CN107319535B - 一种富含螺旋藻激酶的保健食品及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种富含螺旋藻激酶发酵产物的制备方法，包括步骤：1)将破壁螺旋藻加入水中配成螺旋藻发酵基质，灭菌处理；2)向螺旋藻发酵基质中接种枯草芽孢杆菌，进行深层液体通气发酵；3)在发酵液中接种酵母菌，进行低温静置发酵；4)将静置发酵后的发酵液进行低温真空浓缩，烘干，粉碎，即得。本发明还公开了采用上述富含螺旋藻激酶发酵产物制备的螺旋藻保健食品；所述螺旋藻保健食品不仅具有较高的螺旋藻激酶活性，而且成品藻腥味较小，口感较好，易被人接受。较传统的螺旋藻片，大幅的提高了其溶栓防栓，调节血脂，改变血液流变的特性。

Description

一种富含螺旋藻激酶的保健食品及其制备方法
技术领域
本发明属于微生物发酵领域，具体涉及一种富含螺旋藻激酶发酵产物的制备方法，及其包含螺旋藻激酶发酵产物的螺旋藻保健食品。
背景技术
激酶食品因其具有特殊的功能受到人们的广泛关注和开发利用，目前较常见的有纳豆激酶食品，螺旋藻激酶食品。其中纳豆(富含纳豆激酶)具有一定的历史，它是以大豆为原料添加枯草芽孢杆菌发酵制成，已被国家食药局列入普通食品。而富含螺旋藻激酶食品正在进一步开发中，它是以螺旋藻为底物添加枯草芽孢杆菌发酵而成的。
螺旋藻具有极高的营养价值，其独特的医疗保健功能和特有的生物活性成分受到生物学，医学，营养学的广泛关注，其蛋白质含量可达60-70％，而且还含有β-胡萝卜素，维生素E等多种维生素、矿物质和多种微量元素；其中螺旋藻具有增强机体非特异性免疫力，抗辐射，改善造血功能，延缓细胞衰老，促进人体外周血中NK细胞的活性和显著提高超氧化物歧化酶(SOD)的活力。枯草芽孢杆菌以具有丰富营养的螺旋藻作为底物进行发酵，可使其发酵产物富含螺旋藻激酶，螺旋藻激酶是一种具有生物活性的丝氨酸蛋白酶，可提高血管内皮细胞纤溶活性，具有较强的溶解血栓和抑制血栓形成的特性，且成本低廉,溶栓效果好,作用迅速,持续时间长,而且安全性好,无任何毒副作用，成为新一代理想的预防和治疗栓塞的生化药物。
中国专利CN102727538B公开了一种含螺旋藻活性肽、蛋白酶及激酶的螺旋藻及制备方法和应用，该方法采用单一菌种枯草芽孢杆菌进行发酵，发酵方式为间隔搅拌发酵，其步骤包括：将螺旋藻和水进行1：1.3混合，然后添加枯草芽孢杆菌进行发酵18-24h，其间每4h搅拌一次，发酵完成后置于3℃冰箱后熟70-100h。该方法采用的间隔搅拌发酵，会造成发酵浆中的通气不足，因枯草芽孢杆菌发酵过程中产生的氨不能及时排出，会造成螺旋藻浆的pH升高，从而抑制自身菌体的生长和螺旋藻激酶的产生，致使发酵成品螺旋藻激酶含量及活性较低。而且发酵成品中含有大量的氨和螺旋藻固有的藻腥味将造成成品口感比较差。
所以，改进螺旋藻激酶食品的发酵方法，寻找一种螺旋藻激酶活性含量高，且口感较好的螺旋藻激酶食品具有重大的现实意义。
发明内容
为了克服螺旋藻发酵成品中螺旋藻激酶活性、产品低口感差的缺点，本发明提供了一种螺旋藻激酶活性高，且口感较好的螺旋藻保健食品。
本发明的第一目的在于，提供一种富含螺旋藻激酶发酵产物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
1)将破壁螺旋藻加入水中配成螺旋藻发酵基质，对其进行灭菌处理；
2)向灭菌后的螺旋藻发酵基质中接种枯草芽孢杆菌，进行深层液体通气发酵；
3)向步骤2)通气发酵后的发酵液中接种酵母菌，进行低温静置发酵；
4)将步骤3)静置发酵后的发酵液进行低温真空浓缩，烘干，粉碎，即得富含螺旋藻激酶的发酵产物。
在步骤1)中将破壁螺旋藻配制成发酵基质并灭菌，再经过步骤2)的深层液体通气发酵，可促进枯草芽孢杆菌菌体繁殖及螺旋藻激酶的产生；步骤3)采用酵母菌低温静置发酵，可进一步促进枯草芽孢杆菌的裂解，释放胞内的螺旋藻激酶。
本发明所述破壁螺旋藻不限于制备方法，为市售机械破壁的螺旋藻粉末。
