CN108823125A - 一种治疗睡眠障碍益生菌制剂的生产方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗睡眠障碍益生菌制剂的生产方法，包括以下步骤：将副干酪乳杆菌和植物乳杆菌分别培养，得到扩大菌液；然后同时接种到三角瓶中培养，得到一级菌种液；将上述一级菌种液液接种到种子罐培养基中培养，得到种子罐菌种；将种子罐菌种接种到发酵罐发酵培养，发酵完毕后，将发酵液离心，得到湿菌泥和离心后的发酵液，湿菌泥进行冷冻干燥，制成冻干菌粉，离心后的发酵液低温真空浓缩制成代谢物干燥粉，冻干菌粉与代谢物干燥粉复配，制成成品益生菌制剂。同时公开了制成的益生菌制剂的应用。该方法生产的生物制剂的功效具备调节肠内菌群平衡、促进人体消化吸收的同时，还有调理并有效地缓解治疗失眠、焦虑、抑郁、改善睡眠质量的功效。

Description

一种治疗睡眠障碍益生菌制剂的生产方法及应用

技术领域

本发明涉及一种治疗睡眠障碍益生菌制剂的生产方法及应用。

背景技术

随着社会经济发展和自然环境的变化，生活节奏加快，各种压力也接踵而来，睡眠质量不高成为现代人的“顽症”，“失眠”已经不是老年人的“专利”，它已逐渐“缠上”中老年人和青少年。失眠、焦虑、抑郁的发病率越来越高，成为现代人的健康杀手。

我们知道，人的一生时间中有近三分之一是在睡眠中度过，它决定着其余三分之二的人生质量和价值。但是当夜幕降临的时候，越来越多的人开始遭受一种夜晚恐惧症的侵害。他们辗转反侧，痛苦难眠，各种睡姿均无济于事。一夜折腾，等到天亮的时候，不得不强打精神再上职场，身心疲惫的一天又重新开始。

失眠、焦虑、抑郁已成为全社会的巨大隐患，目前全球有近30亿人受到失眠困扰，中国有超过6亿人失眠。千金易得，一“觉”难求，已成为亿万失眠人群的苦衷。顽固性失眠又是焦虑、抑郁症候群中的元凶且是发病率最高的病症，给患者带来无情的痛苦和严重的后果。

失眠、焦虑、抑郁是一种常见的疾病，主要表现为情绪低落、兴趣减低、悲观、思维迟缓。长期失眠会使人皮肤暗淡无光、心烦气躁、醒后不能再入睡、晨起后无有清晰感，不能恢复充沛精力。白天头昏疲乏、认知功能受损、工作学习记忆力下降、注意力不集中、坐立不安、丧失愉快，迟早导致高血压、冠心病、乳腺癌、肠癌、糖尿病等多种疾病的发生，直至发展到自暴自弃的严重后果，对家庭和社会造成严重损害。

生活节奏的加快，再加上劳逸结合不好，人的精神经常处于紧张状态，引起许多人失眠焦虑抑郁。因而带来了诸多痛苦和烦恼，服用安眠药虽能暂时解除失眠的烦恼，但“是药三分毒”长期服用不仅会有副反应，还会产生药物依赖危害人的身体健康。

发明内容

本发明提供一种治疗睡眠障碍益生菌的生产方法，利用副干酪乳杆菌、植物乳杆菌经液体深层发酵获得一种绿色生物制剂，该方法生产的生物制剂的功效具备调节肠内菌群平衡、促进人体消化吸收的同时，还有调理并有效地缓解治疗失眠、焦虑、抑郁、改善睡眠质量的功效。

一种治疗睡眠障碍益生菌制剂的生产方法，包括以下步骤：

（1）将CICC-22164副干酪乳杆菌和CICC-20261植物乳杆菌分别加入培养基2毫升，制成冻干管菌悬液，分别取1.5ml菌悬液分别接入到10ml培养基中，进行菌种扩大培养，分别得到扩大菌液；

