HUT62604A - Process for producing peptides for treating tissue proliferation and pharmaceutical compositions comprising same - Google Patents
Process for producing peptides for treating tissue proliferation and pharmaceutical compositions comprising same Download PDFInfo
- Publication number
- HUT62604A HUT62604A HU9203481A HU348191A HUT62604A HU T62604 A HUT62604 A HU T62604A HU 9203481 A HU9203481 A HU 9203481A HU 348191 A HU348191 A HU 348191A HU T62604 A HUT62604 A HU T62604A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- ala
- leu
- phe
- trp
- val
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
- C07K7/086—Bombesin; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
A találmány tárgyát jó- és rosszindulatú szövetburjánzások kezelésére alkalmas peptidek képezik. A kétéltűekből származó peptid, a bombesin, amely pGlu-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2 [Anastasi és munkatársai, Experientia 27, 166-167 (1971)] közeli rokona az emlősök gasztrin-felszabadító peptidjének (GRP), például a sertés GRP-nek, amely H2N-AlaPro-Val-Ser-Val-Gly-Gly-Thr-Val-Leu-Ala-Lys-Met-TyrPro-Arg-Gly-Asn-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-(NH2) [McDonald és munkatársai, Biochem. Biophys. Rés. Commun. 90, 227-233 (1979)] és az emberi GRP-nek, amely H2N-Val-Pro-Leu-Pro-Ala-Gly-Gly-Gly-Thr-Val-Leu-Thr-Lys-Met-Tyr-Pro-Arg-Gly-Asn-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-(NH2). A bombesinről azt találták, hogy számos humán rák-sejtvonal, köztük a kis-sejt tüdőkarcinóma (SCLC) esetén növekedési faktorként hat, és kimutatták emberi emlő- és prosztatarák esetén is [szerkesztők: Haveman és munkatársai, Recent Results in Cancer Research - Peptide Hormones in Lung Cancer, Springer-Verlag, New York, 1986]. Ezen rákok közül számosról ismert, hogy a GRP-hez vagy bombesin-hez hasonló peptid hormonokat választanak ki. Ennek következtében ezen rákok kezelésére alkalmas szerekként bombesin antagonistákat javasoltak.The present invention relates to peptides for the treatment of benign and malignant tissue proliferations. The amphibian peptide bombesin, which is pGlu-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2 (Anastasi et al., Experientia 27, 166-167). 1971)] is closely related to mammalian gastrin-releasing peptide (GRP), such as porcine GRP, which is H 2 N-AlaPro-Val-Ser-Val-Gly-Gly-Thr-Val-Leu-Ala-Lys-Met -TyrPro-Arg-Gly-Asn-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met (NH 2 ) [McDonald et al., Biochem. Biophys. Gap. Commun. 90, 227-233 (1979)] and human GRP, which is H 2 N-Val-Pro-Leu-Pro-Ala-Gly-Gly-Gly-Thr-Val-Leu-Thr-Lys-Met-Tyr -Pro-Arg-Gly-Asn-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met- (NH 2 ). Bombesin has been found to act as a growth factor in a number of human cancer cell lines, including small cell lung carcinoma (SCLC) and has also been shown in human breast and prostate cancers. in Lung Cancer, Springer-Verlag, New York, 1986]. Many of these cancers are known to secrete peptide hormones such as GRP or bombesin. Consequently, bombesin antagonists have been proposed as agents for the treatment of these cancers.
Cuttitta és munkatársai kimutatták, hogy egy bombesin ellenes fajlagos monoklonális antitest in vivő gátolta kopasz egérbe beültetett humán kis-sejt tüdőrák sejtvonal szaporodását [Cuttitta és munkatársai, Cancer Survey 4.,707-727 (1985)]. 3T3 egér fibroblast-ban, amely bombesin mitózisos hatásáért felelős, Zachary és Rozengurt azt figyelték meg, hogy egy P antagonista anyag (Spantide) bombesin antagonistaként hatott [Zachary és munkatársai, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 82., 7616-7620 (1985)]. Heinz-Erian és munkatársai a bombesin 12-helyzetében lévő His helyére D-Phe-t vittek be, és tengerimalac pankreász acinusaiban bombesin antagonista aktivitást észleltek [HeinzErian és munkatársai, Am. J. of Physiol. 252. G439-G442 (1987)]. Rivier vegy olyan munkáról számolt be, amely arra irányult, hogy a bombesin dekapeptid bioaktív C-terminálisának konformációs szabadságát intramolekuláris diszulfid hidak beépítésével korlátozza; azonban Rivier azt említette, hogy ez ideig a módosított bombesin analógok esetén nem sikerült kimutatnia antagonista aktivitást [Rivier és munkatársai, Competitive Antagonists of Peptide Homones, in Abstracts of the International Symposium on Bombesin-Like Peptides in Health and Disease, Róma, Olaszország (1987. október)].Cuttitta et al. Demonstrated that a specific monoclonal antibody to bombesin inhibited in vivo the proliferation of human small cell lung cancer cell lines implanted in bald mice (Cuttitta et al., Cancer Survey 4: 707-727 (1985)). In a 3T3 mouse fibroblast responsible for the mitotic action of bombesin, Zachary and Rozengurt were observed to have a P antagonist substance (Spantide) acting as a bombesin antagonist [Zachary et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 82: 7616-7620 (1985)]. Heinz-Erian et al., Introduced D-Phe in place of His at position 12 of bombesin and observed bombesin antagonist activity in guinea pig pancreatic acines (HeinzErian et al., Am. J. of Physiol. 252. G439-G442 (1987)]. V Rivier reported a work, which was intended to conformational freedom of the bioactive C-terminal decapeptide of bombesin restricts intramolecular disulfide bridges incorporating; however, Rivier mentioned that, to date, modified bombesin analogues have failed to show antagonistic activity [Rivier et al., Competitive Antagonists of Peptide Homones, Abstracts of the Bombesin-Like Peptides in Health and Disease, Rome, 1987 October)].
A bombesin a gasztrointesztinális szakaszra mind közvetlen, mind közvetett hatással bír, beleértve a hormonok felszabadulására, a pankreász, a gyomor és a vékonybél szekréció stimulálására, valamint a vékonybél mobilitásra gyakorolt hatásokat. A gasztrin és a cholecystokinin (CCK), amelyek bombesin hatására szabadulnak fel, a normális gasztrointesztinális nyálkahártya fenntartásában, valamint a normál és daganatos szövetek szaporodásának gyorsításában játszanak szerepet. Kopasz egérbe beültetett emberi bél- és gyomorrákok szaporodását fokozták gasztrin adagolásával, majd később gátolták szekretin adagolással [Tanake és munkatársai, Tokaku J. Exp. Med. 148, 459 (1986)], továbbá MC-26 egér bélrák - amely gasztrin receptorokkal bír - szaporodását stimulálták pentagasztrinnal [Winsett és munkatársai, Surgery 99, 302, (1980)], és gátolták proglumiddal, ami egy gasztrin-receptor antagonista [Beauchamp és munkatársai, Ann. Surg. 202, 303 (1985)]. A bombesinről azt találták, hogy egyidejűleg hat szövettápláló szerként normális gazdaszervezet pankreászára, valamint növekedésgátló szerként idegen szervezetbe beültetett humán pankreász daganatszövet esetén [Alexander és munkatársai, 1988, Pancreas 2: 247 (1988)].Bombesin has both direct and indirect effects on the gastrointestinal tract, including effects on hormone release, stimulation of pancreas, stomach and small intestine secretion, and small bowel mobility. Gastrin and cholecystokinin (CCK), which are released by bombesin, play a role in maintaining normal gastrointestinal mucosa and accelerating the growth of normal and cancerous tissues. Growth of human intestinal and gastric cancers implanted in bald mice was enhanced by administration of gastrin and subsequently inhibited by administration of secretin (Tanake et al., Tokaku J. Exp. Med. reproduction was stimulated with pentagastrin (Winsett et al., Surgery 99, 302 (1980)) and inhibited by proglum, a gastrin receptor antagonist [Beauchamp et al., Ann. Surg. 202, 303 (1985)]. Bombesin has been found to act simultaneously as a tissue nourishing agent for pancreas normal hosts and as a growth inhibitor in human pancreatic tumor tissue transplanted into a foreign body (Alexander et al., 1988, Pancreas 2: 247 (1988)).
