DK155832B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af n-acetyl--p-aminophenyl-n'-acetyl-alfa-amino-omega-methyl-thioalkansyreester - Google Patents

Description

i

DK 155832B

Opfindelsen angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte smertestillende forbindelser med den i krav l's indledning angivne almene formel I, og denne fremgangsmåde er ejendommelig ved det i krav l's kendetegnende del anførte.

Opfindelsen drejer sig om forbindelser med smertestillende virkning, som er beslægtede med N-acetyl-aminophenol.

Forbindelsen N-acetyl-p-aminophenol benyttes nutildags i vid udstrækning som smertestillende middel. Desværre har den toxiske karakter af stoffet i overdosis været genstand for stor offentlig om-0 tale, som i forbindelse med lettilgængeligheden har ført til stigende brug af stoffet til selvmord. Det organ, som hovedsagelig påvirkes af en overdosis af N-acetyl-p-aminophenol er leveren, og selv om dosen ikke er dødelig, kan den forårsage alvorlig beskadigelse af leveren.

5 Skønt opfindelsen ikke skal begrænses gennem teoretiske be tragtninger, kan følgende forklaring af baggrunden være nyttig. Det antages,at le.verbeskadigelse hidrørende fra N-acetyl-p-aminophenol hænger sammen med stoffet metabolisme, hvor det omsættes til et kemisk yderst reaktionsdygtigt derivat, som bindes covalent til lever-0 proteiner, når stoffet indgives i overdosis, medens ikke-hepatotoxiske doser af N-acetyl-p-aminophenol kun giver anledning til ringe eller ingen covalent binding. Skønt den nøjagtige karakter af den toxiske metabolit ikke kendes, antages den at være et forstadium for cystein-og mercaptursyrekonjugaterne for N-acetyl-p-aminophenol, da udskil-i5 lelser af disse konjugater forøges betydeligt i tilfælde af en overdosis.

Cystein og mercaptursyrekonjugaterne af N-acetyl-p-amino-phenol blandes over aktiveringen af udgangsmolekylet til et kemisk ustabilt mellemprodukt, som normalt straks danner et kompleks med ;0 reduceret glutathion ved levercellen. Ved overdosis sker aktiveringen aj N-acetyl- p-aminophenol imidlertid hurtigere, end det af leveren reducerede glutathion kan synthesiseres, og da niveauet af glutat falder, kombineres nogle af de reaktionsdygtige metabolftter med he-patocytproteiner i stedet. Mængden af det kemisk ustabile mellempro-;5 dukt, som er covalent bundet til hepatocytproteiner, hænger sammen med graden af alvor af den deraf følgende leverbeskadigelse.

2

DK 155832B

Ved overdosis synes den logiske modgift at være glutathion selv, men hvis glutathion indgives udefra, er det ikke i stand til at trænge ind i cellerne, og det er derfor ueffektivt, medmindre der indgives meget store doser. I stedet plejer man at behandle overdo-5 ser med erstatninger for glutathion- sulf- sulphydrylforbindelser, for eksempel cysteamin eller dimercaprol. Man har foreslået, at cyste-amin muligvis inhiberer oxidationen af N-acetyl-p-arninophenol til den toxiske metabolit.

Der findes også en mindre indlysende vej til behandlingen 10 af samme spørgsmål. Medens en overdosis af N-cetyl-p-aminophenol resulterer i glutathionudtømning, bør det huskes, at glutathionsynthese stadig finder sted, og ved tilvejebringelse af et glutathionforstadi-um, skulle det derfor være muligt at fremme glutathionsyntesen og således at reducere den hastighed, hvormed glutathionniveauet falder, 15 og på denne måde skulle det være muligt at hindre glutathionniveauet at falde til den lave værdi, hvor den aktive N-acetyl-p-aminophenol-metabolit begynder at angribe hepatocytproteinerne. Atter her er det derfor konventionelt at behandle overdoser af N-acetyl-p-aminophenol ved tilvejebringelse af et glutathionforstadium, for eksempel methi-20 onin eller cystein.