（2）然后将扩大菌种液同时接种到三角瓶中，即一级种子培养基100毫升，分别接入扩大菌液为1毫升，进行培养，得到一级菌种液；

（3）将上述一级菌种液液1公斤接种到100公斤种子罐培养基中培养，得到种子罐菌种；

（4）将种子罐菌种3公斤接种到100公斤发酵罐中的培养基中发酵培养，培养条件为：发酵温度37℃，搅拌转速120转/分钟，发酵时间24小时，罐压保持0.05兆帕；

（5）发酵完毕后，将发酵液离心，离心速度为12000转/分钟，得到湿菌泥和离心后的发酵液，湿菌泥进行冷冻干燥，制成冻干菌粉，离心后的发酵液低温真空浓缩制成代谢物干燥粉，冻干菌粉与代谢物干燥粉复配，制成成品益生菌制剂。

优选地，步骤（1）所述的菌种扩大培养的培养基为：葡萄糖15克、蛋白胨16克、牛肉浸粉7克、乙酸钠2克、吐温80 1ml、尿素1克、自来水1000毫升；

步骤（2）中一级种子培养基为：葡萄糖30克、蛋白胨8克、牛肉浸粉6克、玉米浆1克、乙酸钠2克、吐温80 1ml、自来水1000毫升；

步骤（3）中种子罐培养基各组分的重量百分比：葡萄糖8%、蛋白胨1%、尿素0.5%、磷酸氢二钾1%、玉米浆1%、乙酸钠0.5%、吐温80 0.4%、聚葡萄糖2%、聚醚消泡剂0.1%、自来水85.5%。

优选地，步骤（4）中所述的发酵罐中的培养基各组分的重量百分比为：葡萄糖12%，蛋白胨1%、海藻糖2%、聚葡萄糖3%、低聚异麦芽糖10%、乙酸钠2%、吐温80 0.2%、马铃薯淀粉5%、共轭亚油酸0.5%、无水氯化钙0.3%、硫酸镁0.5%，玉米浆3%，聚醚消泡剂0.1%，自来水60.4%。

优选地，步骤（5）中所述的湿菌泥进行冷冻干燥的步骤为：

（1）悬菌液的制备:首先取配方中的水1500毫升加热至50℃-55℃，在搅拌下加入麦芽糊精50克，溶化后再加入配方中余下的水1500毫升，然后再加入配方中湿菌泥1000克，脱脂奶粉300克，蔗糖200克，98%的甘油100ml，低聚异麦芽糖300克（加入顺序不分前后），充分25℃-35℃条件下搅拌30分钟，即成为悬菌液，然后将该悬菌液放入30℃的恒温室或箱中恒温30分钟；

（2）冷冻干燥前的预冻：将恒温30分钟的悬菌液分装于冻干盘中，然后放入冷冻干燥机的预冻室内在零下30℃-35℃的条件下预冻3小时；

（3）真空干燥:将预冻好的料盘放入真空干燥室开始抽真空干燥，干燥条件为:真空度为2-5帕，温度-45℃，干燥室温度28℃，干燥时间45小时；冻干完毕后收集冻干料用无菌粉碎机粉碎成细度为100目的菌粉密封包装，制成冻干菌粉。

优选地，步骤（5）中所述的离心后的发酵液低温真空浓缩的步骤为：浓缩条件，真空度0.06兆帕，温度55℃-65℃，浓缩至膏状，固形物含量80%，水分含量20%为止，然后取浓缩膏1000克，加入药用玉米淀粉200克混匀放真空干燥箱中干燥，干燥条件：真空度0.06兆帕，温度55℃-60℃，干燥时间45小时，水分含量3%为合格，然后将其粉碎至100目的粉，密封包装制成代谢物干燥粉。

优选地，步骤（5）中所述的冻干菌粉与代谢物干燥粉复配的步骤为：取100目的冻干菌粉5克、代谢物干燥粉3克、微晶纤维素10克、药用玉米淀粉20克，菊粉5克、硬脂酸镁5克，将以上各物料放入固体搅拌混合机中混合均匀，然后在无菌条件下分装入胶囊中，装瓶或压片即为益生菌制剂。

