CN101535301A - 趋化因子受体活性调节剂、结晶形式和方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供MCP－1受体活性的新颖拮抗剂或部份激动剂/拮抗剂：N－((1R，2S，5R)－5－(叔丁基氨基)－2－((S)－2－氧代－3－(6－(三氟甲基)喹唑啉－4－基氨基)吡咯烷－1－基)环己基)乙酰胺，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前体药物，其具有所要药理学特性的令人意外的组合。也提供本发明的结晶型。含有它们的医药组合物，及使用它们作为药剂以治疗炎性疾病、过敏性、自身免疫、代谢、癌症及/或心血管疾病的方法，也为本发明的目的。本公开的内容也提供制备式(I)化合物的方法，该化合物包括N－((1R，2S，5R)－5－(叔丁基氨基)－2－((S)－2－氧代－3－(6－(三氟甲基)喹唑啉－4－基氨基)吡咯烷－1－基)环己基)乙酰胺，其中R1，R8，R9，R10及“HET”均如本文中所述。本文也提供一些化合物，其是为此方法的有用中间体。

Description

趋化因子受体活性调节剂、结晶形式和方法
本申请分别主张2006年7月28日与2007年3月21日提出申请的美国临时申请号60/834,235与60/896,026的优先权，此两案的公开的内容均并于本文供参考。
技术领域
本发明提供N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前体药物，其具有所要药理学特性的令人意外的组合。也提供本发明的结晶型。
含有它们的医药组合物，及使用它们作为药剂以治疗炎性、过敏性、自身免疫、代谢、癌症及/或心血管疾病的方法，也为本发明的目的。本发明也提供制备式(I)化合物的方法，该化合物包括N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺：
其中R1，R8，R9，R10及
Figure A200780032859D00072
均如本文中所述。本文也提供一些化合物，其为此方法的有用中间体。
发明背景
趋化因子为分子量6-15kDa的趋化性细胞活素(即细胞因子)，其是通过极多种细胞释出，以除其它细胞类型外，特别吸引及活化巨噬细胞、T与B淋巴细胞、嗜伊红细胞、嗜碱细胞及嗜中性白血球(参见：Charo与Rasonhoff，New Eng.J.Med.2006，354，610-621；Luster，New Eng.J.Med.1998，338，436-445；及Rollins，Blood 1997，90，909-928中)。有两种主要趋化因子种类，CXC与CC，根据在氨基酸序列中的最初两个半胱胺酸是被单一氨基酸分隔(CXC)或者为相邻(CC)而定。CXC趋化因子，比如间白血球活素(白介素)-8(IL-8)、嗜中性白血球活化蛋白质-2(NAP-2)及黑色素瘤生长刺激活性蛋白质(MGSA)，主要是对嗜中性白血球与T淋巴球具趋化性，而CC趋化因子，比如RANTES、MIP-1α、MIP-1β、单细胞趋化性蛋白质(MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4及MCP-5)及曙塔新素(eotaxin)(-1与-2)，除其它细胞类型外，特别是对巨噬细胞、T淋巴球、嗜伊红细胞、树突细胞及嗜碱细胞具趋化性。也有趋化因子，趋淋巴素-1、趋淋巴素-2(两者均为C趋化因子)及富来客托活素(fractalkine)(CX3C趋化因子)存在，其并未落在任一种主要趋化因子亚族群中。
这些趋化因子是结合至归属于G-蛋白质偶合的七跨膜功能部位蛋白质族群的专一细胞表面受体(参见：Horuk，Trends Pharm.Sci.1994，15，159-165中)，其是被称为＂趋化因子受体＂。在结合其同系配位体时，趋化因子受体会转导胞内讯息，经过所缔合的三聚G蛋白质，除其它响应外，特别造成胞内钙浓度的快速增加，细胞形状上的改变，增加细胞粘连分子的表达，去颗粒化作用及细胞迁移的促进作用。有至少十种人类趋化因子受体会对CC趋化因子结合或回应，其具有下列特征型式：(参见Zlotnik与Oshie Immunity 2000，12，121)：CCR-1(或＂CKR-1＂或＂CC-CKR-1＂)[MIP-1α、MCP-3、MCP-4、RANTES](Ben-Barruch等人，Cell 1993，72，415-425，与Luster，New Eng.J.Med.1998，338，436-445)；CCR-2A与CCR-2B(或＂CKR-2A＂/＂CKR-2B＂或＂CC-CKR-2A＂/＂CC-CKR-2B＂)[MCP-1，MCP-2，MCP-3，MCP-4，MCP-5](Charo等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1994，91，2752-2756，与Luster，New Eng.J.Med.1998，338，436-445)；CCR-3(或＂CKR-3＂或＂CC-CKR-3＂)[曙塔新素-1，曙塔新素-2，RANTES，MCP-3，MCP-4](Combadiere等人，J.Biol.Chem.1995，270，16491-16494，与Luster，New Eng.J.Med.1998，338，436-445)；CCR-4(或＂CKR-4＂或＂CC-CKR-4＂)[TARC，MDC](Power等人，J.Biol.Chem.1995，270，19495-19500，与Luster，New Eng.J.Med.1998，338，436-445)；CCR-5(或＂CKR-5＂或＂CC-CKR-5＂)[MIP-α，RANTES，MIP-1β](Sanson等人，Biochemistry 1996，35，3362-3367)；CCR-6(或＂CKR-6＂或＂CC-CKR-6＂)[LARC](Baba等人，J.Biol.Chem.1997，272，14893-14898)；CCR-7(或＂CKR-7＂或＂CC-CKR-7＂)[ELC](Yoshie等人，J.Leukoc.Biol.1997，62，634-644)；CCR-8(或＂CKR-8＂或＂CC-CKR-8＂)[I-309](Napolitano等人，J.Immunol.，1996，157，2759-2763)；CCR-10(或＂CKR-10＂或＂CC-CKR-10＂)[MCP-1，MCP-3](Bonini等人，DNA and Cell Biol.1997，16，1249-1256)；及CCR-11[MCP-1，MCP-2及MCP-4](Schweickert等人，J.Biol.Chem.2000，275，90550)。
除了哺乳动物趋化因子受体以外，已证实哺乳动物巨细胞病毒、疱疹病毒及痘病毒，会在受感染细胞中表达蛋白质，而具有趋化因子受体的结合性质(参见：Wells与Schwartz，Curr.Opin.Biotech.1997，8，741-748)。人类CC趋化因子，比如RANTES与MCP-3，可造成钙经由这些经病毒编码的受体快速移动。受体表达可通过使正常免疫系统监督及对感染的响应遭到破坏，而造成感染。此外，人类趋化因子受体，比如CXCR4、CCR2、CCR3、CCR5及CCR8，可充作哺乳动物细胞被微生物(例如被人类免疫缺陷病毒(HIV))感染的共受体。
趋化因子及其同源受体，已被指为炎性、感染性及免疫调节病症与疾病的重要介体，包括气喘与过敏性疾病，以及自身免疫病理学疾病，比如风湿性关节炎与多发性硬化；及代谢疾病，比如动脉粥样硬化与糖尿病(参见：Charo与Rasonhoff，New Eng.J.Med.2006，354，610-621；Z.Gao与W.A.Metz，Chem.Rev.2003，103，3733；P.H Carter，化学生物学上的现行见解2002，6，510；Trivedi等人，Ann.Reports Med.Chem.2000，35，191；Saunders与Tarby，Drug Disc.Today1999，4，80；Premack与Schall，Nature Medicine 1996，2，1174中)。例如，趋化因子单细胞化学吸引剂-1(MCP-1)及其受体CC趋化因子受体2(CCR-2)，是在吸引白血球至发炎位置及在接着活化这些细胞上，扮演枢轴角色。当趋化因子MCP-1结合至CCR-2时，其会引致胞内钙浓度的快速增加，增加细胞粘连分子的表达，及白血球迁移的促进作用。MCP-1/CCR-2交互作用的重要性的实施例说明，已通过使用以基因方式变性老鼠的实验提供。MCP-1-/-老鼠在数种不同类型的免疫激发(challenge)后，不能够添补(recruit)单细胞至发炎位置(Bao Lu等人，J.Exp.Med.1998，187，601)。同样地，当以各种外源剂激发时，CCR-2-/-老鼠不能够添补单细胞或产生干扰素-γ；此外，无CCR-2老鼠的白血球不会响应MCP-1而迁移(Landin Boring等人，J.Clin.Invest.1997，100，2552)，于是证实MCP-1/CCR-2交互作用的专一性。两个其它集团已独立报告使用不同品系的CCR-2-/-老鼠的相当结果(William A.Kuziel等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1997，94，12053，与Takao Kurihara等人，J.Exp.Med.1997，186，1757)。MCP-1-/-与CCR-2-/-动物的存活力与一般正常健康状况是值得注意的，因为MCP-1/CCR-2交互作用的瓦解(disruption)不会引致生理骤变(crisis)。一起采用这些数据，导致的结论是，会阻断MCP-1/CCR2作用的分子将可用于治疗多种炎性与自身免疫病症(参见：M.Feria与F.Diaz-Gonzalez，Exp.Opin.Ther.Patents 2006，16，49；与J.Dawson，W.Miltz及C.Wiessner，C.Exp.Opin.Ther.Targets 2003，7，35)。此项假说目前已在多种不同动物疾病模式中被确认，如下文所述。
已知MCP-1是在患有风湿性关节炎的患者中被向上调节(Alisa Koch等人，J.Clin.Invest.1992，90，772-779)。此外，数项临床前研究已证实MCP-1/CCR2交互作用的拮抗作用机理在治疗风湿性关节炎上的潜在治疗价值。编码MCP-1的DNA疫苗最近已证实会改善大白鼠中的慢性多佐剂所引致的关节炎(Sawsan Youssef等人，J.Clin.Invest.2000，106，361)。同样地，疾病征候可经由对具有胶原所引致关节炎(Hiroomi Ogata等人，J.Pathol.1997，182，106)或链球菌细胞壁所引致关节炎(Ralph C.Schimmer等人，J.Immunol.1998，160，1466)的大白鼠直接给予MCP-1用的抗体而加以控制。可能最显著的是，MCP-1、MCP-1(9-76)的一种肽拮抗剂，经证实在关节炎的MRL-1pr老鼠模型中，会防止疾病开始及降低疾病征候(依给药时间而定)(Jiang-Hong Gong等人，J.Exp.Med.1997，186，131)。此外，已证实小分子CCR2拮抗剂的给药，会在关节炎的啮齿动物模型中，降低临床评分(C.M Brodmerkel等人，J.Immunol.2005，175，5370；与M.Xia等人，美国专利申请0069123，2006)。抗CCR2抗体的给药对老鼠CIA具有不同作用，依给药时间而定(H.Bruhl等人，J.Immunol.2004，172，890)。使用CCR2-/-老鼠的最近研究，已指出CCR2的缺失可在特定实验情况中使啮齿动物关节炎模型更为恶化(M.P.Quinones等人，J.Clin.Invest.2004，113，856；M.P.Quinones等人，J.Mol.Med.2006，84，503)。
已知MCP-1是在动脉粥样硬化性损害中被向上调节，且已证实MCP-1的循环含量经过用治疗剂治疗而被降低(Abdolreza Rezaie-Majd等人，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.2002，22，1194-1199)。数项关键研究已证实MCP-1/CCR2交互作用的拮抗作用，在治疗动脉粥样硬化上的潜在治疗价值。例如，当MCP-1-/-老鼠与缺乏LDL受体的老鼠杂交时，发现主动脉脂质沉积降低83％(Long Gu等人，Mol.Cell 1998，2，275)。同样地，当MCP-1以基因方式自已过度表达人类载脂蛋白B的老鼠中切除时，相对于MCP-1+/+apoB对照老鼠，所形成的老鼠被保护而免于动脉粥样硬化性损害形成(Jennifa Gosling等人，J.Clin.Invest.1999，103，773)。同样地，当CCR-2-/-老鼠与载脂蛋白E-/-老鼠杂交时，发现显著降低动脉粥样硬化性损害的发生率(Landin Boring等人，Nature 1998，394，894；T.C.Dawson等人动脉粥样硬化1999，143，205)。最后，当载脂蛋白E-/-老鼠被给予一种使CCR2的肽拮抗剂编码的基因时，则损伤大小被降低，且斑点稳定性被增加(W.Ni等人Circulation 2001，103，2096-2101)。得自CCR2-/-老鼠的骨髓移植至ApoE3-Leiden老鼠中，会抑制早期致粥瘤性(JGuo等人，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.2003，23，447)，但对已发展的损伤具有最小作用(J.Guo等人，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.2005，25，1014)。
患有2型糖尿病的患者典型上是显示胰岛素抗性，作为该疾病的正字标记特征之一。胰岛素抗性也与称为＂代谢症候群＂或＂症候群X＂的异常族群有关联，该族群包括肥胖、动脉粥样硬化、高血压及脂血症疾症(参见：Eckel等人，Lancet 2005，365，1415中)。充分了解的是，发炎是在使2型糖尿病与＂症候群X＂病理学疾病中的疾病过程更为恶化方面起作用(参见：Chen，药理学研究2006，53，469；Neels与Olefsky，J.Clin.Invest.2006，116，33；Danadona与Aljada，Am J Cardiol.2002 90，27G-33G；Pickup与Crook，Diabetologia 1998，41，1241中)。MCP-1是被认定为在肥胖引致的胰岛素抗性方面起作用。在培养物中，人类前脂肪细胞于构成上表达MCP-1(Gerhardt，Mol.Cell.Endocrinology 2001，175，81)。CCR2被表达于脂肪细胞上；于活体外，添加MCP-1至经分化的脂肪细胞中，会降低经胰岛素刺激的葡萄糖吸收与数种脂肪生成基因的表达(LpL，adipsin，GLU-4)、aP2、β3-肾上腺素能受体及PPARγ(P.Sartipy与D.Loskutoff，Proc.Natl.Acad.Sci USA 1999，96，6902)。患有2型糖尿病的患者具有比非糖尿病对照组较大含量的循环MCP-1(S.Nomura等人，Clin.Exp.Immunol.2000，121，437)，且MCP-1自脂肪组织的释出可经由以抗糖尿病治疗剂比如二甲双胍(metformin)或噻唑烷二酮的治疗而被降低(J.M.Bruun等人J.Clin.Endocrinol.Metab.2005，90，2282)。同样地，MCP-1也被过度表达于肥胖的老鼠实验模型中，且主要是通过脂肪组织产生(Sartipy与Loskutoff，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2003，100，7265)。在肥胖老鼠中，MCP-1的表达既在胰岛素抗性开始之前，又与其同时地发生(HXu等人，J.Clin.Invest.2003，112，1821)。另一项研究证实MCP-1的表达是与老鼠生殖腺周围脂肪组织中的身体质量有正关联性(Weisberg等人J.Clin.Invest.2003，112，1796)。与这些数据一致，胰岛素抗性在db/db老鼠中的发展是无论是经由MCP-1的基因缺失，或通过显性负肽的基因所引致表达而被改善(H.Kanda等人J.Clin.Invest.2006，116，1494)。逻辑倒转也可被证实：MCP-1在脂肪组织中的过度表达会促进胰岛素抗药性(N.Kamei等人，J.Biol.Chem.2006，281，26602)。证实MCP-1的基因缺失不会在db/db老鼠中达成胰岛素抗性的一项冲突结果也已出现(F.Y.Chow等人，Diabetologia 2007，50，471)。与关于MCP-1的数据一致，使用CCR2(MCP-1受体)的直接研究已证实其在肥胖的形成与肥胖所引致的胰岛素抗性方面起作用。高脂肪膳食的维持会在野生型(C.L.Tsou等人，J.Clin.Invest.2007，117，902)与ApoE-/-老鼠(F.Tacke等人，J.Clin.Invest.2007，117，185)两者中增加循环CCR2+炎性单细胞的数目。CCR2的基因缺失会减少老鼠脂肪组织中的经活化巨噬细胞的数目(C.N.Lumeng等人，糖尿病2007，56，16)，但不会影响被认为会保持＂纤瘦＂状态的M2脂肪巨噬细胞的个体群(C.N.Lumeng等人，J.Clin.Invest.2007，117，175)。CCR2的基因缺失会在饮食引致的肥胖模型中，降低饮食引致的肥胖，且改善胰岛素敏感性(S.P.Weisberg等人，J.Clin.Invest.2006，116，115；PCornelius，RP Gladue，RS Sebastian，WO专利2006/013427 A2，2006)，依实验条件而定(A.Chen等人，Obes.Res.2005，13，1311)。小分子CCR2拮抗剂的给药也会在此相同模型中改善胰岛素敏感性(S.P.Weisberg等人，J.Clin.Invest.2006，116，115)。
两项研究描述CCR2在高血压引致的血管发炎、改造及肥大上的重要角色(E Bush等人，Hypertension 2000，36，360；M Ishibashi等人，Circ.Res.2004，94，1203)。
已知MCP-1是在人类多发性硬化中被向上调节，且已证实使用干扰素β-1b的有效疗法会降低末梢血液单核细胞中的MCP-1表达，这指出MCP-1是在疾病进展方面起作用(Carla Iarlori等人，J.Neuroimmunol.2002，123，170-179)。其它研究已证实MCP-1/CCR-2交互作用的拮抗作用，在治疗多发性硬化上的潜在治疗价值；所有这些研究已在实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)中被证实，其为多发性硬化的常用动物模型。对MCP-1的抗体，给予具有EAE的动物，显著地减少了疾病复发(K.J.Kennedy等人，J.Neuroimmunol.1998，92，98)。此外，两份报告已证实CCR-2-/-老鼠对于EAE具抵抗性(B.T.Fife等人，J.Exp.Med.2000，192，899；L.Izikson等人，J.Exp.Med.2000，192，1075)。后续报告通过检验来自不同品系的老鼠中CCR2缺失的作用，延伸了这些最初观察(S.Gaupp等人，Am.J.Pathol.2003，162，139)。值得注意的是，小分子CCR2拮抗剂的给药也会在C57BL/6老鼠中使疾病进展变得迟钝(C.M.Brodmerkel等人，J.Immunol.2005，175，5370)。
已知MCP-1在肺脏移植后发展闭塞性细枝气管炎症候群的患者中被向上调节(Martine Reynaud-Gaubert等人，心脏与肺脏移植期刊，2002，21，721-730；John Belperio等人，J.Clin.Invest.2001，108，547-556)。在闭塞性细枝气管炎症候群的老鼠模型中，对MCP-1的抗体的给药会导致气道闭塞的减弱；同样地，CCR2-/-老鼠在此相同模型中对于气道闭塞具抵抗性(John Belperio等人，J.Clin.Invest.2001，108，547-556)。这些数据指出，MCP-1/CCR2的拮抗作用可有益于治疗移植后的器官排斥。此外，研究已证实MCP-1/CCR2轴的瓦解是能够延长胰岛移植物的存活(I Lee等人J Immunol 2003，171，6929；R Abdi等人，J Immunol2004，172，767)。在大白鼠移植模型中，CCR2与MCP-1是经证实在发展移植物脉管病的移植物中被向上调节(K Horiguchi等人，J Heart Lung Transplant.2002，21，1090)。在另一项研究中，抗-MCP-1基因疗法会减弱移植物脉管病(ASaiura等人，Artherioscler Thromb Vasc Biol 2004，24，1886)。一项研究是描述通过MCP-1的阻断，抑制实验静脉移植物新血管内膜形成(HTatewaki等人，J Vasc Surg.2007，45，1236)。
其它研究已证实MCP-1/CCR2交互作用的拮抗作用，在治疗气喘上的潜在治疗价值。在卵清蛋白激发的老鼠中，MCP-1与中和抗体的多价螯合作用，会造成枝气管高响应性与发炎的显著降低(Jose-AngelGonzalo等人，J.Exp.Med.1998，188，157)。已证实可以经过对MCP-1的抗体的给药，在曼氏裂体吸虫(Schistosoma mansoni)卵激发的老鼠中降低过敏性气道发炎(Nicholas W.Lukacs等人，J.Immunol.1997，158，4398)。与此一致，MCP-1-/-老鼠显示降低对于以曼氏裂体吸虫卵激发的回应(Bao Lu等人，J.Exp.Med.1998，187，601)。
其它研究已证实MCP-1/CCR2交互作用的拮抗作用，在治疗肾脏疾病上的潜在治疗价值。在丝球体性肾炎的老鼠模型中，针对MCP-1的抗体的给药，会造成显著降低血管球新月体形成及第I型胶原的沉积(ClareM.Lloyd等人，J.Exp.Med.1997，185，371)。此外，具有诱导的毒肾血清肾炎的MCP-1-/-老鼠，比其MCP-1+/+相对物，显示显著较少的管状伤害(Gregory H.Tesch等人，J.Clin.Invest.1999，103，73)。
数项研究已证实MCP-1/CCR2交互作用的拮抗作用，在治疗系统红斑狼疮上的潜在治疗价值。CCR2-/-老鼠在系统性红斑狼疮的老鼠模型中，相对于其WT相对物，显示延长的存活期与降低的肾病(G.Perez deLema等人J.Am.Soc.Neph.2005，16，3592)。这些数据与关于MCP-1基因缺失的最近研究中所发现改善疾病的活性(S.Shimizu等人Rheumatology(Oxford)2004，43，1121；Gregory H.Tesch等人，J.Exp.Med.1999，190，1813)，或在狼疮的啮齿动物模型中CCR2的肽拮抗剂的给药(H.Hasegawa等人，关节炎与风湿病，2003，48，2555)一致。
相对于未患病的回肠，发现在得自克隆氏患者的小肠中，CCR2+固有层淋巴细胞的显著30倍增加(S.J.Connor等人Gut 2004，53，1287)。也应注意的是，相对于对照组，在患有活性克隆氏病的患者中，在循环CCR2+/CD14+/CD56+单细胞的子集中有扩大现象。数项啮齿动物研究已证实MCP-1/CCR2交互作用的拮抗作用，在治疗克隆氏病/结肠炎上的潜在治疗价值。CCR-2-/-老鼠是被保护而免于葡聚醣硫酸钠所引致结肠炎的作用(Pietro G.Andres等人，J.Immunol.2000，164，6303)。CCR2、CCR5及CXCR3的小分子拮抗剂(老鼠结合亲和力分别为24，236及369nM)的给药也会保护抵抗葡聚醣硫酸钠引致的结肠炎(H.Tokuyama等人Int.Immunol.2005，17，1023)。最后，MCP-1-/-老鼠在附着素所诱导的结肠炎的模型中显示实质上降低的结肠伤害(宏观与组织学两者)(W.I.Khan等人，Am.J.Physiol.Gastrointest.Liver Physiol.2006，291，G803)。
两份报告描述MCP-1在患有炎性肠疾病的患者的肠上皮细胞与肠粘膜中的过度表达(H.C.Reinecker等人，Gastroenterology 1995，108，40，与Michael C.Grimm等人，J.Leukoc.Biol.1996，59，804)。
一项研究是描述MCP-1基因中的启动子多晶型现象与硬皮病(系统硬化)的缔合作用(S Karrer等人，J Invest Dermatol.2005，124，92)。在组织纤维变性的相关模型中，CCR2/MCP-1轴的抑制会降低在皮肤(TYamamoto与K Nishioka，J Invest Dermatol，2003，121，510；AM Ferreira等人，J Invest Dermatol.2006，126，1900)、肺脏(T Okuma等人，J Pathol.2004，204，594；M Gharaee-Kermani等人，细胞活素2003，24，266)、肾脏(K Kitagawa等人，Am J Pathol.2004，165，237；T Wada等人，J Am SocNephrol 2004，15，940)、心脏(S Hayashidani等人，Circulation 2003，108，2134)及肝脏(S Tsuruta等人，Int J Mol Med.2004，14，837)中的纤维变性。
一项研究已证实MCP-1/CCR2交互作用的拮抗作用，在治疗肺胞炎上的潜在治疗价值。当具有IgA免疫复合肺脏伤害的大白鼠，以静脉内方式使用经培养以抵抗大白鼠MCP-1(JE)的抗体治疗时，肺胞炎的征候被部分地减轻(Michael L.Jones等人，J.Immunol.1992，149，2147)。
数项研究已证实MCP-1/CCR2交互作用的拮抗作用，在治疗癌症上的潜在治疗价值(参见：M.J.Craig与R.D.Loberg，Cancer Metastasis Rev.2006，25，611；I.Conti与B.Rollins，癌症生物学讨论会2004，14，149；R.Giles与R.D.Loberg，Curr.Cancer Drug Targets 2006，6，659中)。当带有人类乳房癌细胞的免疫缺陷老鼠以抗-MCP-1抗体治疗时，发现肺脏微转移的抑制与存活期的增加(Rosalba Salcedo等人，Blood 2000，96，34-40)。使用人类临床肿瘤试样，CCR2表达与前列腺癌症进展有关联(Y.Lu等人，J.Cell.Biochem.2007，101，676)。在活体外，MCP-1表达已被证实会介导前列腺癌细胞生长与侵入(Y.Lu等人，Prostate 2006，66，1311)；此外，通过前列腺癌细胞表达的MCP-1，会诱导关于骨质再吸收的人类骨髓原始粒子(Y.Lu等人，Cancer Res.2007，67，3646)。
多项研究已描述MCP-1/CCR2交互作用的拮抗作用，在治疗再狭窄上的潜在治疗价值。在人类中，MCP-1含量直接地与再狭窄的危险产生相关联(F.Cipollone等人，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.2001，21，327)。缺乏CCR2或MCP-1的老鼠显示动脉损伤后的血管内膜面积与血管内膜/媒质比例的降低(相对于野生型小动物伙伴)(Merce Roque等人，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.2002，22，554；A.Schober等人，Circ.Res.2004，95，1125；W.J.Kim等人，Biochem Biophys Res Commun.2003，310，936)。在老鼠中，MCP-1的显性负抑制剂在骨骼肌中的转移感染(K.Egashira等人，Circ.Res.2002，90，1167)也会降低动脉损伤后的血管内膜增生。CCR2使用中和抗体的阻抑会在放置支架于灵长类动物中之后，降低新血管内膜增生(C.Horvath等人，Circ.Res.2002，90，488)。
两份报告描述具有诱导的脑部创伤的MCP-1大白鼠的过度表达(J.S.King等人，J.Neuroimmunol.1994，56，127，与Joan W.Berman等人，J.Immunol.1996，156，3017)。此外，研究已证实CCR2-/-(O.B.Dimitrijevic等人，Stroke2007，38，1345)与MCP-1-/-(P.M.Hughes等人，J.Cereb.Blood Flow Metab.2002，22，308)两种老鼠被部份保护而免于止血/再灌注损伤。
已知单细胞/巨噬细胞在神经病原性疼痛的发展方面起作用(Liu T，van Rooijen N，Tracey DJ，Pain 2000，86，25)。与此概念一致，关于CCR2在治疗炎性与神经病原性两种疼痛上的潜在角色，已于最近被描述。CCR2-/-老鼠，相对于其WT相对物，显示了对炎性疼痛的改变了的响应，包括足底内福尔马林注射后的疼痛行为的降低，与足底内CFA注射后的机械感觉异常的稍微降低(C.Abbadie等人，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA2003，100，7947)。此外，CCR2-/-老鼠并未于坐骨神经损伤后展示显著的机械感觉异常。同样地，小分子CCR2拮抗剂会在口服给药后，降低机械感觉异常至损伤前程度的～80％(C.Abbadie，J.A.Lindia及H.Wang，WO PCT 110376，2004)。
一项研究描述MCP-1在缺血性心肌病上的关键角色(N.G.rangogiannis等人，Circulation2007，115，584)。另一项研究描述在MCP-1的抑制后，实验心脏衰竭的减弱(S Hayashidani等人，Circulation 2003，108，2134)。
其它研究已提供MCP-1在未于上文提及的各种疾病状态中被过度表达的证据。这些报告提供了相关证据显示MCP-1拮抗剂可为此种疾病的有用治疗剂。另一项研究已证实MCP-1在啮齿动物心脏同种移植物中的过度表达，这指出MCP-1在移植物动脉硬化的发病原理上的作用(MaryE.Russell等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1993，90，6086)。MCP-1的过度表达，已被发现于患有自发性肺纤维变性患者的肺脏内皮细胞中(HarryN.Antoniades等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1992，89，5371)。同样地，MCP-1的过度表达已被发现于患有牛皮癣患者的皮肤中(M.Deleuran等人，J.Dermatol.Sci.1996，13，228，与R.Gillitzer等人，J.Invest.Dermatol.1993，101，127)。与CCR2+细胞的优势有相互关系的发现也已被报告(C.Vestergaard等人，Acta Derm.Venerol.2004，84，353)。最后，最近的报告已证实MCP-1被过度表达于患有与HIV-1有关联的痴呆症患者的脑部与脑脊髓液中(Alfredo Garzino-Demo，WO 99/46991)。
此外，CCR2多晶型现象已被证实至少在患者的一个子集中与肉状瘤病有关联(P.Spagnolo等人，Am J Respir Crit Care Med.2003，168，1162)。
也应注意的是，CCR-2已牵连作为一些HIV菌种的共受体(B.J.Doranz等人，Cell 1996，85，1149)。也已测定出利用CCR-2作为HIV共受体，可能与疾病进展有关联(Ruth I.Connor等人，J.Exp.Med.1997，185，621)。此项发现是与最近的发现一致，后述发现是为CCR-2突变种CCR2-64I的存在，与HIV在人类个体群中的延迟暴发有正关联性(Michael W.Smith等人，Science 1997，277，959)。虽然MCP-1未曾牵涉在这些过程中，但可能的情况是，经由结合至CCR-2而发生作用的MCP-1拮抗剂，在HIV感染的患者中，可具有延迟此疾病进展至AIDS的有利治疗作用。
应注意的是，CCR2也为人类趋化因子MCP-2、MCP-3及MCP-4的受体(Luster New Eng.J.Med.1998，338，436-445)。由于本文中所述的新颖式(I)化合物会通过结合至CCR-2受体，而拮抗MCP-1，故这些式(I)化合物也可为MCP-2、MCP-3及MCP-4被CCR-2所介导的作用的有效拮抗剂。因此，当于本文中指称＂MCP-1的拮抗作用＂时，是假定其是相当于＂CCR-2的趋化因子刺激的拮抗作用＂。
因此，可调节趋化因子活性的化合物可证实在治疗炎性、过敏性、自身免疫、代谢、癌症及/或心血管疾病上的广范围的可利用性。专利申请公报WO2005021500 A1(并于本文供参考，且归属于本案申请人)公开了经由CCR2调节MCP小MCP-1、MCP-2、MCP-3及MCP-4活性的化合物。此参考文献也公开了制备这些化合物的各种方法，包括多步骤合成，其包括保护基的引进与后续移除。
期望发现具有改良的药理学特性的新颖化合物(与已知趋化因子调节剂作比较)。例如，期望发现具有改良的CCR-2抑制活性与对CCR-2相对于对其它G蛋白质-偶合受体(意即5HT2A受体)的改良的选择性的新颖化合物。也期望发现具有下述种类中的一种或多种优点与改良特性的化合物：
(a)医药性质(意即溶解度、渗透性、对持续释出制剂的可控制性)；
(b)剂量需要量(例如较低剂量及/或每日一次服药)；
(c)会降低血液浓度峰顶至峰谷(peak-to-trough)特性的因素(意即清除率及/或分布的体积)；
(d)会增加活性药物对受体的浓度的因素(意即蛋白质结合、分布的体积)；
(e)会降低临床药物-药物交互作用倾向性的因素(细胞色素P450酶抑制或诱发，比如CYP2D6抑制，参阅G.K.Dresser，J.D.Spence，D.G.Bailey，Clin.Pharmacokinet.2000，38，41-57，其并于本文供参考)；
(f)会降低不利副作用可能性的因素(例如除了G蛋白质-偶合受体以外的药理学选择性、潜在化学或代谢反应性、受到限制的CNS穿透，及/或离子通道选择性)。特别期望发现具有所要前述药理学特性相组合的化合物。
本领域也期望提供制备此种化合物的新颖及/或改良的方法。这些方法的特征可为(并非限制)a)容易修改成较大规模生产，比如试验工厂或制造规模；b)能够改良纯度(包括手性纯度)、稳定性及/或中间体及/或最后化合物的容易处理性的处理步骤及/或技术；及/或c)较少处理步骤。
发明内容
本发明提供MCP-1受体活性的新颖拮抗剂或部份激动剂/拮抗剂：N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前体药物，具有所要药理学特性的令人意外的组合。也提供本发明的结晶型。含有它们的医药组合物，及使用它们作为药剂以治疗炎性疾病、过敏性、自身免疫、代谢、癌症及/或心血管疾病的方法，也为本发明的目的。本公开的内容也提供制备式(I)化合物的方法，该化合物包括N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺：
其中R1，R8，R9，R10及均如本文中所述。本文也提供一些化合物，其为此方法的有用中间体。
本发明公开的内容也提供N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，或药学上可接受的盐、溶剂合物或前体药物在药物制造中的用途，该药剂用于治疗炎性疾病、过敏性、自身免疫、代谢、癌症及/或心血管疾病。
附图简述
图1.N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，半水合物，型式H0.5-4的实验与模拟粉末图样。
图2.N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，自由态碱，型式N-2的实验与模拟粉末图样。
图3.N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，1.75摩尔H2O，型式H1.75-5的实验与模拟粉末图样。
图4.N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，单-乙醇溶剂合物，型式E-1的实验与模拟粉末图样。
图5.N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，单-醋酸溶剂合物，型式HAC-1的实验与模拟粉末图样。
图6.N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，单-R-丙二醇溶剂合物，型式RPG-3的实验与模拟粉末图样。
图7.N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，半水合物，型式H0.5-4的DSC。
图8.N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，半水合物，型式H0.5-4的TGA。
图9.N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，自由态碱，型式N-2的DSC。
图10.N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，自由态碱，型式N-2的TGA。
图11.N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，自由态碱，型式N-2，于25℃下的蒸气吸附等温线。
图12.N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，1.75摩尔H2O，型式H1.75-5的DSC。
图13.N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，1.75摩尔H2O，型式H1.75-5的TGA。
图14.N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，单-醋酸溶剂合物，型式HAC-1的DSC。
图15.N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，单-醋酸溶剂合物，型式HAC-1的TGA。
图16.N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，单-乙醇溶剂合物，型式E-1的DSC。
图17.N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，单-乙醇溶剂合物，型式E-1的TGA。
图18.N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，单-R-丙二醇溶剂合物，型式RPG-3的DSC。
图19.N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，单-R-丙二醇溶剂合物，型式RPG-3的TGA。
图20.在狝猴属猴子中的皮内激发(challenge)模型：实施例1抑制了单核细胞添补至皮肤。
图21.在hCCR2KI老鼠中的48-小时TG腹膜炎：实施例1对单细胞/巨噬细胞浸润至腹膜腔中的抑制。
图22.hCCR2KI老鼠EAE(实验自身免疫脑脊髓炎)：实施例1治疗降低了临床评分。
图23.实施例1的质子NMR光谱，第2个替代制备，步骤3-化合物7。
图24.实施例1的质子NMR光谱，第2个替代制备，步骤4-化合物8。
图25.实施例1的质子NMR光谱，第2个替代制备，步骤4-化合物9。
图26.实施例1的质子NMR光谱，第2个替代制备，步骤4-化合物10。
图27.实施例1的质子NMR光谱，第2个替代制备，步骤5-化合物11。
详细说明
本发明提供MCP-1受体活性的新颖拮抗剂或部份激动剂/拮抗剂：N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前体药物，它们具有所要求药理学特性的令人意外的组合。也提供本发明的结晶型。含有它们的医药组合物，及使用它们作为药剂以治疗炎性、过敏性、自身免疫、代谢、癌症及/或心血管疾病的方法，也为本发明的目的。本发明也提供制备式(I)化合物的方法，该化合物包括N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺：
Figure A200780032859D00221
其中R1，R8，R9，R10及
Figure A200780032859D00222
均如本文中所述。本文也提供一些化合物，其为此方法的有用中间体。
N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺令人意外地证实所需要的药理学特性的组合，包括在与适应症结合时的令人惊讶的高度口服生物利用率，这种结合高度地有效且具有优越安全性标准。
证实足够程度的细胞膜渗透性(口服生物利用率的一项重要因素)的已知CCR2受体调节剂，比如在2005年3月10日公告的专利公报WO2005021500(2007年1月16日颁予，归属于本案申请人的美国专利7,163,937)中所公开的，当通过其CCR2-结合能力(功效的一种度量方式)度量时，其不充分有效，及/或当通过hERG与Na+离子通道研究度量时，其缺少如通过离子通道选择性所指示的适当安全性标准。
相反，如本文中通过下文标题为＂比较药理学特性＂的段落中所提出的数据所示，相对较极性分子，N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，显示出令人惊讶的高度细胞膜渗透性，而仍保持有效CCR2结合能力，伴随着优越的离子通道选择性。
因此，本发明是提供具有改良的药理学特性的新颖趋化因子调节剂，预期其可用于治疗炎性、过敏性、自身免疫、代谢、癌症及/或心血管疾病。
具体实施例
在一项具体实施方案中，公开的内容是针对N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，及其药学上可接受的盐。
