CZ282473B6

CZ282473B6 - Bis(fenyl)ethanové deriváty, způsob jejich přípravy a farmaceutická kompozice tyto deriváty obsahující

Info

Publication number: CZ282473B6
Application number: CS923125A
Authority: CZ
Inventors: Peter Dr. Nussbaumer; Anton Dr. Stuetz
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 1991-10-16
Filing date: 1992-10-14
Publication date: 1997-07-16
Also published as: GB9121943D0; SG50542A1; CZ312592A3; PH31113A; FI924657A; DK0539326T3; US5488135A; EP0539326A2; NZ244730A; SK312592A3; HU9203156D0; NO178540B; JP2543298B2; CA2080555A1; KR930007880A; HU211233A9; MX9205921A; RO111074B1; ZA928021B; ES2087499T3

Abstract

Jsou popsány sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R.sub.1 .n.a R.sub.2 .n.nezávisle znamenají alkoxylovou skupinu, R.sub.3 .n.znamená atom vodíku nebo acylovou skupinu a R.sub.4 .n.znamená alkoxylovou skupinu, ve volné formě nebo ve formě soli, pokud taková sůl existuje. Tyto sloučeniny mají potentní antihyperproliferační/protizánětové a protirakovinné vlastnosti. Je rovněž popsán způsob přípravy těchto sloučenin a farmaceutické kompozice, které tyto sloučeniny obsahují jako účinnou látku.ŕ

Description

Oblast techniky

Vynález se týká bis(fenyl)ethanového derivátu, způsobu jeho přípravy, tohoto derivátu jako léčivo a farmaceutické kompozice obsahující tento derivát jako účinnou látku.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu je bis(fenyl)ethanový derivát obecného vzorce I

(I) ve kterém

Ri a R₂ nezávisle znamenají alkoxylovou skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy,

R₃ znamená atom vodíku nebo alkylkarbonylovou skupinu obsahující celkem 2 až 5 uhlíkových atomů,

R4 znamená alkoxylovou skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, ve volné formě nebo ve formě soli.

Všechny takto vymezené sloučeniny jsou dále stručně označovány jako sloučeniny podle vynálezu. Tyto sloučeniny mají farmakologické, zejména antihyperproliferační a protinádorové vlastnosti.

Alkylová část tvořící část alkoxylového substituentu je výhodně tvořena methylovou nebo ethylovou skupinou. Výhodnou alkoxykarbonylovou skupinou ve významu obecného substituentu R₃ je acetylová skupina.

Bis(fenyl)ethanové deriváty obecného vzorce I podle vynálezu mohou být připraveny způsobem podle vynálezu, který zahrnuje

a) redukci odpovídající sloučeniny obecného vzorce II

x (II)

- 1 CZ 282473 B6 ve kterém skupina -X-X- znamená vinylenovou nebo ethinylenovou skupinu, nebo

b) esterifikaci nebo acylaci sloučeniny obecného vzorce ΙΠ

(ΠΙ) ve kterém

Ri a R₂ mají výše uvedený význam,

R₅ znamená hydroxylovou nebo alkoxylovou skupinu a

R^ znamená atom vodíku nebo acylovou skupinu a případné převedení alkoxylové skupiny R4 transesterifikací na jinou alkoxylovou skupinu R4, přičemž funkční skupiny mohou být ve chráněné formě a použité ochranné skupiny mohou být odstraněny po proběhnutí reakce, a izolaci rezultujících sloučenin obecného vzorce I ve volné formě nebo ve formě soli, pokud taková sůl existuje.

Způsob podle vynálezu může byt proveden konvenčním způsobem.

Varianta a) způsobu podle vynálezu se vhodně provádí hydrogenací. Při této hydrogenací se výhodně použije vodík společně s hydrogenačním katalyzátorem, jakým je paladium, platina nebo rhenium, výhodně paladium na uhlí.

Varianta b) způsobu podle vynálezu se rovněž provádí konvenčním způsobem.

Alespoň jeden z R₅ a R^ znamená hydroxy-skupinu, resp. atom vodíku.

Transesterifikace i esterifikace se výhodně provádí v přítomnosti silné kyseliny, jakou je kyselina sírová, s alkoholem odpovídajícím esterové skupině, která má být do sloučeniny zavedena.

Rovněž odstranění ochranných skupin se provádí konvenčním způsobem. Funkční skupinou, která může být vhodně chráněna, je hydroxy-skupina, která se chrání například trialkylsilylovou skupinou. Odstranění například trialkylsilylové skupiny může být provedeno působením kyseliny fluorovodíkové v rozpouštědle, jakým je například acetonitril.

