TW201008571A - Bicyclic nucleosides and nucleotides as therapeutic agents - Google Patents

Description

201008571 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明涉及作為治療劑的雙環核苷和核苷酸之使用和製造方法，用於 、冶療和預防傳染性和增生性疾病，包括微生物感染和癌症。 、 【先前技術】 核苷藥物已臨床使用數十年，用於治療病毒感染和 症。大部分姆雜物)卿_贼職。在魏人馳 似物相繼麟酸化為核普酸5，--麟酸里、5，-二鱗酸鹽和5，_三鱗酸鹽。在某些 情況下’核找三猶鹽例如3，-疊氮基-3，-去氧胸#三磷酸鹽(AZT，抗人^ 免疫缺乏病毒(HIV)藥物)和阿拉伯糖基胞嘧啶三磷酸鹽(阿拉伯糖基胞嘧 咬，抗癌勒是潍化學實體’其透過競爭性抑制聚合酶並隨後與經修飾的 核苷酸結合成為DNA或RNA序列，來抑制DNA或RNA合成。在少數情 況下，核苷類似物作為其5，_一磷酸鹽或5，_二麟酸鹽發揮作用。例如，5_^ ’ _2’_去氧尿苷5,一磷酸鹽(抗癌藥)和2，，2’-二氟-2，-去氧胞苷5，_二麟酸鹽(抗 . 癌藥)已顯示分別抑制胸苷酸核酶和核糖核苷酸還原酶。儘管未磷酸化的核 苷類似物自身可作為腺苷激酶抑制劑和腺苷受體配體，但是目前臨床上有 用的核苷藥物主要依賴於核苷和核苷酸激酶對細胞的活化。 =毒感染是人類健康的主要威脅，並且造成許多嚴重的感染性疾病。 Φ 最值知注意的病毒是血·源性病毒(blood-borne virus, BBV)，其包括c型肝炎 病毒(hepatitis C virus, HCV)、B 型肝炎病毒(hepatitisB virus，HBV)和 HIV， 它們均由於其傳染方式而相關聯，即透過血液或體液。 黃熱病毒(Flaviviridae)係一組正單股rna病毒’具有9_15千驗基肿） 的基因組大小。黃熱病毒由多個屬所組成，包括黃熱病毒屬(F/aWWmy)和肝 炎病毒屬。黃熱病毒屬包括登革熱病毒、日本蜱媒 (Japanese Tick-Bome)病毒和黃熱病(yeii〇wj?ever)病毒。除這些主要的類別 以外，還有一些其他未分類的黃熱病毒屬。肝炎病毒屬僅包括一個種，c 型肝炎病毒’其由許多基因型和亞型所組成。 C型肝炎病毒是病毒性肝炎的一個主要病因，並且在全世界感染了超 過2億人。C型肝炎病毒具有包封在核鞘蛋白和脂質外膜中的正股尺卜丨八基 3 201008571 因組。HCV基因組長度約9.6 kb並且編碼約3,〇〇〇個胺基酸的聚合蛋白 (Dymock β α/·』《ίίνζ>α/ CAew&fry cfe 2000, 11，79)。目前對 HCV感染的治療僅限於單獨使用干擾素-α或與核苷類似物利巴韋結合使用 干擾素-α的免疫療法。然而’此種治療僅在約一半的患者群體中有效β最 近’若干 PCT 專利申請案(WO 99/4369卜 W0 01/32153、WO 01/60315、 WO 01/79246、WO 01/9〇m、WO 01/92282、WO 02/18404、WO 02/057287 和WO 02/057425)已描述了體外試驗中作為抗HCV劑的核苷類似物。 B型肝炎病毒已嚴重地感染了幾乎三分之一的人類族群，並且約5%的 感染者是病毒的慢性帶原者(Delaney WE ei α/.,如伽加/ ά C/iemoi/2m^2001，12,1-35) »慢性HBV感染引起肝臟受損，在晚年時常 發展為肝硬化及/或肝癌》儘管可獲得並廣泛使用有效的疫苗和化學療法， 但是全世界慢性HBV帶原者的數量接近4億。 人類免疫缺乏病毒引起免疫系統的逐步退化，導致AIDS的發生。已臨 床使用一些樂物來治療AIDS ’包括反轉錄酶抑制劑和蛋白酶抑制劑。目前 組合療法被廣泛用於治療AIDS’以降低抗藥性。儘管在抗HIV藥物的開發 中有所進步’但是AIDS仍是最主要的流行病之一。 除了上述BBV以外’某些其他急性病毒感染也對人類生命產生重大威 脅’包括單純皰療病毒(Herpes Simplex virus，HSV)、巨封胞病毒 (cytomegalovirus, CMV)、流感病毒、西尼羅河病毒(WestNik vims)、引起 例如嚴重急性呼吸道症候群(severe acute respiratory syndrome, SARS)的冠狀 病毒(Cbro»aWmses)、天花(Fanb/α)病毒(引起天花）、艾普斯坦-巴爾 (Epstein-Barr vims，EBV)、水痘帶狀疱疹病毒(R„ce//azayfcr virus，vzv)和 人類融合性啤吸道病毒(Z/w/wcwvhy，沾％的感染。因 此，大範圍的相關傳染性疾病和病毒突變的傾向強調了開發不同抗病毒藥 物的持績需要。 細菌感染長期是許多感染性疾病的來源。抗生素的廣泛使用產生了許 多新的危及生命的抗生素抗性細菌品系。真菌感染是另一種類型的傳染性 疾病，其中一些也是危及生命的。對細菌和真菌感染的治療存在不斷增加 的需求。因此，以新的作用機制為主的抗微生物藥物是特別重要的。 201008571 增生性失調(例如癌症)是現今最危及生命的疾病當中的—些並且已集 ㈣究了數十年。在美國，癌症目前是第二主要死亡原因，每年^過5〇〇，_ 人死於這種增生性失調。所有身體的各種有核細胞種類均可轉化為良性或 惡性的腫瘤細胞。正常細胞轉化成為癌細胞是複雜的過程，並且未被完全 理解。癌症;主要包括手術、放射療法和化學療法。儘管化學療法可用 於治療許多類型的癌症，但手術和放射療法僅限於位於身體某些部位的某 些癌症。已存在有-些臨床廣泛使㈣抗癌^其中包括絲^例如順 鉑、和抗代謝物例如5-氟尿嘧咬和吉西他濱。儘管可用手術、放射療法和 化學療法來治療癌症患者，但是目鮮存在騎癌症的域方法。癌症研 究仍然是醫學和藥物機構最重要的關注點之一。 文獻中存在許乡合成彡種經_姆#稍(Chemistiy Nude〇sides and Nucleotides, Vol. 1 (1988), Vol. 2 (1991), Vol. 3 (1994), edited by Leroy B. T_Send’PlenumPress)。然而’存在其抗病毒和抗增生活性未被完全探究 的某些核苷化合物類別。一個這樣的類別是雙環核苷。 同樣地’環烷基-取代的雙環含氮鹼基類似物被用作蛋白質激酶抑制 劑以對抗不受控制的細胞生長，例如在美國專利申請公開第2〇_2〇3143 中所描述的。 【發明内容】 Ο 在本發明的一個特點中，依據方程式I的結構提供了 一種化合物：

5 201008571 其中界定了作為D-或L-核苷或核苷酸的活性藥物成分；A係選自由 -〇-、-S-、-CH2-、-CHF-、-CF2-和-NR-所組成的群組；R1'、R2、R2’、r3、 R3·和 R4'獨立地選自由-Η、函素、-OH、-NHOH、-NHNH2、-N3、-CN、 -OCOCHNC(CH3)2、-COOH、-CONH2、-C(S)NH2、-COOR、-R、-OR、-SR、 -SSR、-NHR和-NR2所組成的群組’或R2和R2’一同或R3和r3’一同代表=〇、 =S、或，其中L’係選自由N、CH、CF、CC1和CBr所組成的群組， 且Y·係選自由Η、鹵素、N3、曱基、乙基和CN所組成的群組；R獨立地 是鹵素、-H、-OH、-SH、-CN、S(CrC4 烷基）、-N〇2、NH2、-NHNH2、-N3、 -NRR·，其中每個 R·獨立地是 H 或 CrC4 烷基、-C(S)NH2、-CH3、-CH2OH、 -CH2NH2 ' -CH2NH3+ ' -COOH ' -COOCH3 ' -COOCH2CH3 ' -CONHCH3 ' -CONH2 '-CF3 '-N(CH3>2 '-NHCOCH3 '-NHCONH2 '-NHCNHNH2 '-〇NH2 > -ch2och3、-o(ch2)ch3、coocrc4烷基、可選擇地取代的烷基、可選擇 地取代的鏈烯基、可選擇地取代的炔基、可選擇地取代的芳基、可選擇地 取代的醯基、可選擇地取代的芳烷基、可選擇地取代的環烷基、可選擇地 取代的環烯基、可選擇地取代的苯基、可選擇地取代的雜芳基、可選擇地 取代的雜環基、可選擇地取代的烷氧基、可選擇地取代的鏈烯氧基、可選 擇地取代的炔氧基、可選擇地取代的芳氧基、可選擇地取代的醯氧基、可 選擇地取代的氧醯基、可選擇地取代的芳烷氧基、可選擇地取代的雜環氧 基、可選擇地取代的雜芳氧基、可選擇地取代的環烷氧基、可選擇地取代 的環烯氧基、可選擇地取代的胺基、可選擇地取代的胺醯基、可選擇地取 代的胺醯氧基、可選擇地取代的醯胺基、可選擇地取代的氧醯胺基、可選 擇地取代的氧醯氧基、可選擇地取代的醯亞胺基、可選擇地取代的醯亞胺 氧基、可選擇地取代的氧醯亞胺基、可選擇地取代的胺基硫代醯基、可選 擇地取代的硫代醯胺基、可選擇地取代的胺基亞橫醯基、可選擇地取代的 胺基磺醯基、可選擇地取代的硫基、可選擇地取代的硫代烷基、可選擇地 取代的硫代醯基、可選擇地取代的硫代醯氧基、可選擇地取代的氧硫代醯 基、可選擇地取代的氧硫代醯氧基、可選擇地取代的磷醯胺基、可選擇地 取代的亞磺醯基、可選擇地取代的磺醯基、可選擇地取代的亞磺醯胺基、 可選擇地取代的磺醯胺基、可選擇地取代的氧亞磺醯胺基和可選擇地取代 的氧磺醯胺基;L 係選自由-〇、NH、NR、CY3、CY2〇、CY2S、CY2NH、 201008571 _CY2 ' -CY2CY2、-CY2OCY2、-CY2SCY2 和-cy2nhcy2 所組成的群組；γ 係獨立地選自由-Η、鹵素、-R、-OR和-NR2所組成的群組；R5係選自由_〇11、 -R、-OR、-NR2或其一磷酸鹽、二鱗酸鹽或三磷酸鹽部分或其模擬物所組 成的群組；鹼基是方程式π的基團： .7?、 ΝΗ ζ\ Ν π ，其中係單或雙鍵；ζ1、ζ3和 >C-CONR2、>C-C(S)NH2、>C-COOR、 >C-NR2、>c-可選擇地取代的雜芳基、 Z4係獨立地選自由>C-CONHR、 >C-R、>C-OR、>C-SR、>C-NHR、 >C-可選擇地取代的烷基*>C-G組 成的組;Z2係選自由>C-NH2*>C=0所組成的群組；G係獨立地選自由-Η、 -F、-α、-I、-ΝΗ2、·ΝΗ(：Η3、_CN、-COOH、-CSNH2、-C三CH、-CeCCH3、 -OCCH2OH、-CC-Si(CH3)3、-CONH2、-CONHCH3、-CONH-苯基、-CONH-v 甲苯基、嗟也、噪吐、咪嗤、嗓峻琳、三嗤和四峻所組成的群組，並且當 化合物包括二個或更多的G基團時<3'係相同或不同的；以及當A係Ο時， R1’、R3、R4’和R5係Η ; L係Ο ;且R2和R3係OH ;然後R2係鹵素、OH、 NHOH、NHNH2、N3、CN、OCOCHNC(CH3)2、COOH、CONH2、C(S)NH2、 ® COOR、R6、OR、SR、SSR、NHR 或 NR2 ’ 且R6係彘素、〇H、SH、CN、 S(cw烷基）、N〇2、NH2、NHNH2、N3、NR，R，，其中每個R，獨立地係H或 烷基、C(S)NH2、CH3、CH2OH、CH2NH2、CH2NH3+、COOH、COOCH3、 COOCH2CH3、CONHCH3、CONH2、CF3、N(CH3)2、NHCOCH3、NHCONH2、 NHCNHNH2、ONH2、CH2OCH3、0(CH2)CH3、COOCCw 烷基）、取代的炫 基、取代的鏈烯基、取代的炔基、取代的芳基、取代的醯基、取代的芳烷 基、取代的環烷基、取代的環烯基、取代的苯基、取代的雜芳基、取代的 雜環基、取代的烷氧基、取代的鏈烯基氧、取代的炔氧基、取代的芳氧基、 取代的醯氧基、取代的氧醯基、取代的芳烷氧基、取代的雜環氧基、取代 的雜芳氧基、取代的環烷氧基、取代的環烯氧基、取代的胺基、取代的胺 7 201008571 醯基、取代的胺醯氧基、取代的醯胺基、取代的氧醯胺基、取代的氧醯氧 基、取代的醯亞胺基、取代的醯亞胺氧基、取代的氧醯亞胺基、取代的胺 基硫代醯基、取代的硫代醯胺基、取代的胺基亞磺醯基、取代的胺基續醯 基、取代的硫基、取代的硫代烷基、取代的硫代醯基、取代的硫代醯氧基、 取代的氧硫代醯基、取代的氧硫代醯氧基、取代的填醯胺基、取代的亞磺 醯基、取代的磺醯基、取代的亞磺醯胺基、取代的磺醯胺基、取代的氧亞 磺醯胺基或取代的氧確醯胺基；或可藥用的其鹽類、酯類、溶劑合物、水 合物或前驅藥。 方程式I化合物的一個實施例中，=係雙鍵，/係>011"，Z2係 >0>«12,23係>(：-疋”，24係>01^"，以及11”、11”'和11”"係彼此獨立地11、？、 I、a、nh2、nhch3、c(=o)nh2、c(=o)nhch3、c(=o)nh(C6H5)、 C(=0)NH(C6H5CH2)、CN、CeCH、CeCCH3、CsCCH2OH、CEC-Si(CH3)3、 c(=s)nh2、co2h、

方程式I化合物的另一實施例中，係單鍵，z1係>C-R"，Z2係>0=0， Z3 係>C-R"' ’ Z4係〉C-R"”，以及 R"、R"，和 R”"係彼此獨立地 Η、F、I、Cl、 NH2、NHCH3、C(=0)NH2、C(=0)NHCH3、C(=0)NH(C6H5)、 -C(=0)NH(CH2C6H5)、CN、C^CH、C三CCH3、OCCH2OH、C=C-Si(CH3)3、 c(=s)nh2、co2h、

方程式I化合物的另一實施例中，z4係>(：-11。 方程式I化合物的另一實施例中，z4係〉^，"，而R"”係f小α、nh2、 NHCH3 ' C(=0)NH2 ^ C(=〇)NHCH3' C(=0)NHC6H5 ' C(=0)NH(CH2C6H5) ' CN、OCH、CeCCH3、C=CCH2〇H、C-C三Si(CH3)3、C(=S)NH2、C02H、 201008571

方程式I化合物的另—實施例中，R""係F、I或Cl。 方程式I化合物的另—實施例中，Z3係>(>11，" ’而R”，係Η。 、 方程式I化合物的另—實施例中’ Ζ3係>〇尺”，，而R，，，係ΝΗ2。 方程式I化合物的另—實施例中，ζ〗係^-H。 方程式I化合物的另—實施例中，Z1係>〇-R"，而R"係獨立地F、I、 Cl' NH2 ' NHCH3'0(=〇)^2 > C(=0)NHCH3 ' C(=0)NHC6H5' ❹ C(=0)NHCH2C6H5、CN、OCH、CCCH3、〇CCH2OH、C-C三Si(CH3)3、 C(=S)NH2、c〇2h、

' 方程式1化合物的另一實施例中，A係氧。 方程式I化合物的另一實抱例中，L係Ο,以及R5係Η或一磷酸鹽、 二麟酸鹽或三攝酸鹽部分或其模擬物。 方程式I化合物的另一實施例中，R5係胺基碟酸鹽或一礙酸鹽、二鱗 〇 酸鹽或三磷酸鹽部分的磷酸酯。 在另一實施例中’方程式I的化合物係選自4-胺基-5-氟-7-(2-C-甲基 -β-D-咬喃核糖基)_吡咯并ρ 三井；各胺基_5_氣_7_(2_c_甲基_p_D_ 吱喃核糖基)-吡咯并[2，1-取1，2,4]三井；4-胺基-5-峨-(2-0甲基4-0-呋喃核糖 基X1各并[2，1-饥1，2,4]三井；4-胺基-7-(2心甲基|0-呋喃核糖基)-吡咯并 [24^1,2,4]三井-5-碳化腈；4-胺基-7-(2-C-曱基-β-D-呋喃核糖基)-吡咯并 [2’1<1[1，2,4]三井-5-羧酸醯胺；4-胺基-5-三甲基石夕烷基乙炔基-7-(2-0甲基 -β-D-呋喃核糖基吡咯并[2，1_饥1，2,4]三井；4-胺基-5-乙炔基-7-(2-0甲基 •P-D-呋喃核糖基 > 吡咯并[2，1-£][1，2,4]三井；4-胺基-7-(2-0甲基十-〇-呋喃核 糖基)-吡咯並[2，l-f][l，2,4]三井-5-羧酸；2,4-二胺基-7-(2-C-甲基-P~D-呋喃核 9 201008571 糖基)-吡咯並即-幻叫⑷三井：本胺基-叩心曱基-㈣-吱喃核糖基户比咯 並[2，l-f][l，2,4]三井-5-羧酸醯胺；4-胺基-5-噁哇-2-基-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃 核糖基)-吡咯並[2，l-fl[U，4]三井；4-胺基-5-嘆唑-2-基-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃 核糖基)-吡咯並[2，l-f][U，4]三井；4-胺基-5-(3Η-[1，2,3]三唑-4-基>7-(2-C-甲 基-β-D-呋喃核糖基)-吡咯並[2，l-f][l，2,4]三井；4-胺基-6-氟-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-吡咯并[2，1.，2,4]三井-7·基；4-胺基-5-咪吐-7-(2-C-甲基-P_I> 呋喃核糖基)-吡咯并[2，l-f|[l，2,4]三井；以及4-胺基-5-咪唑啉-7-(2-C-甲基 -β-D-呋喃核糖基)-吡咯并[2，1-£][1，2,4]三井。 在另一實施例中，方程式I的化合物係4-胺基-7-(2-C-甲基-β-D-"夫喃核 糖基)-°比咯并[2，1-幻[1，2,4]三井。 在另一實施例中，R5係一磷酸鹽、二磷酸鹽或三磷酸鹽部分的胺基鱗 酸鹽或麟酸醋。 在另一實施例中’方程式1的該化合物係

在另一實施例中，方程式I的該化合物係

本發明的另一實施例中，一種藥物劑型，包括方程式！的化合物之治療 j量或其鹽類、醋類、溶劑合物、水合物或前驅藥以及一種或多種 可樂用的載體、稀釋劑及/或賦形劑。 在另一實施例中，藥物劑型適合每日一次用藥。 在另-實蘭巾，綠綱包括4.7 (2_dp_D料核糖私 201008571 °比'各并[2，l-f][l，2,4]三井的治療有效量。 在另一實施例中，一種治療或預防微生物感染、病毒感染或增生性失 調的方法，包括對患有微生物感染、病毒感染或增生性失調或處於這些風 險下的患者施用方程式I的化合物或其藥物劑型的治療有效量。在一個實施 ’ 例中，該病毒感染係C型肝炎病毒感染。 . 在另一實施例中’該方法包括每日一次給該患者施用方程式I的化合物 或其藥物劑型的治療有效量。 在另一實施例中，該方法包括在約iOpg/kg到約30mg/kg的範圍中給 該患者施用方程式I的化合物。 在另一實施例中’該方法包括給該患者施用約10 到約3〇 mg/kg ❹ 的4-胺基-7_(2_C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-吡咯并[2，1-£][1,2,4]三井。 在另一實施例中’該方法包括每曰一次在約1〇 pg/kg到約3〇mg/kg的 範圍中給患者施用方程式I的化合物之治療有效量。 在另一實施例中，一種在人類患者中抑制聚合酶活性的方法，包括對 人類患者施用方程式I的化合物或其藥物劑型之治療有效量。 . 在另一實施例中’一種方法包括抑制HCVNS5B聚合酶活性。 在另一實施例中’一種方法包括體内生產方程式I化合物的治療有效代 謝物，該代謝物具有大於約10小時的細胞内半衰期。 在另一實施例中，一種方法包括體内生產足量的方程式I化合物之治療 ❺ 有效代謝物’以允許在約10 pg/kg到約30 mg/kg的範圍中每日一次在人類 患者中給予方程式I的化合物，或約15 pg/kg到約25 mg/kg。 在另一實施例中’ 一種方法包括給患者施用的方程式I化合物在該患者 中具有大於約2小時的血漿半衰期。 【實施方式】

本發明涉及治療方法、試劑組、組合、化合物，包括它們在製造藥物 中的用途，以及以下組合物，透過抑制DNA及/或RNA合成展現抗增生效 應’尤其可抑制一種或多種聚合酶的活性’或治療其中表明可用聚合酶抑 制劑，例如DNA及/或RNA合成抑制劑的疾病。在一個實施例中，DNA 11 201008571 及/或RNA合成抑制劑包括雙環核苷及/或核苷酸，具有作為聚合酶抑 的活性。 @ 儘管本發明可具體化為許多不同的形式，本文中討論了若干具體實施 例’但是在應當理解本發明僅被認為是本發明原理的示例說明，並非將本 發明限制於所闡述的實施例的情況下。例如，在本文中具體參照具有針對 HCVNS5B聚合酶的抑制活性的化合物闞述本發明時，應當理解需要時可 用其他聚合酶全部或部分替換本文所述的HCV聚合酶。 . 儘管不希望受理論束缚，但是相信透過使用本文所述化合物控制聚合 酶活性’可治療、缓解及/或預防微生物及/或增生性疾病或失調。例如，°_ 種微生物聚合酶把標NS5B，HCV蛋白質，從聚合蛋白中被釋放，並且參 與由單股病毒RNA基因組合成雙股RNA❶相信可透過抑制NS5B和阻抑 〇 或預防雙股HCVRNA的形成來抑制或防止HCV病毒的複製及/或繁殖。 或者’還相信也可將核苷類似物結合進增長的rj、丨a股中，發揮鍵_終止子 的作用及/或導致無效突變。此外，相信也可將核苷酸類似物或衍生的代謝 物結合進增長的RNA中’這可對病毒基因組引起誘變損傷。 還相信也可透過由本文所述的化合物，例如以下方程式I的〇_及/或L_ 核苷和核苷酸，來控制聚合酶活性來抑制及/或預防增生性失調，包括例如 . 急性趙細胞性白丘病、膽管癌、慢性趙細胞性白血病、淋巴瘤、黑色素瘤'、 多發性骨趙瘤、骨肉瘤、胃肉瘤、神經膠質瘤、膀胱癌、乳腺癌、子宮頸 癌、結腸直腸癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌或胃癌和與過 量及/或不適當細胞生長相關的非癌疾病，包括與再狹窄相關的内皮細胞生 © 長，例如冠狀動脈損傷、頸總動脈損傷和腦損傷。另外，可以與上文所述 類似的方式實現高度增生性細胞及/或癌細胞增率生的降低，即可以向高度 增生性細胞及/或癌細胞的RNA及/或複製中的基因組中引入抗增生的核：g： 類似物’引起例如鏈-終止子、框架位移及/或無效突變，所述鏈終止子、 框架位移及/或無效突變中斷細胞增生和代謝衡定所需的下游效應器機制。 除了本發明揭露的方法以外，可透過本領域技術人員已知的鱧外或體 内方法，針對抗增生及/或聚合酶抑制活性篩選這類化合物。 更進一步來說，並且不希望受理論束縛’相信一個或多個標準是核苷 抗病毒及/或抗增生藥物所需要的，包括例如核苷類似物在細胞中合成代謝 12 201008571 為核苦酸’及/或合成代謝的核苷酸選擇性地瞒準病毒蛋白質及/或增生性機 制’例如以肽為主及/或以核酸為主的酶。相信為了在細胞中被碟酸化和選 擇性地瞄準優選的酶’核苷類似物在其糖和驗基部分上可具有有利的修 飾。為了獲得這類有利的核苷類似物，一般的途徑是透過修飾驗基或糖， 或透過修飾驗基和糖二種部分，以產生不同的核苷類似物。文獻中存在合 成多種經修飾的核音的數個不例，包括例如of Nucleosides and Nucleotides Vol. 1 (1988), Vol. 2 (1991), Vol. 3 (1994), edited by L.B. Tovmsend, Plenum Press ； Handbook of Nucleoside Synthesis by H. Vorbruggen and C. Ruh-Pohlenz，John Wiley & Sons，Inc” 2001 ;和 7¾ Organic Y.Mizuno, Elsevier，1986。然後如此處更全面討論的，可 參 針對期望的活性測定所得的經修飾的化合物。 儘管已發現包含多種糖部分的核苷適用於抑制病毒聚合酶，但是在黃 熱病毒的情況下，尤其是HCV的情況下，發現2，-C-甲基核糖核苷是有用的 (見 Eldrup，Α·Β. a/.，J. Med· Chem. 2004,47(21)，5284-97)。 * 術語「感染」和「微生物感染」（及其變異)是指傳染物或微生物所引起 、 的感染’所述傳染物或微生物在此處使用時至少包括細菌、寄生蟲(包括原 蟲）、病毒和真菌（包括單細胞的和多細胞的）。微生物和微生物感染的示例 包括棘阿米巴原蟲(Jc⑽i/KWWOeh)、引起非洲昏睡病的布氏羅得西亞錐蟲 、引起阿米巴病的痢疾阿米巴原蟲 粵 、引起美洲錐蟲病或查加斯病的枯西錐蟲(7>万mzzz·)、 引起血吸蟲病或裂體吸蟲病的血吸蟲、引起隱孢子蟲病的 小隱抱子蟲(〇7/^〇^〇^7^/加/«/7〇^\^//«)、引起賈第蟲病、人型、8型、0型、 0型和£型肝炎的梨型鞭毛蟲((7&/*<也7/<27«^?)、引起皮膚和内臟利什曼病 的利什曼原蟲(Zeis/wnam'a平）、引起癌疾的惡性遽原蟲(p/aswoc?iMm /iJt/cz>arww)、引起胃痛性痙攣、腹瀉和發熱的腸炎沙門式 enteritides)、弓\起结枝病的結核桿菌(Mycobacterium tubercubsis)、弓\ 起水 痘、黃熱病毒、肺炎的水痘帶狀癌瘆病毒、引起例如尿路 感染、腦膜炎和腦膜炎球菌性敗血症的披衣和徽漿菌awe/ 、引起皮膚和軟組織感染以及下呼吸道感染(細菌性病原體 或病毋性病原體)的金黃色葡萄球菌()5’吨⑽似）。 13 201008571

