CN102648201A - N-((1r,2s,5r)-5-(叔丁基氨基)-2-((s)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，趋化因子受体活性的双重调节剂，晶形及方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种新颖拮抗剂：N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺或其药用盐、溶剂化物或前药，该新颖拮抗剂具有出乎意料的双重CCR-2及CCR-5受体活性。还披露晶形、代谢物、含有其的药物组合物及其作为药物治疗炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病的使用方法。本发明也提供制备如本文所提供的式(I)化合物(包括N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺)的方法。本文中还提供适用作该方法的中间体的化合物。

Description

N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-A][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺,趋化因子受体活性的双重调节剂,晶形及方法

技术领域

本发明提供N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，或其药用盐、溶剂化物或前药，它们具有出乎意料的合乎需要的双重活性。也提供本发明的晶形。含有其的药物组合物及其作为药物治疗炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病的使用方法也为本发明的目标。本发明也提供制备式(I)化合物，包括N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的方法：

其中R¹、R⁸、R⁹、R¹⁰及

如本文中所述。本文中也提供适用作该方法的中间体的化合物。本文中也提供活性化合物的代谢物、药物组合物及其用途。

背景技术

趋化因子为分子量为6-15kDa的趋化细胞因子，其由多种细胞释放用以吸引及活化巨噬细胞、T及B淋巴细胞、嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞及嗜中性粒细胞以及其他细胞类型(在Charo等人，New Eng.J.Med.,354:610-621(2006)；Luster,New Eng.J.Med.,338:436-445(1998)；及Rollins,Blood,90:909-928(1997)中评述)。根据氨基酸序列中头两个半胱氨酸是被单一氨基酸间隔的(CXC)或者是相邻的(CC)，有两种主要趋化因子类别，即CXC及CC。CXC趋化因子，诸如白介素8(IL-8)、嗜中性粒细胞活化蛋白2(NAP-2)及黑素瘤生长刺激活性蛋白(MGSA)主要对嗜中性粒细胞及T淋巴细胞具有趋化性，而CC趋化因子，诸如RANTES、MIP-1α、MIP-1β、单核细胞趋化蛋白(MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4和MCP-5)以及嗜酸细胞活化趋化因子(eotaxin)(-1和-2)对巨噬细胞、T淋巴细胞、嗜酸粒细胞、树突状细胞及嗜碱粒细胞以及其他细胞类型具有趋化性。也存在不属于任一主要趋化因子亚科的趋化因子，淋巴细胞趋化因子-1(lymphotactin-1)、淋巴细胞趋化因子-2(均为C趋化因子)及弗拉塔凯(fractalkine)(一种CX₃C趋化因子)。

趋化因子与属于G蛋白偶联七跨膜域蛋白家族的特异性细胞表面受体结合(在Horuk,Trends Pharm.Sci.,15:159-165(1994)中评述)，所述受体称为“趋化因子受体”。在结合其同源配体时，趋化因子受体经由相关的三聚G蛋白转导细胞内信号，引起细胞内钙浓度快速增加、细胞形状改变、细胞粘附分子表达增加、脱颗粒作用及促进细胞迁移以及其他反应。有至少十种人类趋化因子受体以以下特征性模式结合CC趋化因子或对CC趋化因子产生反应(在Zlotnik等人，Immunity,12:121(2000)中评述)：CCR-1(或“CKR-1”或“CC-CKR-1”)[MIP-1α、MCP-3、MCP-4、RANTES](Ben-Barruch等人，Cell,72:415-425(1993)，及Luster,New Eng.J.Med.,338:436-445(1998))；CCR-2A和CCR-2B (或“CKR-2A”/“CKR-2B”或“CC-CKR-2A”/“CC-CKR-2B”)[MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4、MCP-5](Charo等人，Proc.Natl.Acad. Sci.USA,91:2752-2756(1994)及Luster,New Eng.J.Med.,338:436-445(1998))；CCR-3(或“CKR-3”或“CC-CKR-3”)[嗜酸细胞活化趋化因子-1、嗜酸细胞活化趋化因子-2、RANTES、MCP-3、MCP-4](Combadiere等人，J.Biol.Chem.,270:16491-16494(1995)，及Luster,New Eng.J.Med.,338:436-445(1998))；CCR-4(或“CKR-4”或“CC-CKR-4”)[TARC、MDC](Power等人，J.Biol.Chem.,270:19495-19500(1995)，及Luster,New Eng.J.Med.,338:436-445(1998))；CCR-5(或“CKR-5”或“CC-CKR-5”)[MIP-1α、RANTES、MIP-1β](Samson等人，Biochemistry,35:3362-3367(1996))；CCR-6(或“CKR-6”或“CC-CKR-6”)[LARC](Baba等人，J.Biol.Chem.,272:14893-14898(1997))；CCR-7(或“CKR-7”或“CC-CKR-7”)[ELC](Yoshie等人，J.Leukoc.Biol.,62:634-644(1997))；CCR-8(或“CKR-8”或“CC-CKR-8”)[I-309](Napolitano等人，J.Immunol.,157:2759-2763(1996))；CCR-10(或“CKR-10”或“CC-CKR-10”)[MCP-1、MCP-3](Bonini等人，DNA Cell Biol.,16:1249-1256(1997))；及CCR-11[MCP-1、MCP-2及MCP-4](Schweickart等人，J.Biol.Chem.,275:9550(2000))。

除了哺乳动物趋化因子受体以外，已显示哺乳动物巨细胞病毒、疱疹病毒及痘病毒在受感染细胞中表达具有趋化因子受体的结合特性的蛋白质(在Wells等人，Curr.Opin.Biotech.,8:741-748(1997)中评述)。人类CC趋化因子，诸如RANTES和MCP-3，可经由这些病毒编码的受体引起快速钙移动。受体表达可通过导致对正常免疫系统监视及对感染的反应造成破坏而许可感染。此外，人类趋化因子受体，诸如CXCR4、CCR-2、CCR-3、CCR-5及CCR-8可充当微生物，例如人类免疫缺陷病毒(HIV)感染哺乳动物细胞的共受体。

趋化因子及其同源受体为以下疾病中所涉及的重要介质：炎性、感染性及免疫调节性病症和疾病，包括哮喘和过敏性疾病；以及自身免疫性病变，诸如类风湿性关节炎和多发性硬化症；及代谢性疾病，诸如动脉粥样硬化和糖尿病(在Charo等人，New Eng.J.Med.,354:610-621(2006)；Gao,Z.等人，Chem.Rev.,103:3733(2003)；Carter,P.H.,Curr.Opin.Chem.Biol.,6:510(2002)；Trivedi等人，Ann.Reports Med.Chem.,35:191(2000)；Saunders等人，Drug Disc.Today,4:80(1999)；Premack等人，Nature Medicine,2:1174(1996)中评述)。例如，趋化因子单核细胞化学引诱剂-1(MCP-1)及其受体CC趋化因子受体2(CCR-2)在吸引白细胞至炎症部位及随后活化这些细胞中起关键作用。当趋化因子MCP-1结合于CCR-2时，其诱导细胞内钙浓度快速增加、细胞粘附分子表达增加、以及促进白细胞迁移。通过使用经遗传修饰的小鼠进行实验，已证明MCP-1/CCR-2相互作用的重要性。MCP-1-/-小鼠在若干不同类型的免疫激发后无法使单核细胞募集至炎症部位(Lu,B.等人，J.Exp.Med.,187:601(1998))。同样，CCR-2-/-小鼠在用各种外源药物激发时无法募集单核细胞或产生干扰素γ；此外，CCR-2缺失型小鼠的白细胞不会响应于MCP-1而迁移(Boring,L.等人，J.Clin.Invest.,100:2552(1997))，从而表明MCP-1/CCR-2相互作用的特异性。两个其他团队独立报导使用不同CCR-2-/-小鼠株系获得的相同结果(Kuziel,W.A.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,94:12053(1997)，及Kurihara,T.等人，J.Exp.Med.,186:1757(1997))。MCP-1-/-和CCR-2-/-动物的生存力和一般正常健康状况值得注意，因为破坏MCP-1/CCR-2相互作用并未诱发生理危机。总而言之，这些数据可得出以下结论：阻断MCP-1/CCR-2作用的分子将适用于治疗许多炎性及自身免疫性病症(在Feria,M.等人，Exp.Opin.Ther.Patents,16:49(2006)；和Dawson,J.等人，Exp.Opin.Ther.Targets,7:35(2003)中评述)。如下所述，此假设现已在许多不同动物疾病模型中得到验证。

已知类风湿性关节炎患者体内的MCP-1受到上调(Koch,A.等人，J.Clin.Invest.,90:772-779(1992))。此外，若干临床前研究已证明拮抗MCP-1/CCR-2相互作用在治疗类风湿性关节炎中的潜在治疗价值。最近显示编码MCP-1的DNA疫苗可改善大鼠的慢性多佐剂诱发的关节炎(Youssef，S.等人，J.Clin.Invest.,106:361(2000))。同样，可经由向患有胶原蛋白诱发的关节炎(Ogata,H.等人，J.Pathol.,182:106(1997))，或链球菌细胞壁诱发的关节炎(Schimmer,R.C.等人，J.Immunol.,160:1466(1998))的大鼠直接给予MCP-1的抗体来控制疾病症状。可能最重要的是，显示MCP-1的肽拮抗剂MCP-1(9-76)在MRL-lpr小鼠关节炎模型中预防疾病发作并减少疾病症状(视给药时间而定)(Gong,J.-H.等人，J.Exp.Med.,186:131(1997))。此外，已表明在啮齿动物关节炎模型中给予小分子CCR-2拮抗剂可降低临床得分(Brodmerkel,C.M.等人，J.Immunol.,175:5370(2005)；及Xia,M.等人，美国公开2006/0069123)。给予抗CCR-2抗体视给药时间而定对鼠类CIA具有不同作用(Bruhl,H.等人，J.Immunol.,172:890(2004))。最近使用CCR-2-/-小鼠进行的研究已表明在特定实验情形中缺失CCR-2可加剧啮齿动物关节炎模型的病情(Quinones,M.P.等人，J.Clin.Invest.,113:856(2004)；Quinones,M.P.等人，J.Mol.Med.,84:503(2006))。

已知动脉粥样硬化病变中的MCP-1受到上调，并且已显示可经由使用治疗剂治疗来降低MCP-1的循环水平(Rezaie-Majd，A.等人，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.,22:1194-1199(2002))。若干关键研究已证明拮抗MCP-1/CCR-2相互作用在治疗动脉粥样硬化中的潜在治疗价值。例如，当MCP-1-/-小鼠与LDL受体缺乏小鼠杂交时，观测到主动脉脂质沉积降低83%(Gu,L.等人，Mol.Cell,2:275(1998))。类似地，当自过度表达人类载脂蛋白B的小鼠遗传切除MCP-1时，相对于MCP-1+/+apoB对照小鼠，可防止所得小鼠形成动脉粥样硬化病变(Gosling,J.等人，J.Clin.Invest.,103:773(1999))。同样，当CCR-2-/-小鼠与载脂蛋白E-/-小鼠杂交时，观测到动脉粥样硬化病变发生率显著降低(Boring,L.等人，Nature,394:894(1998)；Dawson,T.C.等人，Atherosclerosis,143:205(1999))。最后，当向载脂蛋白E-/-小鼠给予编码CCR-2的肽拮抗剂的基因时，则病变尺寸降低且斑块稳定性增加(Ni,W.等人，Circulation,103:2096-2101(2001))。自CCR-2-/-小鼠移植骨髓至ApoE3-Leiden小鼠中可抑制早期动脉粥样化形成(Guo,J.等人，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.,23:447(2003))，但对晚期病变的作用极小(Guo,J.等人，Arterioscler. Thromb.Vasc.Biol.,25:1014(2005))。

患有2型糖尿病的患者通常展现胰岛素耐受，其为该疾病的一种标志特征。胰岛素耐受也与一组称为“代谢综合征”或“综合征X”的异常相关，所述异常包括肥胖症、动脉粥样硬化、高血压及血脂障碍(在Eckel等人，Lancet,365:1415(2005)中评述)。已认识到炎症在加剧2型糖尿病及“综合征X”病变的疾病过程中起作用(在Chen,H.,Pharmacological Research,53:469(2006)；Neels等人，J.Clin.Invest.,116:33(2006)；Danadona等人，Am.J.Cardiol.,90:27G-33G(2002)；Pickup等人，Diabetologia,41:1241(1998)中评述)。认为MCP-1在肥胖症诱导的胰岛素耐受中起作用。传统上，人类前脂肪细胞组成性表达MCP-1(Gerhardt,Mol.Cell.Endocrinology,175:81(2001))。CCR-2表达于脂肪细胞上；在体外向分化的脂肪细胞添加MCP-1减少胰岛素刺激的葡萄糖吸收及若干脂肪形成基因(LpL、脂素(adipsin)、GLU-4)、P2、β3-肾上腺素能受体及PPARγ的表达(Sartipy,P.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,96:6902(1999))。患有2型糖尿病的患者的循环MCP-1水平高于无糖尿病对照组(Nomura,S.等人，Clin.Exp.Immunol.,121:437(2000))，且MCP-1自脂肪组织的释放可通过用抗糖尿病疗法(诸如二甲双胍或噻唑烷二酮)进行治疗而降低(Bruun,J.M.等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.,90:2282(2005))。同样，MCP-1也在鼠类肥胖症实验模型中过度表达，且主要由脂肪组织产生(Sartipy等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,100:7265(2003))。在肥胖小鼠中，在发生胰岛素耐受之前以及同时发生MCP-1表达(Xu,H.等人，J.Clin.Invest.,112:1821(2003))。另一项研究显示在小鼠性腺外周脂肪组织中MCP-1的表达与体重正相关(Weisberg等人，J.Clin.Invest.,112:1796(2003))。与这些数据一致，db/db小鼠中胰岛素耐受的发展可经由遗传缺失MCP-1或通过基因诱导的显性负相肽的表达而改善(Kanda,H.等人，J.Clin.Invest.,116:1494(2006))。也可证明以下逻辑联系：脂肪组织中MCP-1的过度表达促进胰岛素耐受(Kamei,N.等人，J.Biol.Chem.,281:26602(2006))。也出现一种显示在db/db小鼠中遗传缺失MCP-1不影响胰岛素耐受的矛盾结果(Chow，F.Y.等人，Diabetologia,50:471(2007))。与关于MCP-1的资料一致，使用CCR-2(MCP-1受体)进行的直接研究显示其在形成肥胖症及肥胖症诱导的胰岛素耐受中起作用。在野生型(Tsou,C.L.等人，J.Clin.Invest.,117:902(2007))和ApoE-/-小鼠(Tacke,F.等人，J.Clin.Invest.,117:185(2007))中，维持高脂肪饮食均增加循环CCR-2⁺炎性单核细胞的数目。遗传缺失CCR-2减少鼠类脂肪组织中已活化巨噬细胞的数目(Lumeng,C.N.等人，Diabetes,56:16(2007))，但不影响认为维持“苗条”状态的M2脂肪巨噬细胞群体(Lumeng,C.N.等人，J.Clin.Invest.,117:175(2007))。遗传缺失CCR-2减少饮食诱导的肥胖症且在饮食诱导的肥胖症模型中改善胰岛素敏感性(Weisberg,S.P.等人，J.Clin.Invest.,116:115(2006)；Cornelius,P.等人，PCT公开WO 2006/013427A2)，其视实验条件而定(Chen,A.等人，Obes.Res.,13:1311(2005))。在此相同模型中给予小分子CCR-2拮抗剂也改善胰岛素敏感性(Weisberg,S.P.等人，J.Clin.Invest.,116:115(2006))。

两项研究描述CCR-2在高血压诱导的血管发炎、重塑和肥大中的重要作用(Bush,E.等人，Hypertension,36:360(2000)；Ishibashi,M.等人，Circ.Res.,94:1203(2004))。

已知人类多发性硬化症中MCP-1受到上调，且已显示使用干扰素β-1b的有效疗法降低外周血液单核细胞中MCP-1的表达，表明MCP-1在疾病进展中起作用(Iarlori,C.等人，J.Neuroimmunol.,123:170-179(2002))。其他研究表明拮抗MCP-1/CCR-2相互作用在治疗多发性硬化症中的潜在治疗价值；所有这些研究已在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)、多发性硬化症的常规的动物模型中得以证明。向患有EAE的动物给予MCP-1的抗体显著减少疾病复发(Kennedy,K.J.等人，J.Neureimmunol.,92:98(1998))。此外，两个报导显示CCR-2-/-小鼠能抵抗EAE(Fife,B.T.等人，J.Exp.Med.,192:899(2000)；Izikson,L.等人，J.Exp.Med.,192:1075(2000))。随后的报导通过检查CCR-2缺失在来自不同品系小鼠中的作用对这些初始观测结果进一步研究(Gaupp,S.等人，Am.J.Pathol.,162:139(2003))。值得注意的是，给予小分子CCR-2拮抗剂也削弱C57BL/6小鼠的疾病进展(Brodmerkel,C.M.等人，J.Immunol.,175:5370(2005))。

已知在肺移植后产生阻塞性细支气管炎综合征的患者中MCP-1受到上调(Reynaud-Gaubert,M.等人，J.Heart Lung Transplant.,21:721-730(2002)；Belperio,J.等人，J.Clin.Invest.,108:547-556(2001))。在阻塞性细支气管炎综合征鼠类模型中，给予针对MCP-1的抗体使气管阻塞减轻；同样在此相同模型中，CCR-2-/-小鼠能抵抗气管阻塞(Belperio,J.等人，J.Clin.Invest.,108:547-556(2001))。这些数据表明拮抗MCP-1/CCR-2可能对治疗移植后的器官排斥反应有益。此外，研究显示破坏MCP-1/CCR-2轴能够延长胰岛移植物的存活期(Lee,I.等人，J.Immunol.,171:6929(2003)；Abdi，R.等人，J.Immunol.,172:767(2004))。在大鼠移植物模型中，显示CCR-2和MCP-1在移植物中受到上调，产生移植物血管病变(Horiguchi,K.等人，J.Heart LungTransplant.,21:1090(2002))。在另一项研究中，抗MCP-1基因疗法减轻移植物血管病变(Saiura,A.等人，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.,24:1886(2004))。一种研究描述通过阻断MCP-1来抑制实验性静脉移植物新生内膜形成(Tatewaki,H.等人，J.Vasc.Surg.,45:1236(2007))。

其他研究已证明拮抗MCP-1/CCR-2相互作用在治疗哮喘中的潜在治疗价值。在经卵白蛋白激发的小鼠中使用中和抗体螯合MCP-1致使支气管过度反应和炎症显著减少(Gonzalo,J.-A.等人，J.Exp.Med.,188:157(1998))。已证明可经由给予MCP-1的抗体来减少经曼森氏住血吸虫(Schistosomamansoni)卵激发的小鼠的过敏性气管发炎(Lukacs,N.W.等人，J.Immunol.,158:4398(1997))。与此一致，MCP-1-/-小鼠显示对曼森氏住血吸虫卵激发的反应减少(Lu,B.等人，J.Exp.Med.,187:601(1998))。

其他研究已证明拮抗MCP-1/CCR-2相互作用在治疗肾病中的潜在治疗价值。在肾小球肾炎鼠类模型中给予MCP-1的抗体使肾小球新月体形成及I型胶原蛋白沉积显著减少(Lloyd,C.M.等人，J.Exp.Med.,185:1371(1997))。此外，具有诱导性肾中毒血清肾炎的MCP-1-/-小鼠显示显著低于其MCP-1+/+对应物的肾小管损伤(Tesch,G.H.等人，J.Clin.Invest.,103:73(1999))。

