TW200423960A - Cyclodextrin-based materials, compositions and uses related thereto - Google Patents

Cyclodextrin-based materials, compositions and uses related thereto Download PDF

Info

Publication number
TW200423960A
TW200423960A TW092128118A TW92128118A TW200423960A TW 200423960 A TW200423960 A TW 200423960A TW 092128118 A TW092128118 A TW 092128118A TW 92128118 A TW92128118 A TW 92128118A TW 200423960 A TW200423960 A TW 200423960A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
polymer
cyclodextrin
item
group
host
Prior art date
Application number
TW092128118A
Other languages
English (en)
Inventor
Nathalie C Bellocq
Mark E Davis
Suzie Hwang Pun
Original Assignee
Insert Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Insert Therapeutics Inc filed Critical Insert Therapeutics Inc
Publication of TW200423960A publication Critical patent/TW200423960A/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/645—Polycationic or polyanionic oligopeptides, polypeptides or polyamino acids, e.g. polylysine, polyarginine, polyglutamic acid or peptide TAT
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
    • A61F13/00—Bandages or dressings; Absorbent pads
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/40—Cyclodextrins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6949—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes
    • A61K47/6951—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes using cyclodextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
    • A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
    • A61L15/22—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing macromolecular materials
    • A61L15/28—Polysaccharides or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
    • A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
    • A61L15/42—Use of materials characterised by their function or physical properties
    • A61L15/44—Medicaments
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
    • A61L26/0009—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form containing macromolecular materials
    • A61L26/0023—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
    • A61L26/0061—Use of materials characterised by their function or physical properties
    • A61L26/0066—Medicaments; Biocides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/252—Polypeptides, proteins, e.g. glycoproteins, lipoproteins, cytokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/258—Genetic materials, DNA, RNA, genes, vectors, e.g. plasmids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/60—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a special physical form
    • A61L2300/62—Encapsulated active agents, e.g. emulsified droplets
    • A61L2300/622—Microcapsules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/60—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a special physical form
    • A61L2300/62—Encapsulated active agents, e.g. emulsified droplets
    • A61L2300/626—Liposomes, micelles, vesicles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/80—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a special chemical form
    • A61L2300/802—Additives, excipients, e.g. cyclodextrins, fatty acids, surfactants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Other Resins Obtained By Reactions Not Involving Carbon-To-Carbon Unsaturated Bonds (AREA)

