JPH05113441A - 糖化ヘモグロビンの分析法 - Google Patents

糖化ヘモグロビンの分析法

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JPH05113441A
JPH05113441A JP3113938A JP11393891A JPH05113441A JP H05113441 A JPH05113441 A JP H05113441A JP 3113938 A JP3113938 A JP 3113938A JP 11393891 A JP11393891 A JP 11393891A JP H05113441 A JPH05113441 A JP H05113441A
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JP
Japan
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glycated hemoglobin
exchange group
hemoglobin
column
boric acid
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Application number
JP3113938A
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English (en)
Inventor
Yuji Hirowatari
祐史 廣渡
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tosoh Corp
Original Assignee
Tosoh Corp
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Publication date
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 血液中の糖化ヘモグロビンと非糖化ヘモグロ
ビンとを分離して糖尿病の診断や糖尿病患者の経過観察
の最適な指標とされている糖化ヘモグロビンを効率良く
分析する方法を提供する。 【構成】 第1液、第2液、第3液を順次用いて試料を
陽イオン交換基を有する充填剤に接触させ、次いでホウ
酸交換基を有する充填剤に接触させることにより、まず
非糖化ヘモグロビンと糖化ヘモグロビンを陽イオン交換
基に吸着させ、次いで糖化ヘモグロビンをホウ酸交換基
に吸着させた後、糖化ヘモグロビンを溶離して分離す
る。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は糖尿病の診断や糖尿病患
者の経過観察の指標となる糖化ヘモグロビンの分析法に
関する。
【0002】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】糖化ヘ
モグロビンとは血液中の糖がその濃度に比例して非酵素
的にヘモグロビンと結合して生成したものであり、その
濃度は過去1〜2ケ月の血液中の平均的な糖濃度を反映
すると言われている。そして血糖値や尿糖値に比べ生理
的要因に左右されにくいということもあり、糖尿病の診
断或いは糖尿病患者の経過観察の最適な指標として広く
使用されている。
【0003】従来、血液中の糖化ヘモグロビンを分析す
る方法としてイオン交換ゲルやホウ酸ゲルを用いたミニ
カラム法が知られている。しかしながらイオン交換ゲル
を用いたミニカラム法の場合、糖化ヘモグロビンのA1
分画に、非糖化ヘモグロビンであるヘモグロビンFが含
まれてしまい、このためA1 分画を更に細分画してヘモ
グロビンFを分離する必要があるが、ヘモグロビンFは
糖化ヘモグロビンとイオン強度が近似しているためA1
分画を迅速かつ正確に細分画することは困難であった。
またホウ酸ゲルを用いたミニカラム法では、糖化ヘモグ
ロビンの吸光光度分析の測定波長である415nm付近に
吸収を有するポルフィリンの分離が困難であるため測定
誤差が大きくなり、また他の糖蛋白質、糖類や、溶血の
目的でサンプル中に添加される各種の界面活性剤の影響
で糖化ヘモグロビンとホウ酸ゲルとの相互作用が弱めら
れ、この結果測定に時間を要する問題があった。を固定
相として用いたミニカラム法や高速液体クロマトグラフ
ィー法等が知られている。
【0004】ミニカラム法は非常に簡単な設備によって
分離分析を行うことの便利な方法であるが、ミニカラム
法による血液中の糖化ヘモグロビンの分離分析には上記
の如き問題があるため、現在では分離能力の高い高速液
体クロマトグラフィー法が広く使用されている。この方
法では血液中の糖化ヘモグロビンを迅速に分離分析する
ことができるが、高価な分析装置を必要とするため、ミ
ニカラム法のような簡単な設備によっても容易に糖化ヘ
モグロビンを分離分析できる方法の開発が望まれてい
た。本発明は上記従来技術の問題点に鑑みなされたもの
で、高速液体クロマトグラフィー法はもとより、ミニカ
ラム法によっても容易に血液中の糖化ヘモグロビンを分
離分析することのできる糖化ヘモグロビンの分析方法を
提供することを目的とする。
【0005】
【課題を解決するための手段】即ち本発明の糖化ヘモグ
ロビンの分析法は、試料中を第1液によってカラムに充
填された陽イオン交換基を有する充填剤と接触させて該
充填剤に試料中の糖化ヘモグロビン及び非糖化ヘモグロ
ビンを吸着させ、次いで第2液によって上記充填剤に吸
着されている糖化ヘモグロビン及び非糖化ヘモグロビン
を溶離し、非糖化ヘモグロビンをカラムに充填されたホ
ウ酸交換基を有する充填剤に吸着することなく溶出する
とともに、糖化ヘモグロビンを上記ホウ酸基を有する充
填剤に吸着し、しかる後、第3液によってホウ酸基を有
する充填剤に吸着されている糖化ヘモグロビンを溶出し
て分析することを特徴とする。
【0006】このようにホウ酸交換基を有する充填剤を
使用することにより、ヘモグロビンFを含むことなく糖
化ヘモグロビンを迅速に分画でき、また糖化ヘモグロビ
ンを一旦陽イオン交換基を有する充填剤に吸着させ、次
いでホウ酸交換基を有する充填剤に吸着させることによ
り、ポルフィリン等の如く、415nm付近に吸収を有す
るヘモグロビン以外の物質の影響や、溶血剤としてサン
プルに添加される界面活性剤の影響も受けることなく迅
速且つ正確に糖化ヘモグロビンを分離分析できる。
【0007】本発明において陽イオン交換基を有する充
填剤としては、ポリビニル系樹脂、シリカ系ゲル、デキ
ストラン樹脂等に陽イオン交換基を結合させた充填剤が
