EA016563B1 - Модуляторы активности рецептора хемокина, кристаллические формы и способ их получения - Google Patents

Модуляторы активности рецептора хемокина, кристаллические формы и способ их получения Download PDF

Info

Publication number
EA016563B1
EA016563B1 EA200900245A EA200900245A EA016563B1 EA 016563 B1 EA016563 B1 EA 016563B1 EA 200900245 A EA200900245 A EA 200900245A EA 200900245 A EA200900245 A EA 200900245A EA 016563 B1 EA016563 B1 EA 016563B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
compound
oxo
tert
cyclohexyl
butylamino
Prior art date
Application number
EA200900245A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200900245A1 (ru
Inventor
Перси Х. Картер
Джон В. Данциа
Богуслав М. Мадрик
Майкл Е. Рандаззо
Цили Сяо
Майкл Г. Ян
Рулин Чжао
Original Assignee
Бристол-Маерс Сквибб Компани
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Бристол-Маерс Сквибб Компани filed Critical Бристол-Маерс Сквибб Компани
Publication of EA200900245A1 publication Critical patent/EA200900245A1/ru
Publication of EA016563B1 publication Critical patent/EA016563B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/4025—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. cromakalim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D207/22—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/24—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D207/26—2-Pyrrolidones
    • C07D207/273—2-Pyrrolidones with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to other ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D317/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D317/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3
    • C07D317/72—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 spiro-condensed with carbocyclic rings

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)

Abstract

Изобретение описывает новый антагонист или частичный агонист/антагонист активности MCP-I рецептора: N-((1R,2S,5R)-5-(трет-бутиламино)-2-((S)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамид или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, имеющие неожиданную комбинацию из требуемых фармакологических характеристик. Также описаны кристаллические формы по настоящему изобретению. Фармацевтические композиции, содержащие их, и способы их применения в виде агентов лечения воспалительных заболеваний, аллергических, аутоиммунных, метаболических, раковых и/или сердечно-сосудистых заболеваний также являются целью настоящего изобретения. Соединения, которые являются полезными промежуточными соединениями процесса, также описаны в настоящем изобретении.

