JP6873291B1 - 睡眠促進用組成物及び組成物を含む食品、医薬品、飼料 - Google Patents
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Abstract
【課題】
本発明は、夜間全体及び夜間初期の睡眠量の増加や入眠潜時の短縮、睡眠エピソード長の増加をさせることができ、安定性及び安全性に優れた睡眠促進用組成物を提供することを課題とする。また、本発明は、該睡眠促進用組成物を含有する食品、医薬品、飼料を提供することを課題とする。
【解決手段】
ビフィドバクテリウム・アドレセンティス種、ラクトバチルス・プランタルム種のどちらかに属する微生物又はその培養物を有効成分として含有することを特徴とする睡眠促進用組成物。
【選択図】図１
本発明は、夜間全体及び夜間初期の睡眠量の増加や入眠潜時の短縮、睡眠エピソード長の増加をさせることができ、安定性及び安全性に優れた睡眠促進用組成物を提供することを課題とする。また、本発明は、該睡眠促進用組成物を含有する食品、医薬品、飼料を提供することを課題とする。
【解決手段】
ビフィドバクテリウム・アドレセンティス種、ラクトバチルス・プランタルム種のどちらかに属する微生物又はその培養物を有効成分として含有することを特徴とする睡眠促進用組成物。
【選択図】図１
Description
本発明は、睡眠を促進させることができ、安定性及び安全性に優れた睡眠促進用組成物に関する。また、本発明は、該睡眠促進用組成物を含有する、食品、医薬品、飼料に関する。
睡眠は動物が生きていく上で必要な行動であり、哺乳類のみならず、魚類、ハエ、線虫などの非哺乳類においても、睡眠状態又は睡眠様状態が存在する。近年、ライフスタイルの変化により、生活リズムが乱れ、不眠などの睡眠障害の罹患率が上昇している。厚生労働省の調査によると５人に１人は何らかの睡眠に関する悩みを抱えている（非特許文献１）。睡眠障害は、眠気などによる労働生産性の低下だけでなく、認知症やうつ病などの精神疾患、肥満や糖尿病などの生活習慣病と密接に関連することが明らかとなった。この睡眠不足による経済損失は約３．５兆円になると試算されている（非特許文献２）。
不眠などの睡眠障害を持つ人に対しては、医薬品の睡眠薬の使用が考えられる。睡眠薬としては、バルビツール酸系睡眠薬やベンゾジアゼピン系睡眠薬、非ベンゾジアゼピン系睡眠薬が主として用いられている。しかしながら、バルビツール酸系睡眠薬は依存性などの副作用が強く、ベンゾジアゼピン系睡眠薬による睡眠は、ベンゾジアゼピン速波と呼ばれる異常な周波数領域を示す睡眠を誘発するため、生理的で良質な睡眠を導かないことが知られている。
このことから、医薬品に代わり日常的に摂取することができ、生理的な睡眠を誘発することができる素材の開発が盛んに実施されており、天然成分や食品成分などから様々なものが提案されている。例えば、アミノ酸であるグリシンによる熟眠障害改善剤（特許文献１）や、テアニンによる睡眠促進組成物（特許文献２）などがある。また、古くから発酵食品に利用されており、生体への安全性が高い乳酸菌においても、非病原性乳酸菌であるラクトバチルス・アシドフィラス、ラクトバチルス・ヘルベティカス、ストレプトコッカス・サーモフィラスの特定の菌株による催眠活性（レム睡眠増加とノンレム睡眠減少による睡眠の質改善）（特許文献３）やラクトバチルス・カゼイによる睡眠の質改善剤（特許文献４）ラクトバチルス・ブレビスによる概日リズム改善剤（特許文献５）などがある。
しかしながら、消費者の多様なニーズを満たすためには、未だ充分な選択肢が存在するとは言えない。
キイロショウジョウバエＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ（以下、ショウジョウバエと言う）は、生物学の様々な分野でモデル生物として用いられている。２０００年には全ゲノム配列が決定され、ヒトの疾患に関連する遺伝子の約７５％がショウジョウバエにも存在すると推定され、近年ではアルツハイマー病やパーキンソン病、メタボリックシンドロームなど疾患モデルのショウジョウバエが開発されており、実際に疾患発症メカニズムの解明や、治療薬剤のスクリーニングに用いられている（非特許文献３、４）。
