KR20220143064A - 항바이러스 화합물 - Google Patents

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KR20220143064A
KR20220143064A KR1020227031718A KR20227031718A KR20220143064A KR 20220143064 A KR20220143064 A KR 20220143064A KR 1020227031718 A KR1020227031718 A KR 1020227031718A KR 20227031718 A KR20227031718 A KR 20227031718A KR 20220143064 A KR20220143064 A KR 20220143064A
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다니엘 에이치. 변
그레고리 에프. 친
마이클 오. 클라크
빈두 고얄
페트르 잔사
리차드 엘. 맥만
마이클 알. 미쉬
더스틴 에스. 지젤
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길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드
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Abstract

본 개시내용은 뎅기(Dengue)를 포함한 바이러스 감염을 치료하기 위한 4'-플루오로메틸 뉴클레오사이드를 기재한다.

Description

항바이러스 화합물
관련 출원의 교차 참조
본 출원은 2020년 2월 18일에 출원되고 발명의 명칭이 "ANTIVIRAL COMPOUNDS"인 미국 임시 특허 출원 제62/978,199호에 대해 우선권의 이익을 주장하며, 그 전문은 본원에 참조로서 포함된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 형식으로 전자적으로 제출되고 본원에 그 전체가 원용되어 포함된 서열 목록을 포함한다. 2021년 2월 17일에 생성된 상기 ASCII 사본은 명칭이 1225-WO-PCT_SL.txt이고, 크기가 800 바이트이다.
플라비비리대(Flaviviridae) 과를 포함하는 바이러스는 페스티바이러스(pestiviruse), 플라비바이러스(flavivirus), 및 헤파시바이러스(hepacivirus)를 포함한 적어도 3개의 구별가능한 속을 포함한다(문헌[Calisher, et al., J. Gen. Virol., 1993, 70, 37-43]). 페스티바이러스 ( pestivirus )는 소 바이러스성 설사 바이러스(BVDV: bovine viral diarrhea virus), 고전적 돼지 열병 바이러스(CSFV: classical swine fever virus, 돼지 콜레라(hog cholera)) 및 양의 보더병(BDV: border disease of sheep)과 같은 많은 경제적으로 중요한 동물 질환을 야기하는 한편, 인간 질환에서 이의 중요도는 덜 특징화되어 있다(문헌[Moennig, V., et al., Adv. Vir. Res. 1992, 48, 53-98]). 플라비바이러스(flavivirus)는 뎅기열 및 황열과 같은 중요한 인간 질환의 원인이 되는 한편, 헤파시바이러 스(hepacivirus)는 인간에서 C형 간염 바이러스 감염을 야기한다. 플라비비리대 과에 의해 야기되는 다른 중요한 바이러스 감염은 웨스트 나일 바이러스(WNV: West Nile virus), 일본 뇌염 바이러스(JEV: Japanese encephalitis virus), 진드기-매개 뇌염 바이러스(tick-borne encephalitis virus), 전진 바이러스(Junjin virus), 머레이 밸리 뇌염(Murray Valley encephalitis), 세인트 루이스 뇌염(St. Louis encephalitis), 옴스크 출혈열 바이러스(Omsk hemorrhagic fever virus) 및 지카 바이러스(Zika virus)를 포함한다. 플라비비리대 바이러스 과로부터의 복합적 감염은 세계적으로 유의한 사망률(mortality), 이환율(morbidity) 및 경제적 손실을 야기한다. 따라서, 플라비비리대 바이러스 감염에 대한 효과적인 치료를 개발하는 필요성이 존재한다.
뉴모비리대(Pneumoviridae) 바이러스는 많은 만연한 인간 및 동물 질환의 원인이 되는 음성-센스, 단일-가닥 RNA 바이러스이다. 바이러스의 뉴모비리대 과는 인간 호흡기 세포융합 바이러스(HRSV: human respiratory syncytial virus) 및 인간 메타뉴모바이러스(human metapneumovirus)를 포함한다. 대부분의 모든 어린이는 두번째 생일까지 HRSV 감염을 겪었을 것이다. HRSV는 영아기 및 소아기에서 하기도(lower respiratory tract) 감염의 주요 원인이며, 감염된 아이 중 0.5% 내지 2%는 입원을 필요로 한다.
HRSV 감염을 방지하기 위한 어떠한 백신도 현재 이용 가능하지 않다. 단일클론 항체 팔리비주맙(palivizumab)은 면역예방에 이용 가능하지만, 이의 사용은 고위험도 영아, 예를 들어 미숙아 또는 선천성 심장 또는 폐 질환을 갖는 아이로 한정되고, 일반적인 사용 비용은 종종 엄두도 못 낼 정도로 비싸다. 이에 더하여, 뉴클레오사이드 유사체 리바비린(ribavirin)은 HRSV 감염을 치료하기 위한 유일한 항바이러스제로서 승인되었으나, 제한된 효능을 갖는다. 따라서, 항-뉴모비리대 치료제에 대한 필요성이 존재한다.
바이러스 감염을 치료하는 데 유용한 피롤로[2,3-d]피리미딘 화합물의 예는 미국 특허출원공개 U.S. 2012/0009147 A1호(Cho et al), 미국 특허출원공개 U.S. 2012/0020921 A1호(Cho et al), 국제공개 WO 2008/089105 A2호(Babu et al), 국제공개 WO 2008/141079 A1호(Babu et al), 국제공개 WO 2009/132135 A1호(Butler et al), 국제공개 WO 2010/002877 A2호(Francom), 국제공개 WO 2011/035231 A1호(Cho et al), 국제공개 WO 2011/035250 A1호(Butler et al), 국제공개 WO 2011/150288 A1호(Cho et al), 국제공개 WO 2012/012465호(Cho et al), 국제공개 WO 2012/012776 A1호(Mackman et al), 국제공개 WO 2012/037038호(Clarke et al), 국제공개 WO 2012/087596 A1호(Delaney et al), 및 국제공개 WO 2012/142075 A1호(Girijavallabhan et al)에 기재되어 있다.
그러므로, 효과적이고 허용가능한 독성 프로파일을 갖는 뉴모비리대 바이러스 감염, 예컨대 HRSV 감염, 뎅기를 포함한 플라비비리대 감염, 및 EBOV 감염을 치료하기 위한 조성물 및 방법에 대한 필요성이 존재한다. 본 개시내용은 이들 및 다른 필요성을 해결한다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하며:
[화학식 (I)]
Figure pct00001
,
상기 화학식 (I)에서,
염기는
Figure pct00002
,
Figure pct00003
또는
Figure pct00004
이며;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 H 또는 -C(O)R1A이고, R1A는 C1-6 알킬이고;
R3은 -N(H)R3A이며;
R3A는 H, -CH2OP(O)(OH)2, 또는 -C(O)R3D이고,
R3D는 C3-6 사이클로알킬로 선택적으로 치환되는 C6-12 아릴 또는 C1-6 알킬이며;
R4A는 O이고;
R4B 및 R4C는 각각 독립적으로:
(A) -OH;
(B) -OR4B1 - 여기서 R4B1은 C6-12 아릴임 -;
(C)
Figure pct00005
, - 여기서
아래첨자 m은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이고;
각각의 R4D는 독립적으로 C1-6 알킬임 -;
(D)
Figure pct00006
, - 여기서
R4E1 및 R4E2는 각각 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이며;
R4F1 및 R4F2는 함께 옥소이고;
R4G는 1 내지 3개의 R4G1로 선택적으로 치환되는 C1-8 알킬, C3-8 사이클로알킬, 또는 1 내지 3개의 R4G3으로 선택적으로 치환되는 N, O 및 S로부터 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3 내지 8원 헤테로사이클릴이며;
각각의 R4G1은 독립적으로 -OH, C1-6 알콕시, -(CH2OCH2)1-5-CH3, C1-3 할로알킬, 또는 1 내지 3개의 R4G9로 선택적으로 치환되는 C3-8 사이클로알킬이고;
각각의 R4G3 및 R4G9는 독립적으로 C1-6 알킬임 -; 또는
(E) -(OP(O)(OH))1-2-OH이며;
R5A 및 R5B는 각각 독립적으로 -OP(O)(OH)2로 치환되는 C1-6 알킬이다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하며, 상기 화합물은
Figure pct00007
이다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 약학적 유효량의 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약학적 제형을 제공한다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 뉴모비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서 뉴모비리대 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료적 유효량의 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 피코르나비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서 피코르나비리대 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료적 유효량의 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 플라비비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서 플라비비리대 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료적 유효량의 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 필로비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서 필로비리대 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료적 유효량의 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 뉴모비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서의 뉴모비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제를 제조하는 방법을 제공하며, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 사용되는 것을 특징으로 한다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 피코르나비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서의 피코르나비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제를 제조하는 방법을 제공하며, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 사용되는 것을 특징으로 한다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 플라비비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서의 플라비비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제를 제조하는 방법을 제공하며, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 사용되는 것을 특징으로 한다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 필로비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서의 필로비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제를 제조하는 방법을 제공하며, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 사용되는 것을 특징으로 한다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 인간에서 뉴모비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제의 제조를 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 인간에서 피코르나비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제의 제조를 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 인간에서 플라비비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제의 제조를 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 인간에서 필로비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제의 제조를 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 뉴모비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서 뉴모비리대 바이러스 감염 치료에 사용하기 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 피코르나비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서 피코르나비리대 바이러스 감염 치료에 사용하기 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 플라비비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서 플라비비리대 바이러스 감염 치료에 사용하기 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 필로비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서 필로비리대 바이러스 감염 치료에 사용하기 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료적 유효량의 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 인간에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 호흡기 병태는 만성 폐쇄성 폐질환(chronic obstructive pulmonary disease)이다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 위한 약제를 제조하는 방법을 제공하며, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 사용되는 것을 특징으로 하고, 상기 호흡기 병태는 만성 폐쇄성 폐질환이다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 인간에서 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조를 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공하며, 상기 호흡기 병태는 만성 폐쇄성 폐질환이다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하며, 상기 호흡기 병태는 만성 폐쇄성 폐질환이다.
I. 일반
본 개시내용은 에볼라, 지카, 웨스트 나일(West Nile), 황열(Yellow Fever), 뎅기, HBV, HCV, RSV, 및 다른 것과 같은 바이러스 감염의 치료를 위한 2',3'-디하이드록시-4'-플루오로메틸 뉴클레오사이드 및 관련 화합물을 제공한다.
II. 정의
"알킬"은 선형 또는 분지형 포화된 1가 탄화수소이다. 예를 들어, 알킬기는 1 내지 10개의 탄소 원자(즉, C1-10 알킬) 또는 1 내지 8개의 탄소 원자(즉, C1-8 알킬) 또는 1 내지 6개의 탄소 원자(즉, C1-6 알킬) 또는 1 내지 4개의 탄소 원자(즉, C1-4 알킬)를 가질 수 있다. 알킬기의 예는 메틸(Me, -CH3), 에틸(Et, -CH2CH3), 1-프로필(n-Pr, n-프로필, -CH2CH2CH3), 2-프로필(i-Pr, i-프로필, -CH(CH3)2), 1-부틸(n-Bu, n-부틸, -CH2CH2CH2CH3), 2-메틸-1-프로필(i-Bu, i-부틸, -CH2CH(CH3)2), 2-부틸(s-Bu, s-부틸, -CH(CH3)CH2CH3), 2-메틸-2-프로필(t-Bu, t-부틸, -C(CH3)3), 1-펜틸(n-펜틸, -CH2CH2CH2CH2CH3), 2-펜틸(-CH(CH3)CH2CH2CH3), 3-펜틸(-CH(CH2CH3)2), 2-메틸-2-부틸(-C(CH3)2CH2CH3), 3-메틸-2-부틸(-CH(CH3)CH(CH3)2), 3-메틸-1-부틸(-CH2CH2CH(CH3)2), 2-메틸-1-부틸(-CH2CH(CH3)CH2CH3), 1-헥실(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-헥실(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-헥실(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-메틸-2-펜틸(-C(CH3)2CH2CH2CH3), 3-메틸-2-펜틸(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3), 4-메틸-2-펜틸(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2), 3-메틸-3-펜틸(-C(CH3)(CH2CH3)2), 2-메틸-3-펜틸(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-디메틸-2-부틸(-C(CH3)2CH(CH3)2), 3,3-디메틸-2-부틸(-CH(CH3)C(CH3)3, 및 옥틸(-(CH2)7CH3)을 포함하지만 이로 제한되지 않는다.
"알콕시"는 알킬 기를 부착점에 연결하는 산소 원자를 갖는 알킬 기를 지칭한다: 알킬-O-. 알킬기에 대해서와 같이, C1-6과 같은 알콕시기는 임의의 적합한 수의 탄소 원자를 가질 수 있다. 알콕시기는 예를 들어, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소-프로폭시, 부톡시, 2-부톡시, 이소-부톡시, sec-부톡시, tert-부톡시, 펜톡시, 헥속시 등을 포함한다. 알콕시기는 본원에 기재된 여러 가지 치환기로 추가로 치환될 수 있다. 알콕시기는 치환되거나 비치환될 수 있다.
"하이드록시"는 -OH를 지칭한다.
본원에 사용되는 "할로" 또는 "할로겐"은 플루오로(-F), 클로로(-Cl), 브로모(-Br) 및 요오도(-I)를 지칭한다.
본원에 사용되는 "할로알킬"은 알킬의 하나 이상의 수소 원자가 동일하거나 상이할 수 있는 할로 치환기에 의해 독립적으로 치환된 본원에 정의된 바와 같은 알킬을 지칭한다. 예를 들어, C1-4 할로알킬은 C1-4 알킬의 하나 이상의 수소 원자가 할로 치환기에 의해 대체된 C1-4 알킬이다. 할로알킬기의 예는 플루오로메틸, 플루오로클로로메틸, 디플루오로메틸, 디플루오로클로로메틸, 트리플루오로메틸, 1,1,1-트리플루오로에틸 및 펜타플루오로에틸을 포함하지만 이로 제한되지 않는다.
"사이클로알킬"은 3 내지 20개의 환상 탄소 원자(즉, C3-20 사이클로알킬), 예를 들어 3 내지 12개의 환상 원자, 예를 들어 3 내지 10개의 환상 원자, 또는 3 내지 8개의 환상 원자, 또는 3 내지 6개의 환상 원자, 또는 3 내지 5개의 환상 원자, 또는 3 내지 4개의 환상 원자를 갖는 단일 포화된 또는 부분 불포화된 전체 탄소 고리를 지칭한다. 용어 "사이클로알킬"은 또한, 다중 축합, 포화 및 부분 불포화된 전체 탄소 고리계(예를 들어, 2, 3 또는 4개의 카르보환식 고리를 포함하는 고리계)를 포함한다. 이에, 사이클로알킬은 다환식 카르보사이클, 예컨대 이환식 카르보사이클(예를 들어, 약 6 내지 12개의 환상 탄소 원자를 갖는 이환식 카르보사이클, 예컨대 비사이클로(bicyclo)[3.1.0]헥산 및 비사이클로[2.1.1]헥산), 및 다환식 카르보사이클(예를 들어 최대 약 20개의 환상 탄소 원자를 갖는 삼환식 및 사환식 카르보사이클)을 포함한다. 다중 축합 고리계의 고리는 원자가 요건이 허용하는 범위에서 융합, 스피로 및 브릿지형 결합을 통해 서로 연결될 수 있다. 단환식 사이클로알킬의 비제한적인 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 1-사이클로펜트-1-에닐, 1-사이클로펜트-2-에닐, 1-사이클로펜트-3-에닐, 사이클로헥실, 1-사이클로헥스-1-에닐, 1-사이클로헥스-2-에닐 및 1-사이클로헥스-3-에닐을 포함한다.
본원에 사용되는 "헤테로사이클릴", "헤테로사이클" 또는 "헤테로사이클로알킬"은 고리에 하나 이상의 헤테로원자(즉, 산소, 질소 및 황으로부터 선택되는 적어도 하나의 환상 헤테로원자)를 갖는 단일 포화 또는 부분 불포화 비방향족 고리 또는 비방향족 다중 고리계를 지칭한다. 달리 명시되지 않는 한, 헤테로사이클릴기는 3 내지 약 20개의 환상 원자, 예를 들어 3 내지 12개의 환상 원자, 예를 들어 3 내지 10개의 환상 원자, 또는 3 내지 8개의 환상 원자, 또는 3 내지 6개의 환상 원자, 또는 3 내지 5개의 환상 원자, 또는 4 내지 6개의 환상 원자, 또는 4 내지 5개의 환상 원자를 갖는다. 따라서, 상기 용어는 고리에 약 1 내지 6개의 환상 탄소 원자 및 산소, 질소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택되는 약 1 내지 3개의 환상 헤테로원자를 갖는 단일 포화 또는 부분 불포화 고리(예를 들어, 3원, 4원, 5원, 6원 또는 7원 고리)를 포함한다. 다중 축합 고리(예를 들어, 이환식 헤테로사이클릴)계의 고리는 원자가 요건이 허용하는 범위에서 융합, 스피로 및 브릿지형 결합을 통해 서로 연결될 수 있다. 헤테로사이클은 아제티딘, 아지리딘, 이미다졸리딘, 모르폴린, 옥시란(에폭사이드), 옥세탄, 티에탄, 피페라진, 피페리딘, 피라졸리딘, 피페리딘, 피롤리딘, 피롤리디논, 테트라하이드로푸란, 테트라하이드로티오펜, 디하이드로피리딘, 테트라하이드로피리딘, 퀴누클리딘, 2-옥사-6-아자스피로[3.3]헵탄-6-일, 6-옥사-1-아자스피로[3.3]헵탄-1-일, 2-티아-6-아자스피로[3.3]헵탄-6-일, 2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일, 2-아자비사이클로[3.1.0]헥산-2-일, 3-아자비사이클로[3.1.0]헥사닐, 2-아자비사이클로[2.1.1]헥사닐, 2-아자비사이클로[2.2.1]헵탄-2-일, 4-아자스피로[2.4]헵타닐, 5-아자스피로[2.4]헵타닐 등을 포함하지만 이로 제한되지 않는다.
본원에 사용되는 "아릴"은 단일 전체 탄소 방향족 고리, 또는 적어도 하나의 고리가 방향족인 다중 축합 전체 탄소 고리계를 지칭한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 아릴기는 6 내지 20개의 탄소 원자, 6 내지 14개의 탄소 원자, 또는 6 내지 12개의 탄소 원자를 갖는다. 아릴은 페닐 라디칼을 포함한다. 아릴은 또한 적어도 하나의 고리가 방향족인 약 9 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 다중 축합 고리계(예를 들어, 2, 3 또는 4개의 고리를 포함하는 고리계)를 포함하고, 다른 고리는 방향족 또는 비방향족일 수 있다(즉, 카르보사이클). 이러한 다중 축합 고리계는 상기 다중 축합 고리계의 임의의 카르보사이클 부분 상에서 하나 이상(예를 들어, 1, 2 또는 3개)의 옥소기로 선택적으로 치환된다. 다중 축합 고리계의 고리는 원자가 요건이 허용하는 범위에서 융합, 스피로 및 브릿지형 결합을 통해 서로 연결될 수 있다. 또한 소정의 원자-범위 구성원 아릴(예를 들어, 6원 내지 10원 아릴)이 언급될 때, 원자 범위는 아릴의 총 고리 원자에 대한 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 6원 아릴은 페닐을 포함할 것이며, 10원 아릴은 나프틸 및 1,2,3,4-테트라하이드로나프틸을 포함할 것이다. 아릴기의 비제한적인 예는 페닐, 인데닐, 나프틸, 1,2,3,4-테트라하이드로나프틸, 안트라세닐 등을 포함하지만 이로 제한되지 않는다.
본원에 사용되는 "헤테로아릴"은 고리에 탄소 이외의 하나 이상의 원자를 갖는 단일 방향족 고리를 지칭하며, 상기 원자는 산소, 질소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택되고; "헤테로아릴"은 또한 적어도 하나의 이러한 방향족 고리를 갖는 다중 축합 고리계를 포함하며, 상기 다중 축합 고리계는 이하에서 추가로 설명된다. 따라서, "헤테로아릴"은 약 1 내지 6개의 탄소 원자 및 산소, 질소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택되는 약 1 내지 4개의 헤테로원자의 단일 방향족 고리를 포함한다. 황 및 질소 원자는 고리가 방향족이면, 산화 형태로도 존재할 수 있다. 예시적인 헤테로아릴 고리계는 피리딜, 피리미디닐, 옥사졸릴 또는 푸릴을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. "헤테로아릴"은 또한 다중 축합 고리계(예를 들어, 2, 3 또는 4개의 고리를 포함하는 고리계)를 포함하며, 상기 정의된 바와 같은 헤테로아릴기는 헤테로아릴(예를 들어 1,8-나프티리디닐을 형성하기 위해), 헤테로사이클(예를 들어 1,2,3,4-테트라하이드로-1,8-나프티리디닐을 형성하기 위해), 카르보사이클(예를 들어 5,6,7,8-테트라하이드로퀴놀릴을 형성하기 위해) 및 아릴(예를 들어 인다졸릴을 형성하기 위해)로부터 선택되는 하나 이상의 고리와 축합되어 다중 축합 고리계를 형성한다. 그러므로, 헤테로아릴(단일 방향족 고리 또는 다중 축합 고리계)은 헤테로아릴 고리 내에 약 1 내지 20개의 탄소 원자 및 약 1 내지 6개의 헤테로원자를 갖는다. 이러한 다중 축합 고리계는 상기 축합 고리의 카르보사이클 또는 헤테로사이클 부분 상에서 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3 또는 4개)의 옥소기로 선택적으로 치환될 수 있다. 다중 축합 고리계의 고리는 원자가 요건이 허용하는 범위에서 융합, 스피로 및 브릿지형 결합을 통해 서로 연결될 수 있다. 다중 축합 고리계의 개별 고리는 서로에 대해 임의의 순서로 연결될 수 있음을 이해해야 한다. 헤테로아릴 또는 헤테로아릴 다중 축합 고리계에 대한 부착점은 탄소 원자 및 헤테로원자(예를 들어, 질소)를 포함하는 헤테로아릴 또는 헤테로아릴 다중 축합 고리계의 임의의 적절한 원자에 있을 수 있음을 이해해야 한다. 또한 특정 원자 범위 구성원 헤테로아릴(예를 들어, 5원 내지 10원 헤테로아릴)이 언급될 때, 상기 원자 범위는 헤테로아릴의 총 고리 원자에 대한 것이며, 탄소 원자 및 헤테로원자를 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 5원 헤테로아릴은 티아졸릴을 포함할 것이고, 10원 헤테로아릴은 퀴놀리닐을 포함할 것이다. 예시적인 헤테로아릴은 피리딜, 피롤릴, 피라지닐, 피리미디닐, 피리다지닐, 피라졸릴, 티에닐, 인돌릴, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 푸릴, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 퀴놀릴, 이소퀴놀릴, 벤조티아졸릴, 벤족사졸릴, 인다졸릴, 퀴녹살릴, 퀴나졸릴, 5,6,7,8-테트라하이드로이소퀴놀리닐 벤조푸라닐, 벤즈이미다졸릴, 티아나프테닐, 피롤로[2,3-b]피리디닐, 퀴나졸리닐-4(3H)-온, 트리아졸릴을 포함하지만 이로 제한되지 않는다.
"본 개시내용의 화합물"은 본원에 개시된 화합물을 포함하며, 예를 들어 본 개시내용의 화합물은 실시예의 화합물을 비롯하여, 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물을 포함한다.
"약학적 유효량"은 원하는 치료적 또는 약학적 결과를 제공하는 제형 또는 이의 조합 내 본 개시내용의 화합물의 양을 지칭한다.
"약학적으로 허용가능한 부형제"는 인간 또는 가축에 사용하기에 허용가능한 것으로 미국 식품의약국(United States Food and Drug Administration)에 의해 승인된 임의의 보조제, 담체, 부형제, 활택제(glidant), 감미제, 희석제, 보존제, 염료/착색제, 풍미 증강제, 계면활성제, 습윤제, 분산제, 현탁화제, 안정제, 등장제, 용매 또는 유화제를 포함하지만 이로 제한되지 않는다.
본원에 사용되는 "치료" 또는 "치료하다" 또는 "치료하는"은 유익하거나 원하는 결과를 얻기 위한 접근법을 지칭한다. 본 개시내용의 목적을 위해, 유익하거나 원하는 결과는 증상의 완화 및/또는 증상의 정도의 감소 및/또는 질환 또는 병태와 관련된 증상 악화의 예방을 포함하지만 이로 제한되지 않는다. 일 실시형태에서, "치료" 또는 "치료하는"은 하기 중 하나 이상을 포함한다: a) 질환 또는 병태를 저해하는 것(예를 들어, 질환 또는 병태로부터 기인하는 하나 이상의 증상을 저하시키는 것, 및/또는 질환 또는 병태의 정도를 약화시키는 것); b) 질환 또는 병태와 관련된 하나 이상의 증상의 발생을 늦추거나 정지시키는 것(예를 들어, 질환 또는 병태를 안정화시키고, 질환 또는 병태의 악화 또는 진행을 지연시키는 것); 및 c) 질환 또는 병태를 완화시키는 것, 예를 들어, 임상 증상의 퇴행을 야기하는 것, 질환 상태를 개선하는 것, 질환의 진행을 지연시키는 것, 삶의 질을 증가시키는 것, 및/또는 생존을 연장시키는 것.
"예방"은 바이러스 감염을 앓고 있는 환자에서 임상적 병의 진행을 방지하거나 지체시키는 것을 지칭한다.
본원에 사용되는 "치료적 유효량" 또는 "유효량"은 질환을 치료하기 위해 대상체에게 투여될 때, 질환의 이러한 치료에 영향을 미치기에 충분한 화합물의 양을 포함하여, 원하는 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는데 효과적인 양을 지칭한다. 유효량은 화합물, 질환, 및 이의 중증도 및 치료할 대상의 연령, 체중 등에 따라 달라질 것이다. 유효량은 다양한 양을 포함할 수 있다. 당업계에서 이해되는 바와 같이, 유효량은 하나 이상의 용량일 수 있으며, 즉, 원하는 치료 평가변수(endpoint)를 달성하기 위해 단일 용량 또는 다중 용량이 필요할 수 있다. 유효량은 하나 이상의 치료제를 투여하는 것에 비추어 고려될 수 있으며, 단일 제제는 하나 이상의 다른 제제와 병용하여 바람직하거나 유익한 결과가 달성될 수 있거나 달성되는 경우, 유효량으로 제공되는 것으로 간주될 수 있다. 임의의 공동-투여되는 화합물들의 적합한 용량은 화합물들의 조합된 작용(예를 들어, 상가적 또는 상승적 효과)으로 인해 선택적으로 낮아질 수 있다.
본원에 사용되는 "병용 투여"는 하나 이상의 추가의 치료제의 단위 용량의 투여 전후에 본원에 개시된 화합물의 단위 용량을 투여하는 것, 예를 들어 하나 이상의 추가의 치료제를 투여한 후 수초, 수분 또는 수시간 내에 본원에 개시된 화합물을 투여하는 것을 지칭한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물의 단위 용량이 먼저 투여되고, 이어서 수초 또는 수분 내에 하나 이상의 추가의 치료제의 단위 용량이 투여된다. 대안적으로, 다른 실시형태에서, 하나 이상의 추가의 치료제의 단위 용량이 먼저 투여되고, 이어서 수초 또는 수분 내에 본 개시내용의 화합물의 단위 용량이 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물의 단위 용량이 먼저 투여되고, 이어서 수시간(예를 들어, 1 내지 12시간) 후에 하나 이상의 추가의 치료제의 단위 용량이 투여된다. 다른 실시형태에서, 하나 이상의 추가의 치료제의 단위 용량이 먼저 투여되고, 이어서 수시간(예를 들어, 1 내지 12시간) 후에 본 개시내용의 화합물의 단위 용량이 투여된다. 본원에 개시된 화합물과 하나 이상의 추가적인 치료제의 공동-투여는 대체로 본원에 개시된 화합물과 하나 이상의 추가적인 치료제의 동시 또는 순차 투여를 지칭하며, 그에 따라 치료적 유효량의 각각의 제제가 환자의 신체에 존재하게 된다.
본원에 기재된 화합물의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물, 용매화물, 호변이성질체, 다형체 및 전구약물이 또한 제공된다. "약학적으로 허용가능한" 또는 "생리학적으로 허용가능한"은 수의학적 또는 인간 약학적 용도에 적합한 약학적 조성물을 제조하기에 유용한 화합물, 염, 조성물, 투여 형태 및 다른 물질을 지칭한다.
본원에 기재된 화합물은 약학적으로 허용가능한 염으로서 또는 적절한 경우 유리 염기로서 제조 및/또는 제형화될 수 있다. 약학적으로 허용가능한 염은 유리 염기의 원하는 약리학적 활성을 보유하는 화합물의 유리 염기 형태의 비독성 염이다. 이들 염은 무기 또는 유기산 또는 염기로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, 염기성 질소를 함유하는 화합물은 화합물을 무기산 또는 유기산과 접촉시켜 약학적으로 허용가능한 염으로서 제조될 수 있다. 약학적으로 허용가능한 염의 비제한적인 예는 설페이트, 피로설페이트, 비설페이트(bisulfate), 설파이트, 비설파이트, 포스페이트, 모노하이드로겐-포스페이트, 디하이드로겐포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트, 클로라이드, 브로마이드, 요오다이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포르메이트, 이소부티레이트, 카프로에이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 숙시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말레에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥신-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 설포네이트, 메틸설포네이트, 프로필설포네이트, 베실레이트, 자일렌설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, γ-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 타르트레이트 및 만델레이트를 포함한다. 다른 적절한 약학적으로 허용가능한 염의 목록은 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Lippincott Wiliams and Wilkins, Philadelphia, Pa., 2006]에서 발견된다.
본원에 개시된 화합물의 "약학적으로 허용가능한 염"의 예는 또한, 알칼리 금속(예를 들어, 나트륨, 칼륨), 알칼리 토금속(예를 들어, 마그네슘), 암모늄 및 NX4 +(여기서 X는 C1-C4 알킬임)와 같은 적절한 염기로부터 유래된 염을 포함한다. 나트륨염 또는 칼륨염과 같은 염기 부가염도 포함된다.
또한, 탄소 원자에 부착된 1 내지 n개의 수소 원자가 중수소 원자 또는 D로 치환될 수 있는 본원에 기재된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이성질체 또는 혼합물이 제공되며, 여기서 n은 분자의 수소 원자수이다. 당업계에 공지된 바와 같이, 중수소 원자는 수소 원자의 비방사성 동위원소이다. 이러한 화합물은 대사 저항성을 증가시킬 수 있으므로, 포유동물에게 투여되는 경우에 본원에 기재된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이성질체 또는 혼합물의 반감기를 증가시키는데 유용할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Foster, "Deuterium Isotope Effects in Studies of Drug Metabolism," Trends Pharmacol. Sci., 5(12):524-527 (1984)]을 참조한다. 이러한 화합물은 예를 들어 하나 이상의 수소 원자가 중수소에 의해 대체된 출발 물질을 이용하여 합성된다.
개시된 화합물 내로 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 또한 각각, 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 31P, 32P, 35S, 18F, 36Cl, 123I, 및 125I와 같은 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 불소, 염소 및 요오드의 동위원소를 포함한다. 11C, 18F, 15O 및 13N과 같은 양전자 방출 동위원소로의 치환은 기질 수용체 점유를 조사하기 위한 양전자 방출 단층촬영(PET) 연구에 유용할 수 있다. 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 동위원소-표지 화합물은 일반적으로 이전에 이용된 비표지된 시약 대신 적절한 동위원소-표지 시약을 사용하여 이하에 제시되는 실시예에 기재된 것과 유사한 과정에 의해 제조될 수 있다.
본원에 개시된 실시형태의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 하나 이상의 비대칭 중심을 함유할 수 있으므로, 절대 입체화학의 관점에서 (R)- 또는 (S)-, 또는 아미노산의 경우 (D)- 또는 (L)-로 정의될 수 있는 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 다른 입체이성질체를 야기할 수 있다. 본 개시내용은 모든 이러한가능한 입체이성질체뿐만 아니라, 이의 라세미체 및 광학적으로 순수한 형태를 포함하는 것을 의미한다. 광학 활성 (+) 및 (-), (R)- 및 (S)-, 또는 (D)- 및 (L) 이성질체는 키랄 신톤(chiral synthon) 또는 키랄 시약을 사용하여 제조되거나, 통상적인 기술, 예를 들어 크로마토그래피 및 분별 결정을 사용하여 분할될 수 있다. 개별 거울상이성질체의 제조/단리를 위한 통상적인 기술은 적절한 광학적으로 순수한 전구체로부터 키랄 합성, 또는 예를 들어, 키랄 고압 액체 크로마토그래피(HPLC)를 사용하여 라세미체(또는 염 또는 유도체의 라세미체)의 분리를 포함한다. 본원에 기재된 화합물이 올레핀 이중 결합 또는 다른 기하학적 비대칭 중심을 포함하는 경우, 그리고 달리 명시되지 않는 한, 화합물은 E 및 Z 기하 이성질체를 모두 포함하는 것으로 의도된다. 마찬가지로, 모든 호변이성질체도 포함되는 것으로 의도된다. 화합물이 이의 키랄형으로 표시되는 경우, 실시형태는 특정 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체가 풍부한 형태를 포함하지만 이로 제한되지 않는 것으로 이해된다. 키랄성이 특정되지 않았지만 존재하는 경우, 실시형태는 특정 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체가 풍부한 형태; 또는 이러한 화합물(들)의 라세미 혼합물 또는 스칼레미 혼합물(scalemic mixture)에 관한 것으로 이해된다. 본원에 사용되는 "스칼레미 혼합물"은 1:1 이외의 비율의 입체이성질체의 혼합물이다.
"라세미체"는 거울상이성질체의 혼합물을 지칭한다. 상기 혼합물은 동일한 또는 동일하지 않은 양의 각각의 거울상이성질체를 포함할 수 있다.
"입체이성질체" 및 "입체이성질체들"은 하나 이상의 입체중심의 키랄성이 상이한 화합물을 지칭한다. 입체이성질체는 거울상이성질체 및 부분입체이성질체를 포함한다. 화합물은 이것이 하나 이상의 비대칭 중심 또는 비대칭 치환을 갖는 이중 결합을 갖는다면 입체이성질체 형태로 존재할 수 있으며, 따라서 개별 입체이성질체로서 또는 혼합물로서 생성될 수 있다. 달리 지시되지 않는 한, 설명은 개별 입체이성질체뿐만 아니라 혼합물을 포함하고자 한다. 입체화학의 결정 및 입체이성질체의 분리 방법은 당업계에 잘 알려져 있다(예를 들어, 문헌[Chapter 4 of Advanced Organic Chemistry, 4th ed., J. March, John Wiley and Sons, New York, 1992] 참조).
"호변이성질체"는 양성자의 위치가 상이한 화합물의 대안적인 형태, 예컨대 엔올-케토 및 이민-엔아민 호변이성질체, 또는 고리 -NH-와 고리 =N- 둘 다에 부착된 고리 원자를 함유하는 헤테로아릴기의 호변이성질체 형태, 예컨대 피라졸, 이미다졸, 벤즈이미다졸, 트리아졸, 및 테트라졸을 지칭한다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용되는 모든 전문 용어 및 과학 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 화학기의 앞 또는 끝의 파선은 편의상 존재하고; 화학기는 이의 통상적인 의미를 잃지 않으면서 하나 이상의 파선과 함께 또는 파선 없이 도시될 수 있다. 구조에서 선을 통과하도록 그려진 파상선(wavy line)은 기의 부착 지점을 나타낸다. 파선(dashed line)은 선택적 결합을 나타낸다. 화학적으로 또는 구조적으로 필요하지 않는 한, 어떠한 방향성도, 화학기가 기재되는 순서 또는 화학기가 분자의 나머지에 부착되는 지점(point)에 의해 제시되거나 암시되지 않는다. 예를 들어, 기 "-SO2CH2-"는 "-CH2SO2-"와 동등하고, 둘 다 어느 방향으로나 연결될 수 있다. 유사하게는, "아릴알킬"기는 예를 들어, 기의 아릴 또는 알킬 부분에서 분자의 나머지에 부착될 수 있다. 접두사, 예컨대 "Cu-v" 또는 (Cu-Cv)는 하기 기가 u 내지 v개 탄소 원자를 가짐을 나타낸다. 예를 들어, "C1-6 알킬" 및 "C1-C6 알킬"은 둘 다 알킬기가 1 내지 6개의 탄소 원자를 가짐을 나타낸다.
본원에 사용되는 "용매화물"은 용매와 화합물의 상호작용의 결과를 지칭한다. 본원에 기재된 화합물의 염의 용매화물이 또한 제공된다. 본원에 기재된 화합물의 수화물이 또한 제공된다.
본원에 사용되는 "전구약물"은 인체에 투여될 때 일부 화학 또는 효소 경로에 따라 활성 약물로 전환되는 약물의 유도체를 지칭한다.
III. 화합물
본 개시내용은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 및 (In)의 화합물을 기재한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하며:
[화학식 (I)]
Figure pct00008
,
상기 화학식 (I)에서,
염기는
Figure pct00009
,
Figure pct00010
또는
Figure pct00011
이며;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 H 또는 -C(O)R1A이고, R1A는 C1-6 알킬이고;
R3은 -N(H)R3A이며;
R3A는 H, -CH2OP(O)(OH)2, 또는 -C(O)R3D이고,
R3D는 C3-6 사이클로알킬로 선택적으로 치환되는 C6-12 아릴 또는 C1-6 알킬이며;
R4A는 O이고;
R4B 및 R4C는 각각 독립적으로:
(A) -OH;
(B) -OR4B1 - 여기서 R4B1은 C6-12 아릴임 -;
(C)
Figure pct00012
- 여기서
아래첨자 m은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이고;
각각의 R4D는 독립적으로 C1-6 알킬임 -;
(D)
Figure pct00013
- 여기서
R4E1 및 R4E2는 각각 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이며;
R4F1 및 R4F2는 함께 옥소이고;
R4G는 1 내지 3개의 R4G1로 선택적으로 치환되는 C1-8 알킬, C3-8 사이클로알킬, 또는 1 내지 3개의 R4G3으로 선택적으로 치환되는 N, O 및 S로부터 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3 내지 8원 헤테로사이클릴이며;
각각의 R4G1은 독립적으로 -OH, C1-6 알콕시, -(CH2OCH2)1-5-CH3, C1-3 할로알킬, 또는 1 내지 3개의 R4G9로 선택적으로 치환되는 C3-8 사이클로알킬이고;
각각의 R4G3 및 R4G9는 독립적으로 C1-6 알킬임 -; 또는
(E) -(OP(O)(OH))1-2-OH이며;
R5A 및 R5B는 각각 독립적으로 -OP(O)(OH)2로 치환되는 C1-6 알킬이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I)로 표시될 수 있으며, 염기는
Figure pct00014
,
Figure pct00015
또는
Figure pct00016
이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I)로 표시될 수 있으며, 염기는
Figure pct00017
또는
Figure pct00018
이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I)로 표시될 수 있으며, 염기는
Figure pct00019
이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I)로 표시될 수 있으며, 염기는
Figure pct00020
이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I)로 표시될 수 있으며, 염기는
Figure pct00021
이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R1 및 R2가 각각 독립적으로 H 또는 -C(O)R1A이고, R1A가 C1-6 알킬인 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R1 및 R2가 각각 H인 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R1 및 R2가 각각 -C(O)R1A이고 R1A가 C1-6 알킬인 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R1 및 R2가 각각 -C(O)R1A이고; R1A가 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, sec-부틸 또는 t-부틸인 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R1 및 R2가 각각 -C(O)R1A이고; R1A가 메틸, 에틸, 또는 이소-프로필인 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (Ia)로 표시된다:
[화학식 (Ia)]
Figure pct00022
.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R3이 -N(H)R3A이며; R3A가 H, -CH2OP(O)(OH)2, 또는 -C(O)R3D이고 R3D가 C3-6 사이클로알킬로 선택적으로 치환되는 C6-12 아릴 또는 C1-6 알킬인 화학식 (I), (Ia), (Ib), 또는 (Ic)로 표시될 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R3A가 H인 화학식 (I), (Ia), (Ib), 또는 (Ic)로 표시될 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R3A가 -CH2OP(O)(OH)2인 화학식 (I), (Ia), (Ib), 또는 (Ic)로 표시될 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R3A가 -C(O)R3D이며 R3D가 C3-6 사이클로알킬로 선택적으로 치환되는 C6-12 아릴 또는 C1-6 알킬인 화학식 (I), (Ia), (Ib), 또는 (Ic)로 표시될 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R3A가 -C(O)R3D이며 R3D가 C3-6 사이클로알킬로 선택적으로 치환되는 페닐 또는 C1-3 알킬인 화학식 (I), (Ia), (Ib), 또는 (Ic)로 표시될 수 있다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R3이 -N(H)R3A이며; R3A가 H 또는 -C(O)R3D이고; R3D가 C3-6 사이클로알킬로 선택적으로 치환되는 페닐 또는 C1-3 알킬인 화학식 (Ia)로 표시될 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R3이 -NH2인 화학식 (Ia)로 표시될 수 있다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), 또는 (Id)로 표시될 수 있으며, R4B 및 R4C는 각각 독립적으로
(A) -OH;
(B) -OR4B1 - 여기서 R4B1은 C6-12 아릴임 -;
(C)
Figure pct00023
- 여기서
아래첨자 m은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이고;
각각의 R4D는 독립적으로 C1-6 알킬임 -;
(D)
Figure pct00024
- 여기서
R4E1 및 R4E2는 각각 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이며;
R4F1 및 R4F2는 함께 옥소이고;
R4G는 1 내지 3개의 R4G1로 선택적으로 치환되는 C1-8 알킬, C3-8 사이클로알킬, 또는 1 내지 3개의 R4G3으로 선택적으로 치환되는 N, O 및 S로부터 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3 내지 8원 헤테로사이클릴이며;
각각의 R4G1은 독립적으로 -OH, C1-6 알콕시, -(CH2OCH2)1-5-CH3, C1-3 할로알킬, 또는 1 내지 3개의 R4G9로 선택적으로 치환되는 C3-8 사이클로알킬이고;
각각의 R4G3 및 R4G9는 독립적으로 C1-6 알킬임 -; 또는
(E) -(OP(O)(OH))1-2-OH이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), 또는 (Id)로 표시될 수 있으며, R4B 및 R4C는 각각 독립적으로
(C)
Figure pct00025
- 여기서
아래첨자 m은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이고;
각각의 R4D는 독립적으로 C1-6 알킬임 -;
(D)
Figure pct00026
- 여기서
R4E1 및 R4E2는 각각 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이며;
R4F1 및 R4F2는 함께 옥소이고;
R4G는 1 내지 3개의 R4G1로 선택적으로 치환되는 C1-8 알킬, C3-8 사이클로알킬, 또는 1 내지 3개의 R4G3으로 선택적으로 치환되는 N, O 및 S로부터 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3 내지 8원 헤테로사이클릴이며;
각각의 R4G1은 독립적으로 -OH, C1-6 알콕시, -(CH2OCH2)1-5-CH3, C1-3 할로알킬, 또는 1 내지 3개의 R4G9로 선택적으로 치환되는 C3-8 사이클로알킬이고;
각각의 R4G3 및 R4G9는 독립적으로 C1-6 알킬임 -; 또는
(E) -(OP(O)(OH))1-2-OH이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), 또는 (Id)로 표시될 수 있으며, R4B 및 R4C는 각각 독립적으로
(A) -OH;
(B) -OR4B1 - 여기서 R4B1은 나프틸임 -;
(C)
Figure pct00027
- 여기서
아래첨자 m은 0 또는 1이며;
R4D는 C1-6 알킬임 -;
(D)
Figure pct00028
- 여기서
R4E1은 C1-3 알킬이며;
R4E2는 H이고;
R4F1 및 R4F2는 함께 옥소이고;
R4G는 1개의 R4G1로 선택적으로 치환되는 C1-8 알킬, C4-6 사이클로알킬, 또는 1개의 R4G3으로 선택적으로 치환되는 N 및 O로부터 선택되는 1개의 헤테로원자를 갖는 4 내지 6원 헤테로사이클릴이고;
각각의 R4G1은 독립적으로 -OH, C1-4 알콕시, -(CH2OCH2)1-2-CH3, C1-3 할로알킬, 또는 1개의 R4G9로 선택적으로 치환되는 C3-6 사이클로알킬이며;
각각의 R4G3 및 R4G9는 독립적으로 C1-3 알킬임 -; 또는
(E) -(OP(O)(OH))1-2-OH이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (Ih) 또는 (Ik)로 표시될 수 있으며, R4B는
(B) -OR4B1 - 여기서 R4B1은 나프틸임; 또는
(C)
Figure pct00029
- 여기서
아래첨자 m은 0 또는 1이며;
각각의 R4D는 독립적으로 t-부틸임 -; 또는
(E) -(OP(O)(OH))1-2-OH이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id) 또는 (If)로 표시될 수 있으며, R4C는
(A) -OH; 또는
(D)
Figure pct00030
이고, 여기서
R4E1은 메틸이며;
R4E2는 H이고;
R4F1 및 R4F2는 함께 옥소이며;
R4G는
각각 OH, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, CF3, Me(CH2OCH2)2-, 사이클로프로필 또는 1-메틸사이클로프로필로 선택적으로 치환되는, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 네오펜틸, n-헥산, 2,2-디메틸-부틸, 3,3-디메틸-부틸, 2-에틸-부틸, 또는 2-n-프로필-펜틸,
사이클로부틸, 사이클로펜틸, 또는 사이클로헥실,
각각 메틸, 에틸, n-프로필 또는 이소-프로필로 선택적으로 치환되는, 피롤리디닐, 옥세타닐, 또는 테트라하이드로피라닐이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R5A 및 R5B가 각각 독립적으로 -OP(O)(OH)2로 치환되는 C1-6 알킬인 화학식 (I), (Ib), 또는 (Ic)로 표시될 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R5A 및 R5B가 각각 독립적으로 -OP(O)(OH)2로 치환되는 C1-3 알킬인 화학식 (I), (Ib), 또는 (Ic)로 표시될 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R5B가 -CH2OP(O)(OH)2인 화학식 (I) 또는 (Ic)로 표시될 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R5A가 -CH2OP(O)(OH)2인 화학식 (I) 또는 (Ib)로 표시될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (Ib)로 표시되며:
[화학식 (Ib)]
Figure pct00031
,
상기 화학식 (Ib)에서, R3A는 H이고; R5A는 -CH2OP(O)(OH)2이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (Ic)로 표시되며:
[화학식 (Ic)]
Figure pct00032
,
상기 화학식 (Ic)에서, R3A는 H이고; R5B는 -CH2OP(O)(OH)2이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (Id)로 표시된다:
[화학식 (Id)]
Figure pct00033
.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (Ie)로 표시된다:
[화학식 (Ie)]
Figure pct00034
.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (If)로 표시된다:
[화학식 (If)]
Figure pct00035
.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (Ig)로 표시된다:
[화학식 (Ig)]
Figure pct00036
.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (Ih)로 표시된다:
[화학식 (Ih)]
Figure pct00037
.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (Ij)로 표시된다:
[화학식 (Ij)]
Figure pct00038
.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (Ik)로 표시된다:
[화학식 (Ik)]
Figure pct00039
.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (Im)으로 표시된다:
[화학식 (Im)]
Figure pct00040
.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id) 또는 (If)로 표시될 수 있으며, R4C는
Figure pct00041
이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id) 또는 (If)로 표시될 수 있으며, R4C는
Figure pct00042
이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id) 또는 (If)로 표시될 수 있으며, R4C는
Figure pct00043
이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은, R4G가 1 내지 3개의 R4G1로 선택적으로 치환되는 C1-8 알킬, C3-8 사이클로알킬, 또는 1 내지 3개의 R4G3으로 선택적으로 치환되는 N, O 및 S로부터 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3 내지 8원 헤테로사이클릴이며; 각각의 R4G1이 독립적으로 -OH, C1-6 알콕시, -(CH2OCH2)1-5-CH3, C1-3 할로알킬, 또는 1 내지 3개의 R4G9로 선택적으로 치환되는 C3-8 사이클로알킬이고; 각각의 R4G3 및 R4G9가 독립적으로 C1-6 알킬인 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있으며, R4G는
각각 OH, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, CF3, Me(CH2OCH2)2-, 사이클로프로필 또는 1-메틸사이클로프로필로 선택적으로 치환되는, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 네오펜틸, n-헥산, 2,2-디메틸-부틸, 3,3-디메틸-부틸, 2-에틸-부틸, 또는 2-n-프로필-펜틸,
사이클로부틸, 사이클로펜틸, 또는 사이클로헥실,
각각 메틸, 에틸, n-프로필 또는 이소-프로필로 선택적으로 치환되는, 피롤리디닐, 옥세타닐, 또는 테트라하이드로피라닐이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있으며, R4G는
Me(CH2OCH2)2-, 사이클로프로필 또는 1-메틸사이클로프로필로 선택적으로 치환되는 메틸,
부톡시로 선택적으로 치환되는 에틸,
메톡시로 선택적으로 치환되는 n-프로필,
이소-프로필, n-부틸,
OH, 메톡시 또는 CF3으로 선택적으로 치환되는 이소-부틸,
n-펜틸, 네오펜틸, n-헥산, 2,2-디메틸-부틸, 3,3-디메틸-부틸, 2-에틸-부틸, 2-n-프로필-펜틸,
사이클로부틸, 사이클로헥실,
N-메틸-피롤리디닐, 옥세타닐, 또는 테트라하이드로피라닐이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R4G가 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, n-펜틸, 네오펜틸, n-헥산, 2,2-디메틸-부틸, 3,3-디메틸-부틸, 2-에틸-부틸, 2-n-프로필-펜틸, 사이클로부틸, 사이클로헥실, N-메틸-피롤리디닐, 옥세타닐, 또는 테트라하이드로피라닐인 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R4G가 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, n-펜틸, 네오펜틸, n-헥산, 2,2-디메틸-부틸, 3,3-디메틸-부틸, 2-에틸-부틸, 또는 2-n-프로필-펜틸인 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R4G가 이소-프로필, n-헥산, 2,2-디메틸-부틸, 3,3-디메틸-부틸, 또는 2-에틸-부틸인 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R4G가 이소-프로필인 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R4G가 n-헥산인 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R4G가 2,2-디메틸-부틸인 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R4G가 3,3-디메틸-부틸인 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 R4G가 2-에틸-부틸인 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (Ia)로 표시될 수 있으며,
R1과 R2는 둘 다 H 또는 -C(O)R1A이고, R1A는 메틸, 에틸 또는 이소-프로필이며;
R3은 -NH2이고;
R4B는 -OPh이며;
R4C는
Figure pct00044
이고, 여기서
R4G는
각각 OH, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, CF3, Me(CH2OCH2)2-, 사이클로프로필 또는 1-메틸사이클로프로필로 선택적으로 치환되는, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 네오펜틸, n-헥산, 2,2-디메틸-부틸, 3,3-디메틸-부틸, 2-에틸-부틸, 또는 2-n-프로필-펜틸,
사이클로부틸, 사이클로펜틸, 또는 사이클로헥실,
각각 메틸, 에틸, n-프로필 또는 이소-프로필로 선택적으로 치환되는, 피롤리디닐, 옥세타닐, 또는 테트라하이드로피라닐이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (In)으로 표시되며:
[화학식 (In)]
Figure pct00045
상기 화학식 (In)에서,
R1과 R2는 둘 다 H 또는 -C(O)R1A이고, R1A는 메틸, 에틸 또는 이소-프로필이며;
R4G는
각각 OH, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, CF3, Me(CH2OCH2)2-, 사이클로프로필 또는 1-메틸사이클로프로필로 선택적으로 치환되는, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 네오펜틸, n-헥산, 2,2-디메틸-부틸, 3,3-디메틸-부틸, 2-에틸-부틸, 또는 2-n-프로필-펜틸,
사이클로부틸, 사이클로펜틸, 또는 사이클로헥실,
각각 메틸, 에틸, n-프로필 또는 이소-프로필로 선택적으로 치환되는, 피롤리디닐, 옥세타닐, 또는 테트라하이드로피라닐이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있으며, 상기 화합물은 표 1A, 표 1B, 표 1C 및 표 1D의 화합물로부터 선택된다.
