TW200307692A - Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus - Google Patents

Description

(i) (i) 200307692 玖、發明說明 (發明說明應敘明：發明所屬之技術領域、先前技術、内容、實施方式及圖式簡單說明) 發明範圍 本發明係關於一類化合物，其合成方法，組合物及治療 C型肝炎病毒（HCV)感染的方法。具體地說，本發明提供 新穎肽類似物，含此類似物的醫藥組合物及使用此類似物 治療H C V感染的方法。 發明背景 C型肝炎病毒（HCV)全世界上都是輸血後及社會上獲得 的非-Α非-Β肝炎的主要病因劑。據估計，世界上有超過 二億人受此病毒感染。有高百分比的帶病毒者變成慢性感 染’其中多數發展成慢性肝病，即所謂慢性C型肝炎。而 這一組又成為嚴重肝疾病如肝硬化，肝細胞癌及導至死亡 的肝病的高危險群。 HCV確立病毒抗性的機轉及導致慢性肝病高發生率的 原因現尚不完全明暸。現尚不知HCV如何與病主免疫系統 互動及避開主免疫系統。此外，有關避免HCV感染及疾病 的細胞及體液免疫反應詳情現也尚未確定。據報告，免疫 球蛋白可預防輸血引起的病毒性肝炎，但疾病控制中心 (the Center for Disease Control)現尚未推薦免疫球蛋白治療用 於此目的。有效的保護性免疫反應的缺乏妨礙了疫苗的發

展或適宜的曝露後預防手段，所以近期内希望仍寄託於對 抗病毒的干擾D 各臨床研究的目的在確定能有效地治療受慢性c型奸 炎困擾的病人的HCV感染的醫藥劑。此等研究包括使用α 200307692 (2) 干擾素，單獨使用或與其他抗病毒劑合併使用。此類研究 顯示有當數目的受試驗者對此類治療無反應，也有相當多 、 受試者有不錯的反應，發現大部分在治療完了後復發。 '、 v 直到最近，干擾素（IFN)是臨床上唯一證明對慢性c型肝 炎有利的治療。但其持續反應率仍低，而且干擾素治療也 會引起嚴重的副作用（即視網膜病變，甲狀腺炎，急性胰 臟炎，壓抑），此等副作用降低了接受治療的病人的生活 品質。最近已許可對單獨使用IFN無反應的病人合併使用 鲁 干擾素與病毒唑（ribavirin)。但由IFN所致的副作用並未因 使用此合併治療而減輕。聚乙二醇型的干擾素如 · PEG-Intron®及Pegasys®能明顯地部分指出此等有害的副作 用’但仍未取得治療H C V的供口服的抗病毒藥物。 所以’現在需要發展出治療HCV的克服現有的藥物治療 限制的有效的抗病毒劑。 HCV是黃病毒科有包膜的正鏈RNa病毒。單鏈HCV RNA 基因組的長度約9500個核甞酸，具有編碼約3000個胺基酸 鲁 的單一大多蛋白的開放讀架（〇RF)。於受感染的細胞内， 此多蛋白由細胞及病毒蛋白酶於多位裂解生成結構蛋白 及非結構蛋白（Ns)。於HCV的情形，成熟非結構蛋白 (NS2 ’ NS3，NS4A，NS4B，NS5A 及 NS5B)之增殖是由二 種病毒蛋白酶完成。第一種，現尚未完全明暸其特性，於 NS2-NS3連接處（過去稱NS2/3蛋白酶）裂解；第二種為絲 胺酸蛋白酶，含於NS3(NS3蛋白酶）的N-端區，引發NS3 下流所有順式，於NS3-NS4A列解位，及反式剩餘的 -8 - 200307692

(3) NS4A-NS4B，NS4B-NS5A，NS5A-NS5B位的裂解。NS4A 蛋白質有多種功能，有NS3蛋白酶的輔因子的作用，並可 能有助於NS3膜及其他病毒複製酶成分的定位。NS3蛋白 酶與NS4A之複合形成（complex formation)在所有位的加工 (processing events)，增進蛋白水解上似是必需的。NS3蛋白 也展現核甞三磷酸酶及RN A解旋酶活性。N S 5 B是涉及 HCV複製的RNA-依賴性RNA聚合酶。 發展抗病毒劑的一般策略是純化（inactivate)病毒複製所 必需的病毒編碼的酶。 下面是最近幾年所公告的揭示HCV NS3蛋白酶抑制劑 肽類似物的專利申請案，此等HCV NS3蛋白酶抑制劑肽類 似物不同於本發明化合物： GB 2,337,262 ； JP 10298151 ； JP 11126861 ； JP 11292840 ； JP 2001-103993 ; US 6，159,938 ; US 6，187,905 ; WO 97/43310 ; WO 98/17679 ； WO 98/22496 ； WO 98/46597 ； WO 98/46630 ； WO 99/38888 ； WO 99/50230 ； WO 99/64442 ； WO 99/07733 ； WO 99/07734 ； WO 00/09543 ； WO 00/09558 ； WO 00/20400 ； WO 00/59929 ； WO 00/31129 ； WO 01/02424 ； WO 01/07407 ； WO 01/16357 ； WO 01/32691 ； WO 01/40262 ； WO 01/58929 ； WO 01/64678 ； WO 01/74768 ； WO 01/77113 ； WO 01/81325 ； WO 02/08187 ； WO 02/08198 ； WO 02/08244 ； WO 02/08251; WO 02/08256; WO 02/18369; WO 02/60926及WO 02/79234。 本發明化合物的不同處在與其不同的化學構造及其令 人驚奇的特異地抑制HCV NS3蛋白酶，同時對其他絲胺酸 蛋白酶展現明顯的抑制活性。此外，此等化合物在細胞培 200307692

(4) 養中是有活性的，並在活體内具極良好藥物動力學性質。 本發明概述 本發明範圍内包括式I化合物：

其中R1是瘦基或NHS^Ra，·其中RlA是（Ci 8)烷基，（C3 7) 環烷基或{(Cm)烷基-(C3_7)環烷基}，其視需要以卣，氰 基’硝基’ 0-((^-6)烷基，醯胺基，胺基或苯基作1至3次 <取代，或R1A* (：6或c10芳基，其視需要以鹵，氰基，硝 基’（Ci-6)烷基，〇-(Cl·6)烷基，醯胺基，胺基或苯基作工至 3次之取代；R2是（C5_6)環烷基及。是環戊基；或其醫藥上 可接受的鹽。 本發明範圍内包括.. 醫樂組合物，其含抗C型肝炎病毒有 效量的式I化合物或其治症L ^ ^ 卜 、療上可接受的鹽，及與其混合的 醫藥上可接受的載劑介質或助劑。 根據本發明一具體實姑乂 貫她例，本發明醫藥組合物尚含干擾 素（聚乙二醇型或非聚乙- 一鲜型的）或病毒唑，或一或多種 抗_HCV劑，或以上諸劑的佐何混合物。 本發明另一重要方而4 t 匕梧藉給予哺乳動物抗c型肝炎 -10. 200307692 (5) 病毒有效量的式1化合物，其治療上可接受的鹽，或上述 組合物，單獨給予或與一或多種千擾素（聚乙二醇型或非 聚乙二醇变）或病毒唑，或一或多種其他抗·Η(：：ν劑一起給 予或分別給予以治療c型肝炎病毒感染的方法’ 本發明另一·重要方面包括藉給予哺乳動物抗C型肝炎 病毒有效量的式I化合物’其治療上了接义的鹽，或上述 組合物，單獨給予或與一或多種千擾素（聚乙二醇型或非 聚乙二醇趣）或病毒峻，或一或多種其他抗-HCV劑一起給 予或分別給予以預防C型肝炎病毒感染的方法。 本發明範園還包括式I化合物，如此處所述者，在製成 藥物以治#或預防C型肝炎病毒感染的用途。 較佳具體實施例詳述 定義 如此處所述，下述定義除非另有說明適用於： 在述及各實例時，（R)或（s)用以指示不對稱中心之絕對 構形，此指示是用於整個化合物之說明而非只用於取代基 的說明。 此處“PI，P2及P3”意謂從肽類似物C-端開始延伸至N-端的胺基酸殘基的位置（即P 1是指從C-端開始的1位，P2 是指從C -端開始的2位，依此類推）（見Berger A. & Schechter I.， Transactions of the Royal Society London series B257, 249-264 (1970))。 此處所謂“（1R，2S)·乙烯基- ACCA”意謂下式化合物： 4 200307692

⑹ 即，（1R，2S)1-胺基-2-乙烯基環丙基羧酸。 此處所謂“鹵，，一詞意謂鹵素取代基，選自溴，氣，氟或 碘。

此處所謂“（Cb6)烷基，，或“（低）烷基”一詞，不管單獨使用 或與另一取代基共同使用，意謂非環形直鏈或支鏈垸基取 代基，含1至6個碳原子，包括，例如，甲基，乙基，丙基， 丁基，己基，1-甲基乙基，1-甲基丙基，2·甲基丙基及ι，ΐ_ 二甲基乙基。 此處所謂“（Cn)烷基，，一詞，不管單獨使用或與另一取 代基共同使用，意謂非環形直鏈或支鏈烷基取代基，含1 至8個碳原子，包括，例如，甲基，乙基，2，2 -二甲基丁 基’己基，1-甲基乙基，庚基及辛基。 此處所謂“（c3_7)環烷基，，一詞 ................. 取代基一起使用，意謂環烷基取代基，其含3至7個碳 子’包括環丙基，環丁基，環戊基，環己基及環庚基。

此處所謂“{(Cl_6)烷基-(C3-7)環烷基厂，一詞，意謂含3 7個碳原子的環烷基，直接鍵合於含1至6個碳原子的伸 基上；例如環丙基甲基，環戊基乙基，環己基甲基，環 基乙基及環庚基丙基。在反3人是{((：16)烷基气C37)環烷』 時此基團疋經由（C 1 -6)燒基（即伸燒基部分）聯於s 〇 2上 此處所雨0-(Ci_6)烷基” 一詞，不論單獨使用或與其 基團口併使用，意謂-0-(cl_6)烷基，其中烷基之定義如 ^ 。達^、個铁原子。〇JCi-6)烷基包括甲氧基，乙氧基 丙氧基，1-甲基乙氧基，丁氧基及i，卜二甲基乙氧基。 -12- 200307692 ⑺ r^· 一取代基一般稱作第三-丁氧基。

