SK312592A3

SK312592A3 - Bis(phenyl) ethane derivatives, method of their preparation and pharmaceutical composition containing these derivatives

Info

Publication number: SK312592A3
Application number: SK3125-92A
Authority: SK
Inventors: Peter Nussbaumer; Anton Stuetz
Original assignee: Sandoz Ag
Priority date: 1991-10-16
Filing date: 1992-10-14
Publication date: 1995-03-08
Also published as: GB9121943D0; SG50542A1; CZ312592A3; PH31113A; FI924657A; DK0539326T3; US5488135A; EP0539326A2; NZ244730A; HU9203156D0; NO178540B; JP2543298B2; CA2080555A1; KR930007880A; HU211233A9; MX9205921A; RO111074B1; ZA928021B; ES2087499T3; IL103417A0

Description

Oblast techniky o < o Π) < XX «— z Jj.

m >>□ < ΕΣ ·< Π N -<

•I'»· x

LO hJ

..aeôyJ CJI ' -J

J OO o

sVynález se týká bis (fenyl) eťTTčThových' TtSTiVchĽCl, ''ZpťfSObti jejich prípravy a farmaceutické kompozice, která tyto deriváty obsahuje jako účinnou látku.

Podstata vynálezu

Pŕedmétem vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I

il ve kterém

R₁ a R₂ nezávisle znamenají alkoxylovou skupinu,

Rj znamená atóm vodíku nebo acylovou skupinu a

R 4 znamená alkoxylovou skupinu, ve volné formé nebo ve formé soli, pokud taková súl existuje, pŕičemž všechny tyto formy sloučenin obecného vzorce I jsou dále stručné označovány jako sloučeniny podie vynálezu.

Uvedené sloučeniny podie vynálezu mají diferencované farmakologické, zejména antihyperproliferační a protinádorové vlast nosti.

Alkylová skupina tvoŕící část alkoxylového substituentu výhodné obsahuje 1 až 4 uhlíkové atómy, pŕičemž je zejména tvorená methylovou nebo ethylovou skupinou.

Acylová skupina výhodné znamená zbytek karboxylové kyseliny, zejména alkyl-, arylalkyl- nebo arylkaŕboxylové kyseliny, pŕičemž arylovou skupinou je výhodné fenylová skupina a alkylenová část acylové skupiny včetné karbonylové skupiny výhodne obsahuje 1 až 5 uhlíkových atomú. Výhodným acylovým zbytkem je acetylový zbytek.

Ve výhodné skupine sloučenin podie vynálezu a R2 nezávisle znamenají alkoxylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atómy a a R^ mají výše uvedený význam.

V další podskupine sloučenin podie vynálezu a R₂ nezávisle znamenají alkoxylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atómy,

R^ znamená atóm vodíku nebo alkylkarbonylovou skupinu s celkovým počtem 2 až 5 uhlíkových atomú a R^ znamená alkoxylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atómy (sloučeniny Is)_; r_{] a} R₂ zejména nazávisle zrsmarajímethoxylovou nebo ethoxylovou skupinu; R^ zejména znamená methoxylovou nebo ethoxylovou skupinu.

S.loučeniny podie vynálezu mohou být pripravený zpúsobem, který zahrnuje

a) redukci odpovídající sloučeniny obecného vzorce II

ve kterém skupina -X-X- znamená vinylenovou nebo ethinylenovou skupinu, nebo

b) esterifikaci nebo acylaci sloučeniny obecného vzorce III

CH₂

or₆ (III) ve kterém

R.j a 1*2 mají výše uvedený význam,

R₅ znamená hydroxylovou nebo alkoxylovou skupinu a

Rg znamená atóm vodíku nebo acylovou skupinu a prípadné prevedení alkoxylové skupiny R^ transesterifikací na jinou alkoxylovou skupinu R^, pŕičemž funkční skupiny mohou být ve chránené formé a použité ochranné skupiny mohou být odstránený po probéhnutí reakce, a izolaci rezultujicich sloučenin obecného vzorce I ve volné formé nebo ve formé soli, pokud taková sul existuje.

Zpúsob podie vynálezu múže být proveden konvenčnim zpúsobem.

Varianta a) zpúsobu podie vynálezu se vhodné provádí hydrogenací. Pri této hydrogenaci se výhodné použije vodík společne s hydrogenačním katalyzátorem, jakým je paladium, platina nebo rhenium, výhodné paladium na uhlí.

Varianta b) zpúsobu podie vynálezu se rovnéž provádí konvenčním zpúsobem.

Alespoň jeden z R,, a Rg znamená hydroxy-skupinu, resp. atóm vodíku.

Transesterifikace i esterifikace se výhodné provádí v prítomnosti silné kyseliny, jakou je kyselina sírová, s alkoholem odpovídajícím esterové skupine, která má být do sloučeniny zavedená .