上述所述的生产方法得到的益生菌制剂及其在治疗睡眠障碍中的应用。

有益效果

益生菌是一种有益于人体健康活的微生物，常用的益生菌有嗜酸乳杆菌和双歧杆菌两大类，与副干酪乳杆菌、植物乳杆菌一起被称为“健康四益菌”。副干酪乳杆菌、植物乳杆菌作为益生菌，能够耐受人口中的酶、胃液中低PH值和小肠中的胆汁酸，所以副干酪乳杆菌、植物乳杆菌进入人体后可以在肠道内大量存活，起到调节肠道菌群平衡、促进人体消化吸收、改善睡眠等作用。副干酪乳杆菌、植物乳杆菌活菌及其代谢产物对人体健康起到重要作用，特别是副干酪乳杆菌、植物乳杆菌在发酵过程中产生的代谢产物色氨酸，能促进大脑神经细胞分泌出使人欲睡的神经递质五羟色胺及对生理功能具有调节作用的多肽类物质，让人感到全身舒适，有利于解除疲劳并入睡。代谢产物中的叶酸能够维持大脑血清素的稳定，促进神经健康。副干酪乳杆菌、植物乳杆菌活菌体在人体肠道中定植繁殖生长过程中还会产生VK，VK可以安神，让人保持心情平和，有效改善睡眠质量并防止焦虑抑郁症状的发生。

具体实施方式

下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

副干酪乳杆菌、植物乳杆菌活菌是益生菌的一种，是国际公认、国家卫生部批准使用的益生菌，也是人体肠道正常菌群中的主要组成部分，它具有无毒、有效、安全、绿色对人体健康起到重要作用。

副干酪乳杆菌、植物乳杆菌活菌及其代谢产物的生产具有生产工艺简单、生产周期短、易操作、使用原材料易得，生产中无有三废排放，达到绿色环保生产。

采用发酵菌种是国家获准使用的益生菌种，市售可得：

副干酪乳杆菌、菌号：CICC-22164中国工业微生物菌种保藏管理中心；

植物乳杆菌、菌号：CICC-20261中国工业微生物菌种保藏管理中心。

生产中所使用的设备：菌种培养箱、超净工作台、恒温培养箱、各种试管、三角瓶、种子罐、发酵罐、真空冷冻干燥机、三维搅拌机、低温粉碎机、真空包装机。

实施例1

1.菌种培养：

购进菌种的扩大培养、培养基的配制：葡萄糖15克、蛋白胨16克、牛肉浸粉7克、乙酸钠2克、吐温80 1ml、尿素1克、自来水1000毫升、PH值自然。

操作：将以上配方中的葡萄糖等原料不分前后的加入到配方中的1000毫升水中，搅拌30分钟使之溶化，然后分装于18*180的试管中，每只试管装10毫升，胶塞牛皮纸封口，放医用消毒器中0.1-0.12兆帕灭菌25分钟，培养基灭菌完毕。

接种：在无菌条件下（超净工作台中）分别打开购进的副干酪乳杆菌、植物乳杆菌安瓿管菌种（冻干菌种），菌种量均为0.5g，因用的是二株菌种，在此阶段须分别培养，然后分别向每个打开的冻干管（安瓿管）中加入以上灭好菌的培养基2毫升，摇动溶化备用，此称为冻干管（安瓿管）菌悬液，然后再取2支试管分别装有灭好菌的培养基10毫升，将溶化好的副干酪乳杆菌、植物乳杆菌冻干管菌悬液分别取1.5ml接入到试管中，用胶塞、牛皮纸封好管口，用手轻摇匀，放入恒温培养箱中37℃静置培养24小时即可，此称为扩大菌种液。

