KR20120135716A

KR20120135716A - 이중대칭 구조의 퀴나졸린 유도체 화합물 및 이의 용도

Info

Publication number: KR20120135716A
Application number: KR1020110054581A
Authority: KR
Inventors: 배인환; 송지영; 변은영; 최화일; 김호석; 전미애; 안영길
Original assignee: 한미사이언스 주식회사
Priority date: 2011-06-07
Filing date: 2011-06-07
Publication date: 2012-12-17
Also published as: WO2012169785A3; WO2012169785A9; WO2012169785A2

Abstract

본 발명은 화학식 1로 표시되는 이중대칭 구조의 퀴나졸린 유도체 화합물 및 이의 용도를 제공하며, 상기 본 발명의 화합물은 세포사멸 저해 단백질의 과발현에 의해 유발되는 암, 염증성 질환, 자가 면역 질환 또는 퇴행성 신경 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

이중대칭 구조의 퀴나졸린 유도체 화합물 및 이의 용도 {SYMMETRICALLY STRUCTURED QUINAZOLINE DERIVATIVE COMPOUNDS AND USE THEREOF}

본 발명은 이중대칭 구조의 퀴나졸린 유도체 화합물 및 이의 용도에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 세포사멸 저해 단백질의 과발현에 의해 유발되는 암, 염증성 질환, 자가 면역 질환 또는 퇴행성 신경 질환 등에 예방 또는 치료 효과를 갖는 신규한 이중대칭구조의 퀴나졸린 유도체 화합물 및 이를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.

세포사멸(apoptosis) 혹은 세포 예정사(programmed cell death)는 후생 동물의 항상성 유지 등에 핵심적인 역할을 수행한다. 이러한 세포사멸은 세포의 성장과 사멸을 조절함으로써 생명체를 유지하나 이러한 체계가 여러 요인들로 저해를 받을 경우 암이나 자가 면역 질환 또는 퇴행성 신경 질환 등을 포함하는 병리학적 다양성을 유발할 수 있다 [참조: Thompson, C. B. Science, 267, 1456-1462(1995); Hanahan, D. & Weinberg, R. A., Cell, 100, 57-70(2000)].

암세포 발생단계에서의 이러한 세포사멸의 조절 단계는, 세포사멸 저해 단백질(inhibition of apoptosis protein; IAP)의 과발현으로 인하여 세포내에 IAP 단백질이 축적되고, 이를 통하여 세포사멸 단계를 거쳐야 하는 돌연변이 세포인 암세포의 세포 예정사를 저해함으로써, 다양한 세포사멸 신호(예를 들어 DNA의 손상, 화학적 작용제 및 자외선과 같은 자극)에 의한 암세포의 발생과 성장 그리고 전이과정에서의 자연적 세포 사멸의 기작을 저해하게 된다 [참조: George L. M., Biochemistry , 41, 7344-7349(2002); Yigong Shi, Nature Rev. Mol. Cell. Bio., 5, 897-907,(2004)].

IAP 단백질은 세포 예정사에 관여하는 시스테인 프로테아제인 캐스페이즈(caspase)에 결합하여 세포 예정사를 저해한다. 캐스페이즈는 IAP 단백질의 BIR(baculovirus inhibitory repeat)이라 불리는 아연을 포함하는 70여개의 아미노산으로 구성된 부분에 결합한다. XIAP(human X chromosomeencoded IAP), cIAP-1(cellular IAP 1) 및 cIAP-2(cellular IAP 2)는 3개의 나란히 연결된 BIR 도메인을 N-말단에 가지고 있으며, 다른 포유류 IAP는 한 개의 BIR 도메인을 가지고 있다. XIAP는 IAP 단백질군 중 가장 효과적인 캐스페이즈 저해제이며, 개시-캐스페이즈인 캐스페이즈-9와 실행-캐스페이즈인 캐스페이즈 3/7에 각각 BIR-3 도메인과 BIR-2 도메인을 통해 결합한다. cIAP-1과 -2는 아직까지 세포 예정사에서의 역할이 잘 알려져 있지 않지만 이들 모두 TNF-수용체 1 신호 복합체와 결합한다.

미토콘드리아에서 세포 사멸 신호전달 과정에서 방출되어 나오는 스맥/디아블로(SMAC/Diablo: the second mitochondrial activator of apoptosis / direct IAP-binding protein with low pI) 단백질은, 자연 상태에서의 IAP 단백질에서 IAP 단백질이 캐스페이즈와 결합하는 동일한 부위에 결합함으로써 이러한 IAP 단백질의 활성을 조절한다. 또한, IAP의 유전자 증폭과 IAP 단백질의 과발현은 많은 암세포에서 발견되고 있다.

이러한 이유로 세포사멸에 대한 저항성이 암으로 진행되는데 있어 중요한 메커니즘으로 부각되었으며, 이에 따라 종양세포에서의 정상세포에서와 다른 세포사멸 메커니즘을 표적으로 하는 것이 효과적인 항암제 치료 전략으로 제시되어 왔다. 또한, 이러한 약물들은 정상세포에는 영향이 없으며, 암세포에 특이적으로 작용하여 활성을 나타내어 단독 혹은 병용 요법으로 사용시 부작용을 최소화할 수 있는 장점을 갖는 것으로 보고되고 있다.

노바티스(Novartis)사의 국제 특허공개 제 WO2008/073305A1, WO2008/073306A1, WO2008/016893A2, WO2006/107963A1, WO2006/113376A1 및 WO2005/097791A1, 제넨텍(Genetech)사의 국제 특허공개 제 WO2009/089502A1, WO2008/079735A1, 에이게라(Aegera)사의 국제 특허공개 제 WO2007/131366A1, 테트라로직(TetraLogic)사의 국제 특허공개 WO2008/014252A2 등과 같이 다국적 제약회사에서도 관심있게 연구를 진행 중에 있다.

IAP를 저해하기 위한 방법으로 천연 IAP 저해 단백질인 SMAC/Diablo의 구조를 모방한 연구가 진행 중이다. 이러한 연구 결과 특히 N-말단기의 알라닌-발린-프롤린-이소루이신(Ala-Val-Pro-Ile, AVPI)의 핵심 서열이 IAP 단백질에 결합하는 필수 단백질임이 밝혀지게 되었다 [참조 Yigong Shi, Nature structural biology, 8, 394-401, (2001)]. XIAP, c-IAP1, c-IAP2 또는 수르비빈(survivin)과 같은 IAP 단백질에 의해 저해되고 있는 캐스페이즈-9와 캐스페이즈-3은 성숙된 SMAC 단백질에 의해 교체된다. SMAC 단백질의 이러한 작용은 130Å 길이 이상으로 확장되는 아치 형태의 이합체 구조로써 작용한다 [참조 Chai, J. et al., Nature, 406, 855-862 (2000)]. 이러한 구조의 핵심 서열(AVPI 또는 AVPF)은 시험관내 활성 시험에서도 120-500 nM의 활성을 보여 약리 활성이 있을 것으로 기대되었으나 세포 투과성이 없어 약물 개발에는 이를 수가 없었다.

이에 본 발명자들은, 천연 IAP 저해 단백질 서열인 AVPI의 특성을 가지며 세포 투과성이 있는 물질을 검색하고, 상기 탐색된 화합물을 이용하여 암, 염증성 질환, 자가 면역 질환 및 퇴행성 신경 질환에 대한 활성 여부를 찾고자 노력하였다. 그 결과, AVPI 모방 구조의 활성 및 효력 검색을 통하여, IAP에 대한 선택적인 효능이 뛰어난 이중대칭 구조의 퀴나졸린 유도체를 개발해낼 수 있었다.

WO 2008/073305 A1(NOVATIS AG) 2008.6.19 WO 2008/073306 A1(NOVATIS AG) 2008.6.19 WO 2008/016893 A1(NOVATIS AG) 2008.2.7 WO 2006/107963 A2(NOVATIS AG) 2007.10.12 WO 2006/113376 A1(NOVATIS AG) 2006.10.26 WO 2005/097791 A1(NOVATIS AG) 2005.10.20 WO 2009/089502 A1(GENENTECH.INC) 2009.7.16 WO 2008/079735 A1(GENENTECH.INC) 2008.7.3 WO 2007/131366 A1(AEGERA THERAPEUTICS INC) 2007.11.22 WO 2008/014252 A2(TETRALOGIC PHARM., CO.) 2008.1.31

Thompson, C. B. Science, 267, 1456-1462(1995) Hanahan, D. & Weinberg, R. A., Cell, 100, 57-70(2000) George L. M., Biochemistry, 41, 7344-7349(2002) Yigong Shi, Nature Rev. Mol. Cell. Bio., 5, 897-907(2004) Yigong Shi, Nature structural biology, 8, 394-401(2001) Chai, J. et al., Nature, 406, 855-862 (2000)

따라서, 본 발명의 목적은 신규한 퀴나졸린 유도체 화합물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 화합물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 화합물, 이의 염, 이성질체, 수화물 및 용매화물 중 하나 이상을 포함하는 화합물 라이브러리를 제공하는 것이다.

상기 목적에 따라, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 이중대칭 구조의 퀴나졸린 유도체 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다:

[화학식 1]

상기 식에서,

R¹ 및 R²는 각각 독립적으로 수소, 메틸 또는 에틸이고;

R³은 수소, C_1-8알킬, C_3-8사이클로알킬, C_2-5알케닐, C_2-5알키닐, C_3-8사이클로알킬-C₁ _- ₃알킬, C₃ _- ₈헤테로사이클로알킬, C₃ _- ₈헤테로사이클로알킬-C₁ _- ₃알킬, C₆ _- ₁₀아릴, C₆ _-10아릴-C₁ _- ₃알킬, C₅ _- ₁₀헤테로아릴 또는 C₅ _- ₁₀헤테로아릴-C₁ _- ₃알킬이고, 이때, 상기 R³는 비치환되거나, 할로겐, 히드록시, 니트로, 티올, 아미노, C₁ _- ₃알콕시, C₁ _- ₃알킬티오, 모노(C_1-3알킬)아미노, 디(C_1-3알킬)아미노, C_1-3아실, C_1-3알킬설포닐, C_1-3알콕시카보닐, 모노(C_1-3알킬)아미노카복시, 디(C_1-3알킬)아미노카복시, C_1-3아실로일 및 C_1-3알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있으며;

R⁴는 수소, C_1-6알킬, C_2-6알케닐, C_2-6알키닐, C_1-6알콕시, C_1-6알킬티오, C_3-8사이클로알킬, C_6-10아릴 또는 C_5-10헤테로아릴이고, 이때, 상기 R⁴는 비치환되거나, 할로겐, 히드록시, 니트로, 티올, 아미노, C_1-3알콕시, C_1-3알킬티오, 모노(C_1-3알킬)아미노, 디(C_1-3알킬)아미노, C_1-3아실, C_1-3알킬설포닐, C_1-3알콕시카보닐, 모노(C_1-3알킬)아미노카복시, 디(C_1-3알킬)아미노카복시, C_1-3아실로일 및 C_1-3알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있으며;

R⁵는 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, C_1-3알콕시, 티올, 아미노, 카복시, 포밀, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 또는 C_3-8헤테로사이클로알킬이고;

Y는 NH, NHCH₂, O 또는 S이고;

Z는 하기의 군 중에서 선택되는 하나의 치환기이고:

이때,

V는 NH, NHCH₂ 또는 O이고;

W는 C_1-8알킬, 에틸렌 또는 아세틸렌이며;

Z'는 N 또는 CH이고;

R⁶ 및 R⁷은 각각 독립적으로 수소, 메틸 또는 페닐이고, 이때, 페닐은 비치환되거나, 할로겐, 히드록시, 니트로, 티올, 아미노, C_1-3알콕시, C_1-3알킬티오, 모노(C_1-3알킬)아미노, 디(C_1-3알킬)아미노, C_1-3아실, C_1-3알킬설포닐, C_1-3알콕시카보닐, 모노(C_1-3알킬)아미노카복시, 디(C_1-3알킬)아미노카복시, C_1-3아실로일 및 C_1-3알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있으며;

R⁸은 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 티올, 아미노, 카복시, 포밀, C_1-3알킬, C_1-3알콕시, C_1-3알킬티오, 모노(C_1-3알킬)아미노, 디(C_1-3알킬)아미노, C_1-3아실, C_2-3알케닐, C_2-3알키닐, C_1-3알킬설포닐, C_1-3알콕시카보닐, 모노(C_1-3알킬)아미노카복시, 디(C_1-3알킬)아미노카복시, C_1-3아실로일 또는 C_1-3아실아미노이고;

m은 2 내지 12의 정수이며;

n은 1 내지 3의 정수이고;

o는 0 내지 6의 정수이며;

p는 0 내지 2의 정수이고;

q는 0 내지 5의 정수이며;

r은 0 내지 3의 정수이다.

