SK14993A3 - Immunological method to determine hbaic - Google Patents
Immunological method to determine hbaic Download PDFInfo
- Publication number
- SK14993A3 SK14993A3 SK14993A SK14993A SK14993A3 SK 14993 A3 SK14993 A3 SK 14993A3 SK 14993 A SK14993 A SK 14993A SK 14993 A SK14993 A SK 14993A SK 14993 A3 SK14993 A3 SK 14993A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- hemoglobin
- derivative
- sample
- immunological
- agent
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
- G01N33/721—Haemoglobin
- G01N33/723—Glycosylated haemoglobin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/962—Prevention or removal of interfering materials or reactants or other treatment to enhance results, e.g. determining or preventing nonspecific binding
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/815—Test for named compound or class of compounds
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
V závislosti na výške hladiny cukru v krvi sa zlučuje malá časť glukózy absorbovaná erytrocytmi pri neenzymatickej reakcii s N-terminálnym zvyškom valínu fVreťazca globínu. Reakcia na stabilný glykozylovaný derivát hemoglobínu HbA^ c / forma ketoamínu/ prebieha v dvoch stupňoch. Po prvé sa glukóza viaže rýchlou reverzibilnou adíciou na hemoglobín za vytvorenia labilného glykozylovaného derivátu hemoglobínu /Schiffova báza/. Poipocou ireverzibilnej, pomalej adičnej reakcie Adícia Amadoriho / sa vytvorí stabilná forma. Podiel HbA-, na celkovom hemoglobíne je u látkovej výmeny zdravého jedinca 3 až 6 %· U pacientov s diabetom sa môže podiel HbAi zvýšiť úmerne k výške koncentrácie glukózy v krvi počas štyroch až dvanástich týždňov až na hodnotu 12 %, v jednotlivých prípadoch dokonca až na 20 %· Stanovenie relatívneho podielu HbA^ c v celkovom obsahu hemoglobínu sa ponúka predovšetkým ako integrálny parameter na priebežnú kontrolu hladiny cukru v krvi.
Na stanovenie hemoglobínu glykozylovaného boli popísané mnohé metódy. Konvenčné spôsoby sú založené na technikách ako je elektroforáza, izoelektrická fokusácia a kolorimetrické stanovenia ako aj ión omeničová chromatografia a afinitná chromatografia. Potom čo bola popísaná výroba špecifických polyklonálnych antilátok /US patent 4,237·533/ a monoklonálnych antilátok. /EP-A-0 316 306, EP-A-0 201 187/, bol vyvinutý rad imunologických metód dôkazu HbA-, _· i c
EP-A-0 185 370 popisuje imunologickú metódu stanovenia proteínov, okrem iného HbA^ . pri tejto metóde sa používajú monoklonálne antilátky, ktoré identifikujú špecificky lineárne peptidoepitopy. Na uvolnenie epitopov sa predpisuje denaturácia, okrem iného chaotropnými činidlami. Pri teplotách pod 37 °C je potrebná pre tento krok denaturácia v dĺžke trvania jednej až viacerých hodín, pri teplotách nad 50 °C prebehne tento krok za jednu minútu.
K súčasnému stanoveniu celkového obsahu hemoglobínu vo vzo rke sa nepristúpilo.
V EP-A-0 201 187 ja popísaná metóda stanovenia HbA^ pri ktorej sa používa monoklonálna antilátka proti HbA^ c, ktoré bola získaná imunizáciou natívnym humánnym HbA^ c· DÔkaz sa uskutočňuje pri teplotách 4 až 37 °0, pričom každý inkubačný krok môže trval až 72, hodín. Stanovenie celkového hemoglobínu a HbA^ c v tej istej vzorke sa nepopisujú.
V EP-A-0 3l5 364 J® popísaná metóda stanovenia relatívneho obsahu HbAj vo. vzorke krvi. Hemoglobín sa denaturuje tiokyanátom a s pomocou Saläieho oxidačného činidla, výhodne ferikyanidu, sa prevedie na. met-hemoglobín. V takto upravenej vzorke krvi sa môže stanovil celkový obsah hemoglobínu ako aj obsah HbA^ θ.
V. EP-A-0 407 860 je popísané pre lýzu erytrocytov a denaturáciu derivátov hemoglobínu použitie litných solí, výhodne lítiumtiokyanátu. Obsah HbA^ c sá môže stanovil imunologický. Na dôkaz celkového hemoglobínu sa musí pridal SalSie oxidačné činidlo, výhodne ferikyanid, ktoré prevedie hemoglobín na met-hemoglobín.
Nedostatok obidvoch týchto posledných z menovaných metód spočíva v tom, že aa na prevedenie hemoglobínu na kyano-met-hemoglobín musí pridával kyanid. V Clin. Biochem. 15 /1982/ 83 až 88, sa popisuje náhrada kyanidu na dôkaz celkového hemoglobínu natriumlaurylsulfát /SLS/.
Kie je tu ale uvedený žiadny dôkaz, že sa SLS hodí na predbežnú úpravu vzorky pri imunologickom stanovení derivátov hemoglobínu, špeciálne HbA^ .
Taktiež v EP-A-0 184 787 sa popisuje činidlo na stanovenie celkového hemoglobínu vo vzorke krvi, ktoré neobsahuje kyanid. Činidlom je ión ový, povrchovo aktívny prostriedok s pH najmenej 11,3» výhodne s vyšším ako 13,7. Imunologické stanovenie derivátov hemoglobínu nie je popísané. Velmi vysoká hodnota pH by bola pri imunologickom stanovení derivátov glykolizovaného hemoglobínu nevýhodná, pretože vo velmi alkalickom prostredí môže dojsl k odštiepeniu podielu cukru z hemoglobínu. V prípade značenia použitých antilátok enzýmom, by mohla byl enzymatická reakcia inhibovaná, pretože optimálna hodnota pH najčastejšie používaných enzýmov sa pohybuje okolo pH 6 až 8. Takisto imunologická reakcia môže byl inhibovaná príliš vysokou hodnotou pH.
Preto naäalej trvala potreba imunologickéj dôkaznej metódy na stanovenie derivátov hemoglobínu v krvi, pri kto rej je možné urobil hemolýzu pri nízkych teplotách, ako
- 4 '-W<
•r:<
w ipíSi i
•ÍSP'J.’^ w
ý-„x ý
.ä'. ,’!
; ·' ';-1
,.· c* ·;:·4· · C-W :' Λ1· :.
napríklad pri teplote miestnosti, nepotrebuje žiadnu príliš dlhú dobu inkubácie na predúpravu vzorkov a môže sa vyhnúť činidlám, ktoré sú škodlivé pre životné prostredie, ako napríklad kyanidu, okrem toho by malo byť možné súčasne stanoviť celkový hemoglobín v tom istom hemolyzáte, aby bolo možné stanoviť podiel derivátu hemoglobínu v krvi u obsahu celkového hemoglobínu v krvi bez nutnosti použiť člalšiu vzorku hemoglobínu. Úlohou predloženého vynálezu bolo pripraviť takú imunologickú dôkaznú metódu na stanovenie derivátu hemoglobínu v krvi^
Podstata vynálezu
Úloha bola vyriešená vynálezom, ktorý je bližšie charakterizovaný v patentových nárokoch, V podstate je táto úloha vyriešená imunologickou dôkaznou metódou stanovenia obsahu derivátu hemoglobínu vo vzorke krvi, ktorá je charakterizovaná tým, že sa vzorka spracuje s hemolyzačným činidlom, ktoré obsahuje ión ový detergent s pH 5 až 9,5, a v hemolyzovanej vzorke krvi sa stanoví imunologický derivát hemoglobínu.
