, 즉 CXC 및 CC가 존재한다. CXC 케모카인, 예컨대 인터류킨-8 (IL-8), 호중구-활성화 단백질-2 (NAP-2) 및 흑색종 성장 자극 활성 단백질 (MGSA)은 호중구 및 T 림프구에 대해 1차적으로 화학주성인 반면, CC 케모카인, 예컨대 RANTES, MIP-1α, MIP-1β, 단핵구 화학주성 단백질 (MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-4 및 MCP-5) 및 에오탁신 (-1 및 -2)은, 다른 세포 유형 중, 대식세포, T 림프구, 호산구, 수지상 세포 및 호염기구에 대해 화학주성이다. 또한, 상기 주요 케모카인 하위패밀리 어디에도 속하지 않는 케모카인인 림포탁틴-1, 림포탁틴-2 (둘 모두 C 케모카인임) 및 프락탈카인 (CX3C 케모카인)이 존재한다.
케모카인은 "케모카인 수용체"로 칭해지는 G-단백질-커플링된 7개-막횡단-도메인 단백질의 패밀리에 속하는 특이적 세포-표면 수용체에 결합한다 (문헌 [Horuk, Trends Pharm. Sci., 15:159-165 (1994)]에서 검토됨). 케모카인 수용체가 이들의 동족 리간드에 결합함에 따라, 이들은 회합된 삼량체 G 단백질을 통해 세포내 신호를 전환하여, 다른 반응 중, 세포내 칼슘 농도의 신속한 증가, 세포 외형의 변화, 세포 부착 분자 발현의 증가, 탈과립, 및 세포 이동의 촉진을 일으킨다. 하기 특징적 패턴으로 CC 케모카인에 결합하거나 또는 그에 대해 반응하는 10개 이상의 인간 케모카인 수용체가 존재한다 (문헌 [Zlotnik et al., Immunity, 12:121 (2000)]에서 검토): CCR-1 (또는 "CKR-1" 또는 "CC-CKR-1") [MIP-1α, MCP-3, MCP-4, RANTES] (문헌 [Ben-Barruch et al., Cell, 72:415-425 (1993)] 및 [Luster, New Eng. J. Med., 338:436-445 (1998)]); CCR-2A 및 CCR-2B (또는 "CKR-2A"/"CKR-2B" 또는 "CC-CKR-2A"/"CC-CKR-2B") [MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-4, MCP-5] (문헌 [Charo et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91:2752-2756 (1994)] 및 [Luster, New Eng. J. Med., 338:436-445 (1998)]); CCR-3 (또는 "CKR-3" 또는 "CC-CKR-3") [에오탁신-1, 에오탁신-2, RANTES, MCP-3, MCP-4] (문헌 [Combadiere et al., J. Biol. Chem., 270:16491-16494 (1995)] 및 [Luster, New Eng. J. Med., 338:436-445 (1998)]); CCR-4 (또는 "CKR-4" 또는 "CC-CKR-4") [TARC, MDC] (문헌 [Power et al., J. Biol. Chem., 270:19495-19500 (1995)] 및 [Luster, New Eng. J. Med., 338:436-445 (1998)]); CCR-5 (또는 "CKR-5" 또는 "CC-CKR-5") [MIP-1α, RANTES, MIP-1β] (문헌 [Samson et al., Biochemistry, 35:3362-3367 (1996)]); CCR-6 (또는 "CKR-6" 또는 "CC-CKR-6") [LARC] (문헌 [Baba et al., J. Biol. Chem., 272:14893-14898 (1997)]); CCR-7 (또는 "CKR-7" 또는 "CC-CKR-7") [ELC] (문헌 [Yoshie et al., J. Leukoc. Biol., 62:634-644 (1997)]); CCR-8 (또는 "CKR-8" 또는 "CC-CKR-8") [I-309] (문헌 [Napolitano et al., J. Immunol., 157:2759-2763 (1996)]); CCR-10 (또는 "CKR-10" 또는 "CC-CKR-10") [MCP-1, MCP-3] (문헌 [Bonini et al., DNA Cell Biol., 16:1249-1256 (1997)]); 및 CCR-11 [MCP-1, MCP-2, 및 MCP-4] (문헌 [Schweickart et al., J. Biol. Chem., 275:9550 (2000)]).
포유동물 케모카인 수용체 이외에도, 포유동물 시토메갈로바이러스, 헤르페스바이러스 및 폭스바이러스가 감염된 세포에서 케모카인 수용체의 결합 특성을 갖는 단백질을 발현시키는 것으로 나타났다 (문헌 [Wells et al., Curr. Opin. Biotech., 8:741-748 (1997)]에서 검토). RANTES 및 MCP-3과 같은 인간 CC 케모카인은 이들 바이러스에 의해 코딩된 수용체를 통해 칼슘을 신속하게 동원할 수 있다. 수용체의 발현은 감염에 대한 정상 면역계 감시 및 반응을 파괴함으로써 감염을 허용할 수 있다. 또한, CXCR4, CCR-2, CCR3, CCR5 및 CCR8과 같은 인간 케모카인 수용체는 예를 들어 인간 면역결핍 바이러스 (HIV)와 함께 미생물에 의한 포유동물 세포의 감염에 대한 공동-수용체로서 작용할 수 있다.
케모카인 및 그의 동족 수용체는 염증성, 감염성 및 면역조절 장애 및 질환, 예를 들어 천식 및 알레르기성 질환, 뿐만 아니라 자가면역 병리상태, 예컨대 류마티스 관절염 및 다발성 경화증; 및 대사 질환, 예컨대 아테롬성동맥경화증과 당뇨병의 중요한 매개인자로서 관련되어 왔다 (문헌 [Charo et al., New Eng. J. Med., 354:610-621 (2006)]; [Gao, Z. et al., Chem. Rev., 103:3733 (2003)]; [Carter, P.H., Curr. Opin. Chem. Biol., 6:510 (2002)]; [Trivedi et al., Ann. Reports Med. Chem., 35:191 (2000)]; [Saunders et al., Drug Disc. Today, 4:80 (1999)]; [Premack et al., Nature Medicine, 2:1174 (1996)]에서 검토). 예를 들어, 케모카인 단핵구 화학유인물질-1 (MCP-1) 및 그의 수용체 CC 케모카인 수용체 2 (CCR-2)는 염증 부위에 백혈구를 유인한 후에 이들 세포를 활성화시키는데 중추적 역할을 수행한다. 케모카인 MCP-1이 CCR-2에 결합하는 경우, 이는 세포내 칼슘 농도의 신속한 증가, 세포 부착 분자 발현의 증가 및 백혈구 이동의 촉진을 유도한다. MCP-1/CCR-2 상호작용의 중요성은 유전자 변형 마우스로의 실험에 의해 입증되었다. MCP-1 -/- 마우스는 여러 상이한 유형의 면역 공격 후에 염증 부위 내로 단핵구를 동원할 수 없었다 (문헌 [Lu, B. et al., J. Exp. Med., 187:601 (1998)]). 마찬가지로, CCR-2 -/- 마우스는 다양한 외인성 작용제로 공격하는 경우에 단핵구를 동원하거나 인터페론-γ를 생성할 수 없었으며, 또한 CCR-2가 없는 마우스의 백혈구는 MCP-1에 대한 반응에서 이동하지 않았고 (문헌 [Boring, L. et al., J. Clin. Invest., 100:2552 (1997)]), 이에 따라 MCP-1/CCR-2 상호작용의 특이성이 입증되었다. 2 가지 다른 군에서 독립적으로 상이한 종의 CCR-2 -/- 마우스와 동등한 결과가 보고되었다 (문헌 [Kuziel, W.A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94:12053 (1997)] 및 [Kurihara, T. et al., J. Exp. Med., 186:1757 (1997)]). MCP-1 -/- 및 CCR-2 -/- 동물의 생존력 및 일반적으로 정상인 건강상태는 MCP-1/CCR-2 상호작용의 파괴가 생리학적 위기를 유도하지 않는다는 점에서 주목할 만하다. 종합하면, 이러한 데이터는 MCP-1/CCR-2의 작용을 차단하는 분자가 다수의 염증성 및 자가면역 장애를 치료하는 데 유용할 것이라는 결론을 유도한다 (문헌 [Feria, M. et al., Exp. Opin. Ther. Patents, 16:49 (2006)]; 및 [Dawson, J. et al., Exp. Opin. Ther. Targets, 7:35 (2003)]에서 검토). 이 가설은 이제 하기에 기재되는 바와 같이 다수의 상이한 동물 질환 모델에서 확인되었다.
MCP-1은 류마티스 관절염을 앓는 환자에서 상향조절되는 것으로 공지되어 있다 (문헌 [Koch, A. et al., J. Clin. Invest., 90:772-779 (1992)]). 또한, 몇몇 전임상 연구에서 류마티스 관절염을 치료하는데 있어 MCP-1/CCR-2 상호작용의 길항작용의 잠재적 치료 가치를 입증한 바 있다. MCP-1을 코딩하는 DNA 백신은 최근 래트에서 만성 폴리아주반트-유도된 관절염을 개선시키는 것으로 나타났다 (문헌 [Youssef, S. et al., J. Clin. Invest., 106:361 (2000)]). 마찬가지로, 질환 징후는 콜라겐-유도된 관절염 (문헌 [Ogata, H. et al., J. Pathol., 182:106 (1997)]) 또는 스트렙토코쿠스 세포벽-유도된 관절염 (문헌 [Schimmer, R.C. et al., J. Immunol., 160:1466 (1998)])을 앓는 래트에게 MCP-1에 대한 항체를 직접 투여하여 제어할 수 있다. 아마도 가장 유의하게는, MCP-1, MCP-1(9-76)의 펩티드 길항제가 관절염의 MRL-lpr 마우스 모델에서 (투여 시점에 따라) 질환 개시를 예방하고 질환 징후를 감소시키는 것으로 나타났다 (문헌 [Gong, J.-H. et al., J. Exp. Med., 186:131 (1997)]). 또한, 소분자 CCR-2 길항제의 투여가 관절염의 설치류 모델에서 임상 스코어를 감소시킨다는 것이 입증되었다 (문헌 [Brodmerkel, C.M. et al., J. Immunol., 175:5370 (2005)]; 및 U.S. 공보 번호 2006/0069123 (Xia, M. et al.)). 항-CCR-2 항체의 투여는 투여 시점에 따라 뮤린 CIA에 대해 다양한 효과를 가졌다 (문헌 [Bruhl, H. et al., J. Immunol., 172:890 (2004)]). 최근 CCR-2 -/- 마우스로의 연구는 CCR-2의 결실이 특정 실험 상황에서 설치류 관절염 모델을 악화시킬 수 있음을 시사하고 있다 (문헌 [Quinones, M.P. et al., J. Clin. Invest., 113:856 (2004)]; [Quinones, M.P. et al., J. Mol. Med., 84:503 (2006)]).
MCP-1은 아테롬성동맥경화성 병변에서 상향조절되는 것으로 알려져 있으며, MCP-1의 순환 수준은 치료제로의 치료를 통해 감소되는 것으로 나타났다 (문헌 [Rezaie-Majd, A. et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 22:1194-1199 (2002)]). 몇몇 핵심 연구는 아테롬성동맥경화증을 치료하는데 있어 MCP-1/CCR-2 상호작용의 길항작용의 잠재적 치료 가치를 입증하고 있다. 예를 들어, MCP-1 -/- 마우스가 LDL 수용체-결핍 마우스와 교배된 경우, 대동맥 지질 침착이 83% 감소되는 것이 관찰되었다 (문헌 [Gu, L. et al., Mol. Cell, 2:275 (1998)]). 유사하게, MCP-1이 이미 인간 아포지단백질 B를 과다발현하는 마우스로부터 유전적으로 제외된 경우, 생성된 마우스는 MCP-1 +/+ apoB 대조군 마우스에 비해 아테롬성동맥경화성 병변 형성으로부터 보호되었다 (문헌 [Gosling, J. et al., J. Clin. Invest., 103:773 (1999)]). 마찬가지로, CCR-2 -/- 마우스가 아포지단백질 E -/- 마우스와 교배된 경우, 아테롬성동맥경화성 병변의 발생이 유의하게 감소하는 것이 관찰되었다 (문헌 [Boring, L. et al., Nature, 394:894 (1998)]; [Dawson, T.C. et al., Atherosclerosis, 143:205 (1999)]). 최종적으로, 아포지단백질 E -/- 마우스에게 CCR-2의 펩티드 길항제를 코딩하는 유전자를 투여한 경우, 병변 크기가 감소하고 플라크 안정성이 증가하였다 (문헌 [Ni, W. et al., Circulation, 103:2096-2101 (2001)]). CCR-2 -/- 마우스로부터 ApoE3-라이덴 마우스로의 골수 이식은 조기 아테롬형성을 억제하였으나 (문헌 [Guo, J. et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 23:447 (2003)]), 진행된 병변에 대해서는 최소 효과를 가졌다 (문헌 [Guo, J. et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 25:1014 (2005)]).
제2형 당뇨병 환자는 전형적으로 질환의 중요 특징들 중 하나로 인슐린 저항성을 나타낸다. 인슐린 저항성은 또한 비만, 아테롬성동맥경화증, 고혈압 및 이상지혈증을 포함하는 "대사 증후군" 또는 "증후군 X"로 공지된 이상 징후의 분류와 관련된다 (문헌 [Eckel et al., Lancet, 365:1415 (2005)]에서 검토). 염증은 제2형 당뇨병 및 "증후군 X" 병리상태에서 질환 진행을 악화시키는데 소정의 역할을 수행하는 것으로 널리 인식되어 있다 (문헌 [Chen, H., Pharmacological Research, 53:469 (2006)]; [Neels et al., J. Clin. Invest., 116:33 (2006)]; [Danadona et al., Am. J. Cardiol., 90:27G-33G (2002)]; [Pickup et al., Diabetologia, 41:1241 (1998)]에서 검토). MCP-1은 비만-유도성 인슐린 저항성에서 소정의 역할을 하는 것으로 인식되어 있다. 배양물에서, 인간 전구지방세포는 MCP-1을 구성적으로 발현하였다 (문헌 [Gerhardt, Mol. Cell. Endocrinology, 175:81 (2001)]). CCR-2는 지방세포 상에서 발현되고; 시험관내에서 분화된 지방세포에 MCP-1을 첨가하면 인슐린-자극된 글루코스 흡수 및 몇몇 지방세포 형성 유전자 (LpL, 아디프신, GLU-4), aP2, β3-아드레날린 수용체 및 PPARγ의 발현을 감소시킨다 (문헌 [Sartipy, P. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96:6902 (1999)]). 제2형 당뇨병 환자의 순환 MCP-1의 수준은 비-당뇨병 대조군보다 높고 (문헌 [Nomura, S. et al., Clin. Exp. Immunol., 121:437 (2000)], 메트포르민 또는 티아졸리딘디온과 같은 항-당뇨병 요법으로의 치료에 의해 지방 조직으로부터의 MCP-1의 방출을 감소시킬 수 있다 (문헌 [Bruun, J.M. et al., J. Clin. Endocrinol. Metab., 90:2282 (2005)]). 마찬가지로, MCP-1은 또한 비만의 뮤린 실험적 모델에서 과다발현되고, 일차적으로 지방 조직에 의해 생성된다 (문헌 [Sartipy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 100:7265 (2003)]). 비만 마우스에서, MCP-1의 발현은 인슐린 저항성의 발생에 앞서서, 그리고 이와 동시에 일어난다 (문헌 [Xu, H. et al., J. Clin. Invest., 112:1821 (2003)]). 또 다른 연구는 MCP-1의 발현이 마우스의 생식선 주변 지방 조직에서의 체질량과 긍정적으로 상호관련이 있음을 보여준다 (문헌 [Weisberg et al., J. Clin. Invest., 112:1796 (2003)]). 이들 데이터에 부합하여, db/db 마우스에서의 인슐린 저항성의 발생은 MCP-1의 유전자 결실을 통해서나 또는 우세한 음성 펩티드의 유전자-유도된 발현에 의해 개선되었다 (문헌 [Kanda, H. et al., J. Clin. Invest., 116:1494 (2006)]). 또한, 논리적으로 반대로 입증될 수 있다: 지방 조직에서의 MCP-1의 과다발현은 인슐린 저항성을 촉진시킨다 (문헌 [Kamei, N. et al., J. Biol. Chem., 281:26602 (2006)]). MCP-1의 유전자 결실이 db/db 마우스에서의 인슐린 저항성에 영향을 미치지 않는다는 것을 보여주는 하나의 모순되는 결과도 나타났다 (문헌 [Chow, F.Y. et al., Diabetologia, 50:471 (2007)]). MCP-1에 대한 데이터에 부합하여, CCR-2 (MCP-1 수용체)를 사용하는 직접적인 연구는 이것이 비만 및 비만-유도된 인슐린 저항성의 형성에 소정의 역할을 수행한다는 것을 보여준다. 고지방 식이의 유지는 야생형 (문헌 [Tsou, C.L. et al., J. Clin. Invest., 117:902 (2007)]) 및 ApoE-/- 마우스 (문헌 [Tacke, F. et al., J. Clin. Invest., 117:185 (2007)]) 둘 모두에서 순환 CCR-2+ 염증성 단핵구의 수를 증가시켰다. CCR-2의 유전자 결실은 뮤린 지방 조직에서 활성화된 대식세포의 수를 감소시켰으나 (문헌 [Lumeng, C.N. et al., Diabetes, 56:16 (2007)]), M2 지방 대식세포의 집단에 영향을 미치지 않아 "부족" 상태를 유지하는 것으로 생각된다 (문헌 [Lumeng, C.N. et al., J. Clin. Invest., 117:175 (2007)]). CCR-2의 유전자 결실은 실험 조건에 따라 (문헌 [Chen, A. et al., Obes. Res., 13:1311 (2005)]), 식이-유도된 비만을 감소시키고, 식이-유도된 비만 모델에서 인슐린 민감성을 개선시켰다 (문헌 [Weisberg, S.P. et al., J. Clin. Invest., 116:115 (2006)]; PCT 공보 번호 WO 2006/013427 A2 (Cornelius, P. et al.)). 소분자 CCR-2 길항제의 투여가 또한 상기 동일한 모델에서 인슐린 민감성을 개선시켰다 (문헌 [Weisberg, S.P. et al., J. Clin. Invest., 116:115 (2006)]).
2 가지 연구에서 고혈압-유도된 혈관 염증, 재형성 및 비대증에 있어 CCR-2의 중요한 역할을 기재하고 있다 (문헌 [Bush, E. et al., Hypertension, 36:360 (2000)]; [Ishibashi, M. et al., Circ. Res., 94:1203 (2004)]).
MCP-1은 인간 다발성 경화증에서 상향조절되는 것으로 알려져 있으며, 인터페론 β-1b를 사용하는 효과적인 요법이 말초 혈액 단핵 세포에서의 MCP-1 발현을 감소시키는 것으로 나타났는데, 이는 MCP-1이 질환 진행에 소정의 역할을 수행한다는 것을 시사한다 (문헌 [Iarlori, C. et al., J. Neuroimmunol., 123:170-179 (2002)]). 다른 연구는 다발성 경화증을 치료하는데 있어 MCP-1/CCR-2 상호작용의 길항작용의 잠재적 치료 가치를 입증하였으며; 이들 연구는 모두 다발성 경화증에 대한 통상적인 동물 모델인 실험적 자가면역 뇌척수염 (EAE) 모델에서 입증되었다. EAE를 앓고 있는 동물에게 MCP-1에 대한 항체를 투여하면 질환의 재발이 유의하게 감소하였다 (문헌 [Kennedy, K.J. et al., J. Neuroimmunol., 92:98 (1998)]). 또한, 2 개의 보고에서 CCR-2 -/- 마우스가 EAE에 대해 내성을 나타냄을 보여주었다 (문헌 [Fife, B.T. et al., J. Exp. Med., 192:899 (2000)]; [Izikson, L. et al., J. Exp. Med., 192:1075 (2000)]). 후속 보고에서는 상이한 종의 마우스에서 CCR-2 결실의 효과를 조사하여 처음 관찰 결과를 확대시켰다 (문헌 [Gaupp, S. et al., Am. J. Pathol., 162:139 (2003)]). 특히, 소분자 CCR-2 길항제의 투여는 또한 C57BL/6 마우스에서 질환 진행을 둔화시켰다 (문헌 [Brodmerkel, C.M. et al., J. Immunol., 175:5370 (2005)]).
MCP-1은 폐 이식 후에 폐쇄성 세기관지염 증후군이 발생한 환자에서 상향조절되는 것으로 알려져 있다 (문헌 [Reynaud-Gaubert, M. et al., J. Heart Lung Transplant., 21:721-730 (2002)]; [Belperio, J. et al., J. Clin. Invest., 108:547-556 (2001)]). 폐쇄성 세기관지염 증후군의 뮤린 모델에서, MCP-1에 대한 항체의 투여는 기도 폐쇄의 약화를 유도하고; 이와 마찬가지로, CCR-2 -/- 마우스는 상기 동일한 모델에서 기도 폐쇄에 대한 내성을 나타낸다 (문헌 [Belperio, J. et al., J. Clin. Invest., 108:547-556 (2001)]). 이들 데이터는 MCP-1/CCR-2의 길항작용이 이식에 따른 기관의 거부반응을 치료하는데 유익할 수 있음을 시사한다. 또한, 연구는 MCP-1/CCR-2 축의 파괴가 섬 이식의 생존을 연장시킬 수 있음을 보여준다 (문헌 [Lee, I. et al., J. Immunol., 171:6929 (2003)]; [Abdi, R. et al., J. Immunol., 172:767 (2004)]). 래트 이식편 모델에서, CCR-2 및 MCP-1은 이식편 혈관병증이 발생한 이식편에서 상향조절되는 것으로 나타났다 (문헌 [Horiguchi, K. et al., J. Heart Lung Transplant., 21:1090 (2002)]). 다른 연구에서, 항-MCP-1 유전자 요법은 이식편 혈관병증을 약화시켰다 (문헌 [Saiura, A. et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 24:1886 (2004)]). 한 연구는 MCP-1의 차단에 의한 실험적 정맥 이식편 신생내막 형성의 억제를 기재하고 있다 (문헌 [Tatewaki, H. et al., J. Vasc. Surg., 45:1236 (2007)]).
다른 연구는 천식을 치료하는데 있어 MCP-1/CCR-2 상호작용의 길항작용의 잠재적 치료 가치를 입증하고 있다. 오브알부민-공격된 마우스에서 항체를 무력화시키면서 MCP-1을 제거하면 기관지 과반응성 및 염증이 현저하게 감소하였다 (문헌 [Gonzalo, J.-A. et al., J. Exp. Med., 188:157 (1998)]). 이는 MCP-1에 대한 항체의 투여를 통해 스키스토소마 만소니(Schistosoma mansoni) 알-공격된 마우스에서 알레르기성 기도 염증을 감소시킬 수 있음을 입증한다 (문헌 [Lukacs, N.W. et al., J. Immunol., 158:4398 (1997)]). 이에 부합하여, MCP-1 -/- 마우스는 스키스토소마 만소니 알로의 공격에 대해 감소된 반응을 나타내었다 (문헌 [Lu, B. et al., J. Exp. Med., 187:601 (1998)]).
다른 연구는 신장 질환을 치료하는데 있어 MCP-1/CCR-2 상호작용의 길항작용의 잠재적 치료 가치를 입증하고 있다. 사구체신염의 뮤린 모델에서 MCP-1에 대한 항체를 투여하면 사구체 반월형 형성 및 제I형 콜라겐의 침착이 현저하게 감소하였다 (문헌 [Lloyd, C.M. et al., J. Exp. Med., 185:1371 (1997)]). 또한, 유도된 신독성 혈청 신염을 앓고 있는 MCP-1 -/- 마우스는 이들의 MCP-1 +/+ 상대보다 유의하게 적은 관상 손상을 나타내었다 (문헌 [Tesch, G.H. et al., J. Clin. Invest., 103:73 (1999)]).
몇몇 연구는 전신 홍반성 루푸스를 치료하는데 있어 MCP-1/CCR-2 상호작용의 길항작용의 잠재적 치료 가치를 입증하고 있다. CCR-2 -/- 마우스는 전신 홍반성 루푸스의 뮤린 모델에서 이들의 WT 상대에 비해 생존이 연장되고 신장 질환이 감소되는 것으로 나타났다 (문헌 [Perez de Lema, G. et al., J. Am. Soc. Neph., 16:3592 (2005)]). 이들 데이터는 루푸스의 설치류 모델에서의 MCP-1의 유전적 삭제 (문헌 [Shimizu, S. et al., Rheumatology (Oxford), 43:1121 (2004)]; [Tesch, G.H. et al., J. Exp. Med., 190:1813 (1999)]) 또는 CCR-2의 펩티드 길항제의 투여 (문헌 [Hasegawa, H. et al., Arthritis Rheum., 48:2555 (2003)])에 대한 최근 연구에서 발견된 질환-개질 활성과 일치한다.
질환에 걸리지 않은 회장에 비해 크론병 환자의 소장에서 CCR-2+ 고유판 림프구가 현저하게 30-배 증가하는 것이 관찰되었다 (문헌 [Connor, S.J. et al., Gut, 53:1287 (2004)]). 또한, 대조군에 비해 활동성 크론병 환자에서 순환 CCR-2+/CD14+/CD56+ 단핵구의 서브세트가 확장되는 것에 유의한다. 몇몇 설치류 연구는 크론병/결장염을 치료하는데 있어 MCP-1/CCR-2 상호작용의 길항작용의 잠재적 치료 가치를 입증하였다. CCR-2 -/- 마우스는 덱스트란 황산나트륨-유도된 결장염의 영향으로부터 보호되었다 (문헌 [Andres, P.G. et al., J. Immunol., 164:6303 (2000)]). CCR-2, CCR-5 및 CXCR3의 소분자 길항제의 투여 (각각, 뮤린 결합 친화도 = 24, 236 및 369 nM)는 또한 덱스트란 황산나트륨-유도된 결장염에 대해 보호된다 (문헌 [Tokuyama, H. et al., Int. Immunol., 17:1023 (2005)]). 최종적으로, MCP-1 -/- 마우스는 결장염의 합텐-유도된 모델에서 실질적으로 감소된 결장 손상을 나타내었다 (둘 모두 거시적이며 조직학적임) (문헌 [Khan, W.I. et al., Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol., 291:G803 (2006)]).