Rovnéž odstránení ochranných skupín se provádí konvenčnim zpúsobem. Funkční skupinou, která múže být vhodné chránená, je hydroxy-skupina, která se chráni napríklad trialkylsilylovou skupinou. Odstránení napríklad trialkylsilylové skupiny múže být provedeno pusobením kyseliny fluorovodíkové v rozpouštédle, jakým je napríklad acetonitril.

Získané sloučeniny podie vynálezu mohou být z reakční smési izolovány a prečistený nekterou ze známých metód, napríklad chromatograficky.

výchozí látky použité pri zpúsobu podie vynálezu mohou být rovnéž získány konvenčním zpúsobem.

Sloučeniny obecného vzorce II, ve kterém skupina -X-Xznamená vinylenovou skupinu, mohou být pripravený reakci odpovídající sloučeniny obecného vzorce IV

(IV) ve kterém X znamená aniont, výhodné bromidový aniont, s odpovídající sloučeninou obecného vzorce V

(V) za podmínek obvyklých pri reakcích Wittig/Horner/Emmonsova typu púsobením fosforové složky s bází, jakou je alkyllithium, hydrid alkalického kovu nebo amid alkalického kovu, napríklad amid sodný, lithiumdiisopropylamid nebo alkoholát nebo alkoholát alkalického kovu, pri teploté z teplotního rozmezi od asi -70 do asi 100 °C a současnou nebo následnou konverzi púsobením karbonylová složky pri teploté z teplotního rozmezi od asi -70 °C do asi 120 °C, výhodné pri teploté -60 až 60 °C, ve vhodných rozpauštédlech, jakými jsou napríklad tetrahydrofurán, toluén nebo dimethylsulfoxid.

Sloučeniny obecného vzorce II, ve znamená ethinylenovou skupinu, mohou být vídající sloučeniny obecného vzorce VI kterém skupina -X-Xpŕipraveny reakci odpo-

s odpovídájící sloučeninou obecného vzorce VII

0R₃ (VII ve kterém Y znamená atóm halogénu, výhodné atóm jódu, která se provede standardními postupy používanými pri Hečkove reakci halogenolefinú s acetylény.

Sloučeniny obecného vzorce III, ve kterém znamená atóm vodíku a sloučeniny obecného vzorce III, ve kterém R,, znamená hydroxy-skupinu, mohou být pripravený postupem, který je analogický s výše popsaným postupem, nebo deacylací nebo dealkylací odpovídájících sloučenin obecného vzorce I, ve kterém R^ znamená acylovou skupinu a/nebo R₄ znamená aikoxylovou skupinu.

Pokud zde není specifikována príprava nékterých výchozích látek, potom mohou být takové výchozí látky pripravený známými postupy, nebo postupy, které jsou analogické se známými postupy, nebo postupy popsanými v dále uvedených pŕíkladech anebo jsou tyto výchozí látky známymi sloučeninami.

Príklady provedení vynálezu

Príklad 1

Methylester kyseliny 5-/2-(2,5-dimethoxyfenyl)ethyl/-2-hydroxybenzoové (Obecný vzorec I: R₁, R₂, R₄ = OCH^, Ŕ₃ = H, varianta a)) mg kyseliny 5-/2-(2,5-dimethoxyfenyl)ethinyl/-2-hydroxybenzoové ve forme methylesteru (obecný vzorec II, -X-X- = ethinylenová skupina) nebo 60 mg E/Z-smési methylesteru kyseliny 5-/2(2,5-dimethoxyfenyl)ethinyl/-2-hydroxybenzoové (obecný vzorec II, -X-X- = -X-X- vinylenová skupina) se rozpustí v 10 ml ethylacetátu. Po pŕidání 10 mg 10%.paladia na uhlí se smés míchá pŕes noc pod atmosférou vodíku, načež se zfiltruje pŕes celit a odparí k suchu za sníženého tlaku. Tímto zpúsobem se získá požadovaná sloučenina ve formé bezbarvých kryštálu.

Teplota tání po chromatografickém pŕečišténí: 65 °C, teplota tání po rekrystalizaci z ethanolu: 67 °C.

Výchozí látky se pripraví následujícím zpúsobem.

240 mg 2,5-dimethoxyfenylacetylenu (obecný vzorec VI) a 493 mg methyl-5-jodsalicylátu (obecný vzorec VII) se pod atmosférou argónu rozpustí v bezvodém benzenu prostém kyslíku. Získaná smés se uvede v reakci s 85 mg tetrakis(trifenylfosfin)paladiem, mg jodidu médného a 450 mg triethylaminu a reakční smés se potom míchá pri pokojové teploté pŕes noc, načež se nalije do 100 ml vodného pufru s pH 7. Po extrakci ethylacetátem a chromátografickém prečistení na silikagelu se získá methylester kyseliny 5-/2-(2,5-dimethoxyfenyl)ethinyl/-2-hydroxybenzoové ve formé bezbarvých kryštálu.