[표 1A]
Figure pct00046
Figure pct00047
Figure pct00048
Figure pct00049
[표 1B]
Figure pct00050
Figure pct00051
Figure pct00052
Figure pct00053
Figure pct00054
[표 1C]
Figure pct00055
Figure pct00056
Figure pct00057
Figure pct00058
[표 1D]
Figure pct00059
Figure pct00060
Figure pct00061
Figure pct00062
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있으며, 상기 화합물은
Figure pct00063
,
Figure pct00064
,
Figure pct00065
,
Figure pct00066
,
Figure pct00067
,
Figure pct00068
,
Figure pct00069
,
Figure pct00070
,
Figure pct00071
,
Figure pct00072
,
Figure pct00073
또는
Figure pct00074
이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있으며, 상기 화합물은
Figure pct00075
이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있으며, 상기 화합물은
Figure pct00076
이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있으며, 상기 화합물은
Figure pct00077
이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있으며, 상기 화합물은
Figure pct00078
이다.
일부 실시형태에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)으로 표시될 수 있으며, 상기 화합물은
Figure pct00079
이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하며, 상기 화합물은
Figure pct00080
이다.
또한, 본원에 기재된 화합물의 생체내 대사 생성물은, 이러한 대사 생성물이 선행 기술에 비해 신규하고 자명하지 않은 정도까지 본원의 범위에 포함된다. 이러한 대사 생성물은 예를 들어, 주로 효소 과정으로 인해, 투여된 화합물의 산화, 환원, 가수분해, 아미드화, 에스테르화 등으로부터 발생될 수 있다. 따라서, 화합물을 이의 대사 생성물을 생성하기에 충분한 기간 동안 포유동물과 접촉시키는 것을 포함하는 방법에 의해 생성된 신규하고 자명하지 않은 화합물이 포함된다. 이러한 생성물은 전형적으로 방사성 표지(예를 들어, 14C 또는 3H) 화합물을 제조하고, 이를 검출가능한 용량(예를 들어, 약 0.5 mg/㎏ 초과)으로 래트, 마우스, 기니피그, 원숭이와 같은 동물에게 또는 사람에게 비경구 투여하고, 대사가 일어나기에 충분한 시간(전형적으로 약 30초 내지 30시간)을 주고, 소변, 혈액 또는 다른 생물학적 시료에서 이의 전환 생성물을 단리함으로써 식별된다. 이들 생성물은 표지되어 있기 때문에 용이하게 단리될 수 있다(다른 것은 대사 생성물에서 살아 남은 에피토프에 결합할 수 있는 항체를 사용하여 단리됨). 대사 생성물 구조는 통상적인 방식으로, 예를 들어 MS 또는 NMR 분석에 의해 결정된다. 일반적으로, 대사 생성물의 분석은 당업자에게 잘 알려진 통상적인 약물대사 연구와 동일한 방법으로 수행된다. 변환 생성물은 생체내에서 달리 발견되지 않는 한, 그 자체에 HSV 항바이러스 활성이 없더라도 화합물의 치료적 투여를 위한 진단 분석에 유용하다.
대용 위장 분비물(surrogate gastrointestinal secretion)에서 화합물의 안정성을 결정하는 처방 및 방법이 알려져 있다. 화합물은, 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션 시에 보호된 기의 약 50 몰% 미만이 대용 장액 또는 위액에서 탈보호되는 위장관에서 안정적인 것으로 본원에 정의되어 있다. 단순히, 화합물이 위장관에 안정적이기 때문에, 이들이 생체내에서 가수분해될 수 없음을 의미하지는 않는다. 전구약물은 전형적으로 소화기계에서 안정할 것이지만, 소화관 내강, 간, 폐 또는 기타 대사 장기에서, 또는 일반적으로 세포 내에서 모 약물로 실질적으로 가수분해될 수 있다. 본원에 사용되는 전구약물은 경구 전달에 대한 생물학적 장벽을 극복한 후에 모 약물을 효율적으로 유리시키도록 화학적으로 설계된 화합물인 것으로 이해된다.
IV. 약학적 제형
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 약학적 유효량의 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약학적 제형을 제공한다. 또한 약학적 유효량의 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 및 (In)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 및/또는 에스테르, 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약학적 제형이 본원에 제공된다.
본원의 화합물은 종래의 담체 및 부형제와 함께 제형화된다. 정제는 부형제, 활택제, 충전제, 결합제 등을 함유할 것이다. 수성 제형은 멸균 형태로 제조되고, 경구 투여 이외의 다른 투여에 의해 전달되도록 의도된 경우 일반적으로 등장성일 것이다. 모든 제형은 문헌["Handbook of Pharmaceutical Excipients" (1986)]에 제시된 것과 같은 부형제를 선택적으로 함유할 것이다. 부형제는 아스코르브산 및 다른 항산화제, 킬레이트제, 예컨대 EDTA, 탄수화물, 예컨대 덱스트란, 하이드록시알킬셀룰로스, 하이드록시알킬메틸셀룰로스, 스테아르산 등을 포함한다. 제형의 pH는 약 3 내지 약 11, 예를 들어 약 7 내지 10의 범위이다.
활성 성분이 단독으로 투여되는 것이 가능하긴 하지만, 상기 활성 성분을 약학적 제형으로서 제시하는 것이 바람직할 수 있다. 수의학 용도와 인간 용도 둘 다를 위한 제형은 상기 정의된 바와 같은 적어도 하나의 활성 성분을 하나 이상의 허용가능한 담체 및 선택적으로 다른 치료 성분, 특히 본원에 논의된 바와 같은 추가 치료 성분과 함께 포함한다. 담체(들)는 제형의 다른 성분과 상용성이고 이의 수혜자에게 생리학적으로 무해하다는 의미에서 "허용 가능"해야 한다.
제형은 전술한 투여 경로에 적합한 것을 포함한다. 제제는 편의상 단위 투여 형태로 제시될 수 있으며, 임의의 적합한 방법에 의해 제조될 수 있다. 기법 및 제형은 일반적으로 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA)]에서 발견된다. 이러한 방법은 활성 성분을, 하나 이상의 보조 성분을 이루는 담체와 회합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은 활성 성분을 액체 담체 또는 미분 고체 담체 또는 둘 다와 균일하고 밀접하게 회합시킨 다음, 필요에 따라 생성물을 형상화시킴으로써 제조된다.
경구 투여에 적합한 제형은, 각각이 예정된 양의 활성 성분을 함유하는 캡슐, 사세(cachet) 또는 정제와 같은 별개 단위로서; 분말 또는 과립으로서; 수성 또는 비-수성 액체 중 용액 또는 현탁액으로서; 또는 수중유 액체 에멀젼 또는 유중수 액체 에멀젼으로서 제시될 수 있다. 활성 성분은 또한 볼루스, 연약(electuary) 또는 페이스트로서 투여될 수 있다.
정제는 선택적으로 하나 이상의 보조 성분과 함께 압축 또는 성형에 의해 제조된다. 압축 정제는 분말 또는 과립과 같은 자유-유동 형태의 활성 성분을 적합한 기계에서 압축시키고, 선택적으로 결합제, 윤활제, 불활성 희석제, 보존제, 표면 활성 또는 분산 제제와 혼합함으로써 제조될 수 있다. 주형정(molded tablet)은 불활성 액체 희석제로 습윤화된 분말화된 활성 성분의 혼합물을 적합한 기계에서 성형함으로써 제조될 수 있다. 정제는 선택적으로 코팅되거나 스코어링(score)될 수 있고, 선택적으로 이로부터 활성 성분의 느린 또는 제어 방출을 제공하도록 제형화된다.
눈 또는 다른 외부 조직, 예를 들어 입 및 피부의 감염의 경우, 제형은 바람직하게는 예를 들어, 0.075 내지 20% w/w(0.1% w/w, 예컨대 0.6% w/w, 0.7% w/w 등의 증가분으로 0.1% 내지 20% 범위의 활성 성분(들)을 포함함), 바람직하게는 0.2 내지 15% w/w, 가장 바람직하게는 0.5 내지 10% w/w 양의 활성 성분(들)을 함유하는 국소 연고 또는 크림으로서 적용된다. 연고로 제형화될 때, 활성 성분은 파라핀 또는 수-혼화성 연고 베이스와 함께 이용될 수 있다. 대안적으로, 활성 성분은 수중유 크림 베이스와 함께 크림으로 제형화될 수 있다.
원한다면, 크림 베이스의 수성상은 예를 들어, 적어도 30% w/w의 다가 알코올, 즉, 2개 이상의 하이드록실기를 갖는 알코올, 예컨대 프로필렌 글리콜, 부탄 1,3-디올, 만니톨, 소르비톨, 글리세롤 및 폴리에틸렌 글리콜(PEG 400 포함) 및 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 국소 제형은 바람직하게는, 피부 또는 다른 영향을 받는 영역을 통한 활성 성분의 흡수 또는 침투를 증강시키는 화합물을 포함할 수 있다. 이러한 피부 침투 증강제의 예는 디메틸 설폭사이드 및 관련 유사체를 포함한다.
에멀젼의 유성상은 기지의 방식으로 기지의 성분으로부터 이루어질 수 있다. 상(phase)이 단지 유화제(다르게는 여과촉진제(emulgent)로 알려져 있음)를 포함할 수 있는 한편, 상기 상은 바람직하게는 지방 또는 오일과 또는 지방과 오일 둘 다와 적어도 하나의 유화제의 혼합물을 포함한다. 바람직하게는, 친수성 유화제는 안정화제로서 작용하는 친유성 유화제와 함께 포함된다. 오일과 지방을 둘 다 포함하는 것이 또한 바람직하다. 종합하자면, 유화제(들)는 안정화제(들)와 함께 또는 없이 소위 유화 왁스를 이루며, 왁스는 오일 및 지방과 함께 소위 유화 연고 베이스를 이루고, 이는 크림 제형의 유성 분산상을 형성한다.
제형에 사용하기에 적합한 여과촉진제 및 에멀젼 안정화제는 Tween® 60, Span® 80, 세토스테아릴 알코올, 벤질 알코올, 미리스틸 알코올, 글리세릴 모노-스테아레이트 및 소듐 라우릴 설페이트를 포함한다.
제형에 적합한 오일 또는 지방의 선택은 원하는 미용학적 특성을 달성하는 것에 기초한다. 크림은 바람직하게는 튜브 또는 다른 용기로부터의 누출을 피하기 위해 적합한 일관성(consistency)을 갖는, 기름지지 않으며(non-greasy), 비-오염성이고 세척가능한 생성물이어야 한다. 직쇄 또는 분지쇄, 일염기성 또는 이염기성 알킬 에스테르, 예컨대 디-이소아디페이트, 이소세틸 스테아레이트, 코코넛 지방산의 프로필렌 글리콜 디에스테르, 이소프로필 미리스테이트, 데실 올레에이트, 이소프로필 팔미테이트, 부틸 스테아레이트, 2-에틸헥실 팔미테이트 또는 Crodamol CAP으로 알려진 분지쇄 에스테르의 배합물이 사용될 수 있으며, 마지막 3개가 바람직한 에스테르이다. 이들은 필요한 특성에 따라 단독으로 또는 조합되어 사용될 수 있다. 대안적으로, 고 용융점 지질, 예컨대 백색 연질 파라핀 및/또는 액체 파라핀 또는 다른 미네랄 오일이 사용된다.
본원에서 약학적 제형은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제 및 선택적으로 다른 치료제와 함께 조합을 포함한다. 활성 성분을 함유하는 약학적 제형은 의도된 투여 방법에 적합한 임의의 형태일 수 있다. 경구용으로 사용하는 경우, 예를 들어 정제, 트로키(troche), 로젠지(lozenge), 수성 또는 오일 현탁액, 분산가능한 분말 또는 과립, 에멀젼, 경질 또는 연질 캡슐, 용액, 시럽 또는 엘릭시르(elixir)가 제조될 수 있다. 경구용으로 의도된 조성물은 약학적 조성물의 임의의 제조 방법에 따라 제조될 수 있으며, 이러한 조성물은 입에 맞는 조제물을 제공하기 위해 감미제, 풍미제, 착색제 및 보존제를 포함한 하나 이상의 제제를 함유할 수 있다. 정제의 제조에 적합한 무독성의 약학적으로 허용가능한 부형제와 혼합된 활성 성분을 함유하는 정제가 허용 가능하다. 이들 부형제는 예를 들어, 불활성 희석제, 예컨대 칼슘 또는 소듐 카르보네이트, 락토스, 칼슘 또는 소듐 포스페이트; 과립화제 및 붕해제, 예컨대 옥수수 전분, 또는 알긴산; 결합제, 예컨대 전분, 젤라틴 또는 아카시아; 및 윤활제, 예컨대 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 또는 활석(talc)일 수 있다. 정제는 코팅되지 않을 수 있거나, 위장관에서의 붕해 및 흡착을 지연시킴으로써 장기간에 걸쳐 지속적인 작용을 제공하기 위해 마이크로캡슐화를 포함하는 공지된 기술에 의해 코팅될 수 있다. 예를 들어, 시간 지연 물질, 예컨대 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트는 단독으로 또는 왁스와 함께 이용될 수 있다.
경구용 제형은 또한, 활성 성분이 불활성 고체 희석제, 예를 들어 칼슘 포스페이트 또는 카올린과 혼합되는 경질 젤라틴 캡슐로서, 또는 활성 성분이 물 또는 오일 배지, 예컨대 땅콩유, 액체 파라핀 또는 올리브유와 혼합되는 연질 젤라틴 캡슐로서 제시될 수 있다.
수성 현탁액은 이러한 수성 현탁액의 제조에 적합한 부형제와 혼합된 활성 물질을 함유한다. 이러한 부형제는 현탁제, 예컨대 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 소듐 알기네이트, 폴리비닐피롤리돈, 검 트라가칸트 및 검 아카시아, 및 분산제 또는 습윤제, 예컨대 천연-발생 포스파타이드(예를 들어, 레시틴), 알킬렌 옥사이드와 지방산의 축합 생성물(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트), 에틸렌 옥사이드와 장쇄 지방족 알코올의 축합 생성물(예를 들어, 헵타데카에틸렌옥시세타놀), 에틸렌 옥사이드 및 지방산과 헥시톨 무수물로부터 유래되는 부분 에스테르의 축합 생성물(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트)을 포함한다. 수성 현탁액은 또한, 하나 이상의 보존제, 예컨대 에틸 또는 n-프로필 p-하이드록시벤조에이트, 하나 이상의 착색제, 하나 이상의 풍미제 및 하나 이상의 감미제, 예컨대 수크로스 또는 사카린을 함유할 수 있다.
오일 현탁액은 활성 성분을 식물성 오일, 예컨대 땅콩유(arachis oil), 올리브유, 참기름 또는 코코넛유, 또는 미네랄 오일, 예컨대 액체 파라핀에 현탁시킴으로써 제형화될 수 있다. 경구 현탁액은 증점제, 예컨대 밀랍, 경질 파라핀 또는 세틸 알코올을 함유할 수 있다. 감미제, 예컨대 상기 제시된 것, 및 풍미제가 첨가되어, 입맛에 맞는 경구 조제물을 제공할 수 있다. 이들 조성물은 항산화제, 예컨대 아스코르브산의 첨가에 의해 보존될 수 있다.
물의 첨가에 의한 수성 현탁액의 제조에 적합한 분산가능한 분말 및 과립은 분산제 또는 습윤제, 현탁제, 및 하나 이상의 보존제와 혼합된 활성 성분을 제공한다. 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제는 상기 개시된 것에 의해 예시된다. 추가 부형제, 예를 들어 감미제, 풍미제 및 착색제가 또한 존재할 수 있다.
약학적 조성물은 수중유 에멀젼의 형태로 존재할 수 있다. 유성상은 식물성 오일, 예컨대 올리브유 또는 땅콩유, 미네랄 오일, 예컨대 액체 파라핀, 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 적합한 유화제는 천연-발생 검, 예컨대 검 아카시아 및 검 트라가칸트, 천연-발생 포스파타이드, 예컨대 대두 레시틴, 지방산과 헥시톨 무수물로부터 유래되는 에스테르 또는 부분 에스테르, 예컨대 소르비탄 모노올레에이트, 및 이들 부분 에스테르와 에틸렌 옥사이드의 축합 생성물, 예컨대 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트를 포함한다. 에멀젼은 또한 감미제 및 풍미제를 함유할 수 있다. 시럽 및 엘릭시르는 감미제, 예컨대 글리세롤, 소르비톨 또는 수크로스와 함께 제형화될 수 있다. 이러한 제형은 또한 완화제(demulcent), 보존제, 풍미제 또는 착색제를 함유할 수 있다.
약학적 조성물은 멸균 주사 또는 정맥 조제물, 예컨대 멸균 주사 수성 또는 유성 현탁액의 형태로 존재할 수 있다. 이러한 현탁액은 상기 언급되었던 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제를 사용하여 기지의 당업계에 따라 제형화될 수 있다. 멸균 주사 또는 정맥 조제물은 또한, 무독성의 비경구적으로 허용가능한 희석제 또는 용매 중 멸균 주사가능한 용액 또는 현탁액, 예컨대 1,3-부탄-디올 중 용액일 수 있거나 동결건조된 분말로서 제조될 수 있다. 이용될 수 있는 허용가능한 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액 및 등장성 소듐 클로라이드 용액이 있다. 이에 더하여, 멸균 고정유(fixed oil)가 통상적으로 용매 또는 현탁 매질로서 이용될 수 있다. 이러한 목적을 위해, 합성 모노글리세라이드 또는 디글리세라이드를 포함한 임의의 블랜드 고정유가 이용될 수 있다. 이에 더하여, 지방산, 예컨대 올레산이 마찬가지로 주사제의 제조에 사용될 수 있다.
단일 투여 형태를 생성하기 위해 담체 물질과 병용될 수 있는 활성 성분의 양은 치료되는 숙주 및 특정 투여 방식에 따라 다양할 것이다. 예를 들어, 인간에게의 경구 투여용으로 의도된 시간-방출 제형은, 총 조성물의 약 5% 내지 약 95%(중량:중량)로 다양할 수 있는 적절하고 편리한 양의 담체 물질과 화합된 대략 1 내지 1000 mg의 활성 물질을 함유할 수 있다. 약학적 조성물은 투여를 위해 쉽게 측정가능한 양을 제공하도록 제조될 수 있다. 예를 들어, 정맥 주입용으로 의도된 수용액은, 약 30 mL/hr의 속도로 적합한 부피의 주입이 일어날 수 있도록 하기 위해 용액 밀리리터당 약 3 내지 500 ㎍의 활성 성분을 함유할 수 있다.
눈에의 국소 투여에 적합한 제형은 또한 점안액을 포함하며, 활성 성분은 적합한 담체, 특히 활성 성분용 수성 용매에 용해되거나 현탁된다. 활성 성분은 바람직하게는 이러한 제형에 0.5 내지 20% w/w, 유리하게는 0.5 내지 10% w/w, 특히 약 1.5% w/w의 농도로 존재한다.
입에서의 국소 투여에 적합한 제형은 풍미 베이스, 통상 수크로스 및 아카시아 또는 트라가칸트에 활성 성분을 포함하는 로젠지; 불활성 베이스, 예컨대 젤라틴 및 글리세린, 또는 수크로스 및 아카시아에 활성 성분을 포함하는 패스틸(pastille); 및 적합한 액체 담체에 활성 성분을 포함하는 구강청결제를 포함한다.
직장 투여용 제형은 예를 들어 코코아 버터 또는 살리실레이트를 포함하는 적합한 베이스와 함께 좌제로서 제시될 수 있다.
폐내 또는 비강 투여에 적합한 제형은 예를 들어 0.1 내지 500 미크론, 예컨대 0.5, 1, 30, 35 미크론 등의 입자 크기를 가지며, 이는 비강 통과를 통한 신속한 흡입에 의해 또는 입을 통한 흡입에 의해 투여되어 폐포 소낭에 도달한다. 적합한 제형은 활성 성분의 수성 또는 유성 용액을 포함한다. 에어로졸 또는 건조 분말 투여에 적합한 제형은 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있고, 다른 치료제, 예컨대 아래 기재된 바와 같은 뉴모비리대 감염의 치료 또는 예방에 사용되는 전술된 화합물과 함께 전달될 수 있다.
또 다른 실시형태는 뉴모비리대 감염 및 잠재적으로 관련된 세기관지염(bronchiolitis)을 치료하는 데 적합한 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 신규하며, 효능이 있고, 안전하며, 비자극성이고 생리학적으로 상용성인 흡입가능한 조성물을 제공한다. 바람직한 약학적으로 허용가능한 염은 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 설페이트 또는 포스페이트 염을 포함한 무기산 염인데, 이들은 폐 자극을 덜 야기할 수 있기 때문이다. 바람직하게는, 흡입가능한 제형은 약 1 내지 약 5 μm의 공기역학 질량 중위 직경(MMAD: mass median aerodynamic diameter)을 갖는 입자를 포함하는 에어로졸에서 기관지내(endobronchial) 공간으로 전달된다. 바람직하게는, 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물은 분무기(nebulizer), 가압 계량 용량 흡입기(pMDI: pressurized metered dose inhaler), 또는 건조 분말 흡입기(DPI)를 사용한 에어로졸 전달용으로 제형화된다.
분무기의 비제한적인 예는 애토마이징(atomizing), 제트(jet), 초음파, 가압, 진동 다공성 플레이트, 또는 적응 에어로졸 전달(adaptive aerosol delivery) 기술을 활용하는 분무기를 포함한 동등한 분무기를 포함한다(문헌[Denyer, J. Aerosol medicine Pulmonary Drug Delivery 2010, 23 Supp 1, S1-S10]). 제트 분무기는 기압을 활용하여, 액체 용액을 에어로졸 액적으로 분리시킨다. 초음파 분무기는 액체를 작은 에어로졸 액적으로 전단시키는 압전 결정(piezoelectric crystal)에 의해 작동한다. 가압 분무 시스템(pressurized nebulization system)은 용액을 압력 하에 작은 공극(pore)을 통해 힘을 가하여, 에어로졸 액적으로 발생시킨다. 진동 다공성 플레이트 장치는 신속 진동을 활용하여, 액체 스트림을 적절한 액적 크기로 전단시킨다.
바람직한 실시형태에서, 분무용 제형은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물의 제형을 필요한 MMAD의 입자 내로 에어로졸화할 수 있는 분무기를 사용하여, 주로 약 1 μm 내지 약 5 μm의 MMAD를 갖는 입자를 포함하는 에어로졸에서 기관지내 공간으로 전달된다. 최적으로 치료적으로 효과적이기 위해 그리고 상기도 및 전신 부작용을 피하기 위해, 대부분의 에어로졸화된 입자는 약 5 μm 초과의 MMAD를 갖지 않아야 한다. 에어로졸이 5 μm 초과의 MMAD를 갖는 입자를 상당수 함유한다면, 입자는 상기도에 침착되어 하기도의 염증 및 기관지수축 부위에 전달되는 약물의 양이 저하된다. 에어로졸의 MMAD가 약 1 μm 미만이라면, 입자는 흡입된 공기 중에 부유한 채로 남아 있는 경향이 있고 후속적으로 호기(expiration) 중에 토출된다.
본원의 방법에 따라 제형화되고 전달될 때, 분무용 에어로졸 제형은 뉴모비리대 감염을 치료하기에 충분한 치료적 유효 용량의 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물을 뉴모비리대 감염 부위로 전달한다. 투여되는 약물의 양은 치료적 유효 용량의 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물의 전달 효율을 반영하도록 조정될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 애토마이징, 제트, 가압, 진동 다공성 플레이트, 또는 초음파 분무기와 수성 에어로졸 제형의 조합은 분무기에 따라, 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물의 투여되는 용량 중 적어도 약 20% 내지 약 90%, 전형적으로 약 70%가 기도 내로 전달되는 것을 가능하게 한다. 바람직한 실시형태에서, 활성 화합물 중 적어도 약 30% 내지 약 50%가 전달된다. 더 바람직하게는, 활성 화합물 중 약 70% 내지 약 90%가 전달된다.
또 다른 실시형태에서, 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 건조한 흡입가능한 분말로서 전달된다. 화합물은 건조 분말 또는 계량 용량 흡입기를 사용하여 화합물의 미세 입자를 기관지내 공간 내로 효과적으로 전달하기 위해 건조 분말 제형으로서 기관지내로 투여된다. DPI에 의한 전달을 위해, 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물은 밀링 분무 건조, 임계 유체 가공, 또는 용액으로부터의 침전에 의해 주로 약 1 μm 내지 약 5 μm의 MMAD를 갖는 입자로 가공된다. 약 1 μm 내지 약 5 μm의 MMAD를 갖는 입자 크기를 생성할 수 있는 미디어 밀링(media milling), 제트 밀링 및 분무-건조 장치 및 절차는 당업계에 잘 알려져 있다. 일 실시형태에서, 부형제는 필요한 크기의 입자로 가공되기 전에 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물에 첨가된다. 또 다른 실시형태에서, 부형제는 예를 들어 락토스를 부형제로서 사용함으로써 약물 입자의 분산에 일조하기 위해 필요한 크기의 입자와 배합된다.
입자 크기 결정은 당업계에 잘 알려진 장치를 사용하여 이루어진다. 예를 들어 다단계 앤더슨(Anderson) 캐스케이드 임팩터 또는 계량 용량 및 건조 분말 흡입기 내의 에어로졸을 특징화하는 장치로서 미국 약전 601장에 구체적으로 인용된 것과 같은 다른 적합한 방법.
또 다른 바람직한 실시형태에서, 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물은 건조 분말 흡입기 또는 다른 건조 분말 분산 장치와 같은 장치를 사용하여 건조 분말로서 전달된다. 건조 분말 흡입기 및 장치의 비제한적인 예는 미국 특허 제5,458,135호; 미국 특허 제5,740,794호; 미국 특허 제5775320호; 미국 특허 제5,785,049호; 미국 특허 제3,906,950호; 미국 특허 제4,013,075호; 미국 특허 제4,069,819호; 미국 특허 제4,995,385호; 미국 특허 제5,522,385호; 미국 특허 제4,668,218호; 미국 특허 제4,667,668호; 미국 특허 제4,805,811 및 미국 특허 제5,388,572호에 개시된 것을 포함한다. 2개의 주요 디자인의 건조 분말 흡입기가 존재한다. 하나의 디자인은, 약물용 저장소가 장치 내에 위치하고 환자가 약물 용량을 흡입 챔버 내로 첨가하는 계량 장치이다. 두번째 디자인은, 각각의 개별 용량이 별개의 용기에서 제작된 공장-계량(factory-metered) 장치이다. 시스템 둘 다 1 μm 내지 약 5 μm의 MMAD의 작은 입자로의 약물의 제형화에 의존하고, 종종 락토스와 같으나 이로 제한되지 않는 더 큰 부형제 입자와 함께 공동제형화를 수반한다. 약물 분말은 흡입 챔버에 놓이고(장치 계량에 의해 또는 공장-계량 투입의 파손(breakage)에 의해), 환자의 흡기 유동은 장치 밖으로 그리고 구강 내로 분말을 가속시킨다. 분말 경로의 비-층류(non-laminar flow) 특징은 부형제-약물 응집체의 분해를 야기하고, 큰 부형제 입자의 덩어리는 목구멍 뒤쪽에서 충돌을 일으키는 한편, 더 작은 약물 입자는 폐 깊숙이 침착된다. 바람직한 실시형태에서, 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 본원에 기재된 바와 같은 건조 분말 흡입기의 유형을 사용하여 건조 분말로서 전달되며, 임의의 부형제를 배제한 건조 분말의 MMAD는 주로 1 μm 내지 약 5 μm 범위이다.
또 다른 실시형태에서, 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물은 계량 용량 흡입기를 사용하여 건조 분말로서 전달된다. 계량 용량 흡입기 및 장치의 비제한적인 예는 미국 특허 제5,261,538호; 미국 특허 제5,544,647호; 미국 특허 제5,622,163호; 미국 특허 제4,955,371호; 미국 특허 제3,565,070호; 미국 특허 제3,361306호 및 미국 특허 제6,116,234호에 개시된 것을 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 계량 용량 흡입기를 사용하여 건조 분말로서 전달되며, 임의의 부형제를 배제한 건조 분말의 MMAD는 주로 약 1 μm 내지 약 5 μm 범위이다.
질내 투여에 적합한 제형은 활성 성분에 더하여 당업계에서 적절한 것으로 알려진 바와 같은 질 좌약(pessary), 탐폰, 크림, 젤, 페이스트, 폼(foam) 또는 스프레이 제형으로 제시될 수 있다.
비경구 투여에 적합한 제형은, 항산화제, 완충제, 정균제 및 제형을 의도된 수혜자의 혈액과 등장성이 되게 하는 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비-수성 멸균 주사액; 및 현탁제 및 증점제를 포함할 수 있는 수성 및 비-수성 멸균 현탁액을 포함한다.
제형은 단위-용량 또는 다중-용량 용기, 예를 들어 밀봉된 앰플 및 바이얼에 제시되고, 사용 직전에 멸균 액체 담체, 예를 들어 주사용수의 첨가만 필요로 하는 냉동-건조된(동결건조된) 상태로 저장될 수 있다. 즉석 주사 용액 및 현탁액은 이전에 기재된 종류의 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조된다. 바람직한 단위 투여 제형은 본원 상기에서 언급된 바와 같은 1일 용량 또는 단위 1일 하위용량의 활성 성분을 함유하는 것 또는 이의 적절한 분획이다.
특히 상기 언급된 성분에 더하여, 제형은 해당 제형의 유형에 관한 측면을 갖는 당업계에서 통상적인 다른 제제를 포함할 수 있으며, 예를 들어 경구 투여에 적합한 것은 풍미제를 포함할 수 있는 것으로 이해되어야 한다.
나아가, 수의학적 담체와 함께 상기 정의된 바와 같은 적어도 하나의 활성 성분을 포함하는 수의학적 조성물이 제공된다.
수의학적 담체는 조성물을 투여하는 데 유용한 물질이고, 다르게는 수의학 분야에서 불활성이거나 허용 가능하고 활성 성분과 상용성인 고체, 액체 또는 기체 물질일 수 있다. 이들 수의학적 조성물은 경구, 비경구 또는 임의의 다른 원하는 경로에 의해 투여될 수 있다.
본원의 화합물은 하나 이상의 화합물을 활성 성분으로서 함유하는 제어 방출 약학적 제형("제어 방출 제형")을 제공하는 데 사용되고, 소정의 활성 성분의 덜 빈번한 투여를 가능하게 하기 위해 또는 약동학적 또는 독성 프로파일을 향상시키기 위해 상기 활성 성분의 방출은 제어되고 조절된다.
활성 성분의 유효 용량은 적어도 치료되는 병태의 성질, 독성, 화합물이 예방적으로(더 낮은 용량) 또는 활성 바이러스 감염에 대하여 사용된 것인지의 여부, 전달 방법, 및 약학적 제형에 의존하고, 종래의 용량 상승 연구를 사용하여 임상의에 의해 결정될 것이다. 이는 일당 약 0.0001 내지 약 100 mg/㎏ 체중; 전형적으로 일당 약 0.01 내지 약 10 mg/㎏ 체중; 더 전형적으로 일당 약 0.01 내지 약 5 mg/㎏ 체중; 가장 전형적으로 일당 약 0.05 내지 약 0.5 mg/㎏ 체중인 것으로 예상될 수 있다. 예를 들어, 대략 체중이 70 ㎏인 성인에 대한 1일 후보 용량은 1 mg 내지 1000 mg, 바람직하게는 5 mg 내지 500 mg 범위일 것이고, 단일 또는 다중 용량의 형태를 가질 수 있다.
V. 투여 경로
화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물(본원에서 활성 성분으로 지칭됨) 중 하나 이상은 치료될 병태에 적합한 임의의 경로에 의해 투여된다. 적합한 경로는 경구, 직장, 비강, 폐, 국소(협측 및 설하 포함), 질내 및 비경구(피하, 근육내, 정맥내, 피내, 척추강내 및 경막외 포함) 등을 포함한다. 바람직한 경로는 예를 들어, 수용자의 상태에 따라 달라질 수 있음을 이해할 것이다. 본원의 화합물의 이점은 이들이 경구로 생체이용 가능하고 경구 투여될 수 있다는 점이다.
본 개시내용의 화합물(본 명세서에서 활성 성분으로도 지칭됨)은 치료될 병태에 적합한 임의의 경로에 의해 투여될 수 있다. 적합한 경로는 경구, 직장, 비강, 국소(협측 및 설하 포함), 경피, 질내 및 비경구(피하, 근육내, 정맥내, 피내, 척추강내 및 경막외 포함) 등을 포함한다. 바람직한 경로는 예를 들어, 수용자의 상태에 따라 달라질 수 있음을 이해할 것이다. 본원에 개시된 소정의 화합물의 이점은 이들이 경구로 생체이용 가능하고 경구 투여될 수 있다는 점이다.
본 개시내용의 화합물은 원하는 기간 또는 지속기간 동안, 예컨대 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 6개월 또는 적어도 약 12개월 이상 동안 효과적인 투여 계획에 따라 개체에게 투여될 수 있다. 한 변형에서, 화합물은 개인의 수명 동안 매일 또는 간헐적 스케쥴로 투여된다.
본 개시내용의 화합물의 투여량 또는 투여 빈도는 투여하는 의사의 판단에 기초하여 치료 과정에 걸쳐 조정될 수 있다.
화합물은 유효량으로 개체(예를 들어, 인간)에게 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물은 1일 1회 투여된다.
화합물은 임의의 유용한 경로 및 수단에 의해, 예컨대 경구 또는 비경구(예를 들어, 정맥내) 투여에 의해 투여될 수 있다. 화합물의 치료적 유효량은 일(day)당 약 0.00001 mg/㎏ 체중 내지 일당 약 10 mg/㎏ 체중, 예컨대 일당 약 0.0001 mg/㎏ 체중 내지 일당 약 10 mg/㎏ 체중, 또는 예컨대 일당 약 0.001 mg/㎏ 체중 내지 일당 약 1 mg/㎏ 체중, 또는 예컨대 일당 약 0.01 mg/㎏ 체중 내지 일당 약 1 mg/㎏ 체중, 또는 예컨대 일당 약 0.05 mg/㎏ 체중 내지 일당 약 0.5 mg/㎏ 체중, 또는 예컨대 일당 약 0.3 mg 내지 약 30 mg, 또는 예컨대 일당 약 30 mg 내지 약 300 mg을 포함할 수 있다.
본 개시내용의 화합물은 본 발명의 화합물의 임의의 투여량으로 하나 이상의 추가의 치료제와 병용될 수 있다(예를 들어, 1 mg 내지 1000 mg의 화합물). 치료적 유효량은 용량당 약 1 mg 내지 용량당 약 1000 mg, 예컨대 용량당 약 50 mg 내지 용량당 약 500 mg, 또는 예컨대 용량당 약 100 mg 내지 용량당 약 400 mg, 또는 예컨대 용량당 약 150 mg 내지 용량당 약 350 mg, 또는 예컨대 용량당 약 200 mg 내지 용량당 약 300 mg을 포함할 수 있다. 본 개시내용의 화합물의 다른 치료적 유효량은 용량당 약 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475 또는 약 500 mg이다. 본 개시내용의 화합물의 다른 치료적 유효량은 용량당 약 100 mg, 또는 용량당 약 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 350, 400, 450 또는 약 500 mg이다. 단일 용량은 시간, 일 또는 주 단위로 투여될 수 있다. 예를 들어, 단일 용량은 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 6시간, 8시간, 12시간, 16시간마다 1회, 또는 24시간마다 1회 투여될 수 있다. 단일 용량은 또한 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일마다 1회, 또는 7일마다 1회 투여될 수 있다. 단일 용량은 또한 1주, 2주, 3주마다 1회, 또는 4주마다 1회 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 단일 용량은 매주 1회 투여될 수 있다. 단일 용량은 또한 매월 1회 투여될 수 있다.
본 개시내용의 화합물의 다른 치료적 유효량은 용량당 약 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 약 100 mg이다.
본 개시내용의 화합물의 투여 빈도는 개별 환자의 필요성에 의해 결정될 것이며, 예를 들어 일당 1회 또는 일당 2회 또는 그 초과일 수 있다. 화합물의 투여는 바이러스 감염을 치료하는 데 필요한 기간 동안 계속된다. 예를 들어, 화합물은 바이러스로 감염된 사람에게 20일 내지 180일의 기간 동안, 또는 예를 들어, 20일 내지 90일의 기간 동안, 또는 예를 들어 30일 내지 60일의 기간 동안 투여될 수 있다.
투여는 간헐적일 수 있으며, 수일 이상의 기간 동안 환자는 1일 용량의 본 개시내용의 화합물을 투여받고, 뒤이어 수일 이상의 기간 동안 환자는 1일 용량의 화합물을 투여받지 않는다. 예를 들어, 환자는 화합물의 용량을 격일로, 또는 주당 3회 투여받을 수 있다. 다시 예로서, 환자는 화합물의 용량을 1일 내지 14일의 기간 동안 매일 투여받을 수 있고, 뒤이어 환자는 화합물의 용량을 7일 내지 21일의 기간 동안 투여받지 않고, 뒤이어 환자는 화합물의 1일 용량을 후속 기간(예를 들어, 1일 내지 14일) 동안 다시 투여받는다. 화합물의 투여에 뒤이은 화합물의 비-투여의 교대 기간은 환자를 치료하기 위해 임상적으로 필요한 바와 같이 반복될 수 있다.
일 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4개, 1 또는 2개, 1 내지 3개, 또는 1 내지 4개)의 추가 치료제, 및 약학적으로 허용가능한 부형제와 조합하여 포함하는 약학적 조성물이 제공된다.
일 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4개, 1 또는 2개, 1 내지 3개, 또는 1 내지 4개)의 추가 치료제와 조합하여 포함하는 키트가 제공된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 1, 2, 3, 4개 이상의 추가 치료제와 병용된다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 2개의 추가 치료제와 병용된다. 다른 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 3개의 추가 치료제와 병용된다. 추가 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 4개의 추가 치료제와 병용된다. 1개, 2개, 3개, 4개 또는 그 초과의 추가적인 치료제는 동일한 부류의 치료제로부터 선택되는 상이한 치료제일 수 있고/있거나, 상이한 부류의 치료제로부터 선택될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물이 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 추가 치료제와 병용되는 경우, 조성물의 구성요소는 동시적 또는 순차적 체계로 투여된다. 순차 투여되는 경우, 병용은 2회 이상의 투여로 투여될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물은 환자에게 동시 투여를 위한 단위 투여 형태로, 예를 들어 경구 투여를 위한 고체 투여 형태로 하나 이상의 추가 치료제와 병용된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물은 하나 이상의 추가 치료제와 공동투여된다.
본 개시내용의 화합물의 효과를 연장시키기 위해, 피하 또는 근육내 주사로부터의 화합물의 흡수를 느리게 하는 것이 종종 바람직하다. 이는 불량한 수용성을 갖는 결정질 또는 비정질 물질의 액체 현탁액의 사용에 의해 달성될 수 있다. 그 후에, 화합물의 흡수 속도는 이의 용해 속도에 의존하며, 이는 결국 결정 크기 및 결정질 형태에 의존할 수 있다. 대안적으로, 비경구 투여된 화합물 형태의 지연된 흡수는 화합물을 오일 비히클에 용해시키거나 현탁시킴으로써 달성된다. 주사가능한 데폿(depot) 형태는 폴리락타이드-폴리글리콜라이드와 같은 생분해성 중합체에서 화합물의 마이크로인캡슐(microencapsule) 매트릭스를 형성함으로써 제조된다. 화합물 대 중합체의 비 및 이용되는 특정 중합체의 성질에 따라, 화합물의 방출 속도가 제어될 수 있다. 다른 생분해성 중합체의 예는 폴리(오르토에스테르) 및 폴리(무수물)을 포함한다. 또한, 데폿 주사 제형은 신체 조직과 상용성인 리포솜 또는 마이크로에멀젼에 화합물을 봉입함으로써 제조된다.
VI. 병용 요법
또한, 본원에 제공된 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물 및 조성물은 바이러스 감염, 예컨대 뉴모비리대, 피코르나비리대, 플라비비리대, 또는 필로비리대 바이러스 감염의 치료를 위해 다른 활성 치료제와 병용된다.
뉴모비리대 의 치료를 위한 병용 요법
본원에 제공된 화합물 및 조성물은 또한 다른 활성 치료제와 병용된다. 뉴모비리대 바이러스 감염의 치료를 위해, 바람직하게는, 다른 활성 치료제는 뉴모비리대 바이러스 감염, 특히 호흡기 세포융합 바이러스 감염 및/또는 메타뉴모바이러스 감염에 대해 활성이다. RSV에 대해 활성인 이들 다른 활성 치료제의 비제한적인 예는 리바비린(ribavirin), 팔리비주맙, 모타비주맙(motavizumab), RSV-IGIV(RespiGam®), MEDI-557, A-60444(RSV604로도 알려져 있음), MDT-637, BMS-433771, ALN-RSV0, ALX-0171 및 이들의 혼합물이다. 호흡기 세포융합 바이러스 감염에 대해 활성인 다른 활성 치료제의 다른 비제한적인 예는 호흡기 세포융합 바이러스 단백질 F 저해제, 예컨대 AK-0529; RV-521, ALX-0171, JNJ-53718678, BTA-585, 및 프레사토비르(presatovir); RNA 중합효소 저해제, 예컨대 루미시타빈(lumicitabine) 및 ALS-8112; 항-RSV G 단백질 항체, 예컨대 항-G-단백질 mAb; 바이러스 복제 저해제, 예컨대 니타족사나이드(nitazoxanide)를 포함한다.
일부 실시형태에서, 다른 활성 치료제는 MVA-BN RSV, RSV-F, MEDI-8897, JNJ-64400141, DPX-RSV, SynGEM, GSK-3389245A, GSK-300389-1A, RSV-MEDI 델타M2-2 백신, VRC-RSVRGP084-00VP, Ad35-RSV-FA2, Ad26-RSV-FA2, 및 RSV 융합 당단백질 하위단위 백신을 포함하지만 이로 제한되지 않는, RSV의 치료 또는 방지를 위한 백신일 수 있다.
메타뉴모바이러스 감염에 대해 활성인 다른 활성 치료제의 비제한적인 예는 시알리다제 조절제, 예컨대 DAS-181; RNA 중합효소 저해제, 예컨대 ALS-8112; 및 메타뉴모바이러스 감염의 치료를 위한 항체, 예컨대 EV-046113을 포함한다.
일부 실시형태에서, 다른 활성 치료제는 mRNA-1653 및 rHMPV-Pa 백신을 포함하지만 이로 제한되지 않는 메타뉴모바이러스 감염의 치료 또는 방지를 위한 백신일 수 있다.
피코르나비리대 의 치료를 위한 병용 요법
본원에 제공된 화합물 및 조성물은 또한 다른 활성 치료제와 병용된다. 피코르나비리대 바이러스 감염의 치료를 위해, 바람직하게는, 다른 활성 치료제는 피코르나비리대 바이러스 감염, 특히 엔테로바이러스(Enterovirus) 감염에 대해 활성이다. 이들 다른 활성 치료제의 비제한적인 예는 캡시드 결합 저해제, 예컨대 플레코나릴(pleconaril), BTA-798(바펜다비르(vapendavir)) 및 Wu 등(미국 특허 제7,078,403호) 및 Watson(미국 특허 제7,166,604호)에 의해 개시된 다른 화합물; 융합 시알리다제 단백질, 예컨대 DAS-181; 캡시드 단백질 VP1 저해제, 예컨대 VVX-003 및 AZN-001; 바이러스 프로테아제 저해제, 예컨대 CW-33; 포스파티딜이노시톨 4 키나제 베타 저해제, 예컨대 GSK-480 및 GSK-533; 항-EV71 항체이다.
