CN116617273A - 副干酪乳杆菌lc86在制备用于预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的产品中的应用 - Google Patents

副干酪乳杆菌lc86在制备用于预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的产品中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供副干酪乳杆菌LC86在制备用于预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的产品中的应用。所述副干酪乳杆菌菌株能够显著改善与衰老相关的肌肉萎缩，具体表现在：(1)显著降低SAMP小鼠的衰老评分；(2)显著提高SAMP小鼠的前肢握力和四肢悬挂能力；(3)显著提升腓肠肌肌糖原水平，降低腓肠肌蛋白质羰基含量；(4)降低小鼠血清促炎细胞炎症因子TNF‑ɑ、IL‑6和MCP1水平，增加血清抑炎细胞炎症因子IL‑10水平；(5)显著提升小鼠肝脏SOD酶活性，增加肝脏GSH含量，增加肝脏CAT酶水平，降低肝脏MDA水平。

Description

副干酪乳杆菌LC86在制备用于预防、缓解或治疗与衰老相关 的肌肉萎缩的产品中的应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，涉及一种副干酪乳杆菌的新用途，具体涉及副干酪乳杆菌LC86在制备用于预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的产品中的应用。
背景技术
随着全球范围内老龄化及相关疾病问题的日益凸显，肌肉减少症作为一种常见于老年人的疾病，表现为肌肉质量和功能的丧失。据报道，在80岁及以上的人群中，超过30％患有肌肉减少症。该疾病不仅对老年人的生活质量产生负面影响，如增加跌倒、残疾、骨折和死亡的风险，同时也增加了生活质量下降的风险。因此，维持肌肉功能成为健康老龄化的重要组成部分。研究表明，肠道微生物群失调常见于老年人群体，导致炎症反应和代谢抵抗，而肠道微生物群的年龄相关变化成分可能通过肠道-肌肉轴导致老年人肌肉减少症。越来越多的研究证据支持肌肉功能受肠道微生物群调节的观点。
乳酸菌作为一种益生菌，广泛存在于人体肠道中，被认为是肠道微生态平衡中的重要成员之一，其良好的黏附性有利于维持肠道菌群的结构，并有效保护肠粘膜形态和代谢功能的完整性。乳酸菌在预防和治疗肠道菌群失调方面发挥着重要作用，其主要机制通过空间位阻作用实现。此外，益生乳酸菌在肠道中可产生多种抑菌成分，如酸性物质、抗菌肽和生物酶，从而抑制病原菌的生长和活性。由于乳酸菌具有安全健康、无副作用的特点，并能在动物体内定植并发挥多种有益的健康效果，乳酸菌微生态制剂已被广泛应用于临床补充剂领域。
与年龄相关的数据之一是肌肉损失，包括肌肉质量的损失和肌肉功能的损失。尽管与年龄相关的肌肉退化的原因尚不清楚，但一些科学家认为，氧化应激和活性氧等因素可能会影响细胞信号通路，促进蛋白质水解，并抑制肌肉纤维中的蛋白质合成。另一种解释是由炎症细胞因子IL-6和TNF-α引起的，这些因子可能诱导肌肉分解。目前，尚无特定针对与衰老相关的肌肉萎缩的药物。根据与衰老相关的肌肉萎缩的发病机制和临床途径，治疗与衰老相关的肌肉萎缩可选择抗炎细胞因子、抗氧化剂以及改变肠道菌群的策略。因此，开发更多的益生菌产品以改善与衰老相关的肌肉萎缩问题具有重要意义。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供副干酪乳杆菌LC86在制备用于预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的产品中的应用。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供副干酪乳杆菌LC86在制备用于预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的产品中的应用。
所述副干酪乳杆菌命名为副干酪乳杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)LC86菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2020年7月20日，保藏编号为CGMCC No.1.12731，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本发明创造性地发现副干酪乳杆菌菌株能够显著改善与衰老相关的肌肉萎缩，具体表现在：(1)显著降低SAMP小鼠的衰老评分；(2)显著提高SAMP小鼠的前肢握力和四肢悬挂能力；(3)显著提升腓肠肌肌糖原水平，降低腓肠肌蛋白质羰基含量；(4)降低小鼠血清促炎细胞炎症因子TNFɑ、IL-6和MCP1水平，增加血清抑炎细胞炎症因子IL-10水平；(5)显著提升小鼠肝脏SOD酶活性，增加肝脏GSH含量，增加肝脏CAT酶水平，降低肝脏MDA水平。
