CZ29193A3 - Immunoassay for hemoglobin derivative determination - Google Patents
Immunoassay for hemoglobin derivative determination Download PDFInfo
- Publication number
- CZ29193A3 CZ29193A3 CZ93291A CZ29193A CZ29193A3 CZ 29193 A3 CZ29193 A3 CZ 29193A3 CZ 93291 A CZ93291 A CZ 93291A CZ 29193 A CZ29193 A CZ 29193A CZ 29193 A3 CZ29193 A3 CZ 29193A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- hemoglobin
- agent
- derivative
- sample
- content
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
- G01N33/721—Haemoglobin
- G01N33/723—Glycosylated haemoglobin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/962—Prevention or removal of interfering materials or reactants or other treatment to enhance results, e.g. determining or preventing nonspecific binding
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/815—Test for named compound or class of compounds
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Oblast teohníky
Vynález se týká způsobu stanovení obsahu určitého derivátu hemoglobinu ve vzorku krve . Specielně se vynález týká způsobu stanovení obsahu derivátů hemoglobinu , jako glykosylováného hemoglobinu , který vyžaduje oddělené stanovení celkového obsahu hemoglobi nu a stanovení derivátu hemoglobinu , aby se zjistil podíl derivatizovaného hemoglobinu v krvi.
Dosavadní stav techniky
V závislosti na výšce hladiny cukru v krvi se slučuje malá část glukózy absorbovaná erytrocyty při neenzymatické reakci s N-terminálním zbytkem valinu yé -řetězce globinu. Seakce na stabilní glykosylovaný derivát hemoglobinu HbA^ / forma ketoaminu / probíhá ve dvou stupních. Za prvé se glukóza váže rychlou reversibilní adicí na hemoglobin za vytvoření labilního glykosylovaného derivátu hemoglobinu /Schiffova báze/'. Domoci irreversibilní, pomalé adiční reakce Adice Amadoriho / se vytvoří stabilní forma. Dodíl HbA^ na celkovém hemoglobinu činí u látkové výměny zdravého jedince j až 6 5« . U pacientů s diabetem se může podíl EbA^ zvýšit úměrně k výši koncentrace glukózy v krvi během čtyř až dvanácti týdnů až na hodnotu 12 v jednotlivých uříradech dokonce až na 20 'v
Stanovení relativního podílu EbA-, v celkovém obsahu hemoglobinu se nabízí především jako integrální parametr pro průběžnou kontrolu hladiny cukru v krvi.
Ir o s t ano vení herno glo c inu[ylyko sylo váného
-.j ;csány četné metody. Konvenční způsoby jsou založeny n
-2technikách jako je elektroforéza,isoelektrická fokusace a kolorimetrická stanovení jakož i iomoměničová chromatografie a aíinitní chromatografie. lo té co byla popsána výroba specifických polvklonálních antilátek
Cr Qb ř /US patent 4,237.533 / a monoklonálních antilátek /31A-0 316 306 , EP-A-0 201 187 /, byla vyvinuta řada imunologických metod, důkazu HbAn ~ .
c
- A- 0 135 370 popisuje imunologickou metodu stanovení proteinů , mimo jiné EbAn . Iři této metodě se používají monoklonální antilátky, které identifikují specificky lineární peptidoepitopy. Iro uvolnění epitopů se předepisuje denaturace, mimo jiné chaotropními činidly. Iři teplotách pod 37 °C je zapotřebí pro tento krok denaturace jedna až více hodin,při teplotách nad 50 °C proběhne tento krok za jednu minutu. £ současnému stanovení celkového obsahu herno globinu ve vzorku se nepřistoupilo.
V El -A-0 201 137 je popsána metoda stanovení HbA^ při níž se používá monoklonální antilátka proti HbA^ c> získána imunizací nativním huní 'j
JUKaz se prováni pn teplotách. 4 a
- -n O-. Zlí pncemz každý inkubační krok může trvat až 72 hodin. Stanovení celkového hemoglobinu a HbA-^ Q v témže vzorku se nepopisuji.
A-0 315 364 je popsána metoda stanovení reobsahu EbA·, ve vzorku krve. Hemoglobin se thiokyanátem a pomocí dalšího oxidačního výhodou ferrikyanidu, se převede v met-helativního děnaturuje činidla, s moglobin . novit celko takto upraveném vzorku krve se může staobsah hemoglobinu jakož i obsah Η’οΑ-, .
El- A- 0 407 360 je popsáno pro lysi eratrocytů a denaturaci
Lerivátu luemoglo binu použití lithných
Oosah noasoli. s vynouou _i í tbiumthiokyanátu „ ·„· —----------~~d------ - ------—c může stanovit imunologicky. Pro důkaz celkového hemoglobinu se musí přidat další oxidační činidlo, s vý hodou ferrikyanid, které převede hemoglobin v met-hemoglobin.
Nedostatek čtou těchto posledně jmenovaných metod spočívá v tom, že se pro převedení hemoglobinu na kyano met-hemoglobin musí přidávat kyanid, V Clin. Biochem.
/1982/ 83 až 88 , se popisuje náhrada kyanidu pro důkaz celkového hemoglobinu natriumlaurylsulfát /SIS/. Není zde ale uveden žádný důkaz , že se SIS hodí pro předběžnou úpravu vzorku při imunologickém stanovení derivátu hemoglobinu, specielně KbA1 Q.
Rovněž v RT-A-Q 184 787 se popisuje činidlo pro stanovení celkového hemoglobinu ve vzorku krve, které je prosté kyanidu · Činidlem je iontový, povrchově aktivní prostředek s ph nejméně 11,3 » s výhodou vyšším než 13,7 . Imunologické stanovení derivátu hemoglobinu není popsáno. Velmi vysoká hodnota pH ty byla při imuno logickém stanovení derivátu glvkolvsovaného hemoglobinu nevýhodná, neboň ve velmi alkalickém prostředí může dojít k odštěpení podílu cukru z hemoglobinu. V případě značení použitých antilátek enzymem , by mohla být enzymatická reakce inhibována, neboi optimální hodnota pS nejčastěji používaných enzymů se pohybuje okolo pH 6 až 3. Rovněž imunologická reakce může být inhibována příliš vysekou hodnotou pE.
Iroto trvala dále potřeba imunologické důkazní metody pro stanovení derivátu hemoglobinu v krvi, při níž je možné provést hernolý zu p*~i nízkých teplotách, jako
-4například při teplotě místnosti, nepotřebuje žádnou příliš dlouhou dobu inkubace pro předúpravu vzorků a může se vyhnout činidlům , která jsou škodlivá pro životní prostředí, jako kyanidu , kromě toho by mě lo být možné současně stanovit celkový hemoglobin v témže hemolyzátu , aby bylo možné stanovit podíl derivátu hemoglobinu u obsahu celkového hemoglobinu v krvi bez nutnosti použít další vzorek hemoglobinu. Úkolem předloženého vynálezu bylo připravit takovou imunologcckou důkazní metodu pro stanovení derivátu hemoglobinu v krvi, íodstata vynálezu
Úloha byla vyřešena vynálezem , který je blíže charakterizován v patentových nárocích . V podstatě je tato úloha vyřěšena imunologickou důkazní metodou stanovení obsahu derivátu hemoglobinu ve vzorku krve, která je charakterizována tím, že se vzorek zpracuje s hemolyzačním činidlem, které obsahuje iontový detergent s pH 5 až 9,5 , a v hernolyžovaném vzorku krve se stanoví imunologicky derivát hemoglobinu.