일부 실시형태에서, 다른 활성 치료제는 EV71 백신, TAK-021, 및 EV-D68 아데노벡터-기초 백신을 포함하지만 이로 제한되지 않는 피코르나비리대 바이러스 감염의 치료 또는 방지를 위한 백신일 수 있다.
호흡기 감염에 대한 병용 요법
뉴모비리대 및 피코르나비리대 바이러스의 감염의 대부분은 호흡기 감염이다. 따라서, 감염의 호흡기 증상 및 후유증을 치료하는 데 사용되는 추가 활성 치료제는 본원에 제공된 화합물과 병용될 수 있다. 추가 제제는 바람직하게는 경구로 또는 직접 흡입에 의해 투여된다. 예를 들어, 바이러스 호흡기 감염의 치료를 위해 본원에 제공된 화합물과 병용되는 다른 바람직한 추가 치료제는 기관지 확장제 및 코르티코스테로이드를 포함하지만 이로 제한되지 않는다.
글루코코르티코이드
1950년에 천식 요법으로서 최초로 도입된 글루코코르티코이드(문헌[Carryer, Journal of Allergy, 21, 282-287, 1950])가 이 질환에 대한 가장 강력하고 일관적으로 효과적인 요법으로 남아 있긴 하지만, 이의 작용 기전은 아직 완전히 이해되지 않고 있다(문헌[Morris, J. Allergy Clin. Immunol., 75 (1 Pt) 1-13, 1985]). 안타깝게도, 경구 글루코코르티코이드 요법은 뚜렷한 바람직하지 못한 부작용, 예컨대 몸통 비만(truncal obesity), 고혈압, 녹내장, 당불내성(glucose intolerance), 백내장 형성의 가속화, 골 미네랄 손실(bone mineral loss), 및 심리학적 효과와 관련이 있으며, 이들은 모두 장기간 치료제로서의 이의 용도를 제한한다(문헌[Goodman and Gilman, 10th edition, 2001]). 전신 부작용에 대한 해결책은 스테로이드 약물을 염증 부위에 직접 전달하는 것이다. 흡입된 코르티코스테로이드(ICS)는 경구 스테로이드의 중증 이상반응을 경감시키기 위해 개발되어 왔다. 본원에 제공된 화합물과 병용하여 사용될 수 있는 코르티코스테로이드의 비제한적인 예는 덱사메타손, 덱사메타손 소듐 포스페이트, 플루오로메톨론, 플루오로메톨론 아세테이트, 로테프레드놀(loteprednol), 로테프레드놀 에타보네이트(etabonate), 하이드로코르티손, 프레드니솔론, 플루드로코르티손(fludrocortisone), 트리암시놀론(triamcinolone), 트리암시놀론 아세토나이드, 베타메타손, 베클로메타손 디프로프리오네이트(beclomethasone diproprionate), 메틸프레드니솔론, 플루오시놀론(fluocinolone), 플루오시놀론 아세토나이드, 플루니솔라이드(flunisolide), 플루오코르틴-21-부틸레이트, 플루메타손, 플루메타손 피발레이트, 부데소나이드(budesonide), 할로베타솔 프로피오네이트, 모메타손 푸로에이트, 플루티카손(fluticasone), AZD-7594, 시클레소나이드(ciclesonide); 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염이다.
항염증제
항염증성 캐스케이드 기전을 통해 작동하는 다른 항염증제가 또한, 바이러스 호흡기 감염의 치료를 위해 본원에 제공된 화합물과 병용되는 추가 치료제로서 유용하다. 포스포디에스테라제 저해제(예를 들어 PDE-4, PDE-5, 또는 PDE-7 특이적), 전사 인자 저해제(예를 들어 IKK 저해를 통해 NFκB를 차단함), 또는 키나제 저해제(예를 들어 P38 MAP, JNK, PI3K, EGFR 또는 Syk를 차단함)와 같은 "항염증성 신호 전달 조절제"(이러한 맥락에서 AISTM으로 지칭됨)의 적용은 이러한 저분자가 제한된 수의 공통 세포내 경로 - 항염증성 치료 중재에 결정적인 지점(point)인 신호 전달 경로 - 를 표적화하기 때문에 염증을 차단하는 논리적 접근법이다(P.J. Barnes, 2006에 의한 리뷰를 참조). 이들 비제한적인 추가 치료제는 하기를 포함한다: 5-(2,4-디플루오로-페녹시)-1-이소부틸-1H-인다졸-6-카르복실산(2-디메틸아미노-에틸)-아미드(P38 Map 키나제 저해제 ARRY-797); 3-사이클로프로필메톡시-N-(3,5-디클로로-피리딘-4-일)-4-디플루오로메톡시-벤즈아미드(PDE-4 저해제 로플루밀라스트(Roflumilast)); 4-[2-(3-사이클로펜틸옥시-4-메톡시페닐)-2-페닐-에틸]-피리딘(PDE-4 저해제 CDP-840); N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-4-(디플루오로메톡시)-8-[(메틸설포닐)아미노]-1-디벤조푸란카르복사미드(PDE-4 저해제 오글레밀라스트(oglemilast)); N-(3,5-디클로로-피리딘-4-일)-2-[1-(4-플루오로벤질)-5-하이드록시-1H-인돌-3-일]-2-옥소-아세타미드(PDE-4 저해제 AWD 12-281); 8-메톡시-2-트리플루오로메틸-퀴놀린-5-카르복실산(3,5-디클로로-1-옥시-피리딘-4-일)-아미드(PDE-4 저해제 Sch 351591); 4-[5-(4-플루오로페닐)-2-(4-메탄설피닐-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-피리딘(P38 저해제 SB-203850); 4-[4-(4-플루오로-페닐)-1-(3-페닐-프로필)-5-피리딘-4-일-1H-이미다졸-2-일]-부트-3-인-1-올(P38 저해제 RWJ-67657); 4-시아노-4-(3-사이클로펜틸옥시-4-메톡시-페닐)-사이클로헥산카르복실산 2-디에틸아미노-에틸 에스테르(실로밀라스트(cilomilast)의 2-디에틸-에틸 에스테르 전구약물, PDE-4 저해제); (3-클로로-4-플루오로페닐)-[7-메톡시-6-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-4-일]-아민(게피티닙(gefitinib), EGFR 저해제); 및 4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-N-[4-메틸-3-(4-피리딘-3-일-피리미딘-2-일아미노)-페닐]-벤즈아미드(이마티닙(imatinib), EGFR 저해제).
β2-아드레날린 수용체 작용제 기관지 확장제
흡입되는 β2-아드레날린 수용체 작용제 기관지 확장제, 예컨대 포르모테롤(formoterol), 알부테롤(albuterol) 또는 살메테롤(salmeterol)을 본원에 제공된 화합물과 함께 포함하는 조합 또한, 호흡기 바이러스 감염의 치료에 유용한 적합하지만 비제한적인 조합이다.
흡입되는 β2-아드레날린 수용체 작용제 기관지 확장제, 예컨대 포르모테롤 또는 살메테롤과 ICS의 병용은 또한 기관지 수축과 염증을 둘 다 치료하는 데 사용된다(각각 Symbicort® 및 Advair®). 이들 ICS 및 β2-아드레날린 수용체 작용제 조합을 본원에 제공된 화합물과 함께 포함하는 조합 또한, 호흡기 바이러스 감염의 치료에 유용한 적합하지만 비제한적인 조합이다.
베타 2 아드레날린 수용체 작용제의 다른 예는 베도라드린(bedoradrine), 빌란테롤(vilanterol), 인다카테롤(indacaterol), 올로다테롤(olodaterol), 툴로부테롤(tulobuterol), 포르모테롤(formoterol), 아베디테롤(abediterol), 살부타몰(salbutamol), 아르포르모테롤(arformoterol), 레발부테롤(levalbuterol), 페노테롤(fenoterol), 및 TD-5471이다.
항콜린제
폐 기관지 수축의 치료 또는 예방을 위해, 항콜린제는 잠재적인 용도를 갖고, 따라서 바이러스 호흡기 감염의 치료를 위해 본원에 제공되는 화합물과 병용되는 추가 치료제로서 유용하다. 이들 항콜린제는 COPD에서 콜린성 톤(cholinergic tone)의 제어를 위해 인간에서 치료 효능을 보여준 무스카린성 수용체(특히 M3 아형)의 길항제(Witek, 1999); 1-{4-하이드록시-1-[3,3,3-트리스-(4-플루오로-페닐)-프로피오닐]-피롤리딘-2-카르보닐}-피롤리딘-2-카르복실산(1-메틸-피페리딘-4-일메틸)-아미드; 3-[3-(2-디에틸아미노-아세톡시)-2-페닐-프로피오닐옥시]-8-이소프로필-8-메틸-8-아조니아-비사이클로[3.2.1]옥탄(이프라트로퓸-N,N-디에틸글리시네이트); 1-사이클로헥실-3,4-디하이드로-1H-이소퀴놀린-2-카르복실산 1-아자-비사이클로[2.2.2]옥트-3-일 에스테르(솔리페나신(Solifenacin)); 2-하이드록시메틸-4-메탄설피닐-2-페닐-부티르산 1-아자-비사이클로[2.2.2]옥트-3-일 에스테르(레바트로페이트(Revatropate)); 2-{1-[2-(2,3-디하이드로-벤조푸란-5-일)-에틸]-피롤리딘-3-일}-2,2-디페닐-아세타미드(다리페나신(Darifenacin)); 4-아제판-1-일-2,2-디페닐-부티르아미드(부제파이드(Buzepide)); 7-[3-(2-디에틸아미노-아세톡시)-2-페닐-프로피오닐옥시]-9-에틸-9-메틸-3-옥사-9-아조니아-트리사이클로[3.3.1.02,4]노난(옥시트로퓸-N,N-디에틸글리시네이트); 7-[2-(2-디에틸아미노-아세톡시)-2,2-디-티오펜-2-일-아세톡시]-9,9-디메틸-3-옥사-9-아조니아-트리사이클로[3.3.1.02,4]노난(티오트로퓸-N,N-디에틸글리시네이트); 디메틸아미노-아세트산 2-(3-디이소프로필아미노-1-페닐-프로필)-4-메틸-페닐 에스테르(톨테로딘-N,N-디메틸글리시네이트); 3-[4,4-비스-(4-플루오로-페닐)-2-옥소-이미다졸리딘-1-일]-1-메틸-1-(2-옥소-2-피리딘-2-일-에틸)-피롤리디늄; 1-[1-(3-플루오로-벤질)-피페리딘-4-일]-4,4-비스-(4-플루오로-페닐)-이미다졸리딘-2-온; 1-사이클로옥틸-3-(3-메톡시-1-아자-비사이클로[2.2.2]옥트-3-일)-1-페닐-프로프-2-인-1-올; 3-[2-(2-디에틸아미노-아세톡시)-2,2-디-티오펜-2-일-아세톡시]-1-(3-페녹시-프로필)-1-아조니아-비사이클로[2.2.2]옥탄(아클리디늄-N,N-디에틸글리시네이트); 또는 (2-디에틸아미노-아세톡시)-디-티오펜-2-일-아세트산 1-메틸-1-(2-페녹시-에틸)-피페리딘-4-일 에스테르; 레베페나신(revefenacin), 글리코피로늄 브로마이드, 우메클리디늄 브로마이드, 티오트로퓸 브로마이드, 아클리디늄 브로마이드, 벤사이클로퀴듐 브로마이드를 포함하지만 이로 제한되지 않는다.
점액용해제
본원에 제공된 화합물 및 본원에 제공된 조성물은 또한, 호흡기 감염의 감염과 증상을 둘 다 치료하기 위해 점액용해제와 병용될 수 있다. 점액용해제의 비제한적인 예는 암브록솔(ambroxol)이다. 유사하게는, 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물은 호흡기 감염의 감염과 증상을 둘 다 치료하기 위해 거담제(expectorant)와 병용될 수 있다. 거담제의 비제한적인 예는 과이페네신(guaifenesin)이다.
분무화된 고장성 식염수(nebulized hypertonic saline)는 폐 질환을 갖는 환자에서 소기도(small airway)의 즉각적이고 장기간의 청소율(clearance)을 향상시키는 데 사용된다(문헌[Kuzik, J. Pediatrics 2007, 266]). 그러므로, 본원에 제공된 화합물은 또한 특히 뉴모비리대 바이러스 감염이 세기관지염과 합병증으로 될 때, 분무화된 고장성 식염수와 병용될 수 있다. 화학식 (I) 또는 화학식 (II)의 화합물과 고장성 식염수의 조합은 또한 상기 논의된 임의의 추가 치료제를 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 분무화된 약 3% 고장성 식염수가 사용된다.
COPD의 치료를 위한 병용 요법
본원에 제공된 화합물 및 조성물은 또한 다른 활성 치료제와 병용된다. COPD의 호흡기 악화의 치료를 위해, 다른 활성 치료제는 COPD에 대한 다른 활성물을 포함한다. 이들 다른 활성 치료제의 비제한적인 예는 항-IL5 항체, 예컨대 벤랄리주맙(benralizumab), 메폴리주맙(mepolizumab); 디펩티딜 펩티다제 I(DPP1) 저해제, 예컨대 AZD-7986(INS-1007); DNA 기라제(gyrase) 저해제/토포이소머라제 IV 저해제, 예컨대 시프로플록사신(ciprofloxacin) 하이드로클로라이드; MDR 관련 단백질 4/포스포디에스테라제(PDE) 3 및 4 저해제, 예컨대 RPL-554; CFTR 자극제, 예컨대 이바카프토르(ivacaftor), QBW-251; MMP-9/MMP-12 저해제, 예컨대 RBx-10017609; 아데노신 A1 수용체 길항제, 예컨대 PBF-680; GATA 3 전사 인자 저해제, 예컨대 SB-010; 무스카린성 수용체 조절제/니코틴성 아세틸콜린 수용체 작용제, 예컨대 ASM-024; MARCKS 단백질 저해제, 예컨대 BIO-11006; 키트 티로신(kit tyrosine) 키나제/PDGF 저해제 예컨대 마시티닙(masitinib); 포스포디에스테라제(PDE) 4 저해제, 예컨대 로플루밀라스트, CHF-6001; 포스포이노시타이드-3 키나제 델타 저해제, 예컨대 네미랄리십(nemiralisib); 5-리폭시게나제 저해제, 예컨대 TA-270; 무스카린성 수용체 길항제/베타 2 아드레날린 수용체 작용제, 예컨대 바테펜테롤(batefenterol) 숙시네이트, AZD-887, 이프라트로퓸(ipratropium) 브로마이드; TRN-157; 엘라스타제 저해제, 예컨대 에르도스테인(erdosteine); 메탈로프로테아제-12 저해제 예컨대 FP-025; 인터류킨 18 리간드 저해제, 예컨대 타데키니그 알파(tadekinig alfa); 골격근 트로포닌 활성화제, 예컨대 CK-2127107; p38 MAP 키나제 저해제, 예컨대 아쿠마피모드(acumapimod); IL-17 수용체 조절제, 예컨대 CNTO-6785; CXCR2 케모카인 길항제, 예컨대 다니릭신(danirixin); 백혈구 엘라스타제 저해제, 예컨대 POL-6014; 에폭사이드 하이드롤라제 저해제, 예컨대 GSK-2256294; HNE 저해제, 예컨대 CHF-6333; VIP 작용제, 예컨대 아빕타딜(aviptadil); 포스포이노시타이드-3 키나제 델타/감마 저해제, 예컨대 RV-1729; 보체 C3 저해제, 예컨대 APL-1; 및 G-단백질 연결 수용체-44 길항제, 예컨대 AM-211을 포함한다.
활성 치료제의 다른 비제한적인 예는 또한 부데소나이드(budesonide), 아디포셀(adipocell), 니트릭 옥사이드(nitric oxide), PUR-1800, YLP-001, LT-4001, 아지트로마이신(azithromycin), 가무넥스(gamunex), QBKPN, 소듐 피루베이트, MUL-1867, 만니톨, MV-130, MEDI-3506, BI-443651, VR-096, OPK-0018, TEV-48107, 독소필린(doxofylline), TEV-46017, 올리고G-COPD-5/20, Stempeucel®, ZP-051, 리신 아세틸살리실레이트를 포함한다.
일부 실시형태에서, 다른 활성 치료제는 MV-130 및 GSK-2838497A를 포함하지만 이로 제한되지 않는 COPD에 대해 활성인 백신일 수 있다.
뎅기 의 치료를 위한 병용 요법
본원에 제공된 화합물 및 조성물은 또한 다른 활성 치료제와 병용된다. 플라비비리대 바이러스 감염의 치료를 위해, 바람직하게는, 다른 활성 치료제는 플라비비리대 바이러스 감염, 특히 뎅기 감염에 대해 활성이다. 이들 다른 활성 치료제의 비제한적인 예는 숙주 세포 인자 조절제, 예컨대 GBV-006; 펜레티나이드(fenretinide) ABX-220, BRM-211; 알파-글루코시다제 1 저해제, 예컨대 셀고시비르(celgosivir); 혈소판 활성화 인자 수용체(PAFR: platelet activating factor receptor) 길항제, 예컨대 모디파판트(modipafant); 카드헤린-5/인자 Ia 조절제, 예컨대 FX-06; NS4B 저해제, 예컨대 JNJ-8359; 바이러스 RNA 스플라이싱 조절제, 예컨대 ABX-202; NS5 중합효소 저해제; NS3 프로테아제 저해제; 및 TLR 조절제이다.
일부 실시형태에서, 다른 활성 치료제는 TetraVax-DV, Dengvaxia®, DPIV-001, TAK-003, 생 약독화된(live attenuated) 뎅기 백신, 4가 뎅기열 백신, 4가 DNA 백신, rDEN2델타30-7169; 및 DENV-1 PIV를 포함하지만 이로 제한되지 않는 뎅기의 치료 또는 방지를 위한 백신일 수 있다.
에볼라의 치료를 위한 병용 요법
본원에 제공된 화합물 및 조성물은 또한 다른 활성 치료제와 병용된다. 필로비리대 바이러스 감염의 치료를 위해, 바람직하게는, 다른 활성 치료제는 필로비리대 바이러스 감염, 특히 마르부르크(Marburg) 바이러스, 에볼라 바이러스 및 쿠에바 바이러스(Cueva virus) 감염에 대해 활성이다. 이들 다른 활성 치료제의 비제한적인 예는 리바비린(ribavirin), 팔리비주맙, 모타비주맙(motavizumab), RSV-IGIV(RespiGam®), MEDI-557, A-60444, MDT-637, BMS-433771, 아미오다론(amiodarone), 드로네다론(dronedarone), 베라파밀(verapamil), 에볼라 회복기 혈장(ECP: Ebola Convalescent Plasma), TKM-100201, BCX4430((2S,3S,4R,5R)-2-(4-아미노-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-5-(하이드록시메틸)피롤리딘-3,4-디올), TKM-에볼라, T-705 모노포스페이트, T-705 디포스페이트, T-705 트리포스페이트, FGI-106(1-N,7-N-비스[3-(디메틸아미노)프로필]-3,9-디메틸퀴놀리노[8,7-h]퀴놀론-1,7-디아민), rNAPc2, OS-2966, 브린시도포비르(brincidofovir), 렘데시비르(remdesivir); RNA 중합효소 저해제, 예컨대 갈리데시비르(galidesivir), 파비피라비르(favipiravir)(T-705 또는 아비간(Avigan)으로도 알려져 있음), JK-05; 숙주 세포 인자 조절제, 예컨대 GMV-006; 카드헤린-5/인자 Ia 조절제, 예컨대 FX-06; 및 에볼라 치료용 항체, 예컨대 REGN-3470-3471-3479 및 ZMapp이다.
에볼라에 대해 활성인 다른 비제한적인 활성 치료제는 알파-글루코시다제 1 저해제, 카텝신 B 저해제, CD29 길항제, 수지상 ICAM-3 그래빙(grabbing) 비인테그린 1 저해제, 에스트로겐 수용체 길항제, 인자 VII 길항제 HLA 부류 II 항원 조절제, 숙주 세포 인자 조절제, 인터페론 알파 리간드, 중성(neutral) 알파 글루코시다제 AB 저해제, 니만-픽(niemann-Pick) C1 단백질 저해제, 핵단백질 저해제, 중합효소 공동인자 VP35 저해제, 세린 프로테아제 저해제, 조직 인자 저해제, TLR-3 작용제, 바이러스 외피 당단백질 저해제, 및 에볼라 바이러스 진입 저해제(NPC1 저해제)를 포함한다.
일부 실시형태에서, 다른 활성 치료제는 VRC-EBOADC076-00-VP, 아데노바이러스-기초 에볼라 백신, rVSV-EBOV, rVSVN4CT1-EBOVGP, MVA-BN Filo + Ad26-ZEBOV 계획, INO-4212, VRC-EBODNA023-00-VP, VRC-EBOADC069-00-VP, GamEvac-콤비 백신, SRC VB 벡터, HPIV3/EboGP 백신, MVA-EBOZ, 에볼라 재조합 당단백질 백신, Vaxart 아데노바이러스 벡터 5-기초 에볼라 백신, FiloVax 백신, GOVX-E301, 및 GOVX-E302를 포함하지만 이로 제한되지 않는 에볼라의 치료 또는 방지를 위한 백신일 수 있다.
본원에 제공된 화합물 및 조성물은 또한, 특정 RNA 서열과 염기쌍 듀플렉스를 형성함으로써 번역 과정을 방해하도록 설계된 합성 안티센스 올리고뉴클레오타이드 유사체인 포스포라미데이트 모르폴리노 올리고머(PMO)와 병용될 수 있다. PMO의 예는 AVI-7287, AVI-7288, AVI-7537, AVI-7539, AVI-6002, 및 AVI-6003을 포함하지만 이로 제한되지 않는다.
본원에 제공된 화합물 및 조성물은 또한, 비경구 유체(덱스트로스 식염수 및 링거 락테이트 포함) 및 영양소, 항생제(메트로니다졸(metronidazole) 및 세팔로스포린(cephalosporin) 항생제, 예컨대 세프트리악손(ceftriaxone) 및 세푸록심(cefuroxime)) 및/또는 항진균제 예방, 열 및 통증 의약, 항구토제(예컨대 메토클로프라마이드(metoclopramide)) 및/또는 지사제, 비타민 및 미네랄 보조제(비타민 K 및 아연 설페이트 포함), 항염증제(예컨대 이부프로펜), 통증 의약, 및 환자 집단에서 다른 보편적인 질환에 대한 의약, 예컨대 항말라리아제(아르테메테르(artemether) 및 아르테수네이트-루메판트린(artesunate-lumefantrine) 병용 요법), 장티푸스(퀴놀론 항생제, 예컨대 시프로플록사신(ciprofloxacin), 마크롤라이드(macrolide) 항생제, 예컨대 아지트로마이신(azithromycin), 세팔로스포린 항생제, 예컨대 세프트리악손, 또는 아미노 페니실린, 예컨대 암피실린), 또는 시겔라증(shigellosis)을 포함하여 필로비리대 바이러스 감염을 갖는 환자에게 제공되는 일반적인 관리와 함께 사용하기 위한 것이다.
VII. 바이러스 감염을 치료하는 방법
본 개시내용은 본 개시내용의 화합물을 사용하여 여러 가지 질환, 예컨대 호흡기 세포융합 바이러스(RSV), 에볼라, 지카, 웨스트 나일, 뎅기, HCV 및 HBV를 치료하는 방법을 제공한다. 본 개시내용은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물을 사용하여 여러 가지 질환, 예컨대 호흡기 세포융합 바이러스(RSV), 에볼라, 지카, 웨스트 나일, 뎅기, HCV 및 HBV를 치료하는 방법을 제공한다.
파라믹소비리대(Paramyxoviridae)
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 파라믹소비리대 감염을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료적 유효량의 본 개시내용의 화합물 이의 약학적으로 허용가능한 염을 파라믹소비리대 바이러스에 감염된 개체(예를 들어 인간)에게 투여하는 단계를 포함한다. 파라믹소비리대 바이러스는 니파 바이러스(Nipha virus) 및 파라인플루엔자 바이러스를 포함하지만 이로 제한되지 않는다.
뉴모비리대
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 뉴모비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서 뉴모비리대 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료적 유효량의 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함한다. 뉴모비리대 바이러스는 호흡기 융합 바이러스, 및 인간 메타뉴모바이러스를 포함하지만 이로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 뉴모비리대 바이러스 감염은 호흡기 세포융합 바이러스 감염이다. 일부 실시형태에서, 뉴모비리대 바이러스 감염은 인간 메타뉴모바이러스 감염이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 뉴모비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서의 뉴모비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제를 제조하는 방법을 제공하며, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 사용되는 것을 특징으로 한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간에서 뉴모비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제의 제조를 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 일부 실시형태에서, 뉴모비리대 바이러스 감염은 호흡기 세포융합 바이러스 감염이다. 일부 실시형태에서, 뉴모비리대 바이러스 감염은 인간 메타뉴모바이러스 감염이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 뉴모비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서 뉴모비리대 바이러스 감염 치료에 사용하기 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다. 일부 실시형태에서, 뉴모비리대 바이러스 감염은 호흡기 세포융합 바이러스 감염이다. 일부 실시형태에서, 뉴모비리대 바이러스 감염은 인간 메타뉴모바이러스 감염이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 RSV 감염을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료적 유효량의 본 개시내용의 화합물 이의 약학적으로 허용가능한 염을 호흡기 세포융합 바이러스에 감염된 개체(예를 들어 인간)에게 투여하는 단계를 포함한다. 전형적으로, 개체는 만성 호흡기 세포융합 바이러스 감염을 앓고 있지만, RSV로 급성 감염된 사람들을 치료하는 본 개시내용의 범위 내에 있다.
일부 실시형태에서, RSV 복제를 저해하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 개체(예를 들어 인간)에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 RSV 감염과 관련된 바이러스 부하(viral load)를 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료적 유효량의 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 RSV로 감염된 개체(예를 들어 인간)에게 투여하는 단계를 포함하고, 치료적 유효량은 개체에서 RSV 바이러스 부하를 감소시키기에 충분하다.
본원에서 더 완전히 기재되는 바와 같이, 본 개시내용의 화합물은 하나 이상의 추가 치료제(들)와 함께 RSV로 감염된 개체(예를 들어 인간)에게 투여될 수 있다. 추가 치료제(들)는 본 개시내용의 화합물과 동시에 또는 본 개시내용의 화합물의 투여 전에 또는 후에, 감염된 개체(예를 들어 인간)에게 투여될 수 있다.
일부 실시형태에서, RSV 감염의 치료 또는 방지에 사용하기 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 제공된다. 일부 실시형태에서, RSV 감염의 치료 또는 방지용 약제의 제조를 위한 본 개시내용의 화합물(예를 들어 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물), 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 제공된다.
본원에서 더 완전히 기재되는 바와 같이, 본 개시내용의 화합물은 하나 이상의 추가 치료제(들)와 함께 RSV로 감염된 개체(예를 들어 인간)에게 투여될 수 있다. 나아가 일부 실시형태에서, RSV를 치료하거나 방지하기 위해 사용될 때, 본 개시내용의 화합물은 RSV 조합 약물, RSV 백신, RSV DNA 중합효소 저해제, 면역조절제 톨-유사 수용체(TLR) 조절제, 인터페론 알파 수용체 리간드, 히알루로니다제 저해제, 호흡기 세포융합 표면 항원 저해제, 세포독성 T-림프구-관련 단백질 4(ipi4) 저해제, 사이클로필린 저해제, RSV 바이러스 진입 저해제, 안티센스 올리고뉴클레오타이드 표적화 바이러스 mRNA, 짧은 간섭 RNA(siRNA) 및 ddRNAi 엔도뉴클레아제 조절제, 리보뉴클레오타이드 리덕타제 저해제, RSV E 항원 저해제, 공유 폐쇄된 고리형 DNA(cccDNA) 저해제, 파르네소이드 X(farnesoid X) 수용체 작용제, RSV 항체, CCR2 케모카인 길항제, 티모신 작용제, 사이토카인, 핵단백질 조절제, 레티노산-유도적 유전자 1 자극제, NOD2 자극제, 포스파티딜이노시톨 3-키나제(PI3K) 저해제, 인돌아민-2, 3-디옥시게나제(IDO) 경로 저해제, PD-1 저해제, PD-L1 저해제, 재조합 티모신 알파-1, 브루톤 티로신 키나제(BTK: bruton's tyrosine kinase) 저해제, KDM 저해제, RSV 복제 저해제, 아르기나제 저해제, 및 다른 RSV 약물로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상(예를 들어 1, 2, 3, 4개 이상)의 추가 치료제(들)와 함께 투여될 수 있다.
피코르나비리대(Picornaviridae)
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 피코르나비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서 피코르나비리대 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료적 유효량의 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함한다. 피코르나비리대 바이러스는 포진성 구협염(herpangina), 무균성 수막염(aseptic meningitis), 감기-유사 증후군(common-cold-like syndrome)(인간 리노바이러스 감염), 비-마비성 소아마비-유사 증후군(non-paralytic poliomyelitis-like syndrome), 유행성 흉막통(epidemic pleurodynia)(유행기(epidemics)에 일반적으로 발생하는 급성, 열성, 감염성 질환), 수족구 증후군(hand-foot-mouth syndrome), 소아 및 성인 췌장염 및 중증 심근염을 포함한 이종성 감염군을 야기하는 엔테로바이러스이다. 일부 실시형태에서, 피코르나비리대 바이러스 감염은 인간 리노바이러스 감염이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 피코르나비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서의 피코르나비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제를 제조하는 방법을 제공하며, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 사용되는 것을 특징으로 한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간에서 피코르나비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제의 제조를 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 일부 실시형태에서, 피코르나비리대 바이러스 감염은 인간 리노바이러스 감염이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 피코르나비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서 피코르나비리대 바이러스 감염 치료에 사용하기 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다. 일부 실시형태에서, 피코르나비리대 바이러스 감염은 인간 리노바이러스 감염이다.
플라비비리대
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 플라비비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서 플라비비리대 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료적 유효량의 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함한다. 대표적인 플라비비리대 바이러스는 뎅기, 황열, 웨스트 나일, 지카, 일본 뇌염 바이러스, C형 간염(HCV), 및 B형간염(HBV)을 포함하지만 이로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 플라비비리대 바이러스 감염은 뎅기 바이러스 감염이다. 일부 실시형태에서, 플라비비리대 바이러스 감염은 황열 바이러스 감염이다. 일부 실시형태에서, 플라비비리대 바이러스 감염은 웨스트 나일 바이러스 감염이다. 일부 실시형태에서, 플라비비리대 바이러스 감염은 지카 바이러스 감염이다. 일부 실시형태에서, 플라비비리대 바이러스 감염은 일본 뇌염 바이러스 감염이다. 일부 실시형태에서, 플라비비리대 바이러스 감염은 C형 간염 바이러스 감염이다. 일부 실시형태에서, 플라비비리대 바이러스 감염은 B형 간염 바이러스 감염이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 플라비비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서의 플라비비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제를 제조하는 방법을 제공하며, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 사용되는 것을 특징으로 한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간에서 플라비비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제의 제조를 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 일부 실시형태에서, 플라비비리대 바이러스 감염은 뎅기 바이러스 감염이다. 일부 실시형태에서, 플라비비리대 바이러스 감염은 황열 바이러스 감염이다. 일부 실시형태에서, 플라비비리대 바이러스 감염은 웨스트 나일 바이러스 감염이다. 일부 실시형태에서, 플라비비리대 바이러스 감염은 지카 바이러스 감염이다. 일부 실시형태에서, 플라비비리대 바이러스 감염은 C형 간염 바이러스 감염이다. 일부 실시형태에서, 플라비비리대 바이러스 감염은 B형 간염 바이러스 감염이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 플라비비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서 플라비비리대 바이러스 감염 치료에 사용하기 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다. 일부 실시형태에서, 플라비비리대 바이러스 감염은 뎅기 바이러스 감염이다. 일부 실시형태에서, 플라비비리대 바이러스 감염은 황열 바이러스 감염이다. 일부 실시형태에서, 플라비비리대 바이러스 감염은 웨스트 나일 바이러스 감염이다. 일부 실시형태에서, 플라비비리대 바이러스 감염은 지카 바이러스 감염이다. 일부 실시형태에서, 플라비비리대 바이러스 감염은 C형 간염 바이러스 감염이다. 일부 실시형태에서, 플라비비리대 바이러스 감염은 B형 간염 바이러스 감염이다.
필로비리대(Filoviridae)
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 필로비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서 필로비리대 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료적 유효량의 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함한다. 대표적인 필로비리대 바이러스는 에볼라 및 마르부르크를 포함하지만 이로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 필로비리대 바이러스 감염은 에볼라 바이러스 감염이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 필로비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서의 필로비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제를 제조하는 방법을 제공하며, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 사용되는 것을 특징으로 한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간에서 필로비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제의 제조를 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 일부 실시형태에서, 필로비리대 바이러스 감염은 에볼라 바이러스 감염이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 필로비리대 바이러스 감염 치료의 치료를 필요로 하는 인간에서 필로비리대 바이러스 감염 치료에 사용하기 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다. 일부 실시형태에서, 필로비리대 바이러스 감염은 에볼라 바이러스 감염이다.
VIII. 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방 방법
본 개시내용의 화합물은 또한, 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방에 사용될 수 있다. 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물은 또한, 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방에 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료적 유효량의 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 인간에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 호흡기 병태는 만성 폐쇄성 폐질환이다. 일부 실시형태에서, 바이러스 감염은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료적 유효량의 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 인간에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 호흡기 병태는 천식이다. 일부 실시형태에서, 바이러스 감염은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스, 엔테로바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 위한 약제를 제조하는 방법을 제공하며, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 사용되는 것을 특징으로 하고, 상기 호흡기 병태는 만성 폐쇄성 폐질환이다. 일부 실시형태에서, 바이러스 감염은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 위한 약제를 제조하는 방법을 제공하며, 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 사용되는 것을 특징으로 하고, 상기 호흡기 병태는 천식이다. 일부 실시형태에서, 바이러스 감염은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스, 엔테로바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간에서 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조를 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공하며, 상기 호흡기 병태는 만성 폐쇄성 폐질환이다. 일부 실시형태에서, 바이러스 감염은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간에서 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조를 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공하며, 상기 호흡기 병태는 천식이다. 일부 실시형태에서, 바이러스 감염은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스, 엔테로바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하며, 상기 호흡기 병태는 만성 폐쇄성 폐질환이다. 일부 실시형태에서, 바이러스 감염은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본 개시내용의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하며, 상기 호흡기 병태는 천식이다. 일부 실시형태에서, 바이러스 감염은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스, 엔테로바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기된다.
IX. 실시예
약어. 실험 세부사항을 설명하는 데 특정 약어 및 두문자어가 사용된다. 이들 중 대부분은 당업자에 의해 이해될 것이지만, 표 1은 많은 이러한 약어 및 두문자어의 목록을 포함한다.
[표 2]
Figure pct00081
Figure pct00082
"P*" 표기를 사용한 화합물 구조는 단리된 (R)-이성질체 또는 (S)-이성질체를 지칭하며, 여기서 해당 위치에서의 특정 입체화학은 지정되지 않는다.
A. 중간체
중간체 1. ((3aS,4S,6S,6aS)-6-(4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2,2-디메틸-4-((((트리플루오로메틸)설포닐)옥시)메틸) 테트라하이드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-4-일)메틸 아세테이트
Figure pct00083
무수 테트라하이드로푸란(1 mL) 중 tert-부틸 (7-((3aS,4S,6aS)-6,6-비스9하이드록시메틸)-2,2-디메틸테트라하이드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-4-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-4-일)카르바메이트(국제공개 WO 2015069939호; 100 mg, 0.229 mmol) 및 노보자임(Novozyme)-435(50 mg, 50% w/w)의 용액에 비닐 아세테이트(0.03 mL, 0.321 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 45℃에서 7시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 효소를 THF로 반복해서 세척하였다. 조합된 여과물을 농축시키고, 수득된 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 30-100% 에틸 아세테이트/헥산에 의해 정제하여, 화합물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 10.46 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 6.88 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.39 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 5.17 (dd, J = 6.1, 4.9 ㎐, 1H), 4.78 (d, J = 6.1 ㎐, 1H), 4.03 (q, J = 11.2 ㎐, 2H), 3.63 (s, 2H), 1.96 (s, 3H), 1.50 (d, J = 3.0 ㎐, 12H), 1.29 (s, 3H). LCMS: MS m/z = 478.92 [M+1]; tR = 0.96분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN.
중간체 2. ((3aS,4S,6S,6aS)-6-(4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2,2-디메틸-4-((((트리플루오로메틸)설포닐)옥시)메틸) 테트라하이드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-4-일)메틸 아세테이트
Figure pct00084
디클로로메탄(1 M, 1.46 mL, 1.46 mmol) 중 트리플루오로메탄설폰산 무수물의 용액에 디클로로메탄(3.67 mL) 중 중간체 1(350 mg, 0.731 mmol) 및 피리딘(0.300 mL, 3.66 mmol)의 용액을 0℃에서 첨가하였다. 20분 후, 반응 혼합물을 물(5 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 디클로로메탄(2 × 5 mL)으로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 조 화합물을 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS: MS m/z = 610.79 [M+1], tR = 1.51분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN.
중간체 3. ((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-4-(플루오로메틸)-2,2-디메틸테트라하이드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-4-일)메틸 아세테이트
Figure pct00085
테트라하이드로푸란(1 M, 2.87 mL, 2.87 mmol) 중 테트라부틸암모늄 플루오라이드의 용액을 테트라하이드로푸란(3 mL) 중 조(crude) 중간체 2(350 mg, 0.573 mmol)의 용액에 rt에서 첨가하였다. 4시간 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(5 mL)로 희석시키고, 물(2 × 5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0-100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여, 화합물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 8.12 (br s, 1H), 7.18 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 6.89 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 5.55 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 5.29 (dd, J = 6.5, 4.5 ㎐, 1H), 4.96 (d, J = 6.4 ㎐, 1H), 4.77 - 4.68 (m, 1H), 4.65 - 4.56 (m, 1H), 4.24 - 4.13 (m, 2H), 2.02 (s, 3H), 1.58 (br s, 12H), 1.37 (s, 3H). LCMS: MS m/z = 480.97 [M+1], tR = 1.39분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 3.04분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN.
중간체 4. ((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-4-(플루오로메틸)-2,2-디메틸테트라하이드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-4-일)메탄올
Figure pct00086
물(0.6 mL)과 디옥산(2.4 mL)의 중의 중간체 3(189 mg, 0.393 mmol)의 용액을 100℃까지 가열하였다. 4시간 후, 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 메탄올(2 mL)에 용해시키고, 1 N 포타슘 카르보네이트 용액(1 mL)을 rt에서 혼합물에 첨가하였다. 1.25시간 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 조 잔류물을 헥산 중 0-100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여, 화합물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.79 (s, 1H), 6.86 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.36 (d, J = 5.7 ㎐, 1H), 5.24 (t, J = 5.9 ㎐, 1H), 4.99 (d, J = 6.3 ㎐, 1H), 4.71 (dd, J = 31.9, 10.0 ㎐, 1H), 4.59 (dd, J = 33.4, 10.0 ㎐, 1H), 3.73 (dd, J = 11.5, 1.6 ㎐, 1H), 3.64 (dd, J = 11.5, 2.2 ㎐, 1H), 1.58 (s, 3H), 1.35 (s, 3H). LCMS: MS m/z = 339.24 [M+1], tR = 1.02분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 1.94분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN.
중간체 5. (2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-2-(하이드록시메틸)테트라하이드로푸란-3,4-디올
Figure pct00087
진한 수성 염산 용액(12 N, 0.172 mL, 2.07 mmol)을 아세토니트릴(1 mL) 중 중간체 4(50 mg, 0.148 mmol)의 용액에 rt에서 첨가하였다. 45분 후, 생성된 혼합물을 2 N 수성 소듐 하이드록사이드 용액으로 중화시키고, 분취 HPLC에 의해 정제하여(Gemeni C18 5 uM 110 Å 100 x 30 mm 컬럼, 5-100% 아세토니트릴/물 구배), 화합물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.78 (s, 1H), 6.87 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.75 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.21 (d, J = 8.9 ㎐, 1H), 4.80 - 4.74 (m, 1.5H), 4.65 (dd, J = 9.9, 6.1 ㎐, 1H), 4.52 (d, J = 9.9 ㎐, 0.5H), 4.32 (d, J = 5.4 ㎐, 1H), 3.71 (t, J = 1.9 ㎐, 2H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -237.67 (t, J = 47.7 ㎐). LCMS: MS m/z = 299.20 [M+1], tR = 0.48분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 1.10분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN. HPLC: tR = 2.05분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
중간체 6. 2-에틸부틸 ((S)-(((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-2,2-디메틸테트라하이드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-4-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00088
테트라하이드로푸란(18.75 mL)을 중간체 4(1.5 g, 4.433 mmol)와 중간체 B1(문헌[J. Med.Chem. 2017, 60(5), pp 1648-1661]; 2.197 g, 4.877 mmol)과 마그네슘 클로라이드(0.633 g, 6.65 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 뒤이어 N,N-디이소프로필에틸아민(1.931 mL, 11.08 mmol)을 rt에서 첨가하였다. 50℃에서 2시간 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(400 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(2x100 mL) 및 염수(200 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 디클로로메탄 중 0-20% 메탄올로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 수행하여, 중간체를 얻었다. LCMS: MS m/z = 650.28 [M+1], tR = 1.74분; LC 시스템: Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1100 μl/분에서 0분-1.6분 2-100% 아세토니트릴, 1.6분-1.8분 100% 아세토니트릴, 1.80분-1.90분 100%-2% 아세토니트릴, 1.90분-2.20분 2% 아세토니트릴.
B. 화합물
실시예 1. 2-에틸부틸 ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00089
아세토니트릴(0.4 mL)을 중간체 4(27 mg, 0.080 mmol)와 중간체 B1(문헌[J. Med.Chem. 2017, 60(5), pp 1648-1661]; 36 mg, 0.080 mmol)과 마그네슘 클로라이드(8 mg, 0.08 mmol)의 혼합물에 rt에서 첨가하였다. 혼합물을 50℃까지 10분 동안 가열하고, N,N-디이소프로필에틸아민(0.035 mL, 0.20 mmol)을 첨가하였다. 5시간 후, 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 진한 수성 염산 용액(0.093 mL)을 적가하였다. 30분 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0-100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 수행하여, 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.79 (s, 1H), 7.40 - 7.31 (m, 2H), 7.26 - 7.14 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.36 (d, J = 8.3 ㎐, 1H), 4.80 - 4.70 (m, 1H), 4.70 - 4.58 (m, 2H), 4.33 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.21 (dd, J = 5.7, 1.7 ㎐, 2H), 4.07 - 3.87 (m, 3H), 1.48 (app p, J = 6.2 ㎐, 1H), 1.39 - 1.27 (m, 7H), 0.86 (t, J = 7.5 ㎐, 6H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -238.79 (t, J = 47.7 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.53. LCMS: MS m/z = 610.32 [M+1], tR = 1.22분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 3.03분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN. HPLC: tR = 5.11분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 2. 소듐 ((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메틸 트리포스페이트
Figure pct00090
PO(OMe)3(0.5 mL) 중 중간체 5(10 mg, 0.034 mmol)의 용액에 0℃에서 NaHCO3(10 mg, 0.12 mmol) 및 POCl3(0.03 mL, 0.33 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 4시간 동안 교반하고, 이후에 ACN(0.5 mL) 중 트리부틸암모늄 피로포스페이트(250 mg, 0.46 mmol)의 용액을 첨가하고, 뒤이어 트리부틸아민(0.14 mL, 0.59 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 교반하고, 이온-교환 HPLC에 의해 모니터링하였다. 1시간 후, 반응물을 트리에틸암모늄 비카르보네이트 완충제(1 M, 8 mL)로 켄칭하였다. 반응 혼합물을 rt에서 0.5시간 동안 교반한 다음, 농축시키고, 물로 2회 공동증발(co-evaporate)시켰다. 잔류물을 물(2 mL)에 용해시키고, NaHCO3(400 mg)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 물(약 2 mL)에 용해시키고, C-18 컬럼에 로딩하고, 물로 용리하였다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고, HCl(1 N, 150 uL)로 산성화시키고, 약 4 mL 부피까지 농축시키고, 이온-교환 컬럼에 로딩하고, 물로 용리한 다음, 10-40% 트리에틸암모늄 비카르보네이트 완충제(1 M)-H2O로 용리하였다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고, 농축시켰다. 잔류물을 물(1 mL)에 용해시키고, NaOH(1 N, 0.1 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 약 0.2 mL 부피로 농축시키고, 물로 용리하는 C-18 컬럼으로 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고, 농축시켜, 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 물-d 2 ) δ 7.88 (s, 1H), 7.06 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 6.96 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 5.46 (d, J = 9.2 ㎐, 1H), 4.94 - 4.84 (m, 2H), 4.82 - 4.75 (m, 1H), 4.72 (d, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.13 (dd, J = 10.8, 5.8 ㎐, 1H), 3.96 (dd, J = 10.6, 5.1 ㎐, 1H). 31P NMR (162 ㎒, 물-d 2 ) δ -5.74 (d, J = 19.7 ㎐), -11.10 (d, J = 19.4 ㎐), -21.68 (t, J = 19.7 ㎐). LCMS: MS m/z = 538.88 [M+1], tR = 0.45분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μl/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. 이온 교환 HPLC: tR = 10.303분; 이온 교환 0-80 Milli-Q 물 / 0.5 M TEAB, 14분 구배; 1 mL/분.
실시예 3. 네오펜틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00091
네오펜틸 ( tert -부톡시카르보닐)- L -알라니네이트. (tert-부톡시카르보닐)-L-알라닌(20.61 g, 0.109 mol)을 아세토니트릴(100 mL)에서 얻고, 2,2-디메틸프로판-1-올(8 g, 0.091 mol)을 첨가하고, 뒤이어 EDCI(18.32 g, 0.118 mol) 및 DMAP(16.63 g, 0.136 mol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 반응물을 디클로로메탄 및 물로 희석시켰다. 층을 분할하고, 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 정제를 실리카 겔 크로마토그래피 0-25% 에틸아세테이트/헥산에 의해 실시하여, 중간체 D1을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 7.27 (d, J = 7.5 ㎐, 1H), 4.00 (p, J = 7.4 ㎐, 1H), 3.79 (d, J = 10.5 ㎐, 1H), 3.64 (d, J = 10.5 ㎐, 1H), 1.35 (s, 9H), 1.23 (d, J = 7.4 ㎐, 3H), 0.87 (s, 9H).
Figure pct00092
(S)-1-(네오펜틸옥시)-1-옥소프로판-2-암모늄 클로라이드. 네오펜틸(tert-부톡시카르보닐)-L-알라니네이트(17.45 g, 0.067 mol)를 무수 디클로로메탄(175 mL) 및 디옥산 중 4 N HCl(84.11 mL, 0.336 mol)에서 얻었다. 반응물을 주위 온도에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에 농축시키고, 디클로로메탄으로 공동증발시켰다. 생성된 잔류물을 고 진공 하에 밤새 두어, 중간체 D2를 수득하였고, 이를 정제 없이 그대로 다음 단계에 사용하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 8.60 (s, 3H), 4.08 (q, J = 7.2 ㎐, 1H), 3.90 (d, J = 10.4 ㎐, 1H), 3.78 (d, J = 10.4 ㎐, 1H), 1.43 (d, J = 7.2 ㎐, 3H), 0.90 (s, 9H).