此處所謂“醫藥上可接受的鹽”一詞意謂式I化合物的 鹽，其在正確的醫學判斷範圍内，適用於與人及低等動物 的組織接觸而無毒性，刺激性，過敏反應等，具有合理的 利益/風險比。一般是水溶性或油溶性，或是易分散的， 在其使用上是有效的。此詞包括醫藥上可接受的酸加成鹽 及醫藥上可接受的鹼加成鹽。適宜的鹽的表見於：S. M. Birge et al.，J. Pharm. Sci.，1977，66?頁 1-19，今全文附上供參 考。 “醫藥上可接受的酸加成鹽，，一詞意謂保有生物效果的 及自由態鹼性質的，並且是非生物上或其他方面不需要 的，其是與無機酸如鹽酸，氫溴酸，氫碘酸，硫酸，胺基 磺酸，硝酸，磷酸等，及有機酸如醋酸，三氯醋酸，三氟 醋酸，己二酸，藻酸，抗壞血酸，天冬胺酸，苯磺酸，苯 甲酸，2·乙醯氧基苯甲酸，丁酸，樟腦酸，樟腦磺酸，肉 桂酸，檸檬酸，二葡糖酸，乙燒續酸，穀胺酸，乙醇酸， 甘油基磷酸，半硫酸，庚酸，己酸，甲酸，富馬酸，2-輕基乙院續酸（經乙續酸），乳酸，馬來酸，輕基馬來酸， 蘋果酸，丙二酸，扁桃酸，三甲基苯磺酸，甲烷磺酸，莕 磺酸，菸鹼酸，2-¾:磺酸，草酸，雙羥苯酸，果膠酯酸， 苯基醋酸，3 -苯基丙酸，苦味酸，新戊酸，丙酸，丙酮酸， 水楊酸，硬脂酸，丁二酸，對胺基苯磺酸，酒石酸，對-甲苯橫酸，十一竣燒酸等所成的鹽。 “醫藥上可接受的鹼加成鹽”一詞意謂保有生物效果的 -13 - 200307692 ⑻ Γ^· 及自由態酸性質的，並且是非生物上或其他方面不需要 的，其是與無機鹼如氨或氫氧化物，銨金屬陽離子如鈉， 卸，麵，舞，鍰，鐵，鋅，銅，锃，铭等的碳酸鹽或碳酸 氫鹽所成的鹽。特佳的是銨，鉀，鈉，鈣及鎂鹽。由醫藥 上可接受的有機的無毒的鹼衍生的鹽包括初級，二級及三 級胺，四級胺化合物，經取代的胺，包括天然的經取代的 胺，環形胺及鹼離子交換樹脂，如甲基胺，二甲基胺，三 甲基胺，乙基胺，二乙基胺，三乙基胺，異丙基胺，三丙 基胺，三丁基胺，乙醇胺，二乙醇胺，2-二甲基胺基乙醇， 2-二乙基胺基乙醇，二環己基胺，賴胺酸，精胺酸，組胺 酸，咖啡因，哈胺青黴素，膽鹼，甜菜鹼，伸乙基二胺， 葡糖胺，甲基葡糖胺，可可鹼，嘌呤，六氫吡畊，六氫吡 啶，Ν-乙基六氫吡啶，四甲基銨化合物，四乙基銨化合 物，吡啶，Ν，Ν_二甲基苯胺，Ν·甲基六氫吡啶，Ν -甲基 嗎啉，二環己基胺，二苄基胺，Ν，Ν-二芊基苯乙胺， 1 · ephenamine，Ν，Ν’-二芊基伸乙基二胺，聚胺樹脂等所成 的鹽。特佳的有機無毒性鹼是異丙基胺，二乙基胺，乙醇 胺，三甲基胺，二環己基胺，膽鹼及咖啡因。

此處所謂“抗病毒劑”一詞意謂有效抑制哺乳動物内病 毒生成及/或複製的劑（化合物或生物製劑）。包括干擾哺 乳動物内病毒生成及/或複製機轉的劑。抗病毒劑包括， 例如，病毒峻，金鋼胺，VX-497(merimepodib，Vertex Pharmaceuticals), VX-498 (Vertex Pharmaceuticals), Levovirin, Viramidine， Ceplene (maxamine)， XTL-001 及 XTL-002(XTL •14- 200307692 (9)

Biopharmaceuticals) 〇 此處所謂“其他抗_HCV劑” 一詞意謂減少或預防有關C 型肝炎疾病症狀的進行的劑。此類劑可選自：免疫調節 劑，HCV NS3蛋白酶抑制劑或HCV生命週期中另一標的抑 制劑。 此處所謂“免疫調節劑”一詞意謂有效增強哺乳動物免 疫系統反應的劑（化合物或生物製劑）。免疫調節劑包括， 例如，1類干擾素（如α-，冷-，及ω干擾素，T·干擾素， 共有區干擾素及脫唾液酸干擾素（asialo-interferons))，II類干 擾素（如r-干擾素）及聚乙二醇型干擾素。 此處所謂“HCV NS3蛋白酶抑制劑，，一詞意謂有效抑制 哺乳動物HCV NS3蛋白酶的劑（化合物或生物製劑）。HCV NS3 蛋白酶抑制劑包括 W0 99/07733，WO 99/07734，W0 00/09558，W0 00/09543 或 W0 00/59929 及 Vertex/Eli Lilly 預發展候 補確證為VX-950或LY-570310，所述的化合物。 此處所謂“HCV生活週期中另一標的抑制劑”意謂有效 抑制哺乳動物内HCV生成及/或複製的而非抑制HCV NS3 蛋白酶功能的劑（化合物或生物製劑）。此包括干擾寄主或 HCV病毒於哺乳動物内生成及/或HCV複製所需的機轉的 劑。HCV生活週期内另一標的抑制劑包括，例如，抑制選 自解旋酶、HCV NS2/3蛋白酶内源性核糖體進入位點 (IRES)的劑。HCV生活週期内另一標的抑制劑的特定例包 括 JTK_003/002(Japan Tobacco)及ISIS_14803(ISIS Pharmaceuticals)。 此處所謂“HIV抑制劑”一詞意謂有效抑制哺乳動物内 •15- 200307692

(10) ΗIV生成及/或複製的劑（化合物或生物製劑）。此包括干擾 HI V於哺乳動物内生成及/或複製所需的寄主或病毒機轉 的劑，HIV抑制劑包括，例如，核答抑制劑，非核苷抑制 劑，蛋白酶抑制劑，融合抑制劑及整合酶抑制劑。 此處所謂“HAV抑制劑”一詞意謂有效抑制哺乳動物内 H A V生成及/或複製的劑（化合物或生物製劑）。此包括干 擾HAV於哺乳動物内生成及/或複製所需的寄主或病毒機 轉的劑，HAV抑制劑包括A型肝炎疫苗，例如，Havrix® (GlaxoSmithKline)，VAQTA® (Merck)及Avaxim® (Aventis Pasteur)。 此處所謂“HBV抑制劑”一詞意謂有效抑制哺乳動物内 HBV生成及/或複製的劑（化合物或生物製劑）。此包括干 擾HBV於哺乳動物内生成及/或複製所需的寄主或病毒機 轉的劑。HB V抑制劑包括，例如，抑制HB V病毒DNA聚合 酶或HBV疫苗的劑。HBV抑制劑的特定例包括Lamivudine (Epivir-HBV®), Adefovir Dipivoxil, Entecavir, FTC(Coviracil®)? DAPD (DXG)，L-FMAU (Clevudine®)，AM365(Amrad)，Ldt(Telbivudine), monoval-LdC(Valtorcitabine)? ACH-126,443 (L-Fd4C) (Achillion), MCC478(Eli Lilly)，Racivir (RCV)，Fluoro-L及D核苷，Robustaflavone， ICN 2001_3(ICN)，Bam 205 (Novelos)，XTL-OOl(XTL)，Imino-Sugars (Nonyl-DNJ)(Synergy)，HepBzyme ;及免疫調節劑產物如：干擾 素 a -2b，HE2000 (Hollis-Eden)，Theradigm (Epimmune)，EHT899 (Enzo Biochem)，Thymosin α· 1 (Zadaxin®)，HBV DNA 疫苗 Powder Ject)， HBV DNA 疫苗（Jefferon Center)，HBV 抗原（OraGen)，BayHep B® (Bayer)，Nabi-HB® (Nabi)及 Anti_hepatitis B (Cangene);及 HBV疫苗 •16· 200307692

(11) 產物如：Engerix B，Recombivax HB，GenHevac B，Hepacare，Bio-Hep B，TwinRix，Comvax，Hexavac。 此處所謂“I類干擾素”意謂選自都結合於I型受體的干 擾素。此包括天然的及合成的I類干擾素。I類干擾素的例 包括α-，冷·，ω干擾素，T -干擾素，共有區干擾素及脫 唾液酸干擾素。

此處所謂“II類干擾素”意謂選自都結合於II型受體的干 擾素。II類干擾素的例包括7"-干擾素。 本發明醫藥組合物可含一或多種另外的活性劑，選自， 例如，抗病毒劑，免疫調節劑，其他H C V N S 3蛋白酶抑制 劑，HC V生活週期中另一標的抑制劑，HI V抑制劑，HA V 抑制劑及Η B V抑制劑。此類劑的例見以上定義段内所提供 者0 此類劑中較佳的例如下： 抗病毒劑：病毒峻及金鋼胺； 免疫調節劑：I類干擾素，II類干擾素及聚乙二醇型 干擾素； H C V生活週期中另一標的抑制劑，其抑制標的選自： NS3解旋酶’ HCVNS2/3蛋白酶或内部核糖體進入位 點（IRES); ΗIV抑制劑：核楚抑制劑’非核菩抑制劑，蛋白酶抑 制劑，融合抑制劑及整合酶抑制劑；或 Η Β V抑制劑：抑制Η Β V病毒d Ν Α聚合酶的劑，或是 HBV疫苗。 -17- 200307692

