SI9420051A

SI9420051A - Chemical modified peptide derivatives, process for their preparation and their use in human therapy

Info

Publication number: SI9420051A
Application number: SI9420051A
Authority: SI
Inventors: Hyuk Sun Kim; Xin Zheng Dong; E John Taylor; Sylviane Moreau; Riley S Keyes
Original assignee: Biomeasure Inc
Priority date: 1993-08-09
Filing date: 1994-08-08
Publication date: 1996-12-31
Also published as: RU2133252C1; JP2004339237A; EP0788509A4; DK1288223T3; DE69434181D1; EP1288224A1; ATE399177T1; EP1288224B1; MD1591B2; GEP20002146B; CZ289552B6; EP1288223A1; ATE284413T1; EP0788509A1; DE69434181T2; ES2229045T3; FI960584A; ES2196031T3; CA2168113A1; JP2005015488A

Description

Kemijsko modificirani peptidni derivati, postopek za njihovo pripravo in njihova uporaba v humani terapiji

Predloženi izum se nanaša na terapevtske peptide.

Različni poskusi so bili narejeni, da bi podaljšali aktivnost biološko aktivnih peptidov. Tako so bili npr. peptidi kemijsko modificirani s sintetičnim dodajanjem sladkornih deležev za podaljšanje dobe aktivnosti peptida (Sandoz, WO 88/02756; Sandoz, WO 89/09786; DE 3910667 Al, EPO 0 374 089 A2 (1990); in Breipohl, US patent št. 4,861,755 (1989)). Dodatek kationskih sider (EPO 0 363 589 A2 (1990)) in lipidnih deležev (Whittaker, WO 91/09837; Jung, US patent št. 4,837,303 (1989)) sta bila tudi uporabljena za podaljšanje dobe trajanja peptida.

Predloženi izum v splošnem zagotavlja derivate biološko aktivnih peptidov, ki vsebujejo enega ali več substituentov, ločeno vezanih na amino skupino, ki se nahaja na N-terminalnem koncu ali na stranski verigi peptidnega deleža. V taki modificirani obliki imajo derivati bolj učinkovito in podaljšano biološko aktivnost kot ustrezni nemodificirani peptidi.

Ugodnost peptidnih derivatov je v tem, da niso dragi, da so zelo biokompatibilni, nimajo škodljivih stranskih učinkov in so kompatibilni z različnimi oblikami terapevtskega dajanja. Posebno pa imajo mnogi derivati, ki vsebujejo somatostatin kot peptidni delež, močno izboljšano zmogljivost in selektivnost v primerjavi z nemodificiranim somatostatinom.

S prvega vidika je značilnost predloženega izuma peptidni derivat, ki vsebuje biološko aktivni peptidni delež in vsaj en substituent, vezan na peptidni delež; substituent izberemo iz skupine, ki vključuje spojine I, II in III, pri čemer je spojina I:

kjer je

R_o O, S, ali NR₅, kjer je R₅ H ali (C^C^ alkil;

R₁ in R₂ sta vsak neodvisno H, (CH₂)_mOR₆, ali

CH(OR₇)CH₂OR_g, R_fi je H ali (C₂-C₇)acil, in sta R_? in R_g vsak neodvisno H, (C₂-C_?) acil, ali C(R₉) (R₁₀), kjer sta R_? in R₁₀ vsak neodvisno H ali (C_fC₆) alkil;

ali sta R₇ in R₂ vsak =CHCH₂OR_ir kjer sta v R_n

Rj in R₂ vsak neodvisno H ali (C₂-C_?)acil in je m celo število med 1 in 5, vključno; in je eden od R₃ ali R₄ (CH₂)_nR₁₂ ali (CH₂)_nCH(OH)R₁₂, kjer je R₁₂ CO, CH₂ ali SO₂, in je n celo število med 1 in 5, vključno; in je preostali R₃ ali R₄ H, (C₁-C₆)hidroksialkil, ali (C₂-C_?) acil; in je spojina II:

R₁₃-o-ch₂ ,4-;

r_1a-o-ch

Ί4 ^w~'-ⁿ2^_'T“(CH2)_m“R₁₆-Ri₇-(CH₂)_n~R₁₃ r₁₅-o-ch₂ so R_j3, R₁₄ in R₁₅ vsak neodvisno H ali (C₂-C₂₄)acil;

R₁₆ je NH, ali ni prisoten:

R je CO, O, ali ni prisoten;

R_lg je CO, CH₂, SO₂, ali ni prisoten; in m je celo število med 1 in 5, vključno; in je n celo število med 0 in 5, vključno; in je spojina III:

kjer je

R₁₉ H, NH₂, aromatska funkcionalna skupina, OH, (Cj-CJ hidroksialkil, H(R₂₇)(R_2g), SO₃H, ali ni prisoten, kjer sta R₂₇ in vsak neodvisno H ali (Cj-C₆) alkil;

R₂₀ je O, ali ni prisoten;

R₂₁ je (Cj-CJ alkil, ali ni prisoten;

R₂₂ je N, CH, O ali C;

-R₂₃- je (C₁-C₆) alkil, ali ni prisoten;

R₂₄ je N, CH, ali C;

R₂₅ je NH, O, ali ni prisoten;

R₂₆ je SO₂, CO, CH₂, ali ni prisoten; m je celo število med 0 in 5, vključno; nje celo število med 0 in 5, vključno; p je celo število med 0 in 5, vključno; in q je celo število med 0 in 5, vključno.

V spojinah I, II in III je peptidni delež vezan na vsakega od substituentov s CO-N, CH₂-N ali SO₂-N vezjo med substituentom in atomom dušika N-terminusa ali stranske verige navedenega peptidnega deleža.

V prednostnih izvedbah je -R,₃- (C₁-C₆) alkil; R₂₂ je N, C ali CH; in R₂₄ je C. Alternativno je R₂₂ O; R₁₉, R,_o, R₂₁ in -R₂₃- niso prisotni; in je vsota m in n 3, 4 ali 5.

V nadaljnjih prednostnih izvedbah izuma je substituent spojina I; v tej izvedbi je R₁₂prednostno CH₂ ali SO,. Alternativno je substituent lahko spojina II, pri čemer je R_Jgprednostno CH, ali SO,; R_[3, R_]4 in R_J5 so H; in R_p ni prisoten. V posebno prednostnih izvedbah je substituent (HOCH₂)₃C-NH-(CH)₂-SO₂ ali (HOCH₂)₃C-CH₂.

V še nadaljnjih izvedbah izuma je substituent spojina III; prednostno v tej izvedbi -R,₇- ni prisoten in je vsaj eden od R₂₂ in R₂₄ N. Alternativno sta lahko oba R₂₂ in R₂₄

N.

V drugih izvedbah je substituent eden od:

in

HO(CH₂)₂

(CH₂)COHO(CH₂)₂

(CH₂)₂SO₂Prednostno peptidni delež izberemo iz skupine, ki vključuje: somatostatin, bombezin, kalcitonin, kalcitoninskemu genu soroden peptid (CGRP), amilin, paratiroidni hormon (PTH), gastrin sproščajoči peptid (GRP), melanocit stimulirajoči hormon (MSH), adrenokortikotropni hormon (ACTH), paratiroidu soroden peptid (PTHrP), luteinizirni hormon sproščajoči hormon (LHRH), rastni hormon sproščajoči faktor (GHRF), rastni hormon sproščajoči peptid (GHRP), kolecistokinin (CCK), glukagon, bradikinin, glukagonu podoben peptid (GLP), gastrin, enkefalin, nevromedine, endotelin, substanco P, nevropeptid Υ (ΝΡΥ), peptid ΥΥ (ΡΥΎ), vazoaktivni intestinalni peptid (VIP), gvanilin, pituitarne adenilatne ciklaze aktivirajoči polipeptid (PACAP), /3-celični tropin, adrenomedulin in njihove derivate, fragmente in analoge.

Peptidni delež je prednostno somatostatin ali njegov derivat, fragment ali analog. Najbolj prednostno je somatostatinski analog eden od: H-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-TrpLys-Abu-Cys]-Thr-NFF, H-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH₂, in H-D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH₂. Alternativno je peptidni delež bombezin ali njegov derivat, fragment ali analog.

Še v nadaljnjih prednostnih izvedbah je peptidni derivat eden od:

r~\

HO(CH₂)₂-N N-(CH₂)CO- D-Phe-c (Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys ] -Thr-NH in

HO(CH₂)2- ^N \' ^(CH2^} 2³¾ ' f>?he-c CCys-Tyr-D-Trp-Lys-Atu-<ys] -Thr

Z nadaljnjega vidika predloženi izum zagotavlja dimerne peptidne derivate, ki vsebujejo dva biološko aktivna peptidna deleža in vsaj en substituent, vezan na vsakega od peptidnih deležev. Substituent izberemo iz skupine, ki jo sestavljata spojini IV in V, pri čemer je spojina IV generični strukturni ekvivalent spojine I in je spojina V generični strukturni ekvivalent spojine III. V dimeru je vsak od peptidnih deležev vezan na substituente s CO-N, CH₂-N, ali SO₂-N vezjo med substituentom in atomom dušika N-terminusa ali stranske verige enega od peptidnih deležev.