另一项具体实施方案为N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的结晶型，自由态碱。
另一项具体实施方案为N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的结晶型，自由态碱，其中结晶型包括N-2型式。
另一项具体实施方案为N-2型式，其特征为(或具有)实质上等于下列的单位晶胞参数：
晶胞尺寸：
a＝18.7240(4)
b＝8.0171(2)
c＝19.6568(5)
α＝90
β＝114.935(2)
γ＝90
Figure A200780032859D00231
空间群(Space group)P212121
分子/单位晶胞2
其中该晶体是在约+22℃(RT)的温度下。
另一项具体实施方案为N-2型式，其特征为(或具有)包含三个或更多个2θ值(CuKα)的粉末x-射线衍射图样，该2θ值是选自5.5，9.1，12.1，14.0及19.2，在约22℃的温度下。
另一项具体实施方案为N-2型式，其特征为(或具有)进一步包含四个或更多个2θ值(CuKα
Figure A200780032859D00233
)的粉末x-射线衍射图样，该2θ值是选自包括5.5，9.1，12.1，14.0及19.2，在约22℃的温度下。
另一项具体实施方案为N-2型式，其特征为(或具有)实质上如列示于表3中的部分原子坐标(coordinate)。
另一项具体实施方案为N-2型式，其特征为(或具有)实质上根据图2的粉末x射线衍射图样。
另一项具体实施方案为N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的结晶型，自由态碱，包括形式H1.75-5(1.75摩尔水)，其特征为在表1中所发现的单位晶胞参数；3或4或更多个选自表9的2θ值(CuKα
Figure A200780032859D00241
)；实质上如列示于表4中的部分原子坐标，及/或实质上根据图3的粉末x-射线衍射图样。
另一项具体实施方案为N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的结晶型，自由态碱，包括形式H0.5-4(半水合物)，其特征为在表1中所发现的单位晶胞参数；3或4或更多个选自表9的2θ值(CuKα
Figure A200780032859D00242
)；实质上如列示于表2中的部分原子坐标，及/或实质上根据图1的粉末x-射线衍射图样。
另一项具体实施方案为N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的结晶型，自由态碱，包括型式E-1(单-乙醇溶剂合物)，其特征为在表1中所发现的单位晶胞参数；3或4或更多个选自表9的2θ值(CuKα
Figure A200780032859D00243
)；实质上如列示于表5中的部分原子坐标，及/或实质上根据图4的粉末x-射线衍射图样。
另一项具体实施方案为N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的结晶型，自由态碱，包括形式HAC-1(单-醋酸溶剂合物)，其特征为在表1中所发现的单位晶胞参数；3或4或更多个选自表9的2θ值(CuKα
Figure A200780032859D00244
实质上如列示于表6中的部分原子坐标，及/或实质上根据图5的粉末x-射线衍射图样。
另一项具体实施方案为N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的结晶型图样，自由态碱，包括形式IPA-1(单-异丙醇溶剂合物)，其特征为在表1中所发现的单位晶胞参数；3或4或更多个选自表9的2θ值(CuKα
Figure A200780032859D00251
Figure A200780032859D00252
)；及/或实质上如列示于表7中的部分原子坐标。
另一项具体实施方案为N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的结晶型，自由态碱，包括形式RPG-3(单-R-丙二醇溶剂合物)，其特征为在表1中所发现的单位晶胞参数；3或4或更多个选自表9的2θ值(CuKα 实质上如列示于表8中的部分原子坐标，及/或实质上根据图6的粉末x-射线衍射图样。
另一项具体实施方案为一种医药组合物，包含药学上可接受的载体与实施例的化合物。
另一项具体实施方案为一种调节趋化因子或趋化因子受体活性的方法，其包括对有需要的患者给予治疗上有效量的实施例化合物。
另一项具体实施方案为一种调节CCR-2受体活性的方法，其包括对有需要的患者给予治疗上有效量的实施例化合物。
另一项具体实施方案为一种调节通过CCR2受体所介导的MCP-1、MCP-2、MCP-3与MCP-4及MCP-5活性的方法，其包括对有需要的患者给予治疗上有效量的实施例化合物。
另一项具体实施方案为一种调节MCP-1活性的方法，其包括对有需要的患者给予治疗上有效量的实施例化合物。
另一项具体实施方案为一种抑制CCR2与CCR5活性的方法，其包括对有需要的患者给予治疗上有效量的实施例化合物。
另一项具体实施方案为一种治疗病症的方法，其包括对有需要的患者给予治疗上有效量的实施例化合物，该病症是选自糖尿病、肥胖、代谢症候群、中风、神经病原性疼痛、绝血性心肌病、牛皮癣、高血压、硬皮病、骨关节炎、动脉瘤、发热、心血管疾病、克隆氏病、充血性心衰竭、自身免疫疾病、HIV感染、与HIV有关联的痴呆症、牛皮癣、自发性肺纤维变性、移植物动脉硬化、物理上或化学上引致的脑部创伤、炎性肠疾病、肺胞炎、结肠炎、系统性红斑狼疮、毒肾血清肾炎、丝球体性肾炎、哮喘、多发性硬化、动脉粥样硬化、脉管炎、易受伤害斑、风湿性关节炎、再狭窄、静脉新血管内膜增生、渗析-移植物新血管内膜增生、动脉-静脉旁路血管内膜增生、器官移植、慢性同种移植肾病及癌症。
另一项具体实施方案为一种治疗病症的方法，其包括对有需要的患者给予治疗上有效量的实施例化合物，其中该病症是选自糖尿病、肥胖、克隆氏病、牛皮癣、自发性肺纤维变性、移植物动脉硬化、物理上或化学上引致的脑部创伤、炎性肠疾病、肺胞炎、结肠炎、系统性红斑狼疮、毒肾血清肾炎、丝球体性肾炎、气喘、多发性硬化、动脉粥样硬化与风湿性关节炎、再狭窄、器官移植及癌症。
另一项具体实施方案为一种治疗病症的方法，其包括对有需要的患者给予治疗上有效量的实施例化合物，其中该病症是选自糖尿病、肥胖、克隆氏病、系统性红斑狼疮、丝球体性肾炎、多发性硬化、动脉粥样硬化、再狭窄及器官移植。
另一项具体实施方案为一种治疗病症的方法，其包括对有需要的患者给予治疗上有效量的实施例化合物，其中该病症是选自多发性硬化、动脉粥样硬化、克隆氏病及糖尿病。
另一项具体实施方案为一种治疗病症的方法，其包括对有需要的患者给予治疗上有效量的实施例化合物，其中该病症是选自再狭窄、器官移植及癌症。
另一项具体实施方案为一种治疗糖尿病的方法，其包括对有需要的患者给予治疗上有效量的实施例化合物。
另一项具体实施方案为一种治疗克隆氏病的方法，其包括对有需要的患者给予治疗上有效量的实施例化合物。
另一项具体实施方案为一种治疗多发性硬化的方法，其包括对有需要的患者给予治疗上有效量的实施例化合物。
另一项具体实施方案为一种治疗动脉粥样硬化的方法，其包括对有需要的患者给予治疗上有效量的实施例化合物。
另一项具体实施方案为一种治疗再狭窄的方法，其包括对有需要的患者给予治疗上有效量的实施例化合物。
另一项具体实施方案为一种治疗器官移植的方法，其包括对有需要的患者给予治疗上有效量的实施例化合物。
另一项具体实施方案为一种治疗癌症的方法，其包括对有需要的患者给予治疗上有效量的实施例化合物。
另一项具体实施方案为一种治疗癌症的方法，其中癌症选自乳癌、肝癌、前列腺癌及黑色素瘤。
另一项具体实施方案为一种治疗炎性、过敏性、自身免疫、代谢、癌症及/或心血管疾病的方法，其包括对有需要的患者给予治疗上有效量的实施例化合物。
另一项具体实施方案为一种治疗至少部分通过CCR-2所介导的炎性、过敏性、自身免疫、代谢、癌症及/或心血管疾病的方法，其包括对有需要的患者给予治疗上有效量的实施例化合物。
另一项具体实施方案为一种调节CCR2活性的方法，其包括对有需要的患者给予治疗上有效量的实施例化合物。
另一项具体实施方案为一种调节通过CCR5受体所介导的MIP-1β与RANTES活性的方法，其包括对有需要的患者给予治疗上有效量的实施例化合物。
另一项具体实施方案为实施例的化合物，用于制备药剂以治疗糖尿病、肥胖、代谢症候群、中风、神经病原性疼痛、绝血性心肌病、牛皮癣、高血压、硬皮病、骨关节炎、动脉瘤、发热、心血管疾病、克隆氏病、充血性心衰竭、自身免疫疾病、HIV感染、与HIV有关联的痴呆症、牛皮癣、自发性肺纤维变性、移植物动脉硬化、物理上或化学上引致的脑部创伤、炎性肠疾病、肺胞炎、结肠炎、系统性红斑狼疮、毒肾血清肾炎、丝球体性肾炎、气喘、多发性硬化、动脉粥样硬化、脉管炎、易受伤害斑、风湿性关节炎、再狭窄、静脉新血管内膜增生、渗析-移植物新血管内膜增生、动脉-静脉旁路血管内膜增生、器官移植、慢性同种移植肾病及癌症。
另一项具体实施方案为实施例的化合物，供使用于治疗上。
本发明可在未偏离其精神或基本特质下，以其它特定形式具体表现。本发明也包括本文所指出的本发明的替代方面与具体实施方案的所有组合。应了解的是，任何且所有具体实施方案，均可搭配任何其它具体实施方案，以描述本发明的其它具体实施方案。此外，一项具体实施方案的任何构件(包括优选方面)，是意欲与来自任何具体实施方案的任何与所有其它构件合并，以描述其它具体实施方案。
方法具体实施方案
本发明公开的内容也提供制造式I化合物的新颖方法：
Figure A200780032859D00281
包括N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，或其药学上可接受的盐。
于第1项具体实施方案中，本发明公开的内容提供制备式IV化合物的新颖方法，此方法包括：
使结构式III的氨基酸衍生物或其盐，与式II环己酮或其盐偶合(参阅WO2005021500中的制备)，得到具有取代的酰胺侧链的结构式IV的化合物或其盐
Figure A200780032859D00282
其中：
Ra与Rb独立地为C1-6烷氧基；
或Ra与Rb和它们均连接的碳一起合并，以形成羰基、硫代羰基、环状缩醛或环状硫代缩醛，其中环状缩醛或环状硫代缩醛选自-O-Z-O-与-S-Z-S-，Z为-(CT1T2)2-、-(CT1T2)3-或
Figure A200780032859D00283
且T1，T2及T3，在每一存在处，独立地选自氢、C1-4烷基、C2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF3、OC1-4烷基、OCF3及C(＝O)C1-4烷基(T1，T2及T3优选各为氢)；
R1、R2及R3独立地为氢或胺-保护基；
R4为低级C1-6烷基或任选取代的苄基；
Y为卤素、SMe、S(Me)+R12或OSO2R13；
V为OH、卤素或OSO2R13；
R12为氢、C1-6烷基、-(CH2)C(O)OC1-6烷基或-(CH2)C(O)OC1-6烷基；且
R13在每一存在处为C1-6烷基。
优选胺-保护基是可经由水解作用或氢解作用在标准条件下被移除的基团。此种基团包括但不限于苄氧羰基(Cbz)、叔丁氧羰基(BOC)、芴基甲基氧基羰基(FMOC)、苄基(Bn)或对-甲氧基苄基(PMB)。更优选为Cbz、BOC或Bn基团(尤其是Cbz与Bn)。
于第2项具体实施方案中，本发明公开的内容提供了新颖方法
其中：
Ra与Rb和它们均连接的碳一起合并，以形成羰基或1，3-二氧戊环(尤其是1，3-二氧戊环)；
R1为氢；
R2为Cbz；
R3为氢；
R4为C1-6烷基；
Y为S(Me)；且
V为OH。
于第3项具体实施方案中，其中Y为-SMe，公开的内容提供了一种方法，其进一步包括将式IV化合物用基团R12X进行烷基化，其中X为卤素，以形成其锍盐。烷基化剂优选为碘化甲烷。
于第4项具体实施方案中，公开的内容提供一种方法，其中式IV环己酮为甲苯磺酸盐。
于第5项具体实施方案中，公开的内容是提供一种方法，其中式IV化合物为锍盐。
于第6项具体实施方案中，公开的内容提供一种方法，其中偶合是在惰性气体比如氮或氩(优选为氮)下，于非质子性溶剂中进行，比如丙腈、醋酸异丙酯、醋酸正-丁酯、醋酸叔丁基酯或乙腈(尤其是乙腈及/或醋酸乙酯)。
于第7项具体实施方案中，公开的内容提供一种方法，其中偶合可通过使式II化合物与二酰亚胺偶合试剂，于活化剂与三级胺碱存在下接触而达成。二酰亚胺偶合试剂包括例如EDAC的试剂。活化剂的实例包括HOBt(该术语包括其水合物)与N′，N′-4-二甲氨基-吡啶。三级胺碱包括例如三乙胺、N-N-二异丙基-N-乙胺及三-正-丙基胺。
于第8项具体实施方案中，公开的内容提供一种方法，其中二酰亚胺偶合试剂为EDAC，活化剂为HOBt(该术语包括其水合物)，而三级胺碱为三乙胺。
于第9项具体实施方案中，公开的内容提供一种方法，其中式II化合物对二酰亚胺偶合试剂对活化剂对三级胺的摩尔比，分别为约一比约0.090-1.50比约0.95-1.50比约2.00至3.00。该摩尔比优选分别为一比约0.095-1.05比约0.95-1.10及比约2.10至2.20。
于第10项具体实施方案中，公开的内容提供一种制备具有酯部分基团的式V化合物的新颖方法：
此方法包括：
使式IV化合物或其盐的氨基酸衍生物侧链环化，得到具有酯部分基团的式V化合物。
于第11项具体实施方案中，其中Ra与Rb独立地为C1-6烷氧基，或Ra与Rb和它们均连接的碳一起合并，以形成硫代羰基、环状缩醛或环状硫代缩醛，公开的内容提供了一种方法，其任选进一步包括使Ra与Rb基团水解的步骤，以致使Ra与Rb和它们均连接的碳一起结合，形成羰基。水解可在溶剂比如丙酮、丁酮、乙腈及异丙醇或其水溶液中进行，且优选是在丙酮水溶液中进行。水解步骤优选是跟随在环化步骤之后。
于第12项具体实施方案中，公开的内容提供一种方法，其中环化作用是通过使式IV化合物或其盐，与碱，于溶剂存在下结合而进行。此种碱可为例如但不限于碳酸铯、碳酸氢铯、碳酸钾、叔丁醇钠、六甲基二硅氮化钠，且优选为碳酸铯。
于第13项具体实施方案中，公开的内容提供一种方法，其中环化作用是在惰性气氛比如氮或氩(优选为氮)下，在溶剂中进行，包括例如但不限于DMSO、DMF、DMA、N-甲基吡咯烷酮、环丁砜(尤其是DMSO及/或DMF)。
于第14项具体实施方案中，公开的内容提供一种制备式VI化合物的方法：
Figure A200780032859D00311
此方法包括：
以水解剂，使式V化合物的酯部分基团在约-5至约5℃的温度下水解，以形成化合物VI的酸。酯水解剂为本领域技术人员所熟知，且包括碱金属氢氧化物，MOH，其中M为Li、Na或K，水解剂优选为NaOH水溶液。水解步骤优选是在两相条件下进行，使用可部分混溶于水的有机溶剂。优选有机溶剂为非环状或环状醚类，包括THF、2-甲基THF、1，2-二甲氧基乙烷、1，4-二氧六环，尤其是THF。
或者，于第15项具体实施方案中，其中Ra与Rb和它们均连接的原子一起合并，以形成羰基，公开的内容提供一种制备式VII化合物的方法：
Figure A200780032859D00321
此方法包括：
使式VIa化合物，HO-Z-OH，与式IV化合物(任选在现场)于酸催化剂存在下反应，获得式VII化合物，
其中Z为-(CT1T2)2-、-(CT1T2)3-或且
T1、T2及T3，在每一存在处，独立地选自氢、C1-4烷基、C2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF3、OC1-4烷基、OCF3及C(＝O)C1-4烷基(T1、T2及T3优选是各为氢)。
优选情况是，式VIa化合物为乙二醇，且酸催化剂为对-甲苯磺酸或其水合物。
于第16项具体实施方案中，公开的内容提供一种制备式VIII化合物的方法：
此方法包括：
使式VII的缩酮转变成式VIII的中间体异氰酸酯。此转变优选经过Curtius重排进行。
于第17项具体实施方案中，公开的内容提供一种方法，其中转变步骤经过Curtius重排进行，包括以下步骤：
a)将式VII的实质上无水的溶液与碱(碱是为例如但不限于烷基胺，尤其是三级胺，优选为三乙胺)混合；
b)将卤基甲酸酯(例如氯甲酸酯，优选为i-BuO2CCl)在约-10℃至约0℃的温度下添加至溶液中，以形成式VII酸的混合酐；
c)将混合酐用迭氮化物试剂(优选为NaN3)，于相转移催化剂(优选为四烷基铵盐，比如四丁基溴化铵，在约5摩尔％下)存在下，在约-10℃至约0℃的温度下处理，以形成式VIIa酰基迭氮化物：
Figure A200780032859D00331
及
d)将式VIIa酰基迭氮化物的实质上无水溶液加热，以形成相应的式VIII异氰酸酯。酰基迭氮化物的实质上无水溶液优选于分子筛上干燥。
于第18项具体实施方案中，公开的内容提供一种制备具有缩酮部分基团的式IX化合物的方法：
Figure A200780032859D00332
此方法包括：
使式VIII异氰酸酯(任选在现场)与式R10COW化合物(例如醋酸)，在相应的酸酐(意即(R10CO)2O)存在下接触，以形成式IX的酰胺，其中：
R10为C1-6烷基(R10优选为甲基)：且
W为OH或OC1-6烷基。
于第19项具体实施方案中，公开的内容提供一种制备式X化合物的方法：
此方法包括：
使式IX酰胺的缩酮部分基团水解，以形成式X化合物。缩酮水解条件与试剂为本领域技术人员所熟知。水解作用优选是通过将具有缩酮部分基团的化合物IX在有机溶剂(例如丙酮)与盐酸(约1N)中的溶液，在约45℃至约55℃下加热约2-4小时。
于第20项具体实施方案中，公开的内容提供一种制备式XI化合物的方法：
Figure A200780032859D00342
此方法包括：
将式X化合物用式HNR8R9的胺，于路易斯酸存在下，接着用还原剂进行还原胺化，以形成具有吡咯烷酮胺部分基团的式XI化合物。
于第21项具体实施方案中，公开的内容提供一种方法，其中的还原胺化包括以下步骤：
a)将路易斯酸(优选为钛试剂，包括但不限于TiCl2(O-异丙基)2)，添加至化合物X与具有式HNR8R9的胺在非质子性溶剂中的溶液内，以形成式XA的亚胺-烯胺：
Figure A200780032859D00351
及
b)将式Xa的亚胺-烯胺以还原剂(优选为硼烷二甲基硫化物)处理，制得具有吡咯烷酮胺部分基团的式XI化合物。在前文步骤中，非质子性溶剂可为例如但不限于二氯甲烷、乙腈、DMSO、DMF及N-甲基-吡咯烷酮(优选为二氯甲烷)。
于第22项具体实施方案中，公开的内容提供一种方法，其中式HN(R8)(R9)的胺优选为叔丁基胺。
于第23项具体实施方案中，公开的内容提供一种制备式XII化合物的方法：
Figure A200780032859D00352
此方法包括：
使式XI吡咯烷酮胺去除保护，以形成式XII化合物。
于第24项具体实施方案中，公开的内容提供一种方法，其中去除保护步骤是通过使式XII化合物的溶液于催化剂比如钯存在下进行氢化而进行。氢化作用优选是在约20至约40psig下，于溶剂中，包括但不限于甲醇，在5％Pd/C催化剂上，于约25℃下进行约二至约六小时。
于第25项具体实施方案中，公开的内容提供一种制备式I化合物的方法，其包括使式XII化合物与式化合物偶合，而得到式I化合物，其中：
HET为3-14员杂芳基环，在至少一个环中具有一至四个选自N、O或S的杂原子(优选为一至三个杂原子，尤其是一至两个氮原子)(HET优选为6-取代的喹唑啉-4-基，更优选为6-三氟甲基-喹唑啉-4-基)；且
LG为离去基团，选自卤素或OSO2R16，其中R16为苯基，5-至7-员杂芳基，具有一或多个选自N、S或O的原子，C1-6烷基，或3-至7-员环烷基，其全部均任选被一至三个选自卤素、CF3及C1-6烷基的基团取代(LG优选为卤素，尤其是氯)。
于本文中使用的离去基团包括但不限于比如卤素、甲磺酸基、九氟烷磺酸基、磺酸基、甲苯磺酸基及三氟甲烷磺酸基的基团。优选离去基团为卤素或OSO2R16，其中R16为苯基，5-至7-员杂芳基，具有一或多个选自N、S或O的原子，C1-6烷基，或3-至7-员环烷基，其全部均任选被一至三个选自卤素、CF3及C1-6烷基的基团取代。在最优选具体实施方案中，LG为卤素，尤其是氯。
于第26项具体实施方案中，公开的内容提供一种制备式X化合物的方法：
Figure A200780032859D00362
其包括以下步骤：
以水解剂，使式V化合物的酯部分基团在约-5至约5℃的温度下水解，以形成化合物VI酸：
Figure A200780032859D00371
使式VIa化合物，HO-Z-OH，与式IV化合物(任选在现场)于酸催化剂存在下反应，获得具有羧酸部分基团的式VII化合物：
使式VIa化合物，HO-Z-OH(优选为烷二醇，尤其是乙二醇)，与式IV化合物(任选在现场)，于酸催化剂(优选为对-甲苯磺酸或其水合物)存在下反应，获得具有羧酸部分基团的式VII化合物：
Figure A200780032859D00373
使式VII缩酮的羧酸部分基团转变成式VIII的相应中间体异氰酸酯：
Figure A200780032859D00381
使式VIII异氰酸酯(任选在现场)与式R10COW化合物(例如醋酸)，于其相应的酸酐(意即(R10CO)2O)存在下接触，以形成具有缩酮部分基团的式IX的酰胺：
IX；及
使式IX酰胺的缩酮部分基团水解，以形成式X化合物：
其中：
R1与R2独立地为氢或胺-保护基；
R4与R10独立地为C1-6烷基或任选取代的苄基；
R8与R9独立地为氢或C1-6烷基；
W为OH或OC1-6烷基；
Z为-(CT1T2)2-、-(CT1T2)3-或
Figure A200780032859D00391
且
T1、T2及T3，在每一存在处，独立地选自氢、C1-4烷基、C2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF3、OC1-4烷基、OCF3及C(＝O)C1-4烷基。
于第27项具体实施方案中，公开的内容提供一种制备式XI化合物的方法，其中：
式VII化合物为(7R，8S)-8-((3S)-3-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸烷-7-羧酸或其盐；
式VIIa化合物为((3S)-1-((7R，8S)-7-(叠氮基羰基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐；
式VIII化合物为((3S)-1-((7R，8S)-7-异氰酸根合-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐；
式IX化合物为((3S)-1-((7R，8S)-7-乙酰氨基-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐；
式X化合物为((3S)-1-((1S，2R)-2-乙酰氨基-4-氧代环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐；且
式XI化合物为((3S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(叔丁基氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐。
于第28项具体实施方案中，公开的内容提供一种制备式I化合物的方法.
Figure A200780032859D00401
此方法包括：
以水解剂(优选为碱金属氢氧化物，尤其是氢氧化钠)，使式V化合物的酯部分基团水解，以形成式VI化合物；
使式Va化合物，HO-Z-OH，与式VI化合物，任选在现场于酸催化剂(优选为对-甲苯磺酸或其水合物)存在下反应，而得到具有羧酸部分基团的式VII化合物；
使式VII缩酮的羧酸部分基团转变，以形成相应的式VIII中间体异氰酸酯；
使式VIII异氰酸酯，任选在现场与式R10COW化合物(优选为醋酸)，在相应的酸酐(R10CO)2O(优选为醋酸酐)存在下接触，以形成具有缩酮部分基团的式IX酰胺；
使式IX酰胺的缩酮部分基团水解，以形成式X化合物；及
使式X化合物用式HNR8R9胺(优选为叔丁基胺)，在路易斯酸(优选为钛试剂，比如TiCl2(O-异丙基)2)存在下以还原方式胺化，以形成具有吡咯烷酮胺部分基团的式XI化合物；
使式XI吡咯烷基胺去除保护，以形成式XII化合物；及
使式XII化合物与式
Figure A200780032859D00411
化合物偶合，而得到式I化合物；
其中：
R1与R2独立地为氢或胺-保护基；
R4与R10独立地为C1-6烷基或任选取代的苄基；
R8与R9独立地为氢或C1-6烷基；
W为OH或OC1-6烷基；
Z为-(CT1T2)2-、-(CT1T2)3-或
Figure A200780032859D00412
T1、T2及T3，在每一存在处，独立地选自氢、C1-4烷基、C2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF3、OC1-4烷基、OCF3及C(＝O)C1-4烷基(Z优选为-(CH2)2-)；
HET为3-14员杂芳基环，其在至少一个环中具有一至四个选自N、O或S的杂原子(优选为一至三个杂原子，尤其是一至两个氮原子)(HET优选为6-取代的喹唑啉-4-基，更优选为6-三氟甲基-喹唑啉-4-基)；且
LG为离去基团，选自卤素或OSO2R16，其中R16为苯基，5-至7-员杂芳基，其具有一或多个选自N、S或O的原子，C1-6烷基或3-至7-员环烷基，其全部均任选被一至三个选自卤素、CF3及C1-6烷基的基团取代(LG优选为卤素，尤其是氯)。
于第29项具体实施方案中，公开的内容提供式VI化合物，或其盐：
Figure A200780032859D00421
其中：
R1与R2独立地选自氢，与胺-保护基，选自BOC、Cbz及苄基(优选情况是R1为氢，且R2为Cbz)；
Z为-(CT1T2)2-、-(CT1T2)3-或
Figure A200780032859D00422
且
T1、T2及T3，在每一存在处，独立地选自氢、C1-4烷基、C2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF3、OC1-4烷基、OCF3及C(＝O)C1-4烷基(Z优选为-(CH2)2-)。
优选式VI化合物为(1R，2S)-2-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-氧代环己烷羧酸或其盐。
于第30项具体实施方案中，公开的内容提供式VI化合物，其为(1R，2S)-2-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-氧代环己烷羧酸或其盐。
于第31项具体实施方案中，公开的内容提供新颖式VII化合物，或其盐：
Figure A200780032859D00423
其中：
R1与R2独立地选自氢与胺-保护基，选自BOC、Cbz及苄基(优选情况是R1为氢，且R2为Cbz)；
Z为-(CT1T2)2-、-(CT1T2)3-或
Figure A200780032859D00431
且
T1、T2及T3，在每一存在处，独立地选自氢、C1-4烷基、C2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF3、OC1-4烷基、OCF3及C(＝O)C1-4烷基(Z优选为-(CH2)2-)。
优选式VII化合物为(7R，8S)-8-((3S)-3-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸烷-7-羧酸。
于第32项具体实施方案中，公开的内容提供式VII化合物，其为(7R，8S)-8-((3S)-3-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸烷-7-羧酸或其盐。
于第33项具体实施方案中，公开的内容提供新颖式VIIa化合物，或其盐：
Figure A200780032859D00432
其中：
R1与R2独立地选自氢与胺-保护基，选自BOC、Cbz及苄基(优选情况是R1为氢，且R2为Cbz)；
Z为-(CT1T2)2-、-(CT1T2)3-或
Figure A200780032859D00433
且
T1、T2及T3，在每一存在处，独立地选自氢、C1-4烷基、C2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF3、OC1-4烷基、OCF3及C(＝O)C1-4烷基(Z优选为-(CH2)2-)。
优选式VIIa化合物为((3S)-1-((7R，8S)-7-(叠氮基羰基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯。
于第34项具体实施方案中，公开的内容提供式VIIa化合物，其为((3S)-1-((7R，8S)-7-(叠氮基羰基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐。
于第35项具体实施方案中，公开的内容提供式VIII化合物，或其盐：
Figure A200780032859D00441
其中：
R1与R2独立地选自氢与胺-保护基，选自BOC、Cbz或苄基(优选情况是R1为氢，且R2为Cbz)；
Z为-(CT1T2)2-、-(CT1T2)3-或
Figure A200780032859D00442
且
T1、T2及T3，在每一存在处，独立地选自氢、C1-4烷基、C2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF3、OC1-4烷基、OCF3及C(＝O)C1-4烷基(Z优选为-(CH2)2-)。
优选式VIII化合物为((3S)-1-((7R，8S)-7-异氰酸根合-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯。
于第36项具体实施方案中，公开的内容提供式VIII化合物，其为((3S)-1-((7R，8S)-7-异氰酸根合-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐。
于第37项具体实施方案中，公开的内容提供式IX化合物，或其盐：
Figure A200780032859D00451
其中：
R1与R2独立地选自氢与胺-保护基，选自BOC、Cbz或苄基(优选情况是R1为氢，且R2为Cbz)；
Z为-(CT1T2)2-、-(CT1T2)3-或
Figure A200780032859D00452
T1、T2及T3，在每一存在处，独立地选自氢、C1-4烷基、C2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF3、OC1-4烷基、OCF3及C(＝O)C1-4烷基(Z优选为-(CH2)2-)；且
R10为C1-6烷基(优选为甲基)。
优选式IX化合物为((3S)-1-((7R，8S)-7-乙酰氨基-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯。
于第38项具体实施方案中，公开的内容提供式IX化合物，其为((3S)-1-((7R，8S)-7-乙酰氨基-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐。
于第39项具体实施方案中，公开的内容提供式X化合物，或其盐：
Figure A200780032859D00453
其中：
R1与R2独立地为氢或胺-保护基，选自BOC、Cbz及苄基；且
R10为C1-6烷基。
优选情况是，R1为氢，R2为Cbz，且R10为甲基。优选式X化合物为((3S)-1-((1S，2R)-2-乙酰氨基-4-氧代环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯。
于第40项具体实施方案中，公开的内容提供式X化合物，其为((3S)-1-((1S，2R)-2-乙酰氨基-4-氧代环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐。
于第40项具体实施方案中，公开的内容提供式XI化合物，或其盐：
Figure A200780032859D00461
其中：
R1与R2独立地为氢或胺-保护基，选自BOC、Cbz及苄基；
R8与R9独立地为氢或C1-6烷基；且
R10为C1-6烷基。
优选情况是，R1为氢，R2为Cbz，R8为氢，R9为叔丁基，且R10为甲基。优选式XI化合物为((3S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(叔丁基氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯。
于第41项具体实施方案中，公开的内容提供式XI化合物，其为((3S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(叔丁基氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐。
于第42项具体实施方案中，公开的内容提供式XII化合物，或其盐：
Figure A200780032859D00471
其中：
R1为氢或胺-保护基，选自BOC、Cbz及苄基；
R8与R9独立地为氢或C1-6烷基；且
R10为C1-6烷基。
优选情况是，R1为氢，R8为氢，R9为叔丁基，且R10为甲基。优选式XII化合物为N-((1R，2S，5R)-2-((3S)-3-氨基-2-氧代-1-吡咯烷基)-5-(叔丁基氨基)环己基)乙酰胺。
于第43项具体实施方案中，公开的内容提供式XII化合物，其为N-((1R，2S，5R)-2-((3S)-3-氨基-2-氧代-1-吡咯烷基)-5-(叔丁基氨基)环己基)乙酰胺或其盐。
于第44项具体实施方案中，公开的内容提供选自以下的化合物：
(7R，8S)-8-((3S)-3-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸烷-7-羧酸或其盐；
((3S)-1-((7R，8S)-7-(叠氮基羰基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐；
((3S)-1-((7R，8S)-7-异氰酸根合-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐；
((3S)-1-((7R，8S)-7-乙酰氨基-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐；
((3S)-1-((1S，2R)-2-乙酰氨基-4-氧代环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐；及
((3S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(叔丁基氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐。
于45项具体实施方案中，公开的内容提供一种方法，其中：
式VII化合物为(7R，8S)-8-((3S)-3-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸烷-7-羧酸或其盐；
式VIIa化合物为((3S)-1-((7R，8S)-7-(叠氮基羰基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐；
式VIII化合物为((3S)-1-((7R，8S)-7-异氰酸根合-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐；
式IX化合物为((3S)-1-((7R，8S)-7-乙酰氨基-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐；
式X化合物为((3S)-1-((1S，2R)-2-乙酰氨基-4-氧代环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐；且
式XI化合物为((3S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(叔丁基氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐。
于第46项具体实施方案中，公开的内容提供一种方法，其中式I化合物为N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺或其盐。
本发明可在未偏离其精神或基本特质下，以其它特定形式具体实施。因此，上述具体实施方案不应被认为是限制。本发明的任何与所有具体实施方案，均可结合任何其它一或多项具体实施方案，以描述其它具体实施方案。具体实施方案的各个别构件(包括优选方面)本身为独立的具体实施方案。此外，一项具体实施方案的任何构件，意在与来自任何具体实施方案的任何与所有其它构件合并，以描述其它具体实施方案。此外，本发明包括本文所指出的本发明的不同具体实施方案、部分具体实施方案、定义、说明及实施例的组合。
定义
下文是为本专利说明书与所附权利请求中所使用术语的定义。对本文中基团或术语所提供的最初定义，在整个本说明书与权利请求中适用于该基团或术语，个别地或作为另一种基团的一部分，除非另有指出。
＂烷基＂一词是指直链或分枝链烃基，具有1至12个碳原子，优选为1至6个碳原子。当数目以下标出现在符号＂C＂之后时，该下标是更明确地界定特定基团可含有的碳原子数。例如，＂C1-6烷基＂是指具有一至六个碳原子的直链与分枝链烷基，比如甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正-丁基、叔丁基、正-戊基等等。下标＂0＂是指一个键结。因此，羟基(C0-2)烷基或(C0-2)羟烷基术语是包括羟基、羟甲基及羟乙基。烷基可被一至三个基团取代，取代基选自(C1-6)烷基、(C2-6)烯基、羟基、卤素、氰基、硝基、CF3、O(C1-6烷基)、OCF3、C(＝O)H、C(＝O)(C1-6烷基)、CO2H、CO2(C1-6烷基)、NHCO2(C1-6烷基)、-S(C1-6烷基)、NH2、NH(C1-6烷基)、N(C1-6烷基)2、N(CH3)3 +、SO2(C1-6烷基)、C(＝O)(C1-4亚烷基)NH2、C(＝O)(C1-4亚烷基)NH(烷基)、C(＝O)(C1-4亚烷基)N(C1-4烷基)2、C3-7环烷基、苯基、苄基、苯基乙基、苯基氧基、苄氧基、萘基、四-至七-员杂环基及/或五-至六-员杂芳基。当经取代的烷基被芳基、杂环基、环烷基或杂芳基取代时，该环状系统均如下文定义，且因此可具有零、一、二或三个取代基，也如下文定义。
当＂烷基＂一词是与另一种基团一起使用时，比如在＂芳烷基＂中，此搭配是更明确地定义取代的烷基将含有的至少一个取代基。例如，＂芳烷基＂是指如上文定义的取代的烷基，其中至少一个取代基为芳基，比如苄基。因此，芳基(C0-4)烷基一词包括具有至少一个芳基取代基的取代的低级烷基，且也包括直接结合至另一个基团的芳基，意即芳基(C0)烷基。
＂烯基＂一词是指直链或分枝链烃基，具有2至12个碳原子及至少一个双键。2至6个碳原子且具有一个双键的烯基为最优选。烯基可如上文关于烷基所述那样被取代。
＂炔基＂一词是指直链或分枝链烃基，具有2至12个碳原子及至少一个叁键。2至6个碳原子且具有一个叁键的炔基为最优选。炔基可如上文关于烷基所述那样被取代。
＂亚烷基＂一词是指二价直链或分枝链烃基，具有1至12个碳原子，优选为1至8个碳原子，例如{-CH2-}n，其中n为1至12，优选为1-8。低级亚烷基，意即1至2个碳原子的亚烷基为最优选。＂亚烯基＂与＂亚炔基＂术语是个别地指如上文定义的烯基与炔基的二价基团。亚烯基可如上文关于烷基所述那样被取代。
＂烷氧基＂一词是指被如本文所定义的烷基取代的氧原子。例如，＂烷氧基＂一词包括基团-O-C1-6烷基。
当下标在涉及烷氧基、硫基烷基或氨基烷基时使用时，下标是指该基团除了杂原子以外可含有的碳原子数。
应了解的是，对于所有基团的选择，包括例如烷氧基、硫基烷基及氨基烷基，将由本领域的技术人员来完成，以提供稳定化合物。
＂羰基＂一词是指二价羰基-C(＝O)-。
＂酰基＂一词是指羰基，其连结至有机基团，更特别是基团C(＝O)Re，以及二价基团-C(＝O)Re-，其是被连结至有机基团。基团Re可选自如本文定义的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，或当合适时，为其相应的二价基团，例如亚烷基。
＂环烷基＂一词是指3至9个，优选为3至7个碳原子的完全饱和与部分不饱和烃环(因此包括＂环烯基环＂)。＂环烷基＂一词包括具有零、一、二或三个取代基的环，取代基选自(C1-4)烷基、(C2-4)烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF3、O(C1-4烷基)、OCF3、C(＝O)H、C(＝O)(C1-4烷基)、CO2H、CO2(C1-4烷基)、NHCO2(C1-4烷基)、S(C1-4烷基)、NH2、NH(C1-4烷基)、N(C1-4烷基)2、N(C1-4烷基)3 +、SO2(C1-4烷基)、C(＝O)(C1-4亚烷基)NH2、C(＝O)(C1-4亚烷基)NH(烷基)及/或C(＝O)(C1-4亚烷基)N(C1-4烷基)2。＂环烷基＂一词也包括具有稠合至其上的第二个环(例如包括苯并、杂环基或杂芳基环)的环或具有3至4个碳原子的碳-碳桥基的环。
＂卤基＂或＂卤素＂术语是指氯基、溴基、氟基及碘基。
＂卤烷基＂一词是取代的烷基，其具有一或多个卤基取代基。例如，＂卤烷基＂包括单、双及三氟甲基。
＂卤烷氧基＂一词是具有一或多个卤基取代基的烷氧基。例如，＂卤烷氧基＂包括OCF3。
＂杂原子＂一词包括氧、硫及氮。
＂芳基＂一词是指苯基、联苯基、芴基、1-萘基及2-萘基。＂芳基＂一词包括具有零、一、二或三个取代基的环，取代基选自(C1-4)烷基、(C2-4)烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF3、O(C1-4烷基)、OCF3、C(＝O)H、C(＝O)(C1-4烷基)、CO2H、CO2(C1-4烷基)、NHCO2(C1-4烷基)、S(C1-4烷基)、NH2、NH(C1-4烷基)、N(C1-4烷基)2、N(C1-4烷基)3 +、SO2(C1-4烷基)、C(＝O)(C1-4亚烷基)NH2、C(＝O)(C1-4亚烷基)NH(烷基)及/或C(＝O)(C1-4亚烷基)N(C1-4烷基)2。
