SU576967A3

SU576967A3 - Способ получени антибиотика тиенамицина

Info

Publication number: SU576967A3
Application number: SU7502191704A
Authority: SU
Inventors: Совайер Кахал Джин (Сша); Мэрвин Кахан Фредерик (Канада); Олли Степли Эдвард (Сша); Томас Гоэгельман Роберт (Сша); Эрнандес Себастьян (Испания)
Original assignee: Мерк Энд Ко Инк (Фирма)
Priority date: 1974-11-25
Filing date: 1975-11-24
Publication date: 1977-10-15
Also published as: GB1498087A; BG27916A3; AU8690675A; HU178052B; ZA757366B; HK60480A; US3950357A; KE3094A; RO70072A; SE431348B; DK138663C; IL48521A; FI753305A; EG11963A; AR211109A1; JPS5839519B2; PL96314B1; CY1092A; CS183829B2; DK528075A

Description

отцоштс к об асш щафйййае ШЕ; К raifeiOTHKa, зд етаг Еыоокоэффектнввнм зща ннгйбЕрова1ИИ роста разлшнмх грвджо гзскйтельгзмх н ,г|®мо1|швдте 5к5 ьйихрооргаймзш)з. Предлоз жнный шособ получени атибистиса тнешми1аша новый, в пате гаой н шучно-тахн чгсШвыо взо етвшд оБ ветс а шбиошкг . Эта осгагвЕтс там, «по шга&ш StreptOf myces caltleya NRRL Й357 культивируют в аэробных глубинных услови х в пнтателыюй среде- со1 ржап5ей источшкн угларода, азота и мишральные соли, с послвдуиицйм выделением н очисткой вгелвврго продукта. . АнтЕ&отнк т ешйшпзн формулы ЙНа-йНШ-1-г . VS-tHrt-HrNHi 0 Y получают путем вырапщвани микроорганизма Streptomyces cattleya. Этот штамм выделен из образца почвы н обозка ен как МА-4297 в коллекци культур Мерк ендК°, Инк, Ренвей, Нью-Джер2 -. KvHbtypa ш щктокнвое хравекве в дг шгекй гп культур региошльных лабораторий Ео ЕссхшдоБакнкм, Северного отделенн по айшльэовааиа нссзкйзшаиЁ к сгжрьпкй служ-оы се;5а(2сохоз йстве ных гкхзггдов11Егй отделгнЕЖ сельского хоз йства ОНА, Щар&&, Илл ш:в1с а el присвоен номгр NRRL 8057. КуШ)турага)И -морфологические пркзашси шт&маа Streptomy s cattleya NRBL 8057, Морфогтатет. Сиорофоры вл нпс шкггвымг етирал мн, встречзлнци.мас в вада боковых s ко1эчных ветвей та возду шом ша5влшн. Qio{ эднзйсондалгвьЕ до цнлк5пфн5е«жзц 0,9 х ,2 бвкм с цз мн до 10 мкм н боже. Ку ьтуралылаз признака. Агар нз томатной пасты и свежий ггук . тзтигный рос переменный.р скевато-корвчшвыЁ плоский, пространственные, воздушньШ МНЦБЛЕ§ орхиде с белым, растворимого п гмеша ввт, Агар Чапека. Вегетативный рост бесцветный, плоский, пространственный. Воздушный миовл редкий, розовато-бельш, раство1шмого пнгмеш нет. Агар ичного альбумина. Вегетативный роет рыжевато-ко шчневый со следа ш серо-оркидейао

го, плоский, пространственный. Воздуишын мицелий - орхиде со светлыми тен ми орхидеи м белого, рвстворимого 1шгмента нет.

Агар глицерол аспаргина. Вегетативный рост перемеыио рыжевато-коричневый со следами серорозового , плоский, пространственный. Воздушный Ш11|елий - орхиде с белым, створымого шгмента нет.

Агар пептон-железодрожжевого экстракта. Вегетап вньш рост рыжевато-коричневый, воздушного мицели нет, растворимый пигмент слегка коричневатый , меланин не усваивает, HjS не образует.

Питательный агар. Вегетативаьш рост светлый рыжевато-коричневый, воздушного мицели нет, }acTBoj Moro нигмента нет.

Агар питательного крахмала. Вегетативкьй росг кремовый до рыжевато-корич1«зого, воздушного йощели нет, растворимый пщ-оаент огсутстзугт. Крахмал гихфолизуе умеренно.

Питательный йселатиновый агар. Взге гагваый рост крвмоаыйз аозд щного мицели нет. Желйзиу |жзжмй а2т уь-зерзнно.

SopOHlO yCSS2I2aST ГИЭКОЗу, iiiaSSBuIOiSs 5M5p2SJ5Ш усзаизае фрухстаэу, хсилозу маотоау, гйвжксЗУ , шхаэоэуз S уоЕШЕаез ара&шйзу, д ллкжа у, Еноэмтел, лактозу, рафш-юзу, ра «1козу.

Ойавйальйой эзйшературсй рост Esjjjisrfss 28 Cj Eps3 теьшературе 37° С pecir. умережгэй:.

Нитраты восстанавливает.

Акшбнотик тненамнцнн аолуашт а афсш.есга аэтн5быой фермвктащЕ одходкидэй интзш ьг-х) водной арэ,дь в р8-гул; руэ лых уеж;зг-шк. :лшKyn .ssJC«5S3 оргйШ13ма Streptomycss esttSs a. Taxass q;«Ma содйржнг аеточшжа углерода, азэш н кзоргаг-шческюс золей, ассимщшруегАЫй -йткросргаш-гз}ЛОМ .

-TBSQOjsss, KBEpaMLSp offiiapg - гл;Егкозу5 фрулИ

Зу, Ый) СакЯр-ЗЗу, ксилозу р. MaiEffiED;;: Ш ДЗаТЕй;

а Tsixste KpajcMsjEsij шпк г зер, озса, , крзлмал, кукуруз1- -ю муку, кстюгзгщг «ше ьКЭ ЙГЕ.1 в сз%,ташш э качэзЕзз ысточнгзкоз 2e sa5®ira.3eyeMsfQ уггэрода в мгшгелъкой cpsде . lCo)i5S4ecTso узжзода socyamjiae j аир-жйернс- 1-6% 0t средш.

В ка«зстБ« мсючнЕка азота Morj-r бьгк; 53ШйльiOBPJSiii; s i 3pH ;rat;, .uposc-AsaH-g н лд -эл -га м, лз/:щн ше щэойэсШр зв5Я saysa,. шюикоэал , sw cMiKssi-b каэгпй растэор- 1 ды8 гщсглл ль: кгзг ом§ий « iseta. l-kro ssECK asoim ййггойьзрв в 5.о/шчзстэе 0/2-6% от зеса зоджзй .

