SI9300108A - Immunological method for the determination of hemoglobin derivatives - Google Patents
Immunological method for the determination of hemoglobin derivatives Download PDFInfo
- Publication number
- SI9300108A SI9300108A SI9300108A SI9300108A SI9300108A SI 9300108 A SI9300108 A SI 9300108A SI 9300108 A SI9300108 A SI 9300108A SI 9300108 A SI9300108 A SI 9300108A SI 9300108 A SI9300108 A SI 9300108A
- Authority
- SI
- Slovenia
- Prior art keywords
- hemoglobin
- derivative
- hemolysis reagent
- content
- sample
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
- G01N33/721—Haemoglobin
- G01N33/723—Glycosylated haemoglobin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/962—Prevention or removal of interfering materials or reactants or other treatment to enhance results, e.g. determining or preventing nonspecific binding
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/815—Test for named compound or class of compounds
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Imunološka metoda za določanje derivata hemoglobina
Izum se nanaša na metodo za določanje vsebnosti določenega derivata hemoglobina v vzorcu krvi. Podrobno se izum nanaša na metodo za določanje vsebnosti derivatov hemoglobina, kot glikiranega hemoglobina, ki zahtevajo ločeno določanje vsebnosti celokupnega hemoglobina in določanje derivata hemoglobina, da bi določili delež derivatiziranega hemoglobina v krvi.
V odvisnosti od nivoja sladkorja v krvi se majhen del glukoze, ki so jo privzeli eritrociti, spoji v neencimski reakciji z N-terminalnim ostankom valina /3-verige hemoglobina. Reakcija do stabilnega glikiranega derivata hemoglobina HbAlc (ketoaminska oblika) poteka v dveh stopnjah. Prvič se glukoza preko hitre reverzibilne adicije na hemoglobin veže ob tvorbi labilnega glikiranega derivata hemoglobina (Schiffove baze). Z ireverzibilno počasno premestitveno reakcijo (Amadorijeva premestitev) se tvori stabilna oblika. Delež HbAlc v celokupnem hemoglobinu znaša pri ljudeh z zdravo presnovo 3 do 6 %. Pri bolnikih z diabetesom lahko delež HbAlc proporcionalno višini koncentracije glukoze v krvi med predhodnimi 4 do 12 tedni naraste do vrednosti 12 %, v posameznih primerih celo do 20 %. Določitev relativnega deleža HbAlc v celokupni vsebnosti hemoglobina se ponuja zlasti kot integralni parameter za kontrolo poteka uravnavanja sladkorja v krvi.
Za določanje glikiranega hemoglobina so opisali vrsto metod. Konvencionalne metode temelje na tehnikah, kot elektroforezi, izoelektričnem fokusiranju in kolorimetričnem določanju kot tudi na ionsko izmenjevani in afinitetni kromatografiji. Potem ko so opisali pripravo specifičnih poliklonskih protiteles (US patent 4,247,533) in monoklonskih protiteles (EP-A-0 316 306, EP-A-0 201 187), so razvili vrsto imunoloških metod za dokaz HbAlc.
EP-A-0 185 870 opisuje imunološko metodo za določanje proteinov, med drugim HbAlc. Uporabili so monoklonska protitelesa, ki prepoznajo specifično linearne peptidepitope. Za sproščanje epitopov predpisujejo denaturiranje, med drugim s kaotropnimi reagenti. Pri temperaturah pod 37°C zahteva ta stopnja denaturiranja eno do več ur, pri temperaturah nad 50°C pa eno minuto. V istočasno določanje vsebnosti celokupnega hemoglobina v vzorcu se ne spuščajo.
V EP-A-0 201 187 je opisana metoda za določanje HbAlc, pri kateri uporabijo monoklonska protitelesa proti HbAlc, ki so jih dobili z imuniziranjem z nativnim humanim HbAlc. Dokaz izvedejo pri temperaturah od 4 do 37°C, pri čemer lahko traja vsaka stopnja inkubacije do 72 ur. Določanje vsebnosti celokupnega hemoglobina in vsebnosti HbA^ v istem vzorcu ni opisano.
V EP-0 315 864 je opisana metoda za določanje relativne vsebnosti HbAlc v vzorcu krvi. Hemoglobin denaturirajo s tiocianatom in z dodatnim oksidacijskim sredstvom, prednostno fericianidom, prevedejo v met-hemoglobin V tako obdelanem vzorcu krvi lahko določijo vsebnost celokupnega hemoglobina kot tudi vsebnost HbAlc.
Uporaba litijevih soli, prednostno litijevega tiocianata, za lizo eritrocitov in denaturiranje derivata hemoglobina je opisana v EP-A-0 407 860. Vsebnost HbAlc lahko določijo imunološko. Za dokaz celokupnega hemoglobina je treba dodatno dodati oksidacijsko sredstvo, prednostno fericianid, ki prevede hemoglobin v methemoglobin.
Pomankljivost obeh zadnje navedenih metod je v tem, da je treba za prevedbo hemoglobina v ciano-met-hemoglobin uporabiti cianid. Nadomestitev cianida z natrijevim lavrilsulfatom (SLS) za določitev celokupnega hemoglobina je opisana v Ciin. Biochem. 15 (1982) 83 - 88. Vendar pa tu ni nobenega namiga, da je SLS primeren za predhodno obdelavo vzorca pri imunološki določitvi derivata hemoglobina, posebno HbAlc.
Tudi v EP-A-0 184 787 je opisan reagent za določanje celokupnega hemoglobina v vzorcu krvi, ki je brez cianida. Reagent je ionsko površinsko aktivno sredstvo s pH najmanj 11,3, prednostno več kot 13,7. Imunološkega določanja derivata hemoglobina ne obravnavajo. Zelo visoka vrednost pH bi bila pri imunološki določitvi glikiranega derivata hemoglobina v škodo, ker lahko pride v močno alkalnem do odcepitve sladkornih deležev hemoglobina. V primeru encimskega markiranja uporabljenih protiteles bi prišlo lahko do inhibicije encimske reakcije, ker leži optimalni pH encimov, ki jih najpogosteje uporabljajo, pri pH od 6 do 8. Visoka vrednost pH lahko inhibira tudi imunološko reakcijo.
Zato je še vedno obstojala potreba po imunološki dokazovalni metodi za določanje derivata hemoglobina v krvi, pri čemer bi lahko hemolizo izvedli pri nizkih temperaturah - kot npr. pri sobni temperaturi -, za pripravo vzorca ne bi bil potreben dolg inkubacijski čas in bi se izognili uporabi okolju škodljivih reagentov, kot cianida. Razen tega naj bi bilo možno istočasno določanje celokupnega hemoglobina v istem hemolizatu, da bi mogli določiti delež derivata hemoglobina v vsebnosti celokupnega hemoglobina v krvi brez dodatnega začetka hemolize. Naloga pričujočega izuma je bila dati na razpolago tako imunološko dokazovalno metodo za določanje derivata hemoglobina v krvi.