睡眠研究の分野においてもショウジョウバエを用いた研究は数多くなされており、ショウジョウバエがヒトと類似した睡眠様行動を示すことのみならず、その特徴や分子基盤の多くが哺乳類の睡眠と共通することが明らかになっている（非特許文献５、６）。具体例としては、齢に依存した睡眠様式の変化（非特許文献７）、睡眠の恒常性機構（失った睡眠を補償する睡眠行動）（非特許文献８）、カフェインによる覚醒作用（非特許文献９）、グリシンによる睡眠促進作用（非特許文献１０）、ドパミンやセロトニン、ＧＡＢＡなどの神経伝達物質、並びにＥＧＦの睡眠覚醒制御作用（非特許文献１１、１２、１３）が、ショウジョウバエと哺乳類において共通することが報告されている。更に、哺乳類の視床下部と発生学的及び機能的に類似する、ショウジョウバエの脳間部（ｐａｒｓ ｉｎｔｅｒｃｅｒｅｂｒａｌｉｓ）が、睡眠に重要な役割を果たしていることや、覚醒促進神経回路と睡眠促進神経回路が、ショウジョウバエにおいても哺乳類と同様に、相互に連絡していることなど、神経系の構造の違いにもかかわらず、睡眠に関係する神経回路が進化上で保存されていることが知られている（非特許文献５、６）。
これらのことから、ショウジョウバエは睡眠研究のモデル生物として適しており、睡眠制御に関わる物質の探索にも有用であると考えられている（非特許文献５、６）。
平成２９年度国民健康・栄養調査 ，厚生労働省 <https://www.mhlw.go.jp/content/000451755.pdf>
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本発明は、睡眠を促進させることができ、安定性及び安全性に優れた睡眠促進用組成物を提供することを課題とする。また、本発明は、該睡眠促進用組成物を含有する食品、医薬品、飼料を提供することを課題とする。
本発明者らは、上記の課題を解決するため鋭意検討を進めたところ、複数の微生物が睡眠を促進することを見出した。
すなわち本発明は、以下の態様を含むものである。
（１）ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ ）種、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）種のいずれかに属する１つ以上の微生物を含む睡眠促進用組成物。
（２）前記睡眠促進用組成物が、睡眠量増加用組成物、睡眠導入促進用組成物、睡眠の質向上用組成物から選択される１つ以上であることを特徴とする（１）に記載の睡眠促進用組成物。
（３）前記睡眠促進用組成物が、前記睡眠量増加用組成物であることを特徴とする（２）に記載の睡眠促進用組成物。
（４）前記睡眠促進用組成物が、前記睡眠導入促進用組成物であることを特徴とする（２）に記載の睡眠促進用組成物。
（５）前記睡眠促進用組成物が、前記睡眠の質向上用組成物であることを特徴とする（２）に記載の睡眠促進用組成物。
（６）前記ビフィドバクテリウム・アドレセンティス種が、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ ）ＳＢＴ０４３０またはＳＢＴ２７８６株であることを特徴とする（１）から（５）のいずれかに記載の睡眠促進用組成物。
（７）前記ラクトバチルス・プランタルム種が、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＳＢＴ２２２７株であることを特徴とする（１）から（５）のいずれかに記載の睡眠促進用組成物。
（８）（１）乃至（７）のいずれかに記載の睡眠促進用組成物を含むことを特徴とする睡眠促進用食品、睡眠促進用医薬品又は睡眠促進用飼料。
（９）受託番号がＮＩＴＥ Ｐ-０３１０３であるビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ０４３０株、受託番号がＮＩＴＥ Ｐ-０３１０２であるビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ２７８６株、受託番号がＮＩＴＥ Ｐ-０３１０４であるラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株。
すなわち本発明は、以下の態様を含むものである。
（１）ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ ）種、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）種のいずれかに属する１つ以上の微生物を含む睡眠促進用組成物。
（２）前記睡眠促進用組成物が、睡眠量増加用組成物、睡眠導入促進用組成物、睡眠の質向上用組成物から選択される１つ以上であることを特徴とする（１）に記載の睡眠促進用組成物。
（３）前記睡眠促進用組成物が、前記睡眠量増加用組成物であることを特徴とする（２）に記載の睡眠促進用組成物。
（４）前記睡眠促進用組成物が、前記睡眠導入促進用組成物であることを特徴とする（２）に記載の睡眠促進用組成物。
（５）前記睡眠促進用組成物が、前記睡眠の質向上用組成物であることを特徴とする（２）に記載の睡眠促進用組成物。