由于破壁后螺旋藻其胞内营养物质溶解在发酵液中，因此采用破壁螺旋藻进行发酵可更直接的被菌种利用。
在步骤1)中，所述破壁螺旋藻与所述水的添加质量比为1:2～4，本发明不限于使用水的种类，采用灭菌水效果较优。
当破壁螺旋藻和无菌水的比例为1:3时，配制成的发酵基质浓度适中，适宜菌体的生长的同时又有利于后续发酵液的低温真空浓缩；
所述灭菌处理具体为湿热灭菌；所述湿热灭菌的温度为105℃～115℃，灭菌时间为10～20min；优选为灭菌温度为110℃，灭菌时间为15min。
所述灭菌温度和时间的设定即能杀灭掉破壁螺旋藻中常见的微生物又能尽量减少螺旋藻营养物质的损失。
本发明进一步提出地，步骤2)中所述深层液体通气发酵在pH值为7.5～8.5、培养温度为35℃～39℃的条件下，以110～150r/min的转速，每升螺旋藻发酵基质每分钟通入0.8～1.6L无菌空气的通气量，发酵20～28小时；
优选地，所述通气量为每升螺旋藻发酵基质每分钟通入1.1～1.3L的无菌空气；
步骤2)中所述枯草芽孢杆菌的接种量为1％～5％，优选为2.5％～3.5％；本发明采用枯草芽孢杆菌菌种不限于种类，本发明优先使用来源于中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为:CICC10456的枯草芽孢杆菌。
在步骤2)中，由于采用深层液体通气发酵，向发酵罐中匀速通入无菌空气，相对合适的通气量不仅可给予枯草芽孢杆菌充足的氧气供应，而且还可以将此阶段产生的氨气带出发酵基质，防止发酵液pH升高，使发酵液的pH维持在相对稳定的水平，从而促进菌体繁殖和螺旋藻激酶的产生。
本发明进一步提出的，步骤3)中所述低温静置发酵在pH值为5.5～6.5、培养温度为8℃～16℃的条件下，培养时间为20～28小时；
优选地，所述培养温度为10℃～14℃；
进一步优选地，所述发酵液中添加了浓度为15％～30％的葡萄糖或蔗糖溶液，所述葡萄糖或蔗糖溶液占所述发酵液的质量百分比的5％～10％。
在步骤3)酵母菌静置发酵前，向发酵液中补充营养成分可加速酵母菌静置发酵。所述营养成分不限于葡萄糖或蔗糖。
步骤3)中所述酵母菌按的接种量为0.1％～0.5％，优选为0.15％～0.25％；本发明采用酵母菌菌种不限于种类；本发明优先使用的菌种酵母菌(酿酒酵母)来源于中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为:CICC 10005。
步骤3)酵母菌静置发酵过程中，由于发酵温度较低，枯草芽孢杆菌的生长受到抑制。新添加的酵母菌可在低温和无氧环境中进行缓慢发酵，其发酵产生的酸性物质，可加速枯草芽孢杆菌菌体的裂解，从而释放出更多的螺旋藻激酶，其发酵产生的酸性物质还可以中和枯草芽孢杆菌产生的氨类物质，改善发酵基质的口感，去除螺旋藻发酵产物的藻腥味。另外酵母菌还可利用枯草芽孢杆菌所不能利用的营养物质，从而产生各种激素和生物活性成分，改善螺旋藻发酵液的特性。
本发明进一步提出地，步骤4)中所述低温真空浓缩的温度为45℃～60℃，优选为50℃～55℃。干燥过程中，选择合适的温度即能保持干燥产物中有较高的螺旋藻激酶活力又能缩短干燥时间，提高干燥效率，从而降低生产成本。
作为优选方案，本发明提供一种富含螺旋藻激酶发酵产物的制备方法，包括以下步骤：
1)将破壁螺旋藻加入水中配成螺旋藻发酵基质，进行灭菌处理；
2)向灭菌后的螺旋藻发酵基质中按2.5％～3.5％的接种量接种枯草芽孢杆菌，在pH值为7.5～8.5、培养温度为35℃～39℃的条件下，以110～150r/min的转速，每升螺旋藻发酵基质每分钟通入1.1～1.3L的无菌空气的通气量，进行深层液体通气发酵20～28小时；
3)在步骤2)通气发酵后的发酵液添加占所述发酵液的质量百分比为5％～10％、浓度为15％～30％的葡萄糖溶液，再按0.15％～0.25％的接种量接种酵母菌，在pH值为5.5～6.5、温度为10℃～14℃的条件下，进行低温静置发酵20～28小时；