Nalogo rešimo z izumom, ki je podrobneje označen v patentnih zahtevkih. V bistvu rešimo to nalogo z imunološko dokazovalno metodo za določanje vsebnosti derivata hemoglobina v vzorcu krvi, ki je označena s tem, da obdelamo vzorec s hemoliznim reagentom, ki vsebuje ionski detergent s pH od 5 do 9,5, in v vzorcu hemolizirane krvi imunološko določimo derivat hemoglobina.
Nadaljnji predmet izuma je metoda za določanje vsebnosti derivata hemoglobina in celokupnega hemoglobina v vzorcu krvi, ki obstaja v tem, da vzorec krvi obdelamo s hemoliznim reagentom, ki vsebuje ionski detergent s pH od 5,0 do 9,5, v hemoliziranem vzorcu fotometrično določimo vsebnost celokupnega hemoglobina in v hemoliziranem vzorcu imunološko določimo derivat hemoglobina.
Nadaljnji predmet izuma je hemolizni reagent, ki vsebuje ionski detergent s pH od 5 do 9,5, njegova uporaba za pripravo vzorca krvi za imunološko določanje derivata hemoglobina in po želji za določanje vsebnosti celokupnega hemoglobina kot tudi testni komplet, ki vsebuje hemolizni reagent.
Pod učinkom hemoliznega reagenta se eritrociti, ki jih vsebuje vzorec krvi, lizirajo in hemoglobin prevede v specifičen hemoglobinski kromofor. Nastali hemoglobinski kromofor lahko uporabimo preko njegove karakteristične absorpcije za določitev vsebnosti celokupnega hemoglobina in preko imunološke reakcije specifičnega epitopa za določitev derivata hemoglobina. Kot imunološko dokazovalno metodo lahko načelno uporabimo vse običajne metode, kot npr. sandwich-teste, DEMAteste, precipitacijske ali aglutinacijske teste kot tudi teste po principu FPIA in CEDIA. Možni so tako mokri kot tudi suhi testi.
V hemoliznem reagentu lahko uporabimo kot ionske detergente anionske detergente, prednostno natrijev dodecilsulfat (SDS), natrijev dioktilsulfosukcinat (DONS), kationske detergente, prednostno tetradeciltrimetilamonijev bromid (TTAB) ali cetiltrimetilamonijev bromid (CTAB) ali amfionske detergente, prednostno Zwittergent 3-14. Hemolizni reagent dodamo vzorcu krvi v množini, ki zadoča, da lizira eritrocite, prevede hemoglobin v specifični hemoglobinski kromofor in sprosti epitope derivata hemoglobina. Homolizni reagent dodamo vzorcu krvi v razmerju 1:10 do 1:400, tako da znaša koncentracija ionskega detergenta v nastali mešanici 0,01 do 5 mas.%, prednostno 0,5 do 1,5 mas.%. Vrednost pH hemoliznega reagenta leži v rahlo kislem do šibko alkalnem območju. Prednostno leži pH med J,0 do 9,5, posebno prednostno pri 7,4. Za naravnavo vrednosti pH v hemoliznem reagentu lahko uporabimo vse običajne puferje. Prednostno uporabimo HEPES, MES, TRIS ah fosfatni pufer.
Hemolizni reagent lahko vsebuje nadaljnje reagente, ki rabijo npr. pri odpravi motenj imunološke reakcije, oksidacije hemoglobina, odstranitvi motnosti, stabiliziranju ali konserviranju. Nekateri detergenti, med drugimi SDS, lahko motijo imunološke reakcije. V redkih primerih se pojavijo po dodatku hemoliznega reagenta zamotnitve in izkosmičenja, ki imajo različne vzroke. Pri nizkih temperaturah je npr. SDS težko topen. Presenetljivo se je pokazalo, da se lahko tem motnjam izognemo z dodatkom neionskega detergenta, prednostno polioksietilenetra, kot je Brij 35 in 58 ali Triton Χ100 kot tudi polioksietilenestra, kot je Myrj_52 in 59 ali Tween 20. Normalno dodamo neionski detergent hemoliznemu reagentu v taki množini, da znaša po dodatku k vzorcu v nastali mešanici koncentracija 0,01 do 5 mas.%, prednostno 0,1 do 0,5 mas.%.
Hemolizni reagent lahko vsebuje še vedno običajno oksidacijsko sredstvo fericianid, npr. heksacianoferat (III). Vendar lahko pride skupaj s kationskimi detergenti do obarjanj. Dodatno je pri uporabi fericianida potrebna zaščita pred svetlobo. Presenetljivo se je pokazalo, da se lahko pri dodatku konservimih sredstev, katerih mehanizem delovanja temelji na učinku na tiolne skupine, kot sta npr.
I metilizotiazolon ali Bronidox® K, povsem odpovemo dodatku fericianida. Skupaj s kationskimi detergenti vodijo ta konservima sredstva do rjavo zeleno obarvanega hemoglobinskega kromofora, katerega absorpcijski maksimum leži pri 570 nm. Posebna prednost je v tem, da dosežemo prvič z dodatkom konservimega sredstva tako prevedbo hemoglobina v specifičen hemoglobinski kromofor kot tudi dobro konserviranje hemoliznega reagenta in drugič, da je končna točka hemolize dobro vidna na spremembi barve iz rdeče v rjavo-zeleno. Konservima sredstva uporabimo v hemoliznem reagentu v koncentraciji od 0,005 do 0,2 mas.%, prednostno 0,01 do 0,02 mas.%.
Hemoliza, prevedba hemoglobina v specifični hemoglobinski kromofor kot tudi priprava vzorca za dokaz derivatov hemoglobina s hemoliznim reagentom so pri nizkih temperaturah, prednostno pri 4 do 37 °C in zlasti prednostno pri sobni temperaturi (20 °C) zaključene po 1 do 10 minutah. V večini primerov zadošča za popolno pripravo vzorca 2-minutna inkubacija.
Tako pripravljeni vzorec krvi nato razredčimo z reakcijskim puferjem v razmeiju 1:10 do 1:100. Kot pufer lahko uporabimo vse običajne puferje, ki ne motijo imunološke reakcije. Prednostno uporabimo pufer MES ali HEPES V koncentracijah od 10 do 200 mmolov/1. Vrednost pH reakcijskega pufeija znaša 5,0 do 8,0. V primeru da obsega imunološki dokaz encimsko reakcijo, bo imel reakcijski pufer prednostno vrednost pH, ki ustreza optimalnemu pH encimske reakcije. Reakcijski pufer lahko nadalje že vsebuje reagente, potrebne za dokaz derivata hemoglobina, predvsem partneije za specifično vezavo, prednostno visoko specifična poliklonska ali monoklonska protitelesa.
Tudi tu se je presenetljivo pokazalo, da je dodatek nadaljnjega detergenta, prednostno neionskih detergentov, kot sta Brij ali Myij, ugoden za to, da nudi optimalne pogoje tako za pripravo vzorca za dokaz derivata hemoglobina, kot glikiranega hemoglobina, kot tudi za imunološko reakcijo, in za preprečitev motenj. Detergent dodamo reakcijskemu puferju v taki množini, da znaša koncentracija v nastali mešanici 0,01 do 5 mas.%, prednostno 0.5 mas,%.
