SE448991B - Analogiforfarande for framstellning av n-acetyl-para-aminofenyl-n'acetyl-d,l-metionat som har analgetisk aktivitet - Google Patents

Description

443991 _,_ till ett i hög grad kemiskt reaktionsbenäget derivat, som kovalent bindes vid levercellproteinerna, när medlet ges i överdos, medan icke hepatotoxiska doser av N-acetyl-para-aminofenol ger upphov till ringa eller ingen kovalent bindning. Ehuru den exakta karaktären av den toxiska metaboliten icke är känd, förmodar man att den utgöres av en prekursor för cystein- och merkapturinsyra-konjugater av N-acetyl-para- aminofenol, eftersom utsöndring av dessa konjugat signifikant ökar i en överdossituation.

Cystein- och merkapturinsyra-konjugaten av N-acetyl-para- aminofenol bildas via aktiveringen av modermolekylen till en kemiskt obeständig mellanprodukt, som normalt omedelbart bildar ett komplex med reducerad glutation inom levercellen. I överdossituationen sker emellertid aktiveringen av N-acetyl-para-aminofenol snabbare än den hepatiska reducerade glutationen kan syntetiseras och medan nivån för glutation faller, kombineras en viss mängd av den reaktionsbenägna metaboliten i stället med hepatocytproteiner. Den mängd av den kemiskt obeständiga mellanprodukten som kovalent bindes vid hepatocyt-proteiner korrelerar med allvarligheten av den följande leverskadan.

I överdossituationen skulle det logiska motgiftet därför vara glutation själv, men vid exogen administration saknar glutation förmåga att penetrera cellerna och är därför ineffektiv, såvida icke massiva doser administreras. Det är därför vanligt att i stället be- handla överdoser med glutationsubstitut, sulfydrylföreningar, såsom cysteamin eller dimerkaprol. Det har vidare föreslagits att cysteamin kan inhibera oxidation av N-acetyl-para-aminofenol till den toxiska metaboliten.

Det finns även en mindre tillhands liggande väg att bemöta samma problem. Medan en N-acetyl-para-aminofenol-överdos medför glutationutarmning, bör det ihågkommas att glutationsyntes fortfarande äger rum, varför man genom att tillhandahålla en glutationprekursor skulle kunna befrämja glutationsyntesen för reduktion av den hastighet med vilken glutationnivåerna sjunker och på så sätt hindre glutation- nivåerna från att falla till den låga nivå vid vilken den aktiva N-acetyl-para-aminofenolmetaboliten börjar angripa heptatocytproteinerna.

Det är därför vanligt att behandla överdoser av N-acetyl-para-aminofenol genom att tillhandahålla en glutationprekursor, såsom metionin eller cystein.

Dessa konventionella metoder för behandling av överdoser av N-acetyl-para-aminofenol är emellertid ofta ineffektiva på grund av den tid som förlöper mellan intagning av N-acetyl-para-fenolöverdosen - _ 448 991 och intagningen av glutationsubstitutet eller glutationprekursorn i levercellerna.

Föreliggande uppfinning bygger delvis pà upptäckten att man genom kemisk kombination av en glutationprekursor med N-acetyl- -para-aminofenol synes kunna reducera risken för leverskada i över- dossituationer, ty intagandet av en överdos av N-acetyl-para-amino- fenyl för sedan i sig själv tillförsäkra att sulfydrylgrupperna erforderliga i en glutationprekursor samtidigt är närvarande i levern för befrämjande av áteruppbyggandet av glutationförràden.

Detta är icke den enda fördelen med uppfinningen, ehuru den är betydelsefull. Det har även visat sig att den kemiska kombi- nationen av N-acetyl-para-aminofenol med en glutationprekursor ger en mycket välsmakande arom, vida mer acceptabel än den extremt bittra smaken av den förra, och är vidare fri från den utpräglade oangenäma lukten av den förra.

Föreliggande uppfinning avser analogiförfarande för fram- ställning av N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionat som har analgetisk aktivitet, vilket förfarande utmärkes av att en förening med formeln CHSCONLO ou eller o2 o uoz I _ (mi) ' ' ' (m) omsättes med en N-acetyl~amino-tioalkansyra med den allmänna formeln NK..

CO-CH; P-s-(cagz-ca av) C0.0H vari X' är en metylgrupp eller med en blandad anhydrid därav med den allmänna formeln 443,991 NH-G}CH3 / XI-S-(CH2)2fCH \\\\\ g (II) co-o-Q- f o j-Ayi vari m är 0 eller l, Q betecknar antingen en kolatom C eller_en sulfinylgrupp, “Ayl" betecknar en alkylgrupp med 1-20 kolatomer, en arylgrupp med 6-20 kolatomer, en alkarylgrupp med 7-20 kolatomer eller en aralkylgrupp med 7-20 kolatomer, och X' är en metylgrupp och att, om så är nödvändigt, N02-gruppen i vilken som helst resulterande nitroförening reduceras till aminogruppen och sedan acetyleras, vilket sålunda ger det önskade N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl- -D,L-metionatet med formeln; cHfco-xx o-co-cx- (cn2)2-s-CH3 (I) Omsättningen mellan den blandade anhydriden II och N-acetyl-para-aminofenol kan och bör företrädesvis utföras i ett vattenfrítt inert organiskt lösningsmedel. För av i det följande nämnda skäl bör det observeras att denna reaktion med fördel vidare kan utföras i närvaro av en bas, såsom en tertiär amin, exempelvis trietylamin eller pyridin. _ De såsom utgàngsmaterial vid nämnda reaktion använda blandade anhydriderna med formeln II kan med fördel framställas i ett preliminärt steg genom omsättning av en N'-acetyl-amino-tioalkansyra eller ett blockerat derivat därav med den allmänna formeln NH-CO-CH5 X' -S-(CHZ) n-CH (IV) C0.0H 448 991 vari n är l eller 2 och X' är väte, en blockerande grupp, metyl eller en grupp med den allmänna formeln NH-CO-CHE C0.0H vari n' är l eller 2 och p är 0 eller 1, eller ett salt därav med en reaktionsbenägen organisk klorid med den allmänna formeln 0 _ H Ayl-fO]m-Q-Cl (V) . vari "Ayl" är alkyl med 1-20 kolatomer, aryl med 6-20 kolatomer, alkaryl med 7-20 kolatomereller aralkyl med 7-20 kolatomer, m är O eller l och Q är antingen en kolatom C eller, när m är O, en sulfinylgrupp S=O, i närvaro av en bas för bildning av den önskade motsvarande blanda- de anhydriden med formeln II.