Прн8«ен ют питательные неоргашгдаскне соли, ко Topbse 1ШОТ натрий, калий, аммогшм, кальций, фоофа сульфат, , карбошт, можж также эклгоаггь сгаедёз 8Вбтадш ®, г а рймер кобальта, магнй , jsejs: и .

Фермсшацню щхжод т при 20-37° дл полуЧЕЮ1Я овт19мальных результатов - при 22-30° С, рН mttsfKitHidi среды 6,0-8,0.

Фвр е11гащга осуществл ют в глубинных услови х .

Незначительную ферментацию антибиотика провод т путем инокул ции питательной среды антибиотиком-продуцентом и после переноса в средупродуцент ферментацию провод т при посто нной температуре около 24°С в течение нескольких дней. Сосуд с посевом встр хивают при посто нной комнатной TCMnepaiype (28° С) в течение двух дней или до полутени удовлетворительного роста и некоторые из вновь культур используют дл инокул ции ; второй стадии посева или среды-продуцента.

Дл получеш5 юлы154х ко етеств анга5иотика ф€р1 гнтащ о проводат в баках, снабженкьи смзс телем и средстваьй-: дп а жр-овагш фзpм€ rпtциo:

ной средьз. nKTaTejibHjiu cpsKy no.Tiy-ia T в баке к стерилизуют нагрзвашзем прк тгмперагуре сзсоио 4 20° С. Яри охчаждез-ии oiepasssosai-it-rjic сред} ркЕйвают предварительно п эоросиз-гм культур продуцгнта,. затем фзрьйнтйьупс прозад т в isvsims 3-5 джзй щт и-г ггмеазЕганиЕ к зэвгфовашш ьшктат злькоЁ сздь:. пс. Tiviv Hepaiypy ирмьйрко 24С.

Тнена «н11 ; огйсЕ ;:;s-jr;c2 С-глсз jESJUBCTBOj sSfrKu jsaiK-c; p-.:r3-j;o;-;j.ac.3 л .ij : зпи;-:с

р8Спг;йЕ|К5й ;- з ЙЗТЗКЭ Р. -/. jr/;r;2;;t ;3CJtViO -ОуАЭЬШОзицаЯ; ;с-огш7Сйзушибал; эгл кк чгскс формузге, (чэ) 43,52 шгерсг-;, 5,92 : c-oродДг 10,23 ssora, 23,5 кислорода к 11,77 ospbi.

г. :-Я--% , 10 -;,

Sp3ai.

аэйдого фсжвалЯШС . рН ЗрГ. Ноло зтзльгйыз iCKJCio ;

гЕЗН-ГаДШКОг-г. 5О5;:375П1;:;йЗШй: :. ;S; ,«.,

гак. :..чО5Г14Щзт отс..:. ;-;,:::t::r,a: ч-г;,т ..г-Т енайжц Е uCucasais is G;irJSiC-ii:i. Е е-сгь 3 зодйо;й ра jiacp ::r5;j ;:::;;a;;-;.u:vv: ; 5ЕИ;(8 У1Г/Г.1;:; ;: ., а г гг - :-;:: ;; ;-.

Oy ISSpUj p-rf j-f .ril..Sp .. V.jr/iVTJ: :,T

(pH7,9) Ери |5€ ихзет iapsot 23 дша, с. insji -ой д-з ;;C-s SKp:;.i3Si з ;

2В KSJIME Лрг2 рЕ 7,0 :Ггл;р:1С:Ц ,:огу;:ас г,е.бмодЯКЁ 3 10 Ajw Фосчга:алсго бог;:-;

период полураслада соскал з:: гслько

, HSS3с: К1а.йьно &ге,г: ;:;-35г;;:Г1;.;й

нрогиз разлхкЕй . rjJSS SGiiiCBcaisSEiSMj; п грамотжггштэЕьимх SfiKirepssi @ коаогг si&ss «p jeiffiKHe в

аЖДК1ЩНг.