Description

200423960 玖、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係提供一種經由使帶有包藏宿主（譬如環糊精）之聚 合體與帶有至少兩個官能基之連結分子交聯所形成之材料 ，該連結分子係作為包藏寄生物，與該包藏宿主形成包藏 複合物。對於其中環糊精為包藏宿主之聚合體而言，舉例 之包藏寄生物包括菩酚、金剛烷、膽固醇及其衍生物。在 某些具體實施例中，聚合體帶有包藏寄生物，而帶有包藏 宿主譬如環糊精之連結分子係用以使聚合體交聯。根據上 述說明之材料可用以傳輸治療劑，譬如蛋白質、核酸及醫 藥。 【先前技術】 被稱為π糖聚合體π之具有懸垂糖部份基團之聚合體（Bioconj. Chem·，3 : 256(1992))於近年來已吸引極大興趣，大部份作為生 物學上重要碳水化合物分子之多價顯示之骨架。此等糖聚 合體已被使用作為病毒-宿主細胞連附及白血球-内皮細胞 黏附之有效抑制劑（FEBS，272: 209 (1990); Can· J· Microbiol·，37 ·· 233 (1991) ; J. Am. Chem· Soc·，119 : 3161 (1997))。糖聚合體亦已被發 掘作為標的藥物與基因傳輸之媒劑（J. Hepatology，21 : 806 (1994)) ，及作為細胞黏連之人造受質（J. Cell Biol.，115 : 485 (1991))。糖 聚合體作為生物可相容植入材料之合適性，相對地尚未被 發掘，且被限制於少數實例，例如描述於Microbiol. Chem· Phys·， 195 ·· 3597 (1994)中。 對於作為生物可相容植入材料使用之聚合體，其性質，特 88463 200423960 別是表面組成，是極為重要的。努力包括引進生物可相容 組件至整體系統中及於其表面上。例如在J. Colloid Interface Sci.， 149 : 84 (1992)中所述之研究，已証實具有懸垂葡萄糖單位在 整體中之共聚物，或具有共價結合中性多醣之表面，証實 血小板黏連與蛋白質吸附之減少。 因此，易於製備之生物可相容聚合材料，可用於藥物傳輸 及其他生物醫學用途。 【發明内容】 本發明係提供一種經由使帶有包藏宿主（譬如環糊精）之聚 合體與帶有至少兩個官能基之連結分子交聯所形成之材料 ，該連結分子係作為包藏寄生物，與該包藏宿主形成包藏 複合物。對於其中環糊精為包藏宿主之聚合體而言，舉例 之包藏寄生物包括莕酚、金剛烷、膽固醇及其衍生物。在 某些具體實施例中，聚合體帶有包藏寄生物，而帶有包藏 宿主譬如環糊精之連結分子係用以使聚合體交聯。根據上 述說明之材料可用以傳輸治療劑，譬如蛋白質、核酸及醫 藥。 發明詳述 I.概論 環糊精具有環結構，其具有籃狀之形狀。此形狀允許環糊 精包含許多種類之分子進入其内部腔穴中。參閱，例如Szejtli， 環播 I及真汔藏禮合# ; Akademiai Klado, Budapest, 1982;及 Bender 等人，環瀚#必季Springer-Verlag，Berlin，1978。環糊精能夠與一 陣列有機分子形成包藏複合物，該分子包括例如藥物、殺 88463 200423960 害劑、除草劑及戰爭用劑。參閱Tenjarla等人，J：尸/^rm. &ζ·.，87 :425-429 (1998) ; Zughul 等人，PAarm. Z^v· 此 3 ·· 43-53 (1998); 及 Albers 等人，CWi. TTzer. Z)n/g Gamier 办尤 12 : 311-337 (1995)。 線性環糊精為基質之聚合體（CDP)已在先前被証實於活體 外（在許多不同細胞系中）與活體内（Gonzalez等人1999 Bioconjugate Chem 10： 1068-1074;與 Hwang 等人 2001 Bioconjugate Chem 12(2) : 280-290)均具有低毒性。本發明至少一部份係關於以聚 合體為基質之生物可相容材料，該聚合體帶有或包含環糊 精部份基團，其方式是使線性股與帶有兩個或多個部份基 團之連結分子交聯，該部份基團係與環糊精形成包藏複合 物，如圖1中所示。此外，熟諳此藝者將明瞭此概念當然可 被擴大至帶有或包含不為環糊精之包藏宿主之聚合體，伴 隨著帶有包藏寄生物之連結分子，其係與此等包藏宿主形 成包藏複合物，或者，帶有包藏寄生物之聚合體，伴隨著 帶有或包含包藏宿主之連結分子，其係與此等包藏寄生物 形成包藏複合物。不為環糊精及相關環溶膠澱粉之包藏宿 主之實例，包括全氫三苯（其係與聚乙烯形成包藏複合物） ’尿素/硫脲（其係與脂防酸類及相關分子形成包藏複合物 ，如在美國專利案號4,776,984、5，106,542及4，170,601中所述者） ，環吩烷（譬如在美國專利4，116,955中所述者）及在美國專利 案號4,841，081、4,367,072及4,898,654中所述者，其全部均據此 以其全文併於本文供參考。 於本發明之某些具體實施例中，譬如在下文實例19中所描 述者，聚合體帶有包藏宿主與包藏寄生物，因此係與本身 88463 200423960 交聯，其方式是在宿主與寄生物之間於相同聚合體鏈上， 及/或在宿主與寄生物之間於相鄰聚合體鏈上，形成包藏複 合物。進行交聯之條件將影嚮此兩種包藏複合物類型間之 平衡。例如，在高稀釋下進行複合，將有利於分子内複合 物之形成，而在高濃度下進行複合，將有利於分子間複合 物之形成，在一些情況中，包括連環烷-與旋轉烷-類型結 構。在某些此種具體實施例中，高度分子間交互作用會增 加材料之剛性、溶點及強度。 對本申請案之目的而言，聚合體”摻有’f包藏宿主，譬如環 糊精部份基團，其方式是具有包藏宿主在聚合體鏈内，例 如自聚合體移除包藏宿主需要切斷聚合體鏈。此種聚合體 之實例為上文所指之線性環糊精為基質之聚合體。’’帶有’’ 環糊精部份基團之聚合體，具有聚合體鏈，包藏宿主係連 接至其上，例如包藏宿主係附加至不同聚合體鏈。如本文 中所述之聚乙烯亞胺-CD聚合體，係為此類型聚合體之實例 。π包含ff包藏宿主之聚合體，係為’’帶有π或”摻有π或帶有 且摻有包藏宿主之聚合體，或者具有共價結合包藏宿主作 為聚合體鏈之一部份。包含包藏宿主之任何聚合體可被採 用於本申請案中。在某些具體實施例中，摻有包藏宿主之 聚合體係為線性（意即非分枝狀）聚合體。在某些具體實施 例中，包藏宿主，例如被摻入或被帶有於聚合體上，係規 則地間隔在整個或沿著聚合體上。 所形成材料之物理性質，可藉由選擇會形成不同強度包藏 複合物之部份基團而改變；複合物愈強，所形成材料愈耐 88463 200423960 人L更同樣地，使用帶有超過兩個此種部份基團之連 ’.σ刀子可藉由加交聯度，而增加材料之強度與剛性， 譬如增加連結分子對聚合體質量之比例。此材料之物理性 貝亦可藉由變更連結分子本身之撓性，或藉由變更連結基 在環糊精聚合體本身内之撓性而改變。 再者基貝之活眩内性質可利用基質中於生理學條件下不 安定之鍵結而改變。例#，聚合體股線、交聯分子或兩者 ’可包含在生理學條件下^安定之鍵結，譬如g旨與肤鍵。 安置於生理學環境中之後，此等鍵結將逐漸開始分裂，造 成逐漸降解及喪失結構完整性。廣範圍性f可藉由改變此 種鍵結在聚合體股線中之頻率，經由使不安定與抵抗性交 聯分子以不同比例合併，或經由選擇具有不同強度之不^ 不安足鍵結而達成1如，肽鍵通常比§旨鍵對分裂較具抵 抗性，該酯鍵依次比硫酯鍵具較低不安定性。 - 化物及s如/β療劑、病毒、佐劑等物質，可與聚合體〜 起調配’其方式是形成包藏複合物，或藉由簡易混合或包 覆，而未形成包藏複合物，正如此項技藝中關於一般生物 可相容聚合體所習知。 增加該物質治療利用性之化合物，譬如發出訊息月太、其他 有助於細胞潜移之部份基團或佐劑，可被摻入經交聯材料 中’其方式是使包藏複合物寄生物共輕至吾人感興趣之會 體’且加入此共輛物在該材料中，&圖2中所描緣者。此: 軛物可在交聯程序之前、期間或之後加入。治療化合物： 可以此方式加人，較佳為其中在藥物與包藏寄生物/宿“ 88463 -10- 200423960 之連接係於生理學條件下不安定，譬如酯键。參閱美國專 利申請案公報 20030008818 與 20030017972。 II.定義 為方便起見，將本專利說明書、實例及隨文所附申請專利 範圍中所採用之某些術語收集於此處。 π佐劑’’，當此術語被使用於本文中時，係為一種獨自具有 極少或無治療價值，但會增加治療劑有效性之化合物。舉 例之佐劑包括放射敏化劑、轉移感染加強劑（譬如氯喹及其 類似物）、向化性劑與化學吸引劑、會調制細胞黏連及/或 細胞移動之肽、細胞滲透劑、多重抗藥性之抑制劑及/或射 流泵等。 ’’生物可相容聚合體’’與π生物相容性π之術語，當關於聚 合體使用時，是技藝上明瞭的。例如，生物可相容聚合體 包括一些聚合體，其本身既非對宿主（例如動物或人類）有 毒，亦不會在產生單體或寡聚合亞單位或其他副產物之速 率下，於有毒濃度下在宿主中降解（若聚合體會降解時）。 在本發明之某些具體實施例中，生物降解一般係涉及聚合 體在生物體中降解成為例如其單體性亞單位，已知其可有 效地為無毒性。但是，由於此種降解所形成之中間寡聚合 產物可具有不同毒物學性質，或生物降解可涉及氧化作用 或會產生分子而非聚合體之單體性亞單位之其他生物化學 反應。因此，在某些具體實施例中，欲供活體内使用譬如 移植或注入病患中之生物可降解聚合體之毒物學，可於一 或多種毒性分析後測得。無必要認為具有100%純度之任何 88463 -11 - 200423960 主題組合物才是生物可相容的。因此，主題組合物可包含99 %、98%、97%、96%、95%、90%、85%、80%、75% 或甚 至更低之生物可相容聚合體，例如包含本文中所述之聚合 體及其他材料以及賦形劑，而仍然是生物可相容的。 為測定聚合體或其他材料是否為生物可相容，可能必須進 行毒性分析。此種檢測係為此項技藝中所習知。此種檢測 之一項實例可以活癌細胞，譬如GT3TKB腫瘤細胞，以下述 方式進行：使試樣在lMNaOH中，於37t下降解，直到發現 完全降解為止。然後，以1 M HC1使溶液中和。將約200微升 不同濃度之已降解試樣產物置於96-井組織培養板中，並在 1〇4 /井密度下，以人類胃癌細胞（GT3TKB)接種。將已降解 之試樣產物，與GT3TKB細胞一起培養48小時。可將檢測結 果以相對生長％對已降解試樣在組織培養井中之濃度作圖 。此外，本發明之聚合體與配方亦可藉由習知活體内試驗 評估，譬如大白鼠中之皮下植入法，以確認其不會在皮下 植入位置造成顯著程度之刺激或發炎。 ”生物可降解”一詞係為技藝上所明瞭，且包括意欲在使用 期間降解之聚合體、組合物及配方，譬如本文中所述者。 生物可降解聚合體典型上與生物不可降解聚合體不同，因 前者可在使用期間降解。在某些具體實施例中，此種利用 係涉及活體内利用，譬如活體内治療，而在其他某些具體 實施例中，此種利用係涉及活體外利用。一般而言，可歸 因於生物降解能力之降解，係涉及使生物可降解之聚合體 降解成為其成份亞單位，或例如藉由生物化學過程，使聚 88463 -12- 200423960 合體消化成較小非聚合之亞單位。在某些具體實施例中， 兩種不同類型之生物降解可一般性地被確認。例如，一種 生物降解類型可涉及聚合體主鏈中鍵結（無論共價或其他） 之分裂。在此種生物降解中，典型上會造成單體與寡聚物 ，而又更典型上為此種生物降解係藉由連接聚合體之一或 多個亞單位之键結之分裂而發生。對照上而言，另一種生 物降解類型可涉及在侧鏈内部或使侧鏈連接至聚合物主鏈 之鍵結（無論共價或其他）之分裂。例如，以側鏈連接至聚 合體主鏈之治療劑或其他化學部份基團，可藉由生物降解 釋出。在某些具體實施例中，一種或另一種或兩種一般類 型之生物降解，可發生在聚合體使用期間。 於本文中使用之”生物降解”一詞係涵蓋兩種一般類型之生 物降解。生物可降解聚合體之降解速率，係經常部份依多 種因素而定，包括負貴任何降解之键結之化學身分，此種 聚合體之分子量、結晶度、生物安定性及交聯度，植入物 之物理特徵（例如形狀與大小），及投藥之模式與位置。例 如，分子量愈大，結晶度愈高，及/或生物安定性愈大，任 何生物可降解聚合體之生物降解通常愈緩慢。’f生物可降解 π —詞係意欲涵蓋亦被稱為’’生物可侵蝕π之物質與過程。 於某些具體實施例中，其中生物可降解之聚合體亦具有與 其結合之治療劑或其他物質，此種聚合體之生物降解速率 可以此種物質之釋出速率為特徵。在此種情況中，生物降 解速率不僅可依聚合體之化學身分與物理特性而定，而且 依被併入其中之物質之身分而定。主題組合物之降解不僅 88463 -13 - 200423960 包括鍵結藉由例如氧化作用及 ，亦包括分子間鍵結之瓦解，譬如 、㈣用《分裂 與外來包藏宿主之競爭性複合物形：：解：生物複合物藉由 在某些具體實施例中，本發明之聚 用中可接受之期間内生物降解。在甘二万所要之應 如活月豆内>口療，此種降解係在曝 ^ 間，且具有溫度在25旬7t門^ “有阳值介於6與8之 ”37C間又生理溶液時，於— 發生，通常少於约五年、—主、 又〃月間内 夭、u - 年、穴個月、三個月、—個月 、二天或甚至一天。| ，此喂八俨伤产的 在其他具體實施例中 時與㈣間之期 之應用而定。 干肝依所要 生物可水解鍵結（例如酯、 此 m 灭故酿、胺基甲酸酯戋 醯亞胺），係指會在生理學條件下分 〆 八刻而艰忐〜i , 鍵、、、口（例如酯係被 刀衣而…基與竣酸)。生理學條件包括消化道(例如胃 、腸寺）《酸性與驗性環境，腫瘤之酸性環境，酵素分裂、 新陳代謝作用及其他生物學過程，而較佳係指脊椎動物譬 如哺乳動物中之生理學條件。 ”保健提供者”一詞係指對人們、社區等提供保健服務之個 人或機構。”保健提供者"之實例包括醫生、醫院、持婧照 顧退休團體、熟練看護機構、亞急性護理機構、診所、多 專長診所、自立移動性中心、家庭保健機構及_。 '本文中使用之說明書"係意謂描述關於套件之有關聯物 :或操作法之文件。此等物料可包括下列任何組合：背景 資訊、成份之清單及其可用性資訊(購買資訊等），關於使 88463 -14- 200423960 用該套件、發現且故障排除之簡略或詳細擬案，參考资料 、技術支援及任何其他有關文件。說明書可伴隨著套件， 或以個別構成組件供應，無論是以文件形式，或可在電腦 可謂取記憶裝置上供應或自網際網路網站下載之電子形式 ，或以記錄形式呈現。說明書可包含一或多份文件，且音 謂包括未來更新。 於本文中使用之”套件”係意謂至少兩個構成套件之組件之 收集。此等組件係一起構成關於特定目的之功能性單位。 個別構成組件可以物理方式一起或個別包裝。例如，一個 包含關於使用套件之說明書之套件，彳以或可以不以物理 万式包含該說明書與其他個別構成組件。替代地，說明書 可以個別構成組件供應，無論是呈文件形式，或可在電^ 可項取圮fe裝置上供應或自網際網路網站下載之電子形式 ，或以記錄形式呈現。 於本文中使用之”⑽八丨構造物，，一詞，為總稱術語，包括小 的干擾RNA (siRNA)、髮夾腹八及其他咖人物種，其可在活體 内分裂以形成siRNA。本文之構造物亦包括表現載體（
亦被稱為RNA#現載體），其能夠導致會在細胞中形成_A 或髮夾RNA《轉綠本，及/或可在活體内產生侧A之轉錄 本。 關於主題治療方法之主題化合物之”有效量”，係指治療劑 在製劑中〈量’當其被應用作為所要劑量服用法之-部份 時根據關於治療或預防特定病症之臨床上可接受之標準 ’係提供一項利益。 88463 -15 - 200423960 欲藉由主題方法治療之，，病人"或”病患"，係、為動物，較 佳為哺乳動物，包括人類。 ^防或治m詞係為技藝上所明瞭，且包括對宿主 技丁 4多種王題組合物。若其係在不想要症狀(例如宿主 動物之疾病或其他不想要狀態）之臨絲明之前投藥，則處 理即為預防，意即其係保護宿主抵抗不想要症狀之發展， m不想要症狀〈表象後投藥，則處理即為治 療（意即，其係意欲減少、改正或安定化現有之不想要症狀 或副作用）。 ”防止"-詞係為技藝上所明瞭，且當關於症狀譬如局部復 毛⑴如疼痛）’疾病譬如癌症，徵候簇複徵譬如心臟衰竭 或任何其他醫療症狀使用時，是此項技藝中所極為明瞭的 ，且包括組合物之投藥’相對於未接受該組合物之病患， 其會在病患中降低醫療症狀病徵之頻率或延遲其展開。因 此，癌症《防止包括例如在接受預防治療之病患個體群中 ，相對於未經治療之對照個體群，降低可偵測癌生長之數 及/或在經治療之個體群中，相對於未經治療之對照個 -群’延遲可偵測癌生長之出現’例如達統計學上及，或浮 床上《顯著量°感染之防止包括例如在經治療之個體群中 ’相對於未經治療之對照個體群，降低感染之診斷數目， 及/或在經治療之個體雜φ 士攻 "群十相對於未經治療之對照個體群 j遲感染㈣之展開。疼痛之防止包㈣如在經 =群中，相對於未經治療之對照個體群，減少病患和 歷疼痛感覺之頻率或者使其延遲。 … 88463 -16- 200423960 於本文中使用之”治療劑”一詞，包括任何合成或天然生成 之生物活性化合物或物質組合物，當其被投予生物體（人類 或非人類動物）時，會藉由局部及/或系統作用，誘發所= 之藥理學、致免疫及/或生理學作用。因此，此術語係涵蓋 傳統上被認為是藥物之化合物或化學品，疫苗及生物醫藥 二包括分子，譬如蛋白質皆激素 '核酸、基因構造： 等。更特足1：之，”治療劑”一詞包括供使用於所有主要治 療領域之化合物或組合物，包括但不限於佐劑；抗傳染: ，譬如抗生素與抗病毒劑；止痛劑與止痛劑組合、滅食慾 藥、消炎劑、抗癲癇H、局部與全身麻醉藥、安眠藥^ :藥、抗精神病劑、致類神經病症劑、抗抑鬱劑、解焦慮 劑、拮抗劑、神經元阻斷劑、抗膽鹼能與擬膽鹼藥劑、= 繩：驗與繩蕈驗劑、抗腎上腺素能藥物、抗節律不齊藥： 柷问血壓藥劑、激素與營養物、防治關節炎藥、治氣喘藥 =、抗搐搦藥、抗組織胺類、止惡心藥、抗腫瘤藥、止癢 藥退熱藥，解瘦藥、心與血管製劑（包括劈通道阻斷劑、 ^阻斷劑、&催動劑及抗節律不齊藥）、抗高血壓藥、利尿 劑三血管擴張劑；中極神經系統刺激劑；咳漱與感冒製劑 。解除充風剑，衫斷劑；激素；骨骼生長刺激劑與骨質耗 .、p制剑，免疫抑制；肌肉鬆弛劑；精神興奮劑丨鎮靜藥 :鎮：劑’蛋白質、肽及其片段(無論是天然生成、以化學 :式口成或以重組方式製成）；及核酸分子（兩種或多種核 酸之聚人踢形Λ» /㈡）式，典論是核糖核甞酸（RNA)或去氧核糖核苷 酸（DNA)，包括雔| ^、 栝又舁早版分子兩者、基因構造物、表現載 88463 -17- 200423960 反有％、我刀+等）、小分子（例如多克索紅菌素）及其他生 才丨巨刀子例如蛋白質與酵素。此藥劑可為生物活性 劑，用於包括獸醫之醫療應用上，及在農業上，譬如關於 植物以及其他續域。治療劑—詞亦包括但不限於藥,· 維生素：刪補充劑；用於疾病或病症之治療、防：： 診斷、治誠緩和之物質；$會影嚮身體結構或功能之物 質；或前體藥物’在其被放置於預定生理環境中之後，其 會變得具生物活性或較具活性。 治療指數”-詞係指被定義為LD5〇/ED5〇之藥物治療指數。 酿基係“適合用於酸化氮原子以形成酸胺或胺基甲酸醋 ’酿化碳原子以形成_，酿化硫原子以形成硫酉旨，或酸化 氧原子以形成酯基之基團，例如連接至(哪部份基團之烴 。較佳醞基包括苯甲醯基、乙醯基、第三-丁基乙醯基、三 甲基乙醯基及二氟乙醯基。更佳醯基包括乙醯基與苯甲醯 基。最佳酸基為乙酸基。 "醯基胺基”一詞係為技藝上所明瞭，且較佳係指可以下列 通式表示之部份基團：
11 其中R9與R、丨各獨立表示氫或烴取代基，譬如烷基、雜烷基 、芳基、雜芳基、碳環脂族及雜環脂族。 ’’胺’’與胺基”術語係為技藝上所明瞭，且係指未經取代 與經取代之胺類，以及銨鹽，例如可以下列通式表示者·· 88463 -18 - 200423960 /9 I" Ν\ 或-—N-^Rl0 \10 \ R9 其中R9、R1q及R，1g各獨立表示氫或烴取代基，或r9與！和 彼等所連接之Ν原子一起採用，完成雜環，具有4至8個原 子在環結構中。在較佳具體實施例中，R9、皆不為 酉跋基，例如R9、Ri Q及R’i Q係選自氫、烷基、雜烷基、芳基、 雜方基、碳環脂族及雜環脂族。於本文中使用之，，烷基胺,, 一詞，係意謂如上文定義之胺基，具有至少一個經取代或 未經取代 < 烷基連接至其上。帶正電荷㈠列如R，1 G存在）之胺 基，係被稱為”銨”基。在銨基以外之胺基中，此胺較佳為 驗性，例如其共軛酸具有pKa高於7。 、”酿胺基”與”醯胺”術語係為技藝上所明瞭，為胺基取代 之羰基，譬如可以下列通式表示之部份基團：
其中R9與R10均如上文定義 包括醯亞胺類。 在某些具體實施例中，醯胺係 /、π Α 土 μ徊碳原子， 佳為1至12個，更佳為1至6個， 更佳為1至4個碳原子 烷基鏈可為直鏈(例如正-丁基)或分枝狀(例如第二-丁' 異丁基或第三-丁基）。較佳分枯^ 土 ^ 、 刀枝狀烷基具有一或兩個分 ，較佳為一個分枝。較佳烷基為飽 个鲍和烷基具有 88463 -19- 200423960 或多個雙鍵及/或一或多個參键。較佳不飽和烷基具有一或 兩個雙鍵或一個參鍵，更佳為一個雙鍵。烷基鏈可為未經 取代，或被1至4個取代基取代。較佳烷基為未經取代。較 佳經取代燒基為單_、二_或三取代。較佳燒基取代基包括 鹵基、函烷基、羥基、芳基（例如苯基、甲苯基、烷氧基苯 基、烷氧羰基苯基、齒苯基）' 雜環基及雜芳基。 π烯基π與π炔基”術語係指在長度及可能之取代上類似上 述烷基，但個別含有至少一個雙键或參鍵之不飽和脂族基 團。當不另外指出時，烯基與決基術語較佳係個別指低碳 晞基與低碳炔基。當烷基一詞伴隨著烯基與炔基術語存在 於清單中時，烷基一詞係指排除烯基與炔基之飽和烷基。 於本文中使用之”烷氧基團，，與，，烷氧基”術語，係指燒 基。代表性烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、第三-丁 氧基等。酸為藉由氧以共價連結之兩個烴。因此，賦與 烴成為醚之烴取代基，可為烷氧基或另一種部份基團，譬 如芳基、雜芳基…α雜烷基、·〇_芳烷基、·〇_雜芳烷基 、-〇-碳環脂族或雜環脂族。 ’’烷硫基”一詞係指各烷基。代表性烷硫基包括甲硫基、乙 硫基等。”硫醚”係指結合至兩個烴取代基之硫原子，例如 其中氧被硫置換之醚。因此，於碳原子上之硫醚取代基， 係指烴取代之硫原子取代基，譬如烷硫基或芳硫基等。 於本文中使用之”芳烷基”一詞，係指被芳基取代之烷基。 ”芳基環”係指芳族烴環系統。芳族環係為單環狀或稠合雙 環狀環系統，譬如苯基、莕基等。單環狀芳族環含有約5至 88463 -20- 423960 較佳為5至7個碳原子 ’且最佳為5至6磁原
代基包括低碳烷基、氰基、_基及齒烷基。 约10個碳原子，較佳為5至 子在環中。 個碳原子在 只有一個環 環基。芳族 經取代。較 、雜烷基、 ’’碳環脂族環’’係指飽和或不飽和烴環。竣環脂族環不為芳 族。奴％脂族％為單環狀，或為經稠合、螺或橋接之雙環 狀裱系統。單環狀碳環脂族環含有約4至約1〇個碳原子，較 佳為4至7個碳原子，且最佳為5至6個碳原子在環中。雙環 狀碳環脂族環含有8至12個碳原子，較佳為9至1〇個碳^子 在環中。碳環脂族環可為未經取代，或被1至4個取代基在 環上經取代。較佳碳環脂族環取代基包括！|基、氰基、燒 基、雜烷基、_烷基、苯基、苯氧基或其任何組合。更佳 取代基包括iS基與_纪基。較佳碳環脂族環包括環戊基、 環己基、稼己稀基、環庚基及環辛基。更佳碳環脂族環包 括環己基、環庚基及環辛基。 ’’藏基π 一詞係為技藝上所明瞭，且包括譬如可以下列通式 表示之部份基團· 88463
21 200423960 其中X為一個键結或表示氧或硫，且& ^表示氫、烴取代基 或藥學上可接受之鹽，Ru，表示氫或烴取代基。在X為氧， 且Ru或Ri i，不為氫之情沉下，此化學式表示”酯"。在χ為氧 ，而Rl 1係如上文定義之情況下，此部份基團於本文中係稱 為羧基’且特別是當心i為氫時，此化學式表示”羧酸”。在 X為氧’且Ri i為氫之情沉下，此化學式表示”甲酸酯”。一 般而s ’在上式之氧原子被疏置換之情況下，此化學式表 示”硫代羰基"。在X為硫，且Rll或Rll，不為氫之情況下，此 化學式表7F ’’硫酯”。在X為硫，且Rl丨為氫之情況下，此化 學式表示”硫代羧酸"。在X為硫，且Ru，為氫之情況下，此 化學式表tf ’’硫代甲酸酯"。另一方面，在χ為一個鍵結， 不為氫’而羰基係結合至烴之情況下，上式表示，f酮,，基。 在X為一個鍵結，Ru為氫，而羰基係結合至烴之情況下， 上式表示’’醛，，或”甲醯”。
