JP5799397B2 - 癌の抑制 - Google Patents

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Description

本発明は、一般的な癌、特に、結腸直腸癌、前立腺癌、乳癌および肺癌の、増殖、維持および進行の抑制に関する。
結腸直腸癌は、米国の男女双方ともに３番目に多い一般的な癌であり、世界の癌罹患率についての世界保健機関の2003年4月の報告によれば、毎年940,000を超える新たな症例が診断され、毎年世界中でほぼ500,000人の死亡が報告されている。結腸癌の5年全生存率は約60％であり、米国ではこの疾患で毎年ほぼ60,000人が死亡している。
現在採用されている療法は、主に、結腸または直腸における腫瘍の位置、および疾患の病期に依存しており、ａ）外科手術、ｂ）化学療法、ｃ）生物療法、またはｄ）放射線療法を含み得る。原発腫瘍を除去する外科手術が、主な第一選択治療である。しかし、外科手術の一般的な副作用として、外科手術による出血、脚の血栓、および手術中の隣接器官への損傷を含む。
外科的選択肢は、以下を含む：（i）腸切除。これは、癌に罹患した結腸または直腸の領域に到達するための、腹部の切開を含む。外科手術は、癌、および癌に隣接する結腸または直腸の部分を除去する。その後、結腸または直腸の２つの健常な端部が元通りに縫合される；（ii）肝臓切除。これは、結腸直腸領域から肝臓へ広がった転移の除去、および癌に隣接する肝臓の部分の除去を含む。肝臓は、残りが健常である限り、半分まで除去され得る。肝臓の癌細胞を破壊する他の２つの方法として、放射線（高周波アブレーション）および熱（マイクロ波凝固）を含む；ならびに（iii）凍結外科手術（凍結療法とも呼ばれる）。これは、液体窒素を用いて、肝臓にまで広がった結腸直腸癌を凍結および破壊する。これは、肝臓の腫瘍の大きさが小さい場合に用いられる。
化学療法は一般的に、通常腫瘍がリンパ節にまで広がった少数派の患者に対する外科手術の補助として用いられており、そのような患者に対する化学療法の利益ははっきりと確立されている。しかし、化学療法による副作用として、吐き気、嘔吐、食欲低下、脱毛、口内炎、手足などの発疹を含み、また、感染症の危険、軽症による出血または痣、および貧血による疲労を含む。化学療法は、以下の種々の状況において行われ得る：（i）結腸直腸癌が進行し、体の他の部分に既に広がっている場合、一次化学療法が通常用いられる。この場合、外科手術では癌を除去することができないので、現時点では、医師は通常、腫瘍小結節を小さくし、症状を緩和し、そして寿命を延ばすことができる化学療法を推奨する；（ii）癌が外科手術的に除去された後に化学療法が行われる場合、補助化学療法が用いられる。外科手術はすべての癌を除去し得ないので、肝臓に転移した、または広がったかもしれない細胞などの、見逃されたかもしれないあらゆる癌細胞を殺すために、補助化学療法治療がしばしば用いられる；および（iii）外科手術に先立ち、腫瘍を小さくするために、術前化学療法が用いられ得、それによって外科医は、合併症をより少なくしながら、腫瘍を完全に除去することができる。化学療法はしばしば、放射線療法と共に行われて、放射線療法をより効果的にする。
生物療法は、既に広がった癌を有する人々に指示され得る。現在の療法は、以下の使用を含む：（i）生物反応修飾物質。これは、癌を直接的に破壊しないが、代わりに腫瘍に対して反応するように免疫系を誘発する。生物反応修飾物質は、インターフェロンおよびインターロイキンなどのサイトカインを含む。しかし、この戦略は、より効果的に作用するように免疫系の細胞を刺激することを期待して、注射または点滴による大量投与での使用を含む。また、生物反応修飾物質の使用はしばしば、発熱、悪寒、吐き気および食欲低下を含むインフルエンザ様症状を伴う。さらに、不所望の副作用として、注射位置の発疹または腫れ、治療の結果としての血圧低下、および疲労を含む；（ii）コロニー刺激因子。これは、赤血球および白血球ならびに血小板などの骨髄細胞の生産を刺激する。このため、コロニー刺激因子は腫瘍に直接影響を及ぼさないが、代わりに、癌治療中に免疫系を支援するのに役立つ。しかし、残念ながら、コロニー刺激因子の使用は、骨の疼痛、疲労、発熱および食欲低下などの不所望の副作用を伴う；そして（iii）腫瘍ワクチン。これは、癌細胞を認識するように免疫系を促進する。このワクチンは通常、癌の発病後に利用されるので、予防的というよりは抑制的である。有効性は乏しく、腫瘍ワクチンの使用は、筋肉痛および軽度の発熱を伴う。
結腸直腸癌の治療の主な困難は、20〜25％の患者が初期診断時に臨床的に検出可能な肝臓転移を有し、そしてさらに40〜50％の患者が、最初の外科手術後3年以内に肝臓転移を発症することである。通常、転移性疾患は最初に肝臓において発症する。
乳癌は、非メラノーマ皮膚癌を例外として、女性の最も多い一般的な種類の癌である。2007年の米国の女性において、ほぼ180,000の浸潤性乳癌の新たな症例が診断され得ると推定される。女性は、8人に約1人（13％）が湿潤性乳癌を発症する一生涯の危険を有している。
現在の療法は、外科手術、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、および生物療法を含む。ある治療法の別の治療法に対する選択は、腫瘍の大きさおよび位置、リンパ浸潤および組織学的亜型判定などの組織学的要因、疾患の病期または範囲、ならびに患者の年齢および全体的な健康を考慮することを含む。
外科的選択肢は、リンパ節を除去するまたは除去しない、乳腺切除または腫瘍摘出手術（乳房温存療法または乳腺部分切除とも呼ばれる）を含む。不運にも、乳腺切除を経験した患者はしばしば、創傷感染および膿瘍、皮膚弁の壊死、胸壁の知覚障害、ファントム乳房症候群、術後疼痛症候群、血清腫またはリンパ浮腫の１またはそれ以上に苦しむ。同様に、腫瘍摘出手術に関連する合併症は、腋窩静脈の損傷または血栓症、血清腫形成、リンパ浮腫、肩運動の機能障害、腕神経叢への損傷、および胸壁の疼痛を含む。
放射線療法は、乳房軟組織の壊死、持続性乳房浮腫、肋骨骨折、肩運動の低下、知覚障害および腕の疼痛を伴う上腕神経叢障害、リンパ浮腫、血管肉腫、肺癌、冠動脈疾患、ならびに症候性肺炎などの合併症を伴う。
しかし、現在の化学療法選択肢は、吐き気、脱毛、早期閉経、一過性熱感、疲労および一時的な血球数の低下などの不所望の副作用と連動する。また、より深刻な副作用は、肝臓毒性、出血性膀胱炎、無月経、小脳性運動失調、心筋機能障害、末梢神経障害、骨髄抑制、神経毒性、脱毛症、および胸水を含む。
ホルモン療法は今まで、TamoxifenTMの使用、ならびに／またはArimidexTM、AromasinTMおよびFemaraTMなどのアロマターゼインヒビターの使用に集中してきた。これらの治療用分子は、ホルモン、特にエストロゲンの活性を抑制することで作用し、このため、乳癌の外科手術後に残り得る乳癌細胞の増殖を阻害する。しかし、残念ながら、ホルモン療法は、一過性熱感および膣乾燥などの不所望の副作用を伴う。特に、TamoxifenTMの治療は、子宮内膜癌の危険を増大させ、更年期障害を誘発し、そして白内障を発症する危険を増大させることが示されてきた。
生物療法は今まで、HerceptinTMの使用に集中してきた。しかし、この治療用分子の使用は、心毒性、発熱、悪寒、吐き気、嘔吐および疼痛などの副作用を伴い、これらは特に最初の点滴後に起こり得る。
前立腺癌は、米国において癌が元で死亡した男性の２番目に大きな死亡原因であり、そして米国人男性において診断される最も多い一般的な癌である。米国において、10人中1人の男性が、その生涯に前立腺癌を発症すると推定される。
他の種類の癌と同様に、利用可能な治療は、癌の悪性度および病期、ならびに患者の年齢および全体的な健康などの種々の要因に依存する。現在の療法は、以下を含む：（i）PSA血液検査に基づく経過観察（watchful waiting）。これは、患者の状態が悪化しなかったことを調べるために定期的に実行される。この手法は、癌が患者の平均余命に影響を及ぼさないような、年配の男性を侵す、小さく、増殖が遅く、侵襲性でない癌に対して推奨される；（ii）前立腺切除（すなわち、前立腺の除去）。しかしこれは、膀胱制御の問題、尿漏、インポテンス、および吻合部狭窄などの副作用を伴う；（iii）高出力Ｘ線を用いる外照射療法（EBRT）などの放射線療法。しかしこの療法は、直腸の問題、持続性出血、および直腸潰瘍を伴う。あるいは、前立腺内に直接移植される放射性シードインプラントが用いられ得る。この療法は、小線源療法としても知られており、そして外部ビームを介して通常達成されるよりも（長時間ではあるが）少ない放射線量を照射する。不運にも、この種類の療法は、遅い痛みを伴う排尿、およびインポテンスなどの合併症を伴う；（iv）ホルモン療法。これは、男性の性ホルモンが癌細胞の増殖を刺激することを防止するように設計される。これは通常、男性性ホルモン分泌の化学的阻害によって、または外科的手段（睾丸除去）によって、達成される。不運にも、これらの療法は、乳房肥大、性欲の低下、インポテンス、一過性熱感、体重増加、ならびに筋肉および骨量の低下などの副作用を伴う。また、いくらかのホルモン療法薬剤が、吐き気、下痢、疲労、および肝臓障害を引き起こすことが示されている；（v）化学療法。これは、結腸直腸癌、乳癌または前立腺癌との関連で前述したのと同じ種類の薬剤を用いる；および（vi）凍結療法。これは、罹患組織を凍結することによって癌細胞を破壊する。残念ながら、この療法は、しばしば膀胱周りの組織への損傷および長期的合併症（例えば直腸または排尿を制御する筋肉への損傷）をもたらす、凍結プロセスの及ぶ範囲を監視する上での困難のために、限られている。
肺癌は、世界中で男性および女性の双方に対する癌関連死亡率の主な原因である。世界的に肺癌は、依然として最も多い一般的な悪性腫瘍であり、推定1.04百万の新たな症例が毎年見つかっており、診断される新たな癌症例の12.8％を表す。肺癌は世界中で毎年921,000人の死亡原因であり、癌関連死のほぼ18％を占める。
現在の肺癌療法は、外科手術、放射線療法および化学療法を、別々に、または組み合わせて含む。これらの療法を用いる場合、医師は、肺癌の種類（小細胞または非小細胞）、腫瘍の大きさおよび位置、腫瘍の病期（肺外部への転移の有無）、ならびに患者の全体的な健康を考慮する
非小細胞肺癌（NSCLC）に対して、現在利用可能な治療は、以下を含む：（i）化学療法。不運にも、NSCLCは、化学療法に対して中適度にのみ感受性がある。単剤療法反応率は、15％辺りであり、より新しい薬剤（例えばGemcitabineTM、PaclitaxelTM、DocetaxelTM、VinorelbineTM）では僅かに高い反応率を有する（20〜25％）。また、化学療法は、血球数の減少、吐き気、嘔吐、下痢、口内炎および口腔内腫瘍、脱毛ならびに疲労などの合併症を伴う；（ii）生物療法。最近の研究努力は、分子標的を同定し、そしてこの知識を用いて分子標的療法を開発することに重点的に集中してきた。いくつかの分子標的療法が現在開発中であり、そしてNSCLCにおいて検査されているが、これらの療法は、悪寒、発熱、筋肉痛、疲労、食欲低下、吐き気、嘔吐、および下痢などのインフルエンザ様症状を含む不所望の副作用を伴う；（iii）放射線療法。この種の療法は、通常、外科手術の補助として、または、限られた肺予備能、もしくは併発状態の存在のために外科的切除が可能でない場合には単独で用いられる。放射線療法単独では、早期NSCLCにおいて5年後の生存率はほんの12〜16％である。残念ながら、合併症が一般的であり、吐き気、疲労、皮膚反応、脱毛、持続性の咳、のどの乾きまたは痛み、および嚥下障害を含む；（iv）併用化学−放射線療法。最近の研究は、（逐次ではなく）同時の白金ベースの化学療法および放射線療法で治療される場合、切除不能なIII期疾患の患者において僅かの生存を示してきた。しかし、上記の癌の種類と同様に、化学療法および放射線療法の使用は、多くの不所望の副作用を有する；（v）外科手術。これは通常、腫瘍が早期である場合、および／または腫瘍が広がっていない場合に用いられる。例として、以下を含む：楔状切除。これは、組織の三角形状の薄片の除去を含む。楔状切除は、腫瘍、および腫瘍周辺の少量の正常組織を除去するのに用いられる。僅かに多い量の組織をとる場合、これは、部分切除と呼ばれる；肺葉切除。これは、肺葉全体（全区域）の除去を含む；および肺全摘出術。これは、片肺全部の除去を含む。これらの治療介入後に直面する副作用は、疼痛、感染症だけでなく、肺炎、出血、血栓および他の感染症を含む。また、周術期死亡率は、肺全摘出術について6％、肺葉切除について3％、そして部分切除について1％である。
小細胞肺癌（SCLC）に対して、現在利用可能な治療は、以下を含む：（i）化学療法。単剤化学療法は、17％〜50％に及ぶ反応率を示す。併用化学療法は、優れた反応率および生存を伴うが、主要な副作用は、骨髄抑制、腎臓毒性、腫瘍崩壊症候群（高尿酸血症、高リン血症、低カルシウム血症、脱水症、および高カリウム血症によって特徴付けられる）、脊髄圧迫、および低ナトリウム血症を含む；（ii）放射線療法。この療法は、症状を緩和するためにのみ用いられ、そして患者は必ず再発する；（iii）外科手術。ほとんどのSCLC患者は、非外科的に治療される。例外は、リンパ節転移の全く無い肺に限られた非常に早期の疾患を示す比較的少数の患者（＜5％）である。このような患者は通常、初期診断手順として肺腫瘍の切除を経験する。しかし、これらの患者でさえ、外科手術単独で根治し得るとは考えられない。
再発性SCLCの患者は、極めて不良な予後であり、SCLCの患者の約65〜70％が、診察時に播腫性疾患を有する。進行期のSCLCは現在、治癒不能であり、そして進行期の疾患の患者の平均生存期間は1年未満である。限局性疾患（すなわち、限局期）の患者でさえ、平均生存期間は2年未満である。SCLCの5年生存率は20％未満である。
上で議論した現在利用可能な療法の全てについて（議論した癌の種類−結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、および肺癌−のそれぞれについて）、さらなる問題、すなわち腫瘍崩壊症候群（TLS）がある。TLSは、極めて重篤であり、時折癌療法の命にかかわる合併症となる。これは、自然腫瘍壊死もしくは治療関連腫瘍壊死または劇症アポトーシスに由来する様々な代謝異常として定義され得る。TLSの患者に観察される代謝異常は、二次低カルシウム血症を伴う、高カリウム血症、高尿酸血症、および高リン血症を含み、そして急性腎不全（ARF）をもたらし得る。
癌（特に、結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌および肺癌）は、世界規模で動物の健康管理に関する主要な問題を提示し続けている。したがって、当該技術分野において、上記の問題の１またはそれ以上に対処する、代わりの、および／または改善された癌治療薬ならびに癌療法を必要とする。
本発明は、新たな領域の非細胞毒性抗癌剤を提供することによって、上記の問題の１またはそれ以上を解決する。
より詳細には、本発明の第１の局面は、癌の治療に使用するためのポリペプチドを提供し、このポリペプチドは、
ａ．成長ホルモン分泌細胞においてエキソサイトーシス融合装置の蛋白質を切断し得る、非細胞毒性プロテアーゼ、
ｂ．成長ホルモン分泌細胞上の結合部位に結合し得るターゲティング部分（ＴＭ）であって、この結合部位が、成長ホルモン分泌細胞内でエンドサイトーシスを受けてエンドソーム内に取り込まれ得る、ＴＭ、
ｃ．成長ホルモン分泌細胞のエンドソーム内から、エンドソーム膜を横切り、そして細胞質ゾル内に、プロテアーゼをトランスロケートし得る、トランスロケーションドメイン、
を含む。
使用時、本発明のポリペプチドは成長ホルモン分泌細胞に結合する。その後、トランスロケーション成分が、成長ホルモン分泌細胞の細胞質ゾル内への、プロテアーゼ成分の輸送を生じさせる。最後に、一旦内側に入ると、プロテアーゼが、成長ホルモン分泌細胞のエキソサイトーシス融合プロセスを阻害する。このため、成長ホルモン分泌細胞のエキソサイトーシス融合装置を不活性化することによって、本発明のポリペプチドは、成長ホルモン分泌細胞からの成長ホルモンの放出／分泌を阻害する。
本発明のポリペプチドの「生物活性」成分は、非細胞毒性プロテアーゼによって提供される。この明瞭なグループのプロテアーゼは、SNARE蛋白質（例えば、SNAP-25、VAMP、またはシンタキシン−Gerald K (2002) 「Cell and Molecular Biology」 (第4版) John Wiley & Sons, Inc.参照）として知られる細胞内輸送蛋白質を蛋白質分解切断することによって機能する。頭字語SNAREは、用語Soluble NSF Attachment Receptor（可溶性NSF付着レセプター）に由来し、NSFは、N-ethylmaleimide-Sensitive Factor（N-エチルマレイミド感受性因子）を意味する。SNARE蛋白質は、細胞内小胞形成に不可欠であり、このため細胞からの小胞輸送を介した分子の分泌に不可欠である。したがって、一旦所望の標的細胞に送達されると、非細胞毒性プロテアーゼは、標的細胞からの細胞分泌を阻害し得る。
本発明のポリペプチドが結合する主な標的細胞は、成長ホルモンを分泌する、正常な、無病の、非癌細胞である。しかし、これらの細胞は、本発明に従って治療される最終的な「下流の」癌細胞とは異なる。
本発明は、成長ホルモンおよび／またはインスリン様成長因子（IGF-1）の全身濃度または血清濃度を低下／最小化させ得る（および低下／最小化させるのに使用するための）ポリペプチドを提供する。また、腫瘍崩壊症候群（TLS）を減少／最小化させるのに使用するためのポリペプチドが提供される。
本発明のポリペプチドは、特に、結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、および／または肺癌（例えばSCLCまたはNSCLC）（これらはそれらの転移、前癌症状およびそれらの兆候を含む）の１またはそれ以上の治療での使用に適している。これに関して、「治療」は、癌細胞、または局部的循環、局所的循環、もしくは体循環における癌細胞の広がりを、減少させ、防止し、または除去することを含む。
このため、本発明の関連する局面において、患者の癌を治療する方法であって、患者に治療上有効な量の本発明のポリペプチドを投与する工程を含む方法が提供される。本発明はまた、患者の成長ホルモンおよび／またはIGF-1濃度（好ましくは、全身濃度および／または血清濃度）を低下させる方法であって、患者に治療上有効な量の本発明のポリペプチドを投与する工程を含む方法を提供する。例として、１つの実施形態において、本発明は、約10ng／mlの、好ましくは6ng／ml未満の、より好ましくは4または5ng／ml未満の閾値に成長ホルモンの基底濃度を維持することを可能にする。健常な人では、日常の成長ホルモン濃度は通常、入眠約1時間後に約35ng／mlの濃度の頂点に達し得る。これに関して、１つの実施形態において、本発明は、この頂点が、約25ng／mlの、好ましくは20ng／ml未満の、より好ましくは15ng／ml未満の閾値に制御されることを可能とする。また、腫瘍崩壊症候群（TLS）を減少／最小化させる方法が提供される。
いかなる理論によっても縛られることを望まないが、本発明者らは、成長ホルモンの全身濃度の上昇が、全身IGF-1濃度を上昇させ、そして後者がIGF-1Rの活性化の増大、および癌遺伝子の活性化の関連する増大に関与し、このことにより細胞増殖の増大および腫瘍の形成／増殖に至ると確信している。
本発明のポリペプチドの投与に続いて、下垂体の前部からの成長ホルモン（例えばヒトGH）の分泌の低下が観察される。同様に、循環IGF-1濃度の濃度低下が観察される。このGH/IGF-1濃度の低下は、腫瘍の縮小と相関する。このため、本発明のポリペプチドの使用は、主要な反作用生物学的経路の１つを除去することによって、癌治療に好ましい環境を提供する。
投与の後、癌の局所的広がりおよび遠位の広がりは減少する、または除去される。これに関して、いかなる理論によっても縛られることを望まないが、本発明者らは、転移の広がりが、IGF-1の循環濃度を低下させる本発明のポリペプチドによって阻害されると確信している。
本発明の利点は、癌の治療後、下垂体機能が正常に戻ることである。言い換えれば、本発明は、下垂体に最小限の後療法影響を及ぼす短時間作用療法を提供する。このため、現在の下垂体切除療法に対して、本発明は、骨粗しょう症、短腸症候群、アルツハイマー病に至り得る記憶喪失、関節炎、背痛、線維筋痛および慢性疲労などの、初期の癌治療に由来する合併症を防止するために、複雑かつ不愉快な後治療（通常、生涯にわたる）療法の必要性を回避する。
本発明のポリペプチドの生物活性成分は、非細胞毒性プロテアーゼである。非細胞毒性プロテアーゼは、細胞を殺さない別クラスの分子であり、実際、それらは、蛋白質合成以外の細胞プロセスを阻害することによって機能する。非細胞毒性プロテアーゼは、種々の植物によって、ならびに種々の微生物（クロストリジウム属（Clostridium）種およびナイセリア属（Neisseria）種など）によって、大毒素分子の一部として生産される。
クロストリジウム菌神経毒素は、非細胞毒性毒素分子の主要な群を表し、そしてジスルフィド結合によって一緒に連結された２つのポリペプチド鎖を含む。これらの２つの鎖は、重鎖（H鎖）（約100kDaの分子量を有する）、および軽鎖（L鎖）（約50kDaの分子量を有する）と呼ばれる。プロテアーゼ機能を有し、そして小胞および／またはエキソサイトーシスプロセスに関与する細胞膜関連（SNARE）蛋白質（例えば、シナプトブレビン、シンタキシンまたはSNAP-25）に高度な基質特異性を示すのは、L鎖である。これらの基質は、神経分泌機構の重要な成分である。
ナイセリア属種、最も重要なことには、N. gonorrhoeae種、そしてストレプトコッカス（Streptococcus）種、最も重要なことには、S. pneumoniae種は、機能的に類似した非細胞毒性毒素分子を生産する。このような非細胞毒性プロテアーゼの例は、IgAプロテアーゼである（WO99/58571参照、これは、その全体が参照によって本明細書に援用される）。
このため、本発明の非細胞毒性プロテアーゼは、好ましくはクロストリジウム菌神経毒素プロテアーゼ、またはIgAプロテアーゼである。
次に本発明のターゲティング部分（ＴＭ）成分について、この成分が、本発明のポリペプチドを、成長ホルモン分泌細胞に、好ましくは下垂体細胞および／または脳下垂体外細胞に結合させる。１つの実施形態において、ＴＭは、下垂体の前部に、例えば成長ホルモン分泌細胞および／または下垂体前葉の細胞に、結合する。
適切なＴＭは、成長ホルモン分泌細胞レセプターに対するリガンド（サイトカイン、成長因子、神経ペプチド、レクチン、および抗体など）を含む。用語抗体は、モノクローナル抗体、およびFab、F(ab)'2、Fv、ScFvなどの抗体断片を含む。
本発明のＴＭは、下垂体細胞などの成長ホルモン分泌細胞上のレセプターに結合する。例として、ＴＭは、レプチン（OB）レセプターおよびそのイソ型、グレリンレセプター、ソマトスタチン（sst）レセプター（例えば、sst1、sst2、sst3、sst4およびsst5ならびにそれらのスプライス改変体）、インスリン成長因子（IGF）レセプター（例えばIGF-1）、erbBレセプター（例えば、erbB1、erbB2、erbB3およびerbB4ならびにそれらのスプライス改変体）、VIP-グルカゴン-GRF-セクレチンスーパーファミリーレセプター（そのスプライス改変体を含む）（下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド（PACAP）レセプター（例えば、PAC、VPAC1および／またはVPAC2）など）、オレキシン（OX）レセプターおよびスプライス改変体（例えば、OX1および／またはOX2）、インターロイキン（IL）レセプター（例えば、IL-1、IL-2、IL-6およびIL-10レセプター）、神経成長因子（NTR）レセプター（例えば、TrkA(NTR)およびp75(NTR)）、血管内皮成長因子（VEGF）レセプター（例えば、VEGFR1、VEGFR2およびVEGFR3）、ボンベシンレセプター（例えば、BRS-1、BRS-2またはBRS-3）、ウロテンシンレセプター、メラニン凝集ホルモンレセプター1、プロラクチン放出ホルモンレセプター、KiSS-1レセプター、コルチコトロピン放出因子レセプター1、ならびに成長ホルモン放出ホルモン（GHRH）レセプター、に結合し得る。
１つの実施形態において、本発明のＴＭは、レプチンレセプターに結合する。このようなＴＭの適切な例は、レプチンペプチド（完全長レプチンペプチド（例えば、レプチン167）など）、ならびにその短縮型またはペプチド類似体（レプチン22-167、レプチン70-95、およびレプチン116-122など）を含む。
別の実施形態において、本発明のＴＭは、グレリンレセプターに結合する。これに関する適切なＴＭの例は、グレリンペプチド（完全長グレリン（例えば、グレリン117）など）、ならびにその短縮型またはペプチド類似体（グレリン24-117およびグレリン52-117；[Trp3, Arg5]-グレリン(1-5)、des-Gln-グレリン、コルチスタチン-8、His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2、成長ホルモン放出ペプチド（例えばGHRP-6）、もしくはヘキサレリンなど）を含む。
１つの実施形態において、本発明のＴＭは、ソマトスタチン（SST）レセプターに結合する。例として、適切なＴＭは、SSTペプチドおよびコルチスタチン（CST）-ペプチド、ならびにそれらのペプチド類似体（D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2（BIM 23052）、D-Phe-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-D-Nal-NH2（BIM 23056）またはc[Cys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2（BIM-23268）など）を含む。さらなる例は、SSTペプチドSST-14およびSST-28、ならびに以下のようなペプチドおよびペプチド類似体（オクトレオチド、ランレオチド、BIM23027、バプレオチド、セグリチド、およびSOM230など）を含む。これらのＴＭは、SSTレセプター、特にsst1、sst2、sst3、sst4およびsst5レセプターに結合するのに好ましいＴＭである。
１つの実施形態において、本発明のＴＭは、インスリン様成長因子（IGF）レセプターに結合する。適切な例は、例えばIGF-1ペプチドおよびIGF-2ペプチドを含む。
１つの実施形態において、本発明のＴＭは、VIP-グルカゴン-GRF-セクレチンスーパーファミリーレセプター（PAC（例えばPAC1）、またはVPAC（例えばVPAC-1またはVPAC-2）レセプターなど）に結合する。このようなＴＭの適切な例は、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド（PACAP）、血管作動性腸管ペプチド（VIP）、ならびにこれらの短縮型およびペプチド類似体を含む。
１つの実施形態において、ＴＭは、VIPペプチド（VIP1およびVIP-2ペプチドを含む、例えばVIP(1-28)）またはその短縮型もしくはペプチド類似体である。これらのＴＭは、VPAC-1への選択的結合を示す。あるいは、VPAC-2への選択的結合を示すＴＭが用いられ得る（例えばmROMなど）（Yuら、Peptides 27 (6) p1359-66 (2006)参照、参照によって本明細書に援用される）。別の実施形態において、ＴＭは、PACAPペプチド（例えばPACAP(1-38)もしくはPACAP(1-27)）、またはその短縮型もしくはペプチド類似体であり得る。これらのＴＭは、PAC（例えばPAC-1）レセプターに結合するのに好ましいＴＭである。
別の実施形態において、本発明のＴＭは、オレキシンレセプター（例えば、OX1またはOX2レセプター）に結合する。適切なＴＭの例は、完全長オレキシン-Aペプチドおよびその短縮型またはペプチド類似体、ならびにオレキシン-Bペプチドおよびその短縮型またはペプチド類似体を含む。
１つの実施形態において、本発明のＴＭは、インターロイキンレセプターに結合する。適切なＴＭの例は、IL-1ペプチド（例えば、IL-1α、IL-β、IL-18ペプチド）およびその短縮型またはペプチド類似体、IL-2ペプチド（例えば、IL-2、IL-3、IL-12、IL-23ペプチド）およびその短縮型またはペプチド類似体、ならびにIL-17ペプチド（例えばIL-17A、IL-17Cペプチド）およびその短縮型またはペプチド類似体を含む。
別の実施形態において、本発明のＴＭは、NGFレセプターに結合する。適切なＴＭの例は、完全長NGF、およびその短縮型またはペプチド類似体を含む。
１つの実施形態において、本発明のＴＭは、血管作動性上皮成長因子（vasoactive epidermal growth factor；VEGF）レセプターに結合する。適切なＴＭの例は、VEGFペプチド（例えば、VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-DまたはVEGF-Eおよび関連するスプライス改変体）およびその短縮型またはペプチド類似体、ならびに胎盤成長因子（PIGF）およびその短縮型またはペプチド類似体を含む。
別の実施形態において、本発明のＴＭは、ErbBレセプターに結合する。例として、ＴＭは、EGFペプチド、形質転換成長因子-α（TGF-α）ペプチド、EGFおよびTGF-αのキメラ、アンフィレギュリンペプチド、ベータセルリンペプチド、エピゲンペプチド、エピレギュリンペプチド、ヘパリン結合EGF（HB-EGF）ペプチド、ニューレグリン（NRG）ペプチド（NRG1α、NRG1β、NRG2α、NRG2β、NRG3、NRG4およびニューレグリンスプライス改変体など）、トモレグリン1およびトモレグリン2ペプチド、ニューログリカン-Cペプチド、lin-3ペプチド、ベイン（vein）ペプチド、グルケンペプチド、スピッツペプチド、もしくはケレンペプチド、ならびにそれらの短縮型およびペプチド類似体から選ばれる。４クラスのErbBレセプター（ErbB1、erbB2、erbB3およびerbB4と呼ばれる）があり、これらはHERレセプターとも呼ばれる。これらのレセプターの多くの改変体が存在し、これらの改変体は完全長レセプターの選択的スプライシングおよび／または切断から生じる（例えば、EGFR v1の翻訳は、aa543から開始；EGFR vIIはaa521-603を欠失；EGFR vIIIはaa6-273を欠失；EGFR vIII/Δ12-13はaa6-273および409-520を欠失；EGFR vIVはaa959-1030を欠失；EGFR vVは残基958にて切断；EGFR TDM/2-7は6-273をタンデム重複；EGFR TDM/18-25は664-1030をタンデム重複；EGFR-TDM/18-26は664-1014をタンデム重複）。また、erbB4 JM-a、erbB4 JM-b、erbB4 CYT-1およびerbB4 CYT-1と呼ばれる４つのErbB4レセプターイソ型がある。
好ましいＴＭは、ErbBレセプター（例えば、ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4）およびそのスプライス改変体、特にErbB1レセプターに結合する。ErbB ＴＭはまた、６システインのEGF-モジュール（このモジュールは、潜在的リガンドの膜貫通領域に近接して配置される）内の４番目のシステインと５番目のシステインとの間にスプライス部位を有するEGFモチーフを含む蛋白質を含み得る。例えば、光レセプター間マトリクスプロテオグリカン-2（IMP-2）、メプリン（MEP）1α、MEP1β、ムチン（MUC）3、MUC4、MUC12.およびMUC17、ならびにTノット足場を有する蛋白質（ジャガイモカルボキシペプチダーゼインヒビターなど）、およびErbBレセプターに対する抗体（セツキシマブ、ABX-EGF、トラスツズマブまたはEMD72000など）である。さらなる例は、異なるErbBリガンド（B-ループ配列が昆虫（ショウジョウバエ）ErbBリガンドに存在する配列に置換された哺乳類erbBレセプターリガンド、EGFのC-ループ配列がTGFα(44-50)の配列に置換されたErbBリガンド、EGF/TGFαキメラ（例えば、E3T、T3E、E4T、T4E、T3E4T、T6EおよびE3T4E）をもたらすように１またはそれ以上のドメインがTGFαの対応配列に置換されたEGFリガンド、ならびにＮ末端のTGFα配列（WSHFND）またはニューレグリン配列（SHLVK）が、Ｎ末端のEGF配列のＣ末端の１番目のシステイン残基（NSDSE）、T1Eおよびビレグリンを置換するのに用いられたEGFキメラなど）のドメイン（ループ配列および／または結合アミノ酸）を交換することによって生じたキメラを含む。さらなるキメラは、別の蛋白質（ドメインが血液凝固、神経発達または細胞接着蛋白質（例えばNotch 3、Delta 1、EMR1、F4/80、EMR3およびEMR4レセプター）など）のEGF様ドメインに置換されたEGFを含む。
さらなる実施形態において、本発明のＴＭは、メラニン凝集ホルモンレセプター1に結合する。これに関する適切なＴＭの例は、メラニン凝集ホルモン（MCH）ペプチド（完全長MCHなど）、その短縮型および類似体を含む。
別の実施形態において、本発明のＴＭは、プロラクチン放出ホルモンレセプターに結合する。これに関する適切なＴＭの例は、プロラクチン放出ペプチド、その短縮型および類似体を含む。
さらなる実施形態において、本発明のＴＭは、KiSS-1レセプターに結合する。これに関する適切なＴＭの例は、キスペプチン-10、キスペプチン-54ペプチド、それらの短縮型および類似体を含む。
別の実施形態において、本発明のＴＭは、コルチコトロピン放出因子レセプター1に結合する。これに関する適切なＴＭの例は、コルチコトロピン放出ホルモン、ウロコルチン1およびウロコルチン2を含み、それらの短縮型および類似体を含む。
別の実施形態において、本発明のＴＭは、成長ホルモン放出ホルモン（GHRH）レセプターに結合する。GHRHは、成長ホルモン放出因子（GRFまたはGHRF）またはソマトクリニンとしても知られる。本発明の適切なＴＭの例は、完全長GHRH(1-44)ペプチド、ならびにその短縮型またはペプチド類似体（GHRH(1-29); GHRH(1-37); hGHRH(1-4O)-OH; [MeTyr1,Ala15,22,Nle27]-hGHRH(1-29)-NH2; [MeTyr1,Ala8,9,15,22,28,Nle 27]-hGHRH(1-29)-NH2; シクロ(25-29)[MeTyr1,Ala15,DAsp25,Nle27,Orn29+++]-hGHRH(1-29)-NH2; (D-Tyr1)-GHRH(1-29)-NH2; (D-Ala2)-GHRH(1-29)-NH2; (D-Asp3)-GHRH(1-29)-NH2; (D-Ala4)-GHRH(1-29)-NH2; (D-Thr7)-GHRH(1-29)-NH2; (D-Asn8)-GHRH(1-29)-NH2; (D-Ser9)-GHRH(1-29)-NH2; (D-Tyr1O)-GHRH(1-29)-NH2; (Phe4)-GHRH(1-29)-NH2; (pCI-Phe6)-GHRH(1-29)-NH2; (N-Ac-Tyr1)-GHRH(1-29)-NH2; (N-Ac-Tyr1, D-Ala2)-GHRH(1-29)-NH2; (N-Ac-D-Tyr1, D-Ala2)-GHRH(1-29)-NH2; (N-Ac-D-Tyr1, D-Ala2, D-Asp3)-GHRH(1-29)-NH2; (D-Ala2, NLeu27)-GHRH(1-29)-NH2; (His1, D-Ala2, NLeu27)-GHRH(1-29)-NH2; (N-Ac-His1, D-Ala2, N-Leu27)-GHRH(1-29)-NH2; (His1, D-Ala2, D-Ala4, Nleu27)-GHRH(1-29)-NH2; (D-Ala2, D-Asp3, D-Asn8, NLeu27)-GHRH(1-29)-NH2; (D-Asp3, D-Asn8, NLeu27)-GHRH(1-29)-NH2; [His1, NLeu27]-hGHRH(1-29)-NH2; [NLeu27]-hGHRH(1-29)-NH2; H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-NH2; H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-NH2; H-Tyr-D-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-NH2; H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-Ala-Lys-Val-Arg-Leu-NH2; H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-Ala-Lys-Val-Arg-Leu-NH2; His-Val-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Gln-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Ala-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Leu-Asn-Arg; およびHis-Val-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Gln-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Ala-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Leu-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-Alaなど）を含む。