Его 5ШОЛ 53ОЕ311. Э ЗНТНб-Щ-ШpifflHoro ирегара - дав 5 фек1щй в результате З5фай®№1 грампетюкжтельныйсн грамотркцательнышс QsK-K ntm, , Staphyioc«xxus aureus, Proteus msrebilis, Escharidiia , KlebsisJIs pneumoniss, .а5 ssruginosa к Eutsrobaeter cSisoJs. Его можно использовать как дополнение к корму животным и как дезинфектант. Примен ть в водных композици х можно в концентрации 0,1-100 г антибиотика на 1 млн.ч. раствора дл ингибировакн роста вредных бактерий на медицинском и зубном оборудовании и в качестве бактерицида в промышленном масштабе, нагфимер, в водных красках дл ингибировани роста разрушительных бактерий. Антибиотик тиенамицин можно использовагь в различных фармацевтических рецептах в качестве ингредаента или в сочетании с одним или бопее антибиотиками или одним или более фар макалогичесхи активными веществам Антибиотик используют в форме капсул или таблеток, порошков, жидких растворов, суспензий иш эликсиров. Его можно ввод}ггь орально, топнвдски , внутривешю, внутримьшючно. Таблетки и капсулы дл орального ввзде н могут бытъ в дозировке длн одноразового применещ1Я в могуг содержать, нащжмер, св зующие аганты, сироп, камедь, желатин, сорбитол, т агант, iioji i3HjSUinHpporotfiOH, ншолкктели, лакюзу , сахар, крахмал, фосфат кальци ,, сорбйтол или ГЕЩик, ймсзываюпще sesjecas, mпример стеарат маг к , тальк, йогшэпызпглйколь; крем1 езем, дезеггзграторы, шпрщлер каршфельный крахг.щл, илн соответствующие сглачиваюшие аге.и.гы. нглример лаурилнатрийсртьфокат. Таблетки можно покрьшггь известным методом. смесЕ могут быть а форме воднызс или масл шк сусгшнзкй, растзоров, змульсш, сиропов, эшжс;чров ИЛИ в виде сухого продукта дл растзорени с водой :-jJ3i ру утЛМй Jcидs ocт ш. Tajoig згаздкие смеси могут содержать условные добазкй, например агенты по;г/чени суспензий, например сорбитолозый сироп, метшщеллюлозу, глюкозу (еахаркый сироп), хсеиавш, гидроксюталцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу , стеарат алюлшни в геле шш гидрогеккзованнь;е пищевые сиры, агект-э гульгаторь - ле1Штш-1, сорбйтанмоноолеат или камедь, неводные носители, которые могуг включать ишдевые масла, waupnMsp миндальное масло, фракцио нировадшое кокосовое масло, масл ные эфиры, пропилеетшжоль или зтиловый спирт, презерванты, например метил кли пропил п-гидроксибензоаты или сорбиновую кислоту. Суппозитории должны содержать достаточное котйпестзо основ, например масло какао или другае глицериды. Композиции дл инъекций могут быть в одноразовых дозах в ампулах или в дозах дл многоразового использовани с дополнительными агентами-консервантами . Композици могут быть в виде суспензий, растворов , змульсий в масле или водных носител х. Композиции могут быть также в виде порошка или жидких спреев или ингал нтов, лепешек или .полосканий дл горла. Дл закальшани в гтза или уши используют индивидуальные капсулы. Дозировка введени зависит от сосго вв большого , веса и типа инфекции, частоты введени и юсоба введени , при зтом парентеральное введение вл етс предпочтительным дл большинства инфекций, а оральный путь - дл кншеч ых ЕШфекций . Орально или парентер&пьао антибиотик ввод т в кол1ркстве 2-600 мг/кг в деиь, предвочтикльно 5-1(Юмг/кг в день раздельными дозами, т.е. 3-4 раза в день. Можво примен ть одворезо ые доз р жки, у&прюлгр 25, 250, 500 или 1000мг активного ннгредвента с подходаионии фнзнологвчески приемлемыми носнтел ми или эксцкпиентами . Полученный антибиотик имеет активность 50-400 ад/мл. Очинённый т ешмиц н шлучают путем примекз .ни фнлырацнк гел через гель полнакрнлалн-ща с р23 «8ром пор, нсключгипщнм молокуль Е«сом более 1500. ПредЕЗЧ1:-11ельЭ1г.а гелзк ЕЕ-л етс биогель р ЛцсарйароваЕЕьш .зизйпопж :а xsiiiOHoc5s53-so3 гьале soдны гн рзггворзлш ай-гмст клгг cprsK; 4eQKiix оско.зааа, напркмгр нкриднщ , UiEiOKiiHOBs лутк.щшоз, кол ндйксз 51 ашскламиков . Получгнньш элкйт мокко очистить к друт гл .feiiTOflaj/m очкст;;н-. -Предпочтителы-1ы)й спсгобом o-rKCTfa восста Еозлеш-юго о&11деш сгс Пенамкщ-гкз вл етс рропуск21шэ раствора ь.ткбиоткка, например фильтрованного ферме шг1даокнсго бульош ; pFI 4-5; через колошсу. содер;кащ ю СЕЛЬН Зд кзтнаносбмеаную смол}- с иьфоштного гнпа в шгклг натркл. ЯолзчешЕхЕ ад,с.зрбат затем nafr ход щем э/ава ггом, жпример 2%-Еым кадрг&ш ззрйднном . ЭлБйты собирают во фрак на, раз1й8р фра1сщж зависит от размера ко;юшс1. Затвм о етку а.вергшют последовательньЕчги процессами со спёд тйэдн Ароматографическнми средамк: ан оггообмгшгью смолы типа полисттфолтрнметнламмошш1 кагио} ообмешаые смолы гнпа пол стыролсульфонзга , гелепрон цаекые смолы н полимерные абсорбенпг. Бнозктивнссть э.пкаюв измер ют нтутем пробы с пркмЕненкем Stsphyiococojs aureus АТСС б538Рв качестве организма пробы. Пример. Трубку с лиофилизованной культурой Streptomycas cattleya открьтают асеитично и содержимое взвешивают в трубке, содержащей 0,7 мл стерильных солей Дениса сзждующей композиции (г) СО.1Ш Девиса Цитрат натри о,5 KjHP047,0 КН2Р043,0 ( NN4)23041,0 MgSp47H2O0,1 Дистиллированна вода1000 мл

Порцию 0,2 мл этой суспензии исгг. щш прививки кос ка культуры q)eW)i А (;:гасс агар) следующей композиции (г).

Среда А

Автолиза дрожжей10,0

Глюкоза10,0

Фосфатный буфер2,0

MgSO4- 7HjO0,05

Дистиллированна вода1000 мл

(рН до 6,5 применением NaOH)

Фосфатный буферный раствор KHjPO491,0

NaHP0495,0

ДЬ1стшшированна вода1000 мл

Дн кос ков добавл ют агар 25,0 г/л.

Привитый кос к подвергают инкубации 8 дней при 28° С и хран т при 4° С.

Порцию спор и воздушного мицели кос ка используют дл прививки колбы Эрленмейера емкостью 250 мл, содержащей 50 мл среды А (без агара). Колбу с посевом встр хивают прш 28° С на шейкере со скоростью 220 об/мкн в течение 2 дней, в течение этого времени получают удовлетворительный рост.

15 колб Эрлейнмейера по 250 мл, кажда содерашт 40 мл среды В, прививают 1 мл на колбу культуры из посева. Среда В илеет следующую ко шозицию (г).

Среда В

Кукурузна мука20,0

Барда10,0

Соева мука15,0

Нитрат натри 4,0

CaCl22H200,5

MgS04-7H200,1

CaClj-eHjO0,01

FeS04-7H2O0,01

По нгликоль 20000,25 об

Дистиллированна Н201СХЮмл

(рН довод т до 6,5

применением NaOH)

15 кодй с продуктом встр хивают при 28° С иа шейкере со скоростью 220 об/мин в течение 3 дней с пробами, Полуниными в процессе ферментацноииого цикла. В пробах примен ют бульон, подверг нутый центрифугированкю.

Через 53 час бульоны из 13 колб сливают. ЧЬсть подвергают центрифугированию и опробированию. Оставшийс бульон фильтр}тот, довод т до рН 7 и 500 мл суиит при температуре ниже 0° С с получением 10,7 г твердого вещества. 1,5 г последнего соедин ют с 25 мл смеси п-бутилового спирта и воды (1:99). рН раствора составл ет 7,0. if cTSop нанос т иа колонку 5 х 118 см биогел Р 2 (200-400 меш), которую предварительно уравновеш вахгт смесью л-бутклового спирта и воды. Гель щхмвл ют тем же раствором со сксфостью 10 мл/мин соб ракп 650 мл головного погона с 75 фракци ми, 20 мл кажда . Поток элюента на правл ют записывающим дифферещшалькым

гесорактомефом . фракцию опробирукт на антибактерийнум ЕКГАЗНОСТЬ. Тиенамицин обнаружен во фракци х 34-40 с максимумом во фракции 37. 10 мл фракции 37 сушат при темкературе ниже 0°С с получением 2,0мл твердого вещества . Последнее соедин ют с 5 мл вол дл пробы. Пластины с пробок повергают нкуоации в течение кочи при 28° С. Пс;;учили следующие резульraroi:

Концентраци , мг/мл PasNtef эонь., мм, к

Staphyiceoccjs aureus АТСС 5533 F

8030

4025

2021

1017

П р и м е р 2. Открывают асептически трубку с лиофмлизованной культурой Streptomyces cattleya и содерхммое ззвещивают в 0,8 мл стерильных солей Девиса композиции примера 1.