Az alábbiakban az alkalmazott (nem szokásos) rövidítéseket ismertetjük:Below are the (unusual) abbreviations used:
ciklohexil-Ala - CHx-Ala (ciklohexil-alanin) «2 ccyclohexyl-Ala - CHx-Ala (cyclohexyl-alanine) «2 c
H2C CH2 ‘ azonosító csoportH 2 C CH 2 '
H2C ch2 H 2 C ch 2
CHCH
CH2 CH 2
NH2—CH—CO2H vNH 2 —CH — CO 2 H v
pGlu = H2C---CH-COOH (piroglutaminsav);pGlu = H 2 C --- CH-COOH (pyroglutamic acid);
H2C NHH 2 C NH
CC
Nle = H2N-CH-COOH (norleucin)Nle = H 2 N-CH-COOH (norleucine)
I (CH2)3-CH3 I (CH 2 ) 3 -CH 3
Pál - 3-piridil-alaninPaul - 3-pyridylalanine
D-Cpa = D-para-klór-fenilalaninD-Cpa = D-para-chlorophenylalanine
HyPro = hidroxi-prolinHyPro = hydroxyproline
Nal = naftil-alaninNal = naphthylalanine
Sár = szarkozinMud = sarcosine
F5~Phe = pentafluor-fenilalaninF5 ~ Phe = pentafluorophenylalanine
R = jobb (D) konfiguráció; S = bal (L) konfiguráció; racemát = 1:1 arányú R és S elegyR = better configuration (D); S = left (L) configuration; racemate = 1: 1 mixture of R and S
1-metil-His; 3-metil-His = metil (CH3) csoport a hisztidin vagy 3 helyzetű nitrogénjén;1-methyl-His; 3-methyl-His = methyl (CH3) on the histidine or 3-position nitrogen;
HH
C—N1H+ _ CH C—N3HC-N 1 H + _ CH C-N 3 H
HCHHCH
NH2— CH--COOHNH 2 - CH - COOH
A találmány tárgyát egy lineáris vagy gyűrűs, terápiás célra alkalmas peptid .képezi, amely hét - tíz aminosav egységből áll, és amely az alábbiakban megadott, természetben előforduló, a karboxil-terminálison egy Met egységgel záródó peptidek valamelyikével analóg: (a) litorin; (b) emlős GRP tíz aminosavból álló karboxil-terminális régiója, neuromedin B vagy neuromedin C; és (c) kétéltűek bombesinjének tíz aminosavból álló karboxil-terminális régiója, amely az alábbi általános képlet analógja:The present invention relates to a linear or cyclic therapeutic peptide consisting of seven to ten amino acid units which is analogous to one of the following naturally occurring peptides which terminate with one Met unit at the carboxyl terminus: (a) litorin; (b) a ten-amino acid carboxyl terminal region of mammalian GRP, neuromedin B or neuromedin C; and (c) a ten-amino acid carboxyl-terminal region of amphibian bombesin, analogous to the following formula:
RÍR j
A°-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-R3, /A ° -A 1 -A 2 -A 3 -A 4 -A 5 -A 6 -A 7 -A 8 -A 9 -R 3, /
R2 aholR2 where
A° jelentése Gly, a pGlu, Nle, a-aminovajsav, Alá, Val, Gin,A ° is Gly, pGlu, Nle, α-aminobutyric acid, Ala, Val, Gin,
Asn, Leu, Ile, p-X-Phe (ahol X = H, F, Cl, Br, NO2, OH,Asn, Leu, Ile, pX-Phe (where X = H, F, Cl, Br, NO 2 , OH,
CH3), Trp vagy β-Nal bármelyikének D- vagy L-izomerje, vagy hiányzik,CH3), any D or L isomer of Trp or β-Nal, or is absent,
A1 jelentése pGlu, Nle, a-aminovajsav, Alá, Val, Gin, Asn,A 1 is pGlu, Nle, α-aminobutyric acid, Al, Val, Gln, Asn,
Leu, Ile, p-X-Phe (ahol X = H, F, Cl, Br, N02, OH vagyLeu, Ile, pX-Phe (where X = H, F, Cl, Br, NO 2 , OH or
CH3), Asp, Glu, F5-Phe, Trp, β-Nal, Cys vagy Lys bármelyikének D- vagy L-izomerje, vagy hiányzik;CH 3 ), any D or L isomer of any of Asp, Glu, F 5 -Phe, Trp, β-Nal, Cys or Lys;
A2 jelentése Gly vagy pGlu, Alá, Val, Gin, Asn, Leu, Ile, p-X-Phe (ahol X - H, F, Cl, Br, N02, OH vagy CH3), Trp, β-Nal, Asp, Glu, His, 1-metil-His, 3-metil-His, Cys vagy Lys bármelyikének D- vagy L-izomerje, vagy hiányzik,A 2 is Gly or pGlu, Al, Val, Gln, Asn, Leu, Ile, pX-Phe (where X is H, F, Cl, Br, NO 2 , OH or CH 3 ), Trp, β-Nal, Asp , The D or L isomer of any of Glu, His, 1-methyl-His, 3-methyl-His, Cys or Lys, or is absent,
A3 jelentése p-X-Phe (ahol X = H, F, Cl, Br, N02, OH vagy 3 is pX-Phe (where X = H, F, Cl, Br, NO 2 , OH or
CH3), β-Nal vagy Trp bármelyikének D- vagy L-izomerje;CH 3 ), D- or L-isomer of any of β-Nal or Trp;
A4 jelentése Alá, Val, Gin, Asn, Gly, Leu, Ile, Nle, a-amino-vajsav, p-X-Phe (ahol X = H, F, Cl, Br, N02, OH vagy CH3), Trp vagy β-Nal;A 4 is Ala, Val, Gln, Asn, Gly, Leu, Ile, Nle, α-aminobutyric acid, pX-Phe (where X = H, F, Cl, Br, NO 2 , OH or CH 3 ), Trp or β-Nal;
A5 jelentése Gin, Asn, Gly, Alá, Leu, Ile, Nle, a-aminovajsav, Val, p-X-Phe (ahol X = H, F, Cl, Br, N02, OH vagy CH3), Trp, Thr vagy β-Nal; 5 is Gln, Asn, Gly, Ala, Leu, Ile, Nle, α-aminobutyric acid, Val, pX-Phe (where X = H, F, Cl, Br, NO 2 , OH or CH 3 ), Trp, Thr or β-Nal;
A6 jelentése Sár, Gly, vagy Alá, N-metil-Ala, Val, Gin, Asn, Leu, Ile, p-X-Phe (ahol X = H, F, Cl, Br, N02, OH vagy CH3), Trp, Cys vagy β-Nal bármelyikének D-izomerje;A 6 is Sar, Gly, or Ala, N-methyl-Ala, Val, Gln, Asn, Leu, Ile, pX-Phe (where X = H, F, Cl, Br, NO 2 , OH or CH 3 ), The D isomer of any of Trp, Cys, or β-Nal;
