CN109588726A - 一种用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种制备用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物及其制备方法,其制备方法包括以下步骤:将干酪乳杆菌菌粉体、干酪乳杆菌的发酵代谢物粉体以及菌粉载体混合,得到混合物,即得到用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物。本发明用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物及其制备方法,经过实验证明,本发明的干酪乳杆菌组合物对睡眠质量差、失眠以及焦虑、抑郁的病人具有很好的疗效。
Description
技术领域
本发明涉及益生菌组合物技术领域,具体涉及一种用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合及其制备方法。
背景技术
随着社会的发展,人们在工作生活中的压力也越来越大,由于人们的生活习惯以及生活环境等因素,影响到睡眠,直接导致睡眠不足,进一步还可能导致发生肥胖、高血压、抑郁症等症状,以及导致糖尿病等慢性疾病的发生。针对睡眠质量差,失眠等症状,传统的治疗方法是依靠中西药等药物对人体进行调节。但是,一方面,药物的治疗效果并不明显,治疗成本高;另一方面,药物本身会对人体产生损害,长期服用药物,会导致机体产生其他有害症状。此外,解决睡眠不足的问题,目前还采用睡眠诱导剂,例如氨基酸提取物、植物提取物、香料等。但是,上述方法改善睡眠的效果并不明显。
目前,通过益生菌的培养获得有效治疗失眠的有效成分中,改善睡眠的效果不仅不明显,而且生产工艺不成熟,无法规模化生产,目标产物的产量低,生产效率低,亟待进一步改进。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物及其制备方法,用以解决现有对失眠、抑郁等症状改善效果不明显,使用成本高,产品生产工艺复杂,无法规模化生产的缺陷。
为实现上述目的,本发明提供一种制备用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物的方法,其包括以下步骤:
将干酪乳杆菌菌粉体、干酪乳杆菌的发酵代谢物粉体以及菌粉载体混合,得到混合物,即得到用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物;
所述干酪乳杆菌菌粉体按照包括如下步骤的方法制备得到:将干酪乳杆菌通过培养基培养后,离心获得干酪乳杆菌菌泥,将所述干酪乳杆菌菌泥经冷冻干燥处理,得到干酪乳杆菌菌粉体;
所述发酵代谢物粉体按照包括如下步骤方法制备得到:将通过培养基培养的干酪乳杆菌发酵液经离心后,获得离心发酵液,将所述离心发酵液浓缩干燥处理,得到发酵代谢物粉体。
优选的,所述干酪乳杆菌菌粉体的制备方法中,还包括将离心获得的干酪乳杆菌菌泥制备成干酪乳杆菌悬菌液,将所述干酪乳杆菌悬菌液冷冻干燥处理获得干酪乳杆菌菌粉体的步骤;
其中,所述悬菌液的制备过程为:将如下质量分数的原料混合:干酪乳杆菌菌泥800-1200份,水4500-5500份,脱脂奶粉500-700份,蔗糖50-150份、98%甘油150-250份,麦芽糊精100-200份以及低聚异麦芽糖400-600份,混合物在-35℃--30℃的条件下预冻2-5小时,-40℃--30℃真空冷冻干燥,粉碎成120目的干酪乳杆菌菌粉体。
优选的,所述发酵代谢物粉体的制备方法中,将所述发酵液浓缩至水分含量至多为30%形成发酵液浓缩膏,将所述发酵液浓缩膏与药用马铃薯淀粉以5:2-2:1混合,得到混合物,将该混合物干燥至水分含量至多为5%,粉碎至120目,得到代谢物物粉体。
优选的,所述菌粉载体包括微晶纤维素、药用玉米淀粉、低聚果糖以及硬脂酸镁;
所述组合物包括干酪乳杆菌菌粉体9-11份、所述发酵代谢物粉体4-6份、所述微晶纤维素18-22份、所述药用玉米淀粉80-120份、所述低聚果糖8-12份、所述硬脂酸镁8-12份。