Den reaktionsbenägna organiska kloriden med formeln V kan exempelvis utgöras av ett alkyl-, aralkyl-, aryl- eller alkaryl- klorformiat med den allmänna formeln 0 ll .ÄyIÅÉ-C-Cl (Va) eller en steriskt belastad alkyl-, aralkyl-, aryl- eller alkarylsyra- klorid med den allmänna formeln O Ayl-g-Cl (vb) eller en alkyl-, aralkyl-, aryl- eller alkarylsulfonylklorid med den allmänna formeln V” Ayl-s-cl (va) 448 991 varvid i de allmänna formlerna Va, Vb och Vc "Acyl“ är alkyl, aral- kyl, aryl eller alkaryl med upp till 20 kolatomer.

Reaktionen (i det följande ibland benämnd “förstastegs- reaktionen") mellan aminotioalkansyran (eller det blockerade deri- vatet därav) med formeln IV eller ett salt därav och den reaktions- benägna kloriden med formeln V (eller Va, Vb eller Vc) utföres lämp- ligen i ett vattenfritt inert och vanligen organiskt lösningsmedel, företrädesvis ett polärt organiskt lösningsmedel, såsom antingen ett substituerat aromatiskt lösningsmedel, såsom toluen eller nàgot halogenhaltigt aromatiskt kolväte, eller speciellt ett halogeñhaltigt alifatiskt kolväte, såsom diklormetan eller framförallt kloroform (triklormetan).

Denna förstastegsreaktion måste utföras i närvaro av en bas, som med fördel kan utgöras av en tertiär amin, särskilt trietyl- amin eller pyridin.

Såsom nämnts utföres den följande reaktionen mellan den blandade anhydriden och N-acetyl-para-aminofenol (i det följande ibland benämnd "andrastegsreaktionen") med fördel i samma vattenfria inerta organiska lösningsmedel somldet i vilket förstastegsreaktionen utföres och andrastegsreaktionen störes icke av närvaron av basen.

Det är därför möjligt och i själva verket önskvärt att utföra både förstastegsreaktionen och andrastegsreaktionen i samma vattenfria inerta organiska lösningsmedel, utan mellanliggande isolering av förstastegsreaktionsprodukten, och vanligen i samma reaktionskärl.

En ytterligare aspekt av uppfinningen avser ett alter- nativt förfarande för framställning av N-acetyl-para-aminofenyl-N'- -acetyl-amino~tioalkansyraesterderivaten med formeln I, varvid man omsätter en para-aminofenyl-N-acetyl-amino-tioalkansyraester med den allmänna formeln NH-CO-C H5 CO-O{ä:;:>»NH2 vari n" är l eller 2 och X" är väte, en blockerande grupp, metyl eller en grupp med den allmänna formeln X""s_(CH2)n||_CH 448 991 NH-cofcflz / / “[S]D“(CH2)nn|"CH ' ' \ CO-O» -NH2 vari n"' är l eller 2 och p är 0 eller 1, med ett acyleringsmedel för bildning av motsvarande N-acetyl-paraaminofenyl-N'-acetyl-amino- -tioalkansyraester och därefter, när X" är en blockerande grupp, avlägsnar denna för bildning av det önskade motsvarande N-acetyl- (VII') -para-amínofenyl-N'-acetylamino-tioalkansyraesterderivatet med formeln I.

Acetyleringen av para-amino-fenyl-N-acetylaminotioalkan- syraestern VII kan utföras med användning av ett konventionellt acetyleringsmedel, såsom företrädesvis ättiksyraanhydrid.

Para-aminofenyl-N-acetylamino~tioalkansyraestrarna VII kan framställas i ett preliminärt steg av sistnämnda förfarande genom omsättning av en para-nitrofenyl-N'-acetyl-amino-tioalkansyraester med den allmänna formeln NH-CO-CH5 r"-s-(cH2)n"-CH (VIII) vari n" är l eller 2 och X" är väte, en blockerande grupp, metyl eller en estergrupp med den allmänna formeln NH-CO-CH5 -[slp-(cH2)n“.-CH (vIII') \ co-o N02 vari n"' är 1 eller 2 och p är 0 eller l, med ett reduktionsmedel.

Reduktionen av para-nitrofenyl-N-acetyl-amino-tioalkan- syraestern VIII kan lämpligast utföras med användning av simultant bildat väte såsom reduktionsmedel, som lämpligen alstras med järnpulver och syra, företrädesvis varm ättiksyra. 44s_991 Para-nitrofenyl-N'-acetyl-amino-tioalkansyraestrarna VIII kan i sin tur framställas i ett initialsteg vid detta alternativa förfarande genom omsättning av en N-acetyl-amino-tioalkansyra med formeln IV med bis-(4-nitrofenyl)-sulfitet med formel (IIb).

Reaktionen mellan N-acetyl-amino-tioalkansyran IV och bis-(4-nitrofenyl)-sulfitet (IIb) utföres företrädesvis i lösning i en tertiär amin, särskilt pyridin, och kan'och lämpligen bör utföras vid eller nära rumstemperatur, således icke gärna över 30°C. _ Uppfinningen omfattar givetvis även N-acetyl-para-amino- fenyl-N'-acetyl-amino-tioalkansyraesterderivat med den allmänna for- meln I, framställda vid det ovan nämnda och i följande exempel ytter- ligare beskrivna förfarandet.

För användning inom humanmedicinen sásom ett analgetikum bör N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionatet givetvis bere- das på ett lämpligt sätt till farmaceutiska kompositioner genom association med lämpliga farmaceutiska vehiklar.

Uttrycket "farmaceutisk“ avses häri utesluta varje möj- lighet att karaktären av vehikeln (givetvis med hänsyn tagen till det avsedda administrationssättet för kompositionen) skulle vara skadlig, snarare än gynnsam. Valet av en lämplig vehikel för varje valt admi- nistrationssätt förmodas ligga inom kompetensen för var och en som har erfarenhet av framställning av farmaceutiska kompositioner.

Kompositioner som innehåller föreningen enligt uppfin- ningen kan administreras oralt eller rektalt. Med avseende på dessa olika administrationssätt utgöres den farmaceutisk vehikeln företrä- desvis av: (a) den intagningsbara excipienten i en tablett, belagd tab- lett resp. piller; den intagningsbara behållaren i en kapsel eller kachê; den intagningsbara pulverformiga fasta bäraren i ett pulver; eller det intagningsbara flytande mediet i en syrup, lösning, suspension eller tinktur och mixtur; eller (b) ett basmaterial med låg smältpunkt med förmåga att fri- göra den aktiva komponenten för att denna skall kunna fullgöra sin farmakologiska funktion, vilket basmaterial vid lämplig utformning bildar ett supposítorium.