(12) 如前所述，可考慮合併治療，其中是將式（丨）化人物， 或其醫藥上可接受的鹽與至少一種另外的劑—起給予，此 另外的劑是選自··抗病毒劑，免疫調節劑，另—種H c v n 3 蛋白酶抑制劑，另一種HCV生活週期内標的抑制劑，hiv 抑制劑，HAV抑制劑及HBV抑制劑。此類劑的例見上定義 段所述。此等另外的劑可與本發明化合物合併製成單—醫 藥劑形。或者是，此等另外的劑可作為多種劑形的一部分 給予病人’例如，使用套件給予。此等另外的劑可於給予 式（1)化合物，或醫藥上可接受的鹽，之前、同時、或之 後給予病人。 此處所謂“治療”一詞意謂給予本發明化合物或組合物 以減輕或排除C型肝炎疾病症狀及/或減少病人病毒載量。 此處所謂“預防”一詞意謂在個體曝露於病毒後但尚未 出現症狀如’及/或在血中檢查出病毒如，給予本發明化 合物或組合物。 較佳具體實施例 較隹是，上述式I化合物，其中R1是羥基或nhso2r1a， 其中RiASd-d烷基，（c3_7)環烷基或{((^_6)烷基-(c3_7) 環烷基}，其都是視需要以画，硝基或烷基作1-3 次之取代，或苯基，其是視需要以卣，硝基，（Ci_6)烷基 或0-(Ci-6)烷基作1至3次之取代。 更隹是上述式I化合物，其中R1是羥基或NHS〇2R1A，其 中R1A是甲基，乙基，環丙基，環丁基，環戊基，環丙基 甲基，環己基乙基，CC13，CF3，苯基，2·氟苯基或4 -甲 -18 - 200307692

(13) 基苯基。 最佳是如上界定的式I化合物，其中R1是羥基或 NHS02R1A，其中RiA是甲基，環丙基，cf3或苯基。尤佳 是R1A為環丙基。 R1最佳是羥基。 R2最佳是環戊基。 本發明較佳具體實施例内包括所有表1所列式I化合物。 根據另一具體實施例，本發明組合物可尚含另一抗 H C V劑。抗 H C V劑的例包括α -，/3 ，6 ，r ·或ω -干 擾素’病毒峻及金鋼胺。 根據又一具體實施例，本發明組合物可尚含另一 HCV N S 3蛋白酶抑制劑。 根據又一具體實施例，本發明組合物可尚含HCV生活週 期中其他標的抑制劑，包括，但不限於，解旋酶，Ν $ 2 / 3 蛋白酶或内部核糖體進入位點（IRES)。 本發明醫藥組合物可經口，非經腸或經植入的儲存器終 予。較佳疋經口給予或以注射給予。本發明醫藥組合物了 含任何習用的無毒醫藥載劑，助劑或載體。在某此 、 a W形 下’調配物pH可用醫藥上可接受的酸、鹼或緩衝劑調教 以增強已調配的化合物或其投送形式的安定性。此處所細 非經腸包括皮下，皮内，靜脈内，肌肉内，關節内，、、A # α膜 腔内’胸骨内，鞘膜内及病灶内注射或輸液技術。 此醫藥組合物可以是滅菌注射製劑形式，例如減菌的了 注射的水性或油性懸浮液。此等懸浮液可根據此技蓺 -19- 200307692

(14) 技術用適宜的分散劑或濕潤劑（如吐溫8 〇)及懸浮劑調配。 本發明醫藥組合物可以任何可接受的劑形經口給予，包 括但不限於，膠囊，錠及水性懸浮液與溶液。如係用錠作 經口給予，一般使用的載劑包括乳糖及玉米澱粉。也可加 滑潤劑如硬脂酸鎂。以膠囊形式作經口給予時，可用的稀 釋劑包括乳糖及乾玉米)殿粉。在以水性懸浮液作經口給予 時’是將活性成分與乳化劑或懸浮劑結合。如有必要，可 加某些甘味劑及/或矯味劑及/或增色劑。 供上述碉配物及組合物用的其他適宜的載劑或載體見 於標準醫藥文件，例如 “Remington，s pharmaeeutieal Sciences，，，

The Science and Practice of Pharmacy，19th Ed.，Mack Publishing Company，Easton，Penn·，（1995)。 劑量水平是約每天每公斤體重〇.〇1至約l〇〇毫克之間， 較佳是約每天每公斤體重〇丨至約5 〇毫克此處所述蛋白酶 抑制劑化合物用作單一治療以預防及治療由HCV引起的 疾病。一般是以本發明醫藥組合物每天給予約1至約5次， 或疋以連績輸液給予。此種給予可用作慢性和急性治療。 可與載劑物質合併製成單一劑形的活性成分的量可視要 治療的病主及特定給予方式而變化。典型製劑可含約5% 至約95%活性化合物（重量/重量）。較佳是此種製劑含約 2 〇 %至約8 0 °/〇活性化合物。 精於此技藝者會了解到，可能需較上述劑量為低或高的 劑量。特定病人所需的特定劑量及治療方案可取決於各種 因素，包括所用特定化合物的活性，年齡，體重，一般健 -20- (15) (15)200307692

康情況，性別，飲食，給予時間，由 、、 徘出速度，合用藥物， 感染的嚴重性及感染過程，病人感 4耒的情況及醫生的判 斷。-般而言，治療是以較肽的適度劑量為小的劑量開 始。所以，劑量是從小幅增加直至達適當效果。一般而言， 化合物最需要是以產生抗病毒效果而不產生不良副作用 的濃度給予。 當本發明組合物含式！化合物及—或多種其他治療劑或 預防劑時，此化合物及另外的劑在—劑量内的含量約1〇 土 1 Ο Ο Λ較佳疋早一冶療方案所給予的劑量的約丨〇至 8 0%。 奂此♦化合物或其醫藥上可接受的鹽與醫藥上可接受 的載劑一起調配時，所得組合物可活體内給予哺乳動物， 如人，以抑制HCV NS3蛋白酶或治療或預防HcV病毒感 染。此種治療也可以本發明化合物與其他的劑混合達成， 此等劑包括，但不限於，α -，冷-，占，ω -或7 _干擾素， 病毒峻及金鋼胺；其他HCV NS3蛋白酶抑制劑；其他Hcv 生活週期標的抑制劑，包括但不限於解旋酶，NS2/3蛋白 酶’或内部核糖體進入位點QRES);或其混合物。此等另 外的劑可與本發明化合物製成單一劑形。或者是，此等另 外的劑可作為多劑形的一部分分別給予哺乳動物。 如果醫藥組合物只含本發明化合物作為活性成分，此法 還包括給予該哺乳動物選自免疫調節劑，抗病毒劑，HCV NS3蛋白酶抑制劑，或其他HCV生活週期標的抑制劑如解 旋酶’ N S 2 / 3蛋白酶或I r £ §的劑。此等另外的刻可在給予 -21- 200307692

(16) 本發明組合物之前、同時或之後給予哺乳動物。 此處所述式I化合物也可用作實驗室試劑。本發明化合 物也可用以治療或預防物料的病毒污染，所以減少接觸此 類物料（例如血液，組織，外科器材及衣物，實驗室儀器 及衣物，以及血液收集設備及物料）的實驗室或醫務人員 或病人的病毒感染的危險性。 此處所述式I化合物也可用作研究試劑。式I化合物也可 用作正面對照以完成細胞為基礎的鐘定或活體外或活體 内病毒複製鑑定。 本發明其他詳情以下述實例說明，應了解到此等實例並 非限制後附申請專利範圍。 方法論 一般而言，式I化合物及其中間體是以已知方法用適於 反應物的條件製備。有數種方法揭示於WO 00/09543及WO 00/09558，今一併附上供參考。 下列方案說明用非環形中間體以已知方法製備式6a關 鍵中間體。 -22- 200307692 (17)

方案1

方案1 : 步騾A，C，D :簡言之，PI，P2及P3部分可用揭示於 WO 00/09543及WO 00/09558的已知肽偶合技術键聯。 步騾B :此步騾包括4 -羥基取代基構形的轉換。有數種 方法，其中此種轉換是精於此技藝者所已知的。習用方法 之一例是已知的 Mitsunobu 反應（Mitsunobu Synthesis 1981, -23 - 200307692

(18)

January，1·28; Rano et al· Tet. Lett· 1994, 36, 3779-3792; Krchnak et al· Tet· Lett· 1995, 36, 6193-6196)。 步騾E :大環之生成可經由婦烴置換（metathesis)用Ru-為基礎的催化劑進行，如 Miller，S.J.; Blackwell，H.E.; Grubbs， R.H. J. Am. Chem. Soc. 1996，118，9606-9614(a); Kingsbury，J.S·; Harrity, J.P.A.; Bonitatebus, P.J.; Hoveyda, A.H. J. Am. Chem. Soc. 1999, 121? 791-799 (b) and Huang, J.; Stevens, E.D.; Nolan, S.P.; Petersen, J.L.; J· Am· Chem· Soc. 1999, 121，2674-2678 (c)或如 WO 00/59929 内所述 者。也應了解到，含其他過渡金屬元素的催化劑也可用於 本發明。

C， P〇y3 (a)

Grubbs'催化劑 之後，式6a關键中間體之轉化成本發明式1化合物於如 下實例中詳述。 式I化合物，其中R1是上述NHS02R1A，是用對應的式I 之酸（即R1是幾基）與適宜的式r1AS〇2NH2之續酸胺在有偶 合劑之存在下於標準條件偶合製備。雖則可用一般習用的 偶合劑，但發現TBTU及HATU是實用的。磺醯胺可由市場 購得或可用已知方法製備。 實例 今以非限制性實例詳細說明本發明。其他特定合成或解 -24- 200307692