2.一级种子培养：

配方：葡萄糖30克、蛋白胨8克、牛肉浸粉6克、玉米浆1克、乙酸钠2克、吐温80 1ml、自来水1000毫升、PH值自然。

操作：将上述原料不分前后的加入到配方中的自来水中，开动搅拌机，搅拌20分钟，使全部溶化，此称为一级种子培养液。

将搅拌溶化好的一级种子培养液按用量加入到三角瓶中，然后用6层纱布外加一层牛皮纸扎好瓶口，放入医用消毒器中灭菌，灭菌前首先打开消毒器上的排气阀门等有少量蒸汽排出时关闭，当消毒器上的压力达到0.05兆帕时，打开消毒器上的排气阀门排气6-8分钟，然后关闭排气阀门，继续加温，当消毒器中的蒸汽压力达到0.1-0.12兆帕时开始计时，灭菌时间为25分钟，完毕后离开热源，让其自然降温，当消毒器上的压力表归零时，打开消毒器，取出灭好菌的培养基放入超净工作台中自然降温，当温度降至37℃时，将以上培养好的扩大菌种液共同移接到三角瓶灭好菌的培养液中，接种量分别是1%，即一级种子培养液100毫升，接入扩大菌液为1毫升（每个菌种），完毕后用原有纱布及牛皮纸将瓶口封好，用手稍加摇动使接入的菌种与培养液混合均匀，然后放恒温箱中在37℃的条件下培养21小时即可，此称为一级菌种液。

3.发酵设备、管道及无菌过滤系统的灭菌:

操作:首先打开各进出管道及无菌空气管道的阀门，通入0.12-0.14兆帕的蒸汽，让蒸汽与管道阀门联通并有少量蒸汽排出，通气40分钟，让管道内的蒸汽压力保持0.12-0.14兆帕，保持40分钟，然后关闭各进出管道阀门，备用。

种子罐及发酵罐的空罐灭菌:

关闭各个阀门，打开罐底部的排污阀及罐夹层的排污阀，打开直接蒸汽阀门向罐内通入0.12-0.14兆帕的蒸汽，当罐内达到121℃时开始计时，灭菌时间为40分钟，然后关闭罐底部排污阀及夹层排污阀，罐中温度自然降至37℃备用。

种子罐培养：

配方：（培养基各组分的重量百分比）葡萄糖8%、蛋白胨1%、尿素0.5%、磷酸氢二钾1%、玉米浆1%、乙酸钠0.5%、吐温80 0.4%、聚葡萄糖2%、聚醚消泡剂0.1%、自来水85.5%、PH值自然。

具体操作：首先将配方中所使用的自来水投入到已空罐灭菌的种子罐中，开动搅拌机，分别加入配方中所需的原料（加入顺序不分前后），然后在不停的搅拌中通入蒸汽加温，首先利用罐夹层蒸汽加热到95℃时，再改用直接蒸汽加热，当罐中温度达到121℃时保持30分钟即可达到灭菌的效果，然后关闭蒸汽，开始通过罐夹层的自来水冷却降温，当罐内温度达到37℃时备用，此称为种子培养基。然后将以上培养好的一级菌种培养液在无菌条件下接种到种子罐中去，接种量是罐内培养基的1%，即可100公斤种子罐培养基分别接入一级菌种液1公斤即可。然后盖好罐上的接种帽开始搅拌培养，培养条件：温度37℃，PH值自然，搅拌转速80转/分钟，罐压0.05兆帕，培养时间36小时即可达到要求，如果罐压降低，可通入无菌空气保持罐压，罐压过高可用罐顶的放气阀调整，此称为种子罐菌种。

4.发酵:

配方:培养基各组分的重量百分比

葡萄糖12%，蛋白胨1%、海藻糖2%、聚葡萄糖3%、低聚异麦芽糖10%、乙酸钠2%、吐温800.2%、马铃薯淀粉5%、共轭亚油酸0.5%、无水氯化钙0.3%、硫酸镁0.5%，玉米浆3%，聚醚消泡剂0.1%，自来水60.4%，共100公斤。