Description

Объектом настоящего изобретения является М-((1К,2§,5К)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамид или его фармацевтически приемлемая соль, сольват или пролекарство и их кристалические формы, имеющие неожиданные комбинации желательных фармакологических характеристик. Фармацевтические композиции, содержащие их, и способы их применения в виде агентов лечения воспалительных, аллергических, аутоиммунных, метаболических, рака и/или сердечно-сосудистых заболеваний являются также объектом настоящего изобретения. Настоящее изобретение также включает в себя способ получения соединений формул (X) и (XI):
νη,κ2
о
X чнк,н2
Кг'' 'Кв
XI где К1, К2, К.8, Яд и К10 являются такими, как описано далее.
Соединения, которые являются полезными промежуточными соединениями способа, также охватываются данным изобретением.
Сведения о предшествующем уровне техники
Хемокины являются хемотаксическими цитокинами с молекулярной массой 6-15 кДа, которые высвобождаются большим числом клеток для привлечения и активации, помимо других типов клеток, макрофагов, Т- и В-лимфоцитов, эозинофилов, базофилов и нейтрофилов (описано в обзоре: С На го апб КакопйоК, Νο\ν Епд. I. Меб. 2006, 354, 610-621; ЬиЦег, Νο\ν Епд. I. Меб. 1998, 338, 436-445 и КоШпк, В1ооб 1997, 90, 909-928). Существует два больших класса хемокинов, СХС и СС, в зависимости от того, отделены ли первые два остатка цистеина в аминокислотной последовательности одной аминокислотой (СХС) или они являются смежными (СС). СХС хемокины, такие как интерлейкин-8 (1Ь-8), нейтрофилактивирующий белок-2 (ΝΑΡ-2) и белок, стимулирующий активность роста меланомы (МО8А), являются хемотаксическими, в первую очередь, для нейтрофилов и Т-лимфоцитов, в то время как СС хемокины, такие как ΚΑΝΤΕ8, ΜΙΡ-1α, ΜΙΡ-1β, хемотаксические белки моноцитов (МСР-1, МСР-2, МСР-3, МСР-4 и МСР-5) и эотаксины (-1 и -2) являются хемотаксическими, помимо других типов клеток, для макрофагов, Т-лимфоцитов, эозинофилов, дендритных клеток и базофилов. Также существуют хемокины лимфотактин-1, лимфотактин-2 (оба С хемокины) и фракталкин (СХ3С хемокин), которые не попадают ни в одно из основных подсемейств хемокинов.
Хемокины связываются со специфическими рецепторами клеточной поверхности, принадлежащими к семейству белков с 7-трансмембранным доменом, сопряженных с О-белком (см. обзор Ногик, Тгепбк Рйагш. 8с1 1994, 15, 159-165), которые обозначаются как хемокиновые рецепторы. При связывании с соответствующими лигандами хемокиновые рецепторы преобразуют внутриклеточный сигнал через связанные тримерные О-белки, что приводит, среди прочих реакций, к быстрому возрастанию концентрации внутриклеточного кальция, изменениям в форме клеток, повышенной экспрессии молекул клеточной адгезии, дегрануляции и способствует миграции клеток. Существует по меньшей мере десять типов хемокиновых рецепторов человека, которые связываются или реагируют на СС хемокины с последующими характерными эффектами (описано в обзоре 21о1п1к апб ОкЫе 1шшиш1у 2000, 12, 121):
ССК-1 (или СКК-1 или СС-СКК-1) [М1Р-1а, МСР-3, МСР-4, ΚΑΝΤΕ8] (Веп-Ваггисй е! а1., Се11 1993, 72, 415-425 и ЬиЦег, Ν'ν Епд. I. Меб. 1998, 338, 436-445);
ССК-2А и ССК-2В (или СКК-2А/СКК-2В, или СС-СКК-2А/СС-СКК-2В) [МСР-1, МСР-2, МСР-3, МСР-4, МСР-5] (СНаго, е! а1., Ргос. N11. Асаб. 8с1 И8А. 1994, 91, 2752-2756 и ЬиЦег, Ν'ν Епд. I. Меб. 1998, 338, 436-445);
ССК-3 (или СКК-3, или СС-СКК-3) [эотаксин-1, эотаксин-2, КАОТЕ8, МСР-3, МСР-4] (СошЬаб1еге, е! а1., I. Вю1. СНет. 1995, 270, 16491-16494 и ЬиЦег, Ν'ν Епд. I. Меб. 1998, 338, 436-445);
ССК-4 (или СКК-4 или СС-СКК-4) [ТАКС, МОС] (Ромюг, е! а1., I. Вю1. СНет. 1995, 270, 1949519500 и ЬцЦег, Ν'ν Епд. I. Меб. 1998, 338, 436-445);
- 1 016563
ССК-5 (или СКК-5 или СС-СКК-5) [М1Р-1а, ΚΆΝΤΕ8, ΜΙΡ-1β] (Запкоп, е! а1., БюсЬетйгу. 1996, 55, 3362-3367);
ССК-6 (или СКК-6 или СС-СКК-6) [БАКС] (ВаЬа, е! а1., 1. Бю1. СЕет. 1997, 272, 14893-14898);
ССК-7 (или СКК-7 или СС-СКК-7) [ЕБС] (УокЫе е! а1., 1. Беикос. Вю1. 1997, 62, 634-644);
ССК-8 (или СКК-8 или СС-СКК-8) [1-309] (№ро1йапо е! а1., 1. 1ттипо1, 1996, 157, 2759-2763);
ССК-10 (или СКК-10 или СС-СКК-10) [МСР-1, МСР-3] (Вошш, е! а1., ΌΝΑ апб Се11 Вю1. 1997, 16, 1249-1256) и
ССК-11 [МСР-1, МСР-2 и МСР-4] (ЗсЬетеккей, е! а1., 1. Вю1. СЕет. 2000, 275, 90550).
Наряду с хемокиновыми рецепторами млекопитающих цитомегаловирусы млекопитающих, герпесвирусы и поксвирусы, как было показано, экспрессируют в инфицированных клетках белки со связывающими свойствами хемокиновых рецепторов (см. обзор: Ае11к и 5>с11\\'аг1х. Сигг. Θρίη. Вю!есЕ. 1997, 8, 741-748). Хемокины СС человека, такие как ΡΑΝΤΈ8 и МСР-3, могут вызывать быструю мобилизацию кальция через кодированные вирусом рецепторы. Экспрессия рецепторов может облегчать развитие инфекции, способствуя нарушению нормального иммунного надзора и ответа на инфекцию. Кроме того, хемокиновые рецепторы человека, такие как СХСК4, ССК-2, ССК-3, ССК5 и ССК8, могут действовать как корецепторы при инфицировании клеток млекопитающих микробами, например вирусами иммунодефицита человека (ВИЧ).
Хемокины и соответствующие им рецепторы задействованы в качестве важных медиаторов воспалительных, инфекционных и иммунных расстройств и заболеваний, включая астму и аллергические заболевания, так же как и аутоиммунные патологии, такие как ревматоидный артрит и атеросклероз (описаны в обзоре СЕаго апб КакопйоГГ, №\ν Епд. 1. Меб. 2006, 354, 610-621; Ζ. Сао апб А.А. МеА СЕет. Рсу. 2003, 103, 3733; Р.Н. СаЛет, Сштеп! Оршюп ш СЕетка1 Вю1оду. 2002, 6, 510; Тпуебб е! а1., Апп. КероПк Меб. СЕет. 2000, 35, 191; Заипбегк апб ТагЬу, Эгид Э1кс. Тобау. 1999, 4, 80; Ргетаск апб ЗсЕа11, №1Шге Мебкте. 1996, 2, 1174). Например, хемокин хемоаттрактант моноцитов 1 типа (МСР-1) и его рецептор СС хемокиновый рецептор 2 (ССК-2) играют ключевую роль в привлечении лейкоцитов к местам воспаления и в последующей активации этих клеток. Когда хемокин МСР-1 связывается с ССК-2, он вызывает быстрое увеличение внутриклеточной концентрации кальция, повышенную экспрессию молекул клеточной адгезии, дегрануляцию клеток и способствует миграции лейкоцитов. Демонстрация значения взаимодействия МСР-1/ССК-2 была осуществлена с помощью экспериментов с генетически модифицированными мышами. Мыши МСР-1-/- были не способны к привлечению моноцитов в места вирусного воспаления после иммунной провокации нескольких разных типов (Вао Би, е! а1., 1. Ехр. Меб. 1998, 187, 601). Аналогично, мыши ССК-2 были не способны привлекать нейтрофилы или продуцировать интерферон-γ при провокации; более того, лейкоциты нулевых по ССК-2 мышей не мигрировали в ответ на МСР-1 (Бапбш Воппд, е! а1., 1. С1т. 1пуек!. 1997, 100, 2552), тем самым демонстрируя специфичность взаимодействия МСР-1/ССК-2. Две другие группы исследователей независимо друг от друга сообщили о таких же результатах с разными линиями мышей ССК-2 - (Аббат А. КтШеЕ е! а1., Ргос. №!1. Асаб. ЗсБ ИЗА. 1997, 94, 12053 и Такао КштЕата, е! а1., 1. Ехр. Меб. 1997, 186, 1757). Жизнеспособность и обычно нормальное состояние здоровья животных МСР-1-/- и ССК-2 заслуживают внимание, поскольку нарушение взаимодействия МСР-1/ССК-2 не вызывает критических физиологических расстройств. При совместном рассмотрении эти данные приводят к выводу, что молекулы, которые блокируют действия МСР-1/ССК-2, будут пригодны в лечении большого числа воспалительных и аутоиммунных расстройств (см. обзор: М. Репа апб Р. П1а7-Соп7а1е7, Ехр. Орт. ТЕег. Ра!еп!к. 2006, 16, 49 и 1. Эа^коп, А. Мб!/ и С. А1еккпег, С. Ехр. Орт. ТЕег. Тагде!к. 2003, 7, 35). Эта гипотеза в настоящее время подтверждена на нескольких животных моделях различных заболеваний, как описано ниже.
Известно, что МСР-1 повышается у пациентов с ревматоидным артритом (Айка КосЕ, е! а1., 1. Сбп. 1пуек!. 1992, 90, 772-779). Более того, некоторые доклинические исследования показали потенциальную терапевтическую ценность антагонизма взаимодействия МСР-1/ССК-2 в лечении ревматоидного артрита. Как было недавно показано, ДНК вакцина, кодирующая МСР-1, облегчает течение вызванного полиадъювантом хронического артрита у крыс (За\\ъап УоиккеГ, е! а1,. 1. С1ш. 1пуек!. 2000, 106, 361). Аналогично, симптомы заболевания могут сдерживаться путем непосредственного введения антител к МСР-1 крысам с коллагениндуцированным артритом (Н1гоот1 Ода!а, е! а1., 1. Ра!Ео1. 1997, 182, 106) или вызванным клеточными стенками стрептококков артритом (Ка1рЕ С. ЗсЫттет, е! а1., 1. 1ттипо1. 1998, 160, 1466). Возможно, наиболее важно, что пептидный антагонист МСР-1, МСР-1 (9-76), как было показано, и предотвращает начало заболевания, и уменьшает симптомы заболевания (в зависимости от времени введения) в мышиной модели артрита МКБ-1рт (Лапд-Нопд Сопд, е! а1., 1. Ехр. Меб. 1997, 186, 131). Более того, было показано, что введение низкомолекулярных антагонистов ССК-2 снижает балльную оценку выраженности клинических проявлений в модели артрита на грызунах (С. М. Вгобтегке1, е! а1., 1. 1ттипо1. 2005, 175, 5370 и М. Х1а, е! а1., патентная заявка США 0069123, 2006). Введение анти-ССК-2 антител имеет различные эффекты на мышиный С1А, в зависимости от времени введения (Н. ВтиЫ, е! а1. 1. 1ттипо1. 2004, 172, 890). Последние исследования с мышами ССК-2 - предполагают, что потеря ССК-2 может ухудшать течение артрита в моделях на грызунах в специфических экспериментальных условиях
- 2 016563 (М.Р. Ошпопез, е! а1. 1. СЕп. Ιηνβδΐ. 2004, 113, 856; М.Р. Ошпопез, е! а1. 1. Мо1. Меб. 2006, 84, 503).
Известно, что МСР-1 повышается в атеросклеротических бляшках, и было показано, что циркулирующие уровни МСР-1 снижаются при лечении терапевтическими агентами (ЛЬбо1геха Кеха1е-Ма)б. е! а1., Аг1епозс1ег. ТйготЬ. Уазе. Бю1. 2002, 22, 1194-1199). Некоторые ключевые исследования показали потенциальную терапевтическую ценность антагонизма взаимодействия МСР-1/ССВ-2 в лечении атеросклероза. Например, когда МСР-1-/- мышей скрещивают с ЬОЬ рецептор-дефицитными мышами, наблюдается 83% снижение отложения липидов в аорте (Ьопд Си, е! а1., Мо1. Се11. 1998, 2, 275). Сходным образом, когда генетически удаляют МСР-1 у мышей, которые уже сверхэкспрессируют аполипопротеин В человека, полученные мыши защищены от образования атеросклеротических бляшек по сравнению с контрольными мышами МСР-1+/+ ароВ (бепшГа Соз1шд, е! а1., 1. СЕп. ЕгтезЕ 1999, 103, 773). Аналогично, когда ССВ-2-/- мышей скрещивают с мышами аполипопротеин Е-/-, наблюдается существенное снижение появления атеросклеротических бляшек (Ьапбт Воппд, е! а1., Иа!иге. 1998, 394, 894; Т.С. Оа^зоп, е! а1. А111его5с1его515. 1999, 143, 205). В конечном счете, когда мышам аполипопротеин Е-/- вводят ген, кодирующий пептидный антагонист ССВ-2, размер бляшек уменьшается и повышается стабильность бляшки (XV. N1, е! а1. Спси1а!юп. 2001, 103, 2096-2101). Пересадка костного мозга от мышей ССВ-2- мышам АроЕ3-Ье1беп подавляет ранний атерогенез (1. Сио, е! а1. Аг1епозс1ег. ТйтотЬ. Уазс. Вю1. 2003, 23, 447), но обладает минимальным действием на сформированные бляшки (1. Сио, е! а1. Аг1епозс1ег. ТйтотЬ. Уазс. Вю1. 2005, 25, 1014).
Пациенты с сахарным диабетом 2 типа обычно демонстрируют инсулинорезистентность, как одно из отличительных свойств заболевания. Инсулинорезистентность также связана с группированием патологий, известных как метаболический синдром или синдром X, который включает ожирение, атеросклероз, гипертензию и дислипидемию (см. обзор: Еске1, е! а1. Ьапсе!. 2005, 365, 1415). Общепризнано, что воспаление играет роль в утяжелении патологического процесса при диабете 2 типа и синдроме X (см. обзор: Сйеп, Р11агшасо1ощса1 Везеагсй. 2006, 55, 469; Иее1з апб 01еГзку, 1. С1т. ЕгтезЕ 2006, 116, 33; Эапабопа апб АЩаба, Ат. 1. Сатбю1. 2002, 90, 27С-33С; Рюкир апб Сгоок, П1аЬе!о1од1а. 1998, 41, 1241). МСР-1 известен, как играющий роль в инсулинорезистентности, вызванной ожирением. В культуре, преадипоциты человека стабильно экспрессируют МСР-1 (Сегйагб!, Мо1. Се11. Епбосппо1оду 2001, 175, 81). ССВ-2 экспрессируется на адипоцитах; добавление МСР-1 к дифференцированным адипоцитам ш νίΙΐΌ снижает стимулированный инсулином захват глюкозы и экспрессию нескольких адипогенных генов (ЪрЕ, адипсин, СЬи-4), аР2, в3-адренорецептора и РРАВу) (Р. 8агйру апб Ό. ЬозкШоГГ, Ргос, №111. Асаб. 8ск И8А. 1999, 96, 6902). Пациенты с диабетом 2 типа имеют более высокие уровни циркулирующего МСР-1, чем в контроле без диабета (8. Иотига, е! а1. С1т. Ехр. 1ттипо1. 2000, 727, 437), и высвобождение МСР-1 из жировой ткани может быть снижено путем применения противодиабетическим лечением, таким как метформин или тиазолидиндионы (ЕМ. Вгиип, е! а1. 1. С1т. Епбосппо1. Ме!аЬ. 2005, 90, 2282). Аналогично, МСР-1 был также сверхэкспрессирован в мышиных экспериментальных моделях ожирения и, в первую очередь, продуцировался жировой тканью (8атйру апб Еозки!оЕГ, Ргос. Иа!1. Асаб. 8с1. И8А. 2003, 100, 7265). У мышей с ожирением экспрессия МСР-1 предшествует или появляется одновременно с началом инсулинорезистентности (Н. Хи, е! а1. 1. С1ш. ЕгтезЕ 2003, 772, 1821). Другое исследование показало, что экспрессия МСР-1 положительно коррелирует с массой тела в перигонадальной жировой ткани мышей ^е1зЬетд, е! а1. 1. С1ш. ЕгтезЕ 2003, 772, 1796). Следуя этим данным, развитие инсулинорезистентности у мышей бЬ/бЬ ослабляли либо путем генетической делеции МСР-1, либо путем гениндуцированной экспрессии доминантного негативного пептида (Н. Капба, е! а1. 1. С1т. ЕгтезЕ 2006, 116, 1494). Следующее логическое преобразование может быть также продемонстрировано: сверхэкспрессия МСР-1 в жировой ткани обеспечивала инсулинорезистентность (Ν. Катер е! а1. 1. Вю1. Сйет. 2006, 281, 26602). Также имеется один противоречивый результат, показывающий, что генетическая делеция МСР-1 не воздействует на инсулинорезистентность у мышей бЬ/бЬ (Ε.Υ. Сйоте, е! а1. О1аЬе1о1оща 2007, 50, 471). Следуя данным о МСР-1, прямые исследования с ССВ-2 (МСР-1 рецептор) показали, что он играет роль в формировании ожирения и вызванной ожирением инсулинорезистентности. Соблюдение диеты с большим количеством жиров повышает число циркулирующих воспалительных моноцитов ССВ-2+ как в диком типе мышей (С.Ь. Тзои, е! а1. 1. С1ш. ЕгтезЕ 2007, 777, 902), так и у мышей АроЕ-/- (Е. Таске, е! а1. 1. С11п. ЕгтезЕ 2007, 117, 185). Генетическая делеция ССВ-2 снижает число активированных макрофагов в жировой ткани мышей (С.И. Ьитепд, е! а1. Э1аЬе1ез. 2007, 56, 16), но не воздействует на популяцию М2 макрофагов жировой ткани, которые, как полагают, поддерживают худое состояние (С.И. Ьитепд, е! а1. 1. С11п. ЕщезЕ 2007, 777, 175). Генетическая делеция ССВ-2 уменьшает вызванное диетой ожирение и улучшает чувствительность к инсулину в модели с вызванным диетой ожирением (8.Р. XVе^зЬе^д. е! а1. С11п. ЕгтезЕ 2006, 776, 115; Р. Согпе1шз, В.Р. С1абие, В.8. 8еЬазйап, патент ν0 2006/013427 А2, 2006), в зависимости от экспериментальных условий (А. Сйеп, е! а1. 0Ьез. Вез. 2005, 13, 1311). Введение низкомолекулярного антагониста ССВ-2 также улучшает чувствительность к инсулину в такой же модели (8.Р. ’№е1зЬегд, е! а1. 1. С1ш. ЕщезЕ 2006, 116, 115).
Два исследования описывают важную роль ССВ-2 в вызванном гипертензией сосудистом воспалении, ремоделировании и гипертрофии (Е. Визй е! а1., Нурейепзюп. 2000, 36, 360; М. 1зЫЬазЫ, е! а1. Сис. Вез. 2004, 94, 1203).
- 3 016563
Известно, что МСР-1 повышается у людей с рассеянным склерозом, и было показано, что эффективное лечение интерфероном β-16 снижает экспрессию МСР-1 в мононуклеарных клетках периферической крови, предполагая что МСР-1 играет роль в прогрессировании заболевания (Саг1а 1аг1оп, е! а1., 1. №иго1ттиио1, 2002, 123, 170-179). Другие исследования продемонстрировали потенциальную терапевтическую ценность антагонизма взаимодействия МСР-1/ССВ-2 в лечении рассеянного склероза; все эти исследования были продемонстрированы на экспериментальном аутоиммунном энцефаломиелите (ЕАЕ), традиционной модели рассеянного склероза. Введение антител к МСР-1 животным с ЕАЕ значительно снижает частоту рецидива заболевания (К.1. Кеппебу, е! а1., 1. №иго1ттипо1. 1998, 92, 98). Более того, два сообщения показали, что мыши ССВ-2-/- устойчивы к ЕАЕ (В.Т. БИе, е! а1., 1. Ехр. Меб. 2000, 192, 899; Ь. ΙζίΚδοη. е! а1., 1. Ехр. Меб. 2000, 192, 1075). Следующее сообщение расширяет эти начальные наблюдения путем проверки эффектов делеции ССВ-2 у мышей из разных линий (8. Саирр, е! а1. Ат. 1. Ра!ко1. 2003, 162, 139). В частности, введение низкомолекулярного антагониста ССВ-2 также ослабляет прогрессирование заболевания у мышей С57ВБ/6 (С.М. Вгобтегке1, е! а1. 1. 1ттипо1. 2005, 175, 5370).
Известно, что МСР-1 повышается у пациентов с развившимся после пересадки легкого синдромом облитерирующего бронхиолита (Майше Веупаиб-СаиЬей, е! а1., 1. о! Неай апб Бипд Тгапзр1ап!., 2002, 21, 721-730; 1окп Ве1рейо, е! а1., 1. Скп. 1пуез!. 2001, 108, 547-556). В мышиной модели синдрома облитерирующего бронхиолита введение антитела к МСР-1 приводит к ослаблению облитерации дыхательных путей; аналогично, мыши ССВ-2 были устойчивы к облитерации дыхательных путей в такой же модели (1о1т Ве1рейо, е! а1., 1. Скп. 1пуез!. 2001, 108, 547-556). Эти данные предполагают, что антагонизм МСР-1/ССВ-2 может быть полезным в лечении отторжения органов после пересадки. Кроме того, исследования показали, что нарушение оси МСР-1/ССВ-2 было способно продлить жизнеспособность пересаженных островков поджелудочной железы (I. Бее е! а1. 1. 1ттипо1 2003, 171, 6929; В. АЬб1 е! а1., 1. 1ттипо1. 2004, 172, 767). В крысиных моделях с трансплантатами, как было показано, ССВ-2 и МСР-1 повышаются в трансплантатах, в которых развилась васкулопатия трансплантата (К. НопдисЫ е! а1., 1. Неай Бипд Тгапзр1ап!. 2002, 21, 1090). В другом исследовании анти-МСР-1 генная терапия ослабляла васкулопатию трансплантата (А. 8ашта е! а1., Айкепозс1ет ТкготЬ. Уазе. Вю1. 2004, 24, 1886). Одно исследование описывает подавление образования неоинтимы в экспериментально пересаженных венах путем блокирования МСР-1 (Н. Та!е^ак1 е! а1., 1. Уазе 8игд. 2007, 45, 1236).
Другие исследования демонстрируют потенциальную терапевтическую ценность антагонизма взаимодействия МСР-1/ССВ-2 в лечении астмы. Разрушение МСР-1 нейтрализующим антителом у мышей, сенсибилизированных овальбумином, приводило к заметному уменьшению гиперчувствительности бронхов и воспаления (1озе-Апде1 Со^а1о, е! а1., 1. Ехр. Меб. 1998, 188, 157). Это доказывает возможность снижения аллергического воспаления дыхательных путей у мышей, сенсибилизированных яйцами 8ск1з!озота тапзош, путем введения антител к МСР-1 (№ско1аз ^. Бикасз, е! а1., 1. 1ттипо1. 1997, 158, 4398). Учитывая это, МСР-1-/- мыши показывают сниженный ответ на сенсибилизацию яйцами 8ск1з!озота тапзош (Вао Ьи, е! а1., 1. Ехр. Меб. 1998, 187, 601).
Другие исследования демонстрируют потенциальную терапевтическую ценность антагонизма взаимодействия МСР-1/ССВ-2 в лечении болезни почек. Введение антител к МСР-1 в мышиной модели гломерулонефрита приводит к заметному уменьшению образования гломерулярных полумесяцев и отложения коллагена I типа (С1аге М. Б1оуб, е! а1., 1. Ехр. Меб. 1997, 185, 1371). Кроме того, мыши МСР-1-/- с вызванным нефротоксическим сывороточным нефритом демонстрируют существенно меньшее повреждение канальцев, чем аналогичные особи МСР-1+/+ (Сгедогу Н. Тезск, е! а1., 1. Скп. 1пуез!. 1999, 103, 73).
Некоторые исследования демонстрируют потенциальную терапевтическую ценность антагонизма взаимодействия МСР-1/ССВ-2 в лечении системной красной волчанки. Мыши ССВ-2-/- показывают увеличенную выживаемость и меньшую патологию почек относительно аналогичных особей дикого типа в мышиной модели системной красной волчанки (С. Ре^еζ бе Бета, е! а1. 1. Ат. 8ос. Мерк. 2005, 16, 3592). Эти данные согласуются с модифицирующей болезнь активностью, обнаруженной в последних исследованиях генетической делеции МСР-1 (8. 8к^т^ζи, е! а1. Вкеита!о1оду (Охкотб), 2004, 43, 1121; Сгедогу Н. Тезск, е! а1., 1. Ехр. Меб. 1999, 190, 1813), или введения пептидного антагониста ССВ-2 (Н. Назеда^а, е! а1. Айкйкз & Вкеитайзт 2003, 48, 2555) в моделях волчанки на грызунах.
Заметное 30-кратное увеличение ССВ-2+ лимфоцитов собственной пластинки наблюдалось в тонкой кишке пациентов с болезнью Крона, по сравнению с непораженной подвздошной кишкой (8.1. Соппог, е! а1. Си!. 2004, 55, 1287). Также следует отметить, что было расширение субпопуляции циркулирующих ССВ-2'/СЭ14'/СЭ56' моноцитов у пациентов с активной болезнью Крона по сравнению с контролем. Ряд исследований на грызунах продемонстрировал потенциальную терапевтическую ценность антагонизма взаимодействия МСР-1/ССВ-2 в лечении болезни/колита Крона. Мыши ССВ-2-/- были защищены от колита, вызванного декстраном натрия сульфата (Р1е!го С. Апбгез, е! а1., 1. 1ттипо1. 2000, 164, 6303). Введение низкомолекулярного антагониста ССВ-2, ССВ5 и СХСВ3 (сродство связывания = 24, 236 и 369 нМ соответственно) также защищает от колита, вызванного декстраном натрия сульфата (Н. Токиуата, е! а1. 1п!. 1ттипо1. 2005, 17, 1023). В конечном счете, мыши МСР-1-/- показали существенное снижение повреждения толстой кишки (и макроскопически и гистологически) в моделях гаптенин
- 4 016563 дуцированного колита (ν.Ι. КНаи, е! а1. Ат. 1. Р11укю1. 6акйош!ек!. Ыуег Р11укю1. 2006, 291, 6803).
Два сообщения описывают сверхэкспрессию МСР-1 в клетках эпителия кишечника и слизистой оболочки кишки пациентов с воспалительным заболеванием кишечника (Н.С. Вешескег, е! а1., 6ак!гоеи!его1оду, 1995, 108, 40 аиб М1сйае1 С. 6пшш, е! а1., 1. Ьеикос. Βίο1. 1996, 59, 804).
Одно исследование описывает связь полиморфизма промоутера в гене МСР-1 и склеродермии (системного склероза) (8. Каггег е! а1., 1. 1иуек!. Эегта1о1. 2005, 124, 92). В сходных моделях фиброза тканей ингибирование оси ССВ-2/МСР-1 уменьшает фиброз кожи (Т. УататоЮ апб К. №1кЫока, 1. 1иуек! ЭегтаЮк 2003, 121, 510; А.М. Реггепа е! а1., 1. 1иуек!. ЭегтаЮк 2006, 126, 1900), легкого (Т. Окита е! а1., 1. Ра11ю1. 2004, 204, 594; М. Ойагаее-Кегташ е! а1., Су!ок1ие 2003, 24, 266), почки (К. Кйада^а е! а1., Ат. 1. Ра11ю1. 2004, 165, 237; Т. \Уаба е! а1., 1. Ат. 8ос. №ер1по1. 2004, 75, 940), сердца (8. НауакЫбаш е! а1., Спси1а!юи. 2003, 108, 2134) и печени (8. Ткиги!а е! а1., 1и!. 1. Мо1. Меб. 2004, 14, 837).
Одно исследование демонстрирует потенциальную терапевтическую ценность антагонизма взаимодействия МСР-1/ССВ-2 в лечении альвеолита. Когда крысы с легкими, поврежденными 1дА иммунными комплексами, были внутривенно пролечены антителами против крысиного МСР-1 (ЕЕ), симптомы альвеолита были частично ослаблены (Мюйае1 Ь. 1оиек, е! а1., 1. 1ттиио1. 1992, 149, 2147).
Некоторые исследования демонстрируют потенциальную терапевтическую ценность антагонизма взаимодействия МСР-1/ССВ-2 в лечении рака (см. обзор: М.1. Сга1д аиб В.Э. ЬоЬегд, Саисег Ме!ак!ак1к Веу. 2:06, 25, 611; I. Сои!1 аиб Β. ВоШик, 8еттагк ш Саисег Вю1оду. 2004, 14, 149; В. Обек аиб Β.Ό. ЬоЬегд, Сшт. Саисег Эгид Тагде!к. 2006, 6, 659). Когда иммунодефицитных мышей, несущих клетки рака молочной железы человека, лечат анти-МСР-1 антителами, наблюдается ингибирование легочных микрометастазов и увеличение выживаемости (Вока1Ьа 8а1себо, е! а1., В1ооб. 2000, 96, 34-40). Используя препараты опухолей человека, была обнаружена связь экспрессии ССВ-2 с прогрессированием рака предстательной железы (Υ. Ьи, е! а1. 1. Се11. Вюсйеш. 2007, 101, 676). 1и уйго, экспрессия МСР-1, как было показано, опосредует рост и инвазию клеток рака предстательной железы (Υ. Ьи, е! а1. Ргок!а!е 2006, 66, 1311); более того, МСР-1, экспрессируемый клетками рака предстательной железы, вызывает резорбцию костей предшественниками костного мозга человека (Υ. Ьи, е! а1., Саисег Век. 2007, 67, 3646).
Многие исследования описывают потенциальную терапевтическую ценность антагонизма взаимодействия МСР-1/ССВ-2 в лечении рестеноза. У людей уровни МСР-1 прямо коррелируют с риском рестеноза (Р. С1ро11оие, е! а1. Айепокс1ег. ТНготЬ. Уакс. Вю1. 2001, 21, 327). Мыши, дефицитные по ССВ-2 или МСР-1, демонстрируют уменьшение площади интимы и соотношения интима/медиа (относительно животных того же помета с диким типом) после повреждения артерии (Мегсе Воцие, е! а1. Айепокс1ег. ТНготЬ. Уакс. Вю1. 2002, 22, 554; А. 8сНоЬег, е! а1. Спс. Век. 2004, 95, 1125; XV.Е К1т, е! а1. Вюсйеш Вюрйук Век Соттии. 2003, 310, 936). У мышей трансфекция доминантного негативного ингибитора МСР-1 в скелетной мышце (К. ЕдакЫга, е! а1. Спс. Век. 2002, 90, 1167) также уменьшает гиперплазию интимы после повреждения артерии. Блокада ССВ-2 с помощью нейтрализующих антител уменьшает гиперплазию неоинтимы после стентирования у приматов (С. НогуаШ, е! а1. Спс. Век. 2002, 90, 488).
Два сообщения описывают сверхэкспрессию МСР-1 у крыс с вызванной черепно-мозговой травмой (1.8. К1ид, е! а1., 1. №еиго1ттиио1. 1994, 56, 127 и 1оаи V. Вегтаи, е! а1., 1. 1ттпио1. 1996, 156, 3017). Кроме того, исследования показывают, что и мыши ССВ-2-/- (О.В. О1тйгуеую, е! а1. 8!гоке 2007, 38, 1345), и мыши МСР-1-/- (Р.М. Нпдйек, е! а1. 1. СегеЬ. В1ооб Е1о\г Ме!аЬ. 2002, 22, 308) частично защищены от ишемического/реперфузионного повреждения.
Известно, что моноциты/макрофаги играют важную роль в развитии нейропатической боли (Ьш Т., уаи Вооуеи Ν., Тгасеу Ό.Ε, Раш. 2000, 86, 25). Учитывая это, в последнее время была описана потенциальная роль ССВ-2 в лечении воспалительной и нейропатической боли. Мыши ССВ-2-/- показали измененные ответы на воспалительную боль относительно аналогичных особей дикого типа, включая уменьшение болевого поведения после инъекции формалина в подошву и несколько уменьшенную механическую аллодинию после инъекции СРА в подошву (С. АЬЬаб1е, е! а1. Ргос. №111. Асаб. 8с1, И8А. 2003, 100, 7947). Кроме того, мыши ССВ-2-/- не показывают значительную механическую аллодинию после повреждения седалищного нерва. Аналогичным образом, низкомолекулярный антагонист ССВ-2 уменьшает механическую аллодинию до -80% от уровня до повреждения при введении внутрь (С. АЬЬаб1е, ЕЛ. Ьшб1а, аиб Н. №аид, АО РСТ 110376, 2004).
Одно исследование описывает ключевую роль МСР-1 в ишемической кардиомиопатии (Ν.6. Ргаидод/аишк, е! а1., Спси1а!юи 2007, 115, 584). Другое исследование описывает ослабление экспериментальной сердечной недостаточности вследствие ингибирования МСР-1 (8. НауакЫбаш е! а1., Спсп1а!юи. 2003, 108, 2134).
Другие исследования предусматривают доказательство того, что МСР-1 сверхэкспрессирован при различных заболеваниях, не упомянутых выше. Эти сообщения предусматривают соответствующие доказательства того, что МСР-1 антагонисты могут быть полезными лекарственными средствами при таких болезнях. Другое исследование демонстрирует сверхэкспрессию МСР-1 в трансплантатах сердца грызунов, предполагая роль МСР-1 в патогенезе атеросклероза трансплантата (Магу Е. Викке11, е! а1. Ргос. №а!1. Асаб. 8с1. И8А., 1993, 90, 6086). Сверхэкспрессия МСР-1 была отмечена в клетках эндотелия легких у пациентов с идиопатическим легочным фиброзом (Напу Ν. Аи!ошабек, е! а1., Ргос. №а!1. Асаб. 8сг И8А.
- 5 016563
1992, 89, 5371). Аналогично, сверхэкспрессия МСР-1 была отмечена в коже пациентов с псориазом (М. Эе1еигап, е! а1., 1. Эегта!о1. 8с1. 1996, 13, 228 и Я. СШИгег, е! а1., 1. 1пуек1. Эегта!о1. 1993, 101, 127); также доложено о сходных находках с преобладанием клеток ССЯ-2+ (С. Уек!егдаагб, е! а1. Ас!а Эегт. Уепего1. 2004, 84, 353). Наконец, последнее сообщение показывает, что МСР-1 сверхэкспрессирован в мозге и цереброспинальной жидкости у пациентов с ВИЧ-1-ассоциированной деменцией (ЛИгебо Сагапо-Оето, \¥О 99/46991).
Кроме того, полиморфизм ССЯ-2, как было показано, связан с саркоидозом по меньшей мере в одной из подгрупп пациентов (Р. 8радпо1о, е! а1. Ат. 1. ЯекрЯ Сп! Саге Меб. 2003, 168, 1162).
Также необходимо отметить, что ССЯ-2 задействован в качестве корецептора для некоторых штаммов ВИЧ (ВЛ. Эогапх. е! а1., Се11. 1996, 85, 1149). Также было установлено, что применение ССЯ-2 в качестве корецептора ВИЧ может коррелировать с прогрессированием заболевания (Яи1й I. Соппог, е! а1., 1. Ехр. Меб. 1997, 185, 621). Эта находка согласуется с последним открытием того, что присутствие мутантного ССЯ-2, ССЯ-2-641 положительно коррелирует с замедленным началом ВИЧ-инфекции в человеческой популяции (М1сйае1 V. 8тйй, е! а1., 8с1епсе 1997, 277, 959). Хотя МСР-1 не участвует в этих процессах, возможно антагонисты МСР-1, которые действуют через связывание с ССЯ-2, могут обладать благоприятными терапевтическими эффектами в замедлении прогрессирования заболевания в СПИД у ВИЧ-инфицированных пациентов.
Необходимо отметить, что ССЯ-2 также является рецептором для хемокинов человека МСР-2, МСР-3 и МСР-4 (Ьик!ег, Ыете Епд. 1. Меб. 1998, 338, 436-445). Поскольку новые соединения формулы (I), описанные в настоящем патенте, проявляют антагонизм в отношении МСР-1 путем связывания с ССЯ-2 рецептором, возможно, эти соединения формулы (I) также являются эффективными антагонистами эффектов МСР-2, МСР-3 и МСР-4, которые опосредуются через ССЯ-2. Соответственно, когда в данном описании приводится ссылка на антагонизм МСР-1, надо понимать, что это эквивалентно антагонизму хемокиновой стимуляции ССЯ-2.
Соответственно, соединения, которые модулируют хемокиновую активность, могут демонстрировать широкий спектр применения в лечении воспалительных, аллергических, аутоиммунных, метаболических, раковых и/или сердечно-сосудистых заболеваний. Патентная публикация XVО 2005021500 А1 (включенная в данное описание посредством ссылки и принадлежащая настоящему заявителю) раскрывает соединения, которые модулируют активность МСР-1, МСР-2, МСР-3 и МСР-4 посредством ССЯ-2. Ссылка также раскрывает различные процессы приготовления этих соединений, включая многоэтапный синтез, который включает введение и последующее удаление защитных групп.
Желательно обнаружить новые соединения с улучшенными фармакологическими характеристиками по сравнению с известными модуляторами хемокинов. Например, желательно найти новые соединения с улучшенной ингибирующей ССЯ-2 активностью и избирательностью к ССЯ-2 относительно других сопряженных с С-белком рецепторов (т.е. 5-НТ2А рецепторов). Также необходимо найти соединения с предпочтительными и улучшенными характеристиками в одной или более из следующих категорий:
(a) фармацевтические свойства (т.е. растворимость, проницаемость, возможность создания препаратов с замедленным высвобождением);
(b) потребность в дозе (например, более низкие дозировки и/или однократное суточное дозирование);
(c) факторы, которые снижают амплитудные характеристики концентрации в крови (т.е. клиренс и/или объем распределения);
(б) факторы, которые повышают концентрацию активного препарата на рецепторе (т.е. связывание белками, объем распределения);
(е) факторы, которые снижают предрасположенность к клиническим взаимодействиям между лекарствами (ингибирование или индукция фермента цитохром Р450, такое как ингибирование СУР 2Ό6, см. С.К. Эгеккег, Ι.Ό. 8репсе, Э.С. ВаНеу, С1ш. Рйагтасокше!. 2000,38, 41-57, который включен в данное описание посредством ссылки);
(1) факторы, которые снижают возможность нежелательных побочных эффектов (например, фармакологическая избирательность, кроме сопряженных с С-белком рецепторов, потенциальная химическая или метаболическая реакционность, ограниченное проникновение в ЦНС и/или ионоканальная избирательность). В особенности желательно найти соединения, обладающие желаемой комбинацией вышеупомянутых фармакологических характеристик.
Также желательно в технологии обеспечить новые и/или улучшенные способы получения таких соединений. Эти способы могут быть охарактеризованы, помимо прочего: а) гибкой адаптацией к крупномасштабному производству, такому как масштаб опытного производства или промышленный масштаб; б) этапами процесса и/или методиками, позволяющими улучшить чистоту (включая хиральную чистоту), стабильность и/или легкость обращения с промежуточными соединиями и/или конечными соединениями и/или в) меньшим числом стадий процесса.
- 6 016563
Сущность изобретения
Настоящее изобретение обеспечивает новый МСР-1 антагонист или частичный агонист/антагонист активности рецептора: Х-((1К,2§,5К.)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамид или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, имеющие неожиданные комбинации желательных фармакологических характеристик. Также обеспечиваются кристалические формы по настоящему изобретению. Фармацевтические композиции, содержащие их, и способы их применения в виде агентов для лечения заболеваний, выбранных из диабетов, ожирения, метаболического синдрома, инсульта, нейропатической боли, ишемической кардиомио патии, псориаза, гипертензии, склеродермии, остеоартрита, аневризмы, лихорадки, сердечно-сосудистого заболевания, болезни Крона, застойной сердечной недостаточности, аутоиммунных заболеваний, ВИЧинфекции, ВИЧ-ассоциированной деменции, псориаза, идиопатического фиброза легких, атеросклероза трансплантата, физически или химически вызванной травмы головного мозга, воспалительного заболевания кишечника, альвеолита, колита, системной красной волчанки, нефротоксического сывороточного нефрита, гломерулонефрита, астмы, рассеянного склероза, атеросклероза, васкулита, нестабильных бляшек, ревматоидного артрита, рестеноза, венозной неоинтимальной гиперплазии, неоинтимальной гиперплазии диализ-трансплантата, неоинтимальной гиперплазии артериовенозного шунта, пересадки органа, хронической нефропатии аллотрансплантата и рак, являются также объектом настоящего изобретения.
Настоящее изобретение также обеспечивает способ получения соединений формулы (X)
о включающий следующие стадии:
гидролиз сложноэфирного остатка соединения формулы V гидролизующим агентом для образования кислоты соединения VI в интервале температур от приблизительно -5 до приблизительно 5°С
ΝΚ.Κ, о
V VI взаимодействие соединения формулы У1а, ΗΟ-Ζ-ΟΗ, с соединением формулы VI (необязательно ίη 811и) в присутствии кислотного катализатора с получением соединения формулы VII, имеющего остаток карбоновой кислоты
превращение остатка карбоновой кислоты кеталя формулы VII в соответствующий изоцианат формулы VIII
- 7 016563 взаимодействие изоцианата формулы VIII с соединением формулы Ε10ί.Ό\ν в присутствии соответствующего ангидрида кислоты (Я10СО)2О с образованием амида формулы IX, имеющего остаток кеталя:
4ΝΚιΡΕ2
IX; и гидролиз кетального остатка амида формулы IX с образованием соединения формулы X, где Я1 и Я2 независимо представляют собой водород или защитную группу амина;
Я-ι и К.10 независимо представляют собой С1-6алкил или бензил;
представляет собой ОН или О-С1-6алкил;
Ζ представляет собой -С2Н4-.
Настоящее изобретение также обеспечивает способ получения соединения формулы (XI)
к® 'К»
X!
включающий:
a) добавление кислоты Льюиса в раствор соединения формулы X, полученного способом по п.12 и амина, имеющего формулу ΗΝΚ8Κ9, причем Я8 и Я9 независимо представляют собой водород или С1-6алкил, в апротонном растворителе, чтобы образовать имин-енамин; и
b) обработку имин-енамина восстанавливающим агентом, чтобы получить соединение формулы XI, имеющее аминопирролидонильный остаток.
Также настоящее изобретение обеспечивает следующие соединения: (7Я,88)-8-((38)-3-(((бензилокси)карбонил)амино)-2-оксо-1-пирролидинил)-1,4-диоксаспиро[4.5]декан-7-карбоновую кислоту или ее соль;
бензил ((38)-1-((7Я,88)-7-(азидокарбонил)-1,4-диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль;
бензил ((38)-1-((7Я,88)-7-изоцианато-1,4-диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль;
бензил ((38)-1-((7Я,88)-7-ацетамидо-1,4-диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль;
бензил ((38)-1-((18,2Я)-2-ацетамидо-4-оксоциклогексил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль;
бензил ((3 8)-1-((18,2Я,4Я)-2-ацетамидо-4-(трет-бутиламино)циклогексил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1. Экспериментальные и модельные порошковые рентгенограммы №((1К,28,5Я)-5-(третбутиламино)-2-((8)-2-оксо-3 -(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1 -ил)циклогексил)ацетамида, гемигидрат, форма Н0.5-4.
Фиг. 2. Экспериментальные и модельные порошковые рентгенограммы №((1К,28,5Я)-5-(третбутиламино)-2-((8)-2-оксо-3 -(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1 -ил)циклогексил)ацетамида, свободное основание, форма Ν-2.
Фиг. 3. Экспериментальные и модельные порошковые рентгенограммы №((1Я,28,5К.)-5-(третбутиламино)-2-((8)-2-оксо-3 -(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1 ил)циклогексил)ацетамида, 1,75 моль Н2О, форма Н1.75-5.
Фиг. 4. Экспериментальные и модельные порошковые рентгенограммы №((1К,28,5Я)-5-(третбутиламино)-2-((8)-2-оксо-3 -(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1 -ил)циклогексил)ацетамида, сольват моноэтанола, форма Е-1.
Фиг. 5. Экспериментальные и модельные порошковые рентгенограммы №((1К,28,5Я)-5-(третбутиламино)-2-((8)-2-оксо-3 -(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1 -ил)циклогексил)- 8 016563 ацетамида, сольват моноуксусной кислоты, форма НАС-1.
Фиг. 6. Экспериментальные и модельные порошковые рентгенограммы №((1Я,28,5Я)-5-(третбутиламино)-2-((8)-2-оксо-3 -(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1 -ил)циклогексил)ацетамида, сольваты моно-Я-пропиленгликоля, форма ЯРС-3.
Фиг. 7. Дифференциальная сканирующая калориметрия И8С Ы-((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)-2((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, гемигидрат, форма Н0.5-4.
Фиг. 8. Термогравиметрический анализ ТСА Ы-((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, гемигидрат, форма Н0.5-4.
Фиг. 9. Дифференциальная сканирующая калориметрия Э8С Ы-((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)-2((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободное основание, форма N-2.
Фиг. 10. Термогравиметрический анализ ТСА №((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободное основание, форма N-2.
Фиг. 11. Изотерма сорбции пара №((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободное основание, форма N-2 при температуре 25°С.
Фиг. 12. Дифференциальная сканирующая калориметрия Э8С №((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, 1,75 моль Н2О, форма Н 1.75-5.
Фиг. 13. Термогравиметрический анализ ТСА №((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, 1,75 моль Н2О, форма Н 1.75-5.
Фиг. 14. Дифференциальная сканирующая калориметрия Э8С №((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, сольват моноуксусной кислоты, форма НАС-1.
Фиг. 15. Термогравиметрический анализ ТСА №((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, сольват моноуксусной кислоты, форма НАС-1.
Фиг. 16. Дифференциальная сканирующая калориметрия Э8С №((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, сольват моноэтанола, форма Е-1.
Фиг. 17. Термогравиметрический анализ ТСА №((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, сольват моноэтанола, форма Е-1.
Фиг. 18. Дифференциальная сканирующая калориметрия Э8С №((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, сольват моно-Я-пропиленгликоля, форма ЯРС-3.
Фиг. 19. Термогравиметрический анализ ТСА К-((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, сольват моно-Япропиленгликоля, форма ЯРС-3.
Фиг. 20. Модель внутрикожной пробы у обезьян суиото1ди8: соединение по примеру 1 ингибирует рекруитмент мононуклеарных клеток к коже.
Фиг. 21. 48-часовой ТС перитонит у мыши йССЯ-2 К1: ингибирование соединением по примеру 1 инфильтрации моноцитов/макрофагов в брюшной полости.
Фиг. 22. ЕАЕ (экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит) у мыши йССЯ-2 К1: лечение соединением по примеру 1 снижает баллы клинической оценки.
Фиг. 23. Протонный спектр ЯМР соединения по примеру 1, 2-е альтернативное получение
стадия 3 - соединение 7.
Фиг. 24. Протонный спектр ЯМР соединения по примеру 1, 2-е альтернативное получение
стадия 4 - соединение 8.
Фиг. 25. Протонный спектр ЯМР соединения по примеру 1, 2-е альтернативное получение
стадия 4 - соединение 9.
Фиг. 26. Протонный спектр ЯМР соединения по примеру 1, 2-е альтернативное получение
стадия 4 - соединение 10.
Фиг. 27. Протонный спектр ЯМР соединения по примеру 1, 2-е альтернативное получение
стадия 5 - соединение 11.
- 9 016563
Подробное описание
Настоящее изобретение предусматривает новый антагонист или частичный агонист/антагонист активности рецептора МСР-1: №((1К,2§,5К)-5-(трет-бутиламино)-2-((§)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамид или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, обладающие непредвиденной комбинацией желательных фармакологических характеристик. Кристаллические формы настоящего изобретения также предусмотрены. Фармацевтические композиции, их содержащие, и способы их применения в качестве агентов для лечения воспалительных, аллергических, аутоиммунных, метаболических, раковых и/или сердечно-сосудистых заболеваний также являются целью данного изобретения.
[М-((1В,2§,5В)-5-(трет-Бутиламино)-2-((§)-2-оксо-3-(б-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил]ацетамид неожиданно демонстрирует желаемую комбинацию фармакологических характеристик, включая неожиданно высокую степень пероральной биодоступности в комбинации с указаниями на то, что оно высокоэффективно и имеет отличные критерии безопасности.
Известные модуляторы рецепторов ССР-2, такие как раскрыты в патентной заявке \¥О 2005021500, опубликованной 10 марта 2005 г. (патент США № 7163937, поданный 16 января 2007 г., принадлежащий настоящему заявителю), которые демонстрируют адекватную степень проницаемости мембран (ключевой фактор пероральной биодоступности), недостаточно эффективны, как было измерено по их сродству связывания ССР-2 (мера эффективности), и/или у них был недостаток соответствующих критериев безопасности, как показала селективность ионного канала, измеренная посредством НЕКС и исследований ионных каналов Να'.
Напротив, как показывают данные, представленные в данном описании, в разделе, озаглавленном Сравнительные фармакологические характеристики, относительно полярной молекулы Ν-((1Κ,2δ,5Κ)5-(трет-бутиламино)-2-((Б)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1ил)циклогексил)ацетамид демонстрирует неожиданно высокую степень мембранной проницаемости и поддерживает мощное сродство связывания ССК-2 наряду с отличной селективностью ионного канала.
Соответственно, настоящее изобретение предусматривает новый модулятор хемокинов, обладающий улучшенными фармакологическими характеристиками, который будет полезен в лечении воспалительных, аллергических, аутоиммунных, метаболических, раковых и/или сердечно-сосудистых заболеваний.
Настоящее изобретение также обеспечивает способ получения соединений формулы (X) >5*
о
X где Κι и К2 независимо представляют собой водород или защитную группу амина;
К4 и К10 независимо представляют собой С!-балкил или бензил;
представляет собой ОН или О-С1-6алкил;
Ζ представляет собой -С2Н4-.
Настоящее изобретение также обеспечивает способ получения соединения формулы (XI)
Также настоящее изобретение обеспечивает следующие соединения: (7К,8Б)-8-((3§)-3-(((бензилокси)карбонил)амино)-2-оксо-1-пирролидинил)-1,4-диоксаспиро[4.5]декан-7-карбоновую кислоту или ее соль, бензил ((3§)-1-((7К,8Б)-7-(азидокарбонил)-1,4-диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль, бензил ((3§)-1-((7К,8Б)-7-изоцианато-1,4-диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль, бензил ((3§)-1-((7К,8Б)-7-ацетамидо-1,4-диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль,
- 10 016563 бензил ((38)-1-((18,2К.)-2-ацетамидо-4-оксоциклогексил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль, бензил ((3 8)-1-((18,2К,4К)-2-ацетамидо-4-(трет-бутиламино)циклогексил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль.
Воплощения
В первом воплощении изобретение относится к Ы-((1К,28,5К.)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамиду и его фармацевтически приемлемой соли.
Другое воплощение представляет собой кристаллическую форму Ы-((1К,28,5К.)-5-(третбутиламино)-2-((8)-2-оксо-3 -(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1 -ил)циклогексил)ацетамида, свободное основание.
Другое воплощение представляет собой кристаллическую форму Ы-((1К,28,5К.)-5-(третбутиламино)-2-((8)-2-оксо-3 -(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1 -ил)циклогексил)ацетамида, свободное основание, где кристалическая форма содержит N-2 форму.
Другое воплощение представляет собой N-2 форму, которая характеризуется с помощью (или имеющая) параметров элементарной ячейки, главным образом равных следующим значениям:
размеры элементарной ячейки:
а=18,7240(4),
Ь=8,0171(2), с=19,6568(5);
а=90;
β=114,935 (2));
γ=90;
У(А3)=2675,7(1);
пространственная группа Р212121;
молекулы/элементарная ячейка 2, где измерение указанной кристаллической формы осуществляют при комнатной температуре около 22°С.
Другое воплощение в N-2 форме, которая характеризуется с помощью (или имеющая) порошковой рентгенограммы, включающей три или большее количество 2Θ значений (СиКа λ=1,5418 А), выбранных из 5,5, 9,1, 12,1, 14,0 и 19,2, при температуре около 22°С.
Другое воплощение представляет собой N-2 форму, которая характеризуется с помощью (или имеющая) порошковой рентгенограммы, дополнительно включающей четыре или большее количество 2Θ значений (СиКа λ=1,5418 А), выбранных из 5,5, 9,1, 12,1, 14,0 и 19,2, при температуре около 22°С.
Другое воплощение представляет собой N-2 форму, которая характеризуется с помощью (или имеющая) фракционных атомных координат, по существу, являющихся такими, как приведено в табл. 3.
Другое воплощение представляет собой N-2 форму, которая характеризуется с помощью (или имеющая) порошковой рентгенограммы, в основном в соответствии с фиг. 2.
Другое воплощение представляет собой кристаллическую форму N-((1^,28,5К.)-5-(третбутиламино)-2-((8)-2-оксо-3 -(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)ирролидин-1 -ил)циклогексил)ацетамида, свободное основание, включая форму Н1.75-5 (1,75 моль воды), которая характеризуется с помощью параметров элементарной ячейки, представленных в табл. 1; 3, или 4, или большим количеством 2Θ значений (СиКа λ=1,5418 А), выбранных из табл. 9; фракционные атомные координаты, по существу, представлены в табл. 4 и/или порошковая рентгенограмма в основном соответствует фиг. 3.
Другое воплощение представляет собой кристаллическую форму N-((1^,28,5К.)-5-(третбутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободное основание, включающая форму Н0.5-4 (гемигидрат), которая характеризуется с помощью параметров элементарной ячейки, представленных в табл. 1; 3, или 4, или большего количества 2Θ значений (СиКа λ=1,5418 А), выбранных из табл. 9; фракционные атомные координаты, по существу, представлены в табл. 2 и/или рентгенограмма на порошке, по существу, соответствует фиг. 1.
Другое воплощение представляет собой кристаллическую форму N-((1^,28,5К.)-5-(третбутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)ирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободное основание, включая форму Е-1 (сольват моноэтанола), которая характеризуется с помощью параметров элементарной ячейки, представленных в табл. 1; 3, или 4, или большего количества 2Θ значений (СиКа λ=1,5418 А), выбранных из табл. 9; фракционные атомные координаты, по существу, представлены в табл. 5 и/или рентгенограмма на порошке, по существу, соответствует фиг. 4.
Другое воплощение представляет собой кристаллическую форму N-((1^,28,5К.)-5-(третбутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)ирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободное основание, включая форму НАС-1 (сольват моноуксусной кислоты), которая характеризуется с помощью параметров элементарной ячейки, представленных в табл. 1; 3, или 4, или большего количества 2Θ значений (СиКа λ=1,5418 А), выбранных из табл. 9; фракционные атомные ко
- 11 016563 ординаты, по существу, представлены в табл. 6 и/или рентгенограмма на порошке, по существу, соответствует фиг. 5.
Другое воплощение представляет собой образцы кристаллической формы И-((1В,28,5В)-5-(третбутиламино)-2-((8)-2-оксо-3 -(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1 -ил)циклогексил)ацетамида, свободное основание, включая форму ΙΡΑ-1 (сольват моноизопропанола), которая характеризуется с помощью параметров элементарной ячейки, представленных в табл. 1; 3, или 4, или большего количества 2Θ значений (СиКа λ=1,5418 А), выбранных из табл. 9; и/или фракционных атомных координат, по существу, являющихся такими, как приведено в табл. 7.
Другое воплощение представляет собой кристаллическую форму И-((1В,28,5В)-5-(третбутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободное основание, включая форму ВРС-3 (сольват моно-В-пропиленгликоля), которая характеризуется с помощью параметров элементарной ячейки, представленных в табл. 1; 3, или 4, или большего количества 2Θ значений (СиКа λ=1,5418 А), выбранных из табл. 9; фракционные атомные координаты, по существу, представлены в табл. 8 и/или рентгенограмма на порошке, по существу, соответствует фиг. 6.
Другое воплощение представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую фармацевтически приемлемые носитель и соединение по примерам.
Другое воплощение представляет собой способ модулирования хемокина или хемокиновой активности рецептора, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по примерам.
Другое воплощение является способом лечения расстройств, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения примеров, указанные расстройства выбраны из следующих: диабеты, ожирение, метаболический синдром, инсульт, нейропатическая боль, ишемическая кардиомиопатия, псориаз, гипертензия, склеродермия, остеоартрит, аневризма, лихорадка, сердечно-сосудистое заболевание, болезнь Крона, застойная сердечная недостаточность, аутоиммунные заболевания, ВИЧ-инфекция, ВИЧ ассоциированная деменция, псориаз, идиопатический фиброз легких, атеросклероз трансплантата, физически- или химически вызванная травма головного мозга, воспалительное заболевание кишечника, альвеолит, колит, системная красная волчанка, нефротоксический сывороточный нефрит, гломерулонефрит, астма, рассеянный склероз, атеросклероз, васкулит, нестабильные бляшки, ревматоидный артрит, рестеноз, гиперплазия венозной неоинтимы, гиперплазия неоинтимы диализ трансплантата, гиперплазия интимы артериовенозного шунта, пересадка органа, хроническая нефропатия аллотрансплантата и рак.
Другое воплощение является способом лечения расстройств, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения примеров, отличающимся тем, что указанные расстройства выбраны из следующих: диабеты, ожирение, болезнь Крона, псориаз, идиопатический фиброз легких, атеросклероз трансплантата, физически- или химически вызванная травма головного мозга, воспалительное заболевание кишечника, альвеолит, колит, системная красная волчанка, нефротоксический сывороточный нефрит, гломерулонефрит, астма, рассеянный склероз, атеросклероз, ревматоидный артрит, рестеноз, пересадка органа и рак.
Другое воплощение является способом лечения расстройств, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения примеров, отличающимся тем, что указанные расстройства выбраны из следующих: диабеты, ожирение, болезнь Крона, системная красная волчанка, гломерулонефрит, рассеянный склероз, атеросклероз, рестеноз и пересадка органа.
Другое воплощение является способом лечения расстройств, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения примеров, отличающимся тем, что указанные расстройства выбраны из следующих: рассеянный склероз, атеросклероз, болезнь Крона и диабеты.
Другое воплощение представляет собой способ лечения расстройств, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по примерам, где указанные расстройства выбраны из рестеноза, пересадки органа и рака.
Другое воплощение представляет собой способ лечения диабетов, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по примерам.
Другое воплощение представляет собой способ лечения болезни Крона, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по примерам.
Другое воплощение представляет собой способ лечения рассеянного склероза, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по примерам.
Другое воплощение представляет собой способ лечения атеросклероза, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по примерам.
Другое воплощение представляет собой способ лечения рестеноза, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по примерам.
- 12 016563
Другое воплощение представляет собой способ лечения пересадки органа, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по примерам.
Другое воплощение представляет собой способ лечения рака, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по примерам.
Другое воплощение представляет собой способ лечения рака, где рак выбран из рака молочной железы, рака печени, рака предстательной железы и меланомы.
Другое воплощение представляет собой способ лечения воспалительных, аллергических, аутоиммунных, метаболических, раковых и/или сердечно-сосудистых заболеваний, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по примерам.
Другое воплощение представляет собой способ лечения воспалительных, аллергических, аутоиммунных, метаболических, раковых и/или сердечно-сосудистых заболеваний, которые, по крайней мере, частично опосредованы ССК.-2, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по примерам.
Другим воплощением является соединение по примерам для получения лекарственного средства для лечения диабетов, ожирения, метаболического синдрома, инсульта, нейропатической боли, ишемической кардиомиопатии, псориаза, гипертензии, склеродермии, остеоартрита, аневризмы, лихорадки, сердечно-сосудистого заболевания, болезни Крона, застойной сердечной недостаточности, аутоиммунных заболеваний, ВИЧ-инфекции, ВИЧ-ассоциированной деменции, псориаза, идиопатического фиброза легких, атеросклероза трансплантата, физически- или химически вызванной травмы головного мозга, воспалительного заболевания кишечника, альвеолита, колита, системной красной волчанки, нефротоксического сывороточного нефрита, гломерулонефрита, астмы, рассеянного склероза, атеросклероза, васкулита, нестабильных бляшек, ревматоидного артрита, рестеноза, гиперплазии венозной неоинтимы, ги перплазии неоинтимы диализ-трансплантата, гиперплазии интимы артериовенозного шунта, пересадки органа, хронической нефропатии аллотрансплантата и рака.
Другим воплощением является соединение по примерам для применения в терапии.
Изобретение может быть воплощено в его конкретных формах, без отступления от сущности или его существенных признаков. Настоящее изобретение также охватывает все комбинации альтернативных аспектов и воплощений изобретения, отмеченных в настоящем изобретении.
Следует понимать, что любое и все воплощения могут быть взяты вместе с любым другим воплощением для описания дополнительных воплощений по настоящему изобретению. Кроме того, любые элементы воплощений (включая предпочтительные аспекты) предназначены для объединения с любым и всеми другими элементами из любого воплощения, чтобы описать дополнительные воплощения.
Воплощения способа.
Настоящее изобретение также обеспечивает новый способ получения соединений формулы (X)
включающий следующие стадии:
гидролиз сложноэфирного остатка соединения формулы V гидролизующим агентом для образования кислоты соединения VI в интервале температур от приблизительно -5 до приблизительно 5°С ζίο ζίο ο ο
V VI взаимодействие соединения формулы νΐα, ΗΟ-Ζ-ΟΗ, с соединением формулы VI (необязательно ίη 811и) в присутствии кислотного катализатора с получением соединения формулы VII, имеющего остаток карбоновой кислоты
- 13 016563
превращение остатка карбоновой кислоты кеталя формулы VII в соответствующий изоцианат формулы VIII