두 보고는 염증성 장 질환을 앓는 환자의 장 상피 세포 및 장 점막에서의 MCP-1의 과다발현을 기재하였다 (문헌 [Reinecker, H.C. et al., Gastroenterology, 108:40 (1995)], 및 [Grimm, M.C. et al., J. Leukoc. Biol., 59:804 (1996)]).
한 연구는 경피증 (전신 경화증)이 있는 MCP-1 유전자에서의 프로모터 다형성의 연관성을 기재하고 있다 (문헌 [Karrer, S. et al., J. Invest. Dermatol., 124:92 (2005)]). 조직 섬유증의 관련 모델에서, CCR-2/MCP-1 축의 억제는 피부 (문헌 [Yamamoto, T. et al., J. Invest. Dermatol., 121:510 (2003)]; [Ferreira, A.M. et al., J. Invest. Dermatol., 126:1900 (2006)]), 폐 (문헌 [Okuma, T. et al., J. Pathol., 204:594 (2004)]; [Gharaee-Kermani, M. et al., Cytokine, 24:266 (2003)]), 신장 (문헌 [Kitagawa, K. et al., Am. J. Pathol., 165:237 (2004)]; [Wada, T. et al., J. Am. Soc. Nephrol., 15:940 (2004)]), 심장 (문헌 [Hayashidani, S. et al., Circulation, 108:2134 (2003)]) 및 간 (문헌 [Tsuruta, S. et al., Int. J. Mol. Med., 14:837 (2004)])에서 섬유증을 감소시켰다.
한 연구는 폐포염을 치료하는데 있어 MCP-1/CCR-2 상호작용의 길항작용의 잠재적 치료 가치를 입증하고 있다. IgA 면역 복합체 폐 손상이 있는 래트를 래트 MCP-1 (JE)에 대해 생성된 항체로 정맥내 치료하는 경우, 폐포염의 징후는 부분적으로 완화되었다 (문헌 [Jones, M.L. et al., J. Immunol., 149:2147 (1992)]).
여러 연구는 암을 치료함에 있어 MCP-1/CCR-2 상호작용의 길항작용의 잠재적 치료 가치를 보여주었다 (문헌 [Craig, M.J. et al., Cancer Metastasis Rev., 25:611 (2006)]; [Conti, I. et al., Seminars in Cancer Biology, 14:149 (2004)]; [Giles, R. et al., Curr. Cancer Drug Targets, 6:659 (2006)]에서 검토). 인간 유방 암종 세포를 보유하는 면역결핍 마우스를 항-MCP-1 항체로 치료한 경우, 폐 미세전이의 억제 및 생존의 증가가 관찰되었다 (문헌 [Salcedo, R. et al., Blood, 96:34-40 (2000)]). 인간 임상 종양 표본 사용시, CCR-2 발현은 전립선암 진행과 관련된다 (문헌 [Lu, Y. et al., J. Cell. Biochem., 101:676 (2007)]). 시험관내에서, MCP-1 발현은 전립선암 세포 성장 및 침입을 매개하는 것으로 나타났으며 (문헌 [Lu, Y. et al., Prostate, 66:1311 (2006)]); 또한 전립선암 세포에 의해 발현된 MCP-1은 골 재흡수를 위한 인간 골수 전구세포를 유도하였다 (문헌 [Lu, Y. et al., Cancer Res., 67:3646 (2007)]).
다수의 연구가 재협착을 치료하는데 있어 MCP-1/CCR-2 상호작용의 길항작용의 잠재적 치료 가치를 기재하고 있다. 인간에서, MCP-1 수준은 재협착에 대한 위험과 직접적으로 서로 관련이 있다 (문헌 [Cipollone, F. et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 21:327 (2001)]). CCR-2 또는 MCP-1이 결핍된 마우스에서는 동맥 손상 이후에 (야생형 한배 자손에 비해) 혈관내막 영역 및 내막/중막 비의 감소가 나타났다 (문헌 [Roque, M. et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 22:554 (2002)]; [Schober, A. et al., Circ. Res., 95:1125 (2004)]; [Kim, W.J. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 310:936 (2003)]). 마우스에서, 골격근에서의 MCP-1의 우세한 음성 억제제의 형질감염 (문헌 [Egashira, K. et al., Circ. Res., 90:1167 (2002)])이 또한 동맥 손상 이후에 혈관내막 증식증을 감소시켰다. 무력화 항체를 사용하는 CCR-2의 차단은 영장류에서의 스텐팅 이후에 신생내막 증식증을 감소시켰다 (문헌 [Horvath, C. et al., Circ. Res., 90:488 (2002)]).
2개의 보고서가 유도된 뇌 외상이 있는 래트에서 MCP-1의 과다발현을 기재하고 있다 (문헌 [King, J.S. et al., J. Neuroimmunol., 56:127 (1994)] 및 [Berman, J.W. et al., J. Immunol., 156:3017 (1996)]). 또한, 연구는 CCR-2 -/- 마우스 (문헌 [Dimitrijevic, O.B. et al., Stroke, 38:1345 (2007)]) 및 MCP-1 -/- 마우스 (문헌 [Hughes, P.M. et al., J. Cereb. Blood Flow Metab., 22:308 (2002)])가 둘 모두 허혈/재관류 손상으로부터 부분적으로 보호된다는 것을 보여준다.
단핵구/대식세포는 신경병증성 통증의 발병에 중요한 역할을 수행하는 것으로 알려져 있다 (문헌 [Liu, T. et al., Pain, 86:25 (2000)]). 이러한 개념에 부합하여, 최근 염증성 및 신경병증성 통증 둘 모두의 치료에 있어서의 CCR-2에 대한 잠재적 역할이 기재되었다. CCR-2 -/- 마우스는 이들의 WT 상대에 비해, 발바닥내 포르말린 주사 이후의 감소된 통증 행동 및 발바닥내 CFA 주사 이후의 약간 감소된 기계적 이질통을 비롯한, 염증성 통증에 대해 변형된 반응을 나타내었다 (문헌 [Abbadie, C. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 100:7947 (2003)]). 또한, CCR-2 -/- 마우스는 좌골 신경 손상 이후에 유의한 기계적 이질통을 나타내지 않았다. 마찬가지로, 소분자 CCR-2 길항제는 경구 투여 후에 기계적 이질통을 손상 전 수준의 약 80%로 감소시켰다 (PCT 공보 번호 WO 2004/110376 (Abbadie, C. et al.)).
한 연구는 허혈성 심근병증에 있어 MCP-1의 중요한 역할을 기재하고 있다 (문헌 [Frangogiannis, N.G. et al., Circulation, 115:584 (2007)]). 또 다른 연구는 MCP-1의 억제에 따른 실험적 심부전의 약화를 기재하고 있다 (문헌 [Hayashidani, S. et al., Circulation, 108:2134 (2003)]).
다른 연구는 MCP-1이 상기 언급되지 않은 다양한 질환-상태에서 과다발현된다는 증거를 제공한다. 이러한 보고는 MCP-1 길항제가 상기 질환에 대한 유용한 요법이 될 수 있다는 상관된 증거를 제공한다. 다른 연구는 설치류 심장 동종이식편에서의 MCP-1의 과다발현을 입증하였으며, 이는 이식 동맥경화증의 발병에 있어서의 MCP-1에 대한 역할을 시사한다 (문헌 [Russell, M.E. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6086 (1993)]). MCP-1의 과다발현은 특발성 폐 섬유증 환자의 폐 내피 세포에서 나타났다 (문헌 [Antoniades, H.N. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:5371 (1992)]). 유사하게, MCP-1의 과다발현은 건선 환자의 피부에서 나타났으며 (문헌 [Deleuran, M. et al., J. Dermatol. Sci., 13:228 (1996)] 및 [Gillitzer, R. et al., J. Invest. Dermatol., 101:127 (1993)]); CCR-2+ 세포의 우세성과의 상관적 발견이 또한 보고되었다 (문헌 [Vestergaard, C. et al., Acta Derm. Venerol., 84:353 (2004)]). 마지막으로, 최근 보고는 MCP-1이 HIV-1-관련 치매 환자의 뇌 및 뇌척수액에서 과다발현된다는 것을 보여주고 있다 (PCT 공보 번호 WO 99/46991 (Garzino-Demo, A.)).
또한, CCR-2 다형성은 적어도 하나의 하위세트의 환자에서 사르코이드증과 관련이 있는 것으로 밝혀졌다 (문헌 [Spagnolo, P. et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med., 168:1162 (2003)]).
또한, CCR-2가 HIV의 몇몇 균주에 대한 공-수용체로서 포함됨을 유의해야 한다 (문헌 [Doranz, B.J. et al., Cell, 85:1149 (1996)]). 또한, HIV 공-수용체로서의 CCR-2의 사용이 질환 진행과 서로 관련될 수 있는 것으로 결정되었다 (문헌 [Connor, R.I. et al., J. Exp. Med., 185:621 (1997)]). 이러한 발견은 CCR-2 돌연변이 CCR-2-64I의 존재가 인간 집단에서 HIV의 개시 지연과 서로 긍정적으로 관련되어 있다는 최근의 발견에 부합한다 (문헌 [Smith, M.W. et al., Science, 277:959 (1997)]). MCP-1이 이러한 과정에 관련되지는 않으나, CCR-2에 대한 결합을 통해 작용하는 MCP-1 길항제가 HIV-감염 환자에서 AIDS에 대한 질환 진행을 지연시키는데 유익한 치료 효과를 나타낼 수 있을 것이다.
CCR-2가 또한 인간 케모카인 MCP-2, MCP-3 및 MCP-4에 대한 수용체임에 유의해야 한다 (문헌 [Luster, New Eng. J. Med., 338:436-445 (1998)]). 본원에 기재된 신규 화학식 I의 화합물은 CCR-2 수용체로의 결합에 의해 MCP-1에 대해 길항작용을 하므로, 이들 화학식 I의 화합물은 또한 CCR-2에 의해 매개되는 MCP-2, MCP-3 및 MCP-4의 작용의 효과적인 길항제일 수 있다. 따라서, 본원에서 "MCP-1의 길항작용"이 언급된 경우, 이는 "CCR-2의 케모카인 자극의 길항작용"과 동등한 의미로 간주된다.
따라서, 케모카인 활성을 조절하는 화합물은 염증성 질환, 알레르기성 질환, 자가면역 질환, 대사 질환, 암 및/또는 심혈관 질환을 치료하는데 있어 광범위한 유용성을 입증할 수 있었다. PCT 공보 번호 WO 2005/021500 A1 (본원에 참조로 포함되며, 본 출원인에게 양도됨), WO 2008/014381 A1, WO 2008/014360 A1 및 WO 2008/014361 A1에는 CCR-2를 통해 MCP-1, MCP-2, MCP-3 및 MCP-4 활성을 조절하는 화합물이 개시되어 있다. 또한, 이 참고문헌은 보호기의 도입 및 후속의 제거를 포함하는 다단계 합성을 포함하는 이들 화합물의 다양한 제조 방법을 개시하고 있다.
공지된 케모카인 조절제에 비해 개선된 약리학적 특징을 갖는 신규 화합물을 발견하는 것이 바람직하다. 예를 들어, CCR-2 단독에 대한 선택성, CCR-5 대비 CCR-2에 대해 우세한 선택성, CCR-2 대비 CCR-5에 대해 우세한 선택성, 또는 다른 G 단백질-커플링된 수용체 (즉, 5HT2A 수용체)와 비교시 등가효능 이중 CCR-2/5 억제 활성을 갖는 신규 화합물을 발견하는 것이 바람직하다. 또한, 등가효능 이중 CCR-2/5 억제 활성, 및 하기 카테고리 중 하나 이상의 유리한 특징을 갖는 화합물을 발견하는 것이 바람직하다:
(a) 제약 특성 (즉, 용해도, 투과성, 지속 방출 제제에 대한 적응성);
(b) 투여량 요건 (예를 들어, 보다 낮은 투여량 및/또는 일일 1회 투여);
(c) 혈중 농도 최고-대-최저(peak-to-trough) 특징을 감소시키는 요인 (즉, 제거율 및/또는 분포 부피);
(d) 수용체에서의 활성 약물의 농도를 증가시키는 요인 (즉, 단백질 결합, 분포 부피);
(e) 임상 약물-약물 상호작용에 대한 책임을 감소시키는 요인 (시토크롬 P450 효소 억제 또는 유도, 예컨대 CYP 2D6 억제, 문헌 [Dresser, G.K. et al., Clin. Pharmacokinet., 38:41-57 (2000)] (이로써 본원에 참조로 포함됨) 참조); 및
(f) 유해 부작용에 대한 잠재성을 감소시키는 요인 (예를 들어, G 단백질-커플링된 수용체보다 뛰어난 약리학상 선택성, 잠재적 화학적 또는 대사적 반응성, 제한된 CNS 침투, 이온-채널 선택성). 특히, 상기 언급된 약리학적 특징의 바람직한 조합을 갖는 화합물을 발견하는 것이 바람직하다.
또한, 이러한 화합물을 제조하는 새롭고/거나 개선된 방법을 제공하는 것이 당업계에서 바람직하다. 이러한 방법은, 비제한적으로, a) 보다 대규모 생산, 예컨대 파일럿 플랜트 또는 제조 규모에 대한 용이한 적용; b) 중간체 및/또는 최종 화합물의 순도 (키랄 순도 포함), 안정성 및/또는 취급 용이성을 개선할 수 있는 공정 단계 및/또는 기술; 및/또는 c) 더 적은 공정 단계를 특징으로 할 수 있다.
본 발명은 뜻밖의 등가효능 이중 CCR-2 및 CCR-5 수용체 억제 활성을 갖는 신규 길항제: N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 용매화물 또는 전구약물을 제공한다. 또한 본 발명은 등가효능 이중 CCR-2/5 활성 및 바람직한 약리학적 특징의 신규한 뜻밖의 조합을 제공한다. 본 발명의 결정질 및 대사물 형태가 또한 제공된다. 그를 함유하는 제약 조성물, 및 염증성 질환, 알레르기성 질환, 자가면역 질환, 대사 질환, 암 및/또는 심혈관 질환 치료용 작용제로서의 그의 사용 방법이 또한 본 발명의 목적이다. 본 개시내용은 또한 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드를 비롯한 하기 화학식 I의 화합물의 제조 방법을 제공한다.
<화학식 I>
Figure pct00003
상기 식에서, R1, R8, R9, R10 및
Figure pct00004
는 본원에 기재된 바와 같다. 방법에 유용한 중간체인 화합물이 또한 본원에 제공된다.
본 개시내용은 또한 염증성 질환, 알레르기성 질환, 자가면역 질환, 대사 질환, 암 및/또는 심혈관 질환 치료용 의약의 제조를 위한, N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드, N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-(2-히드록시-1,1-디메틸-에틸)피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 용매화물 또는 전구약물의 용도를 제공한다.
본 개시내용은 또한 활성 화합물의 대사물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 전구약물, 그의 제약 조성물, 및 염증성 질환, 알레르기성 질환, 자가면역 질환, 대사 질환, 암 및/또는 심혈관 질환, 특히 당뇨병, 다발성 경화증, 크론병 및/또는 아테롬성동맥경화증의 치료에서의 상기 대사물의 사용 방법을 제공한다.
따라서, 본원에서는 뜻밖의 바람직한 약리학적 특징의 조합을 갖는 케모카인 활성의 신규 조절제 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 전구약물을 개시한다.
본 개시내용은 제약상 허용되는 담체 및 치료 유효량의 하나 이상의 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 전구약물 형태를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 또한 염증성 질환, 알레르기성 질환, 자가면역 질환, 대사 질환, 암 및/또는 심혈관 질환, 특히 당뇨병, 다발성 경화증, 크론병 및/또는 아테롬성동맥경화증의 치료를 필요로 하는 숙주에게 치료 유효량의 하나 이상의 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 전구약물 형태를 투여하는 것을 포함하는, 염증성 질환, 알레르기성 질환, 자가면역 질환, 대사 질환, 암 및/또는 심혈관 질환, 특히 당뇨병, 다발성 경화증, 크론병 및/또는 아테롬성동맥경화증의 치료 방법을 제공한다.
본 개시내용은 본원에 개시된 화합물 및 그에 유용한 중간체의 제조 방법을 제공한다.
본 개시내용은 요법에서의 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다.
본 개시내용은 염증성 질환, 알레르기성 질환, 자가면역 질환, 대사 질환, 암 및/또는 심혈관 질환 치료용 의약의 제조를 위한 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다.
도 1은 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드의 실험적 및 모의 분말 패턴을 개시한다.
도 2는 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드, 유리 염기 형태 N-1의 시차 주사 열량측정법 분석을 개시한다.
도 3은 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드, 유리 염기 형태 N-1의 열중량 분석을 개시한다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 뜻밖의 등가효능 이중 CCR-2 및 CCR-5 수용체 활성을 갖는 신규 길항제: N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 용매화물 또는 전구약물을 제공한다. 추가로, 본 발명은 바람직한 약리학적 특징의 신규 조합을 제공한다. 본 발명의 결정질 형태 및 대사물이 또한 제공된다. 그를 함유하는 제약 조성물, 및 염증성 질환, 알레르기성 질환, 자가면역 질환, 대사 질환, 암 및/또는 심혈관 질환 치료용 작용제로서의 그의 사용 방법이 또한 본 발명의 목적이다. 본 개시내용은 또한 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드를 비롯한 하기 화학식 I의 화합물의 제조 방법을 제공한다.
<화학식 I>
Figure pct00005
상기 식에서, R1, R8, R9, R10 및
Figure pct00006
는 본원에 기재된 바와 같다. 방법에 유용한 중간체인 화합물이 또한 본원에 제공된다.
N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드는 뜻밖에 등가효능 이중 CCR-2/5 수용체 억제 활성을 나타낸다.
추가로, N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드는 등가효능 이중 CCR-2/5 수용체 억제 활성, 및 놀랍도록 높은 정도의 경구 생체이용률 및 효능이 높고 우수한 안전성 기준을 갖는다는 징조를 비롯한 약리학적 특징의 바람직한 조합을 나타낸다.
공지된 케모카인 수용체의 조절제, 예컨대 PCT 공보 번호 WO 2004/071460 A1 및 WO 2005/021500 A1 (2007년 1월 16일에 공개되고 본 출원인에게 양도된 미국 특허 번호 7,163,937)에 개시된 것들은 이들의 CCR-2 또는 CCR-5-결합 능력 (효능의 척도)에 의한 측정시에 충분한 효능을 나타내지 않고/거나, hERG 및 Na+ 이온 채널 연구에 의한 측정시에 이온 채널 선택성에 의해 나타난 바와 같이 안전성에 대한 적절한 기준이 결여되어 있다.
케모카인 수용체의 다른 공지된 조절제, 예컨대 PCT 공보 번호 WO 2008/014381 A1, WO 2008/014360 A1 및 WO 2008/014361 A1에 개시된 것들은 CCR-2 수용체 활성의 길항제 또는 부분적 효능제/길항제로서 선택적이다. 그러나, 그의 CCR-2 및 CCR-5-결합 능력에 의한 측정시에, 이러한 공지된 조절제는 CCR-2 활성을 우세하게 나타내며, 등가효능 이중 길항제가 아니다.
케모카인 수용체의 다른 공지된 조절제, 예컨대 문헌 [Carter et al. (American Chemical Society, August 17, 2008)]에 개시된 것들은 hERG 및 Na+ 이온 채널 연구에 의한 측정시에 이온 채널 선택성에 의해 나타난 바와 같이 이중 CCR-2/5 조절제이지만, 안전성에 대한 적절한 기준이 결여되어 있다.
대조적으로, 본원에서 하기 섹션 표제 "비교 약리학적 특징"에 제시한 데이터에 의해 설명된 바와 같이, N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드는 놀랍게도 등가효능 CCR-5 및 CCR-2 결합 능력을 나타낸다. 또한 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드는 놀랍게도 높은 정도의 막 투과성을 나타내면서, 우수한 이온 채널 선택성과 함께 등가효능 CCR-2/5 이중 결합 능력을 여전히 유지한다.
따라서, 본 발명은 등가효능 CCR-2 및 CCR-5 결합 능력을 갖는 신규 케모카인 조절제를 제공하고, 염증성 질환, 알레르기성 질환, 자가면역 질환, 대사 질환, 암 및/또는 심혈관 질환을 치료하는데 유용할 것으로 예상되는 약리학적 특징을 개선시킨다.
실시양태
한 실시양태에서, 본 개시내용은 하기 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염에 관한 것이다.
Figure pct00007
또 다른 실시양태는 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드의 결정질 형태이다.
또 다른 실시양태는 N-1 및/또는 P-1 형태를 포함하는 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드의 결정질 형태이다.
또 다른 실시양태는 N-1 형태를 포함하는 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드의 결정질 형태이다.
또 다른 실시양태는 N-1 또는 P-1 형태를 실질적으로 순수한 형태로 포함하는 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드의 결정질 형태이다.
또 다른 실시양태는 N-1 형태를 실질적으로 순수한 형태로 포함하는 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드의 결정질 형태이다.
또 다른 실시양태는 다음과 실질적으로 동일한 단위 셀 파라미터를 특징으로 하며, 결정이 약 -70℃의 온도에 있는 것인 N-1 형태이다:
셀 치수:
a = 7.3085(6)
b = 16.257(1)
c = 22.688(2)
α°= 90
β°= 90
γ°= 90
공간군 P212121
분자/단위 셀 (Z): 1
밀도, 계산치 g-cm-3: 1.194.
또 다른 실시양태는 실질적으로 도 1에 따른 분말 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 (또는 갖는) N-2 형태이다.
또 다른 실시양태는 실질적으로 도 2에 나타낸 것에 따른 시차 주사 열량측정법 온도기록도를 특징으로 하는 (또는 갖는), 약 205℃ 초과의 흡열 전이를 갖는 N-2 형태이다.
또 다른 실시양태는 도 3에 나타낸 것에 따른 열 중량 분석 곡선을 특징으로 한다 (또는 갖는다).
또 다른 실시양태는 표 1에 나타낸 단위 셀 파라미터 및/또는 실질적으로 도 1에 따른 분말 X선 회절 패턴을 특징으로 하는, 형태 N-1을 포함하는, N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드의 결정질 형태이다.
또 다른 실시양태는 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제약 조성물이다.
또 다른 실시양태는 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드, 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물이다.
또 다른 실시양태는 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드, 그의 제약상 허용되는 염, 및 하나 이상의 추가의 치료제를 포함하는 제약 조성물이다.
또 다른 실시양태는 케모카인 또는 케모카인 수용체 활성의 조절을 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 케모카인 또는 케모카인 수용체 활성의 조절 방법이다.
또 다른 실시양태는 CCR-2 및 CCR-5 수용체 활성의 조절을 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, CCR-2 및 CCR-5 수용체 활성의 조절 방법이다.
또 다른 실시양태는 CCR-2 및 CCR-5 수용체에 의해 매개되는 MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-4, MCP-5, MIP-1a, MIP-1b 및 RANTES 활성의 조절을 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, CCR-2 및 CCR-5 수용체에 의해 매개되는 MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-4, MCP-5, MIP-1a, MIP-1b 및 RANTES 활성의 조절 방법이다.
또 다른 실시양태는 MCP-1 활성의 조절을 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, MCP-1 활성의 조절 방법이다.
또 다른 실시양태는 당뇨병, 비만, 대사 증후군, 졸중, 신경병증성 통증, 허혈성 심근병증, 건선, 고혈압, 경피증, 골관절염, 동맥류, 열, 심혈관 질환, 크론병, 울혈성 심부전, 자가면역 질환, HIV-감염, HIV-관련 치매, 건선, 특발성 폐 섬유증, 이식 동맥경화증, 물리적- 또는 화학적-유도성 뇌 외상, 염증성 장 질환, 폐포염, 결장염, 전신 홍반성 루푸스, 신독성 혈청 신염, 사구체신염, 천식, 다발성 경화증, 아테롬성동맥경화증, 혈관염, 취약성 플라크, 류마티스 관절염, 재협착, 정맥 신생내막 증식증, 투석-이식편 신생내막 증식증, 동정맥 단락 내막 증식증, 기관 이식, 만성 동종이식편 신병증 및 암으로부터 선택된 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 장애의 치료 방법이다.
또 다른 실시양태는 당뇨병, 비만, 크론병, 건선, 특발성 폐 섬유증, 이식 동맥경화증, 물리적- 또는 화학적-유도성 뇌 외상, 염증성 장 질환, 폐포염, 결장염, 전신 홍반성 루푸스, 신독성 혈청 신염, 사구체신염, 천식, 다발성 경화증, 아테롬성동맥경화증, 및 류마티스 관절염, 재협착, 기관 이식, 암, 정맥 신생내막 증식증, 투석-이식편 신생내막 증식증 및 동정맥 단락 신생내막 증식증으로부터 선택된 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 장애의 치료 방법이다.
또 다른 실시양태는 당뇨병, 비만, 크론병, 전신 홍반성 루푸스, 사구체신염, 다발성 경화증, 아테롬성동맥경화증, 재협착, 기관 이식, 정맥 신생내막 증식증, 투석-이식편 신생내막 증식증 및 동정맥 단락 신생내막 증식증으로부터 선택된 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 장애의 치료 방법이다.
또 다른 실시양태는 다발성 경화증, 아테롬성동맥경화증, 크론병, 당뇨병, 정맥 신생내막 증식증, 투석-이식편 신생내막 증식증 및 동정맥 단락 신생내막 증식증으로부터 선택된 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 장애의 치료 방법이다.
또 다른 실시양태는 재협착, 기관 이식, 암, 정맥 신생내막 증식증, 투석-이식편 신생내막 증식증 및 동정맥 단락 신생내막 증식증으로부터 선택된 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 장애의 치료 방법이다.
또 다른 실시양태는 당뇨병의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 당뇨병의 치료 방법이다.
또 다른 실시양태는 크론병의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 크론병의 치료 방법이다.
또 다른 실시양태는 다발성 경화증의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 다발성 경화증의 치료 방법이다.
또 다른 실시양태는 아테롬성동맥경화증의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 아테롬성동맥경화증의 치료 방법이다.
또 다른 실시양태는 재협착의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 재협착의 치료이다.
또 다른 실시양태는 기관 이식의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 기관 이식의 치료 방법이다.
또 다른 실시양태는 암, 예를 들어, 유방암, 간암, 전립선암 및 흑색종의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 암, 예를 들어, 유방암, 간암, 전립선암 및 흑색종의 치료 방법이다.