微生物引起的其他常見的感染包括但不限於以下表中所列的感染： 感染 細菌 真菌 原蟲 病毒 AIDS X 腳癬 X 水痘 X 感冒 X 腹瀉性痢疾 X X X 登革熱 X 流感 X 生殖器疱疹 X 癔疾 X X 腦膜炎 X 肺炎 X X 鼻竇炎 X X 皮膚病 X X X X 膿毒性咽喉炎 X 結核病 X 尿路感染 X 14 201008571 感染 細菌 真菌 原蟲 病毒 陰道感染 X X 病毒性肝炎 X 關於本發明的治療方法，方程式i的化合物可適用於抑制聚合酶包括例 如HCV NS5B及/或微生物複製例如HCV複製和治療微生物感染例如HCV 感染。可被治療的宿主包括單細胞生物包括細胞系或多細胞生物例如動 物，其基因組中可編碼一個或多個宿主特異性及/或入侵性的蛋白質，並且 與宿主增生性機制平行發揮作用或與宿主機制合作形成新的病毒體，或改 變正常的宿主增生模式。例如，宿主包括感染的細胞、用全部或部分編碼 聚合酶的基目_如HCV基隨轉染的峨，或患有增纽失調或微生物 感染的動物，例如由RNA病毒包括例如屬於黃熱病毒類的病毒，例如黃熱 病毒或HCV、或DNA病毒或反轉錄病毒例如jjqv或聊所引起的病毒 * 感染。 在個實施Y列中’本發明的方法治療黃熱病毒類的版入病毒，尤其是 HCV所引_病械染。騰治絲有病理學微生械染侧病症或^生 性〇調的宿絲物的示雕方法包括：❹療有效量對受影響的宿主施用 ❹ H的化合物。療法的—個神黯重複施職療有效量的一種或多 種化合物’以達到期望的治療效果’例如齡宿主㈣病毒負荷及/或 合狀觸轉。絲㈣—補他括重減用亞-治 療有效量’猶_累積至練纽量。在又—個實施方案巾，預 種化合物及7或其鹽類、賴、溶劑合物、水合物和前驅藥 的早次劑量達到期望的治療效果。 樂 在一個實施例中，可使用化合物治療患有病理學聚合 γγ生m或增生性病症)的宿絲物，例如顿、大鼠、豬、牛、 兔^猫^:馬、鳥、稱、魚或靈長動物例如猴子、麵或人。 在本文中使用時，術語「治療有效量 : ;示方程式I的化合物如以下用量：當根據期望; 時，所述峨供物___嶋輸= 15 201008571 部分達到期望的絲，及/或延遲被治療的具體赫、病症以或狀況的發 生’及/或抑制其進展，及/或預p方、停止或完全反轉彡發生或發展。用藥可 為單次劑量或分份劑量，並可以數分鐘、數小時、數天、數周、數月或數 年的間隔發生或在任何這些週期之期間連續發生，但是應當明白每天一次 用藥是想要的’因為患者易於遵守用藥方案’制是當賴的持續時間大 於數天時。藥物的半衰期是決定用藥頻率中重要的藥物動力學參數。達到 穩態藥物濃麟需的_以及在贿方案改變後建立新穩態濃度所需的時 間是活性治療物的消除半衰期的函數。對每日一次用藥而言，為了最小化 Cmax/Cmin的波動，通常需要>6小時的血漿tl/2。在本說明書中，已經舉 例說明了化合物9在臨床前動物物種中具有4_7 6小時的血漿半衰期^另 外’在^代人類肝細胞中，化合物9、化合物25的活性合成代謝產物的細 胞内半衰期為38小時。活性三鱗酸合成代謝物的長細胞内半衰期結合其血 漿半衰期，通常表明需要時化合物9可每天施用一次，用於在患者中治療 性治療及/或預防性治療疾病，包括例如感染或微生物感染，例如肝細胞感 染，包括慢性C型肝炎。 ’ 合適的劑量介於約每kg體重0.1 ng到約每kg體重i〇g的範圍内，或 每kg體重約lg到約i〇g的範圍内，或每kg體重約1〇g到約3〇§的範圍 内，或每kg體重約15 g到約25 g的範圍内，或每kg體重約i mg到約1〇 g 的範圍内’或每kg體重約1 mg到約5〇〇mg的範圍内，或每吆體重約】mg 到約25〇1^的範圍内’或每岵體重每劑量約11118到約1〇〇1^的範圍内， 或多達每kg體重每劑量約50mg，或每岵體重每劑量更多或更少的量。 儘管不希望限制本發明的範圍，但是對動物(例如人類)施用時，組合物 可以例如治療有效量的劑量被施用，以達到約〇 lnM到約1〇〇ηΜ 〇 ι μΜ 到約100 μΜ、或約0.5 μΜ到約75 μΜ、或約1 μΜ到約50 μΜ、或大於或 等於約0.1 μΜ、或大於或等於約〇.5 μΜ或大於或等於約五μΜ的活性分子 血漿舉值，及/或約0·1 pm〇l/百萬細胞到約100pmol/百萬細胞、1〇〇pm〇J/ 百萬細胞到約lOOOpmol/百萬細胞、或約1000pm〇I/百萬細胞到約1〇〇〇〇 pmol/百萬細胞、或大於或等於約10pm〇1/百萬細胞、或大於或等於約％ pmol/百萬細胞或大於或等於約100pm〇1/百萬細胞的細胞内濃度，並可根據 個體需要和狀況隨時間調整。達到的活性分子的血漿峰值及/或細胞内濃度 201008571 取決於本領域技術人員熟悉的若干因素，包括例如施用途徑 、吸收_率、蛋 白質齡、化合物轉化、化合物合成代謝、化合物練_、化合物進入 基因組的整合、和排泄和失活率。 可根據多種目素聰合義和㈣綠，所制素包括被治療的 -個或多個具體病症’-個或多個病症的嚴重性，受試者的遺傳圖譜、年 齡、健康、性別、飲食和體重’單獨的施用途徑或與藥理學考慮，包括使 用的具體化合物的活性、有效性、生物利用率、藥物代謝動力學和毒理學 圖譜組合，無論使用藥物遞送體系還是將藥物作為藥物組合的一部分施 用。因此，要使用的用藥方案可廣泛變化，並可必要地偏離此處本發明揭 露的用藥方案。 ® 在一個實施例中，本發明的活性成分可在單次劑量或一系列劑量中被 施用。儘管可能單獨施用活性成分，例如作為配方設計的級分及/或作為來 自分批反應的經純化的化合物被施用’但是可能期望其作為組合物，例如 藥物組合物存在。這類組合物的配製是本領域技術人員所公知的。例如， • 候選的藥物組合物可含有一種或多種載體、稀釋劑及/或賦形劑，及其任何 組合’其中這類載體是無活性的藥物成分。示例包括常規溶劑、分散介質、 填充劑、固體載體、塗層、抗真菌劑、抗細菌劑、抗病毒劑、皮穿透劑、 表面活性劑、等滲劑、吸收劑、佐劑、鎮痛劑、穩定劑、防腐劑、藥物等 等。應當理解本發明的組合物也可包含其他補充性的生理學活性劑。這些 嚳 載體、稀釋劑和賦形劑構成了方程式I化合物的藥物載體系統。 要被施用給動物的一種候選載體是「可藥用的」，其含義是與組合物 的其他成分相容並且適當地被宿主耐受。可根據期望的施用途徑來調整組 合物。例如，本文中的組合物可配製用於口、直腸、鼻、局部，包括頻和 舌下、經皮、陰道、注射/可注射、及/或腸胃外，包括皮下、肌内、靜脈内 和真皮内施用。其他合適的施用途徑包括在此處。組合物可便利地以單位 劑型存在’並且可透過製藥領域已知的任何方法來製備。合適的藥物配製 物及/或形式在例如 Hoover，John E. Remington’s Pharmaceutical Sciences， Mack Publishing Co” Eston, PA; 18th edition (1995);和 Liberman, H. A. and Lachman, L. Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, NY，1980中討論。示例性的方法包括將一種或多種活性成分與構成一種或 17 201008571 多種助劑的載體結合的步驟。通常可如以下來製備組合物：將一種或多種 活性成分與液體載體或細分的固體載體或二者均勻並密切地結合，並且 果需要，使產物成形。 適用於口施用的組合物可以作為離散單位，例如膠囊、囊劑或錠劑， 各含有預定量的活性成分存在；作為粉末或顆粒存在；作為水性或非水性 液體中的溶液或懸浮液存在；或作為水包油液體乳劑或油包水液體乳劑存 在。活性成分也可作為團劑、舐劑或糊劑存在。 可透過壓縮或模塑來製造錠劑，可選地使用一種或多種助劑。可如下 製備壓縮旋劑：在合適的機器中壓縮自由流動形式，例如粉末或顆粒的活 性成分，可選地與黏合劑，例如惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑例如澱粉羥 乙酸鈉、交聯的聚乙稀吡咯烷酮、交聯的羧甲基織維素鈉、表面活性劑或 分散劑混合。可如下製造模塑的錠劑：在技術人員已知的合適機器中對 用惰性液體稀釋劑濕潤的粉末狀化合物的混合物進行模塑。錠劑可以可選 地被塗覆及/或帶有’並職配製綠供其料倾分的贿及/或受控 釋放’使用例如改變比例的羥丙基曱基纖維素來提供一種或多種想要的釋& 放特性曲線。錠劑可被提供為可選地帶有腸溶衣，從而除了胃之外在腸 分中提供釋放。 ° 適用於口中局部施用的組合物包括菱形錠劑^泥姐辟)，其在調味或不調 味的基質中含有活性成分’所述基質通常為蔗糖和金合歡膠或黃著膠；軟 錠劑(pastille)，其在惰性基質中包含活性成分，所述惰性基質例如明膠和甘 油，及/或簾糖和金合歡膠；和漱口劑(mou出wash),其在具有或不耳有調味 及/或額外成分的合適液體載體中包含活性成分。 = 適用於局部施用至皮膚的組合物可包含溶於或懸浮於任何合適載體及/ 或基質中的化合物’並可以是洗劑、凝膠、霜劑、糊劑、軟膏劑等形式。 合適的載體包括礦物油、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯、乳化蠟、山 梨醇單硬脂酸酯、聚山梨酯6〇、十六烧基酯蝶、錄犧硬脂醇、2_辛基十一 烷醇、苯甲醇和水。也可使用經皮貼劑施用包含一種或多種本發明的化I 物的組合物。用於直腸施用的組合物可以作為帶有合適基質的检劑存在： 所述基質包括例如可可脂、甘油、明膠及/或聚乙二醇及其他。適用二降道 施用的組合物可以作為含有下述組合物的陰道栓棉塞霜^、 201008571 凝膠、糊劑、泡沫及/或喷霧配製物存在，所述組合物除了本領域已知的一 種或多種載體外，還含有一種或多種本發明的活性成分化合物。 適用於腸胃外施用的組合物包括例如水性和非水性的等滲無菌注射溶 液其可含有抗氧化劑、緩衝液、殺細菌劑及/或使組合物與預期受體的血 等滲的溶質，·和水性和非水性的無菌懸浮液，其可包含例如懸浮劑和增稠 劑。腸胃外組合物可存在於單劑量或多劑量密封的容器中，例如安親和管 f瓶中，並可儲存在冷凍乾燥(凍乾)的條件下，所述條件僅需要在即將使用 前添加無菌液體載體例如注射用水。可由先前所述種類的無菌粉末、顆粒 和注射溶液和縣液。另外，可透過乾粉吸人如乾粉形式 遞送，或者透過霧劑吸入器(mist inhaler)以霧劑的形式遞送組合物和配製 ® 物。 應虽理解，除了上述活性成分以外，本文的組合物還可包含對所述組 合物的類型而言適宜的其他試劑。例如，適用於口施用的組合物可包含例 如黏合劑、著色劑、甜味劑、增稠劑、調味劑、崩解劑、塗覆劑、防腐劑、 调滑劑及/或延時劑(timedeiayagen^合適的甜味劑包括例如蔗糖乳糖、 葡萄糖、阿司巴甜及/或糖精。合適的崩解劑包括例如玉米殿粉、甲基纖維 素、聚乙烯吡略燒鲖、黃胞膠、膨潤土、海藻酸及/或瓊脂。合適的調味劑 包括例如薄荷油，冬青樹(wintergreen)油，櫻桃、橙或覆盆子調料。合適的 塗覆劑包括例如丙烯酸及/或異丁烯酸及/或其酯類的多聚物或共聚物，蠛、 Ο 知肪醇、玉米醇溶蛋白、紫膠或榖蛋白。合適的防腐劑包括例如苯曱酸納、 維生素f、α-生育盼、抗壞企酸、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯或 亞硫酸氫納。合適的潤滑劑包括例如硬脂酸鎂、硬脂酸、油酸納、氯化鈉 或滑石。合適的延時劑包括例如甘油單硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。 另外’適用於本發明中的足夠鹼性或酸性的其他化合物也可形成鹽。 在-些情況下’鹽可被用作分離、純化、溶解、或遞送此處所述化合物的 助劑。另外，本發明的化合物可以可藥用鹽的形式來施用。然而，非可藥 用的鹽也落入本發明的範圍，其在可藥用鹽或其他化合物的製備中例如被 用作中間體。 合適的可藥用鹽包括但不限於可藥用無機酸，包括例如鹽酸、硫酸、 磷酸、硝酸、碳酸、硼酸、胺基項酸和氫溴酸的鹽，或可藥用有機酸例如 19 201008571