A7 jelentése 1-metil-His, 3-metil-His, His, Lys, Asp vagy Glu; 7 is 1-methyl-His, 3-methyl-His, His, Lys, Asp or Glu;
A8 jelentése Leu, Ile, Val, Nle, a-aminovajsav, p-X-Phe (ahol X = H, F, Cl, Br, N02, OH vagy CH3), Trp, Thr, β-Nal, Lys, Asp, Glu, CHx-Ala vagy Cys;A 8 is Leu, Ile, Val, Nle, α-aminobutyric acid, pX-Phe (where X = H, F, Cl, Br, NO 2 , OH or CH 3 ), Trp, Thr, β-Nal, Lys, Asp , Glu, CHx-Ala or Cys;
A9 jelentése Met, Met-oxid, Leu, Ile, Nle, a-aminovajsav, p-X-Phe (ahol X = H, F, Cl, Br, N02, OH vagy CH3), Trp, β-Nal, CHx-Ala vagy Cys bármelyikének L-izomerje; 9 is Met, Methoxide, Leu, Ile, Nle, α-amino butyric acid, pX-Phe (where X = H, F, Cl, Br, NO 2 , OH or CH 3 ), Trp, β-Nal, CH x The L-isomer of any of Ala or Cys;
R1 és R2 mindegyike, egymástól függetlenül hidrogénatom,R 1 and R 2 are each, independently hydrogen,
1-12 szénatomos alkilcsoport, 7-10 szénatomos fenil-alkilcsoport, COEi - ahol Ej jelentése 1-20 szénatomos alkil-,C 1 -C 12 alkyl, C 7 -C 10 phenylalkyl, COE 1 - wherein E 1 is C 1 -C 20 alkyl,
3-20 szénatomos alkenil-, 3-20 szénatomos alkinil-, fenil-, naftil- vagy 7-10 szénatomos fenil-alkil-csoport - vagy 1-12 szénatomos acilcsoport, és Rf és R2 a peptid N-terminális aminosav jához kapcsolódnak; azzal a megkötéssel, hogy ha Rf vagy R2 egyike COEf, a másiknak hidrogénatomnak kell lennie; és R3 jelentése hidrogénatom, aminocsoport, 1-12 szénatomos alkilcsoport, 7-10 szénatomos fenil-alkil-csoport, vagy 3-20 szénatomos naftil-alkil-csoport; azzal a további megkötéssel, hogy ha A° jelen van, A1 jelentése ρ-Glu jelentéstől eltérő; és ha A° vagy A1 jelen van, A2 jelentése a pGlu jelentéstől eltérő, továbbá azzal a megkötéssel, hogy ha A° hiányzik és A1 jelentése pGlu, Rf jelentésének hidrogénatomnak kell lennie, és R2 a Glu egy része, amely a pGlu-ban imingyűrűt alkot; továbbá azzal a megkötéssel, hogy ha Αθ hiányzik és A1 jelentése pGlu jelentéstől eltérő, A1 helyettesítő az A9 helyettesítőhöz kapcsolódhat, vagy ha A° és A1 hiányzik és A2 jelentése pGlu jelentéstől eltérő, A2 A9-hez kapcsolódhat, vagy ha A°, A1 és A2 hiányzik, A3-nak A9-hez kötődhet egy gyűrűs peptidet alkotva; és azzal a további megkötéssel, hogy ha A° hiányzik ésC 3 -C 20 alkenyl, C 3 -C 20 alkynyl, phenyl, naphthyl or C 7 -C 10 phenylalkyl, or C 1 -C 12 acyl, and R f and R 2 are attached to the N-terminal amino acid of the peptide. ; with the proviso that if R 2 is one or Rf Coef, the other must be H; and R 3 is hydrogen, amino, C 1 -C 12 alkyl, C 7 -C 10 phenylalkyl, or C 3 -C 20 naphthylalkyl; with the further proviso that when A 0 is present, A 1 is other than ρ-Glu; and when A 0 or A 1 is present, A 2 is different from pGlu, with the proviso that when A 0 is absent and A 1 is pGlu, R f must be hydrogen and R 2 is a portion of Glu forms an imine ring in pGlu; with the proviso that if Αθ is missing and A 1 is different from pGlu, then A 1 may be linked to A 9 , or if A 0 and A 1 are absent and A 2 is different from pGlu, it may be linked to A 2 A 9 , or when A 0, A 1 and A 2 are absent, A 3 may bind to A 9 to form a cyclic peptide; and with the further proviso that if A ° is missing and
A1 jelentése Asp vagy Glu, vagy ha A° és A1 hiányzik és A2 jelentése Asp vagy Glu, akkor vagy A2 A7-tel vagy A8-cal kapcsolódhat, ahol A7 vagy A8 jelentése Lys, vagy ha A° hiányzik és A1 jelentése Lys vagy A° és AÍ hiányzik és A2 jelentése Lys, A1 vagy A2 kötődhet A7-hez vagy A8-hoz, ahol A7 vagy A8 jelentése Asp vagy Glu; továbbá azzal a megkötéssel, hogy A1 vagy A2 bármelyike lehet Cys, és egy diszulfid hídon keresztül kapcsolódhat A8-hoz vagy A9-hez, azzal a megkötéssel, hogy A8 vagy A9 bármelyike Cys lehet, és egy diszulfid hídon keresztül kapcsolódhat AÍ-hez vagy A2-hez; továbbá azzal a megkötéssel, hogy ha A° és A1 hiányzik, és A6 jelentése D-Ala, akkor A8-A9 nem lehet Leu-Met-NH2;A 1 is Asp or Glu, or when A 0 and A 1 are absent and A 2 is Asp or Glu, it can be linked to either A 2 A 7 or A 8 , where A 7 or A 8 is Lys, or when A 0 is absent and A 1 is Lys or A 0 and A 1 is absent and A 2 is Lys, A 1 or A 2 may be linked to A 7 or A 8 , wherein A 7 or A 8 is Asp or Glu; further provided that any of A 1 or A 2 may be Cys and may be linked to A 8 or A 9 via a disulfide bridge, provided that any of A 8 or A 9 may be Cys and a disulfide bridge may be linked to A 1 or A 2 ; with the proviso that when A 0 and A 1 are absent and A 6 is D-Ala then A 8 -A 9 cannot be Leu-Met-NH 2;
továbbá a fenti vegyületek gyógyászati célra alkalmas sói.and pharmaceutically acceptable salts thereof.