＂杂环基＂或＂杂环的＂术语是指取代与未取代的非芳族(其可为部分或完全饱和的)3-至15-员环，其具有一至四个杂原子。此种环可为3-至7-员单环状基团、7-至11-员双环状基团及10-至15-员三环状基团。含有杂原子的杂环基的各环可含有一或两个氧或硫原子及/或一至四个氮原子，其条件是各环中杂原子的总数为四或更少，及进一步条件是该环含有至少一个碳原子。完成双环状与三环状基团的稠合环可仅含有碳原子，且可为饱和、部分饱和或不饱和的。氮与硫原子可任选被氧化，且氮原子可任选被季化。杂环基可在任何可采用的氮或碳原子上被连接。杂环基环可含有零、一、二或三个取代基，其选自(C1-4)烷基、(C2-4)烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF3、O(C1-4烷基)、OCF3、C(＝O)H、C(＝O)(C1-4烷基)、CO2H、CO2(C1-4烷基)、NHCO2(C1-4烷基)、S(C1-4烷基)、NH2、NH(C1-4烷基)、N(C1-4烷基)2、N(C1-4烷基)3 +、SO2(C1-4烷基)、C(＝O)(C1-4亚烷基)NH2、C(＝O)(C1-4亚烷基)NH(烷基)及/或C(＝O)(C1-4亚烷基)N(C1-4烷基)2。举例的杂环族基团包括氮杂环丁烷基、吡咯烷基、氧杂环丁烷基、二氢咪唑基、噁唑烷基、异二氢噁唑基、噻唑烷基、异噻唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代氮杂
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基、氮杂
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基、4-哌啶酮基、四氢吡喃基、吗啉基、硫代吗啉基、硫代吗啉基亚砜、硫代吗啉基砜、1，3-二氧戊环、奎宁环基及四氢-1，1-二氧代噻吩基等。
＂杂芳基＂一词是指取代与未取代的芳族3-至14-员环，其在至少一个环中具有一至四个选自O、S或N的杂原子。该环可为5-或6-员单环状基团、9-或10-员双环状基团及11-至14-员三环状基团。含有杂原子的杂芳基的各环可含有一或两个氧或硫原子及/或一至四个氮原子，其条件是各环中杂原子的总数为四或更少，且各环具有至少一个碳原子。完成双环状与三环状基团的稠合环可仅含有碳原子，且可为饱和、部分饱和或不饱和的。氮与硫原子可任选被氧化，且氮原子可任选被季化。为双环状或三环状的杂芳基必须包含至少一个全芳族环，但一个或多个其它稠合环可为芳族或非芳族的。杂芳基可在任何环的任何可采用氮或碳原子上被连接。杂芳基环系统可含有零、一、二或三个取代基，选自(C1-4)烷基、(C2-4)烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF3、O(C1-4烷基)、OCF3、C(＝O)H、C(＝O)(C1-4烷基)、CO2H、CO2(C1-4烷基)、NHCO2(C1-4烷基)、S(C1-4烷基)、NH2、NH(C1-4烷基)、N(C1-4烷基)2、N(C1-4烷基)3 +、SO2(C1-4烷基)、C(＝O)(C1-4亚烷基)NH2、C(＝O)(C1-4亚烷基)NH(烷基)，及/或C(＝O)(C1-4亚烷基)N(C1-4烷基)2。
举例的杂芳基包括吡咯基、吡唑基、二氢吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基、吲哚基、苯并噻唑基、苯并二氧杂环戊烯基、苯并噁唑基、苯并噻吩基、喹啉基、四氢异喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、吲嗪基、苯并呋喃基、色酮、香豆基、苯并吡喃基、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基、二氢异吲哚基、四氢喹啉等。特定杂芳基包括例如6-取代的喹唑啉-4-基与6-三氟甲基-喹唑啉-4-基。
在基团被指称为＂任选取代＂的情况中，此术语在本文中是被定义为包括经取代与未经取代的基团两者。
此处所描述的化合物可具有不对称中心。含有不对称取代原子的本发明化合物，可以光学活性或外消旋形式分离。本领域中熟知如何制备光学活性形式，比如通过外消旋形式的拆分，或通过光学活性起始物质的合成而得到。烯烃、C＝N双键等的许多几何异构体，也可存在于本文所述的化合物中，且所有此种稳定异构体均意欲包括在本发明中。本发明化合物的顺式与反式几何异构体可以作为异构体的混合物或作为经分离的异构体形式被描述和分离。一种结构式的所有手性、非对映异构体、外消旋形式及所有几何异构形式都被包括在内，除非明确指示特定立体化学或异构形式。
本文中所公开的化合物的一种对映异构体，与另一种比较，可显示优越活性。因此，所有立体化学物质都被认为是本发明的一部分。当需要时，外消旋物质的分离可通过HPLC，使用手性管柱，或通过解析，使用解析剂比如氯化樟脑磺酰camphonic达成，如Steven D.Young等人，抗微生物剂与化学疗法，1995，2602-2605中所述。
于本文中采用的＂药学上可接受＂的措辞，是指在安全可靠医学判断的范围内，适用于与人类及动物的组织接触，而不会有过度毒性、刺激性、过敏性响应或其它问题或并发症，伴随着合理利益/风险比的化合物、物质、组合物及/或剂型。
于本文中使用的＂药学上可接受的盐＂是指所公开的化合物的衍生物，其中母体化合物是通过制造其酸或碱盐而被改质。药学上可接受盐的实施例，包括但不限于碱性残基比如胺类的无机酸或有机酸盐；酸性残基比如羧酸类的碱或有机盐；及其类似物。药学上可接受的盐，包括母体化合物的常用无毒性盐或四级铵盐，例如由无毒性无机或有机酸形成。例如，此种常用无毒性盐包括得自无机酸的，无机酸比如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等；及由有机酸制得的盐，有机酸比如醋酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、双羟萘酸、顺丁烯二酸、羟基顺丁烯二酸、苯基醋酸、谷胺酸、苯甲酸、水杨酸、磺胺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、反丁烯二酸、甲苯磺酸、甲烷磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙磺酸等。
本发明药学上可接受的盐，可自含有碱性或酸性部分的母体化合物，通过常规化学方法合成而得。一般而言，此种盐可通过使这些化合物的自由态酸或碱形式，与化学计量的适当碱或酸，在水中，或在有机溶剂中，或在此两者的混合物中反应而制成；一般而言，非水性介质，例如醚、醋酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是优选的。适当盐的清单可参阅Remington氏医药科学，第17版，Mack出版公司，Easton，PA，1985，第1418页，其公开的内容并于本文供参考。
由于已知前体药物会提高许多需要的医药质量(例如溶解度、生物利用率、制造等...)，故本发明化合物可以前体药物形式传输。因此，本发明是意在包括目前所请求化合物的前体药物，其传输方法及含有它们的组合物。＂前体药物＂是意在包括任何共价结合的载体，当此种前体药物被给予哺乳动物患者时，其会在活体内释出本发明的活性母体药物。本发明的前体药物是通过改变存在于化合物中的官能基而制成，其方式是致使这些改变，无论是在例行操作中或在活体内，分裂成母体化合物。前体药物包括本发明的化合物，其中羟基、氨基或氢硫基是结合至任何基团，当本发明之前体药物被给予哺乳动物患者时，该基团会分别地分裂而形成自由态羟基、自由态氨基或自由态氢硫基。前体药物的实施例包括但不限于在本发明化合物中的醇与胺官能基的醋酸酯、甲酸酯及苯甲酸酯衍生物。
＂稳定化合物＂与＂稳定结构式＂是意在表示一种化合物，其足够强健而自反应混合物中留存，分离至有用纯度，及调配成有效治疗剂。本发明是意在具体化表现稳定化合物。
＂治疗有效量＂是意在包括单独本发明化合物的量，或所请求化合物的组合的量，或本发明化合物结合用其它活性成份的量，该量可有效抑制MCP-1或有效治疗或预防病症。
于本文中使用的＂进行治疗＂或＂治疗作业＂是包括在哺乳动物中，特别是在人类中的疾病状态的治疗，且包括：(a)预防该疾病状态发生于哺乳动物中，特别是当此种哺乳动物易患该疾病状态，但尚未被诊断为具有该疾病时；(b)抑制该疾病状态，意即遏制其发展；及/或(c)减轻该疾病状态，意即造成该疾病状态的退化。
于本文中使用以指称特定型式例如＂N-2＂的名称，不应被认为是限制关于具有类似或相同物理与化学特性的任何其它物质，而是应了解这些指称仅只是鉴别符号，其应根据也在本文中提出的特征鉴定信息加以解释。
本发明是提供N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的自由态碱的至少部份结晶型，作为一种新颖物质，特别是呈药学上可接受的型式。于某些优选具体实施方案中，此自由态碱的结晶型是呈实质纯式。此自由态碱的结晶型的优选具体实施方案公开于实施例2中，为E-1、HAC-1、IPA-1、N-2、RPG-3、H0.5-4及H1.75-5型式。
于本文中使用的＂多晶型物＂是指具有相同化学组成但形成晶体的分子、原子及/或离子具有不同空间排列的结晶型。
于本文中使用的＂溶剂合物＂是指分子、原子及/或离子的结晶型，其进一步含有被并入晶体结构式中的一或多种溶剂的分子。在溶剂合物中的溶剂分子可以规则排列及/或非有序排列存在。溶剂合物可含有无论是化学计量或非化学计量的溶剂分子。例如，具有非化学计量的溶剂分子的溶剂合物，可由于溶剂自溶剂合物的部份丢失所造成。
于本文中使用的＂非晶质＂是指不为结晶性的分子、原子及/或离子的固体形式。非晶质固体不会显示明确的X-射线衍射图样。
于本文中使用的＂实质上纯＂，当参考结晶型使用时，是指化合物具有纯度大于90重量％，包括大于90，91，92，93，94，95，96，97，98及99重量％，且也包括等于约100重量％的化合物，以化合物重量为基准。其余物质包括该化合物的其它型式，及/或由于其制备而发生的反应不纯物及/或处理不纯物。例如，N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的结晶型，当通过此时已知且本领域中一般所接受的方式度量时，可被视为实质上纯，因其具有纯度大于90重量％，其中其余小于10重量％的物质包含N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的其它型式，及/或反应不纯物及/或处理不纯物。
结晶型的试样可具有实质上纯相均一性，这显示有优势量的单晶型式及任选的少量一种或多种其它结晶型存在。超过一种结晶型存在于试样中，可通过比如粉末X-射线衍射(PXRD)或固态核磁共振光谱学(SSNMR)的技术测定。例如，在以实验方式度量的PXRD图样与模拟PXRD图样的比较上，额外吸收峰的存在，可表示超过一种结晶型存在试样中。模仿PXRD可由单晶X-射线数据进行计算。参阅Smith，DK，＂用于计算X-射线粉末衍射图样的FORTRAN程序＂，Lawrence放射实验室，Livermore，California UCRL-7196(1963年4月)。
结晶型优选是具有实质上纯相均一性，如通过在以实验方式度量的PXRD图样中，由于不存在于模拟PXRD图样中的额外吸收峰所发生的低于总吸收峰面积的10％，优选是低于5％，且更优选是低于2％所显示的。最优选为一种结晶型，其具有实质上纯相均一性，在以实验方式度量的PXRD图样中的总吸收峰面积，具有由于不存在于模拟PXRD图样中的额外吸收峰所发生的低于1％。
制备结晶型的程序为本领域中已知。结晶型可通过多种方法制备，包括例如自适当溶剂的结晶化作用或再结晶化作用，升华作用，自熔融体的生长，自另一相的固态转变，自超临界流体的结晶化作用，及喷射喷雾。结晶型来自溶剂混合物的结晶化作用或再结晶化作用的技术，包括例如溶剂的蒸发，降低溶剂混合物的温度，将分子及/或盐的过饱和溶剂混合物加入晶种，使溶剂混合物冻干，及添加反溶剂(反萃溶剂)至溶剂混合物中。
这些型式可使用单晶X-射线衍射作特征鉴定与区别，其是以一种型式的单晶在固定分析温度下的单位晶胞与强度度量为基础。单位晶胞与强度分析的详细说明于Stout & Jensen，X-射线结构式测定中提供：实用指南，Macmillan公司，New York(1968)，第3章，其并于本文供参考。或者，原子在结晶格子内空间关系上的独特排列，可根据所发现的部份原子坐标作特征鉴定。参阅Stout & Jensen参考数据，关于结构式分析的部分坐标的实验测定。另一种表现晶体结构式特征的方式是通过粉末X-射线衍射分析，其中是将实验或所发现的衍射分布形态，与代表纯粉末物质的模拟分布形态作比较，两者均在相同分析温度下操作，且关于主题型式的度量值以一系列2θ值和强度进行特征鉴定。
于本文中采用的＂可忽视的重量损失＂一词，当通过TGA作特征鉴定时，是表示纯(未经溶剂化的)结晶型的存在。
于本文中采用的＂可忽视的％吸水率＂一词，当通过水份吸着等温线作特征鉴定时，是表示经测试的型式为非吸湿性。
于本发明的一项具体实施方案中，N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的结晶型，是以实质纯形式提供。此结晶型可被采用于医药组合物中，该组合物可任选包含一种或多种其它经选择的成份，例如选自包括赋形剂、载体及其它不同分子结构式的活性医药成份或活性化学个体之一。
结晶型优选是具有实质上纯相均一性，如通过在以实验方式度量的PXRD图样中，由于不存在于模拟PXRD图样中的额外吸收峰所发生的低于总吸收峰面积的10％，优选是低于5％，且更优选是低于2％所显示的。最优选为一种结晶型，其具有实质上纯相均一性，在以实验方式度量的PXRD图样中，由不存在于模拟PXRD图样中的额外吸收峰所发生的面积低于总吸收峰面积的1％。
于另一项具体实施方案中，提供一种组合物，其基本上由N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的结晶型组成。此项具体实施方案的组合物可包含至少90重量％的该型式，以其在组合物中的重量为基准。
反应不纯物及/或处理不纯物的存在可通过本领域中已知的分析技术测定，例如层析、核磁共振光谱学、质谱法或红外线光谱学。
结晶型可通过多种方法制备，包括例如自适当溶剂中的结晶化作用或再结晶化作用，升华作用，自熔融体的生长，自另一相的固态转变，自超临界流体的结晶化作用，及喷射喷雾。结晶型自溶剂混合物的结晶化作用或再结晶化作用的技术，包括例如溶剂的蒸发，降低溶剂混合物的温度，将分子及/或盐的过饱和溶剂混合物加入晶种，使溶剂混合物冻干，及添加反溶剂(反萃溶剂)至溶剂混合物中。可采用高通过量结晶化作用技术，以制备结晶型，包括多晶型物。
药物的晶体，包括多晶型物，制备方法，及药物晶体的特征鉴定，于药物的固态化学，S.R.Byrn，R.R.Pfeiffer及J.G.Stowell，第2版，SSCI，West Lafayette，Indiana(1999)中有过讨论。
关于采用溶剂的结晶化技术，一种或多种溶剂的选择，典型地是依一种或多项因素而定，比如化合物的溶解度、结晶化技术及溶剂的蒸气压。可采用溶剂的组合，例如可使化合物溶解在第一种溶剂中而得到溶液，接着添加反溶剂，以降低化合物在溶液中的溶解度，且获得晶体的形成。＂反溶剂＂为其中化合物具有低溶解度的溶剂。制备晶体的适当溶剂包括极性与非极性溶剂。
在一种制备晶体的方法中，是将N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺于适当溶剂中悬浮及/或搅拌，而得浆液，可将其加热以促进溶解。于本文中使用的＂浆液＂一词是指自由态碱的饱和溶液，其也可含有额外数量的化合物，而得到于特定温度下的化合物与溶剂的不均匀混合物。关于此点的适当溶剂包括例如极性非质子性溶剂与极性质子性溶剂，及其中两种或多种的混合物，如本文中所公开的。
可将籽晶添加至任何结晶化作用混合物中，以促进结晶化作用。正如本领域技术人员所了解的，使用晶种是作为一种控制特定结晶型生长的方式，或作为一种控制结晶性产物粒子大小分布的方式。因此，所需要晶种量的计算，是依可采用晶种的大小与平均产物粒子的所需大小而定，比如在＂批次结晶器的程序化冷却＂，J.W.Mullin与J.Nyvlt，化学工程科学1971，26，369-377中所述的。一般而言，是需要小尺寸晶种，以有效地在批次中控制晶体的生长。小尺寸晶种可通过较大晶体的筛选、研磨或微粉化，或通过溶液的微结晶化作用产生。应小心的是晶体的研磨或微粉化不会造成自所要结晶型的结晶性方面的任何改变(即改变成非晶质或另一种多晶型物)。
经冷却的混合物可于真空下过滤，且可将经分离的固体用适当溶剂洗涤，比如冷的再结晶作用溶剂，并于氮吹气下干燥，而得所要的结晶型。经分离的固体可通过适当光谱法或分析技术分析，比如SSNMR、DSC、PXRD或其类似方式，以确保产物的优选结晶型形成。所形成的结晶型通常以大于约70重量％的分离产率，但优选是大于90重量％的量生成，以最初被用于结晶化作用程序中的N-((1R，2S，5R)-
5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的重量为基准。若必要，此产物可经共研磨或通过网目筛网，以去除产物团块。
结晶型可直接从用于制备N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的最后处理步骤的反应介质中制得。这可例如通过在最后处理步骤中采用自由态碱可自其中结晶的溶剂或溶剂混合物达成。或者，结晶型可通过蒸馏或溶剂添加技术获得。供此项目的使用的适当溶剂，包括本文中所述的任何溶剂，包括质子性极性溶剂，比如醇类，及非质子性极性溶剂，比如酮类。
作为一般指引，可将反应混合物过滤以移除任何不期望的不纯物、无机盐等，接着以反应溶剂或结晶化作用溶剂洗涤。可使所形成的溶液浓缩，以移除过量溶剂或气态组份。若采用蒸馏，则所收集馏出物的最后量可以改变，依工艺因素而定，包括例如容器大小、搅拌能力等。作为一般指引，在进行溶剂置换之前，可使反应溶液蒸馏至原先体积的约1/10。可根据标准工艺技术，将反应物取样与检测，以测定反应的程度与重量％产物。若需要，可添加或移除额外的反应溶剂，以使反应浓度达最佳化。最后浓度优选是被调整至约50重量％，此时通常形成浆液。
优选可直接添加溶剂至反应容器中，而无需蒸馏反应混合物。供此项目的使用的优选溶剂，是可最后参与结晶晶格中的溶剂，如上文关于溶剂交换所讨论的。虽然最后浓度可依所要的纯度、回收等而改变，但自由态碱在溶液中的最后浓度优选为约4％至约7％。可将反应混合物在溶剂添加之后搅拌，且同时温热。为为说明的目的，可将反应混合物搅拌约1小时，同时温热至约70℃。反应优选是进行热过滤，并用反应溶剂、所添加的溶剂或其组合进行洗涤。可添加籽晶至任何结晶化作用溶液中，以引发结晶化作用。
本文中所述的各种型式可通过利用本领域技术人员已知的各种分析技术进行彼此区别。此种技术包括但不限于粉末X-射线衍射(PXRD)及/或热重分析(TGA)。具体地说，这些型式可使用单晶X-射线衍射作特征鉴定与区别，其是以一种特定型式的单晶在固定分析温度下的单位晶胞度量为基础。单位晶胞的详细说明提供于Stout & Jensen，X-射线结构式测定：实用指南，Macmillan公司，New York(1968)，第3章中，其并于本文供参考。或者，原子在结晶格子内空间关系方面的独特排列，可根据所发现的部分原子坐标作特征鉴定。另一种表达晶体结构特征的方式是通过粉末x-射线衍射分析，其中是将衍射分布形态，与代表纯粉末物质的模拟分布形态比较，两者均在相同分析温度下操作，且主题型式的度量值用一系列2θ值(通常为四个或更多个)进行表征。
可使用表征此型式特征的其它方式，比如固态核磁共振(SSNMR)光谱、示差扫描卡计法(DSC)、热记录术及结晶性或非晶质型态学的总体检查。这些参数也可合并使用，以表征主题型式的特征。
本领域技术人员已知，获得X-射线衍射图样可具有度量误差，该误差是依所采用的度量条件而定。特定言之，一般已知X-射线衍射图样中的强度可能波动，依所采用的度量条件及晶体的形状或型态学而定。应进一步了解的是，相对强度也可依实验条件而改变，因此准确的强度等级不应纳入考虑。此外，关于常规X-射线衍射图样衍射角度的度量误差通常为约0.2o或更低，优选为约0.1o(如后文所讨论)，且此种程度的度量误差应被纳入考虑，比如关于前文所提及的衍射角度。因此，应了解的是，本发明的结晶型并不限于提供X-射线衍射图样完全相同于本文所公开的附图中所描绘X-射线衍射图样的结晶型。任何提供X-射线衍射图样基本上相同于附图中所公开的图样的结晶型，落在本发明的范围内。确定X-射线衍射图样实质同一性的能力，是在本领域技术人员已知的技术范围内。
合成
图式1
酮酯V的水解成酮酸VI
Figure A200780032859D00591
使酮酯V水解成其相应的酮酸VI，其方式是使V悬浮于部分可与水溶混的有机溶剂中，比如非环状或环状醚类，包括THF、2-甲基THF、1，2-二甲氧基乙烷、1，4-二氧六环，THF为优选的并添加含水碱，比如碱金属氢氧化物MOH的水溶液，其中M为Li、Na或K，1N NaOH是为优选的碱，在-5℃至+5℃下。然后，将两相混合物于≦5℃下搅拌至少一小时。碱添加与反应时的低温是重要的，以使在邻近酯基的碳上的差向异构化作用降至最低。接着添加水不可溶混的溶剂，优选为甲基叔丁基醚，并分离液层。然后，将产物从水溶液转移返回至有机溶剂中，优选为二氯甲烷，其方式是以酸，优选为3N HCl，调整pH，并将VI于溶液中使用于下一步骤。
图式2
酮酸VI的缩酮化成缩酮酸VII
Figure A200780032859D00601
VI的溶液，优选是在二氯甲烷中，是通过蒸馏而被交换成非吸湿性较高沸点溶剂，比如甲苯、三氟甲苯、二甲苯，较高沸点酯类，比如醋酸正-丁酯或异丁酯，优选为甲苯。然后，添加式HO-Z-OH的二醇(其中Z是如前文定义)，优选为乙二醇(1.2当量)，接着为催化量(0.5-2M％)的酸，优选为对-甲苯磺酸，并使混合物在大气压力下蒸馏，直到化合物VII的形成达完成为止。产物VII是于冷却至大约70℃后，在添加醋酸乙酯时形成结晶。在进一步冷却至室温后，VII是通过过滤及后续干燥而被分离，呈约70％产率(对于HO(CH2)2OH，R1＝H，R2＝CBz)。
图式3
缩酮酸VII的转变成未经单离的缩酮异氰酸酯VIII，接着转变成缩酮酰胺IX，经由酸活化作用/叠氮化作用、Curtius重排及酰化作用
Figure A200780032859D00611
首先使酮酸VII活化，其方式是在下述条件下将其转变成其混合酐，使用三级胺类，优选为三乙胺，与卤基甲酸酯，优选为氯甲酸异丁酯，在无水溶剂中，比如甲苯、三氟甲苯、1，2-二氯乙烷、1-氯基丁烷、二甲苯，优选为无水甲苯，通过将卤基甲酸酯添加至VII与三烷基胺的预先冷却溶液中。关于混合酐形成的优选温度为-10℃至0℃。在大约30分钟后，添加碱金属叠氮化物的水溶液，优选为～30重量％的叠氮化钠，与相转移催化剂，比如四烷基铵盐，优选为四丁基溴化铵(5摩尔％)，并将两相混合物在-10℃至0℃下剧烈搅拌约1小时。然后，分离有机相，并使所形成的酰基叠氮化物溶液干燥，4
Figure A200780032859D0078114636QIETU
分子筛为优选干燥剂。异氰酸酯VIII当场用羧酸进行的Curtius重排及同时捕获、以形成缩酮酰胺IX的反应，是用下述方式达成的，首先将羧酸，优选为醋酸，及其相应的酐，优选为醋酸酐，添加至酰基叠氮化物的无水溶液中，接着，将混合物在80-90℃下加热1-4小时。酐搭配羧酸的使用是重要的，以使不纯物形成降至最低。在通过蒸馏部分移除溶剂与羧酸后，产物被冷却至室温以形成结晶。IX通过过滤与干燥而被分离，呈65-78％产率(对于Z＝-(CH2)2-，R1＝H，R2＝CBz，R10＝Me)。
图式4
将缩酮酰胺IX水解成酮酰胺X
化合物IX的缩酮水解成酮酰胺X是通过将IX在有机、水可溶混的溶剂(优选为丙酮)中的溶液，与强酸的水溶液，优选为1N HCl，加热2-4小时而达成的。关于水解作用的优选温度为45-55℃。在移除丙酮后，将产物萃取至二氯甲烷中，其通过蒸馏被交换至醋酸乙酯中。在冷却至室温时产物X自醋酸乙酯中形成结晶，且通过过滤与干燥而被分离，呈85-90％产率(对于HO(CH2)2OH，R1＝H，R2＝CBz，R10＝Me)。
图式5
将酮酰胺X还原胺化成氨基酰胺XI
Figure A200780032859D00622
于X在优选为二氯甲烷中的无水溶液内，添加一级或二级胺，优选为叔丁基胺(5当量)，接着为路易斯酸，优选为TiCl2(OPr-i)2(1.2当量)，于-20℃至0℃下。使所形成的亚胺混合物温热至10-20℃，并将硼烷(1.1-1.2当量)以与二甲硫醚或THF(优选为二甲硫醚)的复合物添加。将反应混合物搅拌4-6小时，然后，添加以水饱和的醋酸乙酯。通过过滤移除钛盐，且产物XI以其与含水酸(优选为1N HCl)的盐，自有机滤液萃取至水中。接着，添加二氯甲烷，并将含水碱，优选为浓氢氧化铵，添加至搅拌的两相混合物中，直到pH被调整至8.0-8.5为止。然后，将富含产物的二氯甲烷相分离，并以氯化铵水溶液洗涤两次，以移除不想要的XI反式异构体，且最后使用水。二氯甲烷通过蒸馏交换成醋酸乙酯中，且在冷却及庚烷添加时XI自醋酸乙酯中形成结晶。XI通过过滤与干燥被分离，呈65-70％产率(对于R1＝H，R2＝CBz，R8＝H，R9＝叔-Bu，R10＝Me)。
图式6
吡咯烷氧代胺XI的去除保护
Figure A200780032859D00631
胺保护基R2的移除，其中R2为CO2CH2Ph或CH2Ph，是通过使XI在醇、优选为甲醇中的溶液，于Pd催化剂存在下、优选为5重量％Pd/C，进行氢化数小时而达成的。然后，通过过滤移除催化剂，且甲醇通过蒸馏交换成醋酸乙酯。在冷却及庚烷添加时产物XII自醋酸乙酯中形成结晶，其通过过滤与干燥而被分离，呈90-95％产率(对于R1＝H，R2＝CBz，R8＝H，R9＝叔-Bu，R10＝Me)。
图式7
胺XII与带有离去基团的杂环HET-LG的偶合
Figure A200780032859D00641
化合物I的合成是通过使吡咯烷酮胺XII与带有离去基团的杂环，于叔胺存在下，优选为三乙胺，在可相容溶剂中偶合而达成的，该溶剂比如二氯甲烷、异丙醇或乙腈，二氯甲烷为优选。因此，将所有成份合并，并使溶液在室温下反应24-48小时。也可采用先前制成的粗制杂环族成份的溶液。在反应完成后，将二氯甲烷以稀酸、优选为5重量％醋酸水溶液洗涤，分离水相，然后，将二氯甲烷通过蒸馏交换成醋酸乙酯。产物I，其在冷却及庚烷添加时自醋酸乙酯中形成结晶，通过过滤与干燥而分离，呈75-80％产率(对于R1＝H，R8＝H，R9＝叔-Bu，R10＝Me，HET＝6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基)。
关于本发明的方法，起始物质为市购可得的或可容易地由本领域技术人员制备。溶剂、温度、压力、具有所要基团的起始物质及其它反应条件，可容易地由本领域技术人员按适当方式选择。此方法可按比例增大，比如用商业化生产设备，以制备较大量的式I化合物。
【实施例】
实施例
下述实施例说明本发明化合物与起始物质的具体实施方案，而非意欲限制权利要求的范围。
按适当方式，反应于干燥氮(或氩)的气氛下进行。关于无水反应，是采用得自EM的Dri-Solv溶剂。关于其它反应，
是使用试剂级或HPLC级溶剂。除非另有述及，否则全部市购所得的试剂均以接收时的情况使用。
LC/MS度量值是使用Shimadzu HPLC/Waters ZQ单一四极质谱仪混合系统获得。关于感兴趣吸收峰的数据，是自正模式电喷雾离子化作用报告的。NMR(核磁共振)光谱通常是于Bruker或JEOL 400MHz与500MHz仪器上、在所指示的溶剂中获得。所有化学位移是以溶剂共振作为内标的四甲基硅烷的ppm距离作报告。1H-NMR光谱数据通常报告如下：化学位移，多重性(s＝单重峰，brs＝宽单峰，d＝二重峰，dd＝二重峰的二重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，sep＝七重峰，m＝多重峰，app＝表观)，偶合常数(Hz)及积分。
本领域技术人员将了解本文在整个说明书中所使用的标准缩写。为了易于参考，缩写包括但未必受限于：sat.＝饱和，HPLC＝高性能液相层析法，AP＝面积百分比，KF＝Karl-Fischer，RT＝室温，mmol＝毫摩尔，HRMS＝高分辨质谱，TBTU＝四氟硼酸O-苯并三唑-2-基-N，N，N′，N′-四甲基脲，MTBE＝TBME＝叔丁基甲基醚，EDAC＝N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐，EDC＝N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺，TEA＝三乙胺，DPPA＝叠氮化二苯基磷酰，IPA＝异丙醇，TFA＝三氟醋酸，DCM＝二氯甲烷，THF＝四氢呋喃，DMF＝N，N-二甲基甲酰胺，BOP＝六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲氨基)磷，EtOAc＝醋酸乙酯，DMSO＝二甲亚砜，℃＝摄氏度数，eq＝当量或数当量，g＝克或数克，mg＝毫克或数毫克，mL(或ml)＝毫升或数毫升，h＝小时或数小时，M＝摩尔浓度，N＝当量浓度，min＝分钟或数分钟，MHz＝百万赫兹，TLC＝薄层层析法，v/v＝体积对体积比例，及ca.＝约。
＂α＂、＂β＂、＂R＂及＂S＂是为本领域技术人员所熟悉的立体化学名称。
实施例1
N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺
Figure A200780032859D00651
实施例1，步骤1：使(1R，2S，5R)-2-苄氧羰基氨基-7-氧代-6-氮-双环并[3.2.1]辛烷-6-羧酸叔丁酯(89.6克，0.24摩尔，参阅：P.H Carter等人，PCT申请WO 2005/021500)溶于醋酸乙酯(1.5升)中，并将所形成的溶液以饱和NaHCO3(2 x 0.45升)与饱和NaCl(1 x 0.45升)洗涤。使溶液脱水干燥(Na2SO4)，然后直接过滤进入3颈3升圆底烧瓶中。将溶液以直接氮注入涤气，然后，在氮大气下装填10％ Pd/C(13.65克)。将烧瓶抽气，且以氢回充填；将其再重复两次。使氢起泡经过此溶液30分钟，接着，将反应物在1大气压H2下搅拌18小时。将烧瓶抽气，以氮回充填，及装填新催化剂(6克10％ Pd/C)。使氢鼓泡经过此溶液30分钟，然后，将反应物于1大气压H2下搅拌18小时。将烧瓶抽气，并以氮回充填。使混合物经过硅藻土过滤；接着，以醋酸乙酯洗涤过滤垫。以乙腈(0.3升)稀释滤液(～1.6升EtOAc体积)，且相继装填L-N-Cbz-甲硫胺酸(68克，0.24摩尔)、TBTU(77克，0.24摩尔)及N，N-二异丙基乙胺(42毫升，0.24摩尔)。将反应物在室温下搅拌4小时，于此段时间内，其是从悬浮液改变成透明溶液。通过添加饱和NH4Cl(0.75升)与水(0.15升)使反应淬灭；将混合物以EtOAc(0.75升)再稀释。将液相混合，并分离，且将有机相以饱和Na2CO3(2 x 0.9升)与饱和NaCl(1 x 0.75升)洗涤。使溶液脱水干燥(Na2SO4)，过滤，及在真空中浓缩，而得(1R，2S，5R)-2-((S)-2-(苄氧羰基氨基)-4-(甲硫基)丁酰氨基)-7-氧代-6-氮-双环并[3.2.1]辛烷-6-羧酸叔丁酯，为油状物，将其带至下一步骤，无需进一步纯化。关于主要吸收峰的LC/MS：[M-Boc+H]+＝406.3；[M+Na]+＝528.3.1H-NMR(400MHz，d4-MeOH)：δ 7.36(m，5H)，5.11(s，2H)，4.32(m，1H)，4.2(m，1H)，4.0(m，1H)，2.5-2.7(m，3H)，2.25(m，1H)，2.11(s，3H)，2.05(m，4H)，1.9(m，1H)，1.7(m，2H)，1.54(s，9H).也存在EtOAc[1.26(t)，2.03(s)，4.12(q)]与N，N，N，N-四甲基脲[2.83(s)].
实施例1，步骤2：使(1R，2S，5R)-2-((S)-2-(苄氧羰基氨基)-4-(甲硫基)丁酰氨基)-7-氧代-6-氮-双环[3.2.1]辛烷-6-羧酸叔丁酯的试样(假定为0.24摩尔；参阅先前程序)溶于碘甲烷(1,250克)中，并在室温下搅拌48小时。在真空中浓缩反应物。使残留物溶于二氯甲烷中，及在真空中浓缩。将其再重复两次。使所形成的泥状物溶于二氯甲烷(0.4升)中，并倒入正迅速搅拌的MTBE溶液(4.0升)中。将所形成的黄色固体经由抽气过滤收集，且在高真空下干燥，而得锍盐(179克)。将此物质带至下一步骤，无需进一步纯化。关于主要吸收峰的LC/MS：[M-Me2S+H]+＝458.4；[M]+＝520.4.1H-NMR(400MHz，d4-MeOH)：δ7.35(m，5H)，5.09(s，2H)，4.33(m，1H)，4.28(m，1H)，3.98(m，1H)，3.3-3.45(m，2H)，2.97(s，3H)，2.94(s，3H)，2.78(m，1H)，2.0-2.3(m，4H)，1.7(m，2H)，1.52(s，9H).也存在MTBE[1.18(s)，3.2(s)]与微量的N，N，N，N-四甲基脲[2.81(s)]。
实施例1，步骤3：使得自前一步骤的全部锍盐(假定为0.24摩尔)溶于DMSO(2.0升)中。将所形成的溶液于氮气及室温下搅拌，并分次装填碳酸铯(216克)。将此悬浮液于室温下搅拌3小时，然后过滤，以移除固体。将溶液区分成数份～0.22升，且按下述处理：将反应混合物(～0.22升)以醋酸乙酯(1.5升)稀释，并以水(3 x 0.5升)与盐水(1 x 0.3升)连续洗涤。使有机相脱水干燥(Na2SO4)，过滤，及在真空中浓缩。获得所要的(1R，2S，5R)-2-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-7-氧代-6-氮双环[3.2.1]辛烷-6-羧酸叔丁酯(90.8克，83％)，为微晶性泡沫物，不含四甲基脲不纯物质。关于主要吸收峰的LC/MS：[M-Boc+H]+＝358.4；[M+Na]+＝480.4.1H-NMR(400MHz，d4-MeOH)：δ 7.35(m，5H)，5.12(s，2H)，4.35(m，2H)，4.2(m，1H)，3.6(m，1H)，3.3(m，1H)，2.64(m，1H)，2.28-2.42(m，2H)，2.15(m，1H)，1.7-2.0(m，5H)，1.55(s，9H)。若需要，此物质可通过溶于MTBE(1体积)中，添加至庚烷(3.3体积)中，及收集所形成的沉淀物，而被分离成固体。
实施例1，步骤4：于(1R，2S，5R)-2-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-7-氧代-6-氮双环[3.2.1]辛烷-6-羧酸叔丁酯(108克，0.236摩尔)在THF(1升)中的正在搅拌的溶液内，装填氢氧化锂单水合物(21.74克，0.519摩尔)。慢慢添加水(0.3升)，以致使温度不超过20℃。将反应物在室温下搅拌过夜，且于真空中移除挥发性物质。经由添加1N HCl(450毫升)与NaH2PO4调整pH值至～4。将所形成的白色沉淀物通过过滤收集，并以水(2 x 1升)洗涤。使固体溶于二氯甲烷(1.5升)与水(～1升)中。使有机层脱水干燥(Na2SO4)，过滤，及在真空中浓缩。使残留物溶于EtOAc(0.7升)中，并将所形成的溶液在回流下加热1小时。于冷却至室温后，分离固体，及经由过滤收集。使这些固体通过于异丙醇中再结晶进行纯化，而得所要的(1R，2S，5R)-2-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氧羰基氨基)环己烷羧酸，为白色固体(104.5克，93％产率)。关于主要吸收峰的LC/MS：[M-tBu+H]+＝420.2；[M-Boc+H]+＝376.2；[M+H]+＝476.2.1H-NMR(400MHz，d4-MeOH)：δ 7.35(m，5H)，5.11(s，2H)，4.35(m，2H)，3.71(m，1H)，3.45-3.6(m，2H)，2.99(m，1H)，2.41(m，1H)，2.15(m，1H)，2.0(m，2H)，1.6-1.9(m，4H)，1.46(s，9H).
实施例1，步骤5：于3升圆底烧瓶中，装填(1R，2S，5R)-2-((S)-3-
(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氧羰基氨基)环己烷羧酸(75.5克，0.158摩尔)、EDC·HCl(33.5克，0.175摩尔)、1-羟基苯并三唑(23.6克，0.175摩尔)及二氯甲烷(1升)。将反应物在室温下搅拌2小时，于此段时间内，其从白色悬浮液改变成透明溶液。使氨(气体)鼓泡进入溶液中，直到pH值为强碱性(纸)为止，并将反应物搅拌10分钟；
重复添加此氨，且将反应物再搅拌10分钟。添加水。将有机相以饱和NaHCO3、NaH2PO4及盐水洗涤，然后在真空中浓缩。将残留物以乙腈(0.5升)配成浆液，然后浓缩，获得(1R，2S，5R)-2-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氧羰基氨基)环己烷羧酰胺，为白色固体(75.9克，～100％)，将其使用于下一步骤，无需进一步纯化。关于主要吸收峰的LC/MS：[M-Boc+H]+＝375.3；[M+H]+＝475.4；[M-tBu+H]+＝419.3.1H-NMR(400MHz，d4-MeOH)：δ 7.35(m，5H)，5.11(s，2H)，4.25(m，2H)，3.70(m，1H)，3.6(m，1H)，3.45(m，1H)，2.91(m，1H)，2.38(m，1H)，2.12(m，1H)，1.9-2.05(m，2H)，1.65-1.9(m，4H)，1.46(s，9H).
实施例1，步骤6：将反应以三等份进行，并合并供水溶液处理。于5升3颈圆底烧瓶中，添加(1R，2S，5R)-2-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氧羰基氨基)环己烷羧酰胺(25.3克，53毫摩尔)、乙腈(1.9升)及2.6升水/冰。将混合物搅拌，并冷却至0℃。添加碘苯二醋酸酯(25.77克，80毫摩尔)，且将反应物搅拌2小时；添加另外0.5当量的碘苯二醋酸酯。将反应物搅拌9小时(反应温度<10℃)。于混合物中，添加8当量N，N-二异丙基乙胺与2当量醋酸酐。于接下来的三十分钟内，每十分钟添加4当量N，N-二异丙基乙胺与2当量醋酸酐，直到反应已进行至完成(HPLC)为止。在真空中移除乙腈；自残留物分离出一些固体，及将其通过过滤进行收集。以二氯甲烷(3升，接着1升)萃取其余残留物。相继以水、饱和NaHCO3及盐水洗涤有机相。将所收集的固体，伴随着活性碳(15克)，添加至有机相中。将混合物于40℃下搅拌30分钟，然后过滤，及在真空中浓缩。使残留物溶于EtOAc(1升)中，并将所形成的溶液在75℃下搅拌1小时，然后，使其冷却至室温。分离固体，及通过过滤收集。使此固体通过再结晶进一步纯化：首先，使其溶于0.5升CH2Cl2中，然后在真空中浓缩，接着自1升EtOAc中再结晶；将其重复三次。将得自上述母液的固体使用相同方法再结晶三次。使合并的固体自乙腈(0.7升)中再结晶两次，以提供66克(84％)(1R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸叔丁酯(纯度>99.5％，通过HPLC)。关于主要吸收峰的LC/MS：[M+H]+＝489.4；[M-tBu+H]+＝433.3.1H-NMR(400MHz，d4-MeOH)：δ 7.3-7.4(m，5H)，5.11(s，2H)，4.35(m，1H)，4.15(m，1H)，4.04(m，1H)，3.8(m，1H)，3.6(m，2H)，2.44(m，1H)，2.12(m，1H)，1.87-2.05(m，4H)，1.87(s，3H)，1.55-1.7(m，2H)，1.46(s，9H)。Hofmann重排的立体化学真实性经过此化合物的X-射线晶体结构式分析确认，如图1中所示。
实施例1，步骤7：于(1R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸叔丁酯(100克，0.205摩尔)在二氯甲烷(400毫升)中的溶液内，于-20℃下添加TFA(400毫升)。将反应溶液于室温下搅拌2小时。在减压下移除溶剂与大部份TFA，并将残留物以二氯甲烷(2升)与K2CO3水溶液(2升)稀释。以1N HCl调整pH值至10。将水层以二氯甲烷(3 x 1升)萃取。使合并的有机层以Na2SO4脱水干燥，及浓缩，而得(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-氨基环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯，为油状物(81克，100％产率)。将此胺直接使用于下一步骤，无需进一步纯化。
实施例1，步骤8：将(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-氨基环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(13.3克，34毫摩尔)与3，5-二-叔丁基环己-3，5-二烯-1，2-二酮(7.54克，34毫摩尔)在甲醇(160毫升)中的溶液，于室温下搅拌2小时。使溶液浓缩，并以丙酮(132毫升)与水(33毫升)稀释，接着添加Dowex-50WX8-200(33克)。将反应物在室温下搅拌2小时。通过过滤移除Dowex-50WX8-200，且以二氯甲烷(300毫升)洗涤。使滤液在真空下浓缩，以移除大部份丙酮。将残留物以二氯甲烷(200毫升)稀释，并以NaHCO3水溶液(200毫升)与盐水(200毫升)洗涤。将合并的水层以二氯甲烷(2 x 100毫升)萃取。使合并的有机萃取物以Na2SO4脱水干燥，及浓缩。在EtOAc(100毫升)与己烷(200毫升)中，通过结晶化作用，获得产物(S)-1-((1S，2R)-2-乙酰氨基-4-氧代环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯，为固体(12克，90％产率)。1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 7.99(d，J＝9.35Hz，1H)，7.44(d，J＝8.80Hz，1H)，7.28-7.39(m，5H)，5.03(s，2H)，4.50(s，1H)，4.31(d，J＝12.10Hz，1H)，4.18(q，J＝8.98Hz，1H)，3.27(m，2H)，2.82(dd，J＝15.12，5.22Hz，1H)，2.52-2.65(m，1H)，2.40(dd，J＝12.92，4.67Hz，1H)，2.15-2.31(m，2H)，2.09(d，J＝15.40Hz，1H)，1.90(m，1H)，1.81(s，3H)，1.68(m，1H).m/z：388.46[M+H].