优选的,所述干酪乳杆菌的通过培养基的培养方法包括以下步骤:
菌种扩大培养:将干酪乳杆菌菌种接种到培养基中,在培养箱中37℃培养24小时,得到扩大菌种液;
一级菌种种子培养:将所述扩大菌种液按照质量分数为1%的接种量接种到一级菌种培养液中,在37℃的条件下培养21小时,得到一级菌种培养液;
种子罐菌种培养:将所述一级菌种培养液接种到种子罐培养基中,37℃培养36小时,得到种子罐菌种;
发酵培养:将种子罐菌种接种到发酵培养基,37℃培养24小时,得到发酵菌种培养液。
优选的,所述发酵培养基的包括以下质量百分比的原料:葡萄糖9-13%、蛋白胨1-3%、海藻糖0.5-1.5%、低聚果糖4-6%、乳糖7-9%、乙酸钠0.5-1.5%、吐温80 0.1-0.3%、玉米淀粉3-5%、共轭亚油酸0.5-1.5%、硫酸镁0.5-1.5%、聚醚消泡剂0.1-0.3%、自来水57-74%。
优选的,所述干酪乳杆菌保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为:CCTCCNO:M2018301。
由所述方法制备的用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物。
本发明用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物及其制备方法,经过实验证明,本发明的干酪乳杆菌组合物对睡眠质量差、失眠以及焦虑、抑郁的病人具有很好的疗效;本发明的培养干酪乳杆菌的发酵培养基采用了最佳的组分,可以获得干酪乳杆菌的代谢产物中,具有较高含量的VK、色氨酸、叶酸含量,有效的改善其在改善睡眠中的作用。本发明的制备方法,更适宜规模化生产,有效提高了生产效率。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。
下面将更详细地描述本发明的具体实施例。提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明,并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。
如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为一开放式用语,故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本发明的较佳实施方式,然所述描述乃以说明书的一般原则为目的,并非用以限定本发明的范围。本发明的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。
实施例1干酪乳杆菌菌粉体及发酵代谢物粉体的制备
本发明中的干酪乳杆菌菌种的筛选:本发明的干酪乳杆菌菌种分离自新鲜的蜂蜜,经初筛、复筛而得到,为一株改善人体睡眠的菌株,经16S DNA鉴定为干酪乳杆菌,并将其保藏于中国典型培养物保藏中心,其保藏号为:CCTCCNO:M2018301。该干酪乳杆菌菌种的序列如SEQ ID 1.所示。
1、生产设备的准备
菌种培养箱、超净工作台、恒温培养箱、各种试管、三角瓶、种子罐、发酵罐、真空冷冻干燥机、三维搅拌机、低温粉碎机、真空包装机。
2、干酪乳杆菌菌种扩大培养
配制菌种扩大培养基:葡萄糖20克、蛋白胨11克、牛肉浸粉8克、乙酸钠1克、吐温800.5ml、尿素1.5克、水1000ml、pH值自然。对-80℃保存菌种的扩大培养。
将菌种扩大培养基中的葡萄糖等原料加入到1000ml水中,搅拌30min使之溶化,然后分装于18×180的试管中,每只试管装10ml,胶塞牛皮纸封口,培养基在医用消毒器中0.1-0.12兆帕,灭菌25min。在无菌条件下,将保藏菌种室温融化后,取以上灭好菌的试管培养基1支,将保存菌液1ml加入试管中,封好管口,轻轻摇匀,放入恒温培养箱中37℃静置培养24小时,得到菌种扩大培养液。
3、一级菌种种子培养