V primeru da je treba v istem vzorcu poleg določitve derivata hemoglobina ugotoviti tudi vsebnost celokupnega hemoglobina, merimo prednostno po dodatku reakcijskega pufeija za določitev vsebnosti celokupnega hemoglobina absorpcijo pri valovnih dolžinah od 400 do 650 nm, prednostno 500 do 650 in posebno prednostno pri 546 ali 570 nm. V primeru mokrega testa določimo ekstinkcijo pri tej valovni dolžini v kiveti fotometrično, v primeru suhega testa lahko določimo absorpcijo reflekcijsko fotometrično po nanosu dobljene mešanice na testni nosilec.
Tak testni nosilec za določanje vsebnosti celokupnega hemoglobina lahko konstruiramo zelo enostavno, ker ni treba, da bi vseboval kemikalije. Za enostavne zahteve zadošča vpojna koprena, ki je nameščena na transparentni nosilni foliji. Za boljše rokovanje s testnim trakom in njegovo boljšo uporabo lahko vsebuje še nadaljnje nosilčne sloje, npr. transportno kopreno ah dozirno kopreno.
Vsebnost celokupnega hemoglobina in vsebnost derivata hemoglobina lahko določimo tudi v različnih delih vzorca po dodatku hemoliznega reagenta. V tem primeru določimo v delu mešanice iz vzorca in hemoliznega reagenta, če je potrebno po ustreznem razredčenju, fotometrično vsebnost celokupnega hemoglobina. Drugemu delu mešanice dodamo reakcijski pufer in nato imunološko določimo derivat hemoglobina.
Za določanje derivata hemoglobina, kot HbAlc, so načelno primerne vse običajne imunološke metode. Kot že opisano, lahko pripravimo poliklonska in monoklonska protitelesa proti derivatom hemoglobina, prednostno HbAlc, ki specifično vežejo karakteristične epitope derivata hemoglobina. (US 4,247,533, EP-A-0 316 306 in EP-A-0 201187).
Pri varianti imunološkega dokaza, načinu markiranja kot tudi metodi detekcije merilnih signalov gre za znane metode iz stanja tehnike. Primerni so npr. sandwich testi z encimskim markiranjem (ELISA), testi z IEMA, RIA, precipitacijski in aglutinacijski testi kot tudi homogeni imunski testi, kot tehnologija CEDIA®, ΕΜΓΤ ali FPIA.
V mokrem testu se vrši imunološko določanje derivata hemoglobina prednostno po načelu TINIA, ker tu ni potrebna nikakršna stopnja ločenja. Vzorcu dodamo za analit specifično protitelo in polihapten kot aglutinacijsko sredstvo. Polihapten obstojf iz nosilčnega materiala, npr. albumina, dekstrana ali IgG, na katerega je pripojenih več epitopov, na katere se lahko vežejo specifična protitelesa. Ker se lahko precipitacija protiteles vrši samo preko polihaptena, dobimo pri pojemajoči vsebnosti analita v vzorcu naraščajočo motnost, ki jo lahko dokažemo nefelometrično ali turbidimetrično.
Prednostno je za derivat hemoglobina specifično protitelo že vsebovano v reakcijskem puferju. Po dodatku reakcijskega puferja lahko v nastali mešanici najprej fotometrično določimo vsebnost celokupnega hemoglobina. Precipitacijsko reakcijo sprožimo z dodatkom raztopine, ki vsebuje polihapten. Po kratkem inkubacijskem času, pri čemer večinoma zadošča 5 minut, lahko nastalo motnost izmerimo pri primerni valovni dolžini, prednostno pri valovnih dolžinah od 340 do 600 nm, zlasti prednostno pri 340 nm, in iz tega določimo koncentracijo derivata hemoglobina. Ker se vrši merjenje celokupnega hemoglobina pri valovnih dolžinah od 500 do 650 nm, prednostno pri 546 ali 570 nm, se ti dve meritvi ne motita in ju lahko izvedemo drugo za drugo v eni kiveti v isti reakcijski raztopini.
Pri pripravi raztopine polihaptena, to pomeni tekoče galenske oblike polihaptena ali glikoziliranega proteina oz. peptida, se je pokazalo, da le-ta pri fosfatnem puferju, ki se uporablja običajno, pri pH od 7,0 do 7,5 ni stabilen in lahko vodi pri daljšem skladiščenju do razkroja glikoproteina. Take nestabilnosti glikoziliranih proteinov v fosfatnem puferju so npr. znane iz Ahmed et al., J. Biol. Chem. 261 (1986), 4889 4894. Z uporabo puferja MES v koncentraciji od 5 do 200 mmolov/I, prednostno 20 do 50 mmolov/l in vrednostjo pH od 5,0 do 8,0, prednostno med 6,0 do 6,5, in istočasnim dodatkom EDTA ali ekvivalentnega tvorca kompleksov v prednostni koncentraciji od 1 do 50 mmolov/l, posebno prednostno 0,1 do 20 mmolov/l, smo dosegli stabiliziranje glikoziliranih peptidov, proteinov in polihaptena. Dodatek albumina govejega seruma (RSA) v prednostni koncentraciji od 0,1 do 2 %, posebno prednostno 1 %, je imel nadaljnji pozitiven učinek na stabilnost raztopine polihaptena. To raztopino polihaptena lahko skladiščimo več kot 12 mesecev pri 4°C, ne da bi bile opazne omembe vredne nestabilnosti polihaptena oz. glikoziliranih proteinov ali peptidov. Pri stresni obremenitvi 3 tedne pri 35°C nastopijo samo upadi za 15 do 20 % prvotnega ekstinkcijskega signala.
Kot j suhi testj se vrši imunološka določitev derivata hemoglobina prednostno po načelu testa IEMA. Po dodatku reakcijskega puferja k vzorcu hemolizirane krvi dodamo specifično encimsko markirano protitelo. V prednostni izvedbeni obliki je v reakcijskem puferju protitelo že vsebovano. Po kratki inkubaciji nanesemo mešanico na testni nosilec. Prosta encimsko markirana protitelesa prestrežemo na epitopni matrici, t.j. coni testnega nosilca, na katero je pripojenih več epitopov, na katere se lahko vežejo specifična protitelesa. V nadaljnji coni, dokazovalni coni, določimo kompleks iz derivata hemoglobina in markiranega protitelesa s presnovo primernega encimskega substrata reflekcijsko fotometrično. Substrat je lahko vsebovan v dokazovalni coni ali pa pride vanjo s tem, da spravimo dokazovalno cono v stik z nadaljnjo cono, ki vsebuje substrat.
Smotrno pridejo reagenti, potrebni za metodo v smislu izuma, na tržišče v obliki testnega kompleta, ki vsebuje v najmanj dveh med seboj ločenih embalažah poleg hemoliznega reagenta druge reagente v raztopljeni ali liofilizirani obliki ali nanešene na testni nosilec.
Pričujoči izum pojasnjujemo z naslednjimi primeri.
Primer 1:
Istočasna določitev celokupnega hemoglobina in HbAR v mokrem testu
Poskuse smo izvedli na aparaturi Hitachi 717 firme Boehringer Mannheim GmbH. Vsebnost celokupnega hemoglobina smo izmerili fotometrično pri valovni dolžini 546 nm. Imunološki dokaz HbAlc se je vršil po načelu testa TINIA s turbidimetriČnim merjenjem pri 340 nm. Vse določitve in inkubacije smo izvedli pri temperaturi 37 °C.
