TW200521124A - 3,5 disubstituted indazole compounds, pharmaceutical compositions, and methods for mediating or inhibiting cell proliferation - Google Patents

Description

200521124 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於在3位上具有經取代苯甲醯胺唑的3,5-二取 代吲唑，其可藉由蛋白激酶活性，尤其藉由諸如、 CDK2、CDK4及CDK6等細胞週期調節蛋白依賴性激酶之介 導作用來調節及/或抑制細胞增殖。本發明進一步係關於包 含該等化合物及組合物之醫藥組合物，且係關於藉由投與 有效量之該等化合物來治療癌症以及其他與非期望之血管 發生及/或細胞增殖相關的疾病狀況之方法。 【先前技術】 細胞增殖可因應多種刺激而發生且可由細胞分裂週期 (或細胞週期，即細胞藉以繁殖及分裂之過程）之失調所造 成。過度增殖性疾病狀態（包括癌症）之特徵在於，細胞因（例 如）直接或間接調控整個週期進展的基因受到損傷而以失 控的活力在整個細胞週期内不受限制地蔓延生長。因此， 周畴、、、田胞週期1由此調節㉟度增殖之藥劑可用於治療與失 控或非期f之細胞增殖相關的多種疾病狀況。 =們正在細胞及分子層次上對細胞增殖之機制進行積極 九在、、、田胞層-人上，人們正在研究傳送信號路徑之失調、 :細胞週期控制之喪失、無法控制的血管發生或炎症反應路 徑=刺激’而在分子層次上，該等過程受到多種蛋白質的 凋即其中蛋白激酶最爲可疑。㉟殖之總體減弱亦可起因 ^程式化細胞死亡或細胞社，其亦經由多通道來調節， 其中某些通道涉及各種蛋白水解酵素蛋白。在候選調節蛋 94609.doc 200521124 白中，蛋白激酶爲-類酵素，其可催化蛋白質中特定路胺 酸、絲胺酸或蘇胺酸殘基之經基的碟酸化反應。通常，該 等填酸化反應會顯著擾亂蛋白質之功能，目此，蛋白㈣ 在多種細胞程序之調節中皆極其重要。舉例而t，雖然本 發明非欲受束縛於-特定理論，但據認爲··作爲諸如細胞 週期調節蛋白依賴性激酶(「CDK」)等蛋白激酶之抑制劑， 本發明藥劑可調節細胞RNA及DNA合成之水平，並因此有 望用於治療病毒感染，例如HIV、人乳頭瘤病毒、跑療病毒、 EB(Epstein-Barr)病毒、腺病毒、辛德比斯病毒（如仙 vims)、痘病毒及諸如此類。（參見Schang，等人，vir〇l Μ， 2107-2120 (2000))。另外，在加蛋白f之磷酸化反應中涉 及到了 CDK5，此暗示了治療或預防阿茲海默氏病 (Alzheimer，s disease)之潛在方法（H〇s〇i，等人，；則㈤心爪。 (Tokyo) ’ U7 ’ 741·749 〇995))。cdk 爲絲胺酸'蘇胺酸蛋 白激酶’其在調節細胞週期不同階段間的轉換中起關鍵作 用例如;k Gl期（介於有絲分裂與新一輪細胞分裂之DNA 稷製開始之間的間隙）中的休眠期進展至8期（活躍的 «成期）’或從G2期進展至發生活躍的有絲分裂及細胞分裂 的Μ/月CDK錯合物係藉由一調節性細胞週期調節蛋白亞 基（例如’細胞週期調節蛋白A、B1、B2、D1、D2、D3及 E)締合一催化激酶次單位（例如，cDK1、cDK2、CDK4、 CDK5及CDK6)形成。顧名思義，CDK表現出一種對細胞週 J凋節蛋白亞基之絕對依賴性，以便磷酸化其靶底物，且 不同的激酶/細胞週期調節蛋白對發揮作用來調整貫穿細 94609.doc 200521124 胞週期各特定階段之進展。 迄今，已經證實諸多°弓丨唾衍生物皆具有治療潛力：英國 專利第2345486號揭示吲唑衍生物可作爲酪胺酸激酶抑制 劑，歐洲專利第05 1 8805號證實經狐。定取代之吲吐類化合物 具有5受體活性；WO 89/43969揭示環尿中之吲唑類化合物 可用做HIV蛋白酶抑制劑；美國專利第4,415,569號證實吡 唑啉酮吲唑衍生物具有支氣管擴張作用；美國專利第 5,208,248號揭示吲唑類化合物可用於治療偏頭痛。吲唑衍 生物之其他治療應用闡述於WO 96/20192、歐洲專利第 04994774號、日本專利第60/004184號、歐洲專利第0023633 號、美國專利第405 1145號、日本專利第59/228248號、英 國專利第1/376600號、美國專利第4978603號、歐洲專利第 0904769 號及 De Lucca 等人之著作（Journal of Medicinal Chemistry，42，13 5-52 (1999))中。用於製備吲唾衍生物之通 用合成流程由Wentrup等人揭示於Journal of Organic Chemistry (43，2037-41(1978))中；亦由 Fugimura等人揭示 於 Chemical Abbstracts (1070，749 (1987))中。更特定言之， 已經證實，3,5經取代之吲唑類化合物可作爲蛋白激酶抑制 劑：WIPO國際公開案第01/85726號揭示經1，1-二氧四氫異 噻唑取代之吲唑化合物可用作CDK抑制劑；WO 02/10137 揭示3，5經取代之吲唑可用作Jun胺基末端激酶抑制劑之抑 制劑；且美國專利第6,555,539號及界0 03/00448 8揭示了在 3位上具有一苯并咪唑之3,5經取代吲唑。 然而，業内仍需要更有效的CDK抑制劑，具體而言，需 94609.doc 200521124 要對靶CDK激酶具有高度親和性以及對其他蛋白激酶更具 高選擇性的CDK抑制劑。本發明化合物通常較先前公開案 所闡述之化合物更宜選作CDK抑制劑。 【發明内容】 本發明之一目的係提供強效且具選擇性的CDK抑制劑。 因此，本發明之一目的係獲得可抑制CDK或其細胞週期調 節蛋白錯合物之活性的化合物及藥物組合物。本發明之另 -目標係提供-種藉由抑制CDK治療癌症適應症之有效方 法。本發明之再—目標係獲得包含可有效阻斷癌細胞向增 '月轉換的化σ物之醫藥組合物。藉助以下詳細闡述可明 瞭本毛月之忒等及其他目的及優點’其可藉由使用下述本 發明細胞週期控制劑而達成。 根據該等目的，本發 ^月^供一式I之化合物或其一醫藥 上可接受之鹽或溶劑合物：

94609.doc 200521124 其中R1、R2、R3及R4係選自下列組成之群：η、鹵代基、 氰基、硝基、三氟甲氧基、三氟甲基、疊氮基、羥基、crc6 烧氧基、Ci-CiG烧基、C2-C6稀基、C2_C6炔基、-C(0)R5、 -C(0)0R5 -0C(0)R5 -NR5C(0)R6 -C(0)NR5R6 -(CR5R6)NR7R8 > -CR5R6NR7R8、-NR5〇R6、-so2NR5R6、-s(o)j(crc6烷基）（其中 j 係 0至 2的整數），-(CR5R6)t(CVCi()芳基）、(CR5R6)t(CVCi〇 環烷 基）、-(CR5R6)t(4S 1〇 員雜環）、_(CR5R6)qC(〇)(CR7R8)t(C6_CH 芳基）、-(CR5R6)qC(O)(CR7R8)t(C3-C10 環烷基）、-(CR5R6)qC(〇) (CR7R8)t(4 至 10 員雜環）、_(CR5R6)t〇(CR7R8MC6_Ci〇 芳基）、 -(CR5R6)t〇(CR7R8)q(C3-C1()環烧基）、-(αΐ5ί16χ〇(〇ί17Ι18)ς(4 至 1〇 員雜環）、-(CR5R6)qS〇2(CR7R8)t(C6-Cl〇芳基）、_(CR5R6)qS〇2 (CWMCVCi。環烷基）及1〇員雜 環）’其中q及t皆各自獨立爲一自〇至5之整數，上述ri、r2、 R3或R4之環烷基或雜環部分的1或2個環碳原子視情況經一 氧（ = 0)部分取代，每一 R5、r6、R7&R8皆獨立選自H、Ci& 烧基；且其中R1、R2、R3及R4不同時爲Η。 在一實施例中’ Rl爲_(CR5R6)NR7R8，且R2、R3及R4係獨 立選自Η或F。 在—實施例中，Rl爲乙胺基曱基，R3爲Η，且R2及1^爲1?。 在另一實施例中尺1爲乙胺基甲基，R2及R4爲H，且…爲卜 在再一實施例中，本發明係關於一選自 94609.doc 200521124

本發明亦提供若干製備式i化合物之方法。 本發明進一步提供一種使用一化合物作爲細胞週期控制 劑來治療一由激酶之抑制介導的疾病或病症之方法，其包 括向一有其需要的患者投與一式I化合物或一式I化合物 之醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。 本發明進一步提供一種治療真菌感染、惡性腫瘤或癌症 以及其他與非期望之血管發生及/或細胞增殖相關之疾病 狀態的方法，其包括向一需該治療之病人投與有效量之一 式I之化合物或一式Ϊ化合物之醫藥上可接受之鹽或溶劑 合物。 本發明亦提供一種藉由向一有其需要之患者投與式1化 合物或式I化合物之醫藥上可接受之鹽或溶劑合物來選擇 性地抑制CDK激酶活性之方法。 殺亡發明亦提供-包含-式I之化合物或-式“匕合物之 醫藥上可接受之鹽或溶劑合物之醫藥組合物，及該組合物 於^療由激酶活性介導的疾病中之、冶療料，舉例而言， :寺疾病爲癌症以及其他與非期望之血管發生及/或細胞 曰=相關之疾病狀況’例如糖尿病性視網膜病、新生血管 性青光眼、類風濕性關節炎及幹癖。 94609.doc 200521124 本發明藥劑及包含該等藥劑之組合物可# 失控的或非期望的細胞增 '。療夕種與 癌症、自體免疫性疾病、病毒 ^ 幻如 $仆地产十 生疾病、黴菌性疾病、神統 由二:及心血管疾病。因此，本發明亦係關於若干； 由才又與—有效量之本發明藥劑治療該等疾病之方法。 =以下詳述内容將明瞭本發明之其他態樣、優點及特徵。 本發明之化合物及組合物可用作抗增殖劑以及哺乳 激酶錯合物、昆蟲激酶或黴菌激酶錯合物之抑制齊卜舉例 而言，其可抑制CDK錯合物。該等化合物及組合物亦可用 於控制增殖、分化及/或細胞凋亡。 灰除非另有說明’否則本文所用術語「函代」係指敦代、 氣代、溴代或碘代。較佳*代基團爲氟代基、氯代基及溴 代基。 、 除非另有說明，否則本文所用術語「烷基」包括具有直 鏈或具支鏈部分之飽和單價烴基。烷基」指一具有1 至6個碳原子的直鏈或具支鏈烷基部分及諸如此類。 術語「烯基」指一鏈中具有2至12個碳原子的直鏈或具支 鏈烯基基團。示例性烯基包括丙烯基、丁_2_烯基、丁 _3_ 烯基、2-曱基丙-2-烯基、己-2-烯基、乙烯基、戊烯基及諸 如此類。 術語「炔基」指一鏈中具有2至12個碳原子的直鏈或具支 鏈快基基團。示例性炔基包括丙炔基、丁 炔基、丁 -3_ 炔基、2-甲基丁 _2_炔基、己-2-炔基、乙炔基、丙炔基、戊 快基及諸如此類。 94609.doc • 12 - 200521124