配制一级菌种种子培养基:葡萄糖40克、蛋白胨4克、牛肉浸粉2克、玉米浆0.5克、乙酸钠1.5克、吐温80 1ml、水1000ml、pH值自然。将上述原料加入到1000ml水中,搅拌20min,使其全部溶化,得到一级菌种种子培养液。
将搅拌溶化好的一级菌种种子培养液,按用量加入到三角瓶中,然后用6层纱布外加一层牛皮纸扎好瓶口,放入医用消毒器中灭菌,灭菌前首先打开消毒器上的排气阀门,等有少量蒸汽排出时关闭,当消毒器上的压力达到0.05兆帕时,打开消毒器上的排气阀门排气6-8min,然后关闭排气阀门,继续加温,当消毒器中的蒸汽压力达到0.1-0.12兆帕时,开始计时,灭菌时间为25min。完毕后,自然降温至压力表为零时,打开消毒器,取出灭好菌的培养基放入超净工作台中自然降温,当温度降至37℃时,将上述培养的扩大菌种液移接到三角瓶的灭菌培养液中,接种量分别是1%,即一级种子培养液100ml,接入扩大菌液为1ml,完毕后,将瓶口封好,用手稍加摇动使接入的菌种与一级种子培养液混合均匀,然后,置于恒温箱中37℃的条件下培养21小时,得到为一级菌种培养液。
4、种子罐菌种培养
首先,打开各进出管道及无菌空气管道的阀门,通入0.12-0.14兆帕的蒸汽,让蒸汽与管道阀门联通并有少量蒸汽排出,通气40min,让管道内的蒸汽压力保持0.12-0.14兆帕,保持40min,然后关闭各进出管道阀门,备用。
种子罐及发酵罐灭菌:关闭各个阀门,打开罐底部的排污阀及罐夹层的排污阀,打开蒸汽阀门向罐内通入0.12-0.14兆帕的蒸汽,当罐内达到121℃时开始计时,灭菌时间为40min,然后关闭罐底部排污阀及夹层排污阀,罐中温度自然降至37℃备用。
配制种子罐菌种培养基,培养基各组分的重量百分比:葡萄糖6%、蛋白胨2%、尿素1%、磷酸氢二钾0.5%、玉米浆1.5%、乙酸钠1%、吐温80 0.8%、聚葡萄糖1%、聚醚消泡剂0.2%、水86%、pH值自然。首先,将上述配方中所使用的水投入到已空罐灭菌的种子罐中,开动搅拌机,分别加入种子罐菌种培养基的各个组分,然后,在不停的搅拌中通入蒸汽加温,利用罐夹层蒸汽加热到95℃时,再改用直接蒸汽加热,当罐中温度达到121℃时,保持30min,关闭蒸汽,开始通过罐夹层的自来水冷却降温至37℃,备用,得到种子罐菌种培养基。
将上述一级菌种培养液在无菌条件下接种到种子罐菌种培养基,接种量分别是罐内培养基的1%,即100公斤种子罐菌种培养基接入一级菌种培养液1公斤即可。然后盖好接种帽,搅拌培养,培养条件为:温度37℃,pH值自然,搅拌转速80转/min,罐压0.05兆帕,培养时间36小时,得到种子罐菌种。
5、菌种的发酵培养
发酵培养基配方:培养基各组分的重量百分比:葡萄糖12%,蛋白胨2%、海藻糖1%、低聚果糖5%、乳糖8%、乙酸钠1%、吐温80 0.2%、玉米淀粉4%、共轭亚油酸1%、硫酸镁1%,聚醚消泡剂0.1%,自来水64.7%,共100公斤。
首先,将水加到发酵罐中去,开动搅拌机,向发酵罐中加入发酵培养基的配方的原料,然后通入蒸汽加热,利用发酵罐夹层蒸汽加热到95℃,再改用直接蒸汽加热,当发酵罐中温度达到121℃时,开始计时,保持30min,然后通过夹层的自来水冷却降温,使得罐中的温度降到37℃,接入菌种。接种前,提高种子罐的罐压力达到0.1兆帕,发酵罐的罐压保持0.05兆帕,然后打开接种管道阀门,将种子罐培养好的菌种在压差作用下将菌种输送到发酵罐中,关闭接种管道阀门。接种量为每100公斤发酵培养基接入种子罐菌种3公斤。培养条件为:发酵温度37℃,搅拌转速120转/min,发酵时间24小时,罐压保持0.05兆帕,pH值自然,得到发酵菌种培养液。
发酵完毕后,将发酵菌种培养液抽入到贮罐中,开动管式离心机,调整转速14000转/min,以每min进料15公斤的进料速度进行离心,离心完毕后,收集干酪乳杆菌湿菌泥,将离心收集的干酪乳杆菌湿菌泥进行冷冻干燥,离心后的发酵液可进行低温真空浓缩,加入载体,真空干燥后复配成品用。
6、干酪乳杆菌菌泥的冷冻干燥
悬菌液的制备:取干酪乳杆菌湿菌泥1000克,加入无菌蒸馏水5000ml,脱脂奶粉600克,蔗糖100克,质量分数98%的甘油200ml,麦芽糊精150克,低聚异麦芽糖500克。