实施例1，步骤9：于TiCl4(1M，在二氯甲烷中，36毫升，36毫摩尔)在二氯甲烷(30毫升)中的溶液内，于0℃下添加Ti(OiPr)4(10.8毫升，36毫摩尔)。然后，将混合物于室温下搅拌10分钟。于(S)-1-((1S，2R)-2-乙酰氨基-4-氧代环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(23.25克，60毫摩尔)在二氯甲烷(600毫升)中的溶液内，于室温下添加叔丁基胺(30毫升，300毫摩尔)，接着，于-50℃下添加TiCl4/Ti(OiPr)4溶液。使反应物慢慢温热至室温。2小时后完成反应(反应于HPLC上监测，其方式是以甲醇中的NaBH4使HPLC试样淬灭)。使溶液冷却至10℃，并添加BH3SMe2(1M，在二氯甲烷中，66毫升，66毫摩尔)。将混合物于室温下搅拌5小时，然后，以Na2CO3水溶液(300毫升)使反应淬灭。滤出沉淀物。分离两液层，及以二氯甲烷(600毫升)萃取水层。将合并的二氯甲烷层以1N HCl(150毫升与15毫升)萃取两次(产物与不想要的反式异构体都在酸性水相中)。使合并的酸性水层以12M NH4OH水溶液(12毫升)中和至pH～8，并以二氯甲烷(600毫升，450毫升)萃取两次(产物在有机相中，而反式异构物仍然在水层中)。将合并的有机层以NH4Cl水溶液洗涤3次(3 x 200毫升)，直到无反式异构物留在有机层中为止。使有机层以Na2SO4脱水干燥，及浓缩。使残留物在EtOAc/己烷(200毫升/800毫升)中通过结晶化作用纯化，而得所要的(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(叔丁基氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(20.80克，78％产率)，为具有99.5％纯度的白色固体。1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm8.76(s，1H)，7.27-7.46(m，6H)，5.03(m，2H)，4.14(m，1H)，4.07(q，J＝8.80Hz，1H)，3.83(m，1H)，3.36(m，2H)，2.91(s，1H)，2.18(m，1H)，2.04(m，1H)，1.78(s，3H)，1.41-1.74(m，7H)，1.04(s，9H).m/z：445.54[M+H].
实施例1，步骤10：于(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(叔丁基氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(43.3克，98毫摩尔)在甲醇(400毫升)中的溶液内，添加10％潮湿Pd/C(4.34克)。将混合物抽气，并使用氢气瓶以氢回充填。将混合物于室温下搅拌5小时。过滤混合物，且以甲醇(500毫升)洗涤，及在真空下浓缩至干。使所获得的粗产物在减压下以IPA(2 x 100毫升)蒸馏，获得产物N-((1R，2S，5R)-2-
((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁基氨基)环己基)乙酰胺，为油状物(30克，98％产率)。将此胺使用于下一步骤，无需进一步纯化。
实施例1，步骤11：于N-((1R，2S，5R)-2-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁基氨基)环己基)乙酰胺(30克，97毫摩尔)在IPA(400毫升)中的溶液内，添加TEA(27毫升，195毫摩尔)与4-氯-6-(三氟甲基)喹唑啉(25克，107毫摩尔；参阅P.H.Carter等人，PCT申请WO 2005/021500)。将混合物于室温下搅拌过夜，然后在70℃下搅拌1小时。使所形成的溶液在减压下浓缩至干。使残留物溶于二氯甲烷(1升)中，并以醋酸溶液I(通过合并700毫升水与22.6毫升冰醋酸制成)(500毫升，200毫升)萃取两次。将酸性水层(pH4-5)以二氯甲烷(2 x 300毫升)萃取。以醋酸溶液II(300毫升；通过合并300毫升水与4毫升冰醋酸制成)萃取二氯甲烷层。使合并的醋酸层以1M NaOH碱化至pH>12，并以二氯甲烷(3 x 700毫升)萃取。使合并的有机层脱水干燥，及浓缩，而得粗产物，为固体(45.6克，93％产率)。使粗产物通过自EtOAc(400毫升)/己烷(900毫升)中再结晶纯化，而得42.86克(88％)具有99.7％纯度的N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺。1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 9.71(1H，宽广s.)，9.02(1H，s)，8.71(1H，d，J＝7.97Hz)，8.59(1H，s)，8.04(1H，dd，J＝8.66，1.79Hz)，7.88(1H，d，J＝8.52Hz)，4.91-5.13(1H，m)，4.30-4.57(1H，m)，3.86(1H，dt，J＝11.89，3.71，3.64Hz)，3.43-3.57(1H，m)，3.35-3.45(1H，m)，3.04(1H，t，J＝3.85Hz)，2.23-2.40(1H，m)，2.05-2.22(1H，m)，1.90-1.98(1H，m)，1.86-1.93(3H，m)，1.50-1.78(5H，m)，0.98-1.15(9H，m).13C-NMR(126MHz，DMSO-d6)δ ppm 171.23，169.35，159.54，156.87，151.17，128.97，128.20，125.76(1C，q，J＝30.52Hz)，121.55(1C，宽广s.)，124.04(1C，q，J＝272.11Hz)，114.31，53.26，52.39，50.81，47.56，45.70，42.77，34.52，32.17，29.14(3C，s)，26.49，23.29，20.30.19F-NMR(471MHz，DMSO-d6)δppm-60.34(s).m/z：507.0[M+H].对C25H33N6O2F3的分析计算值：C，59.27；H，6.56；N，16.59；F，11.25实测值：C，59.44；H，6.64；N，16.74；F，10.99.
实施例1的替代制备
实施例1，替代制备，步骤1：将烘箱干燥过的3颈圆底烧瓶装上干燥搅拌棒、干燥回流冷凝管及两个隔片。在N2下冷却后，于烧瓶中相继装填(1R，2S，5R)-2-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氧羰基氨基)环己烷羧酸(60克，126毫摩尔；参阅实施例1，步骤4)、乙腈(800毫升)、N-甲基吗啉(27.7毫升，252毫摩尔)及二苯基磷酰叠氮(29.9毫升，139毫摩尔)。将反应物在室温下搅拌1小时40分钟，此时，添加2-三甲基硅烷基乙醇(90毫升，631毫摩尔)。将反应设定至加热，并于30分钟后达到回流。使其回流1小时，此时，使其逐渐冷却至50℃，然后以外部冷却使之冷却至15℃。通过添加醋酸(1.734毫升，30.3毫摩尔)使反应淬灭。使反应物在真空中浓缩，接着溶于EtOAc(1.2升)中。将其相继以水(1x0.3升)、饱和NaHCO3(2 x 0.3升)、1N HCl(1 x 0.3升)及盐水(2 x 0.3升)洗涤。使有机相脱水干燥(Na2SO4)，过滤，及在真空中浓缩。在浓缩过程中，固体很早就呈现。在移除挥发性物质后，添加800毫升10％ EtOAc/己烷，并将混合物搅拌过夜。收集固体，及干燥，而产生(1R，3R，4S)-4-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-3-((2-三甲基硅烷基)乙氧羰基氨基)环己基氨基甲酸叔丁酯(60.5克，102毫摩尔，81％产率)。HPLC显示此物质为72％纯，具有两种12％不纯物。将此物质带至下一步骤，无需纯化。稍后，使滤液浓缩，而产生另外的4.38克产物。总产量＝64.9克(87％)。
实施例1，替代制备，步骤2：将干燥500毫升圆底烧瓶装上搅拌棒，并相继装填(1R，3R，4S)-4-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-3-((2-三甲基硅烷基)乙氧羰基氨基)环己基氨基甲酸叔丁酯(60.5克)、CH2Cl2(180毫升)及对-甲苯磺酸单水合物(19.48克，102毫摩尔)在CH2Cl2(120毫升)与甲醇(30毫升)中的溶液。将混合物放置在回转式蒸发器上，并移除大部份CH2Cl2(浴温约20℃)。当混合物开始起泡时，释放真空，并使浴温增加至46℃(温度在44与51℃之间改变；其是通过外部添加冰而被控制)。使混合物在此温度下旋转刚好一小时(在整个期间，可见到气体释出)，然后以EtOAc(1升)稀释。将有机相以0.5N NH4OH(2 x250毫升)洗涤。合并含水洗涤液，且放在一旁。将有机相以饱和NH4Cl(1x 250毫升)与饱和NaCl(1 x 250毫升)洗涤；抛弃这些含水洗涤液。将最初合并的NH4OH洗涤液以EtOAc(1 x 250毫升)反萃取，并将此有机萃取液以饱和NH4Cl(1 x 60毫升)与饱和NaCl(1 x 60毫升)洗涤。合并全部有机萃取液，脱水干燥(Na2SO4)，过滤，及浓缩。使残留物通过洗脱经过SiO2填充柱而纯化(13厘米宽 x 7.5厘米高)。第一种洗脱剂为纯EtOAc(约4升)。第二种洗脱剂为1:9(MeOH中的10％ NH4OH)/CH2Cl2(约5升)。将含有所要产物的级分汇集在一起，并蒸发，而得所要的(1R，2S，5R)-5-氨基-2-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸2-(三甲基硅烷基)乙酯(31.6克，64.4毫摩尔，63％产率)。
实施例1，替代制备，步骤3：于(1R，2S，5R)-5-氨基-2-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸2-(三甲基硅烷基)乙酯(400毫克，0.82毫摩尔)在乙腈(3毫升)中的正在搅拌溶液内，相继装入二异丙基乙胺(315.8毫克，3当量)与溴基乙腈(109.5毫克，1.1当量)。将混合物在40℃下搅拌30小时。在减压下移除溶剂，将残留物通过硅胶管柱层析纯化，使用二氯甲烷中的1.5％甲醇作为洗脱剂。获得所要的(1R，2S，5R)-2-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(氰基甲氨基)环己基氨基甲酸2-(三甲基硅烷基)乙酯，为白色固体(400毫克，93％)。LC/MS实测值[M+H]+＝530.
实施例1，替代制备，步骤4：使(1R，2S，5R)-2-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(氰基甲氨基)环己基氨基甲酸2-(三甲基硅烷基)乙酯(400毫克，0.76毫摩尔)在二氯甲烷(5毫升)中的正在搅拌溶液冷却至0℃，并分次添加m-CPBA(372.6毫克，2.2当量)。将混合物于室温下搅拌1.5小时。添加饱和Na2S2O3溶液(3毫升)与饱和NaHCO3溶液(3毫升)，且将混合物于室温下搅拌0.5小时。以二氯甲烷(80毫升)稀释混合物，以饱和NaHCO3(20毫升)与盐水(20毫升)洗涤。使溶液以无水Na2SO4脱水干燥，过滤，及在真空中浓缩。使所得的残留物溶于甲醇(5毫升)中，并于溶液中添加NH2OH-HCl(262.7毫克，5当量)。将混合物在60℃下搅拌2.5小时。冷却至室温后，以二氯甲烷(80毫升)稀释该混合物，及经过硅藻土垫过滤。将滤液以饱和NaHCO3(2 x 20毫升)洗涤。以二氯甲烷(30毫升)萃取含水洗涤液。合并二氯甲烷层，并以盐水(30毫升)洗涤。使溶液以无水Na2SO4脱水干燥，过滤，及在真空中浓缩，而得(1R，2S，5R)-2-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(羟氨基)环己基氨基甲酸2-(三甲基硅烷基)乙酯(350毫克，91％)。LC/MS实测值[M+H]+＝507.
实施例1，替代制备，步骤5：将(1R，2S，5R)-2-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(羟氨基)环己基氨基甲酸2-(三甲基硅烷基)乙酯(350毫克，0.69毫摩尔)在丙酮(5毫升)中的溶液于室温下搅拌16小时。在真空中浓缩混合物。使残留物溶于无水THF(7毫升)中，并冷却至0℃。逐滴添加MeMgBr的溶液(1.1毫升，3M，在乙醚中，5当量)。将混合物于室温下搅拌1.5小时。在0℃下，以水(5毫升)使反应淬灭。将混合物以醋酸乙酯(100毫升)稀释，且经过硅藻土垫过滤。将滤液以盐水(30毫升)洗涤。使溶液以无水MgSO4脱水干燥，过滤，及在真空中浓缩。使残留物溶于2毫升乙腈中，并添加1毫升CS2。将混合物于室温下搅拌1小时。移除溶剂，且使粗产物通过硅胶管柱层析纯化，使用二氯甲烷中的1.5％甲醇作为洗脱剂，以提供所要的(1R，2S，5R)-2-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁基氨基)环己基氨基甲酸2-(三甲基硅烷基)乙酯(160毫克，42％)。LC/MS实测值[M+H]+＝547.
实施例1，替代制备，步骤6：于(1R，2S，5R)-2-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁基氨基)环己基氨基甲酸2-(三甲基硅烷基)乙酯(100毫克，0.183毫摩尔)在二氯甲烷(3毫升)中的正在搅拌的溶液内，装入三氟醋酸(2毫升)。将反应物在室温下搅拌2小时，及在真空中浓缩。使残留物溶于二氯甲烷(50毫升)中，并以饱和NaHCO3(20毫升)洗涤。将水层以二氯甲烷(3 x 30毫升)萃取。合并二氯甲烷层，并以无水Na2SO4脱水干燥，过滤，及在真空中浓缩，而得(S)-1-((1S，2R，4R)-2-氨基-4-(叔丁基氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(66毫克，90％)。LC/MS实测值[M+H]+＝403.
实施例1，替代制备，步骤7：于(S)-1-((1S，2R，4R)-2-氨基-4-(叔丁基氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(22毫克，0.055毫摩尔)在二氯甲烷(2毫升)中的溶液内，相继装入三乙胺(11.1毫克，2当量)与醋酸酐(6.1毫克，1.1当量)。将反应物在室温下搅拌1.5小时，以二氯甲烷(50毫升)稀释，并以饱和NaHCO3(20毫升)洗涤。使有机相以无水Na2SO4脱水干燥，过滤，及在真空中浓缩，而得(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(叔丁基氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(22毫克，90％)。LC/MS实测值[M+H]+＝445.
实施例1，替代制备，步骤8：于(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(叔丁基氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(22毫克，0.05毫摩尔)在甲醇(2毫升)中的溶液内，添加Pd(OH)2(20毫克50％潮湿催化剂)。将烧瓶抽气，并自氢气球以氢回充填。将混合物于室温下搅拌1小时，且通过过滤移除催化剂。使滤液在真空中浓缩，以提供N-((1R，2S，5R)-2-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁基氨基)环己基)乙酰胺(13毫克，85％)。LC/MS实测值[M+H]+＝311.
实施例1，替代制备，步骤9：于N-((1R，2S，5R)-2-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁基氨基)环己基)乙酰胺(70毫克，0.225毫摩尔)在异丙醇(3毫升)中的溶液内，添加4-氯基-6-(三氟甲基)喹唑啉(63毫克，1.2当量)与三乙胺(56.9毫克，2.5当量)。将混合物于室温下搅拌1.5小时。于减压下移除溶剂。使残留物用制备HPLC纯化，以提供标题化合物，为其双-TFA盐(110毫克，67％)。LC/MS实测值[M+H]+＝507.
实施例1的第2个替代制备
Figure A200780032859D00751
实施例1，第2个替代制备，步骤1a：于氢化器中，添加(7R，8S)-8-((S)-1-苯基-乙氨基)-1，4-二氧杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯4-甲苯磺酸盐1A(1417克，2.8摩尔，参阅：WO2004098516，类似美国专利6,835,841制成)、乙醇(200标准纯度(proof)，11.4升)及10％ Pd/C催化剂(50％潮湿，284克)。将混合物以氮惰性化，然后，以氢气(45psig)加压，及在约40℃下激烈搅拌，直到起始物质被消耗为止(HPLC)。使此悬浮液冷却，以氮气吹扫，并趁惰性化时，通过过滤移除催化剂。将用过的催化剂以乙醇(4.3升)洗涤。合并滤液与洗涤液，及在真空下浓缩至体积为2-3升，同时保持批料在40℃-60℃之间。添加醋酸异丙酯(5升)，并使混合物浓缩至体积为～2升，直到移除大部分乙醇(<0.5％)为止，且残留水份含量为<1,000ppm。将批料体积通过添加醋酸异丙酯调整至～7.5升。将混合物加热至80℃，直到透明为止，接着冷却至65℃-70℃。添加1的籽晶(5克)，及使批料冷却至50℃，历经2小时，然后再冷却至20℃，历经4小时，并保持～10小时。过滤所形成的浆液，且以醋酸异丙酯(2升)洗涤滤饼。使产物于真空及～35℃下干燥，直到使挥发性物质减至低于～1％(LOD)为止。获得(7R，8S)-8-氨基-1，4-二氧杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯4-甲苯磺酸盐1，为白色结晶性固体(936克，83％产率；HPLC纯度：99.8％)。1H-NMR：(300MHz，CDCl3)8.14-7.89(brs，3H)，7.75(d，J9.0Hz，2H)，7.15(d，J8.0Hz，2H)，4.22-4.04(m，2H)，4.01-3.77(m，4H)，3.55-3.43(m，1H)，3.20-3.13(m，1H)，2.40-2.27(m，4H)，2.21-1.94(m，2H)，1.81-1.51(m，3H)，1.23(t，J 7.0Hz，3H)；HPLC：Waters Xterra MS C184.6毫米 x 150毫米内径，3.5微米粒子大小，0.05％ NH4OH(5％ ACN，95％ H2O，溶剂A)，至0.05％ NH4OH(95％ ACN，5％ H2O，溶剂B)，5％B至20％B，在10分钟内，改变至95％B，在25分钟内，然后改变至5％B，在1分钟内；11.1分钟(氨基酯1)。
Figure A200780032859D00761
实施例1，第2个替代制备，步骤1b：将(7R，8S)-8-氨基-1，4-二氧杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯4-甲苯磺酸盐1(450.1克；已知化合物的还原性去除保护的产物-参阅R.J.Cherney，WO 2004/098516与G.V.Delucca &S.S.Ko，WO 2004/110993)与1-乙基-3-(3-二甲基-氨基-丙基)碳化二亚胺盐酸盐(236.3克)、1-羟基苯并三唑水合物(171.9克)、N-苄氧羰基-L-甲硫胺酸(333.4克)及乙腈(3.1升)合并。向此经搅拌的混合物中，在低于30℃下添加三乙胺(249.5克)。于反应完成(HPLC)时，将混合物以醋酸乙酯(8.2升)稀释，并以25％碳酸氢钾水溶液(2 x 4.5升)、接着以水(4.5升)洗涤。分离有机相，及在减压下浓缩，获得(7R，8S)-8-((S)-2-苄氧羰基氨基-4-甲硫基-丁酰基氨基)-1，4-二氧杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯2的溶液(1.4升)。添加碘甲烷(2.39千克)，使容器隔离光线，并使混合物在缓慢搅拌下保持约24小时。向该浓稠黄色沉淀物中，添加甲基叔丁基醚(2.7升)，且使混合物保持约1小时。通过过滤分离产物，及将滤饼以甲基叔丁基醚(2 x 1.4升)洗涤，然后在真空下干燥，产生碘化[(S)-3-苄氧基-羰基氨基-3-((7R，8S)-7-乙氧羰基-1，4-二氧杂-螺[4.5]癸-8-基胺甲酰基)-丙基]-二甲基锍3(671.4克，～94％产率)，为灰白色固体(HPLC纯度99.9％)。
Figure A200780032859D00771
实施例1，第2个替代制备，步骤2：将锍盐3(619.4克)与碳酸铯(416.8克)及无水二甲亚砜(6.2升)在装有洗气器的反应器中合并，以中和挥发性硫化物。保持剧烈搅动，直到获得完全转化(HPLC)为止。添加醋酸乙酯(12.4升)，接着加20％盐水(3升)。分离有机相，以盐水(2 x 3升)洗涤两次，并蒸发，获得(7R，8S)-8-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代-吡咯烷-1-基)-1，4-二氧杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯4在醋酸乙酯中的溶液(～0.8升)。添加丙酮(2.55升)，接着加0.5M盐酸水溶液(2.3升)。伴随着良好混合，将溶液加热至50到60℃，直到4完全转化成(1R，2S)-2-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代-吡咯烷-1-基)-5-氧代-环己烷羧酸乙酯5为止(HPLC)。在低于40℃时，使混合物在减压下浓缩，冷却至～30℃，及添加水(4.1升)。使所形成的浆液冷却至5到10℃，并搅拌～1小时。过滤产物，且以水(2 x 2.5升)洗涤滤饼。在脱液时，使滤饼在真空烘箱中，低于40℃下干燥至恒重，获得环己酮5(272克，70％产率)(HPLC纯度98.7％)。
Figure A200780032859D00772
实施例1，第2个替代制备，步骤3：使环己酮5(100克)悬浮于THF(500毫升)中，并冷却至0℃。在0-5℃下添加1N NaOH(271克)，并将两相混合物在≦5℃下搅拌至少一小时。添加MTBE(500毫升)，且分离各层。将底部水层再一次以MTBE(500毫升)洗涤，并分离各层。将二氯甲烷(500毫升)添加至富含产物的水层中，且使混合物冷却至0℃。保持≦5℃下添加3N HCl(156克)。在搅拌至少10分钟后，使混合物温热至20-25℃，及分离液层。以二氯甲烷(100毫升)萃取水层。合并有机层，并将溶剂通过蒸馏交换成甲苯。将甲苯溶液体积调整至大约1升，且添加对-甲苯磺酸单水合物(0.24克)。添加乙二醇(16.22克)，并使混合物在大气压力下蒸馏，直到化合物7的形成完成为止，而罐体积为大约500-700毫升。使溶液冷却至大约70℃，并保持大约70℃下添加醋酸乙酯(500毫升)。使混合物冷却，且过滤，而得73克(70％产率)化合物7，(7R，8S)-8-((3S)-3-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸烷-7-羧酸。
Figure A200780032859D00781
实施例1，第2个替代制备，步骤4：于化合物7(147克)在无水甲苯(370毫升)中的浆液内，于15-25℃下添加三乙胺(32.7克)。于25℃下搅拌10-15分钟后，在浆液变成溶液后，使烧瓶冷却至-10℃，并在-10o-0℃下添加氯甲酸异丁酯(44.1克)。将混合物在-10o-0℃下搅拌约30分钟。在-10o-0℃下添加叠氮化钠(42克)与四丁基溴化铵(5.2克)在水(130毫升)中的溶液。将两相浆液激烈搅拌至少一小时，并添加甲苯(1750毫升)，接着加水(300毫升)。将两相搅拌至少10分钟，且分离上方有机层，及以4
Figure A200780032859D0078114636QIETU
分子筛干燥。添加醋酸酐(76毫升)与醋酸(28毫升)，并将溶液加热至80-90℃，历经1-4小时，直到通过HPLC侦测到<2AP的中间体9为止。使溶剂在大气压下部份蒸馏出去，至最初体积的大约三分之二，使溶液冷却至环境温度，且将所形成的浆液搅拌16小时。慢慢添加庚烷(350毫升)，并将浆液搅拌1小时。过滤固体，以甲苯/庚烷4:1(300毫升)洗涤，及干燥，而得109克(78％产率)化合物10，((3S)-1-((7R，8S)-7-乙酰氨基-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯。
Figure A200780032859D00791
实施例1，第2个替代制备，步骤5：于化合物10(109克)在丙酮(760毫升)中的溶液内，装入1N HCl(760毫升)。将混合物加热至50℃，历经2.5小时。在减压下蒸馏出丙酮，并将产物以二氯甲烷1 x 1升与1 x 0.5升萃取两次。合并二氯甲烷层，且将二氯甲烷通过蒸馏交换成醋酸乙酯，直到锅上的沸点达到78℃为止，及最后体积为大约10毫升/克化合物10输入量。使醋酸乙酯浆液冷却至环境温度，搅拌16小时，并过滤固体，且以醋酸乙酯(400毫升)洗涤。使固体干燥，而得84克(87％产率)化合物11，((3S)-1-((1S，2R)-2-乙酰氨基-4-氧代环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯。
Figure A200780032859D00792
实施例1，第2个替代制备，步骤6：TiCl2(OPr1)2试剂是通过将Ti(O1Pr)4(11.5毫升)，在5-10℃下，添加至1M TiCl4在二氯甲烷中的溶液(39毫升)内，且随后于环境温度下搅拌15分钟而预先形成的。使化合物11(25克)溶于二氯甲烷(500毫升)中，且在室温下添加叔丁基胺(34毫升)。10分钟后，使溶液冷却至-25到-20℃，及在温度低于-20℃下添加预先形成的钛试剂溶液。使混合物温热至环境温度，并将其搅拌1小时。采取试样，通过以甲醇中的硼氢化钠的微小淬灭，以确认完成亚胺形成(醇类不存在显示起始酮11的完全消耗)。然后，在0-5℃下添加硼烷硫化二甲烷(7.0毫升)，并使反应混合物温热至环境温度，且搅拌至少5小时。在减压下部分蒸发二氯甲烷(约一半)，并在30-60分钟内添加潮湿醋酸乙酯(300毫升，通过将醋酸乙酯与水搅拌而预先形成)。将所形成的浆液搅拌至少4小时，过滤固体，及以二氯甲烷洗涤数次，直到不超过5M％产物留在滤饼中为止。合并滤液与洗涤液，添加1N HCl(200毫升)，并将两相混合物搅拌至少30分钟(～20分钟后，气体释出停止)。分离富含产物的水层(上层相)，并添加二氯甲烷(500毫升)。将浓氢氧化铵添加至经搅拌的两相混合物中，直到使pH值调整至8-8.5(～15毫升)为止。分离有机相，且以14重量％氯化铵2 x 100毫升洗涤，以移除化合物12的不想要的反式异构体，及最后以水(25毫升)洗涤。将二氯甲烷于常压下通过蒸馏交换成醋酸乙酯，直到锅上的沸点达到78℃为止，且最后体积为大约5毫升/克化合物11输入量(～140毫升)。使溶液冷却至环境温度。在40-50℃下慢慢添加庚烷(250毫升)，且化合物12开始结晶。将浆液在室温下搅拌3小时，并过滤固体，以庚烷(100毫升)洗涤，及干燥，而得20.1克(70％产率)化合物12，((3S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(叔丁基氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯，为白色绒毛状结晶。
Figure A200780032859D00801
实施例1，第2个替代制备，步骤7：使化合物12(20克)溶于甲醇(400毫升)中，并添加5％Pd/C催化剂(1.8克，9重量％)。使混合物在25℃和25psig下氢化3小时。通过过滤移除催化剂，且将甲醇通过连续蒸馏交换成醋酸乙酯。在冷却时，使产物自醋酸乙酯(160毫升)中结晶。于25℃下添加庚烷(160毫升)，将浆液搅拌1小时，及过滤产物，以庚烷洗涤，并干燥，而得12.8克(94％产率)化合物13，N-((1R，2S，5R)-2-((3S)-3-氨基-2-氧代-1-吡咯烷基)-5-(叔丁基氨基)环己基)乙酰胺。
Figure A200780032859D00811
实施例1，第2个替代制备，步骤8：使6-(三氟甲基)-4-喹唑啉醇14(5克；参阅P.H Carter等人，PCT申请WO 2005/021500)悬浮于二氯甲烷(100毫升)中。添加N，N-二异丙基乙胺(4.2毫升，1.05当量)与DMF(0.4毫升，0.2当量)。然后，于冷却下，将草酰氯(3.0毫升，1.5当量)在20-25℃下添加至经搅拌的浆液中(放热性添加)。将橘色浆液在30-35℃下搅拌2小时。发现稳定气体释出，历经～1.5小时，此时，浆液变成橘色溶液。冷却至20℃后，在剧烈搅动下，将反应溶液逐滴添加至20重量％K2HPO4水溶液(50毫升)中，并有气体释出。分离下层有机相，并以20重量％K2HPO4水溶液(50毫升)再一次洗涤。在16小时内，将该有机溶液本身使用于下一步骤。
实施例1，第2替代制备，步骤8：于15在二氯甲烷中的溶液(22毫升，5.5毫摩尔)内，添加固体13(1.55克，5毫摩尔)，并将混合物在室温下搅拌，直到固体溶解为止。添加三乙胺(1.4毫升，11毫摩尔)，且将混合物于环境温度下搅拌24小时。添加水(10毫升)，将两相搅拌10分钟，及分离有机相。将二氯甲烷通过连续蒸馏交换成醋酸乙酯，直到锅上的沸点达到78℃为止，及最后体积为大约10毫升/克化合物13输入量(～15毫升)。使浆液冷却至环境温度，慢慢添加庚烷(15毫升)，及将浆液搅拌16小时。过滤固体，以庚烷/醋酸乙酯1:1(5毫升)洗涤，并干燥，而得1.83克(72％产率)N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的米黄色结晶(型式N-2，通过XRD)，实施例1。
实施例2
N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的结晶型
N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺自由态碱的各种结晶型，是按下述方法进行制备与特征鉴定的。
关于特征鉴定各型式的程序
单晶数据
数据在Bruker-Nonius(BRUKER AXS公司，5465 East CherylParkway Madison，WI 53711 USA)CAD4序列衍射计上收集。单位晶胞参数是经过25个高角度反射的实验衍射计设定的最小平方分析获得。强度是使用Cu Kα放射(λ＝1.5418
Figure A200780032859D0078114636QIETU
)，在恒温下，以θ-2θ可变扫描技术度量，且仅对Lorentz-极化因子校正。背景计数是在扫描极端处，对一半扫描时间收集。或者，单晶数据是于Bruker-Nonius Kappa CCD 2000系统上，使用Cu Kα放射(λ＝1.5418
Figure A200780032859D0078114636QIETU
)收集。所度量强度数据的转位与处理以在收集程序套装中的HKL2000包装软件(Otwinowski，Z.& Minor，W.(1997)巨分子结晶学，Carter，W.C.Jr & Sweet，R.M.编着(Academic，NY)，第276卷，第307-326页)进行(收集数据集与处理使用的界面：收集：数据集软件，R.Hooft，Nonius B.V.，1998)。或者，单晶数据是于Bruker-AXS APEX2 CCD系统上，使用Cu Kα放射(λ＝1.5418
Figure A200780032859D0078114636QIETU
)收集。所度量强度数据的转位与处理，是以APEX2包装软件/程序套装(APEX2数据收集与处理使用的界面：APEX2使用的手册，v1.27；BRUKER AXS公司，5465 East Cheryl Parkway Madison，WI 53711 USA)进行。
当指明时，晶体是在数据收集期间，于Oxford低温系统的冷流中冷却(Oxford Cryosystems Cryostream冷却器：J.Cosier与A.M.Glazer，J.Appl.Cryst.，1986，19，105)。
结构式是通过直接方法解析，且以所发现的反射为基础，使用以下的任一种精调，SDP(SDP，结构式测定包，Enraf-Nonius，Bohemia NY11716。散射因子，包括f′与f＂，在SDP软件中，是取自＂国际结晶学表＂，Kynoch出版社，Birmingham，England，1974；第IV卷，表2.2A与2.3.1)软件包，伴随着少许局部修正，或结晶学包MAXUS(maXus解决与精修软件套装：S.Mackay，C.J.Gilmore，C.Edwards，M.Tremayne，N.Stewart，K.Shankland.maXus：关于得自衍射数据或SHELXTL4的晶体结构式解决与精修的计算机程序。所导出的原子参数(坐标与温度因子)是经过全矩阵最小平方精调。于精调中被降至最少的函数为∑w(|Fo|-|Fc|)2。R是被定义为∑‖Fo|-|Fc‖/∑|Fo|，而Rw＝[∑w(|Fo|-|Fc|)2/∑w|Fo|2]1/2，其中w为适当加权函数，以所发现强度的误差为基础。差异图是在所有精调阶段下检验。氢是在理想化位置上，以均向性温度因子引进，但无氢参数被改变。
X-射线粉末衍射数据(PXRD)
PXRD数据是使用Bruker C2 GADDS获得。放射为Cu Kα(40KV，50mA)。试样-检测器距离为15厘米。将粉末试样放置在1毫米或较小直径的密封玻璃毛细管中；将毛细管在数据收集期间旋转。数据是对3≦2θ≦35o收集，其中试样曝露时间为至少2000秒。将所形成的二次元衍射弧积分，以产生传统1-次元PXRD图样，具有步阶大小为0.02度2θ，在3至35度2θ的范围内。
示差扫描卡计法(DSC)
DSC实验在TA InstrumentsTMQ1000或2920型中进行。将试样(约2-6毫克)于铝浅盘中称重，且精确地记录至百分之一毫克，并转移至DSC。仪器是以氮气于50毫升/分钟下吹气。
于10℃/分钟加热速率下，在室温与300℃之间收集数据。图形是以吸热峰向下制成。
热重分析(TGA)
TGA实验在TA InstrumentsTMQ500或2950型中进行。将试样(约10-30毫克)置于预先称量皮重的铂浅盘中。试样的重量通过仪器精确地度量，并记录至千分之一毫克。将炉子以氮气在100毫升/分钟下吹气。于10℃/分钟加热速率下，在室温与300℃之间收集数据。
型式的制备与分析
关于这些实施例的单位晶胞数据及其它性质，呈现于表1中。单位晶胞参数得自单晶X-射线结晶学分析。单位晶胞的详细说明可参阅Stout& Jensen，X-射线结构式测定：实用指引(MacMillian，1968)的第3章。
关于实施例2a、b、c、d、e、f、g及h的部分原子坐标，及度量它们的条件呈现于表2-9中。
此外，关于实施例2a、b、c、d、e及f的特性粉末x-射线衍射吸收峰位置(度2θ±0.1)@RT，呈现于表9中，其全部均以高质量图样为基础，以衍射计(Cu Kα)收集，使用旋转毛细管，其中2θ是以NIST其它适当标准物作校准。
最后，图1、2、3、4、5及6分别呈现关于实施例2a、b、c、e、d及f的XRPD图样。图8、10、13、15、17及19分别公开实施例2a、b、c、d、e及f的TGA，而图7、9、12、14、16及18分别公开实施例2a、b、c、d、e及f的DSC。图11公开实施例2b的蒸气吸着等温线。
型式制备，DSC与TGA特征鉴定
实施例2a，型式H0.5-4：使150毫克N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺自由态碱溶于以水饱和的温热醋酸正-丁酯中。添加庚烷，直到发现持续混浊为止。使浆液冷却至室温。型式H0.5-4的特征为每摩尔N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺自由态碱，0.5摩尔水。型式H0.5-4的特征为DSC热解曲线，具有宽广吸热峰，通常是在约室温与约67℃间的范围内开始，与TGA曲线一致；于较高温度下，其它事件可因而发生。型式H0.5-4的特征为TGA热曲线，直到约100℃，具有重量损失通常从0.6％至约1.4％。关于型式H0.5-4的理论重量损失为1.7％，但是，由于不稳定水合物，于干燥时变得部分脱水，并非不寻常。
实施例2b，型式N-2：在77℃下，使1克N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺自由态碱溶于10毫升不含水的EtOAc中。使溶液冷却至70℃。添加10毫克N-2晶种。于浆液中，以注射泵添加18毫升正-庚烷，历经1小时。使浆液从70℃冷却至20℃，历经1小时，并于20℃下搅拌过夜。通过过滤分离固体，以3毫升正-庚烷洗涤，在真空烘箱中，于50℃下干燥过夜。型式N-2为N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺自由态碱，纯净型式(无其它水或溶剂的分子)。型式N-2的特征为DSC热解曲线，通常在约230℃与约232℃之间具有吸热开始，单是熔解，未具有其它转变。型式N-2的特征为TGA曲线，在达到约200℃时，具有可忽略的重量损失，并与单晶结构一致。
实施例2c，型式H1.75-5：将50毫克N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺自由态碱在1毫升水中的浆液激烈搅拌超过16小时。型式H1.75-5的特征为每一摩尔N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺自由态碱，1.75摩尔水。型式H1.75-5的特征为DSC热解曲线，通常在约室温与约70℃之间具有吸热峰开始，与TGA曲线一致；于较高温度下，其它事件可因而发生。型式H1.75-5的特征为TGA曲线，在温度达到约100℃下，具有约4.3％至约5.3％的重量损失。理论重量损失为约5.9％，但是，由于不稳定水合物，于干燥时变得部分脱水，并非不寻常。
实施例2d，HAC-1：使100毫克N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺自由态碱，在80℃下溶于0.1毫升HOAc中。于其中添加0.2毫升t-BuOAc，并使溶液冷却至20℃。蒸发溶液至干。将所形成的固体在庚烷中，于50℃下搅拌15小时，接着冷却至20℃。过滤HAC-1，并于25℃及真空下干燥过夜。型式HAC-1的特征为每一摩尔N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺自由态碱，1摩尔醋酸。型式HAC-1的特征为DSC热解曲线，通常在约100℃下具有吸热开始，与TGA曲线一致；于较高温度下，其它事件可因而发生。型式HAC-1的特征也为TGA曲线，直到约200℃时，具有约15.3％重量损失。理论重量损失为约10.5％，但是，由于较少量高沸点溶剂仍然与固体结合，并非不寻常。在类似此种情况中，PXRD为型式的诊断，但对少量偶发溶剂不敏感。
实施例2e，型式E-1：使50毫克N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺自由态碱溶于<1毫升煮沸的乙醇中。使溶液冷却至室温，并使其慢慢蒸发。型式E-1的特征为每一摩尔N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺自由态碱，1摩尔乙醇。型式E-1的特征为DSC热解曲线，通常在约100℃下具有吸热开始，与TGA曲线一致；于较高温度下，其它事件可因而发生。型式E-1的特征为TGA热曲线，直到约150℃时，具有约7.1％至约7.6％的重量损失。理论重量损失为约8.3％，但是，由于不稳定溶剂合物于干燥时变得部分去溶剂化，这并非不寻常。
实施例2f，RPG-3：使30至40毫克N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺自由态碱溶于2毫升外消旋丙二醇中。添加水，直到发现混浊为止。使溶剂慢慢蒸发至干。型式RPG-3的特征为每一分子N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺自由态碱，1分子R-丙二醇。型式RPG-3的特征为DSC热解曲线，在约70℃下具有吸热开始，与TGA曲线一致，于较高温度下，其它事件可因而发生。型式RPG-3的特征为TGA曲线，直到约110℃时具有约16.4％的重量损失。理论重量损失为约13.1％，但是，由于较少量高沸点溶剂仍然与固体结合，这并非不寻常。在类似此种情况中，PXRD为型式的诊断，但对少量偶发溶剂不敏感。
实施例2g，型式IPA-1：将40毫克N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺自由态碱在<1毫升的异丙醇中配成浆液。将浆液温和加热，以溶解剩余固体。使溶液冷却至室温，并使其慢慢蒸发，直到发现结晶为止。型式IPA-1的特征为每一摩尔N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺自由态碱，1摩尔异丙醇。
表1
单位晶胞参数
Figure A200780032859D00861
表1(续)
单位晶胞参数
 
