CN109846044B - 具有改善记忆、提高免疫力的益生菌组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明实施例公开了一种具有改善记忆、提高免疫力的益生菌组合物及其制备方法，本发明实施例还提供一种制备所述的组合物的方法，其包括以下步骤：将所述发酵乳杆菌通过扩大菌种培养、一级种子培养、种子罐培养以及发酵培养获得发酵乳杆菌发酵菌液；其中，所述组合物包括发酵乳杆菌菌粉体以及所述发酵乳杆菌代谢物粉体。本发明实施例的具有改善记忆、提高免疫力的益生菌组合物，对改善儿童的记忆力，提高儿童的注意力、集中力具有很好的效果；此外，对改善儿童免疫力也有显著作用。

Description

具有改善记忆、提高免疫力的益生菌组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及微生物制剂技术领域，具体涉及一种具有改善记忆、提高免疫力的益生菌组合物及其制备方法。

背景技术

随着社会的发展，经济水平及生活水平的提高，越来越多的人们存在着对能够维持心理功能，如记忆、认知、智力、动机、注意力和集中力的药物的日益增长的需求，甚至对健康人也变的尤为重要。这种药物名为益智药、智能保健药、记忆增强剂、认知增强剂和智力增强剂，其包括药品、补充剂、营养制品和功能性食品。益智药的主要特点是增强学习和记忆获得，以及使得习得行为抵抗易于损害它们的药剂，以及保护大脑免受各种物理或化学损伤，并最终促进信息在脑半球间的流动并有效增强皮质/皮层下机制。也期待精神药物不存在常见的负面药理学作用，因为这些药物专门用于健康的患者，包括年轻和年老的患者。通常开发了改善健康个体的认知工作的表现的这些药物，用于在患有神经精神障碍和脑损伤的患者中治疗认知能力丧失和提高生活质量。

面临社会的压力，越来越多的人被促使使用通常处方用于治疗致残疾病的药物，目的仅仅是提高他们的工作和效率潜力，而没有考虑滥用所述药物引起的潜在的副作用或成瘾性。这类药物或补充剂日益增长的市场需求使得若干非处方的药物或膳食补充剂为消费者可用，但经科学明确证实对记忆或相关心理功能不具有任何正面作用。

综上所述，传统的药物及相关产品在使用的过程中，存在明显的不足和缺陷，亟待进一步改进。

发明内容

本发明实施例的目的在于提供具有改善记忆、提高免疫力的益生菌组合物及其制备方法，用以解决现有改善记忆、提高免疫力药物存在副作用的缺陷。

为实现上述目的，本发明实施例提供一种具有改善记忆、提高免疫力的益生菌组合物，所述组合物包括发酵乳杆菌菌粉体以及所述发酵乳杆菌代谢物粉体。

优选的，所述发酵乳杆菌保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为：CCTCCNO：M2018267。

优选的，所述组合物还包括包含发酵乳杆菌的菌粉载体，所述菌粉载体包括微晶纤维素、药用玉米淀粉、菊粉、硬脂酸镁；

其中，所述组合物包括以下质量份数原料：发酵乳杆菌菌粉体9-11份、发酵乳杆菌代谢物粉体4-6份、微晶纤维素18-22份、药用玉米淀粉80-120份、菊粉8-12份、硬脂酸镁8-12份。

优选的，所述组合物包括以下质量份数的原料：发酵乳杆菌菌粉体10份、发酵乳杆菌代谢物粉体5份、微晶纤维素20份、药用玉米淀粉100份、菊粉10份、硬脂酸镁10份。

本发明实施例还提供一种制备权所述的组合物的方法，其包括以下步骤：

将所述发酵乳杆菌通过扩大菌种培养、一级种子培养、种子罐培养以及发酵培养获得发酵乳杆菌发酵菌液；

将所述发酵乳杆菌发酵菌液离心分别收集发酵乳杆菌菌泥及离心后的发酵液，并将所述发酵乳杆菌菌泥和离心后的发酵液冷冻干燥粉碎，获得发酵乳杆菌菌粉体以及发酵乳杆菌代谢物粉体；