Še z nadaljnjega vidika predloženi izum zagotavlja postopek za zdravljenje bolezni, kot npr. raka, pri pacientih; postopek vključuje stopnjo dajanja pacientu terapevtske količine peptidnih derivatov, opisanih tukaj. V prednostnih izvedbah je peptidni delež, ki ga uporabimo pri zdravljenju, somatostatin.

Z izrazom biološko aktiven, kot ga uporabljamo tukaj, je mišljen naraven, rekombinanten in sintetičen peptid, ki ima fiziološko ali terapevtsko aktivnost. Na splošno ta izraz zajema vse derivate, fragmente in analoge biološko aktivnih peptidov, ki imajo kvalitativno podoben ali nasproten učinek od nemodificiranega peptida.

Slika 1 je diagram dveh krivulj rasti celic AR42J v prisotnosti različnih somatostatinskih derivatov.

Peptidni derivati

Na splošno peptidni derivati v smislu izuma vsebujejo dve ločeni komponenti: 1) biološko aktiven peptid; in 2) vsaj en substituent s strukturo spojin I, II in III. Peptidni derivati, narejeni v skladu s postopkom, opisanimi tukaj, vključujejo naslednje spojine.

Derivati spojine I ² / \

R₃O O-iCH^nCJHOHJR^-NH-P· ^-NK-R^GUCK) (CK₂)_n

kjer so R_o, R_p R₂, R_y R₄, R₁₂ in n, kot so definirani tukaj, in je NH-P’ biološko aktiven peptidni delež. V teh izvedbah je NH skupina nameščena na N-terminalnem koncu ali na stranski verigi peptida in P’ predstavlja ostanek peptida.

Derivati spojine II

R “O-CH₂

R₁₄-O-CH₂-C- (CH₂) _ffl-Ri₆-R₁₇- (CH₂) _n-R₁₈-NH-P · r₁₅-o-ch₂ kjer so R_J3, R_J4, R₁₅, R₁₆, R_1?, R_lg, m, n, in NH-P’, kot so definirani tukaj.

Derivati spojine III

- \ ^19-^20-^21-^22 - ^23 - *24-^R25-(CH₂)_p-R₂₆-NH-P' (^CH2)n kjer so R₁₉, R_2Q, R₂₁, R₂₂, R₂₃, R₂₄, R₂₅, R₂₆, m, n, p in NH-P’, kot so definirani tukaj.

Poleg struktur, prikazanih zgoraj, vključujejo spojine, narejene v skladu s predloženim izumom tudi peptidne derivate, ki vsebujejo dva ali več substituentov, vezanih na peptidni delež. Te izvedbe izuma obsegajo derivate biološko aktivnih peptidov, ki imajo več kot eno prosto amino skupino, npr. lizinski ostanek

Predloženi izum prav tako zagotavlja dimerne peptidne derivate, ki vsebujejo dva peptidna deleža, vezana na posamezen substituent, npr. dva bradikininska analoga, vezana na substituent spojine V.

Peptidni derivati v smislu izuma so derivati biološko aktivnih peptidov, izbranih iz skupine, ki jo sestavljajo: somatostatin, bombezin, kalcitonin, kalcitoninskemu genu soroden peptid (CGRP), amilin, paratiroidni hormon (PTH), gastrin sproščajoči peptid (GRP), melanocit stimulirajoči hormon (MSH), adrenokortikotropni hormon (ACTH), paratiroidu soroden peptid (PTHrP), luteinizirni hormon sproščajoči hormon (LHRH), rastni hormon sproščajoči faktor (GRF), rastni hormon sproščajoči peptid (GHRP), kolecistokinin (CCK), glukagon, bradikinin, glukagonu podoben peptid (GLP), gastrin, enkefalin, nevromedini, endotelin, substanca P, nevropeptid Y 8(NPY), peptid ΥΥ (ΡΥΥ), vazoaktivni intestinalni peptid (VIP), gvanilin, pituitarne adenilatne ciklaze aktivirajoči polipeptid (PACAP), /3-celični tropin, adrenomedulin ali njihovi derivati, fragmenti in analogi.

V posebno prednostnih izvedbah je peptidni delež somatostatin ali njegov derivat, fragment ali analog. Somatostatinski analogi, ki jih lahko uporabimo v skladu s predloženim izumom vključujejo, vendar ne omejujoče, naslednje spojine: H-D-/3-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂;

H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-j8-Nal-NH₂;

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-/3-Nal-NH₂;

H-D-/3-Nal-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂;

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr-NH₂;

H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr-NH₂;

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr;

H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr;

H-Gly-Pen-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr;

H-Phe-Pen-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr;

H-Phe-Pen-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr;

H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol;

H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂;

H-D-Trp-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂;

H-D-Trp-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂;

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂;

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Trp-NH₂;

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂;

Ac-D-Phe-Lys’-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Asp-Thr-NH₂;

Ac-hArg-(Et)₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂;

Ac-D-hArg-(Et)<Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂;

Ac-D-hArg-(Bu)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂;

Ac-D-hArg-(Et)<Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂;

Ac-L-hArg-(Et)₂-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂;

Ac-D-hArg-(CH₂CF₃)₂-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂;

Ac-D-hArg-(CH₂CF₃)₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂;

Ac-D-hArg-(CH₂CF₃)₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Phe-NH₂;

Ac-D-hArg-(CH₂CF₃)₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NHEt;

Ac-L-hArg-(CH₂-CF₃)₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂;

Ac-D-hArg-(CH₂CF₃)₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-(Me)-Thr-Cys-THr-NH₂;

Ac-D-hArg-(CH₂CF₃)₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-(Me)-Thr-Cys-THr-NHEt;

Ac-hArg-(CH₃, heksil)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂;

H-hArg-(heksil₂)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂;

Ac-D-hArg-(Et₂)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NHEt;

Ac-D-hArg-(Et₂)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Phe-NH₂;

propionil-D-hArg-(Et₂)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-(iPr)-Thr-Cys-Thr-NH₂;

Ac-D-/3-Nal-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Gly-hArg(Et)₂-NH₂;

Ac-D-Lys(iPr)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂;

Ac-D-hArg-(CH₂-CF₃)₂-D-hArg(CH₂CF₃)₂-Gly-Cys-Phe-D-TrpLys-Thr-Cys-Thr-NH₂;

Ac-D-hArg-(CH₂-CF₃)₂-D-hArg(CH₂CF₃)₂-Gly-Cys-PheD-Trp-Lys-Thr-Cys-Phe-NH₂;

Ac-D-hArg-(Et₂)-D-hArg(Et)₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-LysThr-Cys-Thr-NH₂;

Ac-Cys-Lys-Asn-4-Cl-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-D-Cys-NH₂;

Bmp-Tyr-D-T rp-Lys-V al-Cys-Thr-NH₂;

Bmp-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Phe-NH₂;

Bmp-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-p-Cl-Phe-NH₂;

Bmp-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-/3-Nal-NH₂;

H-D-/3-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂;

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH₂;

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-j8-Nal-NH₂;

H-pentafluoro-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂;

Ac-D-/3-Nal-Cys-pentafluoro-Phe-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂;

H-D-/3-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-/3-Nal-NH₂;

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-/3-Nal-NH₂;

H-D-/3-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH₂;

H-D-p-Cl-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH₂;

Ac-D-p-Cl-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH₂;

H-D-Phe-Cys-/3-Nal-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂;

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Cys-Thr-NH₂;

ciklo (pro-Phe-D-Trp-N-Me-Lys-Thr-Phe);

ciklo (pro-Phe-D-Trp-Lys-Thr-N-Me-Phe);

ciklo (N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe);

ciklo (Pro-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe);

ciklo (Pro-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe);

ciklo (Pro-Phe-L-Trp-Lys-Thr-Phe);

ciklo (Pro-Phe-D-Trp(F)-Lys-Thr-Phe);

ciklo (Pro-Phe-Trp(F)-Lys-Thr-Phe);

ciklo (Pro-Phe-D-Trp-Lys-Ser-Phe);

ciklo (Pro-Phe-D-Trp-Lys-Thr-p-Cl-Phe);

ciklo (D-Ala-N-Me-D-Phe-D-Thr-D-Lys-Trp-D-Phe);

ciklo (D-Ala-N-Me-D-Phe-D-Val-Lys-D-Trp-D-Phe);

ciklo (D-Ala-N-Me-D-Phe-D-Thr-Lys-D-Trp-D-Phe);

ciklo (D-Abu-N-Me-D-Phe-D-Val-Lys-D-Trp-D-Tyr);

ciklo (N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe);

ciklo (Pro-Tyr-D-Trp-4-amfe-Thr-Phe);

ciklo (Pro-Phe-D-Trp-4-amfe-Thr-Phe);