Ehuru nämnda former av kompositionen förmodas vara de som kommer att användas, är uppfinningen icke nödvändigtvis begränsad till dessa möjligheter. 9 448 991 N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-amino-tioalkansyraester- derivaten enligt uppfinningen kommer oftast att administreras i form av tabletter, kapslar eller andra fasta enhetsdosformer. Med tanke på de i det följande rekommenderade doseringarna kommer det ofta att vara önskvärt att använda kompositionen i form av fasta enhetsdoser, innehållande i huvudsak 500 mg av N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl- -amino-tioalkansyraesterderivaten.

Ehuru doseringarna för de analgetiska N-acetyl-para-amino- fenyl-N'-acetyl-amino-tioalkansyraesterderivaten med formeln I i viss mån är beroende av administrationssättet och givetvis även av det för behandling avsedda tillståndet, kan det allmänt sägas att den användbara dosen normalt kommer att ligga inom intervallet l - 4 g av det aktiva analgetikumet per dag för en vuxen människa.

Det bör i detta sammanhang lämpligen observeras att N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-tioalkansyraesterderivaten med formeln I givetvis kan administreras inom medicinen och när så är lämpligt beredas i farmaceutiska kompositioner för detta ändamål i kombination med andra farmakologiskt aktiva komponenter, såsom en eller flera av följande: N-acetyl-para-aminofenol, kodein, kodein- fosfat, koffein, koffeinhydrat, koffeincitrat, butobarbiton, famprofa- zon, propyfenazon, klormezanon, fenolftalein, acetylsalicylsyra, acetomenafton, orfenadrincitrat, fenobarbiton, dihydrokodeintartrat, dextropropoxifen och pseudoefedrin-hydroklorid_ Det bör givetvis inses att den relativa friheten från hepatotoxiska effekter av N-acetyl-para- aminofenyl-N'-acetyl-amino-tioalkansyraesterderivaten med formeln I icke bör föranleda nâgra sådana överdoser av de andra komponenterna.

Uppfinningen åskådliggöres närmare medelst följande exempel, vari de angivna temperaturerna avser Celsius-grader.

Grupp I - Framställning av derivat med formeln I via blandade anhydrider ned formeln II Exempel l.

Framställning av N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionat (A) via den blandade anhydriden Ste A: Framställning av den blandade anhydriden (II, vari n är 2 och X' är Me) En blandning av 19,1 g N-acetylmetionin och 9,45 g metylklor- formiat i 200 ml kloroform försattes droppvis med 21 g trietylamin, medan temperaturen upprätthölls under 150. När tillsatsen var_full- ständig, âterflödesupphettades blandningen 15 minuter och tilläts sedan svalna till rumstemperatur. 448 991 10 Steg B: Överföring av den blandade anhydriden till metionatet (A) 15,1 g N-acetyl-para-aminofenol sattes till reaktionspro- dukten från steg A och blandningen återflödesupphettades 1,5 timmar.

Blandningen fick svalna till rumstemperatur, 100 ml vatten tillsattes och blandingen skakades kraftigt, tills produkten utföll.

Produkten avfiltrerades och torkades i vakuum för bildning av 13 g N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionat med smält- punkten 1_a3° .

Framställning av derivat med formeln I via de para-nitrofenyl- substituerade mellanprodukterna med formeln VIII Exempel ¿¿ Framställning av N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionat Steg A: Framställning av para-nitrofenyl-N-acetyl-D,L-metionat En lösning av 16,8 g N-acetyl-D,L-metionat i 50 ml pyridin sattes till en lösning av 28,5 g bis(4-nitrofenyl)-sulfit i 90 ml pyridin och den mörka blandningen upprätthölls en timme vid rumstempera- tur. Koncentrering av den mörka blandningen under reducerat tryck vid en temperatur under 400 gav en mörk olja, vilken löstes i 100 ml etylacetat och tvättades först med 2M saltsyra och sedan med natrium- karbonatlösning och slutligen med vatten och torkades över magnesium- sulfat.

Efter eliminering av etylacetatet under reducerat tryck sattes lOO ml eter till den kvarvarande oljan. Man erhöll på så sätt gräddfärgade nålar, vilka tillvaratogs och tvättades med eter och sugtorkades. Utbyte 17,2 g.

Steg B: Framställning av para-aminofenyl-N-acetyl-D,L-metionat En lösning av 5 g 4-nitrofenyl-N-acetyl-D,L-metionat i 80 ml ättiksyra sattes långsamt till en omrörd blandning av 40 g järnpulver och 180 ml varm ättiksyra upphettad på ett ângbad. Efter en timme filt- rerades blandningen och ättiksyralösningen koncentrerades under reduce- rat tryck för bildning av en brun klisterartad produkt. 448 991 ll Steg C: Framställning av N-acety1-para-aminofenyl-N'-acetyl-D,L- -metionat Den klisterartade produkten behandlades med 20 ml ättiksyraanhydrid och förvarades 15 minuter. 100 ml vatten till- sattes och blandningen extraherades två gånger med etylacetat.

Etylacetatlösningen koncentrerades under reducerat tryck och- áterstoden behandlades med 50 ml eter och förvarades. Man erhöll pà sà satt en beläggning av en vit fast substans runt kolven och en olja i kolvens botten.

Den fasta substansen (2 g) tillvaratogs och omkris- talliserades tvà gånger ur etylacetat/metanol, smältpunkt l8l°.

Di-(N-acety1-para-amínofenyl-N',N"-diacetyl- -cystationatet (C), di-(N-acetyl-para-aminofenyl)-N',N“-di- acetyl-cystationatet (D) och N-acetyl-para-aminofenol-N'-acetyl- -S-metyl-cysteinatet (E) kan samtliga Framställas på ett sätt liknande det som beskrives i exempel 5 med lämpliga modifika- tioner beträffande mängder och reaktanter.

I exempel l och 2 utgjordes både utgângsmaterialet och slutprodukten av racemiska blandningar av D- och L-isome- rerna, men det bör givetvis inses att med användning av den optiskt aktiva L-isomeren såsom utgàngsmaterial skulle motsva- ha erhållits. av en annan aspekt enligt upp- detaljer beträffande beredning av N-acetyl-para-aminofeny1-N+-acetyl-D,L-metionat till farma- rande L-isomer av slutprodukten För àskádliggörande finningen lämnas i det följande ceutiska kompositioner. 44s,991 12 Beredning 1 Komposition i form av tabletter innehållande både N-acetyl-para-amino- fenol och N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionat En tablettblandning framställdes genom att man intimt blandade följande komponenter: d N-acetyl-para-aminofenol 600,00 g N-acetyl-para-aminofenyl-N-acety1-D,L-metionat 800,00 g Majsstärkelse 131,48 g Kaliumsøšbat 1,16 g Talk 27,80 9 Stearinsyra 5,56 ¶ l566,00 g Blandningen pressades sedan med en konventionell tablett- maskin för bildning av tabletter om 780 mg, vardera innehållande 300 mg N-acetyl-para-aminofenol och 400 mg N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl- -D,L-metionat.