若干研究已证明拮抗MCP-1/CCR-2相互作用在治疗全身性红斑狼疮中的潜在治疗价值。在全身性红斑狼疮鼠类模型中，CCR-2-/-小鼠相对于其WT对应物展现存活期延长及肾病减少(Perez de Lema,G.等人，J.Am.Soc.Neph.,16:3592(2005))。这些资料与关于在狼疮症啮齿动物模型中对遗传缺失MCP-1(Shimizu,S.等人，Rheumatology(Oxford),43:1121(2004)；Tesch,G.H.等人，J.Exp.Med.,190:1813(1999))或给予CCR-2肽拮抗剂(Hasegawa,H.等人，Arhritis Rheum.,48:2555(2003))进行的最近研究中所发现的改良疾病的活性一致。

观测到相对于未患病回肠，在克隆氏病(Crohn's)患者的小肠中CCR-2⁺固有层淋巴细胞显著增加30倍(Connor,S.J.等人，Gut,53:1287(2004))。也注意到，相对于对照组，在患有活动性克隆氏病的患者中循环CCR-2⁺/CD14⁺/CD56⁺单核细胞子集扩大。若干啮齿动物研究已证明拮抗MCP-1/CCR-2相互作用在治疗克隆氏病/结肠炎中的潜在治疗价值。防止CCR-2-/-小鼠受到葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎的影响(Andres,P.G.等人，J.Immunol.,164:6303(2000))。给予CCR-2、CCR-5及CXCR3的小分子拮抗剂(鼠类结合亲和力分别=24、236及369nM)也防止受葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎影响(Tokuyama,H.等人，Int.Immunol.,17:1023(2005))。最后，MCP-1-/-小鼠在半抗原诱导的结肠炎模型中显示实质上减少的结肠损伤(在宏观及组织学层面)(Khan,W.I.等人，Am.J.Pysiol.Gastrointest.Liver Physiol.,291:G803(2006))。

两个报导描述MCP-1在患有炎性肠疾病患者的肠道上皮细胞及肠粘膜中过度表达(Reinecker，H.C.等人，Gastroenterology,108:40(1995)；及Grimm,M.C.等人，J.Leukoc.Biol.,59:804(1996))。

一项研究描述MCP-1基因的启动子多形现象与硬皮病(全身性硬化症)相关(Karrer,S.等人，J.Invest.Dermatol.,124:92(2005))。在组织纤维化的相关模型中，抑制CCR-2/MCP-1轴减少以下的纤维化：皮肤(Yamamoto,T.等人，J.Invest.Dermatol.,121:510(2003)；Ferreira,A.M.等人，J.Invest.Dermatol.,126:1900(2006))；肺(Okuma,T.等人，J.Pathol.,204:594(2004)；Gharaee-Kermani,M.等人，Cytokine,24:266(2003))；肾(Kitagawa,K.等人，Am.J.Pathol.,165:237(2004)；Wada,T.等人，J.Am.Soc.Nephrol.,15:940(2004))；心脏(Hayashidani,S.等人，Circulation,108:2134(2003))；及肝(Tsuruta,S.等人，Int.J.Mol.Med.,14:837(2004))。

一项研究已证明拮抗MCP-1/CCR-2相互作用在治疗肺泡炎中的潜在治疗价值。当使用针对大鼠MCP-1(JE)产生的抗体静脉内治疗患有IgA免疫复合性肺损伤的大鼠时，肺泡炎症状得到部分缓解(Jones,M.L.等人，J.Immunol.,149:2147(1992))。

若干研究已显示拮抗MCP-1/CCR-2相互作用在治疗癌症中的潜在治疗价值(在Craig,M.J.等人，Cancer Metastasis Rev.,25:611(2006)；Conti,I.等人，Seminars in Cancer Biology,14:149(2004)；Giles,R.等人，Cur r.Cancer DrugTargets,6:659(2006)中评述)。当用抗MCP-1抗体治疗带有人类乳癌细胞的免疫缺乏小鼠时，观测到对肺微小转移的抑制及存活期延长(Salcedo,R.等人，Blood，96:34-40(2000))。使用人类临床肿瘤试样，发现CCR-2表达与前列腺癌进展相关(Lu,Y.等人，J.Cell.Biochem.,101:676(2007))。已在体外显示MCP-1表达介导前列腺癌细胞生长和侵入(Lu,Y.等人，Prostate,66:1311(2006))；此外，由前列腺癌细胞表达的MCP-1诱导人类骨髓祖细胞的骨胳再吸收(Lu,Y.等人，Cancer Res.,67:3646(2007))。

多项研究已描述拮抗MCP-1/CCR-2相互作用在治疗再狭窄中的潜在治疗价值。在人类中，MCP-1水平与再狭窄风险直接相关(Cipollone,F.等人，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.,21:327(2001))。缺乏CCR-2或MCP-1的小鼠显示动脉损伤后内膜面积及内膜/中膜比降低(相对于同窝出生野生型仔畜)(Roque,M.等人，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.,22:554(2002)；Schober，A.等人，Circ.Res.,95:1125(2004)；Kim,W.J.等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.,310:936(2003))。在小鼠中，将MCP-1的显性负相抑制剂转染于骨胳肌中(Egashira,K.等人，Circ.Res.,90:1167(2002))也减少动脉损伤后的内膜增生。在灵长类动物中使用中和抗体阻断CCR-2减少装入血管支架后的新生内膜增生(Horvath,C.等人，Circ.Res.,90:488(2002))。

两个报导描述在具有诱导型脑创伤的大鼠中MCP-1过度表达(King,J.S.等人，J.Neuroimmunol.,56:127(1994)，及Berman,J.W.等人，J.Immunol.,156:3017(1996))。此外，研究显示部分防止CCR-2-/-(Dimitrijevic,O.B.等人，Stroke,38:1345(2007))和MCP-1-/-小鼠(Hughes,P.M.等人，J.Cereb.BloodFlow Metab.,22:308(2002))受局部缺血/再灌注损伤影响。

已知单核细胞/巨噬细胞在神经痛的发展中起重要作用(Liu,T.等人，Pain,86:25(2000))。与此观念一致，最近已描述CCR-2在治疗炎性疼痛和神经痛中的潜在作用。CCR-2-/-小鼠相对于其WT对应物显示对炎性疼痛的反应改变，包括足底内福尔马林(formalin)注射后疼痛行为减少及足底内CFA注射后机械性异常疼痛略微减轻(Abbadie,C.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,100:7947(2003))。此外，CCR-2-/-小鼠在坐骨神经损伤后不显示显著机械性异常疼痛。同样，经口给予小分子CCR-2拮抗剂后使机械性异常疼痛降低至损伤前程度的约80%(Abbadie,C.等人，PCT公开WO 2004/110376)。

一项研究描述MCP-1在缺血性心肌病中的关键作用(Frangogiannis,N.G.等人，Circulation,115:584(2007))。另一项研究描述在抑制MCP-1后实验性心力衰竭减轻(Hayashidani,S.等人，Circulation,108:2134(2003))。

其他研究已提供证据表明MCP-1在上文未提及的各种疾病病症中过度表达。这些报导提供相关证据表明MCP-1拮抗剂可为适用于所述疾病的治疗剂。另一项研究表明MCP-1在啮齿动物心脏同种异体移植物中过度表达，表明MCP-1在移植物动脉硬化发病机制中起作用(Russell,M.E.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6086(1993))。已注意到在患有特发性肺纤维化的患者的肺内皮细胞中MCP-1过度表达(Antoniades,H.N.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:5371(1992))。类似地，注意到在患有牛皮癣的患者的皮肤中MCP-1过度表达(Deleuran,M.等人，J.Dermatol.Sci.,13:228(1996)，及Gillitzer,R.等人，J.Invest.Dermatol.,101:127(1993))；也已报导以CCR-2+细胞为主的相关研究结果(Vestergaard,C.等人，Acta Derm.Venerol.,84:353(2004))。最后，最近报导显示在患有HIV-1相关性痴呆患者的脑和脑脊液中MCP-1过度表达(Garzino-Demo,A.,PCT公开WO 99/46991)。

此外，已显示CCR-2多形现象至少在一个患者子集中与结节病相关(Spagnolo,P.等人，Am.J.Respir.Crit.Care Med.,168:1162(2003))。

也应注意涉及CCR-2为一些HIV病毒株的共受体(Doranz,B.J.等人，Cell,85:1149(1996))。也已确定使用CCR-2作为HIV共受体可能与疾病进展相关(Connor,R.I.等人，J.Exp.Med.,185:621(1997))。此研究结果与以下最近研究结果一致：在人类群体中存在CCR-2突变体CCR-2-64I与HIV发作延迟正相关(Smith,M.W.等人，Science,277:959(1997))。尽管MCP-1不牵涉于这些过程中，但在HIV感染患者中经由结合于CCR-2起作用的MCP-1拮抗剂可能对于延迟疾病进展至AIDS起有益治疗作用。

应注意CCR-2也为人类趋化因子MCP-2、MCP-3及MCP-4的受体(Luster,New Eng.J.Med..,338:436-445(1998))。因为本文中所述的新型式(I)化合物通过结合于CCR-2受体来拮抗MCP-1，故这些式(I)化合物也可能为CCR-2所介导的MCP-2、MCP-3及MCP-4作用的有效拮抗剂。因此，当本文中提及“拮抗MCP-1”时，则假定其等同于“拮抗CCR-2的趋化因子刺激”。

因此，调节趋化因子活性的化合物可显示在治疗炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病中的广泛效用。PCT公开WO 2005/021500A1(以引用的方式并入本文中并转让于本申请者)、WO2008/014381A1、WO 2008/014360A1和WO 2008/014361A1披露经由CCR-2调节MCP-1、MCP-2、MCP-3及MCP-4活性的化合物。参考文献也披露制备这些化合物的各种方法，包括包含引入并随后移除保护基的多步骤合成。

期望发现与已知趋化因子调节剂相比具有改良的药理学特征的新型化合物。例如，期望发现与对单独CCR-2具有选择性、相对于CCR-5主要对CCR-2具有选择性、相对于CCR-2主要对CCR-5具有选择性、或其他G蛋白偶联受体(即5HT2A受体)相比，具有等效双重CCR-2/5抑制活性的新型化合物。也期望发现具有等效双重CCR-2/5抑制活性及以下一种或多种有利特征的化合物：

(a)药物特性(即溶解度、渗透性、对持续释放调配物的适用性)；

(b)剂量要求(例如较低剂量和/或每日一次给药)；

(c)减小血液浓度峰谷特征的因素(即清除率和/或分布体积)；

(d)增加受体处活性药物浓度的因素(即蛋白质结合、分布体积)；

(e)降低临床药物-药物相互作用倾向的因素(细胞色素P450酶抑制或诱导，诸如CYP 2D6抑制，参看Dresser,G.K.等人，Clin.Pharmacokinet.,38:41-57(2000)，以引用的方式并入本文中)；及

(f)降低不利副作用可能性的因素(例如除G蛋白偶联受体以外的药理学选择性、可能的化学或代谢反应性、有限CNS穿透、离子通道选择性)。特别期望发现具有上述药理学特征的适宜组合的化合物。

本领域也期望提供制备所述化合物的新型和/或改良方法。这些方法的特征可为(但不限于)：a)易于改适用于较大规模生产，诸如试验性工厂规模或制备规模；b)方法步骤和/或技术使得能够改良中间体和/或最终化合物的纯度(包括手性纯度)、稳定性和/或操作便利性；和/或c)工艺步骤较少。

发明内容

本发明提供一种新颖拮抗剂：N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，或其药用盐、溶剂化物或前药，该拮抗剂具有出乎意料的等效(equipotent)双重CCR-2和CCR-5受体抑制活性。此外，本发明呈现等效双重CCR-2/5活性与适宜的药理学特征的新颖且出乎意料的组合。也提供本发明的结晶及代谢物形式。含有其的药物组合物及其作为药物治疗炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病的使用方法也为本发明的目标。本发明也提供制备式(I)化合物，包括N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的方法：

其中R¹、R⁸、R⁹、R¹⁰及如本文中所述。本文中也提供适用作该方法的中间体的化合物。

本发明也提供N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺、N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-(2-羟基-1,1-二甲基-乙基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺、或药用盐、溶剂化物或前药的用途，其是用于制备治疗炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病的药物。

本发明也提供活性化合物、或其药用盐或前药的代谢物；其药物组合物；及使用所述代谢物治疗炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病，具体糖尿病、多发性硬化症、克隆氏病和/或动脉粥样硬化的方法。

因此，本文中披露趋化因子活性的新颖调节剂、或其药用盐或前药，它们具有适宜的药理学特征的出乎意料的组合。

本发明提供包含药用的载体及治疗有效量的至少一种本发明化合物或其药用盐或前药形式的药物组合物。

本发明也提供治疗炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病，尤其糖尿病、多发性硬化症、克隆氏病和/或动脉粥样硬化的方法，其包括向需要该治疗的主体给予治疗有效量的至少一种本发明化合物或其药用盐或前药形式。

本发明提供制备本文中所披露的化合物的方法及其有用的中间体。

本发明提供本发明化合物的用途，其是用于治疗中。

本发明提供本发明化合物的用途，其是用于制备用于治疗炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病的药物。

附图说明

图1披露N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的实验及模拟粉末图。

图2披露N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，游离碱形式N-1的差示扫描量热法分析。

图3披露N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，游离碱形式N-1的热重分析。

具体实施方式

本发明提供一种新颖拮抗剂：N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，或其药用盐、溶剂化物或前药，它们具有出乎意料的等效双重CCR-2及CCR-5受体活性。此外，本发明还提供适宜的药理学特征的新颖组合。也提供本发明的晶形及代谢物。含有其的药物组合物及其作为药物治疗炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病的使用方法也为本发明的目标。本发明也提供制备式(I)化合物，包括N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的方法：

其中R¹、R⁸、R⁹、R¹⁰及

如本文中所述。本文中也提供适用作该方法的中间体的化合物。

N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺出乎意料地显示等效双重CCR-2/5受体抑制活性。

此外，N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺显示等效双重CCR-2/5受体抑制活性与药理学特征(包括令人惊讶的高度口服生物利用度与高度有效并具有极佳安全性准则的适应征(indication)的组合)的适宜组合。

已知趋化因子受体调节剂，诸如PCT公开WO 2004/071460A1和WO2005/021500A1(美国专利7,163,937，2007年1月16日颁予，转让于本申请者)中所披露的那些并不充分有效(如通过其CCR-2或CCR-5结合能力(一种功效量度)所测量)，和/或如通过hERG及Na+离子通道研究所测量的离子通道选择性所指示其缺少适当的安全性准则。

其他已知趋化因子受体调节剂，诸如PCT公开WO 2008/014381A1、WO 2008/014360A1和WO 2008/014361A1号中所披露的那些为CCR-2受体活性的选择性拮抗剂或选择性部分激动剂/拮抗剂。然而，这些己知调节剂如其CCR-2及CCR-5结合能力所测量主要显示CCR-2活性且不为等效双重拮抗剂。

其他已知趋化因子受体调节剂，诸如Carter等人(American ChemicalSociety,2008年8月17日)中所披露的那些为双重CCR-2/5调节剂，但如通过hERG及Na+离子通道研究测量的离子通道选择性所指示缺少适当的安全性准则。

相比之下，如本文在下文题为“比较药理学特征”的章节中提供的资料所说明，N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺令人惊讶地展现等效CCR-5及CCR-2结合能力。此外，N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺显示令人惊讶的高度的膜渗透性，且仍保持等效CCR-2/5双重结合能力以及极佳离子通道选择性。

因此，本发明提供具有等效CCR-2及CCR-5结合能力的新型趋化因子调节剂，且改良药理学特征，所述特征预期适用于治疗炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病。

实施方案

在一实施方案中，本发明涉及N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺：

及其药用盐。

另一实施方案为N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的晶形。

另一实施方案为N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的晶形，其中该晶形包含N-1和/或P-1晶形。

另一实施方案为N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的晶形，其中该晶形包含N-1晶形。

另一实施方案为N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的晶形，其中该晶形包含呈实质上纯形式的N-1或P-1晶形。

另一实施方案为N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的晶形，其中该晶形包含呈实质上纯形式的N-1晶形。

另一实施方案为N-1晶形，其特征在于实质上等于以下的晶胞参数：

晶胞尺寸：

a=7.3085(6)

b=16.257(1)

c=22.688(2)

α°=90

β°=90

γ°=90

空间群P2₁2₁2₁

分子/晶胞(Z)：1

密度计算值g-cm^-3：1.194

其中该晶体处于约-70℃的温度。

另一实施方案为N-2晶形，其特征在于(或具有)实质上与图1一致的粉末x射线衍射图。

另一实施方案为N-2晶形，其特征在于(或具有)实质上与图2中所示一致的差示扫描量热法热分析图，在高于约205℃处具有吸热转变。

另一实施方案特征在于(或具有)与图3中所示一致的热重分析曲线。

另一实施方案为N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的晶形，其包含晶形N-1，其特征在于表1中所见的晶胞参数；和/或实质上与图1一致的粉末x射线衍射图。

另一实施方案为包含N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺或其药用盐的药物组合物。

另一实施方案为包含N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺、其药用盐及药用的载体的药物组合物。

另一实施方案为包含N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺、其药用盐及至少一种其他治疗剂的药物组合物。

另一实施方案为调节趋化因子或趋化因子受体活性的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐。

另一实施方案为调节CCR-2及CCR-5受体活性的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐。

另一实施方案为调节由CCR-2及CCR-5受体介导的MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4、MCP-5、MIP-1a、MIP-1b及RANTES活性的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐。

另一实施方案为调节MCP-1活性的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐。

另一实施方案为治疗病症的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐，所述病症选自糖尿病(diabetes)、肥胖症(obesity)、代谢综合征(metabolic syndrome)、中风(stroke)、神经痛(neuropathic pain)、缺血性心肌病(ischemic cardiomyopathy)、牛皮癣(psoriasis)、高血压(hypertension)、硬皮病(scleroderma)、骨关节炎(osteoarthritis)、动脉瘤(aneurism)、发热(fever)、心血管疾病(cardiovasculardisease)、克隆氏病(Crohn’s disease)、充血性心力衰竭(congestive heart failure)、自身免疫性疾病(autoimmune diseases)、HIV感染(HIV-infection)、HIV相关性痴呆(HIV-associated dementia)、牛皮癣(psoriasis)、特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis)、移植物动脉硬化(transplant arteriosclerosis)、物理或化学诱导的脑创伤(physically-or chemically-induced brain trauma)、炎性肠疾病(inflammatory bowel disease)、肺泡炎(alveolitis)、结肠炎(colitis)、全身性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus)、肾中毒血清肾炎(nephrotoxicserum nephritis)、肾小球肾炎(glomerulonephritis)、哮喘(asthma)、多发性硬化症(multiple sclerosis)、动脉粥样硬化(atherosclerosis)、血管炎(vasculitis)、易损斑块(vulnerable plaques)、类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis)、再狭窄(restenosis)、静脉新生内膜增生(venous neointimal hyperplasia)、透析移植物新生内膜增生(dialysis-graft neointimal hyperplasia)、动静脉瘘内膜增生(arterio-venous shunt intimal hyperplasia)、器官移植(organ transplantation)、慢性同种异体移植肾病(chronic allograft nephropathy)、以及癌症。

