JP2007212277A - 液体クロマトグラフィ装置 - Google Patents

Abstract

【課題】環境温度の変動などに起因する溶離液中の溶存酸素が分析結果に与える影響を適切に抑制する。
【解決手段】充填剤を保持したカラム６０と、溶離液を保持した溶離液保持部１２Ａ，１２Ｂ，１２Ｃと、溶離液保持部１２Ａ，１２Ｂ，１２Ｃからカラム６０に溶離液を供給するための配管８０Ａ〜８０Ｃ，８１Ａ〜８１Ｃ，８４，８５，８６と、を備えた液体クロマトグラフィ装置Ｘにおいて、配管８０Ａ〜８０Ｃ，８１Ａ〜８１Ｃ，８４，８５，８６は、酸素透過性の低い材料により形成された酸素難透過部を有している。
【選択図】図２

Description

本発明は、カラムに導入される溶離液中の溶存酸素の影響を低減することができる液体クロマトグラフィ装置に関する。

血液などの生体試料を用いて生体成分を分離分析する場合には、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）を利用した高速液体クロマトグラフィ装置（ＨＰＬＣ装置）が広く用いられている（たとえば特許文献１参照）。一般的なＨＰＬＣ装置は、図６に示したように、分析カラム９０に生体成分を含んだ試料をインジェクションして分析カラムの充填剤に生体成分を吸着させた後に、送液ポンプ９１にて分析カラム９０に送られた溶離液によって生体成分を脱着させ、配管９５を介して脱着液を連続的に供給するとともに測光機構９２によって脱着液の吸光度を連続的に測定することにより、分離分析を行なうものである。

多くのＨＰＬＣ装置９では、分離分析を安定して行なうため、送液ポンプの上流に脱気装置９３を設置している（たとえば特許文献２参照）。脱気装置９３は、溶離液中に存在する酸素等の気体を除去するためのものである。この脱気装置９３を設けることにより、溶溶離液に溶存する気体が気泡となることが抑制され、送液ポンプ９１の流量が不安定になるのを防止することができる。これにより、ＨＰＬＣ装置９において分離分析を安定して行なうことができるようになる。

特開平７−１２０４４７号公報 特開２００１−１３３４４５号公報

脱気装置９３と分析カラム９０および測光機構９２との間を繋ぐ配管９４，９５としては、脱気装置９３や分析カラム９０に対する接続操作性、流路抵抗、耐薬品性あるいは耐久性を考慮して、テフロン（登録商標）製のものが一般に使用されている（先の特許文献２参照）。しかしながら、テフロン（登録商標）は、ガス透過性が比較的に高いものである。そのため、脱気装置９３において溶離液中の溶存気体を除去したとしても、溶離液がテフロン（登録商標）製の配管９４，９５を移動する間に装置内の気体が溶離液に再吸収されてしまう。

そして、溶離液への気体の溶解量は溶離液の温度によって異なる一方で、溶離液の温度は環境温度の影響を受けるため、配管９４，９５における再吸収量は、環境温度によって異なったものとなる。そのため、装置外部の温度（環境温度）が変動した場合、あるいは環境温度が異なる状態で生体成分の分析を行なった場合には、溶離液中の溶存気体の状態（溶解量）が異なったものとなる。その結果、配管９４，９５がテフロン（登録商標）などのガス透過性の高い材質により形成されている場合には、分析カラム９０および測光機構９２に供給される溶離液中の溶存気体の状態が異なったものとなり、環境温度の変化が大きな環境化では、ＨＰＬＣ装置９において分離分析を安定して行なうことが困難となる。

また、血液試料中のグリコヘモグロビン濃度を測定する場合には、グリコヘモグロビンは、ヘモグロビン総量におけるグリコヘモグロビンの割合として把握される。しかしながら、溶離液中の溶存酸素濃度が環境温度の変動などに伴って変動した場合には、ヘモグロビン中のオキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンとの比率が変動する。その一方で、測光機構９２においては、血液試料を希釈して酸素が比較的多い状態で分析カラム９０に導入することから、オキシヘモグロビンの最大吸収波長である４１５ｎｍを測定波長として使用している。そのため、環境温度の変化が大きな環境下では、オキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンとの比率が変動することとなるため、正確な測定が困難となる。

さらに、ＨＰＬＣ装置９では、通常、１つの検体の測定につき、複数種類の溶離液を使用し、それらの溶離液相互で流量を異ならせて分析カラム９０に供給している。そのため、複数種類の溶離液ごとに配管９４を通過する時間（滞留時間）が異なったものとなるため、分析カラム９０では、１つの検体の測定において、溶離液の溶存酸素濃度が変化することなる。その結果、配管９４での気体の再吸収に起因して、測定結果が真値からズレてしまう。

