CN101484792B - 糖基血红蛋白浓度测定方法和浓度测定装置 - Google Patents
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Abstract
在测定糖基血红蛋白浓度的情况下，从400～450nm的波长范围中选择多个波长作为测定波长。优选利用液相色谱法，连续地或间歇地感光至少在415～430nm的波长范围内的不同的峰值波长的光，从而获得以波长、洗提时间和检测量作为变量的3维色谱图，并根据该3维色谱图，对糖基血红蛋白浓度进行运算。
Description
技术领域
本发明涉及测定在血液等的试样中含有的糖基血红蛋白的浓度的技术。
背景技术
在采用血液等的机体试样，对机体成分分离分析的情况下，广泛地使用采用了高速液相色谱法(HPLC)的高速液相色谱图装置(HPLC装置)(例如，参照专利文献1)。
如图13所示的那样，一般的HPLC装置9按照下述方式构成，该方式为：在试样调制单元90中，调制包括机体成分的试样，然后，将该试样导入分析柱91中，使机体成分吸附于分析柱91的填充剂中。在试样采用全血来测定糖基血红蛋白的情况下，对分析柱91，使从全血中采取的红血球溶血后，稀释溶血液，将该状态的机体试样导入。另一方面，吸附于填充剂中的机体成分通过将洗提液借助送液泵92，从洗提液瓶93供给分析柱91的方式洗提。包括来自分析柱91的机体成分的洗提液导入测光机构94，在该测光机构94中，连续地测定包括机体成分的洗提液的吸光度，由此，进行机体成分的分析。
如图14所示的那样，测光机构94在包括机体成分的洗提液在测光单元95的流路96中流通的期间，照射来自光源97的光，在此时的透射光在感光部98中感光。在感光部98中感光的光的波长在干涉滤波器99中选择，另一方面，从感光部98输出与感光量相对应的输出电平的信号。由于测光机构94中的洗提液的测光连续地进行，故洗提时间和感光量(吸光度)之间的关系作为图15所示的色谱图而获得。
在HPLC装置9中，还根据作为吸光度随时间的变化的色谱图，对血红蛋白总量进行运算，并且运算在该血红蛋白总量中糖基血红蛋白所占的比例(由图15中的交叉影线表示的部分)的糖基血红蛋白浓度。
但是，由于洗提液中的氧等的气体的溶解量随洗提液的温度而不同，故在装置外部的温度(环境温度)改变的情况下，或在于环境温度不同的状态进行机体成分的分析的情况下，洗提液中的溶解气体的状态(溶解量)不同。由此，在洗提液中的溶解氧浓度随环境温度的变化等而改变的情况下，血红蛋白中的氧合血红蛋白与脱氧血红蛋白的比例变化。另外，即使在导入分析柱91中的机体试样中，针对每次的测定，血红蛋白中的氧合血红蛋白和脱氧血红蛋白的比例改变。
另一方面，由于导入分析柱91中的机体试样采用稀释溶血液而氧较多的状态的式试样，在测光机构94中，将氧合血红蛋白的最大吸收波长415nm用作测定波长。由此，在环境温度的变化较大的环境下等的条件下，由于氧合血红蛋白和脱氧血红蛋白的比例不同，故在同一波长测定它们的情况下，难以进行正确的测定。
专利文献1：日本特开平7-120447号文献
发明内容
本发明的课题在于即使在氧合血红蛋白和脱氧血红蛋白的比例不同的情况下，仍可适当地测定糖基血红蛋白的浓度。
本发明的第1方面所提供的糖基血红蛋白浓度测定方法为利用在对试样照射光时从试样传过来的光来测定糖基血红蛋白浓度的方法，其中，利用在400～450nm的波长范围内具有峰值波长的多个测定波长的光来测定糖基血红蛋白的浓度。
优选的是，连续地或间歇地感光从试样传过来的光中的、至少在415～430nm的波长范围内的不同的峰值波长的光，从而测定糖基血红蛋白浓度。