1 I 乙酸、丙酸、丁酸、酒石酸、馬來酸、羥基馬來酸、延胡索酸、馬來酸、 擰檬酸、乳酸、粘酸、葡糖酸、苯甲酸、琥珀酸、草酸、苯乙酸、甲磺酸、 甲苯績酸、笨確酸、水楊醯基對胺基苯續酸、天冬氨酸、谷氨酸、依地酸、 硬脂酸、棕櫊酸、油酸、月桂酸、泛酸、鞣酸、抗壞血酸和纈草酸的鹽。 驗基鹽(base salt)包括但不限於與可藥用陽離子形成的鹽，包括鹼金屬 和驗土金屬鹽’例如鈉、鉀、鋰、鈣、鎂、銨和烷基銨。具體而言，本發 明的範圍内包括陽離子鹽，例如鈉鹽或鉀鹽，或破酸基的烷基(例如甲基和 乙基)酯。 速溶化合物的鹽可以是適合藥用（即可藥用;)的鹽，包括但不限於通過將 速溶化合物的溶液與可藥用酸的溶液混合形成的睃加成鹽可藥用的酸可 以是鹽酸、甲罐酸' 琥珀酸、乙酸、苯甲酸、草酸、檸檬酸、酒石酸、碳 ® 酸或磷酸。多種可藥用鹽是本領域公知的，並可與速溶化合物一起施用， 例如 Berge SM et al” "Pharmaceutical Salts." J. Pharm. Sci. 66:1-19 (1977)和 Haynes DA et al·，"Occurrence of pharmaceutically acceptable anions and cations in the Cambridge Structural Database," J. Pharm. Sci. 94:2111-2120 (2005)中揭露的可藥用鹽，所述參考文獻透過引用併入此處。例如，FDA_ 批准的可商業出售的鹽列表包括乙酸鹽、苯績酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、 酒石酸氫鹽、溴化物、依地酸舞鹽、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氣化物、檸檬 酸鹽、二鹽酸化物、依地酸鹽、乙二績酸鹽、十二烷基硫酸鹽(est〇late)、乙 續酸鹽、延胡索酸鹽、葡庚糖酸鹽(gluceptate)、葡萄糖酸鹽(gluc〇nate)、谷 ❹ 氨酸鹽、經乙醯基肺酸鹽(glycollylarsanilate)、己基間苯二盼鹽 (hexylresorcinate)、海巴明鹽(hydrabamine)、氫演化物、氫氣化物、經萘酸 鹽、換化物、羥乙基績酸鹽、乳酸鹽、乳糖醛酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、 扁桃酸鹽、甲項酸鹽、甲基溴化物、甲基确酸鹽、甲基硫酸鹽、粘酸鹽、 萘磺酸鹽、硝酸鹽(mitrate)、雙羥萘酸鹽(pamoate)、泛酸鹽、磷酸鹽、磷酸 氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、次醋酸鹽、琥珀酸鹽、硫 駿鹽、韓酸鹽、酒石酸鹽、茶氣酸鹽(teoclate)和三乙基破化物(出娜〇出加）。 在另一實施例中，此處所述的化合物及其衍生物和藥物組合物用於下 述藥物的製造’所述藥物用於治療微生物感染及/或增生性疾病或病症，包 20 201008571 括例如抑制聚合酶活性’包括RNA-依賴性職病毒複製，例如HCV複 製’及其治療例如RNA-依賴性KNA病毒感染。 此處包括了方程式I的大量變例和化學配方設十以下的定義和示例旨 在幫助描述一些可能的實施例。 單獨或組合中的「炫基」是指單價燒基，其可為直鍵或具支鍵的，並 較佳地具有i 織更絲i ·個麵子。賴麟齡仔包括甲基、 乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、正己基等。 單獨或组合"「魏基」是指二航基，其愤基如以上所述。 單獨或組合巾的「芳基」是指具有單環(例如苯綱多個觸(例如蔡 基或蒽基)的不飽和芳香族碳環基，其較佳地具有6到Μ個碳原子。芳基的 醫例子包括苯基、萘基等。 早獨或組合中的「亞芳基」是指二價芳基，其中芳基如以上所述。 單獨或組合㈣「钱基」是指基岐基办，其巾絲如以上所述。 士，獨或組合中的「芳垸基」是指-亞垸基·芳基’其較佳地在亞燒基部分 =具有1到10個碳原子，在芳基部分中具有6到_碳原子。這類芳炫 , 基的示例是苄基、苯乙基等。 张十.單?，，合中的「芳院氧基」是指基團芳燒基-〇-，其中芳烧基如以上 所述。這類芳烷氧基的示例是苄氧基等。 ^或組合令的「燒氧基」是指基團勝〇 ,其愤基如以上所述。 β 甲氧ΐ备乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、 仲丁 f1基正減基、正己氧基、m基丁氧基等。 妙的鍵婦基」是指單價鏈烯基，其可為直鏈或具支鏈的， 佳t 2 個碳原子和更佳地2到6個碳原子，和至少1個、較 佳地1-2個碳-碳雙鍵。例子包括乙烯基(_CH=CH2)、正丙婦基 (丙烯基(_c(ch3)=ch2)、丁烯基(-ch2Ch=chch3)等。 所述早獨錄σ㈣「鏈縣氧」是指錢鏈職〇·，其中_基如以上 更佳=块基」是指炔基，其較佳地具有2到ι_子和 更佳到個碳原子，並具有至少】個、較佳地12個碳碳三鍵。块基 21 201008571 I 4 的示例包括乙炔基(-CCH)、炔丙基(-CH2CCH)、戊-2-炔基 (-CH2CsCCH2-CH3)等。 單獨或組合中的「炔氧基」是指基團炔基-〇-，其中炔基如以上所述。 單獨或組合中的「醯基」是指基團H-C(o)-、烷基-C(O)-、環烷基-C(o)-、 芳基-c(0)-、雜芳基-c(o)-和雜環基-c(o)-，其中烷基、環烷基、芳基、雜 务基和雜環基如此處所述。 單獨或組合中的「氧醯基」是指基團H-OC(O)-、烷基-OC(O)-、環烷基 _OC(〇)-、芳基-OQO)-、雜芳基_%(〇)+雜環基·〇(：(〇)_，其中烧基、環烧 基'芳基、雜芳基和雜環基如此處所述。 單獨或組合中的「胺基」是指基團_NR"，"R"，"，其中每個R""丨獨立地是 氫、燒基、環烷基、芳基、雜芳基和雜環基，且其中烷基、環烷基、芳基、 © 雜务基和雜環基如此處所述。 單獨或組合中的「胺醯基」是指基團_C(〇)NR，”"R"，，，，其中每個R"m獨 ^地是氫、燒基、環烷基、芳基、雜芳基和雜環基，且其中烷基、環烧基、 方基、雜务基和雜環基如此處所述。 . 單獨或組合中的「醯胺基」是指基團，其中每個R，""獨 ^地是氫、烷基、環烷基、芳基、雜芳基和雜環基，且其中烷基、環烧基、 芳基、雜芳基和雜環基如此處所述。 —單獨或組合中的「醯氧基」是指基團_〇C(〇)_H、_〇C(〇)_烷基、_〇c(〇)_ 方基、-C(0)〇-雜芳基*_c(〇)〇_雜環基，其中烷基、芳基、雜芳基和雜環基 如此處所述。 單獨或組合中的「胺酿基氧」是指基團 烷基、-oc(o)m”"’·芳基、_0C(0)NR""，^芳基和 _0C(0)NR，"，，_ 雜環基，其 中R"”’獨iL地是氫、燒基、環烧基、芳基、雜芳基和雜環基，且其中炫基、 環烷基、芳基、雜芳基和雜環基如此處所述。 單獨或組合中的「氧醯胺基」是指基團、Upp 烧基、術"”C⑼〇·芳基、-NR""，C(0)0-雜芳基和NR""，C(0)0-雜環基，其 t R""’獨iL地是氫、院基、環烧基、芳基、雜芳基和雜環基，且其中烧基、 裱烷基'芳基、轉基和雜環基如此處所述。 22 201008571 單獨或組合中的「氧醯氧基」是指基團-〇C(0)-OH、-0C(0)0_烧基、 -^(0)0·芳基、_〇c(〇)〇雜芳基和^(0)0雜環基，且其中燒基、環^基、 方土。、雜芳基和雜環基如此處所述。 單獨或組合中的「醯亞胺基」是指基團-C(NR，，m)-R，，，"，其中每個R"," 獨立，是氫、燒基、環烷基、芳基、雜芳基和雜環基，且其中烷基、環烷 基、芳基、雜芳基和雜環基如此處所述。 單獨或組合中的「醯亞胺基氧」是指基團-o-c(nr”，，，)-r，"，，，其中每個 獨立地疋氫、燒基、環烧基、芳基、雜芳基和雜環基，且其中燒基、環 烷基、芳基、雜芳基和雜環基如此處所述。 〇 R組合中的「氧醯亞胺基」是指基IC(NR””，)翁”，，其中每個 —是氫、貌基、環烧基、芳基、雜芳基和雜環基，且其中烧基、環 烷基、芳基、雜芳基和雜環基如此處所述。 單獨或組合中的「環烧基」是指環狀絲，其具有單個環或多個铜環， • 具有3到8個碳原子。這類環烧基包括，舉例而言，單環結構例如 ，丙基、環了基、職基、環己基、環辛基料，或辦結細如金剛燒 基(adamantanyl)等。 早獨或組合㈣「環稀基」是指環狀埽基，其具有單個環和至少一個 内部^飽和位點’較佳地具有4到8個礙原子。合適的環稀基的示例包括 例如環丁_2_絲、軸_3•絲、環[_4縣、環辛_3_縣等。 ❹ ，或組合中的「_素」是指氣、氣、漠和破。 早獨或組合巾的「料基」是指單鮮香麟環H滿足芳香性的 =咖1標準(即含有如+ 2兀個電子，是平面和共輕的）並且環内較佳地具 =到=個碳原子和i到4個選自氧、氮、•硫的雜原子(並包括硫砸 和氮的氧化物）。這類雜芳基可具有單環(例如讀基、轉基或其n氧化 物’或吱喃基)或多個稠環(例如β引嗪基、苯並味唆基、香豆素基哇 異喧琳基或苯並喧唾基；)。 & 單獨或組合中的「雜環基」是指單價飽和或不飽和的基團，其具有單 個環或多個稠環’環内較佳地具有從〗到8個礙原子和〗到4個選自氛、 硫、氧、硒和磷的雜原子》更佳的雜原子是氮。 23 201008571 雜環基和料基_子但不祕射、财私 =二咬、鱗、錢、建嗓、命秦、異啊、辦、啊、嗓吟、麵、 、、喹啉、酞♦、萘基吡咬、喹噁琳、喧嗤啉、嗜啉、嗓啶、β弄唑、 。弄„咬、啊、菲略琳、異魁、吩嘻、異射、吩鱗、吩售唤、 唑、咪嗤琳、齡”瓜嗓、邮琳、鄰苯二甲醯亞胺、似4_四氫 異啥琳、4,5,6,7-四氫苯_嗟吩、封、喧二唾、嚼二嗤、噪三唾、四唑、 噻唑烷、噻吩、苯並问噻吩、.嗎啉代、呱咬基轉燒四氣咬喊基、三 t [1，3]間二氧雜環戊烯等。雜環基環也可可選地與芳環融合，從而 定義包括雙環、轉。典型地，這獅合的轉基射選地被取代的苯 、享個鍵。苯並-融合的雜環基的例子包括但不限於，苯並[1，3]間二氧 =環戊埽、苯並咪也侧、四A啥琳和亞甲基二氧苯環結構。與雜環的結❹ «可位於雜原子位X上，或通職穩子結合，或解並稠合的衍生 物而言通過苯環的雜原子和碳原子結合。 —單獨或組合中的「硫代」是指基團Η-S-、烷基-s_、環烷基_s_、芳基_s… 雜芳基-S-和雜環基_S· ’其巾烷基、環烷基、芳基、雜芳基和雜環基如 . 所述。 單獨或組合"「贼絲」錄，糾絲如歧所述。 ’ 單獨或組合中的「硫代醯基」是指基團H_c(s>、燒基_c(s)_、環烧基 -C(s)-、芳基_c(s)_、雜芳基_c(s>和雜環基七⑻，其中燒基環烧基芳 基、雜芳基和雜環基如此處所述。 單獨或組合中的「氧硫代醯基」是指基團H0_c(s)、烧基oc(s)、環 ® 烷基o-c(s)-、芳基o-c⑻_、雜芳基〇_嗯_和雜環基〇c⑻，其中烧基、 環烧基、芳基、雜芳基和雜環基如此處所述。 單獨或組合中的「氧破代醯氧基」是指基團H〇_c(s)_〇_、烧基 -〇-C(S)-〇-、環烷基-〇_c(S)-0-、芳基-0-C(S)-0-、雜芳基_〇_c(s)_〇_和雜環 基-Of⑻_〇·’其巾織、魏基、芳基、歸基和雜環基如此處所述。 早獨或組合中的「鱗釀胺基J是指基團_NR’””-P(〇)(R""")(〇R"m")，其中 R代表Η、院基、環烧基、鍵烯基或芳基，R""”代表〇r_或是經基或胺 基，且R_是烷基、環烷基、芳基或芳烷基，其中垸基、胺基、鏈稀基、 芳基、環烧基和芳烧基如此處所述。 24 201008571 單獨或組合中的「硫代醯氧基」是指基團H-C(S)-〇-、烷基-C(S)-0-、 環烧f c(s)·0、芳基_c(s>〇_、雜芳基-C(S>0_和雜環基-c(s)-〇-，其中烷 基、環燒基、芳基、雜芳基和雜環基如此處所述。 早獨^組合中的「亞硫醯基」是指基團H S(〇)、炫基_s(〇)、環燒基 •s(o)_、方基_S(0)_、雜芳基_8(〇)和雜環基_s(〇) ’其中烧基環烷基芳 基、雜芳基和雜環基如此處所述。 單獨或魬合中的「磺醯基」是指基團H S(〇)2_、烷基-s(〇)2_、環烧基 ，·、芳基-s(o)2_、雜芳基爾_和雜環基部)2_，其中烷基、環烷基、 芳基、雜芳基和雜環基如此處所述。 單獨或組合中的「亞磺醯胺基」是指基團H-S(0)-NR""，、烧基 S(O) NR ·、環燒基_3(〇)_服"，"·、芳基 8(〇)_顺，""、雜芳基 8(〇)_服,""_ 和雜環基Aom"，"·，其中『獨立地是氫、烧基、環烧基、芳基、雜芳 基和，環基，且其愤基、魏基、芳基、鮮基和轉基如此處所述。 單獨或組合中的「績醯胺基」是指基團迅8(〇)2_^，"”_、院基 • -s(0)2_mm”-、環烷基-s(〇)2-nr”"’-、芳基-s(o)2-nr"，"·、雜芳基_8(〇)2掀，"，，_ . 和雜環基-s(〇)2-NR""，-，其中R""，獨立地是氫、烷基、環烷基、芳基、雜芳 基和，環基’且其巾絲、環絲、絲、雜絲轉環基如此處所述。 單獨或組合中的「氧亞續醯胺基」是指基團H0~S(0)-NR"，"-、烧基 -O-S(o)-·’”’·、環烷基_〇_8(〇)_服""，·、芳基_〇 s(〇)撕，"，、雜芳基 ❹-〇-巧)撕，”’-和雜環基·〇-8(0)-ΝΚ""，·，其中R""獨立地是氫、烷基、環炫 基、芳基、雜芳基和雜環基，且其中烷基、環烧基、芳基、雜芳基和雜環 基如此處所述。 早獨或組合的「氧項醢胺基」是指基團H0-S(0)2-NR"'"-、统基 •〇-S(0)2_NR””’-、環烷基-O-SdNR”"’…芳基_〇 8(〇)2|"，、雜芳基 -〇-S(0)2-NR”"’-和雜環基_〇S(0)2-NR，”"-，其中R，"”獨立地是氫、烧基、環 炫基、芳基、料基和雜環基’且其中絲、環絲、絲、雜芳基和雜 環基如此處所述。 早獨或組合中的「胺基硫代醯基」是指基團，豆中备_ 個R"”，獨立地是氮、絲、環院基、芳基、雜芳基，其作H基中母芳 基、雜芳基和雜環基如此處所述。 25 201008571 單獨或組合中的「硫代醯胺基」是指基團H-C(S)-NR"，"-、烷基 -C(S)-NR""’-、環烷基·(：：⑻-nr_、芳基_c⑻-nr"，"-、雜芳基 和雜環基-C(S)-NR’””- ’其中R""，獨立地是氫、烷基、環烷基、芳基、雜芳 基’且其中院基、環燒基、芳基、雜芳基和雜環基如此處所述。 單獨或组合中的「胺基亞磺醯基」是指基團R，””R’"”N_s(〇)_，其中每 個R""’獨立地是氫、烷基、環烷基、芳基、雜芳基和雜環基，且其中烷基、 環烷基、芳基、雜芳基和雜環基如此處所述。 單獨或組合中的「胺基確醯基」是指基團，其中每個 R""’獨立地是氫、烷基、環烧基、芳基、雜芳基和雜環基，且其中烧基、環 烧基、芳基、雜芳基和雜環基如此處所述。 術語「取代的」（及其變異)表示被一個或多個基團取代或與之稠合(例 如從而形成稠合的多環基團），所述基團例如羥基、醯基、烷基、烷氧基、 鏈烯基、鏈烯基氧、炔基、炔氧基、胺基、胺醯基、硫基、芳烷基、芳 烧氧基、芳基、芳氧基、醯胺基、氰基、_素、硝基、磺基、磷醯基、 磷醯胺基、亞磷醯基、雜芳基、雜芳基氧、雜環基、雜環基氧、氧醯基、 醯氧基、肟、肟醚、腙、氧醯胺基、氨醯基氧、三鹵曱基(trihal〇methyl)、 二烧基甲矽烷基、五氟乙基、三氟子氧基、二氟甲氧基、三氟甲烷硫基 (trifluoromethanethio)、三氟乙炔基、單烷基胺基或二烷基胺基、單(取代 的烷基)胺基或二(取代的烷基)胺基、單芳基胺基或二芳基胺基、單雜芳 基胺基或二雜芳基胺基、單雜環基胺基或二雜環基胺基、不對稱的二取 代胺(其具有選自烷基、芳基、雜芳基或雜環基的不同取代基和其他類似 的取代）。術語「取代的胺基」包括胺基酸和胜肽殘留物。「取代的苯基」 包括例如1，3·二氧苯甲酸、4-甲氧苯基、4-雜環己基、2-胺基苯、4-氟苯基、 2-氟苯基、3-乙醯苯基以及甲苯基。 除非另有說明’術語「驗基」是核苦或核普酸的驗基部分。驗基部分 是核苷或核苷酸的氛-雜環部分。方程式I的核苷酸的驗基部分是由方程式 (II)所表示的雜環，並稱作「鹼基」。核苷鹼基與核苷的糖部分以以下方式 結合：可產生D或L核苷的α和召二種端基異構體。這使用連接鹼基與糖 部分的νΑΛΑΛ鍵表示。 201008571 術语「糖」是指核苷或核苷酸的吱鳴糖部分。方程式i核苷、核苷酸和 核普酸模擬物及/或其前驅藥的糖部分在其呋喃糖的C1_、C2-、C3-和C4-位置上可含有一個或多個取代基。取代基可指向咬喃糖的或万_面上。核 苷或核苷酸驗基可被認為是呋喃糖位置上的取代基，並較佳地指向糖 的点-面。面是σ夫喃糖的其上面存在例如天然冷核芽酸的嗓吟或鳴咬 驗基的侧面。〇：-面是與召-面相反的糖側面。 術语「保護基」(及其變異)是指改變或掩蔽另一部分的特性或反應性(例 如改變官能團極性、親脂性或疏水性)的部分或取代基。保護基的例子和化 學結構是大量和非常廣泛的。針對〇、S、N、羥基或_的「保護基」的 示例包括例如醯基、甲矽烧基等的部分。保護基也可在想要的化合物的合 成中發揮中間體的作用，以例如透過促進合成路徑中化學鍵的形成及/或斷 裂來提高想要的反應效率。保護基也可提高或增強藥物吸收、溶解度、親 月曰性、生物利用率、效力及/或進入細胞的藥物遞送，並且也可被稱作前驅 樂。在這樣的情況下，保護基如此處所述將治療活性化合物轉化為前驅藥。 在任何事件中，含有保護基的化合物可具有生物活性或者是無活性的。針 • 對這些和其他部分的其他合適的保護基由T.W. Greene andP.G.M. WutS;

Protecting Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed, John Wiley & Sons, Inc. (1999) 所描述。 在本文中使用時，速溶化合物的「水合物」可為適合藥用（即可藥用） 〇 的水合物，其為透過向宿主分子(例如游離形式的化合物)中添加水或其元素 所形成的化合物，包括但不限於單水合物、二水合物等。 在本文中使用時，速溶化合物的「溶劑合物」可為適合藥用（即可藥用） 的溶劑合物，其中溶劑化是溶質與溶劑的相互作用，所述相互作用導致溶 質物質在溶液中的穩定，並且其中溶劑化的狀態是溶液中與溶劑分子絡合 的離子。溶劑合物和水合物也可稱作「類似物」。 本發明具體涉及可透過例如聚合酶抑制而發揮抗增生劑作用的核苷和 核普酸類似化合物，更具體地涉及用於治療疾病(例如增生性和傳染性疾病） 的雙環核苷和核苷酸、這些化合物的組合物、用於合成這些化合物的中間 體、用於製備這些化合物的方法，和用於治療所述疾病相關病症的方法。 27 201008571 對應於方程式i的結構，方程式i的化合物：

其中^〜^界定了作為D-或L-核苷或核苷酸的活性藥物成分；A係選自由 -Ο-、-S-、-CH2-、-CHF-、-CF2-和-NR-所組成的群組；R1'、R2、R2·、R3、 ^ R3’和 R4’獨立地選自由-H、鹵素、-OH、-NHOH、-NHNH2、-N3、~CN、 -OCOCHNC(CH3)2、-COOH、-CONH2、-C(S)NH2、-COOR、-R、-OR、-SR、 -SSR、-NHR和-NR2所組成的群組，或R2和R2·—同或R3和f 一同代表％、 =S、或Α’-Υ1，其中L'係選自由N、CH、CF、CC1和CBr所組成的群組， ' 且Y·係選自由H、鹵素、Ns、甲基、乙基和CN所組成的群組；R獨立地 是鹵素、-H、-OH、-SH、-CN、S(CrC4 烷基）、-N〇2、NH2、-NHNH2、-N3、 -NR’R· ’ 其中每個 R·獨立地是 H 或 CrC4 烷基、-C(S)NH2、-CH3、-CH2OH、 -CH2NH2 ' -CH2NH3+ ' -COOH ' -COOCH3 ' -COOCH2CH3 ' -CONHCH3 ' -CONH2 '-CF3 '-N(CH3)2 '-NHCOCH3 '-NHCONH2 '-NHCNHNH2 '-ONH2 ' 〇 -CH2〇CH3、-0(CH2)CH3、COOC1-C4烧基、可選擇地取代的院基、可選擇 地取代的鏈烯基、可選擇地取代的炔基、可選擇地取代的芳基、可選擇地 取代的醯基、可選擇地取代的芳烷基、可選擇地取代的環烷基、可選擇地 取代的環浠基、可選擇地取代的苯基、可選擇地取代的雜芳基、可選擇地 取代的雜環基、可選擇地取代的烧氧基、可選擇地取代的鏈歸氧基、可選 擇地取代的炔氧基、可選擇地取代的芳氧基、可選擇地取代的醯氧基、可 選擇地取代的氧醯基、可選擇地取代的芳烷氧基、可選擇地取代的雜環氧 基、可選擇地取代的雜芳氧基、可選擇地取代的環烧氧基、可選擇地取代 的環嫦氧基、可選擇地取代的胺基、可選擇地取代的胺醯基、可選擇地取 28 201008571 代的胺醯氧基、可選擇地取代的醯胺基、可選擇地取代的氧醯胺基、可選 擇地取代的氧醯氧基、可選擇地取代的醯亞胺基、可選擇地取代的醯亞胺 氧基、可選擇地取代的氧醯亞胺基、可選擇地取代的胺基梳代醯基、可選 擇地取代的硫代醯胺基、可選擇地取代的胺基亞磺醯基、可選擇地取代的 胺基續醯基、可選擇地取代的硫基、可選擇地取代的硫代烷基、可選擇地 取代的硫代醯基、可選擇地取代的硫代醯氧基、可選擇地取代的氧硫代醢 基、可選擇地取代的氧硫代醯氧基、可選擇地取代的磷醯胺基、可選擇地 取代的亞磺醯基、可選擇地取代的磺醯基、可選擇地取代的亞磺醯胺基、 可選擇地取代的磺醯胺基、可選擇地取代的氧亞磺醯胺基和可選擇地取代 的氧績醯胺基;L 係選自由-Ο、NH、NR、CY3、CY2〇、CY2S、CY2NH、 β -CY2、-CY2CY2、-CY2OCY2、-CY2SCY2 和-CY2NHCY2 所組成的群組；γ 係獨立地選自由-H、i素、-R、-OR和-NR2所組成的群組；R5係選自由-〇H、 -R、-OR、-NR2或其一磷酸鹽、二填酸鹽或三磷酸鹽部分或其模擬物所組 成的群組；鹼基是方程式II的基團：

，其中係單或雙鍵；Z1、Z3和Z4係獨立地選自由>C-CONHR、 >C-CONR2、>C-C(S)NH2、>C-COOR、>C-R、>C-OR、>C-SR、>C-NHR、 >C-NR2、>C-可選擇地取代的雜芳基、>c-可選擇地取代的烷基*>C-G組 成的組；Z2係選自*>C-NH2*>C=0所組成的群組；G係獨立地選自由_H、 -F、-α、-I、-NH2、-NHCH3、-CN、-COOH、-CSNH2 ' -C=CH、-OCCH3、 -OCCH2OH、-C=C-Si(CH3)3、-CONH2、-CONHCH3、-CONH-苯基、-CONH- 甲苯基、嘆嗤、嚼唾、咪唾、味峻咐、三嗤和四嗤所組成的群組、或可藥 用的其鹽類、酯類、溶劑合物、水合物或前驅藥 在一個示例性實施例中，當方程式I化合物包括二個或更多的G基團 時，G'係相同或不同的。 29 201008571 在一個示例性實施例中’當A係Ο時’R1’、R3、R4和R5係H;L係〇 ; 且 R2'和 R3'係 OH ;然後 R2 係鹵素、〇Η、ΝΗΟΗ、ΝΗΝΗ2、Ν3、CN、 OCOCHNC(CH3)2、COOH、CONH2、C(S)NH2、COOR、R6、〇R、SR、SSR、 NHR 或 NR2，且 R6 係鹵素 OH、SH ON、S(Cm 烷基）、N〇2、NH2、NHNH2、 N3、NR，R’，其中每個R’獨立地係H或烷基、C(S)NH2、CH3、CH2OH、 CH2NH2、CH2NH3+、COOH、COOCH3、COOCH2CH3、CONHCH3、CONH2、 CF3 ' N(CH3)2 ' NHCOCHs ' NHCONH2 ' NHCNHNH2 ' 〇NH2 ' CH2OCH3 ' 0(CH2)CH3、COOCCw烷基）、取代的烷基、取代的鏈烯基、取代的炔基、 取代的芳基、取代的醯基、取代的芳烷基、取代的環烷基、取代的環烯基、 取代的苯基、取代的雜芳基、取代的雜環基、取代的烧氧基、取代的鏈烯 基氧、取代的炔氧基、取代的芳氧基、取代的醯氧基、取代的氧醯基、取 Θ 代的芳烷氧基、取代的雜環氧基、取代的雜芳氧基、取代的環烧氧基、取 代的環烯氧基、取代的胺基、取代的胺醯基、取代的胺醯氧基、取代的醯 胺基、取代的氧醯胺基、取代的氧醯氧基、取代的醯亞胺基、取代的醯亞 胺氧基、取代的氧醯亞胺基、取代的胺基硫代醯基、取代的硫代酿胺基、 - 取代的胺基亞磺醯基、取代的胺基磺醯基、取代的硫基、取代的硫代烧基、 取代的硫代醯基、取代的硫代醯氧基、取代的氧硫代醯基、取代的氧硫代 醯氧基、取代的填醯胺基、取代的亞續醯基、取代的磺醯基、取代的亞確 醯胺基、取代的磺醯胺基、取代的氧亞磺醯胺基或取代的氧確醢胺基。 方程式I化合物的一個實施例中’=係雙鍵，Z1係>(>1^，Z2係 ❹ >C-NH2，Z3 係>011"'，Z4 係>C-R""，以及 R"、R"·和 R""係彼此獨立地 Η、F、 I、Cl、NH2、NHCH3、C(=0)NH2、C(=0)NHCH3、C(=0)NH(C6H5)、 C(=0)NH(C6H5CH2)、CN、C三CH、C=CCH3、C三CCH2OH、C三C-Si(CH3)3、 C(=S)NH2、CO2H、

方程式I化合物的另一實施例中，二二係單鍵’Z1係^-R" ’ z2係>0=〇 ’ Z3 係>〇-11"，，Z4 係〉C-R""，以及 R"、R”’和 R”"係彼此獨立地 Η、F、I、Cl、 30 201008571 NH2、NHCH3、C(=0)NH2、C(=0)NHCH3、C(=0)NH(C6H5)、 -C(=0)NH(CH2C6H5)、CN、CCH、CCCH3、CeCCH2OH、C三C-Si(CH3)3、 c(=s)nh2、co2h、

方程式I化合物的另一實施例中，/係>〇11。 方程式I化合物的另一實施例中，z4係>C-R""，而R"，·係F、I、Cl、NH2、 NHCH3、C(=0)NH2、C(=〇)NHCH3、C(=0)NHC6H5、C(=0)NH(CH2C6H5)、 ❹ CN、CeCU、C^CCH3、〇CCH2OH、C-C=Si(CH3)3、C(=S)NH2、C02H、

方程式I化合物的另—實施例中，，而R，m係F、j或C1。 方程式I化合物的另一實施例中，z3係^及"，，而Rm係Η。 方程式I化合物的另一實施例中，Z^>C_R，"，而R"，係NJJ2。 方程式I化合物的另—實施例中，Z1 .>C H。 方程式I化合物的另—實施例中，21係>(：_11"，而R"係獨立地F、工、 Cl' NH2 - NHCHs ' C(K))NH2 ' C(=0)NHCH3 ' C(=0)NHC6H5 ' C(-0)NHCH2C6H5' CN . CsCH , c=CCHs . c^CCH2OH ' C-C=Si(CH3)3 ' C(=S)NH2、c〇2H、

方程式I化合物的另一實施例中 ，A係氧。 實施例巾，[係〇，以及r5^h或—填酸鹽、 4酸鹽或三磷酸鹽邹分或其模擬物。 在另一营施例中， 方程式I的化合物係選自4-胺基-5-氟-7-(2-0甲基 31 201008571 -β-D-0夫喃核糖基>°比嘻并[2,1 _f] [ 1，2,4]三井；4-胺基冬氣-7-(2心甲基-β_0~ 呋喃核糖基)-吡咯并[2，l-f][i，2,4]三井；4-胺基-5-块-(2-C-曱基-β-D-呋喃核糖 基)-吡咯并[2，l-f][l，2,4]三井；4_胺基-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-吡咯并 [2，1-：{][1，2,4]三井-5-碳化猜；4-胺基-7-(2-(^-甲基-择_〇-11夫味核糖基)-0^哈并 [2，l-f][l，2,4]三井-5-羧酸醯胺；4-胺基-5-三甲基石夕烷基乙炔基-7-(2-C-甲基 -β-D-咬喃核糖基比洛并[2，i_f][i，2,4]三井；4-胺基-5-乙快基-7-(2-C-甲基 -β-D-呋喃核糖基)-吡咯并[2，i_f][i，2,4]三井；4-胺基-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核 糖基)-吡咯並P，l-f][l，2,4]三井_5_羧酸；2,4-二胺基-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核 糖基)-吡咯並[2，1-饥1，2,4]三井；4-胺基-7-(2-(：-甲基令0-呋喃核糖基)>吡咯 並[2，1-幻[1，2,4]三井-5-羧酸醯胺；4-胺基-5-噁嗤-2-基-7-(2-0曱基令0-呋喃 核糖基)-吡咯並P，l-f][l，2,4]三井；4-胺基-5-噻唑-2-基-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃 核糖基)-吡咯並[2，1-£][1,2,4]三井；4-胺基-5-(3乩[1，2,3]三峻-4-基)~7-(2-(：-甲 基-β-D-呋喃核糖基)·吡咯並[2，1-£][1，2,4]三井；4-胺基-6-氟-7-(2-(：-曱基各1>-呋喃核糖基)-吡咯并[2，1-!][1，2,4]三井-7-基；4-胺基-5-咪唑-7-(2-〇：-甲基-择-〇-呋喃核糖基)-吡咯并[2，l-f][l，2,4]三井；以及4-胺基-5-咪唑淋-7-(2-C-甲基 -β-D-呋喃核糖基)-吡咯并[2，1-£][1，2,4]三井。 在另一實施例中，方程式I的化合物係4-胺基-7-(2-C-甲基-β-D-吱喃核 糖基)-啦咯并|；2，1-沉1，2,4]三井。 在另一實施例中，R5係一磷酸鹽、二麟酸鹽或三碟酸鹽部分的胺基鱗 酸鹽或填酸醋。 在另-實施例中’可獨立地在其中可選擇s的每個位置上用％代替s。 本^明的化合物還包括其可藥用鹽類、酷類、溶劑合物、水合物I或其前 在一個實施例中，糖部分可透過以下來表示： 32 201008571

及其C-5 —磷酸鹽、二填酸鹽和三構酸鹽衍生物，或其C-5 —磷酸鹽、二 磷酸鹽和三磷酸鹽模擬衍生物，及其前驅藥部分例如磷酸鹽和胺基碗酸鹽。 在另一實施例中，糖部分可透過以下化學式表示：

及其C-5 —磷酸鹽、二填酸鹽和三磷酸鹽衍生物，或其C-5 —磷酸鹽、二 磷酸鹽和三磷酸鹽模擬衍生物。 在另一實施例中，糖部分可透過以下化學式來表示：

33 201008571 及其C-5 —磷酸鹽、二填酸鹽和三填酸鹽衍生物，或其C-5 —磷酸鹽、二 磷酸鹽和三磷酸鹽模擬衍生物。 在另一實施例中，糖部分可透過以下化學式來表示··