（６）前記ビフィドバクテリウム・アドレセンティス種が、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ ）ＳＢＴ０４３０またはＳＢＴ２７８６株であることを特徴とする（１）から（５）のいずれかに記載の睡眠促進用組成物。
（７）前記ラクトバチルス・プランタルム種が、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＳＢＴ２２２７株であることを特徴とする（１）から（５）のいずれかに記載の睡眠促進用組成物。
（８）（１）乃至（７）のいずれかに記載の睡眠促進用組成物を含むことを特徴とする睡眠促進用食品、睡眠促進用医薬品又は睡眠促進用飼料。
（９）受託番号がＮＩＴＥ Ｐ-０３１０３であるビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ０４３０株、受託番号がＮＩＴＥ Ｐ-０３１０２であるビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ２７８６株、受託番号がＮＩＴＥ Ｐ-０３１０４であるラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株。
本発明は、睡眠を促進させることができる睡眠促進用組成物を提供するものであり、本願でいう「睡眠を促進させる（睡眠促進）」とは、睡眠量の増加（夜間睡眠量の増加）、睡眠導入の促進（夜間初期の睡眠量の増加や入眠潜時の短縮）、睡眠の質の向上（最長睡眠エピソードの増加に表れるような深い眠りの増加）をもたらすことが出来ることを指している。即ち、本発明は、一態様において、睡眠量増加用組成物、睡眠導入促進組成物、及び/又は睡眠の質向上用組成物を提供する。
本発明の睡眠促進用組成物について説明する。本発明の有効成分はビフィドバクテリウム・アドレセンティス種、ラクトバチルス・プランタルム種、に属する微生物であって、睡眠維持の向上又は睡眠導入の促進効果を有するものであればいずれも利用することができる。
ビフィドバクテリウム・アドレセンティス種、ラクトバチルス・プランタルム種であればその菌株は特に限定されないが、好ましい例としてはビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ ）種ではＳＢＴ０４３０及びＳＢＴ２７８６株が、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）種ではＳＢＴ２２２７株が挙げられる。
これら３菌株は、いずれも特許生物寄託センター（ＩＰＯＤ）に寄託しており、受領番号を表１に示す。
これら微生物は、単独で用いることもできるし、適宜２種以上の微生物を組み合わせて用いても良い。
微生物の培養は、各微生物に適した条件を採用すればよい。例えば、培地には乳培地又は乳成分を含む培地、これを含まない半合成培地、化学的に規定された合成培地等種々の培地を用いることができる。このような培地としては、還元脱脂乳やＭＲＳ培地などを例示することができる。
得られた培養物から遠心分離などの集菌手段によって分離された菌体をそのまま本発明の有効成分として用いることができる。生菌体が好ましいが、菌体に何らかの処理を加えても良く、濃縮、乾燥、凍結乾燥などした菌体を用いることもできるし、加熱乾燥などにより死菌体にしても良く、その処理方法は特に限定されるものではない。
菌体として純粋に分離されたものだけでなく、培養物、懸濁物、その他の菌体含有物や、菌体を酵素や物理的手段を用いて処理した細胞質や細胞壁画分も用いることができる。
培養物などの形態としては、合成培地であるＭＲＳ培地（ＤＩＦＣＯ社製）、還元脱脂乳培地など一般的に乳酸菌の培養に用いられる培地を用いた培養物だけでなく、チーズ、発酵乳、乳製品乳酸菌飲料などの乳製品などを例示することができるが、特に限定されるものではない。
菌体として純粋に分離されたものだけでなく、培養物、懸濁物、その他の菌体含有物や、菌体を酵素や物理的手段を用いて処理した細胞質や細胞壁画分も用いることができる。
培養物などの形態としては、合成培地であるＭＲＳ培地（ＤＩＦＣＯ社製）、還元脱脂乳培地など一般的に乳酸菌の培養に用いられる培地を用いた培養物だけでなく、チーズ、発酵乳、乳製品乳酸菌飲料などの乳製品などを例示することができるが、特に限定されるものではない。
本発明の睡眠促進用組成物は、食品、医薬品、飼料等に添加することができる。その際、本発明の睡眠促進用組成物はそのまま使用してもよいが、食品、医薬品、及び飼料に通常含まれる他の原材料とともに使用できることから、常法に従い、粉末剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤等に用いることも出来る。また、ヨーグルト、乳飲料、ウエハース等の飲食品、及び飼料に配合することも可能である。