Ha az előzőekben megadott általános képletben R^ vagy R2 bármelyike alifás, aromás vagy lipofil csoport, a vegyület in vivő aktivitása hosszantartó, és a találmány szerinti vegyületek célszövetekbe való szállítása megkönnyíthető.When any of R 1 or R 2 in the above general formula is an aliphatic, aromatic or lipophilic group, the in vivo activity of the compound is prolonged and the delivery of the compounds of the invention to target tissues can be facilitated.
Még előnyösebben a fenti általános képletben a helyettesítők jelentése az alábbi:More preferably, in the above general formula the substituents have the following meanings:
A°A °
A1 jelentése pGlu, Gly, D-Phe vagy A° hiányzik, jelentése pGlu, D-Phe, D-Ala, D-B-Nal, D-Cpa, D-Asn, Cys vagy A1 hiányzik,A 1 is pGlu, Gly, D-Phe or A 0 is absent, pGlu, D-Phe, D-Ala, DB-Nal, D-Cpa, D-Asn, Cys or A 1 are absent,
L-izomerje.L-isomer.
Cys bármelyikénekTo any Cys
-His, 3-metil-His,-His, 3-methyl-His,
Az előnyös peptid-analógok példáiként említjük a következő két:Examples of preferred peptide analogs include the following two:
pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Leu-NH2;pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Leu-NH2;
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Leu-NH2;D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Leu-NH 2 ;
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2;D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH 2 ;
D-Cpa-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2;D-Cpa-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH 2 ;
• ·• ·
- 9 D-Cpa-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Leu-NH2;- 9 D-Cpa-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Leu-NH 2 ;
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Leu-Leu-NH2;D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Leu-Leu-NH 2 ;
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Leu-Met-NH2;D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Leu-Met-NH 2 ;
D-Cpa-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Leu-Met-NH2; pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Phe-Leu-NH2; D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Phe-Leu-NH2;D-Cpa-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Leu-Met-NH 2 ; pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Phe-Leu-NH 2 ; D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Phe-Leu-NH 2 ;
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Phe-Met-NH2;D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Phe-Met-NH 2 ;
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Phe-Leu-NH2;D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Phe-Leu-NH 2 ;
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-CHx-Ala-Leu-NH2;D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-CHx-Ala-Leu-NH 2 ;
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Nle-NH2;D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Nle-NH 2 ;
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Leu-Nle-NH2;D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Leu-Nle-NH 2 ;
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Phe-Nle-NH2;D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Phe-Nle-NH 2 ;
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Phe-Nle-NH2;D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Phe-Nle-NH 2 ;
Ac-His-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Leu-Leu-NH2; ciklo-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Leu; D-Cys-Asn-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Cys-NH2; ciklo-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met; Cys-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Cys-NH2; ciklo-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met; ciklo-D-Phe-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met;Ac-His-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Leu-Leu-NH 2 ; cyclo-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Leu; D-Cys-Asn-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Cys-NH 2 ; cyclo-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met; Cys-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Cys-NH 2 ; cyclo-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met; cyclo-D-Phe-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met;
és ciklo-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met.and cyclo-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met.
Egy természetes aminosav módosítása vagy egy szintetikus aminosav helyettesítése, amelyekre nem korlátozó példaként említjük a pGlu, Nle, Pál, D-Cpa, Met-oxid, Nal, Sár, 1-metilHis vagy 3-metil-His, egy analóg A°, A1, A6 vagy A9 helyzeteinek egyikébe vagy ezek közül többe való bevitelét, vagy az analógon végrehajtott gyűrűzárást, az analóg fokozott stabilitását ered* ·Modification of a natural amino acid or substitution of a synthetic amino acid, such as, but not limited to, pGlu, Nle, Paul, D-Cpa, Methoxide, Nal, Sar, 1-methylHis or 3-methyl-His, is an analog of A °, A 1 , A 6 or A 9 , or the ring closure of the analogue, increased stability of the analogue * ·
- 10 ményezik, azaz védik az amino terminálist az exopeptidáz okozta lebomlástól, és a peptid belső részeit az endopeptidáz okozta lebomlástól. Egyes találmány szerinti analógok karboxilterminális dipeptid szekvenciája megfelel a bombesin vagy bombesinnel rokon analógok természetes C-terminális szekvenciájának.- Protects the amino terminal from degradation by exopeptidase, and protects the interior of the peptide from degradation by endopeptidase. The carboxyl-terminal dipeptide sequence of some analogs of the invention corresponds to the natural C-terminal sequence of bombesin or bombesin-related analogs.
A találmány tárgyát képezi egy lineáris vagy egy gyűrűs, terápiás célra szolgáló peptid, amely hét - tíz aminosav egységből áll, és amely az alábbi, a természetben előforduló, a karboxil-terminálison egy Met egységgel záródó peptidek analógja: (a) litorin; (b) emlős GRP tíz aminosavból álló karboxil-terminális régiója, neuromedin B vagy neuromedin C, és (c) kétéltűek bombesinjének tíz aminosavból álló karboxil-terminális régiója, és ez az analóg a fenti, természetben előforduló peptidek valamelyikének agonistája.The present invention provides a linear or cyclic therapeutic peptide consisting of seven to ten amino acid units, which is an analog of the following naturally occurring peptides terminated at the carboxyl terminus with a Met moiety: (a) litorin; (b) a ten-amino acid carboxyl-terminal region of mammalian GRP, neuromedin B or neuromedin-C; and (c) a ten-amino acid carboxyl-terminal region of amphibian bombesin, and is an agonist of one of the above naturally occurring peptides.
A találmány egy előnyös megvalósulási módja esetén az analóg a természetben előforduló biológiailag aktív peptidnek agonistája vagy részleges agonistája, előnyösen az analóg legalább 25 %-ban, előnyösebben 50 vagy 75 %-ban homológ a természetben előforduló peptid egy régiójával. Az agonista kifejezést olyan értelemben alkalmazzuk, hogy az utánozza vagy fokozza a természetes peptid biológiai hatását a célsejtjére, a részleges agonista a természetes peptid biológiai hatását utánozza vagy fokozza, de kisebb mértékben, mint az agonista. A biológiai hatást - ahogy azt itt értjük - a természetes peptidnek az alábbi egy vagy két rendszerben kifejtett hatásával mérjük: egy in vitro pankreász amilázt felszabadító vizsgálat, és egy in vitro 3T3 fibroblaszt sejt elválasztó rendszer, « ·In a preferred embodiment of the invention, the analog is an agonist or partial agonist of the naturally occurring biologically active peptide, preferably at least 25%, more preferably 50 or 75% homologous to a region of the naturally occurring peptide. The term agonist is used in the sense that it mimics or enhances the biological activity of the natural peptide on its target cell, while the partial agonist mimics or enhances the biological activity of the natural peptide, but to a lesser extent than the agonist. The biological effect, as used herein, is measured by the action of the natural peptide in one or two of the following systems: an in vitro pancreatic amylase release assay and an in vitro 3T3 fibroblast cell secretion system.