4)将步骤3)静置发酵后的发酵液在50℃～55℃的温度下，进行低温真空浓缩，烘干，粉碎，即得。
本发明的第二目的在于，提供一种上述制备方法所制得的富含螺旋藻激酶的发酵产物。
上述制备方法制备的富含螺旋藻激酶的发酵产物，可进一步制作成保健食品。添加合适份额的螺旋藻，不仅可以调整单位成品螺旋藻片中含有的螺旋藻激酶活力，而且还将螺旋藻具有的抗氧化提升免疫力的功能引入其中。
本发明的第三目的在于，提供一种包括上述发酵产物的保健食品，所述保健食品中的活性成分，包括上述所制得的富含螺旋藻激酶的发酵产物和螺旋藻。
其中，所述富含螺旋藻激酶的发酵产物与所述螺旋藻的质量比为：2～8:0.5～7，优选为5.5～6.5:0.5～3.5；
所述保健食品可以进一步制备成螺旋藻片、螺旋藻胶囊或螺旋藻糖果。
本发明进一步提出的，所述保健食品具体为一种螺旋藻片，按重量份计，所述螺旋藻片包括以下组分：
Figure BDA0001368586140000051
Figure BDA0001368586140000061
优选地，按重量份计，所述螺旋藻片包括以下组分：
Figure BDA0001368586140000062
所述螺旋藻片的制备方法，包括以下步骤：
1)将富含螺旋藻激酶的发酵产物、螺旋藻、羧甲基淀粉钠、二氧化硅、硬脂酸镁分别过20～40目筛，混合；
2)将过筛后的粉末按照等量递增法进行混合，制得混合粉，将混合粉进行压片，即得螺旋藻片。
本发明进一步提出的，根据保健效果，将所述富含螺旋藻激酶的发酵产物和螺旋藻按合适份额混合，还可以制成螺旋藻胶囊，按重量份计，所述螺旋藻胶囊包括以下组分：
Figure BDA0001368586140000063
优选地，按重量份计，所述螺旋藻片包括以下组分：
Figure BDA0001368586140000064
所述螺旋藻胶囊的制备方法，包括以下步骤：
1)将富含螺旋藻激酶的发酵产物、螺旋藻粉、淀粉、微粉硅胶、硬脂酸镁，充分混合后，制得混合粉；
2)用体积百分比为70％～90％的酒精与所述混合粉混和，充分搅拌，制得软材，过15～20目筛，制粒，置于50℃～55℃的条件下干燥，填充胶囊，即得。
本发明进一步提出的，所述保健食品具体为一种螺旋藻糖果，按重量份计，所述螺旋藻糖果包括以下组分：
Figure BDA0001368586140000071
优选地，按重量份计，所述螺旋藻糖果包括以下组分：
Figure BDA0001368586140000072
所述螺旋藻糖果的制备方法，包括以下步骤：
1)将富含螺旋藻激酶的发酵产物、螺旋藻、山楂粉、微晶纤维素、硬脂酸镁和甜味剂，分别过70～90目筛，充分混合后，制得混合粉；
2)用体积百分比为5％～10％的PVP乙醇与所述混合粉混合，充分搅拌，制得软材，过15～20目筛，置于55℃～65℃的条件下干燥，使其含水量小于4％；
3)在步骤2)制得的颗粒中加入体积百分比为1％的聚乙二醇6000，进行压片，即得。
本发明的第四目的在于，上述制得的螺旋藻片、螺旋藻胶囊或螺旋藻糖果在高粘血症上的保健应用。较传统的螺旋藻片，本发明制得保健食品可大幅的提高了其溶栓防栓，调节血脂，改变血液流变的特性。
本发明至少具有以下有益效果：
1)在深层液体通气发酵过程中，给予充足的通气量，带走发酵液中的氨，能够维持pH相对稳定，从而促进菌体的生长和螺旋藻激酶的产生。
2)在静置密封发酵过程中，酵母菌发酵产生的酸性物质，可加速枯草芽孢杆菌菌体的溶解促进螺旋藻激酶的释放，同时也可中和发酵液中的氨，去除发酵液中的藻腥味和特殊的臭味，提升产品的口感，更易被人接受。
3)本发明配比制成的螺旋藻片中不仅有螺旋藻原有的提升免疫力的功能，而且较强的螺旋藻激酶的活性使其具有调节血脂，溶栓防栓，改变血液流变的特性。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