Суспензию иотользуют дл инокул ции кос ков среды А (плюс агар) с композицией, приведенной в примере 1.

Привитые кос ки подвергают иьжубации в течение недели при 28° С и затем хран прк 4° С.

спор и воздущного М15це1ш одного из кос ков используют дл П жвивки в колбе Эрленмейера емкостью 250мл с посевом, содержащей 50 :.. 1 pe:ibi 4. Колбу с :.iccBnvi встр хивают при 28° С со скоростью 220 об/мнн в течение 2 дней, затем получают удовлетворттельный рост.

Исгтолъзуют 15 колб Эрленмейера емкостью по 250 мл, каждую с 40 мл среды В. Каждую колбу прививают 1 мл культуры из колбы посева. Колбы ргтр чивзют при 28°с со скоростью 220 об/мин на шейкере в тече({ие 3 дней с пробами, вьшолненными в процессе ферментационного цикла. В пробах примен ют плавающий бульон, прошедцшй центрифугирование . Получают следующие результаты: Возраст, час4853 72

рН6,- 6,4 5,5

Активность к Staphylococcus aureus АТСС 6538Р,

размер зоны, мм38 40 38

Через 53 час бульоны из 13 колб собирают и фильтруют. рН порцин фильтрата в 400 мл довод т до 4,8 разбавленным HCI и его адсорбируют на 140 KUi Довекс 50 х 2Na при скорости 14 мл/мин. Адсорбат промьшают 200 мл деионизированной воды и злюируют 2%-ным пиридином в воде, собира 6 X 70 мл фракций. рН фракций довод т до 7,0 Пробы брали на всех фракци х. Пробы указьтают ш 45%-ную активность э юатов.

Элюатную фракцию сушат при температуре ниже 0° С с получением 117 мг твердых веществ.

Последние раствор ют в 1,5 мл смеси fi-бутилового спирта и воды (1:99). Раствор нанос т на слой биогел 1,4x81,5 см, который предварительно урайновешивают смес.ью л-бутилового спирта, во

(смачивающа основа)-15,0

Барда10,0

Хлопкова среда

(фар ламеда )5,0

СоОг-бНаб0,01

СаСОз (послг регулировадаш pli)3

Полигликош, 2000ОД 5%

Ворсшроаодл вода1000 м

(рН довод т до 73

применением NaOH)

Температуру в баке довод т до 24° С в течен . 120 час. Добавл ют не более 1% дополнительного ногасител полкгликол 2000. Провод т атжбактарвые пробы..

400 л бульона фильтруют на пресс-фильтре н добавл ют 1,2 г натриевой соли (этилендшштрило) - тетрауксус ой кислоты к фильтрату. Фильтрат охлаждают до 6° С, довод т рН до 4,0 ±0,2 и поддерживают при 6° С. Холодный фильтрат адсорбирунгт на 38 л Довгкс 50x4Nat 20-50 меш, при скоростл 4 . / сорбат промьшазот 4G мл деионизироBSfflioS зодЫ; злкзируют 2%-ным зодным кирадйыом к три фракиди (по 19 к ка -эда ) -юбирЕКП is osipcoHpyfoT. Аншбактерийные пробы оказываю, «jjfo элаат фракций 2 и 3 содержит 22% акгг1вностзг.. Три фракции собирают, концентрируют до 3,8 л и довод т рН до 7. 3j8 л полученного выше концентрата aj: cop6npyf;iT на 2,5 п Довекс (смола хлориднога щжла) при скорости 200 мл/мин. Смолу элюир пот деиснизировашюй водой в том же кош честве . € ракции собирают и кахсдую довод т до рН 7,0. Пробы показывают 75%-ную биоактивносга во фракщаж 5-S. Эти фракции собнрают и . руют. 3 л этого фильтрата сушат при темпэрапре ни се , получают 1ь,6г твердых вещасд с активность 70 едУмг.

4 г BbiCjiueHHorb при температуре ниже 0°С твердого вещества соедин ют с 50мл 0,1 М 2,6 лутидинлцета-шого буфера. Раствор с рН 6,3 нанос т ш колонку, полученную следуиндим образом.

2,5 л Довекса 50x8 (200-4Шмеш) смоль: водородного 15нкла преобразуют в 2,6 луткдаковый цикл. Смолу уравновешивают с 5 объемамз-; колонки 2,6 лутидинацетатного буфера, 0,1 М, рН 6,3. Размеры уравновешенной смолы в елоэ . Колонку про вл ют буфером (0,1 М) со скоростью 14 мл/летн.

Поток элкюнта направл ют записьюающим дкф , ферекадгальным рефрактором Меккоматкк. Про вл ют до получени 220 фраквдй по 20 мл кажда , Каждую следующую фракцию от 44 до 142 опробируют при разбавлении 1:50. Биоактивность наблюдаетс во фракци х 78-136, максимальна во фракци х 92-94. Фракции 82-116 отбирают и собирают с получением 700 мл раствора. Раствор раздел ют на две порци 350 мл и сушат при температуре ниже 0° С.

Одну порцию высушенных веществ раствор ют в 2,6 - лутидинадетатном буфере, 0,1 М, рН 7,0.

Раствор 27 мл нанос т на колонку бногел Р-2 (200-400 меш) 5x108 см, которую предварительно уравновешивают буфер (0,1 М). Гель затем про вл ют буфером при скорости 10 мл/мин.