(19) 析方法見 WO 00/09543 ; WO 00/09558 及 WO 00/59929 及一起申請 案09/368,670，所有此等文件一併附上供參考。 溫度以攝氏度表示。除非另有說明，溶液百分比表現重 量/容積關係，溶液比表現容積/容積關係。核磁共振（NMR) 譜以Bruker 400 MHz分光計記錄；化學化移（5 )以每百萬分 之份報告，除非另有說明是指内氘化的溶劑。所有終化合 物（抑制劑）的NMR譜以DM SO-d6記錄。閃拄色層分析以二 氧化矽膠（Si02)根據Still氏閃色層分析技術進行（W.C. Still et al.，J· Org· Chem·，1978, 43, 2923)。 實例中所用縮寫包括：Boc:第三-丁基氧基羰基[Me3 COC(0)];BSA:牛血清白蛋白；CHAPS:3-[(3-膽醯胺 基丙基）_二甲基按基]·1-丙燒續酸酿；CH2Cl2 = DCM:二氯 甲烷；DEAD :二乙基氮二羧酸酯；DIAD :二異丙基氮二 羧酸酯；DIPEA :二異丙基乙基胺；DMAP :二甲基胺基 吡啶；DMF : Ν，Ν·二甲基甲醯胺；DMSO :二甲基亞颯； (S，S)-Et-DUPHOS Rh (COD)OTf: ( + )-1,2-雙（2S，5S)-2,5· 二乙基膦腺基）苯（細胞辛二烯）羅丁鑌（1)三氟甲烷磺酸 鹽；EtOH :乙醇；EtOAc :醋酸乙酯；ESMS :電噴質譜； HATU: 0_(7_氮雜苯并三唑-1·基）-1，1，3,3_四甲基錁六氟 磷酸鹽；HPLC :高效液體色層分析；MS :質譜；MALDI-TOF : Matrix Assisted Laser Disorption Ionization-Time of Flight; FAB · Fast Atom Bombardment); Me ：甲基；MeOH :甲醇；R.T.:室溫（18° 至 22° ); TBTU: 2-(111-苯并三唑-1-基）_1，153,3-四甲基錁四 氟硼酸鹽；TFA :三氟醋酸；THF :四氫呋喃；TLC :薄 -25- 200307692 (20) 層色層分析；Tris/HCl :參（羥基甲基）胺基甲烷鹽酸鹽。 實例1 二肽1 c之合成

將Boc-巍基脯胺酸la(50.0克，216毫莫耳），（1R，2S)_乙 歸基- ACCA鹽酸鹽 lb(42.25 克，238毫莫耳），TBTU (76_36 克’ 23 8毫莫耳）及DIPEA (113毫升，649毫莫耳）於DMF (8 〇〇亳升）内的混合物在氮氣下於室溫攪拌。3 5小時後， 蒸發溶劑，殘餘物用EtOAc萃取。萃取物用鹽酸（1〇%)， 飽和碳酸氫鈉及鹽水洗。然後將有機相於硫酸鎂上乾燥， 過濾’蒸發，得油體。於高真空乾燥過夜（1 8小時）乾燥後，

知二肤lc，為黃色泡沫（72·0克，94%，以HPLC測定純度 >95%) 〇 實例2 之合达i

26- 200307692

(21) 將二肽lc (72.0克，203毫莫耳），三苯基膦（63.94克， 243.8亳莫耳，12當量）及4-硝基苯甲酸（4 1.08克，245.8 毫莫耳，1.2當量）溶於無水THF(1_ 4公升）内。將此攪拌的 溶液在氮氣下冷至〇°C。然後用45分鐘滴加DEAD (38.4毫 升’2 44亳莫耳，K2當量），任反應物升至室溫。4小時後， 备發溶劑，將殘餘物分成四部分。每一部分都於細二氧化 石夕膠（10-4 0微米網眼，柱直徑12公分，柱長16公分）上用 梯度2:1己烷/E tO Ac至1:1己烷/EtO Ac至純EtO Ac作色層分 析純化。得酯2a，經蒸發溶劑及於7〇 t高真空乾燥1小時 後為無定形白色固體（1081克，定量產出 實例3 之合成

將硝基苯甲醯基酯2a(108.1克，203.1毫莫耳）溶於THF (1.0公升）内，將所得溶液冷至〇 〇C。然後快速加單水合氫 氧化鋰（10.66克，253.9毫莫耳）於水（225毫升）内的溶液， 此反應物於〇°C攪拌30分鐘，之後用鹽酸（1N，50.8亳升） 中和剩餘的鹼。再緩慢加酸至黃色褪去（7毫升）。然後將 所得混合物蒸發，殘餘物用EtOAc(3xl50毫升）萃取。萃取 物用飽和碳酸氫鈉（15〇毫升）及鹽水（150毫升）洗。有機相 -27- 200307692

(22) 於硫酸鎂上乾燥，用矽藻土過濾，蒸發。殘餘物於高真空 乾燥過夜，得醇3a，為無色泡沫（70· 1克，98%，HPLC測 定純度>99%)。 實例4 r2S)-N-B〇c-胺基-壬-8-烯酸Mg)之合成

C- (4b) Pyridine, Acp COOEt 二今气 'Na0H (1N) COOEt T ^ T EtOOC 人 NHAc ^ ^HOOC 入 NHAc (4a) (4b) (S,S)-Et-DUPHOS Rh(COD)OTf (1/500)

Nal04 H20

1) BOC^O, DMAP, THF v2)U0H,H20

步騾A. 於市場上購得的二乙基2 -乙醯胺基丙二酸酯4a (100克，0·46莫耳）於二呤烷（5 00毫升）内的溶液中滴加氫 氧化鈉水溶液（1Μ，1當量，460毫升），費時30至45分鐘。 將所得混合物攪拌1 6.5小時，然後真空蒸發二哼烷。所得 水溶液用三份300毫升的EtOAc萃取，用濃HC1酸化至pH 1。任此溶液於冰水浴内結晶。待少許晶體出現後，混合 物以超音波振動，出現大量沉澱。過濾，真空乾燥，得化 合物4b (62.52克，72 %產出率），為白色固體。 步騾B ·將於1公升圓底燒瓶内的以磁力攪拌的商業上 -28- (23) (23)200307692 可購知的7·辛烯十从二醇4c (25克，0.173莫耳）及112〇 (1〇〇毛升）乳液中加過破酸鈉水溶液（4〇7克，〇19〇莫耳， 1,1當I ’於47 5亳升H2〇内），費時20分鐘（有少許放熱）。 生成的混合物再於室溫攪拌1小時（以TLC證實反應已完 全）。然後將混合物倒入分離漏斗内，由有機層分離出水 層水溶液用NaCi飽和，傾出，再一次分離有機部分。 合併二次分離出的有機部分，於硫酸鈉上乾燥，用棉塞過 滤（於巴斯得滴管内），得化合物4d (15 135克，無色油體， 78%產出率）。水溶液用CH2C12過濾，用無水MgS04乾燥， 真空濃縮（不加熱，6 -庚醛沸點1 5 3 °C )又得一部分化合物 4 d ( 1 · 9 5 7克’無色油體，i 〇 %產出率）。總產出率8 8 %。 步驟C.於固體2 -乙醯胺基丙二酸乙酯4b (7.57克，40 晕莫耳）内加6_庚醛4d (4·48克，40亳莫耳）於吡啶（32毫 升’ 1 〇當量）内的溶液，費時1分鐘。所得溶液於i 〇 〇c浴内 冷卻。費時4分鐘加醋酸酐（12毫升，32當量）。將所得有 機溶液於室溫攪拌3小時，加另一部分2-乙醯胺基丙二酸 乙酯4b (2.27克）。此混合物再於室溫攪拌丨χ小時。然後加 冰（6 0毫升），將此溶液攪拌1 · 5小時，此混合物再以2 5 〇亳 升水稀釋’用一部分二乙酸萃取。此酸溶液用in HC1， 飽和NaHC〇3洗，乾燥（NaeCU)，濃縮，作閃色層分析 (EtOAC 40%/己烷），得化合物4e (4.8克，50%產出率）， 為淡黃色油體。 步驟D.於去氣（以氬氣通入30分鐘）的ζ·2·乙醯胺基 -2,8-壬烯酸乙酯4e (8.38克，35毫莫耳）於無水乙醇（7〇毫 -29- 200307692

(24) 升）内的溶液中加（S，S)-Et-DUPHOS Rh(COD)〇tf (51 毫 克，基質/催化劑=496)。將此混合物置於30磅/吋2氫下（4-真2 -Ha循環後）於parr搖動器上擺摔2小時。將所得混合 物蒸發至乾得粗製化合物4 f，其用於下一步騾不必純化。 步騾E.於粗製（S)_2_乙醯胺基-8-壬烯酸乙酯4f (7.3 克，30·3毫莫耳）於THF(100亳升）内的溶液中加B〇c20 (13·2克，2當量）及DMAP(740亳克，〇·2當量）。此反應混 合物於回流加熱2 · 5小時。然後蒸發大部分THF溶劑，粗 製混合物用CH2C12稀釋，用IN HC1洗以除去DMAP。有機 層再以飽和NaHC03水溶液萃取，用無水Na2S04乾燥，真 空濃縮。粗製產物以THF(50亳升）及水（30毫升）稀釋，加 1^011.1120(2.54克，2當量），此混合物於室溫攪拌25小時 (以TLC證實水解已完全）。將反應混合物真空濃縮除去大 部THF溶劑，用CH2C12稀釋。所得溶液用IN HC1洗，用無 水Na2S04乾燥，真空下濃縮。為除去少量雜質及過多的 Boc20，將粗製產物作閃色層分析純化（用溶劑梯度1〇〇〇/。 己烷-100% EtOAc作洗離劑）。得高純度標題化合物4g， 為淡黃色油體（5·82克，71%產出率）。4 NMR (DMSO, 400 ΜΗζ):δ 7.01 (d，J=8 Ηζ，1Η)，5.79 (tdd，Jt=6.7 Hz，Jd=17.0, 1〇·2 Ηζ，1Η)， 5.00 (md5 Jd=17.0 Ηζ，1Η)，4·93 (md5 Jd=10.2 Ηζ，1Η)，3·83 〇，1Η)， 2·00 (q，J=6.9 Hz，2H)，1.65-1.5 (m5 2H)，1.38 (s，9H)，1.35-1.21 (m， 6H)。 實例5 三肽5b之合成_ -30- (25) (25)200307692