将所述发酵乳杆菌菌粉体以发酵乳杆菌代谢物粉体与菌粉载体混合，得到所述组合物。

优选的，所述发酵乳杆菌菌粉体的制备方法具体为：

将所述发酵乳杆菌菌泥、无菌水、脱脂奶粉、低聚果糖、甘油、麦芽糊精以及低聚异麦芽糖混合得到发酵乳杆菌悬菌液，将所述悬菌液冷冻干燥粉碎获得发酵乳杆菌菌粉体。

优选的，所述悬菌液冷冻干燥在-35℃--30℃的条件下预冻2-5小时，-50℃--40℃真空冷冻干燥，粉碎成100目的发酵乳杆菌菌粉。

优选的，所述离心后的发酵液先经过低温浓缩至水分含量最多为20％的发酵液浓缩膏，将所述发酵液浓缩膏与药用玉米淀粉以5：1-4：1混合，得到混合物，然后在温度55℃-60℃，干燥时间40-50小时，粉碎得到含水量至多为3％的发酵乳杆菌菌粉体。

本发明实施例还包括所述的方法制备的组合物，在制备具有下述至少一种功能的产品中的应用：

1)改善记忆力；

2)提高免疫力；

3)改善睡眠；

4)提高注意力。

本发明实施例具有如下优点：

本发明实施例的具有改善记忆、提高免疫力的益生菌组合物，对改善儿童的记忆力，提高儿童的注意力、集中力具有很好的效果；此外，对改善儿童免疫力也有显著作用。

具体实施方式

以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。

本发明的实施例提供具有改善记忆、提高免疫力的益生菌组合物及其制备方法。本发明实施例首先获得了一株新的菌株发酵乳杆菌菌株，该发酵乳杆菌菌株分离自面包，经初筛、复筛获得，经16S DNA鉴定为发酵乳杆菌，该发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum HYZQF K-7)于2018年05月14日，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉，武汉学，其保藏编号为：CCTCCNO：M2018267。该菌种序列如SEQ ID 1所示。

本发明实施例中所使用的设备：菌种培养箱、超净工作台、恒温培养箱、各种试管、三角瓶、种子罐、发酵罐、真空冷冻干燥机、三维搅拌机、低温粉碎机、真空包装机。

一、扩大菌种培养

发酵乳杆菌菌种培养：取出保存在-80℃冰箱的菌种，并对菌种进行扩大培养，发酵乳杆菌培养基的配制：葡萄糖18克、蛋白胨14克、牛肉浸粉6克、乙酸钠3克、吐温80 1ml、尿素0.5克、自来水1000毫升、pH值自然。将上述培基的原料加入到1000毫升水中，搅拌30min使之溶化，然后分装于18*180的试管中，每只试管装10毫升，胶塞牛皮纸封口，放医用消毒器中0.1-0.12兆帕灭菌25min，培养基灭菌完毕。

发酵乳杆菌接种，在无菌条件下打开-80℃下保存冷冻管，室温融化后，然后再取以上灭好菌的培养基试管1支，将溶化好的-80℃保存菌液取1毫升加入试管中，用胶塞、牛皮纸封好管口，用手轻摇匀，放入恒温培养箱中37℃静置培养15小时即可，获得扩大菌种培养菌液。

二、一级种子培养

培养基配方：葡萄糖25克、蛋白胨6克、牛肉浸粉5克、玉米浆4克、乙酸钠3克、吐温80 1ml、自来水1000毫升、pH值自然。将上述原料加入到配方中的自来水中，开动搅拌机，搅拌20min，使全部溶化，此为一级种子培养液。将搅拌溶化好的一级种子培养液按用量加入到三角瓶中，然后用6层纱布外加一层牛皮纸扎好瓶口，放入医用消毒器中灭菌，灭菌前，首先打开消毒器上的排气阀门等有少量蒸汽排出时关闭，当消毒器上的压力达到0.05兆帕时，打开消毒器上的排气阀门排气6-8min，然后关闭排气阀门，继续加温，当消毒器中的蒸汽压力达到0.1-0.12兆帕时开始计时，灭菌时间为25min，完毕后离开热源，让其自然降温，当消毒器上的压力表归零时，打开消毒器，取出灭好菌的培养基放入超净工作台中自然降温，当温度降至37℃时，将以上培养好的一级种子培养液移接到灭好菌的三角瓶培养液中，接种量分别是1％，即一级种子培养液100毫升，接入扩大菌种菌液为1毫升，完毕后用原有纱布及牛皮纸将瓶口封好，用手稍加摇动使接入的菌种与培养液混合均匀，然后放恒温箱中在37℃的条件下培养15小时即可，此称为一级种子培养菌液。