Získané sloučeniny podle vynálezu mohou být z reakční směsi izolovány a přečištěny některou ze známých metod, například chromatograficky.

Výchozí látky použité při způsobu podle vynálezu mohou být rovněž získány konvenčním způsobem.

Sloučeniny obecného vzorce II, ve kterém skupina -X-X- znamená vinylenovou skupinu, mohou být připraveny reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce IV

-2CZ 282473 B6 (IV)

ve kterém X znamená aniont, výhodně bromidový aniont, s odpovídající sloučeninou obecného vzorce V

OHC

(V) za podmínek obvyklých při reakcích Wittig/Homer/Emmonsova typu působením fosforové složky s bází, jakou je alkyllithium, hydrid alkalického kovu nebo amid alkalického kovu, například amid sodný, lithiumdiisopropylamid nebo alkoholát nebo alkoholát alkalického kovu, při teplotě z teplotního rozmezí od asi -70 do asi 100 °C a současnou nebo následnou konverzí působením karbonylové složky při teplotě z teplotního rozmezí od asi -70 do asi 120 °C, výhodně při teplotě -60 až 60 °C, ve vhodných rozpouštědlech, jakými jsou například tetrahydrofuran, toluen nebo dimethylsulfoxid.

Sloučeniny obecného vzorce II, ve kterém skupina -X-X- znamená ethinylenovou skupinu, mohou být připraveny reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce VI

(VI) s odpovídající sloučeninou obecného vzorce VII

(VII) ve kterém Y znamená atom halogenu, výhodně atom jodu, která se provede standardními postupy používanými při Heckově reakci halogenolefmů s acetyleny.

Sloučeniny obecného vzorce ΙΠ, ve kterém R< znamená atom vodíku a sloučeniny obecného vzorce ΠΙ, ve kterém R5 znamená hydroxy-skupinu, mohou být připraveny postupem, který je

-3CZ 282473 B6 analogický s výše popsaným postupem, nebo deacylací nebo dealkylací odpovídajících sloučenin obecného vzorce I, ve kterém R₃ znamená acylovou skupinu a/nebo R4 znamená alkoxylovou skupinu.

Pokud zde není specifikována příprava některých výchozích látek, potom mohou být takové výchozí látky připraveny známými postupy, nebo postupy, které jsou analogické se známými postupy, nebo postupy popsanými v dále uvedených příkladech anebo jsou tyto výchozí látky známými sloučeninami.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Methylester kyseliny 5-/2-(2,5-dimethoxyfenyl)ethyl/-2-hydroxybenzoové (Obecný vzorec I: Ri, R₂, R4 = OCH₃, R₃ = H, varianta a)) mg kyseliny 5-/2-(2,5-dimethoxyfenyl)ethinyl/-2-hydroxybenzoové ve formě methylesteru (obecný vzorec II, -X-X- = ethinylenová skupina) nebo 60 mg E/Z-směsi methylesteru kyseliny 5-/2-(2,5-dimethoxyfenyl)ethinyl/-2-hydroxybenzoové (obecný vzorec II, -X-X- = -X-Xvinylenová skupina) se rozpustí v 10 ml ethylacetátu. Po přidání 10 mg 10 % paladia na uhlí se směs míchá přes noc pod atmosférou vodíku, načež se zfiltruje přes celit a odpaří k suchu za sníženého tlaku. Tímto způsobem se získá požadovaná sloučenina ve formě bezbarvých krystalů.

Teplota tání po chromatografickém přečištění: 65 °C, teplota tání po rekrystalizaci z ethanolu: 67 °C.

Výchozí látky se připraví následujícím způsobem.

240 mq 2,5-dimethoxyfenylacetylenu (obecný vzorec VI) a 493 mg methyl-5-jodsalicylátu (obecný vzorec VII) se pod atmosférou argonu rozpustí v bezvodém benzenu prostém kyslíku. Získaná směs se uvede v reakci s 85 mg tetrakis(trifenylfosfin)paladiem, 20 mg jodidu mědného a 450 mg triethylaminu a reakční směs se potom míchá při pokojové teplotě přes noc, načež se nalije do 100 ml vodného pufru s pH 7. Po extrakci ethylacetátem a chromatografickém přečištění na silikagelu se získá methylester kyseliny 5-/2-(2,5-dimethoxyfenyl)ethinyl/-Zhydroxybenzoové ve formě bezbarvých krystalů.