Dalším předmětem vynálezu je způsob stanovení obsahu derivátu hemoglobinu a celkového hemoglobinu ve vzorku krve, který spočívá v tom, že se vzorek krve zpracuje s hemolyzačním činidlem, které obsahuje iontový detergent s pH 5,0 až 9,5, v hernolyžovaném vzorku se stanoví fotometricky celkový obsah hemoglobinu a v hemolyzovaném vzorku se stanoví imunologicky derivát hemoglobinu.
Dalším předmětem vynálezu je hemolyzačni činidlo , které obsahuje iontový detergent s pH 5 až 9,5, jeho použití pro předúpravu vzorku krve pro imunologické stanovení derivátu hemoglobinu a, v případě,še se tc požaduje, pro stanovení obsahu celkového hernox-S· globínu, jakož i testovací souprava,která obsahuje hemolyzační činidlo.
Působením hemolyzačního činidla dojde k lysí erytrocytů obsažených ve vzorku krve a hemoglobin se převede na specifický chromofor hemoglobinu. Vznikající chromofor hemoglobinu se může s ohledem na svou charakteristickou absorpci použít ke stanovení celkového obsahu hemoglobinu a pomocí imunologické reakce specifického epitopu ke stanovení derivátu hemoglobinu. Při imunologické důkazní metodě se mohou použít v principu všechny běžné metody, jako například sendvičové testy, ILHA -testy,precipitační a aglutinační testy, jakož i testy na principu PPIA a OHLIA. Jsou možné jak mokré tak i suché testy.
V hemolyzačním činidLu se mohou používat všechny iontové detergenty, aniontové detergenty , s výhodou natriumdodecylsulfát /SLS/ , natriumdioktylsulfosukcinát /LONS/ , kationtové detergenty , s výhodou tetrade cyltrimethylammoniumbromid /ΤΪΑΕ·/ nebo cetyltrimethylammoniumbromid /CíAB/ nebo obojetné iontové detergenty s výhodou obojetný Zuiutergent 3-14 . Hemolyzační činidlo se přidává do vzorku krve v množství , které vystačí k lysi erytrocytů , dále k tomu, aby převe dlo hemoglobin ve specifický chromofor hemoglobinu a uvolnilo epitopy derivátu hemoglobinu. Hemolyzační činidlo se přidává do vzorku krve v poměru 1 : 10 až 1 : 400 , takže koncentrace iontového detergentu ve ο,ΟΙ až 5 h hmot. , s vynouou
Hodnota ph hemolyzačního činidla se pohybuje v mírně kyselé až slab’ alkalické oblá sti. S výhodou :.e pH pohybuje mezi 5,0 až 9»5,3 výhodou zejména okolo '7,4 molvzačním činidle ze moncu neužívat vsechn** dožne n nastaveni noonoty pd v nepufry. S výhodou, se používají pufry HBBb5,KBS,ThIS nebo fosfátový pufr.
Hemolyzační činidlo může obsahovat další reagencie, například ty které slouží k odstranění rušení imunologické reakce ,oxidace hemoglobinu, pro odstranění zákalu, pro stabilizaci nebo konzervaci. Některé detergenty, mimo jiné SNS, mohou rušit imunologické reakce. Ve vzácných případech se po přídavku hemolyzačního činidla objevují zákaly a vyvločkování,které mají různé příčiny.Iři nízkých teplotách je například SDS těžko rozpustná. S překvapením se ukázalo, že se může těmto rušením zabránit přídavkem neiontového detergentů, výhodné jsou polyoxyethylenethery ja ko například Brij 35 a 58 nebo Triton X100 jakož i polyoxyethylenestery , jako například Myrj 52 a 59 nebo Tween 20. Normálně se neiontový detergent přidává k hemolyzačnímu činidlu v množství, po jehož přídavku ke vzorku činí koncentrace ve vznikající směsi 0,01 až 5 hmot. , s výhodou 0,1 až 0,5 % hmot.
Sále může být v hemolyzaóním činidle obsažen běž ný oxidační prostředek ferrikyanid, například hexakyanoželezitan . . Spolu s kationtovými detergenty .moko**· může ovšem dojít k vypadnutí. Dále je nezbytná při použití ferrikyanidu ochrana před světlem.
S překvapením se ukázalo, že při přídavku konzervačních činidel, jejichž mechanismus účinku spočívá na oxidačním ataku thiolových skupin, jako například ťíD methylisothiazolů nebo Brcnidoxtu K, lze zcela upustit od přídavku ferrikyanidu . Spolu s kationtovými detergenty vedou tato konzervační činidla ke hnědozeleně zbarvenému chromoforu hemoglobinu, jehož absorpční maximum se pohybuje okolo 570 nm.Zvláštní výhoda spočívá v tom, že se za prvé přídavkem tohoto konzervačního činidla dosáhne jak převedení hemoglo binu ve specifický chromoíor hemoglobinu, tak i dobré konzervace hemolyzačního činidla a za druhé koncový bod hemolýzy se dá dobře identifikovat barevným přechodem od červené do hnědozelené barvy.Konzervační činidla se v hernolyzačním činidle používají v koncentraci 0,005 až 0,2 70 hmot.,s výhodou 0,01 až 0,02 hmot.
Hernolýza, převedení hemoglobinu na specifický ohromofor hemoglobinu jakož i předúprava vzorku pro dú kaz derivátů hemoglobinu pomocí hemolyzačního činidla se ukončí při nízkých teplotách, s výhodou 4 až 37 °C a s výhodou při teplotě místnosti /20 °C/ po 1 až 10 minutách. V nejčastějších případech postačí inkubace /
minut pro dokonalou předúpravu vzorku·
Takto připravený vzorek krve se potom zředí reakčním pufrem v poměru 1 : 10 až 1 í 100. Jako pufry se mohou používat všechny běžné pufry,které neruší imunologickou reakci. S výhodou se používá MES nebo
HEPES pufr v koncentracích 10 až 200 mmolú/1 . Hodnota pH reakčního pufru činí 5,0 až 3,0. Jestliže imunologický důkaz obsahuje enzymatickou reakci,bude mít reakční pufr s výhodou optimálnímu pH enzymatické hodnotu pH, která odpovídá reakce. Reakční pufr může dále již obsahovat činidla nezbytná pro důkaz derivátu hemoglobinu, především specifické vazební partnery, s výhodou vysoce specifická polyklonální nebo monoklonální antilátky.
Rovněž se zde s překvapením ukázalo, že přídavek dalšího detergentu, s výhodou neiontových detergentů jako Brij nebo Myrj, je výhodný, aby se vytvořily opti mální podmínky jak pro přípravu vzorků pro důkaz derivátu hemoglobinu, jako glykosyloveného hemoglobinu tak i pro imunologickou reakci a zabránilo se póru ·
-8chám. Letergent se k reakčnímu pufru přidává v množství, které ve vznikající směsi odpovídá koncentraci 0,01 až 5 % hmot., s výhodou 0,5 % hmot. .