상기 다른 목적에 따라, 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 암, 염증성 질환, 자가 면역 질환 또는 퇴행성 신경 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

상기 또 다른 목적에 따라, 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물, 이의 염, 이성질체, 수화물 및 용매화물 중 하나 이상을 포함하는 화합물 라이브러리를 제공한다.

본 발명의 퀴나졸린 유도체 화합물은 세포 사멸 저해에 의한 암세포의 성장, 염증성 질환, 자가 면역 질환 및 퇴행성 신경질환을 선택적이고 효과적으로 억제하며 부작용이 적으므로, 상기 용도의 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

이하, 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.

본 명세서에 사용되는 용어 '할로겐'은 다른 언급이 없으면, 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 의미한다.

본 명세서에 사용되는 용어 '알킬'은 다른 언급이 없으면, 직쇄형 또는 분지형의 탄화수소 잔기를 의미한다.

본 명세서에 사용되는 용어 '사이클로알킬'은 다른 언급이 없으면 사이클로프로필 등을 포함한 환상 알킬을 나타낸다.

본 명세서에 사용되는 용어 '아릴'은 다른 언급이 없으면 페닐, 나프틸 등을 포함하는 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 이상의 방향족 그룹을 나타낸다.

본 명세서에 사용되는 용어 '헤테로사이클로알킬'은 다른 언급이 없으면 O, N 및 S 중에서 선택된 1개 이상의 헤테로 원자를 함유하는 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 이상의 환상 알킬을 나타낸다. 모노 헤테로사이클로알킬의 예로는 피페리딘일, 모폴린일, 티아모폴린일, 피롤리딘일, 이미다졸리딘일, 테트라하이드로퓨란일, 피페라진일 및 이와 유사한 그룹을 들 수 있으나 이들로 제한되는 것은 아니다.

본 명세서에 사용되는 용어 '헤테로아릴'은 다른 언급이 없으면 O, N 및 S 중에서 선택된 헤테로원자를 함유하는 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 이상의 방향족 그룹을 의미한다. 모노사이클릭 헤테로아릴의 예로는 티아졸릴, 옥사졸릴, 티오펜일, 퓨란일, 피롤릴, 이미다졸릴, 이소옥사졸릴, 피라졸릴, 트리아졸릴, 티아디아졸릴, 테트라졸릴, 옥사디아졸릴, 피리딘일, 피리다진일, 피리미딘일, 피라진일 및 이와 유사한 그룹을 들 수 있으나 이들로 제한되는 것은 아니다. 바이사이클릭, 헤테로아릴의 예로는 인돌릴, 벤조티오펜일, 벤조퓨란일, 벤즈이미다졸릴, 벤즈옥사졸릴, 벤즈이속사졸릴, 벤즈티아졸릴, 벤즈티아디아졸릴, 벤즈트리아졸릴, 퀴놀린일, 이소퀴놀린일, 퓨린일, 퓨로피리딘일 및 이와 유사한 그룹을 들 수 있으나 이들로 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 따른 화합물은 또한 약학적으로 허용되는 염을 형성할 수 있다. 이러한 약학적으로 허용되는 염에는 약학적으로 허용되는 음이온을 함유하는 무독성 산부가염을 형성하는 산이면 특별히 한정되지 않는다. 예를 들면, 염산, 황산, 질산, 인산, 브롬화수소산, 요오드화수소산 등과 같은 무기산; 타타르산, 포름산, 시트르산, 아세트산, 트리클로로아세트산, 트리플루오로아세트산, 글루콘산, 벤조산, 락트산, 푸마르산, 말레인산 등과 같은 유기 카본산 및; 메탄설폰산, 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산, 나프탈렌설폰산 등과 같은 설폰산 등에 의해 형성된 산부가염을 들 수 있다. 이들 중 바람직한 예로는 황산, 메탄설폰산 또는 할로겐화수소산 등에 의해 형성된 산부가염이 포함된다. 바람직한 염으로는 본 발명의 화합물의 염산염일 수 있다.

한편, 본 발명에 따른 화합물들은 비대칭 탄소중심을 가질 수 있으므로 R 또는 S 이성체, 라세믹 화합물, 부분입체이성체 혼합물, 또는 개개 부분입체이성체로서 존재할 수 있으며, 이들 모든 이성체 및 혼합물은 본 발명의 범위에 포함된다. 그 외에도, 화학식 1의 화합물의 용매화물 및 수화물 형태도 본 발명의 범위에 포함된다.

본 발명의 화학식 1의 이중대칭 구조의 퀴나졸린 유도체 화합물은 바람직하게는, 상기 식에서

R¹는 수소 또는 메틸이고;

R²는 수소, 메틸 또는 에틸이며;

R³은 수소, 이소프로필, t-부틸 또는 사이클로헥실이고;

R⁴는 수소, C_1-6알킬, C_1-6알콕시, C_3-8사이클로알킬, C_6-10아릴 또는 C_5-10헤테로아릴이고, 이때, 상기 R⁴는 비치환되거나, 할로겐, 히드록시, 니트로, 티올, 아미노, C_1-3알콕시, C_1-3알킬티오, 모노(C_1-3알킬)아미노, 디(C_1-3알킬)아미노, C_1-3아실, C_1-3알킬설포닐, C_1-3알콕시카보닐, 모노(C_1-3알킬)아미노카복시, 디(C_1-3알킬)아미노카복시, C_1-3아실로일 및 C_1-3알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있으며;

R⁵는 수소, 할로겐, 히드록시, 메톡시 또는 에톡시이고;

Y는 NH, NHCH₂ 또는 O이고;

Z는 하기의 군 중에서 선택되는 하나의 치환기이고:

이때,

V는 NH, NHCH₂ 또는 O이고;

W는 C_1-8알킬, 에틸렌 또는 아세틸렌이며;

Z'는 N 또는 CH이고;

R⁶ 및 R⁷은 각각 독립적으로 수소, 메틸 또는 페닐이고;

R⁸은 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, 카복시, 포밀, C_1-3알킬, C_1-3알콕시, C_1-3알킬티오, 모노(C_1-3알킬)아미노, 디(C_1-3알킬)아미노 또는 C_1-3아실이며;

m은 2 내지 12의 정수이며;

n은 1 내지 3의 정수이고;

o는 0 내지 6의 정수이며;

p는 0 내지 2의 정수이고;

q는 0 내지 5의 정수이며;

r은 0 내지 3의 정수인 화합물일 수 있다.

더욱 바람직하게는, 상기 Z는 하기의 군에서 선택되는 치환기일 수 있다:

본 발명에 따른 이중대칭 구조의 퀴나졸린 유도체 화합물의 보다 바람직한 예는 하기와 같다. 전술한 바와 같이, 하기 화합물의 염, 이성질체, 수화물 또는 용매화물도 가능하다:

1) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((1S,4S)-사이클로헥산-1,4-디일비스(메틸렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-2-(메칠아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;

2) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(헥사-2,4-디엔-1,6-디일비스(옥시))비스(7- 메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;

3) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((1R,4R)-사이클로헥산-1,4-디일비스(메틸렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;

4) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-((1S,4S)-사이클로헥산-1,4-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;

5) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-((1R,4R)-사이클로헥산-1,4-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;

6) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(피페라진-1,4-디일)비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;

7) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((1S,4S)-사이클로헥산-1,4-디일비스(메틸렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-2-사이클로헥실-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)아세틸)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;

8) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((1S,4S)-사이클로헥산-1,4-디일비스(메틸렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-(3-메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;

9) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-((1,4-페닐렌비스(메틸렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;

10) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-((1,3-페닐렌비스(메틸렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;

11) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((1S,2S)-1,2-디페닐에탄-1,2-디일)비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;

12) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(부탄-1,4-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;

13) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(헥산-1,6-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;

14) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(옥탄-1,8-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;

15) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(데칸-1,10-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;

16) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((에탄-1,2-디일비스(옥시))비스(에탄-2,1-디일))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;

17) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-([1,1'-비페닐]-4,4'-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;

18) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(2-부틴-1,4-디일비스(옥시))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;

19) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(헥사-2,4-디엔-1,6-디일비스(옥시))비스(4,1-페닐렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;

20) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(헥사-1,3-디인-1,4-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드);

21) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(헥사-2,4-디엔-1,6-디일비스(옥시))비스(4,1-페닐렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-2-사이클로헥실-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)아세틸)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;

22) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((헥사-2,4-디엔-1,6-디일비스(옥시))비스(3-클로로-4,1-페닐렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염; 및

23) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-((6,6'-(헥사-2,4-디엔-1,6-디일비스(옥시))비스(피리딘-6,3-디일))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염.

이하, 본 발명에 따른 화합물의 제조방법에 대하여 설명한다.

이하의 제조방법 및 실시예에서 하기의 약자가 사용된다:

Ala: 알라닌

Boc-: tert-부톡시카보닐

Cbz-: 2-벤질옥시카보닐아미노

Chg: 사이클로헥실글라이신

CuCl: 쿠퍼 클로라이드

DIPEA: N,N-디이소프로필에틸아민

DMAP: N,N-디메틸아미노피리딘

DMF: N,N-디메틸 포름아마이드

DMSO: 디메틸 설폭사이드

EA: 에틸 아세테이트

EDCI: 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드

HATU: [2-(1H-9-아자벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로니움헥사플루오로포스페이트]

HOBT: N-히드록시벤조트리아졸

Mass: 질량분석 크로마토그램

MC: 메틸렌클로라이드

MeAla: 메틸알라닌

MeOH: 메탄올

-OBn: -O-벤질

TEA: 트리에틸아민

THF: 테트라하이드로퓨란

TLC: 얇은 층 크로마토그래피

TMEDA: N,N,N',N'-테트라메틸에틸렌디아민

Tle: t-부틸글라이신

Val: 발린;

본 발명에 따른 화학식 1의 화합물은 하기 반응식 1, 반응식 2 및 반응식 3에 나타낸 합성 방법에 따라 제조할 수 있다.

[반응식 1]

상기 방법은 i) 화학식 II의 화합물을 링커(Y-Z-Y)와 반응시켜, 화학식 III의 화합물을 수득하는 단계; ii) 상기 화학식 III의 화합물을 철과 반응시키고, 환원하여 화학식 IV의 화합물을 수득하는 단계; iii) 상기 화학식 IV의 화합물을 3개의 펩타이드와 반응시켜 화학식 V의 화합물을 수득하는 단계; 및 iv) 상기 화학식 V의 화합물을 염산과 반응시켜 화학식 I-1의 화합물을 수득하는 단계를 포함한다.