Teplota tání: 105 - 108 °C).

6,6 mmolu lithiumdiisopropylamidu ve směsi tetrahydrofuranu a n-hexanu se při teplotě -40 °C přidá k suspenzi 1 g2,5 dimethoxybenzyltrifenylfosfoniumbromidu (obecný vzorec IV) v 15 ml absolutního tetrahydrofuranu. Po jednohodinovém míchání se reakční směs ochladí na teplotu -70 °C, načež se k ní pomalu přidá 372 mg 3-methoxykarbonyl-4-hydroxybenzaldehydu (obecný vzorec V) rozpuštěného v 5 ml absolutního tetrahydrofuranu. Směs se potom míchá po dobu jedné hodiny při teplotě -70 °C a potom ještě při okolní teplotě po dobu dvou hodin, načež se nalije do vodného roztoku chloridu amonného. Po extrakci ethylacetátem a odpaření se získá směs (E)- a (Z)-methylesteru kyseliny 5-/2-(2,5-dimethoxyfenyl)ethenyl/-2-hydroxybenzoové, která může být chromatografována na silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí nhexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 9:1. První frakce, která je tvořena Z-isomerem majícím vzhled bezbarvých krystalů a teplotu tání 78 až 80 °C, je následována E-isomerem

-4CZ 282473 B6 majícím vzhled bezbarvých krystalů a teplotu tání 80 až 82 °C.

Příklad 2

Ethylester kyseliny 5-/2-(2,5-dimethoxyfenyl)ethyl/-2-hydroxybenzoové (Obecný vzorec I: Ri, R₂ = OCH3, R3 = H, R4 = OCH2CH3, varianta b))

250 mg kyseliny 5-/2-(2,5-dimethoxyfenyl)ethyl/-2-hydroxybenzoové nebo 250 mg methylesteru kyseliny 5-/2-(2,5-dimethoxyfenyl)ethyl/-2-hydroxybenzoové (obecný vzorec III, R₅ = OH nebo OCH₃, Ré = H) se rozpustí v 10 ml bezvodého ethanolu a k takto získanému roztoku se potom přidá 0,2 ml koncentrované kyseliny sírové. Směs se potom zahřívá pod zpětným chladičem na teplotu varu po dobu 48 hodin, načež se nalije do 150 ml vody. Po extrakci ethylacetátem a chromatografickém přečištění na silikagelu se získá požadovaná sloučenina ve formě bezbarvého oleje.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum: 10,69 (s, IH), 7,67 (d, J=2, 2Hz, IH),

7,29 (dd, J=2, 2+8, 5Hz, IH),

6,91 (d, J=8, 5Hz, IH),

6,66 - 6,83 (m, 3H),

4,42 (qua, J=7Hz, 2H),

3,79 (s, 3H),

3.75 (s, 3H),

2.76 - 2,92 (m, 4H), 1,44 (tr, J=7Hz, 3H).

Příklad 3

Methylester kyseliny 5-/2-(2,5-dimethoxyfenyl)ethyl/-2-acetoxybenzoové (Obecný vzorec I: R_b R₂, R4 = OCH3, R3 = COCH3, varianta b))

150 mg methylesteru kyseliny 5-/2-(2,5-dimethoxyfenyl)ethyl/-2-hydroxybenzoové (sloučenina z příkladu 1) se rozpustí ve 2,5 ml anhydridu kyseliny octové a k takto získanému roztoku se potom přidá 45 mg pyridinu. Získaná směs se míchá přes noc při okolní teplotě, načež se nalije do 100 ml vody a extrahuje ethylaceátem. Sloučené organické extrakty se postupně promyjí 0,1 N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou. Po odpaření rozpouštědla se požadovaná sloučenina získá ve formě bezbarvého oleje.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum: 7,85 (d, J=2Hz, IH),

7.34 (dd, J=2+8Hz, IH), 6,99 (d, J=8Hz, IH),

6,66 - 6,80 (m, 3H), 3,87 (s,3H),

3,76(5, 3H), 2,89 (s, 4H),

2.34 (s, 3H).

-5CZ 282473 B6

Analogickým způsobem se získají následující sloučeniny podle vynálezu.