Calším predmetom vynálezu je sposob stanovenia obsahu derivátu hemoglobínu a celkového hemoglobínu vo vzorke krvi, ktorý spočíva v tom, že sa vzorka krvi spracuje s hemolyzačným činidlom, ktoré obsahuje ión ový detergent s pH 5,0 až 9,5, v hemolyzovanej vzorke sa stanoví fotometrický celkový obsah hemoglobínu a v hemolyzovanej vzorke sa stanoví imunologický derivát hemoglobínu.
Calším predmetom vynálezu je hemolyzačné činidlo, ktoré obsahuje ión ový detergent s pH 5 až 9,5, jeho použitie na predúpravu vzorky krvi na imunologické stanovenie derivátu hemoglobínu a, v prípade, že sa to vyžaduje, na stanovenie obsahu celkového hemoglobínu, ako aj testovacia
>%<· ľ’ Λ . ύ'·'
'/4 súprava, ktorá obsahuje hemolyzačné činidlo.
pôsobením hemolyzačného činidla dôjde k lýze erytrocytov obsiahnutých vo vzorke krvi a hemoglobín sa prevedie na Špecifický ..chromofór hemoglobínu. Vznikajúci chromofór hemoglobínu sa môže s ohladom na svoju charakteristickú absorpciu použil na stanovenie celkového obsahu hemoglobínu a pomocou imunologickej reakcie Špecifického epitopu na stanovenie derivátu hemoglobínu. Pri imunologickej dôkaznej metóde sa môžu použil v princípe vSetky bežné metódy, ako napríklad sendvičové testy, IEMAtesty, precipitačné a aglutinačné testy, ako aj testy na princípe FPIA a CEDIA. Sú možné ako mokré tak aj suché testy.
V hemolyzaČnom činidle sa môžu používal všetky iónové detergenty, anión ové detergenty, s výhodou natriumdodecylsulfát /SDS/, natriumdioktylsulfosukcinát /DONS/, katión ové detergenty, výhodne tetradecyltrimetylamóniumbromid /TTAB/ alebo cetyltrimetylamóniumbromid /CTAB/ alebo obojaké ion ové detergenty, výhodne obojaký Zwittergent 314» Hemolyzačné činidlo sa pridáva do vzorky krvi v množstvách, ktoré vystačia k lýze erytrocytov, Šalej na to, aby previedlo hemoglobín na špecifický chromofór hemoglobínu a uvolnilo epitopy derivátu hemoglobínu. Hemolyzačné činidlo sa pridáva do vzorky krvi v pomere 1 · 10 až 1 : 400 takže koncentrácia ión ového detergentu vo vznikajúcej zmesi je 0,01 až 5 % hmôt., výhodne 0,5 až 1,5 % hmôt. Hodnota pH hemolyzačného činidla sa pohybuje v mierne kyslej až slabo alkalickej oblasti. S výhodou sa pH pohybuje medzi 5,0 až 9,5, výhodne najmä okolo 7,4· Na nastavenie hodnoty pH v hemolyzaČnom činidle sa môžu používal všetky bežné
pufre. S výhodou sa používajú pufre HEPES, MES, TRIS alebo fosfátový pufer.
Hemolyzačné činidlo môže obsahoval ďalšie reagencie, napríklad tie ktoré slúžia na odstránenie rušenia imunologickej reakcie, oxidácie hemoglobínu, na ostranenie zákalu, na stabilizáciu alebo konzerváciu. Niektoré detergenty, okrem iného SDS, môžu rušil imunologické reakcie. Vo vzácnych prípadoch sa po prídavku hemolyzačného činidla objavujú zákaly a vyvločkovanie, ktoré majú rôzne príčiny. Pri nízkych teplotách je napríklad SDS lažko rozpustná. S prekvapením sa ukázalo, že sa môže týmto rušeniam zabránil prídavkom neión ovaného detergentu, výhodné sú polyoxyetylénétery ako napríklad Brij 35 a 58 alebo Triton XlOO ako aj polyoxyetylénestery, ako napríklad Myrj 52 a 59 alebo Tween 20. Normálne sa neión ový detergent pridáva k hemolyzačnému činidlu v množstve, po ktorého prídavku k vzorke je koncentrácia vo vznikajúcej zmesi 0,01 až 5 % hmôt., výhodne 0,1 až 0,5 % hmôt.
fiál e j môže byl v hemolyzačnom činidle obsiahnutý bežný oxidačný prostriedok ferikyanid, napríklad hexakyanoželezitan. Spolu s katión ovýrni detergentmi môže však dôjsl k vypadnutiu, fialej je nevyhnutná pri použití ferikyanidu ochrana pred svetlom. S prekvapením sa ukázalo, že pri prídavku konzervačných činidiel, ktorých mechanizmus účinku spočíva v oxidačnom ataku tiolových skupín, ako napríklad metylizotiazolov alebo Bronidoxu^'K, sa dá úplne upustil od prídavku ferikyanidu. Spolu s katiónovými detergentmi vedú tieto konzervačné činidlá k hnedo zeleno zfarbenému chromofóru hemoglobínu, ktorého absorpčné maximum sa pohybuje okolo 570 nm. Zvláštna výhoda spočíva v tom, že sa po prvé prídavkom tohto konzervačného činidla
- 7 dosiahne aj prevedenia hemoglob’ínu na špecifický chromofór hemoglobínu, aj dobrá konzervácia hemolyzačného činidla a po druhé koncový bod hemolýzy sa dá dobre identifikoval farebným prechodom od červenej do hnedozelenej farby. Konzervačné činidlá sa v hemolyzačnom činidle používajú v koncentrácii 0,005 až 0,2 % hmôt», výhodne 0,01 až 0,02 % hmôt.
Hemolýzy, prevedenie hemoglobínu na špecifický chromofór hemoglobínu ako aj predúprava vzorky na dokaz derivátu hemoglobínu pomocou hemolyzačného činidla sa ukončí pri nízkych teplotách, s výhodou 4 až 37 °C a výhodne pri teplote miestnosti /20 °C/ po 1 až 10 minútach. V najčastejších prípadoch postačí inkubácia 2 minúty na dokonalú predúpravu vzorky.
«t
Takto pripravená vzorky krvi sa potom zriedi reakčným pufrom v pomere 1 · 10 až 1 ; 100. Ako pufre sa môžu používal všetky bežné pufre, ktoré nerušia imunologickú reakciu. S výhodou sa používa MES alebo HEPES pufer v koncentráciách 10 až 200 mmolov/1. Hodnota pH reakčného pufru je 5,0 až 8,0. Ak imunologický dokaz obsahuje enzymatickú reakciu, bude mal reakčný pufer výhodne hodnotu pH, ktorá od povedá optimálnemu pH enzymatickej reakcie. Reakčný pufer môže úalej už obsahoval činidlá nevyhnutné pre dokaz derivátu hemoglobínu, predovšetkým špecifických väzbových partnerov, výhodne vysoko špecifické polyklonálne alebo monoklonálne antilátky.
Taktiež sa tu s prekvapením ukázalo·, že prídavok äalšieho detergentu, výhodne neiónových detergentov ako Brij alebo Myrj, je výhodný, na vytvorenie optimálnych podmienok ako na prípravu vzoriek na dôkaz derivátu hemoglobínu, ako glykozylovaného hemoglobínu, tak aj pre imunologickú reakciu a na to, aby sa zabránilo poruchám. Uetergent sa k reakčnému pufru pridáva v množstve, ktoré vo vznikajúcej zmesi odpovedá koncentrácii 0,01 až 5 % hmôt., výhodne U, p % hmôt..