взаимодействие изоцианата формулы VIII с соединением формулы К10СО^ в присутствии соответствующего ангидрида кислоты (К10СО)2О с образованием амида формулы IX, имеющего остаток кеталя
гидролиз кетального остатка амида формулы IX с образованием соединения формулы X, где
К1 и К2 независимо представляют собой водород или защитную группу амина;
К4 и К10 независимо представляют собой С1-6алкил или бензил; представляет собой ОН или О-С1-6алкил;
Ζ представляет собой -С2Н4В другом воплощении настоящее изобретение обеспечивает новый способ получения соединения формулы IV, включающий связывание производного аминокислоты структуры III или его соли с циклогексаноном формулы II или его солью (см. получение в \УО 2005021500), чтобы получить соединение структуры IV или его соль, имеющую замещенную амидную боковую цепь
где Ка и независимо представляют собой С1-6алкокси или
К,, и вместе с атомом, к которому они присоединены, объединены, чтобы образовать карбонил, тиокарбонил, циклический ацеталь или циклический тиоацеталь, где циклический ацеталь или циклический тиоацеталь выбраны из -Ο-Ζ-Ο- и -8-Ζ-8-, Ζ представляет собой -(СТ1Т2)2, -(СТ1Т2)3 или
Ть Т2 и Т3 в каждом случае независимо выбраны из водорода, С1_4алкила, С2_4алкенила, галогена,
- 14 016563 гидрокси, циано, нитро, СР3, О-С1-4алкила, ОСР3 и С(=О)-С1_4алкила (предпочтительно Τι, Т2 и Т3, каждый, представляют собой водород);
К1, К2 и К3 независимо представляют собой водород или защитную группу амина;
К4 представляет собой низший С1-6алкил или необязательно замещенный бензил;
Υ представляет собой галоген, 8Ме, 8(Ме)+К12 или О8О2К13;
V представляет собой ОН, галоген или О8О2К13;
К12 представляет собой водород, С1-6алкил, -(СН2)С(О)О-С1-6алкил или -(СН2)С(О)О-С1-6алкил и
К13 в каждом случае представляет собой С1-6алкил.
Предпочтительные защитные группы амина представляют собой группы, которые могут быть удалены путем гидролиза или гидрогенолиза в стандартных условиях. Такие группы включают без ограничения, карбобензилокси (СЬх) группу, трет-бутилоксикарбонил (Вос), флуоренилметилоксикарбонильную (Ршок) группу, бензильную (Вп) группу или п-метоксибензильную (РМВ) группу. Более предпочтительными являются СЬх. Вос или Вп группы (в особенности СЬх и Вп).
В еще одном воплощении настоящее изобретение обеспечивает новый способ, где к, и кЬ вместе с атомами углерода, к которому они присоединены, объединены, чтобы образовать карбонильную или 1,3-диоксолановую группу (в особенности 1,3-диоксолановую группу);
К1 представляет собой водород;
К2 представляет собой СЬх;
К3 представляет собой водород;
К4 представляет собой С1-6алкил;
Υ представляет собой 8(Ме) и
V представляет собой ОН.
В следующем воплощении, где Υ представляет собой -8Ме, изобретение обеспечивает способ, дополнительно включающий алкилирование соединения формулы IV группой к12Х, где X представляет собой галоген, чтобы образовать его соль сульфония. Агент алкилирования предпочтительно представляет собой метилйодид.
В следующем воплощении изобретение обеспечивает способ, где циклогексанон формулы IV представляет собой толуолсульфонатую соль.
В следующем воплощении изобретение обеспечивает способ, где соединение формулы IV представляет собой соль сульфония.
В следующем воплощении изобретение обеспечивает способ, где связывание проводят в инертной атмосфере, такой как азот или аргон (предпочтительно азот) в апротонном растворителе, таком как пропионитрил, изопропилацетат, н-бутилацетат, трет-бутилацетат или ацетонитрил (в особенности ацетонитрил и/или этилацетат).
В еще одном воплощении изобретение обеспечивает способ, где связывание может быть достигнуто путем взаимодействия соединения формулы II с диимидным связывающим реагентом в присутствии активатора и основания третичного амина. Диимидный связывающий реагент включает реагенты, например, такой как ΕΩΛΕ'. Примеры активаторов включают НОВ! (указанный термин включает его гидраты) и Ν',Ν’-4-диметиламинопиридин. Основание третичного амина, включает, например, триэтиламин, Ы-М-дизопропил-М-этиламин и три-н-пропиламин.
В еще одном воплощении изобретение обеспечивает способ, где диимидный связывающий реагент представляет собой ΕΩΛΟ активатор представляет собой НОВ! (указанный термин включает его гидраты) и основание третичного амина представляет собой триэтиламин.
В следующем воплощении изобретение обеспечивает способ, где мольные соотношения соединения формулы II к диимидному связывающему реагенту, к активатору, к третичному амину составляют приблизительно 1:0,090-1,50, 1:0,95-1,50, 1:2,00-3,00 соответственно.
Указанные мольные соотношения предпочтительно составляют приблизительно 1:0,095-1,05, 1:0,95-1,10 и 1:2,10-2,20 соответственно.
В одном из воплощений изобретение обеспечивает новый способ получения соединения формулы V, имеющего сложноэфирный остаток
включающий циклизацию боковой цепи производного аминокислоты соединения формулы IV или его соли, чтобы получить соединение формулы V, имеющее сложноэфирный остаток.
- 15 016563
В еще одном воплощении, где Ка и К независимо представляют собой С1-6алкокси или Ка и К вместе с атомом углерода, к которому они оба присоединены, объединены, чтобы образовать тиокарбонил, циклический ацеталь или циклический тиоацеталь, изобретение обеспечивает способ, который необязательно дополнительно включает стадию гидролиза Ка и групп для того, чтобы комбинация из К, и вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образовала карбонил. Гидролиз может быть проведен в растворителе, таком как ацетон, бутанон, ацетонитрил и изопропанол или их водные растворы и предпочтительно проводится в водном растворе ацетона. Предпочтительно стадия гидролиза следует за стадией циклизации.
В еще одном воплощении изобретение обеспечивает способ, где циклизацию проводят путем объединения соединения формулы IV или его соли с основанием в присутствии растворителя. Такими основаниями могут быть, например, без ограничения, карбонат цезия, бикарбонат цезия, карбонат калия, трет-бутилат натрия, гексаметилдисилазид натрия и предпочтительно карбонат цезия.
В следующем воплощении изобретение обеспечивает способ, где циклизацию проводят в инертной атмосфере, такой как азот или аргон (предпочтительно азот) в растворителе, включая, например, без ограничения, ДМСО, ДМФ, ДМА, Ν-метилпирролидон, сульфолан (в особенности, ДМСО и/или ДМФ).
В следующем воплощении изобретение обеспечивает способ получения соединения формулы V
включающий гидролиз сложноэфирного остатка соединения формулы V гидролизующим агентом с образованием кислоты соединения VI в интервале температур от приблизительно -5 до приблизительно 5°С.
Агенты гидролиза сложного эфира хорошо известны среднему специалисту в данной области и включают гидроксиды щелочных металлов, МОН, где М представляет собой Ь1, №1 или К, предпочтительно гидролизующий агент представляет собой водный раствор №аОН. Предпочтительно стадию гидролиза проводят в двухфазных условиях с органическим растворителем, который частично смешивается с водой. Предпочтительные органические растворители представляют собой ациклические или циклические эфиры, включая ТГФ, 2-метилТТФ, 1,2-диметоксиэтан, 1,4-диоксан, в особенности ТГФ.
Альтернативно, в еще одном воплощении, где Ка и К|:, вместе с атомом, к которому они присоединены, объединены, чтобы образовать карбонил, изобретение обеспечивает способ получения соединения формулы VII
включающий взаимодействие соединения формулы У!а, ΗΟ-Ζ-ΟΗ, с соединением формулы VI (необязательно ίη 811и) в присутствии кислотного катализатора, что дает соединение формулы VII, где Ζ представляет собой -^Η4-.
Предпочтительно соединение формулы У!а представляет собой этиленгликоль и кислотный катализатор представляет собой п-толуолсульфоновую кислоту или ее гидрат.
- 16 016563
В следующем воплощении изобретение обеспечивает способ получения соединения формулы VIII
включающий преобразование кеталя формулы VII в промежуточный изоцианат формулы VIII. Преобразование предпочтительно проводят с помощью перегруппировки по Курциусу.
В еще одном воплощении изобретение обеспечивает способ, где стадию преобразования проводят с помощью перегруппировки по Курциусу, включающую следующие стадии:
a) смешивание, по существу, безводного раствора формулы VII с основанием (основание представляет собой, например, без ограничения, алкиламин, в особенности третичный амин, предпочтительно триэтиламин);
b) добавление галогенформиата (например, хлорформиата, предпочтительно изо-ВиО2СС1) в раствор при температуре в интервале от приблизительно -10 до приблизительно 0°С, чтобы образовать смешанный ангидрид кислоты формулы VII;
c) обработка смешанного ангидрида реагентом азида (предпочтительно ΝαΝ3) в присутствии катализатора фазового переноса (предпочтительно соль тетралкиламмония, такая как бромид тетрабутиламмония, приблизительно при 5 мол.%) при температуре в интервале от приблизительно -10 до приблизительно 0°С, чтобы образовать азид кислоты формулы УПа
б) нагревание, по существу, безводного раствора ацилазида формулы УПа. чтобы образовать соответствующий изоцианат формулы VIII. Предпочтительно, по существу, безводный раствор ацилазида сушат над молекулярными ситами.
В еще одном воплощении изобретение обеспечивает способ получения соединения формулы IX, имеющего кетальный остаток
включающий взаимодействие изоцианата формулы VIII (необязательно ίη кби) с соединением формулы К|0СО\У (например, уксусной кислотой) в присутствии соответствующего ангидрида кислоты (т.е. (К10СО)2О) с образованием амида формулы IX, где К10 представляет собой С1-6алкил (К10 предпочтительно представляет собой метил) и представляет собой ОН или О-С1-6алкил.
В следующем воплощении изобретение обеспечивает способ получения соединения формулы X
включающий гидролиз кетального остатка амида формулы IX с образованием соединения формулы X.
- 17 016563
Условия гидролиза кеталя и реагенты хорошо известны среднему специалисту в данной области. Предпочтительно гидролиз проводят путем нагревания раствора соединения IX, имеющего кетальный остаток, в органическом растворителе (например, ацетоне) и соляной кислоты (приблизительно, 1Η) при температуре в интервале от приблизительно 45 до приблизительно 55°С в течение приблизительно 2-4 ч.
В еще одном воплощении изобретение обеспечивает способ получения соединения формулы XI
включающий восстановительное аминирование соединения формулы X амином формулы ΗΝΚ.ΧΚ.9 в присутствии кислоты Льюиса, далее агентом восстановления с образованием соединения формулы XI, имеющего аминопирролидонильный остаток.
В следующем воплощении изобретение обеспечивает способ, где восстановительное аминирование включает следующие стадии:
а) добавление кислоты Льюиса (предпочтительно реагент титана, включая, без ограничения, Τ^С12(Ο-изопропил)2) в раствор соединения X и амина, имеющего формулу ΗΝΚ8Β9 в апротонном растворителе, чтобы образовать имин-енамин формулы Xа
Ь) обработка имин-енамина формулы Ха агентом восстановления (предпочтительно борандиметилсульфид), чтобы получить соединение формулы XI, имеющее аминопирролидонильный остаток.
В вышеупомянутых стадиях апротонным растворителем может быть, например, без ограничения, дихлорметан, ацетонитрил, ДМСО, ДМФ и Ν-метилпирролидинон (предпочтительно дихлорметан).
В следующем воплощении изобретение обеспечивает способ, где амин формулы ΗΝ(Β8)(Β9) предпочтительно представляет собой трет-бутиламин.
В еще одном воплощении изобретение обеспечивает способ получения соединения формулы X
включающий следующие стадии:
гидролиз сложноэфирного остатка соединения формулы V агентом гидролиза, чтобы образовать кислоту соединения VI в интервале температур от приблизительно -5 до приблизительно 5°С
взаимодействие соединения формулы У1а, ΗΟ-Ζ-ΟΗ, с соединением формулы VI (необязательно ίη δίΐιι) в присутствии кислотного катализатора, что дает соединение формулы VII, имеющее остаток карбоновой кислоты
- 18 016563
взаимодействие соединения формулы У!а, НО-2-ОН (предпочтительно алкиленгликоль, в особенности этиленгликоль), с соединением формулы VI (необязательно ш К1!и) в присутствии кислотного катализатора (предпочтительно п-толуолсульфоновой кислоты или ее гидрата), что дает соединение формулы VII, имеющее остаток карбоновой кислоты
преобразование остатка карбоновой кислоты кеталя формулы VII в соответствующий промежуточный изоцианат формулы VIII
взаимодействие изоцианата формулы VIII (необязательно ш кйи) с соединением формулы Я10СОV (например, уксусная кислота) в присутствии соответствующего ангидрида кислоты (т.е. (Я40СО)2О) с образованием амида формулы IX, имеющего кетальный остаток
гидролиз кетального остатка амида формулы IX с образованием соединения формулы X
где Я1 и Я2 независимо представляют собой водород или защитную группу амина;
Я4 и Я10 независимо представляют собой С1-6алкил или бензил;
V представляет собой ОН или О-С1-6алкил;
Ζ представляет собой -С2Н4-.
В еще одном воплощении изобретение обеспечивает способ получения соединения формулы XI, где соединение формулы VII представляет собой (7Я,88)-8-((38)-3-(((бензилокси)карбонил)амино)-2-оксо-1-пирролидинил)-1,4диоксаспиро[4.5]декан-7-карбоновую кислоту или ее соль;
- 19 016563 соединение формулы У11а представляет собой бензил ((38)-1-((7В,88)-7-(азидокарбонил)-1,4диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль;
соединение формулы VIII представляет собой бензил ((38)-1-((7В,88)-7-изоцианато-1,4диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль;
соединение формулы IX представляет собой бензил ((38)-1-((7В,88)-7-ацетамидо-1,4диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль;
соединение формулы X представляет собой бензил ((38)-1-((18,2В)-2-ацетамидо-4оксоциклогексил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль;
соединение формулы XI представляет собой бензил ((38)-1-((18,2В,4В)-2-ацетамидо-(третбутиламино)циклогексил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль.
В следующем воплощении изобретение обеспечивает соединение формулы VI или его соль
где В1 и В2 независимо выбраны из водорода и защитной группы амина, выбранной из Вос, СЬх и бензила (предпочтительно В1 представляет собой водород и В2 представляет собой СЬх);
Ζ представляет собой -С2Н4-.
Предпочтительным соединением формулы VI является (1В,28)-2-((8)-3-(бензилоксикарбониламино)-2-оксопирролидин-1-ил)-5-оксоциклогексанкарбоновая кислота или ее соль.
В следующем воплощении изобретение обеспечивает соединение формулы VI, которое представляет собой (1В,28)-2-((8)-3-(бензилоксикарбониламино)-2-оксопирролидин-1-ил)-5-оксоциклогексанкарбоновую кислоту или ее соль.
В следующем воплощении изобретение обеспечивает новое соединение формулы VII или его соль νκ,η2
VII где В1 и В2 независимо выбраны из водорода и защитной группы амина, выбранной из Вос, СЬх и бензила (предпочтительно В1 представляет собой водород и В2 представляет собой СЬх);
Ζ представляет собой -С2Н4-.
Предпочтительным соединением формулы VII является (7В,88)-8-((38)-3-(((бензилокси)карбонил)амино)-2-оксо-1-пирролидинил)-1,4-диоксаспиро [4.5] декан-7-карбоновая кислота.
В следующем воплощении изобретение обеспечивает соединение формулы VII, которое представляет собой (7В,88)-8-((38)-3-(((бензилокси)карбонил)амино)-2-оксо-1-пирролидинил)-1,4-диоксаспиро[4.5]декан-7-карбоновую кислоту или его соль.
В следующем воплощении изобретение обеспечивает новые соединения формулы УПа или их соли
УПа где В1 и В2 независимо выбраны из водорода и защитной группы амина, выбранной из Вос, СЬх и бензила (предпочтительно В! представляет собой водород и В2 представляет собой СЬх).
Предпочтительным соединением формулы ΥΠα является бензил ((38)-1-((7В,88)-7-(азидокарбонил)1,4-диоксаспиро [4.5] дец-8-ил)-2-оксо-3 -пирролидинил)карбамат.
- 20 016563
В еще одном воплощении изобретение обеспечивает соединение формулы УПа, которое представляет собой бензил ((38)-1-((7К,88)-7-(азидокарбонил)-1,4-диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3пирролидинил)карбамат или его соль.
В 35-м воплощении изобретение обеспечивает соединение формулы VIII или его соль
VIII где Кд и К2 независимо выбраны из водорода и защитной группы амина, выбранной из Вос, СЬх или бензила (предпочтительно Κι представляет собой водород и К2 представляет собой СЬх);
Ζ представляет собой -С2Н4-.
Предпочтительным соединением формулы VIII является бензил ((38)-1-((7К,88)-7-изоцианато-1,4диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат.
В еще одном воплощении изобретение обеспечивает соединение формулы VIII, которое представляет собой бензил ((38)-1-((7К,88)-7-изоцианато-1,4-диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль.
В следующем воплощении изобретение обеспечивает соединение формулы IX или его соль
где Кд и К2 независимо выбраны из водорода и защитной группы амина, выбранной из Вос, СЬх или бензила (предпочтительно Κι представляет собой водород и К2 представляет собой СЬх);
Ζ представляет собой -С2Н4- и
К10 представляет собой С1-6алкил (предпочтительно метил).
Предпочтительным соединением формулы IX является бензил ((38)-1-((7К,88)-7-ацетамидо-1,4диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат.
В еще одном воплощении изобретение обеспечивает соединение формулы IX, которое представляет собой бензил ((38)-1-((7К,88)-7-ацетамидо-1,4-диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль.
В следующем воплощении изобретение обеспечивает соединение формулы X или его соль
где Κι и К2 независимо представляют собой водород или защитную группу амина, выбранную из Вос, СЬх и бензила; и
К10 представляет собой С1-6алкил.
Предпочтительно Κι представляет собой водород, К2 представляет собой СЬх и К10 представляет собой метил. Предпочтительным соединением формулы X является бензил ((38)-1-((18,2К)-2-ацетамидо-4оксоциклогексил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат.
В еще одном воплощении изобретение обеспечивает соединение формулы X, которое представляет собой бензил ((38)-1-((18,2К)-2-ацетамидо-4-оксоциклогексил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль.
- 21 016563
В следующем воплощении изобретение обеспечивает соединение формулы XI или его соль ык,кг
й/ к»
XI где К1 и К2 независимо представляют собой водород или защитную группу амина, выбранную из Вос, СЬх и бензила;
К8 и К9 независимо представляют собой водород или С1-6алкил и
К10 представляет собой С1-6алкил.
Предпочтительно К1 представляет собой водород, К2 представляет собой СЬх, К8 представляет собой водород, К9 представляет собой трет-бутил и К10 представляет собой метил.
Предпочтительным соединением формулы XI является бензил ((38)-1-((18,2К,4К)-2-ацетамидо-4(трет-бутиламино)циклогексил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат.
В следующем воплощении изобретение обеспечивает соединение формулы XI, которое представляет собой бензил ((38)-1-((18,2К,4К)-2-ацетамидо-4-(трет-бутиламино)циклогексил)-2-оксо-3пирролидинил)карбамат или его соль.
В следующем воплощении изобретение обеспечивает соединение, выбранное из (7К,88)-8-((38)-3-(((бензилокси)карбонил)амино)-2-оксо-1-пирролидинил)-1,4диоксаспиро[4.5]декан-7-карбоновой кислоты или ее соли;
бензил ((38)-1-((7К,88)-7-(азидокарбонил)-1,4-диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамата или его соли;
бензил ((38)-1-((7К,88)-7-изоцианато-1,4-диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамата или его соли;
бензил ((38)-1-((7К,88)-7-ацетамидо-1,4-диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамата или его соли;
бензил ((38)-1-((18,2К)-2-ацетамидо-4-оксоциклогексил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамата или его соли и бензил ((3 8)-1-((18,2К,4К)-2-ацетамидо-4-(трет-бутиламино)циклогексил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамата или его соли.
В еще одном воплощении изобретение обеспечивает способ, где соединение формулы VII представляет собой (7К,88)-8-((38)-3-(((бензилокси)карбонил)амино)-2оксо-1-пирролидинил)-1,4-диоксаспиро[4.5]декан-7-карбоновую кислоту или ее соль;
соединение формулы VII;·! представляет собой бензил ((38)-1-((7К,88)-7-(азидокарбонил)-1,4диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль;
соединение формулы VIII представляет собой бензил ((38)-1-((7К,88)-7-изоцианато-1,4диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль;
соединение формулы IX представляет собой бензил ((38)-1-((7К,88)-7-ацетамидо-1,4диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль;
соединение формулы X представляет собой бензил ((38)-1-((18,2К)-2-ацетамидо-4оксоциклогексил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль; и соединение формулы XI представляет собой бензил ((38)-1-((18,2К,4К)-2-ацетамидо-4-(третбутиламино)циклогексил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамат или его соль.
В еще одном воплощении изобретение обеспечивает способ, где соединение представляет собой №((1К,28,5К)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин1-ил)циклогексил)ацетамид или его соль.
Настоящее изобретение может быть воплощено в других конкретных формах без отступления от сущности или его существенных признаков. Таким образом, упомянутые выше воплощения не должны быть рассмотрены как ограничивающие. Любое и все воплощения по настоящему изобретению могут быть взяты вместе с любым другим воплощением или воплощениями, для описания дополнительных воплощений. Каждый индивидуальный элемент (включая предпочтительные аспекты) воплощения является своим собственным независимым воплощением. Кроме того, элемент любого воплощения предназначен, чтобы быть объединенным с любым и всеми другими элементами из любого воплощения, чтобы описать дополнительные воплощения. Кроме того, настоящее изобретение охватывает комбинации различных воплощений, части воплощений, определений, описаний и примеры по изобретению, отмеченные в настоящем изобретении.
- 22 016563
Определения
Далее представлены определения терминов, используемых в настоящем описании и прилагаемой формуле изобретения. Исходное определение, обеспеченное для группы или термина в настоящем изобретении, применяется к указанной группе или термину на протяжении всего описания и в формуле изобретения, индивидуально или как часть другой группы, если иное не указано.
Термин алкил относится к прямой или разветвленной цепи углеводородной группы, имеющей от 1 до 12 атомов углерода, предпочтительно от 1 до 6 атомов углерода. Когда числа показаны в нижнем индексе после символа С, нижний индекс определяет более конкретно число атомов углерода, которые может содержать отдельная группа. Например, С1-6алкил относится к прямой или разветвленной цепи алкильных групп, содержащих от 1 до 6 атомов углерода, таких как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, трет-бутил, н-пентил и т. д. Нижний индекс Ο относится к связи. Таким образом, термин гидрокси(Со-2)алкил или (Со-2)гидроксиалкил включает гидрокси, гидроксиметил и гидроксиэтил. Алкильные группы могут быть замещены от 1 до 2 групп, выбранных из (С1-6)алкила, (С2-6)алкенила, гидрокси, галогена, циано, нитро, СЕ3, Ο(С1-6алкила), ΟСΕ3, ί’(=Ο)Η. ^^КС^алиила), ί.Ό2Η. СΟ2(С1-6алкила), NΗСΟ2(С1-6алкила), -8(С!-6алкила), ΝΗ2, NΗ(С1-6алкила), №(С!-6алкила)2, Ν(ί.Ή3)3'. 8Ο2(С1-6алкила), С(=Ο)(С1-4алкилена)NΗ2, С(=Ο)(С1-4алкилен)NΗ(алкила), С(=Ο)(С1-4алкилен)N(С1 4алкила)2, С3-7циклоалкила, фенила, бензила, фенилэтила, фенилокси, бензилокси, нафтила, от 4- до 7членного гетероцикло и/или от 5- до 6-членного гетероарила. Когда замещенный алкил замещен арилом, гетероцикло, циклоалкилом или гетероарильной группой, то указанные кольцевые системы являются теми, как определено ниже, и, таким образом, могут иметь ноль, один, два или три заместителя, также как определено ниже.
Рассматриваемые в настоящем изобретении соединения могут иметь асимметричные центры. Соединения по настоящему изобретению, содержащие асимметрично замещенный атом, могут быть выделены в оптически активной или рацемической форме. Среднему специалисту хорошо известны способы получения оптически активных форм, такие как путем разделения рацемических форм или с помощью синтеза из оптически активных исходных продуктов. Большинство геометрических изомеров олефинов, С=№ двойных связей и им подобные могут также присутствовать в соединениях, описанных в настоящем изобретении, и все такие стабильные изомеры рассмотрены в настоящем изобретении. Описаны цис- и транс-геометрические изомеры соединений по настоящему изобретению и могут быть выделены в виде смеси изомеров или как отдельные изомерные формы. Имеются в виду все хиральные, диастереомерные, рацемические формы и все геометрические изомерные формы структур, за исключением конкретной стереохимии или если изомерная форма конкретно определена.
Один из энантиомеров соединений, раскрытых в настоящем изобретении, может проявлять лучшую активность по сравнению с другим. Таким образом, все стереохимические формы рассмотрены как часть настоящего изобретения. Когда неоходимо, разделение рацемического продукта может быть достигнуто с помощью ВЭЖХ, с использованием хиральной колонки или путем разделения, используя агент разделения, такой как камфоновый хлорид, как в статье 81сусп Ό. Уоипд, с1 а1., Апбш1сгоЫа1 Адепй апб СйешоШегару, 1995, 2602-2605.
Выражение фармацевтически приемлемый, используемое в настоящем изобретении, относится к тем соединениям, веществам, композициям и/или дозируемым формам, которые находятся в области официальной медицинской практики, пригодным для применения в контакте с тканями человека и животных без излишней токсичности, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения, соразмерно приемлемому соотношению польза/риск.
Как используют в настоящем изобретении, термин фармацевтически приемлемые соли относится к производным раскрытых соединений, где исходное соединение модифицируют путем применения его кислотной или основной соли. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, но без ограничения, неорганические или органические кислотные соли основных остатков, таких как амины; щелочные или органические соли кислотных остатков, такие как карбоновые кислоты; и им подобные. Фармацевтически приемлемые соли включают обычные нетоксичные соли или соли четвертичного аммония исходного соединения, образованного, например, из нетоксичных неорганических или органических кислот. Например, такие обычные нетоксичные соли включают те, которые произведены из неорганических кислот, таких как хлористо-водородная, бромисто-водородная, серная, сульфаминовая, фосфорная, азотная и им подобные; и соли, полученные из органических кислот, таких как уксусная, пропионовая, янтарная, гликолевая, стеариновая, молочная, яблочная, винная, лимонная, аскорбиновая, памоевая, малеиновая, гидроксималеиновая, фенилуксусная, глутаминовая, бензойная, салициловая, сульфаниловая, 2-ацетоксибензойная, фумаровая, толуолсульфоновая, метансульфоновая, этандисульфоновая, щавелевая, изэтиновая и им подобные.
Фармацевтически приемлемые соли по настоящему изобретению могут быть синтезированы из исходного соединения, которое содержит основной или кислотный остаток с помощью обычных химических способов. В целом такие соли могут быть получены путем взаимодействия форм свободной кислоты или основания таких соединений со стехиометрическим количеством соответствующего основания или кислоты в воде или в органическом растворителе или в их смеси; в целом безводные среды, подоб
- 23 016563 ные простому эфиру, этилацетату, этанолу, изопропанолу или ацетонитрилу, являются предпочтительными. Перечни подходящих солей представлены в Кеш1пд!оп'8 РЬагтасеийса1 8с1епсе5, 17!Ь ей., Маск РиЬШЫпд Сотрапу, Байоп, РА, 1985, р. 1418, раскрытие которой при этом включено как ссылка.
Термины стабильное соединение и стабильная структура предназначены для обозначения соединения, которое является достаточно устойчивым, чтобы сохраниться при выделении до пригодной степени чистоты из реакционной смеси и при добавлении в эффективный терапевтический агент. Настоящее изобретение предназначено для воплощения стабильных соединений.
Термин терапевтически эффективное количество предназначен для включения количества соединения по настоящему изобретению само по себе или количества комбинаций заявленных соединений или количества соединения по настоящему изобретению в комбинацию с другими активными ингредиентами, эффективными для ингибирования МСР-1 или эффективными для лечения или профилактики расстройств.
Как используют в настоящем изобретении, обработка или лечение охватывают лечение болезненного состояния у млекопитающего, в особенности у человека, и включают:
(а) профилактику болезненного состояния, имеющегося у млекопитающего, в частности, когда такое млекопитающее предрасположено к болезненному состоянию, но еще не было диагностировано на его наличие;
Ь) ингибирование болезненного состояния, т. е. остановка его развития; и/или (с) снятие болезненного состояния, т. е. вызывание регрессии болезненного состояния.
Наименования, используемые в настоящем изобретении, характеризующие конкретную форму, например Ν-2, не должны быть рассмотрены, как ограничение относительно любого другого вещества, обладающего подобными или идентичными физическими и химическими характеристиками, а скорее нужно подразумевать, что эти обозначения представляют собой простые идентификаторы, которые должны интерпретироваться в соответствии с характеристической информацией, также представленной в настоящем изобретении.
Настоящее изобретение обеспечивает по крайней мере в части кристаллические формы свободного основания Ы-((1К,28,5К)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида как нового продукта, в частности в фармацевтически приемлемой форме. В определенных предпочтительных воплощениях кристаллические формы свободного основания являются, по существу, чистой формой. Предпочтительные воплощения кристалических форм свободного основания раскрыты в примере 2 как формы Ε-1, НАС-1, ГРА-1, Ν-2, РРС-3, Н0.5-4 и Н1.75-5.
Как используют в настоящем изобретении, термин полиморф относится к кристаллическим формам, имеющим одинаковую химическую структуру, но различные пространственные расположения молекул, атомов и/или ионов, формирующих кристалл.
Как используют в настоящем изобретении, термин сольват относится к кристаллической форме молекулы, атома и/или ионов, которая дополнительно содержит молекулы растворителя, или растворители включены в кристалическую структуру.
Молекулы растворителя в сольвате могут присутствовать в нормальном расположении и/или неупорядоченном расположении. Сольват может содержать или стехиометрическое, или нестехиометрическое количество молекул растворителя. Например, сольват с нестехиометрическим количеством молекул растворителя может возникнуть из частичной потери растворителя из сольвата.
Как используется в настоящем изобретении, термин аморфный относится к твердой форме молекулы, атома и/или ионов, которая не является кристаллической. Аморфное твердое вещество не показывает характерную дифракционную рентгенограмму.
Как используется в настоящем изобретении, по существу, чистый, когда используется в отношении к кристаллической форме, означает соединение, имеющее чистоту более чем 90 вес.%, включая более чем 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 и 99 вес.%, а также включая чистоту, равную приблизительно 100 вес.%. соединения, в расчете на вес соединения. Остающийся материал включает другую форму(ы) соединения, и/или реакционные примеси, и/или примеси при обработке, являющиеся результатом ее получения. Например, кристаллическую форму Ы-((1К,28,5К)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида можно считать, по существу, чистой в том, что она имеет чистоту более чем 90 вес.%, как измерено методами, которые являются в настоящее время известными и общепринятыми в данной области, где отставшее менее чем 10 вес.% вещество включает другую форму(ы) Ы-((1К,28,5К)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида и/или реакционные примеси, и/или примеси при обработке.
Образцам кристаллических структур по изобретению можно обеспечить, по существу, чистую фазовую однородность, идентифицируемую наличием доминирующего количества единственной кристаллической структуры и, необязательно, незначительных количеств одной или более других кристаллических форм. Присутствие более чем одной кристаллической формы в образце может быть определено методами, такими как порошковая дифракция рентгеновских лучей (РХКП) или твердофазная ядерная маг
- 24 016563 нитно-резонансная спектроскопия (88ΝΜΒ). Например, присутствие экстра-пиков при сравнении экспериментально измеренной рентгенограммы ΡXΚ^ с модельной рентгенограммой РXΚ^ может указывать на более чем одну кристаллическую форму в образце. Модельная рентгенограмма ΡXΚ^ может быть вычислена на основе данных рентгеновского анализа монокристалла. См. статью διηίΐΐι. Ό.Κ., А ΡΟΡΤΡΑΝ Ргодгат Гог Са1си1абпд X-Βау Ро\\'бег ΌίΓΓΓαοΙίοη Райетз, Ьа^гепсе ΡαάίαΙίοη ЬаЬога1огу, Ыуегтоге, СайГогша, иСРЬ-7196 (Арп1 1963).
Предпочтительно кристаллическая структура имеет, по существу, чистую фазовую однородность, как обозначено, посредством менее чем 10%, предпочтительно менее чем 5% и более предпочтительно менее чем 2% общей площади пика в экспериментально измеренной рентгенограмме РXΚ^, являющейся результатом экстра-пиков, которые отсутствуют на модельной рентгенограмме РXΚ^. Наиболее предпочтительна кристаллическая форма, имеющая, по существу, чистую фазовую однородность менее чем с 1% от общей площади пика в экспериментально измеренной рентгенограмме РXΚ^, являющейся результатом экстра-пиков, которые отсутствуют на модельной рентгенограмме РXΚ^.
Процедуры для получения кристаллических форм известны в данной области техники. Кристаллические формы могут быть получены разнообразными методами, включая, например, кристаллизацию или перекристаллизацию из подходящего растворителя, сублимацию, рост из расплава, переход в твердую фазу из другой фазы, кристаллизацию из суперкритической жидкости и реактивное распыление. Способы кристаллизации или перекристаллизации кристаллических форм из растворяющей смеси включают, например, выпаривание растворителя, уменьшение температуры растворяющей смеси, использование кристаллической затравки в пересыщенной растворяющей смеси молекулы и/или соли, замораживание, высушивающее растворяющую смесь, и добавление антирастворителей (противорастворителей) к растворяющей смеси.
Формы могут быть охарактеризованы и идентифицированы с использованием рентгеноструктурного анализа, который основан на измерениях элементарной ячейки и интенсивности монокристалла формы при фиксированной аналитической температуре. Детальное описание анализа элементарных ячеек и интенсивности раскрывается в 81ои1 & •Κη^η, X-Βау 81гис1иге А Ргасйса1 Сшбе, МастШан
Со., №\ν Уогк (1968), глава 3, которая включена в настоящее описание в качестве ссылки. Альтернативно, уникальное расположение атомов в кристаллической решетке может быть охарактеризовано согласно наблюдаемым фракционным атомным координатам; см. ссылку 81ои1 & •кизеи для экспериментального определения фракционных координат для структурного анализа. Другим средством характеристики кристаллической структуры является порошковый рентгеноструктурный анализ, в котором экспериментальный или наблюдаемый профиль дифракции сравнивают с модельным профилем, представляющим чистое вещество в виде порошка, оба измеряют при одной и той же аналитической температуре и измерения для тестируемой формы характеризуют в виде ряда значений 2Θ и интенсивностей.
Термин незначительная потеря массы, используемый в настоящем изобретении, как охарактеризовано ΤΟΑ, указывает на присутствие беспримесной (несольватированной) кристаллической формы.
Термин незначительное поглощение влаги%, также используемый в настоящем изобретении, как охарактеризовано изотермой сорбции влажности, указывает на то, что тестируемая форма является негигроскопичной.
В одном воплощении изобретения кристаллическая форма №((1К,28,5В)-5-(трет-бутиламино)-2((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1 -ил)циклогексил)ацетамида обеспечивается, по существу, в чистой форме. Эта кристаллическая форма может использоваться в фармацевтических композициях, которые могут необязательно включать один или более других компонентов, например, выбранных из группы, состоящей из наполнителей, носителей и одного из других активных фармацевтических компонентов или активных химических объектов других молекулярных структур.
Предпочтительно кристаллическая форма имеет, по существу, чистую фазовую однородность, как обозначено, менее чем 10%, предпочтительно менее чем 5% и более предпочтительно менее чем 2% общей площади пика в экспериментально измеренной рентгенограмме РXΚ^, являющейся результатом экстра-пиков, которые отсутствуют на модельной рентгенограмме РXΡ^. Наиболее предпочтительна кристаллическая форма, имеющая, по существу, чистую фазовую однородность с менее чем 1% общей площади пика в экспериментально измеренной рентгенограмме РXΚ^, являющейся результатом экстрапиков, которые отсутствуют на модельной рентгенограмме РXΒ^.
В другом воплощении изобретения обеспечивается композиция, состоящая, по существу, из кристаллических форм №((1В,28,5К.)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4ламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида. Композиция этого воплощения может включать по крайней мере 90 вес.%. формы в расчете на ее вес в композиции.
Присутствие реакционных примесей реакции и/или примесей при обработке может быть определено аналитическими методами, известными в данной области, такими как, например, хроматография, спектроскопия ядерного магнитного резонанса, масс-спектрометрия или инфракрасная спектроскопия.
- 25 016563
Кристаллические формы могут быть получены разнообразием методов, включая, например, кристаллизацию или перекристаллизацию из подходящего растворителя, сублимацию, рост из расплава, переход в твердую фазу из другой фазы, кристаллизацию из суперкритической жидкости и реактивное распыление. Способы кристаллизации или перекристаллизации кристаллических форм из растворяющей смеси включают, например, выпаривание растворителя, уменьшение температуры растворяющей смеси, использование кристаллической затравки в пересыщенной растворяющей смеси молекулы и/или соли, замораживание, высушивающее растворяющую смесь, и добавление антирастворителей (противорастворителей) к растворяющей смеси. Могут использоваться высокопроизводительные способы кристаллизации для получения кристаллических форм, включая полиморфы.
Кристаллы лекарства, включая полиморфы, способы получения и характеристики кристаллов лекарства обсуждаются в 8ойб-81а!е С11епнк1гу оГ Эгидк, 8.Я. Вут, Я.Я. РГеИГег и ТС. 8!о^е11, 2пб ЕбШоп, 88С.Т ^№ек! ЬаГауе!!е, Шб1апа (1999).
Для методов кристаллизации, которые используют растворитель, выбор растворителя или растворителей обычно зависит от одного или более факторов, таких как растворимость соединения, методики кристаллизации и давления пара растворителя. Могут использоваться комбинации растворителей; например, соединение может быть солюбилизировано в первом растворителе для получения раствора с последующим добавлением антирастворителя, для уменьшения растворимости соединения в растворе и образования кристаллов. Антирастворитель представляет собой растворитель, в котором соединение имеет низкую растворимость. Подходящие растворители для получения кристаллов включают полярные и неполярные растворители.
В одном методе получения кристаллов Ы-((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамид суспендируют и/или перемешивают в подходящем растворителе, чтобы получить суспензию, которая может быть нагрета, чтобы ускорить растворение. Термин суспензия, как используется в настоящем изобретении, означает насыщенный раствор свободного основания, который может также содержать дополнительное количество соединения, чтобы получить гетерогенную смесь соединения и растворителя при данной температуре. Подходящие растворители в этом отношении включают, например, полярные апротонные растворители и полярные протонные растворители и смеси двух или большего количества растворителей, как раскрыто в настоящем изобретении.
Кристаллические затравки могут быть добавлены к любой смеси для кристаллизации для ускорения кристаллизации. Как будет понятно квалифицированному специалисту, применение затравки используется для управления ростом конкретной кристаллической структуры или для управления распределением размера частиц кристаллического продукта. Соответственно, вычисление количества необходимых затравок зависит от размера доступной затравки и желательного размера средней частицы продукта, как описано, например, в Ргодгаттеб Соо1шд оГ Ва!сй Сгу к(а1Нхегк, IV. МиШп и 1. Ыуу1!, Сйетка1 Епдтееппд 8с1епсе 1971, 26, 369-377. Вообще затравки небольшого размера необходимы для эффективного управления ростом кристаллов в партии. Затравка небольшого размера может быть получена просеиванием, помолом или тонким измельчением больших кристаллов или микрокристаллизацией растворов. Должна быть предпринята осторожность, чтобы размалывание или тонкое измельчение кристаллов не привели ни к какому изменению в кристалличности заданной кристаллической формы (т. е. изменения на аморфную форму или на другой полиморф).
Охлажденная кристаллизационная смесь может быть офильтрована под вакуумом и выделенные твердые частицы могут быть промыты подходящим растворителем, таким как холодный перекристаллизационный растворитель, и высушены при продувке азотом для получения заданной кристаллической формы. Выделенные твердые частицы могут быть проанализированы подходящей спектроскопической или аналитической методикой, такой как 88№МЯ, Э8С, РXΚ^, или подобной, чтобы удостовериться в образовании предпочтительной кристаллической формы продукта. Получающуюся кристаллическую форму обычно производят в количестве более чем приблизительно 70 вес.%. отдельного выхода, предпочтительно более чем 90 вес.%. отдельного выхода в расчете на вес Ы-((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, первоначально используемого в процедуре кристаллизации. Продукт может быть перемолот или пропущен через сито для измельчения продукта, в случае необходимости.
Кристаллические формы могут быть получены непосредственно из реакционной среды конечного процесса для получения Ы-((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида. Это может быть достигнуто, например, с использованием на заключительной стадии процесса растворителя или смеси растворителей, из которых может быть выкристаллизовано свободное основание. Альтернативно, кристаллические формы могут быть получены дистилляцией или методами добавления растворителя. Подходящие растворители с этой целью включают любой из тех растворителей, которые описаны в настоящем изобретении, включая протонные полярные растворители, такие как спирты, и апротонные полярные растворители, такие как кетоны.
- 26 016563
Посредством общей методики реакционная смесь может быть отфильтрована, чтобы удалить любые нежелательные примеси, неорганические соли и т. п., с последующей промывкой реакционным или кристаллизационным растворителем. Получающийся раствор может быть сконцентрирован, чтобы удалить избыток растворителя или газообразные включения. Если используется дистилляция, то окончательное количество собранного продукта перегонки может измениться, в зависимости от факторов процесса, включая, например, размер сосуда, мощность перемешивания и т.п. Посредством общей методики реакционный раствор может быть дистиллирован приблизительно до 1/10 от первоначального объема прежде, чем осуществится замена растворителя. Может быть отобрана и протестирована проба, чтобы определить содержание реакционной смеси и вес.% продукта в соответствии со стандартными методами процесса. Если желательно, то дополнительный реакционный растворитель может быть добавлен или удален, чтобы оптимизировать концентрацию реакционной смеси. Предпочтительно заключительную концентрацию регулируют приблизительно до 50 вес.%, при которой обычно получается суспензия.
Предпочтительно могут быть добавлены растворители непосредственно в реакционный сосуд, не дистиллируя реакционную смесь. Предпочтительные растворители с этой целью представляют собой те растворители, которые могут в конечном счете встраиваться в кристаллическую решетку, как обсуждается выше в связи со сменой растворителя. Хотя заключительная концентрация может изменяться в зависимости от желаемой чистоты, отделения и т.п., заключительная концентрация свободного основания в растворе составляет предпочтительно от приблизительно 4 до приблизительно 7%. Реакционная смесь может быть перемешана после добавления растворителя и одновременно нагрета. Для иллюстрации, реакционную смесь можно перемешивать в течение приблизительно 1 ч, нагревая приблизительно до 70°С. Реакционную смесь предпочтительно отфильтровывают горячей и промывают или реакционным растворителем, или добавленным растворителем, или их комбинацией. Кристаллы затравки могут быть добавлены к любому раствору для инициирования кристаллизации.
Различные формы, описанные в настоящем изобретении, могут быть различимы друг от друга с помощью разных аналитических методов, известных квалифицированным в данной области специалистам. Такие способы включают, но не ограничиваясь, рентгеновскую дифракцию на порошке (РХКЭ) и/или термогравиметрический анализ (ТСА). Конкретно, формы могут быть охарактеризованы и идентифицированы с использованием рентгеноструктурного анализа, который основан на измерениях элементарной ячейки монокристалла конкретной формы при фиксированной аналитической температуре. Детальное описание элементарных ячеек раскрывается в 8Юи1 & Ιοηδοη, Х-Кау 81гис1иге Ос1сгтта1юп: А РгасЕса1 Сшбе, МастШап Со., №\ν Уогк (1968), глава 3, которая включена в настоящее описание в качестве ссылки. Альтернативно, уникальное расположение атомов в кристаллической решетке может быть охарактеризовано согласно наблюдаемым фракционным атомным координатам. Другим средством характеристики кристаллической структуры является порошковый рентгеноструктурный анализ, в котором профиль дифракции сравнивают с модельным профилем, представляющим чистое вещество в виде порошка, оба измеряют при одной и той же аналитической температуре и измерения для тестируемой формы характеризуют в виде ряда значений 2Θ (обычно четыре или более).
Могут использоваться другие способы характеристики формы, такие как твердофазная ядерная магнитно-резонансная спектроскопия (88ΝΜΚ), дифференциальная сканирующая калориметрия (О8С), теплография и макроскопическое исследование кристаллической или аморфной морфологии. Эти параметры могут также использоваться в комбинации, чтобы охарактеризовать изучаемую форму.
Специалист в данной области оценит, что рентгенограммы могут быть получены с ошибкой измерения, которая зависит от используемых условий измерения. В частности, общеизвестно, что интенсивности на рентгенограмме могут колебаться в зависимости от используемых условий измерения и формы или морфологии кристалла. Должно быть понятно, что относительные интенсивности могут также изменяться в зависимости от экспериментальных условий и, соответственно, точный порядок интенсивностей не должен приниматься во внимание. Дополнительно, ошибка измерения угла дифракции для типичной рентгенограммы составляет обычно приблизительно 0,2° или менее, предпочтительно приблизительно 0,1° (как обсуждается в дальнейшем), и такая степень ошибки измерения должна быть принята во внимание, как имеющая отношение к вышеупомянутым углам дифракции. Следовательно, должно быть понятно, что кристаллические формы настоящего изобретения не ограничиваются кристаллическими формами, которые обеспечиваются рентгенограммами, по существу, идентичными рентгенограммам, изображенным на приложенных фигурах, раскрытых в настоящем изобретении. Любые кристаллические формы, которые обеспечиваются рентгенограммами, по существу, идентичными рентгенограммам, раскрытым на приложенных фигурах, находятся в пределах области охраны настоящего изобретения. Способность устанавливать существенные идентичности рентгенограмм находится в пределах области знаний среднего специалиста.
- 27 016563
Синтез
Схема 1
Гидролиз кетоэфира У в кетокислоту VI
Кетоэфир У гидролизуют в его соответствующую кетокислоту VI путем суспендирования соединения У в органическом растворителе, частично смешанном с водой, таком как ациклические или циклические эфиры, включая ТГФ, 2-метил ТГФ, 1,2-диметоксиэтан, 1,4-диоксан, ТГФ является предпочтительным, и добавления водного основания, такого как водные растворы гидроксидов щелочных металлов МОН, где М представляет собой Ь1, №1 или К, 1н. ЫаОН, являющегося предпочтительным основанием, при температуре в интервале от -5 до 5°С. Двухфазную смесь затем взбалтывают при температуре <5°С в течение по крайней мере 1 ч. Низкая температура для добавления основания и реакции является существенной, чтобы минимизировать эпимеризацию у атома углерода, смежного с эфирной группой. Затем добавляют несмешиваемый с водой растворитель, предпочтительно метил-трет-бутиловый эфир и слои разделяют. Продукт затем переносят из водного раствора обратно в органический растворитель, предпочтительно дихлорметан, устанавления значения рН с помощью кислоты, предпочтительно 3н. раствора НС1 и соединение VI используют в растворе на следующей стадии.
Схема 2
Кетализация кетокислоты VI в кеталь кислоты VII
Кетализация
ΗΟ-Ζ-ΟΗ
VI
^со,л с;
νπ
Раствор соединения VI, предпочтительно в дихлорметане, заменяют путем растворения в негигроскопическом, с более высокой температурой кипения растворителе, таком как толуол, трифтортолуол, ксилолы, с более высокой температурой кипения эфирах, таких как н-бутил- или изобутилацетат, предпочтительно толуол. Затем добавляют гликоль формулы НО-2-ОН (где Ζ является тем, как определено зирга), предпочтительно этиленгликоль (1,2 экв.), а затем каталитическое количество (0,5-2 мол.%) кислоты, предпочтительно п-толуолсульфоновую кислоту, и смесь отгоняют при атмосферном давлении, пока не завершится образование соединения VII. Продукт VII кристаллизуют путем добавления этилацетата после охлаждения до температуры приблизительно 70°С. После дальнейшего охлаждения до комнатной температуры соединение VII выделяют путем фильтрации и последующего высушивания приблизительно с 70% выходом (для НО(СН2)2ОН, В1=Н, В2=СВζ).
Схема 3
Преобразование кеталя кислоты VII в невыделенный кеталь изоцианат VIII и затем в кеталь амид IX с помощью кислотной активации/азидирования, перегруппировки по Курциусу и ацилирования
Кетокислоту VII вначале активируют путем преобразования в ее смешанный ангидрид, используя третичные амины, предпочтительно триэтиламин и галогенформиаты, предпочтительно изобутилхлорформиат, в сухих растворителях, таких как толуол, трифтортолуол, 1,2-дихлорэтан, 1-хлорбутан, ксилолы, предпочтительно сухой толуол, путем добавления галогенформиата, чтобы предварительно охладить
- 28 016563 раствор соединения VII и триалкиламина. Предпочтительные интервалы температур для образования смешанного ангидрида равны от -10 до 0°С. Приблизительно через 30 мин добавляют водный раствор азида щелочных металлов, предпочтительно ~30 вес.% азида натрия и катализатор фазового переноса, такого как соли тетралкиламмония, предпочтительно бромид тетрабутиламмония (5 мол.%) и двухфазную смесь энергично взбалтывают в течение приблизительно 1 ч в интервале температур от -10 до 0°С. Органическую фазу затем отделяют и полученный раствор ацилазида сушат, 4А молекулярные сита являются предпочтительным агентом высушивания. Перегруппировку по Курциусу и сопутствующее улавливание изоцианата VIII ίη δίΐιι с карбоновой кислотой с образованием амида кеталя IX осуществляют путем первоначального добавления карбоновой кислоты, предпочтительно уксусной кислоты и ее соответствующего ангидрида, предпочтительно уксусного ангидрида, в сухой раствор ацилазида и последующего нагревания смеси до температуры 80-90°С в течение 1-4 ч. Применение ангидрида в объединении с карбоновой кислотой является важным, чтобы минимизировать образование примеси. После парциального удаления растворителя и карбоновой кислоты путем дистилляции продукт кристаллизуют при охлаждении до комнатной температуры. Соединение IX выделяют путем фильтрации и высушивания с 65-78% выходом (для Ζ=-(ί.Ή2)2-. К.1=Н, Р2=С’Вх. 110=Ме).
Схема 4
Гидролиз кеталя амида IX до кетоамида X
Кетальный гидролиз соединения IX в кетоамид X осуществляют путем нагревания раствора соединения IX в органическом, смешанном с водой растворителем, предпочтительно ацетоне и водном растворе сильной кислоты, предпочтительно 1н. растворе НС1, в течение 2-4 ч. Предпочтительная температура для гидролиза имеет значение 45-55°С. После удаления ацетона продукт экстрагируют дихлорметаном, который заменяют на этилацетат путем дистилляции. Продукт X кристаллизуют из этилацетата при охлаждении до комнатной температуры и выделяют путем фильтрации и высушивания с 85-90% выходом (для НО(СН2)2ОН, Я1=Н, 1Т СВ/, 1ю=Ме).
Схема 5
Восстановительное аминирование кетоамида X в аминоамид XI
К сухому раствору соединения X, предпочтительно в дихлорметане, добавляют первичный или вторичный амин, предпочтительно трет-бутиламин (5 экв.), а затем кислоту Льюиса, предпочтительно Т1С12(ОРг-изо)2 (1,2 экв.), при температуре в интервале от -20 до 0°С. Полученную иминную смесь нагревают до температуры 10-20°С и добавляют боран (1,1-1,2 экв.) в виде комплекса с диметилсульфидом или ТГФ, предпочтительно диметилсульфидом. Реакционную смесь взбалтывают в течение 4-6 ч и затем добавляют насыщенный водный раствор этилацетата. Соли титана удаляют путем фильтрации и продукт XI экстрагируют из органического фильтрата с водой в виде его соли водным раствором кислоты, предпочтительно 1н. раствором НС1. Затем добавляют дихлорметан и водный раствор основания, предпочтительно концентрированный гидроксид аммония, добавляют к взбалтываемой двухфазной смеси, пока значение рН не доведут до 8,0-8,5. Обогащенную продуктом фазу дихлорметана затем отделяют и промывают дважды водным раствором хлорида аммония, чтобы удалить нежелательный трансизомер соединения XI и, наконец, водой. Дихлорметан заменяют на этилацетат путем дистилляции и соединение XI кристаллизуют из этилацетата при охлаждении и добавлении гептана. Соединение XI выделяют путем фильтрации и высушивания с 65-70% выходом (для К1=Н, 12=СВ7, 18=Н, 19=трет-Ви, 110=Ме).
- 29 016563
Схема 6. Снятие защиты с пирролидониламина XI ашше йерго1ес!юп = снятие защиты с амина.
Удаление защитной группы амина К2, где К2 представляет собой СО2СН2Рк или СН2Рк, осуществляют путем гидрирования раствора соединения XI в спирте, предпочтительно метаноле, в присутствии Ρά катализатора, предпочтительно 5 вес.% Рб/С, в течение нескольких часов. Катализатор затем удаляют путем фильтрации и метанол заменяют на этилацетат путем дистилляции. Продукт соединения XII, который кристаллизуют из этилацетата при охлаждении и добавлении гептана, выделяют путем фильтрации и высушивания с 90-95% выходом (для К|=Н. В2=СВх. К8=Н, К9.= трет-Ви, К10=Ме).
Схема 7
Связывание амина XII с несущей гетероцикл уходящей группой НЕТ-ЬС
XII
