SK284925B6 - Kombinovaný preparát a jeho použitie pri liečení neurodegeneratívnych ochorení - Google Patents
Kombinovaný preparát a jeho použitie pri liečení neurodegeneratívnych ochorení Download PDFInfo
- Publication number
- SK284925B6 SK284925B6 SK240-98A SK24098A SK284925B6 SK 284925 B6 SK284925 B6 SK 284925B6 SK 24098 A SK24098 A SK 24098A SK 284925 B6 SK284925 B6 SK 284925B6
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- adenosine
- ach
- concentration
- intracellular
- muscarinic
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
- A61K31/52—Purines, e.g. adenine
- A61K31/522—Purines, e.g. adenine having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. hypoxanthine, guanine, acyclovir
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
- A61K31/473—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. acridines, phenanthridines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
- A61K31/52—Purines, e.g. adenine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Kombinovaný preparát, ktorý obsahuje zlúčeninu majúcu inhibičný účinok na acetylcholínesterázu alebo muskarínovú účinnosť a zlúčeninu zvyšujúcu endogénnu extracelulárnu hladinu adenozínu, je vhodný na liečenie demencie.
Description
Oblasť techniky
Vynález sa týka farmaceutických kombinovaných preparátov na liečenie demencie, ktorá je vyvolávaná neurodegeneratívnymi ochoreniami.
Doterajší stav techniky
Až dosiaľ prevažne sledovaná farmakologická stratégia pri liečení senilných demencií spočívala v udržiavaní muskarínovej aktivácie receptorov dávkami muskarínových agonistov alebo inhibítorov ACHE, ktorý zvyšujú koncentráciu endogénneho acetylcholínu (ACH) v receptore. Je sporné, či možno inhibíciou ACHE pri postupujúcom rozrušovaní cholinergných systémov neurónov skutočne dosiahnuť dostatočné zvýšenie hladiny ACH. Ďalej majú inhibítory ACHE pri nedostatočnej špecifite závažné vedľajšie účinky. Potenciácia účinku nedostatočných koncentrácií ACH, ktorá je sprostredkovaná muskarinovými receptormi, a to inými mechanizmami, bola by preto žiaduca a mohla by byť základom vývoja zodpovedajúcej kombinačnej terapie.
Je známe, že ACH ovplyvňuje nielen funkcie nervových buniek alebo aj glia-buniek (astrocytov) (Messamore se sp., Neuroreport, 5, (1994), str. 1473 až 1476). Nakoľko patologické reakcie glia-buniek zohrávajú v patofyziológii demencie zrejme dôležitú úlohu (Akiyama se sp., Brain Res. 632 (1993), str. 249 až 259), boli kultivované astrocyty zvolené ako modelový systém in vitro. Ovplyvnenie intracelulámeho uvoľňovania Ca2+, vyvolaného cez muskarínové receptory, bolo zisťované pomocou dynamickej metódy zobrazovacej fluorescencie.
Teraz bolo zistené, že Cl-adenozín potencuje muskarinové intraceluláme uvoľňovanie Ca*+ v kultivovaných potkaních astrocytoch, a to v závislosti od koncentrácie (pozri obrázok 1 až 3, tabuľky 1 a 2). Tak je možné už v prítomnosti 1 μΜ Cl-adenozínu odmerať asi tridsaťnásobnú potenciáciu intracelulámeho zvýšenia Ca2', vyvolaného ACH. Tento efekt nebol inhibovateľný nikotínovým antagonistom receptorov ACH, ale mohol byť blokovaný muskarínovým antagonistom receptorov (tabuľka 3). Práve tak potencioval Cl-adenozin intraceluláme uvoľňovanie Ca2+, vyvolané muskarínovým agonistom oxotremorínom-M (tabuľka 4). Väčšina pokusov (n > 200), ktoré dokazujú potencujúci efekt Cl-adenozínu, sa uskutočňuje pri koncentrácii ACH ΙΟΟηΜ. V týchto nízkych koncentráciách je i samotný ACH neúčinný; taktiež samotný Cl-adenozín je v testovanom rozsahu koncentrácií (3 nM až 3 μΜ) neúčinný. Pokusy s účinkom dávok na stanovenie potrebnej koncentrácie Cl-adenozínu na vyvolanie signálu Ca2+ v súčinnosti so 100 nM ACH, preukázali potencujúci efekt pri mikromolámych koncentráciách Cl-adenozínu. Prahová koncentrácia je v okolí 1 μΜ. Pretože Cl-adenozín svojou afinitou k receptorom zodpovedá endogénnemu adenozínu (Daly se sp., Lifc Sci., 28 (1981), str. 2083 až 2097), znamená to, že relevantne takéto zvýšenie extracelulámej hladiny adenozínu z fyziologického nanomolárneho rozsahu koncentrácií (Ballarin se sp., Acta Physiol. Scand., 142, (1991), str. 97 až 103) na 1 μΜ stačí na to, aby podprahové koncentrácie ACH prejavili účinok na muskulárny receptor.