Ak sa v rovnakej vzorke má okrem stanovenia derivátu hemoglobínu určil celkový obsah hemoglobínu, meria sa s výhodou po prídavku reakčného pufru na zistenie obsahu celkového hemoglobínu absorpcia pri vlnových dĺžkach 400 až 650 nm, výhodne 500 až 650 a najvýhodnejšie pri 546 až 570 nm. V prípade testu robeného za mokra sa extinicia stanoví pri týchto vlnových dĺžkach fotometrický v kyvete, v prípade testu robeného za sucha sa môže absorpcia určoval fotometrický meraním podlá spätného odrazu po nanesení rezultujúcej zmesi na testovací nosič.
Takýto testovací nosič na stanovenie obsahu celkového hemoglobínu sa môže konštruoval velmi jednoducho, pretože nemusí obsahoval žiadne chemikálie. Pre jednoduché požiadavky vystačí nasiakavé rúno, ktoré sa nanesie na transparentnú fóliu nosiča, pre účely lepšej manipulácie a vyhodnotenia testovacieho prúžku môžu byt obsiahnuté äalšie nové vrstvy, napríklad transportné rúno alebo dávkovacie rúno.
Obsah celkového hemoglobínu a obsah derivátu hemoglobínu sa môžu určoval v rozdielnych dávkach vzorky po prídavku hemolyzačného činidla, V tomto prípade sa stanoví v časti zmesi pozostávajúcej zo vzorky a hemolyzačného činidla,
V prípade, že je to nutné po odpovedajúcom zriedení, fotometrický obsah celkového hemoglobínu. K druhej časti zmesi sa pridá reakčný pufer a potom sa stanoví imunologický derivát hemoglobínu.
Na stanovenie derivátu hemoglobínu, ako HbA^ c> sú v princípe vhodné všetky bežné imunologické metódy. Ako bolo
- 9 vyššie popísané, môžu sa vyrobil polyklonálne a monoklonálne antilátky proti dérivátom hemoglobínu, výhodne HbA^ c, ktoré viažu špecificky charakteristické epitopy derivátu hemoglobínu /US 4,247-533, EP-A-0 3*6 306 a EP-A-0 201 187/.
pri variante imunologického dôkazu spôsobu značenia, ako i metóde detekcie merných signálov ide o metódy známe zo stavu techniky. Ako príklad sú vhodné sendvičové testy so značením enzýmu /ELISA/, vedenie testu IEMA, tes ty RIAS, precipitačné a aglutinačné testy, ako aj homogénny immunoassay ako technológie CEDIA®, EMIT alebo FPIA.
Pri mokrom teste sa imunologické stanovenie derivátu hemoglobínu robí s výhodou podlá princípu TINIA, pretože tu nie je nutný žiadny krok separácie. Vzorka sa doplní antilátkou špecifickou pre analyt a polyhapténom ako aglutinačným činidlom. Polyhaptén pozostáva z nosného materiálu, napríklad albumínu, dextránu alebo IgG, na ktorý je nakopulovaných viacej epitopov, na ktoré sa môžu špecifické antilátky. Vzhladom k tomu, že sa precipitácia antilátok môže uskutočňoval iba cez polyhaptén, získa sa pri ubúdajúcom obsahu analytu vo vzorke zväčšujúci sa zákal, ktorý sa moče preukázal nefelometricky alebo turbidimetricky.
S výhodou je derivát hemoglobínu so špecifickou antilátkou obsiahnutý už v reakčnom pufri. Po prídavku reakčného pufru sa môže vo vznikajúcej zmesi stanovil fotometrický obsah celkového hemoglobínu. Precipitačná reakcia sa naštartuje prídavkom roztoku, ktorý obsahuje polyhaptén.
Po krátkej inkubačnej dobe, pričom 5 minút je najčastejšie postačujúcich, môže sa meral vznikajúci zákal pri vhodnej vlnovej dĺžke, výhodne pri vlnových dĺžkach 340 až 600 nm,
- 10 predovšetkým potom výhodne pri 340 nm, a z nameraných výsledkov sa môže stanovil koncentrácia derivátu hemoglobínu. Vzhladom k tomu, žé meranie celkového hemoglobínu prebieha pri vlnových dĺžkach 500 až 650 nm, výhodne pri 546 alebo 570 nm, nerušia sa obidve merania a môžu sa robil za sebou v jednej kyvete a v rovnakom reakčnom roztoku.
Pri výrobe polyhapténového roztoku, to znamená tekutej galenickej forme polyhapténu alebo glykozylovaného proteínu poprípade peptidu, sa ukázalo, že toto nie je pri obvykle používanom fosfátovom pufri pri pH 7,0 až 7,5 stabilné a pri dlhšom skladovaní môže dochádzal k rozkladu glykoproteínu. Takéto nestability glykozylovaných proteínov vo fosfátovom pufri sú napríklad známe z Ahmed et al., J. Biol. Chem. 261 /1986/, 4889-4894· Použitím MES pufru v koncentrácii 5 až 200 mmolov/1, výhodne 20 až 50 mmolov/1 a pri pH 5>0 až 8,0, výhodne pri hodnote pH medzi 6,0 až 6,5 a súčasnom prídavku EDTA alebo ekvivalentného komplexotvorného činidla vo výhodnej koncentrácii 1 až 50 mmolov/1, najvýhodnejšie potom 0,1 až 20 mmolov/1, bola dosiahnutá stabilizácia glykozylovaných peptidov, proteínov a polyhapténov. prídavok albumínu hovädzieho séra /PSA/ vo výhodnej koncentrácii 0,1 až 2 %, najvýhodnejšie potom 1 %, poskytlo Salší pozitívny účinok na stabilitu polyhapténového roztoku. Tento polyhapténov.ý roztok sa môže skladoval dlhšie ako 12 mesiacov pri 4 °C, bez toho aby bolo možné pozoroval nestability polyhapténu poprípade glykozylovaných proteínov alebo peptidov, ktoré by stáli za zmienku. Pri stresovom zalažení 3 týždňoch pri 35 °C sa objavujú iba úbytky signálu 15 až 20 % pôvodného extinkčného signálu. ,
- 11 Ako suchý test sa robí imunologické stanovenie derivátu hemoglobínu výhodne podlá princípu testu IEMA.Po prídavku reakčného pufru k hemolyzovanej vzorke krvi sa pridá špecifická antilátka značená enzýmom. Pri výhodnej realizácii je antilátka už obsiahnutá v reakčnom pufri. Po krátkej inkubácii sa zmes nanesie na nosič testu. Na matrici epitopu, to znamená oblasti nosiča testu, na ktorej je nakopulovaných viac epitopov, ná ktoré sa môžu viazal špecifické antilétky, sa zachytia volné antilátky značené enzýmom. V dalšej oblasti, dôkaznej oblasti, sa zisluje reflexnou fotometriou komplex pozostávajúci z derivátu hemoglobínu a značenej antilátky pomocou reakcie vhodného substrátu enzýmu. Substrát môže byl obsiahnutý v dôkaznej oblasti alebo sa môže do nej dostal uvedením dôkaznej oblasti do kontaktu s Salšou oblaslou, ktorá tento substrát obsahuje·
S výhodou sa činidlá nutné pre metódu podlá vynálezu predávajú vo forme testovacieho kitu, ktorý obsahuje najmenej v dvoch od seba oddelených baleniach popri hemolyzačnom činidle ostatné činidlá v rozpustenej alebo lyofilizovanej forme alebo nanesené na nosiči testu.
príklady realizácie vynálezu '
Predložený vynález je vysvetlený pomocou nasledujúcich príkladov·
Príklad 1
Súčasné stanovenie celkového hemoglobínu a HbA-, x · c v mokrom teste pokusy boli urobené na Hitachi 7I7 firmy Boehringer Mannheim GmbH. Obsah celkového hemoglobínu bol meraný fotometrický pri vlnovej dĺžke 546 nm. Imunologický dôkaz HbA-, sa uskutočňoval podía princípu testu TINIA turbidimetrickým meraním pri 340 nm. Všetky stanovenia a inkubácie boli uskutočňované pri teplote 37 °q.