Jestliže se ve stejném vzorku má vedle stanovení derivátu hemoglobinu určit celkový obsah hemoglobinu, měří se s výhodou po přídavku reakčního pufru pro zjištění obsahu celkového hemoglobinu absorpce při vlnových délkách 400 až 650 nm, s výhodou 500 až 650 a nejvýhodněji při 546 až 570 nm. V případě testu prováděného za mokra se extinkce stanoví při těchto vlnových délkách fotometricky v kývete, v případě testu prováděného za suchu se může absorpce určovat fotometricky měřením podle zpětného odrazu po nanesení rezultující směsi na testovací nosič.
Takovýto testovací nosič pro stanovení obsahu celkového hemoglobinu se může konstruovat velmi snadno, neboí nemusí obsahovat žádné chemij^kálie.Pro jednoduché požadavky vystačí nasákavé rouno,které se nanese na transparentní fólii nosiče. Pro účely lepší manipulace a vyhodnocení testovacího proužku mohou být obsaženy další nosné vrstvy , například transportní rouno nebo dávkovači rouno.
Obsah celkového hemoglobinu a obsah derivátu hemoglobinu se mohou určovat v rozdílných dávkách vzorku co přídavku hemolyzačního činidla.? tomto případě se stanoví v části směsi sestávající ze vzorku a hemoLyzaóního činidla, v případě, že je to nutné po odpovídajícím zředění,fotometricky obsah celkového hemoglobinu. Ke druhé části směsi se přidá reakční pufr a potom se stanoví imunologicky derivát herno ?lobinu.
Pro stanovení derivátu hemoglobinu jaxo
-Qjsou v principu vhodné všechny běžné imunologické metody. Jak bylo výše popsáno, mohou se vyrobit pclyklcnální a monoklonální antilátky proti derivátům hemoglobinu, s výhodou HbA^ c, které vážou specificky charakteristické epitopy derivátu hemoglobinu /US 4,247,533 , SP-A0 316 306 a EP-A-0 201 137/.
Iři variantě imunologického důkazu způsobu značení, jakoži metodě detekce měrných signálů se jedná o metody známé ze stavu techniky. Jako příklad jsou vhodné sendvičové testy se značením enzymu /ELISA/, vedení testu IEMA, tesy SIAs , precipitační a aglutinační testy, jakož i homogenní immunoassay jako technologie CEDIA® , EMIT nebo ΕΡΙΑ.
Při mokrém testu se imunologické stanovení derivátu hemoglobinu provádí s výhodou podle principu TINIA, nebol· zde není nutný žádný krok separace. Vzorek se doplní antilátkou specifickou pro analyt a polyhaptenem jako aglutinaóním činidlem.Polyhapten sestává z nosného materiálu, například albuminu, dextranu nebo IgG, na který je nakopulováno více epitopů, na které se mokou vázat specifické antilátky. Vzhledem k tomu, že se precipitace antilátek může provádět pouze přes polyhapten, získá se při ubývajícím obsahu analytu ve vzorku zvětšující se zákal,který se může prokázat nefelometrioky nebo turbidimetricky.
S výhodou je derivát hemoglobinu se specifickou antilátkou obsažen jíž v reakčním pufru. Po přídavku reakčního pufru se může ve vznikající směsi stanovit fotometricky obsah celkového hemoglobinu. Precipitační reakce se nastartuje přídavkem roztoku,který obsahuje polyhapten. Po krátké inkubační době,při5 minut nejčastěji je postačující, může se měit vznixa^ici zaxai pri vhodné vínové uelce, s vy-10hodou při vlnových délkách 340 až 600 hb, zejména pak výhodné při 340 nm, a z naměřených výsledků se může stanovit koncentrace derivátu hernoglóbinu.Vzhledem k tomu, že měření celkového hemoglobinu probíhá při vlnových délkách 500 až 650 nm , s výhodou při 546 nebo 570 nm, neruší se obě měření a mohou se provádět za sebou v jedné kyvetě a ve stejném reakčním roztoku.
Iři výrobě polyhaptsnového roztoku, to znamená tekuté galenické formě polyhaptenu nebo glykosylovaného proteinu popřípadě peptidů, ukázalo se, že toto není při obvykle používaném fosfátovém pufru při pH 7,0 až
7,5 stabilní a při delším skladování může docházet k rozkladu glykoproteinu. Takovéto nestability glykosylovaných proteinů, ve fosfátovém pufru jsou například známy z Ahmed et al.,J. Biol. Chem. 261 /1986/ ,48394894. Použitím MBS pufru v koncentraci 5 až 200 mmolů/1, s výhodou 20 až 50 mmolů/1 a při pH 5,0 až 8,0, s výhodou při hodnotě pE mezi 6,0 až 6,5 a současném přídavku BETA nebo ekvivalentního komplexotvorného činidla ve výhodné koncentraci 1 až 50 mmolů/1, nejvýhodnějš pak 0,1 až 20 mmolů/1, byla dosažena stabilizace glykosylovaných peptidů, proteinů a polyhaptenů. Přídavek albuminu hovězího séra /BSA/ ve výhodné koncentraci 0,1 až 2 $ , nejvýhodněji pak 1 > , poskytlo další pozitivní účinek na stabilitu polyhaptenového roztoku. Tento pclyhaptenový roztok se může skladovat déle než 12 meěíců při 4 °C, aniž by bylo možné pozorovat nestability polyhaptenu popřípadě glykosylováných proteinů nebo peptidů, keré by stály za zmínku. Při stresovém zatížení 3 týdnů při 35 °C se objevují pouze úbytky signálu 15 až 20 0 původního extinkčního signálu.
-11Jako suchý test se provádí imunologické stanovení derivátu hemoglobinu s výhodou podle principu testu IhHA. Po přídavku reakčního pufru k hemolyzovanému vzorku krve se přidá specifická antílátka značená enzymem. Při vý hodném provedení je antílátka již obsažena v reakčním pufru. Po krátké inkubaei se směs nanese na nosič testu. Na matrici epitopu , to znamená oblasti nosiče testu, na které je nakopulováno více epitopů, na které se mohou vázat specifické antilátky, se zachytí volné antilátky značené enzymem. V další oblasti, důkazní oblasti, se zjišťuje reflexní fotometrií komplex sestávající z derivátu hemoglobinu a značené antilátky pomocí reakce vhodného substrátu enzymu. Substrát může být obsažen v důkazní oblasti nebo se může do ní dostat uvedením důkazní oblasti do kontaktu s další oblastí,která tento substrát obsahuje.
S výhodou se činidla nutná pro metodu podle vynálezu prodávají ve formě testovacího kitu, který obsahuje nejméně ve dvou od sebe oddělených baleních vedle hemolyzačního činidla ostatní činidla v rozpuštěné neco lyofilisovane forse nebff/nS^Kosiči testu·
Příklady provedeni vynálezu
Předložený vynález je vysvětlen pomocí následujících! příkladů :
Příklad 1
Současné stanovení celkového hemoglobinu a HbÁ^ v mokrem tesru
Pokusy byly provedeny na Hitachi 717 firmy Poehringer Mannheim GmbH. Obsah celkového hemoglobinu byl při vlnové délce 546 nm. Imunolose prováděl podle principu testu ρ'ΐρ-,·’ or.
fotometrickv iůkaz HbATINlA iurbidimerrickým měřením při 540 nm. Všechna stanovení a inkubace byly prováděny při teplotě 57 °C.