Синтез соединения I осуществляют путем связывания пирролидониламина XII и несущей гетероцикл уходящей группы в присутствии третичного амина, предпочтительно триэтиламина, в совместимом растворителе, таком как дихлорметан, изопропанол или ацетонитрил, дихлорметан является предпочтительным. Все компоненты затем объединяют и полученый раствор реагирует в течение 24-48 ч при комнатной температуре. Может также быть применен раствор предварительно полученного сырого гетероциклического компонента. После завершения реакции дихлорметан промывают разбавленной кислотой, предпочтительно водным раствором 5 вес.% уксусной кислоты, водную фазу отделяют и дихлорметан затем заменяют на этилацетат путем дистилляции. Продукт соединения I, который кристаллизуют из этилацетата при охлаждении и добавлении гептана, выделяют путем фильтрации и высушивания с 75-80% выходом (для К1=Н, К8=Н, К.д=трет-Ви, К10=Ме, НЕТ=6 (трифторметил)хиназолин-4-ил).
Для способа по настоящему изобретению исходные продукты являются коммерчески доступными или могут быть легко получены средним специалистом в данной области. Растворители, значения температур, давления, исходные продукты, имеющие требуемые группы и другие условия реакции, могут быть легко выбраны в качестве пригодных средним специалистом. Способ может быть осуществлен в увеличенном масштабе, таком как в коммерческих производственных мощностях, для получения большого количества соединения формулы I.
Примеры
Следующие примеры демонстрируют воплощения изобретенных соединений и исходных продуктов и не предназначены для ограничения объема формулы изобретения.
Как определено, реакции проводят в атмосфере сухого азота (или аргона). Для безводной реакции применяют Όπ-8ο1ν растворители из ЕМ. Для других реакций используют химически чистые реагенты или растворители для ВЭЖХ. Если иное не установлено, все коммерчески приобретенные реагенты используют как полученные.
ЬС/М8 измерения получают, используя гибридный одноквадрупольный масс-спектрометр 81ιίιη;·ιάζιι НРЬС/Аа1ег8 Ζβ. Данные по значениям пиков представляют из положительной электрораспылительной ионизации. Данные спектра ЯМР (ядерный магнитный резонанс), как правило, получают на приборах Вгикег или 1ЕОЬ 400 и 500 МГ ц в соответствующих растворителях. Все химические сдвиги представлены в част./млн из тетраметилсилана с помощью резонанса растворителя в виде внутреннего стандарта. Н-ЯМР спектральные данные, как правило, получают в виде следующих значений: химический сдвиг, мультиплетность (с = синглет, широкий с = широкий синглет, д = дуплет, дд = дуплет дуплетов, т = триплет, кв = квартет, кер = септет, м = мультиплет, видим. = видимый), константы связывания (Гц) и интегрирование.
- 30 016563
Средним специалистам будут понятны стандартные сокращения, используемые в настоящем изобретении на протяжении всей спецификации. Для удобства ссылки сокращения включают, но не требуют ограничения:
за!. - насыщенной,
ВЭЖХ - жидкостная хроматография высокого разрешения,
АР - процент области,
КЕ - Карл-Фишер,
ВТ - комнатная температура, тто1 - миллимоль,
НВМ8 - масс-спектроскопия высокого разрешения,
ТВТИ - тетрафторборат 0-бензотриазол-2-ил-И,И,И',И'-тетраметилурония,
МТВЕ - ТВМЕ - трет-бутилметиловый эфир,
ЕЭЛС - гидрохлорид И-(3-диметиламинопропил)-И'-этилкарбодиимида,
ЕЭС - И-(3-диметиламинопропил)-И'-этилкарбодиимид,
ТЕА - триэтиламин,
ЭРРА - дифенилфосфорилазид,
1РА - изопропиловый спирт,
ТФК - трифторуксусная кислота,
ЭСМ - дихлорметан,
ТГФ - тетрагидрофуран,
ДМФ - Ν,Ν-диметилформамид,
В0Р - гексафторфосфат (бензотриазол-1-илокси)-трис-(диметиламино)фосфония,
Е!0Ас - этилацетат,
ДМСО - диметилсульфоксид, °С - градус Цельсия, экв. - эквивалент или эквиваленты, г - грамм или граммы, мг - миллиграмм или миллиграммы, мл - миллилитр или миллилитры, ч - час или часы,
М - моляр,
N - нормаль, мин - минута или минуты,
МГц - мегагерц,
ТСХ - тонкослойная хроматография, об./об. - соотношение объема к объему и са. - приблизительно.
α, β, В и 8 представляют собой стереохимические обозначения, хорошо знакомые среднему специалисту в данной области.
Пример 1. №((1В,28,5В)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4иламино)пирролидин-1 -ил)циклогексил)ацетамид н
Пример 1, стадия 1.
(1В,28,5В)-трет-Бутил-2-бензилоксикарбониламино-7-оксо-6-азабицикло[3.2.1]октан-6-карбоксилат (89,6 г, 0,24 моль, см.: Р.Н. Сайег, е! а1. РСТ ν0 2005/021500) растворяют в этилацетате (1,5 л) и полученный раствор промывают насыщенным раствором NаНС0з (2x0,45 л) и насыщенным раствором №1С1 (1x0,45 л). Раствор сушат (Νι2804) и затем фильтруют непосредственно в 3-горлую круглодонную колбу объемом 3 л. Раствор продувают непосредственной инжекцией азота перед загрузкой 10% Рб/С (13,65 г) в атмофере азота. Колбу вакуумируют и снова заполняют водородом; данный процесс повторяют более двух раз. Водород пробулькивают через раствор в течение 30 мин и затем реакционную смесь перемешивают при 1 атм Н2 в течение 18 ч. Колбу вакуумируют, снова заполняют азотом и загружают свежеприготовленным катализатором (6 г 10% Рб/С). Водород пробулькивают через раствор в течение 30 мин и затем реакционную смесь перемешивают при 1 атм Н2 в течение 18 ч. Колбу вакуумируют и снова заполняют азотом. Смесь фильтруют через целит; фильтровальную лепешку затем промывают этилацетатом. Фильтрат (~1,6 л объема Е!0Ас) разбавляют ацетонитрилом (0,3 л) и загружают последовательно Е-№СЬх-метионином (68 г, 0,24 моль), ТВТИ (77 г, 0,24 моль) и Ν,Ν-диизопропилэтиламином (42 мл,
- 31 016563
0,24 моль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч, в течение которых она из суспензии становится прозрачным раствором. Реакционную смесь гасят добавлением насыщенного раствора МН4С1 (0,75 л) и воды (0,15 л); смесь разбавляют затем Е!ОАс (0,75 л). Фазы смешивают, разделяют и органическую фазу промывают насыщенным раствором Ыа2СОз (2x0,9 л) и насыщенным раствором Мао (1x0,75 л). Раствор сушат (Ыа28О4), фильтруют и концентрируют в вакууме, что дает (1В,28,5В)-трет-бутил-2-((8)-2-(бензилоксикарбониламино)-4-(метилтио)бутанамидо)-7-оксо-6азабицикло[3.2.1]октан-6-карбоксилат в виде масла, который переносят на следующую стадию без дополнительной очистки.
БС/М8 для первичного пика: [М-Вос+Н]+ = 406,3; [М+Ыа]+ = 528,3.
'Н ЯМР (400 МГц, б4-МеОН): δ 7,36 (м, 5Н), 5,11 (с, 2Н), 4,32 (м, 1Н), 4,2 (м, 1Н), 4,0 (м, 1Н), 2,5-2,7 (м, 3Н), 2,25 (м, 1Н), 2,11 (с, 3Н), 2,05 (м, 4Н), 1,9 (м, 1Н), 1,7 (м, 2Н), 1,54 (с, 9Н).
Также присутствует Е!ОАс [1,26 (т), 2,03 (с), 4,12 (кв.)] и Ν,Ν,Ν,Ν-тетраметилмочевина [2,83 (с)]. Пример 1, стадия 2.
Образец (1В,28,5В)-трет-бутил-2-((8)-2-(бензилоксикарбониламино)-4-(метилтио)бутанамидо)-7оксо-6-азабицикло[3.2.1]октан-6-карбоксилата (0,24 моль допустимое; см. предыдущую методику) растворяют в иодметане (1,250 г) и перемешивают в течение 48 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в дихлорметане и концентрируют в вакууме. Данный процесс повторяют более двух раз. Полученный шлам растворяют в дихлорметане (0,4 л) и выливают в постоянно перемешиваемый раствор МТВЕ (4,0 л). Полученное твердое вещество желтого цвета собирают с помощью вакуумной фильтрации и сушат при глубоком вакууме, что дает соль сульфония (179 г). Указанный продукт переносят на следующую стадию без дополнительной очистки.
БС/М8 для первичного пика: [М-Ме28+Н]+ = 458,4; [М]+ = 520,4.
'Н ЯМР (400 МГц, б4-МеОН): δ 7,35 (м, 5Н), 5,09 (с, 2Н), 4,33 (м, 1Н), 4,28 (м, 1Н), 3,98 (м, 1Н), 3,33,45 (м, 2Н), 2,97 (с, 3Н), 2,94 (с, 3Н), 2,78 (м, 1Н), 2,0-2,3 (м, 4Н), 1,7 (м, 2Н), 1,52 (с, 9Н).
Также присутствует МТВЕ [1,18 (с), 3,2 (с)] и следы Ν,Ν,Ν,Ν-тетраметилмочевины [2,81 (с)].
Пример 1, стадия 3.
Всю соль сульфония из предыдущей стадии (0,24 моль допустимое) растворяют в ЭМ8О (2,0 л). Полученный раствор перемешивают в атмофере азота при комнатной температуре и загружают порционно карбонат цезия (216 г). Суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч и затем фильтруют, чтобы удалить твердые вещества. Раствор разделяют на ~0,22 л порций и обрабатывают следующим образом: реакционную смесь (~0,22 л) разбавляют этилацетатом (1,5 л) и промывают последовательно водой (3x0,5 л) и рассолом (1x0,3 л). Органическую фазу сушат ^а^ОД фильтруют и концентрируют в вакууме. Требуемый (1В,58,5В)-трет-бутил-2-((8)-3-(бензоилоксикарбониламино)-2оксопирролидин-1-ил)-7-оксо-6-азабицикло[3.2.1]октан-6-карбоксилат (90,8 г, 83%) получают в виде микрокристаллической пены, свободной от примеси тетраметилмочевины.
БС/М8 для первичного пика: [М-Вос+Н]+ = 358,4; |М+№|' = 480,4.
'Н ЯМР (400 МГц, б4-МеОН): δ 7,35 (м, 5Н), 5,12 (с, 2Н), 4,35 (м, 2Н), 4,2 (м, 1Н), 3,6 (м, 1Н), 3,3 (м, 1Н), 2,64 (м, 1Н), 2,28-2,42 (м, 2Н), 2,15 (м, 1Н), 1,7-2,0 (м, 5Н), 1,55 (с, 9Н).
При необходимости, указанный продукт может быть выделен в виде твердого вещества путем растворения в МТВЕ (1 объем), добавления в гептан (3,3 объема) и сбора полученного осадка.
Пример 1, стадия 4.
Перемешиваемый раствор (1В,28,5В)-трет-бутил-2-((8)-3-(бензилоксикарбониламино)-2оксопирролидин-1-ил)-7-оксо-6-азабицикло[3.2.1]октан-6-карбоксилата (108 г, 0,236 моль) в ТГФ (1 л) загружают моногидратом гидроксида лития (21,74 г, 0,519 моль). Медленно добавляют воду (0,3 л) так, чтобы температура не превышала 20°С. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и летучие вещества удаляют в вакууме. Значение рН доводят до ~4 путем добавления 1н. раствора НС1 (450 мл) и NаН2РО4. Полученные осадки белого цвета собирают фильтрацией и промывают водой (2x1 л). Твердое вещество растворяют в дихлорметане (1,5 л) и воде (~1 л). Органический слой сушат (Ыа28О4), фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в Е!ОАс (0,7 л) и полученный раствор нагревают при температуре кипения с обратным холодильником в течение 1 ч. Твердые вещества разделяют после охлаждения до комнатной температуры и собирают путем фильрации. Указанные твердые вещества очищают путем перекристаллизации в изопропаноле, что дает требуемую (1В,28,5В)-2-((8)-3-(бензилоксикарбониламино)-2-оксопирролидин-1-ил)-5-(третбутоксикарбониламино)циклогексанкарбоновую кислоту в виде твердого вещества белого цвета (104,5 г, 93% выход).
БС/М8 для первичного пика: [М-!Ви+Н]+ = 420,2; [М-Вос+Н]+ = 376,2; [М+Н]+ = 476,2.
'|| ЯМР (400 МГц, б4-МеОН): δ 7,35 (м, 5Н), 5,11 (с, 2Н), 4,35 (м, 2Н), 3,71 (м, 1Н), 3,45-3,6 (м, 2Н), 2,99 (м, 1Н), 2,41 (м, 1Н), 2,15 (м, 1Н), 2,0 (м, 2Н), 1,6-1,9 (м, 4Н), 1,46 (с, 9Н).
- 32 016563
Пример 1, стадия 5. Круглодонную колбу объемом 3 л загружают (1Я,28,5Я)-2-((8)-3(бензилоксикарбониламино)-2-оксопирролидин-1-ил)-5-(третбутоксикарбониламино)циклогексанкарбоновой кислотой (75,5 г, 0,158 моль), ЕЭ-ОНС1 (33,5 г, 0,175 моль), 1-гидроксибензотриазолом (23,6 г, 0,175 моль) и дихлорметаном (1 л). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч, в течение которых она изменяет свой цвет с белой суспензии на прозрачный раствор. Аммиак (газ) пробулькивают в раствор, пока значение рН не станет практически основным (бумага) и полученную реакционную смесь перемешивают в течение 10 мин; добавление указанного аммиака повторяют и полученную реакционную смесь перемешивают в течение еще 10 мин. Добавляют воду. Органическую фазу промывают насыщенным раствором №1НСОз. №Н2РО4 и рассолом перед концентрированием в вакууме. Остаток суспендируют ацетонитрилом (0,5 л) и затем концентрируют, что дает (1Я,28,5Я)-2-((8)-3-(бензилоксикарбониламино)-2-оксопирролидин-1ил)-5-(трет-бутоксикарбониламино)циклогексанкарбоксамид в виде твердого вещества белого цвета (75,9 г, -100%), который используют на следующей стадии без дополнительной очистки.
ЬС/М8 для первичного пика: [М-Вос+Н]+ = 375,3; [М+Н]+ = 475,4; [М-!Вц+Н]+ = 419,3. '11 ЯМР (400 МГц, б4-МеОН): δ 7,35 (м, 5Н), 5,11 (с, 2Н), 4,25 (м, 2Н), 3,70 (м, 1Н), 3,6 (м, 1Н), 3,45 (м, 1Н), 2,91 (м, 1Н), 2,38 (м, 1Н), 2,12 (м, 1Н), 1,9-2,05 (м, 2Н), 1,65-1,9 (м, 4Н), 1,46 (с, 9Н).
Пример 1, стадия 6.
Реакционную смесь распределяют на три равные порции и объединяют для обработок водным раствором. 3-горлую круглодонную колбу объемом 5 л загружают (1Я,28,5Я)-2-((8)-3(бензилоксикарбониламино)-2-оксопирролидин-1-ил)-5-(трет-бутоксикарбониламино)циклогексанкарбоксамидом (25,3 г, 53 ммоль), ацетонитрилом (1,9 л) и 2,6 л смесью вода/лед. Смесь перемешивают и охлаждают до температуры 0°С. Добавляют диацетат иодбензола (25,77 г, 80 ммоль) и полученную реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч; добавляют еще 0,5 экв. диацетата йодбензола. Реакционную смесь перемешивают в течение 9 ч (температура реакционной смеси <10°С). Смесь загружают 8 экв. Ν,Ν-диизопропилэтиламина и 2 экв. уксусного ангидрида. В течение следующих 30 мин добавляют 4 экв. Ν,Ν-диизопропилэтиламина и 2 экв. уксусного ангидрида в течение каждых 10 мин, пока реакция не придет к завершению (ВЭЖХ). Ацетонитрил удаляют в вакууме. Некоторое количество твердого вещества выделяют из остатка и его собирают фильтрацией. Оставшийся остаток экстрагируют дихлорметаном (3 л, затем 1 л). Органическую фазу промывают последовательно водой, насыщенным раствором NаНСО3 и рассолом. Собранные твердые вещества добавляют к органической фазе вместе с активированным углем (15 г). Смесь перемешивают в течение 30 мин при температуре 40°С перед фильтрацией и концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в Е!ОАс (1 л) и полученный раствор перемешивают при температуре 75°С в течение 1 ч перед обеспечением охлаждения до комнатной температуры. Твердые вещества отделяют и собирают фильтрацией. Затем указанные твердые вещества очищают путем перекристаллизации: их вначале растворяют в 0,5 л СН2С12, затем концентрируют в вакууме, затем перекристаллизовывают из 1 л ЕЮЛс; указанный процесс повторяют трижды. Твердые вещества, полученные из маточного раствора, как указано выше, трижды перекристаллизовывают, используя аналогичный способ. Объединенные твердые вещества перекристаллизовывают более двух раз из ацетонитрила (0,7 л) для обеспечения 66 г (84%) трет-бутил (1Я,3Я,48)-3-ацетамидо-4-((8)-3-(бензилоксикарбониламино)-2оксопирролидин-1-ил)циклогексилкарбамата (чистота >99,5%, определяют с помощью ВЭЖХ).
ЬС/М8 для первичного пика: [М+Н]+ = 489,4; [М-!Вц+Н]+ = 433,3.
'|| ЯМР (400 МГц, б4-МеОН): δ 7,3-7,4 (м, 5Н), 5,11 (с, 2Н), 4,35 (м, 1Н), 4,15 (м, 1Н), 4,04 (м, 1Н), 3,8 (м, 1Н), 3,6 (м, 2Н), 2,44 (м, 1Н), 2,12 (м, 1Н), 1,87-2,05 (м, 4Н), 1,87 (с, 3Н), 1,55-1,7 (м, 2Н), 1,46 (с, 9Н).
Стереохимическая точность перегруппировки по Хофману (НоЕтапп) подтверждена с помощью рентгеноструктурного анализа структуры указанного соединения, как показано на фиг. 1.
Пример 1, стадия 7.
К раствору трет-бутил (1Я,3Я,48)-3-ацетамидо-4-((8)-3-(бензилоксикарбониламино)-2оксопирролидин-1-ил)циклогексилкарбамата (100 г, 0,205 моль) в дихлорметане (400 мл) добавляют ТФК (400 мл) при температуре -20°С. Реакционный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Растворитель и большую часть ТФК удаляют при пониженном давлении и остаток разбавляют дихлорметаном (2 л) и водным раствором К2СО3 (2 л). Значение рН доводят до 10 с помощью 1н. раствора НС1. Водный слой экстрагируют дихлорметаном (3x1 л). Объединенный органический слой сушат над №28О4 и концентрируют, что дает бензил (8)-1-((18,2Я,4Я)-2-ацетамидо-4аминоциклогексил)-2-оксопирролидин-3-илкарбамат в виде масла (81 г, 100% выход). Указанный амин используют непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.
- 33 016563
Пример 1, стадия 8.
Раствор бензил (8)-1-((18,2В,4В)-2-ацетамидо-4-аминоциклогексил)-2-оксопирролидин-3илкарбамата (13,3 г, 34 ммоль) и 3,5-ди-трет-бутилциклогекса-3,5-диен-1,2-диона (7,54 г, 34 ммоль) в метаноле (160 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Раствор концентрируют и разбавляют ацетоном (132 мл) и водой (33 мл) с последующим добавлением 0о\\'ех-50АХ8-200 (33 г). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. 0о\\'ех-50АХ8-200 удаляют фильтрацией и промывают дихлорметаном (300 мл). Фильтрат концентрируют в вакууме, чтобы удалить большую часть ацетона. Остаток разбавляют дихлорметаном (200 мл) и промывают водным раствором №аНСОз (200 мл) и рассолом (200 мл). Объединенные водные слои экстрагируют дихлорметаном (2x100 мл). Объединенные органические экстракты сушат над №а28О4 и концентрируют. Продукт бензил (8)-1-((18,2В)-2-ацетамидо-4-оксоциклогексил)-2-оксопирролидин-3-илкарбамат получают в виде твердого вещества (12 г, 90% выход) путем кристаллизации в Е!ОАс (100 мл) и гексане (200 мл).
Ή ЯМР (500 МГц, 1)\18О-сГ): δ част./млн 7,99 (д, 1=9,35 Гц, 1Н), 7,44 (д, 1=8,80 Гц, 1Н), 7,28-7,39 (м, 5Н), 5,03 (с, 2Н), 4,50 (с, 1Н), 4,31 (д, 1=12,10 Гц, 1Н), 4,18 (кв., 1=8,98 Гц, 1Н), 3,27 (м, 2 Н), 2,82 (дд, 1=15,12, 5,22 Гц, 1Н), 2,52-2,65 (м, 1Н), 2,40 (дд, 1=12,92, 4,67 Гц, 1Н), 2,15-2,31 (м, 2Н), 2,09 (д, 1=15,40 Гц, 1Н), 1,90 (м, 1Н), 1,81 (с, 3Н), 1,68 (м, 1Н).
т/ζ: 388,46 [М+Н].
Пример 1, стадия 9.
К раствору Т1С14 (1 М в дихлорметане, 36 мл, 36 ммоль) в дихлорметане (30 мл) при температуре 0°С добавляют Т1(О1Рг)4 (10,8 мл, 36 ммоль). Затем смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин. К раствору бензил (8)-1-((18,2В)-2-ацетамидо-4-оксоциклогексил)-2-оксопирролидин-3илкарбамата (23,25 г, 60 ммоль) в дихлорметане (600 мл) добавляют трет-бутиламин (30 мл, 300 ммоль) при комнатной температуре с последующим добавлением раствора Т1С14/Т1(О1Рг)4 при температуре -50°С. Реакционной смеси дают возможность медленно нагреться до комнатной температуры. Реакция заканчивается через 2 ч (ход реакции контролируют на ВЭЖХ путем гашения ВЭЖХ образца с №аВН4 в метаноле). Раствор охлаждают до температуры 10°С и добавляют ВН3-8Ме2 (1 М в дихлорметане, 66 мл, 66 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 ч затем гасят водным раствором №а2СО3 (300 мл). Осадок отфильтровывают. Два слоя разделяют и водный слой экстрагируют дихлорметаном (600 мл). Объединенные дихлорметановые слои дважды экстрагируют с помощью 1н. раствора НС1 (150 мл и 15 мл); (продукт и нежелательный транс-изомер, оба, находятся в кислотной водной фазе). Объединенные кислотные водные слои нейтрализуют 12 М водным раствором №Н4ОН (12 мл) до значения рН ~8 и дважды экстрагируют дихлорметаном (600 мл, 450 мл); (продукт находится в органической фазе, в то время как транс-изомер находится еще в водном слое). Объединенные органические слои промывают водным раствором №Н4С1 трижды (3x200 мл), пока транс-изомер не покинет органический слой. Органический слой сушат над №а28О4 и концентрируют. Остаток очищают путем кристаллизации в смеси Е!ОАс/гексан (200 мл / 800 мл), что дает требуемый бензил (8)-1-((18,2В,4В)-2-ацетамидо4-(трет-бутиламино)циклогексил)-2-оксопирролидин-3-илкарбамат (20,80 г, 78% выход) в виде твердого вещества белого цвета с 99,5% чистотой.
Ή ЯМР (500 МГц, 1)\18О-сГ): δ част./млн 8,76 (с, 1Н), 7,27-7,46 (м, 6Н), 5,03 (м, 2Н), 4,14 (м, 1Н), 4,07 (кв., 1=8,80 Гц, 1Н), 3,83(м, 1Н), 3,36 (м, 2Н), 2,91 (с, 1Н), 2,18 (м, 1Н), 2,04 (м, 1Н), 1,78 (с, 3Н), 1,411,74 (м, 7Н), 1,04 (с, 9Н).
т/ζ: 445,54 [М+Н].
Пример 1, стадия 10.
К раствору бензил (8)-1-((18,2В,4В)-2-ацетамидо-4-(трет-бутиламино)циклогексил)-2-оксопирролидин-3-илкарбамата (43,3 г, 98 ммоль) в метаноле (400 мл) добавляют Рб/С (4,34 г) с 10% влажностью. Смесь вакуумируют и снова заполняют водородом из баллона. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 ч. Затем ее фильтруют и промывают метанолом (500 мл) и концентрируют в вакууме досуха. Полученный сырой продукт отгоняют с помощью 1РА (2x100 мл) при пониженном давлении, что дает продукт №-((1В,28,5В)-2-((8)-3-амино-2-оксопирролидин-1-ил)-5-(трет-бутиламино)циклогексил)ацетамид в виде масла (30 г, 98% выход). Указанный амин используют на следующей стадии без дополнительной очистки.
Пример 1, стадия 11.
К раствору №-((1В,28,5В)-2-((8)-3-амино-2-оксопирролидин-1-ил)-5-(трет-бутиламино)циклогексил)ацетамида (30 г, 97 ммоль) в 1РА (400 мл) добавляют ТЕА (27 мл, 195 ммоль) и 4-хлор-6(трифторметил)хиназолин (25 г, 107 ммоль; см. Р.Н. Сайег, е! а1. РСТ АО 2005/021500). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и затем перемешивают при температуре 70°С в течение 1 ч. Полученный раствор концентрируют при пониженном давлении досуха. Остаток растворяют в дихлорметане (1 л) и дважды экстрагируют раствором уксусной кислоты I (полученным путем объединения 700 мл воды и 22,6 мл ледяной уксусной кислоты) (500 мл, 200 мл). Кислотный водный слой (рН 4-5) экстрагируют дихлорметаном (2x300 мл). Дихлорметановый слой экстрагируют раствором уксусной кислоты II (300 мл; полученный путем объединения 300 мл воды с 4 мл ледяной уксусной кисло
- 34 016563 ты). Объединенные уксуснокислотные слои подщелачивают 1 М раствором ΝαΟΗ до значения рН>12 и экстрагируют дихлорметаном (3x700 мл). Объединенные органические слои сушат и концентрируют, что дает сырой продукт в виде твердого вещества (45,6 г, 93% выход). Сырой продукт очищают путем перекристаллизации из смеси ЕЮАс (400 мл)/гексан (900 мл), что дает 42,86 г (88%) №((1В,28,5В)-5-(третбутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамид с 99,7% чистотой.
1Н ЯМР (500 МГц, ΌΜ8Ο-ά6): δ част./млн 9,71 (1Н, ш. с), 9,02 (1Н, с), 8,71 (1Н, д, 1=7,97 Гц), 8,59 (1Н, с), 8,04(1Н, дд, 1=8,66, 1,79 Гц), 7,88(1Н, д 1=8,52 Гц), 4,91-5,13 (1Н, м), 4,30-4,57 (1Н, м), 3,86 (1Н, дт, 1=11,89, 3,71, 3,64 Гц), 3,43-3,57 (1Н, м), 3,35-3,45 (1Н, м), 3,04 (1Н, т, 1=3,85 Гц), 2,23-2,40 (1Н, м), 2,05-2,22 (1Н, м), 1,90-1,98 (1Н, м), 1,86-1,93 (3Н, м), 1,50-1,78 (5Н, м), 0,98-1,15 (9Н, м).
13С-ЯМР (126 МГц, ΌΜ8Ο-ά6): δ част./млн 171,23, 169,35, 159,54, 156,87, 151,17, 128,97, 128,20, 125,76 (1С, кв., 1=30,52 Гц), 121,55(1С, ш.с), 124,04(1С, кв., 1=272,11 Гц), 114,31, 53,26, 52,39, 50,81, 47,56, 45,70, 42,77, 34,52, 32,17, 29,14 (3С, с), 26,49, 23,29, 20,30.
19Е-ЯМР (471 МГц, ΌΜ8Ο-ά6): δ част./млн -60,34 (с), т/ζ: 507,0 [Μ+Н].
Аналитически вычислено для С25НззN6Ο2Εз: С, 59,27; Н, 6,56; Ν, 16,59; Е, 11,25. Получено: С, 59,44; Н, 6,64; Ν, 16,74; Е, 10,99.
Альтернативное получение соединения по примеру 1.
Пример 1, альтернативное получение, стадия 1.
Высушенную в печи 3-горлую круглодонную колбу оборудуют сухой мешалкой, сухим обратным холодильником и двумя мебранами. После охлаждения в атмофере Ν2 колбу загружают последовательно (1В,28,5В)-2-((8)-3-(бензилоксикарбониламино)-2-оксопирролидин-1-ил)-5-(трет-бутоксикарбониламино)циклогексанкарбоновой кислотой (60 г, 126 ммоль; см. пример 1, стадия 4), ацетонитрилом (800 мл), Ν-метилморфолином (27,7 мл, 252 ммоль) и дифенилфосфорилазидом (29,9 мл, 139 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч 40 мин, в течение которых добавляют 2-триметилсилилэтанол (90 мл, 631 ммоль). Реакционную смесь подвергают нагреванию и доводят до температуры кипения с обратным холодильником 30 мин позже. Смеси дают возможность находиться при температуре кипения с обратным холодильником в течение 1 ч, в течение которых ей дают возможность постепенно остыть до температуры 50°С и затем охлаждают до температуры 15°С с помощью внешнего охлаждения. Реакционную смесь гасят добавлением уксусной кислоты (1,734 мл, 30,3 ммоль). Затем ее концентрируют в вакууме и растворяют в ЕЮАс (1,2 л). Ее промывают последовательно водой (1x0,3 л), насыщенным раствором ШНСЮз (2x0,3 л), 1н. раствором НС1 (1x0,3 л) и рассолом (2x0,3 л). Органическую фазу сушат (Νο28Ο.·ι). фильтруют и концентрируют в вакууме. Твердое вещество появляется очень рано в процессе концентрирования. После удаления летучих компонентов добавляют 800 мл 10% смеси ЕЮАс/гексан и смесь перемешивают в течение ночи. Твердое вещество собирают и сушат, чтобы получить на выходе трет-бутил (1В,3В,48)-4-((8)-3-бензилоксикарбониламино2-оксопирролидин-1-ил)-3 -((2-триметилсилил)этоксикарбониламино)циклогексилкарбамат (60,5 г,
102 ммоль, 81% выход). ВЭЖХ показывает, что продукт имеет 72% чистоту с двумя 12% примесями. Указанный продукт переносят на следующую стадию без дополнительной очистки. Фильтрат позже концентрируют, чтобы получить на выходе еще 4,38 г продукта.
Общий выход = 64,9 г (87%).
Пример 1, альтернативное получение, стадия 2.
Сухую круглодонную колбу объемом 500 мл оборудуют мешалкой и загружают последовательно трет-бутил (1В,3В,48)-4-((8)-3-бензилоксикарбониламино-2-оксопирролидин-1-ил)-3-((2-триметилсилил)этоксикарбониламино)циклогексилкарбаматом (60,5 г), СН2С12 (180 мл) и раствором моногидрата паратолуолсульфоновой кислоты (19,48 г, 102 ммоль) в СН2С12 (120 мл) и метаноле (30 мл). Смесь помещают на роторный испаритель и основную часть СН2С12 удаляют (температура бани приблизительно 20°С). Когда смесь переходит в пену, вакуум убирают и температуру бани повышают до 46°С (температуру изменяют в интервале между 44 и 51°С; ее контролируют добавлением внешнего льда). Смесь перемешивают при данной температуре в течение точно 1 ч (выделение газа видимо все время) и затем разбавляют ЕЮАс (1 л). Органическую фазу промывают 0,5н. ЫНЮН (2x250 мл). Водные промывки объединяют и откладывают. Органическую фазу промывают насыщенным раствором ЫН4С1 (1x250 мл) и насыщенным раствором №С1 (1x250 мл); указанные водные промывки отбрасывают. Первоначально объединенные МНЮН промывки обратно экстрагируют ЕЮАс (1x250 мл) и этот органический экстракт промывают насыщенным раствором ΝΉ4α (1x60 мл) и насыщенным раствором №1С1 (1x60 мл). Все органические экстракты объединяют, сушат (Να28Ο4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают путем элюирования через слой 8Ю2 (13 см ширины x7,5 см толщины). Первичный элюент очищают ЕЮАс (приблизительно 4 л). Вторичный элюент очищают смесью 1:9 (10% ЯНЮН в ΜβΟ^/^^^ (приблизительно 5 л). Фракции, содержащие требуемый продукт, объединяют и выпаривают, что дает требуемый 2-(триметилсилил)этил (1В,28,5В)-5-амино-2-((8)-3-бензилоксикарбониламино-2-оксопирролидин-1ил)циклогексилкарбамат (31,6 г, 64,4 ммоль, 63% выход).
- 35 016563
Пример 1, альтернативное получение, стадия 3.
Перемешиваемый раствор 2-(триметилсилил)этил (1К,2З,5К)-5-амино-2-((З)-3-бензилоксикарбониламино-2-оксопирролидин-1-ил)циклогексилкарбамата (400 мг, 0,82 ммоль) в ацетонитриле (3 мл) загружают последовательно диизопропилэтиламином (315,8 мг, 3 экв.) и бромацетонитрилом (109,5 мг, 1,1 экв.). Смесь перемешивают при температуре 40°С в течение 30 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью хроматографии на колонке с силикагелем, используя 1,5% метанол в дихлорметане в виде элюента. Требуемый 2-(триметилсилил)этил (1К,2З,5К)-2((З)-3-бензилоксикарбониламино-2-оксопирролидин-1-ил)-5-(цианометиламино)циклогексилкарбамат получают в виде твердого вещества белого цвета (400 мг, 93%).
ЬС/МЗ получено [М+Н]+ = 530.
Пример 1, альтернативное получение, стадия 4.
Перемешиваемый раствор 2-(триметилсилил)этил(1К,2З,5К)-2-((З)-3-бензилоксикарбониламино-2оксопирролидин-1-ил)-5-(цианометиламино)циклогексилкарбамата (400 мг, 0,76 ммоль) в дихлорметане (5 мл), охлаждают до температуры 0°С и загружают порционно м-СРВА (372,6 мг, 2,2 экв.). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Добавляют насыщенный раствор №2З2О3 (3 мл) и насыщенный раствор NаНСО3 (3 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 0,5 ч. Смесь разбавляют дихлорметаном (80 мл), промывают насыщенным раствором NаНСО3 (20 мл) и рассолом (20 мл). Раствор сушат над безводным №2ЗО4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток растворяют в метаноле (5 мл) и раствор загружают с NН2ОН-НС1 (262,7 мг, 5 экв.). Смесь перемешивают при температуре 60°С в течение 2,5 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь разбавляют дихлорметаном (80 мл) и фильтруют через плотный слой из целита. Фильтрат промывают насыщенным раствором NаНСО3 (2x20 мл). Водные промывки экстрагируют дихлорметаном (30 мл). Дихлорметановые слои объединяют и промывают рассолом (30 мл). Раствор сушат над безводным №2ЗО4, фильтруют и концентрируют в вакууме, что дает 2-(триметилсилил)этил (1К,2З,5К)-2-((З)-3бензилоксикарбониламино-2-оксопирролидин-1-ил)-5-(гидроксиамино)циклогексилкарбамат (350 мг, 91%).
ЬС/МЗ получено [М+Н]+ = 507.
Пример 1, альтернативное получение, стадия 5.
Раствор 2-(триметилсилил)этил (1 К,2З,5К)-2-((З)-3-бензилоксикарбониламино-2-оксопирролидин1-ил)-5-(гидроксиамино)циклогексилкарбамата (350 мг, 0,69 ммоль) в ацетоне (5 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч. Смесь концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в безводнм ТГФ (7 мл) и охлаждают до температуры 0°С. Добавляют по каплям раствор МеМдВг (1,1 мл, 3 М в диэтиловом эфире, 5 экв.). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Реакционную смесь гасят водой (5 мл) при температуре 0°С. Затем ее разбавляют этилацетатом (100 мл) и фильтруют через плотный слой из целита. Фильтрат промывают рассолом (30 мл). Раствор сушат над безводным МдЗО4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в 2 мл ацетонаитрила и добавляют 1 мл СЗ2. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель удаляют и сырой продукт очищают с помощью хроматографии на колонке с силикагелем, используя 1,5% метанол в дихлорметане в виде элюента для обеспечения требуемого 2-(триметилсилил)этил (1К,2З,5К)-2-((З)-3бензилоксикарбониламино-2-оксопирролидин-1-ил)-5-(трет-бутиламино)циклогексилкарбамата (160 мг, 42%).
ЬС/МЗ получено [М+Н]+ = 547.
Пример 1, альтернативное получение, стадия 6.
Перемешиваемый раствор 2-(триметилсилил)этил (1 К,2З,5К)-2-((З)-3-бензилоксикарбониламино-2оксопирролидин-1-ил)-5-(трет-бутиламино)циклогексилкарбамата (100 мг, 0,183 ммоль) в дихлорметане (3 мл) загружают трифторуксусной кислотой (2 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре и концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в дихлорметане (50 мл) и промывают насыщенным раствором NаНСО3 (20 мл). Водный слой экстрагируют дихлорметаном (3x30 мл). Дихлорметановые слои объединяют и сушат над безводным №2ЗО4, фильтруют и концентрируют в вакууме, что дает бензил (З)-1-((1З,2К,4К)-2-амино-4-(трет-бутиламино)циклогексил)-2оксопирролидин-3-илкарбамат (66 мг, 90%).
ЬС/МЗ получено [М+Н]+ = 403.
Пример 1, альтернативное получение, стадия 7.
Раствор бензил (З)-1-((1З,2К,4К)-2-амино-4-(трет-бутиламино)циклогексил)-2-оксопирролидин-3илкарбамата (22 мг, 0,055 ммоль) в дихлорметане (2 мл) загружают последовательно триэтиламином (11,1 мг, 2 экв.) и уксусным ангидридом (6,1 мг, 1,1 экв.). Реакционную смесь перемешивают в течение 1,5 ч при комнатной температуре, разбавляют дихлорметаном (50 мл) и промывают насыщенным раствором NаНСО3 (20 мл). Органическую фазу сушат над безводным №2ЗО4, фильтруют и концентрируют в вакууме, что дает бензил (З)-1-((1З,2К,4К)-2-ацетамидо-4-(трет-бутиламино)циклогексил)-2оксопирролидин-3-илкарбамат (22 мг, 90%).
ЬС/МЗ получено [М+Н]+ = 445.
- 36 016563
Пример 1, альтернативное получение, стадия 8.
К раствору бензил (8)-1-((18,2К,4К)-2-ацетамидо-4-(трет-бутиламино)циклогексил)-2оксопирролидин-3-илкарбамата (22 мг, 0,05 ммоль) в метаноле (2 мл) добавляют Ρ6(ΟΗ)2 (20 мг 50%-ной влажности катализатора). Колбу вакуумируют и снова заполняют водородом из баллона. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч и катализатор удаляют фильтрацией. Фильтрат концентрируют в вакууме для получения №-((1К,28,5К)-2-((8)-3-амино-2-оксопирролидин-1-ил)-5-(третбутиламино)циклогексил)ацетамида (13 мг, 85%).
ЬС/М8 получено [Μ+Η]+ = 311.
Пример 1, альтернативное получение, стадия 9.
К раствору №-((1К,28,5К)-2-((8)-3-амино-2-оксопирролидин-1-ил)-5-(трет-бутиламино)циклогексил)ацетамида (70 мг, 0, 225 ммоль) в изопропаноле (3 мл) добавляют 4-хлор-6(трифторметил)хиназолин (63 мг, 1,2 экв.) и триэтиламин (56,9 мг, 2,5 экв.). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью препаративной ВЭЖХ для обеспечения указанного в заголовке соединения в виде его бис-ТФК соли (110 мг, 67%).
ЬС/М8 получено |М+И|' = 507.
2-е альтернативное получение по примеру 1.
Ρά/С 1Н21
ЕЮН -> 1-РгОАс
Пример 1, 2-е альтернативное получение, стадия 1а.
В гидрогенизатор загружают этил 4-толуолсульфонатную соль (7К,88)-8-((8)-1-фенилэтиламино)1,4-диоксаспиро[4.5]декан-7-карбоксилата 1А (1417 г, 2,8 моль, взято из ΧΥΟ 2004098516, полученного в соответствии с методикой, представленной в И8 6835841), этанол (крепости 200, 11,4 л) и 10% Рб/С катализатор (50% влажность, 284 г). Смесь инертируют азотом, затем герметизируют газообразным водородом (45 ряд) (1 рбд = 1 фунт/кв.дюйм = 0,069 бар) и энергично взбалтывают при температуре приблизительно равной 40°С, пока исходный продукт не израсходуется (ВЭЖХ). Во время инертирования суспензию охлаждают, продувают газообразным азотом и катализатор удаляют фильтрацией. Использованный катализатор промывают этанолом (4,3 л). Фильтрат и промывки объединяют и концентрируют в вакууме до объема 2-3 л, пока температура бани поддерживается в интервале 40-60°С. Загружают изопропилацетат (5 л) и смесь концентрируют до объема ~2 л, до тех пор, пока удалится большая часть этанола (<0,5%) и доля остаточной влажности <1,000 част./млн. Объем бани доводят до ~7,5 л путем добавления изопропилацетата. Смесь нагревают до температуры 80°С, пока она не станет прозрачной, затем охлаждают до температуры 65-70°С. Добавляют затравку 1 (5 г) и баню охлаждают до температуры 50°С в течение более 2 ч, затем охлаждают до температуры 20°С в течение более 4 ч и удерживают при данной температуре в течение ~10 ч. Полученную суспензию фильтруют и лепешку промывают изопропилацетатом (2 л). Продукт сушат в вакууме при температуре ~35°С до тех пор, пока содержание летучих веществ уменьшится ниже ~1% (ΕΟΌ). 4-Толуолсульфонатную соль этил (7К,88)-8-амино-1,4диоксаспиро[4.5]декан-7-карбоксилата 1 получают в виде кристаллического твердого вещества белого цвета (936 г, 83% выход; ВЭЖХ чистота: 99,8%).
'|| ЯМР (300 МГц, СОС13): δ 14-7,89 (ш.с, 3Η), 7,75 (д, 1=9,0 Гц, 2Η), 7,15 (д, 1=8,0 Гц, 2Η), 4,22-4,04 (м, 2Η), 4,01-3,77 (м, 4Η), 3,55-3,43 (м, 1Н,), 3,20-3,13 (м, 1Η), 2,40-2,27 (м, 4Η), 2,21-1,94 (м, 2Η), 1,811,51 (м, 3Η), 1,23 (т, 1=7,0 Гц, 3Н);
ВЭЖХ: \Уа1ег5 Х1егга М8 С18 4,6x150 мм 1.б., 3,5 мкм размер частиц, от 0,05% ΝΗ4ΟΗ (5% АС№, 95% Η2Ο, растворитель А) до 0,05% ΝΗ4ΟΗ (95% АС№, 5% Η2Ο, растворитель В), от 5 до 20% В в течение 10 мин изменяется до 95% В в течение 25 мин и затем изменяется до 5% В в течение 1 мин; 11,1 мин (аминоэфир 1).
- 37 016563
Пример 1, 2-е альтернативное получение, стадия 1Ь.
4-Толуолсульфонатную соль этил (7К,88)-8-амино-1,4-диоксаспиро[4.5]декан-7-карбоксилата 1 (450,1 г; продукт реакции восстановительного снятия защиты известного соединения - см. К. 1. СЬегпеу, \УО 2004/098516 и С.У. Эе1исса & 8.8. Ко, \УО 2004/110993) объединяют с гидрохлоридом 1-этил-3-(3диметиламинопропил)карбодиимида (236,3 г), гидратом 1-гидроксибензотриазола (171,9 г), Ν-карбобензилокси-Ь-метионином (333,4 г) и ацетонитрилом (3,1 л). К перемешиваемой смеси добавляют триэтиламин (249,5 г) при температуре ниже 30°С. После завершения реакции (ВЭЖХ) смесь разбавляют этилацетатом (8,2 л) и промывают 25% водным раствором бикарбоната калия (2x4,5 л), а затем водой (4,5 л). Органическую фазу отделяют и концентрируют при пониженном давлении, чтобы получить раствор этил (7К,88)-8-((8)-2-бензилоксикарбониламино-4-метилсульфаноилбутириламино)-1,4диоксаспиро[4.5]декан-7-карбоксилата 2 (1,4 л). Добавляют метилйодид (2,39 кг), сосуд закрывают от света и смесь держат при медленном взбалтывании в течение приблизительно 24 ч. К густому осадку желтого цвета добавляют метил трет-бутиловый эфир (2,7 л) и смесь выдерживают в течение приблизительно 1 ч. Продукт выделяют фильтрацией и лепешку промывают метил-трет-бутиловым эфиром (2x1,4 л), затем сушат в вакууме, получая на выходе йдид [(8)-3-бензилоксикарбониламино-3-((7К,88)-7этоксикарбонил-1,4-диоксаспиро[4.5]дек-8-илкарбамоил)пропил]диметилсульфония 3 (671,4 г, ~94% выход) в виде твердого вещества грязно-белого цвета (ВЭЖХ чистота 99,9%).
Пример 1, 2-е альтернативное получение, стадия 2.
Соль сульфония 3 (619,4 г), карбонат цезия (416,8 г) и безводный диметилсульфоксид (6,2 л) объединяют в реакторе, оборудованном скруббером, для нейтрализации летучих сульфидов. Энергичное взбалтывание поддерживают, пока не произойдет полное превращение (ВЭЖХ). Добавляют этилацетат (12,4 л), а затем 20% раствор рассола (3 л). Органическую фазу отделяют, промывают дважды рассолом (2x3 л) и выпаривают, чтобы получить раствор этил (7К,88)-8-((8)-3бензилоксикарбониламино-2-оксо-пирролидин-1-ил)-1,4-диоксаспиро[4.5]декан-7-карбоксилата 4 в этилацетате (~0,8 л). Добавляют ацетон (2,55 л), а затем 0,5 М водный раствор соляной кислоты (2,3 л). С хорошим перемешиванием раствор нагревают до температуры в интервале от 50 до 60°С, пока не закончится превращение соединения 4 в этил (1К,28)-2-((8)-3-бензилоксикарбониламино-2-оксо-пирролидин1-ил)-5-оксо-циклогексанкарбоксилат 5 (ВЭЖХ). Смесь концентрируют при пониженном давлении при температуре ниже 40°С, охлаждают до температуры ~30°С и добавляют воду (4,1 л). Полученную суспензию охлаждают до температуры в интервале от 5 до 10°С и взбалтывают в течение ~1 ч. Продукт фильтруют и лепешку промывают водой (2x2,5 л). После обезвоживания лепешку сушат до постоянного веса при температуре ниже 40°С в вакуумной печи. Получают циклогексанон 5 (272 г, 70% выход) (ВЭЖХ чистота 98,7%).
6 7
- 38 016563
Пример 1, 2-е альтернативное получение, стадия 3.
Циклогексанон 5 (100 г) суспендируют в ТГФ (500 мл) и охлаждают до температуры 0°С. Добавляют 1н. раствор Ν;·ιΟΗ (271 г) при температуре 0-5°С и двухфазную смесь взбалтывают при температуре <5°С в течение по крайней мере 1 ч. Добавляют МТВЕ (500 мл) и слои разделяют. Нижний водный слой промывают снова МТВЕ (500 мл) и слои разделяют. Дихлорметан (500 мл) загружают в обогащенный продуктом водный слой и смесь охлаждают до температуры 0°С. Загружают 3н. раствор НС1 (156 г), поддерживая температуру <5°С. После перемешивания в течение по крайней мере 10 мин смесь нагревают до температуры 20-25°С и слои разделяют. Водный слой экстрагируют дихлорметаном (100 мл). Органические слои объединяют и растворитель заменяют на толуол путем дистилляции. Объем раствора толуола доводят приблизительно до 1 л и добавляют моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (0,24 г). Добавляют этиленгликоль (16,22 г) и смесь отгоняют при атмосферном давлении, пока не завершится образование соединения 7 и объем сосуда не составит приблизительно 500-700 мл. Раствор охлаждают до температуры приблизительно 70°С и добавляют этилацетат (500 мл), поддерживая температуру равной приблизительно 70°С. Смесь охлаждают и фильтруют, что дает 73 г (70% выход) соединения 7, (7К,88)-8-((38)-3-(((бензилокси)карбонил)амино)-2-оксо-1-пирролидинил)-1,4-диоксаспиро[4.5]декан-7карбоновой кислоты.
,ΝΗΟκ ИНСЬг
0=0
><„.сом3 —_ ,,МСО
О -
Пример 1, 2-е альтернативное получение, стадия 4.
К суспензии соединения 7 (147 г) в сухом толуоле (370 мл) загружают триэтиламин (32,7 г) при температуре 15-25°С. После того как суспензия станет раствором через 10-15 мин перемешивания при температуре 25°С, колбу охлаждают до температуры ~10°С и загружают изобутилхлорформиат (44, 1 г) при температуре -(10-0)°С. Смесь взбалтывают при температуре -(10-0)°С в течение приблизительно 30 мин. Добавляют раствор азида натрия (42 г) и бромида тетрабутиламмония (5,2 г) в воде (130 мл) при температуре -(10-0)°С. Двухфазную суспензию энергично взбалтывают в течение по крайней мере 1 ч и добавляют толуол (1750 мл), а затем воду (300 мл). Два фазы перемешивают в течение по крайней мере 10 мин и верхний органический слой разделяют и сушат с помощью 4 А молекулярных сит. Добавляют уксусный ангидрид (76 мл) и уксусную кислоту (28 мл) и раствор нагревают до температуры 80-90°С в течение 1-4 ч, пока значение АР промежуточного соединения 9 не станет <2 АР, что определяют с помощью ВЭЖХ. Растворитель частично отгоняют до приблизительно двух третей от исходного объема при атмосферном давлении, раствор охлаждают до температуры окружающей среды и полученную суспензию перемешивают в течение 16 ч. Медленно добавляют гептан (350 мл) и суспензию перемешивают в течение 1 ч. Твердые вещества отфильтровывают, промывают смесью толуол/гептан 4:1 (300 мл) и сушат, что дает 109 г (78% выход) соединения 10, бензил ((38)-1-((7К,88)-7-ацетамидо-1,4диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамата.
Пример 1, 2-е альтернативное получение, стадия 5.
К раствору соединения 10 (109 г) в ацетоне (760 мл) загружают 1н. раствор НС1 (760 мл). Смесь нагревают до температуры 50°С в течение 2,5 ч. Ацетон отгоняют при пониженном давлении и продукт дважды экстрагируют дихлорметаном 1x1 л и 1x0,5 л. Дихлорметановые слои объединяют и дихлорметан замещают на этилацетат путем дистилляции, пока температуру кипения в котле не доведут до 78°С и конечного объема вводимого соединения 10 приблизительно 10 мл/г. Этилацетатную суспензию охлаждают до температуры окружающей среды, взбалтывают в течение 16 ч, твердые вещества отфильтровывают и промывают этилацетатом (400 мл). Твердое вещество сушат, что дает 84 г (87% выход) соединения 11, бензил ((38)-1-((18,2К)-2-ацетамидо-4-оксоциклогексил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамата.
- 39 016563
ΝΗεβζ
ГЧНСЬг гС
Ан ,,ΝΗΑο __________
Ο
Пример 1, 2-е альтернативное получение, стадия 6.
Реагент Т1С12(Рог1)2 предварительно формируют путем добавления Т1(О‘рт)4 (11,5 мл) в 1 М раствор Т1С14 в дихлорметане (39 мл) при температуре 5-10°С и последующего перемешивания при температуре окружающей среды в течение 15 мин. Соединение 11 (25 г) растворяют в дихлорметане (500 мл) и добавляют трет-бутиламин (34 мл) при комнатной температуре. Через 10 мин раствор охлаждают до температуры в интервале от -25 до -20°С и добавляют образованный раствор реагента титана при температуре ниже -20°С. Смеси дают возможность нагреться до температуры окружающей среды и ее взбалтывают в течение 1 ч. Берут образец, чтобы подтвердить завершение образования имина путем минигашения борогидридом натрия в метаноле (отсутствие спиртов показывает полный расход исходного кетона 11). Затем добавляют борандиметилсульфид (7,0 мл) при температуре 0-5°С и полученную реакционную смесь нагревают до температуры окружающей среды и перемешивают в течение по крайней мере 5 ч. Дихлорметан частично (приблизительно половину) выпаривают при пониженном давлении и добавляют влажный этилацетат (300 мл, образованный путем взбалтывания этилацетата с водой) в течение 30-60 мин. Полученную суспензию взбалтывают в течение по крайней мере 4 ч, твердые вещества отфильтровывают и промывают несколько раз дихлорметаном, пока в лепешке сохранится не более чем 5 мол.% продукта. Фильтрат и промывки объединяют, добавляют 1н. раствор НС1 (200 мл) и двухфазную смесь взбалтывают в течение по крайней мере 30 мин (выделение газа прекращается через ~20 мин). Водный слой, обогащенный продуктом (верхнюю фазу), разделяют и добавляют дихлорметан (500 мл). Концентрированный гидроксид аммония добавляют к взбалтываемой двухфазной смеси, пока значение рН не доведут до 8-8,5 (-15 мл). Органическую фазу отделяют и промывают 2x100 мл 14 вес.% хлоридом аммония, чтобы удалить нежелательное трансизомерное соединение 12, и, наконец, водой (25 мл). Дихлорметан замещают на этилацетат путем дистилляции при нормальном давлении, пока температуру кипения в реакторе не доведут до 78°С и конечный объем вводимого соединения 11 приблизительно не станет равным 5 мл/г (~140 мл). Раствор охлаждают до температуры окружающей среды. Медленно добавляют гептан (250 мл) при температуре 40-50°С и соединение 12 начинает кристаллизоваться. Суспензию взбалтывают при комнатной температуре в течение 3 ч и твердые вещества отфильтровывают, промывают гептаном (100 мл) и сушат, что дает 20,1 г (70% выход) соединения 12, бензил ((38)-1-((18,2К,4К)-2-ацетамидо-4(трет-бутиламино)циклогексил)-2-оксо-3-пирролидинил)карбамата, в виде пушистых кристаллов белого цвета.
Пример 1, 2-е альтернативное получение, стадия 7.
Соединение 12 (20 г) растворяют в метаноле (400 мл) и добавляют 5% Рб/С катализатор (1,8 г, 9 вес.%). Смесь гидрируют при температуре 25°С и давлении 25 рад в течение 3 ч. Катализатор удаляют фильтрацией и метанол заменяют на этилацетат путем непрерывной дистилляции. Продукт выкристаллизовывают из этилацетата (160 мл) при охлаждении. Добавляют гептан (160 мл) при температуре 25°С, суспензию взбалтывают в течение 1 ч и продукт фильтруют, промывают гептаном и сушат, что дает 12,8 г (94% выход) соединения 13, №(1К,28,5К)-2-((38)-3-амино-2-оксо-1-пирролидинил)-5-(третбутиламино)циклогексил)ацетамида.
- 40 016563
Пример 1, 2-е альтернативное получение, стадия 8.
6-(Трифторметил)-4-хиназолинол 14 (5 г; см. Р.Н. Сайег, е1 а1. РСТ \УО 2005/021500) суспендируют в дихлорметане (100 мл). Добавляют Ν,Ν-диизопропилэтиламин (4,2 мл, 1,05 экв.) и ДМФА (0,4 мл, 0,2 экв.). Затем к взбалтываемой суспензии добавляют оксалилхлорид (3,0 мл, 1,5 экв.) при температуре 20-25°С при охлаждении (экзотермическое добавление). Оранжевого цвета суспензию взбалтывают при температуре 30-35°С в течение 2 ч. Происходит устойчивое выделение газа в течение ~1,5 ч, при котором суспензия станет раствором оранжевого цвета. После охлаждения до температуры 20°С реакционный раствор добавляют по каплям к 20 вес.% водному раствору К2НРС (50 мл) при энергичном взбалтывании и выделении газа. Нижнюю органическую фазу отделяют и промывают еще один раз 20 вес.% водным раствором К2НРО4 (50 мл). Органический раствор используют как таковой для следующей стадии в течение 16 ч.
Пример 1.
Пример 1, 2-е альтернативное получение, стадия 8.
К раствору 15 в дихлорметане (22 мл, 5,5 ммоль) добавляют твердое соединение 13 (1,55 г, 5 ммоль) и смесь взбалтывают при комнатной температуре, пока твердые вещества не растворятся. Добавляют триэтиламин (1,4 мл, 11 ммоль) и смесь взбалтывают в течение 24 ч при температуре окружающей среды. Добавляют воду (10 мл), две фазы взбалтывают в течение 10 мин и органическую фазу отделяют. Дихлорметан заменяют на этилацетат путем непрерывной дистилляции, пока температуру кипения в реакторе не доведут до 78°С и конечный объем вводимого соединения 13 приблизительно не станет равным 10 мл/г (~15 мл). Суспензию охлаждают до температуры окружающей среды, медленно добавляют гептан (15 мл) и суспензию взбалтывают в течение 16 ч. Твердые вещества отфильтровывают, промывают смесью гептан/этилацетат 1:1 (5 мл) и сушат, что дает 1,83 г (72% выход) кристаллов бежевого цвета (форма Ν-2 с помощью дифракционного рентгеновского анализа ХКЭ) Ν-(( 1К,28,5К)-5-(третбутиламино)-2-((8)-2-оксо-3 -(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1 ил)циклогексил)ацетамида по примеру 1.
Пример 2.
Кристаллические формы №((1К,28,5К)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида.
Различные кристаллические формы №((1К,28,5К)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободного основания получают и характеризуют, как описано ниже.
Методики характеристики форм
Данные монокристалла.
Данные собирают на дифрактометре серии Вгикег-Шшик (ВКИКЕК АХ8, 1пс., 5465 Еак! СЕегу1 Рагк^ау Майкоп, XVI 53711 И8А) САЭ4. Параметры элементарной ячейки получают посредством анализа методом наименьших квадратов экспериментальных значений параметров дифрактометра при 25 отражениях под большими углами. Интенсивности измеряют, используя СиКа излучение (λ=1,5418 А) при постоянной температуре с Θ-2Θ различными методиками сканирования и корректируют только для факторов поляризации Лоренца. Фоновые индексы собирают при экстремумах наблюдаемых значений в течение половины времени сканирования. Поочередно, данные монокристалла собирают на приборе Вгикег-№шик Карра ССЭ 2000 куйет, используя СиКа излучение (λ=1,5418 А). Индексирование и проведение измерений данных интенсивности осуществляют с программным обеспечением НКЬ2000 (О^то^кИ, Ζ. & ΜίηοΓ, V. (1997) ίη Масгото1еси1аг СгуйаЛодгарку, еЛк. Сайег, ν.Ο 1г & 8^ее1, К.М. (АсаЛетю, ΝΥ), уо1. 276, р. 307-326) с пакетом программ (Со11ес1 Эа1а со11сс11оп ;·ιηά ргосекктд икег т!ейасе: Со11ес1: Эа1а сойссйоп койгаге, К. Ноой, №шик В.У., 1998). Поочередно, данные монокристалла собирают на приборе Вгикег-АХ8 АРЕХ2 ССИ куйет, используя СиКа излучение (λ=1,5418 А). Индексирование и проведение измерений данных интенсивности осуществляют с программным обеспечением, программным приложением АРЕХ 2 (АРЕХ 2 Эа1а со11сс11оп ;·ιηά ргосекктд икег йИейасе: АРЕХ2 Икег Мата^ ν1.27; ВКИКЕК АХ8, 1пс., 5465 Еак1 Сйегу1 Рагк\уау МаШком, VI 53711 И8А).
Если указано, то кристаллы охлаждают в холодном потоке криосистемы ОхГогЛ сгуо куйет (ОхГогЛ Сгуокуйетк Сгуойгеат соо1ег: I. Соыег ;·ιηά А.М. С1ахег, I. Арр1. Сгуй, 1986, 79, 105) во время сбора данных.
- 41 016563
Структуры решены прямыми методами и уточнялись на основе наблюдаемых отражений, используя или пакет программ 8ЭР (8ОР, 81гис1иге Пе!егтша1юп Раскаде, ЕпгаГ-Иоп1ик, Войепиа ΝΥ 11716. 8сайегтд ГасЮгк, тс1ибшд Г апб Г, т Ше 8ЭР коП\гаге теге !акеп Ггот !Не 'ЧЩегпаОогий ТаЬ1ек Гог Сгук!а11одгарйу, КупосН Ргекк, В1гтшдйат, Епд1апб, 1974; Уо1. IV, ТаЬ1ек 2.2А апб 2.3.1) с незначительными изменениями, или пакет программ по кристаллографии МАXυ8 (таXик ко1и!юп апб гейпетеп! кой^аге кш!е: 8. Маскау, С.1. СПтоге, С. Еб^агбк, М. Тгетаупе, Ν. 81е\\'аг1 К. 8Напк1апб. таXик: а сотри!ег ргодгат Гог !Не ко1ийоп апб гейпетеп! оГ сгук!а1 к!гис!игек Ггот бгГГгасйоп ба!а ог 8НЕ^XТ^). Полученные атомные параметры (координаты и температурные коэффициенты) уточнены с помощью метода наименьших квадратов с полной матрицей. Функция, минимизированная при уточнении, была М|Р0|-|Рс|)2 σ, Я определен как Х||р0|-|Гс||/2|р0|, где Я„ = [Х„(|Р0|-|Рс|)2/Г„|Р0|2]1/2, где - соответствующая весовая функция, основанная на погрешностях в наблюдаемых интенсивностях. Различные диаграммы исследованы на всех стадиях уточнения. Водороды введены в теоретических положениях с изотропными температурными коэффициентами, но водородные параметры не были изменены.
Данные дифракции порошка рентгена (РАЙО).
Данные РУНО были получены, используя Вгикег С2 САОЭ8. Излучение было СиКа (40 кВ, 50 мА). Расстояние образец - датчик было 15 см. Порошковые образцы были помещены в запечатанные стеклянные капилляры на 1 мм или меньше в диаметре; капилляр вращался в течение сбора данных. Данные были собраны для 3<2θ<35° с временем экспозиции образца по крайней мере 2000 с. Получающиеся двумерные дифракционные линии интегрировали, чтобы создать традиционную 1-мерную рентгенограмму РXЯ^ с размером шага 0,02° 2Θ в диапазоне 3-35° 2Θ.
Дифференциальная сканирующая калориметрия (Э8С).
Эксперименты дифференциальной сканирующей калориметрии (Ό8ί.') были выполнены на приборе ТА ШкйитепЦ™ модели 01000 или 2920. Образец (приблизительно 2-6 мг) взвешивают в алюминиевом резервуаре и взвешивают точно до 0,01 мг и направляют на Ό8Ο Прибор продувают азотом при 50 мл/мин. Данные собирают между комнатной температурой и 300°С при скорости нагревания 10°С/мин. График сделан с эндотермическими пиками, направленными вниз.
Термогравиметрический анализ (ТСА).
Эксперименты термогравиметрического анализа (ТСА) были выполнены на приборе ТА ШкйитепЦ™ модели 0500 или 2950. Образец (приблизительно 10-30 мг) помещают в платиновый резервуар, предварительно измеренный. Вес образца измеряют точно и регистрируют до 0,001 мг с помощью прибора. Печь продувают азотом при 100 мл/мин. Данные собирают между комнатной температурой и 300°С при скорости нагревания 10°С/мин.
Получение и анализ форм.
Данные элементарной ячейки и другие свойства для этих примеров представлены в табл. 1. Параметры элементарной ячейки были получены из кристаллографического рентгеноструктурного анализа монокристалла. Детальный расчет элементарных ячеек может быть найден в главе 3 8!ои! & 1епкеп, X-Яау 8!гис!иге Пе!егтта1юп: а Ргасйса1 Сшбе (МасМййап, 1968).
Фракционные атомные координаты для примеров 2а-2д и условия, при которых они были измерены, представлены в табл. 2-9.
Дополнительно, характеристические положения пиков при рентгеновской дифракции на порошке (градусы 2Θ±0,1) @ КТ для примеров 2а,-2Г представлены в табл. 9, все из которых основаны на высококачественных рентгенограммах, полученных на дифрактометре (СиКа) с вращающимся капилляром с 2Θ калиброванным с М8Т другого пригодного стандарта.
Наконец, фиг. 1-6 представляют рентгенограммы КИРО для примеров 2а-2Г, фиг. 8, 10, 13, 15, 17 и 19 раскрывают ТСА примеров 2а, Ь, с, б, е и Г соответственно. Фиг. 7, 9, 12, 14, 16 и 18 раскрывают О8С примеров 2а, Ь, с, б, е и Г соответственно. Фиг. 11 раскрывает изотерму сорбции пара примера 2Ь.
Получение формы, характеристика О8С и ТСА.
Пример 2а, форма Н0.5-4.
150 мг №((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободного основания растворяют в теплом н-бутилацетате, насыщенном водой. Добавляют гептан, пока не произойдет исчезновение помутнения. Суспензии дают возможность остыть до комнатной температуры. Форму Н0.5-4 характеризуют с помощью 0,5 моль воды на моль №((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободного основания. Форма Н0.5-4, характеризующаяся с помощью О8С термограммы, имеет широкую эндотерму, возникающую, как правило, в интервале между приблизительно комнатной температурой и приблизительно 67°С в соответствии с кривой ТСА; при более высоких температурах могут быть другие результаты. Форма Н0.5-4, характеризующаяся с помощью ТСА термальной кривой, имеет потерю веса, как правило, от 0,6 до приблизительно 1,4% при температуре вплоть до приблизительно 100°С. Теоретическая потеря веса для формы Н0.5-4 составляет 1,7%, однако весьма обычно для нестабильных гидратов становится частично дегидратированным после высыхания.
- 42 016563
Пример 2Ь, форма Ν-2.
г Ν-(( 11,28,51)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободного основания растворяют в 10 мл безводного Е(ОАс при температуре 77°С. Раствор охлаждают до температуры 70°С. Добавляют 10 мг затравки Ν-2. К суспензии добавляют 18 мл н-гептана в течение 1 ч через шприцевой насос. Суспензию охлаждают от 70 до 20°С в течение 1 ч и взбалтывают при температуре 20°С в течение ночи. Твердое вещество выделяют фильтрацией, промывают 3 мл н-гептана, сушат при температуре 50°С в вакуумной печи в течение ночи. Форма Ν-2 представляет собой N-((11,28,51)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамид, свободное основание, беспримесную форму (без дополнительных молекул воды или растворителя). Форма Ν-2, характеризующаяся с помощью О8С термограммы, имеет эндотерму, возникающую, как правило, между приблизительно 230 и приблизительно 232°С как одиночный расплав без других превращений. Форма Ν-2, характеризующаяся с помощью ТСЛ кривой, имеет незначительную потерю веса при температуре вплоть до приблизительно 200°С и в соответствии с монокристаллической структурой.
Пример 2с, форма Н1.75-5.
Суспензию 50 мг N-((11,28,51)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин4-иламино)пирролидин-1-ил) циклогексил)ацетамида, свободного основания энергично взбалтывают в 1 мл воды в течение более чем 16 ч. Форму Н1.75-5 характеризуют с помощью 1,75 моль воды на 1 моль №((11,28,51)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин1-ил)циклогексил)ацетамида, свободного основания. Форма Н1.75-5, характеризующаяся с помощью О8С термограммы, имеет эндотерму, возникающую, как правило, между приблизительно комнатной температурой и приблизительно 70°С в соответствии с кривой ТСЛ; при более высоких температурах могут быть другие результаты. Форма Н1.75-5, характеризующаяся с помощью ТСА кривой, имеет потерю веса от приблизительно 4,3 до приблизительно 5,3% при температуре до приблизительно 100°С. Теоретическая потеря веса составляет приблизительно 5,9%, однако весьма обычно для нестабильных гидратов становиться частично дегидратированными после высыхания.
Пример 2ά, НАС-1.
