SK10662002A3 - Semnogenická aktivita nepatogénnych mliečnych baktérií - Google Patents

Semnogenická aktivita nepatogénnych mliečnych baktérií Download PDF

Info

Publication number
SK10662002A3
SK10662002A3 SK1066-2002A SK10662002A SK10662002A3 SK 10662002 A3 SK10662002 A3 SK 10662002A3 SK 10662002 A SK10662002 A SK 10662002A SK 10662002 A3 SK10662002 A3 SK 10662002A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
cncm
lactic acid
acid bacteria
composition
pathogenic lactic
Prior art date
Application number
SK1066-2002A
Other languages
English (en)
Inventor
James M. Krueger
Michael J. Pabst
Chantal Cayuela
Marie-Christine Degivri
Donna Hartley
Original Assignee
Compagnie Gervais Danone
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Compagnie Gervais Danone filed Critical Compagnie Gervais Danone
Publication of SK10662002A3 publication Critical patent/SK10662002A3/sk

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C11/00Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions
    • A23C11/02Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions containing at least one non-milk component as source of fats or proteins
    • A23C11/10Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions containing at least one non-milk component as source of fats or proteins containing or not lactose but no other milk components as source of fats, carbohydrates or proteins
    • A23C11/103Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions containing at least one non-milk component as source of fats or proteins containing or not lactose but no other milk components as source of fats, carbohydrates or proteins containing only proteins from pulses, oilseeds or nuts, e.g. nut milk
    • A23C11/106Addition of, or treatment with, microorganisms
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1234Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1238Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt using specific L. bulgaricus or S. thermophilus microorganisms; using entrapped or encapsulated yoghurt bacteria; Physical or chemical treatment of L. bulgaricus or S. thermophilus cultures; Fermentation only with L. bulgaricus or only with S. thermophilus
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L11/00Pulses, i.e. fruits of leguminous plants, for production of food; Products from legumes; Preparation or treatment thereof
    • A23L11/60Drinks from legumes, e.g. lupine drinks
    • A23L11/65Soy drinks
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/065Microorganisms
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74Bacteria
    • A61K35/741Probiotics
    • A61K35/744Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/20Hypnotics; Sedatives
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225Lactobacillus
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/46Streptococcus ; Enterococcus; Lactococcus
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215Microorganisms
    • Y10S435/822Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/853Lactobacillus
    • Y10S435/854Lactobacillus acidophilus
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215Microorganisms
    • Y10S435/822Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/885Streptococcus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Anesthesiology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Description