さらなる実施形態において、ＴＭはボンベシンレセプター（例えばBRS-1、BRS-2、またはBRS-3）に結合する。ボンベシンレセプターに結合する、本発明で使用するためのＴＭは、ボンベシン（元来カエルの皮膚から単離された１４のアミノ酸ペプチド（pGlu-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2））、ならびに哺乳類における２つの公知のホモログ、すなわちニューロメジンB、ならびにガストリン放出ペプチド（GRP）（ブタGRP−Ala-Pro-Val-Ser-Val-Gly-Gly-Gly-Thr-Val-Leu-Ala-Lys-Met-Tyr-Pro-Arg-Gly-Asn-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Mel-NH2およびヒトGRP−Val-Pro-Leu-Pro-Ala-Gly-Gly-Gly-Thr-Val-Leu-Thr-Lys-Met-Tyr-Pro-Arg-Gly-Asn-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2など）を含む。さらなるＴＭは、対応ボンベシン、ニューロメジンBおよびGRPの短縮型およびそれらのペプチド類似体を含む。
別の実施形態において、本発明のＴＭは、ウロテンシンレセプターに結合する。これに関する適切なＴＭは、ウロテンシンペプチド（これはウロテンシン-II（U-II）など環状神経ペプチドである）、ならびにその短縮型およびペプチド類似体を含む。U-IIのＣ末端環状領域は、異なる種を超えて非常に保存されており、そして６アミノ酸残基（-Cys-Ple-Trp-Lys-Tyr-Cys-）を含み、これはソマトスタチン-14（-Phe-Trp-Lys-Thr-）の中心領域と構造的に類似している。本発明で使用するのに適したウロテンシンペプチドは、U-II前駆体ペプチド（プレプロウロテンシン-II（その２つのヒト124および139イソ型を含む）など）、ならびにその短縮型およびペプチド類似体（１１残基の成熟ペプチド型など）を含む。
本発明の第２の局面に従えば、物質の組成、すなわちポリペプチドが提供され、このポリペプチドは、
ａ．成長ホルモン分泌細胞においてエキソサイトーシス融合装置の蛋白質を切断し得る、非細胞毒性プロテアーゼ、
ｂ．成長ホルモン分泌細胞上の結合部位に結合し得るターゲティング部分（ＴＭ）であって、この結合部位が、成長ホルモン分泌細胞内でエンドサイトーシスを受けてエンドソーム内に取り込まれ得る、ＴＭ、および
ｄ．成長ホルモン分泌細胞のエンドソーム内から、エンドソーム膜を横切り、そして細胞質ゾル内に、プロテアーゼをトランスロケートし得る、トランスロケーションドメイン、
を含む。
本発明の第１の局面の特徴のすべてが、上記の第２の局面に等しく当てはまる。
本発明の第１および／または第２の局面の好ましい実施形態において、ＴＭはヒトペプチドアミノ酸配列を有する。このため、好ましいＴＭは、例えば、ヒトGHRHペプチド、ヒトCSTペプチド、またはヒトSSTペプチドである。
LHN/C-ラットGHRP融合蛋白質の精製を示す。実施例３において述べられる方法を用いて、LHN/C-rGHRP融合蛋白質をE. coli BL21（DE3）細胞から精製した。手短に言えば、細胞破壊後に得た可溶性産物を、ニッケルチャージドアフィニティキャプチャーカラムに適用した。結合蛋白質を200mMイミダゾールで溶出し、第Xa因子で処理して融合蛋白質を活性化し、その後第２のニッケルチャージドアフィニティキャプチャーカラムに再適用した。精製手順からのサンプルをSDS-PAGEによって評価した。レーン１：分子量マーカー（kDa）、レーン２：浄化した粗細胞溶解物、レーン３〜５：第１のニッケルキレーティングセファロースカラム溶出液（0.1mg/ml）、レーン６〜８：第１のニッケルキレーティングセファロースカラム溶出液（0.01mg/ml）、レーン９：非還元条件下での第Xa因子消化蛋白質、レーン１０：非還元条件下での精製LHN/C-rGHRP、レーン１１：還元条件下での精製LHN/C-rGHRP。 LHN/C-ラットLEP116-122融合蛋白質の精製を示す。実施例３において述べられる方法を用いて、LHN/C-ラットLEP116-122融合蛋白質をE. coli BL21（DE3）細胞から精製した。手短に言えば、細胞破壊後に得た可溶性産物を、ニッケルチャージドアフィニティキャプチャーカラムに適用した。結合蛋白質を200mMイミダゾールで溶出し、第Xa因子で処理して融合蛋白質を活性化し、その後第２のニッケルチャージドアフィニティキャプチャーカラムに再適用した。精製手順からのサンプルをSDS-PAGEによって評価した。レーン１：第１のニッケルキレーティングセファロースカラム溶出液、レーン２：非還元条件下で第Xa因子で処理した第１のニッケルキレーティングセファロースカラム溶出液、レーン３：還元条件下で第Xa因子によって処理した第１のニッケルキレーティングセファロースカラム溶出液、レーン４〜６：非還元条件下の第２のニッケルキレーティングセファロースカラム溶出液、レーン７〜９：還元条件下の第２のニッケルキレーティングセファロースカラム溶出液、レーン１０：分子量マーカー（kDa）。 種々のLHNで処理した分化MtT/SからのGH分泌を示す。実験データの部において述べられる方法を用いた：10-8MのコルチコステロンによるMtT/Sの分化後、細胞を以下の分子の１つで48時間処理した：LHnB (10OnM)、LHnC (10OnM)またはLHnD (100nM)。その後、40mM KClを含むKrebs培地を用いる分泌アッセイに10分間、細胞を供した。 LHN/A-GHRH融合蛋白質の精製を示す。実施例３において述べられる方法を用いて、LHN/A-GHRH融合蛋白質をE. coli BL21（DE3）細胞から精製した。手短に言えば、細胞破壊後に得た可溶性産物を、ニッケルチャージドアフィニティキャプチャーカラムに適用した。結合蛋白質を200mMイミダゾールで溶出し、第Xa因子で処理して融合蛋白質を活性化し、その後第２のニッケルチャージドアフィニティキャプチャーカラムに再適用した。精製手順からのサンプルをSDS-PAGEによって評価した。レーン１：分子量マーカー（kDa）、レーン２:可溶性画分、レーン３：非還元条件下で第Xa因子で処理した第１のニッケルキレーティングセファロースカラム溶出液、レーン４：非還元条件下の第２のニッケルキレーティングセファロースカラムロード、レーン５：非還元条件下の第２のニッケルキレーティングセファロースカラム溶出液、レーン６：非還元条件下の最終サンプル、レーン７：還元条件下の最終サンプル。 LHN/C-GHRH融合蛋白質の精製を示す。実施例３において述べられる方法を用いて、LHN/A-GHRH融合蛋白質をE. coli BL21（DE3）細胞から精製した。手短に言えば、細胞破壊後に得た可溶性産物を、ニッケルチャージドアフィニティキャプチャーカラムに適用した。結合蛋白質を200mMイミダゾールで溶出し、第Xa因子で処理して融合蛋白質を活性化し、その後第２のニッケルチャージドアフィニティキャプチャーカラムに再適用した。精製手順からのサンプルをSDS-PAGEによって評価した。レーン１：分子量マーカー（kDa）、レーン２:可溶性画分、レーン３：非還元条件下で第Xa因子によって処理した第１のニッケルキレーティングセファロースカラム溶出液、レーン４：非還元条件下の第２のニッケルキレーティングセファロースカラムロード、レーン５：非還元条件下の第２のニッケルキレーティングセファロースカラム溶出液、レーン６：非還元条件下の最終サンプル、レーン７：還元条件下の最終サンプル。 LHN/A-GHRHおよびLHN/C-GHRH最終産物を示す。実施例３において述べられる方法を用いて、LHN/A-GHRHおよびLHN/C-GHRH融合蛋白質をE. coli BL21（DE3）細胞から精製した。精製手順からのサンプルをSDS-PAGEによって評価した。レーン１：分子量マーカー（kDa）、レーン２：非還元条件下の最終サンプル（LHN/A-GHRH）、レーン３：還元条件下の最終サンプル（LHN/A-GHRH）、レーン４：非還元条件下の最終サンプル（LHN/C-GHRH）、レーン５：還元条件下の最終サンプル（LHN/C-GHRH）。 インビボでのラットIGF-1濃度へのCP-GHRH-LHDの活性を示す。図７は、ビヒクルのみのコントロールと比較した、処置5日後のラットIGF-1濃度に及ぼすCP-GHRH-LHD（SXN101000）のi.v.（静脈内）投与の影響を示す。 インビボでのラットIGF-1濃度へのCP-GHRH-LHDの活性を示す。図８は、ビヒクルのみのコントロールと比較した、処置後1〜8日目のラットIGF-1濃度に及ぼすCP-GHRH-LHD（SXN101000）のi.v.投与の影響を示す。9および10日目では、カニューレのブロッキングが原因で、ｎ数が少なくなりすぎて考慮されていない。 インビボでのラットGH濃度へのCP-GHRH-LHDの活性を示す。図９ｂは、ビヒクルのみのコントロール（図９ａ）およびオクトレオチド点滴（図９ｃ）と比較した、処置5日後のラットGH濃度に及ぼすCP-GHRH-LHD（SXN101000）のi.v.投与の影響を示す。
ポリペプチドの調製
本発明のポリペプチドは、３つの主成分を含む：「生物活性」（すなわち、非細胞毒性プロテアーゼ）；ＴＭ；およびトランスロケーションドメイン。このような融合蛋白質の調製に関連する一般的な技術はしばしば、再標的化毒素技術と呼ばれる。例示の目的で、WO94/21300、WO96/33273、WO98/07864、WO00/10598、WO01/21213、WO06/059093、WO00/62814、WO00/04926、WO93/15766、WO00/61192およびWO99/58571を参照する。これらの刊行物は、全体が参照によって本明細書に援用される。
より詳細には、本発明のＴＭ成分は、本発明のプロテアーゼ成分またはトランスロケーション成分のいずれかと融合され得る。この融合は、好ましくは、共有結合（例えば直接共有結合のような、またはスペーサー／リンカー分子を介して）によるものである。プロテアーゼ成分およびトランスロケーション成分は、好ましくは、共有結合（例えば直接共有結合またはスペーサー／リンカー分子を介して）を介して一緒に連結されている。適切なスペーサー／連結分子が当該技術において周知であり、通常、５から４０、好ましくは１０から３０のアミノ酸残基長のアミノ酸ベースの配列を含む。
使用時、ポリペプチドは二鎖配座を有し、プロテアーゼ成分およびトランスロケーション成分は、好ましくはジスルフィド結合を介して、一緒に連結されている。
本発明のポリペプチドは、従来の化学的結合体化技術によって調製され得、これは当業者に周知である。例として、Hermanson, G.T. (1996), Bioconjugate techniques, Academic Press,およびWong, S.S. (1991), Chemistry of protein conjugation and cross-linking, CRC Press, Nagyら, PNAS 95 p1794-99 (1998)を参照する。本発明のポリペプチドに合成ＴＭを付着させるためのさらなる詳細な方法は、例えばEP0257742に与えられる。上記の結合体化の刊行物は、参照によって本明細書に援用される。
あるいは、ポリペプチドは、単一のポリペプチド融合蛋白質の組換え調製物によって調製され得る（例えばWO98/07864参照）。この技術は、インビボ細菌機構に基づいており、これによって、天然のクロストリジウム菌神経毒素（すなわちホロ毒素）が調製され、以下の「単純化された」構造配列を有する融合蛋白質をもたらす：
NH2-［プロテアーゼ成分］-［トランスロケーション成分］-［ＴＭ］-COOH
WO98/07864に従えば、ＴＭは、融合蛋白質のＣ末端に配置される。その後、融合蛋白質は、プロテアーゼによる処理によって活性化される。このプロテアーゼは、プロテアーゼ成分とトランスロケーション成分との間の部位にて切断する。このため、トランスロケーション成分およびＴＭを含む別の単一のポリペプチド鎖に（ジスルフィド橋を介して）共有結合されている、単一のポリペプチド鎖としてのプロテアーゼ成分を含む二鎖蛋白質が製造される。
あるいは、WO06/059093に従えば、融合蛋白質のＴＭ成分は、プロテアーゼ切断部位とトランスロケーション成分との間の、直鎖融合蛋白質配列の真中に配置される。このことは、ＴＭがトランスロケーションドメインに付着される（すなわち、天然のクロストリジウム菌ホロ毒素を用いて生じるように）ことを保証するが、この場合、これらの２つの成分が、天然のホロ毒素に対して順番が反転されている。プロテアーゼ切断部位での続く切断が、ＴＭのＮ末端部分を露呈し、そして二鎖ポリペプチド融合蛋白質を提供する。
上記のプロテアーゼ切断配列は、部位指定変異導入などの従来の手段によって、ＤＮＡレベルで導入され得る（および／または任意の固有の切断配列が除去され得る）。切断配列の存在を確かめるためのスクリーニングは、手動で、またはコンピュータソフトウェア（例えばDNASTAR, Inc.によるMapDrawプログラム）を活用して、実行され得る。任意のプロテアーゼ切断部位が用いられ得るが（すなわち、クロストリジウム菌または非クロストリジウム菌）、以下が好ましい：
エンテロキナーゼ (DDDDK↓)
第Xa因子 (IEGR↓/IDGR↓)
TEV(タバコエッチウイルス) (ENLYFQ↓G)
トロンビン (LVPR↓GS)
プレシジョン (LEVLFQ↓GP)
さらなるプロテアーゼ切断部位は、非細胞毒性プロテアーゼによって、例えばクロストリジウム菌神経毒素によって切断される認識配列を含む。これらは、非細胞毒性プロテアーゼ（クロストリジウム菌神経毒素など）によって切断される、SNARE（例えば、SNAP-25、シンタキシン、VAMP）蛋白質認識配列を含む。具体的な例は、US2007/0166332に与えられており、この刊行物の全体が参照によって本明細書に援用される。
また、用語プロテアーゼ切断部位には、自己切断型配列であるインテインも含まれる。自己スプライシング反応は、例えば存在する還元剤の濃度を変化させることによって、制御可能である。上記の「活性化」切断部位も用いられ得る。というのも、「破壊的」切断部位（以下で議論する）が、本発明のポリペプチド内に取り込まれるべきであるからである。
好ましい実施形態において、本発明の融合蛋白質は、１またはそれ以上のＮ末端および／またはＣ末端に位置する精製タグを含み得る。任意の精製タグが用いられ得るが、以下が好ましい：
His-タグ（例えば6×ヒスチジン）、好ましくはＣ末端および／またはＮ末端タグとして
MBP-タグ（マルトース結合蛋白質）、好ましくはＮ末端タグとして
GST-タグ（グルタチオン-Ｓ-トランスフェラーゼ）、好ましくはＮ末端タグとして
His-MBP-タグ、好ましくはＮ末端タグとして
GST-MBP-タグ、好ましくはＮ末端タグとして
チオレドキシン-タグ、好ましくはＮ末端タグとして
CBD-タグ（キチン結合ドメイン）、好ましくはＮ末端タグとして
１またはそれ以上のペプチドスペーサー／リンカー分子が融合蛋白質内に含まれ得る。例えば、ペプチドスペーサーが、精製タグと、融合蛋白質分子の残りの部分との間で用いられ得る。
このため、本発明の第３の局面は、上記のように、ポリペプチド（すなわち、本発明の第２の局面）をコードする核酸（例えばＤＮＡ）配列を提供する。
この核酸は、ベクター（プラスミドなど）の形状で含まれ得、ベクターは、任意に、複製起点、核酸組込部位、プロモーター、ターミネーター、およびリボソーム結合部位の１またはそれ以上を含み得る。
本発明はまた、宿主細胞において、特に大腸菌（E. coli）においてまたはバキュロウイルス発現系を介して、上記の核酸配列（すなわち、本発明の第３の局面）を発現させる方法を含む。
本発明はまた、本発明のポリペプチドを活性化させる方法を含み、この方法は、ポリペプチドを、非細胞毒性プロテアーゼ成分とトランスロケーション成分との間に位置する認識部位（切断部位）にてポリペプチドを切断するプロテアーゼと接触させる工程を含み、これによって、ポリペプチドを、非細胞毒性プロテアーゼ成分とトランスロケーション成分とがジスルフィド結合によって一緒に連結されている二鎖ポリペプチドに変換する。好ましい実施形態において、認識部位は、天然に存在するクロストリジウム菌神経毒素に、および／または天然に存在するIgAプロテアーゼに、固有ではない。
本発明のポリペプチドは、非標的領域内への分散に関連する不所望の副作用を減少させる、または防止するようにさらに改変され得る。この実施形態に従って、ポリペプチドは、破壊的切断部位を含む。破壊的切断部位は、「活性化」部位（すなわち、二鎖形成）とは区別され、非細胞毒性プロテアーゼによってではなく第２のプロテアーゼによって切断可能である。さらに、破壊的切断部位にて第２のプロテアーゼによってそのように切断されると、ポリペプチドは効力が低下する（例えば、意図された標的細胞への結合能力、トランスロケーション活性、および／または非細胞毒性プロテアーゼ活性が低下する）。完全性について、本発明の「破壊的」切断部位のいずれかが、本発明のポリペプチド内の「活性化」部位として別個に用いられ得る。
このため、この実施形態に従えば、本発明は、部位外位置にて制御可能に不活性化および／または破壊され得るポリペプチドを提供する。
好ましい実施形態において、破壊的切断部位は、循環プロテアーゼ（例えば、細胞外プロテアーゼ（血清プロテアーゼまたは血液凝固カスケードのプロテアーゼなど））、組織関連プロテアーゼ（例えば、マトリクスメタロプロテアーゼ（MMP）（筋肉のMMPなど））、および細胞内プロテアーゼ（好ましくは標的細胞に無いプロテアーゼ）から選ばれる第２のプロテアーゼ（すなわち、破壊的プロテアーゼ）によって、認識および切断される。
このため、使用時、本発明のポリペプチドは、その意図された標的細胞から離れて分散される、および／または非標的細胞によって吸収されるようになれば、このポリペプチドは、（第２のプロテアーゼによる）破壊的切断部位の切断によって不活性化されるようになる。
１つの実施形態において、破壊的切断部位は、部位外細胞型内に存在する第２のプロテアーゼによって認識および切断される。この実施形態において、部位外細胞および標的細胞は、好ましくは異なる細胞型である。あるいは（またはさらに）、破壊的切断部位は、部位外位置に（例えば、標的細胞の遠位に）存在する第２のプロテアーゼによって認識および切断される。したがって、破壊的切断が細胞外で起こる場合、標的細胞および部位外細胞は、同じ細胞型または異なる細胞型であり得る。これに関して、標的細胞および部位外細胞はそれぞれ、本発明の同じポリペプチドが結合するレセプターを有し得る。
本発明の破壊的切断部位は、ポリペプチドが部位外位置内または部位外位置にある場合、ポリペプチドの不活性化／破壊を提供する。これに関して、破壊的切断部位での切断が、ポリペプチドの効力を最小化する（同じ破壊的切断部位を欠いている、または同じ破壊的部位を有するが非切断型である、同一のポリペプチドと比較した場合）。例として、効力の低下は、（哺乳類細胞レセプターへの）結合の低下、および／または（細胞質ゾルの方向に哺乳類細胞のエンドソーム膜を横切る）トランスロケーションの低下、および／またはSNARE蛋白質切断の低下を含む。
本発明との関連において破壊的切断部位を選択する場合、破壊的切断部位は、製造プロセスの一部として本発明のポリペプチドの翻訳後改変に別個に用いられ得る任意のプロテアーゼの基質でないことが好ましい。これに関して、本発明の非細胞毒性プロテアーゼは通常、（本発明の破壊的切断部位とは構造上区別される、別個の「活性化」プロテアーゼ切断部位を介する）プロテアーゼ活性化事象を利用する。活性化切断部位の目的は、本発明のポリペプチドの非細胞毒性プロテアーゼ成分とトランスロケーション成分または結合成分との間のペプチド結合を切断することによって、これらの２つの成分が、ジスルフィド結合を介して一緒に連結されている、「活性化型」二鎖ポリペプチドを提供することである。
このため、本発明のポリペプチドの破壊的切断部位が、「活性化」切断部位および続くジスルフィド結合形成に悪影響を及ぼさないことを保証するのに役立つために、前者は好ましくは、本発明のポリペプチド内に、「活性化」切断部位から、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、およびより好ましくは少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０の（隣接する）アミノ酸残基離れた位置に、導入される。
破壊的切断部位および活性化切断部位は好ましくは、ポリペプチドの天然成分に対して外因的（すなわち、工作的／人工的）である。言い換えれば、この切断部位は好ましくは、ポリペプチドの対応する天然成分に固有ではない。例として、BoNT/A L鎖またはH鎖（のそれぞれ）に基づくプロテアーゼ成分またはトランスロケーション成分は、切断部位を含むように本発明に従って工作され得る。しかし、この切断部位は、対応するBoNT天然L鎖またはH鎖に存在しない。同様に、ポリペプチドのターゲティング部分成分がプロテアーゼ切断部位を含むように工作される場合、この切断部位は、対応するターゲティング部分の対応する天然配列に存在しない。
本発明の好ましい実施形態において、破壊的切断部位および「活性化」切断部位は、同じプロテアーゼによって切断されない。１つの実施形態において、２つの切断部位は、各認識配列内の許容されるアミノ酸の少なくとも１つ、より好ましくは少なくとも２つ、特に好ましくは少なくとも３つ、そして最も好ましくは少なくとも４つが異なるという点で、互いに異なる。
例として、クロストリジウム菌L鎖成分とHN成分との間に第Xa因子「活性化」部位を含むポリペプチドキメラの場合、第Xa因子部位以外の部位である破壊的切断部位を用いることが好ましく、これは、L鎖成分および／またはHN成分および／またはＴＭ成分の他のところに挿入され得る。この筋書きでは、ポリペプチドは、L鎖成分とHN成分との間に代わりの「活性化」部位（例えば、エンテロキナーゼ切断部位）に適合するように改変され得、その場合、別個の第Xa因子切断部位が、破壊的切断部位としてポリペプチド内の他のところに取り込まれ得る。あるいは、L鎖成分とHN成分との間の既存の第Xa因子「活性化」部位が保持され得、そしてトロンビン切断部位などの代わりの切断部位が破壊的切断部位として取り込まれ得る。
切断部位を含めるために本発明の成分のいずれかの一次配列内の適切な部位を同定する場合、挿入されるべく提案された切断部位と厳密に適合する一次配列を選択することが好ましい。そうすることで、ポリペプチド内に最小限の構造的変更が導入される。例として、切断部位は通常、少なくとも３つの隣接するアミノ酸残基を含む。このため、好ましい実施形態において、新たな切断部位を導入するのに必要とされるアミノ酸残基の少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つを（正しい位置に）既に有する切断部位が選ばれる。例として、１つの実施形態において、カスパーゼ３切断部位（DMQD）が導入され得る。これに関して、例えば、Dxxx、xMxx、xxQx、xxxD、DMxx、DxQx、DxxD、xMQx、xMxD、xxQD、DMQx、xMQD、DxQD、およびDMxDから選ばれる一次配列を既に含む好ましい挿入位置が同定される。
同様に、切断部位を表面露出領域内に導入することが好ましい。表面露出領域内では、既存のループ領域が好ましい。
本発明の好ましい実施形態において、破壊的切断部位は、以下の位置の１またはそれ以上に導入され、これは、BoNT/Aの一次アミノ酸配列に基づく。挿入位置は（便宜上）BoNT/Aを参照して同定されているが、代わりのプロテアーゼドメインおよび／またはトランスロケーションドメインの一次アミノ酸配列は、このBoNT/A位置と容易にアライメントされ得る。
プロテアーゼ成分について、以下の１またはそれ以上の位置が好ましい：27-31、56-63、73-75、78-81、99-105、120-124、137-144、161-165、169-173、187-194、202-214、237-241、243-250、300-304、323-335、375-382、391-400、および413-423。上記の番号付けは好ましくは、本発明のプロテアーゼ成分のＮ末端から開始する。
好ましい実施形態において、破壊的切断部位は、プロテアーゼ成分のＮ末端から、８より大きいアミノ酸残基の位置、好ましくは１０より大きいアミノ酸残基の位置、より好ましくは２５より大きいアミノ酸残基の位置、特に好ましくは５０より大きいアミノ酸残基の位置に位置する。同様に、好ましい実施形態において、破壊的切断部位は、プロテアーゼ成分のＣ末端から、２０より大きいアミノ酸残基の位置、好ましくは３０より大きいアミノ酸残基の位置、より好ましくは４０より大きいアミノ酸残基の位置、特に好ましくは５０より大きいアミノ酸残基の位置に位置する。
トランスロケーション成分について、以下の１またはそれ以上の位置が好ましい：474-479、483-495、507-543、557-567、576-580、618-631、643-650、669-677、751-767、823-834、および845-859。上記の番号付けは好ましくは、本発明のトランスロケーションドメイン成分のＮ末端について449の開始位置を、そしてトランスロケーションドメイン成分のＣ末端について871の終了位置を認める。
好ましい実施形態において、破壊的切断部位は、トランスロケーション成分のＮ末端から、１０より大きいアミノ酸残基の位置、好ましくは２５より大きいアミノ酸残基の位置、より好ましくは４０より大きいアミノ酸残基の位置、特に好ましくは５０より大きいアミノ酸残基の位置に位置する。同様に、好ましい実施形態において、破壊的切断部位は、トランスロケーション成分のＣ末端から、１０より大きいアミノ酸残基の位置、好ましくは２５より大きいアミノ酸残基の位置、より好ましくは４０より大きいアミノ酸残基の位置、特に好ましくは５０より大きいアミノ酸残基の位置に位置する。
好ましい実施形態において、破壊的切断部位は、ＴＭ成分のＮ末端から、１０より大きいアミノ酸残基の位置、好ましくは２５より大きいアミノ酸残基の位置、より好ましくは４０より大きいアミノ酸残基の位置、特に好ましくは５０より大きいアミノ酸残基の位置に位置する。同様に、好ましい実施形態において、破壊的切断部位は、ＴＭ成分のＣ末端から、１０より大きいアミノ酸残基の位置、好ましくは２５より大きいアミノ酸残基の位置、より好ましくは４０より大きいアミノ酸残基の位置、特に好ましくは５０よりも大きいアミノ酸残基の位置に位置する。
本発明のポリペプチドは、１またはそれ以上（例えば２、３、４、５またはそれ以上）の破壊的プロテアーゼ切断部位を含み得る。１より多くの破壊的切断部位が含まれる場合、各切断部位は同じまたは異なり得る。これに関して、１より多くの破壊的切断部位の使用は、部位外不活性化の改善を提供する。同様に、２またはそれ以上の異なる破壊的切断部位の使用は、さらなる設計融通性を提供する。
破壊的切断部位は、ポリペプチドの以下の成分のいずれかの内に工作され得る：非細胞毒性プロテアーゼ成分；トランスロケーション成分；ターゲティング部分；または（存在する場合）スペーサーペプチド。これに関して、破壊的切断部位は、ポリペプチドがその標的部位／標的細胞から離れて不安定となることを保証しつつ（例えば、ターゲティング／結合領域および／もしくはトランスロケーションドメインに、ならびに／または非細胞毒性プロテアーゼドメインへの影響を最小限とすることによって）ポリペプチドの効力への悪影響を最小限とすることを保証するように、選択される。
好ましい破壊的切断部位（および対応する第２のプロテアーゼ）は、すぐ下の表に記載される。記載の切断部位は、単に説明のためのものであって、本発明に対して限定的であることは意図されない。
Figure 0005799397
マトリクスメタロプロテアーゼ（MMP）は、本発明との関連において破壊的プロテアーゼの好ましいグループである。このグループ内で、ADAM17（EC 3.4.24.86、TACEとしても知られる）が好ましく、そして種々の膜固定細胞表面蛋白質を切断して、細胞外ドメインを「脱落させる」。さらなる好ましいMMPは、アダマリシン、セラリシン、およびアスタシンを含む。
好ましい破壊的プロテアーゼの別のグループは、哺乳類血中プロテアーゼ（トロンビン、凝固第VIIa因子、凝固第IXa因子、凝固第Xa因子、凝固第XIa因子、凝固第XIIa因子、カリクレイン、蛋白質Ｃ、およびMBP関連セリンプロテアーゼなど）である。
本発明の１つの実施形態において、この破壊的切断部位は、少なくとも３または４、好ましくは５または６、より好ましくは６または７、そして特に好ましくは少なくとも８の隣接するアミノ酸残基を有する認識配列を含む。これに関して、（隣接するアミノ酸残基に関して）認識配列がより長いほど、意図されない第２のプロテアーゼを介する破壊的部位の非特異的切断が起こりにくい。
本発明の破壊的切断部位は、プロテアーゼ成分および／またはターゲティング部分および／またはトランスロケーション成分および／またはスペーサーペプチド内に導入されるのが好ましい。これらの４成分の内、プロテアーゼ成分が好ましい。したがって、ポリペプチドは、非細胞毒性プロテアーゼ成分および／または結合成分および／またはトランスロケーション成分の直接的破壊によって、迅速に不活性化され得る。
ポリペプチドの送達
使用時、本発明は、ポリペプチド、ならびに医薬的に許容可能なキャリア、賦形剤、アジュバント、推進剤、および／または塩から選ばれる少なくとも１つの成分を含む医薬組成物を用いる。
本発明のポリペプチドは、経口、非経口、持続点滴、吸入または局所適用用に処方され得る。注射に適した組成物は、溶液、懸濁液もしくは乳濁液、または使用前に適切なビヒクルに溶解もしくは懸濁される乾燥粉末の形態であり得る。
局部送達手段は、エアロゾル、または他の噴霧（例えば、ネブライザー）を含み得る。これに関して、ポリペプチドのエアロゾル製剤は、肺、および／または他の鼻腔、および／または気管支もしくは気道への送達を可能とする。
好ましい投与経路は、全身（例えばiv）、腹腔鏡、および／または局部注射（下垂体内への直接の経蝶形骨洞（transsphenoidal）注射）から選ばれる。
注射用製剤の場合、任意で、投与部位でのポリペプチドの保持を助けるために、または投与部位からのポリペプチドの除去を減らすために、医薬的に活性な物質を含むことがある。このような医薬的に活性な物質の一例は、血管収縮剤（アドレナリンなど）である。このような製剤は、投与後のポリペプチドの滞留時間を増やし、このためポリペプチドの効果を増大させる、および／または高める利点を与える。
本発明のポリペプチドの投与の用量範囲は、所望の治療効果をもたらす範囲である。必要とされる用量範囲は、ポリペプチドまたは組成物の正確な性質、投与経路、製剤の性質、患者の年齢、患者の状態の性質、程度もしくは重症度、もしあれば禁忌、および主治医の判断に依存すると理解される。これらの投与量レベルにおける変化は、最適化のために標準的な経験的日常業務を用いて調整され得る。
適切な１日投与量（患者の体重kgあたり）は、0.0001〜1mg/kg、好ましくは0.0001〜0.5mg/kg、より好ましくは0.002〜0.5mg/kg、そして特に好ましくは0.004〜0.5mg/kgの範囲である。単位用量は、１回あたり1マイクログラム未満から30mgまで変化し得るが、通常、0.01から1mgの範囲であり、毎日、または好ましくは週１回もしくは6ヶ月に１回などのより低い頻度で投与され得る。
特に好ましい投与計画は、１×量として2.5ngのポリペプチドに基づく。これに関して、好ましい投与量は、１×〜１００×（すなわち、2.5〜250ng）の範囲である。
通常、流体投薬形態が、ポリペプチドおよびパイロジェン不含の無菌ビヒクルを用いて調製される。用いられるビヒクルおよび濃度に依存して、ポリペプチドは、ビヒクルに溶解または懸濁され得る。溶液を調製する際、ポリペプチドはビヒクルに溶解され得、この溶液は、必要であれば塩化ナトリウムの添加によって等張にされ、そして無菌操作を用いて無菌フィルターを通す濾過によって無菌にした後、適切な無菌バイアルまたはアンプル内に満たして密封される。あるいは、溶液安定性が充分である場合、密封容器内の溶液はオートクレイブによって滅菌され得る。好都合には、緩衝剤、可溶化剤、安定化剤、防腐剤もしくは殺菌剤、懸濁化剤もしくは乳化剤、および／または局部麻酔剤などの添加剤がビヒクルに溶解され得る。
乾燥粉末（これは、使用前に適切なビヒクルに溶解または懸濁される）は、滅菌前成分を無菌区域で無菌操作を用いて無菌容器内に満たすことによって、調製され得る。あるいは、成分は、無菌区域で無菌操作を用いて適切な容器内に溶解され得る。その後、産物は凍結乾燥され、そして容器は無菌的に密封される。
筋肉内、皮下または皮内注射に適した非経口懸濁液が、無菌成分が無菌ビヒクルに溶解される代わりに懸濁されること、そして無菌化が濾過によって達成され得ないこと以外、実質的に同様に調製される。成分は、無菌状態で単離され得るか、または例えばガンマ線照射によって、単離後に滅菌され得る。
好都合には、成分の一様分布を促進するために、懸濁化剤（例えばポリビニルピロリドンなど）が組成物内に含まれる。
定義の部
ターゲティング部分（ＴＭ）は、本発明のポリペプチドと標的細胞（通常、哺乳類細胞、特にヒト細胞）の表面との間に物理的会合を引き起こすように、結合部位と機能的に相互作用する任意の化学的構造を意味する。用語ＴＭは、標的細胞上の結合部位に結合し得る任意の分子（すなわち、天然に存在する分子、またはその化学的／物理的に改変された改変体）を含み、この結合部位は、インターナリゼーション（例えば、エンドソーム形成）−レセプター媒介エンドサイトーシスとも呼ばれる−し得る。ＴＭは、エンドソーム膜トランスロケーション機能を有し得、この場合、本発明の剤に、ＴＭ成分およびトランスロケーションドメイン成分が別々に存在する必要はない。上記の記載を通して、具体的なＴＭが記載されてきた。これらのＴＭの参照は、単なる例であり、本発明は、成長ホルモン放出細胞上の結合部位への結合（すなわちターゲティング）能力を有するその改変体および誘導体のすべてを含み、結合部位はインターナリゼーションし得る。
本発明のＴＭは、問題の標的細胞に結合する（好ましくは特異的に結合する）。用語「特異的に結合する」は好ましくは、ＴＭが、106M-1以上、例えば107M-1以上、108M-1以上、または109M-1以上の結合親和性（Ka）で標的細胞に結合することを意味する。
本明細書におけるＴＭの参照は、問題の標的細胞に結合する能力を保持するその断片および改変体を含む。例として、改変体は、参照のＴＭと、少なくとも80％、好ましくは少なくとも90％、より好ましくは少なくとも95％、そして最も好ましくは少なくとも97％または少なくとも99％のアミノ酸配列相同性を有し得る。このため、改変体は、アミノ酸の１またはそれ以上の類似体（例えば非天然アミノ酸）、または置換された連結を含み得る。また、例として、ＴＭに関して用いられる場合の用語断片は、参照のＴＭの、少なくとも１０、好ましくは少なくとも２０、より好ましくは少なくとも３０、そして最も好ましくは少なくとも４０のアミノ酸残基を有するペプチドを意味する。用語断片はまた、上記の改変体に関する。このため、例として、本発明の断片は、少なくとも１０、２０、３０または４０のアミノ酸を有するペプチド配列を含み得、このペプチド配列は、参照のペプチドの対応するペプチド配列の（隣接する）アミノ酸に対して少なくとも80％の配列相同性を有する。
例として、ErbBペプチドＴＭは、安定化の増大などの特性の変化を伴う変異蛋白質ErbBリガンドを生じるように改変され得る。例として、ErbB ＴＭ変異蛋白質は、細胞プロテアーゼに対する安定性を与える、46または47位のバリン残基（EGFVal46または47）などのアミノ酸改変を有するErbBペプチドを含む。ErbB ＴＭはまた、アミノ酸の欠失または付加アミノ酸の挿入を有し得る。これは、２つのＣ末端アミノ酸の欠失および51位での中立アミノ酸置換を有するEGF（特にEGF51Gln51；US20020098178A1参照）、ならびにアミノ酸が欠失したEGF（例えば；rEGF2-48；rEGF3-48およびrEGF4-48）を含むが、これらに限定されない。ErbB ＴＭの断片は、予測βターン領域を含むTGFαの断片（例えば、配列Ac-C-H-S-G-Y-V-G-A-R-C-O-OMeのペプチド）、EGFの断片（[Ala20]EGF(14-31)など）、およびペプチドYHWYGYTPQNVIまたはGE11を含み得る。上記の特許明細書の全体が、参照によって本明細書に援用される。
さらなる例として、ソマトスタチン（SST）およびコルチスタチン（CST）は、高い構造相同性を有し、そして全ての公知のSSTレセプターに結合する。完全長SSTは、アミノ酸配列：
MLSCRLQCALAALSIVLALGCVTGAPSDPRLRQFLQKSLAAAAGKQELAKYFLAELLSEPNQTENDALEPEDLSQAAEQDEMRLELQRSANSNPAMAPRERKAGCKNFFWKTFTSC
を有する。
完全長CSTは、アミノ酸配列：
MYRHKNSWRLGLKYPPSSKEETQVPKTLISGLPGRKSSSRVGEKLQSAHKMPLSPGLLLLLLSGATATAALPLEGGPTGRDSEHMQEAAGIRKSSLLTFLAWWFEWTSQASAGPLIGEEAREVARRQEGAPPQQSARRDRMPCRNFFWKTFSSCK
を有する。
これらのＴＭの参照は、その以下のＴＭの断片（および対応する改変体）を含む：
NFFWKTF;
(RまたはK)NFFWKTF;
C(RまたはK)NFFWKTF;
(PまたはG)C(RまたはK)NFFWKTF;
NFFWKTF(SまたはT);
NFFWKTF(SまたはT)S;
NFFWKTF(SまたはT)SC;
(RまたはK)NFFWKTF(SまたはT);
(RまたはK)NFFWKTF(SまたはT)S;
(RまたはK)NFFWKTF(SまたはT)SC;
C(RまたはK)NFFWKTF(SまたはT);
C(RまたはK)NFFWKTF(SまたはT)S;
C(RまたはK)NFFWKTF(SまたはT)SC;
(PまたはG)C(RまたはK)NFFWKTF(SまたはT);
(PまたはG)C(RまたはK)NFFWKTF(SまたはT)S;または
(PまたはG)C(RまたはK)NFFWKTF(SまたはT)C。
上記の配列に関して、(PまたはG)の選択肢が与えられる場合、CST ＴＭの場合はPが好ましいが、SST ＴＭの場合はGが好ましい。(RまたはK)の選択肢が与えられる場合、CST ＴＭの場合はRが好ましいが、SST ＴＭの場合はKが好ましい。(SまたはT)の選択肢が与えられる場合、CST ＴＭの場合はSが好ましいが、SST ＴＭの場合はTが好ましい。
好ましい断片は、少なくとも７または少なくとも１０のアミノ酸残基、好ましくは少なくとも１４または少なくとも１７のアミノ酸残基、そしてより好ましくは少なくとも２８または２９のアミノ酸残基を含む。例として、好ましい配列は、以下を含む：
SANSNPAMAPRERKAGCKNFFWKTFTSC (SST-28);
AGCKNFFWKTFTSC (SST-14);
QEGAPPQQSARRDRMPCRNFFWKTFSSCK (CST-29);
QERPPLQQPPHRDKKPCKNFFWKTFSSCK (CST-29);
QERPPPQQPPHLDKKPCKNFFWKTFSSCK (CST-29);