Ci 元基’為具有i個成員原子之燒基鏈。例如，燒基本 有四個碳成員原子。C4烷基可為飽和或不飽和，具有一或 兩個雙鍵（順式或反式）或一個參鍵。較佳C4烷基係為飽和 。較佳不飽和C4烷基具有一個雙鍵。C4烷基可為未經取代 ，或被一或兩個取代基取代。較佳取代基包括低碳烷基、 低碳雜燒基、氰基、自基及!|燒基。 鹵素’f係指氟基、氯基、溴基或碘基取代基。較佳函基為 氟基、氯基及溴基；更佳為氯基與氟基。 ”鹵烷基”係指直鏈、分枝狀或環狀烴，被一或多個卣基取 代基取代。較佳鹵烷基為C1-C12 ;更佳為C1<：6 ;又更佳為 88463 -22- 200423960 C3。較佳鹵基取代基為氟基與氯基。最佳鹵烷基為三氟甲 基。 π雜烷基”為碳原子與至少一個雜原子之飽和或不飽和鏈， 其中沒有兩個雜原子是相鄰的。雜烷基鏈含有1至18成員原 子（碳與雜原子）在此鏈中，較佳為1至12，更佳為1至6，又 更佳1至4個。雜燒基鏈可為直鏈或分枝狀。較佳分枝狀雜 烷基具有一或兩個分枝，較佳為一個分枝。較佳雜烷基為 飽和。不飽和雜烷基具有一或多個雙鍵及/或一或多個參鍵 。較佳不飽和雜烷基具有一或兩個雙鍵或一個參鍵，更佳 為一個雙鍵。雜烷基鏈可為未經取代或被1至約4個取代基 取代’除非另有指明。較佳雜烷基為未經取代。較佳雜烷 基取代基包括自基、芳基（例如苯基、甲苯基、烷氧基苯基 、烷氧羧基苯基' 苯基）、雜環基、雜芳基。例如，被下 列取代基取代之烷基鏈係為雜烷基：烷氧基（例如甲氧基、 乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基）、芳氧基（例如苯氧基 、氯基苯氧基、甲苯氧基、甲氧基苯氧基、苄氧基、烷氧 羰基苯氧基、醯氧基苯氧基）、醯氧基（例如丙醯氧基、苯 甲醯氧基、乙醯氧基）、胺甲醯基氧基、羧基、巯基、烷硫 基、醯基硫基、芳基硫基（例如苯硫基、氯苯硫基、烷基苯 基硫基、烷氧基苯硫基、苄硫基、烷氧羰基苯硫基）、胺基 (例如胺基、單-與二-C1-C3烷胺基、甲基苯基胺基、甲芊基 胺基、C1-C3烷基醯胺基、胺甲醯基、脲基、胍基）。 ’’雜原子”係指多價非碳原子，譬如硼、磷、矽、氮、硫或 氧原子，較佳為氮、硫或氧原子。含有超過一個雜原子之 88463 -23- 200423960 基團可含有不同雜原子。 淖万基％係指芳族環系統，含有碳及1至約4個雜原子 在％中^万族每係為單環狀或稠合f €狀if H I p 狀雜芳族環含有％ $ s μ ! Λ μ 士 e f ^ 口 ,、，々5 土約；U)個成貝原子（碳與雜原子），較佳 為5至7、，。且最佳為5至6個在環中。雙環狀雜芳族環含^ 至12個成員原子’較佳為9或1〇個成員原子在環中。，，雜* 基”-詞亦包括雙環狀環系統，其中只有一個環為芳族：： 如另一個環為環燒基、環烯基或雜環基。雜芳族環可為未 :耳代或被1 土约4個取代基在環上經取代。較佳雜芳族 %取代基包括鹵基、氰基、低碳烷基、雜烷基、鹵烷基、 苯基、苯氧基或其任何組合。較佳雜芳族環包括遠吩基、 樹…基，基"票呤基”密淀基”比淀基及咬 喃基。更佳雜芳族環包括ρ塞吩基、咬喃基及峨唉基。 雜衣I曰狹％為非方族飽和或不飽和環，含有碳及1至約 4個雜原子在環中，其中沒有兩個雜原子在環中係為相鄭的 ’且較佳為在環中連接至雜原子之礙亦未具有幾基、胺基 或瓜醇基連接至其上。雜環脂族環係為單環狀或為經稠合 或橋接之雙環狀環系統。單環狀雜環脂族環含有約4至約ι〇 ㈣員原子（碳與雜原子），較佳為4至7，且最佳為⑷個 成員原子在環中。f環雜環脂族環含有8至12個成員原子， 較佳為9iUG個成員原子在環中。雜環脂族環可為未經取代 或被1至，4 4個取代基在環上經取代。較佳雜環脂族環取 代“括齒基、氰基、低碳烷基、雜烷基、齒烷基、苯基 、苯氧基或其任何组合。更佳取代基包括齒基與齒烷基。 88463 -24- 200423960 _ %基包括例如嘍吩”塞E、呋喃、哌喃、異笨并呋喃、 、黃嘻呤素 '朴塞”比咯、咪峻、吡唑、異嘧吐、 兴％唑”比啶、吡啩、嘧啶、嗒畊 '吲啩、異吲哚 、w唑、嘌呤、喹畊、異喹啉、乙内醯脲、喝唑啉、二氫 咪唑三酮、三唑啉酉同"查啉、呔畊、莕啶、喹呤啉”奎： 啉、嗜啉，、叶♦”卡啉、菲咬，、啡啉、啡啤 、、t中H塞啡、咬咕、啡十井、四氯吨洛、氧伍園、 &伍圜、气唑、六氫吡哫、六氫吡畊、嗎福啉、内酯類、 内醒胺類，譬如一氮四圜g同與四氫峨哈酮，沙、沙 同（sultone)等。較佳雜環脂族環包括六氫吡畊 、四氯咬喃基、四讓基及—雜環 環。 π羥基’’ 一詞係意謂_〇H。 、低蛟烷基”係指烷基鏈，包含丨至5個，較佳為丨至4個碳 成員原子，更佳為1或2個碳成員原子。低碳烷基可為飽和 或不飽和。較佳低碳烷基為飽和。低碳烷基可為未經取代 ，或被一或約兩個取代基取代。於低碳烷基上之較佳取代 基，包括氰基、自基、三氟甲基、胺基及羥基。在整個申 μ术中，較佳烷基為低碳烷基。在較佳具體實施例中，於 本又中被稱為烷基之取代基係為低碳烷基。同樣地，，，低碳 烯基π與”低碳炔基”具有類似鏈長。 ”低碳雜烷基’’係指雜烷基鏈，包含丨至4個，較佳為丨至3 個成員原子，更佳為1至2個成員原子。低碳雜烷基含有一 或兩個非相鄰雜原子成員原子。較佳低碳雜烷基含有一個 88463 -25- 200423960 雜原子成員原子。低碳雜烷基可為飽和或不飽和。較佳低 硬雜统基為飽和。低碳雜烷基可為未經取代，或被一或約 兩個取代基取代。於低碳雜烷基上之較佳取代基，包括氰 基、函基、三氟甲基及羥基。 ”以1雜烷基”為具有丨個成員原子之雜烷基鏈。例如，m4雜 烷基含有一或兩個非相鄰雜原子成員原子。含有丨個雜原子 成員原子之M4雜烷基可為飽和或不飽和，具有一個雙鍵（順 式或反式）或一個參鍵。含有2個雜原子成員原子之較佳M4 雜烷基係為飽和。較佳不飽和M4雜烷基具有一個雙鍵。M4 雜烷基可為未經取代，或被一或兩個取代基取代。較佳取 代基田包―括低碳垸基、低碳雜燒基、氰基、商基及㈣基。 Π異氰酸酯"係指基團-NCO。 成員原子係指多價原子（例如c、〇、Ν或s原子）在鏈或 環：統中’其係構成該鏈或環之一部份。例如，在甲紛中 、’、個碳原？係為環之成員^?，而氧原子及甲基取代基 之碳原子不為環之成員原子。 =中使用之”確基，，-詞，係意謂-N〇2-。 、 可接又之鹽係指在任何酸性（例如 團上形成之陽離子鹽，或在任何驗性（例如胺基或狐 ::團上形成〈陰離子鹽。此種鹽係為此項技藝中所習知 八2例如世界專利公報87/05297, Johnston等人，1987年9月11 #、、、彳於本文供參考。Λ種鹽係藉-般熟諳此藝者已 、口 <万法製成。應明瞭的是，孰練枯餘可处▲、i + 士 種鹽勝 ^疋祕技師可&較優先使用- ，以提供經改良之溶解度、安定性、調配 88463 • 26 - 200423960 簡易性、價格等。此種鹽之測定與最佳化係在熟練技師實 務之la圍内。較佳陽離子包括鹼金屬（譬如鈉與鉀）與鹼土 金屬（譬如鎂與鈣），及有機陽離子，譬如三甲基銨、四丁 基銨等。較佳陰離子包括鹵根（譬如氯根）、磺酸根、羧酸 根、麟酸根I。明顯地意欲涵蓋在此種冑Θ者係為加成鹽 ，其可提供一個其中曾經沒有之光學中心。例如，對掌性 酒石酸鹽可製自本發明化合物。此定義包括此種對掌性鹽。 ，’苯基”為六員單環狀芳族環，其可以或可以不被1至5個 取代基取代。取代基可位於苯環上之鄰、間或對位或其任 何組合。較佳苯基取代基包括：圏基、氰基、低碳烷基、 雜烷基、iS烷基、苯基、苯氧基或其任何組合。在苯環上 之更佳取代基包括南基與#烷基。最佳取代基為函基。 ”多環基"與”多環狀基團，，術語係指兩個或多個環（例如環 烷基、環烯基、雜芳基、芳基及/或雜環基），其中一個環 之兩個或多個成員原子係為第二個環之成員原子。經過非 相鄰原子接合之環係被稱為”橋接，，環，而經過相鄰原子接 合之環係為”稠合環π。 ’’小的有機分子π —詞係指小於約25〇〇 amu，較佳係小於 1500 amu之有機化合物。此術語係涵蓋大部份不為蛋白質或 核酸之醫藥。 π氫硫基'’一闲係意渭-SH，而’’磺醯基”一詞係意謂·。 於小的有機分子上之，’取代”或，，取代基”，一般而言係指 結合至氫以外之部份基團之多價原子上之位置，例如鏈或 環之成員原子除外之鏈或環上之位置。此種部份基團包括 88463 -27- 200423960 本文中所定義者，及其他如在此項技藝中所已知者，例如 鹵素、烷基 '烯基、炔基、疊氮化物、函烷基、羥基、羰 基（譬如羧基、烷氧羰基、甲醯基、酮或醯基）、硫代羰基（ 譬如硫酯、硫代醋酸酯或硫代甲酸酯）、烷氧基、磷醯基、 膦酸酯、次膦酸酯、胺 '醯胺、脒、亞胺、氰基、硝某、 疊氮基、氫硫基、烷硫基、硫酸酯、磺酸酯、胺磺醯基、 磺醯胺基、磺醯基、矽烷基、醚、環烷基、雜環基、雜烷 基、雜缔基與雜炔基、雜芳烷基、芳烷基、芳基或雜芳基 。熟諳此藝者應明瞭的是，某些取代基譬如芳基、雜芳基 、多環基、燒氧基、烷胺基、烷基、環烷基、雜環基、缔 基、炔基、雖烷基、雜烯基及雜炔基，若適當則本身可經 取代。本發明並非意欲以任何方式受限於有機化合物之可 容許取代基。應明瞭的是，”取代”或，，被…取代”所包括之隱 含附帶條件是，此種取代係根據經取代原子與取代基之所 允許價鍵，且此取代會造成安定化合物，例如其不會自發 性地進行轉變，譬如藉由重排、環化、脫除、水解等。 於本文中使用之各措辭之定義，例如烷基、m、n等，當 其在任何結構中出現超過一次時，係意欲與其在相同結構 中別處之定義無關。 縮寫Me、Et、Ph、Tf、Nf、Ts及Ms係個別表示甲某、乙 基、苯基、三氟甲燒續醯基、九氟丁境績醯基、對-甲艾石菩 醒基及甲燒磺醯基。由一般熟諳此藝之有機化學師所利用 之較概括性縮寫清單，係出現在有機化學期刊各卷之.第一 個議題中；此清單典型上係呈現在表中，其標題為瘦 88463 -28 - 200423960 寫清單。被包含在該清單中之縮寫，及由一般熟諳此藝之 有機化學師所利用之所有縮寫，均據此併於本文供參考。 鄰位、間位及對位之術語係個別應用於1，2-、1，3-及1，4-二 取代苯類。例如，名稱1，2-二甲苯與鄰位-二甲苯係為同義。 三氟甲燒磺酿基（triflyl)、甲苯續驢基（tosyl)、甲燒續驢基(mesyl) 及九氟燒續醯基（nonaflyl)之術語，係為技藝上所明瞭，且係 個別指三氟甲烷磺醯基、對-甲苯磺醯基、甲烷磺醯基及九 氟丁垸績酿基。三氟甲燒續酸酉旨（triflate)、甲苯績酸酉旨（tosylate) 、甲燒續酸酯（mesylate)及九氟燒續酸酯（nonaflate)之術語，係 為技藝上所明瞭，且係個別指三氟甲烷磺酸酯、對-甲苯磺 酸酯、甲烷磺酸酯及九氟丁烷磺酸酯官能基，及含有該基 團之分子。 於本文中使用之”保護基”措辭，係意謂暫時取代基，其係 保護潛在反應性官能基，免於不期望之化學轉變。此種保 護基之實例個別包括獲酸之酯類、醇類之碎燒基醚類及酸 類與酮類之縮醛與縮酮。保護基化學之領域已被回顧 (Greene，T.W·; Wuts，P.G.M·#屬合竑之获護差，第 2版；Wiley-New York， 1991 ; 及 Kocienski，P.J.获護羞，Georg Thieme Verlag ·· New York，1994) 〇 n前體藥物n —詞係意欲涵蓋會在生理學條件下被轉化成本 發明治療活性劑之化合物。一種製造前體藥物之常用方法 ，係包括經選擇之部份基團，譬如酯類或縮酮，其係在生 理學條件下水解以顯現出所要之分子。在其他具體實施例 中，前體藥物係藉由宿主動物之酵素活性而被轉化。 88463 -29- 200423960
發明之目的而言，化學元素係根據元素週期表，CAS ’化學與物理手冊，第67版，聰_87，内部封面而確認。亦 广：明之目的而言’ ”烴”—詞係意欲包括具有至少一個 人:氫鍵結〈所有允許之化合物或部份基團。在廣義方面， ί =烴類包括非環狀與環狀、分枝狀與未分枝、碳環族 '衣族^族與非芳族有機化合物’丨可經取代或未經 取代。 化合物之所意欲涵蓋之相當物包括其他方面與其相應 物’且其具有相同有用性質中取代基之一或多 —間易：型係被製成，㈤不會不利地影嚮化合物之功效。 :般：言’本發明化合物可藉由一般反應圖式中所示之方 “如下又所述者，或藉由其修正法，使用易於取得 物質、試劑及習用合成程序製成。在此等反應中， 耶可利用本身為已知，但未在此處提及之變型。 方法與組合物之舉例應用 根據本發明《治療組合物含有治療劑與本發明之材料，譬 :以％糊精為基質之材料。治療劑可為任何合成或天然生 =物活性治療劑，包括此項技藝中已知者。適當治療 Μ <貫例包括但不限於浐 , 於抗生素、類固醇、多核苷酸（例如基 組麵、雜、卿Α及反有意義寡核芬酸）、質粒、蛋 :質 '多肽 '肽片段、小分子(例如多克索紅菌素)及其他 生物活性巨分子，你|力疋A〒 蛋白貝舁酵素。在某些具體實施例 :’此藥劑可伴隨著傳輸系統’例如核酸可被包含在病毒 中’或_可被攜帶在微脂粒或微球體内’且傳輸系統係 88463 -30- 200423960 被分散於該材料中。 一本發月〈治療組合物可藉此項技藝中已知之方式製成。於 美所較佳具"貝施例中，本發明之材料，譬如以環糊精為 土貝 < 材料，係與如上述之治療劑混合或於其存在下製備 根據本發明，此材料係充作治療劑之傳輸媒劑。治療劑（ ,^佐刎）與材料可藉熟諳此藝者明瞭之方式缔合，例如 ，一人互作用、氫鍵、疏水性交互作用、具有包藏宿主之 匕藏奴口物〈形成或共價連接至聚合體，較佳係藉由可逆 連接，譬如酿或碳酸@旨。在某些具體實施例中，治療劑及/ ，a 可以共饧方式連接，視情況經過可逆鏈結，至會與 包藏宿主例如環糊精形成包藏複合物之部份基團。缔：程 卞 移動1'生研九、光散射、電子顯微鏡術，而係依治療 文又作為一種傳輸模式，例如含有本發明材料盘DNA ，本發明㈣組合物’可用以幫助轉移感染，意即麵之 12收至動物（例如人類）細胞中（B⑽以f，〇·國家科學院會刊，％ 97 7301 (1995)，Zanta 等人，生物共軛化學8: 839_844 (1997))。 ^ 、某二具把貝犯例中，本發明之治療組合物係呈適合注射 形式，而在其他具體實施例中，此組合物係適合局部塗敷 。本發明治療組合物之其他投藥模式，依治療組合物之狀 態而定，係、包括此項技藝中已知之方法，譬如但不限於口 服投藥、非經腸、靜脈内、鼻内、眼球内、顧内或腹膜腔 内注射。 依所使用治療劑之類型而定，本發明之治療組合物可使用 88463 -31 - 200423960 於多種治療方法（例如DNA疫苗、抗生素、抗病毒劑）中，用 於治療遣傳或後天病症，例如膽囊纖維變性、$歇氏病 肌肉營養不良、廳、癌症（例如多發性骨髓瘤、白血病、 黑色素瘤及卵巢癌）、心與血管症狀（例如進行性心臟衰竭 、再狹专及血友病)及神經病症狀(例如腦部創傷卜在其他 具體實施例中，主題組合物可用 ，,、 、 、口瀠俶口，譬如切開術 、糖尿病潰癌：、褥瘡、裂傷、灼傷等。 治療劑可涵蓋從核酸（譬如载體、職構造物或反有音至 隸菩酸）或蛋白質至小的有機分子之範圍。在某些具體膏 她例中，藥劑為抗癌(譬如喜樹鹼或相關衍生物）、抗真菌 、=細菌、抗霉菌或抗病毒、冶療劑。在某些具體實施例中 实劑為受體催動劑。在某4b且許杳^ ^丨士 .^ Λ她例中，藥劑為受體 广㈣。在某些具體實施财’治療劑為蛋白酶抑制劑。 再者：本發明之聚合體可含有—種治療劑或可含有超過一 台療劑。例# ’兩種或多種不同癌症藥物，或—種癌症 樂物與一種免疫抑制劑，或一 被加入組合物中。 種“素與-種消炎劑’可 依所使用治療劑之類型而定，本發明之治療組合物可使用 於夕種治療方法(例如脆疫苗、抗生素、抗病毒劑)中，用 於’台療遺傳或後天病症，例如膽囊纖維變性、^ 、、 肌肉營養不良、AIDS、癌症（例如容 ^ 病 發性骨髓瘤、白血病、 …色素瘤及印巢癌）、心與血管症狀（例如進行性心臟衰竭 再狹乍及血友病）及神經病症狀（例如腦部創傷）。 在某些特定具體實施例中，本發明组合物可用以治療傷口 88463 -32- 200423960 (意即促進傷口癒合）。雖然單獨之基質可作為傷口密封劑 使用，但此種組合物可包含例如PDGF-B或用於在標的細胞 中產生PDGF-B之表現載體，細胞增生或分化之刺激子，幹 細胞或原始粒子細胞，及/或其他已知在促進癒合、抑制感 染等有效之化合物。 在其他具體實施例中，本發明組合物可用於癌症之治療。 此種組合物可包含化學治療劑、血管生成抑制劑、細胞增 生抑制劑、放射敏化劑及/或任何其他可用於癌症治療之藥 劑。 例如，可被調配在主題組合物中用於癌症治療之化合物， 包括：胺基導眠能、阿姆薩素（amsacrine)、安那史唑（anastrozole) 、天冬醯胺酶、beg、二卡如醯胺Oicalutamide)、博來霉素、 布捨瑞林(buserelin)、白血福恩（busulfan)、康波謝辛（campothecin) 、卡配西塔賓（capecitabine)、破氯胺始、亞硝基脈氮芥、苯丁 酸氮芥（chlorambucil)、順氯胺鉑、克拉利賓（cladribine)、可若宗 酸鹽（clodronate)、秋水仙素、環磷醯胺、環丙氯地孕酮、阿 糖胞苷、氮烯咪胺、達克汀霉素、道諾紅菌素、二晞青春 素、二乙基己稀雌驗、多謝他索（docetaxel)、多克索紅菌素、 表紅菌素、雌二醇、雌氮芥（estramustine)、衣托糖誓（etoposide) 、約克美斯燒（exemestane)、非葛拉亭（filgrastim)、弗達拉賓 (fludarabine)、氟氫化可體松、氟脲嘧啶、氟羥甲睪酮 '弗如 醯胺（flutamide)、真西塔賓（gemcitabine)、金雀異黃素、郭捨瑞 林（goserelin)、羥基脲、依達紅菌素、依發斯醯胺（ifosfamide)、 愛馬汀尼伯（Imatinib)、干擾素、伊利諾提肯（irinotecan)、伊洛 88463 -33 - 200423960 語提肯（irinotecan)、列特羅峻（letrozole)、甲龜四氫葉酸、留普 内S旨（leuprolide)、左旋四咪α坐、環己亞硝脲、氮芥、甲孕酮 、甲地孕酮、苯丙胺酸氮芥、巯基嘌呤、巯乙磺酸鈉、胺 甲噪呤、絲裂霉素、米托坦、絲裂黃艱I (mitoxantrone)、尼如 酉蠢胺（nilutamide)、諾可達嗤（nocodazole)、八端歐肽（octreotide)、 草酸銷、培克里他索（paclitaxel)、巴密宗酸鹽（pamidronate)、戊 托制菌素(pentostatin)、普利卡霉素、波非莫（porfimer)、甲基芊 肼、瑞提崔斯得(raltitrexed)、利圖西馬伯（rituximab)、鏈霉亞硝 基素、蘇拉明、他摩西吩（tamoxifen)、天莫洛驢胺（temozolomide) 、天尼#、睪酮、競基鳥嗓呤、p塞替♦ (thiotepa)、二氯化二 環戊二烯欽、拓波提肯（topotecan)、搓史圖諸馬伯（trastuzumab) 、崔替諾因（tretinoin)、長春花鹼、長春新鹼、長春花素及威 諾賓（vinorelbine) 〇 此等化學治療劑可藉由其作用機制被分類成例如下列組群 :抗新陳代謝劑/抗癌劑，譬如嘧啶類似物（5-氟尿嘧啶、5-氟脫氧尿答、卡配西塔賓（capecitabine)、真西塔賓（gemcitabine) 及阿糖胞甞）與嘌呤類似物，葉酸鹽拮抗劑及相關抑制劑（ 黢基嗓吟、競基鳥嘌呤、戊托制菌素（pentostatin)及2-氯基脫 氧腺# (克拉利賓（cladribine)));抗增生/抗有絲分裂劑，包括 天然產物，譬如長春花植物驗（長春花驗、長春新驗及威諾 賓（vinorelbine))，微管瓦解劑，譬如紅豆杉燒（培克里他索 (paclitaxel)、多謝他索（docetaxel))、長春新驗（vincristin)、長春鹼 、据可達唆(nocodazole)、艾波希 I同（Epothilone)及那威賓（navelbine)) 、表二鬼臼素（天尼苷）、DNA傷害劑（放線菌素、阿姆薩素 88463 -34- 200423960 (amsacrine)、蒽環素、博來霉素、白血福恩（busuifan)、喜樹驗 、碳氯胺舶、苯丁酸氮芥（chlorambucil)、順氯胺鉑、環磷醯 胺、環磷醯胺（cytoxan)、達克汀霉素、道諾紅菌素、多克索 紅菌素、表紅菌素、六甲基三聚氰胺草酸鉑、異環磷醯胺 、木丙胺酸氮介、莫氯塔明（merchl〇rehtamine)、絲裂霉素、絲 裂黃酮（mitoxantrone)、亞硝基脲、普利卡霉素、甲基苄肼、 天尼苷、噻替派及衣托糖:y： (etoposide)(vpi6));抗生素，譬如 達克汀霉素（放線菌素D)、道諾紅菌素、多克索紅菌素（亞 里亞莓素）、依達紅囷素、慈環素、絲裂黃嗣 、博來霉素、普利卡霉素（光神霉素）及絲裂霉素；酵素 天冬醯胺酶’其係系統性地使L-天冬素生物代謝，及剝奪 未具有合成其自有天冬素能力之細胞）；破壞血小板劑；抗 增生/抗有絲分裂烷基化劑，譬如氮芥末類（氮芥、環磷醯 胺與類似物、苯丙胺酸氮芥、苯丁酸氮芥（chlorambucil))、一 鼠參S與甲基二聚氣胺（六甲三聚氯胺與p塞替喊（thi〇tepa))、 烷基磺酸鹽-白血福恩（busulfan)、亞硝基脲（卡氮芥（BCNU)與 類似物、鏈霉亞硝基素）、卓p井（trazenes)-達卡巴寧 (dacarbazinine)(DTIC);抗增生/抗有絲分裂抗代謝物，譬如葉 酸類似物（胺甲喋呤）；鉑配位錯合物（順氯胺鉑、碳氯胺鉑） 、甲基苄肼、羥基脲、米托坦、胺基導眠能；激素、激素 類似物（雌激素、他摩西吩（tamoxifen)、郭捨瑞林（goserelin)、 二卡如醯胺（bicalutamide)、尼如醯胺（niiutamide))及芳香酶抑制 劑（列特羅唑（letrozole)、安那史唑（姐批加四⑹）；抗凝血劑（肝素 、合成肝素鹽及其他凝血酶抑制劑）；纖維蛋白溶解劑（譬如 88463 -35- 200423960 組織血纖維蛋白溶酶原活化劑、鏈激酶及尿激酶）、阿斯匹 靈、COX-2抑制劑、二吡達莫（dipyridamole)、替克羅匹定（ticlopidine) 、克羅匹多葛瑞（clopidogrel)、亞伯西瑪伯（abciximab);抗潛移 劑；抗分泌劑（布瑞維定(breveldin));免疫抑制（環孢素、塔可 利馬斯（tacrolimus)(FK-506)、喜洛利莫斯（sirolimus)(雷帕霉素）、 硝基脒峻硫嘌呤、分枝酚酸莫非替（mycophenolate mofetil));抗 血管生成化合物（TNP-470、金雀異黃素）與生長因子抑制劑（ 血管内皮生長因子（VEGF)抑制劑、成纖維細胞生長因子（FGF) 抑制劑）；血管收縮素受體阻斷劑；氧化氮供體；反有意義 寡核穿酸；抗體（搓史圖諸馬伯（trastuzumab));細胞循環抑制 劑與分化謗發物（崔替語因（tretinoin)) ; mTOR抑制劑、拓樸異 構酶抑制劑（多克索紅菌素（亞德里亞霉素）、阿姆薩素 (amsacrine)、喜樹鹼、道諾紅菌素、達克汀霉素、約尼苷、 表紅菌素、衣托糖：y： (etoposide)、依達紅菌素與絲裂黃酮 (mitoxantrone)、拓波提肯（t〇p〇tecan)、伊利諾提肯（irinotecan))、 皮質類固醇（可體松、地塞米松、氫基可體松、甲基氫化潑 尼松、潑尼松及氫化潑尼松）；生長因子訊息轉導激酶抑制 劑，粒線體機能障礙謗發物與卡斯蛋白酶活化劑；染色質 瓦解劑。 根據本發明’治療方法係投予治療上有效量之本發明治療 組合物。治療上有效量，正如熟諳此藝者所明瞭，將以逐 一情況為基礎作決定。欲被考慮之因素，包括但不限於待 治療之病症，及患有該病症者之身體特徵。 本發明之另一項具體實施例為一種組合物，其含有至少一 88463 -36- 200423960 種具有農業利用性之生物活性化合物，及本發明之線性環 糊精改質之聚合體或線性氧化環糊精改質之聚合體。具農 業上生物活性之化合物包括此項技藝中已知者。例如，適 當農業上生物活性化合物包括但不限於殺真菌劑、除草劑 、殺昆蟲劑及殺霉菌劑。 IV、舉例之組合物 在某些具體實施例中，從屬之聚合體為線性含環糊精之聚 合體，例如聚合體主鏈包含環糊精部份基團。例如，聚合 體可為水溶性線性環糊精聚合體，其係經由提供至少一種 經改質以在正好兩個位置之每一個處帶有一個反應性位置 之環糊精衍生物，並使該環糊精衍生物與一種具有正好兩 個反應性部份基團而能夠與該反應性位置形成共價键之連 結劑，在促進該反應性位置與該反應性部份基團之反應， 以在連結劑與環糊精衍生物之間形成共價键之聚合條件下 反應而製成，其中係製成包含環糊精衍生物與連結劑之交 替單位之線性聚合體。多種適當聚合體係描述於美國專利 申請案20020151523與10/656,838中。或者，聚合體可為具有線 性聚合物主鏈之水溶性線性環糊精聚合體，該聚合體包含 多個經取代或未經取代之環糊精部份基團與連結基部份基 團在線性聚合體主鏈中，其中各環糊精部份基團，惟在聚 合體鏈末端之環糊精部份基團除外，係連接至兩個該連結 基部份基團，各連結基部份基團係以共價方式連結兩個環 糊精部份基團。在又另一項具體實施例中，聚合體為水溶 性線性環糊精聚合體，包含多個以共價方式藉由多個連結 88463 - 37 - 200423960 基部份基團連接在一起之環糊精部份基團，其中各環糊精 部份基團，惟在聚合體鏈末端之環糊精部份基團除外，係 連接至兩個連結基部份基團，以形成線性環糊精聚合體。 連結基可為次烷基鏈、聚乙二醇（PEG)鏈、聚琥珀酸酐、 聚麩胺酸、聚（乙烯亞胺）、寡醣、胺基酸鏈或任何其他適 當鏈結。在某些具體實施例中，連結基本身可在生理學條 件下安定，譬如次烷基鏈，或其可在生理學條件下分裂， 譬如藉由酵素（例如此鏈結含有肽順序，其係為肽酶之受質） ，或藉由水解作用（例如鏈結含有可水解基團，譬如酯或硫 代酯）。連結基可為生物學上不活性，譬如PEG、聚乙醇酸 或聚乳酸鏈，或可為生物學上活性，譬如寡-或多肽，其當 自部份基團分裂時，會結合受體，使酵素失活等等。生物 學上可相容及/或生物可侵蝕之各種寡聚合連結基是此項技 藝中已知的，且鏈結之選擇可影嚮材料之最終性質，譬如 當被植入時其是否為对久性，在植入後其是否會逐漸變形 或收縮，或是否其會逐漸降解並被身體吸收。連結基可藉 任何適當鍵結或官能基連接至部份基團，包括碳-碳鍵結、 酯類、醚類、醯胺類、胺類、碳酸酯類、胺基甲酸酯類、 磺醯胺類等。 在列舉之具體實施例中，用於形成此材料之環糊精聚合體 ，係為環糊精與聚乙二醇（peg)之共聚物。此種聚合體可藉 此項技藝中所習知之技術製成，譬如藉由下列反應式舉例 之反應：
SPA-PEG3400-SPA
PEG-CDP 88463 -38- 200423960 其中梯形體表示環糊精部份基團，如更詳細地於下文中所 述者，且η表示整數1至20，較佳為2至12。此聚合體可經改 質，例如藉由治療用部份基團之共價連接，例如經過可在 生理學條件下分裂之連結基。 在此種聚合體中，環糊精部份基團可表示共聚物重量之至 少2%，較佳為共聚物重量之至少5%或10%，或甚至多達20 %、40%、50%、60%、80% 或甚至 90%。 在某些具體實施例中，用於形成具有下式結構材料之環糊 精聚合體：
其中R對各存在處係獨立表示Η、低碳烷基、環糊精部份 基團或
m對各存在處係獨立表示整數2-10,000，較佳為10至5,000， 或100至1,000。此類型之適當聚合體係較詳細地討論於美國 專利申請案編號10/372,723與PCT申請案WO 03/072637中。 在某些具體實施例中，R表示環糊精部份基團，針對至少 約1%，更佳為至少約3%，而至高約5%、10%、20%、35% 或甚至50%之氮原子，如果沒有環糊精部份基團時，其係為 一級胺類（意即帶有兩個存在而表示Η之R)。 在某些具體實施例中，環糊精部份基團係構成至少約2% 88463 -39- 200423960 、现或4%重量比，至高達5%、7%或甚至娜重量比之環 糊精改質之聚合體。 在某些具體實施例中，於聚合體中之至少約2%、3%或4 %重量比’至高5%、7%或甚至1〇%之一氮參園亞單位，係 被環糊精部份基團改質。 帶有容易接受與環糊精部份基團之衍化作用之親核性胺基 取代基之聚（乙烯亞胺）之共聚物，亦可用以製備在本發明範 圍内之經環糊精改質之聚合體。 舉例之環糊精部份基團包括環狀結構，基本上包含6至9 個醣部份基團’譬如環糊精及經氧化之環糊精。環糊精部 份基團係視情況包含連結基部份基圏，其係、在環狀結構盘 聚合體主鏈之間形成共價鏈結，較佳係具有丨至如個原子在 此鏈中’譬如烷基鏈’包括二羧酸衍生物(譬如戊二酸衍生 物、琥踊酸衍生物等），及雜燒基鏈，譬如寡乙二醇鍵。環 糊精部份基團可進-步包含—或多個礙水化合物部份基: ’較佳為單、純 < 水化合物部份基_，譬如半乳糖，連接工 環狀核心，無論是直接（意即經由碳水化合物鏈結）或經= 連結基。 β %糊精為含有天然生成之仏㈩—哌喃葡糖單位在α_(ι，4)鏈結 中之環狀多醋。最常見之環糊精為（扑環糊精 '(外環㈣ 及(r)-環糊精，其個別含有六、七或八個哌喃葡糖單位。： 結構上，環糊精之環狀性質會形成花托或似甜甜圈之形狀 γ具有内部^性或疏水性孔穴，二級獲基位於環糊精花 托之一個側面上，而一級羥基位於另—側面上。因此， 88463 -40- 200423960