Поток злюента гащ авл ют за1шсывавшшм ферешщальным рефрактометром Меккоматик. Про вление продолжаЕгт до повуче м 105 фракдай (20 мл кажда ), фракпд собирают, Кажцую фра;« цаю 51-90 сшро&руит щ® разбавлении 1:50. Проба показывает них feosKTSSHociB во фракци х 67-75, максимум в 70 н 71. (| ак1щк 68-75 сс рают с псзлу низм объемЕ 162 м . К 145 м собраайой фракци добавл ют 3 мл (рН 7,0) буфера фосфата катрй и растз кош№нтр руют до 9 мл. Концент1йт с содержанием 78% общего биовктнвного материала оскт т ко онку бзгаге Р-2, сушат прн тампграгуда щи:йсе 0°С с получг не&а 185 мг. Оставпжес 11 й«л фршсцнй S8-75 c-jfrnai прн TeMsepatjps нзсзсе 0°С с псвту Енгм 1,9кк теардых зеществ с актшзностью 10Ю ад/мг.

П р н М е р 5. Tpj-eicy с лпоф лиз-г-ванной кулыз-рой Strsptcmyces jattSsya отхрьЕВзгс-т асго13гческн и содер к1ййос гзвешгазан s Gs-S мг; -г таршхьньпс солзк Девйса кслшсзщнн прй ш 1.

Эту суспензию нспслйзугот дл йнз5сул цш1 5тыргх кэсгкоз среды А (шлос агар) ксмпсзгазс: примера i.

Инок нрованные кос ки подЕергаит KHscjea1ИИ в течение недели при 2 8° С и затем хран т при 4° С.

10 1Л среды А асептично nepesccsT за од н ic кос коз, споры и воздушный Еоэ шца-зт г су;т.-:пз;::: : 3,3 мл последней использутат дл 5Шокул цку . 2л терзгоро: {сзннг-§ Эр йзоёе-рс,, содержащей 5001иш ср5ДЬ 4, с Есеезсэ 3crp -x;L;ji3i при 28° С со скоростью 160 c6/M.;s т шейкзре в течение 48 fsc.

Культуру ш ко бь sccgES ssstsiKsyErr длг ино1сул цго-: бака еглкостггвэ 190 п т ssjXJ sejoiKsE СТЕЛИ, .щего 160 г.-;л среды А. Te mepar py Е баке довод т до 2§° С, еремещйваит со жоростью ISO , пропуска псугок зоз,н5тш ® Ts jggse , Пекогаситель - йолиглихэль 2СЮО эсшапь зукт в количестве ке болгз 1%. рН нзмен етс следугощ м образом:

Возраст, часG, 12 24

рЕ6,3 6,65,6

35 л культуры из бака посева исэользушт дл инокул щи фернектерЕ (srviKocTbso 756 л) лз нерхсавеющей стали, содержэлдего 467 л среды Е кэмпоз1Щ н примера 4.

Процесс провод т прн 24° С прн скоростк зремешиванн 95 об/мнн в течение . Пеногаситель - полигликоль 2000 добавл ют в количестве не более 1,1%.

400 л бульона фильтруют через фильтр-пресс к порошок дл фильгр-овани добавл ют к 1,2 г (этнлендинитрило ) тетрауксусной кислоты, к фильтрату добавл ют соль . Фильтрат охлаждают дс 6° С, довод т до рН 4,0 ± 0,2 и вьщерживают 9 ды. Гель про вл ют смесью п-бутилового сгофта и воды при скорости 1 мл/мин и собирают 2 мл фракций Поток эпюента направл ют записьшающим рефрактометром Меккоматик. Фракции опробируют на антибактерийную активность разбавлением 1:20. Биоактивный пик наблюдали на фракци х 44-53. Фракции 46-49 и половина фракции 50 собирают. 1 мл обраэид последних фракций снова спробнруют н остаток сушат при температуре ниже 0° С с выходом 4,2 мг частично очищенного антибнотмка. П р и м е р 3, Трубку с лиофнлизованной культурой открьтают асептнчио и содержимое взвешивают в 0,8 мл сте1жльных солей Девиса композиции примера 1. Суспензию используют дл инокул ции четырех кос ков среды А (плюс агар) композиции, указанН (ж в примере 1. Привитые кос ки подвергают инкубации в течение недели при 28° С и хран т при 4° С. Порцию спор и воздушного мицели одного из кос ков используют дл прививки трех колб Эрленмейера (250 мл) с перегородками, кажда содержит 50 мл среды А. Три колбы с посевом встр хивают при 28° С на шейкере со скоростью 220 об/мин в течение 1 дн , получают удовлетворительный рост. 12 колб Эрленмейе (2000 мл), кажда содержаща 250 мл среды С, прививают 7 мл суспензии, полученной с аптечным собиранием содержани.. 3 колб с посевом. Среда С имеет следующую композицию (ч.): Кукурузна мука20,0 г Барда 10,0 Соева мука15,0 CaCl22HjO0,5 MgS04-7H200,1 . CoClj- бНзО0,01 FeS04-7H200,01 СаСОз4,0 Погао-ликоль 20000,25 об. Дистиллированна вода10000 мл ( рН доводюш до 6,5 применением NaOH) Три колбы встр хивают при 28° С со скоростью 220 об/мин на шейкере в течение 72 час. Бульсшы соедин ют и часть центрифугируют дл . Собранный бульон имеет рН 7,4, антибактерийна проба с применением плавающего 1 нтрифугованногр бульона - 43 мм. Бульон фильтруют, рН фильтрата довод т до 4,0 разбавлением HCI. 3000мл адсорбируют на 300мл Довекс 50x2 Na при 30 мл/мин. Адсорбат промьшают 300 мл деионизированной воды и элю руют 2%-ным пиридином, собира 8x150 мл фракций. рН фракций довод т до 7,0. Элюат фракций 2 и 3 (300 мл) соедин ют и с содержанием 48% общего &«оактивного мате{тала нанос т на колонку Довекс 50x2 Na 280 мл порции соединенных фракций элюата с рН 7,0, полученного вьпие, пропускают через колонку (40 мл) смол ного цикла. Смолу промывают 160 мл деионизированной воды. Элюент и промытые фракции собирают с получением 440 мл раствора. Раствор довод т до рН 8,2 разбавлением гидроокисью натри , концентрируют при пониженном давлении доЗОО мл, довод т до рН 7,0 разбавленным HCI и сушат при температуре ниже 0°Сс получением 189 мл твердых веществ, которые раствор ют в смеси fi-бутилового спирта и воды (1:99). 25 мл раствора нанос т на колонку биогел Р (200-400 мещ), который предварительно уравновешивают смесью п-бутилового спирта и воды. Гель про вл ют и-бутиловым спиртом со скоростью 6,7 мл/мин. Поток злюента направл ют записывающим дифференциальн м рефрактометром Меккоматик . 500 мл головного погона соедин ют с фракци л™ (20 мл каждой). Каждую фракцию опробируют на антибактерийнутп активность при разбавлении 1:25. Биоактивиость наблюдают во фракци х 37-42, максимум во фракщ1и 39. Фракции 38-41 общим объемом 80 мл собирают. Раствор концентрируют до 10 мл при рН 7,0 и сушат при температуре ниже 0°С. Твердое вещество (13,5 мг) имеет сравнительную силу в щесть раз больще, чем образец на биогеле р 2 колонки в пробе с дисковой диффузией на Staphylococcus aureus. П р и м е р 4. Трубку с лиофилизованной культурой Streptomyces cattleya открьшают icenтически и содержимое взвешивают в 0,8 мл стерильных солей Девиса композкшш примера . Эту суспензию используют дл прививки четырех кос ков среды А (плюс агар) композиции примера 1. Привитые кос ки подвергают инкубации в течение недели при 28° С и затем хран т при 4° С. 10 мл среды А асептически перенос т на один из кос ков, споры и воздушный мицелий помешают в суспензию. .3,3 мл суспензии используют дл инокул ции 2 л перегороженной колбы Эрленмейера с 500 мл среды А. Эту колбу с посевом встр хивают при 28° С на шейкере со скоростью 160 об/мин в течение 48 час, получают удовлетворительный рост. Культуру из этой колбы с посевом используют дл прививки, в баке емкостью 190 л из нержавеющей стали, содержащем 160 мл среды А, провод т процесс при 28° С при перемешивании со скоростью 150 об/кош в течение 24 час. Пеногаситель полиглико 2000 используют в количестве не более 1%.рН измен етс следунвдим образом. Возраст, час О1224 рП6,4 4,40,3 43л культуры в этом баке используют дл инокул ции 756л ферментера из нержавеющей стали , содержащего 467 л среды Е следующей компоэиции (г): СредаЕ Церелоза Кукурузна жидкость