ciklo (N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-4-amfe-Thr-Phe);

ciklo (Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba);

ciklo (Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba-Gaba);

ciklo (Asn-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe);

ciklo (Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-NH(CH₂)₄CO);

ciklo (Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-/3-Ala);

ciklo (Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-D-Glu)-OH;

ciklo (Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe);

ciklo (Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gly);

ciklo (Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba);

ciklo (Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gly);

ciklo (Asn-Phe-Phe-D-Trp(F)-Lys-Thr-Phe-Gaba);

ciklo (Asn-Phe-Phe-D-Trp(NO₂)-Lys-Thr-Phe-Gaba);

ciklo (Asn-Phe-Phe-Trp(Br)-Lys-Thr-Phe-Gaba);

ciklo (Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe(I)-Gaba);

ciklo (Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Tyr(But)-Gaba);

ciklo (Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Pro-Cys)-OH;

ciklo (Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Tpo-Cys)-OH ciklo (Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-MeLeu-Cys)-OH;

ciklo (Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-Gaba);

ciklo (Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-D-Phe-Gaba);

ciklo (Phe-Phe-D-Trp(5F)-Lys-Thr-Phe-Phe-Gaba);

ciklo (Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys(Ac)-Thr-Phe-NH-(CH₂)₃'CO);

ciklo (Lys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba);

ciklo (Lys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba); in ciklo (Orn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba) kjer Lys* označuje amidni most, ki se tvori med Lys* in Asp.

Peptidne spojine, navedene zgoraj, so opisane v naslednjih referencah, katere so vse vključene tukaj z referencami:

EP prijava št. P5 164 EU; Van Binst, G. et al. Peptide Research 5:8 (1992); Horvath, A. et al. Abstract, Conformations of Somatostatin Analogs Having Anti-tumor Activity, 22. evropski peptidni simpozij 13.-19. sept. 1992, Interlaken, Švica; PCT prijava WO 91/09056 (1991); EP prijava 0 363 589 A2 (1990); EP prijava 0 203 031 A2 (1986); US patenti št.: 4 904 642; 4 871 717; 4 853 371; 4 725 577; 4 684 620; 4 650

787; 4 603 120; 4 585 755; 4 522 813; 4 486 415; 4 485 101; 4 435 385; 4 395 403; 4 369

179; 4 360 516; 4 358 439; 4 328 214; 4 316 890; 4 310 518; 4 291 022; 4 238 481; 4 235

886; 4 224 190; 4 211 693; 4 190 648; 4 146 612; in 4 133 782.

V somatostatinskih analogih, navedenih zgoraj, ima vsak amino kislinski ostanek strukturo NH-C(R)H-CO-, v kateri je R stranska veriga; črte med amino kislinskimi ostanki predstavljajo peptidne vezi, ki spajajo amino kisline. Če je amino kislinski ostanek optično aktiven, potem je predvidoma konfiguracija v obliki L, razen če ni oblika D izrecno označena. Če sta v peptidu prisotna dva ostanka Cys, se med obema deležema tvori disulfidni most. Vendar pa ta vez ni prikazana v navedenih ostankih.

Dodatni prednostni somatostatinski analogi v smislu izuma imajo naslednjo formulo:

^Ri ^A1^A2-^A3-^D-Trp-Lys-A₆-A₇-A_a-R2 kjer je A D- ali L-izomer ali /3-Nal, Trp, /3-piridil-Ala, Phe, substituiran Phe, ali izpuščen; in sta A, in A^ vsak neodvisno Cys, Asp ali Lys. Ti deleži so kovalentno vezani eden na drugega z disulfidnim mostom ali amidnim mostom. Poleg tega je A₃/3-Nal, Phe, ali o-, m-, ali p-substituiran X-Phe, kjer je X halogen, OH, NH₂, NO₂ ali Cj ₃ alkil; A₆ je Val, Thr, Ser, Ala, Phe, /3-Nal, Abu, Ile, Nle ali Nva; in A_g je Phe, Thr, Tyr, Trp, Ser, /3-Nal, alkoholna skupina ali izpuščen; R₁ in R₂ sta vsak neodvisno H ali nižji acil ali nižji alkil; in R₃ je OH, NH₂ ali izpuščen. Prednostno, kadar je eden od A₂ in A_? Cys, je drugi tudi Cys; če je Ag alfa-amino alkohol, je R₃ izpuščen; in če nobeden od A₂ in A_? ni Cys, potem je A₂ različen od A_?.

Posebno prednostni somatostatinski analogi v smislu te izvedbe so:

Me-D-Phe-Cys-Tyr-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂;

H-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Nal-NH₂;

H-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂;

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH₂;

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Nal-NH₂; in

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol.

V drugih izvedbah imajo linearni somatostatinski analogi v smislu izuma naslednjo strukturo:

A¹-A²-A³-D-Trp-Lys-A⁶-A⁷-A³-R₃ kjer je A¹ D- ali L- izomer od Ala, Leu, Ile, Val, Nle, Thr, Ser, /3-Nal, /3-piridil-Ala, Trp, Phe, 2,4-dikloro-Phe, pentafluoro-Phe, p-X-Phe ali o-X-Phe, kjer je X CH₃, Cl, Br, F, OH, OCH₃ ali NO₂;

A² je Ala, Leu, Ile, Val, Nle, Phe, /3-Nal, piridil-Ala, Trp, 2,4-dikloro-Phe, pentafluoro-Phe, o-X-Phe ali p-X-Phe, kjer je X CH₃, Cl, Br, F, OH, OCH₃ ali NO₂;

A³ je piridil-Ala, Trp, Phe, β-Nal, 2,4-dikloro-Phe, pentafluoro-Phe, o-X-Phe, ali p-X-Phe, kjer je X CH₃, Cl, Br, F, OH, OCH₃ ali NO₂;

A⁶ je Val, Ala, Leu, Ile, Nle, Thr, Abu ali Ser;

A⁷ je Ala, Leu, lle, Val, Nle, Phe, j3-Nal, piridil-Ala, Trp, 2,4-dikloro-Phe, pentafluoro-Phe, o-X-Phe, ali p-X-Phe, kjer je X CH₃, Cl, Br, F, OH, OCH₃ ali NO₂;

A⁸ je D- ali L- izomer od Ala, Leu, Ile, Val, Nle, Thr, Ser, Phe, jS-Nal, piridil-Ala, Trp, 2,4-dikloro-Phe, pentafluoro-Phe, p-X-Phe ali o-X-Phe, kjer je X CH₃, Cl, Br, F, OH, OCH₃ ali NO₂, ali njegov alkohol; in sta Rj in R₂ neodvisno H ali nižji acil ali nižji alkil; in je R₃ je OH, NH₂ ali izpuščen. Prednostno, je vsaj eden od A¹ in A⁸ in eden od A² in A⁷ aromatska amino kislina; in če je A⁸ alkohol, je R₃ izpuščen. Poleg tega A¹, A², A⁷ in A⁸ ne morejo biti vsi aromatske amino kisline. Posebno prednostni analogi v smislu tega vidika izuma vključujejo:

H-D-Phe-p-kloro-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH₂;

H-D-Phe-p-NO₂-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH₂;

H-D-Nal-p-kloro-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH₂;

H-D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH₂;

H-D-Phe-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH₂;

H-D-Phe-p-kloro-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH₂; in

H-D-Phe-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Ala-D-/3-Nal-NH₂.

V še nadaljnjih prednostnih izvedbah je peptidni delež bombezin ali njegov derivat, fragment ali analog. Bombenzinski analogi, ki jih lahko uporabimo pri uporabi predloženega izuma vključujejo, vendar ne omejujoče, nevromedin C, nevromedin B, litorin in gastrin sproščajoči peptid (GRP), ki ima naslednjo amino kislinsko sekvenco.