本发明可适用于采用液相色谱法的糖基血红蛋白浓度的测定方法。在这种情况下，糖基血红蛋白浓度根据例如将测定波长、洗提时间和检测量作为变量的3维色谱图而运算。更具体地说，例如，糖基血红蛋白浓度作为如下比例运算得到，该比例为：在所述3维色谱图中，与糖基血红蛋白对应的体积或累计值在与血红蛋白总量对应的体积或累计值中所占的比例。糖基血红蛋白浓度也可以通过如下运算得出：根据各测定波长中的以洗提时间和检测量作为变量的色谱图，对糖基血红蛋白的比例进行运算，并且，对各测定波长的糖基血红蛋白的比例进行平均。
糖基血红蛋白浓度也可以作为如下比例运算得到，该比例为：在各测定波长的血红蛋白检测量的峰值和洗提时间的2维色谱图中，与糖基血红蛋白对应的面积在与血红蛋白总量对应的面积中所占的比例。
还可以根据从试样传过来的在400～420nm的波长范围内具有峰值波长的光的量即第一光量以及从试样传过来的在420～440nm的波长范围内具有峰值波长的光的量即第二光量，对糖基血红蛋白浓度进行测定。在这种情况下，糖基血红蛋白浓度可通过下述方式进行运算，该方式为：根据所述第一光量来计算氧合血红蛋白浓度或与该浓度相关的值，另一方面，根据所述第二光量来计算脱氧血红蛋白浓度或与该浓度相关的值，并且，对所述氧合血红蛋白浓度和所述脱氧血红蛋白浓度进行合计，或对与所述氧合血红蛋白浓度相关的值和与所述脱氧血红蛋白浓度相关的值进行合计，将该合计而运算的值作为血红蛋白浓度。
本发明的糖基血红蛋白浓度测定方法采用液相色谱法的情况下，利用第1色谱图和第2色谱图重叠的色谱图来对糖基血红蛋白浓度进行运算，所述第1色谱图为表示基于所述第一光量获得的洗提时间和检测量的关系并与氧合血红蛋白相对应的色谱图，所述第2色谱图为表示基于所述第二光量获得的洗提时间和检测量的关系并与脱氧血红蛋白相对应的色谱图。
上述试样例如为将血球进行溶血的试样。
本发明的第2方面提供一种糖基血红蛋白浓度测定装置，其具备测光机构，该测光机构将来自光源的光照射于试样，并在感光部对此时从试样传过来的光进行感光，其中，所述测光机构以区分在400～450nm的波长范围内具有峰值波长的多个测定波长的光，使其在感光部感光的方式构成。
优选的是，所述感光部以能够连续或间歇地感光至少在415～430nm的波长范围内的不同峰值波长的光的方式构成。
本发明可适用于利用液相色谱法的糖基血红蛋白浓度的测定装置。该这种情况下，还包括运算部，该运算部以根据将测定波长、洗提时间和检测量作为变量的3维色谱图，对糖基血红蛋白浓度进行运算的方式构成。
运算部例如以将糖基血红蛋白浓度作为如下比例运算的方式构成，该比例为：在所述3维色谱图中，与糖基血红蛋白对应的体积或累计值在与血红蛋白总量对应的体积或累计值中所占的比例。更具体地说，运算部例如以运算如下比例作为糖基血红蛋白浓度的方式构成：在将从上述3维色谱图中获得的洗提时间和检测量的峰值作为变量的2维色谱图中，与糖基血红蛋白对应的面积在与血红蛋白总量对应的面积中所占的比例。运算部也可以按照由如下过程运算糖基血红蛋白浓度的方式构成：根据各测定波长中的以洗提时间和检测量作为变量的色谱图中，对糖基血红蛋白的比例进行运算，并且，对各测定波长的糖基血红蛋白的比例进行平均。所述运算部还可以以将如下比例作为糖基血红蛋白浓度运算的方式构成，该比例为：在各测定波长的血红蛋白检测量的峰值和洗提时间的2维色谱图中，与糖基血红蛋白对应的面积在与血红蛋白总量对应的面积中所占的比例。
本发明的糖基血红蛋白浓度测定装置还可包括运算部，该运算部根据从试样传过来的在400～420nm的波长范围内具有峰值波长的光的量即第一光量以及从试样传过来的在420～440nm的波长范围内具有峰值波长的光的量即第二光量，对糖基血红蛋白浓度进行运算。所述运算部例如构成为：根据所述第一光量来计算氧合血红蛋白浓度或与该浓度相关的值，另一方面，根据所述第二光量来计算脱氧血红蛋白浓度或与该浓度相关的值，并且，对所述氧合血红蛋白浓度和所述脱氧血红蛋白浓度进行合计，或对与所述氧合血红蛋白浓度相关的值和与所述脱氧血红蛋白浓度相关的值进行合计，将通过该合计而运算得出的值作为血红蛋白浓度。