优选地，在预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的产品中，副干酪乳杆菌LC86活菌数不低于1×109CFU/mL或1×109CFU/g，可为1×109CFU/g(CFU/mL)、5×109CFU/g(CFU/mL)、1×1010CFU/g(CFU/mL)、5×1010CFU/g(CFU/mL)、1×1011CFU/g(CFU/mL)、5×1011CFU/g(CFU/mL)、1×1012CFU/g(CFU/mL)等。上述数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
第二方面，本发明提供一种预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的益生菌剂，所述益生菌剂中的菌株包括副干酪乳杆菌LC86。
由于副干酪乳杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)LC86菌株为益生菌，因此其在用于制备预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的相关产品时，安全性高，且不易产生抗药性。
优选地，所述的预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的益生菌剂中还包括长双歧杆菌BL21。
所述长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)BL21菌株于2015年1月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.10452，具体保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
由于长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)BL21菌株为益生菌，因此其在用于制备预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的相关产品时，安全性高，且不易产生抗药性。
本发明创造性地开发了一种全新的益生菌复配方式，将副干酪乳杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)LC86菌株和长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)BL21菌株进行复配，发现两者存在潜在的相互作用，能够相互配合，在改善衰老相关的肌肉萎缩的功效上协同增效，在使用菌量一致的情况下，与单一的LC86菌株或单一的BL21菌株相比，两种菌的复配在上述功效的发挥显著提高，获得了本领域技术人员难以预见的技术效果。
优选地，所述预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的益生菌剂中副干酪乳杆菌LC86与长双歧杆菌BL21的活菌数之比为(2-4):1。
所述预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的益生菌剂中副干酪乳杆菌LC86与长双歧杆菌BL21的活菌数之比可以为2:1、3:1、7:2、4:1等。上述数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
在所述预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的益生菌剂中，副干酪乳杆菌LC86与长双歧杆菌BL21两种菌株在满足上述特定的活菌数比例关系时具有更优的协同增效的效果。
优选地，所述的预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的益生菌剂中副干酪乳杆菌LC86和长双歧杆菌BL21以冻干粉的形式存在。
优选地，所述冻干粉由包括如下步骤的方法制备得到：
将副干酪乳杆菌LC86与长双歧杆菌BL21分别接种于培养基中培养得菌液，离心，收集菌体，与冻干保护剂混合，冻干，即得；
优选地，所述发酵培养基包含葡萄糖、蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉、K2HPO4、柠檬酸氢二铵、乙酸钠、MgSO4、MnSO4或吐温80。
优选地，所述发酵培养基中的组分以浓度计包括葡萄糖20-40g/L、蛋白胨10-15g/L、牛肉浸粉5-8g/L、酵母浸粉3-7g/L、K2HPO4 2-3g/L、柠檬酸氢二铵2-3g/L、乙酸钠3-5g/L、MgSO4 0.3-0.5g/L、MnSO4 0.05-0.1g/L和吐温80 0.5-1.5g/L。
上述20-40g/L中的具体数值例如20g/L、22g/L、25g/L、27g/L、30g/L、32g/L、35g/L、37g/L、40g/L等。