另一实施方案为治疗病症的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐，其中所述病症选自糖尿病、肥胖症、克隆氏病、牛皮癣、特发性肺纤维化、移植物动脉硬化、物理或化学诱导的脑创伤、炎性肠疾病、肺泡炎、结肠炎、全身性红斑狼疮、肾中毒血清肾炎、肾小球肾炎、哮喘、多发性硬化症、动脉粥样硬化、以及类风湿性关节炎、再狭窄、器官移植、癌症、静脉新生内膜增生、透析移植物新生内膜增生、以及动静脉瘘新生内膜增生。

另一实施方案为治疗病症的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐，其中所述病症选自糖尿病、肥胖症、克隆氏病、全身性红斑狼疮、肾小球肾炎、多发性硬化症、动脉粥样硬化、再狭窄、器官移植、静脉新生内膜增生、透析移植物新生内膜增生、以及动静脉瘘新生内膜增生。

另一实施方案为治疗病症的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐，其中所述病症选自多发性硬化症、动脉粥样硬化、克隆氏病、糖尿病、静脉新生内膜增生、透析移植物新生内膜增生、以及动静脉瘘新生内膜增生。

另一实施方案为治疗病症的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐，其中所述病症选自再狭窄、器官移植、癌症、静脉新生内膜增生、透析移植物新生内膜增生及动静脉瘘新生内膜增生。

另一实施方案为治疗糖尿病的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐。

另一实施方案为治疗克隆氏病的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的t N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐。

另一实施方案为治疗多发性硬化症的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐。

另一实施方案为治疗动脉粥样硬化的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐。

另一实施方案为治疗再狭窄的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐。

另一实施方案为治疗器官移植的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐。

另一实施方案为治疗癌症，例如乳癌、肝癌、前列腺癌及黑素瘤的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐。

另一实施方案为治疗静脉新生内膜增生的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐。

另一实施方案为治疗透析移植物新生内膜增生的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐。

另一实施方案为治疗动静脉瘘新生内膜增生的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐。

另一实施方案为治疗炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病和/或心血管疾病的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐。

另一实施方案为治疗至少部分由CCR-2和CCR-5介导的疾病的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐。

另一实施方案为N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺及其药用盐在制备用于治疗以下疾病的药物中的使用方法：糖尿病、肥胖症、代谢综合征、中风、神经痛、缺血性心肌病、牛皮癣、高血压、硬皮病、骨关节炎、动脉瘤、发热、心血管疾病、克隆氏病、充血性心力衰竭、自身免疫性疾病、HIV感染、HIV相关性痴呆、牛皮癣、特发性肺纤维化、移植物动脉硬化、物理或化学诱导的脑创伤、炎性肠疾病、肺泡炎、结肠炎、全身性红斑狼疮、肾中毒血清肾炎、肾小球肾炎、哮喘、多发性硬化症、动脉粥样硬化、血管炎、易损斑块、类风湿性关节炎、再狭窄、静脉新生内膜增生、透析移植物新生内膜增生、动静脉瘘内膜增生、器官移植、慢性同种异体移植肾病、癌症、静脉新生内膜增生、透析移植物新生内膜增生、以及动静脉瘘新生内膜增生。

在另一实施方案中，本发明涉及N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-(2-羟基-1,1-二甲基-乙基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺：

及其药用盐。含有其的药物组合物及其作为药物治疗炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病的使用方法也为本发明的一实施方案。

方法实施方案

在第一实施方案中，本发明提供制备式I化合物或其盐形式的方法：

其包含：

1)使式I-cc的腙化合物转化为式I-bb的化合物；及

2)使式I-bb的化合物与式I-aa的化合物偶合，其中：

R₁独立地为氢或选自苄氧羰基、叔丁氧基羰基、芴基甲氧羰基、苄基及对甲氧基苄基的胺保护基；

R₈及R₉独立地为氢或C_1-6烷基；

R₂₁为=O；

HET为任选地经取代的具有至少一个氮杂原子的3至14元杂环基或杂芳基二环；及

LG为-OR₁₆，其中R₁₆为C_1-6烷基、苯基、具有一个或多个选自N、S或O的原子的5至7元杂芳基，或3至7元环烷基，这些基团全部都任选地经1至3个选自卤素、CF₃或C_1-6烷基的基团取代。

在第二实施方案中，本发明提供式I化合物为N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的方法。

在第三实施方案中，本发明提供制备式I化合物的方法，其中式I-bb化合物为下式化合物：

在第四实施方案中，本发明提供制备式I化合物的方法，其中偶合经由酸性后处理，随后添加碱来进行。

在第五实施方案中，本发明提供制备式I化合物的方法，其中酸性后处理中的酸选自柠檬酸、酒石酸、乙醇酸及盐酸。

在第六实施方案中，本发明提供制备式I化合物的方法，其中碱选自K₂HPO₄、Na₂HPO₄、NaHCO₃及KHCO₃。

在第七实施方案中，本发明提供制备式I化合物的方法，其中使式I-cc的腙化合物转化为式I-bb化合物包括使式I-cc腙化合物与酰化剂、亲核试剂和/或叔胺碱在溶剂中反应，随后(i)在第二种叔胺碱存在下使用醇或(ii)使用醇盐进行拦截(interception)以形成式I-bb化合物。

在第八实施方案中，本发明提供酰化剂选自磷酰氯、草酰氯、亚硫酰氯及光气，优选为磷酰氯的方法。

在第九实施方案中，本发明提供叔胺碱选自三乙胺、N-N-二异丙基-N-乙基胺、三正丙基胺、N-甲基吗啉及1,4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷，优选为N-N-二异丙基-N-乙基胺的方法。

在第十实施方案中，本发明提供亲核试剂选自二甲基4-氨基吡啶、二甲基苯胺、吡啶及二甲基吡啶，优选为二甲基4-氨基吡啶的方法。

在第十一实施方案中，本发明提供反应中所用的亲核试剂的量为2.0至4.0当量，优选为3.0当量的方法。

在第十二实施方案中，本发明提供醇或醇盐选自苯酚、五氟苯酚、甲醇、乙醇、甲醇钠及苯酚钠，优选为苯酚的方法。

在第十三实施方案中，本发明提供第二种叔胺碱选自三乙胺、N-N-二异丙基-N-乙基胺、三正丙基胺、N-甲基吗啉及1,4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷，优选为N-N-二异丙基-N-乙基胺的方法。

在第十四实施方案中，本发明提供溶剂选自乙腈、二氯甲烷及纯磷酰氯的方法。

在第十五实施方案中，本发明提供反应及拦截在环境温度至70℃范围内的温度下进行的方法。

在第十六实施方案中，本发明提供式I-cc化合物为下式化合物的方法：

在第十七实施方案中，本发明提供其中式I-cc的腙化合物是通过包括以下的方法制备的方法：使式I-dd的腙化合物

与原甲酸酯在酸存在下在高温下反应产生式I-cc的腙化合物；其中R₂₁为=O；R₂₂为-NH-NH₂；R₂₃为氰基烷基；或R₂₂与R₂₃可一起形成5至8元环，其中该环可任选地被一个或多个选自氨基、烷基、芳基或杂芳基的取代基取代且可任选地含有1、2、3或4个独立地选自N、S或O的杂原子。

在第十八实施方案中，本发明提供原甲酸酯选自原甲酸三甲酯、原甲酸三乙酯及原甲酸三丙酯，优选为原甲酸三甲酯的方法。

在第十九实施方案中，本发明提供酸选自乙酸、三氟乙酸、盐酸及甲磺酸，优选为乙酸的方法。

在第二十实施方案中，本发明提供反应在40℃至90℃，优选40℃至75℃范围内的温度下进行的方法。

在第二十一实施方案中，本发明提供其中式I-dd化合物选自下式化合物的方法：

在第二十二实施方案中，本发明提供式I-dd的腙化合物是通过包括以下的方法制备的方法：使式I-ee化合物(R₂₃=O)与式I-ff的卡巴肼化合物：

在溶剂中在碱存在下缩合产生式I-dd的腙化合物；其中R₂₁为=O且R₂₂和R₂₃如上文中所述。

在第二十三实施方案中，本发明提供溶剂选自乙醇、2-丙醇、1-丙醇及甲醇，优选为乙醇的方法。

在第二十四实施方案中，本发明提供碱选自乙酸钠、乙酸钾、三乙胺及N-N-二异丙基-N-乙基胺，优选为乙酸钠的方法。

在第二十五实施方案中，本发明提供其中缩合在20℃至60℃，优选25℃至55℃范围内的温度下进行的方法。

在第二十六实施方案中，本发明提供式I-ff的卡巴肼化合物为半卡巴肼盐酸盐的方法。

在第二十七实施方案中，本发明提供式I-ee的化合物为新戊酰基乙腈的方法。

在第二十八实施方案中，本发明提供制备N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的方法，其包括以下方案中所述的方法：

本发明在不悖离其精神或基本属性下可以其他特定形式实施。因此，以上实施方案不应视为具有限制性。本发明的任何及所有实施方案可与任何其他一个或多个实施方案联合以描述其他实施方案。实施方案的各要素(例如优选的或具体的方面)为其自身独立的实施方案。此外，一实施方案的任何要素意在与任何实施方案的任何及所有其他要素组合以描述其他实施方案。此外，本发明涵盖本文中所述的本发明的不同实施方案、实施方案部分、定义、描述及实例的组合。

定义

以下为本说明书及随附权利要求中使用的术语的定义。除非另外指示，否则本文中所提供的基团或术语的初始定义适用于本说明书及权利要求通篇中的个别或作为另一基团的一部分的该基团或术语。

术语“烷基”是指具有1至12个碳原子，优选1至6个碳原子的直链或支链烃基。在符号“C”后出现下标形式的数字时，该下标更明确定义具体基团可含有的碳原子数。例如“C_1-6烷基”是指具有1至6个碳原子的直链和支链烷基，诸如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基等。下标“0”是指键。因此，术语羟基(C_0-2)烷基或(C_0-2)羟基烷基包括羟基、羟基甲基及羟基乙基。烷基可被1至3个选自以下的基团取代：(C_1-6)烷基、(C_2-6)烯基、羟基、卤素、氰基、硝基、CF₃、O(C_1-6烷基)、OCF₃、C(=O)H、C(=O)(C_1-6烷基)、CO₂H、CO₂(C_1-6烷基)、NHCO₂(C_1-6烷基)、-S(C_1-6烷基)、NH₂、NH(C_1-6烷基)、N(C_1-6烷基)₂、N(CH₃)₃ ⁺、SO₂(C_1-6烷基)、C(=O)(C_1-4亚烷基)NH₂、C(=O)(C_1-4亚烷基)NH(烷基)、C(=O)(C_1-4亚烷基)N(C_1-4烷基)₂、C_3-7环烷基、苯基、苄基、苯基乙基、苯氧基、苄氧基、萘基、4至7元杂环基、和/或5至6元杂芳基。当经取代的烷基被芳基、杂环基、环烷基或杂芳基取代时，所述环状系统如下文所定义且因此可具有0、1、2或3个也如下文所定义的取代基。

当术语“烷基”与另一基团一起使用时，诸如在“芳基烷基”中，此联合更明确定义经取代的烷基可含有的至少一个取代基。例如，“芳基烷基”是指至少一个取代基为芳基的如上文所定义的经取代烷基，诸如苄基。因此，术语芳基(C_0-4)烷基包括具有至少一个芳基取代基的经取代低碳烷基并且也包括直接键结至另一基团的芳基，即芳基(C₀)烷基。

术语“烯基”是指具有2至12个碳原子和至少一个双键的直链或支链烃基。具有2至6个碳原子且具有一个双键的烯基是最优选的。烯基可如上文关于烷基所述那样经取代。

术语“炔基”是指具有2至12个碳原子和至少一个三键的直链或支链烃基。具有2至6个碳原子且具有一个三键的炔基是最优选的。炔基可如上文关于烷基所述那样经取代。

术语“亚烷基”是指具有1至12个碳原子，优选1至8个碳原子的二价直链或支链烃基，例如{-CH₂-}_n，其中n为1至12，优选为1至8。低碳亚烷基，即具有1至2个碳原子的亚烷基是最优选的。术语“亚烯基”及“亚炔基”分别指如上文所定义的烯基及炔基的二价基团。亚烯基可如上文关于烷基所述那样经取代。

术语“烷氧基”指被如上文所定义的烷基取代的氧原子。例如，术语“烷氧基”包括基团-O-C_1-6烷基。

当提及烷氧基、硫烷基或氨基烷基时使用下标时，下标是指该基团除杂原子外还可含有的碳原子数。

应了解所有基团，包括例如烷氧基、硫烷基及氨基烷基可由本领域技术人员进行选择以提供稳定化合物。

术语“羰基”是指二价羰基-C(=O)-。

术语“酰基”是指连接至有机基团的羰基，更具体为连接至有机基团的基团C(=O)R_e，以及二价基团-C(=O)R_e-。基团R_e可选自如本文中所定义的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，或适当时选自相应二价基团，例如亚烷基。

术语“环烷基”是指具有3至9个，优选3至7个碳原子的完全饱和和部分不饱和的烃环(因此包括“环烯基环”)。术语“环烷基”包括具有0、1、2或3个选自以下的取代基的所述环：(C_1-4)烷基、(C_2-4)烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF₃、O(C_1-4烷基)、OCF₃、C(=O)H、C(=O)(C_1-4烷基)、CO₂H、CO₂(C_1-4烷基)、NHCO₂(C_1-4烷基)、S(C_1-4烷基)、NH₂、NH(C_1-4烷基)、N(C_1-4烷基)₂、N(C_1-4烷基)₃ ⁺、SO₂(C_1-4烷基)、C(=O)(C_1-4亚烷基)NH₂、C(=O)(C_1-4亚烷基)NH(烷基)、和/或C(=O)(C_1-4亚烷基)N(C_1-4烷基)₂。术语“环烷基”也包括稠合有第二环(例如包括苯并、杂环基环或杂芳基环)或具有3至4个碳原子的碳-碳桥的所述环。

术语“卤代”或“卤素”是指氯、溴、氟及碘。

术语“卤代烷基”是指具有一个或多个卤素取代基的经取代烷基。例如，“卤代烷基”包括单氟甲基、二氟甲基及三氟甲基。

术语“卤代烷氧基”是指具有一个或多个卤素取代基的烷氧基。例如“卤代烷氧基”包括-OCF₃。

术语“杂原子”包括氧、硫及氮。

术语“芳基”是指苯基、联苯基、芴基、1-萘基及2-萘基。术语“芳基”包括具有0、1、2或3个选自以下的取代基的所述环：(C_1-4)烷基、(C_2-4)烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF₃、O(C_1-4烷基)、OCF₃、C(=O)H、C(=O)(C_1-4烷基)、CO₂H、CO₂(C_1-4烷基)、NHCO₂(C_1-4烷基)、S(C_1-4烷基)、NH₂、NH(C_1-4烷基)、N(C_1-4烷基)₂、N(C_1-4烷基)₃ ⁺、SO₂(C_1-4烷基)、C(=O)(C_1-4亚烷基)NH₂、C(=O)(C_1-4亚烷基)NH(烷基)、和/或C(=O)(C_1-4亚烷基)N(C_1-4烷基)₂。

术语“杂环基”或“杂环”是指具有1至4个杂原子的经取代及未经取代的非芳族(可为部分或完全饱和)3至15元环。所述环可为3至7元单环基团、7至11元二环基团及10至15元三环基团。含杂原子的杂环基团的各环可含有1或2个氧原子或硫原子和/或1至4个氮原子，其限制条件为各环中杂原子的总数为4个或小于4个，且进一步限制条件为各环含有至少一个碳原子。实现二环基团及三环基团的稠合环可仅含有碳原子且可为饱和、部分饱和或不饱和的。氮原子及硫原子可任选地被氧化且氮原子可任选地被季铵化。杂环基可在任何可用氮原子或碳原子处连接。杂环基环可含有0、1、2或3个选自以下的取代基：(C_1-4)烷基、(C_2-4)烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF₃、O(C_1-4烷基)、OCF₃、C(=O)H、C(=O)(C_1-4烷基)、CO₂H、CO₂(C_1-4烷基)、NHCO₂(C_1-4烷基)、S(C_1-4烷基)、NH₂、NH(C_1-4烷基)、N(C_1-4烷基)₂、N(C_1-4烷基)₃ ⁺、SO₂(C_1-4烷基)、C(=O)(C_1-4亚烷基)NH₂、C(=O)(C_1-4亚烷基)NH(烷基)、和/或C(=O)(C_1-4亚烷基)N(C_1-4烷基)₂。示例性杂环基包括氮杂环丁烷基、吡咯烷基、氧杂环丁烷基、咪唑啉基、噁唑烷基、异噁唑啉基、噻唑烷基、异噻唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代氮杂

基、氮杂

基、4-哌啶酮基、四氢吡喃基、吗啉基、硫吗啉基、硫吗啉基亚砜、硫吗啉基砜、1,3-二氧杂环戊烷、奎宁环基、四氢-1,1-二氧代噻吩基及其类似基团。

术语“杂芳基”是指在至少一个环中具有1至4个选自O、S或N的杂原子的经取代及未经取代的芳族3至14元环。所述环可为5或6元单环基团、9或11元二环基团及11至14元三环基团。含杂原子的各杂芳基环可含有1或2个氧原子或硫原子和/或1至4个氮原子，其限制条件为各环中杂原子的总数为4个或小于4个且各环具有至少一个碳原子。实现二环基团或三环基团的稠合环可仅含有碳原子且可为饱和、部分饱和或不饱和的。氮原子及硫原子可任选地被氧化且氮原子可任选地被季铵化。二环或三环杂芳基须包括至少一个完全芳族环，但其他稠合环可为芳族或非芳族。杂芳基可在任何环的任何可用氮原子或碳原子处连接。杂环基环系统可含有0、1、2或3个选自以下的取代基：(C_1-4)烷基、(C_2-4)烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF₃、O(C_1-4烷基)、OCF₃、C(=O)H、C(=O)(C_1-4烷基)、CO₂H、CO₂(C_1-4烷基)、NHCO₂(C_1-4烷基)、S(C_1-4烷基)、NH₂、NH(C_1-4烷基)、N(C_1-4烷基)₂、N(C_1-4烷基)₃ ⁺、SO₂(C_1-4烷基)、C(=O)(C_1-4亚烷基)NH₂、C(=O)(C_1-4亚烷基)NH(烷基)、和/或C(=O)(C_1-4亚烷基)N(C_1-4烷基)₂。

示例性杂芳基包括吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基、吲哚基、苯并噻唑基、苯并间二氧杂环戊烯基、苯并噁唑基、苯并噻吩基、喹啉基、四氢异喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、吲嗪基、苯并呋喃基、色酮基、香豆素基、苯并吡喃基、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基、二氢异吲哚基、四氢喹啉基及其类似基团。特定杂芳基包括例如6位经取代的喹唑啉-4-基及6-三氟甲基-喹唑啉-4-基。

当一基团任选地经取代时，其应包括经取代及未经取代的基团。

本文所述的化合物可具有不对称中心。含有不对称取代的原子的本发明化合物可以旋光或外消旋形式分离。本领域熟知如何制备旋光形式，诸如通过拆分外消旋形式或通过以旋光起始物质合成。本文中所述的化合物中也可存在烯烃、C=N双键等的许多几何异构体，且所有所述稳定异构体均涵盖于本发明中。描述本发明化合物的顺式及反式几何异构体且其可以以异构体的混合物或单独的异构形式分离。除非特别指示具体的立体化学或异构体形式，否则预期结构的所有手性、非对映异构体、外消旋形式及所有几何异构体形式。