Semnogenická aktivita nepatogénnych mliečnych baktérií
Oblasť techniky
Predložený vynález sa týka nepatogénnych mliečnych baktérií a potravinárskych produktov obsahujúcich tieto baktérie. Bunková stena týchto baktérií je citlivá voči pôsobeniu enzýmov muramidázového typu. Tieto enzýmy produkujú fragmenty bunkovej steny nazývané muramylpeptidy, ktoré ak sa prijmú v potrave, zlepšujú kvalitu spánku.
Doterajší stav techniky
V súčasnosti má mnoho ľudí problémy so zaspávaním alebo trpia duševnými chorobami ako je nespavosť. K potlačeniu týchto problémov sa vyvinulo mnoho produktov obsahujúcich benzodiazepiny alebo barbituráty. Avšak tieto produkty by sa mali podávať pod dohľadom lekára pre svoje vedľajšie účinky ako je závislosť na liekoch, denná ospalosť, strata pamäti a vzájomné ovplyvňovanie s inými látkami, najmä alkoholom.
Výskum infekčných chorôb ukázal, že infekcie patogénnymi baktériami vyvolávajú najmenej tri fyziologické odpovede v infikovanom subjekte: imunitnú odpoveď, horúčku a zmenu spánku. Mediátory týchto reakcií v hostiteľovi sú súčasťami bunkových stien baktérií zodpovedných za infekciu, najmä muramylpeptidy (a tiež lipopolysacharidy u gramnegatívnych baktérií). Výskum ukázal, že bunkové steny patogénnych baktérií ako je Staphylococcus aureus sa hydrolyzujú makrofágmi a poskytujú voľné muramylpeptidy (JohannsenL. et al., 1994).
US patent 4 698 330 navrhuje používať prostriedky založené na prečistených muramylpeptidoch, ktoré majú somnogenickú aktivitu, a tak možno predísť vedľajším účinkom liekov, ktoré obsahujú benzodiazepiny alebo barbituráty. Aj keď podávanie týchto muramylpeptidov vedie k prehĺbeniu hlbokého spánku nazývaného “Non Rapid Eye Movement” spánok /NREM/ /pozn. prekl. slovné spojenie NREM je opakom slovného spojenia REM Rapid Eye Movement, čo znamená rýchly pohyb očí/ a súčasne vyvoláva zvýšenie telesnej teploty, čo vyžaduje paralelné podávanie antipyretických zlúčenín.
Patentové prihlášky CH 654 330 A, CN I 114 217 A a WO 8 800 438 A popisujú prostriedky obsahujúce baktérie, najmä mliečne baktérie, ktoré zlepšujú spánok. Avšak tieto dokumenty neuverejňujú, ako prispievajú mliečne baktérie k zlepšeniu spánku Ovplyvnenie spánku, rovnako ako ďalšie nárokové výhody (viac energie, lepšia chuť do jedla a lepšie trávenie, zmiernenie reumatizmu, atď.) týchto prostriedkov, ktoré obsahujú mliečne baktérie, vyplývajú zo špecifickej rovnováhy živín a mikroživín obsiahnutých v popísaných prostriedkoch.
Podstata vynálezu
Vynálezci zistili, že nepatogénne baktérie, ktoré nespôsobujú infekcie, ako sú mliečne baktérie, môžu modifikovať fázy spánku, napríklad môžu zvýšiť dĺžku NREM hlbokého spánku. Zistilo sa, že mliečne baktérie, ktoré sú príčinou predĺženia NREM fázy, sú také baktérie, ktorých bunková stena je citlivá na pôsobenie enzýmov muramidázového typu, ako sú lyzozým a mutanozín.
Vynálezci sledovali pôsobenie muramidázy, muranolyzínu na bunkovú stenu rôznych mliečnych baktérií, najmä bunkových stien mliečnych baktérií Lactobacillus gasseri 9221 (CNCM 1-2131), Lacíobacillus acidophilus 9223 (CNCM 1-2274), Lacíobacillus acidophilus 9173 (CNCM 1-2132), Lacíobacillus helveticus 9343 (CNCM 1-2275), Streptococcus thermophilus 9340 (CNCM 1-1520) a Streptococcus thermophilus 10090 (CNCM 1-2272) sa hydrolyzovali mutanolyzínom sa vznikli dve frakcie: rozpustná frakcia obsahujúca muramzlpeptidy a nerozpustná frakcia. Oproti tomu bunková stena Lacíobacillus gasseri 9221 (CNCM 1-2131) sa mutanolyzínom nehydrolyzovala a muramylpeptidy sa neuvoľnili. Po inkubácii Lactobacillus gasseri 9221 (CNCM 1-2131, uložený 24/2/99) s mutanolyzínom sa získala len nerozpustná frakcia. Účinky mliečnych baktérií, ktorých bunkové steny sa hydrolyzovali enzýmami muramidázového typu, na spánok sa overili na dvoch experimentálnych systémoch:
1) In vitro pokusy s ľudskými monocytmi ukázali, že mliečne baktérie, ktorých bunkové steny sa hydrolyzovali za účelom poskytnutia rozpustnej frakcie obsahujúcej muramzlpeptidy, boli schopné silno aktivovať monocyty, vrátane zvýšenej produkcie peroxidového aniónu a tiež vrátane produkcie cytokínov IL-lb a TNEa. Peroxidový anión je kyslíkatý radikál produkovaný monocytmi, ktorý sú priamo zúčastňuje na zabíjaní mikróbov. Cytokíny sú skupina mediátorov zápalových proteínov, ktoré sú známe tým, že sa zúčastňujú na regulácii spánku. Aktivácia monocytov sa pozorovala aj u laktobacilov, aj u streptokokov, vrátane Lactobacillus acidophilus 9223 (CNCM 1-2274), Lactobacillus acidophilus 9173 (CNCM 1-2132), Lactobacillus helveticus 9343 (CNCM 1-2275), Streptococcus thermophilus 9340 (CNCM 1-1520) a Streptococcus thermophilus 10090 (CNCM 1-2272).