보다 구체적인 반응 과정을 단계별로 예시하면 다음과 같다

제 1 단계

제조예 1에서 수득된 화합물(1.0~1.1 당량), 아민 (0.48~0.52 당량), TEA (4.0~4.5 당량)을 2-프로판올(20~22 mL/g) 용매 하에서 교반하여 용해시킨다. 반응 용액의 온도를 70~90℃로 올린 후 4~5시간 동안 더 교반한다. 반응 용액의 온도를 상온으로 식힌 후 생성된 고체를 여과하고 2-프로판올로 씻어준 후 건조하여 목적 화합물을 수득한다.

제 2 단계

철(9.5~10.0 당량)과 염산(0.7~0.8 당량)을 50% 에탄올에 넣고 반응 온도를 90~110℃로 올려서 1시간 환류시켜 활성화한다. 여기에 상기 제 1 단계에서 수득된 화합물(1.0~1.2 당량)을 활성화된 철에 첨가하고 2~3시간 동안 90~110℃에서 환류시킨다. 반응이 완결되면 반응 용액을 셀라이트 패드에서 감압 여과하고, 클로로포름:이소프로필알콜 = 4:1 용액(80~90 mL/g)으로 세척한 후 얻어진 여과액을 중탄산 나트륨 수용액으로 세척한다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 다음, 감압 여과 및 감압 건조하여 목적 화합물을 수득한다.

제 3 단계

상기 제 2 단계에서 수득된 화합물(1 당량)과 Ala-Tle-Pro 유도체(5.5~6.0 당량), EDCI(9.5~10.0 당량)을 피리딘(29~31 mL/g) 용매 하에서 교반한다. 반응 용액의 온도를 50~60℃로 올린 후 4~5시간 동안 더 교반하고 감압 농축한 후 EA에 녹이고 중탄산 나트륨 수용액으로 세척한다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 다음, 감압 여과 및 감압 농축하여 컬럼 크로마토그래피로 정제함으로써 목적 화합물을 수득한다.

제 4 단계

상기 제 3 단계에서 수득된 화합물(1.0~1.1 당량)을 4M HCl/다이옥산 용액 (9~10 mL/g)에 녹인 후 상온에서 3~4시간 동안 교반한다. 반응 후 생성된 고체를 여과하고 디에틸 에테르로 씻어준 후 건조하여 목적 화합물을 수득한다.

대안적으로, 본 발명의 화학식 I의 화합물은 하기의 공정을 통해 제조될 수 있다.

[반응식 2]

상기 반응식에서, A는 하기 구조를 갖는 치환체이다:

보다 구체적인 반응 과정을 단계별로 예시하면 다음과 같다

제 1 단계

제조예 1의 제 3 단계에서 수득된 화합물(1.0~1.1 당량)과 탄산칼륨(2.0~2.5 당량)을 아세톤에서 교반시키고 브롬화합물(1.5~1.7 당량)을 가하여 5시간 동안 가열 환류시킨다. 반응 용액의 온도를 상온으로 식힌 후 고체를 여과하고 아세톤으로 씻어준 후 여과액을 감압 건조하여 목적 화합물을 수득한다.

제 2 단계

철(4.9~5.2 당량)과 염산(0.7~0.8 당량)을 50% 에탄올에 넣고 반응 온도를 90~110℃로 올려서 1시간 환류시켜 활성화시킨다. 여기에 상기 제 1 단계에서 수득된 화합물(1.0~1.2 당량)을 활성화된 철에 첨가하고 2~3시간 동안 90~110℃에서 환류시킨다. 반응이 완결되면 반응 용액을 셀라이트 패드에서 감압 여과하고, 클로로포름:이소프로필알콜 = 4:1 용액(80~90 mL/g)으로 세척한 후 얻어진 여과액을 중탄산 나트륨 수용액으로 세척한다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 다음, 감압 증류하여 컬럼 크로마토그래피로 정제함으로써 목적 화합물을 수득한다.

제 3 단계

상기 제 2 단계에서 수득된 화합물(1.0~1.1 당량)과 Ala-Tle-Pro 유도체 (3.0~3.2 당량), EDCI(5.0~5.3 당량)를 피리딘(29~31 mL/g) 용매 하에서 교반하여 용해시킨다. 반응 용액의 온도를 50~60℃로 올린 후 4~5시간 동안 더 교반하고 감압 증류한 후 EA에 녹이고 중탄산 나트륨 수용액으로 세척한다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 다음, 감압 증류하여 컬럼 크로마토그래피로 정제함으로써 목적 화합물을 수득한다.

제 4 단계

상기 제 3단계에서 수득된 화합물(1.0~1.2 당량)을 건조된 아세톤에 녹인다. TMEDA(2.0~1.2 당량)와 CuCl(2.0~1.2 당량)을 순차적으로 넣고 상온, 산소 조건 하에서 5~6시간 교반하고 감압 농축한 후 EA에 녹이고 중탄산 나트륨 수용액으로 세척한다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 다음, 감압 여과 및 감압 증류하여 컬럼 크로마토그래피로 정제함으로써 목적 화합물을 수득한다.

제 5 단계

상기 제 4 단계에서 수득된 화합물(1.0~1.1 당량)을 4M HCl/다이옥산 용액 (9~10 mL/g)에 녹인 후 상온에서 3~4시간 동안 교반한다. 반응 후 생성된 고체를 여과하고 디에틸 에테르로 씻어준 후 건조하여 목적 화합물을 수득한다.

[반응식 3]

상기 식에서, A는 반응식 2에서 설명한 바와 같다.

보다 구체적인 반응 과정을 단계별로 예시하면 다음과 같다

제 1 단계

제조예 1에서 수득된 화합물(1.0~1.1 당량), 아민(2.0~2.2 당량)을 2-프로판올(20~22 mL/g) 용매 하에서 교반한다. 반응 용액의 온도를 70~90℃로 올린 후 4~5시간 동안 더 교반한다. 반응 용액의 온도를 상온으로 식힌 후 생성된 고체를 여과하고 2-프로판올로 씻어준 후 건조하여 목적 화합물을 수득한다.

제 2 단계

제 3 단계

상기 제 2 단계에서 수득된 화합물(1.0~1.1 당량)과 Ala-Tle-Pro 유도체(3.0~3.2 당량), EDCI(5.0~5.3 당량)를 피리딘(29~31 mL/g) 용매 하에서 교반하여 용해시킨다. 반응 용액의 온도를 50~60℃로 올린 후 4~5시간 동안 더 교반하고 감압 증류한 후 EA에 녹이고 중탄산 나트륨 수용액으로 세척한다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 다음, 감압 증류하여 컬럼 크로마토그래피로 정제함으로써 목적 화합물을 수득한다.

제 4 단계

상기 제 3단계에서 수득된 화합물(1.0~1.2 당량)을 건조된 아세톤에 녹인다. TMEDA(2.0~1.2 당량)와 CuCl(2.0~1.2 당량)를 순차적으로 넣고 상온, 산소 조건 하에서 5~6시간 교반하고 감압 농축한 후 EA에 녹이고 중탄산 나트륨 수용액으로 세척한다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 다음, 감압 여과 및 감압 증류하여 컬럼 크로마토그래피로 정제함으로써 목적 화합물을 수득한다.

제 5 단계

상기 제 4 단계에서 수득된 화합물(1.0~1.1 당량)을 4M HCl/다이옥산 용액(9~10 mL/g)에 녹인 후 상온에서 3~4시간 동안 교반한다. 반응 후 생성된 고체를 여과하고 디에틸 에테르로 씻어준 후 건조하여 목적 화합물을 수득한다.

본 발명의 유사체의 합성은, 반응식 1, 반응식 2 및 반응식 3에 도시된 바와 같은 스맥/디아블로(SMAC/DIABLO) 유사 구조 라이브러리를 제조하는 일반 반응 도식을 사용하여 수행할 수 있으며, 질량 분석은 워터스(Waters)사의 MicroMass ZQ^TM를 사용하여 진행할 수 있다.

본 발명은 상기 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 암, 염증성 질환, 자가 면역 질환 또는 퇴행성 신경 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 등의 활성성분의 투여량은 처리되는 대상, 질병 또는 상태의 심각도, 투여의 속도 및 처방 의사의 판단에 따른다. 유효 성분으로서 화학식 1의 화합물은 사람을 포함하는 포유동물에 하루 0.01 내지 200 ㎎/㎏(체중), 바람직하게는 10 내지 100 ㎎/㎏(체중)의 양으로 1일 1~2회 또는 On/Off 스케줄로 경구 또는 비경구적 경로를 통해 투여할 수 있다. 일부 경우에 있어서, 상기 언급된 범위 보다 적은 투여량 수치가 보다 적합할 수 있고, 해로운 부작용을 일으키지 않으면서도 보다 많은 투여량이 사용될 수도 있으며, 보다 많은 투여량의 경우는 하루에 걸쳐 수회의 적은 투여량으로 분배된다.

본 발명의 약학 조성물은 통상적인 방법에 따라 제제화할 수 있으며, 정제, 환제, 산제, 캅셀제, 시럽, 에멀젼, 마이크로에멀젼 등의 다양한 경구 투여 형태 또는 근육내, 정맥내 또는 피하투여와 같은 비경구 투여 형태로 제조될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물이 경구제형의 형태로 제조되는 경우, 사용되는 담체의 예로는 셀룰로오스, 규산칼슘, 옥수수전분, 락토오스, 수크로스, 덱스트로스, 인산칼슘, 스테아르산, 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘, 젤라틴, 탈크, 계면활성제, 현탁제, 유화제, 희석제 등을 들 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물이 주사제의 형태로 제조되는 경우 상기 담체로는 물, 식염수, 포도당 수용액, 유사 당수용액, 알콜, 글리콜, 에테르(예: 폴리에틸렌글리콜 400), 오일, 지방산, 지방산에스테르, 글리세라이드, 계면활성제, 현탁제, 유화제 등을 들 수 있다.

나아가, 본 발명은 상기 본 발명에 따른 화합물, 이의 염, 이성질체, 수화물 및 용매화물 중 하나 이상을 포함하는 화합물 라이브러리를 제공한다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

제조예 1: 4-클로로-7-메톡시-6-니트로퀴나졸린의 제조

단계 (1): 7-플루오로-3H-퀴나졸린-4-온의 제조

2-아미노-4-플루오로벤조산(100 g, 0.64 mol)과 포름아미드(154 mL, 3.87 mol)에 촉매량(1 mL)의 N,N-디메틸포름아미드를 첨가하고 교반하였다. 반응온도를 180℃까지 올린 후 다시 14시간 동안 교반하였다. 용액의 온도를 상온으로 낮춘 후 증류수(1000 mL)를 첨가한 다음, 30분간 교반한 후 여과하여 표제 화합물(86 g, 81.3%)을 수득하였다.

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): δ 12.34(s, 1H), 8.19-8.12(m, 2H), 7.46-7.34(m, 2H)

MS (ESI⁺, m/z): 165 [M+H]⁺

단계 (2): 7-플루오로-6-니트로-3H-퀴나졸린-4-온의 제조

상기 단계 (1)에서 수득한 7-플루오로-3H-퀴나졸린-4-온(25 g, 152 mmol)을 0℃에서 황산(50 mL) 및 질산(51 mL)의 혼합용액에 서서히 첨가하였다. 이 용액을 상온에서 1시간 동안 교반하고 반응온도를 110℃로 올린 후 2시간 동안 교반하였다. 용액의 온도를 상온으로 낮춘 뒤 얼음물(300 mL)을 첨가하였다. 생성된 고체를 30분 가량 교반하고 여과하여 표제 화합물(25 g, 79%)을 수득하였다.