Uporabili smo tele raztopine:
Hemolizni reagent:
20 | mM | NaPO4-puferja pH 7,0 |
1,0 | % | SDS |
0,1 | % | natrijevega azida |
0,02 | % | kalijevega heksacianoferata (III) |
0,5 | % | Brija 35 |
Reaciiski pufer:
20 | mM | MES-pufeija pH 6,0 |
150 | mM | natrijevega klorida |
3,0 | % | PEG-a 6000 |
0,5 | % | Brija 35 |
0,1 | % | albumina govejega s< |
0,1 % natrijevega azida mM EDTA mg/ml PAK <HbAlc> S-IgG (DE) (poliklonsko ovčje protitelo proti HbAlc) ali
100 Mg/ml MAK <HbAlc> M-IgG (DE) (monoklonsko mišje protitelo proti HbAJ
Raztopina polihaptena:
mM MES-pufeija pH 6,0
150 mM natrijevega klorida
6,0 % PEG-a 6000
0,5 % Brij-a 35
0,1 % albumina govejega seruma μ-g/ml polihapten HbAlc-/3-l-4(cis, MHS)-RSA 18:1
K vzorcu krvi smo dodali hemolizni reagent v razmerju 1:100 in pri 25 °C inkubirali 2 minuti. K 5 μ\ hemoliziranega vzorca smo dodali 250 μ\ reakcijskega puferja. Po 4 minutah smo izmerili absorpcijo celokupnega hemoglobina pri 546 nm (El). Eno minuto kasneje smo izmerili absorpcijo pri 340 mn (E2) in nato dopipetirali 50 μΐ raztopine polihaptena in inkubirali 5 minut. Nato smo izmerili motnost pri 340 nm (E3).
Za določitev vrednosti HbAlc v g/dl nanašamo diferenco ekstinkcij Δ E = E3-kE2 proti koncentraciji HbAlc in določimo grafično.
volumen + volumen ..... , vzorec reakcijski pufer k = volumenski korekcijski faktor -celokupni volumen
Koncentracijo celokupnega hemoglobina izračunamo iz konstantnega faktorja K z množenjem z El (K = molami ekstinkcijski koeficient hemoglobinskega kromofora x faktor razredčenja). Kot kalibrator je rabila EDTA-polna kri z znano vsebnostjo hemoglobina in HbA^. EDTA-polno kri smo za izdelavo umeritvene krivulje različno močno razredčili s hemoliznim reagentom.
Umeritvene krivulje so grafično prikazane na sliki 1 in 2. Na sliki 1 smo nanesli koncentracijo celokupnega hemoglobina proti El. Dobimo linearen odnos. Pri izračunavanju lahko torej množimo s konstantnim faktorjem K. V sliki 2 smo nanašali razliko ekstinkcij E = E3-kE2 proti vsebnosti HbAlc.
Pri nadaljnjih poskusih smo hemoliziranemu vzorcu krvi najprej dopipetirali raztopino polihaptena in po petminutni inkubaciji sprožili precipitacijsko reakcijo z dodatkom reakcijskega pufetja, ki je vseboval specifično protitelo. To zaporedje pipetiranja je vodilo v primerjavi z zgoraj navedenim zaporedjem pipetiranja, pri katerem smo najprej dodali protitelo in potem polihapten, do razločno manjše občutljivosti pri določitvi HbAJc (slika 3).
Primer 2
Testni trak za določitev celokupnega hemoglobina in HbAlc
K 30 μ\ polne krvi smo dodali 300 μϊ hemoliznega reagenta in inkubirali 10 minut pri 20 °C. Hemolizni reagent je obstajal iz 0,18 %-ne raztopine SDS, ki smo jo zapufrali na pH 7.
Za določitev celokupnega hemoglobina smo nanesli 32 μϊ hemoliziranega vzorca krvi na testni trak. Zgradba testnega traku je grafično prikazana na sl. 4. Obstoji samo iz neobdelane dozirne koprene (1) iz steklenih vlaken, neobdelane transportne koprene iz steklenih vlaken (2), neobdelane poliestrske tkanine (3) in transparentne polikarbonatne folije (4). Testni trak ne vsebuje nobeneh dodatnih kemikalij. S to izvedbo poskusa se da zelo precizno izmeriti vsebnost celokupnega hemoglobina v vzorcu krvi pri valovni dolžini 576 nm.
Dobili smo variacijske koeficiente pod 2,5 % (Tabela 1).
Tabela 1:
Določitev celokupnega hemoglobina
VK smo vsakokrat izračunali iz 10 posameznih določitev.
Koncentracija HbAlc [g/dl]
VK [%]
14,1
17,5
13.7
14.7
1,0
2,5
1,9
1,8
Za določitev koncentracije HbA^ dodamo k 32 μ\ hemoliziranega vzorca 1200 μ,Ι reakcijskega pufeija in inkubiramo 10 minut. Reakcijski pufer sestoji iz 100 mM Hepesa, pH 7,4, 100 mM NaCl in 0,1 % Brija s konjugatom monoklonskega protitelesa-encima (konjugat MAK-encim). 32 μΐ mešanice smo nanesli na testni trak, ki je grafično prikazan na sliki 5. Prosti konjugat protitelesa prestrežemo na epitopski matrici (11). V coni, kije priključena nanjo, določimo kompleks protitelo proti HbAlc-encim s presnovo substrata potem, ko smo spravili substratno kopreno (13), ki vsebuje substrat, v stik s transportno kopreno (12), refleksijsko fotometrično (Tabela 2).
Tabela 2:
Določitev koncentracije HbAlc s testnim trakom
VK smo vsakokrat izračunali iz 10 posameznih določitev.
Koncentracija HbAlc VK [g/dl] [%]
0,8
1,1
1,4
6,8
5,4
6,0
Primer 3
Vpliv različnih ionskih detergentov na določanje HbAu
Poskuse smo izvedli tako, kot je opisano v primeru 1. Hemolizni reagent je imel to-le sestavo:
20 | mM | NaPO4-pufeija pH 7,2 |
0,1 | % | natrijevega azida |
0,02 | % | kalijevega heksacianoferata (III) |
0,5 | % | Brija 35 |
V tabeli 3 navedeni ionski detergenti so bili vsakokrat vsebovani v tam navedeni koncentraciji.
V primeru ΤΓΑΒ in CTAB se v hemoliznem reagentu ni nahajal kalijev heksacianoferat (III), ker se ta z detergenti obori.
Sestava reakcijskega pufeija in raztopine polihaptena ustreza primeru 1.
Kot krvni vzorec smo uporabili standard z vsebnostjo HbAlc 3,2 g/dl. Vsi testirani ionski detergenti so povzročili lizo celic in sproščanje epitopa. Kot najprimernejši se je pokazal anionski detergent SDS kot tudi kationska detergenta TTAB in CTAB.
Tabela 3:
Določanje HbAR
Vpliv različnih ionskih detergentov v hemoliznem reagentu.