術語「環烷基」指一每環I 却八於4 ^ B 衣具有3至丨2個成環原子之飽和或 口 P刀飽和的、皁環或稠合或 班 ,...^ y ? ^ 累方疋夕裱的碳環。環烷基之示 例性貫例包括以下部分··

口.0，〇.〇.〇,〇0. 〇>·^, 0,0.0 O^.CO.co 及諸如此類。 除非另有說明，否則本文所 「 去除-氯原子而得自芳族炉之有：二方基」包括-藉由 有機基團，例如苯基或萘基。 除非另有說明，否則本文所用術語「4至1()員㈣

含1至4雜原子（每一皆選自〇 、々」L 團， 及1^之方無及非芳族雜環基 二二中母一雜環基围在其環體系内皆具有⑷。個原子， 芳族雜環基團包括在其環的0或8原子。非 芳族雜*“體系内僅具有4個原子之基團，但 基團在其環體系内必須至少具有5個原子。該等雜 %基團包括苯并稠合環體系。一 ” €丁其^ > 4貝雜％基團之實例爲氮雜 且㈣環丁幻。—5員雜«團之實例爲。塞。坐基 〇貝雜環基團之實例爲啥琳基。非芳族雜環基團之實 94609.doc 200521124 例爲it各啶基、四氫呋喃基、二氫呋喃基、四氫噻吩基、 四氫吡喃基、二氫吡喃基、四氫硫吡喃基、六氫吡啶并基、 嗎琳代基、硫㈣代基、4呂料基"瓜祕、氮雜環丁 基、氧°且基、硫°旦基、高π瓜咬基、氧畔基、石荒畔基、，号氮 年基、二氮呼基、硫氮呼基、1，2,3,6·四氫。比絲、各 啉基、3-。比咯啉基、二氫„引哚基、2Η_π比喃基、4Η·η比喃基、 二料基、i，3-二氧戊環基"比嗤琳基、二㈣基、二^味 基、二氫吡喃基、二氫噻吩基、二氫呋喃基、吡唑烷基、 味唾琳基ϋ絲、3_氮雜二環[31()]己基、3氮雜二環 [4.1.0]庚基、3H-吲哚基及喹嗪基。芳族雜環基團之實例爲 吼。定基、_、絲、^基、㈣基、三減、㈣基、四

唑基、呋喃基、噻吩基、異崎唑基、噻唑基、噚唑基、 噻唑基、吡咯基、喹啉基、異喹啉基、吲哚基、苯并咪 基、苯并Μ基…曾琳基、十坐基、中氮茚基、醜嗓基 。井基—呼基、異，D朵基、蝶咬基、嗓吟基、噚二唾 塞-嗤基、吱咕基、苯并心基、苯并d塞吩基、苯并嗟 基、苯并Μ基、㈣録、喧料基、二氮雜蔡基: °南开m °上述得自於上文列示各類基團之基團可在. 能處與C連接或與爾。例如，一得自料之基團可爲， 口各-1-基（與Ν連接）或料_3_基（與c連接）。再如，—得自， 唾之基團可爲味m(與Ν連接）或咪唾_3_基㈣連 環可視情況在任何成環碳、硫或氮原；處經!至 團取代。其中兩個環碳原子經氧部分取代之雜環; 、|〗爲U-二氧-硫嗎琳基。4至1〇_之其他示例,1 94609.doc -14- 200521124 實例係得自（但不限於）下列：

除非另有說明’否則術語「氧」指=0。 術語「醯胺」指基團-C(0)N(R，）（R”），其中R，及R"皆獨立 選自於如上文定義之氫、烷基、烯基、炔基、-OH、烷氧基、 環烷基、雜環烷基、雜芳基、芳基；或R，及R”與氮共同環 化形成一如上文定義之雜環烷基或雜芳基。 術語「經取代的」指具有一或多個取代基的規定基團或 94609.doc -15- 200521124 刀。術语「未經取〇的 ib X Θ -ir τχ, 代的」扣不具有取代基的規定基團。 在本發明之範圍内，應瞭解，-式Ϊ化合物可展示互變 異構現象’而本說明書中之式圖僅代表可能的互變異構形 式之-。應瞭解，本發明涵蓋可調節及/或抑制激酶活性之 任何互變異構形式，而不僅限於在該等式圖中所用之任一 互變異構形式。 某些本發明化合物可以單立體異構體(即，基本不含有其 他的立體異構體)、外消旋物、及/或對映異構體及/或非對 映異構體的混合物之形式存在。所有該等單異構體、立體 異構體及其混合物皆意欲涵蓋於本發明之II圍内。較佳 地，具光學活性之本發明化合物係以旋光純形式使用。 如彼等熟諳此項技術者通常所瞭解，一具有對掌中心 (即，-不對稱碳原子）之旋光純化合物爲—主要由兩種可能 對映異構體（即，對映異構體純的）之一構成的旋光純化合 物，而一具有一個以上對掌中心之旋光純化合物係一既可 爲非對映體純亦可爲對映異構體純之旋光純化合物。較佳 地，本發明之化合物係以一至少90%旋光純之形式使用， 即，一包含至少90❶/◦的一單獨異構體（8〇%對映異構體超量 ("e.e.")或非對映體超量（"de"))之形式，更佳爲至少95% (90% e.e.或 d.e.)，甚至更佳爲至少 97.5% (95% e.e.或d.e·)， 且最佳爲至少99% (98% e.e·或d.e·)。 另外，式I及式II意欲涵蓋該等所識別結構之溶合形式 或非溶合形式。舉例而言，式j及式π包括呈水合及非水合 幵/式的具有所指示結構的化合物。溶劑合物之其他實例包 94609.doc -16- 200521124 乙酸乙酯、乙酸或乙醇 括與異丙醇、乙醇、甲醇、dmso、 胺結合之結構。 「醫藥上可接受之鹽」欲指可保有特定化合物之游離酸 及游離鹼之生物有效性，且非為生物學上或其他方面具有 不良性之鹽類。本發明化合物具有足夠 夠之驗性官能基或具有該兩者官能基，因此^^多^ 機或有機鹼及無機及有機酸中的任一種反應，而形成一醫 藥上可接受之鹽。示例性醫藥上可接受之鹽包括彼等藉由 本毛明化a物與一無機或有機酸或一無機鹼反應製得之 鹽，例如包括下述之鹽：硫酸鹽、焦硫酸鹽、重硫酸鹽、 亞硫酸鹽、重亞硫酸鹽、磷酸鹽、磷酸氫鹽、磷酸二氫鹽、 偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、 丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、 己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸 鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、丁炔 一酸鹽、己炔-1，6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基 苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、曱氧基苯曱 酉文鹽、本一甲酸鹽、績酸鹽、二曱基苯績酸鹽、苯乙酸鹽、 本丙酸鹽、苯丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、7 _經基丁酸鹽、 羥基乙酸鹽、酒石酸鹽、甲烷_磺酸鹽、丙烷磺酸鹽、萘-j 續酸鹽、萘-2-續酸鹽及扁桃酸鹽。 若本發明化合物爲鹼，則該所期望之醫藥上可接受之鹽 可藉由此項技術中現有的任何適宜之方法製得，舉例而 言’用一無機酸（例如，氫氯酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷 94609.doc -17 - 200521124 酸及類似物）或用一有機酸（例如，乙酸、馬來酸、琬珀酸、 扁桃酸、富馬酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水楊 酸、σ比喃糖苦基酸（例如，葡糖酸酸或半乳糖駿酸）、α -經 基酸（例如，檸檬酸或酒石酸）、胺基酸（例如，天冬胺酸或

穀胺酸）、芳香族酸（例如，苯甲酸或肉桂酸）、磺酸（例如， 對甲基苯磺酸或乙烷磺酸）或類似物）處理該游離驗。若本發 明化合物爲酸，則該期望之醫藥上可接受鹽可藉由任何適 宜方法製備，舉例而言，用無機鹼或有機鹼（例如，胺（一級 胺、二級胺或三級胺）、鹼金屬氫氧化物或鹼土金屬氫氧化 物或類似物）處理該游離酸。適宜鹽之示例性實例包括衍生 自胺基酸（例如，甘胺酸及精胺酸）、氨、一級胺、二級胺及 三級胺及環胺（例如，呱啶、嗎啉及呱嗪）之有機鹽；及衍生 自納#5、鉀、鎮、欽、鐵、銅、辞、銘及鐘之無機鹽。

右爲固態藥劑，則熟諳此項技術者可瞭解，本發明化合 物及鹽可以不同晶體或多形性之形式存在，所有該等形式 均意欲屬本發明及指定化學式涵蓋範圍。 本發明之細胞週期控制劑可用作治療哺乳動物（尤其 人類）之以非期望之内源性組織增生爲特徵的增生性疾 之藥物。式I化合物可用作治療患有與過度細胞增殖相 之疾病（例如，癌症、幹癬、涉及非期望之白血球增生的 疫性病以及再狹窄症及其他平滑肌病）的患者。另夕卜，該; 化口物可用來防止分裂後的組織及/或細胞之去分化。