Z týchto experimentálnych výsledkov vyplýva, že obmedzovanie cholinergnej funkcie pri demencii, sprostredkovávané muskarinovými receptormi, možno zlepšiť zvýšením extracelulámej koncentrácie adenozínu. To by mohlo byť možné súčasnou aplikáciou inhibítora príjmu adenozínu, ako je propentofylín (Parkinson se sp., Gem. Pharma col. 25 (1994), str. 1053 až 1058). Farmakologické zvýšenie extracelulámej koncentrácie adenozínu by mohlo dovoliť nižšie dávkovanie inhibítora ACHE, prípadne muskarínového agonistu receptorov, prípadne použitého pri kombinovanej terapii, čo by mohlo znižovať nebezpečie nežiaducich vedľajších účinkov.
Podstata vynálezu
Vynález sa teda týka kombinovaného preparátu obsahujúceho najmenej
1. jednu zlúčeninu, ktorá má inhibičný účinok na acetyl-cholíncstcrázu (takzvaný inhibítor ACHE) alebo má muskarínovú účinnosť,
2. jednu zlúčeninu, ktorá zvyšuje endogénnu extracelulámu hladinu adenozínu a
3. farmaceutický nosič, s potenciovaným stupňovaním muskarínového účinku pri neurodegeneratívnych ochoreniach, na súčasné, oddelené alebo časovo odstupňované užívanie.
Neurodegeneratívne ochorenia súvisia so zánikom cholinergných neurónov a s cholinergným deficitom (Toghi a kol., Neurosci. Lett. 177 (1994), str. 1939 až 1942). Tieto kombinované preparáty kompenzujú cholinergný deficit zosilnením prenosu signálov, ktorý je závislý od koncentrácie Ca2+, vyvolanej stimuláciou muskarínových receptorov. Takéto zosilnenie možno zrejme dosiahnuť kooperatívnymi účinkami adenozínu, a to pomocou kombinácie látok, ktoré zvyšujú extracelulámu koncentráciu adenozínu pomocou muskarínových agonistov receptorov alebo inhibítorov acetylcholínesterázy (inhibítorov ACHE).
Známe zlúčeniny s inhibičným účinkom na ACHE sú napríklad 9-amino-l,2,3,4-tetrahydroakridín (Tacrin, COGNEX) a l-benzyl-4-[(5,6-dimetoxy-l-indanon)-2-yl]-metylpiperidín (E 2020, ARICEPT). Známy muskarinový agonista je napríklad milamelín.
Zlúčeniny, zvyšujúce endogénnu extracelulámu hladinu adenozínu, sú napríklad xantínové deriváty všeobecného
a/alebo fyziologicky znášateľné soli zlúčeniny všeobecného vzorca (1), v ktorom
R1 znamená
a) oxoalkylovú skupinu s 3 až 8 atómami uhlíka, ktorej uhlíkový reťazec môže byť priamy alebo rozvetvený,
b) hydroxyalkylovú skupinu s 1 až 8 atómami uhlíka, ktorej uhlíkový reťazec môže byť priamy alebo rozvetvený, a ktorej hydroxylová skupina predstavuje primárnu, sekundárnu alebo terciárnu alkoholovú funkciu, alebo
R2 znamená
a) atóm vodíka alebo
b) alkylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, ktorej uhlíkový reťazec môže byť priamy alebo rozvetvený,
R3 znamená
a) atóm vodíka,
b) alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka, ktorej uhlíkový reťazec môže byť priamy alebo rozvetvený,
c) alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka, ktorej uhlíkový reťazec je prerušený atómom kyslíka, alebo
d) oxoalkylovú skupinu s 3 až 8 atómami uhlíka, ktorej uhlíkový reťazec môže byť priamy alebo rozvetvený.
Výhodne sa používajú zlúčeniny všeobecného vzorca (1), v ktorom R1 znamená
a) oxoalkylovú skupinu so 4 až 6 atómami uhlíka, ktorej uhlíkový reťazec je priamy, alebo
b) alkylovú skupinu s 3 až 6 atómami uhlíka,
R2 znamená alkylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka,
R3 znamená
a) alkylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, alebo
b) oxoalkylovú skupinu s 3 až 6 atómami uhlíka.
Obzvlášť výhodne sa používa l-(5-oxohexyl)-3-metyl-7-n-propylxantín (propentofylín).
Ďalšie zlúčeniny všeobecného vzorca (I) sú uvedené ako príklady: l-(5-hydroxy-5-mctylhexyl)-3-metylxantín, 7-(etoxymetyl)-l-(5-hydroxy-5-metylhexyl)-3-metylxantín, 1-(5-oxohexyl)-3,7-dimetylxantín, 7-(2-oxopropyl)-l ,3-di-n-butylxantín alebo l-hexyl-3,7-dimetylxantín.
Vhodné fyziologicky znášanlivé soli xantínových derivátov všeobecného vzorca (1) sú napríklad soli s alkalickými kovmi alebo s kovmi alkalických zemín alebo soli amónne, včítane solí s fyziologicky znášanlivými organickými amóniovými zásadami.
Príprava zlúčenín všeobecného vzorca (I) sa môže realizovať v štandardných podmienkach známym spôsobom (patentové spisy č. US 4,289.776, US 4,833.146, US 3,737.433).