100 мг N-((11,28,51)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободного основания растворяют в 0,1 мл НОАс при температуре 80°С. К полученной реакционной смеси добавляют 0,2 мл трет-ВиОАс и раствор охлаждают до температуры 20°С. Раствор выпаривают досуха. Полученное твердое вещество взбалтывают в гептане при температуре 50°С в течение 15 ч, а затем охлаждают до температуры 20°С. Форму НАС-1 фильтруют и сушат при температуре 25°С в вакууме в течение ночи. Форму НАС-1 характеризуют с помощью 1 моль уксусной кислоты на 1 моль N-((11,28,51)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободного основания. Форма НАС-1, характеризующаяся с помощью О8С термограммы, имеет эндотерму, возникающую, как правило, при температуре приблизительно 100°С в соответствии с кривой ТСА; при более высоких температурах могут быть другие результаты. Форма НАС-1, также характеризующаяся с помощью ТСА кривой, имеет приблизительно 15,3% потерю веса вплоть до приблизительно 200°С. Теоретическая потеря веса составляет приблизительно 10,5%, однако весьма обычно для незначительного количества растворителей с высокой температурой кипения остаться связанным с твердым веществом. В случаях, аналогичных указанному, дифрактограмма на порошке РКЮ является определяющей формы, но не чувствительной к небольшому количеству случайного растворителя.
Пример 2е, форма Е-1.
мг N-((11,28,51)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободного основания растворяют в <1 мл кипящего этанола. Раствор охлаждают до комнатной температуры и дают возможность медленно выпариваться. Форму Е-1 характеризуют с помощью 1 моль этанола на 1 моль N-((11,28,51)-5-(трет-бутиламино)-2((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободного основания. Форма Е-1, характеризующаяся с помощью О8С термограммы, имеет эндотерму, возникающую, как правило, при температуре приблизительно 100°С в соответствии с ТСА кривыми; при более высоких температурах могут быть другие результаты. Форма Е-1, характеризующаяся с помощью ТСА термальной кривой, имеет потерю веса от приблизительно 7,1 до приблизительно 7,6% при температуре вплоть до приблизительно 150°С. Теоретическая потеря веса составляет приблизительно 8,3%, тем не менее, не яляется редким случаем для нестабильных сольватов, чтобы стать частично десольватированными при высушивании.
- 43 016563
Пример 2£, КРС-3.
От 30 до 40 мг №((1К,28,5К)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободного основания растворяют в 2 мл рацемического пропиленгликоля. Добавляют воду, до тех пор пока будет обнаружено помутнение. Растворителю дают возможность медленно выпариваться досуха. Форму КРС-3 характеризуют с помощью 1 молекулы К-пропиленгликоля на одну молекулу №((1К,28,5К)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободного основания. Форма КРС-3, характеризующаяся с помощью О8С термограммы, имеет эндотерму, возникающую при температуре приблизительно 70°С в соответствии с кривой ТСА, с более высокой температурой могут быть другие результаты. Форма КРС-3, характеризующаяся с помощью ТСА кривой, имеет потерю веса от приблизительно 16,4% при температуре вплоть до приблизительно 110°С. Теоретическая потеря веса составляет приблизительно 13,1%, однако весьма обычно для незначительного количества растворителей с высокой температурой кипения остаться связанными с твердым веществом. В случаях, аналогичных указанному, дифрактограмма РККЭ является определяющей, но не чувствительной к небольшому количеству случайного растворителя.
Пример 2 г, форма гРА-1.
мг №((1К,28,5К)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободного основания суспендируют в <1 мл изопропиловом спирте. Суспензию осторожно нагревают, чтобы растворить оставшееся твердое вещество. Раствор охлаждают до комнатной температуры и дают возможность медленно выпариваться, пока происходит формирование кристаллов. Форму ГРА-1 характеризуют с помощью 1 моль изопропилового спирта на 1 моль №((1К,28,5К)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободного основания.
Таблица 1
Параметры элементарной ячейки
Соед. Форма т а(А) Ь(А) с(А) а0 β° 7° МГ)
Пр. 2а НО.5-4 ~50 17.7845(7} 7.6215(3) 20.9510(9) 90 109.062(3) 90 2684.1(2)
Пр. 2Ь Ν-2 КОМ. темп. 18.7240(4) 8.0171(2) 19.6568(5) 90 114.935(2) 90 2675.7(1)
Пр. 2с Н1.75-5 -70 12.7648(2) 34.3194(7) 12.9659(2) 90 99.053(1) 90 5609.4(2)
Пр. 2ά НАС-1 КОМ. темп. 7.9766(7) 11.058(2) 33.348(4) 90 90 90 2941.4(6)
Пр. 2е Е-1 -50 7.9866(3) 11.2594(6) 32.680(2) 90 90 90 2938.7(2)
Пр. 2ί КРС-3 -50 10.3004(3) 10.5475(4) 15.4784(6) 90.045(3) 102.476(2) 109.083(2) 1547.0(1)
Пр. ΙΡΑ-1 КОМ, темп. 8.4487(2) 11.6615(3) 31.3800(9) 90 90 90 3091.7(1)
Продолжение табл. 1
Соед. Ζ' Ут йрасч.
Пр. 2а 2 671 Р2, 1.235
Пр. 2Ь 2 669 Р21 1.258
Пр. 2с 4 701 Ρ2ι 1.274
Пр. 24 1 735 Р212|2, 1.279
Пр. 2е 1 735 Ρ2Ά2, 1.249
Пр. 2ί 2 774 Р1 1.257
ΠΡ· 1 773 Ρ2ι2,2, 1.217
Переменные, используемые в табл.1:
Т - температура по Цельсию для кристаллографических данных (КТ представляет собой комнатную температуру, которая приблизительно равна 22°С);
V - объем элементарной ячейки;
Ζ' - количество молекул лекарственного средства на асимметричную ячейку;
Ут - V (элементарная ячейка)/^ молекул лекарственного средства на ячейку);
кд - пространственная группа;
ά расч - вычисленная плотность кристалла.
- 44 016563
Таблица 2
Атомные координаты для примера, 2а, форма Н0.5-4
Атом X Υ Ζ Атом X Υ Ζ
Р1 0.1718 0.5612 0.2388 Р138 0.9730 0.9700 0.6210
Р2 0.1576 0.4167 0.1518 Р139 1.0220 0.7300 0.6430
РЗ 0.1277 0.6827 0.1463 Р140 0.9470 0.7710 0.5532
N7 0.3729 0.0177 -0.0187 0137 0.5289 1.1320 0.2702
N9 0.3967 0,3613 0.0716 НЮ 0.3464 0.3422 0.0601
N11 0.5034 0.5324 0.1275 Н16 0.1889 -0.1347 -0.0192
N12 0.1513 -0.3723 -0.0803 Н85 0.2780 0.4332 0.1193
N15 0,2070 -0.0340 -0.0258 Н88 0.4895 0.3182 0.0357
N18 0.4944 0.7660 0.2016 Н90 0.2688 -0.4938 -0.1162
023 0.3677 0.2704 -0.0786 Н91 0.2791 -0.3427 -0.1635
025 0.2371 0.2420 0.0154 Н93 0.2277 0.1128 -0.0967
С82 0.2630 0.6176 0.1822 Н95 0.3290 -0.0521 -0.1140
С83 0.4281 0.4888 0.1165 Н99 0.3760 -0.3135 -0.0574
С84 0.3027 0.5269 0.1466 Н100 0.3100 -0.3067 -0.0228
С86 0.3810 0.5754 0.1513 Н102 0.5234 0.0450 0.0773
С87 0.4447 0.2515 0.0409 Н103 0.4804 0.1033 0.1290
С89 0.2647 -0.3681 -0.1237 Н105 0.1184 -0.0766 -0.1500
С92 0.2304 -0.0122 -0.0852 Н106 0.1831 -0.0821 -0.1859
С94 0.3163 -0.0776 -0.0729 НПО 0.3980 0.9063 0.2542
С96 0.4172 0.7161 0.1933 Н112 0.4292 -0.1628 0.0516
С97 0.1821 0.5681 0.1800 НПЗ 0.3692 -0.0449 0.0742
С98 0.3221 -0.2755 -0.0632 Н115 0.2715 0.8230 0.2452
С101 0.4735 0.0847 0.0816 Н117 0.0540 -0.3914 -0.0071
С104 0,1724 -0.1130 -0.1448 Н118 0.1047 -0.5613 -0,0042
С107 0.3915 0.1858 -0.0261 Н119 0.0122 -0,5664 -0.0392
С108 0.2116 0.0919 0.0195 Н121 0.0157 -0.2070 -0.1065
С109 0.3748 0.8103 0.2276 Н122 -0.0438 -0.3568 -0.1418
С111 0.4081 -0.0451 0.0507 Н123 0.0156 -0.2818 -0.1762
С114 0.2994 0.7605 0.2220 Н126 0.1446 -0.3645 -0.1779
С116 0.0592 -0.4960 -0.0309 Н128 0.5835 0.7006 0.1755
С120 0.0087 -0.3106 -0.1338 Н130 0.2266 0.0448 0.1189
С124 0.0696 -0.4465 -0.0977 Н131 0.1603 -0.0732 0.0701
С125 0.1783 -0.3101 -0.1359 Н132 0.1430 0.1249 0.0800
С127 0.5309 0.6696 0.1690 Н134 0.0091 -0.6633 -0.1497
С129 0.1827 0.0426 0.0774 Н135 0.1005 -0.6984 -0.1175
С133 0.0611 -0.6143 -0.1412 Н136 0.0686 -0.5851 -0.1833
Г4 0.9541 0.9380 0.5714 Н141 0.1830 -0.4440 -0.0580
Р5 0.9826 0.6800 0,5759 Н14 0.6945 1.0312 0.5339
|р6 1.0259 0.8300 0.6655 Н21 0.7741 1.5073 0.4379
- 45 016563
N8 0.6040 1.3694 0.4758 Н28 0.7049 1.4602 0.3064
N13 0.6631 1.0203 0.5573 Н29 0.6130 1.4814 0.2902
N17 0.7581 1.7462 0.3780 Н32 0.5464 1.0615 0.5430
N19 0.6266 0.8793 0.6383 Н34 0.6724 1,6789 0.4661
N20 0.7501 1.4082 0.4350 Н35 0.5807 1.7062 0.4509
N22 0.7080 0.6517 0.7080 Н38 0.8152 0.9372 0.5749
024 0.7581 1.1336 0.4774 Н41 0.5545 1.4575 0.3823
026 0.5442 1.1244 0.4164 Н44 0,5540 1.3350 0.5873
С27 0.6643 1.5023 0.3242 Н45 0.6406 1.2709 0.6290
СЗО 0.6817 0.9034 0.6081 Н48 0.6272 1.8887 0.3818
С31 0.5921 1.1293 0.5402 Н49 0.5627 1.7587 0.3377
СЗЗ 0.6205 1.6624 0.4324 Н52 0.6566 1.2721 0.3752
С36 0.5758 1.2019 0.4701 Н55 0.6234 1.5433 0.5534
С37 0.8201 0.8496 0.6069 Н56 0.6965 1.4170 0.5619
С39 0.7568 0,8126 0.6288 Н58 0.8887 1.9136 0.4290
С40 0.6067 1.4694 0.4172 Н59 0.9292 1.8759 0.3743
С42 0.8902 0.7591 0.6317 Н60 0.9085 1.7203 0.4146
С43 0.6042 1.2934 0.5840 Н62 0.6632 1.7578 0.2922
С46 0.7651 0,6822 0,6794 Н64 0.8824 1.3038 0.5620
С47 0.6162 1.7663 0.3697 Н65 0.8870 1.4370 0.5064
С50 0.8099 1.8166 0.3410 Н66 0.9097 1.2396 0.5019
С51 0.6689 1.3952 0.3877 Н69 0.7263 1.9822 0.2803
С53 0.7895 1.2775 0.4740 Н70 0.8132 2.0339 0.2846
С54 0.6389 1.4243 0.5469 Н71 0.7823 2.0761 0.3450
С57 0.8917 1.8331 0.3947 Н73 0.8374 1.5813 0.3078
С61 0.6751 1.6998 0.3362 Н74 0.8486 1.7393 0.2638
С63 0.8750 1.3182 0.5148 Н75 0.7629 1.6701 0.2558
С67 0.9615 0,8066 0,6143 Н77 0.8443 0.5011 0.7349
С68 0.7802 1.9934 0.3099 Н79 0.9456 0.5638 0.6960
С 72 0.8152 1.6904 0.2872 Н81 0.6060 0.7320 0.7067
С 76 0.8381 0,5893 0.7029 Н142 0.7500 1.8390 0.4090
С78 0.8982 0.6264 0.6799 Н143 0.5333 1.1298 0.3123
С80 0.6445 0.7516 0.6862 Н144 0.5194 1.0278 0.2538
- 46 016563
Таблица 3
Атомные координаты для примера 2Ь, основная форма Ν-2
Атом X Υ Ζ Атом X Υ Ζ
N1 0.7824 1.3195 0.3238 С71 0.9289 1.4591 0.5167
N2 0.1685 0.3056 -0.0178 Н72 0.9378 1.4237 0.5668
НЗ 0.1633 0.1989 -0.0196 Н73 0.9764 1.4359 0.5102
N4 0.6223 0.8215 0,1887 С74 0.8719 1.7574 0.6080
N5 0.2627 0.4840 -0.0849 С75 0.6719 1.2862 0.4846
N6 0.6868 0.9765 0.2943 Н76 0.6246 1.2933 0.4390
Н7 0.7030 0.9877 0.3420 Н77 0.6814 1.3914 0.5103
N8 0.4185 0,9718 0.0742 Н78 0.6660 1.2009 0.5162
N9 0.0989 0.0258 -0.1003 С79 0.9173 1.6199 0.6639
N10 0.7913 1.3680 0.4754 Н80 0.8851 1.5217 0.6541
НН 0.7826 1.4618 0.4918 Н81 0.9305 1.6578 0.7142
N12 0.5331 0.6005 0.1813 Н82 0.9647 1.5943 0.6584
N13 0.3353 0.7474 0.0475 С83 0.9176 1.9198 0.6225
Н14 0.3028 0.6896 0.0583 Н84 0.9680 1.8999 0.6220
N15 0.8501 1.6946 0.5311 Н85 0.9252 1.9631 0,6707
N16 0.4567 1.1267 0.1887 Н86 0.8887 1.9992 0.5842
017 0.7470 1,1042 0.4435 С87 0.7960 1.7901 0.6131
018 0,2114 0,7470 -0.1165 Н88 0.7660 1.8705 0.5758
019 0.2229 0.5239 0.0583 Н89 0,8064 1.8325 0.6620
020 0.8588 1.0890 0.3360 Н90 0.7667 1.6881 0.6048
Р21 0.5881 0.9034 0.4961 С91 0.2069 0.3753 0.0494
Р22 0.4828 0.7754 0.4659 С92 0,1886 0.3981 -0.1294
Р23 0.5874 0.6500 0.5199 Н93 0.1617 0.4641 -0.1751
С24 0.1049 -0.1653 -0.0049 С94 0.1345 0.3960 -0.0889
Н25 0.1473 -0.2167 -0.0125 Н95 0.1249 0.5115 -0.0787
Н26 0.0773 -0.2487 0.0097 С96 0.3636 0.8982 0.1612
Н27 0.1257 -0.0826 0.0338 С97 0.0560 0.3169 -0.1396
С28 0.0052 -0.2107 -0.1371 Н98 0.0300 0.3865 -0.1836
Н29 -0.0334 -0.1565 -0.1806 Н99 0.0226 0.3123 -0.1131
НЗО -0.0204 -0.2889 -0.1178 С100 0.0655 0.1409 -0.1647
Н31 0.0423 -0.2685 -0.1506 Н101 0.0138 0.0994 -0.1999
С32 -0.0102 0.0236 -0.0618 С102 0.2651 0.6526 -0.0801
нзз 0.0176 0.1111 -0.0276 С103 0.3727 0.8727 0.0930
Н34 -0.0371 -0.0447 -0.0399 С104 0.3129 0.8065 0.1831
Н35 -0.0478 0.0713 -0.1077 Н105 0.2826 0.7213 0.1525
С36 0.6347 0.8573 0.2590 С106 0.4090 1.0275 0.2081
С37 0.7956 1.1614 0.3094 С107 0.1998 0.2249 -0.1544
С38 0.5429 0.6399 0.2526 Н108 0.2268 0.1548 -0.1108
С39 0.5969 0.8058 0.3661 Н109 0.2321 0.2314 -0.1820
Н40 0.6303 0.8901 0.3943 С110 0.0479 -0.0823 -0.0781
С41 0.5928 0.7673 0.2949 С111 0.3943 0.5437 -0.0102
С42 0.7174 1.0886 0.2543 Н112 0.4319 0.5306 0.0416
Н43 0.7243 1,0288 0.2140 НПЗ 0.4226 0.5469 -0.0417
С44 0.8437 1.4188 0.3806 С114 0.1202 0.1477 -0.2041
Н45 0.8919 1.4020 0.3733 Н115 0.0955 0.2128 -0.2496
С46 0.8266 1.6034 0.3730 Н116 0.1283 0.0355 -0.2179
Н47 0.7791 1.6255 0.3797 С117 0.3076 0.8411 0.2485
Н48 0.8177 1.6396 0.3230 С118 0.2292 0.2619 0.1158
С49 0.5524 0.7201 0.3942 Н119 0.2846 0.2720 0.1469
С50 0.6668 1.2414 0.2237 Н120 0.2172 0.1487 0.0989
Н51 0.6690 1.2785 0.1776 Н121 0.2001 0.2924 0.1441
Н52 0.6125 1.2182 0.2137 С122 0.3349 0.4024 -0.0337
С53 0.8609 1.3569 0.4595 Н123 0.3502 0.3144 -0.0588
Н54 0.8773 1.2398 0.4636 Н124 0.3290 0.3556 0.0092
С55 0.4991 0.5496 0.2836 С125 0.3458 0.7009 -0.0200
Н56 0.4668 0.4624 0.2569 Н126 0.3682 0.7937 -0.0371
С57 0.7010 1.3718 0.2841 С127 0.4561 1.0941 0.1233
Н58 0.6975 1.4822 0.2628 Н128 0.4859 1.1659 0.1085
Н59 0.6744 1.3722 0.3171 С129 0.4030 1.0567 0.2762
- 47 016563
С60 0.9137 1.6472 0.5099 Н130 0.4339 1.1390 0.3084
Н61 0.9621 1.7039 0.5438 С131 0.2548 0.7395 0.2713
С62 0.7404 1.2441 0.4666 С132 0.3536 0.9679 0.2955
С63 0.5039 0.5898 0.3526 Н133 0.3500 0.9907 0,3403
Н64 0.4747 0.5300 0.3726 Р134 0.1847 0.7359 0.2156
С65 0.5722 0.6959 0.1556 Р135 0.2364 0.8060 0.3220
Н66 0.5642 0.6734 0.1065 Р136 0.2859 0.5920 0.2960
С67 0.8949 1.7014 0.4308 Р137 0.1977 0.8329 0.2710
Н68 0.9412 1.6866 0.4211 Р138 0.2168 0.6170 0.2301
Н69 0.8818 1.8193 0.4256 Р139 0.2934 0.6790 0.3395
С70 0.5532 0.7632 0.4678 Н140 0.8280 1.7679 0.5060
Н141 0.1330 -0.0400 -0.1062
Таблица 4
Атомные координаты для примера 2с, основная форма Н1.75-5
Атом X Υ Ζ Атом X Υ Ζ
С1 0.3942 0.1176 0.2183 С51 0.6094 0.0443 -0.0547
С2 0.2287 0.1174 0.0897 С52 0.6750 0.0382 0.0420
N3 0.1192 0.1293 0.0594 С53 0.9963 0.1572 0.4974
N4 0.1798 0.0501 0.1322 С54 0.7176 -0.0005 0.0684
N5 0.3753 0.0509 0.2822 С55 1.1985 0.0503 0.7049
N6 -0.0927 0.1070 -0.1055 С56 1.1539 0.1133 0.4965
N7 -0.3691 0.1154 -0.3165 С57 1.0229 0.1608 0.6162
N8 -0.2260 0.1440 -0.1970 С58 1.0367 0.1185 0.4572
09 0.1323 0,1298 -0.1137 С59 0.7341 0.1669 0.3280
010 0.0301 0.0456 0.0130 С60 1.1829 0.1168 0.6162
СП 0.0785 0.1332 -0.0419 С61 1.1435 0.1563 0,6496
С12 0.2431 0.0735 0.0697 С62 0,5636 0.1744 0.0306
С13 -0.2272 0.0747 -0.2281 С63 0.6973 0,1581 0.4320
С14 0.0812 0.0382 0.0995 С64 0.7972 0.1517 0.5115
С15 0.4135 0.0738 0.2008 С65 1.3015 0.0605 0.7775
С16 0.2774 0.1283 0.2010 С66 1.2257 0.0279 0.6122
С17 0.3592 0.0623 0.0929 С67 1.1287 0.0258 0.7652
С18 -0.3242 0.0799 -0.2978 С68 0.9017 0.0664 0.4282
С19 -0.1859 -0.0329 -0.2601 С69 0.8592 0.0308 0.4749
С20 -0.3192 0.1441 -0.2671 Р70 0.7706 -0.0040 0.1659
С21 -0.1804 0.1091 -0.1748 Р71 0.7890 -0.0119 0.0101
С22 -0.1842 0.0372 -0.2149 Р72 0.6477 -0.0283 0.0583
С23 0.0394 0.1336 0.1281 N73 0.7366 0.2979 0.1640
С24 -0.3330 0.0112 -0,3340 N74 0.9286 0.2769 0.3415
С25 -0.2347 0.0067 -0.2683 N75 0.9490 0.3548 0.4399
С26 0.0308 0.0146 0.1792 N76 0.6679 0.2686 0.0076
С27 -0.3753 0.0465 -0.3473 N77 0.5468 0.3015 -0.1239
С28 -0.0381 0.1410 -0.0545 N78 1.1302 0.3587 0.6021
С29 0.4391 0.0161 0.3216 079 0.7689 0.2552 0.3756
СЗО 0.4331 -0.0152 0.2365 080 0.8000 0.3561 0.3182
С31 -0.0565 0.1490 0.0571 С81 0.6779 0.3005 0.0685
- 48 016563
С32 0.5574 0.0267 0.3640 С82 0.8021 0.2636 0.1953
СЗЗ 0.3907 0.0006 0.4127 С83 0.6253 0.3363 0.0330
Р34 -0.1107 -0.0374 -0.1835 С 84 0.8293 0.2641 0.3145
Р35 -0.1514 -0.0419 -0.3469 С85 0.9704 0.2829 0.4523
Р36 -0.2560 -0.0605 -0.2519 С86 0.9612 0.3232 0.6101
N37 0.9782 0.0854 0.4895 С87 1.0815 0.3238 0.6395
N38 0.8832 0.1624 0.4564 С88 0.6395 0.3717 0.0871
N39 0.6198 0.1729 0.1273 С89 0.9221 0.3194 0.4932
N40 0.7167 0.1350 0.2533 С90 0.5107 0.3694 -0.1081
N41 0.5429 0.1472 -0.0401 С91 0.5605 0.3350 -0.0649
N42 1.1331 0.0855 0.6708 С92 0.6021 0.2715 -0,0843
043 0.9140 0.1821 0.2960 С93 0.5266 0.4037 -0.0538
044 0.8654 0.0771 0.3382 С94 0.9119 0.2659 0,1620
С45 0.8542 0.1720 0.3563 С95 0.5911 0.4051 0.0443
С46 0.5876 0.1117 -0.0112 С96 1.1535 0.3924 0.6738
С47 0.6629 0.1387 0.1561 С97 0.6068 0.4429 0.0984
С48 0.6954 0.0688 0.1114 С98 0.8832 0.3710 0.3595
С49 0.6512 0.1060 0.0865 С99 1.0912 0.2839 0.4757
С50 0.5679 0.0801 -0.0813 С100 1.1264 0.2872 0,5933
С101 0.9810 0.2861 0.2520 0151 0.4292 0.1756 0.7593
С102 0.9190 0.4094 0.3235 0152 0.3473 0.1636 0.8339
С103 1.0516 0.4113 0.6921 Н153 0.4310 0.1254 0.2979
С104 1.2130 0.3807 0.7821 Н154 0.4349 0.1341 0.1645
С105 1.2167 0.4208 0.6206 Н155 0.2779 0.1337 0.0447
Р106 0.6836 0.4427 0.1806 Н156 0.2164 0.0417 0.2100
Р107 0.5186 0.4543 0.1375 Н157 0.3714 0.0703 0.3474
Р108 0.6281 0.4715 0.0364 Н158 -0.0576 0.0785 -0.0868
N109 0.3031 0.2523 0.0895 Н159 0.2173 0.0675 -0.0123
N110 0.3202 0.3294 0.1970 Н160 0.4992 0.0681 0.2061
N111 0.5022 0.3356 0.3522 Н161 0.2372 0.1127 0.2569
N112 0.0946 0.2741 -0.0674 Н162 0.2676 0.1594 0.2134
N113 -0.0336 0.2377 -0.1697 Н163 0.3639 0.0302 0.0854
N114 -0.2016 0.2650 -0.2433 Н164 0.4006 0.0751 0.0350
0115 0.1682 0.3314 0.0829 Н165 -0.3534 0.1727 -0.2828
0116 0.1499 0.2237 0.1243 Н166 -0.1099 0.0321 -0.1626
С117 0.2052 0.2373 0.0644 Н167 0.0215 0.1059 0.1611
С118 0.2992 0.2930 0.2475 Н168 0.0659 0.1539 0.1907
С119 -0.0515 0,3401 -0.0764 Н169 -0.3750 -0.0142 -0.3730
С120 0.3416 0.2960 0.3644 Н170 -0.0484 0.0061 0.1467
С121 -0.1222 0.3701 -0.0923 Н171 0.0783 -0.0115 0.2000
С122 0.4698 0.2615 0.2174 Н172 0.0297 0.0317 0.2489
С123 -0.1737 0.2997 -0.1931 Н173 -0.4526 0.0496 -0.3983
С124 -0.0044 0.2713 -0.1206 Н174 -0.0573 0.1673 -0.1021
С125 -0.2438 0.3311 -0.2090 Н175 0.4770 -0.0409 0.2650
С126 -0.0754 0.3040 -0.1278 Н176 0 1484 -0.0242 0.2146
С127 0.1701 0.2420 -0.0535 Н177 0.4596 -0.0045 0.1679
С128 0.3488 0.2578 0.2007 Н178 -0.1282 0.1348 0.0707
С129 0.5097 0.2640 0.3350 Н179 -0.0650 0.1804 0.0686
С130 0.4624 0.2986 0.3883 Н180 0.5963 -0.0009 0.3924
- 49 016563
С131 -().0968 0.4077 -0.0362 Н181 0.5930 0.0381 0.3032
С132 0.3460 0.2683 0.0015 Н182 0.5596 0.0461 0.4284
С133 -0.1317 0.2372 -0.2271 Н183 0.4332 -0.0251 0.4433
С134 0.5253 0.3677 0.4289 ΗΙ84 0.3902 0,0220 0.4712
С135 -0.2190 0.3662 -0.1602 Н185 0.3084 -0.0081 0.3820
С136 0.2745 0.2511 -0.0941 Н186 0.9987 0.0754 0.5691
С137 0.5618 0.4023 0.3689 Н187 0.7487 0.1066 0.2786
С138 0.6152 0.3567 0.5186 Н188 1.1096 0.0983 0.7400
С139 0.4264 0.3788 0.4754 Н189 0.7448 0.0641 0.1858
С140 0.2540 0.3461 0.1186 Н190 0.5192 0.0845 -0.1565
С141 0.2900 0.3831 0.0758 Н191 0.5930 0.0200 -0.1086
Р142 0.0020 0.4176 -0.0257 Н192 1.0402 0.1792 0.4633
Р143 -0.1497 0.4372 -0.0806 Н193 1.1791 0.0849 0.4744
Р144 -0.1239 0.4079 0.0550 Н194 1.1975 0.1355 0.4619
0145 0.4346 0,1106 0.5123 Н195 0.9975 0.1890 0.6409
0146 0.1371 0.2037 0.3256 Н196 0.9825 0.1382 0.6530
0147 0.6629 0.2454 0.5702 Н197 1.0259 0.1190 0.3726
0148 0.4523 0.2291 0.5970 Н198 0.6972 0.1932 0.2915
0149 0.3986 0.3042 0.6776 Н199 1.2687 0.1146 0.6366
0150 0.3459 0.1840 0.4326 Н200 1.1831 0.1795 0.6123
Н201 1.1631 0.1593 0.7328 Н251 1.1684 0.4299 0.5453
Н202 0.5306 0.2029 0.0082 Н252 0.3950 0.3437 0.2241
Н203 0.6519 0.1824 0.4545 Н253 0.5749 0.3293 0.3230
Н204 0.6483 0.1323 0.4245 Н254 0.1193 0.3022 -0.0335
Н205 0.8029 0.1216 0.5375 Н255 0.2147 0.2880 0.2355
Н206 0.7957 0.1702 0.5801 Н256 0.0233 0.3437 -0.0249
Н207 1,3466 0.0340 0.8006 Н257 0.3083 0.3215 0.3958
Н208 1.3500 0.0795 0.7383 Н258 0.3160 0,2703 0.4028
Н209 1.2843 0.0747 0.8476 Н259 0.5050 0.2366 0.1841
Н210 1.2710 0.0024 0.6388 Н260 0.4927 0.2878 0.1790
Η21Ι 1.1517 0.0185 0.5635 Н261 -0.3192 0.3277 -0.2606
Н212 1.2687 0.0462 0.5671 Н262 0.1323 0.2153 -0,0854
Н213 1.1703 -0.0007 0.7926 Н263 0.3327 0.2320 0.2439
Н214 1.1105 0.0421 0.8313 Н264 0.4885 0.2372 0.3700
Н215 1.0556 0.0182 0.7149 Н265 0.5951 0.2670 0.3470
Н216 0.7976 0.0176 0.4203 Н266 0.4874 0.2957 0.4712
Н217 0.9226 0.0100 0.4973 Н267 0.3419 0.2998 0.0019
Н218 0.8269 0.0390 0.5453 Н268 0.4278 0.2594 0.0040
Н219 0.7349 0.3217 0.2190 Н269 -0.1537 0.2100 -0.2663
Н220 1.0259 0.3684 0,4660 Н270 -0.2738 0.3905 -0.1734
Н221 1.2052 0.3497 0.5802 Н271 0.3087 0.2249 -0.1215
Н222 0.7595 0.2370 0.1705 Н272 0.2609 0.2719 -0.1576
Н223 0.9510 0.2576 0.4964 Н273 0.5805 0.4266 0.4203
Н224 0.9305 0.2994 0.6498 Н274 0.6328 0.3938 0.3368
Н225 0.9306 0.3505 0.6365 Н275 0.5006 0.4101 0.3051
П226 1.1023 0.3226 0.7234 Н276 0.6311 0.3804 0.5741
Н227 0.6892 0.3732 0.1634 Н277 0.5931 0.3310 0.5600
Н228 0.8361 0.3164 0.4802 Н278 0.6878 0.3500 0.4880
Н229 0.4622 0.3687 -0.1842 Н279 0.4455 0.4020 0.5307
Н230 0.5955 0.2449 -0.1310 Н280 0.3644 0.3877 0.4139
Н231 0.4887 0.4301 -0.0865 Н281 0.4001 0.3535 0.5147
Н232 0.9411 0.2373 0.1483 Н282 0.2315 0.3935 0.0139
Н233 0.9065 0.2830 0.0906 Н283 0.3050 0.4046 0.1373
Н234 1.1232 0.2576 0.4474 Н284 0.3642 0.3778 0.0457
Н235 1.1194 0.3088 0.4371 Н297 0.5031 0.1166 0.5720
Н236 1.2129 0.2887 0.6081 Н298 0.4013 0.1383 0.4827
Н237 1.1010 0.2618 0.6307 Н291 0.1415 0.2116 0.2456
Н238 0.9841 0.3173 0.2399 Н292 0.0561 0.1944 0.3301
Н239 1.0614 0.2747 0.2630 Н285 0.7189 0.2533 0.6386
Н240 0.8608 0.4208 0.2603 Н286 0.7007 0.2488 0.5014
Н241 0.9250 0.4304 0.3884 Н287 0.4531 0.2087 0.6605
Н242 0.9943 0.4069 0.2987 Н288 0.5334 0.2354 0.5869
Н243 1.0681 0.4363 0.7411 Н289 0.4187 0.2763 0.6478
Н244 1.0091 0.4217 0.6147 Н290 0.4459 0.3091 0.7532
Н245 1.0017 0.3911 0.7227 Н293 0.3695 0.2054 0.4921
Н246 1.2276 0,4062 0.8315 Н294 0.2663 0.1913 0.3921
Н247 1.1658 0.3601 0.8194 Н295 0.4701 0.1653 0.8329
Н248 1.2882 0.3671 0.7752 Н296 0.4645 0.1639 0.6962
Н249 1.2341 0.4465 0.6673 Н299 0.2731 0.1523 0.8513
Н250 1.2881 0.4078 0.6030 Н300 0.4117 0.1542 0.8909
- 50 016563
Таблица 5
Атомные координаты для примера 2е, основная форма Е-1
Атом X Υ Ζ Атом X Υ Ζ
Р18 0.2662 0.4002 0.0274 Р23 0.0301 0.3722 0.0039
Р19 0.0473 0.4191 0.0033 С18 0.1648 0.3165 0.0297
Р20 0.1401 0.2386 0.0059 Н31 0.2375 0.5477 0.2387
02 0.3035 0.7582 0.1985 Н41 0.5018 0.4801 0.2585
028 0.4277 0.5819 0.1087 Н42 0.4761 0.3850 0.2161
N1 0.5559 0.6627 0.1978 Н51 0.6480 0.5043 0.1733
N6 0.2412 0.4989 0.1766 Н52 0.7376 0.5463 0.2204
N8 0.0422 0.3993 0.2139 Η6Ι 0.2881 0.5282 0.1472
N10 -0.1606 0.2714 0.1828 Н91 -0.1519 0.3157 0.2435
N27 0.6744 0.6813 0.1115 Н111 -0.2586 0.1707 0.1140
N29 0.9824 0.8036 0.1064 Н121 -0.1207 0.1964 0.0469
С2 0.3877 0.6687 0.2028 Н141 0.2343 0.4431 0.0976
СЗ 0.3235 0.5438 0.2136 Н211 0.5921 0.8399 0.1984
С4 0.4822 0.4775 0.2252 Н221 0.4827 0.7942 0.1303
С5 0.6231 0.5426 0.2028 Н231 0.6846 0.8993 0.0877
С7 0.1130 0.4242 0.1780 Н232 0.6444 0.9699 0.1348
С9 -0.0900 0.3261 0.2139 Н241 0.9421 0.9813 0.1221
С11 -0.1488 0,2295 0.1107 Н251 1.0517 0.8711 0.1826
С12 -0.0761 0.2450 0.0735 Н252 0.8644 0.9484 0.1930
С13 0.0600 0.3235 0.0687 Н261 0.8551 0.7433 0.2231
С14 0.1243 0.3844 0.1017 Н262 0.8872 0.6821 0.1741
С15 -0.0857 0.2914 0.1453 Н271 0.8051 0.6804 0.1028
С16 0.0498 0.3680 0.1409 Н291 1.0794 0.7695 0.1261
С17 0.1207 0.3503 0.0270 Н294 0.7893 0.5312 0.0656
С21 0.6470 0.7650 0.1817 Н292 0.6583 0.4189 0.0854
С22 0.6168 0.7817 0.1361 Н293 0.5951 0.5011 0.0421
С23 0.7030 0.8953 0.1212 Н311 0.9885 0.9169 0.0098
С24 0.8922 0.8952 0.1304 Н312 0.8322 0.8277 0.0324
С25 0.9185 0.8727 0.1765 Н313 0.8750 0.9701 0.0523
С26 0.8353 0.7590 0.1910 Н321 1.2632 0.9515 0.0466
С28 0.5782 0.5936 0.0987 Н322 1.1556 1.0063 0.0897
С29 0.6596 0.5024 0.0711 Н323 1.2983 0.8878 0.0951
СЗО 1.0633 0.8393 0.0676 Н331 1.1943 0.7459 0.0197
С31 0.9326 0.8931 0.0389 Н332 1.2251 0.6857 0.0690
С32 1.2044 0.9276 0.0745 НЗЗЗ 1.0345 0.6616 0.0430
СЗЗ 1.1314 0.7245 0.0492 Н971 -0.8355 0.1305 0.1615
099 -0.4402 0.1232 0.1894 Н972 -0.7164 0.0043 0.1747
С97 -0.7313 0.0985 0.1797 Н973 -0.7551 0.1157 0.2115
С98 -0.5812 0.1608 0.1676 Н981 -0.5951 0.2544 0.1716
Р21 0.3052 0.3620 0.0283 Н982 -0.5565 0.1430 0.1349
Р22 0.1907 0.2403 0.0143 Н991 -0.3383 0.1855 0.1847
- 51 016563
Таблица 6
Атомные координаты для примера 26, основная форма НАС-1
Атом X Υ Ζ
С1 0.0418 0.3612 0.1413
N2 -0.1614 0.2566 0.1827
N3 0.5574 0.6476 0.1969
04 0.4002 0.5938 0.1104
N5 0.0480 0.3793 0.2136
N6 0.2349 0.4911 0.1766
N7 0.6581 0.6819 0.1120
09 0.3141 0.7518 0,2032
СЮ 0.6548 0,7519 0.1823
СИ 0.1091 0.4116 0.1779
С12 0.6143 0.7805 0.1389
С13 -0.0977 0.2822 0.1453
С14 0.3251 0.5321 0.2128
С15 -0.0849 0.3037 0.2135
С16 0.5496 0.5972 0,0993
С17 0.8422 0.7397 0,1888
N18 0.9734 0.7976 0.1050
С19 -0.1674 0.2302 0.1113
С20 0.0380 0.3268 0.0698
С21 0.1085 0.3827 0.1029
С22 0.6188 0.5229 0.1991
С23 0.7063 0.8942 0.1260
С24 0.3943 0.6572 0.2042
С25 0.4808 0.4583 0.2218
С27 0.8951 0.8864 0.1321
С28 0.9305 0.8535 0.1757
Р29 0.2449 0.4047 0.0277
СЗО 1.0501 0.8412 0.0669
С31 0.6205 0.5052 0.0708
С32 -0.1018 0.2511 0.0743
СЗЗ 0,1058 0.3467 0.0300
Р36 0.1168 0.2494 0.0085
Р37 0.0041 0.4132 0.0068
СЗЗ 0.9217 0.9066 0.0421
С39 1.2014 0.9229 0.0747
С40 1.1073 0.7290 0.0448
08 -0.4446 0.1296 0.1963
С26 -0.5724 0.1491 0.1735
034 -0.5673 0.2213 0.1458
С35 -0.7251 0.0824 0.1840
Атом X Υ Ζ
Н32 -0.1504 0.2133 0.0512
Н21 0.2024 0.4361 0,1001
Н19 -0.2633 0,1786 0.1141
Н15 -0.1260 0.2877 0.2400
Н6 0.2703 0.5248 0.1514
Н14 0.2507 0.5355 0.2354
Н25А 0.5017 0.4595 0.2502
Н25В 0.4643 0.3765 0.2131
Н22А 0.6302 0.4915 0.1724
Н22В 0.7255 0.5203 0.2124
НЮ 0.6208 0.8184 0.1990
Н12 0.4961 0.7944 0.1361
Н31А 0.7369 0.5221 0.0663
Н31В 0.5607 0.5108 0.0459
Н31С 0.6086 0.4250 0,0815
Н17А 0.8651 0.7215 0,2164
Н17В 0.8826 0.6751 0.1722
Н23А 0.6885 0.9061 0.0978
Н23В 0.6640 0.9626 0.1405
Н28А 0.8869 0.9177 0.1920
Н28В 1.0495 0.8473 0.1796
Н27 0.9448 0.9635 0.1263
Н18 1.0626 0.7570 0.1189
Н39А 1.2479 0.9507 0.0498
Н39В 1.2853 0.8792 0.0894
Н39С 1.1647 0.9911 0.0903
Н38А 0.9706 0.9352 0.0175
Н38В 0.8802 0.9740 0.0573
Н38С 0.8310 0.8527 0.0360
Н40А 1.1575 0.7492 0.0195
Н40В 1.0092 0.6805 0.0403
Н40С 1.1861 0,6845 0.0608
Н7 0.7708 0.6743 0.1022
Н35А -0.8134 0.1022 0.1656
Н35В -0.7586 0.1045 0.2107
Н35С -0.7035 -0.0029 0.1830
Н8 -0.3548 0.1817 0.1876
- 52 016563
Таблица 7
Атомные координаты для примера 2д, основная форма ГРА-1
Атом X Υ Ζ Атом X Υ Ζ
Е1 0.1519 0.3786 0.0243 Н4В 0.8724 0.7912 0.1232
ЕЗ -0.0140 0.2540 -0.0043 НЗ 0.6171 0.6809 0.1026
Г2 0.0260 0.4241 0.0085 Н1 0.1162 0.5505 0.1460
N4 0.8062 0,8075 0.1016 НЮ 0.3362 0.7935 0.1099
N3 0.5159 0.6834 0.1054 Н9 0.3991 0.8799 0.1736
N2 0.3481 0.7197 0.1890 Н6А 0.4782 0.9618 0.Ю51
N1 0.0675 0.5440 0.1700 Н6В 0.5369 0.8805 0.0686
N5 -0.1311 0.4643 0.2095 Н22 0.0665 0.4473 0.0929
N6 -0.2941 0.3121 0.1828 Н5 0.7491 0.9735 0.1042
01 0.1140 0.8031 0.1697 Н21 -0.3360 0.1865 0.1167
02 0.2925 0.5779 0.1031 Н12А 0.5507 0.4357 0.0989
СЮ 0.4463 0.7911 0.1197 Н12В 0.6252 0.5211 0,0660
С9 0.4471 0.8051 0.1677 Н12С 0.4678 0.4565 0.0549
С4 0.9030 0.8194 0.0629 Н8А 0.6698 0.7392 0.1786
С24 -0.0632 0.3232 0.0669 Н8В 0.6137 0.8216 0.2153
С19 -0.0909 0.3946 0.1378 Н16 0.0302 0.6334 0.2243
С6 0.5348 0.8912 0.0992 Н13А 0.4882 0.6277 0.2283
С20 -0.2139 0.3158 0.1454 Н13В 0.4421 0.5607 0.1863
СИ 0.4342 0.5879 0.0964 НЗВ 0.9771 0.9859 0.0712
С22 -0.0159 0.3962 0.0980 НЗС 1.0944 0.9144 0.0431
С5 0.7048 0.9021 0.1156 НЗО 1.0915 0.8973 0.0926
С17 -0.0508 0.4684 0.1726 Н23 -0.2112 0.1922 0.0537
С21 -0.2559 0.2399 0.1123 Н18 -0.3052 0.3848 0.2368
С14 0.1869 0.7250 0.1863 Н2А 0.7158 0.7853 0.0234
С12 0.5279 0.4917 0.0774 Н2В 0.8604 0.8380 -0.0010
С8 0.6155 0.8107 0,1847 Н2С 0.7518 0.9169 0.0270
С16 0.1187 0.6161 0.2052 Н7А 0.6551 0.9825 0.1718
С13 0.4041 0.6134 0.2080 Н7В 0.8129 0.9118 0.1736
сз 1.0281 0.9129 0.0679 Н1А 1.0319 0.6803 0.0846
С23 -0.1824 0.2437 0.0749 Н1В 1.0662 0.7077 0.0366
С18 -0.2485 0.3861 0.2114 Н1С 0.9087 0.6458 0.0495
С2 0.7981 0.8420 0.0246 Н15А 0.2542 0,5916 0.2593
С7 0.7045 0.9108 0,1635 Н15В 0.2564 0.4841 0.2288
С1 0.9852 0.7023 0.0579 НЗА -0.4990 0.1985 0.1863
С15 0.2577 0.5672 0.2298 Н27 -0.6926 0.2734 0.1759
С25 0.0153 0.3263 0.0246 Н26А -0.7745 0.0861 0.1320
Р4 0.1640 0.2980 0.0315 Н26В -0.6492 0.1771 0,1173
Е5 -0.0739 0.3770 -0.0036 Н26С -0.8259 0.2136 0.1243
Е6 0.0440 0.2214 0.0112 Н28А -0.8028 0.1216 0.2237
03 -0.5666 0.1486 0.1890 Н28В -0.9203 0.1527 0.1868
С27 -0.7093 0.1903 0.1763 Н28С -0.8515 0.2497 0.2160
С26 -0.7420 0,1648 0.1343
С28 -0.8290 0.1780 0.2024
С29 -0.8460 0.1070 0.1744
СЗО -0.6990 0.2550 0.1410
- 53 016563
Таблица 8
Атомные координаты для примера 2Г, основная форма ВРС-3
Атом X Υ Ζ
Я 1,4700 0.5720 0.6614
Р7 1.4119 0.5575 0.7000
Г2 1.4315 0.5398 0.7741
Г8 1.5600 0.5336 0.8131
ЕЗ 1.6320 0.5630 0.7860
Г9 1.6111 0.5864 0.6960
N9 0.7997 -0.0295 0.8348
N8 0.7989 0.1232 0.9974
N11 1.1628 -0.0946 0.6829
N10 1.0937 0.0679 0.7424
N7 0.5331 0.0253 1.0441
N12 1.3802 -0.0414 0.6342
03 0.8190 0.0931 0.7142
04 1.0177 0.2159 0.9737
С34 0.7187 0.1296 0.9094
С45 1.3119 0.1383 0.6926
С37 0.6769 0.0002 0.8509
СЗО 0.4799 0.0412 0.9508
С42 1.1869 0.0349 0.7058
С31 0.5850 0.1596 0.9161
С49 1.4737 0.3643 0.7029
СЗЗ 0.5750 -0.1179 0.8869
С47 1.3487 0.2751 0.7153
С40 0.8584 0.0198 0.7679
С32 0.4447 -0.0846 0.8933
С41 0.9773 -0.0327 0.7663
С39 1.0115 -0.0750 0.8618
СЗЗ 0.9405 0.1730 1.0250
С38 0.8681 -0.1166 0.8863
С28 0.4760 0.0765 1.1130
С43 1.2625 -0.1234 0.6483
С44 1.4064 0.0935 0.6556
С46 1.5338 0.1870 0.6430
С48 1.5649 0.3202 0.6666
С36 1.0000 0.1703 1.1211
С29 0.5552 0.0482 1.2020
С27 0.3192 0.0052 1.1006
С26 0.5156 0.2276 1.1108
СЗО 1.5103 0.5068 0.7292
N3 0.6420 0.6560 0.4169
С55 0.4573 0.5719 0.0792
С56 0.3131 0.5089 0.0936
С54 0.4592 0.5517 -0.0152
05 1.1135 0.3136 0.8309
06 0.9224 0.3638 0.6775
С52 0.9658 0.4383 0.7607
С53 1.0998 0.4403 0.8150
С51 0.9706 0.5801 0.7445
Н8 0.7521 0.0843 1.0354
НЮ 1.1043 0.1515 0.7516
Н34 0.7767 0.2034 0.8813
Н37 0.6246 0.0147 0.7931
НЗО 0.3926 0.0620 0.9462
Н31А 0.5395 0.1776 0.8580
Η3ΙΒ 0.6110 0.2396 0.9557
НЗЗА 0,5480 -0.1985 0.8476
нззв 0.6213 -0.1349 0.9450
Н47 1.2884 0.3066 0.7391
Н32А 0.3953 -0.0742 0.8343
Н32В 0.3818 -0.1587 0.9172
Н41 0.9434 -0.1120 0.7240
Н39А 1.0471 -0.1496 0.8633
Н39В 1.0801 -0.0006 0.9013
Н38А 0.8152 -0.2110 0.8689
Н38В 0.8786 -0.0998 0.9495
Н43 1.2434 -0.2140 0.6327
Н46 1.5955 0.1582 0.6190
Н48 1.6483 0.3822 0.6582
Н36А 1.0650 0.1213 1.1285
Н36В 0.9249 0.1270 1.1498
Н36С 1.0484 0.2607 1.1471
Н29А 0.5101 -0.0427 1,2144
Н29В 0.5546 0.1090 1.2479
Н29С 0.6509 0.0606 1.1995
Атом X Υ Ζ
N2 0.6350 0.3813 0.3765
N6 0.2687 0.8628 0.3992
N4 0.3398 0.7349 0.3149
N1 0.8898 0.3354 0.4598
N5 0.0527 0.9107 0.3489
С12 0.4202 0.2078 0.3911
О1 0.6129 0.7507 0.2839
СЮ 0,7273 0.4981 0.3447
С6 0.8597 0.4735 0.3332
С9 0.7661 0.6239 0.4071
С20 0.1173 0.7695 0.2548
С19 0.0264 0.8385 0.2716
С5 0.9561 0.4627 0.4193
С17 0.2435 0.7914 0.3234
С8 0.8573 0.6109 0.4957
02 0.4273 0.3887 0.2980
С24 -0.0460 0.6680 0.1174
С16 0.4606 0.7449 0.3864
С22 0.0802 0.6875 0.1776
С14 0.5786 0.7190 0.3544
С7 0.9892 0.5850 0.4828
С23 -0.1359 0.7367 0.1342
С18 0.1707 0.9200 0.4061
С25 -0.0848 0.5788 0.0372
С13 0,5736 0,6259 0.4906
С21 -0.1010 0.8179 0.2096
С4 0,9438 0.1985 0.3554
СЗ 0.9469 0.2256 0.4509
С15 0.4317 0.6466 0.4565
С2 1.0956 0.2572 0.5066
СИ 0.4953 0.3347 0.3508
С1 0.8466 0.1026 0.4843
Р4 -0.1040 0.4554 0.0598
Р5 0,0211 0.6100 -0.0030
Р6 -0.1869 0.5900 -0.0238
РЮ -0.2221 0.5070 0.0190
Р11 -0.0370 0.4791 0.0400
Р12 -0.0360 0.6334 -0.0302
07 0.3015 0.5242 0.1820
08 0.5067 0.7155 0.1016
Н12С 0.3410 0.1518 0.3473
Н10А 0.6770 0.5138 0.2867
Н6А 0.8326 0.3912 0.2958
Н6В 0.9113 0.5467 0.3027
Н9 0.8236 0.6994 0.3801
Н95 1.0446 0.4603 0.4067
Н8В 0.8035 0.5371 0.5249
Н8С 0.8845 0.6928 0.5336
Н16 0.4967 0.8363 0.4153
Н22 0.1413 0.6448 0.1660
Н7А 1.0479 0.6636 0.4601
Н77В 1.0425 0.5720 0.5399
Н23 -0.2199 0.7261 0.0931
Н18 0.1897 0.9731 0.4584
Н13А 0.6288 0.6865 0.5425
ШЗВ 0.5604 0.5340 0.5057
Η2Ι -0.1626 0.8605 0.2204
Н4А 0.8479 0.1679 0.3217
Н4В 0.9856 0.1305 0.3502
Н4С 0.9960 0.2797 0.3330
Н15А 0.3587 0.5626 0.4312
Н15В 0.4034 0.6838 0.5038
Н2А 1.1552 0.3410 0.4913
НЗВ 1.1310 0.1867 0.4955
Н2С 1.0948 0.2640 0.5683
Н1А 0.8496 0.1213 0.5456
Н1В 0.8758 0.0261 0.4785
Н1С 0.7522 0.0839 0.4497
Н99 0.9009 0.3500 0.5070
Н7 0.3628 0.5029 0.2157
Н8А 0.5335 0.7307 0.1555
Н55 0.5214 0.5322 0.1164
Н56А 0.2502 0.5475 0.0555
Н56В 0.2814 0.4136 0.0755
- 54 016563
Н27А 0.2727 0.0063 1.0399 Н54А 0.4034 0.5980 -0.0510
Н27В 0.2829 0.0501 1.1386 Н54В 0.4208 0.4574 -0.0335
Н27С 0.3022 -0.0863 1.1155 Н54С 0.5546 0.5867 -0.0221
Н26А 0.6150 0,2666 1.1142 Н5 1.0835 0.2863 0.8748
Н26В 0.4925 0.2636 1.1602 Н6 0.9213 0.2865 0.6847
Н26С 0.4641 0.2486 1.0564 Н52 0.8933 0.3997 0.7941
Н100 0.5160 -0.0550 1.0510 Н53А 1.1740 0.4907 0,7866
Н2 0.6741 0.3386 0.4153 Н53В 1.1148 0.4884 0.8717
Н4 0.3295 0.6914 0.2656 Н51А 1.0458 0,6226 0.7158
Н12А 0.3879 0.2319 0.4404 Н51В 0.9866 0.6294 0.8002
Н12В 0.4843 0.1597 0.4113 Н51С 0.8826 0.5788 0.7073
Таблица 9 Характерные положения пиков при рентгеновской дифракции на порошке (градусы 2θ±0,1)α КТ для примеров 2а-2д основаны на высококачественной рентгенограмме, полученной на дифрактометре (СиКа) с вращающимся капилляром с 2Θ калиброванным с Ν!8Τ другого пригодного стандарта
Пр. 2а Пр. 2Ь Пр. 2с Пр. 20 Пр. 2е Пр. 2£ Пр. 2§
5.2 5.5 5.1 5.3 5.4 6.3 6.9
7.9 9.1 6.9 9.6 9.4 9.0 8.7
17.1 12.1 7.4 13.7 11.2 11.7 9.8
17.6 14.0 10.2 14.7 13.7 15.0 10.3
19.6 19.2 18.0 19.5 19.1 17.6 11.8
Сравнительные фармакологические характеристики.
Исследования и данные, сравнивающие фармакологические характеристики примера 1 и соединений, найденных в XVО 2005021500 (соответствующему патенту США № 7163937, принадлежащему настоящему заявителю), представлены ниже.
Связывание мононуклеарных клеток периферической крови человека (ССК-2 связывание).
См., например, УокЫтцга е! а1., Г ^тцпок 1990, 145, 292. Исследования связывания ССК-2 человека проводятся с мононуклеарными клетками периферической крови человека (НРВМСк) с использованием меченого Ά человеческого МСР-1 в качестве лиганда-метки. Клетки НРВМС выделяют из лейкоцитарной массы человека 1еикорак (Вю1ощса1 8рес1аИу Шс.) при помощи стандартного протокола Исо11Нурасще (Меб1а!есй Се11дго). Выделенные клетки НРВМС отмывают и разбавляют до 1х107/мл в буфере связывания (КРМЫ640, 0,1% В8А, 20 мМ Нерек, рН 7,4). 125ЬМСР-1 (№№Фегк Е1тег) разбавляют до 0,45 нМ в буфере связывания. Исследование связывания выполняют с помощью 96-луночного фильтровального планшета (М1Шроге). Общее связывание 125ЬМСР-1 оценивают следующим образом: в каждую реакцию общим объемом 150 мкл добавляют 5х105 клеток, 0,15 нМ 125ЬМСР-1 и соединение, так что конечная концентрация распределяется в диапазоне от 0 до 100 нМ. Планшет инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин, после чего трижды отмывают КРМЕ1640, 0,1% В8А, 0,4 М №С1, 20 мМ Нерек, рН 7,4, используя вакуумную фильтрационную установку (М1Шроге). После отмывания планшет высушивают на воздухе в течение 60 мин при комнатной температуре. Затем добавляют 25 мкл Мюгокст! 20 в каждую лунку. Планшет запечатывают и считывают на Тгйцх в течение 1 мин. Неспецифическое связывание определяют в присутствии 300 нМ холодного МСР-1 (РергоТесй Ичс.). Специфический ^ЕМСРИ подсчитывают как разницу между общим и неспецифическим связыванием. Все процедуры дублируют. ГС50 определяют как концентрацию конкурирующих соединений, требуемую для снижения специфического связывания на 50%.
НЕКО ток.
НЕК-293 клетки, стабильно экспрессирующие НЕКО каналы, выращивают (37°С, 5% СО2) в среде Еад1е в модификации ЭЫЬессо с добавлением 10% 8щта фетальной бычьей сыворотки, заменимых аминокислот, 2 мМ Ь-глутамина и 500 мкг/мл О418 в инкубаторе. Буфер, диссоциирующий клетки, добавляют для выделения клеток из флаконов, которые затем высевают в 384-луночные черные/чистые планшеты Согшпд, покрытые поли-Э-лизином с плотностью 2х104 клеток на лунку (20 мкл) в 10% сывороточной среде и инкубируют в течение 15-24 ч при 37°С в 5% СО2 инкубаторе до получения смыкающегося монослоя клеток.
мМ исходный раствор красителя ВТС-АМ (Мо1еси1аг РгоЬек, Еидепе, ОК) приготавливают в 100% ЭМ8О и затем добавляют в пропорции 1:1 к 10% (мас./об.) плюроновой кислоте в ЭМ8О в день исследования. Краситель затем разбавляют в НЕКО внешнем ЕР буфере (140 мМ №С1, 4,0 мМ КС1, 1,8 мМ СаС12, 1,0 мМ МдС12, 10 мМ НЕРЕ8, рН 7,3 и 10 мМ глюкозы; все компоненты буфера получены в 8щта С11ет1са1). Эту смесь красителя ВТС (30 мкл) добавляют к клеткам и получают конечную концентрацию загрузки 2,5 мкМ. Клетки инкубируют при 21°С в течение 45 мин.
Тестируемые соединения разбавляют до 10 мМ ДМСО в 60 мкл. Эти соединения затем последовательно разводят в пропорции 1:2 в ДМСО в колонках 1-10 и 11-20 384-луночного планшета. Подготовленные к исследованию планшеты создают путем внесения 2,5 мкл из планшета с последовательно разбавленным ДМСО, который готовят с помощью Уе1осйу 11 ВюСе1. Водные планшеты создают путем добавления 48 мкл буфера ЕР и затем разбавляют 30-45 мин перед тем, как исследование считывают на РЬГРК. После загрузки красителя разбавленные водой соединения добавляют к клеткам трех дублирую
- 55 016563 щих планшетов (10 мкл), получая десять различных концентраций от 80 мкМ до 0,156 нМ. Конечная концентрация ДМСО в исследовании составляет 1%. Готовые к исследованию водные планшеты готовят и разбавляют на устройстве СуЬю 1к|шй Ьаий1ег.
Клетки, загруженные красителем, считывают на ГЫРК384 (Мо1еси1аг Пеукек, 8ипиууа1е, СА), который возбуждает краситель, используя 488 нм линию аргонового лазера. Эмиссию фильтруют с помощью 540±30 нм фильтрующей полосы пропускания. Каналы НЕКС стимулируются для открывания путем добавления 20 мкл/лунка буфера ЕР, содержащего 66 мМ К28О4 и 1,3 мМ Т128О4 (8щта/А1йпс11). Для каждого планшета данные собирают каждую секунду в течение 12 с, когда добавляют Т1+-содержащий стимулирующий буфер. Сбор данных производят каждую секунду в течение 48 с и затем продолжают каждую 3 с в течение дополнительных 2 мин.
Динамический диапазон исследования определяют от пустых до полных лунок. Полные лунки (колонки 21 и 22) определяют максимальную НЕКС активацию для планшета (без тестируемого соединения), пустые лунки (колонки 23 и 24) определяют 100% ингибирование НЕКС. Пустые лунки содержат 400 нМ либо стандартного НЕКС ингибитора дофетилида (Искег е! а1., 1998), либо Е-4031. Значения рядов данных в каждой лунке с образцом сначала корректируют для вариации клетка/сигнал, негативный контрольный (чистые) фон и нормализуют к положительному контролю (полные), используя интерактивное программное обеспечение ГЫРК. Данные кривых ответа на ток НЕКС Т1+-концентрации тестируемого соединения затем подгоняют с помощью Ехсе1 Ей (Ю Вн51пе55 8о1и!юп5 Ытйей, 8штеу, ИК), используя логическую формулу, Υ=А+((В-А)/1+((С/X)Λ^))), где А - максимальное ингибирование. Данные анализируют путем приближения максимальных амплитуд изменения флуоресценции для тока Т1+ для данных условий тестируемого соединения. Мощность (ТС50 значения) соединений подсчитывают по средним значениям трех лунок.
Исследование связывания с сайтом 2 натриевого канала.
См. также ^.А. Сайега11, е! а1. 1. Вю1, СНет. 1981, 256, 8922. Стандартный буфер связывания, содержащий 50 мМ НЕРЕ8, 50 мМ ТГ18-НС1, рН 7,4, 130 мМ хлорида холина, 5,4 мМ КС1, 0,8 мМ МдС12, 5,5 мМ глюкозы, 40 нг/мл ЬдТ. Реакции связывания запускают путем добавления синаптосом (приготовленных из головного мозга крыс \У15(аг) в смесь реакции, содержащую 5 нМ [3Н]-батрахотоксина в стандартном буфере связывания и соединение, подлежащее тестированию, в желаемой концентрации. Образцы затем перемешивают и инкубируют при 37°С в течение 60 мин. Реакции останавливают путем добавления ледяного моющего буфера, содержащего 50 мМ НЕРЕ8, 50 мМ Тгй-НСЕ рН 7,4, 1,8 мМ СаС12, 0,8 мМ МдС12 и 1 мг/мл альбумина бычьей сыворотки. Синаптосомы немедленно собирают на стекловолоконные фильтры и отмывают трижды моющими буферами. Радиоактивность [3Н]-батрахотоксина, оставшегося на фильтрах, подсчитывают с помощью жидкостных сцинтилляционных спектрометров.
Исследование проницаемости параллельных искусственных мембран (РАМРА).
Исследование проницаемости параллельных искусственных мембран (РАМРА) состоит из специально приготовленных комбинаций липидов с лецитиновой основой, обозначаемых как липид желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). Липид ЖКТ применяют для формирования мембраны в виде плоского многослойного блока, сходного с тем, что применяется в исследованиях Сасо-2. Липид ЖКТ весьма напоминает структуру и свойства мембраны ш νίλΌ, судя по стандартным соединениям, которые пассивно абсорбируются в организме человека. РАМРА широко используется в качестве ш уйго модели для скрининга проницаемости исследуемых соединений. Скорость прохождения соединений через мембрану РАМРА используется для определения коэффициента проницаемости (Рс), который может быть отнесен к 1п νί\Ό пассивной проницаемости соединения.
Коэффициент проницаемости (Рс) конкретного соединения исследуется в рН-зависимьгх условиях с апикальным и базолатеральным рН 7,4. Все эксперименты проводятся трижды.
Соединения (10 мМ исходных растворов в 100% ДМСО) разбавляют 1:100 в рН 7,4 донорском буфере (рIОN САТ #110151), обеспечивая 100 мкМ раствор исследования в 1% ДМСО. Соединение, разбавленное в донорском буфере, переносят в планшет \У11а1тап ишПНег и фильтруют перед введением 200 мкл в донорскую лунку планшета исследования (рIОN САТ #110163). Мембрану РАМРА создают путем нанесения пипеткой 4 мкл липидного раствора (рIОN САТ #110169) на фильтровальный планшет (У\УК. САТ #13503). Мембрану затем покрывают 200 мкл акцепторного буфера при рН 7,4 (рIОN САТ #110139). РАМРА планшет исследования (донорскую сторону и акцепторную сторону) замещают и инкубируют при комнатной температуре в течение 4 ч. Планшет затем разбирают и планшеты спектрофотометра (У\УК. САТ #655801) заполняют (150 мкл/лунка). Донорские, акцепторные, контрольные и пустые планшеты считывают в планшетном считывающем устройстве 8рес!гаМах υV. Данные импортируют в программу рЮ^ которая анализирует спектры и вычисляет значения Рс.
- 56 016563
Хемотаксис СС1-2.
Исследование хемотаксиса СС1-2 человека проводят на клеточной линии моноцитов человека, ТНР-1. ТНР-1 клетки сначала метят флуоресцентным красителем Са1сеш-АМ в 1РМИ1640 без фенолового красного, без В8А (рН 7,4) при 37°С в течение 30 мин с легким помешиванием каждые 15 мин. Меченые клетки затем отмывают и ресуспендируют при 1х105/мл в буфере хемотаксиса (1РМИ1640 без фенолового красного, 0,1% В8А, рН 7,4). Тестируемое соединение разбавляют в буфере хемотаксиса, так что конечная концентрация исследования находится в диапазоне от 0,01 нМ до 1 мкМ. Лиганд МСР-1 (РергоТесй Шс.) разбавляют до 20 нМ в буфере хемотаксиса. Для выполнения исследования такой же объем разведений тестируемого соединения смешивают с таким же объемом меченных клеток ТНР-1 (смесь 1) и такой же объем разведений тестируемого соединения смешивают с таким же объемом разбавленного лиганда МСР-1 (смесь 2). Обе смеси инкубируют независимо при 37°С в течение 10 мин, после чего аккуратно перемешивают. Вызванный МСР-1 хемотаксис измеряют в планшете хемотаксиса (Вес1оп Июкшкоп) путем помещения 50 мкл смеси 1 в верхнюю камеру и 225 мкл смеси 2 в нижнюю камеру. Планшет закрывают крышкой и инкубируют при 37°С в течение 30 мин. Спустя 30 мин планшет считывают на СуЮПиог. Все этапы теста дублируют. Чтобы определить отношение сигнал/шум, 50 мкл только меченых клеток ТНР-1 (5х104/лунка) помещают в верхнюю камеру и 225 мкл только лиганда МСР-1 помещают в нижнюю камеру (конечная концентрация 10 нМ). Ингибирование, достигнутое ранжированными концентрациями тестируемого соединения, подсчитывают как процент МСР-1 контроля, свободного от соединения. Κ'.'50 определяют как концентрацию тестируемого соединения, необходимого для получения 50% ингибирования хемотаксиса клеток.
Фиксация потенциала 11Е1С.
Фиксацию потенциала цельных клеток используют для прямого измерения токов 11Е1С в клетках НЕК-293, стабильно экспрессирующих субъединицу а клонированного калиевого канала 11Е1С. Соединение тестируют в водном буфере с рН 7,4 при комнатной температуре. Повторяющиеся тестовые импульсы (0,05 Гц) применяют от исходного потенциала -80 до 20 мВ в течение 2 с и вызывают хвостовые токи, затем тестовые импульсы путем пошагового приращения напряжения до -65 мВ. Эффекты соединения подсчитывают путем измерения ингибирования пикового хвостового тока.
Фиксация потенциала натриевого канала.
Фиксацию потенциала цельных клеток используют для прямого измерения натриевых токов внутрь клеток НЕК-293, экспрессирующих натриевый канал сердца человека, 8С№А. Соединение тестируют в безбелковом водном буфере. Для определения стабильного состояния ингибирования натриевые токи вызывают каждые 5 с, используя следующий протокол напряжения: клетки содержат при потенциале -90 мВ и пошагово изменяют до -20 мВ в течение 60 мс. Эффекты подсчитывают путем измерения ингибирования пикового тока во время тестового импульса до -20 мВ. Зависимость от скорости ингибирования оценивают путем стимуляции при частотах 1 и 4 Гц.
Фармакокинетика однократного введения у крыс.
Самцы крыс 8ргадие-ОаМеу (250-300 г) используют для фармакокинетических исследований. Крыс не кормят в течение ночи перед пероральным введением препарата и кормят через 4 ч после введения. Образцы крови (~0,3 мл) собирают из яремной вены в содержащие К2ЕИТА пробирки и затем центрифугируют при 4°С (1500-2000хд) для получения плазмы. В исследовании пероральной биодоступности 2 группы животных (N=2-3 в группе) получают тестируемое соединение либо в виде внутривенной (IV) инфузии (в течение 10 мин) через яремную вену, либо через желудочный зонд. Последовательные образцы крови получают через 0,17 (только для IV введения); 0,25; 0,5; 0,75; 1; 2; 4; 6; 8 и 24 ч после введения препарата. Образцы плазмы, полученные путем центрифугирования при 4°С (1500-2000хд), хранят при -20°С до проведения анализа с помощью ЬС/М8/М8.
Фармакокинетика однократного введения у обезьян.
Фармакокинетику различных тестируемых соединений изучают на самцах макак Супото1ди§ в перекрестном исследовании. Обезьян не кормят в течение ночи перед пероральным введением препарата и кормят через 4 ч после введения. Группа из 1-3 животных (от 3 до 5 кг) получает соединение путем IV инфузии (в течение 10 мин) через бедренную вену и через желудочный зонд с однонедельным перерывом между курсами лечения. Последовательные образцы крови получают из бедренной артерии через 0,17 (только для IV введения); 0,25; 0,5; 0,75; 1; 2; 4; 6; 8 и 24 ч после введения препарата и центрифугируют при 4°С (1500-2000хд), чтобы получить плазму. Образцы хранят при -20°С до проведения анализа с помощью ЬС/М8/М8.
- 57 016563
Анализ данных фармакокинетических исследований.
Параметры фармакокинетики получают посредством анализа без компартментализации зависимости концентрации в плазме от времени (программное обеспечение КЖЕТ1СА™, версия 4.2, 1ппаРЕаке СогрогаПоп, РЫ1абе1рЫа, РА). Пиковую концентрацию (Стах) и время для достижения Стах записывают напрямую из экспериментальных наблюдений. Площадь под кривой от нулевой отметки до времени последнего взятия образца (АИС(О-Т)) подсчитывают с помощью комбинации линейной и логарифмической трапециевидной суммации. Общий клиренс плазмы (СЬТр), объем распределения стабильного состояния (Укк), предполагаемое время полувыведения (Т 1/2) и среднее время пребывания (МКТ) оценивают после IV введения. Оценки Т1/2 производят, используя минимум 3 временные точки с количественно измеряемыми концентрациями. Абсолютная пероральная биодоступность (Р) оценивается как отношение нормализованных по дозе значений площади под кривой после перорального и IV введения.
Ниже приведены данные для каждого соединения, полученные в исследованиях, описанных выше.
Таблица 10
Сравнительные данные ш νίΙΐΌ
Соединение ССК2 связывание, 1СИ (нМ) ЬЕКС ток, 1С?(1 (нМ) Связывание каналов (% ингибирования) РАМРА проницаемость (нм/сек)
Пример 12а5, 9/02005021500 0.27(7) 2,800 Нет данных Нет данных
Пример 12а| 9/02005021500 0.43 ± 0.06 (2) 770 Нет данных Нет данных
Пример 2к Ψ02005021500 0.88 ±0.60 (23) 51,000 97%, ΙΟ,ΟΟΟηΜ 529 ±157 (9)
Пример 12Μ 9/02005021500 1.15 ±0.07 (2) >80,000 54%, 10,000 нМ 392
Пример 8а 9/02005021500 1.83 ±0.80 (72) >80,000 3%, 10,000 нМ 33%, 30,000 нМ 94 ±58(70)
Пример 8е, 9/02005021500 2.20 ±0.03 (2) >80,000 6%, ΙΟ,ΟΟΟηΜ 2±2(2)
Пример 9с, 9/02005021500 0.96 ±0.26 (19) >80,000 48%, ΙΟ,ΟΟΟηΜ 75%, 30,000 нМ 145 ±71 (8)
Пример 1, настоящее изобретение 2.74 ±1.34(15) >80,000 13%, ΙΟ,ΟΟΟηΜ 32%, 30,000 нМ 560 ± 86 (5)
Таблица 11а
Дополнительные сравнительные данные ш νίΙΐΌ
Соединение ССК2 хемотаксис, 1С50 (нМ) фиксация потенциала ЪЕКС (% ингибирования) фиксация потенциала Ма+ канала (% ингибирования)
Пример 2к 9/02005021500 0.24 ±0.16 (72) 83%, ΙΟ,ΟΟΟηΜ 52%, 10,000 нМ 90%, 30,000 нМ
Пример 8а 9/02005021500 2.63 ±1,24 (4) 4%, ΙΟ,ΟΟΟηΜ 22%, ΙΟ,ΟΟΟηΜ 49%, 30,000 нМ
Пример 9с, Ψ02005021500 0.21 4%, ΙΟ,ΟΟΟηΜ 19%, 10,000 нМ 39%, 30,000 нМ
Пример 1. настоящее изобретение 0.75 ±0.42 (76) 12%, ΙΟ,ΟΟΟηΜ 19%, 30,000 нМ 29%, 30,000 нМ
Таблица 11Ь
Сравнительные фармакокинетические данные ш у1уо у крыс
Соединение Доза 1У/РО (мг/кг) С1 (мл/мнн/кг) Г% Пероральная АИС (нМ*ч)
Пример 2к 9/02005021500 2.5/25 40 68 9294
Пример 8а Ψ02005021500 6/72 42 1.4 690
Пример 9с, 4/43 54 14 1855
9/02005021500
Пример 1, Настоящее изобретение 2/10 25 79 10169
- 58 016563
Таблица 11с Сравнительные фармакокинетические данные ίη νίνο у обезьян
Соединение Доза ΐν/ΡΟ (мг/кг) С1 (мл/мин/кг) Р% Пероральная АиС (иМ‘ч)
Пример 2к ^02005021500 1/1.4 25 46 862
Пример 8а Υ/02005021500 1/11 14 9.4 1896
Пример 9с, ЧУ02005021500 1/10 12 26 6763
Пример 1, Настоящее изобретение 1/1 12 95 2352
Применение
Показательные соединения примеров являются модуляторами активности хемокиновых рецепторов, как было продемонстрировано в исследованиях, известных специалисту в данной области. В этом разделе авторы описывают такие исследования и приводят литературные ссылки на них. Еще исследования описаны в разделе, озаглавленном Сравнительные фармакологические характеристики, см. выше. Путем демонстрации активности в этих исследованиях антагонизма МСР-1 соединения примеров, как ожидается, будут полезны в лечении заболеваний человека, связанных с хемокинами и их когнатными рецепторами. По определению, активностью в этих исследованиях обладает соединение, демонстрирующее Κ\0 30 мкМ или ниже в концентрации при измерении в конкретном исследовании.
Антагонизм связывания МСР-1 с клетками РВМС человека (УокЫтига с1 а1. Е ^типоГ 1990, 145, 292).
По крайней мере одно соединение, описанное в примерах, обладает активностью антагонизма связывания МСР-1 с клетками РВМС человека (мононуклеарными клетками периферической крови человека), описанными в настоящем изобретении.
Фильтровальные планшеты М1Шротс (#МΑВVN1250) обрабатывают 100 мкл буфера связывания (0,5% альбумина бычьей сыворотки, 20 мМ буфера НЕРЕ8 и 5 мМ магния хлорида в среде КРМI 1640) в течение 30 мин при комнатной температуре. Чтобы измерить связывание, 50 мкл буфера связывания с или без известной концентрации соединения совмещают с 50 мкл меченого 125Ьчеловеческого МСР-1 (для получения конечной концентрации радиолиганда 150 пМ) и 50 мкл буфера связывания, содержащего 5х105 клеток. Клетки, используемые для таких исследований связывания, могут включать мононуклеарные клетки периферической крови человека, выделенные с помощью градиентного центрифугирования Е1со11-Нурадие, моноциты человека (ХУстсг с1 а1., Е Iттиηο1. МсШобк. 1980, 36, 89) или клеточную линию ТНР-Г которая экспрессирует эндогенный рецептор. Смесь соединения, клеток и радиолиганда инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин. Планшеты помещают на вакуумное устройство, применяют вакуум и планшеты отмывают трижды буфером связывания, содержащим 0,5 М №С1. Пластиковый фартук удаляют с планшета, планшет высушивают на воздухе, лунки выбивают и подсчитывают импульсы. Процент ингибирования связывания подсчитывают, используя общее число импульсов, полученных в отсутствие какого-либо конкурирующего соединения и фоновое связывание определяют путем добавления 100 нМ МСР-1 вместо тестируемого соединения.
Антагонизм МСР-1-индуцированного тока кальция (8и11кап, е1 а1. Мс11юб5 Мо1. Вю1, 114, 125-133 (1999).
По крайней мере одно соединение, описанное в примерах, обладает активностью антагонизма МСР-1-индуцированного тока кальция, описанного в настоящем изобретении.
Мобилизацию кальция измеряют, используя флуоресцентный краситель, индикатор Са2+, Е1ио-3. Клетки инкубируют при 8х105 клеток/мл в забуференном фосфатом физиологическом растворе, содержащем 0,1% альбумин бычьей сыворотки, 20 мМ буфера НЕРЕ8, 5 мМ глюкозы, 1% фетальной бычьей сыворотки, 4 мкМ Е1ио-3 АМ и 2,5 мМ пробенецида, в течение 60 мин при 37°С. Клетки, используемые для таких исследований кальция, могут включать моноциты человека, выделенные, как это описано ХУстсг с! а1., Е ТттипоЕ МсШобк, 36, 89-97 (1980), или клеточные линии, которые экспрессируют эндогенный рецептор ССК-2, такой как ТНР-1 и МопоМас-6. Клетки затем отмывают трижды в забуференном фосфатом физиологическом растворе, содержащем 0,1% альбумин бычьей сыворотки, 20 мМ НЕРЕ8, 5 мМ глюкозы и 2,5 мМ пробенецида. Клетки ресуспендируют в забуференном фосфатом физиологическом растворе, содержащем 0,5% альбумин бычьей сыворотки, 20 мМ НЕРЕ8 и 2,5 мМ пробенецида при конечной концентрации 2-4х106 клеток/мл. Клетки высевают на 96-луночные микропланшеты с черными стенками (100 мкл/лунка) и планшеты центрифугируют при 200хд в течение 5 мин. Различные концентрации соединения добавляют в лунки (50 мкл/лунка) и через 5 мин 50 мкл/лунка МСР-1 добавляют для получения конечной концентрации 10 нМ. Мобилизацию кальция определяют с помощью флуоресцентного планшет-ридера. Монослой клеток возбуждают аргоновым лазером (488 нм) и связанную с клетками флуоресценцию измеряют в течение 3 мин (каждую секунду в течение первых 90 с и каждые 10 с в
- 59 016563 течение следующих 90 с). Данные выражают как произвольные единицы измерения флуоресценции и изменение флуоресценции в каждой лунке, определенное как разница максимума и минимума. Зависимое от соединение ингибирование подсчитывают относительно ответа только на МСР-1.
Антагонизм МСР-1-индуцированного хемотаксиса клеток РВМС человека (Васоп е1 а1., Вп1. I. Рйагшасо1. 1988, 95, 966).
По крайней мере одно соединение, описанное в примерах, обладает активностью антагонизма МСР-1-индуцированного хемотаксиса клеток РВМС человека, описанного в настоящем изобретении.
№игоргоЬе МВА96-96-луночная камера хемотаксиса, Ро1уй1йошск МРС 96-луночный планшет и №игоргоЬе поликарбонатные 8-микронные фильтры без поливинилпирролидона РЕЭ5 подогревают в инкубаторе 37°С. Мононуклеарные клетки периферической крови человека (РВМС) (Воуит е1 а1., 8сапб. I. С1т. ЬаЬ ЕкекЕ 8ирр1. 1968, 97, 31), только что выделенные с помощью стандартного метода разделения в градиенте плотности в фиколле, суспендируют в ЭМЕМ при 1х 107 клеток/мл и согревают до 37°С. 60 нМ раствора МСР-1 человека также подогревают до 37°С. Разведения тестируемых соединений проводят при 2-кратной концентрации, необходимой для ЭМЕМ. Суспензию РВМС и раствор 60 нМ МСР-1 смешивают 1:1 в полипропиленовых пробирках с предварительно подогретой ЭМЕМ с или без разбавления тестируемых соединений. Эти смеси подогревают до 37°С в нагревателе пробирок. Для запуска исследования добавляют смесь МСР-1/соединение в лунки Ро1уй1йошск МРС 96-луночного планшета, который помещают в нижнюю часть камеры хемотаксиса №игоргоЬе. Приблизительный объем составляет 400 мкл в каждой лунке и должен быть положительный мениск после внесения растворов. 8-микронный фильтр аккуратно помещают сверху на 96-луночный планшет, резиновый уплотнитель прикрепляют ко дну верхней камеры и камеру собирают. Объем 200 мкл смеси клеточная суспензия/соединение добавляют в соответствующие лунки верхней камеры. Верхнюю камеру накрывают герметизирующей крышкой и собранное устройство помещают в 37°С инкубатор на 45 мин. После инкубации герметизирующую крышку удаляют и оставшуюся клеточную суспензию аспирируют. Камеру разбирают и фильтр аккуратно извлекают. Пока фильтр держат под углом 90°, немигрировавшие клетки смывают с помощью слабой струи забуференного фосфатом физиологического раствора и верх фильтра стирают с помощью кончика резинового ракеля. Повторяют этап смывания еще два раза. Фильтр высушивают на воздухе и затем полностью погружают в краситель Апд111 Се1тка на 45 с. Затем фильтр отмывают путем замачивания в дистиллированной воде в течение 7 мин и затем дополнительного 15 с полоскания в свежей дистиллированной воде. Фильтр снова высушивают на воздухе. Мигрировавшие клетки на фильтры определяют количественно с помощью визуальной микроскопии.