Absorpcijo smo merili pri 340 nm.
Detergent | Koncentracija v hemoliznem reagentu | El [OgAUHbAjJ | E2 [3,2 g/dl HbAJ | ADE = E1-E2 |
SDS | 0,5% | 337 mE | 73 mE | 264 mE |
SDS | 1,0% | 338 mE | 80 mE | 258 mE |
Zwitter- | ||||
gent 3-14 | 0,5% | 341 mE | 172 mE | 169 mE |
Zwitter- | ||||
gent 3-14 | 1,0% | 343 mE | 139 mE | 204 mE |
TTAB | 1,0% | 377 mE | 149 mE | 228 mE |
CTAB | 1,0% | 374 mE | 137 mE | 237 mE |
Kontrola brez ionskega detergenta | 340 mE | 275 mE | 65 mE |
Primer 4
Odvisnost dinamičnega merilnega področja določanja HbAlc od koncentracije Briia 35
Poskuse smo izvedli tako kot v primeru 3. V hemoliznem reagentu smo konstantno uporabili 1 % SDS. Koncentracijo Brija 35 v reakcijskem pufeiju smo variirali znotraj območja, navedenega v tabeli 4. Kot vzorec je rabil v primeru 3 navedeni standard HbA^.
Merilno območje se je od 47 mE kontrole že z dodatkom 0,1 % Brija 35 razširilo na 233 mE. Prednostna koncentracija Brija 35 je znašala 0,1 do 1,0 %.
Tabela 4:
Vpliv različnih koncentracij Brija v reakcijskem puferju na določanje HbAlc
Absorpcijo smo merili pri 340 nm
Koncentracija El E2
Brija 35 v reakcijskem pufeiju | [0g/dlHbAlc] | [3,2 g/dl HbAJ | ΔΕ = E1-E2 |
- | 240 mE | 193 mE | 47 mE |
0,1% | 266 mE | 33 mE | 233 mE |
0,25% | 274 mE | 40 mE | 234 mE |
0,5% | 302 mE | 57 mE | 245 mE |
1,0% 351 mE 99 mE
2,0% 385 mE 242 mE
252 mE 143 mE
Primer 5
Vpliv različnih detergentov v reakcijskem puferju na določanje HbAR
Poskuse smo izvedli analogno primeru 4. V reakcijskem puferju smo uporabili detergente, navedene v tabeli 5. Dinamično merilno področje smo najbolj razširili z dodatkom Brija 35, 56 in 58 kot tudi Myija 52 in 59. Vendar pa so tudi drugi neionski detergenti, kot Triton, kot tudi amfionski detergenti, kot Zwittergent 3-14, pokazali v primerjavi s kontrolo razločno izrazit pozitiven učinek.
Tabela 5:
Vpliv detergentov v reakcijskem puferju
Detergent | koncentracija v reakcijskem puferju | El [Og/dlHbAJ | E2 [3,2 g/dl HbAjJ | ΔΕ = E1-E2 |
Kontrola | - | 240 mE | 193 mE | 47 mE |
Brij 35 | 0,5% | 302 mE | 57 mE | 245 mE |
Brij 56 | 0,5% | 302 mE | 57 mE | 245 mE |
Brij 58 | 0,5% | 303 mE | 51 mE | 252 mE |
Triton x 114 | 0,2% | 523 mE | 275 mE | 248 mE |
Triton x 100 | 0,5% | 298 mE | 202 mE | 96 mE |
Tween80 | 0,25 | 277 mE | 143 mE | 134 mE |
Tween60 | 0,25 | 266 mE | 75 mE | 191 mE |
Tween40 | 0,25 | 276 mE | 86 mE | 189 mE |
Tween20 | 0,1 | 266 mE | 131 mE | 135 mE |
Zwitter- gent 3-14 | 0,1 | 308 mE | 155 mE | 153 mE |
Myrj 52 | 0,5% | 308 mE | 40 mE | 268 mE |
Myrj 59 | 0,5% | 317 mE | 31 mE | 286 mE |
Primer 6:
Istočasno določanje celokupnega hemoglobina in HbAR s specifičnim riavo-zelenim hemoglobinskim kromoforom
Poskuse smo izvedli na aparaturi Hitachi 717 firme Boehringer Mannheim GmbH. Vsebnost celokupnega hemoglobina smo izmerili fotometrično pri valovni dolžini 570 nm. Imunološki dokaz HbAlc se je vršil po principu TINIA-testa s turbidimetriČnim merjenjem pri 340 nm. Vse določitve in inkubacije smo izvedli pri temperaturi 37 °C.
Uporabili smo te-le raztopine:
Hemolizni reagent:
20 | mM | NaPO4 puferja pH 7,4 |
1,0 | % | tetradeciltrimetilamonijevega bromida (TTAB) |
0,01 | % | metilizotiazolona |
0,02 | % | Bronidoxa® K |
0,5 | % | Brija 35 |
10 | mM | EDTA |
Reakcijski pufer:
20 | mM | MES puferja pH 6,0 |
150 | mM | natrijevega klorida |
3,0 | % | PEGa 6000 |
0,5 | % | Brija 35 |
0,01 | % | metilizotiazolona |
0,02 | % | Bronidoxa® K |
1,2 | mg/ml PAK <HbAlc> S-IgG (DE) (poliklonsko ovčje protitelo proti HbAlc) | |
Raztopina polihaptena: |
mM MES puferja pH 6,0
150 mM natrijevega klorida
6,0 % PEGa 6000
0,5 % Brija 35 μ-g/ml polihaptena
K vzorcu krvi smo dodali hemolizni reagent v razmerju 1:100 in pri 25 °C inkubirali 2 minut. K 10 μΐ hemoliziranega vzorca smo dodali 250 μΐ reakcijskega puferja. Po 4 minutah smo izmerili absorpcijo celokupnega hemoglobina pri 570 nm (El). Eno minuto kasneje smo izmerili absorpcijo pri 340 nm (E2) in nato dopipetirali 50 μΐ raztopine polihaptena in inkubirali 5 minut. Nato smo izmerili motnost pri 340 nm (E3).
Za določitev vrednosti HbAlc v g/dl nanašamo diferenco ekstinkcij Δ E = E3-kE2 proti koncentraciji HbAlc in določimo grafično.
νθΙυΠ,6η™ + VOlUn’enrakdpk,p»fer k = volumenski korekcijski faktor =celokupni volumen
Koncentracijo celokupnega hemoglobina izračunamo iz konstantnega faktorja K z množenjem z El (K = molarni ekstinkcijski koeficient hemoglobinskega kromofoija x faktor razredčenja). Karakteristični absorpcijski spektrum je podan na sl. 6. Kot kalibrator je rabila EDTA-polna kri z znano vsebnostjo hemoglobina in HbAlc. EDTA-polno kri smo za izdelavo umeritvene krivulje različno močno razredčili s hemoliznim reagentom.
Umeritvene krivulje so grafično prikazane na sliki 7 in 8. Na sliki 7 smo nanesli koncentracijo celokupnega hemoglobina proti El. Dobimo linearen odnos. Pri izračunavanju lahko torej množimo s konstantnim faktorjem K V sliki 8 smo nanašali razliko ekstinkcij Δ E = E3-k E2 proti vsebnosti HbAlc.