H-Ala-Pro-Val-Ser-Val-Gly-Gly-Gly-Thr-Val-LeuAla-Lys-Met-Tyr-Pro-Arg-Gly-Asn-HisTrp-Ala-Val-Gly-His- Leu-Met-NH,

Drugi bombenzinski analogi, ki jih lahko uporabimo v predloženem izumu, vključujejo spojine, opisane v naslednjih referencah, katerih vsebina je vključena tukaj z referencami:

Coy et al. Peptides, Proceedings of the Eleventh Amer. Peptide Symposium, izd. Rivier et al. ESCOM, str. 65-67 (1990); Wang et al. J. Biol. Chem. 265:15695 (1990); Mahmoud et al. Cancer Research 51:1798 (1991); Wang et al. Biochemistry 29:616 (1990); Heimbrook et al., Synthetic Peptides: Approaches to Biological Problems, UCLA Symposium on Mol. and Celi. Biol. New Series, Vol. 86, izd. Tam and Kaiser; Martinez et al., J. Med. Chem. 28:1874 (1985); Gargosky et al., Biochem. J. 247-427 (1987); Dubreuil et al., Drug Design and Delivery, Vol 2:49, Hanvood Academic Publishers, GB (1987); Heikkila et al., J. Biol. Chem. 262:16456 (1987); Caranikas et al., J. Med. Chem. 25:1313 (1982); Saeed et al., Peptides 10:597 (1989); Rosell et al, Trends in Pharmacological Sciences 3:211 (1982); Lundberg et al. Proč. Nat. Aca. Sci. 80:1120, (1983); Engberg et al. Nature 293:222 (1984); Mizrahi et al, Euro. J. Pharma, 82:101 (1982); Leander et al. Nature 294:467 (1981); Woll et al, Biochem. Biphys. Res. Comm. 155:359 (1988); Rivier et al, Biochem. 17:1766 (1978); Cuttitta et al, Cancer Surveys 4:707 (1985); Aumelas et al, Int. J. Peptide Res. 30:596 (1987); Szepeshazi. et al, Cancer Research 51:5980 (1991); Jensen, et al. Trends Pharmacol. Sci. 12:13 (1991); US patenti št. 5,028,692; 4,943,561; 4,207,311; 5,068,222; 5,081,107; 5, 084,555; EP prijave št. 0 315 367 A2 (1989); 0 434 979 Al (1991); 0 468 497 A2 (1992); 0 313 158 A2 (1989) 0 339 193 Al (1989); PCT prijave št. WO 90/010137 (1990); 90/02545 (1992); in angleška prijava GB 1 231 051A (1990).

Peptide v smislu izuma lahko zagotovimo v obliki farmacevtsko sprejemljivih soli. Primeri prednostnih soli so tisti s terapevtsko sprejemljivimi organskimi kislinami, npr. ocetno, mlečno, maleinsko, citronsko, jabolčno, askorbinsko, jantarno, benzojsko, salicilno, metansulfonsko, toluensulfonsko ali pamojsko kislino, kot tudi s polimernimi kislinami, kot npr. taninsko kislino ali karboksimetilcelulozo, in soli z anorganskimi kislinami, kot npr. halogenvodikovimi kislinami, vključno klorovodikovo kislino, žveplovo kislino in fosforjevo kislino.

Sinteza spojin

V nadaljevanju so opisane sinteze spojin I, II in III.

Pri opisovanju sintez spojin v smislu izuma so uporabljene naslednje okrajšave:

Nal:

Abu

D:

naftilalanin (i ali 2) alfa-aminomaslena kislina desnosučno

L:	levosučno
HOAC:	ocetna kislina
BOP:	benzotriazol-l-iloksitris(dimetilamino)fosfonijev heksafluoro-fosfat
BOC:	terc.-butiloksikarbonil
DCC:	dicikloheksil karbodiimid
EDC:	l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid
DEPC:	dietilcianofosfonat
DMF:	dimetilformamid
CH₂C1₂:	diklorometan
MeOH:	metanol
EtOH:	etanol
DIEA:	N,N-diizopropiletilamin
HOBT:	1-hidroksibenzotriazol
HBTU:	0-benzotriazol-l-il,N,N,N’,N’-tetrametiluronijev heksafluorofosfat
THF:	tetrahidrofuran
TFA:	trifluorocetna kislina.

Izhodne snovi in intermediate za spojine I, II in III so tržno dosegljive. Alternativno lahko izhodne snovi pripravimo po postopkih, ki so dobro znani in vključeni v literaturi. Tako je npr. kemija derivatov, sorodnih askorbinski kislini, opisana v J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1:1220 (1974); Carbohvd. Res., 67:127 (1978); Yakugaku Zashi, 86:376 (1966); US pat.št. 4,552,888; J. Med. Chem,, 31:793 (1988); prav tam 34:2152 (1991) in 35:1618 (1992), katerih vsebina je vključena tukaj z referencami. Kemija derivatov sorodnih tris-u je opisana v Arch. Biochem. Biophv, 96, 653 (1962), Biochem., 5 467 (1966), katerega vsebina je prav tako vključena tukaj z referenco.

Sinteza peptidnih derivatov

Pripajanje spojin I, II ali III na ustrezno prosto amino skupino zaščitene amino kisline ali peptida, lahko na splošno dosežemo s postopki, ki so dobro znani in se uporabljajo v sintezi peptidov (npr. DCC, DCC-HOBT, DIC-HOBT PPA, EDCHOBT, DEPT, BOP, HBTU) z uporabo baze (npr. DIEA) v inertnem topilu (npr. DMF, THF ali CH₂C1_O etil acetatu ali njihovi kombinaciji). Deblokiranje zaščitenih skupin prav tako lahko izvedemo z dobro znanimi postopki (npr. z odstranitvijo skupine z dodatkom kisline ali baze, TFA, dioksan-HCl, amoniaka, NaOMe, piperidina). V večini primerov je reakcijska temperatura v območju od -30°C do sobne temperature.

Na splošno prva stopnja sinteze vključuje reakcijo med epoksidom in prosto amino skupino zaščitene amino kisline ali peptida; kompleksiranje in deprotekcijo lahko dosežemo z uporabo dobro znanih postopkov, kot npr. tistih, opisanih v McManus, et al., Synth. Communications 3, 177 (1973), katerih vsebina je vključena tukaj z referenco. Po sintezi lahko izvedemo čiščenje intermediatov in produktov z običajnimi postopki, kot npr. kromatografijo ali HPLC. Identifikacijo spojin lahko izvedemo z običajnimi tehnikami, kot npr. NMR, amino kislinsko analizo in masno spektrometrijo.

Naslednji primeri ponazarjajo prednostne postopke za tvorbo spojin v smislu izuma.

Primer 1 - Sinteza somatostatinskih derivatov

Naslednji somatostatinski derivat, na katerega se tukaj sklicujemo kot na BIM-23118, sintetiziramo v skladu s predloženim izumom:

OH

HO

0- (CH₂) 3C0-D-Nal-cfCys-iyr-D-Trp-Lys-Val-Cy_Sj -Thr-NH₂

Primer 1.1 - 3-0-(benziloksikarboniImetil)-2,5,6-triacetil-askorbinska kislina

Acetanhidrid (6 ml) dodamo po kapljicah k raztopini 3-0(benziloksikarbonilmetil)askorbinske kisline (2,2 g) v piridinu (30 ml) in zmes nato mešamo preko noči pri sobni temperaturi. Piridin uparimo pod znižanim tlakom, pri čemer ostane ostanek, ki ga nato razdelimo med etil acetat in IN HC1. Etil acetatno plast izperemo z IN HC1 in nato z vodo. Po sušenju (MgSO₄) etil acetat uparimo pod znižanim tlakom; sledove piridina in acetanhidrida, ki še vedno ostanejo, odstranimo z večkratnim souparevanjem s toluenom. Nastalo 3-0-(benziloksikarobnilmetil)2,5,6-tiracetil-askorbinsko kislino posušimo pod vakuumom, da dobimo viskozni gel, ki ostane v ostanku (2,4 g). TLC (silikagel: CHCl₃/aceton [9:1], Rf= 0,52).

Primer 1.2 - 3-0-(karboksimetil)-2,5,6-triacetil-askorbinska kislina

Brozgo Pd-C (100 mg) v vodi (2 ml) dodamo k raztopini 3-0(benziloksikarbonilmetil)-2,5,6-triacetil-askorbinske kisline (2,4 g) v etanolu (30 ml) in suspenzijo stresamo pod vodikom (l,14.10⁵Pa) 6 ur. Katalizator nato odstranimo s filtracijo skozi blazino celita in filtrat uparimo pod znižanim tlakom, da dobimo 3-0(karboksimetil)-2,5,6-triacetil-askorbinsko kislino. TLC (silikagel: CHCl₃/MeOH/HOAc [9:1:0,1], Rf=0,2).

Primer 1.3 - 5,6-0-izopropiliden-askorbinska kislina

Acetilklorid (0,67 ml) dodamo k suspenziji askorbinske kisline (8,0 g) v acetonu (80 ml), ki jo hitro mešamo, in zmes mešamo pri sobni temperaturi preko noči. Oborino zberemo s filtriranjem, izperemo z etil acetatom in posušimo pod znižanim tlakom, da dobimo 8,29 g 5,6-0-izopropiliden-askorbinske kisline kot brezbarvne trdne snovi. TLC (silikagel: CHCl₃/MeOH/HOAc [3:1:0,1], Rf=0,54).

Primer 1.4 - 3-0-(etoksikarbonilpropil)-5,6-izopropiliden-askorbinska kislina

Raztopino 5,6-izopropiliden-askorbinske kisline (2,0 g) v 10 ml DMF dodamo po kapljicah k suspenziji NaH (0,44 g 50% mineralno-oljne NaH disperzije, izprane večkrat s heksanom) v 5 ml DMF. Ko preneha razvijanje plina, dodamo po kapljicah

1,43 ml raztopine etil 4-bromobutirata v 5 ml DMF in zmes mešamo pri sobni temperaturi preko noči. Topilo uparimo pri znižanem tlaku in dobljeni ostanek kromatografiramo na silikagelu (55 g) ob uporabi CHCl₃/MeOH (19:1) kot eluenta. Ustrezne frakcije zberemo in topilo odstranimo pri znižanem tlaku, da dobimo viskozni ostanek, ki vsebuje 3-0-(etoksikarbonilpropil)-5,6-izopropiliden-askrobinsko kislino (1,1 g).