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): δ 12.83(br, 1H), 8.27(d, 1H), 8.32(s, 1H), 7.79(d, 1H)

MS(ESI⁺, m/z): 210 [M+H]⁺

단계 (3): 7-메톡시-6-니트로-3H-퀴나졸린-4-온의 제조

상기 단계 (2)에서 수득한 7-플루오로-3H-퀴나졸린-4-온(25 g, 0.12 mol)을 메탄올(1.2 L)에 현탁시켰다. 30℃ 이하로 유지하면서 반응 용액에 NaOMe(19.4 g, 0.36 mol)를 서서히 첨가하고 교반하였다. 반응온도를 65℃까지 올린 후 다시 2시간 동안 교반하였다. 용액의 온도를 상온으로 낮춘 후 1N 염산 수용액을 첨가하여 pH 5-6으로 조정하였다. 반응 용액에 물(300 mL)을 첨가한 후 30분간 교반하였다. 생성된 고체를 여과하여 표제 화합물(26 g, 98%)을 수득하였다.

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d⁶): δ 8.51(s, 1H), 8.22(s, 1H), 7.41(s, 1H), 4.03(s, 3H)

단계 (4): 4-클로로-7-메톡시-6-니트로퀴나졸린의 제조

상기 단계 (3)에서 수득한 7-메톡시-6-니트로-3H-퀴나졸린-4-온(26 g, 0.12 mol) 및 티오닐 클로라이드(178 mL, 2.45 mol), 포스포러스 옥사이클로라이드(35 mL, 0.38 mol) 및 N,N-디메틸포름아미드(1 mL)를 첨가하여 교반하였다. 반응온도를 100℃로 올려 화합물이 맑게 녹은 후 2시간 동안 교반하였다. 반응온도를 상온으로 낮추고 용매를 감압 증류하였다. 얻어진 잔사에 톨루엔(300 mL)을 붓고 다시 감압 증류하였다. 이 과정을 3회 반복하여 표제 화합물(27 g, 85%)을 수득하였다.

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d⁶): δ 9.12(s, 1H), 8.78(s, 1H), 7.79(s, 1H), 4.11(s, 3H)

제조예 2: (S)-1-((S)-2-((S)-2-(tert- 부톡시카보닐(메틸)아미노)프로판아미도)-3,3-디메틸부타노일)피롤리딘-2-카복실산의 제조

단계 (1): (S)-2-벤질 1-tert-부틸 피롤리딘-1,2-디카복시레이트의 제조

Boc-Pro-OH(50.0 g, 0.23 mol)를 디클로로 메탄(500 mL)에 용해한 후, EDCI(89.1 g, 0.46 mol), DMAP(5.7 g, 0.05 mol), DIPEA(162 mL, 0.93mol), 벤질알콜(48 mL, 0.46 mol)을 적가하였다. 반응액을 상온에서 12시간 교반하였다. 5% 시트르산 수용액으로 여러 번 세척하고, 유기층은 황산나트륨으로 건조한 후, 감압 여과 및 감압 증류하여 표제 화합물(70.0 g, 99%)을 노란색 오일로 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, CDCl₃): δ 7.32 (m, 5H), 5.20 (m, 2H), 4.27 (d, 1H), 3.52 (m, 2H), 1.91 (m, 4H), 1.35 (s, 9H)

MS (ESI⁺, m/z): 306 [M+H]⁺

단계 (2): (S)-벤질 피롤리딘-2-카복실레이트 염산염의 제조

상기 단계 (1)의 (S)-2-벤질 1-tert-부틸 피롤리딘-1,2-디카복시레이트 (70.0 g, 0.23 mol)을 4M HCl/다이옥산 용액(175 mL)에 녹인 후 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 후 용액을 감압 농축하고, 디에틸 에테르를 이용하여 재결정을 하여, 표제 화합물(42.6 g, 77%)을 흰색 고체로 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, CDCl₃): δ 7.32 (m, 5H), 5.20 (m, 2H), 4.27 (d, 1H), 3.52 (m, 2H), 1.91 (m, 4H)

MS (ESI⁺, m/z): 206 [M+H]⁺

단계 (3): (S)-벤질 1-((S)-2-(tert-부톡시카보닐아미노)-3,3-디메틸부타노일)피롤리딘-2-카복실레이트의 제조

상기 단계 (2)의 (S)-벤질 피롤리딘-2-카복실레이트 염산염(30.0 g, 0.12 mol)을 디클로로 메탄(300 mL)에 용해한 후, Boc-Tle-OH(26.7 g, 0.12 mol), HATU(56.6 g, 0.15 mol), DIPEA(43 mL, 0.25 mol)을 적가하였다. 반응액을 상온에서 4시간 교반하였다. 불용성분을 여과를 통해 제거하고, 5% 시트르산 수용액으로 여러 번 세척하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조하고, 감압 여과 및 감압 증류한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(47.0 g, 91%)을 투명한 오일로 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, CDCl₃): δ 7.33 (m, 5H), 5.15 (m, 2H), 4.61 (m, 2H), 3.84 (m, 2H), 2.25 (m, 2H), 1.98 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 0.98 (s, 9H)

MS (ESI⁺, m/z): 419 [M+H]⁺

단계 (4): (S)-벤질 1-((S)-2-아미노-3,3-디메틸부타노일)피롤리딘-2-카복실레이트 염산염의 제조

상기 단계 (3)의 (S)-벤질 1-((S)-2-(tert-부톡시카보닐아미노)-3,3-디메틸부타노일)피롤리딘-2-카복실레이트(47.0 g, 0.11 mol)를 4M HCl/다이옥산 용액 (115 mL)에 녹인 후 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 후 용액을 감압 증류하여, 표제 화합물(39.0 g, 98%)을 투명한 오일로 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, CDCl₃): δ 7.35 (s, 5H), 5.18 (q, 2H), 4.67 (t, 1H), 4.02 (m, 2H), 3.56 (m, 1H), 2.32 (m, 1H), 1.93 (m, 3H), 1.13 (s, 9H)

MS (ESI⁺, m/z): 319 [M+H]⁺

단계 (5): (S)-벤질 1-((S)-2-((S)-2-(tert-부톡시카보닐(메틸)아미노)프로판아미도)-3,3-디메틸부타노일)피롤리딘-2-카복실레이트의 제조

상기 단계 (4)의 (S)-벤질 1-((S)-2-아미노-3,3-디메틸부타노일)피롤리딘-2-카복실레이트 염산염(29.0 g, 0.08 mol)을 디클로로 메탄(300 mL)에 용해한 후, Boc-MeAla-OH(24.9 g, 0.12 mol), EDCI(23.5 g, 0.12 mol), DIPEA(43 mL, 0.25 mol)를 적가하였다. 반응액을 상온에서 12시간 교반하였다. 5% 시트르산 수용액으로 여러 번 세척하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조하고, 감압 여과 및 감압 증류한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(30.0 g, 72%)를 투명한 오일로 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, CDCl₃): δ 7.33 (m, 5H), 5.16 (q, 2H), 4.16 (m, 1H), 4.54 (m, 1H), 3.84 (m, 1H), 3.66 (m, 1H), 2.77 (s, 3H), 2.18 (m, 1H), 1.95 (m, 3H), 1.47 (s, 9H), 1.29 (m, 5H), 0.96 (s, 9H)

MS (ESI⁺, m/z): 504 [M+H]⁺

단계 (6): (S)-1-((S)-2-((S)-2-(tert-부톡시카보닐(메틸)아미노)프로판아미도)-3,3-디메틸부타노일)피롤리딘-2-카복실산의 제조

상기 단계 (5)의 (S)-벤질 1-((S)-2-((S)-2-(tert-부톡시카보닐(메틸)아미노)프로판아미도)-3,3-디메틸부타노일)피롤리딘-2-카복실레이트(28.0 g, 0.06 mol)를 메탄올(300 mL)에 용해한 후, 10% 팔라듐/탄소 (2.8 g)를 넣고 수소화 반응 상태에서 1.5시간 동안 교반하였다. 불용성 성분을 여과를 통해 제거하고, 용액을 감압 농축한 후, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(21.0 g, 91%)을 흰색 고체로 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, CDCl₃): δ 4.57 (m, 3H), 3.83 (m, 1H), 3.65 (m, 1H), 2.75 (s, 3H), 2.31 (m, 1H), 2.01 (m, 3H), 1.46 (s, 9H), 1.29 (d, 3H), 0.98 (s, 9H)

MS (ESI⁺, m/z): 414 [M+H]⁺

실시예 1: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((1S,4S)-사이클로헥산-1,4-디일비스(메틸렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-2-(메칠아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

단계 (1): (1R,4R)-사이클로헥산-1,4-디일비스(메틸렌) 디메탄설포네이트의 제조

트랜스-1,4-사이클로헥산디메탄올(10 g, 0.069 mol)을 MC 하에서 교반하였다. 이 용액에 메탄설포닐클로라이드(13 mL, 0.166 mol)를 0℃에서 첨가한 후, 같은 온도에서 트리에틸아민(23.2 mL, 0.166 mol)을 서서히 첨가하였다. 반응온도를 상온으로 올리고 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 얼음을 넣고 반응을 종결시킨 후 MC로 희석하였다. 유기층을 중탄산나트륨 수용액과 소금물로 세척한 후, 황산나트륨으로 건조한 다음, 감압 여과 및 감압 건조하여 표제 화합물(14.0 g, 67%)을 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, CDCl₃): δ 4.03(d, 4H), 2.99(s, 6H), 1.89(m, 4H), 1.72(m, 2H), 1.07(m, 4H)

단계 (2): (1R,4R)-1,4-비스(아지도메틸)사이클로헥산의 제조

상기 단계 (1)에서 수득한 화합물(13.6 g, 0.045 mol)과 소듐아자이드(17.7 g, 0.271 mol)를 DMF (110 mL)에 녹인 후, 120℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 용액의 온도를 상온으로 낮추고 얼음을 첨가한 후 에틸아세테이트로 희석하였다. 유기층을 1N 수산화나트륨 수용액, 물, 소금물로 세척하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 다음, 감압 여과 및 감압 건조하여 표제 화합물(8.1 g, 92%)을 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, CDCl₃): δ 3.19(d, 4H), 1.72(m, 4H), 1.44(m, 2H), 0.96(m, 4H)

단계 (3): 트랜스-1,4-사이클로헥산디메탄아민의 제조

상기 단계 (2)에서 수득한 화합물(3.7g, 0.019 mol)과 트리페닐포스핀(30.0 g, 0.114 mol)을 THF(40 mL)에 녹인 후, 물(7.0 mL, 0.381 mol)을 첨가하였다. 반응 용액을 60℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 종료 후 용액을 감압 증류하여 THF를 제거하였다. 잔류물에 헥산을 첨가한 후 생성된 고체를 여과하여 트리페닐포스핀을 제거하였다. 상기 과정을 5회 반복한 후 감압 건조하여 표제 화합물(2.4 g, 90%)을 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, CDCl₃): δ 2.33(d, 4H), 1.73(m, 4H), 1.04(m, 2H), 0.78(M, 4H)

단계 (4): N,N'-((1R,4R)-사이클로헥산-1,4-디일비스(메틸렌))비스(7-메톡시-6-니트로퀴나졸린-4-아민)의 제조

제조예 1 에서 수득한 4-클로로-7-메톡시-6-니트로퀴나졸린(27 g, 0.098 mol)과 상기 단계 (3)에서 수득한 트랜스-1,4-사이클로헥산디메탄아민(6.7 g, 0.047 mol) 및 트리에틸아민(53 mL, 0.38 mol)을 2-프로판올(1300 mL) 용매 하에서 교반하였다. 반응 용액의 온도를 60℃로 올린 후 4시간 동안 더 교반하였다. 반응 용액의 온도를 상온으로 낮춘 후 생성된 고체를 여과하여 표제 화합물(19 g, 70%)을 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, DMSO-d⁶): δ 9.00(s, 2H), 8.59(m, 2H), 8.45(s, 2H), 7.31(s, 2H), 3.99(s, 6H), 1.81(m, 4H), 1.66(br, 2H), 0.95(m, 4H)