具体操作:首先将配方中所使用的自来水投入到已空罐灭菌的发酵罐中去，开动搅拌机，向发酵罐中投入配方中所使用的原料（加入顺序不分先后），然后通入蒸汽加热，首先利用夹层蒸汽加热到95℃，然后再改用直接蒸汽加热，当罐中温度达到121℃时开始计时，保持30分钟即可达到灭菌效果，然后通过夹层的自来水冷却降温，当罐中的温度降到37℃时开始接入菌种，接种前首先提高种子罐的罐压力达到0.1兆帕，发酵罐的罐压保持0.05兆帕，然后打开接种管道阀门，将种子罐培养好的种子通过压差的方式输送到发酵罐中去，然后关闭接种管道阀门。

接种量是每100公斤发酵罐中的培养基接入种子罐培养的菌种3公斤，培养条件：发酵温度37℃，搅拌转速120转/分钟，发酵时间24小时即可，罐压保持0.05兆帕，PH值自然，如果罐压降低可通入无菌空气保持罐压，罐压过高可用罐顶的排气阀调整，此为发酵液。

5.发酵液离心，收集湿菌泥

发酵完毕后将发酵液抽入到贮罐中，为了保证发酵液中菌体的完整性，选择离心转速非常重要。

操作:开动管式离心机，调整转速12000转/分钟，以每分钟进料15公斤的进料速度进行离心，离心完毕后收集湿菌泥，将离心收集的湿菌泥进行冷冻干燥，离心后的发酵液可进行低温真空浓缩加入载体，真空干燥后复配成品用。

一、菌泥的冷冻干燥

1、悬菌液的制备:取湿菌泥1000克，加入无菌蒸馏水3000毫升，脱脂奶粉300克，蔗糖200克，98%的甘油100ml，麦芽糊精50克，低聚异麦芽糖300克。

操作:首先取配方中的水1500毫升加热至50℃-55℃，在搅拌下加入麦芽糊精，溶化后再加入配方中余下的水，然后再加入配方中其它的原料（加入顺序不分前后）。充分搅拌30分钟（25℃-35℃的条件下搅拌）。即成为悬菌液，然后将该悬菌液放入30℃的恒温室或箱中恒温30分钟进行预冻。

冷冻干燥前的预冻，将恒温30分钟的悬菌液分装于冻干盘中，然后放入冷冻干燥机的预冻室内在零下30℃-35℃的条件下预冻3小时，冻结后进行抽真空干燥。

真空干燥:将预冻好的料盘放入真空干燥室开始抽真空干燥，干燥条件为:真空度为2-5帕，温度-45℃，干燥室温度28℃，干燥时间45小时。冻干完毕后收集冻干料用无菌粉碎机粉碎成细度为100目的菌粉密封包装备用（此称为冻干菌粉）。

2、离心发酵液的低温浓缩：浓缩条件，真空度0.06兆帕，温度55℃-65℃，浓缩至膏状，固形物含量80%，水分含量20%为止，然后加入药用玉米淀粉为载体，混匀后进行真空干燥。取浓缩膏1000克，加入药用玉米淀粉200克混匀放真空干燥箱中干燥，干燥条件：真空度0.06兆帕，温度55℃-60℃，干燥时间45小时，水分含量3%为合格，然后将其粉碎至100目的粉，密封包装备用（此称为代谢物干燥粉）。

成品的复配：取100目的冻干菌粉5克、代谢物干燥粉3克、微晶纤维素10克、药用玉米淀粉20克，菊粉5克、硬脂酸镁5克，（此称为载体菌粉）。

操作：将以上各物料放入固体搅拌混合机中混合均匀，然后在无菌条件下分装入胶囊中，装瓶或压片即为成品。

培养基的优化

实验数据分析：通过大量的配比实验证明，当培养基配料为葡萄糖12%，蛋白胨1%、海藻糖2%、聚葡萄糖3%、低聚异麦芽糖10%、乙酸钠2%、吐温80 0.2%、马铃薯淀粉5%、共轭亚油酸0.5%、无水氯化钙0.3%、硫酸镁0.5%，玉米浆3%，聚醚消泡剂0.1%，自来水60.4%时发酵代谢中VK、色氨酸、叶酸含量分别为5.0%、3.0%、1.0%达到最高值，而发酵液中活菌量为200亿cfu/ml也达到最高值，故选此发酵培养基配方。