Příklad R₁č.	r₂	r₃	R4	Varianta	Teplota tání nebo nukleární magneticko rezonanční spektrum
4	OCH₃	och₃	coch₃	och₃	a)³⁾	olej, NMRⁿ
5	OCH₃	och₃	H	och₂ch₂ch₃	a) b)²⁾	olej, NMR⁶⁾
6	och₃	och₃	H	OCH₂CH₂CH₂CH₃	a) b)²⁾	olej, NMR⁷⁾
7	och₂ch₃	OCH₂CH₃	H	och₃	a)⁴⁾ b)	olej, NMR⁸⁾
8	och₃	och₃	H	OCH(CH₃)₂	a) b)²⁾	olej, NMR⁵⁾

1) viz příklad 3

2) při esterifíkaci se vychází z odpovídající sloučeniny vzor III, ve kterém Rj znamená hydroxy-skupinu (t.t.=120 - 125 °C),

3) vychází se z odpovídajících sloučenin obecného vzorce II, ve kterém skupina -X-Xznamená vinylenovou skupinu, (t.t.=86 - 88 °C, E-isomer; t.t.=63 - 66 °C, Z-isomer) připravených postupem popsaným v příkladu 1,

4) vychází se z E/Z-směsi (asi 1,3 : 1) odpovídajících sloučenin obecného vzorce II, ve kterém skupina -X-X- znamená vinylenovou skupinu (t.t =45 - 50 °C), připravených postupem popsaným v příkladu 1,

5) 10,77(s, 1H),

7,62 (d, J=2, 3Hz, 1H),

7.28 (dd, J=2, 3+8, 5Hz, 1H),

6,9 (d, J=8, 5Hz, 1H),

6,8 (d, J=9Hz, 1H),

6,66 - 6,75 (m, 2H),

5.29 (sept, J=6, 25Hz, 1H),

3,79 (s, 3H),

3.75 (s, 3H),

2.75 - 2,9 (m, 4H),

1,41 (d, J=6, 25Hz, 6H),

6) 10,69 (s,lH),

7.65 (d, J=2, 2Hz, 1H),

7.29 (dd, J=2, 2+8, 5Hz, 1H),

6,91 (d, J=8, 5Hz, 1H),

6.66 - 6,83 (m, 3H),

4,32 (tr, J=7Hz, 2H),

3,79 (s, 3H),

3.75 (s, 3H),

2,77 - 2,93 (m, 4H),

-6CZ 282473 B6

1,83 (sex, J=7Hz, 2H),

1,06 (tr, J=7Hz, 3H),

7) 10,69 (s,lH),

7,63 (d, J=2, 2Hz, IH),

7.28 (dd, J=2, 2+8, 5Hz, IH),

6,9 (d, J=8, 5Hz, IH),

6,79 (d, J=8, 5Hz, IH),

6,65 - 6,75 (m, 2H),

4,36 (tr, J=6, 7Hz, 2H),

3,78 (s, 3H),

3,74 (s, 3H),

2,76 - 2,92 (m, 4H),

1,70- 1,85 (m, 2H),

1,40- 1,56 (m, 2H),

1,00 (tr, J=7, 3 Hz, 3H),

8) 10,59 (s,lH),

7,68 (d, J=2, 3Hz, IH),

7.29 (dd, J=2, 3+8, 5Hz, IH),

6,92 (d, J=8, 5Hz, IH),

6,65-6,81 (m, 3H),

3,99 (qua, J=7Hz, 2H),

3,96 (s, 3H),

3,94 (qua, J=7Hz, 2H),

2,76 - 2,93 (m, 4H),

1,42 (tr, J=7Hz, 3H),

1,38 (tr, J=7Hz, 3H).

Sloučeniny obecného vzorce I ve volné formě nebo ve formě farmaceuticky přijatelné soli, pokud taková sůl existuje, mají výhodné chemoterapeutické vlastnosti. Vzhledem k tomu jsou indikovány pro použití ve funkci farmaceutik.

Tyto sloučeniny zejména mají antihyperproliferační/protizánětové a protirakovinnové vlastnosti. V následujícím popisu jsou použity dále uvedené zkratky:

CHO-K1 = buněčná řada známá jako Chinese hamster-ovary-Kl,

DMEM = Dulbeccovo modifikované Eagleovo prostředí (Gibco),

EGF = epidermální růstový faktor

FCS = fetální telecí sérum

HaCat = buněčná řada známá jako human adult calcium temperature,

RPMI-1640 = medium 1640 Roswell Park Memoriál Institute,

TGFalfa = transformační růstový faktor alfa.