本文中所披露化合物的一种对映异构体相较于另一对映异构体可显示优越活性。因此，所有立体化学均视为本发明的一部分。当需要时，可通过使用手性柱进行的HPLC，或如Young,S.D.等人，Antimicrobial Agents andChemotherapy,2602-2605(1995)中所述通过使用诸如樟脑酰氯(camphonicchloride)的拆分剂进行拆分来达成外消旋物质的分离。

片语“药用”在本文中用于指在可靠医学判断范围内、适合与人类及动物的组织接触而无过多毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，与合理益处/风险比相称的那些化合物、物质、组合物和/或剂型。

如本文所用的“药用盐”是指所披露化合物的衍生物，其中母体化合物通过制备其酸盐或碱盐而被改性。药用盐的实例包括(但不限于)碱性残基(诸如胺)的无机酸盐或有机酸盐；酸性残基(诸如羧酸)的碱金属盐或有机盐；等等。药用盐包括例如由无毒性无机或有机酸形成的母体化合物的常规的无毒盐或季铵盐。例如，所述常规的无毒盐包括自诸如盐酸、苯磺酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等无机酸获得的盐；以及由以下制备的盐：有机酸，诸如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、扑酸、顺丁烯二酸、羟基顺丁烯二酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、反丁烯二酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙基磺酸等。

本发明的药用盐可通过常规的化学方法由含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。一般而言，所述盐可通过使这些化合物的游离酸或游离碱形式与化学计量的量的适当碱或酸于水或有机溶剂中或于两者的混合物中反应来制备；一般而言，如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈的非水性介质是优选的。适合盐的列表见于Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版，Mack Publishing Company,Easton,PA，第1418页(1985)中，其披露内容以引用的方式并入本文中。

因为已知前药增强药物的许多适宜的品质(例如溶解性、生物利用度、制备等)，所以本发明化合物可以前药形式给药。因此，本发明意在涵盖本发明所主张的化合物的前药、其给药方法及含有其的组合物。“前药”意在包括当将该前药给予哺乳动物受试者时体内释放本发明的活性母体药物的任何共价键结的载体。通过将化合物中所存在的官能团改性使得所述改性在常规操作中或在体内裂解成母体化合物来制备本发明前药。前药包括羟基、氨基或硫氢基键结至任何基团，使得当将本发明前药给予哺乳动物受试者时其裂解从而分别形成游离羟基、游离氨基或游离硫氢基的本发明化合物。前药的实例包括(但不限于)本发明化合物中的醇及胺官能团的乙酸酯、甲酸酯及苯甲酸酯衍生物。

“稳定化合物”及“稳定结构”意在指足够稳固从而可经受从反应混合物中分离至适用纯度以及配制成有效治疗剂的化合物。本发明意在包含稳定化合物。

“治疗有效量”意在包括有效抑制CCR-2及CCR-5或有效治疗或预防本文中所论述的病症的单独本发明化合物的量，或所主张化合物的组合的量，或本发明化合物与其他活性成分的组合的量。

如本文中所使用，“治疗”涵盖治疗哺乳动物、尤其人类的疾病病症，且包括：(a)预防疾病病症在哺乳动物中发生，尤其当该哺乳动物易患该疾病病症但尚未诊断出患上该疾病病症时；(b)抑制疾病病症，即遏止其发展；和/或(c)缓解疾病病症，即使该疾病病症消退。

本文中用以命名具体形式的名称，例如“N-1”或“P-1”，不应视为关于任何其他具有类似或相同物理及化学特征的物质具有限制性，而应理解为这些命名仅为应根据也于本文中提供的表征信息解释的识别符。

本发明提供作为新颖物质，具体地呈药用形式的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的游离碱的晶形。在某些优选的实施方案中，游离碱的晶形呈实质上纯的形式。游离碱的优选的实施方案在实施例中披露为N-1晶形。此外，认为游离碱可以P-1晶形和/或N-1与P-1晶形的组合形式存在。

如本文所用的“多晶型物”是指具有相同化学组成但形成晶体的分子、原子和/或离子的空间排列不同的晶形。

如本文所用的“溶剂化物”是指另外含有一种或多种溶剂的分子引入结晶结构中的分子、原子和/或离子的晶形。溶剂化物中的溶剂分子可以规则排列和/或无序排列形式存在。溶剂化物可包含化学计量或非化学计量的量的溶剂分子。例如，具有非化学计量的量的溶剂分子的溶剂化物可因溶剂化物的溶剂部分损失而产生。

本发明意在包括本发明化合物中出现的原子的所有同位素。同位素包括原子数相同、但质量数不同的那些原子。作为一般实例而并非限制，氢同位素包括氘及氚。碳同位素包括¹³C及¹⁴C。经同位素标记的本发明化合物一般可通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与本文所述类似的方法使用适当经同位素标记的试剂替代否则使用的未经标记的试剂来制备。

如本文所用的“非晶形”是指分子、原子和/或离子的非结晶的固体形式。非晶形固体不显示确定的x射线衍射图。

如本文所用的“实质上纯的”在关于晶形使用时是指以化合物的重量计，该化合物纯度大于90wt%，包括超过90wt%、91wt%、92wt%、93wt%、94wt%、95wt%、96wt%、97wt%、98wt%及99wt%，以及包括等于约100wt%化合物I。其余物质包含该化合物的其他形式和/或其制备中所产生的反应杂质和/或加工杂质。例如，N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱或盐的晶形可视为实质上纯的，因为如通过此时已知的且本领域一般接受的方式所测量，其纯度大于90wt%，其中剩余少于10wt%的物质包含其他形式的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱或盐，和/或反应杂质和/或加工杂质。

可提供具有实质上纯的相均质性的晶形样品，表示存在占优势量的单一晶形及任选地存在的少量一种或多种其他晶形。可通过诸如粉末x射线衍射(PXRD)或固态核磁共振光谱(SSNMR)的技术来确定样品中是否存在多于一种晶形。例如，将实验测得的PXRD图与模拟PXRD图进行比较，所出现的额外峰即指示样品中存在多于一种晶形。模拟PXRD可由单晶x射线数据计算得到。参见Smith,D.K.,“A FORTRAN Program for Calculating X-RayPowder Diffraction Patterns,”Lawrence Radiation Laboratory,Livermore,California,UCRL-7196(1963年4月)。

优选地，若实验测得PXRD图中出现模拟PXRD图中原本不存在的额外峰所产生的面积占总峰面积小于10%，优选小于5%，且优选小于2%时，则表示该晶形具有实质上纯的相均质性。具有以下实质上纯的相均质性的晶形是最优选的，其中在实验测得PXRD图中出现模拟PXRD图中原本不存在的额外峰所产生的面积占总峰面积小于1%。

制备晶形的程序在本领域中是已知的。晶形可由多种方法制备，包括例如从适合溶剂中结晶或重结晶、升华、从熔体中生长、自另一相的固态转换、从超临界流体中结晶及射流喷雾。从溶剂混合物中进行晶形的结晶或重结晶的技术包括例如蒸发溶剂、降低溶剂混合物温度、对分子和/或盐的过饱和溶剂混合物进行晶体接种、冷冻干燥溶剂混合物、以及添加反溶剂(反萃溶剂)至溶剂混合物中。

可使用单晶x射线衍射来表征及辨别晶形，该单晶x射线衍射基于在固定分析温度下对一种晶形的单晶进行晶胞测量。在Stout等人，第3章，X-RayStructure Determination:A Practical Guide,Macmillan Co.,New York(1968)中提供晶胞的详细描述。或者，可根据所观测到的原子分数座标来表征晶格内原子空间关系的独特排列。表征结晶结构的另一方式为粉末x射线衍射分析，其中将实验性或所观测到的衍射曲线与代表纯粉末材料的模拟曲线进行比较，两者均在相同分析温度下进行，且以一系列2θ值来表征标的晶形的测量值。

可使用其他方式来表征该晶形，诸如固态核磁共振(SSNMR)、差示扫描量热法及热重分析。也可组合使用这些参数来表征标的晶形。

如本文所用通过TGA表征的术语“可忽略的重量损失”表明存在纯(非溶剂化)的晶体形式。

在本发明的一实施方案中，提供呈实质上纯形式的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱或盐的晶形。此晶形可用于药物组合物中，所述药物组合物可任选地包括一种或多种选自例如以下的其他组分：赋形剂、载体，及一种具有不同分子结构的其他药物活性成分或活性化学实体。

优选地，晶形具有实质上纯的相均质性，如在实验测得的PXRD图中模拟PXRD图中所不存在的额外峰所产生的面积占总峰面积小于10％，优选小于5%，且更优选小于2%所指示。最优选为具有以下实质上纯的相均质性的晶形，其中在实验测得的PXRD图中模拟PXRD图中所不存在的额外峰所产生的面积占总峰面积小于1%。

在另一实施方案中，提供基本上由N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱或盐的晶形组成的组合物。此实施方案的组合物可以该晶形在组合物中的重量计包含至少90wt%的该晶形。

可通过本领域已知的分析技术(诸如色谱法、核磁共振光谱法、质谱法或红外光谱法)确定是否存在反应杂质和/或加工杂质。

晶形可由多种方法制备，包括例如从适合溶剂中结晶或重结晶、升华、从熔体中生长、自另一相的固态转换、从超临界流体中结晶及射流喷雾。从溶剂混合物中进行晶形的结晶或重结晶的技术包括例如蒸发溶剂、降低溶剂混合物温度、对分子和/或盐的过饱和溶剂混合物进行晶体接种、冷冻干燥溶剂混合物及添加反溶剂(反萃溶剂)至溶剂混合物中。可使用高通量结晶技术制备晶形，包括多晶型物。

药物晶体(包括多晶型物)、其制备方法及药物晶体的表征于Bryn,S.R.等人，Solid-State Chemistry of Drugs，第2版，SSCI,West Lafayette,Indiana.(1999)中论述。

就使用溶剂的结晶技术而言，溶剂的选择通常视一种或多种因素而定，诸如化合物的溶解度、结晶技术及溶剂的蒸气压。可使用溶剂的组合；例如可使该化合物溶解于第一溶剂中得到溶液，随后添加反溶剂以降低该化合物于该溶液中的溶解度并提供晶体形成。“反溶剂”为化合物于其中具有低溶解度的溶剂。用于制备晶体的适合溶剂包括极性及非极性溶剂。

在一种制备晶体的方法中，将N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱或盐于适合溶剂中混悬和/或搅拌以提供浆料，可加热浆料以促进溶解。如本文所用的术语“浆料”是指也可含有额外量的固体从而在指定温度下提供异质混合物的饱和溶液。适合于此方面的溶剂包括例如极性非质子溶剂及极性质子溶剂以及其两种或两种以上的混合物，如本文中所披露。

可将晶种添加至任何结晶混合物中以促进结晶。如本领域技术人员所明了，可使用接种作为控制特定晶形生长的方式或控制结晶产物粒度分布的方式。因此，所需晶种量的计算视可用晶种的尺寸及平均产物粒子的所要尺寸而定，如例如Mullin,J.W.等人，“Programmed cooling of batch crystallizers,”Chemical Engineering Science,26:369-377(1971)中所述。一般而言，需要小尺寸的晶种以有效控制批料中晶体的生长。小尺寸晶种可通过筛分、研磨大晶体或使大晶体微米尺寸化，或使溶液微结晶而产生。应注意研磨晶体或使其微米尺寸化未导致所要晶形在结晶度方面产生任何变化(即，变为非晶形或另一多晶型物)。

冷却的混合物可在真空下过滤，且可用适合溶剂(诸如冷重结晶溶剂)洗涤经分离的固体，以及在氮气净化下干燥得到所要晶形。可通过适合光谱技术或分析技术，诸如SSNMR、DSC、PXRD等技术分析所述经分离的固体以确保形成产物的优选晶形。通常所产生所得晶形的量以在结晶程序中最初使用的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱或盐的重量计大于约70wt%分离产率，但优选大于90wt%。必要时，可将产物共研磨或使其穿过筛网以使产物去结块。

可从制备N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱或盐的最终方法步骤的反应介质中直接制备晶形。其可例如通过在最终方法步骤中使用化合物可自其中结晶的溶剂或溶剂混合物而达成。或者，可通过蒸馏或溶剂添加技术获得晶形。用于此目的的适合溶剂包括任何本文所述的那些溶剂，包括极性质子溶剂(诸如醇)及极性非质子溶剂(诸如酮)。

作为一般指导原则，可将反应混合物过滤以移除任何不需要的杂质、无机盐及其类似物，随后用反应或结晶溶剂进行洗涤。可将所得溶液浓缩以移除过量溶剂或气态组分。若使用蒸馏，则所收集馏出物的最终量会视方法因素，包括例如容器尺寸、搅拌能力等因素而变化。作为一般指导原则，可将反应溶液蒸馏至最初体积的约1/10，随后进行溶剂置换。可根据标准处理技术对该反应进行取样及测定以确定反应程度及产物的wt%。必要时，可添加或移除其他反应溶剂以使反应浓度最佳化。优选将最终浓度调整为约50wt%，在此浓度下通常产生浆液。

优选将溶剂直接添加至反应容器中而不蒸馏反应混合物。用于此目的的优选溶剂为那些如上所述与溶剂交换相关的、可能最终参与晶格中的溶剂。尽管最终浓度可视所要纯度、回收率等因素而变化，但溶液中游离碱的最终浓度优选为约4%至约7%。在添加溶剂后，可搅拌该反应混合物且同时温热。举例说明，可搅拌反应混合物约1小时同时温热至约70℃。优选将反应物趁热过滤并用反应溶剂、所添加溶剂或其组合洗涤。可将晶种添加至任何结晶溶液中以引发结晶。

可通过使用本领域普通技术人员已知的各种分析技术将本文中所述的各种晶形彼此区分。所述技术包括(但不限于)粉末x射线衍射(PXRD)、差示扫描量热法(DSC)和/或热重分析(TGA)。或者，可使用单晶x射线衍射来表征及辨别晶形，该单晶x射线衍射基于在固定分析温度下对给定晶形的单一晶体进行晶胞测量。在Stout等人，第3章，X-Ray Structure Determination:APractical Guide,Macmillan Co.,New York(1968)中提供晶胞的详细描述。具体地，可根据所观测到的原子分数座标表征晶格内原子空间关系的独特排列。表征结晶结构的另一方式为粉末x射线衍射分析，其中将所观测到的衍射曲线与由单晶结构数据产生的模拟曲线进行比较。标的晶形的粉末x射线衍射测量值表征为一系列2θ值(通常为四个或四个以上)。

可使用其他方式来表征晶形，诸如固态核磁共振(SSNMR)光谱法、差示扫描量热法(DSC)、测温法及对结晶或非晶形形态学的大体检查。也可组合使用这些参数来表征标的晶形。

本领域普通技术人员应了解，视所使用测量条件而定，可能获得具有测量误差的x射线衍射图。具体而言，通常已知x射线衍射图的强度可视所使用测量条件及晶体的形状或形态而波动。应进一步理解，相对强度也可视实验条件而变化，因此不应考虑强度的确切等级。此外，常规的x射线衍射图衍射角的测量误差通常为约0.2°2θ值或更低，优选为约0.1°2θ值(如下文中所论述)，并且关于上述衍射角应考虑该测量误差度。因此，应了解本发明的晶形不限于提供x射线衍射图与本文所披露的附图中所描述的x射线衍射图完全相同的晶形。任何提供与附图中所披露的那些实质上相同的x射线衍射图的晶形都属于本发明的范围内。确定x射线衍射图实质相同的能力在本领域普通技术人员的能力范围内。

合成

方案1：制备腙I-dd

使式I-ff的卡巴肼(诸如半卡巴肼盐酸盐)与式I-ee的化合物(诸如新戊酰基乙腈)在溶剂(例如乙醇、2-丙醇、1-丙醇及甲醇，优选为乙醇)中在碱(例如乙酸钠、乙酸钾、三乙胺及N-N-二异丙基-N-乙基胺，优选为乙酸钠)存在下在20-60℃范围内，优选在25-55℃范围内的温度下缩合以提供式I-dd的腙化合物，其中R₂₁为=O；R₂₂为-NH-NH₂；且R₂₃为氰基烷基；或R₂₂与R₂₃可一起形成5至8元环，其中该环可任选地被一个或多个选自氨基、烷基、芳基或杂芳基的取代基取代且可任选地含有1、2、3或4个独立地选自N、S或O的杂原子。

方案2：制备式I-cc的腙

使式I-dd的腙化合物，诸如

与原甲酸酯(例如原甲酸三甲酯、原甲酸三乙酯和原甲酸三丙酯，优选为原甲酸三甲酯、原甲酸酯)，在酸(例如乙酸、三氟乙酸、盐酸和甲磺酸，优选为乙酸)存在下，在高温(诸如40-90℃，优选为40-75℃)下反应以产生式I-cc的腙化合物，其中R₂₁=O，R₂₂和R₂₃如上文所述。

方案3：化合物I-cc的转化

使式I-cc的腙化合物转化为式I-bb的化合物，其中LG为-OR₁₆，其中R₁₆为C_1-6烷基、苯基、具有一个或多个选自N、S或O的原子的5至7元杂芳基、或3至7元环烷基，其全部任选地被1至3个选自卤素、CF₃或C_1-6烷基的基团取代，其中该转化是通过使式I-cc的腙化合物(例如7-叔丁基-3H-吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-酮)与酰化剂、亲核试剂(诸如二甲基4-氨基吡啶(DMAP))和/或叔胺碱在溶剂(例如乙腈、二氯甲烷及纯磷酰氯)中反应，随后(i)在第二种叔胺碱存在下使用醇或(ii)使用醇盐来拦截以形成式I-bb化合物。可使用的酰化剂的实例为磷酰氯(POCl₃)、草酰氯、亚硫酰氯及光气。优选的酰化剂为POCl₃。三乙胺、N-N-二异丙基-N-乙基胺(DIEA)、三正丙基胺、N-甲基吗啉及1,4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷(DABCO)为可用于上述转化的叔胺碱的实例。优选的叔胺碱为DIEA。一般而言，反应中所使用的亲核试剂的量为2.0至4.0当量，优选为3.0当量。在上述转化中可使用的醇或醇盐的实例为苯酚、五氟苯酚、甲醇、乙醇、甲醇钠及苯酚钠，其中苯酚为优选的醇。一般而言，在环境温度至70℃范围内的温度下进行反应及拦截。

方案4：制备式I化合物或其盐

如WO 2008/014381A1中所述类似的方式制备的式I-aa化合物偶合，其中：R₁独立地为氢或选自苄氧羰基(Cbz)、叔丁氧基羰基(BOC)、芴基甲氧羰基(FMOC)、苄基(Bn)、以及对甲氧基苄基(PMB)的胺保护基，优选为氢；R₈及R₉独立地为氢或C_1-6烷基；R₂₁为=O；HET为任选地经取代的具有至少1个氮杂原子(优选总共2至4个杂原子，尤其4个氮原子)的3至14元杂环基或杂芳基二环；且LG为-OR₁₆，其中R₁₆为C_1-6烷基、苯基、具有一个或多个选自N、S或O的原子的5至7元杂芳基、或3至7元环烷基，其全部任选地被1至3个选自卤素、CF₃或C_1-6烷基的基团取代；以获得相应式I化合物，例如N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，或其盐。偶合可通过本领域通常已知的偶合方法；或者经由酸性后处理并随后添加碱来进行。酸性后处理中可使用的酸的实例为柠檬酸、酒石酸、乙醇酸及盐酸。可添加的碱的实例为K₂HPO₄、Na₂HPO₄、NaHCO₃及KHCO₃。