Teplota tání: 105-108 °C).

Ί

6,6 mmolu lithiumdiisopropylamidu ve smési tetrahydrofuranu a n-hexanu se pri teploté -40 °C pridá k suspenzi 1 g 2,5dimethoxybenzyltrifenylfosfoniumbromidu (obecný vzorec IV) v 15 ml absolutního tetrahydrofuránu. Po jednohodinovém míchání se reakční smés ochladí na teplotu -70 °C, načež se k ní pomalú pridá 372 mg 3-methoxykarbonyl-4-hydroxybenzaldehydu (obecný vzorec V) rozpusteného v 5 ml absolutního tetrahydrofuránu. Smés se potom míchá po dobu jedné hodiny pri teploté -70 °C a potom ješte pri okolní teploté po dobu dvou hodin, načež se nalije do vodného roztoku chloridu amonného. Po extrakci ethylacetátem a odparení se získá smés (E)- a (Z)-methylesťeru kyseliny 5-/2-(2,5-dimethoxyfenyl )ethenyl/-2-hydroxybenzoové, která múže být chromatografována na silikagélu za použití eluční soustavy tvorené smési n-hexanu a ethylacetátu v objemovém poméru 9:1. První frakce, která je tvorená Z-isomerem majícím vzhled bezbarvých kryštálu a teplotu tání 78 až 80 °C, je následována E-isomerem majícím vzhled bezbarvých krystalú a teplotu tání 80 až 82 °C).

Príklad 2

Ethylester kyseliny 5-/2-(2,5-dimethoxyfenyl)ethyl/-2-hydroxybenzoové (Obecný vzorec I: R₁, R₂ = 0CH₃, R^ = H, R^ = OCH₂CH₃, varianta b))

250 mg kyseliny 5-/2-(2,5-dimethoxyfenyl)ethyl/-2-hydroxybenzoové nebo 250 mg methylesteru kyseliny 5-/2-(2,5-dimethoxyfenyl ) ethyl/-2-hydroxybenzoové (obecný vzorec III, R^ = OH nebo OCH^, Rg = H) se rozpustí v 10 ml bezvodého ethanolu a k takto získanému roztoku se potom pridá 0,2 ml koncentrované kyseliny sírové. Smés se potom zahŕívá pod zpetným chladičem na teplotu varu po dobu 48 hodin, načež se nalije do 150 ml vody. Po extrakci ethylacetátem a chromatografickém pŕečišténí na silikagélu se získá požadovaná sloučenina ve formé bezbarvého oleje.

Nukleárni magnetickorezonanční spektrum: 10,69(s,1h),

7,67(d,J=2,2Hz,1H),

7,29(dd,J=2,2+8,5Hz,IH 6,91(d,J=8,5Hz,IH),

6,6 6“6,83(m,3H),

4,42(qua,J=7Hz,2H), 3,79(s,3H),

3,75(s,3H),

2,76-2,92(m,4H),

1,44(tr,J=7Hz,3H).

Príklad 3

Methylester kyseliny 5-/2-(2,5-dimethoxyfenyl)ethyl/-2-acetoxyben zoové (Obecný vzorec I: R₁ , R₂, R₄ = OCH^, R₃ = COCH.J, varianta b))

150 mg methylesteru kyseliny 5-/2-(2,5-dimethoxyfenyl)ethyl/-2-hydroxybenzoové (sloučenina z príkladu 1) se rozpustí ve 2,5 ml anhydridu kyseliny octové a k takto získanému roztoku se potom pridá 45 mg pyridinu. Získaná smes se míchá preš noc pri okolní teploté, načež se nalije do 100 ml vody a extrahuje ethylaceátem. Sloučené organické extrakty se postupné promyjí

0,1 N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodným roztokem hydrogénuhličitanu sodného a vodou. Po odparení rozpouštédla se požadovaná sloučenina získá ve forme bezbarvého oleje.

Nukleárni magnetickorezonanční spektrum: 7,85(d, J=2Hz, III),

7,34(dd,J=2+8Hz,1H), 6,99(d,J=8Hz,1 H),

6,66-6,80(m,3H), 3,87(s,3H),

3,76(s,3H), 2,89(s,4H), 2,34(s,3H).

Analogickým zpúsobem se získají následující sloučeniny podie vynálezu.

Pri- _Rl R₂ R₃ R₄ klad

č.