首先将1500ml水加热至65℃-70℃,在搅拌下加入麦芽糊精,溶化后,再补加水至5000ml,向水中再加入悬菌液配方中其它的原料组分,15℃-20℃的条件下搅拌20min。得到悬菌液,将该悬菌液置于37℃的恒温室或箱中恒温60min进行预冻。冷冻干燥前的预冻,将悬菌液分装于冻干盘中,然后放入冷冻干燥机的预冻室内在零下30℃-35℃的条件下预冻4小时,冻结后,进行抽真空干燥。将预冻好的料盘放入真空干燥室开始抽真空干燥,干燥条件为:真空度为10-15帕,温度-35℃,干燥室温度30℃,干燥时间36小时。冻干完毕后,收集冻干料,将该冻干料用无菌粉碎机粉碎成细度为120目的干酪乳杆菌菌粉体密封包装备用,得到干酪乳杆菌菌粉体。
7、发酵代谢物粉体的制备
将离心分离得到的离心发酵液,进行低温浓缩,浓缩条件为:真空度0.06兆帕,温度60℃-65℃,浓缩至膏状,固形物含量70%,水分含量30%为止,得到发酵液浓缩膏,然后在发酵液浓缩膏中加入药用马铃薯淀粉为载体,混匀后进行真空干燥。
取发酵液浓缩膏1000克,加入药用马铃薯淀粉400克混匀放到真空干燥箱中干燥。干燥条件为:真空度0.06兆帕,温度55℃-60℃,干燥时间50小时,水分含量至多为5%,然后将其粉碎至120目的粉,得到代谢物粉体。
实施例2用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物的制备
本实施例中,菌粉载体包括微晶纤维素、药用玉米淀粉、低聚果糖以及硬脂酸镁;其中,用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物包括干酪乳杆菌菌粉体10克、发酵代谢物粉体5克、微晶纤维素20克、药用玉米淀粉100克、低聚果糖10克、硬脂酸镁10克。
将以上各物原料放入固体搅拌混合机中混合均匀,然后在无菌条件下分装入胶囊中,装瓶或压片即为本发明的用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物。
实施例3用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物的制备
本实施例中,用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物:干酪乳杆菌菌粉体9克、干酪乳杆菌的发酵代谢物粉体4克、微晶纤维素18克、药用玉米淀粉80克,低聚果糖8克、硬脂酸镁8克。
将以上各物原料放入固体搅拌混合机中混合均匀,然后在无菌条件下分装入胶囊中,装瓶或压片即为本发明的用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物。
实施例4用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物的制备
本实施例中,用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物:干酪乳杆菌菌粉体11克、干酪乳杆菌的发酵代谢物粉体6克、微晶纤维素22克、药用玉米淀粉120克,低聚果糖12克、硬脂酸镁12克。
将以上各物原料放入固体搅拌混合机中混合均匀,然后在无菌条件下分装入胶囊中,装瓶或压片即为本发明的用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物。
实施例5用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物的制备
本实施例中,用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物:干酪乳杆菌菌粉体9.5克、干酪乳杆菌的发酵代谢物粉体5.5克、微晶纤维素19.5克、药用玉米淀粉110克,低聚果糖10克、硬脂酸镁9.5克。
将以上各物原料放入固体搅拌混合机中混合均匀,然后在无菌条件下分装入胶囊中,装瓶或压片即为本发明的用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物。