또 다른 실시양태는 정맥 신생내막 증식증의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 정맥 신생내막 증식증의 치료 방법이다.
또 다른 실시양태는 투석-이식편 신생내막 증식증의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 투석-이식편 신생내막 증식증의 치료 방법이다.
또 다른 실시양태는 동정맥 단락 신생내막 증식증의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 동정맥 단락 신생내막 증식증의 치료 방법이다.
또 다른 실시양태는 염증성 질환, 알레르기성 질환, 자가면역 질환, 대사 질환 및/또는 심혈관 질환의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 염증성 질환, 알레르기성 질환, 자가면역 질환, 대사 질환 및/또는 심혈관 질환의 치료 방법이다.
또 다른 실시양태는 적어도 부분적으로 CCR-2 및 CCR-5에 의해 매개되는 질환의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 적어도 부분적으로 CCR-2 및 CCR-5에 의해 매개되는 질환의 치료 방법이다.
또 다른 실시양태는 당뇨병, 비만, 대사 증후군, 졸중, 신경병증성 통증, 허혈성 심근병증, 건선, 고혈압, 경피증, 골관절염, 동맥류, 열, 심혈관 질환, 크론병, 울혈성 심부전, 자가면역 질환, HIV-감염, HIV-관련 치매, 건선, 특발성 폐 섬유증, 이식 동맥경화증, 물리적- 또는 화학적-유도성 뇌 외상, 염증성 장 질환, 폐포염, 결장염, 전신 홍반성 루푸스, 신독성 혈청 신염, 사구체신염, 천식, 다발성 경화증, 아테롬성동맥경화증, 혈관염, 취약성 플라크, 류마티스 관절염, 재협착, 정맥 신생내막 증식증, 투석-이식편 신생내막 증식증, 동정맥 단락 내막 증식증, 기관 이식, 만성 동종이식편 신병증, 암, 정맥 신생내막 증식증, 투석-이식편 신생내막 증식증 및 동정맥 단락 신생내막 증식증의 치료를 위한 의약의 제조에서의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염의 사용 방법이다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 하기 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-(2-히드록시-1,1-디메틸-에틸)피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 및 그의 제약상 허용되는 염에 관한 것이다.
Figure pct00008
그를 함유하는 제약 조성물, 및 염증성 질환, 알레르기성 질환, 자가면역 질환, 대사 질환, 암 및/또는 심혈관 질환 치료용 작용제로서의 그의 사용 방법이 또한 본 발명의 실시양태이다.
방법 실시양태
제1 실시양태에서, 본 개시내용은
1) 화학식 I-cc의 히드라존 화합물을 화학식 I-bb의 화합물로 전환시키는 것; 및
2) 화학식 I-bb의 화합물을 화학식 I-aa의 화합물과 커플링시키는 것
을 포함하며, 여기서
R1은 독립적으로 수소, 또는 카르보벤질옥시 기, tert-부틸옥시카르보닐, 플루오레닐메틸옥시카르보닐 기, 벤질 기 및 p-메톡시벤질 기로부터 선택된 아민-보호기이고;
R8 및 R9는 독립적으로 수소 또는 C1-6알킬이고;
R21은 =O이고;
HET는 1개 이상의 질소 헤테로원자를 갖는 임의로 치환된 3 내지 14원 헤테로시클로 또는 헤테로아릴 비시클릭 고리이고;
LG는 -OR16이고, 여기서 R16은 C1-6알킬, 페닐, N, S 또는 O로부터 선택된 1개 이상의 원자를 갖는 5 내지 7원 헤테로아릴, 또는 3 내지 7원 시클로알킬이고, 이들 모두는 할로겐, CF3 또는 C1-6알킬로부터 선택된 1 내지 3개의 기로 임의로 치환되는 것인
화학식 I의 화합물 또는 그의 염 형태의 제조 방법을 제공한다.
Figure pct00009
제2 실시양태에서, 본 개시내용은 화학식 I의 화합물이 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드인 방법을 제공한다.
제3 실시양태에서, 본 개시내용은 화학식 I-bb의 화합물이 화학식
Figure pct00010
의 화합물인 화학식 I의 화합물의 제조 방법을 제공한다.
제4 실시양태에서, 본 개시내용은 커플링이 산성 후처리에 이은 염기의 첨가를 통해 일어나는 것인 화학식 I의 화합물의 제조 방법을 제공한다.
제5 실시양태에서, 본 개시내용은 산성 후처리에서의 산이 시트르산, 타르타르산, 글리콜산 및 염산으로부터 선택되는 것인 화학식 I의 화합물의 제조 방법을 제공한다.
제6 실시양태에서, 본 개시내용은 염기가 K2HPO4, Na2HPO4, NaHCO3 및 KHCO3으로부터 선택되는 것인 화학식 I의 화합물의 제조 방법을 제공한다.
제7 실시양태에서, 본 개시내용은 화학식 I-cc의 히드라존 화합물을 화학식 I-bb의 화합물로 전환시키는 것이 화학식 I-cc의 히드라존 화합물을 용매 중에서 아실화제, 친핵체 및/또는 3급 아민 염기와 반응시킨 후에 (i) 제2의 3급 아민 염기의 존재 하에서 알코올을 사용하거나, 또는 (ii) 알콕시드를 사용하여 차단함으로써 화학식 I-bb의 화합물을 형성하는 것을 포함하는 것인, 화학식 I의 화합물의 제조 방법을 제공한다.
제8 실시양태에서, 본 개시내용은 아실화제가 옥시염화인, 옥살릴 클로라이드, 티오닐 클로라이드 및 포스겐으로부터 선택된 것, 바람직하게는 옥시염화인인 방법을 제공한다.
제9 실시양태에서, 본 개시내용은 3급 아민 염기가 트리에틸아민, N-N-디이소프로필-N-에틸 아민, 트리-n-프로필아민, N-메틸 모르폴린 및 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄으로부터 선택된 것, 바람직하게는 N-N-디이소프로필-N-에틸 아민인 방법을 제공한다.
제10 실시양태에서, 본 개시내용은 친핵체가 디메틸 4-아미노피리딘, 디메틸아닐린, 피리딘 및 루티딘으로부터 선택된 것, 바람직하게는 디메틸 4-아미노피리딘인 방법을 제공한다.
제11 실시양태에서, 본 개시내용은 반응에 사용된 친핵체의 양이 2.0 내지 4.0 당량, 바람직하게는 3.0 당량인 방법을 제공한다.
제12 실시양태에서, 본 개시내용은 알콜 또는 알콕시드가 페놀, 펜타플루오로페놀, 메탄올, 에탄올, 나트륨 메톡시드 및 나트륨 페놀레이트로부터 선택된 것, 바람직하게는 페놀인 방법을 제공한다.
제13 실시양태에서, 본 개시내용은 제2의 3급 아민 염기가 트리에틸아민, N-N-디이소프로필-N-에틸 아민, 트리-n-프로필아민, N-메틸 모르폴린 및 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄으로부터 선택된 것, 바람직하게는 N-N-디이소프로필-N-에틸 아민인 방법을 제공한다.
제14 실시양태에서, 본 개시내용은 용매가 아세토니트릴, 디클로로메탄 및 순수한 옥시염화인으로부터 선택된 것인 방법을 제공한다.
제15 실시양태에서, 본 개시내용은 반응 및 차단이 주위 온도 내지 70℃ 범위의 온도에서 수행되는 것인 방법을 제공한다.
제16 실시양태에서, 본 개시내용은 화학식 I-cc의 화합물이 화학식
Figure pct00011
의 화합물인 방법을 제공한다.
제17 실시양태에서, 본 발명은 화학식 I-cc의 히드라존 화합물이, 하기 화학식 I-dd의 히드라존 화합물을 승온에서 산의 존재 하에 오르토포르메이트와 반응시켜 화학식 I-cc의 히드라존 화합물을 수득하는 것을 포함하는 방법에 의해 제조되는 것인 방법을 제공한다.
<화학식 I-dd>
Figure pct00012
상기 식에서, R21은 =O이고; R22는 -NH-NH2이고; R23은 시아노알킬이거나; 또는 R22 및 R23은 함께 5 내지 8원 고리를 형성하고, 여기서 고리는 아미노, 알킬, 아릴 또는 헤테로아릴로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 임의로 치환될 수 있고, N, S 또는 O로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3 또는 4개의 헤테로원자를 임의로 함유할 수 있다.
제18 실시양태에서, 본 개시내용은 오르토포르메이트가 트리메틸오르토포르메이트, 트리에틸오르토포르메이트 및 트리프로필오르토포르메이트로부터 선택된 것, 바람직하게는 트리메틸오르토포르메이트인 방법을 제공한다.
제19 실시양태에서, 본 개시내용은 산이 아세트산, 트리플루오로아세트산, 염산 및 메탄술폰산으로부터 선택된 것, 바람직하게는 아세트산인 방법을 제공한다.
제20 실시양태에서, 본 개시내용은 반응이 40 내지 90℃, 바람직하게는 40 내지 75℃ 범위의 온도에서 수행되는 것인 방법을 제공한다.
제21 실시양태에서, 본 개시내용은 화학식 I-dd의 화합물이 화학식
Figure pct00013
의 화합물로부터 선택된 것인 방법을 제공한다.
제22 실시양태에서, 본 개시내용은 화학식 I-dd의 히드라존 화합물이, 화학식 I-ee의 화합물 (R23=O)을 용매 중에서 염기의 존재 하에 하기 화학식 I-ff의 카르바지드 화합물과 축합시켜 화학식 I-dd의 히드라존 화합물을 수득하는 것을 포함하는 방법에 의해 제조되는 것인 방법을 제공한다.
<화학식 I-ff>
Figure pct00014
상기 식에서, R21은 =O이고, R22 및 R23은 상기 기재된 바와 같다.
제23 실시양태에서, 본 개시내용은 용매가 에탄올, 2-프로판올, 1-프로판올 및 메탄올로부터 선택된 것, 바람직하게는 에탄올인 방법을 제공한다.
제24 실시양태에서, 본 개시내용은 염기가 아세트산나트륨, 아세트산칼륨, 트리에틸아민 및 N-N-디이소프로필-N-에틸 아민으로부터 선택된 것, 바람직하게는 아세트산나트륨인 방법을 제공한다.
제25 실시양태에서, 본 개시내용은 축합이 20 내지 60℃, 바람직하게는 25 내지 55℃ 범위의 온도에서 일어나는 것인 방법을 제공한다.
제26 실시양태에서, 본 발명은 화학식 I-ff의 카르바지드 화합물이 세미카르바지드 히드로클로라이드인 방법을 제공한다.
제27 실시양태에서, 본 발명은 화학식 I-ee의 화합물이 피발로일 아세토니트릴인 방법을 제공한다.
제28 실시양태에서, 본 발명은 하기 반응식에 기재된 방법을 포함하는, N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드의 제조 방법을 제공한다.
Figure pct00015
본 발명은 그의 취지 또는 본질적인 속성에서 벗어나지 않으면서 다른 특정 형태로 구현될 수 있다. 따라서, 상기 실시양태는 제한적인 것으로 간주되어서는 안된다. 본 발명의 임의의 및 모든 실시양태는 임의의 다른 실시양태 또는 실시양태들과 조합되어 추가 실시양태를 기재할 수 있다. 실시양태의 각각의 개별 요소 (예를 들어, 바람직한 또는 특별한 측면)는 그 자체의 독립적 실시양태이다. 또한, 실시양태의 임의의 요소는 임의의 실시양태로부터의 임의의 및 모든 다른 요소와 조합되어 추가 실시양태를 기재하는 것으로 의도된다. 또한 본 발명은 본원에 기재된 본 발명의 다양한 실시양태, 실시양태의 일부, 정의, 설명 및 실시예의 조합을 포함한다.
정의
다음은 본 명세서 및 첨부되는 청구항에서 사용되는 용어의 정의이다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에서의 기 또는 용어에 대해 제공되는 처음의 정의는 개별적으로 또는 또 다른 기의 일부로서 명세서 및 청구항 전반에 걸친 기 또는 용어에 적용된다.
용어 "알킬"은 1 내지 12개의 탄소 원자, 바람직하게는 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 기를 지칭한다. 기호 "C" 뒤에 숫자가 아래첨자로 나타나는 경우에, 아래첨자는 특정한 기가 함유할 수 있는 탄소 원자의 수를 보다 한정적으로 정의한다. 예를 들어, "C1-6알킬"은 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 및 분지쇄 알킬 기, 예컨대 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸, n-펜틸 등을 지칭한다. 아래첨자 "0"은 결합을 지칭한다. 따라서, 용어 히드록시(C0-2)알킬 또는 (C0-2)히드록시알킬은 히드록시, 히드록시메틸 및 히드록시에틸을 포함한다. 알킬기는 (C1-6)알킬, (C2-6)알케닐, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, CF3, O(C1-6알킬), OCF3, C(=O)H, C(=O)(C1-6알킬), CO2H, CO2(C1-6알킬), NHCO2(C1-6알킬), -S(C1-6알킬), NH2, NH(C1-6알킬), N(C1-6알킬)2, N(CH3)3 +, SO2(C1-6알킬), C(=O)(C1-4알킬렌)NH2, C(=O)(C1-4알킬렌)NH(알킬), C(=O)(C1-4알킬렌)N(C1-4알킬)2, C3-7시클로알킬, 페닐, 벤질, 페닐에틸, 페닐옥시, 벤질옥시, 나프틸, 4 내지 7원 헤테로시클로 및/또는 5 내지 6원 헤테로아릴로부터 선택된 1 내지 3개의 기로 치환될 수 있다. 치환된 알킬이 아릴, 헤테로시클로, 시클로알킬 또는 헤테로아릴 기로 치환된 경우, 상기 고리계는 하기에 정의된 바와 같고, 따라서 또한 하기에 정의된 바와 같은 0, 1, 2 또는 3개의 치환기를 가질 수 있다.
용어 "알킬"이 또 다른 기와 함께 사용되는 경우 (예컨대 "아릴알킬"), 이 조합은 치환된 알킬이 함유하게 될 치환기들 중 하나 이상을 보다 구체적으로 정의한다. 예를 들어, "아릴알킬"은 치환기들 중 하나 이상이 아릴, 예컨대 벤질인 상기 정의된 바와 같은 치환된 알킬기를 지칭한다. 따라서, 용어 아릴(C0-4)알킬은 하나 이상의 아릴 치환기를 갖는 치환된 저급 알킬을 포함하며, 또한 또 다른 기에 직접 결합된 아릴, 즉 아릴(C0)알킬을 포함한다.
용어 "알케닐"은 2 내지 12개의 탄소 원자 및 1개 이상의 이중 결합을 갖는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 기를 지칭한다. 2 내지 6개의 탄소 원자 및 1개의 이중 결합을 갖는 알케닐기가 가장 바람직하다. 알케닐 기는 알킬기에 대해 상기 기재된 바와 같이 치환될 수 있다.
용어 "알키닐"은 2 내지 12개의 탄소 원자 및 1개 이상의 삼중 결합을 갖는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 기를 지칭한다. 2 내지 6개의 탄소 원자 및 1개의 삼중 결합을 갖는 알키닐기가 가장 바람직하다. 알키닐 기는 알킬기에 대해 상기 기재된 바와 같이 치환될 수 있다.
용어 "알킬렌"은 1 내지 12개의 탄소 원자, 바람직하게는 1 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 2가의 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 기, 예를 들어 {-CH2-}n (여기서, n은 1 내지 12, 바람직하게는 1 내지 8임)을 나타낸다. 저급 알킬렌 기, 즉 1 또는 2개의 탄소 원자를 갖는 알킬렌 기가 가장 바람직하다. 용어 "알케닐렌" 및 "알키닐렌"은 각각 상기 정의된 바와 같은 알케닐 및 알키닐 기의 2가의 라디칼을 지칭한다. 알케닐렌 기는 알킬기에 대해 상기 기재된 바와 같이 치환될 수 있다.
용어 "알콕시"는 본원에 정의된 바와 같은 알킬에 의해 치환된 산소 원자를 지칭한다. 예를 들어, 용어 "알콕시"는 기 -O-C1-6알킬을 포함한다.
알콕시, 티오알킬 또는 아미노알킬 언급시에 아래 첨자가 사용되는 경우, 이 아래 첨자는 헤테로원자 이외에 기가 함유할 수 있는 탄소 원자의 개수를 나타낸다.
예를 들어 알콕시, 티오알킬 및 아미노알킬을 비롯한 모든 기는 당업자가 안정한 화합물을 제공하도록 선택할 것으로 이해되어야 한다.
용어 "카르보닐"은 2가의 카르보닐 기 -C(=O)-를 지칭한다.
용어 "아실"은 유기 라디칼에 연결된 카르보닐 기, 보다 구체적으로는 기 C(=O)Re, 뿐만 아니라 유기 라디칼에 연결된 2가의 기 -C(=O)Re-를 지칭한다. 기 Re는 본원에 정의된 바와 같은 알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클로, 아릴 또는 헤테로아릴, 또는 적절한 경우에 상응하는 2가의 기, 예를 들어 알킬렌으로부터 선택될 수 있다.
용어 "시클로알킬"은 3 내지 9개, 바람직하게는 3 내지 7개의 탄소 원자를 갖는, 완전히 포화된 및 부분적으로 불포화된 탄화수소 고리를 지칭한다 (따라서, "시클로알케닐 고리"를 포함함). 용어 "시클로알킬"은 (C1-4)알킬, (C2-4)알케닐, 할로겐, 히드록시, 시아노, 니트로, CF3, O(C1-4알킬), OCF3, C(=O)H, C(=O)(C1-4알킬), CO2H, CO2(C1-4알킬), NHCO2(C1-4알킬), S(C1-4알킬), NH2, NH(C1-4알킬), N(C1-4알킬)2, N(C1-4알킬)3 +, SO2(C1-4알킬), C(=O)(C1-4알킬렌)NH2, C(=O)(C1-4알킬렌)NH(알킬) 및/또는 C(=O)(C1-4알킬렌)N(C1-4알킬)2로부터 선택된 0, 1, 2 또는 3개의 치환기를 갖는 상기 고리를 포함한다. 용어 "시클로알킬"은 또한 그에 융합된 제2 고리 (예를 들어, 벤조, 헤테로시클로 또는 헤테로아릴 고리 포함)를 갖거나, 또는 3 내지 4개의 탄소 원자의 탄소-탄소 가교를 갖는 상기 고리를 포함한다.
용어 "할로" 또는 "할로겐"은 클로로, 브로모, 플루오로 및 아이오도를 지칭한다.
용어 "할로알킬"은 1개 이상의 할로 치환기를 갖는 치환된 알킬을 의미한다. 예를 들어, "할로알킬"은 모노, 비 및 트리플루오로메틸을 포함한다.
용어 "할로알콕시"는 1개 이상의 할로 치환기를 갖는 알콕시 기를 의미한다. 예를 들어, "할로알콕시"는 OCF3을 포함한다.
용어 "헤테로원자"는 산소, 황 및 질소를 포함할 것이다.
용어 "아릴"은 페닐, 비페닐, 플루오레닐, 1-나프틸 및 2-나프틸을 지칭한다. 용어 "아릴"은 (C1-4)알킬, (C2-4)알케닐, 할로겐, 히드록시, 시아노, 니트로, CF3, O(C1-4알킬), OCF3, C(=O)H, C(=O)(C1-4알킬), CO2H, CO2(C1-4알킬), NHCO2(C1-4알킬), S(C1-4알킬), NH2, NH(C1-4알킬), N(C1-4알킬)2, N(C1-4알킬)3 +, SO2(C1-4알킬), C(=O)(C1-4알킬렌)NH2, C(=O)(C1-4알킬렌)NH(알킬) 및/또는 C(=O)(C1-4알킬렌)N(C1-4알킬)2로부터 선택된 0, 1, 2 또는 3개의 치환기를 갖는 상기 고리를 포함한다.
용어 "헤테로시클로" 또는 "헤테로시클릭"은 1 내지 4개의 헤테로원자를 갖는 치환된 및 비치환된 비-방향족 (부분적으로 또는 완전히 포화될 수 있음) 3 내지 15원 고리를 지칭한다. 상기 고리는 3 내지 7원 모노시클릭 기, 7 내지 11원 비시클릭 기 및 10 내지 15원 트리시클릭 기일 수 있다. 헤테로원자를 함유하는 헤테로시클로 기의 각각의 고리는 1 또는 2개의 산소 또는 황 원자, 및/또는 1 내지 4개의 질소 원자를 함유할 수 있되, 단 각각의 고리에서의 헤테로원자의 총 수는 4개 이하이며 추가로 고리는 1개 이상의 탄소 원자를 함유한다. 비시클릭 및 트리시클릭 기를 완성하는 융합된 고리는 오직 탄소 원자만을 함유할 수 있으며, 포화, 부분적으로 포화 또는 불포화될 수 있다. 질소 및 황 원자는 임의로 산화될 수 있고, 질소 원자는 임의로 4급화될 수 있다. 헤테로시클로 기는 임의의 이용가능한 질소 또는 탄소 원자에 부착될 수 있다. 헤테로시클로 고리는 (C1-4)알킬, (C2-4)알케닐, 할로겐, 히드록시, 시아노, 니트로, CF3, O(C1-4알킬), OCF3, C(=O)H, C(=O)(C1-4알킬), CO2H, CO2(C1-4알킬), NHCO2(C1-4알킬), S(C1-4알킬), NH2, NH(C1-4알킬), N(C1-4알킬)2, N(C1-4알킬)3 +, SO2(C1-4알킬), C(=O)(C1-4알킬렌)NH2, C(=O)(C1-4알킬렌)NH(알킬) 및/또는 C(=O)(C1-4알킬렌)N(C1-4알킬)2로부터 선택된 0, 1, 2 또는 3개의 치환기를 함유할 수 있다. 예시적인 헤테로시클릭기는 아제티디닐, 피롤리디닐, 옥세타닐, 이미다졸리닐, 옥사졸리디닐, 이속사졸리닐, 티아졸리디닐, 이소티아졸리디닐, 테트라히드로푸라닐, 피페리딜, 피페라지닐, 2-옥소피페라지닐, 2-옥소피페리딜, 2-옥소피롤로디닐, 2-옥소아제피닐, 아제피닐, 4-피페리도닐, 테트라히드로피라닐, 모르폴리닐, 티아모르폴리닐, 티아모르폴리닐 술폭시드, 티아모르폴리닐 술폰, 1,3-디옥솔란, 퀴누클리디닐, 테트라히드로-1,1-디옥소티에닐 등을 포함한다.
용어 "헤테로아릴"은 고리들 중 하나 이상에 O, S 또는 N으로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 갖는 치환 및 비치환된 방향족 3 내지 14원 고리를 지칭한다. 상기 고리는 5 또는 6원 모노시클릭 기, 9 또는 10원 비시클릭 기 및 11 내지 14원 트리시클릭 기일 수 있다. 헤테로원자를 함유하는 헤테로아릴 기의 각각의 고리는 1 또는 2개의 산소 또는 황 원자, 및/또는 1 내지 4개의 질소 원자를 함유할 수 있으며, 단 각각의 고리 내의 헤테로원자의 총 개수는 4개 이하이고, 각각의 고리는 1개 이상의 탄소 원자를 갖는다. 비시클릭 및 트리시클릭 기를 완성하는 융합된 고리는 탄소 원자만을 함유할 수 있으며, 포화, 부분 포화 또는 불포화될 수 있다. 질소 및 황 원자는 임의로 산화될 수 있고, 질소 원자는 임의로 4급화될 수 있다. 비시클릭 또는 트리시클릭인 헤테로아릴 기는 하나 이상의 완전한 방향족 고리를 포함하여야 하나, 다른 융합된 고리 또는 고리들은 방향족 또는 비-방향족일 수 있다. 헤테로아릴 기는 임의의 고리의 임의의 이용가능한 질소 또는 탄소 원자에 부착될 수 있다. 헤테로아릴 고리계는 (C1-4)알킬, (C2-4)알케닐, 할로겐, 히드록시, 시아노, 니트로, CF3, O(C1-4알킬), OCF3, C(=O)H, C(=O)(C1-4알킬), CO2H, CO2(C1-4알킬), NHCO2(C1-4알킬), S(C1-4알킬), NH2, NH(C1-4알킬), N(C1-4알킬)2, N(C1-4알킬)3 +, SO2(C1-4알킬), C(=O)(C1-4알킬렌)NH2, C(=O)(C1-4알킬렌)NH(알킬) 및/또는 C(=O)(C1-4알킬렌)N(C1-4알킬)2로부터 선택된 0, 1, 2 또는 3개의 치환기를 함유할 수 있다.
예시적인 헤테로아릴 기는 피롤릴, 피라졸릴, 피라졸리닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 티아디아졸릴, 이소티아졸릴, 푸라닐, 티에닐, 옥사디아졸릴, 피리딜, 피라지닐, 피리미디닐, 피리다지닐, 트리아지닐, 인돌릴, 벤조티아졸릴, 벤조디옥솔릴, 벤족사졸릴, 벤조티에닐, 퀴놀리닐, 테트라히드로이소퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 벤즈이미다졸릴, 벤조피라닐, 인돌리지닐, 벤조푸라닐, 크로모닐, 쿠마리닐, 벤조피라닐, 신놀리닐, 퀴녹살리닐, 인다졸릴, 피롤로피리딜, 푸로피리딜, 디히드로이소인돌릴, 테트라히드로퀴놀리닐 등을 포함한다. 특정 헤테로아릴 기는, 예를 들어 6-치환된 퀴나졸린-4-일 및 6-트리플루오로메틸-퀴나졸린-4-일을 포함한다.
기가 임의로 치환된 경우에, 이는 치환된 기 및 비치환된 기를 포함할 수 있다.
본원에 기재된 화합물은 비대칭 중심을 가질 수 있다. 비대칭적으로 치환된 원자를 함유하는 본 발명의 화합물은 광학 활성 형태 또는 라세미 형태로 단리될 수 있다. 광학적으로 활성인 형태를 제조하는 방법 (예를 들어, 라세미 형태의 분할에 의해 또는 광학적으로 활성인 출발 물질로부터의 합성에 의해)은 당업계에 널리 공지되어 있다. 올레핀, C=N 이중 결합 등의 많은 기하 이성질체가 또한 본원에 기재된 화합물에 존재할 수 있고, 이러한 모든 안정한 이성질체가 본 발명에서 고려된다. 본 발명의 화합물의 시스 및 트랜스 기하 이성질체가 기재되어 있고, 이들은 이성질체의 혼합물로서 또는 분리된 이성질체 형태로서 단리될 수 있다. 특정 입체화학 또는 이성질체 형태를 달리 구체적으로 명시하지 않는다면, 모든 키랄, 부분입체이성질체, 라세미 형태 및 모든 기하 이성질체 형태의 구조가 의도된다.