上述10-15g/L中的具体数值例如10g/L、11g/L、12g/L、13g/L、14g/L、15g/L等。
上述5-8g/L中的具体数值例如5g/L、5.5g/L、6g/L、6.5g/L、7g/L、7.5g/L、8g/L等。
上述3-7g/L中的具体数值例如3g/L、4g/L、5g/L、6g/L、7g/L等。
上述2-3g/L中的具体数值例如2g/L、2.2g/L、2.4g/L、2.6g/L、2.8g/L、3g/L等。
上述3-5g/L中的具体数值例如3g/L、3.2g/L、3.4g/L、3.6g/L、3.8g/L、3g/L、4.2g/L、4.4g/L、4.6g/L、4.8g/L、5g/L等。
上述0.3-0.5g/L中的具体数值例如0.3g/L、0.32g/L、0.35g/L、0.37g/L、0.4g/L、0.42g/L、0.45g/L、0.47g/L、0.5g/L等。
上述0.05-0.1g/L中的具体数值例如0.05g/L、0.06g/L、0.07g/L、0.08g/L、0.09g/L、0.1g/L等。
上述0.5-1.5g/L中的具体数值例如0.5g/L、0.6g/L、0.7g/L、0.8g/L、0.9g/L、1g/L、1.1g/L、1.2g/L、1.3g/L、1.4g/L、1.5g/L等。
优选地，所述培养的温度为30-40℃，培养的时间为12-48h；
所述培养温度可以为30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃等，上述数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
所述培养的时间可以为如12h、14h、16h、18h、20h、22h、24h、30h、36h、40h、48h等，上述数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述冻干保护剂包括海藻糖、蔗糖、乳糖、脱脂乳粉、甘油、甘露醇或吐温中的任意一种或至少两种的组合。所述至少两种的组合例如海藻糖和蔗糖的组合、甘露醇和吐温的组合、蔗糖和甘露醇的组合等，其他任意的组合方式均可。
优选地，所述预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的益生菌剂还包括功能助剂。
优选地，所述功能助剂包括菊粉、抗性糊精、低聚果糖、低聚异麦芽糖或低聚半乳糖中的任意一种或至少两种的组合。
所述至少两种的组合例如菊粉和抗性糊精的组合、低聚果糖和低聚异麦芽糖的组合、低聚果糖和低聚半乳糖的组合等，其他任意的组合方式均可。
第三方面，本发明提供一种如第二方面所述益生菌剂在制备用于预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的产品中的应用。
优选地，所述产品包括保健品或药品；
优选地，所述保健品或药品的剂型包括溶液剂、片剂、胶囊剂或颗粒剂；
优选地，所述药品还包括药物载体和/或药学上可接受的辅料；
优选地，所述药学上可接受的辅料包括赋形剂、填充剂、崩解剂、粘合剂润滑剂、稀释剂或调味剂中的任意一种或至少两种的组合。
所述至少两种的组合例如赋形剂和填充剂的组合、填充剂和崩解剂的组合、崩解剂和粘合剂的组合等，其他任意组合均可，在此不再一一赘述。
第四方面，本发明提供一种副干酪乳杆菌LC86在制备TNF-ɑ拮抗剂、IL-6拮抗剂、MCP-1拮抗剂SOD酶促进剂、GSH促进剂、CAT酶促进剂、MDA拮抗剂或IL-10分泌促进剂中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供一种副干酪乳杆菌LC86在制备用于预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的产品中的应用。所述副干酪乳杆菌菌株能够显著改善与衰老相关的肌肉萎缩，具体表现在：(1)显著降低SAMP小鼠的衰老评分；(2)显著提高SAMP小鼠的前肢握力和四肢悬挂能力；(3)显著提升腓肠肌肌糖原水平，降低腓肠肌蛋白质羰基含量；(4)降低小鼠血清促炎细胞炎症因子TNFɑ、IL-6和MCP1水平，增加血清抑炎细胞炎症因子IL-10水平；(5)显著提升小鼠肝脏SOD酶活性，增加肝脏GSH含量，增加肝脏CAT酶水平，降低肝脏MDA水平。
附图说明
图1是各组小鼠衰老评分的变化；
图2是各组小鼠小鼠肌肉力量的测试，前肢握力测试(A)和四肢悬挂测试(B)的统计结果图；
图3是各组小鼠结肠腓肠肌肌糖原(A)和蛋白质羰基含量(B)检测结果统计图；
图4是各组小鼠血清肿瘤坏死因子TNF-α(A)、白介素6(IL-6)(B)、MCP1(C)，和白介素10(IL-10)(D)的含量统计图；
图5是各组小鼠肝脏组织SOD酶活性(A)、GSH水平(B)、CAT酶活性(C)和MDA含量(D)的统计图；
上述各图中，柱状图上显示不同的小写字母的表示两组间有显著差异(p<0.05)。
具体实施方式