-12Eyly použity následující roztoky : hemolyzační činidlo :
mM KaPO^-pufru p3 7 ,0 1,0 SDS 0,1 % natriumazidu 0,02 i» kaliumhexakyanoželezitanu 0,5 % Brij 35 reakční pufr :
mM MES pufru pE 6,0 150 mM natriumchloridu
3,0 $ PEG 6000
0,5 % Brij 35
0,1 albuminu hovězího séra
0,1 $ natriumazidu 10 mM EDTA mg/ml PAK^HbA1 Q> S-IgG /DE/ / polyklonální ovčíAK proti EbA^ c / nebo
100 ug/ml MAK £. HbA-j θ > M-IgG /DE/ / monoklonální myší-AK proti EbA^ Q / polyhaptenový roztok :
mM MBS-pufru pE 6,0
150 mM natriumchloridu
6,0 % PEG 6000
0,5 % Brij
0,1 ř albuminu hovězího séra ug/ml polyhaptenu HbAn - β -l-4/cys,MHS/-ESA 13 1
Ke vzorku krve bylo přidáno hemolyzační činidlo v poměru 1 : 100 a inkubovalo se 2 minuty při 25 °C. E 5 ul hernolyžovaného vzorku bylo přidáno 250 ul reakčního pufru. Po 4 minutách se měřila absorpce celkového hemoglobinu při 546 nm /El/'.0
-13jednu minutu později byla změřena absorpce při 340 nm /22/ a potom se připipetovalo 50 ul polyhapternového roztoku a inkubovalo se 5 minut. íotom se měřil zákal při 340 nm /23/.
Ero stanovení hodnoty EbA^ c v g/dl se nanesl rozdíl extinkce Δ2 = 23 - k.E2 proti koncentraci HbA^ c a provedlo grafické vyhodnocení.
k = korekční faktor objemu objem vzorku + objem reakčního pufru celkový objem
Koncentrace celkového hemoglobinu se vypočítá z konstantního faktoru £ násobením El / £ = molární extinkční koeficient chromoforu hemoglobinu x zřežovací faktor /♦ Jako kalibrátor sloužila EDTA-plná krev se známým obsahem hemoglobinu a HbA·^ c· £DTA -plná krev byla pro vynesení kalibrační křivky v různém poměru zředěna hemolyzačním činidlem.
Kalibrační křivky jsou znázorněny graficky na obr.
a 2. Ka obr. 1 byla nanášena koncentrace celkového hemoglobinu proti 21. Vyplývá lineární vztah. Eři vý počtu lze tedy násobit konstantním faktorem £ . Na obr2 byl nanášen rozdíl extinkce 2 = 23 - k.22 proti obsahu HbAn „ .
c
Eři dalších pokusech se k hernolyžovanému vzorku krve připtpetoval nejdříve polyhaptenový roztok a po pětiminutové inkubaci byla odstartována precipitaóní reakce přídavkem reakčního pufru,který obsahoval specifickou antilátku.Tento sled pipetování vedl ve srovnání s výše uvedeným sledem pipetování, při kterém se nejdříve přidala antilátka a potom polyhapten, ke zřstejně menší citlivosti při stanovení EbA-, n / obr. 3/.
-14Příklad 2
Testovací proužky pro stanovení celkového hemoglobinu a HbA-, Λ o
ul plné krve se doplnilo 300 ul hernolyzačniho činidla a inkubovalo se 10 minut při 20 °C. Hemolyzační činidlo sestávalo z 0,13$ roztoku 303 , který byl nastaven pufrem na pH 7.
Pro stanovení celkového hemoglobinu se naneslo 32 ul hernolyžovaného vzorku krve na testovací proužek . konstrukce testovacího proužku je znázorněna graficky na obr. 4. Testovací proužek sestává pouze z neupraveného dávkovacího rouna 1 ze skleněných vláken, neupraveného dopravního rouna 2 ze skleněných vláken, neupravené polyesterové tkaniny 2 a průsvitné polykarbonátové fólie 4 · Testovací proužek neosahuje žádné další chemikálie. Pomocí tohoto provedení pokusu se dá obsah celkového hemoglobinu ve vzorku krve velmi přesně změřit při vlnové délce 576 nm.
Byly získány variační koeficienty pod 2,5 /'tabulka 1 /
Tabulka 1 ;
Stanovení celkového hemoglobinu
Variační koeficient byl vypočítán z 10 jednotlivých stanovení
| icentrace Eb | Vk |
| /g/dl/ | /$/ |
| 14,1 | 1,0 |
| 17,5 | 2,5 |
| 13,7 | |
| 14,7 | 1,3 |
-15Pro stanovení koncentrace EbA^ Q se ke 32 ul herno lyžovaného vzorku přidá 1200 ul reakčního pufru a 10 minut se inkubuje . Heakční pufr sestává ze ICO mM Hepes , pH 7,4 , 100 mM KaCl a 0,1 / Brij 35 s konjugá tem MAK-enzymu . 12 ul směsi se naneslo na proužek , který je znázorněn graficky na obr. 5 · Ha matrici 11 epitopu se zachytí volný konjugát antilátky a enzymu ·
V oblasti, která dále následuje, transportním rounu 12 se stanoví komplex enzymu, HbA^ G a antilátky reakcí substrátu po uvedení substrátového rouna 13, které obsahuje substrát , do styku s transportním rounem 12 ,re flexní fotometrií. /Tabulka 2/.
Tabulka 2
Stanovení koncentrace EbÁ-, pomocí testovacího proužku
Variační koeficient /VE/ byl zjištěn z 10 jednotli vých měření koncentrace HbA^ VE / g/dl/ /%/ ,8 i
-u ,
1,4
5,0
Příklad 3
Vliv různých, iontových detergentu na stanovení li υΛη c
fokusy byly prováděny stejně jako v příkladu 1. Hemolyzační činidlo mělo následující, složeni 20 mM HaPO^-pufru pH 7,2 ks. 1 iumhe xak var. o ě e le z i t snu
-16lontové detergenty uvedené v tabulce 3 byly obsaženy v koncentracích, které jsou tam uváděny.
V případu T1AB a GTAB nebyl v hemolyzačním činidle obsažen kaliumhexykyanoželezitan , nebot se s těmito detergenty sráží.
Složení reakčního povídá složení , které pufru a roztoku polyhaptenu je uvedeno v příkladů 1.
Ori _
u.—
Jako vzorek 3,2 g/dl. Všechny rve bvl použit standard s obsahem EbAn n v J- J_ testované iontové detergenty vyvolávají lysi buněk a uvolnění epitopu.Nejvýhodnější se ukázal být ani Xontový detergent SBS jakož i kationtové detergenty T1A3 a CTAB.