本発明の睡眠促進用組成物を食品、医薬品、飼料等に配合する場合、微生物の配合割合は特に限定されず、製造の容易性や好ましい一日投与量にあわせて適宜調節すればよい。投与対象者の症状、年齢などを考慮してそれぞれ個別に決定されるが、通常成人の場合、微生物の培養物などを１０〜２００ｇ、２０〜２００ｇ、５０〜２００ｇ、１００〜２００ｇ、１５０〜２００ｇ、２０〜１５０ｇ、５０〜１５０ｇ、１００〜１５０ｇ、又は５０〜１００ｇ、あるいはその菌体自体を０．１〜５，０００ｍｇ、０．２〜５０００ｍｇ、０．５〜５，０００ｍｇ、１〜５，０００ｍｇ、２〜５，０００ｍｇ、５〜５，０００ｍｇ、１０〜５，０００ｍｇ、２０〜５，０００ｍｇ、５０〜５，０００ｍｇ、１００〜５，０００ｍｇ、２００〜５，０００ｍｇ、５００〜５，０００ｍｇ、１，０００〜５，０００ｍｇ、２，０００〜５，０００ｍｇ、０．２〜２，０００ｍｇ、０．５〜２，０００ｍｇ、１〜２，０００ｍｇ、２〜２，０００ｍｇ、５〜２，０００ｍｇ、１０〜２，０００ｍｇ、２０〜２，０００ｍｇ、５０〜２，０００ｍｇ、１００〜２，０００ｍｇ、２００〜２，０００ｍｇ、５００〜２，０００ｍｇ、１，０００〜２，０００ｍｇ、０．５〜１，０００ｍｇ、１〜１，０００ｍｇ、２〜１，０００ｍｇ、５〜１，０００ｍｇ、１０〜１，０００ｍｇ、２０〜１，０００ｍｇ、５０〜１，０００ｍｇ、１００〜１，０００ｍｇ、２００〜１，０００ｍｇ、５００〜１，０００ｍｇ、１〜５００ｍｇ、２〜５００ｍｇ、５〜５００ｍｇ、１０〜５００ｍｇ、２０〜５００ｍｇ、５０〜５００ｍｇ、１００〜５００ｍｇ、２００〜５００ｍｇ、２〜２００ｍｇ、５〜２００ｍｇ、１０〜２００ｍｇ、２０〜２００ｍｇ、５０〜２００ｍｇ、１００〜２００ｍｇ、５〜１００ｍｇ、１０〜１００ｍｇ、２０〜１００ｍｇ、５０〜１００ｍｇ、１０〜５０ｍｇ、又は２０〜５０ｍｇ摂取できるように配合量などを調整すればよい。このようにして摂取することにより所望の効果を発揮することができる。
（睡眠促進用組成物の睡眠促進作用の評価方法）
本発明の睡眠促進用組成物の睡眠促進作用は、実施例に記載したショウジョウバエを対象とした動物試験により確認することができる。
本発明の睡眠促進用組成物の睡眠促進作用は、実施例に記載したショウジョウバエを対象とした動物試験により確認することができる。
以下に実施例、試験例を示し、本発明について詳細に説明するが、これらは単に例示するのみであり、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。
（試験例１）微生物の睡眠促進作用
ビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ０４３０とＳＢＴ２７８６株、ラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株について、ショウジョウバエを用いて睡眠促進作用を評価した。
１．試験方法
（１）供与菌
ビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ０４３０とＳＢＴ２７８６株、とラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株を供与菌とした。
（２）供与菌体の調製
上記（１）の各供与菌を同表２に示した条件で培養をした後（ＯＤ６００＝０．７以上）、遠心分離（７，０００×ｇ、４℃、２０ｍｉｎ）により菌体を分離した。菌体は生理食塩水で２回洗浄した後、培養量の１／１０量の１２．５％トレハロース溶液に懸濁した。さらにこの懸濁液を２％アガー、１０％スクロース溶液と等量混合して供与菌体を含有する飼料を作製した。
（３）試験手順
野生型のショウジョウバエＣＳ２２０２ｕ系統を、温度２５℃で１２時間ごとの明暗周期下で飼育した、羽化後５日の未交尾のメスの個体を評価に用いた。ショウジョウバエを、上記（２）の飼料（試験群）または乳酸菌を含まない１％アガー、５％スクロースから構成される飼料（コントロール群）とともに直径５ｍｍのガラスチューブに入れ、ショウジョウバエの行動を測定するＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｒｉｋｉｎｅｔｉｃｓ社製）で３日間行動を測定した。ショウジョウバエでは、不動期間（動かない期間）が５分以上の場合を“睡眠”と定義されている。そこで、夜間全体（照明が消灯している期間）と、夜間の最初の３時間の睡眠量、夜間開始時から最初の睡眠エピソードが観察されるまでの時間、夜間で最も長い睡眠エピソードの長さについて中央値を算出し、試験群とコントロール群を比較した。睡眠量とは、観察期間（日中または夜間）に観察された総睡眠時間（Ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｓｌｅｅｐ ｔｉｍｅ）である。