Varianta Teplota tání nebo nukleárni magneticko rezonanční spektrum

4	och₃	och₃	COCH₃	och₃	a)³>	olej, NMr1
5	och₃	och₃	H	OCH₂CH₂CH₃	a) b)²⁾	olej, NMR⁶⁾
6	och₃	och₃	H	OCH₂CH₂CH₂CH₃	a) b)²⁾	olej, NMR⁷)
7	och₂ch₃	OCH₂CH₃	H	och₃	a)⁴⁾b)	olej, NMR⁸⁾
8	och₃	och₃	H	OCH(CH₃)₂	a) b)^{1 2) 3}	olej, NMR⁵⁾

1) viz príklad 3

2) pri esterifikaci se vychází z odpovídající sloučeniny vzorce III, ve kterém R^ znamená hydroxy-skupinu (t.t.=120125°C),

3) vycházi se z odpovídájicich sloučenin obecného vzorce II, ve kterém skupina -X-X- znamená vinylenovou skupinu, (t.t.=86-88°C, E-isomer; t.t.=63-66 °C, Z-isomer) pripravených postupem popsaným v príkladu 1,

4) vychází se z E/Z-smési (asi 1,3:1) odpovídajících sloučenin obecného vzorce II, ve kterém skupina -X-X- znamená vinylenovou skupinu (t.t.=45-50 °C), pripravených postupem popsaným v príkladu 1,

5) 10,77(s,1H),

7,62(d,J=2,3Hz,1H),

7,28(dd,J=2,3+8,5Hz,1H),

6,9(d,J=8,5Hz,1 H),

6,8(d,J=9Hz,1H),

6.66- 6,75(m,2H),

5,29(sept,J=6,25Hz,1 H),

3,79(s,3H),

3,75(s,3H),

2,75-2,9(m,4H),

1,41(d,J=6,25Hz,6H),

6) 10,69(s,1H),

7,65(d,J=2,2Hz,1H),

7,29(dd,J=2,2+8,5Hz,1H),

6,91(d,J=8,5Hz,1H),

6.66- 6,83(m,3H),

4,32(tr,J=7Hz,2H),

3,79(s,3H),

3,75(s,3H),

2,77-2,93(m,4H),

1, 83(sex,J=7Hz,2H),

1,06(tr,J=7Hz,3H),

7) 1O,69(S,1H),

7,63(d,J=2,2Hz,1 H),

7,28(dd,J=2,2+8,5Hz,1H),

6,9(d,J=8,5Hz,1H),

6,79(d,J=8,5Hz,1H),

6,65-6,75(m,2H),

4,36(tr,J=6,7Hz,2H),

3,78(s,3H),

3,74(s,3H),

2,76-2,92(m,4H),

1,70-1,85(m,2H),

1,40-1,56(m,2H),

1,00(tr,J=7,3Hz,3H),

8) 10,59(s,1H),

7,68(d,J=2,3Ηζ,1 Η),

7,29(dd,J=2,3+8,5Ηζ,1Η),

6,92(d,J=8,5Ηζ,1 Η),

6,65-6,81(m,3H),

3,99(qua,J=7Hz,2Η),

3,96(s,3H),

3, 94(qua,J=7Hz, 2Η) ,

2,76 -2,93(m,4H),

1,42(tr,J=7Hz,3Η),

1,38(tr,J=7Hz,3Η).

Sloučeniny obecného vzorce I ve volné formé nebo ve formé farmaceutický prijateľné soli, pokud taková súl existuje, mají výhodné chemoterapeutické vlastnosti. Vzhledem k tomu jsou indikovány pro použití ve funkci farmaceutik.

Tyto sloučeniny zejména mají antihyperproliferační/protizánétové a protirakovinnové vlastnosti. V následujícím popisu jsou použitý dále uvedené zkratky:

CHO-K1 = bunečná rada známá jako Chinese hamster-ovary-K1,

DMEM = Dulbeccovo modifikované Eagleovo prostredí (Gibco),

EGF = epidermální rústový faktor

FČS = fetální telecí sérum

HaCat = bunečná rada známá jako human adult calcium temperature,

RPMI-1640 = médium 1640 Roswell Park Memoriál Inštitúte,

TGFalfa = transformační rústový faktor alfa.

Antihyperproliferační/protizánétová účinnost a/nebo proti rakovinná účinnost múže být napríklad stanovená následujícím zpú sobem.

1) Inhibice proliferace lidské keratinocytové bunečné rady HaCat (nebo referenční bunečné rady CHO-K1)

Buňky HaCaT, které predstavuj! spontánne transformovanou, TGF-alfa- a EGF-receptorové pozitívni netumorigenní lidskou keratinocytovou bunečnou radu s vysoce zachovanými fenotypovými diferenciačními charakteristikami normálních keratinocytu (Boukamp a kol., J.Celí. Biol. 106, 761-771 (1988)), se kultivují v prostredí DMEM obohacenému 2,2 g/1 hydrogénuhličitanu sodného, 0,11 g/1 pyruvátu sodného, 15 mM HEPES , 5 % FCS, penicilinem (100 U/ml), streptomycinem (100/Ug/ml) a glutaminem (ke zvýšení finálni koncentrace o 4 mM). Buňky CHO-K1 se kultuvují ve výše uvedeném prostredí obsahujícím navíc 40/Ug/ml prolinu. Za účelem proliferačního stanovení se buňky detašují trypsinizací, suspendují v čerstvém kultivačním prostredí a zaočkují na 96 jamkovou mikrotitrační plotnu v množství 2000 až 4000 bunék a 0,2 ml na jamku.