DRMPCRNFFWKTFSSCK (CST-17);
PCRNFFWKTFSSCK (CST-14);および
PCKNFFWKTFSSCK (CST-14)。
ＴＭが正常なGH分泌細胞に、好ましくは正常なGH分泌細胞上のSSTまたはCSTレセプターに結合し得る限り、ＴＭは、例えば少なくとも３０もしくは３５のアミノ酸残基、または少なくとも４０もしくは４５のアミノ酸残基の、より長いアミノ酸配列を含み得る。これに関して、ＴＭは好ましくは、完全長SSTまたはCSTの断片であるが、少なくともコア配列「NFFWKTF」を、または上で規定された一次アミノ酸配列の１つを含む。
さらなる例として、本発明のGHRHペプチドは、以下を含む：
YADAIFTASYRKVLGQLSARKLLQDILSR; YADAIFTASYRNVLGQLSARKLLQDILSR;
YADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIM; YADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMS;
ADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMSR;
YADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMSRQQGESNQERGARARL;
YADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMSRQQGESNQERGA;
YADAIFTNAYRKVLGQLSARKLLQDIMSR; YADAIFTNSYRKVLGQLSARKALQDIMSR;
YADAIFTASYKKVLGQLSARKLLQDIMSR; YADAIFTASYKRVLGQLSARKLLQDIMSR;
YADAIFTASYNKVLGQLSARKLLQDIMSR; YADAIFTASYRKVLGQLSAKKLLQDIMSR;
YADAIFTASYKKVLGQLSAKKLLQDIMSR; YADAIFTASYRKVLGQLSANKLLQDIMSR;
YADAIFTASYRNVLGQLSARKLLQDIMSR; YADAIFTASYRKVLGQLSARNLLQDIMSR;
YADAIFEASYRKVLGQLSARKLLQDIMSR; YADAIFTASERKVLGQLSARKLLQDIMSR;
YADAIFTASYRKELGQLSARKLLQDIMSR; YADAIFTASYRKVLGQLSARKLLQDIMSR;
YADAIFTESYRKVLGQLSARKLLQDIMSR; YADAIFTNSYRKVLAQLSARKLLQDIM;
YADAIFTNSYRKVLAQLSARKLLQDIMSR; YADAIFTASYRKVLAQLSARKLLQDIMSR;
YADAIFTAAYRKVLAQLSARKALQDIASR; YADAIFTAAYRKVLAQLSARKALQDIMSR;
HVDAIFTQSYRKVLAQLSARKLLQDILNRQQGERNQEQGA;
HVDAIFTQSYRKVLAQLSARKALQDILSRQQG; HVDAIFTSSYRKVLAQLSARKLLQDILSR;
HVDAIFTTSYRKVLAQLSARKLLQDILSR; YADAIFTQSYRKVLAQLSARKALQDILNR;
YADAIFTQSYRKVLAQLSARKALQDILSR。
ＴＭが、選択された標的細胞に結合することを確認することは、日常の作業である。例えば、成長ホルモン分泌細胞の代表である組織または細胞が、過剰の非標識化ＴＭの存在下で、標識化された(例えばトリチウム化された)ＴＭに露呈される、単純な放射性置換実験が用いられ得る。このような実験において、非特異的および特異的結合の相対的割合が評価され得、これによってＴＭが標的細胞に結合することの確認を可能とする。必要に応じて、アッセイは１またはそれ以上の結合アンタゴニストを含み得、そしてアッセイはさらにＴＭ結合の損失を観察することを含み得る。この種の実験の例は、Hulme, E. C. (1990), Receptor-binding studies, a brief outline, pp. 303-311, In Receptor biochemistry, A Practical Approach, E. C. Hulme編, Oxford University Pressにおいて見られ得る。
本発明との関連において、ペプチドＴＭの参照（例えば、GHRHペプチド、またはレプチンペプチド）は、対応する「参照」ＴＭと同じレセプターに結合する限り、そのペプチド類似体を含む。この類似体は：
β-Nal = β-ナフチルアラニン
β-Pal = β-ピリジルアラニン
hArg(Bu) = N-グアニジノ-(ブチル)-ホモアルギニン
hArg(Et)2 = N,N'-グアニジノ-(ジメチル)-ホモアルギニン
hArg(CH2CF3)2 = N,N'-グアニジノ-ビス-(2,2,2,- トリフルオロエチル)-ホモアルギニン
hArg(CH3,ヘキシル) = N,N'-グアニジノ-(メチル,ヘキシル)-ホモアルギニン
Lys(Me) = Ne-メチルリジン
Lys(iPr) = Ne-イソプロピルリジン
AmPhe = アミノメチルフェニルアラニン
AChxAla = アミノシクロヘキシルアラニン
Abu = α-アミノ酪酸
Tpo = 4-チアプロリン
MeLeu = N-メチルロイシン
Orn = オルニチン
Nle = ノルロイシン
Nva = ノルバリン
Trp(Br) = 5-ブロモ-トリプトファン
Trp(F) = 5-フルオロ-トリプトファン
Trp(N02) = 5-ニトロ-トリプトファン
Gaba = γ-アミノ酪酸
Bmp = J-メルカプトプロピオニル
Ac = アセチル
Pen = ペニシラミン
などの合成残基を含み得る。
例として、上記のペプチド類似体の局面は、SSTペプチド、GHRHペプチド、ボンベシンペプチド、グレリンペプチド、およびウロテンシンペプチドなどの具体的なペプチドＴＭに関してより詳細に記載されるが、同じ原理が本発明の全てのＴＭに当てはまる。
本発明を実行するのに用いられ得るソマトスタチン類似体は、以下の刊行物（これらは、参照によって本明細書に援用される）に記載されるものを含むが、これらに限定されない：Van Binst, G.ら. Peptide Research 5: 8 (1992); Horvath, A.ら. Abstract, “Conformations of Somatostatin Analogs Having Antitumor Activity”, 22nd European peptide Symposium, 9月 13-19,1992,インターラーケン,スイス; US5,506,339; EP0363589; US4,904,642; US4,871,717; US4,725,577; US4,684,620; US4,650.787: US4,585,755; US4,725,577; US4,522,813; US4,369,179; US4,360,516; US4,328,214; US4,316,890; US4,310,518; US4,291,022; US4,238,481; US4,235,886; US4,211,693; US4,190,648; US4,146,612; US4,133,782; US5,506,339: US4,261,885; US4,282,143; US4,190,575; US5,552,520: EP0389180; EP0505680; US4,603,120; EP0030920; US4,853.371; WO90/12811; WO97/01579; WO91/18016: WO98/08529およびWO98/08528: WO/0075186およびWO00/06185; WO99/56769;ならびにFR 2,522,655。これらの刊行物はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に援用される。
類似体を合成する方法は、例えば、上で引用された特許によって示されるように、充分に実証されている。例えば、H-D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2の合成は、EP0395417A1の実施例１に記載されるプロトコールに従うことによって達成され得る。同様に、Ｎ末端が置換された合成類似体は、例えば、WO88/02756、EP0329295およびUS5,240,561に記載されるプロトコールに従うことによって達成され得る。
直鎖SST類似体の使用もまた、本発明の範囲内に含まれ、例えば：H-D-Phe-p-クロロ-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2; H-D-Phe-p-NO2-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH2; H-D-*Nal-p-クロロ-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH2; H-D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2; H-D-Phe-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH2; H-D-Phe-p-クロロ-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH2;およびH-D-Phe-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Ala-D-ベータ-Nal-NH2、である。
１またはそれ以上の化学的部分（例えば糖誘導体、モノもしくはポリヒドロキシ（C2-12）アルキル基、モノもしくはポリヒドロキシ（C2-12）アシル基、またはピペラジン誘導体）は、SST類似体に、例えばそのＮ末端アミノ酸に、付着され得る（WO88/02756、EP0329295、およびUS5,240,561参照）。
GHRHペプチド類似体は、1990年代にまで遡り、そして「標準アンタゴニスト」[Ac-Tyr', D-Arg2jhGH-RH (1-29) Nhaを含む。米国特許4,659,693は、GH-RH(1-29)配列の2位に、特定のN,N'-ジアルキル-オメガ-グアニジノ アルファ-アミノアシル残基を含むGH-RHアンタゴニスト類似体を開示している。さらなる例は、WO91/16923、US5,550,212、US5,942,489、US6,057,422、US5,942,489、US6,057,422、WO96/032126、WO96/022782、WO96/016707、WO94/011397、WO94/011396に与えられ、それぞれが参照によって本明細書に援用される。
本発明で使用するのに適したボンベシン類似体の例は、以下を含むＴＭを含む：D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2（コード名BIM-26218）、D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Leu-NH2（コード名BIM-26187）; D-Cpa-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-φ[CH2NH]-Phe-NH2（コード名 BIM-26159）、およびD-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-φ[CH2NH]-Cpa-NH2（コード名 BIM-26189); D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-N-メチル-D-Ala-His-Leu-メチルエステル、およびD-Fg-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Leu-メチルエステル。
ボンベシン類似体は、天然に存在する構造上関連したペプチド（すなわちボンベシン、ニューロメジンB、ニューロメジンC、リトリン、およびGRP）に由来するペプチドを含む。これらの天然に存在するＴＭペプチドの関連のあるアミノ酸配列が、以下に記載される：
ボンベシン（最後の１０aa): Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2
ニューロメジンB: Gly-Asn-Leu-Trp-Ala-Thr-Gly-His-Phe-Met-NH2
ニューロメジンC: Gly-Asn-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2
リトリン: pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Phe-Met-NH2
ヒトGRP（最後の１０aa）: Gly-Asn-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2。
本発明で使用するのに適した類似体は、以下に記載される：米国出願番号502,438（1990年3月30日出願）、米国出願番号397,169（1989年8月21日出願）、米国出願番号376,555（1989年7月7日出願）、米国出願番号394,727（1989年8月16日出願）、米国出願番号317,941（1989年3月2日出願）、米国出願番号282,328（1988年12月9日出願）、米国出願番号257,998（1988年10月14日出願）、米国出願番号248,771（1988年9月23日出願）、米国出願番号207,759（1988年6月18日出願）、米国出願番号204,171（1988年6月8日出願）、米国出願番号173,311（1988年3月25日出願）、米国出願番号100,571（1987年9月24日出願）、米国出願番号520,225（1990年5月9日出願）、米国出願番号440,039（1989年11月21日出願）。これらの出願は全体が参照によって本明細書に援用される。ボンベシン類似体はまた、以下に記載される：Zacharyら, Proc. Nat. Aca. Sci. 82:7616 (1985); Heimbrookら,「Synthetic Peptides: Approaches to Biological Problems」, UCLA Symposium on Mol. and Cell. Biol. New Series, Vol. 86, TarnおよびKaiser編; Heinz-Erianら, Am. J. Physiol. G439 (1986): Martinezら, J. Med. Chem. 28:1874 (1985); Gargoskyら, Biochem. J. 247:427 (1987); Dubreuilら, Drug Design and Delivery, Vol 2:49, Harwood Academic Publishers, GB (1987); Heikkilaら, J. Biol. Chem. 262:16456 (1987); Caranikasら, J. Med. Chem. 25:1313 (1982): Saeedら, Peptides 10:597 (1989); Rosellら, Trends in Pharmacological Sciences 3:211 (1982); Lundbergら, Proc. Nat. Aca. Sci. 80:1120 (1983); Engbergら, Nature 293:222 (1984); Mizrahiら, Euro. J. Pharma. 82:101 (1982); Leanderら, Nature 294:467 (1981); Wollら, Biochem. Biophys. Res. Comm. 155:359 (1988); Rivierら, Biochem. 17:1766 (1978); Cuttittaら, Cancer Surveys 4:707 (1985); Aumelasら, Int. J. Peptide Res. 30:596 (1987)。これらの全体もまた、参照によって本明細書に援用される。
類似体は、WO92/20363およびEP0737691に記載されるような従来技術によって調製され得る。さらなるボンベシン類似体は、例えばWO89/02897、WO91/17181、WO90/03980およびWO91/02746に記載され、これらの全体が参照によって本明細書に援用される。
本発明のＴＭとしての使用に適したグレリン類似体の例は、以下を含む：Tyr-DTrp-DLys-Trp-DPhe-NH2, Tyr-DTrp-Lys-Trp-DPhe-NH2, His-DTrp-DLys-Trp-DPhe-NH2, His-DTrp-DLys-Phe-DTrp-NH2, His-DTrp-DArg-Trp-DPhe-NH2, His-DTrp-DLys-Trp-DPhe-Lys-NH2, デスアミノTyr-DTrp-Ala-Trp-DPhe-NH2, デスアミノTyr-DTrp-DLys-Trp-DPhe-NH2, デアミノTyr-DTrp-Ser-Trp-DPhe-Lys-NH2, デスアミノTyr-DTrp-Ser-Trp-DPhe-NH2, His-DTrp-DTrp-Phe-Met-NH2, Tyr-DTrp-DTrp-Phe-Phe-NH2, Glyψ[CH2NH]-DβNal-Ala-Trp-DPhe-Lys-NH2, Glyψ[CH2NH]-DベータNal-DLys-TrP-DPhe-Lys-NH2, DAla-DベータNal-DLys-DTrp-Phe-Lys-NH2, His-DベータNal-DLys-Trp-DPhe-Lys-NH2, Ala-His-DTrp-DLys-Trp-DPhe-Lys-NH2, Alaφ[CH2NH]-DベータNal-Ala-Trp-DPhe-Lys-NH2, DベータNal-Ala-Trp-DPhe-Ala-NH2, DAla-DシクロヘキシルAla-Ala-Phe-DPhe-Nle-NH2, DシクロヘキシルAla-Ala-Phe-DTrp-Lys-NH2, DAla-DベータAla-Thr-DThr-Lys-NH2, DシクロヘキシルAla-Ala-Trp-DPhe-NH2, DAla-DベータNal-Ala-Ala-DAla-Lys-NH2, DベータNal-Ala-Trp-DPhe-Leu-NH2, His-DTrp-Phe-Trp-DPhe-Lys-NH2, DAla-DベータNal-DAla-DTrp-Phe-Lys-NH2, pAla-Trp-DAla-DTrp-Phe-NH2, His-Trp-DAla-DTrp-Phe-LysNH2, DLys-DβNal-Ala-Trp-DPhe-Lys-NH2, DAla-DベータNal-DLys-DTrp-Phe-Lys-NH2, Tyr-DAla-Phe-Aib-NH2, Tyr-DAla-Sar-NMePhe-NH2, αγAbu-DTrp-DTrp-Ser-NH2, αγAbu-DTrp-DTrp-Lys-NH2, αγAbu-DTrp-DTrp-Orn-NH2, αAbu-DTrp-DTrp-Orn-NH2, DThr-DαNal-DTrp-DPro-Arg-NH2, DAla-Ala-DAla-DTrp-Phe-Lys-NH2, Alaψ[CH2NH]His-DTrp-Ala-Trp-DPhe-Lys-NH2, Lys-DHis-DTrp-Phe-NH2, γAbu-DTrp-DTrp-Orn-NH2, inip-Trp-Trp-Phe-NH2, Ac-DTrp-Phe-DTrp-Leu-NH2, Ac-DTrp-Phe-DTrp-Lys-NH2, Ac-DTrp-DTrp-Lys-NH2, DLys-Tyr-DTrp-DTrp-Phe-Lys-NH2, Ac-DベータNal-Leu-Pro-NH2, pAla-Trp-DTrp-DTrp-Orn-NH2, DVal-DαNal-DTrp-Phe-Arg-NH2, DLeu-DαNal-DTrp-Phe-Arg-NH2, シクロヘキシルAla-DαNal-DTrp-Phe-Arg-NH2, DTp-DαNal-DTrp-Phe-Arg-NH2, DAla-DβNal-DPro-Phe-Arg-NH2, Ac-DαNal-DTrp-Phe-Arg-NH2, DaNal-DTrp-Phe-Arg-NH2, His-DTrp-DTrp-Lys-NH2, Ac-DpNal-DTrP-NH2, αAib-DTrp-DシクロヘキシルAla-NH2, αAib-DTrp-DAla-シクロヘキシルAla-NH2, DAla-DシクロヘキシルAla-Ala-Ala-Phe-DPhe-Nle-NH2, DPhe-Ala-Phe-DPal-NH2, DPhe-Ala-Phe-DPhe-Lys-NH2, DLys-Tyr-DTrp-DTrp-Phe-NH2, Ac-DLys-Tyr-DTrp-DTrp-Phe-NH2, Arg-DTrp-Leu-Tyr-Trp-Pro(環状Arg-Pro), Ac-DβNal-PicLys-ILys-DPhe-NH2, DPal-Phe-DTrp-Phe-Met-NH2, DPhe-Trp-DPhe-Phe-Met-NH2, DPal-Trp-DPhe-Phe-Met-NH2, pAla-Pal-DTrp-DTrp-Orn-NH2, αγAbu-Trp-DTrp-DTrp-Om-NH2, βAla-Trp-DTrp-DTrp-Lys-NH2, γAbu-Trp-DTrp-DTrp-Orn-NH2, Ava-Trp-DTrp-DTrp-Orn-NH2, DLys-Tyr-DTrp-Ala-Trp-DPhe-NH2, His-DTrp-DArg-Trp-DPhe-NH2, <Glu-His-Trp-DSer-DArg-NH2, DPhe-DPhe-DTrp-Met-DLys-NH2, 0-(2-メチルアリル)ベンゾフォノンオキシム, (R)-2-アミノ-3-(IH-インドール-3-イル)-l-(4-フェニルピペリジン-1-イル)プロパン-1-オン, N-((R)-1-((R)-1-((S)-3-(IH-インドール-3-イル)-1-オキソ-1-(4-フェニルピペリジン-1-イル)プロパン-2-イルアミノ)-6-アミノ-1-オキソヘキサン-2-イルアミノ)-3-ヒドロキシ-1-オキソプロパン-2-イル)ベンズアミド, (S)-N-((S)-3-(1H-インドール-3-イル)-1-オキソ-1-(4-フェニルピペリジン-1-イル)プロパン-2-イル)-6-アセトアミド-2-((S)-2-アミノ-3-(ベンジルオキシ)プロパンアミド)ヘキサンアミド, (S)-N-((R)-3-(1H-インドール-3-イル)-1-オキソ-1-(4-フェニルピペリジン-1-イル)プロパン-2-イル)-2-((S)-2-アセトアミド-3-(ベンジルオキシ)プロパンアミド)-6-アミノヘキサンアミド, (R)-N-(3-(1H-インドール-3-イル)-1-(4-(2-メトキシフェニル)ピペリジン-1-イル)-1-オキソプロパン-2-イル)-4-アミノブタンアミド, (R)-N-(3-(1H-インドール-3-イル)-1-(4-(2-メトキシフェニル)ピペリジン-1-イル)-1-オキソプロパン-2-イル)-2-アミノ-2-メチルプロパンアミド, 3-(p-トリルカルバモイル)-2-ナフトエ酸メチル, 3-(4-(2-メトキシフェニル)ピペリジン-1-カルボニル)-2-ナフトエ酸エチル, 3-(2-メトキシフェニルカルバモイル)-2-ナフトエート, (S)-2,4-ジアミノ-N-((R)-3-(ナフタレン-2-イルメトキシ)-1-オキソ-1-(4-フェニルピペリジン-1-イル)プロパン-2-イル)ブタンアミド, ナフタレン-2,3-ジイルビス((4-(2-メトキシフェニル)ピペラジン-1-イル)メタノン), (R)-2-アミノ-N-(3-(ベンジルオキシ)-1-オキソ-1-(4-フェニルピペラジン-1-イル)プロパン-2-イル)-2-メチルプロパンアミド、または(R)-2-アミノ-3-(ベンジルオキシ)-1-(4-フェニルピペラジン-1-イル)プロパン-1-オン。
本発明のＴＭとしての使用に適したウロテンシン類似体の例は、以下を含む：Cpa-c[D-Cys-Phe-Trp-Lys-Thr-Cys]-Val-NH2;およびAsp-c[Cys-Phe-Trp-Lys-Tyr-Cys]-Val-OH。
本発明のポリペプチドは、クロストリジウム菌神経毒素の機能HCドメインを欠く。したがって、このポリペプチドは、Shoneら(1985) Eur. J. Biochem. 151, 75-82に記載されるような結合アッセイにおいて（クロストリジウム菌HC成分を介して）ラットシナプトゾーム膜を結合させることができない。好ましい実施形態において、ポリペプチドは好ましくは、クロストリジウム菌神経毒ホロ毒素の最後の５０のＣ末端アミノ酸を欠く。別の実施形態において、ポリペプチドは好ましくは、クロストリジウム菌神経毒ホロ毒素の最後の１００、好ましくは最後の１５０、より好ましくは最後の２００、特に好ましくは最後の２５０、そして最も好ましくは最後の３００のＣ末端アミノ酸残基を欠く。あるいは、HC結合活性は、変異導入によって無効にされ得る／低下され得る。例として、便宜上BoNT/Aに言及すると、ガングリオシド結合ポケットにおける１または２のアミノ酸残基の変異の改変（W1266をLへ、そしてY1267をFへ）により、HC領域はそのレセプター結合機能を失う。類似の変異が非血清型Aクロストリジウム菌ペプチド成分になされ得る（例えば、変異を有するボツリヌス菌B(W1262をLへ、そしてY1263をFへ)またはボツリヌス菌E（W1224をLへ、そしてY1225をFへ）に基づく構築物）。活性部位への他の変異が、HCレセプター結合活性の同じアブレーションを達成する（例えば、ボツリヌス菌A型毒素におけるY1267S、および他のクロストリジウム菌神経毒素における対応する高度に保存された残基）。この詳細および他の変異の詳細は、Rummelら (2004) (Molecular Microbiol. 51:631-634)に記載される（これは、参照によって本明細書に援用される）。
別の実施形態において、本発明のポリペプチドは、クロストリジウム菌神経毒素の機能HCドメインを欠き、そして任意の機能的に同等のＴＭも欠く。したがって、このポリペプチドは、クロストリジウム菌神経毒素の天然の結合機能を欠き、そしてShoneら(1985) Eur. J. Biochem. 151, 75-82に記載されるような結合アッセイにおいて（クロストリジウム菌HC成分を介して、または任意の機能的に同等のＴＭを介して）ラットシナプトゾーム膜を結合させることができない。
１つの実施形態において、ＴＭは好ましくはコムギ胚芽凝集素（WGA）ペプチドではない。
天然のクロストリジウム菌神経毒素のHCペプチドは、約４００〜４４０のアミノ酸残基を含み、そしてそれぞれ約25kDaの２つの機能的に区別されたドメイン、すなわちＮ末端領域（一般にHCNペプチドまたはドメインと呼ばれる）およびＣ末端領域（一般にHCCペプチドまたはドメインと呼ばれる）から成る。この事実は、以下の刊行物によって確かめられ、各刊行物は、その全体が参照によって本明細書に援用される：Umland TC (1997) Nat. Struct. Biol. 4: 788-792; Herreros J (2000) Biochem. J. 347: 199-204; Halpern J (1993) J. Biol. Chem. 268: 15, pp. 11188-11192; Rummel A (2007) PNAS 104: 359-364; Lacey DB (1998) Nat. Struct. Biol. 5: 898-902; Knapp (1998) Am. Cryst. Assoc. Abstract Papers 25: 90; SwaminathanおよびEswaramoorthy (2000) Nat. Struct. Biol. 7: 1751-1759; ならびにRummel A (2004) Mol. Microbiol. 51 (3), 631-643。さらに、Ｃ末端の160〜200のアミノ酸残基を構成するＣ末端領域（HCC）が、クロストリジウム菌神経毒素の、その天然の細胞レセプターへの結合、すなわち神経筋接合部の神経末端への結合に関与することは、充分に実証されている。この事実は、上記の刊行物によっても確かめられる。このため、本明細書中における、天然のクロストリジウム菌神経毒素が結合する細胞表面レセプターに重鎖が結合し得ないように機能重鎖HCペプチド（またはドメイン）を欠くクロストリジウム菌重鎖との言及は、クロストリジウム菌重鎖が単に機能HCCペプチドを欠くことを意味する。言い換えれば、HCCペプチド領域は、神経筋接合部の神経末端へのその天然の結合能力を不活性化するように（例えば従来の化学的処理または蛋白質分解処理によって）、部分的にまたは完全に欠失されるか、そうでなければ改変される。
このため、１つの実施形態において、本発明のクロストリジウム菌HNペプチドは、クロストリジウム菌神経毒素のＣ末端ペプチド部分（HCC）の部分を欠き、このため天然のクロストリジウム菌神経毒素のHC結合機能を欠く。例として、１つの実施形態において、Ｃ末端側が伸長したクロストリジウム菌HNペプチドは、クロストリジウム菌神経毒素重鎖のＣ末端の４０のアミノ酸残基、またはＣ末端の６０のアミノ酸残基、またはＣ末端の８０のアミノ酸残基、またはＣ末端の１００のアミノ酸残基、またはＣ末端の１２０のアミノ酸残基、またはＣ末端の１４０のアミノ酸残基、またはＣ末端の１５０のアミノ酸残基、またはＣ末端の１６０のアミノ酸残基を欠く。別の実施形態において、本発明のクロストリジウム菌HNペプチドは、クロストリジウム菌神経毒素の完全Ｃ末端ペプチド部分（HCC）を欠き、このため天然のクロストリジウム菌神経毒素のHC結合機能を欠く。例として、１つの実施形態において、クロストリジウム菌HNペプチドは、クロストリジウム菌神経毒素重鎖のＣ末端の１６５のアミノ酸残基、またはＣ末端の１７０のアミノ酸残基、またはＣ末端の１７５のアミノ酸残基、またはＣ末端の１８０のアミノ酸残基、またはＣ末端の１８５のアミノ酸残基、またはＣ末端の１９０のアミノ酸残基、またはＣ末端の１９５のアミノ酸残基を欠く。さらなる例として、本発明のクロストリジウム菌HNペプチドは、以下からなる群から選ばれるクロストリジウム菌HCC参照配列を欠く：
ボツリヌス菌A型神経毒素-アミノ酸残基(Y1111-L1296)
ボツリヌス菌B型神経毒素-アミノ酸残基(Y1098-E1291)
ボツリヌス菌C型神経毒素-アミノ酸残基(Y1112-E1291)
ボツリヌス菌D型神経毒素-アミノ酸残基(Y1099-E1276)
ボツリヌス菌E型神経毒素-アミノ酸残基(Y1086-K1252)
ボツリヌス菌F型神経毒素-アミノ酸残基(Y1106-E1274)
ボツリヌス菌G型神経毒素-アミノ酸残基(Y1106-E1297)
破傷風菌神経毒素 -アミノ酸残基(Y1128-D1315)。
上に同定された参照配列は、僅かな変異が血清亜型に従って生じ得るので、指針として考慮されるべきである。
本発明のプロテアーゼは、真核細胞におけるエキソサイトーシス融合装置の１またはそれ以上の蛋白質を切断し得る全ての非細胞毒性プロテアーゼを含む。
本発明のプロテアーゼは好ましくは、細菌プロテアーゼ（またはその断片）である。より好ましくは、細菌プロテアーゼは、クロストリジウム属（Clostridium）またはナイセリア属（Neisseria）／ストレプトコッカス属（Streptococcus）から選ばれる（例えば、クロストリジウム菌L鎖、または好ましくはN. gonorrhoeae（N. ゴノリーア）またはS. pneumoniae（S. ニューモニアイ）由来のナイセリアIgAプロテアーゼ）。
本発明はまた、必要なプロテアーゼ活性をなお示す限り、改変体非毒性細胞プロテアーゼ（すなわち、天然に存在するプロテアーゼ分子の改変体）を含む。例として、改変体は、参照プロテアーゼ配列と少なくとも70％、好ましくは少なくとも80％、より好ましくは少なくとも90％、そして最も好ましくは少なくとも95％または少なくとも98％のアミノ酸配列相同性を有し得る。このため、用語改変体は、エンドペプチダーゼ活性が増大(または低下)した非細胞毒性プロテアーゼを含む。ここでは、BoNT/A変異体Q161A、E54A、およびK165LのKcat/Kmの増大に特に言及する（Ahmed, S.A. (2008) Protein J. DOI 10.1007/s10930-007-9118-8参照。これは、参照によって本明細書に援用される）。プロテアーゼに関して用いられる場合の用語断片は、通常、参照のプロテアーゼの、少なくとも１５０、好ましくは少なくとも２００、より好ましくは少なくとも２５０、そして最も好ましくは少なくとも３００のアミノ酸残基を有するペプチドを意味する。ＴＭ「断片」成分（上で議論された）と同様に、本発明のプロテアーゼ「断片」は、参照の配列に基づいた改変体プロテアーゼの断片を含む。
本発明のプロテアーゼは好ましくは、セリンまたはメタロプロテアーゼ活性（例えばエンドペプチダーゼ活性）を示す。プロテアーゼは好ましくは、SNARE蛋白質（例えばSNAP-25、シナプトブレビン／VAMP、またはシンタキシン）に特異的である。
神経毒素のプロテアーゼドメイン（例えば細菌神経毒素のプロテアーゼドメイン）に特に言及する。このため、本発明は、天然に存在する神経毒素ドメイン、およびこの天然に存在する神経毒素の組換え技術で調製された型の使用を含む。
例となる神経毒素は、クロストリジウムによって生産され、用語クロストリジウム菌神経毒素は、C. tetani（C. テタニ）(TeNT)、およびC. botulinum（C. ボツリナム）(BoNT)血清型A-Gによって生産される神経毒素、ならびにC. baratii（C. バラティ）およびC. butyricum（C. ブチリカム）によって生産される密接に関連したBoNT様神経毒素を含む。上記の略語は、本明細書中を通じて使用する。例えば、BoNT/Aの名称は、神経毒素の供給源がBoNT（血清型A）であることを示す。他のBoNT血清型に対しても、対応する名称が適用される。
BoNTは知られるうち最も強力な毒素であり、マウスに対する半数致死量（LD50）値は血清型に応じて0.5〜5ng/kgに及ぶ。BoNTは、胃腸管に吸着され、そして全身循環に入った後、コリン作動性神経末端のシナプス前膜に結合し、神経伝達物質アセチルコリンの放出を防止する。BoNT/B、BoNT/D、BoNT/FおよびBoNT/Gはシナプトブレビン／小胞関連膜蛋白質（VAMP）を切断し、BoNT/C、BoNT/AおよびBoNT/Eは25kDaのシナプトソーム関連蛋白質（SNAP-25）を切断し、BoNT/Cはシンタキシンを切断する。
BoNTは共通の構造を共有し、50kDaまでの軽鎖（L鎖）への単一のジスルフィド結合によって共有結合された100kDaまでの重鎖（H鎖）から成る、150kDaまでの二鎖蛋白質である。H鎖は、それぞれが50kDaまでの２つのドメインから成る。Ｃ末端ドメイン（HC）は高親和性神経細胞結合に必要とされ、Ｎ末端ドメイン（HN）は膜トランスロケーションに関与すると提唱される。L鎖は、基質SNARE蛋白質の切断に関与する亜鉛依存性メタロプロテアーゼである。
用語L鎖断片は、神経毒素のL鎖の成分を意味し、この断片は、メタロプロテアーゼ活性を示し、そして細胞エキソサイトーシスに関与する小胞および／または原形質膜関連蛋白質を蛋白質分解切断し得る。
適切なプロテアーゼ（参照）配列の例は、以下を含む：
ボツリヌス菌A型神経毒素-アミノ酸残基(1-448)
ボツリヌス菌B型神経毒素-アミノ酸残基(1-440)
ボツリヌス菌C型神経毒素-アミノ酸残基(1-441)
ボツリヌス菌D型神経毒素-アミノ酸残基(1-445)
ボツリヌス菌E型神経毒素-アミノ酸残基(1-422)
ボツリヌス菌F型神経毒素-アミノ酸残基(1-439)
ボツリヌス菌G型神経毒素-アミノ酸残基(1-441)
破傷風菌神経毒素 -アミノ酸残基(1-457)
IgAプロテアーゼ -アミノ酸残基(1-959)*
（*は、Pohlner, J.ら (1987). Nature 325, pp. 458-462。これは、参照によって本明細書に援用される）。
上に同定された参照配列は、僅かな変異が血清亜型に従って生じ得るので、指針として考慮されるべきである。例として、US 2007/0166332（参照によって本明細書に援用される）は、僅かに異なるクロストリジウム菌配列を引用している：
ボツリヌス菌A型神経毒素-アミノ酸残基(M1-K448)
ボツリヌス菌B型神経毒素-アミノ酸残基(M1-K441)
ボツリヌス菌C型神経毒素-アミノ酸残基(M1-K449)
ボツリヌス菌D型神経毒素-アミノ酸残基(M1-R445)
ボツリヌス菌E型神経毒素-アミノ酸残基(M1-R422)
ボツリヌス菌F型神経毒素-アミノ酸残基(M1-K439)
ボツリヌス菌G型神経毒素-アミノ酸残基(M1-K446)
破傷風菌神経毒素 -アミノ酸残基(M1-A457)。
軽鎖を含む種々のクロストリジウム菌毒素断片は、これらの軽鎖断片が神経伝達物質放出装置のコア成分を特異的に標的にし得、このため細胞機構全体の実行に関与し、これによってクロストリジウム菌毒素が基質を蛋白質分解切断するという条件で、本発明の局面において有用であり得る。クロストリジウム菌毒素の軽鎖は約４２０〜４６０のアミノ酸長であり、そして酵素ドメインを含む。研究によって、クロストリジウム菌毒素軽鎖の完全長が、酵素ドメインの酵素活性に必須ではないことが示された。非限定の例として、BoNT/A軽鎖の最初の８アミノ酸は、酵素活性に必要とされない。別の非限定の例として、TeNT軽鎖の最初の８アミノ酸は、酵素活性に必要とされない。同様に、軽鎖のカルボキシル末端は、活性に必要とされない。非限定の例として、BoNT/A軽鎖の最後の３２アミノ酸（残基417-448）は、酵素活性に必要とされない。別の非限定の例として、TeNT軽鎖の最後の３１アミノ酸（残基427-457）は、酵素活性に必要とされない。このため、この実施形態の局面は、例えば少なくとも３５０のアミノ酸、少なくとも３７５のアミノ酸、少なくとも４００のアミノ酸、少なくとも４２５のアミノ酸、および少なくとも４５０のアミノ酸の長さを有する酵素ドメインを含むクロストリジウム菌毒素の軽鎖を含み得る。この実施形態の他の局面は、例えば多くとも３５０のアミノ酸、多くとも３７５のアミノ酸、多くとも４００のアミノ酸、多くとも４２５のアミノ酸、および多くとも４５０のアミノ酸の長さを有する酵素ドメインを含むクロストリジウム菌毒素の軽鎖を含み得る。
本発明の非細胞毒性プロテアーゼ成分は、好ましくはBoNT/A、BoNT/BまたはBoNT/D血清型L鎖（またはその断片もしくは改変体）を含む。