Tabulka 3
Vliv různých iontových detergentů v hemolyzačním činidle
| Absorpce | byla měřena | při 340 nm. | |||
| detergent | koncentra- | SI | E2 | AS = £ | -Ί ΊΓ |
| ce v herno- | /0 g/dl | /3,2 g/dl | |||
| lyzačnírn | EbAl / | EbA-, F | |||
| činidle | |||||
| SIS | 0,5 fy | 337 eS | 73 mS | 264 | mS |
| SDS | 1,0 fy | 333 mS | 30 mS | 253 | WH* 1 UÁJ |
| obojetný | 0,5 fy | 341 &E | 172 mS | 169 | mS |
| ?wíííergent | |||||
| 3-14 | |||||
| obojetný | j-, 0 | 343 eS | 139 eE | 204 | mS |
| detergent | |||||
| 3-14 | |||||
| rrvr. a - ilU' | Ί Π íL - , U /0 | 377 eS | 149 eS | 223 | mS |
| p T Λ Ή k? -u*Í4-' | 374 mS | 137 mS | 237 | 1t2 | |
| kontrola n. | |||||
| iontový | -- | 340 mS | 275 eS | 65 | mS |
detergent
-Ylstanoveni EbA-, _ J_ c v příkladu 3· no už i to 1 5» BBS.
Závislost dynamické měrné oblasti na koncentraci Brij 35
Pokusy byly provedeny stejně jako V kemolyzačním činidle bylo konstantně
Koncentrace Brij 35 v reakčním pufru byla měněna v rozmezí uvedeném v tabulce 4. Jako vzorek sloužil standard
EbAn uvedení v nříkladu 3· c -1·
Měrná oblast se rozšířila ze 47eE kontroly již přídavkem 0,1 # Brij 35 na 233 eE. Výhodná koncentrace Brij 35 se pohybovala okolo ^yO až 1,0 fy.
Tabulka 4
Vliv různých koncentrací Brij v reakčním pufru na stanovení HbA-, „ i c
Absorpce byla měřena při 340 nm
Koncentrace
| Brij 35 | El | S2 | £E = Ξ1-Ε2 |
| reakčním | /0 g/dl BbA1 c | /3,2 g/dl kbA·, | |
| 'fru | |||
| - | 240 mE | 193 eE | 47 eE |
| 0,1 y° | 266 mE | 33 eE | 233 eE |
| 0,25 c/o | 274 mS | 40 mE | 234 eS |
| 0,5 % | 302 mE | 57 eE | 245 eE |
| 1,0 % | 351 mE | 99 niE | 252 mE |
| 2,0 /o | 385 eE | 242 mE | 143 eE |
Příklad 5 ni HbA iv různých detergentů v reakčním pufru na stanové1 c
Pokusy byly provedeny analogicky jako v příkladu 4.
-187 reakčním pufru byly použity detergenty uvedené v ta bulce 5. Přídavkem Brij 35 , 56 a 53 , jakož i Myrj 52 a 59 byla dynamická měrná oblast maximálně rozšířena . Ale i jiné neiontové detergenty jako Triton , jakož i obojetné iontové detergenty , jako Zwittergent 3-14 vykazovaly ve srovnání s kontrolou výrazně pozitivnější účinek.
Tabulka 5
Vliv detergentů v reakčním pufru detergemt koncentrace El v reakčním /0 g/dl
E2 4) S = E1-E2 /3,2 g/dl
| pufru | HbA-L | 0 / | EbA·^ | |||||
| kontrola | 240 | •tnE | 193 | mE | 47 | mE | ||
| Brij 35 | 0,5 $ | 302 | mE | 57 | mE | 245 | mE | |
| Erij 56 | 0,5 % | 302 | rnE | 57 | mE | 245 | mE | |
| Brij 58 | 0,5 % | 303 | mE | 51 | mE | 252 | mE | |
| Triton x | 114 | 0,2 <$> | 523 | mE | 275 | mE | 248 | mE |
| Triton x | 100 | 0,5 fi | 298 | mE | 202 | mB | 96 | mE |
| Tween 90 | 0,25 í* | 277 | mE | 143 | **>7Γ· | 134 | ΙΠ-ί -t | |
| Tween 60 | 0,25 | 266 | mS | • 75 | mE | 191 | mE | |
| Tween 40 | 0,25 $ | 27 6 | mZ | 86 | mE | 139 | mE | |
| Tween 20 | 0,1 % | 266 | mE | 131 | mE | 135 | mS |
Zwittergent
| 3-14 | 0,1 % | 308 | mE | 155 | mE | 153 | mE | |
| Myr j | 50 | 0,5 % | 308 | mE | 40 | mE | 263 | mE |
| Myr j | 59 | 0,5 0 | 317 | mE | 31 | mE | 286 | ee |
Příklad 6
Současné stanovení celkovéhohernoglób inu a EbAj se specifickým hnědozeleným chromoforen hemoglobinu .το.
Pokusy byly provedenýma Hitachi 717 firmy Boehrin ger Mannheim GmbH. Obsah celkového hemoglobinu byl mě řen fotometricky při vlnové délce 570 nm,. Imunologický důkaz EbA^ se prováděl podle principu testu TISIA tur bidimetrickým měřením při 340 nm.Všechna stanovení a in kubace se prováděl?/ při teplotě 37 °C.
Byly použity následující roztoky :
Hemolyzační činidlo mM NaPO^ pufru pE 7,4
1,0 $ tetradecyltrimethylammoniumbromidu /TIAB/
0,01 $ methylisothiazolonu 0,02 $ Bronidoxu® S
0,5 $ Brij 35 mM EDTA
Reakční pufr:
mM MES pufru pH 6,0
150 mM natriumchloridu
3,0 $ PES 6000
0,5 $ Brij 35
0,01 $ methylisothiazolonu
0,02 $ Bronidoxií“) K
1,2 mg/ml PAS < EbA^ c > S-IgG /DE/ / polyklonální ovčí AS proti HbA·
Polyhaptenový roztok :
| 20 | mM | MES pufru pH 6,0 |
| 150 | mM | natriumchloridu |
| 6,0 | /*7 7« | PEG 6000 |
| 0,5 | £ | x — tj s > |
| 20 t | ig/ml | pclyhaptenu |
lytační činidlo v θ m o 7T* -? ' - — v
Se vzorku krve bylo přidáno herno poměrů. 1 :100 a inkubovalo se při 25
-20K 10 ul hernolyžovaného vzorku se přidalo 250 cl reakčního pufru. Po 4 minutách hýla měřena absorpce celkového hemoglobinu při 570 nm /21/. 0 minutu později byla měřena absorpce při 340 nm /22/ a potom se připipetovalo 50 ul polyhaptenového roztoku a ihkubovalo se pět minut. Potom se měřil zákal oři 340 nm /23/.
Pro stanovení hodnoty HbA^ Q v g/dl se vjmesl roz díl extinkce &2 = 23 -k.22 proti koncentraci HbA^ Qa provedlo se grafické vyhodnocení.
k = korekční faktor objemu = objem vzorku + objem reakčního pufru celkový objem
Koncentrace celkového hemoglobinu se vypočítá z konstantního faktoru K násobením 21 / K = molární extinkční koeficient chromoforu hemoglobinu x zřeůovací faktor /. Charakteristické absorpční spektrum je reprodukováno na cbr. 6. Jkko kalibrétor sloužila ELTAplná krev se známým obsahem hemoglobinu a HbA^ c· E2TAplná krev byla pro vytvoření kalibrační křivky zředěna v různém poměru s hernolyzačním činidlem.