挙げられる。またホウ酸基を有する充填剤としては上記
樹脂等にホウ酸交換基を結合させた充填剤が挙げられ
る。陽イオン交換基の種類は特に限定されないが、例え
ばスルホキシプロピル基やカルボキシメチル基、グルタ
ミン酸基等が挙げられる。カラムに充填する充填剤中の
陽イオン交換基とホウ酸基との割合は、陽イオン交換基
の種類によっても異なるが、例えば陽イオン交換基がカ
ルボキシル基の場合、1:1程度が好ましい。これらの
充填剤を充填するカラムとしては、液体クロマトグラフ
ィー用カラム、ミニカラム法用のオープンタイプのカラ
ム等を用いることができる。上記陽イオン交換基を有す
る充填剤と、ホウ酸交換基を有する充填剤とは同一のカ
ラムに充填して用いても、別々のカラムに充填して用い
ても良いが、同一のカラムに充填して用いた場合には、
異なるカラムに充填した場合に比べ、カラムの連結等の
手間がないため好ましい。また充填剤の粒径は使用する
分析手段によっても異なるが、例えば液体クロマトグラ
フィー法を使用する場合には、3〜10μm程度、ミニ
カラム法を使用する場合には、20〜100μm程度の
ものが好ましい。
【0008】本発明において、第1液としては陽イオン
交換基に糖化ヘモグロビン及び非糖化ヘモグロビンを吸
着させ得るものであれば特に限定されないが、例えばpH
5.5〜6.5のイオン強度5〜20mMのリン酸緩衝液や
酢酸緩衝液等が挙げられる。また第2液としては陽イオ
ン交換基に吸着されている糖化ヘモグロビン及び非糖化
ヘモグロビンを溶離して非糖化ヘモグロビンはホウ酸交
換基に吸着させることなく溶出し、糖化ヘモグロビンは
ホウ酸交換基に吸着させ得るものであれば特に限定され
ない。このような第2液としては、例えばpH7〜8のイ
オン強度5〜20mMのリン酸緩衝液や酢酸緩衝液等が
挙げられる。更にこれら第2液中にアルカリ土類金属塩
であるMgCl2 、CaCl2 等を10〜50mM程度添加する
と、ホウ酸交換基に対する糖化ヘモグロビンの吸着力が
高まり好ましい。第3液としては、糖化ヘモグロビンを
ホウ酸交換基から溶離できるものであれば特に限定され
ないが、例えば100mM酢酸溶液や、300mMソル
ビトール溶液等を用いることができる。
【0009】本発明方法において上記充填剤を充填した
カラム及び上記第1、第2、第3液を用いて糖化ヘモグ
ロビンを分離するには、高速液体クロマトグラフィー
法、ミニカラム法等が採用されるが、高速液体クロマト
グラフィー法の場合もミニカラム法の場合も、第1、第
2、第3液を1〜2ミリリットル/分の速度で流すこと
が好ましい。
【0010】糖化ヘモグロビンの検出には吸光光度計を
用い、測定波長400〜430nmで測定すれば良い。特
に好ましい測定波長は415nmである。高速液体クロマ
トグラフィー法の場合にはフロータイプの吸光光度計が
用いられ、ミニカラム法の場合にはセルタイプの吸光光
度計が用いられる。
【0011】
【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説
明する。
【0012】実施例1 抗凝固剤としてエチレンジアミン四酢酸ナトリウム塩を
添加して採血した新鮮血を、溶血剤A(東ソー(株)
製)にて10倍に希釈したものを試料とし、1回の測定
に30マイクロリットルを使用した。陽イオン交換基を
有する充填剤としてTSKgelホウ酸トヨパール65
0(東ソー(株)製)を用い、陽イオン交換基を有する
充填剤としてTSKgelSP−トヨパール650(東
ソー(株)製)を用い、内径1cmのオープンタイプのカ
ートリッジカラムに、まずホウ酸交換基を有する充填剤
0.25ミリリットルを充填し、次に陽イオン交換基を有
する充填剤を0.25ミリリットル充填したものを分離用
カラムとして用いた。第1液として5mMリン酸緩衝液
pH6.0を、第2液として250mM酢酸アンモニウム、
50mM塩化マグネシウム混合液pH8.0を、第3液とし
て50mM酢酸溶液を用い、これらを順次各々2.5ミリ
リットルずつカラムに滴下したところ、糖化ヘモグロビ
ンは第3液中に分離された。カラムから滴下した第2液
と第3液を、それぞれ試験管に受け、これらの415nm
における吸光度を吸光光度計により測定し、第2液の吸
光度:A2、第3液の吸光度:A3 から、下記数式1に
より糖化ヘモグロビン量を算出した。第3液の滴下終了
までに要した時間は、略3分であり、非常に短時間で糖
化ヘモグロビンを確実に分離分析することができた。
【0013】
【数1】糖化ヘモグロビン量(%)=A3 ÷(A2 +A
3 )×100
【0014】
【表1】
【0015】
【発明の効果】以上説明したように本発明方法は、陽イ
オン交換基を有する充填剤とホウ酸交換基を有する充填
剤とを連続して設け、まず陽イオン交換基を有する充填
剤に糖化ヘモグロビンと非糖化ヘモグロビンとを吸着さ
せ、次いで糖化ヘモグロビンをホウ酸交換基を有する充
填剤に吸着させた後、糖化ヘモグロビンを溶離して分離
する方法を採用したため、ミニカラム法等の簡単な手段
を用いても、糖尿病の診断や糖尿病患者の経過観察の最
適な指標とされている血液中の糖化ヘモグロビンを、ヘ
モグロビンFや溶血剤の影響を受けることなく確実かつ
短時間で分離分析することができる効果がある。また同
一カラム内に陽イオン交換基を有する充填剤とホウ酸交
換基を有する充填剤とを層状に充填するか、それぞれを
別々のカラムに充填してこれらのカラムを連結して分析
する方法を採用したことにより、同一カラム中に陽イオ
ン交換基とホウ酸交換基がランダムに分布して存在する
場合に比べ糖化ヘモグロビンの分離能率が向上するとと
もに、測定誤差がを小さくすることができる効果があ
る。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 試料中の糖化ヘモグロビン及び非糖化ヘ
    モグロビンを第1液によって、カラムに充填された陽イ
    オン交換基を有する充填剤に接触させて該充填剤に吸着
    させ、次いで第2液によって上記充填剤に吸着されてい
    る糖化ヘモグロビン及び非糖化ヘモグロビンを溶離し、
    非糖化ヘモグロビンをカラムに充填されたホウ酸交換基
    を有する充填剤に吸着することなく溶出するとともに、
    糖化ヘモグロビンを上記ホウ酸基を有する充填剤に吸着
    し、しかる後、第3液によってホウ酸基を有する充填剤
    に吸着されている糖化ヘモグロビンを溶出して分析する
    ことを特徴とする糖化ヘモグロビンの分析法。
JP3113938A 1991-04-18 1991-04-18 糖化ヘモグロビンの分析法 Pending JPH05113441A (ja)