本発明のポリペプチド、特にそのプロテアーゼ成分は、ペグ化され得る。このことが、安定性（例えばプロテアーゼ成分の働きの持続期間）を増大させるのに役立ち得る。ペグ化は、プロテアーゼがBoNT/A、BまたはC1プロテアーゼを含む場合に特に好ましい。ペグ化は好ましくは、プロテアーゼ成分のＮ末端へのPEGの付加を含む。例として、プロテアーゼのＮ末端は、同じまたは異なり得る１またはそれ以上のアミノ酸（例えばシステイン）残基によって伸長され得る。このアミノ酸残基の１またはそれ以上が、そこに付着された（例えば共有結合された）独自のPEG分子を有し得る。この技術の例は、WO2007/104567（その全体が参照によって本明細書に援用される）に記載される。
トランスロケーションドメインは、プロテアーゼ活性の機能発現が標的細胞の細胞質ゾル内で起こるような標的細胞内へのプロテアーゼのトランスロケーションを可能とする分子である。どの分子（例えば蛋白質またはペプチド）であっても、本発明の必要なトランスロケーション機能を有するかは、多数の従来アッセイの任意の１つによって確認され得る。
例えば、Shone C.（1987）は、リポソームを用いるインビトロアッセイを記載しており、試験分子でチャレンジする。必要なトランスロケーション機能の存在は、K+および／または標識NADのリポソームからの放出によって確認され、これは容易にモニタリングされ得る［Shone C. (1987) Eur. J. Biochem., vol. 167(1), pp. 175-180参照］。
さらなる例は、Blaustein R.（1987）によって提供され、これは、平面リン脂質二層膜を用いる単純なインビトロアッセイを記載している。この膜を試験分子でチャレンジし、そして必要なトランスロケーション機能は、この膜を横断する伝導の増大によって確認される［Blaustein (1987) FEBS Letts., vol. 226, no. 1, pp. 115-120参照］。
膜融合の評価、およびこのため本発明での使用に適したトランスロケーションドメインの同定を可能にするさらなる方法は、Methods in Enzymology vol. 220および221, Membrane Fusion Techniques, Part AおよびB, Academic Press 1993によって提供される。
本発明はまた、改変体ドメインが必要なトランスロケーション活性をなお示す限り、改変体トランスロケーションドメインを含む。例として、改変体は、参照のトランスロケーションドメインと、少なくとも70％、好ましくは少なくとも80％、より好ましくは少なくとも90％、そして最も好ましくは少なくとも95％または少なくとも98％のアミノ酸配列相同性を有し得る。トランスロケーションドメインに関して用いられる場合の用語断片は、参照のトランスロケーションドメインの、少なくとも２０、好ましくは少なくとも４０、より好ましくは少なくとも８０、そして最も好ましくは少なくとも１００のアミノ酸残基を有するペプチドを意味する。クロストリジウム菌トランスロケーションドメインの場合、断片は好ましくは、参照のトランスロケーションドメイン（例えばHNドメイン）の、少なくとも１００、好ましくは少なくとも１５０、より好ましくは少なくとも２００、そして最も好ましくは少なくとも２５０のアミノ酸残基を有する。ＴＭ「断片」成分（上で議論された）と同様に、本発明のトランスロケーション「断片」は、参照の配列に基づいた改変体トランスロケーションドメインの断片を含む。
トランスロケーションドメインは好ましくは、低ｐＨの条件下で脂質膜におけるイオン透過孔を形成し得る。好ましくは、エンドソーム膜内の孔形成が可能な蛋白質分子の部分のみを使用することが見出されている。
トランスロケーションドメインは、微生物蛋白質供給源から、特に細菌またはウイルス蛋白質供給源から得られ得る。したがって、１つの実施形態において、トランスロケーションドメインは、細菌毒素またはウイルス蛋白質のような酵素のトランスロケーションドメインである。
細菌毒素分子の特定のドメインがこのような孔を形成し得ることは、充分に実証されている。また、ウイルス発現膜融合蛋白質の特定のトランスロケーションドメインがこのような孔を形成し得ることも知られている。このようなドメインが、本発明において用いられ得る。
トランスロケーションドメインは、HNドメイン（またはその機能成分）などのクロストリジウム菌起源であり得る。HNは、H鎖のアミノ末端側半分にほぼ等価なクロストリジウム菌神経毒素のH鎖の一部もしくは断片、または完全なH鎖中のその断片に対応するドメインを意味する。H鎖は、H鎖のHC成分の天然の結合機能を欠く。これに関して、HC機能は（ＤＮＡ合成レベルでの、またはヌクレアーゼもしくはプロテアーゼ処理による合成後レベルでの）HCアミノ酸配列の欠失によって除去され得る。あるいは、HC機能は、化学的または生物学的処理によって不活性化され得る。このため、H鎖は、天然のクロストリジウム菌神経毒素（すなわちホロ毒素）が結合する標的細胞上の結合部位に結合することができない。
適切な（参照）トランスロケーションドメインの例は、以下を含む：
ボツリヌス菌A型神経毒素-アミノ酸残基（449-871）
ボツリヌス菌B型神経毒素-アミノ酸残基（441-858）
ボツリヌス菌C型神経毒素-アミノ酸残基（442-866）
ボツリヌス菌D型神経毒素-アミノ酸残基（446-862）
ボツリヌス菌E型神経毒素-アミノ酸残基（423-845）
ボツリヌス菌F型神経毒素-アミノ酸残基（440-864）
ボツリヌス菌G型神経毒素-アミノ酸残基（442-863）
破傷風菌神経毒素 -アミノ酸残基（458-879）。
上に同定された参照配列は、僅かな変異が血清亜型に従って生じ得るので、指針として考慮されるべきである。例として、US 2007/0166332（参照によって本明細書に援用される）は、以下の僅かに異なるクロストリジウム菌配列を引用している：
ボツリヌス菌A型神経毒素-アミノ酸残基(A449-K871)
ボツリヌス菌B型神経毒素-アミノ酸残基(A442-S858)
ボツリヌス菌C型神経毒素-アミノ酸残基(T450-N866)
ボツリヌス菌D型神経毒素-アミノ酸残基(D446-N862)
ボツリヌス菌E型神経毒素-アミノ酸残基(K423-K845)
ボツリヌス菌F型神経毒素-アミノ酸残基(A440-K864)
ボツリヌス菌G型神経毒素-アミノ酸残基(S447-S863)
破傷風菌神経毒素 -アミノ酸残基(S458-V879)。
本発明との関連において、トランスロケーションドメインを含む種々のクロストリジウム菌毒素HN領域は、これらの活性断片が、標的細胞の細胞内小胞から細胞質内への非細胞毒性プロテアーゼ（例えばクロストリジウム菌L鎖）の放出を促進し得、このため細胞機構全体の実行に関与し、これによってクロストリジウム菌毒素が基質を蛋白質分解切断するという条件で、本発明の局面において有用であり得る。クロストリジウム菌毒素の重鎖由来のHN領域は約４１０〜４３０のアミノ酸長であり、そしてトランスロケーションドメインを含む。研究によって、クロストリジウム菌毒素重鎖のHN領域の完全長は、トランスロケーションドメインのトランスロケーション活性に必須ではないことが示された。このため、この実施形態の局面は、例えば少なくとも３５０のアミノ酸、少なくとも３７５のアミノ酸、少なくとも４００のアミノ酸、および少なくとも４２５のアミノ酸の長さを有するトランスロケーションドメインを含むクロストリジウム菌毒素HN領域を含み得る。この実施形態の他の局面は、例えば多くとも３５０のアミノ酸、多くとも３７５のアミノ酸、多くとも４００のアミノ酸、および多くとも４２５のアミノ酸の長さを有するトランスロケーションドメインを含むクロストリジウム菌毒素HN領域を含み得る。
ボツリヌス菌（Clostridium botulinum）および破傷風菌（C. tetani）における毒素生産の遺伝的基礎に関するさらなる詳細について、Hendersonら (1997) The Clostridia: Molecular Biology and Pathogenesis, Academic pressを参照する。
用語HNは、天然に存在する神経毒素HN部、ならびに上記のトランスロケーション機能をなお示す限り、天然に存在しないアミノ酸配列および／または合成アミノ酸残基を有する改変HN部分を含む。
あるいは、トランスロケーションドメインは、非クロストリジウム菌起源であり得る。非クロストリジウム菌（参照）トランスロケーションドメイン起源の例は、以下を含むが、これらに限定されない：ジフテリア菌毒素のトランスロケーションドメイン［O’Keefeら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1992) 89, 6202-6206；Silvermanら, J. Biol. Chem. (1993) 269, 22524-22532；およびLondon, E. (1992) Biochem. Biophys. Acta., 1112, 25-51］、シュードモナス菌外毒素A型のトランスロケーションドメイン［Priorら, Biochemistry (1992) 31, 3555-3559］、炭疽菌毒素のトランスロケーションドメイン［Blankeら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1996） 93, 8437-8442］、トランスロケーション機能の種々の融合性または疎水性ペプチド［Plankら, J. Biol. Chem. (1994) 269, 12918-12924；およびWagnerら, (1992) PNAS, 89, 7934-7938］、および親水性ペプチド［Murataら, (1992) Biochem., 31, 1986-1992］。トランスロケーションドメインは、天然に存在する蛋白質に存在するトランスロケーションドメインを反映し得るか、またはトランスロケーションドメインのトランスロケーション能を破壊しない限り、アミノ酸改変を含み得る。
本発明での使用に適したウイルス（参照）トランスロケーションドメインの具体的な例は、ウイルス発現膜融合蛋白質の特定のトランスロケーションドメインを含む。例えば、Wagnerら(1992)およびMurataら(1992)は、インフルエンザウイルス血球凝集素のＮ末端領域に由来する多数の融合性および親水性のペプチドのトランスロケーション（すなわち、膜融合および小胞形成）機能を記載している。所望のトランスロケーション活性を有することが公知の他のウイルス発現膜融合蛋白質は、セムリキ森林ウイルス（SFV）の融合性ペプチドのトランスロケーションドメイン、水疱性口内炎ウイルス（VSV）グリコプロテインGのトランスロケーションドメイン、SERウイルスF蛋白質のトランスロケーションドメインおよび泡沫状ウイルスエンベロープ糖蛋白質のトランスロケーションドメインである。ウイルスがコードするスパイク蛋白質は、本発明に関連して特別な適用を有し、例えば、SFVのE1蛋白質およびVSVのG蛋白質のG蛋白質である。
表（以下）に記載した（参照）トランスロケーションドメインの使用は、それらの配列改変体の使用を含む。改変体は、この改変体が、必要なトランスロケーション機能を有するという条件で、１またはそれ以上の保存的な核酸置換および／または核酸欠失もしくは挿入を含み得る。改変体はまた、この改変体が必要なトランスロケーション機能を保有する限り、１またはそれ以上のアミノ酸置換および／またはアミノ酸欠失もしくは挿入を含み得る。
Figure 0005799397
本発明のポリペプチドはさらに、トランスロケーション促進ドメインを含み得る。このドメインは、標的細胞の細胞質ゾル内への非細胞毒性プロテアーゼの送達を促進し、例えば、WO08/008803およびWO08/008805に記載されており、それぞれが参照によって本明細書に援用される。
例として、適切なトランスロケーション促進ドメインは、エンベロープされたウイルス融合性ペプチドドメインを含み、例えば、適切な融合性ペプチドドメインは、インフルエンザウイルス融合性ペプチドドメイン（例えば、２３アミノ酸のインフルエンザAウイルス融合性ペプチドドメイン）、アルファウイルス融合性ペプチドドメイン（例えば、２６アミノ酸のセムリキ森林ウイルス融合性ペプチドドメイン）、水疱性融合性ペプチドドメイン（例えば、２１アミノ酸の水疱性口内炎ウイルス融合性ペプチドドメイン）、レスピロウイルス融合性ペプチドドメイン（例えば、２５アミノ酸のセンダイウイルス融合性ペプチドドメイン）、モリビリウイルス融合性ペプチドドメイン（例えば、２５アミノ酸のイヌジステンパーウイルス融合性ペプチドドメイン）、アブラウイルス融合性ペプチドドメイン（例えば、２５アミノ酸のニューカッスル病ウイルス融合性ペプチドドメイン）、ヘニパウイルス融合性ペプチドドメイン（例えば、２５アミノ酸のヘンドラウイルス融合性ペプチドドメイン）、メタニューモウイルス融合性ペプチドドメイン（例えば、２５アミノ酸のヒトメタニューモウイルス融合性ペプチドドメイン）、もしくはスプーマウイルス融合性ペプチドドメイン（例えば、サル泡沫状ウイルス融合性ペプチドドメイン）；またはそれらの断片もしくは改変体を含む。
さらなる例として、トランスロケーション促進ドメインは、クロストリジウム菌毒素HCNドメインまたはその断片もしくは改変体を含み得る。より詳細には、クロストリジウム菌毒素HCNトランスロケーション促進ドメインは、少なくとも２００アミノ酸、少なくとも２２５アミノ酸、少なくとも２５０アミノ酸、少なくとも２７５アミノ酸の長さを有し得る。これに関して、クロストリジウム菌毒素HCNトランスロケーション促進ドメインは好ましくは、多くとも２００アミノ酸、多くとも２２５アミノ酸、多くとも２５０アミノ酸、または多くとも２７５アミノ酸の長さを有する。具体的な（参照）例は、以下を含む：
ボツリヌス菌A型神経毒素-アミノ酸残基(872-1110)
ボツリヌス菌B型神経毒素-アミノ酸残基(859-1097)
ボツリヌス菌C型神経毒素-アミノ酸残基(867-1111)
ボツリヌス菌D型神経毒素-アミノ酸残基(863-1098)
ボツリヌス菌E型神経毒素-アミノ酸残基(846-1085)
ボツリヌス菌F型神経毒素-アミノ酸残基(865-1105)
ボツリヌス菌G型神経毒素-アミノ酸残基(864-1105)
破傷風菌神経毒素 -アミノ酸残基(880-1127)。
上記の配列位置は、血清型／亜型に従って僅かに変化し得、そして適切な（参照）クロストリジウム菌毒素HCNドメインのさらなる例は、以下を含む：
ボツリヌス菌A型神経毒素-アミノ酸残基(874-1110)
ボツリヌス菌B型神経毒素-アミノ酸残基(861-1097)
ボツリヌス菌C型神経毒素-アミノ酸残基(869-1111)
ボツリヌス菌D型神経毒素-アミノ酸残基(865-1098)
ボツリヌス菌E型神経毒素-アミノ酸残基(848-1085)
ボツリヌス菌F型神経毒素-アミノ酸残基(867-1105)
ボツリヌス菌G型神経毒素-アミノ酸残基(866-1105)
破傷風菌神経毒素 -アミノ酸残基(882-1127)。
上記の促進ドメインはいずれも、本発明における使用に適した上記のあらゆるトランスロケーションドメインペプチドと組み合わされ得る。このため、例として、非クロストリジウム菌促進ドメインは、非クロストリジウム菌トランスロケーションドメインペプチドと、またはクロストリジウム菌トランスロケーションドメインペプチドと組み合わされ得る。あるいは、クロストリジウム菌毒素HCNトランスロケーション促進ドメインは、非クロストリジウム菌トランスロケーションドメインペプチドと組み合わされ得る。あるいは、クロストリジウム菌毒素HCN促進ドメインは、クロストリジウム菌トランスロケーションドメインペプチドと組み合わされ得、その例は、以下を含む：
ボツリヌス菌A型神経毒素-アミノ酸残基(449-1110)
ボツリヌス菌B型神経毒素-アミノ酸残基(442-1097)
ボツリヌス菌C型神経毒素-アミノ酸残基(450-1111)
ボツリヌス菌D型神経毒素-アミノ酸残基(446-1098)
ボツリヌス菌E型神経毒素-アミノ酸残基(423-1085)
ボツリヌス菌F型神経毒素-アミノ酸残基(440-1105)
ボツリヌス菌G型神経毒素-アミノ酸残基(447-1105)
破傷風菌神経毒素 -アミノ酸残基(458-1127)。
配列相同性：
一致率（percent identity）を決定するために、種々のあらゆる配列アライメント方法が使用され得、このような方法としては、グローバル法、ローカル法、およびハイブリッド法、例えばセグメントアプローチ法を含むがこれらに限定されない、。一致率を決定するためのプロトコールは、当業者の範囲内の日常の手順である。グローバル法は、分子の始めから終わりまでの配列をアライメントし、そして個々の残基対のスコアを合計することによって、かつギャップペナルティを課すことによって、最良のアライメントを決定する。非限定の方法は、例えば、CLUSTAL W（例えばJulie D. Thompsonら、CLUSTAL W: Improving the Sensitivity of Progressive Multiple Sequence Alignment Through Sequence Weighting, Position- Specific Gap Penalties and Weight Matrix Choice, 22(22) Nucleic Acids Research 4673-4680 (1994)参照）；および反復改善法（例えばOsamu Gotoh, Significant Improvement in Accuracy of Multiple Protein. Sequence Alignments by Iterative Refinement as Assessed by Reference to Structural Alignments, 264(4) J. Mol. Biol. 823-838 (1996)参照）を含む。ローカル法は、入力配列の全てによって共有される１またはそれ以上の保存モチーフを同定することによって配列をアライメントする。非限定の方法は、例えば、Match-box（例えばEric DepiereuxおよびErnest Feytmans, Match-Box: A Fundamentally New Algorithm for the Simultaneous Alignment of Several Protein Sequences, 8(5) CABIOS 501-509 (1992)参照）；Gibbsサンプリング（例えばC. E. Lawrenceら, Detecting Subtle Sequence Signals: A Gibbs Sampling Strategy for Multiple Alignment, 262(5131) Science 208-214 (1993)参照）；Align-M（例えばIvo Van Walleら, Align-M - A New Algorithm for Multiple Alignment of Highly Divergent Sequences, 20(9) Bioinformatics:1428-1435 (2004)参照）を含む。
このため、配列一致率は、従来の方法によって決定される（例えばAltschulら, Bull. Math. Bio. 48: 603-16, 1986、ならびにHenikoffおよびHenikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915-19, 1992参照）。手短に言えば、以下に示すように、１０のギャップオープニングペナルティ、１のギャップエクステンションペナルティ、ならびにHenikoffおよびHenikoff(同節)の「blosum 62」のスコア行列を用いてアライメントスコアを最適化するように、２つのアミノ酸配列がアライメントされる（アミノ酸が標準の一字コードによって示される）。
配列一致を決定するためのアライメントスコア
A R N D C Q E G H I L K M F P S T W Y V
A 4
R -1 5
N -2 0 6
D -2 -2 1 6
C 0 -3 -3 -3 9
Q -1 1 0 0 -3 5
E -1 0 0 2 -4 2 5
G 0 -2 0 -1 -3 -2 -2 6
H -2 0 1 -1 -3 0 0 -2 8
I -1 -3 -3 -3 -1 -3 -3 -4 -3 4
L -1 -2 -3 -4 -1 -2 -3 -4 -3 2 4
K -1 2 0 -1 -3 1 1 -2 -1 -3 -2 5
M -1 -1 -2 -3 -1 0 -2 -3 -2 1 2 -1 5
F -2 -3 -3 -3 -2 -3 -3 -3 -1 0 0 -3 0 6
P -1 -2 -2 -1 -3 -1 -1 -2 -2 -3 -3 -1 -2 -4 7
S 1 -1 1 0 -1 0 0 0 -1 -2 -2 0 -1 -2 -1 4
T 0 -1 0 -1 -1 -1 -1 -2 -2 -1 -1 -1 -1 -2 -1 1 5
W -3 -3 -4 -4 -2 -2 -3 -2 -2 -3 -2 -3 -1 1 -4 -3 -2 1 1
Y -2 -2 -2 -3 -2 -1 -2 -3 2 -1 -1 -2 -1 3 -3 -2 -2 2 7
V 0 -3 -3 -3 -1 -2 -2 -3 -3 3 1 -2 1 -1 -2 -2 0 -3 -1 4
次いで、一致率は以下のように計算される：
Figure 0005799397
実質的に相同なポリペプチドは、１またはそれ以上のアミノ酸置換、欠失または付加を有するとして特徴付けられる。これらの変化は好ましくは些細な性質のものであり、すなわち、保存的なアミノ酸置換（以下参照）、およびポリペプチドの折り畳みまたは活性に顕著に影響を及ぼさない他の置換；通常１から約３０のアミノ酸の、取るに足りない欠失；ならびにアミノ末端メチオニン残基、最大約２０〜２５残基の小リンカーペプチド、またはアフィニティータグなどの取るに足らないアミノまたカルボキシ末端伸長、である。
保存的なアミノ酸置換
塩基性：アルギニン
リジン
ヒスチジン
酸性： グルタミン酸
アスパラギン酸
極性： グルタミン
アスパラギン
疎水性：ロイシン
イソロイシン
バリン
芳香族：フェニルアラニン
トリプトファン
チロシン
小： グリシン
アラニン
セリン
トレオニン
メチオニン
これらの２０の標準アミノ酸に加えて、非標準アミノ酸（4-ヒドロキシプロリン、6-N-メチルリジン、2-アミノイソ酪酸、イソバリン、およびα-メチルセリンなど）が、本発明のポリペプチドのアミノ酸残基について置換され得る。限られた数の非保存的なアミノ酸、遺伝コードによってコードされないアミノ酸、および非天然のアミノ酸が、クロストリジウム菌ポリペプチドアミノ酸残基について置換され得る。本発明のポリペプチドはまた、天然に存在しないアミノ酸残基を含み得る。
天然に存在しないアミノ酸は、限定されないが、トランス-3-メチルプロリン、2,4-メタノプロリン、シス-4-ヒドロキシプロリン、トランス-4-ヒドロキシプロリン、N-メチルグリシン、アロ-トレオニン、メチル-トレオニン、ヒドロキシエチルシステイン、ヒドロキシエチルホモ-システイン、ニトロ-グルタミン、ホモグルタミン、ピペコリン酸、tert-ロイシン、ノルバリン、2-アザフェニルアラニン、3-アザフェニルアラニン、4-アザフェニルアラニン、および4-フルオロフェニルアラニンを含む。天然に存在しないアミノ酸残基を蛋白質内に取り込むためのいくつかの方法が当該技術分野において公知である。例えば、化学的にアミノアシル化されたサプレッサーtRNAを用いてナンセンス突然変異が抑制されるインビトロ系が用いられ得る。アミノ酸およびアミノアシル化tRNAを合成する方法が当該技術分野において公知である。ナンセンス突然変異を含むプラスミドの転写および翻訳が、大腸菌（E. coli）S30抽出物ならびに市販の酵素および他の試薬を含む無細胞系において実行される。蛋白質がクロマトグラフィーによって精製される（例えば、Robertsonら, J. Am. Chem. Soc. 113:2722, 1991; Ellmanら, Methods Enzvmol. 202:301, 1991; Chungら, Science 259:806-9, 1993; およびChungら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:10145-9, 1993参照）。第２の方法において、翻訳が、変異mRNAおよび化学的にアミノアシル化されたサプレッサーtRNAのマイクロインジェクションによってアフリカツメガエル（Xenopus）卵母細胞内で実行される（Turcattiら, J. Biol. Chem. 271:19991-8, 1996）。第３の方法において、置換されるべき天然アミノ酸（例えばフェニルアラニン）の不在下で、そして所望の天然に存在しないアミノ酸（例えば、2-アザフェニルアラニン、3-アザフェニルアラニン、4-アザフェニルアラニン、または4-フルオロフェニルアラニン）の存在下で、E. coli細胞が培養される。天然に存在しないアミノ酸は、その天然の同等物の代わりにポリペプチド内に取り込まれる（Koideら, Biochem. 33:7470-6, 1994参照）。天然に存在するアミノ酸残基は、インビトロの化学修飾によって天然に存在しない種に変換され得る。化学修飾は、置換の範囲をさらに拡大するために、部位指定変異導入と組み合わされ得る（WynnおよびRichards, Protein Sci. 2:395-403, 1993）。
限られた数の非保存的なアミノ酸、遺伝コードによってコードされないアミノ酸、天然に存在しないアミノ酸、および非天然のアミノ酸が、本発明のポリペプチドのアミノ酸残基について置換され得る。
本発明のポリペプチドにおける必須アミノ酸が、部位指定変異導入またはアラニンスキャニング変異導入（CunninghamおよびWells, Science 244: 1081-5, 1989）などの当該技術分野において公知の手順に従って同定され得る。生物相互作用の部位がまた、推定接触部位アミノ酸の変異と併用して、核磁気共鳴、結晶学、電子線回折または光親和性標識などの技術によって決定されるような、構造の物理分析によって決定され得る（例えば、de Vosら, Science 255:306-12, 1992; Smithら, J. Mol. Biol. 224:899-904, 1992; Wlodaverら, FEBS Lett. 309:59-64, 1992参照）。必須アミノ酸の正体はまた、本発明のポリペプチドの関連成分（例えばトランスロケーションまたはプロテアーゼ成分）との相同性分析から推論され得る。
Reidhaar-OlsonおよびSauer（Science 241:53-7, 1988）またはBowieおよびSauer（Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:2152-6, 1989）によって開示されるような公知の変異導入およびスクリーニングの方法を用いて、多重アミノ酸置換がなされ、そして検査され得る。手短に言えば、これらの著者らは、ポリペプチドにおける２またはそれ以上の位置を同時に無作為化し、機能的ポリペプチドを選択し、そしてその後変異導入されたポリペプチドを配列決定して各位置にて許容可能な置換の範囲を決定する方法を開示している。他の使用され得る方法は、ファージディスプレイ法（例えば、Lowmanら, Biochem. 30:10832-7, 1991; Ladnerら, U.S. Patent No. 5,223,409; Huse, WO92/06204）および領域指定変異導入（Derbyshireら, Gene 46:145, 1986; Nerら, DNA 7:127, 1988）を含む。
Reidhaar-OlsonおよびSauer（Science 241:53-7, 1988）またはBowieおよびSauer（Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:2152-6, 1989）によって開示されるような公知の変異導入およびスクリーニングの方法を用いて、多重アミノ酸置換がなされ、そして検査され得る。手短に言えば、これらの著者らは、ポリペプチドにおける２またはそれ以上の位置を同時に無作為化し、機能的ポリペプチドを選択し、そしてその後変異導入されたポリペプチドを配列決定して各位置にて許容可能な置換の範囲を決定する方法を開示している。他の使用され得る方法は、ファージディスプレイ法（例えば、Lowmanら, Biochem. 30:10832-7, 1991; Ladnerら, U.S. Patent No. 5,223,409; Huse, WO92/06204）および領域指定変異導入（Derbyshireら, Gene 46:145, 1986; Nerら, DNA 7:127, 1988）を含む。
さらに、本発明の局面および／または実施形態を説明する、図面の簡単な説明を示す。
実施例１ LHN/C骨格構築物の調製
実施例２ LHN/C-ヒトGHRPの構築
実施例３ LHN/C-ヒトGHRP融合物の発現および精製
実施例４ LHN/D-CP-qGHRH29融合蛋白質の構築
実施例５ LHN/D-CP-qGHRH29融合蛋白質の発現および精製
実施例６ LHN/AのSST ＴＭへの化学的結合体化
実施例７ 結腸直腸癌の治療方法
実施例８ 乳癌の治療方法
実施例９ 前立腺癌の治療方法
実施例１０ 小細胞肺癌の治療方法
実施例１１ 結腸直腸癌の治療方法
実施例１２ 小細胞肺癌の治療方法
実施例１３ 前立腺癌の治療方法
実施例１４ 小細胞肺癌の治療方法
実施例１５ 乳癌の治療方法
実施例１６ 結腸直腸癌の治療方法
実施例１７ 前立腺癌の治療方法
実施例１８ 小細胞肺癌の治療方法
実施例１９ 結腸直腸癌の治療方法
実施例２０ 乳癌の治療方法
実施例２１ 結腸直腸癌の治療方法
実施例２２ 前立腺癌の治療方法
実施例２３ 乳癌の治療方法
実施例２４ 小細胞肺癌の治療方法
実施例２５ 結腸直腸癌の治療方法
実施例２６ 前立腺癌の治療方法
実施例２７ 乳癌の治療方法
実施例２８ 小細胞肺癌の治療方法
実施例２９ 結合、分泌およびインビボアッセイ
実施例３０ 非小細胞肺癌の治療方法
実施例３１ 非小細胞肺癌の治療方法
実施例３２ 非小細胞肺癌の治療方法
実施例３３ 乳癌の治療方法
実施例３４ 小細胞肺癌の治療方法
実施例３５ 結腸直腸癌の治療方法
実施例３６ 前立腺癌の治療方法
実施例３７ インビボでのラットIGF-1濃度へのCP-GHRH-LHDの活性
実施例３８ インビボでのラットIGF-1濃度へのCP-GHRH-LHDの活性
実施例３９ インビボでのラット成長ホルモン濃度へのCP-GHRH-LHDの活性
配列番号
最初のMetアミノ酸残基または対応する最初のコドンが以下の配列番号のいずれかにおいて示される場合、この残基／コドンは任意である。
配列番号１ LHN/AのＤＮＡ配列
配列番号２ LHN/BのＤＮＡ配列
配列番号３ LHN/CのＤＮＡ配列
配列番号４ LHN/DのＤＮＡ配列
配列番号５ IgA-HNtetのＤＮＡ配列
配列番号６ ヒトGHRPリンカーのＤＮＡ配列
配列番号７ ヒトGHRP-C融合物のＤＮＡ配列
配列番号８ ヒトGHRP-C融合物の蛋白質配列
配列番号９ ヒトGHRH-D融合物の蛋白質配列
配列番号１０ ヒトEGF-D融合物の蛋白質配列
配列番号１１ ヒトNGF-D GS35融合物の蛋白質配列
配列番号１２ ヒトLEP116-122-D融合物の蛋白質配列
配列番号１３ ヒトVIP-D融合物の蛋白質配列
配列番号１４ ヒトLEP116-122-C融合物の蛋白質配列
配列番号１５ ヒトIGF1-C融合物の蛋白質配列
配列番号１６ ヒトSST14-C GS35融合物の蛋白質配列
配列番号１７ ヒトGHRP-D融合物の蛋白質配列
配列番号１８ ヒトIGF1-D融合物の蛋白質配列
配列番号１９ ヒトNGF-C融合物の蛋白質配列
配列番号２０ ヒトSST14-D GS20融合物の蛋白質配列
配列番号２１ ヒトVIP-C融合物の蛋白質配列
配列番号２２ ヒトグレリン-A融合物の蛋白質配列
配列番号２３ CP-hGHRH29 N8A K12N M27L-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号２４ Ｎ末端-hGHRH29 N8A M27L-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号２５ IgA-HNtet-SST14融合物の蛋白質配列
配列番号２６ IgA-HNtet-GHRP融合物の蛋白質配列
配列番号２７ ヒトグレリンS3W-A融合物の蛋白質配列
配列番号２８ SST28-D融合物の蛋白質配列
配列番号２９ GRP-D融合物の蛋白質配列
配列番号３０ GRP-B融合物の蛋白質配列
配列番号３１ CP-qGHRH29リンカーのＤＮＡ配列
配列番号３２ CP-qGHRH29-D融合物のＤＮＡ配列
配列番号３３ CP-qGHRH29-D融合物の蛋白質配列
配列番号３４ CP-qGHRH-A融合物の蛋白質配列
配列番号３５ CP-qGHRH-C融合物の蛋白質配列
配列番号３６ CP-qGHRH-D融合物の蛋白質配列
配列番号３７ CP-qGHRH-D N10-PL5融合物の蛋白質配列
配列番号３８ CP-qGHRH-D N10-HX12融合物の蛋白質配列
配列番号３９ CP-SST28-D融合物の蛋白質配列
配列番号４０ CP-SST14-D融合物の蛋白質配列
配列番号４１ IgA-CP-SST14-HNtet融合物の蛋白質配列
配列番号４２ CP-UTS-A融合物の蛋白質配列
配列番号４３ CP-hTGF-B GS10-NS融合物の蛋白質配列
配列番号４４ CP-hTGF-B GS10-GS20融合物の蛋白質配列
配列番号４５ LHN/Aの蛋白質配列
配列番号４６ LHN/Bの蛋白質配列
配列番号４７ LHN/Cの蛋白質配列
配列番号４８ LHN/Dの蛋白質配列
配列番号４９ IgA-HNtetの蛋白質配列
配列番号５０ 合成オクトレオチドペプチド
配列番号５１ 合成GHRHアゴニストペプチド
配列番号５２ 合成GHRHアンタゴニストペプチド
配列番号５３ CP-MCH-D融合物の蛋白質配列
配列番号５４ KISS-D融合物の蛋白質配列
配列番号５５ PrRP-A融合物の蛋白質配列
配列番号５６ CP-CRH-C融合物の蛋白質配列
配列番号５７ CP-HS_GHRH_1-27-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号５８ CP-HS_GHRH_1-28-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号５９ CP-HS_GHRH_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号６０ CP-HS_GHRH_1-44-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号６１ CP-HS_GHRH_1-40-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号６２ CP-HS_GHRH_Ala9-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号６３ CP-HS_GHRH_Ala22-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号６４ CP-HS_GHRH_Ala8_Lys11_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号６５ CP-HS_GHRH_Ala8_Lys11_Arg12_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号６６ CP-HS_GHRH_Ala8_Asn11_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号６７ CP-HS_GHRH_Ala8_Lys20_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号６８ CP-HS_GHRH_Ala8_Lys11_Lys20_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号６９ CP-HS_GHRH_Ala8_Asn20_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号７０ CP-HS_GHRH_Ala8_Asn12_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号７１ CP-HS_GHRH_Ala8_Asn21_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号７２ CP-HS_GHRH_Ala8_Glu_7_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号７３ CP-HS_GHRH_Ala8_Glu_10_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号７４ CP-HS_GHRH_Ala8_Glu_13_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号７５ CP-HS_GHRH_Ala8-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号７６ CP-HS_GHRH_Glu8_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号７７ CP-HS_GHRH_Ala15_1-27-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号７８ CP-HS_GHRH_Ala15-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号７９ CP-HS_GHRH_Ala8_Ala15_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号８０ CP-HS_GHRH_Ala8_9_15_22_27-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号８１ CP-HS_GHRH_Ala8_9_15_22-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号８２ CP-HS_GHRH_HVQAL_1-32-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号８３ CP-HS_GHRH_HVSAL_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号８４ CP-HS_GHRH_HVTAL_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号８５ CP-HS_GHRH_QALN-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号８６ CP-HS_GHRH_QAL-LHD融合物の蛋白質配列