Antihyperproliferační/protizánětová účinnost a/nebo protirakovinná účinnost může být například stanovena následujícím způsobem.

1) Inhibice proliferace lidské keratinocytové buněčné řady HaCat (nebo referenční buněčné řadyCHO-Kl)

Buňky HaCaT, které představují spontánně transformovanou, TGF-alfa- a EGF-receptorově pozitivní netumorigenní lidskou keratinocytovou buněčnou řadu s vysoce zachovanými fenotypovými diferenciačními charakteristikami normálních keratinocytů (Boukamp a kol.,

-7CZ 282473 B6

J.Cell. Biol. 106, 761-771 (1988)), se kultivují v prostředí DMEM obohacenému 2,2 g/1 hydrogenuhličitanu sodného, 0,11 g/1 pyruvátu sodného, 15 mM HEPES, 5 % FCS, penicilinem (100 U/ml), streptomycinem (100 pg/ml) a glutaminem (ke zvýšení finální koncentrace o 4 mM). Buňky CHO-K1 se kultivují ve výše uvedeném prostředí obsahujícím navíc 40 pg/ml prolinu. Za účelem proliferačního stanovení se buňky detašují trypsinizací, suspendují v čerstvém kultivačním prostředí a zaočkují na 96 jamkovou mikrotitrační plotnu v množství 2000 až 4000 buněk a 0,2 ml na jamku. Po 24 hodinách se kultivační prostředí nahradí čerstvým kultivačním prostředím obsahujícím odstupňované koncentrace testované sloučeniny. Po 3 až 4 dnech inkubace se měří míra buněčné proliferace kolorimetricky za použití sulforhodaminu B (Skehan a kol., J. Nati. Cancer Inst. 82, 1107-1112 (1990)). Získané výsledky jsou vyjádřeny pomocí střední ± standardní odchylky ze třech měření.

Při výše popsaném testu bylo prokázáno, že testované sloučeniny inhibují proliferaci buněk HaCaT, přičemž jejich hodnoty IC₅o se pohybují od asi 0,03 μΜ do asi 3 μΜ.

Protirakovinná účinnost může být například stanovena následujícím způsobem.

2) Inhibice proliferace nádorových buněk

Nádorové buněčné řady, například K-562, L1210, HeLa, SKBR-3, MDAMB-468, MCF-7 nebo MDAMB-231 (všechny tyto nádorové buněčné řady jsou dostupné u Američan Type Culture Collection, Rockville, MD 20852, USA), se kultivují v prostředí RPMI-1640 obohaceném 10 % tepelně inaktivovaného (56 °C/30 minut) FCS a antibiotiky (1 x GIBCO pěnicilin-streptomycinový roztok). Když se dosáhne exponenciálního růstu nádorových buněčných řad kultivovaných v suspenzi (K-562 a L1210) nebo konfluence adherentních buněčných řad (HeLa, SK-BR-3, MDAMB-468, MCF-7 a MDAMB-231), buňky se izolují (adherentní buňky se trypsinizují), suspendují v čerstvém kultivačním prostředí a zaočkují na 96 jamkové kultivační plotny v množství pohybujícím se od 1000 do 5000 buněk na jamku. Buňky se potom kultivují po dobu až 4 dnů ve finálním objemu 0,2 ml/jamka pri teplotě 37 °C ve zvlhčovaném inkubátoru, nacházejícím se v rovnovážném stavu s 5% oxidem uhličitým, v přítomnosti odstupňovaných koncentrací testované sloučeniny. Míra buněčné proliferace se měří kolorimetrickým stanovením za použití MTT (Alley a kol., Cancer Res.48 (1988) 589-601) v případě buněk kultivovaných v suspenzi nebo sulforhodaminu B v případě adherentních buněk.

Při výše uvedeném testu bylo prokázáno, že testované sloučeniny inhibují proliferaci čtyř výše zmíněných buněčných řad, přičemž jejich hodnoty IC₅₀ se pohybují od asi 0,019 μΜ do asi μΜ.