Beredning 2.

Komposition i form av tabletter innehållande både N-acetylfpara-amino- fenol och N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionat i kombination med andra aktiva föreningar En tablettblandning framställdes genom att man intimt blandade följande komponenter: N-acetyl-para-aminofenol 540,00 g N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionat 720,00 g 2-(para-klorfenyl)-tetrahydro-2-metyl-4H-l,3-tia- 200,00 g zin-4-on-l,l-dioxid Gelatin ~ 12,60 g Majsstärkelse 64,00 g Alginsyra 16,20 g Talk 42,00 g Stearinsyra 24,50 9 Magnesiumstearat 4,53 E 1s24,oo g 448 991 13 Blandningen pressades sedan med en konventionell tablette- ringsmaskin för bildning av tabletter om 812 mg, vardera innehållande 270 mg N-acetyl-para-aminofenol, 360 mg N-acetyl-para-aminofenyl-N'- -acetyl-D,L-metionat och l00 mg 2-(paraklorfenyl)-tetrahydro-3-metyl- -4H-1,3-tiazin-4-on-l,l-dioxid.

Beredning 3.

Komposition i form av tabletter En tablettblandning framställdes genom att man intimt blandade följande komponenter: Första granuleringen N-acetyl-para-aminofenol 240,00 g N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionat 320,00 g Kodeinfosfat 6,40 g Natriumdioktylsulfosuccinat [60%-ig (vikt) lösning] 1,312 g Sorbitol . 8,40 g Majsstärkelse 32,00 g Polyetylenglykoler (medelmolekylvikt 6000-75000) 9,60 g Andra granuleringen Vikt av granuler från första granuleringen 6l2,702 g Talk 36,71 g Magnesiumstearat 4,05 g Majsstärkelse 4,32 g Sorbitol 99,44 g Finfördelad kiseldioxid (200 m2/g - BET) 2,89 g Blandningen pressades sedan med en sedvanlig tabletterings- maskin för bildning av tabletter om 757 mg, vardera innehållande 300 mg N-acetyl-para-aminofenol, 400 mg N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl- ~D,L-metionat och 8 mg kodeinfosfat.

Beredning 4.

Komposition i form av lösliga tabletter _ En tablettblandning framställdes genom att man intimt blandade följande komponenter: 448 291 14 N-acetyl-para-aminofenol - 300,00 g N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionat 400,00 g Kodeinfosfat 8,00 g Koffein 30,00 g Sorbitol 50,00 g Natriumsackarin 10,00 g Natriumvätekarbonat l500,00 g Glutaminsyra 0,90 g Natriumlaurylsulfat _ 0,10 g vattenfri citronsyra 925,00 g Natriumkarbonat 30,00 g Magnesiumstearat 0,60'g Blandningen pressades sedan med en konventionell tablette- ringsmaskin för bildning av lösliga tabletter om 3.254 mg, vardera innehållande 300 mg N-acetyl-para-aminofenol, 400 mg N-acetyl-para- aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionat, 8 mg kodeinfosfat och 30 mg koffein.

Beredning 5.

Komposition i flytande form Följande komponenter blandades: N-acetyl-para-aminofenol 64,8 kg N-acetyl-para-aminofenyl~N'-acetyl-D,L-metionat 106,4 kg Etylalkohol . 383,0 kg Propylenglykol 466,0 kg Glycerol 1700 ,-0 kg Passionsfruktarom 45,0 kg Eurokoltartrazin 0,675 kg Renat vatten till 4500,00 liter för bildning av en blandning innehållande 72 mg N-acetyl-para-amino- fenol och ll8 mg N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionat i en 5 ml-dos av blandningen.

I samtliga beredningar 1-5 är det givetvis möjligt att variera mängden N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionat med motsvarande anpassning av mängderna av övriga komponenter och i vissa fall kan mängden N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionat delvis eller helt ersättas av andra N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-amino- tioalkansyraesterderivat med formeln I, speciellt lämpliga är sådana med formlerna B, C, D, E och F, eventuellt även i detta fall med lämp- lig anpassning av mängderna av dessa föreningar och de övriga kompo- nenterna. _, ' 0 448 991 15 Beredning 6.

Komgosition i form av tuggbara tabletter Tuggbara tabletter framställdes av följande ingredienser i _blandning: Ingrediens Mängd per enhetsdos i mg N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl- D,L-metionat l287,00 sackaros " loo ,oo Natriumsackarin 1,50 Acacia 60,00 Mannitol 200,00 Magnesiumstearat 20,00 Stearinsyra (pressad 3 gånger). 20,00 Citronsyra (vattenfri) 15,00 Sorbitolgranuler 88,00 Totalt l84l,50 44s_991 I6 Beredning 7.

Komposition i form av brustabletter Brustabletter framställdes av följande ingredienser i blandning: Ingrediens N-acetylfpara-aminofenyl-N'-acetyl- D,L-metionat Polyvinylpyrrolidon Natriumlaurylsulfat Natriumbikarbonat (extra fint) Natriumbikarbonat (extra grovt) Citronsyra (vattenfria fina granuler) Natriumkarbonat (vattenfritt) Magnesiumstearat Mängd per I enhetsdos i mg Totalt l287,00 100,00 6,00 l350,00 150,00 925,00 30,00 20,00 3868,00 448 991 - l7 Slutligen har vissa undersökningar utförts för att visa frånvaro av icke önskvärda biverkningar samt de utomordentliga anal- getiska egenskaperna hos en av föreningarna enligt uppfinningen, näm- ligen N-acetyl-para-aminofeny1-N'-acetyl-D,L-metionat med struktur- formeln A, vilken förening i det följande benämnes “förening A".

Bestämning av stabilitet För att bestämma stabiliteten av förening A i det gastro- intestinala området framställdes simulerade mag- och tarmsafter och andra testvätskor på följande sätt: Framställning av simulerad magsaft " 0,35 g natriumklorid, 0,5 g glycin och 94 ml lM saltsyra blandades och volymen inställdes på 1000 ml med destillerat vatten. pH i detta system var ungefär 1,79.

Framställning av simulerad tarmsaft 6,1 g enbasiskt kaliumfosfat och 3,9 g dinatriumvätefosfat löstes i 1000 ml vatten. pH i den erhållna lösningen var 6,85.

Framställning av tris-buffert 0,05M tris-buffert bereddes genom upplösning av 6,05 g tris-(hydroximetyl)-metylamin i 1000 ml vatten och inställning av pH på 7,2 genom tillsats av 0,lM H01.