すなわち、夜間全体において睡眠量が増加することは、夜間の睡眠量を増加させることで睡眠を促進することを示す。また、夜間の最初の３時間の睡眠量が増加することは、睡眠導入を促進することを示す。夜間開始時から最初の睡眠エピソードが観察されるまでの時間（Ｌａｔｅｎｃｙ ｔｏ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｓｌｅｅｐ ｂｏｕｔ）は、入眠潜時と呼ばれるものであり、これが短縮することも睡眠導入を促進することを示す。夜間で最も長い睡眠エピソードの長さ（Ｌｏｎｇｅｓｔ ｓｌｅｅｐ ｂｏｕｔ）が増加することは、睡眠が深いこと、すなわち睡眠の質が向上することを示す。各群、約９６匹のショウジョウバエを用いて評価し、ウィルコクソンの順位和検定により有意差の有無を評価した。ｐ＜０.０５で有意差あり、ｐ＜０.１で有意傾向ありと判定した。
ビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ０４３０とＳＢＴ２７８６株、ラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株について、ショウジョウバエを用いて睡眠促進作用を評価した。
１．試験方法
（１）供与菌
ビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ０４３０とＳＢＴ２７８６株、とラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株を供与菌とした。
（２）供与菌体の調製
上記（１）の各供与菌を同表２に示した条件で培養をした後（ＯＤ６００＝０．７以上）、遠心分離（７，０００×ｇ、４℃、２０ｍｉｎ）により菌体を分離した。菌体は生理食塩水で２回洗浄した後、培養量の１／１０量の１２．５％トレハロース溶液に懸濁した。さらにこの懸濁液を２％アガー、１０％スクロース溶液と等量混合して供与菌体を含有する飼料を作製した。
（３）試験手順
野生型のショウジョウバエＣＳ２２０２ｕ系統を、温度２５℃で１２時間ごとの明暗周期下で飼育した、羽化後５日の未交尾のメスの個体を評価に用いた。ショウジョウバエを、上記（２）の飼料（試験群）または乳酸菌を含まない１％アガー、５％スクロースから構成される飼料（コントロール群）とともに直径５ｍｍのガラスチューブに入れ、ショウジョウバエの行動を測定するＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｒｉｋｉｎｅｔｉｃｓ社製）で３日間行動を測定した。ショウジョウバエでは、不動期間（動かない期間）が５分以上の場合を“睡眠”と定義されている。そこで、夜間全体（照明が消灯している期間）と、夜間の最初の３時間の睡眠量、夜間開始時から最初の睡眠エピソードが観察されるまでの時間、夜間で最も長い睡眠エピソードの長さについて中央値を算出し、試験群とコントロール群を比較した。睡眠量とは、観察期間（日中または夜間）に観察された総睡眠時間（Ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｓｌｅｅｐ ｔｉｍｅ）である。すなわち、夜間全体において睡眠量が増加することは、夜間の睡眠量を増加させることで睡眠を促進することを示す。また、夜間の最初の３時間の睡眠量が増加することは、睡眠導入を促進することを示す。夜間開始時から最初の睡眠エピソードが観察されるまでの時間（Ｌａｔｅｎｃｙ ｔｏ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｓｌｅｅｐ ｂｏｕｔ）は、入眠潜時と呼ばれるものであり、これが短縮することも睡眠導入を促進することを示す。夜間で最も長い睡眠エピソードの長さ（Ｌｏｎｇｅｓｔ ｓｌｅｅｐ ｂｏｕｔ）が増加することは、睡眠が深いこと、すなわち睡眠の質が向上することを示す。各群、約９６匹のショウジョウバエを用いて評価し、ウィルコクソンの順位和検定により有意差の有無を評価した。ｐ＜０.０５で有意差あり、ｐ＜０.１で有意傾向ありと判定した。
２．試験結果
ビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ０４３０株を評価した結果を図１から４に示す。ビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ０４３０株を摂取した群はコントロール群と比べて、夜間睡眠量の有意な増加（図１）、夜間最初の３時間の睡眠量の有意な増加（図２）、入眠潜時の有意な短縮（図３）、最も長い睡眠エピソード長の有意な増加傾向（図４）が認められた。
ビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ０４３０株を評価した結果を図１から４に示す。ビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ０４３０株を摂取した群はコントロール群と比べて、夜間睡眠量の有意な増加（図１）、夜間最初の３時間の睡眠量の有意な増加（図２）、入眠潜時の有意な短縮（図３）、最も長い睡眠エピソード長の有意な増加傾向（図４）が認められた。
ビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ２７８６株を評価した結果を図５から８に示す。ビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ２７８６株を摂取した群はコントロール群と比べて、夜間睡眠量の有意な増加（図５）、夜間最初の３時間の睡眠量の有意な増加（図６）、入眠潜時の有意な短縮（図７）、最も長い睡眠エピソード長の有意な増加（図８）が認められた。
ラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株を評価した結果を図９から１２に示す。ラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株を摂取した群はコントロール群と比べて、夜間睡眠量の有意な増加（図９）、夜間最初の３時間の睡眠量の有意な増加（図１０）、入眠潜時の有意な短縮（図１１）、最も長い睡眠エピソード長の有意な増加（図１２）が認められた。
これらの結果から、ビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ０４３０株とＳＢＴ２７８６株、ラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株は、睡眠量を増加する作用、睡眠導入を促進する作用、睡眠の質を向上する作用を有することが示された。
（実施例１）睡眠促進剤（顆粒）の製造
ラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株を食用可能な合成培地（０．５％酵母エキス、０．１％トリプチケースペプトン添加）に５重量％接種し、３８℃で１５時間培養後、遠心分離で菌体を回収した。回収した菌体を凍結乾燥し、前期菌体の凍結乾燥粉末を得た。この凍結乾燥粉末１ｇを乳糖５ｇと混合し、顆粒状に成形して本発明の睡眠促進剤を得た。
ラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株を食用可能な合成培地（０．５％酵母エキス、０．１％トリプチケースペプトン添加）に５重量％接種し、３８℃で１５時間培養後、遠心分離で菌体を回収した。回収した菌体を凍結乾燥し、前期菌体の凍結乾燥粉末を得た。この凍結乾燥粉末１ｇを乳糖５ｇと混合し、顆粒状に成形して本発明の睡眠促進剤を得た。
（実施例２）睡眠促進剤（散剤）の製造
第１３改正日本薬局方解説書製剤総則「散剤」の規定に準拠し、上記実施例１で得られたラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株の凍結乾燥粉末１０ｇに乳糖（日局）４００ｇ、バレイショデンプン（日局）６００ｇを加えて均一に混合し、本発明の睡眠促進剤を製造した。
第１３改正日本薬局方解説書製剤総則「散剤」の規定に準拠し、上記実施例１で得られたラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株の凍結乾燥粉末１０ｇに乳糖（日局）４００ｇ、バレイショデンプン（日局）６００ｇを加えて均一に混合し、本発明の睡眠促進剤を製造した。
（実施例３）睡眠促進用栄養組成物の製造
ラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株を食用可能な合成培地（０．５％酵母エキス、０．１％トリプチケースペプトン添加）に５重量％接種し、３８℃で１５時間培養後、遠心分離で菌体を回収し、回収した菌体を凍結乾燥した。ビタミンＣ４０ｇまたはビタミンＣとクエン酸の等量混合物４０ｇ、グラニュー糖１００ｇ、コーンスターチと乳糖の等量混合物６０ｇに、この凍結乾燥粉末の凍結乾燥粉末４０ｇを加えて混合した。混合物を袋に詰め、本発明の睡眠促進用栄養組成物を製造した。
ラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株を食用可能な合成培地（０．５％酵母エキス、０．１％トリプチケースペプトン添加）に５重量％接種し、３８℃で１５時間培養後、遠心分離で菌体を回収し、回収した菌体を凍結乾燥した。ビタミンＣ４０ｇまたはビタミンＣとクエン酸の等量混合物４０ｇ、グラニュー糖１００ｇ、コーンスターチと乳糖の等量混合物６０ｇに、この凍結乾燥粉末の凍結乾燥粉末４０ｇを加えて混合した。混合物を袋に詰め、本発明の睡眠促進用栄養組成物を製造した。