- 12 Boli použité nasledujúce roztoky:
hemolyzačné činidlo:
mM NaPO^-pufru pH 7>0 1,0 % SDS
0,1 % nátriumazidu
0,02 % káliumhexakyanoŽelezitanu 0,5 % Brij 35 reakčný pufer:
mM MES pufru pH 6,0 150 mM nátriumchloridu 3,0 % PEG 6000
0,5 % Brij 35
0,1 % albumínu hovädzieho séra
0,1 % nátriumazidu mM EDTA m^ PAKCHbA^ c>S-IgG /DE/ / polyklonélna ovčia· · AK proti HbA-^ / alebo
100 ug/ml MAKXHbA^ c>M-IgG /DE/ / monoklonálna myšiaAK proti HbA-L c / polyhaptónový roztok:
mM MES-pufru pH 6,0
I50 mM nátriumchloridu
6,0 % PEG 6000
0,5 % Brij
0,1 % albumínu hovädzieho séra ug/ml polyhapténu HbA^ c -|X-l-4/cys,KHS/-RSA 18 ;1
K vzorke krvi bolo pridané hemolyzačné činidlo v po mére 1:100 a inkubovalo sa 2 minúty pri 25 °C. K 5 ul hemolyzovanej vzorky bolo pridaných 250 ul reakčného pufru. Po 4 minútach sa merala absorpcia celkového hemoglobínu pri 546 nm /EL/. 0 jednu minútu neskôr bola zrne- 13 raná absorpcia pri 340 nm /E2/ a potom sa pripipetovalo 50 ul polyhapténového roztoku a inkubovalo sa 5 minút. Potom sa meral zákal pri 340 nm /E3/.
Na stanovenie hodnoty HbA^ v g/dl sa naniesol rozdiel extinkcieΔΕ = E3 - k.E2 proti koncentrácii HbA^ c a urobilo grafické vyhodnotenie.
objem + objem vzorky reakčného pufru k = korekčný faktor objemu ---celkový objem
Koncentrácia celkového hemoglobínu sa vypočíta z konštantného faktoru K násobeným El / K = molárny extinkčný koeficient chromofóru hemoglobínu x zriedovací faktor /.
Ako kalibrátor slúžila EDTA-plná krv so známym obsahom hemoglobínu a HbA-^ c . EDTA-plná krv bola pre vynesenie kalibračnej krivky v rožnom pomere zriedená hemolyzačným Činidlom.
Kalibračné krivky sú znázornené graficky na obr. 1 a 2. Na obr. 1 bola nanáSaná koncentrácia celkového hemoglobínu proti El. Vyplýva lineárny vzlah. pri výpočte sa téda dá násobil konštantným faktorom K. Na obr. 2 bol nanášaný rozdiel extinkcie E = E3 - k.E2 proti obsahu HbA^ c.
Pri dalších pokusoch sa k hemolyzovanej vzorke krvi pripipetoval najskôr polyhapténový roztok a po palminútovej inkubácii bola odštartovaná precipitačná reakcia prídavkom reakčného pufru, ktorý obsahoval špecifickú antilátku. Tento sled pipetovania viedol v porovnaní s vyššie uvedeným sledom pipetovania, pri ktorom sa najsk&r pridala entilátka a potom polyhaptén, ku zreteľne menšej citlivosti pri stanovení HbA·^ / obr. 3/·
- 14 •'Xl . 'X‘ ·’ ·>
···;;/ < ';”V ···:< '.
.;? y
Λ.·“ * ,-vj.
Ä«
w.
•í.'·.';
/Si
'.í;·.'
U v;
; . r: -» '-ΰ:ί λ<·.
i c; ' · . \
/.5; ·,·, ·. ? _ v
S?... ·'*-'·.·' · ··’. >\‘·» i
>?
áác ?· príklad 2
Testovacie prúžky na stanovenie celkového hemoglobínu a HbAq Λ i c f ul plnej krvi sa doplnilo 300 ul hemolyzačného činidla a inkubovalo sa 10 minút pri 20 °C. Hemolyzačné činidlo pozostávalo z 0,18% roztoku SDS, ktorý bol nastavený pufrom na pH 7’
Na stanovenie celkového hemoglobínu sa nanieslo 32 ul hemolyzovenej vzorky krvi na testovací prúžok. Konštrukcia testovacieho prúžku je znáísornená graficky na obr. 4. Testovací prúžok pozostáva iba z neupraveného dávkovacieho rúna 1 zo sklenených vlákien, neupraveného dopravného rúna 2 zo sklenených vlákien, neupravenej polyesterovej tkaniny J ® priesvitnej polykarbonátovej fólie 4· Testovací prúžok neobsahuje žiadne äelšie chemikálie. Pomocou tejto realizácie pokusu sa dá obsah celkového hemoglobínu vo vzorke krvi velmi presne zmeral pri vlnovej dĺžke 576 nm.
Boli získané variačné koeficienty pod 2,5 / tabuľka 1/
Tabulka 1:
Stanovenie celkového hemoglobínu Variačný koeficient bol vypočítaný z 10 jednotlivých í
stanovení koncentrácia Hb VK / g/dl / /%/ '••«•SV
7<-
| 14,1 | 1,0 |
| 17,5 | 2,5 |
| 13,7 | 1,9 |
| 14,7 | 1,8 |
š;.:’
?. - ·
i ,'<·.·
'.V' • >
Na stanovenie koncentrácie HbA^ sa k 32 ul hemolyzovanej vzorky pridá 1200 ul reakčného pufru a 10 minút sa inkubuje. Reakčný pufer pozostáva zo 100 mM Hepes, pH 7,4, 100 mM NaOl a 0,1 % Brij 35 s konjugátom MAK-enzýmu. 12 ul zmesi sa nanieslo na prúžok, ktorý je znázornený graficky na obr. 5. Na matrici 11 epitopu sa zachytí volný konjugát antilátky a enzýmu. V oblasti, ktorá Šalej nasleduje, transportnom rúne 12 sa stanoví komplex enzýmu, i-lbA^ a antilótky reakciou substrátu po uvedení usbstrétového rúna 13, ktorá obsahuje substrát, do styku s transportným rúnom 12, reflexnou fotometriou. / tabúlka 2/.
Tabulka 2:
Stanovenie koncentrácie HbA-i pomocou testovacieho prúžku •L
Variačný koeficient /VK/ bol zaistený z 10 jednotlivých
meraní koncentrácia HbA·^ VK / g/dl / /%/
0,8 6,8
1,1 5,4
1,4 6,0
Príklad 3
Vplyv rôznych iónových detergentov na stanovenie HbAj, . Pokusy boli uskutočňované rovnako ako v príklade 1.
Hemolyzačné činidlo malo nasledujúcu zloženie:
mM Napo^-pufru pH 7,2
0,1 % nátriumazidu
0,02· % káliumhexakyanoželezitanu
0,5 % Brij 35 ·' i i •Ί
A?
iónové detergenty uvedené v tabulke 3 boli obsiahnuté v koncentráciách, ktoré sa tam uvádzajú.
V prípade TTAB a CTAB nebol v hemolyzačnom činidle obsiahnutý káliumhexykyanoželezitan, lebo sa s týmito detergentmi zráža.
r£;i·
W i»/·’?
Zloženie reakčného pufru a roztoku polyhapténu odpovedá zloženiu, ktoré je uvedené v príklade 1.