また、複数のＨＰＬＣ装置９相互では、配管９４，９５のガス透過性について製造間差が生じることも想定され、その場合には、装置間で配管９４，９５での再吸収量が異なったものとなるため、複数のＨＰＬＣ装置９相互での測定精度に差が生じてしまう。

本発明は、環境温度の変動などに起因する溶離液中の溶存酸素が分析結果に与える影響を適切に抑制することを課題としている。

本発明においては、充填剤を保持したカラムと、溶離液を保持した１または複数の溶離液保持部と、上記溶離液保持部から上記カラムに上記溶離液を供給するための配管と、を備えた液体クロマトグラフィ装置であって、上記配管は、酸素透過性の低い材料により形成された酸素難透過部を有していることを特徴とする、液体クロマトグラフィ装置が提供される。

本発明の液体クロマトグラフィ装置は、たとえば溶離液保持部からカラムに溶離液を供給するまでの間に溶離液を脱気するための脱気装置をさらに備え、配管が溶離液保持部と脱気装置との間を接続する第１配管と、脱気装置とカラムとの間を接続する第２配管と、を含んだものとされる。この場合の酸素難透過部は、たとえば第２配管の全部または一部に設けられる。

本発明の液体クロマトグラフィ装置は、たとえばカラムを含み、かつ一定温度に温調された分析ユニットを備えたものとされる。この場合の酸素難透過部は、たとえば少なくとも第２配管における分析ユニットから延出する部分に設けられる。

分析ユニットは、たとえば第２配管の途中に設けられたマニホールドをさらに備えたものとされる。この場合の酸素難透過部は、第２配管における脱気装置とマニホールドとの間に設けるが好ましい。

本発明の液体クロマトグラフィ装置は、カラムからの脱離液に基づいて、試料中の特定成分を検出するための検出機構と、カラムと検出機構との間を接続する追加の配管と、をさらに備えたものとされる。この場合、追加の配管は、酸素透過性の低い材料により形成された酸素難透過部を有するものとするのが好ましい。

酸素難透過部は、たとえばナイロン、ポリエーテルエーテルケトン（ＰＥＥＫ）、ポリエチレン、またはステンレス（ＳＵＳ）により形成される。

本発明の液体クロマトグラフィ装置は、たとえば血液試料に含まれるグリコヘモグロビンの濃度を測定するように構成される。

以下、本発明の具体的な例について、図１ないし図４を参照して説明する。

図１に示したＨＰＬＣ装置Ｘは、ラック１０に保持させた採血管１１をテーブル２０にセットして、全血中のグリコヘモグロビン濃度を自動で測定するように構成されたものである。このＨＰＬＣ装置Ｘは、複数の溶離液ボトル１２Ａ，１２Ｂ，１２Ｃ（図面上は３つ）、および装置本体２を備えている。

各溶離液ボトル１２Ａ，１２Ｂ，１２Ｃは、後述する分析カラム６０に供給すべき溶離液を保持したものであり、装置本体２におけるホルダ部２１に配置されている。溶離液としては、たとえばｐＨや塩濃度の異なるバッファが使用される。

装置本体２は、上述のテーブル２０およびホルダ部２１の他に、筐体３の内部に収容された、脱気ユニット４、試料調製ユニット５、分析ユニット６、および測光ユニット７を有している（図２参照）。

テーブル２０は、所定部位にセットされたラック１０を移動させることにより、ラック１０に保持させた採血管１１を、後述する試料調製ユニット５におけるノズル５１（図２参照）により採取可能な位置に移動させるように構成されている。

筐体３には、操作パネル３０および表示パネル３１が設けられている。操作パネル３０は、複数の操作ボタン３２が設けられたものであり、操作ボタン３２を操作することにより、各種の動作（分析動作や印字動作など）を行わせるための信号を生成させ、あるいは各種の設定（分析条件の設定や被験者のＩＤ入力など）を行うことができる。表示パネル３１は、分析結果やエラーである旨を表示するとともに、設定時における操作手順や操作状況などを表示するためのものである。

図２に示したように、脱気ユニット４は、分析ユニット６（分析カラム６０）に溶離液を供給する前に、溶離液から溶存気体を除去するためのものであり、配管８０Ａ，８０Ｂ，８０Ｃを介して溶離液ボトル１２Ａ，１２Ｂ，１２Ｃに、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃを介して分析ユニット６のマニホールド６１に連結されている。図３に示したように、脱気ユニット４は、温度測定部４０Ａ，４０Ｂ，４０Ｃ、チャンバ４１、複数のスパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃ（図面上は３つ）、ポンプ４３、演算部４４および制御部４５を有している。

