TW202140038A - 抗病毒化合物 - Google Patents

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Abstract

本發明描述用於治療包括登革熱(Dengue)之病毒感染的4'-氟甲基核苷。

Description

抗病毒化合物
包含黃病毒科(Flaviviridae )家族之病毒包含至少三個可區分的屬，包括瘟病毒(pestivirus )、黃病毒(flavivirus )及肝炎病毒(hepacivirus ) (Calisher等人, J. Gen. Virol., 1993, 70, 37-43)。雖然瘟病毒引起許多經濟上重要之動物疾病，諸如牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)、經典豬瘟病毒(CSFV，豬霍亂(hog cholera))及羊邊界病(BDV)，但其在人類疾病中之重要性並未充分表徵(Moennig, V.等人, Adv. Vir. Res. 1992, 48, 53-98)。黃病毒引起重要人類疾病，諸如登革熱(dengue fever)及黃熱病(yellow fever)，而肝炎病毒引起人類中之C型肝炎病毒感染。由黃病毒科家族引起之其他重要病毒感染包括西尼羅病毒(West Nile virus；WNV)、日本腦炎病毒(JEV)、壁虱傳播的腦炎病毒、庫京病毒(Junjin virus)、墨累溪谷腦炎(Murray Valley encephalitis)、聖路易腦炎(St. Louis encephalitis)、鄂木斯克出血熱病毒(Omsk hemorrhagic fever virus)及茲卡病毒(Zika virus)。合併而言，來自黃病毒科病毒家族之感染在全世界造成顯著死亡率、發病率及經濟損失。因此，需要開發針對黃病毒科病毒感染之有效治療。
肺病毒科(Pneumoviridae )病毒為造成許多流行性人類及動物疾病之反義單股RNA病毒。肺病毒科病毒家族包括人類呼吸道融合性病毒(HRSV)及人類間質肺炎病毒。幾乎所有兒童在兩歲前都會經歷HRSV感染。HRSV為嬰兒期及孩童期中下呼吸道感染之主要原因，其中0.5%至2%的感染者需要住院。
目前還沒有可用於預防HRSV感染的疫苗。單株抗體帕利珠單抗(palivizumab)可用於免疫預防，但其使用限於高風險的嬰兒，例如早產嬰兒或患有先天性心臟或肺部疾病之嬰兒，並且就一般使用而言成本通常過高。另外，核苷類似物利巴韋林(ribavirin)已作為唯一的用於治療HRSV感染之抗病毒劑審批通過，但功效有限。因此，需要抗肺病毒科治療劑。
適用於治療病毒感染的吡咯并[2,3-d]嘧啶化合物之實例描述於以下文獻中：美國2012/0009147 A1 (Cho等人)、美國2012/0020921 A1 (Cho等人)、WO 2008/089105 A2 (Babu等人)、WO 2008/141079 A1 (Babu等人)、WO 2009/132135 A1 (Butler等人)、WO 2010/002877 A2 (Francom)、WO 2011/035231 A1 (Cho等人)、WO 2011/035250 A1 (Butler等人)、WO 2011/150288 A1 (Cho等人)、WO 2012/012465 (Cho等人)、WO 2012/012776 A1 (Mackman等人)、WO 2012/037038 (Clarke等人)、WO 2012/087596 A1 (Delaney等人)及WO 2012/142075 A1 (Girijavallabhan等人)。
因此，需要有效且具有可接受毒性概況的用於治療肺病毒科病毒感染(諸如HRSV感染)、黃病毒科感染(包括登革熱(dengue))及EBOV感染的組合物及方法。本發明解決此等及其他需要。
在一個實施例中，本發明提供一種式(I)化合物：
Figure 02_image001
式(I)， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： 鹼基為
Figure 02_image004
； R1 及R2 各自獨立地為H或-C(O)R1A ，其中R1A 為C1-6 烷基； R3 為-N(H)R3A ； R3A 為H、-CH2 OP(O)(OH)2 或-C(O)R3D ，其中 R3D 為C6-12 芳基或視情況經C3-6 環烷基取代之C1-6 烷基； R4A 為O； R4B 及R4C 各自獨立地為： (A)           -OH； (B)           -OR4B1 ，其中R4B1 為C6-12 芳基； (C)
Figure 02_image006
，其中 下標m為0、1、2、3、4或5；且 各R4D 獨立地為C1-6 烷基； (D)
Figure 02_image008
，其中 R4E1 及R4E2 各自獨立地為H或C1-6 烷基； R4F1 及R4F2 一起為側氧基； R4G 為視情況經1至3個R4G1 取代之C1-8 烷基；C3-8 環烷基；或視情況經1至3個R4G3 取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基； 各R4G1 獨立地為-OH、C1-6 烷氧基、-(CH2 OCH2 )1-5 -CH3 、C1-3 鹵烷基或視情況經1至3個R4G9 取代之C3-8 環烷基； 各R4G3 及R4G9 獨立地為C1-6 烷基；或 (E)           -(OP(O)(OH))1-2 -OH；且 R5A 及R5B 各自獨立地為經-OP(O)(OH)2 取代之C1-6 烷基。
在另一實施例中，本發明提供一種化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為：
Figure 02_image010
。
在另一實施例中，本發明提供一種醫藥調配物，其包含醫藥學上有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽以及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。
在另一實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之肺病毒科病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之小核糖核酸病毒科(Picornaviridae )病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之黃病毒科病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之絲狀病毒科(Filoviridae )病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之肺病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之小核糖核酸病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之黃病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之絲狀病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之肺病毒科病毒感染所用的藥劑。
在另一實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之小核糖核酸病毒科病毒感染所用的藥劑。
在另一實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之黃病毒科病毒感染所用的藥劑。
在另一實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之絲狀病毒科病毒感染所用的藥劑。
在另一實施例中，本發明提供本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之肺病毒科病毒感染。
在另一實施例中，本發明提供本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之小核糖核酸病毒科病毒感染。
在另一實施例中，本發明提供本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之黃病毒科病毒感染。
在另一實施例中，本發明提供本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之絲狀病毒科病毒感染。
在另一實施例中，本發明提供一種治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。
在另一實施例中，本發明提供一種用於製造供治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。
在另一實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療或預防人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化所用的藥劑，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。
在另一實施例中，本發明提供用於治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2020年2月18日申請且名稱為「ANTIVIRAL COMPOUNDS」的美國臨時專利申請案第62/978,199號之優先權益，該申請案之全部內容以引用的方式併入本文中。I. 綜述
本發明提供用於治療病毒感染之2'3'-二羥基-4'-氟甲基核苷及相關化合物，該等病毒感染諸如伊波拉(Ebola)、茲卡、西尼羅、黃熱病、登革熱、HBV、HCV、RSV及其他病毒感染。II. 定義
「烷基」為直鏈或分支鏈飽和單價烴。舉例而言，烷基可具有1至10個碳原子(亦即，C1-10 烷基)、或1至8個碳原子(亦即，C1-8 烷基)、或1至6個碳原子(亦即，C1-6 烷基)、或1至4個碳原子(亦即，C1-4 烷基)。烷基之實例包括(但不限於)甲基(Me、-CH3 )、乙基(Et、-CH2 CH3 )、1-丙基(n -Pr、正丙基、-CH2 CH2 CH3 )、2-丙基(i -Pr、異丙基、-CH(CH3 )2 )、1-丁基(n -Bu、正丁基、-CH2 CH2 CH2 CH3 )、2-甲基-1-丙基(i -Bu、異丁基、-CH2 CH(CH3 )2 )、2-丁基(s -Bu、二級丁基、-CH(CH3 )CH2 CH3 )、2-甲基-2-丙基(t -Bu、三級丁基、-C(CH3 )3 )、1-戊基(正戊基、-CH2 CH2 CH2 CH2 CH3 )、2-戊基(-CH(CH3 )CH2 CH2 CH3 )、3-戊基(-CH(CH2 CH3 )2 )、2-甲基-2-丁基(-C(CH3 )2 CH2 CH3 )、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3 )CH(CH3 )2 )、3-甲基-1-丁基(-CH2 CH2 CH(CH3 )2 )、2-甲基-1-丁基(-CH2 CH(CH3 )CH2 CH3 )、1-己基(-CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH3 )、2-己基(-CH(CH3 )CH2 CH2 CH2 CH3 )、3-己基(-CH(CH2 CH3 )(CH2 CH2 CH3 ))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3 )2 CH2 CH2 CH3 )、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3 )CH(CH3 )CH2 CH3 )、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3 )CH2 CH(CH3 )2 )、3-甲基-3-戊基(-C(CH3 )(CH2 CH3 )2 )、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2 CH3 )CH(CH3 )2 )、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3 )2 CH(CH3 )2 )、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3 )C(CH3 )3 )及辛基(-(CH2 )7 CH3 )。
「烷氧基」係指具有將烷基連接至連接點之氧原子的烷基：烷基-O-。就烷基而言，烷氧基可具有任何合適數目個碳原子，諸如C1-6 。烷氧基包括例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、2-丁氧基、異丁氧基、二級丁氧基、三級丁氧基、戊氧基、己氧基等。烷氧基可進一步經本文所描述之各種取代基取代。烷氧基可經取代或未經取代。
「羥基」係指-OH。
如本文所使用，「鹵基」或「鹵素」係指氟(-F)、氯(-Cl)、溴(-Br)及碘(-I)。
如本文所使用，「鹵烷基」係指烷基之一或多個氫原子獨立地經鹵基取代基置換的如本文所定義之烷基，該鹵基取代基可相同或不同。舉例而言，C1-4 鹵烷基係C1-4 烷基之一或多個氫原子已經鹵基取代基置換的C1-4 烷基。鹵烷基之實例包括(但不限於)氟甲基、氟氯甲基、二氟甲基、二氟氯甲基、三氟甲基、1,1,1-三氟乙基及五氟乙基。
「環烷基」係指具有3至20個環碳原子(亦即，C3-20 環烷基)，例如3至12個環原子，例如3至10個環原子，或3至8個環原子，或3至6個環原子，或3至5個環原子，或3至4個環原子之單飽和或部分不飽和全碳環。術語「環烷基」亦包括多重縮合、飽和及部分不飽和全碳環系統(例如包含2、3或4個碳環之環系統)。因此，環烷基包括多環碳環，諸如雙環碳環(例如，具有約6至12個環碳原子之雙環碳環，諸如雙環[3.1.0]己烷及雙環[2.1.1]己烷)，及多環碳環(例如具有多達約20個環碳原子之三環及四環碳環)。多重縮合環系統之環在價數要求允許時可經由稠合、螺環及橋聯鍵彼此連接。單環環烷基之非限制性實例包括環丙基、環丁基、環戊基、1-環戊-1-烯基、1-環戊-2-烯基、1-環戊-3-烯基、環己基、1-環己-1-烯基、1-環己-2-烯基及1-環己-3-烯基。
如本文所使用，「雜環基」或「雜環」或「雜環烷基」係指在環中具有至少一個雜原子(亦即，選自氧、氮及硫之至少一個環雜原子)之單飽和或部分不飽和非芳環或非芳族多環系統。除非另外說明，否則雜環基具有3至約20個環原子，例如3至12個環原子，例如3至10個環原子，或3至8個環原子，或3至6個環原子，或3至5個環原子，或4至6個環原子，或4至5個環原子。因此，術語包括在環中具有約1至6個環碳原子及約1至3個選自由氧、氮及硫組成之群的環雜原子之單飽和或部分不飽和環(例如3員、4員、5員、6員或7員環)。多重縮合環(例如雙環雜環基)系統之環在價數要求允許時可經由稠合、螺環及橋聯鍵彼此連接。雜環包括(但不限於)氮雜環丁烷、氮丙啶、咪唑啶、嗎啉、環氧乙烷(環氧化物)、氧雜環丁烷、硫雜環丁烷、哌𠯤、哌啶、吡唑啶、哌啶、吡咯啶、吡咯啶酮、四氫呋喃、四氫噻吩、二氫吡啶、四氫吡啶、
Figure 110105397-A0304-12-01
啶、2-氧雜-6-氮雜螺[3.3]庚-6-基、6-氧雜-1-氮雜螺[3.3]庚-1-基、2-硫雜-6-氮雜螺[3.3]庚-6-基、2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基、2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基、3-氮雜雙環[3.1.0]己基、2-氮雜雙環[2.1.1]己基、2-氮雜雙環[2.2.1]庚-2-基、4-氮雜螺[2.4]庚基、5-氮雜螺[2.4]庚基及其類似物。
如本文所使用之「芳基」係指單全碳芳環或多重縮合全碳環系統，其中至少一個環為芳環。舉例而言，在一些實施例中，芳基具有6至20個碳原子、6至14個碳原子或6至12個碳原子。芳基包括苯基。芳基亦包括具有約9至20個碳原子之多重縮合環系統(例如包含2、3或4個環之環系統)，其中至少一個環係芳環且其中其他環可為芳環或不為芳環(亦即碳環)。該等多重縮合環系統於多重縮合環系統之任何碳環部分上視情況經一或多個(例如1、2或3個)側氧基取代。多重縮合環系統之環在價數要求允許時可經由稠合、螺環及橋聯鍵彼此連接。亦應理解，當提及某一原子範圍之員數之芳基(例如6員至10員芳基)時，原子範圍係針對芳基之總環原子。舉例而言，6員芳基將包括苯基且10員芳基將包括萘基及1,2,3,4-四氫萘基。芳基之非限制性實例包括(但不限於)苯基、茚基、萘基、1,2,3,4-四氫萘基、蒽基及其類似基團。
如本文所使用之「雜芳基」係指環中具有至少一個除碳以外的原子之單芳環，其中該原子選自由氧、氮及硫組成之群；「雜芳基」亦包括具有至少一個此類芳環之多重縮合環系統，該等多重縮合環系統進一步描述於下文中。因此，「雜芳基」包括具有約1至6個碳原子及約1至4個選自由氧、氮及硫組成之群的雜原子之單芳環。硫及氮原子亦可以氧化形式存在，其限制條件為環為芳環。例示性雜芳環系統包括(但不限於)吡啶基、嘧啶基、㗁唑基或呋喃基。「雜芳基」亦包括多重縮合環系統(例如包含2、3或4個環之環系統)，其中如上文所定義之雜芳基與一或多個選自雜芳基(形成例如1,8-㖠啶基)、雜環(形成例如1,2,3,4-四氫-1,8-㖠啶基)、碳環(形成例如5,6,7,8-四氫喹啉基)及芳基(形成例如吲唑基)之環縮合形成多重縮合環系統。因此，雜芳基(單芳環或多重縮合環系統)在雜芳環內具有約1至20個碳原子及約1至6個雜原子。該等多重縮合環系統可於縮合環之碳環或雜環部分上視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)側氧基取代。多重縮合環系統之環在價數要求允許時可經由稠合、螺環及橋聯鍵彼此連接。應理解，多重縮合環系統之個別環可相對於彼此以任何次序連接。應理解，雜芳基或雜芳基多重縮合環系統之連接點可在雜芳基或雜芳基多重縮合環系統之任何適合原子處，包括碳原子及雜原子(例如氮)。亦應理解，當提及某一原子範圍之員數之雜芳基(例如5員至10員雜芳基)時，原子範圍係針對雜芳基之總環原子且包括碳原子及雜原子。舉例而言，5員雜芳基將包括噻唑基且10員雜芳基將包括喹啉基。例示性雜芳基包括(但不限於)吡啶基、吡咯基、吡𠯤基、嘧啶基、嗒𠯤基、吡唑基、噻吩基、吲哚基、咪唑基、㗁唑基、異㗁唑基、噻唑基、呋喃基、㗁二唑基、噻二唑基、喹啉基、異喹啉基、苯并噻唑基、苯并㗁唑基、吲唑基、喹喔啉基、喹唑啉基、5,6,7,8-四氫異喹啉基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、硫茚基、吡咯并[2,3-b]吡啶基、喹唑啉基-4(3H)-酮及三唑基。
「本發明化合物」包括本文所揭示之化合物，例如，本發明化合物包括式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)化合物，包括實例之化合物。
「醫藥學上有效量」係指提供所希望之治療或醫藥結果的調配物或其組合中本發明化合物的量。
「醫藥學上可接受之賦形劑」包括(但不限於)任何佐劑、載劑、賦形劑、助滑劑、甜味劑、稀釋劑、防腐劑、染料/著色劑、風味增強劑、界面活性劑、潤濕劑、分散劑、懸浮劑、穩定劑、等滲劑、溶劑或乳化劑，其已經美國食品與藥物管理局(the United States Food and Drug Administration)批准為可接受用於人類或家畜。
如本文所使用，「治療(treatment/treat/treating)」係指用於獲得有益或所希望之結果的方法。出於本發明之目的，有益或所希望之結果包括(但不限於)症狀緩解及/或症狀程度減輕及/或預防與疾病或病況相關之症狀的惡化。在一個實施例中，「治療(treatment/treating)」包括以下中之一或多者：a)抑制疾病或病況(例如，減少由疾病或病況引起之一或多種症狀，及/或減弱疾病或病況之程度)；b)減緩或遏制與疾病或病況相關之一或多種症狀的發展(例如，使疾病或病況穩定、延緩疾病或病況之惡化或進展)；及c)緩解疾病或病況，例如使臨床症狀消退、改善疾病狀態、延緩疾病進展、提高生活品質及/或延長存活期。
「預防」係指預防或延遲患有病毒感染之患者之臨床疾病之發展。
如本文所使用之「治療有效量」或「有效量」係指有效地引發所要生物學或醫學反應之量，包括在向個體投與以用於治療疾病時足以實現此類疾病治療之化合物的量。有效量將視化合物、待治療個體之疾病及其嚴重程度及年齡、體重等而變化。有效量可包括一定範圍之量。如所屬領域中所瞭解，有效量可以是一或多次劑量，亦即，達成所需治療終點可能需要單次劑量或多次劑量。因此，在投與一或多種治療劑之情形下可考慮有效量，且若與一或多種其他藥劑結合可獲得或已獲得所希望或有利的結果，則單一藥劑可視為以有效量投與。任何共投與化合物之適合劑量可視情況因化合物之組合作用(例如累加或協同效應)而減少。
如本文所使用，「共同投與」包括在投與單位劑量之一或多種額外治療劑之前或之後投與單位劑量之本文所揭示化合物，例如在投與一或多種額外治療劑的數秒、數分鐘或數小時內投與本文所揭示化合物。舉例而言，在一些實施例中，首先投與單位劑量之本發明化合物，隨後在數秒或數分鐘內投與單位劑量之一或多種額外治療劑。或者，在其他實施例中，首先投與單位劑量之一或多種其他治療劑，接著在數秒或數分鐘內投與單位劑量之本發明化合物。在一些實施例中，首先投與單位劑量之本發明化合物，接著在數小時(例如1至12小時)之後投與單位劑量之一或多種其他治療劑。在其他實施例中，首先投與單位劑量之一或多種其他治療劑，接著在數小時(例如1至12小時)之後投與單位劑量之本發明化合物。本文所揭示化合物與一或多種其他治療劑之共同投與通常係指同時或依序投與本文所揭示化合物及一或多種其他治療劑，使得在患者體內存在治療有效量之每種藥劑。
亦提供本文所描述之化合物的醫藥學上可接受之鹽、水合物、溶劑合物、互變異構形式、多晶型物及前藥。「醫藥學上可接受」或「生理學上可接受」係指適用於製備適用於獸醫學或人類醫藥用途之醫藥組合物的化合物、鹽、組合物、劑型及其他物質。
本文所描述之化合物可製備及/或調配為醫藥學上可接受之鹽或在適當時製備及/或調配為游離鹼。醫藥學上可接受之鹽為具有游離鹼之所需藥理學活性的化合物之游離鹼形式之無毒鹽。此等鹽可衍生自無機或有機酸或鹼。舉例而言，含有鹼氮之化合物可藉由使該化合物與無機酸或有機酸接觸而製備為醫藥學上可接受之鹽。醫藥學上可接受之鹽之非限制性實例包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸單氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、丁二酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、反丁烯二酸鹽、順丁烯二酸鹽、丁炔-1,4-二酸鹽、己炔-1,6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、磺酸鹽、甲基磺酸鹽、丙基磺酸鹽、苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、苯乙酸鹽、苯丙酸鹽、苯丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ-羥丁酸鹽、乙醇酸鹽、酒石酸鹽及杏仁酸鹽(mandelate)。其他適合的醫藥學上可接受之鹽的清單見於Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第21版, Lippincott Wiliams and Wilkins, Philadelphia, Pa., 2006中。
本文所揭示化合物之「醫藥學上可接受之鹽」的實例亦包括衍生自適當鹼之鹽，該鹼諸如鹼金屬(例如，鈉、鉀)、鹼土金屬(例如，鎂)、銨及NX4 + (其中X為C1 -C4 烷基)。亦包括諸如鈉鹽或鉀鹽之鹼加成鹽。
亦提供本文所描述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、異構體或混合物，其中連接至碳原子之1至n個氫原子可經氘原子或D置換，其中n為分子中之氫原子的數目。如此項技術中已知，氘原子為氫原子之非放射性同位素。該等化合物可增加代謝抗性，且因此當向哺乳動物投與時，可適用於增加本文所描述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、異構體或混合物之半衰期。參見例如，Foster, 「Deuterium Isotope Effects in Studies of Drug Metabolism」, Trends Pharmacol. Sci., 5(12):524-527 (1984)。此等化合物例如藉由採用其中一或多個氫原子已經氘置換之起始物質來合成。
可併入所揭示化合物中之同位素之實例亦包括氫、碳、氮、氧、磷、氟、氯及碘之同位素，諸如分別為2 H、3 H、11 C、13 C、14 C、13 N、15 N、15 O、17 O、18 O、31 P、32 P、35 S、18 F、36 Cl、123 I及125 I。經正電子發射同位素(諸如11 C、18 F、15 O及13 N)取代可適用於正電子發射斷層攝影術(PET)研究，以檢查受質受體佔用率。經同位素標記之式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)化合物可通常藉由與如下文闡述之實例中所描述之方法類似的方法，使用合適的經同位素標記之試劑代替先前所用之未經標記之試劑來製備。
本文所揭示之實施例之化合物或其醫藥學上可接受之鹽可含有一或多個不對稱中心，且可因此產生對映異構體、非對映異構體及其他立體異構形式，該等立體異構形式就絕對立體化學而言可定義為(R )-或(S )-，或針對胺基酸定義為(D)-或(L)-。本發明意謂包括所有該等可能的異構體，以及其外消旋及光學純形式。具光學活性之(+)及(-)、(R )-及(S )-或(D)-及(L)-異構體可使用對掌性合成子或對掌性試劑來製備，或使用習知技術(例如層析及分步結晶)來解析。用於製備/分離個別對映異構體之習知技術包括自適合之光學純前驅體進行對掌性合成或使用例如對掌性高壓液相層析(HPLC)對外消旋體(或鹽或衍生物之外消旋體)進行解析。當本文所描述之化合物含有烯系雙鍵或其他幾何不對稱中心時且除非另外說明，否則意欲化合物包括E與Z型幾何異構體。同樣，亦意欲包括所有互變異構形式。在化合物以其對掌性形式表示時，應理解，實施例涵蓋但不限於特定非對映異構性或對映異構性增濃形式。在未指定但存在對掌性時，應理解，實施例係針對特定非對映異構性或對映異構性增濃形式；或此類化合物之外消旋或非外消旋混合物。如本文中所使用，「非外消旋混合物」為比率不為1:1的立體異構體之混合物。
「外消旋體」係指對映異構體之混合物。該混合物可包含相等或不相等量之各對映異構體。
「立體異構體(stereoisomer/stereoisomers)」係指一或多個立體中心之對掌性不同的化合物。立體異構體包含對映異構體及非對映異構體。若化合物具有一或多個不對稱中心或不對稱取代之雙鍵，則其可以立體異構形式存在且因此可以單獨的立體異構體或以混合物形式產生。除非另外指明，否則該描述意欲包括個別立體異構體以及混合物。判定立體化學及分離立體異構體之方法為此項技術中所熟知(參見例如Advanced Organic Chemistry, 第4章, 第4版, 3月期刊, John Wiley及Sons, 紐約, 1992)。
「互變異構體」係指質子位置不同的化合物之替代形式，諸如烯醇-酮基及亞胺-烯胺互變異構體，或含有連接至環-NH-及環=N-兩者之環原子之雜芳基的互變異構形式，諸如吡唑、咪唑、苯并咪唑、三唑及四唑。
除非另有定義，否則本文中所用的所有技術及科學術語均具有與一般熟習此項技術者通常所理解相同的意義。在化學基團之前端或末端處之短劃線為出於方便之目的；可在具有或不具有一或多個短劃線之情況下描繪化學基團而不會丟失其普通含義。穿過結構中之線所繪製的波浪線指示基團之連接點。虛線指示視情況存在之鍵。除非在化學上或結構上需要，否則書寫化學基團之次序或其與分子其餘部分之連接點不指示或暗示方向。舉例而言，基團「-SO2 CH2 -」等效於「-CH2 SO2 -」，且兩者可沿任一方向連接。類似地，「芳基烷基」例如可在該基團之芳基或烷基部分處連接至分子之其餘部分。諸如「Cu-v 」或(Cu -Cv )之前綴指示以下基團具有u至v個碳原子。舉例而言，「C1-6 烷基」及「C1 -C6 烷基」均指示烷基具有1至6個碳原子。
如本文所使用，「溶劑合物」係指溶劑與化合物之相互作用之產物。亦提供本文所描述之化合物之鹽的溶劑合物。亦提供本文所描述之化合物之水合物。
如本文所使用之「前藥」係指藥物之衍生物，其在投與人體時根據一些化學或酶促路徑轉化成活性藥物。III. 化合物
本發明描述式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)及(In)化合物。
在一些實施例中，本發明提供一種式(I)化合物：
Figure 02_image012
式(I)， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： 鹼基為
Figure 02_image014
； R1 及R2 各自獨立地為H或-C(O)R1A ，其中R1A 為C1-6 烷基； R3 為-N(H)R3A ； R3A 為H、-CH2 OP(O)(OH)2 或-C(O)R3D ，其中 R3D 為C6-12 芳基或視情況經C3-6 環烷基取代之C1-6 烷基； R4A 為O； R4B 及R4C 各自獨立地為： (A)           -OH； (B)           -OR4B1 ，其中R4B1 為C6-12 芳基； (C)
Figure 02_image016
，其中 下標m為0、1、2、3、4或5；且 各R4D 獨立地為C1-6 烷基； (D)
Figure 02_image018
，其中 R4E1 及R4E2 各自獨立地為H或C1-6 烷基； R4F1 及R4F2 一起為側氧基； R4G 為視情況經1至3個R4G1 取代之C1-8 烷基；C3-8 環烷基；或視情況經1至3個R4G3 取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基； 各R4G1 獨立地為-OH、C1-6 烷氧基、-(CH2 OCH2 )1-5 -CH3 、C1-3 鹵烷基或視情況經1至3個R4G9 取代之C3-8 環烷基； 各R4G3 及R4G9 獨立地為C1-6 烷基；或 (E)           -(OP(O)(OH))1-2 -OH；且 R5A 及R5B 各自獨立地為經-OP(O)(OH)2 取代之C1-6 烷基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)表示，其中鹼基為
Figure 02_image020
。 在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)表示，其中鹼基為
Figure 02_image026
Figure 02_image027
。 在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)表示，其中鹼基為
Figure 02_image029
。 在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)表示，其中鹼基為
Figure 02_image031
。 在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)表示，其中鹼基為
Figure 02_image033
。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中R1 及R2 各自獨立地為H或-C(O)R1A ，其中R1A 為C1-6 烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中R1 及R2 各自為H。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中R1 及R2 各自為-C(O)R1A ，其中R1A 為C1-6 烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中R1 及R2 各自為-C(O)R1A ；且R1A 為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基或三級丁基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中R1 及R2 各自為-C(O)R1A ；且R1A 為甲基、乙基或異丙基。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽由式(Ia)表示：
Figure 02_image035
。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)或(Ic)表示，其中R3 為-N(H)R3A ；R3A 為H、-CH2 OP(O)(OH)2 或-C(O)R3D ，其中R3D 為C6-12 芳基或視情況經C3-6 環烷基取代之C1-6 烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)或(Ic)表示，其中R3A 為H。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)或(Ic)表示，其中R3A 為-CH2 OP(O)(OH)2 。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)或(Ic)表示，其中R3A 為-C(O)R3D ，其中R3D 為C6-12 芳基或視情況經C3-6 環烷基取代之C1-6 烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)或(Ic)表示，其中R3A 為-C(O)R3D ，其中R3D 為苯基或視情況經C3-6 環烷基取代之C1-3 烷基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)表示，其中R3 為-N(H)R3A ；R3A 為H或-C(O)R3D ；且R3D 為苯基或視情況經C3-6 環烷基取代之C1-3 烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)表示，其中R3 為-NH2 。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)或(Id)表示，其中R4B 及R4C 各自獨立地為： (A)           -OH； (B)           -OR4B1 ，其中R4B1 為C6-12 芳基； (C)
Figure 02_image037
，其中 下標m為0、1、2、3、4或5；且 各R4D 獨立地為C1-6 烷基； (D)
Figure 02_image039
，其中 R4E1 及R4E2 各自獨立地為H或C1-6 烷基； R4F1 及R4F2 一起為側氧基； R4G 為視情況經1至3個R4G1 取代之C1-8 烷基；C3-8 環烷基；或視情況經1至3個R4G3 取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基； 各R4G1 獨立地為-OH、C1-6 烷氧基、-(CH2 OCH2 )1-5 -CH3 、C1-3 鹵烷基或視情況經1至3個R4G9 取代之C3-8 環烷基； 各R4G3 及R4G9 獨立地為C1-6 烷基；或 (E)   -(OP(O)(OH))1-2 -OH。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)或(Id)表示，其中R4B 及R4C 各自獨立地為： (C)
Figure 02_image041
，其中 下標m為0、1、2、3、4或5；且 各R4D 獨立地為C1-6 烷基； (D)
Figure 02_image043
，其中 R4E1 及R4E2 各自獨立地為H或C1-6 烷基； R4F1 及R4F2 一起為側氧基； R4G 為視情況經1至3個R4G1 取代之C1-8 烷基；C3-8 環烷基；或視情況經1至3個R4G3 取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基； 各R4G1 獨立地為-OH、C1-6 烷氧基、-(CH2 OCH2 )1-5 -CH3 、C1-3 鹵烷基或視情況經1至3個R4G9 取代之C3-8 環烷基； 各R4G3 及R4G9 獨立地為C1-6 烷基；或 (E)   -(OP(O)(OH))1-2 -OH。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)或(Id)表示，其中R4B 及R4C 各自獨立地為： (A)           -OH； (B)           -OR4B1 ，其中R4B1 為萘基； (C)
Figure 02_image045
，其中 下標m為0或1；且 R4D 為C1-6 烷基； (D)
Figure 02_image047
，其中 R4E1 為C1-3 烷基； R4E2 為H； R4F1 及R4F2 一起為側氧基； R4G 為視情況經1個R4G1 取代之C1-8 烷基；C4-6 環烷基；或視情況經1個R4G3 取代的具有1個選自N及O之雜原子的4員至6員雜環基； 各R4G1 獨立地為-OH、C1-4 烷氧基、-(CH2 OCH2 )1-2 -CH3 、C1-3 鹵烷基或視情況經1個R4G9 取代之C3-6 環烷基； 各R4G3 及R4G9 獨立地為C1-3 烷基；或 (E)   -(OP(O)(OH))1-2 -OH。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(Ih)或(Ik)表示，其中R4B 為： (B)           -OR4B1 ，其中R4B1 為萘基；或 (C)
Figure 02_image049
，其中 下標m為0或1；且 各R4D 獨立地為三級丁基；或 (E)   -(OP(O)(OH))1-2 -OH。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)或(If)表示，其中R4C 為： (A)   -OH；或 (D)
Figure 02_image051
，其中 R4E1 為甲基； R4E2 為H； R4F1 及R4F2 一起為側氧基；且 R4G 為 甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、正戊基、新戊基、正己烷、2,2-二甲基-丁基、3,3-二甲基-丁基、2-乙基-丁基或2-正丙基-戊基，其各自視情況經OH、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、CF3 、Me(CH2 OCH2 )2 -、環丙基或1-甲基環丙基取代， 環丁基、環戊基或環己基， 吡咯啶基、氧雜環丁烷基或四氫哌喃基，其各自視情況經甲基、乙基、正丙基或異丙基取代。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ib)或(Ic)表示，其中R5A 及R5B 各自獨立地為經-OP(O)(OH)2 取代之C1-6 烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ib)或(Ic)表示，其中R5A 及R5B 各自獨立地為經-OP(O)(OH)2 取代之C1-3 烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)或(Ic)表示，其中R5B 為-CH2 OP(O)(OH)2 。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)或(Ib)表示，其中R5A 為-CH2 OP(O)(OH)2 。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽由式(Ib)表示：
Figure 02_image053
式(Ib)， 其中R3A 為H；且R5A 為-CH2 OP(O)(OH)2 。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽由(Ic)表示：
Figure 02_image055
式(Ic)， 其中R3A 為H；且R5B 為-CH2 OP(O)(OH)2 。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽由式(Id)表示：
Figure 02_image057
式(Id)。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽由式(Ie)表示：
Figure 02_image059
式(Ie)。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽由式(If)表示：
Figure 02_image061
式(If)。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽由式(Ig)表示：
Figure 02_image063
式(Ig)。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽由式(Ih)表示：
Figure 02_image065
式(Ih)。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽由式(Ij)表示：
Figure 02_image067
式(Ij)。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽由式(Ik)表示：
Figure 02_image069
式(Ik)。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽由式(Im)表示：
Figure 02_image071
式(Im)。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)或(If)表示，其中R4C 為：
Figure 02_image073
。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)或(If)表示，其中R4C 為：
Figure 02_image075
。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)或(If)表示，其中R4C 為：
Figure 02_image077
。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中R4G 為視情況經1至3個R4G1 取代之C1-8 烷基、C3-8 環烷基或視情況經1至3個R4G3 取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基；各R4G1 獨立地為-OH、C1-6 烷氧基、-(CH2 OCH2 )1-5 -CH3 、C1-3 鹵烷基或視情況經1至3個R4G9 取代之C3-8 環烷基；且各R4G3 及R4G9 獨立地為C1-6 烷基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中R4G 為 甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、正戊基、新戊基、正己烷、2,2-二甲基-丁基、3,3-二甲基-丁基、2-乙基-丁基或2-正丙基-戊基，其各自視情況經OH、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、CF3 、Me(CH2 OCH2 )2 -、環丙基或1-甲基環丙基取代， 環丁基、環戊基或環己基， 吡咯啶基、氧雜環丁烷基或四氫哌喃基，其各自視情況經甲基、乙基、正丙基或異丙基取代。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中R4G 為 視情況經Me(CH2 OCH2 )2 -、環丙基或1-甲基環丙基取代之甲基， 視情況經丁氧基取代之乙基， 視情況經甲氧基取代之正丙基， 異丙基、正丁基， 視情況經OH、甲氧基或CF3 取代之異丁基， 正戊基、新戊基、正己烷、2,2-二甲基-丁基、3,3-二甲基-丁基、2-乙基-丁基、2-正丙基-戊基， 環丁基、環己基， N-甲基-吡咯啶基、氧雜環丁烷基或四氫哌喃基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中R4G 為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、正戊基、新戊基、正己烷、2,2-二甲基-丁基、3,3-二甲基-丁基、2-乙基-丁基、2-正丙基-戊基、環丁基、環己基、N-甲基-吡咯啶基、氧雜環丁烷基或四氫哌喃基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中R4G 為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、正戊基、新戊基、正己烷、2,2-二甲基-丁基、3,3-二甲基-丁基、2-乙基-丁基或2-正丙基-戊基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中R4G 為異丙基、正己烷、2,2-二甲基-丁基、3,3-二甲基-丁基或2-乙基-丁基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中R4G 為異丙基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中R4G 為正己烷。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中R4G 為2,2-二甲基-丁基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中R4G 為3,3-二甲基-丁基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中R4G 為2-乙基-丁基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)表示，其中 R1 及R2 均為H或-C(O)R1A ，其中R1A 為甲基、乙基或異丙基； R3 為-NH2 ； R4B 為： -OPh；且 R4C 為：
Figure 02_image079
，其中 R4G 為 甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、正戊基、新戊基、正己烷、2,2-二甲基-丁基、3,3-二甲基-丁基、2-乙基-丁基或2-正丙基-戊基，其各自視情況經OH、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、CF3 、Me(CH2 OCH2 )2 -、環丙基或1-甲基環丙基取代， 環丁基、環戊基或環己基， 吡咯啶基、氧雜環丁烷基或四氫哌喃基，其各自視情況經甲基、乙基、正丙基或異丙基取代。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽由式(In)表示：
Figure 02_image081
式(In) 其中 R1 及R2 均為H或-C(O)R1A ，其中R1A 為甲基、乙基或異丙基；且 R4G 為 甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、正戊基、新戊基、正己烷、2,2-二甲基-丁基、3,3-二甲基-丁基、2-乙基-丁基或2-正丙基-戊基，其各自視情況經OH、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、CF3 、Me(CH2 OCH2 )2 -、環丙基或1-甲基環丙基取代， 環丁基、環戊基或環己基， 吡咯啶基、氧雜環丁烷基或四氫哌喃基，其各自視情況經甲基、乙基、正丙基或異丙基取代。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中該化合物係選自表1A、表1B、表1C及表1D之化合物。表 1A.
Figure 02_image083
Figure 02_image085
Figure 02_image087
Figure 02_image089
表 1B.
Figure 02_image091
Figure 02_image093
Figure 02_image095
Figure 02_image097
Figure 02_image099
表 1C.
Figure 02_image101
Figure 02_image103
Figure 02_image105
Figure 02_image107
表 1D.