〃失拴或非正常的細胞增殖相關之疾病或病症包 不限於）下列疾病·· U 94609.doc -18 - 200521124 -各種癌症，包括(但不限於)，癌瘤、淋巴譜系之造血性 腫瘤、骨髓譜系之造血性腫瘤、間葉來源的腫瘤、中樞及 周圍神經“㈣及包括黑色素瘤、制細胞瘤及卡波西 氏肉瘤（Kaposi’s sarcoma)等在内的其他腫瘤。 --特徵爲細胞增生異常的疾病過程，例如良性前列腺 增生症、家族性大腸息肉症、神經纖維瘤病、動脈粥樣硬 化、肺纖維化、關節炎、幹癬、腎小球腎炎、血管成形術 或血管手術後再狹窄症、肥厚性苑痕形成、發炎性腸道疾 病、移植排斥、内毒素性休克及真菌感染。 -與缺陷性細胞計相關之病症，例如癌症(包括(但不限 於）彼等上文提及之類型）、病毒感染（包括（但不限於 病毒、痘病毒、EB病毒、辛德比斯病毒及腺病毒)、卿感 染患者體内AIDS進展之預防、自體免疫性疾病（包括（但不 限於）系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、幹癬、自體免疫 介導的腎小料炎、發炎性腸道疾病及自體免疫性糖^ 病神經變性疾病（包括（但+限於）阿兹海默氏病、肌萎縮 性脊髓側索硬化症、色素性視網膜炎、帕金森氏病 (Μ—仙⑽）、AIDS相關的癡呆症、脊髓性肌肉= 縮症及小腦退化）、骨髓增生異常綜合征、再生障礙性貧 血、與心肌梗死相關的缺血性損傷、腦中風及再灌注損傷貝 心律失常、動脈粥樣硬化、#素誘導的或與酒精相關的肝 臟疾病、 -血液疾病（包括（但不限於）慢性貧血及再生障礙性貧 血）、肌肉骨骼系統之退化性疾病、（包括（但不限於）骨質= 94609.doc -19· 200521124 鬆症及關節炎）、阿斯匹林過敏性哮喘、囊性纖維化、多發 性硬化、腎臟疾病及癌症疼痛。 本發明活性劑亦可用於抑制侵犯性癌症之發展、腫瘤血· 管發生及轉移。 另外，舉例.而言，作爲CDK之抑制劑，本發明活性劑可 =節細胞RNA及DNA合成之水平並因此而有望用於治療病 毋感木例如，HIV、人乳頭瘤病毒、皰療病毒、EB病毒、 腺病毒、辛德比斯病毒、痘病毒及諸如此類。 _ 本卷月化口物及組合物可抑制（例如）CDK/細胞週期調節 蛋白錯合物（例如在細胞週期之g〇*Gi期内之彼等，例如 CDK2、CDK4、及/或CDK6錯合物）之激酶活性。 斤才又〃的以獲彳于治療或抑制效果之細胞週期控制劑之具 體Μ里可藉由此項技術中一習知方法根據該病例之特定情 况加以確定，該等特定情況包括，例如，所投與之具體藥 劑、投藥途徑、所治療之疾病及所治療之受試者或主體。 、、、田胞週期控制劑之實例性曰總劑量可以單次劑量或多次 _ d里形式投與，其包含一 〇〇1毫克/公斤體重至約5〇毫克/ 公斤體重之劑量。 本t明細胞週期控制劑可藉由多種適宜途徑中之任何一 種才又與’例如’經口、直腸、皮、皮下、靜脈内、肌内或 鼻内投與。細胞週期控制劑較佳在投與前調配爲適合於期 望給藥途徑之組合物。 - ，本發明之醫藥组合物或製劑包含一有效量之細胞週期控 製J (視U況）一或多種其他活性劑及一醫藥上可接受之載 94609.doc -20- 200521124 劑（例如該藥劑的—鍤經亦丨 r 賦形劑);當該載劑用作-稀釋 劑時，其可爲一爲活柯忐八+ , W枰 -丄 f成知充當媒劑、賦形劑或介質之固 體、半固體或液體姑榀。士找 丨貝之固 ’、本^明之組合物可藉由將活性成 份與-載劑混合、或用一載劑稀釋活性成份 份封入或包覆至-載劑内而製得，其可呈膠囊、藥囊二 製容器或諸如此類之疮々 ^ 為 、/式。除了一或多種細胞週期控制劑 及所有其他活性成份以冰杂 卜’只例性成份包括Avicel (維晶纖 維素）、殿粉、乳糖、二κ人 一 Χ σ &酸鈣、白土、蔗糖、滑石粉、 明膠、瓊脂、果膠、阿拉伯膠、硬脂酸鎂、硬脂酸、花生 油撖才見油、單硬脂酸甘油醋、吐溫8〇 (聚山梨醇 醋80)、丁二醇、可可油、蜂腹、聚乙二醇、丙乙二醇、 去水山梨醇單硬脂酸酯、聚山梨醇酯6〇、2_辛基十二烷醇、 苯甲醇、甘胺酸、山梨酸、ώ梨酸鉀、磷酸氫二鈉、氣化 納及水。 虡等組合物可製備成適合於期望投藥方式之多種形式中 的任一種。例如，醫藥組合物可製備成錠劑、丸劑、散劑、 3旋 ' 藥t、藥丸、_、懸浮液、乳液、溶液、糖衆、 乳溶膠（固體形式或在液體介質中）、軟膏（例如，包含多達 1 〇重$ %之一細胞週期控制劑）、軟凝膠及硬凝膠膠囊、栓 劑、無菌可注射溶液、無菌經封裝之粉末及諸如此類之形 式0 同樣地’載劑或稀釋劑可包括此項技術中習知之延時或 緩釋材料’例如單獨或與一蠟劑混合之單硬脂酸甘油酯或 一硬自旨酸甘油酷、乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、異丁 94609.doc 200521124 烯酸甲酯及諸如此類。 本發明可採用多種醫藥形式。因此，若使用固體載劑， 則該製劑可製成錠劑、以粉劑或小丸形式置於一硬明膠膝 囊中或呈片劑或含錠形式。固體載劑之量可變化，但通常 爲約25毫克至約1克。若使用液體載劑，則該製劑可呈以下 形式：糖漿、乳液、軟明膠膠囊、置於安瓿瓶或小玻璃瓶 中之無ii可注射溶液或懸浮液或非水性液體懸浮液。 爲獲得一穩定的水溶性劑型，將本發明藥劑之一醫藥上 可接X之鹽洛解於一有機或無機酸之水溶液，例如琥珀酸 或檸檬酸之0·3 Μ溶液中。若不能獲得一可溶性鹽形式，則 可將該藥劑溶解於一適宜的共溶劑或共溶劑之組合物中。 適宜共溶劑之實例包括（但不限於）占濃度總體積〇_6〇%之 酒精、丙二醇、聚乙二醇3〇〇、聚山梨醇酯8〇、甘油及諸如 此類。式I之化合物可溶解於DMS〇中並用水稀釋。該組合 物亦可爲活性成份的一鹽形式溶於一適宜水性媒劑（例 如’水或等滲鹽水或葡萄糖溶液）中之溶液形式。 本發明組合物可以普遍習知之製備醫藥組合物之方法製 得，舉例而言，利用諸如混合、溶解、顆粒化、製糖衣丸、 研磨成粉狀、乳化、封入膠囊、 、包載或低壓凍乾等習知技

…U ”丨心，又艰恧徑而定。對於注射，本發明 藥劑可調配至水性溶液中 較佳調配至生理上可配合的緩 94609.doc -22- 200521124 衝液’例如漢克氏溶液（Hanks’s solution)、林格溶液 (Ringer s solution)或生理鹽水缓衝液中。對於透過黏膜投 與，可在該調配物中使用適合於欲透過之障壁的穿透劑。 該等穿透劑在此項技術中爲人們所普遍習知。 對於經口投藥方式 物與此項技術中習知之醫藥上可接受載劑混合而容易地調 配。該等載劑使本發明化合物可調配爲適於接受治療之患 者經口服用之錠劑、丸劑、糖衣藥丸、膠囊、液體：凝膠 劑、糖漿、膏劑、懸浮液及諸如此類。適於經口使用之醫 藥製劑可藉由以下獲得：使一固體賦形劑與該活性成份（藥 劑）混合，視情況研磨所得混合物，並在添加適合的助劑後 處理粒料混合物（如需要）以獲得錠劑或糖衣藥丸核心。適合 的賦形劑包括：填充劑，例如包括乳糖、蔗糖、甘露醇或 山梨醇在内的糖；及纖維素製劑，例如，玉米殿粉、小麥 殿粉、稻米澱粉、馬鈴薯殺粉、明膠、樹膠、經丙基甲基 纖維素、m甲基纖維素納、甲基纖維素或聚乙心㈣ (pvp)。如需要，可添加崩解劑，例如，交聯聚乙烯㈣烧 酮、瓊脂、或海藻酸或其鹽（例如海藻酸鈉）。 糖衣丸核心具有適宜之包衣。爲達成此目的，可使用婉 農縮的糖溶液’其視情況可包含阿拉伯樹膠1乙稀㈣ 烷酮、聚丙烯酸凝膠、聚乙二醇及/ $ — 4人 哗及/或一虱化鈦、漆溶液及 適a的有機溶劑或溶劑混合物。亦可 力」句该寺錠劑或糖衣丸 匕衣中添加染料或色素，用以辨螞七 辨$或表徵活性劑之不同組 合。 94609.doc 23- 200521124 可：口使用之醫藥製劑包括明膠製成的配合插入膠囊以 及月▲膠及~塑劑(例如甘油或山梨醇)製成的柔軟密封膠 囊》亥等配合插入膠囊可包含與添充劑（例如乳糖）、黏合劑 (例如澱粉）及/或潤滑劑（例如滑石粉或硬脂酸鎖）及（視情況） 穩定航合之活性成份。在軟膠囊中，料活性劑可溶解 或懸浮於諸如脂肪油、液狀石壤或聚乙二醇等適當液體 中。另外，可添加穩定劑。所有經口投與之調配物皆應以 適：該投與之劑量投與。對於口腔投藥方式，該等組合物 可採用以4知方法調配成的旋劑或含錠之形式。 對於經鼻内或藉由吸人投藥，根據本發明使用之化合物 :使用-適當推進劑(二氟二氣甲烷、說三氣乙烷、四氟二 乳乙貌、二氧化碳或其他適當氣體）方便地以噴霧劑形式由 壓力褒置或噴霧器投送。若係一壓力氣溶膠，劑量單位可 供-閥門投送-經計量之數量來決定。在吸入器或 吹入器及此類器械中使用的明膠膠囊及膠筒可調配爲包含 該化合物與-適當粉末基劑（例士 〇乳糖或殿粉）之粉末混合 該等化合物可調配用於藉由注射（例如，濃注或連續輸注 非經腸投與。用於注射之調配物可以單位劑型提供，其置 於諸如安瓶瓶或多劑量容器中並添加有防腐劑。該等組合 物可呈該等例如於油性或水性媒劑中之懸浮液、溶液或乳 液等形式，且可包含例如懸乳劑、穩定劑及/或分散劑等調 配齊ij。 適於非經腸投與之醫藥組合物包括呈水溶性形式的活性 94609.doc 200521124 成份之水溶液。另外，該等活性劑之懸浮液可製備成適宜 的油性注射懸浮液。適合的親脂溶劑或媒劑包括脂肪油（例 如芝麻油）或合成的脂肪酸脂（例如油酸乙酯或甘油三酯）或 =質體。水性注射懸浮液可包含能增加該懸浮液黏度的物 夤，例如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或葡聚糖。視情況，該 懸浮液亦可包含適合的敎劑或可增加該等化合物之溶解 度的藥劑，以能夠製備出高濃度之溶液。 丁於向眼睛投藥的方式，該活性劑係在一醫藥上可接受 之眼：媒劑内遞送’藉此使該化合物與眼睛表面接觸足： 長的日守間以允許該化合物透過眼睛的角膜及内部區域，包 括，例如前房、後房、玻璃體、房水、玻璃體液、角膜、 虹=/睫毛、晶狀體、脈絡膜、視網膜及鞏膜。該醫藥上可 =之眼用媒劑可爲__軟膏、植物油或—封裝材料。本發 。化η物亦可直接注射至玻璃體液及房水中。 的L者’該活性成份可呈散劑形式，以便在使用前與適合 /⑼如滅菌無熱原水）組合。該等化合物亦可調配至諸 ^由王2保留灌腸劑等含有（例如）習知坐藥基劑（例如，可 ’:一他甘油酯）等直腸組合物申。 由物:可調配爲儲積製劑。該等長效調配物可藉 例而 皮下或肌内)或藉由肌内注射投與。因此，舉 爲一可接=1匕合物可與適合的聚合或疏水性材料（例如作 性衍生物，例广礼液)或離子交換樹脂調配’或作爲微溶 刃例如，微溶性鹽。 疏水性化合㈣軸⑽fsl、_非極性 94609.doc -25- 200521124 表面活性劑、一可與水混合的有機聚合物及一水相之共溶 劑系統。該共溶劑系統可爲一VPD共溶劑系統。vpd爲一 含3% w/v苯甲醇、8% w/v非極性表面活性劑聚山梨醋肋及 65% w/v聚乙二醇3〇〇並用無水乙醇補足體積的溶液。該 VPD共溶劑系統（VPD:5W)包含用5%葡萄糖水溶液u稀釋 的VPD。該共溶劑系統可完全溶解疏水性化合物，且經由 全身投與時其本身産生之毒性較低。通常，可顯著改變一 共洛劑系統之比例而不會破壞其溶解度及毒性特徵。另 外可改變该等共溶劑組份之特徵：例如，可使用其他低 毋非極性表面活性劑代替聚山梨酯80 ;可改變聚乙二醇之 伤額’可用其他生物相容的聚合物代替聚乙二醇；並且可 用其他糖或多糖代替葡萄糖。 或者，可採用其他適於疏水性醫藥化合物的送藥系統。 敘K 1±藥物之送藥媒劑或載劑之已知實例爲脂質體及乳 夜乜^通㊉會以毒性增大爲代價，但亦可採用某些有機 溶劑，例如-田 —T基亞砜。另外，該等化合物亦可用一持續 釋放系統（例如h a 、' v〗戈包含治療劑的固體疏水性聚合物之 基質）遞送。客链4七& 夕種持績釋放材料業已確定並爲彼等熟諳此項 技術者所孰知。& ^ 、 …、 持績釋放膠囊視其化學特性可在數週至1〇〇 天以上之時門μ 、曰j上釋放化合物。端視治療劑之化學特性及， 物穩定性，亦可p 玍 了採用另外的蛋白質穩定策略。 該等醫藥纟 ^、、' 3物亦可包含適合的固相或凝膠相載劑或賅 形劑。該等*^ f 取刮或賦形劑之實例包括碳酸鈣、磷酸鈣、糠、 殿粉、纖維幸彳、_ 々竹生物、明膠及聚合物（例如聚乙二醇）。 94609.doc -26 - 200521124 某些本發明之化合物亦可以具有I藥上可相$的異荷離 子之鹽的形式提供。醫藥上可相容之鹽可用包括氫氯酸、 石爪s 文乙馱、礼酸、酒石酸' 蘋果酸、琥珀酸等在内的多 種酉义$成。鹽在水或其他質子溶劑中通常會較對應的自由 鹼形式更易溶解。