- 11 mindkét rendszer leírása szerepel a 88308916.6 számú európai szabadalmi leírásban, amelyet leírásunkba referenciaként építünk be. Egy agonista a természetes peptidnek pankreász sejtekből amilázt felszabadító hatását vagy fibroblaszt sejt megosztását 100 %-kal fokozza, míg egy részleges agonista stimuláló hatása kisebb, azaz 0 - 99 %.11 of both systems are described in European Patent Application 88308916.6, which is incorporated herein by reference. An agonist increases the amylase release or fibroblast cell division of a natural peptide from pancreatic cells by 100%, while a partial agonist has a lower stimulatory effect of 0 to 99%.
A találmány szerinti peptidek hasznosak emberek nem-malignáns sejtburjánzásos betegségeinek, például simaizom burjánzásnak a kezelésére. A találmány szerinti peptidek hasznosak emberek rákos megbetegedésének kezelésére is, különösen prosztata-, bél-, emlő-, pankreász- vagy tüdőrák kezelésére. Ezen kívül a találmány szerinti peptidek alkalmasak étvágy csökkentésére, pankreász-elválasztás fokozására, vagy alkohol iránti vágy csökkentésére.The peptides of the invention are useful in the treatment of non-malignant cell proliferative diseases in humans, such as smooth muscle proliferation. The peptides of the invention are also useful in the treatment of human cancers, particularly prostate, bowel, breast, pancreatic or lung cancers. In addition, the peptides of the invention are useful for reducing appetite, enhancing pancreatic secretion, or decreasing craving for alcohol.
A találmány szerinti analógok alkalmazhatók gyógyászati célra alkalmas sóik formájában is. Az előnyös sók példáiként említjük a terápiásán elfogadható szerves savakkal, például ecetsavval, tejsavval, maleinsavval, citromsavval, almasavval, aszkorbinsavval, borostyánkősavval, benzoesavval, szalicilsavval, metánszulfonsavval, toluolszulfonsavval, trifluor-ecetsavval vagy pamoesavvál, valamint polimer savakkal, például csersavval vagy karboxi-metil-cellulózzal, valamint szervetlen savakkal, például halogén-hidrogénsavakkal, így hidrogén-kloriddal, kénsavval vagy foszforsavval alkotott sókat.The analogs of the invention may also be used in the form of their pharmaceutically acceptable salts. Examples of preferred salts include the therapeutically acceptable organic acids such as acetic acid, lactic acid, maleic acid, citric acid, malic acid, ascorbic acid, succinic acid, benzoic acid, salicylic acid, methanesulfonic acid, polysulfonic acid, trifluoroacetic acid, salts with inorganic acids such as hydrochloric acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid or phosphoric acid.
A találmány további előnyei az előnyös megvalósítási módok alábbi leírásából nyilvánvaló válnak.Further advantages of the invention will become apparent from the following description of preferred embodiments.
A találmány előnyös megvalósítási módjainak ismertetése előtt röviden a rajzot ismertetjük:Before describing preferred embodiments of the invention, the drawing will be briefly described:
• · · · • · * * · • · · · · · • · ···· 4 ♦ · · 4 · · 4 ·4• · · · · · * * · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · ·
- 12 Az 1. ábrán azoknak a természetes előfordulású peptideknek az aminosav-szekvenciáit ismertetjük, amelyeknek a találmány szerinti peptidek analógjai.Figure 1 depicts the amino acid sequences of naturally occurring peptides having analogs of the peptides of the invention.
Az alábbiakban a találmány előnyös megvalósítási módjai szerinti szerkezetet, szintézist és alkalmazást ismertetjük.The following describes the structure, synthesis and use of the preferred embodiments of the invention.
SzerkezetStructure
A találmány szerinti peptidek az 1. ábrán bemutatott szekvenciák valamelyikéből származnak, amely szekvenciák a természetben előforduló peptideknek vagy azok részleteinek megfelelőek. A bombesint, a neuromedin B-t, a neuromedin C-t, a litorint és a találmány szerinti vegyületek GRP analógjait az 502 438 számú (1990. március 30-án bejelentett) amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben, amely a 397 169 számú (1989. augusztus 21-én benyújtott) amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés CIP bejelentése (continuation in part, részleges folytatás), amely a 376 555 számú (1989. július 7-én benyújtott) amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés CIP bejelentése és a 394 727 számú (1989. augusztus 16-án benyújtott) amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben, mely két utóbbi á 317 941 számú (1989. március 2-án benyújtott) amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés CIP bejelentése, amely a 282 328 számú (1988. december 9-én benyújtott) amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés CIP bejelentése, amely a 257 998 számú (1988. október 14-én benyújtott) amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés CIP bejelentése, amely a 248 771 számú (1988. szeptember 23-án benyújtott amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés CIP bejelentése, amely a 207 759 számú (1988. június 16-án benyúj• *· 4 ·· « · « · · *·· · · · ··· • » « ♦ · · · · ·· ··«· « ··The peptides of the invention are derived from one of the sequences shown in Figure 1, which correspond to the naturally occurring peptides or fragments thereof. Bombesin, Neuromedin Bt, Neuromedin Ct, Litorin, and GRP analogues of the compounds of the invention are disclosed in U.S. Patent No. 502,438 (filed March 30, 1990), U.S. Patent No. 397,169, issued August 21, 1989. CIP Application (continuation in part) filed in U.S. Patent Application Serial No. 376,555 (filed July 7, 1989) and U.S. Patent No. 394,727 (Aug. 16, 1989). US Patent Application No. 317,941 (filed March 2, 1989), CIP Application, filed December 9, 1988, U.S. Patent No. 282,328, filed December 9, 1988. US Patent Application CIP, filing U.S. Pat. No. 257,998, filed October 14, 1988. U.S. Patent Application Serial No. 248,771 (1988); United States Patent Application, filed September 23, CIP, filing U.S. Patent No. 207,759, filed June 16, 1988. · · · · · · · · · · · · · · · · ·