Figure 02_image109
Figure 02_image111
Figure 02_image113
Figure 02_image115
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中該化合物為：
Figure 02_image117
Figure 02_image119
。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中該化合物為：
Figure 02_image121
。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中該化合物為：
Figure 02_image123
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在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中該化合物為：
Figure 02_image125
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在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中該化合物為：
Figure 02_image127
。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)表示，其中該化合物為：
Figure 02_image129
。
在一些實施例中，本發明提供一種化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為：
Figure 02_image131
。
就本文所描述之化合物之活體內代謝產物相對於先前技術為新穎且不顯著的而言，此類產物亦在本文之範疇內。此類產物可例如由所投與化合物之氧化、還原、水解、醯胺化、酯化及其類似作用產生，主要由於酶促過程產生。因此，包括藉由包含使化合物與哺乳動物接觸足以產生其代謝產物的時間段之製程而製備的新穎及非顯著化合物。此類產物通常由製備放射性標記(例如14 C或3 H)之化合物，將其以可偵測劑量(例如大於約0.5 mg/kg)非經腸投與動物(諸如大鼠、小鼠、天竺鼠、猴)或人類，使代謝進行充足的時間(通常約30秒至約30小時)且自尿液、血液或其他生物樣品分離其轉化產物來鑑別。此等產物因為其經標記而容易分離(其他藉由使用能夠結合代謝物中留存之抗原決定基的抗體進行分離)。代謝物結構係以習知方式，例如藉由MS或NMR分析確定。一般而言，代謝物之分析以與熟習此項技術者熟知之習知藥物代謝研究相同的方式進行。轉化產物只要未以其他方式在活體內發現，則適用於診斷分析以用於化合物之治療性給藥，即使其自身不具有HSV抗病毒活性。
用於測定替代性胃腸道分泌物中化合物之穩定性的配方及方法為已知的。化合物在本文中定義為在胃腸道中穩定，其中在37℃下培育1小時後，在替代性腸液或胃液中少於約50莫耳%之受保護基團脫除保護基。僅因為化合物對胃腸道穩定並不意謂其無法活體內水解。前藥通常在消化系統中將為穩定的，但可在消化腔、肝臟、肺或其他代謝器官中或一般在細胞內實質上水解成母體藥物。如本文所用，前藥應理解為化學設計成在克服經口遞送的生物學障壁之後有效釋放母體藥物之化合物。IV. 醫藥調配物
在一些實施例中，本發明提供一種醫藥調配物，其包含醫藥學上有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。本文亦提供一種醫藥調配物，其包含醫藥學上有效量的式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)及(In)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物及/或酯，及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。
本文之化合物與習知載劑及賦形劑一起調配。錠劑將含有賦形劑、助滑劑、填充劑、黏合劑及其類似物。水性調配物以無菌形式製備，且在意欲藉由除經口投藥以外的方式遞送時通常為等滲的。所有調配物將視情況含有賦形劑，諸如「Handbook of Pharmaceutical Excipients」(1986)中所闡述之賦形劑。賦形劑包括抗壞血酸及其他抗氧化劑、螯合劑(諸如EDTA)、碳水化合物(諸如聚葡萄糖)、羥烷基纖維素、羥烷基甲基纖維素、硬脂酸及其類似物。調配物之pH值在約3至約11範圍內，例如為約7至10。
儘管活性成分可單獨投與，但其較佳可呈醫藥調配物形式。用於獸醫及人類用途之調配物均包含至少一種如上文所定義之活性成分，以及一或多種可接受之載劑及視情況選用之其他治療成分，尤其如本文所論述之彼等額外治療成分。載劑必須在與調配物之其他成分相容及對其受體生理學無害之意義上為「可接受」的。
調配物包括適用於前述投藥途徑之調配物。調配物可宜以單位劑型呈現且可利用任何適合方法來製備。技術及調配物通常見於Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA)中。該等方法包括使活性成分與構成一或多種附屬成分之載劑結合的步驟。一般而言，藉由使活性成分與液體載劑或細粉狀固體載劑或兩者均勻且緊密結合且隨後視需要使產物成形來製備調配物。
適合於經口投與的調配物可呈現為離散單元形式，諸如各含有預定量之活性成分的膠囊、扁囊劑或錠劑；粉末或粒子形式；於水性或非水性液體中之溶液或懸浮液形式；或水包油液體乳液或油包水液體乳液形式。活性成分亦可以推注、舐劑或糊劑形式投與。
錠劑可藉由視情況與一或多種附屬成分一起壓縮或模製來製造。壓縮錠劑可藉由在適合機器中壓縮視情況與黏合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑混合的呈自由流動形式之活性成分(諸如粉末或粒子)來製備。模製錠劑可藉由在適合機器中模製經惰性液體稀釋劑濕潤之粉末狀活性成分之混合物來製備。可將錠劑視情況包覆包衣或刻痕且視情況調配，以便提供活性成分自其之緩慢或控制釋放。
對於眼部或其他外部組織(例如口腔及皮膚)感染，調配物較佳以含有例如0.075至20% w/w (包括以0.1% w/w (諸如0.6% w/w、0.7% w/w等)遞增之在0.1%與20%之間的範圍內的活性成分)，較佳0.2至15% w/w且最佳0.5至10% w/w之量的活性成分的局部軟膏或乳膏形式施用。當調配成軟膏時，活性成分可與石蠟或水可混溶性軟膏基劑一起使用。或者，活性成分可與水包油乳膏基劑一起調配成乳膏。
視需要，乳膏基劑之水相可包括例如至少30% w/w之多元醇，亦即具有兩個或更多個羥基之醇，諸如丙二醇、丁-1,3-二醇、甘露糖醇、山梨糖醇、丙三醇及聚乙二醇(包括PEG 400)及其混合物。局部調配物宜包括增強活性成分經由皮膚或其他受影響區域吸收或滲透之化合物。該等經皮滲透增強劑之實例包括二甲亞碸及相關類似物。
乳液之油相可由已知成分以已知方式構成。儘管該相可僅包含乳化劑(或稱為利泄劑)，但其宜包含至少一種乳化劑與脂肪或油或與脂肪及油之混合物。較佳地，包括親水性乳化劑以及充當穩定劑之親脂性乳化劑。較佳亦包括油與脂肪。乳化劑與穩定劑一起或不與穩定劑一起構成所謂乳化蠟，且蠟與油及脂肪一起構成所謂乳化軟膏基劑，其形成乳膏調配物之油性分散相。
適用於調配物之利泄劑及乳液穩定劑包括Tween® 60、Span® 80、鯨蠟硬脂醇、苯甲醇、肉豆蔻醇、單硬脂酸甘油酯及月桂基硫酸鈉。
用於調配物之適合的油或脂肪之選擇係基於實現所需化妝品特性。乳膏應較佳為非油膩、非染色及可洗產物，具有適合的稠度以避免自試管或其他容器洩漏。可使用直鏈或分支鏈、單元或二元烷基酯，諸如二異己二酸酯、硬脂酸異鯨蠟酯、椰子脂肪酸之丙二醇二酯、肉豆蔻酸異丙酯、油酸癸酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸丁酯、棕櫚酸2-乙基己酯或分支鏈酯之摻合物(稱為Crodamol CAP)，最後三者為較佳酯。視所需特性而定，此等酯可單獨或組合使用。或者，使用高熔點脂質，諸如白色軟石蠟及/或液體石蠟或其他礦物油。
本文之醫藥調配物包含與一或多種醫藥學上可接受之載劑或賦形劑及視情況使用之其他治療劑的組合。含有活性成分之醫藥調配物可呈適用於所欲投藥方法之任何形式。當用於例如經口投與時，可製備錠劑、糖衣錠、口含錠、水性或油性懸浮液、可分散粉末或粒子、乳液、硬或軟膠囊、溶液、糖漿或酏劑。可根據用於製造醫藥組合物之任何方法製備意欲用於經口使用的組合物，且該等組合物可含有一或多種劑，包括甜味劑、調味劑、著色劑及防腐劑，以便提供可口製劑。含有與適用於製造錠劑之醫藥學上可接受無毒賦形劑混合的活性成分之錠劑為可接受的。此等賦形劑可為例如惰性稀釋劑，諸如碳酸鈣或碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；粒化及崩解劑，諸如玉米澱粉或褐藻酸；黏合劑，諸如澱粉、明膠或阿拉伯膠；及潤滑劑，諸如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。錠劑可未經包覆或可利用已知技術(包括微囊封裝)包覆以延緩在胃腸道中之崩解及吸附，且因此提供較長時段的持久作用。舉例而言，可單獨或與蠟一起使用諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯之延時材料。
用於經口使用之調配物亦可呈硬明膠膠囊形式，其中活性成分與惰性固體稀釋劑(例如磷酸鈣或高嶺土)混合，或呈軟明膠膠囊形式，其中活性成分與水或油介質(諸如花生油、液體石蠟或橄欖油)混合。
水性懸浮液含有與適用於製造水性懸浮液之賦形劑摻合的活性材料。此類賦形劑包括懸浮劑，諸如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、褐藻酸鈉、聚乙烯吡咯啶酮、黃蓍膠及阿拉伯膠；及分散劑或潤濕劑，諸如天然存在之磷脂(例如卵磷脂)、環氧烷與脂肪酸之縮合產物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)、環氧乙烷與長鏈脂族醇之縮合產物(例如十七伸乙氧基鯨蠟醇)、環氧乙烷與衍生自脂肪酸之偏酯及己糖醇酐之縮合產物(例如聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯)。水性懸浮液亦可含有一或多種防腐劑，諸如對羥基苯甲酸乙酯或對羥基苯甲酸正丙酯；一或多種著色劑；一或多種調味劑及一或多種甜味劑，諸如蔗糖或糖精。
油性懸浮液可藉由使活性成分懸浮於植物油(諸如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)中或礦物油(諸如液體石蠟)中來調配。口服懸浮液可含有增稠劑，諸如蜂蠟、硬石蠟或鯨蠟基醇。可添加甜味劑(諸如上述甜味劑)及調味劑，以提供適口之口服製劑。此等組合物可藉由添加抗氧化劑(諸如抗壞血酸)來保存。
適合於藉由添加水來製備水性懸浮液的可分散粉末及粒子提供活性成分與分散劑或潤濕劑、懸浮劑及一或多種防腐劑之混合物。合適之分散劑或潤濕劑及懸浮劑由上文所揭示之彼等試劑例示。亦可存在額外賦形劑，例如甜味劑、調味劑及著色劑。
醫藥組合物亦可呈水包油乳液形式。油相可為植物油，諸如橄欖油或花生油，礦物油，諸如液體石蠟，或此等物質之混合物。適合的乳化劑包括天然存在之膠，諸如阿拉伯膠及膠狀黃蓍；天然存在之磷脂，諸如大豆卵磷脂；來源於脂肪酸及己糖醇酐之酯或偏酯，諸如脫水山梨糖醇單油酸酯；及此等偏酯與環氧乙烷之縮合產物，諸如聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯。乳液亦可含有甜味劑及調味劑。糖漿及酏劑可與甜味劑(諸如丙三醇、山梨糖醇或蔗糖)一起調配。此類調配物亦可含有緩和劑、防腐劑、調味劑或著色劑。
醫藥組合物可呈無菌可注射或靜脈內製劑形式，諸如呈無菌可注射水性或油性懸浮液形式。此懸浮液可根據已知技術使用上文已提及之彼等適合分散劑或潤濕劑及懸浮劑來調配。無菌可注射或靜脈內製劑亦可為於無毒非經腸可接受稀釋劑或溶劑中之無菌可注射溶液或懸浮液，諸如於1,3-丁二醇中之溶液；或製備成凍乾粉末。在可接受之媒劑及溶劑中，可採用的有水、林格氏溶液(Ringer's solution)及等滲氯化鈉溶液。另外，無菌不揮發性油可常用作溶劑或懸浮介質。出於此目的，可採用任何溫和不揮發性油，包括合成性單甘油酯或二甘油酯。此外，諸如油酸之脂肪酸同樣可用於製備可注射劑。
可與載劑材料組合產生單一劑型之活性成分的量將視所治療之主體及特定投藥模式而變化。舉例而言，意欲用於向人類經口投與之延時釋放調配物可含有大約1至1000 mg活性材料與適當且適宜量之載劑材料的混配物，該量可在總組合物之約5%至約95% (重量:重量)範圍內變化。醫藥組合物可製備成提供容易量測之量以供投與。舉例而言，意欲用於靜脈內輸注之水溶液每毫升溶液可含有約3至500 μg活性成分，以便可以約30 mL/hr之速率進行適合體積之輸注。
適用於局部投與至眼睛之調配物亦包括滴眼劑，其中活性成分溶解或懸浮於適合載劑中，尤其用於活性成分之水性溶劑中。活性成分較佳以0.5至20%，有利地0.5至10%且尤其約1.5% w/w之濃度存在於此類調配物中。
適用於在口腔中局部投與之調配物包括在調味基劑(通常為蔗糖及阿拉伯膠或黃蓍)中包含活性成分之口含錠；在惰性基劑(諸如明膠及甘油或蔗糖及阿拉伯膠)中包含活性成分之片劑；以及在適合液體載劑中包含活性成分之漱口水。
用於直腸投與之調配物可以具有適合的基劑(包含例如可可脂或水楊酸酯)之栓劑形式呈現。
適用於肺內或經鼻投與之調配物具有例如在0.1至500微米範圍內之粒度，諸如0.5、1、30、35等，其藉由經鼻孔快速吸入或藉由經口腔吸入以便達到肺泡來投與。適合的調配物包括活性成分之水性或油性溶液。適用於以氣霧劑或乾燥粉末形式投與之調配物可根據習知方法製備且可與其他治療劑一起遞送，該等治療劑諸如迄今為止用於治療或預防如下文所描述之肺病毒科感染的化合物。
另一實施例提供一種新穎、有效、安全、無刺激性及生理上相容的包含式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的可吸入組合物，其適用於治療肺病毒科感染及潛在相關的細支氣管炎。較佳醫藥學上可接受之鹽為無機酸鹽，包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽或磷酸鹽，因為其可引起較少肺部刺激。較佳地，可吸入調配物係以包含質量中數氣動粒徑(MMAD)在約1與約5 µm之間的粒子的氣霧劑遞送至支氣管內空間。較佳地，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)之化合物經調配以供使用噴霧器、加壓定劑量吸入器(pMDI)或乾燥粉末吸入器(DPI)進行氣霧劑遞送。
噴霧器之非限制性實例包括霧化、噴射、超音波、加壓、振動多孔板或等效噴霧器，包括利用適應性氣霧劑遞送技術之彼等噴霧器(Denyer,J. Aerosol medicine Pulmonary Drug Delivery 2010,23 增刊1, S1-S10)。噴射式噴霧器利用空氣壓力將溶液破碎成氣霧劑液滴。超音噴霧器藉由壓電晶體將液體剪切成小氣霧劑液滴來起作用。加壓噴霧系統在壓力下迫使溶液穿過小孔以產生氣霧劑液滴。振動式多孔板裝置利用快速振動將液體流剪切成適當液滴大小。
在一較佳實施例中，用於噴霧之調配物係以包含MMAD主要介於約1 µm與約5 µm之間的粒子的氣霧劑之形式，使用能夠使式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)之化合物之調配物霧化為所需MMAD之粒子的噴霧器遞送至支氣管內空間。為達到最佳治療效果且避免上呼吸道及全身副作用，大多數霧化粒子之MMAD不應大於約5 µm。若氣霧劑含有大量MMAD大於5 µm之粒子，則該等粒子沈積於上呼吸道中，由此減少遞送至炎症部位之藥物的量及下呼吸道中之支氣管收縮。若氣霧劑之MMAD小於約1 µm，則該等粒子傾向於保持懸浮於吸入之空氣中且隨後在呼氣期間呼出。
當根據本文中之方法調配及遞送時，用於噴霧之氣霧劑調配物將足以治療肺病毒科感染的治療有效劑量之式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)之化合物遞送至肺病毒科感染部位。必須調節所投與之藥物之量以反映治療有效劑量之式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)之化合物之遞送效率。在一較佳實施例中，視噴霧器而定，水性氣霧劑調配物與霧化、噴射、加壓、振動多孔板或超音波噴霧器之組合准許約至少20%至約90%，通常約70%所投與劑量之式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)之化合物遞送至呼吸道中。在一較佳實施例中，遞送至少約30%至約50%之活性化合物。更佳地，遞送約70%至約90%之活性化合物。
在另一實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽以乾燥可吸入粉末形式遞送。該等化合物係使用乾燥粉末或定劑量吸入器以乾燥粉末調配物形式經支氣管內投與以將化合物之細粒有效遞送至支氣管內空間。對於藉由DPI遞送，藉由研磨噴霧乾燥、臨界流體處理或自溶液沈澱將式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)之化合物處理為MMAD主要介於約1 µm與約5 µm之間的粒子。能夠製造MMAD在約1 µm與約5 µm之間的粒度的介質研磨、噴射研磨及噴霧乾燥裝置及程序係此項技術中熟知的。在一個實施例中，賦形劑在加工成所需大小之粒子之前添加至式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)之化合物中。在另一實施例中，將賦形劑與所需大小之粒子共混合以幫助藥物粒子之分散，例如藉由使用乳糖作為賦形劑。
粒度測定係使用此項技術中熟知之裝置進行。舉例而言，多級Anderson級聯衝擊器或其他適合方法，諸如美國藥典第601章內特別引用的方法，作為表徵定劑量及乾燥粉末吸入器內之氣霧劑的裝置。
在另一較佳實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)之化合物係使用諸如乾燥粉末吸入器之裝置或其他乾燥粉末分散裝置以乾燥粉末形式遞送。乾燥粉末吸入器及裝置之非限制性實例包括揭示於以下文獻中之彼等者：US5,458,135；US5,740,794；US5775320；US5,785,049；US3,906,950；US4,013,075；US4,069,819；US4,995,385；US5,522,385；US4,668,218；US4,667,668；US4,805,811；及US5,388,572。乾燥粉末吸入器有兩種主要設計。一種設計係計量裝置，其中藥物之儲集器置放於該裝置內且患者將一定劑量藥物添加至吸入腔室中。第二種設計係工廠計量裝置，其中各個別劑量係在獨立容器中製造。兩種系統均取決於將藥物調配成MMAD為約1 µm至約5 µm之小粒子且通常涉及與較大賦形劑粒子(諸如但不限於乳糖)共調配。將藥物粉末置放於吸入腔室(藉由裝置計量或藉由工廠計量劑量耗損)中且患者之吸氣流體加快粉末離開裝置且進入口腔。粉末路徑之非層流特徵使賦形劑-藥物聚集物分散，且大賦形劑粒子之質量造成其衝擊喉底，而較小藥物粒子於肺中深部沈積。在較佳實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽係以乾燥粉末形式使用如本文所描述之任一類型的乾燥粉末吸入器遞送，其中不包括任何賦形劑之乾燥粉末之MMAD主要在1 µm至約5 µm範圍內。
在另一實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)之化合物係以乾燥粉末形式使用定劑量吸入器遞送。定劑量吸入器及裝置之非限制性實例包括以下文獻中所揭示之彼等者：US5,261,538；US5,544,647；US5,622,163；US4,955,371；US3,565,070；US3,361306；及US6,116,234。在較佳實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽係以乾燥粉末形式使用定劑量吸入器遞送，其中不包括任何賦形劑之乾燥粉末之MMAD主要在約1至5 µm範圍內。
適用於經陰道投與之調配物可呈現為子宮托、棉塞、乳膏、凝膠、糊狀物、發泡體或噴霧調配物形式，該等調配物除了含有活性成分以外，亦含有諸如此項技術中已知為合適之載劑。
適於非經腸投與之調配物包括可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及使調配物與預期接受者之血液等滲之溶質的水性及非水性無菌注射溶液；及可包括懸浮劑及增稠劑之水性及非水性無菌懸浮液。
調配物可於單位劑量或多劑量容器(例如密封安瓿及小瓶)中呈現，且可在冷凍乾燥(凍乾)條件下儲存，其僅需要在臨使用前添加無菌液體載劑(例如注射用水)。自先前所描述種類之無菌粉末、粒子及錠劑製備即用型注射溶液及懸浮液。較佳單位劑量調配物為含有如上文中所述之日劑量或單位每日子劑量或其適當部分之活性成分的彼等調配物。
應理解，除上文特定提及之成分之外，該等調配物亦可包括關於所討論調配物之類型的此項技術中習知的其他藥劑，例如適用於經口投與之調配物可包括調味劑。
進一步提供包含至少一種如上文所定義之活性成分以及其相關獸醫用載劑之獸醫用組合物。
獸醫用載劑為適用於投與組合物之目的的物質且可為固體、液體或氣體物質，其另外為惰性的或在獸醫領域中可接受且與活性成分相容。此等獸醫用組合物可經口、非經腸或藉由任何其他所需途徑投與。
本文中之化合物用於提供控制釋放醫藥調配物，其含有一或多種化合物(「控制釋放調配物」)作為活性成分，其中該活性成分之釋放經控制及調節以實現不太頻繁地給藥或改良給定活性成分之藥物動力學或毒性概況。
活性成分之有效劑量至少取決於所治療之病況之性質、毒性、預防性(較低劑量)或針對活性病毒感染使用化合物、遞送方法及醫藥調配物，且將由臨床醫師使用習知劑量遞增研究決定。其可預期為每天約0.0001至約100毫克/公斤體重；通常為每天約0.01至約10毫克/公斤體重；更通常每天約0.01至約5毫克/公斤體重；最通常每天約0.05至約0.5毫克/公斤體重。舉例而言，用於約70 kg體重之成人之日候選劑量將在1 mg至1000 mg範圍內，較佳在5 mg與500 mg之間，且可呈單劑量或多劑量形式。V. 投藥途徑
式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)之化合物中之一或多者(在本文中稱為活性成分)藉由適合於待治療之病況的任何途徑投與。適合的途徑包括經口、經直腸、經鼻、經肺、局部(包括頰內及舌下)、經陰道及非經腸(包括皮下、肌肉內、靜脈內、皮內、鞘內及硬膜外)及其類似途徑。應瞭解，較佳途徑可隨例如接受者之病況而變化。本文中之化合物之優勢在於其為經口生物可用的且可經口給藥。
本發明之化合物(在本文中亦稱為活性成分)可藉由適用於待治療之病況之任何途徑投與。適合途徑包括經口、經直腸、經鼻、局部(包括經頰及舌下)、經皮、經陰道及非經腸(包括皮下、肌肉內、靜脈內、皮內、鞘內及硬膜外)及其類似途徑。應瞭解，較佳途徑可隨例如接受者之病況而變化。本文所揭示之某些化合物之優勢為其為經口生物可用的且可經口給藥。
本發明化合物可根據有效給藥方案向個體投與持續所需時間段或持續時間，諸如至少約一個月、至少約2個月、至少約3個月、至少約6個月或至少約12個月或更久。在一個變化形式中，化合物按每日或間歇性時程投與個體生命之持續時間。
本發明之化合物之劑量或給藥頻率可在治療療程內基於投藥醫師之判斷來調節。
可向個體(例如，人類)投與有效量之化合物。在一些實施例中，化合物每日投與一次。
化合物可藉由任何適用途徑及方式，諸如藉由經口或非經腸(例如靜脈內)投與來投與。化合物之治療有效量可包括每日每公斤體重約0.00001 mg至每日每公斤體重約10 mg，諸如每日每公斤體重約0.0001 mg至每日每公斤體重約10 mg，或諸如每日每公斤體重約0.001 mg至每日每公斤體重約1 mg，或諸如每日每公斤體重約0.01 mg至每日每公斤體重約1 mg，或諸如每日每公斤體重約0.05 mg至每日每公斤體重約0.5 mg，或諸如每日約0.3 mg至約30 mg，或諸如每日約30 mg至約300 mg。
本發明化合物可以任何劑量之本發明化合物(例如，1 mg至1000 mg化合物)與一或多種額外治療劑組合。治療有效量可包括每劑量約1 mg至每劑量約1000 mg，諸如每劑量約50 mg至每劑量約500 mg，或諸如每劑量約100 mg至每劑量約400 mg，或諸如每劑量約150 mg至每劑量約350 mg，或諸如每劑量約200 mg至每劑量約300 mg。本發明化合物之其他治療有效量係每劑量約100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475或約500 mg。本發明化合物之其他治療有效量為每劑量約100 mg，或每劑量約125、150、175、200、225、250、275、300、350、400、450或約500 mg。單次劑量可每小時、每日或每週投與。舉例而言，單次劑量可每隔1小時、2小時、3小時、4小時、6小時、8小時、12小時、16小時投與一次或每隔24小時投與一次。單次劑量亦可每隔1天、2天、3天、4天、5天、6天投與一次或每隔7天投與一次。單次劑量亦可每隔1週、2週、3週投與一次或每隔4週投與一次。在一些實施例中，單次劑量可每週投與一次。單次劑量亦可每月投與一次。
本發明化合物之其他治療有效量係每劑量約20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或約100 mg。
本發明化合物之給藥頻率將由個別患者之需求確定，且可為例如每日一次或每日兩次或更多次。化合物之投與持續治療病毒感染所必需的時長。舉例而言，可向感染病毒之人類投與化合物持續20天至180天之時間段，或例如20天至90天之時間段，或例如30天至60天之時間段。
投與可為間歇性的，其中在數天或更多天之時段期間患者接受日劑量之本發明化合物，接著在數天或更多天之時段期間患者不接受日劑量之化合物。舉例而言，患者可每隔一天或每週三次接受一劑量之化合物。再次藉助於實例，患者可每天接受一劑量之化合物持續1至14天之時段，隨後在7至21天之時段期間患者不接受一劑量之化合物，隨後在後續時段(例如，1至14天)期間患者再次接受日劑量之化合物。可視治療患者之臨床需要來重複交替時段之化合物投與，繼而化合物不投與。
在一個實施例中，提供醫藥組合物，其包含本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽與一或多種(例如，一種、兩種、三種、四種、一或兩種、一至三種或一至四種)額外治療劑的組合，及醫藥學上可接受之賦形劑。
在一個實施例中，提供套組，其包含本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽與一或多種(例如一種、兩種、三種、四種、一或兩種、一至三種或一至四種)額外治療劑的組合。
在一些實施例中，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽與一種、兩種、三種、四種或更多種額外治療劑組合。在一些實施例中，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽與兩種額外治療劑組合。在其他實施例中，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽與三種額外治療劑組合。在其他實施例中，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽與四種額外治療劑組合。一種、兩種、三種、四種或更多種額外治療劑可為選自相同類別之治療劑的不同治療劑及/或其可選自不同類別之治療劑。
在一些實施例中，當本發明之化合物與如本文所述之一或多種額外治療劑組合時，組合物之組分按同時或依序方案投與。當依序投與時，該組合可以兩次或更多次投與形式投與。
在一些實施例中，本發明之化合物與一或多種額外治療劑以單一劑型組合以用於同時向患者投與，例如呈用於經口投與之固體劑型。
在一些實施例中，本發明之化合物與一或多種額外治療劑共同投與。
為延長本發明化合物之作用，通常需要減慢化合物自皮下或肌肉內注射吸收。此可藉由使用具有不良水溶性之結晶或非晶形材料之液體懸浮液來達成。則化合物之吸收率視其溶解率而定，溶解率又可視晶體尺寸及結晶形態而定。或者，藉由將化合物溶解或懸浮於油媒劑中來實現非經腸投與之化合物之延遲吸收。藉由在諸如聚丙交酯-聚乙交酯之生物可降解聚合物中形成化合物之微膠囊基劑來製造可注射積存形式。視化合物與聚合物之比率及所使用之特定聚合物的性質而定，可控制化合物釋放速率。其他可生物降解之聚合物的實例包括聚(原酸酯)及聚(酸酐)。亦藉由將化合物包覆於與身體組織相容之脂質體或微乳液中來製備儲槽式可注射調配物。VI. 組合療法
本文所提供之式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)之化合物及組合物亦與其他活性治療劑組合用於治療病毒感染，諸如肺病毒科、小核糖核酸病毒科、黃病毒科或絲狀病毒科病毒感染。用於治療肺病毒科之組合療法
本文所提供之化合物及組合物亦與其他活性治療劑組合使用。對於治療肺病毒科病毒感染，其他活性治療劑較佳具有抗肺病毒科病毒感染，尤其呼吸道融合性病毒感染及/或間質肺炎病毒感染之活性。具有抗RSV活性的此等其他活性治療劑之非限制性實例為利巴韋林、帕利珠單抗、莫維珠單抗(motavizumab)、RSV-IGIV (RespiGam® )、MEDI-557、A-60444 (亦稱作RSV604)、MDT-637、BMS-433771、ALN-RSV0、ALX-0171及其混合物。具有抗呼吸道融合性病毒感染活性的其他活性治療劑之其他非限制性實例包括呼吸道融合性病毒蛋白F抑制劑，諸如AK-0529、RV-521、ALX-0171、JNJ-53718678、BTA-585及普沙托韋(presatovir)；RNA聚合酶抑制劑，諸如盧米西他濱(lumicitabine)及ALS-8112；抗RSV G蛋白抗體，諸如抗G蛋白mAb；病毒複製抑制劑，諸如硝唑沙奈(nitazoxanide)。
在一些實施例中，其他活性治療劑可為用於治療或預防RSV之疫苗，包括(但不限於) MVA-BN RSV、RSV-F、MEDI-8897、JNJ-64400141、DPX-RSV、SynGEM、GSK-3389245A、GSK-300389-1A、RSV-MEDI δM2-2疫苗、VRC-RSVRGP084-00VP、Ad35-RSV-FA2、Ad26-RSV-FA2及RSV融合醣蛋白次單元疫苗。
具有抗間質肺炎病毒感染活性的其他活性治療劑之非限制性實例包括唾液酸酶調節劑，諸如DAS-181；RNA聚合酶抑制劑，諸如ALS-8112；及用於治療間質肺炎病毒感染之抗體，諸如EV-046113。
在一些實施例中，其他活性治療劑可為用於治療或預防間質肺炎病毒感染之疫苗，包括(但不限於) mRNA-1653及rHMPV-Pa疫苗。用於治療小核糖核酸病毒科之組合療法
本文所提供之化合物及組合物亦與其他活性治療劑組合使用。對於治療小核糖核酸病毒科病毒感染，其他活性治療劑較佳具有抗小核糖核酸病毒科病毒感染，尤其腸病毒(Enterovirus)感染之活性。此等其他活性治療劑之非限制性實例為衣殼結合抑制劑，諸如普來可那立(pleconaril)、BTA-798 (伐彭達韋(vapendavir))以及Wu等人(US 7,078,403)及Watson (US 7,166,604)所揭示之其他化合物；融合唾液酸酶蛋白，諸如DAS-181；衣殼蛋白VP1抑制劑，諸如VVX-003及AZN-001；病毒蛋白酶抑制劑，諸如CW-33；磷脂酸肌醇4激酶β抑制劑，諸如GSK-480及GSK-533；抗EV71抗體。
在一些實施例中，其他活性治療劑可為用於治療或預防小核糖核酸病毒科病毒感染之疫苗，包括(但不限於) EV71疫苗、TAK-021及基於EV-D68腺病毒載體之疫苗。用於呼吸道感染之組合療法
許多肺病毒科及小核糖核酸病毒科病毒感染為呼吸道感染。因此，用於治療呼吸道症狀及感染後遺症之額外活性治療劑可與本文所提供之化合物組合使用。該等額外藥劑較佳經口投與或藉由直接吸入投與。舉例而言，與本文所提供之化合物組合用於治療病毒性呼吸道感染的其他較佳額外治療劑包括(但不限於)支氣管擴張劑及皮質類固醇。糖皮質素
在1950年作為哮喘療法首次引入(Carryer, Journal of Allergy, 21, 282-287, 1950)的糖皮質素對於此疾病而言一直為最強效且始終有效的療法，但其作用機制尚不完全清楚(Morris, J. Allergy Clin. Immunol., 75 (1 Pt) 1-13, 1985)。令人遺憾的係，口服糖皮質素療法引起深遠的非所需副作用，諸如軀幹性肥胖、高血壓、青光眼、葡萄糖不耐、白內障形成加速、骨礦流失及心理影響，其皆限制口服糖皮質素療法用作長期治療劑(Goodman及Gilman, 第10版, 2001)。針對全身性副作用之解決方案係將類固醇藥物直接遞送至炎症部位。已研發出吸入型皮質類固醇(ICS)來減輕口服類固醇之嚴重不良作用。可與本文所提供之化合物組合使用的皮質類固醇之非限制性實例為地塞米松(dexamethasone)、地塞米松磷酸鈉、氟米龍(fluorometholone)、乙酸氟米龍、氯替潑諾(loteprednol)、依碳氯替潑諾(loteprednol etabonate)、氫化可的松(hydrocortisone)、潑尼松龍(prednisolone)、氟氫可的松(fludrocortisone)、曲安西龍(triamcinolone)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、倍他米松(betamethasone)、丙酸倍氯米松(beclomethasone diproprionate)、甲基潑尼松龍(methylprednisolone)、氟輕松(fluocinolone)、乙酸氟輕松(fluocinolone acetonide)、氟尼縮松(flunisolide)、氟可丁-21-丁酯(fluocortin-21-butylate)、氟米松(flumethasone)、特戊酸氟米松(flumetasone pivalate)、布地奈德(budesonide)、丙酸鹵倍他松(halobetasol propionate)、糠酸莫米松(mometasone furoate)、氟替卡松(fluticasone)、AZD-7594、環索奈德(ciclesonide)；或其醫藥學上可接受之鹽。抗發炎劑
經由抗發炎級聯機制起作用的其他抗發炎劑亦適用作與本文所提供之化合物組合用於治療病毒性呼吸道感染的額外治療劑。應用「抗發炎信號轉導調節劑」(在本文中稱為AISTM)，如磷酸二酯酶抑制劑(例如，PDE-4、PDE-5或PDE-7特異性抑制劑)、轉錄因子抑制劑(例如，經由IKK抑制阻斷NFκB)或激酶抑制劑(例如，阻斷P38 MAP、JNK、PI3K、EGFR或Syk)，係一種切斷炎症的邏輯方法，因為此等小分子靶向有限數目個共同細胞內路徑(作為抗發炎治療性干預之關鍵點的彼等信號轉導路徑) (綜述參見P.J. Barnes, 2006)。此等非限制性額外治療劑包括：5-(2,4-二氟-苯氧基)-1-異丁基-1H-吲唑-6-甲酸(2-二甲基胺基-乙基)-醯胺(P38 Map激酶抑制劑ARRY-797)；3-環丙基甲氧基-N-(3,5-二氯-吡啶-4-基)-4-二氟甲氧基-苯甲醯胺(PDE-4抑制劑羅氟司特(Roflumilast))；4-[2-(3-環戊氧基-4-甲氧基苯基)-2-苯基-乙基]-吡啶(PDE-4抑制劑CDP-840)；N-(3,5-二氯-4-吡啶基)-4-(二氟甲氧基)-8-[(甲基磺醯基)胺基]-1-二苯并呋喃甲醯胺(PDE-4抑制劑奧利司特(Oglemilast))；N-(3,5-二氯-吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟苯甲基)-5-羥基-1H-吲哚-3-基]-2-側氧基-乙醯胺(PDE-4抑制劑AWD 12-281)；8-甲氧基-2-三氟甲基-喹啉-5-甲酸(3,5-二氯-1-氧基-吡啶-4-基)-醯胺(PDE-4抑制劑Sch 351591)；4-[5-(4-氟苯基)-2-(4-甲亞磺醯基-苯基)-1H-咪唑-4-基]-吡啶(P38抑制劑SB-203850)；4-[4-(4-氟-苯基)-1-(3-苯基-丙基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基]-丁-3-炔-1-醇(P38抑制劑RWJ-67657)；4-氰基-4-(3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基)-環己烷甲酸2-二乙基胺基-乙酯(西洛司特(Cilomilast)之2-二乙基-乙酯前藥，PDE-4抑制劑)；(3-氯-4-氟苯基)-[7-甲氧基-6-(3-嗎啉-4-基-丙氧基)-喹唑啉-4-基]-胺(吉非替尼(Gefitinib)，EGFR抑制劑)；及4-(4-甲基-哌𠯤-1-基甲基)-N-[4-甲基-3-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基胺基)-苯基]-苯甲醯胺(伊馬替尼(Imatinib)，EGFR抑制劑)。β2- 腎上腺素受體促效劑支氣管擴張劑
包含吸入型β2-腎上腺素受體促效劑支氣管擴張劑(諸如福莫特羅(formoterol)、沙丁胺醇(albuterol)或沙美特羅(salmeterol))與本文所提供化合物之組合亦為適用於治療呼吸道病毒感染之適合(但非限制性)組合。
吸入型β2-腎上腺素受體促效劑支氣管擴張劑(諸如福莫特羅或沙美特羅)與ICS之組合亦用於治療支氣管收縮及發炎(分別為Symbicort®及Advair®)。包含此等ICS及β2-腎上腺素受體促效劑組合以及本文所提供化合物之組合亦為適用於治療呼吸道病毒感染之適合(但非限制性)組合。
β2腎上腺素受體促效劑之其他實例為貝多拉君(bedoradrine)、維蘭特羅(vilanterol)、茚達特羅(indacaterol)、奧達特羅(olodaterol)、妥洛特羅(tulobuterol)、福莫特羅、阿貝特羅(abediterol)、沙丁胺醇、阿福特羅(arformoterol)、左旋沙丁胺醇(levalbuterol)、非諾特羅(fenoterol)及TD-5471。抗膽鹼劑
對於治療或預防肺部支氣管收縮，抗膽鹼劑具有潛在效用，且因此適用作與本文所提供之化合物組合用於治療病毒性呼吸道感染之額外治療劑。此等抗膽鹼劑包括(但不限於)蕈毒鹼受體(尤其M3亞型)之拮抗劑，其在人類中展現出控制COPD之膽鹼能基調(cholinergic tone)的治療功效(Witek, 1999)；1-{4-羥基-1-[3,3,3-參-(4-氟-苯基)-丙醯基]-吡咯啶-2-羰基}-吡咯啶-2-甲酸(1-甲基-哌啶-4-基甲基)-醯胺；3-[3-(2-二乙基胺基-乙醯氧基)-2-苯基-丙醯氧基]-8-異丙基-8-甲基-8-氮鎓-雙環[3.2.1]辛烷(異丙托銨-N,N-二乙基甘胺酸酯(Ipratropium-N,N-diethylglycinate))；1-環己基-3,4-二氫-1H-異喹啉-2-甲酸1-氮雜-雙環[2.2.2]辛-3-基酯(索利那新(Solifenacin))；2-羥甲基-4-甲亞磺醯基-2-苯基-丁酸1-氮雜-雙環[2.2.2]辛-3-基酯(瑞伐托酯(Revatropate))；2-{1-[2-(2,3-二氫-苯并呋喃-5-基)-乙基]-吡咯啶-3-基}-2,2-二苯基-乙醯胺(達非那新(Darifenacin))；4-氮雜環庚烷-1-基-2,2-二苯基-丁醯胺(甲碘布卓(Buzepide))；7-[3-(2-二乙基胺基-乙醯氧基)-2-苯基-丙醯氧基]-9-乙基-9-甲基-3-氧雜-9-氮鎓-三環[3.3.1.02,4]壬烷(氧托銨-N,N-二乙基甘胺酸酯(Oxitropium-N,N-diethylglycinate))；7-[2-(2-二乙基胺基-乙醯氧基)-2,2-二-噻吩-2-基-乙醯氧基]-9,9-二甲基-3-氧雜-9-氮鎓-三環[3.3.1.02,4]壬烷(噻托銨-N,N-二乙基甘胺酸酯(Tiotropium-N,N-dimethylglycinate))；二甲基胺基-乙酸2-(3-二異丙基胺基-1-苯基-丙基)-4-甲基-苯酯(托特羅定-N,N-二甲基甘胺酸酯(Tolterodine-N,N-dimethylglycinate))；3-[4,4-雙-(4-氟-苯基)-2-側氧基-咪唑啶-1-基]-1-甲基-1-(2-側氧基-2-吡啶-2-基-乙基)-吡咯啶鎓；1-[1-(3-氟-苯甲基)-哌啶-4-基]-4,4-雙-(4-氟-苯基)-咪唑啶-2-酮；1-環辛基-3-(3-甲氧基-1-氮雜-雙環[2.2.2]辛-3-基)-1-苯基-丙-2-炔-1-醇；3-[2-(2-二乙基胺基-乙醯氧基)-2,2-二-噻吩-2-基-乙醯氧基]-1-(3-苯氧基-丙基)-1-氮鎓-雙環[2.2.2]辛烷(阿地溴銨-N,N-二乙基甘胺酸酯(Aclidinium-N,N-diethylglycinate))；或(2-二乙基胺基-乙醯氧基)-二-噻吩-2-基-乙酸1-甲基-1-(2-苯氧基-乙基)-哌啶-4-基酯；瑞芬那新(revefenacin)、格隆溴銨(glycopyrronium bromide)、蕪地溴銨(umeclidinium bromide)、噻托溴銨(tiotropium bromide)、阿地溴銨(aclidinium bromide)、苯環喹溴銨(bencycloquidium bromide)。黏液溶解劑
本文所提供之化合物及本文所提供之組合物亦可與黏液溶解劑組合以治療呼吸道感染之感染及症狀兩者。黏液溶解劑之非限制性實例為胺溴素(ambroxol)。類似地，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)之化合物可與祛痰劑組合以治療呼吸道感染之感染及症狀兩者。除痰劑之非限制性實例為愈創甘油醚(guaifenesin)。
霧化的高滲鹽水用於改善患有肺病之患者體內小氣道之即時及長期清理(Kuzik,J. Pediatrics 2007, 266)。因此，尤其當肺病毒科病毒感染併發有細支氣管炎時，本文所提供之化合物亦可與霧化的高滲鹽水組合。式(I)或式(II)之化合物與高滲鹽水之組合亦可包含上文所論述之額外藥劑中之任一者。在一個實施例中，使用霧化的約3%高滲鹽水。用於治療 COPD 之組合療法
本文所提供之化合物及組合物亦與其他活性治療劑組合使用。對於治療COPD之呼吸道惡化，其他活性治療劑包括具有抗COPD活性的其他活性治療劑。此等其他活性治療劑之非限制性實例包括抗IL5抗體，諸如苯拉組單抗(benralizumab)、美泊珠單抗(mepolizumab)；二肽基肽酶I (DPP1)抑制劑，諸如AZD-7986 (INS-1007)；DNA回旋酶抑制劑/拓樸異構酶IV抑制劑，諸如鹽酸環丙沙星(ciprofloxacin hydrochloride)；MDR相關蛋白4/磷酸二酯酶(PDE) 3及4抑制劑，諸如RPL-554；CFTR刺激劑，諸如艾伐卡托(ivacaftor)、QBW-251；MMP-9/MMP-12抑制劑，諸如RBx-10017609；腺苷A1受體拮抗劑，諸如PBF-680；GATA 3轉錄因子抑制劑，諸如SB-010；蕈毒鹼受體調節劑/菸鹼性乙醯膽鹼受體促效劑，諸如ASM-024；MARCKS蛋白抑制劑，諸如BIO-11006；kit酪胺酸激酶/PDGF抑制劑，諸如馬賽替尼(masitinib)；磷酸二酯酶(PDE) 4抑制劑，諸如羅氟司特(roflumilast)、CHF-6001；磷酸肌醇-3激酶δ抑制劑，諸如奈米利塞(nemiralisib)；5-脂肪加氧酶抑制劑，諸如TA-270；蕈毒鹼受體拮抗劑/β2腎上腺素受體促效劑，諸如琥珀酸巴芬特羅(batefenterol succinate)、AZD-887、異丙托溴銨(ipratropium bromide)；TRN-157；彈性蛋白酶抑制劑，諸如厄多司坦(erdosteine)；金屬蛋白酶-12抑制劑，諸如FP-025；介白素18配體抑制劑，諸如他德介白素α (tadekinig alfa)；骨骼肌肌鈣蛋白活化劑，諸如CK-2127107；p38 MAP激酶抑制劑，諸如阿庫馬莫德(acumapimod)；IL-17受體調節劑，諸如CNTO-6785；CXCR2趨化激素拮抗劑，諸如達尼立辛(danirixin)；白血球彈性蛋白酶抑制劑，諸如POL-6014；環氧化物水解酶抑制劑，諸如GSK-2256294；HNE抑制劑，諸如CHF-6333；VIP促效劑，諸如阿肽地爾(aviptadil)；磷酸肌醇-3激酶δ/γ抑制劑，諸如RV-1729；補體C3抑制劑，諸如APL-1；及G蛋白偶聯受體-44拮抗劑，諸如AM-211。
活性治療劑之其他非限制性實例亦包括布地奈德、阿地普塞(adipocell)、一氧化氮、PUR-1800、YLP-001、LT-4001、阿奇黴素(azithromycin)、伽木奈克(gamunex)、QBKPN、丙酮酸鈉、MUL-1867、甘露糖醇、MV-130、MEDI-3506、BI-443651、VR-096、OPK-0018、TEV-48107、多索茶鹼(doxofylline)、TEV-46017、OligoG-COPD-5/20、Stempeucel®、ZP-051、離胺酸乙醯水楊酸。
在一些實施例中，其他活性治療劑可為具有抗COPD活性的疫苗，包括(但不限於) MV-130及GSK-2838497A。用於治療登革熱之組合療法
本文所提供之化合物及組合物亦與其他活性治療劑組合使用。對於治療黃病毒科病毒感染，其他活性治療劑較佳具有抗黃病毒科病毒感染，尤其登革熱感染之活性。此等其他活性治療劑之非限制性實例為宿主細胞因子調節劑，諸如GBV-006；芬維A胺(fenretinide) ABX-220、BRM-211；α-葡萄糖苷酶1抑制劑，諸如西戈斯韋(celgosivir)；血小板活化因子受體(PAFR)拮抗劑，諸如莫地帕泛(modipafant)；鈣黏蛋白-5/因子Ia調節劑，諸如FX-06；NS4B抑制劑，諸如JNJ-8359；病毒RNA剪接調節劑，諸如ABX-202；NS5聚合酶抑制劑；NS3蛋白酶抑制劑；及TLR調節劑。
在一些實施例中，其他活性治療劑可為用於治療或預防登革熱之疫苗，包括(但不限於) TetraVax-DV、Dengvaxia ®、DPIV-001、TAK-003、減毒活登革熱疫苗、四價登革熱疫苗、四價DNA疫苗、rDEN2δ30-7169及DENV-1 PIV。用於治療伊波拉之組合療法
本文所提供之化合物及組合物亦與其他活性治療劑組合使用。對於治療絲狀病毒科病毒感染，其他活性治療劑較佳具有抗絲狀病毒科病毒感染，尤其馬堡病毒(Marburg virus)、伊波拉病毒及奎瓦病毒(Cueva virus)感染之活性。此等其他活性治療劑之非限制性實例為：利巴韋林、帕利珠單抗、莫維珠單抗、RSV-IGIV (RespiGam® )、MEDI-557、A-60444、MDT-637、BMS-433771、胺碘酮(amiodarone)、屈奈達隆(dronedarone)、維拉帕米(verapamil)、伊波拉康復者血漿(Ebola Convalescent Plasma；ECP)、TKM-100201、BCX4430 ((2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-5-(羥甲基)吡咯啶-3,4-二醇)、TKM-Ebola、T-705單磷酸酯、T-705二磷酸酯、T-705三磷酸酯、FGI-106 (1-N,7-N-雙[3-(二甲基胺基)丙基]-3,9-二甲基喹啉并[8,7-h]喹啉酮-1,7-二胺)、rNAPc2、OS-2966、布林西多福韋(brincidofovir)、瑞德西韋(remdesivir)；RNA聚合酶抑制劑，諸如加利司韋(galidesivir)、法維拉韋(favipiravir) (亦被稱作T-705或Avigan)、JK-05；宿主細胞因子調節劑，諸如GMV-006；鈣黏蛋白-5/因子Ia調節劑，諸如FX-06；及用於治療伊波拉之抗體，諸如REGN-3470-3471-3479及ZMapp。
具有抗伊波拉活性的其他非限制性活性治療劑包括α-葡萄糖苷酶1抑制劑、組織蛋白酶B抑制劑、CD29拮抗劑、樹突狀ICAM-3撰取非整合素1抑制劑、雌激素受體拮抗劑、因子VII拮抗劑HLA II類抗原調節劑、宿主細胞因子調節劑、干擾素α配體、中性α葡萄糖苷酶AB抑制劑、尼曼-匹克C1蛋白(niemann-Pick C1 protein)抑制劑、核蛋白抑制劑、聚合酶輔因子VP35抑制劑、絲胺酸蛋白酶抑制劑、組織因子抑制劑、TLR-3促效劑、病毒套膜醣蛋白抑制劑及伊波拉病毒進入抑制劑(NPC1抑制劑)。
在一些實施例中，其他活性治療劑可為用於治療或預防伊波拉之疫苗，包括(但不限於) VRC-EBOADC076-00-VP、基於腺病毒之伊波拉疫苗、rVSV-EBOV、rVSVN4CT1-EBOVGP、MVA-BN Filo + Ad26-ZEBOV方案、INO-4212、VRC-EBODNA023-00-VP、VRC-EBOADC069-00-VP、GamEvac-combi疫苗、SRC VB載體、HPIV3/EboGP疫苗、MVA-EBOZ、伊波拉重組醣蛋白疫苗、基於Vaxart腺病毒載體5之伊波拉疫苗、FiloVax疫苗、GOVX-E301及GOVX-E302。
本文所提供之化合物及組合物亦可與胺基磷酸酯嗎啉代寡聚物(PMO)組合使用，該等胺基磷酸酯嗎啉代寡聚物係經設計以藉由與特定RNA序列形成鹼基對雙螺旋體而干擾轉譯過程的合成反義寡核苷酸類似物。PMO之實例包括(但不限於) AVI-7287、AVI-7288、AVI-7537、AVI-7539、AVI-6002及AVI-6003。
本文所提供之化合物及組合物亦意欲與提供給患有絲狀病毒科病毒感染之患者一般護理一起使用，包括非經腸流體(包括右旋糖鹽水及林格氏乳酸鹽)及營養物、抗生素(包括甲硝噠唑(metronidazole)及頭孢菌素抗生素，諸如頭孢曲松(ceftriaxone)及頭孢呋辛(cefuroxime))及/或抗真菌預防物、發熱及止痛藥、抗嘔劑(諸如甲氧氯普胺(metoclopramide))及/或止瀉劑、維生素及礦物質補充劑(包括維生素K及硫酸鋅)、抗發炎劑(諸如布洛芬(ibuprofen))、疼痛藥物及用於患者群體中之其他常見疾病的藥物，諸如抗瘧疾劑(包括蒿甲醚及青蒿琥酯-苯芴醇組合療法)、傷寒(包括喹啉酮抗生素(諸如環丙沙星)、巨環內酯抗生素(諸如阿奇黴素)、頭孢菌素抗生素(諸如頭孢曲松)或胺基青黴素(諸如胺苄西林(ampicillin)))或志賀桿菌病(shigellosis)。VII. 治療病毒感染之方法
本發明提供使用本發明化合物來治療各種疾病之方法，該等疾病諸如呼吸道融合性病毒(RSV)、伊波拉、茲卡、西尼羅、登革熱、HCV及HBV。本發明提供使用式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)之化合物來治療各種疾病之方法，該等疾病諸如呼吸道融合性病毒(RSV)、伊波拉、茲卡、西尼羅、登革熱、HCV及HBV。副黏液病毒科 (Paramyxoviridae )
在一些實施例中，本發明提供用於治療副黏液病毒科感染之方法，其包含向感染副黏液病毒科病毒之個體(例如人類)投與治療有效量之本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。副黏液病毒科病毒包括(但不限於)立百病毒(Nipah virus)及副流感病毒(parainfluenze virus)。肺病毒科
在一些實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之肺病毒科病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。肺病毒科病毒包括(但不限於)呼吸道融合性病毒及人類間質肺炎病毒。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染為呼吸道融合性病毒感染。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染為人類間質肺炎病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之肺病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之肺病毒科病毒感染所用的藥劑。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染為呼吸道融合性病毒感染。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染為人類間質肺炎病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之肺病毒科病毒感染。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染為呼吸道融合性病毒感染。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染為人類間質肺炎病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供用於治療RSV感染之方法，其包含向感染呼吸道融合性病毒之個體(例如人類)投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。通常，個體患有慢性呼吸道融合性病毒感染，但治療急性感染RSV之人係在本發明之範疇內。
在一些實施例中，提供一種抑制RSV複製之方法，其包含向個體(例如人類)投與本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，本發明提供一種降低與RSV感染相關之病毒負荷的方法，其中該方法包含向感染RSV之個體(例如人類)投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該治療有效量足以降低個體中之RSV病毒負荷。
如本文更充分描述，本發明化合物可與一或多種額外治療劑一起向感染RSV之個體(例如人類)投與。額外治療劑可與本發明化合物同時或在投與本發明化合物之前或之後向經感染個體(例如人類)投與。
在一些實施例中，提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療或預防RSV感染。在一些實施例中，提供本發明化合物(例如式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)化合物)或其醫藥學上可接受之鹽，其用於製造供治療或預防RSV感染所用之藥劑。
如本文更充分描述，本發明化合物可與一或多種額外治療劑一起向感染RSV之個體(例如人類)投與。此外，在一些實施例中，當用於治療或預防RSV時，本發明化合物可與一或多種(例如一種、兩種、三種、四種或多於四種)選自由以下組成之群的額外治療劑一起投與：RSV組合藥物、RSV疫苗、RSV DNA聚合酶抑制劑、免疫調節劑、鐸樣受體(TLR)調節劑、干擾素α受體配體、玻尿酸酶抑制劑、呼吸道融合性表面抗原抑制劑、細胞毒性T淋巴細胞相關蛋白4 (ipi4)抑制劑、親環蛋白抑制劑、RSV病毒進入抑制劑、靶向病毒mRNA之反義寡核苷酸、短干擾RNA (siRNA)及ddRNAi、核酸內切酶調節劑、核糖核苷酸還原酶抑制劑、RSV E抗原抑制劑、共價閉合環狀DNA (cccDNA)抑制劑、法尼醇X受體(farnesoid X receptor)促效劑、RSV抗體、CCR2趨化激素拮抗劑、胸腺素促效劑、細胞介素、核蛋白調節劑、視黃酸誘導性基因1刺激劑、NOD2刺激劑、磷脂酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制劑、吲哚胺-2,3-雙加氧酶(IDO)路徑抑制劑、PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑、重組胸腺素α-1、布魯頓氏酪胺酸激酶(bruton's tyrosine kinase；BTK)抑制劑、KDM抑制劑、RSV複製抑制劑、精胺酸酶抑制劑及其他RSV藥物。小核糖核酸病毒科
在一些實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之小核糖核酸病毒科病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。小核糖核酸病毒科病毒為引起異質感染群之腸病毒，該等感染包括疱疹性咽峽炎、無菌性腦膜炎、普通感冒樣症候群(人類鼻病毒感染)、無麻痹性脊髓灰白質炎樣症候群、流行性肋肌痛(一般在流行病中出現的急性、發熱性、感染性疾病)、手足口症候群、兒童及成人胰臟炎及嚴重心肌炎。在一些實施例中，小核糖核酸病毒科病毒感染為人類鼻病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之小核糖核酸病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之小核糖核酸病毒科病毒感染所用的藥劑。在一些實施例中，小核糖核酸病毒科病毒感染為人類鼻病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之小核糖核酸病毒科病毒感染。在一些實施例中，小核糖核酸病毒科病毒感染為人類鼻病毒感染。黃病毒科
在一些實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之黃病毒科病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。代表性黃病毒科病毒包括(但不限於)登革熱、黃熱病、西尼羅、茲卡、日本腦炎病毒、C型肝炎(HCV)及B型肝炎(HBV)。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為登革熱病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為登革熱病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為黃熱病病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為西尼羅病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為茲卡病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為日本腦炎病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為C型肝炎病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為B型肝炎病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之黃病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之黃病毒科病毒感染所用的藥劑。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為登革熱病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為黃熱病病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為西尼羅病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為茲卡病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為C型肝炎病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為B型肝炎病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之黃病毒科病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為登革熱病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為黃熱病病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為西尼羅病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為茲卡病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為C型肝炎病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為B型肝炎病毒感染。絲狀病毒科
在一些實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之絲狀病毒科病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。代表性絲狀病毒科病毒包括(但不限於)伊波拉病毒及馬堡病毒。在一些實施例中，絲狀病毒科病毒感染為伊波拉病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之絲狀病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之絲狀病毒科病毒感染所用的藥劑。在一些實施例中，絲狀病毒科病毒感染為伊波拉病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之絲狀病毒科病毒感染。在一些實施例中，絲狀病毒科病毒感染為伊波拉病毒感染。VIII. 治療或預防由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化的方法
本發明化合物亦可用於治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化。式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)之化合物亦可用於治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化。
在一些實施例中，本發明提供一種治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒或間質肺炎病毒引起。
在一些實施例中，本發明提供一種治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為哮喘。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒、腸病毒或間質肺炎病毒引起。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製造供治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒或間質肺炎病毒引起。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製造供治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為哮喘。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒、腸病毒或間質肺炎病毒引起。
在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療或預防人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化所用的藥劑，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒或間質肺炎病毒引起。