Figure pct00093
네오펜틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 무수 디클로로메탄(227 mL) 중 중간체 D2(13.15 g, 67.2 mmol) 및 페닐 디클로로포스페이트(10 mL, 67.2 mmol)의 용액에 트리에틸아민(20.78 mL, 147.84 mmol)을 0℃에서 아르곤 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 후에, 4-니트로페놀(9.348 g, 67.2 mmol) 및 트리에틸아민(10.39 mL, 73.92 mmol)을 첨가하였다. 0℃에서 1시간 교반 후, 반응 혼합물을 Et2O로 희석시키고, 고체를 여과해 내었다. 조 물질을 감압 하에 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여(80 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 100% 디클로로메탄, 뒤이어 0-45% 에틸 아세테이트/ 헥산), 원하는 화합물을 부분입체이성질체 혼합물(19 g, 64.79%, 부분입체이성질체 혼합물)로서 얻었다. 수득된 화합물을 고 진공 하에 건조하여, 부분 고체화를 야기하였다. 디이소프로필 에테르를 부분적으로 고체화된 물질에 첨가하고, 초음파처리하여, 미세한 고체를 수득하였다. 고체를 여과에 의해 단리하였다. 디이소프로필 에테르를 이용한 초음파처리 및 여과의 또 다른 차례로 중간체 D3을 얻었다. 중간체 D3은 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 8.31 - 8.23 (m, 2H), 7.52 - 7.43 (m, 2H), 7.38 (dd, J = 8.6, 7.2 ㎐, 2H), 7.28 - 7.18 (m, 3H), 4.09 (dq, J = 9.8, 7.2 ㎐, 1H), 3.83 - 3.72 (m, 2H), 1.34 (dd, J = 7.2, 1.2 ㎐, 3H), 0.91 (s, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -1.32 (s). LCMS: MS m/z = 436.85 [M+1]; tR = 1.67분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN.
Figure pct00094
네오펜틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 중간체 4(0.015 g, 0.044 mmol)와 중간체 D3(0.021 g, 0.049 mmol)과 마그네슘 클로라이드(0.006 g, 0.067 mmol)의 혼합물에 테트라하이드로푸란(0.5 mL)을 실온에서 첨가하고, 뒤이어 N,N-디이소프로필에틸아민(0.019 mL, 0.111 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 그 후에, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 수득된 잔류물을 포화된 소듐 클로라이드 용액 및 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 층을 분할하고, 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 수득된 잔류물을 무수 아세토니트릴(0.5 mL)에 용해시키고, 얼음 배쓰에서 냉각시키고, 뒤이어 진한 염산(0.088 mL, 1.058 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 얼음 배쓰에서 냉각시키고, 3 N 수성 소듐 하이드록사이드 용액으로 중화시켰다. 생성된 혼합물을 분취 HPLC(30분 진행에서 Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80 Å 150 x 30 mm 컬럼, 15%-85% 아세토니트릴/물 구배)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.78 (s, 1H), 7.34 (dd, J = 8.6, 7.1 ㎐, 2H), 7.27 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.35 (d, J = 8.4 ㎐, 1H), 4.81 - 4.55 (m, 3H), 4.33 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.24 - 4.17 (m, 2H), 4.02 - 3.86 (m, 1H), 3.83 (d, J = 10.5 ㎐, 1H), 3.73 (d, J = 10.5 ㎐, 1H), 1.33 (dd, J = 7.1, 1.0 ㎐, 3H), 0.91 (s, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.54. LCMS: MS m/z = 596.10 [M+1]; tR = 1.16분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μl/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN. HPLC: tR = 4.848분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 4. 3,3-디메틸부틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00095
3,3-디메틸부틸 ( tert -부톡시카르보닐)- L -알라니네이트. (tert-부톡시카르보닐)-L-알라닌(22.38 g, 0.118 mol)을 아세토니트릴(100 mL)에서 얻고, 3,3-디메틸부탄-1-올(10.07 g, 0.099 mol), 뒤이어 EDCI(19.89 g, 0.128 mol) 및 DMAP(18.06 g, 0.148 mol)를 한꺼번에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 반응물을 디클로로메탄 및 물로 희석시켰다. 층을 분할하고, 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 실리카 겔 크로마토그래피 0-25% 에틸아세테이트/헥산에 의한 정제는 중간체 E1을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 7.22 (d, J = 7.4 ㎐, 1H), 4.13 - 3.82 (m, 3H), 1.47 (t, J = 7.2 ㎐, 2H), 1.35 (s, 9H), 1.19 (d, J = 7.3 ㎐, 3H), 0.88 (s, 9H).
Figure pct00096
(S)-1-(3,3-디메틸부톡시)-1-옥소프로판-2-암미늄 클로라이드. 중간체 E1(20.9 g, 0.076 mol)을 무수 디클로로메탄(200 mL) 및 디옥산 중 4 N HCl(95.57 mL, 0.382 mol)에서 얻었다. 반응물을 주위 온도에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에 농축시키고, 디클로로메탄으로 공동증발시켰다. 생성된 잔류물을 고 진공 하에 밤새 두고, 중간체 E2를 정제 없이 그대로 다음 단계에 사용하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 8.67 (s, 3H), 4.32 - 4.07 (m, 2H), 3.97 (d, J = 7.2 ㎐, 1H), 1.52 (t, J = 7.3 ㎐, 2H), 1.39 (d, J = 7.1 ㎐, 3H), 0.89 (s, 9H).
Figure pct00097
3,3-디메틸부틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 무수 디클로로메탄(300 mL) 중 중간체 E2(15.93 g, 75.96 mmol) 및 페닐 디클로로포스페이트(11.3 mL, 75.96 mmol)의 용액에 트리에틸아민(23.5 mL, 167.1 mmol)을 0℃에서 아르곤 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 후에, 4-니트로페놀(10.57 g, 75.96 mmol) 및 트리에틸아민(11.74 mL, 83.56 mmol)을 첨가하였다. 0℃에서 1시간 교반 후, 반응 혼합물을 Et2O로 희석시키고, 고체를 여과해 내었다. 조 물질을 감압 하에 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여(80 g SiO2 Combiflash(HP Gold 컬럼, 100% 디클로로메탄, 뒤이어 0-35% 에틸 아세테이트/ 헥산), 중간체 E3을 부분입체이성질체 혼합물로서 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 8.28 (d, J = 9.1 ㎐, 2H), 7.53 - 7.34 (m, 4H), 7.30 - 7.16 (m, 3H), 6.66 (td, J = 13.2, 10.0 ㎐, 1H), 4.06 - 3.88 (m, 3H), 1.40 - 1.29 (m, 2H), 1.24 - 1.11 (m, 3H), 0.83 (s, 9H). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6 ) δ -1.26, -1.57. LCMS: MS m/z = 450.96 [M+1]; tR = 1.71분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN.
Figure pct00098
3,3-디메틸부틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 중간체 4(0.015 g, 0.044 mmol)와 중간체 E3(0.022 g, 0.049 mmol)과 마그네슘 클로라이드(0.006 g, 0.067 mmol)의 혼합물에 테트라하이드로푸란(0.5 mL)을 실온에서 첨가하고, 뒤이어 N,N-디이소프로필에틸아민(0.019 mL, 0.111 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 그 후에, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 수득된 잔류물을 포화된 소듐 클로라이드 용액 및 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 층을 분할하고, 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 수득된 잔류물을 무수 아세토니트릴(0.5 mL)에 용해시키고, 얼음 배쓰에서 냉각시키고, 뒤이어 진한 염산(0.088 mL, 1.058 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 얼음 배쓰에서 냉각시키고, 3 N 수성 소듐 하이드록사이드 용액으로 중화시켰다. 생성된 혼합물을 분취 HPLC(30분 진행에서 Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80 Å 150 x 30 mm 컬럼, 15%-85% 아세토니트릴/물 구배)에 의해 정제하여, 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.78 (d, J = 1.8 ㎐, 1H), 7.39 - 7.28 (m, 2H), 7.28 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (dd, J = 5.7, 4.5 ㎐, 1H), 6.75 (dd, J = 8.7, 4.5 ㎐, 1H), 5.37 (dd, J = 8.2, 6.2 ㎐, 1H), 4.83 - 4.53 (m, 3H), 4.36 (dd, J = 18.1, 5.2 ㎐, 1H), 4.30 - 4.04 (m, 4H), 3.96 - 3.81 (m, 1H), 1.51 (td, J = 7.5, 2.2 ㎐, 2H), 1.27 (ddd, J = 19.5, 7.1, 1.1 ㎐, 3H), 0.90 (d, J = 1.9 ㎐, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.7, 3.51. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -238.40 - -238.89 (m). LCMS: MS m/z = 610.05 [M+1]; tR = 1.20분 (부(minor) 이성질체), 1.22분 (주(major) 이성질체); LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μl/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN. HPLC: tR = 5.024분 (부 이성질체), 5.1분 (주 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
S p 부분입체이성질체 및 R p 부분입체이성질체의 분리. 부분입체이성질체를 키랄 분취 HPLC에 의해 서로 단리하였다(Chiralpak IA 5 μm, 21X250 mm; 100% 에탄올):
Figure pct00099
Figure pct00100
실시예 5. 실시예 4의 제1 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.78 (s, 1H), 7.32 (t, J = 7.9 ㎐, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.86 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.75 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.37 (d, J = 8.1 ㎐, 1H), 4.83 - 4.71 (m, 1H), 4.71 - 4.59 (m, 2H), 4.38 (d, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.26 (dd, J = 5.1, 1.7 ㎐, 2H), 4.16 - 4.07 (m, 2H), 3.93 - 3.74 (m, 1H), 1.56 - 1.47 (m, 2H), 1.24 (dd, J = 7.2, 1.2 ㎐, 3H), 0.90 (s, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.73. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -238.61 (t, J = 47.7 ㎐). LCMS: MS m/z = 610.13 [M+1]; tR = 1.20분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μl/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN. HPLC: tR = 4.996분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 6. 실시예 4의 제2 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.79 (s, 1H), 7.35 (dd, J = 8.6, 7.1 ㎐, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.36 (d, J = 8.3 ㎐, 1H), 4.82 - 4.56 (m, 3H), 4.33 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.24 - 4.04 (m, 4H), 3.94 - 3.80 (m, 1H), 1.50 (t, J = 7.4 ㎐, 2H), 1.29 (dd, J = 7.1, 1.0 ㎐, 3H), 0.90 (s, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.51. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -238.84 (t, J = 47.7 ㎐). LCMS: MS m/z = 610.14 [M+1]; tR = 1.21분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN. HPLC: tR = 5.079분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 7. 2,2-디메틸부틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00101
2,2-디메틸부틸 ( tert -부톡시카르보닐)- L -알라니네이트. (tert-부톡시카르보닐)-L-알라닌(11.11 g, 0.059 mol)을 아세토니트릴(60 mL)에서 얻고, 2,2-디메틸부탄-1-올(5.0 g, 0.049 mol), 뒤이어 EDCI(9.876 g, 0.064 mol) 및 DMAP(8.967 g, 0.073 mol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 반응물을 디클로로메탄 및 물로 희석시켰다. 층을 분할하고, 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 정제를 실리카 겔 크로마토그래피 0-20% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 실시하여, 중간체 H1을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 7.26 (d, J = 7.5 ㎐, 1H), 3.99 (p, J = 7.4 ㎐, 1H), 3.81 (d, J = 10.6 ㎐, 1H), 3.66 (d, J = 10.6 ㎐, 1H), 1.35 (s, 9H), 1. 23 (m, 5H), 0.84 - 0.72 (m, 9H).
Figure pct00102
(S)-1-(2,2-디메틸부톡시)-1-옥소프로판-2-암미늄 클로라이드. 중간체 H1(10.34 g, 0.038 mol)을 무수 디클로로메탄(100 mL) 및 디옥산 중 4 N HCl(47.28 mL, 0.189 mol)에서 얻었다. 반응물을 주위 온도에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에 농축시키고, 디클로로메탄으로 공동증발시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 두고, 중간체 H2를 정제 없이 그대로 다음 단계에 사용하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 8.65 (s, 3H), 4.05 (q, J = 7.2 ㎐, 1H), 3.91 (d, J = 10.6 ㎐, 1H), 3.79 (d, J = 10.6 ㎐, 1H), 1.42 (d, J = 7.2 ㎐, 3H), 1.26 (q, J = 7.6 ㎐, 2H), 0.87 - 0.73 (m, 9H).
Figure pct00103
2,2-디메틸부틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 무수 디클로로메탄(150 mL) 중 중간체 H2(7.9 g, 37.67 mmol) 및 페닐 디클로로포스페이트(5.605 mL, 37.67 mmol)의 용액에 트리에틸아민(11.64 mL, 82.87 mmol)을 0℃에서 아르곤 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 후에, 4-니트로페놀(5.24 g, 37.67 mmol) 및 트리에틸아민(5.82 mL, 41.43 mmol)을 첨가하였다. 0℃에서 1시간 교반 후, 반응 혼합물을 Et2O로 희석시키고, 고체를 여과해 내었다. 조 물질을 감압 하에 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여(80 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 100% 디클로로메탄, 뒤이어 0-35% 에틸 아세테이트/ 헥산), 중간체 H3을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 8.32 - 8.23 (m, 2H), 7.52 - 7.34 (m, 4H), 7.31 - 7.18 (m, 3H), 4.15 - 4.02 (m, 1H), 3.86 - 3.74 (m, 2H), 1.39 - 1.28 (m, 3H), 1.32 - 1.19 (m, 2H), 0.89 - 0.76 (m, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -1.35, -1.57. LCMS: MS m/z = 450.94 [M+1]; tR = 1.71분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN.
Figure pct00104
2,2-디메틸부틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 중간체 4(0.015 g, 0.044 mmol)와 중간체 H3(0.022 g, 0.049 mmol)과 마그네슘 클로라이드(0.006 g, 0.067 mmol)의 혼합물에 테트라하이드로푸란(0.5 mL)을 실온에서 첨가하고, 뒤이어 N,N-디이소프로필에틸아민(0.019 mL, 0.111 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 그 후에, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 수득된 잔류물을 포화된 소듐 클로라이드 용액 및 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 층을 분할하고, 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 수득된 잔류물을 무수 아세토니트릴(0.5 mL)에 용해시키고, 얼음 배쓰에서 냉각시키고, 뒤이어 진한 염산(0.088 mL, 1.058 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 얼음 배쓰에서 냉각시키고, 3 N 수성 소듐 하이드록사이드 용액으로 중화시켰다. 생성된 혼합물을 분취 HPLC(30분 진행에서 Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80 Å 150 x 30 mm 컬럼, 15%-85% 아세토니트릴/물 구배)에 의해 정제하여, 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.78 (d, J = 1.4 ㎐, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 7.27 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (dd, J = 5.8, 4.5 ㎐, 1H), 6.74 (dd, J = 9.9, 4.5 ㎐, 1H), 5.37 (dd, J = 8.2, 6.7 ㎐, 1H), 4.83 - 4.53 (m, 3H), 4.36 (dd, J = 16.6, 5.3 ㎐, 1H), 4.24 (ddd, J = 21.2, 5.7, 1.8 ㎐, 2H), 4.01 - 3.72 (m, 3H), 1.36 - 1.24 (m, 5H), 0.90 - 0.77 (m, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.72, 3.54. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -238.38 - -238.82 (m). LCMS: MS m/z = 610.05 [M+1]; tR = 1.32분 (부 이성질체), 1.33분 (주 이성질체); LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN. HPLC: tR = 5.021분 (부 이성질체), 5.093분 (주 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
Sp 부분입체이성질체 및 Rp 부분입체이성질체의 분리. 부분입체이성질체를 키랄 분취 HPLC에 의해 서로 단리하였다(Chiralpak IA 5 μm, 21X250 mm; 100% 에탄올).
Figure pct00105
Figure pct00106
실시예 8. 실시예 7의 제1 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.78 (s, 1H), 7.32 (t, J = 7.8 ㎐, 2H), 7.19 (m,3H), 6.86 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.75 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.37 (d, J = 8.2 ㎐, 1H), 4.81 - 4.56 (m, 3H), 4.37 (d, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.26 (d, J = 4.9 ㎐, 2H), 3.99 - 3.66 (m, 3H), 1.36 - 1.19 (m, 5H), 0.87 (s, 6H), 0.82 (t, J = 7.6 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.72. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -238.59 (t, J = 47.7 ㎐). LCMS: MS m/z = 610.11 [M+1]; tR = 1.21분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μl/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN. HPLC: tR = 5.007분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 9. 실시예 7의 제2 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.79 (s, 1H), 7.34 (t, J = 7.9 ㎐, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.35 (d, J = 8.3 ㎐, 1H), 4.81 - 4.55 (m, 3H), 4.33 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.21 (d, J = 5.8 ㎐, 2H), 3.94 (dd, J = 9.9, 7.1 ㎐, 1H), 3.85 (d, J = 10.7 ㎐, 1H), 3.76 (d, J = 10.6 ㎐, 1H), 1.36 - 1.24 (m, 5H), 0.89 - 0.77 (m, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.54. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -238.76 (t, J = 47.7 ㎐). LCMS: MS m/z = 610.14 [M+1]; tR = 1.22분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN. HPLC: tR = 5.085분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 10. 메틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00107
메틸 ((퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. L-알라닌 메틸 에스테르 하이드로클로라이드(14 g, 100 mmol)를 50 mL의 무수 DCM과 혼합하고, 얼음 배쓰에서 분위기 질소 하에 교반하였다. 페닐 디클로로포스페이트(16.4 mL, 110 mmol)를 반응에 적가하고, 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 트리에틸아민(29.4 mL, 210 mmol)을 20 mL 무수 DCM과 혼합하고, 반응에 적가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하였다. 펜타플루오로페놀(18.4 g, 100 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 트리에틸아민(14.7 mL, 105 mmol)을 30 mL의 무수 DCM과 혼합하고, 반응에 적가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 DCM(50 mL)으로 희석시키고, 물(5x10 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조한 다음, 감압 하에 농축시켜, 고체를 얻었다. 이소프로필 에테르(130 mL)를 고체에 첨가하였다. 큰 조각의 고체를 분해시킨 다음, 20분 동안 초음파처리하고, 이후에 혼합물을 24시간 동안 교반하였다. 고체를 수집하고, 소량의 이소프로필 에테르(30 mL)로 세척하고, 고 진공 하에 건조하여, 중간체 K1을 얻었다. 중간체 K1은 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 7.40 - 7.32 (m, 2H), 7.28 - 7.19 (m, 3H), 4.20 (m, 1H), 3.96 - 3.85 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 1.47 (d, J = 7.1 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -1.62. 19F NMR (376 ㎒, 클로로포름-d) δ -153.82 (dd, J = 18.5, 2.7 ㎐), -159.99 (td, J = 21.8, 3.8 ㎐), -162.65 (dd, J = 22.2, 17.6 ㎐). LCMS: MS m/z = 425.9 [M+1], 423.9 [M-1], tR = 1.68분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 갖는 물, B: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴; 구배: 2 mL/분에서 0분-0.3분 5% B, 0.3분-1.5분 5-100% B, 1.5분-2분 100% B, 2분-2.2분 100-5% B. HPLC: tR = 3.76분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 2 mL/분에서 5분 이내에 2-98% B.
Figure pct00108
메틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 중간체 4(56 mg, 0.165 mmol) 및 중간체 K1(74 mg, 0.174 mmol)을 혼합하고, 5 mL의 무수 THF에 용해시켰다. 마그네슘 클로라이드(47 mg, 0.495 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. DIPEA(72 μL, 0.414 mmol)를 첨가하고, 반응물을 45℃에서 20시간 동안 교반하였다. 더 많은 중간체 K1(74 mg, 0.174 mmol)을 첨가하고, 반응물을 45℃에서 8시간 동안 교반하였다. 그 후에, 반응물을 rt에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc(10 mL)로 희석시키고, 물(3x5 mL), 그 후에 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하였다(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0-100% 에틸 아세테이트/헥산). 분획을 조합하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 ACN(5 mL)에 용해시키고, 얼음 배쓰에서 교반하였다. 진한 수성 염산(250 μL)을 적가하였다. 반응물을 얼음 배쓰에서 1시간 동안 교반하였다. 얼음 배쓰를 제거하고, 반응물을 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc(15 mL)로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(20 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 유기 추출물을 수집하고, 염수(10 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 C18 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하였다(Phenomenex Gemini 컬럼, 5-95% ACN/물). 분획을 조합하고, 동결-건조하여, 생성물을 얻었다. 생성물은 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.79 (s, 1H), 7.38 - 7.30 (m, 2H), 7.26 - 7.15 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.36 (d, J = 8.4 ㎐, 1H), 4.81 - 4.57 (m, 3H), 4.34 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.20 (dt, J = 5.7, 1.9 ㎐, 2H), 3.91 (dq, J = 10.0, 7.1 ㎐, 1H), 3.65 (s, 3H), 1.29 (dd, J = 7.1, 1.1 ㎐,3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.49. LCMS: MS m/z = 540.0 [M+1], 538.2 [M-1], tR = 1.14분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 갖는 물, B: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴; 구배: 2 mL/분에서 0분-0.3분 5% B, 0.3분-1.5분 5-100% B, 1.5분-2분 100% B, 2분-2.2분 100-5% B. HPLC: tR = 2.23분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 2 mL/분에서 5분 이내에 2-98% B. HPLC: tR = 3.770분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 11. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-2-((((((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시) 메틸)테트라하이드로푸란-3,4-디일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00109
실시예 10(13 mg, 0.024 mmol)을 2 mL 무수 THF에 용해시키고, rt에서 교반하였다. 이소부티르산 무수물(8 μL, 0.048 mmol) 및 DMAP(0.3 mg, 0.0024 mmol)를 첨가하고, 반응물을 30분 동안 교반하였다. 더 많은 이소부티르산 무수물(4 μL, 0.024 mmol)을 첨가하고, 반응물을 30분 동안 교반하였다. 그 후에, 반응물을 EtOAc(10 mL)로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(2x5 mL), 뒤이어 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조한 다음, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하였다(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0-10% 메탄올/DCM). 분획을 조합하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 ACN에 용해시키고, 물로 희석시키고, 동결-건조하여, 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.79 (s, 1H), 7.38 - 7.13 (m, 5H), 6.79 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.61 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.88 - 5.77 (m, 2H), 5.60 (d, J = 7.8 ㎐, 1H), 4.79 - 4.52 (m, 2H), 4.39 - 4.21 (m, 2H), 3.96 (dq, J = 10.2, 7.1 ㎐, 1H), 3.66 (s, 3H), 2.68 (p, J = 7.0 ㎐, 1H), 2.46 (p, J = 7.0 ㎐, 1H), 1.31 (dd, J = 7.1, 1.0 ㎐, 3H), 1.22 (dd, J = 7.0, 1.1 ㎐, 6H), 1.07 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.03 (d, J = 7.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.38. LCMS: MS m/z = 680.2 [M+1], 678.3 [M-1], tR = 1.60분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 갖는 물, B: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴; 구배: 2 mL/분에서 0분-0.3분 5% B, 0.3분-1.5분 5-100% B, 1.5분-2분 100% B, 2분-2.2분 100-5% B. HPLC: tR = 3.17분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 2 mL/분에서 5분 이내에 2-98% B. HPLC: tR = 5.460분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 12. 이소프로필 ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00110
테트라하이드로푸란(1 mL)을 중간체 4(200 mg, 0.591 mmol)와 중간체 M1(문헌[J.Org.Chem. 2011, 76(20), pp 8311-8319]; 322 mg, 0.709 mmol)과 마그네슘 클로라이드(84 mg, 0.887 mmol)의 혼합물에 rt에서 첨가하였다. 혼합물을 40℃까지 10분 동안 가열하고, N,N-디이소프로필에틸아민(0.257 mL, 1.478 mmol)을 첨가하였다. 40℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 rt로 냉각시키고, 감압 하에 농축 침강시켰다. 조 잔류물을 에틸 아세테이트(20 mL)에 용해시키고, 생성된 혼합물을 물(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 아세토니트릴(7 mL)에 용해시키고, 진한 수성 염산 용액(0.493 mL)을 0℃에서 적가하였다. 0℃에서 2시간 후, 반응 혼합물을 0℃에서 에틸 아세테이트(30 mL) 및 물(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.83 (s, 1H), 7.71 (bs, 2H), 7.43 - 7.30 (m, 2H), 7.25 - 7.15 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.68 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.04 (dd, J = 13.2, 10.1 ㎐, 1H), 5.29 - 5.22 (m, 2H), 5.14 (d, J = 7.3 ㎐, 1H), 4.86 (hept, J = 6.2 ㎐, 1H), 4.70 - 4.58 (m, 1H), 4.57 - 4.44 (m, 2H), 4.20 (t, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.05 - 3.91 (m, 2H), 3.85 - 3.68 (m, 1H), 1.21 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.15 (dd, J = 6.3, 2.8 ㎐, 6H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -236.69 (t, J = 48.1 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 3.51. LCMS: MS m/z = 568.15 [M+1], tR = 1.19분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴. HPLC: tR = 2.55분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN. HPLC: tR = 4.32분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 13. 에틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00111
테트라하이드로푸란(4 mL)을 중간체 4(200 mg, 0.591 mmol)와 중간체 N1(국제공개 WO 2012075140호; 415 mg, 0.946 mmol)과 마그네슘 클로라이드(84 mg, 0.887 mmol)의 혼합물에 rt에서 첨가하였다. 혼합물을 40℃까지 10분 동안 가열하고, N,N-디이소프로필에틸아민(0.257 mL, 1.478 mmol)을 첨가하였다. 40℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 rt로 냉각시키고, 감압 하에 농축 침강시켰다. 조 잔류물을 에틸 아세테이트(20 mL)에 용해시키고, 생성된 혼합물을 물(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 아세토니트릴(3 mL)에 용해시키고, 진한 수성 염산 용액(0.514 mL)을 0℃에서 적가하였다. 0℃에서 2시간 후, 반응 혼합물을 0℃에서 에틸 아세테이트(30 mL) 및 물(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.83 (s, 1H), 7.71 (bs, 2H), 7.45 - 7.33 (m, 2H), 7.31 - 7.09 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.68 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.08 (dd, J = 13.3, 10.1 ㎐, 1H), 5.32 - 5.22 (m, 2H), 5.14 (d, J = 7.3 ㎐, 1H), 4.70 - 4.44 (m, 3H), 4.19 (t, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.11 - 3.94 (m, 4H), 3.88 - 3.74 (m, 1H), 1.22 (d, J = 6.7 ㎐, 3H), 1.15 (t, J = 7.1 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -236.69 (t, J = 48.0 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 3.46. LCMS: MS m/z = 554.11 [M+1], tR = 1.13분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μl/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴. HPLC: tR = 2.42분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN. HPLC: tR = 4.05분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 14. 사이클로헥실 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00112
(S)-1-(사이클로헥실옥시)-1-옥소프로판-2-암미늄 클로라이드. L-알라닌(20.0 g, 224.48 mmol)과 사이클로헥사놀(213.6 g, 2132.6 mmol)의 혼합물에 트리메틸실릴 클로라이드(76.56 mL, 695.9 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 밤새 교반시켰다. 반응물을 농축시키고, 수득된 잔류물을 톨루엔 2x100 mL, 뒤이어 헥산 500 mL로 공동증발시켰다. 수득된 잔류물을 고 진공 하에 15분 동안 건조하고, 헥산을 교반하면서 서서히 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 고체를 여과에 의해 분리하고, 헥산으로 세척하고, 고 진공 하에 밤새 건조하여, 중간체 O1을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 8.53 (d, J = 17.7 ㎐, 3H), 4.77 (tt, J = 8.4, 3.7 ㎐, 1H), 3.99 (t, J = 6.9 ㎐, 1H), 1.88 - 1.59 (m, 4H), 1.54 - 1.12 (m, 8H).
Figure pct00113
사이클로헥실 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 무수 디클로로메탄(400 mL) 중 중간체 O1(23.2 g, 111.7 mmol) 및 페닐 디클로로포스페이트(16.2 mL, 108.91 mmol)의 용액에 트리에틸아민(35 mL, 251.33 mmol)을 0℃에서 아르곤 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 그 후에, 4-니트로페놀(14.53 g, 104.44 mmol) 및 트리에틸아민(18 mL, 125.66 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, Et2O로 희석시키고, 고체를 여과해 내었다. 조 물질을 감압 하에 농축시키고, 수득된 잔류물을 에틸 아세테이트에 용해시키고, 포화된 수성 소듐 카르보네이트 용액 및 염수로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여(330 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0-10% 메탄올/디클로로메탄), 원하는 화합물을 부분입체이성질체 혼합물(41.3 g, 83%, 부분입체이성질체 혼합물)로서 얻었다. 이렇게 해서 수득된 물질을 고 진공 하에 밤새 건조하여, 고체화를 초래하였다. 디이소프로필 에테르(225 mL)를 고체화된 물질에 첨가하고, 광범위한 초음파처리로 미세한 고체를 초래하였다. 여과에 의한 고체의 단리로 중간체 O2를 1H NMR 및 31P NMR에 의해 단일 이성질체로서 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 8.32 - 8.23 (m, 2H), 7.52 - 7.40 (m, 2H), 7.38 (dd, J = 8.6, 7.2 ㎐, 2H), 7.29 - 7.17 (m, 3H), 4.68 (dp, J = 8.7, 3.8 ㎐, 1H), 4.02 (dq, J = 9.8, 7.1 ㎐, 1H), 1.78 - 1.64 (m, 3H), 1.57 - 1.46 (m, 1H), 1.44 - 1.22 (m, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ -1.32 (s) LCMS: MS m/z = 448.86 [M+1]; tR = 1.3분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN
Figure pct00114
사이클로헥실 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 테트라하이드로푸란(2 mL)을 중간체 4(200 mg, 0.591 mmol)와 중간체 O2(318 mg, 0.709 mmol)와 마그네슘 클로라이드(84 mg, 0.887 mmol)의 혼합물에 rt에서 첨가하였다. 혼합물을 50℃까지 10분 동안 가열하고, N,N-디이소프로필에틸아민(0.257 mL, 1.478 mmol)을 첨가하였다. 50℃에서 3시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 rt로 냉각시키고, 감압 하에 농축 침강시켰다. 조 잔류물을 에틸 아세테이트(20 mL)에 용해시키고, 생성된 혼합물을 물(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 아세토니트릴(7 mL)에 용해시키고, 진한 수성 염산 용액(0.493 mL)을 0℃에서 적가하였다. 0℃에서 2시간 후, 반응 혼합물을 0℃에서 에틸 아세테이트(30 mL) 및 물(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.83 (s, 1H), 7.71 (s, 2H), 7.43 - 7.30 (m, 2H), 7.27 - 7.11 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 6.69 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.17 - 5.94 (m, 1H), 5.36 - 5.19 (m, 2H), 5.14 (dd, J = 7.3, 1.0 ㎐, 1H), 4.70 - 4.59 (m, 2H), 4.58 - 4.45 (m, 2H), 4.21 (t, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.05 - 3.91 (m, 2H), 3.85 - 3.70 (m, 1H), 1.76 - 1.55 (m, 4H), 1.50 - 1.12 (m, 9H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -236.73 (t, J = 48.1 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 3.52. LCMS: MS m/z = 608.19 [M+1], tR = 1.31분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴. HPLC: tR = 2.89분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN. HPLC: tR = 4.90분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 15. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-((((((S)-1-(사이클로헥실옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-2-(플루오로메틸)테트라하이드로푸란-3,4-디일 디아세테이트
Figure pct00115
N,N'-디이소프로필카르보디이미드(42 mg, 0.33 mmol) 및 아세트산(20 mg, 0.33 mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(1.0 mL)에 아르곤 하에 용해시키고, 혼합물을 rt에서 30분 동안 교반하였다. 실시예 14(40 mg, 0.07 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘(8 mg, 0.07 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 교반하였다. 2시간 후, 메탄올(0.5 mL)을 첨가하고, 혼합물을 20분 동안 교반한 다음, 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(10 mL)으로 2회 그리고 염수(10 mL)로 1회 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 7.92 (s, 1H), 7.32 - 7.25 (m, 3H), 7.25 - 7.20 (m, 2H), 7.17 - 7.10 (m, 1H), 6.62 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.51 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.86 (dd, J = 7.5, 5.4 ㎐, 1H), 5.80 (d, J = 5.4 ㎐, 1H), 5.64 (d, J = 7.5 ㎐, 1H), 4.75 (tt, J = 8.8, 3.9 ㎐, 1H), 4.71 - 4.63 (m, 1H), 4.60 - 4.52 (m, 1H), 4.33 (ddd, J = 10.8, 5.7, 1.9 ㎐, 1H), 4.25 (ddd, J = 10.8, 5.8, 2.2 ㎐, 1H), 4.08 - 3.97 (m, 2H), 2.12 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.96 - 1.62 (m, 4H), 1.57 - 1.17 (m, 7H). 19F NMR (376 ㎒, 클로로포름-d) δ -234.25 (t, J = 46.8 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ 2.69. LCMS: MS m/z = 692.34 [M+1], tR = 1.51분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴. HPLC: tR = 3.30분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN.
실시예 16. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-((((((S)-1-(사이클로헥실옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-2-(플루오로메틸)테트라하이드로푸란-3,4-디일 디프로피오네이트
Figure pct00116
프로피온산 무수물(17 mg, 0.13 mmol) 및 실시예 14(40 mg, 0.07 mmol)를 무수 테트라하이드로푸란(1.0 mL)에 아르곤 하에 용해시키고, 혼합물을 rt에서 5분 동안 교반하였다. 4-디메틸아미노피리딘(8 mg, 0.07 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 교반하였다. 2시간 후, 메탄올(0.5 mL)을 첨가하고, 혼합물을 20분 동안 교반한 다음, 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(10 mL)으로 2회 그리고 염수(10 mL)로 1회 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 7.91 (s, 1H), 7.32 - 7.25 (m, 3H), 7.24 - 7.20 (m, 2H), 7.16 - 7.11 (m, 1H), 6.60 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.50 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.98 - 5.91 (m, 2H), 5.88 (dd, J = 7.3, 5.4 ㎐, 1H), 5.83 (d, J = 5.4 ㎐, 1H), 5.63 (d, J = 7.3 ㎐, 1H), 4.79 - 4.71 (m, 1H), 4.67 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 4.56 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.33 (ddd, J = 10.8, 5.6, 1.8 ㎐, 1H), 4.25 (ddd, J = 10.8, 5.8, 2.2 ㎐, 1H), 4.11 - 4.06 (m, 1H), 4.05 - 3.97 (m, 1H), 2.39 (q, J = 7.6 ㎐, 2H), 2.26 (qd, J = 7.6, 1.9 ㎐, 2H), 1.98 (d, J = 14.2 ㎐, 1H), 1.83 - 1.75 (m, 2H), 1.68 (t, J = 8.1 ㎐, 2H), 1.55 - 1.28 (m, 6H), 1.17 (t, J = 7.6 ㎐, 3H), 1.07 (t, J = 7.6 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, 클로로포름-d) δ -234.18 (t, J = 46.9 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ 2.73. LCMS: MS m/z = 720.60 [M+1], tR = 1.63분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μl/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴. HPLC: tR = 3.52분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN.
실시예 17. 헥실 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00117
헥실 L -알라니네이트 하이드로클로라이드. L-알라닌(4.45 g, 50 mmol)을 1-헥사놀(30 mL)과 혼합하였다. TMS-Cl(19.1 mL, 150 mmol)을 적가하고, 반응물을 RT에서 16시간 동안 교반하였다. 더 많은 1-헥사놀(10 mL) 및 TMS-Cl(5 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃까지 가열하고, 20시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 오일을 고 진공 하에 건조하고, 오일을 서서히 고체화시켜, 중간체 R1을 하이드로클로라이드 염으로서 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.77 (s, 3H), 4.20 (m, 3H), 1.71 (m, 5H), 1.47 - 1.19 (m, 6H), 1.01 - 0.78 (m, 3H).
Figure pct00118
헥실 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 페닐 디클로로포스페이트(3.7 mL, 25 mmol)를 무수 DCM(50 mL)에 용해시키고, 얼음 배쓰에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 중간체 R1(5.2 g, 25 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 반응물을 30분 동안 교반하였다. 트리에틸아민(8.4 mL, 60 mmol)을 적가한 다음, 60분 동안 교반하였다. p-니트로페놀(3.1 g, 22.5 mmol) 및 트리에틸아민(4.2 mL, 30 mmol)을 첨가하였다. 얼음 배쓰를 제거하고, 반응 혼합물을 RT에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 DCM(100 mL)으로 희석시키고, 물(3 x 20 mL)로 세척하였다. 유기물을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하였다(120 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0-20% 에틸 아세테이트/헥산). 분획을 조합하고, 감압 하에 농축시켜, 중간체 R2(부분입체이성질체 혼합물)를 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.25 (d, J = 9.1 ㎐, 2H), 7.51 - 7.32 (m, 4H), 7.32 - 7.15 (m, 3H), 4.14 (m, 3H), 3.93 (m, 1H), 1.62 (m, 2H), 1.44 (m, 3H), 1.39 - 1.20 (m, 6H), 0.99 - 0.82 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.03 (s), -3.08 (s).
Figure pct00119
헥실 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 테트라하이드로푸란(1 mL)을 중간체 4(100 mg, 0.296 mmol)와 중간체 R2(173 mg, 0.384 mmol)와 마그네슘 클로라이드(42 mg, 0.443 mmol)의 혼합물에 rt에서 첨가하였다. 혼합물을 50℃까지 10분 동안 가열하고, N,N-디이소프로필에틸아민(0.129 mL, 0.739 mmol)을 첨가하였다. 50℃에서 3시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 rt로 냉각시키고, 감압 하에 농축 침강시켰다. 조 잔류물을 에틸 아세테이트(20 mL)에 용해시키고, 생성된 혼합물을 물(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 아세토니트릴(7 mL)에 용해시키고, 진한 수성 염산 용액(0.246 mL)을 0℃에서 적가하였다. 0℃에서 2시간 후, 반응 혼합물을 0℃에서 에틸 아세테이트(30 mL) 및 물(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여, 생성물(부분입체이성질체 혼합물)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.83 (s, 0.24 H), 7.83 (s, 0.76 H), 7.72 (bs, 2H), 7.41 - 7.33 (m, 2H), 7.26 - 7.14 (m, 3H), 6.88 - 6.82 (m, 1H), 6.70 (d, J = 4.5 ㎐, 0.26 H), 6.68 (d, J = 4.5 ㎐, 0.74 H), 6.13 - 5.99 (m, 1H), 5.37 - 5.06 (m, 3H), 4.74 - 4.44 (m, 3H), 4.25 - 4.11 (m, 1H), 4.06 - 3.93 (m, 4H), 3.90 - 3.76 (m, 1H), 1.58 - 1.44 (m, 2H), 1.34 - 1.11 (m, 9H), 0.87 - 0.74 (m, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -236.47 (t, J = 48.1 ㎐), -236.76 (t, J = 48.1 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 3.55, 3.47. LCMS: MS m/z = 610.16 [M+1], tR = 1.35분 (부 이성질체) 및 1.37분 (주 이성질체); LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴. HPLC: tR = 3.02분 (부 이성질체) 및 3.06분 (주 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN. HPLC: tR = 5.16분 (부 이성질체) 및 5.23분 (주 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
Sp 부분입체이성질체 및 Rp 부분입체이성질체의 분리. 부분입체이성질체를 키랄 분취 SFC에 의해 서로 단리하여(Chiralpak AD-H 5 μm, 21X250 mm; 30% 메탄올), 실시예 18 및 실시예 19를 제공하였다.
실시예 18. 헥실 ((R)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00120
실시예 17의 제1 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.83 (s, 1H), 7.36 - 7.28 (m, 2H), 7.23 - 7.09 (m, 3H), 6.88 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.69 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.99 (dd, J = 13.0, 10.1 ㎐, 1H), 5.22 (d, J = 8.6 ㎐, 1H), 4.69 - 4.57 (m, 1H), 4.54 - 4.42 (m, 2H), 4.17 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.03 - 3.90 (m, 4H), 3.84 - 3.69 (m, 1H), 1.53 - 1.40 (m, 2H), 1.30 - 1.05 (m, 9H), 0.82 - 0.73 (m, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -236.46 (t, J = 48.1 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 3.54. LCMS: MS m/z = 610.16 [M+1], tR = 1.35분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴. HPLC: tR = 3.02분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN. HPLC: tR = 5.16분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 19. 헥실 ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00121
실시예 17의 제2 용리 부분입체이성질체: 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.83 (s, 1H), 7.73 (bs, 2H), 7.45 - 7.27 (m, 2H), 7.29 - 7.10 (m, 3H), 6.86 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.68 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.06 (dd, J = 13.2, 10.1 ㎐, 1H), 5.28 - 5.19 (m, 2H), 5.18 - 5.09 (m, 1H), 4.70 - 4.57 (m, 1H), 4.58 - 4.45 (m, 2H), 4.23 - 4.17 (m, 1H), 4.05 - 3.95 (m, 4H), 3.88 - 3.79 (m, 1H), 1.57 - 1.48 (m, 2H), 1.30 - 1.18 (m, 9H), 0.85 - 0.80 (m, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -236.75 (t, J = 48.1 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 3.47. LCMS: MS m/z = 610.16 [M+1], tR = 1.37분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μl/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴. HPLC: tR = 3.06분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN. HPLC: tR = 5.23분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 20. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-2-((((S)-(((S)-1-이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-디일 디아세테이트
Figure pct00122
N,N'-디이소프로필카르보디이미드(56 mg, 0.44 mmol) 및 아세트산(26 mg, 0.44 mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(2.0 mL)에 아르곤 하에 용해시키고, 혼합물을 rt에서 30분 동안 교반하였다. 실시예 12(50 mg, 0.09 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘(11 mg, 0.09 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 교반하였다. 2시간 후, 메탄올(0.5 mL)을 첨가하고, 혼합물을 20분 동안 교반한 다음, 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(10 mL)으로 2회 그리고 염수(10 mL)로 1회 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.86 (s, 1H), 7.80 (bs, 2H), 7.41 - 7.32 (m, 2H), 7.28 - 7.11 (m, 3H), 6.83 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.66 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.13 (dd, J = 13.2, 10.1 ㎐, 1H), 5.75 (dd, J = 8.7, 5.5 ㎐, 1H), 5.67 (d, J = 5.4 ㎐, 1H), 5.53 (d, J = 8.7 ㎐, 1H), 4.86 (hept, J = 6.2 ㎐, 1H), 4.73 - 4.61 (m, 1H), 4.61 - 4.49 (m, 1H), 4.21 - 4.07 (m, 2H), 3.89 - 3.71 (m, 1H), 2.13 (s, 3H), 1.93 (s, 3H), 1.21 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.15 (dd, J = 6.2, 2.8 ㎐, 6H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -234.62 (t, J = 46.9 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 3.49. LCMS: MS m/z = 652.41 [M+1], tR = 1.38분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴. HPLC: tR = 2.98분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN. HPLC: tR = 5.03분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 21. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-((((((S)-1-에톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-2-(플루오로메틸)테트라하이드로푸란-3,4-디일 디아세테이트
Figure pct00123
N,N'-디이소프로필카르보디이미드(57 mg, 0.45 mmol) 및 아세트산(27 mg, 0.45 mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(2.0 mL)에 아르곤 하에 용해시키고, 혼합물을 rt에서 30분 동안 교반하였다. 실시예 13(50 mg, 0.09 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘(11 mg, 0.09 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 교반하였다. 2시간 후, 메탄올(0.5 mL)을 첨가하고, 혼합물을 20분 동안 교반한 다음, 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(10 mL)으로 2회 그리고 염수(10 mL)로 1회 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.86 (s, 1H), 7.80 (bs, 2H), 7.40 - 7.33 (m, 2H), 7.25 - 7.16 (m, 3H), 6.83 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.66 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.16 (dd, J = 13.3, 10.1 ㎐, 1H), 5.75 (dd, J = 8.7, 5.5 ㎐, 1H), 5.67 (d, J = 5.4 ㎐, 1H), 5.53 (d, J = 8.7 ㎐, 1H), 4.74 - 4.44 (m, 2H), 4.21 - 4.09 (m, 2H), 4.05 - 3.97 (m, 2H), 3.91 - 3.75 (m, 1H), 2.13 (s, 3H), 1.93 (s, 3H), 1.22 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.14 (t, J = 7.1 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -234.59 (t, J = 46.8 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 3.44. LCMS: MS m/z = 638.26 [M+1], tR = 1.32분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴. HPLC: tR = 2.84분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN. HPLC: tR = 4.78분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 22. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-2-((((S)-(((S)-1-이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-디일 디프로피오네이트
Figure pct00124
실시예 12(50 mg, 0.09 mmol)를 아르곤 하에 무수 테트라하이드로푸란(2.0 mL)에 용해시켰다. 프로피온산 무수물(24 mg, 0.19 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘(1 mg, 0.01 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 교반하였다. 30분 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(10 mL)으로 2회 그리고 염수(10 mL)로 1회 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.85 (s, 1H), 7.80 (bs, 2H), 7.41 - 7.32 (m, 2H), 7.28 - 7.13 (m, 3H), 6.83 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.66 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.13 (dd, J = 13.2, 10.1 ㎐, 1H), 5.78 (dd, J = 8.5, 5.5 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 5.5 ㎐, 1H), 5.53 (d, J = 8.5 ㎐, 1H), 4.96 - 4.76 (m, 1H), 4.73 - 4.62 (m, 1H), 4.62 - 4.47 (m, 1H), 4.26 - 4.05 (m, 2H), 3.91 - 3.68 (m, 1H), 2.46 - 2.37 (m, 2H), 2.31 - 2.00 (m, 2H), 1.21 (d, J = 7.1 ㎐, 3H), 1.14 (dd, J = 6.2, 2.4 ㎐, 6H), 1.07 (t, J = 7.5 ㎐, 3H), 0.93 (t, J = 7.5 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -234.55 (t, J = 46.8 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 3.50. LCMS: MS m/z = 680.51 [M+1], tR = 1.48분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μl/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴. HPLC: tR = 3.23분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN. HPLC: tR = 5.50분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 23. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-2-((((S)-(((S)-1-이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-디일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00125
실시예 12(50 mg, 0.09 mmol)를 아르곤 하에 무수 테트라하이드로푸란(2.0 mL)에 용해시켰다. 이소부티르산 무수물(29 mg, 0.19 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘(1 mg, 0.01 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 교반하였다. 4시간 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(10 mL)으로 2회 그리고 염수(10 mL)로 1회 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.85 (s, 1H), 7.78 (bs, 2H), 7.41 - 7.31 (m, 2H), 7.26 - 7.13 (m, 3H), 6.82 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.64 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.13 (dd, J = 13.2, 10.0 ㎐, 1H), 5.75 (dd, J = 8.3, 5.4 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 5.5 ㎐, 1H), 5.53 (d, J = 8.3 ㎐, 1H), 4.86 (hept, J = 6.3 ㎐, 1H), 4.74 - 4.63 (m, 1H), 4.63 - 4.51 (m, 1H), 4.23 - 4.06 (m, 2H), 3.90 - 3.70 (m, 1H), 2.73 - 2.58 (m, 1H), 2.41 (hept, J = 7.0 ㎐, 1H), 1.21 (d, J = 7.1 ㎐, 3H), 1.17 - 1.10 (m, 12H), 0.95 (dd, J = 17.5, 7.0 ㎐, 6H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -234.04 (t, J = 46.7 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 3.53. LCMS: MS m/z = 708.42 [M+1], tR = 1.61분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μl/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴. HPLC: tR = 3.46분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN. HPLC: tR = 5.92분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 24. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-((((((S)-1-에톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-2-(플루오로메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-디일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00126
실시예 13(50 mg, 0.09 mmol)을 아르곤 하에 무수 테트라하이드로푸란(2.0 mL)에 용해시켰다. 이소부티르산 무수물(30 mg, 0.19 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘(1 mg, 0.01 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 교반하였다. 4시간 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(10 mL)으로 2회 그리고 염수(10 mL)로 1회 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.85 (s, 1H), 7.79 (bs, 2H), 7.40 - 7.32 (m, 2H), 7.26 - 7.14 (m, 3H), 6.82 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.64 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.16 (dd, J = 13.3, 10.1 ㎐, 1H), 5.75 (dd, J = 8.4, 5.5 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 5.5 ㎐, 1H), 5.53 (d, J = 8.3 ㎐, 1H), 4.77 - 4.65 (m, 1H), 4.62 - 4.51 (m, 1H), 4.21 - 4.12 (m, 2H), 4.10 - 3.96 (m, 2H), 3.95 - 3.73 (m, 1H), 2.65 (hept, J = 7.0 ㎐, 1H), 2.41 (hept, J = 7.0 ㎐, 1H), 1.22 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.18 - 1.03 (m, 9H), 0.96 (dd, J = 17.6, 7.0 ㎐, 6H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -234.01 (t, J = 46.7 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 3.49. LCMS: MS m/z = 694.42 [M+1], tR = 1.55분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μl/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴. HPLC: tR = 3.34분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN. HPLC: tR = 5.70분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 25. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-((((((S)-1-에톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-2-(플루오로메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-디일 디프로피오네이트
Figure pct00127
실시예 13(50 mg, 0.09 mmol)을 아르곤 하에 무수 테트라하이드로푸란(2.0 mL)에 용해시켰다. 프로피온산 무수물(25 mg, 0.19 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘(1 mg, 0.01 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 교반하였다. 30분 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(10 mL)으로 2회 그리고 염수(10 mL)로 1회 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.85 (s, 1H), 7.79 (bs, 2H), 7.41 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 6.83 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.66 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.16 (dd, J = 13.3, 10.1 ㎐, 1H), 5.78 (dd, J = 8.6, 5.5 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 5.5 ㎐, 1H), 5.53 (d, J = 8.5 ㎐, 1H), 4.73 - 4.62 (m, 1H), 4.61 - 4.49 (m, 1H), 4.21 - 4.11 (m, 2H), 4.09 - 3.98 (m, 2H), 3.91 - 3.74 (m, 1H), 2.46 - 2.37 (m, 2H), 2.29 - 2.12 (m, 2H), 1.22 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.14 (t, J = 7.1 ㎐, 3H), 1.07 (t, J = 7.5 ㎐, 3H), 0.93 (t, J = 7.5 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -234.52 (t, J = 46.8 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 3.45. LCMS: MS m/z = 666.35 [M+1], tR = 1.43분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μl/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴. HPLC: tR = 3.11분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN. HPLC: tR = 5.27분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 26. 2-하이드록시-2-메틸프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00128
(S)-1-(2-(벤질옥시)-2-메틸프로폭시)-1-옥소프로판-2-암미늄 클로라이드. 아세토니트릴(20 mL) 중 Boc-L-알라닌(1.26 g, 6.66 mmol)과 2-벤질옥시-2-메틸프로판올(1.0 g, 5.55 mmol)과 EDCI(1.12 g, 7.21 mmol)의 혼합물에 DMAP(2.04 g, 8.32 mmol)를 첨가하였다. 그 후에, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, EtOAc로 희석시키고, 염수로 세척하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 진공내에서 농축시켰다. 수득된 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(헥산 중 EtOAc 0% → 60%)에 의해 정제하여 Boc-L-알라닌 프로필 에스테르를 얻었고, 이를 DCM(10 mL)에 용해시키고, 디옥산 중 4 N HCl(5.5 mL, 22.19 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 진공 내에서 농축시키고, ACN(10 mL)에 재용해시키고, 밤새 동결건조하여, 중간체 AA1을 얻었고, 다음 반응에 사용하였다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.82 (s, 3H), 7.42 - 7.07 (m, 5H), 4.44 (s, 2H), 4.24 (m, 2H), 4.08 (d, J = 11.2 ㎐, 1H), 1.70 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.28 (d, J = 2.4 ㎐, 6H). LCMS m/z = 251.97 [유리 염기 M+1], tR = 0.85분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN
Figure pct00129
2-(벤질옥시)-2-메틸프로필 ((4-니트로페녹시)(페녹시) 포스포릴)-L-알라니네이트. DCM(20 mL) 중 중간체 AA1(832 mg, 2.89 mmol)의 용액에 페닐 포스포로디클로리데이트(0.43 mL, 2.89 mmol)를 -78℃에서 한꺼번에 첨가하고, 트리에틸아민(0.80 mL, 5.76 mmol)을 -78℃에서 5분에 걸쳐 적가하였다. 생성된 혼합물을 드라이 아이스 배쓰의 제거 후 30분 동안 교반하고, -78℃까지 냉각시키고, p-니트로페놀(402 mg, 2.89 mmol)을 한꺼번에 첨가하고, 트리에틸아민(0.40 mL, 2.89 mmol)을 -78℃에서 5분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 드라이 아이스 배쓰의 제거 후 50분 동안 교반한 다음, DCM으로 희석시키고, 염수로 세척하고, 진공 내에서 농축시키고, 생성된 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(헥산 중 EtOAc 0% → 60%)에 의해 정제하여, 중간체 AA2(부분입체이성질체 혼합물)를 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.25 - 8.12 (m, 2H), 7.41 - 7.14 (m, 12H), 4.45 (m, 2H), 4.31 - 4.12 (m, 2H), 4.07 (m, 1H), 3.89 (m, 1H), 1.41 (m, 3H), 1.27 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.10, -3.18. LCMS m/z = 528.78 [M+1], tR = 1.70분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN
Figure pct00130
2-(벤질옥시)-2-메틸프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2--(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 중간체 5(0.04 g, 0.134 mmol)와 중간체 AA2(0.081 g, 0.153 mmol)와 마그네슘 클로라이드(0.064 g, 0.671 mmol)의 혼합물에 N,N-디메틸포름아미드(2 mL)를 실온에서 첨가하고, 뒤이어 N,N-디이소프로필에틸아민(0.07 mL, 0.402 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 3시간 동안 교반하였다. 그 후에, 반응 혼합물을 분취 HPLC(Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80 Å 150 x 30 mm 컬럼, 0-100% 아세토니트릴/물)에 의해 정제하여, 중간체 AA3을 얻었다. LCMS: MS m/z = 688.18 [M+1], tR = 1.20분 (주 이성질체) 및 1.22분 (부 이성질체); LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN.