化合物 Z’ Vm sg dcalc
实施例2a 2 671 P21 1.235
实施例2b 2 669 P21 1.258
实施例2c 4 701 P21 1.274
实施例2d 1 735 P212121 1.279
实施例2e 1 735 P212121 1.249
实施例2f 2 774 P1 1.257
实施例2g 1 773 P212121 1.217
于表1中使用的变量定义于下文：
T＝关于结晶学数据的温度，以摄氏表示(RT为室温，其为约+22℃)
V＝单位晶胞的体积
Z′＝每不对称单位的药物分子数目
Vm＝V(单位晶胞)/(每晶胞的Z药物分子)
sg＝空间群
dcalc＝经计算的晶体密度
表2
关于实施例2a，型式H0.5-4的原子坐标
 
原子 X Y Z 原子 X Y Z
F1 0.1718 0.5612 0.2388 F138 0.9730 0.9700 0.6210
F2 0.1576 0.4167 0.1518 F139 1.0220 0.7300 0.6430
F3 0.1277 0.6827 0.1463 F140 0.9470 0.7710 0.5532
N7 0.3729 0.0177 -0.0187 O137 0.5289 1.1320 0.2702
N9 0.3967 0.3613 0.0716 H10 0.3464 0.3422 0.0601
N11 0.5034 0.5324 0.1275 H16 0.1889 -0.1347 -0.0192
N12 0.1513 -0.3723 -0.0803 H85 0.2780 0.4332 0.1193
N15 0.2070 -0.0340 -0.0258 H88 0.4895 0.3182 0.0357
 
原子 X Y Z 原子 X Y Z
N18 0.4944 0.7660 0.2016 H90 0.2688 -0.4938 -0.1162
O23 0.3677 0.2704 -0.0786 H91 0.2791 -0.3427 -0.1635
O25 0.2371 0.2420 0.0154 H93 0.2277 0.1128 -0.0967
C82 0.2630 0.6176 0.1822 H95 0.3290 -0.0521 -0.1140
C83 0.4281 0.4888 0.1165 H99 0.3760 -0.3135 -0.0574
C84 0.3027 0.5269 0.1466 H100 0.3100 -0.3067 -0.0228
C86 0.3810 0.5754 0.1513 H102 0.5234 0.0450 0.0773
C87 0.4447 0.2515 0.0409 H103 0.4804 0.1033 0.1290
C89 0.2647 -0.3681 -0.1237 H105 0.1184 -0.0766 -0.1500
C92 0.2304 -0.0122 -0.0852 H106 0.1831 -0.0821 -0.1859
C94 0.3163 -0.0776 -0.0729 H110 0.3980 0.9063 0.2542
C96 0.4172 0.7161 0.1933 H112 0.4292 -0.1628 0.0516
C97 0.1821 0.5681 0.1800 H113 0.3692 -0.0449 0.0742
C98 0.3221 -0.2755 -0.0632 H115 0.2715 0.8230 0.2452
C101 0.4735 0.0847 0.0816 H117 0.0540 -0.3914 -0.0071
C104 0.1724 -0.1130 -0.1448 H118 0.1047 -0.5613 -0.0042
C107 0.3915 0.1858 -0.0261 H119 0.0122 -0.5664 -0.0392
C108 0.2116 0.0919 0.0195 H121 0.0157 -0.2070 -0.1065
C109 0.3748 0.8103 0.2276 H122 -0.0438 -0.3568 -0.1418
C111 0.4081 -0.0451 0.0507 H123 0.0156 -0.2818 -0.1762
C114 0.2994 0.7605 0.2220 H126 0.1446 -0.3645 -0.1779
C116 0.0592 -0.4960 -0.0309 H128 0.5835 0.7006 0.1755
C120 0.0087 -0.3106 -0.1338 H130 0.2266 0.0448 0.1189
C124 0.0696 -0.4465 -0.0977 H131 0.1603 -0.0732 0.0701
C125 0.1783 -0.3101 -0.1359 H132 0.1430 0.1249 0.0800
C127 0.5309 0.6696 0.1690 H134 0.0091 -0.6633 -0.1497
C129 0.1827 0.0426 0.0774 H135 0.1005 -0.6984 -0.1175
C133 0.0611 -0.6143 -0.1412 H136 0.0686 -0.5851 -0.1833
F4 0.9541 0.9380 0.5714 H141 0.1830 -0.4440 -0.0580
F5 0.9826 0.6800 0.5759 H14 0.6945 1.0312 0.5339
F6 1.0259 0.8300 0.6655 H21 0.7741 1.5073 0.4379
N8 0.6040 1.3694 0.4758 H28 0.7049 1.4602 0.3064
N13 0.6631 1.0203 0.5573 H29 0.6130 1.4814 0.2902
N17 0.7581 1.7462 0.3780 H32 0.5464 1.0615 0.5430
N19 0.6266 0.8793 0.6383 H34 0.6724 1.6789 0.4661
N20 0.7501 1.4082 0.4350 H35 0.5807 1.7062 0.4509
N22 0.7080 0.6517 0.7080 H38 0.8152 0.9372 0.5749
O24 0.7581 1.1336 0.4774 H41 0.5545 1.4575 0.3823
O26 0.5442 1.1244 0.4164 H44 0.5540 1.3350 0.5873
C27 0.6643 1.5023 0.3242 H45 0.6406 1.2709 0.6290
C30 0.6817 0.9034 0.6081 H48 0.6272 1.8887 0.3818
C31 0.5921 1.1293 0.5402 H49 0.5627 1.7587 0.3377
C33 0.6205 1.6624 0.4324 H52 0.6566 1.2721 0.3752
C36 0.5758 1.2019 0.4701 H55 0.6234 1.5433 0.5534
C37 0.8201 0.8496 0.6069 H56 0.6965 1.4170 0.5619
 
原子 X Y Z 原子 X Y Z
C39 0.7568 0.8126 0.6288 H58 0.8887 1.9136 0.4290
C40 0.6067 1.4694 0.4172 H59 0.9292 1.8759 0.3743
C42 0.8902 0.7591 0.6317 H60 0.9085 1.7203 0.4146
C43 0.6042 1.2934 0.5840 H62 0.6632 1.7578 0.2922
C46 0.7651 0.6822 0.6794 H64 0.8824 1.3038 0.5620
C47 0.6162 1.7663 0.3697 H65 0.8870 1.4370 0.5064
C50 0.8099 1.8166 0.3410 H66 0.9097 1.2396 0.5019
C51 0.6689 1.3952 0.3877 H69 0.7263 1.9822 0.2803
C53 0.7895 1.2775 0.4740 H70 0.8132 2.0339 0.2846
C54 0.6389 1.4243 0.5469 H71 0.7823 2.0761 0.3450
C57 0.8917 1.8331 0.3947 H73 0.8374 1.5813 0.3078
C61 0.6751 1.6998 0.3362 H74 0.8486 1.7393 0.2638
C63 0.8750 1.3182 0.5148 H75 0.7629 1.6701 0.2558
C67 0.9615 0.8066 0.6143 H77 0.8443 0.5011 0.7349
C68 0.7802 1.9934 0.3099 H79 0.9456 0.5638 0.6960
C72 0.8152 1.6904 0.2872 H81 0.6060 0.7320 0.7067
C76 0.8381 0.5893 0.7029 H142 0.7500 1.8390 0.4090
C78 0.8982 0.6264 0.6799 H143 0.5333 1.1298 0.3123
C80 0.6445 0.7516 0.6862 H144 0.5194 1.0278 0.2538
表3
关于实施例2b，碱(base)型式N-2的原子坐标
 
原子 X Y Z 原子 X Y Z
N1 0.7824 1.3195 0.3238 C71 0.9289 1.4591 0.5167
N2 0.1685 0.3056 -0.0178 H72 0.9378 1.4237 0.5668
H3 0.1633 0.1989 -0.0196 H73 0.9764 1.4359 0.5102
N4 0.6223 0.8215 0.1887 C74 0.8719 1.7574 0.6080
N5 0.2627 0.4840 -0.0849 C75 0.6719 1.2862 0.4846
N6 0.6868 0.9765 0.2943 H76 0.6246 1.2933 0.4390
H7 0.7030 0.9877 0.3420 H77 0.6814 1.3914 0.5103
N8 0.4185 0.9718 0.0742 H78 0.6660 1.2009 0.5162
N9 0.0989 0.0258 -0.1003 C79 0.9173 1.6199 0.6639
N10 0.7913 1.3680 0.4754 H80 0.8851 1.5217 0.6541
H11 0.7826 1.4618 0.4918 H81 0.9305 1.6578 0.7142
N12 0.5331 0.6005 0.1813 H82 0.9647 1.5943 0.6584
N13 0.3353 0.7474 0.0475 C83 0.9176 1.9198 0.6225
H14 0.3028 0.6896 0.0583 H84 0.9680 1.8999 0.6220
N15 0.8501 1.6946 0.5311 H85 0.9252 1.9631 0.6707
N16 0.4567 1.1267 0.1887 H86 0.8887 1.9992 0.5842
O17 0.7470 1.1042 0.4435 C87 0.7960 1.7901 0.6131
O18 0.2114 0.7470 -0.1165 H88 0.7660 1.8705 0.5758
O19 0.2229 0.5239 0.0583 H89 0.8064 1.8325 0.6620
O20 0.8588 1.0890 0.3360 H90 0.7667 1.6881 0.6048
 
原子 X Y Z 原子 X Y Z
F21 0.5881 0.9034 0.4961 C91 0.2069 0.3753 0.0494
F22 0.4828 0.7754 0.4659 C92 0.1886 0.3981 -0.1294
F23 0.5874 0.6500 0.5199 H93 0.1617 0.4641 -0.1751
C24 0.1049 -0.1653 -0.0049 C94 0.1345 0.3960 -0.0889
H25 0.1473 -0.2167 -0.0125 H95 0.1249 0.5115 -0.0787
H26 0.0773 -0.2487 0.0097 C96 0.3636 0.8982 0.1612
H27 0.1257 -0.0826 0.0338 C97 0.0560 0.3169 -0.1396
C28 0.0052 -0.2107 -0.1371 H98 0.0300 0.3865 -0.1836
H29 -0.0334 -0.1565 -0.1806 H99 0.0226 0.3123 -0.1131
H30 -0.0204 -0.2889 -0.1178 C100 0.0655 0.1409 -0.1647
H31 0.0423 -0.2685 -0.1506 H101 0.0138 0.0994 -0.1999
C32 -0.0102 0.0236 -0.0618 C102 0.2651 0.6526 -0.0801
H33 0.0176 0.1111 -0.0276 C103 0.3727 0.8727 0.0930
H34 -0.0371 -0.0447 -0.0399 C104 0.3129 0.8065 0.1831
H35 -0.0478 0.0713 -0.1077 H105 0.2826 0.7213 0.1525
C36 0.6347 0.8573 0.2590 C106 0.4090 1.0275 0.2081
C37 0.7956 1.1614 0.3094 C107 0.1998 0.2249 -0.1544
C38 0.5429 0.6399 0.2526 H108 0.2268 0.1548 -0.1108
C39 0.5969 0.8058 0.3661 H109 0.2321 0.2314 -0.1820
H40 0.6303 0.8901 0.3943 C110 0.0479 -0.0823 -0.0781
C41 0.5928 0.7673 0.2949 C111 0.3943 0.5437 -0.0102
C42 0.7174 1.0886 0.2543 H112 0.4319 0.5306 0.0416
H43 0.7243 1.0288 0.2140 H113 0.4226 0.5469 -0.0417
C44 0.8437 1.4188 0.3806 C114 0.1202 0.1477 -0.2041
H45 0.8919 1.4020 0.3733 H115 0.0955 0.2128 -0.2496
C46 0.8266 1.6034 0.3730 H116 0.1283 0.0355 -0.2179
H47 0.7791 1.6255 0.3797 C117 0.3076 0.8411 0.2485
H48 0.8177 1.6396 0.3230 C118 0.2292 0.2619 0.1158
C49 0.5524 0.7201 0.3942 H119 0.2846 0.2720 0.1469
C50 0.6668 1.2414 0.2237 H120 0.2172 0.1487 0.0989
H51 0.6690 1.2785 0.1776 H121 0.2001 0.2924 0.1441
H52 0.6125 1.2182 0.2137 C122 0.3349 0.4024 -0.0337
C53 0.8609 1.3569 0.4595 H123 0.3502 0.3144 -0.0588
H54 0.8773 1.2398 0.4636 H124 0.3290 0.3556 0.0092
C55 0.4991 0.5496 0.2836 C125 0.3458 0.7009 -0.0200
H56 0.4668 0.4624 0.2569 H126 0.3682 0.7937 -0.0371
C57 0.7010 1.3718 0.2841 C127 0.4561 1.0941 0.1233
H58 0.6975 1.4822 0.2628 H128 0.4859 1.1659 0.1085
H59 0.6744 1.3722 0.3171 C129 0.4030 1.0567 0.2762
C60 0.9137 1.6472 0.5099 H130 0.4339 1.1390 0.3084
H61 0.9621 1.7039 0.5438 C131 0.2548 0.7395 0.2713
C62 0.7404 1.2441 0.4666 C132 0.3536 0.9679 0.2955
C63 0.5039 0.5898 0.3526 H133 0.3500 0.9907 0.3403
H64 0.4747 0.5300 0.3726 F134 0.1847 0.7359 0.2156
C65 0.5722 0.6959 0.1556 F135 0.2364 0.8060 0.3220
 
原子 X Y Z 原子 X Y Z
H66 0.5642 0.6734 0.1065 F136 0.2859 0.5920 0.2960
C67 0.8949 1.7014 0.4308 F137 0.1977 0.8329 0.2710
H68 0.9412 1.6866 0.4211 F138 0.2168 0.6170 0.2301
H69 0.8818 1.8193 0.4256 F139 0.2934 0.6790 0.3395
C70 0.5532 0.7632 0.4678 H140 0.8280 1.7679 0.5060
H141 0.1330 -0.0400 -0.1062
表4
关于实施例2c，碱型式H1.75-5的原子坐标
 
原子 X Y Z 原子 X Y Z
C1 0.3942 0.1176 0.2183 C51 0.6094 0.0443 -0.0547
C2 0.2287 0.1174 0.0897 C52 0.6750 0.0382 0.0420
N3 0.1192 0.1293 0.0594 C53 0.9963 0.1572 0.4974
N4 0.1798 0.0501 0.1322 C54 0.7176 -0.0005 0.0684
N5 0.3753 0.0509 0.2822 C55 1.1985 0.0503 0.7049
N6 -0.0927 0.1070 -0.1055 C56 1.1539 0.1133 0.4965
N7 -0.3691 0.1154 -0.3165 C57 1.0229 0.1608 0.6162
N8 -0.2260 0.1440 -0.1970 C58 1.0367 0.1185 0.4572
O9 0.1323 0.1298 -0.1137 C59 0.7341 0.1669 0.3280
O10 0.0301 0.0456 0.0130 C60 1.1829 0.1168 0.6162
C11 0.0785 0.1332 -0.0419 C61 1.1435 0.1563 0.6496
C12 0.2431 0.0735 0.0697 C62 0.5636 0.1744 0.0306
C13 -0.2272 0.0747 -0.2281 C63 0.6973 0.1581 0.4320
C14 0.0812 0.0382 0.0995 C64 0.7972 0.1517 0.5115
C15 0.4135 0.0738 0.2008 C65 1.3015 0.0605 0.7775
C16 0.2774 0.1283 0.2010 C66 1.2257 0.0279 0.6122
C17 0.3592 0.0623 0.0929 C67 1.1287 0.0258 0.7652
C18 -0.3242 0.0799 -0.2978 C68 0.9017 0.0664 0.4282
C19 -0.1859 -0.0329 -0.2601 C69 0.8592 0.0308 0.4749
C20 -0.3192 0.1441 -0.2671 F70 0.7706 -0.0040 0.1659
C21 -0.1804 0.1091 -0.1748 F71 0.7890 -0.0119 0.0101
C22 -0.1842 0.0372 -0.2149 F72 0.6477 -0.0283 0.0583
C23 0.0394 0.1336 0.1281 N73 0.7366 0.2979 0.1640
C24 -0.3330 0.0112 -0.3340 N74 0.9286 0.2769 0.3415
C25 -0.2347 0.0067 -0.2683 N75 0.9490 0.3548 0.4399
C26 0.0308 0.0146 0.1792 N76 0.6679 0.2686 0.0076
C27 -0.3753 0.0465 -0.3473 N77 0.5468 0.3015 -0.1239
C28 -0.0381 0.1410 -0.0545 N78 1.1302 0.3587 0.6021
C29 0.4391 0.0161 0.3216 O79 0.7689 0.2552 0.3756
C30 0.4331 -0.0152 0.2365 O80 0.8000 0.3561 0.3182
C31 -0.0565 0.1490 0.0571 C81 0.6779 0.3005 0.0685
C32 0.5574 0.0267 0.3640 C82 0.8021 0.2636 0.1953
C33 0.3907 0.0006 0.4127 C83 0.6253 0.3363 0.0330
 