及其C-5 —磷酸鹽、二構酸鹽和三磷酸鹽衍生物，或其C-5 —磷酸鹽、二 磷酸鹽和三磷酸鹽模擬衍生物。 還在又一個實施方案中，糖部分可透過以下化學式來表示：

及其C-5 —磷酸鹽、二鱗酸鹽和三填酸鹽衍生物，或其C-5 —磷酸鹽、二 磷酸鹽和三磷酸鹽模擬衍生物。 因此，方程式I的化合物的一個實施例可透過以下化學式或其鹽類、酯 類、溶劑合物、水合物或前驅藥來表示： @

34 201008571

35 201008571

36 201008571 另外，化學式i的化合物的另一實施例可透過以下化學式或其鹽類、酯 類、溶劑合物、水合物或前驅藥來表示：

37 201008571

38 201008571

每個 R可以是鹵素、一11、-011、-811、-0^、8(〇1-0：4烷基)、-1^02、>^2、 -NHNH2 或-N3、-NR’R’。每個 R’可獨立地是 Η、CrC4 烷基、-C(S)NH2、-CH3、 -CH2OH、-CH2NH2、-CH2NH3+、-COOH、-COOCH3、-COOCH2CH3、 -CONHCH3 ' -CONH2 ' -CF3 ' -N(CH3)2 ' -NHCOCHs ' -NHCONH2 ' ❹ -NHCNHNH2、-ONH2、-CH2OCH3、-0(CH2)CH3、COO(CrC4alkyl)、取代 的烷基、取代的鏈烯基、取代的炔基、取代的芳基、取代的醯基、取代的 芳烷基、取代的環烷基、取代的環烯基、取代的苯基、取代的雜芳基、取 代的雜環基、取代的烷氧基、取代的鍵烯基氧、取代的炔氧基、取代的芳 氧基、取代的醯氧基、取代的氧醯基、取代的芳燒氧基、取代的雜環氧基、 取代的雜芳氧基、取代的環娱*氧基、取代的環烯氧基、取代的胺基、取代 的胺醯基、取代的胺醯氧基、取代的醯胺基、取代的氧醯胺基、取代的氧 醯氧基、取代的醯亞胺基、取代的醯亞胺氧基'取代的氧酿亞胺基、取代 的胺基硫代醯基、取代的硫代醮胺基、取代的胺基亞績醯基、取代的胺基 績醢基、取代的硫基、取代的硫代院基、取代的硫代酿基、取代的硫代酿 39 201008571 氧基、取代的氧硫代醯基、取代的氧硫代醯氧基、取代的填醯胺基、取代 的亞項醯基、取代的績醢基、取代的亞確醯胺基、取代的確醯胺基、取代 的氧亞硫醯胺基或取代的氧績醯胺基。每個G可為-H、-F、-Cl、-I、-ΝΉ2、 -NHCH3、-CN、-CCH、-OCCH3、-CeCCH2OH、-〇C-Si(CH3)3、-CONH2、 -CSNH2、-COOH、-CONHCH3、-CONH-苯基、-CONH-甲苯基、嗟吐、鳴 唑、咪唾、咪嗅'林、三唑或四吐。其C-5 —磷酸鹽、二填酸鹽和三填酸鹽 衍生物，或其C-5 —填酸鹽、二磷酸鹽和三碟酸鹽模擬衍生物》 在另一實施例例中’糖部分可透過以下結構中的任一個來表示：

或其C-5 —麟酸鹽、二鱗酸鹽和三罐酸鹽衍生物，或其c_5 —麟酸鹽、二 磷酸鹽和三磷酸鹽模擬衍生物》本發明的核苷還包括衍生物例如核苷酸， 和其核苷酸模擬物及/或前驅藥’例如鱗酸酯和胺基麟酸酯。 在多個實施例中’上述方程式I的本發明化合物的核苷酸模擬物包括以 下化合物’其中R5是式(III)或(IV)的一麟酸鹽或一麟酸鹽模擬物： X1， x2-p— X4* X3' (III) 4- (IV) 〇 40 201008571 X1 X4和X6部分獨立地為=〇、=S或=]服。χ2’、X3,和χ5·部分可為·Η、F、 -NROR、-N3、-CN、-(ΒΗ2〇)·Μ" ' 、-R、-OR、_SR 或视2。取代 基(BH2G)TvT和(BH3)#是離子對’其透過帶負電的硼與麟連接。^是陽離 子’例如可藥用的陽離子如Ca2+、銨、三烷基銨或四院基銨，例如、 Εί3ΝΗ" ' Βιι3ΝΗΓ和 Bu^ ° 在多個實施例中’以上討論的方程式I化合物的核苷酸模擬物包括二填 酸鹽和二填酸鹽和二碟酸鹽和三碟酸鹽模擬物，包括以下化合物，其中R5 是式(V)的二鱗酸鹽或三磷酸鹽部分： X10 ❿ X4 Ρ-Χ6 X9 X3 X2 II , II ρ-χ5-ρ— X8 X7 (V) ο Χ2、Χ3 和 X4 可為=0、=S、=Se 或=NR〇X5 和 X6 可為-〇-、-S-、-Se-、-CY2CX〇)-、 -CH(OH)->-C(OH)2—CH20--CH2CH2->-CH2CH(NH2>.-CH2CH2CH(NH2)-' -CY2OCY2.-'-CY2-'-CRY-、CY2CY2-'-CHR-'«-、-HC=CH“-NH-' -NR-、>NOH、>NOR、>NNH2 或>NNHR。X7、X8、X9 和 X丨。可為_H、_F、 -OR、-SR、-NR2、-NROR、-NRNR2、-CN、-N3、、-(BH2GXM"、 參 -R和-SeR; -Y、-R ’其中-(BH2G)TVi^-(BH3)TVT如以上所界定〇 n為〇或卜 除非另有說明，術語「磷酸酯模擬物」（及其變異)是指磷酸酯類似物， 包括但不限於雄酸酿、疏代填酸醋(phosphothiolate)、碼代填酸醋 (phosphoselenoate)、一砸代磷酸醋(selenophosphate)、一硫代碟酸醋、p-漠 填酸酯(P-boranophosphate)、胺基構酸酯、胺基確酸酯、績酸酯、續醯胺及/ 或其組合。磷酸模擬物的示例性實施例包括磷酸酯、胺基鱗酸酯、硫代礙 酸酯、甲基鱗酸酯、氟甲基填酸酯、二氟甲基填酸酯、乙烯基鱗酸酯、苯 基碟酸S旨、績酸醋、敦麟酸醋、二硫代硫代構酸醋(dithiophosphorothioate)、 5'-亞甲基填酸酯、5’-二氟甲基碟酸酯、5’-脫氧碟酸酯、51·胺基胺基麟酸酯 (5’-aminophosphoramidate)和 5·-硫代碟酸醋。 還應當理解，術語「二填酸鹽模擬物」和「三填酸鹽模擬物」分別明 確地表示二填酸鹽類似物和三填酸鹽類似物，其包含至少一種填酸醋模擬 201008571 物、二麟酸鹽和三填酸鹽橋接位點(例如X5、X6和x1G)處的各種修飾之一， 及/或非橋接磷酸氧原子(例如X4、X3和X2)的替換。 對本發明的化合物而言，額外的核苷酸鱗酸酯模擬物和製造適當磷酸 酯模擬物的方法至少描述於WO 2003/072757和WO2003/073989中，其整 體内容透過引用併入此處。此處討論的許多核苷酸模擬物可透過與所揭露 的相似的途徑或使用有機碟化學的公知知識來製備。通常，本發明的核普 和核苷酸的磷酸酯模擬物可不經磷酸化而抑制酶功能，及/或對於帶有未經 修飾的磷酸基的核苷酸而言具有增強的核酸酶穩定性。 當是對掌性時，一磷酸鹽、二填酸鹽和三鱗酸鹽模擬物中的α_ρ、β_ρ 和γ-Ρ可獨立地採用Λ或5構型。 在本發明的另一實施例中，藥物劑型包括方程式I的化合物和一種或多 ◎ 種可藥用的載體、稀釋劑及/或賦形劑。 在藥物劑型的另一實施例中，針對人類患者中的微生物感染、病毒感 染或增生性病症提供治療有效劑量的方程式1的化合物，其範圍從約1〇 pg/kg 到約 30 mg/kg »

在另-實施财，錄_包含對人齡者提供每日—韻藥的方程 式I彳b合物的足量化合物D

’所述藥物触包括治猶效量的4-胺 基-7-(2-C_甲基·沒-D-呋喃核糖基)-吡咯并[2,1^ ，2,4]三井和一種或多種可 治療有效量在約10μ_到約3〇mg/kg 在人類患者巾抑概合酶雜 藥用的載體、稀釋劑及/或賦形劑。 在本發明的另一實施例中，治 間》 在本發明的另一實施例中， 的方法包括 對人類患者施用藥物劑型。 42 201008571 在所述方法的一個示例性實施例中，聚合酶活性是HCVNS5B聚合酶 活性。 在所述方法的另一示例性實施例中，藥物劑型每日施用一次。 在所述方法的另一示例性實施例中，方程式I化合物的有治療活性的化 合物是Z1為H、R2為CH3且R5是Η或 〇 ο 〇

I I I ΗΟ-Ρ-〇-ρ-π-Ρ-

I I I 〇Η OH ΟΗ 。 在另一示例性的實施例中’方程式I化合物的有治療活性的化合物包括 ❹ R5的胺基鱗酸醋或鱗酸醋。 在另一示例性的實施例中’方程式I化合物的有治療活性的化合物包括 有治療活性的化合物的鹽酸鹽。 在另一實施例中，提供了涉及透過對患者每曰施用一次藥物劑型來治 . 療C型肝炎病毒感染的方法’所述藥物劑型包含治療有效量的化合物： ΝΗ,

和一種或多種可藥用的載體、稀釋劑及/或賦形劑。 在另一實施例中，提供了涉及對患者施用範圍從約1〇μδ/^到約3〇 mg/kg的治療有效量的方程式I化合物的方法。 在另一示例性實施例中，所述方法包括體内生產治療上有效的方程式工 化合物的代謝物’所述代謝物具有大於約1〇小時的細胞内半衰期。 在另一示例性實施例中，所述方法包括體内生產治療上有效的代謝 物’從而允許在人類患者中母日一次在約l〇pg/kg到約3〇mg/kg的範圍内 對方程式I進行用藥。 在另一個示例性實施例中’施用給人類患者方程式化合物的血漿半衰 期大於約2小時。 43 201008571 在另一個示範性實施方案中，細胞外濃度為ίο M的方程式丨化入物的 藥物劑型導致原代細胞中有治療活性的化合物的細胞内水準大於約^ pmoles/百萬細胞。 在另一示例性實施例中，藥物劑型包括治療有效劑量的根據以下所述 結構的方程式I化合物，或其鹽類、酯類、溶劑合物、水合物或前驅藥和 —種或多種可藥用載體、稀釋劑及/或賦形劑，所述結構為：’

其中： R” 為 Η、F、Cl、I、CN、CONH2、C^CSi(CM 烷基)3、CN：H、c〇〇H、

圮是匚“烷基，且

〇 II 0 I HO — II _厂 1 —〇-P— I 1 OH 1 OH 或其模擬物，或其鹽類、酯類、溶劑合物、 1 HO-P— R5 是 Η、 oh ο ο Ο

ΗΟ I II I HO—_ _ρ_ q« -ρ — ~〇* Ρ一

OH OH OH 44 201008571 水合物或前驅藥’以及一種或多種藥物的載體、稀釋劑及/或賦形劑。 在另一示例性實施例中，藥物劑型包括以上所述的方程式I的化合物’ 其中R’’是Η，R2是CH3，且R5是Η或 Q Ο Ο

II II ρ_ 一〇_ ·ρ—

I I OH OH OH ο 在另一示例性實施例中，藥物劑型包括¥的胺基鱗酸酯或磷酸酯。 ❹ 在另一示例性實施例中，藥物劑型包括治療有效劑量的根據以下所述 結構的活性藥物成分或其鹽類、酯類、溶劑合物、水合物或前驅藥，和一 種或多種藥物載體、稀释劑及/或賦形劑，所述結構為： νη9

在另一示例性實施例中’藥物劑型包含範圍在1〇 到3〇 mg/kg的 治療有效劑量的活性藥物成分。 在另一示例性實施例中，藥物劑型包含活性藥物成分的鹽酸鹽。 在另一示例性實施例中，藥物劑型包含活性藥物成分的酯類。 在另一示例性實施例中，藥物劑型包含活性藥物成分的前驅藥。 在另一示例性實施例中，藥物劑型是口、直腸、鼻、局部、頰、舌下、 經皮、陰道、注射或胃腸外劑型。 本發明的化合物可具有一個或多個不對稱的碳原子，因此能夠顯示其 旋光異構體的形式’及其外消旋或非外消旋混合物的形式。可依據本領域 公知的常規方法(例如透過用旋光性的酸或驗處理形成非對映異構的鹽)通 過拆分外消旋混合物獲得旋光異構體。適合的酸的例子是酒石酸、二乙醯 基酒石酸、二苯甲醯基酒石酸、二甲苯醯基酒石酸和樟腦磺酸然後藉由 結晶、隨餘健”解雜紐•來分轉職異構體祕合物。分 45 201008571 I j有5财用的方法涉及透過將方程式1的化合物與活化形式的旋 •^1^紐二輯旋紐#級鹽反應，來合祕健職異構體分 :例如S旨類、酿胺、縮搭、縮酮等。可透過常規手段例如色譜、蒸德、 、.日日或昇華來为離合成的非對映異構體’然後水解以遞送對映異構體純淨 的化。物。在-些情況下，原始旋光性藥物的水解在對患者用藥前不是必 需的’因為化合物可作為馳藥發揮侧^同樣可透過使職光性起始材 料獲得方程式I的旋光性化合物。

除了以上所討論的旋光異構體或潛在的旋光異構體以外，其他類型的 異構體明確地被包括在本發明中。例子包括順式異構體(cisisomers)、反式 異構體(trans is〇mers)、E異構體、z異構體、順式異構體(syn is〇mer)、反式 異構想(anti-isomers)、互變異構體等。芳基、雜環基或雜芳基互變異構趙、 雜原子同分異構體和鄰位、間位或對位取代的同分異構體也作為同分異構 體包括在内。溶劑合物或溶劑加成化合物例如水合物或醇化物也明確地作 為本發明的化學品包括在内，和包括在在例如用於遞送的配製物或藥物組 合物中。

以上針對所揭露的化合物和衍生物以及中間體詳敘的通式的等同物是 以其他方式與之對應並具有相同的一般特性的化合物(例如其互變異構 艘），和其中一個或多個R基團是其中定義的取代基的簡單變化的化合物， 例如其中R是比所示基團更高級的烷基。另外，當取代基被指定為氫或可 以是氫時，在該位置上除氫以外的取代基(例如鹵素、羥基、胺基和相似的 官能團)的確切化學性質不是決定性的，只要其對總體活性及/或合成步驟沒 有不利影響即可。例如’已知同一碳上兩個經基、兩個胺基、兩個疏基、 或兩個氫-雜原子基團的混合物不受保護時或作為衍生物是不穩定的。 驗性含氮基團可以用下述試劑季銨化(quartemised)，所述試劑例如是低 級烧基自化物’例如甲基、乙基、丙基和丁基氣化物、溴化物和破化物； 硫酸二烷基酯例如硫酸二甲基酯和硫酸二乙基酯；和其他。 在一些實施例中，此處所揭露的化合物，例如核苷和核苷酸還包括其 前驅藥衍生物，是有治療活性的化合物經共價修飾的潛伏形式。 46 201008571 術v°則驅樂」以其最廣泛的含義來使用，並且包括在生物學體系中 施用時’透過例如自發的化學反應、代謝化$反應、酶備化的化學反應及/ 或光解，被體内轉化或活化為有治療活性的化合物。舉例而言，前驅藥可 如以下而被活化.在刖驅藥進入細胞後透過細胞酶或化學切割例如水解， 從而釋放(解離)核苷、核苷酸或核苷酸模擬物。前驅藥的示例包括可被氧 化還原、g曰化、去g旨化、院基化、去院基化、醮化、去酿化、胺化、去 胺化、磷酸化、去磷酸化、光解及/或水解的化合物。能夠將前驅藥酶促轉 化或活化為有治療活性的化合物的酶包括例如醢胺酶、乙酿膽鹼酯酶酯 酶、脂酶、核酸酶、氧化酶、麟脂酶、碟酸酶、及/或還原酶。這類前驅藥 修姊可提高或增強例如藥物吸收、溶解度、親脂性、生物利用率、效力及/ 或進入細胞的藥物遞送。 可透過修飾糖部分或磷酸酯或磷酸酯模擬物使其包含前驅藥取代基， 來製備本發明的化合物的前驅藥衍生物。前驅藥也可在功能性部分或前述 的有治療活性的化合物上含有不穩定的保護基。除了本文所述的這些以 外，核苷、核苷酸和核苷酸鱗酸酯模擬物的前驅藥衍生物以及適用於本發 明的刖驅樂的製造方法例如描述於PCT公開WO 2003/072757和WO 2003/073989和美國專利申請公開US20020361177中。 刖驅樂是下述化合物’其在藥理學上是惰性的，但是處於或接近預定 把位點時被酶或化學作用轉化為活性藥物形式(即活性藥物成分）。換言之， 刖驅樂疋在體内代謝後產生活性化合物的無活性化合物，所述代謝可被酶 控制或不受酶控制。前驅藥也可被廣泛地歸類為二組：生物前體和載體前 驅藥。前驅藥也可依據其作用性質再分類。生物前體前驅藥是下述^^合物， 其結構内已含有活性物類的種胚，從而在代謝後產生活性物類。例如，第 一種前驅藥-抗細菌藥百浪多息(prontosil)被體内代謝為其活性代謝物氨 苯續胺。載體前驅藥如下形成：透過將活性藥物與載體物類組合形成具有 期望的化學和生物學特徵的化合物’其中所述連接為酯類或醯胺，從而載 體前驅藥在吸收或遞送至把位點後容易被代謝。例如可結合親脂部分以提 高透過膜的轉運。透過官能團與載體連接的载體前驅藥被稱作二分前驅藥 (bipartatepmdrugs)。其中載體透過獨立的結構與藥物連接的前驅藥被稱作 三分前驅藥(11扣31^16?1'0〇!11^8)，其中載體透過酶控制的代謝過程被去除， 47 201008571 並且其中連接結構通過酶體系被去除或透過化學反應被去除。（Thomas G， Medicinal Chemistry: An Introduction, 2000, John Wiley & Sons, Ltd. pp. 12, 17 243 and 364-372)(還見於 Wermuth CG, 2003, The Practice of Medicinal Chemistry, 2nd Ed” Jaw/e/mciVej·? 33:561-582)。經基保護基是指任何合適的 基團’例如叔-丁氧基-羰基(t-BOC)和叔-丁基-二甲基-甲矽烷基(TBS)。其他 經基保護基親示於 Hanson JRy 1999, Protecting Groups in Organic Synthesis，

Sheffield Academic Press，2:8-35中，其通過引用並入本文。

舉例而言’被施用給宿主時，前驅藥通常作為可藥用的前驅藥被施用， 其透過例如依靠酶活性或酸或鹼溶劑解的水解或氧化被代謝，形成具有治 療活性的化合物和前驅藥部分或取代基。「前驅藥部分」或「前驅藥取代 基」是指透過代謝、水解及/或酶促過程從有治療活性的化合物上被去除的 不穩定基團。然而，非可藥用的前驅藥也落入本發明的範圍内，並可在例 如體外實驗中被用於提高溶解度及/或在可藥用前驅藥或其他化合物的製備 中用作中間體。