Ako vzorka krvi bol použitý štandart s obsahom HbA^ c 3>2 g/dl. Všetky testované iónové detergenty vyvolávajú lýzu buniek a uvolnenie epitopu. Najvýhodnejším sa ukázal byť aniónový detergent SDS ako aj katiónové detergenty TTAB a CTAB.
£<·< ·;
Tabulka 3:
Vplyv rôznych iónových detergentov v hemolyzačnom činidle Absorpcia bola meraná pri 340 nm.
| detergent | koncentrácia | El | E2 ΔΕ = E1-E2 |
| v hemolyzsč- | / 0 g/dl | /3,2 g/dl | |
| nora činidle | HbAl 0 Z | ,lbAl e / | |
| SDS | 0,5 % | 337 mE | 73 mE 264 mE |
| SDS | 1,0 % | 338 mE | 80 mE 258 mE |
| obojaký | 0,5 % | 34I mE | 172 mE 169 mE |
, Λ
Zwittergent
| 3-14 obojaký | 1,0 % | 343 mE | 139 mE | 204 | mE |
| detergent 3-14 TTAB | 1,0 % | 377 mE | , 149 mE | 228 | mE |
| CTAB | 1,0 % | 374 mE | 137 mE | 237 | mE |
| kontrola n. | |||||
| iónový detergent — | 340 mE | 275 mE | 65 | mE |
- 17 príklad 4
Závislosť dynamickej mernej oblasti stanovenia HbA^ na koncentrácii Brij 35
Pokusy boli uskutočňované rovnako ako v príklade 3.
V hemolyzačnom činidle bolo konštantné použité 1 % SDS. Koncentrácia Brij 35 v reakčnom pufri bola menená v rozmedzí uvedenom v tabulke 4· Ako vzorka slúžil štandart í-IbA·^ uvedený v príklade 3.
Merná oblasť sa rozšírila zo 47 mE kontroly už prídavkom 0,1 % Brij 35 na 233 mE. Výhodná koncentrácia Brij 35 sa pohybovala okolo 0,1 až 1,0
Tabulka 4;
Vplyv rôznych koncentrácii Brij v reakčnom pufri na stanovenie HbAn n c
Absorpcia bola meraná pri 340 nm
Koncentrácia Brij 35 El B2 &E = E1-E2 v reakčnom pufri / 0 g/dl HbA^ / / 3,2 g/dl HbA^ /
| - | 240 mE | 193 mE | 47 mE |
| 0,1 % | 266 mE | 33 mE | 233 mE |
| 0,25 % | 274 mE | 40 mE | 234 mE |
| 0,5 % | 302 mE | 57 mE | 24 5 mE |
| 1,0 % | 35i mE | 99 mE | 252 mE |
| 2,0 % | 385 mE | 242 mE | 143 mE |
Príklad 5
Vplyv rôznych detergentov v reakčnom pufri na stanovenie HbA-^ c
Pokusy boli uskutočňované analogicky ako v príklade 4.
- 18 V reakčnom pufri boli použité detergenty uvedené v tabulke 5. Prídavkom Brij 35, 56 a 58, ako aj My r j 52 a 59 bola dynamická merná oblasl maximálne rozšírená. Ale aj iné neiónové detergenty ako Triton, ako aj obojaké iónové detergenty, ako Zwittergent 3-I4 vykazovali v porovnaní s kontrolou výrazne pozitívnejší účinok.
Tabulka 5:
Vplyv detergentov v reakčnom pufri
| /'ľ./:· ľ-'. | detergent | koncentrácia v reakčnom pufri | El / 0 g/dl HbAl </ | E2 Z 3,2 g/dl HbAi c/ | ΔΕ = El—1 |
| & | kontrola | - | 240 mE | 193 mE | 47 mE |
| 'j/ 1 | Brij 35 | 0,5 % | 302 mE | 57 mE | 245 mE |
| . < < | Brij 56 | 0,5 % | 302 mE | 57 mE | 245 mE |
| iX | Brij 58 | 0,5 % | 303 mE | 51 mE | 252 mE |
| v.·,:. | Triton x 114 | 0,2 % | 523 mE | 275 ®E | 248 mE |
| J .· | Triton x 100 | 0,5 % | 298 mE | 202 mE | 96 mE |
| Tween 90 | 0,25 % | 277 mE | 143: mE | 134 mE | |
| Tween 60 | 0,25 % | 266 mE | 75 mE · | 191 mE | |
| ·/ | Tween 40 | 0,25 % | 276 mE | 86 mE | 189 mE |
| .'»· .· >ľ | Tween 20 Zwittergent | 0,1 % | 266 mE | 13i mE | 135 mE |
| 3-14 | 0,1 % | 308 mE | 155 mE | 153 mE | |
| t * *·, | Myrj 50 | 0,5 % | 308 mE | 40 mE | 268 mE |
| ''ďe | Mýrj 59 | 0,5 % | 3l7 mE | 31 mE | 286 mE |
Príklad 6
Súčasné stanovenie celkového hemoglobínu a HbAq so «·· c špecifickým hnedozeleným chromofórom hemoglobínu ·:;Ί •V·!
v® i
v'J';
'· \
- 19 Si ·* '®'j
U
Pokusy boli urobené na Hitachi 7I7 firmy Boehringer Mannheim GmbH. Obsah celkového hemoglobínu bol meraný fotometrický pri vlnovej dĺžke 570 nm. Imunologický dokaz HbA-j· c sa uskutočňoval podlá princípu, testu ΤΙΜΙΑ turbidimetrickým meraním pri 340 nm. Všetky stanovenia a inkubácie sa uskutočňovali pri teplote 37 °0.
Boli použité nasledujúce roztoky:
Hemolyzačné činidlo mM NaPO^ pufru pH 7>4 «'
1,0 % tetradecyltrimetylamóniumbromidu /TTAB/
0,01 % metylizotiazolónu
0,02 % Bronidoxií^K
0,5 % Brij 35 mM EDTA
Reakčný pufer:
mM MES pufru pH 6,0
ISO mM nátriumchloridu
3,0 % PES 6000
0,5 % Brij 35
0,01 % metylizotiazolónu
0,02 % Bronidoxt^K
1,2 mg/ml PAK<HbA-L ^S-IgO /DE/ / polyklonálna ovčia AK proti HbA^ ' /
Polyhapténový roztok:
mM MES pufru pH 6,0
I50 mM nátriumchloridu
6,0 % PEG 6000
0,5 % Brij 35 ug/ml polyhapténu
K vzorke krvi bolo pridané hemolyzačné činidlo v pomere 1:100 a inkubovalo sa pri 25 °C 2 ífiinúty.
K 10 ul hemolyzovane j vzorky sa pridalo 250 ml reakčného pufru. po 4 minútach bola meraná absorpcia celkového hemoglobínu pri 570 nm /El/. 0 minútu neskôr bola meraná absorpcia pri 340 nm /E2/ a potom sa pripipetovalo 50 ul polyhapténového roztoku a inkubovalo sa pať minút. Potm sa meral zákal pri 340 nm /E3/.
Na stanovenie hodnoty HbAj v g/dl sa vyniesol rozdiel extinkcie ΔΕ = E3 -k.E2 proti koncentrácii HbA·^ a urobilo sa grafické vyhodnotenie.
objem + objem reakčného vzorky pufru k = korekčný faktor objemu = --celkový objem
Koncentrácia celkového hemoglobínu sa vypočíta z konštantného faktoru K násobením El / K =molárny extinkčný koeficient chromofóru hemoglobínu x zrieÓovací faktor/. Charakteristické absorpčné spektrum je reprodukované na obr.
6. Ako kalibrátor slúžila EDTA-plná krv so známym obsahom hemoglobínu a HbA-^ c· EDTA-plná krv bola na vytvorenie kalibračnej krivky zriedené v rôznom pomere s hemolyzačným činidlom.