（実施例４）睡眠促進用飲料の製造
上記実施例３で得られたラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株１ｇを６９９ｇの脱イオン水に溶解した後、４０℃まで加熱後、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ-ＴＵＲＲＡＸ Ｔ-２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、９，５００ｒｐｍで２０分間撹拌混合した。マルチトール１００ｇ、酸味料２ｇ、還元水飴２０ｇ、香料２ｇ、脱イオン水１７６ｇを添加した後、１００ｍｌのガラス瓶に充填し、９５℃、１５秒間殺菌後、密栓し、本発明の飲料１０本（１００ｍｌ入り）を製造した。
上記実施例３で得られたラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株１ｇを６９９ｇの脱イオン水に溶解した後、４０℃まで加熱後、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ-ＴＵＲＲＡＸ Ｔ-２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、９，５００ｒｐｍで２０分間撹拌混合した。マルチトール１００ｇ、酸味料２ｇ、還元水飴２０ｇ、香料２ｇ、脱イオン水１７６ｇを添加した後、１００ｍｌのガラス瓶に充填し、９５℃、１５秒間殺菌後、密栓し、本発明の飲料１０本（１００ｍｌ入り）を製造した。
（実施例５）睡眠促進用飼料の製造
大豆粕１２ｋｇ、脱脂粉乳１４ｋｇ、大豆油４ｋｇ、コーン油２ｋｇ、パーム油２３．２ｋｇ、トウモロコシ澱粉１４ｋｇ、小麦粉９ｋｇ、ふすま２ｋｇ、ビタミン混合物５ｋｇ、セルロース２．８ｋｇ、ミネラル混合物２ｋｇを配合し、１２０℃、４分間殺菌して、実施例３で得られたラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株１０ｋｇを配合して、本発明の飼料を製造した。
大豆粕１２ｋｇ、脱脂粉乳１４ｋｇ、大豆油４ｋｇ、コーン油２ｋｇ、パーム油２３．２ｋｇ、トウモロコシ澱粉１４ｋｇ、小麦粉９ｋｇ、ふすま２ｋｇ、ビタミン混合物５ｋｇ、セルロース２．８ｋｇ、ミネラル混合物２ｋｇを配合し、１２０℃、４分間殺菌して、実施例３で得られたラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株１０ｋｇを配合して、本発明の飼料を製造した。
（実施例６）発酵乳の製造
ラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株を食用可能な合成培地（０．５％酵母エキス、０．１％トリプチケースペプトン添加）に５重量％接種し、３７℃で１７時間培養後、遠心分離で菌体を回収し、凍結乾燥した。この凍結乾燥菌体５ｇ、脱脂粉乳１７００ｇ、グルコース３００ｇ、脱イオン水７６９５ｇを混合し、９５℃で２時間保持することで加熱殺菌した。これを３７℃まで冷却し、乳酸菌スターター（Ｌｂ．ｃａｓｅｉ）を３００ｇ植菌し、撹拌混合後、３７℃に保持したインキュベーター内でｐＨ４．０まで発酵させた。ｐＨ４．０到達後、１０℃以下まで冷却し、本発明の発酵乳１０ｋｇを製造した。
ラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株を食用可能な合成培地（０．５％酵母エキス、０．１％トリプチケースペプトン添加）に５重量％接種し、３７℃で１７時間培養後、遠心分離で菌体を回収し、凍結乾燥した。この凍結乾燥菌体５ｇ、脱脂粉乳１７００ｇ、グルコース３００ｇ、脱イオン水７６９５ｇを混合し、９５℃で２時間保持することで加熱殺菌した。これを３７℃まで冷却し、乳酸菌スターター（Ｌｂ．ｃａｓｅｉ）を３００ｇ植菌し、撹拌混合後、３７℃に保持したインキュベーター内でｐＨ４．０まで発酵させた。ｐＨ４．０到達後、１０℃以下まで冷却し、本発明の発酵乳１０ｋｇを製造した。
本発明は、新たな睡眠を促進する組成物として、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス種、ラクトバチルス・プランタルム種に属する微生物、該微生物を含む組成物と該組成物を含む食品、医薬品、及び飼料を提供するものである。本発明の組成物等を摂取することにより睡眠を促進できる。
［寄託生物材料への言及］