在本发明的糖基血红蛋白浓度测定装置采用液相色谱法的情况下，所述运算部还可以利用第1色谱图和第2色谱图重叠的色谱图来对糖基血红蛋白浓度进行运算，所述第1色谱图为表示基于所述第一光量获得的洗提时间和检测量的关系并与氧合血红蛋白相对应的色谱图，所述第2色谱图为表示基于所述第二光量获得的洗提时间和检测量的关系并与脱氧血红蛋白相对应的色谱图。
上述试样例如为将血球进行溶血的试样。
附图说明
图1为表示本发明的第1实施方式的糖基血红蛋白测定装置的一例的HPLC装置的概略结构图；
图2为用于说明图1所示的HPLC装置中的测光机构的剖视图；
图3为表示图1所示的HPLC装置的主要部分的方框图；
图4为用于说明图1所示的HPLC装置的动作的流程图；
图5为用于说明图1所示的HPLC装置的运算电路的浓度测定处理的流程图；
图6为在运算电路中获得的3维色谱图的一例；
图7为用于说明本发明的第2实施方式的运算电路的浓度测定处理的流程图；
图8A为表示特定时间的测定波长和吸光度之间的关系的曲线图，图8B为通过特定时间的最大吸光度制作的2维色谱图；
图9为用于说明本发明的第3实施方式的运算电路的浓度测定处理的流程图；
图10为测定波长为415nm的情况(1点划线)，测定波长为430nm的情况(虚线)，将测定波长为415nm时的吸光度和430nm时的吸光度合计的情况(实线)的2维色谱图；
图11为表示实施例1的环境温度与糖基血红蛋白浓度之间的关系的曲线图；
图12为比较例1的环境温度与糖基血红蛋白浓度之间的关系的曲线图；
图13为表示现有的糖基血红蛋白测定装置的一例的HPLC装置的概略结构图；
图14为用于说明图13所示的HPLC装置的测光机构的剖视图；
图15为在图13所示的HPLC装置中获得的色谱图的一例。
符号说明：
符号X表示HPLC装置(糖基血红蛋白测定装置)；
标号5表示测光机构；
标号51表示(测光机构)光源；
标号53B表示(测光机构)感光元件(感光部)
标号61表示运算部。
具体实施方式
下面参照附图，对本发明的第1～第3实施方式进行具体说明。
首先，参照图1～图6，对本发明的第1实施方式进行说明。
图1所示的HPLC装置X相当于本发明的糖基血红蛋白浓度测定装置的一例，按照采用全血来测定糖基血红蛋白浓度的方式构成。该HPLC装置X包括多个洗提液瓶10、11、12(在图面上为3个)，脱气装置2，试样调制单元3，分析单元4，测光机构5和运算电路6。
各洗提液瓶10、11、12保持应供给后述的分析柱40的洗提液。作为洗提液，例如采用pH，氯浓度不同的缓冲液。
脱气装置2用于在将洗提液供给到分析单元4(分析柱40)之前，从洗提液中去除溶解气体，经由管70A，70B，70C而与洗提液瓶10、11、12连接，经由管71A，71B，71C而与分析单元4的集管41连接。
如图1所示的那样，试样调制单元3用于利用从采血管13采取的血球成分，调制导入分析柱40的试样。该试样调制单元3包括试样喷嘴30，调制液箱31和稀释槽32。
试样喷嘴30用于采取以采血管13的血液试样14为主的各种液体，可进行液体的吸引排出，并且可沿上下方向和水平方向移动。该试样喷嘴30的动作通过图外的控制机构进行控制。
调制液箱31用于保持利用血液试样14调制导入分析柱40的导入用试样的调制液。在调制液箱31中，保持作为调制液的溶解有红血球的溶血液、用于稀释溶血液的稀释液等。