Figure pct00131
2-하이드록시-2-메틸프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. THF(2 mL) 중 중간체 AA3(14 mg, 0.02 mmol)의 용액에 10% Pd/C(11 mg, 0.01 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 H2 기체 하에 15시간 동안 교반하고, 여과하였다. 여과물을 진공내에서 농축시키고, ACN에 용해시키고, 분취 HPLC에 의해 정제하여(Phenominex Gemini-NX 10u C18 110 Å 250 x 30 mm 컬럼, 수 중 ACN 10% 내지 100%), 생성물을 부분입체이성질체 혼합물로서 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.79 (s, 1H), 7.39 - 7.27 (m, 2H), 7.28 - 7.13 (m, 3H), 6.85 (dd, J = 6.9, 4.5 ㎐, 1H), 6.74 (dd, J = 11.1, 4.5 ㎐, 1H), 5.36 (dd, J = 8.3, 5.9 ㎐, 1H), 4.83 - 4.68 (m, 1H), 4.73 - 4.64 (m, 1H), 4.69 - 4.56 (m, 1H), 4.36 (dd, J = 16.6, 5.2 ㎐, 1H), 4.30 - 4.15 (m, 2H), 4.05 - 3.92 (m, 1H), 3.96 - 3.86 (m, 2H), 1.32 (ddd, J = 19.2, 7.2, 1.1 ㎐, 3H), 1.18-1.19 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.78, 3.54 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) -238.51 - -238.97 (m). LCMS: MS m/z = 598.05 [M+1], tR = 0.94분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN. HPLC: tR = 3.697분 (주 이성질체), 3.734분 (부 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 27. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-2-((((((S)-1-(2-하이드록시-2-메틸프로폭시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시) 포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-디일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00132
2-(벤질옥시)-2-메틸프로필 ((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-4-(플루오로메틸)-2,2-디메틸테트라하이드로푸로[3,4- d ][1,3]디옥솔-4-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 중간체 4(0.2 g, 0.591 mmol)와 중간체 AA2(0.375 g, 0.709 mmol)와 마그네슘 클로라이드(0.112 g, 1.182 mmol)의 혼합물에 테트라하이드로푸란(2.5 mL)을 실온에서 첨가하고, 뒤이어 N,N-디이소프로필에틸아민(0.258 mL, 1.478 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 후에, 반응 혼합물을 EtOAc로 희석시키고, 염수로 세척하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 진공내에서 농축시켰다. 수득된 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(헥산 중 EtOAc 0% → 100%)에 의해 정제하여, 중간체 BB1(부분입체이성질체 혼합물)을 얻었다. LCMS: MS m/z = 728.18 [M+1], tR = 1.39분 (부 이성질체) 및 1.42분 (주 이성질체); LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN.
Figure pct00133
2-(벤질옥시)-2-메틸프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2--(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 아세토니트릴(14 mL) 중 중간체 BB1(0.35 g, 0.481 mmol)의 얼음 냉각 용액에 진한 염산(0.35 mL, 9.6 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 4시간 동안 교반하였다. 그 후에, 반응 혼합물을 얼음으로 희석시키고, 수성 포화된 소듐 비카르보네이트 용액으로 중화시켰다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 분리하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 농축시켰다. 수득된 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(0-20% 메탄올/디클로로메탄)에 의해 정제하여, 중간체 BB2(부분입체이성질체 혼합물)를 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.78 (d, J = 1.1 ㎐, 1H), 7.38 - 7.12 (m, 10H), 6.88 - 6.81 (m, 1H), 6.74 (dd, J = 8.3, 4.5 ㎐, 1H), 5.36 (dd, J = 8.3, 6.6 ㎐, 1H), 4.82 - 4.67 (m, 1H), 4.71 - 4.63 (m, 1H), 4.67 - 4.55 (m, 1H), 4.45 (d, J = 4.8 ㎐, 2H), 4.34 (dd, J = 16.4, 5.2 ㎐, 1H), 4.29 - 4.12 (m, 3H), 4.10 - 3.90 (m, 2H), 1.35 - 1.21 (m, 9H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -238.39 - -238.76 (m). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.69, 3.49. LCMS: MS m/z = 688.10 [M+1]; tR = 1.20분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN.
Figure pct00134
(2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-((((((S)-1-(2-(벤질옥시)-2-메틸프로폭시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)-옥시)메틸)-2-(플루오로메틸)테트라하이드로푸란-3,4-디일 비스(2-메틸프로파노에이트). THF(2 mL) 중 중간체 BB2(0.05 g, 0.073 mmol)의 용액에 이소부티르산 무수물(0.072 mL, 0.436 mmol), 그 후에 DMAP(1.3 mg, 0.011 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 LCMS로 모니터링하면서 30분 동안 교반하고, 반응 혼합물을 메탄올로 켄칭시키고, 농축시켰다. 수득된 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(0-15% 메탄올/디클로로메탄)에 의해 정제하여, 중간체 BB3(부분입체이성질체 혼합물)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올- d 4 ) δ 7.79 (d, J = 4.1 ㎐, 1H), 7.36 - 7.12 (m, 10H), 6.87 - 6.73 (m, 1H), 6.60 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.87 - 5.76 (m, 2H), 5.59 (dd, J = 7.8, 4.4 ㎐, 1H), 4.76 - 4.63 (m, 1H), 4.65 - 4.51 (m, 1H), 4.46 (d, J = 1.4 ㎐, 2H), 4.35 (dt, J = 9.1, 2.8 ㎐, 1H), 4.26 (ddd, J = 10.7, 5.4, 2.1 ㎐, 1H), 4.18 (dd, J = 11.5, 2.7 ㎐, 1H), 4.13 - 3.93 (m, 2H), 2.73 - 2.59 (m, 1H), 2.53 - 2.39 (m, 1H), 1.34 (dd, J = 7.1, 1.1 ㎐, 2H), 1.31 - 1.18 (m, 13H), 1.01 - 1.09 (m, 6H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -235.36 (t, J = 47.0 ㎐), -235.91 (t, J = 47.0 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.45, 3.33. LCMS: MS m/z = 828.21 [M+1]; tR = 1.60분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN
Figure pct00135
(2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-2-((((((S)-1-(2-하이드록시-2-메틸프로폭시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시) 포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-디일 비스(2-메틸프로파노에이트). THF(2 mL) 중 중간체 BB3(40 mg, 0.048 mmol)의 용액에 10% Pd/C(26 mg, 0.024 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 H2 기체 하에 15시간 동안 교반하고, 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 수득된 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(0-15% 메탄올/디클로로메탄)에 의해 정제하여, 생성물(부분입체이성질체 혼합물)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.79 (d, J = 4.2 ㎐, 1H), 7.35 - 7.29 (m, 2H), 7.27 - 7.15 (m, 3H), 6.79 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.62 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.86 - 5.76 (m, 2H), 5.60 - 5.56 (m, 1H), 4.76 - 4.53 (m, 2H), 4.37 - 4.21 (m, 2H), 4.07 - 3.88 (m, 3H), 2.67 (p, J = 6.9 ㎐, 1H), 2.53 - 2.38 (m, 1H), 1.40 - 1.25 (m, 3H), 1.25 - 1.16 (m, 12H), 1.01 - 1.09 (m, 6H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -235.56 (t, J = 46.9 ㎐), -235.96 (t, J = 46.9 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.50, 3.45. LCMS: MS m/z = 738.17 [M+1]; tR = 1.29분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μl/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN. HPLC: tR = 5.31분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
Sp 부분입체이성질체 및 Rp 부분입체이성질체의 분리. 부분입체이성질체를 키랄 분취 SFC에 의해 서로 단리하였다(SFC chiralpak AD-H 5 μm, 21X250 mm; 30% 이소프로판올).
Figure pct00136
Figure pct00137
실시예 28. 실시예 27의 제1 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.80 (s, 1H), 7.36 - 7.27 (m, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.76 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.92 (dd, J = 7.6, 5.6 ㎐, 1H), 5.84 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 5.59 (d, J = 7.5 ㎐, 1H), 4.72 (s, 1H), 4.61 (s, 1H), 4.34 (d, J = 4.5 ㎐, 2H), 4.04 - 3.87 (m, 3H), 2.73 - 2.58 (m, 1H), 2.48 (p, J = 7.0 ㎐, 1H), 1.30 (dd, J = 7.2, 1.2 ㎐, 3H), 1.25 - 1.16 (m, 12H), 1.03 - 1.10 m, (6H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -235.93 (t, J = 47.0 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.49. LCMS: MS m/z = 738.16 [M+1]; tR = 1.31분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN. HPLC: tR = 5.282분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 29. 실시예 27의 제2 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.79 (s, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 2H), 7.25 (dt, J = 8.7, 1.2 ㎐, 2H), 7.18 - 7.20 (m, 1H), 6.79 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.62 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.88 - 5.77 (m, 2H), 5.59 (d, J = 7.8 ㎐, 1H), 4.78 - 4.65 (m, 1H), 4.66 - 4.53 (m, 1H), 4.34 (ddd, J = 10.8, 4.8, 1.8 ㎐, 1H), 4.27 (ddd, J = 10.7, 5.6, 2.1 ㎐, 1H), 4.09 - 3.92 (m, 2H), 3.91 (d, J = 10.9 ㎐, 1H), 2.67 (hept, J = 7.0 ㎐, 1H), 2.46 (hept, J = 7.1 ㎐, 1H), 1.37 (dd, J = 7.1, 1.0 ㎐, 3H), 1.26 - 1.10 (m, 12H), 1.02 - 1.08 (m, 6H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -235.54 (t, J = 46.8 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.44. LCMS: MS m/z = 738.17 [M+1]; tR = 1.30분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN. HPLC: tR = 5.277분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 30. (S)-2-메톡시프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00138
(S)-2-메톡시프로필 ( tert -부톡시카르보닐)- L -알라니네이트. (tert-부톡시카르보닐)-L-알라닌(2.519 g, 0.013 mol)을 아세토니트릴(12 mL)에서 얻고, (S)-2-메톡시프로판-1-올(1 g, 0.011 mol), 뒤이어 EDCI(2.239 g, 0.014 mol) 및 DMAP(2.033 g, 0.017 mol)를 한꺼번에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 반응물을 디클로로메탄 및 물로 희석시켰다. 층을 분할하고, 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과한 다음, 감압 하에 농축시켰다. 실리카 겔 크로마토그래피 0-30% 에틸아세테이트/헥산에 의한 정제는 중간체 EE1을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 7.31 (d, J = 7.4 ㎐, 1H), 4.10 - 3.92 (m, 3H), 3.50 (td, J = 6.3, 4.2 ㎐, 1H), 3.26 (s, 3H), 1.38 (s, 9H), 1.25 (d, J = 7.4 ㎐, 3H), 1.07 (d, J = 6.4 ㎐, 3H).
Figure pct00139
(S)-2-메톡시프로필)- L -알라니네이트 하이드로클로라이드. 중간체 EE1(2.165 g, 0.008 mol)을 무수 디클로로메탄(22 mL) 및 디옥산 중 4 N HCl(10.36 mL, 0.041 mol)에서 얻었다. 반응물을 주위 온도에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에 농축시키고, 디클로로메탄으로 공동증발시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 두고, 중간체 EE2를 정제 없이 그대로 다음 단계에 사용하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 8.64 (s, 3H), 4.17 - 3.99 (m, 3H), 3.53 (m, 1H), 3.24 (s, 3H), 1.41 (d, J = 7.2 ㎐, 3H), 1.07 (d, J = 6.4 ㎐, 3H).
Figure pct00140
(S)-2-메톡시프로필 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 무수 디클로로메탄(26 mL) 중 중간체 EE2(1.5 g, 7.589 mmol) 및 페닐 디클로로포스페이트(1.129 mL, 7.589 mmol)의 용액에 트리에틸아민(2.34 mL, 16.66 mmol)을 0℃에서 아르곤 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 후에, 4-니트로페놀(1.056 g, 7.589 mmol) 및 트리에틸아민(1.17 mL, 8.33 mmol)을 첨가하였다. 0℃에서 1시간 교반 후, 반응 혼합물을 Et2O로 희석시키고, 고체를 여과해 내었다. 조 물질을 감압 하에 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여(80 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 100% 디클로로메탄, 뒤이어 0-75% 에틸 아세테이트/ 헥산), 중간체 EE3(부분입체이성질체 혼합물)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 8.32 - 8.23 (m, 2H), 7.53 - 7.44 (m, 1H), 7.49 - 7.34 (m, 3H), 7.30 - 7.16 (m, 3H), 6.70 (ddd, J = 13.6, 10.0, 7.9 ㎐, 1H), 4.08 - 3.89 (m, 3H), 3.48 - 3.36 (m, 1H), 3.19 (d, J = 1.0 ㎐, 3H), 1.26 - 1.11 (m, 3H), 1.01 (dd, J = 6.4, 1.5 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, DMSO- d 6 ) δ -1.26, -1.47. LCMS: MS m/z = 438.99 [M+1]; tR = 1.43분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN.
Figure pct00141
(S)-2-메톡시프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 중간체 4(0.15 g, 0.443 mmol)와 중간체 EE3(0.214 g, 0.488 mmol)과 마그네슘 클로라이드(0.063 g, 0.665 mmol)의 혼합물에 테트라하이드로푸란(1.5 mL)을 실온에서 첨가하고, 뒤이어 N,N-디이소프로필에틸아민(0.193 mL, 1.108 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 그 후에, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 수득된 잔류물을 분취 HPLC(Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80 Å 150 x 30 mm 컬럼, 15-85% 아세토니트릴/물)에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 조합하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 무수 아세토니트릴(3 mL)에 용해시키고, 얼음 배쓰에서 냉각시키고, 뒤이어 진한 염산(0.2 mL, 2.4 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 얼음 배쓰에서 냉각시키고, 얼음으로 희석시키고, 뒤이어 수성 소듐 비카르보네이트 용액으로 중화시켰다. 생성된 혼합물을 분취 HPLC(30분 진행에서 Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80 Å 150 x 30 mm 컬럼, 15%-85% 아세토니트릴/물 구배)에 의해 정제하여, 생성물(부분입체이성질체 혼합물)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 7.81 (d, J = 2.4 ㎐, 1H), 7.67 (s, 2H), 7.35 (dt, J = 8.5, 6.9 ㎐, 2H), 7.24 - 7.11 (m, 3H), 6.83 (dd, J = 5.6, 4.5 ㎐, 1H), 6.67 (dd, J = 8.0, 4.5 ㎐, 1H), 6.05 (td, J = 13.9, 10.1 ㎐, 1H), 5.30 - 5.18 (m, 2H), 5.10 (dd, J = 7.3, 2.6 ㎐, 1H), 4.67 - 4.55 (m, 1H), 4.50 (dd, J = 14.2, 7.0 ㎐, 2H), 4.18 (q, J = 5.2 ㎐, 1H), 3.96 (m, 4H), 3.83 (dd, J = 10.5, 7.0 ㎐, 1H), 3.49 - 3.40 (m, 1H), 3.20 (d, J = 2.0 ㎐, 3H), 1.20 (dd, J = 15.3, 7.1 ㎐, 3H), 1.02 (dd, J = 6.3, 3.8 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO- d 6 ) δ -236.33 - -236.84 (m). 31P NMR (162 ㎒, DMSO- d 6 ) δ 3.57, 3.44. LCMS: MS m/z = 598.03 [M+1]; tR = 1.00분 (부 이성질체) 및 1.10분 (주 이성질체); LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μl/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN. HPLC: tR = 3.95분 (부 이성질체), 4.018분 (주 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
Sp 부분입체이성질체 및 Rp 부분입체이성질체의 분리. 부분입체이성질체를 키랄 분취 SFC에 의해 서로 단리하였다(SFC chiralpak AD-H 5 μm, 21X250 mm; 30% 이소프로판올).
Figure pct00142
Figure pct00143
실시예 31. 실시예 30의 제1 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.78 (s, 1H), 7.33 (dd, J = 8.5, 7.3 ㎐, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 3H), 6.86 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.75 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.37 (d, J = 8.2 ㎐, 1H), 4.82 - 4.71 (m, 1H), 4.71 - 4.59 (m, 2H), 4.38 (d, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.26 (dd, J = 5.2, 1.7 ㎐, 2H), 4.07 - 3.99 (m, 2H), 3.98 - 3.85 (m, 1H), 3.58 - 3.49 (m, 1H), 3.32 (s, 3H), 1.26 (dd, J = 7.2, 1.2 ㎐, 3H), 1.11 (d, J = 6.4 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -238.62 (t, J = 47.8 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.69. LCMS: MS m/z = 597.94 [M+1]; tR = 1.11분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μl/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN. HPLC: tR = 3.939분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 32. 실시예 30의 제2 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.79 (s, 1H), 7.39 - 7.29 (m, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.36 (d, J = 8.3 ㎐, 1H), 4.82 - 4.55 (m, 3H), 4.33 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.21 (dt, J = 5.8, 1.8 ㎐, 2H), 4.04 (d, J = 5.0 ㎐, 2H), 3.93 (dq, J = 9.8, 7.2 ㎐, 1H), 3.59 - 3.48 (m, 1H), 3.31 (s, 3H), 1.31 (dd, J = 7.1, 1.0 ㎐, 3H), 1.10 (d, J = 6.4 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -238.78 (t, J = 47.8 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.44. LCMS: MS m/z = 597.97 [M+1]; tR = 1.12분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN. HPLC: tR = 4.005분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 33. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-2-((((((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시) 메틸)테트라하이드로푸란-3,4-디일 디프로피오네이트
Figure pct00144
THF(2 mL) 중 실시예 10(0.057 g, 0.106 mmol)의 용액에 프로피온산 무수물(0.041 mL, 0.317 mmol), 그 후에 DMAP(2.58 mg, 0.021 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 LCMS로 모니터링하면서 10분 동안 교반하고, 반응 혼합물을 메탄올로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 유기층을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액으로 세척하고, 분리하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 농축시켰다. 수득된 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(0-15% 메탄올/디클로로메탄)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.79 (s, 1H), 7.38 - 7.29 (m, 2H), 7.33 - 7.21 (m, 2H), 7.23 - 7.14 (m, 1H), 6.79 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.62 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.91 - 5.78 (m, 2H), 5.58 (d, J = 7.9 ㎐, 1H), 4.76 - 4.64 (m, 1H), 4.58 (q, J = 10.0 ㎐, 1H), 4.37 - 4.28 (m, 1H), 4.25 (ddd, J = 10.5, 5.5, 2.1 ㎐, 1H), 4.02 - 3.89 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 2.45 (qd, J = 7.5, 1.0 ㎐, 2H), 2.26 (qd, J = 7.6, 3.2 ㎐, 2H), 1.31 (dd, J = 7.1, 1.0 ㎐, 3H), 1.16 (t, J = 7.6 ㎐, 3H), 1.04 (t, J = 7.5 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.37. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -236.42 (t, J = 46.6 ㎐). LCMS: MS m/z = 652.09 [M+1]; tR = 1.23분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN. HPLC: tR = 4.994분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 34. 2 - 에틸부틸 ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시-5-(4-이미노-3-((포스포노옥시)메틸)-3,4-디하이드로피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00145
2- 에틸부틸 ((S)-((((2R,3S,4R,5S)-5(3-((((벤질옥시)(하이드록시)포스포릴)옥시)메틸)-4-이미노-3,4-디하이드로피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. DMF(2.25 mL) 중 실시예 1(0.125 g, 0.205 mmol)의 용액에 디벤질클로로메틸 포스페이트 및 소듐 요오다이드를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 생성된 반응 혼합물을 분취 HPLC(Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80 Å 150 x 30 mm 컬럼, 0-100% 아세토니트릴/물)에 의해 정제하여, 중간체 II1을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 12.49 (s, 1H), 10.31 (d, J = 10.5 ㎐, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.45 (dd, J = 4.8, 2.3 ㎐, 1H), 7.36 (t, J = 7.9 ㎐, 2H), 7.26 (d, J = 4.3 ㎐, 4H), 7.20 (dt, J = 11.9, 6.6 ㎐, 4H), 6.91 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 6.07 (dd, J = 13.0, 10.1 ㎐, 1H), 5.64 (d, J = 10.8 ㎐, 2H), 5.39 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 5.29 (s, 1H), 5.20 (d, J = 8.7 ㎐, 1H), 4.76 (d, J = 6.9 ㎐, 2H), 4.68 - 4.58 (m, 1H), 4.59 - 4.48 (m, 1H), 4.40 (s, 1H), 4.19 (t, J = 3.8 ㎐, 1H), 3.98 (ddd, J = 19.0, 10.9, 5.6 ㎐, 3H), 3.93 - 3.79 (m, 2H), 1.43 (h, J = 6.3 ㎐, 1H), 1.32 - 1.20 (m, 7H), 0.80 (t, J = 7.4 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 3.59, 0.13. 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -235.99 (t, J = 47.6 ㎐). LCMS: MS m/z = 810.23 [M+1]; tR = 1.30분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN.
Figure pct00146
2-에틸부틸 ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시-5-(4-이미노-3-((포스포노옥시)메틸)-3,4-디하이드로피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. THF(2 mL) 중 중간체 II1(47 mg, 0.058 mmol)의 용액에 10% Pd/C(6.17 mg, 0.058 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 H2 기체 하에 1.5시간 동안 교반하고, 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 수득된 잔류물을 분취 HPLC(Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80 Å 150 x 30 mm 컬럼, TFA 변형제를 갖는 0-100% 아세토니트릴/물)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 10.33 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.48 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 7.40 - 7.30 (m, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 3H), 6.90 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 6.07 (dd, J = 13.1, 10.1 ㎐, 1H), 5.67 (d, J = 11.5 ㎐, 2H), 5.41 (s, 1H), 5.19 (d, J = 8.7 ㎐, 1H), 4.63 (q, J = 10.2 ㎐, 1H), 4.57 - 4.44 (m, 1H), 4.39 (dd, J = 8.8, 4.9 ㎐, 1H), 4.18 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 4.06 - 3.77 (m, 5H), 1.42 (h, J = 6.2 ㎐, 1H), 1.33 - 1.19 (m, 7H), 0.80 (t, J = 7.5 ㎐, 6H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6 ) δ -74.19 (s), -236.54 (t, J = 47.9 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 3.59, 0.12. LCMS: MS m/z = 720.16 [M+1]; tR = 1.21분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN. HPLC: tR = 4.854분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 35. (R)-1-메틸피롤리딘-3-일 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시) (페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00147
(R)-1-메틸피롤리딘-3-일 ( tert -부톡시카르보닐)- L -알라니네이트. THF(20 mL) 중 (S)-1-메틸피롤리딘-3-올(1.0 g, 0.01 mol) 및 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라닌(2.058 g, 0.011 mol)의 용액에 트리페닐포스핀(3.63 g, 0.014 mol)을 한꺼번에 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물에 디이소프로필 아조디카르복실레이트(2.53 mL, 0.013 mol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액, 뒤이어 5% 수성 시트르산 용액으로 세척하였다. 시트르산 추출물을 EtOAc(2x)로 세척하였다. 산 추출물을 2 N 수성 NaOH 용액으로 염기성화시켜, pH 9를 얻고, EtOAc(2x)로 추출하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜, 중간체 JJ1을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 5.29 - 5.18 (m, 1H), 5.02 (s, 1H), 4.28 (t, J = 7.6 ㎐, 1H), 2.80 (dd, J = 9.6, 5.4 ㎐, 1H), 2.69 (d, J = 3.6 ㎐, 2H), 2.42 - 2.19 (m, 5H), 1.89 - 1.72 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.36 (d, J = 7.2 ㎐, 3H).
Figure pct00148
(R)-1-메틸피롤리딘-3-일- L -알라니네이트 디하이드로클로라이드. 중간체 JJ1(2.27 g, 0.008 mol)을 무수 디클로로메탄(20 mL)에서 얻고, 디옥산 중 4 N HCl(14.59 mL, 0.058 mol)을 첨가하였다. 주위 온도에서 4시간 동안 교반하였다. 감압 하에 농축시키고, 디클로로메탄으로 공동증발시켰다. 고 진공 하에 밤새 두고, 중간체 JJ2를 그대로 다음 단계에 사용하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 11.34 (s, 1H), 8.81 (s, 3H), 5.38 (s, 1H), 4.06 (q, J = 7.1 ㎐, 1H), 3.44 (d, J = 78.6 ㎐, 5H), 2.84 (s, 3H), 2.12 (s, 1H), 1.43 (d, J = 7.1 ㎐, 3H).
Figure pct00149
(R)-1-메틸피롤리딘-3-일 ((4-니트로페녹시)(페녹시) 포스포릴)- L -알라니네이트. 무수 디클로로메탄(19 mL) 중 중간체 JJ2(1.5 g, 4.079 mmol) 및 페닐 디클로로포스페이트(0.607 mL, 4.079 mmol)의 용액에 트리에틸아민(1.848 mL, 13.155 mmol)을 0℃에서 아르곤 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 후에, 4-니트로페놀(0.567 g, 4.079 mmol) 및 트리에틸아민(0.616 mL, 4.385 mmol)을 첨가하였다. 0℃에서 1시간 교반 후, 반응 혼합물을 Et2O로 희석시키고, 고체를 여과해 내었다. 조 물질을 감압 하에 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여(80 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0-10% 메탄올/디클로로메탄), 중간체 JJ3(부분입체이성질체 혼합물)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.26 - 8.18 (m, 2H), 7.44 - 7.30 (m, 4H), 7.26 - 7.15 (m, 3H), 5.20 (d, J = 8.5 ㎐, 1H), 4.24 - 3.89 (m, 1H), 3.80 (dd, J = 11.5, 8.8 ㎐, 1H), 2.97 - 2.80 (m, 1H), 2.75 (d, J = 21.6 ㎐, 1H), 2.68 - 2.58 (m, 1H), 2.39 - 2.18 (m, 5H), 1.78 (dd, J = 14.6, 7.8 ㎐, 1H), 1.45 - 1.34 (m, 3H). LCMS: MS m/z = 450.23 [M+1]; tR = 1.07분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN.
Figure pct00150
(R)-1-메틸피롤리딘-3-일 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시) (페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 중간체 4(0.1 g, 0.296 mmol)와 중간체 JJ3(0.5 g, 1.113 mmol)과 마그네슘 클로라이드(0.141 g, 1.478 mmol)의 혼합물에 테트라하이드로푸란(3 mL)을 실온에서 첨가하고, 뒤이어 N,N-디이소프로필에틸아민(0.129 mL, 0.739 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 후에, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 수득된 잔류물을 포화된 소듐 클로라이드 용액 및 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 층을 분할하고, 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 수득하고, 0-10% 메탄올/디클로로메탄을 사용하여 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 수득된 순수한 분획을 조합하고, 농축시켰다. 수득된 잔류물을 무수 아세토니트릴(3 mL)에 용해시키고, 얼음 배쓰에서 냉각시키고, 뒤이어 진한 염산(0.257 mL, 3.086 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 농축시켰다. 수득된 잔류물을 분취 HPLC(Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80 Å 150 x 30 mm 컬럼, TFA 변형제를 갖는 0-100% 아세토니트릴/물)에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 조합하고, 감압 하에 농축시켰다. 수득된 잔류물을 물로 희석시키고, 수성 포화된 소듐 비카르보네이트 용액으로 중화시켰다. 수성층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 분리하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 아세토니트릴과 물에 용해시키고, 동결건조하여, 생성물(부분입체이성질체 혼합물)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.79 (d, J = 0.7 ㎐, 1H), 7.40 - 7.29 (m, 2H), 7.28 - 7.15 (m, 3H), 6.86 (dd, J = 6.7, 4.5 ㎐, 1H), 6.75 (dd, J = 13.6, 4.6 ㎐, 1H), 5.41 - 5.32 (m, 1H), 5.14 (ddt, J = 8.1, 5.4, 2.6 ㎐, 1H), 4.82 - 4.55 (m, 3H), 4.36 (dd, J = 14.7, 5.3 ㎐, 1H), 4.28 - 4.18 (m, 2H), 3.97 - 3.79 (m, 1H), 2.87 - 2.76 (m, 1H), 2.76 - 2.59 (m, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.40 - 2.19 (m, 2H), 1.79 (ddt, J = 14.5, 7.6, 3.9 ㎐, 1H), 1.28 (ddd, J = 17.1, 7.1, 1.1 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -238.41 - -238.79 (m). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.72, 3.44. LCMS: MS m/z = 609.20 [M+1]; tR = 0.80분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN HPLC: tR = 3.113분 (주 이성질체) 및 3.168분 (부 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 36. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-2-((((((S)-1-(((R)-1-메틸피롤리딘-3-일)옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시) 포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-디일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00151
THF(2 mL) 중 실시예 35(0.045 g, 0.074 mmol)의 용액에 이소부티르산 무수물(0.074 mL, 0.444 mmol), 그 후에 DMAP(1.3 mg, 0.011 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 LCMS로 모니터링하면서 30분 동안 교반하고, 반응 혼합물을 메탄올로 켄칭시키고, 농축시켰다. 수득된 잔류물을 분취 HPLC(Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80 Å 150 x 30 mm 컬럼, TFA 변형제를 갖는 0-100% 아세토니트릴/물)에 의해 정제하여, 생성물(부분입체이성질체 혼합물)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.80 (d, J = 3.4 ㎐, 1H), 7.33 (dd, J = 8.4, 7.4 ㎐, 2H), 7.28 - 7.15 (m, 3H), 6.87 - 6.58 (m, 2H), 5.96 - 5.71 (m, 2H), 5.59 (dd, J = 7.9, 2.7 ㎐, 1H), 5.20 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.77 - 4.49 (m, 2H), 4.40 - 4.22 (m, 2H), 4.02 - 3.83 (m, 1H), 2.94 - 2.62 (m, 3H), 2.54 - 2.35 (m, 5H), 2.25 (dq, J = 22.6, 7.4 ㎐, 2H), 1.89 - 1.72 (m, 1H), 1.32 (dd, J = 7.1, 1.1 ㎐, 3H), 1.22 (dd, J = 7.0, 1.1 ㎐, 6H), 1.06 (ddd, J = 18.6, 7.0, 4.7 ㎐, 6H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -235.33 (t, J = 46.8 ㎐), -235.86 (t, J = 46.7 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.38. LCMS: MS m/z = 749.24 [M+1]; tR = 1.13분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN.
Sp 부분입체이성질체 및 Rp 부분입체이성질체의 분리. 부분입체이성질체를 키랄 분취 SFC에 의해 서로 단리하였다(SFC chiralpak IA 5 μm, 25X250 mm; 25% 이소프로판올).
Figure pct00152
Figure pct00153
실시예 37. 실시예 36의 제1 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.81 (s, 1H), 7.38 - 7.29 (m, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.76 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.96 - 5.79 (m, 2H), 5.59 (d, J = 7.8 ㎐, 1H), 5.22 (dq, J = 6.8, 3.6 ㎐, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.61 (s, 1H), 4.42 - 4.26 (m, 2H), 3.99 - 3.85 (m, 1H), 3.14 - 2.92 (m, 3H), 2.68 (dt, J = 14.0, 7.0 ㎐, 2H), 2.58 - 2.42 (m, 4H), 2.32 (dq, J = 14.7, 7.4 ㎐, 1H), 2.04 - 1.83 (m, 1H), 1.25 (ddd, J = 20.9, 7.1, 1.1 ㎐, 9H), 1.06 (dd, J = 17.9, 7.0 ㎐, 6H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올- d 4 ) δ -235.85 (t, J = 46.7 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올- d 4 ) δ 3.43 LCMS: MS m/z = 749.24 [M+1]; tR = 1.16분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μl/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN HPLC: tR = 4.614분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 38. 실시예 36의 제2 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.80 (s, 1H), 7.38 - 7.28 (m, 2H), 7.26 - 7.16 (m, 3H), 6.80 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.63 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.89 - 5.75 (m, 2H), 5.59 (d, J = 7.9 ㎐, 1H), 5.19 (ddt, J = 8.0, 5.4, 2.7 ㎐, 1H), 4.79 - 4.51 (m, 2H), 4.42 - 4.19 (m, 2H), 3.95 (dq, J = 9.8, 7.1 ㎐, 1H), 2.96 - 2.60 (m, 4H), 2.53 - 2.37 (m, 5H), 2.32 - 2.17 (m, 1H), 1.82 (dtd, J = 14.3, 7.2, 2.6 ㎐, 1H), 1.33 (dd, J = 7.1, 1.1 ㎐, 3H), 1.22 (dd, J = 7.0, 1.2 ㎐, 6H), 1.05 (dd, J = 18.3, 7.0 ㎐, 6H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -235.32 (t, J = 46.8 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.37. LCMS: MS m/z = 749.23 [M+1]; tR = 1.13분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μl/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN. HPLC: tR = 4.553분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 39. (R)-2-메톡시프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00154
(R)-((2-메톡시프로폭시)메틸)벤젠. THF(20 mL) 중 (R)-(-)-1-벤질옥시-2-프로판올(3.0 g, 0.018 mol)의 얼음 냉각된 용액에 소듐 하이드라이드(0.866 g, 0.036 mol)를 나누어서 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하고, 뒤이어 메틸 요요다이드(2.247 mL, 0.036 mol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 얼음 냉수 및 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 유기층을 분리하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 농축시켰다. 수득된 잔류물을 0-40% 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여, 중간체 NN1을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 7.37 (d, J = 4.3 ㎐, 4H), 7.31 (dd, J = 10.5, 6.1 ㎐, 1H), 4.66 - 4.53 (m, 2H), 3.64 - 3.38 (m, 3H), 3.42 (s, 3H), 1.18 (d, J = 6.3 ㎐, 3H).
Figure pct00155
(R)-2-메톡시프로필 ( tert -부톡시카르보닐)- L -알라니네이트. THF(20 mL) 중 중간체 NN1(2.0 g, 0.011 mol)의 탈기된 용액에 10% Pd/C(0.3 g, 0.003 mol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 수소 하에 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물에 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라닌(2.519 g, 0.013 mol), 아세토니트릴(10 mL), EDCI(2.5 g, 0.016 mol) 및 DMAP(2.169 g, 0.018 mol)를 한꺼번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시키고, 에틸아세테이트 및 물로 희석시켰다. 층을 분할하고, 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 실리카 겔 크로마토그래피 0-30% 에틸아세테이트/헥산에 의한 정제는 중간체 NN2를 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 7.26 (d, J = 7.4 ㎐, 1H), 4.10 - 3.93 (m, 2H), 3.91 (dd, J = 11.4, 5.7 ㎐, 1H), 3.46 (td, J = 6.2, 4.2 ㎐, 1H), 3.23 (s, 3H), 1.35 (s, 9H), 1.25 - 1.10 (m, 3H), 1.05 (d, J = 6.4 ㎐, 3H).
Figure pct00156
(R)-2-메톡시프로필)- L -알라니네이트 하이드로클로라이드. 중간체 NN2(2.5 g, 0.010 mol)를 무수 디클로로메탄(25 mL) 및 디옥산 중 4 N HCl(11.96 mL, 0.048 mol)에 용해시켰다. 생성된 용액을 주위 온도에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에 농축시키고, 디클로로메탄으로 공동증발시켰다. 생성된 잔류물을 고 진공 하에 밤새 두고, 중간체 NN3을 그대로 다음 단계에 사용하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 8.63 (s, 3H), 4.19 (dd, J = 11.4, 3.8 ㎐, 1H), 4.10 - 3.96 (m, 2H), 3.59 - 3.46 (m, 1H), 3.24 (s, 3H), 1.41 (d, J = 7.2 ㎐, 3H), 1.08 (d, J = 6.4 ㎐, 3H).
Figure pct00157
(R)-2-메톡시프로필 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 무수 디클로로메탄(34 mL) 중 중간체 NN3(1.95 g, 9.865 mmol) 및 페닐 디클로로포스페이트(1.468 mL, 9.865 mmol)의 용액에 트리에틸아민(3.05 mL, 21.71 mmol)을 0℃에서 아르곤 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 후에, 4-니트로페놀(1.372 g, 9.865 mmol) 및 트리에틸아민(1.525 mL, 10.85 mmol)을 첨가하였다. 0℃에서 1시간 교반 후, 반응 혼합물을 Et2O로 희석시키고, 고체를 여과해 내었다. 조 물질을 감압 하에 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여(80 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 100% 디클로로메탄, 뒤이어 0-100% 에틸 아세테이트/ 헥산), 중간체 NN4(부분입체이성질체 혼합물)를 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 8.33 - 8.23 (m, 2H), 7.54 - 7.44 (m, 1H), 7.49 - 7.33 (m, 3H), 7.23 (m, 3H), 6.70 (ddd, J = 13.7, 9.9, 8.3 ㎐, 1H), 4.09 - 3.94 (m, 2H), 3.92 (ddd, J = 11.4, 5.7, 1.4 ㎐, 1H), 3.48 - 3.36 (m, 1H), 3.20 (d, J = 1.5 ㎐, 3H), 1.23 (ddd, J = 7.2, 4.0, 1.2 ㎐, 3H), 1.01 (dd, J = 6.4, 1.1 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6 ) δ -1.26, -1.48. LCMS: MS m/z = 439.00 [M+1]; tR = 1.43분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN
Figure pct00158
(R)-2-메톡시프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 중간체 4(0.15 g, 0.443 mmol)와 중간체 NN4(0.214 g, 0.488 mmol)와 마그네슘 클로라이드(0.063 g, 0.665 mmol)의 혼합물에 테트라하이드로푸란(1.5 mL)을 실온에서 첨가하고, 뒤이어 N,N-디이소프로필에틸아민(0.193 mL, 1.108 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 그 후에, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 수득된 잔류물을 분취 HPLC(Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80 Å 150 x 30 mm 컬럼, 0-100% 아세토니트릴/물)에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 조합하고, 감압 하에 농축시켰다. 수득된 잔류물을 무수 아세토니트릴(3 mL)에 용해시키고, 얼음 배쓰에서 냉각시키고, 뒤이어 진한 염산(0.2 mL, 2.4 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 얼음 배쓰에서 냉각시키고, 얼음으로 희석시키고, 뒤이어 수성 소듐 비카르보네이트 용액으로 중화시켰다. 생성된 혼합물을 분취 HPLC(Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80 Å 150 x 30 mm 컬럼, 0-100% 아세토니트릴/물)에 의해 정제하여, 생성물(부분입체이성질체 혼합물)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.78 (d, J = 1.1 ㎐, 1H), 7.33 (q, J = 7.8 ㎐, 2H), 7.27 - 7.13 (m, 3H), 6.85 (dd, J = 6.2, 4.6 ㎐, 1H), 6.74 (dd, J = 10.6, 4.6 ㎐, 1H), 5.36 (dd, J = 8.3, 6.1 ㎐, 1H), 4.82 - 4.55 (m, 3H), 4.35 (dd, J = 17.4, 5.3 ㎐, 1H), 4.29 - 4.15 (m, 2H), 4.10 (ddd, J = 11.5, 4.0, 2.6 ㎐, 1H), 4.06 - 3.86 (m, 2H), 3.53 (ddt, J = 9.8, 6.3, 3.5 ㎐, 1H), 3.31 (s, 3H), 1.29 (ddd, J = 19.7, 7.2, 1.1 ㎐, 3H), 1.11 (dd, J = 6.4, 2.3 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -238.52 - -238.94 (m). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.70, 3.41. LCMS: MS m/z = 598.04 [M+1]; tR = 0.99분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN HPLC: tR = 3.947분 (부 이성질체), 4.011분 (주 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
Sp 부분입체이성질체 및 Rp 부분입체이성질체의 분리. 부분입체이성질체를 키랄 분취 SFC에 의해 서로 단리하였다(SFC Chiralpak AD-H 5 μm, 21X250 mm; 30% 이소프로판올):
Figure pct00159
Figure pct00160
실시예 40. 실시예 39의 제1 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.78 (s, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 3H), 6.86 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.76 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.37 (d, J = 8.2 ㎐, 1H), 4.83 - 4.71 (m, 1H), 4.71 - 4.59 (m, 2H), 4.37 (d, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.26 (dd, J = 5.0, 1.7 ㎐, 2H), 4.09 (dd, J = 11.5, 4.0 ㎐, 1H), 4.06 - 3.86 (m, 2H), 3.60 - 3.48 (m, 1H), 3.31 (s, 3H), 1.26 (dd, J = 7.2, 1.2 ㎐, 3H), 1.12 (d, J = 6.4 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -238.68 (t, J = 47.9 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.71. LCMS: MS m/z = 598.08 [M+1]; tR = 0.96분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μl/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN. HPLC: tR = 3.938분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 41. 실시예 39의 제2 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.78 (s, 1H), 7.39 - 7.29 (m, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.36 (d, J = 8.4 ㎐, 1H), 4.82 - 4.56 (m, 3H), 4.33 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.21 (tt, J = 6.0, 3.6 ㎐, 2H), 4.10 (dd, J = 11.5, 3.9 ㎐, 1H), 4.03 - 3.88 (m, 2H), 3.53 (pd, J = 6.3, 4.0 ㎐, 1H), 1.31 (dd, J = 7.2, 1.0 ㎐, 3H), 1.11 (d, J = 6.4 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -238.81 (t, J = 47.6 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.42 LCMS: MS m/z = 598.05 [M+1]; tR = 0.99분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN. HPLC: tR = 4.004분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 42. 2-부톡시에틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00161
2-부톡시에틸 ( tert -부톡시카르보닐)- L -알라니네이트. 건조 디클로로메탄(100 mL) 중 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라닌(10.57 g, 56 mmol) 및 2-부톡시에탄-1-올(6.00 g, 51 mmol)의 교반된 용액에 N-메틸모르폴린(16.75 mL, 152 mmol), 4-(디메틸아미노)피리딘(0.12 g, 1 mmol) 및 트리-프로필포스폰산 환식 무수물(36.27 mL, 61 mmol, 에틸 아세테이트 중 50%)을 0℃에서 아르곤 분위기 하에 첨가하였다. 그 후에, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(50 mL), 10% 시트르산 용액으로 2회(2x 40 mL), 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액으로 2회(2x 40 mL) 및 염수로 1회(50 mL) 세척하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 3 cm의 실리카 겔 층을 통해 여과하고, 추가 디클로로메탄으로 세척하였다. 조합된 유기물을 감압 하에 농축 침강시키고, 디클로로메탄과 함께 공동증류시키고, 고 진공 하에 밤새 건조하여, 중간체 QQ1을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.27 (d, J = 7.4 ㎐, 1H), 4.26 - 4.14 (m, 1H), 4.14 - 4.06 (m, 1H), 4.05 - 3.93 (m, 1H), 3.58 - 3.49 (m, 2H), 3.39 (t, J = 6.5 ㎐, 2H), 1.50 - 1.42 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.35 - 1.27 (m, 2H), 1.23 (d, J = 7.4 ㎐, 3H), 0.87 (t, J = 7.4 ㎐, 3H).