步騾i ·將氯化氫於二嘮烷内的溶液（4N)加於 碎片3a(5.32克’ 15·0亳莫耳）内成為無色溶液。於室溫攪 拌1 ^時後，蒸發落劑，殘餘物置於高真空下3小時，製得 化合物5a的鹽酸鹽，為無定形固體，原樣使用。 步騾2 ·將DIPEA (2.6亳升，15毫莫耳）加於上面製備的 P1-P2鹽酸鹽（15晕莫耳）於無水dcm(i〇〇毫升）内的混合 物中’生成均質溶液。分別將1^丁11(5.30克，16.5亳莫耳， 1.1當量）加於攪拌的（：9_接頭48(4.〇7克，15〇毫莫耳）於無 水D C Μ ( 1 3 0毫升）内的溶液中，試劑部分溶解。加d I p e A (2.6¾升’ 15毫莫耳），1〇分鐘後生成基本均質溶液。然 後於此溶液内加P1_P2溶液，並加dipea至反應物呈鹼性 (pH>8，石蕊試驗）=於氮氣下攪掉5小時後，蒸發溶劑， 殘餘物用EtOAc(2x250毫升）萃取，用稀鹽酸（0.05N，400 毫升），水（4 00毫升）及飽和碳酸氫鈉（4〇〇毫升）洗。然後將 合併之有機相於硫酸鎂上乾燥，過濾，蒸發，得黃色漿體。 此粗製產物於二氧化矽膠上作色層分析，用6 ·· 1 EtOAc/ 己燒至純E10 A c作洗離劑，得所需三肽，二婦5 b，為白色 •31- (26) 200307692

泡沫（5.88 克，82%，HpLc^ 定純度 實例6 太環中間體6a之合说

於二婦5b (4.0克， 的溶液内通入Ar 2小 劑（262毫克，0.434亳 氣下回流。2 8小時後 於二氧化矽膠上作柱

788毫莫耳）於無水DCM(800毫升）内 寺脫氧。然後加固體Hoveyda氏催化 莫耳，5.5莫耳。/〇)，將此反應物於Ar ’將紅橘色溶液蒸發成無定形固體， 色層分析純化。開始溶劑系統為1 〇 %

EtOAc於CKbCh内。一但由柱洗去催化劑後，將溶劑換成 純EtOAc。由柱洗離催化劑可由其顏色證明。分離大環產 物6a，為無色泡沫，再將其溶於CH2C12 /己烷（約1 :2)内。 蒸發溶劑，得白色粉（3.3 62克，89%產出率）。 ij! NMR (CDC13, 400 ΜΗζ)··δ 1.20-1.50 (m，6H)，1·43 (s，9H)，1.53 (dd， J=9.5&5.4, 1H)，1.61-1.70 (m，1H)，1.76-1.90 (m，2H)，2·05-2·26 (m，4H)， 2.45 (d，J=14.3，1H)，3.67 (s，3H)，3.71 (d，J=ll.l，1H)，3.90 (dd， J=ll.l&4.3, 1H)，4.43-4.53 (m，2H)，4.76 (d，J=8.6, 1H)，4.86 (bd，J=9.8, 1H)，5.20-5.23 (m，2H)，5.57 (dt，J=7.0&9.8, 1H)，7.32 (bs，1H)。 實例7 硫脲 -32- 200307692 (27) 硫服7 a之合成：

於第三-異硫代氰酸丁酯（5·0亳升；39.4毫莫耳）於DCM (2 00毫升）内的溶液中加環戊基胺（4 ·67毫升；47.3毫莫 耳）’再加DIE A，此反應混合物於室溫揽摔2小時。此混 合物以EtOAc稀釋，用10%檸檬酸水溶液（2χ)，飽和 NaHC03(2x)，Η2〇(2χ)及鹽水（lx)洗。將有機層於無水 MgS04上乾燥，過濾，蒸發，得N-第三丁基_N，_環戊基 硫脲，為白色固體（3.70克；47%產出率）。將此N-第三-丁基-N，-環戊基硫脲（3.70克）溶於濃HC1 (46毫升）内。所 得暗黃色溶液於回流輕輕加熱。40分鐘後，將反應混合物 冷至室溫，再於冰内冷卻，以固體及飽和NaHC03水溶液 鹼化至ρΗ9·5。將產物萃取入EtOAc (3 X)内。合併之EtOAc 萃取物用H20(2x)及鹽水（lx)洗。將有機層乾燥（MgS04)， 過濾，濃縮，得米色固體（2.46克粗製產物）。此粗製產物 以己烷/EtOAc 95/5研磨，經過濾後得N-環戊基硫脲7a， 為白色固體（2.38; 9 0%產出率）。 4 NMR (400 MHz，DMS0-d6):S 7.58 (bs，1H)，7.19 (bs，1H)，6.76 (bs， 1H)，4.34 (bs，1H)，1.92-1.79 (m，2H)，1.66-1.55 (m，2H)，1.55-1.30 (m， 4H)。MS; es+ 144.9(M+H)+，es-: 142·8(Μ·Η)_。 硫脲7b之製備 •33 - 200307692 (28) 用上述方法使用商業上可購得的環己基胺代替環戊基 胺，製得硫脲7b

7b 實例8 化i合物101之合成

8f 8g 101

-34- 200307692 (29) 步騾Α·於大環中間體6a( 13.05克，27.2毫莫耳，1.0當 量），Ph3P(14.28克，54.4毫莫耳，2.0當量）及2-羧基甲氧 基-4-羥基-7-甲氧基崦啉（WO 00/09543 ; WO 00/09558 及 WO 00/5 9929)(6.67 克，28.6毫莫耳，1.05 當量）於 THF (450 毫升）内的溶液中於0 °C費時15分鐘滴加DIAD(10.75毫 升’ 5 4 · 6毫莫耳’ 2.0當量）。然後移去冰浴，將反應混合 物於室溫攪拌3小時。待起始物完全轉化成產物後，真空 蒸發溶劑，殘餘物用EtOAc稀釋，用飽和NaHC03(2x)及鹽 水（1 X)洗，有機層於無水硫酸鎂上乾燥，過濾，蒸發至乾。 作閃色層分析後得純化合物7a;拄先用己烷/EtOAc (50:50) 洗，再用CHCl3/EtOAc (95:5)洗除去Ph3PO及DIAD副產 物，以TLC監測洗離雜質。最後用CHCl3/EtOAc (70:3 0) 由柱洗離所需產物8a。一般情形下色層分析步騾須重複 2 - 3次後可得高純度化合物8 a，為白色固體，總產出率6 8 % (12·8克，99·5%純度，以HPLC測定）。 步騾Β.於Boc-保護的中間體8a(1.567克）於CH2C12(15 毫升）内的溶液中加4N HCl於二嘮烷内的溶液（12亳升）。 此反應混合物於室溫攪拌1小時。[如在反應到半途有黏铜 膠體生成時，再加1〇毫升CHaCh]在去保護完成時，蒸發 去溶劑至乾，得黃色固體及糊樣物質。將此混合物溶於約 5% MeOH於CHsCh内的溶液中，再於真空下蒸發至乾， 得化合物8b，為黃色固體，將其用於下一步騾，不必純化。 步騾C.於環戊醇（614微升，6.76毫莫耳）於THF (15毫 升）内的溶液中滴加光氣於甲苯内的溶液（1 · 9 3 Μ，5 · 9 6毫 -35- (30) (30)200307692

升，U.502毫莫耳），此混合物於室溫檀掉2小時生成環戊 基氯甲酸酯試劑（z)。然後真空下蒸發去約半量溶劑。所 餘淺黃色溶液藉加CH2C12(5毫升）稀釋，濃縮至原容積的 半量，以確保已除去超量的光氣。將上述環戊基氯甲酸醋 ^劑進步以THF (15毫升）稀釋，加於胺_211(：1鹽“内。 將此混合物在冰浴内冷至，滴加以州調整pH至約 8.5-9,此反應混合物再於〇χ：攪拌工小時。然後用以〇^ 稀釋混合物，用水（lx)，飽和NaHC〇3 (2χ)，Η2〇 (2χ)及 鹽水（lx)洗。有機層於無水MgS〇4上乾燥，過濾，真空蒸 發，得黃琥珀色泡沫。以閃柱色層分析（用Et〇Ac内的3〇% 己烷至20%己烷梯度溶劑洗離）純化，得二甲基酯8c，產 出率80%(1·27克），純度>93%。 步騾D.將二甲基酯8e (1.17克）溶於THF/Me〇H/H2〇(2〇 毫升’2:1:1比）内，加心011水溶液（18毫升，1.1當量）。 此反應混合物於室溫攪拌i小時，然後蒸發至乾，得鈉鹽 8d，為白色固體（約i.66毫莫耳）。化合物8d直接用於下一 步騾不必純化。 步騾E.將粗製鈉鹽8d(1.66亳莫耳）溶於THF (17毫升） 内，加E“N，此混合物於冰浴内冷至〇〇c。滴加異丁基氯 甲酸酯（322微升，2.5¾莫耳），此混合物於〇〇c攪拌75分 鐘。然後加二氮甲烷（15毫升），於〇。〇攪拌3〇分鐘，再於 室溫攪拌1小時。真空下蒸發去大部溶劑，剩餘混合物用 EtOAc稀釋，用飽和 NaHC03(2x)，Η2〇(2χ)及鹽水洗， 於無水MgSCU上乾燥，過濾，真空蒸發，得化合物8e，為 -36- 200307692