原子 X Y Z 原子 X Y Z
F34 -0.1107 -0.0374 -0.1835 C84 0.8293 0.2641 0.3145
F35 -0.1514 -0.0419 -0.3469 C85 0.9704 0.2829 0.4523
F36 -0.2560 -0.0605 -0.2519 C86 0.9612 0.3232 0.6101
N37 0.9782 0.0854 0.4895 C87 1.0815 0.3238 0.6395
N38 0.8832 0.1624 0.4564 C88 0.6395 0.3717 0.0871
N39 0.6198 0.1729 0.1273 C89 0.9221 0.3194 0.4932
N40 0.7167 0.1350 0.2533 C90 0.5107 0.3694 -0.1081
N41 0.5429 0.1472 -0.0401 C91 0.5605 0.3350 -0.0649
N42 1.1331 0.0855 0.6708 C92 0.6021 0.2715 -0.0843
O43 0.9140 0.1821 0.2960 C93 0.5266 0.4037 -0.0538
O44 0.8654 0.0771 0.3382 C94 0.9119 0.2659 0.1620
C45 0.8542 0.1720 0.3563 C95 0.5911 0.4051 0.0443
C46 0.5876 0.1117 -0.0112 C96 1.1535 0.3924 0.6738
C47 0.6629 0.1387 0.1561 C97 0.6068 0.4429 0.0984
C48 0.6954 0.0688 0.1114 C98 0.8832 0.3710 0.3595
C49 0.6512 0.1060 0.0865 C99 1.0912 0.2839 0.4757
C50 0.5679 0.0801 -0.0813 C100 1.1264 0.2872 0.5933
C101 0.9810 0.2861 0.2520 O151 0.4292 0.1756 0.7593
C102 0.9190 0.4094 0.3235 O152 0.3473 0.1636 0.8339
C103 1.0516 0.4113 0.6921 H153 0.4310 0.1254 0.2979
C104 1.2130 0.3807 0.7821 H154 0.4349 0.1341 0.1645
C105 1.2167 0.4208 0.6206 H155 0.2779 0.1337 0.0447
F106 0.6836 0.4427 0.1806 H156 0.2164 0.0417 0.2100
F107 0.5186 0.4543 0.1375 H157 0.3714 0.0703 0.3474
F108 0.6281 0.4715 0.0364 H158 -0.0576 0.0785 -0.0868
N109 0.3031 0.2523 0.0895 H159 0.2173 0.0675 -0.0123
N110 0.3202 0.3294 0.1970 H160 0.4992 0.0681 0.2061
N111 0.5022 0.3356 0.3522 H161 0.2372 0.1127 0.2569
N112 0.0946 0.2741 -0.0674 H162 0.2676 0.1594 0.2134
N113 -0.0336 0.2377 -0.1697 H163 0.3639 0.0302 0.0854
N114 -0.2016 0.2650 -0.2433 H164 0.4006 0.0751 0.0350
O115 0.1682 0.3314 0.0829 H165 -0.3534 0.1727 -0.2828
O116 0.1499 0.2237 0.1243 H166 -0.1099 0.0321 -0.1626
C117 0.2052 0.2373 0.0644 H167 0.0215 0.1059 0.1611
C118 0.2992 0.2930 0.2475 H168 0.0659 0.1539 0.1907
C119 -0.0515 0.3401 -0.0764 H169 -0.3750 -0.0142 -0.3730
C120 0.3416 0.2960 0.3644 H170 -0.0484 0.0061 0.1467
C121 -0.1222 0.3701 -0.0923 H171 0.0783 -0.0115 0.2000
C122 0.4698 0.2615 0.2174 H172 0.0297 0.0317 0.2489
C123 -0.1737 0.2997 -0.1931 H173 -0.4526 0.0496 -0.3983
C124 -0.0044 0.2713 -0.1206 H174 -0.0573 0.1673 -0.1021
C125 -0.2438 0.3311 -0.2090 H175 0.4770 -0.0409 0.2650
C126 -0.0754 0.3040 -0.1278 H176 0.3484 -0.0242 0.2146
C127 0.1701 0.2420 -0.0535 H177 0.4596 -0.0045 0.1679
C128 0.3488 0.2578 0.2007 H178 -0.1282 0.1348 0.0707
 
原子 X Y Z 原子 X Y Z
C129 0.5097 0.2640 0.3350 H179 -0.0650 0.1804 0.0686
C130 0.4624 0.2986 0.3883 H180 0.5963 -0.0009 0.3924
C131 -0.0968 0.4077 -0.0362 H181 0.5930 0.0381 0.3032
C132 0.3460 0.2683 0.0015 H182 0.5596 0.0461 0.4284
C133 -0.1317 0.2372 -0.2271 H183 0.4332 -0.0251 0.4433
C134 0.5253 0.3677 0.4289 H184 0.3902 0.0220 0.4712
C135 -0.2190 0.3662 -0.1602 H185 0.3084 -0.0081 0.3820
C136 0.2745 0.2511 -0.0941 H186 0.9987 0.0754 0.5691
C137 0.5618 0.4023 0.3689 H187 0.7487 0.1066 0.2786
C138 0.6152 0.3567 0.5186 H188 1.1096 0.0983 0.7400
C139 0.4264 0.3788 0.4754 H189 0.7448 0.0641 0.1858
C140 0.2540 0.3461 0.1186 H190 0.5192 0.0845 -0.1565
C141 0.2900 0.3831 0.0758 H191 0.5930 0.0200 -0.1086
F142 0.0020 0.4176 -0.0257 H192 1.0402 0.1792 0.4633
F143 -0.1497 0.4372 -0.0806 H193 1.1791 0.0849 0.4744
F144 -0.1239 0.4079 0.0550 H194 1.1975 0.1355 0.4619
O145 0.4346 0.1106 0.5123 H195 0.9975 0.1890 0.6409
O146 0.1371 0.2037 0.3256 H196 0.9825 0.1382 0.6530
O147 0.6629 0.2454 0.5702 H197 1.0259 0.1190 0.3726
O148 0.4523 0.2291 0.5970 H198 0.6972 0.1932 0.2915
O149 0.3986 0.3042 0.6776 H199 1.2687 0.1146 0.6366
O150 0.3459 0.1840 0.4326 H200 1.1831 0.1795 0.6123
H201 1.1631 0.1593 0.7328 H251 1.1684 0.4299 0.5453
H202 0.5306 0.2029 0.0082 H252 0.3950 0.3437 0.2241
H203 0.6519 0.1824 0.4545 H253 0.5749 0.3293 0.3230
H204 0.6483 0.1323 0.4245 H254 0.1193 0.3022 -0.0335
H205 0.8029 0.1216 0.5375 H255 0.2147 0.2880 0.2355
H206 0.7957 0.1702 0.5801 H256 0.0233 0.3437 -0.0249
H207 1.3466 0.0340 0.8006 H257 0.3083 0.3215 0.3958
H208 1.3500 0.0795 0.7383 H258 0.3160 0.2703 0.4028
H209 1.2843 0.0747 0.8476 H259 0.5050 0.2366 0.1841
H210 1.2710 0.0024 0.6388 H260 0.4927 0.2878 0.1790
H211 1.1517 0.0185 0.5635 H261 -0.3192 0.3277 -0.2606
H212 1.2687 0.0462 0.5671 H262 0.1323 0.2153 -0.0854
H213 1.1703 -0.0007 0.7926 H263 0.3327 0.2320 0.2439
H214 1.1105 0.0421 0.8313 H264 0.4885 0.2372 0.3700
H215 1.0556 0.0182 0.7149 H265 0.5951 0.2670 0.3470
H216 0.7976 0.0176 0.4203 H266 0.4874 0.2957 0.4712
H217 0.9226 0.0100 0.4973 H267 0.3419 0.2998 0.0019
H218 0.8269 0.0390 0.5453 H268 0.4278 0.2594 0.0040
H219 0.7349 0.3217 0.2190 H269 -0.1537 0.2100 -0.2663
H220 1.0259 0.3684 0.4660 H270 -0.2738 0.3905 -0.1734
H221 1.2052 0.3497 0.5802 H271 0.3087 0.2249 -0.1215
H222 0.7595 0.2370 0.1705 H272 0.2609 0.2719 -0.1576
H223 0.9510 0.2576 0.4964 H273 0.5805 0.4266 0.4203
 
原子   X          Y          Z          原子 X          Y          Z         
H224 0.9305   0.2994   0.6498   H274 0.6328   0.3938     0.3368    
H225 0.9306   0.3505     0.6365   H275 0.5006   0.4101   0.3051  
H226 1.1023   0.3226    0.7234   H276 0.6311   0.3804     0.5741  
H227 0.6892   0.3732   0.1634   H277 0.5931   0.3310   0.5600  
H228 0.8361   0.3164   0.4802   H278 0.6878   0.3500   0.4880    
H229 0.4622   0.3687   -0.1842 H279 0.4455   0.4020   0.5307  
H230 0.5955   0.2449   -0.1310 H280 0.3644    0.3877   0.4139  
H231 0.4887   0.4301   -0.0865 H281 0.4001    0.3535    0.5147  
H232 0.9411   0.2373   0.1483   H282 0.2315   0.3935   0.0139  
H233 0.9065   0.2830   0.0906   H283 0.050     0.4046   0.1373  
H234 1.1232   0.2576   0.4474   H284 0.3642     0.3778     0.0457  
H235 1.1194   0.3088   0.4371   H297 0.5031   0.1166   0.5720  
H236 1.2129   0.2887   0.6081   H298 0.4013   0.1383   0.4827    
H237 1.1010   0.2618   0.6307   H291 0.1415   0.2116   0.2456  
H238 0.9841   0.3173   0.2399   H292 0.0561   0.1944   0.3301  
H239 1.0614   0.2747   0.2630   H285 0.7189   0.2533   0.0386  
H240 0.8608   0.4208   0.2603   H286 0.7007   0.2488   0.5014  
H241 0.9250   0.4304   0.3884    H287 0.4531   0.2087   0.6605  
H242 0.9943   0.4069   0.2987   H288 0.5334   0.2354   0.5869  
H243 1.0681   0.4363     0.7411   H289 0.4187     0.2763   0.6478  
H244 1.0091   0.4217   0.6147   H290 0.4459   0.3091   0.7532  
H245 1.0017   0.3911     0.7227    H293 0.3695    0.2054   0.4921    
H246 1.2276   0.4062   0.8315   H294 0.2663   0.1913   0.3921  
H247 1.1658   0.3601    0.8194   H295 0.4701     0.1653   0.8329  
H248 1.2882   0.3671    0.7752   H296 0.4645     0.1639   0.6962  
H249 1.2341   0.4465     0.6673   H299 0.2731   0.1523   0.8513  
H250 1.2881   0.4078     0.6030   H300 0.4117     0.1542   0.8909  
表5
关于实施例2e，碱型式E-1的原子坐标
 
原子 X Y Z 原子 X Y Z
F18 0.2662 0.4002 0.0274 F23 0.0301 0.3722 0.0039
F19 0.0473 0.4191 0.0033 C18 0.1648 0.3165 0.0297
F20 0.1401 0.2386 0.0059 H31 0.2375 0.5477 0.2387
O2 0.3035 0.7582 0.1985 H41 0.5018 0.4801 0.2585
O28 0.4277 0.5819 0.1087 H42 0.4761 0.3850 0.2161
N1 0.5559 0.6627 0.1978 H51 0.6480 0.5043 0.1733
N6 0.2412 0.4989 0.1766 H52 0.7376 0.5463 0.2204
N8 0.0422 0.3993 0.2139 H61 0.2881 0.5282 0.1472
N10 -0.1606 0.2714 0.1828 H91 -0.1519 0.3157 0.2435
N27 0.6744 0.6813 0.1115 H111 -0.2586 0.1707 0.1140
N29 0.9824 0.8036 0.1064 H121 -0.1207 0.1964 0.0469
C2 0.3877 0.6687 0.2028 H141 0.2343 0.4431 0.0976
 
原子 X Y Z 原子 X Y Z
C3 0.3235 0.5438 0.2136 H211 0.5921 0.8399 0.1984
C4 0.4822 0.4775 0.2252 H221 0.4827 0.7942 0.1303
C5 0.6231 0.5426 0.2028 H231 0.6846 0.8993 0.0877
C7 0.1130 0.4242 0.1780 H232 0.6444 0.9699 0.1348
C9 -0.0900 0.3261 0.2139 H241 0.9421 0.9813 0.1221
C11 -0.1488 0.2295 0.1107 H251 1.0517 0.8711 0.1826
C12 -0.0761 0.2450 0.0735 H252 0.8644 0.9484 0.1930
C13 0.0600 0.3235 0.0687 H261 0.8551 0.7433 0.2231
C14 0.1243 0.3844 0.1017 H262 0.8872 0.6821 0.1741
C15 -0.0857 0.2914 0.1453 H271 0.8051 0.6804 0.1028
C16 0.0498 0.3680 0.1409 H291 1.0794 0.7695 0.1261
C17 0.1207 0.3503 0.0270 H294 0.7893 0.5312 0.0656
C21 0.6470 0.7650 0.1817 H292 0.6583 0.4189 0.0854
C22 0.6168 0.7817 0.1361 H293 0.5951 0.5011 0.0421
C23 0.7030 0.8953 0.1212 H311 0.9885 0.9169 0.0098
C24 0.8922 0.8952 0.1304 H312 0.8322 0.8277 0.0324
C25 0.9185 0.8727 0.1765 H313 0.8750 0.9701 0.0523
C26 0.8353 0.7590 0.1910 H321 1.2632 0.9515 0.0466
C28 0.5782 0.5936 0.0987 H322 1.1556 1.0063 0.0897
C29 0.6596 0.5024 0.0711 H323 1.2983 0.8878 0.0951
C30 1.0633 0.8393 0.0676 H331 1.1943 0.7459 0.0197
C31 0.9326 0.8931 0.0389 H332 1.2251 0.6857 0.0690
C32 1.2044 0.9276 0.0745 H333 1.0345 0.6616 0.0430
C33 1.1314 0.7245 0.0492 H971 -0.8355 0.1305 0.1615
O99 -0.4402 0.1232 0.1894 H972 -0.7164 0.0043 0.1747
C97 -0.7313 0.0985 0.1797 H973 -0.7551 0.1157 0.2115
C98 -0.5812 0.1608 0.1676 H981 -0.5951 0.2544 0.1716
F21 0.3052 0.3620 0.0283 H982 -0.5565 0.1430 0.1349
F22 0.1907 0.2403 0.0143 H991 -0.3383 0.1855 0.1847
表6
关于实施例2d，碱型式HAC-1的原子坐标
 
原子 X Y Z 原子 X Y Z
C1 0.0418 0.3612 0.1413 H32 -0.1504 0.2133 0.0512
N2 -0.1614 0.2566 0.1827 H21 0.2024 0.4361 0.1001
N3 0.5574 0.6476 0.1969 H19 -0.2633 0.1786 0.1141
O4 0.4002 0.5938 0.1104 H15 -0.1260 0.2877 0.2400
N5 0.0480 0.3793 0.2136 H6 0.2703 0.5248 0.1514
N6 0.2349 0.4911 0.1766 H14 0.2507 0.5355 0.2354
N7 0.6581 0.6819 0.1120 H25A 0.5017 0.4595 0.2502
O9 0.3141 0.7518 0.2032 H25B 0.4643 0.3765 0.2131
C10 0.6548 0.7519 0.1823 H22A 0.6302 0.4915 0.1724
C11 0.1091 0.4116 0.1779 H22B 0.7255 0.5203 0.2124
 
原子 X Y Z 原子 X Y Z
C12 0.6143 0.7805 0.1389 H10 0.6208 0.8184 0.1990
C13 -0.0977 0.2822 0.1453 H12 0.4961 0.7944 0.1361
C14 0.3251 0.5321 0.2128 H31A 0.7369 0.5221 0.0663
C15 -0.0849 0.3037 0.2135 H31B 0.5607 0.5108 0.0459
C16 0.5496 0.5972 0.0993 H31C 0.6086 0.4250 0.0815
C17 0.8422 0.7397 0.1888 H17A 0.8651 0.7215 0.2164
N18 0.9734 0.7976 0.1050 H17B 0.8826 0.6751 0.1722
C19 -0.1674 0.2302 0.1113 H23A 0.6885 0.9061 0.0978
C20 0.0380 0.3268 0.0698 H23B 0.6640 0.9626 0.1405
C21 0.1085 0.3827 0.1029 H28A 0.8869 0.9177 0.1920
C22 0.6188 0.5229 0.1991 H28B 1.0495 0.8473 0.1796
C23 0.7063 0.8942 0.1260 H27 0.9448 0.9635 0.1263
C24 0.3943 0.6572 0.2042 H18 1.0626 0.7570 0.1189
C25 0.4808 0.4583 0.2218 H39A 1.2479 0.9507 0.0498
C27 0.8951 0.8864 0.1321 H39B 1.2853 0.8792 0.0894
C28 0.9305 0.8535 0.1757 H39C 1.1647 0.9911 0.0903
F29 0.2449 0.4047 0.0277 H38A 0.9706 0.9352 0.0175
C30 1.0501 0.8412 0.0669 H38B 0.8802 0.9740 0.0573
C31 0.6205 0.5052 0.0708 H38C 0.8310 0.8527 0.0360
C32 -0.1018 0.2511 0.0743 H40A 1.1575 0.7492 0.0195
C33 0.1058 0.3467 0.0300 H40B 1.0092 0.6805 0.0403
F36 0.1168 0.2494 0.0085 H40C 1.1861 0.6845 0.0608
F37 0.0041 0.4132 0.0068 H7 0.7708 0.6743 0.1022
C38 0.9217 0.9066 0.0421 H35A -0.8134 0.1022 0.1656
C39 1.2014 0.9229 0.0747 H35B -0.7586 0.1045 0.2107
C40 1.1073 0.7290 0.0448 H35C -0.7035 -0.0029 0.1830
O8 -0.4446 0.1296 0.1963 H8 -0.3548 0.1817 0.1876
C26 -0.5724 0.1491 0.1735
O34 -0.5673 0.2213 0.1458
C35 -0.7251 0.0824 0.1840
表7
关于实施例2g，碱型式IPA-1的原子坐标
 
原子 X Y Z 原子 X Y Z
F1 0.1519 0.3786 0.0243 H4B 0.8724 0.7912 0.1232
F3 -0.0140 0.2540 -0.0043 H3 0.6171 0.6809 0.1026
F2 0.0260 0.4241 0.0085 H1 0.1162 0.5505 0.1460
N4 0.8062 0.8075 0.1016 H10 0.3362 0.7935 0.1099
N3 0.5159 0.6834 0.1054 H9 0.3991 0.8799 0.1736
N2 0.3481 0.7197 0.1890 H6A 0.4782 0.9618 0.1051
N1 0.0675 0.5440 0.1700 H6B 0.5369 0.8805 0.0686
N5 -0.1311 0.4643 0.2095 H22 0.0665 0.4473 0.0929
N6 -0.2941 0.3121 0.1828 H5 0.7491 0.9735 0.1042
 
原子 X Y Z 原子 X Y Z
O1 0.1140 0.8031 0.1697 H21 -0.3360 0.1865 0.1167
O2 0.2925 0.5779 0.1031 H12A 0.5507 0.4357 0.0989
C10 0.4463 0.7911 0.1197 H12B 0.6252 0.5211 0.0660
C9 0.4471 0.8051 0.1677 H12C 0.4678 0.4565 0.0549
C4 0.9030 0.8194 0.0629 H8A 0.6698 0.7392 0.1786
C24 -0.0632 0.3232 0.0669 H8B 0.6137 0.8216 0.2153
C19 -0.0909 0.3946 0.1378 H16 0.0302 0.6334 0.2243
C6 0.5348 0.8912 0.0992 H13A 0.4882 0.6277 0.2283
C20 -0.2139 0.3158 0.1454 H13B 0.4421 0.5607 0.1863
C11 0.4342 0.5879 0.0964 H3B 0.9771 0.9859 0.0712
C22 -0.0159 0.3962 0.0980 H3C 1.0944 0.9144 0.0431
C5 0.7048 0.9021 0.1156 H3D 1.0915 0.8973 0.0926
C17 -0.0508 0.4684 0.1726 H23 -0.2112 0.1922 0.0537
C21 -0.2559 0.2399 0.1123 H18 -0.3052 0.3848 0.2368
C14 0.1869 0.7250 0.1863 H2A 0.7158 0.7853 0.0234
C12 0.5279 0.4917 0.0774 H2B 0.8604 0.8380 -0.0010
C8 0.6155 0.8107 0.1847 H2C 0.7518 0.9169 0.0270
C16 0.1187 0.6161 0.2052 H7A 0.6551 0.9825 0.1718
C13 0.4041 0.6134 0.2080 H7B 0.8129 0.9118 0.1736
C3 1.0281 0.9129 0.0679 H1A 1.0319 0.6803 0.0846
C23 -0.1824 0.2437 0.0749 H1B 1.0662 0.7077 0.0366
C18 -0.2485 0.3861 0.2114 H1C 0.9087 0.6458 0.0495
C2 0.7981 0.8420 0.0246 H15A 0.2542 0.5916 0.2593
C7 0.7045 0.9108 0.1635 H15B 0.2564 04841 0.2288
C1 0.9852 0.7023 0.0579 H3A -0.4990 0.1985 0.1863
C15 0.2577 0.5672 0.2298 H27 -0.6926 0.2734 0.1759
C25 0.0153 0.3263 0.0246 H26A -0.7745 0.0861 0.1320
F4 0.1640 0.2980 0.0315 H26B -0.6492 0.1771 0.1173
F5 -0.0739 0.3770 -0.0036 H26C -0.8259 0.2136 0.1243
F6 0.0440 0.2214 0.0112 H28A -0.8028 0.1216 0.2237
O3 -0.5666 0.1486 0.1890 H28B -0.9203 0.1527 0.1868
C27 -0.7093 0.1903 0.1763 H28C -0.8515 0.2497 0.2160
C26 -0.7420 0.1648 0.1343
C28 -0.8290 0.1780 0.2024
C29 -0.8460 0.1070 0.1744
C30 -0.6990 0.2550 0.1410
表8
关于实施例2f，碱型式RPG-3的原子坐标
 
原子 X Y Z 原子 X Y Z
F1 1.4700 0.5720 0.6614 N2 0.6350 0.3813 0.3765
F7 1.4119 0.5575 0.7000 N6 0.2687 0.8628 0.3992
F2 1.4315 0.5398 0.7741 N4 0.3398 0.7349 0.3149
 
原子 X Y Z 原子 X Y Z
F8 1.5600 0.5336 0.8131 N1 0.8898 0.3354 0.4598
F3 1.6320 0.5630 0.7860 N5 0.0527 0.9107 0.3489
F9 1.6111 0.5864 0.6960 C12 0.4202 0.2078 0.3911
N9 0.7997 -0.0295 0.8348 O1 0.6129 0.7507 0.2839
N8 0.7989 0.1232 0.9974 C10 0.7273 0.4981 0.3447
N11 1.1628 -0.0946 0.6829 C6 0.8597 0.4735 0.3332
N10 1.0937 0.0679 0.7424 C9 0.7661 0.6239 0.4071
N7 0.5331 0.0253 1.0441 C20 0.1173 0.7695 0.2548
N12 1.3802 -0.0414 0.6342 C19 0.0264 0.8385 0.2716
O3 0.8190 0.0931 0.7142 C5 0.9561 0.4627 0.4193
O4 1.0177 0.2159 0.9737 C17 0.2435 0.7914 0.3234
C34 0.7187 0.1296 0.9094 C8 0.8573 0.6109 0.4957
C45 1.3119 0.1383 0.6926 O2 0.4273 0.3887 0.2980
C37 0.6769 0.0002 0.8509 C24 -0.0460 0.6680 0.1174
C30 0.4799 0.0412 0.9508 C16 0.4606 0.7449 0.3864
C42 1.1869 0.0349 0.7058 C22 0.0802 0.6875 0.1776
C31 0.5850 0.1596 0.9161 C14 0.5786 0.7190 0.3544
C49 1.4737 0.3643 0.7029 C7 0.9892 0.5850 0.4828
C33 0.5750 -0.1179 0.8869 C23 -0.1359 0.7367 0.1342
C47 1.3487 0.2751 0.7153 C18 0.1707 0.9200 0.4061
C40 0.8584 0.0198 0.7679 C25 -0.0848 0.5788 0.0372
C32 0.4447 -0.0846 0.8933 C13 0.5736 0.6259 0.4906
C41 0.9773 -0.0327 0.7663 C21 -0.1010 0.8179 0.2096
C39 1.0115 -0.0750 0.8618 C4 0.9438 0.1985 0.3554
C35 0.9405 0.1730 1.0250 C3 0.9469 0.2256 0.4509
C38 0.8681 -0.1166 0.8863 C15 0.4317 0.6466 0.4565
C28 0.4760 0.0765 1.1130 C2 1.0956 0.2572 0.5066
C43 1.2625 -0.1234 0.6483 C11 0.4953 0.3347 0.3508
C44 1.4064 0.0935 0.6556 C1 0.8466 0.1026 0.4843
C46 1.5338 0.1870 0.6430 F4 -0.1040 0.4554 0.0598
C48 1.5649 0.3202 0.6666 F5 0.0211 0.6100 -0.0030
C36 1.0000 0.1703 1.1211 F6 -0.1869 0.5900 -0.0238
C29 0.5552 0.0482 1.2020 F10 -0.2221 0.5070 0.0190
C27 0.3192 0.0052 1.1006 F11 -0.0370 0.4791 0.0400
C26 0.5156 0.2276 1.1108 F12 -0.0360 0.6334 -0.0302
C50 1.5103 0.5068 0.7292 O7 0.3015 0.5242 0.1820
N3 0.6420 0.6560 0.4169 O8 0.5067 0.7155 0.1016
C55 0.4573 0.5719 0.0792 H12C 0.3410 0.1518 0.3473
C56 0.3131 0.5089 0.0936 H10A 0.6770 0.5138 0.2867
C54 0.4592 0.5517 -0.0152 H6A 0.8326 0.3912 0.2958
O5 1.1135 0.3136 0.8309 H6B 0.9113 0.5467 0.3027
O6 0.9224 0.3638 0.6775 H9 0.8236 0.6994 0.3801
C52 0.9658 0.4383 0.7607 H95 1.0446 0.4603 0.4067
C53 1.0998 0.4403 0.8150 H8B 0.8035 0.5371 0.5249
C51 0.9706 0.5801 0.7445 H8C 0.8845 0.6928 0.5336
 
原子 X Y Z 原子 X Y Z
H8 0.7521 0.0843 1.0354 H16 0.4967 0.8363 0.4153
H10 1.1043 0.1515 0.7516 H22 0.1413 0.6448 0.1660
H34 0.7767 0.2034 0.8813 H7A 1.0479 0.6636 0.4601
H37 0.6246 0.0147 0.7931 H77B 1.0425 0.5720 0.5399
H30 0.3926 0.0620 0.9462 H23 -0.2199 0.7261 0.0931
H31A 0.5395 0.1776 0.8580 H18 0.1897 0.9731 0.4584
H31B 0.6110 0.2396 0.9557 H13A 0.6288 0.6865 0.5425
H33A 0.5480 -0.1985 0.8476 H13B 0.5604 0.5340 0.5057
H33B 0.6213 -0.1349 0.9450 H21 -0.1626 0.8605 0.2204
H47 1.2884 0.3066 0.7391 H4A 0.8479 0.1679 0.3217
H32A 0.3953 -0.0742 0.8343 H4B 0.9856 0.1305 0.3502
H32B 0.3818 -0.1587 0.9172 H4C 0.9960 0.2797 0.3330
H41 0.9434 -0.1120 0.7240 H15A 0.3587 0.5626 0.4312
H39A 1.0471 -0.1496 0.8633 H15B 0.4034 0.6838 0.5038
H39B 1.0801 -0.0006 0.9013 H2A 1.1552 0.3410 0.4913
H38A 0.8152 -0.2110 0.8689 H2B 1.1310 0.1867 0.4955
H38B 0.8786 -0.0998 0.9495 H2C 1.0948 0.2640 0.5683
H43 1.2434 -0.2140 0.6327 H1A 0.8496 0.1213 0.5456
H46 1.5955 0.1582 0.6190 H1B 0.8758 0.0261 0.4785
H48 1.6483 0.3822 0.6582 H1C 0.7522 0.0839 0.4497
H36A 1.0650 0.1213 1.1285 H99 0.9009 0.3500 0.5070
H36B 0.9249 0.1270 1.1498 H7 0.3628 0.5029 0.2157
H36C 1.0484 0.2607 1.1471 H8A 0.5335 0.7307 0.1555
H29A 0.5101 -0.0427 1.2144 H55 0.5214 0.5322 0.1164
H29B 0.5546 0.1090 1.2479 H56A 0.2502 0.5475 0.0555
H29C 0.6509 0.0606 1.1995 H56B 0.2814 0.4136 0.0755
H27A 0.2727 0.0063 1.0399 H54A 0.4034 0.5980 -0.0510
H27B 0.2829 0.0501 1.1386 H54B 0.4208 0.4574 -0.0335
H27C 0.3022 -0.0863 1.1155 H54C 0.5546 0.5867 -0.0221
H26A 0.6150 0.2666 1.1142 H5 1.0835 0.2863 0.8748
H26B 0.4925 0.2636 1.1602 H6 0.9213 0.2865 0.6847
H26C 0.4641 0.2486 1.0564 H52 0.8933 0.3997 0.7941
H100 0.5160 -0.0550 1.0510 H53A 1.1740 0.4907 0.7866
H2 0.6741 0.3386 0.4153 H53B 1.1148 0.4884 0.8717
H4 0.3295 0.6914 0.2656 H51A 1.0458 0.6226 0.7158
H12A 0.3879 0.2319 0.4404 H51B 0.9866 0.6294 0.8002
H12B 0.4843 0.1597 0.4113 H51C 0.8826 0.5788 0.7073
表9
关于实施例2a、b、c、d、e、f及g的特性粉末x-射线衍射吸收峰位置(度2θ±0.1)@RT，以高质量图样为基础，以衍射计(CuKα)收集，使用旋转毛细管，其中2θ是以NIST其它适当标准物校准。
 