2) In vivo pokusy na králikoch ukázali, že mliečne baktérie, ktorých bunková stena sa hydrolyzuje mutalyzínom za účelom poskytnutia rozpustnej frakcie obsahujúcej muramylpeptidy, ovplyvňovali ' fázy spánku. Spánok sa analyzoval pomocou elektroencefalogramov (EEG). Muramylpeptidy podstatne predĺžili fázu spánku nazývanú NREM (Non Rapid Eye Movement) a skrátili fázu spánku nazývanú REM (Rapid Eye Movement).
Predložený vynález popisuje niekoľko baktérií, ktoré zlepšujú kvalitu spánku tým, že predlžujú dĺžku fázy spánku “Non Rapid Eye Movement” (NREM). Ďalšou dôležitou charakteristikou baktérií je, že sa jedná o baktérie, ktoré sú pre ľudí nepatogénne a že ich bunkové steny sú náchylné na pôsobenie enzýmov muramidáyového typu, najmä na pôsobenie muranolyzínu.
Krátky popis obrázkov
Tomuto vynálezu je možné lepšie porozumieť odkazom na obrázky v tomto dokumente, ktoré však pre porozumenie nie sú nutné.
Obr.l graficky znázorňuje množstvo peroxidového aniónu a ĽL-β meraného v supernatante kultúry monocytov po kontakte s bakteriálnou suspenziou v súlade s vynálezom.
Obr.2 je graf, ktorý znázorňuje vzťah medzi koncentráciou IL-Ιβ a TNFa meraného po vystavení monocytov bakteriálnym bunkám.
Obr. 3 je grafické znázornenie percent času strávených v NREM fáze a REM fáze ako funkcie času po vstreknutí dvoch rôznych hladín koncentrácie materiálu z bunkových stien v súlade s vynálezom.
Obr.4 ukazuje grafické znázornenie podobné tomu na Obr.3, kde materiál bakteriálnych bunkových stien nie je citlivý na štiepenie enzýmov muramidázového typu, za účelom zaistiť rozpustné frakciu obsahujúcu muramylpeptidy.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Mliečne baktérie tak, ako je uvedené vo vynáleze, môžu byť vybrané z nasledujúcich rodov Lactobacillus, Streptococcus, Lcictococcus ci Bifidohacteriiim. Baktérie výhodne
mliečne baktérie sa vyberú z nasledujúcich zástupcov:
Lactobacillus DN-112089 acidophilus 9223 (CNCM 1-2274, uložený 3/8/99),
Lactobacillus DN-112001 acidophilus 9170 (CNCM 1-2273, uložený 3/8/99),
Lactobacillus acidophilus 9173 (CNCM 1-2132, uložený 24/2/99)
Lactobacillus helvelicus 9343 (CNCM 1-2275, uložený 3/8/99),
DN-119028
Streptococcus thermophilus 9340 (CNCM 1-1520, uložený 30/12/94)
Streptococcus thermophilus 10090 (CNCM 1-2272, uložený 3/8/99),
DN-001143
Ostatné kmene všeobecne verejne dostupné. CNCM 1-2274, CNCM 1-2273, CNCM 1-2132, CNCM 1-2275, CNCM 1-1520 a BNCM 1-2272 boli uložené v Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, Inštitút Pastur, 25 rue du Docteur Roux, 75 724 Paris Cedex 15, Francúzsko. Tieto uloženia sa uskutočnili na základe podmienok Budapeštianskej zmluvy.
Predložený vynález sa týka kultúr mliečnych baktérií, ktoré zahŕňajú dve alebo viac kmeňov mliečnych baktérií, podobne ako je to popísané u jednotlivého kmeňa vynálezu.
Predložený vynález tiež popisuje doplnky výživy alebo potraviny obsahujúce mliečne baktérie, ktoré zlepšujú kvalitu spánku. Doplnky výživy sa skladajú z mliečneho základu, najme z fermentovaného mlieka obsahujúceho kmene mliečnych baktérií, ktorých bunkové steny sú citlivé na pôsobenie mutanolyzínu. Použitie takéhoto doplnku výživy alebo potraviny zlepší kvalitu spánku.
Mlieko je vybrané z mliek rôznych živočíšnych druhov. Mlieko môže byť čiastočne alebo úplne odtučnené. Mliečny základ môže zahŕňať produkty vzniknuté zriedením alebo zahustením týchto mliek ako sú napríklad zádrže ultrafiltrácie alebo diafiltrácie. Mliečny základ môže obsahovať médiá mliečneho základu ako sú základy pre mliečne potraviny alebo mliečne zmesi pre jogurt alebo fermentované mlieka. Tieto mlieka sa môžu doplniť laktózou, minerálmi, vitamínmi, tukmi, vo vode rozpustnou mliečnou sušinou, extraktmi rastlín, príchuťami atď.
Alternatívnym postupom sa môže tiež doplnok stravy alebo potraviny získať z rastlinného substrátu akým je sójové mlieko, šťava alebo ovocná dužina.
Napríklad doplnok výživy alebo potraviny v súlade s vynálezom sa získa uskutočnením nasledujúceho postupu: Mliečny základ sa inokuluje aspoň jedným kmeňom mliečnej baktérie obsahujúcej 106 až 107 kolónií tvoriacich jednotku na ml. Podmienky inkubácie sa líšia podľa kmeňa alebo kultúry použitých mliečnych baktérií. Napríklad ak je kultúra zložená z kmeňa Streptococcus thermophilus alebo zmes obsahuje aspoň jeden kmeň Streptococcus thermophilus, optimálne kultivačné podmienky sú 25 až 44 °C, 3 až 24 hodín. Ak sa kultúra skladá z kmeňov Lactobacillus cicidophihis alebo Lactobacillus helveticus alebo zmesi obsahujúcej jeden kmeň Lactobacillus acidophilus alebo Lactobacillus helveticus, optimálne kultivačné podmienky sú 37 až 44 °C, aspoň 8 až 16 hodín.