对比例1
本对比例组合物与实施例2的区别在于,不含有干酪乳杆菌菌粉体、干酪乳杆菌发酵代谢物粉体,只含有微晶纤维素19.5克、药用玉米淀粉125克,低聚果糖10克、硬脂酸镁9.5克。
对比例2
从公司购买的现有的干酪乳杆菌,按照实施例1方法培养获得干酪乳杆菌菌粉体、干酪乳杆菌发酵代谢物粉体,并取干酪乳杆菌菌粉体9.5克、干酪乳杆菌发酵代谢物粉体5.5克、微晶纤维素19.5克、药用玉米淀粉125克,低聚果糖10克、硬脂酸镁9.5克。
测试例
1临床试验
1.1一般资料
选择2015年6月-2018年7月接受本试验药物组合物且具有睡眠障碍、抑郁、焦虑症状的病例共有1060人,其中,治疗1组:中老年男性350人,年龄33-78岁,平均年龄56岁;治疗2组:中老年女性350人,年龄34-80岁,平均年龄57岁;治疗3组:青少年男性180人,年龄14-18岁,平均年龄17岁;治疗4组:青少年女性180人,年龄15-19岁,平均年龄18;空白对照组190人,平均年龄30岁,对照组201人,平均年龄35.2岁,作为研究对象。每组患者在性别、年龄、病情类型等基本资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。
1.2评价标准
治愈:临床症状在治疗后基本改善或者全部消失;
有效:临床症状在治疗后得到改善;
无效:症状未明显减轻或加重。
5.3治疗方法
治疗1-4组:分别将实施例2至5的用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物供患者服用,每天1次,每次服用1剂/10g,每克干酪乳杆菌含活干酪乳杆菌50亿/CFU。
空白对照组:将对比例1的组合物供患者服用,每天1次,每次服用1剂/10g。
对照组:对比例2的组合物供患者服用,每天1次,每次
5.4结果
经过60天治疗,六组的临床治疗效果对比结果见表1
表1
本发明的改善睡眠的干酪乳杆菌组合物的实验研究中,实验组别治疗1组至治疗4组,选取的试验人员中,其存在着不同程度的睡眠障碍,睡眠时间少,睡眠质量差,记忆力和注意力下降,精神抑郁,心浮气躁的症状。
治疗1组中,男性350人在服用本发明的干酪乳杆菌组合物3天开始统计效果,服用3天有不同年龄的85人感觉睡眠质量改善。服用9天,有152人感觉明显改善睡眠质量。服用15天有289人改善睡眠质量极其明显,并有181人改善了坐立不安、心情郁闷都得到改善。服用60天有198人的睡眠完全改善,能正常睡眠,晨起后感觉大脑清晰、心情愉快、精力充沛;121人当中焦虑抑郁均解除,心情舒畅。共有31人在服用干酪乳杆菌组合物未能改善睡眠质量,焦虑抑郁也未得到改善。
治疗2组中,女性350人在服用3天开始统计效果,服用3天有不同年龄的235人感觉睡眠质量改善。服用9天,有298人感觉明显改善睡眠质量。服用15天有326人改善睡眠质量极其明显,并有247人改善了坐立不安、心情郁闷得到显著改善。服用60天有202人的睡眠质量完全改善并能正常睡眠,晨起后大脑清晰、精力充沛;焦虑、抑郁、坐立不安的131人也均解除,心情舒畅。试验中间共有17人在服用干酪乳杆菌在睡眠焦虑等方面未能显效。
治疗3组中,青少年男性180人在服用3天开始统计效果,服用3天有不同年龄的163人感觉睡眠质量改善。服用9天,有171人睡眠质量明显改善。服用15天有174人改善睡眠质量极其明显,并改善了174人当中的72人的坐立不安、焦虑、抑郁等症状。服用60天有174人的睡眠质量完全改善,感到精力充沛、记忆力增强;试验期间共有6人在服用干酪乳杆菌在睡眠、焦虑等方面未能显效。
治疗4组中,青少年女性180人在服用3天开始统计效果,服用3天有不同年龄的160人感觉睡眠质量改善。服用9天有172人睡眠质量明显改善。服用15天有176人改善睡眠质量极其明显,并改善了176人当中的82人的坐立不安、焦虑、抑郁等症状。服用60天有176人的睡眠质量完全改善,感到精力充沛、记忆力增强;试验期间服用干酪乳杆菌及其代谢产物共有4人在在睡眠、焦虑、抑郁等方面未能显效。