示範性的前驅藥部分包括但不限於以下的殘基：蛋白質；抗生素；可 透過碳原子(磷酸酯）、氮原子(胺基磷酸酯)或氧原子(鱗酸酯)與鱗酸酯部分 或鱗酸酯模擬物部分結合或可透過Rl_R5基團中任一個或多個與糖部分結 合的D·和L-胺基酸；透過碳原子(鱗酸酯)、氮原子(胺基填酸酯)或氧原子(構 酸酯)與磷酸酯部分或磷酸酯模擬物部分結合或可透過rLr5基圏中任一個 或多個與糖部分結合的肽(較佳地多達1〇個胺基酸）；透過碳原子(鱗酸醋）、 氮原子(胺基磷酸S旨)或氧原子(鱗酸醋)與鱗酸醋部分或鱗酸醋模擬物部分結 合或可透過RlR5基u恤-個或多個與糖部分結合的藥物部分；以及包括 類固醇；維生素；多胺；碳水化合物；聚乙二醇_0;環水楊芽基 (mryls);被取代的4到8元環，具有或不具錄環取代，與末端碟 卩分(γ或β)的13魏魏81結合，或她旨部分或鱗 Γβ或β、γ之間的接合等。伽1和絲魏醋是尤 ’、優選的别*^^藥部分。 益碰中，歸5’·—鱗酸鹽模擬物的前驅藥可完全或部分地掩 蔽磷酸sa模擬物部分的貞電荷，或賊二魏麵擬物或三模擬物 48 201008571 部分或麟酸酯部分的負電荷’從而例如增強進入細胞的藥物吸收及/或藥物 遞送。 在另一實施例中，可將一個或多個前驅藥取代基或部分與核苷一磷酸 鹽模擬物上一個或多個X2’、X3·和X5’位置接合’或與核苷二磷酸鹽或三碌 酸鹽模擬物上一個或多個X7-X1G位置連接。位置X2’、X3’和X5’中示例性的 前驅藥取代基包括2,3-0-二酿基甘油基氧、2,3-0-二炫基甘油基氧、1-0-烧 基-2-0-醯基甘油基氧、1-0-醯基-2-0-烧基甘油基氧、n炫基_2_〇醢基小 硫代甘油基氧、醢氧基甲氧基、；醯基-2-硫代乙氧基、&特戊醯基_2-硫代 乙氧基、酿氧基曱氧基、特戊醯基氧甲氧基、烷氧基羰基氧甲氧基、&烧基 二硫代乙氧基酿氧基甲氧基、孓醢基-2-硫代乙氧基、孕特戊醯基硫代 乙氧基、特戊醯基氧甲氧基、烷氧基羰基氧甲氧基和孓烷基二硫代乙氧 基。 在另一實施例中’前驅藥取代基是糖部分羥基上的取代基(即例如R1_R5 中的任意一個）。舉例而言，修飾導致酯類的形成，並且在這一點上較佳的 前驅藥取代基為CrC6醯基’例如乙醯基、丙酿基、特戊酿基等。還優選的 ， 是被取代的CrC0酿基部分’例如氟乙酿基、二氣乙酿基等。更佳地，取代 的C!-C6酿基被表不為由丙胺酸、天冬酿胺、半耽胺酸、穀胺醜胺、甘胺酸、 異亮胺酸、亮胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、脯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、色 胺酸、路胺酸、綠胺酸、天冬胺酸、谷胺酸、精胺酸、組胺酸和賴胺酸組 β 成的L或D胺基酸的殘基。最佳地，前驅藥取代基是D或L•纈胺酸的胺基 酸殘基。 適合藥用的口服載體系統(也稱作藥物遞送系統，其為現代技術，其與 樂物製品一起或作為藥物製品的一部分分配，其允許將藥物均勻釋放或猫 準至身體)較佳地包括FDA-批准的及/或USP-批准的無活性成分。按照21 CFR210.3(b)(8)，無活性的成分是除活性成分以外藥物製品的任何組分。根 據21 CFR 210.3(b)(7) ’活性成分是旨在提供藥理學活性，或在疾病的診斷、 治癒、減輕、治療或預防中提供其他直接效果，或影響人體或其他動物體 結構或任何功能的，藥物製品的任何組分。活性成分包括製品的這些組分： 它們在藥物製品的製造期間可經歷化學改變，並可以旨在提供所述活性或 效果的經修飾的形式存在於藥物製品中。在本文中使用時，試劑盒(也稱作 49 201008571 劑型)是經包裝_騎制集合，包括為了例如齡每日_次_劑型的 包裝。 在本文中使用時，口服劑型包括膠囊(固體口服劑型，由殼和填充物組 成’其中殼由單健封的外殼組成’或由有咖帶子密封的、安裝在一起 的兩半組成’並且其中膠攸可由师、澱粉、纖維素或其他合適的材料 製成，可為軟或硬的，並用可被傾倒或擠壓的固體或液體成分填充）、膠囊 或有塗層的丸粒(固體劑型，其中藥物被包封在由合適形式的明膠製成的、 硬或軟的可溶容器或「殼」中；藥物自身是顆粒的形式，對其可應用不同 量的塗層）、有塗層的延長釋放膠囊(固體劑型，其中藥物被包封在由合適形 式的明膠製成的、硬或軟的可溶容器或「殼」中；另外，膠囊被指定的塗 層覆蓋’所述塗層以以下方式釋放一種或多種藥物：與作為常規劑型存在 的藥物相較至少允許減少用藥頻率）、延遲釋放膠囊(固體劑型，其中藥物被 包封在由合適形式的明膠所製成的、硬或軟的可溶容器或「殼」中，所述 殼在除施用後立即释放之外的其他時間釋放一種(或多種)藥物，其中包有腸 溶衣的物品是延遲釋放的劑型）、延遲釋放丸粒膠囊(固體劑型，其中藥物被 包封在由合適形式的明膠製成的、硬或軟的可溶容器或「殼」中；藥物自 身是顆粒形式，上面應用了腸溶衣因此將藥物的釋放延遲至其進入腸）、延 長釋放膠囊(固體劑型，其中藥物被包封在由合適形式的明膠製成的、硬或 軟的可溶容器中，所述容器以下述方式釋放一種或多種藥物：與作為常規 劑型存在的藥物相較允許減少用藥頻率）、薄膜-塗層的延長釋放膠囊(固體 劑型，其中藥物被包封在由合適形式的明膠製成的、硬或軟的可溶容器或 「殼」中；另外，膠囊被指定的薄膜塗層覆蓋，所述塗層以以下方式釋放 一種或多種藥物：與作為常規劑型存在的一種或多種藥物相較至少允許減 少用藥頻率）、有明膠塗層的膠囊(固體劑型，其中藥物被包封在由合適形式 的明膠製成的、硬或軟的可溶容器中；通過加帶子的過程，用額外的明膠 層塗覆膠囊，從而形成完整的密封）、填充了液體的膠囊(固體劑型，其中藥 物被包封在可溶的明膠殼中’所述殼透過添加多元醇例如山梨糖醇或甘油 而被塑化，並因此較硬殼膠囊具有稍微更稠的粘稠度；典型地，活性成分 被溶於或分散於液想運載體中）、顆粒(小微粒或細粒）、丸粒(由高度純化的 藥物組成的小無菌固體塊’含有或不含有賦形劑，通過顆粒的形成或透過 201008571 壓縮和製模製成）、有塗層的延長釋放丸粒(固體劑型，其中藥物自身是顆粒 的形式，上面塗敷了不同量的塗層，所述塗層以以下方式釋放一種或多種 藥物.與作為常規劑型存在的一種或多種藥物相較允許減少用藥頻率）、丸 劑(小的、圓形的固體劑型，其含有旨在用於口施用的藥劑）、粉末(乾燥的、 精細分裂的藥物及/或化學品的密切混合物，其旨在用於内用或外用）、酏劑 (澄清的、氣味令人愉悦的、甜味的含水酒精液體，其含有溶解的藥劑；其 旨在用於口服使用）、口香糖(甜味和有香味的、多種性狀的不溶可塑材料， 其被°且嚼時將藥物物質釋放進σ㈣）、滅(含有高濃度賴糖或其他糖的 口服溶液，該術語還被用於包括在甜味和黏性運載體中製備的任何其他液 體劑型’包括口服懸浮液)、錠劑(含有或沒有合適稀釋劑的藥物物質的固體 劑型）、可咀嚼的錠劑(含有或沒有合適稀釋劑的藥物物質的固體劑型，其旨 在被咀嚼，在口腔中產生令人愉悅的口味殘留，所述口味殘留容易地被吞 咽並且不會留下苦味或令人不悅的後味)、有塗層的錠劑(含有有或沒有合適 稀釋劑的藥物物質的固體劑型，並且被指定的塗層覆蓋）、有塗層的微粒旋 劑(含有樂物微粒聚集物的固體劑型’每個微粒被塗層覆蓋）、延遲釋放疑劑 (固體劑型，其在除施用後立即釋放之外的其他時間釋放一種(或多種)藥 物’其中包有腸溶衣的物品是延遲釋放的劑型）、延遲釋放顆粒鍵劑(含有藥 物微粒聚集物的固體劑型，每個微粒被塗層覆蓋，所述塗層在除施用後立 即釋放之外的其他時間釋放一種或多種藥物，其中包有腸溶衣的物品是延 〇 遲釋放的劑型）、可分散的錠劑(在施用前旨在置於液體中的錠劑，在液體中 其内容物會最終分布於整個液體中，其中術語「可分散的錠劑」不再用於 被批准的藥物產品中，而是被術語「用於懸浮液的錠劑」代替）、泡騰旋劑(含 有酸例如檸檬酸、酒石睃和碳酸氫鈉的混合物的固體劑型，其溶於水中時 釋放二氧化碳，其中其旨在於施用前被溶於或分散於水中）、延長釋放錠劑 (含有藥物的固體劑型，其與以常規劑型存在的藥物相較允許至少減少用藥 頻率）、薄膜塗層的錠劑(含有或沒有合適稀釋劑的藥物物質的固體劑型，並 且帶有薄層不溶於水的或水溶性的聚合物塗層）、薄膜塗層的延長釋放錠劑 (含有或沒有合適稀釋劑的藥物物質的固體劑型，並且帶有薄層不溶於水的 或水溶性的聚合物塗層；以下述方式配製錠劑：使得其含有的藥物在消化 後延長的時段内可獲得）、用於溶液的錠劑(置於液體中時形成溶液的旋 51 201008571 劑）、用於懸浮液的鍵劍(置於紐中時形成懸浮液的铺，先前被稱作「可 分散的錠劑」）、多層浦(含有藥物物_固體劑型，其被壓縮形成多層鍵 劑或錠劑包鍵劑，内部錠劑是核，外部部分是殼）、多層延長釋放輔(含有 藥物物質的固體劑型’其被壓縮形成多層錠劑或鋪包鍵劑，内部旋劑是 核’外部部分是殼，其另外被指定的塗層覆蓋；所述旋劑以以下方式來配 製·與作為常規劑型存在的藥物相較至少允許減少用藥頻率）、口崩解的錠 ，(含有藥物物質的固體劑型，其置於舌上時迅速崩解，通常在大概數秒内 崩解)、口崩解延遲釋放鍵劑(含有藥物物質的固體劑型，其置於舌上時迅速 崩解，通常在大概數秒内崩解，但是其在除施用後立即釋放之外的其他時 間釋放藥物）、可溶疑劑(固體劑型，其含有或沒有合適稀釋劑的藥物物質， 並且具有在流體中溶解的能力）、糖塗層的錠劑(固體劑型，其含有或沒有合 © 適稀釋劑的藥物物質，並且帶有有色或無色水溶性糖的塗層）、滲透的劑型 等。 口服劑型組合物含有活性藥物成分和一種或多種無活性的藥物成分， 例如稀釋劑、增溶劑、醇、黏合劑、受控釋放聚合物、腸溶聚合物、崩解 . 劑、賦形劑、著色劑、調味劑、甜味劑、抗氧化劑、防腐劑、色素、添加 劑、填充劑、懸浮劑、表面活性劑(例如陰離子、陽離子、兩性和非離子的） 等。多種FDA-批准的局部無活性成分見FDA的

Database" ’其含有製造商明確預期的無活性成分，其中根據21 CFR 210.3(b)(7)中給出的活性成分的定義’無活性成分也可在某些情況下被認為 ❹ 是活性成分。醇是可取決於產物配方而被認為有活性或無活性的成分的一 個良好的示例。 除了使用前驅藥途徑外，可透過使用治療上可接受的載體(例如脂質體 懸浮液、陽離子脂質和多聚亞胺)幫助此處所述化合物(包括核苷及/或核苷 酸)的遞送。 本發明的核苷可由合成有機化學和核苷化學的技術人員使用確立的合 成方法氯備(Chemistry 〇f Nucleosides and Nucleotides ΥοΙΛ，2,3, oditedby

Townsend, Plenum Press; Handbook of Nucleoside Synthesis by Vorbriiggen Ruh-Pohlenz, John Wiley & Sons, Inc., 2001; The Organic Chemistry of Nucleic 52 201008571

AiAby YoshihisaMizuno,Elsevier’ 1986)。需要時，本發明的核苷可透過確 立的磷酸化步驟被轉化為它們對應的一磷酸鹽、二磷酸鹽和三碟酸鹽。 流程圖A-D圖示了可適用於製備本發明中化合物(例如方程式j的化合 物和類似化合物)的化學過程和轉化。 可如流程圖A中所示，透過完整的啦洛並三井的糖基化製備糖基吡咯 並三井。用於這類糖苷化的條件是本領域技術人員所公知的。 [流程圖A]

在流程圖A中，較佳地A為_〇_、_CHr或可選地受保護的_N_ ; R2、Ry、 R、R3、R4彼此獨立地為·Η、幽素、烧基、_〇_燒基、_〇H、可選地受保護 φ 的_〇、甲基或-F ; R5是可選地受保護的-OH或-NH2 ; Lv是離去基團；且Q 獨立地是 _ 素、-Η、-OH、_SH、-CN、S(CrC4 烷基)、-N02、NH2、-NHNH2、 -N3、-NRiR·，其中每個R，獨立地是H或Ci_C4烷基、、_Ch3、 -CH2OH ' -CH2NH2 ' -CH2NH3+ ' -COOH > -COOCH3 ' -COOCH2CH3 ' -CONHCH3 ' -CONH2 ' -CF3 ' -N(CH3)2 ' -NHCOCH3 ' -NHCONH2 ' _NHCNHNH2、_ONH2、_CH2OCH3、-〇(CH2)CH3、coocrc4 烷基、可選擇 地取代的院基、可選擇地取代的鏈稀基、可選擇地取代的炔基、可選擇地 取代的芳基、可選擇地取代的醯基、可選擇地取代的芳烷基、可選擇地取 代的環烷基、可選擇地取代的環烯基、可選擇地取代的苯基、可選擇地取 代的雜芳基、可選擇地取代的雜環基、可選擇地取代的烷氧基、可選擇地 取代的鏈烯基氧、可選擇地取代的炔氧基、可選擇地取代的芳氧基、可選 53 201008571

擇地取代的醯氧基、可選擇地取代的氧醯基、可選擇地取代的芳烷氧基、 可選擇地取代的雜環氧基、可選擇地取代的雜芳氧基、可選擇地取代的環 炫氧基、可選擇地取代的環烯氧基、可選擇地取代的胺基、可選擇地取代 的胺醯基、可選擇地取代的胺醯氧基、可選擇地取代的醯胺基、可選擇地 取代的氧醯胺基、可選擇地取代的氧醯氧基、可選擇地取代的醯亞胺基、 可選擇地取代的醯亞胺氧基、可選擇地取代的氧醯亞胺基、可選擇地取代 的胺基硫代醯基、可選擇地取代的硫代醯胺基、可選擇地取代的胺基亞硫 醯基、可選擇地取代的胺基項醯基、可選擇地取代的硫基、可選擇地取代 的硫代烷基、可選擇地取代的硫代醯基、可選擇地取代的硫代醯氧基、可 選擇地取代的氧硫代醯基、可選擇地取代的氧硫代醯氧基、可選擇地取代 的磷醯胺基、可選擇地取代的亞磺醯基、可選擇地取代的磺醯基、可選擇 地取代的亞磺醢胺基、可選擇地取代的磺醯胺基、可選擇地取代的氧亞磺 醯胺基、可選地取代的氧項酿胺基、售嗤、鳴嗅、咪吐、咪嗤琳、三嗤和 四吐。 也可使用充分確定的方法’將此處所述的化合物轉化爲它們對應的一 填酸鹽、二碟酸鹽和三碟酸鹽。另外，如上所述，可製備一鱗酸鹽、二鱗 酸鹽和三磷酸鹽的前驅藥，從而優化這些經雄酸化的化合物的生物學效 力。製備這類前驅藥的方法是本領域所公知的(見例如Wagner，C.R.，βία/. 及βν·, 2000, 20, 417-451) 〇

流程圖Β

在流程圖Β中’較佳地優選地Α為_〇_、_CH2_或可選地受保護的_ν_ ; R、R、R、R、R、R4彼此獨立地為_Η、鹵素、烧基、烧基、、 可選地受保護的-〇-、或甲基，並且鹼基如此處所述。 54 201008571 藥。=則=述’使用磷酸酯的一種備選方案是使用磷酸酯模擬物及其前驅 個這樣的碟酸酷模擬物在以下文中示出’並且可使用適當受保護的 核皆和已知的條件製備。 [流程圖q

II || μ n HO-P-X-P-O-p—a Base 0H 0Η R3.、' V 2,、在3流程3圖C4中’較佳地A為-O-、-CH2-或可選地受保護的_N_ ; Rr、R2、 R、R3、R4彼此獨立地為-H、鹵素、烧基、-〇-燒基、-〇H、可選地受 保護的Ο-、甲基或_F ; 乂，是办s_视_ CI?2 CHF、CC1H c 或-CHBr-。鹼基如此處所述。

流程圖D

Ο 化合物1可使用本領域技術人員普遍已知的方法(例如齡心如八咖， 乂此冗卞傷⑽习和美國專利號他^奶中所述的步嫩生產^言 之’向化合物A中添加邱〇4和Me〇H，然後冰冷至Mc>c並添加腿之 後添加DCBC1和DMF，得到化合物B。向化合物B中添加SnC^和DCM， 55 201008571 之後將混合物在3°C下冰冷，並添加蒸餾h2〇得到化合物C。向化合物C 中添加Dess Martin periodinane，然後添加DCM得到化合物D。向化合物D 中添加MeMgBr和段2〇，並將混合物從_75。(：升高至-l〇〇C，得到化合物卜 向化合物1中添加四氟乙酸，然後添加蒸餾h2〇，然後將混合物在6〇〇c下 培月8小時得到化合物e。 可使用公知的步驟測試本發明的化合物的生物學活性❶例如，可根據 公開的、廣泛使用的方案來進行抗病毒測試。為了獲得治療指數，也可與 抗病毒活性平行測量化合物誘導的對宿主細胞的細胞毒性。為了確定抗病 毒核普的作用模式’可根據已知的方案，對相應的核苷酸三麟酸鹽進行以 酶為主的〜對病毒聚合酶抑制的測定^七也-反酿虹过乂/乃⑺/跗⑴乃， 8615; Dhanak 过α/. «/·历〇/· 〇iew· 2002, 277, 38322-38327)。本發明的一些化 合物顯示少於1 μΜ的針對HCV NS5B的Ki值。 因為被感染的肝細胞尹複製體RNA複製模擬HCV RNA的複製，所以 在複製體測定中具有抑制作用的化合物是可能用作抗_HGC藥物的。含 HCV-複製體的細胞系(Randal gjjd Rice，Cwrrewi z>2 /吩cZ/oms /leases 2001，14, 743)可用於鑑定潛在的抗_HCV化合物。它們中有 Lohmann 開發的被廣泛使用的亞基因組複製體系統饮如1999, 285, 110; J. General Virol 2000, 81,1631; J. Virol. 2001, 75,1437,2002, 76, 4008)。本發明的一些化合物顯示有效的抗―沉乂活性，其具有低μΜ和低 於ΙμΜ的EC5〇值。 已知來自肝細胞的無限增生化細胞系(例如含複製體的細胞系中使用的 Huh7細胞)具有降低的代謝活性。因此，評估有治療活性的實體的肝細胞内 水準需要在原代肝細胞中評估，所述實體透過合成代謝或分解代謝過程在 細胞内產生。本發明的一些化合物在原代肝細胞中顯示與含複製體的細胞 中相比更高的細胞内三磷酸鹽合成代謝物水準。

Korba et al. {Antiviral Res. 1992,19, 55), and Pai etal. {Antimicrobial CT^moi/ieA·· 1996, 40, 380)開發的廣泛使用的方案可適用於測定體外 抗-HBV活性。 可根據 Schinazi ei α/·開發的方案而·cf/dgewte 決er. 1990, 34, 1〇61; 1992, 36, 2423; 1993, 3入 875)或其他廣泛使用的方案(Kimpton ^/. 201008571 測定。太2f32; Ch如心Ζ·』婉 c/iew·2001，44,1866)進行抗 _fflv 抑制劑齡S喊性的鮮三魏时娜祕齡4 5B卿的的有效 =二所述非結構位置5B _B)是1^的驗-側性腿聚 icv。A ’邊^合物可適合於在宿主中治療Hcv及/或抑制或預防 當頻蓽她ί發明的化合物可顯示多種活性譜，並可給技術人員提供對 Ιϊΐϊΐ 紐的病毒_储龄案。本㈣的無化合物相對 ㈣射的療法而言也降低了麵和耐纽水準，w或改善 了樂物代謝動力學特性。 宙於本發明的核普、核練、核普酸模擬物及/或它們的前驅藥可適 ί種酶，包括但不_職細八聚合酶、解螺旋酶、核糖核 苷酸還原酶、蛋白f激酶和端粒末端轉移酶，和驗調控G蛋白質、拉兩 吟能受體和多種_變構位點。舉勤言，本發明的核#、核#酸核^ 轉翻於'自療黃病毒類麵^病毒、尤其是HCV引起的 卜，對快速分裂的癌細胞展示細胞毒性的核苦、核苦酸模擬物及/或 f别驅藥和衍錄可剌療增生雌症，包括但不限赠癌、肝癌、 刖列腺癌、結腸癌、乳腺癌、卵巢癌、黑色素瘤和白血病。

^作為P2受體、G_蛋白的配體以及蛋白質激酶的抑制劑本發明的核芽、 核苷酸、核練物及/或糊的前絲也可適驗絲大範_其他疾 病和病症，例如炎性疾病、自身免疫疾病、2型糖尿病和心血管疾病。、 為了解決藥物抗性的問題’組合療法被廣泛用於傳染性疾病及/或辦生 性失調的治療中。本發明的-種或多種核菁、㈣酸、核練模擬物、前 驅藥或可藥用麵、賴、_合物、水合物和前縣也可作為含一種 或多種化學實體的單-配製物(例如單一旋劑或注射用溶液)被練性地施 用’或者可選地可在單獨的g&製物巾與—種或多種其他活性化學實想組人 施用，形成組合療法。其他活性化學實體可包括小分子、多肽及/或多核； 酸’及其組合、鹽類、酯類、溶劑合物、水合物和前驅藥及/或其他衍生^。 當作為單獨的時物施㈣，個體化合物可在幾乎相__(例如施用兩 種個體㈣)共同施用’或在^同⑽間及/或以不同的鮮翔施用。舉例 而言，通常透過預定量的時間中想要的藥物血水準濃度來確定施用給宿主 57 201008571 的每種化合_齡，㈣在宿±t_治療錄，如本钱巾已知和此 處所進-步描述的’如，本發_化合物與已知顯示抗病毒及/或抗 ^作用的其他藥劑組合使用時，可以是有用的。例如，與免疫調節劑病 毒劑例如僧素及/或干齡触侧如干較α2Β_如可& Seherfng Corp.，Kenilworth，N.J.購得的intron® A干擾素）、聚乙二醇化的干擾素^ 2Α(例如可由Hoffinaim-LaRoche，Nutley，N.J.購得的、聚乙二醇化 的干擾素α 2B(例如可由Schering Corp·，Kenilworth，N.J·購得的

Peg-IntronTM)、連續干擾素(例如可由 Valeantphann_tieais CA.購得的干擾素alphacon·!或祕职竭、干擾素α 2A、重組干擾素〇 2Α(例如可由Hoffinaim-LaRoche，Nutley，N.J·購得的Roferon干擾素)或淋巴 細胞樣干擾素tau和已知調控宿主免疫應答的其他大分子或小分子組合 時’在病毒感染的治療中可為有益的。

同樣地’本發明的化合物與肌苷一磷酸鹽脫氫酶(^^印抑制劑、抗病 毒核苷酸及/或抗病毒非核苷的組合可增進單獨施用時此處所揭露的核苷或 核普酸的活性。其他適用於本發明的示範性組合包括與例如以下的組合： 環孢黴素例如環孢黴素A;細胞因子例如白細胞介素2、白細胞介素6、白 細胞介素12 ; 1型辅助性T細胞應答增強子；干擾rna ;反義rna ;味唑 喧諾洞’例如resimiquimod或Imiqimod ;肌苷5，-一磷酸鹽脫氫酶抑制劑； 二氛嗅核苦’金剛烧胺；金剛乙胺；及/或金屬蛋白酶、絲胺酸蛋白酶、聚 合酶或解螺旋酶抑制劑；及其組合。在一個實施例中，本發明的一種或多 種化合物與具有抗-HCV活性的一種或多種以下所述化合物組合使用，所述 化合物包括例如HCV解螺旋酶抑制劑、HCV金屬蛋白酶抑制劑、HCV聚 合酶抑制劑、HCVNS4B蛋白抑制劑、HCVNS5A抑制劑、HCV絲胺酸蛋 白酶抑制劑，及/或HCV輸入、裝配或輸出蛋白抑制劑。 本發明還涉及適用於施用具體用藥方案的試劑盒或包裝，以便於混合 及/或施用此處所揭露的組合物。舉例而言，可將一個月的鍵;劑供應包裝在 錠劑分配器例如Ortho, Inc.提供的DIALPAK®鍵劑分配器中，所述旋劑分 配器在圓心處含有撥號構件，所述撥號構件指向一周的一天，從而當藥丸 從分散器中取出時，撥號盤可被轉動使其指向這一周的下一天。該設計旨 在避免在一天中大致採取兩丸，並且也被設計為使設備的擁有者在漏掉一 58 201008571 天時知道該情況》又一例證包括供應—個月的粉末供給 ，所述粉末供給包 ，有獨立的稀釋劑月供給和可重複施用的塑料用藥杯。本領域技術人員應 备知曉，這類試劑盒可含有上述組件的許多不同變化，例如試劑盒以單位 劑型包裝或者被包裝成每日、每周或每年的試劑盒。 本發明的另一方面是透過將HCV複製體與方程式I的化合物或其可藥 用鹽類、酯類、溶劑合物、水合物或前驅藥接觸來抑制HCV複製體功能的 方法。

基於前述流程圖及/或步驟和以下的實施例，本領域技術人員可使用相 似的方法製備與糖部分結核的被取代的吡咯並-三井，如表1和2中所示。 表1.糖基4-胺基吡咯並-三井的取代，其中R〃、R…和可獨立地選 擇。

59 201008571 表2.糖基4-酮吡咯並-三井的取代，其中R〃、R/〃和R〃〃可獨立地選擇。 〇

除非另有說明，否則在此處(包括流程圖和實驗章節）中可使用的縮寫如 下：

Ar :氬

Bn :苄基

Bu :正丁基

Bz :苯甲醯基 DCB : 2,4-二氯苯甲基 DCM :二氯甲烷 DIEA :二異丙基乙胺 201008571 DMF :二曱基甲醯胺 DMSO =二甲基亞颯 ESI :電喷射離子化 Et ·乙基 EtOAc :乙酸乙酯 HPLC ·尚效液相色譜 Me :甲基 MeOH:曱醇 MS :質譜法 NMR :核磁共振 • Ph :苯基 RT :室溫 TEA :三乙胺 TFA:三氟乙酸 THF:四氫呋喃 提出以下的非限制性實施例，從而為本領域常規技術人員提供如何製 備和使用此處所揭露的化合物的完全揭露和描述。以下的特定實施例是代 表性的方程式(1)的化合物，並因此僅被理解為示例性的，而不以任何方式 限制本發明的剩餘部分。 β 示例1 4-胺基-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-吡咯並[2，1-幻[1，2,4]三井(化合物9)

的製備。 61 201008571 . » 步驟i :將無水THF(200mL)中的化合物1，3,5-雙_〇-(2,4-二氣苯甲 基)-1-0-甲基-2-C-甲基-D-»夫喃核糖(19.2 g)在Ar下冰:水浴中冰冷至〇。〇，然 後以10分鐘的間隔分4批用NaH(油中60%的分散劑，2.6 g)處理。將懸浮 液溫熱至RT，然後用2,4-二氯苄基氯化物(11.2 mL)逐滴處理。然後將反應 在Ar下加熱至7〇。(：保持16-24小時。將冷卻的反應混合物過濾，並在二氧 化矽上用10-30%EtOAc:己烷洗提’形成作為α和β端基異構體的混合物 的化合物 2(16.68 g): iNM^CDCls)主要端基異構體:δ L42 (s, 3Η); 3 46 (s， 3H); 3.64 (d, 1H, J= 4.8 Hz); 3.73 (dd, 1H, 3.9, 10.7 Hz); 3.67 (dd, 1H, J= 4.4,10.7 Hz); 4.29 (q, 1H, J= 4.3 Hz); 4.56 - 4.85 (m, 7H); 7.11 - 7.25 (m, 3H, ·/= 2.0, 8.4 Hz); 7.31 - 7.41 (m，5H); 7.58 (d，1H，*/= 8.4 Hz)。 步驟li:將TFA(70mL)中的化合物2(6.91 g)冰冷至〇°c然後用水(7此）❿ 逐滴處理。將混合物溫熱至RT，然後挽掉4小時。將得到的溶液濃縮至 mL並緩慢添加至EbO:飽和NaHC〇3 (水性)(總計80 mL)的50:50混合物中。 用NaHC〇3(水性)中和混合物，並用醚(2x50 mL)萃取水性層，然後用 NaHC〇3 (水性)洗條結合的有機萃取物。將有機萃取物乾燥、過濾 並真空濃縮。在二氧化石夕柱上用5-40% EtOAc:己院洗提粗製材料，得到作 為α和β端基異構想的混合物的化合物3(5.2 g): 4NMR^de-丙明)兩種端基 異構體:δ 1.52 (s，6H); 3.79 (t，4H，《/= 4.8 Hz); 3.99 (d，1H，·/= 5.6 Hz); 4.10 (d， 1H, J= 7.3 Hz); 4.21 - 4.27 (m, 1H); 4.37 (dd, 1H, J= 4.5,10.0 Hz); 4.62-4.95 (m, 12H); 5.10 (d, 1H, J= 9.1 Hz); 5.20 (d, 1H, J= 4.6 Hz); 5.57 (d, 1H, J= 4.8 ❹