本組合物包含—細胞週期控制劑及（視情況） -或多種其他活性成份，例如一與該細胞週期控制劑相容 且適合於所治療之適應症的習知抗增殖藥劑。 。亥等化合物可用作抗血管新成劑及調整及/或抑制蛋白 激酶活|±用_ ’因此可用來治療癌症或其他與蛋白激酶 所介導的細胞增殖相關的疾病。 激酶之調節 有效量」欲指一藥劑（當投與一 治療有效量之本發明藥劑可用於治療由蛋白 或控制所介導的疾病 需該治療之哺乳動物時)足以有效治療-藉由一或多種激 酶之活性調節的疾病的數量。因此，例如，-式Ϊ化合物、

其鹽'活性代謝物或前藥之治療有效量係—足以調節、調 查或抑制-或多種激酶之活性從而減輕或緩和由該活性所 介導的疾病狀況之用量。 =療」欲指至少緩解—至少部分受到—或多種激酶 /影響的哺乳動物（例如人類）之疾病狀況，並包括防 :哺乳動物出現該疾病狀況，尤其是於發現該哺乳動物 出現該疾錄況但仍未診斷出具㈣病時；調節及/或抑 该疾病狀況；及/或緩和該疾病狀況。 在本文所述任-本發明方法的一具體實施例中，該異 94609.doc -27- 200521124 細胞生長係癌，包括（但不限於）肺癌、骨癌、胰腺癌、皮膚 癌、頭頸癌、表皮或眼内黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、直 腸癌、肛區癌、胃癌、結腸癌、乳癌、子宮癌、輸卵管癌 瘤、子宮内膜癌瘤、宮頸癌瘤、陰道癌瘤、陰戶癌瘤、何 傑金氏病（Hodgkin’s Disease)、食道癌、小腸癌、内分泌系 統癌、曱狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、 尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴細 胞性淋巴瘤、膀胱癌、腎臟或輸尿管癌、腎細胞癌瘤、腎 盂癌瘤、中樞神經係統（CNS)腫瘤、原發性CNS淋巴瘤、脊 柱腫瘤、腦幹膠質瘤、垂體腺瘤或一或多種上述癌症之組 合。在该方法之另一實施例中，該異常細胞生長係一良性 增殖疾病，包括（但不限於）幹癖、良性前列腺肥大或再狹窄 症。 在本文所述任一發明方法之其他具體實施例中，該方法 進一步包括投予該哺乳動物一定數量的一或多種選自抗腫 藥劑、抗血管發生劑、信號轉瘤導抑制劑及抗增殖劑之物 質，該等用量在治療異常細胞生長中共同起作用。本發明 化合物可與其他抗腫瘤藥劑聯合，其方法揭示於w〇 03 8716、W0 03 8717、W0 03 8715、W0 03 8730、W0 03 8718、 WO 038665、WO 037107、WO 038786、WO 038719 中，該 等專利案之全部内容皆以引用的方式倂入本文中。抗腫瘤 藥劑之實例包括有絲分裂抑制劑，例如，諸如長春鹼 (種Mastine)、長春瑞濱（νιη⑽、長春醯胺（νι_s_) 及長春新鹼（Vincristlne)等長春花生物鹼衍生物、秋水仙鹼 94609.doc 200521124 別膽烧（colchines allochochine)、軟海綿素（halichondrine)、 N-苯甲醯基三甲基甲醚秋水仙酸、多拉司他汀l〇(dolastatin 1 〇)、美登素（maystansine)、根黴素（rhizoxine)、紫杉烷類 例如紫杉醇（taxol)(太平洋紫杉醇（paclitaxel))、多西他賽 (docetaxel(Taxotere))、2f-N-[3-(二甲胺基）丙基]戊二醯胺 (紫杉醇衍生物）、硫代秋水仙鹼（thiocholchicine)、半胱胺 酸三苯甲基酯（trityl cysteine)、替尼泊苷（teniposide)、胺甲 蝶呤（methotrexate)、硫嗤嘌呤（azathioprine)、氟尿嘴口定 (fluorouricil)、阿糖胞普（cytocine arabinoside)、2’2’-二氟去 氧胞苷（吉西他濱（gemcitabine))、多柔比星（adriamycin)及 絲裂黴素（mitamycin);烧基化藥劑，例如，順鉑 (cis_platin)、卡錄（carboplatin)、奥沙利始（oxiplatin)、異丙 鉑（iproplatin)、N-乙醯基-DL-十二烧基肌胺酸-L-白胺酸乙 酯（Asaley 或 Asalex)、1，4-環己二稀-1，4-二胺基甲酸、2,5-雙（1_σ丫丙 σ定基）-3,6·二氧，二乙醋（地 σ丫酿（diaziquone))、 Μ- 雙 甲磺醯氧基 丁烷鏈尿黴素 (154-bis(methanesulfonyloxy)butane(bisulfan or leucosulfan) chlorozotocin)、氣乙礬（clomesone)、氰嗎淋阿黴素 (cyanomorpholinodoxorubicin)、環地松（cyclodisone)、雙脫 水半乳糖醇（dianhydroglactitol)、氟多潘（fluorodopan)、西 磺非（hepsulfam)、絲裂黴素C(mitomycin C)、海蒽酮絲裂徽 素 C(hycantheonemitomycin C)、米托 口坐胺（mitozolamide)、 1-(2-氯乙基）-4-(3-氯丙基）-六氮π比111井二氮氣酸鹽 (1 -(2-chloroethyl)-4-(3-chloropropyl)-piperazine dihydrochloride)、 94609.doc -29- 200521124 六氫0比卩井二酮（piperazinedione)、雙漠丙醯狐嗓 (pipobroman)、泊非黴素（porfiromycin)、螺旋乙内酷脲芥 (spirohydantoin mustard)、替羅昔隆（teroxirone)、四韵 (tetraplatin) 、 σ塞 替 口瓜(thiotepa) 、 曲他胺 (triethylenemelamine)、尿。密 σ定氮芥（uracil nitrogen mustard)、 氫 氣酸雙 甲績醯 基丙胺