Východiskové látky reakcií sú známe alebo sa môžu jednoducho pripravovať metódami známymi z literatúry.
Pod pojmom „potenciované“ sa rozumejú účinky, ktoré sú vyššie ako súčet jednotlivých účinkov.
Výhodné kombinované preparáty obsahujú propentofylín a l-benzyl-4-[(5,6-dimetoxy-l-indanon)-2-yl]-metylpiperidín.
Kombinovaný preparát podľa vynálezu je napríklad vhodný na liečenie demencie, predovšetkým senilnej demencie.
Kombinovaný preparát podľa vynálezu môže zahŕňať taktiež kombinované balenie alebo kompozície, v ktorých sú súčasti usporiadané vedľa seba a môžu sa teda podávať súčasne, oddelene alebo časovo odstupňované, jednému a tomu istému ľudskému alebo zvieraciemu telu.
Vynález sa ďalej týka spôsobu výroby kombinovaného preparátu, ktorý sa vyznačuje tým, že sa
1. zlúčenina, ktorá má inhibičný účinok na acetylcholínesterázu alebo má muskarínovú účinnosť,
2. zlúčenina, ktorá zvyšuje endogénnu extracelulámu hladinu adenozínu a
3. farmaceutický nosič obvyklým spôsobom spracujú na farmaceutickú aplikačnú formu.
Kombinovaný preparát podľa tohto vynálezu môže byť k dispozícii ako dávkovacia jednotka vo forme liekových foriem, ako kapsúl, vrátane mikrokapsúl, ktoré obvykle neobsahujú farmaceutické nosiče, tabliet, vrátane dražé a piluliek alebo čapíkov, pričom pri použití kapsúl možno materiál, z ktorého sú vyrobené, pokladať za nosič a obsah sa môže vyskytovať napríklad ako prášok, gél, emulzia, disperzia alebo roztok. Obzvlášť výhodné a jednoduché je však to, keď sa vyrábajú orálne (perorálne) formulácie s obidvoma účinnými komponentmi, t. j. 1. a 2., ktoré obsahujú vypočítané množstvo účinných látok spolu s akýmkoľvek požadovaným farmaceutickým nosičom. Taktiež možno používať zodpovedajúcu formuláciu (čapíky) na rektálnu terapiu. Práve tak je možná transdermálna aplikácia vo forme masti alebo krémov, parenterálne (intraperitoneálne, subkutánne, intravenózne, intraarterálne, intramuskuláme) injekcie alebo infúzie roztokov alebo perorálna aplikácia roztokov, ktoré obsahujú kombinácie podľa vynálezu. Maste, pasty, krémy a púdre môžu okrem účinných látok obsahovať obvyklé nosiče, napríklad živočíšne a rastlinné tuky, vosky, parafíny, škrob, tragant, deriváty celulózy, polyetylénglykoly, silikóny, bentonity, mastenec, oxid zinočnatý, mliečny cukor, kyselinu kremičitú, hydroxid hlinitý, kremičitan vápenatý a polyamidový prášok alebo zmesi týchto látok.
Tablety, pilulky alebo granuláty možno vyrábať obvyklými spôsobmi, ako je lisovanie, máčanie alebo metóda vírivého lôžka, alebo dražovanie v kotle, a obsahujú nosiče a ďalšie bežné pomocné látky, napríklad želatínu, agarózu, škrob (napríklad zemiakový, kukuričný alebo pšeničný škrob), celulózu, ako etylcelulózu, oxid kremičitý, rôzne cukry, ako mliečny cukor, uhličitan horečnatý a/alebo fosforečnany vápenaté. Dražovací roztok sa skladá obvykle z cukru a/alebo škrobového sirupu a väčšinou obsahuje ešte želatínu, arabskú gumu, polyvinylpyrolidún, syntetické estery celulózy, povrchovoaktívne látky, zmäkčovadlá, pigmenty a podobné prísady, ako to zodpovedá stavu techniky. Pri výrobe liekových foriem sú použiteľné akékoľvek obvyklé regulátory tekutosti, mazadlá alebo látky uľahčujúce kĺzanie, ako stearan horečnatý a látky uľahčujúce uvoľňovanie.
Výhodne majú prípravky podobu poťahovaných tabliet alebo viacvrstvových tabliet, pričom účinný komponent 2. môže byť v poťahu, prípadne v jadre, pripadne v niektorej vrstve, zatiaľ čo účinný komponent 1. môže byť v jadre, prípadne v poťahu, pripadne v inej vrstve. Účinné zložky sa môžu vyskytovať taktiež v retardovanej forme alebo môžu byť adsorbované na retardačný materiál, prípadne môžu byť v retardačnom materiáli obsiahnuté (napríklad ako je materiál na báze celulózy alebo polystyrénovej živice, napríklad hydroxyetylcelulózy). Oneskorené uvoľňovanie účinných látok možno dosiahnuť taktiež tak, žc sa príslušná časť, prípadne vrstva, vybaví obvyklými poťahmi, ktoré sa nerozpúšťajú v žalúdočných šťavách.