二級藉基位於其上之側面，比一級經基位於其上之側面， 具有較寬廣直徑。環糊精内部孔穴之疏水性質，允許加入 多種化合物（综合超分子化學，第3卷，J.L. Atwood等人編著， Pergamon 出版社（1996); 丁. Cserhati，分析生物化學，225: 328-332 (1995) ;Husain 等人，應用光譜學，46 : 652-658 (1992) ; FR 2 665 169)。關 於使聚合體改質之其他方法係揭示於Suh，J.與Noh，Y.， 5/〇(9巧.Mo/· CAem· Z故· 1998, 5, 1327-1330 中0 環糊精已被使用作為各種治療化合物之傳輸媒劑，其方式 是與可安裝至環糊精之疏水性腔穴中之各種藥物形成包藏 複合物，或經由與其他生物活性分子，譬如寡核苷酸及其 衍生物，形成非共價缔合複合物。例如，參閱美國專利4,727,064 、5,608,015、5,276,088及5,691，316。各種含環糊精聚合體及其 製備方法，亦為此項技藝中已知。综合超分子化學,第3卷， 88463 -41 - 200423960 J.L· Atwood等人編著，pergamon出版社（1996)。環糊精聚合體已 經由使環糊精或環糊精與其他碳水化合物之混合物，使用 聚合劑，例如環氧氯丙烷、二異氰酸酯、二環氧化物，進 行連結或交聯而被製成（不溶性環糊精聚合體珠粒， Chem. Abstr. 222444m，102 ·· 94 ; Zsadon 與 Fenyvesi，關於環糊精之第 一屆國際討論會，J. Szejtli編著，D. Reidel出版公司，Boston，第327-336 頁；Fenyvesi 等人，1979, Ann. Univ· Budapest, Chim.段落 15 : 1322 :及 Wiedenhof 等人，1969, Die Stirke 21 : 119-123)。此等聚合劑能 夠與碳6、2及3上之一級與二級羥基反應。經環糊精改質之 聚合體載劑可被偶合至生物辨識分子，以藥物傳輸至其作 用位置為標的。亦參閱美國專利案號6，180,739、5,981，740、 5,929，131、5,910,551及5,792,821 (揭示可聚合環糊精衍生物）， 6,048,736 (討論使用環糊精聚合體之藥物傳輸）（揭示可聚合環 糊精衍生物），5,856,416與5,593,768 (揭示帶有環糊精部份基團 之單體與聚合體），5,608,015 (揭示製備可聚合環糊精衍生物 之方法）及5,516,766 (描述環糊精聚合體之用途）。 交聯分子一般係包含兩個或多個部份基團，其係與環糊精 或另一種包藏宿主形成包藏複合物，此等部份基團係藉由 原子鏈以共價方式連結，該原子鏈允許部份基團被間隔分 開0.5至50毫微米，較佳係分開1至30毫微米。部份基團可選 自會與包藏宿主譬如環糊精形成包藏複合物之任何分子， 例如苯環、金剛烷多環、膽固醇、莕酚衍生物等。參閱， 例如 Szejtli，摩翁潜！真汔藏瘦合#; Akademiai Klado, Budapest， 1982 ;及 Bender 等人，環游潜必學，Springer-Verlag，Berlin，1978。環 88463 -42- 200423960 糊精能夠與一陣列有機分子形成包藏複合物，該有機分子 包括例如藥物、殺害劑及除草劑。參閱Tenjarla等人， 6W·, 87 : 425-429 (1998) ; Zughul 等人，P/zarm. Z)ev.及以⑽/·, 3 : 43-53 (1998);及 Albers 等人，CrzY. i?ev· 77^· Cam’w 办说，12 : 311-337 (1995)。在交聯分子中之部份基團可為相同或不同， 且可在單一物質中同時使用不同交聯分子。 在部份基團間之共價鏈結可為任何適當鏈結，譬如次烷基 鏈、聚乙二醇（PEG)鏈、聚（乙晞亞胺）、寡醣、胺基酸鏈或 任何其他適當鏈結。此鏈結可在生理學條件下安定，譬如 次燒基鏈，或其可在生理學條件下分裂，譬如藉由酵素（例 如鏈結含有肽順序，其係為肽酶之受質），或藉由水解作用 (例如鏈結含有可水解基團，譬如酯或硫酯）。此鏈結可為 生物學上不活性，譬如PEG、聚乙醇酸或聚乳酸鏈，或可為 生物學上活性，譬如寡-或多肽，當其自部份基團分裂時， 會結合受體，使酵素失活等。生物學上可相容及/或生物可 侵蝕之各種寡聚合鏈結，係為此項技藝中已知，且鏈結之 選擇可影嚮材料之最終性質，譬如當被植入時其是否為耐 久性，在植入後其是否會逐漸變形或收縮，或其是否會逐 漸降解並被身體吸收。連結基可藉任何適當鍵結或官能基 連接至部份基團，包括碳-碳鍵結、酯類、醚類、醯胺類、 胺類、碳酸酯類、胺基甲酸酯類、磺醯胺類等。 在一列舉具體實施例中，交聯分子包含部份基團，其係為 生物活性藥物，藉由鏈結接合，此鏈結係為生物活性，且 在生理學條件下水解。在植入後，鏈結係逐漸被分裂，釋 88463 -43 - 200423960 出活性藥物，並使材料之結構 繁八踢、、a . 〇 77降解。若支撐環糊精之 水口眩亚為生物可降解，則此材 μ 出被複合於其中之生物活性 夺、漸…慢慢地釋 並侦雜^ 表物。在此種具體實施例中， 用。 匕ΰ在材枓中，以獲得治療作 本發明之材料可進一步包含一 卞丨、 或夕種生物活性劑。此種藥 训π可與環糊精形成包藏複 ,^ ι口物，或可僅只是分散於材料 :“列〈藥劑包括核酸、病毒、多肽、多錯合體、醫藥 、小的有機分子、抗體或任何其他治療劑。 某…、月庄貝犯例中’王題組合物包含颜八1構造物，例 如使用RNA干擾物_邱以達成標的基因之減少。舰玉構造 物包含雙股驗，其可專一地阻斷標的基因之表現，且適合 使用王題組合物之傳輸，係提供於活體外或活體内抑 制基因表現之有用方法。觸構造物可包含無論是與標的 核酸順序相同或實質上相同之,嶋長伸縮物，或只與標的 核酸順序之—個區域相同或實質上相同之dsRNA短伸縮物。 視情況，職構造物係含有核苷酸順序，其係在細胞之 生理學條件下雜化至供欲被抑制基因（意即"標的”基因）用 之至少一部份轉錄本之核苷酸順序。此雙股RNA僅需 要足夠類似天然RNA，其具有媒介胃丨之能力。因此，本 發明具有能夠容許順序變型之優點，該順序變型可能被預 期係由於基因突變、品系同質異相或進化分歧。在標的順 序與RNAi構造物順序之間，所容許核甞酸失配之數目，係 在5個鹼基對中不超過丨，或在1〇個鹼基對中不超過1 ,或在 88463 -44- 200423960 20個鹼基對中不超過1，或在50個鹼基對中不超過1。在siRNA 複體中心之失配是最重要的，且基本上可廢除標的RNA之分 裂。對照上而言，在對標的RNA互補之siRNA股線之Y末端 處之核苷酸，對於標的識別之專一性，並無顯著貢獻。順 序同一性可藉由此項技藝中已知之順序比較與排列演算法 達最佳化（參閱Gribskov與Devereux，順序分析引物，Stockton出版 社，1991及其中引述之參考資料），並計算核：y：酸順序間之百 分比差異，例如藉由Smith-Waterman演算法，如在BESTFIT軟 體程式中所施行者，使用預設參數（例如Wisconsin大學基因 計算組群）。在抑制性RNA與部份標的基因之間，大於90% 順序同一性或甚至100%順序同一性，係為較佳。或者，RNA 之複體區域可於功能上被定義為能夠與一部份標的基因轉 錄本雜化之核苷酸順序（例如400 mM NaCl，40 mM PIPES pH 6.4, 1 mM EDTA，50°C或70°C雜化12-16小時；接著洗滌）。 雙股結構可藉由單一自身互補RNA股線或兩個互補RNA股 線形成。RNA複體形成可無論是在細胞内部或外部引發。RNA 可以每細胞允許傳輸至少一份複本之量引進。較高劑量（例 如每細胞至少5、10、100、500或1000份複本）之雙股物質， 可產生較有效抑制，而較低劑量亦可用於特定應用。抑制 係為順序專一性，因相應於RNA複體區域之核苷酸順序，係 為基因抑制之標的。 主題RNAi構造物可為’’小干擾性RNAf’或’’siRNA”。此等核酸 為約19-30個核苷酸長度，而又更佳為21-23個核苷酸長度。 應明瞭siRNA係添補核酸酶複合物，且導引此複合物至標的 88463 -45 - 200423960 mRNA，其方式是配對至專一順序。結果，標的mRNA係被 蛋白質複合物中之核酸酶降解。在一特定具體實施例中， 此21-23個核苷酸之siRNA分子係包含3’羥基。在某些具體實 施例中，siRNA構造物可經由較長雙股RNA之處理而產生， 例如於酵素切片劑存在下。於一項具體實施例中，係使用 蜂蠅屬活體外系統。在此具體實施例中，係將dsRNA與衍生 自蜂蠅屬胚胎之可溶性萃取物合併，藉以產生組合。此組 合係被保持在其中係將dsRNA處理成約21至約23個核苷酸之 RNA分子之條件下。siRNA分子可使用熟諳此藝者已知之多 種技術純化。例如，可使用凝膠電泳以純化siRNA。或者， 非變性方法，譬如非變性管柱層析，可用以純化siRNA。此 外，層析（例如尺寸排阻層析）、甘油梯度離心、使用抗體 之親和純化可用以純化siRNA。 RNAi構造物之製造可藉由化學合成方法或藉由重組核酸 技術進行。經處理細胞之内源RNA聚合酶可媒介活體内轉錄 ，或經無性繁殖之RNA聚合酶可用於活體外轉錄。RNAi構 造物可包括對無論是鱗酸鹽-糖主键或核菩之修正，例如降 低對細胞核酸酶之感受性、改進生物利用率、改進配方特 性及/或改變其他藥物動力學性質。例如，天然RN A之磷酸 二酯鏈結可被修正以包含至少一個氮或硫雜原子。於RNA結 構上之修正可被訂製，以允許專一基因抑制，同時避免對 dsRNA之一般回應。同樣地，鹼基可經修正，以阻斷腺苷脫 胺酶之活性。RNAi構造物可以酵素方式或藉由部份/全部 有機合成產生，任何經修正之核糖核苷酸可藉由活體外酵 88463 -46- 200423960 素或有機合成引進。以化學方式修正RNA分子之方法，可配 合調整以修正RNAi構造物（參閱，例如Heidenreich等人（1997) Nucleic Acids Res: 25 : 776-780 ; Wilson 等人（1994) J Mol Recog 7 ： 89-98 ;Chen 等人 Π 995) Nucleic Acids Res 23 : 2661-2668 ; Hirschbein 等人 (1997) Antisense Nucleic Acid Dmg Dev 7 ·· 55-61)。僅只是說明，RNAi 構造物之主鏈可以偶磷基硫代酸酯、磷醯胺酸酯、磷醯基 二硫代酸酯、嵌合膦酸甲酯-磷酸二酯、肽核酸，5-丙炔基-嘧啶，其含有寡聚物或糖變性物（例如21-取代之核糖核苷、a-組態）進行修正。 在一些情況中，siRNA分子之至少一個股具有3’懸空物， 約1至約6個核苷酸長度，惟可為2至4個核苷酸長度。更佳 情況是，此3’懸空物係為1-3個核苷酸長度。在某些具體實 施例中，一條3’懸空物具有股線，而另一條股線係為鈍端或 亦具有懸空物。對各股線，懸空物之長度可為相同或不同 。為進一步加強siRNA之安定性，3,懸空物可被安定化以防 止降解。於一項具體實施例中，RN A係藉由加入嘌呤核苷酸 ，譬如腺苷或鳥嘌呤核糖#核甞酸，而被安定化。或者’ 喊咬核答酸被修正之類似物之取代，例如脉喊淀核芬核嘗 酸T懸空物被2’-脫氧胸腺核苷之取代係被容許，而不會影嚮 RNAi之效率。τ羥基不存在會顯著地加強懸空物在組織培養 基中之核酸酶抵抗性，且在活體内可為有利的。 RNAi構造物亦可呈長雙股RNA形式。在某些具體實施例中 ，RNAi構造物為至少25、50、100、200、300或400個鹼基。 在某些具體實施例中，RNAi構造物為400-800個鹼基長度。 88463 -47- 200423960 雙股RNA係於胞内被消化，例如在細胞中產生siRNA順序。 但是，長雙股RNA於活體内之利用，未必是實用的，推測上 係由於可能因與順序無關之dsRNA回應所造成之有害作用所 致。在此種具體實施例中，利用會降低干擾素或PKR作用之 局部傳輸系統及/或藥劑，係為較佳的。 或者，RNAi構造物係呈髮夾結構（稱為髮夾RNA)形式。髮 夹RNA可以外源方式合成，或可經由從RNA聚合酶III啟動子 於活體内轉錄而形成。製造與使用此種用於使基因在哺乳 動物細胞中不活動之髮夾RNA之實例，係描述於例如Paddison 等人，Genes Dev. 2002, 16 : 948-58 ; McCaffrey 等人，Nature. 2002, 418 :38-9; McManus 等人，RNA. 2002, 8 ·· 842-50; Yu 等人，Proc Natl Acad Sd USA· 2002, 99 ·· 6047-52)。此種髮夾RNA較佳係被設計在細 胞或動物中，以確保連續與安定壓抑所要之基因。此項技 藝中已知siRNA可經由在細胞中處理髮夾RNA而產生。 PCT申請案WO 01/77350描述舉例之載體，用於轉基因之雙 方向性轉錄，而產生相同轉基因在真核細胞中之有意義與 反有意義RNA轉錄本。因此，在某些具體實施例中，對最終 傳輸而言，主題組合物包含具有下述獨特特徵之重組載體 :其包含病毒複製子，具有兩個重疊轉錄單位，以相反取 向排列，且與吾人感興趣之RNAi構造物用之轉基因侧面相 接，其中兩個重疊轉錄單位係產生有意義與反有意義RNA轉 錄本，來自宿主細胞中之相同轉基因片段。 V業務方法 本發明之其他方面係提供進行業務之某些方法。特定言之 88463 -48 - 200423960 月匕夠獲得新穎治療組合物及其
三者。 ，實施本發明之方法可使得 經改良之配方。此技術步驟 時，係提供進行醫藥或鲂任 因此，在某些具體實施例中，本發明係提供進行醫藥業務 之方法，其包括： a· 製造配方或套件，並会j太+ 士 π w τ /、匕s本又中所揭示任何組合物之 醫藥組合物；與 b.對保健提供者推銷使用此配方或套件在疾病或病症治 療上之利益。 在其他具體貫施例中，太於日曰/ 』r尽嗌明係揭不進行醫藥業務之方法 ’其包括： a·提供配銷、網路以銷售纟文中所揭示任冑、組合物之醫藥 組合物；與 - b·對病患或醫師提供關於使用此製劑於疾病或病症治療 上之說明書資料。 、 在某些具體實施例中，本發明係提供進行醫藥業務之方法 ’其包括：
88463 -49- 200423960 方與劑量； b.進行步驟⑻中所確認配方之治療剖析，關於在動物中 之功效與毒性；及 C，提供配銷網路，以銷售步驟（b)中被確認為具有可接受 治療形態之一或多種製劑。 此具體實施例之另一個步驟包括提供銷售群，以推銷此製 劑至保健提供者。 於又其他具體實施例中，本發明係提供進行醫藥業務之方 法，其包括： a*測定本文中所揭示任何組合物之醫藥組合物之適當配 方與劑量；與 胃 b·對第三者，申請許可該配方之進一步發展與銷隹之 利。 u罹 【實施方式】 範例 現在一般性地描述本發明，參考下述實例並 听史易於明瞭 ，其僅只是被包含以提供本發明某些方面鱼夏贿舍 *、 /、，、自足爲施例 說明目的，並非意欲限制本發明。 J心 實例1 聚乙晞亞胺(PEiy環糊精共轭物之合成 (Suh 等人 1992, L Am· Chein. SI% j 7917) 88463 -50- 200423960
八,NH ΝΗ2 ΝΗ Ο;。 使分枝狀PEI (60毫克，Aldrich Mw 25,000)溶於DMS〇(4毫升） 與已脫氣之水（6毫升）溶劑混合物中。於氬氣下，將環糊精 單甲苯磺酸酯（928毫克，環糊精技術發展公司）添加至溶液 中。在將混合物於7(TC下攪拌約丨小時後，混濁溶液轉變成 透明。於此溫度及氬氣下48小時後，溶液轉變成微黃色。 將溶液轉移至Spectra/POTMWCO255000薄膜，並對著水滲析6天 。然後藉冷凍乾燥移除水。使溶液凍乾後，獲得白色粉末（134 写克）。ί哀糊精/ PEI比例係以1Ή nmr之質子積分為基準計 算而得。 1 實例2 可水解聚乙晞亞胺(Pmy環糊精共軛物之合成 Ahn 等人 2002 魁龙』1^80, 273-282 88463 -51 - 200423960
可水解PEI-PEG係按Ahn等人2002制放期刊80, 273-282參考資 料中所述合成。使所形成之可水解PEI聚合體溶於DMSO (4毫 升）與已脫氣之水（6毫升）溶劑混合物中。將環糊精單甲苯磺 酸酯（環糊精技術發展公司）於氬氣下添加至溶液中。然後 ，使反應混合物沉澱至冷乙醚中，並使產物於真空下乾燥 過夜。環糊精/ PEI比例係以1HNMR之質子積分為基準計算 而得。 實例3 線性環糊精為基質之聚乙二醇聚合體(CD-PEG)之合成 CD-PEG聚合體係藉由二官能基化/3-環糊精單體（A)與二官 能基化聚乙二醇共單體（B)之聚合反應而製成，獲得ABAB產 物。合成程序係首先涉及二官能基化少環糊精（6A，6D-二去氧 -6A，6D-二（2-胺基乙燒硫基）-沒-環糊精（表示二半腕胺-/5-稼糊精） 之製備，根據文獻程序（Gonzalez 等人 1999 Bioconjugate Chem, 10 : 1068-1074 ;與 Hwang 等人 2001 Bioconjugate Chem. 12 (2) : 280-290)。 聚合步驟係使用市購可得之二官能基化聚乙二醇進行。研 88463 -52- 200423960 究三種方法。 方法I:使用二酸-聚乙二醇
< EDC / 磺酸基 NHS 〉C——PEG—C. _^ 、 ) OH S
合成 : 具有不同分子量（Mw = 250、600、3000、6000)之二酸-PEG係 購自Fluka，Milwaukee，WI。在一項典型實驗中，係使PEG6 0 〇 -(COOH)2 (0.096 克，0·16 毫莫耳）溶於 pH 6.5 下之 1 毫升 25 mM MES 緩衝劑（2-(N-嗎福啉基）乙烷磺酸）中。添加已溶於2毫升 25mMMES緩衝劑（pH6.5)中之二半胱胺-/5-環糊精（0.2克，0.16 毫莫耳）。然後，添加1-(3-二甲胺基丙基）-3-乙基碳化二亞胺 鹽酸鹽（EDC)(0.612 克，3.2 毫莫耳，Aldrich，Milwaukee，WI)與 N-羥基磺酸基琥珀醯亞胺（磺酸基-NHS)(0.026克，0·12毫莫耳， Pierce，Rockford，IL)。將所形成之溶液於室溫下授拌過夜。接 著，將聚合體溶液轉移至Spectra/Por7MWC0 10,000薄膜 (Spectrum，Houston，TX)，並對著水滲析24小時。然後，使溶液 凍乾至乾涸。這獲得272毫克白色固體（產率·· 93% )。 特徵鑒定：光散射與分子量測定 比折射率增量dn/dc係在磷酸鹽緩衝之鹽水lx (PBS) (Cellgro, Mediatech 公司，Hemdon，VA)中，使用 Bausch & Lomb ABBE-3L 折射 率度量。然後，將聚合體試樣在裝有ERC-7512 RI偵測器、 Precision Detectors PD2020/DLS 靜態光散射偵測器及 PLaquagel· 〇H 30 (聚合體實驗室，Amherst，ΜΑ)管柱之Hitachi D6000 HPLC系 88463 -53 - 200423960 統上，使用磷酸鹽缓衝之鹽水lx作為溶離劑，於0.7毫升/ 分鐘流率下分析。對各聚合體所測得之dn/dc、重量平均分 子量Mw及多分散性指數Mw/Mn係報告於下表中。 方法II :使用丙酸二琥珀醯亞胺醯酯聚乙二醇
νη2 η2ν ο \_/ ο ο χ ^s—CH2-CH2—HN-C 一 CHr CH2— 0—PEG34。。一 0~ CHr CH2 — C—NH~ CHr CH2 — S \ /χ 表1 : CD-PEG聚合體之靜態光散射與分子量測定 聚合體 dn/dc Mw (Da) 多分散性 CD-PEG6 0 0 〇 0.1267 21,560 1.69 CD-PEG3000 0.1296 10,490 1.35 cd-peg600 0.1361 28,450 1.77 cd-peg25〇 0.1359 21,150 1.06 合成·· 將丙酸二琥珀醯亞胺醯酯聚乙二醇（PEG34()()-(SPA)2)(1.0854克 ，0.32毫莫耳，Shearwater聚合體公司，Huntsville，AL)在5毫升 DMSO中之溶液添加至已溶於2毫升DMSO中之二半胱胺-/3-環 糊精（0.4克，0_32毫莫耳）之溶液内。立即形成黏稠溶液。然 後，將反應混合物於室溫及氬氣下攪拌過夜。添加乙醚使 聚合體沉澱，接著以吸量管倒出。蒸發殘留醚，並使聚合 體再溶解於水中。然後，將所形成之溶液轉移至1〇,〇〇〇 MWCO Spectra/Por薄膜，並對著水滲析24小時。接著使溶液滚乾至 -54- 88463 200423960 乾涸。這獲得1.329克白色固體（產率：95% )。 特徵鑒定：先散射與分子量測定 此聚合物係使用上文所提出之相同技術進行特徵鑒定。 dn/dc係經計算為0.1316，而重量平均分子量Mw經測得為 184,000Da，具有多分散性指數Mw/Mn為2.18。 方法III :使用二-笨并三唑碳酸酯聚乙二醇
合成 ·· 將二-苯并三唑碳酸酯聚乙二醇（PEG3 400-(BTC)2)(1克，0.32 毫莫耳，Shearwater聚合體公司，Huntsville，AL)在5毫升DMSO中 之溶液，添加至已溶於2毫升DMSO中之二半胱胺-少環糊精 (0.4克，0.32毫莫耳）之溶液内。立即形成黏稠溶液。然後， 將反應混合物於室溫及氬氣下攪拌過夜。添加乙醚使聚合 體沉殿，接著以吸量管倒出。蒸發殘留醚，並使聚合體再 溶解於水中。然後，將所形成之溶液轉移至 10,000 MWC〇 Spectra/Por薄膜，並對著水滲析24小時。接著使 溶液凍乾至乾涸。這獲得1.3克白色固體（產率：95% )。 實例4 88463 -55- 200423960 CD-PEG聚合體之分子量控制： 使二半胱胺- /5-環糊精·2 HC1 (0.577克，0.46毫莫耳）於真空 及100°C下乾燥16小時。然後，添加丙酸二琥珀醯亞胺醯酯 聚乙二醇（PEG3 400 -(SPA)2)(1.565 克，0.46 毫莫耳，Shearwater 聚 合體公司，Huntsville，AL)。於混合物中，添加無水DMSO (8毫 升）。攪拌10分鐘後，於氬氣下添加DIEA(176微升，1.01毫莫 耳）。在所選定之時間（15分鐘、30分鐘、60分鐘、1小時、 2小時及5小時）下移除一部份聚合反應溶液（1毫升）。接著 ，將此等試樣轉移至1〇,〇〇〇 MWCO Spectra/Por薄膜，並對著水 滲析24小時。然後使溶液凍乾至乾涸。所形成固體之MW係 按上述測得。 如圖3中所示，於5小時時間過程内，聚合體Mw增加至約 8〇 kDa。聚合體Mw可被控制在50至80 kDa之間。 實例5
可水解線性環糊精為基質之聚乙二醇聚合體(CD-PEG)之合成 方法 I :使用 NHS-HBA-CM-PEGwm-CM-HBA-NHS
II
II
II
II - 〇-C_CH2-〇-PEG340^~OCH2—O〇-CH — CH2_C — 0-N、 CH] CH3
CH2-CH-〇-C-CH2-〇-PEG34〇r CH, II II , 〇-CH2-C-〇-CH-CH2-C—NH-CH2-CH2-Sj CH, 將 NHS-HBA-CM-PEG3 4 0 ()-CM-HBA-NHS((X2 克，0.06 毫莫耳， Shearwater聚合體公司，Huntsville AL)在1·5毫升DMSO中之溶液 -56- 88463 200423960 ，添加至已溶於2毫升DMSO中之二半胱胺-/9-環糊精（0.074克 ，〇·〇6毫莫耳）之溶液内。然後，將反應混合物於室溫及氬 氣下攪拌過夜。以乙醚使所形成之聚合體沉澱，過濾，及 在真空下乾燥。 方法II :使用PEG琥珀醯亞胺醯基琥珀酸鹽（PEG-(SS)，
合成 ： 將二琥珀醯亞胺醯基琥珀酸鹽聚乙二醇（peg34()()-(ss)2) (SunBio 公司，980-5 Kwan-yang Dong，Anyang City，S· Korea)(0.3 毫莫耳） 在5毫升DMSO中之溶液，添加至已溶於2毫升DMSO中之二 半胱胺-沒-環糊精（0.3毫莫耳）之溶液内。然後，將反應混合 物於室溫及氬氣下攪拌過夜。以乙醚使所形成之聚合體沉 澱，過濾，及在真空下乾燥。 實例6 可水解線性環糊精為基質之聚合體之合成
〇 57- 0 X 88463 200423960 合成: 將雙[琥珀醯亞胺醯基琥珀酸]乙二醇酯（EGS)(0.2毫莫耳， Pierce，Rockford，IL)在2毫升DMSO中之溶液，添加至二半胱胺-/5-環糊精（0.2毫莫耳）在100°C及真空下乾燥過夜且已溶於1.5 毫升DMSO中之溶液内。然後，將反應混合物於室溫及氬氣 下攪拌過夜。使所形成之混合物以丙酮沉澱，過濾，及在 真空下乾燥。 實例7 二金剛烷交聯劑：磷酸雙-(2(1-金鋼烷基）乙基）酯之合成 (Zhang 等人 1997, J· Am· Chem· Soc· 119(7) ： 1676-1681)
合成 ·· 使無水吡啶（10毫升，Aldrich，Milwaukee，WI)在冰浴中冷卻， 並逐滴添加二氯磷·酸甲酯（1.488克，10毫莫耳，Aldrich，Milwaukee， WI)。使混合物再保持冷15分鐘。在這段期間内，形成二氯 磷酸N-甲基吡錠之沉澱物。添加1-金剛烷乙醇（4.758克，26.4 毫莫耳，Aldrich，Milwaukee，WI)，並將密封之混合物於室溫下 攪拌過夜。然後將其倒入10% NaHC03 (50毫升）中，並於真空 下蒸發吡啶。使微黃色固體溶於1升水中，並以醚（三份150 毫升）萃取。以2N HC1使水相酸化至pH 1，接著以三份150毫 升液份之CHC13 : n-BuOH (7 : 3)萃取。將合併之有機層（醚與 CHC13 ·· n-BuOH)以水洗滌，而在混合溶劑中形成微黃色沉澱 88463 -58- 200423960 物，此時於真空下蒸發溶劑。形成微黃色固體，並自丙酮/ 己烷再結晶。使固體於真空下乾燥，產率60%。 特徵鑒定： 產物係藉1HNMR與13CNMR進行特徵鑒定。1HNMR(CDC13) :(5 1.45-1.75 (m，28H，-CH2 -，金鋼烷基），1.95 (m，6H，C-H，金鋼烷基）， 4.07 (q，4H，-CH2 -)及 8.60 (br，1H，POOH). 13 C NMR (CDC13，500 MHz): 5 28.59, 31.77, 37.02, 42.52, 43,96, 44.02, 64.21，64.26.產物亦藉質量光 譜特徵鑒定：電噴霧離子化作用：421[M-H]_. 實例8 可水解金剛烷交聯劑之合成：
合成 ·· 將 1-金剛烷甲胺（0.152 克，0.92 毫莫耳，Aldrich，Milwaukee，WI) 添加至雙[號珀醯亞胺醯基琥珀酸]乙二醇酯（EGS)(0.2克，0.43 毫莫耳，Pierce，Rockford，IL)在10毫升無水二氣甲燒中之溶液 内。將所形成之溶液於室溫下攪拌5小時。然後，使其以 0.1NHC1酸化，並以二氯甲烷萃取。使有機相以MgS〇4脫水乾 燥，接著於真空下濃縮至乾涸。這獲得〇·22克固體（產率90%)。 特徵鑒定： 產物係藉質量光譜進行特徵鑒定：電喷霧離子化作用： 88463 -59- 200423960 557 [M+H]+，579 [M+Na]+，1135 [2M+Na]+. 實例9 二金剛烷聚乙二醇交聯劑之合成： 研究各種方法： 方法I : #用二酸-聚乙二醇
將1_金剛烷甲胺（0.64毫莫耳，Aldrich，Milwaukee，WI)添加至已 溶於二氯甲烷中之PEG-二酸（0.32毫莫耳，Fluka，Milwaukee，WI) 内。添加1，3-二環己基碳化二亞胺（DCC)(3.2毫莫尊，Aldrich， Milwaukee，WI)，並將所形成之溶液於室溫下攪拌過夜。濾出 沉澱物（二環己基異脲，DCU)，並以18% HC1洗滌濾液。使有 機相以MgS04脫水乾燥，然後於真空下濃縮至乾涸。使所形 成之固體再溶解於水中，以使殘留DCC沉澱。濾出DCC，並 使濾液凍乾。 方_法Π :徒用丙酸二琥珀醯亞胺醯酯聚乙二蜂
將 1-金剛烷甲胺（0.1 克，0.60 毫莫耳，Aldrich，Milwaukee，WI) 添加至已溶於10毫升二氯甲烷中之丙酸二琥珀醯亞胺醯酯 聚乙二醇（PEG3 400 -(SPA)2)(1.02 克，0·30 毫莫耳，Shearwater 聚合 88463 -60- 200423960 體公司，Huntsville，AL)内。將所形成之溶液於室溫下揽拌過夜 。在真空下蒸發溶劑，並使殘留物溶於水中，及離心，以 移除過量1-金剛烷甲胺。然後，將上層清液轉移至1，〇〇〇 MWCO Spectra/Por薄膜，並對著水滲析24小時。接著使溶液康乾至 乾涸。這獲得0.88克固體（產率84% )。 方法 III :使用聚乙二醇（Sandier 等人 2000, Langmuir 16 ·· 1634-1642)
使聚乙二醇（Mw = 1000)(1 克，1 毫莫耳，Aldrich，Milwaukee，WI) 經由在真空及70°C下加熱過夜而乾燥。使異氰酸1-金鋼烷基 酉旨（0.39克，2.2毫莫耳，Aldrich，Milwaukee，WI)溶於無水二氯甲 烷（25毫升）中之後，將其添加至已乾燥之聚乙二醇中。然後 添加兩種觸媒，二月桂酸二丁基錫（63.2毫克，0.1毫莫耳， Aldrich，Milwaukee，WI)與三乙胺（10.1 毫克，0.1 毫莫耳，Aldrich， Milwaukee，WI)。將反應混合物於回流下加熱7小時。移除溶 劑後，使反應產物溶於蒸館水中。藉由添加活性碳及連續 過濾使水溶液純化，接著凍乾。以70%產率回收所形成之聚 合體，並藉iHNMR進行特徵鑒定。 方法IV :使用二-苯并三唑碳酸酯聚乙二醇 88463 -61- 200423960