Figure pct00162
2-부톡시에틸 ((퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 중간체 QQ1(14.2 g, 49.07 mmol)을 50 mL의, 1,4-디옥산 중 4 M HCl에 용해시키고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 감압 하에 농축시키고, 톨루엔으로 공동증류시켜, 순수한 고체를 얻었고, 이를 고 진공 하에 1시간 동안 건조하였다. 고체를 디클로로메탄(200 mL)에 현탁시키고, 페닐 디클로로포스페이트(8.03 mL, 53.98 mmol) 및 트리에틸아민(14.96 mL, 107.96 mmol)을 -78℃에서 순차적으로 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 그 후에 펜타플루오로페놀(9.03 g, 49.07 mmol) 및 트리에틸아민(8.84 mL, 63.79 mmol)을 순차적으로 첨가한 다음, 생성된 혼합물을 실온까지 가온시켰다. 3시간 후, 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 고체를 여과해 내고, 여과물을 포화된 암모늄 클로라이드 수용액(100 mL), 물(100 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하였다. 유기물을 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 실리카 겔의 3 cm 층을 통해 여과하였고, 이를 1:5 에틸 아세테이트와 디클로로메탄 혼합물(100 mL)로 세척하였다. 조합된 유기물을 감압 하에 농축 침강시켜, NMR에 기초하여 인(phosphorus) 상 이성질체 둘 다의 혼합물로서 22.5 g의 고체 조 생성물을 얻었다. 고체를 디이소프로필 에테르(6 mL)와 헥산(200 mL)의 비등(boiling) 혼합물에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 밤새 격렬히 교반하였다. 고체 생성물을 여과에 의해 단리하고, 헥산(3x 40 mL)으로 세척하여, 중간체 QQ2를 얻었다. 중간체 QQ2는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.47 - 7.35 (m, 2H), 7.31 - 7.16 (m, 3H), 6.93 (dd, J = 14.2, 9.9 ㎐, 1H), 4.23 - 4.08 (m, 2H), 4.07 - 3.90 (m, 1H), 3.52 (t, J = 4.8 ㎐, 2H), 3.35 (t, J = 6.5 ㎐, 2H), 1.46 - 1.37 (m, 2H), 1.36 - 1.18 (m, 5H), 0.84 (t, J = 7.4 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -154.25 (d, J = 21.6 ㎐, 2F), -160.87 (td, J = 23.3, 3.2 ㎐, 1F), -163.70 (td, J = 24.0, 4.2 ㎐, 2F). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 0.42. LCMS: MS m/z = 511.95 [M+1], tR = 1.70분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴.
Figure pct00163
2-부톡시에틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 테트라하이드로푸란(0.7 mL)을 중간체 4(100 mg, 0.296 mmol)와 중간체 QQ2(196 mg, 0.384 mmol)와 마그네슘 클로라이드(42 mg, 0.443 mmol)의 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 40℃까지 10분 동안 가열하고, N,N-디이소프로필에틸아민(0.129 mL, 0.739 mmol)을 첨가하였다. 40℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축 침강시켰다. 조 잔류물을 에틸 아세테이트(20 mL)에 용해시키고, 생성된 혼합물을 물(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 아세토니트릴(5 mL)에 용해시키고, 진한 수성 염산 용액(0.246 mL)을 0℃에서 적가하였다. 0℃에서 4시간 후, 반응 혼합물을 0℃에서 에틸 아세테이트(30 mL) 및 물(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 8.10 - 7.75 (m, 3H), 7.43 - 7.33 (m, 2H), 7.27 - 7.15 (m, 3H), 6.91 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 6.71 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.11 (dd, J = 13.3, 10.1 ㎐, 1H), 5.43 - 5.10 (m, 3H), 4.70 - 4.57 (m, 1H), 4.58 - 4.44 (m, 2H), 4.23 - 4.12 (m, 2H), 4.13 - 4.02 (m, 1H), 3.99 (d, J = 5.3 ㎐, 2H), 3.93 - 3.78 (m, 1H), 3.55 - 3.49 (m, 2H), 3.35 - 3.33 (m, 2H), 1.47 - 1.37 (m, 2H), 1.34 - 1.17 (m, 5H), 0.84 (t, J = 7.4 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -236.74 (t, J = 47.9 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d6) δ 3.44. LCMS: MS m/z = 626.03 [M+1], tR = 1.26분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μl/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴. HPLC: tR = 2.78분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN. HPLC: tR = 4.68분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 43. 2-메톡시-2-메틸프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00164
2-메톡시-2-메틸프로필 ( tert -부톡시카르보닐)- L -알라니네이트. 건조 디클로로메탄(50 mL) 중 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라닌(4.00 g, 21 mmol) 및 2-메톡시-2-메틸프로판-1-올(2.00 g, 19 mmol)의 교반된 용액에 N-메틸모르폴린(6.33 mL, 58 mmol), 4-(디메틸아미노)피리딘(0.05 g, 0.4 mmol) 및 트리-프로필포스폰산 환식 무수물(13.72 mL, 23 mmol, 에틸 아세테이트 중 50%)을 0℃에서 아르곤 분위기 하에 첨가하였다. 그 후에, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(30 mL), 10% 시트르산 용액으로 2회(2x 20 mL), 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액으로 2회(2x 20 mL) 및 염수로 1회(20 mL) 세척하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 3 cm의 실리카 겔 층을 통해 여과하고, 디클로로메탄과 에틸 아세테이트의 3:1 혼합물로 세척하였다. 조합된 유기물을 감압 하에 농축 침강시키고, 디클로로메탄과 함께 공동증류시키고, 고 진공 하에 밤새 건조하여, 중간체 RR1을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.30 (d, J = 7.4 ㎐, 1H), 4.10 - 3.77 (m, 3H), 3.11 (s, 3H), 1.37 (s, 9H), 1.24 (d, J = 7.4 ㎐, 3H), 1.10 (s, 6H).
Figure pct00165
2-메톡시-2-메틸프로필 ((퍼플루오로페녹시)(페녹시)-포스포릴)- L -알라니네이트. 중간체 RR1(5.1 g, 18.52 mmol)을 15 mL의, 1,4-디옥산 중 4 M HCl에 용해시키고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 감압 하에 농축시키고, 톨루엔으로 공동증류시켜, 순수한 고체를 얻었고, 이를 고 진공 하에 1시간 동안 건조하였다. 고체를 디클로로메탄(100 mL)에 현탁시키고, 페닐 디클로로포스페이트(3.03 mL, 20.37 mmol) 및 트리에틸아민(5.65 mL, 40.75 mmol)을 -78℃에서 순차적으로 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 그 후에 펜타플루오로페놀(3.41 g, 18.52 mmol) 및 트리에틸아민(3.59 mL, 25.93 mmol)을 순차적으로 첨가한 다음, 생성된 혼합물을 실온까지 가온시켰다. 3시간 후, 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 고체를 여과해 내고, 여과물을 포화된 암모늄 클로라이드 수용액(100 mL), 물(100 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하였다. 유기물을 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 실리카 겔의 3 cm 층을 통해 여과하였고, 이를 1:3 에틸 아세테이트와 디클로로메탄 혼합물(100 mL)로 세척하였다. 조합된 유기물을 감압 하에 농축 침강시켜, NMR에 기초하여 인 상 이성질체 둘 다의 혼합물로서 6.23 g의 조 생성물을 얻었다. 고체를 비등 디이소프로필 에테르(50 mL)에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 밤새 격렬히 교반하였다. 고체 생성물을 여과해 내고, 저온 디이소프로필 에테르(2x 10 mL)로 세척하고, 헥산(3x 20 mL)으로 세척하여, 중간체 RR2를 얻었다. 중간체 RR2는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.46 - 7.36 (m, 2H), 7.29 - 7.16 (m, 3H), 6.92 (dd, J = 14.2, 9.9 ㎐, 1H), 4.12 - 3.86 (m, 3H), 3.09 (s, 3H), 1.31 (d, J = 7.1 ㎐, 3H), 1.09 (s, 6H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -154.22 (d, J = 21.4 ㎐, 2F), -160.89 (td, J = 23.4, 3.2 ㎐, 1F), -163.69 (td, J = 23.4, 4.0 ㎐, 2F). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 0.43. LCMS: MS m/z = 497.86 [M+1], tR = 1.65분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴.
Figure pct00166
2-메톡시-2-메틸프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 테트라하이드로푸란(0.7 mL)을 중간체 4(100 mg, 0.296 mmol)와 중간체 RR2(191 mg, 0.384 mmol)와 마그네슘 클로라이드(42 mg, 0.443 mmol)의 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 40℃까지 10분 동안 가열하고, N,N-디이소프로필에틸아민(0.129 mL, 0.739 mmol)을 첨가하였다. 40℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축 침강시켰다. 조 잔류물을 에틸 아세테이트(20 mL)에 용해시키고, 생성된 혼합물을 물(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 아세토니트릴(5 mL)에 용해시키고, 진한 수성 염산 용액(0.246 mL)을 0℃에서 적가하였다. 0℃에서 4시간 후, 반응 혼합물을 0℃에서 에틸 아세테이트(30 mL) 및 물(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.83 (s, 1H), 7.70 (bs, 2H), 7.44 - 7.30 (m, 2H), 7.26 - 7.14 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 6.68 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 6.10 (dd, J = 13.1, 10.1 ㎐, 1H), 5.29 - 5.21 (m, 2H), 5.13 (d, J = 7.3 ㎐, 1H), 4.72 - 4.43 (m, 3H), 4.25 - 4.15 (m, 1H), 4.03 - 3.95 (m, 3H), 3.95 - 3.82 (m, 2H), 3.08 (s, 3H), 1.26 (d, J = 7.2 ㎐, 3H), 1.09 (s, 6H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -236.71 (t, J = 48.1 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 3.47. LCMS: MS m/z = 612.03 [M+1], tR = 1.16분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μl/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴. HPLC: tR = 2.47분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN.
실시예 44. 에틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(나프탈렌-1-일옥시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00167
에틸 ((나프탈렌-1-일옥시)(퍼플루오로페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 건조 테트라하이드로푸란(50 mL) 중 포스포릴 트리클로라이드(3.00 g, 19.57 mmol)의 용액에 -78℃에서 아르곤 하에 나프탈렌-1-올(2.82 g, 19.57 mmol)을 첨가하였다. 트리에틸아민(6.00 mL, 43.05 mmol)을 적가하였다. 15분 후, 반응물을 0℃까지 가온시켰다. 30분 후, 반응물을 -78℃까지 다시 냉각시키고, 에틸 L-알라니네이트 하이드로클로라이드(3.01 g, 19.57 mmol), 뒤이어 트리에틸아민(2.73 mL, 19.57 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고, 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 0℃까지 냉각시키고, 펜타플루오로페놀(3.60 g, 19.57 mmol)을 첨가하고, 뒤이어 트리에틸아민(3.00 mL, 21.52 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온되게 하고, 2시간 동안 교반하고, 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석시키고, 포화된 암모늄 클로라이드 수용액(100 mL), 물(100 mL) 및 염수(100 mL)로 세척하였다. 유기물을 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축 침강시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0% → 35% 에틸 아세테이트 구배를 사용하여 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 4.9 g의 조 생성물을 부분입체이성질체 혼합물로서 얻었다. 고체를 비등 디이소프로필 에테르(70 mL)에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 밤새 격렬히 교반하였다. 고체 생성물을 여과해 내고, 저온 디이소프로필 에테르(2x 10 mL)로 세척하고, 헥산(3x 20 mL)으로 세척하여, 중간체 SS1을 얻었다. 중간체 SS1은 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 8.14 - 8.08 (m, 1H), 8.03 - 7.98 (m, 1H), 7.82 (d, J = 7.7 ㎐, 1H), 7.67 - 7.44 (m, 4H), 7.11 (dd, J = 14.3, 9.9 ㎐, 1H), 4.15 - 3.92 (m, 3H), 1.33 (d, J = 7.1 ㎐, 3H), 1.09 (t, J = 7.1 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -154.19 (d, J = 21.6 ㎐, 2F), -160.70 (t, J = 23.4 ㎐, 1F), -163.61 (t, J = 21.9 ㎐, 2F). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 0.68. LCMS: MS m/z = 489.95 [M+1], tR = 1.76분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴.
Figure pct00168
에틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(나프탈렌-1-일옥시)포스포릴)-L-알라니네이트. 테트라하이드로푸란(0.4 mL)을 중간체 4(50 mg, 0.148 mmol)와 중간체 SS1(94 mg, 0.192 mmol)과 마그네슘 클로라이드(21 mg, 0.222 mmol)의 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 40℃까지 10분 동안 가열하고, N,N-디이소프로필에틸아민(0.064 mL, 0.369 mmol)을 첨가하였다. 40℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축 침강시켰다. 조 잔류물을 에틸 아세테이트(20 mL)에 용해시키고, 생성된 혼합물을 물(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 아세토니트릴(5 mL)에 용해시키고, 진한 수성 염산 용액(0.123 mL)을 0℃에서 적가하였다. 0℃에서 4시간 후, 반응 혼합물을 0℃에서 에틸 아세테이트(30 mL) 및 물(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 8.19 - 8.10 (m, 1H), 8.02 - 7.93 (m, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.80 - 7.72 (m, 1H), 7.62 - 7.55 (m, 2H), 7.52 - 7.43 (m, 2H), 6.91 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 6.67 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.26 (dd, J = 13.0, 10.1 ㎐, 1H), 5.38 - 5.11 (m, 3H), 4.74 - 4.46 (m, 3H), 4.22 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 4.13 - 3.99 (m, 4H), 3.95 - 3.86 (m, 1H), 1.22 (d, J = 7.1 ㎐, 3H), 1.12 (t, J = 7.1 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -236.51 (t, J = 47.7 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 3.98. LCMS: MS m/z = 604.02 [M+1], tR = 1.21분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴. HPLC: tR = 2.69분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN. HPLC: tR = 4.51분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 45. 2-(2-에톡시에톡시)에틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00169
2-(2-에톡시에톡시)에틸 ( tert -부톡시카르보닐)- L -알라니네이트. 건조 디클로로메탄(100 mL) 중 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라닌(12.41 g, 66 mmol) 및 2-(2-에톡시에톡시)에탄-1-올(8.00 g, 60 mmol)의 교반된 용액에 N-메틸모르폴린(19.67 mL, 179 mmol), 4-(디메틸아미노)피리딘(0.15 g, 1.2 mmol) 및 트리-프로필포스폰산 환식 무수물(42.6 mL, 72 mmol, 에틸 아세테이트 중 50%)을 0℃에서 아르곤 분위기 하에 첨가하였다. 그 후에, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(50 mL), 10% 시트르산 용액으로 2회(2x 40 mL), 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액으로 2회(2x 40 mL) 및 염수로 1회(50 mL) 세척하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 3 cm의 실리카 겔 층을 통해 여과하고, 추가 디클로로메탄으로 세척하였다. 조합된 유기물을 감압 하에 농축 침강시키고, 디클로로메탄과 함께 공동증류시키고, 고 진공 하에 밤새 건조하여, 중간체 TT1을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.27 (d, J = 7.4 ㎐, 1H), 4.23 - 4.14 (m, 1H), 4.14 - 4.06 (m, 1H), 4.05 - 3.94 (m, 1H), 3.64 - 3.56 (m, 2H), 3.55 - 3.49 (m, 2H), 3.49 - 3.39 (m, 4H), 1.38 (s, 9H), 1.23 (d, J = 7.4 ㎐, 3H), 1.09 (t, J = 7.0 ㎐, 3H).
Figure pct00170
2-(2-에톡시에톡시)에틸 ((퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 중간체 TT1(18.3 g, 59.93 mmol)을 50 mL의, 1,4-디옥산 중 4 M HCl에 용해시키고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 감압 하에 농축시키고, 톨루엔으로 공동증류시켜, 조 생성물을 얻었고, 이를 고 진공 하에 1시간 동안 건조하였다. 생성된 고체를 디클로로메탄(100 mL)에 현탁시키고, 페닐 디클로로포스페이트(9.81 mL, 65.92 mmol) 및 트리에틸아민(18.28 mL, 131.84 mmol)을 -78℃에서 순차적으로 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 그 후에 펜타플루오로페놀(11.03 g, 59.93 mmol) 및 트리에틸아민(10.80 mL, 78.05 mmol)을 순차적으로 첨가한 다음, 생성된 혼합물을 실온까지 가온시켰다. 3시간 후, 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 고체를 여과해 내고, 여과물을 포화된 암모늄 클로라이드 수용액(100 mL), 물(100 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하였다. 유기물을 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 실리카 겔의 3 cm 층을 통해 여과하였고, 이를 1:1 에틸 아세테이트와 디클로로메탄 혼합물(100 mL)로 세척하였다. 조합된 유기물을 감압 하에 농축 침강시켜, 부분입체이성질체의 혼합물로서 21.7 g의 조 생성물을 얻었다. 고체를 최소량의 비등 디이소프로필 에테르에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 밤새 격렬히 교반하였다. 고체 생성물을 여과해 내고, 저온 디이소프로필 에테르(2x 20 mL)로 세척하고, 헥산(3x 40 mL)으로 세척하여, 중간체 TT2를 얻었다. 중간체 TT2는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.47 - 7.36 (m, 2H), 7.30 - 7.20 (m, 3H), 6.92 (dd, J = 14.2, 9.9 ㎐, 1H), 4.21 - 4.08 (m, 2H), 4.07 - 3.92 (m, 1H), 3.62 - 3.56 (m, 2H), 3.53 - 3.47 (m, 2H), 3.45 - 3.36 (m, 4H), 1.29 (d, J = 7.1 ㎐, 3H), 1.07 (t, J = 7.0 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -154.24 (d, J = 21.5 ㎐, 2F), -160.86 (t, J = 23.1 ㎐, 1F), -163.68 (t, J = 21.7 ㎐, 2F). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 0.40. LCMS: MS m/z = 528.06 [M+1], tR = 1.64분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴.
Figure pct00171
2-(2-에톡시에톡시)에틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 테트라하이드로푸란(0.7 mL)을 중간체 4(100 mg, 0.295 mmol)와 중간체 TT2(203 mg, 0.384 mmol)와 마그네슘 클로라이드(42 mg, 0.443 mmol)의 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 40℃까지 10분 동안 가열하고, N,N-디이소프로필에틸아민(0.129 mL, 0.739 mmol)을 첨가하였다. 40℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축 침강시켰다. 조 잔류물을 에틸 아세테이트(20 mL)에 용해시키고, 생성된 혼합물을 물(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 아세토니트릴(5 mL)에 용해시키고, 진한 수성 염산 용액(0.246 mL)을 0℃에서 적가하였다. 0℃에서 4시간 후, 반응 혼합물을 0℃에서 에틸 아세테이트(30 mL) 및 물(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.84 (s, 1H), 7.77 (bs, 2H), 7.42 - 7.34 (m, 2H), 7.28 - 7.13 (m, 3H), 6.86 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.69 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.11 (dd, J = 13.3, 10.1 ㎐, 1H), 5.37 - 5.22 (m, 2H), 5.20 - 5.10 (m, 1H), 4.64 (q, J = 10.2 ㎐, 1H), 4.57 - 4.43 (m, 2H), 4.24 - 4.14 (m, 2H), 4.12 - 4.05 (m, 1H), 4.03 - 3.97 (m, 2H), 3.92 - 3.79 (m, 1H), 3.59 - 3.54 (m, 2H), 3.51 - 3.45 (m, 2H), 3.43 - 3.38 (m, 4H), 1.24 (d, J = 7.1 ㎐, 3H), 1.07 (t, J = 7.0 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -236.74 (t, J = 48.1 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 3.43. LCMS: MS m/z = 642.08 [M+1], tR = 1.13분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μl/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴. HPLC: tR = 2.43분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN. HPLC: tR = 4.05분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 46. 부틸 ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00172
부틸 ( tert -부톡시카르보닐)- L -알라니네이트. 건조 디클로로메탄(100 mL) 중 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라닌(14.04 g, 74 mmol) 및 부탄-1-올(5.00 g, 67 mmol)의 교반된 용액에 N-메틸모르폴린(22.25 mL, 202 mmol), 4-(디메틸아미노)피리딘(0.17 g, 1.4 mmol) 및 트리-프로필포스폰산 환식 무수물(48.19 mL, 81 mmol, 에틸 아세테이트 중 50%)을 0℃에서 아르곤 분위기 하에 첨가하였다. 그 후에, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(50 mL), 10% 시트르산 용액으로 2회(2x 40 mL), 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액으로 2회(2x 40 mL) 및 염수로 1회(50 mL) 세척하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 3 cm의 실리카 겔 층을 통해 여과하고, 추가 디클로로메탄으로 세척하였다. 조합된 유기물을 감압 하에 농축 침강시키고, 디클로로메탄과 함께 공동증류시키고, 고 진공 하에 밤새 건조하여, 중간체 UU1을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.27 (d, J = 7.4 ㎐, 1H), 4.19 - 3.89 (m, 3H), 1.60 - 1.48 (m, 2H), 1.42 - 1.28 (m, 11H), 1.22 (d, J = 7.4 ㎐, 3H), 0.88 (t, J = 7.4 ㎐, 3H).
Figure pct00173
부틸 ((퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 중간체 UU1(6.75 g, 27.5 mmol)을 30 mL의, 1,4-디옥산 중 4 M HCl에 용해시키고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 감압 하에 농축시키고, 톨루엔으로 공동증류시켜, 큐어(cure) 고체를 얻었고, 이를 고 진공 하에 1시간 동안 건조하였다. 고체를 디클로로메탄(30 mL)에 현탁시키고, 페닐 디클로로포스페이트(4.51 mL, 30.3 mmol) 및 트리에틸아민(8.39 mL, 60.6 mmol)을 -78℃에서 순차적으로 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 그 후에 펜타플루오로페놀(5.07 g, 27.5 mmol) 및 트리에틸아민(4.20 mL, 30.0 mmol)을 순차적으로 첨가한 다음, 생성된 혼합물을 실온까지 가온시켰다. 3시간 후, 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 고체를 여과해 내고, 여과물을 포화된 암모늄 클로라이드 수용액(50 mL), 물(50 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기물을 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 실리카 겔의 3 cm 층을 통해 여과하였고, 이를 추가의 디클로로메탄(50 mL)으로 세척하였다. 조합된 유기물을 감압 하에 농축 침강시켜, 부분입체이성질체의 혼합물로서 12.2 g의 조 생성물을 얻었다. 고체를 비등 헥산(120 mL)에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 밤새 격렬히 교반하였다. 고체 생성물을 여과해 내고, 헥산(3x 30 mL)으로 세척하여, 중간체 UU2를 얻었다. 중간체 UU2는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.47 - 7.36 (m, 2H), 7.30 - 7.17 (m, 3H), 6.89 (dd, J = 14.2, 9.9 ㎐, 1H), 4.12 - 3.91 (m, 3H), 1.59 - 1.45 (m, 2H), 1.38 - 1.19 (m, 5H), 0.85 (t, J = 7.3 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -154.24 (d, J = 20.7 ㎐, 2F), -160.88 (t, J = 23.1 ㎐, 1F), -163.70 (t, J = 21.6 ㎐, 2F). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 0.48. LCMS: MS m/z = 467.92 [M+1], tR = 1.86분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% 아세토니트릴.
Figure pct00174
부틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 테트라하이드로푸란(0.5 mL)을 중간체 4(70 mg, 0.207 mmol)와 중간체UU2(126 mg, 0.269 mmol)와 마그네슘 클로라이드(30 mg, 0.310 mmol)의 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 40℃까지 10분 동안 가열하고, N,N-디이소프로필에틸아민(0.090 mL, 0.517 mmol)을 첨가하였다. 40℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축 침강시켰다. 조 잔류물을 에틸 아세테이트(20 mL)에 용해시키고, 생성된 혼합물을 물(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 아세토니트릴(2 mL)에 용해시키고, 진한 수성 염산 용액(0.172 mL)을 0℃에서 적가하였다. 0℃에서 4시간 후, 반응 혼합물을 0℃에서 에틸 아세테이트(30 mL) 및 물(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.83 (s, 1H), 7.73 (bs, 2H), 7.43 - 7.32 (m, 2H), 7.25 - 7.13 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.69 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.08 (dd, J = 13.2, 10.2 ㎐, 1H), 5.34 - 5.21 (m, 2H), 5.20 - 5.07 (m, 1H), 4.71 - 4.58 (m, 1H), 4.57 - 4.41 (m, 2H), 4.29 - 4.15 (m, 1H), 4.10 - 3.94 (m, 4H), 3.93 - 3.74 (m, 1H), 1.60 - 1.42 (m, 2H), 1.36 - 1.13 (m, 5H), 0.84 (t, J = 7.4 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -236.73 (t, J = 47.8 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 3.49. LCMS: MS m/z = 582.02 [M+1], tR = 1.22분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μl/분에서 0분-0.2분 2% 아세토니트릴, 0.2분-1.5분 2-100% 아세토니트릴, 1.5분-2.2분 100% 아세토니트릴, 2.2분-2.4분 100%-2% 아세토니트릴, 2.4분-2.5분 2% 아세토니트릴. HPLC: tR = 2.75분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 갖는 물; 구배: 2 mL/분에서 0분-5.0분 2-98% ACN, 5.0분-6.0분 98% ACN. HPLC: tR = 4.60분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 47. 에틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(4-(tert-부틸)페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00175
에틸 ((4-( tert -부틸)페녹시)(4-니트로페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 디클로로메탄(20 mL) 중 인(V) 옥시클로라이드(0.61 mL, 6.52 mmol)의 용액에 -78℃에서 아르곤 분위기 하에 L-알라닌 에틸 에스테르(1.00 g, 6.52 mmol)를 첨가하였다. 트리에틸아민(2.00 mL, 14.35 mmol)을 서서히 적가하였다. 15분 후, 반응물을 0℃까지 가온시켰다. 30분 후, 반응물을 -78℃까지 냉각시키고, 4-tert-부틸페놀(0.98 g, 6.52 mmol)을 첨가하였다. 트리에틸아민(0.91 mL, 6.52 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고, 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 0℃까지 냉각시켰다. 4-니트로페놀(0.91 g, 6.52 mmol)을 첨가하고, 뒤이어 트리에틸아민(0.91 mL, 6.52 mmol)을 적가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고, 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, 암모늄 클로라이드, 물, 염수로 세척하였다. 유기물을 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 농축시켰다. 중간체 VV1(부분입체이성질체 혼합물)을 실리카 겔 크로마토그래피(헥산 중 0-50% 에틸 아세테이트 구배를 사용함)에 의해 오일로서 단리하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 8.31 (d, J = 8.8 ㎐, 2H), 7.57 - 7.36 (m, 4H), 7.24 - 7.09 (m, 2H), 6.76 - 6.57 (m, 1H), 4.12 - 3.77 (m, 3H), 1.30 - 1.21 (m, 12H), 1.11 (t, J = 7.1 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ -1.16, -1.24. LCMS: MS m/z = 451.00 [M+1], tR = 1.84분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN.
Figure pct00176
에틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(4-(tert-부틸)페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 테트라하이드로푸란(0.5 mL)을 중간체 4(40 mg, 0.12 mmol)와 중간체 VV1(71 mg, 0.16 mmol)과 마그네슘 클로라이드(17 mg, 0.18 mmol)의 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하였다. N,N-디이소프로필에틸아민(52 μL, 0.30 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 50℃까지 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 에틸 아세테이트(2 mL)로 희석시켰다. 유기물을 물(2 mL)로 세척하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 농축시켰다. 아세토니트릴(2 mL) 중 잔류물의 용액에 수성 염산 용액(0.3 mL, 3.6 mmol, 12 M)을 0℃에서 적가하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(5 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화된 수성 소듐 카르보네이트 용액(5 mL) 및 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 HPLC 크로마토그래피(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å, 100 x 30 mm, 수 중 5-100% 아세토니트릴의 구배)에 의해 정제하여, 실시예 VV(부분입체이성질체 혼합물)를 얻었다. LCMS: MS m/z = 609.96 [M+1], tR = 1.42분 (부), 1.44분 (주); LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN
Sp 부분입체이성질체 및 Rp 부분입체이성질체의 분리. 부분입체이성질체를 키랄 분취 SFC에 의해 서로 단리하였다(SFC chiralpack AD-H 5 μm, 250 x 21 mm; 메탄올 25%):
Figure pct00177
Figure pct00178
실시예 48. 실시예 47의 제1 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 8.00 (s, 1H), 7.40 - 7.33 (m, 3H), 7.16 - 7.09 (m, 2H), 6.99 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.40 (d, J = 8.1 ㎐, 1H), 4.82 - 4.72 (m, 1H), 4.70 - 4.57 (m, 2H), 4.39 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.34 - 4.20 (m, 2H), 4.12 (q, J = 7.1 ㎐, 2H), 3.96 - 3.83 (m, 1H), 1.33 - 1.26 (m, 12H), 1.22 (t, J = 7.1 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.93. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -238.56 (t, J = 47.8 ㎐). LCMS: MS m/z = 609.96 [M+1], tR = 1.42분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 2.91분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 49. 실시예 47의 제2 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.99 (s, 1H), 7.43 - 7.35 (m, 2H), 7.35 - 7.30 (m, 1H), 7.20 - 7.13 (m, 2H), 6.96 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 5.39 (d, J = 8.4 ㎐, 1H), 4.82 - 4.69 (m, 1H), 4.69 - 4.53 (m, 2H), 4.35 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.28 - 4.15 (m, 2H), 4.15 - 4.07 (m, 2H), 3.99 - 3.84 (m, 1H), 1.35 - 1.26 (m, 12H), 1.22 (t, J = 7.1 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.78. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -238.79 (t, J = 47.8 ㎐). LCMS: MS m/z = 609.96 [M+1], tR = 1.45분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 2.94분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 50. (1-메틸사이클로프로필)메틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00179
(1-메틸사이클로프로필)메틸 ( tert -부톡시카르보닐)- L -알라니네이트. 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 하이드로클로라이드(1.22 g, 6.36 mmol)를 10 mL의 아세토니트릴 중 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라닌(1.00 g, 5.29 mmol)의 용액에 아르곤 분위기 하에 첨가하였다. 15분 후, 4-(디메틸아미노)-피리딘(0.71 g, 5.81 mmol), 그 후에 (1-메틸사이클로프로필)메탄올(0.51 ml, 5.29 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 수 중 5% 시트르산 용액(2 x 10 mL)으로 세척하였다. 유기물을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트(10 mL), 물(5 mL), 그 후에 염수(10 mL)로 세척하였다. 유기물을 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(헥산 중 0-10% 에틸 아세테이트 구배를 사용함)에 의해 정제하여, 중간체 YY1을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.26 (d, J = 7.4 ㎐, 1H), 4.09 - 3.69 (m, 3H), 1.38 (s, 9H), 1.25 (d, J = 7.5 ㎐, 3H), 1.06 (s, 3H), 0.56 - 0.39 (m, 2H), 0.38 - 0.24 (m, 2H).
Figure pct00180
(1-메틸사이클로프로필)메틸 L -알라니네이트 하이드로클로라이드. 1,4-디옥산 중 4 M 하이드로겐 클로라이드(3.7 mL, 14.80 mmol)를 디클로로메탄(10 mL) 중 중간체 YY1(1.85 g, 7.19 mmol)의 용액에 0℃에서 첨가하였다. 1시간 후, 반응물을 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄(10 mL)에서 얻고, 농축시켰다. 이전 단계를 반복하였다. 중간체 YY2를 추가 정제 없이 다음 반응에 사용하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 8.41 (s, 3H), 4.13 (q, J = 7.2 ㎐, 1H), 4.07 - 3.91 (m, 2H), 1.43 (d, J = 7.2 ㎐, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.56 - 0.47 (m, 2H), 0.39 - 0.33 (m, 2H).
Figure pct00181
(1-메틸사이클로프로필)메틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 페닐 디클로로포스페이트(0.82 mL, 5.45 mmol) 및 트리에틸아민(1.58 mL, 11.36 mmol)을 디클로로메탄(15 mL) 중 중간체 YY2(880 mg, 4.54 mmol) 현탁액에 0℃에서 순차적으로 첨가하였다. 1시간 후, 4-니트로페놀(0.63 g, 4.54 mmol) 및 트리에틸아민(0.79 mL, 5.8 mmol)을 0℃에서 순차적으로 첨가한 다음, 생성된 혼합물을 실온까지 가온시켰다. 2.5시간 후, 반응 혼합물을 디클로로메탄(50 mL)으로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0-100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여, 중간체 YY3(부분입체이성질체 혼합물)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 8.34 - 8.27 (m, 2H), 7.55 - 7.37 (m, 4H), 7.31 - 7.17 (m, 3H), 6.78 - 6.65 (m, 1H), 4.13 - 3.97 (m, 1H), 3.89 - 3.76 (m, 2H), 1.31 - 1.21 (m, 3H), 1.02 (d, J = 1.5 ㎐, 3H), 0.49 - 0.37 (m, 2H), 0.35 - 0.23 (m, 2H). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ -1.25, -1.44. LCMS: MS m/z = 433.02 [M-1], tR = 1.75분 (부), 1.77 (주); LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN.
Figure pct00182
(1-메틸사이클로프로필)메틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 테트라하이드로푸란(0.5 mL)을 중간체 4(40 mg, 0.12 mmol)와 중간체 YY3(67 mg, 0.15 mmol)과 마그네슘 클로라이드(17 mg, 0.18 mmol)의 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하였다. N,N-디이소프로필에틸아민(52 μL, 0.30 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 50℃까지 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 에틸 아세테이트(2 mL)로 희석시켰다. 유기물을 물(2 mL)로 세척하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 농축시켰다. 아세토니트릴(2 mL) 중 잔류물의 용액에 수성 염산 용액(0.3 mL, 3.60 mmol, 12 M)을 0℃에서 적가하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(5 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(5 mL) 및 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 HPLC 크로마토그래피(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å, 100 x 30 mm, 수 중 5-100% 아세토니트릴)에 의해 정제하여, 생성물(부분입체이성질체 혼합물)을 얻었다. LCMS: MS m/z = 593.95 [M+1], tR = 1.33분 (부), 1.35분 (주); LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN
Sp 부분입체이성질체 및 Rp 부분입체이성질체의 분리. 부분입체이성질체를 키랄 분취 HPLC에 의해 서로 단리하였다(Chiralpak IA 5 μm, 250 x 22 mm; 에탄올 100%):
Figure pct00183
Figure pct00184
실시예 51. 실시예 50의 제1 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.87 (s, 1H), 7.36 - 7.29 (m, 2H), 7.25 - 7.15 (m, 3H), 7.07 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.86 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.38 (d, J = 8.2 ㎐, 1H), 4.81 - 4.73 (m, 1H), 4.70 - 4.59 (m, 2H), 4.38 (d, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.33 - 4.23 (m, 2H), 4.00 - 3.86 (m, 3H), 1.34 - 1.28 (m, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.51 - 0.47 (m, 2H), 0.38 - 0.33 (m, 2H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.75. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -238.49 (t, J = 48.0 ㎐). LCMS: MS m/z = 594.00 [M+1], tR = 1.33분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 2.70분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 52. 실시예 50의 제2 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.99 (s, 1H), 7.42 - 7.31 (m, 3H), 7.29 - 7.15 (m, 3H), 6.93 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 5.38 (d, J = 8.4 ㎐, 1H), 4.80 - 4.69 (m, 1H), 4.69 - 4.53 (m, 2H), 4.33 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.29 - 4.15 (m, 2H), 4.03 - 3.90 (m, 2H), 3.85 (d, J = 11.1 ㎐, 1H), 1.38 - 1.32 (m, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.52 - 0.43 (m, 2H), 0.39 - 0.32 (m, 2H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.60. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -238.78 (t, J = 47.7 ㎐). LCMS: MS m/z = 594.00 [M+1], tR = 1.35분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 2.76분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 53. 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00185
3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸프로필 ( tert -부톡시카르보닐)- L -알라니네이트. 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 하이드로클로라이드(2.43 g, 12.69 mmol)를 10 mL의 아세토니트릴 중 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라닌(2.00 g, 10.57 mmol)의 용액에 아르곤 분위기 하에 첨가하였다. 15분 후, 4-(디메틸아미노)-피리딘(1.42 g, 11.62 mmol), 그 후에 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸프로판-1-올(1.69 ml, 10.55 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 수 중 5% 시트르산 용액(2 x 10 mL)으로 세척하였다. 유기물을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트(10 mL), 물(5 mL), 그 후에 염수(10 mL)로 세척하였다. 유기물을 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(헥산 중 0-10% 에틸 아세테이트 구배를 사용함)에 의해 정제하여, 중간체 BBB1을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.32 (d, J = 7.3 ㎐, 1H), 4.15 (d, J = 11.6 ㎐, 1H), 4.08 - 3.95 (m, 2H), 1.37 (s, 9H), 1.25 (d, J = 7.3 ㎐, 3H), 1.13 - 1.09 (m, 6H).
Figure pct00186
3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸프로필 ((4-니트로페녹시)(페녹시) 포스포릴)- L -알라니네이트. 1,4-디옥산 중 4 M 하이드로겐 클로라이드(10 mL, 40.00 mmol)를 디클로로메탄(5 mL) 중 중간체 BBB1(1.88 g, 6.00 mmol)의 용액에 첨가하였다. 1시간 후, 반응물을 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄(15 mL)에 용해시키고, 0℃까지 냉각시켰다. (페닐 디클로로포스페이트(1.07 mL, 7.21 mmol) 및 트리에틸아민(1.83 mL, 13.22 mmol)을 순차적으로 첨가하였다. 1시간 후, 4-니트로페놀(0.836 g, 6.00 mmol) 및 트리에틸아민(0.92 mL, 7.00 mmol)을 0℃에서 순차적으로 첨가한 다음, 생성된 혼합물을 실온까지 가온시켰다. 2.5시간 후, 반응 혼합물을 디클로로메탄(50 mL)으로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0-100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여, 중간체 BBB2(부분입체이성질체 혼합물)를 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 8.30 (d, J = 8.9 ㎐, 2H), 7.56 - 7.36 (m, 4H), 7.35 - 7.16 (m, 3H), 6.85 - 6.64 (m, 1H), 4.18 - 3.94 (m, 3H), 1.30 - 1.23 (m, 3H), 1.10 (s, 6H). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ -1.29, -1.46. 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -76.19, -76.19.
Figure pct00187
3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 테트라하이드로푸란(0.5 mL)을 중간체 4(40 mg, 0.12 mmol)와 BBB2(73 mg, 0.15 mmol)와 마그네슘 클로라이드(17 mg, 0.18 mmol)의 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하였다. N,N-디이소프로필에틸아민(52 μL, 0.30 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 50℃까지 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 에틸 아세테이트(2 mL)로 희석시켰다. 유기물을 물(2 mL)로 세척하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 농축시켰다. 아세토니트릴(2 mL) 중 잔류물의 용액에 수성 염산 용액(0.3 mL, 3.60 mmol, 12 M)을 0℃에서 적가하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(5 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(5 mL) 및 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 HPLC 크로마토그래피(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å, 100 x 30 mm, 수 중 5-100 아세토니트릴)에 의해 정제하여, 생성물을 얻었다. LCMS: MS m/z = 649.97 [M+1], tR = 1.38분 (부), 1.40분 (주); LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLCz; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN
Sp 부분입체이성질체 및 Rp 부분입체이성질체의 분리. 부분입체이성질체를 키랄 분취 SFC에 의해 서로 단리하였다(SFC chiralpack AD-H 5 μm, 250 x 21 mm; 이소프로판올 30%):
Figure pct00188
Figure pct00189
실시예 54. 실시예 53의 제1 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.84 (s, 1H), 7.38 - 7.30 (m, 2H), 7.24 - 7.15 (m, 3H), 7.00 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.82 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.38 (d, J = 8.2 ㎐, 1H), 4.82 - 4.73 (m, 1H), 4.70 - 4.62 (m, 2H), 4.38 (d, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.31 - 4.24 (m, 2H), 4.17 (d, J = 11.5 ㎐, 1H), 4.09 - 4.03 (m, 1H), 4.01 - 3.93 (m, 1H), 1.37 - 1.26 (m, 3H), 1.19 - 1.12 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.69. 1H 디커플드(decoupled) 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -78.76 (s), -238.55 (t, J = 47.8 ㎐). LCMS: MS m/z = 649.97 [M+1], tR = 1.38분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 2.88분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 55. 실시예 53의 제2 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.89 (s, 1H), 7.40 - 7.32 (m, 2H), 7.28 - 7.17 (m, 3H), 7.10 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.83 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.38 (d, J = 8.3 ㎐, 1H), 4.81 - 4.70 (m, 1H), 4.70 - 4.57 (m, 2H), 4.33 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.29 - 4.14 (m, 3H), 4.07 - 3.91 (m, 2H), 1.34 (dd, J = 7.2, 1.0 ㎐, 3H), 1.17 - 1.11 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.50. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -78.77 (s), -238.67 (t, J = 47.8 ㎐). LCMS: MS m/z = 649.97 [Mz+1], tR = 1.40분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 2.89분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 56. 프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00190
프로필 L -알라니네이트 하이드로클로라이드. L-알라닌(20.00 g, 224.48 mmol)과 1-프로판올(200 mL)의 혼합물에 클로로트리메틸실란(30 mL, 272.68 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃에서 밀봉된 용기에서 15시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에 농축시켰다. 고체를 분쇄하고, 에틸 아세테이트/헥산의 혼합물(100 mL, 50:50)에서 얻고, 여과하였다. 필터 케이크(filter cake)를 에틸 아세테이트/헥산(20 mL, 50:50)으로 세척하고, 고 진공 하에 건조하여, 중간체 EEE1을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 8.63 (s, 3H), 4.20 - 3.95 (m, 3H), 1.69 - 1.54 (m, 2H), 1.41 (d, J = 7.2 ㎐, 3H), 0.88 (t, J = 7.4 ㎐, 3H).
Figure pct00191
프로필 ((퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 페닐 디클로로포스페이트(4.88 mL, 32.81 mmol) 및 트리에틸아민(9.12 mL, 65.62 mmol)을 디클로로메탄(50 mL) 중 EEE1(5.00 mg, 29.83 mmol) 현탁액에 0℃에서 순차적으로 첨가하였다. 1시간 후, 펜타플루오로페놀(5.49 g, 29.83 mmol) 및 트리에틸아민(4.55 mL, 32.81 mmol)을 0℃에서 순차적으로 첨가한 다음, 생성된 혼합물을 실온까지 가온시켰다. 2.5시간 후, 반응 혼합물을 디클로로메탄(100 mL)으로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(100 mL) 및 염수(100 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(헥산 중 0-30% 에틸 아세테이트 구배를 사용함)에 의해 정제하여, 중간체 EEE2(부분입체이성질체 혼합물)를 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.46 - 7.38 (m, 2H), 7.30 - 7.18 (m, 3H), 6.89 (dd, J = 14.1, 9.9 ㎐, 1H), 4.03 - 3.92 (m, 3H), 1.62 - 1.48 (m, 2H), 1.29 (d, J = 6.8 ㎐, 3H), 0.85 (t, J = 7.4 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -154.11 - -154.32 (m), -160.60 - -161.00 (m), -163.56 - -163.91 (m). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 0.48. LCMS: MS m/z = 453.9 [M+1], tR = 1.81분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN.
Figure pct00192
프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 테트라하이드로푸란(0.5 mL)을 중간체 4(40 mg, 0.12 mmol)와 중간체 EEE2(63 mg, 0.15 mmol)와 마그네슘 클로라이드(17 mg, 0.18 mmol)의 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하였다. N,N-디이소프로필에틸아민(52 μL, 0.30 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 50℃까지 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 에틸 아세테이트(2 mL)로 희석시켰다. 유기물을 물(2 mL)로 세척하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 농축시켰다. 아세토니트릴(2 mL) 중 잔류물의 용액에 수성 염산 용액(0.3 mL, 3.60 mmol, 12 M)을 0℃에서 적가하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(5 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(5 mL) 및 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 HPLC 크로마토그래피(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å, 100 x 30 mm, 수 중 5-100% 아세토니트릴)에 의해 정제하여, 실시예 EEE(부분입체이성질체 혼합물)를 얻었다. LCMS: MS m/z = 567.94 [M+1], tR = 1.24분 (부), 1.26분 (주); LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN
Sp 부분입체이성질체 및 Rp 부분입체이성질체의 분리. 부분입체이성질체를 키랄 분취 SFC에 의해 서로 단리하였다(SFC chiralpack AD-H 5 μm, 250 x 21 mm; 에탄올 35%):
Figure pct00193
Figure pct00194
실시예 57. 실시예 56의 제1 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.96 (s, 1H), 7.36 - 7.28 (m, 2H), 7.25 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 7.22 - 7.14 (m, 3H), 6.94 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 5.39 (d, J = 8.2 ㎐, 1H), 4.81 - 4.73 (m, 1H), 4.70 - 4.60 (m, 2H), 4.38 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.33 - 4.21 (m, 2H), 4.11 - 3.99 (m, 2H), 3.97 - 3.87 (m, 1H), 1.70 - 1.57 (m, 2H), 1.33 - 1.27 (m, 3H), 0.93 (t, J = 7.4 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.59. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -236.94 (t, J = 47.7 ㎐). LCMS: MS m/z = 567.94 [M], tR = 1.24분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μl/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 2.53분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 58. 실시예 56의 제2 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.90 (s, 1H), 7.41 - 7.33 (m, 2H), 7.28 - 7.17 (m, 3H), 7.12 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.85 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 5.38 (d, J = 8.4 ㎐, 1H), 4.80 - 4.70 (m, 1H), 4.70 - 4.57 (m, 2H), 4.34 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.27 - 4.17 (m, 2H), 4.11 - 3.98 (m, 2H), 3.97 - 3.85 (m, 1H), 1.71 - 1.55 (m, 2H), 1.36 - 1.29 (m, 3H), 0.92 (t, J = 7.4 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.59. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -237.39 (t, J = 47.7 ㎐). LCMS: MS m/z = 567.94 [M+1], tR = 1.26분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μl/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 2.57분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 59. 펜틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00195
펜틸 ( tert -부톡시카르보닐)- L -알라니네이트. 100 mL의 건조 디클로로메탄 중 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라닌(5.00 g, 26 mmol) 및 1-펜타놀(2.12 g, 24.05 mmol)의 교반된 용액에 4-메틸모르폴린(7.93 mL, 72.15 mmol), 4-(디메틸아미노)피리딘(59 mg, 0.48 mmol) 및 트리-프로필포스폰산 환식 무수물(17.18 mL, 28.86 mmol, 에틸 아세테이트 중 50%)을 0℃에서 아르곤 분위기 하에 첨가하였다. 그 후에, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수 중 시트르산의 10% 용액(20 mL)으로 2x, 소듐 비카르보네이트의 포화된 수용액(20 mL)으로 2x 그리고 염수(50 mL)로 1회 세척하였다. 조합된 유기물을 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 실리카 겔의 3 cm 층을 통해 여과하였고, 이를 추가의 디클로로메탄(200 mL)으로 세척하였다. 유기물을 감압 하에 농축시키고, DCM과 함께 공동증류시키고, 고 진공 하에 밤새 건조하였다. 어떠한 추가 정제도 수행하지 않았고, 중간체 HHH1을 다음 단계에 수행하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.26 (d, J = 7.4 ㎐, 1H), 4.25 - 3.80 (m, 3H), 1.65 - 1.48 (m, 2H), 1.41 - 1.18 (m, 16H), 1.00 - 0.74 (m, 3H).