温度測定部４０Ａ，４０Ｂ，４０Ｃは、チャンバ４１に導入される溶離液の温度を測定するためのものであり、配管８０Ａ，８０Ｂ，８０Ｃにおけるチャンバ４１の近傍に設けられている。この温度測定部４０Ａ，４０Ｂ，４０Ｃは、配管８０Ａ，８０Ｂ，８０Ｃの内部に配置されたサーミスタ（図示略）を備えており、配管８０Ａ，８０Ｂ，８０Ｃに存在する溶離液の温度を直接測定できるように構成されている。この温度測定部４０Ａ，４０Ｂ，４０Ｃにおける測定結果は、演算部４４に出力される。

チャンバ４１は、複数の減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃ（図面上は３つ）を規定するとともに、スパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃを収容するためのものである。

スパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃは、内部において溶離液を流通させるものであるとともに、溶離液中の溶存気体を透過させるものであり、シリコンなどの公知のガス透過膜により中空に形成されている。このスパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃは、スパイラル状とされることにより、減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃ内での流路長が大きく確保されており、減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃにおける気体との接触面積を大きく確保しつつ、減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃにおける溶離液の滞留時間を大きく確保できるように構成されている。

ポンプ４３は、配管８２を介して減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃの気体を排出し、減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃを減圧するためのものである。このポンプ４３は、制御部４５によって、その動作が制御されている。

演算部４４は、温度測定部４０Ａ，４０Ｂ，４０Ｃから送信されてくる溶離液の温度データに基づいて、ポンプ４３に対する制御量を演算するためのものである。この演算部４４は、たとえば予め定めておいた溶離液の温度とポンプ４３の吸引圧力との関係式にしたがって、ポンプ４３に対する制御量を演算するように構成される。吸引圧力は、たとえばポンプ４３における弁（図示略）の開放状態あるいはポンプ４３の駆動電力（駆動電圧）により調整される。

制御部４５は、演算部４４において演算された制御量にしたがってポンプ４３の動作を制御するためのものである。

演算部４４および制御部４５は、たとえばＣＰＵ、ＲＯＭおよびＲＡＭにより構成される。

図２に示したように、試料調製ユニット５は、採血管１１から採取した血球成分から、分析カラム６０に導入する試料を調製するためのものである。この試料調製ユニット５は、ノズル５１、調製液タンク５２および希釈槽５３を有している。

ノズル５１は、採血管１１の血液試料１３をはじめとする各種の液体を採取するためのものであり、液体の吸引・吐出が可能であるとともに、上下方向および水平方向に移動可能とされている。このノズル５１の動作は、図外の制御手段によって制御されている。

調製液タンク５２は、血液試料１３をもとに、分析カラム６０に導入する導入用試料を調製するための調製液を保持したものである。この調製液タンク５２には、調製液として、赤血球の溶血させるための溶血液、溶血液を希釈するための希釈液などが保持されている。調製液タンク５２からの調製液の採取には、ノズル５１が使用される。

希釈槽５３は、血液試料中の赤血球を溶血させ、かつ溶血液を希釈して導入用試料を調整する場を提供するためのものである。この希釈槽５３は、後述する分析ユニット６におけるインジェクションバルブ６３に配管８３を介して接続されており、希釈槽５３において調製された導入用試料がインジェクションバルブ６３を介して分析カラム６０に導入できるように構成されている。

分析ユニット６は、分析カラム６０の充填剤に対する生体成分の吸着・脱着をコントロールし、各種の生体成分を測光ユニット７に供するためのものであり、図外の温調機構により温度コントロールされている。分析ユニット６における設定温度は、たとえば４０℃程度とされる。分析カラム６０は、試料中のヘモグロビンを選択的に吸着させるための充填剤を保持させたものである。充填剤としては、たとえばメタクリル酸エステル共重合体が使用される。

分析ユニット６は、分析カラム６０の他に、マニホールド６１、送液ポンプ６２、およびインジェクションバルブ６３を有している。

マニホールド６１は、複数の溶離液ボトル１２Ａ，１２Ｂ，１２Ｃのうちの特定の溶離液ボトル１２Ａ，１２Ｂ，１２Ｃから、インジェクションバルブ６３に選択的に溶離液を供給させるためのものである。このマニホールド６１は、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃを介して脱気ユニット４の減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃ（スパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃ）に接続され、配管８４を介してインジェクションバルブ６３に接続されている。