Kalibrační křivky jsou znázorněny graficky na obr.
a 8. Ka obr. 7' byla vynesena koncentrace celkového hemoglobinu proti 21.Vztah je lineární. Při výpočtu se může tedy násobit konstantním faktorem K. Ka obr.
byl vynesen extinkční rozdíl £ 2 = 23^k.22 proti obsahu HbAn Λ .
Claims (13)
1. Imunologická metoda pro moglobinu v plné krvi, v y z n tím , že •f « z* a/ vzorek krve se zpracuje s hemolyzačním čini dlen,které obsahuje iontový detergent s pH 5 až 9,5 , a b/ v hemolyzovaném vzorku krve se stanoví imunologicky derivát hemoglobinu.
2. Metoda podle nároku 1,vyznačující se tím , že se vzorek krve zpracovává s hemolyzačním činidlem při teplotách 4 až 37 °C až 10 mi nut.
3. Metoda podle jednoho z nároků 1 a 2 , v y značujicí se tím , že hemolyzační činidlo obsahuje dále neiontový detergent.
4. Metoda podle jednoho z nároků 1 až 3 , v y značujicí se tím , že .se hemolyzovaný vzorek doplní reakčním pufrem,který obsahuje neiontový detergent nebo obojetné iontový detergent a v rezultující směsi se stanoví imunologicky derivát hemoglobinu.
5. Metoda podle jednoho z nároků 1 až 4 , v y značujicí se tím , že derivát hemoglobinu je HbA^ G·
6. Metoda pro stanovení obsahu derivátu hemoglobinu a celkového hemoglobinu ve vzorku krve , v y V . Z Z 1 Z M _
3 Θ t> i ΠΙ | Z Θ s θ a/ vzorek krve zpracuje s hemolyzačním činidlem,
s e t í m , že se obsah celkového hemoglobinu stanoví měřením charakteristické absorpce specifického chromoforu hemoglobinu.
8. Metoda podle jednoho z nároků 6 a 7 ,vyzná čující se tím , že hemolyzační činidlo obsahuje dále neiontový detergent.
9. Metoda podle jednoho z nároků 6 až 8 , v y značující se tím , že se hemolyzovaný vzorek doplní reakčním pufrem,který obsahuje neiontový nebo obojetně iontový detergent a v rezultující směsi se stanoví celkový hemoglobin a derivát hemoglobinu.
i0
XV I hemolyzační cimdio obsanujici iontový detergent s pH 5 až 9,5·
11. Hemolyzační činidlo podle nároku 10 , vyznačující se tím , že obsahuje ne iontový detergent.
12. Hemolyzační čin 10 nebo 11 , v y z n a č obsahuje vhodné oxidační nidlo, jehož mechanismus ataku • 4 z* ~í n ’ ? XJ-J- -LU in.
idlo podle jednoho z nároků ující se tím, že činidlo nebo konzervační óiúčihku spočívá na oxidačním t'OUl he nc i v začni .dla po
-,Ί ίο no
-az nároirů 10 až 12 při imunologickém stanovení derivátu hemoglobinu nebo současném stanovení derivátu he moglobinu a obsahu celkového hemoglobinu ve vzorku.
14. Testovací souprava pro imunologický důkaz derivátu hemoglobinu , sestávající alespoň ze dvou oa sebe oddělených balení, ze kterých jedno obsahuje hemolyzační činidlo podle jednoho z nároků 10 až 12 , a druhé další směs činidla, která obsahuje reagencie nezbytné pro imunologický důkaz derivátu hemoglobinu.
l5. Testovací souprava podle nároku 14 , vyznačující se tím , že reagencie nezbytné pro imunologický důkaz jsou naneseny na nosiči testu.
16. Stabilizace roztoku glykosylovaného proteinu, peptidů nebo polyhaptenu ,vyznačující se tím , že jako pufr se používá MES-pufr, pE 5,0 až 8,0 a obsahuje roztok SETA.
17. Stabilizace roztoku podle nároku 16 , v y znač u ze je ořidan noA.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4206932A DE4206932A1 (de) | 1992-03-05 | 1992-03-05 | Immunologische methode zur bestimmung eines haemoglobinderivates |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ29193A3 true CZ29193A3 (en) | 1994-01-19 |
Family
ID=6453281
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ93291A CZ29193A3 (en) | 1992-03-05 | 1993-02-26 | Immunoassay for hemoglobin derivative determination |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5541117A (cs) |
| EP (1) | EP0559164B1 (cs) |
| JP (1) | JP2637677B2 (cs) |
| KR (1) | KR930020162A (cs) |
| CN (1) | CN1081765A (cs) |
| AT (1) | ATE193378T1 (cs) |
| AU (1) | AU652092B2 (cs) |
| CA (1) | CA2090981C (cs) |
| CZ (1) | CZ29193A3 (cs) |
| DE (2) | DE4206932A1 (cs) |
| DK (1) | DK0559164T3 (cs) |
| ES (1) | ES2148190T3 (cs) |
| FI (1) | FI930975A (cs) |
| HR (1) | HRP930253A2 (cs) |
| HU (1) | HUT70463A (cs) |
| IL (1) | IL104902A0 (cs) |
| NO (1) | NO930770L (cs) |
| NZ (1) | NZ247054A (cs) |
| PL (1) | PL297915A1 (cs) |
| PT (1) | PT559164E (cs) |
| SI (1) | SI9300108A (cs) |
| SK (1) | SK14993A3 (cs) |
| ZA (1) | ZA931533B (cs) |
Families Citing this family (41)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5739037A (en) * | 1992-09-29 | 1998-04-14 | Drew Scientific Limited | Process for eliminating labile glycohaemoglobin from a sample |
| US5610076A (en) * | 1994-04-29 | 1997-03-11 | Alteon Inc. | Method for detecting hemoglobin advanced glycosylation endproducts |
| FR2721112B1 (fr) * | 1994-06-13 | 1996-08-14 | Gks Technologies | Dispositif de diagnostic rapide de toute molécule glyquée et procédé de mise en Óoeuvre. |
| JP3150857B2 (ja) * | 1994-10-19 | 2001-03-26 | 富士写真フイルム株式会社 | グリコヘモグロビン含有比測定用分析要素及び分析方法 |
| EP0729031A1 (en) * | 1995-02-24 | 1996-08-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Set of reagents determining the content of total haemoglobin |
| JP3269765B2 (ja) | 1995-12-14 | 2002-04-02 | 富士写真フイルム株式会社 | ヘモグロビン誘導体の免疫学的測定方法及びその方法に用いる処理試薬 |
| JP3551678B2 (ja) * | 1996-03-14 | 2004-08-11 | 東ソー株式会社 | ヘモグロビンＡ１ｃの測定法及びキット |
| US6855562B1 (en) | 1996-07-30 | 2005-02-15 | Horiba, Ltd. | Immunoassay method for lyzed whole blood |
| JP3249919B2 (ja) * | 1996-07-30 | 2002-01-28 | 株式会社堀場製作所 | 免疫測定方法 |
| US5858794A (en) * | 1997-05-13 | 1999-01-12 | Bayer Corporation | Cyanide-containing hemoglobin reagent composition and method providing acceptable precision, accuracy and freedom from white cell interference on automated hematology analyzers |