（１）ビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ２７８６株（受領番号：ＮＩＴＥ ＡＰ-０３１０２、受領日：２０２０年１月１４日）、寄託先：〒２９２-０８１８ 日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２-５-８、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）。
（２）ビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ０４３０株（受領番号：ＮＩＴＥ ＡＰ-０３１０３、受領日：２０２０年１月１４日）、寄託先：〒２９２-０８１８ 日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２-５-８、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）。
（３）ラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株（受領番号：ＮＩＴＥ ＡＰ-０３１０４、受領日：２０２０年１月１４日）、寄託先：〒２９２-０８１８ 日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２-５-８、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）。
（１）ビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ２７８６株（受領番号：ＮＩＴＥ ＡＰ-０３１０２、受領日：２０２０年１月１４日）、寄託先：〒２９２-０８１８ 日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２-５-８、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）。
（２）ビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ０４３０株（受領番号：ＮＩＴＥ ＡＰ-０３１０３、受領日：２０２０年１月１４日）、寄託先：〒２９２-０８１８ 日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２-５-８、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）。
（３）ラクトバチルス・プランタルムＳＢＴ２２２７株（受領番号：ＮＩＴＥ ＡＰ-０３１０４、受領日：２０２０年１月１４日）、寄託先：〒２９２-０８１８ 日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２-５-８、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）。
Claims (8)
- ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ ）種に属する１つ以上の微生物を有効成分として含む睡眠促進用組成物。
- 前記睡眠促進用組成物が、睡眠量増加用組成物、睡眠導入促進用組成物、睡眠の質向上用組成物から選択される１つ以上であることを特徴とする請求項１に記載の睡眠促進用組成物。
- 前記睡眠促進用組成物が、前記睡眠量増加用組成物であることを特徴とする請求項２に記載の睡眠促進用組成物。
- 前記睡眠促進用組成物が、前記睡眠導入促進用組成物であることを特徴とする請求項２に記載の睡眠促進用組成物。
- 前記睡眠促進用組成物が、前記睡眠の質向上用組成物であることを特徴とする請求項２に記載の睡眠促進用組成物。
- 前記ビフィドバクテリウム・アドレセンティス種が、受託番号がＮＩＴＥ Ｐ-０３１０３であるビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ０４３０株または受託番号がＮＩＴＥ Ｐ-０３１０２であるビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ２７８６株であることを特徴とする請求項１から請求項５のいずれかに記載の睡眠促進用組成物。
- 請求項１乃至請求項６のいずれかに記載の睡眠促進用組成物を含むことを特徴とする睡眠促進用食品、睡眠促進用医薬品又は睡眠促進用飼料。
- 受託番号がＮＩＴＥ Ｐ-０３１０３であるビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ０４３０株、受託番号がＮＩＴＥ Ｐ-０３１０２であるビフィドバクテリウム・アドレセンティスＳＢＴ２７８６株。
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