- 13 tott) amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés CIP bejelentése, amely a 204 171 számú (1988. június 8-án benyújtott) amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés CIP bejelentése, amely a 173 311 számú (1988. március 25-én benyújtott) amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés CIP bejelentése, amely a 100 571 számú (1987. szeptember 24-én benyújtott) amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés CIP bejelentése, amely bejelentések mindegyikének bejelentője Coy és munkatársai, és amely bejelentéseket leírásunkba referenciaként beépítünk; továbbá a fenti vegyületek leírása szerepel a Zachary és munkatársai, Proc. Nat. Aca. Sci. 82., 7616 (1985) ; Heimbrook és munkatársai, Synthetic Peptides: Approaches to Biological Problems, UCLA Symposium on Mól. and Cell. Bioi. New Series, 86. kötet, szerkesztők: Tam és Kaiser; Heinz-Erian és munkatársai, Am. J. Physiol. G439 (1986);- CIP filing of U.S. Patent Application Publication No. 13,331, filed March 25, 1988, filed June 8, 1988, filed under U.S. Patent No. 204,171, filed June 8, 1988. U.S. Patent Application CIP Application, which is CIP Application No. 100,571, filed September 24, 1987, each of which is hereby incorporated by reference in its entirety, by Coy et al. and the compounds described above are described in Zachary et al., Proc. Nat. Aca. Sci., 82, 7616 (1985); Heimbrook et al., Synthetic Peptides: Approaches to Biological Problems, UCLA Symposium on Mol. and Cell. Biol. New Series, Volume 86, editors: Tam and Kaiser; Heinz-Erian et al., Am. J. Physiol. G439 (1986);
Martinez és munkatársai, J. Med. Chem. 28., 1874 (1985); Gargosky és munkatársai, Biochem. J. 247, 427 (1987); Dubreuil és munkatársai, Drug Design and Delivery, 2. kötet, 49, Harwood Academic Publishers, GB, 1987; Heikkila és munkatársai, J. Bioi. Chem. 262, 16456 (1987); Caranikas és munkatársai, J. Med. Chem. 25, 1313 (1982); Saed és munkatársai, Peptides 10: 597 (1989);Martinez et al., J. Med. Chem., 28, 1874 (1985); Gargosky et al., Biochem. J. 247, 427 (1987); Dubreuil et al., Drug Design and Delivery, Volume 2, 49, Harwood Academic Publishers, GB, 1987; Heikkila et al., J. Bioi. Chem. 262, 16456 (1987); Caranikas et al., J. Med. Chem. 25, 1313 (1982); Saed et al., Peptides 10: 597 (1989);
Rosell és munkatársai, Trends in Pharmacological Sciences 3, 211 (1982) ; Lundberg és munkatársai, Proc. Nat. Aca. Sci. 80, 1120 (1983); Engberg és munkatársai, Natúré 293. 222 (1984); Mizrahi és munkatársai, Euro. J. Pharma. 82., 101 (1982) ; Leander és munkatársai, Natúré 294, 467 (1981); Woll és munkatársai, Biochem. Biophys. Rés. Comm. 155, 359 (1988); Rivier és munkatársai, Biochem. 17, 1766 (1978); Cuttitta és munkatársai, Cancer • ·· « ·· « « · » · ν ·««»««·»· • ·· *··· a «· ···« v ··Rosell et al., Trends in Pharmacological Sciences 3, 211 (1982); Lundberg et al., Proc. Nat. Aca. Sci. 80, 1120 (1983); Engberg et al., Natura 293: 222 (1984); Mizrahi et al., Euro. J. Pharma. 82, 101 (1982); Leander et al., Natura 294, 467 (1981); Woll et al., Biochem. Biophys. Gap. Comm., 155, 359 (1988); Rivier et al., Biochem. 17, 1766 (1978); Cuttitta et al., Cancer.
- 14 Surveys 4, 707 (1985); és az Aumelas és munkatársai, Int. J. Peptide Rés. 30, 596 (1987) szakirodalmi helyeken ismertetik, amelyeket ugyancsak referenciaként építünk leírásunkba.- 14 Surveys 4, 707 (1985); and Aumelas et al., Int. J. Peptide Sl. 30, 596 (1987), which are also incorporated herein by reference.
Az analógok szintéziseSynthesis of analogs
A következőkben a D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Leu-NH2 képletnek megfelelő bombesin agonista, a BIM-26187 szintézisét ismertetjük. Más bombesin vagy GRP agonisták is előállíthatok az alábbi szintézis eljárás módosított változatának végrehajtásával.The following describes the synthesis of the bombesin agonist DIM-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Leu-NH2, BIM-26187. Other bombesin or GRP agonists may be prepared by carrying out a modified version of the following synthesis procedure.
1) alfa-terc-butoxi-karbonil (BOC)-leucin beépítése1) incorporation of alpha-tert-butoxycarbonyl (BOC) leucine
4-metil-benzhidril-aminba4-methyl-benzhydrylamine
Kloridion formájú 4-metil-benzhidril-amin-polisztirol gyantát (Bachem, Inc.), (0,72 milliekvivalens/g) egy olyan ACT200 peptid szintetizátor (Advanced Chem. Tech, Inc.) reakcióedényébe viszünk, amely a következő reakcióciklus végrehajtására van programozva: (a) metilén-klorid; (b) 10 % trietil-amin kloroformban; (c) metilén-klorid; és (d) dimetil-formamid.The chloride ion-form 4-methylbenzhydrylamine polystyrene resin (Bachem, Inc.) (0.72 milliequivalents / g) is charged to a reaction vessel of an ACT200 peptide synthesizer (Advanced Chem. Tech, Inc.) to carry out the following reaction cycle. programmed with: (a) methylene chloride; (b) 10% triethylamine in chloroform; (c) methylene chloride; and (d) dimethylformamide.
A semlegesített gyantát alfa-terc-butoxi-karbonil (BOC)-leucinnal és diizopropil-karbodiimiddel - mindegyikből 3 mól ekvivalens mennyiséggel - metilén-kloridban 1 órán át keverjük. A kapott aminosav-gyantát a szintetizátorban dimetil-formamiddal mossuk és 5 %-os dimetil-formamidos ecetsavanhidriddel reagáltat juk 5 percig. Ezután dimetil-formamiddal és metilén-kloriddal mossuk.The neutralized resin was stirred with alpha-tert-butoxycarbonyl (BOC) leucine and diisopropylcarbodiimide in 3 molar equivalents each in methylene chloride for 1 hour. The resulting amino acid resin was washed in the synthesizer with dimethylformamide and reacted with 5% dimethylformamide acetic anhydride for 5 minutes. It is then washed with dimethylformamide and methylene chloride.
2) A maradék aminosavak kapcsolása2) Coupling of the remaining amino acids
A peptid szintetizátort úgy programozzuk, hogy az alábbi reakcióciklust hajtsa végre: (a) metilén-klorid; (b) 33 %-os me♦ · » ·* « · 9 ·The peptide synthesizer is programmed to carry out the following reaction cycle: (a) methylene chloride; (b) 33% me ♦ · »· *« · 9 ·
Λ 9 · ·*· • · · ···« · ·· · ·· · «· ··Λ 9 · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · ·
- 15 tilén-kloridos trifluor-ecetsav (TFA) (kétszer, alkalmanként 5 és 25 perc), (c) metilén-klorid; (d) izopropil-alkohol; (e) 10 %-os kloroformos trietil-amin; és (f) metilén-klorid.Trifluoroacetic acid (TFA) (15 times, 5 and 25 minutes each), (c) methylene chloride; (d) isopropyl alcohol; (e) 10% chloroform triethylamine; and (f) methylene chloride.
Ezután egymást követően a fentivel azonos eljárással az alábbi aminosavakat (3 mólekvivalens mennyiségben) kapcsoljuk: BOC-Leu, BOC-His (tozil), BOC-Gly, BOC-Val, BOC-Ala, BOC-Trp, BOC-Gln (a kapcsolást 1 ekvivalens hidroxi-benzotriazol jelenlétében végezzük), BOC-D-Phe (a kapcsolást 1 ekvivalens hidroxi-benzotriazol jelenlétében végezzük). A kész gyantát ezután metanollal mossuk és levegőn szárítjuk.The following amino acids (3 molar equivalents) are then sequentially coupled using the same procedure: BOC-Leu, BOC-His (tosyl), BOC-Gly, BOC-Val, BOC-Ala, BOC-Trp, BOC-Gln In the presence of 1 equivalent of hydroxybenzotriazole), BOC-D-Phe (coupling is carried out in the presence of 1 equivalent of hydroxybenzotriazole). The finished resin is then washed with methanol and air dried.