(31) 黃色泡沫（1 · 2克，約1 · 6 6毫莫耳）。此二氮酮中間體8 e直接 用於下一步騾不必純化。 步騾F.將二氮酮8e(1.2克，1.66亳莫耳）溶於THF (17 毫升）内的溶液於冰浴内冷至〇°C。滴加HBr水溶液（48%， 1.24毫升），此反應混合物於〇。(：攪拌1小時。此混合物以 EtOAc稀釋，用飽和 NaHC03(2x)，H20(2x)及鹽水（lx)洗， 於無水M g S 04上乾燥，過滤，蒸發至乾，得α 溴酮中間 體8 f，為淺黃色泡沫（約1 · 6 5 7毫莫耳）。 步騾G·於溴酮8f(2.51克，3.27毫莫耳）於異丙醇（105 愛升）内之溶液中加環戊基硫脈7a(565毫克，3.92亳莫 耳），將此反應混合物置於預熱至7 0 °C之油浴内並撥拌1.5 小時。真空除去異丙醇，將產物溶於EtO Ac内。此溶液用 飽和NaHC〇3，水及鹽水洗，有機層於無水MgS04上乾燥， 過濾，蒸發，得粗製產物8g(1.35克），為淺黃色固體。此 粗製產物以閃色層分析於二氧化矽膠上純化（丨：丨己垸 /EtOAc)，得2.12毫克灰白色固體（80%產出率）。 步騾H· 將甲基酯8g(1.82克，2.2毫莫耳）溶於 THF/MeOH/H2O(38/20/18 毫升）内，用 Li0H.H20(935 毫克，22.3 毫莫耳）皂化。此水解反應於室溫進行1 8小時。然後將溶 液蒸發至乾，得灰白色糊。此糊用EtO Ac及鹽水稀釋。用 IN HC1將混合物pH調整至6。分離EtOAc層，水層用Et〇Ae 萃取二次。合併之EtOAc層用去離子水（2x)及鹽水（1χ) 洗，乾燥（MgS〇4)，蒸發，得環形三肽化合物ιοί，為黃 色固體（1.76克，99%產出率）。 200307692

(32) 轉化成Na鹽 將化合物8h(106毫克，0.132毫莫耳）溶於MeOH(20毫升） 内，加0.0 1N NaOH溶液（13.2毫升）。此澄清黃色溶液用水 稀釋，凍乾，得化合物8hNa鹽，為黃白色不定形固體（106 毫克，97 %產出率）。 M.S·(電噴）：799.3 (M-H)· 801.4 (M + H)反相 HPLC同一性 (0.06% TFA ; CH3CN : H20) : 99%。 NMR (400 MHz? DMSO-d6) · δ 8.02(d? J=9.2 Hz, 1H), 7.90 (d? J=6.4 Hz，1H)，7.76 (s，1H)，7.44 (bs，2H)，7.27 (d，J=1.9 Hz，1H)，7·11 (d， J=7.0 Hz，1H)，7.03 (d，J=9.2 Hz，1H)，5.48 (dd，J=18.4, 9.9 Hz，1H)，5.43 (bs5 1H)，5.15 (dt5 J=17.8, 7·63 Hz，1H)，4.70 (bs，1H)，4·49·4·34 (m，2H)， 4.34-4.25 (m，1H)，4.13-4.03 (m，1H)，3.99-3.86 (m，1H)，3.90 (s，3H)， 2.58-2.44 (m，1H)，2.42-2.32 (m，1H)，2.15-1.93 (m，4H)，1.83-1.14 (m， 24H)，1.14-1.12 (m，1H)。 實例9 用實例8所述相同工序，但於步騾G中用環己基硫脲 7b，得化合物102鈉鹽。

巾 NMR (400 MHz，DMSO-d6) : 5 8.02(d, J=9.2 Hz，1H)，7.86 (bs，1H)， 7.78 (d，J=7.3 Hz，1H)，7.43 (s，2H)，7.27 (d，J=2.2 Hz，1H)，7.12 (d， -38- 200307692

(33) J=6.9 Hz，1H)，7·〇3 (dd，J=9·2, 19 Hz，1Η)，5.57-5.40 (m，1H)，5·40 (s， 1H)，5.26-5.17 (m，1H)，4.70 (bs，1H)，4.52-4.35 (m，2H)，4.29-4.23 (m， 1H)，4·18_4·00 (m，1H)，3·90 (s5 3H)，3·87·3·65 (m，1H)，2.42-2.32 (m5 1H)，2.19-2.10 (m，1H)，2·07·1·96 O, 3H)，1.82-0.95 (m，28H)。MS; es+: 815.4 (M+H)+ 0 es-: 813.4 實例1 0 NS3-NS4A 蛋鱼^酶 I....炙

此用以評估本發明化合物的酶鐘定見WO 00/09543及WO 00/59929 ° 實例1 1 以細胞為篡遂的HCV RNA複製鑑定 細胞培養： 以前述方法（Lohman et al” 1990, Science 285.110-113)確立安 定地保留亞基因組HCV複製子的Huh7細胞，並定為S22.3 細胞系（WO 02/052015)。將 S 22 · 3 細胞保留於 Dulbecco，s Modified Earle培養基（DMEM)内，此培養基内加有1〇 % FBS 及1亳克/毫升新黴素（標準培養基）。鑑定期間，使用加有 10%FBS的DMEM培養基，内含〇.5%DMSO，但不含新黴 素（鐘定培養基）。加化合物前1 6小時，將S 2 2.3細胞用胰 蛋白酶消化，並用標準培養基稀釋至5 0 0 0 0細胞/毫升。取 200微升（10000個細胞）分布於96凹碟的每一凹内。然後將 碟於371在5% C02下培養至第二天。 -39- 200307692 (34) 試劑及物料： 產物 公司 目錄編號 儲存 DMEM Wisent Inc. 10013CV 4°C DMSO Sigma D -2650 室溫 Dulbecco’s PBS Gibco-BRL 14190-136 室溫 胎牛血清 Bio-Whittaker 14-90 IF -20〇C/4〇C 新黴素(G418) Gibco-BRL 10131-027 -20〇C/4〇C 胰蛋白酶-EDTA Gibco-BRL 25300-054 -20〇C/4〇C 96凹的碟 Costar 3997 室溫 PVDF 0.22微米過濾器 Millipore SLGV025LS 室溫 深凹滴定碟 聚丙諦 Beckman 267007 室溫 試驗化合物之製備 將10微升試驗化合物（於100 % DMSO内）加於2毫升鑑定 培養基内，使DMSO終濃度為0.5%，此溶液以超音波振動 15分鐘，用0.22微米Millipore Filter Unit過濾。將900微升移 入聚丙烯深凹滴定碟之A排。B至Η排含400微升整數份的 鑑定培養基（含0·5% DMSO)，用以藉將400微升由一排移 至另一排（H排不含化合物）作系列稀釋（1/2)。 試驗化合物用於細胞 由含S 2 2 · 3細胞的9 6凹的碟吸出細胞培養物。將有適宜 稀釋的試驗化合物的1 7 5微升鑑定培養基由含化合物的碟 的每一凹轉移至細胞培養物碟每一對應凹（H排用作“無抑 制對照”）。將細胞培養碟於37°C在5% C02下培養72小時。 總細胞RNA之萃取 培養 72 小時後，用 RNeasy 96 套件（Qiagen®，RNeasy Handbook， 1999)由96凹碟的S22.3細胞萃取總細胞RNA。簡言之，由 細胞完全取出鑑定培養基，加含143 mM /5 -硫氫基乙醇的 -40- 200307692

(35)

100微升RLT緩衝液（Qiagen®)於96凹細胞培養碟的每一凹 内。將此微碟（microplate)輕輕搖動2 0秒。然後將1 0 0微升 7 0%乙醇加於每一微碟凹内，藉吸管混合。取出溶胞產 物，用於RNeasy 96 (Qiagen®)碟的凹，此碟係置於Qiagen® Square-Well Block的頂部。用膠帶將RNeasy 96碟密封，將有 RNeasy 96凹碟的Square-Well Block載入固定器内，置於4K15C

離心轉頭（rotor bucket)上。將樣品於室溫以6000轉/分鐘（約 5600 X g)離心4分鐘。由碟上除去膠帶，RNeasy 96碟的每一 凹内加0 · 8毫升Buffer RW1 (Qiagen® RNeasy 96套件）。再用新膠 帶密封RNeasy 96碟，於室溫以6000轉/分鐘離心4分鐘。將 RNeasy 96碟置於另一清潔的Square-Well Block頂上，除去膠 帶，於RNeasy 96碟的每一凹内加0.8毫升Buffer RPE (Qiagen® RNeasy 96套件）。再用新膠帶密封RNeasy 96碟，於室溫以 6000轉/分鐘離心10分鐘。除去膠帶，將RNeasy96碟置於 含1.2毫升收集微管的支架頂端。藉加50微升無RNase的水 於每一凹内洗離RNA，用新膠帶將碟密封，於室溫培養1 分鐘。然後將碟於室溫以6000轉/分鐘離心4分鐘。再用第 二容積50微升無RNase的的水重複此一洗離步騾。將含總 細胞RNA的微管存於-70°C。 總細胞RN A之定量

用 RiboGreen® RNA定量套件（Molecular Probes®)於 STORM® 系 統（Molecular Dynamics®)上定量 RNA。簡言之，將 RiboGreen 試劑於 TE (10 mM Tris-HCl ρΗ=7·5，1 mM EDTA)内稀釋 200倍。 一般是，將50微升試劑用10毫升TE稀釋。將核糖體rnA •41- 200307692

(36) 標準曲線於TE内稀釋至2微克/毫升，再將預定量（1〇〇， 50，40，20，10，5，2及0微升）的核糖體RNA溶液移入新 * 96凹碟（COSTAR #3997)内，再用TE將容積加至100微升。 一般而言，9 6凹碟的第一列用於標準曲線，其他的凹用於 要定量的RNA樣品。將要定量的10微升每一 RNA樣品移至 96凹碟的對應的凹，加90微升TE。於96凹碟的每一凹内 加一容積（1 0 0微升）稀釋的RiboGreen試劑，於室溫培養2至5 分鐘’避光（200微升終容積内的10微升RNA樣品產生20 X φ 稀釋）。每一凹的螢光強度用STORM®系統（Molecular Dynamics®)測定。以已知量的核糖體RNA為基礎製出標準曲 · 線及生成的螢光強度。由標準曲線及20X稀釋校對測出實 驗樣品的RNA濃度。 試劑及物料 產物 公司 目錄# 儲存 DEPC Sigma D5758 4°C EDTA Sigma E5134 室溫 Trizma-Base Sigma T8524 室溫 Trizma-HCl Sigma T7149 室溫 收集管條 Qiagen 19562 室溫 Ribogreen RNA定量套件 Molecular Probe R11490 -20°C RNeasy 96 套件 Qiagen 74183 室溫 Square-Well Blocks Qiagen 19573 室溫