ここで、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃとしては、全体が酸素透過性の低い材料、たとえばナイロン、ポリエーテルエーテルケトン（ＰＥＥＫ）、ポリエチレン、またはステンレス（ＳＵＳ）により形成されたものを使用することができる。これらの材料は、ガス透過性の低い材料であり、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃとして先に例示したものを用いた場合には、脱気ユニット４において脱気された状態を適切に維持して分析ユニット６（マニホールド６１）に溶離液を供給することができる。また、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃは大きな圧力がかからない部分であるために、ステンレス（ＳＵＳ）のように強度の大きなものではなくポリエチレンおよびナイロンのような材料であっても必要な強度を確保できる。その一方で、ポリエチレンおよびナイロンは、加工性が良く、可撓性が高いために配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃの取り回しが容易であり、また安価に入手できるという利点を有している。

送液ポンプ６２は、溶離液をインジェクションバルブ６３に移動させるための動力を付与するためのものであり、配管８４の途中に設けられている。送液ポンプ６２は、たとえば溶離液の流量が１．０〜２．０ｍｌ／ｍｉｎとなるように動作させられる。

インジェクションバルブ６３は、一定量の導入用試料を採取するとともに、その導入用試料を分析カラム６０に導入可能とするものであり、複数の導入ポートおよび排出ポート（図示略）を備えている。このインジェクションバルブ６３には、インジェクションループ６４が接続されている。このインジェクションループ６４は、一定量（たとえば数μＬ）の液体を保持可能なものであり、インジェクションバルブ６３を適宜切り替えることにより、インジェクションループ６４が希釈槽５３と連通して希釈槽５３からインジェクションループ６４に導入用試料が供給される状態、インジェクションループ６４が配管８５を介して分析カラム６０と連通してインジェクションループ６４から導入用試料が分析カラム６０に導入される状態、あるいはインジェクションループ６４に図外の洗浄槽から洗浄液が供給される状態を選択することができる。このようなインジェクションバルブ６３としては、たとえば六方バルブを使用することができる。

図４に示したように、測光ユニット７は、分析カラム６０からの脱着液に含まれるヘモグロビンを光学的に検出するためのものであり、測光セル７０、光源７１、ビームスプリッタ７２、測定用受光系７３および参照用受光系７４を有している。

測光セル７０は、測光エリアを規定するためのものである。この測光セル７０は、導入流路７０Ａ、測光流路７０Ｂおよび排出流路７０Ｃを有しており、これらの流路７０Ａ，７０Ｂ，７０Ｃが一連に連通している。導入流路７０Ａは、分析カラム６０（図２参照）からの脱離液を測光流路７０Ｂに導入するためのものであり、分析カラム６０に配管８６を介して接続されている。配管８６としては、 先に説明した配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃと同様に、全体が酸素透過性の低い材料、たとえばナイロン、ポリエーテルエーテルケトン（ＰＥＥＫ）、ポリエチレンまたはステンレス（ＳＵＳ）により形成されたものが使用される。測光流路７０Ｂは、測光対象となる脱離液を流通させ、かつ脱離液を測光するための場を提供するものであり、直線状に形成されている。この測光流路７０Ｂは、両端が開放しているとともに、両端部が透明カバー７５により塞がれている。排出流路７０Ｃは、測光流路７０Ｂの脱離液を排出するためのものであり、配管８７を介して廃液槽８８に接続されている（図２参照）。

光源７１は、測光流路７０Ｂを流通する脱離液に光を照射するためのものである。この光源７１は、光軸Ｌが測光流路７０Ｂの中心を通過するように、測光流路７０Ｂの端面７０Ｂａ（透明カバー７５）に対面した状態で配置されている。光源７１としては、オキシヘモグロビンの最大吸収波長である４１５ｎｍおよび参照波長である５００ｎｍの光を含んだ波長範囲の光を出射可能なもの、たとえばハロゲンランプが使用されている。もちろん、光源７１としては、ハロゲンランプ以外のもの、たとえば１または複数のＬＥＤ素子を備えたものを使用することもできる。

ビームスプリッタ７２は、光源７１から出射された光のうち、測光流路７０Ｂを透過した光を分割して測定用受光系７３および参照用受光系７４に入射させるためのものであり、光軸Ｌ上において、４５度傾斜した状態で配置されている。ビームスプリッタ７２としては、ハーフミラーなどの公知の種々のものを使用することができる。

測定用受光系７３は、ビームスプリッタ７２を透過した光のうち、オキシヘモグロビンの最大吸収波長である４１５ｎｍの光を選択的に受光するものであり、光軸Ｌ上に配置されている。この測定用受光系７３は、４１５ｎｍの光を選択的に透過させる干渉フィルタ７３Ａと、干渉フィルタ７３Ａを透過した光を受光するための受光素子７３Ｂと、を備えている。受光素子７３Ｂとしては、フォトダイオードを使用することができる。