在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療或預防人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化所用的藥劑，其中該呼吸道病況為哮喘。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒、腸病毒或間質肺炎病毒引起。
在一些實施例中，本發明提供本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒或間質肺炎病毒引起。
在一些實施例中，本發明提供本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化，其中該呼吸道病況為哮喘。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒、腸病毒或間質肺炎病毒引起。IX. 實例
縮寫 . 使用某些縮寫及頭字語描述實驗細節。儘管大部分縮寫及頭字語為熟習此項技術者理解，但表2含有許多此等縮寫及頭字語之清單。表 2. 縮寫及頭字語之清單 .
縮寫 含義
Ac 乙酸鹽
ACN 乙腈
AIBN 偶氮二異丁腈
Bn 苯甲基
Bu 丁基
Bz 苯甲醯基
BzCl 苯甲醯氯
CDI 1,1'-羰基二咪唑
DAST 三氟化二乙基胺基硫
DCE 1,2-二氯乙烷
DCM 二氯甲烷
DMAP 4-二甲基胺基吡啶
DMDO 二甲基二氧環丙烷
DMSO 二甲亞碸
DMF 二甲基甲醯胺
DMTrCl 4,4'-二甲氧基三苯甲基氯
DMTr 4,4'-二甲氧基三苯甲基
EDCI N -(3-二甲基胺基丙基)-N '-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽
Et 乙基
Imid 咪唑
KOtBu 三級丁醇鉀
LC 液相層析法
MCPBA 間氯過苯甲酸
Me 甲基
m/z 質荷比
MS或ms 質譜
NIS N -碘丁二醯亞胺
NMP N -甲基-2-吡咯啶酮
Ph 苯基
Ph3 P 三苯膦
PMB 對甲氧基苯甲基
PMBCl 對甲氧基苯甲基氯
PhOC(S)Cl 氯硫代甲酸苯酯
(PhO)3 PMeI 碘化甲基三苯氧基鏻
Pyr 吡啶
RT 室溫
TBAF 氟化四丁銨
TBS 三級丁基二甲基矽基
TBSCl 氯化三級丁基二甲基矽烷
TMSN3 疊氮化三甲基矽烷
TEA 三乙胺
TES 三乙基矽烷
TFA 三氟乙酸
THF 四氫呋喃
TMS 三甲基矽基
TMSCl 氯化三甲基矽烷
Ts 4-甲苯磺醯基
TsOH 對甲苯磺酸
δ 參考殘餘非氘化溶劑峰之百萬分率
使用「P* 」標記之化合物結構係指其中未指定彼位置之特定立體化學的(R)-或(S)-異構體。A. 中間物 中間物 1. 乙酸 ((3aS,4S,6S,6aS)-6-(4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2,2- 二甲基 -4-(((( 三氟甲基 ) 磺醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲酯
Figure 02_image133
向(7-((3aS,4S,6aS)-6,6-雙9羥甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d ][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)吡咯并[2,1-f ][1,2,4]三𠯤-4-基)胺基甲酸三級丁酯(WO2015069939；100 mg，0.229 mmol)及諾維信-435 (Novozyme-435) (50 mg，50% w/w)於無水四氫呋喃(1 mL)中之溶液中添加乙酸乙烯酯(0.03 mL，0.321 mmol)，且在45℃下攪拌反應混合物7 h。過濾反應混合物且用THF反覆地洗滌酶。濃縮合併之濾液，且所獲得殘餘物藉由矽膠層析(30-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.46 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 6.88 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 5.39 (d,J = 4.9 Hz, 1H), 5.17 (dd,J = 6.1, 4.9 Hz, 1H), 4.78 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 4.03 (q,J = 11.2 Hz, 2H), 3.63 (s, 2H), 1.96 (s, 3H), 1.50 (d,J = 3.0 Hz, 12H), 1.29 (s, 3H)。LCMS：MSm/z = 478.92 [M+1]；tR = 0.96 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。中間物 2. 乙酸 ((3aS,4S,6S,6aS)-6-(4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2,2- 二甲基 -4-(((( 三氟甲基 ) 磺醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲酯
Figure 02_image135
在0℃下向三氟甲烷磺酸酐於二氯甲烷中之溶液(1 M，1.46 mL，1.46 mmol)中添加中間物1 (350 mg，0.731 mmol)及吡啶(0.300 mL，3.66 mmol)於二氯甲烷(3.67 mL)中之溶液。20 min後，用水(5 mL)稀釋反應混合物，且用二氯甲烷(2 × 5 mL)萃取所得混合物。合併之有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。所得粗化合物直接用於下一步驟中。LCMS：MSm/z = 610.79 [M+1]，tR = 1.51 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。中間物 3. 乙酸 ((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-4-( 氟甲基 )-2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲酯
Figure 02_image137
在室溫下將氟化四丁銨於四氫呋喃中之溶液(1 M，2.87 mL，2.87 mmol)添加至粗中間物2 (350 mg，0.573 mmol)於四氫呋喃(3 mL)中之溶液中。4 h後，將反應混合物用乙酸乙酯(5 mL)稀釋且用水(2 × 5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0­-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到化合物。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 8.12 (br s, 1H), 7.18 (d,J = 4.7 Hz, 1H), 6.89 (d,J = 4.7 Hz, 1H), 5.55 (d,J = 4.4 Hz, 1H), 5.29 (dd,J = 6.5, 4.5 Hz, 1H), 4.96 (d,J = 6.4 Hz, 1H), 4.77 - 4.68 (m, 1H), 4.65 - 4.56 (m, 1H), 4.24 - 4.13 (m, 2H), 2.02 (s, 3H), 1.58 (br s, 12H), 1.37 (s, 3H)。LCMS：MSm/z = 480.97 [M+1]，tR = 1.39 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：tR = 3.04 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。中間物 4. ((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-4-( 氟甲基 )-2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲醇
Figure 02_image139
將中間物3 (189 mg，0.393 mmol)於水(0.6 mL)及二㗁烷(2.4 mL)中之溶液加熱至100℃。4 h後，減壓濃縮所得混合物。將粗殘餘物溶解於甲醇(2 mL)中，且在室溫下將1 N碳酸鉀溶液(1 mL)添加至混合物中。1.25 h後，減壓濃縮反應混合物，且粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到化合物。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.79 (s, 1H), 6.86 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 5.36 (d,J = 5.7 Hz, 1H), 5.24 (t,J = 5.9 Hz, 1H), 4.99 (d,J = 6.3 Hz, 1H), 4.71 (dd,J = 31.9, 10.0 Hz, 1H), 4.59 (dd,J = 33.4, 10.0 Hz, 1H), 3.73 (dd,J = 11.5, 1.6 Hz, 1H), 3.64 (dd,J = 11.5, 2.2 Hz, 1H), 1.58 (s, 3H), 1.35 (s, 3H)。LCMS：MSm/z = 339.24 [M+1]，tR = 1.02 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：tR = 1.94 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。中間物 5. (2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-2-( 羥甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二醇
Figure 02_image141
在室溫下將濃鹽酸水溶液(12 N，0.172 mL，2.07 mmol)添加至中間物4 (50 mg，0.148 mmol)於乙腈(1 mL)中之溶液中。45 min後，所得混合物用2 N氫氧化鈉水溶液中和，藉由製備型HPLC (Gemeni C18 5μm 110Å 100 × 30 mm管柱，5-100%乙腈/水梯度)純化，得到化合物。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.78 (s, 1H), 6.87 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.75 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 5.21 (d,J = 8.9 Hz, 1H), 4.80 - 4.74 (m, 1.5H), 4.65 (dd,J = 9.9, 6.1 Hz, 1H), 4.52 (d,J = 9.9 Hz, 0.5H), 4.32 (d,J = 5.4 Hz, 1H), 3.71 (t,J = 1.9 Hz, 2H)。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -237.67 (t,J = 47.7 Hz)。LCMS：MSm/z = 299.20 [M+1]，tR = 0.48 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：tR = 1.10 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：tR = 2.05 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。中間物 6. ((S)-(((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 乙基丁酯
Figure 02_image143
在室溫下將四氫呋喃(18.75 mL)添加至中間物4 (1.5 g，4.433 mmol)、中間物B1 (J. Med.Chem.2017 ,60 (5), 第1648-1661頁；2.197 g，4.877 mmol)及氯化鎂(0.633 g，6.65 mmol)之混合物中，接著添加N ,N -二異丙基乙胺(1.931 mL，11.08 mmol)。在50℃下2 h後，用乙酸乙酯(400 mL)稀釋反應混合物，且用水(2×100 mL)及鹽水(200 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-20%甲醇/二氯甲烷溶離，得到中間物。LCMS：MSm/z = 650.28 [M+1]，tR = 1.74 min；LC系統：Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.6 min 2-100%乙腈，1.6 min-1.8 min 100%乙腈，1.80 min-1.90 min 100%-2%乙腈，1.90 min-2.20 min 2%乙腈，1100 µl/min。B. 化合物 實例 1. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 乙基丁酯
Figure 02_image145
在室溫下將乙腈(0.4 mL)添加至中間物4 (27 mg，0.080 mmol)、中間物B1 (J. Med.Chem.2017 ,60 (5), 第1648-1661頁；36 mg，0.080 mmol)及氯化鎂(8 mg，0.08 mmol)之混合物中。將混合物加熱至50℃後保持10 min，且添加N ,N -二異丙基乙胺(0.035 mL，0.20 mmol)。5 h後，將反應混合物冷卻至室溫，且逐滴添加濃鹽酸水溶液(0.093 mL)。30 min後，用乙酸乙酯(20 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.79 (s, 1H), 7.40 - 7.31 (m, 2H), 7.26 - 7.14 (m, 3H), 6.85 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 5.36 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 4.80 - 4.70 (m, 1H), 4.70 - 4.58 (m, 2H), 4.33 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.21 (dd,J = 5.7, 1.7 Hz, 2H), 4.07 - 3.87 (m, 3H), 1.48 (app p,J = 6.2 Hz, 1H), 1.39 - 1.27 (m, 7H), 0.86 (t,J = 7.5 Hz, 6H)。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.79 (t,J = 47.7 Hz)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.53。LCMS：MSm/z = 610.32 [M+1]，tR = 1.22 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：tR = 3.03 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：tR = 5.11 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 2. ((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲基三磷酸鈉
Figure 02_image147
在0℃下向中間物5 (10 mg，0.034 mmol)於PO(OMe)3 (0.5 mL)中之溶液中添加NaHCO3 (10 mg，0.12 mmol)及POCl3 (0.03 mL，0.33 mmol)。在0℃下攪拌反應混合物4 h，此時添加焦磷酸三丁銨(250 mg，0.46 mmol)於ACN (0.5 mL)中之溶液，接著添加三丁胺(0.14 mL，0.59 mmol)。在0℃下攪拌反應混合物且藉由離子交換HPLC監測。1 h後，用碳酸氫三乙銨緩衝液(1 M，8 mL)淬滅反應物。在室溫下攪拌反應混合物0.5 h，接著濃縮，且與水共蒸發兩次。將殘餘物溶解於水(2 mL)中且添加NaHCO3 (400 mg)。濃縮所得混合物。將殘餘物溶解於水(約2 mL)中，且裝載至C-18管柱，用水溶離。合併含有產物之溶離份，用HCl (1 N，150 μL)酸化且濃縮至約4 mL體積，裝載至離子交換管柱，用水溶離，接著用10-40%碳酸氫三乙銨緩衝液(1 M)-H2 O溶離。合併含有產物之溶離份且濃縮。將殘餘物溶解於水(1 mL)中且添加NaOH (1 N，0.1 mL)。將所得混合物濃縮至約0.2 mL體積，且藉由C-18管柱純化，用水溶離。合併含有產物之溶離份且濃縮，得到產物。1 H NMR (400 MHz, 水-d2 ) δ 7.88 (s, 1H), 7.06 (d,J = 4.7 Hz, 1H), 6.96 (d,J = 4.7 Hz, 1H), 5.46 (d,J = 9.2 Hz, 1H), 4.94 - 4.84 (m, 2H), 4.82 - 4.75 (m, 1H), 4.72 (d,J = 5.3 Hz, 1H), 4.13 (dd,J = 10.8, 5.8 Hz, 1H), 3.96 (dd,J = 10.6, 5.1 Hz, 1H)。31 P NMR (162 MHz, 水-d2 ) δ -5.74 (d,J = 19.7 Hz), -11.10 (d,J = 19.4 Hz), -21.68 (t,J = 19.7 Hz)。LCMS：MSm/z = 538.88 [M+1]，tR = 0.45 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µl/min。離子交換HPLC：tR = 10.303 min；離子交換0-80 Milli-Q水/0.5 M TEAB，14 min梯度；1 mL/min。實例 3. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸新戊酯
Figure 02_image149
( 三級丁氧基羰基 )-L - 丙胺酸新戊酯 . 將(三級丁氧基羰基)-L -丙胺酸(20.61 g，0.109 mol)溶解於乙腈(100 mL)中，且添加2,2-二甲基丙-1-醇(8 g，0.091 mol)，接著添加EDCI (18.32 g，0.118 mol)及DMAP (16.63 g，0.136 mol)。在室溫下攪拌反應物4 h。用二氯甲烷及水稀釋反應物。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。藉由矽膠層析(0-25%乙酸乙酯/己烷)進行純化，得到中間物D1 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.27 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 4.00 (p,J = 7.4 Hz, 1H), 3.79 (d,J = 10.5 Hz, 1H), 3.64 (d,J = 10.5 Hz, 1H), 1.35 (s, 9H), 1.23 (d,J = 7.4 Hz, 3H), 0.87 (s, 9H)。
Figure 02_image151
氯化 (S)-1-( 新戊氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 銨 . 將(三級丁氧基羰基)-L -丙胺酸新戊酯(17.45 g，0.067 mol)溶解於無水二氯甲烷(175 mL)及含4 N HCl之二㗁烷(84.11 mL，0.336 mol)中。在環境溫度下攪拌反應物4 h。減壓濃縮反應物，且與二氯甲烷共蒸發。將所得殘餘物在高真空下放置隔夜，得到中間物D2 ，其不經純化按原樣用於下一步驟。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.60 (s, 3H), 4.08 (q,J = 7.2 Hz, 1H), 3.90 (d,J = 10.4 Hz, 1H), 3.78 (d,J = 10.4 Hz, 1H), 1.43 (d,J = 7.2 Hz, 3H), 0.90 (s, 9H)。
Figure 02_image153
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸新戊酯 . 在氬氣氛圍下在0℃下，向中間物D2 (13.15 g，67.2 mmol)及二氯磷酸苯酯(10 mL，67.2 mmol)於無水二氯甲烷(227 mL)中之溶液中添加三乙胺(20.78 mL，147.84 mmol)。在0℃下攪拌所得混合物1 h。接著添加4-硝基苯酚(9.348 g，67.2 mmol)及三乙胺(10.39 mL，73.92 mmol)。在0℃下攪拌1 h後，用Et2 O稀釋反應混合物，且濾出固體。減壓濃縮粗產物，且藉由矽膠層析(80 g SiO2 Combiflash HP Gold管柱，100%二氯甲烷，接著0-45%乙酸乙酯/己烷)純化，得到呈非對映異構混合物之所要化合物(19 g，64.79%，非對映異構混合物)。將所獲得化合物高真空乾燥，使得部分固化。將二異丙基醚添加至部分固化之物質中且用超音波處理，得到精細固體。藉由過濾分離固體。用二異丙基醚進行另一輪超音波處理且過濾，得到中間物D3 。藉由NMR光譜確定中間物D3為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 8.31 - 8.23 (m, 2H), 7.52 - 7.43 (m, 2H), 7.38 (dd,J = 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.28 - 7.18 (m, 3H), 4.09 (dq,J = 9.8, 7.2 Hz, 1H), 3.83 - 3.72 (m, 2H), 1.34 (dd,J = 7.2, 1.2 Hz, 3H), 0.91 (s, 9H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ -1.32 (s)。LCMS：MSm/z = 436.85 [M+1]；tR = 1.67 min ；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image155
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸新戊酯 . 在室溫下向中間物4 (0.015 g，0.044 mmol)、中間物D3 (0.021 g，0.049 mmol)及氯化鎂(0.006 g，0.067 mmol)之混合物中添加四氫呋喃(0.5 mL)，接著添加N,N -二異丙基乙胺(0.019 mL，0.111 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物1.5 h。接著減壓濃縮反應混合物，且用飽和氯化鈉溶液及乙酸乙酯稀釋所獲得殘餘物。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。將所獲得殘餘物溶解於無水乙腈(0.5 mL)中且在冰浴中冷卻，接著逐滴添加濃鹽酸(0.088 mL，1.058 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1 h。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用3 N氫氧化鈉水溶液中和。所得混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，15%-85%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.78 (s, 1H), 7.34 (dd, J = 8.6, 7.1 Hz, 2H), 7.27 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.35 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.81 - 4.55 (m, 3H), 4.33 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.24 - 4.17 (m, 2H), 4.02 - 3.86 (m, 1H), 3.83 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 3.73 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 1.33 (dd, J = 7.1, 1.0 Hz, 3H), 0.91 (s, 9H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.54。LCMS：MSm/z = 596.10 [M+1]；tR = 1.16 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µl/min。HPLC：tR = 4.848 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 4. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 3,3- 二甲基丁酯
Figure 02_image157
( 三級丁氧基羰基 )-L - 丙胺酸 3,3- 二甲基丁酯 . 將(三級丁氧基羰基)-L -丙胺酸(22.38 g，0.118 mol)溶解於乙腈(100 mL)中，且添加3,3-二甲基丁-1-醇(10.07 g，0.099 mol)，接著一次性添加EDCI (19.89 g，0.128 mol)及DMAP (18.06 g，0.148 mol)。在室溫下攪拌反應物4 h。用二氯甲烷及水稀釋反應物。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。藉由矽膠層析(0-25%乙酸乙酯/己烷)進行純化，得到中間物E1 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.22 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 4.13 - 3.82 (m, 3H), 1.47 (t,J = 7.2 Hz, 2H), 1.35 (s, 9H), 1.19 (d,J = 7.3 Hz, 3H), 0.88 (s, 9H)。
Figure 02_image159
氯化 (S)-1-(3,3- 二甲基丁氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 銨 . 將中間物E1 (20.9 g，0.076 mol)溶解於無水二氯甲烷(200 mL)及含4 N HCl之二㗁烷(95.57 mL，0.382 mol)中。在環境溫度下攪拌反應物4 h。減壓濃縮反應物，且與二氯甲烷共蒸發。將所得殘餘物在高真空下放置隔夜，且中間物E2 不經純化按原樣用於下一步驟。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.67 (s, 3H), 4.32 - 4.07 (m, 2H), 3.97 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 1.52 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.39 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 0.89 (s, 9H)。
Figure 02_image161
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸 3,3- 二甲基丁酯 . 在氬氣氛圍下在0℃下，向中間物E2 (15.93 g，75.96 mmol)及二氯磷酸苯酯(11.3 mL，75.96 mmol)於無水二氯甲烷(300 mL)中之溶液中添加三乙胺(23.5 mL，167.1 mmol)。在0℃下攪拌所得混合物1 h。接著添加4-硝基苯酚(10.57 g，75.96 mmol)及三乙胺(11.74 mL，83.56 mmol)。在0℃下攪拌1 h後，用Et2 O稀釋反應混合物，且濾出固體。將粗產物減壓濃縮，且藉由矽膠層析(80 g SiO2 Combiflash HP Gold管柱，100%二氯甲烷，接著0-35%乙酸乙酯/己烷)純化，得到呈非對映異構混合物之中間物E3 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.28 (d,J = 9.1 Hz, 2H), 7.53 - 7.34 (m, 4H), 7.30 - 7.16 (m, 3H), 6.66 (td,J = 13.2, 10.0 Hz, 1H), 4.06 - 3.88 (m, 3H), 1.40 - 1.29 (m, 2H), 1.24 - 1.11 (m, 3H), 0.83 (s, 9H)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ -1.26, -1.57。LCMS：MSm/z = 450.96 [M+1]；tR = 1.71 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image163
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 3,3- 二甲基丁酯 . 在室溫下向中間物4 (0.015 g，0.044 mmol)、中間物E3 (0.022 g，0.049 mmol)及氯化鎂(0.006 g，0.067 mmol)之混合物中添加四氫呋喃(0.5 mL)，接著添加N,N -二異丙基乙胺(0.019 mL，0.111 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物1.5 h。接著減壓濃縮反應混合物，且用飽和氯化鈉溶液及乙酸乙酯稀釋所獲得殘餘物。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。將所獲得殘餘物溶解於無水乙腈(0.5 mL)中且在冰浴中冷卻，接著逐滴添加濃鹽酸(0.088 mL，1.058 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1 h。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用3 N氫氧化鈉水溶液中和。所得混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，15%-85%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到產物。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.78 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 7.39 - 7.28 (m, 2H), 7.28 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (dd,J = 5.7, 4.5 Hz, 1H), 6.75 (dd,J = 8.7, 4.5 Hz, 1H), 5.37 (dd,J = 8.2, 6.2 Hz, 1H), 4.83 - 4.53 (m, 3H), 4.36 (dd,J = 18.1, 5.2 Hz, 1H), 4.30 - 4.04 (m, 4H), 3.96 - 3.81 (m, 1H), 1.51 (td,J = 7.5, 2.2 Hz, 2H), 1.27 (ddd,J = 19.5, 7.1, 1.1 Hz, 3H), 0.90 (d,J = 1.9 Hz, 9H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.7, 3.51。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.40 - -238.89 (m)。LCMS：MSm/z = 610.05 [M+1]；tR = 1.20 min (次要異構體)，1.22 min (主要異構體)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µl/min。HPLC：tR = 5.024 min (次要異構體)，5.1 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
S p 及 R p 非對映異構體之解析 . 非對映異構體藉由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA 5 µm，21×250 mm；100%乙醇)彼此分離：
Figure 02_image165
實例 5. 實例4之第一溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.78 (s, 1H), 7.32 (t,J = 7.9 Hz, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.86 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 6.75 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 5.37 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 4.83 - 4.71 (m, 1H), 4.71 - 4.59 (m, 2H), 4.38 (d,J = 5.3 Hz, 1H), 4.26 (dd,J = 5.1, 1.7 Hz, 2H), 4.16 - 4.07 (m, 2H), 3.93 - 3.74 (m, 1H), 1.56 - 1.47 (m, 2H), 1.24 (dd,J = 7.2, 1.2 Hz, 3H), 0.90 (s, 9H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.73。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.61 (t,J = 47.7 Hz)。LCMS：MSm/z = 610.13 [M+1]；tR = 1.20 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µl/min。HPLC：tR = 4.996 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 6. 實例4之第二溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.79 (s, 1H), 7.35 (dd,J = 8.6, 7.1 Hz, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 6.84 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 6.73 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 5.36 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 4.82 - 4.56 (m, 3H), 4.33 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.24 - 4.04 (m, 4H), 3.94 - 3.80 (m, 1H), 1.50 (t,J = 7.4 Hz, 2H), 1.29 (dd,J = 7.1, 1.0 Hz, 3H), 0.90 (s, 9H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.51。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.84 (t,J = 47.7 Hz)。LCMS：MSm/z = 610.14 [M+1]；tR = 1.21 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：tR = 5.079 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 7. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2,2- 二甲基丁酯
Figure 02_image167
( 三級丁氧基羰基 )-L - 丙胺酸 2,2- 二甲基丁酯 . 將(三級丁氧基羰基)-L -丙胺酸(11.11 g，0.059 mol)溶解於乙腈(60 mL)中，且添加2,2-二甲基丁-1-醇(5.0 g，0.049 mol)，接著添加EDCI (9.876 g，0.064 mol)及DMAP (8.967 g，0.073 mol)。在室溫下攪拌反應物4 h。用二氯甲烷及水稀釋反應物。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。使用矽膠層析(0-20%乙酸乙酯/己烷)進行純化，得到中間物H1 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.26 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 3.99 (p,J = 7.4 Hz, 1H), 3.81 (d,J = 10.6 Hz, 1H), 3.66 (d,J = 10.6 Hz, 1H), 1.35 (s, 9H), 1. 23 (m, 5H), 0.84 - 0.72 (m, 9H)。
Figure 02_image169
氯化 (S)-1-(2,2- 二甲基丁氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 銨 . 將中間物H1 (10.34 g，0.038 mol)溶解於無水二氯甲烷(100 mL)及含4 N HCl之二㗁烷(47.28 mL，0.189 mol)中。在環境溫度下攪拌反應物4 h。減壓濃縮反應物，且與二氯甲烷共蒸發。將殘餘物在高真空下放置隔夜，且中間物H2不經純化按原樣用於下一步驟。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.65 (s, 3H), 4.05 (q,J = 7.2 Hz, 1H), 3.91 (d,J = 10.6 Hz, 1H), 3.79 (d,J = 10.6 Hz, 1H), 1.42 (d,J = 7.2 Hz, 3H), 1.26 (q,J = 7.6 Hz, 2H), 0.87 - 0.73 (m, 9H)。
Figure 02_image171
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸 2,2- 二甲基丁酯 . 在氬氣氛圍下在0℃下，向中間物H2 (7.9 g，37.67 mmol)及二氯磷酸苯酯(5.605 mL，37.67 mmol)於無水二氯甲烷(150 mL)中之溶液中添加三乙胺(11.64 mL，82.87 mmol)。在0℃下攪拌所得混合物1 h。接著添加4-硝基苯酚(5.24 g，37.67 mmol)及三乙胺(5.82 mL，41.43 mmol)。在0℃下攪拌1 h後，用Et2 O稀釋反應混合物，且濾出固體。將粗產物減壓濃縮，且藉由矽膠層析(80 g SiO2 Combiflash HP Gold管柱，100%二氯甲烷，接著0-35%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物H3。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 8.32 - 8.23 (m, 2H), 7.52 - 7.34 (m, 4H), 7.31 - 7.18 (m, 3H), 4.15 - 4.02 (m, 1H), 3.86 - 3.74 (m, 2H), 1.39 - 1.28 (m, 3H), 1.32 - 1.19 (m, 2H), 0.89 - 0.76 (m, 9H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ -1.35, -1.57。LCMS：MSm/z = 450.94 [M+1]；tR = 1.71 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image173
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2,2- 二甲基丁酯 . 在室溫下向中間物4 (0.015 g，0.044 mmol)、中間物H3 (0.022 g，0.049 mmol)及氯化鎂(0.006 g，0.067 mmol)之混合物中添加四氫呋喃(0.5 mL)，接著添加N,N -二異丙基乙胺(0.019 mL，0.111 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物1.5 h。接著減壓濃縮反應混合物，且用飽和氯化鈉溶液及乙酸乙酯稀釋所獲得殘餘物。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。將所獲得殘餘物溶解於無水乙腈(0.5 mL)中且在冰浴中冷卻，接著逐滴添加濃鹽酸(0.088 mL，1.058 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1 h。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用3 N氫氧化鈉水溶液中和。所得混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，15%-85%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到產物。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.78 (d,J = 1.4 Hz, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 7.27 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (dd,J = 5.8, 4.5 Hz, 1H), 6.74 (dd,J = 9.9, 4.5 Hz, 1H), 5.37 (dd,J = 8.2, 6.7 Hz, 1H), 4.83 - 4.53 (m, 3H), 4.36 (dd,J = 16.6, 5.3 Hz, 1H), 4.24 (ddd,J = 21.2, 5.7, 1.8 Hz, 2H), 4.01 - 3.72 (m, 3H), 1.36 - 1.24 (m, 5H), 0.90 - 0.77 (m, 9H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.72, 3.54。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.38 - -238.82 (m)。LCMS：MSm/z = 610.05 [M+1]；tR = 1.32 min (次要異構體)，1.33 min (主要異構體)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：tR = 5.021 min (次要異構體)，5.093 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 . 非對映異構體藉由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA 5 µm，21×250 mm；100%乙醇)彼此分離。
Figure 02_image175
實例 8. 實例 7 之第一溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.78 (s, 1H), 7.32 (t,J = 7.8 Hz, 2H), 7.19 (m,3H), 6.86 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.75 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 5.37 (d,J = 8.2 Hz, 1H), 4.81 - 4.56 (m, 3H), 4.37 (d,J = 5.3 Hz, 1H), 4.26 (d,J = 4.9 Hz, 2H), 3.99 - 3.66 (m, 3H), 1.36 - 1.19 (m, 5H), 0.87 (s, 6H), 0.82 (t,J = 7.6 Hz, 3H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.72。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.59 (t,J = 47.7 Hz)。LCMS：MSm/z = 610.11 [M+1]；tR = 1.21 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µl/min。HPLC：tR = 5.007 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 9. 實例 7 之第二溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.79 (s, 1H), 7.34 (t,J = 7.9 Hz, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 6.84 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 5.35 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 4.81 - 4.55 (m, 3H), 4.33 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.21 (d,J = 5.8 Hz, 2H), 3.94 (dd,J = 9.9, 7.1 Hz, 1H), 3.85 (d,J = 10.7 Hz, 1H), 3.76 (d,J = 10.6 Hz, 1H), 1.36 - 1.24 (m, 5H), 0.89 - 0.77 (m, 9H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.54。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.76 (t,J = 47.7 Hz)。LCMS：MSm/z = 610.14 [M+1]；tR = 1.22 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：tR = 5.085 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 10. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸甲酯
Figure 02_image177
(( 全氟苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸甲酯 . 將L-丙胺酸甲酯鹽酸鹽(14 g，100 mmol)與50 mL無水DCM混合，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將二氯磷酸苯酯(16.4 mL，110 mmol)逐滴添加至反應物中，且攪拌反應混合物30 min。將三乙胺(29.4 mL，210 mmol)與20 mL無水DCM混合且逐滴添加至反應物中。攪拌反應物1小時。一次性添加五氟苯酚(18.4 g，100 mmol)。將三乙胺(14.7 mL，105 mmol)與30 mL無水DCM混合且逐滴添加至反應物中。在RT下攪拌反應混合物16小時。反應物用DCM (50 mL)稀釋且用水(5×10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥，且接著減壓濃縮，得到固體。將異丙基醚(130 mL)添加至固體中。將大塊固體分解，且接著用超音波處理20 min，之後攪拌混合物24小時。收集固體且用少量異丙基醚(30 mL)洗滌，並且高真空乾燥，得到中間物K1。藉由NMR光譜確定中間物K1為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 7.40 - 7.32 (m, 2H), 7.28 - 7.19 (m, 3H), 4.20 (m, 1H), 3.96 - 3.85 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 1.47 (d,J = 7.1 Hz, 3H)。31 P NMR (162 MHz, 氯仿-d ) δ -1.62。19 F NMR (376 MHz, 氯仿-d ) δ -153.82 (dd,J = 18.5, 2.7 Hz), - 159.99 (td,J = 21.8, 3.8 Hz), -162.65 (dd,J = 22.2, 17.6 Hz)。LCMS：MSm/z = 425.9 [M+1]，423.9 [M-1]，tR = 1.68 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：tR = 3.76 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。
Figure 02_image179
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸甲酯 . 將中間物4 (56 mg，0.165 mmol)及中間物K1 (74 mg，0.174 mmol)混合且溶解於5 mL無水THF中。一次性添加氯化鎂(47 mg，0.495 mmol)。添加DIPEA (72 μL，0.414 mmol)，且在45℃下攪拌反應物20小時。添加更多中間物K1 (74 mg，0.174 mmol)，且在45℃下攪拌反應物8小時。接著在室溫下攪拌反應物16小時。反應物用EtOAc (10 mL)稀釋，且用水(3×5 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO2 管柱層析(4 g SiO2 Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化。合併溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於ACN (5 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃鹽酸水溶液(250 µL)。在冰浴中攪拌反應物1小時。移除冰浴，且在室溫下攪拌反應物1小時。用EtOAc (15 mL)稀釋反應物，且添加飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)。攪拌混合物10 min。收集有機萃取物且用鹽水(10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由C18管柱層析(Phenomenex Gemini管柱，5-95% ACN/水)純化。合併溶離份且冷凍乾燥，得到產物。藉由NMR光譜確定該產物為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.79 (s, 1H), 7.38 - 7.30 (m, 2H), 7.26 - 7.15 (m, 3H), 6.85 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 5.36 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.81 - 4.57 (m, 3H), 4.34 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.20 (dt,J = 5.7, 1.9 Hz, 2H), 3.91 (dq,J = 10.0, 7.1 Hz, 1H), 3.65 (s, 3H), 1.29 (dd,J = 7.1, 1.1 Hz,3H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.49。LCMS：MSm/z = 540.0 [M+1]，538.2 [M-1]，tR = 1.14 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：tR = 2.23 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：tR = 3.770 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 11. 雙 (2- 甲基丙酸 ) (2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-2-((((((S)-1- 甲氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二酯
Figure 02_image181
將實例10 (13 mg，0.024 mmol)溶解於2 mL無水THF中且在RT下攪拌。添加異丁酸酐(8 μL，0.048 mmol)及DMAP (0.3 mg，0.0024 mmol)，且攪拌反應物30 min。添加更多異丁酸酐(4 μL，0.024 mmol)，且攪拌反應物30 min。反應物接著用EtOAc (10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2×5 mL)、接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且接著減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO2 管柱層析(4 g SiO2 Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/DCM)純化。合併溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於ACN中，用水稀釋且冷凍乾燥，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.79 (s, 1H), 7.38 - 7.13 (m, 5H), 6.79 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.61 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 5.88 - 5.77 (m, 2H), 5.60 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 4.79 - 4.52 (m, 2H), 4.39 - 4.21 (m, 2H), 3.96 (dq,J = 10.2, 7.1 Hz, 1H), 3.66 (s, 3H), 2.68 (p,J = 7.0 Hz, 1H), 2.46 (p,J = 7.0 Hz, 1H), 1.31 (dd,J = 7.1, 1.0 Hz, 3H), 1.22 (dd,J = 7.0, 1.1 Hz, 6H), 1.07 (d,J = 7.0 Hz, 3H), 1.03 (d,J = 7.0 Hz, 3H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.38。LCMS：MSm/z = 680.2 [M+1]，678.3 [M-1]，tR = 1.60 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：tR = 3.17 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：tR = 5.460 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 12. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸異丙酯
Figure 02_image183
在室溫下將四氫呋喃(1 mL)添加至中間物4 (200 mg，0.591 mmol)、中間物M1 (J.Org.Chem. 2011 ,76 (20), 第8311-8319頁；322 mg，0.709 mmol)及氯化鎂(84 mg，0.887 mmol)之混合物中。將混合物加熱至40℃後保持10 min，且添加N,N -二異丙基乙胺(0.257 mL，1.478 mmol)。在40℃下攪拌2小時後，將反應混合物冷卻至室溫，且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙酸乙酯(20 mL)中，且用水(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。分離有機層，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙腈(7 mL)中，且在0℃下逐滴添加濃鹽酸水溶液(0.493 mL)。在0℃下2小時後，在0℃下用乙酸乙酯(30 mL)及水(20 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.71 (bs, 2H), 7.43 - 7.30 (m, 2H), 7.25 - 7.15 (m, 3H), 6.84 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.68 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.04 (dd,J = 13.2, 10.1 Hz, 1H), 5.29 - 5.22 (m, 2H), 5.14 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 4.86 (七重峰,J = 6.2 Hz, 1H), 4.70 - 4.58 (m, 1H), 4.57 - 4.44 (m, 2H), 4.20 (t,J = 4.8 Hz, 1H), 4.05 - 3.91 (m, 2H), 3.85 - 3.68 (m, 1H), 1.21 (d,J = 7.0 Hz, 3H), 1.15 (dd,J = 6.3, 2.8 Hz, 6H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -236.69 (t,J = 48.1 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.51。LCMS：MSm/z = 568.15 [M+1]，tR = 1.19 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µL/min。HPLC：tR = 2.55 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：tR = 4.32 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 13. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸乙酯
Figure 02_image185
在室溫下將四氫呋喃(4 mL)添加至中間物4 (200 mg，0.591 mmol)、中間物N1 (WO2012075140；415 mg，0.946 mmol)及氯化鎂(84 mg，0.887 mmol)之混合物中。將混合物加熱至40℃後保持10 min，且添加N,N -二異丙基乙胺(0.257 mL，1.478 mmol)。在40℃下攪拌2小時後，將反應混合物冷卻至室溫，且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙酸乙酯(20 mL)中，且用水(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。分離有機層，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙腈(3 mL)中，且在0℃下逐滴添加濃鹽酸水溶液(0.514 mL)。在0℃下2小時後，在0℃下用乙酸乙酯(30 mL)及水(20 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.71 (bs, 2H), 7.45 - 7.33 (m, 2H), 7.31 - 7.09 (m, 3H), 6.84 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.68 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.08 (dd,J = 13.3, 10.1 Hz, 1H), 5.32 - 5.22 (m, 2H), 5.14 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 4.70 - 4.44 (m, 3H), 4.19 (t,J = 4.8 Hz, 1H), 4.11 - 3.94 (m, 4H), 3.88 - 3.74 (m, 1H), 1.22 (d,J = 6.7 Hz, 3H), 1.15 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -236.69 (t,J = 48.0 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.46。LCMS：MSm/z = 554.11 [M+1]，tR = 1.13 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µl/min。HPLC：tR = 2.42 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：tR = 4.05 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 14. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸環己酯