Kalibračné krivky sú znázornené graficky na obr. 7 a
8. Na obr. 7 bola vynesená koncentrácia celkového heraoglo bínu proti El. Vzťah je lineárny. Pri výpočte sa môže teda násobiť konštantným fakt orom K. Na obr. 8 bol vynesený extinkčný rozdiel ΔΕ = E3 -k.E2 proti obsahu HbA^
Claims (17)
1. Imunologická metóda na stanovenie dérivátu hemoglobínu v plnej krvi, vyznačujúca sa tým, že a/ vzorka krvi sa spracuje s hemolyzačným činidlom, ktoré obsahuje iónový detergent s pH 5 až 9,5, a b/ v hemolyzovanej vzorke krvi sa stanoví imunológie ky derivát hemoglobínu.
2. Metóda podlá nároku 1,vyznačujúca sa tým, že sa vzorka krvi spracuváva s hemolyzačným činidlom pri teplotách 4 až 37 °C až 10 minút.
3. Metóda podlá jedného z nárokov 1 a 2, vyznáčujúcasa tým, že hemolyzačné činidlo obsahuje Šalej neiónový detergent.
4. Metóda podlá jedného z nárokov 1 až 3, vyzná Čujúca sa t ý m, že sa hemolyzovaná vzorka doplní reakčným pufrom, ktorý obsahuje neiónový detergent alebo obojako iónový detergent a v rezultujúcej zmesi sa stanoví imunologický derivát hemoglobínu.
5. Metóda podlá jedného z nárokov 1 až 4, vyzná čujúca sa tým, že derivát hemoglobínu je HbA^
6. ’Metóda ne stanovenie obsahu derivátu hemoglobínu a celkového hemoglobínu vo vzorke krvi, vyznačujú c a s a t ý m, že sa a/ vzorka krvi spracuje s hemolyzačným činidlom, kto ré obsahuje iónový detergent s pH 5,0 až 9,5, b/ v hemolyzovanej vzorke sa stanoví obsah celkového hemoglobínu, a c/ v hemolyzovanej vzorke sa stanoví imunologický derivát hemoglobínu.
7. Metóda podlá nároku 6,vyznačujúca sa tým, že sa obsah celkového hemoglobínu stanoví meraním charakteristickej absorpcie špecifického chromofóru hemoglobínu.
8. Metóda podlá jedného z nárokov 6a 7, vyznačuj ú c a sa t ý m, že hemolyzačné Činidlo obsahuje Šalej neiónový detergent.
9. Metóda podlá jedného z nárokov 6 až 8, vyzná čujúca sa t ý m, že sa hemolyzovaná vzorka doplní reakčným pufrom, ktorý obsahuje neiónový alebo obojako iónový detergent a v rezultujúcej zmesi sa stanoví celkový hemoglobín a derivát hemoglobínu.
10. Hemolyzačné činidlo obsahujúce iónový detergent s pH 5 až 9,5.
11. Hemolyzačné činidlo podlá nároku 10, v y z n a čujúce sa tým, že obsahuje neiónový dptergent.
12. Hemolyzačné činidlo podlá jedného z nárokov 10 alebo 11,vyznačujúce sa tým, že obsahuje vhodné oxidačné činidlo alebo konzervačné činidlo, ktorého mechanizmus účinku spočíva v oxidačnom ataku tiolových skupín.
13. Použitie hemolyzačného činidla nodla jedného z {
'1 nárokov 10 až 12 pri imunologickom stanovení derivátu hemoglobínu alebo súčasnom stanovení derivátu hemoglobínu a obsahu celkového hemoglobínu vo vzorke.
14. Testovacia súprava na imunologický dôkaz derivátu hemoglobínu, pozostávajúca aspoň z dvoch od seba oddelených balení, z ktorých jedno obsahuje hemolyzačné činidlo podlá jedného z nárokov 10 až 12, a druhé äalšiu zmes činidla, ktorá obsahuje reagencie nevyhnutné pre imunologický dôkaz derivátu hemoglobínu.
15. Testovacia súprava podlá nároku 14, v y z naduj ú c a sa tým, že reagencie nevyhnutné pre imunologický dokaz sú nanesené na nosiči testu.
16. Stabilizácia roztoku glykozylovaného proteínu, peptidu alebo polyhapténu, vyznačujúca sa tým, že ako pufer sa používa MES-pufer, pH 5»0 až 8,0 a obsahuje roztok ΕΌΤΑ.
17. Stabilizácia roztoku podlá nároku 16, vyznačujúca satým, že je pridaný RSA.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4206932A DE4206932A1 (de) | 1992-03-05 | 1992-03-05 | Immunologische methode zur bestimmung eines haemoglobinderivates |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK14993A3 true SK14993A3 (en) | 1993-10-06 |
Family
ID=6453281
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK14993A SK14993A3 (en) | 1992-03-05 | 1993-03-01 | Immunological method to determine hbaic |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5541117A (sk) |
| EP (1) | EP0559164B1 (sk) |
| JP (1) | JP2637677B2 (sk) |
| KR (1) | KR930020162A (sk) |
| CN (1) | CN1081765A (sk) |
| AT (1) | ATE193378T1 (sk) |
| AU (1) | AU652092B2 (sk) |
| CA (1) | CA2090981C (sk) |
| CZ (1) | CZ29193A3 (sk) |
| DE (2) | DE4206932A1 (sk) |
| DK (1) | DK0559164T3 (sk) |
| ES (1) | ES2148190T3 (sk) |
| FI (1) | FI930975A (sk) |
| HR (1) | HRP930253A2 (sk) |
| HU (1) | HUT70463A (sk) |
| IL (1) | IL104902A0 (sk) |
| NO (1) | NO930770L (sk) |
| NZ (1) | NZ247054A (sk) |
| PL (1) | PL297915A1 (sk) |
| PT (1) | PT559164E (sk) |
| SI (1) | SI9300108A (sk) |
| SK (1) | SK14993A3 (sk) |
| ZA (1) | ZA931533B (sk) |
Families Citing this family (41)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5739037A (en) * | 1992-09-29 | 1998-04-14 | Drew Scientific Limited | Process for eliminating labile glycohaemoglobin from a sample |
| US5610076A (en) * | 1994-04-29 | 1997-03-11 | Alteon Inc. | Method for detecting hemoglobin advanced glycosylation endproducts |
| FR2721112B1 (fr) * | 1994-06-13 | 1996-08-14 | Gks Technologies | Dispositif de diagnostic rapide de toute molécule glyquée et procédé de mise en Óoeuvre. |
| JP3150857B2 (ja) * | 1994-10-19 | 2001-03-26 | 富士写真フイルム株式会社 | グリコヘモグロビン含有比測定用分析要素及び分析方法 |
| EP0729031A1 (en) * | 1995-02-24 | 1996-08-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Set of reagents determining the content of total haemoglobin |
| JP3269765B2 (ja) | 1995-12-14 | 2002-04-02 | 富士写真フイルム株式会社 | ヘモグロビン誘導体の免疫学的測定方法及びその方法に用いる処理試薬 |
| JP3551678B2 (ja) * | 1996-03-14 | 2004-08-11 | 東ソー株式会社 | ヘモグロビンＡ１ｃの測定法及びキット |
| US6855562B1 (en) | 1996-07-30 | 2005-02-15 | Horiba, Ltd. | Immunoassay method for lyzed whole blood |
| JP3249919B2 (ja) * | 1996-07-30 | 2002-01-28 | 株式会社堀場製作所 | 免疫測定方法 |
| US5858794A (en) * | 1997-05-13 | 1999-01-12 | Bayer Corporation | Cyanide-containing hemoglobin reagent composition and method providing acceptable precision, accuracy and freedom from white cell interference on automated hematology analyzers |