| EP0905514B1 (en) * | 1997-09-27 | 2003-11-26 | Horiba, Ltd. | Blood cell count/immunoassay apparatus using whole blood |
| US6485923B1 (en) | 2000-02-02 | 2002-11-26 | Lifescan, Inc. | Reagent test strip for analyte determination having hemolyzing agent |
| JPWO2002021142A1 (ja) * | 2000-09-07 | 2004-01-15 | 和光純薬工業株式会社 | 総ヘモグロビン及び糖化ヘモグロビンの測定方法 |
| WO2004042364A2 (en) * | 2002-11-05 | 2004-05-21 | Therasense, Inc. | Assay device, system and method |
| KR101185576B1 (ko) * | 2003-05-27 | 2012-09-24 | 미쓰비시 가가쿠 메디엔스 가부시키가이샤 | 면역크로마토그래피 방법 |
| CA2510277C (en) * | 2003-09-23 | 2012-07-24 | Epinex Diagnostics, Inc. | Rapid test for glycated albumin |
| US7939030B2 (en) * | 2003-10-29 | 2011-05-10 | Mec Dynamics Corp. | Micro mechanical methods and systems for performing assays |
| US7541190B2 (en) * | 2005-02-07 | 2009-06-02 | Beckman Coulter, Inc. | Method of measurement of cellular hemoglobin |
| WO2006112339A1 (ja) * | 2005-04-14 | 2006-10-26 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | ヘモグロビン誘導体の測定方法、それに用いる試薬組成物、測定キット、分析デバイス、及び分析システム |
| JP5279485B2 (ja) * | 2006-03-24 | 2013-09-04 | アークレイ株式会社 | グリコヘモグロビン濃度測定方法および濃度測定装置 |
| EP2015053B1 (en) * | 2006-03-24 | 2016-06-15 | ARKRAY, Inc. | Method for determination of glycosylated hemoglobin level and apparatus for determination of the level |
| WO2007127616A2 (en) * | 2006-04-12 | 2007-11-08 | Benjamin Pless | Cavitation heating system and method |
| US8338183B2 (en) * | 2006-07-29 | 2012-12-25 | I-Sens, Inc. | Electrochemical determination system of glycated proteins |
| CN101595386B (zh) * | 2007-01-30 | 2012-05-09 | 爱科来株式会社 | 吩噻嗪衍生物色素的检测方法及用于该方法的显色剂试剂 |
| EP2211175B1 (en) | 2007-10-30 | 2012-04-25 | Panasonic Corporation | Method for measurement of hemoglobin and hemoglobin derivative, and measurement kit |
| CN101493467A (zh) * | 2008-01-25 | 2009-07-29 | 上海伊思柏生物科技有限公司 | 定量测定糖化蛋白质的方法 |
| KR101005559B1 (ko) | 2008-07-15 | 2011-01-05 | 주식회사 아이센스 | 바이오센서를 이용한 단백질 측정 장치 |
| WO2010009459A1 (en) * | 2008-07-18 | 2010-01-21 | Bayer Healthcare Llc | Methods, devices, and systems for glycated hemoglobin analysis |
| EP2360471B1 (en) | 2008-12-11 | 2017-02-15 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Method for pre-treating sample containing glycated hemoglobin |
| US20100167306A1 (en) * | 2008-12-26 | 2010-07-01 | Henry John Smith | Rapid test for glycated albumin in saliva |
| CN102640002B (zh) * | 2009-05-20 | 2015-08-05 | 瑞莱诊断体系股份有限公司 | 检测糖化血红蛋白百分比的系统和方法 |
| EP2562539B1 (en) * | 2010-03-31 | 2023-09-27 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Method of analyzing hemoglobins |
| JP5906604B2 (ja) * | 2011-08-11 | 2016-04-20 | 東洋紡株式会社 | 全血検体の成分測定方法 |
| KR101207418B1 (ko) | 2012-02-10 | 2012-12-04 | 주식회사 아이센스 | 효소법을 이용하는 당화혈색소 정량분석용 용혈시약 조성물 |
| WO2015169511A2 (de) * | 2014-05-06 | 2015-11-12 | Diasys Diagnostic Systems Gmbh | Enzymatische bestimmung von hba1c |
| CN104062430B (zh) * | 2014-06-30 | 2016-03-30 | 洛阳普莱柯万泰生物技术有限公司 | 一种用于检测样品中流感病毒的试剂盒及其检测方法和应用 |
| CN109154623B (zh) * | 2015-12-30 | 2022-04-05 | W健康公司 | 用于确定血液样本中的HbA1c的量的方法 |
| US20210278422A1 (en) * | 2018-09-12 | 2021-09-09 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Reagent and method for measuring hemoglobins |
| CN110702894A (zh) * | 2019-10-10 | 2020-01-17 | 南京欧凯生物科技有限公司 | 一种直接测定糖化血红蛋白含量的检测方法 |
| CN112067566A (zh) * | 2020-08-28 | 2020-12-11 | 南开大学 | 一种用于糖化血红蛋白定量分析的比色传感器 |
| CN113984689B (zh) * | 2021-10-25 | 2023-11-03 | 中元汇吉生物技术股份有限公司 | 一种测定谷胱甘肽还原酶的试剂盒 |
Family Cites Families (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4247533A (en) * | 1978-05-01 | 1981-01-27 | The Rockefeller University | Hemoglobin A1c radioimmunoassay |
| US4200435A (en) * | 1978-12-26 | 1980-04-29 | Abbott Laboratories | Determination of glycosylated hemoglobin in blood |
| JPS5861465A (ja) * | 1981-10-07 | 1983-04-12 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | 血液の分析方法 |
| US4478744A (en) * | 1982-01-25 | 1984-10-23 | Sherwood Medical Company | Method of obtaining antibodies |
| HU186976B (en) * | 1982-10-01 | 1985-10-28 | Reanal Finomvegyszergyar | Process for determation of glucose containt of glucolized in non-ensimatic way proteins and reagent lutes for this process |
| US4529705A (en) * | 1983-06-06 | 1985-07-16 | Coulter Electronics, Inc. | Reagent for combined diluting and lysing whole blood |
| US4658022A (en) * | 1985-08-08 | 1987-04-14 | Molecular Diagnostics, Inc. | Binding of antibody reagents to denatured protein analytes |
| CA1339952C (en) * | 1984-10-29 | 1998-07-14 | William J. Knowles | Immunoassays for denatured protein analytes, particularly hb alc, and monoclonal antibodies thereto |
| US4727036A (en) * | 1985-08-08 | 1988-02-23 | Molecular Diagnostics, Inc. | Antibodies for use in determining hemoglobin A1c |
| US4647654A (en) * | 1984-10-29 | 1987-03-03 | Molecular Diagnostics, Inc. | Peptides useful in preparing hemoglobin A1c immunogens |
| CA1263590A (en) * | 1984-12-06 | 1989-12-05 | Jeffrey Benezra | Cyanide-free hemoglobin reagent |
| DK145385D0 (da) * | 1985-03-29 | 1985-04-01 | Novo Industri As | Monoklonalt antistof til immunkemisk analyse |
| DE3532868A1 (de) * | 1985-09-14 | 1987-03-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von glykosiliertem haemoglobin sowie hierzu geeignete verbindungen und verfahren zu deren herstellung |
| US4806468A (en) * | 1987-02-05 | 1989-02-21 | Becton, Dickinson And Company | Measurement of glycosylated hemoglobin by immunoassay |
| US4861728A (en) * | 1987-07-24 | 1989-08-29 | Becton, Dickinson And Company | Immunoassay of glycosylated hemoglobin using a labeled boron reagent |