본원에 개시된 화합물의 한 거울상이성질체는 다른 것에 비해 더 우수한 활성을 나타낼 수 있다. 따라서, 모든 입체화학이 본 발명의 일부인 것으로 간주된다. 필요한 경우, 라세미체 물질의 분리는 키랄 칼럼을 이용한 HPLC에 의해 또는 문헌 [Young, S.D. et al., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 2602-2605 (1995)]에서와 같이 캄폰산 클로라이드와 같은 분할제를 사용하는 분할에 의해 달성될 수 있다.
어구 "제약상 허용되는"은 합리적인 의학적 판단의 범주 내에서 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제점이나 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과의 접촉에 사용하기 적합하고, 합당한 유익/유해 비율이 균형을 이룬 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 지칭하기 위해 본원에 사용된다.
본원에 사용된 "제약상 허용되는 염"은 산 또는 염기 염을 제조함으로써 모 화합물을 변형시킨, 개시된 화합물의 유도체를 지칭한다. 제약상 허용되는 염의 예로는, 아민과 같은 염기성 잔기의 무기산 또는 유기산 염; 카르복실산과 같은 산성 잔기의 알칼리 또는 유기 염 등이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다. 제약상 허용되는 염은, 예를 들어 비독성 무기 또는 유기 산으로부터 형성된 모 화합물의 통상적인 비독성 염 또는 4급 암모늄 염을 포함한다. 예를 들어, 이러한 통상의 비독성 염에는 염산, 벤젠 술폰산, 브로민화수소산, 황산, 술팜산, 인산, 질산 등과 같은 무기산으로부터 유래된 염, 및 아세트산, 프로피온산, 숙신산, 글리콜산, 스테아르산, 락트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 팜산, 말레산, 히드록시말레산, 페닐아세트산, 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 술파닐산, 2-아세톡시벤조산, 푸마르산, 톨루엔술폰산, 메탄술폰산, 에탄 디술폰산, 옥살산, 이세티온산 등과 같은 유기산으로부터 제조된 염이 포함된다.
본 발명의 제약상 허용되는 염은 통상의 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 잔기를 함유하는 모 화합물로부터 합성할 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 물 또는 유기 용매 중에서, 또는 둘의 혼합물 중에서 (일반적으로, 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세토니트릴과 같은 비수성 매질이 바람직함) 유리 산 또는 염기 형태의 상기 화합물을 화학량론적 양의 적절한 염기 또는 산과 반응시켜 제조할 수 있다. 적합한 염의 목록은 그의 개시내용이 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, p.1418 (1985)]에서 발견된다.
전구약물은 약제의 수많은 바람직한 특성 (예를 들어, 용해도, 생체이용률, 제조 특성 등)을 개선시키는 것으로 공지되어 있기 때문에, 본 발명의 화합물은 전구약물 형태로 전달될 수 있다. 따라서, 본 발명은 본원에 청구된 화합물의 전구약물, 이들의 전달 방법 및 이들을 함유하는 조성물을 포함하도록 의도된다. "전구약물"은 이 전구약물이 포유동물 대상체에게 투여되었을 때 생체내에서 본 발명의 활성 모 약물을 방출하는 임의의 공유 결합된 담체를 포함하도록 의도된다. 본 발명의 전구약물은 화합물에 존재하는 관능기를 개질시켜 제조하는데, 이 때 개질된 관능기는 통상의 조작법에 의해 또는 생체내에서 모 화합물로 절단된다. 전구약물에는 히드록시, 아미노 또는 술프히드릴 기가 임의의 기에 결합된 본 발명의 화합물이 포함되며, 본 발명의 전구약물이 포유동물 대상체에게 투여되는 경우에 이는 절단되어 각각 유리 히드록실, 유리 아미노 또는 유리 술프히드릴 기를 형성한다. 전구약물의 예로는 본 발명의 화합물의 알콜 및 아민 관능기의 아세테이트, 포르메이트 및 벤조에이트 유도체가 포함되나, 이에 제한되지는 않는다.
"안정한 화합물" 및 "안정한 구조"는 반응 혼합물로부터 유용한 정도의 순도로의 단리 및 효능있는 치료제로의 제제화에서 잔존하기에 충분히 강한 화합물을 나타내는 것을 의미한다. 본 발명은 안정한 화합물을 구현하는 것으로 의도된다.
"치료 유효량"은 CCR-2 및 CCR-5를 둘 다 억제하는 데 효과적이거나 또는 본원에서 논의된 장애를 치료 또는 예방하는 데 효과적인, 단독의 본 발명의 화합물의 양 또는 본 발명의 청구된 화합물들의 조합물의 양 또는 다른 활성 성분과 조합된 본 발명의 화합물의 양을 포함하는 것으로 의도된다.
본원에 사용된 "치료하는" 또는 "치료"는 포유동물, 특히 인간에서의 질환-상태의 치료를 포함하고, (a) 포유동물에서, 특히 상기 포유동물이 질환-상태가 되기 쉽지만 이를 앓고 있는 것으로는 아직 진단되지 않은 경우에, 질환-상태의 발생을 예방하는 것; (b) 질환-상태를 억제하는 것, 즉 그의 발달을 저지하는 것; 및/또는 (c) 질환-상태를 경감시키는 것, 즉 질환-상태의 퇴행을 유발하는 것을 포함한다.
특정 유형을 나타내기 위해 본원에 사용된 명칭, 예를 들어 "N-1" 또는 "P-1"은 유사하거나 동일한 물리적 및 화학적 특징을 보유하는 임의의 다른 물질에 대해 제한적인 것으로 간주되어서는 안 되며, 오히려 이들 명칭이 또한 본원에 제시된 특성화 정보에 따라 해석되어야 하는 식별 기호일 뿐인 것으로 이해되어야 한다.
본 발명은 신규 물질로서의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드의 유리 염기의 결정질 형태를, 특히 제약상 허용되는 형태로 제공한다. 바람직한 특정 실시양태에서, 유리 염기의 결정질 형태는 실질적으로 순수한 형태이다. 유리 염기의 바람직한 실시양태는 N-1 형태로서 실시예에 개시되어 있다. 추가로, 유리 염기가 P-1 형태로 존재할 수 있고/거나 N-1 및 P-1의 형태의 조합으로 존재할 수 있는 것으로 여겨진다.
본원에 사용된 "다형체"는 동일한 화학적 조성을 갖지만 결정을 형성하는 분자, 원자 및/또는 이온의 공간적 배열이 상이한 결정질 형태를 지칭한다.
본원에 사용된 "용매화물"은 결정질 구조에 혼입된 용매 또는 용매들의 분자를 추가로 함유하는 분자, 원자 및/또는 이온의 결정질 형태를 지칭한다. 용매화물 내 용매 분자는 규칙적 배열 및/또는 비-순위적 배열로 존재할 수 있다. 용매화물은 화학량론적 또는 비-화학량론적 양의 용매 분자를 포함할 수 있다. 예를 들어, 비-화학량론적 양의 용매 분자를 갖는 용매화물은 용매화물로부터 용매가 부분적으로 손실될 수 있다.
본 발명은 본 발명의 화합물에서 발생하는 원자의 모든 동위원소를 포함하도록 의도된다. 동위원소는 동일한 원자 번호를 갖되 상이한 질량수를 갖는 원자를 포함한다. 일반적인 예로서 비제한적으로, 수소의 동위원소에는 중수소 및 삼중수소가 포함된다. 탄소의 동위원소에는 13C 및 14C가 포함된다. 동위원소-표지된 본 발명의 화합물은 일반적으로 당업자에게 공지된 통상의 기술 또는 본원에 기재된 것과 유사한 방법에 의해, 달리 사용되는 표지되지 않은 시약 대신에 적절한 동위원소-표지된 시약을 사용하여 제조할 수 있다.
본원에 사용된 "무정형"은 결정질이 아닌 분자, 원자 및/또는 이온의 고체 형태를 지칭한다. 무정형 고체는 명확한 X선 회절 패턴을 나타내지 않는다.
본원에 사용된 "실질적으로 순수한"은 결정질 형태의 언급에 사용된 경우에 화합물의 중량을 기준으로 화합물 I의 90 중량% 초과의 순도 (90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 및 99 중량% 초과, 및 약 100 중량%와 동등한 순도 포함)를 갖는 화합물을 의미한다. 나머지 물질은 다른 형태(들)의 화합물, 및/또는 그의 제조시 발생하는 반응 불순물 및/또는 처리 불순물을 포함한다. 예를 들어, N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드, 유리 염기 또는 염의 결정질 형태는 현재 당업계에 공지되어 있으며 일반적으로 허용되는 수단에 의해 측정하였을 때 90 중량% 초과의 순도를 갖는다면 실질적으로 순수한 것으로 간주할 수 있으며, 여기서 나머지 10 중량% 미만의 물질은 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드, 유리 염기 또는 염의 다른 형태(들) 및/또는 반응 불순물 및/또는 처리 불순물을 포함한다.
결정질 형태의 샘플은 실질적으로 순수한 상 균질성 (우세한 양의 단결정질 형태 및 임의로는 소량의 하나 이상의 다른 결정질 형태가 존재함을 나타냄)을 갖도록 제공될 수 있다. 샘플 내에 하나 초과의 결정질 형태가 존재하는지 여부는 분말 X선 회절 (PXRD) 또는 고체상 핵 자기 공명 분광분석법 (SSNMR)과 같은 기술로 결정할 수 있다. 예를 들어, 실험적으로 측정된 PXRD 패턴을 모의 PXRD 패턴과 비교하였을 때 여분의 피크가 존재하는 것은 샘플 내에 하나 초과의 결정질 형태가 존재함을 나타낼 수 있다. 모의 PXRD는 단결정 X선 데이터로부터 계산될 수 있다. 문헌 [Smith, D.K., "A FORTRAN Program for Calculating X-Ray Powder Diffraction Patterns," Lawrence Radiation Laboratory, Livermore, California, UCRL-7196 (April 1963)]을 참조한다.
바람직하게는, 결정질 형태가 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는다는 것은 실험적으로 측정된 PXRD 패턴에서 모의 PXRD 패턴에 존재하지 않는 여분의 피크가 전체 피크 영역의 10% 미만, 바람직하게는 5% 미만, 보다 바람직하게는 2% 미만으로 발생한다는 것을 나타낸다. 실험적으로 측정된 PXRD 패턴에서 모의 PXRD 패턴에 존재하지 않는 여분의 피크가 전체 피크 영역의 1% 미만으로 발생한 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는 결정질 형태가 가장 바람직하다.
결정질 형태의 제조 절차는 당업계에 공지되어 있다. 결정질 형태는, 예를 들어 적합한 용매로부터의 결정화 또는 재결정화, 승화, 용융물로부터의 성장, 다른 상으로부터의 고체 상태 변환, 초임계 유체로부터의 결정화, 및 제트 분무를 비롯한 다양한 방법으로 제조할 수 있다. 용매 혼합물로부터 결정질 형태의 결정화 또는 재결정화 기술로는, 예를 들어 용매의 증발, 용매 혼합물의 온도 하강, 분자 및/또는 염의 과포화 용매 혼합물의 결정 시딩, 용매 혼합물의 동결 건조, 및 용매 혼합물에의 역용매 (반대용매)의 첨가가 포함된다.
형태는 고정된 분석 온도에서 형태의 단결정의 단위 셀 측정을 기초로 하는 단결정 X선 회절을 사용하여 특성화 및 구별될 수 있다. 단위 셀의 상세한 설명은 문헌 [Stout et al., Chapter 3, X-Ray Structure Determination: A Practical Guide, Macmillan Co., New York (1968)]에 제공되어 있다. 대안적으로, 결정질 격자 내의 공간적 관계에서 원자의 고유 배열은 관찰된 분율 원자 좌표에 따라 특성화될 수 있다. 결정 구조를 특성화하는 또 다른 수단은 분말 X선 회절 분석으로, 여기서는 실험적 또는 관찰된 회절 프로파일을 순수한 분말 물질을 나타내는 모의 프로파일과 비교하고 (둘 모두 동일 분석 온도에서 수행), 대상 형태에 대한 측정 결과를 일련의 2θ 값으로 특성화한다.
고체상 핵 자기 공명 (SSNMR), 시차 주사 열량측정법 및 열중량 분석과 같은 형태를 특성화하는 다른 방식을 이용할 수 있다. 이러한 파라미터는 또한 조합으로 사용하여 대상 형태를 특성화할 수 있다.
TGA에 의한 특성화에서와 같이 본원에 사용된 용어 "무시할 수 있는 중량 손실"은 순수한 (비-용매화된) 결정 형태가 존재함을 나타낸다.
본 발명의 한 실시양태에서, N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노의)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드, 유리 염기 또는 염의 결정질 형태는 실질적으로 순수한 형태로 제공된다. 상기 결정질 형태는, 예를 들어 부형제, 담체, 및 다른 활성 제약 성분 또는 상이한 분자 구조의 활성 화학 물질 중 하나로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 다른 성분을 임의로 포함할 수 있는 제약 조성물로 사용될 수 있다.
바람직하게는, 결정질 형태가 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는다는 것은 실험적으로 측정된 PXRD 패턴에서 모의 PXRD 패턴에 존재하지 않는 여분의 피크가 전체 피크 영역의 10% 미만, 바람직하게는 5% 미만, 보다 바람직하게는 2% 미만으로 발생한다는 것을 나타낸다. 실험적으로 측정된 PXRD 패턴에서 모의 PXRD 패턴에 존재하지 않는 여분의 피크가 전체 피크 영역의 1% 미만에서 발생한 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는 결정질 형태가 가장 바람직하다.
또 다른 실시양태에서, N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드, 유리 염기 또는 염의 결정질 형태로 본질적으로 이루어진 조성물이 제공된다. 이 실시양태의 조성물은 조성물 내에서의 자신의 중량에 기초하여 그 유형을 적어도 90 중량% 포함할 수 있다.
반응 불순물 및/또는 처리 불순물의 존재 여부는, 예를 들어 크로마토그래피, 핵 자기 공명 분광분석법, 질량 분광측정법 또는 적외선 분광분석법과 같은 당업계에 공지된 분석 기술로 결정할 수 있다.
결정질 형태는, 예를 들어 적합한 용매로부터의 결정화 또는 재결정화, 승화, 용융물로부터의 성장, 다른 상으로부터의 고체 상태 변환, 초임계 유체로부터의 결정화, 및 제트 분무를 비롯한 다양한 방법으로 제조할 수 있다. 용매 혼합물로부터 결정질 형태의 결정화 또는 재결정화 기술로는, 예를 들어 용매의 증발, 용매 혼합물의 온도 하강, 분자 및/또는 염의 과포화 용매 혼합물의 결정 시딩, 용매 혼합물의 동결 건조, 및 용매 혼합물에의 역용매 (반대용매)의 첨가가 포함된다. 고처리량 결정화 기술을 이용하여 다형체를 비롯한 결정질 형태를 제조할 수 있다.
다형체를 비롯한 약물의 결정, 약물 결정의 제조 방법 및 특성화는 문헌 [Byrn, S.R. et al., Solid-State Chemistry of Drugs, 2nd Edition, SSCI, West Lafayette, Indiana (1999)]에 개시되어 있다.
용매를 이용한 결정화 기술의 경우, 용매 또는 용매들의 선택은 전형적으로 하나 이상의 인자, 예컨대 화합물의 용해도, 결정화 기술, 및 용매의 증기압에 의존한다. 용매의 조합이 사용될 수 있고; 예를 들어, 화합물을 제1 용매에 용해시켜 용액을 생성한 후에, 용액에서 화합물의 용해도를 감소시키는 역용매를 첨가하여 결정을 형성시킬 수 있다. "역용매"는 화합물이 낮은 용해도를 갖는 용매이다. 결정의 제조에 적합한 용매는 극성 및 비극성 용매를 포함한다.
한 가지 결정 제조 방법에서, N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드, 유리 염기 또는 염을 적합한 용매 중에서 현탁 및/또는 교반시켜 슬러리를 수득하고, 이를 가열하여 용해를 촉진시킬 수 있다. 본원에 사용된 용어 "슬러리"는 포화된 용액을 의미하며, 이는 또한 추가량의 고체를 함유하여 주어진 온도에서 불균질 혼합물을 생성할 수 있다. 이와 관련하여 적합한 용매로는, 예를 들어 본원에 개시된 바와 같은 극성 비양성자성 용매 및 극성 양성자성 용매, 및 이들의 둘 이상의 혼합물이 포함된다.
결정화를 촉진하기 위하여 임의의 결정화 혼합물에 시드 결정을 첨가할 수 있다. 당업자에게 명백한 바와 같이, 시딩은 특정 결정질 형태의 성장 제어를 위한 수단으로서나 또는 결정 생성물의 입자 크기 분포 제어를 위한 수단으로 사용된다. 따라서, 필요한 시드의 양의 계산은, 예를 들어 문헌 [Mullin, J.W. et al., "Programmed cooling of batch crystallizers," Chemical Engineering Science, 26:369-377 (1971)]에 기재된 바와 같이, 이용가능한 시드의 크기 및 평균 생성물 입자의 목적하는 크기에 따라 달라진다. 일반적으로, 배치 내의 결정 성장을 효과적으로 제어하기 위해 작은 크기의 시드가 요구된다. 작은 크기의 시드는 보다 큰 결정의 체에 의한 분리, 분쇄 또는 미분, 또는 용액의 미세-결정화에 의해 생성될 수 있다. 결정의 분쇄 또는 미분이 목적하는 결정 형태로부터의 결정성에 임의의 변화가 일어나지 않도록 (즉, 무정형 또는 또 다른 다형체로 변화되지 않도록) 주의해야 한다.
냉각된 혼합물은 진공하에 여과할 수 있으며, 단리된 고체를 냉각 재결정화 용매와 같은 적합한 용매로 세척하고, 질소 퍼징하에 건조시켜 원하는 결정질 형태를 수득할 수 있다. 단리된 고체를 적합한 분광 또는 분석 기술, 예컨대 SSNMR, DSC, PXRD 등으로 분석하여 생성물의 바람직한 결정질 형태의 형성을 확인할 수 있다. 생성된 결정질 형태는 전형적으로 결정화 절차에 본래 사용되는 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드, 유리 염기 또는 염의 중량을 기준으로 약 70 중량 % 초과의 단리 수율로 생성되지만, 바람직하게는 90 중량 % 초과의 단리 수율로 생성된다. 필요에 따라 생성물을 공동-밀링하거나 메쉬 스크린을 통해 통과시켜 생성물을 분쇄할 수 있다.
결정질 형태는 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드, 유리 염기 또는 염의 제조를 위한 최종 처리 단계의 반응 매질로부터 직접 제조할 수 있다. 이는 예를 들어 최종 처리 단계에 화합물이 결정화될 수 있는 용매 또는 용매의 혼합물을 사용하여 이루어질 수 있다. 대안적으로, 결정질 형태는 증류 또는 용매 첨가 기술에 의해 수득할 수 있다. 이러한 목적에 적합한 용매는, 알콜과 같은 양성자성 극성 용매 및 케톤과 같은 비양성자성 극성 용매를 비롯하여, 본원에 기재된 임의의 용매를 포함한다.
일반적 지침으로서, 반응 혼합물을 여과하여 임의의 원하지 않는 불순물, 무기 염 등을 제거한 후에 반응물 또는 결정화 용매로 세척할 수 있다. 생성된 용액을 농축시켜 잉여 용매 또는 기체 성분을 제거할 수 있다. 증류가 이용되는 경우, 수집된 증류물의 최종량은, 예를 들어 용기 크기, 교반 성능 등을 비롯한 처리 요인에 따라 달라질 수 있다. 일반적 지침으로서, 반응 용액을 용매 교체를 수행하기 이전 본래 부피의 약 1/10로 증류시킬 수 있다. 표준 처리 기술에 따라 반응물을 샘플링하고 검정하여 반응의 정도 및 생성물의 중량%를 결정할 수 있다. 원하는 경우에, 추가의 반응 용매를 첨가하거나 제거하여 반응 농도를 최적화시킬 수 있다. 바람직하게는, 최종 농도는 통상적으로 슬러리가 생성되는 시점에 약 50 중량%로 조정한다.
반응 혼합물을 증류시키지 않고 반응 용기에 용매를 직접 첨가하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 목적에 바람직한 용매는, 용매 교환과 관련하여 상기 논의된 바와 같이, 마지막에 결정 격자에 참여할 수 있는 것이다. 최종 농도는 원하는 순도, 회수율 등에 따라 달라질 수 있으나, 용액 중 유리 염기의 최종 농도는 바람직하게는 약 4% 내지 약 7%이다. 반응 혼합물은 용매 첨가 후에 교반할 수 있고, 동시에 가온할 수 있다. 예를 들어, 반응 혼합물을 약 1시간 동안 약 70℃로 가온하면서 교반할 수 있다. 반응물은 바람직하게는 고온 여과하고, 반응 용매, 첨가된 용매 또는 이들의 조합으로 세척한다. 시드 결정은 임의의 결정화 용액에 첨가되어 결정화를 개시할 수 있다.
본원에 기재된 다양한 형태는 당업자에게 공지된 다양한 분석 기술을 이용하여 서로 구별할 수 있다. 이러한 기술로는 분말 X선 회절 (PXRD), 시차 주사 열량측정법 (DSC) 및/또는 열중량 분석 (TGA)이 있으나 이에 제한되지는 않는다. 대안적으로, 이들 형태는 단결정 X선 회절을 이용하여, 고정된 분석 온도에서 주어진 형태의 단결정의 단위 셀 측정을 기초로 하여 특성화하고 구별할 수 있다. 단위 셀의 상세한 설명은 문헌 [Stout et al., Chapter 3, X-Ray Structure Determination: A Practical Guide, Macmillan Co., New York (1968)]에 제공되어 있다. 구체적으로는, 결정 격자 내의 공간적 관계에서 원자의 고유 배열은 관찰된 분율 원자 좌표에 따라 특성화할 수 있다. 결정 구조를 특성화하는 또 다른 수단은 측정한 회절 프로파일을 단결정 구조 데이터로부터 산출되는 모의 프로파일과 비교하는 분말 X선 회절 분석에 의한다. 대상 형태를 위한 분말 X선 회절 측정은 일련의 2θ 값 (보통 4개 이상임)으로 특성화된다.
고체상 핵 자기 공명 (SSNMR) 분광분석법, 시차 주사 열량측정법 (DSC), 온도 기록법 및 결정질 또는 무정형 형태의 육안 조사와 같은 다른 형태 특성화 수단이 사용될 수 있다. 이러한 파라미터는 또한 조합으로 사용하여 대상 형태를 특성화할 수 있다.
당업자는 X선 회절 패턴이, 이용되는 측정 조건에 따라 달라지는 측정 오류와 함께 얻어질 수 있음을 인식할 것이다. 특히, 일반적으로 X선 회절 패턴에서의 강도는 사용되는 측정 조건 및 결정의 외형 또는 형태에 따라 달라질 수 있는 것으로 공지되어 있다. 실험 조건에 따라 상대적인 강도가 또한 달라질 수 있고, 따라서 강도의 정확한 순서가 고려되지 않아야 한다는 것을 추가로 이해하여야 한다. 또한, 통상적인 X선 회절 패턴에서의 회절 각도의 측정 오차는 통상적으로 약 0.2°2θ 값 이하, 바람직하게는 약 0.1°2θ 값 (아래에서 논의됨)이며, 이러한 정도의 측정 오차는 상기 언급된 회절 각도에 포함되는 것으로 계산되어야 한다. 따라서, 본 발명의 결정 형태는 본원에 개시된 첨부된 도면에 도시된 X선 회절 패턴과 완전히 동일한 X선 회절 패턴을 제공하는 결정 형태에 제한되지 않음을 이해하여야 한다. 첨부된 도면에 개시된 것들과 실질적으로 동일한 X선 회절 패턴을 제공하는 임의의 결정 형태가 본 발명의 범주 내에 속한다. X선 회절 패턴의 실질적인 동일성을 확인하는 능력은 당업자의 능력 범위 내의 것이다.
합성
반응식 1: 히드라존 I-dd의 제조
Figure pct00016
화학식 I-ff의 카르바지드, 예컨대 세미카르바지드 히드로클로라이드를 용매, 예를 들어 에탄올, 2-프로판올, 1-프로판올 및 메탄올, 바람직하게는 에탄올 중에서 염기, 예를 들어 아세트산나트륨, 아세트산칼륨, 트리에틸아민 및 N-N-디이소프로필-N-에틸 아민, 바람직하게는 아세트산나트륨의 존재 하에 20 내지 60℃ 범위, 바람직하게는 25 내지 55℃ 범위의 온도에서 화학식 I-ee의 화합물, 예컨대 피발로일 아세토니트릴과 축합시켜 화학식 I-dd의 히드라존 화합물을 수득하였으며, 여기서 R21은 =O이고; R22는 -NH-NH2이고; R23은 시아노알킬이거나; 또는 R22 및 R23은 함께 5 내지 8원 고리를 형성할 수 있고, 여기서 고리는 아미노, 알킬, 아릴 또는 헤테로아릴로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 임의로 치환될 수 있고, N, S 또는 O로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3 또는 4개의 헤테로원자를 임의로 함유할 수 있다.
반응식 2: 화학식 I-cc의 히드라존의 제조
Figure pct00017
화학식 I-dd의 히드라존 화합물, 예컨대
Figure pct00018
을 산, 예를 들어 아세트산, 트리플루오로아세트산, 염산 및 메탄술폰산, 바람직하게는 아세트산의 존재 하에, 승온, 예컨대 40-90℃, 바람직하게는 40-75℃에서 오르토포르메이트, 예를 들어 트리메틸오르토포르메이트, 트리에틸오르토포르메이트 및 트리프로필오르토로프메이트, 바람직하게는 트리메틸오르토포르메이트, 오르토포르메이트와 반응시켜, 화학식 I-cc의 히드라존 화합물을 수득하였으며, 여기서 R21은 =O이고, R22 및 R23은 상기 기재된 바와 같다.