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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2012111A1 (en) * 2006-03-24 2009-01-07 Arkray, Inc. Method of measuring glycohemoglobin concentration and apparatus for concentration measurement
EP2015053A1 (en) * 2006-03-24 2009-01-14 Arkray, Inc. Method for determination of glycosylated hemoglobin level and apparatus for determination of the level
CN114712894A (zh) * 2022-04-08 2022-07-08 无锡博慧斯生物医药科技有限公司 一种糖化血红蛋白层析柱的活化液、活化方法和应用
CN114712894B (en) * 2022-04-08 2024-04-30 无锡博慧斯生物医药科技有限公司 Activating solution, activating method and application of glycosylated hemoglobin chromatographic column

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6131696A (ja) * 1984-07-23 1986-02-14 Matsushita Electric Works Ltd 送風機

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6131696A (ja) * 1984-07-23 1986-02-14 Matsushita Electric Works Ltd 送風機

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2012111A1 (en) * 2006-03-24 2009-01-07 Arkray, Inc. Method of measuring glycohemoglobin concentration and apparatus for concentration measurement
EP2015053A1 (en) * 2006-03-24 2009-01-14 Arkray, Inc. Method for determination of glycosylated hemoglobin level and apparatus for determination of the level
EP2012111A4 (en) * 2006-03-24 2009-07-15 Arkray Inc METHOD FOR MEASURING GLYCOHEMOBLOBIN CONCENTRATION AND DEVICE FOR CONCENTRATION MEASUREMENT
US8268625B2 (en) 2006-03-24 2012-09-18 Arkray, Inc. Method of measuring glycated hemoglobin concentration and concentration measuring apparatus
EP2015053A4 (en) * 2006-03-24 2014-03-05 Arkray Inc METHOD FOR DETERMINING THE MIRROR OF GLYCOSYLATED HEMOGLOBIN AND DEVICE FOR DETERMINING THE MIRROR
CN114712894A (zh) * 2022-04-08 2022-07-08 无锡博慧斯生物医药科技有限公司 一种糖化血红蛋白层析柱的活化液、活化方法和应用
CN114712894B (en) * 2022-04-08 2024-04-30 无锡博慧斯生物医药科技有限公司 Activating solution, activating method and application of glycosylated hemoglobin chromatographic column

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