本实施例是一种富含螺旋藻激酶发酵产物的制备方法，包括以下步骤：
1)种子液的制备:取一环活化过的菌种，接入装量为50mL种子培养基的250mL三角瓶中，进行培养。酵母菌的培养温度为28℃，摇床转速为120rpm，培养时间为12h；枯草芽孢杆菌的培养温度为37℃，摇床转速为160rpm条件下培养18h。
2)菌种扩培：分别取10mL种子液，接入盛有500mL发酵培养基的2.5L三角瓶中(接种量为2％,V/V)。酵母菌的培养温度为28℃，摇床转速为120rpm，培养时间为12h；枯草芽孢杆菌的培养温度为37℃，摇床转速为160rpm条件下培养12h。
3)发酵培养基灭菌：取5kg破壁螺旋藻干粉加入到15L无菌水中，搅拌均匀，装入到50L的发酵罐中，再将发酵罐内的pH调至7.5-8.0，然后进行湿热灭菌，灭菌温度是110℃，灭菌时间为15min。
4)深层液体通气发酵：将发酵罐内的液体冷却至37℃，在无菌条件下，按3％的比例将枯草芽孢杆菌菌种接种到发酵罐中进行一次发酵，发酵条件为：培养温度37℃，通气量为每L液体1.2L/min，培养时间为24h，转速为130r/min。
5)酵母菌进行静置发酵：将发酵罐内的发酵液温度降至为12℃，添加浓度为21％的葡萄糖溶液1L，pH调整到6，接入酵母菌进行二次发酵，接种量为0.2％，接入菌种后，搅拌均匀，静置发酵，在12℃条件下保温发酵24h。
6)将发酵产物进行52℃低温真空浓缩，再将浓缩产物在50-55℃条件下烘至含水量7％以下，烘干后粉碎，即得。
实施例2
本实施例是一种富含螺旋藻激酶发酵产物的制备方法，包括以下步骤：
步骤1)～3)与实施例1相同；
4)深层液体通气发酵：将发酵罐内的液体冷却至37℃，在无菌条件下，按3％的比例将枯草芽孢杆菌菌种接种到发酵罐中进行一次发酵，发酵条件为：培养温度37℃，通气量为每L液体1.6L/min，培养时间为24h，转速为130r/min。
5)酵母菌进行静置发酵：将发酵罐内的发酵液温度降至为10℃，添加浓度为21％的葡萄糖溶液1L，pH调整到6，接入酵母菌进行二次发酵，接种量为0.2％，接入菌种后，搅拌均匀，静置发酵，在12℃条件下保温发酵24h。
步骤6)与实施例1相同；
实施例3
本实施例是一种富含螺旋藻激酶发酵产物的制备方法，包括以下步骤：
步骤1)～3)与实施例1相同；
4)深层液体通气发酵：将发酵罐内的液体冷却至37℃，在无菌条件下，按3％的比例将枯草芽孢杆菌菌种接种到发酵罐中进行一次发酵，发酵条件为：培养温度37℃，通气量为每L液体0.8L/min，培养时间为24h，转速为130r/min。
5)酵母菌进行静置发酵：将发酵罐内的发酵液温度降至为16℃，添加浓度为21％的葡萄糖溶液1L，pH调整到6，接入酵母菌进行二次发酵，接种量为0.2％，接入菌种后，搅拌均匀，静置发酵，在12℃条件下保温发酵24h。
(6)将发酵产物进行55℃低温真空浓缩，再将浓缩产物在50-55℃条件下烘至含水量7％以下，烘干后粉碎，即得。
实施例4
本实施例是一种富含螺旋藻激酶发酵产物的制备方法，包括以下步骤：
步骤1)、2)与实施例1相同；
3)发酵培养基灭菌：取5kg破壁螺旋藻干粉加入到15L无菌水中，搅拌均匀，装入到50L的发酵罐中，再将发酵罐内的pH调至7.5-8.0，然后进行湿热灭菌，灭菌温度是115℃，灭菌时间为20min。
4)深层液体通气发酵：将发酵罐内的液体冷却至37℃，在无菌条件下，按3％的比例将枯草芽孢杆菌菌种接种到发酵罐中进行一次发酵，发酵条件为：培养温度37℃，通气量为每L液体1.0L/min，培养时间为24h，转速为130r/min。
5)酵母菌进行静置发酵：将发酵罐内的发酵液温度降至为10℃，添加浓度为21％的葡萄糖溶液1L，pH调整到6，接入酵母菌进行二次发酵，接种量为0.2％，接入菌种后，搅拌均匀，静置发酵，在12℃条件下保温发酵24h。
6)将发酵产物进行52℃低温真空浓缩，再将浓缩产物在50-55℃条件下烘至含水量7％以下，烘干后粉碎，即得。