对比例1

按照实施例1中所述的方法将副干酪乳杆菌进行培养和发酵，其他条件均不变，制成益生菌制剂。

对比例2

按照实施例1中所述的方法将植物乳杆菌进行培养和发酵，其他条件均不变，制成益生菌制剂。

对比例3

按照实施例1所述的方法，将植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、瑞士乳杆菌、保加利亚乳杆菌、副干酪乳杆菌以及酿酒酵母按照实施例1所述的制备方法制成益生菌制剂，其他条件均不变。

将实施例及对比例中代谢过程中的产物及发酵液中的菌数进行检测及测量，并且将制成的益生菌制剂对人体进行测试，结果如下表1、表2：

表1代谢过程中的产物及发酵液中的菌数：

表2对改善睡眠、焦虑、抑郁应用效果：

应用人群：

效果：

实施例1制备的益生菌制剂的效果说明：

男性300人在服用3天开始统计效果，服用3天有不同年龄的151人感觉睡眠质量改善。服用9天，有278人感觉明显改善睡眠质量。服用15天有281人改善睡眠质量极其明显，并有164人改善了坐立不安、心情郁闷都得到改善。服用30天有283人的睡眠完全改善，能正常睡眠，晨起后感觉大脑清晰、心情愉快、精力充沛；164人当中焦虑抑郁均解除，心情舒畅；共有17人在服用干酪乳杆菌未能改善睡眠质量，焦虑抑郁也未得到改善。

女性：300人在服用3天开始统计效果，服用3天有不同年龄的217人感觉睡眠质量改善。服用9天，有289人感觉明显改善睡眠质量。服用15天有291人改善睡眠质量极其明显，并有218人改善了坐立不安、心情郁闷得到显著改善。服用30天有293人的睡眠质量完全改善并能正常睡眠，晨起后大脑清晰、精力充沛；焦虑、抑郁、坐立不安的218人也均解除，心情舒畅；试验中间共有7人在服用干酪乳杆菌在睡眠焦虑等方面未能显效。

青少年男性：200人在服用3天开始统计效果，服用3天有不同年龄的193人感觉睡眠质量改善。服用9天，有195人睡眠质量明显改善。服用15天有196人改善睡眠质量极其明显，并改善了196人当中的86人的坐立不安、焦虑、抑郁等症状。服用30天有196人的睡眠质量完全改善，感到精力充沛、记忆力增强；试验期间共有4人在服用干酪乳杆菌在睡眠、焦虑等方面未能显效。

青少年女性：200人在服用3天开始统计效果，服用3天有不同年龄的189人感觉睡眠质量改善。服用9天有193人睡眠质量明显改善。服用15天有195人改善睡眠质量极其明显，并改善了195人当中的98人的坐立不安、焦虑、抑郁等症状。服用30天有195人的睡眠质量完全改善，感到精力充沛、记忆力增强；试验期间服用干酪乳杆菌及其代谢产物共有5人在在睡眠、焦虑、抑郁等方面未能显效。

而对于对比例1-3制备的益生菌制剂，效果相对于实施例，有较大的差距，虽然对比例3所使用的益生菌菌种种类比实施例1多，但是在培养的过程会产生彼此抑制的效果，而本发明采用两种菌种，达到的效果更好。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (8)

1.一种治疗睡眠障碍益生菌制剂的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将CICC-22164副干酪乳杆菌和CICC-20261植物乳杆菌分别加入培养基2毫升，制成冻干管菌悬液，分别取1.5ml菌悬液分别接入到10ml培养基中，进行菌种扩大培养，分别得到扩大菌液；