將 1-金剛燒甲胺（0.1 克，0·60 毫莫耳，Aldrich，Milwaukee，WI) 添加至已溶於10毫升二氯甲烷中之二苯并三唑碳酸酯聚乙 二醇(PEG3 4〇〇-(BTC)2 )(1.02 克，0.30 毫莫耳，Shearwater 聚合體公 司，Huntsville，AL)内。將所形成之溶液於室溫下攪拌過夜。在 真空下蒸發溶劑，並使殘留物溶於水中，及離心，以移除 過量1-金剛烷甲胺。然後，將上層清液轉移至1，000 MWCO Spectra/Por薄膜，並對著水滲析24小時。接著使溶液凍乾至 乾涸。這獲得0.88克固體（產率84% )。 實例10 可水解二金剛烷聚乙二醇交聯劑之合成： 研究各種方法： 方法I :使用聚乙二醇
使聚乙二醇（Mw= 1000)(1 毫莫耳，Aldrich, Milwaukee，WI)經由 在真空及70°C下加熱過夜而乾燥。在使1-金剛烷醋酸（2.2毫 莫耳，Aldrich，Milwaukee，WI)溶於無水甲苯（15毫升）中之後， 將其添加至已乾燥之聚乙二醇中。然後以催化量添加對-甲 88463 -62- 200423960 苯續酸（Aldrich，Milwaukee，WI)。使所形成之混合物使用Dean-Stark 裝置以 共沸方 式回流 16 小時。 於反應 完成後 ，在 真空下 移除溶劑，並以醚使所形成之聚合體沉澱。 方法II :使用琥珀酸二琥珀醯亞胺醯酯聚乙二醇
將 1-金剛烷甲胺（0.1 克，0.60 毫莫耳，Aldrich，Milwaukee, WI) 添加至已溶於10毫升二氯甲烷中之琥珀酸二琥珀醯亞胺醯 醋聚乙二醇（PEG3 4 ο 〇 _(SS)2 XSunBio 公司，980-5 Kwan-yang Dong， Anyang City，S. Korea)(0.30毫莫耳）内。將所形成之溶液於室溫下 攪拌過夜。於真空下蒸發溶劑，並使所形成之聚合體以醚 沉澱。 實例11
將 1_ 金剛烷 f 胺（〇·212 克，1_29 毫莫耳，Aldrich，Milwaukee，WI) 添加至已溶於10毫升無水二甲基甲醯胺（Aldrich，Milwaukee，WI) 中之胺基三醋酸參-琥珀醯亞胺醯酯（TSAT)(0.2克，0.41毫莫耳 ，Pierce，Rockford，IL)内。將所形成之混合物於室溫及氬氣下 88463 -63 - 200423960 授拌14小時。過濾沉澱物，並藉質量光譜特徵鑒定：電噴 霧離子化作用：633.4 [M+H]+，655.6 [M+Na]+，1265.3 [2M+H]+，1287.1 |；2M+Na]+. 實例12 四金剛燒交聯劑之合成：
將 1-金剛烷甲胺（0.212 克，1.29 毫莫耳，Aldrich，Milwaukee，WI) 添加至已溶於5毫升無水二甲基甲酸胺（Aldrich，Milwaukee，WI) 中之肆-(N-琥珀醯亞胺醯基羧基丙基）異戊四醇（NHS-4)(0.1克， 0.12毫莫耳，分子生物科技，Boulder，CO)内。將所形成之混合 物於室溫及氬氣下攪拌14小時。過濾沉澱物，並藉質量光 譜特徵鑒定：電噴霧離子化作用·· 1013.7 [M+H]+，1035.8 [M+Na]+。 實例13 四-金剛烷聚乙二醇交聯劑之合成： 88463 -64- 200423960 方法I :使用異戊四醇乙氧基化物（15/4 E〇/〇H)
使異戊四醇乙氧基化物（15/4 EO/OH)(Mn = 797)(1毫莫耳，Aldrich, Milwaukee，WI)經由在真空及70°C下加熱過夜而乾燥。使異氰 酸1-金鋼燒基g旨（4.4毫莫耳，Aldrich，Milwaukee，WI)溶於無水二 氯甲烷（25毫升）中之後，將其添加至已乾燥之聚合體中。然 後添加兩種觸媒，二月桂酸二丁基錫（0.1毫莫耳，Aldrich， Milwaukee，WI)與三乙胺（0·1 毫莫耳，Aldrich，Milwaukee，WI)。將 反應混合物於回流下加熱7小時。移除溶劑後，使反應產物 溶於蒸餾水中。使水溶液藉由添加活性碳及連續過濾而純 化，接著滚乾。
方法II :使用4臂PEG
88463 -65- 200423960 使4臂PEG (Μη = 10000)(1毫莫耳，Shearwater聚合體公司， Huntsville，AL)經由在真空及70°C下加熱過夜而乾燥。使異氰 酸1-金鋼烷基酯（4.4毫莫耳，Aldrich，Milwaukee，WI)溶於無水二 氯甲烷（25毫升）中之後，將其添加至已乾燥之聚合體中。然 後添加兩種觸媒，二月桂酸二丁基錫（0.1毫莫耳，Aldrich， Milwaukee，WI)與三乙胺（0· 1 毫莫耳，Aldrich，Milwaukee，WI)。將 反應混合物於回流下加熱7小時。移除溶劑後，使反應產物 溶於蒸鶴水中。使水溶液藉由添加活性碳及連續過濾、而純 化，接著凍乾。 實例14 可水解四-金剛烷聚乙二醇交聯劑之合成： 方法I :使用異戊四醇乙氣基化物（15/4 EO/OH)
使異戊四醇乙氧基化物（15/4 EO/OH)(Mn = 797)(1毫莫耳，Aldrich, Milwaukee，WI)經由在真空及70°C下加熱過夜而乾燥。使1-金 剛燒酷酸（4.4毫莫耳，Aldrich，Milwaukee，WI)溶於無水甲苯中之 後，將其添加至已乾燥之聚合體中。然後以催化量添加對-甲苯磺酸（Aldrich，Milwaukee，WI)。使所形成之混合物使用Dean- 88463 -66- 200423960
Stark裝置以共沸方式回流16小時。於反應完成後，在真空下 移除溶劑，並使所形成之聚合體以醚沉澱。
方法II :使用4臂PEG
使 4 臂 PEG (Mn= 10000)(1 毫莫耳，Shearwater 聚合體公司，Huntsville， AL)經由在真空及70°C下加熱過夜而乾燥。使1-金剛燒酷酸 (4.4毫莫耳，Aldrich，Milwaukee，WI)溶於無水甲苯中之後，將其 添加至已乾燥之聚合體中。然後以催化量添加對-甲苯磺酸 (Aldrich，Milwaukee，WI)。使所形成之混合物使用Dean-Stark裝置 以共沸方式回流16小時。於反應完成後，在真空下移除溶 劑，並使所形成之聚合體以醚沉澱。
方法III :使用4-臂PEG-琥珀酸琥珀醯亞胺醯酯（PEG-SSL
88463 - 67 - 200423960 將 1-金剛烷甲胺（0.069 克，0·44 毫莫耳，Aldrich，Milwaukee，WI) 添加至先前已溶於10毫升二氯甲烷中之1克二琥珀酸琥珀醯 亞胺醯酯聚乙二醇（(PEG10k-SS)4)(SunBio 公司，980-5Kwan-yang Dong，Anyang City，S. Korea)(0.1毫莫耳）内。將所形成之溶液於室 溫下攪拌過夜。於真空下蒸發溶劑，並使所形成之聚合體 以醚沉澱。 實例15 八-金剛烷聚乙二醇交聯劑之合成：
二月桂酸 二丁基踢
ΝΗ、Γ/ 使8臂PEG (Μη = 10000)(1毫莫耳，Shearwater聚合體公司， Huntsville，AL)經由在真空及70°C下加熱過夜而乾燥。使異氰 酸1-金鋼烷基酯（4.4毫莫耳，Aldrich，Milwaukee, WI)溶於無水二 氯甲烷（25毫升）中之後，將其添加至已乾燥之聚合體中。然 後添加兩種觸媒，二月桂酸二丁基錫（0.1毫莫耳，Aldrich， Milwaukee，WI)與三乙胺（0.1 毫莫耳，Aldrich，Milwaukee，WI)。將 反應混合物於回流下加熱7小時。移除溶劑後，使反應產物 溶於蒸餾水中。使水溶液藉由添加活性碳及連續過濾而純 化，接著凍乾。 88463 -68- 200423960 實例16 可水解八-金剛烷聚乙二醇交聯劑之合成：
使8臂PEG (Mn = 10000)(1毫莫耳，Shearwater聚合體公司， Huntsville，AL)經由在真空及70°C下加熱過夜而乾燥。使1-金剛 燒酷酸（4.4毫莫耳，Aldrich，Milwaukee，WI)溶於無水甲苯中之後 ，將其添加至已乾燥之聚合體中。然後以催化量添加對-甲 苯績酸（Aldrich，Milwaukee，WI)。使所形成之混合物使用Dean-Stark 裝置以 共沸方 式回流 16 小時。 於反應 完成後 ，在 真空下 移除溶劑，並使所形成之聚合體以醚沉澱。 實例17 多金剛烷交聯劑之合成：
方法I :使用分枝狀PEI
將1-金剛：)：充醋酸（Aldrich，Milwaukee, WI)添加至已溶於pH 6.5之 88463 -69- 200423960 MES 緩衝劑 25 mM 中之 PEI (Aldrich，Milwaukee，WI)内。然後，將 1-(3-二甲胺基丙基）-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽（EDC)(Aldrich， Milwaukee，WI)與 N- 基琥珀 Si 亞胺（NHS)(Aldrich，Milwaukee，WI) 添加至反應混合物中。將反應混合物於室溫下攪拌24小時 ，接著轉移至10000 MWCO Spectra/Por薄膜，並對著水滲析24小 時。然後使溶液凍乾至乾涸。 方法II :使用聚三葡萄糖 (Akiyoshi 等人 1993: Macromolecules 26 ·· 3062-3068)
使異氰酸1-金鋼燒基S旨（Aldrich，Milwaukee，WI)與聚三葡萄糖 (Sigma-Aldrich，Milwaukee，WI)在含有 ρ比淀之無水 DMSO 中，於 80 °C下反應8小時。將乙醇添加至反應混合物中，並將所形成 之混合物於4°C下儲存過夜。分離沉澱物，藉由對著水滲析 而純化，及;東乾至乾酒。金剛燒之取代度係藉由1 H NMR測 得。 實例18 可水解多金剛烷交聯劑之合成： (Simamoto 等人 1992. Macromolecules 25〔5665-5670) 88463 -70- 200423960
使聚三葡萄糖（Sigma-Aldrich，Milwaukee，WI)在60 °C下溶於無水 DMF中。添加已溶於無水DMF中之1-金剛烷羰基氯（Aldrich， Milwaukee，WI)與無水ρ比咬。將所形成之混合物於60°C下攪拌2 小時，並在室溫下再1小時。將混合物倒入乙醇中。收集沉 澱物，並以乙醇，然後以乙醚洗滌。使固體於真空及50°C下 乾燥2小時。金剛烷之取代度係藉由1HNMR測得。 實例19 自身交聯聚合體之合成： 含有環糊精與金剛烷官能基之聚合體之合成，係在三個步 驟中進行。 1.步驟1 :單體6A，6D-雙-(2-胺基-2-羧基乙硫基）-6A，6D-二去氧 -/3-環糊精（CD-BisCys)之合成
使167毫升0.1 Μ碳酸鈉緩衝劑在裝有磁攪拌棒、冷凝器及 88463 -71 - 200423960 中隔之500毫升2-頸部圓底燒瓶中脫氣45分鐘。於此溶液中 ，添加1.96克（16.2毫莫耳）L-半胱胺酸與10.0克（73.8毫莫耳）二 -破-/5-環糊精（Gonzalez 等人 1999 Bioconjugate Chem. 10 : 1068-1074 ; 與 Hwang 等人 2001 Bioconjugate Chem. 12 (2) : 280-290 ; Gonzalez，Η.， Hwang，S.J.及 Davis，Μ·Ε· (2000)線性環糊精共聚物 WO 001734Α1)。 將所形成之懸浮液於回流溫度下加熱4.5小時，直到溶液轉 變成透明無色為止。然後，使其冷卻至室溫，並使用IN HC1 酸化至pH 3。藉由緩慢添加丙g同（溶液之3倍重量比）使產物 猛然破碎。這獲得9.0克（90.0% )產量CD-BisCys。使所形成之 固體接受陰離子性交換管柱層析，使用0-0.4 Μ重碳酸銨溶液 之梯度溶離。ESI/MS (m/z) : 1342 [Μ]+，1364 [M+Na]' CD-BisCys 之 純度係藉HPLC確認。 2.步驟2 ·· CD-BisCys-PEG3 4 0 0共聚物之合成
使 CD-BisCys (2 克，1.49 毫莫耳）與 SPA-PEG3400-SPA (5.07 克，1.49 毫莫耳，Shearwater公司）溶於無水DMSO (40毫升）中。10分鐘 後，於氬氣下添加二異丙基乙胺（DIEA，0.571毫升，2.2當量 ，Aldrich)。將反應混合物於氬氣下攪拌2-6天。發現黏度之 增加作為聚合反應時間之函數。將水（200毫升）添加至聚合 反應溶液中，並激烈攪拌。然後，使溶液在25,000 MWCO 88463 -72- 200423960
Spectra/Por 7薄膜中，於約10毫克聚合體/毫升水之濃度下滲 析2.5天。於凍乾後，獲得白色絨毛狀粉末(6.2克，92%產率）。 特徵鑒定：先散射與分子量測定 比折射率增量dn/dc係在磷酸鹽緩衝之鹽水lx (PBS)(Cellgr〇, Mediatech 公司，Hemdon，VA)中，使用 Bausch & Lomb ABBE-3L 折射 率度量。然後，聚合體試樣係在裝有ERC-7512 RI偵測器、 Precision Detector PD2020/DLS 靜態光散射偵測器及 PL aquagel-OH 30 (聚合體實驗室，Amherst，ΜΑ)管拄之 Hitachi D6000 HPLC 系 統上，使用磷酸鹽緩衝之鹽水lx作為溶離劑，於0.7毫升/ 分鐘流率下分析。dn/dc經計算為0.1348 ’而重量平均分子量 Mw經測得為103,500 Da，具有多分散性指數Mw/Mn為1·71。 3.金剛烷共軛至CD-BisCys-PEG3 4〇〇共聚物
使CD-BisCys-PEG34()()共聚物（0.32毫莫耳重複單位）溶於無水 DMSO中，並攪拌10分鐘。將1-金剛烷甲胺（0.76毫莫耳，Aldrich， Milwaukee，WI)、DIEA (0·76 毫莫耳）、EDC (0·96 毫莫耳）及 NHS (0.71 毫莫耳）添加至聚合體溶液中。將混合物攪拌約16小時。將 水添加至所形成之混合物中，以移除過量1-金剛烷甲胺。過 濾沉澱物後，使溶液以1〇,〇〇〇 MWCO Spectra/Por薄膜對著水滲 88463 -73 - 200423960 析48小時，並凍乾至乾涸。金剛烷之取代度係藉由1H NMR 測得。 實例20 RGD-改質之金剛烷-PEG衍生物之合成
步驟 1 : VS-PEG<Q〇〇-AD(2)之合成 將乙烯基颯-PEG5〇〇0-NHS (l)(Shearwater聚合體，0·147毫莫耳） 添加至裝有攪拌棒之圓底燒瓶中，並溶於5毫升DMSO中。 於其中添加金剛烷甲胺（Aldrich，0.147毫莫耳）。將所形成之 溶液於室溫下攪拌1小時。使所形成之混合物對著3500 MWCO 薄膜（光譜Por)滲析過夜。然後凍乾溶液，而得乙烯基颯-PEG5〇〇〇-AD(2) 〇 步驟2 : RGDpep-PEG_AD共輛物合成 使按照Kok等人所述（生物共軛物化學（2002)，13(1)，128-135)合 成之RGDpep-SH溶於pH 7.2之PBS (磷酸鹽緩衝之鹽水）lx中。 然後’將乙缔基石風-PEG〗〇 〇 〇 - AD (2)添加至RGDpep-SH落液中。 將所形成之溶液於室溫下攪拌2小時。接著，將聚合體溶液 轉移至 Spectra/Por 7 MWCO 3500 薄膜（Spectrum，Houston，TX)，並對 88463 -74- 200423960 著水滲析24小時。然後使溶液凍乾至乾涸，而得RGDpep-PEG5 0 00 -AD ⑶。 實例21 材料之製備： 使帶有包藏宿主之聚合體（實例1-6)在100毫克/毫升下， 溶於pH 7.2之PBS (磷酸鹽缓衝之鹽水）lx中。然後添加交聯 劑（實例7-18)(比例：金剛烷/環糊精·· 1/1或1/2)。將所形成 之混合物激烈混合，獲得交聯劑溶液。在約10分鐘内，發 現黏度增加。 實例22 離子類型材料之製備： 使用多價離子 使帶有包藏宿主與羧基之聚合體（參閱實例19步驟2)在100 毫克/毫升下，溶於0.1 M CaCl2水溶液中，然後添加至含有 交聯劑混合物（實例7-18)(比例：金剛烷/環糊精：1/1或1/2) 之小玻瓶中。將所形成之混合物激烈混合，獲得交聯劑與 二胺基化合物溶液。發現黏度增加。 使用二胺基化合物 使帶有包藏宿主與羧基之聚合體（參閱實例19步驟2)在100 毫克/毫升下，溶於水中，然後添加至含有交聯劑混合物（ 實例7-18)(比例：金剛烷/環糊精：1/1或1/2)與二胺基化合物 例如 PEG3 4 〇 〇 -(NH2 )2 (Shearwatei* 聚合體）或 Cn H2 n -(NH2 )2 (比例·· NH2/C〇CT : 1/1或1/2)之小玻瓶中。將所形成之混合物激烈混 合，獲得交聯劑與二胺基化合物溶液。發現黏度增加。 88463 -75- 200423960 传用聚％離子 使帶有包藏宿主與羧基之聚合體（參閱實例19步驟2)在ι〇〇 毫克/毫升下，料水中，⑽添加至含有交聯劑混合物（ 實例7’（比例：金岡m/環糊精：1Λ或1/2)與聚陽離子例如 聚離胺酸或聚乙諦亞胺之小破瓶中。將所形成之混人物激 烈混合’獲得交聯劑與聚陽離子溶液。發現黏度增加。 實例23 曰 令有病毒或蛋白質之村料 使帶有包藏宿主之聚合體（實织_6)溶於PH72之PBS(鱗酸 鹽缓衝之鹽水）lx中，其含有蛋白f或病毒在所要之濃度下 ，以獲得聚合體溶液’在最後濃度為1〇〇毫克/毫升溶液下 。然後添加交聯劑（實例7-18)(比例：金剛烷/環糊精'：丨八或 1 /2)。將所形成之混合物激烈混合，獲得交聯劑溶液。在約丄〇 分鐘内’發現黏度增加。 實例24 含有發出訊息肽之材料之製備 使帶有包藏但王 < 聚合體（實例1-6)溶於ρΗ 7·2之(磷酸 鹽缓衝之鹽水(含有當需要時之蛋白質、病毒或其他藥 物或藥物傳輸S統）中，在所要之濃度下’以獲得聚合體溶 液，在最後濃度為100毫克/毫升溶液下。然後，添加交聯 劑（實例7-⑻（比例：金剛垸/環糊精：1/2)與發出訊息肤（實 例20)(比例：金剛燒/環糊精：丨/2)。將所形成之混合物激 烈混合，獲得交聯劑溶液。在約1〇分鐘内，發現黏度增加。 實例25 88463 76- 200423960 關於細胞經過基質之移動性之研究。 a. 基質（〇.2毫升，由CD-PEG3 400與磷酸雙-(2(1-金鋼烷基）乙 基）酯所組成）係按實例21中所述製成，並添加至 FluoroBlok插入物（適合24井格式，Falcon目錄# 351152)之 底部。 b. 將CCD細胞以PBS沖洗，然後曝露至5 //M螢光標記物 鈣黃綠素-AM，歷經15-30分鐘。 c. 然後’使CCD細胞騰蛋白酶化’並覆蓋在插入物中基 質之上方，於10,000個細胞/插入物下，在0.5毫升培 養基中。 d. 接著，將含有10毫微克/毫升人類pDGF蛋白質之工毫 升培養基添加至下層室。 e·細胞經過基質並進入下層室之移動性，係藉螢光顯微 鏡術監測3天。經過基質並通過插入物之成功潛移， 係由下層室中細胞之存在証實，其係如圖5中所示， 於覆蓋後，藉由螢光顯微鏡術觀察72小時。 實例26 對於以基質調配之具有CDJpEI多錯合體iCCD成纖維細胞之 轉移感染研究 於24-井板中之井底，以〜0.2毫升下文所列者塗覆： a•未塗覆（對照組） b·基質 c•含有1微克含蟲螢光素酶基因之質粒之基質。 d•含有CDP多錯合體之基質。 88463 -77- 200423960 e.含有CDPEI多錯合體之基質。 f·未塗覆。不含CDPEI多錯合體（正對照組I :傳統轉移 感染程序） g_未塗覆。不含CDP多錯合體（正對照組π :傳統轉移 感染程序）。 將CCD (成纖維細胞，ATCC)於40,000個細胞/井下，覆蓋在24 井板中。於覆蓋細胞24小時後，移除培養基，將細胞以 沖洗，並溶解。使用蟲螢光素酶檢測，分析細胞溶胞產物 之蟲螢光素酶蛋白質活性。結果係以RLu /井報告。此f驗 註實細胞能夠成功地潛移至基質，並藉由被包含在基質中 之多錯合體轉移感染。轉移感染效率僅稍微低於藉由在培 養基中不含多錯合體之轉移感染。 註：基質係由與二金剛烷交聯劑磷酸（雙_(2(1_金鋼烷基）乙 基）醋’ Μ於合成程序，參时例7)交聯之CMEG(關於合成 程序，參閱實例3方法Π)所組成。基質調配程序係描述於實 =21中。當多錯合體被加人基質中時，多錯合體係經由在 最適宜裝料比之下，將職升聚合體溶液添加至微升含 蟲勞光素酶基因質粒之溶液（〇 1亳香 、毛无/ ¾升）中而製成。多錯 石體係被包含在用以溶解按實例
、 合肝枝貝例21中所述調配之基質CD PEG成份與基質之緩衝溶液中。 關於正對照實驗’多錯合體係 細胞培養基中。 並直接添加至 實例27 藉由含有環糊精（CD)之聚 材料可按圖1中所概要描繪者， 88463 -78- 200423960 合體（A)與二-或多官能性連結劑（B)之自組而製成，該連結 劑係以能夠與該含環糊精聚合體形成包藏複合物之分子封 端。物質（P)可經調配，以包含蛋白質 '細胞、病毒、多錯 合體或其他治療劑或含有治療劑之傳輸系統。 舉例之連結劑
〇
II ch2ch2o P—〇ch2ch2 — oh ，可按照 Breslow 與 Zhang， JACS (1996), 118, 8495-8496，與 Zhang 與 Breslow，JACS (1993)，7/5, 9353-9354中所述之擬案製成。在明白此項技藝中一般已知之 技術後，熟諳此藝者可容易地修改此擬案，以在廣範圍不 同連結劑下達成，當該術語於本文中使用時，其可被採用 作為連結分子。雙官能性連結劑或含環糊精之聚合體可含 有生物可降解之鏈結，以促進治療劑之釋出及/或材料之降 解。 會增加物質之治療利用性之化合物，譬如發出訊息肽或其 他促進細胞潛移之部份物質，可經由使包藏複合物寄生物 共軛至吾人感興趣之個體中，並將此共軛物加入材料中， 如圖2中所述，而被摻入材料中。共軛物可在交聯過程之前 、期間或之後加入。 例如，一種由具有下式之重複亞單位製成之聚合體：
例如其中單體之Mw為大約 4800，可在pH 7.2之PBS(磷酸鹽緩衝之鹽水）1χ中，於1〇〇毫 -79- 88463 200423960 可能需要將混合物離心， 。可將33.3微升液份之連 克/毫升下，被製成聚合體溶液。 然後撥拌此落液，以使聚合體增溶 結分子
’CH2—CH2一〇—p一0—ch2一CH； OH
^ 、、、 於132毫克/毫升下，在二 氟甲烷中之溶液，置入小玻瓶中， 斤 ^ ^ 使一氣甲烷於室溫下 或在37 C下 < 烘箱中蒸發。然後， ,..^ ^ 了將1笔升聚合體溶液添 加至殘田連結劑中，視情況研製以促進溶解。接著，可使 落液靜止，並在例如10分鐘後’溶液變成黏稠。為將外來 物》譬如治療劑或病毒粒子加入交聯聚合體中，此物質可 在最後靜止時間之前，存在於溶液中。例如，此物質可存 在於用以溶解環糊精聚合體之溶劑中，或在連結分子之原 始溶液中，或可在交聯反廊夕俞 ^ , %反怂又則，添加至任一種成份中或 至取後落液中。 實例28 方法與結果 ·· 使用基$ 1 (60 kD聚合體，根據實例3方法u製成，與交聯 劑，根據實例9方法Π製成）與基質2(8〇kD聚合體，根據實例 3方法II製成，與父聯劑，根據實例9方法η製成）。 60 kD基質在活體内之應用 將300微升60 kD基質吸取至i cc注射器中，並藉由上下移動 注射器柱▲而移除所有氣泡。23G針頭對基質通過而言足夠 大’僅需要若干壓力。20G針頭足夠大，以允許基質容易地 通過。 88463 -80- 200423960 使雄性史泊格多利（sPrague-Dawley)大白鼠犧牲，刮毛，並 在其3侧區域上造成8毫米傷口。使用具有2〇g針頭之丨⑶注 射态’逐出過量60肋基質，直到留下1〇〇微升體積為止。然 後，將基質塗敷至8毫米傷口開孔，而無任何外溢。進行相 同程序，十隹使用150微升基们，且其係裝滿大白鼠背部皮 膚中之8毫米開孔傷口。 探查將基質塗敷至切開傷口之可行性。在大白鼠背部上造 成一個大約2英吋長度之全厚度切口。將注射器裝滿2〇〇微 升60 kD基質，並使用2〇G針頭，成功地以皮内方式在切開位 置處注射。 80 kD基質之應用 在大白鼠背部造成兩個8毫米全厚度皮膚開孔。使用丨Μ 注射器與20G針頭，將一個開孔以100微升8〇尬基質處理。 此體積係均勻地裝滿開孔；但是，當與6〇kD基質比較時， 需要更多力以傳輸80 kD。150微升80 kD基質係裝滿而溢出δ 毫米皮膚開孔。200微升80 kD基質係成功地藉由皮内注射傳 輸，惟需要大量力，才能完成此注射。 實例29 進行研究，以在與二-金剛烷-PEG (36.5毫克/毫升）（實例9 方法II)交聯之前與之後，獲得CD-PEG^oo基質（100毫克/毫 补）（實例3方法II)之最初流變數據。將此等數據與在2·4毫克 /毫升下之膠原基質作比較，其係為用於臨証前模式發展之 橾準配方之一。 結果： 88463 -81 - 200423960 第一系列實驗係以CD-PEG340()聚合體，於100毫克/毫升下 進行，未使用交聯劑。在各種恒定應變下進行頻率掃描。 圖7顯示在37t下之頻率掃描。Gn係大於σ，而造成tan 5 為大約3.2。正如預期，此聚合體溶液大部份顯示黏性行為 。此係藉由G’之斜率作為頻率之函數而確認。對純粹黏稠 流體而言，預期理論斜率為2，而對純粹彈性流體而言，預 期斜率為0，涵蓋某一頻率範圍。於結構層次下，此等結果 之解釋是聚合體分子會藉由某種弱交互作用，與彼此交互 作用。被施加至材料之能量，可藉由移動交互作用之節點（ 旋轉，纏結），以彈性方式被分子儲存。然後，使大部份此 能量消散成熱能。此聚合體溶液之經度量複數黏度為0.27 Pa s ，在10.0孤度/秒下。 圖8顯示相同物質於20°c下。發現黏度增加至1.46 Pa s，在10 弧度/秒下。此數值係高於37°C下之黏度大約7倍。 圖9顯示關於與36.5毫克/毫升二-金剛烷-PEG交聯之CD-PEG34GQ聚合體之頻率掃描。交聯劑之添加會增加基質黏度 ，超過100倍，至大約33.1 Pa s。同時，tan 5會降低大約3倍 ，至1.2之數值，而G’之斜率降至0.58。此等結果係與彈性行 為上之增加一致。於結構上，聚合體在材料内之移動係受 束縛，而所施加之能量可以較受限之方式被儲存於網狀組 織點之間。此行為亦經由以下觀察而被確認，當被浸潰之 物體被拉離表面時，經交聯基質具有拉取長弦線之傾向。 整體而論，黏稠力仍然是優勢的（tan6 >1)(參閱圖11)。 圖10顯示20°C下之交聯聚合體。黏度進一步增加至大約 88463 -82- 200423960 5〇Pas，然而所有其他特性仍然類似。 作為一項比較，圖11顯示膠原基質在2.4毫克/毫升下之猶 率知為。膠原基質在其定型狀態下（意即在Π下），顯承典 型統膠行為，其中ian3在低數值〇·14，Gf斜率為〇·〇7。於4 槿卜，、二曰、 沒疋水久與有秩序排列網狀組織之指標。所施加之 旎f在網狀組織節點之間僅能夠被儲存至有限程度，且回 復達很大程度。此材料之複數黏度為 12.8 Pa s。 。 實例30 活體外生物相容性實驗 方法： 基質係使用根據實例3方法Π製成之58kD環糊精（cd)聚合 Μ知自 '例9方法Π之交聯劑製成。於調配基質時，將 =GFPDNA4GFC]^毒之任一個與基質一起混合。調配低與 回劑里（DNA或病毒。各種治療組係列示於表2中。對所有 組群而言’ 58kD環糊精基質之最後濃度為⑽毫克/毫升。 將大約謂微升之各個別試劑以吸量管吸取至.井平底板中 :重複測試各組群。使含有待測配方之.井板於室溫下安 置大約30分鐘。將2_5χ 1〇4個CQM〇74sk細胞（人類皮膚成纖 維細胞）放置在交聯基質配方之上方，位於含有⑽牛胎兒 血清_)之2〇〇微升體積之腿刚培養基中。咖-職^田胞 系在細胞計數時為大約職匯合，其中經由錐藍染色，細胞 存法力大於95%。在倒置顯微鏡下，每日對含有組群卜8之 各井檢視細胞存活力與GFP榮光信號。在實驗開始後之第4 與8天，將200微升新培養基添加（而非置換）至各井中。使 88463 -83 - 200423960 板於37°C下以5% C02培養。 CD4PEI之合成