Mliečny základ inokulovaný kultúrou sa môže doplniť o peptid N3, kvasnicový extrakt, antioxidanty ako je cysteín, vitamíny, rozpustné vlákna ako sú oligosacharidy alebo ďalšie substráty, ktoré sa v súčasnosti používajú k podpore rastu použitých kmeňov mliečnych baktérií.
Mliečne baktérie alebo doplnky výživy, ktoré ich obsahujú, umožňujú zlepšené kvalitu spánku predĺžením NREM fázy a/alebo skrátením REM fázy. Predĺženie NREM fázy spánku zodpovedá predĺženiu hlbokého spánku. Predĺženie fázy hlbokého spánku vedie k lepšiemu zotaveniu od únavy, väčšej čulosti v priebehu dňa a iným výhodám.
Ďalej mliečne baktérie, ktoré sú nepatogénnymi mikroorganizmami, sa môžu podávať pre zlepšenie kvality spánku bez rizika spustenia rozsiahlej reakcie imunitného systému. Mliečne baktérie pozitívne interagujú s imunitným systémom bez toho, aby indukovali patologické reakcie (ako nadprodukcia cytokínov), ako je tomu u patogénnych baktérií.
Naviac, použitie mliečnych baktérií pre zlepšenie kvality spánku nevyvoláva vedľajšie účinky spojené s užívaním barbiturátov alebo benzodiazepínov.
Predloženému vynálezu je možné lepšie porozumieť s pomocou dodatočných informácií, ktoré sú uvedené ďalej a ktoré poskytujú neobmedzené príklady znázorňujúce vlastnosti kmeňov mliečnych baktérií v súlade s vynálezom.
Príklad 1
In vitro pokusy
Hydrolýza bunkových stien rôznych kmeňov mliečnych baktérií pomocou mutanolyzínu
Bunkové steny sa pripravili z kultúry mliečnych baktérií na stacionárnej fáze. Bakteriálne bunky sa rozbili na francúzskom lise. Za účelom získania surového extraktu deproteinovaných bunkových stien sa pri príprave použilo povrchovo aktívne činidlo dodecylsíran sodný a trypsín. Peptidoglykán z bunkových stien mliečnych baktérií sa štiepil mutanolyzínom zo Streplomyces globisporus (Sigma Aldrich, St. Louis, MO). Peptidoglykán (5 až 10 mg/ml) sa inkubovali s 0,1 až 0,25 mg mutanolyzínu pri 37 °C vo fosforečnanovom tlmivom roztoku, pH 5,8, 24 hodín. Výsledný hydrolyzát sa oddelil centriíugáciou s použitím centrifugačných koncentrátorov (Pall Microsep (tm), Nothborough, MA) a pomocou membrány s rozdeľovacím rozmedzím 10 kDa sa oddelili molekuly s nízkou molekulovou hmotnosťou od ostatného materiálu s vyššou molekulovou hmotnosťou.
Testovanými baktériami boli Lactobacillus gasseri 9221, Lactobacillus acidophilus 9223, Lactobacillus acidophilus 9173, Lactobacilus helveticus 9343, Streptococcus thermophilus 9340 a Streptococcus thermophilus 10090.
Bunkové steny piatich testovaných baktérií sa čiastočne hydrolyzovali mutanolyzínom za vzniku rozpustnej frakcie obsahujúcej muramylpeptidy a nerozpustnej frakcie odolnej voči pôsobeniu mutanolyzínu.
Len bunkové steny Lactobacillus gasseri 9221 (CNCM 1-2131, uložené 24/2/99) sa mutanolyzínom nehydrolyzovali a neuvoľňovali muramylpeptidy.
Indukcia produkcie peroxidového aniónu a cytokínov bunkami mliečnych baktérií v ľudských monocytoch
Monocyty sa izolovali zo sdravých dospelých ľudí. Erytrocyty sa sedimentovali pomocou dextranu s vysokou molekulovou hmotnosťou. Mononukleárne bunky sa oddelili od neutrofilov pomocou Histopaque gradientu (Sigma-Aldrich). Mononukleárne bunky, ktoré obsahovali aj monocyty, aj lymvocyty, sa kultivovali pri denzide 1,5 . 106 buniek/ml, čo zodpovedá hodnote približne 0,5 . 10ú monocytov/ml, v médiu modifikovaného Earle soľného roztoku, v inkubátore pri 37 °C s 5% CO2. Pri pokusoch zameraných na meranie produkcie ΤΝΈα monocyty boli monocyty kultivované v prítomnosti 0,2%, teplom inaktivovaného (56 °C, 30 minút) ľudského séra typu AB.
Baktérie Lactobacillus gasseri 9221, Lactobacillus acidophilus 9223, Lactobacillus acidophilus 9173, Lactobacilus helveticus 9343, Streptococcus Ihermophilus 9340 a Streptococcus fhermophilus 10090.Pelety mliečnych baktérií sa pridali do suspenzie za účelom získania koncentrácie bakteriálnych proteínov 1 mg/ml (určené pomocou Lowry proteínového testu) Testovali sa suspenzie obsahujúce od 0,1 do 300 ng/ml bakteriálnych proteínov.
Produkcia peroxidového aniónu (O2) pomocou monocytov sa merala pomocou metódy cytochromu C potom, čo sa monocyty aktivovali forbolmyristátacetátom (PMA) 40 minút pri 37 °C v inkubátore s 5% CO2. Redukcia cytochromu C peroxidovým aniónom sa merala spektrofotometricky pri 550 nm. K výpočtu množstva vyprodukovaného peroxidového aniónu sa použil extinkčný koeficient 0,021 μΜ'1.
Produkcia cykokínov sa merala pomocou ELISA (Enzýme Link Immunosorbent Assay) vo vzorkách kultivačného média s monocytmi. Použili sa kity pre IL-Ιβ (BioSource International, Carmarillo, CA) a TNFa (Genzyme Diagnostics, Cambridge, MA).