具体地，N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺可根据以下方案制备：

对于本发明的方法，起始物质可购得或可由本领域普通技术人员容易地制备。本领域普通技术人员可容易地选择适当的溶剂、温度、压力、具有所要基团的起始物质及其他反应条件。该方法可扩大规模以制备较大量的式I化合物，诸如使用商业制造设施制备。

实施例

以下实施例说明本发明化合物及起始物质的实施方案，且不欲限制权利要求的范围。

适当时，反应在无水氮气(或氩气)氛围下进行。对于无水反应，使用来自EM的

溶剂。对于其他反应，利用试剂级或HPLC级溶剂。除非另有说明，否则所有可购得的试剂以接收时原样使用。

使用Shimadzu HPLC/Waters ZQ单四极杆质谱仪混合系统获得LC/MS测量值。由正性模式电喷雾电离报导相关峰的数据。通常在指定溶剂中，利用Bruker或JEOL 400MHz及600MHz仪器获得NMR(核磁共振)谱。使用溶剂共振作为内标，以ppm为单位报导针对四甲基硅烷的所有化学位移。¹HNMR谱数据通常如下报导：化学位移、多重性(s=单峰、br s=宽单峰，d=二重峰，dd=双二重峰、t=三重峰、q=四重峰、sep=七重峰、m=多重性、app=明显)、偶合常数(Hz)、以及积分。

本领域技术人员应可辨识本文中所利用的标准缩写。为便于参考，缩写包括(但不一定限于)：Hg=汞；sat.=饱和；HPLC=高效液相色谱；AP=面积百分比；KF=卡尔-费雪(Karl-Fischer)；RT=室温(除非另有说明，否则室温为约22℃的温度)；mmol=毫摩尔；HRMS=高分辨质谱；℃=摄氏度；kg-千克；g=克；mg=毫克；L=升；mL(或ml)=毫升；h或hr＝小时；M=摩尔浓度；N=当量浓度；min=分钟；MHz=兆赫；v/v=体积/体积比；%w/w=重量/重量百分比；wt％=重量百分比；nm=纳米；LOD=干燥失重。

“α”、“β”、“R”及“S”为本领域技术人员熟悉的立体化学命名。

实施例1

N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺

实施例1，步骤1：在22-25℃下，向3L圆底烧瓶中添加半卡巴肼盐酸盐(100.0g，0.89摩尔)、新戊酰基乙腈(112.2g，0.89摩尔)及乙醇(1L)。添加完成后，使反应混合物冷却至12-15℃，添加无水乙酸钠(73.5g，0.89摩尔)。添加无水乙酸钠会吸热，从而使温度升至22-25℃。将反应混合物维持在22-25℃并搅拌60-90分钟。而后，通过HPLC分析反应混合物，表明完成腙中间体的形成。

实施例1，步骤2：随后将反应混合物加热至68至72℃，且在5-10分钟时间内添加原甲酸三甲酯(475.7g，4.48摩尔)。使反应混合物冷却至40-45℃，随后在15-20分钟时间内添加乙酸(53.8g，0.89摩尔)。添加完成后，在20-25分钟时间内使温度升高至70±2℃。达到指定温度后，搅拌反应混合物18-20hr。在此时段结束时，通过HPLC分析反应混合物，表明完成吡唑并[1，5-a][1,3,5]三嗪的形成。

实施例1，步骤3：在50-55℃下，在减压(约5-10mm Hg)下浓缩来自实施例1步骤2的吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪以产生残余物。向残余物中添加四氢呋喃(THF，2L)及丙酮(2L)，在50-55℃下搅拌所得混合物90分钟。而后，经由布氏漏斗(Buckner funnel)过滤反应混合物以移除所产生的氯化钠(NaCl)及乙酸钠(NaOAc)沉淀。在50-55℃下在减压(约400-450mm Hg)下浓缩所得滤液至干，产生残余物。将残余物吸收在原甲酸2-甲酯(2-甲基THF，450mL)中，在22-25℃下搅拌所得混合物2个小时。在此时段结束时，过滤反应混合物，随后依次使用2-甲基THF(100mL)、叔丁基甲基醚(MTBE，200mL)喷雾洗涤。在45-50℃下在减压下(约400-450mm Hg)干燥所得产物得到7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4(3H)-酮(107.0g，62.1%w/w，HPLC纯度：在220nm下为99.2AP)。以较大规模重复步骤1至3产生以千克计的量的7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4(3H)-酮。

实施例1，步骤4：向玻璃内衬反应器中添加7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4(3H)-酮(1.0kg，5.2摩尔)、二甲基4-氨基吡啶(1.27kg，10.4摩尔)、乙腈(10L)和二异丙基乙基胺(0.672kg，5.2摩尔)。在环境温度下在氮气氛围下搅拌所得浆料不少于15分钟的时间直至形成澄清溶液。将澄清溶液缓慢添加至含有乙腈(6.0L)及磷酰氯(POCl₃，0.822kg，5.3摩尔)的第二玻璃内衬反应器中。添加完成后，在低于35℃下搅拌所得混合物2小时。此时段结束时，通过HPLC分析反应物，表明反应完成。添加苯酚(0.64kg，6.8摩尔)和二异丙基乙基胺(0.87kg)，在环境温度下搅拌所得反应混合物不少于1hr。而后，通过HPLC分析反应混合物，表明完成反应。向反应混合物中依次添加2-甲基-THF(20L)和水(10L)。分离有机相与水相，丢弃水相。用柠檬酸-盐水溶液(5wt%，10L)洗涤有机相，再次分离所得的有机相与水相，并丢弃水相。再重复以上柠檬酸-盐水溶液洗涤两次。柠檬酸-盐水溶液洗涤完成后，添加磷酸氢二钾溶液(K₂HPO₄，7.5wt%，10L)。分离有机相与水相，丢弃水相。再重复以上K₂HPO₄溶液洗涤一次直至pH值为约8。

实施例1，步骤5：将N-[2-(3-氨基-2-氧代-吡咯烷-1-基)-5-叔丁基氨基-环己基]-乙酰胺(以如美国公开2008/0027083A1中所述的类似方式制备，1.05kg)添加至实施例1步骤4的碱性有机相中。添加完成后，在环境温度下搅拌反应混合物16小时。此时段结束时，通过HPLC分析反应混合物，表明反应完成。依次向反应混合物中添加水(20L)和乙酸(HOAc，0.406kg)，分离所得的有机层和水层。用2-甲基THF(10L)萃取水层。合并有机层，添加HOAc(0.406kg)。用水(10L)洗涤所得混合物，分离所得的有机层与水层。再次用2-甲基THF(10L)萃取此水层。再次合并水层，添加二氯甲烷(DCM，15L)。添加氢氧化钠(NaOH，10N，1.04L)以调整pH值至约13.0。添加完成后，再次分离有机层与水层，并搁置该富含产物的DCM层。再使用另外的二氯甲烷(10L)萃取水层。合并DCM富集有机层，并用水(10L)洗涤。在真空中浓缩所得富含产物的DCM溶液至最小体积。添加乙酸乙酯(EtOAc)，连续蒸馏出残余DCM和水，产生浆料(最终体积为约5L)。添加MTBE(15L)，搅拌所得浆料不少于1hr。而后，过滤浆料，再用MTBE(5L)洗涤湿滤饼。在55℃下在真空中干燥湿滤饼直至LOD≤0.5wt%，得到实施例1的非晶形游离碱(0.9kg，55M%产率，HPLC纯度：99.5AP)。¹H NMR(600.13MHz,DMSO-d₆)δ1.04(s,9H),1.34(s,9H),1.58(m,3H),1.64(m,2H),1.81(s,3H),2.05(m,1H),2.12(m,1H),2.36(m,1H),2.93(br s,1H),3.48(m,2H),3.84(m,1H),4.26(br s,1H),4.86(t,J=8.9Hz,1H),6.39(s,1H),8.07(s,1H),8.94(br s,1H);¹³C NMR(125.8MHz,DMSO-d₆)δ21.3,23.3,25.9,29.3,30.0,32.2,32.6,35.5,43.1,46.5,47.7,50.7,51.7,52.5,92.3,148.7,148.8,152.9,167.3,168.5,171.2；C₂₅H₄₀N₈O₂的HRMS计算值:(M+1)485.3274,实验值485.3343。

实施例2

经氚标记的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺

实施例3

经氘标记的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺

实施例4

经碳14标记的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺

*＝¹⁴C标记的位置

实施例5

N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的N-1晶体形式

N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的游离碱晶体形式，包括其盐形式及溶剂化物，如下所述制备及表征。

表征晶形的程序

单晶数据

利用Bruker-Nonius(Bruker AXS,Inc.,5465East Cheryl Parkway Madison,WI 53711USA)CAD4系列衍射仪收集数据。经由对具有25高角度反射的实验衍射仪设置进行最小二乘分析获得晶胞参数。强度是使用θ-2θ可变扫描技术，使用Cu Kα辐射

在恒定温度下测量并仅针对洛伦茨偏光因子(Lorentz-polarization factor)进行校正。在一半扫描时间的扫描极点下收集背景计数。或者，以Bruker-Nonius Kappa CCD 2000系统使用Cu Kα辐射收集单晶数据。使用Collect程序套件中的HKL2000软件包(Otwinowski,Z.等人的Macromolecular Crystallography,Carter,W.C.；Jr.等人编,Academic,NY，publ.,第276卷,第307-326页(1997))进行所测得强度数据的索引及处理。(Collect Data收集及处理使用者介面：Collect:数据收集软件,R.Hooft,Nonius B.V,1998.)。或者利用Bruker-AXS APEX2CCD系统使用Cu Kα辐射

收集单晶数据。使用APEX2软件包/程序套件(APEX2数据收集及处理使用者介面：APEX2使用者手册,v1.27;Bruker AXS,Inc.,5465East Cheryl Parkway Madison,WI 53711 USA)进行所测得强度数据的索引及处理。

有指示时，在数据收集期间于Oxford冷冻系统(Oxford CryosystemsCryostream冷却器：Cosier,J.等人，J.Appl.Cryst.,19:105(1986))的冷流中冷却晶体。

通过直接法解析结构并使用具有少量局部修改的SDP(SDP，结构测定包，Enraf-Nonius,Bohemia NY 11716。SDP软件中的散射因子，包括f′及f″获自结晶学国际表(International Tables for Crystallography),Kynoch Press,Birmingham,England,第IV卷，表2.2A及2.3.1(1974))软件包或结晶学包MAXUS(maXus解析及精修软件套件：Mackay,S.等人，maXus：由衍射数据解析及精修晶体结构的电脑程序或SHELXTL4)基于所观测到的反射进行精修。经由全矩阵最小二乘法精修所衍生的原子参数(座标及温度因子)。在精修中最小化的函数为Σ_w(|F_o|-|F_c|)²，R定义为Σ|F_o|-F_c||/Σ|F_o|，而R_w=[Σ_w(|F_o|-|F_c|)²/Σ_w|F_o|²]^1/2，其中w为基于所观测强度的误差的适当加权函数。在精修的所有阶段检查差图(Difference map)。将氢引至具有各向同性温度因子的理想位置，但氢参数不变化。

X射线粉末衍射数据(PXRD)

使用Bruker C2GADDS获得PXRD数据。辐射为Cu Kα(40KV，50mA)。样品-检测器距离为15cm。将粉末样品置于直径为1mm或低于1mm的密封玻璃毛细管中；在数据收集期间旋转毛细管。就3≤2θ≤35°收集数据，样品暴露时间为至少2000秒。整合所得二维衍射弧以产生传统一维PXRD图，其中步长为0.02度2θ，在3至35度2θ范围内。将约200mg装填于Philips粉末x射线衍射(PXRD)样品固定器中。样品转移至Philips MPD单元(45KV，40mA，Cu Kα)。在室温下在2至32的2θ范围内收集数据(连续扫描模式，扫描速率0.03度/秒，自动发散及抗散射狭缝，接收狭缝：0.2mm，样品旋转器：开)。

差示扫描量热法(DSC)

在TA

Q1000或2920型中进行DSC实验。将样品(约2-6mg)在铝盘中称重且精确至百分之一毫克记录，并转移至DSC中。以5mL/min用氮气净化仪器。在室温与300℃之间以10℃/min的加热速率收集数据。绘制曲线，其中吸热峰指向下方。

热重分析(TGA)

在TA

Q500或2950型中进行TGA实验。将样品(约10-30mg)置于预先配衡的铂盘中。通过仪器精确测量样品重量且精确至千分之一毫克记录。以100mL/min用氮气对炉进行净化。在室温与300℃之间以10℃/min的加热速率收集数据。

晶形的制备及分析

该实施例的晶胞数据及其他特性提供于表1中。晶胞参数获自单晶x射线结晶学分析。对晶胞的详细说明可见于Stout等人，X-Ray StructureDetermination:A Practical Guide,Macmillan(1968)的第3章中。

最后，图1呈示实施例5的XRPD图。图2和3分别披露实施例5的DSC和TGA分析。

晶形制备、XRD、DSC和TGA表征

实施例5，N-1晶形，游离碱

自乙酸乙酯和MTBE中结晶N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的晶形N-1。晶形N-1为纯(无水分子或溶剂分子)形式的N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺。晶形N-1的特征在于XRD图匹配由单晶结构数据产生的模拟图。晶形N-1的特征在于通常在约205℃开始熔融/分解吸热的DSC热分析图。晶形N-1的特征在于TGA热曲线在高达约210℃具有重量损失。

表1

晶胞参数

表1中所使用的变量如下定义：

T=结晶学数据的温度，以摄氏度表示(RT为约+22℃的室温)

V=晶胞体积

Z′＝每一个不对称单元中药物分子的数目

Vm=V(晶胞)/(每个晶胞中的Z个药物分子)

sg=空间群

dcalc=晶体密度计算值

比较药理学特征

对实施例1与WO 2005/021500A1、WO 2008/014381A1及WO2008/014360A1中发现的化合物的药理学特征进行比较的测定及数据提供于下文中。

人类外周血液单核细胞结合

也参见：Yoshimura等人，J.Immunol.,145:292(1990)。使用¹²⁵I-人类MCP-1作为示踪配体，使用人类外周血液单核细胞(hPBMC)建立人类CCR-2结合测定。使用标准规程以Ficoll-Hypaque(Mediatech

)从人类leukopak(Biological Specialty Inc.)中分离hPBMC。洗涤经分离的hPBMC并于结合缓冲液(RPMI-1640，0.1% BSA，20mM Hepes，pH 7.4)中稀释至1×10⁷/ml。¹²⁵I-MCP-1(NEN/Perkin Elmer)在结合缓冲液中稀释至0.45nM。将化合物在结合缓冲液中稀释3倍至结合测定中所用的最终浓度。使用96孔过滤板(Millipore)进行结合测定。如下评估总¹²⁵I-MCP-1结合：向总体积为150μl的各反应物中添加5×10⁵个细胞、0.15nM ¹²⁵I-MCP-1及化合物，使得最终浓度在0至100nM范围内。将板在室温下孵育30分钟，随后使用真空歧管过滤(Millipore)用RPMI-1640、0.1%BSA、0.4M NaCl、20mMHepes(pH 7.4)洗涤三次。洗涤后，将板在室温下风干60分钟。此后向各孔中添加25μl的Microscint 20。将板密封，并在Trilux上计数1分钟。在300nM冷MCP-1(PeproTech Inc.)存在下测量非特异性结合。特异性¹²⁵I-MCP-1计算为总结合与非特异性结合之间的差异。所有条件均测试两次。IC50定义为使特异性结合降低50%所需的竞争化合物的浓度。

T细胞CCR-5结合测定所用的方法类似于用于hPBMC CCR-2结合测定的方法，不同之处为使用人类外周T细胞作为CCR-5来源(参见下文)且使用¹²⁵I-MIP-1β作为示踪剂(Amersham)。

分离外周T细胞

最近报导指示在个体之间，T细胞上的CCR-5表达明显不同(Desmetz,C.等人，“The strength of the chemotactic response to a CCR-5binding chemokineis determined by the level of cell surface CCR-5density”,Immunology,119(4):551-561(2006))。因此，预先筛选具有CCR-5的高T细胞表达的血液供者。首先通过标准规程以Ficoll-Hypaque从人类全血中分离hPBMC。随后在用抗CCR-5抗体以及抗CD4抗体或抗CD8抗体进行染色后，使用流式细胞仪分析测量T细胞上的CCR-5表达。要求那些>5%外周T细胞(CD4⁺及CD8⁺)表达CCR-5的血液供者再提供血液以供分离PBMC，随后使用标准E花环丛集(E-rosetting)技术分离T细胞，该技术依赖于T细胞结合于绵羊红细胞(RBC)的独特能力。

CCR-2趋化性

使用人类单核细胞株THP-1进行人类CCR-2趋化性测定。首先在37℃下在不含酚红、不含BSA的RPMI-1640(pH 7.4)中用荧光染料钙黄绿素AM(Calcein-AM)标记THP-1细胞30分钟，同时每15分钟轻缓混合。接着洗涤经标记的细胞并以1×10⁵/ml再混悬于趋化性缓冲液(不含酚红的RPMI-1640，0.1%BSA，pH 7.4)中。将测试化合物在趋化性缓冲液中稀释使得最终检测浓度在0.01nM至1μM范围内。将配体MCP-1(PeproTech Inc.)在趋化性缓冲液中稀释至20nM。为进行测定，将等体积测试化合物稀释液与等体积经标记THP-1细胞混合(混合物1)，并将等体积测试化合物稀释液与等体积经稀释MCP-1配体混合(混合物2)。将两种混合物在37℃独立孵育10分钟，随后轻缓混合。随后在趋化性板(Becton Dickinson)中通过将50μl混合物1置于顶部腔室中并将225μl混合物2置于底部腔室中来测量MCP-1诱导的趋化性。将板用盖子覆盖，并在37℃下孵育30分钟。30分钟后，在

上对板进行读取。所有条件均测试两次。为进行信噪比测量，将单独50μl经标记THP-1细胞(5×10⁴/孔)置于顶部腔室中并将单独225μl配体MCP-1置于底部腔室中(最终浓度为10nM)。将由分级浓度的测试化合物得到的抑制计算为不含化合物的MCP-1对照物的百分比。IC50定义为达成细胞趋化性50%抑制所需的测试化合物浓度。

CCR-5趋化性

采用与以上所阐述类似的方法，不同之处为使用经分离的外周T细胞作为表达CCR-5的细胞，并且MIP-1β(50nM，PeproTech Inc.)为配体。

hERG通量

使稳定表达hERG通道的HEK293细胞于培养箱中在补充有10% Sigma胎牛血清、非必需氨基酸、2mM L-谷氨酰胺及500μg/ml G418的杜尔贝科氏改良伊格氏培养基(Dulbecco's Modified Eagle's Media)中生长(37℃，5%CO₂)。使用细胞解离缓冲液自烧瓶中提取细胞，随后将细胞以每孔(20μl)2×10⁴个细胞的密度涂铺于384孔