下面结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
下述实施例和对比例中部分材料来源如下所述：
下述实施例中涉及的MRS培养基配方如下：
以水1000mL计，蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、葡萄糖20g/L、乙酸钠2g/L、酵母粉5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、K2PO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O0.1g/L、MnSO4 0.05g/L、吐温801mL/L、半胱氨酸盐酸盐0.5g/L。其中蛋白胨、牛肉膏、葡萄糖、乙酸钠、酵母粉、柠檬酸氢二铵、K2PO4·3H2O、MgSO4·7H2O、MnSO4、吐温80和半胱氨酸盐酸盐购自国药集团化学试剂有限公司。
试验动物为SPF级雄性SAMP8小鼠，小鼠饲料购自上海斯莱克公司；测定TNF-α、IL-6、MCP1和IL-10水平用购自上海酶联生物科技有限公司的ELISA试剂盒；测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(glutathione，GSH)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)水平使用购自南京建成生物工程公司的检测试剂盒。
下述实施例所涉及的副干酪乳杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)LC86菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2020年7月20日，保藏编号为CGMCC No.1.12731，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
下述实施例所涉及的长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)BL21菌株于2015年1月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.10452，具体保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
下述实施例所涉及的副干酪乳杆菌LC86冻干粉的制备方法：
将副干酪乳杆菌LC86按照占MRS培养基总质量3％的接种量接种到培养基中，于37℃下培养18h，得到培养液；将培养液离心，得到菌体；将菌体用海藻糖冻干保护剂(含有海藻糖100g/L、脱脂奶粉100g/L，溶剂为水)重悬(冻干保护剂和菌体的质量比为2:1)，得到重悬液；将重悬液采用真空冷冻法进行冻干，得到副干酪乳杆菌LC86冻干粉，检测其活菌数为3000亿CFU/g。
下述实施例所涉及的长双歧杆菌BL21冻干粉的制备方法：
将长双歧杆菌BL21按照占MRS培养基总质量3％的接种量接种到培养基中，于37℃下培养18h，得到培养液；将培养液离心，得到菌体；将菌体用海藻糖冻干保护剂(含有海藻糖100g/L、脱脂奶粉100g/L，溶剂为水)重悬(冻干保护剂和菌体的质量比为2:1)，得到重悬液；将重悬液采用真空冷冻法进行冻干，得到长双歧杆菌BL21冻干粉，检测其活菌数为3000亿CFU/g。
实施例1
本实施例提供五种益生菌剂，分别如下：
(S1)上述制得的LC86冻干粉剂；
(S2)上述制得的BL21冻干粉剂；
(S3)LC86+BL21复合菌剂，将制得的LC86冻干粉剂与BL21冻干粉剂以活菌数4:1进行混合均匀即得；
(S4)LC86+长双歧杆菌ATCC 15707复合菌剂，将制得的LC86冻干粉剂与ATCC15707冻干粉剂以活菌数4:1进行混合均匀即得；
(S5)LC86+BL21+菊粉复合菌剂，将制得的LC86冻干粉剂、BL21冻干粉剂与菊粉进行混合，其中LC86菌株与BL21菌株的活菌数为4:1，冻干菌粉总量与菊粉的质量比为1:5。
实施例2
本实施例探究实施例1制得五种益生菌剂(S1、S2、S3、S4、S5)对与衰老相关的肌肉萎缩小鼠血清AST和ALT、血清和肝脏甘油三酯、氧化应激标志物含量、血清促炎细胞因子和肠道通透性的影响：
(1)动物分组
将60只16周龄成年雄性SAMP8小鼠(体重22±2g)随机分为6组，每组10只，模型组(CTL组每日生理盐水灌胃)，益生菌剂S1组(LC86菌量为1×109CFU/天)，益生菌剂S2组(BL21菌量为1×109CFU/天)，益生菌剂S3组(LC86和BL21总菌量为1×109CFU/天)、益生菌剂S4组(LC86和ATCC 15707总菌量为1×109CFU/天)、益生菌剂S5组(LC86和BL21总菌量为1×109CFU/天)，持续12周。所有小鼠均无特定病原体；将10只16周龄青年雄性SAMP8小鼠(体重22±2g)设置为空白对照组(Young组)。将小鼠单独饲养于笼内，环境清洁安静，温度23-25℃，湿度50-70％，各组小鼠在实验期间自由获得食物和水。