Dávkovanie, ktoré sa má použiť, závisí samozrejme od rôznych faktorov, ako je liečený živočích (t. j. človek alebo zviera), vek, hmotnosť, celkový zdravotný stav, závažnosť symptómov, liečené ochorenie, prípadné sprievodné ochorenia (ak sa vyskytnú), charakter paralelného liečenia inými liekmi alebo počet opakovaní liečenia. Dávky sa podávajú obvykle viackrát denne a výhodne raz až trikrát denne. Aplikované množstvá účinnej látky sa pritom riadia odporúčanou dennou dávkou samotnej účinnej látky a všeobecne sa v kombinovanom preparáte majú pohybovať v rozsahu od 10 % hmotn. až do 100 % hmotn. odporúčanej dennej dávky, výhodne od 20 % hmotn. až do 80 % hmotn. najmä 50 % hmotn.. Vhodná terapia s kombináciami podľa vynálezu spočíva teda napríklad v podávaní individuálnych dávok kombinovaných preparátov podľa vynálezu, ktoré obsahujú
1. 100 mg až 600 mg, výhodne od 200 mg do 400 mg propentofylinu, najmä 300 mg propentofylínu a
2. 2 mg až 20 mg, výhodne od 5 mg až do 10 mg 1-benzyl-4-[(5,6-dimetoxy-1 -indanon)-2-yl]-metylpiperidínu, pričom množstvo závisí prirodzene od počtu individuálnych dávok a od liečeného ochorenia a individuálna dávka sa môže skladať z niekoľkých súčasne podávaných dávkovacích jednotiek.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obr. 1 znázorňuje výsledky zobrazovacej fluorescencie, ako sú opísané na str. 10. Dávky 100 nM ACH a taktiež 1 pM Cl-adenozinu, použité jednotlivo, sú neúčinné. Ich kombinácia vedie k dramatickému zvýšeniu intracelulámej koncentrácie Ca2+ v astrocytoch. Pokusy, ktoré boli uskutočnené v médiu bez Ca2+, majú naproti tomu menší, alebo stále ešte masívny intracelulárny vzostup Ca2+ v astrocytoch, keď sa nasadí ACH a Cl-adenozín spoločne; to poukazuje, že intracelulárny Ca2+je mobilizovaný.
Obr. 2 znázorňuje pokus zobrazovacej fluorescencie, ako je opísaný na str. 10, pričom krivka dávka-účinok intracelulámeho zvýšenia Ca2+, vyvolaného ACH v astrocytoch pri súčasnom pôsobení 1 μΜ Cl-adenozínu, je značne posunutá doľava. Tu musí byť hladina ACH iba 100 nM, aby sa vyvolal rovnako veľký signál Ca2+, na ktorý by bola potrebná tridsaťkrát vyššia koncentrácia ACH (viac ako 3 μΜ) v neprítomnosti kooperujúceho účinku adenozínu.
Obr. 3 znázorňuje výsledky pokusu zobrazovacej fluorescencie, ako je opísaný na str. 10, kde sa stanovuje koncentrácia Cl-adenozínu v prítomnosti 100 nM ACH, ktorá je potrebná na mobilizáciu Ca2+.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Farmakologické príklady uskutočnenia
Kultúry astrocytov
Kultúry kortikálnych astrocytov pochádzajú z mozgovej kôry potkaních embryí (Wistar), vo veku 19 až 20 dní, ktoré boli matkám odobrané po usmrtení v éterovej narkóze. Po preparácii mozgu bolo kôrové tkanivo odsaté pipetou a uložené do modifikovaného média (Dulbecco EagleMedium, DEM) s prísadou 15 % fetálneho teľacieho séra. Po filtrácii šošovkovitým papierom bola bunková suspenzia naočkovaná na sklenené kultivačné doštičky (s vrstvou polyetylénimínu) a kultivovaná v kultivačných fľašiach pri dvojnásobnej výmene média za týždeň, za štandardných podmienok v termostate. Asi po 7 dňoch boli bunky pozbierané a po trypsinácii (aby sa eliminovali nervové bunky) opäť naočkované v koncentrácii 5 x 104 buniek/cm2 a kultivované počas ďalších 6 až 8 dní až do začiatku pokusov. Tieto kultúry pozostávali z viac ako 95 % astrocytov, ktoré mali pozitívnu reakciu na marker astrocytov GFAP (kyslý fibrilámy proteín glia-bunick).