Obrázok 1 ukazuje, že baktérie Lactobacillus acidophilus 9223, Lactobacillus acidophilus 9173, Lactobacilus helveticus 9343, Streptococcus Ihermophilus 9340 a Streptococcus ihermophilus 10090 sú schopné silne aktivovať ľudské monocyty, aby indukovali produkciu peroxidového aniónu aIL-Ιβ. Naopak, Lactobacillus gasseri 9221, ktorého bunková stena je necitlivá voči pôsobeniu mutanolyzínu, indukovala len slabú aktivitu v ľudských monocytoch. Obrázok 2 ukazuje, že produkcia IL-Ιβ a TNFa sú navzájom vo vzájomnom blízkom vzťahu (R2=0,95).
Príklad 2
In Vivo pokusy
Aktivita bunkových stien mliečnych baktérii zlepšujúcich spánok u králikov
Pokusy týkajúce sa spánku sa uskutočnili s králikmi použitím jedného z kmeňa mliečnych baktérií, Lactobacillus acidophilus 9223, ktorý dal pozitívnu odpoveď pri in vitro teste a jedného kmeňa Lactobacillus gasseri 9221, ktorý bol pri in vitro teste negatívny. Bunkové steny testovaných baktérií sa podávali pomocou vnútrožilových injekcií
Pokusnými zvieratami boli dospelé samce novozélandského králika bieleho (Myrtle Rabbitery, Thompson Station, TN) vážiaci od 3,5 od 4,5 kg.
Králiky sa operovali za účelom implantovania systému pre zaznamenávanie ich elektroencefalogramov (EEG). Systém umožňovali zvieratám pohyb bez obtiaží. V jednotlivých dňoch každé zviera dostalo alebo pojivo alebo látku, ktorá sa mala testovať Preto každé zviera slúžilo zároveň ako svoja vlastná kontrola. Marginálna ušná žila sa použila pre vnútrožilové injekcie. Obsah injekcie bol 0,1 mg/kg.
Záznamy sa interpretovali a klasifikovali podľa troch stavov bdelosti: bdelá fáza, NREM fáza (nízka frekvencia elektroencefalogramov, vysoká amplitúda elektroencefalogramu a žiadny telesný pohyb, ktorý je charakteristický pre hlboký, ťažký spánok) a REM fáza (vysoká frekvencia elektroencefalogramov, nízka amplitúda elektroencefalogramu a občasný telesný pohyb, ktorý je charakteristický pre paradoxálny spánok). Dĺžka každej časti sa vyjadrila ako celkové percento z zaznamenávanom čase za hodinu.
Obrázok 3 ukazuje, že bunkové steny Lactobacillus acidophilus 9223 podávané v dávkach 0,1 mg/kg a 1,0 mg/kg ovplyvnili spánok predĺžením NREM fázy a skrátením REM fázy. Nárast NREM fázy začal v priebehu druhej hodiny po injekcii a pretrval po celú dobu testu. Naproti tomu Obrázok 4 ukazuje, že bunkové steny Lactobacillus gasseri 9221 nemali na spánok významný vplyv.
Liečebné podávanie
Podstata veci tohto vynálezu sa efektívne orálne podáva cicavcov, vrátane ľudí. Účinné množstvo sa bude podstatne líšiť v závislosti od indivídua, stavu alebo podmienok daného indivídua, od požadovaného výsledku, atď. Orálne podávanie je účinné u cicavcov, vrátane ľudí, pretože štiepenie bunkových stien mliečnych baktérií enzýmami muramidázového typu sa prirodzene vyskytuje v celom tráviacom trakte, so začiatkom v ústnej dutine pokračuje cez žalúdok a črevá. Prípadne možno podávať predštiepené muramylpeptidy orálne, injekčné alebo pomocou čípkov. Injekcie môžu byť vnútrožilové alebo vnútrosvalové. Výhodnejšie pre uľahčenie podávania a pre pacientovo pohodlie sa používa podávanie orálnou cestou.
Aktívne činidlo, muramylpeptidy, sú vo vode rozpustné. Mliečne baktérie, pokiaľ sa podávajú takto, sa môžu zabezpečiť farmaceutický vhodným nosičom a výhodne sú zaistené ako element alebo doplnok potravinárskych produktov, výhodne obsahujúce mlieko alebo produkty fermentovaného mlieka. Vo výhodnom prevedení sa mliečne baktérie alebo predštiepené muramylpeptidu dodávajú v jogurtových produktoch. Jogurt môže byť ochutený alebo neochutený a povaha samotného jogurtu, ochrana dodaného aktívneho činidla, nie je podstatou v zmysle tohto vynálezu. Mliečne baktérie sa s výhodou orálne podávajú v množstve od 1 mg do 1 g na kg telesnej hmotnosti na deň. Zlepšenie spánku je komplikovaný mechanizmus a podmienky pre liečený subjekt značne ovplyvňujú účinnú dávku. Nosič pre podávanie, ak sa jedná o orálne podávanie, je v podstate neobmedzený s tou podmienkou, že neobsahuje enzýmy štiepiace muramylpeptidy alebo inak neblokuje aktivitu aktívneho činidla tohto vynálezu pri stimulácii produkcie peroxidového aniónu monocytmi rovnako ako produkciu cytokínov.
Ďalší spôsob určenia účinného množstva je účinná dávka 1 mg/ml suspenzie proteínu mliečnych baktérií v rozsahu od 0,01 do 100 ml/kg.
Tento vynález sa všeobecne popísal vďaka odkazom na jednotlivé uskutočnenia. Príklady nie sú mienené a nemali by byť považované za obmedzujúce, ak nie je špeciálne uvedené. Odborníci sú si vedomí alternatív, ktoré sa môžu vyskytnúť, najmä s ohľadom na identifikáciu nepatogénnych mliečnych baktérií, pojiva alebo nosiča, koncentrácie alebo suspenzie alebo ďalších hľadísk prípravy. Tieto alternatívy zostávajú v rozsahu tohto vynálezu, ak to nie je vylúčené opakovanou citáciou nárokov uvedených ďalej.