Claims (17)
- PATENTNI ZAHTEVKI1. Metoda za določanje vsebnosti derivata hemoglobina v vzorcu krvi, označena s tem, da (a) vzorec krvi obdelamo s hemoliznim reagentom, ki vsebuje ionski detergent s pH od 5 do 9,5, in (b) v hemoliziranem vzorcu krvi določimo derivat hemoglobina imunološko.
- 2. Metoda po zahtevku 1, označena s tem, da obdelujemo vzorec krvi s hemoliznim reagentom pri temperaturah od 4 do 37 °C do 10 minut.
- 3. Metoda po enem od zahtevkov 1 in 2, označena s tem, da vsebuje hemolizni reagent dodatno neionski detergent.
- 4. Metoda po enem od zahtevkov 1 do 3, označena s tem, da dodamo hemoliziranemu vzorcu reakcijski pufer, ki vsebuje neionski ali amfionski detergent, in v nastali mešanici določimo derivat hemoglobina imunološko.
- 5. Metoda po enem od zahtevkov 1 do 4, označena s tem, da je derivat hemoglobina HbAlc.
- 6. Metoda za določanje vsebnosti derivata hemoglobina in celokupnega hemoglobina v vzorcu krvi, označena s tem, da (a) obdelamo vzorec krvi s hemoliznim reagentom, ki vsebuje ionski detergent s pH od 5,0 do 9,5, (b) v hemoliziranem vzorcu določimo vsebnost celokupnega hemoglobina in (c) v hemoliziranem vzorcu imunološko določimo derivat hemoglobina.
- 7. Metoda po zahtevku 6, označena s tem, da določimo vsebnost celokupnega hemoglobina z meljenjem karakteristične absorpcije specifičnega hemoglobinskega kromofora.
- 8. Metoda po enem od zahtevkov 6 in 7, označena s tem, da vsebuje hemolizni reagent dodatno neionski detergent.
- 9. Metoda po enem od zahtevkov 6-8, označena s tem, da dodamo hemoliziranemu vzorcu reakcijski pufer, ki vsebuje neionski ali amfionski detergent, in v nastali mešanici določimo celokupni hemoglobin in derivat hemoglobina.
- 10. Hemolizni reagent, označen s tem, da vsebuje ionski detergent s pH od 5 do 9,5.
- 11. Hemolizni reagent po zahtevku 10, označen s tem, da vsebuje neionski detergent.
- 12. Hemolizni reagent po enem od zahtevkov 10 ali 11, označen s tem, da vsebuje primerno oksidacijsko sredstvo ali konservirno sredstvo, katerega mehanizem delovanja temelji na oksidativnem napadu na tiolne skupine.
- 13. Uporaba hemoliznega reagenta po enem od zahtevkov 10 do 12 pri imunološkem določanju derivata hemoglobina ali istočasnem določanju derivata hemoglobina in vsebnosti celokupnega hemoglobina v vzorcu.
- 14. Testni komplet za imunološki dokaz derivata hemoglobina, označen s tem, da sestoji iz najmanj dveh med seboj ločenih zavojev, od katerih vsebuje eden hemolizni reagent po enem od zahtevkov 10 do 12 in drugi nadaljnjo mešanico reagentov, ki vsebuje za imunološki dokaz derivata hemoglobina potrebne reagente.
- 15. Testni komplet po zahtevku 14, označen s tem, da so za imunološki dokaz potrebni reagenti naneseni na testni nosilec.
- 16. Stabiliziranje raztopine glikoziliranega proteina, peptida ali polihaptena, označeno s tem, da uporabimo kot pufer MES-pufer, pH 5,0 do 8,0, in da vsebuje raztopina EDTA.
- 17. Stabiliziranje raztopine po zahtevku 16, označeno s tem, da dodamo RSA. λ r
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE4206932A DE4206932A1 (de) | 1992-03-05 | 1992-03-05 | Immunologische methode zur bestimmung eines haemoglobinderivates |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SI9300108A true SI9300108A (en) | 1993-09-30 |
Family
ID=6453281
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SI9300108A SI9300108A (en) | 1992-03-05 | 1993-03-05 | Immunological method for the determination of hemoglobin derivatives |
Country Status (23)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5541117A (sl) |
EP (1) | EP0559164B1 (sl) |
JP (1) | JP2637677B2 (sl) |
KR (1) | KR930020162A (sl) |
CN (1) | CN1081765A (sl) |
AT (1) | ATE193378T1 (sl) |
AU (1) | AU652092B2 (sl) |
CA (1) | CA2090981C (sl) |
CZ (1) | CZ29193A3 (sl) |
DE (2) | DE4206932A1 (sl) |
DK (1) | DK0559164T3 (sl) |
ES (1) | ES2148190T3 (sl) |
FI (1) | FI930975A (sl) |
HR (1) | HRP930253A2 (sl) |
HU (1) | HUT70463A (sl) |
IL (1) | IL104902A0 (sl) |
NO (1) | NO930770L (sl) |
NZ (1) | NZ247054A (sl) |
PL (1) | PL297915A1 (sl) |
PT (1) | PT559164E (sl) |
SI (1) | SI9300108A (sl) |
SK (1) | SK14993A3 (sl) |
ZA (1) | ZA931533B (sl) |
Families Citing this family (41)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5739037A (en) * | 1992-09-29 | 1998-04-14 | Drew Scientific Limited | Process for eliminating labile glycohaemoglobin from a sample |
US5610076A (en) * | 1994-04-29 | 1997-03-11 | Alteon Inc. | Method for detecting hemoglobin advanced glycosylation endproducts |
FR2721112B1 (fr) * | 1994-06-13 | 1996-08-14 | Gks Technologies | Dispositif de diagnostic rapide de toute molécule glyquée et procédé de mise en Óoeuvre. |
JP3150857B2 (ja) * | 1994-10-19 | 2001-03-26 | 富士写真フイルム株式会社 | グリコヘモグロビン含有比測定用分析要素及び分析方法 |
EP0729031A1 (en) * | 1995-02-24 | 1996-08-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Set of reagents determining the content of total haemoglobin |
JP3269765B2 (ja) | 1995-12-14 | 2002-04-02 | 富士写真フイルム株式会社 | ヘモグロビン誘導体の免疫学的測定方法及びその方法に用いる処理試薬 |
JP3551678B2 (ja) * | 1996-03-14 | 2004-08-11 | 東ソー株式会社 | ヘモグロビンA1cの測定法及びキット |
US6855562B1 (en) | 1996-07-30 | 2005-02-15 | Horiba, Ltd. | Immunoassay method for lyzed whole blood |
JP3249919B2 (ja) * | 1996-07-30 | 2002-01-28 | 株式会社堀場製作所 | 免疫測定方法 |
US5858794A (en) * | 1997-05-13 | 1999-01-12 | Bayer Corporation | Cyanide-containing hemoglobin reagent composition and method providing acceptable precision, accuracy and freedom from white cell interference on automated hematology analyzers |