Pokusy so zobrazovacou fluorescenciou na meranie intracelulárnej koncentrácie Ca2+ a jej experimentálne ovplyvnenie
Na začiatku pokusu (6 až 8 dní po druhom naočkovaní) boli kultivované astrocyty označené fluorescenčným markerom Ca2, a to inkubáciou s 5 μΜ fura-2-acetoxymetylesterom (Molecular Probes) v BHKR (Krebs-Hingerov roztok s hydrogenuhličitanom a Hepes-pufrom) pri 37 °C počas 1 h. Po označení boli kultivačné doštičky, ktoré obsahovali kultivované astrocyty, prenesené do meracej komory a inštalované na invertnom fluorescenčnom mikroskope (Zeiss Axiovert 100, Zeiss Fluar 40 x Objektív). Tu bola komora v priebehu trvania pokusu (spravidla 20 až 30 min.) kontinuálne perfundovaná BHKR s kontrolovanou teplotou (37 °C), pri rýchlosti prietoku
600 μΐ/min.. Meranie sa uskutočňovalo prístrojom na analýzu obrazu s možnosťou fluorescenčného vstupu (FUCAL-Fluoreszenz-Imaging-System; T.I.L.L. Photonics GmbH, Planegg), pri ktorom sa po iniciácii dvoma excitačnými vlnovými dĺžkami pri 340 a 380 nm merala emitovaná fluorescencia nad vlnovou dĺžkou 420 nm pomocou kamery CCD (CS 90, Theta Systém, Grôbenzell) a počítala zodpovedajúca koncentrácia Ca2+. Meranie sa uskutočňovalo v časových odstupoch po 12 s, a to vždy pred a v priebehu a po prídavku rôznych testovaných substancií k perfundovanému médiu. Zmeny intracelulámej koncentrácie Ca2+ boli stanovené na jednotlivých rovinách buniek, a to v rôznych, vždy adekvátne určených meracích okienkach. Rôzne testované substancie (acetylcholin alebo oxotremorín v prítomnosti alebo neprítomnosti Cl-adenozínu) boli pridávané spravidla počas 1 min. k perfúznemu médiu. Nakoľko vyvolané vzostupy intracelulámeho Ca2+ boli prechodné, boli v tabuľkách a krivkách výsledkov vykázané zmeny koncentrácii intracelulámeho Ca2+ vztiahnuté na práve odmerané vrcholové hodnoty.
Tabuľka 1
Zvýšenie intracelulámej koncentrácie Ca2+ (nM)
| acetylcholin (nMI | intracelulárna koncentrácia Ca2+ (nM) | |
| bez prídavku | + 1 μΜ Cl-adenozínu | |
| 3 | 14.1712.87 | |
| 10 | 23.5914.25 | |
| 100 | 2.1811.8 | 56.27 1 6.7 |
| 300 | 1.4±1.57 | 107.27 ±9.41 |
| 1 000 | 19.8313.24 | |
| 3 000 | 41.91 ±5.59 | 182.18 ±12.27 |
| 6 000 | 73.79 110.94 | |
| 10 000 | 126.79 1 12.07 | 220.99 ± 10.97 |
| 30 000 | 214.20110.38 | |
| 100 000 | 192.74116.61 | |
| 300 000 | 203.491 15.46 |
Priemerné hodnoty + SEM, počet odmeraných buniek n = 4 (pre každú meranú hodnotu)
Tabuľka 1 ukazuje, že krivka dávka-účinok intracelulámeho zvýšenia Ca2+, vyvolaného v astrocytoch pôsobením ACH a súčasným účinkom 1 μΜ Cl-adenozínu, je značne posunutá doľava. Tu musí hladina ACH predstavovať iba 100 nM, aby sa vyvolal rovnako veľký signál Ca2+, na ktorý by bola nutná tridsaťkrát vyššia koncentrácia ACH (viac ako 3 μΜ) v neprítomnosti kooperujúceho účinku adenozínu. Na tento kooperatívny efekt potrebné kritické zvýšenie adenozínu leží v takom rozsahu, ktoré by malo byť dosiahnuté terapiou blokátorom príjmu adenozínu propentoťylínom.
Tabuľka 2
Priemerné hodnoty + SEM, počet odmeraných buniek n = 45 (pre každú meranú hodnotu)
Tabuľka 2 ukazuje koncentrácie Cl-adenozínu potrebné na mobilizáciu Ca2+ v prítomnosti 100 nM ACH.
Tabuľka 3
Pôsobenie antagonistov nikotínového receptora acetylcholínu (hexametónia) a muskarínového receptora acetylcholínu (pFHHSiD) na zvýšenie intracelulámej koncentrácie Ca2+ pôsobením 100 nM acetylcholínu a 1 μΜ Cl-adenozínu v kultivovaných astrocytoch.
2. jednu zlúčeninu, ktorá zvyšuje endogénnu extracelulámu hladinu adenozinu vybranú zo skupiny obsahujúcej deriváty xantinu všeobecného vzorca (I)
| testovaná látka | zvýšenie Ca*+ (% kontroly) | |
| 10 μΜ Hexametónium | 90.7 ±6,26 | n=13 |
| 50 nM pFHHSiD | 53.9 ±7,2 | n-19 |
| 200 nM pFHHDSiD | 22 ±4.7 | n=5 |
pFHHSiD (p-fluóranalóg hydrochloridu hexahydro-sila-di-fenidolu); výrobca: RBI (Research Biochemicals International)
Priemerné hodnoty + SEM v percentách zvýšenia intracelulárneho Ca2+, ktoré sa dosiahlo v neprítomnosti antagonistov pôsobením 100 nM acetylcholínu a 1 μΜ Cl-adenozínu (kontrolná hodnota = 100 %). Ako kontrolná hodnota bolo odmerané intraceluláme zvýšenie Ca2+98,4 + 6,4 nM (n =125).