Hz); 5.62 (s, 1H); 7·25 -7.70 (m, 18H)。 步驟iii:在Ar下用三氣乙腈(1.95 mL)和Cs2C03 (254 mg)處理無水DCM (40 mL)中的化合物3 (5.52 g)，並在RT下授拌3小時。將溶液用dcm (50 mL) 稀釋’用水(100 mL)洗滌，並用DCM (2x50 mL)萃取水性層。將結合的有 機萃取物用鹽水(100 mL)洗滌、乾燥(MgS〇4)、過濾並濃縮。將得到的殘餘 物用15%EtOAc:己烷經過二氧化矽柱洗提，得到作為α*β端基異構體的 混合物的目標化合物化合物4(5.58 g) : iHNMR^CDCy主要端基異構體：δ 1.56 (s, 3H); 3.71 (dd, 1H, J= 4.8,10.8 Hz); 3.80 (dd, 1H, J= 4.0,10.8 Hz); 4.15 (d, IH,J= 8.1 Hz); 4.42-4.91 (m, 7H); 6.25 (s, 1H); 7.15-7.53 (m, 9H); 8.55 (s，1H)。 62 201008571

步驟iv :在Ar下用粉末狀的4人分子篩將無水〇01^(20〇1^)中的化 合物4 (5.0 g)處理2小時。然後將溶液冰冷至-7(TC(内部溫度），用新鮮蒸顧 的0比1各(1.46mL)處理，然後用BF3_OEt2(2.76mL)逐滴處理。將混合物授拌 40分鐘，同時維持内部溫度低於_55°C。然後將混合物冷卻至_70〇c並在曱 醇(20mL)中用7MNH3處理，之後溫熱至RT。將混合物用DCM稀釋並用 水洗蘇。將有機萃取物乾燥(MgS〇4)、過濾並真空濃縮得到灰色膠質。將粗 製材料塗敷到二氧化矽快速柱上，並用15%EtOAc:己烷洗提得到作為比例 約2:3的α和β端基異構體的混合物的吡洛核苷化合物5 (2.72 g) : 4NMR (CDC13)僅 β-端基異構體：δ 9.53 (br s，1H)，7.60-7.14 (m，9H)，6.36-6.35 (m， 1H), 6.11-6.10 (m, 1H), 6.04 (br s, 1H), 5.13 (s, 1H), 4.89-4.61 (m, 6H), ® 4.37-4.36 (m, 1H), 4.21 (d, J8.4 Hz, 1H), 4.10 (dd, /2.6 Hz, 10.5 Hz, 1H), 3.85 (dd，/1.9 Hz，10.5 Hz，1H)，1.16 (s，3H)。 步驟v:將化合物5(端基異構體的混合物，1.37 g)懸浮於無水乙腈(6就) 中。添加無水DMF直至觀察到均一的溶液(〜i.o mL)，並在a下將溶液於 冰:丙酮浴上冰冷至-12°C。10分鐘後’用異氰酸氣項醯酯(〇 17此)逐滴處理 溶液’並將得到的混合物在0°C下授拌45分鐘，其間觀察到深紅色。將混 合物倒在冰(100g)上，用EtOAc(lOOmL)稀釋，並攪拌直至並融化。將有 機萃取物乾燥(MgS〇4)、過濾並真空濃縮得到深粉色油。將粗製材料懸浮於 20mL50:50DCM:己烧中’塗敷至二氧化砍快速柱上，並用15·50%EtOAc: 〇 己烧洗提得到呈β_端基異構體(0.69 g)的化合物C，相應的α-端基異構體

(0·28 g)獨立收集：〗H NMR (CDC13) β-端基異構體：δ 10.44 (S，1Η)^.53 (d，J 8.3 Hz, 1H), 7.47 (d, J2.0 Hz, 1H), 7.42-7.37 (m, 3H), 732-7.21 (m, 4H), 6.79 (dd, J2.6, 3.8 Hz, 1H), 6.10 (dd, J2.6 Hz, 3.5 Hz, 1H), 5.11 (s, 1H), 4.9〇 (d, J 12.5 Hz, 1H), 4.85 (d, J13.1 Hz, 1H), 4.74 (d, 713.1 Hz, 1H), 4.73 (d,y 12.5 Hz, 1H), 4.68 (d, J 12.4 Hz, 1H), 4.59 (d, J 12.4 Hz, 1H), 4.35 (ddd, /1.9 Hz, 2.4 Hz, 8.4 Hz, 1H), 4.13 (d, J8.4 Hz, 1H), 4.05 (dd, J2.8 Hz, 10.6 Hz, 1H), 3.76 (dd，1.7 Hz, 10.6 Hz，1H), 1.20 (3H，s)。 ’ ’ 步驟vi.將乾燥THF(13 mL)中的NaH (72.5 mg)冷卻至_5°c l〇分鐘。逐 滴添加胃(2址)中的化合物6(0.6§，卜端基異構體），隨後分部分添加 Ph2P(0)0NH2 (0.39 g) ’然後在0〇C下攪拌3〇分鐘。混合物在曱苯和水之間 63 1 · 201008571 分配，將有機萃取物收集、乾燥(Mgso4)、過濾並真空濃縮。將產物儲存於 冰箱中並在隨後的反應中使用而不經進一步純化：iHNMR&DMSO): δ 7.63 (br d, J 1.9 Hz, 1H), 7.58-7.54 (m, 4H), 7.45-7.33 (m, 4H), 6.76 (d, /4.4 Hz, 1H), 6.14 (d, J4A Hz, 1H), 6.13 (br s, 2H), 5.36 (s, 1H), 4.76-4.62 (m, 6H), 4.22-4.19(m, 1H), 4.0 (d,/7.0 Hz, 1H),3.83 (dd, J3.5Hz, 10.9Hz, 1H), 3.76 (dd，/4.4 Hz, 10.9 Hz, 1H)，1.15 (s，3H)。 步驟vii:向化合物7 (60 mg)在無水DMA(2 mL)中的溶液中添加乙酸甲 脒(700 mg) ’並將懸浮液在Ar下於14(TC加熱1.5小時。將混合物冷卻至 RT並再次添加乙酸甲脒(700mg)，將混合物在14〇。(：下再加熱1.5小時。將 混合物冷卻至RT過夜，之後發生沉澱。去除上清液，並用DCM洗滌沉澱。 將上清液和結合的洗滌液真空濃縮。將殘餘的DMA餾出，並將 © 殘餘物在DCM (5 mL)中吸收，用水(1 mL)洗滌，用MgS04乾燥、過濾並濃 縮。透過蒸餾去除剩餘的DMA，並在快速矽膠(己烷中50% EtOAc)上純化 殘餘物，得到呈無色漿體的化合物8 (32 mg): bNMR(CDC13): δ 7.89(s，1H)， 7.61(d, 78.3 Hz, 1H), 7.46(d, J8.3 Hz, 1H), 7.38-7.19(m, 6H), 7.15 (dd, /2.1 Hz, 8.3 Hz, 1H), 6.82 (d, J4.5 Hz, 1H), 6.56 (d, J4.5 Hz, 1H), 5.88 (s, 1H), 5.76 (br s, 2H), 4.86 (s, 2H), 4.72 (s, 2H), 4.73-4.62 (m, 2H), 4.40-4.35 (m, 1H), 4.09 (d，《78.3 Hz，1H), 3.97 (dd，·72·7 Hz, 10.9 Hz，1H), 3.81 (dd» «/3.7 Hz, 10.8

Hz, 1H), 1.14 (s, 3H); 13C NMR (CDC13): δ 155.47, 147.18, 136.17, 134.65, 134.60, 134.25, 134.10, 133.79, 133.54,133.30, 132.66, 130.42,130.24,130.17, ❹ 129.72, 129.39, 129.24,128.84, 127.29,127.26, 127.20,114.43,110.86,100.48, 85·06, 83.76, 79.43, 78.67, 70.22, 70.19, 70.10, 62.88, 18.00 » 步驟viii:向化合物8 (240 mg)在乾燥甲醇(30 mL)中的溶液中挽拌添加 無水乙酸納(192 mg)和冰醋酸(670 4)。將混合物除去氣體，用Ar沖洗，並 添加活性炭上的10%鈀(150 mg)。將混合物在H2下於45°C授拌66小時。 將反應混合物除去氣體，用Ar沖洗，濾過含MeOH的矽藻土墊，並濃縮獲 得粗產物。在快速矽膠上的柱色譜(EtOAc中17%MeOH)得到化合物9(70.7 mg)〇ESI-MS m/z 281 ([M+H]+); lU NMR (cU-DMSO) δ 7.81 (s, 1H), 7.61 (br s, 2H), 6.84 (d, J4.4 Hz, 1H), 6.70 (d, J4.4 Hz, 1H), 5.39 (s, 1H), 4.90 (br s, 1H), 64 201008571 4.75 (br t, J5Λ Hz, 1H), 4.66 (s, 1H), 3.78-3.55 (m, 3H), 3.62-3 55 (m 1H) 0.78 (s，3H)。 ’ ’ 示例2 4-胺基-5-氟-7-(2-C-甲基-β-D-吱喃核糖基)·》比略並三井(化 合物11)的製備。 ’’

步驟i :向化合物8(0.11 g)在乙腈(2mL)中的懸浮液中添加 Selectfluor (1 -氣甲基-4-氟-1，4-一氮雜二環[2 ·2.2]辛燒雙(四氟蝴酸鹽)χ8〇 mg) ’將混合物挽拌並在RT下聲處理5分鐘。將管密封並在微波反應器中 於82°C下加熱15分鐘。真空去除溶劑得到深棕色膠質。將粗製產物(化合 物10)懸浮於2mLDCM中，上樣在二氧化梦快速柱上並用12%Et〇Ac/己 燒洗提得到呈淡棕色泡沫(30 mg)的產物：4nmr (CDC13): δ 7.79 (s，1H)， 7.61 (d, /8.4 Hz, 1H), 7.45 (d, J8.2 Hz, 1H), 7.45 (d, J8.2 Hz, 1H), 7.41 (d, J 2.1 Hz, 1H), 7.37-7.34 (m, 3H), 7.27-7.17 (m, 3H), 6.60 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 參 4.87 (s, 2H), 4.72 (s, 2H), 4.69 (q, J 12.6 Hz, 2H), 4.36 (td, J8.5 Hz, 2.9 Hz, 1H), 4.07 (d,/8.5 Hz, 1H), 3.97 (dd, J2.5Hz, 10.9 Hz, 1H), 3.79 (dd, J3.2 Hz, 10.9Hz，lH)，1.16(s，3H)。 步驟ii :向化合物10 (50 mg)在無水曱醇(4mL)中的擾拌懸浮液中添加 乙酸鈉(60 mg)和10% Pd/C (40 mg)。將混合物在45〇c下氫化16小時。將混 合物過濾去除催化劑’並將濾液真空濃縮。通過柱色譜MeOH/CH2Cl2) 純化粗製材料，提供化合物10 (5.1 mgy ESI_MS jn/z 299.16; NMR (de-DMSO): δ 7.73 (s, 1H), 6.66 (s, 1H), 5.37 (s, 1H), 3.74-3.69 (m, 3H), 3.60-3.57 (m，1H), 0.80 (s，3H)。 示例3 65 201008571 4-胺基-5-氣-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)·吡嘻並[2，1-巧[1，2,4]三井)化 合物12)的製備。

步驟i :在Ar下將無水DMF(2 mL)中的化合物9 (52 mg)冰冷至0°C， 並用N-氣琥珀醯亞胺在無水DMF中的溶液(1 mL中27 mg)逐滴處理。將混 合物溫熱至RT並攪拌1小時。將混合物濃縮，然後用0-10% MeOH:EtOAc © 經過二氧化矽柱洗提，得到化合物12 (5.3 mg): ESI-MS m/z 407.1 lH NMR (de-DMSO): δ 0.83 (s, 3H); 3.60 (m, 1H); 3.70 - 3.74 (m, 4H); 4.74 (s, 1H); 4.84 (t, 1H, J= 5.0 Hz); 4.91 (d, 1H, J= 6.4 Hz); 5.36 (s, 1H); 6.86 (s, 1H); 7.83 (s，1H)。 示例4 4-胺基-5-碘-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-吡咯並p，l-q[l，2,4]三井(化合 物13)的製備。

步驟i :在RT下向化合物9(5.2mg)在無水DMF(0.5mL)中的溶液中 添加N-碘代琥珀醯亞胺(4.7 mg)，並將混合物在RT和Ar下在黑暗中授拌4 天。添加飽和的硫代硫酸鈉溶液(4滴），並用EtOAc (3x1 mL)萃取得到的混 合物。將有機相濃縮並凍乾。將得到的殘餘物懸浮於小量MeOH中，並在 66 201008571 快速矽膠上純化兩次(洗提梯度從EtOAc到EtOAc中5%MeOH)，得到呈無 色固體的化合物 13(1.5mg): de-DMSO): !H NMR (300 MHz, de-DMSO): δ 7.87 (s, 1H), 7.34 (br s, 2H), 7.01 (s, 1H), 5.35 (s, 1H), 4.91 (br s, 1H), 4.82 (t, /5.1 Hz, 1H), 4.72 (s, 1H), 3.77-3.66 (m, 3H), 3.61-3.54 (m, 1H), 0.79 (s, 3H) 〇 示例5 4-胺基-7-(2-C-曱基-β-D-呋喃核糖基)-吡咯並[2，l-q[l，2,4]三井-5-腈(化 合物14)的製備。

步驟i:將化合物13 (20 mg)在無水DMA (0.7 mL)中的溶液抽真空並用 Ar沖洗(三次）。添加辞粉(1 mg)、雙(三_叔丁基構)鈀⑼(η mg)和氰化鋅(18 mg)，並將混合物在150°C和Ar下擾拌加熱1小時。將混合物冷卻至RT， 添加與固相結合的三苯基磷(PS-TPP，先前用DMA洗滌，60 mg)，並將得 到的混合物在RT和Ar下攪拌21小時。將混合物濾過矽藻土並用EtOH洗 滌。將濾液濃縮，並透過蒸餾(Kugelrohr)去除殘餘的DMA，得到25 mg油。 將該材料在快速梦膠上純化兩次，用EtOAc中5%MeOH洗提得到呈淡黃 色固體的產物(4 mg)。將該材料在含1 mg活性炭的2 mL MeOH中大致煮 沸’得到呈無色固體的化合物14(2.5mg) : ESI-MSm/z306([M+H]VH NMR (300 MHz, de-DMSO): δ 8.11 (s, 1H), 7.58 (br s, 2H), 7.35 (s, 1H), 5.37 (s, 1H), 4.95 (d, J6.5 Hz, 1H), 4.86 (t, J4.8 Hz, 1H), 4.80 (s, 1H), 3.80-3.69 (m, 3H)，3.64-3.57 (m, 1H)，0.81 (s，3H)。 示例6 67 201008571 4-胺基-7-(2-C-甲基-β-D-吱喃核糖基)-吼嘻並[2，i_f][i，2,4]三井·5_叛酸 醯胺(化合物15)的製備。

步驟i:向化合物14 (12 mg)在乙醇(4.8 mL)中的溶液中添加〇.7 mL 28% 氨水和0.18 mL 30%過氧化氫。將混合物在密封的管中於RT下授拌19小 時。真空去除溶劑得到呈淡黃色固體的產物(9.1 mg)。將該材料中 a〇Ac/Me〇H中重結晶’得到呈無色固體的化合物15 (6.5 mg): ESI-MS m/z 324 ([M+H]^; *H NMR (500 MHz, de-DMSO): δ 10.38 (d, J 3.1 Hz, 1H), 8.07 (br s, 1H), 8.04 (d, /3.1 Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.52 (br s, 1H), 7.23 (s, 1H), 5.39 (s, 1H), 4.98 (d, J1A Hz, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.64 (t, J5.B Hz, 1H), 3.82-3.73 (m, 2H), 3.71-3.66 (m, 1H), 3.55 (dd, J7.1 Hz, 8.3 Hz, 1H), 0.82 (s, 3H)。 示例7 4-胺基-5-二甲基碎烧基乙快基-7-(2-C-甲基-p-D-®夫喃核糖基)_〇比洛並 [2，l-f][l，2,4]三井(化合物16)的製備。

68 201008571 步驟i :在Ar下無水DMF(0.40 mL)中將化合物13 (43 mg，0.11 mmol) 的溶液、三乙胺(32pL，0.42 mmol)和(三甲基甲矽烷基)乙炔(0.12 pmL, U mmol)—起攪拌 5 分鐘，然後添加 Cul (5.2 mg，27 μιηοΐ)和 PdCl2(PPh3)2 (8.1 mg，12 μιηοΐ)，並將得到的混合物在RT下擾掉2小時。將反應混合物過據、 真空濃縮並通過反相LCMS純化，得到呈米色固體的化合物16 (1〇 mg， 26%) ： ESI-MS m/z 377.2 ([M+H]^ NMR (de-DMSO) δ 7.94 (s, 1H), 6.96 (s, 1H)，5.33 (s，1H), 3.76-3.55 (m，4H)，0.79 (s，3H)，0.24 (s，9H)。 示例8 ® 井(化合物17)的製備 4-胺基-5-乙快基-7-(2-C-甲基-β-D-吱0(¾核糖基)-e比洛並[2，1_£][1，2,4]三

步驟i:將化合物16 (2·0 mg，5.3 μιηοΐ)在甲醇(〇.2〇 mL)中的溶液與 碳酸鹽(2·9 mmol/g，18 mg，53 pmol)—起攪拌30分鐘。將溶液中樹脂中傾析 並真空濃縮，得到呈白色固體的化合物17 (0.45 mg，28%): ESI-MS m/z 305.2 ([M+H]+); lU NMR (de-DMSO) δ 7.92(s, 1H), 6.97 (s, 1H), 5.35 (s, 1H), 4.91-4.73 (m, 3H)，4.38 (s，1H)，3.76-3.57 (m，4H), 0.80 (s，3H)。 69 201008571 示例9 4-胺基-5-羧酸-7-(2-C-甲基-β-D-»夫喃核糖基)-吼略並[2，1_叩,2,4]=丼 (化合物18)的製備。 μ —

向化合物14 (3.5 mg)在甲醇(1 mL)中的溶液中添加5 μNaOH的水溶 液，並將混合物在70°C下加熱5小時。冷卻至RT後，通過添加5 M ^ © 的水溶液中和溶液。將水性混合物凍乾得到白色固體。向燒瓶中添加甲醇^ mL)並將懸浮液過濾。將濾液真空濃縮得到白色薄膜(3 mg)。通過製備性反 相HPLC純化，得到呈白色固體的化合物μ (1 mg)。ESI-MS m/z 325 _Η]+) 〇 . 示例10 2’4-二胺基-7-(2-C-甲基-β-D-呋嗔核糖基)-吡咯並[2，1-耶，2,4]三井(化合 物20)的製備。 13

步驟i :在Ar下將化合物7 (50 mg，0.07 mmol)在DCM (3 ml)中的溶液 冷卻至·78 C ’之後在5分鐘内逐滴添加DCM (900 pL，0.9 mmol)中的1.0 Μ 三氯化硕溶液。然後在-^(^，^(^下將得到的棕色/紅色溶液擾拌^^時， 並允許其在3小時期間逐步溫熱至〇〇c，並在〇°c下放置20小時。再添加 一份DCM (100 uL，0.1 mmol)中1.0 Μ三氣化领的小份試樣，將反應混合物 70 201008571 溫熱至RT並攪拌4天’之後添加DCM:甲醇(5 ml，1:1 v/v)溶液。30分鐘後， 將反應混合物過濾並蒸發至乾燥。將粗製材料溶於含甲醇(2滴以幫助溶解) 的EtOAc(2ml)中，並在二氧化矽上使用〇_15%Me〇H/Et〇Ac透過柱色譜 純化。將含有產物的級分(如LCMS所指出的)結合，蒸發至乾燥得到化合物 19 ’所述化合物19由於其不穩定性而被立即用於隨後的反應中。 步驟ii :在Ar下向無水乙醇(3 ml)中部分純化的化合物19的溶液中添 加胍碳酸鹽(150 mg，2.0 mmol) ’然後添加三乙胺(1〇〇 μΐ，0.726 mmol)。將懸 浮液在微波反應器中於160°C下加熱2小時，之後將反應混合物過濾並蒸發 至乾燥。將粗製材料懸浮於水(3 ml)和甲醇(3滴)中，並透過反相製備性 HPLC純化。結合適當的級分並凍乾得到呈白色固體的化合物20(3 mg): ESI-MS m/z 296.06 ([M+H]^; ]H NMR (D3-CH3CN): 0.92 (s, 3H), 3.86 (m, 4H)，5.22 (s，1H)，6.61 (d，1H)，6·94 (d，1H)。 示例11 ' 4·胺基-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-吡咯並[2，l-f][l，2,4]三井-5-硫羰 酸醯胺(化合物21)的製備》

\\\ nh2 ❹ H0 5h 14 步驟1:向無水极〇11(3〇0)中添加？285(7.3〇11^，〇.〇2111111〇1)，並將混 合物在密封的管中在RT下攪拌1小時。向反應混合物中添加化合物14(51 mg，0.0033 mmol)在無水EtOH中的溶液(30 μΐ)。將混合物在密封的管中於 12(TC下加熱3小時，然後冷卻至RT，之後添加水並用DCM萃取混合物。 將水性層濃縮至乾燥，並通過柱色譜石夕膠(洗提梯度：乙酸乙酯到乙酸乙酯 中17%甲醇)純化殘餘物，得到化合物21 : ESI-MS m/z 340 ([M+Hf)。 示例12 71 201008571 4-胺基-5K2-基-7-(2-C-甲基-β-D-0夫味核糖基比洛並[2，l-f][l，2,4] 三井(化合物22)的製備。

步驟i :向化合物13(60 mg，0.148 mmol)在無水DMA (2.5 ml)中的溶液 ❹ 中添加甲錫烷基噁唑(120 μΐ，0.573 mmol)’將混合物除去氣體並用&沖洗5 次。然後添加Pd^BuA (15 mg，0.029 mmol)並將混合物在i5〇°c下加熱1 小時。將混合物冷卻至RT，通過蒸镏(Kugelrohr)去除DMA。將殘餘物吸收 在乙腈(10 ml)中’並用己燒(10 x2〇 ml)萃取溶液。將乙腈相真空濃縮，並 將殘餘物在二氧化石夕上純化(洗提梯度：乙酸乙酯到乙酸乙酯中16%甲醇）， 得到化合物 22 : ESI-MS m/z 348 ([M+H]。； 1H NMR (300 MHz，d^DMSCO: 10.1 (br d, 1H, J 1.8 Hz), 8.24 (br d, J 1.8 Hz, 1H), 8.17 (d, J 0.9 Hz, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.40 (d, J 0.9 Hz, 1H), 7.33 (s, 1H), 5.40 (d, 0.5 Hz, 1H), 4.94-4.88 (m, 2H), 4.75 (s, 1H), 3.80-3.72 (m, 3H), 3.64-3.57 (m, 1H), 0.81 (s, ^

3H)。 ’ U 示例13 4-胺基-5-售吐-2-基-7-(2-C-甲基-β-D-吱喊核糖基比洛並[2，i_f][i,2,4] 三井(化合物23)的製備。 72 201008571 N〇s nh2

步驟i :在At下向化合物13 (20 mg，0.05 mmol)在DMA (2 ml)中的溶 液中添加三丁基甲錫烧基噻唑(0.2 ml，0.64 mmol)和Pd(PPh3)4 (2.85 mg， ❹ 0.002 mmol)。將得到的溶液加熱至60〇C過夜’然後在80。。下加熱4小時。 冷卻至RT後’通過Kugelrohr蒸餾去除DMA。透過正常相矽膠色譜(Bi〇tage MPLC)純化粗製材料得到呈白色固體的化合物23(2.5 mg) : ESI-MS m/z 364.17 ([M+HJ1)。 示例14 4-胺基-5-(3Η-[1，2,3]三唑-4-基)-7-(2-C-甲基呋喃核糖基 > 吡咯並 [2，l-f][l，2,4]三井(化合物2句的製備。

步驟i:向化合物Π (1.0 mg，3.3 μιηοΐ)、疊氮化納(6.6 mg，99 μτηοΐ)在水 (1.3mL)和乙腈(0.2mL)中的懸浮液中’添加抗壞血酸納在水中的〇1Μ溶 液(26 pL，2.5 μηιοί) ’ 之後添加 CuS04.5H20 的 0.1 Μ 溶液(13.2 pL，1.2 μιηοΐ)。將混合物在微波輻射下在12〇。(：下擾拌5小時《在反應混合物中觀 73 201008571 察到三唑(化合物24)，之後將殘餘物真空濃縮提供粗製產物：ESI MSm/z 348.1 。 示例15 4-胺基-6-氟-7-(2_C-甲基-β-D-呋喃核糖基)·吡咯並[21_沉12,4]三井_7_ 基(化合物32)的製備。 /5^CN nBuU, SEMCI \^NH THF — r<5 5r