DE69819996T2 (de) * | 1997-09-27 | 2004-09-02 | Horiba Ltd. | Gerät für die Zählung von Blutzellen und zur immunologischen Bestimmung unter Verwendung von Vollblut |
US6485923B1 (en) * | 2000-02-02 | 2002-11-26 | Lifescan, Inc. | Reagent test strip for analyte determination having hemolyzing agent |
AU2001282550A1 (en) * | 2000-09-07 | 2002-03-22 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Method of quantifying total hemoglobin and glycohemoglobin |
US7670853B2 (en) * | 2002-11-05 | 2010-03-02 | Abbott Diabetes Care Inc. | Assay device, system and method |
EP1637883B1 (en) * | 2003-05-27 | 2009-11-25 | Mitsubishi Kagaku Iatron, Inc. | Immunochromatographic method |
CA2510277C (en) * | 2003-09-23 | 2012-07-24 | Epinex Diagnostics, Inc. | Rapid test for glycated albumin |
CN101300470B (zh) * | 2003-10-29 | 2011-01-26 | Mec戴内米克公司 | 用于进行化验的微机械系统和方法 |
US7541190B2 (en) * | 2005-02-07 | 2009-06-02 | Beckman Coulter, Inc. | Method of measurement of cellular hemoglobin |
JP4957547B2 (ja) * | 2005-04-14 | 2012-06-20 | パナソニック株式会社 | ヘモグロビン誘導体の測定方法、それに用いる試薬組成物、測定キット、分析デバイス、及び分析システム |
CN101484792B (zh) * | 2006-03-24 | 2011-05-18 | 爱科来株式会社 | 糖基血红蛋白浓度测定方法和浓度测定装置 |
WO2007111283A1 (ja) * | 2006-03-24 | 2007-10-04 | Arkray, Inc. | グリコヘモグロビン濃度測定方法および濃度測定装置 |
US20100012049A1 (en) * | 2006-04-12 | 2010-01-21 | Jms Co., Ltd | Cavitation heating system and method |
EP2047272B1 (en) * | 2006-07-29 | 2014-10-22 | i-Sens, Inc. | Electrochemical determination system of glycated proteins |
CN101595386B (zh) * | 2007-01-30 | 2012-05-09 | 爱科来株式会社 | 吩噻嗪衍生物色素的检测方法及用于该方法的显色剂试剂 |
JP5465008B2 (ja) * | 2007-10-30 | 2014-04-09 | パナソニック株式会社 | ヘモグロビン及びヘモグロビン誘導体の測定方法、測定キット |
CN101493467A (zh) * | 2008-01-25 | 2009-07-29 | 上海伊思柏生物科技有限公司 | 定量测定糖化蛋白质的方法 |
KR101005559B1 (ko) | 2008-07-15 | 2011-01-05 | 주식회사 아이센스 | 바이오센서를 이용한 단백질 측정 장치 |
WO2010009459A1 (en) * | 2008-07-18 | 2010-01-21 | Bayer Healthcare Llc | Methods, devices, and systems for glycated hemoglobin analysis |
CN102246036B (zh) | 2008-12-11 | 2016-01-20 | 积水医疗株式会社 | 含有糖化血红蛋白的试样的前处理方法 |
US20100167306A1 (en) * | 2008-12-26 | 2010-07-01 | Henry John Smith | Rapid test for glycated albumin in saliva |
CN102640002B (zh) * | 2009-05-20 | 2015-08-05 | 瑞莱诊断体系股份有限公司 | 检测糖化血红蛋白百分比的系统和方法 |
ES2961300T3 (es) * | 2010-03-31 | 2024-03-11 | Sekisui Medical Co Ltd | Método para analizar hemoglobinas |
JP5906604B2 (ja) * | 2011-08-11 | 2016-04-20 | 東洋紡株式会社 | 全血検体の成分測定方法 |
KR101207418B1 (ko) | 2012-02-10 | 2012-12-04 | 주식회사 아이센스 | 효소법을 이용하는 당화혈색소 정량분석용 용혈시약 조성물 |
US10202632B2 (en) | 2014-05-06 | 2019-02-12 | Diasys Diagnostic Systems Gmbh | Enzymatic determination of HbA1c |
CN104062430B (zh) * | 2014-06-30 | 2016-03-30 | 洛阳普莱柯万泰生物技术有限公司 | 一种用于检测样品中流感病毒的试剂盒及其检测方法和应用 |
DK3397971T3 (da) * | 2015-12-30 | 2021-09-20 | W Health L P | Fremgangsmåde til bestemmelse af mængden af et HBA1C i en blodprøve |
CN112334767B (zh) * | 2018-09-12 | 2024-01-09 | 积水医疗株式会社 | 血红蛋白类测定用试剂以及血红蛋白类的测定方法 |
CN110702894A (zh) * | 2019-10-10 | 2020-01-17 | 南京欧凯生物科技有限公司 | 一种直接测定糖化血红蛋白含量的检测方法 |
CN112067566A (zh) * | 2020-08-28 | 2020-12-11 | 南开大学 | 一种用于糖化血红蛋白定量分析的比色传感器 |
CN113984689B (zh) * | 2021-10-25 | 2023-11-03 | 中元汇吉生物技术股份有限公司 | 一种测定谷胱甘肽还原酶的试剂盒 |
Family Cites Families (25)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4247533A (en) * | 1978-05-01 | 1981-01-27 | The Rockefeller University | Hemoglobin A1c radioimmunoassay |
US4200435A (en) * | 1978-12-26 | 1980-04-29 | Abbott Laboratories | Determination of glycosylated hemoglobin in blood |
JPS5861465A (ja) * | 1981-10-07 | 1983-04-12 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | 血液の分析方法 |
US4478744A (en) * | 1982-01-25 | 1984-10-23 | Sherwood Medical Company | Method of obtaining antibodies |
HU186976B (en) * | 1982-10-01 | 1985-10-28 | Reanal Finomvegyszergyar | Process for determation of glucose containt of glucolized in non-ensimatic way proteins and reagent lutes for this process |
US4529705A (en) * | 1983-06-06 | 1985-07-16 | Coulter Electronics, Inc. | Reagent for combined diluting and lysing whole blood |
US4727036A (en) * | 1985-08-08 | 1988-02-23 | Molecular Diagnostics, Inc. | Antibodies for use in determining hemoglobin A1c |
CA1339952C (en) * | 1984-10-29 | 1998-07-14 | William J. Knowles | Immunoassays for denatured protein analytes, particularly hb alc, and monoclonal antibodies thereto |
US4647654A (en) * | 1984-10-29 | 1987-03-03 | Molecular Diagnostics, Inc. | Peptides useful in preparing hemoglobin A1c immunogens |
US4658022A (en) * | 1985-08-08 | 1987-04-14 | Molecular Diagnostics, Inc. | Binding of antibody reagents to denatured protein analytes |
CA1263590C (en) * | 1984-12-06 | 1989-12-05 | CYANIDE-FREE REAGENT FOR THE DETERMINATION OF HEMOGLOBIN | |
DK145385D0 (da) * | 1985-03-29 | 1985-04-01 | Novo Industri As | Monoklonalt antistof til immunkemisk analyse |
DE3532868A1 (de) * | 1985-09-14 | 1987-03-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von glykosiliertem haemoglobin sowie hierzu geeignete verbindungen und verfahren zu deren herstellung |
US4806468A (en) * | 1987-02-05 | 1989-02-21 | Becton, Dickinson And Company | Measurement of glycosylated hemoglobin by immunoassay |
US4861728A (en) * | 1987-07-24 | 1989-08-29 | Becton, Dickinson And Company | Immunoassay of glycosylated hemoglobin using a labeled boron reagent |
DE3733084A1 (de) * | 1987-09-30 | 1989-04-13 | Boehringer Mannheim Gmbh | Testtraeger zur analytischen bestimmung eines bestandteils einer koerperfluessigkeit |