(bis(3-mesyloxypropyl)amine hydrochloride)、絲裂黴素 (mitomycin)，亞硝基脲（nitrosoureas)藥劑，例如環己基-氯 乙基亞硝基脲、甲基環己基-氯乙基亞硝基脲、1-(2-氣乙 基）-3-(2,6 -二氧-3-瓜σ定基）-1-亞硝'基腺、雙（2-氯乙基）亞石肖 基脲、丙卡巴肼（procarbazine)、達卡巴嗪（dacarbazine)、氮 芬相關化合物，例如恩比興（mechloroethamine)、環填醯胺 (cyclophosphamide)、異環填酸胺（ifosamide)、美法侖 (melphalan)、苯丁 酸氮芥（chlorambucil)、雌 芥填酸納 (estramustine sodium phosphate)、鏈脲黴素（strptozoin)及替 莫唆胺（temozolamide) ; DNA抗代謝物，例如，5-氟尿σ密咬、 阿糖胞苷（〇>^〇811^&1&1)丨11〇31(16)、經基脲、2-[(3經基-2-氮茚 基）伸甲基]-肼基硫代羧酸醯胺、去氧氟尿苷 (deoxyfluorouridine)、5_羥基-2-甲醯基吡啶縮胺基硫腺 (5-hydroxy-2-formylpyridine thiosemicarbazone)、α-2’-去氧 -6-硫代鳥皆、胺基乙酸艾菲地可寧（aphidicolin glycinate)、 5 -氮脫氧胞嘴σ定（5-azadeoxycytidine)、β-硫鳥σ票呤去氧核苦 (beta-thioguanine deoxyriboside)、環胞苷（cyclocytidine)、 口瓜諾嗤（guanazole)、肌苦糖二酸（inosine glycodialdehyde)、 94609.doc -30- 200521124 馬貝辛 II(macbecin II)、0比 σ坐基口米 口坐（pyrazolimidazole)、克 拉屈濱（cladribine)、喷托他丁（pentostatin)、硫鳥嗓呤 (thioguanine)、魏基嗓呤（mercaptopurine)、博來黴素 (bleomycin)、2_ 氯去氧腺苷（2-chiorodeoxyadenosine)、胸苷 酸合酶（thymidylate synthase)抑制劑，例如雷替曲塞及培美 曲口坐二納（raltitrexed and pemetrexed disodium)、氯笨吩口秦 (clofarabine)、氟尿苷（floxuridine)及氟達拉濱 (fludarabine) ; DNA/RNA抗代謝物，例如，L-亞硝基和美 丙胺酸（L-alanosine)、5-氮雜胞苷（5-azacytidine)、阿西維 辛（acivicin)、胺基蝶呤（aminopterin)及其衍生物例如 氯-5-[[2,4_二胺基-5-甲基-6-喹唑啉基]甲基]胺基]笨甲隨 基）-L-天冬胺酸、N-[4-[[2,4-二胺基-5-乙基-6-喧°坐琳基]甲 基]胺基]苯甲醯基丨-L-天冬胺酸、N-[2-氯-4-[[2,4_二胺基虫寒 啶基]-曱基]胺基]苯甲醯基卜L-天冬胺酸、可溶性巴克氏_ 酸抗代謝物（Baker、antifol)、二氣稀丙基散洙花素 (dichloroallyl lawsone)、布嗤那（brequinar)、吱氟^ 脲喷— (ftoraf)、二氫-5-氮雜胞苷、胺甲蝶呤、N-(膦醯基乙醯基） 天冬胺酸四鈉鹽、α比嗤吱喃菌素（pyrazofuran)、曲美沙特 (trimetrexate)、光輝黴素（plicamycin)、放線菌素 -D(actinomycin D)、克利特非辛（cryptophycin)及類似物1列 如cryptophycin-52或，舉例而言，揭示於歐洲專利申請案 第239362號中之較佳抗代謝物之一，例如N-(5-[N-(3,4-二氣 -2-曱基-4 -氧啥17坐琳-6-基曱基）-N-曱基胺基]-2 -嗟吩甲酉篮 基）-L-榖胺酸；生長因子抑制劑；細胞週期抑制劑；嵌人十生 94609.doc -31 - 200521124 抗生素，例如多柔比星及博來黴素；蛋白質，例如干擾素； 及抗激素，例如抗雌激素（例如他莫昔芬 (N〇lVadex™)(tamoxifen))或例如抗雄激素（例如康士德 (CaS〇dexTM)((4’-氰基_3_(4_氟苯磺醯基）_2·羥基_2·甲基 -3，-(三氟甲基）丙醯苯胺））。該等聯合治療可藉由同時、順 序或分開投與各單獨治療用組份而達成。 抗血管發生劑包括MMP-2(基質金屬蛋白酶勾抑制劑、 MMP-9(基質金屬蛋白酶9)抑制劑及c〇x_n (環氧合酶h)抑 制劑。有用的COX-II抑制劑之實例包括 CELEBREXTM(aiecoxib)、伐地考昔（valdec〇xib)及羅非考昔 (rofecoxib)。有用的基質金屬蛋白酶抑制劑之實例揭示= WO 96/33 172(1996年 10月 24 日公開）、w〇 96/27583(1996年 3月7日公開）、歐洲專利申請案第973〇4971 1號（1997年7月8 曰申請）、歐洲專利申請案第99308617·2號（1999年1〇月29 日申請）、WO 98/07697(1998年2月26日公開）、w〇 98/035 16(1 998年 1月 29 日公開）、w〇 98/34918(1 998年 8 月 13 日公開）、WO 98/34915(1998年8月13日公開）、w〇 98/33768( 1998年 8月 6 日公開）、w〇 98/30566 (1998年 7月 16 曰公開）、歐洲專利申請案第6〇6,〇46號（1994年7月13曰公 開）、歐洲專利公開案第931，788號（1999年7月28曰公開）、 WO 90/05719(1990年 5 月 31 曰公開）、WO 99/52910(1999年 10 月 21 日）、WO 99/52889(1999 年 10 月 21 日公開）、w〇 99/29667(1999年6月17日公開）、PCT國際公開案第 PCT/IB98/01113號（1998年7月21曰申請）、歐洲專利申請案 94609.doc -32- 200521124 第99302232.1號（1999年3月25日申請）、英國專利申請案第 9912961.1號（1999年6月3日申請）、美國臨時專利申請案第 60/148,464號（1999年8月12日申請）、美國專利申請案第 5,863,949號（1999年1月26曰頒佈）美國專利第5,861，510號 (1999年1月19日頒佈）及歐洲專利公開案第780,386號（1997 年6月25日公開）中，其全部内容皆以引用的方式倂入本文 中。較佳MMP-2及MMP-9抑制劑係彼等具有很小或不具有 抑制MMP -1之活性者。更佳地’係彼等相對於其他基質金 屬蛋白酶（即，MMP-1、MMP-3、MMP-4、MMP-5、MMP-6、 MMP-7、MMP-8、MMP_10、MMP-11、MMP-12及 MMP-13) 可有選擇性地抑制MMP-2及/或MMP-9者。 信號轉導抑制劑之實例包括可抑制EGFR(表皮生長因子 受體）反應之藥劑’例如EGFR抗體、EGF抗體及係EGFR抑 制劑之分子；VEGF(血管内皮生長因子）；及erbB2受體抑制 劑，例如結合erbB2受體的有機分子或抗體，例如赫賽汀 (HERCEPTINTM(Genentech 公司，South San Francisco, California，USA)) 〇 EGFR抑制劑揭示於（例如）WO 95/19970 (1995年7月27曰 公開）、WO 98/14451 (1998年 4 月 9 日公開）、WO 98/02434 (1998年1月22日公開）及美國專利第5,747,498號（1998年5月 頒佈）中。EGFR抑制劑包括（但不限於）單克隆抗體C225及抗 -EGFR 22Mab (ImClone Systems公司，New York，USA)、化 合物 ZD-1839 (AstraZeneca)、BIBX-13 82 (Boehringer Ingelheim)、MDX-447 (Medarex公司，Annandale，New Jersey， 94609.doc -33- 200521124 USA)及 OLX-103 (Merck & Co. of Whitehouse Station，New Jersey，USA)、VRCTC-310(VentechResearch)及EGF融合毒 素（Seragen 公司，Hopkinton，Massachusettes)。VEGF 抑制 劑，例如 SU-5416 及 SU-6668 (Sugen 公司，South San Francisco, California，USA)，亦可與一式I化合物聯合或共 同投與。VEGF抑制劑揭示於（例如）WO 99/24440 (1999年5 月20曰公開）、PCT國際專利申請案第PCT/IB99/00797號 (1999年5月3日申請）、WO 95/21613(1995年8月17日公開）、 WO 99/61422 (1999年12月2日公開）、美國專利第5,834,504 號（1998年 11 月 10 日頒佈）、WO 98/50356 (1998年 11 月 12 曰 公開）、美國專利第5,883，113號（1999年3月16曰頒佈）、美國 專利第5,886,020號（1999年3月23曰頒佈）、美國專利第 5,792,783號（1998年 8 月 11 日頒佈）、WO 99/10349(1999 年 3 月4曰公開）、WO 97/32856( 1997年9月12曰公開）、WO 97/225 96(1997年 6 月 26 日公開）、WO 98/54093 (1998年 12 月 3 日公開）、WO 98/02438 (1998 年 1 月 22 日公開）、WO 99/16755 (1999年 4月 8 日公開）及 WO 98/02437 (1998年 1 月 22曰公開），其全部内容皆以引用的方式倂入本文中。某些 特異性VEGF抑制劑之其他實例爲IM862 (Cytran公司， Kirkland，Washington，USA);抗-VEGF 單克隆抗體 (Genentech公司 South San Francisco, California);及得自 Ribozyme (Boulder， Colorado)及 Chiron (Emeryville， California)的angiozyme (—種合成核酶）。ErbB2受體抑制 劑，例如GW-282974 (Glaxo Wellcome pic)及單克隆抗體 94609.doc -34- 200521124

AR-209 (Aronex Pharmaceuticals 公司，The Woodlands， Texas ’ USA)及2B-1 (Chiron)，可與式i化合物聯合投與。 該等erbB2抑制劑包括彼等闡述於w〇 9 8/0243 4( 1998年1月 22 曰公開）、WO 99/35146 (1999 年 7 月 15 日公開）、WO 99/35132 (1999年 7月 15 日公開）、WO 98/02437 (1998年 1 月 22 日公開）、WO 97/13760 (1997 年 4 月 17 日公開）、WO 95/19970 (1995年7月27日公開）、美國專利第5,587,458號 (1996年12月24日頒佈）及美國專利第5,877,3〇5號（1999年3 月2日頒佈）中者，其中之每一專利案之全部内容皆以引用 的方式倂入本文中。在本發明中適用的ErbB2受體抑制劑亦 闡述於1999年1月27曰申請的美國臨時專利申請案第 60/117,341號及1999年1月27日申請的美國臨時專利申請案 第60/11 7,346號中，兩者之全部内容皆以引用的方式倂入本 文中。 其他可使用的抗增殖劑包括酵素法呢基蛋白轉移酶之抑 制劑及受體酪胺酸激酶PDGFri抑制劑，包括在下述美國 專利申請案中揭示並申請專利的化合物：第〇9/221946號 (1998年12月28日申請）；第09/454058號（1999年12月2曰申 請）；第〇9/501163號（2000年2月9日申請）；第〇9/53993〇號 (2000年3月31日申請）；第09/202796號（1997年5月22曰申 請第_84339號（1"9年8月％日申請）；及第〇9/383755 號（1999年8月26日申請）；及在下述美國臨時專利申請案中 揭示並申請專利的化合物：第6〇/1682〇7號（^的年丨丨月⑽ 曰申請）；第60/17〇119號（1999年12月1〇日申請）；第 94609.doc -35- 200521124 60/177718號（2000年 1 月 21 日申請）；第 60/168217 號（1999年 11月30曰申請）；及第60/2008 34號（2〇〇〇年5月1曰申請）。每 一上述專利申請案及臨時專利申請案之全部内容皆以引用 的方式倂入本文中。 式I化合物亦可與其他用於治療異常細胞生長或癌症之 藥劑一同使用，該等藥劑包括（但不限於）能增強抗腫瘤免疫 反應之藥劑（例如，CTLA4 (細胞毒性淋巴細胞抗原4)抗 體’及其他可阻斷CTLA4之藥劑）；及抗增殖藥劑（例如，其 他法呢基蛋白轉移酶抑制劑。可用於本發明之特異性 CTLA4抗體包括彼等揭示於美國臨時專利申請案第 60/11 3,647號（1998年12月23曰申請）中者，該申請案之全部 内谷以引用的方式倂入本文中。 【實施方式】 採用下述反應途徑及合成流程使用此項技術中可利用技 術及易獲得原料可製得本發明藥劑。 本發明尤佳化合物之製備詳細闡釋於下述實例中。熟諳 此項技術者將認識到，所闡釋的該等化學反應可容易地加 以修改來製備諸多其他本發明激酶抑制劑。舉例而言，本 發明非實例性化合物之合成可藉由彼等熟諳此項技術者所 明瞭之修改形式而成功完成，例如，藉由適當保護干擾基 團、更換爲此項技術中習知之其他適合的藥劑，或例行性 修駭應條件。另-種方式本文所揭示之反應或在此 員技術中白知之其他反應亦被公認爲適合用於製備本發明 其他化合物。 94609.doc -36- 200521124 ” κ另有忒明’否則在下述實例中所有溫度皆以攝氏度 給出’所有部份及百分 久曰刀比白私：重1计。除非另有說明，否 則藥劑係從商業供應商⑷σ Aldrleh Chemleal公司或 Lancas⑽Synthesis有限公司）購得且在使用前未經進一步 純化。由氫化鈣蒸餾而得的四氳呋喃（thf)及ΝΑ·二甲基甲 醯胺（DMF)係由杨⑽購得，其裝於牢固密封之瓶内且按 原樣使用。除非另有說明，否則所有溶劑皆使用熟諳此項 技術者易於瞭解之標準方法加以純化。 下述反應通常在一正壓氬氣下或使用一乾燥試管在環境 度度下（除非另有說明）於無水溶劑中實施，且該等反應燒瓶 裝有用以經由唧筒導入底物及藥劑之橡膠隔片。玻璃儀器 用烘箱乾燥及/或加熱乾燥。分析性薄層層析法（TLC)係在 玻璃支持的石夕膠60 F 254板Analtech (0.25 mm)上實施，採 用合適的溶劑比（v/v)實施洗脫，並在適合處予以標示。該 等反應藉由TLC進行分析並根據原料耗盡之判斷來終止。 TLC板之顯影係藉由一對甲氧基苯甲醛噴霧藥劑或磷鉬 酸藥劑（Aldrich Chemical，20重量％於乙醇中）實施並藉由 加熱活化。除非另有說明，否則追蹤檢查通常藉由以下方 法實施：使用反應溶劑或萃取溶劑使反應體積加倍，然後 使用標明的水溶液採用25體積％的萃取體積進行洗滌。産 物溶液用無水Na2S04或MgS04乾燥後過濾，在一旋轉蒸發 器上於負壓下蒸發掉溶劑，並注明係於真空下去除溶劑。 急驟管柱層析法（Still 等人，J· Org. Chem.，43, 2923 (1978)) 係使用Baker級急驟矽膠（47-61微米）及一矽膠實施：原料比 94609.doc -37- 200521124 約爲20:1至50:1，除非另外說明。氫化反應係在該等實例中 標明的壓力下或在環境壓力下實施。 . b-NMR譜記錄於在300 MHz或500 MHz下運作之Bruker · 儀器上，13C-NMR譜記錄於在75 MHz下運作之儀器上。NMR 譜係使用氯仿（7·25 ppm 及 77.00 ppm)或 CD：3〇D(3.4 ppm 及 4·8 ppm及49.3 ppm)或内部四甲基矽烷（0 00卯叫作爲參考 標準以CDCU溶液（以ppm報告）形式獲得。根據需要使用了 其他NMR溶劑。當報告峰多樣性時，使用以下縮寫：§(單 籲 峰），d(雙峰），t(三峰），m(多峰），br(寬峰），dd(雙雙峰）， dt(雙三峰）。當給出偶聯常數時，以赫茲報告之。 紅外（IR)光譜以淨油或KBr片形式記錄於一 Perkin_Elmer FT-IR光譜儀上’當給出時係以波數（⑽）報告。質譜使用 LSIMS或電喷射獲得。所有熔點㈣)皆未經修正。 在實例中使用的原料係購得及/或可藉由此項技術中習 知技術製備。 94609.doc 實例1:

基上4_甲基比唆-3_產~^^1^基_胺

-38- 200521124

95%

EtNHz，NeCNBHs， Zna^MeOHrt

1b

(a)中間物la — （5-溴-4-甲基-吡啶-3_基甲基）-乙基-胺 將5-溴-4-甲基-吡啶-3-甲醛（6.74克，33.7毫莫耳）[關於該 化合物之製備參見：Reich，S. R·; Bleckman，Τ· M.; Kephart， S· Ε·; Romines，W. Η·; Wallace，Μ· B·，美國專利第 6,555，539 號，2003年4月29曰]在氮氣氛下溶解於甲醇（290亳升）中。經 30分鐘滴加一溶於甲醇中的乙胺溶液（2.0 Μ，90亳升，180 毫莫耳）。隨後在室溫下連續攪拌30分鐘。 在另外一燒瓶内，將氰基硼氫化鈉（2.33克，37.1毫莫耳） 溶解於甲醇（150亳升）中。添加無水氣化鋅（2.53克，18.5毫 莫耳）並在室溫下連續攪拌20分鐘。然後將該溶液（鋅/氰基 硼氫化鹽）緩慢添加至上述醛/乙胺溶液中。用溶於甲醇（120 毫升）的2.0 M HC1酸化該反應溶液至pH值爲4，然後在室溫 94609.doc -39- 200521124 下攪拌18小時。 藉由疑轉蒸發法去除溶劑並將剩餘物分配於乙酸乙酯及 10 /。奴鲛鈉水洛液之間。用硫酸鎂乾燥有機提出物並濃縮 之’得到爲一橙色油形式之粗胺la (7·36克，95%)，其無需 進一步純化即可用於下一步反應：lfi NMR (CDC13) 5 8.53 (s， 1H)，8·31 (s，1H)，3.77 (s，2H)，2·67 (q，J= 7.0 Hz，2 H)，2.42 (s，3H)，1.11 (t，7 q fjz，3H)。 (b) 中間物lb 一 （5-溴-4-甲基-呱啶-3_基甲基）-乙基-胺 基甲酸第三丁基酯 將二碳酸二-第三丁酯（10.43克，47.8毫莫耳）添加入一溶 於THF (400毫升）之粗胺la (7·36克，321毫莫耳）溶液中， 隨後再添加氫氧化鈉水溶液（1〇 Μ，101毫升）。在室溫下劇 烈攪拌該雙相性溶液2〇小時。將該溶液分配於水與乙酸乙 酉旨之間；該有機提取物經硫酸鎂乾燥，過濾並濃縮。將如 此獲得的粗製黃色油藉由矽膠層析法純化（用一梯度爲丨〇% 至30%的乙酸乙酯溶於己烷之溶液洗脫），生成爲黃色油之 溴σ比啶lb(5·37克，51%):1HNMR(CDCl3)δ8·58(s，lH)， 8.22 (s，1Η)，4.47 (s，2Η)，3.17 (br s，2Η)，2.37 (s，3Η)，1.45 (s，9H)，1·〇3 (t，J = 7·2 Hz，3H)。 (c) 中間物lc 一 5_碘-1_(四氫-吡喃-2_基）-1 H-吲唑-3-羧 酸甲氧基-甲基-醯胺 依照 Sun 等人之方法[Sun，J.-H· ; Teleha，C· A· ; Yan， J.-S· ; Rogers，J· D·;及 Nugie卜 D· Α·，J. Org· Chem. 1997， 62,5627]用二氫吡喃烷基化5_碘-111-吲哚-3-羧酸甲氧基-曱 94609.doc -40- 200521124 基-醯胺[該化合物之製備參見：Reich，s. R.，Bleckman， Τ· Μ· ; Kephart，S· Ε· ; Romines，W. Η· ; Wallace，Μ。Β·， 美國專利第6,555,539 B2號，2003年4月29曰]，獲得爲一灰 白色粉末之醯胺 lc (通常>9〇〇/0) : 4 NMR (DMSO-d6) 5 8.3 7 (s，1H)，7.74 (dd，J 叫 _5, 8.8 Hz，1H)，7.68 (d，J = 8·8 Hz， 1H)，5·97 (dd，2.3, 9·〇 Hz，1H)，3·88 (m，2H)，3.79 (s，3H)， 3.42 (s，3H)，2.35 (m，1H)，2.03 (m，2H)，1·75 (m，1H)，1.58 (m，2H) 〇 (d)中間物Id — 5-峨-1_(四氫比喃-2-基）-1 H-吲嗤-3-甲 醛 將氫化鋁鋰（1.2當量）逐份添加入一冷卻的（<5。〇)溶於 THF之醯胺溶液（ΐ·〇當量）中。在低於5它下持續攪拌直至反 應結束’通常爲30分鐘。藉由在低於5。。下緩慢添加乙酸乙 酉曰使反應中止’並將全部混合物倒人Q 4 _ ^則〇4中。有 機層經鹽水絲，經硫酸鎖乾燥，濃縮並藉由㈣層析法

、、，屯化彳于到爲灰白色粉末之醛Id (通常約70%) : b NMR (CDC13) ά 10.15 (s, IU) r ΑΊ r 1 it、^ V， ），8·47 (s，_，7.82 (dd，J = 1.5, 8.7

Hz，1H)，7.78 (d，J = 8.5 Hz mw w …T J wz，1H)，6.04 (dd，J = 2.3, 9.28 Hz， 1H)，3.85 (m，2H)，2·35 m、i /

Un5 1H)5 2.05 (m5 2H)5 1.76 (m5 1H)5 1.60 (m，2H)。 (e)中間物le 乙基_{5_[3 -甲醯基小（四氫· 0比喃冬 基）-1Η-吼唾-5-基]-4-甲基“比。定_3_基曱基卜胺基曱酸第三 丁基西旨 將碘吲唑Id (3.56克 10·0毫莫耳）、雙戊醯二硼（2.79克， 94609.doc -41 . 200521124 11毫莫耳）、乙酸鉀（2.74克，30毫莫耳）及雙（二苯磷基）· 一茂鐵]一氣把（11)與二氯甲烧之錯合物（245毫克，〇.3毫莫 耳）溶解於N，N-二甲基乙醯胺（60毫升）中。藉由抽空（直至溶 劑開始冒泡）及用氬氣沖洗（3個循環）對該溶液進行除氣，然 後在80°C油浴中加熱2小時。略微冷卻（至約5〇。〔〕）後，添加 一溶解於Ν，Ν·二甲基乙醯胺（40毫升）之溴π比σ定ib(3.62克， 11毫莫耳）溶液，隨後再添加去離子水（10毫升）及磷酸鉀 (3.18克，15毫莫耳）。將該溶液除氣，加入四（三苯基膦）把 (347毫克，0_3毫莫耳），並再一次除氣。在一 90°C油浴中攪 拌該混合物4.5小時。冷卻至室溫後，用乙酸乙酯（300毫升） 稀釋該混合物，用去離子水（150毫升）及飽和氯化鈉溶液 (100毫升）洗滌之。有機層經硫酸鎂乾燥，過濾並濃縮成一 粗製黑紅色油（9.43克）。藉由矽膠層析法（用50-100%的乙酸 乙酯溶於己烷中之溶液洗脫）純化，得到爲一橙色油的經偶 聯産品le (2·9462克）。該産品之1H NMR顯示，其受到約1 當量頻哪醇（pinacol)的污染。藉由用己烧研磨得到爲一細 微的黃色粉末之純 le (2.0853 克，447()):4 NMR (CDC13) 5 10.25 (s，1H)，8·39 (s，1H)，8.34 (s，1H)，8·22 (s，1H)，7.74 (d，J = 8.7 Ηζ，1Η)，7.38 (dd，J =1.5, 8·5 Ηζ，1Η)，5.88 (dd5 J =2.8, 9.2 Hz，1H)，4_53 (s，2H)，4.03 (m，1H)，3.81 (m，1H)， 3.24 (br s，2H)，2.60 (m，1H)，2.18 (s，3H)，2.15 (m，2H)， 1.77 (m，1H)，1·65 (m，2H)，1·47 (s，9H)，1.09 (t，J =7.0 Hz， 1H) 〇 (f)中間物 If 一 {5-[3-(4,6-二氟-1H-苯并咪唑-2_ 94609.doc -42- 200521124 基）-1(四氫-σ比嚼-2-基）-11^-°引嗤-5_基]-4-甲基-吼。定-3-基甲 基卜乙基-胺基甲酸第三丁基酯 將醛1〇(2.05克，4.28毫莫耳）、1，2-二胺基_3,5_二氟苯（617 宅克，4_28宅莫耳）及亞硫酸氫納（891毫克，8.57毫莫耳）溶 解於Ν，Ν--一甲基乙&&月女（43宅升）中並在一 12〇 °c油浴中加 熱21小時。冷卻至室溫後，用乙酸乙酯〇〇〇毫升）稀釋該混 合物，並用半飽和的氣化鈉水溶液（75毫升，1:1混合的去離