（2）然后将两种扩大菌种液同时接种到三角瓶中，即一级种子培养基100毫升，分别接入扩大菌液为1毫升，进行培养，得到一级菌种液；

（3）将一级菌种液液1公斤接种到100公斤种子罐培养基中培养，得到种子罐菌种；

（4）将种子罐菌种3公斤接种到100公斤发酵罐中的培养基中发酵培养，培养条件为：发酵温度37℃，搅拌转速120转/分钟，发酵时间24小时，罐压保持0.05兆帕；

（5）发酵完毕后，将发酵液离心，离心速度为12000转/分钟，得到湿菌泥和离心后的发酵液，湿菌泥进行冷冻干燥，制成冻干菌粉，离心后的发酵液低温真空浓缩制成代谢物干燥粉，冻干菌粉与代谢物干燥粉复配，制成成品益生菌制剂。

2.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤（1）所述的菌种扩大培养的培养基为：葡萄糖15克、蛋白胨16克、牛肉浸粉7克、乙酸钠2克、吐温80 1ml、尿素1克、自来水1000毫升；

步骤（2）中一级种子培养基为： 葡萄糖30克、蛋白胨8克、牛肉浸粉6克、玉米浆1克、乙酸钠2克、吐温80 1ml、自来水1000毫升；

步骤（3）中种子罐培养基各组分的重量百分比：葡萄糖8%、蛋白胨1%、尿素0.5%、磷酸氢二钾1%、玉米浆1%、乙酸钠0.5%、吐温80 0.4%、聚葡萄糖2%、聚醚消泡剂0.1%、自来水85.5%。

3.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤（4）中所述的发酵罐中的培养基各组分的重量百分比为：葡萄糖12%，蛋白胨1%、海藻糖2%、聚葡萄糖3%、低聚异麦芽糖10%、乙酸钠2%、吐温80 0.2%、马铃薯淀粉5%、共轭亚油酸0.5%、无水氯化钙0.3%、硫酸镁0.5%，玉米浆3%，聚醚消泡剂0.1%，自来水60.4%。

4.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤（5）中所述的湿菌泥进行冷冻干燥的步骤为：

（1）悬菌液的制备:首先取配方中的水1500毫升加热至50℃-55℃，在搅拌下加入麦芽糊精50克，溶化后再加入配方中余下的水1500毫升，然后再加入配方中湿菌泥1000克，脱脂奶粉300克，蔗糖200克，98%的甘油100ml，低聚异麦芽糖300克（加入顺序不分前后），充分25℃-35℃条件下搅拌30分钟，即成为悬菌液，然后将该悬菌液放入30℃的恒温室或箱中恒温30分钟；

（2）冷冻干燥前的预冻：将恒温30分钟的悬菌液分装于冻干盘中，然后放入冷冻干燥机的预冻室内在零下30℃-35℃的条件下预冻3小时；

（3）真空干燥:将预冻好的料盘放入真空干燥室开始抽真空干燥，干燥条件为:真空度为2-5帕，温度-45℃，干燥室温度28℃，干燥时间45小时；冻干完毕后收集冻干料用无菌粉碎机粉碎成细度为100目的菌粉密封包装，制成冻干菌粉。

5.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤（5）中所述的离心后的发酵液低温真空浓缩的步骤为：浓缩条件，真空度0.06兆帕，温度55℃-65℃，浓缩至膏状，固形物含量80%，水分含量20%为止，然后取浓缩膏1000克，加入药用玉米淀粉200克混匀放真空干燥箱中干燥，干燥条件：真空度0.06兆帕，温度55℃-60℃，干燥时间45小时，水分含量3%为合格，然后将其粉碎至100目的粉，密封包装制成代谢物干燥粉。

6.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤（5）中所述的冻干菌粉与代谢物干燥粉复配的步骤为：取100目的冻干菌粉5克、代谢物干燥粉3克、微晶纤维素10克、药用玉米淀粉20克，菊粉5克、硬脂酸镁5克，将以上各物料放入固体搅拌混合机中混合均匀，然后在无菌条件下分装入胶囊中，装瓶或压片即为益生菌制剂。

7.一种权利要求1-6之一所述的生产方法得到的益生菌。

8.一种权利要求7所述的益生菌在治疗睡眠障碍中的应用。