при 6° С. Холодный фильтрат адсорбируют на 38 л Довекса 50x4 Na (20-50 меш) при скорости 4 л/мин. Адсорбат элюируют 2%-ным водным пиридином и три фракции (по 19 л кажда ) собирают и опробируют. Пробы показывают 27%-ную биоактивность во фракци х 2 и 3. Элюат фракхщй 2 и 3 собирают, концентрируют до 3,7 л и довод т рН до 7.

В 3,7 л концентрата элюата довод т рН до 7,4 и адсорбируют со скоростью 200 мл/мин. Смолу элюируют деинизированной водой с той же скоростью, фракции собирают, довод т рН до 7,0. Фракцию 4 (4л), содержац{ую 50% активности в концентрате, фильтруют через фильтр Миллипор 0,45мкм. Светлый фильтрат высушивают при температуре ниже с получением 12,4 г твердого вещества с активностью 270 ед/мг.

4 г высушениых при температуре ниже ОС твердых веществ соедин ют с 2,6 - лутидинацетатным буфером, 0,1 М, рН 6,3. Раствор (50 мл) довод т до рН 6,3 добавлением уксусной кислоты, нанос т на колонку Довекс 50x8 2,6 - лутидинового Щ1кла смолу (200-400 мещ), которую предварительно уравновеиивают буфером (0,1 М). Смолу про вл ют тем же буфером, 0,1 М, рН 6,3, при скорости 14 мл/мин.

Поток элзоента направл ют записьшающим дифференциальным рефрактометром Меккоматик. Про вление продолжают до получени 150 фракций (20мл кажда ). Другие фракции 72-150 с робируют при разбавлении 1:50. Единственный биоактивный пик во фракци х 76-148, максимум во фракци х 92-102. Фракции 86-113 собирают с получением 580мл раствора, содержащего 71% биоактивности при нанесении на колонку Довекс 50x8. Этот раствор подвергают сушке при температуре ниже 0° С. Полученный раствор раствор ют в 2,6 лутидинацетагном буфере, 0,1 М, рН7,0, с получением 25 мл. Раствор нанос т на слой биогел Р-2 (200-400 меш), которьт предварительно уравновешивают буфером (0,1 М). Гель про вл ют тем же буфером при скорости 9 мл/мин. Поток элюента нагфавл ют записывакицим дифференциальным рефрактометром Меккоматик. Про вление продолжают до получени 105 фракций (по 20 мл кажда ). Каждую фракцию 65-80 опробируют при разбавлении 1:200. Наблюдают биоактивный пик во фракци х 67-76. Фракции 70-72 собирают и высушивают , при температуре ниже 0°С с получением 16,0 мл раствора с активностью 13,800 ед/мг. Фракции 69,73 н 74 собирают и высушивают щж reivmeратуре ниже О С с получением 20,2 мг с активностью S,200 ед/мг.

16 г высушенных при температуре ниже веществ раствор ют в 2,6 лутиданацетатном буфе (х, 0,1,М, с получением 10мл. Раствор нанос т на слой биотел Р-2 (200-400 меш) 5x108 см, кото| 1й предва{нггельнр уравнстешивают тем же буфером . Гепь про вл ют буфером при скорости 9 мл/мин. Поток элюента направл ют записывающим дифференциальным рефрактометром Меккоматик . Про вл ют до палученм 105 фракций (кажда по 20 мл). Каждую фракцию 65-80 опробируют при разбавлении 1:200.

Бноактивнын пик наблюдают во фракци х

67-75. Фракции 68-72 со&1рают и высушивают при температуре ниже с получением 9,1 мг с активностью 15,000 ед/мг.

П р н М е р 6. Трубку с лиофилиэованной культурой Streptomyces cattteya открьшают асептически и содержимое взвещивают в 50 мл стершпг ной среды А (с композицией 1), наход щейс в перегороженной колбе Эрленмейера емкостью 250 мл.

Инокулированную колбу встр хивают при 28° С со скоростью 220 об/мин в течение 48 час. 40 мл бульона асептично смешивают с 20%-ным стерильным гликолем. 2 мл полученной смеси шшеткой закапывают в стерильную ампулу, затем замораживают и хран т на паровой фазе холодильника с жидким азотом.

Замороженное содержимое ампул ишользуют дл инокул ции пе{)егороженнсш колбы Эрленмейера (250 мл), содержащей 50 мл среды А . Колбу с

посевом встр хивают при 28° С со скоростью 160 об/мин в течение 24 час.

Порцию 10 мл из этой колбы с культурсш используют дл инокул ции перегороженных KOJ Эрленмейера (2 л кажда ), содержащих 500 мл

среды А. Эти колбы с посевсмл встр хивают со

скоростью с 160 об/мни ор 28° С в течение 24 час.