配列番号８７ CP-hGHRH29 N8A M27L-LHD融合物の蛋白質配列
実施例１−LHN/C骨格構築物の調製
以下の手順によって、マルチドメイン融合物発現用の発現骨格としての使用のためのクローンを作出する。本実施例は、血清型Cベースのクローン（配列番号３）の調製に基づくが、手順および方法は、血清型A、BおよびD（配列番号１、２および４）などの全てのLHN血清型に、ならびにIgAおよび破傷風菌HN（配列番号５）などの他のプロテアーゼまたはトランスロケーションドメインに、合成またはＰＣＲ増幅によって作出する場合ＤＮＡ鋳型のために適切な公開された配列（配列番号５）を用いることによって、等しく適用可能である。
クローニングおよび発現ベクターの調製
pCR 4（Invitrogen）は、容易に構築物の確認をするために、ベクターおよび隣接するシーケンシングプライマー部位内に制限配列を欠くという理由で選んだ標準のクローニングベクターである。発現ベクターは、構築物挿入のための多重クローニング部位NdeI-BamHI-SalI-PstI-XbaI-HindIIIを含むように改変されたpET（Novagen）発現ベクターに基づいており、発現ベクターの断片を、非可動性プラスミドを作出するために除去しており、種々の異なる融合タグを、精製オプションを増やすために挿入しており、そしてベクター骨格における既存のXbaI部位を、サブクローニングを簡略化するために除去している。
LC/Cの調製
ＤＮＡ配列を、（種々の逆翻訳ソフトウェアツール（例えばBacktranslation tool v2.0（Entelechon））の１つを用いて、GenBank（アクセッション番号P18640）などの無料で利用可能なデータベース資源から得た）LC/Cアミノ酸配列の逆翻訳によって設計する。BamHI/SalI認識配列を、正確なリーディングフレームを維持する配列の５’および３’末端のそれぞれに取り込む。ＤＮＡ配列を、逆翻訳中に取り込まれる制限酵素切断配列について（SeqBuilder, DNASTAR Inc.などのソフトウェアを用いて）スクリーニングする。クローニング系によって必要とされる切断配列と共通であるとわかったあらゆる切断配列を、共通のE. coliコドン使用が維持されることを保証するように、提案コーディング配列からBacktranslation toolによって除去する。E. coliコドン使用を、Graphical Codon Usage Analyser（Geneart）などのソフトウェアプログラムを参照して評価し、そして％ＧＣ含量およびコドン使用比を、公開されたコドン使用表（例えばGenBank Release 143, 2004年9月13日）を参照して評価する。このLC/Cオープンリーディングフレーム（ORF）を含む最適化ＤＮＡ配列を、その後（例えばEntelechon, GeneartまたはSigma-Genosysによって）商業的に合成し、そしてpCR 4ベクター内に与える。
HN/C挿入物の調製
ＤＮＡ配列を、（種々の逆翻訳ソフトウェアツール（例えばBacktranslation tool v2.0（Entelechon））の１つを用いて、GenBank（アクセッション番号P18640）などの無料で利用可能なデータベース資源から得た）HN/Cアミノ酸配列の逆翻訳によって設計する。Ｎ末端にPstI制限配列を、およびＣ末端にXbaI-停止コドン-HindIIIを付加し、正確なリーディングフレームが維持されることを保証する。ＤＮＡ配列を、逆翻訳中に取り込まれる制限酵素切断配列について（SeqBuilder, DNASTAR Inc.などのソフトウェアを用いて）スクリーニングする。クローニング系によって必要とされる配列と共通であるとわかったあらゆる配列を、提案コーディング配列からBacktranslation toolによって除去し、共通のE. coliコドン使用が維持されることを保証する。E. coliコドン使用を、Graphical Codon Usage Analyser（Geneart）などのソフトウェアプログラムを参照して評価し、そして％ＧＣ含量およびコドン使用比を、公開されたコドン使用表（例えばGenBank Release 143, 2004年9月13日）を参照して評価する。この最適化ＤＮＡ配列をその後（例えばEntelechon, GeneartまたはSigma-Genosysによって）商業的に合成し、そしてpCR 4ベクター内に与える。
スペーサー（LC-HNリンカー）の調製
LC-HNリンカーは、リンカーの既存の配列情報を鋳型として用いて、第一原理から設計し得る。例えば、血清型Cリンカー（この場合、LCとHNとの間のジスルフィド橋を成すシステイン間に存在するドメイン間ポリペプチド領域として規定される）は、天然の第Xa因子切断部位を含む配列HKAIDGRSLYNKTLDを有する。この配列情報は、GenBank（アクセッション番号P18640）またはSwissprot（アクセッション遺伝子座BXC1_CLOBO）などの利用可能なデータベース資源から無料で利用可能である。特定のプロテアーゼ切断部位の生成のために、第Xa因子の天然の認識配列を、改変された配列VDAIDGRSLYNKTLQに用い得るか、またはエンテロキナーゼ活性化部位を活性化ループ内に挿入して、VDGIITSKTKSDDDDKNKALNLQなどの配列を生成し得る。種々の逆翻訳ソフトウェアツール（例えば、EditSeq best E. coli reverse translation (DNASTAR Inc.)、またはBacktranslation tool v2.0（Entelechon））の１つを用いて、リンカー領域をコードするＤＮＡ配列を決定する。BamHI/SalIおよびPstI/XbaI/停止コドン/HindIII制限酵素配列を、正確なリーディングフレームで、どちらかの末端に取り込む。ＤＮＡ配列を、逆翻訳中に取り込まれる制限酵素切断配列について（MapDraw, DNASTAR Inc.などのソフトウェアを用いて）スクリーニングする。クローニング系によって必要とされる配列と共通であるとわかったあらゆる配列を、提案コーディング配列から手動で除去し、共通のE. coliコドン使用が維持されることを保証する。E. coliコドン使用を、Graphical Codon Usage Analyser（Geneart）などのソフトウェアプログラムを参照して評価し、そして％ＧＣ含量およびコドン使用比を、公開されたコドン使用表（例えばGenBank Release 143, 2004年9月13日）を参照して評価する。この最適化ＤＮＡ配列をその後（例えばEntelechon, GeneartまたはSigma-Genosysによって）商業的に合成し、そしてpCR 4ベクター内に与える。
骨格クローンの組立および確認
大きさが小さいために、活性化リンカーは、２工程のプロセスを用いて転移しなければならない。pCR-4リンカーベクターをBamHI+SalIの組合せ制限酵素で切断し、切断したリンカーベクターはその後BamHI+SalI制限酵素切断LC ＤＮＡの受け手として機能する。一旦LCコーディングＤＮＡをリンカーＤＮＡの上流に挿入すると、完全長LC-リンカーＤＮＡ断片を単離し、そしてpET発現ベクターMCSに転移させ得る。LC-リンカーを、BamHI/PstI制限酵素消化を用いてpCR 4クローニングベクターから切り出す。pET発現ベクターを同じ酵素で消化するが、再環状化を防ぐための追加の予防措置としてアンタークティックホスファターゼ（antarctic phosphatase）でも処理する。LC-リンカーおよびpETベクター骨格をゲル精製し、精製した挿入物およびベクター骨格をT4 ＤＮＡリガーゼを用いて一緒に連結する。産物をTOP10細胞に形質転換し、その後BamHI/PstI制限消化を用いてLC-リンカーについてスクリーニングする。その後、pET-LCリンカー構築物のPstI/HindIII制限部位内へのHN挿入のために、プロセスを繰り返す。
制限酵素によるスクリーニングは、合成中に全ての成分を既に配列決定して確認しているので、最終骨格物が正確であることを保証するのに充分である。しかし、骨格内へのいくつかの成分のサブクローニング中に、同じくらいの大きさの断片が除去および挿入されている場合、正確な挿入を確認するために小領域の配列決定を必要とする。
実施例２−LHN/C-ヒトGHRPの構築
以下の手順によって、ターゲティング部分（ＴＭ）がトランスロケーションドメインに対してＣ末端側に提示される、マルチドメイン融合発現の発現構築物としての使用のためのクローンを作出する。本実施例は、ヒトGHRP-C融合物（配列番号７）の調製に基づくが、手順および方法は、ＴＭがトランスロケーションドメインに対してＣ末端側である、他のプロテアーゼ、トランスロケーションおよびＴＭ融合物を作出するのに、等しく適用可能である。
スペーサー-ヒトGHRP挿入物の調製
HNドメインのＣ末端にGHRP配列を提示するために、スペーサーおよびターゲティング部分（ＴＭ）領域を隣接させるように、ＤＮＡ配列を設計し、骨格クローン（配列番号３）内への取り込みを可能とする。このＤＮＡ配列は、BamHI-SalI-PstI-XbaI-スペーサー-GHRP-停止コドン-HindIII（配列番号６）として配置され得る。このＤＮＡ配列は、種々の逆翻訳ソフトウェアツール（例えば、EditSeq best E. coli reverse translation (DNASTAR Inc.)、またはBacktranslation tool v2.0（Entelechon））の１つを用いて設計され得る。一旦ＴＭ ＤＮＡを設計すると、好ましいスペーサーをコードするのに必要な付加ＤＮＡをインシリコで作出する。正確なリーディングフレームが、スペーサー、GHRPおよび制限配列について維持され、かつXbaI配列が、DAMメチル化をもたらし得る塩基TCより始まらないことを保証することが好ましい。ＤＮＡ配列を、取り込まれた制限配列についてスクリーニングし、そして残りの配列からあらゆる付加配列を手動で除去し、共通のE. coliコドン使用が維持されることを保証する。E. coliコドン使用を、Graphical Codon Usage Analyser（Geneart）などのソフトウェアプログラムを参照して評価し、そして％ＧＣ含量およびコドン使用比を、公開されたコドン使用表（例えばGenBank Release 143, 2004年9月13日）を参照して評価する。この最適化ＤＮＡ配列をその後（例えばEntelechon, GeneartまたはSigma-Genosysによって）商業的に合成し、そしてpCR 4ベクター内に与える。
スペーサー-ヒトGHRPの骨格内への挿入
骨格構築物（配列番号３）およびGHRP ＴＭをコードする新規に合成したpCR 4-スペーサー-ＴＭベクター（配列番号６）を用いてLC-リンカー-HN-スペーサー-GHRP構築物（配列番号７）を作出するために、１または２工程の方法が用いられ得る。通常、ＴＭ ＤＮＡが１００塩基対未満である場合、２工程方法を用いる。１工程方法を用いて、pCR 4-スペーサー-ＴＭベクターをXbaIおよびHindIII制限酵素で切って、そして同じように切ったpET骨格構築物内にＴＭコーディングＤＮＡ断片を挿入することによって、GHRPを骨格構築物内に直接挿入し得る。２工程方法を用いて、LHNドメインを、骨格クローンから制限酵素BamHIおよびXbaIを用いて切り出し、そして同じように消化したpCR 4-スペーサー-GHRPベクター内に連結する。これによって、pCR 4内にLHN-スペーサー-GHRP ORFを作出し、これは、このベクターから制限酵素BamHIおよびHindIIIを用いて、次の同じように切断したpET発現構築物内への連結のために切り出し得る。最終構築物は、LC-リンカー-HN-スペーサー-GHRP ＤＮＡ（配列番号７）を含み、このＤＮＡは、配列番号８に示した配列を含む融合蛋白質をもたらす。
制限酵素によるスクリーニングは、合成中またはＰＣＲ増幅後に全ての成分を既に配列決定して確認しているので、最終骨格物が正確であることを保証するのに充分である。しかし、骨格内へのいくつかの成分のサブクローニング中に、同じくらいの大きさの断片が除去および挿入されている場合、正確な挿入を確認するために小領域の配列決定を必要とする。
実施例３−LHN/C-ヒトGHRP融合物の発現および精製
本実施例は、配列番号８に示される配列を含むヒトGHRP-C融合物の調製に基づいており、ここではpET発現ベクターORFはヒスチジン精製タグもコードする。これらの手順および方法は、本発明のあらゆるＣ末端側提示融合蛋白質に等しく適用可能である。必要に応じて、活性化酵素は、各配列内のプロテアーゼ活性化部位と適合可能であるように選択される。
LHN/C-GHRP融合蛋白質の発現
LHN/C-GHRP融合蛋白質の発現を、以下のプロトコールを用いて達成する。250mlフラスコ内の0.2％グルコサミンおよび30μg/mlカナマイシンを含む改変TBの100mlに、LHN/C-GHRP発現株由来の単一コロニーを接種する。培養物を37℃にて、225rpmで16時間増殖させる。2Lフラスコ内の0.2％グルコサミンおよび30μg/mlカナマイシンを含む改変TBの1Lに、10mlの一晩培養物を接種する。OD600nmが約0.5に達するまで37℃にて培養物を増殖させ、達した時点で温度を16℃に下げる。1時間後、1mM IPTGで培養物を誘導し、そして16℃でさらに16時間増殖させる。
LHN/C-GHRP融合蛋白質の精製
35mlの50mM HEPES ｐＨ7.2、200mM NaClおよび約10gのE. coli BL21（DE3）細胞ペーストを含むファルコンチューブを解凍する。細胞ペーストを氷上で、22ミクロンの出力にて30秒オン30秒オフの10サイクルで超音波処理し、サンプルが冷たいままであることを保証する。溶解した細胞を18000rpm、4℃で30分間回転させる。上清を、50mM HEPES ｐＨ7.2、200mM NaClで平衡化した0.1M NiSO4チャージドキレーティングカラム（20〜30mlカラムで充分である）上にロードする。40および100mMイミダゾールの段階グラジエントを用い、非特異的結合蛋白質を洗い流し、そして200mMイミダゾールで融合蛋白質を溶出する。溶出した融合蛋白質を5Lの50mM HEPES ｐＨ7.2、200mM NaClに対して4℃にて一晩透析し、そして透析した融合蛋白質のODを測定する。1mgの融合蛋白質あたり10mgの第Xa因子を加え、そして25℃にて静置して一晩インキュベートする。50mM HEPES ｐＨ7.2、200mM NaClで平衡化した0.1M NiSO4チャージドキレーティングカラム（20〜30mlカラムで充分である）上にロードする。カラムを50mM HEPES ｐＨ7.2、200mM NaClで基線まで洗浄する。40および100mMイミダゾールの段階グラジエントを用い、非特異的結合蛋白質を洗い流し、そして200mMイミダゾールで融合蛋白質を溶出する。溶出した融合蛋白質を5Lの50mM HEPES ｐＨ7.2、150mM NaClに対して4℃にて一晩透析し、そして融合物を約2mg/mlにまで濃縮し、サンプルを等分して-20℃にて凍結する。精製した蛋白質を、OD、BCAおよび純度分析を用いて検査する。図１は、SDS-PAGEで分析した精製蛋白質を示し、図２、図４、図５および図６は、この方法を用いた他の精製構築物を示す。
実施例４−LHN/D-CP-qGHRH29融合蛋白質の構築
以下の手順によって、ターゲティング部分（ＴＭ）がプロテアーゼとトランスロケーションドメインとの間の中央に提示される、マルチドメイン融合発現の発現構築物としての使用のためのクローンを作出する。本実施例は、CP-qGHRH29-D融合物（配列番号３３）の調製に基づくが、手順および方法は、本発明の他のあらゆるCP融合物を作出するのに等しく適用可能である。
CP-qGHRH29リンカー挿入物の調製
HNドメインのＮ末端にqGHRH29配列を提示するために、ＴＭに活性化プロテアーゼ部位およびスペーサー領域を隣接させるように、ＤＮＡ配列を設計し、骨格クローン（配列番号４）内への取り込みを可能とする。このＤＮＡ配列は、BamHI-SalI-スペーサー-プロテアーゼ活性化部位-qGHRH29-スペーサー-PstI-XbaI-停止コドン-HindIII（配列番号３１）として配置され得る。このＤＮＡ配列は、種々の逆翻訳ソフトウェアツール（例えば、EditSeq best E. coli reverse translation (DNASTAR Inc.)、またはBacktranslation tool v2.0（Entelechon））の１つを用いて設計され得る。一旦ＴＭ ＤＮＡを設計すると、好ましいスペーサーをコードするのに必要な付加ＤＮＡをインシリコで作出する。正確なリーディングフレームが、スペーサー、プロテアーゼ活性化部位、qGHRH29および制限配列について維持され、かつXbaI配列が、DAMメチル化をもたらし得る塩基TCより始まらないことを保証することが好ましい。ＤＮＡ配列を、取り込まれた制限配列についてスクリーニングし、そして残りの配列からあらゆる付加配列を手動で除去し、共通のE. coliコドン使用が維持されることを保証する。E. coliコドン使用を、Graphical Codon Usage Analyser（Geneart）などのソフトウェアプログラムを参照して評価し、そして％ＧＣ含量およびコドン使用比を、公開されたコドン使用表（例えばGenBank Release 143, 2004年9月13日）を参照して評価する。この最適化ＤＮＡ配列をその後（例えばEntelechon, GeneartまたはSigma-Genosysによって）商業的に合成し、そしてpCR 4ベクター内に与える。
CP-qGHRH29リンカーの骨格内への挿入
骨格構築物（配列番号４）およびヒトqGHRH29 ＴＭをコードする新規に合成したpCR 4-スペーサー-活性化部位-ＴＭ-スペーサーベクター（配列番号３１）を用いてLC-スペーサー-活性化部位-qGHRH29-スペーサー-HN構築物（配列番号３２）を作出するために、１または２工程の方法が用いられ得る。通常、ＴＭ ＤＮＡが１００塩基対未満である場合、２工程方法を用いる。１工程方法を用いて、pCR 4-スペーサー-活性化部位-ＴＭ-スペーサーベクターをSalIおよびPstI制限酵素で切って、そして同じように切ったpET骨格構築物内にＴＭコーディングＤＮＡ断片を挿入することによって、qGHRH29リンカー領域を骨格構築物内に直接挿入し得る。２工程方法を用いて、LCドメインを、骨格クローンから制限酵素BamHIおよびSalIを用いて切り出し、そして同じように消化したpCR 4-スペーサー-活性化部位-ＴＭ-スペーサーベクター内に連結する。これによって、pCR 4内にLC-スペーサー-活性化部位-qGHRH29-スペーサーORFを作出し、これは、このベクターから制限酵素BamHIおよびPstIを用いて、次の同じように切断したpET発現構築物内への連結のために切り出し得る。最終構築物は、LC-スペーサー-活性化部位-qGHRH29-スペーサー-HN ＤＮＡ（配列番号３２）を含み、このＤＮＡは、配列番号３３に示した配列を含む融合蛋白質をもたらす。
制限酵素によるスクリーニングは、合成中またはＰＣＲ増幅後に全ての成分を既に配列決定して確認しているので、最終骨格物が正確であることを保証するのに充分である。しかし、骨格内へのいくつかの成分のサブクローニング中に、同じくらいの大きさの断片が除去および挿入されている場合、正確な挿入を確認するために小領域の配列決定を必要とする。
実施例５−LHN/D-CP-qGHRH29融合蛋白質の発現／精製
本実施例は、配列番号３３に示される配列を含むLHN/D-CP-qGHRH29融合物の調製に基づいており、ここでは、pET発現ベクターORFはヒスチジン精製タグもコードする。これらの手順および方法は、本発明のあらゆるCP融合蛋白質に等しく適用可能である。必要に応じて、活性化酵素は、各配列内のプロテアーゼ活性化部位と適合可能であるように選択される。
LHN/D-CP-qGHRH29融合蛋白質の発現
LHN/D-CP-qGHRH29融合蛋白質の発現を、以下のプロトコールを用いて達成する。250mlフラスコ内の0.2％グルコサミンおよび30μg/mlカナマイシンを含む改変TBの100mlに、LHN/D-CP-qGHRH29発現株由来の単一コロニーを接種する。培養物を37℃にて、225rpmで16時間増殖させる。2Lフラスコ内の0.2％グルコサミンおよび30μg/mlカナマイシンを含む改変TBの1Lに、10mlの一晩培養物を接種する。OD600nmが約0.5に達するまで37℃にて培養物を増殖させ、達した時点で温度を16℃に下げる。1時間後、1mM IPTGで培養物を誘導し、そして16℃でさらに16時間増殖させる。
LHN/D-CP-qGHRH29融合蛋白質の精製
35mlの50mM HEPES ｐＨ7.2、200mM NaClおよび約10gのE. coli BL21（DE3）細胞ペーストを含むファルコンチューブを解凍する。細胞ペーストを氷上で、22ミクロンの出力にて30秒オン30秒オフの10サイクルで超音波処理し、サンプルが冷たいままであることを保証する。溶解した細胞を18000rpm、4℃で30分間回転させる。上清を、50mM HEPES ｐＨ7.2、200mM NaClで平衡化した0.1M NiSO4チャージドキレーティングカラム（20〜30mlカラムで充分である）上にロードする。40および100mMイミダゾールの段階グラジエントを用い、非特異的結合蛋白質を洗い流し、そして200mMイミダゾールで融合蛋白質を溶出する。溶出した融合蛋白質を5Lの50mM HEPES ｐＨ7.2、200mM NaClに対して4℃にて一晩透析し、そして透析した融合蛋白質のODを測定する。mg融合蛋白質あたり3.2μlのエンテロキナーゼ（New England Biolabs）を加え、そして25℃にて静置して一晩インキュベートする。50mM HEPES ｐＨ7.2、200mM NaClで平衡化した0.1M NiSO4チャージドキレーティングカラム（20〜30mlカラムで充分である）上にロードする。カラムを50mM HEPES ｐＨ7.2、200mM NaClで基線まで洗浄する。40および100mMイミダゾールの段階グラジエントを用い、非特異的結合蛋白質を洗い流し、そして200mMイミダゾールで融合蛋白質を溶出する。溶出した融合蛋白質を5Lの50mM HEPES ｐＨ7.2、150mM NaClに対して4℃にて一晩透析し、そして融合物を約2mg/mlにまで濃縮し、サンプルを等分して-20℃にて凍結する。精製した蛋白質を、OD、BCAおよび純度分析を用いて検査する。
実施例６−LHN/AのSST ＴＭへの化学的結合体化
以下の手順によって、実施例３において述べられる製造方法を用いて配列番号１から調製したLHN/Aアミノ酸配列（配列番号４５）、および化学的に合成したSSTオクトレオチドペプチド（配列番号５０）を含む化学的に結合体化させた分子を作出する。しかし、手順および方法は、本発明のあらゆるポリペプチドの結合体調製（例えば配列番号５１または配列番号５２などのＴＭの、配列番号４５〜４９のアミノ酸配列を含むようなプロテアーゼ／トランスロケーション融合骨格への結合体化）に、等しく適用可能である。
LHN/A蛋白質を、Bio-rad PD10カラムを用いて、50mM HEPES、150mM塩からPBSE（100mM 14.2g Na2HPO4、100mM 5.85g NaCl、1mM EDTANa2、ｐＨ7.5（1M HClによる））へ緩衝液交換した。これは、PD10カラムを通す１カラム容積のPBSE洗浄によって行い、その後PD10カラムの先端から液滴が出なくなるまで、蛋白質をカラムに加えた。その後8mlのPBSEを加え、そして0.5mlの画分を集める。集めた画分を、A280リーディングを用いて測定し、蛋白質を含む画分をプールする。濃度が1.55mg/mlのLHN/Aを、緩衝液交換工程から得、そしてこれを以下の反応を構成するのに用いた：
Figure 0005799397
サンプルをＲＴにて3時間回転させた後、別のPD10カラムに通してPBSEへ緩衝液交換し、そして蛋白質含有画分をプールした。その後、最終濃度が25MmのDTTを誘導体化した蛋白質に加えて、そしてサンプルを室温で10分間放置した。その後、A280およびA343リーディングを取ってSPDP:LHN/A相互作用の比を算出し、そして１から３の間の誘導体比をもたらす反応をペプチド結合体化のために用いた。SPDP試薬は、N-ヒドロキシコハク酸イミド（NHS）エステルを介してLHN/Aの第１級アミンに結合し、スルフィドリル反応性部分に、合成ペプチド上のフリーのシステインのフリーのSH基へのジスルフィド結合を形成させる。この場合、ペプチド配列は、Ｎ末端上のフリーのシステインと共に合成したオクトレオチドである（配列番号８３）。SPDPで誘導体化したLHN/Aを、４倍過剰のオクトレオチドリガンドと混合し、その後回転させながらＲＴにて90分間反応を放置した。その後、PD10カラムを用いてこの過剰オクトレオチドを除去し、LHN/A-オクトレオチド結合体化分子を残した。
実施例７−結腸直腸癌の治療方法
II期の結腸直腸癌と診断された59歳の男性を、通常の化学療法で治療する。治療の効果を改善するために、そして転移を防止するために、患者は本発明のGHRHペプチドＴＭポリペプチド（例えば配列番号９、２３〜２４、３３〜３８、５７〜８７）の経蝶形骨洞注射を受ける。この場合、ポリペプチドは、GHRHペプチドに化学的に結合体化された本発明のプロテアーゼ-トランスロケーション融合骨格（例えばBoNT/Dプロテアーゼおよびトランスロケーションドメイン）を含む。2週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の顕著な縮小が観察される。IGF-1血中濃度が上昇し始める3ヶ月後に治療を繰り返し、そして4週間後、通常の検出ツール（結腸内視術、CTスキャン、PETスキャンなど）によって、もはや観察され得る腫瘍はなく、癌胎児性抗原（CEA）の濃度は正常に戻った。
実施例８−乳癌の治療方法
II期の乳癌と診断された52歳の女性を、通常の化学療法で治療する。治療の効果を改善するために、そして転移を防止するために、患者は本発明のグレリンペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号８、１７、２２、２６〜３７）の経蝶形骨洞注射を受ける。4週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の顕著な縮小が観察される。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める4ヶ月後に治療を繰り返し、そして6週間後、通常の検出ツール（MRI、超音波検査、乳房特異的ポジトロン放出断層撮影、マンモグラフィー、シンチグラフィーなど）によって、もはや観察され得る腫瘍はない。
実施例９−前立腺癌の治療方法
II期の前立腺癌と診断された71歳の男性を、ホルモン療法で治療する。治療の効果を改善するために、そして転移を防止するために、患者は本発明のGHRHペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号９、２３〜２４、３３〜３８、５７〜８７）の静脈注射を受ける。3週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の顕著な縮小が観察される。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める3ヶ月後に治療を繰り返し、そして7週間後、通常の検出ツール（Ｘ線、プロスタシント（ProstaScint）スキャン、MRI、経直腸的超音波断層法、CTスキャンなど）によって、もはや観察され得る腫瘍はなく、PSAの濃度は正常に戻った。
実施例１０−小細胞肺癌の治療方法
II期の小細胞肺癌と診断された62歳の女性を、通常の化学療法で治療する。治療の効果を改善するために、そして転移を防止するために、患者は本発明のIGF-1ペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号１５、１８）の経蝶形骨洞注射を受ける。4週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の大きさの顕著な低下が観察される。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める4ヶ月後に治療を繰り返し、そして4週間後、通常の検出ツール（Ｘ線、CTスキャン、気管支鏡検査法など）によって、またはこの癌に推奨される通常の血液検査を用いて、もはや観察され得る腫瘍はない。
実施例１１−結腸直腸癌の治療方法
II期の結腸直腸癌と診断された53歳の男性を、通常の化学療法で治療する。治療の効果を改善するために、そして転移を防止するために、患者は本発明のCSTまたはSSTペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号１６、２０、２５、２８、３９〜４１）の経蝶形骨洞注射を受ける。2週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の顕著な縮小が観察される。IGF-1血中濃度が上昇し始める3ヶ月後に治療を繰り返し、そして4週間後、通常の検出ツール（結腸内視術、CTスキャン、PETスキャンなど）によって、もはや観察され得る腫瘍はなく、癌胎児性抗原（CEA）の濃度は正常に戻った。
実施例１２−小細胞肺癌の治療方法
I期の小細胞肺癌と診断された59歳の男性を、通常の化学療法で治療する。治療の効果を改善するために、そして転移を防止するために、患者は本発明のウロテンシンペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号４２）の経蝶形骨洞注射を受ける。3週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の大きさの顕著な低下が観察される。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める4ヶ月後に治療を繰り返し、そして5週間後、通常の検出ツール（Ｘ線、CTスキャン、MRI、PETスキャン、放射性核種イメージング、気管支鏡検査法など）によって、またはこの癌に推奨される通常の血液検査を用いて、もはや観察され得る腫瘍はない。
実施例１３−前立腺癌の治療方法
IIc期の前立腺癌と診断された66歳の男性を、アンドロゲン除去療法で治療する。治療の効果を改善するために、そして転移を防止するために、患者は本発明のCSTまたはSST ＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号１６、２０、２５、２８、３９〜４１）の静脈注射を受ける。10日以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の顕著な縮小が観察される。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める2ヶ月後に治療を繰り返し、そして5週間後、通常の検出ツール（Ｘ線、プロスタシントスキャン、MRI、経直腸的超音波断層法、CTスキャンなど）によって、もはや観察され得る腫瘍はなく、PSAの濃度は正常に戻った。
実施例１４−小細胞肺癌の治療方法
限局期の小細胞肺癌と診断された60歳の女性を、外科手術で治療する。治療の効果を改善するために、そして転移を防止するために、患者は本発明のレプチンペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号１２、１４）の経蝶形骨洞注射を受ける。6週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、腫瘍の再発は観察されない。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める4ヶ月後に治療を繰り返し、そして8週間後、通常の検出ツール（Ｘ線、CTスキャン、MRI、PETスキャン、放射性核種イメージング、気管支鏡検査法など）によって、またはこの癌に推奨される通常の血液検査を用いて、もはや観察され得る腫瘍はない。
実施例１５−乳癌の治療方法
III期の乳癌と診断された62歳の女性を、放射線で治療する。治療の効果を改善するために、そして転移を防止するために、患者は本発明のVIPペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号１３、２１）の経蝶形骨洞注射を受ける。10日以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の顕著な縮小が観察される。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める2ヶ月後に治療を繰り返し、そして3週間後、通常の検出ツール（MRI、超音波検査、乳房特異的ポジトロン放出断層撮影、マンモグラフィー、シンチグラフィーなど）によって、もはや観察され得る腫瘍はない。
実施例１６−結腸直腸癌の治療方法
III期の結腸直腸癌と診断された50歳の女性を、外科手術で治療する。治療の効果を改善するために、そして転移を防止するために、患者は本発明のErbBペプチド融合蛋白質（例えば配列番号１０）の経蝶形骨洞注射を受ける。8週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、腫瘍の再発は観察されず、そして他の場所への転移は現れない。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める4ヶ月後に治療を繰り返し、そして8週間後、通常の検出ツール（結腸内視術、CTスキャン、PETスキャンなど）によって、もはや観察され得る腫瘍はなく、癌胎児性抗原（CEA）の濃度は正常にとどまる。
実施例１７−前立腺癌の治療方法
III期の前立腺癌と診断された67歳の男性を、外照射およびホルモン療法で治療する。治療の効果を改善するために、そして転移を防止するために、患者は本発明のグレリン（GHRP）ペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号８、１７、２２、２６〜３７）の経蝶形骨洞注射を受ける。3週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の顕著な縮小が観察される。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める4ヶ月後に治療を繰り返し、そして7週間後、通常の検出ツール（Ｘ線、プロスタシントスキャン、MRI、経直腸的超音波断層法、CTスキャンなど）によって、もはや観察され得る腫瘍はなく、PSAの濃度は正常に戻った。
実施例１８−小細胞肺癌の治療方法
進行期癌の小細胞肺癌と診断された65歳の男性を、通常の化学療法および脳転移を治療するための放射線で治療する。治療の効果を改善するために、そしてさらなる転移を防止するために、患者は本発明のGHRHペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号９、２３〜２４、３３〜３８、５７〜８７）の静脈注射を受ける。4週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに、腫瘍の顕著な縮小および転移の消失が観察される。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める3ヶ月後に治療を繰り返し、そして8週間後、通常の検出ツール（Ｘ線、CTスキャン、MRI、PETスキャン、放射性核種イメージング、気管支鏡検査法など）によって、またはこの癌に推奨される通常の血液検査を用いて、もはや観察され得る腫瘍はない。
実施例１９−結腸直腸癌の治療方法
II期の結腸直腸癌と診断された66歳の男性を、外科手術で治療する。治療の効果を改善するために、そして転移を防止するために、患者は本発明のIGF-1ペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号１５、１８）の経蝶形骨洞注射を受ける。その後3ヶ月以内に、腫瘍の再発は観察されず、そして他の場所への転移は検出され得ない。このことは、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関する。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める4ヶ月後に治療を繰り返し、そして6ヶ月後、通常の検出ツール（結腸内視術、CTスキャン、PETスキャンなど）によっても腫瘍は観察できず、癌胎児性抗原（CEA）の濃度は正常にとどまる。
実施例２０−乳癌の治療方法
IIIb期の乳癌と診断された54歳の女性を、術前化学療法で治療する。治療の効果を改善するために、そして転移を防止するために、患者は本発明のErbBペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号１０）の経蝶形骨洞注射を受ける。2週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の顕著な縮小が観察される。患者はその後、非定型的乳房切除術および再建術を受ける。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める3ヶ月後に新たな注射を実現し、そして8ヶ月後、通常の検出ツール（MRI、超音波検査、乳房特異的ポジトロン放出断層撮影、マンモグラフィーなど）によって、もはや観察され得る腫瘍はない。
実施例２１−結腸直腸癌の治療方法
IV期の結腸直腸癌と診断された62歳の女性（肝臓に３つの転移を観察した）を、肝動脈への注射による化学療法で治療する。治療の効果を改善するために、そして他の場所への転移を防止するために、患者は本発明のボンベシン（GRP）ペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号２９〜３０）の経蝶形骨洞注射を受ける。2週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍および転移の顕著な縮小が観察される。その後外科手術を実現し、腫瘍と転移とを同時に除去する。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める4ヶ月後に融合蛋白質による治療を繰り返し、そして9ヶ月後、通常の検出ツール（結腸内視術、CTスキャン、PETスキャンなど）によって、もはや観察され得る腫瘍はなく、癌胎児性抗原（CEA）の濃度は正常にとどまる。