Po 24 hodinách se kultivační prostredí nahradí čerstvím kultivačním prostredím obsahujícím odstupňované koncentrace testované sloučeniny. Po 3 až 4 dnech inkubace se méŕí míra bunečné proliferace kolorimetrický za použití sulforhodaminu B (Skehan a kol., J.Natl.Cancer Inst.82, 1107-1112 (1990)). Získané výsledky jsou vyjádŕeny pomoci strední + štandardní odchýlky ze tŕech méŕení.

Pri výše popsaném testu bylo prokázáno, že testované sloučeniny inhibují proliferaci bunék HaCaT, pŕičemž jejich hodnoty IC^g se pohybují od asi 0,03/UM do asi 3/UM.

Protirakovinná účinnosť muže být napríklad stanovená následujícím zpúsobem.

2) Inhibice proliferace nádorových bunék

Nádorové bunéčné rady, napríklad K-562, L1210, HeLa, SKBR-3, MDAMB-468, MCF-7 nebo MDAMB-231 (všechny tyto nádorové bunéčné rady jsou dostupné u American Type Culture Collection, Rockville, MD 20852, USA), se kultivují v prostredí RPMI-1640 obohaceném 10 % tepelné inaktivovaného (56 °C/30 minút) FCS a antibiotiky (1 x GIBCO penicilin-streptomycinový roztok). Když se dosáhne exponenciálního rustu nádorových bunečných rad kultivovaných v suspenzi (K-562 a L1210) nebo konfluence adherentních bunečných rad (HeLa, SK-BR-3, MDAMB-468, MCF-7 a MDAMB-231), buň ky se izolují (adherentní buňky se trypsinizují), suspendují v čerstvém kultivačním prostredí a zaočkují na 96 jamkové kultivač ní plotny v množství pohybujícím se od 1000 do 5000 bunék na jamku. Buňky se potom kultivují po dobu 2 až 4 dnu ve finálním objemu 0,2 ml/jamka pri teploté 37 °C ve zvlhčovaném inkubátoru, nacházejícím se v rovnovážném stavu s 5 % oxidem uhličitým, v prítomnosti odstupňovaných koncentrací testované sloučeniny. Mira bunéčné proliferace se méŕí kolorimetrickým stanovením za použití MTT (Alley a kol., Cancer Res.48 (1988) 589-601) v pŕípadé bunék kultivovaných v suspenzi nebo sulforhodaminu B v pŕípadé adherentních bunék.

Pri výše uvedeném testu bylo prokázáno, že testované slou čeniny inhibují proliferaci čtyŕ výše zmĺnéných bunéčných rad, pŕičemž jejich hodnoty ICj-θ se pohybují od asi 0,019/uM do asi 3/UM.

3) Účinek na rúst lidských nádoru xenotransplatnovaných na holou myš

Bunéčná rada MiaPaCa-2 je lidskou pankreatickou nádorovou bunečnou radou; bunéčná rada A431 je odvozená od lidského epidermoidního karcinomu zevního ženského pohlavního ústroji. Obé tyto bunéčné rady jsou dostupné u ATCC (American Type Culture Collection). Tyto bunéčné kultury jsou kultivovány bez antibiotík a antifungálních činidel. Samičky holých myší Balb/C s téles nou hmotností od 20 do 23 g ve skupinách po péti jedincích jsou udržovány na režimu zahrnujícím volný prítok pitné vody a patoge ηύ-prostou potravu pro hlodavce. Nádory se iniciují subkutánní injekcí 10 bunék uvedených kultivovaných nádorových bunéčných rad holým myším. Jakmile nádory dosáhnou približné 1 cm v prúméru, provede se jejich excize, načež se naŕeží na malé kousky velikosti asi 3 x 3 mm a subkutánné transplantuj! do obou bokú ho14 lých myší. Jeden a dva týdny po uvedené transplantaci se za použití kalibru zméŕí velikost nádorú. Pokusná zvíŕata s rostoucími nádory jsou rozdelená do kontrolních a ošetrovaných skupín vždy s identickou strední velikosti nádorú. Testované sloučeniny se podávají perorálne. Tentýž roztok testované látky se použije pro dva následné ošetŕující kroky. Kontrolním zvíŕatúm se podáva pouze vehikulum. V týdenních intervalech se méŕí objemy nádorú a tyto objemy se vyjadrí jako strední objem nádoru na jedno pokusné zvíŕe (mm ). Získané výsledky se vyhodnotí použitím štatistického programu RS/1 (BBN Software Products Corp.), pŕičemž jsou použitý testy včetné Študentova testu a Mann-Whitneyova testu.