参照用受光系７４は、ビームスプリッタ７２において反射して光路が変えられた光のうち、参照波長である５００ｎｍの光を選択的に受光するものである。この測定用受光系７４は、５００ｎｍの光を選択的に透過させる干渉フィルタ７４Ａと、干渉フィルタ７４Ａを透過した光を受光するための受光素子７４Ｂと、を備えている。受光素子７４Ｂとしては、フォトダイオードを使用することができる。

次に、ＨＰＬＣ装置Ｘの動作について説明する。

ＨＰＬＣ装置Ｘを用いてグリコヘモグロビンを測定する場合には、まず血液試料１３が入った採血管１１をラック１０に保持させた状態で、ラック１０をテーブル２０の所定の部位にセットする。採血管１１の血液試料１３は、予め血漿層と血球層に分離させられる。このような分離は、遠心分離機を用いて、あるいは血球成分を自然沈降させることにより行なうことができる。

ＨＰＬＣ装置Ｘにおいては、測定開始の指示が確認された場合には、テーブル２０においてラック１０を移動させ、目的とする採血管１１から血液試料１３を採取する。測定開始の指示は、使用者がＨＰＬＣ装置Ｘの所定の操作ボタン３２を操作することにより行なわれる。

採血管１１からの血液試料１３の採取は、ノズル５１を動作させることにより、血球層において行なわれる。ノズル５１によって採取された血液試料１３は、ノズル５１を動作させることによって希釈槽５３に供給される。希釈槽５３にはさらに、調製液タンク５２から溶血剤および希釈液が順次供給され、ノズル５１を利用したピペッティング操作によって希釈槽５３内の液体を混合することによって導入用試料が調製される。希釈槽５３において調製された導入用試料は、インジェクションループ６４に供給され、インジェクションループ６４において保持される。

ＨＰＬＣ装置Ｘにおいてはさらに、測定開始の指示が確認された場合には、インジェクションバルブ６３に対して溶離液が供給される。溶離液は、送液ポンプ６２の動力により、溶離液ボトル１２Ａ，１２Ｂ，１２Ｃから脱気ユニット４、マニホールド６１を介してインジェクションバルブ６３に供給される。複数の溶離液ボトル１２Ａ，１２Ｂ，１２Ｃのうちのいずれの溶離液ボトル１２Ａ，１２Ｂ，１２Ｃの溶離液を供給するかは、マニホールド６１を制御することによって選択される。

脱気ユニット４では、溶離液が配管８０Ａ，８０Ｂ，８０Ｃを流通する間に温度測定部４０Ａ，４０Ｂ，４０Ｃにおいて溶離液の温度が測定される。この温度測定部４０Ａ，４０Ｂ，４０Ｃにおける測定結果は演算部４４に出力され、演算部４４において、温度測定部４０Ａ，４０Ｂ，４０Ｃから送信されてくる溶離液の温度データに基づいて、ポンプ４３の制御量が演算される。この演算部４４は、たとえば予め定めておいた溶離液の温度とポンプ４３の吸引力（たとえばポンプ４３における弁（図示略）の開放状態あるいはポンプ４３の駆動電力（駆動電圧）との関係式にしたがって、ポンプ４３に対する制御量の演算を行なう。演算部４４においてポンプ４３の制御量が演算された場合には、制御部４５は、演算部４４において演算された制御量にしたがってポンプ４３の動作を制御する。これにより、配管８２を介して減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃから排気される気体の量が、溶離液の温度（溶存酸素濃度）に応じて調整される、その結果、脱気ユニット４では、溶離液の温度（溶存酸素濃度）に応じてポンプ４３によって減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃの減圧度が調整される。

一方、配管８０Ａ，８０Ｂ，８０Ｃを流通する溶離液は、減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃの内部においてスパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃを流通した後に、スパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃから排出される。このとき、スパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃがガス透過性の高い材質により形成されているとともに、減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃがポンプ４３によって減圧されているため、溶離液がスパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃを流通する間に、溶離液からは溶存酸素を含めた溶存ガスが除去される。そして、脱気ユニット４では、溶離液の温度に応じて減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃの減圧度が調整されるため、溶離液が減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃから排出される際には、溶離液の温度に関係なく、溶離液の溶存酸素濃度が一定とされる。ここで、溶離液の温度は、ＨＰＬＣ装置Ｘの外部の温度（環境温度）の影響を受けるが、脱気ユニット４においては、環境温度に関係なく溶存酸素濃度が一定の溶離液を排出することが可能となる。これにより、環境温度の変動が生じた場合、あるいは異なる環境温度下で測定が行なわれる場合であっても、脱気ユニット４から排出される溶離液の溶存酸素濃度を一定なものとすることができる。