Figure 02_image187
氯化 (S)-1-( 環己氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 銨 . 向L -丙胺酸(20.0 g，224.48 mmol)及環己醇(213.6 g，2132.6 mmol)之混合物中添加氯化三甲基矽烷(76.56 mL，695.9 mmol)。在80℃下攪拌反應物隔夜。濃縮反應物，且所獲得殘餘物與甲苯(2×100 mL)共蒸發，接著與己烷(500 mL)共蒸發。將所獲得殘餘物高真空乾燥15 min，且在攪拌的同時緩慢添加己烷。在室溫下攪拌混合物30 min，且藉由過濾分離固體，用己烷洗滌，並且高真空乾燥隔夜，得到中間物O1 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.53 (d,J = 17.7 Hz, 3H), 4.77 (tt,J = 8.4, 3.7 Hz, 1H), 3.99 (t,J = 6.9 Hz, 1H), 1.88 - 1.59 (m, 4H), 1.54 - 1.12 (m, 8H)。
Figure 02_image189
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸環己酯 . 在氬氣氛圍下在0℃下，向中間物O1 (23.2 g，111.7 mmol)及二氯磷酸苯酯(16.2 mL，108.91 mmol)於無水二氯甲烷(400 mL)中之溶液中添加三乙胺(35 mL，251.33 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物1.5 h。接著在0℃下添加4-硝基苯酚(14.53 g，104.44 mmol)及三乙胺(18 mL，125.66 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌1 h且用Et2 O稀釋，並且濾出固體。減壓濃縮粗產物，且將所獲得殘餘物溶解於乙酸乙酯中，並且用飽和碳酸鈉水溶液及鹽水洗滌。分離有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。粗物質藉由矽膠層析(330 g SiO2 Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/二氯甲烷)純化，得到呈非對映異構混合物之所要化合物(41.3 g，83%，非對映異構混合物)。將由此獲得之物質高真空乾燥隔夜，引起固化。將二異丙基醚(225 mL)添加至固化物質中且經徹底超音波處理，得到精細固體。藉由過濾分離固體，得到中間物O2 ，其藉由1 H NMR及31 P NMR確定為單一異構體。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 8.32 - 8.23 (m, 2H), 7.52 - 7.40 (m, 2H), 7.38 (dd,J = 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.29 - 7.17 (m, 3H), 4.68 (dp,J = 8.7, 3.8 Hz, 1H), 4.02 (dq,J = 9.8, 7.1 Hz, 1H), 1.78 - 1.64 (m, 3H), 1.57 - 1.46 (m, 1H), 1.44 - 1.22 (m, 9H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ-1.32 (s) LCMS：MSm/z = 448.86 [M+1]；tR = 1.3 min ；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min
Figure 02_image191
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸環己酯 . 在室溫下將四氫呋喃(2 mL)添加至中間物4 (200 mg，0.591 mmol)、中間物O2 (318 mg，0.709 mmol)及氯化鎂(84 mg，0.887 mmol)之混合物中。將混合物加熱至50℃後保持10 min，且添加N ,N -二異丙基乙胺(0.257 mL，1.478 mmol)。在50℃下攪拌3小時後，將反應混合物冷卻至室溫，且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙酸乙酯(20 mL)中，且用水(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。分離有機層，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙腈(7 mL)中，且在0℃下逐滴添加濃鹽酸水溶液(0.493 mL)。在0℃下2小時後，在0℃下用乙酸乙酯(30 mL)及水(20 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.71 (s, 2H), 7.43 - 7.30 (m, 2H), 7.27 - 7.11 (m, 3H), 6.85 (d,J = 4.4 Hz, 1H), 6.69 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.17 - 5.94 (m, 1H), 5.36 - 5.19 (m, 2H), 5.14 (dd,J = 7.3, 1.0 Hz, 1H), 4.70 - 4.59 (m, 2H), 4.58 - 4.45 (m, 2H), 4.21 (t,J = 4.8 Hz, 1H), 4.05 - 3.91 (m, 2H), 3.85 - 3.70 (m, 1H), 1.76 - 1.55 (m, 4H), 1.50 - 1.12 (m, 9H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -236.73 (t,J = 48.1 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.52。LCMS：MSm/z = 608.19 [M+1]，tR = 1.31 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µL/min。HPLC：tR = 2.89 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：tR = 4.90 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 15. 二乙酸 (2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-((((((S)-1-( 環己氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-2-( 氟甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二酯
Figure 02_image193
在氬氣下將N ,N '-二異丙基碳化二亞胺(42 mg，0.33 mmol)及乙酸(20 mg，0.33 mmol)溶解於無水四氫呋喃(1.0 mL)中，且在室溫下攪拌混合物30分鐘。添加實例14 (40 mg，0.07 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(8 mg，0.07 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物。2小時後，添加甲醇(0.5 mL)，且攪拌混合物20分鐘，接著用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌兩次並用鹽水(10 mL)洗滌一次。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 7.92 (s, 1H), 7.32 - 7.25 (m, 3H), 7.25 - 7.20 (m, 2H), 7.17 - 7.10 (m, 1H), 6.62 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 6.51 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 5.86 (dd,J = 7.5, 5.4 Hz, 1H), 5.80 (d,J = 5.4 Hz, 1H), 5.64 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 4.75 (tt,J = 8.8, 3.9 Hz, 1H), 4.71 - 4.63 (m, 1H), 4.60 - 4.52 (m, 1H), 4.33 (ddd,J = 10.8, 5.7, 1.9 Hz, 1H), 4.25 (ddd,J = 10.8, 5.8, 2.2 Hz, 1H), 4.08 - 3.97 (m, 2H), 2.12 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.96 - 1.62 (m, 4H), 1.57 - 1.17 (m, 7H)。19 F NMR (376 MHz, 氯仿-d ) δ -234.25 (t,J = 46.8 Hz)。31 P NMR (162 MHz, 氯仿-d ) δ 2.69。LCMS：MSm/z = 692.34 [M+1]，tR = 1.51 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µL/min。HPLC：tR = 3.30 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。實例 16. 二丙酸 (2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-((((((S)-1-( 環己氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-2-( 氟甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二酯
Figure 02_image195
在氬氣下將丙酸酐(17 mg，0.13 mmol)及實例14 (40 mg，0.07 mmol)溶解於無水四氫呋喃(1.0 mL)中，且在室溫下攪拌混合物5分鐘。添加4-二甲基胺基吡啶(8 mg，0.07 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物。2小時後，添加甲醇(0.5 mL)，且攪拌混合物20分鐘，接著用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌兩次並用鹽水(10 mL)洗滌一次。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 7.91 (s, 1H), 7.32 - 7.25 (m, 3H), 7.24 - 7.20 (m, 2H), 7.16 - 7.11 (m, 1H), 6.60 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 6.50 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 5.98 - 5.91 (m, 2H), 5.88 (dd,J = 7.3, 5.4 Hz, 1H), 5.83 (d,J = 5.4 Hz, 1H), 5.63 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 4.79 - 4.71 (m, 1H), 4.67 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 4.56 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 4.33 (ddd,J = 10.8, 5.6, 1.8 Hz, 1H), 4.25 (ddd,J = 10.8, 5.8, 2.2 Hz, 1H), 4.11 - 4.06 (m, 1H), 4.05 - 3.97 (m, 1H), 2.39 (q,J = 7.6 Hz, 2H), 2.26 (qd,J = 7.6, 1.9 Hz, 2H), 1.98 (d,J = 14.2 Hz, 1H), 1.83 - 1.75 (m, 2H), 1.68 (t,J = 8.1 Hz, 2H), 1.55 - 1.28 (m, 6H), 1.17 (t,J = 7.6 Hz, 3H), 1.07 (t,J = 7.6 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, 氯仿-d ) δ -234.18 (t,J = 46.9 Hz)。31 P NMR (162 MHz, 氯仿-d ) δ 2.73。LCMS：MSm/z = 720.60 [M+1]，tR = 1.63 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µl/min。HPLC：tR = 3.52 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。實例 17. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸己酯
Figure 02_image197
L - 丙胺酸己酯鹽酸鹽 . 將L -丙胺酸(4.45 g，50 mmol)與1-己醇(30 mL)混合。逐滴添加TMS-Cl (19.1 mL，150 mmol)，且在RT下攪拌反應物16小時。添加更多1-己醇(10 mL)及TMS-Cl (5 mL)。將反應混合物加熱至80℃且攪拌20小時。減壓濃縮反應混合物。將所得油狀物高真空乾燥，且油狀物緩慢固化，得到呈鹽酸鹽之中間物R1 。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 8.77 (s, 3H), 4.20 (m, 3H), 1.71 (m, 5H), 1.47 - 1.19 (m, 6H), 1.01 - 0.78 (m, 3H)。
Figure 02_image199
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸己酯 . 將二氯磷酸苯酯(3.7 mL，25 mmol)溶解於無水DCM (50 mL)中，且在氮氣氛圍下在冰浴中攪拌。一次性添加中間物R1 (5.2 g，25 mmol)。攪拌反應物30分鐘。逐滴添加三乙胺(8.4 mL，60 mmol)，且接著攪拌60分鐘。添加對硝基苯酚(3.1 g，22.5 mmol)及三乙胺(4.2 mL，30 mmol)。移除冰浴，且在RT下攪拌反應混合物16小時。反應物用DCM (100 mL)稀釋且用水(3 × 20 mL)洗滌。有機物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO2 管柱層析(120 g SiO2 Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化。合併溶離份且減壓濃縮，得到中間物R2 (非對映異構混合物)。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 8.25 (d,J = 9.1 Hz, 2H), 7.51 - 7.32 (m, 4H), 7.32 - 7.15 (m, 3H), 4.14 (m, 3H), 3.93 (m, 1H), 1.62 (m, 2H), 1.44 (m, 3H), 1.39 - 1.20 (m, 6H), 0.99 - 0.82 (m, 3H)。31 P NMR (162 MHz, 氯仿-d ) δ -3.03 (s), -3.08 (s)。
Figure 02_image201
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸己酯 . 在室溫下將四氫呋喃(1 mL)添加至中間物4 (100 mg，0.296 mmol)、中間物R2 (173 mg，0.384 mmol)及氯化鎂(42 mg，0.443 mmol)之混合物中。將混合物加熱至50℃後保持10 min，且添加N ,N -二異丙基乙胺(0.129 mL，0.739 mmol)。在50℃下攪拌3小時後，將反應混合物冷卻至室溫，且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙酸乙酯(20 mL)中，且用水(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。分離有機層，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙腈(7 mL)中，且在0℃下逐滴添加濃鹽酸水溶液(0.246 mL)。在0℃下2小時後，在0℃下用乙酸乙酯(30 mL)及水(20 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物(非對映異構混合物)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.83 (s, 0.24 H), 7.83 (s, 0.76 H), 7.72 (bs, 2H), 7.41 - 7.33 (m, 2H), 7.26 - 7.14 (m, 3H), 6.88 - 6.82 (m, 1H), 6.70 (d,J = 4.5 Hz, 0.26 H), 6.68 (d,J = 4.5 Hz, 0.74 H), 6.13 - 5.99 (m, 1H), 5.37 - 5.06 (m, 3H), 4.74 - 4.44 (m, 3H), 4.25 - 4.11 (m, 1H), 4.06 - 3.93 (m, 4H), 3.90 - 3.76 (m, 1H), 1.58 - 1.44 (m, 2H), 1.34 - 1.11 (m, 9H), 0.87 - 0.74 (m, 3H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -236.47 (t,J = 48.1 Hz), -236.76 (t,J = 48.1 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.55, 3.47。LCMS：MSm/z = 610.16 [M+1]，tR = 1.35 min (次要異構體)及1.37 min (主要異構體)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µL/min。HPLC：tR = 3.02 min (次要異構體)及3.06 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：tR = 5.16 min (次要異構體)及5.23 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 . 非對映異構體藉由對掌性製備型SFC (Chiralpak AD-H 5 µm，21×250 mm；30%甲醇)彼此分離，得到實例18及實例19。實例 18. ((R)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸己酯
Figure 02_image203
實例 17 之第一溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.36 - 7.28 (m, 2H), 7.23 - 7.09 (m, 3H), 6.88 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 6.69 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 5.99 (dd,J = 13.0, 10.1 Hz, 1H), 5.22 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 4.69 - 4.57 (m, 1H), 4.54 - 4.42 (m, 2H), 4.17 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.03 - 3.90 (m, 4H), 3.84 - 3.69 (m, 1H), 1.53 - 1.40 (m, 2H), 1.30 - 1.05 (m, 9H), 0.82 - 0.73 (m, 3H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -236.46 (t,J = 48.1 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.54。LCMS：MSm/z = 610.16 [M+1]，tR = 1.35 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µL/min。HPLC：tR = 3.02 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：tR = 5.16 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 19. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸己酯
Figure 02_image205
實例 17 之第二溶離非對映異構體 ：1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.73 (bs, 2H), 7.45 - 7.27 (m, 2H), 7.29 - 7.10 (m, 3H), 6.86 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.68 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.06 (dd,J = 13.2, 10.1 Hz, 1H), 5.28 - 5.19 (m, 2H), 5.18 - 5.09 (m, 1H), 4.70 - 4.57 (m, 1H), 4.58 - 4.45 (m, 2H), 4.23 - 4.17 (m, 1H), 4.05 - 3.95 (m, 4H), 3.88 - 3.79 (m, 1H), 1.57 - 1.48 (m, 2H), 1.30 - 1.18 (m, 9H), 0.85 - 0.80 (m, 3H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -236.75 (t,J = 48.1 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.47。LCMS：MSm/z = 610.16 [M+1]，tR = 1.37 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µl/min。HPLC：tR = 3.06 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：tR = 5.23 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 20. 二乙酸 (2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-2-((((S)-(((S)-1- 異丙氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二酯
Figure 02_image207
在氬氣下將N ,N '-二異丙基碳化二亞胺(56 mg，0.44 mmol)及乙酸(26 mg，0.44 mmol)溶解於無水四氫呋喃(2.0 mL)中，且在室溫下攪拌混合物30分鐘。添加實例12 (50 mg，0.09 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(11 mg，0.09 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物。2小時後，添加甲醇(0.5 mL)，且攪拌混合物20分鐘，接著用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌兩次並用鹽水(10 mL)洗滌一次。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.86 (s, 1H), 7.80 (bs, 2H), 7.41 - 7.32 (m, 2H), 7.28 - 7.11 (m, 3H), 6.83 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.66 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.13 (dd,J = 13.2, 10.1 Hz, 1H), 5.75 (dd,J = 8.7, 5.5 Hz, 1H), 5.67 (d,J = 5.4 Hz, 1H), 5.53 (d,J = 8.7 Hz, 1H), 4.86 (七重峰,J = 6.2 Hz, 1H), 4.73 - 4.61 (m, 1H), 4.61 - 4.49 (m, 1H), 4.21 - 4.07 (m, 2H), 3.89 - 3.71 (m, 1H), 2.13 (s, 3H), 1.93 (s, 3H), 1.21 (d,J = 7.0 Hz, 3H), 1.15 (dd,J = 6.2, 2.8 Hz, 6H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -234.62 (t,J = 46.9 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.49。LCMS：MSm/z = 652.41 [M+1]，tR = 1.38 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µL/min。HPLC：tR = 2.98 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：tR = 5.03 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 21. 二乙酸 (2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-((((((S)-1- 乙氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-2-( 氟甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二酯
Figure 02_image209
在氬氣下將N ,N '-二異丙基碳化二亞胺(57 mg，0.45 mmol)及乙酸(27 mg，0.45 mmol)溶解於無水四氫呋喃(2.0 mL)中，且在室溫下攪拌混合物30分鐘。添加實例13 (50 mg，0.09 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(11 mg，0.09 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物。2小時後，添加甲醇(0.5 mL)，且攪拌混合物20分鐘，接著用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌兩次並用鹽水(10 mL)洗滌一次。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.86 (s, 1H), 7.80 (bs, 2H), 7.40 - 7.33 (m, 2H), 7.25 - 7.16 (m, 3H), 6.83 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.66 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.16 (dd,J = 13.3, 10.1 Hz, 1H), 5.75 (dd,J = 8.7, 5.5 Hz, 1H), 5.67 (d,J = 5.4 Hz, 1H), 5.53 (d,J = 8.7 Hz, 1H), 4.74 - 4.44 (m, 2H), 4.21 - 4.09 (m, 2H), 4.05 - 3.97 (m, 2H), 3.91 - 3.75 (m, 1H), 2.13 (s, 3H), 1.93 (s, 3H), 1.22 (d,J = 7.0 Hz, 3H), 1.14 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -234.59 (t,J = 46.8 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.44。LCMS：MSm/z = 638.26 [M+1]，tR = 1.32 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µL/min。HPLC：tR = 2.84 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：tR = 4.78 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 22. 二丙酸 (2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-2-((((S)-(((S)-1- 異丙氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二酯
Figure 02_image211
在氬氣下將實例12 (50 mg，0.09 mmol)溶解於無水四氫呋喃(2.0 mL)中。添加丙酸酐(24 mg，0.19 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(1 mg，0.01 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物。30分鐘後，反應混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌兩次並用鹽水(10 mL)洗滌一次。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.85 (s, 1H), 7.80 (bs, 2H), 7.41 - 7.32 (m, 2H), 7.28 - 7.13 (m, 3H), 6.83 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.66 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.13 (dd,J = 13.2, 10.1 Hz, 1H), 5.78 (dd,J = 8.5, 5.5 Hz, 1H), 5.69 (d,J = 5.5 Hz, 1H), 5.53 (d,J = 8.5 Hz, 1H), 4.96 - 4.76 (m, 1H), 4.73 - 4.62 (m, 1H), 4.62 -4.47 (m, 1H), 4.26 - 4.05 (m, 2H), 3.91 - 3.68 (m, 1H), 2.46 - 2.37 (m, 2H), 2.31 - 2.00 (m, 2H), 1.21 (d,J = 7.1 Hz, 3H), 1.14 (dd,J = 6.2, 2.4 Hz, 6H), 1.07 (t,J = 7.5 Hz, 3H), 0.93 (t,J = 7.5 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -234.55 (t,J = 46.8 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.50。LCMS：MSm/z = 680.51 [M+1]，tR = 1.48 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µl/min。HPLC：tR = 3.23 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：tR = 5.50 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 23. 雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-2-((((S)-(((S)-1- 異丙氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二酯
Figure 02_image213
在氬氣下將實例12 (50 mg，0.09 mmol)溶解於無水四氫呋喃(2.0 mL)中。添加異丁酸酐(29 mg，0.19 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(1 mg，0.01 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物。4小時後，反應混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌兩次並用鹽水(10 mL)洗滌一次。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5 µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.85 (s, 1H), 7.78 (bs, 2H), 7.41 - 7.31 (m, 2H), 7.26 - 7.13 (m, 3H), 6.82 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.64 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.13 (dd,J = 13.2, 10.0 Hz, 1H), 5.75 (dd,J = 8.3, 5.4 Hz, 1H), 5.69 (d,J = 5.5 Hz, 1H), 5.53 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 4.86 (七重峰,J = 6.3 Hz, 1H), 4.74 - 4.63 (m, 1H), 4.63 - 4.51 (m, 1H), 4.23 - 4.06 (m, 2H), 3.90 - 3.70 (m, 1H), 2.73 - 2.58 (m, 1H), 2.41 (七重峰,J = 7.0 Hz, 1H), 1.21 (d,J = 7.1 Hz, 3H), 1.17 - 1.10 (m, 12H), 0.95 (dd,J = 17.5, 7.0 Hz, 6H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -234.04 (t,J = 46.7 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.53。LCMS：MSm/z = 708.42 [M+1]，tR = 1.61 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µl/min。HPLC：tR = 3.46 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：tR = 5.92 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 24. 雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-((((((S)-1- 乙氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-2-( 氟甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二酯
Figure 02_image215
在氬氣下將實例13 (50 mg，0.09 mmol)溶解於無水四氫呋喃(2.0 mL)中。添加異丁酸酐(30 mg，0.19 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(1 mg，0.01 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物。4小時後，反應混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌兩次並用鹽水(10 mL)洗滌一次。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.85 (s, 1H), 7.79 (bs, 2H), 7.40 - 7.32 (m, 2H), 7.26 - 7.14 (m, 3H), 6.82 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.64 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.16 (dd,J = 13.3, 10.1 Hz, 1H), 5.75 (dd,J = 8.4, 5.5 Hz, 1H), 5.69 (d,J = 5.5 Hz, 1H), 5.53 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 4.77 - 4.65 (m, 1H), 4.62 - 4.51 (m, 1H), 4.21 - 4.12 (m, 2H), 4.10 - 3.96 (m, 2H), 3.95 - 3.73 (m, 1H), 2.65 (七重峰,J = 7.0 Hz, 1H), 2.41 (七重峰,J = 7.0 Hz, 1H), 1.22 (d,J = 7.0 Hz, 3H), 1.18 - 1.03 (m, 9H), 0.96 (dd,J = 17.6, 7.0 Hz, 6H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -234.01 (t,J = 46.7 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.49。LCMS：MSm/z = 694.42 [M+1]，tR = 1.55 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µl/min。HPLC：tR = 3.34 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：tR = 5.70 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 25. 二丙酸 (2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-((((((S)-1- 乙氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-2-( 氟甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二酯
Figure 02_image217
在氬氣下將實例13 (50 mg，0.09 mmol)溶解於無水四氫呋喃(2.0 mL)中。添加丙酸酐(25 mg，0.19 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(1 mg，0.01 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物。30分鐘後，反應混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌兩次並用鹽水(10 mL)洗滌一次。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.85 (s, 1H), 7.79 (bs, 2H), 7.41 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 6.83 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.66 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.16 (dd,J = 13.3, 10.1 Hz, 1H), 5.78 (dd,J = 8.6, 5.5 Hz, 1H), 5.69 (d,J = 5.5 Hz, 1H), 5.53 (d,J = 8.5 Hz, 1H), 4.73 - 4.62 (m, 1H), 4.61 - 4.49 (m, 1H), 4.21 - 4.11 (m, 2H), 4.09 - 3.98 (m, 2H), 3.91 - 3.74 (m, 1H), 2.46 - 2.37 (m, 2H), 2.29 - 2.12 (m, 2H), 1.22 (d,J = 7.0 Hz, 3H), 1.14 (t,J = 7.1 Hz, 3H), 1.07 (t,J = 7.5 Hz, 3H), 0.93 (t,J = 7.5 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -234.52 (t,J = 46.8 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.45。LCMS：MSm/z = 666.35 [M+1]，tR = 1.43 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µl/min。HPLC：tR = 3.11 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：tR = 5.27 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 26. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 羥基 -2- 甲基丙酯
Figure 02_image219
氯化 (S)-1-(2-( 苯甲氧基 )-2- 甲基丙氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 銨 . 向Boc-L-丙胺酸(1.26 g，6.66 mmol)、2-苯甲氧基-2-甲基丙醇(1.0 g，5.55 mmol)及EDCI (1.12 g，7.21 mmol)於乙腈(20 mL)中之混合物中添加DMAP (2.04 g，8.32 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物2 h，接著用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(0至60% EtOAc/己烷)純化，得到Boc-L-丙胺酸丙酯，將其溶解於DCM (10 mL)中，且在室溫下添加含4 N HCl之二㗁烷(5.5 mL，22.19 mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌2 h，真空濃縮，再溶解於ACN (10 mL)中，凍乾隔夜，得到中間物AA1 且用於下一反應中。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 8.82 (s, 3H), 7.42 - 7.07 (m, 5H), 4.44 (s, 2H), 4.24 (m, 2H), 4.08 (d,J = 11.2 Hz, 1H), 1.70 (d,J = 7.0 Hz, 3H), 1.28 (d,J = 2.4 Hz, 6H)。LCMSm/z = 251.97 [游離鹼M+1]，tR = 0.85 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min
Figure 02_image221
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2-( 苯甲氧基 )-2- 甲基丙酯 . 在-78℃下向中間物AA1 (832 mg，2.89 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸苯酯(0.43 mL，2.89 mmol)，且在-78℃下經5 min逐滴添加三乙胺(0.80 mL，5.76 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且將其冷卻至-78℃，並且在-78℃下一次性添加對硝基苯酚(402 mg，2.89 mmol)且經5 min添加三乙胺(0.40 mL，2.89 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物50 min，接著用DCM稀釋，用鹽水洗滌，真空濃縮，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至60% EtOAc/己烷)純化，得到中間物AA2 (非對映異構混合物)。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 8.25 - 8.12 (m, 2H), 7.41 - 7.14 (m, 12H), 4.45 (m, 2H), 4.31 - 4.12 (m, 2H), 4.07 (m, 1H), 3.89 (m, 1H), 1.41 (m, 3H), 1.27 (m, 6H)。31 P NMR (162 MHz, 氯仿-d ) δ -3.10, -3.18。LCMSm/z = 528.78 [M+1]，tR = 1.70 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min
Figure 02_image223
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸 2-( 苯甲氧基 )-2- 甲基丙酯 . 在室溫下向中間物5 (0.04 g，0.134 mmol)、中間物AA2 (0.081 g，0.153 mmol)及氯化鎂(0.064 g，0.671 mmol)之混合物中添加N,N -二甲基甲醯胺(2 mL)，接著添加N,N -二異丙基乙胺(0.07 mL，0.402 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物3 h。反應混合物接著藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，0-100%乙腈/水)純化，得到中間物AA3 。LCMS：MSm/z = 688.18 [M+1]，tR = 1.20 min (主要異構體)及1.22 min (次要異構體)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image225
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 羥基 -2- 甲基丙酯 . 向中間物AA3 (14 mg，0.01 mmol)於THF (2 mL)中之溶液中添加10% Pd/C (11 mg，0.01 mmol)。在H2 氣體下在室溫下攪拌所得混合物15 h，且過濾。真空濃縮濾液，將其溶解於ACN中，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 × 30 mm管柱，10至100% ACN/水)純化，得到呈非對映異構混合物之產物。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.79 (s, 1H), 7.39 - 7.27 (m, 2H), 7.28 - 7.13 (m, 3H), 6.85 (dd,J = 6.9, 4.5 Hz, 1H), 6.74 (dd,J = 11.1, 4.5 Hz, 1H), 5.36 (dd,J = 8.3, 5.9 Hz, 1H), 4.83 - 4.68 (m, 1H), 4.73 - 4.64 (m, 1H), 4.69 - 4.56 (m, 1H), 4.36 (dd,J = 16.6, 5.2 Hz, 1H), 4.30 - 4.15 (m, 2H), 4.05 - 3.92 (m, 1H), 3.96 - 3.86 (m, 2H), 1.32 (ddd,J = 19.2, 7.2, 1.1 Hz, 3H), 1.18-1.19 (m, 6H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.78, 3.54。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) -238.51 - -238.97 (m)。LCMS：MSm/z = 598.05 [M+1]，tR = 0.94 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：tR = 3.697 min (主要異構體)，3.734 min (次要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 27. 雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-2-((((((S)-1-(2- 羥基 -2- 甲基丙氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二酯
Figure 02_image227
((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-4-( 氟甲基 )-2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸 2-( 苯甲氧基 )-2- 甲基丙酯 . 在室溫下向中間物4 (0.2 g，0.591 mmol)、中間物AA2 (0.375 g，0.709 mmol)及氯化鎂(0.112 g，1.182 mmol)之混合物中添加四氫呋喃(2.5 mL)，接著添加N,N -二異丙基乙胺(0.258 mL，1.478 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h。反應混合物接著用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(0至100% EtOAc/己烷)純化，得到中間物BB1 (非對映異構混合物)。LCMS：MSm/z = 728.18 [M+1]，tR = 1.39 min (次要異構體)及1.42 min (主要異構體)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image229
BB1                                                    BB2
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸 2-( 苯甲氧基 )-2- 甲基丙酯 . 向中間物BB1 (0.35 g，0.481 mmol)於乙腈(14 mL)中之冰冷溶液中逐滴添加濃鹽酸(0.35 mL，9.6 mmol)。在0℃下攪拌反應混合物4 h。反應混合物接著用冰稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液中和。用乙酸乙酯萃取反應混合物，且分離有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(0-20%甲醇/二氯甲烷)純化，得到中間物BB2 (非對映異構混合物)。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.78 (d,J = 1.1 Hz, 1H), 7.38 - 7.12 (m, 10H), 6.88 - 6.81 (m, 1H), 6.74 (dd,J = 8.3, 4.5 Hz, 1H), 5.36 (dd,J = 8.3, 6.6 Hz, 1H), 4.82 - 4.67 (m, 1H), 4.71 - 4.63 (m, 1H), 4.67 - 4.55 (m, 1H), 4.45 (d,J = 4.8 Hz, 2H), 4.34 (dd,J = 16.4, 5.2 Hz, 1H), 4.29 - 4.12 (m, 3H), 4.10 - 3.90 (m, 2H), 1.35 - 1.21 (m, 9H)。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.39 - -238.76 (m)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.69, 3.49。LCMS：MSm/z = 688.10 [M+1]；tR = 1.20 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image231
雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-((((((S)-1-(2-( 苯甲氧基 )-2- 甲基丙氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-2-( 氟甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二酯 . 在室溫下向中間物BB2 (0.05 g，0.073 mmol)於THF (2 mL)中之溶液中添加異丁酸酐(0.072 mL，0.436 mmol)，且接著添加DMAP (1.3 mg，0.011 mmol)。攪拌所得混合物30 min，藉由LCMS監測。用甲醇淬滅反應混合物且濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(0-15%甲醇/二氯甲烷)純化，得到中間物BB3 (非對映異構混合物)。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.79 (d,J = 4.1 Hz, 1H), 7.36 - 7.12 (m, 10H), 6.87 - 6.73 (m, 1H), 6.60 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 5.87 - 5.76 (m, 2H), 5.59 (dd,J = 7.8, 4.4 Hz, 1H), 4.76 - 4.63 (m, 1H), 4.65 - 4.51 (m, 1H), 4.46 (d,J = 1.4 Hz, 2H), 4.35 (dt,J = 9.1, 2.8 Hz, 1H), 4.26 (ddd,J = 10.7, 5.4, 2.1 Hz, 1H), 4.18 (dd,J = 11.5, 2.7 Hz, 1H), 4.13 - 3.93 (m, 2H), 2.73 - 2.59 (m, 1H), 2.53 - 2.39 (m, 1H), 1.34 (dd,J = 7.1, 1.1 Hz, 2H), 1.31 - 1.18 (m, 13H), 1.01 - 1.09 (m, 6H)。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -235.36 (t,J = 47.0 Hz), -235.91 (t,J = 47.0 Hz)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.45, 3.33。LCMS：MSm/z = 828.21 [M+1]；tR = 1.60 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min
Figure 02_image233
雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-2-((((((S)-1-(2- 羥基 -2- 甲基丙氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二酯 . 向中間物BB3 (40 mg，0.048 mmol)於THF (2 mL)中之溶液中添加10% Pd/C (26 mg，0.024 mmol)。在H2 氣體下在室溫下攪拌所得混合物15 h，且過濾。濃縮濾液，且所獲得殘餘物藉由矽膠層析(0-15%甲醇/二氯甲烷)純化，得到產物(非對映異構混合物)。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.79 (d,J = 4.2 Hz, 1H), 7.35 - 7.29 (m, 2H), 7.27 - 7.15 (m, 3H), 6.79 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 6.62 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 5.86 - 5.76 (m, 2H), 5.60 - 5.56 (m, 1H), 4.76 - 4.53 (m, 2H), 4.37 - 4.21 (m, 2H), 4.07 - 3.88 (m, 3H), 2.67 (p,J = 6.9 Hz, 1H), 2.53 - 2.38 (m, 1H), 1.40 - 1.25 (m, 3H), 1.25 - 1.16 (m, 12H), 1.01 - 1.09 (m, 6H)。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -235.56 (t,J = 46.9 Hz), -235.96 (t,J = 46.9 Hz)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.50, 3.45。LCMS：MSm/z = 738.17 [M+1]；tR = 1.29 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µl/min。HPLC：tR = 5.31 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 . 非對映異構體藉由對掌性製備型SFC (SFC Chiralpak AD-H 5µm，21×250 mm；30%異丙醇)彼此分離。
Figure 02_image235
實例 28. 實例 27 之第一溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.80 (s, 1H), 7.36 - 7.27 (m, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 6.76 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 5.92 (dd,J = 7.6, 5.6 Hz, 1H), 5.84 (d,J = 5.6 Hz, 1H), 5.59 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 4.72 (s, 1H), 4.61 (s, 1H), 4.34 (d,J = 4.5 Hz, 2H), 4.04 - 3.87 (m, 3H), 2.73 - 2.58 (m, 1H), 2.48 (p,J = 7.0 Hz, 1H), 1.30 (dd,J = 7.2, 1.2 Hz, 3H), 1.25 - 1.16 (m, 12H), 1.03 - 1.10 m, (6H)。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -235.93 (t,J = 47.0 Hz)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.49。LCMS：MSm/z = 738.16 [M+1]；tR = 1.31 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：tR = 5.282 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 29. 實例 27 之第二溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.79 (s, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 2H), 7.25 (dt,J = 8.7, 1.2 Hz, 2H), 7.18 - 7.20 (m, 1H), 6.79 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.62 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 5.88 - 5.77 (m, 2H), 5.59 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 4.78 - 4.65 (m, 1H), 4.66 - 4.53 (m, 1H), 4.34 (ddd, J = 10.8, 4.8, 1.8 Hz, 1H), 4.27 (ddd,J = 10.7, 5.6, 2.1 Hz, 1H), 4.09 - 3.92 (m, 2H), 3.91 (d,J = 10.9 Hz, 1H), 2.67 (七重峰,J = 7.0 Hz, 1H), 2.46 (七重峰,J = 7.1 Hz, 1H), 1.37 (dd,J = 7.1, 1.0 Hz, 3H), 1.26 - 1.10 (m, 12H), 1.02 - 1.08 (m, 6H)。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -235.54 (t,J = 46.8 Hz)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.44。LCMS：MSm/z = 738.17 [M+1]；tR = 1.30 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：tR = 5.277 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 30. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (S)-2- 甲氧基丙酯