Claims (21)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Použitie nepatogénnych mliečnych baktérií na prípravu prostriedku na zlepšenie kvality spánku cicavcov.
  2. 2. Použitie podľa nároku 1, v ktorom sa použijú bunkové steny nepatogénnych mliečnych baktérií citlivých na pôsobenie murimidázových enzýmov.
  3. 3. Použitie podľa nároku 1, v ktorom sa bunkové steny nepatogénnych mliečnych baktérií hydrolyzujú mutanolyzínom za získania rozpustnej frakcie obsahujúcej muramylpeptidy.
  4. 4. Použitie podľa nároku 1, v ktorom prostriedok vyvoláva produkciu peroxidových aniónov pomocou monocytov tohto cicavca.
  5. 5. Použitie podľa nároku 1, v ktorom cicavcom je človek.
  6. 6. Použitie nepatogénnych mliečnych baktérií na prípravu prostriedku na podporu fázy NREM u cicavcov.
  7. 7. Použitie nepatogénnych mliečnych baktérií na prípravu prostriedku produkujúceho aspoň jednu zlúčeninu z nasledujúcich peroxidový anión, IL-Ιβ alebo TNFa na aktiváciu cicavčích monocytov.
  8. 8. Použitie bunkových stien nepatogénnych mliečnych baktérií na prípravu prostriedku na podporu fázy NREM u cicavcov.
  9. 9. Použitie podľa nároku 8, v ktorom protein bunkových stien je vo forme muramylpeptidov.
  10. 10. Použitie podľa nároku 1, 6, 7 alebo 8, v ktorom nepatogénne mliečne baktérie sú jedného z rodu Lactococcus, Lactobacillus, Streptococcus a Bifidobacterium.
  11. 11. Použitie podľa nároku 1, v ktorom nepatogénne mliečne baktérie sú vybrané zo skupiny pozostávajúcej z Lactobacillus helveticus, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus fermentum a Streptococcus thermophilus.
  12. 12. Použitie podľa nároku 11, v ktorom mliečna baktéria je vybraná zo skupiny pozostávajúcej z CNCM 1-2274, CNCM 1-2132, CNCM 1-2275, CNCM 1-1520, CNCM 1-2272 a ich zmesí.
  13. 13. Použitie podľa nároku 1, v ktorom je prostriedok vo forme orálne požívateľného potravinárskeho produktu.
  14. 14. Potravinársky produkt orálne prijateľný cicavcami, vyznačujúci sa tým, že obsahuje množstvo nepatogénnych mliečnych baktérií, ktoré je účinné na podporu NREM fázy spánku.
  15. 15. Potravinársky produkt podľa nároku 14, vyznačujúci sa tým, že produkt je z mliečnym produktom.
  16. 16. Potravinársky produkt podľa nároku 15, vyznačujúci sa tým, že mliečny produkt je fermentovaným mliečnym produktom.
  17. 17. Potravinársky produkt podľa nároku 16, vyznačujúci sa tým, že mliečnym produktom jej ogurt.
  18. 18. Prostriedok pre zlepšenie kvality spánku, vyznačujúci sa tým, že obsahuje nepatogénne mliečne baktérie v množstve, ktoré je účinné pre podporovanie NRJEM fázy spánky a farmaceutický prijateľný nosič.
  19. 19. Prostriedok podľa nároku 18, vyznačujúci sa tým, že bunkové steny mliečnych baktérií sú citlivé na pôsobenie muramidázových enzýmov.
  20. 20. Prostriedok podľa nároku 18, vyznačujúci sa tým, že nepatogénne mliečne baktérie sú vybrané zo skupiny pozostávajúcej z CNCM 1-2274, CNCM 1-2273, CNCM 1-2132, CNCM 1-2275, CNCM 1-1520 a CNCM 1-2272.
  21. 21 .Prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje látku, ktorou je biologicky čistý bakteriálny kmeň, ktorý je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z CNCM 1-2274, CNCM 1-2273, CNCM 1-2132, CNCM 1-2275, CNCM 1-1520 a CNCM 1-2272.
SK1066-2002A 1999-12-20 2000-12-20 Semnogenická aktivita nepatogénnych mliečnych baktérií SK10662002A3 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/466,768 US6444203B2 (en) 1999-12-20 1999-12-20 Administering bacteria to improve sleep
PCT/EP2000/013020 WO2001045722A1 (en) 1999-12-20 2000-12-20 Somnogenic activity of non-pathogenic lactic acid bacteria