단계 (5): N4,N4'-((1R,4R)-사이클로헥산-1,4-디일비스(메틸렌))비스(7-메톡시퀴나졸린-4,6-디아민)의 제조

철 4.6 g을 50% 에탄올 수용액 (50 mL)에 희석시키고 염산 (1.0 mL)를 첨가한 후 반응 온도를 100℃로 올려서 활성화시켰다. 상기 단계 (4)에서 수득한 트랜스-1,4-사이클로헥산디메탄아민(4.5 g, 8.20 mmol)을 상기 활성화된 철에 첨가하고 1시간 동안 100℃에서 환류시켰다. 반응이 완결된 다음 상기 반응 용액을 셀라이트 패드에서 감압 여과하고, 클로로포름:이소프로필알콜 = 4:1(v/v) 용액으로 세척한 후 얻어진 여과액을 중탄산 나트륨 수용액으로 세척하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 다음, 감압 여과 및 감압 증류 후 컬럼크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물(0.6 g, 15%)을 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, DMSO-d⁶): δ 8.14(s, 2H), 7.48(m, 2H), 7.13(s, 2H), 6.93(s, 2H), 5.05(s, 4H), 3.88(s, 6H), 1.78(m, 4H), 1.66(br, 2H), 0.91(m, 4H)

단계 (6): 디-tert-부틸((2S,2'S)-(((2S,2'S)-((2S,2'S)-2,2'-(((4,4'-(((1S,4S-사이클로헥산-1,4-디일비스(메틸렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(아잔디일))비스(카보닐))비스(피롤리딘-2,1-디일))비스(3,3-디메틸-1-옥소부탄-2,1-디일))비스(아잔디일))비스(1-옥소프로판-2,1-디일))비스(메틸카바메이트)의 제조

상기 단계 (5)에서 수득한 화합물(1.0 g, 2.05 mmol)과 제조예 2에서 수득한 (S)-1-((S)-2-((S)-2-(tert-부톡시카보닐(메틸)아미노)프로판아미도)-3,3-디메틸부타노일)피롤리딘-2-카복실산(5.1 g, 12.28 mmol) 및 EDCI(3.9 g, 20.47 mmol)을 피리딘/DMF 용매 (50/5 mL)하에서 교반하였다. 반응 용액의 온도를 60℃로 올린 후 4시간 동안 더 교반하고 감압 증류한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물(1.7 g, 65%)을 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, CDCl₃): δ 9.68(s, 2H), 9.34(br, 2H), 8.79(s, 2H), 8.52(s, 2H), 7.16(s, 2H), 6.90(br, 2H), 5.70(m, 2H), 4.85(m, 2H), 4.71(m, 2H), 4.63(d, 2H), 3.98(s, 6H), 3.87(m, 2H), 3.71(m, 2H), 2.79(s, 6H), 2.54(m, 2H), 2.25-1.92(m, 2H) 2.16(br, 4H), 1.91(m, 2H), 1.68(br, 4H), 1.50(s, 18H), 1.34(d, 6H), 0.98(s, 18H)

단계 (7): (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((1S,4S)-사이클로헥산-1,4-디일비스(메틸렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

상기 단계 (6)에서 수득한 화합물(510 mg, 0.34 mmol)을 EA (10 mL)에 녹인 후 4M HCl/다이옥산 용액 (2.0 mL, 7.97 mmol)을 첨가했다. 반응 용액을 상온에서 3시간 동안 교반한 후 생성된 고체를 여과하고 디에틸 에테르로 세척한 후 연노란색 고체의 표제 화합물(340 mg, 74%)을 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, DMSO-d⁶): δ 9.98(m, 2H), 9.77(s, 2H), 9.50(m, 2H), 8.88(s, 2H), 8.77(s, 2H), 8.61(d, 2H), 7.42(s, 2H), 4.78(m, 2H), 4.51(d, 2H), 4.01(s, 6H), 3.77(m, 2H), 3.69(m, 2H), 3.48(m, 2H), 2.13-1.89(m, 8H), 1.75(m, 8H), 1.33(d, 6H), 0.98(s, 18H)

실시예 2: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(헥사-2,4-디엔-1,6-디일비스(옥시))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

단계 (1): 7-메톡시-6-니트로-4-(프로파질옥시)-퀴나졸린의 제조

7-메톡시-6-니트로-3H-퀴나졸린-4-온(1 g, 4.52 mmol)과 탄산칼륨(1.25 g, 9.04 mmol)을 아세톤(15 mL)에서 교반시키고, 프로파질브로마이드(807 mg, 6.78 mmol)을 가하여 5시간 동안 가열 환류시켰다. 감압 농축 후 생성된 고체를 여과하여 표제 화합물(1 g, 85%)을 얻었다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, DMSO-d⁶): δ 8.59 (s, 2H), 7.48 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 4.81 (d, 2H), 4.06 (s, 3H), 3.46 (d, 1H).

MS (ESI⁺, m/z): 260 [M+H]⁺

단계 (2): 6-아미노-7-메톡시-4-(프로파질옥시)-퀴나졸린의 제조

철(1.1 g)을 50% 에탄올 수용액(13 mL)에 희석시키고, 염산용액 한방울을 첨가한 후 80℃에서 활성화시켰다. 여기에 상기 단계 1에서 수득된 화합물(1 g, 3.85 mmol)을 첨가하고 1시간 동안 80℃에서 환류시켰다. 반응이 완결되면 반응 용액을 셀라이트 패드에서 감압 여과하고, 에탄올로 세척한 후 얻어진 여과액을 중탄산 나트륨 수용액으로 세척하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 다음, 감압 증류 및 실리카겔 컬럼으로 정제하여 표제 화합물(410 ㎎, 46%)을 얻었다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, CDCl₃): δ 8.12 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 4.80 (d, 2H), 4.19 (br, 2H), 3.96 (s, 3H), 2.46 (d, 1H).

MS (ESI⁺, m/z): 230 [M+H]⁺

단계 (3): tert-부틸 (S)-1-((S)-1-((S)-2-(7-메톡시-4-(프로파질옥시)-퀴나졸린-6-일카바모일)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-1-옥소프로판-2-일(메틸)카바메이트의 제조

상기 단계 2에서 수득된 화합물(400 mg, 1.74 mmol)과 제조예 2에서 수득한 (S)-1-((S)-2-((S)-2-(tert-부톡시카보닐(메틸)아미노)프로판아미도)-3,3-디메틸부타노일)피롤리딘-2-카복실산(858 mg, 2.62 mmol), EDCI(667 mg, 3.48 mmol)을 피리딘(6 mL) 용매 하에서 교반하였다.　 반응 용액의 온도를 50℃로 올린 후 4시간 동안 더 교반하고 감압 증류한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(1.02 g, 94%)을 얻었다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, CDCl₃) δ 9.48 (br, 1H), 9.18 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.90 (brs, 1H), 4.85-4.82 (m, 1H), 4.80 (s, 2H), 4.64 (d, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.88-3.84 (m, 1H), 3.70-3.67 (m, 1H), 2.80 (s, 3H), 2.56-2.53 (m, 1H), 2.48 (s, 1H), 2.30-1.90 (m, 3H), 1.58 (s, 9H), 1.33 (d, 3H), 0.98 (s, 9H).

MS (ESI⁺, m/z): 625 [M+H]⁺

단계 (4): 디-tert-부틸(2S,2'S)-1,1'-(2S,2'S)-1,1'-((2S,2'S)-2,2'-(4,4'-(헥사-2,4-디엔-1,6-디일비스(옥시))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(아잔디일)비스(옥소메틸렌)비스(피롤리딘-2,1-디일))비스(3,3-디메틸-1-옥소부탄-2,1-디일)비스(아잔디일)비스(1-옥소프로판-2,1-디일)비스메틸카바메이트의 제조

상기 단계 3에서 수득된 화합물(250 mg, 0.08 mmol), CuCl(32 mg, 0.32 mmol), TMEDA(48 ul, 0.32 mmol)를 아세톤(1 mL) 산소조건 하에서 12시간 동안 교반한다.　 감압 농축후 실리카겔 컬럼 정제하여 표제 화합물(80 mg, 80%)을 얻었다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, CDCl₃) δ 9.48 (br, 2H), 9.16 (s, 2H), 8.11 (s, 2H), 7.08 (s, 2H), 6.90 (br, 2H), 4.88 (s, 4H), 4.85-3.98 (m, 6H), 3.98 (s, 6H), 3.87-3.84 (m, 2H), 3.70-3.68 (m, 2H), 2.80 (s, 6H), 2.58-2.54 (m, 2H), 2.16-1.90 (m, 6H), 1.51 (s, 18H), 1.33 (d, 6H), 0.97 (s, 18H).

MS (ESI⁺, m/z): 1247 [M+H]⁺

단계 (5): (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(헥사-2,4-디엔-1,6-디일비스(옥시))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

상기 단계 4에서 수득된 화합물(50 mg, 0.04 mmol)을 에틸아세테이트(1 mL)에 녹이고, 4M HCl/다이옥산 용액(0.1 mL)을 가하여 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 후 생성된 고체를 여과하여, 연노란색 고체로 표제 화합물(43 mg, 96%)을 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, DMSO-d⁶): δ 9.61 (br, 4H), 8.95 (br, 2H), 8.84 (s, 2H), 8.62 (d, 2H), 8.50 (s, 2H), 7.25 (s, 2H), 4.95 (s, 4H), 4.75-4.73 (m, 2H), 4.51 (d, 2H), 4.13-4.07 (m, 2H), 4.03 (s, 6H), 3.75-3.71 (m, 4H), 2.45 (s, 6H), 2.10-1.91 (m, 8H), 1.34 (d, 6H), 1.01 (s, 18H)

MS (ESI⁺, m/z): 1047 [M+H]⁺

실시예 3: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((1R,4R)-사이클로헥산-1,4-디일비스(메틸렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

실시예 1에서 단계 (4)의 트랜스-1,4-사이클로헥산디메탄아민 대신 시스-1,4-사이클로헥산디메탄아민을 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 표제 화합물(13 mg, 2.3%)을 수득하였다.

MS (ESI⁺, m/z): 1079 [M+H]⁺

실시예 4: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-((1S,4S)-사이클로헥산-1,4-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

실시예 1에서 단계 (4)의 트랜스-1,4-사이클로헥산디메탄아민 대신 트랜스-1,4-사이클로헥산디아민을 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 표제 화합물(185 mg, 10%)을 수득하였다.

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d⁶): δ 9.79(s, 2H), 9.16(s, 2H), 8.88(s, 2H), 8.82(s, 2H), 8.61(d, 2H), 7.34(s, 2H), 4.77(m, 2H), 4.53(d, 2H), 4.44(br, 2H), 4.09(s, 6H), 3.71(m, 4H), 2.49(s, 6H), 2.27(s, 2H), 2.17(m, 4H), 2.08-1.91(m, 8H), 1.76(m, 4H), 1.34(d, 6H), 1.15(s, 6H), 0.95(s, 18H)

MS (ESI⁺, m/z): 1051 [M+H]⁺

실시예 5: ((S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-((1R,4R)-사이클로헥산-1,4-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

실시예 1에서 단계 (4)의 트랜스-1,4-사이클로헥산디메탄아민 대신 시스-1,4-사이클로헥산디아민을 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 표제 화합물(185 mg, 10%)을 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, DMSO-d⁶): δ 15.11 (br, 2H), 9.80 (s, 2H), 9.71 (br, 2H), 9.52 (br, 2H), 9.04 (s, 4H), 8.85 (s, 2H), 8.66 (s, 2H), 7.50 (s, 2H), 4.78 (m, 2H), 4.52 (d, 2H), 4.48 (br, 2H), 4.02 (s,8H), 3.76 (m, 4H), 2.49 (s, 6H), 2.03 (s, 16H), 1.36 (d, 6H), 1.00 (s, 18H)

MS (ESI⁺, m/z): 1051 [M+H]⁺

실시예 6: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(피페라진-1,4-디일)비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

실시예 1에서 단계 (4)의 트랜스-1,4-사이클로헥산디메탄아민 대신 피페라진을 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 표제 화합물(2.5 mg, 1.5%)을 수득하였다.