Pri výše uvedeném testu bylo zjišténo, že testované sloučeniny podávané v dávce od 30 mg/kg do 100 mg/kg perorálne nebo v dávce od 3 mg/kg do 10 mg/kg intravenózne významné (P menší než 0,05 nebo menší než 0,01) inhibují v prúbéhu celé ošetrovací periódy rúst nádorú A431 (lidský epidermoidní nádory s pŕeexpresí receptoru EGF). Po ukončení experimentu (4 týdny) je objem nádoru u myší, kterým byla podávána testovaná látka, roveň asi 10 až 50 % objemu nádoru kontrolních pokusných zvíŕat. Rúst nádorú MiaPaCa (lidské pankreatické nádory determinující normálni množství receptoru EGF) je inhibován obdobne: po 3 týdnech ošetrení je objem nádorú u ošetrovaných myší výrazné inhibován oproti objemu nádorú kontrolních pokusných zvíŕat.

Antihyperproliferační/protizánétová účinnost po topické aplikaci múže být napríklad stanovená následujícím zpúsobem.

4) Inhibice oxazolonem indukované alergické kontaktní dermatitidy u myší

Senzibilace se indukuje jedinou aplikaci 2% oxazolonu (10/Ul) do abdominální pokožky myší (8 pokusných zvíŕat ve skupine). Hypersenzitivní reakce zpúsobující boltcový otok se vyvolá druhým podaním 2% oxazolonu aplikovaného po 8 dnech do jednoho z boltcu každého pokusného zvíŕete.

Inhibice otoku boltce se dosáhne dvéma topickými aplika15 cemi testované sloučeniny (30 minút pred a po aplikaci látky vyvolávající uvedenou reakci). Inhibiční účinnost testovaných sloučenin se stanoví na základe rozdílu hmotnostni ušního boltce zvíŕat, kterým byla podána testivaná sloučenina, a hmotnosti ušního boltce pokusných zvíŕat, kterým bylo podáno pouze vehikulum (smes propylenglykolu a acetónu v objemovém pomeru 7:3), a je vyjadrená v procentech snížení hmotnosti oteklého boltce, pŕičemž se za základ bere hmotnosť oteklého boltce pokusných zvíŕat, * kterým bylo podáno pouze vehikulum.

. Pri výše uvedeném testu bylo prokázáno, že se pri dávce

1,2 % testované sloučeniny dosáhne v prípade sloučenin podie vynálezu asi 20 až asi 60 % inhibice otoku ušního boltce pokusných zvíŕat.

Sloučeniny obecného vzorce I ve volné formé nebo ve formé farmaceutický prijateľné soli, pokud taková súl existuje, jsou proto indikovaný pro použití ve funkci antiproliferačních/protizánétových a protirakovinných činidel pri léčení hyperproliferačních/zánétových onemocnéní a stavu a rakoviny, napríklad pri potlačení neoplastických porúch, napríklad pri léčení zánétových/-hyperproliferačních onemocnení kúže, rakoviny kúže, kožních a systemických projevu imunologický mediovaných onemocnení a autoimuH nitních chorob, jakými jsou lupénka, atopická dermatitída, kontaktní dermatitída a pridružená ekzematózní dermatitída, seborrhoid ní dermatitída, lišej, pemfigus, bulózní pemfigoid, epidermolyzní bulóza, kopŕivka, angioedémy, vaskulitidy, erytémy, kožní eosinofilie, Lupus erythematosus a ohraničené vypadávání vlasú.

V rámci uvedených indikací se dávkování sloučenin podie vynálezu bude samozrejmé ménit napríklad v závislosti na konkrétni použité sloučeniné, zpúsobu podání a typu onemocnéní, které je treba léčit. Nicméné se obvykle uspokojivých výsledku dosáhne v pŕipadé, kdy se uvedené sloučeniny podávají v denní dávce asi 0,1 až asi 10 mg/kg intravenózné nebo asi 0,5 až asi 100 mg/kg perorálne, pričemž tato denní dávka se výhodné rozdélí do dvou až čtyŕ dílčích dávek podávaných v určitých časových intervalech. Pro vétšinu velkých savcú činí celková denní dávka asi 7 až asi

2000 mg sloučeniny podie vynálezu, pŕičemž tato celková denní dávka se napríklad podáva v až asi čtyŕech dílčích dávkach nebo v retardované formé. Jednotkové dávkovací formy napríklad obsahují asi 1,75 až asi 1000 mg sloučenin podie vynálezu ve smési s alespoň jedním pevným nebo kapalným farmaceutický prijateľným nosičem nebo ŕedidlem.