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK10662002A3 true SK10662002A3 (sk) 2005-06-02

Family

ID=23853027

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1066-2002A SK10662002A3 (sk) 1999-12-20 2000-12-20 Semnogenická aktivita nepatogénnych mliečnych baktérií

Country Status (19)

Country Link
US (1) US6444203B2 (sk)
EP (1) EP1251860B1 (sk)
JP (1) JP4527922B2 (sk)
AT (1) ATE328601T1 (sk)
AU (1) AU3161801A (sk)
BR (1) BR0016523A (sk)
CA (1) CA2394802A1 (sk)
CZ (1) CZ20022483A3 (sk)
DE (1) DE60028613T2 (sk)
DK (1) DK1251860T3 (sk)
ES (1) ES2266023T3 (sk)
HU (1) HUP0300025A3 (sk)
MX (1) MXPA02006116A (sk)
PL (1) PL202465B1 (sk)
PT (1) PT1251860E (sk)
RU (1) RU2262943C2 (sk)
SK (1) SK10662002A3 (sk)
WO (1) WO2001045722A1 (sk)
ZA (1) ZA200204974B (sk)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2785809B1 (fr) * 1998-11-18 2001-01-12 Gervais Danone Sa Selection et utilisations de souches de bacteries lactiques modulatrices de l'immunite non-specifique
TW200533299A (en) * 2004-03-31 2005-10-16 Calpis Co Ltd Functional food for improving endogenous rhythm of melatonin secretion, and functional food for improving circadian rhythm
US20150147298A1 (en) * 2006-07-24 2015-05-28 CortControl, Inc. Sleep enhancement with cortisol reduction medical food
EP2110028A1 (en) * 2008-04-15 2009-10-21 Nestec S.A. Bifidobacterium longum and hippocampal BDNF expression
AU2014221272B2 (en) * 2008-11-03 2016-01-21 Société des Produits Nestlé S.A. A nutritional composition comprising probiotics and improving sleep patterns
AU2009319257B2 (en) * 2008-11-03 2014-10-09 Société des Produits Nestlé S.A. A nutritional composition comprising probiotics and improving sleep patterns
FR2938552B1 (fr) 2008-11-19 2010-12-03 Gervais Danone Sa Souche hypocholesterolemiante de lactobacillus delbrueckii
JP5923238B2 (ja) * 2010-07-07 2016-05-24 アサヒグループホールディングス株式会社 迷走神経活性化剤
WO2014064488A1 (en) * 2012-10-25 2014-05-01 Compagnie Gervais Danone Streptococcus thermophilus strains for treating helicobacter pylori infection
CN106132424A (zh) * 2014-03-25 2016-11-16 株式会社益力多本社 睡眠质量改善剂
JP6127169B2 (ja) * 2016-02-15 2017-05-10 三基商事株式会社 睡眠改善剤
JP7154473B2 (ja) * 2017-05-31 2022-10-18 学校法人順天堂 疲労回復用および/または疲労蓄積予防用組成物
MA51307A (fr) 2017-12-19 2021-03-31 Gervais Danone Sa Compositions laitières fermentées et procédés de préparation de celles-ci
CN111297915B (zh) * 2019-04-12 2021-11-23 首都医科大学附属北京友谊医院 治疗帕金森病快速眼动期睡眠行为障碍的益生菌组合物、制剂及用途
CA3146927A1 (en) * 2019-08-09 2021-02-18 Fanny LARRERE Fermented plant-based probiotic compositions and processes of preparing the same
CA3146915A1 (en) * 2019-08-09 2021-02-18 Fanny LARRERE Fermented compositions and processes of preparing the same
JP6873291B1 (ja) 2020-02-05 2021-05-19 雪印メグミルク株式会社 睡眠促進用組成物及び組成物を含む食品、医薬品、飼料
CN113854457A (zh) * 2021-09-18 2021-12-31 山东绿丰生态农业股份有限公司 一种助睡眠促消化樱桃酵素固体饮品及其制备方法