实施例2a 实施例2b 实施例2c 实施例2d 实施例2e 实施例2f 实施例2g
5.2 5.5 5.1 5.3 5.4 6.3 6.9
7.9 9.1 6.9 9.6 9.4 9.0 8.7
17.1 12.1 7.4 13.7 11.2 11.7 9.8
17.6 14.0 10.2 14.7 13.7 15.0 10.3
19.6 19.2 18.0 19.5 19.1 17.6 11.8
比较药理学特性
将实施例1与WO2005021500(相当于美国专利号7,163,937，转让于本案申请人)中所发现化合物的药理学特性作比较的检测与数据叙述如下。
人类末梢血液单核细胞结合(＂CCR2结合＂)
参阅例如Yoshimura等人，J.Immunol.1990，145，292。人类CCR2结合检测以人类末梢血液单核细胞(hPBMC)，使用125I-人类MCP-1作为示踪剂配位体建立。hPBMC使用具有Ficoll-Hypaque(Mediatech Cellgro)的标准方案，自人类leukopak中分离(Biological Specialty公司)。将经分离的hPBMC洗涤，并在结合缓冲剂(RPMI-1640，0.1％ BSA，20mM Hepes，pH7.4)中，稀释至1 x 107/毫升。将125I-MCP-1(NEN/Perk Elmer)在结合缓冲剂中稀释至0.45nM。将化合物于结合缓冲剂中，以结合检测中所使用最后浓度的3-倍进行稀释。结合检测是使用96-井滤板(Millipore)进行。总125I-MCP-1结合是按下述评估：于总体积为150微升的各反应物中，添加5 x 105个细胞、0.15nM125I-MCP-1及化合物，以致使最后浓度范围为0至100nM。使板在室温下培养30分钟，接着使用真空歧管过滤(Millipore)，以RPMI-1640，0.1％ BSA，0.4M NaCl，20mM Hepes，pH 7.4三次洗涤。洗涤后，使板在室温下风干60分钟。接着添加25微升Microscint20至各井中。将板密封，并于Trilux上计数1分钟。非专一性结合是于300nM冷MCP-1(PeproTech公司)存在下测定。专一125I-MCP-1是以全部与非专一性结合间的差异计算。所有条件均重复测试。IC50是被定义为降低专一性结合达50％所需要竞争化合物的浓度。
hERG通量
使稳定地表现hERG通道的HEK293细胞于培养器上，在补充有10％Sigma牛胎儿血清、非必须氨基酸、2mM L-谷酰胺及500微克/毫升G418的Dulbecco氏变性Eagle氏培养基中生长(37℃，5％ CO2)。使用细胞解离缓冲剂，以自烧瓶中萃取细胞，然后将其在每井(20微升)2 x 104个细胞的密度下，于10％血清培养基中，覆盖至384-井Corning聚-D-赖胺酸涂覆的黑色/透明板中，并在37℃下，于5％ CO2培养器中培养15-24小时，直到获得细胞的汇合单层为止。
BTC-AM染料(Molecular Probes，Eugene，OR)的2mM储备液是在100％DMSO中制成，然后在检测当天，以1:1添加至DMSO中的10％(w/v)普洛尼克酸内。接着，将染料在hERG外部EP缓冲剂(140mM NaCl，4.0mM KCl，1.8mM CaCl2，1.0mM MgCl2，10mM HEPES，pH 7.3及10mM葡萄糖；所有缓冲剂成份均得自Sigma化学公司)中稀释。将此BTC染料混合物(30微升)添加至细胞中，并产生2.5μM的最后装填浓度。使细胞在21℃下培养45分钟。
将待测化合物以60微升稀释至10mM DMSO中。然后在1:2比例下，于DMSO中，在384-井板的直行1-10与11-20内，连续性地稀释这些化合物。预备检测板是经由从DMSO连续性地稀释的板点取2.5微升而产生，其是在Velocity 11 BioCel上制成。含水板是通过添加48微升EP缓冲剂而产生，然后在FLIPR上读取检测之前30-45分钟时进行稀释。装填染料后，将稀化合物水溶液添加至三个复制板(10微升)的细胞中，产生80μM至0.156nM的十点浓度范围。在检测中的最后DMSO浓度为1％。预备检测含水板在Cybio液体处理器上制备并稀释。
经装填染料的细胞在FLIPR384(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)上读取，其使用氩雷射的488毫微米线激发染料。发射是使用540±30毫微米带通滤波器过滤。hERG通道是通过添加含有66mM K2SO4与1.3mM Tl2SO4(Sigma/Aldrich)的20微升/井EP缓冲剂刺激而开启。对于各板，是每秒收集数据，历经12秒期间，此时添加含T1+的刺激缓冲剂。每秒进行数据收集，历经48秒，然后每三秒持续进行另外2分钟。
检测的动态范围是测定自空白试验与总体试验井。总体试验井(直行21与22)界定板(没有待测化合物存在)的最大hERG活化作用，而空白试验井(直行23与24)界定100％hERG抑制。空白试验井是含有400nM的标准hERG抑制剂多菲提得(dofetilide)(Ficker等人，1998)或E-4031的任一种。首先将各试样井中的原始数据点针对细胞/讯息偏差、负对照组(空白试验)背景，使用在线FLIPR软件作修正，并正常化至正对照组(总体试验)。然后，关于hERG T1+通量数据的待测化合物浓度响应曲线，使用Excel Fit(ID Business Solutions有限公司，Surrey，UK)，以单一位置计算术方程式(Y＝A+((B-A)/1+((C/X)＾D)))，其中A＝最大抑制)吻合(fit)。分析数据，其方式是将对T1+通量的荧光上最高变化幅度，对待测化合物的特定条件作吻合。化合物的功效(IC50值)是计算自三份复制井的平均值。
钠通道，位点2结合检测
也参阅：W.A.Catterall等人J.Biol.Chem.1981，256，8922。标准结合缓冲剂含有50mM HEPES，50mM Tris-HCl，pH7.4，130mM氯化胆碱，5.4mM KCl，0.8mM MgCl2，5.5mM葡萄糖，40微克/毫升LqT。结合反应是通过添加突触体(制自Wistar大白鼠脑部)至含有标准结合缓冲剂中的5nM[3H]-虾膜毒素和在所要浓度下欲被测试的化合物的反应混合物中而起始。然后将试样混合，并在37℃下培养60分钟。通过添加含有50mM HEPES，50mM Tris-HCl，pH7.4，1.8mM CaCl2，0.8mM MgCl2及1毫克/毫升牛血清白蛋白的冰冷洗涤缓冲剂使反应停止。立即收集突触体至玻璃纤维滤器上，并以洗涤缓冲剂洗涤3次。残留在滤器上的[3H]-虾膜毒素的放射活性，使用液体闪烁分光计计数。
平行人工膜渗透性检测(PAMPA)
平行人工膜渗透性检测(PAMPA)是包括被称为胃肠道(GIT)脂质的特殊调配卵磷脂为基料的脂质组合。此GIT脂质是用以在类似Caco-2检测中所使用的夹层板组装中形成膜。当通过已知会被动地吸收在人类中的标准化合物度量时，GIT脂质是接近地类似活体内细胞膜组合物与性能。PAMPA被广泛地作为发现化合物渗透性筛检的活体外模式使用。化合物经过PAMPA膜的通过速率，用以测定渗透系数(Pc)，其可能与化合物的活体内被动渗透性有关联。
特定化合物的渗透系数(Pc)是在具有顶端及底与外侧pH为74的pH依赖性环境中检验。所有实验均在三份复制测定中进行。
将化合物(在100％DMSO中的10mM储备液)于pH 7.4供体井缓冲剂(pION目录#110151)中以1:100稀释，提供1％ DMSO中的100μM检测溶液。将稀释于供体井缓冲剂中的化合物转移至Whatman单滤器板，并在分配200微升至检测板(pION目录#110163)的供体井之前过滤。PAMPA膜是通过以吸量管吸取4微升脂质溶液(pION目录#110169)至滤板(VWR目录#13503)上而形成。然后，将该膜以在pH7.4下的200微升受体井缓冲剂(pION目录#110139)覆盖。合并PAMPA检测板(供体侧与受体侧)，并使其在室温下培养4小时。接着将板拆开，并充填分光光度计板(VWR目录#655801)(150微升/井)。供体、受体、参考物及空白试验板在SpectraMax UV板读取器中读取。数据通过pION软件捕获，以此分析光谱且产生Pc值。
CCR2趋化性
人类CCR2趋化性检测是使用人类单核血球细胞系THP-1进行的。首先将THP-1细胞在37℃下，于不含酚红、不含BSA的RPMI-1640(pH7.4)中，以荧光染料钙黄绿素-AM标识，历经30分钟，伴随着每15分钟温和混合。然后，洗涤经标识的细胞，并于1 x 105/毫升下，再悬浮于趋化性缓冲剂(不含酚红的RPMI-1640，0.1％ BSA，pH7.4)中。将待测化合物在趋化性缓冲剂中稀释，以致使最后检测浓度范围为0.01nM至1μM。将配位体MCP-1(PeproTech公司)在趋化性缓冲剂中稀释至20nM。为进行此检测，将等体积的待测化合物稀释液与等体积的经标识THP-1细胞混合(混合物1)，并将等体积的待测化合物稀释液与等体积的稀MCP-1配位体混合(混合物2)。使两种混合物独立地在37℃下培养10分钟，接着温和混合。然后，MCP-1-所引致的趋化性是在趋化性板(Becton Dickinson)中，通过放置50微升混合物1于顶部室中，及225微升混合物2于底部室中进行测量。将板以盖子覆盖，并在37℃下培养30分钟。30分钟后，该板在Cytofluor上读取。所有条件均重复测试。关于信号对噪声测定，是将单独50微升经标识的THP-1细胞(5 x 104/井)置于顶部室中，并将单独225微升配位体MCP-1置于底部室中(最后浓度为10nM)。通过待测化合物的分级浓度所达成的抑制，是以不含化合物的MCP-1对照组的百分比计算的。IC50是被定义为达到细胞趋化性的50％抑制作用所需要的待测化合物浓度。
hERG贴片夹持
全细胞贴片夹持是在稳定地表达无性繁殖hERG钾通道α亚单位的HEK-293细胞中，用以直接地度量hERG电流。化合物是在室温下，于具有pH7.4的缓冲水溶液中测试的。施加重复性试验脉冲(0.05Hz)，从保持电位-80mV至+20mV，历时2秒，而尾电流是在试验脉冲之后，通过形成电压阶层至-65mV而被诱出的。来自化合物的作用是通过度量尖峰尾电流的抑制计算而得的。
钠通道贴片夹持
全细胞贴片夹持是在表达人类心脏钠通道SCN5A的HEK-293细胞中，用以直接地度量向内钠电流。化合物在不含蛋白质的缓冲水溶液中测试。关于测定稳定状态抑制，钠电流使用下述电压方案每5秒进行诱出：将细胞保持在-90mV的电位下，并逐步变到-20mV，历时60毫秒。在试验脉冲至-20mV期间，通过测量峰电流的抑制，计算其效果。抑制的速率依存性是通过在1Hz与4Hz频率下的刺激进行评估的。
在大白鼠中的单一剂量药物动力学
将雄性史泊格多利(Sprague-Dawley)大白鼠(250-300克)用于药物动力学研究。在经口服药之前，使大白鼠断食过夜，而于服药后4小时喂食。从颈静脉收集血液试样(～0.3毫升)至含K2EDTA的管中，然后在4℃下离心(1500-2000xg)，以获得血浆。在口服生物利用率研究中，使2组动物(每组N＝2-3)接受待测化合物，通过颈静脉、以静脉内(IV)灌注(历经10分钟)，或通过口腔灌食法。序列血液试样是在服药后，于0.17(仅针对IV)，0.25，0.5，0.75，1，2，4，6，8及24小时时获得的。将通过在4℃下离心(1500-2000xg)所获得的血浆试样，在-20℃下储存，直到通过LC/MS/MS分析为止。
在猴子中的单一剂量药物动力学
各种待测化合物的药物动力学是在公狝猴属猴子中，于交叉设计中评估的。在经口服药之前，使猴子断食过夜，而于服药后4小时喂食。使一组1-3只动物(3至5千克)通过股静脉通过IV灌注(历经10分钟)与通过口腔灌食法接受化合物，伴随着治疗之间的1周洗出。在服药后，于0.17(仅IV)，0.25，0.5，0.75，1，2，4，6，8及24小时时，从股动脉收集序列血液试样(～0.3毫升)，并在4℃下离心(1500-2000xg)，以获得血浆。将试样在-20℃下储存，直到通过LC/MS/MS分析为止。
关于药物动力学检测的数据分析
药物动力学参数是通过血浆浓度对时间数据的非区域分析(KINETICATM软件，4.2版，InnaPhase公司，Philadelphia，PA)获得。尖峰浓度(Cmax)与Cmax的时间自实验观察中直接记录。从时间零至最后取样时间的曲线下方面积(AUC(0-T))，是使用线性与对数梯形总和的组合计算而得的。总血浆清除率(CLTp)、分布的稳定状态体积(Vss)、表观脱除半衰期(T1/2)及平均停留时间(MRT)是于静脉内给药后估计的。T1/2的估计是使用具有可计量浓度的最少3个时间点得到的。绝对口服生物利用率(F)是作为口服与IV剂量后的剂量正常化AUC值的比例估计的。
当在上述检测中测量时，发现关于各化合物的下述数据。
表10.比较活体外数据
 
化合物 CCR2结合IC50(nM) hERG通量IC50(nM) Na+通道结合(％抑制) PAMPA渗透性(毫微米/秒)
实施例12as，WO2005021500  0.27(1) 2,800 不可取得 不可取得
实施例12ajWO2005021500 0.43±0.06(2) 770 不可取得 不可取得
实施例2kWO2005021500 0.88±0.60(23) 51,000 97％，10,000nM 529±157(9)
实施例12bdWO2005021500 1.15±0.07(2) >80,000 54％，10,000nM 392
实施例8aWO2005021500 1.83±0.80(12) >80,000 3％，10,000nM33％，30,000nM 94±58(10)
实施例8e，WO2005021500 2.20±0.03(2) >80,000 6％，10,000nM 2±2(2)
实施例9c，WO2005021500 0.96±0.26(19) >80,000 48％，10,000nM75％，30,000nM 145±71(8)
本发明实施例1 2.74±1.34(15) >80,000 13％，10,000nM32％，30,000nM 560±86(5)
表11a.其它比较活体外数据
 
化合物 CCR2趋化性IC50(nM)   hERG贴片夹持(％抑制)     Na+通道贴片夹持(％抑制)       
实施例2kWO2005021500 0.24±0.16(12) 83％，10,000nM 52％，10,000nM90％，30,000nM
实施例8aWO2005021500 2.63±1.24(4) 4％，10,000nM 22％，10,000nM49％，30,000nM
实施例9c，WO2005021500 0.21 4％，10,000nM 19％，10,000nM39％，30,000nM
实施例1，本发明 0.75±0.42(16) 12％，10,000nM19％，30,000nM 29％，30,000nM
表11b.在大白鼠中的比较活体内药物动力学数据
 
化合物 剂量IV/PO(毫克/千克) Cl(毫升/分钟/千克) F％ 口服AUC(nM＊h)
实施例2kWO2005021500 2.5/25 40 68 9294
实施例8aWO2005021500 6/72 42 1.4 690
实施例9c，WO2005021500 4/43 54 14 1855
实施例1，本发明 2/10 25 79 10169
表11c.在猴子中的比较活体内药物动力学数据
 
化合物 剂量IV/PO(毫克/千克) Cl(毫升/分钟/千克) F％ 口服AUC(nM＊h)
实施例2kWO2005021500 1/1.4 25 46 862
实施例8aWO2005021500 1/11 14 9.4 1896
实施例9c，WO2005021500 1/10 12 26 6763
实施例1，本发明 1/1 12 95 2352
实用性
使用本领域技术人员已知的检测方法，证实实施例的代表性化合物是趋化因子受体活性的调节剂。在此段落中，发明人是描述了这些检测方法并给出其文献参考资料。更多检测方法描述在上文标题为＂比较药理学特性＂的段落中。由于在这些MCP-1拮抗作用的检测中显现活性，故预期实施例的化合物可用于治疗与趋化因子及其同源受体有关联的人类疾病。当在特定检测中测量时，这些检测中活性的定义是其浓度表现出IC50为30μM或较低的化合物。
MCP-1结合至人类PBMC的拮抗作用
(Yoshimura等人，J.Immunol.1990，145，292)
实施例中所述的至少一种化合物，在此处所述的MCP-1结合至人类PBMC(人类外周血液单核细胞)的拮抗作用中，是具有活性的。
将微孔滤板(#MABVN1250)用100微升结合缓冲剂(0.5％牛血清白蛋白；20mM HEPES缓冲剂及5mM氯化镁在RPMI 1640培养基中)，在室温下处理三十分钟。为测量结合作用，
将50微升结合缓冲剂，使用或未使用已知浓度的化合物，与50微升125-I标识的人类MCP-1(以获得最后浓度为150pM放射配位体)及含有5 x 105个细胞的50微升结合缓冲剂合并。用于此种结合检测的细胞，可包括通过Ficoll-Hypaque梯度离心所分离的人类外周血液单核细胞、人类单细胞(Weiner等人，J.Immunol.Methods.1980，36，89)或表达内源受体的THP-1细胞系。将化合物、细胞及放射配位体的混合物在室温下培养三十分钟。将板置于真空歧管上，施加真空，及将板以含有0.5M NaCl的结合缓冲剂洗涤三次。将塑料边缘自板上移除，使板风干，将井穿孔及计数。结合作用的抑制百分比，是使用任何竞争化合物不存在下所获得的总计数，及通过添加100nM MCP-1替代待测化合物所测得的背景结合，计算而得的。
MCP-1-所引致钙流入量的拮抗作用
(Sullivan等人，Methods Mot.Biol.，114，125-133(1999)
在实施例中所述的至少一种化合物，在此处所述的MCP-1-所引致钙流入量检测的拮抗作用中，是具有活性的。
钙移动是使用荧光Ca2+指示剂染料Fluo-3测量。使细胞在8 x 105个细胞/毫升下，于含有0.1％牛血清白蛋白、20mM HEPES缓冲剂、5mM葡萄糖、1％牛胎儿血清、4μM Fluo-3AM及2.5mM羧苯磺丙胺的磷酸盐缓冲的盐水中，在37℃下培养60分钟。用于此种钙检测的细胞，可包括如由Weiner等人，J.Immunol.Methods，36，89-97(1980)所述分离的人类单细胞或表达内源CCR2受体的细胞系，比如THP-1与单Mac-6。然后，将这些细胞在含有0.1％牛血清白蛋白、20mM HEPES、5mM葡萄糖及2.5mM羧苯磺丙胺的磷酸盐缓冲的盐水中洗涤三次。使细胞再悬浮于含有0.5％牛血清白蛋白、20mM HEPES及2.5mM羧苯磺丙胺的磷酸盐缓冲的盐水中，最后浓度为2-4 x 106个细胞/毫升。将细胞覆盖于96-井黑色壁微板(100微升/井)中，并使板在200xg下离心5分钟。将不同浓度的化合物添加至井(50微升/井)中，并于5分钟后，添加50微升/井的MCP-1，以获得最后浓度为10nM。利用荧光成像板读取器检测钙移动。以氩激光(488nM)使细胞单层激发，并测量细胞结合的荧光达3分钟(对前90秒为每秒钟，而对后90秒为每10秒钟)。数据是以任意荧光单位产生，而对各井的荧光改变，是以最高-最低差别测得的。化合物依赖性的抑制，是相对于单独MCP-1的响应计算而得的。
MCP-1-所引致人类PBMC趋化性的拮抗作用
(Bacon等人，Brit.J.Pharmacol.1988，95，966)
实施例中所述的至少一种化合物，在此处所述的MCP-1-所引致人类PBMC趋化性检测的拮抗作用中，是具有活性的。
将Neuroprobe MBA96-96-井趋化室、Polyfiltronics MPC96井板及Neuroprobe不含聚乙烯基吡咯烷酮的聚碳酸酯PFD5 8-微米滤器，在37℃培养器中温热。使刚通过标准聚蔗糖密度分离方法分离的人类外周血液单核细胞(PBMC)(Boyum等人，Scand.J.Clin.Lab Invest.Suppl.1968，97，31)按1 x 107c/毫升，悬浮于DMEM中，并在37℃下温热。也将人类MCP-1的60nM溶液在37℃下温热。待测化合物的稀释液在DMEM中所需要浓度的2x下构成。将PBMC悬浮液与60nm MCP-1溶液，以1:1混合在具有预先温热DMEM的聚丙烯管中，使用或未使用待测化合物的稀释液。使这些混合物在37℃管件温热器中温热。为开始检测，将MCP-1/化合物混合物添加至Polyfiltronics MPC 96井板的井中，该板已被置于Neuroprobe趋化室的底部中。对各井来说，体积大约为400微升，且于分配后应为正弯月面。将8微米滤器温和地置于96井板的顶部，使橡胶垫片连接至上方室的底部，并将该室组装在一起。将200微升体积的细胞悬浮液/化合物混合物添加至上方室的适当井中。将上方室以板封闭器覆盖，并将组装好的单元置于37℃培养器中45分钟。培养后，移除板封闭器，并吸出所有残留细胞悬浮液。将此室拆开，并温和地移除滤器。在将滤器保持于90度角时，使用磷酸盐缓冲盐水的温和液流，洗去未迁移的细胞，并将滤器顶部以橡胶刮板的尖端擦拭。此洗涤再重复两次。使滤器风干，然后完全浸没在Wright Geimsa着色料中45秒。通过浸泡在蒸馏水中7分钟，洗涤滤器，然后在刚蒸馏的水中再洗涤15秒。使滤器再一次风干。滤器上的迁移细胞，通过目视显微镜术定量。
哺乳动物趋化因子受体提供了用于干扰或促进哺乳动物(比如人类)中免疫细胞功能的标的。会抑制或促进趋化因子受体功能的化合物，可特别用于调节免疫细胞功能，以提供治疗目的。因此，本发明涉及可用于预防及/或治疗很多种炎性、传染性及免疫调节病症与疾病的化合物，该病症与疾病包括哮喘与过敏性疾病，被致病微生物(其定义中包括病毒)感染，以及自身免疫病理学疾病，比如风湿性关节炎与动脉粥样硬化。
例如，能抑制哺乳动物趋化因子受体(例如人类趋化因子受体)的一种或多种功能的本发明化合物，可被给予，以抑制(意即降低或防止)发炎或感染疾病。结果，一种或多种炎性过程，比如白血球迁移、粘连、趋化性、胞裂外排(例如酶、组胺的胞裂外排)或炎性介体释出，均被抑制。
同样地，能促进哺乳动物趋化因子受体(例如人类趋化因子)的一种或多种功能的本发明化合物，其被给予以刺激(诱发或增强)免疫或炎性响应，比如白血球游出、粘连、趋化性、胞裂外排(例如酶、组胺的胞裂外排)或炎性介体释出，因而造成炎性过程的有利刺激。例如，可添补嗜伊红体，以对抗寄生感染。此外，如果人们预期传输足量化合物，经过引致趋化因子受体内部化作用，以造成细胞上的受体表达的损失，或以会造成细胞潜移的方向错误的方式传输化合物，前述炎性、过敏性及自身免疫疾病的治疗，也可预期使用本发明的化合物，其能促进哺乳动物趋化因子受体的一种或多种功能。
除了灵长类动物比如人类的外，多种其它哺乳动物也可根据本发明的方法进行治疗。例如，哺乳动物，包括但不限于乳牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、天竺鼠、大白鼠，或其它牛、羊、马、犬、猫科动物、啮齿动物或老鼠物种，均可治疗。但是，此方法也可实施在其它物种上，比如鸟类物种。在上述方法中治疗的患者，是为想要在其中调节趋化因子受体活性的雄性或雌性哺乳动物。于本文中使用的＂调节＂是意欲包括拮抗作用、催动作用、部份拮抗作用及/或部份催动作用。
CCR5结合与功能性检测
细胞衍生与细胞培养物：稳定地表现内源CC趋化因子受体5(CCR5)的HT1080细胞汇集库，使用由Harrington、Sherf及Rundlett所概述的方法发展(参阅美国专利US 6,361,972与US 6,410,266)。最高表达的无性繁殖系使用重复性流动细胞计数法分离，接着为次代无性繁殖。然后，将这些细胞按3 x 105个细胞/井，于6-井培养皿中培养，并以含有嵌合HA-标记的G蛋白质Gqi5的DNA载体转染(分子装置；得自酵素(Fermentes)的15微升Ex-Gen中的5微克线性化载体DNA用于该转染)。转染后两天，将井合并，并覆盖至P100板中。于覆盖后七天，选取菌落，扩张，并通过Western氏沾吸(blot)分析Gqi5含量。具有Gqi5(得自于转染)与CCR5(内源)的高度表达的无性繁殖系(称为3559.1.6)被选择并使用于下文所述的实验。将HT1080细胞(无性繁殖系3559.1.6)用补充有10％经渗析的牛胎儿血清、2％青霉素/链霉素/谷酰胺及500微克/毫升潮霉素B(最后浓度)的α-MEM，在37℃与5％ CO2下，于潮湿气层中培养。
细胞膜制剂：使含有1 x 108个HT1080细胞(无性繁殖系3559.1.6)的细胞丸粒再悬浮于5毫升冰冷细胞膜制备缓冲剂(50mM HEPES，5mMMgCl2，1mM CaCl2)中，并于冰上，在高速下，于Polytron均化器上均化20秒。将匀浆以另外25毫升细胞膜制备缓冲剂稀释，并离心12分钟(48,000xg，于4℃下)。在如前述再均化之前，使细胞丸粒再悬浮于5毫升细胞膜制备缓冲剂中。将匀浆以5毫升细胞膜制备缓冲剂稀释，并检测CCR5蛋白质浓度。
结合检测：将得自上述细胞膜制剂的刚制成的匀浆在结合缓冲剂(50mM HEPES，5mM MgCl2，1mM CaCl2，0.1％ BSA；于检测前，添加一份完全蛋白酶抑制剂片剂)中稀释，以达到最后蛋白质浓度为10微克/井(得自Corning公司的固体白色96-井板)。将此细胞膜制剂与WGA-SPA珠粒(Amerhsam；经预先浸泡于结合缓冲剂中)混合，以获得浓度为200微克/井。然后，将细胞膜/SPA珠粒混合物(100微升/井)添加至板中，该板已以2微升含有不同浓度待测物品的DMSO预加斑点(对负对照组为纯DMSO；对待测物品，为不同浓度的本发明实施例；500nM MIP-1β作为正对照组)。结合检测是通过添加50微升[125I]-MIP-1β(PerkinElmer；将物质在结合缓冲剂中稀释，以便使50微升/井的添加量能获得最后浓度为0.1nM[125I]-MIP-1β)引发的。将板密封，并在Packard TopCount上计数之前，使其在室温下静置4-6小时。计算待测物品的结合百分率，使用负与正对照组以限定各实验的限幅。
荧光计成像板读取器(FLIPR)-为基础的功能性检测：将HT1080细胞(无性繁殖系3559.1.6)在10,000个细胞/井(30微升)下覆盖于384-井板(黑色/透明底部Biocoat PDL，Beckton Dickinson)中，并装入30微升/井的Fluro-4AM荧光染料(通过溶解1毫克Fluro-4AM于440微升DMSO中，并在以10毫升Hanks缓冲剂进一步稀释之前，以100微升普洛尼克(pluronic)溶液稀释而制成)。将细胞在37℃与5％ CO2下培养30分钟，然后洗涤三次，并悬浮于检测缓冲液(20mM HEPES，1.2mM CaCl2，5mM MgCl2，2.5毫米羧苯磺丙胺(probenecid)，0.5％ BSA，1x Hanks)中。将待测物品在DMSO中连续稀释，然后于添加至细胞(10微升/井)中之前，用检测缓冲液进行1:10稀释。使用FLIPR，读取板的通量诱发(意即激动剂活性)(10-70秒)。接着将细胞用激动剂溶液(30微升/井；通过在100毫升检测缓冲液中，稀释30微升的100微摩尔浓度MIP-1β而制成；此方案在此检测中传输的最后浓度为5nM MIP-1β)进一步装填(charged)，板使用FLIPR读取一分钟。测定待测物品相对于0.4％ DMSO/缓冲剂负对照组的拮抗剂活性。
公开内容中的至少一种化合物为CCR2与CCR5两者的抑制剂，且可用以治疗与任一种趋化因子有关联的疾病。本发明化合物被认为是双拮抗剂。
可以趋化因子受体功能抑制剂治疗的人类或其它物种的疾病或症状，包括但不限于：炎性或过敏性疾病与症状，包括呼吸过敏性疾病，比如哮喘、过敏性鼻炎、过敏性肺病、过敏性肺炎、嗜伊红蜂窠纤炎(例如Well氏症候群)、嗜伊红肺炎(例如Loeffler氏症候群、慢性嗜伊红肺炎)、嗜伊红筋膜炎(例如Shulman氏症候群)、延迟型过敏性、组织间隙肺脏疾病(ILD)(例如自发性肺纤维变性或与ILD有关联的风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、关节粘连脊椎炎、系统硬化、Sjogren氏症候群、多肌炎或皮肌炎)；全身过敏或过敏性响应、药物过敏反应(例如对青霉素、头孢菌素类)、由于摄食受污染色胺酸所致的嗜伊红血球过多-肌痛症候群、昆虫螫伤过敏反应；自身免疫疾病，比如风湿性关节炎、牛皮癣关节炎、多发性硬化、全身性红斑狼疮、重症肌无力、幼年开始型糖尿病；丝球体性肾炎、自身免疫桥本氏病、Behcet氏疾病；移植排斥(例如在移植时)，包括同种移植排斥或移植物-对-宿主疾病；炎性肠疾病，比如克隆氏病与溃疡性结肠炎；脊椎关节病；硬皮病；牛皮癣(包括T-细胞所媒介的牛皮癣)，与炎性皮肤病，比如皮炎、湿疹、异位性皮炎、过敏性接触性皮肤炎、荨麻疹；脉管炎(例如坏死性、皮肤及过敏性脉管炎)；嗜伊红肌炎、嗜伊红筋膜炎；伴随着皮肤或器官的白血球浸入的癌症。其中不想要的炎性响应欲被抑制的其它疾病或症状，可经治疗，其包括但不限于脉管炎、易受伤害斑、静脉新血管内膜增生再灌注损伤、渗析-移植物新血管内膜增生、动脉-静脉旁路血管内膜增生、动脉粥样硬化、某些血液学噁性病症、细胞活素所引致的毒性(例如败血性休克、内毒素休克)、多肌炎、皮肌炎。人类或其它物种中可以趋化因子受体功能抑制剂治疗的传染性疾病或症状，包括但不限于HIV。
可以趋化因子受体功能的抑制剂治疗的人类或其它物种的疾病或症状，包括但不限于：免疫压抑，比如在具有免疫不全症候群的个体中的免疫压抑，比如AIDS或其它病毒感染，进行放射疗法、化学疗法、关于自身免疫疾病的疗法或药物疗法(例如皮质类固醇疗法)的个体，以上疗法会造成免疫压抑；由于先天性缺乏受体功能或其它原因所致的免疫压抑；及感染疾病，比如寄生疾病，包括但不限于蠕虫感染，比如线虫(圆形虫)；(鞭虫病、蛲虫病、蛔虫病、钩虫、类圆线虫病、旋毛虫病、丝虫病)；吸虫(血吸虫)(血吸虫病、分枝
Figure A200780032859D0112114204QIETU
虫病)、玥虫(带虫)(胞虫病、肥胖玥虫病、囊虫病)；内脏蠕虫、内脏游走性幼虫(例如弓蛔虫属)、嗜伊红胃肠炎(例如异尖属、Phocanema属)、皮肤游走性幼虫(巴西钩虫、犬钩虫)。因此，本发明化合物可用于预防与治疗极多种炎性、感染性及免疫调节病症与疾病。
此外，如果人们预期传输足量化合物，经过引致趋化因子受体内部化作用，以造成细胞上的受体表达的损失，或以会造成细胞潜移方向错误的方式传输化合物时，前述炎性、过敏性及自身免疫疾病的治疗，也可预期趋化因子受体功能的促进剂。
另一方面，本发明可用以评估G蛋白质偶合受体的推断专一激动剂或拮抗剂。本发明涉及将这些化合物用在关于能调节趋化因子受体活性的化合物的筛选检测的制剂与实行方面。此外，本发明化合物可用于确立或测定其它化合物对趋化因子受体的结合位置，例如在一检测中通过竞争性抑制或作为参考物，以将其已知活性与具有未知活性的化合物作比较。当发展新检测试验或方案时，根据本发明的化合物可用以测试其有效性。具体地说，此种化合物可于市售套件中提供，例如供使用于涉及前述疾病的医药研究上。本发明化合物也可用于评估趋化因子受体的推断专一调节剂。此外，人们可利用本发明的化合物，以检验不被认为是趋化因子受体的G蛋白质偶合受体的专一性，无论是作为不结合化合物的实施例，或作为在可帮助界定交互作用特定位置的受体上具有活性的化合物的结构变型。
本文中所公开的的化合物可用以治疗或预防病症，选自风湿性关节炎、骨关节炎、败血性休克、动脉粥样硬化、动脉瘤、发热、心血管作用、血液流动性休克、败血病症候群、绝血再灌注后的伤害、疟疾、克隆氏病、炎性肠疾病、分枝杆菌感染、脑膜炎、牛皮癣、充血性心衰竭、纤维变性疾病、恶病质、移植物排斥、自身免疫疾病、皮肤炎性疾病、多发性硬化、辐射伤害、氧过多肺胞伤害、HIV、HIV痴呆症、非胰岛素依赖性糖尿病、哮喘、过敏性鼻炎、异位性皮炎、自发性肺纤维变性、大泡型类天弹疮、蠕虫寄生感染、过敏性结肠炎、湿疹、结合膜炎、移植、家族性嗜伊红血球过多、嗜伊红蜂窠纤炎、嗜伊红肺炎、嗜伊红筋膜炎、嗜伊红胃肠炎、药物引致的嗜伊红血球过多、胆囊纤维变性、Churg-Strauss症候群、淋巴瘤、霍奇金(Hodgkin)氏疾病、结肠癌、Felty氏症候群、肉状瘤病、葡萄膜炎、阿耳滋海默氏、丝球体性肾炎与系统性红斑狼疮、食管鳞状细胞癌、神经病原性疼痛及肥胖。
另一方面，该化合物可用以治疗或预防炎性病症，选自风湿性关节炎、骨关节炎、动脉粥样硬化、动脉瘤、发热、心血管作用、克隆氏病、炎性肠疾病、牛皮癣、充血性心衰竭、多发性硬化、自身免疫疾病、皮肤炎性疾病。
另一方面，该化合物是用以治疗或预防炎性病症，选自风湿性关节炎、骨关节炎、动脉粥样硬化、克隆氏病、炎性肠疾病及多发性硬化。
另一方面，在本文中所公开的的实施例可用于治疗多种癌症，包括但不限于下述：
癌瘤，包括以下的癌瘤，膀胱(包括加速与转移性膀胱癌)、乳房、结肠(包括结肠直肠癌)、肾脏、肝脏、肺脏(包括小与非小细胞肺癌及肺脏腺癌)、卵巢、前列腺、睪丸、尿生殖道、淋巴系统、直肠、喉、胰脏(包括外分泌胰癌)、食道、胃、胆囊、子宫颈、甲状腺及皮肤(包括鳞状细胞癌)；
淋巴样血统的造血肿瘤，包括白血病、急性淋巴球白血病、急性淋巴胚细胞白血病、B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、霍奇金(Hodgkin)氏淋巴瘤、非霍奇金(Hodgkin)氏淋巴瘤、有毛细胞淋巴瘤、组织胞淋巴瘤及Burketts淋巴瘤；
髓样血统的造血肿瘤，包括急性与慢性骨髓性白血病、脊髓发育不良症候群、髓样白血病及前骨髓细胞白血病；
中枢与外周神经系统的肿瘤，包括星细胞瘤、神经胚细胞瘤、神经胶质瘤及神经鞘瘤；
间叶来源的肿瘤，包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤及骨肉瘤；以及
其它肿瘤，包括黑色素瘤、着色性干皮病、角质棘皮瘤、生殖细胞瘤、甲状腺滤胞癌及畸胎癌。
另一项具体实施方案中，本文中公开了治疗癌症的方法，其中癌症选自乳癌、肝癌、前列腺癌及黑色素瘤。此外，本文中所公开的化合物可用于治疗卵巢癌与多发性骨髓瘤。
本发明提供用于治疗多种非癌性增生疾病的方法。
合并治疗，用以预防与治疗炎性、传染性及免疫调节病症与疾病，包括哮喘与过敏性疾病，以及自身免疫病理学疾病，比如风湿性关节炎与动脉粥样硬化，及上文所指出的病理学疾病，通过本发明化合物与其它已知供此种利用的化合物的组合加以说明。例如，在治疗或预防炎症时，本发明化合物可并用消炎或止痛剂，比如阿片制剂激动剂、脂氧合酶抑制剂、环氧化酶-2抑制剂、间白血球活素抑制剂(比如间白血球活素-1抑制剂)、肿瘤坏死因子抑制剂、NMDA拮抗剂、氧化氮的抑制剂或氧化氮合成的抑制剂、非类固醇消炎剂、磷酸二酯酶抑制剂或细胞活素抑制用消炎剂，例如并用以下化合物，比如乙酰胺吩(acetaminophen)、阿司匹林、可待因、芬塔诺(fentaynl)、异丁苯丙酸(ibuprofen)、吲哚美萨辛(indomethacin)、酮洛拉克(ketorolac)、吗啡、那丙新(naproxen)、非那西汀(phenacetin)、吡氧胺(piroxicam)、类固醇止痛剂、磺非塔尼(sufentanyl)、山林达克(sunlindac)、干扰素α等。同样地，本发明化合物可伴随以下药物一起给药，疼痛舒解剂；强化剂，比如咖啡碱、H2-拮抗剂、聚二甲硅氧烷、氢氧化铝或镁；解除充血剂，比如苯肾上腺素、苯丙醇胺、伪麻黄碱、氧基美塔唑啉(oxymetazoline)、麻黄碱、
Figure A200780032859D0114114239QIETU
唑啉(naphazoline)、丁苄唑啉、氢化脱氧麻黄碱或左旋脱氧-麻黄碱；及镇咳药，比如可待因、二氢可待因酮、咳米吩(caramiphen)、卡贝他戊烷(carbetapentane)或右旋美索吩(dextramethorphan)；利尿剂；及镇静或非镇静抗组织胺药。同样地，于本文中所公开的的化合物可并用其它药物，此药物是用于治疗/预防/抑制或改善本发明化合物对其有用的疾病或症状。此种其它药物可通过其常用途径及量，与本发明化合物同时或相继地给药。当化合物与一或多种其它药物同时使用时，可使用除了本发明化合物以外含有此种其它药物的医药组合物。因此，该医药组合物，包括除了本发明公开内容中的化合物以外，也含有一种或多种其它活性成份的组合物。
可与本发明化合物并用的其它活性成份的实施例，无论是分别地或在相同医药组合物中给药，包括但不限于：(a)整合素拮抗剂，比如供选择素ICAM与VLA-4使用的；(b)类固醇类，比如贝可美塞松、甲基氢化泼尼松、β-美塞松、泼尼松、地塞米松及氢基可体松；(c)免疫抑制剂，比如环孢素、塔可利马斯(tacrolimus)、雷帕霉素及其它FK-506型免疫抑制剂；(d)抗组织胺类(H1-组织胺拮抗剂)，比如溴吩尼拉明(bromopheniramine)、氯吩尼拉明(chlorpheniramine)、地氯吩尼拉明(dexchlorpheniramine)、三普利定(triprolidine)、克列马斯汀(clemastine)、苯海拉明(diphenhydramine)、二苯基吡拉林(diphenylpyraline)、吡甲胺(tripelennamine)、羟嗪(hydroxyzine)、甲二拉嗪(methdilazine)、异丙嗪(promethazine)、异丁嗪(trimeprazine)、氮塔丁(azatadine)、西普洛庚汀(cyproheptadine)、安他唑啉、吩尼拉明新安替根、阿斯特米唑(astemizole)、特菲那定(terfenadine)、罗拉他汀(loratadin)、西替利嗪(cetirizine)、非克索吩拿定(fexofenadine)、脱乙氧羰基罗拉他汀等；(e)非类固醇抗气喘剂，比如b2-激动剂(间羟特丁肾上腺素、间丙特瑞醇(metaproterenol)、芬忒醇、新异丙肾上腺素、阿布特拉(albuteral)、必托特醇(bitolterol)及吡丁特醇(pirbuterol))、茶碱、色甘酸钠、阿托品、溴化依普拉搓品(ipratropiumbromide)、白三烯素拮抗剂(扎鲁司特(zafirlukast)、蒙帖路卡斯特(montelukast)、普朗路卡斯特(pranlukast)、衣拉路卡斯特(iralukast)、波毕路卡斯特(pobilukast)、SKB-102，203)、白三烯素生物合成抑制剂(吉留通(zileuton)、BAY-1005)；(f)非类固醇消炎剂(NSAID)，比如丙酸衍生物(阿米诺丙吩、苯萨丙吩(benxaprofen)、布可洛西酸、卡丙吩、联苯丁酮酸、菲诺丙吩(fenoprofen)、弗丙吩(fluprofen)、氟双丙吩、异丁苯丙酸(ibuprofen)、吲哚丙吩(indoprofen)、氧代丙吩(ketoprofen)、米罗丙吩(miroprofen)、那丙新(naproxen)、噁普罗辛(oxaprozin)、吡丙吩、普南丙吩(pranoprofen)、苏丙吩(suprofen)、提普若吩克酸(tiaprofenic acid)及提氧丙吩)，醋酸衍生物(吲哚美萨辛(indomethacin)、阿谢美塔辛(acemetacin)、阿可洛吩拿克(alclofenac)、克利达拿克(clidanac)、二可吩拿克(diclofenac)、吩可吩拿克、氯苯噻唑乙酸、吩提查克(fentiazac)、氟若吩拿克、对异丁基苯乙酸、异克西百克(isoxepac)、噁皮拿克(oxpinac)、沙林达克(sulindac)、提品拿克、四苯酰吡咯乙酸(tolmetin)、纪多美塔辛及周美皮克(zomepirac))，灭酸衍生物(氟灭酸、甲氯灭酸、甲灭酸、尼灭酸及甲苯灭酸)，联苯基羧酸衍生物(二氟苯柳酸与氟吩尼索(flufenisal))，氧胺类(oxicams)(异氧胺(isoxicam)、吡氧胺(piroxicam)、苏氧胺(sudoxicam)及天氧胺(tenoxicam))，柳酸酯类(乙酰柳酸、硫酸沙嗪(sulfasalazine))，及咪唑咔类(炎爽痛、苄间戊二烯酮、戊烯保泰松、莫非布塔宗(mofebutazone)、氧基苯基保泰松、苯基保泰松)；(g)环氧化酶-2(COX-2)抑制剂；(h)磷酸二酯酶型IV(PDE-IV)抑制剂；(i)趋化因子受体的其它拮抗剂；(j)胆固醇降低剂，比如HMG-COA还原酶抑制剂(洛伐制菌素(lovastatin)、辛伐制菌素(simvastatin)及普拉伐制菌素(pravastatin)、弗伐制菌素(fluvastatin)、阿托伐制菌素(atorvsatatin)及其它制菌素)，多价螯合剂(消胆胺与可列斯替保(colestipol))，尼可同(nicotonic)酸，非诺纤酸衍生物(杰非布洛吉(gemfibrozil)、可洛纤(clofibrat)、非诺纤酸酯(fenofibrate)及苯杂纤酸酯(benzafibrate))，及普洛布可(probucol)；(k)抗糖尿病剂，比如胰岛素、磺酰基脲类、双缩胍(二甲双胍)、a-配醣酶抑制剂(阿卡糖(acarbose))及葛塔宗(glitazone)类(
Figure A200780032859D0116114259QIETU
葛塔宗(troglitazone)与皮欧葛塔宗(pioglitazone))；(l)干扰素制剂(干扰素α-2a、干扰素-2B、干扰素α-N3、干扰素β-1a、干扰素β-1b、干扰素γ-1b)；(m)抗病毒化合物，比如依发伯恩姿(efavirenz)、聂伯拉平(nevirapine)、因地那伯(indinavir)、建西可洛伯(ganciclovir)、拉米五定(lamivudine)、发西可若伯(famciclovir)及佳西塔宾(zalcitabine)；(o)其它化合物，比如5-氨基水杨酸及其前体药物，抗代谢物，比如硝基唑硫嘌呤与6-巯基嘌呤，及细胞毒性癌症化学治疗剂。本发明化合物对第二种活性成份的重量比，可以改变，且是依各成份的有效剂量而定。
通常，使用每一种的有效剂量。因此，例如，当本发明化合物与NSAID并用时，本发明化合物对NSAID的重量比，一般范围为约1000:1至约1:1000，或者，从约200:1至约1:200。本发明化合物与其它活性成份的组合，通常也在前述范围内，但在各种情况中，应使用各活性成份的有效剂量。
在治疗癌症方面，化学治疗剂及/或其它治疗法(例如放射疗法)的组合经常是有利的。第二种(或第三种)药剂可具有与主要治疗剂相同或不同的作用机制。采用细胞毒性药物组合可为特别有用，其中被给予的两种或多种药物是以不同方式或在细胞循环的不同阶段中发生作用，及/或其中两种或多种药物具有重迭毒性或副作用，及/或其中被合并的药物在治疗由患者所明示的特定疾病状态上各具有经证实的功效。
因此，本文中所公开的化合物(或本文中所公开的其它化学式)可结合其它抗癌剂和细胞毒剂一起给药并可用于治疗癌症或其它增生疾病的治疗法。本文中的发明进一步包括本文中的化合物(或本文中所公开的其它化学式)在药剂制备中的用途，该药剂用于治疗癌症，及/或其包括本文化合物与说明书一起的包装，该说明书是指示化合物可并用其它抗癌剂或细胞毒剂及用于治疗癌症的治疗法。本发明进一步包括该化合物与一种或多种其它药剂的组合，呈套件形式，例如其中它们被包装在一起，或置于被作为套件一起销售的分离的包装中，或其中它们被包装以被一起调配。
第二种(或多种)抗癌剂可选自下列的任一种或多种：
烷基化剂(包括氮芥末类、烷基磺酸盐、亚硝基脲类、乙烯亚胺衍生物及三氮烯类)；抗血管生成剂(包括间质金属蛋白酶抑制剂)；抗代谢物(包括腺苷脱胺酶抑制剂、叶酸拮抗剂、嘌呤类似物及嘧啶类似物)；抗生素或抗体(包括单克隆抗体、CTLA-4抗体、蒽环霉素)；芳香酶抑制剂；
细胞循环响应改变剂；酶；法呢基蛋白质转移酶抑制剂；
激素与抗激素剂及类固醇(包括合成类似物、类皮质糖、雌激素/抗雌激素剂[例如SERM]、雄激素/抗雄激素剂、黄体制剂、黄体酮受体激动剂及促黄体生成激素释出[LHRH]激动剂与拮抗剂)；似胰岛素生长因子(IGF)/似胰岛素生长因子受体(IGFR)系统调节剂(包括IGFR1抑制剂)；整合素发出讯息抑制剂；激酶抑制剂(包括多激酶抑制剂及/或Src激酶或Src/abl抑制剂、环素依赖性激酶[CDK]抑制剂、panHer、Her-1及Her-2抗体，VEGF抑制剂，包括抗-VEGF抗体，EGFR抑制剂、有丝分裂原活化蛋白质[MAP]抑制剂、MEK抑制剂、极光体激酶抑制剂、PDGF抑制剂及其它酪胺酸激酶抑制剂或丝胺酸/苏胺酸激酶抑制剂；
微管瓦解剂，比如也天西定(ecteinascidin)或其类似物及衍生物；微管安定化剂，比如红豆杉烷类与天然生成的艾波希酮(epothilone)及其合成与半合成类似物；
微管结合、去稳定化剂(包括长春花植物碱)；及
拓朴异构酶抑制剂；异戊烯基蛋白质转移酶抑制剂；铂配位错合物；讯息转导抑制剂；及其它作为抗癌使用的药剂，以及细胞毒剂，比如生物响应改变剂、生长因子及免疫调节剂。
此外，本发明化合物可其它治疗剂一起调配或共同给药，该其它治疗剂是针对其在寻求解决与前述症状有关联副作用上的特定实用性进行选择的。例如，本发明化合物可与数种药剂一起调配，以预防恶心、过敏性及胃刺激，比如止吐药，及H1与H2抗组胺药。
上述其它治疗剂，当与本发明化合物合并采用时，可例如以医师的桌上参考数据(Physicians′Desk Reference)(PDR)中所指示的量使用，或如本领域技术人员已知以其它方式所测得的。
这些化合物是以治疗上有效量给予哺乳动物。所谓＂治疗上有效量＂，是意谓本发明公开内容中的化合物当单独或并用另一种治疗剂对哺乳动物给药时，有效预防或改善疾病状态或疾病进展的量。
剂量与配方
本公开内容中的化合物可以口服剂型给药，比如片剂、胶囊(其每一个均包含持续释出或按时释出配方)、丸剂、粉末、颗粒、酏剂、酊剂、悬浮液、糖浆及乳化液。其也可以静脉内(推注或输液)、腹膜腔内、皮下或肌内形式给药，全部均使用药物领域普通技术人员熟知的剂型。其可单独给药，但一般是与医药载体一起给药，根据所选定的给药途径及标准医药实务作选择。
本发明化合物的剂量服用法，当然是依已知因素而改变，比如特定药剂的药效特性及其给药模式与途径；接受者的物种、年龄、性别、健康状况、医疗症状及体重；病征的性质与程度；共同治疗的种类；治疗频率；给药途径，患者的肾与肝功能，及所需要的效果。医师或兽医可决定及对所需要药物的有效量开处方，以预防、抗衡或遏制病症的发展。
以下述作为一般指引，各活性成份的每日口服剂量，当用于所指示的作用时，其范围是在约每天0.001至1000毫克/千克体重之间，或在每天约0.01至100毫克/千克体重之间，或者，在约1.0至20毫克/千克/天之间。静脉内方式的剂量，在恒定速率输液期间，是从约1至约10毫克/千克/分钟。本发明化合物可以单一日服剂量给药，或总日服剂量可以每日二、三或四次的分离剂量给药。在一项具体实施方案中，活性成份的每日口服剂量是在3与600毫克的间，无论是每日给药一次，或以分离剂量每日给药两次。或者，活性成份可以10-20毫克的剂量给予，每日给药两次，或以40至100毫克，每日给药一次。或者，活性成份可一天两次给予12.5毫克的剂量，或一天一次75毫克。或者，活性成份可以3，10，30，100，300及600毫克的剂量给予，无论是一天给予一次或两次。
本发明化合物可以鼻内形式，通过局部使用的适当鼻内载体，或通过经皮途径，使用经皮的皮肤贴药给药。当以经皮传输系统形式给药时，剂量给药在整个剂量用法中当然是连续的，而非间歇性的。
这些化合物通常与适当医药稀释剂、赋形剂或载体(于本文中总称为医药载体)混合给药，其是针对所意欲包括的给药形式适当地选择的，意即口服片剂、胶囊、酏剂、糖浆等，并与常规医药实践相一致。
例如，对于以片剂或胶囊形式的口服给药而言，活性药物成份可与口服、无毒性、药学上可接受的惰性载体合并，比如乳糖、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、甘露醇、山梨醇等；对于呈液体形式的口服给药而言，口服药物成份可与任何口服、无毒性药学上可接受的惰性载体合并，比如乙醇、甘油、水等。此外，当希望或必要时，也可将适当粘合剂、润滑剂、崩解剂及着色剂并入混合物中。适当粘合剂包括淀粉、明胶，天然糖类，比如葡萄糖或β-乳糖、玉米增甜剂，天然与合成胶质，比如阿拉伯胶、西黄蓍树胶或海藻酸钠，羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡类等。在这些剂量形式中使用的润滑剂，包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、醋酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、呫吨胶等。
本发明化合物也可以脂质体传输系统形式给药，比如小单层状泡囊、大单层状泡囊及多层状泡囊。脂质体可由多种磷脂类制备，比如胆固醇、硬脂基胺或磷脂酰胆碱。
本发明化合物也可与作为可达标的药物载体的可溶性聚合物偶合。此种聚合物可包括聚乙烯基吡咯烷酮、吡喃共聚物、多羟基丙基甲基丙烯酰胺-酚、多羟基乙基天门冬胺酰胺酚或被棕榈酰基残基取代的聚氧化乙烯-聚赖胺酸。此外，本发明化合物可偶合至可用于达成药物受控释放的生物可降解聚合物种类，例如聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸与聚乙醇酸的共聚物、聚ε-己内酯、聚羟丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基酰化物及水凝胶的交联或两亲嵌段共聚物。
适用于给药的剂型(医药组合物)，每剂量单位可含有约1毫克至约100毫克活性成份。在这些医药组合物中，活性成份通常是以约0.5-95重量％的量存在，以组合物的总重量为基准。
明胶胶囊可含有活性成份与粉末状载体，比如乳糖、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸等。可使用类似稀释剂，以制造压缩片剂。片剂与胶囊可被制成持续释放产物，以提供药物的连续释放，历经数小时期间。压缩片剂可用糖涂覆或薄膜涂覆，以掩盖任何令人不愉快的味道及保护片剂隔离大气，或用肠溶性物质涂覆，以在胃肠道中选择性崩解。
供口服给药的液体剂量形式，可含有着色剂与矫味剂，以增加病人接纳性。
一般而言，水、适当油、盐水、含水右旋糖(葡萄糖)及相关糖溶液，以及二醇类，比如丙二醇或聚乙二醇，是非经肠溶液用的适当载体。供非经肠给药用的溶液，可含有活性成份的水溶性盐，适当稳定剂，及若必要时使用的缓冲物质。抗氧化剂，比如亚硫酸氢钠、亚硫酸钠或抗坏血酸，无论是单独或合并，都是适当的稳定剂。也使用柠檬酸及其盐类，以及EDTA钠。此外，非经肠溶液可含有防腐剂，比如氯化苄烷氧铵、对羟基苯甲酸甲酯或丙酯及氯丁醇。
适当医药载体描述于Remington氏医药科学中，Mack出版公司，其为本领域中的标准参考书。
供本发明化合物给药用的代表性有用医药剂型，可说明如下：
胶囊
大数目的单位胶囊可通过充填标准两片式硬明胶胶囊而制成，各具有100毫克粉末状活性成份、150毫克乳糖、50毫克纤维素及6毫克硬脂酸镁。
软明胶胶囊
可制备活性成份在可消化油比如大豆油、棉籽油或橄榄油中的混合物，并利用正位移泵注入明胶中，以形成含有100毫克活性成份的软明胶胶囊。这些胶囊应经洗涤并干燥。
片剂
片剂可通过常规程序制成，因此剂量单位为100毫克活性成份、0.2毫克胶态二氧化硅、5毫克硬脂酸镁、275毫克微晶性纤维素、11毫克淀粉及98.8毫克乳糖。可涂敷适当涂层，以增加可口性或延迟吸收。
可注射剂
适合通过注射给药的非经肠组合物可通过将1.5重量％活性成份在10体积％的丙二醇和水中搅拌而制成。溶液应以氯化钠形成等渗性，及经灭菌。
悬浮液
可制备含水悬浮液以供口服给药，因此各5毫升含有100毫克细分活性成份、200毫克羧甲基纤维素钠、5毫克苯甲酸钠、1.0克山梨醇溶液(美国药典)和0.025毫升香草醛。
在本发明化合物与例如其它抗凝血剂(anticoagulant)合并的情况中，日服剂量可为每千克病人体重约0.1至100毫克式I化合物，和约1至7.5毫克第二种抗凝血剂。对片剂形式而言，本发明化合物一般可以每剂量单位约5至10毫克的量存在，而第二种抗凝血剂的量为每剂量单位约1至5毫克。
在两种或多种前述第二种治疗剂与实施例的化合物一起给药的情况中，鉴于治疗剂在组合给药时的附加的或增效作用，各成份在一典型日服剂量与典型剂型中的量，相对于当该药剂单独给药时的常用剂量，通常可被降低。
特别是当以单一剂量单位提供时，在所合并的活性成份之间，存有化学交互作用的可能性。因此，当实施例的化合物与第二种治疗剂合并在单一剂量单位中时，调配时要做到，虽然将活性成份合并在单一剂量单位中，但活性成份间的物理接触是被降至最低(意即减少)。例如，可将一种活性成份以肠溶性物质涂覆。通过肠溶性涂覆其中一种活性成份，则不仅能够使所合并活性成份间的接触降至最低，而且能够控制其中一种这些成份在胃肠道中释出，以致使其中一种这些成份不会在胃中释出，而是在肠中释出。其中一种活性成份也可涂覆一种物质，该物质会在整个胃肠道中达成持续释出，且也用其使所合并活性成份间的物理接触降至最低。此外，此持续释出成份可另外用肠溶性物质涂覆，以致使此成份的释出仅发生于肠中。又另一种途径是涉及组合产物的调配，其中将一种成份涂覆持续性及/或肠溶性释出的聚合体，而另一种成份也涂覆聚合物，比如低粘度级羟丙甲基纤维素(HPMC)或如本领域中已知的其它适当物质，以进一步分隔活性成份。此聚合物涂层是用以形成对于与另一种成份交互作用的额外障壁。
使本发明组合产物成份间的接触降至最低的这些以及其它方式，无论是以单一剂量形式给药或以个别形式但同时通过相同方式给药，一旦了解本发明公开的内容后，均将为本领域技术人员所容易了解的。
此外，本文中所公开的某些化合物可作为其它化合物的新陈代谢产物使用。因此，在一项具体实施方案中，化合物或者可作为实质上纯的化合物使用，则其也可被并入医药组合物中，或可作为新陈代谢产物使用，该代谢产物是于该化合物之前体药物给药后产生的。在一项具体实施方案中，化合物由于可用于治疗如本文中所述的病症，而可作为新陈代谢产物使用。
本文中使用的＂实质上纯＂是意欲包括具有纯度大于约90重量百分的化合物，包括约90，91，92，93，94，95，96，97，98，99及100百分。
作为一项实施例，本文中所公开的的化合物具有纯度大于约90百分(重量)，为实质上纯的，其中小于约10百分的其余物质包括化合物的其它代谢产物，化合物的前体药物，及/或由于其制备而发生的反应物及/或处理不纯物。
显然地，在明白上文陈述内容之后，本发明的许多修正与变型均为可能。因此，应该了解，在随文所附权利请求的范围内，本发明可按本文中所详述用其它方式实施。
活体内检测与功效
N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺(也被称为＂实施例1＂)是在下述的活体内检测中评估，如下文所述。
段落1.在狝猴属猴子中，于皮内(ID)MCP-1激发之后，实施例1会阻断单核细胞添补至皮肤
MCP-1的皮内注射会造成单核细胞至注射位置的浸润。此模型的最初发展是为了评估CCR2拮抗剂对于单核细胞浸润至用人类MCP-1所注射的皮肤组织中的抑制作用。细胞浸润可半定量地通过组织学记分计量。
方法
使各猴子每日一次服用实施例1或其载体对照物(0.05N HCl)，历经三天。将实施例1以0，5，10或20毫克/千克的剂量经口方式给予4只狝猴属猴子的组群(每组每性别2只)。于第3天服药后，立即使所有动物接受2次10微克(50微升/注射)人类MCP-1(R&D系统)的皮内注射，及2次其DPBS对照物(50微升/注射)的皮内注射，注射点在背侧胸部上的分别的位点。所有位置的真皮切片检查均在MCP-1(或DPBS)激发后大约18小时获得。使切片检查进行半定量组织学评估。皮肤试样的代表性部分通过光学显微镜检查法检验，注意到显微损伤与细胞浸润，并将其发生率以表列出。
除了切片检查分析以外，收集血液，并评估全血液计数与细胞差别。也评估血浆试样的化合物(与代谢产物)浓度，和血清试样的系统MCP-1含量。
结果
单核细胞响应MCP-1激发而添补至用载体处理对照动物的皮肤是显著的(平均组织学评分为2.0，具有1-3的范围，表10)。在5、10及20毫克/千克时，实施例1会抑制了此真皮单核细胞浸润，分别达75％、95％及95％(表10与图20)。该化合物也会阻断其它细胞类型的浸润，比如嗜伊红细胞与嗜中性白血球(表12)。实施例1在18小时时的血浆浓度，及其与抑制程度和Cyno趋化性IC90值的关系摘录于表12中。在cyno趋化性检测中，基于实施例1的IC50值7.1±2.7nM，5、10及20毫克/千克剂量，在服药后18小时，造成自由血浆浓度为趋化性IC90的0.8-、2.1-及4.3-倍(表12)。
表12
在狝猴属猴子中实施例1对于单核细胞及其它细胞类型响应MCP-1激发的浸润的作用的摘述a，b
 