Figure 02_image237
( 三級丁氧基羰基 ) -L - 丙胺酸 (S)-2- 甲氧基丙酯 . 將(三級丁氧基羰基)-L -丙胺酸(2.519 g，0.013 mol)溶解於乙腈(12 mL)中，且添加(S )-2-甲氧基丙-1-醇(1 g，0.011 mol)，接著一次性添加EDCI (2.239 g，0.014 mol)及DMAP (2.033 g，0.017 mol)。在室溫下攪拌反應物4 h。用二氯甲烷及水稀釋反應物。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且接著減壓濃縮。藉由矽膠層析(0-30%乙酸乙酯/己烷)進行純化，得到中間物EE1 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.31 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 4.10 - 3.92 (m, 3H), 3.50 (td,J = 6.3, 4.2 Hz, 1H), 3.26 (s, 3H), 1.38 (s, 9H), 1.25 (d,J = 7.4 Hz, 3H), 1.07 (d,J = 6.4 Hz, 3H)。
Figure 02_image239
(S)-2- 甲氧基丙基 -L - 丙胺酸酯鹽酸鹽 . 將中間物EE1 (2.165 g，0.008 mol)溶解於無水二氯甲烷(22 mL)及含4 N HCl之二㗁烷(10.36 mL，0.041 mol)中。在環境溫度下攪拌反應物4 h。減壓濃縮反應物，且與二氯甲烷共蒸發。將殘餘物在高真空下放置隔夜，且中間物EE2 不經純化按原樣用於下一步驟。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.64 (s, 3H), 4.17 - 3.99 (m, 3H), 3.53 (m, 1H), 3.24 (s, 3H), 1.41 (d,J = 7.2 Hz, 3H), 1.07 (d,J = 6.4 Hz, 3H)。
Figure 02_image241
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸 (S)-2- 甲氧基丙酯 . 在氬氣氛圍下在0℃下，向中間物EE2 (1.5 g，7.589 mmol)及二氯磷酸苯酯(1.129 mL，7.589 mmol)於無水二氯甲烷(26 mL)中之溶液中添加三乙胺(2.34 mL，16.66 mmol)。在0℃下攪拌所得混合物1 h。接著添加4-硝基苯酚(1.056 g，7.589 mmol)及三乙胺(1.17 mL，8.33 mmol)。在0℃下攪拌1 h後，用Et2 O稀釋反應混合物，且濾出固體。將粗產物減壓濃縮，且藉由矽膠層析(80 g SiO2 Combiflash HP Gold管柱，100%二氯甲烷，接著0-75%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物EE3 (非對映異構混合物)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.32 - 8.23 (m, 2H), 7.53 - 7.44 (m, 1H), 7.49 - 7.34 (m, 3H), 7.30 - 7.16 (m, 3H), 6.70 (ddd,J = 13.6, 10.0, 7.9 Hz, 1H), 4.08 - 3.89 (m, 3H), 3.48 - 3.36 (m, 1H), 3.19 (d,J = 1.0 Hz, 3H), 1.26 - 1.11 (m, 3H), 1.01 (dd,J = 6.4, 1.5 Hz, 3H)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ -1.26, -1.47。LCMS：MSm/z = 438.99 [M+1]；tR = 1.43 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image243
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (S)-2- 甲氧基丙酯 . 在室溫下向中間物4 (0.15 g，0.443 mmol)、中間物EE3 (0.214 g，0.488 mmol)及氯化鎂(0.063 g，0.665 mmol)之混合物中添加四氫呋喃(1.5 mL)，接著添加N,N -二異丙基乙胺(0.193 mL，1.108 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物1.5 h。接著減壓濃縮反應混合物，且所獲得殘餘物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，15%-85%乙腈/水)純化。合併純溶離份且減壓濃縮。將所獲得殘餘物溶解於無水乙腈(3 mL)中且在冰浴中冷卻，接著逐滴添加濃鹽酸(0.2 mL，2.4 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1 h。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用冰稀釋，接著用碳酸氫鈉水溶液中和。所得混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，15%-85%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到產物(非對映異構混合物)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.81 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 7.67 (s, 2H), 7.35 (dt,J = 8.5, 6.9 Hz, 2H), 7.24 - 7.11 (m, 3H), 6.83 (dd,J = 5.6, 4.5 Hz, 1H), 6.67 (dd,J = 8.0, 4.5 Hz, 1H), 6.05 (td,J = 13.9, 10.1 Hz, 1H), 5.30 - 5.18 (m, 2H), 5.10 (dd,J = 7.3, 2.6 Hz, 1H), 4.67 - 4.55 (m, 1H), 4.50 (dd,J = 14.2, 7.0 Hz, 2H), 4.18 (q,J = 5.2 Hz, 1H), 3.96 (m, 4H), 3.83 (dd,J = 10.5, 7.0 Hz, 1H), 3.49 - 3.40 (m, 1H), 3.20 (d,J = 2.0 Hz, 3H), 1.20 (dd,J = 15.3, 7.1 Hz, 3H), 1.02 (dd,J = 6.3, 3.8 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -236.33 - -236.84 (m)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.57, 3.44。LCMS：MSm/z = 598.03 [M+1]；tR = 1.00 min (次要異構體)及1.10 min (主要異構體)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µl/min。HPLC：tR = 3.95 min (次要異構體)，4.018 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 . 非對映異構體藉由對掌性製備型SFC (SFC Chiralpak AD-H 5µm，21×250 mm；30%異丙醇)彼此分離。
Figure 02_image245
實例 31. 實例 30 之第一溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.78 (s, 1H), 7.33 (dd,J = 8.5, 7.3 Hz, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 3H), 6.86 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 6.75 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 5.37 (d,J = 8.2 Hz, 1H), 4.82 - 4.71 (m, 1H), 4.71 - 4.59 (m, 2H), 4.38 (d,J = 5.3 Hz, 1H), 4.26 (dd,J = 5.2, 1.7 Hz, 2H), 4.07 - 3.99 (m, 2H), 3.98 - 3.85 (m, 1H), 3.58 - 3.49 (m, 1H), 3.32 (s, 3H), 1.26 (dd,J = 7.2, 1.2 Hz, 3H), 1.11 (d,J = 6.4 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.62 (t,J = 47.8 Hz)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.69。LCMS：MSm/z = 597.94 [M+1]；tR = 1.11 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µl/min。HPLC：tR = 3.939 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 32. 實例 30 之第二溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.79 (s, 1H), 7.39 - 7.29 (m, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 6.85 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 5.36 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 4.82 - 4.55 (m, 3H), 4.33 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.21 (dt,J = 5.8, 1.8 Hz, 2H), 4.04 (d,J = 5.0 Hz, 2H), 3.93 (dq, J = 9.8, 7.2 Hz, 1H), 3.59 - 3.48 (m, 1H), 3.31 (s, 3H), 1.31 (dd, J = 7.1, 1.0 Hz, 3H), 1.10 (d, J = 6.4 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.78 (t,J = 47.8 Hz)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.44。LCMS：MSm/z = 597.97 [M+1]；tR = 1.12 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：tR = 4.005 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 33. 二丙酸 (2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-2-((((((S)-1- 甲氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二酯
Figure 02_image247
在室溫下向實例10 (0.057 g，0.106 mmol)於THF (2 mL)中之溶液中添加丙酸酐(0.041 mL，0.317 mmol)，且接著添加DMAP (2.58 mg，0.021 mmol)。攪拌所得混合物10 min，藉由LCMS監測。反應混合物用甲醇淬滅且用乙酸乙酯稀釋。用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌有機層，分離，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(0-15%甲醇/二氯甲烷)純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.79 (s, 1H), 7.38 - 7.29 (m, 2H), 7.33 - 7.21 (m, 2H), 7.23 - 7.14 (m, 1H), 6.79 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.62 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.91 - 5.78 (m, 2H), 5.58 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.76 - 4.64 (m, 1H), 4.58 (q, J = 10.0 Hz, 1H), 4.37 - 4.28 (m, 1H), 4.25 (ddd, J = 10.5, 5.5, 2.1 Hz, 1H), 4.02 - 3.89 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 2.45 (qd, J = 7.5, 1.0 Hz, 2H), 2.26 (qd, J = 7.6, 3.2 Hz, 2H), 1.31 (dd, J = 7.1, 1.0 Hz, 3H), 1.16 (t, J = 7.6 Hz, 3H), 1.04 (t, J = 7.5 Hz, 3H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.37。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -236.42 (t, J = 46.6 Hz)。LCMS：MSm/z = 652.09 [M+1]；tR = 1.23 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：tR = 4.994 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 34. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基 -5-(4- 亞胺基 -3-(( 膦醯氧基 ) 甲基 )-3,4- 二氫吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 ) 四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 乙基丁酯
Figure 02_image249
((S)-((((2R,3S,4R,5S)-5(3-(((( 苯甲氧基 )( 羥基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-4- 亞胺基 -3,4- 二氫吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸 2- 乙基丁酯 . 向實例1 (0.125 g，0.205 mmol)於DMF (2.25 mL)中之溶液中添加磷酸二苯甲基氯甲酯及碘化鈉。在室溫下攪拌反應混合物隔夜，且所得反應混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，0-100%乙腈/水)純化，得到中間物II1 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 12.49 (s, 1H), 10.31 (d,J = 10.5 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.45 (dd,J = 4.8, 2.3 Hz, 1H), 7.36 (t,J = 7.9 Hz, 2H), 7.26 (d,J = 4.3 Hz, 4H), 7.20 (dt,J = 11.9, 6.6 Hz, 4H), 6.91 (d,J = 4.7 Hz, 1H), 6.07 (dd,J = 13.0, 10.1 Hz, 1H), 5.64 (d,J = 10.8 Hz, 2H), 5.39 (d,J = 4.7 Hz, 1H), 5.29 (s, 1H), 5.20 (d,J = 8.7 Hz, 1H), 4.76 (d,J = 6.9 Hz, 2H), 4.68 - 4.58 (m, 1H), 4.59 - 4.48 (m, 1H), 4.40 (s, 1H), 4.19 (t,J = 3.8 Hz, 1H), 3.98 (ddd,J = 19.0, 10.9, 5.6 Hz, 3H), 3.93 - 3.79 (m, 2H), 1.43 (h,J = 6.3 Hz, 1H), 1.32 - 1.20 (m, 7H), 0.80 (t,J = 7.4 Hz, 6H)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.59, 0.13。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -235.99 (t,J = 47.6 Hz)。LCMS：MSm/z = 810.23 [M+1]；tR = 1.30 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image251
((S)-(((2R,3S,4R,5S)-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基 -5-(4- 亞胺基 -3-(( 膦醯氧基 ) 甲基 )-3,4- 二氫吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 ) 四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 乙基丁酯 . 向中間物II1 (47 mg，0.058 mmol)於THF (2 mL)中之溶液中添加10% Pd/C (6.17 mg，0.058 mmol)。在H2 氣體下在室溫下攪拌所得混合物1.5 h，且過濾。濃縮濾液，且所獲得殘餘物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，0-100%乙腈/水，含TFA改質劑)純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.33 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.48 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 7.40 - 7.30 (m, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 3H), 6.90 (d,J = 4.7 Hz, 1H), 6.07 (dd,J = 13.1, 10.1 Hz, 1H), 5.67 (d,J = 11.5 Hz, 2H), 5.41 (s, 1H), 5.19 (d,J = 8.7 Hz, 1H), 4.63 (q,J = 10.2 Hz, 1H), 4.57 - 4.44 (m, 1H), 4.39 (dd,J = 8.8, 4.9 Hz, 1H), 4.18 (d,J = 4.9 Hz, 1H), 4.06 - 3.77 (m, 5H), 1.42 (h,J = 6.2 Hz, 1H), 1.33 - 1.19 (m, 7H), 0.80 (t,J = 7.5 Hz, 6H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ-74.19 (s), -236.54 (t,J = 47.9 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.59, 0.12。LCMS：MSm/z = 720.16 [M+1]；tR = 1.21 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：tR = 4.854 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 35. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (R)-1- 甲基吡咯啶 -3- 基酯
Figure 02_image253
( 三級丁氧基羰基 )-L - 丙胺酸 (R)-1- 甲基吡咯啶 -3- 基 酯 . 向(S)-1-甲基吡咯啶-3-醇(1.0 g，0.01 mol)及(三級丁氧基羰基)-L -丙胺酸(2.058 g，0.011 mol)於THF (20 mL)中之溶液中一次性添加三苯膦(3.63 g，0.014 mol)。向所得反應混合物中添加偶氮二甲酸二異丙酯(2.53 mL，0.013 mol)，且在室溫下攪拌反應混合物2 h。反應物用EtOAc稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，接著用5%檸檬酸水溶液洗滌。用EtOAc (2×)洗滌檸檬酸萃取物。酸萃取物用2 N NaOH水溶液鹼化，得到pH值9，且用EtOAc (2×)萃取。分離有機層，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且減壓濃縮，得到中間物JJ1 。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 5.29 - 5.18 (m, 1H), 5.02 (s, 1H), 4.28 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 2.80 (dd,J = 9.6, 5.4 Hz, 1H), 2.69 (d,J = 3.6 Hz, 2H), 2.42 - 2.19 (m, 5H), 1.89 - 1.72 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.36 (d,J = 7.2 Hz, 3H)。
Figure 02_image255
L - 丙胺酸 (R)-1- 甲基吡咯啶 -3- 基 酯二鹽酸鹽 . 將中間物JJ1 (2.27 g，0.008 mol)溶解於無水二氯甲烷(20 mL)中，且添加含4 N HCl之二㗁烷(14.59 mL，0.058 mol)。在環境溫度下攪拌4 h。減壓濃縮，且與二氯甲烷共蒸發。在高真空下放置隔夜，且中間物JJ2 按原樣用於下一步驟中。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.34 (s, 1H), 8.81 (s, 3H), 5.38 (s, 1H), 4.06 (q,J = 7.1 Hz, 1H), 3.44 (d,J = 78.6 Hz, 5H), 2.84 (s, 3H), 2.12 (s, 1H), 1.43 (d,J = 7.1 Hz, 3H)。
Figure 02_image257
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸 (R)-1- 甲基吡咯啶 -3- 基 酯 . 在氬氣氛圍下在0℃下，向中間物JJ2 (1.5 g，4.079 mmol)及二氯磷酸苯酯(0.607 mL，4.079 mmol)於無水二氯甲烷(19 mL)中之溶液中添加三乙胺(1.848 mL，13.155 mmol)。在0℃下攪拌所得混合物1 h。接著添加4-硝基苯酚(0.567 g，4.079 mmol)及三乙胺(0.616 mL，4.385 mmol)。在0℃下攪拌1 h後，用Et2 O稀釋反應混合物，且濾出固體。將粗產物減壓濃縮，且藉由矽膠層析(80 g SiO2 Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/二氯甲烷)純化，得到中間物JJ3 (非對映異構混合物)。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 8.26 - 8.18 (m, 2H), 7.44 - 7.30 (m, 4H), 7.26 - 7.15 (m, 3H), 5.20 (d,J = 8.5 Hz, 1H), 4.24 - 3.89 (m, 1H), 3.80 (dd,J = 11.5, 8.8 Hz, 1H), 2.97 - 2.80 (m, 1H), 2.75 (d,J = 21.6 Hz, 1H), 2.68 - 2.58 (m, 1H), 2.39 - 2.18 (m, 5H), 1.78 (dd,J = 14.6, 7.8 Hz, 1H), 1.45 - 1.34 (m, 3H)。LCMS：MSm/z = 450.23 [M+1]；tR = 1.07 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image259
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (R)-1- 甲基吡咯啶 -3- 基酯 . 在室溫下向中間物4 (0.1 g，0.296 mmol)、中間物JJ3 (0.5 g，1.113 mmol)及氯化鎂(0.141 g，1.478 mmol)之混合物中添加四氫呋喃(3 mL)，接著添加N,N -二異丙基乙胺(0.129 mL，0.739 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h。接著減壓濃縮反應混合物，且所獲得殘餘物用飽和氯化鈉溶液及乙酸乙酯稀釋。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析，使用0-10%甲醇/二氯甲烷純化。合併所獲得之純溶離份且濃縮。將所獲得殘餘物溶解於無水乙腈(3 mL)中且在冰浴中冷卻，接著逐滴添加濃鹽酸(0.257 mL，3.086 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1 h且濃縮。所獲得殘餘物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，0-100%乙腈/水，含TFA改質劑)純化。合併純溶離份且減壓濃縮。所獲得殘餘物用水稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液中和。用乙酸乙酯萃取水層。分離有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且凍乾，得到產物(非對映異構混合物)。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.79 (d,J = 0.7 Hz, 1H), 7.40 - 7.29 (m, 2H), 7.28 - 7.15 (m, 3H), 6.86 (dd,J = 6.7, 4.5 Hz, 1H), 6.75 (dd,J = 13.6, 4.6 Hz, 1H), 5.41 - 5.32 (m, 1H), 5.14 (ddt,J = 8.1, 5.4, 2.6 Hz, 1H), 4.82 - 4.55 (m, 3H), 4.36 (dd,J = 14.7, 5.3 Hz, 1H), 4.28 - 4.18 (m, 2H), 3.97 - 3.79 (m, 1H), 2.87 - 2.76 (m, 1H), 2.76 - 2.59 (m, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.40 - 2.19 (m, 2H), 1.79 (ddt,J = 14.5, 7.6, 3.9 Hz, 1H), 1.28 (ddd,J = 17.1, 7.1, 1.1 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.41 - -238.79 (m)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.72, 3.44。LCMS：MSm/z = 609.20 [M+1]；tR = 0.80 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：tR = 3.113 min (主要異構體)及3.168 min (次要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 36. 雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-2-((((((S)-1-(((R)-1- 甲基吡咯啶 -3- 基 ) 氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二酯
Figure 02_image261
在室溫下向實例35 (0.045 g，0.074 mmol)於THF (2 mL)中之溶液中添加異丁酸酐(0.074 mL，0.444 mmol)，且接著添加DMAP (1.3 mg，0.011 mmol)。攪拌所得混合物30 min，藉由LCMS監測。用甲醇淬滅反應混合物且濃縮。所獲得殘餘物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，0-100%乙腈/水，含TFA改質劑)純化，得到產物(非對映異構混合物)。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.80 (d,J = 3.4 Hz, 1H), 7.33 (dd,J = 8.4, 7.4 Hz, 2H), 7.28 - 7.15 (m, 3H), 6.87 - 6.58 (m, 2H), 5.96 - 5.71 (m, 2H), 5.59 (dd,J = 7.9, 2.7 Hz, 1H), 5.20 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.77 - 4.49 (m, 2H), 4.40 - 4.22 (m, 2H), 4.02 - 3.83 (m, 1H), 2.94 - 2.62 (m, 3H), 2.54 - 2.35 (m, 5H), 2.25 (dq,J = 22.6, 7.4 Hz, 2H), 1.89 - 1.72 (m, 1H), 1.32 (dd,J = 7.1, 1.1 Hz, 3H), 1.22 (dd,J = 7.0, 1.1 Hz, 6H), 1.06 (ddd,J = 18.6, 7.0, 4.7 Hz, 6H)。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -235.33 (t,J = 46.8 Hz), -235.86 (t,J = 46.7 Hz)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.38。LCMS：MSm/z = 749.24 [M+1]；tR = 1.13 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Sp及Rp非對映異構體之解析. 非對映異構體藉由對掌性製備型SFC (SFC Chiralpak IA 5µm，25×250 mm；25%異丙醇)彼此分離。
Figure 02_image263
實例 37. 實例 36 之第一溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.81 (s, 1H), 7.38 - 7.29 (m, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 6.84 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.76 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 5.96 - 5.79 (m, 2H), 5.59 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 5.22 (dq,J = 6.8, 3.6 Hz, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.61 (s, 1H), 4.42 - 4.26 (m, 2H), 3.99 - 3.85 (m, 1H), 3.14 - 2.92 (m, 3H), 2.68 (dt,J = 14.0, 7.0 Hz, 2H), 2.58 - 2.42 (m, 4H), 2.32 (dq,J = 14.7, 7.4 Hz, 1H), 2.04 - 1.83 (m, 1H), 1.25 (ddd,J = 20.9, 7.1, 1.1 Hz, 9H), 1.06 (dd,J = 17.9, 7.0 Hz, 6H)。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -235.85 (t,J = 46.7 Hz)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.43。LCMS：MSm/z = 749.24 [M+1]；tR = 1.16 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µl/min。HPLC：tR = 4.614 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 38. 實例 36 之第二溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.80 (s, 1H), 7.38 - 7.28 (m, 2H), 7.26 - 7.16 (m, 3H), 6.80 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 6.63 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 5.89 - 5.75 (m, 2H), 5.59 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 5.19 (ddt,J = 8.0, 5.4, 2.7 Hz, 1H), 4.79 - 4.51 (m, 2H), 4.42 - 4.19 (m, 2H), 3.95 (dq,J = 9.8, 7.1 Hz, 1H), 2.96 - 2.60 (m, 4H), 2.53 - 2.37 (m, 5H), 2.32 - 2.17 (m, 1H), 1.82 (dtd,J = 14.3, 7.2, 2.6 Hz, 1H), 1.33 (dd,J = 7.1, 1.1 Hz, 3H), 1.22 (dd,J = 7.0, 1.2 Hz, 6H), 1.05 (dd,J = 18.3, 7.0 Hz, 6H)。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -235.32 (t,J = 46.8 Hz)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.37。LCMS：MSm/z = 749.23 [M+1]；tR = 1.13 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µl/min。HPLC：tR = 4.553 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 39. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (R)-2- 甲氧基丙酯
Figure 02_image265
(R)-((2- 甲氧基丙氧基 ) 甲基 ) 苯 . 向(R)-(-)-1-苯甲氧基-2-丙醇(3.0 g，0.018 mol)於THF (20 mL)中之冰冷溶液中逐份添加氫化鈉(0.866 g，0.036 mol)。在0℃下攪拌反應混合物30 min，接著添加碘甲烷(2.247 mL，0.036 mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌1 h，並用冰冷的水及乙酸乙酯稀釋。分離有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析，使用0-40%乙酸乙酯/己烷純化，得到中間物NN1 。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 7.37 (d,J = 4.3 Hz, 4H), 7.31 (dd,J = 10.5, 6.1 Hz, 1H), 4.66 - 4.53 (m, 2H), 3.64 - 3.38 (m, 3H), 3.42 (s, 3H), 1.18 (d,J = 6.3 Hz, 3H)。
Figure 02_image267
( 三級丁氧基羰基 )-L - 丙胺酸 (R)-2- 甲氧基丙酯 . 向中間物NN1 (2.0 g，0.011 mol)於THF (20 mL)中之經脫氣溶液中添加10% Pd/C (0.3 g，0.003 mol)，且在氫氣下攪拌反應混合物隔夜。過濾反應混合物，且向濾液中一次性添加(三級丁氧基羰基)-L -丙胺酸(2.519 g，0.013 mol)、乙腈(10 mL)、EDCI (2.5 g，0.016 mol)及DMAP (2.169 g，0.018 mol)。將反應混合物在室溫下攪拌隔夜，且用乙酸乙酯及水稀釋。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。藉由矽膠層析(0-30%乙酸乙酯/己烷)進行純化，得到中間物NN2 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.26 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 4.10 - 3.93 (m, 2H), 3.91 (dd,J = 11.4, 5.7 Hz, 1H), 3.46 (td,J = 6.2, 4.2 Hz, 1H), 3.23 (s, 3H), 1.35 (s, 9H), 1.25 - 1.10 (m, 3H), 1.05 (d,J = 6.4 Hz, 3H)。
Figure 02_image269
(R)-2- 甲氧基丙基 -L - 丙胺酸酯鹽酸鹽 . 將中間物NN2 (2.5 g，0.010 mol)溶解於無水二氯甲烷(25 mL)及含4 N HCl之二㗁烷(11.96 mL，0.048 mol)中。在環境溫度下攪拌所得溶液4 h。減壓濃縮反應物，且與二氯甲烷共蒸發。將所得殘餘物在高真空下放置隔夜，且中間物NN3 按原樣用於下一步驟中。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.63 (s, 3H), 4.19 (dd,J = 11.4, 3.8 Hz, 1H), 4.10 - 3.96 (m, 2H), 3.59 - 3.46 (m, 1H), 3.24 (s, 3H), 1.41 (d,J = 7.2 Hz, 3H), 1.08 (d,J = 6.4 Hz, 3H)。
Figure 02_image271
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸 (R)-2- 甲氧基丙酯 . 在氬氣氛圍下在0℃下，向中間物NN3 (1.95 g，9.865 mmol)及二氯磷酸苯酯(1.468 mL，9.865 mmol)於無水二氯甲烷(34 mL)中之溶液中添加三乙胺(3.05 mL，21.71 mmol)。在0℃下攪拌所得混合物1 h。接著添加4-硝基苯酚(1.372 g，9.865 mmol)及三乙胺(1.525 mL，10.85 mmol)。在0℃下攪拌1 h後，用Et2 O稀釋反應混合物，且濾出固體。將粗產物減壓濃縮，且藉由矽膠層析(80 g SiO2 Combiflash HP Gold管柱，100%二氯甲烷，接著0-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物NN4 (非對映異構混合物)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.33 - 8.23 (m, 2H), 7.54 - 7.44 (m, 1H), 7.49 - 7.33 (m, 3H), 7.23 (m, 3H), 6.70 (ddd,J = 13.7, 9.9, 8.3 Hz, 1H), 4.09 - 3.94 (m, 2H), 3.92 (ddd,J = 11.4, 5.7, 1.4 Hz, 1H), 3.48 - 3.36 (m, 1H), 3.20 (d,J = 1.5 Hz, 3H), 1.23 (ddd,J = 7.2, 4.0, 1.2 Hz, 3H), 1.01 (dd,J = 6.4, 1.1 Hz, 3H)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ -1.26, -1.48。LCMS：MSm/z = 439.00 [M+1]；tR = 1.43 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min
Figure 02_image273
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (R)-2- 甲氧基丙酯 . 在室溫下向中間物4 (0.15 g，0.443 mmol)、中間物NN4 (0.214 g，0.488 mmol)及氯化鎂(0.063 g，0.665 mmol)之混合物中添加四氫呋喃(1.5 mL)，接著添加N,N -二異丙基乙胺(0.193 mL，1.108 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物1.5 h。接著減壓濃縮反應混合物，且所獲得殘餘物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，0-100%乙腈/水)純化。合併純溶離份且減壓濃縮。將所獲得殘餘物溶解於無水乙腈(3 mL)中且在冰浴中冷卻，接著逐滴添加濃鹽酸(0.2 mL，2.4 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1 h。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用冰稀釋，接著用碳酸氫鈉水溶液中和。所得混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，0-100%乙腈/水)純化，得到產物(非對映異構混合物)。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.78 (d,J = 1.1 Hz, 1H), 7.33 (q,J = 7.8 Hz, 2H), 7.27 - 7.13 (m, 3H), 6.85 (dd,J = 6.2, 4.6 Hz, 1H), 6.74 (dd,J = 10.6, 4.6 Hz, 1H), 5.36 (dd,J = 8.3, 6.1 Hz, 1H), 4.82 - 4.55 (m, 3H), 4.35 (dd,J = 17.4, 5.3 Hz, 1H), 4.29 - 4.15 (m, 2H), 4.10 (ddd,J = 11.5, 4.0, 2.6 Hz, 1H), 4.06 - 3.86 (m, 2H), 3.53 (ddt,J = 9.8, 6.3, 3.5 Hz, 1H), 3.31 (s, 3H), 1.29 (ddd,J = 19.7, 7.2, 1.1 Hz, 3H), 1.11 (dd,J = 6.4, 2.3 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.52 - -238.94 (m)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.70, 3.41。LCMS：MSm/z = 598.04 [M+1]；tR = 0.99 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：tR = 3.947 min (次要異構體)，4.011 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 . 非對映異構體藉由對掌性製備型SFC (SFC Chiralpak AD-H 5µm，21×250 mm；30%異丙醇)彼此分離：
Figure 02_image275
實例 40. 實例39之第一溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.78 (s, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 3H), 6.86 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.76 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 5.37 (d,J = 8.2 Hz, 1H), 4.83 - 4.71 (m, 1H), 4.71 - 4.59 (m, 2H), 4.37 (d,J = 5.3 Hz, 1H), 4.26 (dd,J = 5.0, 1.7 Hz, 2H), 4.09 (dd,J = 11.5, 4.0 Hz, 1H), 4.06 - 3.86 (m, 2H), 3.60 - 3.48 (m, 1H), 3.31 (s, 3H), 1.26 (dd,J = 7.2, 1.2 Hz, 3H), 1.12 (d,J = 6.4 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.68 (t,J = 47.9 Hz)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.71。LCMS：MSm/z = 598.08 [M+1]；tR = 0.96 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µl/min。HPLC：tR = 3.938 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 41. 實例39之第二溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.78 (s, 1H), 7.39 - 7.29 (m, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 6.84 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 5.36 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.82 - 4.56 (m, 3H), 4.33 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.21 (tt,J = 6.0, 3.6 Hz, 2H), 4.10 (dd,J = 11.5, 3.9 Hz, 1H), 4.03 - 3.88 (m, 2H), 3.53 (pd,J = 6.3, 4.0 Hz, 1H), 1.31 (dd,J = 7.2, 1.0 Hz, 3H), 1.11 (d,J = 6.4 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.81 (t,J = 47.6 Hz)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.42。LCMS：MSm/z = 598.05 [M+1]；tR = 0.99 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：tR = 4.004 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 42. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 丁氧基乙酯
Figure 02_image277
( 三級丁氧基羰基 )-L - 丙胺酸 2- 丁氧基乙酯 . 在氬氣氛圍下在0℃下，向(三級丁氧基羰基)-L -丙胺酸(10.57 g，56 mmol)及2-丁氧基乙-1-醇(6.00 g，51 mmol)於無水二氯甲烷(100 mL)中之經攪拌溶液中添加N -甲基嗎啉(16.75 mL，152 mmol)、4-(二甲基胺基)吡啶(0.12 g，1 mmol)及三丙基膦酸環酐(36.27 mL，61 mmol，50%於乙酸乙酯中)。接著在室溫下攪拌反應混合物2小時。反應混合物用水(50 mL)洗滌，用10%檸檬酸溶液(2× 40 mL)洗滌兩次，用飽和碳酸氫鈉水溶液(2× 40 mL)洗滌兩次，且用鹽水(50 mL)洗滌一次，經硫酸鈉乾燥，經由3 cm矽膠層過濾，用額外二氯甲烷洗滌矽膠層。將合併之有機物減壓濃縮，與二氯甲烷共蒸餾，且高真空乾燥隔夜，得到中間物QQ1 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.27 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 4.26 - 4.14 (m, 1H), 4.14 - 4.06 (m, 1H), 4.05 - 3.93 (m, 1H), 3.58 - 3.49 (m, 2H), 3.39 (t,J = 6.5 Hz, 2H), 1.50 - 1.42 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.35 - 1.27 (m, 2H), 1.23 (d,J = 7.4 Hz, 3H), 0.87 (t,J = 7.4 Hz, 3H)。
Figure 02_image279
(( 全氟苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸 2- 丁氧基乙酯 . 將中間物QQ1 (14.2 g，49.07 mmol)溶解於50 mL含4 M HCl之1,4-二㗁烷中，且將反應混合物在室溫下攪拌2小時，減壓濃縮，且與甲苯共蒸餾，得到純固體，將其高真空乾燥1小時。將固體懸浮於二氯甲烷(200 mL)中，且在-78℃下依序添加二氯磷酸苯酯(8.03 mL，53.98 mmol)及三乙胺(14.96 mL，107.96 mmol)，並且在室溫下攪拌所得混合物2小時。將反應混合物冷卻至0℃，且接著依序添加五氟苯酚(9.03 g，49.07 mmol)及三乙胺(8.84 mL，63.79 mmol)，並且接著使所得混合物升溫至室溫。3小時後，將反應混合物冷卻至0℃且濾出固體，用飽和氯化銨水溶液(100 mL)、水(100 mL)及鹽水(50 mL)洗滌濾液。有機物經硫酸鈉乾燥且經由3 cm矽膠層過濾，用1:5之乙酸乙酯及二氯甲烷混合物(100 mL)洗滌矽膠層。將合併之有機物減壓濃縮，得到22.5 g固體粗產物，基於NMR，其為兩種磷異構體之混合物。將固體溶解於二異丙基醚(6 mL)及己烷(200 mL)之沸騰混合物中，且在室溫下劇烈攪拌混合物隔夜。藉由過濾分離固體產物且用己烷(3× 40 mL)洗滌，得到中間物QQ2 。藉由NMR光譜確定中間物QQ2為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.47 - 7.35 (m, 2H), 7.31 - 7.16 (m, 3H), 6.93 (dd,J = 14.2, 9.9 Hz, 1H), 4.23 - 4.08 (m, 2H), 4.07 - 3.90 (m, 1H), 3.52 (t,J = 4.8 Hz, 2H), 3.35 (t,J = 6.5 Hz, 2H), 1.46 - 1.37 (m, 2H), 1.36 - 1.18 (m, 5H), 0.84 (t,J = 7.4 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -154.25 (d,J = 21.6 Hz, 2F), -160.87 (td,J = 23.3, 3.2 Hz, 1F), -163.70 (td,J = 24.0, 4.2 Hz, 2F)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 0.42。LCMS：MSm/z = 511.95 [M+1]，tR = 1.70 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µL/min。
Figure 02_image281
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 丁氧基乙酯 . 在室溫下將四氫呋喃(0.7 mL)添加至中間物4 (100 mg，0.296 mmol)、中間物QQ2 (196 mg，0.384 mmol)及氯化鎂(42 mg，0.443 mmol)之混合物中。將混合物加熱至40℃後保持10 min，且添加N ,N -二異丙基乙胺(0.129 mL，0.739 mmol)。在40℃下攪拌2小時後，將反應混合物冷卻至室溫，且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙酸乙酯(20 mL)中，且用水(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。分離有機層，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙腈(5 mL)中，且在0℃下逐滴添加濃鹽酸水溶液(0.246 mL)。在0℃下4小時後，在0℃下用乙酸乙酯(30 mL)及水(20 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.10 - 7.75 (m, 3H), 7.43 - 7.33 (m, 2H), 7.27 - 7.15 (m, 3H), 6.91 (d,J = 4.4 Hz, 1H), 6.71 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.11 (dd,J = 13.3, 10.1 Hz, 1H), 5.43 - 5.10 (m, 3H), 4.70 - 4.57 (m, 1H), 4.58 - 4.44 (m, 2H), 4.23 - 4.12 (m, 2H), 4.13 - 4.02 (m, 1H), 3.99 (d,J = 5.3 Hz, 2H), 3.93 - 3.78 (m, 1H), 3.55 -
Figure 02_image290
3.49 (m, 2H), 3.35 - 3.33 (m, 2H), 1.47 - 1.37 (m, 2H), 1.34 - 1.17 (m, 5H), 0.84 (t,J = 7.4 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -236.74 (t,J = 47.9 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.44。LCMS：MSm/z = 626.03 [M+1]，tR = 1.26 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µl/min。HPLC：tR = 2.78 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：tR = 4.68 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 43. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 甲氧基 -2- 甲基丙酯
Figure 02_image291
( 三級丁氧基羰基 )-L - 丙胺酸 2- 甲氧基 -2- 甲基丙酯 . 在氬氣氛圍下在0℃下，向(三級丁氧基羰基)-L -丙胺酸(4.00 g，21 mmol)及2-甲氧基-2-甲基丙-1-醇(2.00 g，19 mmol)於無水二氯甲烷(50 mL)中之經攪拌溶液中添加N -甲基嗎啉(6.33 mL，58 mmol)、4-(二甲基胺基)吡啶(0.05 g，0.4 mmol)及三丙基膦酸環酐(13.72 mL，23 mmol，50%於乙酸乙酯中)。接著在室溫下攪拌反應混合物2小時。反應混合物用水(30 mL)洗滌，用10%檸檬酸溶液(2× 20 mL)洗滌兩次，用飽和碳酸氫鈉水溶液(2× 20 mL)洗滌兩次，且用鹽水(20 mL)洗滌一次，經硫酸鈉乾燥，經由3 cm矽膠層過濾，用二氯甲烷及乙酸乙酯之3:1混合物洗滌矽膠層。將合併之有機物減壓濃縮，與二氯甲烷共蒸餾，且高真空乾燥隔夜，得到中間物RR1 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.30 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 4.10 - 3.77 (m, 3H), 3.11 (s, 3H), 1.37 (s, 9H), 1.24 (d,J = 7.4 Hz, 3H), 1.10 (s, 6H)。
Figure 02_image293
(( 全氟苯氧基 )( 苯氧基 )- 磷醯基 )-L - 丙胺酸 2- 甲氧基 -2- 甲基丙酯 . 將中間物RR1 (5.1 g，18.52 mmol)溶解於15 mL含4 M HCl之1,4-二㗁烷中，且將反應混合物在室溫下攪拌2小時，減壓濃縮，且與甲苯共蒸餾，得到純固體，將其高真空乾燥1小時。將固體懸浮於二氯甲烷(100 mL)中，且在-78℃下依序添加二氯磷酸苯酯(3.03 mL，20.37 mmol)及三乙胺(5.65 mL，40.75 mmol)，並且在室溫下攪拌所得混合物2小時。將反應混合物冷卻至0℃，且接著依序添加五氟苯酚(3.41 g，18.52 mmol)及三乙胺(3.59 mL，25.93 mmol)，並且接著使所得混合物升溫至室溫。3小時後，將反應混合物冷卻至0℃且濾出固體，用飽和氯化銨水溶液(100 mL)、水(100 mL)及鹽水(50 mL)洗滌濾液。有機物經硫酸鈉乾燥且經由3 cm矽膠層過濾，用1:3之乙酸乙酯及二氯甲烷混合物(100 mL)洗滌矽膠層。將合併之有機物減壓濃縮，得到6.23 g粗產物，基於NMR，其為兩種磷異構體之混合物。將固體溶解於沸騰的二異丙基醚(50 mL)中，且在室溫下劇烈攪拌混合物隔夜。濾出固體產物，且用冷的二異丙基醚(2× 10 mL)及己烷(3× 20 mL)洗滌，得到中間物RR2。藉由NMR光譜確定中間物RR2 為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.46 - 7.36 (m, 2H), 7.29 - 7.16 (m, 3H), 6.92 (dd,J = 14.2, 9.9 Hz, 1H), 4.12 - 3.86 (m, 3H), 3.09 (s, 3H), 1.31 (d,J = 7.1 Hz, 3H), 1.09 (s, 6H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -154.22 (d,J = 21.4 Hz, 2F), -160.89 (td,J = 23.4, 3.2 Hz, 1F), -163.69 (td,J = 23.4, 4.0 Hz, 2F)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 0.43。LCMS：MSm/z = 497.86 [M+1]，tR = 1.65 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µL/min。
Figure 02_image295
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 甲氧基 -2- 甲基丙酯 . 在室溫下將四氫呋喃(0.7 mL)添加至中間物4 (100 mg，0.296 mmol)、中間物RR2 (191 mg，0.384 mmol)及氯化鎂(42 mg，0.443 mmol)之混合物中。將混合物加熱至40℃後保持10 min，且添加N ,N -二異丙基乙胺(0.129 mL，0.739 mmol)。在40℃下攪拌2小時後，將反應混合物冷卻至室溫，且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙酸乙酯(20 mL)中，且用水(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。分離有機層，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙腈(5 mL)中，且在0℃下逐滴添加濃鹽酸水溶液(0.246 mL)。在0℃下4小時後，在0℃下用乙酸乙酯(30 mL)及水(20 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.70 (bs, 2H), 7.44 - 7.30 (m, 2H), 7.26 - 7.14 (m, 3H), 6.84 (d,J = 4.4 Hz, 1H), 6.68 (d,J = 4.4 Hz, 1H), 6.10 (dd,J = 13.1, 10.1 Hz, 1H), 5.29 - 5.21 (m, 2H), 5.13 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 4.72 - 4.43 (m, 3H), 4.25 - 4.15 (m, 1H), 4.03 - 3.95 (m, 3H), 3.95 - 3.82 (m, 2H), 3.08 (s, 3H), 1.26 (d,J = 7.2 Hz, 3H), 1.09 (s, 6H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -236.71 (t,J = 48.1 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.47。LCMS：MSm/z = 612.03 [M+1]，tR = 1.16 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µl/min。HPLC：tR = 2.47 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。實例 44. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 萘 -1- 基氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸乙酯