Sloučeniny podie vynálezu mohou být podávány zpúsobem, který je obvyklý pri použití účinných látek v rámci uvedených indikací. Sloučeniny podie vynálezu mohou být smíšeny s konvenčnými chemoterapeuticky prijateľnými nosiči nebo ŕedidly a prípadnými dalšími pomocnými látkami a podávány napríklad perorálné ve formé napríklad tablet nebo kapslí.

Alternativné mohou být sloučeniny podie vynálezu podávány topicky v obvyklých galenických formách, jakými jsou napríklad masti nebo krémy, nebo parenterálné anebo intravenózne. Koncentrace účinné látky se budou samozrejmé ménit v závistosti napríklad na konkrétni použité účinné sloučeniné, požadovaném léčení a povaze použité galenické formy. Obecné se však uspokojivých výsledku napríklad dosáhne pri použití topických aplikačních forem s koncentracemi účinné látky asi 0,05 až asi 5 %, zejména asi 0,1 až asi 1 % hmotnosti.

Farmaceutické kompozice obsahující sloučeninu obecného vzorce I ve volné formé nebo ve formé farmaceutický pŕijatelné soli, pokud taková súl existuje, společné s alespoň jedním farmaceutický prijateľným nosičem nebo ŕedidlem tvorí rovnéž součást vynálezu.

Vynález rovnéž zahrnuje sloučeniny obecného vzorce I ve volné formé nebo ve formé farmaceutický pŕijatelné soli, pokud taková súl existuje, pro použití jako farmaceutika, zejména pri léčení hyperproliferačních/zánétových porúch a rakoviny, zejména rakoviny prsu nebo pankreatického karcinómu.

Vynález rovnéž zahrnuje zpúsob léčení hyperproliferačních/zá nétových porúch a rakoviny, jehož podstata spočivá v tom, že se pacientovi, který takové léčení potrebuje, podá terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I ve volné formé ne17 bo ve forme farmaceutický pŕijatelné soli, pokud taková súl existuje.

Sloučenina z príkladu 1, tj. methylestr kyseliny 5-/2-(2,5dimethoxyfenyl)ethyl/-2-hydroxybenzoové je výhodnou sioučeninou. Bylo napríklad stanoveno, že pri výše uvedeném testu 1 má tato sloučenina rovnou 0,045/UM, zatímco na rozdíl od toho je

EGF receptorové negatívni bunečná rada CH0-K1 je inhibována pri ICjjq vétší než asi 0,3/UM.

Pri výše uvedeném testu 2 inhibuje tato sloučenina tri ze čtyŕech testovaných prsních nádorových bunečných rad, tj. bunečné rady SK-BR-3, MDAMB-468 a MCF-7, pri IC_5Q pohybující se od 20 do 50 nM, zatímco prsní nádorové bunečné rady MDAMB-231 a neprsní nádorové bunéčné rady K-562, L1210 a HeLa jsou inhibovány pri IC^₀pohybující se od 200 do 470 nM, což je ukazatelem selektivity vúči nékterým prsním nádorúm. Na rozdíl od toho kolchicin neselck tivné inhibuje všechny testované nádorové bunéčné rady pri IC^g po hybující se mezi 5 a 20 nM.

Pri výše uvedeném testu 3 provedeném s nádory A431 se pri dávce 30 mg/kg podávané perorálné trikrát týdné dosáhne toho, že objem nádoru u myší, kterým byla podávána testovaná sloučenina, predstavuje pouze 56,3 % objemu nádoru u mýší z kontrolní skupiny pokusných zvíŕat. Tyto výsledky byly získané po ukončení experimentu (4 týdny). Pri dávce 3 mg/kg podané intravenózné činil objem nádoru u myší, kterým byla podána testovaná sloučenina, asi 40 % objemu nádoru u myší z kontrolní skupiny zvíŕat. U pankreatických nádorú MiaPaCa mél nádor u myší, kterým byla perorálné podána sloučenina z príkladu 1 po dobu 2 týdnú, velikost rovnou asi 46 % velikosti nádoru u myší z kontrolní skupiny zvíŕat. Pri obdobném experimentu, pri kterém se podává štandardní srovnatelná intraperitoneální dávka 10 mg/kg každý tretí den (cisplatina nemúže být obvykle podávána perorálné), se výrazné inhibice dosáhne až po 4 týdnech léčení (velikost nádoru u léčených myší predstavuje asi 40 % velikosti nádoru u myší z kontrolní skupiny pokusných zvíŕat) a to i když strední objem nádoru na počátku podávání cisplatiny mél pouze asi poloviční velikost nádoru, který byl léčen podáváním sloučeniny z príkladu 1.