2S

NBS, DMF

6 R = DCB

i. nBuLi (4 eq) MesSnQ (4 eq) E^O/hexane ii. XeF2

步驟丨：在-78°(：下向11^(15111£)中6(1.3§)的溶液中添加紐\1〇(1.24 mL;己烧中1.6 M)。15分鐘後添加2-氣甲氧基—乙基-三甲基矽烷(0.48址）。 將反應混合物溫熱至室溫，並攪拌15小時。添加NH4Cl(aq)(50mL)並用乙 酸乙酯(3x 35 mL)萃取水性層。將結合的有機物用鹽水洗務，乾燥如妨⑹ 並濃縮’得到淡黃色油(1.91 g)。在二氧化矽上通過快速柱色譜進行純化， 用15到25 % EtOAc /己烷洗提得到化合物26 (1.39 g)(15% EtOAc/己烧中 Rf - 0.3)。 步驟ii:在室溫下向26(1.17g)在DMF (20mL)中的溶液中添加N-溴琥 矩醯亞胺(0.49 g)並攪拌反應混合物。16小時後tic分析顯示2的消耗和新 點的形成。添加甲醇(5 mL)並將反應混合物濃縮得到粘稠的黃色油(1.98 g) ’在二氧化>6夕上將其通過快速柱色譜純化，用10% EtOAc/己烧洗提得到 呈淡黃色油的化合物27(1.01 g)。 步驟iii:在-78°C下向27 (350 mg)在Et2〇/己烧(6 mL; 1:2)中的溶液中逐 滴添加《BuLi的溶液(1·〇 mL ;己院中1.5 M)。將反應混合物授拌15分鐘， 74 201008571 然後逐滴添加氣化三甲基錫(1.5 mL;四氫呋喃中1_〇 Μ)。在70分鐘内將反 應混合物緩慢溫熱至室溫。Tic分析顯示SM的消失(在15%EtOAc/己烷中 Rf〜0.5)和兩個新點的出現(Rf~〇.35-還原的溴吡洛和Rf〜0.6-產物）。添加 NH4Cl(aq)(20mL)，用乙酸乙酯(3X20mL)萃取水性層，並將結合的有機 物用鹽水(20 mL)洗滌、乾燥(MgS〇4)和濃縮得到黃色油(510 mg)。將粗製錫 酸鹽溶於二氣曱烧(8 mL)中，並在室溫下添加二氟化氣(71 mg)、三氟曱烷 績酸銀(silver triflate，146 mg)和二叔丁基-4-甲基-0比咬(16 mg)。10分鐘後， tic分析顯示初始材料的消耗和新產物的出現(Rf~〇.3 · 10% EtOAc/己烷)。添 加NaHCO3(aq)(20mL)，用二氣甲燒(3x20mL)萃取反應，並將結合的有機 物用鹽水(20 mL)洗滌、乾燥(MgS〇4)和濃縮，得到淡棕色的油(410 mg)。通 ® 過快速柱色譜在二氧化矽上進行純化，用1%到3%到6%到10%的EtOAc/ 己烷洗提，得到呈無定形白色固體的產物28 (65 mg)。 步驟^:向28(6〇11^)在11^(1.5111]：)中的溶液中添加1'6处的溶液 (0.21 mL ;四氫呋喃中1.0M)，將反應置於微波反應器中，並加熱至75°C ' 保持45分鐘。Tic分析顯示新點的出現(20% EtOAc/己烷中Rf- 0.3)。添加 NH4CI (aq) (10 mL)並用乙酸乙酯(3 X 15 mL)萃取水性層。將結合的有機物 用鹽水(10mL)洗滌，乾燥(MgS04)並濃縮得到淡黃色油(12mg)。在二氧化 矽上通過快速柱色譜進行純化，用1〇〇%己烷到16% EtOAc/己烷洗提得到 呈白色固體的產物29 (42 mg)。 〇 步驟v :在-5°C下向29(27mg)在THF(0.5mL)中的溶液中添加六甲基 二石夕化鐘(60 pL ;四氫呋喃中1.〇M)。將反應混合物在15分鐘内溫熱至室 溫，然後添加二苯基璃基-羥胺(13 mg)，並將反應混合物擾拌1小時。Tic 分析顯示有非常相似的Rf (20% EtOAc/己烧中0.26)的新點。添加H20 (10 mL)並用乙酸乙酯(3χ 15 mL)萃取水性層。將結合的有機物用鹽水(1〇此） 洗滌、乾燥(MgS〇4)並濃縮得到粗製的30(45 mg)，所述粗製的30被直接用 於下一反應中。 步驟vi :在微波反應器中將3〇 (28 mg)和乙酸甲脒(290 mg)在丙-1-醇 (2.0mL)中的懸浮液在200°C下加熱1小時。得到深掠色懸浮液。LC/MS分 析顯示SM的消耗和產物形成。通過觀察到新點(4〇%Et〇Ac/己烷中虹 -0.35)。將反應混合物濃縮得到棕色油，將其在二氧化矽上通過快速柱色譜 75 201008571 純化，用20%到30%到40% EtOAc/己烷洗提得到呈無定形白色固體的31 (21 mg) 〇 步驟vii :在室溫下向31 (20mg)的甲醇溶液中添加乙酸納(21 mg)、乙 酸(4滴)和鈀(27 mg;碳上10%)。將大氣抽空並填充氳氣(重複3次)，在45°C 下攪拌反應。16小時後，透過LC/MS分析反應混合物，顯示反應完全。將 反應混合物通過0.45 um注射器式過濾器過濾，並用甲醇(7mL)洗滌殘餘 物。濃縮濾液得到呈白色固體的粗製產物(44mg)。在二氧化矽上透過快速 柱色譜純化，用100% DCM到10% MeOH/DCM到20% MeOH/DCM洗提 得到呈白色固體的化合物32 (3.5 mg) » 20% MeOH/ DCM中Rf - 0.5 ; 4 NMR (cU-MeOD) δ 7.85 (s, 1H), 6.63 (s, 1H), 5.57 (s, 1H), 3.99 (m, 2H), 3.85 (m, 2H),1.02 (s, 3H); ES/MS: m/z 299.1 ([MH"]) 〇 ❿ 示例16 4-胺基-7-(2-C-甲基呋喃核糖基吡咯並[2，1-杌1,2,4]三井的雙 -POM (特戊醯基氧甲基)前驅藥(化合物34)的製備。

步驟i:用N，N-二甲基甲醯胺二甲基縮醛(730 uL)處理無水DMF (2 mL) 中的化合物9，即4-胺基-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基>吡咯並 三井(156mg)，並在微波反應器中將得到的溶液在70°C下加熱1〇分鐘。將 混合物冷卻並去除溶劑，在含0-20% MeOH:DCM的二氧化矽上純化粗製材 料，得到化合物 33 (200mg)。ESI-MS m/z 336 ([M+H] VH NMR (d6_CD3eN) 76 201008571 δ 8.87 (s, 1Η), 7.99 (s, 1H), 6.84 (d, J4.4 Hz, 1H), 6.75 (d, J4A Hz, 1H), 5.45 (s, 1H), 5.44 (br s, 1H), 4.09 (br s, 1H), 3.8-3.9 (m, 3H), 3.55-3.75 (m, 2H), 3.20 (s，3H)，3.19 (s, 3H), 0.87 (s，3H)。 步驟ii:在Ar氣氛下將Bis-POM磷酸溶於DCM (20 mL)和DMF(2滴） 中。逐滴添加草醯氯(1.16mL)並將溶液擾拌2小時，之後在高度真空下去 除溶劑，得到呈黃色油的鱗醯氯。將殘餘物溶於無水THF(lmL)中，並逐 滴添加進化合物33的0Λ咬溶液(lmL)中。將混合物在室溫下擾拌5天，之 後添加飽和的氣化錄溶液(5 mL)。用乙酸乙酯萃取混合物，並將結合的萃取 物乾燥(鹽水、Na2S04)、過濾並真空濃縮。在含0-20% MeOH:DCM的二氧 化梦上純化粗製殘餘物。通過lcms分析級分’結合含有Bis-POM核苷化合 物的這些級分，並去除溶劑得到粗製混合物。對粗製混合物進行水解而不 經進一步純化。ESI-MS m/z 617 ([M+H]’，645 ([M+H]。。

步驟iii:用HCl(lM，0.6mL)處理乙腈(1.2mL)中含Bis-POM核苷的粗 製混合物，並在微波反應器中於60°C下將混合物加熱10分鐘。通過添加水 (1 mL)和DMSO(1.2mL)稀釋反應混合物，然後過濾。通過製備性反相 HPLC(水10%NHLjOAc緩衝液中60%到90% MeOH)純化，得到呈玻璃狀固 體的化合物 34 (5.8 mg)。ESI-MS m/z 589 611 ([M+Na]，； NMR (dg-DMSO) δ 7.82 (s, 1Η), 7.66 (br s, 2H), 6.84 (d, 74.4 Hz, 1H), 6.54 (d, J4.4 Hz, 1H), 5.63 (s, 2H), 5.59 (s, 2H), 5.43 (s, 1H), 5.18 (br s, 1H), 4.89 (br s, 1H), 4.18-4.38 (m,2H), 3.96 (brtr,J6-8 Hz, 1H), 3.68 (d,J8.7 Hz, 1H), 1.17 (s,9H), 1.16 (s，9H), 0.78 (s，3H)。 示例17 4-胺基-5-咪唑-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-吡咯並[2，1·ί][1，2,4]三井 (化合物38)的製備。 77 201008571

步驟i :向化合物14(30mg)中添加乙二胺(6〇〇μΐ)，將反應置於微波反 響 應器中，並加熱至110 C保持40分鐘。真空去除溶劑。通過柱色譜(丨〇〇%

EtOAc然後15%MeOH/EtOAc)純化粗製材料，得到呈白色固體的還原的咪 唑化合物 35(13.1 mg) ·· ESI-MSm/zSAMfM+H^^HNMRpOOMHz， de-DMSO): δ 11.90 (br d, J3.5 Ηζ,ΙΗ), 7.88 (br d, /3.6 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.21(s, 1H), 7.04 (s, 1H), 5.38 (s, 1H), 4.95 (d, J6.9 Hz, 1H), 4.71 (s, 1H), 4.65 仏 /5.6 Hz, 1H), 3.88-3.39 (m, 8H), 0.82 (s，3H)。 步驟ii ·將化合物35 (12mg)和味唾(21.1 mg)結合，並與乙腈共同蒸發 三次。添加DMF(0.2ml)隨後添加1，3-二氣-l，i，3,3-四異丙基二^氧烷 (16.5μ1)，並將混合物在RT下挽拌過夜<»真空去除溶劑。添加己烧，收集 〇 受甲矽氧基保護的化合物36(16 mg)並用於下一步驟中而不經進一步純化。 步驟iii :向化合物36 (22 mg)的DMSO (0.3 ml)溶液中添加2-二氧峨代 苯甲酸(IBX，14 mg)，並將混合物在45。(：下加熱3小時。真空去除溶劑。將 黃色殘餘物懸浮於EtOAc中並用飽和的水性亞硫酸納淬滅，用iMNaOH 洗務’乾燥(MgS〇4) ’過濾和真空濃縮。通過柱色譜(5〇%Et〇Ac/己炫)純化 得到被氧化的化合物37 (7.5 mg)。 步驟iv:向化合物37 (7.5 mg)的THF (0.1 ml)溶液中添加xbAF (3 mg)， 並將混合物在RT下授拌5分鐘。真空去除溶劑並通過柱色譜(100 % Et〇Ac 然後5% MeOH/EtOAc)純化混合物，得到呈白色固體的去保護的4_胺基_5_ 咪峻-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-吡咯並[2，1-如，2,4]三井，化合物38(1,2 78 201008571 mg) ： ESI-MS m/z 347 ([M+H]+); ^NMR (300 MHz, de-DMSO): δ 12.54 (br s, 1H), 11.43 (br s, 1H), 7.91 (br s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.23 (m, 1H), 7.15 (s, 1H), 7.03 (m, 1H), 5.40 (s, 1H), 4.98 (d, J6.9 Hz, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.67 (t, J5J Hz, 1H)，3.85-3.51 (m，4H), 0.85 (s, 3H)。 示例18 核普5'—鱗酸鹽。 向適當的核苷化合物(0.156 mmol)(在真空中於P2〇s上乾燥過夜)中添加 磷酸三甲基醋(1.5 mL)。將混合物在含4A分子篩的密封容器中擾捽過夜。 然後將其冷卻至〇。0並透過注射器添加含構氣氧化物(35.811L，2.5當量）。 將混合物在0°C下攪拌3小時’然後透過添加四乙銨碳酸氫鹽(teAB) (1M) (1.5mL)和水(15mL)淬滅反應。用CHC13和醚洗滌水性溶液然後凍乾》使 用含有水和水中5%乙腈的C18柱，通過HPLC純化粗製產物，提供在凍乾 後成為三乙基錄鹽的一磷酸鹽。 示例19 5'-對-苯基甲氧基異丙氨醯基麟酸酯前驅藥。 在RT和Ar下，向適當核苷化合物(〇.6 mmol)在無水thf (5 mL)中的 溶液中’添加曱氧基異丙氨醯基氯磷酸苯基酯(4〇mg，5當量X根據文獻步 ❹ 驟新鮮製備.J Med. Chem. 1993, 36,1048-1052 and Antiviral Research， 1999，’43, 37-53)和1-甲基咪唑(95 μ卜l〇當量）。透過tlc監測反應。36小 時後’蒸發反應混合物並在二氧化石夕凝膠上純化殘餘物，使用CH2Cl2中 0-10% MeOH作為洗提液，提供了非對映異構體的kl混合物。 示例20 2-[5-〇-雙(特戊酿基氧曱基刀磷醯基前驅藥。 在RT和Ar下，向化合物核苷—磷酸鹽(〇 〇24胃〇1)的三乙基链鹽在無 水MeOH(0.5mL)t的溶液中’添加三丁基甲錫烷基甲醇鹽(14jj L，2當 量)。將反應混合物在RT下攪拌3〇分鐘，然後蒸發並與乙腈共同蒸發三次。 將殘餘物溶於無水乙腈(3 mL)中並添加四丁基溴化錄〇5 5 mg，2當量)和碘 79 201008571 代甲基piovalate(58mg ’ 10當量）。將反應混合物回流加熱1小時，冷卻至 RT，並蒸發溶劑。將殘餘物在矽膠柱上純化，用CH2C12中l-5%MeOH提 供前驅藥。 示例21 核苷5·-二構酸鹽。 在RT和Ar下，向V-—磷酸鹽(0.031 mmol)的三乙基銨鹽[透過與無水 DMF(2 X 1 mL)—起共同蒸發兩次乾燥]在〇·5 mL無水DMF中的溶液中，添 加N，1SP-羰二咪唑(25 mg ’ 5當量）。將反應混合物在rt下授拌4小時，之 後的分析性TLC顯示無初始材料。然後向上述溶液中添加四丁基麟酸按鹽 (1.5 7H-Bu3N續酸鹽，其被製備(見pct，WO 88/03921)，並透過與無水DMF ❹ 一起共同蒸發三次進一步被乾燥）。反應後進行XLC，典型地在3天後’ LC-MS顯示顯著的(>50%)成為產物的轉化。用！此三乙胺、丨^水淬滅 反應並在RT下攪拌40分鐘。通過反相HPLC純化粗製產物，提供純淨的 產物。 示例22 核苷-5’-三磷酸鹽。

Ο 0 〇

II II II

HO个〇个〇个。

OH OH OH

H〇 OH 25 (在本文中稱作化合物25)。 向魏三甲基醋(1址’無水)中冰冷的核苦混合物」_1)中添加 POCl3 (30 μΐ) ’並將混合物在〇〇c下授掉2小時之後添加β%ν(72⑹， 之後添加乙腈(0.5mL)和三丁基焦碟酸錢〇9〇mg)。再在屹下之小時後， 1M 氫三乙基錢緩衝液(1Q址，pH 8 5)中泮滅反 80 201008571 應。通過製備性HPLC純化產物，得到化合物25 : MS m/z ([M-H]-) 519; 31P NMR (D20) δ -7·4 (m，IP), -1〇·1 to -10.2 (m，1P)，-21.1 to -21.3 (m，IP)。 示例23 基於細胞的HCVRNA複製螢光素酶報告試驗。 用於基於細胞的HCVRNA複製螢光素酶報告試驗方案的Μρ_ι細胞包 括Huh-7(人類肝癌)所衍生的細胞系’其細胞質中帶有正在複製的犯、丨a。該 RNA(稱作複製體)編碼催化RNA複製體複製的所有jjCV非結構蛋白質(包 括HCVNS2到NS5B)。每個細胞的複製艘拷貝數約為1〇〇〇到5〇〇〇。在正 在分裂的細胞中’複製體作為附加艘被穩定維持，並且因此其對於將細胞 保持在亞匯合狀態和確保複製體的選擇(透過在補充有〇 25 mg/ml G418的 培養基中培養細胞進行)而言是重要的。HCV基因組的整個結構區域被新黴 素抗性基因代替；因此，該細胞系不產生有傳染性的病毒。另外，用 FMDV-2A自主加工肽將勞火蟲瑩光素酶⑺r辦y /Mczy^raye)基因與基因 融合，這允許由一個順反子表達成熟的螢光素酶和新黴素轉酸轉移酶二 者。螢光素酶水平與HCV RNA水平成正比，並且細胞體系允許在細胞培 養物中評價HCV抑制劑的效價。 該實驗大綱在第1天包括以下步驟：（1)以10,0⑻細胞/96孔平板孔的 密度塗布細胞’並在37°C下孵育；（2)製造化合物稀釋液；（3)將化合物稀釋 ® 液添加至細胞，（4)畔育72小時。該實驗在第4天包括以下步驟：（1)針對細 胞毒性進行細胞效價藍(cell titer blue)實驗(該實驗基於有代謝活性的細胞中 刃天月（細胞效價藍)成為螢光產物試鹵靈(res〇rugn)的還原，並且該實驗可 以和用於HCV複製體螢光酶報告試驗的實驗聯合）；（2)用Bright G1〇螢光 素酶底物(Promega)進行螢光素酶實驗並對發光進行讀數；（3)處理結果。 在該大綱中’細胞培養物包含MP4細胞(維持HCV亞基因組複製體的 Huh7細胞，所述HCV亞基因組複製體含有螢光素酶_FM〇v 2A新黴素碟 酸轉移酶融合基因）。MIM細胞維持在補充有1〇% FBS和〇 25 mg/mi G4i8 的Dulbecxo’s改良的Earie培養基(DMEM)l|7。透過胰蛋白酶消化將細胞傳 代並冷凍於90%FBS/10%DMSO中。在該實驗期間，DMEM培養基補充 有 10% FBS ’ 含有 〇.5% DMS〇 並缺乏 G418。 81 201008571 就細胞平板製備而言，在實驗當天’將ΜΡ-l細胞用胰蛋白酶消化，並 稀釋獲得5,000-10,000細胞/70 μΐ實驗培養基《將若干μ1(約10,000個細胞） 分布於黑色96孔ViewPlateTM (Packard)的每個孔中。將平板於37°c下在 5°/0C02中孵育直至化合物添加。 如下製備化合物平板：（1)向缺乏G418的實驗培養基中添加化合物 (100% DMSO中20 mM)，獲得60 μΜ的溶液和0.5%的最終DMSO濃度； (2)聲振處理 15 分鐘(任選的）；（3)滤經 0.22 pmMillipore FilterUnit(；96 孔格 式)(任選的）；（4)在深孔滴定板中製備最終的稀釋液平板，在第3到u列添 加400 μΐ實驗培養基(含0.5% DMSO) ; (5)將200 μΐ化合物溶液轉移至稀釋 液平板的第3列；（6)在第3列中製備最高濃度(2Χ);⑺如下製備1/3系列 稀釋液：從第3列_將200 μΐ轉移至第4列，然後從第4列中將200 μΐ轉 © 移至第5列，依此類推至第11列(第12列中不含化合物）。 透過從化合物平板的每個孔中轉移70 μΐ至細胞平板的對應孔中(使用 三列作為「無抑制對照」；使用第[9]列作為九-點劑量應答），向細胞中添加 測試化合物。將細胞在37°C、5% C02下孵育3天。 根據Alamar藍實驗方案’將實驗平板從37。〇孵育箱中取出，並添加 20 μΐ CellTiter-BlueTM試劑。將細胞在37°C孵育箱中孵育3小時。將實驗平 板搖晃10秒’並記錄56〇EX/590Emnm處的螢光。使用以下的等式相對於1 〇〇% 未處理的對照來表述結果：％抑制=1〇〇 - [(RFU彳^- RFU “ / RFU以财_ RFU μ) XIOOp或者’根據MTT方案，通過活體染料3-(4, 5-二甲基嗟唑 ❹ -2·基)-2,5-二苯基四唑溴化鹽(MTT)的代謝測定細胞毒性的程度。向每個孔 中添加MTT (lmg/ml) ’並將平板在37°C下孵育3小時。對孔進行抽吸，添 加異丙醇(200μΙ〇並在540/690nm下讀出吸光度數值。使用非線性回歸分析 °十算產生50%細胞毒性(CC50)的化合物濃度。 使用螢光素酶實驗方案，將培養基從實驗平板中抽吸，並添加5〇 μ1先 刖溫熱至室溫的IX Glo裂解緩衝液(Pr〇mega>孵育在室溫下進行1〇分鐘， 間或搖動。將黑色的帶子置於平板底部，並添加50 μ1先前溫熱至室溫的 Bright-Glo螢光素酶底物(Promega)。隨後輕柔混合^然後使用以下的方案利 用Packard Topcount儀器：數據模式：發光(CPS);計數延遲=丨分鐘；計數 時間=2秒。培養平板的每個孔中的發光測定(CPS)是存在不同濃度抑制劑 82 201008571 時HCVRNA複製量的度量。100%抑制使用以下的等式計算：1〇〇%抑制= 100- [CPS (抑制劑）/ CPS (對照）X 100]。對抑制_濃度數據應用與剛模 型擬合的非線性曲線，並使用計算機曲線擬合程序計算50%有效濃度 (EC5〇)。透過以上所述的實驗方案’在基於細胞的HCV RNA複製螢光酶報 告試驗中研究下表3中顯示的代表性的方程式I化合物的生物學特性。 表3.基於細胞$HCVRNA複製螢光素酶報告試驗EC5Q和CC5Q濃度。 化合物編號 不例編號 EC50 μΜ CC50 μΜ 9 1 1.3 365 11 2 3.1 >100 12 3 0.22 6.5 14 5 1.4 18.8 15 6 0.0062 —---- 0.37 34 16 3.8 ------ 45 --1 主/1 i认“晌沾Hr'VRMA递匍总水1綠招备就驗50υΜ ΊΓ从h 表4.基於細胞的HCVRNA複製螢光素酶報告試驗50uM下的％抑 Ο 制。

83 201008571 32 15 23 34 16 100 35 17 99 38 17 99 示例24 總細胞複製體RNA連續傳代方案。 用G418在Huh-7(人類肝癌）中選擇將複製的⑽八附加體在細胞質中維 持的HCV亞基因組複製體。可使用G418和特異性抑制劑的二元組合，分 離對HCV RNA複製體的特異性抑制劑有抗性的HCV複製體。為了確定抑 制劑-抗性的複製體RNA是否編碼賦予抗性的穩定突變，可將複製體^^ ® 從抗性細胞系中分離，並透過電穿孔連續傳代為Huh_7稚細胞。在新一輪 選擇後，可用抑制劑展示具有推定的抑制劑_抗性複製體的細胞種群或細胞 系的表型，以證實抗性表型經遣傳作圖至複製體民丨、认。 該實驗大綱包括以下步驟：⑴分離細胞質方 ， 案）；(2)轉染進入Huh-7稚細胞中；⑶選擇菌落3-4周；(4)挑取和擴大菌落， 或者建立結合的細胞種群》具體地，使用四從吓試劑盒(Qiagen)，根據製 造商的說明’從含有抑制劑_抗性複製體並在1〇cm組織培養平板中培養的 Huh7細胞中提取總rna 〇透過Taqman(g) RT pCR分析測定HCV複製體 RNA拷貝數’並通常透過電穿孔將1〇到2〇飓總細胞奶八(其含有約丨χ 1〇9 ^ 個HCVRNA的拷貝)轉染成為8 χ 1〇6個Hun_7稚細胞。隨後在1〇 cm組織 培養平板中培養經轉化的細胞，所述平板含有補充有1〇%胎牛血清(1〇% FCS)的DMEM。轉染後48小時，將培養基更換為補充了 0.25mg/ml G418 的DMEM(1G%FCS)，並且每三天將其更換—次。需要時將細胞1:3傳代 以維持培養物亞融合。在轉染後和⑽8選擇後三到四周形成了可見的菌 落。可挑選G418抗性菌落並將其發展為第二代細胞系，或者結合入種群培 養物中’所述種群培養物喊了帶有賴傳代的HCV複製RNA的細胞。 透過使用第三代複製體細胞測量EG。，證實穩定並賦予特異性抑制劑抗 的突變的傳代。 84 201008571 示例25 NS5b鏈終止實驗。 NS5b鏈終止反應使用與髮夾模板懸突互補的每種核苷酸的逐步添加 (第-個核苷酸是放射性的）’即直接標記方法。如果被測試的化合物是鏈終 止子，則該系統忐夠清楚地顯示其進入鏈中的結合，並且未觀察到進一步 的延伸。 根據該方案，製備兩個獨立管的内容物。管A含有15 μ1丨⑹緩衝液、 1.5 μΐ酶、1.0 μΐ寡聚物和5 0 μι，總體積約9 μ1。管Β含有6叫的。 將管A的内容物與管B的内容物混合，提供了 15 μ1的總體積，之後在3〇«>c 下孵育60分鐘。將小份試樣與RNA上樣緩衝液混合，在70。(：下加熱15 分鐘’並在含7.2 Μ尿素的20%丙烯醯胺凝膠上電泳。NS5b的終濃度為1 μΜ，NTP/cpd的終濃度為2 μΜ。 不例26 HCV聚合酶抑制實驗。 對於使用NS5b^55(基因型lb)經純化的酶的HCVNS5b聚合酶抑制實 驗，使用多聚r(U) RNA模板(Sigma)。假定為Michaelis-Menten動力學，使 用作為底物濃度函數的初始速率的非線性、最小二乘法擬合，針對多聚 模板和ATP測定動力學常數Km。