稀释槽32用于提供溶有血液试样14中的红血球并且稀释溶血液来调制导入用试样的场所。该稀释槽32经由管72连接于后述的分析单元4中的注射阀43，并且以在稀释槽32中调制的导入用试样可经由注射阀43导入分析柱40中的方式构成。
分析单元4用于控制对分析柱40的填充剂的机体成分的吸附、洗提，并将各种机体成分供给测光机构5，通过图外的调温机构进行温度控制。分析单元4中的设定温度例如为40℃的程度。分析柱40保持用于有选择地吸附试样中的血红蛋白的填充剂。作为填充剂采用例如甲基丙烯酸酯共聚物。
分析单元4不仅包括分析柱40，还包括集管41，送液泵42和注射阀43。
分析单元41用于从多个洗提液瓶10、11、12中的特定的洗提液瓶10、11、12，有选择地将洗提液供给注射阀43。该集管41经由管71A，71B，71C与脱气装置2连接，经由管73与注射阀43连接。
送液泵42用于提供经由注射阀43将洗提液移动到分析柱40用的动力，设置于管73中的途中。送液泵42按照例如洗提液的流量在1.0～2.0ml/min的方式动作。
注射阀43可采取一定量的导入用试样并且将该导入用试样导入分析柱40中，包括多个导入口和排出口(图示省略)。注射环44连接于该注射阀43。该注射环44可保持一定量(例如，数μL)的液体，可以通过适当切换注射阀43来选择如下状态：注射环44与稀释槽32连通，从稀释槽32将导入用试样供给注射环44的状态；注射环44经由管74与分析柱40连通，从注射环44将导入用试样导入分析柱40中的状态；或从图外的清洗槽，将清洗液供给到注射环44的状态。这样的注射阀43可采用例如6通阀。
如图2所示的，测光机构5以光学方式检测来自分析柱40的洗提液中包括的血红蛋白，包括测光单元50，光源51，分光器52，测定用感光系统53和参照用感光系统54。
测光单元50用于规定测光区域。该测光单元50包括导入流路50A，测光流路50B和排出流路50C，这些流路50A，50B，50C一串地连通。导入流路50A用于将来自分析柱40(参照图1)的洗提液导入测光流路50B，经由管75而与分析柱40连接。测光流路50B流通有构成测光对象的洗提液，并且提供用于对洗提液进行测光的场所，呈直线状而形成。在该测光流路50B两端开放，并且两端部通过透明盖55塞住。排出流路50C用于排出测光流路50B的洗提液，经由管76而与废液槽15连接(参照图1)。
光源51用于对在测光流路50B中流通的洗提液照射光。该光源51以光轴L通过测光流路50B的中心的方式设置为面对测光流路50B的端面50Ba(透明盖55)的状态。光源51也可对应于后述的运算部61(参照图3)的浓度运算方式选择可射出的波长范围，但是，通常为可射出400～500nm的波长范围的光，例如采用卤灯。显然，光源51也可采用卤灯以外的类型，例如具有1个或多个LED元件的类型。
分光器52用于分割从光源51射出的光中的、透过测光流路50B的光并使该光射入测定用感光系统53和参照用感光系统54，在光轴L上，以45度倾斜的状态设置。分光器52可采用半透半反镜等的公知的各种类型。
测定用感光系统53对透射了分光器52的光中的、作为目的波长的光有选择地进行感光，并且该测定用感光系统53设置于光轴L上。该测定用感光系统53包括波长选择部53A、以及用于感光透射该波长选择部53A的光的感光元件53B。波长选择部53A选择对应于后述的运算部61(参照图3)中的浓度运算方法而应该透射的光的波长。该波长选择部53A可采用干涉滤波器、锐截止滤波器和衍射光栅等的公知的分光机构。感光元件53B可采用光电二极管。
参照用感光系统54用于取得抑制来自分析柱40(参照图1)的洗提液的浊度、散射的影响用的数据，有选择地感光在分光器52中反射而光路改变的光中的、作为参照波长的500nm的光。该测定用感光系统74包括有选择地使500nm的光透射的干涉滤波器54A；用于感光透射干涉滤波器54A的光的感光元件54B。感光元件54B可采用光电二极管。