聚D-赖氨酸涂覆的黑色/透明板中的10%血清培养基中，并在37℃下于5% CO₂培养箱中孵育15-24小时，直至获得汇合的细胞单层。

在100% DMSO中制备2mM BTC-AM染料储备液(Molecular Probes,Eugene,OR)，随后在测定当天以1:1添加至含10%(w/v)的Pluronic酸的DMSO溶液中。随后将染料于hERG外部EP缓冲液(140mM NaCl，4.0mMKCl，1.8mM CaCl₂，1.0mM MgCl₂，10mM HEPES(pH 7.3)及10mM葡萄糖；所有缓冲液组分获自Sigma Chemical)中稀释。将此BTC染料混合物(30μl)添加至细胞中，产生2.5μM的最终负载浓度。将细胞在21℃下孵育45分钟。

测试化合物在60μl 10mM DMSO中稀释。随后化合物于384孔板的第1-10列及第11-20列中以1:2比率在DMSO中连续稀释。通过自DMSO连续稀释板取2.5μl产生测定即用板，其是在Velocity 11

上制备。通过添加48μl EP缓冲液产生含水板，随后稀释，30-45分钟后于

上对测定进行读取。负载染料后，向三个重复板(10μl)的细胞中添加水性稀释的化合物，产生80μM至0.156nM的十点浓度范围。测定中的最终DMSO浓度为1％。在CyBio液体处理器上制备测定即用含水板并进行稀释。

在使用氩激光的488nm线激发染料的

384(Molecular Devices,Sunnyvale,CA)上对负载染料的细胞进行读取。使用540±30nm带通滤波器过滤发射光。通过每孔添加20μl含有66mM K₂SO₄及1.3mM Tl₂SO₄的EP缓冲液(Sigma/Aldrich)刺激hERG通道开放。对于各板，每秒收集数据持续12秒的时间，此时添加含有Tl⁺的刺激物缓冲液。每秒进行数据收集持续48秒，随后继续每三秒进行收集再持续2分钟。

从空白及全体孔中测量测定的动态范围。全体孔(第21列及第22列)定义板的最大hERG活化(不存在测试化合物)，而空白孔(第23列及第24列)定义100% hERG抑制。空白孔含有400nM标准hERG抑制剂多非利特(dofetilide)(Ficker等人，1998)或E-4031。使用在线

软件首先针对细胞/信号变化、阴性对照(空白)背景对各样品孔的原始数据点进行标准化，并针对阳性对照(全体)进行校正。随后使用Excel Fit(ID Business SolutionsLimited,Surrey,UK)以单点逻辑方程式Y=A+((B-A)/1+((C/X)^D)))(其中A=最大抑制)拟合关于hERG Tl⁺通量数据的测试化合物浓度反应曲线。通过拟合关于给定测试化合物条件下Tl⁺通量的最大荧光变化幅度对数据进行分析。由三个重复孔的平均值计算化合物的效能(IC₅₀值)。

钠通道，位点2结合测定

也参见：Catterall,W.A.等人J.Biol.Chem.,256:8922(1981)。标准结合缓冲液含有50mM HEPES、50mM Tris-HCl(pH 7.4)、130mM氯化胆碱、5.4mM KCl、0.8mM MgCl₂、5.5mM葡萄糖、40μg/mL LqT。通过向于标准结合缓冲液中含有5nM[³H]-蟾毒素(batrachotoxin)及所需浓度的欲测试化合物的反应混合物中添加突触体(由威斯塔大鼠(Wistar rat)脑制备)起始结合反应。随后混合样品且在37℃下孵育60分钟。通过添加含有50mM HEPES、50mMTris-HCl(pH 7.4)、1.8mM CaCl₂、0.8mM MgCl₂及1mg/mL牛血清白蛋白的冰冷洗涤缓冲液终止反应。即刻收集突触体至玻璃纤维过滤器上，用洗涤缓冲液洗涤3次。使用液体闪烁光谱仪对过滤器上保留的[³H]-蟾毒素放射性进行计数。

并行人工膜渗透性测定(PAMPA)

并行人工膜渗透性测定(PAMPA)由称为胃肠道(GIT)脂质的经特别调配的基于卵磷脂的脂质组合组成。使用GIT脂质在类似于Caco-2测定中所使用的夹层板组件中形成膜。如通过已知在人类中被动吸收的标准化合物所测量，GIT脂质与体内膜组合物及效能十分类似。PAMPA广泛用作体外模型以供对所发现化合物进行渗透性筛选。使用化合物穿过PAMPA膜的速率来测定渗透性系数(Pc)，其可能与化合物的体内被动渗透性相关。

在顶部和基底外侧部pH值为7.4的pH值相关环境中研究特定化合物的渗透性系数(Pc)。所有实验均进行三次测定。

将测试化合物(在100%DMSO中的10mM储备液)以1∶100稀释于pH7.4供者孔缓冲液(pION目录号110151)中，提供100μM测定溶液，其中DMSO为1%。将在供者孔缓冲液中稀释的化合物转移至Whatman

板并过滤，随后分配200μl至测定板(pION目录号110163)的供者孔中。通过用移液管吸取4μl脂质溶液(pION目录号110169)至过滤板(VWR目录号13503)上来形成PAMPA膜。使用pH 7.4的200μl受者孔缓冲液(pION目录号110139)覆盖膜。将PAMPA测定板(供者侧及受者侧)组合且在室温下孵育4小时。随后将板拆开并注满分光光度计板(VWR目录号655801)(每孔150μl)。在UV板读取器中对供者板、受者板、参考板及空白板进行读取。通过pION软件获取数据，该软件分析光谱并得出Pc值。

hERG膜片箝

使用全细胞膜片箝直接测量稳定表达所克隆hERG钾通道α亚单位的HEK-293细胞中的hERG电流。在室温下于pH 7.4的水性缓冲液中对化合物进行测试。在-80mW至+20mV的保持电位下施加重复测试脉冲(0.05Hz)2秒，并在测试脉冲后通过使电压步进至-65mV引出尾电流。通过测量峰值尾电流的抑制来计算化合物的作用。

钠通道膜片箝

使用全细胞膜片箝直接测量表达人类心脏钠通道SCN5A的HEK-293细胞中的内向钠电流。在不含蛋白质的水性缓冲液中对化合物进行测试。为测量稳态抑制，使用以下电压方案每5秒引出钠电流：细胞保持在-90mV的电位下且历时60ms步进至-20mV。通过测量在测试脉冲达到-20mV期间对峰值电流的抑制来计算作用。通过在1Hz及4Hz的频率下进行刺激来评估抑制的速率相关性。

大鼠中的单剂量药物动力学

使用雄性斯普拉-道来大鼠(Sprague-Dawley rat)(250-300g)进行药物动力学研究。在PO给药前使大鼠禁食隔夜并在给药后4h喂食。自颈静脉收集血液样品(约0.3mL)至含K₂EDTA的管中，随后在4℃下离心(1500-2000xg)以获得血浆。在口服生物利用度研究中，使2组动物(每组N=2-3)经由颈静脉进行静脉内(IV)输注(历经10min)或通过口服管饲法接受测试化合物。在给药后0.17(仅对于IV)、0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8及24h获得系列血液样品。将通过在4℃下离心(1500-2000xg)获得的血浆样品储存在-20℃下，直至通过LC/MS/MS进行分析。

猴中的单剂量药物动力学

以交叉设计在雄性短尾猴(cynomolgus monkey)中评估各种测试化合物的药物动力学。在PO给药前使猴禁食隔夜并在给药后4h喂食。使1组1-3只动物(3至5kg)通过经由股静脉进行IV输注(历经10min)及通过口服管饲法接受化合物，其中在治疗之间进行1周清除。在给药后0.17(仅IV)、0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8及24h自股动脉收集系列血液样品(约0.3mL)，在4℃下离心(1500-2000xg)获得血浆。将样品储存在-20℃下直至通过LC/MS/MS进行分析。

药物动力学测定的数据分析

通过对血浆浓度相对于时间数据进行非隔分析(Kinetica软件，版本4.2，InnaPhase Corporation,Philadelphia,PA)获得药物动力学参数。由实验观测直接记录峰值浓度(C_max)及C_max时间。使用线性及对数梯形总和来计算自时间0至末次取样时间的曲线下面积(AUC(0-T))。在IV给药后估算总血浆清除率(CLTp)、稳态分布体积(Vss)、表观消除半衰期(T1/2)及平均滞留时间(MRT)。使用最少3个时间点以可定量浓度进行T1/2估算。绝对口服生物利用度(F)估算为经口及IV给药后剂量校正AUC值的比率。

CCR-2钙移动

使用人类单核细胞株THP-1单核细胞株建立人类CCR-2介导的细胞内钙通量测定。首先通过将THP-1细胞再混悬于含有4μM fluo-3(MolecularProbes)及1.25mM丙磺舒(Probenecid)的葡萄糖-及HEPES-缓冲的PBS(pH7.4)中使其负载荧光团，随后在37℃下孵育60分钟。洗涤一次移除过量fluo-3后，将细胞再混悬于具有1.25mM丙磺舒的洗涤缓冲液(含有无酚红RPMI)中，以每孔2×10⁵接种于96孔板中。将板置于

-1(Molecular Devices)中，其使用氩离子激光激发细胞并自动添加测试化合物及人类MCP-1，同时监测荧光变化。向各孔中添加浓度在0至100nM范围内的测试化合物稀释液或单独的缓冲液，离心且孵育10分钟。随后添加重组人类MCP-1(PeproTech Inc.)至10nM的最终浓度。监测荧光位移并自动计算基底峰值偏移(base-to-peak excursion)。所有条件均测试两次。将通过分级浓度的化合物达成的抑制计算为不含化合物的MCP-1对照物的百分比。

CCR-5钙移动

采用与以上所述的CCR-2钙移动类似的方法，不同之处为MIP-1β(50nM)为配体，并且细胞株为HT1080/CCR-5，其中内源性CCR-5通过基因表达随机活化(RAGE)技术上调。

CCR-2GTP-γS交换

使用由HT1080人类细胞株制备的膜来测定[³⁵S]-GTPγS与CCR-2的MCP-1依赖性结合，其中通过RAGE技术(Athersys)上调内源性CCR-2。各反应物(200μL)含有20mM Na-HEPES、10mM MgCl₂、50mM NaCl、0.1%BSA(Sigma)、1% DMSO及10μM GDP(pH 7.4)。通过使MCP-1浓度自1pM变为1μM来测定MCP-1依赖性[³⁵S]-GTPγS结合的EC50。在室温下孵育反应物90分钟，并在Millipore MAFC 96孔过滤板上收集[³⁵S]-GTPγS/Gα_i复合物。在相同条件下以1nM MCP-1测定测试化合物对[³⁵S]-GTPγS与CCR-2膜的MCP-1依赖性结合的抑制。使用来自Graphpad Prism 4的配体结合软件分析数据。

CCR-5GTP-γS交换

采用与以上所阐述的CCR-2GTP-γS交换程序类似的方法，不同之处为MIP-1αLD78β为配体，且细胞株为CCR-5/HT1080。使用MIP-1α/LD78β作为CCR-5配体，因为其提供比MIP-1β大的信噪比。

CCR-2全血整合素(CD11b)上调

使用人类全血建立CCR-2依赖性CD11b上调测定。在37℃下使用实施例1的浓度范围预孵育全血(100μl)10分钟。随后向除了未经刺激的对照反应物以外的各反应物中添加人类重组MCP-1(10μl，100nM)至10nM的最终浓度。在37℃下孵育反应物30分钟。孵育后，添加1ml冰冷FACS(具有10%FBS的PBS)缓冲液，在1500rpm下离心样品5分钟，再混悬于50μlFACS缓冲液中。随后细胞在黑暗中在冰上与20μl抗CD14-FITC/抗CD11b-PE溶液一起孵育20分钟，然后向各反应物中添加1ml 1x FACS溶胞溶液(Becton Dickinson)。随后在黑暗中在冰上孵育样品30分钟。固定及红细胞溶解后，将细胞离心并再混悬于200μl FACS溶胞溶液中。在染色1小时内使用FACSCalibur流式细胞仪通过流式细胞测量术分析样品。使用CellQuestPro软件进行数据获取及分析。使用连续闸控策略(sequential gatingstrategy)来分析CD14^highCD11b⁺单核细胞群体。为进行分析，CD11b测量为中值荧光强度(MFI)。

CCR-5全血CD11b上调

采用与以上所阐述的CCR-2全血CD11b上调方法类似的方法，例外为使用MIP-1β(50nM)作为配体。

发现以下关于比较化合物的数据(参看WO 2008/014381A1、WO2008/014360A1及WO 2008/014361A1)。比较数据显示出乎意料的等效双重CCR-2及CCR-5受体抑制性与适宜的药理学特征的组合。

表2：比较性体外数据

表3：其他比较性体外数据

表4：其他比较性体外数据

表5：其他比较性体外数据

表6：大鼠中的比较性体内药物动力学数据

表7：猴中的比较性体内药物动力学数据

令人惊讶的是，发现本发明的实施例1如通过其CCR-2及CCR-5结合能力所测量，针对CCR-2或CCR-5的活性不是优势差别的，而是为等效双重拮抗剂，并且具有有益的药理学特征。参看表2至5。例如，参看表5，其中实施例1针对CCR-2及CCR-5等效，而WO 2008/014381及WO2008/014360的实例1针对CCR-2的活性占优势。

效用

使用本领域技术人员已知的测定显示所述实施例的化合物为趋化因子受体活性的调节剂。在此章节中描述所述测定并给出其参考文献。在本文中在上文题为“比较性药理学特征”的章节中描述更多测定。通过在这些测定中显示具有MCP-1拮抗性的活性，预期所述实施例的化合物适用于治疗与趋化因子及其同源受体相关的人类疾病。这些测定中的活性定义为当在特定测定中测量时，化合物显示30μM或低于30μM浓度的IC₅₀。

拮抗MCP-1诱导的钙内流

(Sullivan等人，Methods Mol.Biol.,114:125-133(1999))

实施例中所述的至少一种化合物在本文中所述的拮抗MCP-1诱导的钙内流测定中具有活性。

使用荧光Ca²⁺指示染料Fluo-3测量钙移动。在37℃下将细胞以每毫升8×10⁵个细胞于含有0.1%牛血清白蛋白、20mM HEPES缓冲剂、5mM葡萄糖、1%胎牛血清、4μM Fluo-3AM及2.5mM丙磺舒的磷酸盐缓冲生理盐水中孵育60分钟。所述钙测定中所用的细胞可包括如Weiner等人，J.Immunol.Methods,36:89-97(1980)所述的经分离的人类单核细胞，或表达内源性CCR-2受体的细胞株，诸如THP-1及MonoMac-6。随后在含有0.1%牛血清白蛋白、20mM HEPES、5mM葡萄糖及2.5mM丙磺舒的磷酸盐缓冲生理盐水中洗涤细胞三次。将细胞再混悬于含有0.5%牛血清白蛋白、20mMHEPES及2.5mM丙磺舒的磷酸盐缓冲生理盐水中至最终浓度每毫升2-4×10⁶个细胞。将细胞涂铺于96孔黑壁微测定板(每孔100μl)中且将板以200x g离心5分钟。向孔中添加各种浓度的化合物(每孔50μl)，且在5分钟后，每孔添加50μl MCP-1得到10nM的最终浓度。通过使用荧光成像板读取器检测钙移动。使用氩激光(488nm)激发细胞单层，并测量细胞相关的荧光3分钟(头90秒每秒测量，接下来90秒每10秒测量)。以任意荧光单位产生数据，且测定各孔荧光变化的最大-最小差异。相对于单独使用MCP-1时的反应，计算与化合物相关的抑制作用。

哺乳动物趋化因子受体提供干扰或促进哺乳动物(诸如人类)的免疫细胞功能的靶标。抑制或促进趋化因子受体功能的化合物特别适用于调节免疫细胞功能，以达成治疗目的。因此，本发明是关于适用于预防和/或治疗以下各种不同疾病的化合物：炎性、感染性及免疫调节性病症及疾病，包括哮喘及过敏性疾病；致病性微生物(其定义包括病毒)感染；以及自身免疫性病变，诸如类风湿性关节炎及动脉粥样硬化。

例如，可给予抑制哺乳动物趋化因子受体(例如人类趋化因子受体)的一种或多种功能的本发明化合物来抑制(即减少或预防)发炎或感染性疾病。结果，一种或多种炎性过程，诸如白细胞渗出、粘附、趋化性、胞吐(例如酶、组胺胞吐)或炎症介体释放得到抑制。

类似地，促进哺乳动物趋化因子受体(例如人类趋化因子)的一种或多种功能的本发明化合物在给予时刺激(诱导或增强)免疫或炎性反应，诸如白细胞渗出、粘附、趋化性、胞吐(例如酶、组胺胞吐)或炎症介体释放，致使炎性过程得到有益刺激。例如，嗜酸粒细胞可被募集以对抗寄生虫感染。此外，若预期给药足量化合物经由诱导趋化因子受体内化而引起细胞上的受体表达损失，或以致使细胞迁移导向错误的方式给药化合物，则预期促进哺乳动物趋化因子受体的一种或多种功能的本发明化合物也可用于治疗上述炎性、过敏性及自身免疫性疾病。

除了诸如人类的灵长类动物以外，多种其他哺乳动物也可根据本发明的方法来治疗。例如，可治疗包括(但不限于)牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、天竺鼠、大鼠或其他牛类、绵羊类、马类、犬类、猫类、啮齿动物或鼠类物种的哺乳动物。然而，该方法也可在诸如禽类物种的其他物种中实施。用以上方法治疗的受试者为需要调节趋化因子受体活性的哺乳动物(雄性或雌性)。如本文所用的“调节”意在涵盖拮抗作用、激动作用、部分拮抗作用和/或部分激动作用。

基于荧光成像板读取器

的功能测定

将HT1080细胞(纯系3559.1.6)以每孔10000个细胞(30微升)涂铺于384孔板(黑色/透明底

PDL,Beckton Dickinson)中，每孔装入30微升Fluo-4AM荧光染料(通过将1mg Fluo-4AM溶解于440微升DMSO中且用100微升Pluronic溶液稀释，随后再用10mL亨克氏缓冲液(Hanks buffer)稀释来制备)。在37℃及5% CO₂下孵育细胞30min，随后洗涤三次，并混悬于测定缓冲液(20mM HEPES，1.2mM CaCl₂，5mM MgCl₂，2.5mM丙磺舒，0.5%BSA，1x亨克氏溶液)中。测试物品于DMSO中连续稀释，随后用测定缓冲液以1∶10稀释，随后添加至细胞中(每孔10微升)。使用

对板的通量诱导(即激动剂活性)进行读取(10-70s)。随后进一步向细胞中装入激动剂溶液(每孔30微升，通过将30微升100毫摩尔浓度MIP-1β于100mL测定缓冲液中稀释来制备，此方案于测定中给药最终浓度为5nM的MIP-1β)，使用

对板进行读取历时1分钟。相对于0.4% DMSO/缓冲液阴性对照物测定测试物品的拮抗活性。

体内测定及功效

于下文所述的体内测定中评估N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺(也称为“实施例1”)。

hCCR-2KI小鼠中48小时巯基乙酸盐(TG)诱发的腹膜炎模型

方法

对hCCR-2KI小鼠(C57BL/6-SVJ129)腹膜内注射1ml巯基乙酸盐(TG)(Hardy Diagnostics)。对于各研究，每组使用八只雄性小鼠。在TG注射前1小时经口给予实施例1。所使用的媒介物为含0.01N盐酸。TG注射后四十八小时，通过注射5ml PBS/10mM EDTA/10% BSA至腹膜腔中进行腹膜灌洗。