MS (ESI⁺, m/z): 1022 [M+H]⁺

실시예 7: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((1S,4S)-사이클로헥산-1,4-디일비스(메틸렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-2-사이클로헥실-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)아세틸)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

제조예 2의 단계 (3)의 Boc-Tle-OH 대신 Boc-Chg-OH를 사용하는 것을 제외하고 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 표제 화합물(60 mg, 10%)을 수득하였다.

MS (ESI⁺, m/z) : 1131 [M+H]⁺

실시예 8: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((1S,4S)-사이클로헥산-1,4-디일비스(메틸렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-(3-메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

제조예 2의 단계 (3)의 Boc-Tle-OH 대신 Boc-Val-OH를 사용하는 것을 제외하고 실시예 1과 같은 방법을 수행하여 표제 화합물(50 mg, 9%)을 수득하였다.

MS (ESI⁺, m/z): 1051 [M+H]⁺

실시예 9: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-((1,4-페닐렌비스(메틸렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

실시예 1에서 단계 (4)의 트랜스-1,4-사이클로헥산디메탄아민 대신 1,4-페닐렌디메틸아민을 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 표제 화합물(1.5 mg, 1.3%)을 수득하였다.

MS (ESI⁺, m/z): 1073 [M+H]⁺

실시예 10: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-((1,3-페닐렌비스(메틸렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

실시예 1에서 단계 (4)의 트랜스-1,4-사이클로헥산디메탄아민 대신 1,3-페닐렌디메탄아민을 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 표제 화합물(65 mg, 10%)을 수득하였다.

MS (ESI⁺, m/z): 1073 [M+H]⁺

실시예 11: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((1S,2S)-1,2-디페닐에탄-1,2-디일)비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

실시예 1에서 단계 (4)의 트랜스-1,4-사이클로헥산디메탄아민 대신 (1S,2S)-1,2-디페닐에탄-1,2-디아민을 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 표제 화합물(418.8mg, 19%)을 수득하였다.

¹H-NMR (300MHz, DMSO-d⁶): δ 9.72 (s, 2H), 9.34 (br, 2H), 9.04 (s, 2H), 8.85 (m, 4H), 8.57 (d, 2H), 7.43 (m, 4H), 7.38 (s, 2H), 7.16 (m, 6H), 6.34 (m, 2H), 4.72 (t, 2H), 4.48 (d, 2H), 3.98 (s, 6H), 3.18 (m, 4H), 2.26 (s, 6H), 2.02 (m, 10H), 1.33 (d, 6H), 0.90 (s, 18H)

MS (ESI⁺, m/z): 1149 [M+H]⁺

실시예 12: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(부탄-1,4-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

실시예 1에서 단계 (4)의 트랜스-1,4-사이클로헥산디메탄아민 대신 1,4-디아미노부탄을 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 표제 화합물(217 mg, 1.8%)을 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, DMSO-d⁶): δ 9.48 (br. s, 2H), 9.30 (br. d, 2H), 8.59 (s, 2H), 8.34 (s, 2H), 8.10 (s, 2H), 7.14 (s, 2H), 4.73 (m, 2H), 4.51 (m, 4H), 3.95 (s, 6H), 3.68 (m, 4H), 3.52 (m, 4H), 2.75 (s, 3H), 2.65 (s, 3H), 1.99 (m, 8H), 1.67 (m, 4H), 1.21 (d, 6H), 0.93 (s, 18H)

MS (ESI⁺, m/z): 1026 [M+H]⁺

실시예 13: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(헥산-1,6-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

실시예 1에서 단계 (4)의 트랜스-1,4-사이클로헥산디메탄아민 대신 1,6-디아미노펜탄을 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 표제 화합물(2 mg, 1.5%)을 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, DMSO-d⁶): δ 8.92 (s, 2H), 8.64 (s, 2H), 7.23 (s, 2H), 4.80 (t, 2H), 4.70 (m, 2H), 4.13 (s, 6H), 3.98 (m, 4H), 3.80 (m, 6H), 2.68 (s, 6H), 2.17 (m, 8H), 1.84 (m, 4H), 1.49 (m, 10H), 1.11 (s, 18H)

MS (ESI⁺, m/z): 1053 [M+H]⁺

실시예 14: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(옥탄-1,8-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

실시예 1에서 단계 (4)의 트랜스-1,4-사이클로헥산디메탄아민 대신 1,8-디아미노옥탄을 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 표제 화합물(384 mg, 9.2%)을 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, DMSO-d⁶): δ 9.98(br, 2H) 9.80(s, 2H), 8.90 (br,2H), 8.87 (s, 2H), 8.80 (s, 2H), 8.64 (d, 2H), 7.46 (m, 2H), 4.79 (m, 2H), 4.52 (d, 2H), 4.04 (m, 8H), 3.83 (m, 2H), 3.68 (m, 6H), 2.71 (m, 2H), 2.46 (s, 6H), 1.99 (m, 10H), 1.65 (m, 4H), 1.17 (m, 14H), 1.00 (s, 18H)

MS (ESI⁺, m/z): 1081 [M+H]⁺

실시예 15: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(데칸-1,10-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

실시예 1에서 단계 (4)의 트랜스-1,4-사이클로헥산디메탄아민 대신 1,10-디아미노데칸을 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 표제 화합물(507 mg, 12%)을 수득하였다.

MS (ESI⁺, m/z): 1109 [M+H]⁺

실시예 16: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((에탄-1,2-디일비스(옥시))비스(에탄-2,1-디일))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

실시예 1에서 단계 (4)의 트랜스-1,4-사이클로헥산디메탄아민 대신 2,2'-(에틸렌디옥시)비스(에틸아민)을 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 표제 화합물(729 mg, 17%)을 수득하였다.

MS (ESI⁺, m/z): 1085 [M+H]⁺

실시예 17: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-([1,1'-비페닐]-4,4'-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

실시예 1에서 단계 (4)의 트랜스-1,4-사이클로헥산디메탄아민 대신 벤지딘을 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 표제 화합물(2mg, 1.7%)을 수득하였다.

MS (ESI⁺, m/z): 1121 [M+H]⁺

실시예 18: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(2-부틴-1,4-디일비스(옥시))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

실시예 2에서 단계 (1)의 프로파질브로마이드 대신 2-부틴-1,4-디올을 사용한 것을 제외하고 실시예 1의 단계 (5), (6), (7)과 동일한 방법을 수행하여 표제 화합물(115 mg, 15%)을 수득하였다.

MS (ESI⁺, m/z): 1023 [M+H]⁺

실시예 19: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(헥사-2,4-디엔-1,6-디일비스(옥시))비스(4,1-페닐렌))비스 (아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노) 프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

단계 (1): 1-니트로-4-(프로파질옥시)벤젠의 제조

4-니트로페놀(2.78 g, 19.98 mmol)과 탄산칼륨(5.52 g, 39.96 mmol)을 아세톤(60 mL) 중에서 교반시키고, 프로파질브로마이드(3.57 mg, 29.98 mmol)을 가하여 5시간 동안 가열 환류시켰다. 감압 농축 후 생성된 고체를 여과하여 표제 화합물(1 g, 85%)을 얻었다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, DMSO-d⁶): δ 8.24 (d, 2H), 7.21 (d, 2H), 4.99 (d, 2H), 3.68 (t, 1H)

단계 (2): 4-(프로파질옥시)벤젠아민의 제조

철 (5.5 g)을 50% 에탄올 수용액 60 mL에 희석시키고, 염산용액 한방울을 첨가하여 80℃에서 활성화시켰다. 여기에 상기 단계 1에서 수득된 1-니트로-4-(프로파질옥시)벤젠 (3.5 g, 19.76 mmol)을 첨가하고 1시간 동안 80℃에서 환류시켰다. 반응이 완결되면 반응 용액을 셀라이트 패드에서 감압 여과하고, 에탄올로 세척한 후 얻어진 여과액을 중탄산 나트륨 수용액으로 세척한다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 다음, 감압 증류 및 실리카겔 컬럼 정제하여4-(프로파질옥시)벤젠아민 (2.6 g, 89%)을 얻었다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, CDCl₃): δ 6.83 (d, 2H), 6.64 (d, 2H), 4.16 (d, 2H), 3.47 (br, 2H), 2.49 (d, 1H).

단계 (3): 7-메톡시-6-니트로-N-(4-프로파질 옥시페닐)퀴나졸린-4-아민의 제조

상기 단계 2에서 수득된 화합물(1.3 g, 8.82 mmol)을 4-클로로-7- 메톡시-6-니트로-퀴나졸린(2.1 g, 8.82 mmol)과 2-프로판올(30 mL) 용매 하에서 교반하였다.　 반응 용액의 온도를 80℃로 올린 후 4시간 동안 더 교반하였다.　 반응 용액의 온도를 상온으로 식힌 후 생성된 고체를 여과하여 표제 화합물(3 g, 97%)을 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, DMSO-d⁶): δ 11.84 (br, 1H), 9.63 (d, 1H), 8.87 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.63 (d, 2H), 7.08 (d, 2H), 4.81 (s, 2H), 4.07 (s, 3H), 3.60-3.57 (m, 1H).

단계 (4): 7-메톡시-N4-(4-프로파질 옥시페닐)퀴나졸린-4,6-디아민의 제조

철(2.4 g)을 50% 에탄올 수용액 30 mL에 희석시키고, 염산용액 한방울을 첨가하여 80℃에서 활성화시켰다. 여기에 상기 단계 3에서 수득된 화합물(3 g, 8.56 mmol)을 첨가하고 1시간 동안 80℃에서 환류시켰다. 반응이 완결되면 반응 용액을 셀라이트 패드에서 감압 여과하고, 에탄올로 세척한 후 얻어진 여과액을 중탄산 나트륨 수용액으로 세척하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 다음, 감압 증류 및 실리카겔 컬럼정제하여 표제 화합물(2 g, 70%)을 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, CDCl₃): δ 9.15 (br, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.74 (d, 2H), 7.38 (s, 1H), 6.99 (d, 2H), 6.97 (s, 1H), 5.26 (br, 2H), 4.77 (d, 2H), 3.94 (s, 3H), 2.49 (d, 1H)

단계 (5): tert-부틸 (S)-1-((S)-1-((S)-2-(7-메톡시-4-(4-(프로파질옥시)페닐아미노)-퀴나졸린 -6- 일카바모일)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-1-옥소프로판-2-일(메틸)카바메이트의 제조

상기 단계 4에서 수득된 화합물(130 mg, 0.41 mmol)과 제조예 2에서 수득한 (S)-1-((S)-2-((S)-2-(tert-부톡시카보닐(메틸)아미노)프로판아미도)-3,3-디메틸부타노일)피롤리딘-2-카복실산(200 mg, 0.61 mmol) 및 EDCI(157 mg, 0.82 mmol)를 피리딘(2 mL) 용매 하에서 교반하여 용해시켰다. 　반응 용액의 온도를 50℃로 올린 후 4시간 동안 더 교반하고 감압 증류한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(150 g, 51%)을 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, CDCl₃) δ 9.72 (s, 1H), 8.87 (brs, 1H), 8.57 (s, 1H), 7.68 (br, 1H), 7.59 (d, 2H), 7.18 (s, 1H), 7.01 (d, 2H), 4.90-4.88 (m, 1H), 4.73-4.63 (m, 4H), 4.03-3.87 (m, 4H), 3.74-3.71 (m, 1H), 2.80 (s, 3H), 2.55-2.53 (m, 2H), 2.21-2.02 (m, 3H), 1.50 (s, 9H), 1.34 (d, 3H), 0.98 (s, 9H)

단계 (6): 디-tert-부틸 (2S,2'S)-1,1'-(2S,2'S)-1,1'-((2S,2'S)-2,2'-(4,4'-(4,4'-(헥사-2,4-디엔-1,6-디일비스(옥시))비스(4,1-페닐렌))비스(아잔디일)비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(아잔디일)비스(옥소메틸렌)비스(피롤리딘-2,1-디일))비스(3,3-디메틸-1-옥소부탄-2,1-디일)비스(아잔디일)비스(1-옥소프로판-2,1-디일)비스메틸카바메이트의 제조

상기 단계 5에서 수득된 화합물(264 mg, 0.089 mmol), CuCl(35 mg, 0.36 mmol), TMEDA(54 ul, 0.36 mmol)를 아세톤 (1 mL) 산소조건 하에서 12시간 동안 교반하였다.　 감압 농축후 실리카겔 컬럼 정제하여 표제 화합물(60 mg, 47%)을 수득하였다.