Figure pct00196
펜틸 ((퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 중간체 HHH1(6.11 g, 22.3 mmol)을 디클로로메탄(20 mL)에서 얻었고, 0℃까지 냉각시켰다. 하이드로겐 클로라이드(30.00 mL, 120.00 mmol, 디옥산 중 4 N)를 첨가하였다. 2시간 후, 반응물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄(30 mL)에 용해시키고, 0℃까지 냉각시켰다. 페닐 디클로로포스페이트(3.65 mL, 24.53 mmol) 및 트리에틸아민(6.80 mL, 49.06 mmol)을 순차적으로 첨가하였다. 그 후에 1시간 후, 펜타플루오로페놀(4.0 g, 22.30 mmol) 및 트리에틸아민(3.40 mL, 24.53 mmol)을 0℃에서 순차적으로 첨가한 다음, 생성된 혼합물을 실온까지 가온시켰다. 2.5시간 후, 반응 혼합물을 디클로로메탄(50 mL)으로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(50 mL), 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 3 cm의 실리카 겔을 통해 여과하였다. 패드를 추가 디클로로메탄(200 mL)으로 세척하였다. 유기물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 고온 헥산(30 mL)에 용해시킨 다음, 헥산(120 mL)으로 희석시켰다. 반응물을 2시간 동안 교반시키고, 중간체 HHH2를 여과에 의해 단리하였다. 중간체 HHH2는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.46 - 7.37 (m, 2H), 7.30 - 7.19 (m, 3H), 6.90 (dd, J = 14.3, 9.9 ㎐, 1H), 4.07 - 3.93 (m, 3H), 1.58 - 1.48 (m, 2H), 1.33 - 1.20 (m, 7H), 0.88 - 0.77 (m, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -154.24 (d, J = 21.5 ㎐), -160.86 (t, J = 23.1 ㎐), -163.69 (dd, J = 24.2, 20.4 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 0.47. LCMS: MS m/z = 481.8 [M+1], tR = 1.91분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN.
Figure pct00197
펜틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 테트라하이드로푸란(0.5 mL)을 중간체 4(40 mg, 0.12 mmol)와 중간체 HHH2(74 mg, 0.15 mmol)와 마그네슘 클로라이드(17 mg, 0.18 mmol)의 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하였다. N,N-디이소프로필에틸아민(52 μL, 0.30 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 50℃까지 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 에틸 아세테이트(2 mL)로 희석시켰다. 유기물을 물(2 mL)로 세척하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 농축시켰다. 아세토니트릴(2 mL) 중 잔류물의 용액에 수성 염산 용액(0.3 mL, 3.60 mmol, 12 M)을 0℃에서 적가하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(5 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(5 mL) 및 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 HPLC 크로마토그래피(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å, 100 x 30 mm, 수 중 5-100 아세토니트릴)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.80 (s, 1H), 7.39 - 7.31 (m, 2H), 7.29 - 7.15 (m, 3H), 6.87 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.75 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.36 (d, J = 8.3 ㎐, 1H), 4.81 - 4.57 (m, 3H), 4.34 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.21 (d, J = 5.3 ㎐, 2H), 4.14 - 4.00 (m, 2H), 3.95 - 3.86 (m, 1H), 1.66 - 1.52 (m, 2H), 1.36 - 1.25 (m, 7H), 0.93 - 0.85 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.59. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -238.85 (t, J = 47.7 ㎐). LCMS: MS m/z = 595.97 [M+1], tR = 1.43분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 2.87분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 60. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-((((S)-(((S)-1-(2-에틸부톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-2-(플루오로메틸)테트라하이드로푸란-3,4-디일 디아세테이트
Figure pct00198
아세트산 무수물(11 mg, 0.11 mmol) 및 실시예 1(33 mg, 0.05 mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(1.0 mL)에 아르곤 하에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 4-디메틸아미노피리딘(0.7 mg, 0.005 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 2시간 후, 메탄올(0.5 mL)을 첨가하고, 혼합물을 20분 동안 교반한 다음, 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(10 mL)으로 2회 그리고 염수(10 mL)로 1회 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.82 (s, 1H), 7.38 - 7.31 (m, 2H), 7.28 - 7.23 (m, 2H), 7.22 - 7.17 (m, 1H), 6.86 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.66 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.89 - 5.82 (m, 1H), 5.80 (d, J = 5.5 ㎐, 1H), 5.59 (d, J = 7.9 ㎐, 1H), 4.76 - 4.68 (m, 1H), 4.65 - 4.54 (m, 1H), 4.36 - 4.30 (m, 1H), 4.30 - 4.24 (m, 1H), 4.10 - 3.91 (m, 3H), 2.14 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.57 - 1.43 (m, 1H), 1.41 - 1.28 (m, 7H), 0.88 (t, J = 7.5 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.40. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -236.51 (t, J = 46.9 ㎐). LCMS: MS m/z = 694.1 [M+1], tR = 1.67분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 3.32분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 61. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-((((S)-(((S)-1-(2-에틸부톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-2-(플루오로메틸)테트라하이드로푸란-3,4-디일 디프로피오네이트
Figure pct00199
프로피온산 무수물(14 mg, 0.11 mmol) 및 실시예 1(33 mg, 0.05 mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(1.0 mL)에 아르곤 하에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 4-디메틸아미노피리딘(0.7 mg, 0.005 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 2시간 후, 메탄올(0.5 mL)을 첨가하고, 혼합물을 20분 동안 교반한 다음, 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(10 mL)으로 2회 그리고 염수(10 mL)로 1회 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.83 (s, 1H), 7.41 - 7.29 (m, 2H), 7.29 - 7.23 (m, 2H), 7.23 - 7.16 (m, 1H), 6.89 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.67 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.92 - 5.79 (m, 2H), 5.59 (d, J = 7.7 ㎐, 1H), 4.76 - 4.67 (m, 1H), 4.65 - 4.54 (m, 1H), 4.37 - 4.31 (m, 1H), 4.29 - 4.24 (m, 1H), 4.09 - 4.04 (m, 1H), 4.03 - 3.94 (m, 2H), 2.49 - 2.42 (m, 2H), 2.31 - 2.23 (m, 2H), 1.54 - 1.46 (m, 1H), 1.40 - 1.31 (m, 7H), 1.17 (t, J = 7.6 ㎐, 3H), 1.05 (t, J = 7.5 ㎐, 3H), 0.88 (t, J = 7.5 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.41. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -236.30 (t, J = 46.9 ㎐). LCMS: MS m/z = 722.0 [M+1], tR = 1.78분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 3.54분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 62. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-((((S)-(((S)-1-(2-에틸부톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-2-(플루오로메틸)테트라하이드로푸란-3,4-디일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00200
이소부티르산 무수물(18 mg, 0.11 mmol) 및 실시예 1(34 mg, 0.06 mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(1.0 mL)에 아르곤 하에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 4-디메틸아미노피리딘(0.7 mg, 0.006 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 2시간 후, 메탄올(0.5 mL)을 첨가하고, 혼합물을 20분 동안 교반한 다음, 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(10 mL)으로 2회 그리고 염수(10 mL)로 1회 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.88 (s, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 2H), 7.28 - 7.21 (m, 2H), 7.21 - 7.16 (m, 1H), 6.99 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.69 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.88 - 5.75 (m, 2H), 5.66 - 5.53 (m, 1H), 4.78 - 4.67 (m, 1H), 4.63 - 4.54 (m, 1H), 4.40 - 4.31 (m, 1H), 4.31 - 4.23 (m, 1H), 4.10 - 4.02 (m, 1H), 4.02 - 3.89 (m, 2H), 2.68 (hep, J = 7.0 ㎐, 1H), 2.47 (hep, J = 7.0 ㎐, 1H), 1.58 - 1.43 (m, 1H), 1.39 - 1.30 (m, 7H), 1.25 - 1.18 (m, 6H), 1.08 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.03 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 0.87 (t, J = 7.5 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.44. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -235.60 (t, J = 46.8 ㎐). LCMS: MS m/z = 750.1 [M+1], tR = 1.88분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 3.73분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 63. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-((((((S)-1-(사이클로헥실옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-2-(플루오로메틸)테트라하이드로푸란-3,4-디일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00201
프로피온산 무수물(17 mg, 0.13 mmol) 및 실시예 14(40 mg, 0.07 mmol)를 무수 테트라하이드로푸란(1.0 mL)에 아르곤 하에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 4-디메틸아미노피리딘(8 mg, 0.07 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 2시간 후, 메탄올(0.5 mL)을 첨가하고, 혼합물을 20분 동안 교반한 다음, 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(10 mL)으로 2회 그리고 염수(10 mL)로 1회 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.83 (s, 1H), 7.37 - 7.30 (m, 2H), 7.29 - 7.23 (m, 2H), 7.23 - 7.16 (m, 1H), 6.87 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.65 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.88 - 5.79 (m, 2H), 5.59 (d, J = 7.6 ㎐, 1H), 4.79 - 4.66 (m, 2H), 4.66 - 4.55 (m, 1H), 4.39 - 4.32 (m, 1H), 4.31 - 4.25 (m, 1H), 3.98 - 3.88 (m, 1H), 2.68 (hep, J = 7.0, 1H), 2.47 (hep, J = 7.0, 1H), 1.85 - 1.76 (m, 2H), 1.75 - 1.67 (m, 2H), 1.58 - 1.49 (m, 1H), 1.47 - 1.28 (m, 8H), 1.24 - 1.21 (m, 6H), 1.08 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.04 (d, J = 6.9 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.45. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -235.50 (t, J = 46.9 ㎐). LCMS: MS m/z = 748.1 [M+1], tR = 1.85분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 3.64분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 64. 테트라하이드로-2H-피란-4-일 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00202
(S)-테트라하이드로-2H-피란-4-일 2-아미노프로파노에이트 하이드로클로라이드. L-알라닌(500 mg, 5.61 mmol)과 테트라하이드로-2H-피란-4-올(5 g, 49.0 mmol)의 혼합물에 TMSCl(2 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃에서 15시간 동안 교반하고, 진공내에서 농축시키고, 생성된 고체를 헥산 중 5% EtOAc로 추출하고, 여과하고, 헥산 중 5% EtOAc로 여러 번 세척하였다. 생성된 고체를 고 진공 하에 15시간 동안 건조하여, 중간체 MMM1을 얻었다. 고체의 흡습성으로 인해, 이를 후속 반응에서 그대로 사용하였다.
Figure pct00203
(2S)-테트라하이드로-2H-피란-4-일 2-(((4-니트로페녹시)(페녹시) 포스포릴)아미노)프로파노에이트. 중간체 MMM1(1.33 g, 6.34 mmol)을 메틸렌 클로라이드(15 mL)에 용해시키고, -78℃까지 냉각시키고, 페닐 디클로로포스페이트(1.137 mL, 7.61 mmol)를 신속하게 첨가하였다. 트리에틸아민(2.2 mL, 15.2 mmol)을 -78℃에서 30분에 걸쳐 첨가하고, 생성된 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반하였다. 그 후에, 4-니트로페놀(882 mg, 6.34 mmol)을 한꺼번에 첨가하고, 트리에틸아민(1.1 mL, 7.61 mmol)을 -78℃에서 30분에 걸쳐 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반하고, 물(2x), 염수로 세척하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하였다. 소듐 설페이트를 여과에 의해 제거하고, 여과물을 진공내에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(헥산 중 EtOAc 0% → 70%)에 의해 정제하여, 중간체 MMM2(부분입체이성질체 혼합물)를 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.22 (m, 2H), 7.49 - 7.06 (m, 7H), 4.95 (m, 1H), 4.14 (m, 1H), 4.07 - 3.80 (m, 3H), 3.52 (m, 2H), 1.95 - 1.81 (m, 2H), 1.64 m, 2H), 1.42 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.09, -3.13.
Figure pct00204
테트라하이드로-2H-피란-4-일 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 테트라하이드로푸란(5 mL)을 중간체 4(250 mg, 0.74 mmol)와 중간체 MMM2(433 mg, 0.96 mmol)와 마그네슘 클로라이드(106 mg, 1.11 mmol)의 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하였다. N,N-디이소프로필에틸아민(322 μL, 1.85 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 50℃까지 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시켰다. 유기물을 물(10 mL)로 세척하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 농축시켰다. 아세토니트릴(5 mL) 중 잔류물의 용액에 수성 염산 용액(0.6 mL, 7.39 mmol, 12 M)을 0℃에서 적가하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(10 mL) 및 염수(10 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 HPLC 크로마토그래피(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å, 100 x 30 mm, 수 중 5-100% 아세토니트릴)에 의해 정제하여, 생성물(부분입체이성질체 혼합물)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.86 - 7.82 (m, 1H), 7.40 - 7.30 (m, 2H), 7.28 - 7.15 (m, 3H), 6.99 - 6.93 (m, 1H), 6.83 - 6.77 (m, 1H), 5.40 - 5.35 (m, 1H), 4.95 - 4.88 (m, 1H), 4.81 - 4.58 (m, 3H), 4.40 - 4.31 (m, 1H), 4.29 - 4.18 (m, 2H), 3.97 - 3.78 (m, 3H), 3.56 - 3.46 (m, 2H), 1.92 - 1.82 (m, 2H), 1.66 - 1.55 (m, 2H), 1.34 - 1.25 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.75, 3.56. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -238.53, -238.74. LCMS: MS m/z = 610.01 [M+1], tR = 1.16분 (부), 1.18분 (주); LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 2.32분 (부), 2.37 (주); Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 65. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-2-((((((S)-1-옥소-1-((테트라하이드로-2H-피란-4-일)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-디일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00205
이소부티르산 무수물(26 mg, 0.16 mmol) 및 실시예 64(50 mg, 0.08 mmol)를 무수 테트라하이드로푸란(1.0 mL)에 아르곤 하에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 4-디메틸아미노피리딘(8 mg, 0.07 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 2시간 후, 메탄올(0.5 mL)을 첨가하고, 혼합물을 20분 동안 교반한 다음, 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(10 mL)으로 2회 그리고 염수(10 mL)로 1회 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여, 생성물(부분입체이성질체 혼합물)을 얻었다. LCMS: MS m/z = 750.1 [M+1], tR = 1.62분 (주), 1.65(부); LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN.
Sp 부분입체이성질체 및 Rp 부분입체이성질체의 분리. 부분입체이성질체를 키랄 분취 SFC에 의해 서로 단리하였다(SFC chiralpack 1A 5 μm, 250 x 21 mm; 이소프로판올 30%):
Figure pct00206
Figure pct00207
실시예 66. 실시예 65의 제1 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.81 (s, 1H), 7.39 - 7.30 (m, 2H), 7.26 - 7.16 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.96 - 5.90 (m, 1H), 5.85 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 5.60 (d, J = 7.7 ㎐, 1H), 4.95 - 4.89 (m, 2H), 4.73 (s, 1H), 4.62 (s, 1H), 4.38 - 4.29 (m, 2H), 3.96 - 3.80 (m, 2H), 3.56 - 3.46 (m, 2H), 2.73 - 2.64 (m, 1H), 2.53 - 2.44 (m, 1H), 1.91 - 1.83 (m, 2H), 1.67 - 1.56 (m, 2H), 1.35 - 1.20 (m, 9H), 1.09 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.05 (d, J = 7.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.50. 1H 디커플드 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -235.96. LCMS: MS m/z = 750.08 [M+1], tR = 1.62분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 3.23분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 67. 실시예 65의 제2 용리 부분입체이성질체: 1 H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.80 (s, 1H), 7.38 - 7.30 (m, 2H), 7.29 - 7.23 (m, 2H), 7.22 - 7.17 (m, 1H), 6.80 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.61 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.87 - 5.79 (m, 2H), 5.60 (d, J = 7.8 ㎐, 1H), 4.99 - 4.91 (m, 1H), 4.78 - 4.66 (m, 1H), 4.66 - 4.54 (m, 1H), 4.40 - 4.32 (m, 1H), 4.32 - 4.25 (m, 1H), 4.02 - 3.92 (m, 1H), 3.90 - 3.82 (m, 2H), 3.57 - 3.46 (m, 2H), 2.74 - 2.64 (m, 1H), 2.51 - 2.42 (m, 1H), 1.95 - 1.83 (m, 2H), 1.69 - 1.56 (m, 2H), 1.37 - 1.28 (m, 3H), 1.23 (d, J = 7.0 ㎐, 6H), 1.08 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.03 (d, J = 7.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.40. 1H 디커플드 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -235.32. LCMS: MS m/z = 750.07 [M+1], tR = 1.65분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 3.24분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 68. 2-프로필펜틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00208
2-프로필펜틸 ( tert -부톡시카르보닐)- L -알라니네이트. 100 mL의 건조 디클로로메탄 중 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라닌(5.00 g, 26.42 mmol) 및 2-프로필펜탄-1-올(3.13 g, 24.02 mmol)의 교반된 용액에 4-메틸모르폴린(7.92 mL, 72.07 mmol), 4-(디메틸아미노)피리딘(59 mg, 0.48 mmol) 및 트리-프로필포스폰산 환식 무수물(17.16 mL, 28.83 mmol, 에틸 아세테이트 중 50%)을 0℃에서 아르곤 분위기 하에 첨가하였다. 그 후에, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수 중 시트르산의 10% 용액(20 mL)으로 2x, 소듐 비카르보네이트의 포화된 수용액(20 mL)으로 2x 그리고 염수(50 mL)로 1회 세척하였다. 조합된 유기물을 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 실리카 겔의 3 cm 층을 통해 여과하였고, 이를 추가의 디클로로메탄(200 mL)으로 세척하였다. 유기물을 감압 하에 농축시키고, DCM과 함께 공동증류시키고, 고 진공 하에 밤새 건조하였다. 어떠한 추가 정제도 수행하지 않았고, 중간체 QQQ1을 다음 단계에 수행하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.27 (d, J = 7.5 ㎐, 1H), 4.06 - 3.86 (m, 3H), 1.67 - 1.56 (m, 1H), 1.43 - 1.10 (m, 20H), 0.93 - 0.79 (m, 6H).
Figure pct00209
2-프로필펜틸 ((퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 1,4-디옥산 중 4 M 하이드로겐 클로라이드(10 mL, 40.00 mmol)를 디클로로메탄(5 mL) 중 중간체 QQQ1(5.70 g, 18.93 mmol)의 용액에 첨가하였다. 1시간 후, 반응물을 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄(15 mL)에 용해시키고, 0℃까지 냉각시켰다. (페닐 디클로로포스페이트(3.10 mL, 20.82 mmol) 및 트리에틸아민(5.77 mL, 41.64 mmol)을 순차적으로 첨가하였다. 그 후에 1시간 후, 펜타플루오로페놀(3.48 g, 18.93 mmol) 및 트리에틸아민(2.89 mL, 20.82 mmol)을 0℃에서 순차적으로 첨가한 다음, 생성된 혼합물을 실온까지 가온시켰다. 2.5시간 후, 반응 혼합물을 디클로로메탄(50 mL)으로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 3 cm의 실리카 겔을 통해 여과하였다. 실리카 겔 케이크(cake)를 추가 디클로로메탄(100 mL)으로 세척하였다. 유기물을 농축시켰다. 잔류물을 30 mL의 고온 헥산에 용해시킨 다음, 120 mL의 헥산으로 희석시켰다. 반응물을 5시간 동안 교반시킨 다음, 여과하여, 중간체 QQQ2를 단리하였다. 중간체 QQQ2는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.44 - 7.37 (m, 2H), 7.48 - 7.36 (m, 1H), 6.94 - 6.85 (m, 1H), 4.06 - 3.90 (m, 3H), 1.66 - 1.55 (m, 1H), 1.32 - 1.18 (m, 11H), 0.85 - 0.79 (m, 6H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -154.23 (d, J = 22.6 ㎐), -160.88 (t, J = 23.5 ㎐), -163.71 (t, J = 22.0 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 0.44. LCMS: MS m/z = 523.78 [M+1], tR = 2.04분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μl/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN.
Figure pct00210
2-프로필펜틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 테트라하이드로푸란(0.5 mL)을 중간체 4(40 mg, 0.12 mmol)와 중간체 QQQ2(80 mg, 0.15 mmol)와 마그네슘 클로라이드(17 mg, 0.18 mmol)의 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하였다. N,N-디이소프로필에틸아민(52 μL, 0.30 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 50℃까지 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 에틸 아세테이트(2 mL)로 희석시켰다. 유기물을 물(2 mL)로 세척하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 농축시켰다. 아세토니트릴(2 mL) 중 잔류물의 용액에 수성 염산 용액(0.3 mL, 12 M)을 0℃에서 적가하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(5 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(5 mL) 및 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 HPLC 크로마토그래피(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å, 100 x 30 mm, 수 중 5-100% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.81 (s, 1H), 7.39 - 7.31 (m, 2H), 7.28 - 7.16 (m, 3H), 6.88 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.75 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.36 (d, J = 8.3 ㎐, 1H), 4.81 - 4.57 (m, 3H), 4.34 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.26 - 4.17 (m, 2H), 4.07 - 4.01 (m, 1H), 3.98 - 3.88 (m, 2H), 1.69 - 1.61 (m, 1H), 1.38 - 1.20 (m, 11H), 0.94 - 0.83 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.55. 1H 디커플드 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -238.83. LCMS: MS m/z = 638.03 [M+1], tR = 1.58분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 3.29분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 69. 에틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-발리네이트
Figure pct00211
에틸 L -발리네이트 하이드로클로라이드. 클로로트리메틸실란(4.58 mL, 36 mmol)을 에탄올(20 mL) 중 L-발린(5.0 g, 43 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 70℃에서 18시간 동안 가열하였다. 반응물을 감압 하에 농축시켰다. 어떠한 추가 정제도 수행하지 않았고, 중간체 RRR1을 다음 단계에 이용하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 8.58 (s, 3H), 4.31 - 4.14 (m, 2H), 3.87 - 3.80 (m, 1H), 2.24 - 2.13 (m, 1H), 1.24 (t, J = 7.1 ㎐, 3H), 0.99 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 0.95 (d, J = 6.9 ㎐, 3H).
Figure pct00212
에틸 ((퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)- L -발리네이트. 중간체 RRR1(7.40 g, 40.74 mmol)을 디클로로메탄(15 mL)에 용해시키고, 0℃까지 냉각시켰다. 페닐 디클로로포스페이트(6.67 mL, 44.81 mmol) 및 트리에틸아민(12.42 mL, 89.62 mmol)을 순차적으로 첨가하였다. 그 후에 1시간 후, 펜타플루오로페놀(7.50 g, 40.74 mmol) 및 트리에틸아민(6.21 mL, 44.81 mmol)을 0℃에서 순차적으로 첨가한 다음, 생성된 혼합물을 실온까지 가온시켰다. 2.5시간 후, 반응 혼합물을 디클로로메탄(50 mL)으로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 3 cm의 실리카 겔을 통해 여과하였다. 실리카 겔 케이크를 추가 디클로로메탄(100 mL)으로 세척하였다. 유기물을 농축시켰다. 잔류물을 30 mL의 고온 헥산에 용해시킨 다음, 120 mL의 헥산으로 희석시켰다. 반응물을 5시간 동안 교반시킨 다음, 여과하여, 중간체 RRR2를 단리하였다. 중간체 RRR2는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.48 - 7.34 (m, 2H), 7.28 - 7.18 (m, 3H), 6.81 - 6.71 (m, 1H), 4.07 (q, J = 7.1 ㎐, 2H), 3.69 - 3.58 (m, 1H), 2.01 - 1.88 (m, 1H), 1.16 (t, J = 7.1 ㎐, 3H), 0.80 (d, J = 6.8 ㎐, 3H), 0.76 (d, J = 6.8 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -154.30 (d, J = 21.4 ㎐), -161.10 (t, J = 23.3 ㎐), -163.77 (dd, J = 24.0, 20.1 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 1.95. LCMS: MS m/z = 467.87 [M+1], tR = 1.85분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN.
Figure pct00213
에틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-발리네이트. 테트라하이드로푸란(0.5 mL)을 중간체 4(40 mg, 0.12 mmol)와 중간체 RRR2(72 mg, 0.15 mmol)와 마그네슘 클로라이드(17 mg, 0.18 mmol)의 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하였다. N,N-디이소프로필에틸아민(52 μL, 0.30 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 50℃까지 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 에틸 아세테이트(2 mL)로 희석시켰다. 유기물을 물(2 mL)로 세척하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 농축시켰다. 아세토니트릴(2 mL) 중 잔류물의 용액에 수성 염산 용액(0.3 mL, 12 M)을 0℃에서 적가하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(5 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(5 mL) 및 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 HPLC 크로마토그래피(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å, 100 x 30 mm, 수 중 5-100% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.84 (s, 1H), 7.40 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.15 (m, 3H), 6.97 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.79 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.36 (d, J = 8.4 ㎐, 1H), 4.81 - 4.71 (m, 1H), 4.70 - 4.59 (m, 2H), 4.35 (d, J = 5.1 ㎐, 1H), 4.26 - 4.20 (m, 2H), 4.16 - 4.05 (m, 2H), 3.64 (dd, J = 9.9, 6.2 ㎐, 1H), 2.05 - 1.95 (m, 1H), 1.21 (t, J = 7.2 ㎐, 3H), 0.93 (t, J = 7.7 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 4.41. 1H 디커플드 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -238.95. LCMS: MS m/z = 581.94 [M+1], tR = 1.30분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μl/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 2.64분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 70. 이소부틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00214
이소부틸 ( tert -부톡시카르보닐)- L -알라니네이트. 10 mL의 건조 디클로로메탄 중 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라닌(1.00 g, 5.29 mmol) 및 1-메틸프로판-1-올(0.60 mL, 6.34 mmol)의 교반된 용액에 4-메틸모르폴린(1.74 mL, 15.86 mmol), 4-(디메틸아미노)피리딘(13 mg, 0.11 mmol) 및 트리-프로필포스폰산 환식 무수물(3.78 mL, 6.34 mmol, 에틸 아세테이트 중 50%)을 0℃에서 아르곤 분위기 하에 첨가하였다. 그 후에, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수 중 시트르산의 10% 용액(20 mL)으로 2x, 소듐 비카르보네이트의 포화된 수용액(20 mL)으로 2x, 그리고 염수(50 mL)로 1회 세척하였다. 조합된 유기물을 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 실리카 겔의 3 cm 층을 통해 여과하였고, 이를 추가의 디클로로메탄(200 mL)으로 세척하였다. 유기물을 감압 하에 농축시키고, DCM과 함께 공동증류시키고, 고 진공 하에 밤새 건조하였다. 어떠한 추가 정제도 수행하지 않았고, 중간체 SSS1을 다음 단계에 수행하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.26 (d, J = 7.4 ㎐, 1H), 4.08 - 3.94 (m, 1H), 3.93 - 3.72 (m, 2H), 1.93 - 1.78 (m, 1H), 1.44 - 1.29 (m, 9H), 1.24 (d, J = 7.4 ㎐, 3H), 0.88 (d, J = 6.7 ㎐, 6H).
Figure pct00215
이소부틸 ((퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 1,4-디옥산 중 4 M 하이드로겐 클로라이드(10 mL, 40.00 mmol)를 디클로로메탄(5 mL) 중 중간체 SSS1(12.15 g, 49.54 mmol)의 용액에 첨가하였다. 1시간 후, 반응물을 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄(15 mL)에 용해시키고, 0℃까지 냉각시켰다. 페닐 디클로로포스페이트(8.11 mL, 54.50 mmol) 및 트리에틸아민(15.11 mL, 108.99 mmol)을 순차적으로 첨가하였다. 그 후에 1시간 후, 펜타플루오로페놀(9.12 g, 49.54 mmol) 및 트리에틸아민(7.55 mL, 54.50 mmol)을 0℃에서 순차적으로 첨가한 다음, 생성된 혼합물을 실온까지 가온시켰다. 2.5시간 후, 반응 혼합물을 디클로로메탄(50 mL)으로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 3 cm의 실리카 겔을 통해 여과하였다. 실리카 겔 케이크를 추가 디클로로메탄(100 mL)으로 세척하였다. 유기물을 농축시켰다. 잔류물을 30 mL의 고온 헥산에 용해시킨 다음, 120 mL의 헥산으로 희석시켰다. 반응물을 5시간 동안 교반시킨 다음, 중간체 SSS2를 여과에 의해 단리하였다. 중간체 SSS2는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.45 - 7.38 (m, 2H), 7.23 (dd, J = 11.2, 7.8 ㎐, 3H), 6.91 (dd, J = 14.2, 10.0 ㎐, 1H), 4.07 - 3.94 (m, 1H), 3.81 (d, J = 6.6 ㎐, 2H), 1.89 - 1.79 (m, 1H), 1.29 (d, J = 7.1 ㎐, 3H), 0.86 (d, J = 6.7 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 0.49. 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -154.25 (d, J = 21.3 ㎐), -160.86 (t, J = 23.3 ㎐), -163.55 - -163.79 (m). LCMS: MS m/z = 467.8 [M+1], tR = 1.88분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN.
Figure pct00216
이소부틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 테트라하이드로푸란(0.5 mL)을 중간체 4(40 mg, 0.12 mmol)와 중간체 SSS2(72 mg, 0.15 mmol)와 마그네슘 클로라이드(17 mg, 0.18 mmol)의 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하였다. N,N-디이소프로필에틸아민(52 μL, 0.30 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 50℃까지 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 에틸 아세테이트(2 mL)로 희석시켰다. 유기물을 물(2 mL)로 세척하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 농축시켰다. 아세토니트릴(2 mL) 중 잔류물의 용액에 수성 염산 용액(0.3 mL, 12 M)을 0℃에서 적가하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(5 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(5 mL) 및 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 HPLC 크로마토그래피(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å, 100 x 30 mm, 수 중 5-100% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.84 (s, 1H), 7.39 - 7.32 (m, 2H), 7.27 - 7.17 (m, 3H), 6.96 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.79 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.37 (d, J = 8.3 ㎐, 1H), 4.81 - 4.70 (m, 1H), 4.70 - 4.58 (m, 2H), 4.34 (d, J = 5.1 ㎐, 1H), 4.25 - 4.17 (m, 2H), 3.98 - 3.80 (m, 3H), 1.95 - 1.85 (m, 1H), 1.32 (d, J = 7.1 ㎐, 3H), 0.91 (d, J = 6.7 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.57. 1H 디커플드 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -238.78. LCMS: MS m/z = 581.97 [M+1], tR = 1.35분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μL/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 2.73분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 71. 사이클로부틸 ((((2 R ,3 S ,4 R ,5 S )-5-(4-아미노피롤로[2,1- f ][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트
Figure pct00217
사이클로부틸 ( tert -부톡시카르보닐)- L -알라니네이트. (tert-부톡시카르보닐)-L-알라닌(9.447 g, 0.05 mol)을 아세토니트릴(36 mL)에서 얻고, 사이클로부탄올(3 g, 0.042 mol), 뒤이어 EDCI(8.396 g, 0.054 mol) 및 DMAP(7.624 g, 0.062 mol)를 한꺼번에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 반응물을 디클로로메탄 및 물로 희석시켰다. 층을 분할하고, 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과한 다음, 감압 하에 농축시켰다. 정제를 실리카 겔 크로마토그래피 0-30% 에틸아세테이트/헥산에 의해 실시하여, 중간체 TT1을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 7.21 (d, J = 7.3 ㎐, 1H), 4.87 (p, J = 7.4 ㎐, 1H), 3.91 (h, J = 7.3 ㎐, 1H), 2.20 - 2.28 (m, 2H), 2.10 -1.85 (m, 2H), 1.78 - 1.65 (m, 1H), 1.58 (m, 1H), 1.36 (s, 9H), 1.19 (d, J = 7.4 ㎐, 3H).
Figure pct00218
사이클로부틸- L -알라니네이트 하이드로클로라이드. 중간체 TTT1(8 g, 0.033 mol)을 무수 디클로로메탄(88 mL) 및 디옥산 중 4 N HCl(41.1 mL, 0.164 mol)에서 얻었다. 반응물을 주위 온도에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에 농축시키고, 디클로로메탄으로 공동증발시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 두고, 중간체 TTT2를 정제 없이 그대로 다음 단계에 사용하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 8.65 (s, 3H), 5.03 - 4.90 (m, 1H), 3.97 (q, J = 7.2 ㎐, 1H), 2.34 - 2.21 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.82 - 1.68 (m, 1H), 1.68 - 1.51 (m, 1H), 1.39 (d, J = 7.2 ㎐, 3H).
Figure pct00219
사이클로부틸 ((퍼플루오로페녹시)(페녹시)-포스포릴)- L -알라니네이트. 무수 디클로로메탄(100 mL) 중 중간체 TTT2(5.67 g, 31.56 mmol) 및 페닐 디클로로포스페이트(4.696 mL, 31.56 mmol)의 용액에 트리에틸아민(9.76 mL, 69.44 mmol)을 0℃에서 아르곤 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 후에, 펜타플루오로페놀(5.81 g, 31.56 mmol) 및 트리에틸아민(4.88 mL, 34.72 mmol)을 첨가하였다. 0℃에서 1시간 교반 후, 반응 혼합물을 Et2O로 희석시키고, 고체를 여과해 내었다. 조 물질을 감압 하에 농축시키고, 0-100% 에틸 아세테이트/ 헥산의 용리제 램프(ramp)를 사용하여 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여, 원하는 화합물을 부분입체이성질체 혼합물로서 얻었다. 수득된 화합물을 고 진공 하에 건조하여, 고체화를 야기하였다. 디이소프로필 에테르를 고체화된 물질에 첨가하고, 초음파처리하여, 미세한 고체를 수득하였다. 고체를 여과에 의해 단리하였다. 디이소프로필 에테르를 이용한 초음파처리 및 여과의 또 다른 차례로 중간체 TTT3을 얻었다. 중간체 TTT3은 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 7.40 (dd, J = 8.8, 7.0 ㎐, 2H), 7.27 - 7.16 (m, 3H), 6.85 (dd, J = 14.1, 9.9 ㎐, 1H), 4.91 - 4.78 (m, 1H), 4.00 - 3.82 (m, 1H), 2.28 - 2.15 (m, 2H), 1.99 - 1.84 (m, 2H), 1.76 - 1.63 (m, 1H), 1.56 (m, 1H), 1.25 (dd, J = 7.1, 1.2 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6 ) δ -154.11 - -154.31 (m), -160.88 (t, J = 23.3 ㎐), -163.67 (t, J = 23.6 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 0.45. LCMS: MS m/z = 465.94 [M+1]; tR = 1.67분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN.
Figure pct00220
사이클로부틸 ((((2 R ,3 S ,4 R ,5 S )-5-(4-아미노피롤로[2,1- f ][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 중간체 4(0.1 g, 0.296 mmol)와 중간체 TTT3(0.151 g, 0.325 mmol)과 마그네슘 클로라이드(0.042 g, 0.0.443 mmol)의 혼합물에 테트라하이드로푸란(1.5 mL)을 실온에서 첨가하고, 뒤이어 N,N-디이소프로필에틸아민(0.129 mL, 0.739 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 그 후에, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 수득된 잔류물을 포화된 소듐 클로라이드 용액 및 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 층을 분할하고, 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 수득된 잔류물을 분취 HPLC(Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80 Å 150 x 30 mm 컬럼, 15%-85% 아세토니트릴/물)를 사용하여 정제하였다. 분획을 조합하고, 감압 하에 농축시켰다. 수득된 잔류물을 무수 아세토니트릴(3 mL)에 용해시키고, 얼음 배쓰에서 냉각시키고, 뒤이어 진한 염산(0.133 mL, 1.6 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 얼음 배쓰에서 냉각시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액으로 중화시켰다. 분리된 고체를 여과에 의해 단리하고, 물로 세척하고, 0-20% 메탄올/디클로로메탄에 의해 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.78 (s, 1H), 7.39 - 7.30 (m, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.36 (d, J = 8.3 ㎐, 1H), 4.99 - 4.86 (m, 1H), 4.82 - 4.56 (m, 3H), 4.34 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.24 - 4.15 (m, 2H), 3.87 (m, 1H), 2.35 - 2.22 (m, 2H), 2.02 (m, 2H), 1.82 - 1.68 (m, 1H), 1.69 - 1.53 (m, 1H), 1.28 (dd, J = 7.1, 1.0 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올- d 4 ) δ -238.78 (dd, J = 48.6, 46.9 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올- d 4 ) δ 3.52. LCMS: MS m/z = 580.05 [M+1]; tR = 1.08분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μL/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% ACN. HPLC: tR = 4.415분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
실시예 72. 옥세탄-3-일 ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00221
옥세탄-3-일 ((퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. DCM(50 ml) 중 옥세탄-3-일 L-알라니네이트(1.98 g, 9.55 mmol)의 용액에 페닐 포스포로디클로리데이트(2.01 g, 9.55 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 트리에틸아민(0.97 g, 9.55 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 아이스 배쓰의 제거 후 30분 동안 교반하고, 0℃까지 냉각시키고, 2,3,4,5,6-펜타플루오로페놀(1.76 g, 9.55 mmol)을 한꺼번에 첨가하고, 트리에틸아민(0.97 g, 9.55 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 얼음 배쓰의 제거 후 30분 동안 교반하고, EtOAc로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 유기 용매를 진공 내에서 농축시키고, 생성된 잔류물을 헥산 중 0-100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 중간체를 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 7.38-7.34 (m, 2H), 7.28-7.19 (m, 3H), 5.49-5.43 (m, 1H), 4.91-4.85 (m, 2H), 4.63-4.56 (m, 2H), 4.27-4.22 (m, 1H), 4.06-4.02 (m, 1H), 1.51-1.48 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ 0.38, 0.22. LCMS: MS m/z = 468.01 [M+1], tR = 1.63분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μl/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 3.15분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
Figure pct00222
중간체 4(0.0345 g, 0.103 mmol)와 옥세탄-3-일 ((퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트(0.626 g, 0.134 mmol)와 마그네슘 클로라이드(0.015 g, 0.155 mmol)의 혼합물에 테트라하이드로푸란(1.0 mL)을 실온에서 첨가하고, 뒤이어 N,N-디이소프로필에틸아민(0.063 mL, 0.361 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 그 후에, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 수득된 잔류물을 포화된 소듐 클로라이드 용액 및 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 층을 분할하고, 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 수득된 잔류물을 분취 HPLC(Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80 Å 150 x 30 mm 컬럼, 15%-85% 아세토니트릴/물)를 사용하여 정제하였다. 분획을 조합하고, 감압 하에 농축시켰다. LCMS: MS m/z = 581.97 [M]; ]; tR = 1.12분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1800 μl/분에서 0분-1.8분 2-100% 아세토니트릴, 1.8분-1.85분 100%-2% 아세토니트릴, 1.85분-2.00분 2% 아세토니트릴. HPLC: t-R = 3.37분; Agilent Infinity 1290II; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.8μ C18 100A, 100 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 트리플루오로아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 트리플루오로아세트산을 갖는 물; 구배: 1500 μl/분에서 0-0.55분 2% 아세토니트릴, 0.55-8.55분 2-98% 아세토니트릴, 8.55-9.25분 98% 아세토니트릴
실시예 73. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-2-((((S)-(((S)-1-(옥세탄-3-일옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-디일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00223
이소부티르산 무수물(8.2 mg, 0.05 mmol) 및 실시예 72(15 mg, 0.03 mmol)를 무수 테트라하이드로푸란(1.0 mL)에 아르곤 하에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 4-디메틸아미노피리딘(0.3 mg, 0.003 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 2시간 후, 메탄올(0.5 mL)을 첨가하고, 혼합물을 20분 동안 교반한 다음, 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(10 mL)으로 2회 그리고 염수(10 mL)로 1회 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 수 중 10-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 8.14 (s, 2H), 7.37 (t, J = 7.8 ㎐, 1H), 7.31 - 7.18 (m, 4H), 6.98 (d, J = 4.6 ㎐, 2H), 6.84 (dd, J = 36.1, 4.5 ㎐, 1H), 5.45 (d, J = 5.7 ㎐, 2H), 5.21 (t, J = 6.1 ㎐, 2H), 4.97 (d, J = 6.4 ㎐, 2H), 4.89 - 4.82 (m, 1H), 4.71 (d, J = 47.0 ㎐, 1H), 4.62 - 4.54 (m, 1H), 4.37 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 3.78 (d, J = 11.4 ㎐, 2H), 3.67 (d, J = 11.4 ㎐, 2H), 2.71 (p, J = 7.0 ㎐, 1H), 2.52 (p, J = 7.0 ㎐, 1H), 1.33 - 1.29 (m, 3H), 1.25 (d, J = 7.0 ㎐, 6H), 1.12 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.08 (d, J = 7.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.50. 디커플드 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -235.96 (s). LCMS: MS m/z = 722.1 [M+1], tR = 1.56분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μl/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN.
실시예 74. 2-에틸부틸 ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-부티르아미도피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00224
무수 피리딘(1 mL) 중 중간체 6(150 mg, 0.231 mmol)의 용액에 부타노일 클로라이드(0.026 mL, 0.254 mmol)를 실온에서 아르곤 분위기 하에 적가하였다. 30분 후, 반응 혼합물을 수 중 20-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여, 화합물을 얻었다. LCMS: MS m/z = 720.27 [M+1]; ]; tR = 1.76분; LC 시스템: Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1100 μl/분에서 0분-0.2분 40% 아세토니트릴, 0.2분-1.55분 40%-100% 아세토니트릴, 1.55분-2.80분 100% 아세토니트릴, 2.80-2.81분 100%-40% 아세토니트릴. 수득된 화합물을 아세토니트릴(4 mL)에서 얻고, 진한 HCl(0.4 mL)을 0℃에서 적가하였다. 반응물을 주위 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 얼음 배쓰에서 냉각시키고, 수성 소듐 비카르보네이트 용액으로 중화시켰다. 생성된 혼합물을 수 중 20-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여, 화합물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 10.73 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.40 - 7.31 (m, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 4H), 6.93 - 6.92 (m, 1H), 6.08 - 6.02 (m, 1H), 5.34 - 5.32 (m, 1H), 5.19 (s, 2H), 4.65 - 4.63 (m, 1H), 4.58 - 4.45 (m, 2H), 4.21 - 4.20 (m, 1H), 4.03 - 3.92 (m, 3H), 3.93 - 3.76 (m, 2H), 2.69 - 2.65 (m, 2H), 1.65 - 1.60 (m, 2H), 1.44 - 1.41 (m, 1H), 1.32 - 1.18 (m, 7H), 0.94 - 0.91 (m, 3H), 0.79 - 0.77 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d6) δ 3.54. 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d6) δ -236.50 (t, J = 47.9 ㎐). LCMS: MS m/z = 680.22 [M+1]; ]; tR = 1.37분; LC 시스템: Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1100 μl/분에서 0분-0.2분 40% 아세토니트릴, 0.2분-1.55분 40%-100% 아세토니트릴, 1.55분-2.80분 100% 아세토니트릴, 2.80-2.81분 100%-40% 아세토니트릴.
실시예 75. 2-에틸부틸 ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-벤즈아미도피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00225
무수 피리딘(1 mL) 중 중간체 6(100 mg, 0.154 mmol)의 용액에 벤조일 클로라이드(0.018 mL, 0.154 mmol)를 실온에서 아르곤 분위기 하에 적가하였다. 30분 후, 반응 혼합물을 수 중 20-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여, 화합물을 얻었다. LCMS: MS m/z = 754.26 [M+1]; ]; tR = 1.88분; LC 시스템: Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1100 μl/분에서 0분-0.2분 40% 아세토니트릴, 0.2분-1.55분 40%-100% 아세토니트릴, 1.55분-2.80분 100% 아세토니트릴, 2.80-2.81분 100%-40% 아세토니트릴. 수득된 화합물을 아세토니트릴(3 mL)에서 얻고, 진한 HCl(0.3 mL)을 0℃에서 적가하였다. 반응물을 주위 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 얼음 배쓰에서 냉각시키고, 수성 소듐 비카르보네이트 용액으로 중화시켰다. 생성된 혼합물을 수 중 20-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여, 화합물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 13.15 (s, 0.3H), 11.21 (s, 0.7H), 8.33 - 7.99 (m, 3H), 7.62 - 7.48 (m, 3H), 7.38 - 7.34 (m, 2H), 7.23 - 6.97 (m, 5H), 6.09 - 6.03 (m, 1H), 5.33 - 5.32 (m, 2H), 5.23 -5.21 (m, 1H), 4.69 - 4.63 (m, 1H), 4.57 - 4.49 (m, 2H), 4.22 - 4.20 (m, 1H), 4.02 - 3.79 (m, 5H), 1.46 - 1.40 (m, 1H), 1.32 - 1.19 (m, 7H), 0.79 - 0.77 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d6) δ 3.55. LCMS: MS m/z = 714.27 [M+1]; ]; tR = 1.85분; LC 시스템: Dionex Ultimate 3000 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1100 μl/분에서 0분-1.6분 2-100% 아세토니트릴, 1.6분-1.8분 100% 아세토니트릴, 1.80분-1.90분 100%-2% 아세토니트릴, 1.90분-2.20분 2% 아세토니트릴.
실시예 76. 2-에틸부틸 ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-(2-사이클로헥실아세트아미도)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00226
무수 피리딘(1 mL) 중 중간체 6(150 mg, 0.231 mmol)의 용액에 사이클로헥실아세틸 클로라이드(0.039 mL, 0.254 mmol)를 실온에서 아르곤 분위기 하에 적가하였다. 30분 후, 반응 혼합물을 수 중 20-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여, 화합물을 얻었다. LCMS: MS m/z = 774.45 [M+1]; ]; tR = 1.98분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1100 μl/분에서 0분-0.2분 40% 아세토니트릴, 0.2분-1.55분 40%-100% 아세토니트릴, 1.55분-2.80분 100% 아세토니트릴, 2.80-2.81분 100%-40% 아세토니트릴. 수득된 화합물을 아세토니트릴(4 mL)에서 얻고, 진한 HCl(0.4 mL)을 0℃에서 적가하였다. 반응물을 주위 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 얼음 배쓰에서 냉각시키고, 수성 소듐 비카르보네이트 용액으로 중화시켰다. 생성된 혼합물을 수 중 20-100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 분취 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å 100 x 30 mm 컬럼)에 의해 정제하여, 화합물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 10.71 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.37 - 7.34 (m, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 4H), 6.94 - 6.93 (m, 1H), 6.08 - 6.02 (m, 1H), 5.34 - 5.30 (m, 2H), 5.19 (s, 1H), 4.68 - 4.48 (m, 3H), 4.20 - 4.19 (m, 1H), 4.00 - 3.78 (m, 5H), 2.55 - 2.53 (m, 2H), 1.87 - 1.56 (m, 5H), 1.45 - 1.38 (m, 1H), 1.31 - 1.07 (m, 11H), 1.04 - 0.92 (m, 2H), 0.81 - 0.77 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d6) δ 3.54. 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d6) δ -236.47 (t, J = 48.1 ㎐). LCMS: MS m/z = 734.20 [M+1]; ]; tR = 1.23분; LC 시스템: Dionex Ultimate 3000 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 갖는 물; 구배: 1100 μl/분에서 0분-1.6분 2-100% 아세토니트릴, 1.6분-1.8분 100% 아세토니트릴, 1.80분-1.90분 100%-2% 아세토니트릴, 1.90분-2.20분 2% 아세토니트릴.
실시예 77. 사이클로프로필메틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1- f ][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트
Figure pct00227
사이클로프로필메틸 (tert-부톡시카르보닐)- L -알라니네이트. 50 mL의 건조 디클로로메탄 중 boc-L-알라닌(7.00 g, 37.00 mmol) 및 사이클로프로판메탄올(3.20 g, 44.39 mmol)의 교반된 용액에 아르곤 하에 N-메틸모르폴린(12.20 mL, 110.99 mmol), 4-(디메틸아미노)피리딘(0.094 g, 0.74 mmol) 및 트리-프로필포스폰산 환식 무수물(26.43 mL, 44.39 mmol, 에틸 아세테이트 중 50%)을 0℃에서 첨가하였다. 그 후에, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다(TLC 또는 LCMS에 의해 전환을 모니터링하기 어려움). 반응 혼합물을 물(20 mL), 시트르산의 10% 용액(20 mL)으로 2x, NaHCO3의 포화된 수용액(20 mL)으로 2x 그리고 염수(20 mL)로 1회 세척하였다. 유기물을 Na2SO4에 걸쳐 건조하고, 실리카 겔의 3 cm 층을 통해 여과하였고, 이를 추가의 디클로로메탄으로 세척하였다. 유기물을 감압 하에 농축 침강시키고, 디클로로메탄과 함께 공동증류시키고, 고 진공 하에 밤새 건조하여, 중간체를 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.25 (d, J = 7.3 ㎐, 1H), 4.12 - 3.77 (m, 3H), 1.38 (s, 9H), 1.24 (d, J = 7.4 ㎐, 3H), 1.12 - 0.99 (m, 1H), 0.57 - 0.42 (m, 2H), 0.31 - 0.19 (m, 2H).