Primer 1.5 - 3-0-(karboksipropill-5,6-izopropiliden-askorbinska kislina

4,6 ml 2N NaOH dodamo k raztopini 3-0-(etoksikarbonilpropil)-5,6-izopropilidenaskorbinske kisline (1,02 g) v 15 ml EtOH. Po eni uri večino etanola odstranimo pri znižanem tlaku in ostanek razredčimo z vodo (10 ml) in nakisamo z razredčeno HCl(pH 3). Raztopino nato nasitimo z NaCl in večkrat ekstrahiramo z etil acetatom; združene ekstrakte nato posušimo z MgSO₄. Topilo uparimo pri znižanem tlaku, da dobimo viskozni ostanek, ki vsebuje 3-0-(karboksipropil)-5,6-izopropiliden askor17 binsko kislino (0,84 g). TLC: (silikagel: CHC^/MeOH/HOAC [5:1:0,1]. Rf=0^5).

Primer 1.6 - D-Nal-cfCvs-Tvr-D-Trp-LvsfBOO-Val-Cvsl-Thr-NH.

Raztopino di-terc.butil dikarbonata (0,36 g) v 10 ml DMF dodamo po kapljicah k raztopini D-Nal-cfC^s-Tvr-D-Trp-Lvs-Val-O/sJ-Thr-NF^ acetata (2 g, BIM 23014) v 45 ml DMF. Po dveh urah pri sobni temperaturi topilo odstranimo pri znižanem tlaku, da dobimo ostanek, ki ga nato kromatografiramo na silikagelu (150 g) ob uporabi CHCL^/MeOH (9:1) kot eluenta. Ustrezne frakcije zberemo in topilo odstranimo pri znižanem tlaku, da dobimo ostanek, ki vsebuje D-Nal-c[Cys-Tyr-DTrp-Lys(BOC)-Val-Cys]-Thr-NH₂ (1,45 g). TLC (silikagel: CHCl/MeOH [3:1], Rf=0,52).

0,2 ml diizopropiletilamina dodamo k raztopini D-Nal-ciklo-[Cys-Tyr-D-TrpLys(BOC)-Val-Cys]-Thr-NH₂ (300 mg), 3-0-(karboksipropil)-5,6-izopropiliden askorbinske kisline (56 mg) in HBTU (113 mg) v 5 ml DMF. Zmes mešamo pri sobni temperaturi preko noči in topilo odstranimo pod znižanim tlakom. Ostanek porazdelimo po deležih med zmes etil acetata/MeOH in nasičene vodne raztopine NaCI in nato etilacetatno plast izperemo z nasičenim vodnim NaCI, nato z nasičenim vodnim NaHCO₃ in nato posušimo (MgSOJ. Topilo uparimo pod znižanim tlakom in ostanek izpostavimo preparativni TLC z uporabo zmesi CHCl₃/MeOH (8:1) kot topila za razvijanje. Ustrezno UV-pozitivno cono izoliramo in ekstrahiramo s CHC^/MeOH. Topila odstranimo pri znižanem tlaku, da dobimo zgoraj identificirani produkt (0,20 g). TLC (silikagel: CHCl₃/MeOH[5:l], Rf=0,54).

Primer 1.8 - Odstranitev skupine BOC

Derivat askorbinske kisline, ki vsebuje D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys(BOC)-ValCys]-Thr-NH₂ (95 mg), prikazan zgoraj, obdelujemo s 25% TFA v CHC1₃ 45 minut pri sobni temperaturi. Hlapne substance odstranimo pod znižanim tlakom, da dobimo suh ostanek, ki ga očistimo z uporabo Vydac C_lg HPLC in CH₃CN/O,1% vodne TFA. Končni dobitek je 90 mg (FAB-MS (m/e) 1341).

Primer 1.9 - Druge izvedbe

Naslednje somatostatinske derivate prav tako sintetiziramo na podoben način:

^on

A

OH

O-CI^-CO-D-Phe-c/Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys/-Thr-Nt^

OH

BIH-23181

OH

H'

OH

O-C^-CO-D-Phe-c / Cys-Tyr-D-Trp-Lys -Thr-Cys / -Nal -Nl·^

BIK.-.2319?

Primer 2 - Sinteza BIM-23107

Naslednji somatostatinski derivat, na katerega se prav tako sklicujemo kot na BIM19

23107, sintetiziramo v skladu s predloženim izumom.

(Aco-CH₂)₃-C-NH-CO-(CH₂)₂CO-D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH₂

Primer 2.1 - (Aco-CH₂)₃-C-NH-CO-(CH₂)₂CO-D-Nal-ciCys-Tyr-D-Trp-Lys(BOC)Val-Cvsl-Thr-NH_;

0,03 ml DIEA dodamo k raztopini 2-N-(sukcinil)amino-2-(acetoksimetil)-l,3propandioldiacetata (83 mg) in HBTU (92 mg) v 2 ml DMF, ohlajeni na ledu. Po mešanju pri 0-5°C 30 minut dodamo raztopino D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys(BOC)Val-Cys]-Thr-NH₂ (100 mg) v 2 ml DMF, ki vsebuje 0,03 ml DIEA. Zmes najprej mešamo pri 0-5°C 1 uro in nato pri sobni temperaturi preko noči. Topilo odstranimo pri znižanem tlaku, da dobimo suh ostanek, ki ga razdelimo med etil acetat in vodni nasičeni NaCl in nato EtOAc plast izperemo z vodnim 5% NaHCO₃, in končno z vodnim nasičenim NaCl; nastalo raztopino nato posušimo z MgSO₄. Topilo uparimo pod znižanim tlakom, pri čemer dobimo ostanek, ki vsebuje (Aco-CH₂)₃-C-NH-CO(CH₂)₂-CO-D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys(BOC)-Val-Cys]-Thr-NH₂ (0,14 g). TLC (silikagel: CHCl₃/MeOH/HOAc = 4:1:0,1, Rf=0,82).

Primer 2.2 - Odstranitev skupine BOC mg zgoraj identificirane spojine obdelujemo s 50% TFA v CHC1₃ 45 minut pri sobni temperaturi; hlapne substance nato odstranimo pri znižanem tlaku, da dobimo ostanek. Sledove TFA souparimo večkrat z etanolom in ostanek titriramo z etrom in nato posušimo, da dobimo 30 mg produkta. TLC (silikagel: CHCl₃/MeOH/HOAc = 3:1:1, Rf=0,24).

Primer 2.3 - Druge izvedbe

Naslednje somatostatinske derivate prav tako sintetiziramo na podoben iicčin.

(HO-CH₂)₃-C-NH-CO-(CH₂)₂-CO-D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]-Nal-NH₂

BIM-23158 (HO-CH₂)₃-C-NH-CO-(CH₂)₂-CO-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH₂

2C

BIM-23167 (HO-CH₂)₃-C-NH-CO-(CH₂)₂-CO-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thrnh₂

BIM-23173 (HO-CH₂)₃-C-NH-CH₂-CO-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH₂

BIM-23179 (HO-CH₂)₃-C-NH-CH₂-CO-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂

BIM-23182

Primer 3 - Sinteza BIM-23201

Naslednji somatostatinski derivat, na katerega se prav tako sklicujemo kot na BIM23201, sintetiziramo v skladu s predloženim izumom.

(HO-CH₂)₃-C-CH₂-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH₂

Primer 3.1 - (HO-CH₂)₃-C-CH₂-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH, g 0,3 nm molekularnih sit in nato NaCNBH₃ (36 mg) dodamo po deležih v 15 minutnih presledkih k raztopini D-Phe-c[Cys-Tyr-(OBt)-D-Trp-Lys(BOC)-Thr(OBt) Cys]-Nal-NH₂ (250 mg) in tris (acetoksimetil)acetaldehida (120 mg), dobljenega z oksidacijo triacetil penta-eritritola s piridinijevim dikromatom ali DMSO/oksalil kloridom/trietilaminom v metanolu (10 ml), ki vsebuje 10% ocetno kislino. Zmes nato mešamo pri sobni temperaturi 30 minut in segrevam^ 4 ure. Po filtriranju ostanek razdelimo med etil acetat in vodo. Etil acetatno plast speremo z vodo, nato z vodnim NaHCO₃ in posušimo (MgSOJ. Topilo uparimo pod znižanim tlakom, da dobimo ostanek (0,4 g), ki ga nato raztopimo v metanolu (5 ml), obdelamo z raztopino NaOMe/MeOH (pH 10), mešamo 1 uro in končno nevtraliziramo z 1 N HC1 do pH 5-6. Po uparjenju topila ostanek raztopimo v 90% vodni TFA (5 ml) in mešamo 30 minut. Hlapne snovi odstranimo pod znižanim tlakom, sledove TFA in vode v dobljenem ostanku pa odstranimo s souparevanjem z alkoholom (2x). Ostanek posušimo, nato titriramo z etrom in na koncu očistimo s

HPLC pri pogojih, ki so podobni tistim, opisanim pred tem, da dobimo 41 mg (HOCH₂)₃-C-CH₂-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH₂ kot brezbarvno trdno snov. MS (m/e) 1262,8.