| DE3733084A1 (de) * | 1987-09-30 | 1989-04-13 | Boehringer Mannheim Gmbh | Testtraeger zur analytischen bestimmung eines bestandteils einer koerperfluessigkeit |
| US4970171A (en) * | 1987-11-09 | 1990-11-13 | Miles Inc. | Denaturant reagents for convenient determination of hemoglobin derivatives in blood |
| JP2619900B2 (ja) * | 1988-01-27 | 1997-06-11 | 東亜医用電子株式会社 | 血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬および方法 |
| NO890029D0 (no) * | 1989-01-04 | 1989-01-04 | Axis Research | Nye modifiserte peptider og proteiner for in vitro diagnoser (diabetes). |
| IL94724A (en) * | 1989-07-13 | 1994-02-27 | Miles Inc | Decomposition of red blood cells and denaturation of hemoglobin by the use of lithium salts |
| JP2836865B2 (ja) * | 1989-10-23 | 1998-12-14 | 東亜医用電子株式会社 | 血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬 |
| US5242832A (en) * | 1990-03-01 | 1993-09-07 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Reagent for measurement of leukocytes and hemoglobin in blood |
| JP2891302B2 (ja) * | 1990-03-01 | 1999-05-17 | シスメックス株式会社 | 血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬 |
| DE69121456T2 (de) * | 1990-05-09 | 1996-12-19 | Hoffmann La Roche | Stabilisiertes Harnsäurereagens |
| DE4135542A1 (de) * | 1991-10-28 | 1993-04-29 | Boehringer Mannheim Gmbh | Lagerfaehige proteinloesungen |
-
1992
- 1992-03-05 DE DE4206932A patent/DE4206932A1/de not_active Withdrawn
-
1993
- 1993-02-26 CZ CZ93291A patent/CZ29193A3/cs unknown
- 1993-03-01 SK SK14993A patent/SK14993A3/sk unknown
- 1993-03-01 IL IL104902A patent/IL104902A0/xx unknown
- 1993-03-01 AU AU33871/93A patent/AU652092B2/en not_active Ceased
- 1993-03-02 PL PL29791593A patent/PL297915A1/xx unknown
- 1993-03-03 ES ES93103349T patent/ES2148190T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-03 DE DE59310046T patent/DE59310046D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-03 AT AT93103349T patent/ATE193378T1/de active
- 1993-03-03 HR HR930253A patent/HRP930253A2/hr not_active Application Discontinuation
- 1993-03-03 PT PT93103349T patent/PT559164E/pt unknown
- 1993-03-03 EP EP93103349A patent/EP0559164B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-03 NO NO93930770A patent/NO930770L/no unknown
- 1993-03-03 DK DK93103349T patent/DK0559164T3/da active
- 1993-03-03 NZ NZ247054A patent/NZ247054A/en not_active IP Right Cessation
- 1993-03-04 CA CA002090981A patent/CA2090981C/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-04 FI FI930975A patent/FI930975A/fi unknown
- 1993-03-04 HU HU9300596A patent/HUT70463A/hu unknown
- 1993-03-04 ZA ZA931533A patent/ZA931533B/xx unknown
- 1993-03-04 CN CN93104037A patent/CN1081765A/zh active Pending
- 1993-03-04 US US08/026,464 patent/US5541117A/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-05 SI SI9300108A patent/SI9300108A/sl unknown
- 1993-03-05 JP JP5045130A patent/JP2637677B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1993-03-05 KR KR1019930003336A patent/KR930020162A/ko not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR930020162A (ko) | 1993-10-19 |
| CA2090981C (en) | 1999-11-16 |
| HU9300596D0 (en) | 1993-05-28 |
| NZ247054A (en) | 1995-02-24 |
| JP2637677B2 (ja) | 1997-08-06 |
| CN1081765A (zh) | 1994-02-09 |
| DE59310046D1 (de) | 2000-06-29 |
| ES2148190T3 (es) | 2000-10-16 |
| US5541117A (en) | 1996-07-30 |
| ZA931533B (en) | 1994-09-04 |
| EP0559164A2 (de) | 1993-09-08 |
| HRP930253A2 (en) | 1995-10-31 |
| SI9300108A (en) | 1993-09-30 |
| ATE193378T1 (de) | 2000-06-15 |
| PT559164E (pt) | 2000-10-31 |
| EP0559164A3 (cs) | 1994-01-26 |
| NO930770L (no) | 1993-09-06 |
| IL104902A0 (en) | 1993-07-08 |
| DK0559164T3 (da) | 2000-10-30 |
| CA2090981A1 (en) | 1993-09-06 |
| FI930975A (fi) | 1993-09-06 |
| AU652092B2 (en) | 1994-08-11 |
| JPH0611510A (ja) | 1994-01-21 |
| DE4206932A1 (de) | 1993-09-09 |
| NO930770D0 (no) | 1993-03-03 |
| HUT70463A (en) | 1995-10-30 |
| PL297915A1 (en) | 1993-09-06 |
| EP0559164B1 (de) | 2000-05-24 |
| FI930975A0 (fi) | 1993-03-04 |
| SK14993A3 (en) | 1993-10-06 |
| AU3387193A (en) | 1993-09-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ29193A3 (en) | Immunoassay for hemoglobin derivative determination | |
| CA2654981C (en) | Methods for assaying percentage of glycated hemoglobin | |
| JP3150857B2 (ja) | グリコヘモグロビン含有比測定用分析要素及び分析方法 | |
| US4703001A (en) | Immunoassay for the detection of serum analytes using pH dependent chastropic acids | |
| US8557591B2 (en) | Methods for assaying percentage of glycated hemoglobin | |
| US4639425A (en) | Heterogeneous immunoassay and reagent therefore | |
| EP0154276B1 (en) | Specific binding assay employing anti-g6pdh as label | |
| EP0779513B1 (en) | Method for immunological determination of hemoglobin derivative and treating reagent for use therein | |
| JP4214648B2 (ja) | 糖化蛋白質測定試薬 | |
| US5342788A (en) | Method and standard solution for the determination of thyroxine (T4) or triiodothyronine (T3) | |
| CN113125759A (zh) | 糖化血红蛋白检测试剂盒 | |
| EP0061071B1 (en) | Activated apoglucose oxidase, method of preparing it, its use in specific binding assay methods and reagent means and test kits containing it | |
| Presentini et al. | Influence of the Antibody-Peroxidase Coupling Methods on the Conjugates Stability and on the Methodologies for the Preservation of the Activity in Time | |
| US5294535A (en) | Method for suppressing partial coloration in immunoassays utilizing peroxidase labels | |
| JPH04303769A (ja) | 免疫学的測定装置及び測定方法 | |
| JPH0775574A (ja) | 安定なペルオキシダーゼ組成物及び安定な抗体組成物 |