如图3所示的那样，运算电路6包括控制部60和运算部61。
控制部60用于控制各部分的动作。更具体地说，控制部60控制光源51的点亮、熄灭，控制波长选择部53A而选择在感光元件53B中感光的光的波长，或控制运算部61中的浓度运算处理。
运算部61用于对根据感光元件53B，54B的感光结果，全血中的血红蛋白浓度进行运算。该运算部61存储运算所需要的程序，该动作通过控制部60而控制。
接着，参照图1～图3，以及图4所示的流程图，对HPLC装置X的动作进行说明。
在HPLC装置X中，在确认测定开始的指示的情况下(S1)，向分析柱40供给洗提液(S2)。洗提液利用送液泵42的动力，从洗提液瓶10、11、12经由脱气器2、集管41供给于注射阀43，另外，供给多个洗提液瓶10、11、12中的哪个洗提液瓶10、11、12的洗提液是通过控制集管41的方式选择。供给到注射阀43的洗提液经由管74供给分析柱40。
在HPLC装置X中，还调制须导入分析柱40中的导入用试样(S3)。当进行导入用试样的调制时，首先，从采血管13采取血液试样14。来自采血管13的血液试样14的采取通过使试样喷嘴30动作进行。通过试样喷嘴30采取的血液试样14通过使试样喷嘴30动作，供给稀释槽32。稀释槽32从调制液箱31，依次供给溶血剂和稀释液，通过采用试样喷嘴30的吸移操作，混合稀释槽32内的液体，由此，调制导入用试样。
导入用试样导入分析柱40中(S4)。相对分析柱40的导入用试样的导入进行注射阀43的切换操作，由此，注射环44的导入用试样与洗提液一起导入分析柱40中。在分析柱40中，通过导入导入用试样，将糖基血红蛋白吸附于填充剂上。在将糖基血红蛋白吸附于填充剂上之后，通过集管41，适当切换供给分析柱40的洗提液的种类，洗提吸附于填充剂上的糖基血红蛋白。
另一方面，在从导入用试样的导入开始起，经过一定时间的情况下，通过进行注射阀43的切换操作，接着，将洗提液供给分析柱40，并且进行注射环44的清洗(S5)。另一方面，在注射环44的清洗的同时，与在先说明的情况相同，从与先前不同的采血管13的血液试样14，调制导入用试样(S3)，在注射环44的清洗之后，再次将导入用试样导入注射环44(S4)。这样的导入用试样的调制(S3)，导入(S4)，清洗(S5)在适当切换注射阀43的同时，对应于构成测定对象的采血管13(血液试样14)的数量而反复进行。
含有从分析柱40排出的糖基血红蛋白的洗提液经由管76供给测光机构5的测光单元50，进行测光(S6)。对测光单元50，经由管75和导入管路50A导入洗提液，洗提液在通过测光流路50B和排出流路50C之后，经由管76导入废液槽15。
在测光机构5中，在来自分析柱40的洗提液通过测光流路50B时，利用光源51对洗提液连续照射光。另一方面，透射测光流路50B的光在分光器52中分割之后，在测定用感光系统53和参照用感光系统54中感光。在测定用感光系统53中，透射波长选择部53A的特定波长的光在感光元件53B中有选择地被感光。另一方面，在参照用感光系统54中，作为透射干涉滤波器54A的参照波长为500nm的光有选择地由感光元件54B感光。
感光元件53B，54B的感光结果输出给运算电路6，在该运算电路6中，对糖基血红蛋白的浓度进行运算(S7)。
运算电路6的浓度运算处理按照图5所示的流程图的顺序而进行。
首先，对从400～450nm，优选415～430nm的波长范围选择的多个波长，就每各波长、每各特定时间，进行测光(S10)。更具体地说，从光源51连续地射出光，另一方面，通过控制部60控制波长选择部53A，在感光元件53B感光的光的波长在上述波长范围内经时变化。即，在感光元件53B感光的光的波长连续地或间歇地变化。另外，在上述波长范围内，波长变化的测光反复地进行。