반응식 3: 화합물 I-cc의 전환
Figure pct00019
화학식 I-cc의 히드라존 화합물, 예를 들어 7-tert-부틸-3H-피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-온을 용매, 예를 들어 아세토니트릴, 디클로로메탄 및 순수한 옥시염화인 중에서 아실화제, 친핵체, 예컨대 디메틸 4-아미노피리딘 (DMAP), 및/또는 3급 아민 염기와 반응시킨 후에 (i) 제2의 3급 아민 염기의 존재 하에서 알코올을 사용하거나, 또는 (ii) 알콕시드를 사용하여 차단함으로써 화학식 I-bb의 화합물을 형성함으로써, 화학식 I-cc의 히드라존 화합물을 화학식 I-bb의 화합물로 전환시키며, 여기서 LG는 -OR16이고, 여기서 R16은 C1-6알킬, 페닐, N, S 또는 O로부터 선택된 1개 이상의 원자를 갖는 5 내지 7원 헤테로아릴, 또는 3 내지 7원 시클로알킬이고, 이들 모두는 할로겐, CF3 또는 C1-6알킬로부터 선택된 1 내지 3개의 기로 임의로 치환된다. 사용될 수 있는 아실화제의 예는 옥시염화인 (POCl3), 옥살릴 클로라이드, 티오닐 클로라이드 및 포스겐이다. 바람직한 아실화제는 POCl3이다. 트리에틸아민, N-N-디이소프로필-N-에틸 아민 (DIEA), 트리-n-프로필아민, N-메틸 모르폴린 및 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄 (DABCO)은 전환에 사용될 수 있는 3급 아민 염기의 예이다. 바람직한 3급 아민 염기는 DIEA이다. 일반적으로, 반응에 사용된 친핵체의 양은 2.0 내지 4.0, 바람직하게는 3.0 당량이다. 전환에 사용될 수 있는 알콜 또는 알콕시드의 예는 페놀, 펜타플루오로페놀, 메탄올, 에탄올, 나트륨 메톡시드 및 나트륨 페놀레이트이며, 페놀이 바람직한 알콜이다. 일반적으로, 반응 및 차단은 주위 온도 내지 70℃ 범위의 온도에서 수행될 수 있다.
반응식 4: 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염의 제조
Figure pct00020
화학식 I-bb의 화합물, 예를 들어
Figure pct00021
을 WO 2008/014381 A1에 기재된 것과 유사한 방식으로 제조된 화학식 I-aa의 화합물과 커플링시켜 상응하는 화학식 I의 화합물, 예를 들어 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 또는 그의 염을 수득하며, 여기서 R1은 독립적으로 수소, 또는 카르보벤질옥시 (Cbz) 기, tert-부틸옥시카르보닐 (BOC), 플루오레닐메틸옥시카르보닐 (FMOC) 기, 벤질 (Bn) 기 및 p-메톡시벤질 (PMB) 기로부터 선택된 아민-보호기, 바람직하게는 수소이고; R8 및 R9는 독립적으로 수소 또는 C1-6알킬이고; R21은 =O이고; HET는 1개 이상의 질소 헤테로원자, 바람직하게는 2 내지 4개의 전체 헤테로원자, 특히 4개의 질소 원자를 갖는 임의로 치환된 3 내지 14원 헤테로시클로 또는 헤테로아릴 비시클릭 고리이고; LG는 -OR16이고, 여기서 R16은 C1-6알킬, 페닐, N, S 또는 O로부터 선택된 1개 이상의 원자를 갖는 5 내지 7원 헤테로아릴, 또는 3 내지 7원 시클로알킬이고, 여기서 이들 모두는 할로겐, CF3 또는 C1-6알킬로부터 선택된 1 내지 3개의 기로 임의로 치환된다. 커플링은 당업계에 통상적으로 공지된 커플링 방법 또는 대안적으로 산성을 후처리에 이은 염기의 첨가를 통해 수행될 수 있다. 산성 후처리에 사용될 수 있는 산의 예는 시트르산, 타르타르산, 글리콜산 및 염산이다. 첨가될 수 있는 염기의 예는 K2HPO4, Na2HPO4, NaHCO3 및 KHCO3이다.
구체적으로, N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드는 하기 반응식에 따라 제조될 수 있다.
Figure pct00022
본 발명의 방법을 위한 출발 물질은 상업적으로 입수가능하거나, 또는 당업자에 의해 용이하게 제조될 수 있다. 용매, 온도, 압력, 바람직한 기를 갖는 출발 물질 및 다른 반응 조건은 당업자에 의해 적절한 것으로 용이하게 선택될 수 있다. 방법의 규모를 확대하여 보다 많은 양의 화학식 I의 화합물을, 예컨대 상업적 생산 설비에서 제조할 수 있다.
실시예
하기 실시예는 본 발명의 화합물 및 출발 물질의 실시양태를 예시하는 것이며, 청구의 범위를 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
적절하게는, 반응은 건조 질소 (또는 아르곤)의 분위기 하에서 수행하였다. 무수 반응을 위해, EM으로부터의 드리솔브(DRISOLV)® 용매를 사용하였다. 다른 반응의 경우, 시약 등급 또는 HPLC 등급 용매를 사용하였다. 달리 언급되지 않은 한, 상업적으로 입수한 모든 시약은 받은 상태 그대로 사용하였다.
LC/MS 측정 결과는 시마주(Shimadzu) HPLC/워터스(Waters) ZQ 단일 사중극자 질량 분광측정계 하이브리드 시스템을 이용하여 수득하였다. 관심있는 피크에 대한 데이터는 양성-모드 전기분무 이온화로부터 기록하였다. NMR (핵 자기 공명) 스펙트럼은 통상적으로 지시된 용매 중에서 브루커(Bruker) 또는 JEOL 400 MHz 및 600 MHz 기기 상에서 수득하였다. 모든 화학적 이동은 내부 표준으로 용매 공명이 있는 테트라메틸실란으로부터 ppm으로 기록하였다. 1H-NMR 스펙트럼 데이터는 통상적으로 다음과 같이 기록하였다: 화학적 이동, 다중도 (s = 단일선, br s = 넓은 단일선, d = 이중선, dd = 이중선의 이중선, t = 삼중선, q = 사중선, sep = 칠중선, m = 다중선, app = 명백함), 커플링 상수 (Hz), 및 적분값.
당업자는 본원에 표준 약어가 사용되었음을 인지할 것이다. 참조의 용이성을 위해, 하기 약어를 포함시켰으나, 반드시 이에 제한되는 것은 아니다: Hg = 수은; sat. = 포화, HPLC = 고성능 액체 크로마토그래피, AP = 면적 백분율, KF = 칼-피셔, RT = 실온 (달리 명시되지 않는 한 RT는 약 22℃의 온도임), mmol = 밀리몰, HRMS = 고해상도 질량 분광분석법, ℃ = 섭씨 온도, kg - 킬로그램, g = 그램, mg = 밀리그램, L = 리터, mL (또는 ml) = 밀리리터, h 또는 hr = 시간, M = 몰, N = 노르말, min = 분, MHz = 메가헤르츠, v/v = 부피 대 부피 비, %w/w = 중량/중량%, wt% = 중량%, nm = 나노미터, LOD = 건조감량.
"α", "β", "R" 및 "S"는 당업자에게 친숙한 입체화학 명칭이다.
실시예 1
N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드
Figure pct00023
실시예 1, 단계 1: 3L 둥근-바닥 플라스크에 세미카르바지드 히드로클로라이드 (100.0 g, 0.89 mol), 피발로일 아세토니트릴 (112.2 g, 0.89 mol) 및 에탄올 (1 L)을 22-25℃에서 첨가하였다. 첨가가 완료되면, 반응 혼합물을 12-15℃로 냉각시키고, 무수 아세트산나트륨 (73.5 g, 0.89 mol)을 첨가하였다. 무수 아세트산나트륨의 첨가는 흡열성이었고, 이로 인해 온도가 22-25℃로 상승하였다. 반응 혼합물을 22-25℃로 유지하고, 60-90분 동안 교반하였다. 상기 시간 후, 반응 혼합물을 HPLC에 의해 분석하였고, 여기서 히드라존 중간체의 형성이 완료된 것으로 나타났다.
실시예 1, 단계 2: 이어서, 반응 혼합물을 68-72℃로 가열하고, 트리메틸오르토포르메이트 (475.7 g, 4.48 mol)를 5-10분 기간 동안 첨가하였다. 반응 혼합물을 40-45℃로 냉각시키고, 이어서 아세트산 (53.8 g, 0.89 mol)을 15-20분 기간 동안 첨가하였다. 첨가가 완료되면, 온도를 20-25분 기간 동안 70±2℃로 올렸다. 규정 온도에 이르면, 반응 혼합물을 18-20 시간 동안 교반하였다. 상기 기간의 종결시, 반응 혼합물을 HPLC에 의해 분석하였고, 여기서 피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진의 형성이 완료된 것으로 나타났다.
실시예 1, 단계 3: 실시예 1, 단계 2로부터의 피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진을 50-55℃에서 감압 하에 (약 5-10 mm Hg) 농축시켜 잔기를 수득하였다. 테트라히드로푸란 (THF, 2 L) 및 아세톤 (2 L)을 잔기에 첨가하고, 생성된 혼합물을 50-55℃에서 90분 동안 교반하였다. 상기 시간 후, 반응 혼합물을 부흐너 깔때기를 통해 여과하여, 생성된 염화나트륨 (NaCl) 및 아세트산나트륨 (NaOAc) 침전물을 제거하였다. 생성된 여과물을 50-55℃에서 감압 하에 (약 400-450 mm Hg) 농축 건조시켜, 잔기를 수득하였다. 잔기를 2-메틸오르토포르메이트 (2-메틸 THF, 450 mL) 중에 녹이고, 생성된 혼합물을 22-25℃에서 두(2) 시간 동안 교반하였다. 상기 기간의 종결시, 반응 혼합물을 여과한 후, 2-메틸 THF (100 mL)에 이어서 tert-부틸 메틸 에테르 (MTBE, 200 mL)로 분무 세척하였다. 수득된 생성물을 45-50℃에서 감압 하에 (약 400-450 mm Hg) 건조시켜, 7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4(3H)-온 (107.0 g, 62.1% w/w, HPLC 순도: 220 nm에서 99.2 AP)을 수득하였다. 단계 1 내지 3을 보다 큰 규모로 반복하여, 킬로그램 분량의 7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4(3H)-온을 생산하였다.
실시예 1, 단계 4: 내부가 유리인 반응기에 7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4(3H)-온 (1.0 kg, 5.2 mol), 디메틸 4-아미노피리딘 (1.27 kg, 10.4 mol), 아세토니트릴 (10 L) 및 디이소프로필에틸아민 (0.672 kg, 5.2 mol)을 첨가하였다. 생성된 슬러리를 주위 온도에서 질소 분위기 하에 투명 용액이 형성될 때까지 15 분 이상의 기간 동안 교반하였다. 투명 용액을 천천히 아세토니트릴 (6.0 L) 및 옥시염화인 (POCl3, 0.822 kg, 5.3 mol)을 함유하는 내부가 유리인 제2 반응기에 첨가하였다. 첨가 완료시, 생성된 혼합물을 35℃ 미만에서 2시간 동안 교반하였다. 상기 기간의 종결시, 반응물을 HPLC에 의해 분석하였고, 여기서 반응이 완료된 것으로 나타났다. 페놀 (0.64 kg, 6.8 mol) 및 디이소프로필에틸아민 (0.87 kg)을 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 주위 온도에서 1 시간 이상 동안 교반하였다. 상기 시간 후에, 반응 혼합물을 HPLC에 의해 분석하였고, 여기서 반응이 완료된 것으로 나타났다. 2-메틸-THF (20 L)에 이어서 물 (10 L)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 유기 상 및 수성 상을 분리하고, 수성 상을 폐기하였다. 유기 상을 시트르산-염수 용액 (5 wt%, 10 L)으로 세척하고, 생성된 유기 상 및 수성 상을 분리하고, 수성 상을 다시 폐기하였다. 상기 시트르산-염수 용액 세척을 2 회 더 반복하였다. 시트르산-염수 용액 세척이 완료시, 칼륨 인산 염기 용액 (K2HPO4, 7.5 wt%, 10 L)을 첨가하였다. 유기 상 및 수성 상을 분리하고, 수성 상을 폐기하였다. 상기 K2HPO4 용액 세척을 pH 약 8까지 1회 더 반복하였다.
실시예 1, 단계 5: N-[2-(3-아미노-2-옥소-피롤리딘-1-일)-5-tert-부틸아미노-시클로헥실]-아세트아미드 (미국 공보 번호 2008/0027083 A1에 기재된 것과 유사한 방식으로 제조, 1.05 kg)를 실시예 1, 단계 4로부터의 염기성 유기 상에 첨가하였다. 첨가 완료시, 반응 혼합물을 주위 온도에서 16 시간 동안 교반하였다. 상기 기간의 종결시, 반응 혼합물을 HPLC에 의해 분석하였고, 여기서 반응이 완료된 것으로 나타났다. 물 (20 L)에 이어서 아세트산 (HOAc, 0.406 kg)을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성된 유기 상 및 수성 층을 분리하였다. 수성 층을 2-메틸 THF (10 L)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, HOAc (0.406 kg)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 물 (10L)로 세척하고, 생성된 유기 층 및 수성 층을 분리하였다. 상기 수성 층을 2-메틸-THF (10 L)로 다시 추출하였다. 수성 층을 다시 합하고, 디클로로메탄 (DCM, 15 L)을 첨가하였다. 수산화나트륨 (NaOH, 10N, 1.04 L)을 첨가하여 pH를 약 13.0으로 조정하였다. 첨가 완료시, 유기 층 및 수성 층을 다시 분리하고, 생성물-풍부 DCM 층을 모아두었다. 수성 층을 추가의 디클로로메탄 (10L)으로 추출하였다. DCM 풍부 유기 층을 합하고, 물 (10 L)로 세척하였다. 수득된 생성물 풍부 DCM 용액을 진공 하에 최소 부피로 농축시켰다. 에틸 아세테이트 (EtOAc)를 첨가하고, 잔류 DCM 및 물을 계속적으로 증류하여 슬러리 (최종 부피 약 5 L)를 수득하였다. MTBE (15 L)를 첨가하고, 생성된 슬러리를 1 시간 이상 동안 교반하였다. 상기 시간 후, 슬러리를 여과하고, 습윤 필터 케이크를 추가의 MTBE (5 L)로 세척하였다. 습윤 케이크를 진공 하에 55℃에서 LOD ≤ 0.5 wt%까지 건조시켜, 실시예 1의 무정형 유리 염기 (0.9 kg, 55 M% 수율, HPLC 순도 :99.5 AP)를 수득하였다.
Figure pct00024
실시예 2
삼중수소-표지된 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드
Figure pct00025
실시예 3
중수소-표지된 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드
Figure pct00026
실시예 4
탄소-14 표지된 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드
Figure pct00027
실시예 5
N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드의 N-1 결정 형태
N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드유리 염기 결정 형태 (그의 염 및 용매화물 포함)를 하기 기재된 바와 같이 제조하고 특성화하였다.
형태의 특성화를 위한 절차
단결정 데이터
데이터는 브루커-노니우스(Bruker-Nonius) (브루커 AXS, 인크, 미국 53711 위스콘신주 이스트 체릴 파크웨이 매디슨 5465) CAD4 연속 회절계에서 수집하였다. 단위 셀 파라미터는 25개의 고-각도 반사의 실험용 회절계 세팅의 최소 자승 분석에 의해 얻어졌다. 강도는 θ-2θ 가변 주사 기술로 일정한 온도에서 Cu Kα 방사선 (λ = 1.5418 Å)을 이용하여 측정하였으며, 오직 로렌츠(Lorentz)-편광 인자에 대해 보정하였다. 주사 시간의 절반 동안 주사의 양 극단에서 배경 계수를 수집하였다. 대안적으로, 단결정 데이터를 브루커 노니우스 카파 CCD 2000 시스템에서 Cu Kα 방사선 (λ = 1.5418 Å)을 사용하여 수집하였다. 측정된 강도 데이터의 색인화 및 처리는 콜렉트(Collect) 프로그램 수트 (콜렉트 데이터 수집 및 처리 사용자 인터페이스: 콜렉트: 데이터 수집 소프트웨어 (문헌 [R. Hooft, Nonius B. V., 1998])) 중 HKL2000 소프트웨어 패키지 (문헌 [Otwinowski, Z. et al. in Macromolecular Crystallography, Carter, W.C., Jr. et al., eds., Academic, NY, publ., Vol. 276, pp. 307-326 (1997)])에 의해 수행하였다. 대안적으로, 단결정 데이터를 브루커-AXS APEX2 CCD 시스템에서 Cu Kα 방사선 (λ = 1.5418 Å)을 사용하여 수집하였다. 측정된 강도 데이터의 색인화 및 처리는 APEX2 소프트웨어 패키지/프로그램 수트 (APEX2 데이터 수집 및 처리 사용자 인터페이스: APEX2 사용자 매뉴얼, v1.27; 브루커 AXS, 인크, 미국 53711 위스콘신주 이스트 체릴 파크웨이 매디슨 5465)로 수행하였다.
지시되는 경우, 데이터 수집 동안, 옥스포드(Oxford) 크리오시스템 (옥스포드 크리오시스템즈 크리오스트림 냉각기: 문헌 [Cosier, J. et al., J. Appl. Cryst., 19:105 (1986)])의 냉각 스트림으로 결정을 냉각시켰다.
구조는 직접적인 방법으로 해석하고, SDP (SDP, 구조 결정 패키지, 엔라프-노니우스(Enraf-Nonius), 11716 뉴욕주 보헤미아. SDP 소프트웨어에서 산란 인자 (f' 및 f" 포함)는 문헌 [International Tables for Crystallography, Kynoch Press, Birmingham, England, Vol. IV, Tables 2.2A and 2.3.1 (1974)]로부터 입수함) 소프트웨어 패키지 (약간의 국부적 변경이 있음) 또는 결정학적 패키지 MAXUS (마쿠스(maXus) 해석 및 정밀화 소프트웨어 수트: 맥케이, S. (Mackay, S.) 등, 마쿠스: 회절 데이터 또는 SHELXTL4로부터의 결정 구조의 해석 및 정밀화를 위한 컴퓨터 프로그램)을 이용하여 관찰된 반사상에 기초하여 정밀화하였다. 유도된 원자 파라미터 (좌표 및 온도 인자)를 풀 매트릭스 최소-자승을 통해 정밀화하였다. 정밀화에서 최소화된 상관적 요소는 Σw(|Fo| - |Fc|)2이다. R은 Σ||Fo| - |Fc||/Σ|Fo|로 정의되는 반면, Rw = [Σw(|Fo| - |Fc|)2/Σw|Fo|2]1/2이며, 여기서 w는 관찰된 강도의 오차를 기준으로 적절한 가중 상관적 요소이다. 모든 단계의 정밀화에서 차분 맵(difference map)을 검사하였다. 수소를 등방성 온도 인자를 갖는 이상적인 위치에 도입하였지만, 수소 파라미터는 달라지지 않았다.
X선 분말 회절 데이터 (PXRD)
PXRD 데이터를 브루커 C2 GADDS를 사용하여 수득하였다. 방사선은 Cu Kα(40 KV, 50 ㎃)였다. 샘플-검출기 거리는 15 cm였다. 분말 샘플을 직경 1 mm 이하의 밀봉된 유리 모세관에 넣고, 데이터 수집 동안 모세관을 회전시켰다. 2000초 이상의 샘플 노출 시간으로 3≤2θ≤35°에 대해 데이터를 수집하였다. 생성된 2차원 회절 아크(arc)를 적분하여 3 내지 35°2θ 범위에서 스텝 크기가 0.02°2θ인 전통적인 1차원 PXRD 패턴을 생성하였다. 약 200 mg을 필립스 (Philips) 분발 X선 회절 (PXRD) 샘플 홀더에 채웠다. 샘플을 필립스 MPD 유닛 (45 KV, 40 mA, Cu Kα)으로 옮겼다. 데이터는 실온에서 2 내지 32의 2-세타 범위에서 수집하였다 (연속 스캐닝 모드, 스캐닝 속도 0.03°/초, 오토 디버전스(auto divergence) 및 안티 스캐터(anti scatter) 슬릿, 리시빙 슬릿: 0.2 mm, 샘플 스피너: ON).
시차 주사 열량측정법 (DSC)
TA 인스트루먼츠(TA INSTRUMENTS)® 모델 Q1000 또는 2920에서 DSC 실험을 수행하였다. 샘플 (약 2 내지 6 mg)을 알루미늄 팬에서 칭량하여 밀리그램의 1/100까지 정확하게 기록하고, DSC로 옮겼다. 기기를 질소 기체를 사용하여 50mL/분으로 퍼징하였다. 데이터는 실온 내지 300℃ 사이에서 10℃/분의 가열 속도로 수집하였다. 흡열 피크가 아래를 향하게 플롯이 생성되었다.
열 중량 분석 (TGA)
TA 인스트루먼츠® 모델 Q500 또는 2950에서 TGA 실험을 수행하였다. 샘플 (약 10 내지 30 mg)을 미리 중량을 잰 백금 팬에서 칭량하였다. 샘플 중량을 정확하게 측정하고, 장치에 의해 밀리그램의 1/1000까지 기록하였다. 노를 100 ㎖/분의 질소 기체로 퍼징하였다. 데이터는 실온 내지 300℃ 사이에서 10℃/분의 가열 속도로 수집하였다.
형태의 제조 및 분석
실시예에 대한 단위 셀 데이터 및 다른 특성을 표 1에 나타내었다. 단위 셀 파라미터를 단결정 X선 결정학적 분석으로부터 수득하였다. 단위 셀에 대한 자세한 설명은 문헌 [Chapter 3 of Stout et al., X-Ray Structure Determination: a Practical Guide, Macmillan (1968)]에서 찾아볼 수 있다.
최종적으로, 도 1에 실시예 5에 대한 XRPD 패턴을 제공하였다. 도 2 및 3에는 각각 실시예 5의 DSC 및 TGA 분석이 개시되어 있다.
형태 제조, XRD, DSC 및 TGA 특성화
실시예 5, N-1 형태, 유리 염기
N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드, 형태 N-1을 에틸 아세테이트 및 MTBE로부터 결정화시켰다. 형태 N-1은 순수한 (물 또는 용매의 분자를 함유하지 않음) 형태의 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드였다. 형태 N-1을 XRD 패턴에 의해 특성화하였고, 이는 단결정 구조 데이터에서 생성된 모의 패턴과 일치하였다. 형태 N-1을 전형적으로 약 205℃에서 개시하는 용융/분해 흡열을 갖는 DSC 온도기록도에 의해 특성화하였다. 형태 N-1을 약 210℃까지 중량 손실을 갖는 TGA 열 곡선에 의해 특성화하였다.
Figure pct00028
표 1에 사용된 변수는 하기 정의되어 있다:
T = 결정학적 데이터에 대한 온도 (℃) (RT는 약 +22℃의 실온임)
V = 단위 셀의 부피
Z' = 비대칭 단위 당 약물 분자의 수
Vm = V (단위 셀)/(Z 약물 분자/셀)
sg = 공간군
dcalc = 계산된 결정 밀도
비교 약리학적 특징
실시예 1 및 WO 2005/021500 A1, WO 2008/014381 A1 및 WO 2008/014360 A1에 나타난 화합물의 약리학적 특징을 비교하는 검정 및 데이터를 하기 제시하였다.
인간 말초 혈액 단핵 세포 결합
문헌 [Yoshimura et al., J. Immunol., 145:292 (1990)]을 또한 참조한다. 인간 CCR-2 결합 검정은 추적자 리간드로 125I-인간 MCP-1을 사용하여 인간 말초 혈액 단핵 세포 (hPBMC)로 확립하였다. hPBMC를 피콜-하이파크(Ficoll-Hypaque) (메디아텍(Mediatech) 셀그로(CELLGRO)®)를 사용하는 표준 프로토콜을 이용하여 인간 류코팩(leukopak) (바이올로지 스페셜티 인크.(Biological Specialty Inc.))으로부터 단리하였다. 단리된 hPBMC를 세척하고, 결합 완충제 (RPMI-1640, 0.1% BSA, 20 mM Hepes, pH 7.4) 중에 1x107 개/ml로 희석하였다. 125I-MCP-1 (NEN/퍼킨 엘머(Perkin Elmer))을 결합 완충제 중에 0.45 nM로 희석하였다. 화합물을 결합 검정에 사용된 최종 농도의 3배로 결합 완충제 중에 희석하였다. 결합 검정을 96-웰 필터 플레이트 (밀리포어(Millipore))를 사용하여 수행하였다. 전체 125I-MCP-1 결합을 다음과 같이 평가하였다: 총 부피 150 ㎕의 각각의 반응물에 5x105개 세포, 0.15 nM 125I-MCP-1, 및 화합물 (최종 농도 0 내지 100 nM 범위)을 첨가하였다. 플레이트를 실온에서 30분 동안 인큐베이션한 후에, 진공 매니폴드 여과 (밀리포어)를 이용하여 RPMI-1640, 0.1% BSA, 0.4 M NaCl, 20 mM Hepes, pH 7.4로 3회 세척하였다. 세척 후, 플레이트를 실온에서 60분 동안 공기-건조시켰다. 이어서 각각의 웰에 마이크로신트 20(Microscint 20) 25 ㎕를 첨가하였다. 플레이트를 밀봉하고, 1분 동안 트리룩스(Trilux) 상에서 계수하였다. 300 nM 냉각 MCP-1 (페프로텍 인크.(PeproTech Inc.))의 존재하에 비-특이적 결합을 결정하였다. 특이적 125I-MCP-1을 전체 결합과 비-특이적 결합 사이의 차이로 산출하였다. 모든 조건에 대해 이중으로 시험하였다. IC50은 특이적 결합을 50% 감소시키는데 필요한 경쟁 화합물의 농도로 정의하였다.
T 세포 CCR-5 결합 검정에 이용된 절차는 CCR-5 (하기 참조)의 공급원으로서 인간 말초 T 세포를 사용하고, 추적자로서 125I-MIP-1β (아머샴)를 사용한 것을 제외하고는 hPBMC CCR-2 결합 검정에 대한 것과 유사하였다.