3) Účinek na růst lidských nádorů xenotransplatnovaných na holou myš

Buněčná řada MiaPaCa-2 je lidskou pankreatickou nádorovou buněčnou řadou; buněčná řada A431 je odvozena od lidského epidermoidního karcinomu zevního ženského pohlavního ústrojí. Obě tyto buněčné řady jsou dostupné u ATCC (Američan Type Culture Collection). Tyto buněčné kultury jsou kultivovány bez antibiotik a antifungálních činidel. Samičky holých myší Balb/C s tělesnou hmotností od 20 do 23 g ve skupinách po pěti jedincích jsou udržovány na režimu zahrnujícím volný přítok pitné vody a patogenů-prostou potravu pro hlodavce. Nádory se iniciují subkutánní injekcí 10⁷ buněk uvedených kultivovaných nádorových buněčných řad holým myším. Jakmile nádory dosáhnou přibližně 1 cm v průměru, provede se jejich excize, načež se nařeží na malé kousky velikosti asi 3 x 3 mm a subkutánně transplantují do obou boků holých myší. Jeden a dva týdny po uvedené transplantaci se za použití kalibru změří velikost nádorů. Pokusná zvířata s rostoucími nádory jsou rozdělena do kontrolních a ošetřovaných

-8CZ 282473 B6 skupin vždy s identickou střední velikostí nádorů. Testované sloučeniny se podávají perorálně. Tentýž roztok testované látky se použije pro dva následné ošetřující kroky. Kontrolním zvířatům se podává pouze vehikulum. V týdenních intervalech se měří objemy nádorů a tyto objemy se vyjádří jako střední objem nádoru na jedno pokusné zvíře (mm³). Získané výsledky se vyhodnotí použitím statistického programu RS/1 (BBN Software Products Corp.), přičemž jsou použity testy včetně Studentova testu a Mann-Whitneyova testu.

Při výše uvedeném testu bylo zjištěno, že testované sloučeniny podávané v dávce od 30 mg/kg do 100 mg/kg perorálně nebo v dávce od 3 mg/kg do 10 mg/kg intravenózně významně (P menší než 0,05 nebo menší než 0,01) inhibují v průběhu celé ošetřovací periody růst nádorů A431 (lidský epidermoidní nádory s přeexpresí receptorů EGF). Po ukončení experimentu (4 týdny) je objem nádoru u myší, kterým byla podávána testovaná látka, roven asi 10 až 50% objemu nádoru kontrolních pokusných zvířat. Růst nádorů MiaPaCa (lidské pankreatické nádory determinující normální množství receptorů EGF) je inhibován obdobně: po 3 týdnech ošetření je objem nádorů u ošetřovaných myší výrazně inhibován oproti objemu nádorů kontrolních pokusných zvířat.

Antihyperproliferační/protizánětová účinnost po topické aplikaci může být například stanovena následujícím způsobem.

4) Inhibice oxazolonem indukované alergické kontaktní dermatitidy u myší

Senzibilace se indukuje jedinou aplikací 2% oxazolonu (10 μΐ) do abdominální pokožky myší (8 pokusných zvířat ve skupině). Hypersenzitivní reakce způsobující boltcový otok se vyvolá druhým podáním 2% oxazolonu aplikovaného po 8 dnech do jednoho z boltců každého pokusného zvířete.

Inhibice otoku boltce se dosáhne dvěma topickými aplikacemi testované sloučeniny (30 minut před a po aplikaci látky vyvolávající uvedenou reakci). Inhibiční účinnost testovaných sloučenin se stanoví na základě rozdílu hmotnostní ušního boltce zvířat, kterým byla podána testovaná sloučenina, a hmotnosti ušního boltce pokusných zvířat, kterým bylo podáno pouze vehikulum (směs propylenglykolu a acetonu v objemovém poměru 7:3), a je vyjádřena v procentech snížení hmotnosti oteklého boltce, přičemž se za základ bere hmotnost oteklého boltce pokusných zvířat, kterým bylo podáno pouze vehikulum.

Při výše uvedeném testu bylo prokázáno, že se při dávce 1,2% testované sloučeniny dosáhne v případě sloučenin podle vynálezu asi 20 až asi 60 % inhibice otoku ušního boltce pokusných zvířat.

Sloučeniny obecného vzorce I ve volné formě nebo ve formě farmaceuticky přijatelné soli, pokud taková sůl existuje, jsou proto indikovány pro použití ve funkci antiproliferačních/protizánětových a protirakovinných činidel při léčení hyperproliferačních/zánětových onemocnění a stavů a rakoviny, například při potlačení neoplastických poruch, například při léčení zánětových/hyperproliferačních onemocnění kůže, rakoviny kůže, kožních a systemických projevů imunologicky mediovaných onemocnění a autoimunitních chorob, jakými jsou lupénka, atopická dermatitida, kontaktní dermatitida a přidružená ekzematozní dermatitida, seborrhoidní dermatitida, lišej, pemfigus, bulozní pemfigoid, epidermolyzní buloza, kopřivka, angioedémy, vaskulitidy, erytémy, kožní eosinofilie, Lupus erythematosus a ohraničené vypadávání vlasů.