三、种子罐培养

首先打开各进出管道及无菌空气管道的阀门，通入0.12-0.14兆帕的蒸汽，让蒸汽与管道阀门联通并有少量蒸汽排出，通气40min，让管道内的蒸汽压力保持0.12-0.14兆帕，保持40min，然后关闭各进出管道阀门，备用。

种子罐及发酵罐的空罐灭菌，关闭各个阀门，打开罐底部的排污阀及罐夹层的排污阀，打开直接蒸汽阀门向罐内通入0.12-0.14兆帕的蒸汽，当罐内达到121℃时开始计时，灭菌时间为40min，然后关闭罐底部排污阀及夹层排污阀，罐中温度自然降至37℃备用。

种子罐培养培养基配方中各个组分的重量百分比葡萄糖9％、蛋白胨2％、尿素0.5％、磷酸氢二钾1％、玉米浆1％、乙酸钠0.2％、吐温800.4％、聚葡萄糖2％、聚醚消泡剂0.1％、自来水83.8％、pH值自然。

首先将配方中所使用的自来水投入到已空罐灭菌的种子罐中，开动搅拌机，分别加入配方中所需的原料，然后在不停的搅拌中通入蒸汽加温。首先利用罐夹层蒸汽加热到95℃时，再改用直接蒸汽加热，当罐中温度达到121℃时保持30min即可达到灭菌的效果，然后关闭蒸汽，开始通过罐夹层的自来水冷却降温，当罐内温度达到37℃时备用，此称为种子培养基。然后将以上培养好的一级菌种培养液在无菌条件下接种到种子罐中去，接种量分别是罐内培养基的1％，即可100kg种子罐培养基分别接入一级种子培养菌液1kg即可。然后盖好罐上的接种帽开始搅拌培养，培养条件：温度37℃，PH值自然，搅拌转速80转/min，罐压0.05兆帕，培养时间22小时即可达到要求，如果罐压降低，可通入无菌空气保持罐压，罐压过高可用罐顶的放气阀调整，获得种子罐培养菌种。

四、发酵培养

发酵培养基配方中，各组分的重量百分比：葡萄糖14％、蛋白胨1％、聚葡萄糖1％、低聚异麦芽糖8％、乙酸钠1％、吐温80 0.2％、马铃薯淀粉4％、共轭亚油酸0.5％、无水氯化钙0.2％、硫酸镁0.5％、玉米浆1％、聚醚消泡剂0.1％、自来水68.5％、共100kg。首先，将配方中所使用的自来水投入到已空罐灭菌的发酵罐中去，开动搅拌机，向发酵罐中投入配方中所使用的原料，然后通入蒸汽加热，首先利用夹层蒸汽加热到95℃，然后再改用直接蒸汽加热，当罐中温度达到121℃时开始计时，保持30min即可达到灭菌效果，然后通过夹层的自来水冷却降温，当罐中的温度降到37℃时开始接入菌种，接种前首先提高种子罐的罐压力达到0.1兆帕，发酵罐的罐压保持0.05兆帕，然后打开接种管道阀门，将种子罐培养好的种子通过压差的方式输送到发酵罐中去，然后关闭接种管道阀门。

接种量是每100kg发酵罐中的培养基接入种子罐培养的菌种3kg，培养条件：发酵温度37℃，搅拌转速120转/min，发酵时间17小时即可，罐压保持0.05兆帕，pH值自然，如果罐压降低可通入无菌空气保持罐压，罐压过高可用罐顶的排气阀调整，获得发酵菌液。