US4970171A (en) * | 1987-11-09 | 1990-11-13 | Miles Inc. | Denaturant reagents for convenient determination of hemoglobin derivatives in blood |
JP2619900B2 (ja) * | 1988-01-27 | 1997-06-11 | 東亜医用電子株式会社 | 血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬および方法 |
NO890029D0 (no) * | 1989-01-04 | 1989-01-04 | Axis Research | Nye modifiserte peptider og proteiner for in vitro diagnoser (diabetes). |
IL94724A (en) * | 1989-07-13 | 1994-02-27 | Miles Inc | Decomposition of red blood cells and denaturation of hemoglobin by the use of lithium salts |
JP2836865B2 (ja) * | 1989-10-23 | 1998-12-14 | 東亜医用電子株式会社 | 血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬 |
JP2891302B2 (ja) * | 1990-03-01 | 1999-05-17 | シスメックス株式会社 | 血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬 |
US5242832A (en) * | 1990-03-01 | 1993-09-07 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Reagent for measurement of leukocytes and hemoglobin in blood |
EP0456088B1 (en) * | 1990-05-09 | 1996-08-21 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Stabilized uric acid reagent |
DE4135542A1 (de) * | 1991-10-28 | 1993-04-29 | Boehringer Mannheim Gmbh | Lagerfaehige proteinloesungen |
-
1992
- 1992-03-05 DE DE4206932A patent/DE4206932A1/de not_active Withdrawn
-
1993
- 1993-02-26 CZ CZ93291A patent/CZ29193A3/cs unknown
- 1993-03-01 SK SK14993A patent/SK14993A3/sk unknown
- 1993-03-01 AU AU33871/93A patent/AU652092B2/en not_active Ceased
- 1993-03-01 IL IL104902A patent/IL104902A0/xx unknown
- 1993-03-02 PL PL29791593A patent/PL297915A1/xx unknown
- 1993-03-03 NZ NZ247054A patent/NZ247054A/en not_active IP Right Cessation
- 1993-03-03 EP EP93103349A patent/EP0559164B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-03 PT PT93103349T patent/PT559164E/pt unknown
- 1993-03-03 HR HR930253A patent/HRP930253A2/hr not_active Application Discontinuation
- 1993-03-03 ES ES93103349T patent/ES2148190T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-03 NO NO93930770A patent/NO930770L/no unknown
- 1993-03-03 AT AT93103349T patent/ATE193378T1/de active
- 1993-03-03 DE DE59310046T patent/DE59310046D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-03 DK DK93103349T patent/DK0559164T3/da active
- 1993-03-04 CA CA002090981A patent/CA2090981C/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-04 US US08/026,464 patent/US5541117A/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-04 FI FI930975A patent/FI930975A/fi unknown
- 1993-03-04 ZA ZA931533A patent/ZA931533B/xx unknown
- 1993-03-04 CN CN93104037A patent/CN1081765A/zh active Pending
- 1993-03-04 HU HU9300596A patent/HUT70463A/hu unknown
- 1993-03-05 JP JP5045130A patent/JP2637677B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1993-03-05 KR KR1019930003336A patent/KR930020162A/ko not_active Application Discontinuation
- 1993-03-05 SI SI9300108A patent/SI9300108A/sl unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU652092B2 (en) | 1994-08-11 |
DE4206932A1 (de) | 1993-09-09 |
ZA931533B (en) | 1994-09-04 |
IL104902A0 (en) | 1993-07-08 |
HU9300596D0 (en) | 1993-05-28 |
JPH0611510A (ja) | 1994-01-21 |
HUT70463A (en) | 1995-10-30 |
KR930020162A (ko) | 1993-10-19 |
EP0559164A3 (sl) | 1994-01-26 |
HRP930253A2 (en) | 1995-10-31 |
ES2148190T3 (es) | 2000-10-16 |
US5541117A (en) | 1996-07-30 |
FI930975A0 (fi) | 1993-03-04 |
SK14993A3 (en) | 1993-10-06 |
NO930770L (no) | 1993-09-06 |
JP2637677B2 (ja) | 1997-08-06 |
DK0559164T3 (da) | 2000-10-30 |
NZ247054A (en) | 1995-02-24 |
EP0559164A2 (de) | 1993-09-08 |
DE59310046D1 (de) | 2000-06-29 |
CA2090981C (en) | 1999-11-16 |
PT559164E (pt) | 2000-10-31 |
CN1081765A (zh) | 1994-02-09 |
ATE193378T1 (de) | 2000-06-15 |
EP0559164B1 (de) | 2000-05-24 |
AU3387193A (en) | 1993-09-16 |
CA2090981A1 (en) | 1993-09-06 |
CZ29193A3 (en) | 1994-01-19 |
FI930975A (fi) | 1993-09-06 |
NO930770D0 (no) | 1993-03-03 |
PL297915A1 (en) | 1993-09-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
SI9300108A (en) | Immunological method for the determination of hemoglobin derivatives | |
Doumas et al. | Albumin standards and the measurement of serum albumin with bromcresol green | |
US5418138A (en) | Immunohistochemical staining method and reagents therefor | |
CA2654981C (en) | Methods for assaying percentage of glycated hemoglobin | |
EP0589001B1 (en) | Determination of glycated hemoglobin by fluorescence quenching | |
JP3150857B2 (ja) | グリコヘモグロビン含有比測定用分析要素及び分析方法 | |
EP0154276B1 (en) | Specific binding assay employing anti-g6pdh as label | |
EP2088434B1 (en) | Pyrocatechol violet-metal protein assay | |
CN105122062A (zh) | 未致敏胶乳试剂的劣化防止方法 | |
EP0779513B1 (en) | Method for immunological determination of hemoglobin derivative and treating reagent for use therein | |
US5342788A (en) | Method and standard solution for the determination of thyroxine (T4) or triiodothyronine (T3) | |
CZ244493A3 (en) | SIMULTANEOUS DETERMINATION OF HbAlc AND VARIANTS OF HEMOGLOBIN AND GLYCOSYLATED HbAlc ANALOGS | |
CA1334925C (en) | Process for the determination of thyroxine and a suitable standard solution therefor | |
CN113125759A (zh) | 糖化血红蛋白检测试剂盒 | |
EP0061071B1 (en) | Activated apoglucose oxidase, method of preparing it, its use in specific binding assay methods and reagent means and test kits containing it | |
CN117607426A (zh) | 一种联合检测cTnT和cTnI的试纸条 | |
EP1162462A2 (en) | Assay method for hemoglobin using lipoproteins |