Tabuľka 3 ukazuje, že Cl-adenozínom potenciovaný efekt ACH predstavuje reprezentatívny efekt ACH, sprostredkovaný muskarínovými receptormi, ktorý je antagonizovaný blokátorom muskarínových receptorov, nie však blokátorom nikotínových receptorov.
Tabuľka 4
Pôsobenie Cl-adenozínu a oxotremorínu M, agonistami muskarínových receptorov acetylcholínu na intracelulámy obsah Ca2+ v kultivovaných kortikálnych astrocytoch
| agonísta receptoru aoer.yl ohol ínu | zvýšenie Ca^* (nM) |
| 100 nM Oxotremorín-M | 3,3 ± 5,7 |
| 100 nM Oxotremorín +· 1 μΜ Cl-adenozín | 93,3 ± 23,7 |
Priemerné hodnoty + SEM (n = 6)
Tabuľka 4 ukazuje, že Cl-adenozín taktiež potencuje signál Ca2+, vyvolaný agonistom muskarínových receptorov.
a/alebo fyziologicky prijateľné soli zlúčeniny všeobecného vzorca (I), kde R1 je
a) oxoalkylová skupina obsahujúca 3 až 8 atómov uhlíka, pričom uhlíkový reťazec môže byť priamy alebo rozvetvený, alebo
b) hydroxyalkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka, pričom uhlíkový reťazec môže byť priamy alebo rozvetvený, a ktorej hydroxylová skupina je primárna, sekundárna alebo terciáma alkoholová funkčná skupina,
R2 znamená
a) atóm vodíka alebo
b) alkylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, ktorej uhlíkový reťazec môže byť priamy alebo rozvetvený,
R3 znamená
a) atóm vodíka,
b) alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka, ktorej uhlíkový reťazec môže byť priamy alebo rozvetvený,
c) alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka, ktorej uhlíkový reťazec je prerušený atómom kyslíka, alebo
d) oxoalkylovú skupinu s 3 až 8 atómami uhlíka, ktorej uhlíkový reťazec môže byť priamy alebo rozvetvený, a
3. farmaceutický nosič, s potenciovaným stupňovaním muskarínového účinku pri neurodegeneratívnych ochoreniach na súčasné, oddelené alebo následné užívanie.
2. Kombinovaný preparát podľa nároku 1, v y z n a čujúci sa tým, že v ňom obsiahnuté zlúčeniny sú propentofylín a l-benzyl-4-[(5,6-dimetoxy-l-indanon)-2-yl]-metylpiperidín.
3. Použitie kombinovaného preparátu podľa nárokov 1 alebo 2 na výrobu liečiva na liečenie neurodegeneratívnych ochorení, najmä senilnej demencie.
výkresy
Priemyselná využiteľnosť
Kombinovaný preparát podľa tohto vynálezu, obsahujúci dve účinné zložky a bežný farmaceutický nosič, možno štandardnou farmaceutickou technológiou spracovať do rôznych liekových foriem, ktoré sú určené na podávanie pri liečení neurodegeneratívnych ochorení, napríklad senilnej demencie.
Claims (1)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Kombinovaný preparát obsahujúci najmenej:1. jednu zlúčeninu, ktorá má inhibičný účinok na acetylcholínesterázu alebo má muskarínovú účinnosť, vybranú zo skupiny osahujúcej tetrahydroaminoakridín, 1-benzyl-4-[(5,6-dimetoxy-1 -indanon)-2-yl]-metylpiperidín a milamelín,
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19707655A DE19707655A1 (de) | 1997-02-26 | 1997-02-26 | Kombinationspräparat zur Anwendung bei Demenz |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK24098A3 SK24098A3 (en) | 1998-09-09 |
| SK284925B6 true SK284925B6 (sk) | 2006-02-02 |
Family
ID=7821517
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK240-98A SK284925B6 (sk) | 1997-02-26 | 1998-02-24 | Kombinovaný preparát a jeho použitie pri liečení neurodegeneratívnych ochorení |
Country Status (30)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6037347A (sk) |
| EP (1) | EP0867192B1 (sk) |
| JP (1) | JP4374440B2 (sk) |
| KR (1) | KR100517186B1 (sk) |
| CN (1) | CN100363005C (sk) |
| AR (1) | AR011860A1 (sk) |
| AT (1) | ATE295738T1 (sk) |
| AU (1) | AU749278C (sk) |
| BR (1) | BR9800766A (sk) |
| CA (1) | CA2230350C (sk) |
| CZ (1) | CZ298367B6 (sk) |
| DE (2) | DE19707655A1 (sk) |
| DK (1) | DK0867192T3 (sk) |
| EE (1) | EE03387B1 (sk) |
| ES (1) | ES2242243T3 (sk) |
| HR (1) | HRP980097B1 (sk) |
| HU (1) | HUP9800396A3 (sk) |
| ID (1) | ID19941A (sk) |
| IL (1) | IL123453A (sk) |
| MY (1) | MY120530A (sk) |
| NO (1) | NO327200B1 (sk) |
| NZ (1) | NZ329839A (sk) |
| PL (1) | PL191576B1 (sk) |
| PT (1) | PT867192E (sk) |
| RU (1) | RU2194508C2 (sk) |
| SI (1) | SI0867192T1 (sk) |
| SK (1) | SK284925B6 (sk) |
| TR (1) | TR199800302A2 (sk) |
| TW (1) | TW590772B (sk) |