V rámci uvedených indikací se dávkování sloučenin podle vynálezu bude samozřejmě měnit například v závislosti na konkrétní použité sloučenině, způsobu podání a typu onemocnění, které je třeba léčit. Nicméně se obvykle uspokojivých výsledků dosáhne v případě, kdy se uvedené

-9CZ 282473 B6 sloučeniny podávají v denní dávce asi 0,1 až asi 10 mg/kg intravenozně nebo asi 0,5 až asi 100 mg/kg perorálně, přičemž tato denní dávka se výhodně rozdělí do dvou až čtyř dílčích dávek podávaných v určitých časových intervalech. Pro většinu velkých savců činí celková denní dávka asi 7 až asi 2000 mg sloučeniny podle vynálezu, přičemž tato celková denní dávka se 5 například podává v až asi čtyřech dílčích dávkách nebo v retardované formě. Jednotkové dávkovači formy například obsahují asi 1,75 až asi 1000 mg sloučenin podle vynálezu ve směsi s alespoň jedním pevným nebo kapalným farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být podávány způsobem, který je obvyklý při použití 10 účinných látek v rámci uvedených indikací. Sloučeniny podle vynálezu mohou být smíšeny s konvenčními chemoterapeuticky přijatelnými nosiči nebo ředidly a případnými dalšími pomocnými látkami a podávány například perorálně ve formě například tablet nebo kapslí.

Alternativně mohou být sloučeniny podle vynálezu podávány topicky v obvyklých galenických 15 formách, jakými jsou například masti nebo krémy, nebo parenterálně anebo intravenozně.

Koncentrace účinné látky se budou samozřejmě měnit v závislosti například na konkrétní použité účinné sloučenině, požadovaném léčení a povaze použité galenické formy. Obecně se však uspokojivých výsledků například dosáhne při použití topických aplikačních forem s koncentracemi účinné látky asi 0,05 až asi 5 %, zejména asi 0,1 až asi 1 % hmotnosti.

Farmaceutické kompozice obsahující sloučeninu obecného vzorce I ve volné formě nebo ve formě farmaceuticky přijatelné soli, pokud taková sůl existuje, společně s alespoň jedním farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem tvoří rovněž součást vynálezu.

Vynález rovněž zahrnuje bis(fenyl)ethanový derivát obecného vzorce I jako léčivo, zejména použitelné při léčení hyperproliferačních/zánětových poruch a rakoviny, zejména rakoviny prsu nebo pankreatického karcinomu.

Sloučenina z příkladu 1, tj. methylester kyseliny 5-/2-(2,5-dimethoxyfenyl)ethyl/-2-hydroxy30 benzoové je výhodnou sloučeninou. Bylo například stanoveno, že při výše uvedeném testu 1 má tato sloučenina IC₅₀ rovnou 0,045 μΜ, zatímco na rozdíl od toho je EGF receptorové negativní buněčná řada CHO-K1 je inhibována při IC₅o větší než asi 0,3 μΜ.

Při výše uvedeném testu 2 inhibuje tato sloučenina tři ze čtyřech testovaných prsních nádorových 35 buněčných řad, tj. buněčné řady SK-BR-3, MDAMB-468 a MCF-7, při IC₅₀ pohybující se od 20 do 50 nM, zatímco prsní nádorové buněčné řady MDAMB-231 a neprsní nádorové buněčné řady K-562, L1210 a HeLa jsou inhibovány při IC50 pohybující se od 200 do 470 nM, což je ukazatelem selektivity vůči některým prsním nádorům. Na rozdíl od toho kolchicin neselektivně inhibuje všechny testované nádorové buněčné řady při IC₅₀ pohybující se mezi 5 a 20 nM.