实施例5
本实施例是采用实施例1所制得富含螺旋藻激酶的发酵产物为原料，制备一种螺旋藻片的方法，包括以下步骤：
1)螺旋藻片的配方：富含螺旋藻激酶的发酵产物60份，螺旋藻粉30份，羧甲基淀粉钠7份，二氧化硅2份，硬脂酸镁1份。
2)将烘干粉碎后的螺旋藻发酵产物，羧甲基淀粉钠、螺旋藻粉、二氧化硅、硬脂酸镁、过30目不锈钢筛。
3)混合：将过筛的各物料，按照等量递增法进行混合，得混合粉。将混合粉进行压片，即得螺旋藻片，每片净重500g。
实施例6
本实施例是采用实施例2所制得富含螺旋藻激酶的发酵产物为原料，按照实施例5相同的方式制备一种螺旋藻片。
实施例7
本实施例是采用实施例3所制得富含螺旋藻激酶的发酵产物为原料，按照实施例5相同的方式制备一种螺旋藻片。
实施例8
本实施例是采用实施例4所制得富含螺旋藻激酶的发酵产物为原料，按照实施例5相同的方式制备一种螺旋藻片。
实施例9
本实施例是采用实施例1所制得富含螺旋藻激酶的发酵产物为原料，制备一种螺旋藻胶囊的方法，包括以下步骤：
1)螺旋藻胶囊剂配方：富含螺旋藻激酶的发酵产物60份，螺旋藻粉30份，淀粉7份，微粉硅胶2份，硬脂酸镁1份。
2)混合：按配方比例称取各原料，置入混合机中进行混合30min，混匀，出料，制得总混合粉。
3)用体积浓度80％食用酒精与混合粉混合搅拌30min，制软材，软材过18目筛制粒，置于52℃条件下干燥。
4)填充胶囊，控制每粒胶囊内容物重量500mg。
实施例10
本实施例是采用实施例1所制得富含螺旋藻激酶的发酵产物为原料，制备一种螺旋藻糖果的方法，包括以下步骤：
1)螺旋藻压片糖果原料配方：富含螺旋藻激酶的发酵产物30份，螺旋藻20份，山楂粉30份，微晶纤维素9.3份，硬脂酸镁0.6份，甜味剂0.1份。
2)制粒：山楂粉与各辅料分别粉碎过80目筛，按比例混合均匀，加入适量5％的PVP乙醇溶液制软材，过18目筛造粒，将颗粒在60℃条件干燥，至含水量在4％以下。
3)压片：颗粒中加入1％的聚乙二醇6000，进行压片，每片1000mg，得到螺旋藻压片糖果。
本实施例中从物料粉碎、混合到压片是十分洁净区内进行操作。对比例1
本实施例是一种富含螺旋藻激酶发酵产物的制备方法，包括以下步骤：
步骤1)～4)与实施例1相同；
5)发酵液的后熟:将经过枯草芽孢杆菌发酵后的螺旋藻浆置于4℃冰箱中后熟48h。
6)将发酵产物进行52℃低温真空浓缩，再将浓缩产物在50-55℃条件下烘至含水量7％以下，烘干后粉碎，即得。
按实施例5相同的制备方法制得螺旋藻片。
对比例2
将实施例1制得富含螺旋藻激酶的发酵产物为原料，制备一种螺旋藻片：配方如下(单位g)：
富含螺旋藻激酶的发酵产物30份，螺旋藻粉60份,羟甲淀粉钠7份，二氧化硅2份，硬脂酸镁1份。
按照实施例5相同的制备方法制得螺旋藻片。
对比例3
本实施例是一种富含螺旋藻激酶发酵产物的制备方法，包括以下步骤：
步骤1)～3)与实施例1相同；
4)深层液体通气发酵：将发酵罐内的液体冷却至37℃，在无菌条件下，按3％的比例将枯草芽孢杆菌菌种接种到发酵罐中进行一次发酵，发酵条件为：培养温度37℃，通气量为每L液体0.4L/min，培养时间为24h，转速为20r/min。
步骤5)～6)与实施例1相同；
按实施例5相同的制备方法制得螺旋藻片。
实验例1螺旋藻片溶栓活性的测定
材料：实施例5～实施例8、对比例1～对比例3制得的螺旋藻片。
方法：采用琼脂糖-纤维蛋白平板法测螺旋藻激酶溶栓活性的大小。
在纤维蛋白平板上，分别加入含2000，4000，6000，8000，10000U/1ml的蚓激酶标准溶液10ul，37℃恒温培养18h，以蚓激酶标准品的单位数为横坐标，蚓激酶标准品溶圈两垂直直径的乘积为纵坐标，得二次回归方程。
工作液是由0.01mol/L Na2HPO4和0.9％NaCl溶液组成，取1粒样品螺旋藻片，将样品粉碎，加入工作液并定容到10ml，混匀。精密吸取0.5ml上清液，加入0.5ml工作液，混匀，即为样品溶液。取10ul按照上述方法测定样品溶液的溶圈两垂直直径的乘积，并计算出样品效价单位数。