使線性PEI25 000 (500毫克，Polysciences公司）與6-單甲苯績驗 基-3-環糊精（3.868克，環糊精技術發展公司）溶於36毫升DMSO 中。將所形成之混合物於7(TC下攪拌6天。溶液轉變成微黃 色。然後，將此溶液轉移至Spectra/PorMWCO 10,000薄膜，並 對著水滲析6天。接著，藉冷柬乾燥移除水，而得稍微帶色 之固體。環糊精/ PEI比例係以1HNMR之質子積分為基準計 算而得：（Varian 300 MHz，D20) 5 5.08 ppm (sbr·，CD 之 PPm (m br· CD 之 C2 H-C6 H)，2.5-3.2 ppm ((m bi·· PEI 之 CH2 )· 旦M糊精聚合體（CDP-嗛唑)
/5 CDP係根據先前所述之程序合成（Gonzalez，Η.，Hwang，S. & Davis，Μ· (1999)所oowy喂你 CAem· 70，1068-74)。使咪唆共幸厄至沒CDP 聚合體，其方式是以4-咪唑醋酸（Aldrich，St· Louis，Mo)，使聚合 體末端之一級胺進行醯胺化作用（Sehgal，D. &Vijay，L(1994) 如W所π/^m· 2从87-91)。在一項典型實驗中，使200毫克（33.3 微莫耳）/3CDP溶於800微升25 mM MES (pH 6.5)緩衝劑中，於其 88463 -84- 200423960 中添加4-咪唑醋酸鈉鹽水合物（49·3毫克，0.333毫莫耳）。此 溶液係用以溶解1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基）碳化二亞胺（EDC) (0.128克，0.666毫莫耳）。然後，將已溶於200微升25 mM MES (pH 6·5)缓衝劑中之N-羥基琥珀醯亞胺（NHS)(3.83毫克，33.3微 莫耳）立即添加至聚合體溶液中。將所形成之溶液於室溫下 攪拌24小時，然後使用Spectra Por薄膜MWCO 1000對著水滲析 。使溶液)東乾至乾酒。咪嗤含量係藉由TNBS檢測（Hermanson， G.T.(1996)生物共輛物技術，第132頁，大學出版社，Rockford，IL) ，接著為UV度量法，以定量未反應聚合體末端基之量而測 得。咪唑共軛作用為73%。 表2 :治療組/井（48-井平底板） 組群# 治療 1 0.25毫克/毫升pEGFP + CDP-咪唑在58 kD環糊精中 2 0.025毫克/毫升pEGFP + CDP-咪唑在58 kD環糊精中 3 0.25毫克/毫升pEGFP + CD-1PEI在58 kD環.精中 4 0.025毫克/毫升pEGFP + CD-1PEI在58 kD環糊精中 5 lxl01QP /毫升GFCB在58kD環糊精中 6 1 X 109P /毫升GFCB在58 kD環糊精中 7 空對照組（只有細胞） 8 單獨58 kD環糊精基質對照組 結果： 第1天：組群1-4開始死亡。其開始自板消除。CCD-1074sk 細胞於形態學上’’被圓化’’且漂浮。組群5-8看起來很健康。 細胞係貼附至板，且於形態學上’’伸出π (成纖維細胞之典型 狀態）；但是，此時無一組群具有GFP表現。參閱圖12。 第2天：組群5-8看起來很健康。CCD-1074sk細胞係貼附至 88463 -85- 200423960 板，且伸出’’。組群5-6 (GFCB組群）對GFP表現為陽性。較 高劑量之GFCB(第5組）比起較低劑量之证⑶（第6組）具有較 多GFP表現。此時組群i、3及4看起來完全死亡；但是，一 對細胞已存活於第2組（0.025毫克/毫升pEGFp + CDp_咪唑在 58kD環糊精中）中。在組群“中沒有任何可測得之GFp表現。 第4天··在組群丨-4中之〇〇>1〇74呔細胞似乎已死亡。細胞 正在漂洋。在任何此等組群中不可測得GFP表現。組群5-8 均健康。組群5-6對GFP表現為陽性，且表現顯示甚至比第2 天更鮮明。 第5天：在組群丨_4中之CCD-1〇74sk細胞均死亡，且未見及 任何GFP表現。組群5_8為健康的。組群％對GFp表現為陽性 ，而表現程度再一次顯示比前一天更鮮明。 第6天：在組群丨-4中之CCD-1〇74sk細胞均死亡，且未見及 任何GFP表現。已不再監測細胞。組群％為健康的。組群孓 6仍然表現GFP，且表現程度顯示仍然較前一天鮮明。 第8天：在組群5-8中之CCD-1074sk細胞仍然看起來很健康 。於形怨學上，其與第6天看起來沒有任何不同。其仍然表 現GFP，且顯示係在所觀察之最鮮明強度下。 第12天··在組群5-8中之CCD-1074sk細胞均健康。細胞計數 似乎稍微比第8天多；但是，GFP表現顯示降低。 第13天··在組群5-8中之CCD-1074sk細胞顯示很健康，但GFp 表現開始降低。 實例29 方法 ·· 88463 -86- 200423960 基負A與基質B之成份係按照得自InsertTherap邮匕公司之撰 寫擬案進行調配。基質人為100毫克/毫升糸環糊精 聚合體（實例3方法Π)在PBS中，於pH值為7.2下，與4·4毫克 / I升 至剛燒化合物交聯劑（實例9方法II)。將此兩種成 份分成數液份，並保持分離，直到使用為止。基質Β為ι〇〇 寬克/笔升/3-環糊精-ΡΕΑ4⑽聚合體，在pBS中，於_值為η 下興36·5芜克/耄升二-金剛烷PEG34〇0化合物交聯劑。將 邊成份分成數液份，並保持分離。 測試三種不同傳輸方法： 1)使用手術繃帶將基質人傳輸至傷口位置，並在以手術繃帶 覆蓋之前，將基質B傳輸至傷口位置·· 以氯胺酮與甲苯嘍啡使ICR老鼠麻醉。將背側區域刮毛， 並造成兩個8毫米皮膚開孔。將5〇微升基質a(最後調整體積） 混合，含有少量染料，然後置於小方形片塊之〇於池繃帶上 。使基質凝膠化約2分鐘。在此段期間内，老鼠身上之左邊 傷口開孔，係以Mastisol繃帶黏著劑製備。接著，將含有已 混合基質A之〇pSlte繃帶翻轉（”黏性，，面朝下），並置於左邊 伤口位置上。將右邊傷口開孔以Mastis〇1黏著繃帶製備。含 有少量染料之基質B亦在最後調整體積為5〇微升下構成，並 直接放置在右邊傷口位置上。使其凝膠化約2分鐘，然後以 OpSite繃帶覆蓋。使此動物自手術恢復，並在*天後被犧牲。 V將預先混合之基質a與未預先混合之基質B經過先前塗敷 之手術繃帶，傳輸至傷口位置·· 以氯胺酮與甲苯違呼使ICR老鼠麻醉。將背側區域到毛， 88463 -87- 200423960 並造成兩個8愛米皮膚開孔。以Mastis〇1黏著劑製備兩個傷口 位置，並將1塊單片OpSite繃帶放在傷口上。製備供5〇微升 總注射體積用，而含有少量染料之基質A。將基質直接吸取 至lcc注射器中，並將23G針頭置於注射器上。自注射器射 出過量基質，直到留下大約50微升為止。然後，將此材料 經過OpSite繃帶注射在左邊傷口床上。對右側傷口，製備供 〜100微升總注射體積用之基質B。使用含有23G針頭之1 cc注 射器吸取大約82微升基質B。接著，將少許氣泡吸取至注射 备中。然後，將大約18微升伴隨之交聯劑吸取至相同注射 器針頭中。接著，將另外少許氣泡吸取至注射器中。最後 ，將少f (〜2-4微升）染料吸取至注射器中。將27(}針頭經過 繃帶放置在右邊傷口位置之一端，以使空氣自被覆蓋之傷 口位置放出。將具有23G針頭而含有基質]3之已分離成份之 注射器，經過繃帶（諸成份未經預先混合）放置，並將材科 注入傷口位置中。此27G針頭係提供使注射器中之小氣泡排 氣。使動物於手術後恢復，並在4天後被犧牲。 3)使用各種規格針頭，將基質A與乜注入ργΑ海綿中·· 以氯胺酮與曱苯噻畊使HSD大白鼠麻醉，並將pvA海綿以 皮下方式植入於大白鼠之腹侧上。以傷口夾使切口閉合， 並使動物恢復’歷經4天。將基質A在〜200微升之經調整注 射體積下’與染料（〜2_4微升）一起調配。將基質混合物經過 22G針顽及取至1 cc注射器中，並在注射器中混合。企圖移 除過里氣泡。將已混合之基質注入被犧牲動物上之pvA海绵 之中心。數分鐘後，打開傷口位置，並診查海綿區域。 88463 -88 - 200423960 製備供〜200微升注射用之美 <基貝B。基質含有少量染料，並 使用22G針頭吸取至1 cc注舢 射备中，將22G針頭移除，並以較 短23G注射用針頭置換。將 册材枓在〉王射器中混合，且企圖移 除過量氣泡。將基質注入PVA海 、 母、、弗足中心，使其靜置數分鐘 ，然後打開動物，以診查經注射之海绵。 結果： 及在以手術繃蒂 1)使用手術繃帶將基質A傳輸至傷口位置 覆蓋之前，將基質B傳輸至傷口位置： 將50微升基質Α(最後調整體積）與少量染料混合，放置在 小方形片塊之OpSl_帶上，使其凝膠化，歷經短時間（〜2分 鐘），然後翻轉（”黏性”面朝下）放在左邊傷口位置上。於手 術4天後犧牲動物時，傷口呈現乾燥，並發現動物已毫益困 難地容許基質A。基質顯示停留在其傳輸時之原先位置，音 即在傷口位置之上方，包括一部份周圍未受傷之組織。仍 然留在傷口位置之基質是表面的，且比手術當天較不充足 。在傷口位置處未見及任何粗大發炎外觀。參閱圖Μ.。 含有少量染料之基質B亦在最後調整體積5〇微升下構成， 並直接置於右邊傷口位置上，然後以〇pSite縐帶覆蓋。4天 後，當動物被犧牲時，傷口呈現乾燥，而動物似乎已良好 地容許基質B。在傷口位置周圍大體上未見及任何發炎或任 何其他不利作用。於手術後，基質並未分散在周圍組織上 ，而是停留在原先傷口位置中。於犧牲時仍然留在傷口位 置中之基質是表面的，且比手術當天較不充足。參閱圖 12B。 88463 -89- 200423960 預先混合之基質B經過先前塗敷 2)將預先混合之基質A與未 之手術繃帶傳輸至傷口位置 广微升基質A(最後調整體積)與少量染料混合，然後直 ^王射在Q舞及左輕口位置上。基㈣然定位在 &口位置，而未分散至周圍未受傷之组織。由於注射器中 〈乳泡，Μ可能施行服用體積之精確度量^於手術斗天後 犧牲Μ時’傷口呈現乾燥，幼物容許基^而毫無任何 可觀祭到之不利作用。其暂從# 口刀 立 基貝係侉田在其傳輸時之原先位置 / ^卩在包含些周圍未受傷組織之傷口位置處。於手 :後’基質並未分散於其他周圍組織上；但是，基質僅在 知口表面上，且比手術時較不充足。在總體診察時，於傷 口位置處未見及任何發炎。參閱圖13Α_13Β。 將含有少量染料而最後體積為1〇〇微升之基質β吸取至注 射…中。將基質之各種成份（聚合體、交聯劑及染料）個別 吸取至具有氣泡之注射器中，以分離個別成份。將用以排 除〉王射器中氣泡之排氣針頭，經過繃帶放置在傷口之一端 並將基貝Β之經分離成份經過〇pSite端帶直接注射在右邊 傷口位置上，無需任何預先混合。此方法需要最小量之壓 力’以成功地將基質注入傷口位置中，並使排氣針頭發生 作用’以排除皮膚下之氣泡。一旦基質B之全部成份均被傳 輸至傷口位置中時，藉目視觀察與觸覺，發現基質迅速凝 膠化’且沒有基質滲漏出繃帶。基質仍然定位在傷口床， 且並未大為擴散至周圍組織。當4天後動物被犧牲時，傷口 呈現乾燥，而動物似乎已容許基質B，毫無重大不利作用。 88463 -90- 200423960 傷口位置周圍未見及任何發炎或任何其他不利作用，且基 質顯示停留在局部傷口區域中。基質係被定位至傷口之表 面，且在比原先注射時較低量下。參閱圖13a_13b。 3)將基質A與B使用各種規格之針頭注入pVA海綿中： 以V畺木料製備基負A，並經過22G針頭吸取至1 cc注射器 中。將大約200微升基質注入pVA海綿中，使其靜置數分鐘 ，然後打開動物以供診察。於診察海绵時，基質顯示仍然 定位，且具有最少分散至周圍區域。 製備基免B，與少量染料混合，並以22G針頭吸取至1 cc注 射器中。以較短23G針頭（1英吋）置換22G針頭（1 1/2英吋）。 將大約200微升基質注入PVA海綿中，使其靜置數分鐘，然 後打開動物以供診察。在進一步診察海綿時，基質顯示仍 然定位，並具有最少分散至周圍區域。 結論： 基貝Α與基質Β均極端迅速地凝膠化，且皆為極黏性與濃 稠。即使能將基質以皮下方式注入PVA海綿中，但最容易之 傳輸方法是將基質之各種成份個別（藉由小氣泡分隔）吸取 土 ’主射备中，然後使用23G針頭，直接注射經過被覆蓋之皮 膚開孔。於此方法中，第二個較小規格之針頭可幫助使過 量空氣自傷口繃帶下排氣。 實例30 血小板衍生之生長因子B (PDGF-B)已被証實會刺激成纖維 細胞增生與胞外間質之合成。PDGF-B表現係在大白鼠pvA海 綿模式中，藉由RT-PCR比較環糊精與膠原基質。 88463 -91 - 200423960 動物# 200微升 總注射體積/海綿 組群# 海綿注射内容物 1 ： 單獨之膠原 2 ： 單獨之58 kD環糊精（CD)-金剛烷基 6 質 3 ： 2xl01QPNPGCB在膠原中 4 ·· 2x 101GPNPGCB在CD-金剛烷基質 (N = 6 塊海綿/組群） 中 5 ： 50微克pCTK-PD (使PDGF-B編碼之 質粒DNA) + L-PEI在CD-金剛烷基 質中 6 ： 50微克pCTK-PD + CD咪咬在CD-金 剛烷基質中 方法 進行六個小切開術（0.5公分），並將聚乙烯醇（PVA，M-PACT®) 海綿以皮下方式植入於雄性Harlan史泊格多利（Sprague-Dawley) 大白鼠腹側上。植入四天後，將待測與對照材料以vPBS與 液體膠原（Co/z如仍,或58 kD環糊精（CD)_金剛烷基質 按前述進行稀釋，並注入PVA海綿中。最後膠原配方為1.8 毫克/毫升，以Na〇H調整pH值，並以vPBS致使達到所要體 積。最後58 kD環糊精（CD)-金剛烷基質配方為100毫克/毫升 。將200微升總體積之試劑傳輸至各海绵。注射2天後，使 動物犧牲，並移除海綿。將海綿切成三片塊，並使大部份 海綿（〜70-80% )在液態氮中冷凍，及在-80°C下儲存，以供QPCR 與QRT-PCR分析用。將少部份海綿於4°C下，固定在4% PFA中 18小時，經石蟓包埋，並切片（5微米）。使用Masson氏三原 88463 -92- 200423960 色（細胞=黑色，血管分佈=紅色，及膠原=藍色）與蘇木素-曙紅方法，將切片染色。由兩位個別研究人員以顯微鏡方 式分析組織切片之總體組織學。 結果： 將已植入之PVA海綿以膠原，環糊精基質（CD)，2 X 101 gPN 之PGCB在膠原中，2 x 101 0PN之PGCB在CD中，50微克pCTX-PD + L-PEI在CD中，或50微克pCTK-PD + CD咪吐在CD中之任一 種進行處理。於處理後48小時移除海綿，並個別藉由QRT-PCR 與QPCR方法，檢測人類PDGF-B RNA與病毒DNA。亦將各海 綿之一部份固定、包埋、切片及使用Masson式三原色染色， 以供總體形態學檢視。 關於人類PDGF-B RNA表現之QRT-PCR (定量RT-PCR)分析， 証實以2xl01GPN之PGCB在CD中處理之海綿，具有最高平均 RNA含量為7.0 X 108毫當量PDGF-B /經檢測海綿（圖14)。以 2xl01GPN之PGCB在膠原中處理之海绵，具有類似平均含量 之PDGF-B RNA在3·2 X 108毫當量PDGF-B /經檢測海綿下。以50 微克pCTK-PD + L-PEI在CD中與50微克pCTK-PD CD咪唑在CD中 處理之海綿，個別具有PDGF-B RNA含量為6.8 X 105與9·1 X 104 毫當量PDGF-B /經檢測海綿。最後，以無論是膠原或環糊精 處理之海绵，未顯示可測得之PDGF-B RNA含量（圖14,表3)。 Student氏t-試驗分析顯示所有海綿處理組於統計學上係為不 同（ρ$0·05)，惟在2xl010PN之PGCB在膠原中與2xl010PN之 PGCB在CD中之間之海綿比較除外（表4)。亦進行GAPDH QRT-PCR對照檢測，以監測每個試樣之RNA品質與總RNA。此等 88463 -93 - 200423960 結果顯示一致量之RNA，對所有處理組係涵蓋從1.9 x 107至 6·9 X 107毫當量GAPDH/經檢測海綿之範圍（圖15)。 表 3 : hPDGF_B RNA 偵測之 QRT-PCR 結果 組群 計數⑻ 平均 標準偏差 標準誤差 膠原 6 BQL • • 58kDCD 5 BQL • • 2xl01QPNPGCB 在膠原 中 6 3.2E+8 2.0E8 8.2E+7 2x 1010PNPGCB 在 CD 中 6 7.0E+8 4.1E+8 1.7E+8 50 微克 pCTK-PD + L-PEI 在CD中 6 6.9E+5 2.9E+5 1.2E+5 50 微克 pCTK-PD + CD咪 唆在CD中 6 9.1E+4 1.7E+5 7.1E+4 BQL =低於定量含量（<2 X 103毫當量PDGF-B /經檢測海綿） 毫當量=分子當量為一項任意指定之數目，以正對照組之稀 釋因子為基準。 表4 ··處理組間之hPDGF-B RNA之統計分析 處理組之未成對比較 p-值 2xl01QPNPGCB 在膠原中對2x101gPNPGCB 在 CD 中 0.0699 2 X 1010 PN PGCB 在膠原中對 50 微克 pCTK-PD + L-PEI 在CD中 0.0030 2 X 1010 PN PGCB在膠原中對50微克pCTK-PD + CD咪峻 在CD中 0.0030 2 X 101 0PN PGCB 在 CD 中對 50 微克 pCTK-PD + L-PEI 在CD中 0.0020 2 X 1010 PN PGCB 在 CD 中對 50 微克 pCTK-PD + 0〇咪也 在CD中 0.0020 50 微克 pCTK-PD + L-PEI 在 CD 中對 50 微克 pCTK-PD + CD咪嗤在CD中 0.0014 88463 -94- 200423960 註：無法進行關於膠原與58 kD CD處理組之統計分析。 關於人類PDGF-B DNA之QPCR (定量PCR)分析，顯示以50微 克pCTK-PD + L-PEI在CD中與50微克pCTK-PD + CD咪吐在CD中處 理之海绵，個別具有最高平均含量在2.4xl012與1.7xl012毫當 量PDGF-B /經檢測海绵下（圖16,表5)。以2 X 101 〇PN PGCB在膠 原中與2x 101GPNPGCB在CD中處理之海綿，個別具有平均人 類 PDGF-B DNA 含量為 4·5 X 101 0 與 4·1 X 101 0 毫當量 PDGF-B / 經檢 測海綿。但是，以膠原或環糊精處理之海綿亦個別具有正 PDGF-B DNA含量在9·8 X 108與1·3 X 108毫當量PDGF-B /經檢測海 綿。Student氏1>試驗分析顯示全部組群於統計學上為不同（ρ S0.05)，惟在膠原與環糊精之間，及在2xl01QPNPGCB在膠 原中與2x 101QPNPGCB在CD中處理組之間之海綿比較除外（ 表6)。進行老鼠GAPDH定量，以確保DNA之品質與等量DNA 輸入，而此等結果涵蓋從9.4xl08至2·8χ109毫當量GAPDH/經 檢測海綿之範圍（圖17)。 表5 :海绵内病毒PDGF-B偵測之PCR結果 組群 計數⑻ 平均 標準偏差 標準誤差 膠原 6 9.8E+8 1.5E+9 6.1E+8 58kDCD 5 1.3E+8 2.1E+8 9.2E+7 2xl01GPNPGCB 在膠 原中 6 4.5E+10 3.9E+10 1.6E+10 2x 1010PNPGCB 在 CD 中 6 4.1E+10 2.3E+10 9.2E+9 50 微克 pCTK-PD + L-PEI在CD中 6 2.4E+12 1.1E+11 4.6E+10 50 微克 pCTK-PD + CD 咪吐在CD中 6 1.7E+12 4.1E+11 1.7E+11 88463 -95 - 200423960 表6 :海綿内人類PDGF-B DNA含量之統計分析 處理組之未成對比較 p-值 膠原對58 kD CD 0.2382 膠原對2xl01()PNPGCB在膠原中 0.0207 膠原對2x 101GPNPGCB在CD中 0.0015 膠原對50微克pCTK-PD + L-PEI在CD中 <0.0001 膠原對50微克pCTK-PD + CD咪吐在CD中 <0.0001 58kDCD 對 2xl010PNPGCB在膠原中 0.0321 58 kD CD 對 2 X 101 0PNPGCB 在 CD 中 0.0030 58 kD CD 對 50 微克 pCTK-PD + L-PEI 在 CD 中 <0.0001 58 kD CD對50微克pCTK-PD + CD咪吐在CD中 <0.0001 2xl01QPNPGCB 在膠原中對 2xl01GPNPGCB 在 CD中 0.8197 2x101gPNPGCB在膠原中對50微克pCTK-PD + L-PEI 在 CD 中 <0.0001 2 X 101 〇PN PGCB在膠原中對50微克pCTK-PD + CD咪唆在CD中 <0.0001 2 X 101 G PN PGCB 在 CD 中對 50 微克 pCTK-PD + L-PEI在CD中 <0.0001 2 X 101 G PN PGCB 在 CD 中對 50 微克 pCTK-PD + CD 咪吐在CD中 <0.0001 50 微克 pCTK-PD + L-PEI 在 CD 中對 50 微克 pCTK-PD + CD咪+在CD中 0.0018 QPCR結果顯示顯著含量iPDGF-B DNA在膠原與環糊精對照 海綿中偵測出。關於此觀察之貢獻來源尚未被完全測得； 但是，Hexon QPCR結果，其將僅偵測被包含在腺病毒中之 Hexon順序，其顯示在對照海綿中偵測之DNA係衍生自PCTK-PD質粒（圖18)。由於PDGF-B RNA並未在對照海綿中被偵測出 ，故這指出污染最可能發生在採集海绵時或之後。 88463 -96- 200423960 表7 ··摘述PVA海綿形態學分析 組群 膠囊大小 免疫回應 ii組織 膠原沉積 血管分佈 膠原 薄 最少 ——______ 最少 最少 最少 58kDCD 薄至中等 輕微至 中等 最少至 最少 輕微至 中等 2xl010PN PGCB 在 膠原中 厚 中等 最少至 輕微 輕微 中等至 沉重 2xl〇10PN PGCB 在 CD中 極厚 嚴重 最少至 輕微 輕微 中等 50微克 pCTK-PD + L-PEI 在 CD中 薄至中等 輕微至 中等 最少至 輕微 最少 輕微至 中等 50微克 pCTK-PD + CD咪唑 在CD中 薄至中等 輕微至 中等 最少至 輕微 最少 輕微至 中等 5微米Masson式三原色染色之石蠟切片，係由兩位個別觀 察者分析。海綿特徵係以定性方式，藉由下列標準評估： 最少<輕微<中等<沉重〈嚴重，對所有種類而言，惟膠囊大 小除外。下列標準係用於評估膠囊大小：薄 < 中等 < 厚 < 極 厚。 進行海绵之形態學分析，以評估宿主免疫回應。雖然此項 研先係經設計以基因表現與發炎作為主要終點，但肉芽組 織形成、膠原沉積及新血管形成，當存在時，亦進行分析 。在採集時，以2xl010PN之PGCB在CD中處理之海綿，具有 88463 -97- 200423960 可觀察到及提高量之滲出液在海綿内及其周圍（表7，圖i9” 此等海、纟帛在大小上亦遠大於其他組群。總體組織學檢視顯 現出以2 X 101 〇 PN之PGCB在CD中處理之海綿具有嚴重免疫回 應，其特徵為厚膠囊與細胞浸潤之存在。亦發現肉芽組織 、膠原及新血管形成。以2 X 1〇ι 〇PN之PGCB在膠原中處理之 海绵，亦顯示肉芽組織形成、膠原沉積及新血管形成；但 是，免疫回應並不如以PGCB在CD中處理之海綿一般嚴重。 以單獨之環糊精、50微克pCTK-PD + L-PEI在CD中或50微克 PCTK-PD + CD咪吐在CD中處理之海綿，均有類似結果，具有 最少量之肉芽組織。在此等處理組中發現之整體免疫回應 ，係類似以PGCB在膠原中處理之海綿。最後，發現單獨以 膠原處理之海绵具有最少量之組織、膠原或血管分佈，以 及最少免疫回應。 所有上文引述之參考資料與刊物均據此併於本文供參考。 【圖式簡單說明】 圖1係概要地描繪本發明之交聯聚合體基質。 圖2係說明本發明之基質，包含治療用部份基團。 圖3描繪CD-PEG34〇0之分子量作為聚合反應時間之函數。 圖4呈現轉移感染實驗之結果。 圖5顯示細胞潛移經過如本文中所述之基質。 圖6顯示未交聯之CD-PEG34⑽聚合體之動態頻率掃描。濃 度為1〇〇毫克/毫升，在PBS中，溫度為37t，及應變為0.5%。 圖7呈現未使用交聯劑之CD-PEG34〇〇聚合體之動態頻率掃 描。濃度為100毫克/毫升，在中，溫度為20°c，及應變 88463 -98- 200423960 為 0.5%。 圖8係提供使用36·5毫克/毫升二_金剛烷-PEG交聯劑之CD_ PEG^oo聚合體（100毫克/毫升）之動態頻率掃描。溫度為卩 °C，及應變為0.5%。 圖9為使用36.5耄克/耄升二·金剛燒_peg交聯劑之cd_ peG34〇()聚合體（1〇〇毫克/毫升）之動態頻率掃描。溫度為2〇 °C，及應變為0.5%。 圖10顯示牛膠原基質在2.4毫克/毫升下之動態頻率掃描。 溫度為37 C，及應變為0.5%。 圖11係說明使用如本文中所述基質之活體外檢測之結果。 圖12描繪以主題組合物治療傷口之結果。（12A) ·· ICR老鼠 係以基質A(左邊傷口）與基質B(右邊傷口）處理。所示之動 物係在手術後4天犧牲。紫色油墨為得自手術筆之印記，並 非被使用於基質之染料（深藍色/黑色）。極少染料仍然留在 實際傷口位置上；但是，其餘染料係來自基質之滲出與擴 展至周圍未文傷組織，其係在塗敷傷口繃帶後發生。（12玛： ICR老鼠係以基質A(左邊傷口）與基質B(右邊傷口）處理。所 示之動物係在手術後4天犧牲。左邊與右邊傷口個別顯示基 貝A與基質B於注射後不會擴散至周圍組織。 圖13顯示以主題組合物治療傷口之結果。㈨A)·· icr老鼠 係以基質A(左邊傷口）與基質B(右邊傷口）處理。所示之動 物係在手術後4天犧牲。自然之傷口收縮作用可在左邊與右 邊傷口中見及。可見及來自最初注射所留下之少量染料，· 但疋’沒有染料存在於周圍未受傷組織中。（i3B) : icr老鼠 88463 -99- 200423960 係以基質A (左邊傷口）與基質B (右邊傷口）處理。所示之動 物係在手術後4天犧牲。左邊與右邊傷口個別顯示基質A與 基質B於注射後不會擴散至周圍組織。 圖14描繪在經處理海綿内之PDGF-B表現含量。QRT-PCR係 在得自各治療組之個別海绵試樣上進行。數據係以6塊經檢 測海綿之平均土標準偏差表示。 圖15係說明治療組内之GAPDHRNA含量。 圖16顯示經處理海綿内之病毒PDGF-B DNA。QPCR檢測係 在得自各治療組之海綿試樣上進行。PCR引物係以人類 PDGF-B順序之專一表現為標的，而不會與大白鼠PDGF-B DNA 交叉反應。 圖17描繪海綿内之GAPDH DNA含量。 圖18描繪海綿治療組内之病毒HexonDNA。 圖19係提供PVA海綿之形態學分析。 熟諳此藝者將使用不超過例行實驗術，而明瞭或能夠確定 本文中所述本發明特殊具體實施例之許多等效事項。此種 等效事項係意欲由下述申請專利範圍所涵蓋： 88463 100-