子水與飽和氯化鈉水溶液）洗滌。用乙酸乙酯（2χ丨〇〇毫升） 萃取水層。將所有有機提取物合併，經硫酸鎂乾燥，並濃 縮成一褐色焦油（3 ·3 9克）。藉由石夕膠層析法（用一梯度爲7〇% 至100%的乙酸乙酯溶於己烷之溶液洗脫）純化該粗製材 料’以得到爲一褐色泡沫之苯并咪唑産物lf (211克， 81%)： NMR (CD3OD) 5 8.46 (s5 1H)5 8.41 (s5 1H)5 8.29 (s, 1H), 7.87 (d5 J = 8.6 Hz5 1H)5 7.46 (dd5 J=l.3? 8.6 Hz5 1H)5

7.13 (m，1H)，6.84 (m，1H)，5·99 (dd，J=2.3, 9.9 Hz，1H)， 4.60 (s，2H)，4.01 (m，ih)，3.86 (m，1H)，3.32 (m，2H，被溶 劑峰遮掩），2·67 (m，1H)，2·28 (s，3H)，218 (m，2H)，i89 (m， 析結果（C33H36F2N6〇3 · 0.4 h2〇) c，H，N，F。

(g)實例1 {5_[3_(4,6-二氟笨并咪唑-2-基）]氫-叫I 唑-5-基]-4-曱基·吡啶基甲基}_乙基·胺 將三乙基料（976毫克，請毫莫耳）及三氟乙酸（ΐ2·9毫 升’ 168毫莫耳）添加至— lf(2·02克，3.36毫莫耳）溶於二氣 曱烧（12.9¾升）中之溶液中。在室溫下授拌該混合物^小 94609.doc -43- 200521124 日守。藉由旋轉蒸發去除揮發物，並用環己烷（1〇毫升）及氫氧 化銨水溶液（2 N，20毫升）處理剩餘物。劇烈攪拌15分鐘後， 生成一粉紅色沈澱物，藉由吸濾法收集之。用乙酸乙酯Ο〆 50¾升）萃取該濾液。經合併的有機提取物經硫酸鎂乾燥， 過據並濃縮成一橙色固體（約〇·4克）。將該固體添加至上面 得到的粉紅色沈殿物中，並藉由管柱層析法（用一 1 %濃氫氧 化銨、19%無水乙醇及80%二氣甲烷之混合物洗脫）純化。 藉由環己烷研磨進一步純化如此獲得的産品（1.23克灰白色 固體）以生成爲灰白色固體之純1 (1·〇9克，74%) : 4 NMR (DMSO-d6) δ 13.81 (極寬 s，1H)，8.46 (s，1H)，8.35 (s，2H)， 7·76 (d，J= 8·6 Ηζ，1Η)，7_44 (dd，J=1.3, 8·6 Ηζ，1Η)，7.17 (m， 1H)，7·07 (d之t，Jt = ι·5 Hz，Jd = 1〇·6 Hz，1H) 3·78 (s，2H)， 2.63 (q，J = 7·1 Hz，2H)，2.25 (s, 3H)，1.07 (t，J = 7.1 Hz, 3H)。HRMS [M+H]+計算值：419_1791 ;實際觀測值： 419·1811。分析結果：（C23H2〇F2N6 ·1·1 H2〇) C，H，N，F。 例2 :乙率-1H_茉并咪唑二2-基VlH_吲唑-5· 基上4-甲基甲基卜胺

(a)中間物2a — 乙基-{5-[3-(5-氟-1H-苯并咪唑-2-94609.doc -44 - 200521124 基)-1-(四虱-吡喃_2·基)_1H-吲唑基]_4_甲基-吡啶·3·基 甲基}_胺基甲酸第三_ 丁基酯 友藉由與用於合成中間物lf之方法相同之方法，在亞硫酸 氫鈉(894毛克’ 8 59宅莫耳)存在下，將醛卜pi克，（π 笔莫耳）及4奮1，2_苯二胺（542毫克，（μ毫莫耳）濃縮，得 到爲-橙色泡沫之苯并味唑2a (2 〇4克，78%) : 1η 醒R(DMSO-d6，某些峰由於互變異構性異構化作用而變爲 峰）513·15 及 13·13 s，1H 重疊），8.42 及 8.41 (2 s， Η 重且），8·39 (s5 ιΗ)，8·32 (s，1Η)，7·77 ⑽，了 = ι 〇, Μ ’ 1H)，[7.70 (dd，J = 4·8, 8·8 Hz)及 7 27 ⑽，】=2 5, 9 i )H 重邊]，7.52 (m，2H)，7 〇7 (⑺，ih)，6 们⑷ 了= d

Hz 1H)? 4.53 (s? 2H), 3.96 (m, 1H)? 3.86 (m? 1H), 3.32 (ln5 2H)2.6〇(m，1H)，2.18(s，3H)，2i2(m2H)，i83(m iH)， 1-65 (m, 2H), 1.41(S5 9H)5l.〇5 (tj j=? 〇Hz5 3H)o^^# 果：（—C33H37FN6〇3.〇.5 Η2〇·〇 2 己烧）c，& n，f。 (b)實例2 乙基_{5-[3-(5-氟-1氫-苯并味嗤-2-基）-1氫 -叫卜坐-5-基]-4-甲基’咬j基曱基卜胺 一以與if之去保護相同的方式，將中間物2a (ι·95克，3·34 毫莫耳）轉化爲灰白色固體之標題化合物2 (1G4克，74%): H NMR (DMSO-d6 ’ $些峰由於互變異構性異構化作用而 變爲雙峰）513·80(極寬 S，m)，13.12 (極寬 δ，ιΗ)，8·46 (s’ 1Η)’ 8.39 (s, 1Η)，8.34 (s，1Η)，7 69及 7 25 (2 m，1Η 重 宜），7·48 (m，1Η)，7·44 (dd，J吐5, 8 6 Ηζ，1Η)，7 〇5 (m，1Η)， 3.77 (s，2Η)，2·62 (q j 〜7，Ττ

、，’， iq，J 〜7·3 Ηζ，2Η)，2.25 (s，3Η)，1·〇7 (t，J 94609.doc -45- 200521124 =7·1 Hz，3H)。分析結果：（C23H21FN6.1.1 H20) C，H，N，F。 生物化學及生物學評僧 細胞週期調節蛋白依賴性激酶活性係藉由量化放射性鱗 酸鹽自[32P] ATP或[33P] ATP至一蛋白底物之經酶催化且具 時間依賴性之併入來量測。除非另有說明，否則分析係在 總容積5 0微升的9 6孔板内實施，並且每次反應需存在：1 〇 mM HEPES (N-[2-羥乙基]呱嗪 _N’_[2_ 乙磺酸])(pH 7.4)、1〇 mM MgCl2、25 μΜ三磷酸腺苷（ATP)、1毫克/毫升卵清蛋 白、5微克/毫升亮抑蛋白酶肽、1 mM二硫蘇糖醇、1〇 mM石 -甘油填酸酯、0.1 mM飢酸納、1 mM氟化納、2.5 mM乙二 醇-雙-胺乙基醚）-N，N，N，Nf_四乙酸（EGTA)、2% (v/v)二 甲基亞砜及0·03至0.4 pCi [32/33P]ATP。用酵素啓動該等反 應，在30 C下予以培養，並藉由添加乙二胺四乙酸（edta) 至250 mM而使反應中止。然後用一96孔過濾多支管將經磷 酸化的底物捕獲於一硝基纖維素或磷酸纖維素膜上，並且 藉由用0.85%的磷酸重復洗滌去除未合併在内之放射性。藉 由將經乾燥的膜在磷光計下曝光定量放射性。 近似&值係藉由在存在不同的抑制劑化合物濃度下分析 酵素活性並減去在不存在酵素時測得的本底放射性而測 付。使用Kaleidagraph (Synergy軟體）將抑制數據擬合於一 用於競爭性抑制的方程式中，或使用軟件KineTie(Bi〇Kin 有限公司）將抑制數據擬合於一用於競爭性緊束抑制的方 程式中。 白D成視絪膜細胞瘤激醢活枨 94609.doc 200521124 用傳統的生化層析技術從已共同感染對應的桿狀病毒表 現載體的昆蟲細胞中提純出人類CDK4與細胞週期調節蛋 白D3的一錯合物或人類CDK4與在基因上截短了的（1-264) 細胞週期調節蛋白D3的一錯合物（參見，例如，Meijer及Kim， "Chemical Inhibitors of Cyclin-Dependent Kinases，’’ Methods in Enzymol，· vol· 283 (1997), pp. 113-128·)。用 0.3 至0.5微克經純化的重組成視網膜細胞瘤蛋白片段（Rb)作爲 底物來分析酵素錯合物（5或50 nM)。經改造的Rb片斷（天然 成視網膜細胞瘤蛋白之殘基386-928 ; 62.3 kDa)包含大多數 在天然106-kDa蛋白中存在的磷酸化位點以及一由六個組 胺酸殘基構成的方便純化用標簽。藉由微量過濾將經磷酸 化的Rb底物捕獲至一硝酸纖維素膜上，並如上所述用一磷 光計定量之。對於緊束抑制劑之量測，將該酵素錯合物濃 度降低至5 nM，並延長該分析持續時間至60分鐘，在此期 間産物生成之時間依賴性呈線型。 CDK2/細胞週期調節蚤白A成視網膜細胞瘤激酶活性之抑制 使用經公開的方法（Rosenblatt等人，"Purification and Crystallization of Human Cyclin-dependent Kinase 2，" J. Mol. Biol·，vol. 230，1993, pp. 13 17-13 19)從感染一桿狀病 毒表現載體的昆蟲細胞中提純出CDK2。從表達全長重組細 胞週期調節蛋白A的大腸桿菌細胞中提純出細胞週期調節 蛋白A，並且藉由限制性蛋白分解生成一截短了的細胞週期 調節蛋白構築體並按前述提純之（Jeffrey等人，"Mechanism of CDK activation revealed by the structure of a cyclin 94609.doc -47- 200521124 A-CDK2 complex，’’ Nature，vol· 376 (27 July 1995)，Pp 3 13-320)。製備一 CDK2與經蛋白酶解的細胞週期調節蛋白 A之錯合體並藉由凝膠過濾法純化之。用於該分析之底物爲 上述用於CDK4分析之Rb底物片斷，並且CDK2/細胞週期調 節蛋白A分析之方法除了 CDK2之含量爲150 nM或5 nM外 與CDK4/細胞週期調節蛋白D3分析基本相同。按上述量測 生長因子（例如VEGF及其他生長因子）對細胞增殖的刺 激作用取決於其對各自受體的酪胺酸激酶中的每一酪胺酸 激酶的自動鱗酸化誘導。因此，一蛋白激酶抑制劑阻斷藉 由該等生長因子誘導的細胞增殖之能力與其阻斷受體自動 科酸化作用之能力直接相關。爲了量測該等化合物之蛋白 激酶抑制活性，使用下述構築體。 jg胞生長之抑制··細胞毒性評僧 使用四唑鹽分析法量測對細胞生長之抑制程度，其係基 於可存活細胞還原3-(4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-[2氫]-二苯 四唑鹽溴化物（MTT)至甲臜之能力。然後以分光光度法檢測 忒不溶於水的紫色甲腸産物。在96孔板中培養hcT 116細胞 株。將細胞以McCoy’s 5 A培養基中135微升/孔之體積放置 於適合的培養基中。在加入抑制劑化合物前將板培養4小 時。將不同濃度的抑制劑化合物添加於〇·5% (v/v)的二甲基 亞砜中（15微升/孔），並在37。(：（5% c〇2)下將細胞培養4至6 天（視細胞類型而定）。在培養結束時，添加Μττ至最終濃度 爲〇·2毫克/毫升，並且將細胞在37〇c下再培養4小時。在離 94609.doc -48· 200521124 心培養板並去除培養基後，在540納米下量測甲臢（溶解於 二甲基亞砜中）之吸收度。藉由抑制劑濃度-抑制百分數之半 對數曲線之線性部分測定導致50%生長抑制的抑制劑化合 物之濃度。將所有結果與僅用0.5% (v/v)二甲基亞砜處理的 對照細胞實施比較。 蛋白質激酶組 對照一大的蛋白激酶組篩選本發明化合物，以確定本發 明化合物相對於多種蛋白激酶對CDK的抑制活性。該分析 係使用 Davies，S 等人於 Specificity and Mechanism of Action of Some Commonly Used Protein Kinase Inhibitors (Biochem J· 351，95-105 (2000)，其内容以引用的方式倂入本文中）中 闡釋之方法及材料實施。對照一蛋白激酶組篩選該等化合 物，該等蛋白激酶包括·· AMP活化蛋白激酶（AMPK)、檢查 點激酶（CHK1)、酪蛋白激酶1及2 (CK1及CK2)、細胞質酪 胺酸激酶（CSK)、雙絲胺酸/蘇胺酸/酪胺酸激酶 (DYRK1A)、糖元合成酶激酶3(GSK3B)、c_Jun胺基末端激 酶（JNK)、淋巴細胞激酶（LCK)、分裂素活化蛋白激酶2、