Figure 02_image297
(( 萘 -1- 基氧基 )( 全氟苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸乙酯 . 在氬氣下在-78℃下，向磷醯三氯(3.00 g，19.57 mmol)於無水四氫呋喃(50 mL)中之溶液中添加萘-1-醇(2.82 g，19.57 mmol)。逐滴添加三乙胺(6.00 mL，43.05 mmol)。15分鐘後，將反應物升溫至0℃。30分鐘後，將反應物再次冷卻至-78℃，且添加L -丙胺酸乙酯鹽酸鹽(3.01 g，19.57 mmol)，接著添加三乙胺(2.73 mL，19.57 mmol)。將反應物升溫至室溫且攪拌3小時。將反應物冷卻至0℃，且添加五氟苯酚(3.60 g，19.57 mmol)，接著逐滴添加三乙胺(3.00 mL，21.52 mmol)。將反應混合物升溫至室溫且攪拌2小時，用乙酸乙酯(100 mL)稀釋，且用飽和氯化銨水溶液(100 mL)、水(100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌。有機物經硫酸鈉乾燥，過濾且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠管柱層析，使用0至35%乙酸乙酯/己烷梯度純化，得到4.9 g呈非對映異構體混合物之粗產物。將固體溶解於沸騰的二異丙基醚(70 mL)中，且在室溫下劇烈攪拌混合物隔夜。濾出固體產物，且用冷的二異丙基醚(2× 10 mL)及己烷(3× 20 mL)洗滌，得到中間物SS1 。藉由NMR光譜確定中間物SS1為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.14 - 8.08 (m, 1H), 8.03 - 7.98 (m, 1H), 7.82 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 7.67 - 7.44 (m, 4H), 7.11 (dd,J = 14.3, 9.9 Hz, 1H), 4.15 - 3.92 (m, 3H), 1.33 (d,J = 7.1 Hz, 3H), 1.09 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -154.19 (d,J = 21.6 Hz, 2F), -160.70 (t,J = 23.4 Hz, 1F), -163.61 (t,J = 21.9 Hz, 2F)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 0.68。LCMS：MSm/z = 489.95 [M+1]，tR = 1.76 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µL/min。
Figure 02_image299
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 萘 -1- 基氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸乙酯 . 在室溫下將四氫呋喃(0.4 mL)添加至中間物4 (50 mg，0.148 mmol)、中間物SS1 (94 mg，0.192 mmol)及氯化鎂(21 mg，0.222 mmol)之混合物中。將混合物加熱至40℃後保持10 min，且添加N ,N -二異丙基乙胺(0.064 mL，0.369 mmol)。在40℃下攪拌2小時後，將反應混合物冷卻至室溫，且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙酸乙酯(20 mL)中，且用水(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。分離有機層，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙腈(5 mL)中，且在0℃下逐滴添加濃鹽酸水溶液(0.123 mL)。在0℃下4小時後，在0℃下用乙酸乙酯(30 mL)及水(20 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.19 - 8.10 (m, 1H), 8.02 - 7.93 (m, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.80 - 7.72 (m, 1H), 7.62 - 7.55 (m, 2H), 7.52 - 7.43 (m, 2H), 6.91 (d,J = 4.4 Hz, 1H), 6.67 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.26 (dd,J = 13.0, 10.1 Hz, 1H), 5.38 - 5.11 (m, 3H), 4.74 - 4.46 (m, 3H), 4.22 (d,J = 4.9 Hz, 1H), 4.13 - 3.99 (m, 4H), 3.95 - 3.86 (m, 1H), 1.22 (d,J = 7.1 Hz, 3H), 1.12 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -236.51 (t,J = 47.7 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.98。LCMS：MSm/z = 604.02 [M+1]，tR = 1.21 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µL/min。HPLC：tR = 2.69 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：tR = 4.51 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 45. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2-(2- 乙氧基乙氧基 ) 乙酯
Figure 02_image301
( 三級丁氧基羰基 )-L - 丙胺酸 2-(2- 乙氧基乙氧基 ) 乙酯 . 在氬氣氛圍下在0℃下，向(三級丁氧基羰基)-L -丙胺酸(12.41 g，66 mmol)及2-(2-乙氧基乙氧基)乙-1-醇(8.00 g，60 mmol)於無水二氯甲烷(100 mL)中之經攪拌溶液中添加N -甲基嗎啉(19.67 mL，179 mmol)、4-(二甲基胺基)吡啶(0.15 g，1.2 mmol)及三丙基膦酸環酐(42.6 mL，72 mmol，50%於乙酸乙酯中)。接著在室溫下攪拌反應混合物2小時。反應混合物用水(50 mL)洗滌，用10%檸檬酸溶液(2× 40 mL)洗滌兩次，用飽和碳酸氫鈉水溶液(2× 40 mL)洗滌兩次，且用鹽水(50 mL)洗滌一次，經硫酸鈉乾燥，經由3 cm矽膠層過濾，用額外二氯甲烷洗滌矽膠層。將合併之有機物減壓濃縮，與二氯甲烷共蒸餾，且高真空乾燥隔夜，得到中間物TT1 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.27 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 4.23 - 4.14 (m, 1H), 4.14 - 4.06 (m, 1H), 4.05 - 3.94 (m, 1H), 3.64 - 3.56 (m, 2H), 3.55 - 3.49 (m, 2H), 3.49 - 3.39 (m, 4H), 1.38 (s, 9H), 1.23 (d,J = 7.4 Hz, 3H), 1.09 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。
Figure 02_image303
(( 全氟苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸 2-(2- 乙氧基乙氧基 ) 乙酯 . 將中間物TT1 (18.3 g，59.93 mmol)溶解於50 mL含4 M HCl之1,4-二㗁烷中，且將反應混合物在室溫下攪拌2小時，減壓濃縮，且與甲苯共蒸餾，得到粗產物，將其高真空乾燥1小時。將所得固體懸浮於二氯甲烷(100 mL)中，且在-78℃下依序添加二氯磷酸苯酯(9.81 mL，65.92 mmol)及三乙胺(18.28 mL，131.84 mmol)，並且在室溫下攪拌所得混合物2小時。將反應混合物冷卻至0℃，且接著依序添加五氟苯酚(11.03 g，59.93 mmol)及三乙胺(10.80 mL，78.05 mmol)，並且接著使所得混合物升溫至室溫。3小時後，將反應混合物冷卻至0℃且濾出固體，用飽和氯化銨水溶液(100 mL)、水(100 mL)及鹽水(50 mL)洗滌濾液。有機物經硫酸鈉乾燥且經由3 cm矽膠層過濾，用1:1之乙酸乙酯及二氯甲烷混合物(100 mL)洗滌矽膠層。將合併之有機物減壓濃縮，得到21.7 g呈非對映異構體混合物之粗產物。將固體溶解於最少量的沸騰二異丙基醚中，且在室溫下劇烈攪拌混合物隔夜。濾出固體產物，且用冷的二異丙基醚(2× 20 mL)及己烷(3× 40 mL)洗滌，得到中間物TT2 。藉由NMR光譜確定中間物TT2為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.47 - 7.36 (m, 2H), 7.30 - 7.20 (m, 3H), 6.92 (dd,J = 14.2, 9.9 Hz, 1H), 4.21 - 4.08 (m, 2H), 4.07 - 3.92 (m, 1H), 3.62 - 3.56 (m, 2H), 3.53 - 3.47 (m, 2H), 3.45 - 3.36 (m, 4H), 1.29 (d,J = 7.1 Hz, 3H), 1.07 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -154.24 (d,J = 21.5 Hz, 2F), -160.86 (t,J = 23.1 Hz, 1F), -163.68 (t,J = 21.7 Hz, 2F)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 0.40。LCMS：MSm/z = 528.06 [M+1]，tR = 1.64 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µL/min。
Figure 02_image305
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2-(2- 乙氧基乙氧基 ) 乙酯 . 在室溫下將四氫呋喃(0.7 mL)添加至中間物4 (100 mg，0.295 mmol)、中間物TT2 (203 mg，0.384 mmol)及氯化鎂(42 mg，0.443 mmol)之混合物中。將混合物加熱至40℃後保持10 min，且添加N ,N -二異丙基乙胺(0.129 mL，0.739 mmol)。在40℃下攪拌2小時後，將反應混合物冷卻至室溫，且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙酸乙酯(20 mL)中，且用水(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。分離有機層，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙腈(5 mL)中，且在0℃下逐滴添加濃鹽酸水溶液(0.246 mL)。在0℃下4小時後，在0℃下用乙酸乙酯(30 mL)及水(20 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.84 (s, 1H), 7.77 (bs, 2H), 7.42 - 7.34 (m, 2H), 7.28 - 7.13 (m, 3H), 6.86 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.69 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.11 (dd,J = 13.3, 10.1 Hz, 1H), 5.37 - 5.22 (m, 2H), 5.20 - 5.10 (m, 1H), 4.64 (q,J = 10.2 Hz, 1H), 4.57 - 4.43 (m, 2H), 4.24 - 4.14 (m, 2H), 4.12 - 4.05 (m, 1H), 4.03 - 3.97 (m, 2H), 3.92 - 3.79 (m, 1H), 3.59 - 3.54 (m, 2H), 3.51 - 3.45 (m, 2H), 3.43 - 3.38 (m, 4H), 1.24 (d,J = 7.1 Hz, 3H), 1.07 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -236.74 (t,J = 48.1 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.43。LCMS：MSm/z = 642.08 [M+1]，tR = 1.13 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µl/min。HPLC：tR = 2.43 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：tR = 4.05 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 46. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸丁酯
Figure 02_image307
( 三級丁氧基羰基 )-L - 丙胺酸丁酯 . 在氬氣氛圍下在0℃下，向(三級丁氧基羰基)-L -丙胺酸(14.04 g，74 mmol)及丁-1-醇(5.00 g，67 mmol)於無水二氯甲烷(100 mL)中之經攪拌溶液中添加N -甲基嗎啉(22.25 mL，202 mmol)、4-(二甲基胺基)吡啶(0.17 g，1.4 mmol)及三丙基膦酸環酐(48.19 mL，81 mmol，50%於乙酸乙酯中)。接著在室溫下攪拌反應混合物2小時。反應混合物用水(50 mL)洗滌，用10%檸檬酸溶液(2× 40 mL)洗滌兩次，用飽和碳酸氫鈉水溶液(2× 40 mL)洗滌兩次，且用鹽水(50 mL)洗滌一次，經硫酸鈉乾燥，經由3 cm矽膠層過濾，用額外二氯甲烷洗滌矽膠層。將合併之有機物減壓濃縮，與二氯甲烷共蒸餾，且高真空乾燥隔夜，得到中間物UU1 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.27 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 4.19 - 3.89 (m, 3H), 1.60 - 1.48 (m, 2H), 1.42 - 1.28 (m, 11H), 1.22 (d,J = 7.4 Hz, 3H), 0.88 (t,J = 7.4 Hz, 3H)。
Figure 02_image309
(( 全氟苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸丁酯 . 將中間物UU1 (6.75 g，27.5 mmol)溶解於30 mL含4 M HCl之1,4-二㗁烷中，且將反應混合物在室溫下攪拌2小時，減壓濃縮，且與甲苯共蒸餾，得到固化固體，將其高真空乾燥1小時。將固體懸浮於二氯甲烷(30 mL)中，且在-78℃下依序添加二氯磷酸苯酯(4.51 mL，30.3 mmol)及三乙胺(8.39 mL，60.6 mmol)，並且在室溫下攪拌所得混合物2小時。將反應混合物冷卻至0℃，且接著依序添加五氟苯酚(5.07 g，27.5 mmol)及三乙胺(4.20 mL，30.0 mmol)，並且接著使所得混合物升溫至室溫。3小時後，將反應混合物冷卻至0℃且濾出固體，用飽和氯化銨水溶液(50 mL)、水(50 mL)及鹽水(20 mL)洗滌濾液。有機物經硫酸鈉乾燥且經由3 cm矽膠層過濾，用額外二氯甲烷(50 mL)洗滌矽膠層。將合併之有機物減壓濃縮，得到12.2 g呈非對映異構體混合物之粗產物。將固體溶解於沸騰的己烷(120 mL)中，且在室溫下劇烈攪拌混合物隔夜。濾出固體產物且用己烷(3× 30 mL)洗滌，得到中間物UU2 。藉由NMR光譜確定中間物UU2為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.47 - 7.36 (m, 2H), 7.30 - 7.17 (m, 3H), 6.89 (dd,J = 14.2, 9.9 Hz, 1H), 4.12 - 3.91 (m, 3H), 1.59 - 1.45 (m, 2H), 1.38 - 1.19 (m, 5H), 0.85 (t,J = 7.3 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -154.24 (d,J = 20.7 Hz, 2F), -160.88 (t,J = 23.1 Hz, 1F), -163.70 (t,J = 21.6 Hz, 2F)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 0.48。LCMS：MSm/z = 467.92 [M+1]，tR = 1.86 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2%乙腈，2 µL/min。
Figure 02_image311
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸丁酯 . 在室溫下將四氫呋喃(0.5 mL)添加至中間物4 (70 mg，0.207 mmol)、中間物UU2 (126 mg，0.269 mmol)及氯化鎂(30 mg，0.310 mmol)之混合物中。將混合物加熱至40℃後保持10 min，且添加N ,N -二異丙基乙胺(0.090 mL，0.517 mmol)。在40℃下攪拌2小時後，將反應混合物冷卻至室溫，且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙酸乙酯(20 mL)中，且用水(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。分離有機層，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中，且在0℃下逐滴添加濃鹽酸水溶液(0.172 mL)。在0℃下4小時後，在0℃下用乙酸乙酯(30 mL)及水(20 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.73 (bs, 2H), 7.43 - 7.32 (m, 2H), 7.25 - 7.13 (m, 3H), 6.85 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.69 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.08 (dd,J = 13.2, 10.2 Hz, 1H), 5.34 - 5.21 (m, 2H), 5.20 - 5.07 (m, 1H), 4.71 - 4.58 (m, 1H), 4.57 - 4.41 (m, 2H), 4.29 - 4.15 (m, 1H), 4.10 - 3.94 (m, 4H), 3.93 - 3.74 (m, 1H), 1.60 - 1.42 (m, 2H), 1.36 - 1.13 (m, 5H), 0.84 (t,J = 7.4 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -236.73 (t,J = 47.8 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.49。LCMS：MSm/z = 582.02 [M+1]，tR = 1.22 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µl/min。HPLC：tR = 2.75 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：tR = 4.60 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 47. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )(4-( 三級丁基 ) 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸乙酯
Figure 02_image313
((4-( 三級丁基 ) 苯氧基 )(4- 硝基苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸乙酯 . 在氬氣氛圍下在-78℃下，向氯氧化磷(V) (0.61 mL，6.52 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中添加L -丙胺酸乙酯(1.00 g，6.52 mmol)。緩慢逐滴添加三乙胺(2.00 mL，14.35 mmol)。15分鐘後，將反應物升溫至0℃。30分鐘後，將反應物冷卻至-78℃，且添加4-三級丁基苯酚(0.98 g，6.52 mmol)。添加三乙胺(0.91 mL，6.52 mmol)。使反應物升溫至室溫且攪拌3 h。將反應物冷卻至0℃。添加4-硝基苯酚(0.91 g，6.52 mmol)，接著逐滴添加三乙胺(0.91 mL，6.52 mmol)。使反應物升溫至室溫且攪拌2 h。反應物用乙酸乙酯稀釋，且用氯化銨、水、鹽水洗滌。有機物經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。藉由矽膠層析(使用0-50%乙酸乙酯/己烷梯度)分離呈油狀物之中間物VV1 (非對映異構混合物)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.31 (d,J = 8.8 Hz, 2H), 7.57 - 7.36 (m, 4H), 7.24 - 7.09 (m, 2H), 6.76 - 6.57 (m, 1H), 4.12 - 3.77 (m, 3H), 1.30 - 1.21 (m, 12H), 1.11 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ -1.16, -1.24。LCMS：MSm/z = 451.00 [M+1]，tR = 1.84 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。
Figure 02_image315
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )(4-( 三級丁基 ) 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸乙酯 . 在室溫下將四氫呋喃(0.5 mL)添加至中間物4 (40 mg，0.12 mmol)、中間物VV1 (71 mg，0.16 mmol)及氯化鎂(17 mg，0.18 mmol)之混合物中。在室溫下攪拌混合物20分鐘。添加N ,N -二異丙基乙胺(52 µL，0.30 mmol)。將反應物加熱至50℃後保持2 h。將反應混合物冷卻至室溫，且用乙酸乙酯(2 mL)稀釋。有機物用水(2 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。在0℃下向殘餘物於乙腈(2 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸水溶液(0.3 mL，3.6 mmol，12 M)。1 h後，用乙酸乙酯(5 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(5 mL)及鹽水(5 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。殘餘物藉由HPLC層析(Phenomenex Gemini 5 µm C18 110 Å，100 × 30 mm，5-100%乙腈/水梯度)純化，得到實例VV (非對映異構混合物)。LCMS：MSm/z = 609.96 [M+1]，tR = 1.42 min (次要)，1.44 min (主要)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 . 非對映異構體藉由對掌性製備型SFC (SFC Chiralpak AD-H 5µm，250 × 21 mm；25%甲醇)彼此分離：
Figure 02_image317
實例 48. 實例 47 之第一溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 8.00 (s, 1H), 7.40 - 7.33 (m, 3H), 7.16 - 7.09 (m, 2H), 6.99 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 5.40 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 4.82 - 4.72 (m, 1H), 4.70 - 4.57 (m, 2H), 4.39 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.34 - 4.20 (m, 2H), 4.12 (q,J = 7.1 Hz, 2H), 3.96 - 3.83 (m, 1H), 1.33 - 1.26 (m, 12H), 1.22 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.93。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.56 (t,J = 47.8 Hz)。LCMS：MSm/z = 609.96 [M+1]，tR = 1.42 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：tR = 2.91 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 49. 實例 47 之第二溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.99 (s, 1H), 7.43 - 7.35 (m, 2H), 7.35 - 7.30 (m, 1H), 7.20 - 7.13 (m, 2H), 6.96 (d,J = 4.7 Hz, 1H), 5.39 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.82 - 4.69 (m, 1H), 4.69 - 4.53 (m, 2H), 4.35 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.28 - 4.15 (m, 2H), 4.15 - 4.07 (m, 2H), 3.99 - 3.84 (m, 1H), 1.35 - 1.26 (m, 12H), 1.22 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.78。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.79 (t,J = 47.8 Hz)。LCMS：MSm/z = 609.96 [M+1]，tR = 1.45 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：tR = 2.94 min；Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 50. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (1- 甲基環丙基 ) 甲酯
Figure 02_image319
( 三級丁氧基羰基 )-L - 丙胺酸 (1- 甲基環丙基 ) 甲酯 . 在氬氣氛圍下將1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(1.22 g，6.36 mmol)添加至(三級丁氧基羰基)-L -丙胺酸(1.00 g，5.29 mmol)於10 mL乙腈中之溶液中。15分鐘後，添加4-(二甲基胺基)-吡啶(0.71 g，5.81 mmol)，接著添加(1-甲基環丙基)甲醇(0.51 ml，5.29 mmol)。在室溫下攪拌反應物2 h。反應物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(2 × 10 mL)洗滌。有機物用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)、水(5 mL)、接著鹽水(10 mL)洗滌。有機物經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由矽膠層析(使用0-10%乙酸乙酯/己烷梯度)純化，得到中間物YY1 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.26 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 4.09 - 3.69 (m, 3H), 1.38 (s, 9H), 1.25 (d,J = 7.5 Hz, 3H), 1.06 (s, 3H), 0.56 - 0.39 (m, 2H), 0.38 - 0.24 (m, 2H)。
Figure 02_image321
L - 丙胺酸 (1- 甲基環丙基 ) 甲酯鹽酸鹽 . 在0℃下將含4 M鹽酸之1,4-二㗁烷(3.7 mL，14.80 mmol)添加至中間物YY1 (1.85 g，7.19 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中。1 h後，濃縮反應物。將殘餘物溶解於二氯甲烷(10 mL)中且濃縮。重複前一步驟。中間物YY2 不經進一步純化即用於下一反應。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.41 (s, 3H), 4.13 (q,J = 7.2 Hz, 1H), 4.07 - 3.91 (m, 2H), 1.43 (d,J = 7.2 Hz, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.56 - 0.47 (m, 2H), 0.39 - 0.33 (m, 2H)。
Figure 02_image323
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸 (1- 甲基環丙基 ) 甲酯 . 在0℃下將二氯磷酸苯酯(0.82 mL，5.45 mmol)及三乙胺(1.58 mL，11.36 mmol)依序添加至中間物YY2 (880 mg，4.54 mmol)於二氯甲烷(15 mL)中之懸浮液中。1 h之後，接著在0℃下依序添加4-硝基苯酚(0.63 g，4.54 mmol)及三乙胺(0.79 mL，5.8 mmol)，且接著使所得混合物升溫至室溫。2.5 h之後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0­-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到中間物YY3 (非對映異構混合物)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.34 - 8.27 (m, 2H), 7.55 - 7.37 (m, 4H), 7.31 - 7.17 (m, 3H), 6.78 - 6.65 (m, 1H), 4.13 - 3.97 (m, 1H), 3.89 - 3.76 (m, 2H), 1.31 - 1.21 (m, 3H), 1.02 (d,J = 1.5 Hz, 3H), 0.49 - 0.37 (m, 2H), 0.35 - 0.23 (m, 2H)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ -1.25, -1.44。LCMS：MSm/z = 433.02 [M-1]，tR = 1.75 min (次要)，1.77 (主要)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。
Figure 02_image325
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (1- 甲基環丙基 ) 甲酯 . 在室溫下將四氫呋喃(0.5 mL)添加至中間物4 (40 mg，0.12 mmol)、中間物YY3 (67 mg，0.15 mmol)及氯化鎂(17 mg，0.18 mmol)之混合物中。在室溫下攪拌混合物20分鐘。添加N ,N -二異丙基乙胺(52 µL，0.30 mmol)。將反應物加熱至50℃後保持2 h。將反應混合物冷卻至室溫，且用乙酸乙酯(2 mL)稀釋。有機物用水(2 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。在0℃下向殘餘物於乙腈(2 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸水溶液(0.3 mL，3.60 mmol，12 M)。1 h後，用乙酸乙酯(5 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(5 mL)及鹽水(5 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。殘餘物藉由HPLC層析(Phenomenex Gemini 5 µm C18 110 Å，100 × 30 mm，5-100%乙腈/水)純化，得到產物(非對映異構混合物)。LCMS：MSm/z = 593.95 [M+1]，tR = 1.33 min (次要)，1.35 min (主要)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 . 非對映異構體藉由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA 5µm，250 × 22 mm；100%乙醇)彼此分離：
Figure 02_image327
實例 51. 實例 50 之第一溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.87 (s, 1H), 7.36 - 7.29 (m, 2H), 7.25 - 7.15 (m, 3H), 7.07 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 6.86 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 5.38 (d,J = 8.2 Hz, 1H), 4.81 - 4.73 (m, 1H), 4.70 - 4.59 (m, 2H), 4.38 (d,J = 5.3 Hz, 1H), 4.33 - 4.23 (m, 2H), 4.00 - 3.86 (m, 3H), 1.34 - 1.28 (m, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.51 - 0.47 (m, 2H), 0.38 - 0.33 (m, 2H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.75。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.49 (t,J = 48.0 Hz)。LCMS：MSm/z = 594.00 [M+1]，tR = 1.33 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：tR = 2.70 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 52. 實例 50 之第二溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d 4 ) δ 7.99 (s, 1H), 7.42 - 7.31 (m, 3H), 7.29 - 7.15 (m, 3H), 6.93 (d,J = 4.7 Hz, 1H), 5.38 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.80 - 4.69 (m, 1H), 4.69 - 4.53 (m, 2H), 4.33 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.29 - 4.15 (m, 2H), 4.03 - 3.90 (m, 2H), 3.85 (d,J = 11.1 Hz, 1H), 1.38 - 1.32 (m, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.52 - 0.43 (m, 2H), 0.39 - 0.32 (m, 2H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.60。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.78 (t,J = 47.7 Hz)。LCMS：MSm/z = 594.00 [M+1]，tR = 1.35 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：tR = 2.76 min；Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 53. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 3,3,3- 三氟 -2,2- 二甲基丙酯
Figure 02_image329
( 三級丁氧基羰基 )-L - 丙胺酸 3,3,3- 三氟 -2,2- 二甲基丙酯 . 在氬氣氛圍下將1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(2.43 g，12.69 mmol)添加至(三級丁氧基羰基)-L -丙胺酸(2.00 g，10.57 mmol)於10 mL乙腈中之溶液中。15分鐘後，添加4-(二甲基胺基)-吡啶(1.42 g，11.62 mmol)，接著添加3,3,3-三氟-2,2-二甲基丙-1-醇(1.69 ml，10.55 mmol)。在室溫下攪拌反應物2 h。反應物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(2 × 10 mL)洗滌。有機物用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)、水(5 mL)、接著鹽水(10 mL)洗滌。有機物經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由矽膠層析(使用0-10%乙酸乙酯/己烷梯度)純化，得到中間物BBB1 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.32 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 4.15 (d,J = 11.6 Hz, 1H), 4.08 - 3.95 (m, 2H), 1.37 (s, 9H), 1.25 (d,J = 7.3 Hz, 3H), 1.13 - 1.09 (m, 6H)。
Figure 02_image331
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸 3,3,3- 三氟 -2,2- 二甲基丙酯 . 將含4 M鹽酸之1,4-二㗁烷(10 mL，40.00 mmol)添加至中間物BBB1 (1.88 g，6.00 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液中。1 h後，濃縮反應物。將殘餘物溶解於二氯甲烷(15 mL)中且冷卻至0℃。依序添加二氯磷酸苯酯(1.07 mL，7.21 mmol)及三乙胺(1.83 mL，13.22 mmol)。1 h之後，接著在0℃下依序添加4-硝基苯酚(0.836 g，6.00 mmol)及三乙胺(0.92 mL，7.00 mmol)，且接著使所得混合物升溫至室溫。2.5 h之後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到中間物BBB2 (非對映異構混合物)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.30 (d,J = 8.9 Hz, 2H), 7.56 - 7.36 (m, 4H), 7.35 - 7.16 (m, 3H), 6.85 - 6.64 (m, 1H), 4.18 - 3.94 (m, 3H), 1.30 - 1.23 (m, 3H), 1.10 (s, 6H)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ -1.29, -1.46。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -76.19, -76.19。
Figure 02_image333
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 3,3,3- 三氟 -2,2- 二甲基丙酯 . 在室溫下將四氫呋喃(0.5 mL)添加至中間物4 (40 mg，0.12 mmol)、BBB2 (73 mg，0.15 mmol)及氯化鎂(17 mg，0.18 mmol)之混合物中。在室溫下攪拌混合物20分鐘。添加N ,N -二異丙基乙胺(52 µL，0.30 mmol)。將反應物加熱至50℃後保持2 h。將反應混合物冷卻至室溫，且用乙酸乙酯(2 mL)稀釋。有機物用水(2 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。在0℃下向殘餘物於乙腈(2 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸水溶液(0.3 mL，3.60 mmol，12 M)。1 h後，用乙酸乙酯(5 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(5 mL)及鹽水(5 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。殘餘物藉由HPLC層析(Phenomenex Gemini 5 µm C18 110 Å，100 × 30 mm，5-100%乙腈/水)純化，得到產物。LCMS：MSm/z = 649.97 [M+1]，tR = 1.38 min (次要)，1.40 min (主要)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLCz；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 . 非對映異構體藉由對掌性製備型SFC (SFC Chiralpak AD-H 5 µm，250 × 21 mm；30%異丙醇)彼此分離：
Figure 02_image335
實例 54. 實例 53 之第一溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.84 (s, 1H), 7.38 - 7.30 (m, 2H), 7.24 - 7.15 (m, 3H), 7.00 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 6.82 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 5.38 (d,J = 8.2 Hz, 1H), 4.82 - 4.73 (m, 1H), 4.70 - 4.62 (m, 2H), 4.38 (d,J = 5.3 Hz, 1H), 4.31 - 4.24 (m, 2H), 4.17 (d,J = 11.5 Hz, 1H), 4.09 - 4.03 (m, 1H), 4.01 - 3.93 (m, 1H), 1.37 - 1.26 (m, 3H), 1.19 - 1.12 (m, 6H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.69。1 H去耦19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -78.76 (s), -238.55 (t,J = 47.8 Hz)。LCMS：MSm/z = 649.97 [M+1]，tR = 1.38 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：tR = 2.88 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 55. 實例 53 之第二溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.89 (s, 1H), 7.40 - 7.32 (m, 2H), 7.28 - 7.17 (m, 3H), 7.10 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 6.83 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 5.38 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 4.81 - 4.70 (m, 1H), 4.70 - 4.57 (m, 2H), 4.33 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.29 - 4.14 (m, 3H), 4.07 - 3.91 (m, 2H), 1.34 (dd,J = 7.2, 1.0 Hz, 3H), 1.17 - 1.11 (m, 6H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.50。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ - 78.77 (s), -238.67 (t,J = 47.8 Hz)。LCMS：MSm/z = 649.97 [Mz+1]，tR = 1.40 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：tR = 2.89 min；Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 56. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸丙酯
Figure 02_image337
L - 丙胺酸丙酯鹽酸鹽 . 向L -丙胺酸(20.00 g，224.48 mmol)及1-丙醇(200 mL)之混合物中添加氯三甲基矽烷(30 mL，272.68 mmol)。將所得混合物在密封容器中在70℃下攪拌15 h。減壓濃縮反應物。將固體碾碎，溶解於乙酸乙酯/己烷之混合物(100 mL，50:50)中，且過濾。濾餅用乙酸乙酯/己烷(20 mL，50:50)洗滌且高真空乾燥，得到中間物EEE1 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.63 (s, 3H), 4.20 - 3.95 (m, 3H), 1.69 - 1.54 (m, 2H), 1.41 (d,J = 7.2 Hz, 3H), 0.88 (t,J = 7.4 Hz, 3H)。
Figure 02_image339
(( 全氟苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸丙酯 . 在0℃下將二氯磷酸苯酯(4.88 mL，32.81 mmol)及三乙胺(9.12 mL，65.62 mmol)依序添加至EEE1 (5.00 g，29.83 mmol)於二氯甲烷(50 mL)中之懸浮液中。1 h後，在0℃下依序添加五氟苯酚(5.49 g，29.83 mmol)及三乙胺(4.55 mL，32.81 mmol)，且接著使所得混合物升溫至室溫。2.5 h後，反應混合物用二氯甲烷(100 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析(使用0-30%乙酸乙酯/己烷梯度)純化，得到中間物EEE2 (非對映異構混合物)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 7.46 - 7.38 (m, 2H), 7.30 - 7.18 (m, 3H), 6.89 (dd,J = 14.1, 9.9 Hz, 1H), 4.03 - 3.92 (m, 3H), 1.62 - 1.48 (m, 2H), 1.29 (d,J = 6.8 Hz, 3H), 0.85 (t,J = 7.4 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -154.11 - -154.32 (m), -160.60 - -161.00 (m), -163.56 - -163.91 (m)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 0.48。LCMS：MSm/z = 453.9 [M+1]，tR = 1.81 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。
Figure 02_image341
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸丙酯 . 在室溫下將四氫呋喃(0.5 mL)添加至中間物4 (40 mg，0.12 mmol)、中間物EEE2 (63 mg，0.15 mmol)及氯化鎂(17 mg，0.18 mmol)之混合物中。在室溫下攪拌混合物20分鐘。添加N ,N -二異丙基乙胺(52 µL，0.30 mmol)。將反應物加熱至50℃後保持2 h。將反應混合物冷卻至室溫，且用乙酸乙酯(2 mL)稀釋。有機物用水(2 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。在0℃下向殘餘物於乙腈(2 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸水溶液(0.3 mL，3.60 mmol，12 M)。1 h後，用乙酸乙酯(5 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(5 mL)及鹽水(5 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。殘餘物藉由HPLC層析(Phenomenex Gemini 5 µm C18 110 Å，100 × 30 mm，5-100%乙腈/水)純化，得到實例EEE (非對映異構混合物)。LCMS：MSm/z = 567.94 [M+1]，tR = 1.24 min (次要)，1.26 min (主要)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 . 非對映異構體藉由對掌性製備型SFC (SFC Chiralpak AD-H 5µm，250 × 21 mm；35%乙醇)彼此分離：
Figure 02_image343
實例 57. 實例 56 之第一溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.96 (s, 1H), 7.36 - 7.28 (m, 2H), 7.25 (d,J = 4.7 Hz, 1H), 7.22 - 7.14 (m, 3H), 6.94 (d,J = 4.7 Hz, 1H), 5.39 (d,J = 8.2 Hz, 1H), 4.81 - 4.73 (m, 1H), 4.70 - 4.60 (m, 2H), 4.38 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.33 - 4.21 (m, 2H), 4.11 - 3.99 (m, 2H), 3.97 - 3.87 (m, 1H), 1.70 - 1.57 (m, 2H), 1.33 - 1.27 (m, 3H), 0.93 (t,J = 7.4 Hz, 3H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.59。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -236.94 (t,J = 47.7 Hz)。LCMS：MSm/z = 567.94 [M]，tR = 1.24 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µl/min。HPLC：tR = 2.53 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 58. 實例 56 之第二溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.90 (s, 1H), 7.41 - 7.33 (m, 2H), 7.28 - 7.17 (m, 3H), 7.12 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 6.85 (d,J = 4.7 Hz, 1H), 5.38 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.80 - 4.70 (m, 1H), 4.70 - 4.57 (m, 2H), 4.34 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.27 - 4.17 (m, 2H), 4.11 - 3.98 (m, 2H), 3.97 - 3.85 (m, 1H), 1.71 - 1.55 (m, 2H), 1.36 - 1.29 (m, 3H), 0.92 (t,J = 7.4 Hz, 3H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.59。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -237.39 (t,J = 47.7 Hz)。LCMS：MSm/z = 567.94 [M+1]，tR = 1.26 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µl/min。HPLC：tR = 2.57 min；Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 59. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸戊酯
Figure 02_image345
( 三級丁氧基羰基 )-L - 丙胺酸戊酯 . 在氬氣氛圍下在0℃下，向(三級丁氧基羰基)-L -丙胺酸(5.00 g，26 mmol)及1-戊醇(2.12 g，24.05 mmol)於100 mL無水二氯甲烷中之經攪拌溶液中添加4-甲基嗎啉(7.93 mL，72.15 mmol)、4-(二甲基胺基)吡啶(59 mg，0.48 mmol)及三丙基膦酸環酐(17.18 mL，28.86 mmol，50%於乙酸乙酯中)。接著在室溫下攪拌反應混合物2 h。反應混合物用10%檸檬酸水溶液(20 mL)洗滌2×，用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)洗滌2×，且用鹽水(50 mL)洗滌一次。合併之有機物經硫酸鈉乾燥，經由3 cm矽膠層過濾，用額外二氯甲烷(200 mL)洗滌矽膠層。將有機物減壓濃縮，與DCM共蒸餾，且高真空乾燥隔夜。不進行進一步純化，且中間物HHH1 繼續至下一步驟。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.26 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 4.25 - 3.80 (m, 3H), 1.65 - 1.48 (m, 2H), 1.41 - 1.18 (m, 16H), 1.00 - 0.74 (m, 3H)。
Figure 02_image347
(( 全氟苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸戊酯 . 將中間物HHH1 (6.11 g，22.3 mmol)溶解於二氯甲烷(20 mL)中且冷卻至0℃。添加鹽酸(30.00 mL，120.00 mmol，4 N於二㗁烷中)。2 h後，減壓濃縮反應物。將殘餘物溶解於二氯甲烷(30 mL)中且冷卻至0℃。依序添加二氯磷酸苯酯(3.65 mL，24.53 mmol)及三乙胺(6.80 mL，49.06 mmol)。1 h後，接著在0℃下依序添加五氟苯酚(4.0 g，22.30 mmol)及三乙胺(3.40 mL，24.53 mmol)，且接著使所得混合物升溫至室溫。2.5 h後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)、鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且經由3 cm矽膠過濾。用額外二氯甲烷(200 mL)洗滌墊。減壓濃縮有機物。將殘餘物溶解於熱己烷(30 mL)中且接著用己烷(120 mL)稀釋。攪拌反應物2 h，且藉由過濾分離中間物HHH2 。藉由NMR光譜確定中間物HHH2為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.46 - 7.37 (m, 2H), 7.30 - 7.19 (m, 3H), 6.90 (dd,J = 14.3, 9.9 Hz, 1H), 4.07 - 3.93 (m, 3H), 1.58 - 1.48 (m, 2H), 1.33 - 1.20 (m, 7H), 0.88 - 0.77 (m, 3H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -154.24 (d,J = 21.5 Hz), -160.86 (t,J = 23.1 Hz), -163.69 (dd,J = 24.2, 20.4 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 0.47。LCMS：MSm/z = 481.8 [M+1]，tR = 1.91 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。
Figure 02_image349
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸戊酯 . 在室溫下將四氫呋喃(0.5 mL)添加至中間物4 (40 mg，0.12 mmol)、中間物HHH2 (74 mg，0.15 mmol)及氯化鎂(17 mg，0.18 mmol)之混合物中。在室溫下攪拌混合物20分鐘。添加N ,N -二異丙基乙胺(52 µL，0.30 mmol)。將反應物加熱至50℃後保持2 h。將反應混合物冷卻至室溫，且用乙酸乙酯(2 mL)稀釋。有機物用水(2 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。在0℃下向殘餘物於乙腈(2 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸水溶液(0.3 mL，3.60 mmol，12 M)。1 h後，用乙酸乙酯(5 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(5 mL)及鹽水(5 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。殘餘物藉由HPLC層析(Phenomenex Gemini 5 µm C18 110 Å，100 × 30 mm，5-100%乙腈/水)純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.80 (s, 1H), 7.39 - 7.31 (m, 2H), 7.29 - 7.15 (m, 3H), 6.87 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 6.75 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 5.36 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 4.81 - 4.57 (m, 3H), 4.34 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.21 (d,J = 5.3 Hz, 2H), 4.14 - 4.00 (m, 2H), 3.95 - 3.86 (m, 1H), 1.66 - 1.52 (m, 2H), 1.36 - 1.25 (m, 7H), 0.93 - 0.85 (m, 3H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.59。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.85 (t,J = 47.7 Hz)。LCMS：MSm/z = 595.97 [M+1]，tR = 1.43 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：tR = 2.87 min；Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 60. 二乙酸 (2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-((((S)-(((S)-1-(2- 乙基丁氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-2-( 氟甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二酯