结果：螺旋藻激酶酶活测定结果如表1所示
表1实验组螺旋藻激酶测定结果
实验组 螺旋藻激酶活性(万U/粒)
实施例5 2.98
实施例6 2.69
实施例7 2.43
实施例8 2.47
对比例1 2.22
对比例2 1.84
对比例3 1.12
由表1可知，实施例5～8与对比例1相比，螺旋藻激酶活性高，说明缺少酵母菌静置发酵将严重影响发酵液中螺旋藻激酶的含量；实施例5～8与对比例2相比，说明富含螺旋藻激酶的发酵产物添加量的多少将直接影响螺旋藻片的螺旋藻激酶的含量；实施例5～8与对比例3相比，说明在深层液体发酵过程中，缺少氧不利于螺旋藻激酶的产生。实施例5中，推算经二次发酵的螺旋藻基质干粉其激酶酶活可达9.93万U/g。
实验例2螺旋藻片口感的评价
以12人的感官评价评定螺旋藻片的口感，即采用实施例5～6和对比例1～2制备的螺旋藻片样品放置于鼻孔下方嗅其味道，然后将螺旋藻片样品置于口中，品其味道。12人中若有≥8人选择有，则判定有此气味，若≥8人选择无，则判定无此气味，其它情况则判定为无效。其口感评价结果如表2所示。
表2 12人对实验组螺旋藻片口感评价结果
实验组 有无藻腥味 有无特殊臭味 有无醇香味
实施例5 无 无 有
实施例6 无 无 有
对比例1 有 有 无
对比例2 有 无 有
从结果可以看出，实施例5～6与对比例相比，说明酵母菌静置发酵可除去发除去发酵液中的藻腥味和特殊臭味，提升螺旋藻片成品的口感。实施例5～6与对比例2相比，说明螺旋藻片中螺旋藻的添加比例也会影响成品螺旋藻片的藻腥味。
实验例3螺旋藻片对大鼠血液流变化的影响
材料：实施例5、实施例6的螺旋藻片
实验对象：选取雄性Wistar大鼠50只，年龄为16周左右，购自北大医学院实验动物中心。
方法：将大鼠饲养1周后，随机分为5组，每组10只。分别为空白组，模型组，对照组(山楂降脂片)，实施例1，实施例2。空白组饲喂基础饲料，其余组饲喂高脂饲料(基础饲料78.8％，猪油10％，蛋黄粉10％，胆固醇1％，胆盐0.2％)。各组给药量如下：
空白组：灌胃等体积的水；
对照组：灌胃2g/kg山楂降脂片；
模型组：灌胃等体积的水；
实施例5组：灌胃2g/kg实施例5制备的螺旋藻片；
实施例6组：灌胃2g/kg实施例6制备的螺旋藻片；
连续灌胃15d，禁食12h，断头取血，测定大鼠全血黏度，分离血清检测血清中的TC(总胆固醇)，TG(甘油三脂)，HDL(高密度脂蛋白胆固醇),LDL(低密度脂蛋白胆固醇)的含量。
结果：全血黏度的结果如表3所示，大鼠血清的TC，TG，HDL,LDL的含量如表4所示。
表3不同处理方法对大鼠血液流变化的影响(mPa·s)
组 120(/s) 70(/s) 30(/s)
空白组 4.57±0.02 5.87±0.04 8.44±0.05
模型组 4.74±0.15<sup>*</sup> 6.03±0.12<sup>*</sup> 8.64±0.15<sup>*</sup>
对照组 4.60±0.06<sup>△△</sup> 5.91±0.05<sup>△</sup> 8.49±0.10<sup>△</sup>
实施例5组 4.59±0.09<sup>△△</sup> 5.89±0.06<sup>△</sup> 8.50±0.13<sup>△</sup>
实施例6组 4.62±0.11<sup>△</sup> 5.92±0.12 8.54±0.18
注：*表示与空白组相比P<0.05；△表示与模型组相比P<0.05；△△表示与模型组相比P<0.01。
与空白组相比，模型组大鼠全血黏度在切变率为120/s时显著升高(P<0.05)，模型成立。与模型组相比对照组、实施例5组、实施例6组血液黏度均显著降低(P<0.05，P<0.01)。说明螺旋藻激酶片可有效的抑制大鼠全血粘度上升。