图6表示波长间歇变化的情况的实例，但是，在将上述时间范围作为同一时间处理的情况下，针对每各测定波长获得2维色谱图，如果还使测定波长成为变量，则获得以洗提时间、吸光度和测定波长为变量的3维色谱图。另外，在图6中，较大地设定测定波长的间隔，但是，实际上，测定波长的间隔极小(例如，0.1～2nm)，以波长为变量的情况下的坐标(plot)点不是离散的，而是很连续的。
接着，对相当于同一时间的各波长的血红蛋白的吸光度进行累计(S11)。即，相当于图6的3维色谱图的血红蛋白的部分的体积，作为相当于各测定波长的2维色谱图的血红蛋白的部分的面积的累计(積算)值而运算。
然后，对相当于同一时间的各波长的糖基血红蛋白的吸光度进行累计(S12)。即，将相当于图6的3维色谱图的糖基血红蛋白的部分的体积，作为相当于各测定波长的2维色谱图的血红蛋白的部分的面积的累计值而运算。
然后，运算糖基血红蛋白相对血红蛋白总量的比例(S13)。即，在相当于图6中3维血红蛋白总量的体积(累计值)中的、相当于糖基血红蛋白的体积(累计值)所占的比例进行运算，将其作为糖基血红蛋白浓度(％)。
在S13中的运算结束的情况，返回图4的S7(S14)。即，运算电路6的运算结果显示于图外的显示板中，另外，通过自动的或使用者的按钮操作，进行打印输出(S8)。
在本实施方式中，在包括氧合血红蛋白的最大吸收波长的415nm和作为脱氧血红蛋白的最大吸收波长的430nm的波长范围，根据连续地或间歇地改变波长时的吸光度变化，对糖基血红蛋白浓度进行运算。即，本发明不是从主体上着眼于氧合血红蛋白而对糖基血红蛋白的浓度进行运算，而是还考虑了脱氧血红蛋白的影响而对糖基血红蛋白的浓度进行运算。由此，即使在洗提液中的溶解气体的状态改变，血红蛋白中的氧合血红蛋白与脱氧血红蛋白的比例改变，或导入分析柱40的导入用试样的氧合血红蛋白和脱氧血红蛋白的比例改变的情况下，仍不受到影响。其结果是，在本实施方式中，即使在于HPLC装置X的外部的温度(环境温度)改变的环境下，在环境温度不同的状态测定糖基血红蛋白的情况下，或产生导入分析柱中的试样的氧浓度的差异的情况下，也能够与洗提液的氧合血红蛋白与脱氧血红蛋白的比例无关地测定稳定的糖基血红蛋白浓度。
另外，糖基血红蛋白浓度的计算例如，可根据各测定波长的2维色谱图，分别计算在血红蛋白总量中糖基血红蛋白所占的比例，并且计算各测定波长的糖基血红蛋白的比例的平均值，将该平均值作为糖基血红蛋白浓度。
下面参照图3，图7和图8，对本发明的第2实施方式进行说明。
如图7所示，本实施方式中的运算电路6中的浓度运算处理的方法不同于在先的实施方式。
首先，在400～450nm，优选415～430nm的波长范围选择的多个波长中，每特定时间进行测光(S20)。此方面与第1实施方式的S10(参照图5)相同。在连续地或间歇地改变测定波长的情况下，如图8A所示，获得表示每各时间测定波长和吸光度的关系的曲线图。
接着，选择同一时间的最大吸光度(max)，获得表示图8B所示的那样的洗提时间和最大吸光度的关系的2维色谱图(S21)。
然后，根据图8B所示的2维色谱图，作为与糖基血红蛋白量相对应的面积相对于与血红蛋白总量相对应的面积，对糖基血红蛋白量浓度(％)进行运算(S22)。
在S22的处理结束的情况下，返回图4的S7(S23)，运算电路6的运算结果输出给图外的显示板等(S8)。
在本实施方式中，测定波长采用包括作为氧合血红蛋白的最大吸收波长的415nm和作为脱氧血红蛋白的最大吸收波长的430nm的波长范围，并且通过在这些测定波长中测定的最大吸光度，对糖基血红蛋白浓度进行运算。由此，与本发明的第1实施方式的情况相同，可与来自分析柱40的洗提液中的氧合血红蛋白和脱氧血红蛋白的比例无关地进行稳定的氧合血红蛋白浓度的测定。