減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃ（スパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃ）から排出された溶離液は、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃを介してマニホールド６１に供給された後、配管８４を介してインジェクションバルブ６３に導入される。

ここで、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃとしては、酸素透過率の低い材料により形成されたものが使用されている。そのため、マニホールド６１に供給される溶離液が配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃを流通する間においては、溶離液に酸素などのガスが再吸収されることが抑制される。その結果、脱気ユニット４において溶存酸素濃度が一定なものとされた溶離液は、その状態を適切に維持したままマニホールド６１に供給されることとなる。

インジェクションバルブ６３に供給された溶離液は、配管８５を介して分析カラム６０に供給される。その一方で、インジェクションバルブ６３の切替操作を行うことにより、インジェクションループ６４の導入用試料が溶離液とともに分析カラム６０に導入される。導入用試料の導入開始から一定時間経過した場合には、インジェクションバルブ６３の切替操作を行うことにより、分析カラム６０に対して引き続き溶離液を供給するとともに、インジェクションループ６４の洗浄を行なう。一方、インジェクションループ６４の洗浄と同時的に、先に説明したのと同様にして、先とは異なる採血管１１の血液試料１３から導入用試料を調製し、インジェクションループ６４の洗浄後においては、再び導入用試料をインジェクションループ６４に導入する。このような導入用試料の調製、導入、洗浄は、インジェクションバルブ６３を適宜切り替えつつ、測定対象となる採血管１１（血液試料）の数に応じて繰り返し行なわれる。

一方、分析カラム６０においては、導入用試料が導入されることにより、充填剤にグリコヘモグロビンが吸着する。充填剤にグリコヘモグロビンを吸着させた後においては、マニホールド６１によって、分析カラム６０に供給する溶離液の種類を適宜切り替え、充填剤に吸着したグリコヘモグロビンを脱着させる。

このとき、複数の溶離液相互で流量を異ならせて分析カラム６０に供給し、複数種類の溶離液ごとに配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃを通過する時間（滞留時間）が異なったものとなったとしても、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃにおける酸素の再吸収が適切に抑制される。そのため、分析カラム６０では、１つの血液試料の測定において、溶離液の種類（流量）を変えたとしても、分析カラム６０を移動する溶離液における溶存酸素の量が変化することが適切に抑制される。その結果、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃでの酸素の再吸収に起因して、測定結果が真値からズレてしまうことを抑制し、正確な測定を行なうことが可能となる。

また、複数のＨＰＬＣ装置Ｘ相互では配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃの酸素透過性について製造間差が生じることも想定され、その場合には、複数のＨＰＬＣ装置Ｘ相互で配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃでの再吸収量が異なったものとなるため、複数のＨＰＬＣ装置Ｘ相互での測定精度に差が生じてしまうことが懸念されるが、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃとして酸素透過性の低いものを使用することにより、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃの製造間差の影響を極力抑制することが可能となる。

分析カラム６０から排出されるグリコヘモグロビンを含む脱着液は、配管８６を介して測光ユニット７の測光セル７０に供給される。測光セル７０に対しては、配管８６および導入流路７０Ａを介して脱着液が導入され、この脱着液は測光流路７０Ｂおよび排出流路７０Ｃを通過した後に、配管８７を介して廃液槽８８に導かれる。

ここで、配管８６としては、酸素透過率の低い材料により形成されたものが使用されている。そのため、配管８６を介して分析カラム６０から測光ユニット７（測光セル７０）に脱離液が供給される間において、脱離液に酸素などのガスが再吸収されることが抑制される。その結果、測光ニット７に対しては、溶存酸素濃度が一定に維持されたままに分析カラム６０から脱離液が供給されることとなる。また、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃの場合と同様に、複数のＨＰＬＣ装置Ｘ相互での配管８６の酸素透過性について製造間差に起因する測定精度の低下を抑制することが可能となる。

測光ユニット７においては、脱離液が測光流路７０Ｂを通過する際に、光源７１によって脱離液に対して連続的に光が照射される。その一方で、測光流路７０Ｂを透過した光は、ビームスプリッタ７２において分割された後、測定用受光系７３および参照用受光系７４において受光される。測定用受光系７３では、干渉フィルタ７３Ａを透過したオキシヘモグロビンの最大吸収波長である４１５ｎｍの光が受光素子７３Ｂにおいて選択的に受光される。一方、参照用受光系７４では、干渉フィルタ７４Ａを透過した参照波長である５００ｎｍの光が受光素子７４Ｂにおいて選択的に受光される。