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4110476A (en) * 1977-01-10 1978-08-29 Johnson/Rhodes Cultured Foods, Inc. Preparation of liquid and frozen yogurt products
CH654330A5 (en) 1980-01-31 1986-02-14 Sp Kt Bjuro Dezi Process for the preparation of a biological product for stimulating vitality of humans and animals
US4624853A (en) * 1983-02-07 1986-11-25 S. C. Johnson & Son, Inc. Instant yogurt food product
US4698330A (en) 1983-06-27 1987-10-06 President & Fellows Of Harvard College Somnogenic compositions and method of use
DE3624010A1 (de) 1986-07-16 1988-01-28 Sen Wilhelm Kanne Arznei- bzw. heilmittel zur behandlung des ganzheitlichen menschlichen organismus
US4837036A (en) * 1987-05-22 1989-06-06 The Pro-Mark Companies, Inc. Low fat thin-bodied yogurt product and method
US5716615A (en) 1992-02-10 1998-02-10 Renata Maria Anna Cavaliere Vesely Dietary and pharmaceutical compositions containing lyophilized lactic bacteria, their preparation and use
CN1114217A (zh) 1994-06-23 1996-01-03 南京肉类联合加工厂 生物活性口服液
DE69420397T2 (de) * 1994-06-29 1999-12-23 Societe Des Produits Nestle S.A., Vevey Fermentiertes Futtermittel
AUPM864894A0 (en) 1994-10-07 1994-11-03 Borody, Thomas Julius Treatment of bowel-dependent neurological disorders
WO1996020607A1 (fr) * 1995-01-02 1996-07-11 Compagnie Gervais Danone Ferment lactique, et son utilisation pour la preparation de produits anti-diarrheiques
FR2771600B1 (fr) * 1997-11-28 2000-06-09 Gervais Danone Co Preparation de produits alimentaires par fermentation d'un melange de jus de soja et d'hydrolysat cerealier par streptococcus thermophilus
FR2793257B1 (fr) * 1999-05-06 2001-07-27 Gervais Danone Sa Bacteries lactiques a proprietes anxiolytiques, et leurs utilisations

Also Published As

Publication number Publication date
PL356459A1 (en) 2004-06-28
DK1251860T3 (da) 2006-10-16
AU3161801A (en) 2001-07-03
CZ20022483A3 (cs) 2004-08-18
ATE328601T1 (de) 2006-06-15
BR0016523A (pt) 2002-09-24
RU2002119413A (ru) 2004-02-27
CA2394802A1 (en) 2001-06-28
EP1251860B1 (en) 2006-06-07
HUP0300025A3 (en) 2004-12-28
US6444203B2 (en) 2002-09-03
DE60028613D1 (de) 2006-07-20
MXPA02006116A (es) 2004-08-23
ZA200204974B (en) 2005-10-31
JP4527922B2 (ja) 2010-08-18
EP1251860A1 (en) 2002-10-30
JP2003517828A (ja) 2003-06-03
ES2266023T3 (es) 2007-03-01
PT1251860E (pt) 2006-10-31
HUP0300025A2 (en) 2003-05-28
WO2001045722A1 (en) 2001-06-28
US20010051152A1 (en) 2001-12-13
WO2001045722A9 (en) 2002-09-12
RU2262943C2 (ru) 2005-10-27
DE60028613T2 (de) 2007-05-31
PL202465B1 (pl) 2009-06-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5837238A (en) Treatment of diarrhea
Mitsuoka Bifidobacteria and their role in human health
US6835376B1 (en) Lactobacillus paracasei strain for preventing diarrhea caused by pathogenic bacteria
JP4527922B2 (ja) 非病原性乳酸菌の催眠活性
AU2006234793B2 (en) Selection and use of lactic acid bacteria for reducing inflammation in mammals
RU2336886C2 (ru) Противоаллергический агент, его применение для облегчения аллергии и способ облегчения (уменьшения симптомов) аллергии
NZ248056A (en) A lactobacillus acidophilus strain and a pharmaceutical composition containing it
JP2005536197A (ja) プロバイオティクス菌株、その選択方法、その組成物、およびその使用
SK280682B6 (sk) Bifidobaktérie a ich použitie
US9707258B2 (en) Bioconversion of milk with Bifidobacterium breve for treatment of allergic manifestions in infants
CA2599618C (en) Use of lactobacillus rhamnosus gg in combination with a long chain polyunsaturated fatty acid for the treatment, prevention or reduction of systemic inflammation in a formula-fed infant
US6887465B1 (en) Lactobacillus strains capable of preventing diarrhoea caused by pathogenic bacteria and rotaviruses
US20060233752A1 (en) Method for treating or preventing systemic inflammation in formula-fed infants
JPH10309178A (ja) ビフィズス菌を有効成分とする抗アレルギー剤および醗酵食品
CN116617273A (zh) 副干酪乳杆菌lc86在制备用于预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的产品中的应用
JPH059124A (ja) インターロイキン産生能を調節するための組成物
WO2011071370A1 (en) Probiotic lactic acid bacteria
MXPA99004976A (en) Lactic ferment comprising a particular strain of lactobacillus acidophilus
MXPA01008976A (en) Lactobacillus strains preventing diarrhoea pathogenic bacteria

Legal Events

Date Code Title Description
FC9A Refused patent application