Хемокиновые рецепторы млекопитающих представляют собой мишень для нарушения или стимулирования функционирования иммунных клеток у млекопитающих, таких как человек. Соединения, которые ингибируют или стимулируют функцию хемокиновых рецепторов, особенно полезны для модулирования функции иммунных клеток с терапевтическими целями. Соответственно, настоящее изобретение предусматривает соединения, которые полезны в профилактике и/или лечении широкого спектра воспалительных, инфекционных и иммунорегуляторных расстройств и заболеваний, включая астму и аллергические болезни, инфекцию патогенными микробами (которые, по определению, включают вирусы), так же как и аутоиммунные заболевания, такие как ревматоидный артрит и атеросклероз.
Например, конкретное соединение, которое ингибирует одну или более функций хемокинового рецептора млекопитающего (например, хемокинового рецептора человека), может быть введено, чтобы ингибировать (т.е. снизить или предотвратить) воспалительное или инфекционное заболевание. В результате подавляется один или более воспалительных процессов, таких как миграция лейкоцитов, адгезия, хемотаксис, экзоцитоз (например, ферментов, гистамина) или высвобождение медиаторов воспаления.
Сходным образом, данное соединение стимулирует одну или более функций хемокинового рецептора млекопитающего (например, хемокин человека) при введении, чтобы стимулировать (вызывать или усиливать) иммунный или воспалительный ответ, такой как миграция лейкоцитов, адгезия, хемотаксис, экзоцитоз (например, ферментов, гистамина) или высвобождение медиаторов воспаления, что приводит к полезной стимуляции воспалительных процессов. Например, эозинофилы могут быть привлечены для борьбы с паразитарными инвазиями. Кроме того, лечение вышеуказанных воспалительных, аллергических и аутоиммунных заболеваний может также рассматриваться для текущего соединения, которое стимулирует одну или более функций хемокинового рецептора млекопитающего, если это подразумевает доставку достаточного количества соединения, чтобы вызвать потерю экспрессии рецептора на клетках посредством индукции интернализации хемокиновых рецепторов или доставку соединения таким способом, который приводит к ошибочному направлению миграции клеток.
Наряду с приматами, такими как люди, множество других млекопитающих может быть пролечено согласно способу настоящего изобретения. Например, млекопитающие, включая, помимо прочего, коров, овец, коз, лошадей, собак, кошек, морских свинок, крыс или других видов семейств бычьих, овечьих, лошадиных, собачьих, кошачьих, грызунов или мышиных, могут быть пролечены. Тем не менее способ может также быть применен на практике у других видов, таких как биологические виды птиц. Субъект,
- 60 016563 пролеченный по способам, описанным выше, является млекопитающим, самцом или самкой, у которого модуляция активности хемокиновых рецепторов является желательной. Модуляция при использовании в данном описании предназначена для обозначения антагонизма, агонизма, частичного антагонизма и/или частичного агонизма.
Связывание ССВ5 и функциональные исследования.
Получение клеток и клеточная культура.
Пул клеток НТ1080, стабильно экспрессирующих эндогенный СС хемокиновый рецептор 5 (ССВ5) разрабатывают с помощью способов, кратко изложенных Натпд!оп, 8кег£, и Випб1е!! (см. патенты США и8 6361972 и и8 6410266). Клоны с наибольшей экспрессией изолируют при помощи повторяющейся проточной цитометрии, после чего субклонируют. Эти клетки затем культивируют в 6-луночных чашках с плотностью 3x105 клеток/лунка и трансфицируют ДНК вектором, содержащим химерный НА-меченный С-белок Сс.|15 (Мо1еси1аг Оеуюез; 5 мкг линеаризованного вектора ДНК в 15 мкл Ех-Сеп от Бегтеп!ез используется для трансфекции). Через 2 дня после трансфекции лунки совмещают и высевают в планшеты Р100. Через 7 дней после высевания колонии собирают, расширяют и анализируют на содержание Сс.||5 методом \Уез1егп Ь1о!. Клон (обозначенный как 3559.1.6), обладающий высокой экспрессией Сс.||5 (за счет трансфекции) и ССВ5 (эндогенно), был выбран и используется в экспериментах, описанных ниже. Клетки НТ1080 (клон 3559.1.6) культивируют с альфа-МЕМ, с добавлением 10% диализированной фетальной бычьей сыворотки, 2% пенициллин/стрептомицин/глутамин и 500 мкг/мл гигромицина В (конечная концентрация) при 37°С с 5% СО2 в увлажненной атмосфере.
Приготовление мембран.
Осадок клеток, содержащий Ы108 клеток НТ1080 (клон 3559.1.6), ресуспендируют в 5 мл ледяного буфера МетЬгапе Ргер (50 мМ НЕРЕ8, 5 мМ МдС12, 1 мМ СаС12) и гомогенизируют на высокой скорости в гомогенизаторе Ро1у!гоп в течение 20 с на льду. Гомогенат разбавляют с другими 25 мл буфера МетЬгапе Ргер и центрифугируют в течение 12 мин (48,000xд при 4°С). Осадок клеток ресуспендируют в 5 мл буфера МетЬгапе Ргер перед регомогенизацией, как описано ранее. Гомогенат разбавляют 5 мл буфера МетЬгапе Ргер и исследуют на концентрацию белка ССВ5.
Исследование связывания.
Свежеприготовленный гомогенат из вышеописанного этапа Приготовление мембран разбавляют в буфере связывания (50 мМ НЕРЕ8, 5 мМ МдС12, 1 мМ СаС12, 0,1% В8А; одну таблетку полного ингибитора протеазы добавляют перед исследованием), чтобы получить конечную концентрацию белка 10 мкг/лунка (твердые белые 96-луночные планшеты от Согшпд, Ыс.). Этот препарат мембран смешивают с гранулами ^СА-8РА (Атегкзат; предварительно смоченные в буфере связывания), чтобы получить концентрацию 200 мкг/лунка. Смесь мембрана/8РА гранулы (100 мкл/лунка) затем добавляют к планшету, на который предварительно точечно наносят 2 мкл ДМСО, содержащего различные концентрации тестируемых образцов (чистый ДМСО в качестве отрицательного контроля; различные концентрации примеров этого изобретения в качестве тестируемых образцов; 500 нМ МГР-1 бета в качестве положительного контроля). Исследование связывания запускают посредством добавления 50 мкл [^Ц-ШРП бета (Регкт Е1тег; материал разбавляют в буфере связывания, так что добавление 50 мкл/лунка приводит к конечной концентрации 0,1 нМ [^Ц-МкР-Б бета). Планшет запечатывают и оставляют при комнатной температуре на 4-6 ч перед тем, как считать на устройстве Раскагб ТорСоип!. Пределы содержания тестируемых образцов подсчитывают, используя отрицательный и положительный контроли, чтобы определить окно для каждого эксперимента.
Функциональное исследование, основанное на флуоресцентном планшет-ридере (БЫРВ).
Клетки НТ1080 (клон 3559.1.6) высевают с плотностью 10,000 клеток/лунка (30 мкл) в 384-луночные планшеты (с черным/чистым дном Вюсоа! РЭК Веск!оп ПБскБпзоп) и загружают 30 мкл/лунка флуоресцентным красителем Б1иго-4 АМ (приготовлен путем растворения 1 мг Б1иго-4 АМ в 440 мкл ДМСО и разбавления 100 мкл раствора плюроника перед дальнейшим разбавлением 10 мл буфера Напкз). Клетки инкубируют при 37°С с 5% СО2 в течение 30 мин перед тем, как отмывают трижды, и суспендируют в буфере исследования (20 мМ НЕРЕ8, 1,2 мМ СаС12, 5 мМ МдС12, 2,5 мМ пробенецида, 0,5% В8А, ЫНапкз). Тестируемый образец последовательно разбавляют в ДМСО и затем разбавляют 1:10 буфером исследования, перед тем как добавить к клеткам (10 мкл/лунка). Используя БЫРВ, планшеты считывают (10-70 с) на индукцию тока (т.е. активность агониста). Клетки затем еще загружают раствором агониста (30 мкл/лунка; приготовленный путем разбавления 30 мкл 100 мкМ МБР-1 бета в 100 мл буфера исследования; этот протокол приводит к конечной концентрации 5 нМ МЫ-1 бета в исследовании) и планшеты считывают, используя БЫРВ, в течение 1 мин. Активность антагониста тестируемого образца определяют относительно 0,4% отрицательного контроля ДМСО/буфер.
По крайней мере одно соединение из раскрытых является ингибитором и ССВ-2 и ССВ5 и может быть использовано для лечения заболеваний, связанных с любым из этих хемокинов. Соединения по настоящему изобретению считаются двойными антагонистами.
- 61 016563
Заболевания или состояния человека или других биологических видов, которые могут быть пролечены ингибиторами функции хемокиновых рецепторов, включают, помимо прочего, воспалительные или аллергические заболевания и состояния, включая аллергические болезни дыхательной системы, такие как астма, аллергический ринит, болезни гиперчувствительности легких, гиперчувствительный пневмонит, эозинофильный целлюлит (например, синдром Уэлла), эозинофильные пневмонии (например, синдром Леффлера, хроническая эозинофильная пневмония), эозинофильный фасциит (например, синдром Шульмана), гиперчувствительность замедленного типа, интерстицильные болезнь легких (ШЭ) (например, идиопатический фиброз легких или ΙΕΌ, связанные с ревматоидным артритом, системной красной волчанкой, анкилозирующим спондилитом, системным склерозом, синдром Шегрена, полимиозитом или дерматомиозитом); системные анафилактические или гиперчувствительные реакции, лекарственные аллергии (например, на пенициллин, цефалоспорины), синдром эозинофилии-миалгии, обусловленный приемом контаминированного триптофана, аллергии на укус насекомых; аутоиммунные заболевания, такие как ревматоидный артрит, псориатический артрит, рассеянный склероз, системная красная волчанка, злокачественная миастения, ювенильный диабеты; гломерулонефрит, аутоиммунный тиреоидит, болезнь Бечета; отторжение трансплантата (например, при трансплантации), включая отторжение аллотрансплантата или болезнь трансплантат против хозяина; воспалительные заболевания кишечника, такие как болезнь Крона и язвенный колит; спондилоартропатии; склеродермия; псориаз (включая опосредованный Т-клетками псориаз) и воспалительные дерматозы, такие как дерматит, экзема, атопический дерматит, аллергический контактный дерматит, крапивница; васкулит (например, некротизирующий, кожный и гиперчувствительный васкулит); эозинофильный миозит, эозинофильный фасциит; раки с лейкоцитарной инфильтрацией кожи или органов. Другие заболевания или патологические состояния, при которых нежелательные воспалительные реакции должны быть подавлены, могут быть пролечены, включая помимо прочего васкулит, нестабильные бляшки, гиперплазию венозной неоинтимы при реперфузионном повреждении, гиперплазию неоинтимы диализ-трансплантата, гиперплазию интимы артериовенозного шунта, атеросклероз, некоторые гематологические злокачественные новообразования, цитокин-индуцированную токсичность (например, септический шок, эндотоксический шок), полимиозит, дерматомиозит. Инфекционные заболевания или состояния человека или других видов, которые могут быть пролечены ингибиторами функции хемокиновых рецепторов, включают помимо прочего ВИЧ.
Заболевания или патологические состояния людей или других биологических видов, которые могут быть пролечены стимуляторами функции хемокиновых рецепторов, включают, помимо прочего, иммуносупрессию, такую как у индивидуумов с синдромами иммунодефицита, такого как СПИД или другие вирусные инфекции, у индивидуумов, подвергшихся лучевой терапии, химиотерапии, терапии по поводу аутоиммунного заболевания, или лекарственной терапии (например, кортикостероидная терапия), которая вызывает иммуносупрессию; иммуносупрессия вследствие врожденного дефицита функции рецептора или другой этиологии; и инфекционные заболевания, такие как паразитические болезни, включая, помимо прочего, гельминтные инвазии, такие как нематоды (круглые черви); (трихоцефалез, энтеробиаз, аскаридоз, анкилостомоз, стронгилоидоз, трихинеллез, филяриоз); трематоды (плоские черви) (шистосомоз, клонорхоз), цестоды (ленточные черви) (эхинококкоз, тениоз, цистицеркоз); висцеральные черви, мигрени вследствие висцеральных личинок (например, токсокароз), эозинофильный гастроэнтерит (например, Ашкак! §р., РНосапета ер.), мигрени вследствие кожных личинок (Апсу1оз!ота Ь^Шепзе, Апсу1оз!ота сашпцт). Соединения по настоящему изобретению соответственно полезны в профилактике и лечении широкого спектра воспалительных, инфекционных и иммунорегуляторных расстройств и заболеваний.
Кроме того, лечение вышеуказанных воспалительных, аллергических и аутоиммунных заболеваний может также рассматриваться для стимуляторов функции хемокиновых рецепторов, если это подразумевает доставку достаточного количества соединения, чтобы вызвать потерю экспрессии рецептора на клетках посредством индукции интернализации хемокиновых рецепторов или доставки соединения таким образом, который приводит к ошибочному направлению миграции клеток.
В другом аспекте данное изобретение может быть использовано для оценки предполагаемых специфических агонистов или антагонистов рецептора, сопряженного с С-белком. Настоящее изобретение направлено на применение этих трех соединений в приготовлении и проведении скрининговых исследований для соединений, которые модулируют активность хемокиновых рецепторов. Более того, соединения по этому изобретению полезны в создании или определении места связывания других соединений с хемокиновыми рецепторами, например, путем конкурентного ингибирования или в качестве ссылки на источник в исследовании сравнения его известной активности и соединения с неизвестной активностью. При разработке новых исследований или протоколов, соединения согласно настоящему изобретению могут быть использованы для проверки их плотности. В частности, такие соединения могут быть представлены в коммерческом наборе, например, для применения в фармацевтическом исследовании, изучающем вышеуказанные заболевания. Соединения по данному изобретению также полезны для оценки предполагаемых специфических модуляторов хемокиновых рецепторов. Кроме того, можно применять соединения по данному изобретению для изучения специфичности рецепторов, сопряженных с С-белком, которые не представляются хемокиновыми рецепторами служат, либо в качестве примеров
- 62 016563 соединений, которые не связываются, либо в качестве структурных вариантов соединений, активных в отношении этих рецепторов, которые могут помочь обнаружить специфические сайты взаимодействия.
Соединения, раскрытые в настоящем изобретении, являются полезными для лечения или профилактики расстройств, выбранных из следующих: ревматоидный артрит, остеоартроз, септический шок, атеросклероз, аневризма, лихорадка, сердечно-сосудистые действия, гемодинамический шок, септический синдром, постишемическое реперфузионное повреждение, малярия, болезнь Крона, воспалительные заболевания кишечника, микобактериальная инфекция, менингит, псориаз, застойная сердечная недостаточность, фибротические болезни, кахексия, отторжение трансплантата, аутоиммунные заболевания, кожные воспалительные заболевания, рассеянный склероз, лучевое повреждение, гипероксическое повреждение альвеол, ВИЧ, ВИЧ-деменция, инсулиннезависимый сахарный диабеты, астма, аллергический ринит, атопический дерматит, идиопатический фиброз легких, буллезный пемфигоид, гельминтные паразитарные инвазии, аллергический колит, экзема, конъюнктивит, трансплантация, семейная эозинофилия, эозинофильный целлюлит, эозинофильные пневмонии, эозинофильный фасциит, эозинофильный гастроэнтерит, лекарственная эозинофилия, муковисцидоз, синдром Черджа-Стросс, лимфома, болезнь Ходжкина, рак ободочной кишки, синдром Фелти, саркоидоз, увеит, болезнь Альцгеймера, гломерулонефрит и системная красная волчанка, плоскоклеточный рак пищевода, нейропатическая боль и ожирение.
В другом аспекте соединения полезны в лечении или профилактике воспалительных расстройств, выбранных из ревматоидного артрита, остеоартроза, атеросклероза, аневризмы, лихорадки, сердечнососудистых реакций, болезни Крона, воспалительных заболеваний кишечника, псориаза, застойной сердечной недостаточности, рассеянного склероза, аутоиммунных заболеваний, воспалительных заболеваний кожи.
В другом аспекте эти соединения применимы для лечения или профилактики воспалительных расстройств, выбранных из ревматоидного артрита, остеоартроза, атеросклероза, болезни Крона, воспалительных заболеваний кишечника и рассеянного склероза.
В другом аспекте примеры, раскрытые в данном описании, могут быть полезны в лечении множества раков, включая помимо прочего следующие:
Рак, включая рак мочевого пузыря (включая прогрессирующий и метастатический рак мочевого пузыря), молочной железы, толстой кишки (включая колоректальный рак), почки, печени, легкого (включая мелкоклеточный и немелкоклеточный рак легкого и аденокарциному легкого), яичников, предстательной железы, яичек, мочеполового тракта, лимфатической системы, прямой кишки, гортани, поджелудочной железы (включая рак экзокринной части поджелудочной железы), пищевода, желудка, желчного пузыря, шейки матки, щитовидной железы и кожи (включая плоскоклеточный рак); гематопоэтические опухоли лимфоидного ростка, включая лейкоз, острый лимфолейкоз, острый лимфобластный лейкоз, Вклеточную лимфому, Т-клеточную лимфому, ходжкинскую лимфому, неходжкинскую лимфому, волосатоклеточную лимфому, гистиоцитарную лимфому и лимфому Беркитта; гематопоэтические опухоли миелоидного ростка, включая острый и хронический миелолейкозы, миелодиспластический синдром, миелоидный лейкоз и промиелоцитарный лейкоз; опухоли центральной и периферической нервной системы, включая астроцитому, нейробластому, глиому и шванному; опухоли мезенхимального происхождения, включая фибросаркому, рабдомиосаркому и остеосаркому; и другие опухоли, включая меланому, пигментную ксенодерму, кератоакантому, семиному, фолликулярный рак щитовидной железы и тератокарциному.
В другом воплощении раскрытыми в настоящем изобретении являются способы лечения рака, при котором рак выбран из рака молочной железы, рака печени, рака предстательной железы и меланомы. Кроме того, соединения, раскрытые в настоящем изобретении, могут быть использованы в лечении рака яичников и множественной миеломы.
Настоящее изобретение предусматривает способы лечения множества нераковых пролиферативных заболеваний.
Комбинированная терапия для профилактики и лечения воспалительных, инфекционных и иммунорегуляторных расстройств и заболеваний, включая астму и аллергические болезни, так же как и аутоиммунные заболевания, такие как ревматоидный артрит и атеросклероз, и те заболевания, отмеченные выше, иллюстрируются комбинацией соединений по данному изобретению и других соединений, которые известны таким применением. Например, в лечении или профилактики воспаления настоящие соединения могут применяться в сочетании с противовоспалительным или обезболивающим агентом, таким как опиатный агонист, ингибитор липоксигеназы, ингибитор циклооксигеназы-2, ингибитор интерлейкина, такой как ингибитор интерлейкина-1, ингибитор фактора некроза опухоли, антагонист №МЭА, ингибитор оксида азота или ингибитор синтеза оксида азота, нестероидный противовоспалительный агент, ингибитор фосфодиэстеразы, или цитокинсупрессирующий противовоспалительный агент, например, с соединением, таким как ацетаминофен, аспирин, кодеин, фентанил, ибупрофен, индометацин, кеторолак, морфин, напроксен, фенацетин, пироксикам, стероидный анальгетик, суфентанил, сунлиндак, интерферон-альфа и т. п. Аналогично, данные соединения могут быть введены с ослабляющим боль средством; потенцирующее средство, такое как кофеин, Н2-антагонист, симетикона, гидроксида алюминия или магния; деконгестант, такой как фенилэфрин, фенилпропаноламин, псевдофедрин, оксиметазолин, эпинеф
- 63 016563 рин, нафазолин, ксилометазолин, пропилгекседрин или леводезокси-эфедрин; и противокашлевое средство, такое как кодеин, гидрокодон, карамифен, карбетапентан или декстраметорфан; диуретик; антигистаминное средство с седативным эффектом и без него.
Также соединения, раскрытые в настоящем изобретении, могут применяться в комбинации с другими лекарственными средствами, которые применяются в лечении/профилактике/подавлении или облегчении заболеваний или патологических состояний, по поводу которых соединение по настоящему изобретению применяется. Такие другие лекарственные средства могут быть введены таким путем и в таком количестве, которые обычно используются, одновременно или последовательно с соединением по настоящему изобретению. Когда соединение применяется одновременно с одним или более другими лекарственными средствами, фармацевтическая композиция, содержащая эти другие лекарственные средства в дополнение к соединению по настоящему изобретению, могут применяться. Соответственно, фармацевтические композиции включают те, что также содержат один или более других активных ингредиентов, в дополнение к соединению по настоящему раскрытию.
Примеры других активных ингредиентов, которые могут быть комбинированы с соединением по настоящему изобретению, либо вводимые отдельно, либо в тех же фармацевтических композициях, включают, помимо прочего:
(a) антагонисты интегрина, такие как антагонисты селектинов, Κ',ΆΜδ и УВА-4;
(b) стероиды, такие как беклометазон, метилпреднизолон, бетаметазон, преднизон, дексаметазон и гидрокортизон;
(c) иммуносупрессанты, такие как циклоспорин, такролимус, рапамицин и другие иммуносупрессанты типа ΡΚ-506;
(б) антигистаминные средства (Ш-гистаминовые антагонисты) такие как бромфенирамин, хлорфенирамин, дексхлорфенирамин, трипролидин, клемастин, дифенгидрамин, дифенилпиралин, трипеленнамин, гидроксизин, метдилазин, прометазин, тимепразин, азатадин, ципрогептадин, антазолин, фенирамина пириламин, астемизол, терфенадин, лоратадин, цетиризин, фексофенадин, дезкарбоэтоксилоратодин, и т. п.;
(е) нестероидные противоастматические средства, такие как Ь2-агонисты (тербуталин, метапротеренол, фенотерол, изоэтарин, альбутерал, битолтерол и пирбутерол), теофиллин, кромолин-натрий, атропин, ипратропия бромид, антагонисты лейкотриенов (зафирлукаст, монтелукаст, пранлукаст, иралукаст, побилукаст, §ΚΒ-102,203), ингибиторы биосинтеза лейкотриенов (зилеутон, ВАУ-1005);
(Γ) нестероидные противовоспалительные средства (ЖАЮ$), такие как производные пропионовой кислоты (альминопрофен, бенксапрофен, буклоксовая кислота, карпрофен, фенбуфен, фенопрофен, флупрофен, флурбипрофен, ибупрофен, индопрофен, кетопрофен, миропрофен, напроксен, оксапрозин, пирпрофен, пранопрофен, супрофен, тиапрофеновая кислота и тиоксапрофен), производные уксусной кислоты (индометацин, ацеметацин, алклофенак, клиданак, диклофенак, фенклофенак, фенклозовая кислота, фентиазак, фурофенак, ибуфенак, изоксепак, окспинак, сулиндак, тиопинак, толметин, зидометацин и зомепирак), производные фенамовой кислоты (флуфенамовая кислота, меклофенамовая кислота, мефенамовая кислота, нифлумовая кислота и толфенамовая кислота), производные дифенилкарбоновой кислоты (дифлунизал и флуфенизал), оксикамы (изоксикам, пироксикам, судоксикам и теноксикам), салицилаты (ацетилсалициловая кислота, сульфасалазин) и пиразолоны (апазон, безпиперилон, фепразон, мофебутазон, оксифенбутазон, фенилбутазон);
(д) ингибиторы циклооксигеназы-2 (СОХ-2);
(11) ингибиторы фосфодиэстеразы IV типа (ФДЭЛУ);
(ί) другие антагонисты хемокиновых рецепторов;
(ί) агенты, снижающие уровень холестерина, такие как ингибиторы ГМГ-КоА редуктазы (ловастатин, симвастатин, правастатин, флувастатин, аторвастатин и другие статины), секвестранты (холестирамин и колестипол), никотиновая кислота, производные фенофиброевой кислоты (гемфиброзил, клофибрат, фенофибрат и бензафибрат) и пробукол;
(k) противодиабетические агенты, такие как инсулин, препараты сульфонилмочевины, бигуаниды (метформин), ингибиторы а-глюкозидазы (акарбоза) и глитазонов (троглитазон и пиоглитазон);
(l) препараты интерферонов (интерферон альфа-2а, интерферон-2В, интерферон альфа-№, интерферон бета-1а, интерферон бета-1Ь, интерферон гамма-1Ь);
(т) противовирусные соединения, такие как эфавиренц, невирапин, индинамвир, ганцикловир, ламивудин, фамцикловир и зальцитабин;
(η) другие соединения, такие как 5-аминосалициловая кислота и его пролекарства, антиметаболиты, такие как азатиоприн и 6-меркаптопурин, а также цитотоксические агенты химиотерапии рака.
Пропорция по весу соединения по настоящему изобретению ко второму активному ингредиенту может варьировать и будет зависеть от эффективных доз каждого ингредиента.
В общем случае применяется эффективная доза каждого препарата. Так, например, когда соединение сочетают с НПВС, массовая пропорция соединения по настоящему изобретению и НПВС будет, как правило, находиться в диапазоне от около 1000:1 до около 1:1000 или, альтернативно, от около 200:1 до около 1:200. Комбинации соединения по настоящему изобретению и других активных ингредиентов бу
- 64 016563 дут, как правило, также находиться в вышеупомянутом диапазоне, но в каждом случае должна применяться эффективная доза каждого активного ингредиента.
При лечении рака комбинация химиотерапевтических агентов и/или других видов лечения (например, лучевая терапия) часто имеет преимущества. Второй (или третий) агент может иметь такой же или иной механизм действия относительно первого терапевтического агента. Возможно, в особенности полезно применять комбинации цитотоксических средств, в которых два или более средств при введении действуют разным образом или в разные фазы клеточного цикла, и/или когда два или более средств имеют перекрывающиеся токсичности или побочные эффекты, и/или когда эти средства при сочетании, каждый, демонстрируют эффективность в лечении конкретного заболевания, проявляющегося у пациента.
Соответственно, соединения, раскрытые в данном описании (или другие формулы, раскрытые в настоящем изобретении), могут вводиться в комбинации с другими противораковыми и цитотоксическими агентами и видами лечения, пригодными в лечении рака или других пролиферативных заболеваний. Изобретение также включает применение соединений, раскрытых в настоящем изобретении (или других формул, раскрытых в настоящем изобретении) для приготовления лекарств для лечения рака, и/или оно содержит упаковку настоящих соединений вместе с инструкциями того, что соединения применяются в комбинации с другими противораковыми или цитотоксическими агентами и видами лечения для лечения рака. Настоящее изобретение также включает комбинации соединений по изобретению одного или более дополнительных агентов в форме набора, например, когда они упакованы вместе или помещены в отдельные упаковки, чтобы быть проданы вместе в виде набора, или когда они упакованы для приготовления вместе.
Второй (или более) противораковый агент может быть выбран из одного или более нижеприведенных: алкилирующие агенты (включая производные азотистого иприта, алкилсульфонаты, препараты нитрозомочевины, производные этиленимина и триазены); антиангиогенные средства (включая ингибиторы матричной металлопротеиназы); антиметаболиты (включая ингибиторы аденозиндезаминазы, антагонисты фолиевой кислоты, аналоги пуринов и аналоги пиримидинов); антибиотики или антитела (включая моноклональные антитела, антитела СТЬА-4, антрациклины); ингибиторы ароматазы; модификаторы ответа клеточного цикла; ферменты; ингибиторы фарнезил-протеинтрансферазы; гормональные и антигормональные агенты и стероиды (включая синтетические аналоги, глюкокортикоиды, эстрогены/антиэстрогены [например, 8ЕКМк], андрогены/антиандрогены, прогестины, агонисты прогестероновых рецепторов и агонисты и антагонисты лютеотропин-рилизинг фактора [ЬНКН]); инсулиноподобный фактор роста (1СЕ)/модуляторы системы рецепторов к инсулиноподобному фактору роста (1СЕК) (включая ингибиторы 1СЕК1); ингибиторы интегриновой сигнализации; ингибиторы киназ (включая мультикиназные ингибиторы и/или ингибиторы 8гс киназы или 8гс/аЫ, ингибиторы циклин-зависимой киназы [СОК], пен-Нег, Нег-1 и Нег-2 антитела, ингибиторы УЕСЕ, включая анти-УЕСЕ антитела, ингибиторы ЕСЕК, ингибиторы митоген-активируемого белка [МАР], ингибиторы МЕК, ингибиторы киназы Аигога, ингибиторы РОСЕ и ингибиторы других тирозинкиназ или ингибиторы серин/треониновых киназ; разрушающие микротрубочки агенты, такие как эктеинасцидины или их аналоги или производные; агенты, стабилизирующие микротрубочки, такие как таксаны, и природные эпотилоны и их синтетические и полусинтетические аналоги; связывающие микротрубочки дестабилизирующие агенты (включая алкалоиды барвинка); и ингибиторы топоизомеразы; ингибиторы пренилпротеинтрансферазы; координационные комплексы платины; ингибиторы передачи сигналов; и другие агенты, используемые в качестве противораковых и цитотоксических агентов, такие как модификаторы биологического ответа, факторы роста и иммуномодуляторы.
Дополнительно, соединения по настоящему изобретению могут быть изготовлены или совместно введены с другими терапевтическими агентами, которые выбраны из-за их особенной полезности в отношении побочных эффектов, связанных с вышеупомянутыми обстоятельствами. Например, соединения по изобретению могут быть приготовлены с агентами для предотвращения тошноты, гиперчувствительности и раздражения желудка, такими как антиэметики, Н1 и Н2 антигистаминные средства. Вышеуказанные другие терапевтические агенты, когда применяются в комбинации с соединениями по настоящему изобретению, могут применяться, например, в тех количествах, которые указаны в РЬук^с^аηк' Эекк КсГсгспсс (РОК), или в ином случае, которые определены средним специалистом в данной области.
Соединения вводят млекопитающему в терапевтически эффективном количестве. Под терапевтически эффективным количеством понимают количество соединения по настоящему раскрытию, которое при введении в качестве монотерапии или в комбинации с дополнительным терапевтическим агентом млекопитающему эффективно в отношении профилактики или облегчения патологического состояния или прогрессирования заболевания.
- 65 016563
Дозировка и приготовление.
Соединения по данному раскрытию могут быть введены в таких пероральных лекарственных формах, как таблетки, капсулы (каждая из которых включает препараты с замедленным высвобождением и контролируемым по времени высвобождением), пилюли, порошки, гранулы, эликсиры, настойки, суспензии, сиропы и эмульсии. Они могут также быть введены в форме внутривенного (болюсного или инфузионного), интраперитонеального, подкожного или внутримышечного введения, все используемые лекарственные формы хорошо известны среднему специалисту в области фармацевтики. Они могут быть введены в чистом виде, но, как правило, будут вводиться с фармацевтическим носителем, выбранным на основании выбранного пути введения и обычной фармацевтической практики.
Режим дозирования для соединений по настоящему изобретению будет, несомненно, варьировать в зависимости от известных факторов, таких как фармакодинамические характеристики конкретного агента и его способа и пути введения; биологического вида, возраста, пола, общего состояния, сопутствующих заболеваний и веса реципиента; природы и выраженности симптомов; вида сопутствующего лечения; частоты лечения; пути введения; функции почек и печени пациента и желаемого эффекта. Лечащий врач или ветеринар может определить и назначить эффективное количество лекарственного средства, требуемого для предотвращения, противодействия или прекращения прогрессирования расстройства.
Следуя общим рекомендациям, суточная доза для перорального введения каждого активного ингредиента при использовании для развития указанных эффектов будет находиться в диапазоне между 0,001 и 1000 мг/кг массы тела, или между 0,01 и 100 мг/кг массы тела в день, или, альтернативно, между 1,0 и 20 мг/кг/день. Внутривенно дозы будут находиться в диапазоне от около 1 до около 10 мг/кг/мин при постоянной скорости инфузии. Соединения этого изобретения могут быть введены в однократной суточной дозе или общая суточная доза может быть введена, будучи разделенной на два, три или четыре введения в день. В одном воплощении суточная доза для перорального введения активного ингредиента находится между 3 и 600 мг, вводится либо один раз в сутки или разделенными дозами дважды в сутки. Альтернативно, активный ингредиент может быть введен в дозах 10-20 мг дважды в сутки или от 40 до 100 мг один раз в сутки. Альтернативно, активный ингредиент может быть введен в дозе 12,5 мг дважды в сутки или 75 мг один раз в сутки. Альтернативно, активный ингредиент может быть введен в дозах 3, 10, 30, 100, 300 и 600 мг либо в один, либо в два приема за сутки.
Соединения по настоящему изобретению могут быть введены в интраназальной форме посредством местного применения подходящих интраназальных носителей или посредством чрескожных путей, используя трансдермальные кожные пластыри. При введении в форме трансдермальной системы доставки, дозирование будет, конечно, скорее постоянным, нежели прерывистым на протяжении всего режима дозирования.
Соединения обычно вводятся в смеси с подходящими фармацевтическими разбавителями, наполнителями или носителями (в общем обозначаемые в настоящем изобретении, как фармацевтические носители), подходящим образом выбранными с учетом желаемой формы введения, которая может быть представлена таблетками, капсулами, эликсирами, сиропами и т.п., и согласуется с традиционной фармацевтической практикой.
Например, для перорального введения в форме таблетки или капсулы активный лекарственный компонент может быть комбинирован с принимаемым внутрь нетоксичным, фармацевтически приемлемым, инертным носителем, таким как лактоза, крахмал, сахароза, глюкоза, метилцеллюлоза, магния стеарат, дикальция фосфат, кальция сульфат, манит, сорбитол и т.п.; для перорального введения в жидкой форме принимаемые внутрь лекарственные компоненты могут быть комбинированы с любым принимаемым внутрь нетоксическим фармацевтически приемлемым инертным носителем, таким как этанол, глицерин, вода и т.п. Более того, при желании или необходимости, подходящие связывающие вещества, смазки, дезинтегрирующие агенты и красители могут также быть включены в смесь. Подходящие связывающие вещества включают крахмал, желатин, природные сахара, такие как глюкоза или бета-лактоза, сахаристое вещество кукурузы, природные и синтетические камеди, такие как гуммиарабик, трагакант или натрия альгинат, карбоксиметилцеллюлоза, полиэтиленгликоль, воска и т.п. Смазывающие вещества, применяемые в этих лекарственных формах, включают натрия олеат, натрия стеарат, магния стеарат, натрия бензоат, натрия ацетат, натрия хлорид и т. п. Дезинтеграторы включают помимо прочего крахмал, метилцеллюлозу, агар-агар, бентонит, ксантановую камедь и т.п.
Соединения по настоящему изобретению могут также быть введены в форме липосомальной системы доставки, такой как малые моноламеллярные везикулы, большие моноламеллярные везикулы и мультиламеллярные везикулы. Липосомы могут быть образованы множеством фосфолипидов, таких как холестерин, стеариламин или фосфатидилхолины.
Соединения по настоящему изобретению могут также быть совмещены с растворимыми полимерами, такими как носители нацеливаемых лекарств. Такие полимеры могут включать поливинилпирролидон, пиран сополимер, полигидроксипропилметакриламидфенол, полигидроксиэтиласпартамидфенол или полиэтиленоксид-полилизин замещенный остатками пальмитоила. Более того, соединения по настоящему изобретению могут быть совмещены с классом биодеградируемых полимеров, применимых для достижения контролируемого высвобождения лекарственного средства, например полимолочная
- 66 016563 кислота, полигликолевая кислота, сополимеры полимолочной и полигликолевой кислоты, полиэпсилонкапролактон, полигидроксимасляная кислота, полиортоэфиры, полиацетали, полидигидропираны, полицианоацилаты и сшитые или амфипатические блок-сополимеры гидрогелей.
Лекарственные формы (фармацевтические композиции), подходящие для введения, могут содержать от около 1 до около 100 мг активного ингредиента на единицу дозирования. В этих фармацевтических композициях активный ингредиент будет обычно представлен в количестве около 0,5-95 мас.% относительно общего веса композиции.
Желатиновые капсулы могут содержать активный ингредиент и порошковые носители, такие как лактоза, крахмал, производные целлюлозы, магния стеарат, стеариновая кислота и т.п. Сходные разбавители могут быть использованы для создания прессованных таблеток. Таблетки и капсулы могут быть произведены в виде продуктов с замедленным высвобождением для обеспечения длительного высвобождения лекарственного средства на протяжении нескольких часов. Прессованные таблетки могут быть покрыты сахаром или пленкой, чтобы скрыть любой неприятный вкус и защитить таблетку от атмосферы, или кишечно-растворимой оболочкой для избирательного расщепления в желудочно-кишечном тракте.
Жидкие лекарственные формы для перорального введения могут содержать красители и ароматизаторы для повышения органолептических свойств.
Как правило, вода, подходящее масло, физиологический раствор, водная декстроза (глюкоза) и близкие растворы сахаров и гликоли, такие как пропиленгликоль или полиэтиленгликоли, являются подходящими носителями для парентеральных растворов. Растворы для парентерального введения могут содержать водорастворимую соль активного ингредиента, подходящие стабилизаторы и, если необходимо, буферные вещества. Антиоксиданты, такие как натрия бисульфит, натрия сульфит или аскорбиновая кислота либо по отдельности, либо в сочетании, являются подходящими стабилизаторами. Также применяются лимонная кислота и ее соли и ЕЭТА натрия. Кроме того, растворы для парентерального введения могут содержать консерванты, такие как бензалкония хлорид, метил- или пропилпарабен и хлорбутанол.
Подходящие фармацевтические носители описаны в Яетшд!оп'к РНагтасеи!1са1 8с1епсек, Маск РиЬНкЫпд Сотрапу, стандартном руководстве в данной области.
Характерные применяемые фармацевтические лекарственные формы для введения соединений по данному изобретению могут быть проиллюстрированы следующим образом.
Капсулы.
Большое число отдельных капсул может быть приготовлено путем наполнения стандартных состоящих из 2 частей твердых желатиновых капсул, каждая из которых содержит 100 мг активного ингредиента в виде порошка, 150 мг лактозы, 50 мг целлюлозы и 6 мг магния стеарата.
Мягкие желатиновые капсулы.
Смесь активного ингредиента в пищевом масле, таком как соевое масло, хлопковое масло или оливковое масло, может быть приготовлена и инъецирована посредством насоса вытеснения в желатин для получения мягких желатиновых капсул, содержащих 100 мг активного ингредиента. Капсулы должны быть отмыты и высушены.
Таблетки.
Таблетки могут быть приготовлены с помощью стандартных процедур таким образом, что лекарственная форма содержит 100 мг активного ингредиента, 0,2 мг коллоидного диоксида кремния, 5 мг магния стеарата, 275 мг микрокристаллической целлюлозы, 11 мг крахмала и 98,8 мг лактозы. Подходящие оболочки могут быть использованы для улучшения органолептических свойств или замедления всасывания.
Препараты для инъекций.
Композиция для парентерального введения, подходящая для введения посредством инъекции, может быть приготовлена путем размешивания 1,5 вес.% активного ингредиента в 10 об.% пропиленгликоле или воде. Раствор необходимо сделать изотоническим с помощью натрия хлорида и стерилизовать.
Суспензия.
Водная суспензия может быть приготовлена для перорального введения таким образом, чтобы каждые 5 мл содержали 100 мг тонкоизмельченного активного ингредиента, 200 мг натрия карбоксиметилцеллюлозы, 5 мг бензоата натрия, 1,0 г раствора сорбитола, И.8.Р. и 0,025 мл ванилина.
Когда соединения по данному изобретению комбинируют с другими антикоагулянтами, например, суточная доза может быть от около 0,1 до 100 мг соединения формулы I и от около 1 до 7,5 мг второго антикоагулянта на 1 кг массы тела пациента. Для лекарственной формы в виде таблетки соединения по данному изобретению обычно могут быть представлены в количестве от около 5 до 10 мг на единицу дозирования, и второй антикоагулянт присутствует в количестве от около 1 до 5 мг на единицу дозирования.
Когда два или более вышеупомянутых вторых терапевтических агента вводят с соединением примеров, обычно количество каждого компонента в типичной суточной дозе и типичная дозировка могут быть снижены относительно обычной дозировки агента в режиме монотерапии, учитывая аддитивный или синергичный эффект терапевтических агентов, когда они вводятся в комбинации.
- 67 016563
В особенности, когда предусмотрена единая лекарственная форма, существует возможность для химического взаимодействия между комбинируемыми активными ингредиентами. По этой причине, когда соединение примеров и второй терапевтический агент комбинируют в единой лекарственной форме, их составляют таким образом, что, хотя активные ингредиенты находятся в единой лекарственной форме, физический контакт между активными ингредиентами сведен к минимуму (т.е. уменьшен). Например, один активный ингредиент может быть покрыт кишечно-растворимой оболочкой. Покрывая кишечно-растворимой оболочкой один из активных ингредиентов, можно не только свести к минимуму контакт между комбинируемыми активными ингредиентами, но также контролировать высвобождение одного из этих компонентов в желудочно-кишечном тракте, так что один из этих компонентов не высвобождается в желудке, а высвобождается предпочтительнее в кишечнике. Один из активных ингредиентов может быть также покрыт веществом, которое обеспечивает замедленное высвобождение на протяжении всего желудочно-кишечного тракта, а также служит минимизации физического контакта между комбинируемыми активными ингредиентами. Более того, компонент с замедленным высвобождением может дополнительно иметь кишечно-растворимую оболочку, так что высвобождение этого компонента будет происходить только в кишечнике. Еще один подход включает создание комбинированного продукта, в котором один компонент покрыт полимером для замедленного высвобождения и/или растворимым в кишечнике, а другой компонент также покрыт полимером, таким как гидроксипропилметилцеллюлоза (НРМС) низкой степени вязкости или другими подходящими веществами, известными в специальности, с целью дальнейшего разделения активных компонентов. Полимерная оболочка служит для образования дополнительного препятствия взаимодействию с другим компонентом.
Этот путь, как и другие пути минимизации контакта между компонентами комбинированных продуктов по настоящему изобретению, которые вводятся либо в единой лекарственной форме, либо в отдельных формах, но в одно и то же время и тем же способом, будет очевиден специалисту в данной области, который однажды ознакомился с настоящим раскрытием.
Дополнительно, некоторые соединения, раскрытые в настоящем изобретении, могут быть полезными в виде метаболитов других соединений. Следовательно, в одном воплощении соединения либо могут быть полезными в значительной степени как чистое соединение, которое может быть также включено в фармацевтическую композицию, либо могут применяться в качестве метаболита, который образуется после введения пролекарства этого соединения. В одном воплощении соединение может применяться в виде метаболита, применимого для лечения расстройств, как это описано в настоящем изобретении.
В значительной степени чистое при использовании в данном описании предназначено для обозначения соединения, имеющего чистоту более чем 90 вес.%, включая 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 и 100 вес.%.
В качестве одного примера соединение, раскрытое в данном описании, может быть в значительной степени чистым, имея чистоту более чем примерно 90 вес.%, тогда как остаток менее 10% веществ содержит другой метаболит этого соединения, пролекарство соединения и/или примеси реакций, и/или примеси обработки, появившиеся в результате его приготовления.
Безусловно, многочисленные модификации и вариации настоящего изобретения возможны в свете вышеизложенных положений. Таким образом, необходимо понимать, что в рамках объема, изложенного в формуле изобретения, настоящее изобретение может быть использовано иначе, чем это конкретно описано в настоящем изобретении.
Ση у1уо исследования и эффективность. №((11,28,51)-5-(трет-Бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамид (также обозначаемый как пример 1) оценивают в следующих исследованиях ίη у1уо, как это описано ниже.
Раздел 1.
Пример 1 блокирует привлечение мононуклеарных клеток в кожу после внутрикожной (ГО) пробы МСР-1 у обезьян супото1ди8.
Внутрикожная инъекция МСР-1 приводит к инфильтрации мононуклеарными клетками места инъекции. Эта модель была изначально разработана для оценки ингибирующего действия антагонистов СС1-2 на инфильтрацию мононуклеарными клетками ткани кожи после инъекции МСР-1 человека. Клеточный инфильтрат может быть измерен полуколичественным образом с помощью гистологической шкалы.
- 68 016563
Способы.
Каждой обезьяне вводят соединение примера 1 или контрольный носитель (0,05н. НС1) один раз в сутки в течение 3 дней. Соединение примера 1 вводят в дозах 0, 5, 10 или 20 мг/кг группам из 4 обезьян суиото1дик (по 2 особи каждого пола на группу). Непосредственно после введения на 3-й день всем животным производили 2 внутрикожные инъекции 10 мкг (50 мкл/инъекция) человеческого МСР-1 (В & Ό 8ук!етк) и 2 внутрикожные инъекции контрольного ЭРВ8 (50 мкл/инъекция) в разные места на спинке животных. Биопсию кожи всех мест инъекций получают приблизительно через 18 ч после провокации с МСР-1 (или ЭРВ8). Биопсии выполняют для полуколичественной гистологической оценки. Репрезентативные срезы образцов кожи исследуют с помощью световой микроскопии; микроскопические повреждения и клеточную инфильтрацию отмечают и их распространение сводят в таблицу.
В дополнение к анализу биопсийного материала, кровь собирают и оценивают полную формулу крови и анализируют клеточный состав. Также исследуют образцы плазмы на концентрацию соединения (и метаболита) и образцы сыворотки на системные уровни МСР-1.
Результаты.
Привлечение мононуклеарных клеток к коже контрольных животных, пролеченных носителем, в ответ на провокацию МСР-1 было значительным (средний балл по гистологической шкале составил 2,0, диапазон от 1 до 3, табл. 10). Пример 1 в дозе 5, 10 и 20 мг/кг подавляет такую инфильтрацию дермы мононуклеарными клетками на 75, 95 и 95% соответственно (табл. 10 и фиг. 20). Соединение также блокирует инфильтрацию другими типами клеток, такими как эозинофилы и нейтрофилы (табл. 12). Значения концентрации в плазме примера 1 через 18 ч и их взаимоотношение с уровнями ингибирования, а также значения хемотаксиса Супо !С90 суммированы в табл.12. Основываясь на уровне КА, 7,1±2,7 нМ для примера 1 в исследовании хемотаксиса, суио дозы 5, 10 и 20 мг/кг приводят к концентрации в свободной плазме 0,8-, 2,1- и 4,3-кратного хемотаксиса !С90 через 18 ч после введения дозы (табл. 12).
Таблица 12
Обобщенные результаты действия примера 1 на инфильтрацию мононуклеарными клетками и клетками других типов в ответ на пробу МСР-1 у обезьян суиото1дика,Ь
Дозы мг/кг Концентрация свободной фракции в плазме (нМ) Кратность хемотаксиса 1С90 Баллы мононукле арных клеток (диапазон) (% ингибирова Ния) ΡΜΝ° баллы (диапазон) Еоза баллы (диапазон) Все клетки, баллы (диапазон)
0 0 0 2.0 (1-3) (0%) 0.3 (0-1) 1.5 (0.5-3) 4.0 (2-65)
5 99 0.8 0.5 (0-1) (75%) 0.1 (0-0.5) 1.4 (1-2) 2.0 (1-3)
10 248 2.1 0.1 (0-0.5) (95%) 0.1 (0-0.5) 0.8 (0.5-1) 1.0 (0.5-2)
20 512 4.3 0.1 (0-0.5) (95%) 0 1(0-0) 0.8 (0.5 - 1) 0.9 (0-5-1)
а Применяется произвольная шкала баллов от 0 до 4, где каждое число отражает определенную характеристику воспалительного инфильтрата: 0, неопределимое число клеток воспаления; 0,5, следы; 1, минимальный; 2, легкий; 3, умеренный; 4, заметная инфильтЬ Средние значения являются средними для биопсии 8 мест инъекции МСР-1, представляющих по 2 отдельные биопсии от 4 обезьян на группу. Диапазон представляет собой разброс средних баллов по гистологической шкале для 2 биопсий на животное.
с РМ№ означает полиморфонуклеарную клетку (нейтрофил).
б Еок является сокращением от эозинофилы.
е Общий балл является математической суммой средних значений для каждого клеточного типа, чтобы продемонстрировать эффект дозы.
Оценка изменений медиаторов воспаления в сыворотке показывает увеличение (приблизительно 3-4-кратное) уровня МСР-1 в группах, пролеченных примером 1, относительно контроля, получавшего носитель. Кроме того, анализ полной формулы крови показывает увеличение (~2-кратное) нейтрофилов в группах, пролеченных примером 1, относительно контроля, получавшего носитель, через 18 ч на день 4 после 3 дней дозирования.
- 69 016563
Для уточнения эффекта дозы (концентрации) примера 1 в системе более простого количественного определения авторы использовали мышей 11ССК-2 ΚΣ, чтобы определить эффект примера 1 на инфильтрацию моноцитами/макрофагами в модели перитонита, вызванного тиогликолятом (ТС), с помощью методик, основанных на проточной цитометрии.
Раздел 2.
Пример 1 подавляет инфильтрацию моноцитами/макрофагами в модели 48-часового ТС перитонита у мыши 11ССК-2 КТ
Модель перитонита, вызванного ТС, используется в качестве модели привлечения моноцитов/макрофагов в место воспаления. И опубликованные исследования, и собственные неопубликованные исследования демонстрируют, что привлечение моноцитов/макрофагов в этой модели является зависимым от ССК-2. См. Воппд Ь. е1 а1., бпрабеб топосуТе Ш1дгабоп апб гебисеб 1уре 1 (ТЫ) суЮкте гекропкек ίη С-С сбетокте гесер!ог 2 кпоскои! тке. 1=Сбп Шуей, 100(10):2552-61 (1997) и Кихкк XV.А. е1 а1., 8еуеге гебисбоп ш 1еикосу!е аббекюп апб топосук ехбауакабоп т тке беПс1еп1 ш СС сбетокше гесерЮг
2. Ргос. №а!1. Асаб. 8сТ И8А. 94(22): 12053-8 (1997).
Способы.
Для исследования с 48-часовым ТС перитонитом пример 1 вводят дважды в сутки, первую дозу вводят за 1 ч до инъекции ТС. Общую перитонеальную клеточную формулу получают на изолированных клетках с помощью цитометра. Кровь собирают в пробирку с гепарином из ретроорбитального синуса в конце каждого исследования для проточной цитометрии и в пробирку с БОТА для определения концентрации препарата.
Для проточной цитометрии клетки перитонеального экссудата (1х 106) отмывают однократно в буфере БАС8 (РВ8/0,5 % В8А) и ресуспендируют в буфере БАС8. Клетки инкубируют с Бс-блокирующими антителами (ΒΌ Рбагтшдеп) на льду в течение 15 мин, после чего добавляют следующие антитела (ΒΌ Рбаттшдеп): РЕ конъюгированные анти-Б4/80, БИС конъюгированные анти-Ьу6С и А1еха 647 конъюгированные анти-ЬССВ-2. Через 45 мин на льду клетки фиксируют с помощью ΒΌ СуЮП.х на 15 мин на льду, отмывают дважды буфером БАС8 и ресуспендируют в 200 мкл буфера БАС8. Клеточные объекты (40,000) получают для каждого образца и данные анализируют при помощи программного обеспечения Б1о1о (Тгее8!аг). Вход Б8С/88С устанавливают для включения всех моноцитов (низкий 88С, высокий Б8С), исключая гранулоциты из анализа. Эту популяцию клеток с сигналом выше порогового значения затем анализируют на Ьу6С (БИС), Б4/80 (РЕ) экспрессию. Количества перитонеальных моноцитов/макрофагов определяют путем умножения общей перитонеальной клеточной формулы, полученной с помощью цитометра, и процента моноцитов/макрофагов, выявленных с помощью клеток Б4/80+ по результатам проточной цитометрии. Статистическая значимость разницы между средними значениями анализируют с помощью парного двустороннего ! теста, принимая за значимые различия при уровне р менее 0,05.
Результаты.
Пример 1 оценивают в модели ТС перитонита у мыши 11ССЕ-2 ΚΣ, чтобы определить его ЕС50 в ингибировании инфильтрации моноцитами/макрофагами. Мышам вводят тиогликолят и перорально вводят пример 1 в дозе 1, 25 или 100 мг/кг дважды в сутки. Через 48 ч после введения ТС получают перитонеальный лаваж для анализа клеточной инфильтрации с помощью проточной цитометрии.
Чтобы отличить привлеченные моноциты/макрофаги от местных макрофагов и гранулоцитов, проводят окрашивание обоими маркерами поверхности моноцитов/макрофагов - Б4/80 и Ьу6С, чтобы определить привлеченные моноциты/макрофаги. Дозозависимое ингибирование наблюдается в инфильтрации моноцитами/макрофагами (фиг. 21). Дозы 1, 25 и 100 мг/кг приводят к 24, 74 и 78% ингибированию соответственно. В трех отдельных исследованиях с множественными дозами среднее значение ЕС50 для ингибирования инфильтрации моноцитами/макрофагами с помощью этого анализа было оценено как 3,9 нМ.
Для 1п у1уо оценки уровня занятости рецепторов примером 1 в модели 48-часового ТС перитонита у мыши 11ССЕ-2 КГ измеряют уровни в плазме и примера 1 и мышиного МСР-1. Ограничением этой оценки является то, что только ССК-2 и его основной лиганд МСР-1 принимаются во внимание. Занятость рецепторов лигандом в присутствии конкурентного ингибитора определяют с помощью уравнения Гаддума [КЦ 1
Поскольку пример 1 является конкурентным ингибитором связывания МСР-1 с ССК-2, количества обоих комплексов - мышиный МСР-1/ССК-2 рецептор и пример 1/ССК-2 рецептор могут быть определены с использованием уровней в сыворотке мышиного МСР-1 и несвязанного белками примера 1 в плазме. Кб для связывания мышиного МСР-1 с 11ССЕ-2 составляет 0,91±0,08 нМ (п=8), что определяют в экспериментах конкурентного связывания лиганда на холоде с использованием |:'Т-человеческого МСР-1. Среднее значение К1 для связывания примера 1 с ЬССК-2 составляет 1,3 нМ. Фракцию комплексов мышиный МСР-1/ССК-2 рецептор определяют с использованием уравнения, описанного выше. Чтобы оп
- 70 016563 ределить фракцию комплексов пример 1/ССВ-2, уравнение изменяют следующим образом:
[ΚΙ] I [КГ = 1 + (КП [1))(1 + [Ц/К4)'
В конечном счете, количество свободного ССВ-2 определяют по формуле [ССВ-2]общий = [ССВ-2] свободный + [мышиный МСР-1/ССВ-2] + [пример 1/ССВ-2].
Как показано в табл.13, процент ингибирования инфильтрации моноцитами/макрофагами в брюшине через 48 ч отражает процент комплекса пример 1/ССВ-2 рецептор.
Таблица 13
Определение ш νί\Ό занятости рецепторов примером 1 в крови мыши 11ССВ-2 ΚΙ в модели 48-часового ТС перитонита
Доза (мг/кг) Концентрац ия мышиного МСР-1 в плазме (нМ) Концентрац ИЯ свободного Примера I в плазме (нМ) (кратность 1С90 связывания ССК2) % ССК.2, связанного с мышиным МСР-1 % ССК2, связан ного с Приме ром 1 % свобод ного ССК2 % ингибирования инфильтрации моноцитами/мак рофагами
100 0.015 53(1.8) 0.04 97.6 2.4 78
25 0.017 14(0.5) 0.16 91.2 8.6 74
1 0.005 1.4 (0.05) 0.26 51.4 48.3 24
0 (носитель) 0 0 0 0 100 0
Раздел 3. Исследования хронической эффективности.
Экспериментальный аутоиммунный энцефалит (ЕАЕ).
Способы.
Чтобы оценить эффект примера 1 на хронические модели заболевания, авторы использовали модель ЕАЕ рассеянного склероза у мышей ЬССВ-2 ΚΙ. Чтобы изучить эффект примера 1 на модели ЕАЕ, используют 10 мышей на группу. В день 0 мышей ЬССВ-2 ΚΙ иммунизируют подкожной инъекцией общим объемом 200 мкл из 300 мкл гликопротеина миелина олигодендроцитов (М0С) 35-55 (Сепетеб 8уп!йез1з), смешанного 1:1 с 300 мкг МусоЬас!егшт !цЬегси1оз1з (Н37Ва) (ВесЮп-Оюктзоп) в неполном адъюванте Фрейнда (ГЕА) (81дта-А1бпсД). В день 0 (через 2 ч после иммунизации) и в день 2 мышам вводили интраперитонеально 100 мкл 400 нг коклюшного токсина. Клиническую балльную оценку производят начиная с дня 10, продолжая трижды в неделю на протяжении исследования, на основании шкалы от 0 до 5: 0, нет признаков болезни; 0,5, частичная слабость хвоста; 1, вялый хвост или ковыляющая походка с нормальным тонусом хвоста; 1,5, ковыляющая походка с частичной слабостью хвоста; 2, ковыляющая походка с вялым хвостом (атаксия); 2,5, атаксия с частичным параличом конечности; 3, полный паралич одной конечности; 3,5, полный паралич одной конечности с частичным параличом второй конечности; 4, полный паралич двух конечностей; 4,5, предагональное состояние; 5, гибель. Пероральное введение примера 1 в дозе 25 и 55 мг/кг (дважды в сутки) начинают в день 1.
Результаты.
Пример 1 в обеих дозах снижает площадь под кривой (АИС) клинической балльной оценки на 49% (р<0,05) (фиг. 22). Значение 1С50 составляет 3,7 нМ для примера 1 при связывании 1251-мышиного МСР-1 с клетками, экспрессирующими ЬССВ-2, ЬРВМС (имитирующие ЬССВ-2 ΚΙ условия). На основании этого значения Ιί.'50 дозы 25 и 55 мг/кг приводят к минимальной концентрации в плазме 1- и 3-кратной связывания ΙΟ». Гистологическое исследование спинного мозга в день 22 не показывает существенной разницы в общей воспалительной клеточной инфильтрации между мышами, пролеченными примером 1 и пролеченными носителем. Заметная нейтрофильная инфильтрация наблюдается у мышей, пролеченных соединением.
- 71 016563