말초 T 세포의 단리
최근의 보고는 T 세포 상에서의 CCR-5 발현이 개체 사이에서 상당히 다르다는 것을 지적한다 (문헌 [Desmetz, C. et al., "The strength of the chemotactic response to a CCR-5 binding chemokine is determined by the level of cell surface CCR-5 density", Immunology, 119(4):551-561 (2006)]). 따라서, 혈액 공여자를 CCR-5의 높은 T-세포 발현에 대해 미리 스크리닝하였다. 먼저, hPBMC를 피콜-하이파크를 이용하여 표준 프로토콜에 의해 인간 전혈로부터 단리하였다. 이어서, 항-CCR-5 항체 + 항-CD4 항체 또는 항-CD8 항체로 염색한 후, 유동 세포측정 분석을 이용하여 T 세포 상에서의 CCR-5 발현을 측정하였다. >5% 말초 T 세포 (CD4+ 및 CD8+)가 CCR-5를 발현하는 혈액 공여자에게 요청하여 혈액을 다시 제공받아서, PBMC를 단리하고 후속으로 양 적혈구 (RBC)에 결합하는 T 세포 고유 능력에 의존적인 표준 E-로제팅(rosetting) 기술을 이용하여 T 세포를 단리하였다.
CCR-2 화학주성
인간 CCR-2 화학주성 검정을 인간 단핵구 세포주 THP-1로 수행하였다. THP-1 세포를 우선 페놀 레드-무함유, BSA-무함유 RPMI-1640 (pH 7.4) 중에서 15분 마다 부드럽게 혼합하면서 37℃에서 30분 동안 형광 염료 칼세인(Calcein)-AM으로 표지하였다. 이어서, 표지된 세포를 세척하고, 화학주성 완충제 (페놀 레드-무함유 RPMI-1640, 0.1% BSA, pH 7.4) 중에 1x105/ml로 재현탁시켰다. 시험 화합물을 화학주성 완충제로 0.01 nM에서 1 μM 범위의 최종 검정 농도가 되도록 희석하였다. 리간드 MCP-1 (페프로텍 인크.)을 화학주성 완충제 중에 20 nM로 희석하였다. 검정을 수행하기 위해, 동일한 부피의 시험 화합물 희석액을 동일한 부피의 표지된 THP-1 세포와 혼합하고 (혼합물 1), 동일한 부피의 시험 화합물 희석액을 동일한 부피의 희석된 MCP-1 리간드와 혼합하였다 (혼합물 2). 혼합물을 둘 모두 독립적으로 37℃에서 10분 동안 인큐베이션한 후에 부드럽게 혼합하였다. 이어서, 화학주성 플레이트 (벡톤 디킨슨(Becton Dickinson))에서 50 ㎕의 혼합물 1을 상부 챔버에 넣고, 225 ㎕의 혼합물 2를 하부 챔버에 넣음으로써 MCP-1-유도된 화학주성을 측정하였다. 플레이트의 뚜껑을 덮고, 37℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 30분 후에, 플레이트를 시토플루오르(CYTOFLUOR)® 상에서 판독하였다. 모든 조건에 대해 이중으로 시험하였다. 신호 대 잡음 결정의 경우, 표지된 THP-1 세포 단독 (5x104개/웰) 50 ㎕를 상부 챔버에 넣고, 리간드 MCP-1 단독 225 ㎕를 하부 챔버에 넣었다 (최종 농도 10 nM). 등급별 농도의 시험 화합물에 의해 달성된 억제를 화합물-무함유 MCP-1 대조군의 백분율로 산출하였다. IC50은 세포 화학주성의 50% 억제에 도달하는데 필요한 시험 화합물의 농도로 정의하였다.
CCR-5 화학주성
단리된 말초 T 세포를 CCR-5-발현 세포로서 사용하고, MIP-1β (50 nM, 페프로텍 인크.)가 리간드였던 것을 제외하고는 상기 기재된 것과 유사한 절차를 채택하였다.
hERG 유동
hERG 채널을 안정하게 발현시키는 HEK293 세포를, 인큐베이터에서 10% 시그마(Sigma) 태아 소 혈청, 비-필수 아미노산, 2 mM L-글루타민 및 500 ㎍/ml G418이 보충된 둘베코 변형된 이글 배지 중에서 성장시켰다 (37℃, 5% CO2). 세포 해리 완충제를 사용하여 플라스크로부터 세포를 추출한 후에, 384-웰 코닝(CORNING)® 폴리-D-리신 코팅된 흑색/투명 플레이트에 10% 혈청 배지 중 2x104개 세포/웰 (20 ㎕)의 밀도로 플레이팅하고, 세포의 전면배양 단일층이 생성될 때까지 5% CO2 인큐베이터에서 15 내지 24시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다.
BTC-AM 염료의 2 mM 원액 (몰레큘라 프로브스(Molecular Probes), 오리곤주 유진)을 100% DMSO로 제조한 후에, 검정 당일에 DMSO 중 10%(w/v) 플루론산에 1:1로 첨가하였다. 이어서, 염료를 hERG 외 EP 완충제 (140 mM NaCl, 4.0 mM KCl, 1.8 mM CaCl2, 1.0 mM MgCl2, 10 mM HEPES, pH 7.3 및 10 mM 글루코스; 모든 완충액 성분은 시그마 케미칼(Sigma Chemical)로부터 입수함)로 희석하였다. 이 BTC 염료 혼합물 (30 ㎕)을 세포에 첨가하여 2.5 μM의 최종 부하 농도를 제공하였다. 세포를 21℃에서 45분 동안 인큐베이션하였다.
시험 화합물을 60 ㎕의 10 mM DMSO로 희석하였다. 이어서, 화합물을 384-웰 플레이트의 칼럼 1-10 및 11-20에서 DMSO로 1:2 비로 연속적으로 희석하였다. 검정-예비용 플레이트는, 벨로시티(Velocity) 11 바이오셀 (BIOCEL)® 상에서 제조된 DMSO 연속 희석 플레이트로부터의 2.5 ㎕ 스탬핑에 의해 제조하였다. EP 완충제 48 ㎕를 첨가한 후에 희석하여 수성 플레이트를 만들고, 이로부터 30 내지 45분 후에 FLIPR® 상에서 검정을 판독하였다. 염료 부하 후에, 수성-희석된 화합물을 3개의 복제 플레이트의 세포에 첨가하여 (10 ㎕), 80 μM 내지 0.156 nM의 10-지점 농도 범위를 생성하였다. 검정에서 최종 DMSO 농도는 1%였다. 검정-예비용 수성 플레이트를 제조하고, 사이바이오(Cybio) 액체 취급기에서 희석하였다.
염료 부하된 세포를 아르곤 레이저의 488 nm 선을 사용하여 염료를 여기시키는 FLIPR®384 (몰레큘라 디바이시즈, 캘리포니아주 서니베일)에서 판독하였다. 방출을 540 ± 30 nm 대역 통과 필터를 사용하여 필터링하였다. 66 mM K2SO4 및 1.3 mM Tl2SO4 (시그마/알드리치(Aldrich))를 함유하는 EP 완충제 20 ㎕/웰을 첨가하여 hERG 채널이 개방되도록 자극하였다. 각 플레이트에서, 데이터를 12초 동안 매 초마다 수집하였으며, 이 때 Tl+-함유 자극 완충제를 첨가하였다. 데이터 수집은 48초 동안 매초 마다 진행하였으며, 이후에는 추가 2분 동안 3초 마다 계속하였다.
검정의 역학적 범위는 블랭크 웰 및 토탈 웰로부터 결정하였다. 토탈 웰 (칼럼 21 및 22)은 플레이트에서 최대 hERG 활성화를 나타낸 웰이고 (시험 화합물이 존재하지 않음), 블랭크 웰 (칼럼 23 및 24)은 100% hERG 억제를 나타낸 웰이다. 블랭크 웰은 400 nM의 표준 hERG 억제제 도페틸리드 (Ficker et al., 1998) 또는 E-4031을 함유하였다. 먼저, 각각의 샘플 웰에서 본래 데이터 지점을 세포/신호 변화, 음성 대조군 (블랭크) 배경에 대해 보정하고, 온라인 FLIPR® 소프트웨어를 사용하여 양성 대조군 (토탈)에 대해 정규화시켰다. 이어서, hERG Tl+ 유동 데이터에 대한 시험 화합물 농도 반응 곡선을 엑셀 피트(Excel Fit) (ID 비지니스 솔루션스 리미티드(ID Business Solutions Limited), 영국 서리)를 사용하여 단일-부위 로그 방정식, Y= A + ((B-A)/1 + ((C/X)^D))) (여기서, A = 최대 억제)에 피팅하였다. 시험 화합물의 주어진 조건에서 Tl+ 유동에 대한 형광 변화의 최대 크기를 피팅하여 데이터를 분석하였다. 화합물의 효능 (IC50 값)을 3중 웰의 평균으로부터 산출하였다.
나트륨 채널, 부위 2 결합 검정
문헌 [Catterall, W.A. et al. J. Biol. Chem., 256:8922 (1981)]을 또한 참조한다. 표준 결합 완충제는 50 mM HEPES, 50 mM 트리스-HCl, pH 7.4, 130 mM 콜린 클로라이드, 5.4 mM KCl, 0.8 mM MgCl2, 5.5 mM 글루코스, 40 ㎍/mL LqT를 함유하였다. 표준 결합 완충제 중 5 nM [3H]-바트라코톡신 및 원하는 농도의 시험될 화합물을 함유하는 반응 혼합물에 시냅토솜 (비스타(Wistar) 래트 뇌로부터 제조됨)을 첨가하여 결합 반응을 개시하였다. 이어서, 샘플을 혼합하고, 37℃에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 50 mM HEPES, 50 mM 트리스-HCl, pH 7.4, 1.8 mM CaCl2, 0.8 mM MgCl2 및 1 mg/mL 소 혈청 알부민을 함유하는 빙냉 세척 완충제를 첨가하여 반응을 중지시켰다. 시냅토솜을 즉시 유리 섬유 필터로 수집하고, 세척 완충제로 3회 세척하였다. 필터에 남아있는 [3H]-바트라코톡신의 방사능을 액체 섬광 분광측정계를 이용하여 계수하였다.
병행 인공막 투과성 검정 (PAMPA)
병행 인공막 투과성 검정 (PAMPA)은 위장관 (GIT) 지질로 지칭되는 특수 제제화된 레시틴-기재의 지질 조합으로 이루어진다. GIT 지질을 사용하여 Caco-2 검정에 사용된 것과 유사한 샌드위치 플레이트 어셈블리에 막을 형성하였다. GIT 지질은 인간에서 수동적으로 흡수되는 것으로 공지된 표준 화합물에 의해 측정시 생체내 막 조성 및 성능과 매우 유사하였다. PAMPA는 화합물 발견을 위한 투과성 스크리닝에 이용되는 시험관내 모델로 널리 사용된다. PAMPA 막을 통한 화합물의 통과 속도를 이용하여 투과 계수 (Pc)를 결정하였으며, 이는 화합물의 생체내 수동적 투과성과 관련이 있을 수 있다.
특정 화합물의 투과 계수 (Pc)를 첨부-측부 및 기저-측부 (pH 7.4)의 pH-의존성 세팅에서 조사하였다. 모든 실험은 삼중 결정으로 수행하였다.
시험 화합물 (100% DMSO 중 10 mM 원액)을 pH 7.4 공여자 웰 완충제 (pION CAT #110151)에서 1:100으로 희석하여 1% DMSO 중 100 μM 검정 용액을 제공하였다. 공여자 웰 완충제로 희석한 화합물을 와트만(Whatman) 유니필터(UNIFILTER)® 플레이트로 옮기고, 여과한 후에 검정 플레이트 (pION CAT #110163)의 공여자 웰에 200 ㎕ 분배하였다. 지질 용액 (pION CAT #110169) 4 ㎕를 여과 플레이트 (VWR CAT #13503)에 피펫팅하여 PAMPA 막을 형성하였다. 이어서, 막을 수용자 웰 완충제 (pH 7.4) (pION CAT #110139) 200 ㎕로 덮었다. PAMPA 검정 플레이트 (공여자 측면 및 수용자 측면)를 합하고, 실온에서 4시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 플레이트를 분리하고, 분광 광도 플레이트 (VWR CAT #655801)를 채웠다 (150 ㎕/웰). 공여자, 수용자, 참조 및 블랭크 플레이트를 스펙트라맥스(SPECTRAMAX)® UV 플레이트 판독기에서 판독하였다. 스펙트럼을 분석하여 Pc 값을 생성하는 pION 소프트웨어로 데이터를 수집하였다.
hERG 패치 클램프
전세포 패치-클램프를 사용하여 클로닝된 hERG 칼륨 채널 α 서브유닛을 안정하게 발현시키는 HEK-293 세포에서 hERG 전류를 직접 측정하였다. 화합물을 수성 완충제 (pH 7.4) 중에서 실온에서 시험하였다. 반복적인 시험 펄스 (0.05 Hz)를 2초 동안 -80 mV에서 +20 mV의 유지 전위로부터 인가하고, 꼬리 전류를 -65 mV로의 전압 단계화에 의해 시험 펄스에 따라 유도하였다. 화합물로부터의 효과를 최대 고리 전류의 억제를 측정하여 산출하였다.
나트륨 채널 패치 클램프
전세포 패치-클램프를 사용하여 인간 심장 나트륨 채널인 SCN5A를 발현하는 HEK-293 세포에서 내부 나트륨 전류를 직접 측정하였다. 화합물을 단백질-무함유 수성 완충제로 시험하였다. 정상 상태의 억제를 측정하기 위해, 나트륨 전류를 하기 전압 프로토콜을 이용하여 5초 마다 유도하였다: 세포를 -90 mV의 전위에서 유지하고, 60 ms 동안 -20 mV로 단계적 상승시켰다. -20 mV로의 시험 펄스 도중에 최대 전류의 억제를 측정하여 효과를 산출하였다. 억제의 속도-의존성은 1 Hz 및 4 Hz의 진동수에서의 자극에 의해 평가하였다.
래트에서의 단일-용량 약동학
수컷 스프라그-돌리(Sprague-Dawley) 래트 (250 내지 300 g)를 약동학 연구에 사용하였다. 래트는 밤새 공복을 유지시킨 후에 PO 투여하고, 투여 4시간 후에 먹이를 공급하였다. 혈액 샘플 (약 0.3 mL)을 경정맥으로부터 K2EDTA-함유 튜브에 수집한 후에, 4℃ (1500 내지 2000 xg)에서 원심분리하여 혈장을 수득하였다. 경구 생체이용률 연구에서, 2개 군의 동물 (N = 2 내지 3/군)에게 시험 화합물을 경정맥을 통한 정맥내 (IV) 주입 (10분 동안)으로 또는 경구 위관영양법으로 투여하였다. 일련의 혈액 샘플을 투여 0.17 (IV의 경우만), 0.25, 0.5, 0.75, 1, 2, 4, 6, 8 및 24시간 후에 수득하였다. 4℃ (1500 내지 2000 xg)에서 원심분리하여 수득한 혈장 샘플을 LC/MS/MS로 분석할 때까지 -20℃에서 보관하였다.
원숭이에서의 단일-용량 약동학
다양한 시험 화합물의 약동학을 교차-고안된 수컷 시노몰구스 원숭이에서 평가하였다. 원숭이는 밤새 공복을 유지시킨 후에 PO 투여하고, 투여 4시간 후에 먹이를 공급하였다. 한 군의 1 내지 3 마리의 동물 (3 내지 5 kg)에게 화합물을 대퇴부 정맥을 통한 IV 주입 (10분에 걸쳐)으로 또는 경구 위관영양법으로 투여하였으며, 처치 사이에 1 주일간 세척하였다. 일련의 혈액 샘플 (약 0.3 mL)을 투여 0.17 (IV만), 0.25, 0.5, 0.75, 1, 2, 4, 6, 8 및 24시간 후에 대퇴부 동맥으로부터 수집하고, 4℃ (1500 내지 2000 xg)에서 원심분리하여 혈장을 수득하였다. 샘플을 LC/MS/MS로 분석할 때까지 -20℃에서 보관하였다.
약동학 검정을 위한 데이터 분석
약동학 파라미터를 혈장 농도 대 시간 데이터 (키네티카(Kinetica) 소프트웨어, 버전 4.2, 인나페이스 코포레이션(InnaPhase Corporation), 펜실베이니아주 필라델피아)의 비-구획 분석으로 수득하였다. 최대 농도 (Cmax) 및 Cmax를 위한 시간을 실험적 관찰로부터 직접 기록하였다. 0 시부터 마지막 샘플링 시간까지의 곡선 아래 면적 (AUC(0-T))을 선형 및 로그 사다리꼴 합 공식의 조합을 이용하여 산출하였다. 전체 혈장 클리어런스 (CLTp), 분포의 정상 상태 부피 (Vss), 겉보기 제거 반감기 (T1/2) 및 평균 체류 시간 (MRT)을 IV 투여 이후에 추정하였다. 정량화가능한 농도에서 최소 3개의 시점을 이용하여 T1/2를 평가하였다. 절대 경구 생체이용률 (F)을 경구 및 IV 투여에 따른 용량-정규화 AUC 값의 비로 추정하였다.
CCR-2 칼슘 동원
인간 CCR-2-매개 세포내 칼슘 유동 검정에 인간 단핵구성 세포주 THP-1 단핵구성 세포주를 도입하였다. 먼저, THP-1 세포를 4 μM 플루오-3 (몰레큘라 프로브스) 및 1.25 mM 프로베네시드를 함유하는 글루코스- 및 HEPES-완충 PBS (pH 7.4) 중에 재현탁시킴으로써 이를 형광단으로 부하시키고, 이어서 37℃에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 1회 세척하여 잉여 플루오-3을 제거한 후, 세포를 1.25 mM 프로베네시드를 함유하는 세척 완충제 (페놀 레드-무함유 RPMI 함유) 중에 재현탁시키고, 96-웰 플레이트에 2 x 105/웰로 플레이팅하였다. 플레이트를 아르곤-이온 레이저를 사용하는 FLIPR®-1 (몰레큘라 디바이시스)에 넣어 세포를 여기시키고, 형광의 변화를 모니터링하는 동안 로봇식으로 시험 화합물 및 인간 MCP-1을 첨가하였다. 0 내지 100 nM 농도 범위의 시험 화합물 희석액, 또는 완충제 단독을 각 웰에 첨가하고, 원심분리하고, 10분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 재조합 인간 MCP-1 (페프로텍 인크.)을 10 nM의 최종 농도로 첨가하였다. 형광 이동을 모니터링하고, 베이스-피크 편위를 자동적으로 계산하였다. 모든 조건을 이중으로 시험하였다. 화합물의 등급별 농도에 의해 달성된 억제를 화합물-무함유 MCP-1 대조군의 백분율로서 계산하였다.
CCR-5 칼슘 동원
MIP-1β (50 nM)가 리간드였고, 세포주가 내인성 CCR-5가 유전자 발현의 무작위 활성화 (RAGE) 기술에 의해 상향 조절된 HT1080/CCR-5였다는 것을 제외하고는 상기 기재된 CCR-2 칼슘 동원과 유사한 절차를 채택하였다.
CCR-2 GTP-γS 교환
CCR-2에 대한 [35S]-GTPγS의 MCP-1 의존성 결합을, 내인성 CCR-2가 RAGE 기술 (아테르시스(Athersys))에 의해 상향 조절된 HT1080 인간 세포주로부터 제조된 막을 이용하여 결정하였다. 각각의 반응물 (200 ㎕)은 20 mM Na-HEPES, 10 mM MgCl2, 50 mM NaCl, 0.1% BSA (시그마), 1% DMSO 및 10 μM GDP (pH 7.4)를 함유하였다. 1 pM에서 1 μM까지 MCP-1 농도를 변경하여 [35S]-GTPγS의 MCP-1 의존성 결합에 대한 EC50을 결정하였다. 반응물을 실온에서 90분 시간 동안 인큐베이션하고, [35S]-GTPγS/Gαi 복합체를 밀리포어 MAFC 96 웰 필터 플레이트 상에서 수집하였다. CCR-2 막에 대한 MCP-1 의존성 [35S]-GTPγS 결합의 시험 화합물에 의한 억제를 동일한 조건 하에 1 nM MCP-1에서 결정하였다. 데이터를 그래프패드 프리즘 4로부터의 리간드 결합 소프트웨어를 이용하여 분석하였다.
CCR-5 GTP-γS 교환
MIP-1α/LD78β가 리간드였고, 세포주가 CCR-5/HT1080이었던 것을 제외하고는 상기 기재된 CCR-2 GTP-γS 교환 절차와 유사한 절차를 채택하였다. MIP-1α/LD78β가 MIP-1β보다 더 큰 신호대잡음비를 제공하였기 때문에 이를 CCR-5 리간드로서 사용하였다.
CCR-2 전혈 인테그린 (CD11b) 상향조절
CCR-2-의존성 CD11b 상향조절 검정에 인간 전혈을 도입하였다. 전혈 (100 ㎕)을 37℃에서 10분 동안 실시예 1의 농도 범위로 예비 인큐베이션하였다. 이어서, 인간 재조합 MCP-1 (10 ㎕, 100nM)을 비자극 대조군 반응물을 제외한 각각의 반응물에 10nM의 최종 농도로 첨가하였다. 반응물을 37℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 빙냉 FACS (10% FBS를 함유하는 PBS) 완충제 1 ml를 첨가하고, 샘플을 5분 동안 1500 rpm으로 원심분리하고, FACS 완충제 50 ㎕ 중에 재현탁시켰다. 이어서, 세포를 암실에서 항-CD14-FITC/항-CD11b-PE 용액 20 ㎕와 함께 얼음 상에서 20 분 동안 인큐베이션한 후, 각각의 반응물에 1x FACS 용해 용액 (벡톤 디킨슨) 1 ml를 첨가하였다. 이어서, 샘플을 암실에서 얼음 상에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 고정 및 적혈구 용해 후, 세포를 원심분리하고 FACS-용해 용액 200 ㎕ 중에 재현탁시켰다. 샘플을 팩스칼리버(FACSCalibur) 유동 세포측정기를 이용하여 1시간의 염색 이내에 유동 세포측정법에 의해 분석하였다. 데이터 수득 및 분석을 셀퀘스트프로(CellQuestPro) 소프트웨어를 이용하여 수행하였다. 순차 게이팅 전략을 이용하여 CD14높은 CD11b+ 단핵구 집단을 분석하였다. 분석을 위해, CD11b를 중앙 형광 강도 (MFI)로서 측정하였다.
CCR-5 전혈 CD11b 상향조절
MIP-1β (50 nM)를 리간드로서 사용한 것을 제외하고는 상기 기재된 CCR-2 전혈 CD11b 상향조절 절차와 유사한 절차를 채택하였다.
비교되는 화합물 (WO 2008/014381 A1, WO 2008/014360 A1 및 WO 2008/014361 A1 참조)에 대하여 하기 데이터를 확인한다. 비교 데이터는 등가효능 이중 CCR-2 및 CCR-5 수용체 억제 및 바람직한 약리학적 특징의 뜻밖의 조합을 나타내었다.
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
Figure pct00034
놀랍게도, 본 발명의 실시예 1은 CCR-2 또는 CCR-5에 대하여 우세하게 활성은 아니었으나, 대신에 이는 그의 CCR-2 및 CCR-5 결합 능력에 의한 측정시 등가효능 이중 길항제이며 유익한 약리학적 특징을 보유한다는 것을 발견하였다. 표 2 내지 5를 참조한다. 예를 들어, WO 2008/014381 및 WO 2008/014360의 실시예 1이 CCR-2에 대해 우세하게 활성인 반면, 실시예 1 은 CCR-2 및 CCR-5에 대하여 등가효능이다.
유용성
실시예의 화합물은 당업자에게 공지된 검정을 이용하여 케모카인 수용체 활성의 조절제인 것으로 밝혀졌다. 본 섹션에서, 본 발명자들은 이러한 분석에 대해 기재하고 있으며, 이들의 참조 문헌을 제공하였다. 보다 많은 검정이 본원의 상기 섹션 표제 "비교 약리학적 특징"에 기재되어 있다. 이들 MCP-1 길항작용의 검정에서 활성을 나타내는 실시예의 화합물은 케모카인 및 이들의 동족 수용체와 연관된 인간 질환의 치료에 유용할 것으로 기대된다. 이들 검정에서의 활성은 특정 검정에서 측정하였을 때 30 μM 이하 농도의 IC50을 나타내는 화합물로 정의하였다.
MCP-1-유도된 칼슘 유입의 길항작용
(문헌 [Sullivan et al., Methods Mol. Biol., 114:125-133 (1999)])
실시예에 기재된 하나 이상의 화합물은 본원에 기재된 MCP-1-유도된 칼슘 유입 검정의 길항작용에서 활성을 가졌다.
칼슘 동원은 형광 Ca2+ 지시 염료, 플루오-3을 사용하여 측정하였다. 세포를 0.1% 소 혈청 알부민, 20 mM HEPES 완충제, 5 mM 글루코스, 1% 소 태아 혈청, 4 μM 플루오-3 AM 및 2.5 mM 프로베네시드를 함유하는 인산염-완충 염수 중에서 8x105개 세포/ml로 37℃에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 이러한 칼슘 검정에 사용된 세포는 문헌 [Weiner et al., J. Immunol. Methods, 36:89-97 (1980)]에 기재된 바와 같이 단리된 인간 단핵구 또는 내인성 CCR-2 수용체를 발현하는 세포주, 예컨대 THP-1 및 MonoMac-6을 포함할 수 있다. 이어서, 세포를 0.1% 소 혈청 알부민, 20 mM HEPES, 5 mM 글루코스 및 2.5 mM 프로베네시드를 함유하는 인산염-완충 염수로 3회 세척하였다. 이 세포를 0.5% 소 혈청 알부민, 20 mM HEPES 및 2.5 mM 프로베네시드를 함유하는 인산염-완충 염수 중에서 최종 농도 2-4x106개 세포/ml로 재현탁시켰다. 세포를 96-웰 흑벽 마이크로플레이트 (100 ㎕/웰)에 플레이팅하고, 상기 플레이트를 5분 동안 200 x g에서 원심분리하였다. 다양한 농도의 화합물을 상기 웰 (50 ㎕/웰)에 첨가하고, 5분 후에 50 ㎕/웰의 MCP-1을 첨가하여 최종 농도 10 nM을 얻었다. 칼슘 동원을 형광-영상화 플레이트 판독기를 이용하여 검출하였다. 세포 단일층을 아르곤 레이저 (488 nm)로 여기시키고, 세포-관련 형광을 3분 동안 측정하였다 (처음 90초 동안은 1초 마다, 및 다음 90초 동안은 10초 마다 측정함). 데이터를 임의의 형광 단위로서 작성하고, 각 웰에 대한 형광 변화를 최대-최소 편차로서 측정하였다. 화합물-의존성 억제는 단독 MCP-1만의 반응에 상대적으로 계산하였다.