단계 (7): (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(헥사-2,4-디엔-1,6-디일비스(옥시))비스(4,1-페닐렌))비스(아잔 디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

상기 단계 6에서 수득된 화합물(60 mg, 0.041 mmol)을 에틸아세테이트 (1 mL)에 녹이고, 4M HCl/다이옥산 용액 (0.1 mL)을 가하여 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 후 생성된 고체를 여과하여, 표제 화합물(45 mg, 83%)을 노란색 고체로 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, DMSO-d⁶): δ 11.28 (brs, 2H), 9.83 (s, 2H), 9.46 (brs, 2H), 9.12 (s, 2H), 8.91 (brs, 2H), 8.80 (brs, 2H), 8.60 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.53 (d, 4H), 7.09 (d, 4H), 5.04 (s, 4H), 4.81-4.73 (m, 2H), 4.53-4.50 (m, 2H), 4.06 (s, 6H), 3.99-3.63 (m, 6H), 2.46 (s, 6H), 2.17-1.91 (m, 8H), 1.35 (d, 6H), 1.00 (s, 18H).

실시예 20: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(헥사-1,3-디인-1,4-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시 퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2(메틸아미노)프로판아미도)부타노일) 피롤리딘-2-카복스아미드)의 제조

실시예 19에서 단계 (1)의 4-(프로파질옥시)벤젠아민 대신 프로파질 아민 사용하는 것을 제외하고, 실시예 19와 동일한 방법으로 수행하여 표제 화합물(187 mg, 1.2%)을 베이지색 고체로 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300 MHz, DMSO-d⁶): δ 9.64 (s, 1H), 9.52 (s, 1H), 9.15 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.41 (m, 2H), 7.87 (br. d, 2H), 7.46 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 4.76 (m, 2H), 4.53 (m, 2H), 4.33 (m, 2H), 4.06 (m, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.97 (s, 3H), 3.73 (m, 4H), 3.01 (d, 2H), 2.19 (s, 6H), 1.97 (m, 8H), 1.11 (d, 6H), 0.98 (s, 9H), 0.96 (s, 9H)

MS (ESI⁺, m/z): 1046 [M+H]⁺

실시예 21: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(헥사-2,4-디엔-1,6-디일비스(옥시))비스(4,1-페닐렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-2-사이클로헥실)-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)아세틸) 피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

제조예 2의 단계 (3)의 Boc-Tle-OH 대신 Boc-Chg-OH를 사용하는 것을 제외하고 실시예 19과 같은 방법으로 수행하여 표제 화합물(72mg, 10%)을 수득하였다.

MS (ESI⁺, m/z): 1281 [M+H]⁺

실시예 22: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((헥사-2,4-디엔-1,6-디일비스(옥시))비스(3-클로로-4,1-페닐렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드)이염산염의 제조

단계 (1): 2-클로로-4-니트로-1-(프로프-2-인-1-일옥시)벤젠의 제조

2-클로로-4-니트로페놀(1.0 g, 5.76 mmol)을 아세톤(20 mL)에 용해하고 탄산칼륨(1.5g, 11.52 mmol)과 프로파질 브로마이드(0.65 mL, 8.64 mmol)를 첨가하여 실온에서 4시간 교반하였다. 반응액에 요오드화 나트륨(0.17 g, 1.15 mmol)을 첨가하고 실온에서 1시간 동안 추가로 교반하였다. 반응액을 여과하고 아세톤으로 세척하였다. 여액을 감압 농축한 후, 디클로로메탄에 희석하여 물로 세척하였다. 분리된 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고 감압 농축하여, 표제 화합물(1.2 g, 98%)을 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300MHz, CDCl₃): δ 8.32 (s, 1H), 8.19 (d, 1H), 7.19 (d, 1H), 4.90 (s, 2H), 2.62 (s, 1H)

단계 (2): 3-클로로-4-(프로프-2-인-1-일옥시)아닐린의 제조

철(1.76 g, 28.35 mmol)을 50% 에탄올 수용액(20 mL)에 넣고 염산(0.2 mL, 2.27 mmol)을 첨가한 후 110℃에서 1시간 동안 활성화시켰다. 여기에 상기 단계 (1)에서 수득된 화합물(1.2 g, 5.67 mmol)을 첨가한 후 1시간 동안 110℃에서 환류 교반시켰다. 반응이 완결되면 반응액을 셀라이트 패드에서 고온 감압 여과하고, 에탄올로 세척한 후 얻어진 여액을 감압 농축하였다. 얻어진 잔사를 클로로포름 : 이소프로필알콜 = 4:1 용액에 희석한 후 중탄산 나트륨 수용액으로 세척하였다. 유기층을 황산마그네슘으로 건조한 다음, 감압 여과 및 감압 증류하였다. 얻어진 조생성물을 실리카겔 컬럼 하에서 에틸아세테이트 : 헥산 = 1:2 용액을 사용하여 정제하여 표제 화합물(0.92 g, 89%)을 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300MHz, CDCl₃): δ 6.96 (d, 1H), 6.74 (s, 1H), 6.54 (d, 1H), 4.67 (s, 2H), 3.51 (br, 2H), 2.51 (m, 1H)

단계 (3): (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((헥사-2,4-디엔-1,6-디일비스(옥시))비스(3-클로로-4,1-페닐렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

실시예 19에서 단계 (1)의 4-(프로파질옥시)벤젠아민 대신 상기 단계 (2)의 3-클로로-4-(프로프-2-인-1-일옥시)아닐린을 사용하고, 반응시 피리딘염산염을 첨가하는 것을 제외하고, 실시예 19와 동일한 방법으로 수행하여 표제 화합물(138 mg, 1.2%)을 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300MHz, DMSO-d⁶): δ 11.19 (br, 2H), 9.83 (s, 2H), 9.21 (br, 2H), 9.08 (s, 2H), 8.81 (s, 2H), 8.59 (d, 2H), 7.79 (s, 2H), 7.59 (d, 2H), 7.39 (s, 2H), 7.32 (d, 2H), 5.17 (s, 4H), 4.80 (m, 2H), 4.53 (d, 2H), 4.07 (s, 6H), 3.96 (m, 2H), 3.77 (m, 4H), 3.57 (s, 6H), 2.03 (m, 8H), 1.34 (d, 6H), 1.00 (s, 18H)

실시예 23: (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-((6,6'-(헥사-2,4-디엔-1,6-디일비스(옥시))비스(피리딘-6,3-디일))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

단계 (1): 5-니트로-2-(프로프-2-인-1-일옥시)피리딘의 제조

5-니트로피리딘-2-올(5.0 g, 0.0357 mol)을 아세톤(120 mL)에 용해하고 탄산칼륨(9.87 g, 0.0714 mol)과 프로파질 브로마이드(4.04 mL, 0.0536 mol)을 첨가하여 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고 아세톤으로 세척하였다. 여액을 감압 농축한 후, MC에 희석하여 물로 세척하였다. 분리된 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고 감압 농축하여, 표제 화합물(6.2 g, 97%)을 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300MHz, CDCl₃): δ 9.04 (d, 1H), 8.14 (d, 1H), 6.60 (d, 1H), 4.81 (d, 2H), 2.73 (t, 1H)

단계 (2): 6-(프로프-2-인-1-일옥시)피리딘-3-아민의 제조

철(10.8 g, 0.174 mol)을 50% 에탄올 수용액(100 mL)에 넣고 염산(2.9 mL, 0.0348 mol)을 첨가한 후 110℃에서 1시간 동안 활성화 시켰다. 여기에 상기 단계 (1)에서 수득된 화합물(6.2 g, 0.0348 mol)을 첨가한 후 2시간 동안 110℃에서 환류 교반시켰다. 반응이 완결되면 반응액을 셀라이트 패드에서 고온 감압 여과하고, 에탄올로 세척한 후 얻어진 여액을 감압 농축하였다. 얻어진 잔사를 클로로포름 : 이소프로필알콜 = 4:1 용액에 희석한 후 중탄산 나트륨 수용액으로 세척하였다. 유기층을 황산마그네슘으로 건조한 다음, 감압 여과 및 감압 증류한다. 얻어진 조생성물을 실리카겔 컬럼 하에서 MC : MeOH = 19:1 용액을 사용하여 정제하여 표제 화합물(3.75 g, 73%)을 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300MHz, MeOD): δ 7.27 (d, 1H), 7.20 (s, 1H), 6.47 (d, 1H), 4.73 (s, 2H), 2.87 (t, 1H)

단계 (3): (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-((6,6'-(헥사-2,4-디엔-1,6-디일비스(옥시))비스(피리딘-6,3-디일))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염의 제조

실시예 19에서 단계 (1)의 4-(프로파질옥시)벤젠아민 대신 상기 단계 (2)의 6-(프로프-2-인-1-일옥시)피리딘-3-아민을 사용하고, 반응시 피리딘 염산염을 첨가하는 것을 제외하고, 실시예 19와 동일한 방법으로 수행하여 표제 화합물(48 mg, 1%)을 수득하였다.

¹H NMR Spectrum (300MHz, DMSO-d⁶): δ 11.13 (br, 2H), 9.86 (s, 2H), 9.23 (br, 2H), 9.06 (s, 2H), 8.86 (s, 2H), 8.58 (d, 2H), 8.03 (s, 2H), 7.70 (d, 2H), 7.44 (s, 2H), 6.55 (d, 2H), 4.94 (s, 4H), 4.81 (m, 2H), 4.53 (d, 2H), 4.07 (s, 6H), 3.98 (m, 2H), 3.76 (m, 4H), 2.09 (m, 8H), 1.34 (d, 6H), 1.24 (s, 6H), 1.00 (s, 18H)

상기 실시예 1 내지 23에서 얻어진 화합물들의 구조식을 하기 표 1에 나타내었다

상기 실시예에서 제조된 화합물들에 대하여 다음과 같이 생물검정 시험을 실시하였다.

시험예 1: 세포 성장 억제 평가(in-vitro)

XIAP를 과발현하는 것으로 보고된 MDA-MB-231 유방암 세포(ATCC # HTB-26)와 BxPC-3 췌장암 세포(ATCC #CRL 1687)를 ATCC(American type culture collection; Rockville, MD) 미국 세포주 은행에서 구입하여 실험에 사용하였다. MDA-MB-231 세포주는 10% FBS 및 1% 페니실린/스트렙토마이신(Gibco BRL)를 포함하는 L-15 배지 조건하에 T-75cm² 성장 플라스크에서 성숙시켰다. 정상세포에 대한 독성 실험을 위하여 섬유아세포주인 Hs27(ATCC # CRL 1634)과 Balb/c3t3(ATCC # CCL 163)을 사용하였다. 성장배지에서 키운 여러 세포주를 3,000~5,000 세포/100㎕ 밀도로 96 웰 배양판에 옮긴 후 37℃, 5% CO₂, 95% 공기 및 100% 상대 습도에서 24시간 동안 배양하였다. 단, MDA-MB-231 세포는 대기 조건에서 배양하였다. 여기에 10μM ~ 0.1nM의 농도로 시험물질을 처리하고 MDA-MB-231 세포주는 120시간, 정상 세포주는 72시간 동안 배양시켰다.