Primer 3.2 - Druge izvedbe

Naslednji somatostatinski derivat, na katerega se prav tako sklicujemo kot na BIM23195, sintetiziramo na podoben način.

(HO-CH₂)₃-C-CH₂-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂

BIM-23195

Primer 4 - Sinteza BIM-23197

Naslednji somatostatinski derivat, na katerega se prav tako sklicujemo kot na BIM23197, sintetiziramo v skladu s predloženim izumom.

/n ho(ch₂)₂-:

CvaJ-Thr-NHj

N- (CH₂) ₂SO₂-D-Phe-c [ Cya-Tyr-D-Trp-Ly«-AbuPrimer 4.1 - 2-bromoetansulfonil klorid

Na-2-bromoetansulfonat (4,0 g) obdelujemo s PC1₅ (11,8 g) med ohlajevanjem v ledeni kopeli. Po nastanku tekoče faze, raztopino segrevamo pri 90-120°C 1,5 ure v oljni kopeli, ohladimo na sobno temperaturo, zlijemo v 50 g zdrobljenega ledu in nato mešamo 15 minut. Zmes ekstrahiramo s CH₂C1₂ (3 x 30 ml) in združene ekstrakte izperemo s H₂O (2 x), 5% NaHCO₃ (2 x) in ponovno z H₂O (2 x). S sušenjem nad brezvodnim MgSO₄ in destilacijo pod znižanim tlakom dobimo 2-bromoetansulfonil klorid kot brezbarvno tekočino (1,95 g, 42-44°C/l,3.10³ Pa).

Primer 4.2 - Br-(CH₂)₂-SO₂-D-Phe-cfCys-TyrftBu)-D-Trp-Lys(Boc)-Abu-Cys]ThrftBuj-NHfl-ciklopropil-l-metiD-etil

Raztopino 2-bromoetan sulfonil klorida (30 mg) v DMF (1 ml) dodamo po kapljicah k raztopini H-D-Phe-c[Cys-Tyr(tBu)-D-Trp-Lys(Boc)-Abu-Cys]-Thr(tBu)22 (l-ciklopropil-l-metil)-etila (150 mg) in DIEA (55 mg) v DMF (2 ml) pod N₂ pri 0°C. Reakcijsko zmes mešamo pri 0-5°C 3 ure; topilo nato odstranimo pod znižanim tlakom. Ostanek raztopimo v etil acetatu in izperemo s 5% citronsko kislino (2 x), 5% NaHCO₃ (2x) in slanico (2 x). Raztopino nato posušimo nad brezvodnim MgSO₄, filtriramo in kondenziramo do suhega pod znižanim tlakom. Produkt nadalje očistimo s kratko kolono silikagela z eluiranjem z etil acetatom. Frakcije, ki vsebujejo produkt, zberemo in topilo odstranimo pod znižanim tlakom, da dobimo 105 mg Br-(CH₂)₂-SO₂-D-Phe-c[Cys-Tyr(tBu)-D-Trp-Lys(Boc)-Abu-Cys]-Thr(tBu)-NH(lciklopropil-l-metil)-etila kot rahlo rumeno trdno snov. (silikagel, CHCl₃/MeOH/HOAc (9:1:0,1), Rf=0,36).

Primer 4.3

HO(CH₂)₂-n'

- (CH₂) 2 SO₂-D-Phe-c/Cys-Tyr(tBu)-D-Trp-Lys-(Boc)-AbuCys/-Thr-(tBu)-NH(1-ciklopropil-1-metil)-etil

Raztopino Br-(CH₂)₂-S0₂-D-Phe-c[Cys-Tyr(tBu)-D-Trp-Lys(Boc)-Abu-Q's]Thr(tBu)-NH(lciklopropil-l-metil)-etila (100 mg) in 2-hidroksietilpiperazina (55 mg) v 2 ml 1-propanola refluktiramo pod N₂ 2,5 ure. Raztopino ohladimo na sobno temperaturo in topilo odstranimo pod znižanim tlakom. Ostanek nato raztopimo v etil acetatu, ki vsebuje 5% MeOH in izperemo s slanico (3 x). Na koncu raztopino posušimo nad brezvodnim MgSO₄, filtriramo in kondenziramo do suhega pod znižanim tlakom, pri čemer dobimo 110 mg zgoraj identificirane trdne snovi. Brez nadaljnjega čiščenja to spojino uporabimo direktno v naslednji stopnji.

Primer 4.4

HO(CH₂)₂-N

- (CH₂) 2^so2” D-Phe-c/Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys/-Thr-NH2

110 mg zaščitenega somatostatinskega derivata, dobljenega v prejšnji stopnji, raztopimo v 10 ml 90% vodne raztopine TFA in mešamo pri sobni temperaturi pod N₂eno uro. TFA in vodo odstranimo pod znižanim tlakom in ostanek titriramo s hladnim etrom (3 x 10 ml). Dobimo rahlo rumeno trdno snov; to snov nadalje očistimo na preparativni HPLC z reverzno fazo z eluiranjem z: 1) vodno raztopino NH₄OAc; in

2) vodno raztopino HOAc. Z liofilizacijo zbranih frakcij, ki vsebujejo zgoraj identificirani produkt dobimo belo trdno snov. (18 mg. ESI-MS, ((m+l)/e) 1252,7).

Primer 4.5 - druge izvedbe

Naslednje somatostatinske derivate prav tako sintetiziramo na analogen način:

/ \

HO (CH₂) ₂-N N- (CH₂) -CO-D-Phe-c (Cye-Tyr-D-Trp-Lyi-Ahu-Cy« ] -Thr-NH₂

BIM-23190 r~\

HO{CH₂,₂-

-Trp-Lye-Thr-Cy«]-Nal-NHj (HO-CH₂) ₃C-NH- (CHj) ₂-SO₂-D-Phe-c [ Cye-Tyr-D-Trp-Lye-Abu-Cye ] -ThrNH,

BIM-23196

HO-(CH₂).

r\ (CHj) ₂~N^ Ji- (CH₂) -CO-D-Phe-c [ Cye-Tyr-D-Trp-Lye-Abu-Cye ]

Thr-HH,

Primer 5 - Sinteza bombenzinskih derivatov

Naslednji bombenzinski derivat, na katerega se prav tako sklicujemo kot na BIM 26333, sintetiziramo na podoben način, kot je opisano zgoraj:

Druge peptidne derivate v smislu izuma lahko sintetiziramo na podoben način z uporabo sintetičnih modifikacij, znanih v tehniki.

Rezultati preizkusov testnih peptidov

Primer 6 - Testi vezave

Zato, da bi prikazali afiniteto vezave somatostatinskih (SRIF) analogov na somatostatinski receptor, preizkusimo očiščene spojine, opisane zgoraj,v testih somatostatinske vezave, ki vključujejo meritve inhibicije in vitro vezave [¹²⁵I-Tyrⁿ]SRIF-14 na podganje pankreasne membrane AR42J. Iz tabele I je razvidno, da imajo očiščeni somatostatinski analogi v smislu predloženega izuma visoke vezavne afinitete za te receptorje. Dodatno je v tabelah navedena molekulska masa, določena z masno spektrometrijo in ocenjena iz molekulske strukture za vsak somatostatinski derivat.

Podobno smo očiščeni bombenzinski analog, opisan zgoraj, preizkusili v testu bombenzinske vezave. Test vezave sestoji iz meritev inhibicije in vitro vezave [¹²⁵I-Tyrⁿj bombenzina na podganje pankreasne membrane AR42J; v tem testu smo določili, da je afiniteta vezave bombenzinskega analoga na receptor GRP približno 21 nM.

Primer 7 - Inhibicijski test rastnega hormona (GH)

Skupine po pet podganjih samcev Sprague Dawley (vsak z maso med 250-300 g) injiciramo s.c. s somatostatinskim derivatom ali fiziološko raztopino. 30 minut pred izbranimi časovnimi periodami po dajanju zdravila, prikazanimi v tabeli II (2 uri, 4 ure, 6 ur, 8 ur), podgane anesteziramo z nembutalom i.p. (50 mg/kg). 15 minut po anesteziji vzamemo alikvot krvi s srčno punktacijo preko heparina, za meritev bazalnega GH. Poleg tega smo dali injekcijo s.c. D-Ala²-GRF (10 gg/kg). 15 minut kasneje vzamemo kri, da kvantitativno določimo stimuliran GH, ki ga izmerimo v plazmi z uporabo radioimunskega testa, dobljenega od NIADDKD. Odstotek inhibicije GH izračunamo iz razlik, ki jih dobimo med vrednostmi bazalnega in stimuliranega GH.