実施例２２−前立腺癌の治療方法
III期の前立腺癌と診断された73歳の男性を、ホルモン療法で治療する。治療の効果を改善するために、そして転移を防止するために、患者は本発明のVIPペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号１３、２１）の経蝶形骨洞注射を受ける。6週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の顕著な縮小が観察される。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める3ヶ月後に治療を繰り返し、そして5ヶ月後、通常の検出ツール（Ｘ線、プロスタシントスキャン、MRI、経直腸的超音波断層法、CTスキャンなど）によって、もはや観察され得る腫瘍はなく、PSAの濃度は正常に戻った。
実施例２３−乳癌の治療方法
IIIa期の乳癌と診断された48歳の女性を、術前化学療法で治療する。治療の効果を改善するために、そして転移を防止するために、患者は本発明のNGFペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号１１，１９）の経蝶形骨洞注射を受ける。8週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の顕著な縮小が観察される。その後、定型的乳房切除術および再建術を実現する。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める3ヶ月後に融合蛋白質の注射を繰り返し、そして8ヶ月後、通常の検出ツール（MRI、超音波検査、乳房特異的ポジトロン放出断層撮影、マンモグラフィーなど）によって、もはや観察され得る腫瘍はない。
実施例２４−小細胞肺癌の治療方法
限局期の小細胞肺癌と診断された58歳の男性を、化学療法および放射線療法で治療する。治療の効果を改善するために、そして転移が他の場所に現れるのを防止するために、患者は本発明のCSTまたはSSTペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号１６、２０、２５、２８、３９〜４１）の経蝶形骨洞注射を受ける。3週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の顕著な縮小が観察される。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める3ヶ月後に治療を繰り返し、そして7ヶ月後、通常の検出ツール（Ｘ線、CTスキャン、MRI、PETスキャン、放射性核種イメージング、気管支鏡検査法など）によって、またはこの癌に推奨される通常の血液検査を用いて、もはや観察され得る腫瘍はない。
実施例２５−結腸直腸癌の治療方法
II期の結腸直腸腫瘍と診断された75歳の男性は、本発明のGHRHペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号９、２３〜２４、３３〜３８、５７〜８７）の静脈注射を受ける。2週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の顕著な縮小が観察される。患者はその後、腫瘍を除去するための外科手術を経験する。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める4ヶ月後に治療を繰り返し、そして8ヶ月後、通常の検出ツール（結腸内視術、CTスキャン、PETスキャンなど）によって、もはや観察され得る腫瘍はなく、癌胎児性抗原（CEA）の濃度は正常にとどまる。
実施例２６−前立腺癌の治療方法
II期の前立腺癌と診断された66歳の男性を、小線源療法および外照射療法を組み合わせて治療する。治療の効果を改善するために、そして転移を防止するために、患者は本発明のErbBペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号１０）の経蝶形骨洞注射を受ける。5週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の顕著な縮小が観察される。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める3ヶ月後に治療を繰り返し、そして6ヶ月後、通常の検出ツール（Ｘ線、プロスタシントスキャン、MRI、経直腸的超音波断層法、CTスキャンなど）によって、もはや観察され得る腫瘍はなく、PSAの濃度は正常に戻った。
実施例２７−乳癌の治療方法
II期の乳癌と診断された51歳の女性を、補助療法：ホルモン療法、化学療法およびトラスツズマブで治療する。治療の効果を改善するために、そして転移を防止するために、患者は本発明のVIPペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号１３、２１）の経蝶形骨洞注射を受ける。2週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の顕著な縮小が観察される。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める2ヶ月後に治療を繰り返し、そして6ヶ月後、通常の検出ツール（MRI、超音波検査、乳房特異的ポジトロン放出断層撮影、マンモグラフィーなど）によって、もはや観察され得る腫瘍はない。
実施例２８−小細胞肺癌の治療方法
進展期の小細胞肺癌と診断された56歳の男性を、化学療法および放射線療法で治療する。治療の効果を改善するために、そして他の場所への転移を防止するために、患者は本発明のグレリンペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号８、１７、２２、２６〜３７）の経蝶形骨洞注射を受ける。3週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への新たな転移は現れずに腫瘍の顕著な縮小および転移の大きさの縮小が観察される。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める2ヶ月後および5ヶ月後の二度、治療を繰り返す。患者は、この種の治療および疾患のこの病期で予想されるよりも6ヶ月遅い、11ヶ月後に死亡した。
実施例２９−結合、分泌およびインビボアッセイ
ポリペプチド融合物の有効性を決定するために、本発明者らは、それらの適切なレセプターへの結合能力、インビボおよびインビトロでのGH分泌の低下能力、ならびにインビボでの腫瘍増殖の低下能力を確かめた。以下のアッセイはGHRH融合蛋白質によって例示される。
Ａ） 結合アッセイ：
初代下垂体細胞培養物を、6〜8週齢の雄ウィスター系ラットから確立する。神経中葉を切り刻み、そして残りの組織を小片に切り、単離緩衝液に移す。その後細胞を、アッセイ用の調製に先立ち、２４ウェルプレート内で48時間培養する。迅速かつ高感度な放射分析シンチレーション近接アッセイ（SPA）を用いて、GHRH融合蛋白質の結合親和性を評価する。これに関して、本発明者らはラットGHRH膜画分をアッセイ緩衝液中でSPAビーズおよび125I-標識GHRHとインキュベートする。その後、検査するGHRH融合蛋白質の10-12から10-6Mまでの種々の濃度を用いて、８点IC50置換アッセイを実現する。
Ｂ） 分泌アッセイ：
GHRHレセプターを発現し、そして成長ホルモンを分泌することが知られているMtT/S細胞を用いて、本発明者らはGHRH構築物のGH分泌への効力を実証する。10-8MコルチコステロンによってMtT/S細胞の分化を誘導した48時間後、培地を、10nMのGHRH融合蛋白質（LHnDおよびコントロールとして二重不活性化したLHnD）を含む培地で置換する。48時間後、MtT/S細胞を、10μMホルスコリン、または40mM KClもしくは10-8M GHRHを用いる分泌アッセイに供する。この種の分泌アッセイの例を図３に示し、種々のLHnを用いて、MtT/S細胞からの成長ホルモンをそれらが低下させる効率を決定している。
Ｃ） インビボアッセイ：
GHRH融合蛋白質（図４および図５）を、結腸直腸細胞株を用いる癌の異種移植モデルで検査する：Caco 2、HT 29、SW 837、またはSW 480を4〜6週齢の無胸腺ヌード（Nu/Nu）マウスに移植する。マウスに0.5×107の細胞を注射する。腫瘍の大きさをデジタルキャリパーによって週に２度測定し、そして腫瘍の容積を楕円の式（短辺（short dimension））2×（長辺（long dimension））/2に従って概算する。異種移植片が70mm3にまで、150にまで、または150mm3にまで達すると、マウスを無作為化して、（PBS）またはGHRH融合蛋白質（活性のもの、または二重不活性化バージョン）を受けさせ、そして治療開始4日後に腫瘍を採取する。犠牲にする2時間前に、マウスにBrdUを注射する。BrdUは、S期にあるときの分裂細胞のＤＮＡにのみ統合するので、細胞増殖の特異的マーカーである。イソフルラン麻酔下で心穿刺によって血液を集めてIGF-1濃度を評価し、1時間室温にて凝固させ、そして血清を遠心分離後に集める。メーカーの使用説明書に従ってIGF-1をELISAによって分析する。腫瘍の最終の大きさを、グループ（融合蛋白質：活性もしくは不活性で処理、または非処理）あたりで測定および比較し、そして測定したIGF-1濃度と比較する。
結論：
これらのデータは、GH/IGF-1軸のターゲティングが、癌治療の有効なアプローチであることを裏付ける。GH/IGF-1の濃度を低下させることによって、IGF-1依存性腫瘍の増殖を低下させることが可能であるので、本発明者らはこれらの致命的な癌の進行を減速させ得る。
実施例３０−非小細胞肺癌の治療方法
II期の肺腺癌、非小細胞肺癌、と診断され、そして腫瘍の外科的除去後に放射線療法を経験している52歳の男性非喫煙者に、本発明のGHRHペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号９、２３〜２４、３３〜３８、５７〜８７）の経蝶形骨洞注射を与える。4週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の大きさの顕著な低下が観察される。放射線療法をこの時点で中断し、腫瘍の大きさは増大せず、そして転移は観察されない。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める3ヶ月後に融合蛋白質での治療を繰り返し、そして腫瘍の大きさは、あらゆる付加的な治療介入を必要とせずに、それから3ヶ月間ずっと転移もなく安定した状態である。
実施例３１−非小細胞肺癌の治療方法
IV期の未分化大細胞癌と診断され、肝臓および骨に転移があり、化学療法および放射線療法を経験している60歳の女性喫煙者に、本発明のIGF-1ペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号１５、１８）の経蝶形骨洞注射を与える。4週間以内に、アルカリホスファターゼおよびアラニンアミノトランスフェラーゼの血液検査が、骨および肝臓内の組織障害の低下を示し、これは転移癌の減少を示す。骨スキャンもまた、骨転移の減少を明らかにする。疾患の進行が減速され、そして生存4ヶ月目に患者に融合蛋白質のさらなる治療を与える。
実施例３２−非小細胞肺癌の治療方法
中心胸部領域の気管支においてI期の扁平上皮細胞癌と診断された54歳の男性喫煙者に、本発明のGHRHペプチドＴＭ融合蛋白質（例えば配列番号９、２３〜２４、３３〜３８、５７〜８７）の経蝶形骨洞注射を与える。5週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の顕著な縮小が観察される。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める5ヶ月後に治療を繰り返し、そして4ヶ月後、通常の検出ツール（Ｘ線、CTスキャン、MRI、PETスキャン、放射性核種イメージング、気管支鏡検査法など）によって、またはこの癌に推奨される通常の血液検査を用いて観察され得る腫瘍はない。
実施例３３−乳癌の治療方法
IIIa期の乳癌と診断された50歳の女性を、術前化学療法で治療する。治療の効果を改善するために、そして転移を防止するために、患者は本発明のコルチコトロピン放出因子レセプター1結合ペプチドＴＭ融合物（例えば配列番号５６）を受ける。8週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の顕著な縮小が観察される。その後、定型的乳房切除術および再建術を実現する。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める3ヶ月後に融合蛋白質の注射を繰り返し、そして8ヶ月後、通常の検出ツール（MRI、超音波検査、乳房特異的ポジトロン放出断層撮影、マンモグラフィーなど）によって、もはや観察され得る腫瘍はない。
実施例３４−小細胞肺癌の治療方法
限局期の小細胞肺癌と診断された60歳の男性を、化学療法および放射線療法で治療する。治療の効果を改善するために、そして転移が他の場所に現れるのを防止するために、患者は本発明のKiSS-10またはKiSS-54ペプチドＴＭ融合物（例えば配列番号５４）の経蝶形骨洞注射を受ける。3週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の顕著な縮小が観察される。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める3ヶ月後に治療を繰り返し、そして7ヶ月後、通常の検出ツール（Ｘ線、CTスキャン、MRI、PETスキャン、放射性核種イメージング、気管支鏡検査法など）によって、またはこの癌に推奨される通常の血液検査を用いて、もはや観察され得る腫瘍はない。
実施例３５−結腸直腸癌の治療方法
II期の結腸直腸腫瘍と診断された70歳の男性が、本発明のメラニン凝集ホルモンペプチドＴＭ融合物（例えば配列番号５３）の静脈注射を受ける。2週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の顕著な縮小が観察される。患者はその後、腫瘍を除去するための外科手術を経験する。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める4ヶ月後に治療を繰り返し、そして8ヶ月後、通常の検出ツール（結腸内視術、CTスキャン、PETスキャンなど）によって、もはや観察され得る腫瘍はなく、癌胎児性抗原（CEA）の濃度は正常にとどまる。
実施例３６−前立腺癌の治療方法
II期の前立腺癌と診断された40歳の男性を、小線源療法および外照射療法を組み合わせて治療する。治療の効果を改善するために、そして転移を防止するために、患者は本発明のプロラクチン放出ペプチドＴＭ融合物（例えば配列番号５５）の経蝶形骨洞注射を受ける。5週間以内に、IGF-1血中濃度の顕著な減少と相関して、他の場所への転移は現れずに腫瘍の顕著な縮小が観察される。IGF-1血中濃度が再び上昇し始める3ヶ月後に治療を繰り返し、そして6ヶ月後、通常の検出ツール（Ｘ線、プロスタシントスキャン、MRI、経直腸的超音波断層法、CTスキャンなど）によって、もはや観察され得る腫瘍はなく、PSAの濃度は正常に戻った。
実施例３７−インビボでのラットIGF-1濃度へのCP-GHRH-LHDの活性
目的−処置5日後のラットにおけるIGF-1濃度に対するCP-GHRH-LHD融合物のi.v.（静脈内）投与の影響を、ビヒクルのみの処理コントロールと比較して評価すること。
材料および方法
動物：成熟雄スプラーグドーリーラットを、05.00hに点灯し（14L:10D）、無制限に食料および水を入手できるという標準的な収容条件下で飼育し、そして外科手術の前に少なくとも1週間収容条件に慣らす。
外科手術：研究第1日目に、ラット（200〜250g）をヒプノルム（Hypnorm）（0.32mg/kgフェンタニルクエン酸塩および10mg/kgフルアニソン、i.m.（筋肉内））およびジアゼパム（2.6mg/kg、i.p.（腹腔内））の組合せで麻酔する。右頸静脈を露出させ、そしてシラスティック（silastic）先端部（i.d.（内径）0.50mm、o.d.（外径）0.93mm）ポリエチレンカニューレ（Portex、英国）を右心房の入口に近接するまで血管内に挿入する。カニューレにはヘパリン化（10IU/ml）等張生理食塩水を予め充填する。カニューレの自由端部を、頭皮切開を介して体外に出し、その後２つのステンレス鋼ねじおよび自己硬化性歯科用アクリルを用いて頭蓋骨に固定した保護用ばねをくぐらせる。復元後、動物を、自動血液サンプリング室内の個々のケージにて収容する。保護用ばねの端部を、動物の最大運動自由度を許容する機械スイベルに取り付ける。開存性を維持するために、カニューレを毎日ヘパリン化生理食塩水で洗い流す。
処置：研究第2日目09：00に、ラットはCP-GHRH-LHDまたはビヒクルのみのコントロールのi.v.注射を受ける。
サンプリング：自動血液サンプリングシステム（ABS）が以前に記載されている（Clarkら, 1986; Windleら, 1997）。外科手術3〜4日後、各動物の頸静脈カニューレを自動血液サンプリングシステムに接続する。第6日目07：00にサンプリングが始まる。24時間周期で自動システムを用いて血液サンプルを10分間隔で集める。合計１４４の血液サンプルを集め、それぞれ、38μlを越えない全血を含む。
結果
IGF-1 ELISAキットを用いてIGF-1濃度を測定した。図７は、融合物処理ラットのIGF-1濃度が、ビヒクルのみのコントロールと比較して、ほんの5日後にt-検定P値＝0.0416で統計的に有意に低下していることを示す。
実施例３８−インビボでのラットIGF-1濃度へのCP-GHRH-LHDの活性
目的−CP-GHRH-LHD融合物の活性経時変化を調査し、IGF-1濃度におけるこの化合物の投与と初期効果との間の時間遅延を同定すること。
材料および方法
動物：成熟雄スプラーグドーリーラットを、05.00hに点灯し（14L:10D）、無制限に食料および水を入手できるという標準的な収容条件下で飼育し、そして外科手術の前に少なくとも1週間収容条件に慣らす。
外科手術：研究第1日目に、ラット（260〜280g）をヒプノルムおよびジアゼパムの組合せで麻酔する。その後、右頸静脈を露出させ、そしてシラスティック先端部（i.d. 0.50mm、o.d. 0.93mm）ポリエチレンカニューレ（Portex、英国）を右心房の入口に近接するまで血管内に挿入する。カニューレにはヘパリン化（10IU/ml）等張生理食塩水を予め充填する。カニューレの自由端部を、頭皮切開を介して体外に出し、そしてステンレス鋼ねじおよび歯科用セメントを用いて頭蓋骨に固定したばねを通す。復元後、動物を、ABS室内の個々のケージにて収容する。ばねを、動物の最大運動自由度を許容するスイベルに取り付ける。開存性を維持するために、カニューレを毎日ヘパリン化生理食塩水で洗い流す。
処置：研究第5日目10：00に、ラットはCP-GHRH-LHDまたはビヒクル（無菌生理食塩水）のi.v.注射を受ける。
血液サンプリング：カニューレを洗い流した後、09.30hに各ラットから1匹ずつ手作業で血液サンプル（100μl）を採取する。実験の第5日目から第18日目まで（またはカニューレが塞がれるまで）サンプルを採取する。血液サンプル由来の血漿を、ELISAキットによるIGF-1含量の後の分析のために-20℃で保存する。
結果
図８は、ビヒクルのみのコントロールと比較して、処理後第4日目から融合物処理ラットのIGF-1濃度が統計的に有意に低下していることを示す。
実施例３９−インビボでのラットGH濃度へのCP-GHRH-LHDの活性
目的−処置5日後のラットにおける成長ホルモン濃度に対するCP-GHRH-LHD融合物のi.v.投与の影響を、ビヒクルのみの処理コントロールおよびオクトレオチド点滴コントロールと比較して、評価すること。
材料および方法
動物：成熟雄スプラーグドーリーラットを、05.00hに点灯し（14L:10D）、無制限に食料および水を入手できるという標準的な収容条件下で飼育し、そして外科手術の前に少なくとも1週間収容条件に慣らす。
外科手術：研究第1日目に、ラット（200〜250g）をヒプノルム（0.32mg/kgフェンタニルクエン酸塩および10mg/kgフルアニソン、i.m.）およびジアゼパム（2.6mg/kg、i.p.）の組合せで麻酔する。右頸静脈を露出させ、そしてシラスティック先端部（i.d. 0.50mm、o.d. 0.93mm）ポリエチレンカニューレ（Portex、英国）を右心房の入口に近接するまで血管内に挿入する。カニューレにはヘパリン化（10IU/ml）等張生理食塩水を予め充填する。カニューレの自由端部を、頭皮切開を介して体外に出し、その後２つのステンレス鋼ねじおよび自己硬化性歯科用アクリルを用いて頭蓋骨に固定した保護用ばねをくぐらせる。復元後、動物を、自動血液サンプリング室内の個々のケージにて収容する。保護用ばねの端部を、動物の最大運動自由度を許容する機械スイベルに取り付ける。開存性を維持するために、カニューレを毎日ヘパリン化生理食塩水で洗い流す。
処置：研究第2日目09：00に、ラットはシンタキシン活性化合物またはビヒクルのi.v.注射を受ける。ソマトスタチン（または類似体）の12時間点滴が、サンプリング開始6時間後に始まり（二重カニューレラインの１つを介して投与）、そして12時間だけ続く。［この点滴タイミングは、優れたGHアッセイ制御である。というのも、本発明者らは、ベースラインの分泌、次いで完全な抑制、そして次いで急速な回復／立ち直りを見るからである］
サンプリング：自動血液サンプリングシステム（ABS）が以前に記載されている（Clarkら, 1986; Windleら, 1997）。外科手術3〜4日後、各動物の頸静脈カニューレを自動血液サンプリングシステムに接続する。第6日目07：00にサンプリングが始まる。24時間周期で自動システムを用いて血液サンプルを10分間隔で集める。合計１４４の血液サンプルを集め、それぞれ、38μlを越えない全血を含む。
結果
RIAアッセイを用いて成長ホルモン濃度を測定した。図９ａは、ビヒクル処理動物が成長ホルモンの典型的な脈動的放出を示すことを、図９ｂはGHRH-LHDキメラでの処理後の脈動的な成長ホルモン放出の完全な除去を、そして図９ｃは典型的な成長ホルモン放出の阻止およびオクトレオチド点滴を止めたときのその後の回復を示す。
配列表
配列番号１ LHNA
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配列番号２ LHNB
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配列番号３ LHNC
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配列番号４ LHND
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配列番号５ IgA-HNtet
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配列番号６ GHRPリンカー
Catatgccggttggatccatccaggtcgactttaaactgcagggtgttactctagagggcggtggcggtagcggtggcggtggcagcggcggtggcggtagcgcactagtgggcagctcatttctgtctccggaacatcaacgggtgcagcagcgtaaagagagtaaaaagccgccagcgaaattacagcctcgctaatagaagcttaagggcgaattc
配列番号７ GHRP-C融合物
catatgccggttggatccatgccgatcaccatcaacaacttcaactacagcgatccggtggataacaaaaacatcctgtacctggatacccatctgaataccctggcgaacgaaccggaaaaagcgtttcgtatcaccggcaacatttgggttattccggatcgttttagccgtaacagcaacccgaatctgaataaaccgccgcgtgttaccagcccgaaaagcggttattacgatccgaactatctgagcaccgatagcgataaagataccttcctgaaagaaatcatcaaactgttcaaacgcatcaacagccgtgaaattggcgaagaactgatctatcgcctgagcaccgatattccgtttccgggcaacaacaacaccccgatcaacacctttgatttcgatgtggatttcaacagcgttgatgttaaaacccgccagggtaacaattgggtgaaaaccggcagcattaacccgagcgtgattattaccggtccgcgcgaaaacattattgatccggaaaccagcacctttaaactgaccaacaacacctttgcggcgcaggaaggttttggcgcgctgagcattattagcattagcccgcgctttatgctgacctatagcaacgcgaccaacgatgttggtgaaggccgtttcagcaaaagcgaattttgcatggacccgatcctgatcctgatgcatgaactgaaccatgcgatgcataacctgtatggcatcgcgattccgaacgatcagaccattagcagcgtgaccagcaacatcttttacagccagtacaacgtgaaactggaatatgcggaaatctatgcgtttggcggtccgaccattgatctgattccgaaaagcgcgcgcaaatacttcgaagaaaaagcgctggattactatcgcagcattgcgaaacgtctgaacagcattaccaccgcgaatccgagcagcttcaacaaatatatcggcgaatataaacagaaactgatccgcaaatatcgctttgtggtggaaagcagcggcgaagttaccgttaaccgcaataaattcgtggaactgtacaacgaactgacccagatcttcaccgaatttaactatgcgaaaatctataacgtgcagaaccgtaaaatctacctgagcaacgtgtataccccggtgaccgcgaatattctggatgataacgtgtacgatatccagaacggctttaacatcccgaaaagcaacctgaacgttctgtttatgggccagaacctgagccgtaatccggcgctgcgtaaagtgaacccggaaaacatgctgtacctgttcaccaaattttgcgtcgacgcgattgatggtcgtagcctgtacaacaaaaccctgcagtgtcgtgaactgctggtgaaaaacaccgatctgccgtttattggcgatatcagcgatgtgaaaaccgatatcttcctgcgcaaagatatcaacgaagaaaccgaagtgatctactacccggataacgtgagcgttgatcaggtgatcctgagcaaaaacaccagcgaacatggtcagctggatctgctgtatccgagcattgatagcgaaagcgaaattctgccgggcgaaaaccaggtgttttacgataaccgtacccagaacgtggattacctgaacagctattactacctggaaagccagaaactgagcgataacgtggaagattttacctttacccgcagcattgaagaagcgctggataacagcgcgaaagtttacacctattttccgaccctggcgaacaaagttaatgcgggtgttcagggcggtctgtttctgatgtgggcgaacgatgtggtggaagatttcaccaccaacatcctgcgtaaagataccctggataaaatcagcgatgttagcgcgattattccgtatattggtccggcgctgaacattagcaatagcgtgcgtcgtggcaattttaccgaagcgtttgcggttaccggtgtgaccattctgctggaagcgtttccggaatttaccattccggcgctgggtgcgtttgtgatctatagcaaagtgcaggaacgcaacgaaatcatcaaaaccatcgataactgcctggaacagcgtattaaacgctggaaagatagctatgaatggatgatgggcacctggctgagccgtattatcacccagttcaacaacatcagctaccagatgtacgatagcctgaactatcaggcgggtgcgattaaagcgaaaatcgatctggaatacaaaaaatacagcggcagcgataaagaaaacatcaaaagccaggttgaaaacctgaaaaacagcctggatgtgaaaattagcgaagcgatgaataacatcaacaaattcatccgcgaatgcagcgtgacctacctgttcaaaaacatgctgccgaaagtgatcgatgaactgaacgaatttgatcgcaacaccaaagcgaaactgatcaacctgatcgatagccacaacattattctggtgggcgaagtggataaactgaaagcgaaagttaacaacagcttccagaacaccatcccgtttaacatcttcagctataccaacaacagcctgctgaaagatatcatcaacgaatacttcaatctagagggcggtggcggtagcggtggcggtggcagcggcggtggcggtagcgcactagtgggcagctcatttctgtctccggaacatcaacgggtgcagcagcgtaaagagagtaaaaagccgccagcgaaattacagcctcgctaatagaagcttaagggcgaattc
配列番号８ GHRP-C融合物
PITINNFNYSDPVDNKNILYLDTHLNTLANEPEKAFRITGNIWVIPDRFSRNSNPNLNKPPRVTSPKSGYYDPNYLSTDSDKDTFLKEIIKLFKRINSREIGEELIYRLSTDIPFPGNNNTPINTFDFDVDFNSVDVKTRQGNNWVKTGSINPSVIITGPRENIIDPETSTFKLTNNTFAAQEGFGALSIISISPRFMLTYSNATNDVGEGRFSKSEFCMDPILILMHELNHAMHNLYGIAIPNDQTISSVTSNIFYSQYNVKLEYAEIYAFGGPTIDLIPKSARKYFEEKALDYYRSIAKRLNSITTANPSSFNKYIGEYKQKLIRKYRFVVESSGEVTVNRNKFVELYNELTQIFTEFNYAKIYNVQNRKIYLSNVYTPVTANILDDNVYDIQNGFNIPKSNLNVLFMGQNLSRNPALRKVNPENMLYLFTKFCVDAIDGRSLYNKTLQCRELLVKNTDLPFIGDISDVKTDIFLRKDINEETEVIYYPDNVSVDQVILSKNTSEHGQLDLLYPSIDSESEILPGENQVFYDNRTQNVDYLNSYYYLESQKLSDNVEDFTFTRSIEEALDNSAKVYTYFPTLANKVNAGVQGGLFLMWANDVVEDFTTNILRKDTLDKISDVSAIIPYIGPALNISNSVRRGNFTEAFAVTGVTILLEAFPEFTIPALGAFVIYSKVQERNEIIKTIDNCLEQRIKRWKDSYEWMMGTWLSRIITQFNNISYQMYDSLNYQAGAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNEFDRNTKAKLINLIDSHNIILVGEVDKLKAKVNNSFQNTIPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNLEGGGGSGGGGSGGGGSALVGSSFLSPEHQRVQQRKESKKPPAKLQPR
配列番号９ GHRH-D融合物
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDKSEEKLYDDDDKDRWGSSLQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNLEGGGGSGGGGSGGGGSALVYADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMSRQQGESNQERGA
配列番号１０ EGF-D融合物
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDKSEEKLYDDDDKDRWGSSLQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNLEGGGGSGGGGSGGGGSALVNSDSECPLSHDGYCLHDGVCMYIEALDKYACNCVVGYIGERCQYRDLKWWELR
配列番号１１ NGF-D融合物
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDKSEEKLYDDDDKDRWGSSLQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNLEGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSALVEPHSESNVPAGHTIPQAHWTKLQHSLDTALRRARSAPAAAIAARVAGQTRNITVDPRLFKKRRLRSPRVLFSTQPPREAADTQDLDFEVGGAAPFNRTHRSKRSSSHPIFHRGEFSVCDSVSVWVGDKTTATDIKGKEVMVLGEVNINNSVFKQYFFETKCRDPNPVDSGCRGIDSKHWNSYCTTTHTFVKALTMDGKQAAWRFIRIDTACVCVLSRKAVRRA
配列番号１２ LEP116-122-D融合物
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDKSEEKLYDDDDKDRWGSSLQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNLEGGGGSGGGGSGGGGSALVSCHLPWA
配列番号１３ VIP-D融合物
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDKSEEKLYDDDDKDRWGSSLQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNLEGGGGSGGGGSGGGGSALVHSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILN
配列番号１４ LEP116-122-C融合物
PITINNFNYSDPVDNKNILYLDTHLNTLANEPEKAFRITGNIWVIPDRFSRNSNPNLNKPPRVTSPKSGYYDPNYLSTDSDKDTFLKEIIKLFKRINSREIGEELIYRLSTDIPFPGNNNTPINTFDFDVDFNSVDVKTRQGNNWVKTGSINPSVIITGPRENIIDPETSTFKLTNNTFAAQEGFGALSIISISPRFMLTYSNATNDVGEGRFSKSEFCMDPILILMHELNHAMHNLYGIAIPNDQTISSVTSNIFYSQYNVKLEYAEIYAFGGPTIDLIPKSARKYFEEKALDYYRSIAKRLNSITTANPSSFNKYIGEYKQKLIRKYRFVVESSGEVTVNRNKFVELYNELTQIFTEFNYAKIYNVQNRKIYLSNVYTPVTANILDDNVYDIQNGFNIPKSNLNVLFMGQNLSRNPALRKVNPENMLYLFTKFCVDAIDGRSLYNKTLQCRELLVKNTDLPFIGDISDVKTDIFLRKDINEETEVIYYPDNVSVDQVILSKNTSEHGQLDLLYPSIDSESEILPGENQVFYDNRTQNVDYLNSYYYLESQKLSDNVEDFTFTRSIEEALDNSAKVYTYFPTLANKVNAGVQGGLFLMWANDVVEDFTTNILRKDTLDKISDVSAIIPYIGPALNISNSVRRGNFTEAFAVTGVTILLEAFPEFTIPALGAFVIYSKVQERNEIIKTIDNCLEQRIKRWKDSYEWMMGTWLSRIITQFNNISYQMYDSLNYQAGAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNEFDRNTKAKLINLIDSHNIILVGEVDKLKAKVNNSFQNTIPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNLEGGGGSGGGGSGGGGSALVSCHLPWA
配列番号１５ IGF1-C融合物
PITINNFNYSDPVDNKNILYLDTHLNTLANEPEKAFRITGNIWVIPDRFSRNSNPNLNKPPRVTSPKSGYYDPNYLSTDSDKDTFLKEIIKLFKRINSREIGEELIYRLSTDIPFPGNNNTPINTFDFDVDFNSVDVKTRQGNNWVKTGSINPSVIITGPRENIIDPETSTFKLTNNTFAAQEGFGALSIISISPRFMLTYSNATNDVGEGRFSKSEFCMDPILILMHELNHAMHNLYGIAIPNDQTISSVTSNIFYSQYNVKLEYAEIYAFGGPTIDLIPKSARKYFEEKALDYYRSIAKRLNSITTANPSSFNKYIGEYKQKLIRKYRFVVESSGEVTVNRNKFVELYNELTQIFTEFNYAKIYNVQNRKIYLSNVYTPVTANILDDNVYDIQNGFNIPKSNLNVLFMGQNLSRNPALRKVNPENMLYLFTKFCVDAIDGRSLYNKTLQCRELLVKNTDLPFIGDISDVKTDIFLRKDINEETEVIYYPDNVSVDQVILSKNTSEHGQLDLLYPSIDSESEILPGENQVFYDNRTQNVDYLNSYYYLESQKLSDNVEDFTFTRSIEEALDNSAKVYTYFPTLANKVNAGVQGGLFLMWANDVVEDFTTNILRKDTLDKISDVSAIIPYIGPALNISNSVRRGNFTEAFAVTGVTILLEAFPEFTIPALGAFVIYSKVQERNEIIKTIDNCLEQRIKRWKDSYEWMMGTWLSRIITQFNNISYQMYDSLNYQAGAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNEFDRNTKAKLINLIDSHNIILVGEVDKLKAKVNNSFQNTIPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNLEGGGGSGGGGSGGGGSALVGPETLCGAELVDALQFVCGDRGFYFNKPTGYGSSSRRAPQTGIVDECCFRSCDLRRLEMYCAPLKPAKSA