Claims (1)

  1. 200423960 拾、申請專利範圍： 1· 一種聚合體組合物，其包含線性生物可相容聚合體，包括 多個包藏宿主，與連結分子，各連結分子包含至少兩個部 份基團，，此部份基團會與該包藏宿主形成包藏複合物，其 中該連結分子會使該聚合體交聯。 2·根據申請專利範圍第1項之聚合體組合物，其中包藏宿主 為壤糊精部份基團。 3.根據申請專利範圍第1項之聚合體組合物，其進一步包含 至少一種生物活性化合物或其前體藥物形式。 4·根據申請專利範圍第3項之聚合體組合物，其中生物活性 化合物為核酸。 5. 根據申請專利範圍第4項之聚合體組合物，其中核酸係被 提供於選自病毒、聚合體及微脂粒之傳輸系統中。 6. —種以核酸使細胞轉移感染之方法，其包括使該細胞與根 據申請專利範圍第4項之聚合體組合物接觸。 7·根據申請專利範圍第3項之聚合體組合物，其中化合物為 多肽或小的有機分子。 8. 根據申請專利範圍第3_項之聚合體組合物，其中化合物為 蛋白質或多肤。 9. 根據申請專利範圍第3項之聚合體組合物，其中生物活性 化合物或其前體藥物形式係被提供於傳輸系統中。 10·根據申請專利範圍第9項之聚合體組合物，其中傳輸系統 係選自微粒子與微脂粒。 11.根據申請專利範圍第3項之聚合體組合物，其中生物活性 88463.doc 200423960 化合物係以共價方式連接至會與包藏宿主形成包藏複合 物之部份基團。 12·根據申請專利範圍第1項之聚合體組合物，其進一步包含 至少一種佐劑。 13. 根據申請專利範圍第3項之聚合體組合物，其進一步包含 一種會增加生物活性劑有效性之佐劑。 14. 一種聚合體組合物，其包含生物可相容、生物可降解之聚 合體，其包含多個包藏宿主，與連結分子，各連結分子包 含至少兩個會與包藏宿主形成包藏複合物之部份基團，其 中該連結分子會使該聚合體交聯。 15. —種聚合體組合物，其包含生物可相容聚合體，其包含多 個包藏宿主，與連結分子，各連結分子包含至少三個會與 包藏宿主形成包藏複合物之部份基團，其中該連結分子會 使聚合體交聯。 16· —種聚合體組合物，其包含生物可相容聚合體，其包含多 個環糊精部份基團，與連結分子，各連結分子包含至少兩 個會與環糊精部份基團形成包藏複合物之部份基團，其中 各環糊精部份基團具有不超過兩個對聚合體主鏈之鍵結 ，且該連結分子會使該聚合體交聯。 17· —種治療組合物，其包含a)生物可相容聚合體，其包含多 個包藏宿主，b)連結分子，各連結分子包含至少兩個會與 包藏宿主形成包藏複合物之部份基團，及c)治療劑，其中 該連結分子會使該聚合體交聯。 18. —種製備交聯聚合體之方法，其包括將包含包藏宿主之線 88463.doc 200423960 性生物可相容聚合體與連結分子合併，各八 、、’σ刀于包含至 V兩個會與包藏宿主形成包藏複合物之部份基團。 .根據中請專利範圍㈣項之方法，其中包藏宿:為環糊於 20. 根據申請專利範圍第18項之方法’其十聚合體與連結二 係於生物活性劑存在下合併。 刀 21. 根據中請專利範圍第2()項之方法，其中生物活性劑係以共 價方式連結至會與包藏宿主形成包藏複合物之部份基團/、 22. -種製備交聯聚合體之方法，其包括將包含包藏寄生土物之 聚合體與連結分子合併，各連結分子包含至少兩個會與包 藏哥生物形成包藏複合物之包藏宿主。 23. 根據中請專利範圍第22項之方法，其中包藏宿主為環构精。 24. 根據申請專利範圍第22項之方法，其中聚合體與連結/子 係於生物活性劑存在下合併。 25·根據申請專利範圍第3項之聚合體組合物，其係有用於a 療適合以該生物活性化合物或其前體藥物形式治療之疾 病0 26·根據申請專利範圍第25項之聚合體組合物，其中疾病為病 症。 27·根據申請專利範圍第！項之聚合體組合物，其係有用於仏 療傷口。 28·根據申請專利範圍第27項之聚合體組合物，其中組合物進 一步包含治療劑。 29.根據申請專利範圍第28項之聚合體組合物，其該治療為丨為 編碼PDGF-B之核酸。 88463.doc
TW092128118A 2002-10-09 2003-10-09 Cyclodextrin-based materials, compositions and uses related thereto TW200423960A (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US41737302P 2002-10-09 2002-10-09