对照组中,共计190人在服用3天开始统计效果,服用3天有不同年龄的19人感觉睡眠质量改善。服用9天有25人睡眠质量明显改善。服用15天有21人改善睡眠质量极其明显。服用60天有12人的睡眠质量有一定改善,感到精力恢复、记忆力较好;试验期间178人在睡眠、焦虑、抑郁等方面未能显效。
本发明的用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物,其改善睡眠的效果明显,同时,基于干酪乳杆菌及其代谢产物中含有的有效成分,长期食用本发明的干酪乳杆菌组合物可以很好的改善人的情绪,消除焦虑以及治疗抑郁的效果。
实施例6本发明的发酵培养基的优化
表2本发明的发酵培养基的优化
本实施例的实验数据分析:通过大量的配比实验证明,当发酵培养基配料为:葡萄糖12%,蛋白胨2%、海藻糖1%、低聚果糖5%、乳糖8%、乙酸钠1%、吐温80 0.2%、玉米淀粉4%、共轭亚油酸1%、硫酸镁1%,聚醚消泡剂0.1%,自来水64.7%时发酵代谢中VK、色氨酸、叶酸含量分别为5.2%、3.3%、1.5%达到最高值,而发酵液中活菌量为400亿cfu/ml也达到最高值。本发明的发酵培养基,经过优化后,可以有效的提高干酪乳杆菌的代谢物中的VK、色氨酸、叶酸含量,提高干酪乳杆菌组合物在改善失眠中的作用。
虽然,上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 山东环亿生物科技有限公司
<120> 一种用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物及其制备方法
<130> GG18158540A
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 820
<212> DNA
<213> Lactobacillus casei
<400> 1
gaatatggct ctacggtagg acggctctct ccctaaaggg ttacgccacc ggcttcgggt 60
gttacaaact ctcatggtgt gacgggcggt gtgtacaagg cccgggaacg tattcaccgc 120
ggcgtgctga tccgcgatta ctagcgattc cgacttcgtg taggcgagtt gcagcctaca 180
gtccgaactg agaatggctt taagagatta gcttgacctc gcggtctcgc aactcgttgt 240
accatccatt gtagcacgtg tgtagcccag gtcataaggg gcatgatgat ttgacgtcat 300
ccccaccttc ctccggtttg tcaccggcag tcttactaga gtgcccaact aaatgctggc 360
aactagtcat aagggttgcg ctcgttgcgg gacttaaccc aacatctcac gacacgagct 420
gacgacaacc atgcaccacc tgtcattttg cccccgaagg ggaaacctga tctctcaggt 480
gatcaaaaga tgtcaagacc tggtaaggtt cttcgcgttg cttcgaatta aaccacatgc 540
tccaccgctt gtgcgggccc ccgtcaattc ctttgagttt caaccttgcg gtcgtactcc 600
ccaggcggaa tgcttaatgc gttagctgcg gcactgaagg gcggaaaccc tccaacacct 660
agcattcatc gtttacggca tggactacca gggtatctaa tcctgttcgc tacccatgct 720
ttcgagcctc agcgtcagtt acagaccaga cagccgcctt cgccactggt gttcttccat 780
atatctacgc atttcaccgc tacacatgga gttccactgt 820