(2)血样采集：
12周后实验结束时，所有小鼠用10％腹膜内注射水合氯醛(2mL/kg)麻醉并脱颈，采集血样、肝脏和结肠组织。
(3)衰老评分
使用分级评分系统对上述S1、S2、S3、S4、S5、CTL各组小鼠衰老程度以及16周龄青年雄性SAMP8小鼠(Young组)的衰老程度进行评估，每个类别都有5个等级，分别记为0、1、2、3、4，分数越高表示衰老越严重。评估中使用的指标包括反应性行为、被动性行为、光泽度、粗糙度、脱发、皮肤溃疡、眼周病变和脊柱前凸后凸等方面。将各方面的评分相加以获得每只小鼠的评分，小鼠衰老的评分标准如表1所示。
表1
如图1所示，与青年鼠(Young)相比，模型组(CTL)的衰老评分显著升高。与模型组(CTL)相比，单菌株菌剂S1干预后，小鼠血清的衰老评分显著降低，另外S3复合菌剂组衰老评分低于单菌株菌剂S1，也低于与ATCC15707复配的S4组，说明副乳酪杆菌LC86与长双歧杆菌BL21在减缓衰老程度上有协同增效作用。S5复合菌剂组相较于S3复合菌剂组，衰老评分进一步降低，说明菊粉的加入对益生菌剂有明显的促进作用。
(4)对小鼠肌肉力量的影响：
通过前肢握力和四肢悬挂测试来评估小鼠的肌肉力量。
前肢握力测试方法：各组小鼠前肢抓住水平杆，尾部用约束装置禁止其使用后肢。记录10次试验中的最大握力，并以握力(gm f)表示握力值。
四肢悬挂测试方法：将各组小鼠倒置在标准的金属丝笼顶部，然后让小鼠停留几秒钟。测量其保持的时间。实验重复3次，取平均值。结果以脉冲持续时间(重量(g)×保持时间(s))表示。
肌肉减少症被定义为骨骼肌质量和力量的进行性丧失，本实验评估了各菌剂对小鼠肌肉力量的影响。采取上述方法对各组小鼠使用前肢握力测试和四肢悬挂测试评估肌肉力量。与模型组(CTL)相比，单菌株菌剂S1干预后，小鼠的肌肉力量有所增加，另外S3复合菌剂组小鼠肌肉力量显著高于单菌株菌剂S1，也高于与ATCC 15707复配的S4组，说明副乳酪杆菌LC86与长双歧杆菌BL21在减缓衰老相关的肌肉减少症上有协同增效作用。S5复合菌剂组相较于S3复合菌剂组，肌肉力量更强，说明菊粉的加入对含LC86的菌剂在预防、缓解或治疗小鼠衰老相关的肌肉萎缩有明显的促进作用。
(5)对腓肠肌肌糖原含量和蛋白质羰基含量的影响
结肠肌糖原分析方法：将100mg肌肉组织匀浆于0.5mL冷高氯酸中，然后在4℃下以15000×g离心15分钟，收集上清液。使用南京建成公司的肌糖原测定试剂盒测定肌糖原的水平(以mg/g肌肉表示)。
结肠腓肠肌蛋白质羰基含量分析方法：使用蛋白质羰基测定试剂盒测定小鼠腓肠肌中蛋白质羰基的浓度。具体步骤如下：将100毫克腓肠肌样品在pH＝7的磷酸盐缓冲液中匀浆，然后在4℃下以10000×g离心10分钟，收集上清。将上清液与二硝基苯肼在室温下孵育1小时。随后，用三氯乙酸沉淀蛋白质，并将其重悬于盐酸胍中。在4℃下以10000×g离心10分钟后，在波长370nm处测量上清液的吸光度。
结果如图3所示，与CTL组相比，单菌株菌剂S1干预后，小鼠的肌糖原水平有所增加，另外S3复合菌剂组肌糖原水平显著高于单菌株菌剂S1，也高于与长双歧杆菌ATCC15707复配的S4组，说明副乳酪杆菌LC86与长双歧杆菌BL21在增加小鼠的肌糖原水平上有协同增效作用。S5复合菌剂组相较于S3复合菌剂组，肌糖原水平更高，说明菊粉的加入对含LC86的菌剂在增加小鼠肌糖原水平方面有明显的促进作用。
(7)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠的血清肿瘤坏死因子TNF-α、白介素6(IL-6)、MCP1和IL-10的水平：
结果如图4所示，单菌株菌剂S1干预后，相较于CTL组，小鼠血清TNF-α、白介素6(IL-6)和MCP1水平降低，而白介素10(IL-10)水平升高，另外S3复合菌剂组白介素10(IL-10)水平显著高于单菌株菌剂S1，也高于与长双歧杆菌ATCC 15707复配的S4组；S3复合菌剂组小鼠血清TNF-α、白介素6(IL-6)和MCP1水平相较于S1组降低更为显著，相较于与长双歧杆菌ATCC 15707复配的S4组也更为显著；说明副乳酪杆菌LC86与长双歧杆菌BL21在降低小鼠血清TNF-α、白介素6(IL-6)和MCP1水平，而升高白介素10(IL-10)水平的方面有协同增效作用。S5复合菌剂组相较于S3复合菌剂组，小鼠血清TNF-α、白介素6(IL-6)和MCP1水平降低更为显著，白介素10(IL-10)水平升高也更为显著，说明菊粉对益生菌剂具有良好的促进作用。
(8)氧化应激标志物的检测：
实验结束后处死小鼠，各组小鼠结肠加入生理盐水中，然后匀浆，得到10％结肠匀浆。将匀浆离心10min(5000×g，4℃)以获得上清液。通过南检测试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化物酶(CAT)和丙二醛(MDA)水平。