真實時間R.T.-PCR

真實時間R.T.-PCR是用 TaqMan EZ R.T.-PCR套件 (Perkin-Elmer Applied Biosystems®)於 ABI Prism 7700 Sequence Detection System完成。用類似前述技術（Martell et al·，1999，J· Clin. Microbiol. 37:327-332)的 Taqman 技術（Roche Molecular -42- 200307692

(37)

Diagnostics System)使 R.T.-PCR 適合於 HCV RNA 的 5，IRES 定 量。此系統利用AmpliTaq DNA聚合酶的5，· 3，溶核活性。簡 θ之’此法利用雙重標記的螢光雜交探針（PUTR Probe)，此 探針特別使PCR引物（引物8 125及7028)間的模板退火。探 針的5’端含螢光報告劑（6_羧基螢光素[F am])，其3,端含 勞光媳滅劑（6-羧基四甲基羅丹明[TAMRA])。完整雜交探 針上的媳減劑抑制F A Μ報告劑的發射光譜。雜交探針的核 紅酶降解釋出報告劑，導致螢光射出的增加。ABI Prism 7700 序列測定器在PCR放大過程中連續測定螢光射出的增 加’致使放大的產物直接與信號成正比。於反應早期在代 表產物累積的對數相點分析放大圖。代表已界定出的伴有 PCR產物指數增長的螢光信號增加測定閾的點界定為循 環閾（CT)。CT值與輸入的HCV RNA量成反比；這樣，在 相同PCR條件下，HCV RNA的起始濃度越高，CT越低。藉 將CT與已知的HCV RNA每一濃度標準稀釋相比製成曲線 圖即可用ABI Prism 7700測定系統自動製成標準曲線。 將標準曲線的參考樣品置於每一 R.T.-PCR碟上。活體外 合成HCV複製RNA(藉T7轉錄），純化，並以OD260定量。 考慮及1微克RNA^.BxlO11 RNA拷貝，作稀釋以求有 108，107，106，1〇5，1〇4，1〇3 或 1〇2 RNA拷貝 /5 微升。每 一稀釋中也加總細胞Huh-7 RNA(50亳微克/5微升）。將5 微升每一參考標準（HCV複製子+Huh-7 RNA)與45微升 Reagent Mix合併，用於真實時間R.T.-PCR反應。 確立實驗樣品的真實時間R.T·-PCR反應，此等實驗樣品 200307692

(38) 已於RNeasy 96-凹碟上藉以5微升每一總細胞RNA樣品與 4 5微升Reagent Mix合併純化。 試劑混合物製備： 成分 一個樣品容積 (微升） 一個碟容積(微升） (91個樣品+死容積） 終濃度 無Rnase水 16,5 1617 5X TaqMan EZ 緩衝液 10 980 IX Μη (OAc)2 (25 mM) 6 588 3 mM dATP(10 mM) 1.5 147 300 μΜ dCTP(10 mM) 1.5 147 300 μΜ dGTP(10 mM) 1.5 147 300 μΜ dUTP(20 mM) 1.5 147 600 μΜ Forward Primer (10 μΜ) 1 98 200 ηΜ Reverse Primer (10 μΜ) 1 98 200 ηΜ PUTR探針(5 μΜ) 2 196 200 ηΜ rTthDNA聚合酶 (2·5 U/微升） 2 196 0.1U/微升 AmpErase UNG (1U/微升） 0.5 49 0.01 υ/微升 總容積 45 4410

試劑及物料： 產物 公司 目錄# 儲存 TaqMan EZ R.T.-PCR Kit PE Applied Biosystems N808-0236 -20°C MicroAmp Optical Caps PE Applied Biosystems N801-0935 室溫 MicroAmp Optical 96-Well Reaction Plate PE Applied Biosystems N801-0560 室溫 正向引物序列（SEQ ID NO. 1):5，-ACG CAG AAA GCG TCT AGC CAT GGC GTT AGT-3’

反向引物序列（SEQ ID NO. 2):5, TCC CGG GGC ACT CGC AAG CAC CCT ATC AGG-3’ -44- 200307692

(39) 註：此等引物放大HCV 5,未翻譯區内的256-nt。 PUTR探針序列（SEQ ID NO. 3):16FAm1-TGG TCT GCG GAA CCG GTG AGT AC A CC- |tAmE\! I,模板對照（NTC):毒一碟上使用4個凹作為“NTC”。於 此等對照凹内加5微升水代替RN A。 熱循環條件： 5 0°C 2分鐘 6 0°C 3 0分鐘 9 5〇C 5分鐘 9 5〇C 1 5 秒 6 0°C 1分鐘 V 2循環 9 0°C 1 5秒 ） 60°C 1分鐘 (40循環 R.T.- PCR反應終 了後，數據分析需設定PCR碟的閾螢光 信號，藉將Ct值與每一參考反應所用的RNA拷貝數製圖構 成標準曲線。供鐘定樣品取得的Ct值用以插入由標準曲線 鲁 取得的RNA拷貝數。 最後，將RN A拷貝數正常化（以由細胞培養凹萃取的總 RN A之RiboGreen RNA定量為基礎）並以基因組當量/微克 總 RNA[ge/pg]表達。 ^ 由細胞培養碟每一凹得到的RNA拷貝數[g.e./pg]是在 a 抑制劑各種濃度的複製HCV RNA量的測定。抑制％是以如 下方程式計算： 100_[([g.e./pg inh]/(g.e./>g ctl)xl00] -45- 200307692

(40) 將適合Hi 11模型的非線性曲線使用於抑制·濃度數據’ 用 S AS 軟體（Statistical Software System; SAS Institute，Inc· Cary， N.C·)計算5 0%有效濃度（EC50)。 實例1 2 特異性鑑定 用於評估此化合物選擇性的特異性鑑定揭示於WO 00/09543 ° 實例1 3 藥物動力學性質 本發明化合物也有良好藥物動力學性質，如於鼠在經口 投送5耄克/公斤後於1小時及2小時可測出有意義的血漿 含量。 更明顯的是，下述鑑定，活體内經口吸收篩檢，用以測 定於鼠經口給予後試驗化合物的血衆含量·· 物料及方法： 1 ·用以集中化合物的方法（“彈夾選擇，，）： 要裝入“彈夾”的化合物的選擇是基於其構造的相似性 及物理化學性質。確立可用於所有選擇的化合物的固體相 萃取方法。以起始試驗為基礎，將每一化合物送入鼠血 漿，並以HPLC或/HPLC/MS於0.5//M濃度測定其停滞時 間’離子質量’並以HPLC及/或HpLC/M_以的各化人 物間可能的分離作為基礎將3_4個化合物裝入“彈爽，，。口 2 · 口服載體及化合物製備·· 每- “彈夾，，含3-4種化合物’每一化合物為5“毫克/公 -46 - (41) 200307692

彈夾可製成0 · 5 %的水性甲基纖維素及〇 · 3 %聚氧乙烯 (2〇j山梨糖酮單油酸鹽（吐溫8〇)内的懸浮液。投藥容積為 1 0毫升/公斤，經由口服用管。 3 ·投藥及血漿抽樣： 將Male Sprague Dawley鼠於各自籠内空腹過夜，但可喝 1 0〇/。葡萄糖水溶液。給鼠投送每種“彈夾，，。投藥後i及2小 寺由2隻鼠採取血漿樣品（約i毫升），集中備萃取及分析。

4 ·化合物萃取及分析： 以固體相萃取方法萃取每一彈夾内的投藥後i及2小時 所取血漿樣品，空白血漿，含所有化合物各〇 的空白 =槳。以HPLC及HPLC/MS分析樣品作為比較。以〇 5//M >農度標準評估血漿濃度。 表 1

MeO

Cpd# R1 R2 R3 MS (M-H)- _101 0H 環戊基 環戊基 V / — 799.3 _ 102 0H 環己基 環戊基 813.4 103 nh-so2- 環丙基 環戊基 環戊基 在以本發明化合物評估上述酶及細胞為基礎的鑑定 -47- (42) 200307692

時，發現此等化物具高活性 ^

注°更特定地說，於NS3-NS4A 蛋白酶鑑中此等化合物之ΤΓ 你、人Λ Λ , 、人、，“ ^么 低於0.01//M，於以細胞為 基礎的HCV RNA鑑定中其eC5〇低於0·01/ζΜ。 在此等化合物作特異性評估時，發現式丨化合物之選擇 性在於其於人白血球彈性蛋白酶及組織蛋白酶Β鑑定中 無明顯抑制性。

在此等化合物以鼠作藥物動力學鑑定評估時，於 Μ6Λο〇6ΐ:ΤΛΥ6θη20®(0.5% : 〇·3%)内5毫克/公斤的劑量即產生 出乎意料的良好血漿濃度。化合物101及102之曲線下面積 (AUC)分別為16及18//Μ-小時，而與其最接近的類似物之 AU C為0 · 8至4 · 5 //Μ β小時。此種鼠血漿内化合物吸收量的 顯著增加使此等化合物作為經口給予的有效藥物令人發 生特別興趣。

-48- 200307692 (43)

序列表 <ll〇> BOEHRINGER INGELHEIM (CANADA) LTD.