Az előzőekben leírt 1,41 g peptid-gyantát 5 ml anizollal, 50 mg ditioeritreitollal és 25 ml vízmentes hidrogén-fluoriddal kezeljük 0 °C hőmérsékleten 1 órán át. A hidrogén-fluorid felesleget száraz nitrogénáramban gyorsan elpárologtatjuk, a visszamaradó anyagot éterrel mossuk. A nyers peptidet 100 ml 4 mól/1es ecetsavban oldjuk, és az oldatot vákuumban bepároljuk. A nyers peptidet ezután minimális térfogatú metanol/víz elegyben oldjuk, és etil-acetáttal eldörzsöljük. Az eldörzsölt peptidet 9,4 mm belső átmérőjű, 50 cm magas oktadecil-szilán - szilicium-dioxid oszlopra (Whatman Partisii 10 ODS - 2M9) visszük. Az eluálást 50/50 arányú/ 0,1 %-os TFA/acetonitril 0,1 %-os vizes TFA-ban lévő 20-80 %-os lineáris gradiensével végezzük. A frakciókat analitikai nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással vizsgáljuk, a megfelelő frakciókat kis térfogatra pároljuk be, majd ezeket liofilizáljuk. így 65 mg terméket nyerünk színtelen por formájában.The peptide resin (1.41 g) described above was treated with 5 ml of anisole, 50 mg of dithioerythritol and 25 ml of anhydrous hydrogen fluoride at 0 ° C for 1 hour. The excess hydrogen fluoride was evaporated rapidly in a stream of dry nitrogen and the residue was washed with ether. The crude peptide was dissolved in 100 ml of 4 M acetic acid and the solution was concentrated in vacuo. The crude peptide was then dissolved in a minimum volume of methanol / water and triturated with ethyl acetate. The triturated peptide was loaded onto a 9.4 mm internal diameter 50 cm high octadecylsilane silica column (Whatman Partisil 10 ODS - 2M9). Elution was performed with a linear gradient of 50/50 / 0.1% TFA / acetonitrile in 20% to 80% 0.1% aqueous TFA. The fractions were analyzed by HPLC and the appropriate fractions were concentrated to low volume and lyophilized. 65 mg of product are obtained in the form of a colorless powder.
Más vegyületek, köztük a D-Cpa1, CHx-Ala8 vagy Nle9 is előállíthatok a fentiek szerint.Other compounds, including D-Cpa 1 , CHx-Ala 8 or Nle 9, may be prepared as described above.
··« «· · ···· «« · ···
4« · «4 ··· • · 4 4·«· » ·« »··· ♦ ·«4 «·« 4 ··· • · 4 4 · «·» · «» ··· ♦ · «
- 16 A találmány szerinti peptidek az alábbi módon ciklizálhatók.The peptides of the invention can be cyclized as follows.
A peptid-gyanta észterről hidrogén-fluoriddal lehasított nyers peptidsavat DMF-ban (0,1 - 1 % koncentrációjú) oldjuk, kondenzálószerrel kezeljük (alkalmazhatunk például BOP reagenst, DEPC-t, DPPA-t vagy bármely más kondenzálószert), majd bázissal (például trietil-aminnal vagy diizopropil-etil-aminnal) folytatjuk a kezelést szobahőmérsékleten 1-3 napig. Ezután az anyagot az oldószer vákuumban való eltávolításával beszárítjuk. A visszamaradó anyagot nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással, szokásos módon tisztítjuk. A gyűrűzárást, például a ciklofD-Phe1, Leu8, Leu9]Litorin előállítását, amelyben a D-Phe1 kovalensen kötődik a Leu9-hez, a fenti eljárás szerint hajtjuk végre, BOP reagensként benzotriazol-l-il-oxi-trisz(dimetil-amin)-foszfónium-hexafluoro-foszfátot, DEPC reagensként dietil-ciano-foszfonátot és DPPA reagensként difenil-foszforil-azidot alkalmazunk.The crude peptide acid cleaved from the peptide resin ester with hydrogen fluoride is dissolved in DMF (0.1 to 1%), treated with a condensing agent (e.g. BOP reagent, DEPC, DPPA or any other condensing agent) and then with a base (e.g. triethylamine or diisopropylethylamine) at room temperature for 1-3 days. The material is then dried by removing the solvent in vacuo. The residue was purified by high pressure liquid chromatography in the usual manner. Ring closure, for example, the preparation of cyclofD-Phe 1 , Leu 8 , Leu 9 ] Litorin, in which D-Phe 1 is covalently bound to Leu 9 , is carried out according to the above procedure, as the BOP reagent benzotriazol-1-yloxy. tris (dimethylamine) phosphonium hexafluorophosphate, DEPC reagent diethyl cyanophosphonate and DPPA reagent diphenylphosphoryl azide.
A következőkben a találmány szerinti vegyületek hatásmechanizmusát ismertetjük.The following describes the mechanism of action of the compounds of the invention.
A találmány szerinti analógok ráksejtek szaporodásának gátlására alkalmasak, vagy megelőzhetik a nem-malignáns szövetek burjánzását azáltal, hogy agonistaként vagy részleges agonistaként hatnak; azaz az analóg teljesen vagy részben utánozza vagy fokozza a természetes peptidnek a célsejtre kifejtett biológiai hatását. A ráksejtek szaporodása analógok által való gátlásának egy lehetséges mechanizmusát Bunn és munkatársai ismertetik [Proc. Nat. Aca. Sci. 87., 2162 (1990)], akik egy vagy több neuropeptid adagolása után CHO sejtekben a kalciumion- • ♦ · ·V ••4 4 4 4··· • · · 4··«4 ·· ··«· « ««The analogs of the present invention are useful for inhibiting the proliferation of cancer cells or preventing proliferation of non-malignant tissues by acting as agonists or partial agonists; that is, the analogue wholly or partially mimics or enhances the biological activity of the natural peptide on the target cell. A possible mechanism for inhibiting the growth of cancer cells by analogues is described by Bunn et al., Proc. Nat. Aca. Sci., 87, 2162 (1990)], who, after administration of one or more neuropeptides, produce calcium ions in CHO cells. · «« «
- 17 -fluxust mérték. Bunn és munkatársai a sejtek érzékenységének megszűnését észlelték a neuropeptidre, miután egy második dózist adagoltak, azaz az első dózis adagolása után, és a kalcium koncentrációnak a nyugalmi értékre való visszatérését követően azonos peptid második dózisának adagolása nem váltott ki kalcium fluxust. Ha azonban második dózisként egy más peptidet alkalmaztak, ismét jelentkezett kalcium fluxus. Ez azt mutatja, hogy a különböző peptidek különböző kalcium fluxus utakat idézhetnek elő. Bunn és munkatársai eredményei azt mutatják, hogy a neuropeptid iránti érzéketlenné válás előfordulhat mind rákos, mind normál szövetek esetén, így azt sugallják, hogy egy agonista visszaszoríthatja a tumor sejtek növekedését hasonló mechanizmus révén.- 17 flux was measured. Bunn et al. Observed a loss of cellular sensitivity to the neuropeptide after a second dose, that is, after the first dose, and a second dose of the same peptide did not induce calcium flux following the return of calcium concentration to rest. However, when another peptide was used as the second dose, calcium flux was reappeared. This indicates that different peptides can induce different calcium flux pathways. The results of Bunn et al. Suggest that neuropeptide insensitivity can occur in both cancerous and normal tissues, suggesting that an agonist may suppress the growth of tumor cells through a similar mechanism.