五、发酵乳杆菌菌泥的冷冻干燥

发酵液离心，收集湿菌泥，发酵完毕后将发酵菌液抽入到贮罐中，为了保证发酵液中菌体的完整性，选择离心转速。开动管式离心机，调整转速12000转/min，以每分钟进料15kg的进料速度进行离心，离心完毕后收集湿菌泥，将离心收集的湿菌泥进行冷冻干燥，离心后的发酵液可进行低温真空浓缩加入载体，真空干燥后复配成品用。

1、悬菌液的制备：取湿菌泥1000克，加入无菌蒸馏水3000毫升，脱脂奶粉300克，低聚果糖200克，98％的甘油100ml，麦芽糊精50克，低聚异麦芽糖300克。首先取配方中的水1500毫升加热至50℃-55℃，在搅拌下加入麦芽糊精，溶化后再加入配方中余下的水，然后再加入配方中其它的原料组分。充分搅拌30min(25℃-35℃的条件下搅拌)。即成为悬菌液，然后将该悬菌液放入30℃的恒温室或箱中恒温30min进行预冻。冷冻干燥前的预冻，将恒温30min的悬菌液分装于冻干盘中，然后放入冷冻干燥机的预冻室内在零下30℃-35℃的条件下预冻3小时，冻结后进行抽真空干燥。

真空干燥，将预冻好的料盘放入真空干燥室开始抽真空干燥，干燥条件为:真空度为2-5帕，温度-45℃，干燥室温度28℃，干燥时间45小时。冻干完毕后收集冻干料用无菌粉碎机粉碎成细度为100目的菌粉密封包装备用，获得发酵乳杆菌菌粉体。

2、离心发酵液的低温浓缩：浓缩条件，真空度0.06兆帕，温度55℃-65℃，浓缩至膏状，固形物含量80％，水分含量20％为止，然后加入药用玉米淀粉为载体，混匀后进行真空干燥。取发酵液浓缩膏1000克，加入药用玉米淀粉200克混匀放真空干燥箱中干燥，干燥条件：真空度0.06兆帕，温度55℃-60℃，干燥时间45小时，水分含量3％为合格，然后将其粉碎至100目的粉，密封包装备用，获得发酵乳杆菌菌粉体。其中，发酵液浓缩膏与药用玉米淀粉混合的质量分数比5：1-4：1。

本发明实施例具有改善记忆、提高免疫力的益生菌组合物的复配：取100目的发酵乳杆菌菌粉体5克、发酵乳杆菌代谢物粉体3克、微晶纤维素10克、药用玉米淀粉20克、菊粉5克、硬脂酸镁5克，其中，微晶纤维素、药用玉米淀粉，菊粉、硬脂酸镁为菌粉载体。将以上各物料放入固体搅拌混合机中混合均匀，然后在无菌条件下分装入胶囊中，装瓶或压片即为本发明实施例的组合物成品。

实施例2

本发明实施例具有改善记忆、提高免疫力的益生菌组合物成品的复配：取100目的发酵乳杆菌菌粉体9克、发酵乳杆菌代谢物粉体6克、微晶纤维素22克、药用玉米淀粉120克，菊粉12克、硬脂酸镁12克。

其中，发酵乳杆菌菌粉体和发酵乳杆菌代谢物粉体均为实施例1中方法中制备的发酵乳杆菌菌粉体和发酵乳杆菌代谢物粉体。

实施例3

本发明实施例具有改善记忆、提高免疫力的益生菌组合物成品的复配：取100目的发酵乳杆菌菌粉体9克、发酵乳杆菌代谢物粉体4克、微晶纤维素22克、药用玉米淀粉120克，菊粉8克、硬脂酸镁8克。

其中，发酵乳杆菌菌粉体和发酵乳杆菌代谢物粉体均为实施例1中方法中制备的发酵乳杆菌菌粉体和发酵乳杆菌代谢物粉体。

实施例4

本发明实施例具有改善记忆、提高免疫力的益生菌组合物成品的复配：取100目的发酵乳杆菌菌粉体11克、发酵乳杆菌代谢物粉体6克、微晶纤维素18克、药用玉米淀粉80克，菊粉8克、硬脂酸镁8克。