对于48小时TG腹膜炎研究，每天给予实施例1两次，第一次给药在TG注射前一小时进行。通过细胞计数器获得经分离细胞的总腹膜细胞计数。进行细胞离心涂片(cytospin)以测定差异白细胞计数。使用Wright-GiemsaStain(Sigma-Aldrich)对细胞进行染色历时3分钟，随后用去离子水冲洗5分钟。基于每个样品计数总共200个细胞来计算差异计数。在各研究结束时也在EDTA中从后眼眶窦中收集血液用于测定药物浓度。

为进行流式细胞仪分析，用FACS缓冲液(PBS/0.5%BSA)洗涤腹膜渗出细胞(1×10⁶)一次，再混悬于FACS缓冲液中。细胞在冰上与Fc阻断抗体(BDPharmingen)一起孵育15min，随后添加以下抗体(BD Pharmingen)：PE与抗F4/80的结合物，FITC与抗Ly6C的结合物，以及Alexa 647与抗hCCR-2的结合物。在冰上45min后，于冰上利用BD

固定细胞15min，用FACS缓冲液洗涤两次，再混悬于200μl FACS缓冲液中。获得各样品的细胞事件(40,000)，并使用FloJo软件分析数据(TreeStar)。设置FSC/SSC闸以包括所有单核细胞(低SSC，较高FSC)，同时从分析中排除粒细胞。随后分析此闸控群体的Ly6C(FITC)、F4/80(PE)表达。通过将利用细胞计数器获得的总腹膜细胞计数与来自流式细胞测量术利用F4/80⁺细胞鉴别的单核细胞/巨噬细胞百分比相乘来确定腹膜单核细胞/巨噬细胞数。使用配对双尾t试验法将显著性设定为p值低于0.05来分析平均值之间差异的统计显著性。

结果

于hCCR-2KI小鼠TG腹膜炎模型中评估实施例1以测定其抑制单核细胞/巨噬细胞浸润的EC50。向小鼠给予巯基乙酸盐，并以10、50或160mg/kgBID经口给予实施例1。TG治疗后四十八小时，进行腹膜灌洗以通过流式细胞测量术进行细胞浸润分析。

观测到对单核细胞/巨噬细胞浸润的剂量依赖性抑制。10、50及160mg/kg的剂量分别得到25%、54%及63%的抑制。在使用多个剂量的四个单独研究中，所达到的最大抑制为约70%，并通过此分析所估算的抑制单核细胞/巨噬细胞浸润的平均EC50为4.9nM，其与实施例1抑制¹²⁵I-小鼠MCP-1结合于表达人类CCR-2的细胞(hPBMC)的体外IC50(5.8±2.3nM)充分相关。

为在hCCR-2KI小鼠中的48小时硫基乙酸盐腹膜炎模型中评估实施例1在体内对受体的占用程度，测量实施例1及小鼠MCP-1的血浆水平。关于此估算须说明：仅考虑CCR-2及其主要配体MCP-1。在竞争性抑制剂存在下配体的受体占用率由Gaddum方程式定义：

$\frac{\left[\mathrm{RL}\right]}{\left[R\right]}=\frac{1}{1+(K_d/[L\left]\right)(1+[I]/K_i)}$

由于实施例1为MCP-1结合于CCR-2的竞争性抑制剂，故小鼠MCP-1/CCR-2受体复合物及实施例1/CCR-2受体复合物的量均可使用血浆中小鼠MCP-1及未结合蛋白质的实施例1的血清水平来测定。小鼠MCP-1结合于hCCR-2的K_d为0.91+/-0.08nM(n=8)，其是于冷竞争配体结合实验中使用¹²⁵I-人类MCP-1来测得。实施例1结合于hCCR-2的平均K_i为2.0nM。使用上述方程式形式来测定小鼠MCP-1/CCR-2受体复合物的份额。为测定实施例1/CCR-2复合物的份额，如下再定义方程式：

$\frac{\left[\mathrm{RI}\right]}{\left[R\right]}=\frac{1}{1+(K_i/[I\left]\right)(1+[L]/K_d)}$

最后，游离CCR-2的量由确式测定：

[CCR-2]_总=[CCR-2]_游离+[小鼠MCP-1/CCR-2]+[实施例1/CCR-2]

如表8所示，在48小时对单核细胞/巨噬细胞浸润至腹膜中的抑制百分比反映实施例1/CCR-2受体复合物的百分比。

表8：在48小时TG腹膜炎模型中确定hCCR-2KI小鼠血液中实施例1的体内受体占用率

^a不同研究的剂量选自表中的其他剂量以提供最大抑制实例。此剂量提供hCCR-2KI结合IC90的1.9倍的游离血浆浓度。

总而言之，这些结果清楚表明实施例1为单核细胞/巨噬细胞浸润的有效阻断剂，其EC50为约4.9nM。实施例1对单核细胞/巨噬细胞浸润的最大抑制可通过使用此化合物获得98.5%CCR-2占用率而达成。值得注意的是所述研究在CCR-2缺乏小鼠中显示类似的单核细胞/巨噬细胞浸润的降低(约70-80%)。

可用趋化因子受体功能抑制剂治疗的人类或其他物种的疾病或病症包括(但不限于)：炎性或过敏性疾病及病症，包括呼吸过敏性疾病，诸如哮喘、过敏性鼻炎、超灵敏性肺病、超灵敏性肺炎、嗜酸粒蜂窝织炎(例如韦尔综合征(Well's syndrome))、嗜酸粒细胞性肺炎(例如吕佛勒氏综合征(Loeffler'ssyndrome)、慢性嗜酸粒细胞性肺炎)、嗜酸粒细胞性筋膜炎(例如休曼氏综合征(Shulman's syndrome))、迟发型超敏反应、间质性肺病(ILD)(例如特发性肺纤维化，或ILD伴发类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、强直性脊椎炎、全身性硬化症、休格连氏综合征(

syndrome)、多发性肌炎或皮肌炎)；全身性过敏症或超敏反应、药物过敏(例如对青霉素(penicillin)、头孢菌素(cephalosporin)过敏)、归因于摄入受污染色氨酸的嗜酸粒细胞增多性肌痛综合征、昆虫螫咬过敏；自身免疫性疾病，诸如类风湿性关节炎、牛皮癣性关节炎、多发性硬化症、全身性红斑狼疮、重症肌无力、青少年型糖尿病；肾小球肾炎、自身免疫性甲状腺炎、贝切特氏病(Behcet's disease)；移植物排斥反应(例如在移植中)，包括同种异体移植物排斥反应或移植物抗宿主疾病；炎性肠疾病，诸如克隆氏病及溃疡性结肠炎；脊椎关节病；硬皮病；牛皮癣(包括T细胞介导的牛皮癣)及炎性皮肤病，诸如皮炎、湿疹、特应性皮炎、变应性接触性皮炎、荨麻疹；血管炎(例如坏死性血管炎、皮肤性血管炎及过敏性血管炎)；嗜酸粒细胞性肌炎、嗜酸粒细胞性筋膜炎；伴有白细胞浸润皮肤或器官的癌症。可治疗需抑制不合需要的炎性反应的其他疾病或病症，包括(但不限于)血管炎、易损斑块、静脉新生内膜增生再灌注损伤、透析移植物新生内膜增生、动静脉瘘内膜增生、动脉粥样硬化、某些血液学恶性疾病、细胞因子诱导的毒性(例如感染性休克、内毒素休克)、多发性肌炎、皮肌炎。可用趋化因子受体功能抑制剂治疗的人类或其他物种的感染性疾病或病症包括(但不限于)HIV。

可用趋化因子受体功能促进剂治疗的人类或其他物种的疾病或病症包括(但不限于)：免疫抑制，诸如在患有免疫缺乏综合征(诸如AIDS或其他病毒感染)的个体，进行会引起免疫抑制的辐射疗法、化学疗法、自身免疫性疾病疗法或药物疗法(例如皮质类固醇疗法)的个体中；归因于先天性受体功能缺损或其他诱因的免疫抑制；及感染性疾病，诸如寄生虫疾病，包括(但不限于)蠕虫(helminth)感染，诸如线虫(nematode)(圆虫)；(鞭虫病(Trichuriasis)、蛲虫病(Enterobiasis)、蛔虫病(Ascariasis)、钩虫(Hookworm)、类圆线虫病(Strongyloidiasis)、旋毛虫病(Trichinosis)、丝虫病(filariasis))；吸虫(trematodes)(蛭(flukes)(血吸虫病(Schistosomiasis)、肝双盘吸虫病(Clonorchiasis))；绦虫(cestodes)(带蠕虫)(包虫病(Echinococcosis)、牛带绦虫病(Taeniasis saginata)、囊虫病(Cysticercosis))；内脏蠕虫、内脏幼虫移行症(visceral larva migraines)(例如弓蛔虫属(Toxocara))、嗜酸粒细胞性胃肠炎(例如胃线虫属(Anisaki sp.)、鼠海豚线虫属(Phocanema sp.))、皮肤幼虫移行症(cutaneous larva migraines)(巴西钩口线虫(Ancylostona braziliense)、犬钩虫(Ancylostoma caninum))。本发明化合物相应地适用于预防及治疗多种炎性、感染性及免疫调节性病症及疾病。

此外，若预期给药足量化合物经由诱导趋化因子受体内化而引起细胞的受体表达损失，或以致使细胞迁移导向错误的方式给药化合物，则也可预期趋化因子受体功能促进剂可用于治疗上述炎性、过敏性及自身免疫性疾病。

在另一方面，本发明可用以评估G蛋白偶联受体的假定特异性激动剂或拮抗剂。本发明是关于这些化合物的用途，其是用于预备及执行调节趋化因子受体活性的化合物的筛选测定。此外，本发明化合物适用于建立或确定其他化合物与趋化因子受体的结合位点，例如通过竞争性抑制或作为测定中的对照物来比较其已知活性与具有未知活性的化合物。当开发新的测定或规程时，可使用本发明的化合物测试其有效性。具体地，所述化合物可以商用试剂盒形式提供，例如用于涉及上述疾病的药物研究。本发明化合物也适用于评估趋化因子受体的假定特异性调节剂。此外，可利用本发明化合物来检验认为并非为趋化因子受体的G蛋白偶联受体的特异性，其通过使用本发明化合物作为不结合的化合物的实例或作为对这些受体具有活性的化合物的结构变异体，此可帮助界定特异性相互作用位点。

本文所披露的化合物适用于治疗或预防选自以下的病症：类风湿性关节炎、骨关节炎、感染性休克、动脉粥样硬化、动脉瘤、发热、心血管作用、血液动力休克、败血综合征、缺血后再灌注损伤、疟疾、克隆氏病、炎性肠疾病、分枝杆菌感染、脑膜炎、牛皮癣、充血性心力衰竭、纤维变性病、恶病质、移植物排斥反应、自身免疫性疾病、皮肤炎性疾病、多发性硬化症、辐射损伤、高氧肺泡损伤(hyperoxic alveolar injury)、HIV、HIV痴呆、非胰岛素依赖型糖尿病、哮喘、过敏性鼻炎、异位性皮炎、特发性肺纤维化、大疱性类天疱疮、蠕虫型寄生虫感染、过敏性结肠炎、湿疹、结膜炎、移植、家族性嗜酸粒细胞增多症、嗜酸粒细胞性蜂窝织炎、嗜酸粒细胞性肺炎、嗜酸粒细胞性筋膜炎、嗜酸粒细胞性胃肠炎、药物诱发的嗜酸粒细胞增多症、囊性纤维化、彻奇-斯全司综合征(Churg-Strauss syndrome)、淋巴瘤、霍奇金氏病(Hodgkin's disease)、结肠癌、费尔蒂综合征(Felty's syndrome)、结节病、葡萄膜炎、阿兹海默氏病(Alzheimer)、肾小球肾炎、以及全身性红斑狼疮、食道鳞状细胞癌、神经痛及肥胖症。

在另一方面，化合物适用于治疗或预防选自以下的炎性病症：类风湿性关节炎、骨关节炎、动脉粥样硬化、动脉瘤、发热、心血管作用、克隆氏病、炎性肠疾病、牛皮癣、充血性心力衰竭、多发性硬化症、自身免疫性疾病、皮肤炎性疾病。

在另一方面，化合物用于治疗或预防选自以下的炎性病症：类风湿性关节炎、骨关节炎、动脉粥样硬化、克隆氏病、炎性肠疾病及多发性硬化症。

在另一方面，本文所披露的实例可适用于治疗多种癌症，包括(但不限于)以下：

癌，包括膀胱癌(包括加速膀胱癌及转移性膀胱癌)、乳癌、结肠癌(包括结肠直肠癌)、肾癌、肝癌、肺癌(包括小细胞肺癌与非小细胞肺癌及肺腺癌)、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、淋巴系统癌、直肠癌、喉癌、胰腺癌(包括外分泌胰腺癌)、食道癌、胃癌、胆囊癌、子宫颈癌、甲状腺癌及皮肤癌(包括鳞状细胞癌)；

淋巴系造血性肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤、组织细胞性淋巴瘤及伯基特氏淋巴瘤(Burkettslymphoma)；

骨髓系造血性肿瘤，包括急性骨髓性白血病及慢性骨髓性白血病、骨髓增生异常综合征、髓细胞性白血病及前髓细胞性白血病；

中枢神经系统及外周神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤及神经鞘瘤；

间质起源的肿瘤，包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤及骨肉瘤；及

其他肿瘤，包括黑素瘤、着色性干皮病、角质棘皮瘤、精原细胞瘤、甲状腺滤泡癌及畸胎癌。

在另一实施方案中，本文披露治疗癌症的方法，其中癌症选自乳癌、肝癌、前列腺癌及黑素瘤。此外，本文所披露的化合物可适用于治疗卵巢癌，及多发性骨髓瘤。

本发明提供治疗多种非癌性增殖疾病的方法。

说明预防及治疗以下疾病的组合疗法：炎性、感染性及免疫调节性病症及疾病，包括哮喘及过敏性疾病；以及自身免疫性病变，诸如类风湿性关节炎及动脉粥样硬化；及上述病变，其是通过将本发明化合物与已知用于所述用途的其他化合物组合来达成。例如，在治疗或预防炎症中，本发明化合物可与以下药物联合使用：消炎剂或止痛剂，诸如鸦片激动剂、脂肪氧合酶抑制剂、环氧化酶-2抑制剂、诸如白介素-1抑制剂的白介素抑制剂、肿瘤坏死因子抑制剂、NMDA拮抗剂、一氧化氮抑制剂或一氧化氮合成的抑制剂、非类固醇消炎剂、磷酸二酯酶抑制剂、或细胞因子抑制消炎剂例如与以下化合物：诸如对乙酰氨基酚(acetaminophen)、阿司匹灵(aspirin)、可待因(codeine)、奋乃静(fentaynl)、布洛芬(ibuprofen)、吲哚美辛(indomethacin)、酮咯酸(ketorolac)、吗啡(morphine)、萘普生(naproxen)、非那西汀(phenacetin)、吡罗昔康(piroxicam)、类固醇止痛剂、舒芬太尼(sufentanyl)、苏林酸(sunlindac)、干扰素α等。类似地，本发明化合物可与以下药物一起给予：疼痛舒解剂；增效剂，诸如咖啡因、H2拮抗剂、西甲硅油(simethicone)、氢氧化铝或氢氧化镁；解充血剂，诸如苯肾上腺素、苯丙醇胺、伪麻黄碱(pseudophedrine)、羟甲唑啉(oxymetazoline)、肾上腺素(ephinephrine)、萘甲唑林(naphazoline)、赛洛唑啉(xylometazoline)、环己丙甲胺(propylhexedrine)或左去氧麻黄素(levodesoxy-ephedrine)；及止咳剂(antitussive)，诸如可待因、氢可酮(hydrocodone)、卡拉美芬(caramiphen)、喷托维林(carbetapentane)或右甲吗喃(dextramethorphan)；利尿剂；及镇静性或非镇静性抗组胺剂。同样，本文所披露的化合物可与用于治疗/预防/抑制或改善本发明化合物适用的疾病或病症的其他药物组合。所述其他药物可以其常用途径及常用量与本发明化合物同时或依次给药。当化合物与一种或多种其他药物同时使用时，可使用除本发明化合物外也含有所述其他药物的药物组合物。因此，药物组合物包括除本发明化合物外也含有一种或多种其他活性成分的那些组合物。

可与本发明化合物组合、单独或于同一药物组合物中给药的其他活性成分的实例包括(但不限于)：(a)整合素拮抗剂，诸如选择素(selectin)、ICAM及VLA-4的拮抗剂；(b)类固醇，诸如倍氯米松(beclomethasone)、甲泼尼龙(methylprednisolone)、倍他米松(betamethasone)、泼尼松(prednisone)、地塞米松(dexamethasone)及氢化可的松(hydrocortisone)；(c)免疫抑制剂，诸如环孢菌素(cyclosporin)、他克莫司(tacrolimus)、雷帕霉素(rapamycin)及其他FK-506型免疫抑制剂；(d)抗组胺剂(H1组胺拮抗剂)，诸如溴苯那敏(bromopheniramine)、氯苯那敏(chlorpheniramine)、右氯苯那敏(dexchlorpheniramine)、曲普利啶(triprolidine)、氯马斯丁(clemastine)、苯海拉明(diphenhydramine)、二苯拉林(diphenylpyraline)、曲吡那敏(tripelennamine)、羟嗪(hydroxyzine)、甲地嗪(methdilazine)、异丙嗪(promethazine)、异丁嗪(trimeprazine)、阿扎他定(azatadine)、二苯环庚啶(cyproheptadine)、安他唑啉(antazoline)、非尼拉敏、吡拉明(pyrilamine)、阿司咪唑(astemizole)、特非那定(terfenadine)、氯雷他定(loratadine)、西替利嗪(cetirizine)、非索非那定(fexofenadine)、去羧乙氧基氯雷他定(descarboethoxyloratadine)等；(e)非类固醇平喘药，诸如b2激动剂(特布他林(terbutaline)、间羟异丙肾上腺素(metaproterenol)、非诺特罗(fenoterol)、新异丙肾上腺素(isoetharine)、舒喘宁(albuteral)、比托特罗(bitolterol)、以及吡布特罗(pirbuterol))、茶碱(theophylline)、色甘酸钠(cromolyn sodium)、阿托品(atropine)、异丙托溴铵(ipratropium bromide)、白三烯拮抗剂(扎鲁司特(zafirlukast)、孟鲁司特(montelukast)、普仑司特(pranlukast)、伊拉司特(iralukast)、泊比司特(pobilukast)、SKB-102,203)、白三烯生物合成抑制剂(leukotriene biosynthesisinhibitor)(齐留通(zileuton)、BAY-1005)；(f)非类固醇消炎剂(NSAID)，诸如丙酸衍生物(阿明洛芬(alminoprofen)、苯恶洛芬(benxaprofen)、布氯酸(bucloxicacid)、卡洛芬(carprofen)、芬布芬(fenbufen)、菲诺洛芬(fenoprofen)、氟洛芬(fluprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、布洛芬、吲哚洛芬(indoprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、咪洛芬(miroprofen)、萘普生(naproxen)、奥沙普嗪(oxaprozin)、吡洛芬(pirprofen)、普拉洛芬(pranoprofen)、舒洛芬(suprofen)、噻洛芬酸(tiaprofenic acid)、以及硫恶洛芬(tioxaprofen))、乙酸衍生物(吲哚美辛(indomethacin)、阿西美辛(acemetacin)、阿氯芬酸(alclofenac)、环氯茚酸(clidanac)、双氯芬酸(diclofenac)、芬氯酸(fenclofenac)、芬克洛酸(fenclozicacid)、芬替酸(fentiazac)、呋罗芬酸(furofenac)、异丁芬酸(ibufenac)、伊索克酸(isoxepac)、恶平酸(oxpinac)、舒林酸、硫平酸(tiopinac)、托美丁(tolmetin)、齐多美辛(zidometacin)、以及佐美酸(zomepirac))、芬那酸衍生物(fenamic acidderivative)(氟灭酸(flufenamic acid)、甲氯灭酸(meclofenamic acid)、甲灭酸(mefenamic acid)、尼氟灭酸(niflumic acid)及托芬那酸(tolfenamic acid))、联苯基羧酸衍生物(二氟尼柳(diflunisal)及氟苯柳(flufenisal))、昔康(oxicams)(伊索昔康(isoxicam)、吡罗昔康、舒多昔康(sudoxicam)及替诺昔康(tenoxican))、水杨酸盐(乙酰基水杨酸、柳氮磺胺吡啶)及布他酮(pyrazolone)(阿扎丙宗(apazone)、苯吡哌隆(bezpiperylon)、非普拉宗(feprazone)、莫非保松(mofebutazone)、羟基保泰松(oxyphenbutazone)、苯丁唑酮(phenylbutazone))；(g)环氧化酶-2(COX-2)抑制剂；(h)IV型磷酸二酯酶(PDE-IV)抑制剂；(i)趋化因子受体的其他拮抗剂；(j)降胆固醇剂，诸如HMG-CoA还原酶抑制剂(洛伐他汀(lovastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、普伐他汀(pravastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、以及其他抑制素)、多价螯合剂(sequestrant)(消胆胺(cholestyramine)及考来替泊(colestipol))、烟酸(nicotonicacid)、非诺贝酸衍生物(fenofibric acid derivative)(吉非贝齐(gemfibrozil)、安妥明(clofibrat)、非诺贝特(fenofibrate)及苯扎贝特(benzafibrate))、以及普罗布考(probucol)；(k)抗糖尿病剂，诸如胰岛素、磺脲类(sulfonylureas)、双胍(biguanides)(二甲双胍)、a-葡糖苷酶抑制剂(阿卡波糖)及格列酮(glitazone)(曲格列酮(troglitazone)和吡格列酮(pioglitazone))；(l)干扰素制剂(干扰素α-2a、干扰素-2B、干扰素α-N3、干扰素β-1a、干扰素β-1b、干扰素γ-1b)；(m)抗病毒化合物，诸如依法韦仑(efavirenz)、奈韦拉平(nevirapine)、茚地那韦(indinavir)、更昔洛韦(ganciclovir)、拉米夫定(lamivudine)、泛昔洛韦(famciclovir)、以及扎西他滨(zalcitabine)；(o)其他化合物，诸如5-氨基水杨酸，其前药；抗代谢物，诸如硫唑嘌呤(azathioprine)及6-巯基嘌呤；及细胞毒性癌症化学治疗剂。本发明化合物与第二活性成分的重量比可变化，并且将视各成分的有效剂量而定。