Figure 02_image351
在氬氣下將乙酸酐(11 mg，0.11 mmol)及實例1 (33 mg，0.05 mmol)溶解於無水四氫呋喃(1.0 mL)中，且在室溫下攪拌混合物5分鐘。添加4-二甲基胺基吡啶(0.7 mg，0.005 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物。2小時後，添加甲醇(0.5 mL)，且攪拌混合物20分鐘，接著用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌兩次並用鹽水(10 mL)洗滌一次。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.82 (s, 1H), 7.38 - 7.31 (m, 2H), 7.28 - 7.23 (m, 2H), 7.22 - 7.17 (m, 1H), 6.86 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 6.66 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 5.89 - 5.82 (m, 1H), 5.80 (d,J = 5.5 Hz, 1H), 5.59 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 4.76 - 4.68 (m, 1H), 4.65 - 4.54 (m, 1H), 4.36 - 4.30 (m, 1H), 4.30 - 4.24 (m, 1H), 4.10 - 3.91 (m, 3H), 2.14 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.57 - 1.43 (m, 1H), 1.41 - 1.28 (m, 7H), 0.88 (t,J = 7.5 Hz, 6H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.40。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -236.51 (t,J = 46.9 Hz)。LCMS：MSm/z = 694.1 [M+1]，tR = 1.67 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：tR = 3.32 min；Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 61. 二丙酸 (2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-((((S)-(((S)-1-(2- 乙基丁氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-2-( 氟甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二酯
Figure 02_image353
在氬氣下將丙酸酐(14 mg，0.11 mmol)及實例1 (33 mg，0.05 mmol)溶解於無水四氫呋喃(1.0 mL)中，且在室溫下攪拌混合物5分鐘。添加4-二甲基胺基吡啶(0.7 mg，0.005 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物。2 h後，添加甲醇(0.5 mL)，且攪拌混合物20分鐘，接著用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌兩次並用鹽水(10 mL)洗滌一次。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.41 - 7.29 (m, 2H), 7.29 - 7.23 (m, 2H), 7.23 - 7.16 (m, 1H), 6.89 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 6.67 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 5.92 - 5.79 (m, 2H), 5.59 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 4.76 - 4.67 (m, 1H), 4.65 - 4.54 (m, 1H), 4.37 - 4.31 (m, 1H), 4.29 - 4.24 (m, 1H), 4.09 - 4.04 (m, 1H), 4.03 - 3.94 (m, 2H), 2.49 - 2.42 (m, 2H), 2.31 - 2.23 (m, 2H), 1.54 - 1.46 (m, 1H), 1.40 - 1.31 (m, 7H), 1.17 (t,J = 7.6 Hz, 3H), 1.05 (t,J = 7.5 Hz, 3H), 0.88 (t,J = 7.5 Hz, 6H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.41。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -236.30 (t,J = 46.9 Hz)。LCMS：MSm/z = 722.0 [M+1]，tR = 1.78 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：tR = 3.54 min；Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 62. 雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-((((S)-(((S)-1-(2- 乙基丁氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-2-( 氟甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二酯
Figure 02_image355
在氬氣下將異丁酸酐(18 mg，0.11 mmol)及實例1 (34 mg，0.06 mmol)溶解於無水四氫呋喃(1.0 mL)中，且在室溫下攪拌混合物5分鐘。添加4-二甲基胺基吡啶(0.7 mg，0.006 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物。2小時後，添加甲醇(0.5 mL)，且攪拌混合物20分鐘，接著用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌兩次並用鹽水(10 mL)洗滌一次。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.88 (s, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 2H), 7.28 - 7.21 (m, 2H), 7.21 - 7.16 (m, 1H), 6.99 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 6.69 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 5.88 - 5.75 (m, 2H), 5.66 - 5.53 (m, 1H), 4.78 - 4.67 (m, 1H), 4.63 - 4.54 (m, 1H), 4.40 - 4.31 (m, 1H), 4.31 - 4.23 (m, 1H), 4.10 - 4.02 (m, 1H), 4.02 - 3.89 (m, 2H), 2.68 (七重峰,J = 7.0 Hz, 1H), 2.47 (七重峰,J = 7.0 Hz, 1H), 1.58 - 1.43 (m, 1H), 1.39 - 1.30 (m, 7H), 1.25 - 1.18 (m, 6H), 1.08 (d,J = 7.0 Hz, 3H), 1.03 (d,J = 7.0 Hz, 3H), 0.87 (t,J = 7.5 Hz, 6H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.44。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -235.60 (t,J = 46.8 Hz)。LCMS：MSm/z = 750.1 [M+1]，tR = 1.88 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：tR = 3.73 min；Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 63. 雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-((((((S)-1-( 環己氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-2-( 氟甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二酯
Figure 02_image357
在氬氣下將丙酸酐(17 mg，0.13 mmol)及實例14 (40 mg，0.07 mmol)溶解於無水四氫呋喃(1.0 mL)中，且在室溫下攪拌混合物5分鐘。添加4-二甲基胺基吡啶(8 mg，0.07 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物。2小時後，添加甲醇(0.5 mL)，且攪拌混合物20分鐘，接著用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌兩次並用鹽水(10 mL)洗滌一次。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.37 - 7.30 (m, 2H), 7.29 - 7.23 (m, 2H), 7.23 - 7.16 (m, 1H), 6.87 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 6.65 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 5.88 - 5.79 (m, 2H), 5.59 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 4.79 - 4.66 (m, 2H), 4.66 - 4.55 (m, 1H), 4.39 - 4.32 (m, 1H), 4.31 - 4.25 (m, 1H), 3.98 - 3.88 (m, 1H), 2.68 (七重峰,J = 7.0, 1H), 2.47 (七重峰,J = 7.0 , 1H), 1.85 - 1.76 (m, 2H), 1.75 - 1.67 (m, 2H), 1.58 - 1.49 (m, 1H), 1.47 - 1.28 (m, 8H), 1.24 - 1.21 (m, 6H), 1.08 (d,J = 7.0 Hz, 3H), 1.04 (d,J = 6.9 Hz, 3H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.45。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -235.50 (t,J = 46.9 Hz)。LCMS：MSm/z = 748.1 [M+1]，tR = 1.85 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：tR = 3.64 min；Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 64. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸四氫 -2H- 哌喃 -4- 基酯
Figure 02_image359
2- 胺基丙酸 (S)- 四氫 -2H- 哌喃 -4- 基 酯鹽酸鹽 . 向L-丙胺酸(500 mg，5.61 mmol)及四氫-2H -哌喃-4-醇(5 g，49.0 mmol)之混合物中添加TMSCl (2 mL)。將所得混合物在70℃下攪拌15 h且真空濃縮，且所得固體用含5% EtOAc之己烷萃取，過濾，且用含5% EtOAc之己烷洗滌若干次。將所得固體高真空乾燥15 h，得到中間物MMM1 。歸因於固體之吸濕性質，其按原樣用於後續反應中。
Figure 02_image361
2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2S)- 四氫 -2H- 哌喃 -4- 基 酯 . 將中間物MMM1 (1.33 g，6.34 mmol)溶解於亞甲基氯(15 mL)中，冷卻至-78℃，且快速添加二氯磷酸苯酯(1.137 mL，7.61 mmol)。在-78℃下經30 min添加三乙胺(2.2 mL，15.2 mmol)，且在-78℃下攪拌所得混合物30 min。接著在-78℃下一次性添加4-硝基苯酚(882 mg，6.34 mmol)且經30 min添加三乙胺(1.1 mL，7.61 mmol)。將混合物在-78℃下攪拌30 min，用水(2×)、鹽水洗滌，且經硫酸鈉乾燥。藉由過濾移除硫酸鈉，且真空濃縮濾液。殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至70% EtOAc/己烷)純化，得到中間物MMM2 (非對映異構混合物)。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 8.22 (m, 2H), 7.49 - 7.06 (m, 7H), 4.95 (m, 1H), 4.14 (m, 1H), 4.07 - 3.80 (m, 3H), 3.52 (m, 2H), 1.95 - 1.81 (m, 2H), 1.64 m, 2H), 1.42 (m, 3H)。31 P NMR (162 MHz, 氯仿-d ) δ -3.09, -3.13。
Figure 02_image363
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸四氫 -2H- 哌喃 -4- 基酯 . 在室溫下將四氫呋喃(5 mL)添加至中間物4 (250 mg，0.74 mmol)、中間物MMM2 (433 mg，0.96 mmol)及氯化鎂(106 mg，1.11 mmol)之混合物中。在室溫下攪拌混合物20分鐘。添加N ,N -二異丙基乙胺(322 µL，1.85 mmol)。將反應物加熱至50℃後保持2 h。將反應混合物冷卻至室溫，且用乙酸乙酯(20 mL)稀釋。有機物用水(10 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。在0℃下向殘餘物於乙腈(5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸水溶液(0.6 mL，7.39 mmol，12 M)。1 h後，用乙酸乙酯(20 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。殘餘物藉由HPLC層析(Phenomenex Gemini 5 µm C18 110 Å，100 × 30 mm，5-100%乙腈/水)純化，得到產物(非對映異構混合物)。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.86 - 7.82 (m, 1H), 7.40 - 7.30 (m, 2H), 7.28 - 7.15 (m, 3H), 6.99 - 6.93 (m, 1H), 6.83 - 6.77 (m, 1H), 5.40 - 5.35 (m, 1H), 4.95 - 4.88 (m, 1H), 4.81 - 4.58 (m, 3H), 4.40 - 4.31 (m, 1H), 4.29 - 4.18 (m, 2H), 3.97 - 3.78 (m, 3H), 3.56 - 3.46 (m, 2H), 1.92 - 1.82 (m, 2H), 1.66 - 1.55 (m, 2H), 1.34 - 1.25 (m, 3H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.75, 3.56。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.53, -238.74。LCMS：MSm/z = 610.01 [M+1]，tR = 1.16 min (次要)，1.18 min (主要)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：tR = 2.32 min (次要)，2.37 (主要)；Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 65. 雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-2-((((((S)-1- 側氧基 -1-(( 四氫 -2H- 哌喃 -4- 基 ) 氧基 ) 丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二酯
Figure 02_image365
在氬氣下將異丁酸酐(26 mg，0.16 mmol)及實例64 (50 mg，0.08 mmol)溶解於無水四氫呋喃(1.0 mL)中，且在室溫下攪拌混合物5分鐘。添加4-二甲基胺基吡啶(8 mg，0.07 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物。2小時後，添加甲醇(0.5 mL)，且攪拌混合物20分鐘，接著用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌兩次並用鹽水(10 mL)洗滌一次。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物(非對映異構混合物)。LCMS：MSm/z = 750.1 [M+1]，tR = 1.62 min (主要)，1.65 (次要)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 . 非對映異構體藉由對掌性製備型SFC (SFC chiralpack 1A 5µm，250 × 21 mm；30%異丙醇)彼此分離：
Figure 02_image367
實例 66. 實例 65 之第一溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.81 (s, 1H), 7.39 - 7.30 (m, 2H), 7.26 - 7.16 (m, 3H), 6.85 (d,J = 4.4 Hz, 1H), 6.77 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 5.96 - 5.90 (m, 1H), 5.85 (d,J = 5.6 Hz, 1H), 5.60 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 4.95 - 4.89 (m, 2H), 4.73 (s, 1H), 4.62 (s, 1H), 4.38 - 4.29 (m, 2H), 3.96 - 3.80 (m, 2H), 3.56 - 3.46 (m, 2H), 2.73 - 2.64 (m, 1H), 2.53 - 2.44 (m, 1H), 1.91 - 1.83 (m, 2H), 1.67 - 1.56 (m, 2H), 1.35 - 1.20 (m, 9H), 1.09 (d,J = 7.0 Hz, 3H), 1.05 (d,J = 7.0 Hz, 3H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.50。1 H去耦19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -235.96。LCMS：MSm/z = 750.08 [M+1]，tR = 1.62 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：tR = 3.23 min；Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 67. 實例 65 之第二溶離非對映異構體 ： 1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.80 (s, 1H), 7.38 - 7.30 (m, 2H), 7.29 - 7.23 (m, 2H), 7.22 - 7.17 (m, 1H), 6.80 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.61 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 5.87 - 5.79 (m, 2H), 5.60 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 4.99 - 4.91 (m, 1H), 4.78 - 4.66 (m, 1H), 4.66 - 4.54 (m, 1H), 4.40 - 4.32 (m, 1H), 4.32 - 4.25 (m, 1H), 4.02 - 3.92 (m, 1H), 3.90 - 3.82 (m, 2H), 3.57 - 3.46 (m, 2H), 2.74 - 2.64 (m, 1H), 2.51 - 2.42 (m, 1H), 1.95 - 1.83 (m, 2H), 1.69 - 1.56 (m, 2H), 1.37 - 1.28 (m, 3H), 1.23 (d,J = 7.0 Hz, 6H), 1.08 (d,J = 7.0 Hz, 3H), 1.03 (d,J = 7.0 Hz, 3H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.40。1 H去耦19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -235.32。LCMS：MSm/z = 750.07 [M+1]，tR = 1.65 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：tR = 3.24 min；Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 68. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 丙基戊酯
Figure 02_image369
( 三級丁氧基羰基 )-L - 丙胺酸 2- 丙基戊酯 . 在氬氣氛圍下在0℃下，向(三級丁氧基羰基)-L -丙胺酸(5.00 g，26.42 mmol)及2-丙基戊-1-醇(3.13 g，24.02 mmol)於100 mL無水二氯甲烷中之經攪拌溶液中添加4-甲基嗎啉(7.92 mL，72.07 mmol)、4-(二甲基胺基)吡啶(59 mg，0.48 mmol)及三丙基膦酸環酐(17.16 mL，28.83 mmol，50%於乙酸乙酯中)。接著在室溫下攪拌反應混合物2 h。反應混合物用10%檸檬酸水溶液(20 mL)洗滌2×，用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)洗滌2×，且用鹽水(50 mL)洗滌一次。合併之有機物經硫酸鈉乾燥，經由3 cm矽膠層過濾，用額外二氯甲烷(200 mL)洗滌矽膠層。將有機物減壓濃縮，與DCM共蒸餾，且高真空乾燥隔夜。不進行進一步純化，且中間物QQQ1 繼續至下一步驟。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.27 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 4.06 - 3.86 (m, 3H), 1.67 - 1.56 (m, 1H), 1.43 - 1.10 (m, 20H), 0.93 - 0.79 (m, 6H)。
Figure 02_image371
(( 全氟苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸 2- 丙基戊酯 . 將含4 M鹽酸之1,4-二㗁烷(10 mL，40.00 mmol)添加至中間物QQQ1 (5.70 g，18.93 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液中。1 h後，濃縮反應物。將殘餘物溶解於二氯甲烷(15 mL)中且冷卻至0℃。依序添加二氯磷酸苯酯(3.10 mL，20.82 mmol)及三乙胺(5.77 mL，41.64 mmol)。1 h後，接著在0℃下依序添加五氟苯酚(3.48 g，18.93 mmol)及三乙胺(2.89 mL，20.82 mmol)，且接著使所得混合物升溫至室溫。2.5 h後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且經由3 cm矽膠過濾。用額外二氯甲烷(100 mL)洗滌矽膠濾餅。濃縮有機物。將殘餘物溶解於30 mL熱己烷中，且接著用120 mL己烷稀釋。攪拌反應物5 h，接著過濾，分離中間物QQQ2 。藉由NMR光譜確定中間物QQQ2為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.44 - 7.37 (m, 2H), 7.48 - 7.36 (m, 1H), 6.94 - 6.85 (m, 1H), 4.06 - 3.90 (m, 3H), 1.66 - 1.55 (m, 1H), 1.32 - 1.18 (m, 11H), 0.85 - 0.79 (m, 6H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -154.23 (d,J = 22.6 Hz), -160.88 (t,J = 23.5 Hz), -163.71 (t,J = 22.0 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 0.44。LCMS：MSm/z = 523.78 [M+1]，tR = 2.04 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µl/min。
Figure 02_image373
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 丙基戊酯 . 在室溫下將四氫呋喃(0.5 mL)添加至中間物4 (40 mg，0.12 mmol)、中間物QQQ2 (80 mg，0.15 mmol)及氯化鎂(17 mg，0.18 mmol)之混合物中。在室溫下攪拌混合物20分鐘。添加N ,N -二異丙基乙胺(52 µL，0.30 mmol)。將反應物加熱至50℃後保持2 h。將反應混合物冷卻至室溫，且用乙酸乙酯(2 mL)稀釋。有機物用水(2 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。在0℃下向殘餘物於乙腈(2 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸水溶液(0.3 mL，12 M)。1 h後，用乙酸乙酯(5 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(5 mL)及鹽水(5 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。殘餘物藉由HPLC層析(Phenomenex Gemini 5 µm C18 110 Å，100 × 30 mm，5-100%乙腈/水)純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.81 (s, 1H), 7.39 - 7.31 (m, 2H), 7.28 - 7.16 (m, 3H), 6.88 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.75 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 5.36 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 4.81 - 4.57 (m, 3H), 4.34 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.26 - 4.17 (m, 2H), 4.07 - 4.01 (m, 1H), 3.98 - 3.88 (m, 2H), 1.69 - 1.61 (m, 1H), 1.38 - 1.20 (m, 11H), 0.94 - 0.83 (m, 6H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.55。1 H去耦19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.83。LCMS：MSm/z = 638.03 [M+1]，tR = 1.58 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：tR = 3.29 min；Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 69. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 纈胺酸乙酯
Figure 02_image375
L - 纈胺酸乙酯鹽酸鹽 . 將氯三甲基矽烷(4.58 mL，36 mmol)添加至L -纈胺酸(5.0 g，43 mmol)於乙醇(20 mL)中之溶液中。在70℃下加熱反應物18 h。減壓濃縮反應物。不進行進一步純化，且中間物RRR1 用於下一步驟。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.58 (s, 3H), 4.31 - 4.14 (m, 2H), 3.87 - 3.80 (m, 1H), 2.24 - 2.13 (m, 1H), 1.24 (t,J = 7.1 Hz, 3H), 0.99 (d,J = 7.0 Hz, 3H), 0.95 (d,J = 6.9 Hz, 3H)。
Figure 02_image377
(( 全氟苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 纈胺酸乙酯 . 將中間物RRR1 (7.40 g，40.74 mmol)溶解於二氯甲烷(15 mL)中且冷卻至0℃。依序添加二氯磷酸苯酯(6.67 mL，44.81 mmol)及三乙胺(12.42 mL，89.62 mmol)。1 h後，接著在0℃下依序添加五氟苯酚(7.50 g，40.74 mmol)及三乙胺(6.21 mL，44.81 mmol)，且接著使所得混合物升溫至室溫。2.5 h後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且經由3 cm矽膠過濾。用額外二氯甲烷(100 mL)洗滌矽膠濾餅。濃縮有機物。將殘餘物溶解於30 mL熱己烷中，且接著用120 mL己烷稀釋。攪拌反應物5 h，接著過濾，分離中間物RRR2 。藉由NMR光譜確定中間物RRR2 為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.48 - 7.34 (m, 2H), 7.28 - 7.18 (m, 3H), 6.81 - 6.71 (m, 1H), 4.07 (q,J = 7.1 Hz, 2H), 3.69 - 3.58 (m, 1H), 2.01 - 1.88 (m, 1H), 1.16 (t,J = 7.1 Hz, 3H), 0.80 (d,J = 6.8 Hz, 3H), 0.76 (d,J = 6.8 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -154.30 (d,J = 21.4 Hz), -161.10 (t,J = 23.3 Hz), -163.77 (dd,J = 24.0, 20.1 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 1.95。LCMS：MSm/z = 467.87 [M+1]，tR = 1.85 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。
Figure 02_image379
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 纈胺酸乙酯 . 在室溫下將四氫呋喃(0.5 mL)添加至中間物4 (40 mg，0.12 mmol)、中間物RRR2 (72 mg，0.15 mmol)及氯化鎂(17 mg，0.18 mmol)之混合物中。在室溫下攪拌混合物20分鐘。添加N ,N -二異丙基乙胺(52 µL，0.30 mmol)。將反應物加熱至50℃後保持2 h。將反應混合物冷卻至室溫，且用乙酸乙酯(2 mL)稀釋。有機物用水(2 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。在0℃下向殘餘物於乙腈(2 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸水溶液(0.3 mL，12 M)。1 h後，用乙酸乙酯(5 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(5 mL)及鹽水(5 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。殘餘物藉由HPLC層析(Phenomenex Gemini 5 µm C18 110 Å，100 × 30 mm，5-100%乙腈/水)純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.84 (s, 1H), 7.40 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.15 (m, 3H), 6.97 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.79 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 5.36 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.81 - 4.71 (m, 1H), 4.70 - 4.59 (m, 2H), 4.35 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 4.26 - 4.20 (m, 2H), 4.16 - 4.05 (m, 2H), 3.64 (dd,J = 9.9, 6.2 Hz, 1H), 2.05 - 1.95 (m, 1H), 1.21 (t,J = 7.2 Hz, 3H), 0.93 (t,J = 7.7 Hz, 6H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 4.41。1 H去耦19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.95。LCMS：MSm/z = 581.94 [M+1]，tR = 1.30 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µl/min。HPLC：tR = 2.64 min；Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 70. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸異丁酯
Figure 02_image381
( 三級丁氧基羰基 )-L - 丙胺酸異丁酯 . 在氬氣氛圍下在0℃下，向(三級丁氧基羰基)-L -丙胺酸(1.00 g，5.29 mmol)及1-甲基丙-1-醇(0.60 mL，6.34 mmol)於10 mL無水二氯甲烷中之經攪拌溶液中添加4-甲基嗎啉(1.74 mL，15.86 mmol)、4-(二甲基胺基)吡啶(13 mg，0.11 mmol)及三丙基膦酸環酐(3.78 mL，6.34 mmol，50%於乙酸乙酯中)。接著在室溫下攪拌反應混合物2 h。反應混合物用10%檸檬酸水溶液(20 mL)洗滌2×，用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)洗滌2 ×，且用鹽水(50 mL)洗滌一次。合併之有機物經硫酸鈉乾燥，經由3 cm矽膠層過濾，用額外二氯甲烷(200 mL)洗滌矽膠層。將有機物減壓濃縮，與DCM共蒸餾，且高真空乾燥隔夜。不進行進一步純化，且中間物SSS1 繼續至下一步驟。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.26 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 4.08 - 3.94 (m, 1H), 3.93 - 3.72 (m, 2H), 1.93 - 1.78 (m, 1H), 1.44 - 1.29 (m, 9H), 1.24 (d,J = 7.4 Hz, 3H), 0.88 (d,J = 6.7 Hz, 6H)。
Figure 02_image383
(( 全氟苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸異丁酯 . 將含4 M鹽酸之1,4-二㗁烷(10 mL，40.00 mmol)添加至中間物SSS1 (12.15 g，49.54 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液中。1 h後，濃縮反應物。將殘餘物溶解於二氯甲烷(15 mL)中且冷卻至0℃。依序添加二氯磷酸苯酯(8.11 mL，54.50 mmol)及三乙胺(15.11 mL，108.99 mmol)。1 h後，接著在0℃下依序添加五氟苯酚(9.12 g，49.54 mmol)及三乙胺(7.55 mL，54.50 mmol)，且接著使所得混合物升溫至室溫。2.5 h後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且經由3 cm矽膠過濾。用額外二氯甲烷(100 mL)洗滌矽膠濾餅。濃縮有機物。將殘餘物溶解於30 mL熱己烷中，且接著用120 mL己烷稀釋。攪拌反應物5 h，接著藉由過濾分離中間物SSS2 。藉由NMR光譜確定中間物SSS2 為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.45 - 7.38 (m, 2H), 7.23 (dd,J = 11.2, 7.8 Hz, 3H), 6.91 (dd,J = 14.2, 10.0 Hz, 1H), 4.07 - 3.94 (m, 1H), 3.81 (d,J = 6.6 Hz, 2H), 1.89 - 1.79 (m, 1H), 1.29 (d,J = 7.1 Hz, 3H), 0.86 (d,J = 6.7 Hz, 6H)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 0.49。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -154.25 (d,J = 21.3 Hz), -160.86 (t,J = 23.3 Hz), -163.55 - -163.79 (m)。LCMS：MSm/z = 467.8 [M+1]，tR = 1.88 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。
Figure 02_image385
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸異丁酯 . 在室溫下將四氫呋喃(0.5 mL)添加至中間物4 (40 mg，0.12 mmol)、中間物SSS2 (72 mg，0.15 mmol)及氯化鎂(17 mg，0.18 mmol)之混合物中。在室溫下攪拌混合物20分鐘。添加N ,N -二異丙基乙胺(52 µL，0.30 mmol)。將反應物加熱至50℃後保持2 h。將反應混合物冷卻至室溫，且用乙酸乙酯(2 mL)稀釋。有機物用水(2 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。在0℃下向殘餘物於乙腈(2 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸水溶液(0.3 mL，12 M)。1 h後，用乙酸乙酯(5 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(5 mL)及鹽水(5 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。殘餘物藉由HPLC層析(Phenomenex Gemini 5 µm C18 110 Å，100 × 30 mm，5-100%乙腈/水)純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.84 (s, 1H), 7.39 - 7.32 (m, 2H), 7.27 - 7.17 (m, 3H), 6.96 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 6.79 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 5.37 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 4.81 - 4.70 (m, 1H), 4.70 - 4.58 (m, 2H), 4.34 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 4.25 - 4.17 (m, 2H), 3.98 - 3.80 (m, 3H), 1.95 - 1.85 (m, 1H), 1.32 (d,J = 7.1 Hz, 3H), 0.91 (d,J = 6.7 Hz, 6H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.57。1 H去耦19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.78。LCMS：MSm/z = 581.97 [M+1]，tR = 1.35 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：tR = 2.73 min；Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 71. ((((2R ,3S ,4R ,5S )-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f ][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸環丁酯
Figure 02_image387
( 三級丁氧基羰基 )-L - 丙胺酸環丁酯 . 將(三級丁氧基羰基)-L -丙胺酸(9.447 g，0.05 mol)溶解於乙腈(36 mL)中，且添加環丁醇(3 g，0.042 mol)，接著一次性添加EDCI (8.396 g，0.054 mol)及DMAP (7.624 g，0.062 mol)。在室溫下攪拌反應物4 h。用二氯甲烷及水稀釋反應物。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且接著減壓濃縮。藉由矽膠層析(0-30%乙酸乙酯/己烷)進行純化，得到中間物TT1 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.21 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 4.87 (p,J = 7.4 Hz, 1H), 3.91 (h,J = 7.3 Hz, 1H), 2.20 - 2.28 (m, 2H), 2.10 -1.85 (m, 2H), 1.78 - 1.65 (m, 1H), 1.58 (m, 1H), 1.36 (s, 9H), 1.19 (d,J = 7.4 Hz, 3H)。
Figure 02_image389
L - 丙胺酸環丁酯鹽酸鹽 . 將中間物TTT1 (8 g，0.033 mol)溶解於無水二氯甲烷(88 mL)及含4 N HCl之二㗁烷(41.1 mL，0.164 mol)中。在環境溫度下攪拌反應物4 h。減壓濃縮反應物，且與二氯甲烷共蒸發。將殘餘物在高真空下放置隔夜，且中間物TTT2 不經純化按原樣用於下一步驟。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.65 (s, 3H), 5.03 - 4.90 (m, 1H), 3.97 (q,J = 7.2 Hz, 1H), 2.34 - 2.21 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.82 - 1.68 (m, 1H), 1.68 - 1.51 (m, 1H), 1.39 (d,J = 7.2 Hz, 3H)。
Figure 02_image391
(( 全氟苯氧基 )( 苯氧基 )- 磷醯基 )-L - 丙胺酸環丁酯 . 在氬氣氛圍下在0℃下，向中間物TTT2 (5.67 g，31.56 mmol)及二氯磷酸苯酯(4.696 mL，31.56 mmol)於無水二氯甲烷(100 mL)中之溶液中添加三乙胺(9.76 mL，69.44 mmol)。在0℃下攪拌所得混合物1 h。接著添加五氟苯酚(5.81 g，31.56 mmol)及三乙胺(4.88 mL，34.72 mmol)。在0℃下攪拌1 h後，用Et2 O稀釋反應混合物，且濾出固體。將粗產物減壓濃縮，且藉由矽膠層析，使用0-100%乙酸乙酯/己烷之溶離劑變化來純化，得到呈非對映異構混合物之所要化合物。將所獲得化合物高真空乾燥，引起固化。將二異丙基醚添加至固化物質中且用超音波處理，得到精細固體。藉由過濾分離固體。用二異丙基醚進行另一輪超音波處理且過濾，得到中間物TTT3 。藉由NMR光譜確定中間物TTT3為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.40 (dd,J = 8.8, 7.0 Hz, 2H), 7.27 - 7.16 (m, 3H), 6.85 (dd,J = 14.1, 9.9 Hz, 1H), 4.91 - 4.78 (m, 1H), 4.00 - 3.82 (m, 1H), 2.28 - 2.15 (m, 2H), 1.99 - 1.84 (m, 2H), 1.76 - 1.63 (m, 1H), 1.56 (m, 1H), 1.25 (dd,J = 7.1, 1.2 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -154.11 - -154.31 (m), - 160.88 (t,J = 23.3Hz), -163.67 (t,J = 23.6Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 0.45。LCMS：MSm/z = 465.94 [M+1]；tR = 1.67 min ；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image393
((((2R ,3S ,4R ,5S )-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f ][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸環丁酯 . 在室溫下向中間物4 (0.1 g，0.296 mmol)、中間物TTT3 (0.151 g，0.325 mmol)及氯化鎂(0.042 g，0.443 mmol)之混合物中添加四氫呋喃(1.5 mL)，接著添加N ,N -二異丙基乙胺(0.129 mL，0.739 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物1.5 h。接著減壓濃縮反應混合物，且所獲得殘餘物用飽和氯化鈉溶液及乙酸乙酯稀釋。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。所獲得殘餘物使用製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，15%-85%乙腈/水)純化。合併溶離份且減壓濃縮。將所獲得殘餘物溶解於無水乙腈(3 mL)中且在冰浴中冷卻，接著逐滴添加濃鹽酸(0.133 mL，1.6 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1 h。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用飽和碳酸氫鈉水溶液中和。經分離之固體藉由過濾分離，用水洗滌，且藉由矽膠層析，藉由0-20%甲醇/二氯甲烷純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.78 (s, 1H), 7.39 - 7.30 (m, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 6.84 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 5.36 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 4.99 - 4.86 (m, 1H), 4.82 - 4.56 (m, 3H), 4.34 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.24 - 4.15 (m, 2H), 3.87 (m, 1H), 2.35 - 2.22 (m, 2H), 2.02 (m, 2H), 1.82 - 1.68 (m, 1H), 1.69 - 1.53 (m, 1H), 1.28 (dd,J = 7.1, 1.0 Hz, 3H)。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.78 (dd,J = 48.6, 46.9 Hz)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.52。LCMS：MSm/z = 580.05 [M+1]；tR = 1.08 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：tR = 4.415 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。實例 72. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸氧雜環丁烷 -3- 基酯
Figure 02_image395
(( 全氟苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸氧雜環丁烷 -3- 基酯 . 向L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基酯(1.98 g，9.55 mmol)於DCM (50 ml)中之溶液中一次性添加二氯磷酸苯酯(2.01 g，9.55 mmol)。將所得混合物冷卻至0℃，且逐滴添加三乙胺(0.97 g，9.55 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且將其冷卻至0℃，並且一次性添加2,3,4,5,6-五氟苯酚(1.76 g，9.55 mmol)且逐滴添加三乙胺(0.97 g，9.55 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物30 min，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空濃縮有機溶劑，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-­100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到中間物。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.38-7.34 (m, 2H), 7.28-7.19 (m, 3H), 5.49-5.43 (m, 1H), 4.91-4.85 (m, 2H), 4.63-4.56 (m, 2H), 4.27-4.22 (m, 1H), 4.06-4.02 (m, 1H), 1.51-1.48 (m, 3H)。31 P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ 0.38, 0.22。LCMS：MSm/z = 468.01 [M+1]，tR = 1.63 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µl/min。HPLC：tR = 3.15 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
Figure 02_image397
在室溫下向中間物4 (0.0345 g，0.103 mmol)、((全氟苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基酯(0.626 g，0.134 mmol)及氯化鎂(0.015 g，0.155 mmol)之混合物中添加四氫呋喃(1.0 mL)，接著添加N,N -二異丙基乙胺(0.063 mL，0.361 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物1.5 h。接著減壓濃縮反應混合物，且用飽和氯化鈉溶液及乙酸乙酯稀釋所獲得殘餘物。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。所獲得殘餘物使用製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，15%-85%乙腈/水)純化。合併溶離份且減壓濃縮。LCMS：MSm/z = 581.97 [M]；tR = 1.12 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2%乙腈，1800 µl/min。HPLC：tR = 3.37 min；Agilent Infinity 1290II；管柱：Phenomenex Kinetex 2.8µ C18 100A，100 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%三氟乙酸之乙腈，含0.1%三氟乙酸之水；梯度：0-0.55 min 2%乙腈，0.55-8.55 min 2-98%乙腈，8.55-9.25 min 98%乙腈，1500 µl/min。實例 73. 雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-2-((((S)-(((S)-1-( 氧雜環丁烷 -3- 基氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二酯
Figure 02_image399
在氬氣下將異丁酸酐(8.2 mg，0.05 mmol)及實例72 (15 mg，0.03 mmol)溶解於無水四氫呋喃(1.0 mL)中，且在室溫下攪拌混合物5分鐘。添加4-二甲基胺基吡啶(0.3 mg，0.003 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物。2小時後，添加甲醇(0.5 mL)，且攪拌混合物20分鐘，接著用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌兩次並用鹽水(10 mL)洗滌一次。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 8.14 (s, 2H), 7.37 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.31 - 7.18 (m, 4H), 6.98 (d,J = 4.6 Hz, 2H), 6.84 (dd,J = 36.1, 4.5 Hz, 1H), 5.45 (d,J = 5.7 Hz, 2H), 5.21 (t,J = 6.1 Hz, 2H), 4.97 (d,J = 6.4 Hz, 2H), 4.89 - 4.82 (m, 1H), 4.71 (d,J = 47.0 Hz, 1H), 4.62 - 4.54 (m, 1H), 4.37 (d,J = 4.7 Hz, 1H), 3.78 (d,J = 11.4 Hz, 2H), 3.67 (d,J = 11.4 Hz, 2H), 2.71 (p,J = 7.0 Hz, 1H), 2.52 (p,J = 7.0 Hz, 1H), 1.33 - 1.29 (m, 3H), 1.25 (d,J = 7.0 Hz, 6H), 1.12 (d,J = 7.0 Hz, 3H), 1.08 (d,J = 7.0 Hz, 3H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.50。去耦19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -235.96 (s)。LCMS：MSm/z = 722.1 [M+1]，tR = 1.56 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µl/min。實例 74. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 丁醯胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 乙基丁酯
Figure 02_image401
在室溫下在氬氣氛圍下，向中間物6 (150 mg，0.231 mmol)於無水吡啶(1 mL)中之溶液中逐滴添加丁醯氯(0.026 mL，0.254 mmol)。30 min後，反應混合物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5 µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用20-100%乙腈/水梯度純化，得到化合物。LCMS：MSm/z = 720.27 [M+1]；tR = 1.76 min；LC系統：Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-0.2 min 40%乙腈，0.2 min-1.55 min 40%-100%乙腈，1.55 min-2.80 min 100%乙腈，2.80-2.81 min 100%-40%乙腈，1100 µl/min。將所獲得化合物溶解於乙腈(4 mL)中，且在0℃下逐滴添加濃HCl (0.4 mL)。在環境溫度下攪拌反應物1 h。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用碳酸氫鈉水溶液中和。所得混合物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5 µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用20-100%乙腈/水梯度純化，得到化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.73 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.40 - 7.31 (m, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 4H), 6.93 - 6.92 (m, 1H), 6.08 - 6.02 (m, 1H), 5.34 - 5.32 (m, 1H), 5.19 (s, 2H), 4.65 - 4.63 (m, 1H), 4.58 - 4.45 (m, 2H), 4.21 - 4.20 (m, 1H), 4.03 - 3.92 (m, 3H), 3.93 - 3.76 (m, 2H), 2.69 - 2.65 (m, 2H), 1.65 - 1.60 (m, 2H), 1.44 - 1.41 (m, 1H), 1.32 - 1.18 (m, 7H), 0.94 - 0.91 (m, 3H), 0.79 - 0.77 (m, 6H)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.54。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -236.50 (t, J = 47.9 Hz)。LCMS：MSm/z = 680.22 [M+1]；tR = 1.37 min ；LC系統：Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-0.2 min 40%乙腈，0.2 min-1.55 min 40%-100%乙腈，1.55 min-2.80 min 100%乙腈，2.80-2.81 min 100%-40%乙腈，1100 µl/min。實例 75. ((S)- (((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 苯甲醯胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 乙基丁酯