Framställning av serum Det serum som användes vid analyserna framställdes genom att man nedförde helblod i provrör, inkuberade en timme vid 370 och därefter centrifugerade 10 minuter vid 2000 varv/minut.

Metoder för bestämning Standardlösningar av 1 x l0_4 M av förening A i 0,01 ml metanol framställdes och testades i de simulerade mag- och tarmsafterna, i tris-buffert med tillsatt svinleveresteras och även i serum. Test- lösningarna införlivades i 1 ml av var och en av testvätskorna. En tem- peratur av 30° användes för analyserna avseende tris-buffertmedlet med tillsatt svinleveresteras, medan en temperatur av 370 användes vid analyserna omfattande de simulerade mag- och tarmsafterna och serumet.

Blandningen lämnades sedan i vila och den överstående vätskan sattes fläckvis på TLC-silikaplattor och framkallades i kloroform/metanol (90:10). Blandningen extraherades sedan med 5 ml kloroform och den kloroformhaltiga blandningen filtrerades genom fasseparationspapper, som tillåter endast kloroformlösningen att passera. Kloroformlösningen sattes även fläckvis på TLC-silikaplattor och framkallades i kloroform/ metanol (90:10). 448 991 -' 18 Resultat från stabilitetsbestämningen , Resultaten från denna procedur, utförda med samtliga ovan nämnda testvätskor, visar att: 1. vid 300 hade närvaron av svinleveresteras icke någon inverkan på hydrolyshastigheten för förening A. En halveringstid av ungefär 475 minuter registrerades för förening A i tris-buffertmedlet; 2. vid 370 ökade närvaron av humanserum hydrolyshastigheten för före- ning A. Vid användning av serum från två frivilliga registrerades halveringstider av 140 och 150 minuter. Förmågan hos humanserum att hydrolysera N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionat indikerade närvaron av en viss specifik katalytisk faktor, som är frånvarande i svinleveresteras. Hydrolys av estern i tris-buffert vid 37°~gav en halveringstid av 240 minuter. Detta visar tydligt en ökning av hastig- heten av den spontana hydrolysen vid en temperaturökning om 70 och 3. hydrolysen av estern i simulerad mag- och tarmsaft var mycket låg.

Halveringstider pâ 40 resp. 31,5 timmar registrerades.

Bestämning av farmakologiska effekter För att åskådliggöra och undersöka metabolismen och de resulterande blodnivåerna av N-acetyl-para-aminofenol efter administra- tion av förening A in vivo, jämfört med sådana som erhålles vid admini- stration av jämförbara mängder av N-acetyl-para-aminofenol själv, med eller utan inblandning av metionin, utfördes följande försök.

(A) Undersökning av serumkoncentrationer hos mus 36 Charles River COBS-möss (18 hanar och 18 honor) med en vikt av 30 g undanhölls foder under 16 timmar före försöket, men erhöll sitt vanliga dricksvatten. Tre grupper, vardera innehållande 6 hanar och 6 honor, tillfördes oralt genom en magsond en dosering av l mg/100 g kroppsvikt en suspension i 1%-ig dragant av respektive: Grupp X: 500 mg/kg N-acetyl-para-aminofenol Grupp Y: 500 mg/kg N-acetyl-para-aminofenol + 500 mg/kg metionin Grupp Z: lO73 mg/kg av föreningen A.

Ett blodprov uttogs genom halsspaltning från en hane och en hona från vardera gruppen vid varje undersökningstillfälle, dvs; 0,5, l, 2, 4 och 24 timmar efter den orala administrationen.

Efter 0,5, l, 2 och 4 timmar uppdelades varje serumprov i tre undersökningsprover om 0,1 ml för följande tre bestämningar: Bestämning l: Denna bestämning utfördes enligt en modifiering av metoden enligt Heirwegh och Fevery [Clin. Chem., (1967), lå, (3), 215-2191, som möjliggjorde bestämning på ett litet prov. Denna metod registrerar N-acetyl-para-aminofenol (förkortat "NAPA") i varje form, således såsom 19 448 991 fri NAPA, konjugerad NAPA och kemiskt bunden NAPA i förening A eller i metaboliter, och resultaten angivna i tabell I registrerar således total NAPA uppmätt enligt denna metod.

EÉEEJ ' "Total NAPA" (ng/ml) i serum från Charles River-mus Tid i timmar efter or 1 1 administration a /2 h l h 2 h 4 h 590 Ing/kg wïïàlzA Hane ' 217 265 250 1.07 Hona 555 262 147 574 Mgdeltal 265 199 241 500 mg/kg KAPA Hane 278 2§6 110 43 + 500 mg/kg metionin Hona 402 128 70 56 Medeltal 540 182 90 40, 1075 må/RE förening A Hane 96 255 6? 94 Hona 110 131 70 44 Medeltal 105 193 69 69 Dessa resultat visar att förening A med lätthet hydrolyseras enligt denna metod.

Bestämning 2: Denna bestämning utfördes genom direkt extraktion utan föregående hydrolys enligt en modifikation av nämnda metod. Denna metod registrerar således fri NAPA och de erhållna resultaten anges i tabell II. i 448 9.91 20 Tabell II "Fri NAPA" (ug/ml) i serum från Charles River-mus Tid i timmar efter oral 1 administration /2 h 1 h' 2 h 4 h Hane 127 158 115 32 500 *Bg/IW *få Hona :su 161 78 51 Medeltal 191 165 97 52 + Hona 254 30 MQC MQC 500 mg/”g metionin Medeltal 255 66 A/22 1975 EE/kg förening A Hane 57 78 MQC NQC Hona 66 74 HQC MQC Medeltal 67 76 [I tabell II avser MQC ett värde under den minsta kvantifierbara koncentraitonen uppskattad till 20 ng/ml.] Bestämning 3: Denna bestämning utfördes 16 timmar efter inkubering i närvaro av B-glukuronidas och aryl-sulfatas från en Helix pomatia-juice och direkt extraktion av frigjord NAPA. Kolorimetrering utfördes enligt nämnda metod. Denna metod registrerar således vad som betecknas "enzyma- tisk NAPA", inklusive fri NAPA och NAPA i huvudsak konjugerad till glukuroniderna, och resultaten anges i tabell III.