一般而言，将使用各者的有效剂量。因此，例如当化合物与NSAID组合时，本发明化合物与NSAID的重量比一般在约1000:1至约1∶1000，或者约200:1至约1:200的范围内。本发明化合物与其他活性成分的组合一般也在上述范围内，但在各情况下应使用各活性成分的有效剂量。

在治疗癌症时，化学治疗剂和/或其他治疗(例如辐射疗法)的组合通常有利。第二(或第三)药物可能与初始治疗剂具有相同或不同作用机制。使用细胞毒性药物组合可能尤其适用，其中所给药的两种或两种以上药物以不同方式或在细胞周期不同阶段中起作用，和/或其中两种或两种以上药物具有重迭毒性或副作用，和/或其中所组合的各药物在治疗患者所表现的具体疾病病症中显示功效。

因此，本文所披露的化合物(或本文所披露的其他调配物)可与适用于治疗癌症或其他增殖疾病的其他抗癌剂及细胞毒性剂及治疗组合给药。在本文中本发明另外包含本文化合物(或本文所披露的其他调配物)的用途，其是用于制备用于治疗癌症的药物，和/或其包含将本文化合物与关于所述化合物与治疗癌症的其他抗癌剂或细胞毒性剂及治疗组合使用的说明书包装在一起。本发明另外包含化合物与一种或多种其他药物以试剂盒形式组合，例如其中将它们包装在一起或置于分开包装中以试剂盒形式一起出售，或其中将它们包装以供调配在一起。

第二(或更多)抗癌剂可选自以下任一种或多种：

烷基化剂(包括氮芥、磺酸烷基酯、亚硝基脲、乙撑亚胺衍生物及三氮烯)；抗血管生成剂(包括基质金属蛋白酶抑制剂)；抗代谢物(包括腺苷脱氨酶抑制剂、叶酸拮抗剂、嘌呤类似物及嘧啶类似物)；抗生素或抗体(包括单克隆抗体、CTLA-4抗体、蒽环霉素(anthracycline))；芳香酶抑制剂；

细胞周期反应调节剂；酶；法呢基蛋白质转移酶抑制剂；

激素及抗激素剂及类固醇(包括合成类似物、糖皮质激素、雌激素/抗雌激素[例如SERM]、雄激素/抗雄激素、黄体酮、孕酮受体激动剂及促黄体激素释放[LHRH]激动剂及拮抗剂)；胰岛素样生长因子(IGF)/胰岛素样生长因子受体(IGFR)系统调节剂(包括IGFR1抑制剂)；整合素信号传导抑制剂；激酶抑制剂(包括多激酶抑制剂和/或Src激酶或Src/abl的抑制剂、细胞周期素依赖性激酶[CDK]抑制剂、panHer、Her-1及Her-2抗体、VEGF抑制剂(包括抗VEGF抗体)、EGFR抑制剂、有丝分裂原激活蛋白[MAP]抑制剂、MEK抑制剂、Aurora激酶抑制剂、PDGF抑制剂及其他酪氨酸激酶抑制剂或丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂；

微管破坏剂，诸如海鞘素(ecteinascidin)或其类似物及衍生物；微管稳定剂，诸如紫杉烷(taxane)；及天然存在的埃博霉素(epothilone)及其合成及半合成类似物；

微管结合、去稳定剂(包括长春花生物碱(vinca alkaloid))；及

拓扑异构酶抑制剂；异戊二烯基蛋白质转移酶抑制剂；铂配位络合物；信号转导抑制剂；及用作抗癌剂及细胞毒性剂的其他药物，诸如生物反应调节剂、生长因子及免疫调节剂。

此外，本发明化合物可与因具有处理与上述病症相关的副作用的特别适用性而选择的其他治疗剂一起调配或共给药。例如，本发明化合物可与预防恶心、过敏症及胃刺激的药物，诸如止吐药及H₁及H₂抗组胺剂一起调配。

当与本发明化合物组合使用时，上述其他治疗剂例如可以医师案头参考(Physicians'Desk Reference，PDR)中说明或由本领域普通技术人员以其他方式确定的量使用。

所述化合物以治疗有效量给予哺乳动物。“治疗有效量”是指当单独或与另一治疗剂组合给予哺乳动物时有效预防或改善疾病病症或疾病进展的本发明化合物的量。

剂量及调配物

本发明化合物可以诸如片剂、胶囊剂(各包括持续释放或定时释放调配物)、丸剂、散剂、颗粒剂、酏剂、酊剂、混悬剂、糖浆剂及乳剂的口服剂型给药。其也可以静脉内(推注或输注)、腹膜内、皮下或肌肉内形式给药，其所有均使用在制药领域中普通技术人员所熟知的剂型。其可单独给药，但是通常将连同基于所选给药途径及标准药物规范所选择的药物载体一起给药。

本发明化合物的给药方案当然将视已知因素而定，诸如具体药物的药物动力学特征及其给药模式及途径；接受者的物种、年龄、性别、健康状况、医学病症及体重；症状的性质及程度；并行治疗的种类；治疗频率；给药途径；患者的肾功能及肝功能；以及所要的效果。医师或兽医可确定并规定预防、逆转或遏止病症进展所需的药物的有效量。

作为一般指导原则，当为获得指定效果而使用时，各活性成分的每日口服剂量将在每天每千克体重约0.001至1000毫克之间，或在每天每千克体重约0.01至100毫克之间，或者每天每千克体重约1.0至20毫克之间的范围内。静脉内给药时在恒定速率输注期间剂量将在每分钟每千克体重约1至约10毫克范围内。本发明化合物可以单次每日剂量给药，或总每日剂量可以每日两次、三次或四次的分次剂量给药。在一实施方案中，活性成分的每日口服剂量在3与600mg之间，每日给药一次或以分开剂量每日给药两次。或者，活性成分可以每日两次给药10-20mg的剂量给药或每日一次给药40至100mg的剂量给药。或者，活性成分可每天两次给药12.5mg的剂量或每天一次给药75mg的剂量。或者，活性成分可以每天一次或两次给药3、10、30、100、300及600mg的剂量给药。

本发明化合物可以鼻内形式经由局部使用适合鼻内媒介物、或经由经皮途径使用经皮皮肤贴片来给药。当以经皮给药系统形式给药时，剂量给药在整个给药方案中当然将为连续而非间歇性的。

化合物通常与关于预定给药形式(即口服片剂、胶囊剂、酏剂、糖浆剂等)适当选择且与常规的药物规范相一致的适合药物稀释剂、赋形剂或载体(在本文中统称为药物载体)混合给药。

例如，对于以片剂或胶囊剂形式经口给药，活性药物组分可与以下口服、无毒、药用的惰性载体组合：诸如乳糖、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、甘露醇、山梨糖醇等；对于以液体形式经口给药，口服药物组分可与以下任何口服、无毒、药用的惰性载体组合：诸如乙醇、甘油、水等。此外，需要或必要时，也可将适合粘合剂、润滑剂、崩解剂及着色剂引入混合物中。适合粘合剂包括淀粉；明胶；天然糖，诸如葡萄糖或β乳糖；玉米甜味剂；天然及合成胶，诸如阿拉伯胶(acacia)、黄蓍胶(tragacanth)或海藻酸钠；羧甲基纤维素；聚乙二醇；蜡；等等。这些剂型中所使用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括(但不限于)淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄胞胶(xanthan gum)等。

本发明化合物也可以脂质体给药系统的形式来给药，诸如单层小囊泡、单层大囊泡及多层囊泡。脂质体可由诸如胆固醇、硬脂酰胺或磷脂酰胆碱的多种磷脂形成。

本发明化合物也可与作为靶向药物载体的可溶聚合物偶合。所述聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羟乙基天冬酰胺苯酚(polyhydroxyethylaspartamidephenol)或聚环氧乙烷-经棕榈酰基残基取代的聚赖氨酸。此外，本发明化合物可与以下适用于达成药物的控制释放的一类生物可降解聚合物偶合：例如聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸与聚乙醇酸的共聚物、聚ε-已内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯，及水凝胶的交联或两性嵌段共聚物。

适合给药的剂型(药物组合物)在每剂量单位中可含有约1毫克至约100毫克的活性成分。在这些药物组合物中，活性成分的存在量以组合物的总重量计一般为约0.5-95重量%。

明胶胶囊可含有活性成分及诸如乳糖、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸等粉末状载体。可使用类似稀释剂来制备压制片剂。片剂与胶囊剂均可制备为持续释放产物以提供药物在数小时时间内的连续释放。压制片剂可经糖衣包覆或薄膜包覆以掩盖任何令人不快的味道且保护片剂免受大气影响，或经肠溶衣包覆以使其在胃肠道中选择性崩解。

经口给药的液体剂型可含有着色剂及调味剂以增加患者接受性。

一般而言，水、适合油、生理食盐水、右旋糖(葡萄糖)水溶液及相关糖溶液以及二醇(诸如丙二醇或聚乙二醇)为用于肠胃外溶液的适合载体。用于肠胃外给药的溶液可含有活性成分的水可溶性盐、适合稳定剂，且必要时含有缓冲物质。单独或组合的抗氧化剂(诸如亚硫酸氢钠、亚硫酸钠或抗坏血酸)为适合稳定剂。也使用柠檬酸及其盐和EDTA钠盐。另外，肠胃外溶液可含有防腐剂，诸如苯扎氯铵、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯和氯丁醇。

适合药物载体描述于Remington′s Pharmaceutical Sciences,MackPublishing Company(此领域中的标准参考书)中。

用于本发明化合物给药的代表性适用药物剂型可如下说明：

胶囊剂

可通过各用100毫克粉末状活性成分、150毫克乳糖、50毫克纤维素及6毫克硬脂酸镁填充标准两片式硬明胶胶囊来制备大量单位胶囊。

软明胶胶囊剂

可制备活性成分在可消化油(诸如大豆油、棉籽油或橄榄油)中的混合物，且借助于正电压排出泵将其注入明胶中以形成含有100毫克活性成分的软明胶胶囊。胶囊应经洗涤及干燥。

片剂

通过常规的方法制备片剂，使得剂量单位为100毫克活性成分、0.2毫克胶状二氧化硅、5毫克硬脂酸镁、275毫克微晶纤维素、11毫克淀粉及98.8毫克乳糖。可涂覆适当包衣以增加适口性或延迟吸收。

注射剂

适合通过注射给药的肠胃外组合物可通过在10体积%丙二醇和水中搅拌1.5wt%活性成分来制备。应使用氯化钠使溶液等张并灭菌。

混悬剂

可制备水性混悬剂用于经口给药，使得各5mL含有100mg细粉状活性成分、200mg羧甲基纤维素钠、5mg苯甲酸钠、1.0g山梨糖醇溶液U.S.P.及0.025mL香草醛(vanillin)。

若将本发明化合物与其他抗凝血剂组合，则例如每日剂量可为每千克患者体重约0.1至100毫克的式I化合物及约1至7.5毫克的第二抗凝血剂。对于片剂剂型，本发明化合物的存在量一般可为每剂量单位含约5至10毫克，且第二抗凝血剂的存在量为每剂量单位含约1至5毫克。

若将两种或更多种前述第二治疗剂与本发明化合物一起给药，则鉴于当组合给药时治疗剂的加成或协同作用，典型每日剂量及典型剂型中各组分的量相对于药物单独给予时的常用剂量一般可减少。

特别在以单一剂量单位形式提供时，在组合的活性成分之间可能存在化学相互作用。因此，当将本发明化合物与第二治疗剂组合于单一剂量单位中时，其经调配以使得尽管将活性成分组合于单一剂量单位中，但使活性成分之间的物理接触最小(即减少)。例如，一种活性成分可经肠溶包衣包覆。通过将一种活性成分用肠溶包衣包覆，可能不仅使组合的活性成分之间的接触最小，而且也可能控制一种这些组分在胃肠道中的释放使得一种这些组分不在胃中释放而在肠中释放。一种活性成分也可用在整个胃肠道中实现持续释放并且也用以使组合的活性成分之间的物理接触最小的物质包覆。此外，持续释放的组分可另外经肠溶包衣包覆使得仅在肠中释放此组分。又一方法将涉及调配组合产物，其中一种组分经持续和/或肠溶释放聚合物包覆，且另一种组分也经聚合物(诸如低粘度级羟丙基甲基纤维素(HPMC)或本领域已知的其他适当材料)包覆以进一步隔离活性组分。聚合物包衣用以形成与其他组分的相互作用的另一障壁。

在提供本发明之后，使本发明组合产物的组分(以单一剂型给药或者以分开形式但以相同方式同时给药)之间的接触最小的这些以及其他方式将为本领域技术人员所显而易知。

此外，本文披露的某些化合物可以以其他化合物的代谢物形式适用。因此，在一实施方案中，化合物可以以实质上纯的化合物形式适用，该化合物也可随后引入药物组合物中；或可以以在给予那种化合物的前药后产生的代谢物形式适用。在一实施方案中，化合物可以以适用于治疗本文所述的病症的代谢物形式适用。

如本文所用的“实质上纯的”意在包括纯度大于约90wt%，包括约90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%及100%的化合物。

例如，本文所披露的化合物可为实质上纯的，其纯度大于约90%(以重量计)，其中其余小于约10%的物质包含化合物的其他代谢物、化合物的前药和/或由其制备产生的反应杂质和/或加工杂质。

显然，鉴于上述教导可能对本发明进行多种修改及变化。因此应理解，在所附权利要求的范围内，本发明可以以不同于本文中具体描述的其他方式实施。

Claims (16)

1.化合物或其盐，所述化合物具有下式：

2.权利要求1的化合物，其为所述化合物的晶形。

3.权利要求2的晶形，其中所述晶形包含N-1晶形。

4.权利要求3的晶形，其中所述晶形N-1呈实质上纯的形式。

5.权利要求3的晶形，其中所述N-1晶形的特征为实质上等于以下的晶胞参数：

晶胞尺寸：

a=7.3085(6)

b=16.257(1)

c=22.688(2)

α°=90

β°=90

γ°=90

空间群P2₁2₁2₁

分子/晶胞(Z)：1

密度计算值g-cm^-3：1.194

其中所述晶体是处于约-70℃的温度。

6.权利要求3的晶形，其特征为实质上与图1中所示一致的粉末x射线衍射图。

7.权利要求3的晶形，其特征为实质上与图2中所示一致的差示扫描量热法热分析图，其在高于约205℃处具有吸热转变。

8.权利要求3的晶形，其特征为与图3中所示一致的热重分析曲线。

9.药物组合物，其包含权利要求1的化合物。

10.权利要求9的药物组合物，其另外包含药用的载体。

11.权利要求9的药物组合物，其另外包含至少一种其他治疗剂。

12.一种调节CCR-2和CCR-5受体活性的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的权利要求1的化合物。

13.一种治疗病症的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的权利要求1的化合物，所述病症选自糖尿病、肥胖症、代谢综合征、中风、神经痛、缺血性心肌病、牛皮癣、高血压、硬皮病、骨关节炎、动脉瘤、发热、心血管疾病、克隆氏病、充血性心力衰竭、自身免疫性疾病、HIV感染、HIV相关性痴呆、牛皮癣、特发性肺纤维化、移植物动脉硬化、物理或化学诱导的脑创伤、炎性肠疾病、肺泡炎、结肠炎、全身性红斑狼疮、肾中毒血清肾炎、肾小球肾炎、哮喘、多发性硬化症、动脉粥样硬化、血管炎、易损斑块、类风湿性关节炎、再狭窄、静脉新生内膜增生、透析移植物新生内膜增生、动静脉瘘内膜增生、器官移植、慢性同种异体移植肾病、癌症、静脉新生内膜增生、透析移植物新生内膜增生以及动静脉瘘新生内膜增生。

14.一种制备式I化合物或其盐形式的方法，

其包含：

1)使式I-cc的腙化合物转化为式I-bb的化合物；及

2)使式I-bb的化合物与式I-aa的化合物偶合；其中：

R₁独立地为氢或选自苄氧羰基、叔丁氧基羰基、芴基甲氧羰基、苄基及对甲氧基苄基的胺保护基；

R₈及R₉独立地为氢或C_1-6烷基；

R₂₁为=O；

HET为任选地经取代的具有至少一个氮杂原子的3至14元杂环基或杂芳基二环；及

LG为-OR₁₆，其中R₁₆为C_1-6烷基、苯基、具有一个或多个选自N、S或O的原子的5至7元杂芳基，或3至7元环烷基，这些基团全部都任选地经1至3个选自卤素、CF₃或C_1-6烷基的基团取代。

15.一种制备N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的方法，其包含以下方案中所阐述的方法：

16.化合物或其盐，所述化合物具有下式：

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