表4各组大鼠血清中TC，TG，HDL，LDL的含量(mmol/L)
组别 TC(mmol/L) TG(mmol/L) HDL(mmol/L) LDL(mmol/L)
空白组 1.58±0.22 0.74±0.14 1.30±0.18 0.29±0.08
模型组 1.95±0.20<sup>**</sup> 0.92±0.12<sup>*</sup> 0.86±0.11<sup>**</sup> 0.38±0.10
对照组 1.64±0.25<sup>△</sup> 0.80±0.17 1.00±0.13<sup>△</sup> 0.32±0.05
实施例5组 1.66±0.22<sup>△</sup> 0.79±0.17 0.96±0.12<sup>△</sup> 0.33±0.07
实施例6组 1.68±0.20<sup>△</sup> 0.82±0.19 0.94±0.10<sup>△</sup> 0.35±0.08
注：*表示与空白组相比P<0.05；**表示与空白组相比P<0.01；△表示与模型组相比P<0.05。
与空白组相比，模型组血清中TC，TG，LDL含量均升高，HDL含量降低，其中TC，TG和HDL差异性显著，说明高脂大鼠模型成立。实施例5～6组与模型组相比TC，HDL含量差异性显著，说明螺旋藻片具有明显降低大鼠血清中总胆固醇含量和提升血清中高密度脂蛋白胆固醇的含量。
实验例4螺旋藻片对高粘血症病人的影响
受测人临床诊断为高粘血症，血液血脂含量超出正常水平，症状表现为易疲劳，头昏，失眠，心闷。让受试者每日早晚各服一次，每次三片，测试期间保持日常饮食和生活习惯，服用三个月后，血液中血脂含量降低至正常水平，其失眠、头昏症状消失，高粘血症临床症状明显好转。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (25)

1.一种富含螺旋藻激酶发酵产物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）将破壁螺旋藻加入水中配成螺旋藻发酵基质，对其进行灭菌处理；
2）向灭菌后的螺旋藻发酵基质中接种枯草芽孢杆菌，进行深层液体通气发酵；
3）向步骤2）通气发酵后的发酵液中接种酵母菌，进行低温静置发酵；
4）将步骤3）静置发酵后的发酵液进行低温真空浓缩，烘干，粉碎，即得富含螺旋藻激酶的发酵产物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1）中所述破壁螺旋藻与所述水的添加质量比为1:2~4；
和/或，所述灭菌处理为湿热灭菌；所述湿热灭菌的温度为105℃~115℃，所述湿热灭菌的时间为10~20min。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述破壁螺旋藻与所述水的添加质量比为1:3。
4.根据权利要求1~3任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤2）中所述深层液体通气发酵在pH值为7.5~8.5、培养温度为35℃~39℃的条件下，以110~150r/min的转速，每升螺旋藻发酵基质每分钟通入0.8~1.6L无菌空气的通气量，发酵20~28小时；
和/或，所述枯草芽孢杆菌的接种量为1%~5%。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述通气量为每升螺旋藻发酵基质每分钟通入1.1~1.3L的无菌空气。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌的接种量为2.5%~3.5%。
7.根据权利要求1~3任一所述的制备方法，其特征在于，步骤3）中所述低温静置发酵在pH值为5.5~6.5、培养温度为8℃~16℃的条件下，培养时间为20~28小时；