下面参照图3，图9和图10，对本发明的第3实施方式进行说明。
在本实施方式中，如图9所示，运算电路6的浓度运算处理的方法不同于在先实施方式。
首先，在415nm和430nm中，每特定时间进行测光(S30)。更具体地说，从光源51连续地射出光，另一方面，通过控制部60控制波长选择部53A，在415nm和430nm之间交替地切换由感光元件53B感光的光的波长。这样的测定波长的切换反复地进行。其结果是，如图10所示，测定波长为415nm时的氧合血红蛋白基准的2维色谱图(图10的点划线)，与测定波长为430nm时的脱氧血红蛋白基准的2维色谱图(参照图10的虚线)作为洗提时间和吸光度的关系而获得。
接着，根据测定波长为415nm时的氧合血红蛋白基准的2维色谱图(图10的点划线)，对糖基血红蛋白浓度进行运算(S31)。
接着，根据测定波长为430nm时的脱氧血红蛋白基准的2维色谱图(图10的虚线)，对糖基血红蛋白浓度进行运算(S32)。
然后，对测定波长为415nm时的浓度运算结果和测定波长为430nm时的浓度运算结果进行合计，将其作为糖基血红蛋白浓度(S33)。
在S33的处理结束的情况下，返回图4的S7(S34)，运算电路6的运算结果输出给图外的显示板等(S8)。
在本实施方式中，作为测定波长，在氧合血红蛋白的最大吸收波长的415nm和脱氧血红蛋白的最大吸收波长430nm的测定结果进行合计，对糖基血红蛋白量浓度进行运算。由此，与本发明的第1实施方式的情况相同，可与来自分析柱40的洗提液的氧合血红蛋白与脱氧血红蛋白的比例无关地进行稳定的糖基血红蛋白浓度的测定。
在本实施方式中，糖基血红蛋白浓度也可根据将测定波长为415nm时的色谱图和430nm时的色谱图合计而获得的色谱图(图10的实线)而运算。
另外，获得氧合血红蛋白基准的色谱图时的测定波长并不限于415nm，可从400～420nm的波长范围选择，获得脱氧血红蛋白基准的色谱图时的测定波长并不限于430nm，可从420～440nm的范围选择。
本发明并不限于在先说明的实施方式，可按照各种方式变更。例如，在先描述的浓度运算处理中，血红蛋白量作为吸光度而获得，但是，血红蛋白量不必一定作为吸光度而获得，也可作为透过度，或单纯作为感光量而获得。
此外，作为在测定机构5中区别多个测定波长的光而对其识别的方法，除了在通过1个感光元件53B而进行的情况，也可设置与测定波长的数量相对应的感光元件或采用具有感光区域的发光元件的方法。
作为选择由作为测光机构5中的测定用感光系统53的感光元件53B感光的光的波长(测定波长)的方法，采用在测定用感光元件53中设置波长选择部53A的方案，但是，也可采用波长选择部设置于光源51和测光单元50之间的方案。
还有，本发明并不限于测定血液中的糖基血红蛋白浓度用的HPLC装置，也可适用于采用血液以外的标本的情况，或HPLC装置以外的液相色谱图装置以及其它的糖基血红蛋白量浓度测定装置。
实施例
(实施例1)
在本实施例中，在改变测定波长测定糖基血红蛋白浓度的情况下，对环境温度对测定值造成的影响进行分析。
将环境温度为10℃，20℃和30℃的情况下，对于糖基血红蛋白的浓度，使用在糖基血红蛋白测定装置(“ADAMS A1c HA-8160”：爱科来(ァ一クレィ)株式会社制)采用光电二极管阵列(“紫外线可视多波长检测器MD-910”；日本分光株式会社制)作为感光元件的装置而进行测定。糖基血红蛋白浓度以如下方法测定：在415～430nm的波长范围内，分别测定每1nm处的血红蛋白总量和糖基血红蛋白量，在此基础上，计算在上述的波长范围内的糖基血红蛋白的累计值相对于血红蛋白的累计值的比例作为糖基血红蛋白浓度。