Tabela II prikazuje učinek raznih očiščenih somatostatinskih analogov kot funkcijo časa. Učinkovitost D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH₂ (BIM-23060) pri inhibiciji rastnega hormona v podganah primerjamo z drugimi somatostatinskimi derivati (BIM-23167, BIM-23179 in BIM-23181) v smislu izuma. Za vse derivate je razvidno presenetljivo podaljšanje delovanja, ki pada v odvisnosti od časa.

Dodatne eksperimente vodimo na D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂somatostatinskemu analogu in BIM-23190, BIM-23195 in BIM-23197, da določimo ED₅₀ (t.j. koncentracijo vsake spojine, potrebne da inhibira 50% sproščanja rastnega hormona po določenem času) glede na spojino. Eksperimente vodimo pri dozirnem območju med 25 ptg/kg in 0,25 μ-g/kg. Tabela III prikazuje presenetljivo izboljšanje somatostatinskih derivatov v primerjavi z nemodificiranim peptidom pri različnih časovnih intervalih, pri čemer je razvidna časovno odvisna inhibicija sproščanja stimuliranega GH s spojinami v smislu izuma.

Primer 8 - Antiproliferacijski test

Očiščenim somatostatinskim analogom, opisanim zgoraj, preizkusimo tudi njihovo aktivnost proti hitro proliferacijskim celicam. Iz tabele IV je razviden učinek teh peptidov na rast podganjih pankreasnih tumorskih celic AR42J. Za razliko od naravnega somatostatina je za derivate v smislu izuma razvidna bistvena antiproliferativna aktivnost. Glede na sliko 1, tako BIM-23014C (somatostatinski analog) kot tudi BIM23118 (derivat BIM-23014) inhibirata rast podganjih pankreasnih tumorskih celic AR42J v odvisnosti od koncentracije, pri čemer je BIM-23118 bolj učinkovit glede na obe spojini. Obe spojini inhibirata rast tumorskih celic v večji meri kot nemodificirani somatostatinski analogi pri ekvivalentnih koncentracijah.

Primer 9 - Test navzema timidina

V tem testu izhodne kulture celic Swiss 3T3 rastejo v Eaglovem mediju, modificiranem po Dulbeccu (DMEM), ki ga dopolnimo z 10% fetalnim telečjim serumom v vlažni atmosferi z 10% CO₂ in 90% zraka pri 37°C. Celice zasejemo v zbiralne pladnje s 24 vdolbinami in jih uporabimo 4 dni po zadnji spremembi medija. Zato, da ohranimo celice v G1/G0 fazi celičnega ciklusa, uporabimo DMEM brez seruma 24 ur pred testom navzema timidina; celice nato izperemo dvakrat z 1 ml alikvotom DMEM (-serum, 0,5 μΜ) in [metil-³H] timidina (20Ci/mmol, New England Nuclear). Bombenzinske derivate na začetku testiramo pri 0,001, 0,01, 0,1,

1, 10, 100, 100 nM. Po 28 urah pri 37°C testiramo vgradnjo [metil-³H] timidina v skupke, ki niso topni v kislini, naslednje. Celice najprej speremo dvakrat z 0,9% NaCl (1 ml alikvoti) ohlajenim z ledom; radioaktivnost, topno v kislini, nato odstranimo s 30 minutno inkubacijo pri 40°C s 5% triklorocetno kislino (TCA). Kulture nato enkrat izperemo (1 ml) s 95% etanolom in jih raztopimo s 30 minutno inkubacijo z 1 ml 0,1 N NaOH. Raztopljeno snov prenesemo v fiole, ki vsebujejo 10 ml Scinta (Packard) in določimo radioaktivnost s tekočinsko scintilacijsko spektrometrijo. Iz tega testa je razvidna sposobnost bombenzinskih derivatov, da stimulirajo navzem timidina v celicah. Za EC₅₀ izračunamo, da je 0,48 nm, iz česar je razvidno, da so bombenzinski derivati v smislu izuma učinkoviti simulatorji navzema timidina.

Postopki uporabe

Peptidne derivate v smislu izuma lahko dajemo sesalcem, posebno ljudem na enega od običajnih načinov (npr. oralo, parenteralno, transdermalno ali transmukozno), v obliki formulacij za zadržano sproščanje z uporabo biorazgradljivega, biokompatibilnega polimera ali z dajanjem in situ (npr. v primeru antikancerogenega bombenzina ali somatostatinskih derivatov, v pljuča), z uporabo micelov, gelov in liposomov. Doziranja so na splošno enaka kot tista, ki se navadno uporabljajo za terapevtske peptide pri ljudeh.

Dodatno so peptidni derivati v smislu izuma primerni za izboljšano zdravljenje bolezni, ki so dovzetne za zdravljenje z ustreznimi nemodificiranimi peptidi. Zlasti so somatostatinski derivati, opisani zgoraj, primerni za zdravljenje raka, akromegalije, pankreatitisa, travmatsko inducirane proliferacije, diabetesa, diabetične retinopatije, restenoze, ki sledi angioplastiji, AIDS-a, nevrogenske inflamacije, artritisa in gastrointestinalnih težav, vključno diareje.

TABELA I - In vitro vezavne afinitete in molekulske mase somatostatinskih peptidnih derivatov

SRIF -14

SRIF -28 BIM- 23107 BIM- 23118

MW

TEST'

IZRAČ.

1340.4

1313.5

1340,40

1313,52

0,17

0,23

0,30

BIM- 23135	1426,2	1426,64	2,52
BIM- 23158	1299,6	1299,54	0,33
BIM- 23167	1347,6	1347,55	0,09
BIM- 23173	1235,5	1235,46	0,11
BIM- 23179	1305,9	1305,55	0,12
BIM- 23181	1435,0	1434,62	0,25
BIM- 23182	1193,8	1193,42	0,12
BIM- 23183	1323,0	1322,49	0,22
BIM- 23190	1202,8	1202,47	0,20
BIM- 23191	1314,9	1314,61	0,08
BIM- 23195	1150,8	1150,39	0,08
BIM- 23196	1243,7	1243,50	0,09
BIM- 23197	1252,7	1252,55	0,29
BIM- 23201	1262,8	1262,53	0,14
BIM- 23202	1247,0	1246,53	0,18
TABELA II -	Inhibicija sproščanja	stimuliranega	rastnega hormona

podganah s somatostatinskimi peptidnimi derivati

Inhibicija (odstotek kontrole) 25 pg/kg

BIM- 23060	2 uri 86,39	4 ure 64,96	6 ur 47,62	8 ur 38,15
BIM- 23167	92,67	79,54	59,72	50,14
BIM- 23179	92,79	63,85	67,78	68,26
BIM- 23181	99,24	77,07	60,56	56,12
TABELA III -	Inhibicija sproščanja stimuliranega rastnega	hormona
podganah s somatostatinskimi	peptidnimi derivati,	danimi s.c.
		ED 50 pg/kg
	2 uri	4 ure	6 ur	8 ur
BIM- 23023	0,48	1,11	2,26	4,32
BIM- 23190	0,68	0,57	0,76	1,04
BIM- 23195	1,19	3,13	2,08	3,23
BIM- 23197	1,01	0,59	1,14	1,59

TABELA IV - Antiproliferacijska aktivnost somatostatinskih peptičnih derivatov

Celična rast (odstotek kontrole)¹

SRIF -14	91,3
SRIF -28	98,0
BIM- 23014C	74,1
BIM- 23107	67,5
BIM- 23109	72,1
BIM- 23118	61,0
BIM- 23135	62,9
BIM- 23167	60,2
BIM- 23173	67,9
BIM- 23181	69,1
BIM- 23182	68,7
BIM- 23183	69,1
BIM- 23195	69,2
BIM- 23197	66,4

¹ Koncentracija 100 nM, podganje pankreasne tumorske celice AR42J po 8 dneh.