По;н{ив 100 мл содержимого этих колб исооль

зуют дл инокул ции ферментера из нержавеющей

стали (756 л), содержащего 467 среды А. Бак

подвергают обработке при 28° С со «жоростью 130 об/мин в течение 24 час. Полигликоль 2000 используют в качестве веногасител в количестве ве более 0,1%.

453 культуры используют дл инокул ции

ферментера (5670л) из нержавеющей стали, содержащего 4082 л феды Е композиции примера 4. Процесс привод т при 24° С при скорости вращени 70об/мнн в течение 144 час. Пзногаситель (полнгликоль 2000) добавл ют не

более 0,1%. Пробы провод т с использованием плавающего дентрифугированного бульона. Пробы ва дисксшую диффузию провод т с щжменением фильтровальнсж бумаги.

4,082 л ферментацисйшсн-о бульона фильтруют.

Фильтрат охлаждают до 6° С, довод т рН до 4,5Ю,2 н поддерживают при 6° С, Холодный фильтрат адoapSupytoi . Адсорбат промывают 480 л денонизированной воды н элю1фук т 2%-ным водным пи тдином ар скорости 24 л/мин н грл фракции 300, 520

и 240 л со&1рают и отро& руют пр« fti 7,0. Пробы показывают, что злюат фракщй содержит 4, 16 н 6% (соответствешю) биоактнвностн щш ванесеыт на колонку Довекс 50x4 Na.