剂量(毫克/千克)  自由血浆浓度(nM)     趋化性IC90倍数 单核细胞评分(范围)(抑制％)   PMNc评分(范围)   Eosd评分(范围)   总细胞评分(范围)
0 0 0 2.0(1-3)(0％) 0.3(0-1) 1.5(0.5-3) 4.0(2-6e)
5 99 0.8 0.5(0-1)(75％) 0.1(0-0.5) 1.4(1-2) 2.0(1-3)
10 248 2.1 0.1(0-0.5)(95％) 0.1(0-0.5) 0.8(0.5-1) 1.0(0.5-2)
20 512 4.3 0.1(0-0.5)(95％) 0(0-0) 0.8(0.5-1) 0.9(0.5-1)
a使用任意定的标定系统，从0至4，各数目代表炎性浸润的特定指称，如下：0，不显著数目的炎性细胞；0.5，微量；1，最少；2，温和；3，中等；4，显著浸润。
b平均值为8个MCP-1位置组织切片的平均，代表2个分别组织切片，得自每组4只猴子。范围表示每只动物2个组织切片的平均组织学评分的宽度。
cPMN代表多形核细胞(嗜中性白血球)。
dEos为嗜伊红细胞的缩写。
e总评分为各细胞类型展现剂量响应的平均值的数学总和。
血清炎性介体上的变化的评估表明，在实施例1治疗组中，相对于载体对照组，在MCP-1含量上的增加(大约3-4倍)。此外，全血液计数(CBC)分析显示在实施例1治疗组中，相对于载体对照组，在服药三天后，在第4天的18小时，在嗜中性白血球上的增加(～2-倍)。
为了在可更容易计量系统中精细化实施例1的剂量(浓度)响应，我们使用hCCR2KI老鼠，用以在使用流动细胞计数为基础的操作法的巯基乙酸酯(TG)-所引致的腹膜炎模型中，评估实施例1对于单细胞/巨噬细胞浸润的作用。
段落2.在hCCR2KI老鼠的48-小时TG腹膜炎模型中，实施例1抑制单细胞/巨噬细胞浸润
TG-所引致的腹膜炎模型已被使用作为单细胞/巨噬细胞添补至发炎位置的模型。自己进行的和已发表的研究，都已证实在此模型中的单细胞/巨噬细胞添补是CCR2-依赖性的。参阅Boring L.等人，在C-C趋化因子受体2被剔除的老鼠中减弱的单细胞潜移与经降低的类型1(Th1)细胞活素回应.J Clin Invest.，100(10)：2552-61.(1997)；与Kuziel，WA.等人，在缺乏CC趋化因子受体2的老鼠中严重降低白血球粘连性与单细胞外渗.Proc Natl Acad Sci USA.94(22)：12053-8(1997)。
方法
关于48-小时TG腹膜炎研究，是一天两次服用实施例1，其中第一次服药是在TG注射前一小时给予。总腹膜细胞计数是在经单离的细胞上通过细胞计数器获得。于各研究结束时，也自后眶窦收集血液于肝素中，供流动细胞计数法，及在EDTA中，供测定药物浓度。
关于流动细胞计数分析，是将腹膜渗出物细胞(1 x 106)用FACS缓冲剂(PBS/0.5％ BSA)洗涤一次，并再悬浮于FACS缓冲剂中。使细胞在冰上以Fc-阻断抗体(BD Pharmingen)培养15分钟，接着添加下列抗体(BDPharmingen)：PE共轭抗-F4/80、FITC共轭抗-Ly6c及Alexa 647共轭抗-hCCR2。在冰上45分钟后，使细胞在冰上通过BD Cytofix固定，历经15分钟，以FACS缓冲剂洗涤两次，并再悬浮于200微升FACS缓冲剂中。对于各试样获得细胞事件(40,000)，且数据是使用FloJo软件(TreeStar)分析。设定FSC/SSC闸门，以包含所有单细胞(低SSC，较高FSC)，同时将粒性细胞排除于分析之外。然后，将此选通的个体群分析Ly6C(FITC)、F4/80(PE)表达。腹膜单细胞/巨噬细胞数目通过下述方式测定，将通过细胞计数器所获得的总腹膜细胞计数和通过得自流动细胞计的F4/80+细胞所确认单细胞/巨噬细胞的百分比相乘。平均值间差异的统计学显著性使用配对二尾式(two-tailed)t试验法分析，具有被设定在P值低于0.05以下的显著性。
结果
实施例1是在hCCR2KI老鼠TG腹膜炎模型中评估的，以测定其在抑制单细胞/巨噬细胞浸润上的EC50。老鼠是被给予巯基乙酸酯，且在1，25或100毫克/千克下每天两次(BID)经口服用实施例1。TG治疗后四十八小时，获得腹膜灌洗物，以通过流动细胞计数法供细胞浸润分析。
为区别经添补的单细胞/巨噬细胞对留置的巨噬细胞与粒性细胞，故用F4/80与Ly6C单细胞/巨噬细胞表面标记物的染色，以界定经添补的单细胞/巨噬细胞。发现单细胞/巨噬细胞浸润上的剂量依赖性抑制(图21)。1，25，100毫克/千克的剂量分别获得24％，74％及78％的抑制。在使用多剂量的三项个别研究中，关于抑制单细胞/巨噬细胞浸润，通过此分析的平均EC50被估计为3.9nM。
为了评估在hCCR2KI老鼠的48-小时巯基乙酸酯腹膜炎模型中，被实施例1占领的活体内受体含量，故度量实施例1与老鼠MCP-1两者的血浆含量。对于此评估要注意的是，仅CCR2及其主要配位体MCP-1被纳入考虑。在竞争性抑制剂存在下，配位体的受体占领是通过Gaddum方程式界定的：
[ RL ] [ R ] = 1 1 + ( K d / [ L ] ) ( 1 + [ I ] / K i )
由于实施例1为MCP-1结合至CCR2的竞争性抑制剂，故老鼠MCP-1/CCR2受体复合物与实施例1/CCR2受体复合物两者的量可使用老鼠MCP-1与蛋白质-未结合实施例1两者在血浆中的血清含量测得。老鼠MCP-1结合至hCCR2的Kd为0.91+/-0.08nM(n＝8)，其是在冷竞争配位体结合实验中，使用125I-人类MCP-1测得的。实施例1结合至hCCR2的平均Ki为1.3nM。老鼠MCP-1/CCR2受体复合物的分率是使用上述方程式的形式测定的。为测定实施例1/CCR2复合物的分率，该方程式被再定义为：
[ RI ] [ R ] = 1 1 + ( K i / [ I ] ) ( 1 + [ L ] / K d )
最后，不含CCR2的量由下式测定：
[CCR2]总计＝[CCR2]不含+[老鼠MCP-1/CCR2]+[实施例1/CCR2]
如表13中所示，在48小时时单细胞/巨噬细胞浸润至腹膜中的抑制百分比，反映出实施例1/CCR2受体复合物的百分比。
表13
在48-小时TG腹膜炎模型中，实施例1在hCCR2KI老鼠血液中的活体内受体占领的测定
 
剂量(毫克/千克) 血浆中老鼠MCP-1的浓度(nM)     血浆中自由态实施例1的浓度(nM)(IC90 CCR2结合倍数)  老鼠MCP-1结合的CCR2的％ 实施例1-结合CCR2的％ ％自由态CCR2 单细胞/巨噬细胞浸润的％抑制a 
100 0.015 53(1.8) 0.04 97.6 2.4 78
25 0.017 14(0.5) 0.16 91.2 8.6 74
1 0.005 1.4(0.05) 0.26 51.4 48.3 24
0(载体) 0 0 0 0 100 0
段落3.慢性功效研究
实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)
方法
为了评估实施例1对慢性疾病模型的效果，我们在hCCR2KI老鼠中使用多发性硬化的EAE模型。为研究实施例1对EAE模型的作用，使用每组10只老鼠。于第0天，使hCCR2KI老鼠以总共200微升在不完全Freund氏佐剂(IFA)(Sigma-Aldrich)中的300微克髓磷脂寡树突胶质细胞糖蛋白(MOG)35-55(Genemed Synthesis)，以1:1与300微克结核分枝杆菌(H37Ra)(Becton-Dickinson)混合，以皮下方式免疫。于第0天(免疫作用后两小时)与第2天，将老鼠以腹膜腔内方式注射100微升的400毫微克百日咳毒素。于第10天开始临床记分，在整个研究中每周持续三次，且以0-5的尺度为基础：0，没有疾病迹象；0.5，部份尾部虚弱；1，下垂尾或摇摆步态与尾部紧张性；1.5，摇摆步态与部分尾部虚弱；2，摇摆步态与下垂尾(失调)；2.5(失调与部分肢体瘫痪；3，一个肢体完全瘫痪；3.5，一个肢体的完全瘫痪与第二个肢体的部分瘫痪；4，两个肢体的完全瘫痪；4.5，垂死；5，死亡。在25毫克/千克与55毫克/千克下口服实施例1(每天两次)是于第1天起始。
结果
在两种剂量下的实施例1降低了临床评分的曲线下方面积(AUC)达49％(p<0.05)(图22)。对于实施例1，在125I-老鼠MCP-1结合至hCCR2-表达细胞、hPBMC(模拟hCCR2KI环境)上，IC50为3.7nM。以此IC50值为基准，25与55毫克/千克剂量造成自由血浆峰谷浓度为结合IC90的1-与3-倍。于第22天，脊髓的组织学评估，在以实施例1对载体所治疗的老鼠之间，并未证实总炎性细胞浸润上的显著差异。在用化合物治疗的老鼠中发现了显著嗜中性白血球浸润。

Claims (20)

1.一种化合物，其是N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，或其药学上可接受的盐。
2.权利要求1的化合物，其是N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺或其药学上可接受盐的结晶型。
3.权利要求1-2的结晶型，其中包括N-2型式。
4.权利要求1-3的结晶型，其特征为单位晶胞参数实质上等于下列的值：
晶胞尺寸：
a＝18.7240(4)
b＝8.0171(2)
c＝19.6568(5)
α＝90
β＝114.935(2)
γ＝90
空间群P212121
分子/单位晶胞2
其中该晶体是在约+22℃(RT)的温度下。
5.权利要求1-4的结晶型，其特征为包含三个或更多个2θ值
Figure A200780032859C0002092057QIETU
Figure A200780032859C0002092102QIETU
的粉末x-射线衍射图样，该2θ值选自5.5，9.1，12.1，14.0及19.2，在约22℃的温度下。
6.权利要求1-5的结晶型，其进一步特征为包含四个或更多个2θ值
Figure A200780032859C0002092115QIETU
的粉末x-射线衍射图样，该2θ值选自5.5，9.1，12.1，14.0和19.2，在约22℃的温度下。
7.权利要求1-6的结晶型，其特征为实质上如列示于表3中的部分原子坐标。
8.权利要求1-7的结晶型，其中结晶型具有实质上根据图2的粉末x射线衍射图样。
9.一种医药组合物，其包含权利要求1-8的化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。
10.治疗哺乳动物中的疾病的方法，包括给予哺乳动物治疗有效量的权利要求1-9的化合物，其中疾病选自糖尿病、肥胖、代谢症候群、中风、神经病原性疼痛、绝血性心肌病、牛皮癣、高血压、硬皮病、骨关节炎、动脉瘤、发热、心血管疾病、克隆氏病、充血性心衰竭、自身免疫疾病、HIV感染、与HIV有关联的痴呆症、牛皮癣、自发性肺纤维变性、移植物动脉硬化、物理上或化学上引致的脑部创伤、炎性肠疾病、肺胞炎、结肠炎、系统性红斑狼疮、毒肾血清肾炎、丝球体性肾炎、哮喘、多发性硬化、动脉粥样硬化、脉管炎、易受伤害斑、风湿性关节炎、再狭窄、静脉新血管内膜增生、渗析-移植物新血管内膜增生、动脉-静脉旁路血管内膜增生、器官移植、慢性同种移植肾病和癌症。
11.权利要求10的方法，其中疾病选自糖尿病、肥胖、克隆氏病、系统性红斑狼疮、丝球体性肾炎、多发性硬化、动脉粥样硬化、再狭窄及器官移植。
12.权利要求10-11的方法，其中疾病选自多发性硬化、动脉粥样硬化、克隆氏病及糖尿病。
13.权利要求10-12的方法，其中疾病为糖尿病。
14.权利要求10-12的方法，其中疾病为动脉粥样硬化。
15.权利要求10-12的方法，其中疾病为克隆氏病。
16.权利要求10-12的方法，其中疾病为多发性硬化。
17.一种制备式X化合物的方法：
Figure A200780032859C00031
其包括以下步骤：
用水解剂，使式V化合物的酯部分在约-5至约5℃的温度下水解，以形成化合物VI酸：
Figure A200780032859C00041
使式VIa化合物，HO-Z-OH，与式IV化合物(任选当场)在酸催化剂存在下反应，获得具有羧酸部分的式VII化合物：
Figure A200780032859C00042
使式VII缩酮的羧酸部分转变成式VIII的相应异氰酸酯：
Figure A200780032859C00043
使式VIII异氰酸酯与式R10COW化合物，于其相应的酸酐(R10CO)2O存在下接触，以形成具有缩酮部分的式IX的酰胺：
Figure A200780032859C00051
IX；和
使式IX酰胺的缩酮部分水解，以形成式X化合物，
其中：
R1与R2独立地为氢或胺-保护基；
R4与R10独立地为C1-6烷基或任选取代的苄基；
R8与R9独立地为氢或C1-6烷基；
W为OH或OC1-6烷基；
Z为-(CT1T2)2-、-(CT1T2)3-或
Figure A200780032859C00052
且
T1、T2及T3，在每一存在处，独立地选自氢、C1-4烷基、C2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF3、OC1-4烷基、OCF3及C(＝O)C1-4烷基。
18.权利要求17的方法，其中的还原胺化步骤包括：
a)将路易斯酸添加至化合物X与具有式HNR8R9的胺在非质子性溶剂中的溶液内，以形成式Xa的亚胺-烯胺：
Figure A200780032859C00053
和
b)将式Xa的亚胺-烯胺用还原剂处理，得到具有吡咯烷酮胺部分的式X化合物。
19.权利要求17-18的方法，其中
式VII化合物是(7R，8S)-8-((3S)-3-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸烷-7-羧酸或其盐；
式VIIa化合物是((3S)-1-((7R，8S)-7-(叠氮基羰基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐；
式VIII化合物是((3S)-1-((7R，8S)-7-异氰酸根合-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐；
式IX化合物是((3S)-1-((7R，8S)-7-乙酰氨基-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐；
式X化合物是((3S)-1-((1S，2R)-2-乙酰氨基-4-氧代环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐；和
式XI化合物是((3S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(叔丁基氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐。
20.化合物，选自
(7R，8S)-8-((3S)-3-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸烷-7-羧酸或其盐；
((3S)-1-((7R，8S)-7-(叠氮基羰基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐；
((3S)-1-((7R，8S)-7-异氰酸根合-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐；
((3S)-1-((7R，8S)-7-乙酰氨基-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐；
((3S)-1-((1S，2R)-2-乙酰氨基-4-氧代环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐；及
((3S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(叔丁基氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)氨基甲酸苄酯或其盐。
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