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW200423960A true TW200423960A (en) 2004-11-16

Family

ID=32094010

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW092128118A TW200423960A (en) 2002-10-09 2003-10-09 Cyclodextrin-based materials, compositions and uses related thereto

Country Status (13)

Country Link
US (3) US8357377B2 (zh)
EP (1) EP1549269A4 (zh)
JP (1) JP4602085B2 (zh)
KR (1) KR20050051686A (zh)
CN (1) CN1717209A (zh)
AU (1) AU2003295344B2 (zh)
BR (1) BR0315198A (zh)
CA (1) CA2501132A1 (zh)
MX (1) MXPA05003591A (zh)
RU (1) RU2005114007A (zh)
TW (1) TW200423960A (zh)
WO (1) WO2004032862A2 (zh)
ZA (1) ZA200502754B (zh)

Families Citing this family (63)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102516417B (zh) 2002-09-06 2014-12-10 天蓝制药公司 用于传递治疗剂的以环糊精为基础的聚合物
WO2004032862A2 (en) * 2002-10-09 2004-04-22 Insert Therapeutics, Inc. Cyclodextrin-based materials, compositions and uses related thereto
SG129240A1 (en) * 2003-01-23 2007-02-26 Agency Science Tech & Res Biodegradable copolymer and nucleic acid delivery system
US7605120B2 (en) * 2003-10-22 2009-10-20 Amgen Inc. Antagonists of the brandykinin B1 receptor
US20070020196A1 (en) * 2003-12-31 2007-01-25 Pipkin James D Inhalant formulation containing sulfoalkyl ether cyclodextrin and corticosteroid prepared from a unit dose suspension
US20070020298A1 (en) * 2003-12-31 2007-01-25 Pipkin James D Inhalant formulation containing sulfoalkyl ether gamma-cyclodextrin and corticosteroid
NZ548225A (en) 2003-12-31 2012-12-21 Cydex Pharmaceuticals Inc Inhalant formulation containing sulfoakyl ether cyclodextrin and corticosteroid
US20070020299A1 (en) 2003-12-31 2007-01-25 Pipkin James D Inhalant formulation containing sulfoalkyl ether cyclodextrin and corticosteroid
WO2005088655A1 (en) * 2004-03-12 2005-09-22 The Provost Fellows And Scholars Of The College Of The Holy And Undivided Trinity Of Queen Elizabeth Near Dublin A magnetoresistive medium
RU2007103703A (ru) * 2004-07-01 2008-08-10 Дзе Недзеландз Кэнсе Инститьют (Nl) Комбинация, включающая ингибитор бррм (белка резистентности рака молочной железы) и 4-(4-метилпиперазин-1-илметил)-n-(4-метил-3-(4-пиридин-3-ил)пиримидин-2-иламино)фенил)-бензамид
TWI335352B (en) 2005-03-31 2011-01-01 Calando Pharmaceuticals Inc Inhibitors of ribonucleotide reductase subunit 2 and uses thereof
WO2006115211A1 (ja) * 2005-04-25 2006-11-02 Kaneka Corporation シクロデキストリン含有ポリエステル系重合体及びその製造方法
WO2007009265A1 (en) * 2005-07-22 2007-01-25 The Governors Of The University Of Alberta Tec Edmonton NOVEL β-CYCLODEXTRIN-BASED MOLECULES AND DRUG DELIVERY COMPOSITIONS
US20070185066A1 (en) * 2005-12-20 2007-08-09 Verus Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for the delivery of corticosteroids
US20070160542A1 (en) * 2005-12-20 2007-07-12 Verus Pharmaceuticals, Inc. Methods and systems for the delivery of corticosteroids having an enhanced pharmacokinetic profile
US20070197486A1 (en) * 2005-12-20 2007-08-23 Verus Pharmaceuticals, Inc. Methods and systems for the delivery of corticosteroids
US20070178050A1 (en) * 2005-12-20 2007-08-02 Verus Pharmaceuticals, Inc. Methods and systems for the delivery of corticosteroids having an increased lung depositon
US20070249572A1 (en) * 2005-12-20 2007-10-25 Verus Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for the delivery of corticosteroids
JP2007211060A (ja) * 2006-02-07 2007-08-23 Japan Advanced Institute Of Science & Technology Hokuriku 超分子ポリマー及びその合成方法
JP2009526858A (ja) * 2006-02-15 2009-07-23 ティカ レーケメデル アーベー コルチコステロイド溶液を製造する方法
KR100809046B1 (ko) * 2006-03-10 2008-03-03 가톨릭대학교 산학협력단 풀루란을 가진 나노자가응집체 및 이의 이용방법
US20080027212A1 (en) * 2006-06-28 2008-01-31 Skinner Keith K Methods and compositions for improved uptake of biological molecules
JP2010514679A (ja) * 2006-12-22 2010-05-06 スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー 制御放出組成物及び方法
US20080176958A1 (en) 2007-01-24 2008-07-24 Insert Therapeutics, Inc. Cyclodextrin-based polymers for therapeutics delivery
WO2008112993A1 (en) 2007-03-15 2008-09-18 Ventana Medical Systems, Inc. Stabilized hematoxylin
KR20150041173A (ko) 2007-04-27 2015-04-15 사이덱스 파마슈티칼스, 인크. 클로피도그렐 및 설포알킬 에테르 사이클로덱스트린을 함유하는 제형 및 사용 방법
WO2009001364A2 (en) * 2007-06-28 2008-12-31 Capsutech Ltd Targeting conjugates comprising active agents encapsulated in cyclodextrin-containing polymers
ITMI20071321A1 (it) * 2007-07-04 2009-01-05 Sea Marconi Technologies Di Va Nanospugne a base di ciclodestrine come veicolo per farmaci antitumorali
AU2009232355A1 (en) 2008-04-04 2009-10-08 Calando Pharmaceuticals, Inc. Compositions and use of EPAS1 inhibitors
US10463677B2 (en) 2008-11-07 2019-11-05 Cydex Pharmaceuticals, Inc. Composition containing sulfoalkyl ether cyclodextrin and latanoprost
CA2750252A1 (en) * 2009-01-28 2010-08-05 Smartcells, Inc. Synthetic conjugates and uses thereof
WO2010088282A1 (en) * 2009-01-30 2010-08-05 Rgo Biosciences Llc Nucleic acid binding assays
WO2010099466A2 (en) * 2009-02-26 2010-09-02 The Regents Of The University Of California A supramolecular approach for preparation of size controllable nanoparticles
KR101743591B1 (ko) 2009-05-13 2017-06-20 사이덱스 파마슈티칼스, 인크. 프라수그렐 및 사이클로덱스트린 유도체를 포함하는 약학 조성물 및 그의 제조 및 사용 방법
CN102458114A (zh) 2009-05-29 2012-05-16 锡德克斯药物公司 包含环糊精衍生物的可注射美法仑组合物及其制备和使用方法
US11020363B2 (en) 2009-05-29 2021-06-01 Cydex Pharmaceuticals, Inc. Injectable nitrogen mustard compositions comprising a cyclodextrin derivative and methods of making and using the same
WO2010141667A1 (en) * 2009-06-03 2010-12-09 Case Western Reserve University Therapeutic agent delivery system and method
IN2012DN02345A (zh) 2009-09-16 2015-08-21 Univ Duke
US9226969B2 (en) 2009-11-18 2016-01-05 Nektar Therapeutics Salt form of a multi-arm polymer-drug conjugate
EA201200617A1 (ru) 2009-11-23 2012-11-30 Серулин Фарма Инк. Полимеры на основе циклодекстрина для доставки лекарственных средств
WO2011090940A1 (en) 2010-01-19 2011-07-28 Cerulean Pharma Inc. Cyclodextrin-based polymers for therapeutic delivery
EP3566719A1 (en) * 2010-05-18 2019-11-13 Cerulean Pharma Inc. Compositions and methods for treatment of autoimmune and other diseases
US20120213854A1 (en) * 2010-09-30 2012-08-23 Fetzer Oliver S Methods of treating a subject and related particles, polymers and compositions
JP6013349B2 (ja) 2010-11-01 2016-10-25 メイ ファーマ, インク.Mei Pharma, Inc. 癌の処置のためのイソフラボノイド化合物および方法
US10335491B2 (en) * 2011-07-21 2019-07-02 The Regents Of The University Of California Catalytic delivery nanosubstrates (CDNS) for highly efficient delivery of biomolecules
CN103289075B (zh) 2012-02-22 2016-01-20 天津键凯科技有限公司 聚乙二醇与纳洛酮的结合物及其药物组合物和应用
FR2989001B1 (fr) * 2012-04-06 2017-07-21 Centre Nat Rech Scient Microparticules et nanoparticules constituees de polysaccharides hydrophobises et d'une alpha-cyclodextrine
WO2013158710A2 (en) 2012-04-18 2013-10-24 Cerulean Pharma Inc. Methods and systems for polymer precipitation and generation of particles
US9827321B2 (en) 2012-08-14 2017-11-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Stabilizing shear-thinning hydrogels
WO2014055493A1 (en) 2012-10-02 2014-04-10 Cerulean Pharma Inc. Methods and systems for polymer precipitation and generation of particles
US9828341B2 (en) * 2012-11-28 2017-11-28 Victoria Link Limited Dendritic core compounds
WO2014127357A1 (en) * 2013-02-15 2014-08-21 The Regents Of The University Of California Supramolecular magnetic nanoparticles
CA2902753C (en) 2013-02-27 2019-04-09 Crayola Llc Rinsable inks and methods of making the same
DE102013021060A1 (de) * 2013-12-18 2015-06-18 Rathor Ag Verfahren zur Abtrennung von Monomeren aus isocyanathaltigen Prepolymeren
US10329386B2 (en) 2014-07-08 2019-06-25 Osaka University Self-restoring macromolecular material and production method for same
CA2950694C (en) * 2014-07-09 2019-04-02 Halliburton Energy Services, Inc. Treatment fluids for reducing subterranean formation damage
ES2877712T3 (es) 2015-02-02 2021-11-17 Mei Pharma Inc Terapias combinadas para su uso en el tratamiento del cáncer de mama
EP3322295B1 (en) 2015-06-19 2022-09-28 The University of Queensland Composition
CN105999289B (zh) * 2016-04-01 2018-11-20 南开大学 一种二元超两亲性纳米粒子溶液及其制备方法和应用
CN106349396A (zh) * 2016-08-26 2017-01-25 湖南尔康制药股份有限公司 一种具有超声敏感性的交联淀粉
CN112011040B (zh) * 2020-07-20 2021-08-17 广州医科大学 一种多重纳米传递系统及其制备方法
WO2022029220A1 (en) 2020-08-05 2022-02-10 Ellipses Pharma Ltd Treatment of cancer using a cyclodextrin-containing polymer-topoisomerase inhibitor conjugate and a parp inhibitor
EP4297790A1 (en) * 2021-02-25 2024-01-03 Noble Panacea Labs, Inc. Assembly of organic supramolecular vessels for controlled drug release

Family Cites Families (46)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1390479A (en) 1973-09-05 1975-04-16 I Orch Sinteza Akademii Nauk L Pharmaceutical composition for treatment of parkinsonism
DE2842862A1 (de) * 1978-10-02 1980-04-10 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur bestimmung von ionen, polaren und/oder lipophilen substanzen in fluessigkeiten
CH663951A5 (fr) * 1984-10-10 1988-01-29 Nestle Sa Procede d'enrichissement selectif en acides gras polyinsatures d'un melange contenant des acides gras fractions enrichies obtenues et compositions les contenant.
US4841081A (en) * 1985-10-16 1989-06-20 Osaka Soda Co., Ltd. Method of optically resolving a racemate or a diastereomeric mixture of glycidyl compound
GB2197720A (en) 1986-11-20 1988-05-25 Nat Res Dev Immobilisation of polynucleotides
JP2993967B2 (ja) * 1987-06-17 1999-12-27 インスティテュート・フォー・チャイルド・ヘルス・リサーチ ダニアレルゲンのクローニング
US4877778A (en) * 1987-07-01 1989-10-31 The Children's Medical Center Corporation Method of enhancing lipophile transport using cyclodextrin derivatives
JP2614081B2 (ja) * 1988-05-27 1997-05-28 大塚化学株式会社 光学活性β−ラクタム誘導体の製造法
US4887778A (en) * 1988-06-01 1989-12-19 Universal Instruments Corporation Feeder drive assembly and replaceable section for tape supplying and cover peeling
HU200913B (en) 1988-07-28 1990-09-28 Ciklodextrin Kutato Fejlesztoe Process for producing infusion stock-solution containing pharmaceutically active components of bad water solubility
US5098793A (en) * 1988-09-29 1992-03-24 Uop Cyclodextrin films on solid substrates
US5139687A (en) 1990-05-09 1992-08-18 The Proctor & Gamble Company Non-destructive carriers for cyclodextrin complexes
JPH0425505A (ja) * 1990-05-21 1992-01-29 Toppan Printing Co Ltd シクロデキストリンポリマー及びシクロデキストリン膜の製造方法
WO1992009637A1 (fr) * 1990-11-30 1992-06-11 Toppan Printing Co., Ltd. Procede de production d'un derive de cyclodextrine et polymere contenant de la cyclodextrine immobilisee
JP2976154B2 (ja) * 1991-11-27 1999-11-10 コニカ株式会社 ハロゲン化銀写真感光材料用固形処理剤
HU210922B (en) 1993-05-24 1995-09-28 Europharmaceuticals Sa Nimesulide alkali salt cyclodextrin inclusion complexes their preparation and pharmaceutical compositions containing them
US5880154A (en) * 1994-02-01 1999-03-09 The Board Of Regents Of The University Of Nebraska Polymeric adamantane analogues
HU218280B (en) * 1994-04-26 2000-07-28 Cyclodextrin inclusion complexes containing sin-1a which are stable intheir solid state, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing the comlexes
US5691316A (en) 1994-06-01 1997-11-25 Hybridon, Inc. Cyclodextrin cellular delivery system for oligonucleotides
JP3699141B2 (ja) 1994-09-24 2005-09-28 伸彦 由井 超分子構造の生体内分解性医薬高分子集合体及びその調製方法
US5728804A (en) * 1995-06-02 1998-03-17 Research Corporation Technologies, Inc. Use of cyclodextrins for protein renaturation
US6667293B1 (en) * 1995-09-12 2003-12-23 Hybridon, Inc. Use of cyclodextrins to modulate gene expression with reduced immunostimulatory response
US5844030A (en) * 1996-07-09 1998-12-01 Andros; Nicholas Charged ion cleaning devices and cleaning system
DE19629494A1 (de) * 1996-07-09 1998-01-15 Schering Ag Pseudopolyrotaxane
WO1998047536A1 (en) 1997-04-23 1998-10-29 University Of Otago Controlled release of ophthalmic compositions
JPH11100401A (ja) * 1997-07-30 1999-04-13 Kikkoman Corp 環状オリゴ糖及びそれを含むレトロウイルス性疾患の予防または治療剤
DE69836643T2 (de) * 1997-09-15 2007-09-27 Genetic Immunity, Llc Zusammensetzungen für die zufuhr von genen an antigen-präsentierende zellen der haut
IT1298732B1 (it) 1998-03-13 2000-02-02 Recordati Chem Pharm Composizioni farmaceutiche orali assumibili senza liquidi,contenenti complessi di inclusione
US6048736A (en) * 1998-04-29 2000-04-11 Kosak; Kenneth M. Cyclodextrin polymers for carrying and releasing drugs
US7091192B1 (en) * 1998-07-01 2006-08-15 California Institute Of Technology Linear cyclodextrin copolymers
US6509323B1 (en) * 1998-07-01 2003-01-21 California Institute Of Technology Linear cyclodextrin copolymers
US6261583B1 (en) * 1998-07-28 2001-07-17 Atrix Laboratories, Inc. Moldable solid delivery system
US6703381B1 (en) 1998-08-14 2004-03-09 Nobex Corporation Methods for delivery therapeutic compounds across the blood-brain barrier
WO2000033885A1 (en) 1998-12-04 2000-06-15 California Institute Of Technology Supramolecular complexes containing therapeutic agents
US7375096B1 (en) * 1998-12-04 2008-05-20 California Institute Of Technology Method of preparing a supramolecular complex containing a therapeutic agent and a multi-dimensional polymer network
US6740643B2 (en) * 1999-01-21 2004-05-25 Mirus Corporation Compositions and methods for drug delivery using amphiphile binding molecules
JP2003501440A (ja) 1999-06-07 2003-01-14 マイラス コーポレーション 反応活性なジスルフィド結合を含む化合物
EP1102785B1 (en) 1999-06-07 2013-02-13 Arrowhead Research Corporation COMPOSITIONS FOR DRUG DELIVERY USING pH SENSITIVE MOLECULES
EP1233671A4 (en) 1999-11-29 2005-11-02 Mirus Corp COMPOSITIONS AND METHODS OF DISPOSING MEDICAMENTS USING AMPHIPHILIC BINDING MOLECULARS
SK282717B6 (sk) 2000-03-10 2002-11-06 �Stav Experiment�Lnej Farmakol�Gie Sav Spôsob prípravy ultravysokomolekulových hyalurónanov
EP1307553A2 (en) * 2000-08-01 2003-05-07 Oregon Health & Science University Mammalian dna binding membrane-associated protein-encoding gene and uses
TWI321054B (en) 2000-12-19 2010-03-01 California Inst Of Techn Compositions containing inclusion complexes
US7141540B2 (en) * 2001-11-30 2006-11-28 Genta Salus Llc Cyclodextrin grafted biocompatible amphilphilic polymer and methods of preparation and use thereof
CN102516417B (zh) * 2002-09-06 2014-12-10 天蓝制药公司 用于传递治疗剂的以环糊精为基础的聚合物
WO2004032862A2 (en) 2002-10-09 2004-04-22 Insert Therapeutics, Inc. Cyclodextrin-based materials, compositions and uses related thereto
US20080176958A1 (en) * 2007-01-24 2008-07-24 Insert Therapeutics, Inc. Cyclodextrin-based polymers for therapeutics delivery

Also Published As

Publication number Publication date
KR20050051686A (ko) 2005-06-01
BR0315198A (pt) 2005-08-30
EP1549269A2 (en) 2005-07-06
ZA200502754B (en) 2006-09-27
WO2004032862A2 (en) 2004-04-22
EP1549269A4 (en) 2010-10-06
US8357377B2 (en) 2013-01-22
US20130315980A1 (en) 2013-11-28
WO2004032862A3 (en) 2004-07-01
JP4602085B2 (ja) 2010-12-22
CN1717209A (zh) 2006-01-04
US20040109888A1 (en) 2004-06-10
AU2003295344A1 (en) 2004-05-04
RU2005114007A (ru) 2005-10-10
US20140199370A1 (en) 2014-07-17
CA2501132A1 (en) 2004-04-22
JP2006513992A (ja) 2006-04-27
AU2003295344B2 (en) 2008-01-31
MXPA05003591A (es) 2005-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TW200423960A (en) Cyclodextrin-based materials, compositions and uses related thereto
Le et al. Bioinspired pH-and temperature-responsive injectable adhesive hydrogels with polyplexes promotes skin wound healing
Huang et al. Hyaluronic acid coated albumin nanoparticles for targeted peptide delivery to the retina
Zhou et al. Novel zwitterionic vectors: Multi-functional delivery systems for therapeutic genes and drugs
Kharkar et al. Thiol–ene click hydrogels for therapeutic delivery
Kim et al. MMPs-responsive release of DNA from electrospun nanofibrous matrix for local gene therapy: in vitro and in vivo evaluation
Davis The first targeted delivery of siRNA in humans via a self-assembling, cyclodextrin polymer-based nanoparticle: from concept to clinic
Behr Synthetic gene transfer vectors II: back to the future.
Zhao et al. Folic acid modified cationic γ-cyclodextrin-oligoethylenimine star polymer with bioreducible disulfide linker for efficient targeted gene delivery
Nakayama Hyperbranched polymeric “star vectors” for effective DNA or siRNA delivery
US20170121454A1 (en) Enzymatic synthesis of poly(amine-co-esters) and methods of use thereof for gene delivery
Lu et al. Effective antisense gene regulation via noncationic, polyethylene glycol brushes
Oroojalian et al. Efficient megalin targeted delivery to renal proximal tubular cells mediated by modified-polymyxin B-polyethylenimine based nano-gene-carriers
Kim et al. Anti-apoptotic cardioprotective effects of SHP-1 gene silencing against ischemia–reperfusion injury: Use of deoxycholic acid-modified low molecular weight polyethyleneimine as a cardiac siRNA-carrier
AU2007301693B2 (en) Polymer
Fliervoet et al. Polymers and hydrogels for local nucleic acid delivery
Ardestani et al. Nanosilver based anionic linear globular dendrimer with a special significant antiretroviral activity
Dutta et al. Disulfide bridging strategies in viral and nonviral platforms for nucleic acid delivery
Sui et al. Pyridyl disulfide functionalized polymers as nanotherapeutic platforms
CZ310598A3 (cs) Nízkomolekulární polyetylenimin s dobrou biologickou snášenlivostí, způsob jeho přípravy a použití
KR20120026897A (ko) 전하결합 및 생분해성 공유결합으로 동시에 연결된 고분자?ｓｉＲＮＡ 나노입자 전달체
Zhang et al. Zwitterionic targeting doxorubicin-loaded micelles assembled by amphiphilic dendrimers with enhanced antitumor performance
Rimann et al. Characterization of PLL-g-PEG-DNA nanoparticles for the delivery of therapeutic DNA
Mielanczyk et al. In vitro evaluation of doxorubicin conjugates based on sugar core nonlinear polymethacrylates toward anticancer drug delivery
Liao et al. Synthesis and formulation of four-arm PolyDMAEA-siRNA polyplex for transient downregulation of collagen type III gene expression in TGF-β1 stimulated tenocyte culture