标本采用从健康人采取的血液(健康人标本)和从糖尿病患者采取的血液(糖尿患者血液)。关于糖基血红蛋白的测定结果，在下面的表1和图11中给出。
表1
(比较例1)
在本比较例中，在将测定波长固定为作为氧合血红蛋白的最大吸收波长的415nm，测定糖基血红蛋白浓度的情况下，对环境温度对于测定值造成的影响进行了分析。
除了将测定波长固定以外，与实施例1基本相同的条件下测定糖基血红蛋白的浓度，运算出糖基血红蛋白量在血红蛋白量总量中的比例。关于糖基血红蛋白的测定结果，在下面的表2和图12中给出。
表2
如比较例1，在将测定波长固定在作为氧合血红蛋白的最大吸收波长的415nm，测定糖基血红蛋白的情况下，根据表2和图12可知，环境温度越高，测定值越大，测定值大大受到环境温度的影响。
相对该情况，如实施例1，根据使测定波长从氧合血红蛋白的最大吸收波长(415nm)到脱氧血红蛋白的最大吸收波长(430nm)之间变化时的累计值，对血红蛋白浓度进行运算的情况下，从表1和图11可知，即使环境温度在10～30℃的范围内变化的情况下，测定值几乎不受到环境温度的影响，基本为一定值。
从上述情况可知，根据使测定波长从氧合血红蛋白的最大吸收波长(415nm)到脱氧血红蛋白的最大吸收波长(430nm)之间变化时的累计值，对糖基血红蛋白量浓度进行运算的情况下，不受环境温度(洗提液的溶解氧浓度)或试样的溶解氧浓度的影响，可进行正确而稳定的糖基血红蛋白浓度的测定。
Claims (4)
1.一种糖基血红蛋白浓度测定方法，所述糖基血红蛋白浓度测定方法为利用液相色谱法的糖基血红蛋白浓度的测定方法，其特征在于，利用在对试样照射光时从试样传过来的透射光来测定糖基血红蛋白浓度，其中，
根据从试样传过来的在400～420nm的波长范围内具有峰值波长的光的量即第一光量以及从试样传过来的在420～440nm的波长范围内具有峰值波长的光的量即第二光量，对糖基血红蛋白浓度进行测定，
利用第1色谱图和第2色谱图重叠的色谱图，对糖基血红蛋白浓度进行运算，所述第1色谱图为表示基于所述第一光量获得的洗提时间和检测量的关系并与氧合血红蛋白相对应的色谱图；所述第2色谱图为表示基于所述第二光量获得的洗提时间和检测量的关系并与脱氧血红蛋白相对应的色谱图，其中，所述检测量为吸光度、透过度或者感光量。
2.根据权利要求1所述的糖基血红蛋白浓度测定方法，其特征在于，所述试样为使血球溶血的试样。
3.一种糖基血红蛋白浓度测定装置，所述糖基血红蛋白浓度测定装置为利用液相色谱法的糖基血红蛋白浓度的测定装置，其具备测光机构，该测光机构将来自光源的光照射于试样，并在感光部对此时从试样传过来的透射光进行感光，其中，
所述测光机构以区分在400～420nm的波长范围内具有峰值波长的光以及在420～440nm的波长范围内具有峰值波长的光，并使其在感光部感光的方式构成，
还包括运算部，该运算部根据从试样传过来的在400～420nm的波长范围内具有峰值波长的光的量即第一光量以及从试样传过来的在420～440nm的波长范围内具有峰值波长的光的量即第二光量，对糖基血红蛋白浓度进行运算，
所述运算部利用第1色谱图和第2色谱图重叠的色谱图来对糖基血红蛋白浓度进行运算，所述第1色谱图为表示基于所述第一光量获得的洗提时间和检测量的关系并与氧合血红蛋白相对应的色谱图，所述第2色谱图为表示基于所述第二光量获得的洗提时间和检测量的关系并与脱氧血红蛋白相对应的色谱图，其中，所述检测量为吸光度、透过度或者感光量。
4.根据权利要求3所述的糖基血红蛋白浓度测定装置，其中，所述试样为使血球溶血的试样。
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