Элюат фракции 2 концентрируют др 48

Claims

довод т рН до 7. 48 л концентрата довод т до рК 7,3 и адсорбируют на 76 л Довекс 1x2 (50-100 меш) смолой хлорщцюго цикла при скорости 76 л/мин. Смолу ЭЛЮ1ФУЮТ деионнзированной водой при той же скорости. Собирают 4 фракции, две по 48, одну 70 и одну 48 л. Фракции довод т до рН 7. Пробы показывают , тто 689с исходной биоактивностн гт жсутствует во фракции 70 л. Эту фракцию концентрируют де i 8 л при рН 7,0 и фильтруют с нием фильтра Миллшюр 0,45 мкм. Фильтрат высушивают при температуре ниже 0°С с получением 99 г продукта активностью 310 ед/кг. 10 г высушенного при телшературе ниже твердого веирства соедин ют с 2,6 - лутйдинш татным буфером, 0,1 М, рН 6,3. Раствор 125 м дс од т до рН 63 уксусной кислотой и шнос т на колонку, которую щмдаарнтелъ о уравновешивают буфером и про вл ют буфером (0,1 М) нри скорости 25 мл/мин. Каждую «йтвертую фракщш от 36 до 192 опробируют при разбавле1®и 1:200. Биоактнность про вл етс во фраетщ х , s iaKCSiмум во фракщшх 92-%, Ф|жквдш 80-136 cofej рают, дсйавл ют 590 мл де онизироаанной всйк. получают 1760 мл. Собрашаш разбавленный райвор содержит 62% исходной б оактйзноста, его нанос т на колонку Довекс 50x8, сушат кри TSMISратуре ниже 0° С. Высушенные при температуре ниже 0° С твердые веиестза р 1ствир 1юг в 2,6 лутидииацетатко:.; буфере, 0,1 М, рН 7,0. Раствор 27 мл шнос г ш колонку биогел Р-2 (200-400 меш), которую гфедварител::;;: урарнсвешивают буфером (0,1 М). Гель про вл ют тем йсв буфером гзри скорости 10 мл/мкн. Поток э юента направл ют загшсьшатилм Ш фференциалькым р рактометроы Маккомвтик. По лушю 105 фракдаш (по 20 мл кажда ), их ССЙЕрают . Кахсдую фракци ) 70-93 onpofepyssf прн ра: авлении 1:ЗСЮ. Бноактивность обнаруживаю во фракщих 73-82, максимум во фракда х 77 и 73. Фрак1щк 75-Ж) высуишзают пгш теьшэрат ре ниже 0° С с полуЕкнем 90 мл антибаошка со средней активностью 10,000 ед/мг. 90 мг его соедин ют с 4 мл буфера фосфата калы&ш, М, рН 7. Этот раствор, содерзгащий 596 ед гидфоксила -ШНгас щей оптической плотноси, нанос т на колонку с 90 мл гфедв зрительно щкхмьгтого ХАД-2 и уравновешенного до использовани с 180мл буфера фосфата кальци , 0,01 М, рН7, прн 5° С. ХАД-2 промьшак последовательно п тью объемами i н. NaOH, затем деионизированной водой до получени нейтрального элюенха, п тью объемами 1 н. НС и деионкзированной водой до жйтрального элюента, п тью объемами (ка адого) метанола, адетона, 0,(Ю1 М ЗДГА тетранатри и дистиллированной водьь Перед употреблением растворители вакуумируют. Далее образец нанос т Ш1 колонку с двум порци ми фосфатного буфера по 2 мл. Колонку про вл ют iipii 5° С буфером прн скорост потскг 2 ..ш/мин. 4 кп фракций элюата собирают. Фракции, полу 1енные после 100 мл эл5оата, собирают и при получении 253 мл концентрируют на вращ ющемс устройстве в вазсууме и ниже 10° С до объема 6 мл. Этот раствор, содер/кащкй 436 ед. гщрокашамингас щгй о тнческой плотности, шнос т на кс локку диал5етрС М 1,7 см е 90 мл ХАД-2; предварительно проьагПой, как ук&заво выцш, и уравнозе1ШННОЙ при 5С дйсткллирсБашшй . Образец промывают двум порцйЯШ1 по 2 л дастшгтшрованной воды. Колонку про вл ют дггстиллированшй водой со скоростью 2 мл/мин. 4 мл фракций злюата собирают. Фракцни, получ8Ш1Ыэ после 1(Ю м злюата, собирают, 151 мл концен7р фуют на зраЕцаюадемс вь париом устрсйстае до объема 2,73 мл и раствор jffloqJHjBiSHpyEST ДО патучгни 6,49 2,ш тненамищша. Фракции, пслуенкые K-gsorj 152 г.« Е 345 мл, собирают и коадйнтрируют ЕЕ зр31 даю цеыс вынарком устройстве до oSbsSS 3.34 ь5л F, лвофилЕшруют .щ) пшучеьзш ILSSftSi- -ааса. Эти фракций содер з. g сбщгм 369 es, rjijv роксипгл&шгасшдей аш-аческой алэтностн. Погг- агот 3 ЗД раза очгшденный материал ао сраЕнеЕЯш с влзте аалок, нанесзЕ-шь на Еервра ХДЛ, :гс зокку , аол л-ашт агсгйвность 31,000 ед/мг. Снекгроь-гз. рижский анализ образца нротзукта показывает Ei( при измерений з фосфатном буферз, рН пру Q7 нм. П р и м g р . Оорцню 10 г твердого вещестаа (99 г), nonyieiffioro шз SJBSSCC 1x2 очзспсзй, шедйннют с 2,6 . ByrijfiREas TaTKMrbi оуферой, 0,1 М рН 6,3. Paci-Bop 125 UIE довод т до рК 63 п|Ж пшйощи укс сгшй ю жсггы, гшэсгзт на scfgsoHK 7,6x142 см Довекс Й)хо в щйсж; 2,6 - тщдаЕ-. которую . предвадтктельао ур@взш5ШЕвашт уфером . Колонку Е| айв®ж 5г ё-чгфероеа (0,1 М) прг скорости 35 Шл/ьйш. 3,6 л ггшвЕоаго coJtjsa собврают в. Ж) фракндй по кажда . четвертую ф|йК1Ию &s6 лр скробнр зэ зг« разбавлзшш 1:200. Биоакш ость 0бгТ 5 жй35нг7 во фрщсци х 18-173, максйййум so фракви х 62-82. Фраками 42-102 котлйшаруют к 640мл деиоаизараванной дсйазл ют е нолуздЕием 1920мл. Соединенный, разбавленный раствор, со держыдЕй 63% биоглспшности, каноо т гш кологщ; Довекс 50x3 т высуш зают црк -темзаратуре шжО С Твердые вещества раствор ют в 2,6 -лупад-пгацегатном буфере, ОД М, рН 7). гастзор 2S тг нанос на кшюнку 5x112 см Мотел Р-2 (200-400 меш), йредвар тельно уравновешеш уго буфером (0,1 М)- Затем гепБ про вл ют тем же буфером 1фи скоросги 10 мл/мнн. Поток э юента направл ют записывающим дифференциальным рефрактометром Меккокштик. Про вл ют до получени 125 фракций (кажда по 20 мл). Кажд) фракцию 70-89 опробируют при разбавлении 1:300. Биоактквиосп обнарухсквают во фракци х 72-81, максимум во фракции 77. Фракции 75-79 высушивают при температуре ниже 0° С с получеинем 100.S мл ант биотика с активиостью 8,320 ед/мг. 100,5 мл твердого вещества соедин ют с 4 MJ( буфера фосфата кальци , 0,01 М, рН 7. Этот раствор , содержащий 692 ед гидрокошамингас щей оптической плотности, шиюс т на колонку (1,7 см диаметром) с 90 мл предварительно промытого и уравнсжешенного ХАД-2 до использовани с 180 МП буфера фосфата кальци , 0,01 М, рН7, при 5° С, ХАД-2 промывают до вС11ош эоыни последовательно п тью объемами 1 а NaOH, затем деионизированной водой до жйтральнсго элюеыта, п тью объемами 1 H.HCI, затем деиоиизирсшшной водой до нейтрального элюента, ц тыо объемами метанола, адетона, 0,001 М ЭДТА тетранатрн и затем дистиллированное водс. Вакуумируют все растворители оеред упоггреблением. Затем образец нанос т на колсвосу дважды по 2 мл порци ми фосфатнотх) буфера. Колонку про вл ют при 5° С буфером при жорости 2 мл/мин. 4 мл фракций элюата собирают. Фракции, получениие после 109 мл злюата, собирают и после получени 309 щ снова собирают. К этому э юату добавл ют И,53мг образда ХАД-2 очищенного антибиошка , попу нКого в примере б, содержащего 185 ед гидр жс ла«ашгас щей отнческсЙ плотности . элюат вместе с добавленным аш биотшсом концентрируют в вакууме на вращающгмс вьшарном устройстве при температуре нихое 10°С до объема 7 мл. Этот раствор, содержащий 720 е гидроксиламингас щей оптической плотности, нанос т на колсаку с 90 мл ХАД-2, предварительно щ омытс , как указано выше, и уравно шенной 1фи 5° С. Перед использованием образец промьшают дважды дистиллированной водсй (по 2 мл). Колонку про вл ют дист ллнрованнсж водой со скоростью 2 мл/мин. 4 мл фракций злюата собирают. Фракции, попукааьк после 109 мЛ элюата, собирают и после получени 309 лет концентрируют на вращающемс выпарном устройстве до объема 10,3 мл. Этот раствор , содержаидай 589 ед гидрокснламннгас щей оптической плотности, лиофилизуют с получением 23,6 мг ашибиатнка с активностью 30,140 ед/мг. Полученный таким образом антнбиотнк представл ет собой белое аморфное твердое вещество. Образец его помещахп в кашиш риую трубку, температуру повышают со сксфостью 3° С/м н, происходит разложеже без получени жидкой фазы ва следующих стади х: разм гчение при 130-140°С; сокращение в объеме твердото вещества до 70-174°С, где мате1жал желтел; интенсивное нарастание цвета до красновато-коричневого 1фм 180-200° С; карбонизаци и остаточшле следы твердого веще стра - п(М 205° С. Щю«1Й образец материала ва т ж спектромырни шжазывает гаос абсорбции п 2%,5 нм с Е 268,
2. Элементаргалй анализ дает следующие результаты: 5,67% потерь веса нр суносеори комнатной температуре в течение 4 час в вакууме. КомпоЗИЩ1Я содержит (%) 47,68 углерода, 6,22 водородд, 11,48 азота. Эти результаты совпадакгт с эмпирической формулой CiiHi6N204 S(NH3)o,28- ВЬРШСлеина эжментарна композици содержит (%) С 47,68, K6,13,N 11,52, S 11,57, О 23,1. Пол риметрн ский анализ 1 мг/мл раствора этого образца в 10 мм буфера фосфата кальци показал специфическое оптическое вращение + 80°. ИК-спектр этого образца вы вил характерный пик абсорбции ш 1765, 1650-l550, 2800-2500 и 3500-3100см . Спектр ЯМР на ЮОмГцобразца ЭТОГО продукта. Формула изобретени Способ получени антибиотика тиенамицина формулы CH,-tH(OH)-,-Г -N (HrNH, о отличающийс тем, что щтамм Streptomyces cattleya NRRL 8057 культивируют в аэробных глубинных услови х в питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, с последующим выделением и очисткой целевого продукта.