| DE69819996T2 (de) * | 1997-09-27 | 2004-09-02 | Horiba Ltd. | Gerät für die Zählung von Blutzellen und zur immunologischen Bestimmung unter Verwendung von Vollblut |
| US6485923B1 (en) * | 2000-02-02 | 2002-11-26 | Lifescan, Inc. | Reagent test strip for analyte determination having hemolyzing agent |
| AU2001282550A1 (en) * | 2000-09-07 | 2002-03-22 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Method of quantifying total hemoglobin and glycohemoglobin |
| US7670853B2 (en) * | 2002-11-05 | 2010-03-02 | Abbott Diabetes Care Inc. | Assay device, system and method |
| EP1637883B1 (en) * | 2003-05-27 | 2009-11-25 | Mitsubishi Kagaku Iatron, Inc. | Immunochromatographic method |
| CA2510277C (en) * | 2003-09-23 | 2012-07-24 | Epinex Diagnostics, Inc. | Rapid test for glycated albumin |
| CN101300470B (zh) * | 2003-10-29 | 2011-01-26 | Mec戴内米克公司 | 用于进行化验的微机械系统和方法 |
| US7541190B2 (en) * | 2005-02-07 | 2009-06-02 | Beckman Coulter, Inc. | Method of measurement of cellular hemoglobin |
| JP4957547B2 (ja) * | 2005-04-14 | 2012-06-20 | パナソニック株式会社 | ヘモグロビン誘導体の測定方法、それに用いる試薬組成物、測定キット、分析デバイス、及び分析システム |
| CN101484792B (zh) * | 2006-03-24 | 2011-05-18 | 爱科来株式会社 | 糖基血红蛋白浓度测定方法和浓度测定装置 |
| WO2007111283A1 (ja) * | 2006-03-24 | 2007-10-04 | Arkray, Inc. | グリコヘモグロビン濃度測定方法および濃度測定装置 |
| US20100012049A1 (en) * | 2006-04-12 | 2010-01-21 | Jms Co., Ltd | Cavitation heating system and method |
| EP2047272B1 (en) * | 2006-07-29 | 2014-10-22 | i-Sens, Inc. | Electrochemical determination system of glycated proteins |
| CN101595386B (zh) * | 2007-01-30 | 2012-05-09 | 爱科来株式会社 | 吩噻嗪衍生物色素的检测方法及用于该方法的显色剂试剂 |
| JP5465008B2 (ja) * | 2007-10-30 | 2014-04-09 | パナソニック株式会社 | ヘモグロビン及びヘモグロビン誘導体の測定方法、測定キット |
| CN101493467A (zh) * | 2008-01-25 | 2009-07-29 | 上海伊思柏生物科技有限公司 | 定量测定糖化蛋白质的方法 |
| KR101005559B1 (ko) | 2008-07-15 | 2011-01-05 | 주식회사 아이센스 | 바이오센서를 이용한 단백질 측정 장치 |
| WO2010009459A1 (en) * | 2008-07-18 | 2010-01-21 | Bayer Healthcare Llc | Methods, devices, and systems for glycated hemoglobin analysis |
| CN102246036B (zh) | 2008-12-11 | 2016-01-20 | 积水医疗株式会社 | 含有糖化血红蛋白的试样的前处理方法 |
| US20100167306A1 (en) * | 2008-12-26 | 2010-07-01 | Henry John Smith | Rapid test for glycated albumin in saliva |
| CN102640002B (zh) * | 2009-05-20 | 2015-08-05 | 瑞莱诊断体系股份有限公司 | 检测糖化血红蛋白百分比的系统和方法 |
| ES2961300T3 (es) * | 2010-03-31 | 2024-03-11 | Sekisui Medical Co Ltd | Método para analizar hemoglobinas |
| JP5906604B2 (ja) * | 2011-08-11 | 2016-04-20 | 東洋紡株式会社 | 全血検体の成分測定方法 |
| KR101207418B1 (ko) | 2012-02-10 | 2012-12-04 | 주식회사 아이센스 | 효소법을 이용하는 당화혈색소 정량분석용 용혈시약 조성물 |
| US10202632B2 (en) | 2014-05-06 | 2019-02-12 | Diasys Diagnostic Systems Gmbh | Enzymatic determination of HbA1c |
| CN104062430B (zh) * | 2014-06-30 | 2016-03-30 | 洛阳普莱柯万泰生物技术有限公司 | 一种用于检测样品中流感病毒的试剂盒及其检测方法和应用 |
| DK3397971T3 (da) * | 2015-12-30 | 2021-09-20 | W Health L P | Fremgangsmåde til bestemmelse af mængden af et HBA1C i en blodprøve |
| CN112334767B (zh) * | 2018-09-12 | 2024-01-09 | 积水医疗株式会社 | 血红蛋白类测定用试剂以及血红蛋白类的测定方法 |
| CN110702894A (zh) * | 2019-10-10 | 2020-01-17 | 南京欧凯生物科技有限公司 | 一种直接测定糖化血红蛋白含量的检测方法 |
| CN112067566A (zh) * | 2020-08-28 | 2020-12-11 | 南开大学 | 一种用于糖化血红蛋白定量分析的比色传感器 |
| CN113984689B (zh) * | 2021-10-25 | 2023-11-03 | 中元汇吉生物技术股份有限公司 | 一种测定谷胱甘肽还原酶的试剂盒 |
Family Cites Families (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4247533A (en) * | 1978-05-01 | 1981-01-27 | The Rockefeller University | Hemoglobin A1c radioimmunoassay |
| US4200435A (en) * | 1978-12-26 | 1980-04-29 | Abbott Laboratories | Determination of glycosylated hemoglobin in blood |
| JPS5861465A (ja) * | 1981-10-07 | 1983-04-12 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | 血液の分析方法 |
| US4478744A (en) * | 1982-01-25 | 1984-10-23 | Sherwood Medical Company | Method of obtaining antibodies |
| HU186976B (en) * | 1982-10-01 | 1985-10-28 | Reanal Finomvegyszergyar | Process for determation of glucose containt of glucolized in non-ensimatic way proteins and reagent lutes for this process |
| US4529705A (en) * | 1983-06-06 | 1985-07-16 | Coulter Electronics, Inc. | Reagent for combined diluting and lysing whole blood |
| US4727036A (en) * | 1985-08-08 | 1988-02-23 | Molecular Diagnostics, Inc. | Antibodies for use in determining hemoglobin A1c |
| CA1339952C (en) * | 1984-10-29 | 1998-07-14 | William J. Knowles | Immunoassays for denatured protein analytes, particularly hb alc, and monoclonal antibodies thereto |
| US4647654A (en) * | 1984-10-29 | 1987-03-03 | Molecular Diagnostics, Inc. | Peptides useful in preparing hemoglobin A1c immunogens |
| US4658022A (en) * | 1985-08-08 | 1987-04-14 | Molecular Diagnostics, Inc. | Binding of antibody reagents to denatured protein analytes |
| CA1263590C (en) * | 1984-12-06 | 1989-12-05 | CYANIDE-FREE REAGENT FOR THE DETERMINATION OF HEMOGLOBIN | |
| DK145385D0 (da) * | 1985-03-29 | 1985-04-01 | Novo Industri As | Monoklonalt antistof til immunkemisk analyse |
| DE3532868A1 (de) * | 1985-09-14 | 1987-03-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von glykosiliertem haemoglobin sowie hierzu geeignete verbindungen und verfahren zu deren herstellung |
| US4806468A (en) * | 1987-02-05 | 1989-02-21 | Becton, Dickinson And Company | Measurement of glycosylated hemoglobin by immunoassay |
| US4861728A (en) * | 1987-07-24 | 1989-08-29 | Becton, Dickinson And Company | Immunoassay of glycosylated hemoglobin using a labeled boron reagent |
| DE3733084A1 (de) * | 1987-09-30 | 1989-04-13 | Boehringer Mannheim Gmbh | Testtraeger zur analytischen bestimmung eines bestandteils einer koerperfluessigkeit |
| US4970171A (en) * | 1987-11-09 | 1990-11-13 | Miles Inc. | Denaturant reagents for convenient determination of hemoglobin derivatives in blood |
| JP2619900B2 (ja) * | 1988-01-27 | 1997-06-11 | 東亜医用電子株式会社 | 血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬および方法 |