Při výše uvedeném testu 3 provedeném s nádory A431 se při dávce 30 mg/kg podávané perorálně třikrát týdně dosáhne toho, že objem nádoru u myší, kterým byla podávána testovaná sloučenina, představuje pouze 56,3 % objemu nádoru u myší z kontrolní skupiny pokusných zvířat. Tyto výsledky byly získané po ukončení experimentu (4 týdny). Při dávce 3 mg/kg podané 45 intravenozně činil objem nádoru u myší, kterým byla podána testovaná sloučenina, asi 40 % objemu nádoru u myší z kontrolní skupiny zvířat. U pankreatických nádorů MiaPaCa měl nádor u myší, kterým byla perorálně podána sloučenina z příkladu 1 po dobu 2 týdnů, velikost rovnou asi 46 % velikosti nádoru u myší z kontrolní skupiny zvířat. Při obdobném experimentu, při kterém se podává standardní srovnatelná intraperitoneální dávka 10 mg/kg každý třetí den 50 (cisplatina nemůže být obvykle podávána perorálně), se výrazné inhibice dosáhne až po týdnech léčení (velikost nádoru u léčených myší představuje asi 40 % velikosti nádoru u myší z kontrolní skupiny pokusných zvířat), a to i když střední objem nádoru na počátku podávání cisplatiny měl pouze asi poloviční velikost nádoru, který byl léčen podáváním sloučeniny

-10CZ 282473 B6 z příkladu 1.

Při výše uvedeném testu 4 způsobuje sloučenina z příkladu 1 49% inhibici otoku při koncentraci 1,2%.

V rámci uvedené protirakovinné aplikace může být sloučenina z příkladu 1 podávána vyšším savcům, například lidem, stejnými způsoby podání a za použití stejných dávek jaké jsou obvykle použity při podávání cisplatiny. Tato silná protinádorová účinnost je pozorována při dávkách, které nepotlačují imunitní odezvu organismu a hematopoesu, přičemž nádorové buňky s multirezistenčním fenotypem jsou na sloučeniny podle vynálezu stejně citlivé jako na jejich parentální analogy.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Bis(fenyl)ethanový derivát obecného vzorce 1 (I) ve kterém:

Rj a R₂ nezávisle znamenají alkoxylovou skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy,

R₃ znamená atom vodíku nebo alkylkarbonylovou skupinu obsahující celkem 2 až 5 uhlíkových atomů a

R4 znamená alkoxylovou skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, ve volné formě nebo ve formě soli.
2. Bis(fenyl)ethanový derivát podle nároku 1, kterým je methylester kyseliny 5-/2-(2,5dimethoxyfenyl)ethyl/-2-hydroxy benzoové.
3. Bis(fenyl)ethanový derivát podle nároku 1, ve kterém buď R₃ a R₂ znamenají methoxylovou skupinu a buď R₃ znamená atom vodíku a R4 znamená skupinu OCH₂CH₃, nebo R₃ znamená skupinu COCH₃ a R4 znamená skupinu OCH₃, nebo R₃ znamená atom vodíku a R4 znamená skupinu OCH₂CH₂CH₃,

-11 CZ 282473 B6 nebo R₃ znamená atom vodíku a R4 znamená OCH₂CH₂CH₂CH₃, nebo R₃ znamená atom vodíku a R4 znamená skupinu OCH(CH₃)₂, nebo R_t a R₂ znamenají skupinu skupinu OCH₂CH₃ , R₃ znamená atom vodíku a R4 znamená skupinu OCH₃.
4. Způsob přípravy bis(fenyl)ethanového derivátu podle nároku 1, vyznačený tím, že zahrnuje

a) redukci odpovídající sloučeniny obecného vzorce II (Π) ve kterém -X-X- znamená vinylenovou nebo ethinylenovou skupinu, nebo

b) esterifikaci nebo acylaci sloučeniny obecného vzorce ΠΙ (m) ve kterém

Ri a R₂ mají významy uvedené v nároku 1,

R₅ znamená hydroxy-skupinu nebo alkoxylovou skupinu a

Ré znamená atom vodíku nebo acylovou skupinu, a případné převedení alkoxylové skupiny R4 transesterifikací na jinou alkoxylovou skupinu R4, přičemž funkční skupiny mohou být v chráněné formě a použité ochranné skupiny mohou být odstraněny po ukončení reakce, a izolaci získané sloučeniny obecného vzorce I ve volné formě nebo ve formě soli.
5. Bis(fenyl)ethanový derivát podle nároku 1 ve volné formě nebo ve formě farmaceuticky přijatelné soli jako léčivo.

-12CZ 282473 B6
6. Farmaceutická kompozice s antihyperproliferačním/protizánětovým a protirakovinovým účinkem, vyznačená tím, že obsahuje bis(fenyl)ethanový derivát podle nároku 1 ve volné formě nebo ve formě farmaceuticky přijatelné soli společně s alespoň jedním 5 farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.

Konec dokumentu