受光素子７３Ａ，７４Ａでの受光結果は、図外の演算回路に出力され、この演算回路においてヘモグロビンのクロマトグラム、グリコヘモグロビンの濃度（ヘモグロビン総量におけるグリコヘモグロビンの割合）が演算される。演算回路での演算結果は、表示パネル３１に表示され、また自動的あるいは使用者のボタン操作によってプリントアウトされる。

このようなＨＰＬＣ装置Ｘでは、溶離液の溶存酸素濃度は、脱気ユニット４において一定化されるとともに、酸素透過性の低い配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃにより脱気ユニット４からの溶離液を、溶存酸素濃度を略一定に維持したままマニホールド６１に供給するようにしている。その一方で、マニホールド６１は、インジェクションバルブ６３や分析カラム６０とともに分析ユニット６を構成するものであるとともに、分析ユニット６が一定温度に温調されている。そのため、マニホールド６１から分析カラム６０に供給される溶離液は、温度変化に起因する溶存酸素濃度の変化が生じない。その結果、分析カラム６０に対しては、環境温度に関係なく、溶存酸素濃度が一定化された溶離液を供給することが可能となる。したがって、ＨＰＬＣ装置Ｘでは、溶離液の溶存酸素濃度の変動など起因する測定結果の不安定性を抑制することが可能となる。

一方、分析カラム６０から測光ユニット７に供給される脱離液は、配管８６を流通する際の酸素の再吸収が抑制されている。その結果、測光ユニット７に対しては、導入用試料ごとのオキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンとの比率のバラツキが抑制され、このバラツキに起因する測定結果のバラツキを抑制することが可能となる。

本発明は、上述した実施の形態には限定されず、種々に変更可である。たとえば、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃの全体が酸素ガスの透過率の低い材料により形成されていたが、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃの一部を酸素ガスの透過率の低い材料により形成してもよく、また配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃ以外の配管８０Ａ，８０Ｂ，８０Ｃ，８４，８５についても酸素ガスの透過率の低い材料により形成してもよい。

本発明はさらに、血液中のグリコヘモグロビン濃度を測定するためのＨＰＬＣ装置に限らず、血液以外の検体を用いる場合、グリコヘモグロビン濃度以外の成分を測定する場合、あるいはＨＰＬＣ装置以外の液体クロマトグラフィ装置についても適用することができる。

（参考例）
本参考例においては、脱気ユニットとマニホールドとの間を繋ぐ配管の材質が分析カラムに供給される溶離液の溶存酸素濃度に与える影響について検討した。

溶存酸素濃度の測定は、グリコヘモグロビン測定装置（「ＡＤＡＭＳ Ａ１ｃ ＨＡ−８１６０」；アークレイ株式会社製）におけるマニホールドの入口に溶存酸素濃度測定装置を接続した状態とするとともに、脱気ユニットとマニホールドとの間を繋ぐ配管として下記表１に示すものを用い、通常の分析と同様にして分析カラムに溶離液を供給することにより、分析カラムに導入される溶離液中の溶存酸素濃度を測定した。

溶離液としては、商品名「６１Ａ」、「６１Ｂ」および「６１Ｃ」（アークレイ株式会社製）を用い、溶離液は、流量が１．７ｍｌ／ｍｉｎとなるようにして供給した。環境温度（装置外部の温度）は、３０℃に設定した。溶存酸素濃度の測定結果については、下記表１に示した。表１においては、配管の酸素透過率を同時に示した。

表１から分かるように、環境温度が３０℃の場合には、脱気ユニットとマニホールドとの間を繋ぐ配管の材質によって分析カラムに導入される溶離液中の溶存酸素濃度が異なっていた。より具体的には、配管の材質としてガス透過率の高いものを使用する場合ほど、溶離液中の溶存酸素濃度が高くなっている。これは、ガス透過性の高い材質の配管を用いると、より多くの酸素を再吸収し、それが溶離液中に溶存するためであると考えられる。したがって、酸素の再吸収の影響を抑制する観点からは、配管としてガス透過性の低い材質である、ポリエチレン、ピーク、ナイロンを用いるのが好ましい。

また、溶存酸素濃度は、溶離液の温度により変動するものである一方で、溶離液の温度は環境温度により変動するものである。そのため、ガス透過性の高い配管では、環境温度が変動した場合には、それに連動して溶離液中の溶存酸素濃度も変動する。したがって、ガス透過率の高い配管を用いる場合ほど、環境温度の変動により溶離液中の溶存酸素濃度も変動しやすくなる。したがって、環境温度の変動に起因する酸素の再吸収の影響を抑制する観点からも、配管としてガス透過性の低い材質である、ポリエチレン、ピーク、ナイロンを用いるのが好ましい。