포유동물 케모카인 수용체는 인간과 같은 포유동물에서 면역 세포 기능을 방해하거나 촉진하기 위한 표적을 제공한다. 케모카인 수용체 기능을 억제하거나 촉진하는 화합물은 치료 목적으로 면역 세포 기능을 조절하는 데 특히 유용하다.
따라서, 본 발명은 천식 및 알레르기성 질환, 병원성 미생물 (정의에 의해 바이러스를 포함함)에 의한 감염, 뿐만 아니라 자가면역 병리상태, 예컨대 류마티스 관절염 및 아테롬성동맥경화증을 비롯한 다양한 염증성, 감염성 및 면역조절성 장애 및 질환의 예방 및/또는 치료에 유용한 화합물에 관한 것이다.
예를 들어, 포유동물 케모카인 수용체 (예를 들어, 인간 케모카인 수용체)의 하나 이상의 기능을 억제하는 본 발명의 화합물은 염증성 또는 감염성 질환을 억제 (즉, 저하 또는 예방)하기 위해 투여될 수 있다. 그 결과, 백혈구 이동, 부착, 화학주성, 세포외유출 (예를 들어, 효소, 히스타민의 세포외유출) 또는 염증성 매개인자 방출과 같은 하나 이상의 염증 과정을 억제한다.
유사하게, 포유동물 케모카인 수용체 (예를 들어, 인간 케모카인)의 하나 이상의 기능을 촉진하는 본 발명의 화합물을 투여함으로써, 백혈구 이동, 부착, 화학주성, 세포외유출 (예를 들어, 효소, 히스타민의 세포외유출) 또는 염증성 조절인자 방출과 같은 면역 또는 염증성 반응을 자극 (유도 또는 강화)하여, 염증 과정을 유리하게 자극한다. 예를 들어, 호산구는 기생충 감염을 제거하기 위해 동원될 수 있다. 또한, 케모카인 수용체 내재화 유도를 통해 세포에서 수용체 발현을 손실시킬만큼 충분한 화합물을 전달하거나 또는 잘못된 방향으로 세포를 이동시키는 방식으로 화합물을 전달하는 것이 의도되는 경우, 포유동물 케모카인 수용체의 하나 이상의 기능을 촉진하는 본 발명의 화합물에 의한 상기 염증성, 알레르기성 및 자가면역 질환의 치료가 또한 의도될 수 있다.
영장류, 예컨대 인간 이외에도, 다양한 다른 포유동물이 본 발명의 방법에 따라 치료될 수 있다. 예를 들어, 소, 양, 염소, 말, 개, 고양이, 기니아 피그, 래트 또는 다른 소과, 양과, 말과, 개과, 고양이과, 설치류 또는 쥐과 종들을 비롯한 포유동물이 치료될 수 있으나 이들로 한정되지는 않는다. 그러나, 이 방법은 또한 조류 종과 같은 다른 종에서도 실행될 수 있다. 상기 방법에서 치료되는 대상체는 케모카인 수용체 활성의 조절이 요구되는 수컷 또는 암컷인 포유동물이다. 본원에 사용된 "조절"은 길항작용, 효능작용, 부분적 길항작용 및/또는 부분적 효능작용을 포함하는 것으로 의도된다.
형광측정 영상화 플레이트 판독기 (FLIPR®)-기반 기능적 검정
HT1080 세포 (클론 3559.1.6)를 384-웰 플레이트 (흑색/투명 바닥 바이오코트(BIOCOAT)® PDL, 벡톤 딕킨슨)에서 10,000개 세포/웰 (30 ㎕)로 플레이팅하고, 30 ㎕/웰의 플루오-4 AM 형광 염료 (DMSO 440 ㎕에 플루오-4 AM 1 mg을 용해시키고, 플루로닉 용액 100 ㎕로 희석한 후에 행크스(Hank) 완충제 10 mL로 추가로 희석하여 제조함)를 충전시켰다. 세포를 30분 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션한 후에 3회 세척하고, 검정 완충제 (20 mM HEPES, 1.2 mM CaCl2, 5 mM MgCl2, 2.5 mM 프로베네시드, 0.5% BSA, 1x 행크스)에 현탁시켰다. 시험 제품을 DMSO로 연속적으로 희석한 다음 검정 완충제로 1:10 희석한 후에 세포에 첨가하였다 (10 ㎕/웰). FLIPR®을 사용하여, 유동 유도 (즉, 효능제 활성)에 대해 플레이트를 판독하였다 (10 내지 70초). 이어서, 세포를 효능제 용액 (30 ㎕/웰; 100 μM MIP-1 베타 30 ㎕를 검정 완충제 100 mL로 희석시켜 제조함; 이 프로토콜은 검정물에 최종 농도 5 nM MIP-1 베타를 전달함)으로 추가 충전하고, 플레이트를 1분 동안 FLIPR®을 사용하여 판독하였다. 시험 제품의 길항제 활성을 0.4% DMSO/완충제 음성 대조군과 비교하여 결정하였다.
생체내 검정(들) 및 효능
N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드 (또한 "실시예 1"로 지칭됨)를 하기 기재된 생체내 검정으로 평가하였다.
hCCR-2 KI 마우스 방법에서의 48-시간 티오글리콜레이트 (TG)-유도된 복막염 모델
hCCR-2 KI 마우스 (C57BL/6-SVJ129)에 티오글리콜레이트 (TG) (하디 다이아그노스틱스(Hardy Diagnostics)) 1 ml를 복강내 주사하였다. 각 연구에서, 군당 8마리의 수컷 마우스가 사용되었다. 실시예 1은 TG 주사 1시간 전에 경구 투여하였다. 사용된 비히클은 물 중 0.01 N HCl이었다. TG 주사 48시간 후, 5 ml의 PBS/10 mM EDTA/10% BSA를 복막 강에 주사하여 복막 세척을 수행하였다.
48시간 TG 복막염 연구를 위해, 실시예 1을 1일에 2회 투여하였으며, 첫 번째 투여는 TG 주사 1시간 전이었다. 전체 복막 세포수를 세포 계수기에 의해 단리된 세포 상에서 수득하였다. 사이토스핀을 수행하여 분화 백혈구 수를 측정하였다. 세포를 3분 동안 라이트-김자 염색 (Wright-Giemsa Stain) (시그마-알드리치)으로 염색하고, 이어서 탈이온수로 5분 동안 세정하였다. 분화 수는 샘플당 계수된 총 200개의 세포에 기초하여 계산하였다. 혈액을 또한 각 연구의 종결 시점에 후안구동으로부터 약물 농도의 결정을 위한 EDTA에서 수집하였다.
유동 세포측정 분석을 위해, 복막 삼출액 세포 (1x106개)를 FACS 완충제 (PBS/0.5% BSA)로 1회 세척하고, FACS 완충제 중에 재현탁시켰다. 세포를 얼음 상에서 15분 동안 Fc-차단 항체 (BD 파밍겐(BD Pharmingen))와 함께 인큐베이션한 후에 하기 항체 (BD 파밍겐)를 첨가하였다: PE 접합된 항-F4/80, FITC 접합된 항-Ly6C, 및 알렉사(Alexa) 647 접합된 항-hCCR-2. 얼음 상에서 45분 후에, 세포를 얼음 상에 15분 동안 BD 사이토픽스(CYTOFIX)®에 의해 고정시키고, FACS 완충제로 2회 세척하고, FACS 완충제 200 ㎕ 중에 재현탁시켰다. 세포내 사건 (40,000)을 각각의 샘플에 대해 수득하고, FloJo 소프트웨어 (트리스타(TreeStar))를 이용하여 데이터를 분석하였다. FSC/SSC 게이트를 분석으로부터 과립구를 제외한 모든 단핵구를 포함하도록 설정하였다 (낮은 SSC, 보다 높은 FSC). 이어서, 상기 게이트 집단을 Ly6C (FITC), F4/80 (PE) 발현에 대해 분석하였다. 복막 단핵구/대식세포 수를 세포 계수기에 의해 수득한 전체 복막 세포수를 곱하여 결정하였으며, 단핵구/대식세포의 백분율을 유동 세포측정법으로부터 F4/80+ 세포로 확인하였다. 평균들 사이의 차이의 통계학적 유의성을 0.05 미만의 p 값으로 유의성 설정된 대응표본 양방향 t-검정을 이용하여 분석하였다.
결과
실시예 1을 hCCR-2 KI 마우스 TG 복막염 모델에서 단핵구/대식세포 침윤 억제에 있어 그의 EC50을 결정하기 위해 평가하였다. 마우스에게 티오글리콜레이트를 투여하고, 실시예 1을 10, 50 또는 160 mg/kg BID로 경구 투여하였다. TG 처리한지 48시간 후에, 유동 세포측정법에 의한 세포내 침윤 분석을 위해 복막 세척물을 수득하였다.
단핵구/대식세포 침윤의 용량-의존성 억제가 관찰되었다 (도 4). 10, 50 및 160 mg/kg의 용량은 각각 25%, 54% 및 63%의 억제를 제공하였다. 다중 용량을 사용한 4가지 별도의 연구에서, 도달된 최대 억제는 약 70%였고, 이 분석에 의한 단핵구/대식세포 침윤의 억제에 대한 평균 EC50은 4.9 nM인 것으로 추정되었으며, 이는 인간 CCR-2-발현 세포 (hPBMC)에 대한 125I-마우스 MCP-1 결합의 실시예 1 억제에 있어서의 시험관내 IC50 (5.8 ± 2.3 nM)과 크게 관련된다.
hCCR-2 KI 마우스의 48-시간 티오글리콜레이트 복막염 모델에서 실시예 1에 의한 수용체 점유율의 생체내 수준을 평가하기 위해, 실시예 1 및 마우스 MCP-1 둘 모두의 혈장 수준을 측정하였다. 이러한 평가에 있어서의 주의사항은 CCR-2 및 그의 주요 리간드 MCP-1만이 고려된다는 것이다. 경쟁적 억제제의 존재하에 리간드의 수용체 점유율을 개덤(Gaddum) 방정식으로 정하였다:
Figure pct00035
실시예 1의 화합물은 CCR-2에 대한 MCP-1 결합의 경쟁적 억제제이므로, 마우스 MCP-1/CCR-2 수용체 복합체 및 실시예 1/CCR-2 수용체 복합체 둘 모두의 양은 혈장에서 마우스 MCP-1 및 단백질-결합되지 않은 실시예 1 둘 모두의 혈청 수준을 이용하여 결정할 수 있다. hCCR-2에 결합하는 마우스 MCP-1에 대한 Kd는 0.91 +/- 0.08 nM (n=8) (125I-인간 MCP-1을 사용한 냉각 경쟁 리간드 결합 실험에서 결정됨)이었다. hCCR-2에 대한 실시예 1 결합에 대한 평균 Ki는 2.0 nM이었다. 마우스 MCP-1/CCR-2 수용체 복합체의 분율은 상기 기재된 방정식 형태를 이용하여 결정하였다. 실시예 1/CCR-2 복합체의 분율을 결정하기 위해 방정식을 다음과 같이 다시 정하였다:
Figure pct00036
최종적으로, 유리 CCR-2의 양을 하기 식으로부터 결정하였다:
Figure pct00037
하기 표 8에 나타낸 바와 같이, 제48시간에서의 복막 내로의 단핵구/대식세포 침윤의 억제 백분율은 실시예 1/CCR-2 수용체 복합체의 백분율을 반영한다.
Figure pct00038
종합적으로, 이러한 결과는 실시예 1이 약 4.9 nM의 EC50을 갖는 단핵구/대식세포 침윤의 강력한 차단제임을 명백히 입증한다. 실시예 1에 의한 단핵구/대식세포 침윤의 최대 억제는 상기 화합물에 의한 98.5%의 CCR-2 점유율로 달성될 수 있다. 특히, 연구는 CCR-2-결함 마우스에서의 단핵구/대식세포 침윤에 있어서 유사한 감소 (약 70 내지 80%)를 입증하였다.
케모카인 수용체 기능의 억제제로 치료될 수 있는 인간 또는 다른 종의 질환 또는 상태는 알레르기성 호흡기 질환, 예컨대 천식, 알레르기성 비염, 과민성 폐 질환, 과민성 폐렴, 호산구성 봉와직염 (예를 들어, 웰 증후군), 호산구성 폐렴 (예를 들어, 뢰플러 증후군, 만성 호산구성 폐렴), 호산구성 근막염 (예를 들어, 슐만 증후군), 지연형 과민증, 간질성 폐 질환 (ILD) (예를 들어, 특발성 폐 섬유증, 또는 류마티스 관절염, 전신 홍반성 루푸스, 강직성 척추염, 전신 경화증, 쇼그렌 증후군, 다발성근염 또는 피부근염과 관련된 ILD); 전신 아나필락시스 또는 과민 반응, 약물 알레르기 (예를 들어, 페니실린, 세팔로스포린에 대한 알레르기), 오염된 트립토판의 섭취로 인한 호산구증가근육통 증후군, 곤충 자상 알레르기; 자가면역 질환, 예컨대 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 다발성 경화증, 전신 홍반성 루푸스, 중증 근무력증, 소아 발병 당뇨병; 사구체신염, 자가면역성 갑상선염, 베체트병; 동종이식편 거부 또는 이식편-대-숙주 질환을 비롯한 이식편 거부 (예를 들어, 이식술에서); 염증성 장 질환, 예컨대 크론병 및 궤양성 결장염; 척추관절병증; 경피증; 건선 (T-세포 매개 건선 포함) 및 염증성 피부병, 예컨대 피부염, 습진, 아토피성 피부염, 알레르기성 접촉성 피부염, 두드러기; 혈관염 (예를 들어, 괴사성, 피부성 및 과민성 혈관염); 호산구성 근염, 호산구성 근막염; 피부 또는 기관의 백혈구 침윤을 수반하는 암을 비롯한 염증성 또는 알레르기성 질환 및 상태를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 바람직하지 않은 염증 반응을 억제해야 치료될 수 있는 다른 질환 또는 상태는 혈관염, 취약성 플라크, 정맥 신생내막 증식증 재관류 손상, 투석-이식편 신생내막 증식증, 동정맥 단락 내막 증식증, 아테롬성동맥경화증, 특정 혈액 악성종양, 시토카인 유도성 독성 (예를 들어, 패혈성 쇼크, 내독소성 쇼크), 다발성근염, 피부근염을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 케모카인 수용체 기능의 억제제로 치료될 수 있는 인간 또는 다른 종의 감염성 질환 또는 상태는 HIV를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
케모카인 수용체 기능의 촉진제로 치료될 수 있는 인간 또는 다른 종의 질환 또는 상태는 면역억제, 예컨대 AIDS 또는 다른 바이러스 감염과 같은 면역결핍 증후군이 있는 개체, 면역억제를 야기하는 방사선 요법, 화학요법, 자가면역 질환을 위한 요법 또는 약물 요법 (예를 들어, 코르티코스테로이드 요법)을 받는 개체에의 면역억제; 감염 질환, 예컨대 기생충 질환, 예를 들어 비제한적으로 윤충 감염, 예컨대 선충류 (회충); (편충, 요충, 회충, 구충, 분선충, 선모충, 사상충); 흡충류 (흡충) (주혈흡충증, 간흡충증), 조충 (촌충) (포낭충증, 무구 조충증, 낭미충증); 내장충, 내장 유충 이행증 (예를 들어, 개구충), 호산구성 위장염 (예를 들어, 아니사키(Anisaki) 종, 포카네마(Phocanema) 종), 피부 유충 이행증 (브라질구충, 개 십이지장충)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 따라서, 본 발명의 화합물은 다양한 염증성, 감염성 및 면역조절성 장애 및 질환의 예방 및 치료에 유용하다.
또한, 케모카인 수용체 내재화 유도를 통해 세포에서 수용체 발현을 손실시킬만큼 충분한 화합물을 전달하거나 또는 잘못된 방향으로 세포를 이동시키는 방식으로 화합물을 전달하는 것이 의도되는 경우, 케모카인 수용체 기능의 촉진제에 의한 상기 언급된 염증성, 알레르기성 및 자가면역 질환의 치료가 의도될 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 G 단백질 커플링된 수용체의 추정되는 특이적 효능제 또는 길항제를 평가하는 데 사용될 수 있다. 본 발명은 케모카인 수용체의 활성을 조절하는 화합물의 제조 및 스크리닝 검정의 실행에 있어서의 이들 화합물의 용도에 관한 것이다. 또한, 본 발명의 화합물은, 다른 화합물의 케모카인 수용체에 대한 결합 부위를, 예를 들어 경쟁적 억제를 통해 수립하거나 결정하는데 유용하거나, 또는 활성이 알려지지 않은 화합물을 활성이 공지된 화합물과 비교하기 위한 검정에서의 기준물질로서 유용하다. 새로운 검정 또는 프로토콜을 개발할 경우, 본 발명에 따른 화합물은 이들의 유효성을 시험하는 데 사용될 수 있다. 구체적으로, 본 발명의 화합물은, 예를 들어 상기 기재된 질환과 관련된 제약 연구에 사용하기 위한 시판용 키트로 제공될 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 케모카인 수용체의 추정되는 특이적 조절인자를 평가하는 데 유용하다. 또한, 본 발명의 화합물을 이용하여, 상호작용의 특이적 부위 특정을 도울 수 있는 G 단백질 커플링된 수용체에 대해 결합하지 않는 화합물의 예로 제공하거나 상기 수용체에 대해 활성인 화합물의 구조적 변이체로 제공함으로써, 케모카인 수용체가 아니라고 여겨지는 상기 수용체의 특이성을 시험할 수 있다.
본원에 개시된 화합물은 류마티스 관절염, 골관절염, 패혈성 쇼크, 아테롬성동맥경화증, 동맥류, 열, 심혈관 현상, 혈류역학 쇼크, 패혈증 증후군, 후허혈성 재관류 손상, 말라리아, 크론병, 염증성 장 질환, 미코박테리아 감염, 수막염, 건선, 울혈성 심부전, 섬유증 질환, 악액질, 이식편 거부, 자가면역 질환, 피부 염증성 질환, 다발성 경화증, 방사선 손상, 과산소성 폐포 손상, HIV, HIV 치매, 비-인슐린 의존성 당뇨병, 천식, 알레르기성 비염, 아토피성 피부염, 특발성 폐 섬유증, 수포성 유천포창, 윤충성 기생충 감염, 알레르기성 결장염, 습진, 결막염, 이식, 가족성 호산구증가증, 호산구성 봉와직염, 호산구성 폐렴, 호산구성 근막염, 호산구성 위장염, 약물 유발성 호산구증가증, 낭성 섬유증, 처크-스트라우스 증후군, 림프종, 호지킨병, 결장 암종, 펠티 증후군, 사르코이드증, 포도막염, 알츠하이머, 사구체신염 및 전신 홍반성 루푸스, 식도 편평 세포 암종, 신경병증성 통증 및 비만으로부터 선택된 장애를 치료 또는 예방하는데 유용하다.
또 다른 측면에서, 상기 화합물은 류마티스 관절염, 골관절염, 아테롬성동맥경화증, 동맥류, 열, 심혈관 현상, 크론병, 염증성 장 질환, 건선, 울혈성 심부전, 다발성 경화증, 자가면역 질환, 피부 염증성 질환으로부터 선택된 염증성 장애를 치료 또는 예방하는데 유용하다.
또 다른 측면에서, 상기 화합물은 류마티스 관절염, 골관절염, 아테롬성동맥경화증, 크론병, 염증성 장 질환 및 다발성 경화증으로부터 선택된 염증성 장애를 치료 또는 예방하는데 사용된다.
다른 측면에서, 본원에 개시된 실시예는 하기의 것을 비롯한 (이에 제한되지는 않음) 다양한 암의 치료에 유용할 수 있다:
암종, 예컨대 방광 (가속성 및 전이성 방광암 포함), 유방, 결장 (결장직장암 포함), 신장, 간, 폐 (비소세포 폐암 및 폐 선암종 포함), 난소, 전립선, 고환, 비뇨생식관, 림프계, 직장, 후두, 췌장 (외분비 췌장 암종 포함), 식도, 위, 담낭, 자궁경부, 갑상선 및 피부 (편평 세포 암종 포함)의 암종;
림프계의 조혈 종양, 예컨대 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, B-세포 림프종, T-세포 림프종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 모발상 세포 림프종, 조직구성 림프종, 및 버킷 림프종;
골수계의 조혈 종양, 예컨대 급성 및 만성 골수성 백혈병, 골수이형성 증후군, 골수성 백혈병 및 전골수구성 백혈병;
중추 및 말초 신경계의 종양, 예컨대 성상세포종, 신경모세포종, 신경교종 및 슈반세포종;
중간엽 기원의 종양, 예컨대 섬유육종, 횡문근육종 및 골육종; 및
기타 종양, 예컨대 흑색종, 색소성 건피증, 각화극세포종, 정상피종, 갑상선 여포암 및 기형암종.
또 다른 실시양태에서, 유방암, 간암, 전립선암 및 흑색종으로부터 선택된 암의 치료 방법이 본원에 개시되어 있다. 또한, 본원에 개시된 화합물은 난소암 및 다발성 골수종의 치료에 유용할 수 있다.
본 발명은 다양한 비-암성 증식성 질환의 치료 방법을 제공한다.
자가면역 병리학적 증상, 예를 들어 류마티스 관절염 및 아테롬성동맥경화증 및 상기 기재된 병리상태 뿐만 아니라 천식 및 알레르기성 질환을 비롯한 염증성, 감염성 또는 면역조절성 장애 및 질환을 예방하고 치료하기 위한 조합 요법은 본 발명의 화합물과 이러한 유용성이 공지된 다른 화합물의 조합물에 의해 예시된다. 예를 들어, 염증의 치료 또는 예방에서, 본 발명의 화합물은 항염증제 또는 진통제, 예를 들어 오피에이트 효능제, 리폭시제나아제 억제제, 시클로옥시게나제-2 억제제, 인터류킨 억제제, 예를 들어 인터류킨-1 억제제, 종양 괴사 인자 억제제, NMDA 길항제, 산화질소의 억제제 또는 산화질소 합성의 억제제, 비스테로이드성 항염증제, 포스포디에스테라아제 억제제, 또는 시토카인-억제성 항염증제, 예를 들어 아세트아미노펜, 아스피린, 코데인, 펜타이닐, 이부프로펜, 인도메타신, 케토롤락, 모르핀, 나프록센, 페나세틴, 피록시캄, 스테로이드성 진통제, 수펜타닐, 선린닥, 인터페론 알파 등과 같은 화합물과 함께 사용될 수 있다. 유사하게, 본 발명의 화합물은 진통제; 강화제, 예를 들어 카페인, H2-길항제, 시메티콘, 수산화알루미늄 또는 수산화마그네슘; 충혈제거제, 예를 들어 페닐에프린, 페닐프로판올아민, 슈도페드린, 옥시메타졸린, 에피네프린, 나프타졸린, 크실로메타졸린, 프로필헥세드린 또는 레보데스옥시-에페드린; 진해제, 예를 들어 코데인, 히드로코돈, 카라미펜, 카르베타펜탄 또는 덱스트라메토르판; 이뇨제; 및 진정 또는 비진정 항히스타민제와 함께 투여될 수 있다. 마찬가지로, 본원에 개시된 화합물은 본 발명의 화합물이 유용한 질환 또는 상태의 치료/예방/억제 또는 완화에 사용되는 다른 약물과 조합되어 사용될 수 있다. 이러한 다른 약물들은 소정 경로에 의해, 이를 위해 통상적으로 사용되는 양으로, 본 발명의 화합물과 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 화합물이 하나 이상의 다른 약물과 동시에 사용되는 경우에, 본 발명의 화합물 이외에 이러한 다른 약물을 함유하는 제약 조성물이 사용될 수 있다. 따라서, 제약 조성물은 본 개시내용의 화합물 이외에 하나 이상의 다른 활성 성분도 또한 함유하는 것들을 포함한다.