Zl 448 991 “ Tabell III “Enzymatisk NAPA" (ng/ml) i serum från Charles River-mus T'd ' t' ft lg aämiåistïïâioä er Qra 1/2 h 1 h 2 h 4 h 506 mg/kg NAPA Hane 221 ZSQ 241 IO6 Hona 592 254 146 568 Meaeitei 507 254 194 257 5co mg/kg NAPA Hane 294 192 97 '50 + FCC ng/ke metionin |H°na 592 155 6A 42 Medeltal šüš 164 81 46 1072 mg/kr förening A Hane lol agé 67 98 ' none 115 115 65 50 ïnedeitan los 181 75 ' 74 Resultat: Resultaten angivna i tabell I-III kan tolkas på följande sätt: NAPA administrerad separat ger en hög total eller enzyma- tisk serumfNAPA-koncentration från från den första halvtimen efter oral administration. Denna koncentration sjunker långsamt, men förblir hög upp till 4 timmar efter oral administration.

NAPA administrerad i blandning med metionin ger samma höga totala eller enzymatiska serum-NAPA från den första halvtimmen, men denna koncentration sjunker hastigare än när NAPA administreras separat, vilket visar att metionin accelererar elimineringen av NAPA. Förening A ger emellertid icke den akuta topp som observeras en halv timme efter administration av NAPA + metionin, ehuru koncentrationen av total eller enzymatisk serum-NAPA är lika med den som tillhandahålles av NAPA + metionin~blandning en timme efter oral administration, varefter koncen- trationen av total eller enzymatisk serum-NAPA sjunker enligt samma kinetik som observeras med NAPA + metionin-blandning. Resultaten av respektive total NAPA- och enzymatisk NAPA-bestämningar överensstämmer i själva verket för vart och ett av de testade proverna, vilket innebär 443__991 22 att NAPA finns i musserum, för var och en av de testade substanserna, i huvudsak i form av fri NAPA och NAPA konjugerad till glukuroniderna.

Man kan av detta sluta sig till att förening A ger serum-NAPA-koncen- trationer hos mus identiska med dem som erhålles med en ekvimolär bland- ning av NAPA och metionin, med undantag för en halv timme efter den orala administrationen av substanserna, varvid den akuta toppen obser- verad med NAPA + metionin-blandningen är mycket lägre med förening A, vilket indikerar mindre risk för överdosskador i detta stadium.

(B) Undersökning av serumkoncentrationer hos beagle-hundar 6 beagle-hundar (3 hanhundar och 3 tikar) doserades en gång per dag (kl. 8 varje dag) under 23 dagar med förening A, suspenderad i l%~ig dragant, som administrerades oralt med en oesofagsond, med en hastighet av antingen 432 mg/kg (2 hundar, l hanhund och l tik) eller 675 mg/kg (4 hundar, 2 hanhundar och 2 tikar). Under denna period er- höll hundarna deras sedvanliga foder och vatten till kl. 16 dagen före testdagen, men från denna tidpunkt till kl. 8 testdagen gavs de icke något foder, ehuru de erhöll sitt sedvanliga dricksvatten. Den vanliga doseringen av förening A gavs emellertid till djuret kl. 8 testdagen.

Utan ytterligare utfodring uttogs serumprover från varje djur 2, 4 och 6 timar efter oral administration av förening A, således kl. 10, 12 och 14 testdagen. När 6-timmars-serumprovet uttagits, erhöll djuren sitt sedvanliga foder under en stund, men de sattes åter på fastediét under 12 timmar från kl. 20 testdagen till kl. 8 följande dag, varvid det sista 24-timmars-serumprovet uttogs.

Varje prov uppdelades och NAPA i varje provportion bestäm- des enligt en modifikation av metoden av Heirwegh och Fevery [Clin. Chem. (1967), lå, (3), 215-2191, som möjliggör bestämning på undersöknings- prover om O,l till 0,5 ml serum.

Bestämning 4: En direkt bestämning liknande den som användes vid bestäm- ning 2 gav resultat för fri NAPA enligt tabell IV: 23 Tabell IV 448 991 "Total NAPA" (ug/ml) i serum från beagle-hundar behandlade under 23 dagar med förening A Tid i timmar efter oral administration av den sis~ ta dosen av forening A 2 h 4 h 6 h 24 h ¿ï2 mg/kg förening A Hane 104 84.8 75.2 11.8 Hona 104 115 llO 50.2 Medeltal 104 100 92 2l'O Hane ß6.4 155 1§O 30.2 575 Ei kš förening A Hane llš 170 179 54.8 Honaf- 76-8 155 106 22.8 Hona 115 159 15Ü 45.0 Meaeital 87 150 146 55.2 Bestämning 5: En bestämning liknande bestämning l utförd efter syra-. hydrolys gav resultat avseende total NAPA, omfattande fri NAPA, konjugerad NAPA och NAPA kemiskt besläktad med förening A eller even- tuella metaboliter, vilka resultat anges i tabell V: 44s,991 24 Tabell V "Fri NAPA“ (ng/ml) i serum från beagle-hundar behandlade under 23 dagar med förening A Tid i timmar efter oral administration M h_ ¿ h 6 h 24 h av den sista dosen av förening A A32 mg/kg Hane 50.6 15.8 7,5 MQC förening A ' Hona 57.6 26.0 11.0 _ nQc Medeltal 34.1 19.9 9.4 Hane 11.4 14.6 12.6 QC »E75 Leg/ka Hane 57.6 56.2 15.5 Mac förening A Hon-a 24.6 19.8 a 2 Mac Hona 57.6 22.6 8.2 IQC Medel- tal 27.8 21.6 ll.1 [I tabell V avser MQC värden mindre än minsta kvantifierbara koncentra- tionen, vilken uppskattas till 4 ng/ml.] Resultaten i tabell V visar att förening A med lätthet kan hydrolyseras enligt denna metod.

Det framgår vidare av resultaten i tabell IV och V att NAPA tillvaratages i serum i med lätthet bestämbara mängder upp till 6 timmar efter den sista orala administrationen av förening A i de båda formerna “fri NAPA" och "total NAPA" och upp till 24 timmar i den enkla formen "total NAPA".

(C) Undersökning av analgetisk aktivitet hos råtta Enligt den konventionella Randal-Selitto-tekniken injicera- des 12 Charles River-honråttor, 160-170 g i kroppsvikt, subkutant i en baktass med jäst och 2,5 timmar senare, medan inflammationen fort- satte, administrerades oralt antingen N-acetyl-para-aminofenol [NAPA] eller N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionat [förening A] med en hastighet av antingen l eller 2 mmol/kg. En kontrollgrupp erhöll endast en dragantvehikel. 25 , 448 991 För att bestämma effekten av behandlingen vid smärttrösklar pâlades tryck både på den injicerade baktassen och den andra icke injicerade baktassen. Smärttröskeln noterades såsom lätt tryck vid vilket råttan ryckte till, uppmätt med användning av en Ugo Basile analgesimeter för båda baktassarna hos varje råtta med intervall om l timme, 3 timmar, 5 timmar och 22 timmar efter administrationen och uttrycktes såsom det procentuella smärttröskeltrycket för den injicerade (således inflammerade) baktassen i relation till den icke injicerade (och således friska) baktassen.