配列番号 １６ SST-C融合物
PITINNFNYSDPVDNKNILYLDTHLNTLANEPEKAFRITGNIWVIPDRFSRNSNPNLNKPPRVTSPKSGYYDPNYLSTDSDKDTFLKEIIKLFKRINSREIGEELIYRLSTDIPFPGNNNTPINTFDFDVDFNSVDVKTRQGNNWVKTGSINPSVIITGPRENIIDPETSTFKLTNNTFAAQEGFGALSIISISPRFMLTYSNATNDVGEGRFSKSEFCMDPILILMHELNHAMHNLYGIAIPNDQTISSVTSNIFYSQYNVKLEYAEIYAFGGPTIDLIPKSARKYFEEKALDYYRSIAKRLNSITTANPSSFNKYIGEYKQKLIRKYRFVVESSGEVTVNRNKFVELYNELTQIFTEFNYAKIYNVQNRKIYLSNVYTPVTANILDDNVYDIQNGFNIPKSNLNVLFMGQNLSRNPALRKVNPENMLYLFTKFCVDAIDGRSLYNKTLQCRELLVKNTDLPFIGDISDVKTDIFLRKDINEETEVIYYPDNVSVDQVILSKNTSEHGQLDLLYPSIDSESEILPGENQVFYDNRTQNVDYLNSYYYLESQKLSDNVEDFTFTRSIEEALDNSAKVYTYFPTLANKVNAGVQGGLFLMWANDVVEDFTTNILRKDTLDKISDVSAIIPYIGPALNISNSVRRGNFTEAFAVTGVTILLEAFPEFTIPALGAFVIYSKVQERNEIIKTIDNCLEQRIKRWKDSYEWMMGTWLSRIITQFNNISYQMYDSLNYQAGAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNEFDRNTKAKLINLIDSHNIILVGEVDKLKAKVNNSFQNTIPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNLEGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSALVAGCKNFFWKTFTSC
配列番号 １７ GHRP-D融合物
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDKSEEKLYDDDDKDRWGSSLQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNLEGGGGSGGGGSGGGGSALVGSSFLSPEHQRVQQRKESKKPPAKLQPR
配列番号 １８ IGF1-D融合物
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDKSEEKLYDDDDKDRWGSSLQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNLEGGGGSGGGGSGGGGSALVGPETLCGAELVDALQFVCGDRGFYFNKPTGYGSSSRRAPQTGIVDECCFRSCDLRRLEMYCAPLKPAKSA
配列番号 １９ NGF-C融合物
PITINNFNYSDPVDNKNILYLDTHLNTLANEPEKAFRITGNIWVIPDRFSRNSNPNLNKPPRVTSPKSGYYDPNYLSTDSDKDTFLKEIIKLFKRINSREIGEELIYRLSTDIPFPGNNNTPINTFDFDVDFNSVDVKTRQGNNWVKTGSINPSVIITGPRENIIDPETSTFKLTNNTFAAQEGFGALSIISISPRFMLTYSNATNDVGEGRFSKSEFCMDPILILMHELNHAMHNLYGIAIPNDQTISSVTSNIFYSQYNVKLEYAEIYAFGGPTIDLIPKSARKYFEEKALDYYRSIAKRLNSITTANPSSFNKYIGEYKQKLIRKYRFVVESSGEVTVNRNKFVELYNELTQIFTEFNYAKIYNVQNRKIYLSNVYTPVTANILDDNVYDIQNGFNIPKSNLNVLFMGQNLSRNPALRKVNPENMLYLFTKFCVDAIDGRSLYNKTLQCRELLVKNTDLPFIGDISDVKTDIFLRKDINEETEVIYYPDNVSVDQVILSKNTSEHGQLDLLYPSIDSESEILPGENQVFYDNRTQNVDYLNSYYYLESQKLSDNVEDFTFTRSIEEALDNSAKVYTYFPTLANKVNAGVQGGLFLMWANDVVEDFTTNILRKDTLDKISDVSAIIPYIGPALNISNSVRRGNFTEAFAVTGVTILLEAFPEFTIPALGAFVIYSKVQERNEIIKTIDNCLEQRIKRWKDSYEWMMGTWLSRIITQFNNISYQMYDSLNYQAGAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNEFDRNTKAKLINLIDSHNIILVGEVDKLKAKVNNSFQNTIPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNLEGGGGSGGGGSGGGGSALVEPHSESNVPAGHTIPQAHWTKLQHSLDTALRRARSAPAAAIAARVAGQTRNITVDPRLFKKRRLRSPRVLFSTQPPREAADTQDLDFEVGGAAPFNRTHRSKRSSSHPIFHRGEFSVCDSVSVWVGDKTTATDIKGKEVMVLGEVNINNSVFKQYFFETKCRDPNPVDSGCRGIDSKHWNSYCTTTHTFVKALTMDGKQAAWRFIRIDTACVCVLSRKAVRRA
配列番号 ２０ SST14-D融合物
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDKSEEKLYDDDDKDRWGSSLQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNLEGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSALVAGCKNFFWKTFTSC
配列番号 ２１ VIP-C融合物
PITINNFNYSDPVDNKNILYLDTHLNTLANEPEKAFRITGNIWVIPDRFSRNSNPNLNKPPRVTSPKSGYYDPNYLSTDSDKDTFLKEIIKLFKRINSREIGEELIYRLSTDIPFPGNNNTPINTFDFDVDFNSVDVKTRQGNNWVKTGSINPSVIITGPRENIIDPETSTFKLTNNTFAAQEGFGALSIISISPRFMLTYSNATNDVGEGRFSKSEFCMDPILILMHELNHAMHNLYGIAIPNDQTISSVTSNIFYSQYNVKLEYAEIYAFGGPTIDLIPKSARKYFEEKALDYYRSIAKRLNSITTANPSSFNKYIGEYKQKLIRKYRFVVESSGEVTVNRNKFVELYNELTQIFTEFNYAKIYNVQNRKIYLSNVYTPVTANILDDNVYDIQNGFNIPKSNLNVLFMGQNLSRNPALRKVNPENMLYLFTKFCVDAIDGRSLYNKTLQCRELLVKNTDLPFIGDISDVKTDIFLRKDINEETEVIYYPDNVSVDQVILSKNTSEHGQLDLLYPSIDSESEILPGENQVFYDNRTQNVDYLNSYYYLESQKLSDNVEDFTFTRSIEEALDNSAKVYTYFPTLANKVNAGVQGGLFLMWANDVVEDFTTNILRKDTLDKISDVSAIIPYIGPALNISNSVRRGNFTEAFAVTGVTILLEAFPEFTIPALGAFVIYSKVQERNEIIKTIDNCLEQRIKRWKDSYEWMMGTWLSRIITQFNNISYQMYDSLNYQAGAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNEFDRNTKAKLINLIDSHNIILVGEVDKLKAKVNNSFQNTIPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNLEGGGGSGGGGSGGGGSALVHSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILN
配列番号 ２２ グレリン-A融合物
EFVNKQFNYKDPVNGVDIAYIKIPNAGQMQPVKAFKIHNKIWVIPERDTFTNPEEGDLNPPPEAKQVPVSYYDSTYLSTDNEKDNYLKGVTKLFERIYSTDLGRMLLTSIVRGIPFWGGSTIDTELKVIDTNCINVIQPDGSYRSEELNLVIIGPSADIIQFECKSFGHEVLNLTRNGYGSTQYIRFSPDFTFGFEESLEVDTNPLLGAGKFATDPAVTLAHELIHAGHRLYGIAINPNRVFKVNTNAYYEMSGLEVSFEELRTFGGHDAKFIDSLQENEFRLYYYNKFKDIASTLNKAKSIVGTTASLQYMKNVFKEKYLLSEDTSGKFSVDKLKFDKLYKMLTEIYTEDNFVKFFKVLNRKTYLNFDKAVFKINIVPKVNYTIYDGFNLRNTNLAANFNGQNTEINNMNFTKLKNFTGLFEFYKLLCVDGIITSKTKSDDDDKNKALNLQCIKVNNWDLFFSPSEDNFTNDLNKGEEITSDTNIEAAEENISLDLIQQYYLTFNFDNEPENISIENLSSDIIGQLELMPNIERFPNGKKYELDKYTMFHYLRAQEFEHGKSRIALTNSVNEALLNPSRVYTFFSSDYVKKVNKATEAAMFLGWVEQLVYDFTDETSEVSTTDKIADITIIIPYIGPALNIGNMLYKDDFVGALIFSGAVILLEFIPEIAIPVLGTFALVSYIANKVLTVQTIDNALSKRNEKWDEVYKYIVTNWLAKVNTQIDLIRKKMKEALENQAEATKAIINYQYNQYTEEEKNNINFNIDDLSSKLNESINKAMININKFLNQCSVSYLMNSMIPYGVKRLEDFDASLKDALLKYIYDNRGTLIGQVDRLKDKVNNTLSTDIPFQLSKYVDNQRLLSTLEGGGGSGGGGSGGGGSALVGSSFLSPEHQRVQQRKESKKPPAKLQPR
配列番号 ２３ CP-hGHRH29 N8A K12N M27L-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSIEGRYADAIFTASYRNVLGQLSARKLLQDILSRALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ２４ Ｎ末端-hGHRH29 N8A M27L-LHD融合物の蛋白質配列
HVDAIFTQSYRKVLAQLSARKLLQDILNRNNNNNNNNNNTWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDKSEEKLYDDDDKDRWGSSLQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ２５ IgA-HNtet-SST14融合物
ESNQPEKNGTATKPENSGNTTSENGQTEPEKKLELRNVSDIELYSQTNGTYRQHVSLDGIPENTDTYFVKVKSSAFKDVYIPVASITEEKRNGQSVYKITAKAEKLQQELENKYVDNFTFYLDKKAKEENTNFTSFSNLVKAINQNPSGTYHLAASLNANEVELGPDERSYIKDTFTGRLIGEKDGKNYAIYNLKKPLFENLSGATVEKLSLKNVAISGKNDIGSLANEATNGTKIKQVHVDGCVDGIITSKTKSDDDDKNKALNLQCIKIKNEDLTFIAEKNSFSEEPFQDEIVSYNTKNKPLNFNYSLDKIIVDYNLQSKITLPNDRTTPVTKGIPYAPEYKSNAASTIEIHNIDDNTIYQYLYAQKSPTTLQRITMTNSVDDALINSTKIYSYFPSVISKVNQGAQGILFLQWVRDIIDDFTNESSQKTTIDKISDVSTIVPYIGPALNIVKQGYEGNFIGALETTGVVLLLEYIPEITLPVIAALSIAESSTQKEKIIKTIDNFLEKRYEKWIEVYKLVKAKWLGTVNTQFQKRSYQMYRSLEYQVDAIKKIIDYEYKIYSGPDKEQIADEINNLKNKLEEKANKAMININIFMRESSRSFLVNQMINEAKKQLLEFDTQSKNILMQYIKANSKFIGITELKKLESKINKVFSTPIPFSYSKNLDCWVDNEEDIDVLEGGGGSGGGGSGGGGSALVAGCKNFFWKTFTSC
配列番号 ２６ IgA-HNtet-GHRP融合物
ESNQPEKNGTATKPENSGNTTSENGQTEPEKKLELRNVSDIELYSQTNGTYRQHVSLDGIPENTDTYFVKVKSSAFKDVYIPVASITEEKRNGQSVYKITAKAEKLQQELENKYVDNFTFYLDKKAKEENTNFTSFSNLVKAINQNPSGTYHLAASLNANEVELGPDERSYIKDTFTGRLIGEKDGKNYAIYNLKKPLFENLSGATVEKLSLKNVAISGKNDIGSLANEATNGTKIKQVHVDGCVDGIITSKTKSDDDDKNKALNLQCIKIKNEDLTFIAEKNSFSEEPFQDEIVSYNTKNKPLNFNYSLDKIIVDYNLQSKITLPNDRTTPVTKGIPYAPEYKSNAASTIEIHNIDDNTIYQYLYAQKSPTTLQRITMTNSVDDALINSTKIYSYFPSVISKVNQGAQGILFLQWVRDIIDDFTNESSQKTTIDKISDVSTIVPYIGPALNIVKQGYEGNFIGALETTGVVLLLEYIPEITLPVIAALSIAESSTQKEKIIKTIDNFLEKRYEKWIEVYKLVKAKWLGTVNTQFQKRSYQMYRSLEYQVDAIKKIIDYEYKIYSGPDKEQIADEINNLKNKLEEKANKAMININIFMRESSRSFLVNQMINEAKKQLLEFDTQSKNILMQYIKANSKFIGITELKKLESKINKVFSTPIPFSYSKNLDCWVDNEEDIDVLEGGGGSGGGGSGGGGSALVGSSFLSPEHQRVQQRKESKKPPAKLQPR
配列番号 ２７ グレリンS3W-A融合物
EFVNKQFNYKDPVNGVDIAYIKIPNAGQMQPVKAFKIHNKIWVIPERDTFTNPEEGDLNPPPEAKQVPVSYYDSTYLSTDNEKDNYLKGVTKLFERIYSTDLGRMLLTSIVRGIPFWGGSTIDTELKVIDTNCINVIQPDGSYRSEELNLVIIGPSADIIQFECKSFGHEVLNLTRNGYGSTQYIRFSPDFTFGFEESLEVDTNPLLGAGKFATDPAVTLAHELIHAGHRLYGIAINPNRVFKVNTNAYYEMSGLEVSFEELRTFGGHDAKFIDSLQENEFRLYYYNKFKDIASTLNKAKSIVGTTASLQYMKNVFKEKYLLSEDTSGKFSVDKLKFDKLYKMLTEIYTEDNFVKFFKVLNRKTYLNFDKAVFKINIVPKVNYTIYDGFNLRNTNLAANFNGQNTEINNMNFTKLKNFTGLFEFYKLLCVDGIITSKTKSDDDDKNKALNLQCIKVNNWDLFFSPSEDNFTNDLNKGEEITSDTNIEAAEENISLDLIQQYYLTFNFDNEPENISIENLSSDIIGQLELMPNIERFPNGKKYELDKYTMFHYLRAQEFEHGKSRIALTNSVNEALLNPSRVYTFFSSDYVKKVNKATEAAMFLGWVEQLVYDFTDETSEVSTTDKIADITIIIPYIGPALNIGNMLYKDDFVGALIFSGAVILLEFIPEIAIPVLGTFALVSYIANKVLTVQTIDNALSKRNEKWDEVYKYIVTNWLAKVNTQIDLIRKKMKEALENQAEATKAIINYQYNQYTEEEKNNINFNIDDLSSKLNESINKAMININKFLNQCSVSYLMNSMIPYGVKRLEDFDASLKDALLKYIYDNRGTLIGQVDRLKDKVNNTLSTDIPFQLSKYVDNQRLLSTLEIYALVGSWFLSPEHQRVQQRKESKKPPAKLQPR
配列番号 ２８ SST28-D融合物
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDKSEEKLYDDDDKDRWGSSLQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNLEGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSALVSANSNPAMAPRERKAGCKNFFWKTFTSC
配列番号 ２９ GRP-D融合物
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDKSEEKLYDDDDKDRWGSSLQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNLEGGGGSGGGGSGGGGSALVGNHWAVGHLM
配列番号 ３０ GRP-B融合物
PVTINNFNYNDPIDNNNIIMMEPPFARGTGRYYKAFKITDRIWIIPERYTFGYKPEDFNKSSGIFNRDVCEYYDPDYLNTNDKKNIFLQTMIKLFNRIKSKPLGEKLLEMIINGIPYLGDRRVPLEEFNTNIASVTVNKLISNPGEVERKKGIFANLIIFGPGPVLNENETIDIGIQNHFASREGFGGIMQMKFCPEYVSVFNNVQENKGASIFNRRGYFSDPALILMHELIHVLHGLYGIKVDDLPIVPNEKKFFMQSTDAIQAEELYTFGGQDPSIITPSTDKSIYDKVLQNFRGIVDRLNKVLVCISDPNININIYKNKFKDKYKFVEDSEGKYSIDVESFDKLYKSLMFGFTETNIAENYKIKTRASYFSDSLPPVKIKNLLDNEIYTIEEGFNISDKDMEKEYRGQNKAINKQAYEEISKEHLAVYKIQMCVDEEKLYDDDDKDRWGSSLQCIDVDNEDLFFIADKNSFSDDLSKNERIEYNTQSNYIENDFPINELILDTDLISKIELPSENTESLTDFNVDVPVYEKQPAIKKIFTDENTIFQYLYSQTFPLDIRDISLTSSFDDALLFSNKVYSFFSMDYIKTANKVVEAGLFAGWVKQIVNDFVIEANKSNTMDAIADISLIVPYIGLALNVGNETAKGNFENAFEIAGASILLEFIPELLIPVVGAFLLESYIDNKNKIIKTIDNALTKRNEKWSDMYGLIVAQWLSTVNTQFYTIKEGMYKALNYQAQALEEIIKYRYNIYSEKEKSNINIDFNDINSKLNEGINQAIDNINNFINGCSVSYLMKKMIPLAVEKLLDFDNTLKKNLLNYIDENKLYLIGSAEYEKSKVNKYLKTIMPFDLSIYTNDTILIEMFNKYNSLEGGGGSGGGGSGGGGSALVGNHWAVGHLM
配列番号 ３１ CP-qGHRH29リンカー
ggatccGTCGACaacaacaataacaacaacaataacaacaacgacgatgacgataaaCATGTGGATGCGATCTTTACCCAGAGCTATCGGAAGGTTTTGGCCCAACTGTCTGCTCGTAAACTTTTACAGGACATTCTGAACAGAGCAgaagcggcagccaaagaagcagccgctaaggcgctgcagagtctagaataataagctt
配列番号 ３２ CP-qGHRH29-D融合物
ggatccatgacgtggccagttaaggatttcaactactcagatcctgtaaatgacaacgatattctgtaccttcgcattccacaaaataaactgatcaccacaccagtcaaagcattcatgattactcaaaacatttgggtcattccagaacgcttttctagtgacacaaatccgagtttatctaaacctccgcgtccgacgtccaaatatcagagctattacgatccctcatatctcagtacggacgaacaaaaagatactttccttaaaggtatcattaaactgtttaagcgtattaatgagcgcgatatcgggaaaaagttgattaattatcttgttgtgggttccccgttcatgggcgatagctctacccccgaagacacttttgattttacccgtcatacgacaaacatcgcggtagagaagtttgagaacggatcgtggaaagtcacaaacatcattacacctagcgtcttaatttttggtccgctgccaaacatcttagattatacagccagcctgactttgcaggggcaacagtcgaatccgagtttcgaaggttttggtaccctgagcattctgaaagttgccccggaatttctgctcactttttcagatgtcaccagcaaccagagctcagcagtattaggaaagtcaattttttgcatggacccggttattgcactgatgcacgaactgacgcactctctgcatcaactgtatgggatcaacatccccagtgacaaacgtattcgtccccaggtgtctgaaggatttttctcacaggatgggccgaacgtccagttcgaagagttgtatactttcggaggcctggacgtagagatcattccccagattgagcgcagtcagctgcgtgagaaggcattgggccattataaggatattgcaaaacgcctgaataacattaacaaaacgattccatcttcgtggatctcgaatattgataaatataagaaaatttttagcgagaaatataattttgataaagataatacaggtaactttgtggttaacattgacaaattcaactccctttacagtgatttgacgaatgtaatgagcgaagttgtgtatagttcccaatacaacgttaagaatcgtacccattacttctctcgtcactacctgccggttttcgcgaacatccttgacgataatatttacactattcgtgacggctttaacttgaccaacaagggcttcaatattgaaaattcaggccagaacattgaacgcaacccggccttgcagaaactgtcgagtgaatccgtggttgacctgtttaccaaagtctgcGTCGACaacaacaataacaacaacaataacaacaacgacgatgacgataaaCATGTGGATGCGATCTTTACCCAGAGCTATCGGAAGGTTTTGGCCCAACTGTCTGCTCGTAAACTTTTACAGGACATTCTGAACAGAGCAgaagcggcagccaaagaagcagccgctaaggcgctgcagtgtattaaagtgaaaaacaatcggctgccttatgtagcagataaagatagcattagtcaggagattttcgaaaataaaattatcactgacgaaaccaatgttcagaattattcagataaattttcactggacgaaagcatcttagatggccaagttccgattaacccggaaattgttgatccgttactgccgaacgtgaatatggaaccgttaaacctccctggcgaagagatcgtattttatgatgacattacgaaatatgtggactaccttaattcttattactatttggaaagccagaaactgtccaataacgtggaaaacattactctgaccacaagcgtggaagaggctttaggctactcaaataagatttataccttcctcccgtcgctggcggaaaaagtaaataaaggtgtgcaggctggtctgttcctcaactgggcgaatgaagttgtcgaagactttaccacgaatattatgaaaaaggataccctggataaaatctccgacgtctcggttattatcccatatattggccctgcgttaaatatcggtaatagtgcgctgcgggggaattttaaccaggcctttgctaccgcgggcgtcgcgttcctcctggagggctttcctgaatttactatcccggcgctcggtgtttttacattttactcttccatccaggagcgtgagaaaattatcaaaaccatcgaaaactgcctggagcagcgggtgaaacgctggaaagattcttatcaatggatggtgtcaaactggttatctcgcatcacgacccaattcaaccatattaattaccagatgtatgatagtctgtcgtaccaagctgacgccattaaagccaaaattgatctggaatataaaaagtactctggtagcgataaggagaacatcaaaagccaggtggagaaccttaagaatagtctggatgtgaaaatctctgaagctatgaataacattaacaaattcattcgtgaatgttcggtgacgtacctgttcaagaatatgctgccaaaagttattgatgaactgaataaatttgatctgcgtaccaaaaccgaacttatcaacctcatcgactcccacaacattatccttgtgggcgaagtggatcgtctgaaggccaaagtaaacgagagctttgaaaatacgatgccgtttaatattttttcatataccaataactccttgctgaaagatatcatcaatgaatatttcaatctagaataatgaaagctt
配列番号 ３３ CP-qGHRH29-D融合物
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDNNNNNNNNNNDDDDKHVDAIFTQSYRKVLAQLSARKLLQDILNRAEAAAKEAAAKALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ３４ CP-qGHRH-A融合物
EFVNKQFNYKDPVNGVDIAYIKIPNAGQMQPVKAFKIHNKIWVIPERDTFTNPEEGDLNPPPEAKQVPVSYYDSTYLSTDNEKDNYLKGVTKLFERIYSTDLGRMLLTSIVRGIPFWGGSTIDTELKVIDTNCINVIQPDGSYRSEELNLVIIGPSADIIQFECKSFGHEVLNLTRNGYGSTQYIRFSPDFTFGFEESLEVDTNPLLGAGKFATDPAVTLAHELIHAGHRLYGIAINPNRVFKVNTNAYYEMSGLEVSFEELRTFGGHDAKFIDSLQENEFRLYYYNKFKDIASTLNKAKSIVGTTASLQYMKNVFKEKYLLSEDTSGKFSVDKLKFDKLYKMLTEIYTEDNFVKFFKVLNRKTYLNFDKAVFKINIVPKVNYTIYDGFNLRNTNLAANFNGQNTEINNMNFTKLKNFTGLFEFYKLLCVDGIITSKTKSLIEGRHVDAIFTQSYRKVLAQLSARKLLQDILNRQQGERNQEQGALAGGGGSGGGGSGGGGSALVLQCIKVNNWDLFFSPSEDNFTNDLNKGEEITSDTNIEAAEENISLDLIQQYYLTFNFDNEPENISIENLSSDIIGQLELMPNIERFPNGKKYELDKYTMFHYLRAQEFEHGKSRIALTNSVNEALLNPSRVYTFFSSDYVKKVNKATEAAMFLGWVEQLVYDFTDETSEVSTTDKIADITIIIPYIGPALNIGNMLYKDDFVGALIFSGAVILLEFIPEIAIPVLGTFALVSYIANKVLTVQTIDNALSKRNEKWDEVYKYIVTNWLAKVNTQIDLIRKKMKEALENQAEATKAIINYQYNQYTEEEKNNINFNIDDLSSKLNESINKAMININKFLNQCSVSYLMNSMIPYGVKRLEDFDASLKDALLKYIYDNRGTLIGQVDRLKDKVNNTLSTDIPFQLSKYVDNQRLLST
配列番号 ３５ CP-qGHRH-C融合物
PITINNFNYSDPVDNKNILYLDTHLNTLANEPEKAFRITGNIWVIPDRFSRNSNPNLNKPPRVTSPKSGYYDPNYLSTDSDKDTFLKEIIKLFKRINSREIGEELIYRLSTDIPFPGNNNTPINTFDFDVDFNSVDVKTRQGNNWVKTGSINPSVIITGPRENIIDPETSTFKLTNNTFAAQEGFGALSIISISPRFMLTYSNATNDVGEGRFSKSEFCMDPILILMHELNHAMHNLYGIAIPNDQTISSVTSNIFYSQYNVKLEYAEIYAFGGPTIDLIPKSARKYFEEKALDYYRSIAKRLNSITTANPSSFNKYIGEYKQKLIRKYRFVVESSGEVTVNRNKFVELYNELTQIFTEFNYAKIYNVQNRKIYLSNVYTPVTANILDDNVYDIQNGFNIPKSNLNVLFMGQNLSRNPALRKVNPENMLYLFTKFCVDAIDGRHVDAIFTQSYRKVLAQLSARKLLQDILNRQQGERNQEQGALAGGGGSGGGGSGGGGSALVLQCRELLVKNTDLPFIGDISDVKTDIFLRKDINEETEVIYYPDNVSVDQVILSKNTSEHGQLDLLYPSIDSESEILPGENQVFYDNRTQNVDYLNSYYYLESQKLSDNVEDFTFTRSIEEALDNSAKVYTYFPTLANKVNAGVQGGLFLMWANDVVEDFTTNILRKDTLDKISDVSAIIPYIGPALNISNSVRRGNFTEAFAVTGVTILLEAFPEFTIPALGAFVIYSKVQERNEIIKTIDNCLEQRIKRWKDSYEWMMGTWLSRIITQFNNISYQMYDSLNYQAGAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNEFDRNTKAKLINLIDSHNIILVGEVDKLKAKVNNSFQNTIPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ３６ CP-qGHRH-D融合物
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKHVDAIFTQSYRKVLAQLSARKLLQDILNRQQGERNQEQGAALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ３７ CP-qGHRH-D N10-PL5融合物
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDNNNNNNNNNNDDDDKHVDAIFTQSYRKVLAQLSARKLLQDILNRQQGERNQEQGAPAPAPLQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ３８ CP-qGHRH-D N10-HX12融合物
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDNNNNNNNNNNDDDDKHVDAIFTQSYRKVLAQLSARKLLQDILNRQQGERNQEQGAEAAAKEAAAKALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ３９ CP-SST28-D融合物
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKSANSNPAMAPRERKAGCKNFFWKTFTSCALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ４０ CP-SST14-D融合物
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKAGCKNFFWKTFTSCALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ４１ IgA-CP-SST14-HNtet融合物
ESNQPEKNGTATKPENSGNTTSENGQTEPEKKLELRNVSDIELYSQTNGTYRQHVSLDGIPENTDTYFVKVKSSAFKDVYIPVASITEEKRNGQSVYKITAKAEKLQQELENKYVDNFTFYLDKKAKEENTNFTSFSNLVKAINQNPSGTYHLAASLNANEVELGPDERSYIKDTFTGRLIGEKDGKNYAIYNLKKPLFENLSGATVEKLSLKNVAISGKNDIGSLANEATNGTKIKQVHVDGCVDGIITSKTKSDDDDKAGCKNFFWKTFTSCALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKIKNEDLTFIAEKNSFSEEPFQDEIVSYNTKNKPLNFNYSLDKIIVDYNLQSKITLPNDRTTPVTKGIPYAPEYKSNAASTIEIHNIDDNTIYQYLYAQKSPTTLQRITMTNSVDDALINSTKIYSYFPSVISKVNQGAQGILFLQWVRDIIDDFTNESSQKTTIDKISDVSTIVPYIGPALNIVKQGYEGNFIGALETTGVVLLLEYIPEITLPVIAALSIAESSTQKEKIIKTIDNFLEKRYEKWIEVYKLVKAKWLGTVNTQFQKRSYQMYRSLEYQVDAIKKIIDYEYKIYSGPDKEQIADEINNLKNKLEEKANKAMININIFMRESSRSFLVNQMINEAKKQLLEFDTQSKNILMQYIKANSKFIGITELKKLESKINKVFSTPIPFSYSKNLDCWVDNEEDIDV
配列番号 ４２ CP-UTS-A融合物
EFVNKQFNYKDPVNGVDIAYIKIPNAGQMQPVKAFKIHNKIWVIPERDTFTNPEEGDLNPPPEAKQVPVSYYDSTYLSTDNEKDNYLKGVTKLFERIYSTDLGRMLLTSIVRGIPFWGGSTIDTELKVIDTNCINVIQPDGSYRSEELNLVIIGPSADIIQFECKSFGHEVLNLTRNGYGSTQYIRFSPDFTFGFEESLEVDTNPLLGAGKFATDPAVTLAHELIHAGHRLYGIAINPNRVFKVNTNAYYEMSGLEVSFEELRTFGGHDAKFIDSLQENEFRLYYYNKFKDIASTLNKAKSIVGTTASLQYMKNVFKEKYLLSEDTSGKFSVDKLKFDKLYKMLTEIYTEDNFVKFFKVLNRKTYLNFDKAVFKINIVPKVNYTIYDGFNLRNTNLAANFNGQNTEINNMNFTKLKNFTGLFEFYKLLCVDGGGGSADDDDKNDDPPISIDLTFHLLRNMIEMARIENEREQAGLNRKYLDEVALAGGGGSGGGGSGGGGSALVLQCIKVNNWDLFFSPSEDNFTNDLNKGEEITSDTNIEAAEENISLDLIQQYYLTFNFDNEPENISIENLSSDIIGQLELMPNIERFPNGKKYELDKYTMFHYLRAQEFEHGKSRIALTNSVNEALLNPSRVYTFFSSDYVKKVNKATEAAMFLGWVEQLVYDFTDETSEVSTTDKIADITIIIPYIGPALNIGNMLYKDDFVGALIFSGAVILLEFIPEIAIPVLGTFALVSYIANKVLTVQTIDNALSKRNEKWDEVYKYIVTNWLAKVNTQIDLIRKKMKEALENQAEATKAIINYQYNQYTEEEKNNINFNIDDLSSKLNESINKAMININKFLNQCSVSYLMNSMIPYGVKRLEDFDASLKDALLKYIYDNRGTLIGQVDRLKDKVNNTLSTDIPFQLSKYVDNQRLLST
配列番号 ４３ CP-hTGF-B GS10-NS融合物