<120> MARCROCYCLIC PEPTIDES ACTIVE AGAINST THE HEPATITIS C VIRUS <130> 13/092 <140〉 092101813 <141> 2003-01-28 <150> 2,369,711 <151> 2002-01-30 , <160> 3 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 30 <212> DNA <213>人工序列 — <220> <223>正向引物 <400> 1 acgcagaaag cgtctagcca tggcgttagt <210> 2 <211> 30 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>反向引物 <400> 2 tcccggggca ctcgcaagca ccctatcagg <210> 3 <211> 26 <212> DNA <213〉人工序列 <220> <223> PUTR 探針 <400> 3 tggtctgcgg aaccggtgag tacacc -49-

Claims (1)

1. 200307692 拾、申請專利範國 1. 一種式I化合物： Me〇

   其中R1是羥基或NHS02R1A;其中R^SCCh)烷基， (C3_7)環烷基或{(Cn)烷基- (C3_7)環烷基}，其均視需 要以鹵，氰基，硝基，0((^ 烷基，醯胺基，胺基或 苯基作1至3次之取代，或R1A*C64C1()芳基，其視需 要以鹵，氰基，硝基，（Cu)烷基，occu)烷基，醯胺 基，胺基或苯基作1至3次之取代；R2是（C5_6)環烷基及 R3是環戊基；或其醫藥上可接受的鹽。 2. 根據申請專利範圍第1項之化合物，其中R1是羥基或 NHS02R1A，其中 R1A* (Cb6)烷基，（C3_7)環烷基或 {(C^)烷基-(C3_7)環烷基}，其均視需要以画，硝基或 0((^-6)烷基作1至3次之取代，或苯基其係視需要以 鹵，硝基，（Cm)烷基或CKCm)烷基作1至3次之取代。 3. 根據申請專利範圍第1或2項之化合物，其中R1是 NHS02R1A，其中R1A是甲基，乙基，環丙基，環丁基， 環戊基，環丙基甲基，環己基乙基，CC13，CF3，苯基， 200307692

   2-氟苯基或4-甲基苯基。 4. 根據申請專利範圍第1或2項之化合物，其中R1是羥 基。 5. 根據申請專利範圍第1或2項之化合物，其中R2是環戊 基。 6. 根據申請專利範圍第1或2項之化合物，其是選自由式 10 1，102及103所構成的群：

   200307692

   7. —種醫藥組合物，其含抗C型肝炎病毒有效量的根據 申請專利範圍第1或2項之式I化合物或其醫藥上可接 受的鹽，及與其混合的醫藥上可接受的載劑介質或助 劑。 8. 根據申請專利範圍第7項之醫藥組合物，其尚含治療 有效量的一或多種其他抗-HCV劑。 9. 根據申請專利範圍第8項之醫藥組合物，其中該其他 抗-HCV劑是選自：α-干擾素或聚乙二醇化的α-干擾 素。 10. 根據申請專利範圍第8或9項之醫藥組合物，其中該其 他抗-HCV劑是病毒唑。 11. 根據申請專利範圍第8或9項之醫藥組合物，其中該其 他抗-HCV劑是選自如下的抑制劑：解旋酶，NS2/3蛋 白酶及内部核糖體進入位（IRES)。 12. 根據申請專利範圍第1或2項之式I化合物，或其醫藥上 可接受的鹽，其係用於治療或預防C型肝炎病毒之感 染。 13. 根據申請專利範圍第1或2項之式I化合物在製造藥物 以供治療或預防C型肝炎病毒感染上的用途。 14. 一種零組件套件供製造藥物以治療或預防C型肝炎病 毒感染，其包括二部分： (a) 其中之一包括至少一種根據申請專利範圍第1 至2項之化合物；及 (b) 其他部分包括一或多種抗HCV劑。 200307692 陸、（一>、本案指定代表圖為：第_圖 (二）、本代表圖之元件代表符號簡單說明：

   柒'本案若有化學式時，請揭示蕞能顯示發明特徵的化學式：. MeO

   (Ο -5 - 200307692 (此處由本局於收1 文時黏貼條碼； (92)理專化2730字第214 8 6 專利補充、修ίί中請

   (本申請書格式、順序及粗體字，請勿任意更動，※記號部分請勿填寫） ※案 由：21000 ; 21002 ; 24010 ; 24012 申請案號：〇九二一〇—八一三 申請補充修正日期：中華民國九十二年七月二十四日 依據:貴局九十二年五月二日（九二)智專一(二）15121字第〇九二四〇七八三 七九〇號函辦理。 壹、 專利名稱：類別：0發明匚(新型□新式樣 「具有抗C型肝炎病毒活性之大環肽 MACROCYCLIC PEPTIDES ACTIVE AGAINST THE HEPATITIS C VIRUS」 貳、 申請人：（共1人） 姓名或名稱：（中文/英文）（簽章）ID: 加拿大商百靈佳殷格翰有限公司 BOEHRINGERINGELHEIM (CANADA) LTD. 代表人：（中文/英文）（簽章） 路易斯 G.柏尼爾/LOUISE G. BERNIER 義 文代 釋理 _八, 參、 專利代理人· ID ： A100743645

   姓名：陳長文律師（蓋章） 證書字號：台代字第1117號 事務所地址：台北市敦化北路二〇一號七樓 電話/傳真/手機：（02)2715-3300/(02)2718-8497 連絡人(電話分機）：分機2730 E-MAIL ： attomeys@leeandli.com 肆、 規費： (無） P:\HHT\C03\官方\82952 樣注子標題-BOEHRINGER DOC\l\WCK 200307692 伍、 附送書件： 中文說明書第7、10及11頁替換頁各乙式三份。 陸、 補充、修正說明事項： 申請人謹遵貴局九十二年五月二日來函指示，修正本案中文說明書使 其符合專利法施行細則第十五條所規定之格式要求。 ΡΛΗΗΤΧ：03\，*\82952 樣注子欉題-BOEHRINGER D0C\1\WC1C 200307692 第092101813號專利申請案 中文說明書替換頁(92年7月） ⑴ 玖、發明就明 (發明說明應敘明:發明所屬之技術領域、先前技術、内容、實施方式及圖式簡單說明) 技術領域 本發明係關於一類化合物，其合成方法，組合物及治療 C型肝炎病毒（HCV)感染的方法。具體地說，本發明提供 新穎肽類似物，含此類似物的醫藥組合物及使用此類似物 治療HCV感染的方法。 先前技術 C型肝炎病毒（HCV)全世界上都是輸血後及社會上獲得 的非-A非-B肝炎的主要病因劑。據估計，世界上有超過 二億人受此病毒感染。有高百分比的帶病毒者變成慢性感 染，其中多數發展成慢性肝病，即所謂慢性C型肝炎。而 這一組又成為嚴重肝疾病如肝硬化，肝細胞癌及導至死亡 的肝病的高危險群。 _ HCV確立病毒抗性的機轉及導致慢性肝病高發生率的 原因現尚不完全明瞭。現尚不知HCV如何與病主免疫系統 互動及避開主免疫系統。此外，有關避免HCV感染及疾病 的細胞及體液免疫反應詳情現也尚未確定。據報告，免疫 球蛋白可預防輸血引起的病毒性肝炎，但疾病控制中心 (the Center for Disease Control)現尚未推薦免疫球蛋白治療用 於此目的。有效的保護性免疫反應的缺乏妨礙了疫苗的發 展或適宜的曝露後預防手段，所以近期内希望仍寄託於對 抗病毒的干擾。 各臨床研究的目的在確定能有效地治療受慢性C型肝 炎困擾的病人的HCV感染的醫藥劑。此等研究包括使用α - 200307692 第092101813號專利申請案 中文說明書替換頁(92年7月）

   (4) 養中是有活性的，並在活體内具極良好藥物動力學性質。 發明内容 本發明範圍内包括式I化合物： MeO

   其中R1是羥基或NHS02R1A ;其中R1A* (Cu)烷基，（C3-7) 環烷基或{(Cu)烷基-(C3.7)環烷基}，其視需要以鹵，氰 基，硝基，6)烷基，醯胺基，胺基或苯基作1至3次 之取代，或R1A* (：6或C1()芳基，其視需要以鹵，氰基，硝 基，（Cn)烷基，O-d.6)烷基，醯胺基，胺基或苯基作1至 3次之取代；R2是（C5_6)環烷基及R3是環戊基；或其醫藥上 可接受的鹽。 本發明範圍内包括醫藥組合物，其含抗C型肝炎病毒有 效量的式I化合物或其治療上可接受的鹽，及與其混合的 醫藥上可接受的載劑介質或助劑。 根據本發明一具體實施例，本發明醫藥組合物尚含干擾 素（聚乙二醇型或非聚乙二醇型的）或病毒唑，或一或多種 抗-HCV劑，或以上諸劑的任何混合物。 本發明另一重要方面包括藉給予哺乳動物抗C型肝炎 -10- 200307692 第092101813號專利申請案 中文說明書替換頁(92年7月）

   病毒有效量的式I化合物，其治療上可接受的鹽，或上述 組合物，單獨給予或與一或多種千擾素（聚乙二醇型或非 聚乙二醇型）或病毒唑，或一或多種其他抗-HCV劑一起給 予或分別給予以治療C型肝炎病毒感染的方法， 本發明另一重要方面包括藉給予哺乳動物抗C型肝炎 病毒有效量的式I化合物，其治療上可接受的鹽，或上述 組合物，單獨給予或與一或多種千擾素（聚乙二醇型或非 聚乙二醇型）或病毒唑，或一或多種其他抗-HCV劑一起給 予或分別給予以預防C型肝炎病毒感染的方法。 本發明範圍還包括式I化合物，如此處所述者，在製成 藥物以治療或預防C型肝炎病毒感染的用途。 實施方式 定義 ^ 如此處所述，下述定義除非另有說明適用於： 在述及各實例時，（R)或（S)用以指示不對稱中心之絕對 構形，此指示是用於整個化合物之說明而非只用於取代基 的說明。 此處“PI，P2及P3”意謂從肽類似物C_端開始延伸至N-端的胺基酸殘基的位置（即P1是指從C-端開始的1位，P2 是指從C ·端開始的2位，依此類推）（見Berger A. & Schechter 1_， Transactions of the Royal Society London series B257, 249-264 (1970)) ° 此處所謂“（1R，2S) -乙晞基- ACCA”意謂下式化合物：