其中，发酵乳杆菌菌粉体和发酵乳杆菌代谢物粉体均为实施例1中方法中制备的发酵乳杆菌菌粉体和发酵乳杆菌代谢物粉体。

实施例5

本发明实施例有改善记忆、提高免疫力的益生菌组合物成品的复配：取100目的发酵乳杆菌菌粉体11克、发酵乳杆菌代谢物粉体6克、微晶纤维素18克、药用玉米淀粉80克，菊粉12克、硬脂酸镁12克。

其中，发酵乳杆菌菌粉体和发酵乳杆菌代谢物粉体均为实施例1中方法中制备的发酵乳杆菌菌粉体和发酵乳杆菌代谢物粉体。

实施例6

本发明实施例具有改善记忆、提高免疫力的益生菌组合物成品的复配：取100目的发酵乳杆菌菌粉体10.5克、发酵乳杆菌代谢物粉体5.5克、微晶纤维素20.5克、药用玉米淀粉100克，菊粉10.5克、硬脂酸镁11克。

其中，发酵乳杆菌菌粉体和发酵乳杆菌代谢物粉体均为实施例1中方法中制备的发酵乳杆菌菌粉体和发酵乳杆菌代谢物粉体。

对比例1

中国专利文献CN105641209A实施例3方法制备的具有提高免疫力功能的益生菌组合物记为组合物D，用水溶解服用，每人每次15g，一天三次服用。

测试例

1.本发明具有改善记忆、提高免疫力的益生菌组合物的效果验证

1.1实验设计

选择300例分成6组，每组30人，所有受试者的年龄阶段在5-16岁之间，分别使用实施例2-6制备的口服液以及组合物D，300例患者进入高海拔地区出现的唇干、头痛、呼吸急促、心慌、食欲减退等症状的受试者，排除以下：患有恶性疾病，如肿瘤、严重心、肝、肾疾病；甲状腺疾病。

实验期间，受试者尽量保持膳食和生活习惯不限。

将上述300例受试者每天早、中、晚饭后半小时服用本发明的具有改善记忆、提高免疫力的益生菌组合物10g，对比例的服用方式按照对比例记载的进行。连续服用1个月，其余时间不限制饮食，不改变生活方式。