Resultaten behandlades statistiskt enligt t-testet mot kontrollgrupperna och sammanfattas i tabell VI: Tabell VI ' Procentuella smärttrösklar vid Randall-Selitto-testet på råtta I 2 H 31 'Tidrymd från administration av testförening gg ° ä, (Tidpunkt för injektion av jäst) am E E WH -v-I -ø-l Eg 'å 'å 1 h h 5 h 22 h 5” *å *å 0.5 m (s-f» h» (7-5 h) (24-5 h> + + + + Kontroll _ 41 - 5.1 42 - 2.9 44 - 4.1 42 - 5.5 Når-A 1 151 45 i 5-5 48 i 4-1 47 i 1.? 45 i' 5-4 + + + E + -11 1 5:1-, 44 - 5.8 41 - 2.9 50 - 4-2 ß - 2-4 + + + + 33,1 302 50 - 4.2 54 - 4.0 55 - 5-9 51+ ~ 4-7 1=< 0.05 + + + E + 51- 2 648 55 - 5.5 54 - 5-2 59 - 2-7 .A - 1-9 § I Resultaten i tabell VI indikerar att N-acetyl-para-amino- fenyl-N'-acetyl-D,L-metionat (förening A) uppvisar en statistiskt signi- fikant analgetisk effekt vid 2 mmol/kg-nivån, vilken är minst lika hög som för N-acetyl-para-aminofenol (NAPA) med hänsyn till den nivå av statistisk signifikans som uppnåddes. 448 991 26 (D) Undersökning av antipyretisk aktivitet hos råtta- Med användning av den konventionella proceduren för det jästinducerade hypertermitestet tillfördes flera grupper om l0 Charles River-hanrâttor en subkutan injektion av torrjäst. Omedelbart efter injektionen tillfördes oralt respektive: 100 mg/kg N-acetyl-para-aminofenol (NAPA); 90 mg/kg NAPA + 21,5 mg/kg av förening A; 80 mg/kg NAPA + 43,0 mg/kg av förening A; och 60 mg/kg NAPA + 86,0 mg/kg av förening A.

I blandningarna var den använda mängden av förening A, N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionat, i varje enskilt fall ekvimolär med den 10-, 20- eller 40%-iga reduktionen av mängden_NAPA, varför samtliga medicineringar utfördes vid en nivå ekvivalent mot 100 mg/kg NAPA.

Resultat: Kroppstemperaturen hos varje rätta övervakades noggrant under 6 timmar efter oral administration av NAPA och NAPA/förening A- blandningarna och de erhållna resultaten visas grafiskt i fig. l, av vilka det framgår att de fyra behandlingarna gav liknande antipyre- tiska effekter. Man kan därför sluta sig till att den antipyretiska effekten av förening A, N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionat, på ekvimolär basis är praktiskt taget identisk med den av den omsorgs- fullt undersökta analgetiska substansen NAPA, N-acetyl-para-aminofenol.

(E) Undersökning av akut oral toxicitet hos mus Charles River (CD-l COBS) albinomöss, kroppsvikt 20-22 g, upprätthölls några dagar i ett luftkonditionerat rum för djur och utfodrades med en standarddiét (sterila VAR-granuler). De fick fasta över natten före försöket, men försågs med vatten ad libitum. 15 han- möss och 15 honmöss användes för varje försök.

N-acetyl-para-aminofenol (NAPA) och N-acetyl-para-amino- fenyl-N'-acetyl-D,L-metionat (förening A) administrerades till mössen oralt i form av en suspension (kontinuerligt skakad med en elektromagne- tisk omrörare) i 5%-igt gummi arabikum vid en volym av 0,02 ml/g, antingen individuellt eller i på olika sätt proportionerade blandningar och vid olika doseringsnivåer, såsom visas i tabell VII: _- ' 27 448 991 Tabell VII NAPA/Förening A-för- N-acetyl-para- N-acetyl-para-amino- hållande aminofenol + fenyl-N'-acetyl-D,L- (när tillämpligt) [NAPA] i mg/kg metionat [Förening A]v i mg/kg icke tillämpligt ' no + O [lccïe :.f;.:;f-.J 760 + 0 llåOC + Q 15C + 77_g #50/100 7C0 + 155_6 _ lhCC + 511_1 400 AOC/ECO 300 . 1600 + 590 450 + 600 ÉOC/AOO 900 + l20Q 180 + 2400 icke tillämpligt O + 2000 [lOOß Förening A] 0 + 4000 En kontrollgrupp erhöll endast den 5%-iga gummi arabikum- vehikeln. Mössen observerades under sju dagar och deras beteendemönster och mortalitet registrerades.

Resultat: Beteendet av de behandlade mössen vid den högsta doserings- nivån av de olika blandningarna liknade det som har observerats hos möss medicinerade med N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionat separat vid en doseringsnivå av 4 g/kg och med N-acetyl-para-aminofenol separat vid en doseringsnivâ av 1400 mg/kg. Djuren utvecklade hypotermi, tremor, svansextension, epistaxi och akrocyanos, följd av avdödning.

De djur som dog vid lägre doseringsnivåer uppvisade emeller- tid icke dessa symtom.

LDSO-värdena vid 24 timmar och 7 dagar beräknades medelst metoden enligt Miller och Tainter, uttryckande LDSO för blandningen såsom den totala mängden till djuret tillförd N-acetyl-para-aminofenol 448 991 28 under förutsättning att all N-acetyl-para-aminofenol från förening A är tillgänglig och således på basis av att 100 mg N-acetyl-para-amino- fenyl-N'-acetyl-D,L-metionat ger 46,6 mg N-acetyl-para-aminofenol. De på så sätt beräknade resultaten anges i tabell VIII.

Tabell VIII -- - LD i N-acetyl-Para-amino- - Förhållande mellan "t - NAPA/F A- 50 ° förhâlïšâåäng fenol (NAPA) tal NAPA" [härrörande (om relevant) m9/k9 fran bade ren NAPA och - fran forenlng A] och efter efter metionin ' 24 h 7 dagar icke relevant [lccz :iæil 7=c i 65 690 1 65 <><3 f-.gc/lco šlcøo i 65 sco i 76 10:1- /zcc/:oc ilouc i 155 97,0 i 90 5:1 I + I + ECO/400 §l73C - 185 il5OO - 115 5:2 g i - I I : icke relevant I \ 4000 3 \ 4000 0 [lOO% Förening A] |/ 3 0 1 .