A találmány szerinti analógok hasznosak bél-, prosztata-, emlő-, pankreász- vagy tüdőrák kezelésére, sejtburjánzás megelőzésére simaizomban, az étvágy visszaszorítására, pankreász szekréció fokozására vagy alkohol iránti vágy visszaszorítására. A találmány szerinti analógok adagolhatók emlősnek, különösen embernek a szokásos adagolási módok valamelyikével (például orálisan, parenterálisan, transzdermálisan vagy nyálkahártyán át), nyújtott felszabadulású készítmény formájában egy biológiailag lebomló, biológiailag kompatibilis polimer alkalmazásával, vagy micellák, gélek és liposzómák alkalmazásával adott helyre szállítva (on-site delivery), továbbá rektálisan (például kúp formájában vagy beöntésként). Az analógok embernek 0,25 mg/kg/nap és 5 mg/kg/nap közötti dózisban adagolhatók.The analogs of the invention are useful for treating bowel, prostate, breast, pancreatic, or lung cancer, preventing cell proliferation in smooth muscle, suppressing appetite, enhancing pancreatic secretion, or suppressing craving for alcohol. The analogs of the invention may be administered to a mammal, especially a human, by conventional routes of administration (e.g., orally, parenterally, transdermally or transmucosally) using a biodegradable, biocompatible polymer, or by administration of micelles, gels and liposomes. on-site delivery) and rectally (e.g. in the form of a suppository or enema). Analogs may be administered to a human in a dosage range of 0.25 mg / kg / day to 5 mg / kg / day.
Claims (33)
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US52022690A | 1990-05-09 | 1990-05-09 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HU9203481D0 HU9203481D0 (en) | 1993-01-28 |
HUT62604A true HUT62604A (en) | 1993-05-28 |
Family
ID=24071694
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU9203481A HUT62604A (en) | 1990-05-09 | 1991-05-09 | Process for producing peptides for treating tissue proliferation and pharmaceutical compositions comprising same |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0531342A1 (en) |
JP (1) | JPH05506862A (en) |
CA (1) | CA2081890A1 (en) |
HU (1) | HUT62604A (en) |
WO (1) | WO1991017181A1 (en) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6541610B1 (en) * | 1989-09-05 | 2003-04-01 | Immunex Corporation | Fusion proteins comprising tumor necrosis factor receptor |
US5767236A (en) * | 1990-05-09 | 1998-06-16 | Biomeasure, Inc. | Linear therapeutic peptides |
US5834433A (en) * | 1990-07-26 | 1998-11-10 | Merrell Pharmaceuticals Inc. | Compounds and pharmaceutical uses of peptides of bombesin and GRP |
CA2129032A1 (en) * | 1992-02-07 | 1993-08-19 | Judson V. Edwards | Phenylalanine analogs of bombesin |
EP0737691B1 (en) * | 1995-03-13 | 1998-09-09 | Biomeasure, Inc. | Bombesin analogs |
DE10044989A1 (en) | 2000-09-11 | 2002-03-21 | Bayer Ag | Liquid sulfur-containing oligosiloxanes and their use in rubber compounds |
NZ576739A (en) | 2003-04-22 | 2011-01-28 | Sod Conseils Rech Applic | Peptide vectors for delivering paclitaxel |
CN107446053A (en) | 2008-06-12 | 2017-12-08 | 益普生生物创新有限公司 | The suppression of cancer |
EP2310028B1 (en) | 2008-06-12 | 2016-11-16 | Ipsen Bioinnovation Limited | Fusion proteins for use in the treatment of acromegaly |
GB0820970D0 (en) | 2008-11-17 | 2008-12-24 | Syntaxin Ltd | Suppression of cancer |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4207311A (en) * | 1977-07-18 | 1980-06-10 | The Salk Institute For Biological Studies | Peptides having analgesic and thermoregulative properties |
US4331661A (en) * | 1980-10-03 | 1982-05-25 | The Salk Institute For Biological Studies | Bombesin analogs |
GB8427651D0 (en) * | 1984-11-01 | 1984-12-05 | Beecham Group Plc | Compounds |
US4803261A (en) * | 1986-06-27 | 1989-02-07 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Method for synthesizing a peptide containing a non-peptide |
GB8813356D0 (en) * | 1988-06-06 | 1988-07-13 | Ici Plc | Polypeptide compounds |
GB2231051B (en) * | 1989-05-05 | 1992-12-16 | Erba Carlo Spa | Bombesin antagonists |
WO1991004040A1 (en) * | 1989-09-15 | 1991-04-04 | Biomeasure, Inc. | Treatment of colon cancer |
-
1991
- 1991-05-09 HU HU9203481A patent/HUT62604A/en unknown
- 1991-05-09 WO PCT/US1991/003265 patent/WO1991017181A1/en not_active Application Discontinuation
- 1991-05-09 CA CA002081890A patent/CA2081890A1/en not_active Abandoned
- 1991-05-09 JP JP91509428A patent/JPH05506862A/en active Pending
- 1991-05-09 EP EP91909510A patent/EP0531342A1/en not_active Withdrawn
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO1991017181A1 (en) | 1991-11-14 |
HU9203481D0 (en) | 1993-01-28 |
JPH05506862A (en) | 1993-10-07 |
EP0531342A1 (en) | 1993-03-17 |
EP0531342A4 (en) | 1994-04-06 |
CA2081890A1 (en) | 1991-11-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5552520A (en) | Therapeutic peptide derivatives | |
JP2919889B2 (en) | Therapeutic peptides | |
EP0309297B1 (en) | Therapeutic peptides | |
US5217955A (en) | Treatment of cancer with peptide analog of bombesin, grp, litorin or neuromedin | |
WO1991002746A1 (en) | Therapeutic peptides | |
US5767236A (en) | Linear therapeutic peptides | |
HUT62604A (en) | Process for producing peptides for treating tissue proliferation and pharmaceutical compositions comprising same | |
US5736517A (en) | Treatment of cancer with peptides | |
EP0588873B1 (en) | Treatment of liver cancer | |
HU205771B (en) | Process for producing irreversible peptide ligands for bombesin receptors and process for producing pharmaceutical compositions comprising such peptides as active ingredient | |
EP0737691B1 (en) | Bombesin analogs | |
JP3743794B2 (en) | Bombesin analog | |
RU2088592C1 (en) | Therapeutic peptides or their pharmaceutically acceptable salts | |
AU622123C (en) | Therapeutic peptides | |
CA2144264A1 (en) | Bombesin analogs |