Claims

PATENTNI ZAHTEVKI

1. Peptidni derivat, označen s tem, da sestoji iz biološko aktivnega peptidnega deleža, ki ima prosto amino skupino, in vsaj enega substituenta, vezanega na ta peptidni delež, pri čemer navedeni substituent izberemo iz skupine, ki jo sestavljajo spojine I, II in III, kjer je spojina I:

kjer je

R_o O, S, ali NR₅, kjer je R_s H ali (C^CJ alkil;

Rj in R₂ sta vsak neodvisno H, (CH₂)_mOR₆, ali

CH(OR₇)CH₂OR_g, kjer je R₆ H ali (C₂-C_?)acil in sta R_? in R_g vsak neodvisno H, (C₂-C_?) acil ali C(R₉) (R₁₀), kjer sta R₉ in R₁₀ vsak neodvisno H ali (Cj-C₆) alkil;

ali sta R₁ in R₂ v kombinaciji =CHCH₂OR_n, R_n je H ali (C₂-C₇)acil in je m celo število med 1 in 5, vključno; in je eden od R₃ in R₄ (CH₂)_nR₁₂ ali (CH₂)_nCH(OH)R₁₂, kjer je R₁₂ CO, CH₂ ali SO₂ in je n celo število med 1 in 5, vključno; in je drugi od R₃ in R₄ H, (C₁-C₆)hidroksialkil, ali (C₂-C_?) acil; in je spojina II:

r₁₃-o-ch₂ r₁₄-o-ch₂-c- (ch₂ ) _O-R₁₆-R₁₇- (CH₂) _n-R_ia

R₁₅-O-CH₂ kjer so ^13’ ^14 in R_1S vsak neodvisno H ali (C₂-C₂₄)acil; R₁₆ je NH ali ni prisoten:

R₁₇ je CO, O ali ni prisoten;

R₁₈ je CO, CH₂, SO₂ ali ni prisoten; in m je celo število med 0 in 5, vključno; in je n celo Število med 0 in 5, vključno; in je spojina III:

_r(CH₂), ^19“^2O”’^2l^22^23 ^24” (^2^ p^-^25^-(^2) q”^26 (CH₂)n kjer je

R₁₉ H, NH₂, aromatska funkcionalna skupina, OH, (Cj-C₆) hidroksialkil, H(R₂₇)(R_2g), SO₃H ali ni prisoten, kjer sta R₂₇ in R₂₈ vsak neodvisno H ali (Cj-C₆) alkil;

R₂₀ je O ali ni prisoten;

R₂₁ je (Cj-C₆) alkil ali ni prisoten;

R₂₂jeN, O CaliCH;

R₂₃ je (Cj-C₆) alkil ali ni prisoten;

R₂₄je N, CHali C;

R₂₅ je NH, O ali ni prisoten;

R₂₆ je SO₂, CO ali CH₂; m je celo Število med 2 in 5, vključno; nje celo število med 2 in 5, vključno; p je celo število med 0 in 5, vključno; in q je celo število med 0 in 5, vključno, pri čemer je peptidni delež vezan na navedeni substituent pri R₁₂, R_lg ali R₂₆ s CO-N, CH₂-N ali SO₂-N vezjo med navedenim substituentom in navedeno prosto amino skupino.
2.

Peptidni derivat po zahtevku 1, označen s tem, da je navedeni substituent spojina I.
3. Peptidni derivat po zahtevku 1, označen s tem, da je navedeni substituent spojina II.
4. Peptidni derivat po zahtevku 1, označen s tem, da je navedeni substituent spojina III.
5. Peptidni derivat po zahtevku 2, označen s tem, da je R_o O, R_t je CH(OH)CH₂OH, R₂ je H in je eden od R₃ in R₄ (CH₂)_nR_J2 in je drugi od R₃ in R₄ H ali (Cj-CJhidroksialkil.
6. Peptidni derivat po zahtevku 3, označen s tem, da so R₁₃, R₁₄ in R₁₅ H, R₁₆ je NH, R_j7 je CO ali ni prisoten in m = 0.
7. Peptidni derivat po zahtevku 3, označen s tem, da so R₁₃, R₁₄ in ^R15 ^H’ ^Ri6 ⁱⁿR_1? nista prisotna in m = 0.
8. Peptidni derivat po zahtevku 4, označen s tem, da je R₂₃ (Cj-CJalkil, R₂₂ je N, C ali CH, R₂₄ je.C in sta oba m in n celi števili med 2 in 5, vključno.
9. Peptidni derivat po zahtevku 4, označen s tem, da R₂₃ ni prisoten, R₂₄ je N ali CH, R₂₂ je N, O ali C in sta oba m in n celi števili med 2 in 5, vključno.
10. Peptidni derivat po zahtevku 9, označen s tem, da je R₂₄ N, R₂₂ je O in nobeden od R₁₉, R₂₀ in R₂₁ ni prisoten.
11. Peptidni derivat po zahtevku 9, označen s tem, da sta oba R₂₂ in R₂₄ N.
12. Peptidni derivat po zahtevku 11, označen s tem, da nobeden od R₂₂ in R₂₄ ni prisoten.
13. Peptidni derivat po zahtevku 12, označen s tem, da je R₁₉ OH, R₂₁ je (C_fCJalkil in p = 0.
14. Peptidni derivat po zahtevku 13, označen s tem, da je navedeni substituent eden od:

in

HO(CH₂)₂-N N -(ch₂)₂so₂HO(CH₂)₂-N

-ch₂-co
15. Peptidni derivat po zahtevku 5, označen s tem, da je navedeni peptidni delež izbran iz skupine, ki jo sestavljajo: somatostatin, bombezin, kalcitonin, kalcitoninskemu genu soroden peptid, amilin, paratiroidni hormon, gastrin sproščajoči peptid, melanocit stimulirajoči hormon, adrenokortikotropni hormon, paratiroidu soroden peptid, luteinizirni hormon sproščajoči hormon, rastni hormon sproščajoči faktor, rastni hormon sproščajoči peptid, kolecistokinin, glukagon, bradikinin, glukagonu podoben peptid, gastrin, enkefalin, nevromedini, endotelin, substanca P, nevropeptid Y, peptid YY, vazoaktivni intestinalni peptid, gvanilin, pituitarno adenilatno ciklazo aktivirajoči polipeptid, /3-celični tropin, adrenomedulin in njihovi derivati, fragmenti ali analogi.
16. Peptidni derivat po zahtevku 15, označen s tem, da je navedeni peptidni delež somatostatin ali njegov derivat, fragment ali analog.
17. Peptidni derivat po zahtevku 6, označen s tem, da je navedeni peptidni delež izbran iz skupine, ki jo sestavljajo: somatostatin, bombezin, kalcitonin, kalcitoninskemu genu soroden peptid, amilin, paratiroidni hormon, gastrin sproščajoči peptid, melanocit stimulirajoči hormon, adrenokortikotropni hormon, paratiroidu soroden peptid, luteinizirni hormon sproščajoči hormon, rastni hormon sproščajoči faktor, rastni hormon sproščajoči peptid, kolecistokinin, glukagon, bradikinin, glukagonu podoben peptid, gastrin, enkefalin, nevromedini, endotelin, substanca P, nevropeptid Y, peptid YY, vazoaktivni intestinalni peptid, gvanilin, pituitarno adenilatno ciklazo aktivirajoči polipeptid, /3-celični tropin, adrenomedulin in njihovi derivati, fragmenti ali analogi.
18. Peptidni derivat po zahtevku 17, označen s tem, daje navedeni peptidni delež somatostatin ali njegov derivat, fragment ali analog.
19. Peptidni derivat po zahtevku 7, označen s tem, da je navedeni peptidni delež izbran iz skupine, ki jo sestavljajo: somatostatin, bombezin, kalcitonin, kalcitoninskemu genu soroden peptid, amilin, paratiroidni hormon, gastrin sproščajoči peptid, melanocit stimulirajoči hormon, adrenokortikotropni hormon, paratiroidu soroden peptid, luteinizirni hormon sproščajoči hormon, rastni hormon sproščajoči faktor, rastni hormon sproščajoči peptid, kolecistokinin, glukagon, bradikinin, glukagonu podoben peptid, gastrin, enkefalin, nevromedini, endotelin, substanca P, nevropeptid Y, peptid YY, vazoaktivni intestinalni peptid, gvanilin, pituitarno adenilatno ciklazo aktivirajoči polipeptid, /3-celični tropin, adrenomedulin in njihovi derivati, fragmenti ali analogi.
20. Peptidni derivat po zahtevku 19, označen s tem, da je navedeni peptidni delež somatostatin ali njegov derivat, fragment ali analog.
21. Peptidni derivat po zahtevku 13, označen s tem, da je navedeni peptidni delež izbran iz skupine, ki jo sestavljajo: somatostatin, bombezin, kalcitonin, kalcitoninskemu genu soroden peptid, amilin, paratiroidni hormon, gastrin sproščajoči peptid, melanocit stimulirajoči hormon, adrenokortikotropni hormon, paratiroidu soroden peptid, luteinizirni hormon sproščajoči hormon, rastni hormon sproščajoči faktor, rastni hormon sproščajoči peptid, kolecistokinin, glukagon, bradikinin, glukagonu podoben peptid, gastrin, enkefalin, nevromedini, endotelin, substanca P, nevropeptid Y, peptid YY, vazoaktivni intestinalni peptid, gvanilin, pituitarno adenilatno ciklazo aktivirajoči polipeptid, β-celični tropin, adrenomedulin in njihovi derivati, fragmenti ali analogi.
22. Peptidni derivat po zahtevku 21, označen s tem, da je navedeni peptidni delež somatostatin ali njegov derivat, fragment ali analog.
23. Peptidni derivat po zahtevku 22, označen s tem, da je navedeni somatostatinski analog: H-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂, H-D-Phec[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr--Cys]-Nal-NH₂ ali H-D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-ValCys]-Thr-NH₂.