Claims (19)

1. Соединение, представляющее собой №((1В,28,5В)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамид или его фармацевтически приемлемую соль.
2. Соединение по п.1, представляющее собой кристаллическую форму №((1В,28,5В)-5-(третбутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1ил)циклогексил)ацетамида или его фармацевтически приемлемую соль.
3. Кристаллическая форма по п.2, характеризующаяся следующими параметрами элементарной ячейки:
размеры элементарной ячейки:
а=18,7240(4),
Ь=8,0171(2), с=19,6568(5);
а=90;
β=114,935(2);
γ=90;
V(А3)=2675,7(1);
пространственная группа Ρ212121;
молекулы/элементарная ячейка 2, где измерение указанной кристаллической формы осуществляют при комнатной температуре около 22°С.
4. Кристаллическая форма по пп.2, 3, характеризующаяся с помощью дифракционной рентгенограммы на порошке, включающей три или большее количество 2Θ значений (СиКа λ=1,5418 А), выбранных из 5,5, 9,1, 12,1, 14,0 и 19,2, при температуре около 22°С.
5. Кристаллическая форма по пп.2-4, дополнительно характеризующаяся с помощью дифракционной рентгенограммы на порошке, включающей четыре или большее количество 2Θ значений (СиКа λ=1,5418 А), выбранных из 5,5, 9,1, 12,1, 14,0 и 19,2, при температуре приблизительно 22°С.
6. Кристаллическая форма по пп.2-5, характеризующаяся фракционными атомными координатами в соответствии с табл. 3.
7. Кристаллическая форма по пп.2-6, имеющая дифракционную рентгенограмму на порошке, по существу, в соответствии с фиг. 2.
8. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по пп.1-7 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
9. Способ лечения заболевания у млекопитающего, включающий введение млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения по пп.1-7, где заболевание выбрано из диабета, ожирения, метаболического синдрома, инсульта, нейропатической боли, ишемической кардиомиопатии, псориаза, гипертензии, склеродермии, остеоартрита, аневризмы, лихорадки, сердечно-сосудистого заболевания, болезни Крона, застойной сердечной недостаточности, аутоиммунных заболеваний, ВИЧ-инфекции, ВИЧ-ассоциированной деменции, псориаза, идиопатического фиброза легких, атеросклероза трансплантата, физически или химически вызванной травмы головного мозга, воспалительного заболевания кишечника, альвеолита, колита, системной красной волчанки, нефротоксического сывороточного нефрита, гломерулонефрита, астмы, рассеянного склероза, атеросклероза, васкулита, нестабильных бляшек, ревматоидного артрита, рестеноза, венозной неоинтимальной гиперплазии, неоинтимальной гиперплазии диализ-трансплантата, неоинтимальной гиперплазии артериовенозного шунта, пересадки органа, хронической нефропатии аллотрансплантата и рака.
10. Способ по п.9, отличающийся тем, что заболевание выбрано из диабета, ожирения, болезни Крона, системной красной волчанки, гломерулонефрита, рассеянного склероза, атеросклероза, рестеноза и пересадки органа.
11. Способ по пп.9, 10, отличающийся тем, что заболевание выбрано из рассеянного склероза, атеросклероза, болезни Крона и диабета.
12. Способ получения соединения формулы (X)
X
- 72 016563 включающий следующие стадии:
гидролиз сложноэфирного остатка соединения формулы V гидролизующим агентом для образования кислоты соединения VI в интервале температур от приблизительно -5 до приблизительно 5°С взаимодействие соединения формулы У^а, ΗΟ-Ζ-ΟΗ, с соединением формулы VI (необязательно ίη δίΐιι) в присутствии кислотного катализатора с получением соединения формулы VII, имеющего остаток карбоновой кислоты превращение остатка карбоновой кислоты кеталя формулы VII в соответствующий изоцианат формулы VIII взаимодействие изоцианата формулы VIII с соединением формулы Κ10ί.Ό\ν в присутствии соответствующего ангидрида кислоты (Κ10№)2Ο с образованием амида формулы IX, имеющего остаток кеталя гидролиз кетального остатка амида формулы IX с образованием соединения формулы X, где Κι и К2 независимо представляют собой водород или защитную группу амина; К4 и Κ10 независимо представляют собой С!-6алкил или бензил;
V представляет собой ΟΗ или Ο^μ^χ^;
Ζ представляет собой -С2И4-.
13. Способ получения соединения формулы (XI) включающий:
а) добавление кислоты Льюиса в раствор соединения формулы X, полученного способом по п.12, и
- 73 016563 амина, имеющего формулу НМК8К9, причем К8 и К9 независимо представляют собой водород или С16алкил, в апротонном растворителе, чтобы образовать имин-енамин; и
Ь) обработку имин-енамина восстанавливающим агентом с получением соединения формулы Х1, имеющего аминопирролидонильный остаток.
14. Соединение (7К,88)-8-((38)-3-(((бензилокси)карбонил)амино)-2-оксо-1-пирролидинил)-1,4- диоксаспиро[4.5]декан-7-карбоновой кислоты или его соль.
15. Соединение бензил ((38)-1-((7К,88)-7-(азидокарбонил)-1,4-диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3пирролидинил)карбамата или его соль.
16. Соединение бензил ((38)-1-((7К,88)-7-изоцианато-1,4-диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3пирролидинил)карбамата или его соль.
17. Соединение бензил ((38)-1-((7К,88)-7-ацетамидо-1,4-диоксаспиро[4.5]дец-8-ил)-2-оксо-3пирролидинил)карбамата или его соль.
18. Соединение бензил ((38)-1-((18,2К)-2-ацетамидо-4-оксоциклогексил)-2-оксо-3- пирролидинил)карбамата или его соль.
19. Соединение бензил ((38)-1-((18,2К,4К)-2-ацетамидо-4-(трет-бутиламино)циклогексил)-2-оксо-3пирролидинил)карбамата или его соль.
Экспериментальные и модельные рентгенограммы на порошке №((1К,28,5К)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)2-оксо-3 -(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1 -ил)циклогексил)ацетамида, гемигидрата, форма Н0.5-4
Два-тепа (градус)
Фиг. 1
- 74 016563
Экспериментальные и модельные рентгенограммы на порошке №((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободного основания, форма Ν-2
Два-тетта (градус)
Фиг. 2
Экспериментальные и модельные рентгенограммы на порошке №((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)2-оксо-3 -(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1 -ил)циклогексил)ацетамида, 1,75 моль Н2О, форма Н1.75-5
Два-тетта (градус)
Фиг. 3
- 75 016563
Экспериментальные и модельные рентгенограммы на порошке №((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)-2-((§)2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, сольват моноэтанола, форма Е-1
Форма Е-1 модельная при - 50'С
Форма Е-1 наблюдаемая при КТ
Два-тетта (градус)
Фиг. 4
Экспериментальные и модельные рентгенограммы на порошке №((1Я,28,5Я)-5-(трет-бутиламино)-2-((§)2-оксо-3 -(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1 -ил)циклогексил)ацетамида, сольвата моноуксусной кислоты, форма НАС-1
Фиг. 5
- 76 016563
Экспериментальные и модельные рентгенограммы на порошке N-((1К,28,5К)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)2-оксо-3 -(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1 -ил)циклогексил)ацетамида, сольвата моно-К-пропиленгликоля, форма КРС-3
Форма ЯР6-3 модельная при - 50 №'ЛХ%лЛ.
Форма РРС-3 наблюдаемая при 81 'УЧ
С
Фиг. 6
Ах.„
Форма НР6-3 гибридная при КТ
Дифференциальная сканирующая калориметрия О8С N-((1К,28,5К)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, гемигидрата, форма
- 77 016563
Термогравиметрический анализ ТСА №((1К,28,5К)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, гемигидрата, форма
Н0.5-4
Фиг. 8
Дифференциальная сканирующая калориметрия Э8С №((1К,28,5К)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободного основания, форма N-2
Фиг. 9
- 78 016563
Термогравиметрический анализ №(1К,28,5К)-5-(трет-бутиламино)-2-((§)-2-оксо-3-(6(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободного основания,
Изотерма сорбции пара №((1К,28,5К)-5-(трет-бутиламино)-2-((§)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, свободного основания, форма Ν-2 при температуре
25°С
Фиг. 11
- 79 016563
Дифференциальная сканирующая калориметрия 08С №((1К,28,5К)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, 1,75 моль Н2О, форма
Н1.75-5
СП £
О с >з: о ш о
X
2 т
I !
с-Лμ. / X./ ί
/к ]
I
I “Ί ' 1 —1 ' 1 -------1 1------»-------1 1------Ϊ
100 150 200 250 300
Температура (‘С)
Фиг. 12
Термогравиметрический анализ ТСА №((1К,28,5К)-5-( трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, 1,75 моль Н2О, форма Н1.75-5
Фиг. 13
-Ϊ— ί А------‘ I \ ! ί \ -ί ι \ 5.276% потеря массы при 100С ΐ ι \ (0.5776 мг) ΐ \ ί I V ! X •ί ί X \ ί
- 80 016563
Дифференциальная сканирующая калориметрия О8С N-((1В,28,5В)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, сольвата моноуксусной кислоты, форма НАС-1
Фиг. 14
Термогравиметрический анализ ТСА N-(1В,28,5В)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, сольвата моноуксусной
- 81 016563
Дифференциальная сканирующая калориметрия О8С №((11,28,51)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, сольвата моноэтанола, Е-1 !
•ζ
А Г ν V
I
-з40
Τΰθ
150 200
Температура (°С)
Фиг. 16
260
ТСА №(11,28,51)-5-(трет-бутиламино)-2-((8)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, сольвата моноэтанола, Е-1
- 82 016563
Дифференциальная сканирующая калориметрия Ό8ί.’ №((1В,2§,5В)-5-(трет-бутиламино)-2-((§)-2-оксо-3(6-(трифторметил)хиназолин-4-иламино)пирролидин-1-ил)циклогексил)ацетамида, сольвата моно-К-
ТОА №((1В,2§,5К.)-5-(трет-бутиламино)-2-((§)-2-оксо-3-(6-(трифторметил)хиназолин-4иламино)пирролидин-1 -ил)циклогексил)ацетамида, сольвата моно-К-пропиленгликоля,
- 83 016563
Модель внутрикожной пробы у обезьян супото1дик: соединение по примеру 1 ингибирует привлечение мононуклеарных клеток к коже £
X
4Э
Εζ § ю I ϋ α> т Е
I
X £Х СО
5 £ г
δ
I о п = 4 в группе (по 2 каждого пола)
Доза (мг/кг) О(УеЬ)
С18 (нМ, общий) 0
Кратность 1С90 суло СТХ О
5 1020
99 248512
0.8________24
Пример 1 (мг/кг)
Фиг. 20
48-часовой ТС перитонит у мыши НССЯ-2 КГ ингибирование соединением по примеру 1 инфильтрации моноцитов/макрофагов в брюшной полости
ЕАЕ у мыши НССЯ-2 КГ лечение соединением по примеру 1 снижает баллы клинической оценки
3.50
2300 ф 2.50 о
29/33
Фиг.
29.
к 2.00 £
ф 1.50 х
X 1.00 5 0.50 протонный ЯМР спектр 0 00 соединения по
Примеру
7 10 13 16 19 22 25
День исследования
2-е Альтернативное получение, Стадия 3- Соединение 7
Фиг. 22
- 84 016563
Протонный спектр ЯМР соединения по примеру 1, 2-е альтернативное получение, стадия 3- соединение 7
Яводтгдом фактор вертикальной шкалы = 1 в т
Химический сдвиг (част, на млн.)
Фиг. 23
Протонный спектр ЯМР соединения по примеру 1,2-е альтернативное получение, стадия 4 - соединение 8 фактор вертикальной шкапы = 1
Фиг. 24
- 85 016563
Протонный спектр ЯМР соединения по примеру 1, 2-е альтернативное получение, стадия 4 - соединение 9
Нормализованная интенсивность
Фиг. 25
- 86 016563
Протонный спектр ЯМР соединения по примеру 1,2-е альтернативное получение, стадия 4 - соединение 10
Химический сдвиг (част, на млн.)
Фиг. 26
- 87 016563
Протонный спектр ЯМР соединения по примеру 1,2-е альтернативное получение, стадия 5- соединение 11 фактор вертикальной шкалы
Фиг. 27
Евразийская патентная организация, ЕАПВ
Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
EA200900245A 2006-07-28 2007-07-26 Модуляторы активности рецептора хемокина, кристаллические формы и способ их получения EA016563B1 (ru)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US83423506P 2006-07-28 2006-07-28
US89602607P 2007-03-21 2007-03-21
US11/782,742 US7629351B2 (en) 2006-07-28 2007-07-25 N-((1R,2S,5R)-5-(tert-butylamino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluoromethyl)quinazolin-4-ylamino) pyrrolidin-1-yl)cyclohexyl)acetamide and other modulators of chemokine receptor activity, crystalline forms and process
PCT/US2007/074377 WO2008014360A2 (en) 2006-07-28 2007-07-26 Modulators of chemokine receptor activity, crystalline forms and process