개별적으로 또는 동일한 제약 조성물로 투여되어 본 발명의 화합물과 조합될 수 있는 다른 활성 성분의 예로는 (a) 인테그린 길항제, 예컨대 셀렉틴, ICAM 및 VLA-4에 대한 인테그린 길항제; (b) 스테로이드, 예컨대 베클로메타손, 메틸프레드니솔론, 베타메타손, 프레드니손, 덱사메타손 및 히드로코르티손; (c) 면역억제제, 예컨대 시클로스포린, 타크롤리무스, 라파마이신 및 다른 FK-506 유형 면역억제제; (d) 항히스타민제 (H1-히스타민 길항제), 예컨대 브로모페니라민, 클로르페니라민, 덱스클로르페니라민, 트리프롤리딘, 클레마스틴, 디펜히드라민, 디페닐피랄린, 트리펠렌아민, 히드록시진, 메트딜라진, 프로메타진, 트리메프라진, 아자타딘, 시프로헵타딘, 안타졸린, 페니라민, 피릴아민, 아스테미졸, 테르페나딘, 로라타딘, 세티리진, 펙소페나딘, 데스카르보에톡실로라타딘 등; (e) 비스테로이드성 항천식제, 예컨대 b2-효능제 (테르부탈린, 메타프로테레놀, 페노테롤, 이소에타린, 알부테랄, 비톨테롤 및 피르부테롤), 테오필린, 크로몰린 나트륨, 아트로핀, 이프라트로퓸 브로마이드, 류코트리엔 길항제 (자피를루카스트, 몬텔루카스트, 프란루카스트, 이랄루카스트, 포빌루카스트, SKB-102,203), 류코트리엔 생합성 억제제 (질류톤, BAY-1005); (f) 비스테로이드성 항염증제 (NSAID), 예컨대 프로피온산 유도체 (알미노프로펜, 베녹사프로펜, 부클록산, 카르프로펜, 펜부펜, 페노프로펜, 플루프로펜, 플루르비프로펜, 이부프로펜, 인도프로펜, 케토프로펜, 미로프로펜, 나프록센, 옥사프로진, 피르프로펜, 프라노프로펜, 수프로펜, 티아프로펜산 및 티옥사프로펜), 아세트산 유도체 (인도메타신, 아세메타신, 알클로페낙, 클리다낙, 디클로페낙, 펜클로페낙, 펜클로즈산, 펜티아작, 푸로페낙, 이부페낙, 이속세팍, 옥스피낙, 술린닥, 티오피낙, 톨메틴, 지도메타신 및 조메피락), 페남산 유도체 (플루페남산, 메클로페남산, 메페남산, 니플룸산 및 톨페남산), 비페닐카르복실산 유도체 (디플루니살 및 플루페니살), 옥시캄 (이속시캄, 피록시캄, 수독시캄 및 테녹시칸), 살리실레이트 (아세틸 살리실산, 술파살라진) 및 피라졸론 (아파존, 벤즈피페릴론, 페프라존, 모페부타존, 옥시펜부타존, 페닐부타존); (g) 시클로옥시게나제-2 (COX-2) 억제제; (h) 포스포디에스테라제 유형 IV (PDE-IV)의 억제제; (i) 케모카인 수용체의 기타 길항제; (j) 콜레스테롤 저하제, 예컨대 HMG-CoA 리덕타제 억제제 (로바스타틴, 심바스타틴, 프라바스타틴, 플루바스타틴, 아토르바스타틴 및 기타 스타틴), 격리제 (콜레스티라민 및 콜레스티폴), 니코톤산, 페노피브르산 유도체 (겜피브로질, 클로피브라트, 페노피브레이트 및 벤자피브레이트), 및 프로부콜; (k) 항당뇨제, 예컨대 인슐린, 술포닐우레아, 바이구아나이드 (메트포르민), a-글루코시다제 억제제 (아카르보스) 및 글리타존 (트로글리타존 및 피오글리타존); (l) 인터페론 제제 (인터페론 알파-2a, 인터페론-2B, 인터페론 알파-N3, 인터페론 베타-1a, 인터페론 베타-1b, 인터페론 감마-1b); (m) 항바이러스 화합물, 예컨대 에파비렌즈, 네비라핀, 인디나비르, 간시클로비르, 라미부딘, 팜시클로비르 및 잘시타빈; (o) 기타 화합물, 예컨대 5-아미노살리실산 및 그의 전구약물, 항대사물, 예컨대 아자티오프린 및 6-메르캅토퓨린, 및 세포독성 암 화학요법제가 포함되나, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 화합물 대 제2 활성 성분의 중량비는 변할 수 있고, 이는 각각의 성분의 유효 용량에 따라 달라질 것이다.
일반적으로, 각각의 유효 용량이 사용될 것이다. 따라서, 예를 들어 화합물을 NSAID와 조합할 경우, 본 발명의 화합물 대 NSAID의 중량비는 일반적으로 약 1000:1 내지 약 1:1000, 또는 다르게는 약 200:1 내지 약 1:200일 것이다. 본 발명의 화합물과 다른 활성 성분의 조합물도 또한 일반적으로는 상기 언급된 범위 내에 있을 것이나, 각 경우에, 각각의 활성 성분의 유효 용량이 사용되어야 한다.
암 치료에서는, 화학요법제 및/또는 다른 치료 (예를 들어, 방사선 요법)의 조합이 종종 유리하다. 제2 (또는 제3) 작용제는 1차 치료제와 동일하거나 상이한 작용 메카니즘을 가질 수 있다. 둘 이상의 투여된 약물이 상이한 방식으로 또는 세포 주기의 상이한 단계에 작용하고/거나, 둘 이상의 약물이 중복되는 독성 또는 부작용을 갖고/거나, 조합된 약물이 각각 환자에 의해 나타난 특정 질환-상태를 치료하는데 입증된 효능을 갖는 세포독성 약물 조합을 사용하는 것이 특히 유용할 수 있다.
따라서, 본원에 개시된 화합물 (또는 본원에 개시된 다른 제제)은 다른 항암제 및 세포독성제, 및 암 또는 다른 증식성 질환의 치료에 유용한 치료와 함께 투여될 수 있다. 본원에서 본 발명은 또한 암 치료용 의약의 제조에 있어서의 본원의 화합물 (또는 본원에 개시된 다른 제제)의 용도를 포함하고/거나, 화합물을 다른 항암제 또는 세포독성제 및 암 치료용 처리와 함께 사용하는 설명서와 함께 본원의 화합물을 포함하는 패키지를 포함한다. 본 발명은 또한 화합물 및 하나 이상의 추가의 작용제의 조합을 키트 형태 (예를 들어, 이들은 함께 포장되거나 또는 키트로서 함께 시판되는 별도의 패키지에 포함되거나, 또는 이들은 함께 제제화되어 포장됨)로 포함한다.
제2 (또는 그 이상의) 항암제는 하기의 것들 중 임의의 하나 이상으로부터 선택될 수 있다:
알킬화제 (질소 머스타드, 알킬 술포네이트, 니트로소우레아, 에틸렌이민 유도체 및 트리아젠 포함); 항혈관신생제 (매트릭스 메탈로프로테이나제 억제제 포함); 항대사물 (아데노신 데아미나제 억제제, 폴산 길항제, 퓨린 유사체 및 피리미딘 유사체); 항생제 또는 항체 (모노클로날 항체, CTLA-4 항체, 안트라시클린 포함); 아로마타제 억제제;
세포-주기 반응 조절제; 효소; 파르네실-단백질 트랜스퍼라제 억제제;
호르몬제 및 항호르몬제 및 스테로이드 (합성 유사체, 글로코코르티코이드, 에스트로겐/항-에스트로겐 [예를 들어, SERM], 안드로겐/항-안드로겐, 프로게스틴, 프로게스테론 수용체 효능제, 및 황체형성 호르몬-방출 [LHRH] 효능제 및 길항제 포함); 인슐린-유사 성장 인자 (IGF)/인슐린-유사 성장 인자 수용체 (IGFR) 시스템 조절제 (IGFR1 억제제 포함); 인테그린-신호전달 억제제; 키나제 억제제, 예컨대 다중-키나제 억제제 및/또는 Src 키나제 또는 Src/abl의 억제제, 시클린 의존성 키나제 [CDK] 억제제, panHer, Her-1 및 Her-2 항체, VEGF 억제제, 예컨대 항-VEGF 항체, EGFR 억제제, 미토겐-활성화된 단백질 [MAP] 억제제, MEK 억제제, 오로라(Aurora) 키나제 억제제, PDGF 억제제, 및 다른 티로신 키나제 억제제 또는 세린/트레오닌 키나제 억제제;
미세소관-파괴인자 작용제, 예컨대 엑테이나시딘 또는 이들의 유사체 및 유도체; 미세소관-안정화제, 예컨대 탁산, 및 자연-발생 에포틸론 및 이들의 합성 및 반-합성 유사체;
미세소관-결합, 탈안정화제 (빈카 알칼로이드 포함); 및
토포이소머라제 억제제; 프레닐-단백질 트랜스퍼라제 억제제; 백금 배위 착체; 신호 전달 억제제; 및 항암제로서 사용되는 기타 작용제 및 세포독성제, 예컨대 생물학적 반응 조절제, 성장 인자 및 면역 조절제.
또한, 본 발명의 화합물은 상기 언급된 상태와 관련된 부작용을 처리하는데 있어서의 특정한 유용성에 대해 선별된 다른 치료제와 함께 제제화되거나 또는 공동-투여될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 오심, 과민증 및 위 자극을 예방하는 작용제, 예컨대 항구토제, 및 H1 및 H2 항히스타민제와 함께 제제화될 수 있다.
상기 다른 치료제는 본 발명의 화합물과 함께 사용하였을 때, 예를 들어 문헌 [Physicians' Desk Reference] (PDR)에 지시된 양으로 또는 다르게는 당업자에 의해 결정된 양으로 사용될 수 있다.
화합물은 치료 유효량으로 포유동물에게 투여된다. "치료 유효량"이란 포유동물에 단독으로 또는 추가의 치료제와 조합되어 투여될 경우, 질환-상태 또는 질환의 진행을 예방하거나 완화시키는 데 효과적인 본 발명의 화합물의 양을 의미한다.
투여량 및 제제화
본 개시내용의 화합물은 정제, 캡슐 (이들 각각은 지속 방출 제제 또는 시간 방출 제제를 포함함), 환제, 분말, 과립, 엘릭시르, 팅크제, 현탁액, 시럽 및 에멀젼과 같은 경구 투여 형태로 투여될 수 있다. 이들은 또한 정맥내 (볼루스 또는 주입), 복강내, 피하 또는 근육내 형태로 투여될 수 있고, 사용되는 모든 투여 형태는 제약업계의 숙련자에게 널리 공지되어 있다. 이들은 단독으로 투여될 수도 있지만, 일반적으로는 선택된 투여 경로 및 표준 제약 실무를 기초로 선택되는 제약상 담체와 함께 투여될 것이다.
본 발명의 화합물을 위한 투여 요법은, 물론, 공지된 요인, 예컨대 특정 작용제의 약동학적 특징, 및 그의 투여 방식 및 경로; 수용자의 종, 연령, 성별, 건강, 의학적 상태 및 체중; 징후의 특성 및 정도; 수반되는 치료의 종류; 치료의 빈도; 투여 경로, 환자의 신장 및 간 기능, 및 목적하는 효과에 따라 달라질 것이다. 의사 또는 수의사들은 장애의 진행을 예방, 저지 또는 중지하는 데 필요한 약물의 유효량을 결정하고 처방할 수 있다.
일반적 지침에 따라, 각 활성 성분의 1일 경구 투여량은 표시된 효과를 위해 사용할 경우 1일 당 약 0.001 내지 1000 mg/kg 체중, 또는 약 0.01 내지 100 mg/kg 체중, 또는 다르게는 약 1.0 내지 20 mg/kg/일 범위일 것이다. 정맥내 용량은 일정 속도 주입 동안 약 1 내지 약 10 mg/kg/분 범위일 것이다. 본 발명의 화합물은 단일 1일 용량으로 투여될 수 있거나, 또는 총 1일 투여량을 1일 2회, 3회 또는 4회 용량으로 나누어 투여할 수 있다. 한 실시양태에서, 활성 성분의 1일 경구 투여량은 3 내지 600 mg으로, 1일 1회 투여하거나 또는 1일 2회 용량으로 나누어 투여된다. 대안적으로, 활성 성분은 10 내지 20 mg의 용량으로 1일 2회 투여되거나 또는 40 내지 100 mg의 용량으로 1일 1회 투여될 수 있다. 대안적으로, 활성 성분은 12.5 mg의 용량으로 1일 2회 투여되거나 또는 75 mg의 용량으로 1일 1회 투여될 수 있다. 대안적으로, 활성 성분은 3, 10, 30, 100, 300 및 600 mg의 용량으로 1일 1회 또는 2회 투여될 수 있다.
본 발명의 화합물은 적합한 비내 비히클의 국소 사용을 통해 비내 형태로, 또는 경피 피부 패치를 사용하여 경피 경로를 통해 투여될 수 있다. 경피 전달 시스템의 형태로 투여되는 경우, 투여량의 투여는, 물론 투여 요법 전반에 걸쳐 간헐적이기 보다는 연속적일 것이다.
전형적으로, 본 발명의 화합물은, 의도된 투여 형태, 즉 경구용 정제, 캡슐, 엘릭시르, 시럽 등에 대해 적합하게 선택되고 통상의 제약 실무에 부합하는, 적합한 제약 희석제, 부형제 또는 담체 (본원에서는 총괄적으로 제약 담체로서 지칭됨)와 혼합되어 투여된다.
예를 들어, 정제 또는 캡슐의 형태로 경구 투여하기 위해, 활성 약물 성분은 경구용 비독성의 제약상 허용되는 불활성 담체, 예컨대 락토스, 전분, 수크로스, 글루코스, 메틸 셀룰로스, 스테아르산마그네슘, 인산이칼슘, 황산칼슘, 만니톨, 소르비톨 등과 조합될 수 있고; 액체 형태로 경구 투여하기 위해, 경구 약물 성분은 임의의 경구용 비독성의 제약상 허용되는 불활성 담체, 예컨대 에탄올, 글리세롤, 물 등과 조합될 수 있다. 추가로, 바람직하거나 필요한 경우에, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 착색제가 또한 혼합물 내로 혼입될 수 있다. 적합한 결합제에는 전분, 젤라틴, 천연당, 예컨대 글루코스 또는 베타-락토스, 옥수수 감미제, 천연 및 합성 검, 예컨대 아카시아, 트라가칸트, 또는 알긴산나트륨, 카르복시메틸셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜, 왁스 등이 포함된다. 상기 투여 형태에 이용되는 윤활제는 올레인산나트륨, 스테아르산나트륨, 스테아르산마그네슘, 벤조산나트륨, 아세트산나트륨, 염화나트륨 등을 포함한다. 붕해제에는, 비제한적으로, 전분, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토나이트, 크산탄 검 등이 포함된다.
본 발명의 화합물은 또한 리포솜 전달 시스템, 예컨대 소형 단일층상 소포, 대형 단일층상 소포 및 다중층상 소포의 형태로 투여될 수 있다. 리포솜은 다양한 인지질, 예컨대 콜레스테롤, 스테아릴아민 또는 포스파티딜콜린으로부터 형성될 수 있다.
본 발명의 화합물은 또한 표적화가능한 약물 담체로서 가용성 중합체와 커플링될 수 있다. 이러한 중합체에는 폴리비닐피롤리돈, 피란 공중합체, 폴리히드록시프로필메타크릴아미드-페놀, 폴리히드록시에틸아스파르트아미드페놀 또는 폴리에틸렌옥시드-폴리라이신 (팔미토일 잔기로 치환됨)이 포함될 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물은 약물의 제어된 방출을 달성하는 데 유용한 생분해성 중합체의 클래스, 예를 들어 폴리락트산, 폴리글리콜산, 폴리락트산과 폴리글리콜산의 공중합체, 폴리엡실론 카프로락톤, 폴리히드록시 부티르산, 폴리오르토에스테르, 폴리아세탈, 폴리디히드로피란, 폴리시아노아실레이트, 및 히드로겔의 가교된 또는 양친매성 블록 공중합체와 커플링될 수 있다.
투여에 적합한 투여 형태 (제약 조성물)는 투여 단위 당 약 1 mg 내지 약 100 mg의 활성 성분을 함유할 수 있다. 이러한 제약 조성물에서, 활성 성분은 통상적으로 조성물의 총 중량을 기준으로 약 0.5 내지 95 중량%의 양으로 존재할 것이다.
젤라틴 캡슐은 활성 성분 및 분말형 담체, 예를 들어 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 스테아르산마그네슘, 스테아르산 등을 함유할 수 있다. 유사한 희석제가 압착 정제를 제조하는 데 사용될 수 있다. 정제 및 캡슐은 둘 다 지속 방출 생성물로 제조되어 수 시간에 걸쳐 의약의 연속 방출을 제공할 수 있다. 압착 정제는 당 코팅 또는 필름 코팅되어 임의의 불쾌한 맛을 차폐하고 대기로부터 정제를 보호하거나, 또는 장용 코팅되어 위장관에서 선택적으로 붕해될 수 있다.
경구 투여를 위한 액체 투여 형태는 환자의 순응도를 증가시키기 위해 착색제 및 향미제를 함유할 수 있다.
일반적으로, 물, 적합한 오일, 염수, 수성 덱스트로스 (글루코스) 및 관련된 당 용액 및 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜이 비경구 용액제에 적합한 담체이다. 비경구 투여용 용액은 활성 성분의 수용성 염, 적합한 안정화제, 및 필요할 경우, 완충 물질을 함유할 수 있다. 단독 또는 조합된 중아황산나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같은 항산화제가 적합한 안정화제이다. 또한 시트르산 및 그의 염 및 나트륨 EDTA가 사용된다. 또한, 비경구 용액은 보존제, 예를 들어 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올을 함유할 수 있다.
적합한 제약 담체는 당업계의 표준 참고 문헌인 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company]에 기재되어 있다.
본 발명의 화합물의 투여에 유용한 대표적인 제약 투여 형태를 하기와 같이 예시할 수 있다.
캡슐
표준 2-피스 경질 젤라틴 캡슐에 각각 100 mg의 분말 활성 성분, 150 mg의 락토스, 50 mg의 셀룰로스 및 6 mg의 스테아르산마그네슘을 충전시킴으로써 다수의 단위 캡슐을 제조할 수 있다.
연질 젤라틴 캡슐
대두 오일, 목화씨 오일 또는 올리브 오일와 같은 식용 오일 중 활성 성분의 혼합물을 제조하고, 양변위 펌프에 의해 젤라틴 내에 주입하여 100 mg의 활성 성분을 함유하는 연질 젤라틴 캡슐을 제조할 수 있다. 이 캡슐은 세척하고 건조시켜야 한다.
정제
통상의 절차에 따라, 투여 단위가 활성 성분 100 mg, 콜로이드성 이산화규소 0.2 mg, 스테아르산마그네슘 5 mg, 미세결정질 셀룰로스 275 mg, 전분 11 mg 및 락토스 98.8 mg이도록 정제를 제조할 수 있다. 적절한 코팅을 적용하여 기호성 또는 지연 흡수성을 증가시킬 수 있다.
주사제
10 부피%의 프로필렌 글리콜 및 물 중에서 1.5 중량%의 활성 성분을 교반함으로써 주사 투여에 적합한 비경구 조성물을 제조할 수 있다. 이 용액을 염화나트륨으로 등장성으로 만들고 멸균해야 한다.
현탁액
수성 현탁액은 경구 투여용으로 각 5 mL가 100 mg의 미분된 활성 성분, 200 mg의 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스, 5 mg의 벤조산나트륨, 1.0 g의 소르비톨 용액, U.S.P. 및 0.025 mL의 바닐린을 함유하도록 제조할 수 있다.
본 발명의 화합물이 다른 항응고제와 조합될 경우, 예를 들어 1일 투여량은 환자 체중 kg당 약 0.1 내지 100 mg의 화학식 I의 화합물 및 약 1 내지 7.5 mg의 제2 항응고제일 수 있다. 정제 투여 형태를 위해, 본 발명의 화합물은 일반적으로 투여 단위 당 약 5 내지 10 mg의 양으로, 제2 항응고제는 투여 단위당 약 1 내지 5 mg의 양으로 존재할 수 있다.
2종 이상의 상기 제2 치료제를 실시예의 화합물과 함께 투여하는 경우에는, 조합 투여 시의 치료제의 부가 효과 또는 상승작용 효과로 인해, 일반적으로 전형적인 1일 투여량 및 전형적인 투여 형태에서 각 성분의 양이 단독으로 투여하는 경우의 작용제의 통상적인 투여량에 비해 감소될 수 있다.
특히, 단일 투여 단위로 제공될 경우, 조합된 활성 성분 간의 화학적 상호작용에 대한 가능성이 존재한다. 이러한 이유로, 실시예의 화합물 및 제2 치료제가 단일 투여 단위로 조합되는 경우, 이들은 활성 성분이 단일 투여 단위로 조합됨에도 불구하고, 활성 성분 간의 물리적 접촉을 최소화 (즉, 감소)시키도록 제제화된다. 예를 들어, 하나의 활성 성분은 장용 코팅될 수 있다. 활성 성분 중 하나를 장용 코팅함으로써, 조합된 활성 성분 간의 접촉을 최소화시키는 것이 가능할 뿐만 아니라, 위장관 내에서 이들 성분 중 하나의 방출을 제어하여, 이들 성분 중 하나가 위에서 방출되지 않고 오히려 장에서 방출되도록 하는 것도 가능하다. 활성 성분 중 하나는 또한, 위장관 전반에 걸쳐 지속 방출을 달성하고 조합된 활성 성분 간의 물리적 접촉을 최소화하도록 작용하기도 하는 물질로 코팅될 수 있다. 또한, 지속 방출 성분은 추가적으로 장용 코팅되어 이 성분의 방출이 오직 장에서만 발생하도록 할 수 있다. 또 다른 접근법은, 하나의 성분은 지속 방출 및/또는 장 방출 중합체로 코팅하고, 다른 성분은 또한 저점도 등급의 히드록시프로필 메틸셀룰로스 (HPMC)와 같은 중합체 또는 당업계에 공지된 다른 적절한 물질로 코팅하여, 활성 성분을 추가로 분리하는 조합 생성물의 제제를 포함한다. 중합체 코팅은 다른 성분과의 상호작용에 대한 추가의 장벽을 형성하는 작용을 한다.
단일 투여 형태로 투여하든지, 또는 분리된 형태로 (그러나 동일한 방식으로 동시에) 투여하든지에 관계없이, 본 발명의 조합 생성물의 성분 간의 접촉을 최소화시키는 이러한 방법, 뿐만 아니라 다른 방법들은 본 개시내용을 이해하는 당업자에게 용이하게 명백할 것이다.
또한, 본원에 개시된 특정 화합물은 다른 화합물의 대사물로서 유용할 수 있다. 따라서, 한 실시양태에서, 화합물은 각각의 실질적으로 순수한 화합물로서 유용할 수 있고, 또한 이어서 제약 조성물에 혼입될 수 있거나, 또는 상기 화합물의 전구약물의 투여 후에 생성되는 대사물로서 유용할 수 있다. 한 실시양태에서, 화합물은 본원에 기재된 장애를 치료하는데 유용하게 되어 대사물로 유용할 수 있다.
본원에 사용된 "실질적으로 순수한"은 약 90 중량% 초과 (약 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 및 100% 포함)의 순도를 갖는 화합물을 포함한다.
하나의 예로서, 본원에 개시된 화합물은 약 90 중량% 초과의 순도를 가질 때 실질적으로 순수할 수 있으며, 여기서 나머지 약 10 % 미만의 물질은 화합물의 다른 대사물, 화합물의 전구약물, 및/또는 그의 제조시 발생하는 반응 및/또는 처리 불순물을 포함한다.
명백하게, 본 발명의 다수의 변형 및 변화가 상기 교시에 비추어 가능할 수 있다. 따라서, 첨부된 청구의 범위의 범주 내에서 본 발명이 본원에 구체적으로 기재된 바와 다르게 실시될 수 있다는 것이 이해되어야 한다.

Claims (16)

  1. 하기 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 염.
    Figure pct00039
  2. 제1항에 있어서, 상기 화합물의 결정질 형태인 화합물.
  3. 제2항에 있어서, 결정질 형태가 N-1 형태를 포함하는 것인 결정질 형태.
  4. 제3항에 있어서, 상기 형태 N-1이 실질적으로 순수한 형태인 결정질 형태.
  5. 제3항에 있어서, N-1 형태가 다음과 실질적으로 동일한 단위 셀 파라미터를 특징으로 하며, 상기 결정이 약 -70℃의 온도에 있는 것인 결정질 형태:
    셀 치수:
    a = 7.3085(6)
    b = 16.257(1)
    c = 22.688(2)
    α°= 90
    β°= 90
    γ°= 90
    공간군 P212121
    분자/단위 셀 (Z): 1
    밀도, 계산치 g-cm-3: 1.194.
  6. 제3항에 있어서, 실질적으로 도 1에 나타낸 것에 따른 분말 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 형태.
  7. 제3항에 있어서, 실질적으로 도 2에 나타낸 것에 따른 시차 주사 열량측정법 온도기록도를 특징으로 하는, 약 205℃ 초과의 흡열 전이를 갖는 결정질 형태.
  8. 제3항에 있어서, 도 3에 나타낸 것에 따른 열 중량 분석 곡선을 특징으로 하는 결정질 형태.
  9. 제1항의 화합물을 포함하는 제약 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 제약상 허용되는 담체를 추가로 포함하는 제약 조성물.
  11. 제9항에 있어서, 하나 이상의 추가의 치료제를 추가로 포함하는 제약 조성물.
  12. CCR-2 및 CCR-5 수용체 활성의 조절을 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 제1항의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, CCR-2 및 CCR-5 수용체 활성의 조절 방법.
  13. 당뇨병, 비만, 대사 증후군, 졸중, 신경병증성 통증, 허혈성 심근병증, 건선, 고혈압, 경피증, 골관절염, 동맥류, 열, 심혈관 질환, 크론병, 울혈성 심부전, 자가면역 질환, HIV-감염, HIV-관련 치매, 건선, 특발성 폐 섬유증, 이식 동맥경화증, 물리적- 또는 화학적-유도성 뇌 외상, 염증성 장 질환, 폐포염, 결장염, 전신 홍반성 루푸스, 신독성 혈청 신염, 사구체신염, 천식, 다발성 경화증, 아테롬성동맥경화증, 혈관염, 취약성 플라크, 류마티스 관절염, 재협착, 정맥 신생내막 증식증, 투석-이식편 신생내막 증식증, 동정맥 단락 내막 증식증, 기관 이식, 만성 동종이식편 신병증, 암, 정맥 신생내막 증식증, 투석-이식편 신생내막 증식증 및 동정맥 단락 신생내막 증식증으로부터 선택된 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 제1항의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 장애의 치료 방법.
  14. 1) 화학식 I-cc의 히드라존 화합물을 화학식 I-bb의 화합물로 전환시키는 것; 및
    2) 화학식 I-bb의 화합물을 화학식 I-aa의 화합물과 커플링시키는 것
    을 포함하며, 여기서
    R1은 독립적으로 수소, 또는 카르보벤질옥시 기, tert-부틸옥시카르보닐, 플루오레닐메틸옥시카르보닐 기, 벤질 기 및 p-메톡시벤질 기로부터 선택된 아민-보호기이고;
    R8 및 R9는 독립적으로 수소 또는 C1-6알킬이고;
    R21은 =O이고;
    HET는 1개 이상의 질소 헤테로원자를 갖는 임의로 치환된 3 내지 14원 헤테로시클로 또는 헤테로아릴 비시클릭 고리이고;
    LG는 -OR16이고, 여기서 R16은 C1-6알킬, 페닐, N, S 또는 O로부터 선택된 1개 이상의 원자를 갖는 5 내지 7원 헤테로아릴, 또는 3 내지 7원 시클로알킬이고, 이들 모두는 할로겐, CF3 또는 C1-6알킬로부터 선택된 1 내지 3개의 기로 임의로 치환되는 것인
    화학식 I의 화합물 또는 그의 염 형태의 제조 방법.
    Figure pct00040
  15. 하기 반응식에 기재된 방법을 포함하는, N-((1R,2S,5R)-5-(tert-부틸아미노)-2-((S)-3-(7-tert-부틸피라졸로[1,5-a][1,3,5]트리아진-4-일아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)시클로헥실)아세트아미드의 제조 방법.
    Figure pct00041
  16. 하기 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 염.
    Figure pct00042
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