_ 標準 RdRp 實驗由含 20mMTris-HCl、5 mMMgCl2、5 mMMna2、3 mM

DTT、72 μΜ ATP 和 0.019 μΜ [a-33P]ATP 的 50 pL 反應混合物中 20 Mg/mL 多聚r(U)RNA模板和l〇〇nMHCVNS5bA55(基因型lb)組成。延伸反應通 過ATP的添加起始’並且在25°C下進行60分鐘。通過添加0.2 M EDTA 淬滅反應’通過Multiscreen板(Millipore)過渡收集形成的產物。使用 TopCount(PerkinElmer)對形成的產物定量。使用曲線擬合的計算機程序測 定酶催化的速率被降低一半時的抑制劑濃度(IC5G)。預期本發明的核普5，_ 三填酸鹽化合物的IQo濃度範圍從<10nM到>100 μΜ。在這些條件下，化 合物 25 的 IC50 是 0.37 μΜ。 HCV NS5b聚合酶IQ測定實驗 85 201008571 使用NS5b聚合酶抑制實驗的經改進的方法測定呢％觸劑化合物的 &和作用模式。將酶和模板固定在100nM^2〇g/mL，並且所有其他反應 條件與NS5b聚合酶抑制實驗相同。在不同的Ατρ和抑制劑濃度下監測 NS5b反應的速度。ATP濃度範圍從0.1 μΜ到1000 μΜ，抑制=濃度範圍 從IQo值的0.003倍到7倍。使用Graph Pad Prism分析在每個ατρ和抑制 劑濃度下獲得的速度，以鑑定抑制劑化合物的抑制模式和&。在這些條件 下，化合物25的Ki是〇.〇8 μΜ。 示例27

化合物9在複製體細胞和原代人類肝細胞中的體外合成代謝產生三磷 酸鹽物類化合物25。化合物25的結構是

’其合成製備在上文實施例22 中討論。 在黏附的Huh-7和塗板的原代人類肝細胞中研究了化合物9的體外合 成代謝及其三麟酸鹽(化合物25)的細胞内蓄積。Huh-7人類肝癌肝細胞 (JCRB0403 http://cellbank.nibio.go.jp/>坡維持在含 10%胎牛企清(FBS)的 DMEM中。帶有HCV亞基因組複製體的Huh-7細胞複製體(Lohmann et al.， 1999. Science 285: 110-113)被維持在補充有 10% FBS 和 0.25 mg/ml G418 的 DMEM中。細胞系在37°C下在5%C02-95%空氣大氣壓中培養。塗佈的原 代人類肝細胞(6孔膠原/無覆蓋)購自Cellz Direct(NC，美國），並在相同的醉 育條件下維持於 InVitroGro 培養基(Celsis，In Vitro Technologies, MD 美國） 中。 為了進行細胞内合成代謝研究，將Huh-7細胞用胰蛋白酶消化、收穫、 重懸於補充有10%FBS的DMEM中，計數並以每孔0.7X 1〇6個細胞的密 86 201008571 度接種於6孔平板中，並在5% C〇2氣氛中於37°C下畔育24小時的時段。 去除培養基並用含10 μΜ化合物9的新鮮DMEM + 10% j?BS代替，在37°C 下畔育24小時的時間段。然後用無藥物的培養基將細胞單層快速洗滌三 次’以去除細胞外的化合物9，並將每個孔用新鮮的DMEM+ i〇%FBS畔 育特定時段(即6個孔在第0、2、4、8、24和48小時時）。在畔育時間段結 束時’將培養基從孔中吸出’並用冷鱗酸鹽緩衝的鹽水(pH7.4)洗務細胞單 層。用1.0 ml冰冷的70°/〇乙醇:水處理經洗滌的細胞單層，將其刮下並收穫 進離心管中，然後在4°C下聲處理1分鐘。將得到的細胞裂解物於―跗乞下 過夜儲存，隨後用於提取化合物9的代謝產物。從塗佈的原代人類肝細胞 中分離化合物9和化合物9的細胞內代謝物使用相似的實驗條件，例外是 ® 使用InVitroGro培養基作為細胞培養基。 針對細胞内核苷代謝物的樣品分析：將細胞裂解物樣品在冰上融化， 在乾冰/丙酮浴中進行兩個涞/融循環。將細胞提取物振盈，於4°c下16000g 離心5分鐘’並注射40 pL上清液，使用API4000三元四極系統(triple quadrupole system)進行分析。將Shimadzu LC自動採樣器設置於,從而 將蒸發最小化。使用pH梯度，在維持於40°C下的Biobasic AX，3.0 X 50 mm 柱上分離化合物9的一磷酸鹽、二麟酸鹽和三麟酸鹽(化合物25)。流動相 由溶劑A(含0.008%冰醋酸的30:70 ACN/H20中10 mM乙酸錢)和溶劑B(含 0.225%氨水的30:70 ACN/H20中1 mM乙酸銨)組成。如下進行洗務：在2.5 1〇 分鐘内使用從到100%的緩衝液B的線性梯度，然後以0.5 ml/分鐘恆 定流速的100%B的組成下’在等度條件下保持3分鐘。以陽離子電喷射模 式進行質譜法，對化合物9的一碌酸鹽、二鱗酸鹽和三麟酸鹽而言分別以 m/zm/z 361.1-〉227.1、441·1-> 227.1 和 521·1-> 227.1 使用多個反應監測掃 描官能度。透過將各個代謝物的色譜圖形和峰面積響應與真實標準進行比 較，鑑定和定量所述各個代謝物。 化合物9的藥物代謝動力學特性在雄性Sprague_Dawley大鼠、小獵犬 和獼猴(每個物種n=3)中用5 mg/kg 口服用藥和2 mg/kg iv用藥測定。使用 WinNonlin 無房室模型(noncompartmental model>分;PK #數。 如下表5中所示，用1〇μΜ初始濃度的化合物9將Huh-7-HCV亞基 因組複製體細胞孵育24小時後，化合物25的細胞内濃度達到5.7 pmol/百 87 201008571 萬細胞。出乎意料的是’在相同實驗條件下，原代人類肝細胞產生更高(〜 60倍)的化合物9的三鱗酸鹽的細胞内水準。 預期下述化合物具有每日在治療上施用一次的更大可能，所述化合物 的jk漿半衰期>2小時且其細胞内有治療活性的代謝物具有>1()小時的半衰 期。化合物25的半衰期(tl/2)在複製體細胞和原代人肝細胞中均展示雙相圖 譜：在複製體細胞和原代人肝細胞中均為快速半衰期tl/2 (〇 59 vs 3 4㈣ 隨後是tl/2 2 38小時的延長的緩慢衰退。 表5.化合物25的細胞内蓄積及其在複製體細胞以及原代人類肝細胞 中的半哀期(用10 μΜ初始濃度的化合物9畔育24小時後） 化合物25 Huh-7細胞 人類肝細胞 細胞内三磷酸鹽濃度(pmol/百萬 細胞，孵育24小時） 5.7 339 三鱗酸鹽半衰期，起始相(a，h) 0.59 3.4 三磷酸鹽半衰期，排除相(3,h) 45 38 如下表6中所示’化合物9的跨物種ΡΚ顯示範圍在4-7.6小時的排除 tl/2，口服生物利用率為33-96%。基於這些數據，考慮到化合物9的三構 酸鹽的長細胞内半衰期及其在不同動物物種中的半衰期，預期化合物9在 人類中的血漿半衰期應當足以使其每日一次用藥。 表6.大鼠、猴子和狗中單次ivpmg/kgBw)或口服用藥（5mg/kgBW)後 化合物9的藥物代謝動力學特性。 CL (liiL/inin/lcgB w) Vss (L/kgBW) tl/2 (h) Cmax (_ AUC (μΜ-h) F% 大鼠 18.8 4.19 4.0 2.3 8 13.0 83 猴子 20.5 2.43 4.3 0.8 2 5.0 33 狗 11.4 5.22 7.6 8.3 24.9 96 88 201008571 6 縮寫：CL :總體清除率；Vss :穩態容量分布；Tl/2 :終端排除半衰期； Cmax: 口服用藥後觀察到的最大濃度；AUC :血漿暴露的曲線下面積；F% : 口服生物利用率。 在該說明書和之後申請專利範圍的通篇中，除非上下文另有要求，詞 語「包括」（comprise)及其變化（「comprises」和「c〇mprising」）應當理解為 意味著包含所述整體或步驟或整體或步驟的群組，但是不排除任^其他整 體或步驟或整體或步驟的組。此處提到的所有專利、專利公開、文^和參 考透坶引用整體並入。 【圖式簡單說明】 無 【主要元件符號說明】 益 89

Claims (1)

1. 201008571 七、申請專利範圍： 1. 一種方程式I的化合物或其可藥用鹽類、酯類、溶劑合物、水合物或前 驅藥，所述方程式I為：

   其中 界定了作為D-或L-核發或核皆酸的活性藥物成分； A係選自由-Ο-、-S-、-CH2-、-CHF-、-CF2-和-NR-所組成的群組； 1^'、112、112’、113、113’和114’獨立地選自由_1^、卤素、-〇11、->111011、-见11^2、 -N3、-CN、-OCOCHNC(CH3)2、-COOH、-CONH2、-C(S)NH2、-COOR、-R、 -OR、-SR、-SSR、-NHR和-NR2所組成的群組，或r2和r2’一同或r3和r3’ 一同代表=0、=S、或=L’-Y· ’其中L’係選自由N、CH、CF、CC1和CBr所 組成的群組，且Y1係選自由H、鹵素、N3、甲基、乙基和CN所組成的群 組； R獨立地是鹵素、-H、-OH、-SH、-CN、S(CrC4烷基）、-N02、NH2、 -ΝΗΝΗ2、-N3、_NR'R’，其中每個 R’獨立地是 η 或 CrC4 烷基、-C(S)NH2、 -CH3、-CH2OH、-CH2NH2、-CH2NH3+、-COOH、-COOCH3、-COOCH2CH3、 -CONHCH3 ' -CONH2 ^ -CF3 ' -N(CH3)2 ' -NHCOCH3 ' -NHCONH2 ' -NHCNHNH2、-ONH2、-CH2OCH3、-o(ch2)ch3、coocrc4 烷基、可選擇 地取代的烷基、可選擇地取代的鏈稀基、可選擇地取代的炔基、可選擇地 取代的芳基、可選擇地取代的醯基、可選擇地取代的芳烷基、可選擇地取 代的環烷基、可選擇地取代的環烯基、可選擇地取代的苯基、可選擇地取 代的雜芳基、可選擇地取代的雜環基、可選擇地取代的烷氧基、可選擇地 取代的鏈烯氧基、可選擇地取代的炔氧基、可選擇地取代的芳氧基、可選

   90 201008571 擇地取代的醯氧基、可選擇地取代的氧醯基、可選擇地取代的芳烷氧基、 可選擇地取代的雜環氧基、可選擇地取代的雜芳氧基、可選擇地取代的環 烷氧基、可選擇地取代的環烯氧基、可選擇地取代的胺基、可選擇地取代 的胺醯基、可選擇地取代的胺醯氧基、可選擇地取代的醯胺基、可選擇地 取代的氧醯胺基、可選擇地取代的氧醯氧基、可選擇地取代的醯亞胺基、 可選擇地取代的醯亞胺氧基、可選擇地取代的氧醯亞胺基、可選擇地取代 的胺基硫代醯基、可選擇地取代的硫代醯胺基、可選擇地取代的胺基亞磺 醯基、可選擇地取代的胺基績醯基、可選擇地取代的硫基、可選擇地取代 的硫代烷基、可選擇地取代的硫代醯基、可選擇地取代的硫代酿氧基、可 選擇地取代的氧硫代醯基、可選擇地取代的氧硫代醯氧基、可選擇地取代 ^ 的磷醯胺基、可選擇地取代的亞磺醯基、可選擇地取代的磺醯基、可選擇 地取代的亞磺醯胺基、可選擇地取代的磺醯胺基、可選擇地取代的氧亞磺 醯胺基和可選擇地取代的氧磺醯胺基； L 係選自由-Ο、-S、-NH、-NR、-CY3、-CY20、-CY2S、-CY2NH、-CY2、 • -CY2CY2、-CY2OCY2、-CY2SCY2 和-CY2NHCY2 所組成的群組； Y係獨立地選自由-Η、鹵素、-R、-OR和-NR2所組成的群組； R5係選自由-OH、-R、-OR、-NR2或其一磷酸鹽、二碌酸鹽或三鱗酸鹽 部分或其模擬物所組成的群組； 鹼基是方程式II的基團：

   =係單或雙鍵； Z1、Z3 和 Z4 係獨立地選自 *>C-CONHR、>C-CONR2、>C-C(S)NH2、 >C-COOR、>C-R、>C-OR、>C-SR、>C-NHR' >ONR2、>C-可選擇地取代 的雜芳基、>c-可選擇地取代的烷基和>(>(}組成的組； 201008571 z2係選自由>01^2和>(>0所組成的群組； G 係獨立地選自由-H、-F、_C1、-I、-NH2、-NHCH3、-CN、-COOH、 -CSNH，、-C^CH、-C三CCH3、_C=CCH2〇H、-C=C-Si(CH3)3、-CONH2、 -CONHCH3、-CONH-苯基、-CONH-甲苯基、噻唑、噁唑、咪唑、咪唑啉、 三唾和四峻所組成的群組，並且當化合物包括二個或更多的G基團時，G 係相同或不同的；以及 當A係Ο時，R1’、R3、R4 ’和R5係Η ; L係Ο ;且R2 ’和R3係OH ;然 後R2係鹵素、OH、NHOH、NHNH2、N3、CN、OCOCHNC(CH3)2、COOH、 CONH2、C(S)NH2、COOR、R6、OR、SR、SSR、NHR 或 NR2，且 R6 係鹵 素、OH、SH、CN、S(CM 烷基）、N〇2、NH2、NHNH2、N3、NR’R，其中 每個 R’獨立地係 H 或 CM 烷基、C(S)NH2、CH3、CH2OH、CH2NH2、CH2NH3+、 COOH ' COOCH3 ' COOCH2CH3 ' CONHCH3 > CONH2 ' CF3 ' N(CH3)2 ' NHCOCH3 ' NHCONH2 ' NHCNHNH2 ' ONH2 ' CH2OCH3'0(CH2)CH3 ' COO(Q_4烷基）、取代的烷基、取代的鏈烯基、取代的炔基、取代的芳基、 取代的醯基、取代的芳烷基、取代的環烷基、取代的環烯基、取代的苯基、 取代的雜芳基、取代的雜環基、取代的烷氧基、取代的鏈烯基氧、取代的 炔氧基、取代的芳氧基、取代的醯氧基、取代的氧醯基、取代的芳烷氧基、 取代的雜環氧基、取代的雜芳氧基、取代的環烷氧基、取代的環烯氧基、 取代的胺基、取代的胺醯基、取代的胺醯氧基、取代的醯胺基、取代的氧 醯胺基、取代的氧醯氧基、取代的醯亞胺基、取代的醢亞胺氧基、取代的 氧醯亞胺基、取代的胺基硫代醯基、取代的硫代醯胺基、取代的胺基亞磺 醯基、取代的胺基續醯基、取代的硫基、取代的硫代烷基、取代的硫代醯 基、取代的硫代酿氧基、取代的氧硫代醯基、取代的氧硫代醯氧基、取代 的磷醮胺基、取代的亞磺醯基、取代的磺醯基、取代的亞磺醯胺基、取代 的磺醯胺基、取代的氧亞磺酿胺基或取代的氧續醯胺基。 2.依據申請專利範圍第1項所述的化合物，其中： 係雙鍵， Z1 係>〇-11"， Z2 係〉C-NH2， Z3 係>C-R"，， 201008571 Ζ4·>〇ΙΤ"，以及 R”、R"，和 R""係彼此獨立地 Η、f、ι、c卜 ΝΗ2、NHCH3、C(=0)NH2、 C(=0)NHCH3、C(=0)NH(C6H5)、c(=〇)nh(C6H5CH2)、CN、CCH、C=CCH3、 C三CCH2OH、(>C-Si(CH3)3、C(=s)Nh2、c〇2H、

   3.依據申請專利範圍第1項所述的化合物，其中 =係單鍵， 〇 Z1 係〉C-R"， Z2 係 >〇〇， Z3 係 >OR"，， Z4係>C-R""，以及 . R”、R"·和 R""係彼此獨立地 η、f、I、a、nh2、nhch3、c(=o)nh2、 C(=0)NHCH3、C(=0)NH(C6H5)、-C(=0)NH(CH2C6H5)、CN、C^CH、 OCCH3、OCCH2OH、〇C-Si(CH3)3、c(=s)nh2、co2h、

   4. 依據申請專利範圍第1項所述的化合物，其中24係>〇11e 5. 依據申請專利範圍第1項所述的化合物，其中z4係〉C-R’"，，而R""係F、 I ' Cl ' NH2 ' NHCH3 ' C(=〇)NH2' C(=0)NHCH3 ' C(=0)NHC6H5 ' C(=0)NH(CH2C6H5)、CN、bCH、CCCH3、CeCCH2OH、C-C=Si(CH3)3、 c(=s)nh2、co2h、

   6.依據申請專利範圍第5項所述的化合物，其中r""係F、〗或α。 93 201008571 7·依據申請專利範圍第1項所述的化合物，其中23係>(：-11'”，而Rm係Η。 8. 依據申請專利範圍第1項所述的化合物，其中ζ3係>〇-11"·，而R"'係ΝΗ2。 9. 依據申請專利範圍第1項所述的化合物，其中21係>〇11。 10. 依據申請專利範圍第1項所述的化合物，其中Ζ1係X>R"，而R”係獨 立地 F、I、a、NH2、NHCH3、C(=0)NH2、C(=0)NHCH3、C(=0)NHC6H5、 C(=0)NHCH2C6H5、CN、C=CH、CCCH3、C=CCH2OH、C-CESi(CH3)3、 c(=s)nh2、co2h、

   11. 依據申請專利範圍第1項所述的化合物，其中A係氧。 12. 依據申請專利範圍第1項所述的化合物，其中： L係Ο，以及 R5係Η或一磷酸鹽、二麟酸鹽或三麟酸鹽部分或其模擬物。 13. 依據申請專利範圍第12項所述的化合物，其中R5係胺基攝酸鹽或 酸鹽、二破酸鹽或三磷酸鹽部分的磷酸酯。 14. 依據申請專利範圍第1項所述的化合物，其中方程式I的化合物係選自 4-胺基-5-氣-7-(2-C-甲基-β-D-咬鳴核糖基洛并[2,1-f] [ 1，2,4]三井；

   4-胺基-5-氣-7-(2-C-甲基-β-D-0夫喊核糖基洛并[2，1-幻[1，2,4]三井； 4-胺基-5-峨-(2-C-甲基-β-D-咬味核糖基)-e比嗜·并[2,l-f][l，2,4]三井； 4-胺基-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-吡咯并[2，1-£][1，2,4]三井-5-碳化 腈； 4-胺基-7-(2-C-甲基-β-D-咬味核糖基)-°lt洛并[2,1 -f] [ 1，2,4]二井-5-敎酸 醯胺； 4-胺基-5-三甲基矽烷基乙炔基-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)·吡咯并 [2，l-f][l，2,4]三井； 4-胺基-5-乙炔基-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)_吡咯并[2，l-f][l，2,4]三 井； 4-胺基-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)·吡咯並[2，l-f][l，2,4]三井-5-羧酸； 94 201008571 2,4-二胺基-7-(2-C-甲基-β-D-吱喃核糖基比咯並[2，1-幻[1，2,4]三井； 4-胺基-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-吡咯並[2，1-讯1，2,4]三井-5-羧酸 醯胺； 4-胺基-5-噁唑-2-基-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-吡咯並[2，1·ί][1，2,4] 三井； 4-胺基-5-噻唑-2-基-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)_吡咯並[2，l-f][l ,2,4] 三井； 4-胺基·5-(3Η-[1，2,3]三唑-4-基)-7-(2-0甲基-β-D-呋喃核糖基)吡咯並 [2，1-沉1，2,4]三井； 4-胺基-6-氟-7-(2-C-曱基-β-D-呋喃核糖基)-吡咯并[2，1-£][1,2,4]三井-7- 4-胺基-5-咪唑-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-吡咯并[2，1-饥1，2,4]三井； 以及 4-胺基-5-咪唑啉-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-吡咯并[2，1-^[1，2,4]三 井。 15. 依據申請專利範圍第1項所述的化合物，其係4-胺基-7-(2-C-甲基-β-Ι> 呋喃核糖基)-吡咯并[2，1-巧[1，2,4]三井。 16. 依據申請專利範圍第1項所述的化合物’其中方程式I的該化合物係

   17.依據申請專利範圍第丨項所述的化合物’其中方程式I的該化合物係

   95 201008571 τ· · is. -種藥物劑型’包括依據申請專利範圍第i項方程式工的化合物之治療 有效量、或其鹽類、醋類、溶劑合物、水合物或前驅藥以及一種或多種 可藥用的載體、稀释劑及/或賦形劑。 19.依據申請專利範圍第18項所述的藥物劑型，其中該劑型適合每日一次 用藥。 20·依據申請專利範圍帛18項所述的藥物劑型，其中方程式工的該化合物 係4-胺基-7-(2-C-f基-β-D·呋喃核糖基)_吡咯并阳鄰別三井的治療有 效量。 几一種治療或預防微生物感染、病毒感染或増生性失調的方法，包括對患 有，生物感染、病毒感染或增生性失調或處於這些風險下的患者施用依據 申請專利範圍第1項所述的化合物或其藥物劑型的治療有效量。 ^ 22·依據申請專利範圍第U項所述的方法，其中該患者患有病毒感染或處 於病毒感染的風險下。 23·依據申請專利範圍第22項所述的方法，其中該病毒感染係⑶肝炎病 毒感染 24·依據申請專利範圍帛21項所述的方法，其中該化合物或其藥物劑型係 每日一次給該患者施用。 ’ 25. 依據申請專利範圍第24項所述的方法，其中將該化合物在約1〇JLlg/kg 到約30 mg/kg的範圍中給該患者施用。 26. 依據申請專利範圍第25項所述的方法，其中該化合物係4_胺基_7_(2_c_ 0 甲基-β-D-0夫喃核糖基比1各并[2，i_f][i，2,4]三井。 27· —種在人類患者中抑制聚合酶活性的方法，包括對該人類患者施用依據 申請專利範圍第1項所述的化合物或其藥物劑型。 28. 依據申請專利範圍第27項所述的方法，其中該聚合酶活性係]^^^ NS5B聚合酶活性。 29. 依據申請專利範圍第27項所述的方法，其中該方法包括體内生產方程 式I化合物的治療有效代謝物，該代謝物具有大於約1〇小時的細胞内半衰 期。 30. 依據申請專利範圍第29項所述的方法，其中該方法包括體内生產足量 的該治療有效代謝物’以允許在約1〇只的屯到約3〇 mg/j^g的範圍中每曰一 96 201008571 次在人類患者中給予方程式j的化合物。 3ΐ·依據申請專利範圍第3〇項所述的方法，其中在該人類患者中方程式工 化合物的每日-次㈣的範敝約15_ 25 mg/kg。 32.依據申凊專利範圍第27項所述的方法，其中依據申請專利範圍第i項 所述的該化合物在該患者中具有大於約2小時的血漿半衰期。 0 97 201008571 四、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：無。 (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： 無 五、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學 式： Base R5\.