本实验采用患者自身对照法评价效果。

1.2检测指标

受试者主观评价提高免疫力的效果。

受试实验前后自身对照身体变化，较以前有明显改善且连续超过3天(含3天)记为有效，大于5天记为显效，小于3天记为无效。

1.3实验结果

各组的具体实验结果如表1所示。

表1提高免疫力实验结果

由表1可知：本发明组合物有明显的提高免疫力的作用。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

序列表

<110> 山东环亿生物科技有限公司

<120> 具有改善记忆、提高免疫力的益生菌组合物及其制备方法

<130> GG18158546A

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1398

<212> DNA

<213> Lactobacillus fermentum

<400> 1

ccgactttgg atgttacaaa ctctcatggt gtgacgggcg gtgtgtacaa ggcccgggaa 60

cgtattcacc gcggcatgct gatccgcgat tactagcgat tccgacttcg tgcaggcgag 120

ttgcagcctg cagtccgaac tgagaacggt tttaagagat ttgcttgccc tcgcgagttc 180

gcgactcgtt gtaccgtcca ttgtagcacg tgtgtagccc aggtcataag gggcatgatg 240

atctgacgtc gtccccacct tcctccggtt tgtcaccggc agtctcacta gagtgcccaa 300

cttaatgctg gcaactagta acaagggttg cgctcgttgc gggacttaac ccaacatctc 360

acgacacgag ctgacgacga ccatgcacca cctgtcattg cgttcccgaa ggaaacgccc 420

tatctctagg gttggcgcaa gatgtcaaga cctggtaagg ttcttcgcgt agcttcgaat 480

taaaccacat gctccaccgc ttgtgcgggc ccccgtcaat tcctttgagt ttcaaccttg 540

cggtcgtact ccccaggcgg agtgcttaat gcgttagctc cggcactgaa gggcggaaac 600

cctccaacac ctagcactca tcgtttacgg catggactac cagggtatct aatcctgttc 660

gctacccatg ctttcgagtc tcagcgtcag ttgcagacca ggtagccgcc ttcgccactg 720

gtgttcttcc atatatctac gcattccacc gctacacatg gagttccact accctcttct 780

gcactcaagt tatccagttt ccgatgcact tctccggtta agccgaaggc tttcacatca 840

gaattagaaa accgcctgca ctctctttac gcccaataaa tccggataac gcttgccaca 900

tacgtattac cgcggctgat ggcacgtagt tagccgtgac tttctggtta aataccgtca 960

acgtatgaac agttactgtc atacgtgttt ttctttaaca acagagcttt acgagccgaa 1020

acccttcttc actcacgcgg tgttgctcca tcaggcttgc gcccattgtg gaagattccc 1080

tactgctgcc tcccgtagga gtatgggccg tgtctcagtc ccattgtggc cgatcagtct 1140

ctcaactcgg ctatgcatca tcgccttggt aggccattac cccaccaaca agctaatgca 1200

ccgcaggtcc atccagaagt gatagcgaga agccatcttt taagcgttgt tcatgcgaac 1260

aacgttgtta tgcggtatta gcatctgttt ccaaatgttg tcccccgctt ctgggcaggt 1320

tacctacgtg ttactcaccc gtccgccact cgttggcgac caaaatcaat caggtgcaag 1380

caccatcaat caattggc 1398

Claims (6)

1.一种具有改善记忆、提高免疫力的益生菌组合物，其特征在于，所述组合物包括发酵乳杆菌菌粉体以及所述发酵乳杆菌代谢物粉体；所述发酵乳杆菌保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为：CCTCCNO：M2018267；所述组合物还包括包含发酵乳杆菌的菌粉载体，所述菌粉载体包括微晶纤维素、药用玉米淀粉、菊粉、硬脂酸镁；其中，所述组合物包括以下质量份数原料：发酵乳杆菌菌粉体9-11份、发酵乳杆菌代谢物粉体4-6份、微晶纤维素18-22份、药用玉米淀粉80-120份、菊粉8-12份、硬脂酸镁8-12份。

2.如权利要求1所述的益生菌组合物，其特征在于，所述组合物包括以下质量份数的原料：发酵乳杆菌菌粉体10份、发酵乳杆菌代谢物粉体5份、微晶纤维素20份、药用玉米淀粉100份、菊粉10份、硬脂酸镁10份。

3.一种制备权利要求1或2所述的组合物的方法，其特征在于包括以下步骤：

将所述发酵乳杆菌通过扩大菌种培养、一级种子培养、种子罐培养以及发酵培养获得发酵乳杆菌发酵菌液；

将所述发酵乳杆菌发酵菌液离心，分别收集发酵乳杆菌菌泥及离心后的发酵液，并将所述发酵乳杆菌菌泥和离心后的发酵液冷冻干燥粉碎，获得发酵乳杆菌菌粉体以及发酵乳杆菌代谢物粉体；

将所述发酵乳杆菌菌粉体以及发酵乳杆菌代谢物粉体与菌粉载体混合，得到所述组合物。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述发酵乳杆菌菌粉体的制备方法具体为：将所述发酵乳杆菌菌泥、无菌水、脱脂奶粉、低聚果糖、甘油、麦芽糊精以及低聚异麦芽糖混合得到发酵乳杆菌悬菌液，将所述悬菌液冷冻干燥粉碎获得发酵乳杆菌菌粉体。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述悬菌液冷冻干燥在-35℃至-30℃的条件下预冻2-5小时，-50℃至-40℃真空冷冻干燥，粉碎成100目的发酵乳杆菌菌粉。

6.权利要求3所述的方法制备的组合物，在制备具有下述至少一种功能的产品中的应用：1）改善记忆力；2）提高免疫力；3）改善睡眠；4）提高注意力。