Figure pct00228
사이클로프로필메틸 ((퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 사이클로프로필메틸 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라니네이트(8.26 g, 33.96 mmol)를 디클로로메탄(20 mL)에서 얻고, 0℃까지 냉각시켰다. 하이드로겐 클로라이드(30.00 mL, 120.00 mmol, 디옥산 중 4 N)를 첨가하였다. 2시간 후, 반응물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄(30 mL)에 용해시키고, 0℃까지 냉각시켰다. 페닐 디클로로포스페이트(5.56 mL, 37.35 mmol) 및 트리에틸아민(10.36 mL, 74.70 mmol)을 순차적으로 첨가하였다. 그 후에 1시간 후, 펜타플루오로페놀(6.25 g, 33.96 mmol) 및 트리에틸아민(5.18 mL, 37.35 mmol)을 0℃에서 순차적으로 첨가한 다음, 생성된 혼합물을 실온까지 가온시켰다. 2.5시간 후, 반응 혼합물을 디클로로메탄(50 mL)으로 희석시키고, 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 용액(50 mL), 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 3 cm의 실리카 겔을 통해 여과하였다. 패드를 추가 디클로로메탄(200 mL)으로 세척하였다. 유기물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 가온 tert-부틸 메틸 에테르(100 mL)에 용해시킨 다음, 100 mL의 헥산으로 희석시켰다. 반응물을 2시간 동안 교반시키고, 중간체를 여과에 의해 단리하였다. 중간체는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.47 - 7.38 (m, 2H), 7.30 - 7.18 (m, 3H), 6.98 - 6.82 (m, 1H), 4.06 - 3.93 (m, 1H), 3.87 (d, J = 7.2 ㎐, 2H), 1.30 (d, J = 6.9 ㎐, 3H), 1.12 - 0.98 (m, 1H), 0.53 - 0.43 (m, 2H), 0.27 - 0.20 (m, 2H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -154.22 (d, J = 21.9 ㎐), -160.88 (t, J = 22.4 ㎐), -163.70 (t, J = 21.8 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 0.47 (t, J = 12.5 ㎐). LCMS: MS m/z = 465.8 [M+1], tR = 1.80분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μl/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN.
Figure pct00229
사이클로프로필메틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1- f ][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(플루오로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 테트라하이드로푸란(0.5 mL)을 중간체 4(10 mg, 0.03 mmol)와 사이클로프로필메틸 ((퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트(15 mg, 0.03 mmol)와 마그네슘 클로라이드(4 mg, 0.4 mmol)의 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하였다. N,N-디이소프로필에틸아민(15 μL, 0.09 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 50℃까지 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 에틸 아세테이트(2 mL)로 희석시켰다. 유기물을 물(2 mL)로 세척하고, 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 여과하고, 농축시켰다. 아세토니트릴(2 mL) 중 잔류물의 용액에 수성 염산 용액(0.3 mL, 3.60 mmol, 12 M)을 0℃에서 적가하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(5 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화된 수성 소듐 비카르보네이트 카르보네이트 용액(5 mL) 및 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 HPLC 크로마토그래피(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110 Å, 100 x 30 mm, 수 중 5-100 아세토니트릴)에 의해 정제하여 생성물을 얻었고, 이는 NMR 분광법에 의해 단일 부분입체이성질체인 것으로 결정되었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.91 (s, 1H), 7.40 - 7.33 (m, 2H), 7.30 - 7.17 (m, 3H), 7.14 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 6.86 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 5.37 (d, J = 8.4 ㎐, 1H), 4.81 - 4.69 (m, 1H), 4.68 - 4.57 (m, 2H), 4.34 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.29 - 4.16 (m, 2H), 3.99 - 3.85 (m, 3H), 1.32 (d, J = 7.1 ㎐, 3H), 1.17 - 1.04 (m, 1H), 0.56 - 0.48 (m, 2H), 0.29 - 0.22 (m, 2H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.53. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -238.80 (t, J = 48.0 ㎐). LCMS: MS m/z = 579.89 [M+1], tR = 1.28분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 갖는 물; 구배: 2 μl/분에서 0분-2.0분 2-100% 아세토니트릴, 2.0분-3.05분 100% 아세토니트릴, 3.05분-3.2분 100%-2% 아세토니트릴, 3.2분-3.5분 2% ACN. HPLC: tR = 2.62분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
C. 생물학적 실시예
실시예 78. 뎅기 NS5 단백질의 발현 및 정제
뎅기 혈청형 2(균주 뉴기니 C(New Guinea C))의 전장 NS5 서열을 코딩하는 유전자를 합성하고, 벡터 pET28b의 NheI/XhoI 부위 내로 클로닝하여, N-말단 HIS-태깅된 NS5를 생성하였다. 서열 확인된 플라스미드를 이. 콜라이 BL21(DE3) 내로 형질전환시키고, OD600이 0.5에 도달할 때까지 세포를 LB 배지에서 성장시켰다. 0.5 mM IPTG의 첨가에 의해 단백질 발현을 유도하고, 배양물을 16℃에서 250 rpm에서 밤새 진탕을 계속하였다. 원심분리 후, 1 L 박테리아 배양물로부터의 세포 펠렛을 2개 정제의 EDTA 무함유 완전 프로테아제 저해제 칵테일(Roche Diagnostics, Risch-Rotkreuz, Switzerland)이 보충된 50 mM HEPES(pH 7.6), 500 mM NaCl, 10% 글리세롤, 0.5% TritonX100, 2 mM TCEP를 함유하는 완충제 A에 재현탁시켰다. 미세유체기를 사용하여 세포를 용해시키고 뒤이어 원심분리하였다. 정화된 상층액을 완충제 B[25 mM HEPES 7.5, 500 mM NaCl, 10% Gly, 0.1% CHAPS 및 1 mM TCEP]로 평형화된 5 mL Ni-NTA 컬럼(GE Healthcare)을 통해 정제하였다. 컬럼을 40 mM 이미다졸을 함유하는 완충제 B로 세척하고, NHIS-NS5를 500 mM 이미다졸을 함유하는 완충제 B의 구배로 용리시켰다. NHIS-NS5를 함유하는 분획을 풀링하고, 완충제 C[25 mM HEPES 7.2, 200 mM NaCl, 10% 글리세롤, 0.1% CHAPS, 2 mM DTT]로 평형화된 120 mL Superdex 200 컬럼(GE Healthcare)을 사용하여 크기 배제 크로마토그래피에 의해 추가로 정제하였다. NHIS-NS5 단백질의 질량 및 순도를 질량 분광법 분석에 의해 확인하였다.
대안적으로, Ni-NTA 정제된 NHIS-NS5를 사용하여 트롬빈 프로테아제를 첨가함으로써 N-말단 NHIS-태그를 제거하고, 4℃에서 완충제 B에 대한 투석과 함께 밤새 인큐베이션하였다. 태그-제거된 NS5 단백질을 제2 Ni-NTA 컬럼 상에서 다른 것들로부터 분리하고, 완충제 C[25 mM HEPES 7.2, 200 mM NaCl, 10% 글리세롤, 0.1% CHAPS, 2 mM DTT]로 평형화된 120 mL Superdex 200 컬럼(GE Healthcare)을 사용하여 크기 배제 크로마토그래피에 의해 추가로 정제하였다. NS5 단백질의 질량 및 순도를 질량 분광법 분석에 의해 확인하였다.
실시예 79. DENV Pol IC50
서열 5'-(UCAG)20(UCCAAG)14(UCAG)20-3'(SEQ ID NO: 1)를 갖는 244 뉴클레오타이드 2차 구조-무함유 헤테로중합체성 RNA(sshRNA)를 주형으로서 DENV2-NS5 중합효소 검정에서 5'-CUG-3' 프라이머와 함께 사용한다. 200 nM로부터 시작하는 화합물의 6개의 2-배 희석물 및 저해제-무함유 대조군을 96-웰 플레이트에 평판배양한다. 100 nM DENV2 NS5를 40 mM Tris-HCl(pH 7.5), 10 mM NaCl, 3 mM DTT, 0.2 단위/μL RNasin Plus RNase 저해제, 200 ng/μL sshRNA, 20 μM CUG 및 2 mM MgCl2를 함유하는 반응 혼합물에서 실온에서 5분 동안 예비인큐베이션한다.효소 믹스를 화합물 희석물에 첨가하고, 20 μM의 3개 천연 NTP와 2 μM의 1:100 α-33P-NTP를 함유하는 유사체:염기 매칭된 경쟁 천연 NTP를 함유하는 혼합물의 첨가에 의해 반응을 개시한다. 30℃에서 90분 후, 5 μL의 반응 혼합물을 DE81 음이온 교환 종이 상에 스포팅(spot)하였다. 필터 종이를 Na2HPO4(125 mM, pH 9)로 5분 동안 3회 세척하고, 물 및 에탄올로 헹군 다음, 공기-건조하고, 포스포이미저(phosphorimager)에 노출시킨다. 합성된 RNA를 Typhoon Trio 이미저 및 Image Quant TL 소프트웨어를 사용하여 정량화하고, 반응 속도를 GraphPad Prism 5.0을 사용하여 선형 회귀에 의해 계산한다. IC50 값을 Prism에서 용량-반응(가변 기울기) 방정식(4-모수 로지스틱 방정식)을 사용하여 비-선형 회귀 분석에 의해 계산한다: Y = 하단 + (상단-하단)/(1+10^((LogIC50-X)*경사기울기(HillSlope))).
실시예 80. RSV RNP 제조
RSV 리보핵단백질(RNP) 복합체를 Mason 등(1)으로부터 변형된 방법으로부터 제조하였다. HEp-2 세포를 MEM + 10% 우태혈청(FBS)에서 7.1 x 104개 세포/㎠의 밀도로 평판배양하고, 37℃(5% CO2)에서 밤새 부착시켰다. 부착 후, 세포를 35 mL MEM + 2% FBS에서 RSV A2(MOI=5)로 감염시켰다. 감염 후 20시간째에, 배지를 2 ㎍/mL 액티노마이신 D가 보충된 MEM + 2% FBS로 대체하고, 37℃로 1시간 동안 복귀시켰다. 그 후에, 세포를 PBS로 1회 세척하고, 35 mL의 PBS + 250 ㎍/mL 리소-레시틴(lyso-lecithin)으로 1분 동안 처리하고, 이후에 모든 액체를 흡인하였다. 세포를 1.2 mL의 완충제 A[50 mM TRIS 아세테이트(pH 8.0), 100 mM 포타슘 아세테이트, 1 mM DTT 및 2 ㎍/mL 액티노마이신 D] 내로 긁어서 세포를 수확하고, 18 게이지 바늘을 통해 반복해서 통과시켜(10회) 용해시켰다. 세포 용해물을 아이스에 10분 동안 놔둔 다음, 2400 g, 4℃에서 10분 동안 원심분리하였다. 상층액(S1)을 제거하고, 펠렛(P1)을 1% Triton X-100이 보충된 600 uL의 완충제 B[10 mM TRIS 아세테이트(pH 8.0), 10 mM 포타슘 아세테이트 및 1.5 mM MgCl2]에서 분해시키고, 18 게이지 바늘을 반복해서 통과시켰다(10회). 재현탁된 펠렛을 아이스에 10분 동안 놔둔 다음, 2400 g, 4℃에서 10분 동안 원심분리하였다. 상층액(S2)을 제거하고, 펠렛(P2)을 0.5% 데옥시콜레이트 및 0.1% Tween 40이 보충된 600 uL의 완충제 B에서 분해시켰다. 재현탁된 펠렛을 아이스에 10분 동안 놔둔 다음, 2400 g, 4℃에서 10분 동안 원심분리하였다. 농화된 RSV RNP 복합체를 함유하는 상층액(S3) 분획을 수집하고, 단백질 농도를 280 nm에서 UV 흡광도에 의해 결정하였다. 분취된 RSV RNP S3 분획을 -80℃에 보관하였다.
실시예 81. RSV RNP 검정
전사 반응은 30 μL의 반응 완충제[50 mM TRIS-아세테이트(pH 8.0), 120 mM 포타슘 아세테이트, 5% 글리세롤, 4.5 mM MgCl2, 3 mM DTT, 2 mM 에틸렌글리콜-비스(2-아미노에틸에테르)-테트라아세트산(EGTA), 50 ㎍/mL BSA, 2.5 U RNasin(Promega), ATP, GTP, UTP, CTP 및 1.5 uCi[α-32P] NTP(3000 Ci/mmol)]에 25 ㎍의 조 RSV RNP 복합체를 함유하였다. RSV RNP 전사의 저해에 대해 평가되는 뉴클레오타이드 유사체를 매칭하도록 전사 검정에 사용되는 방사성표지된 뉴클레오타이드를 선택하였다. 저온(cold), 경쟁적 NTP를 이의 Km의 1/2의 최종 농도로 첨가하였다(ATP= 20 μM, GTP= 12.5 μM, UTP= 6 μM 및 CTP= 2 μM). 3개의 잔류 뉴클레오타이드를 100 μM의 최종 농도로 첨가하였다.
뉴클레오타이드 유사체가 RSV RNP 전사를 저해하였는지의 여부를 결정하기 위해, 화합물을 5-배 증가분에서 6단계 일련의 희석을 사용하여 첨가하였다. 30℃에서 90분 인큐베이션 후, 350 μL의 Qiagen RLT 용해 완충제로 RNP 반응을 중단시키고, Qiagen RNeasy 96 키트를 사용하여 RNA를 정제하였다. 정제된 RNA를 RNA 시료 로딩 완충제(Sigma)에서 65℃에서 10분 동안 변성시키고, 2 M 포름알데하이드를 함유하는 1.2% 아가로스/MOPS 겔 상에서 진행시켰다. 아가로스 겔을 건조시키고, Storm 포스포이미저 스크린에 노출시키고, Storm 포스포이미저(GE Healthcare)를 사용하여 발색시켰다. 방사성표지된 총 전사물을 50%까지 감소시킨 화합물의 농도(IC50)를 2개 복제물의 비-선형 회귀 분석에 의해 계산하였다.
실시예 82. DENV-2 moDC EC50
인간 단핵구-유래 수지상 세포(moDC)가, GM-CSF 및 IL-4를 함유하는 인간 Mo-DC 분화 배지(Miltenyi Biotec)에서 배양된 CD14+ 단핵구(AllCells)로부터 유래하였다. 제7일에, moDC를 기계적 분해에 의해 수확하고, 세척하고, 혈청-무함유 RPMI에 현탁시켰다. moDC를 혈청-무함유 RPMI에서 Vero-유래 뎅기 2, 뉴기니 균주(NGC)로 MOI = 0.1에서 2시간 동안 37℃에서 부드럽게 교반하면서 감염시켰다. 세포를 세척하고, 10% 혈청-함유 RPMI(Gibco, 소듐 피루베이트, NEAA, 페니실린-스트렙토마이신이 보충됨)에 재현탁시켰다. 10^5 세포를 등급화된 용량으로 분배된 화합물과 함께 96-웰 플레이트에 3벌로 평판배양하였다(Hewlett-Packard D300 Digital Dispenser). 모든 웰을 0.25% DMSO로 정규화하였다. 48시간 후, 세포를 1x PBS로 세척하고, 모든 상층액을 제거하였다. 총 RNA를 RNEasy 96 플레이트(Qiagen)를 사용하여 추출하고, XLT cDNA 5x Supermix(QuantaBio)를 사용하여 제1-가닥 cDNA를 생산하는 데 사용하였다. cDNA를 GAPDH 유전자 발현 및 DENV2 바이러스에 특이적인 Taqman qPCR 듀플렉스 반응에서 주형으로서 사용하였다. EC50 값을 Prism Graphpad 소프트웨어를 사용하여 결정하고, 양성 대조군 웰 및 화합물-무함유 음성 대조군 웰로 정규화하였다.
실시예 83. moDC CC50
인간 단핵구-유래 수지상 세포(moDC)가, GM-CSF 및 IL-4를 함유하는 인간 Mo-DC 분화 배지(Miltenyi Biotec)에서 배양된 CD14+ 단핵구(AllCells)로부터 유래하였다. 제7일에, moDC를 기계적 분해에 의해 수확하고, 세척하고, 등급화된 용량으로 분배된 화합물과 함께 96-웰 플레이트에 1x10^5 내지 5x10^4개 세포/웰에서 3벌로 배양하였다(Hewlett-Packard D300 Digital Dispenser). 모든 웰을 0.25% DMSO로 정규화하였다. 48시간 후, CellTiter Glo(Promega)를 첨가하고, 실온에서 10분 동안 인큐베이션한 후 광도계 상에서 판독하였다. % 생존력 곡선을 화합물-무함유 및 세포-무함유 대조군 웰에 대해 계산하였다. Prism Graphpad 소프트웨어를 사용하여 CC50 값을 결정하였다.
실시예 84. DENV-2 Huh-7 EC50
Huh7(인간 간암종 7) 세포를 10% FCS-함유 DMEM 완전 배지에서 유지시켰다. 검정일에, 세포를 트립신처리하고(0.1% 트립신-EDTA), 세척하고, 뎅기 혈청형 2 뉴기니 C(NGC) 균주와 함께 혈청-무함유 DMEM에서 MOI = 0.1로 2시간 동안 37℃에서 부드럽게 교반하면서 감염시켰다. 2시간 후, 세포를 혈청-무함유 배지로 세척하고, 10% FCS-함유 DMEM(Gibco, 소듐 피루베이트, NEAA, 페니실린-스트렙토마이신이 보충됨)에 현탁시켰다. 10^5 세포를 등급화된 용량으로 분배된 화합물과 함께 96-웰 플레이트에 3벌로 평판배양하였다(Hewlett-Packard D300 Digital Dispenser). 모든 웰을 0.25% DMSO로 정규화하였다. 48시간 후, 세포를 1x PBS로 세척하고, 모든 상층액을 제거하였다. 총 RNA를 RNEasy 96 플레이트(Qiagen)를 사용하여 추출하고, XLT cDNA 5x Supermix(QuantaBio)를 사용하여 제1-가닥 cDNA를 생산하는 데 사용하였다. cDNA를 GAPDH 유전자 발현 및 DENV2 바이러스에 특이적인 Taqman qPCR 듀플렉스 반응에서 주형으로서 사용하였다. EC50 값을 Prism Graphpad 소프트웨어를 사용하여 결정하고, 양성 대조군 웰 및 화합물-무함유 음성 대조군 웰로 정규화하였다.
실시예 85. Huh-7 CC50
인간 간암종 7(Huh7) 세포를 10% FCS-함유 완전 DMEM에서 유지시켰다. 검정일에, 세포를 0.1% 트립신-EDTA로 트립신처리하고, 세척하고, 등급화된 용량으로 분배된 화합물과 함께 96-웰 플레이트에 1-2 x10^4개 세포/웰에서 3벌로 배양하였다(Hewlett-Packard D300 Digital Dispenser). 모든 웰을 0.25% DMSO로 정규화하였다. 48시간 후, CellTiter Glo(Promega)를 첨가하고, 실온에서 10분 동안 인큐베이션한 후 광도계 상에서 판독하였다. % 생존력 곡선을 화합물-무함유 및 세포-무함유 대조군 웰에 대해 계산하였다. Prism Graphpad 소프트웨어를 사용하여 CC50 값을 결정하였다.
실시예 86. RSV HEp-2 EC50
HEp-2 세포에서 감염성 세포변성(cytopathic) 세포 보호 검정을 사용하여 RSV에 대한 항바이러스 활성을 결정한다. 이 검정에서, 바이러스 감염 및/또는 복제를 저해하는 화합물은 세포 생존력 시약을 사용하여 정량화될 수 있는 바이러스-유도 세포 사멸화에 대해 세포보호 효과를 발휘한다. 본원에서 사용되는 기법은 공개된 문헌에 기재된 방법의 신규한 적응이다(문헌[Chapman et al., Antimicrob Agents Chemother. 2007, 51(9):3346-53]).
HEp-2 세포를 ATCC(Manassas, VI)로부터 수득하고, 10% 우태혈청 및 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 MEM 배지에서 유지시킨다. 세포를 주당 2회 계대배양하고, 서브컨플루언트 단계(subconfluent stage)에서 유지시킨다. RSV 균주 A2의 상업적인 스톡(Advanced Biotechnologies, Columbia, MD)을 적정한 후, 화합물을 시험하여, HEp-2 세포에서 바람직한 세포변성 효과를 발휘하는 바이러스 스톡의 적절한 희석을 결정한다.
항바이러스 시험을 위해, HEp-2 세포를 큰 세포 배양 플라스크에서 거의 컨플루언시까지 그러나 완전한 컨플루언시까지는 안되게 성장시킨다. 시험될 화합물을 플레이트 표준화된 용량 반응 형식에 따라 8 또는 40 시료에서 384-웰 화합물 희석 플레이트에서 DMSO에서 예비희석시킨다. 각각의 시험 화합물의 3-배 일련의 희석 증가분을 플레이트에서 제조하고, 시험 시료를 웰당 100 nL에서 어쿠스틱 이송 장치(acoustic transfer apparatus)(Echo, Labcyte)를 통해 세포 배양 검정 384-웰 플레이트로 이전시킨다. 각각의 화합물 희석을 단일 또는 4벌 시료에서 건조 검정 플레이트 내로 이전시키고, 이를 검정 준비가 될 때까지 보관한다. 양성 대조군 및 음성 대조군을 수직 블록(1 컬럼)에서 플레이트의 끝에서 반대로 놓는다.
후속적으로, 50,000/mL의 밀도에서 세포를 이용한 적정에 의해 이전에 결정된 바이러스 스톡의 적절한 희석을 사용하여 감염성 혼합물을 제조하고, 20 uL/웰을 자동화(uFlow, Biotek)를 통해, 화합물을 갖는 시험 플레이트에 첨가한다. 각각의 플레이트는 음성 대조군 및 양성 대조군(각각 16개 복제물)을 포함하여, 0% 및 100% 바이러스 저해 표준을 각각 생성한다. RSV에 의한 감염 후, 시험 플레이트를 37℃ 세포 배양 인큐베이터에서 4일 동안 인큐베이션한다. 인큐베이션 후, 세포 생존력 시약, Cell TiterGlo(Promega, Madison, WI)를 검정 플레이트에 첨가하고, 이를 간단히 인큐베이션하고, 발광 판독물을 모든 검정 플레이트(Envision, Perkin Elmer)에서 측정한다. RSV-유도 세포변성 효과, 저해 백분율을 잔여 세포 생존력의 수준으로부터 결정한다. 이들 숫자를 0% 및 100% 저해 대조군과 비교하여 각각의 시험된 농도에 대해 계산하고, 각각의 화합물에 대한 EC50 값을, 비-선형 회귀에 의해 RSV-유도 세포변성 효과를 50%만큼 저해하는 농도로서 결정한다. 다양한 강력한 항-RSV 툴 화합물을 항바이러스 활성에 대한 양성 대조군으로서 사용한다.
실시예 87. HEp-2 CC50
시험된 화합물의 세포독성을, 다른 세포 유형에 대해 이전에 기재된 바와 같이 유사한 방식으로 세포 생존력 시약을 사용하여 항바이러스 활성과 병행하여 비감염된 HEp-2 세포에서 결정한다(문헌[Cihlar et al., Antimicrob Agents Chemother. 2008,52(2):655-65]). 항바이러스 활성의 결정에 대한 것과 동일한 프로토콜을, 세포가 RSV로 감염되지 않는 점을 제외하고는 화합물 세포독성의 측정에 사용한다. 사실상, 동일한 밀도에서 비감염된 세포 혼합물을, 또한 100 nL/시료에서 예비희석된 화합물을 함유하는 플레이트에 20 uL/웰로 첨가한다. 그 후에, 검정 플레이트를 4일 동안 인큐베이션하고, 뒤이어 동일한 CellTiter Glo 시약 첨가 및 발광 판독물의 측정을 사용하여 세포 생존력을 시험한다. 비처리된 세포 및 2 μM 퓨로마이신(Sigma, St. Louis, MO)에서 처리된 세포는 각각 100% 및 0% 세포 생존력 대조군으로서 역할을 한다. 세포 생존력의 백분율을 0% 및 100% 대조군과 비교하여 각각의 시험된 화합물 농도에 대해 계산하고, CC50 값을, 비-선형 회귀에 의해 세포 생존력을 50%만큼 감소시키는 화합물 농도로서 결정한다.
실시예 88. RSV NHBE EC50
정상 인간 기관지 상피(NHBE) 세포를 Lonza(Walkersville, MD, Cat # CC-2540)로부터 구매하고, 기관지 상피 성장 배지(BEGM)(Lonza, Walkersville, MD, Cat # CC-3170)에서 배양하였다. 세포를 주당 1회 내지 2회 계대배양하여, < 80% 컨플루언시를 유지시켰다. 배양물에서 6회의 계대배양 후 NHBE 세포를 폐기하였다.
RSV A2 항바이러스 검정을 실시하기 위해, NHBE 세포를 96-웰 플레이트에 BEGM에서 웰당 7,500개 세포의 밀도로 평판배양하고, 37℃에서 밤새 부착시켰다. 부착 후, 100 μL의 세포 배양 배지를 제거하고, Hewlett-Packard D300 디지털 디스펜서를 사용하여 3-배의 일련으로 희석된 화합물을 첨가하였다. DMSO의 최종 농도를 0.05%로 정규화하였다. 화합물 첨가 후, NHBE 세포를 100 μL의 RSV A2의 첨가에 의해 BEGM에서 mL당 1 × 104.5 조직 배양 감염성 용량의 역가에서 감염시킨 다음, 37℃에서 4일 동안 인큐베이션하였다. 그 후에, NHBE 세포를 25℃로 평형화시키고, 100 μL의 배양 배지를 제거하고 100 μL의 Cell-Titer Glo 생존력 시약을 첨가함으로써 세포 생존력을 결정하였다. 혼합물을 25℃에서 10분 동안 인큐베이션하고, 발광 신호를 Envision 발광 플레이트 판독기 상에서 정량화하였다.
[표 3]
Figure pct00230
Figure pct00231
[표 4]
Figure pct00232
비교예 1. 2-에틸부틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(클로로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00233
((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-4-(클로로메틸)-2,2-디메틸테트라하이드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-4-일)메탄올. CE1.1(국제공개 WO 2015/069939호로부터의 중간체 14j; 200 mg, 0.363 mmol)을 5 mL의 무수 피리딘에 용해시켰다. 트리플루오로메탄 설포닐 클로라이드(58 uL, 0.545 mmol)를 한꺼번에 첨가하고, 60분 동안 교반하였다. 더 많은 트리플루오로메탄 설포닐 클로라이드(58 uL, 0.545 mmol)를 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 트리플루오로메탄 설포닐 클로라이드(100 uL)를 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 5 mL 무수 DMF에 용해시키고, 리튬 클로라이드(308 mg, 7.26 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 반응물을 16시간 동안 교반하였다.
반응물을 EtOAc(15 mL)로 희석시키고, 염수(3x10 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하였다(12 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0-20% 에틸 아세테이트/헥산). 분획을 조합하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 디옥산(8 mL)과 물(2 mL)에 용해시키고, 120℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에 농축시켰다.
잔류물을 THF(5 mL)에 용해시켰다. 테트라부틸암모늄 플루오라이드 트리하이드레이트(97 mg, 0.307 mmol)를 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc(15 mL)로 희석시키고, 물(5x5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하였다(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0-100% 에틸 아세테이트/헥산). 분획을 조합하고, 감압 하에 농축시켜, 중간체 CE1.2를 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 7.87 (s, 1H), 6.65 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.54 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.12 (bs, 2H), 5.33 (dd, J = 6.9, 5.9 ㎐, 1H), 5.14 (d, J = 6.9 ㎐, 1H), 5.05 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 3.98 - 3.71 (m, 4H), 1.63 (s, 3H), 1.36 (s, 3H). LCMS: MS m/z = 355.3 [M+1], 353.4 [M-1], tR = 1.04분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 갖는 물, B: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴; 구배: 2 mL/분에서 0분-0.3분 5% B, 0.3분-1.5분 5-100% B, 1.5분-2분 100% B, 2분-2.2분 100-5% B. HPLC: tR = 2.15분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 2 mL/분에서 5분 이내에 2-98% B.
Figure pct00234
2-에틸부틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(클로로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시) (페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. CE1.2(47 mg, 0.132 mmol) 및 CE1.3(72 mg, 0.159 mmol)을 혼합하고, 2 mL의 무수 THF에 용해시켰다. 마그네슘 클로라이드(38 mg, 0.396 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. DIPEA(57 μL, 0.33 mmol)를 첨가하고, 반응물을 40℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc(15 mL)로 희석시키고, 물(5x10 mL), 그 후에 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 소듐 설페이트에 걸쳐 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 MeCN(5 mL)에 용해시키고, 얼음 배쓰에서 교반하였다. 진한 수성 염산(250 uL)을 적가하였다. 반응물을 얼음 배쓰에서 2시간 동안 교반하였다. 1 M 트리에틸암모늄 비카르보네이트 용액을 반응에 첨가하여, pH 8을 얻은 다음, 반응물을 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 중성 조건(5-100% MeCN/물) 하에 분취 HPLC로 정제하였다. 분획을 조합하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 MeCN과 물에 용해시키고, 동결-건조하여, 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.77 (m, 1H), 7.39 - 7.09 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.74 (m, 1H), 5.36 (m, 1H), 4.72 (m, 1H), 4.41 - 4.23 (m, 3H), 4.07 - 3.84 (m, 5H), 1.53 - 1.40 (m, 1H), 1.38 - 1.25 (m, 7H), 0.89 - 0.81 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.46, 3.59. LCMS: MS m/z = 626.2 [M+1], 624.6 [M-1], tR = 1.30분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 갖는 물, B: 0.1% 아세트산을 갖는 아세토니트릴; 구배: 2 mL/분에서 0분-0.3분 5% B, 0.3분-1.5분 5-100% B, 1.5분-2분 100% B, 2분-2.2분 100-5% B. HPLC: tR = 3.14분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 2 mL/분에서 5분 이내에 2-98% B. HPLC: tR = 5.247, 5.327분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 갖는 물, B: 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴; 구배: 1.5 mL/분에서 8.5분 구배로 2 - 98% B.
비교예 2. ((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-7-일)-2-(클로로메틸)-3,4-디하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메틸 테트라하이드로겐 트리포스페이트
Figure pct00235
국제공개 WO 2015/069939호의 화합물 TP13(실시예 33)을 참조한다.
전술한 발명은 명확한 이해를 위해 예시 및 실시예에 의해 다소 상세히 기재되었지만, 당업자는 소정의 변화 및 변형이 첨부된 청구범위의 범위 내에서 실시될 수 있음을 이해할 것이다. 이에 더하여, 본원에 제공된 각각의 참조문헌은, 마치 각각의 참조문헌이 개별적으로 참고로 포함되는 것과 동일한 정도로 전체적으로 참조로서 포함된다. 본 출원과 본원에 제공된 참조문헌 사이에 불일치가 존재하는 경우, 본 출원이 우선할 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> GILEAD SCIENCES, INC. <120> ANTIVIRAL COMPOUNDS <130> 1225-WO-PCT <140> <141> <150> 62/978,199 <151> 2020-02-18 <160> 1 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 244 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 1 ucagucaguc agucagucag ucagucaguc agucagucag ucagucaguc agucagucag 60 ucagucaguc agucagucag uccaagucca aguccaaguc caaguccaag uccaagucca 120 aguccaaguc caaguccaag uccaagucca aguccaaguc caagucaguc agucagucag 180 ucagucaguc agucagucag ucagucaguc agucagucag ucagucaguc agucagucag 240 ucag 244

Claims (79)

  1. 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염으로서,
    [화학식 (I)]
    Figure pct00236

    상기 화학식 (I)에서,
    염기는
    Figure pct00237
    ,
    Figure pct00238
    또는
    Figure pct00239
    이며;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 H 또는 -C(O)R1A이고, R1A는 C1-6 알킬이고;
    R3은 -N(H)R3A이며;
    R3A는 H, -CH2OP(O)(OH)2, 또는 -C(O)R3D이고,
    R3D는 C3-6 사이클로알킬로 선택적으로 치환되는 C6-12 아릴 또는 C1-6 알킬이며;
    R4A는 O이고;
    R4B 및 R4C는 각각 독립적으로 하기이며:
    (A) -OH;
    (B) -OR4B1 - 여기서 R4B1은 C6-12 아릴임 -;
    (C)
    Figure pct00240
    - 여기서
    아래첨자 m은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이고;
    각각의 R4D는 독립적으로 C1-6 알킬임 -;
    (D)
    Figure pct00241
    - 여기서
    R4E1 및 R4E2는 각각 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이며;
    R4F1 및 R4F2는 함께 옥소이고;
    R4G는 1 내지 3개의 R4G1로 선택적으로 치환되는 C1-8 알킬, C3-8 사이클로알킬, 또는 1 내지 3개의 R4G3으로 선택적으로 치환되는 N, O 및 S로부터 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3 내지 8원 헤테로사이클릴이며;
    각각의 R4G1은 독립적으로 -OH, C1-6 알콕시, -(CH2OCH2)1-5-CH3, C1-3 할로알킬, 또는 1 내지 3개의 R4G9로 선택적으로 치환되는 C3-8 사이클로알킬이고;
    각각의 R4G3 및 R4G9는 독립적으로 C1-6 알킬임 -; 또는
    (E) -(OP(O)(OH))1-2-OH;
    R5A 및 R5B는 각각 독립적으로 -OP(O)(OH)2로 치환되는 C1-6 알킬인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  2. 제1항에 있어서, R1 및 R2는 각각 H인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  3. 제1항에 있어서,
    R1 및 R2는 각각 -C(O)R1A이고;
    R1A는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, sec-부틸 또는 t-부틸인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  4. 제1항 또는 제3항에 있어서,
    R1 및 R2는 각각 -C(O)R1A이고;
    R1A는 메틸, 에틸, 또는 이소-프로필인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 화학식의 구조를 가지며,
    Figure pct00242

    상기 화학식에서,
    R3은 -N(H)R3A이며;
    R3A는 H 또는 -C(O)R3D이고;
    R3D는 C3-6 사이클로알킬로 선택적으로 치환되는 페닐 또는 C1-3 알킬인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    R3은 -NH2인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    R4B 및 R4C는 각각 독립적으로 하기인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    (A) -OH;
    (B) -OR4B1 - 여기서 R4B1은 나프틸임 -;
    (C)
    Figure pct00243
    - 여기서
    아래첨자 m은 0 또는 1이며;
    R4D는 C1-6 알킬임 -;
    (D)
    Figure pct00244
    - 여기서
    R4E1은 C1-3 알킬이며;
    R4E2는 H이고;
    R4F1 및 R4F2는 함께 옥소이고;
    R4G는 1개의 R4G1로 선택적으로 치환되는 C1-8 알킬, C4-6 사이클로알킬, 또는 1개의 R4G3으로 선택적으로 치환되는 N 및 O로부터 선택되는 1개의 헤테로원자를 갖는 4 내지 6원 헤테로사이클릴이고;
    각각의 R4G1은 독립적으로 -OH, C1-4 알콕시, -(CH2OCH2)1-2-CH3, C1-3 할로알킬, 또는 1개의 R4G9로 선택적으로 치환되는 C3-6 사이클로알킬이며;
    각각의 R4G3 및 R4G9는 독립적으로 C1-3 알킬임 -; 또는
    (E) -(OP(O)(OH))1-2-OH.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    R4B는 하기인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    (B) -OR4B1 - 여기서 R4B1은 나프틸임 -; 또는
    (C)
    Figure pct00245
    - 여기서
    아래첨자 m은 0 또는 1이며;
    R4D는 t-부틸임 -; 또는
    (E) -(OP(O)(OH))1-2-OH.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    R4C는 하기인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    (A) -OH; 또는
    (D)
    Figure pct00246
    - 여기서
    R4E1은 메틸이며;
    R4E2는 H이고;
    R4F1 및 R4F2는 함께 옥소이며;
    R4G는
    각각 OH, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, CF3, Me(CH2OCH2)2-, 사이클로프로필 또는 1-메틸사이클로프로필로 선택적으로 치환되는, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 네오펜틸, n-헥산, 2,2-디메틸-부틸, 3,3-디메틸-부틸, 2-에틸-부틸, 또는 2-n-프로필-펜틸,
    사이클로부틸, 사이클로펜틸, 또는 사이클로헥실,
    각각 메틸, 에틸, n-프로필 또는 이소-프로필로 선택적으로 치환되는, 피롤리디닐, 옥세타닐, 또는 테트라하이드로피라닐임.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R5A 및 R5B는 각각 -CH2OP(O)(OH)2인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (Ib)의 구조를 가지며,
    [화학식 (Ib)]
    Figure pct00247

    상기 화학식 (Ib)에서,
    R3A는 H이고;
    R5A는 -CH2OP(O)(OH)2인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  12. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (Ic)의 구조를 가지며,
    [화학식 (Ic)]
    Figure pct00248

    상기 화학식 (Ic)에서,
    R3A는 H이고;
    R5B는 -CH2OP(O)(OH)2인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  13. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (Id)의 구조를 갖는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 (Id)]
    Figure pct00249
    .
  14. 제1항 내지 제9항 및 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (Ie)의 구조를 갖는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 (Ie)]
    Figure pct00250
    .
  15. 제1항 내지 제9항 및 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (If)의 구조를 갖는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 (If)]
    Figure pct00251
    .
  16. 제1항 내지 제9항 및 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (Ig)의 구조를 갖는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 (Ig)]
    Figure pct00252
    .
  17. 제1항 내지 제9항, 제13항 및 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (Ih)의 구조를 갖는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 (Ih)]
    Figure pct00253
    .
  18. 제1항 내지 제9항 및 제13항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (Ij)의 구조를 갖는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 (Ij)]
    Figure pct00254
    .
  19. 제1항 내지 제9항, 제13항 및 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (Ik)의 구조를 갖는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 (Ik)]
    Figure pct00255
    .
  20. 제1항 내지 제9항, 제13항 내지 제16항 및 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (Im)의 구조를 갖는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 (Im)]
    Figure pct00256
    .
  21. 제1항 내지 제13항 및 제15항 중 어느 한 항에 있어서, R4C는 하기인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    Figure pct00257
    .
  22. 제1항 내지 제13항 및 제15항 중 어느 한 항에 있어서, R4C는 하기인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    Figure pct00258
    .
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
    R4G는
    각각 OH, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, CF3, Me(CH2OCH2)2-, 사이클로프로필 또는 1-메틸사이클로프로필로 선택적으로 치환되는, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 네오펜틸, n-헥산, 2,2-디메틸-부틸, 3,3-디메틸-부틸, 2-에틸-부틸, 또는 2-n-프로필-펜틸,
    사이클로부틸, 사이클로펜틸, 또는 사이클로헥실,
    각각 메틸, 에틸, n-프로필 또는 이소-프로필로 선택적으로 치환되는, 피롤리디닐, 옥세타닐, 또는 테트라하이드로피라닐인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
    R4G는
    Me(CH2OCH2)2-, 사이클로프로필 또는 1-메틸사이클로프로필로 선택적으로 치환되는 메틸,
    부톡시로 선택적으로 치환되는 에틸,
    메톡시로 선택적으로 치환되는 n-프로필,
    이소-프로필, n-부틸,
    OH, 메톡시 또는 CF3으로 선택적으로 치환되는 이소-부틸,
    n-펜틸, 네오펜틸, n-헥산, 2,2-디메틸-부틸, 3,3-디메틸-부틸, 2-에틸-부틸, 2-n-프로필-펜틸,
    사이클로부틸, 사이클로헥실,
    N-메틸-피롤리디닐, 옥세타닐, 또는 테트라하이드로피라닐인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  25. 제1항, 제7항 내지 제9항 및 제13항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1과 R2는 둘 다 H 또는 -C(O)R1A이고, R1A는 메틸, 에틸 또는 이소-프로필이며;
    R3은 -NH2이고;
    R4B는 -OPh이며;
    R4C는
    Figure pct00259
    이고, 여기서
    R4G는
    각각 OH, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, CF3, Me(CH2OCH2)2-, 사이클로프로필 또는 1-메틸사이클로프로필로 선택적으로 치환되는, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 네오펜틸, n-헥산, 2,2-디메틸-부틸, 3,3-디메틸-부틸, 2-에틸-부틸, 또는 2-n-프로필-펜틸,
    사이클로부틸, 사이클로펜틸, 또는 사이클로헥실,
    각각 메틸, 에틸, n-프로필 또는 이소-프로필로 선택적으로 치환되는, 피롤리디닐, 옥세타닐, 또는 테트라하이드로피라닐인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  26. 제1항에 있어서, 화학식 (In)을 가지며,
    [화학식 (In)]
    Figure pct00260

    상기 화학식 (In)에서,
    R1과 R2는 둘 다 H 또는 -C(O)R1A이고, R1A는 메틸, 에틸 또는 이소-프로필이며;
    R4G는
    각각 OH, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, CF3, Me(CH2OCH2)2-, 사이클로프로필 또는 1-메틸사이클로프로필로 선택적으로 치환되는, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 네오펜틸, n-헥산, 2,2-디메틸-부틸, 3,3-디메틸-부틸, 2-에틸-부틸, 또는 2-n-프로필-펜틸,
    사이클로부틸, 사이클로펜틸, 또는 사이클로헥실,
    각각 메틸, 에틸, n-프로필 또는 이소-프로필로 선택적으로 치환되는, 피롤리디닐, 옥세타닐, 또는 테트라하이드로피라닐인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 표 1A, 표 1B, 표 1C 및 표 1D의 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00261
    ,
    Figure pct00262
    ,
    Figure pct00263
    ,
    Figure pct00264
    ,
    Figure pct00265
    ,
    Figure pct00266
    ,
    Figure pct00267
    ,
    Figure pct00268
    ,
    Figure pct00269
    ,
    Figure pct00270
    ,
    Figure pct00271
    또는
    Figure pct00272
    인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00273
    인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  30. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00274
    인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  31. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00275
    인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  32. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00276
    인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  33. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00277
    인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  34. 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염으로서,
    Figure pct00278
    인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  35. 약학적 유효량의 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약학적 제형.
  36. 뉴모비리대(Pneumoviridae) 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서 뉴모비리대 바이러스 감염을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함하는, 치료하는 방법.
  37. 제36항에 있어서, 상기 뉴모비리대 바이러스 감염은 호흡기 세포융합 바이러스 감염인, 치료하는 방법.
  38. 제36항에 있어서, 상기 뉴모비리대 바이러스 감염은 인간 메타뉴모바이러스(metapneumovirus) 감염인, 치료하는 방법.
  39. 피코르나비리대(Picornaviridae) 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서 피코르나비리대 바이러스 감염을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함하는, 치료하는 방법.
  40. 제39항에 있어서, 상기 피코르나비리대 바이러스 감염은 인간 리노바이러스(rhinovirus) 감염인, 치료하는 방법.
  41. 플라비비리대(Flaviviridae) 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서 플라비비리대 바이러스 감염을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함하는, 치료하는 방법.
  42. 제41항에 있어서, 상기 플라비비리대 바이러스 감염은 뎅기 바이러스(dengue virus) 감염인, 치료하는 방법.
  43. 필로비리대(Filoviridae) 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서 필로비리대 바이러스 감염을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함하는, 치료하는 방법.
  44. 제43항에 있어서, 상기 필로비리대 바이러스 감염은 에볼라 바이러스 감염인, 치료하는 방법.
  45. 뉴모비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서의 뉴모비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제를 제조하는 방법으로서, 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 사용되는 것을 특징으로 하는, 약제를 제조하는 방법.
  46. 제45항에 있어서, 상기 뉴모비리대 바이러스 감염은 호흡기 세포융합 바이러스 감염인, 약제를 제조하는 방법.
  47. 제45항에 있어서, 상기 뉴모비리대 바이러스 감염은 인간 메타뉴모바이러스 감염인, 약제를 제조하는 방법.
  48. 피코르나비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서의 피코르나비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제를 제조하는 방법으로서, 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 사용되는 것을 특징으로 하는, 약제를 제조하는 방법.
  49. 제48항에 있어서, 상기 피코르나비리대 바이러스 감염은 인간 리노바이러스 감염인, 약제를 제조하는 방법.
  50. 플라비비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서의 플라비비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제를 제조하는 방법으로서, 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 사용되는 것을 특징으로 하는, 약제를 제조하는 방법.
  51. 제50항에 있어서, 상기 플라비비리대 바이러스 감염은 뎅기 바이러스 감염인, 약제를 제조하는 방법.
  52. 필로비리대 필로비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서의 필로비리대 필로비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제를 제조하는 방법으로서, 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 사용되는 것을 특징으로 하는, 약제를 제조하는 방법.
  53. 제52항에 있어서, 상기 필로비리대 바이러스 감염은 에볼라 바이러스 감염인, 약제를 제조하는 방법.
  54. 인간에서 뉴모비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제의 제조를 위한 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도.
  55. 제54항에 있어서, 상기 뉴모비리대 바이러스 감염은 호흡기 세포융합 바이러스 감염인, 용도.
  56. 제54항에 있어서, 상기 뉴모비리대 바이러스 감염은 인간 메타뉴모바이러스 감염인, 용도.
  57. 인간에서 피코르나비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제의 제조를 위한 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도.
  58. 제57항에 있어서, 상기 피코르나비리대 바이러스 감염은 인간 리노바이러스 감염인, 용도.
  59. 인간에서 플라비비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제의 제조를 위한 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도.
  60. 제59항에 있어서, 상기 플라비비리대 바이러스 감염은 뎅기 바이러스 감염인, 용도.
  61. 인간에서 필로비리대 바이러스 감염 치료를 위한 약제의 제조를 위한 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도.
  62. 제61항에 있어서, 상기 필로비리대 바이러스 감염은 에볼라 바이러스 감염인, 용도.
  63. 뉴모비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서의 뉴모비리대 바이러스 감염의 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  64. 제63항에 있어서, 상기 뉴모비리대 바이러스 감염은 호흡기 세포융합 바이러스 감염인, 화합물.
  65. 제63항에 있어서, 상기 뉴모비리대 바이러스 감염은 인간 메타뉴모바이러스 감염인, 화합물.
  66. 피코르나비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서의 피코르나비리대 바이러스 감염의 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  67. 제66항에 있어서, 상기 피코르나비리대 바이러스 감염은 인간 리노바이러스 감염인, 화합물.
  68. 플라비비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서의 플라비비리대 바이러스 감염의 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  69. 제68항에 있어서, 상기 플라비비리대 바이러스 감염은 뎅기 바이러스 감염인, 화합물.
  70. 필로비리대 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 인간에서의 필로비리대 바이러스 감염의 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  71. 제70항에 있어서, 상기 필로비리대 바이러스 감염은 에볼라 바이러스 감염인, 화합물.
  72. 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방 방법으로서, 치료적 유효량의 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 인간에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 호흡기 병태는 만성 폐쇄성 폐질환(chronic obstructive pulmonary disease)인, 치료 또는 예방 방법.
  73. 제72항에 있어서, 상기 바이러스 감염은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기되는, 치료 또는 예방 방법.
  74. 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서의 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 위한 약제를 제조하는 방법으로서, 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 사용되는 것을 특징으로 하고, 상기 호흡기 병태는 만성 폐쇄성 폐질환인, 약제를 제조하는 방법.
  75. 제74항에 있어서, 상기 바이러스 감염은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기되는, 약제를 제조하는 방법.
  76. 인간에서 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조를 위한 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도로서, 상기 호흡기 병태는 만성 폐쇄성 폐질환인, 용도.
  77. 제76항에 있어서, 상기 바이러스 감염은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기되는, 용도.
  78. 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 바이러스 감염에 의한 호흡기 병태의 악화의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염으로서, 상기 호흡기 병태는 만성 폐쇄성 폐질환인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  79. 제78항에 있어서, 상기 바이러스 감염은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기되는, 화합물.
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