MDA-MB-231 세포주의 세포 생존율은 셀타이터 96TM(CellTiter 96 AQueous One Solution, MTS, 프로메가사)을 이용하여 490 nm에서 흡광도를 측정하고, 정상세포주의 세포 생존율은 10% TCA(trichloroacetic acid)로 세포를 고정한 다음 SRB(sulforhodamine B) 용액으로 염색하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

이로부터 약물이 암세포 성장을 50% 감소시키는 농도인 GI₅₀ 값을 산출하였다. 암세포 성장율은 다음 수학식 1 또는 2에 의해 산출하였다.

<수학식 1>

[(Ti-Tz)/(C-Tz)] x 100 (Ti>=Tz일 경우)

<수학식 2>

[(Ti-Tz)/Tz] x 100 (Ti<Tz일 경우)

상기 수학식 1 및 2에서, Tz는 0% 세포성장군에서의 흡광도로서 시험약물 처리 직전 세포 밀도를 의미하고, C는 100% 세포성장군에서의 흡광도로서 배지만을 첨가하여 배양된 세포 밀도를 의미하며, Ti는 시험약물을 처리한 세포 밀도를 의미한다.

GI₅₀ 값은 상기 수학식 1의 값이 50일 때의 시험약물 처리농도이며, 이는 암세포 성장을 50% 저해하는 농도를 의미한다. 매 측정시 대조물질과 비교하여 각 세포주의 비교 및 균등 실험을 시행하였다.

각 화합물에 대한 활성도 값을 하기 [표 2]에 명시하였으며, 대조 물질로는 휴먼 게놈 사이언스의 AEG-40730을 사용하였다.

MDA-MB-231 유방암 세포주에 대한 활성도 측정에서 GI₅₀ 값이 10 nM 이하일 경우 "***", 10 nM 초과 1,000 nM 미만일 경우 "**", 1,000 nM 이상일 경우 "*"로 표시 하였다. 그리고, 정상 세포주인 Balb/C와 Hs27에 대해서는 1,000 nM 이상일 경우 "+++"로, 1,000 nM 미만 500 nM 초과일 경우 "++"로, 500 nM 이하일 경우 "+"로 표시하였다.

실시예	MDA-MB-231	BalB/C	Hs27	실시예	MDA-MB-231	BalB/C	Hs27
대조	***	+++	+++	12	**	+++	+++
1	***	+++	+++	13	***	+++	+++
2	***	+++	+++	14	***	+++	+++
3	***	+++	+++	15	***	+++	+++
4	***	+++	+++	16	***	+++	+++
5	***	+++	+++	17	***	+++	+++
6	***	+++	+++	18	***	+++	+++
7	***	+++	+++	19	***	+++	+++
8	***	+++	+++	20	***	+++	+++
9	***	+++	+++	21	***	+++	+++
10	**	+++	+++	22	***	+++	+++
11	***	+++	+++	23	**	+++	+++

상기 표 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 화학식 1의 화합물들은 IAP가 과발현되어 있는 MDA-MB-231 세포주의 성장을 낮은 약물농도에서 매우 효과적으로 억제하여 세포사멸을 유도함을 알 수 있었다. 또한 마우스 정상 세포주인 Balb/C와 인간 정상 세포주인 Hs27에 대하여는 높은 약물농도에서도 억제하지 않아, IAP가 과발현된 세포주에 대하여 높은 선택성을 나타내었다.

따라서, 본 발명의 화합물은 세포 사멸 저해 단백질인 IAP에 선택적으로 작용하여 정상세포에는 영향이 없으며, 종양 및 비정상 세포들의 세포 사멸의 정상 기작을 가능하게 하므로, 부작용 없이 암, 염증성 질환, 자가면역 질환 및 퇴행성 신경질환 등에 단독 혹은 병용 요법으로 사용가능하다.

Claims

하기 화학식 1로 표시되는 이중대칭 구조의 퀴나졸린 유도체 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
[화학식 1]

상기 식에서,
R¹ 및 R²는 각각 독립적으로 수소, 메틸 또는 에틸이고;
R³은 수소, C_1-8알킬, C_3-8사이클로알킬, C_2-5알케닐, C_2-5알키닐, C_3-8사이클로알킬-C₁ _- ₃알킬, C₃ _- ₈헤테로사이클로알킬, C₃ _- ₈헤테로사이클로알킬-C₁ _- ₃알킬, C₆ _- ₁₀아릴, C₆ _-10아릴-C₁ _- ₃알킬, C₅ _- ₁₀헤테로아릴 또는 C₅ _- ₁₀헤테로아릴-C₁ _- ₃알킬이고, 이때, 상기 R³는 비치환되거나, 할로겐, 히드록시, 니트로, 티올, 아미노, C₁ _- ₃알콕시, C₁ _- ₃알킬티오, 모노(C_1-3알킬)아미노, 디(C_1-3알킬)아미노, C_1-3아실, C_1-3알킬설포닐, C_1-3알콕시카보닐, 모노(C_1-3알킬)아미노카복시, 디(C_1-3알킬)아미노카복시, C_1-3아실로일 및 C_1-3알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있으며;
R⁴는 수소, C_1-6알킬, C_2-6알케닐, C_2-6알키닐, C_1-6알콕시, C_1-6알킬티오, C_3-8사이클로알킬, C_6-10아릴 또는 C_5-10헤테로아릴이고, 이때, 상기 R⁴는 비치환되거나, 할로겐, 히드록시, 니트로, 티올, 아미노, C_1-3알콕시, C_1-3알킬티오, 모노(C_1-3알킬)아미노, 디(C_1-3알킬)아미노, C_1-3아실, C_1-3알킬설포닐, C_1-3알콕시카보닐, 모노(C_1-3알킬)아미노카복시, 디(C_1-3알킬)아미노카복시, C_1-3아실로일 및 C_1-3알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있으며;
R⁵는 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, C_1-3알콕시, 티올, 아미노, 카복시, 포밀, C_1-6알킬, C_3-8사이클로알킬 또는 C_3-8헤테로사이클로알킬이고;
Y는 NH, NHCH₂, O 또는 S이고;
Z는 하기의 군 중에서 선택되는 하나의 치환기이고:

이때,
V는 NH, NHCH₂ 또는 O이고;
W는 C_1-8알킬, 에틸렌 또는 아세틸렌이며;
Z'는 N 또는 CH이고;
R⁶ 및 R⁷은 각각 독립적으로 수소, 메틸 또는 페닐이고, 이때, 페닐은 비치환되거나, 할로겐, 히드록시, 니트로, 티올, 아미노, C_1-3알콕시, C_1-3알킬티오, 모노(C_1-3알킬)아미노, 디(C_1-3알킬)아미노, C_1-3아실, C_1-3알킬설포닐, C_1-3알콕시카보닐, 모노(C_1-3알킬)아미노카복시, 디(C_1-3알킬)아미노카복시, C_1-3아실로일 및 C_1-3알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있으며;
R⁸은 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 티올, 아미노, 카복시, 포밀, C_1-3알킬, C_1-3알콕시, C_1-3알킬티오, 모노(C_1-3알킬)아미노, 디(C_1-3알킬)아미노, C_1-3아실, C_2-3알케닐, C_2-3알키닐, C_1-3알킬설포닐, C_1-3알콕시카보닐, 모노(C_1-3알킬)아미노카복시, 디(C_1-3알킬)아미노카복시, C_1-3아실로일 또는 C_1-3아실아미노이고;
m은 2 내지 12의 정수이며;
n은 1 내지 3의 정수이고;
o는 0 내지 6의 정수이며;
p는 0 내지 2의 정수이고;
q는 0 내지 5의 정수이며;
r은 0 내지 3의 정수이다.
제1항에 있어서,
R¹이 메틸인 것을 특징으로 하는 화합물.
제1항에 있어서,
R²가 메틸인 것을 특징으로 하는 화합물.
제1항에 있어서,
R³가 이소프로필, t-부틸 또는 사이클로헥실인 것을 특징으로 하는 화합물.
제1항에 있어서
R⁴가 수소, C_1-6알킬, C_1-6알콕시, C_3-8사이클로알킬, C_6-10아릴 또는 C_5-10헤테로아릴이고, 이때, 상기 R⁴는 비치환되거나, 할로겐, 히드록시, 니트로, 티올, 아미노, C_1-3알콕시, C_1-3알킬티오, 모노(C_1-3알킬)아미노, 디(C_1-3알킬)아미노, C_1-3아실, C_1-3알킬설포닐, C_1-3알콕시카보닐, 모노(C_1-3알킬)아미노카복시, 디(C_1-3알킬)아미노카복시, C₁ _- ₃아실로일 및 C₁ _- ₃알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있는 것을 특징으로 하는 화합물.
제1항에 있어서
R⁵가 메톡시인 것을 특징으로 하는 화합물.
제1항에 있어서
Y가 NH, NHCH₂ 또는 O인 것을 특징으로 하는 화합물.
제1항에 있어서
Z가 하기의 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물:

.
제1항에 있어서
R⁹가 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, 카복시, 포밀, C_1-3알킬, C_1-3알콕시, C_1-3알킬티오, 모노(C_1-3알킬)아미노, 디(C_1-3알킬)아미노 또는 C_1-3아실인 것을 특징으로 하는 화합물.
제1항에 있어서,
상기 화합물이 하기로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물:
1) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((1S,4S)-사이클로헥산-1,4-디일비스(메틸렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-2-(메칠아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;
2) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(헥사-2,4-디엔-1,6-디일비스(옥시))비스(7- 메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;
3) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((1R,4R)-사이클로헥산-1,4-디일비스(메틸렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;
4) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-((1S,4S)-사이클로헥산-1,4-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;
5) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-((1R,4R)-사이클로헥산-1,4-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;
6) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(피페라진-1,4-디일)비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;
7) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((1S,4S)-사이클로헥산-1,4-디일비스(메틸렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-2-사이클로헥실-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)아세틸)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;
8) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((1S,4S)-사이클로헥산-1,4-디일비스(메틸렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-(3-메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;
9) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-((1,4-페닐렌비스(메틸렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;
10) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-((1,3-페닐렌비스(메틸렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;
11) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((1S,2S)-1,2-디페닐에탄-1,2-디일)비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;
12) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(부탄-1,4-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;
13) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(헥산-1,6-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;
14) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(옥탄-1,8-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;
15) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(데칸-1,10-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;
16) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((에탄-1,2-디일비스(옥시))비스(에탄-2,1-디일))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;
17) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-([1,1'-비페닐]-4,4'-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;
18) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(2-부틴-1,4-디일비스(옥시))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;
19) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(헥사-2,4-디엔-1,6-디일비스(옥시))비스(4,1-페닐렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;
20) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(헥사-1,3-디인-1,4-디일비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드);
21) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(헥사-2,4-디엔-1,6-디일비스(옥시))비스(4,1-페닐렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-2-사이클로헥실-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)아세틸)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염;
22) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-(((헥사-2,4-디엔-1,6-디일비스(옥시))비스(3-클로로-4,1-페닐렌))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염; 및
23) (S,S,2S,2'S)-N,N'-(4,4'-((6,6'-(헥사-2,4-디엔-1,6-디일비스(옥시))비스(피리딘-6,3-디일))비스(아잔디일))비스(7-메톡시퀴나졸린-6,4-디일))비스(1-((S)-3,3-디메틸-2-((S)-2-(메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피롤리딘-2-카복스아미드) 이염산염.
제1항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 암, 염증성 질환, 자가 면역 질환 또는 퇴행성 신경 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항의 화합물, 이의 염, 이성질체, 수화물 및 용매화물 중 하나 이상을 포함하는 화합물 라이브러리.