| ZA (1) | ZA981561B (sk) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2237163T3 (es) * | 1998-10-01 | 2005-07-16 | Novartis Ag | Nuevas formulaciones orales de revastigmina de liberacion controlada. |
| US20040110776A1 (en) * | 2002-02-22 | 2004-06-10 | Iok-Hou Pang | Use of propentofylline to control intraocular pressure |
| WO2004028634A1 (en) * | 2002-09-25 | 2004-04-08 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Method and composition for treating alzheimer's disease and dementias of vascular origin |
| US20060280789A1 (en) * | 2004-12-27 | 2006-12-14 | Eisai Research Institute | Sustained release formulations |
| US20070129402A1 (en) * | 2004-12-27 | 2007-06-07 | Eisai Research Institute | Sustained release formulations |
| MX2007007836A (es) | 2004-12-27 | 2007-08-20 | Eisai R&D Man Co Ltd | Metodo para estabilizar un farmaco anti-demencia. |
| US20090208579A1 (en) * | 2004-12-27 | 2009-08-20 | Eisai R & D Management Co., Ltd. | Matrix Type Sustained-Release Preparation Containing Basic Drug or Salt Thereof, and Method for Manufacturing the Same |
| WO2006118265A1 (ja) * | 2005-04-28 | 2006-11-09 | Eisai R & D Management Co., Ltd. | 抗痴呆薬を含有する組成物 |
| EP4019018A1 (en) | 2015-09-11 | 2022-06-29 | Chase Pharmaceuticals Corporation | Muscarinic combination and its use for combating hypocholinergic disorders of the central nervous system |
| RU2616247C1 (ru) * | 2016-03-28 | 2017-04-13 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Северо-Осетинский государственный университет имени Коста Левановича Хетагурова" (СОГУ) | Твердая лекарственная форма, обладающая холинопозитивным действием, на основе 9-бутиламино-3,3-диметил-1,2,4-тригидроакридина |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3737433A (en) * | 1964-09-05 | 1973-06-05 | Albert Ag Chem Werke | Certain oxoalkyldimethylxanthines |
| US3621096A (en) * | 1969-04-03 | 1971-11-16 | Univ North Carolina | Antidepressant method and composition for same comprising a tricyclic antidepressant and a thyroid hormone |
| DE2330742C2 (de) * | 1973-06-16 | 1982-07-29 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | 1-(Oxoalkyl)-3-methyl-7-alkylxanthine, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende Arzneimittel |
| DE2856393C2 (de) * | 1978-12-27 | 1983-04-28 | Merz + Co GmbH & Co, 6000 Frankfurt | Arzneimittel zur Behandlung von Morbus Parkinson |
| JPH062675B2 (ja) * | 1985-04-05 | 1994-01-12 | ヘキストジヤパン株式会社 | 記憶障害治療剤 |
| DE3525801A1 (de) * | 1985-07-19 | 1987-01-22 | Hoechst Ag | Tertiaere hydroxyalkylxanthine, verfahren zu ihrer herstellung, die sie enthaltenden arzneimittel und ihre verwendung |
| IL81610A (en) * | 1986-02-27 | 1990-12-23 | Roussel Uclaf | Derivatives of 1,2,5,6-tetrahydropyridin-3-carboxaldehyde oxime,their preparation and pharmaceutical compositions containing them |
| GB8621870D0 (en) * | 1986-09-11 | 1986-10-15 | Beecham Group Plc | Active compounds |
| FI95572C (fi) * | 1987-06-22 | 1996-02-26 | Eisai Co Ltd | Menetelmä lääkeaineena käyttökelpoisen piperidiinijohdannaisten tai sen farmaseuttisen suolan valmistamiseksi |
| IL87861A0 (en) * | 1987-10-05 | 1989-03-31 | Pfizer | 4-aminopyridine derivatives |
| WO1989002739A1 (en) * | 1987-10-05 | 1989-04-06 | Pfizer Inc. | 4-aminopyridine derivatives |
| DE3817955A1 (de) * | 1988-05-27 | 1989-11-30 | Hoechst Ag | Tnf-inhibitor enthaltendes arzneimittel |
| JPH05506842A (ja) * | 1989-09-15 | 1993-10-07 | ジェンシア・ファーマシュウティカルズ・インコーポレイテッド | 神経変性状態の処置方法 |
| DE4236331A1 (de) * | 1992-10-28 | 1994-05-05 | Boehringer Ingelheim Kg | Synergistische Kombination |
| US5783584A (en) * | 1995-12-11 | 1998-07-21 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | THA analogs useful as cholinesterase inhibitors |
| GB9612710D0 (en) * | 1996-06-18 | 1996-08-21 | Pfizer Ltd | Method of treatment |
-
1997
- 1997-02-26 DE DE19707655A patent/DE19707655A1/de not_active Withdrawn
-
1998
- 1998-02-16 ES ES98102620T patent/ES2242243T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-02-16 DE DE59812801T patent/DE59812801D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-02-16 PT PT98102620T patent/PT867192E/pt unknown
- 1998-02-16 ID IDP980209A patent/ID19941A/id unknown
- 1998-02-16 EP EP98102620A patent/EP0867192B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-02-16 DK DK98102620T patent/DK0867192T3/da active