Det framgår tydligt av resultaten i tabell VIII icke endast att LDSO för förening A, N-acetyl-tara-aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionat, är flera gånger högre än den av den omsorgsfullt undersökta analgetiska föreningen NAPA, N-acetyl-para-aminofenol, utan även att närvaron av t.o.m. en liten proportion av förening A i blandningar därav med NAPA medför en väsentlig ökning av LDSO-värdet hos sådana blandningar jämfört med NAPA, vilket således visar den hepatiska säkerheten hos sådana kompositioner.

(F) Undersökning av akut oral toxicitet hos råtta Undersökningen utfördes på grugper om 10 albinohanråttor och 10 albinohonråttor (Charles River CD-1 COBS) med en kroppsvikt om 80-100 g. Råttorna förvarades under nâgra dagar i ett luftkonditionerat 29 . 448 991 rum för djur och utfodrades med en standarddiét och dricksvatten ad libitum. Före försöket fick de fasta över natten med vatten ad libitum.

NAPA och förening A administrerades oralt genom oesofag-intubering såsom suspensioner (kontinuerligt skakade med en elektromagnetisk om- rörare) i 1%-igt gummi arabikum i en volym av 2 ml/100 g kroppsvikt och vid doseringsnivåer av 1, 2, 4 och 8 g/kg. En kontrollgrupp erhöll oralt under samma försöksbetingelser endast 2 ml/100 g av suspensions- vehikeln. Råttorna upprätthölls under observation under 7 dagar, medan deras beteendemönster observerades och mortaliteten registrerades.

Vad beträffar beteende kunde någon ändring icke observeras i beteendemönstren hos de råttor som behandlades med förening A men administration av NAPA inducerade fullständig prostration och hypotermi hos samtliga råttor vid nivåer av 2, 4 och 8 kg/kg en halv timme efter administrationen. Hårresning och kontinuerlig tårbildning i ögonen visade sig två timmar efter administrationen. De första avdöda råttorna observerades åtta timmar efter administrationen vid doseringsnivån 8 g/kg med konvulsioner av tetanisk typ, epistaxi, blodtårar och akro- cyanos.

Vad beträffar mortaliteten registrerades beträffande före- ning A icke någon mortalitet vid någon av de olika doseringsnivåerna, såsom framgår av tabell IX. Kraftig mortalitet observerades emellertid i fallet NAPA, särskilt vid högre doseringsnivåer, såsom framgår av tabell X.

M o W o _ o o o o o o o z _ m o o o o o o , o o oo .Eooazoo o o o o o o o z oo o o u. o o o o o M o o o z . _ _ _ _ o o o o o o _ o o oo woš H M _ _ _ o o o o o o o z oo o o .u o _ o o o o o o a 10. o o o o o o o o ofi o woïw. m. o h o o o o o o z 3 o o o ü o o o o o o z _ n, n o o o M o o o o o oo m woä o w o o o o o o o .o oo _ o o n o o o o o o o. z 1. _ H w o 9 _ _ _ o oo UÉ o 9_ o o m o o o o o oo o w o o o o o o z oo 4 . Å» ummmmo ß Hmmmw w Hmmmw m Hmmmw d Hmmmw m HmEEflu md Hmšøflu dm Cmx zoo Hound d mcflnwußm uwøwflmunoš Hflwøucmooom fl uwuflufixou »nom 1 xw Hflmnma 31 448 991 o o o. o o o o d w z o o o o o o o o od ddomazox o o o o o o o : od M w m m m m m m m w 2 W o o o o o o o m od wd\w d _ _ W od od od od od od od z od M w w w _ m m w m d w 2 o o o o o o o w od wd\m N od od od od od od od z od om oo oo oo om on om m w 2 oß _ om oo om om om oo o od md\m < oo M oo om om om om oo z od W ood W ood ood ood ood ood wo m o 2 W ood ood ood ood ood ood ood m od wd\w o W ood ood ood ood ood ood oo 2 od W u .dmmmw m. .dmmmfl nu. Hmmmfl m ummmø d .dmmmw m. umEEflu m... umEEHu dm ana :oo .fimucdw ddmnfid JÜHvMHNMHOÉ .HHÜÜUGÜUOHQ H HUHÛHUHXOU. Uflvfiw I vn HHwAmB 448 291 32 På basis av resultaten i tabell IX och X beräknades LDSO-värdena vid 24 timmar och 7 dagar för både förening A och NAPA medelst metoden enligt Miller och Tainter på logaritmiskt papper och följande värden erhölls: Förening A: LDSO (24 timmar och 7 dagar))8 g/kg NAPA: LDSO (24 timmar) = 3,1 i 0,5 g/kg LDSO (7 dagar) = 2,85 1 0,4 g/kg Man kan därav sluta sig till att-förening A vid oral administration i 5%-igt gummi arabikum vid COBS-albinoråttor visade sig vara_vida mindre toxisk än NAPA och inducerade icke någon mortali~ tet vid doseringsnivåer upp till 8 g/kg. _

Claims (3)

1. .få 4; CD xD \O .à PATENTKRAV l. Analogiförfarande för framställning av N-acetyl-para- -aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionat som har analgetisk aktivitet, k ä n n e t e c k n a t av att en förening med formeln cnscona_@_ ou eller oz O NQZ _ _ IEI) ' ' ' (Ha) omsättes med en N-acetyl-amino-tioalkansyra med den allmänna formeln NH-00-CH 5 x'-s- (C112) z-ca (n) C0.0H vari X' är en metylgrupp eller med en blandad anhydrid därav med den allmänna formeln Mfiëßflj X'-S-(CH2)2-CH 0 (II) co-o-Å- f o jn-Ayi vari m är 0 eller l, Q betecknar antingen en kolatom C eller en sulfinylgrupp, 'Ayl“ betecknar en alkylgrupp med l-20 kol- atomer, en arylgrupp med 6-20 kolatomer, en alkarylgrupp med 7-20 kolatomer eller en aralkylgrupp med 7-20 kolatomer, och X' är en metylgrupp och att, om så är nödvändigt, N02-gruppen i vilken som helst resulterande nitroförening reduceras till aminogruppen och sedan acetyleras, vilket sålunda ger det önskade N-acetyl-para-aminofenyl-N'-acetyl-D,L-metionatet med formeln: 448 991 KH cfla-co-un o-co-ca-(Cu¿)2-_s-CH3 (I)
2. 2. Analogiförfarande enligt patentkravet l, k ä n n e t e c k- n a t av att N-acetyl-para-aminofenol omsättes med N-acetyl- metionatmetylkarbonat-blandad anhydrid.
3. 3. Analógiförfarande enligt patentkravet l, k ä n n e t e c k- n a t av att bis-(4-nitrofenyl)sulfit omsättes med N-acetyl- -D,L-metionat och nitrogruppen i den sålunda framställda nítroföreningen reduceras till en aminogrupp och acetyleras därefter.