结果如图5所示：A为超氧化物歧化酶(SOD)、B为谷胱甘肽(GSH)、C为过氧化物酶(CAT)、D为丙二醛(MDA)水平。
与CTL组相比，单菌株菌剂S1干预后，小鼠的SOD、GSH和CAT水平升高，MDA水平下降。S3复合菌剂组SOD、GSH和CAT水平升高显著优于单菌株菌剂S1，MDA水平相较S1显著下降，SOD、GSH和CAT水平高于与长双歧杆菌ATCC 15707复配的S4组，MDA水平低于S4组，说明副乳酪杆菌LC86与长双歧杆菌BL21在特定比例复配，在增加小鼠的组SOD、GSH和CAT水平，降低MDA水平上有协同增效作用。S5复合菌剂组相较于S3复合菌剂组，SOD、GSH和CAT水平更高，MDA水平更低，说明菊粉的加入对含LC86的菌剂在增加小鼠SOD、GSH和CAT水平、降低MAD水平方面有明显的促进作用。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细工艺流程，但本发明并不局限于上述详细工艺流程，即不意味着本发明必须依赖上述详细工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.副干酪乳杆菌LC86在制备用于预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的产品中的应用；
所述副干酪乳杆菌LC86为保藏编号为CGMCC No.1.12731的副干酪乳杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)LC86菌株。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，在预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的产品中，副干酪乳杆菌LC86活菌数不低于1×109CFU/mL或1×109CFU/g。
3.一种预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的益生菌剂，其特征在于，所述益生菌剂中的菌株包括副干酪乳杆菌LC86；
所述副干酪乳杆菌LC86为保藏编号为CGMCC No.1.12731的副干酪乳杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)LC86菌株。
4.根据权利要求3所述的预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的益生菌剂，其特征在于，所述益生菌剂中还包括长双歧杆菌BL21；
所述长双歧杆菌BL21为保藏编号为CGMCC No.10452的长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)BL21菌株。
5.根据权利要求3或4所述的预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的益生菌剂，其特征在于，所述益生菌剂中副干酪乳杆菌LC86与长双歧杆菌BL21的活菌数之比为(2-4):1。
6.根据权利要求3-5任一项所述的预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的益生菌剂，其特征在于，所述益生菌剂中副干酪乳杆菌LC86和长双歧杆菌BL21以冻干粉的形式存在；
优选地，所述冻干粉由包括如下步骤的方法制备得到：
将副干酪乳杆菌LC86与长双歧杆菌BL21分别接种于培养基中培养得菌液，离心，收集菌体，与冻干保护剂混合，冻干，即得；
优选地，所述培养的温度为30-40℃，培养的时间为12-48h；
优选地，所述冻干保护剂包括海藻糖、蔗糖、乳糖、脱脂乳粉、甘油、甘露醇或吐温中的任意一种或至少两种的组合。
7.根据权利要求3-6任一项所述的预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的益生菌剂，其特征在于，所述益生菌剂还包括功能助剂；
优选地，所述功能助剂包括菊粉、抗性糊精、低聚果糖、低聚异麦芽糖或低聚半乳糖中的任意一种或至少两种的组合。
8.权利要求3-7任一项所述的益生菌剂在制备用于预防、缓解或治疗与衰老相关的肌肉萎缩的产品中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述产品包括保健品或药品；
优选地，所述保健品或药品的剂型包括溶液剂、粉剂、片剂、胶囊剂或颗粒剂；
优选地，所述药品还包括药物载体和/或药学上可接受的辅料；
优选地，所述药学上可接受的辅料包括赋形剂、填充剂、崩解剂、粘合剂润滑剂、稀释剂或调味剂中的任意一种或至少两种的组合。
10.副干酪乳杆菌LC86在制备TNF-ɑ拮抗剂、IL-6拮抗剂、MCP-1拮抗剂SOD酶促进剂、GSH促进剂、CAT酶促进剂、MDA拮抗剂或IL-10分泌促进剂中的应用。
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