- 1998-02-16 AT AT98102620T patent/ATE295738T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-02-16 SI SI9830775T patent/SI0867192T1/xx unknown
- 1998-02-23 EE EE9800075A patent/EE03387B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-02-24 SK SK240-98A patent/SK284925B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-02-24 TW TW087102577A patent/TW590772B/zh not_active IP Right Cessation
- 1998-02-24 AU AU56273/98A patent/AU749278C/en not_active Ceased
- 1998-02-24 TR TR1998/00302A patent/TR199800302A2/xx unknown
- 1998-02-24 CA CA002230350A patent/CA2230350C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-02-24 RU RU98103712/14A patent/RU2194508C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-02-24 NZ NZ329839A patent/NZ329839A/xx unknown
- 1998-02-24 CZ CZ0054098A patent/CZ298367B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-02-24 AR ARP980100810A patent/AR011860A1/es not_active Application Discontinuation
- 1998-02-25 MY MYPI98000834A patent/MY120530A/en unknown
- 1998-02-25 HU HU9800396A patent/HUP9800396A3/hu unknown
- 1998-02-25 BR BR9800766-1A patent/BR9800766A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-02-25 ZA ZA981561A patent/ZA981561B/xx unknown
- 1998-02-25 IL IL12345398A patent/IL123453A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-02-25 CN CNB981053289A patent/CN100363005C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-02-25 US US09/030,207 patent/US6037347A/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-02-25 HR HR980097A patent/HRP980097B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-02-25 NO NO19980786A patent/NO327200B1/no not_active IP Right Cessation
- 1998-02-25 JP JP04305898A patent/JP4374440B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-02-26 KR KR10-1998-0006051A patent/KR100517186B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-02-26 PL PL325074A patent/PL191576B1/pl not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE60211343T2 (de) | Derivate von triazolyl-imidazopyridine und von triazolylpurine als ligande des adenosine a2a rezeptoren und ihre verwendung als medicamente | |
| US20150352107A1 (en) | Alpha7 neuronal nicotinic receptor ligand and antipsychotic compositions | |
| HRP960372A2 (en) | (1s, 2s)-1-(4-hydroxyphenyl)-2-(4-hydroxy-4-phenylpiperidin-1-yl)-1-propanolmethanesulfonate tridydrate | |
| CZ6498A3 (cs) | Použití rapamycinu a jeho derivátů v kombinaci s antagonistou NMDA a/nebo AMPA pro výrobu farmaceutických prostředků | |
| EP3541389A1 (en) | Combination of an egfr t790m inhibitor and a cdk inhibitor for the treatment of non-small cell lung cancer | |
| SK284925B6 (sk) | Kombinovaný preparát a jeho použitie pri liečení neurodegeneratívnych ochorení | |
| CA2845039A1 (en) | Combinations of a 5-ht4 receptor agonist and a pde4 inhibitor for use in therapy | |
| AU2012321345A1 (en) | Application of 5-HT6 receptor antagonists for the alleviation of cognitive deficits of down syndrome | |
| CA3148939A1 (en) | Compositions and methods for the treatment of estrogen-dependent disorders | |
| CN101155587A (zh) | 毒蕈碱受体调节剂 | |
| CN115515590A (zh) | 马赛替尼用于治疗多发性硬化患者亚群 | |
| CZ298398A3 (cs) | Farmaceutický přípravek | |
| JPH09221423A (ja) | 薬物依存形成抑制剤 | |
| CA2168265C (en) | Antidepressant | |
| MXPA98001515A (en) | Prepared combination for application in the demen | |
| WO2014165701A1 (en) | Application of 5-ht6 receptor antagonists for the alleviation of cognitive deficits of down syndrome | |
| CA2416706C (en) | Dementia remedies containing 2-aryl-8-oxodihydropurine derivatives as the active ingredient | |
| WO2000016779A1 (en) | Antiviral combinations comprising lamivudine and abacavir | |
| CZ7698A3 (cs) | Nové spiro [2H-1-benzopyran-2,4´-piperidin] -4 (3H)-onové deriváty, jejich adiční soli s kyselinami a farmaceutické přípravky s jejich obsahem | |
| EP0475844B1 (fr) | Utilisation de N-(1-hexahydroazepinylalkyl) acétamides dans la préparation des médicaments destinés au traitement des troubles de la transmission cholinergique | |
| Grünwald et al. | The Effect of Calcium Antagonists in Experimental Atherosclerosis, the Underlying Cause of Heart and Cerebral Vascular Diseases | |
| KR20110083324A (ko) | 비타민 ｃ를 포함하는 태아의 신경세포 보호용 조성물 | |
| JP2010540640A (ja) | ムスカリン作用性レセプターのモジュレーター |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees |
Effective date: 20100224 |