| NO890029D0 (no) * | 1989-01-04 | 1989-01-04 | Axis Research | Nye modifiserte peptider og proteiner for in vitro diagnoser (diabetes). |
| IL94724A (en) * | 1989-07-13 | 1994-02-27 | Miles Inc | Decomposition of red blood cells and denaturation of hemoglobin by the use of lithium salts |
| JP2836865B2 (ja) * | 1989-10-23 | 1998-12-14 | 東亜医用電子株式会社 | 血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬 |
| JP2891302B2 (ja) * | 1990-03-01 | 1999-05-17 | シスメックス株式会社 | 血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬 |
| US5242832A (en) * | 1990-03-01 | 1993-09-07 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Reagent for measurement of leukocytes and hemoglobin in blood |
| EP0456088B1 (en) * | 1990-05-09 | 1996-08-21 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Stabilized uric acid reagent |
| DE4135542A1 (de) * | 1991-10-28 | 1993-04-29 | Boehringer Mannheim Gmbh | Lagerfaehige proteinloesungen |
-
1992
- 1992-03-05 DE DE4206932A patent/DE4206932A1/de not_active Withdrawn
-
1993
- 1993-02-26 CZ CZ93291A patent/CZ29193A3/cs unknown
- 1993-03-01 SK SK14993A patent/SK14993A3/sk unknown
- 1993-03-01 AU AU33871/93A patent/AU652092B2/en not_active Ceased
- 1993-03-01 IL IL104902A patent/IL104902A0/xx unknown
- 1993-03-02 PL PL29791593A patent/PL297915A1/xx unknown
- 1993-03-03 NZ NZ247054A patent/NZ247054A/en not_active IP Right Cessation
- 1993-03-03 EP EP93103349A patent/EP0559164B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-03 PT PT93103349T patent/PT559164E/pt unknown
- 1993-03-03 HR HR930253A patent/HRP930253A2/hr not_active Application Discontinuation
- 1993-03-03 ES ES93103349T patent/ES2148190T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-03 NO NO93930770A patent/NO930770L/no unknown
- 1993-03-03 AT AT93103349T patent/ATE193378T1/de active
- 1993-03-03 DE DE59310046T patent/DE59310046D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-03 DK DK93103349T patent/DK0559164T3/da active
- 1993-03-04 CA CA002090981A patent/CA2090981C/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-04 US US08/026,464 patent/US5541117A/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-04 FI FI930975A patent/FI930975A/fi unknown
- 1993-03-04 ZA ZA931533A patent/ZA931533B/xx unknown
- 1993-03-04 CN CN93104037A patent/CN1081765A/zh active Pending
- 1993-03-04 HU HU9300596A patent/HUT70463A/hu unknown
- 1993-03-05 JP JP5045130A patent/JP2637677B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1993-03-05 KR KR1019930003336A patent/KR930020162A/ko not_active Application Discontinuation
- 1993-03-05 SI SI9300108A patent/SI9300108A/sl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU652092B2 (en) | 1994-08-11 |
| DE4206932A1 (de) | 1993-09-09 |
| ZA931533B (en) | 1994-09-04 |
| SI9300108A (en) | 1993-09-30 |
| IL104902A0 (en) | 1993-07-08 |
| HU9300596D0 (en) | 1993-05-28 |
| JPH0611510A (ja) | 1994-01-21 |
| HUT70463A (en) | 1995-10-30 |
| KR930020162A (ko) | 1993-10-19 |
| EP0559164A3 (sk) | 1994-01-26 |
| HRP930253A2 (en) | 1995-10-31 |
| ES2148190T3 (es) | 2000-10-16 |
| US5541117A (en) | 1996-07-30 |
| FI930975A0 (fi) | 1993-03-04 |
| NO930770L (no) | 1993-09-06 |
| JP2637677B2 (ja) | 1997-08-06 |
| DK0559164T3 (da) | 2000-10-30 |
| NZ247054A (en) | 1995-02-24 |
| EP0559164A2 (de) | 1993-09-08 |
| DE59310046D1 (de) | 2000-06-29 |
| CA2090981C (en) | 1999-11-16 |
| PT559164E (pt) | 2000-10-31 |
| CN1081765A (zh) | 1994-02-09 |
| ATE193378T1 (de) | 2000-06-15 |
| EP0559164B1 (de) | 2000-05-24 |
| AU3387193A (en) | 1993-09-16 |
| CA2090981A1 (en) | 1993-09-06 |
| CZ29193A3 (en) | 1994-01-19 |
| FI930975A (fi) | 1993-09-06 |
| NO930770D0 (no) | 1993-03-03 |
| PL297915A1 (en) | 1993-09-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SK14993A3 (en) | Immunological method to determine hbaic | |
| US4703001A (en) | Immunoassay for the detection of serum analytes using pH dependent chastropic acids | |
| US5478754A (en) | Determination of glycated hemoglobin by fluorescence quenching | |
| JP3150857B2 (ja) | グリコヘモグロビン含有比測定用分析要素及び分析方法 | |
| EP0154276B1 (en) | Specific binding assay employing anti-g6pdh as label | |
| EP2211175B1 (en) | Method for measurement of hemoglobin and hemoglobin derivative, and measurement kit | |
| WO1986004421A1 (en) | Enzyme immunoassay with two-part solution of tetramethylbenzidine as chromogen | |
| US20100311174A1 (en) | Determination of glycated protein | |
| CA1131114A (en) | Method and composition for direct determination of iron in blood serum | |
| JP4392164B2 (ja) | グリコ化タンパク質の定量のための方法およびデバイス | |
| EP0779513B1 (en) | Method for immunological determination of hemoglobin derivative and treating reagent for use therein | |
| US5342788A (en) | Method and standard solution for the determination of thyroxine (T4) or triiodothyronine (T3) | |
| JP4214648B2 (ja) | 糖化蛋白質測定試薬 | |
| EP0061071B1 (en) | Activated apoglucose oxidase, method of preparing it, its use in specific binding assay methods and reagent means and test kits containing it | |
| CN113125759A (zh) | 糖化血红蛋白检测试剂盒 | |
| Presentini et al. | Influence of the Antibody-Peroxidase Coupling Methods on the Conjugates Stability and on the Methodologies for the Preservation of the Activity in Time | |
| JPH11118806A (ja) | ヘモグロビンの安定化方法 | |
| EP1256802A1 (en) | Method for examination of feces occult blood | |
| US6627448B1 (en) | Analyte-binding assay | |
| EP1162462B1 (en) | Assay method for hemoglobin using lipoproteins | |
| JPH0775574A (ja) | 安定なペルオキシダーゼ組成物及び安定な抗体組成物 | |
| Doihofer-Bliesener et al. | Impaired Immunoglobulin G Fc Fragment Function in Diabetics is Caused by a Mechanism Different from Glycation | |
| JPH06347462A (ja) | 免疫測定に使用される固定化担体の保存液、及びこの保存液で保存された担体を用いる免疫学的測定方法 | |
| JPH07140146A (ja) | 安定なペルオキシダーゼ組成物及び安定な抗体組成物 | |
| CA2120348A1 (en) | Immunological method of analysis |