Claims (8)
1.一种制备用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物的方法,其特征在于包括以下步骤:
将干酪乳杆菌菌粉体、干酪乳杆菌的发酵代谢物粉体以及菌粉载体混合,得到混合物,即得到用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物;
所述干酪乳杆菌菌粉体按照包括如下步骤的方法制备得到:将干酪乳杆菌通过培养基培养后,离心获得干酪乳杆菌菌泥,将所述干酪乳杆菌菌泥经冷冻干燥处理,得到干酪乳杆菌菌粉体;
所述发酵代谢物粉体按照包括如下步骤方法制备得到:将通过培养基培养的干酪乳杆菌发酵液经离心后,获得离心发酵液,将所述离心发酵液浓缩干燥处理,得到发酵代谢物粉体。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,
所述干酪乳杆菌菌粉体的制备方法中,还包括将离心获得的干酪乳杆菌菌泥制备成干酪乳杆菌悬菌液,将所述干酪乳杆菌悬菌液冷冻干燥处理获得干酪乳杆菌菌粉体的步骤;
其中,所述悬菌液的制备过程为:将如下质量分数的原料混合:干酪乳杆菌菌泥800-1200份,水4500-5500份,脱脂奶粉500-700份,蔗糖50-150份、98%甘油150-250份,麦芽糊精100-200份以及低聚异麦芽糖400-600份,混合物在-35℃--30℃的条件下预冻2-5小时,-40℃--30℃真空冷冻干燥,粉碎成120目的干酪乳杆菌菌粉体。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,
所述发酵代谢物粉体的制备方法中,将所述发酵液浓缩至水分含量至多为30%形成发酵液浓缩膏,将所述发酵液浓缩膏与药用马铃薯淀粉以5:2-2:1混合,得到混合物,将该混合物干燥至水分含量至多为5%,粉碎至120目,得到发酵代谢物粉体。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,
所述菌粉载体包括微晶纤维素、药用玉米淀粉、低聚果糖以及硬脂酸镁;
所述组合物包括干酪乳杆菌菌粉体9-11份、所述发酵代谢物粉体4-6份、所述微晶纤维素18-22份、所述药用玉米淀粉80-120份、所述低聚果糖8-12份、所述硬脂酸镁8-12份。
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,
所述干酪乳杆菌的通过培养基的培养方法包括以下步骤:
菌种扩大培养:将干酪乳杆菌菌种接种到培养基中,在培养箱中37℃培养24小时,得到扩大菌种液;
一级菌种种子培养:将所述扩大菌种液按照质量分数为1%的接种量接种到一级菌种培养液中,在37℃的条件下培养21小时,得到一级菌种培养液;
种子罐菌种培养:将所述一级菌种培养液接种到种子罐培养基中,37℃培养36小时,得到种子罐菌种;
发酵培养:将种子罐菌种接种到发酵培养基,37℃培养24小时,得到发酵菌种培养液。
6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,
所述发酵培养基的包括以下质量百分比的原料:葡萄糖9-13%、蛋白胨1-3%、海藻糖0.5-1.5%、低聚果糖4-6%、乳糖7-9%、乙酸钠0.5-1.5%、吐温80 0.1-0.3%、玉米淀粉3-5%、共轭亚油酸0.5-1.5%、硫酸镁0.5-1.5%、聚醚消泡剂0.1-0.3%、自来水57-74%。
7.如权利要求1至6任一项所述的方法,其特征在于,
所述干酪乳杆菌保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为:CCTCCNO:M2018301。
8.由权利要求5所述方法制备的用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物。
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