以上のように、配管としてガス透過性の低い材質である、ポリエチレン、ピーク、ナイロンを用いた場合には、脱気装置から分析カラムに溶離液を供給するまでの間での酸素の再吸収を抑制でき、また環境温度の変動による溶存酸素濃度の変動も抑制できる。そのため、先の材質などにより形成したガス透過性の低い配管を用いた場合には、分析カラムから溶離されるグリコヘモグロビンにおけるオキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンとの比率が変動することを抑制し、安定した分析を行なうことが可能となる。

（実施例１）
本実施例では、溶離液の温度に基づいて脱気ユニットにおける減圧度を調整した場合について、環境温度がグリコヘモグロビン濃度の測定結果に与える影響について検討した。

グリコヘモグロビンの測定値は、グリコヘモグロビン測定装置（「ＡＤＡＭＳ Ａ１ｃ ＨＡ−８１６０」；アークレイ株式会社製）を、図１ないし図４を参照して先に説明したＨＰＬＣ装置と同様に、脱気ユニットを図３に示した構成とするとともに、脱気ユニットとマニホールドとの間を繋ぐ配管を、テフロン（登録商標）製のものからナイロン製（商品名「Ｎ２‐１−１／８（乳白色）」；ニッタ・ムアー株式会社製）に変更したものを用いて行なった。

脱気ユニットは、温度測定部としてサーミスタ（商品名「ＰＢ３−４３−Ｓ２」；株式会社芝浦電子製）を用い、溶離液の温度に応じて、ポンプの圧力を下記数式１にしたがって調整するように構成した。

検体としては、健常人から採取した血液（健常人検体）および糖尿病患者から採取した血液（糖尿患者血液）を用いた。グリコヘモグロビンの測定結果については下記表２および図５に示した。

表２および図５から分かるように、溶離液の温度に応じて減圧チャンバの減圧度（ポンプの駆動電力）を調整して溶離液中の溶存酸素濃度を一定となるように試みた場合には、環境温度が異なっていても、健常人検体および糖尿病患者検体ともに、測定値が略同一なものとなった。すなわち、溶離液の温度、あるいは溶離液の温度に影響を与える環境温度に応じて、溶離液中の溶存酸素濃度を一定化した場合には、環境温度などの影響を受けることなく、測定値を安定化させることができる。

本発明に係るＨＰＬＣ装置の一例を示す全体斜視図である。 図１に示したＨＰＬＣ装置の概略構成図である。 図１に示したＨＰＬＣ装置における脱気ユニットを説明するための一部を断面で示した配管図である。 図１に示したＨＰＬＣ装置における測光ユニットを説明するための断面図である。 実施例にけるグリコヘモグロビン濃度の測定結果を示すグラフである。 従来のＨＰＬＣ装置（高速液体クロマトグラフィ装置）の一例を示す概略構成図である。

符号の説明

Ｘ ＨＰＬＣ装置
１２Ａ，１２Ｂ，１２Ｃ 溶離液ボトル
１３ 血液試料
４ 脱気ユニット
６ 分析ユニット
６０ 分析カラム
６１ マニホールド
７ 測光ユニット（検出機構）
８０Ａ，８０Ｂ，８０Ｃ 配管
８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃ 配管
８４ 配管
８６ 配管（追加の配管）

Claims (4)

1. 充填剤を保持したカラムと、
   溶離液を保持した１または複数の溶離液保持部と、
   上記溶離液保持部から上記カラムに上記溶離液を供給するための配管と、
   を備えた液体クロマトグラフィ装置であって、
   上記配管は、酸素透過性の低い材料により形成された酸素難透過部を有していることを特徴とする、液体クロマトグラフィ装置。
2. 上記溶離液保持部から上記カラムに上記溶離液を供給するまでの間に、上記溶離液を脱気するための脱気装置をさらに備えており、かつ、
   上記配管は、上記溶離液保持部と上記脱気装置との間を接続する第１配管と、上記脱気装置と上記カラムとの間を接続する第２配管と、を含んでおり、
   上記酸素難透過部は、上記第２配管の全部または一部に設けられている、請求項１に記載の液体クロマトグラフィ装置。
3. 上記カラムからの脱離液に基づいて、試料中の特定成分を検出するための検出機構と、上記カラムと上記検出機構との間を接続する追加の配管と、をさらに備えており、
   上記追加の配管は、酸素透過性の低い材料により形成された酸素難透過部を有している、請求項１または２に記載の液体クロマトグラフィ装置。
4. 血液試料に含まれるグリコヘモグロビンの濃度を測定するように構成されている、請求項１ないし３のいずれかに記載の液体クロマトグラフィ装置。
   

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