Figure 02_image403
在室溫下在氬氣氛圍下，向中間物6 (100 mg，0.154 mmol)於無水吡啶(1 mL)中之溶液中逐滴添加苯甲醯氯(0.018 mL，0.154 mmol)。30 min後，反應混合物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5 µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用20-100%乙腈/水梯度純化，得到化合物。LCMS：MSm/z = 754.26 [M+1]；tR = 1.88 min；LC系統：Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-0.2 min 40%乙腈，0.2 min-1.55 min 40%-100%乙腈，1.55 min-2.80 min 100%乙腈，2.80-2.81 min 100%-40%乙腈，1100 µl/min。將所獲得化合物溶解於乙腈(3 mL)中，且在0℃下逐滴添加濃HCl (0.3 mL)。在環境溫度下攪拌反應物1 h。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用碳酸氫鈉水溶液中和。所得混合物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5 µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用20-100%乙腈/水梯度純化，得到化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 13.15 (s, 0.3H), 11.21 (s, 0.7H), 8.33 - 7.99 (m, 3H), 7.62 - 7.48 (m, 3H), 7.38 - 7.34 (m, 2H), 7.23 - 6.97 (m, 5H), 6.09 - 6.03 (m, 1H), 5.33 - 5.32 (m, 2H), 5.23-5.21 (m, 1H), 4.69 - 4.63 (m, 1H), 4.57 - 4.49 (m, 2H), 4.22 - 4.20 (m, 1H), 4.02 - 3.79 (m, 5H), 1.46 - 1.40 (m, 1H), 1.32 - 1.19 (m, 7H), 0.79 - 0.77 (m, 6H)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.55。LCMS：MSm/z = 714.27 [M+1]；tR = 1.85 min；LC系統：Dionex Ultimate 3000 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.6 min 2-100%乙腈，1.6 min-1.8 min 100%乙腈，1.80 min-1.90 min 100%-2%乙腈，1.90 min-2.20 min 2%乙腈，1100 µl/min。實例 76. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-(2- 環己基乙醯胺基 ) 吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 乙基丁酯
Figure 02_image405
在室溫下在氬氣氛圍下，向中間物6 (150 mg，0.231 mmol)於無水吡啶(1 mL)中之溶液中逐滴添加環己基乙醯氯(0.039 mL，0.254 mmol)。30 min後，反應混合物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5 µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用20-100%乙腈/水梯度純化，得到化合物。LCMS：MSm/z = 774.45 [M+1]；tR = 1.98 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-0.2 min 40%乙腈，0.2 min-1.55 min 40%-100%乙腈，1.55 min-2.80 min 100%乙腈，2.80-2.81 min 100%-40%乙腈，1100 µl/min。將所獲得化合物溶解於乙腈(4 mL)中，且在0℃下逐滴添加濃HCl (0.4 mL)。在環境溫度下攪拌反應物1 h。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用碳酸氫鈉水溶液中和。所得混合物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5 µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)，使用20-100%乙腈/水梯度純化，得到化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.71 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.37 - 7.34 (m, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 4H), 6.94 - 6.93 (m, 1H), 6.08 - 6.02 (m, 1H), 5.34 - 5.30 (m, 2H), 5.19 (s, 1H), 4.68 - 4.48 (m, 3H), 4.20 - 4.19 (m, 1H), 4.00 - 3.78 (m, 5H), 2.55 - 2.53 (m, 2H), 1.87 - 1.56 (m, 5H), 1.45 - 1.38 (m, 1H), 1.31 - 1.07 (m, 11H), 1.04 - 0.92 (m, 2H), 0.81 - 0.77 (m, 6H)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 3.54。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -236.47 (t, J = 48.1 Hz)。LCMS：MSm/z = 734.20 [M+1]；tR = 1.23 min；LC系統：Dionex Ultimate 3000 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.6 min 2-100%乙腈，1.6 min-1.8 min 100%乙腈，1.80 min-1.90 min 100%-2%乙腈，1.90 min-2.20 min 2%乙腈，1100 µl/min。實例 77. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f ][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸環丙基甲酯
Figure 02_image407
( 三級丁氧基羰基 )-L - 丙胺酸環丙基甲酯 . 在0℃下在氬氣下，向boc-L -丙胺酸(7.00 g，37.00 mmol)及環丙烷甲醇(3.20 g，44.39 mmol)於50 mL無水二氯甲烷中之經攪拌溶液中添加N -甲基嗎啉(12.20 mL，110.99 mmol)、4-(二甲基胺基)吡啶(0.094 g，0.74 mmol)及三丙基膦酸環酐(26.43 mL，44.39 mmol，50%於乙酸乙酯中)。接著在室溫下攪拌反應混合物2小時(難以藉由TLC或LCMS監測轉化)。反應混合物用水(20 mL)洗滌，用10%檸檬酸溶液(20 mL)洗滌2×，用飽和NaHCO3 水溶液(20 mL)洗滌2 ×，且用鹽水(20 mL)洗滌一次。有機物經Na2 SO4 乾燥，經由3 cm矽膠層過濾，用額外二氯甲烷洗滌矽膠層。將有機物減壓濃縮，與二氯甲烷共蒸餾，且高真空乾燥隔夜，得到中間物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.25 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 4.12 - 3.77 (m, 3H), 1.38 (s, 9H), 1.24 (d,J = 7.4 Hz, 3H), 1.12 - 0.99 (m, 1H), 0.57 - 0.42 (m, 2H), 0.31 - 0.19 (m, 2H)。
Figure 02_image409
(( 全氟苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸環丙基甲酯 . 將(三級丁氧基羰基)-L -丙胺酸環丙基甲酯(8.26 g，33.96 mmol)溶解於二氯甲烷(20 mL)中且冷卻至0℃。添加鹽酸(30.00 mL，120.00 mmol，4 N於二㗁烷中)。2 h後，減壓濃縮反應物。將殘餘物溶解於二氯甲烷(30 mL)中且冷卻至0℃。依序添加二氯磷酸苯酯(5.56 mL，37.35 mmol)及三乙胺(10.36 mL，74.70 mmol)。1 h後，接著在0℃下依序添加五氟苯酚(6.25 g，33.96 mmol)及三乙胺(5.18 mL，37.35 mmol)，且接著使所得混合物升溫至室溫。2.5 h後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)、鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且經由3 cm矽膠過濾。用額外二氯甲烷(200 mL)洗滌墊。減壓濃縮有機物。將殘餘物溶解於溫熱的第三丁基甲基醚(100 mL)中，接著用100 mL己烷稀釋。攪拌反應物2 h，且藉由過濾分離中間物。藉由NMR光譜確定中間物為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.47 - 7.38 (m, 2H), 7.30 - 7.18 (m, 3H), 6.98 - 6.82 (m, 1H), 4.06 - 3.93 (m, 1H), 3.87 (d,J = 7.2 Hz, 2H), 1.30 (d,J = 6.9 Hz, 3H), 1.12 - 0.98 (m, 1H), 0.53 - 0.43 (m, 2H), 0.27 - 0.20 (m, 2H)。19 F NMR (376 MHz, DMSO-d6 ) δ -154.22 (d,J = 21.9 Hz), -160.88 (t,J = 22.4 Hz), -163.70 (t,J = 21.8 Hz)。31 P NMR (162 MHz, DMSO-d6 ) δ 0.47 (t,J = 12.5 Hz)。LCMS：MSm/z = 465.8 [M+1]，tR = 1.80 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µl/min。
Figure 02_image411
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f ][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氟甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L - 丙胺酸環丙基甲酯 . 在室溫下將四氫呋喃(0.5 mL)添加至中間物4 (10 mg，0.03 mmol)、((全氟苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L -丙胺酸環丙基甲酯(15 mg，0.03 mmol)及氯化鎂(4 mg，0.4 mmol)之混合物中。在室溫下攪拌混合物20分鐘。添加N ,N -二異丙基乙胺(15 µL，0.09 mmol)。將反應物加熱至50℃後保持2 h。將反應混合物冷卻至室溫，且用乙酸乙酯(2 mL)稀釋。有機物用水(2 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。在0℃下向殘餘物於乙腈(2 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸水溶液(0.3 mL，3.60 mmol，12 M)。1 h後，用乙酸乙酯(5 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(5 mL)及鹽水(5 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。殘餘物藉由HPLC層析(Phenomenex Gemini 5 µm C18 110 Å，100 × 30 mm，5-100%乙腈/水)純化，得到產物，其藉由NMR光譜確定為單一非對映異構體。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.91 (s, 1H), 7.40 - 7.33 (m, 2H), 7.30 - 7.17 (m, 3H), 7.14 (d,J = 4.7 Hz, 1H), 6.86 (d,J = 4.7 Hz, 1H), 5.37 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.81 - 4.69 (m, 1H), 4.68 - 4.57 (m, 2H), 4.34 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.29 - 4.16 (m, 2H), 3.99 - 3.85 (m, 3H), 1.32 (d,J = 7.1 Hz, 3H), 1.17 - 1.04 (m, 1H), 0.56 - 0.48 (m, 2H), 0.29 - 0.22 (m, 2H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.53。19 F NMR (376 MHz, 甲醇-d4 ) δ -238.80 (t,J = 48.0 Hz)。LCMS：MSm/z = 579.89 [M+1]，tR = 1.28 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µl/min。HPLC：tR = 2.62 min；Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。C. 生物學實例 實例 78. 登革熱 NS5 蛋白之表現及純化
合成編碼登革熱血清型2 (新幾內亞C (New Guinea C)病毒株)之全長NS5序列之基因，且將其選殖至載體pET28b之NheI/XhoI位點中，產生N端經HIS標記之NS5。將序列經確認的質體轉化至大腸桿菌(E. coli) BL21 (DE3)中，且使細胞在LB培養基中生長直至OD600 達到0.5。藉由添加0.5 mM IPTG誘導蛋白質表現，且在16℃下以250 rpm持續震盪培養物隔夜。離心後，將來自1 L細菌培養物之細胞沈澱物(pellet)再懸浮於含有50 mM HEPES (pH 7.6)、500 mM NaCl、10%丙三醇、0.5% TritonX100、2 mM TCEP之緩衝液A中，該緩衝液補充有兩片不含EDTA的完全蛋白酶抑制劑混合物(Roche Diagnostics, Risch-Rotkreuz, Switzerland)。使用微流化床溶解細胞，接著進行離心。澄清上清液經由在緩衝液B [25 mM HEPES 7.5、500 mM NaCl、10% Gly、0.1% CHAPS及1 mM TCEP]中平衡之5 mL Ni-NTA管柱(GE Healthcare)純化。管柱用含有40 mM咪唑之緩衝液B洗滌，且NHIS-NS5用一定梯度的含有500 mM咪唑之緩衝液B溶離。合併含有NHIS-NS5之溶離份，且藉由尺寸排阻層析，使用在緩衝液C [25 mM HEPES 7.2、200 mM NaCl、10%丙三醇、0.1% CHAPS、2 mM DTT]中平衡之120 mL Superdex 200管柱(GE Healthcare)進一步純化。藉由質譜分析確認NHIS-NS5蛋白之質量及純度。
替代地，藉由添加凝血酶蛋白酶移除經Ni-NTA純化之NHIS-NS5的N端NHIS標記，且在4℃下與透析緩衝液B培育隔夜。標記經移除之NS5蛋白在第二Ni-NTA管柱上與其他分離，且藉由尺寸排阻層析，使用在緩衝液C [25 mM HEPES 7.2、200 mM NaCl、10%丙三醇、0.1% CHAPS、2 mM DTT]中平衡之120 mL Superdex 200管柱(GE Healthcare)進一步純化。藉由質譜分析確認NS5蛋白之質量及純度。 實例79. DENV Pol IC50
在DENV2-NS5聚合酶分析中，具有序列5'-(UCAG)20(UCCAAG)14(UCAG)20-3' (SEQ ID NO: 1)之244個核苷酸二級無結構雜聚RNA (sshRNA)用作具有5'-CUG-3'引子之模板。將自200 nM開始的六種化合物兩倍稀釋液及無抑制劑對照物接種於96孔盤中。在室溫下將100 nM DENV2 NS5在含有40 mM Tris-HCl (pH 7.5)、10 mM NaCl、3 mM DTT、0.2單位/微升RNasin加RNase抑制劑、200 ng/µL sshRNA、20 μM CUG及2 mM MgCl2 之反應混合物中預培育5分鐘。將酶混合物添加至化合物稀釋液中，且藉由添加含有20 µM三種天然NTP加上2 μM含有1:100 α-33P-NTP之類似物:鹼基配對競爭性天然NTP的混合物來起始反應。在30℃下90分鐘之後，將5 µL反應混合物點樣於DE81陰離子交換紙上。過濾紙用Na2 HPO4 (125 mM，pH 9)洗滌三次，持續5分鐘，用水及乙醇沖洗，隨後風乾且暴露於磷光成像儀。合成RNA使用Typhoon Trio成像儀及Image Quant TL軟體定量，且使用GraphPad Prism 5.0藉由線性回歸計算反應速率。使用劑量-反應(可變斜率)方程式(四參數對數方程式)，藉由非線性回歸分析在Prism中計算IC50值：Y = Bottom + (Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50 -X)*HillSlope))。 實例80. RSV RNP製備
根據自Mason等人(1)修改之方法製備RSV核糖核蛋白(RNP)複合物。以7.1 × 104 個細胞/平方公分之密度將HEp-2細胞接種於MEM + 10%胎牛血清(FBS)中，且使其在37℃ (5% CO2 )下附著隔夜。在附著之後，在35 mL MEM + 2% FBS中用RSV A2 (MOI=5)感染細胞。感染後20小時，用補充有2 μg/mL放線菌素D之MEM + 2% FBS更換培養基，且返回37℃持續一小時。細胞隨後用PBS洗滌一次且用35 mL PBS + 250 μg/mL溶血卵磷脂處理一分鐘，其後抽吸所有液體。藉由將細胞刮削至1.2 mL緩衝液A [50 mM TRIS乙酸鹽(pH 8.0)、100 mM乙酸鉀、1 mM DTT及2 μg/mL放線菌素D]中收集細胞，且藉由重複通過18號針頭(10次)使其溶解。將細胞溶解物在冰中置放10分鐘，且隨後在4℃下以2400 g離心10分鐘。移除上清液(S1)，且藉由重複通過18號針頭(10次)使沈澱物(P1)在600 μL補充有1% Triton X-100之緩衝液B [10 mM TRIS乙酸鹽(pH 8.0)、10 mM乙酸鉀及1.5 mM MgCl2 ]中破碎。將再懸浮的沈澱物在冰中置放10分鐘，且隨後在4℃下以2400 g離心10分鐘。移除上清液(S2)，且使沈澱物(P2)在600 μL補充有0.5%去氧膽酸鹽及0.1% Tween 40之緩衝液B中破碎。將再懸浮的沈澱物在冰中置放10分鐘，且隨後在4℃下以2400 g離心10分鐘。收集含有富集的RSV RNP複合物之上清液(S3)溶離份，且藉由280 nm下之UV吸光度測定蛋白質濃度。將等分的RSV RNP S3溶離份儲存在-80℃下。實例 81. RSV RNP 分析
轉錄反應含有含25 μg粗RSV RNP複合物之30 μL反應緩衝液[50 mM TRIS乙酸鹽(pH 8.0)、120 mM乙酸鉀、5%丙三醇、4.5 mM MgCl2 、3 mM DTT、2 mM乙二醇-雙(2-胺基乙醚)-四乙酸(EGTA)、50 μg/mL BSA、2.5 U RNasin (Promega)、ATP、GTP、UTP、CTP及1.5 uCi [α-32P] NTP (3000 Ci/mmol)]。選擇在轉錄分析中使用之放射性標記核苷酸以匹配針對RSV RNP轉錄之抑制進行評估的核苷酸類似物。冷的競爭性NTP以二分之一其Km之最終濃度添加(ATP = 20 μM、GTP = 12.5 μM、UTP = 6 μM且CTP = 2 μM)。三種其餘核苷酸以100 μM之最終濃度添加。
為了判定核苷酸類似物是否抑制RSV RNP轉錄，使用6步連續稀釋以5倍增量添加化合物。在30℃下培育90分鐘之後，用350 μL Qiagen RLT溶解緩衝液停止RNP反應，且使用Qiagen RNeasy 96套組純化RNA。純化後的RNA在RNA樣品加樣緩衝液(Sigma)中在65℃下變性10分鐘，且在含有2 M甲醛之1.2%瓊脂糖/MOPS凝膠上進行。將瓊脂糖凝膠乾燥並暴露於Storm磷光成像儀螢幕，且使用Storm磷光成像儀(GE Healthcare)顯影。藉由兩次重複實驗之非線性回歸分析計算將總放射性標記轉錄物減少50%之化合物濃度(IC50 )。實例 82. DENV-2 moDC EC50
人類單核球衍生之樹突狀細胞(moDC)係衍生自在含有GM-CSF及IL-4之人類Mo-DC分化培養基(Miltenyi Biotec)中培養的CD14+單核球(AllCells)。在第7天，藉由機械破碎收集moDC，洗滌，且將其懸浮於無血清RPMI中。在37℃下在輕緩攪拌下，moDC在無血清RPMI中用Vero衍生之登革熱2型新幾內亞病毒株(NGC)以MOI = 0.1感染兩小時。洗滌細胞，且將其再懸浮於含10%血清之RPMI (Gibco，補充有丙酮酸鈉、NEAA、青黴素-鏈黴素)中。一式三份地將10^5個細胞接種於96孔盤中，其中化合物以分級劑量分配(Hewlett-Packard D300數位分配器)。所有孔均相對於0.25% DMSO正規化。在48小時時，將細胞用1× PBS洗滌且移除所有上清液。使用RNEasy 96盤(Qiagen)提取總RNA，且使用總RNA使用XLT cDNA 5×超混合液(QuantaBio)產生第一股cDNA。cDNA用作對DENV2病毒及GAPDH基因表現具有特異性之Taqman qPCR雙螺旋反應中之模板。使用Prism Graphpad軟體測定EC50 值，相對於陽性對照及無化合物陰性對照孔正規化。實例 83. moDC CC50
人類單核球衍生之樹突狀細胞(moDC)係衍生自在含有GM-CSF及IL-4之人類Mo-DC分化培養基(Miltenyi Biotec)中培養的CD14+單核球(AllCells)。在第7天，藉由機械破碎收集moDC，洗滌，且一式三份地在96孔盤中以1×10^5至5×10^4個細胞/孔進行培養，其中化合物以分級劑量分配(Hewlett-Packard D300數位分配器)。所有孔均相對於0.25% DMSO正規化。48小時後，添加CellTiter Glo (Promega)且在室溫下培育10分鐘，隨後在光度計上讀數。針對無化合物及無細胞對照孔計算活力%曲線。使用Prism Graphpad軟體測定CC50 值。實例 84. DENV-2 Huh-7 EC50
Huh7 (人類肝癌7)細胞維持於含有10% FCS之DMEM完全培養基中。在分析當天，將細胞胰蛋白酶化(0.1% 胰蛋白酶-EDTA)，洗滌，且在37℃下在輕緩攪拌下，在無血清DMEM中用登革熱血清型2新幾內亞C (NGC)病毒株以MOI = 0.1感染2小時。2小時後，將細胞用無血清培養基洗滌，且懸浮於含有10% FCS之DMEM (Gibco，補充有丙酮酸鈉、NEAA、青黴素-鏈黴素)中。一式三份地將10^5個細胞接種於96孔盤中，其中化合物以分級劑量分配(Hewlett-Packard D300數位分配器)。所有孔均相對於0.25% DMSO正規化。在48小時時，將細胞用1× PBS洗滌且移除所有上清液。使用RNEasy 96盤(Qiagen)提取總RNA，且使用總RNA使用XLT cDNA 5×超混合液(QuantaBio)產生第一股cDNA。cDNA用作對DENV2病毒及GAPDH基因表現具有特異性之Taqman qPCR雙螺旋反應中之模板。使用Prism Graphpad軟體測定EC50 值，相對於陽性對照及無化合物陰性對照孔正規化。實例 85. Huh-7 CC50
人類肝癌7 (Huh7)細胞維持於含有10% FCS之完全DMEM中。^在分析當天，將細胞用0.1%胰蛋白酶-EDTA胰蛋白酶化，洗滌，且一式三份地在96孔盤中以1-2×104個細胞/孔進行培養，其中化合物以分級劑量分配(Hewlett-Packard D300數位分配器)。所有孔均相對於0.25% DMSO正規化。48小時後，添加CellTiter Glo (Promega)且在室溫下培育10分鐘，隨後在光度計上讀數。針對無化合物及無細胞對照孔計算活力%曲線。使用Prism Graphpad軟體測定CC50 值。實例 86. RSV HEp-2 EC50
在HEp-2細胞中使用感染性細胞病變細胞保護分析來測定針對RSV之抗病毒活性。在此分析中，抑制病毒感染及/或複製之化合物產生對抗病毒誘導之細胞殺滅的細胞保護作用，其可使用細胞活力試劑定量。此處使用之技術為公開文獻(Chapman等人, Antimicrob Agents Chemother. 2007, 51(9):3346-53)中所描述方法之新穎修改。
HEp-2細胞獲自ATCC (Manassas，VI)，且維持於補充有10%胎牛血清及青黴素/鏈黴素之MEM培養基中。細胞一週傳代兩次，且保持在近匯合階段。在化合物測試之前滴定RSV病毒株A2 (Advanced Biotechnologies，Columbia，MD)之市售儲備液，以測定在HEp-2細胞中產生所需細胞病變效應的病毒儲備液之適當稀釋。
對於抗病毒測試，HEp-2細胞在大細胞培養燒瓶中生長至接近匯合，但並未完全匯合。以8或40樣品/盤標準化劑量反應形式，在384孔化合物稀釋盤中將待測試化合物預稀釋於DMSO中。在盤中製備各測試化合物之3倍連續遞增稀釋液，且經由聲學轉移設備(Echo，Labcyte)以每孔100 nL將測試樣品轉移至細胞培養物分析384孔盤中。將各化合物稀釋液以單一或一式四份樣品之形式轉移至乾分析盤中，其經儲存直至準備好進行分析。陽性及陰性對照相對地置放在盤之豎直區塊(1行)之末端上。
隨後，使用先前藉由用50,000/mL密度之細胞滴定所測定的病毒儲備液之適當稀釋液製備感染性混合物，且經由自動化(uFlow，Biotek)以20微升/孔添加至具有化合物之測試盤中。各盤包括陰性及陽性對照(各16個複本)以分別產生0%及100%病毒抑制標準。在感染RSV之後，將測試盤在37℃細胞培養培育箱中培育4天。在培育之後，將細胞活力試劑Cell TiterGlo (Promega，Madison，WI)添加至簡單培育之分析盤中，且量測(Envision，Perkin Elmer)所有分析盤中之發光讀數。根據剩餘細胞活力之水準測定RSV誘導之細胞病變效應(抑制百分比)。針對各測試濃度，相對於0%及100%抑制對照計算此等數值，且藉由非線性回歸測定各化合物之EC50 值作為抑制RSV誘導之細胞病變效應達50%之濃度。各種強效抗RSV工具化合物用作抗病毒活性之陽性對照。實例 87. HEp-2 CC50
以與先前針對其他細胞類型所描述類似的方式，使用細胞活力試劑與抗病毒活性並行地在未感染之HEp-2細胞中測定所測試化合物之細胞毒性(Cihlar等人, Antimicrob Agents Chemother. 2008,52(2):655-65.)。使用與抗病毒活性之測定相同的方案來量測化合物細胞毒性，不同之處為細胞不感染RSV。替代地，將相同密度的未感染細胞混合物以20微升/孔添加至含有預稀釋化合物之盤中，該等化合物亦為100 nL/樣品。隨後將分析盤培育4天，接著使用相同CellTiter Glo試劑添加進行細胞活力測試且量測發光讀數。未處理細胞及以2 μM嘌呤黴素(Sigma，St. Louis，MO)處理之細胞分別充當100%及0%細胞活力對照。針對各所測試化合物濃度，相對於0%及100%對照計算細胞活力百分比，且藉由非線性回歸測定CC50 值作為降低細胞活力達50%之化合物濃度。實例 88. RSV NHBE EC50
正常人類支氣管上皮(NHBE)細胞購自Lonza (Walkersville，MD，目錄號CC-2540)，且在支氣管上皮生長培養基(BEGM) (Lonza，Walkersville，MD，目錄號CC-3170)中培養。使細胞每週傳代1至2次以維持＜80%匯合。在培養物中6次傳代之後丟棄NHBE細胞。
為了進行RSV A2抗病毒分析，將BEGM中之NHBE細胞以7,500個細胞/孔之密度接種於96孔盤中，且使其在37℃下附著隔夜。附著之後，移除100 μL細胞培養基，且使用Hewlett-Packard D300數位分配器添加3倍連續稀釋之化合物。將最終DMSO濃度正規化至0.05%。在添加化合物之後，在BEGM中藉由添加100 μL效價為每毫升1 × 104.5 個組織培養感染劑量之RSV A2來感染NHBE細胞，且隨後在37℃下培育4天。隨後使NHBE細胞平衡至25℃，且藉由移除100 μL培養基並添加100 μL Cell-Titer Glo活力試劑來測定細胞活力。將混合物在25℃下培育10分鐘，且在Envision發光盤讀取器上定量發光信號。 表3. 活性資料
實例編號 DENV-2 moDC EC50 (nM) moDC CC50 (nM) DENV-2 Huh-7 EC50 (nM) Huh-7 CC50 (nM) RSV Hep-2 EC50 (nM) Hep-2 CC50 (nM)
中間物5             ＞50000 ＞50000
1 117 ＞5885.49 151 18003 119 ＞50000
化合物實例1       2333         
3 156 ＞11076.8 92 ＞25000 77 ＞100000
4 58 4776 132 17783 29 ＞100000
5       381 12232 575 ＞50000
6       157 7079 92 ＞50000
7 40 6693 159 ＞25000 24 ＞100000
8 45 6401 191 ＞25000 259 ＞50000
9 128 4880 191 ＞25000 179 ＞50000
10 679 ＞19512.1 843 ＞25000 909 ＞50000
11 380 16092 586 ＞18791.5 2042 12641
12 753 ＞25000 453 ＞25000 1367 ＞100000
13 274 ＞10206.4 487 ＞25000 844 ＞89407
14 165 ＞7759.4 205 ＞25000 187 ＞100000
15       1626 ＞25000 1459 ＞50000
16 214 3804 736 13441 1105 32973
17       510 ＞25000 516 ＞100000
18 264 ＞10465.2 384 ＞25000 1298 ＞100000
19 212 10913 416 ＞25000 722 ＞97053
20       2571 ＞25000 3183 ＞100000
21 1039 ＞17257.6 3063 ＞25000 1777 ＞100000
22 735 ＞23603.2 1026 ＞25000 2360 71734
23 387 10908 1803 ＞23226.5 4317 26334
24 257 18557 1556 16005 1833 16618
25 213 12186 291 ＞25000 919 69982
26       ＞24014.3 ＞25000 39293 ＞100000
28 ＞5000 ＞25000 1429 ＞21902.1      
29 951 ＞16922.7 1457 ＞20891.5 1750 21568
30             4133 ＞100000
31       951 ＞25000 1899 ＞100000
32       2596 ＞25000 3729 ＞100000
33       811 ＞25000 1224 43266
34 334 7655 165 6470      
35       ＞25000 ＞25000 42773 ＞100000
37 ＞5000 ＞25000 2700 ＞25000      
38 422 12170 2553 ＞24563.7      
39             2472 ＞100000
40 1596 ＞25000 519 ＞25000 3435 ＞100000
41 814 ＞21826.3 1458 ＞25000 1995 ＞100000
42 258 5330 667 21054 860 ＞100000
43 626 17947 1199 ＞25000 2155 ＞100000
44       191 17120 148 26465
45 ＞5000 ＞25000 4575 ＞25000 21760 ＞100000
46 158 3354 386 10249 236 37099
47       650 21429 389 65855
48       390 15405 215 30186
49       334 ＞25000 225 ＞100000
51 131 4582 326 ＞25000 524 ＞100000
52 71 7853 381 ＞15630.9      
53       419 19747 565 ＞100000
54 241 3255 409 ＞25000 180 ＞100000
55 103 4185 611 ＞25000 150 ＞100000
57 393 4121 626 ＞25000      
58 124 2038 499 ＞20310.5      
59 62 7039 153 11337 298 45067
60       1208 ＞24810 1105 36218
61       568 15027 855 19095
62       662 8085 10097 16781
63 321 5600 602 10677 2424 19101
64       1995 ＞25000      
66       802 ＞25000 1413 16778
67       947 ＞25000 2999 17426
68 169 6257 278 ＞25000 141 ＞100000
69       ＞25000 ＞25000 ＞50000 ＞50000
70 190 3567 245 10615 212 69409
71 143 8798 298 13017 290 ＞100000
72       12374 ＞25000 15627 ＞50000
73       302 9337      
75       175         
表4. 活性資料
實例編號 RSV NHBE EC50 (nM) DENV Pol IC50 (nM)
中間物5 ＞4832.18   
1 595   
化合物實例2    7093
2    737
10 2108   
11 367   
比較實例 1. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氯甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 乙基丁酯
Figure 02_image413
((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-4-( 氯甲基 )-2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲醇 . 將CE1.1 (來自WO 2015/069939之中間物14j；200 mg，0.363 mmol)溶解於5 mL無水吡啶中。一次性添加三氟甲烷磺醯氯(58 μL，0.545 mmol)且攪拌60 min。添加更多三氟甲烷磺醯氯(58 μL，0.545 mmol)且攪拌30 min。添加三氟甲烷磺醯氯(100 μL)且攪拌30 min。減壓濃縮反應物。將殘餘物溶解於5 mL無水DMF中，且一次性添加氯化鋰(308 mg，7.26 mmol)。攪拌反應物16小時。
反應物用EtOAc (15 mL)稀釋且用鹽水(3×10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO2 管柱層析(12 g SiO2 Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化。合併溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於二㗁烷(8 mL)及水(2 mL)中，且在120℃下攪拌2小時。減壓濃縮反應物。
將殘餘物溶解於THF (5 mL)中。添加三水合氟化四丁銨(97 mg，0.307 mmol)，且攪拌反應物1小時。反應物用EtOAc (15 mL)稀釋且用鹽水(5×5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO2 管柱層析(4 g SiO2 Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化。合併溶離份且減壓濃縮，得到中間物CE1.2 。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 7.87 (s, 1H), 6.65 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.54 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 6.12 (bs, 2H), 5.33 (dd,J = 6.9, 5.9 Hz, 1H), 5.14 (d,J = 6.9 Hz, 1H), 5.05 (d,J = 5.9 Hz, 1H), 3.98 - 3.71 (m, 4H), 1.63 (s, 3H), 1.36 (s, 3H)。LCMS：MSm/z = 355.3 [M+1]，353.4 [M-1]，tR = 1.04 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：tR = 2.15 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。
Figure 02_image415
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氯甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 乙基丁酯 . 將CE1.2 (47 mg，0.132 mmol)及CE1.3 (72 mg，0.159 mmol)混合且溶解於2 mL無水THF中。一次性添加氯化鎂(38 mg，0.396 mmol)。添加DIPEA (57 μL，0.33 mmol)，且在40℃下攪拌反應物16小時。反應物用EtOAc (15 mL)稀釋，且用水(5×10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN (5 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃鹽酸水溶液(250 µL)。在冰浴中攪拌反應物2小時。將1 M碳酸氫三乙銨溶液添加至反應物中，得到pH值8，且接著減壓濃縮反應物。粗殘餘物藉由製備型HPLC在中性條件(5-100% MeCN/水)下純化。合併溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d4 ) δ 7.77 (m, 1H), 7.39 - 7.09 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.74 (m, 1H), 5.36 (m, 1H), 4.72 (m, 1H), 4.41 - 4.23 (m, 3H), 4.07 - 3.84 (m, 5H), 1.53 - 1.40 (m, 1H), 1.38 - 1.25 (m, 7H), 0.89 - 0.81 (m, 6H)。31 P NMR (162 MHz, 甲醇-d4 ) δ 3.46, 3.59。LCMS：MSm/z = 626.2 [M+1]，624.6 [M-1]，tR = 1.30 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：tR = 3.14 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：tR = 5.247，5.327 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6 μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。比較實例 2. 三磷酸四氫 (2R,3S,4R,5S)- 5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 氯甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲酯
Figure 02_image417
參見WO 2015/069939中之化合物TP13 (實例33)。
儘管出於清楚地理解之目的已藉助於說明及實例相當詳細地描述前述發明，但熟習此項技術者應瞭解，可在所附申請專利範圍之範疇內實踐某些改變及修改。此外，本文中所提供之各參考文獻係以全文引用的方式併入本文中，其併入程度如同各參考文獻單獨地以引用的方式併入之程度相同。當本申請案與本文所提供之參考文獻之間存在衝突時，應以本申請案為準。
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 110105397-A0101-11-0001-1

Claims (79)

  1. 一種式(I)化合物：
    Figure 03_image419
    式(I)， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： 鹼基為
    Figure 03_image421
    ； R1 及R2 各自獨立地為H或-C(O)R1A ，其中R1A 為C1-6 烷基； R3 為-N(H)R3A ； R3A 為H、-CH2 OP(O)(OH)2 或-C(O)R3D ，其中 R3D 為C6-12 芳基或視情況經C3-6 環烷基取代之C1-6 烷基； R4A 為O； R4B 及R4C 各自獨立地為： (A)  -OH； (B)   -OR4B1 ，其中R4B1 為C6-12 芳基； (C)
    Figure 03_image423
    ，其中 下標m為0、1、2、3、4或5；且 各R4D 獨立地為C1-6 烷基； (D)
    Figure 03_image425
    ，其中 R4E1 及R4E2 各自獨立地為H或C1-6 烷基； R4F1 及R4F2 一起為側氧基； R4G 為視情況經1至3個R4G1 取代之C1-8 烷基；C3-8 環烷基；或視情況經1至3個R4G3 取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基； 各R4G1 獨立地為-OH、C1-6 烷氧基、-(CH2 OCH2 )1-5 -CH3 、C1-3 鹵烷基或視情況經1至3個R4G9 取代之C3-8 環烷基； 各R4G3 及R4G9 獨立地為C1-6 烷基；或 (E)   -(OP(O)(OH))1-2 -OH；且 R5A 及R5B 各自獨立地為經-OP(O)(OH)2 取代之C1-6 烷基。
  2. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R1 及R2 各自為H。
  3. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中 R1 及R2 各自為-C(O)R1A ；且 R1A 為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基或三級丁基。
  4. 如請求項1或3之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中 R1 及R2 各自為-C(O)R1A ；且 R1A 為甲基、乙基或異丙基。
  5. 如請求項1至4中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有下式：
    Figure 03_image427
    其中 R3 為-N(H)R3A ； R3A 為H或-C(O)R3D ；且 R3D 為苯基或視情況經C3-6 環烷基取代之C1-3 烷基。
  6. 如請求項1至5中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中 R3 為-NH2 。
  7. 如請求項1至6中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中 R4B 及R4C 各自獨立地為： (A) -OH； (B) -OR4B1 ，其中R4B1 為萘基； (C)
    Figure 03_image429
    ，其中 下標m為0或1；且 R4D 為C1-6 烷基； (D)
    Figure 03_image431
    ，其中 R4E1 為C1-3 烷基； R4E2 為H； R4F1 及R4F2 一起為側氧基； R4G 為視情況經1個R4G1 取代之C1-8 烷基；C4-6 環烷基；或視情況經1個R4G3 取代的具有1個選自N及O之雜原子的4員至6員雜環基； 各R4G1 獨立地為-OH、C1-4 烷氧基、-(CH2 OCH2 )1-2 -CH3 、C1-3 鹵烷基或視情況經1個R4G9 取代之C3-6 環烷基； 各R4G3 及R4G9 獨立地為C1-3 烷基；或 (E)   -(OP(O)(OH))1-2 -OH。
  8. 如請求項1至7中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中 R4B 為： (B)    -OR4B1 ，其中R4B1 為萘基；或 (C)
    Figure 03_image433
    ，其中 下標m為0或1；且 R4D 為三級丁基；或 (E)   -(OP(O)(OH))1-2 -OH。
  9. 如請求項1至8中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中 R4C 為： (A)     -OH；或 (D)
    Figure 03_image435
    ，其中 R4E1 為甲基； R4E2 為H； R4F1 及R4F2 一起為側氧基；且 R4G 為 甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、正戊基、新戊基、正己烷、2,2-二甲基-丁基、3,3-二甲基-丁基、2-乙基-丁基或2-正丙基-戊基，其各自視情況經OH、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、CF3 、Me(CH2 OCH2 )2 -、環丙基或1-甲基環丙基取代， 環丁基、環戊基或環己基， 吡咯啶基、氧雜環丁烷基或四氫哌喃基，其各自視情況經甲基、乙基、正丙基或異丙基取代。
  10. 如請求項1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R5A 及R5B 各自為-CH2 OP(O)(OH)2 。
  11. 如請求項1至10中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式(Ib)：
    Figure 03_image437
    式(Ib)， 其中 R3A 為H；且 R5A 為-CH2 OP(O)(OH)2 。
  12. 如請求項1至10中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式(Ic)：
    Figure 03_image439
    式(Ic)， 其中 R3A 為H；且 R5B 為-CH2 OP(O)(OH)2 。
  13. 如請求項1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式(Id)：
    Figure 03_image441
    式(Id)。
  14. 如請求項1至9及13中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式(Ie)：
    Figure 03_image443
    式(Ie)。
  15. 如請求項1至9及13中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式(If)：
    Figure 03_image445
    式(If)。
  16. 如請求項1至9及13至15中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式(Ig)：
    Figure 03_image447
    式(Ig)。
  17. 如請求項1至9、13及14中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式(Ih)：
    Figure 03_image449
    式(Ih)。
  18. 如請求項1至9及13至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式(Ij)：
    Figure 03_image451
    式(Ij)。
  19. 如請求項1至9、13及14中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式(Ik)：
    Figure 03_image453
    式(Ik)。
  20. 如請求項1至9、13至16及19中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式(Im)：
    Figure 03_image455
    式(Im)。
  21. 如請求項1至13及15中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R4C 為：
    Figure 03_image457
    。
  22. 如請求項1至13及15中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R4C 為：
    Figure 03_image459
    。
  23. 如請求項1至22中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中 R4G 為 甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、正戊基、新戊基、正己烷、2,2-二甲基-丁基、3,3-二甲基-丁基、2-乙基-丁基或2-正丙基-戊基，其各自視情況經OH、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、CF3 、Me(CH2 OCH2 )2 -、環丙基或1-甲基環丙基取代， 環丁基、環戊基或環己基， 吡咯啶基、氧雜環丁烷基或四氫哌喃基，其各自視情況經甲基、乙基、正丙基或異丙基取代。
  24. 如請求項1至23中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中 R4G 為 視情況經Me(CH2 OCH2 )2 -、環丙基或1-甲基環丙基取代之甲基， 視情況經丁氧基取代之乙基， 視情況經甲氧基取代之正丙基， 異丙基、正丁基， 視情況經OH、甲氧基或CF3 取代之異丁基， 正戊基、新戊基、正己烷、2,2-二甲基-丁基、3,3-二甲基-丁基、2-乙基-丁基、2-正丙基-戊基， 環丁基、環己基， N-甲基-吡咯啶基、氧雜環丁烷基或四氫哌喃基。
  25. 7至9及13至24中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中 R1 及R2 兩者為H或-C(O)R1A ，其中R1A 為甲基、乙基或異丙基； R3 為-NH2 ； R4B 為： -OPh；且 R4C 為：
    Figure 03_image461
    ，其中 R4G 為 甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、正戊基、新戊基、正己烷、2,2-二甲基-丁基、3,3-二甲基-丁基、2-乙基-丁基或2-正丙基-戊基，其各自視情況經OH、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、CF3 、Me(CH2 OCH2 )2 -、環丙基或1-甲基環丙基取代， 環丁基、環戊基或環己基， 吡咯啶基、氧雜環丁烷基或四氫哌喃基，其各自視情況經甲基、乙基、正丙基或異丙基取代。
  26. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式(In)：
    Figure 03_image463
    式(In) 其中 R1 及R2 兩者為H或-C(O)R1A ，其中R1A 為甲基、乙基或異丙基；且 R4G 為 甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、正戊基、新戊基、正己烷、2,2-二甲基-丁基、3,3-二甲基-丁基、2-乙基-丁基或2-正丙基-戊基，其各自視情況經OH、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、CF3 、Me(CH2 OCH2 )2 -、環丙基或1-甲基環丙基取代， 環丁基、環戊基或環己基， 吡咯啶基、氧雜環丁烷基或四氫哌喃基，其各自視情況經甲基、乙基、正丙基或異丙基取代。
  27. 如請求項1至26中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其係選自由表1A、表1B、表1C及表1D中之化合物組成之群。
  28. 如請求項1至27中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為：
    Figure 03_image465
    Figure 03_image467
    。
  29. 如請求項1至28中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為：
    Figure 03_image469
    。
  30. 如請求項1至28中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為：
    Figure 03_image471
    。
  31. 如請求項1至28中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為：
    Figure 03_image473
    。
  32. 如請求項1至28中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為：
    Figure 03_image475
    。
  33. 如請求項1至28中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為：
    Figure 03_image477
    。
  34. 一種化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為：
    Figure 03_image479
    。
  35. 一種醫藥調配物，其包含醫藥學上有效量的如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。
  36. 一種治療有需要人類中肺病毒科(Pneumoviridae )病毒感染之方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
  37. 如請求項36之方法，其中該肺病毒科病毒感染為呼吸道融合性病毒感染。
  38. 如請求項36之方法，其中該肺病毒科病毒感染為人類間質肺炎病毒(metapneumovirus )感染。
  39. 一種治療有需要人類中小核糖核酸病毒科(Picornaviridae )病毒感染之方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
  40. 如請求項39之方法，其中該小核糖核酸病毒科病毒感染為人類鼻病毒感染。
  41. 一種治療有需要人類中黃病毒科(Flaviviridae )病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
  42. 如請求項41之方法，其中該黃病毒科病毒感染為登革熱病毒(dengue virus)感染。
  43. 一種治療有需要人類中絲狀病毒科(Filoviridae )病毒感染之方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
  44. 如請求項43之方法，其中該絲狀病毒科病毒感染為伊波拉病毒(ebola virus)感染。
  45. 一種用於製造供治療有需要人類中肺病毒科病毒感染的藥劑之方法，其中係使用如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
  46. 如請求項45之方法，其中該肺病毒科病毒感染為呼吸道融合性病毒感染。
  47. 如請求項45之方法，其中該肺病毒科病毒感染為人類間質肺炎病毒感染。
  48. 一種用於製造供治療有需要人類中小核糖核酸病毒科病毒感染的藥劑之方法，其中係使用如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
  49. 如請求項48之方法，其中該小核糖核酸病毒科病毒感染為人類鼻病毒感染。
  50. 一種用於製造供治療有需要人類中黃病毒科病毒感染的藥劑之方法，其中係使用如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
  51. 如請求項50之方法，其中該黃病毒科病毒感染為登革熱病毒感染。
  52. 一種用於製造供治療有需要人類中絲狀病毒科病毒感染的藥劑之方法，其中係使用如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
  53. 如請求項52之方法，其中該絲狀病毒科病毒感染為伊波拉病毒感染。
  54. 一種如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽之用途，其用於製造供治療人類肺病毒科病毒感染之藥劑。
  55. 如請求項54之用途，其中該肺病毒科病毒感染為呼吸道融合性病毒感染。
  56. 如請求項54之用途，其中該肺病毒科病毒感染為人類間質肺炎病毒感染。
  57. 一種如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽之用途，其用於製造供治療人類小核糖核酸病毒科病毒感染之藥劑。
  58. 如請求項57之用途，其中該小核糖核酸病毒科病毒感染為人類鼻病毒感染。
  59. 一種如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽之用途，其用於製造供治療人類黃病毒科病毒感染之藥劑。
  60. 如請求項59之用途，其中該黃病毒科病毒感染為登革熱病毒感染。
  61. 一種如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽之用途，其用於製造供治療人類絲狀病毒科病毒感染之藥劑。
  62. 如請求項61之用途，其中該絲狀病毒科病毒感染為伊波拉病毒感染。
  63. 如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之肺病毒科病毒感染。
  64. 如請求項63之化合物，其中該肺病毒科病毒感染為呼吸道融合性病毒感染。
  65. 如請求項63之化合物，其中該肺病毒科病毒感染為人類間質肺炎病毒感染。
  66. 如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之小核糖核酸病毒科病毒感染。
  67. 如請求項66之化合物，其中該小核糖核酸病毒科病毒感染為人類鼻病毒感染。
  68. 如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之黃病毒科病毒感染。
  69. 如請求項68之化合物，其中該黃病毒科病毒感染為登革熱病毒感染。
  70. 如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之絲狀病毒科病毒感染。
  71. 如請求項70之化合物，其中該絲狀病毒科病毒感染為伊波拉病毒感染。
  72. 一種用於治療或預防有需要人類因病毒感染所引起的呼吸道病況惡化之方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。
  73. 如請求項72之方法，其中該病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒或間質肺炎病毒引起。
  74. 一種用於製造供治療或預防有需要人類因病毒感染所引起的呼吸道病況惡化的藥劑之方法，其中係使用如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。
  75. 如請求項74之方法，其中該病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒或間質肺炎病毒引起。
  76. 一種如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽之用途，其用於製造供治療或預防人類因病毒感染所引起的呼吸道病況惡化之藥劑，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。
  77. 如請求項76之用途，其中該病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒或間質肺炎病毒引起。
  78. 如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療或預防有需要人類因病毒感染所引起的呼吸道病況之惡化，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。
  79. 如請求項78之化合物，其中該病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒或間質肺炎病毒引起。
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