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200900245A1 EA200900245A1 (ru) 2009-08-28
EA016563B1 true EA016563B1 (ru) 2012-05-30

Family

ID=38829183

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200900245A EA016563B1 (ru) 2006-07-28 2007-07-26 Модуляторы активности рецептора хемокина, кристаллические формы и способ их получения

Country Status (27)

Country Link
US (2) US7629351B2 (ru)
EP (2) EP2046779B1 (ru)
JP (1) JP5236643B2 (ru)
KR (1) KR20090033915A (ru)
CN (1) CN101535301B (ru)
AR (1) AR062124A1 (ru)
AT (2) ATE522522T1 (ru)
AU (1) AU2007279333B2 (ru)
BR (1) BRPI0715415A2 (ru)
CA (2) CA2659253A1 (ru)
CY (1) CY1111744T1 (ru)
DK (1) DK2046779T3 (ru)
EA (1) EA016563B1 (ru)
ES (1) ES2365264T3 (ru)
HK (1) HK1130476A1 (ru)
HR (1) HRP20110465T1 (ru)
IL (2) IL196427A (ru)
MX (1) MX2009000808A (ru)
NO (1) NO20090190L (ru)
NZ (1) NZ574425A (ru)
PE (1) PE20080732A1 (ru)
PL (1) PL2046779T3 (ru)
PT (1) PT2046779E (ru)
SG (1) SG158924A1 (ru)
SI (1) SI2046779T1 (ru)
TW (2) TW201414729A (ru)
WO (1) WO2008014360A2 (ru)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7687508B2 (en) * 2006-07-28 2010-03-30 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic derivatives as modulators of chemokine receptor activity
US8383812B2 (en) 2009-10-13 2013-02-26 Bristol-Myers Squibb Company N-((1R,2S,5R)-5-(tert-butylamino)-2-((S)-3-(7-tert-butylpyrazolo[1,5-A][1,3,5]triazin-4-ylamino)-2-oxopyrrolidin-1-yl)cyclohexyl)acetamide, a dual modulator of chemokine receptor activity, crystalline forms and processes
KR20120135716A (ko) * 2011-06-07 2012-12-17 한미사이언스 주식회사 이중대칭 구조의 퀴나졸린 유도체 화합물 및 이의 용도
EP2567959B1 (en) 2011-09-12 2014-04-16 Sanofi 6-(4-hydroxy-phenyl)-3-styryl-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine-4-carboxylic acid amide derivatives as kinase inhibitors
US8669281B1 (en) 2013-03-14 2014-03-11 Alkermes Pharma Ireland Limited Prodrugs of fumarates and their use in treating various diseases
MA40320A (fr) * 2014-07-17 2017-05-24 Santen Pharmaceutical Co Ltd Agent prophylactique ou thérapeutique pour des troubles du segment postérieur de l'œil
PT3655395T (pt) * 2017-07-20 2022-02-22 Bristol Myers Squibb Co Processo para a preparação de n-((1r,2s,5r)-5-(tercbutilamino)- 2-((s)-3-(7-terc-butilpirazolo[1,5- a][1,3,5]triazin-4-ilamino)-2-oxopirrolidin-1- il)ciclohexil)acetamida
CN115677728A (zh) * 2022-11-02 2023-02-03 成都科岭源医药技术有限公司 一种海鞘素类化合物中间体的制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050054627A1 (en) * 2003-08-21 2005-03-10 Carter Percy H. Cyclic derivatives as modulators of chemokine receptor activity

Family Cites Families (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6383082A (ja) 1986-09-26 1988-04-13 Takeda Chem Ind Ltd テトラヒドロフランカルボン酸誘導体の製造法
CA2084800A1 (en) 1991-12-16 1993-06-17 Joseph P. Vacca Hiv protease inhibitors with an internal lactam ring
GB9515411D0 (en) 1995-07-27 1995-09-27 Pharmacia Spa N-(4-substituted-benzyl)-2-aminolactam derivatives
US5827875A (en) 1996-05-10 1998-10-27 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of microsomal triglyceride transfer protein and method
UA51716C2 (ru) 1996-07-08 2002-12-16 Авентіс Фармасьютікалз Продактс Інк. СОЕДИНЕНИЯ, ИМЕЮЩИЕ ГИПОТЕНЗИВНОЕ, КАРДИОПРОТЕКТОРНОЕ, АНТИ-ИШЕМИЧЕСКОЕ И АНТИЛИПОЛИТИЧЕСКОЕ СВОЙСТВА, фармацевтическая композиция и способЫ лечения
US6054579A (en) 1997-06-26 2000-04-25 Leukosite, Inc. Synthesis of substituted lactams
GB9716656D0 (en) 1997-08-07 1997-10-15 Zeneca Ltd Chemical compounds
ATE346050T1 (de) 1998-01-27 2006-12-15 Aventis Pharma Inc Substituierte oxoazaheterocyclyl faktor xa hemmer
US6492553B1 (en) 1998-01-29 2002-12-10 Aventis Pharamaceuticals Inc. Methods for preparing N-[(aliphatic or aromatic)carbonyl)]-2-aminoaetamide compounds and for cyclizing such compounds
CA2318601A1 (en) 1998-01-29 1999-08-05 Aventis Pharmaceuticals Products Inc. Method for preparing an n-[(aliphatic or aromatic)carbonyl]-2-aminoacetamide compound and a cyclyzed compound
GB9803228D0 (en) 1998-02-17 1998-04-08 Zeneca Ltd Chemical compounds
US6541208B1 (en) 1998-03-17 2003-04-01 University Of Maryland Biotechnology Institute Diagnostic method for distinguishing HIV-associated dementia from other forms of dementia
AU7354900A (en) 1999-09-09 2001-04-10 Merck & Co., Inc. Inhibitors of prenyl-protein transferase
US6620823B2 (en) 2000-07-11 2003-09-16 Bristol-Myers Squibb Pharme Company Lactam metalloprotease inhibitors
HUP0303652A2 (hu) 2000-12-20 2004-03-01 Bristol-Myers Squibb Company Ciklikus származékok, mint kemokin receptor aktivitás modulátorai és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények
WO2002050019A2 (en) 2000-12-20 2002-06-27 Bristol-Myers Squibb Pharma Co. Diamines as modulators of chemokine receptor activity
AU2002249103A1 (en) 2001-03-29 2002-10-15 Topo Target Aps Succinimide and maleimide derivatives and their use as topoisomerase ii catalytic inhibitors
GB0114867D0 (en) 2001-06-18 2001-08-08 Merck Sharp & Dohme Therapeutic agents
DE10135043A1 (de) 2001-07-11 2003-01-30 Bayer Cropscience Gmbh Substituierte 3-Heteroaryl(amino- oder oxy)-pyrrolidin-2-one, Verfahren zu deren Herstellung und Verwendung als Herbizide oder als Pflanzenwachstumsregulatoren
US7087604B2 (en) 2002-03-08 2006-08-08 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic derivatives as modulators of chemokine receptor activity
TW200307667A (en) 2002-05-06 2003-12-16 Bristol Myers Squibb Co Sulfonylaminovalerolactams and derivatives thereof as factor Xa inhibitors
AU2003263393A1 (en) 2002-09-04 2004-03-29 Glenmark Pharmaceuticals Limited New heterocyclic amide compounds useful for the treatment of inflammatory and allergic disorders: process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
US6835841B2 (en) 2002-09-13 2004-12-28 Bristol-Myers Squibb Company Asymmetric catalytic hydrogenation process for preparation of chiral cyclic β-aminoesters
US7338975B2 (en) 2003-02-12 2008-03-04 Bristol-Myers Squibb Co. Lactams as modulators of chemokine receptor activity
TW200508224A (en) 2003-02-12 2005-03-01 Bristol Myers Squibb Co Cyclic derivatives as modulators of chemokine receptor activity
US7291615B2 (en) 2003-05-01 2007-11-06 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic derivatives as modulators of chemokine receptor activity
US7230133B2 (en) 2003-05-01 2007-06-12 Bristol-Myers Squibb Company Malonamides and malonamide derivatives as modulators of chemokine receptor activity
US20060205761A1 (en) 2003-06-06 2006-09-14 Catherine Abbadie Ccr-2 antagonists for treatment of neuropathic pain
US7351720B2 (en) 2003-06-12 2008-04-01 Bristol-Myers Squibb Company N-ureidoalkyl-piperidines as modulators of chemokine receptor activity
US7317019B2 (en) 2003-08-21 2008-01-08 Bristol Myers Squibb Co. N-alkylated diaminopropane derivatives as modulators of chemokine receptor activity
US20050043392A1 (en) 2003-08-21 2005-02-24 Carter Percy H. Lactams of alkylated acyclic diamine derivatives as modulators of chemokine receptor activity
TWI354664B (en) * 2003-08-21 2011-12-21 Bristol Myers Squibb Co Cyclic derivatives as modulators of chemokine rece
US7378409B2 (en) 2003-08-21 2008-05-27 Bristol-Myers Squibb Company Substituted cycloalkylamine derivatives as modulators of chemokine receptor activity
US7863317B2 (en) 2003-08-21 2011-01-04 Bristol-Myers Squibb Company Lactams of alkylated acyclic diamine derivatives as modulators of chemokine receptor activity
CN101005855A (zh) 2004-07-30 2007-07-25 辉瑞产品公司 治疗由ccr2介导的疾病或紊乱的方法
CA2582225A1 (en) 2004-09-28 2006-04-06 Mingde Xia Substituted dipiperdine ccr2 antagonists
US7687508B2 (en) * 2006-07-28 2010-03-30 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic derivatives as modulators of chemokine receptor activity

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050054627A1 (en) * 2003-08-21 2005-03-10 Carter Percy H. Cyclic derivatives as modulators of chemokine receptor activity
WO2005021500A1 (en) * 2003-08-21 2005-03-10 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic derivatives as modulators of chemokine receptor activity

Also Published As

Publication number Publication date
WO2008014360A2 (en) 2008-01-31
CY1111744T1 (el) 2015-10-07
MX2009000808A (es) 2009-01-29
WO2008014360A3 (en) 2008-12-31
JP2009544756A (ja) 2009-12-17
TW200821301A (en) 2008-05-16
AU2007279333B2 (en) 2012-07-26
BRPI0715415A2 (pt) 2014-01-21
CN101535301A (zh) 2009-09-16
CA2831219A1 (en) 2008-01-31
US7629351B2 (en) 2009-12-08
AU2007279333A1 (en) 2008-01-31
SG158924A1 (en) 2010-02-26
US8049019B2 (en) 2011-11-01
DK2046779T3 (da) 2011-09-05
TW201414729A (zh) 2014-04-16
PL2046779T3 (pl) 2011-09-30
CA2659253A1 (en) 2008-01-31
CN101535301B (zh) 2014-06-18
IL196427A0 (en) 2009-09-22
KR20090033915A (ko) 2009-04-06
NO20090190L (no) 2009-01-29
EP2046779B1 (en) 2011-05-18
AR062124A1 (es) 2008-10-15
IL196427A (en) 2013-02-28
PT2046779E (pt) 2011-07-25
HK1130476A1 (en) 2009-12-31
US20080027084A1 (en) 2008-01-31
IL206679A0 (en) 2010-12-30
EA200900245A1 (ru) 2009-08-28
US20100113489A1 (en) 2010-05-06
NZ574425A (en) 2011-11-25
PE20080732A1 (es) 2008-06-13
JP5236643B2 (ja) 2013-07-17
EP2194051A1 (en) 2010-06-09
HRP20110465T1 (hr) 2011-07-31
SI2046779T1 (sl) 2011-09-30
EP2046779A2 (en) 2009-04-15
TWI421249B (zh) 2014-01-01
ATE509926T1 (de) 2011-06-15
ES2365264T3 (es) 2011-09-27
EP2194051B1 (en) 2011-08-31
ATE522522T1 (de) 2011-09-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2019203476B2 (en) Pyrimidinyl tyrosine kinase inhibitors
EA016563B1 (ru) Модуляторы активности рецептора хемокина, кристаллические формы и способ их получения
US9353087B2 (en) Inhibitors of Bruton&#39;s tyrosine kinase
KR20170016987A (ko) 헤테로시클릭 화합물 및 이들의 레티노이드-관련 희귀 수용체 (ｒｏｒ) 감마-ｔ 저해제로서의 용도
JP5759999B2 (ja) Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（ＴＥＲＴ−ブチルアミノ）−２−（（Ｓ）−３−（７−ＴＥＲＴ−ブチルピラゾロ［１，５−ａ］［１，３，５］トリアジン−４−イルアミノ）−２−オキソピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド、ケモカイン受容体活性のデュアルモジュレーター、結晶形および製造方法
CA2961033A1 (en) Heterocyclic compound
JP4698419B2 (ja) ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルウレア誘導体とその用途
EP2049477B1 (en) Modulators of chemokine receptor activity, crystalline forms and process
PT2049519E (pt) Derivados cíclicos enquanto moduladores da actividade dos receptores das quimiocinas
US11897863B2 (en) Indazole amine derivative, preparation method therefor and medical use thereof
US10550125B2 (en) Prodrugs of imidazotriazine compounds as CK2 inhibitors

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): RU