K-la、K2(MAPK2、MAPKAP-Kla及 MAPKAP-K2)、MAPK 激酶（MKK1，亦稱爲MEK)、分裂素及應激激活蛋白激酶 1(MSK1)、永不發生有絲分裂之激酶6 (NEK6)、P7〇核糖體 蛋白S6激酶（P70s6Kl)、3_磷酸肌醇依賴蛋白激酶1 (PDK1)、鱗酸化酶激酶（PHK)、蛋白激酶A (PKA)、蛋白激 酶B (PKB，亦稱爲Akt)、蛋白激酶C (PKCa)、p38、調節/激 活蛋白（PRAK)、Rho-依賴蛋白激酶（ROCK-II)、應教激活蛋 94609.doc -49- 200521124 白激酶2a、2b、3及4 (分別爲SAPK-2A或p3 8、S APK-2b或 p38 /3 2、SAPK3或ρ3 8γ、SAPK4或ρ3 8δ)及血清和糖皮質激 素誘導之激酶（SGK)。化合物活性劃分成三類··弱抑制活性 (<50%)、中等抑制活性（50至75%)及強抑制活性（>75%)。如 下表1所示，本發明化合物係強效的CDK抑制劑並且作爲 CDK抑制劑與來自美國專利第6,555,539號之3,5經取代吲 唑相比較出人意料具有更高選擇性。 94609.doc 50- 200521124 3，5 , σ坐化合物之激酶活性 表1 : A* Βφ I C* ： ：D* l 1 ! 2 , i ； ί J 一 CDK2/A K ίηΜ) 0.52 0.25 i 0.80 ； I j ；2,40 j 0,78 ί 0.47 I ί HCT-116IC50 ίηΜ) 70 90 86 j >500 Ι 120 22 激酶 ? τ ΑΜΡΚ i +♦ \ ........ 丨+♦ ++ 丨♦+ ί +. ++ CDK2/A 丨 ++ 卜+ ! I ++ ； CHK1 i + + -i * I - I -\ CK1 !. 垂 .I 5 - ! - ! — ···--—、 s CK2 爾 L ♦一 •一 - ! ! - ! 5. 身 卜i - CSK !- - } - ι · j - DYRK1A ++ ♦♦丨 I GSK3B I ♦♦ ++ ♦+丨 ♦+ I ♦♦ JNK i"-. - -i · -Ί * LCK I ♦♦ + I · ^ ί i MAPK2 f _ U.-—— -i .； - -)· I MAPKAP-K1a 丨♦. I +♦丨 +♦ ! 響 ：MAPKAP-K2 _ «. I -； - • i ：, MKK1 ++ 一气」—I·— * ! • MSK1 - ,! -] - ，T NEK6 ! 一：J -I - i 了i P70S6K1 i + ♦丨· i · .· ! · I PDK1 + I - i « ___ΐ----—j....— ...-j • Π PHK + i + | • ♦ i 一.**··…一一〜* ♦♦ ! PKA HHh +♦丨 ♦ i 一，一——μ - -i _一..· .··**«、〜···— ：PKB I -. • ! m i 讓 _ I 擎 PKCa + '+♦ j _ + j • 一一，一卜..一.^^·〜 •丨· i PRAK ： + | 4Hh 丨 + 聲! _ I ROCK-H +丨；丨- __ 一…匕 -! JV— j SAPK-2A 麟 " 丨 i T ί 一…·」二·—」·一二·一...·、 ._ \ PSAPKiZb ’ rSAPK3^...... 猶 -i ________________^ -j 勢T 猶 'I w i 一 ].· ...........，一 ·*·. I SAPK4 — - —T ------- ^ -Γ i SGK + + I -| —二…I - i

c δ-ν)

H XuTsX D KN-C)

丨^01 2 ++強抑制活性>75% +中等抑制活性50至75% -弱抑制活性<50% 555,539 號中 *化合物A、B、C及D闡述於美國專利第6 一 _ / v/儿 丁 〇 可容易地實施另外的分析以測定鱼复〜、& 、其匕激酶錯合物即 VEGF或FGFR(成纖維細胞生長因子受體）激酶相比，式I化 94609.doc -51 - 200521124 合物對CDK之選擇性。該等分析揭示於美國專利第 6,555,539號及WO 03/004488中且在此項技術中爲人們所熟 知0 上述實例性化合物可依照下述概括性實例調配成醫藥組 合物。 1L經腸組合物 爲製備一適合於藉由注射投與之非經腸醫藥組合物，可 將1〇〇毫克式I化合物之水溶性鹽溶解於DMS〇中，然後與 一 10¾升0.9%無菌鹽水混合。將該混合物納入一適合於藉由 注射投與之劑量單位形式中。 輕口組合物 爲製備一經口遞送之醫藥組合物，將100毫克一式ς化合 物與750耄克乳糖混合。將該混合物納入一適合於經口投與 的用於諸如一硬質明膠膠囊的口服劑量單位中。 儘管已參照具體及較佳實施例對本發明加以闡述，但孰 諳此項技術者將會認識到，藉由常規實驗及實踐本發明彳 # 三必各種L改及改良。因此，本發明並非欲受以上闡述内 谷之限制’而是受隨附申請專利範圍及其等效内容之限定。 94609.doc -52-

Claims (1)

1. 200521124 十、申請專利範圍： 1 · 一種式I化合物或醫藥上可接受之鹽或溶劑合物：

   其中R1、R2、R3及R4係選自由下列組成之群：η、鹵 代基、氰基、硝基、三氟甲氧基、三氟甲基、疊氮基、 羥基、cvc6烧氧基、CVCio烧基、c2-c6烯基、c2_c6快基、 -C(0)R5、-C(0)0R5、-0C(0)R5、-NR5C(0)R6、-C(0)NR5R6、 -(cr5r6)nr7r8、_CR5R6NR7R8、-NR5〇R6、-so2nr5r6、 -S(0)j(CrC6院基）、-(CR5R6)t(C6-C10芳基）、-(CR5R6)t(C3-C10 環烷基）、-(CR5R6)t(4 至 10 員雜環）、_(CR5R6)qC(〇)(CR7R8)t (C6-C10 芳基）、-(CR5R6)qC(0)(CR7R8)t(C3-C1()環烧基）、 -(CR5R6)qC(0)(CR7R8)t(4 至 10 員雜環）、-(CR5R6)t〇(CR7RB)q ((VQ。芳基）、-(CR5R6)t〇(CR7R8)q(C3-Cl(}環烷基）、 -(CR5R6)tO(CR7R8)q(4S 10 員雜環）…(CR5R6)qS〇2(CR7R8)t (C6-C10 芳基）、-(CR5R6)qS02(CR7R8)t(C3-ClG 環烷基）及 94609.doc 200521124 -(CR5R6)qS〇2(CRV)i(4_10員雜環），其令』係〇至2之整數，^ 及t各為獨立自〇至5之整數’上述r1、r2、rir4^^ 基或雜環部分的以刺碳原子視情況可經氧基(=〇)部 分取代，R5、R6、尺7及r8各自 倜且k自H、Ci-C6烷基； 並且其中R1、R2、R3及R4不同時.H。 2. 如請求们之化合物或醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其 中 Rl 爲 _(CR5R6)NR7R8,且 R2、R3iR4孫 ^ 及R係獨立選自於Η或F。 3. 如請，項！之化合物或醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其 中R爲乙基胺基甲基，R3爲H，R2及R4爲卩。 4. =請，項丨之化合物或醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其 中R爲乙基胺基甲基，r2&r4爲H，R3爲F。 5· —種選自

   心 或 F之化合物或醫藥上可接 雙之鹽或溶劑合物。 6. 7. -藥、’且口物’其係用於治療由激酶之抑制作用所介 ’夫病或失.周症，其包含如請求項5之化合物或醫藥上 可接受之鹽或溶劑合物。 西藥、、且口物’其係用於治療真菌感染、惡性腫瘤或 癌症以及其他與非期望之^ & a 卜肩11之血官發生及/或細胞增殖相關之 疾病狀態，其句今石主 ，、匕3如凊求項5之化合物或醫藥上可接受之 鹽或溶劑合物。 94609.doc 200521124 8. 一種用於選擇性地抑制CDK激酶活性之醫藥組合物，其 包含如請求項5之化合物或醫藥上可接受之鹽或溶劑合 物。 9. 一種醫藥組合物，其包含如請求項5之化合物或醫藥上可 接受之鹽或溶劑合物。 94609.doc 200521124 七、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無）。 (二) 本代表圖之元件符號簡單說明·· 八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：

   94609.doc