PVTINNFNYNDPIDNNNIIMMEPPFARGTGRYYKAFKITDRIWIIPERYTFGYKPEDFNKSSGIFNRDVCEYYDPDYLNTNDKKNIFLQTMIKLFNRIKSKPLGEKLLEMIINGIPYLGDRRVPLEEFNTNIASVTVNKLISNPGEVERKKGIFANLIIFGPGPVLNENETIDIGIQNHFASREGFGGIMQMKFCPEYVSVFNNVQENKGASIFNRRGYFSDPALILMHELIHVLHGLYGIKVDDLPIVPNEKKFFMQSTDAIQAEELYTFGGQDPSIITPSTDKSIYDKVLQNFRGIVDRLNKVLVCISDPNININIYKNKFKDKYKFVEDSEGKYSIDVESFDKLYKSLMFGFTETNIAENYKIKTRASYFSDSLPPVKIKNLLDNEIYTIEEGFNISDKDMEKEYRGQNKAINKQAYEEISKEHLAVYKIQMCVDGGGGSGGGGSADDDDKVVSHFNDCPDSHTQFCFHGTCRFLVQEDKPACVCHSGYVGARCEHADLLAALAKRLVLQCIDVDNEDLFFIADKNSFSDDLSKNERIEYNTQSNYIENDFPINELILDTDLISKIELPSENTESLTDFNVDVPVYEKQPAIKKIFTDENTIFQYLYSQTFPLDIRDISLTSSFDDALLFSNKVYSFFSMDYIKTANKVVEAGLFAGWVKQIVNDFVIEANKSNTMDAIADISLIVPYIGLALNVGNETAKGNFENAFEIAGASILLEFIPELLIPVVGAFLLESYIDNKNKIIKTIDNALTKRNEKWSDMYGLIVAQWLSTVNTQFYTIKEGMYKALNYQAQALEEIIKYRYNIYSEKEKSNINIDFNDINSKLNEGINQAIDNINNFINGCSVSYLMKKMIPLAVEKLLDFDNTLKKNLLNYIDENKLYLIGSAEYEKSKVNKYLKTIMPFDLSIYTNDTILIEMFNKYNS
配列番号 ４４ CP-hTGF-B GS10-GS20融合物
PVTINNFNYNDPIDNNNIIMMEPPFARGTGRYYKAFKITDRIWIIPERYTFGYKPEDFNKSSGIFNRDVCEYYDPDYLNTNDKKNIFLQTMIKLFNRIKSKPLGEKLLEMIINGIPYLGDRRVPLEEFNTNIASVTVNKLISNPGEVERKKGIFANLIIFGPGPVLNENETIDIGIQNHFASREGFGGIMQMKFCPEYVSVFNNVQENKGASIFNRRGYFSDPALILMHELIHVLHGLYGIKVDDLPIVPNEKKFFMQSTDAIQAEELYTFGGQDPSIITPSTDKSIYDKVLQNFRGIVDRLNKVLVCISDPNININIYKNKFKDKYKFVEDSEGKYSIDVESFDKLYKSLMFGFTETNIAENYKIKTRASYFSDSLPPVKIKNLLDNEIYTIEEGFNISDKDMEKEYRGQNKAINKQAYEEISKEHLAVYKIQMCVDGGGGSGGGGSADDDDKVVSHFNDCPDSHTQFCFHGTCRFLVQEDKPACVCHSGYVGARCEHADLLAALAGGGGSGGGGSGGGGSALVLQCIDVDNEDLFFIADKNSFSDDLSKNERIEYNTQSNYIENDFPINELILDTDLISKIELPSENTESLTDFNVDVPVYEKQPAIKKIFTDENTIFQYLYSQTFPLDIRDISLTSSFDDALLFSNKVYSFFSMDYIKTANKVVEAGLFAGWVKQIVNDFVIEANKSNTMDAIADISLIVPYIGLALNVGNETAKGNFENAFEIAGASILLEFIPELLIPVVGAFLLESYIDNKNKIIKTIDNALTKRNEKWSDMYGLIVAQWLSTVNTQFYTIKEGMYKALNYQAQALEEIIKYRYNIYSEKEKSNINIDFNDINSKLNEGINQAIDNINNFINGCSVSYLMKKMIPLAVEKLLDFDNTLKKNLLNYIDENKLYLIGSAEYEKSKVNKYLKTIMPFDLSIYTNDTILIEMFNKYNS
配列番号 ４５ LHN/Aの蛋白質配列
EFVNKQFNYKDPVNGVDIAYIKIPNAGQMQPVKAFKIHNKIWVIPERDTFTNPEEGDLNPPPEAKQVPVSYYDSTYLSTDNEKDNYLKGVTKLFERIYSTDLGRMLLTSIVRGIPFWGGSTIDTELKVIDTNCINVIQPDGSYRSEELNLVIIGPSADIIQFECKSFGHEVLNLTRNGYGSTQYIRFSPDFTFGFEESLEVDTNPLLGAGKFATDPAVTLAHELIHAGHRLYGIAINPNRVFKVNTNAYYEMSGLEVSFEELRTFGGHDAKFIDSLQENEFRLYYYNKFKDIASTLNKAKSIVGTTASLQYMKNVFKEKYLLSEDTSGKFSVDKLKFDKLYKMLTEIYTEDNFVKFFKVLNRKTYLNFDKAVFKINIVPKVNYTIYDGFNLRNTNLAANFNGQNTEINNMNFTKLKNFTGLFEFYKLLCVDGIITSKTKSDDDDKNKALNLQCIKVNNWDLFFSPSEDNFTNDLNKGEEITSDTNIEAAEENISLDLIQQYYLTFNFDNEPENISIENLSSDIIGQLELMPNIERFPNGKKYELDKYTMFHYLRAQEFEHGKSRIALTNSVNEALLNPSRVYTFFSSDYVKKVNKATEAAMFLGWVEQLVYDFTDETSEVSTTDKIADITIIIPYIGPALNIGNMLYKDDFVGALIFSGAVILLEFIPEIAIPVLGTFALVSYIANKVLTVQTIDNALSKRNEKWDEVYKYIVTNWLAKVNTQIDLIRKKMKEALENQAEATKAIINYQYNQYTEEEKNNINFNIDDLSSKLNESINKAMININKFLNQCSVSYLMNSMIPYGVKRLEDFDASLKDALLKYIYDNRGTLIGQVDRLKDKVNNTLSTDIPFQLSKYVDNQRLLST
配列番号 ４６ LHN/Bの蛋白質配列
PVTINNFNYNDPIDNNNIIMMEPPFARGTGRYYKAFKITDRIWIIPERYTFGYKPEDFNKSSGIFNRDVCEYYDPDYLNTNDKKNIFLQTMIKLFNRIKSKPLGEKLLEMIINGIPYLGDRRVPLEEFNTNIASVTVNKLISNPGEVERKKGIFANLIIFGPGPVLNENETIDIGIQNHFASREGFGGIMQMKFCPEYVSVFNNVQENKGASIFNRRGYFSDPALILMHELIHVLHGLYGIKVDDLPIVPNEKKFFMQSTDAIQAEELYTFGGQDPSIITPSTDKSIYDKVLQNFRGIVDRLNKVLVCISDPNININIYKNKFKDKYKFVEDSEGKYSIDVESFDKLYKSLMFGFTETNIAENYKIKTRASYFSDSLPPVKIKNLLDNEIYTIEEGFNISDKDMEKEYRGQNKAINKQAYEEISKEHLAVYKIQMCVDEEKLYDDDDKDRWGSSLQCIDVDNEDLFFIADKNSFSDDLSKNERIEYNTQSNYIENDFPINELILDTDLISKIELPSENTESLTDFNVDVPVYEKQPAIKKIFTDENTIFQYLYSQTFPLDIRDISLTSSFDDALLFSNKVYSFFSMDYIKTANKVVEAGLFAGWVKQIVNDFVIEANKSNTMDAIADISLIVPYIGLALNVGNETAKGNFENAFEIAGASILLEFIPELLIPVVGAFLLESYIDNKNKIIKTIDNALTKRNEKWSDMYGLIVAQWLSTVNTQFYTIKEGMYKALNYQAQALEEIIKYRYNIYSEKEKSNINIDFNDINSKLNEGINQAIDNINNFINGCSVSYLMKKMIPLAVEKLLDFDNTLKKNLLNYIDENKLYLIGSAEYEKSKVNKYLKTIMPFDLSIYTNDTILIEMFNKYNS
配列番号 ４７ LHN/Cの蛋白質配列
PITINNFNYSDPVDNKNILYLDTHLNTLANEPEKAFRITGNIWVIPDRFSRNSNPNLNKPPRVTSPKSGYYDPNYLSTDSDKDTFLKEIIKLFKRINSREIGEELIYRLSTDIPFPGNNNTPINTFDFDVDFNSVDVKTRQGNNWVKTGSINPSVIITGPRENIIDPETSTFKLTNNTFAAQEGFGALSIISISPRFMLTYSNATNDVGEGRFSKSEFCMDPILILMHELNHAMHNLYGIAIPNDQTISSVTSNIFYSQYNVKLEYAEIYAFGGPTIDLIPKSARKYFEEKALDYYRSIAKRLNSITTANPSSFNKYIGEYKQKLIRKYRFVVESSGEVTVNRNKFVELYNELTQIFTEFNYAKIYNVQNRKIYLSNVYTPVTANILDDNVYDIQNGFNIPKSNLNVLFMGQNLSRNPALRKVNPENMLYLFTKFCVDAIDGRSLYNKTLQCRELLVKNTDLPFIGDISDVKTDIFLRKDINEETEVIYYPDNVSVDQVILSKNTSEHGQLDLLYPSIDSESEILPGENQVFYDNRTQNVDYLNSYYYLESQKLSDNVEDFTFTRSIEEALDNSAKVYTYFPTLANKVNAGVQGGLFLMWANDVVEDFTTNILRKDTLDKISDVSAIIPYIGPALNISNSVRRGNFTEAFAVTGVTILLEAFPEFTIPALGAFVIYSKVQERNEIIKTIDNCLEQRIKRWKDSYEWMMGTWLSRIITQFNNISYQMYDSLNYQAGAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNEFDRNTKAKLINLIDSHNIILVGEVDKLKAKVNNSFQNTIPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ４８ LHN/Dの蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDKSEEKLYDDDDKDRWGSSLQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ４９ IgA-HNtetの蛋白質配列
ESNQPEKNGTATKPENSGNTTSENGQTEPEKKLELRNVSDIELYSQTNGTYRQHVSLDGIPENTDTYFVKVKSSAFKDVYIPVASITEEKRNGQSVYKITAKAEKLQQELENKYVDNFTFYLDKKAKEENTNFTSFSNLVKAINQNPSGTYHLAASLNANEVELGPDERSYIKDTFTGRLIGEKDGKNYAIYNLKKPLFENLSGATVEKLSLKNVAISGKNDIGSLANEATNGTKIKQVHVDGCVDGIITSKTKSDDDDKNKALNLQCIKIKNEDLTFIAEKNSFSEEPFQDEIVSYNTKNKPLNFNYSLDKIIVDYNLQSKITLPNDRTTPVTKGIPYAPEYKSNAASTIEIHNIDDNTIYQYLYAQKSPTTLQRITMTNSVDDALINSTKIYSYFPSVISKVNQGAQGILFLQWVRDIIDDFTNESSQKTTIDKISDVSTIVPYIGPALNIVKQGYEGNFIGALETTGVVLLLEYIPEITLPVIAALSIAESSTQKEKIIKTIDNFLEKRYEKWIEVYKLVKAKWLGTVNTQFQKRSYQMYRSLEYQVDAIKKIIDYEYKIYSGPDKEQIADEINNLKNKLEEKANKAMININIFMRESSRSFLVNQMINEAKKQLLEFDTQSKNILMQYIKANSKFIGITELKKLESKINKVFSTPIPFSYSKNLDCWVDNEEDIDV
配列番号 ５０ 合成オクトレオチドペプチド
Cys-Dphe-Cys-Phe-Dtrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol
配列番号 ５１ 合成GHRHアゴニストペプチド
HIS-ALA-ASP-ALA-ILE-PHE-THR-ASN-SER-TYR-ARG-LYS-VAL-LEU-GLY-GLN-LEU-SER-ALA-ARG-LYS-LEU-LEU-GLN-ASP-ILE-NLE-SER-ARG-CYS
配列番号 ５２ 合成GHRHアンタゴニストペプチド
PhAc-Tyr-D-Arg-Asp-Ala-Ile-Phe(4-Cl)-Thr-Ala-Har-Tyr(Me)-His-Lys-Val-Leu
-Abu-Gln-Leu-Ser-Ala-His-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-D-Arg-Har-CYS
配列番号 ５３ CP-MCH-D融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKDFDMLRCMLGRVYRPCWQVALAKRLVLQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ５４ KISS-D融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDKSEEKLYDDDDKDRWGSSLQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNLEGGGGSGGGGSGGGGSALVYNWNSFGLRFG
配列番号 ５５ PrRP-A融合物の蛋白質配列
EFVNKQFNYKDPVNGVDIAYIKIPNAGQMQPVKAFKIHNKIWVIPERDTFTNPEEGDLNPPPEAKQVPVSYYDSTYLSTDNEKDNYLKGVTKLFERIYSTDLGRMLLTSIVRGIPFWGGSTIDTELKVIDTNCINVIQPDGSYRSEELNLVIIGPSADIIQFECKSFGHEVLNLTRNGYGSTQYIRFSPDFTFGFEESLEVDTNPLLGAGKFATDPAVTLAHELIHAGHRLYGIAINPNRVFKVNTNAYYEMSGLEVSFEELRTFGGHDAKFIDSLQENEFRLYYYNKFKDIASTLNKAKSIVGTTASLQYMKNVFKEKYLLSEDTSGKFSVDKLKFDKLYKMLTEIYTEDNFVKFFKVLNRKTYLNFDKAVFKINIVPKVNYTIYDGFNLRNTNLAANFNGQNTEINNMNFTKLKNFTGLFEFYKLLCVDGIITSKTKSDDDDKNKALNLQCIKVNNWDLFFSPSEDNFTNDLNKGEEITSDTNIEAAEENISLDLIQQYYLTFNFDNEPENISIENLSSDIIGQLELMPNIERFPNGKKYELDKYTMFHYLRAQEFEHGKSRIALTNSVNEALLNPSRVYTFFSSDYVKKVNKATEAAMFLGWVEQLVYDFTDETSEVSTTDKIADITIIIPYIGPALNIGNMLYKDDFVGALIFSGAVILLEFIPEIAIPVLGTFALVSYIANKVLTVQTIDNALSKRNEKWDEVYKYIVTNWLAKVNTQIDLIRKKMKEALENQAEATKAIINYQYNQYTEEEKNNINFNIDDLSSKLNESINKAMININKFLNQCSVSYLMNSMIPYGVKRLEDFDASLKDALLKYIYDNRGTLIGQVDRLKDKVNNTLSTDIPFQLSKYVDNQRLLSTLEGGGGSGGGGSGGGGSALVTPDINPAWYASRGIRPVGRFG
配列番号 ５６ CP-CRH-C融合物の蛋白質配列
PITINNFNYSDPVDNKNILYLDTHLNTLANEPEKAFRITGNIWVIPDRFSRNSNPNLNKPPRVTSPKSGYYDPNYLSTDSDKDTFLKEIIKLFKRINSREIGEELIYRLSTDIPFPGNNNTPINTFDFDVDFNSVDVKTRQGNNWVKTGSINPSVIITGPRENIIDPETSTFKLTNNTFAAQEGFGALSIISISPRFMLTYSNATNDVGEGRFSKSEFCMDPILILMHELNHAMHNLYGIAIPNDQTISSVTSNIFYSQYNVKLEYAEIYAFGGPTIDLIPKSARKYFEEKALDYYRSIAKRLNSITTANPSSFNKYIGEYKQKLIRKYRFVVESSGEVTVNRNKFVELYNELTQIFTEFNYAKIYNVQNRKIYLSNVYTPVTANILDDNVYDIQNGFNIPKSNLNVLFMGQNLSRNPALRKVNPENMLYLFTKFCVDGGGGSADDDDKSEEPPISLDLTFHLLREVLEMARAEQLAQQAHSNRKLMEIIALAGGGGSGGGGSGGGGSALVLQCRELLVKNTDLPFIGDISDVKTDIFLRKDINEETEVIYYPDNVSVDQVILSKNTSEHGQLDLLYPSIDSESEILPGENQVFYDNRTQNVDYLNSYYYLESQKLSDNVEDFTFTRSIEEALDNSAKVYTYFPTLANKVNAGVQGGLFLMWANDVVEDFTTNILRKDTLDKISDVSAIIPYIGPALNISNSVRRGNFTEAFAVTGVTILLEAFPEFTIPALGAFVIYSKVQERNEIIKTIDNCLEQRIKRWKDSYEWMMGTWLSRIITQFNNISYQMYDSLNYQAGAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNEFDRNTKAKLINLIDSHNIILVGEVDKLKAKVNNSFQNTIPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ５７ CP-HS_GHRH_1-27-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ５８ CP-HS_GHRH_1-28-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMSALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ５９ CP-HS_GHRH_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMSRALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ６０ CP-HS_GHRH_1-44-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMSRQQGESNQERGARARLALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ６１ CP-HS_GHRH_1-40-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMSRQQGESNQERGALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ６２ CP-HS_GHRH_Ala9-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFTNAYRKVLGQLSARKLLQDIMSRALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ６３ CP-HS_GHRH_Ala22-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFTNSYRKVLGQLSARKALQDIMSRALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ６４ CP-HS_GHRH_Ala8_Lys11_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFTASYKKVLGQLSARKLLQDIMSRALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ６５ CP-HS_GHRH_Ala8_Lys11_Arg12_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFTASYKRVLGQLSARKLLQDIMSRALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ６６ CP-HS_GHRH_Ala8_Asn11_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFTASYNKVLGQLSARKLLQDIMSRALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ６７ CP-HS_GHRH_Ala8_Lys20_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFTASYRKVLGQLSAKKLLQDIMSRALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ６８ CP-HS_GHRH_Ala8_Lys11_Lys20_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFTASYKKVLGQLSAKKLLQDIMSRALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ６９ CP-HS_GHRH_Ala8_Asn20_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFTASYRKVLGQLSANKLLQDIMSRALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ７０ CP-HS_GHRH_Ala8_Asn12_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFTASYRNVLGQLSARKLLQDIMSRALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ７１ CP-HS_GHRH_Ala8_Asn21_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFTASYRKVLGQLSARNLLQDIMSRALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ７２ CP-HS_GHRH_Ala8_Glu_7_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFEASYRKVLGQLSARKLLQDIMSRALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ７３ CP-HS_GHRH_Ala8_Glu_10_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFTASERKVLGQLSARKLLQDIMSRALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ７４ CP-HS_GHRH_Ala8_Glu_13_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFTASYRKELGQLSARKLLQDIMSRALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ７５ CP-HS_GHRH_Ala8-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFTASYRKVLGQLSARKLLQDIMSRALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ７６ CP-HS_GHRH_Glu8_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFTESYRKVLGQLSARKLLQDIMSRALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ７７ CP-HS_GHRH_Ala15_1-27-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFTNSYRKVLAQLSARKLLQDIMALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ７８ CP-HS_GHRH_Ala15-LHD融合物の蛋白質配列
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配列番号 ７９ CP-HS_GHRH_Ala8_Ala15_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
TWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDGIITSKTKSDDDDKYADAIFTASYRKVLAQLSARKLLQDIMSRALAGGGGSGGGGSGGGGSALALQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFN
配列番号 ８０ CP-HS_GHRH_Ala8_9_15_22_27-LHD融合物の蛋白質配列
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配列番号 ８１ CP-HS_GHRH_Ala8_9_15_22-LHD融合物の蛋白質配列
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配列番号 ８２ CP-HS_GHRH_HVQAL_1-32-LHD融合物の蛋白質配列
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配列番号 ８３ CP-HS_GHRH_HVSAL_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
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配列番号 ８４ CP-HS_GHRH_HVTAL_1-29-LHD融合物の蛋白質配列
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配列番号 ８５ CP-HS_GHRH_QALN-LHD融合物の蛋白質配列
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配列番号 ８６ CP-HS_GHRH_QAL-LHD融合物の蛋白質配列
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配列番号 ８７ CP-hGHRH29 N8A M27L-LHD融合物の蛋白質配列
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Claims (11)

  1. 正常な、無病の、非癌下垂体細胞からの成長ホルモンの分泌を阻害することによって抑制される癌を処置するための、以下のa.、b.、およびc.を含み、クロストリジウム菌神経毒素のC末端ペプチド部分(HCC)の部分を欠き、かつ、神経筋接合部の神経末端へ結合することが出来ないポリペプチドを含む医薬:
    a. 正常な、無病の、非癌下垂体細胞においてエキソサイトーシス融合装置の蛋白質を切断し得る、非細胞毒性プロテアーゼ、
    b. 正常な、無病の、非癌下垂体細胞上の結合部位に結合するターゲティング部分(TM)であって、該結合部位が、該正常な、無病の、非癌下垂体細胞内でエンドサイトーシスを受けてエンドソーム内に取り込まれ得る、TM、
    ここで、前記TMは、成長ホルモン放出ホルモン(GHRH)ペプチド、レプチンペプチド、グレリンペプチド、ソマトスタチン(SST)ペプチド、コルチスタチンペプチド、インスリン様成長因子(IGF)ペプチド、形質転換成長因子(TGF)ペプチド、VIP-グルカゴン-GRF-セクレチンスーパーファミリーペプチド、PACAPペプチド、血管作動性腸管ペプチド(VIP)、オレキシンペプチド、インターロイキンペプチド、神経成長因子(NGF)ペプチド、血管内皮成長因子(VEGF)ペプチド、甲状腺ホルモンペプチド、エストロゲンペプチド、ErbBペプチド、上皮成長因子(EGF)ペプチド、EGFおよびTGF-αキメラペプチド、アンフィレギュリンペプチド、ベータセルリンペプチド、エピゲンペプチド、エピレギュリンペプチド、ヘパリン結合EGF(HB-EGF)ペプチド、ボンベシンペプチド、ウロテンシンペプチド、メラニン凝集ホルモン(MCH)ペプチド、プロラクチン放出ペプチド、キスペプチン-10ペプチド、キスペプチン-54ペプチド、コルチコトロピン放出ホルモンペプチド、ウロコルチン1ペプチド、およびウロコルチン2ペプチドからなる群より選択される、および
    c. 該正常な、無病の、非癌下垂体細胞のエンドソーム内から、エンドソーム膜を横切り、そして細胞質ゾル内に、該プロテアーゼをトランスロケートする、トランスロケーションドメイン、
    ここで、前記トランスロケーションドメインは、ジフテリア菌毒素のトランスロケーションドメイン、シュードモナス菌外毒素A型のトランスロケーションドメイン、インフルエンザウイルス血球凝集素のトランスロケーション、セムリキ森林ウイルス(SFV)の融合性ペプチドのトランスロケーションドメイン、水疱性口内炎ウイルス(VSV)グリコプロテインGのトランスロケーションドメイン、SERウイルスF蛋白質のトランスロケーションドメイン、泡沫状ウイルスエンベロープ糖蛋白質のトランスロケーションドメイン、およびクロストリジウム菌神経毒素トランスロケーションドメインからなる群から選択される。
  2. 前記TMが、成長ホルモン放出ホルモン(GHRH)レセプター、レプチン(OB)レセプター、グレリンレセプター、ソマトスタチン(sst)レセプター、インスリン成長因子(IGF)レセプター、ErbBレセプター、VIP-グルカゴン-GRF-セクレチンスーパーファミリーレセプター、オレキシン(OX)レセプター、インターロイキン(IL)レセプター、神経成長因子(NTR)レセプター、血管内皮成長因子(VEGF)レセプター、ボンベシンレセプター、ウロテンシンレセプター、メラニン凝集ホルモンレセプター1、プロラクチン放出ホルモンレセプター、KiSS-1レセプター、またはコルチコトロピン放出因子レセプター1からなる群より選択されるレセプターに結合する、請求項1記載の医薬。
  3. 以下のa.、b.、およびc.を含み、配列番号:8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87のいずれか1つと、少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、クロストリジウム菌神経毒素のC末端ペプチド部分(HCC)の部分を欠き、かつ、神経筋接合部の神経末端へ結合することが出来ないポリペプチド:
    a. 正常な、無病の、非癌下垂体細胞においてエキソサイトーシス融合装置の蛋白質を切断し得る、非細胞毒性プロテアーゼ、
    ここで、前記非細胞毒性プロテアーゼはクロストリジウム菌神経毒素エンドペプチダーゼまたはIgAプロテアーゼである、
    b. 正常な、無病の、非癌下垂体細胞上の結合部位に結合するターゲティング部分(TM)であって、該結合部位が、該正常な、無病の、非癌下垂体細胞内でエンドサイトーシスを受けてエンドソーム内に取り込まれ得る、TM、
    ここで、前記TMは、成長ホルモン放出ホルモン(GHRH)ペプチド、レプチンペプチド、グレリンペプチド、ソマトスタチン(SST)ペプチド、コルチスタチンペプチド、インスリン様成長因子(IGF)ペプチド、形質転換成長因子(TGF)ペプチド、VIP-グルカゴン-GRF-セクレチンスーパーファミリーペプチド、PACAPペプチド、血管作動性腸管ペプチド(VIP)、オレキシンペプチド、インターロイキンペプチド、神経成長因子(NGF)ペプチド、血管内皮成長因子(VEGF)ペプチド、甲状腺ホルモンペプチド、エストロゲンペプチド、ErbBペプチド、上皮成長因子(EGF)ペプチド、EGFおよびTGF-αキメラペプチド、アンフィレギュリンペプチド、ベータセルリンペプチド、エピゲンペプチド、エピレギュリンペプチド、ヘパリン結合EGF(HB-EGF)ペプチド、ボンベシンペプチド、ウロテンシンペプチド、メラニン凝集ホルモン(MCH)ペプチド、プロラクチン放出ペプチド、キスペプチン-10ペプチド、キスペプチン-54ペプチド、コルチコトロピン放出ホルモンペプチド、ウロコルチン1ペプチド、およびウロコルチン2ペプチドからなる群より選択される、および
    c. 該正常な、無病の、非癌下垂体細胞のエンドソーム内から、エンドソーム膜を横切り、そして細胞質ゾル内に、該プロテアーゼをトランスロケートする、トランスロケーションドメイン、
    ここで、前記トランスロケーションドメインは、ジフテリア菌毒素のトランスロケーションドメイン、シュードモナス菌外毒素A型のトランスロケーションドメイン、インフルエンザウイルス血球凝集素のトランスロケーション、セムリキ森林ウイルス(SFV)の融合性ペプチドのトランスロケーションドメイン、水疱性口内炎ウイルス(VSV)グリコプロテインGのトランスロケーションドメイン、SERウイルスF蛋白質のトランスロケーションドメイン、泡沫状ウイルスエンベロープ糖蛋白質のトランスロケーションドメイン、およびクロストリジウム菌神経毒素トランスロケーションドメインからなる群から選択される。
  4. 前記TMが、成長ホルモン放出ホルモン(GHRH)レセプター、レプチン(OB)レセプター、グレリンレセプター、ソマトスタチン(sst)レセプター、インスリン成長因子(IGF)レセプター、ErbBレセプター、VIP-グルカゴン-GRF-セクレチンスーパーファミリーレセプター、オレキシン(OX)レセプター、インターロイキン(IL)レセプター、神経成長因子(NTR)レセプター、血管内皮成長因子(VEGF)レセプター、ボンベシンレセプター、ウロテンシンレセプター、メラニン凝集ホルモンレセプター1、プロラクチン放出ホルモンレセプター、KiSS-1レセプター、またはコルチコトロピン放出因子レセプター1からなる群より選択されるレセプターに結合する、請求項3記載のポリペプチド。
  5. 請求項3または4に記載のポリペプチドをコードする、核酸。
  6. 前記核酸が、配列番号:7および32のいずれか1つと、少なくとも90％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項3に記載のポリペプチドをコードする、核酸。
  7. 請求項3に記載のポリペプチドを、非細胞毒性プロテアーゼ成分とトランスロケーション成分との間に位置する認識部位(切断部位)にて当該ポリペプチドを切断するプロテアーゼと接触させる工程、および、
    当該ポリペプチドを、非細胞毒性プロテアーゼ成分とトランスロケーション成分とがジスルフィド結合によって一緒に連結されている二鎖ポリペプチドに変換する工程を含む、
    二鎖ポリペプチドを産生する方法。
  8. 以下のa.、b.、およびc.を含み、非細胞毒性プロテアーゼ成分とトランスロケーション成分とがジスルフィド結合によって一緒に連結されており、配列番号:8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87のいずれか1つと、少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、クロストリジウム菌神経毒素のC末端ペプチド部分(HCC)の部分を欠き、かつ、神経筋接合部の神経末端へ結合することが出来ない二鎖ポリペプチド:
    a. 正常な、無病の、非癌下垂体細胞においてエキソサイトーシス融合装置の蛋白質を切断し得る、非細胞毒性プロテアーゼ、
    ここで、前記非細胞毒性プロテアーゼはクロストリジウム菌神経毒素エンドペプチダーゼまたはIgAプロテアーゼである、
    b. 正常な、無病の、非癌下垂体細胞上の結合部位に結合するターゲティング部分(TM)であって、該結合部位が、該正常な、無病の、非癌下垂体細胞内でエンドサイトーシスを受けてエンドソーム内に取り込まれ得る、TM、
    ここで、前記TMは、成長ホルモン放出ホルモン(GHRH)ペプチド、レプチンペプチド、グレリンペプチド、ソマトスタチン(SST)ペプチド、コルチスタチンペプチド、インスリン様成長因子(IGF)ペプチド、形質転換成長因子(TGF)ペプチド、VIP-グルカゴン-GRF-セクレチンスーパーファミリーペプチド、PACAPペプチド、血管作動性腸管ペプチド(VIP)、オレキシンペプチド、インターロイキンペプチド、神経成長因子(NGF)ペプチド、血管内皮成長因子(VEGF)ペプチド、甲状腺ホルモンペプチド、エストロゲンペプチド、ErbBペプチド、上皮成長因子(EGF)ペプチド、EGFおよびTGF-αキメラペプチド、アンフィレギュリンペプチド、ベータセルリンペプチド、エピゲンペプチド、エピレギュリンペプチド、ヘパリン結合EGF(HB-EGF)ペプチド、ボンベシンペプチド、ウロテンシンペプチド、メラニン凝集ホルモン(MCH)ペプチド、プロラクチン放出ペプチド、キスペプチン-10ペプチド、キスペプチン-54ペプチド、コルチコトロピン放出ホルモンペプチド、ウロコルチン1ペプチド、およびウロコルチン2ペプチドからなる群より選択される、および
    c. 該正常な、無病の、非癌下垂体細胞のエンドソーム内から、エンドソーム膜を横切り、そして細胞質ゾル内に、該プロテアーゼをトランスロケートする、トランスロケーションドメイン、
    ここで、前記トランスロケーションドメインは、ジフテリア菌毒素のトランスロケーションドメイン、シュードモナス菌外毒素A型のトランスロケーションドメイン、インフルエンザウイルス血球凝集素のトランスロケーション、セムリキ森林ウイルス(SFV)の融合性ペプチドのトランスロケーションドメイン、水疱性口内炎ウイルス(VSV)グリコプロテインGのトランスロケーションドメイン、SERウイルスF蛋白質のトランスロケーションドメイン、泡沫状ウイルスエンベロープ糖蛋白質のトランスロケーションドメイン、およびクロストリジウム菌神経毒素トランスロケーションドメインからなる群から選択される。
  9. 前記癌が前立腺癌、肺癌、乳癌または結腸直腸癌からなる群より選択される1以上の癌である、請求項1または2に記載の医薬。
  10. 正常な、無病の、非癌下垂体細胞からの成長ホルモンの分泌を阻害することによって抑制される癌を処置するための、当該癌が前立腺癌、肺癌、乳癌または結腸直腸癌からなる群より選択される1以上の癌である、請求項8に記載の二鎖ポリペプチドを含む医薬。
  11. 前記非細胞毒性プロテアーゼがクロストリジウム菌神経毒素エンドペプチダーゼまたはIgAプロテアーゼである、請求項1、2、または9に記載の医薬。
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