和/或，所述酵母菌的接种量为0.1%~0.5%。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤3）中所述低温静置发酵在pH值为5.5~6.5、培养温度为8℃~16℃的条件下，培养时间为20~28小时；和/或，所述酵母菌的接种量为0.1%~0.5%。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述培养温度为10℃~14℃。
10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述发酵液中添加了浓度为15%~30%的葡萄糖或蔗糖溶液，所述葡萄糖或蔗糖溶液占所述发酵液的质量百分比的5%~10%。
11.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述酵母菌的接种量为0.15%~0.25%。
12.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述培养温度为10℃~14℃。
13.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述发酵液中添加了浓度为15%~30%的葡萄糖或蔗糖溶液，所述葡萄糖或蔗糖溶液占所述发酵液的质量百分比的5%~10%。
14.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述酵母菌的接种量为0.15%~0.25%。
15.权利要求1~14任一所述制备方法所制得的富含螺旋藻激酶的发酵产物。
16.一种包括权利要求15所述发酵产物的保健食品，其特征在于，包括权利要求15所述的富含螺旋藻激酶的发酵产物和螺旋藻；所述发酵产物与所述螺旋藻的质量比为：2~8:0.5~7。
17.根据权利要求16所述的保健食品，其特征在于，所述发酵产物与所述螺旋藻的质量比为5.5~6.5:0.5~3.5。
18.根据权利要求16或17所述的保健食品，其特征在于，所述保健食品为螺旋藻片、螺旋藻胶囊或螺旋藻糖果。
19.根据权利要求18所述的保健食品，其特征在于，所述螺旋藻片，按重量份计，包括以下组分：
富含螺旋藻激酶的发酵产物 20~80份
螺旋藻 20~70份
羟甲基淀粉钠 5~10份
二氧化硅 1~4份
硬脂酸镁 0.5~4份。
20.根据权利要求19所述的保健食品，其特征在于，按重量份计，所述螺旋藻片包括以下组分：
富含螺旋藻激酶的发酵产物 55~65份
螺旋藻 25~35份
羧甲基淀粉钠 6~8份
二氧化硅 1.5~2.5份
硬脂酸镁 0.8~1.2份。
21.根据权利要求18所述的保健食品，其特征在于，所述螺旋藻胶囊，按重量份计，包括以下组分：
富含螺旋藻激酶的发酵产物 20~80份
螺旋藻 20~70份
淀粉 5~10份
微粉硅胶 1~4份
硬脂酸镁 0.5~4份。
22.根据权利要求21所述的保健食品，其特征在于，按重量份计，所述螺旋藻胶囊包括以下组分：
富含螺旋藻激酶的发酵产物 55~65份
螺旋藻 25~35份
淀粉 6~8份
微粉硅胶 1.5~2.5份
硬脂酸镁 0.8~1.2份。
23.根据权利要求18所述的保健食品，其特征在于，所述螺旋藻糖果，按重量份计，包括以下组分：
富含螺旋藻激酶的发酵产物 20~70份
螺旋藻 5~30份
山楂粉 10~40份
微晶纤维素 8~12份
硬脂酸镁 0.5~2份
甜味剂 0.05~0.5份。
24.根据权利要求23所述的保健食品，其特征在于，按重量份计，所述螺旋藻糖果包括以下组分：
富含螺旋藻激酶的发酵产物 55~65份
螺旋藻 5~15份
山楂粉 15~25份
微晶纤维素 9~10份
硬脂酸镁 0.5~1份
甜味剂 0.05~0.2份。
25.权利要求16~24任一项所述的保健食品在制备用于治疗高粘血症的产品中的应用。
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