Pri. výše uvedeném testu 4 zpusobuje sloučenina z príkladu 1 49% inhibici otoku pri koncentrací 1,2 %.

V rámci uvedené protirakovinné aplikace muže být sloučenina z príkladu 1 podávána vyšším savcúm, napríklad lidem, stejnými zpúsoby podání a za použití stejných dávek jaké jsou obvykle použitý pri podávání cisplatiny. Tato silná protinádorová účinnost je pozorována pri dávkach, které nepotlačuj! imunitní odezvu organismu a hematopoesu, pŕičemž nádorové bunky s multirezistenčním fenotypem jsou na sloučeniny podie vynálezu stejné citlivé jako na jejich parentální analógy.

Vynález rovnéž zahrnuje zpúsob prípravy léčiva, jehož podstata spočivá v tom, že se sloučenina obecného vzorce I ve volné forme nebo ve formé farmaceutický pŕijatelné soli, pokud taková súl existuje, s alespoň jedním farmaceutický prijateľným nosičem nebo ŕedidlem.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Sloučenina obecného vzorce I r

0R₃ (I) ve kterém

R₁ a R₂ nezávisle znamenají alkoxylovou skupinu,

R^ znamená atóm vodíku nebo acylovou skupinu a

R₄ znamená alkoxylovou skupinu, ve volné formé nebo ve formé soli, pokud taková sul existuje.

2. Sloučenina podie nároku 1 obecného vzorce I, ve kterém

R^ a R₂ nezávisle znamenají alkoxylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atómy a R^ a R₄ mají výše uvedený význam v nároku 1.

3. Sloučenina podie nároku 1 obecného vzorce I, ve kterém

R₁ a R₂ nezávisle znamenají alkoxylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atómy, R^ znamená atóm vodíku nebo alkylkarbonylovou skupinu s celkovým počtem 2 až 5 uhlíkových atomú a R₄ znamená alkoxylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atómy.

4. Sloučenina podie nároku 1, kterou je methylester kyseliny

5. Sloučenina podie nároku 1 obecného vzorce I, ve kterém buä R₁ a R₂ znamenají methoxylovou skupinu a R^ a R^ znamenaj í buä atóm vodíku resp. skupinu OCí^CH^, nebo skupinu COCH^ resp. skupinu OCH^, nebo atóm vodíku resp. skupinu OCH₂CH₂CH₃, nebo atóm vodíku resp. OCH₂CH₂CH₂CH₃, nebo atóm vodíku resp. skupinu OCH(CH₃)₂, nebo R₁ a R₂ znamenají skupinu OCH₂CH₃, R^ znamená atóm vodíku R^ znamená skupinu OCH^.

5-/2-(2,5-dimethoxyfenyl)ethyl/-2-hydroxybenzoové.

6. Zpúsob prípravy sloučeniny podie nároku 1, v y z n a č e n ý t í m , že zahrnuje

a) redukci odpovídajicí sloučeniny obecného vzorce II

0R₃ (II) ve kterém -X-X- znamená vinylenovou nebo ethinylenovou skupinu nebo

b) esterifikaci nebo acylaci sloučeniny obecného vzorce III (III) ve kterém a R2 mají významy uvedené v nároku 1, znamená hydroxy-skupinu nebo alkoxylovou skupinu a

R_c znamená atóm vodíku nebo acylovou skupinu, b

a prípadné prevedení alkoxylové skupiny R₄ transesterifikaci na jinou alkoxylovou skupinu R^, pŕičemž funkční skupiny mohou být v chránené formé a použité ochrán né skupiny mohou být odstránený po ukončení reakce, a izolaci získané sloučeniny obecného vzorce I ve volné formé nebo ve formé soli, pokud taková sul existuje.

7. Farmaceutická kompozice, vyznačená tím, že obsahuje sloučeninu podie nároku 1 ve volné formé nebo ve formé farmaceutický pŕijatelné soli, pokud taková súl existuje, společné y, s alespoz. jedním farmaceutický prijateľným nosičem nebo ŕedidlem.

8. Sloučenina podie nároku 1 ve volné formé nebo ve formé farmaceutický pŕijatelné soli, pokud taková sul existuje, pro použití jako farmaceutikum.

9. Sloučenina podie nároku 8 pro použití pri léčení hyperproliferačních/zánétových porúch a rakoviny.

r

10. Zpúsob prípravy léčiva pro použití pri léčení hyperproliferačních/zánétových porúch a rakoviny, vyznačený tím, že se sloučenina podie nároku 1 ve volné formé nebo ve formé farmaceutický pŕijatelné soli, pokud taková súl existuje, smísí s alespoň jedním farmaceutický pŕijatelným nosičem nebo ŕedidlem.