Disse konventionelle metoder til behandling af overdoser af N-acetyl-p-aminophenol er imidlertid ofte ineffektive som følge af tidsintervallet mellem indtagelsen af N-acetj/l-p-aminophenolover-dosen og ankomsten af glutathionerstatningsstoffet eller glutathion-25 forstadiet til levercellen.

Den foreliggende opfindelse er delvis baseret på den erkendelse, at ved kemisk kombination af et glutathionforstadium med et N-acetyl-p-aminophenol må det være muligt at nedsætte faren for leverbeskadigelse ved overdosis til et minimum, thi indgift af en 30 overdosis af N-acetyl-p-aminophenol skulle da ifølge sagens natur sikre, at de sulphydrylgrupper, som behøves i et glutathionforstadi-um, vil samtidig være til stede i leveren og hjælpe til genopfyldning af glutathionlagrene. 1

Det har også vist sig, at den kemiske kombination af N-acetyl-p-aminophenol med et glutathion-forstadium har en yderst indbydende smag, sgm er langt mere acceptabel end den yderst bitre smag af det førnævnte stof, og det har ikke dettes udtalte lugt.

DK 155832 B

3

Følgelig anvises der gennem den foreliggende opfindelse hidtil ukendte forbindelser med smertestillende virkning. Disse forbindelser er N-acetyl-p-aminophenyl-N' -o(-acetylamino-u>-,ethyl-thioalkansyreester med den almene formel I

CH^-CO-NH-^ ^-0-C0-CH-(CH2)n-S-CH3 (!) NH-CO-CH, hvor n har værdien 1 eller 2.

En specielt foretrukket forbindelse med den almene formel I ovenfor er følgende: N-acetyl-p-aminophenyl-N'-methionat med den almene formel A _ CH,-CO-NH-/ . y—0-C0-CH-CHo-CHn-S-CH, 3 \ / I 2 2 3 (A) \ ________/ NH-CO-CHj svarende til den almene formel I, hvor n er 2.

Alle forbindelserne med den almene formel I omfatter et asymmetrisk carbonatom, og de eksisterer derfor som separate op-tisk-aktive D- og L-isomere samt i form af blandinger af D- og L-5 isomere, navnlig i lige store mængder som racemisk blanding, hvori forbindelserne normalt fremstilles, medmindre der benyttes optisk aktive udgangsmaterialer ved de nedenfor beskrevne fremgangsmåder.

Den foreliggende opfindelse omfatter alle forbindelserne med formlen I som individuelle optisk aktive D- og L-isomere og også i form 10 af blandinger deraf, specielt som racemiske blandinger. Da det er L-aminosyrerne, som forekommer naturligt i legemet, foretrækkes det, når økonomiske btragtninger tillader det, at benytte L-isome-ren af forbindelserne, som fremstilles ifølge den foreliggende opfindelse, f.eks. N-acetyl-p-aminophenyl-N1-acetyl-L-methionat.

15 Reduktionen af p-nitrophenyl-N-acetylaminothioalkansyre- esteren kan bedst udføres under anvendelse af nascerende hydrogen, som reduktionsmiddel, som mest bekvemt opnås ved hjælp af jernpulver og syre, fortrinsvis varm eddikesyre.

4

DK 155832B

Reaktionen mellem N-acetylaminothioalkansyren IV og bis--(4-nitrophenyl)-sulfitet udføres med fordel i opløsning i en tertiær amin, fortrinsvis pyridin og kan og bør bekvemt udføres ved eller nær stuetemperatur, f.eks. ikke over 30°C.

5 Til anvendelse i den humane medicin som smertestillende middel bør de omhandlede forbindelser formuleres til farmaceutiske produkter ved forening med passende farmaceutiske bærestoffer.

Udtrykket "farmaceutisk" er her benyttet under udelukkelse af enhver mulighed for, at karakteren af bærestoffet, under hensyn 10 til den valgte administrationsmåde, er skadeligt i stedet for gavnligt. Valget af et passende bærestof ved en given administration antages at ligge inden for fagfolks kompetence.

Gennem den foreliggende opfindelse bliver det således muligt at anvise farmaceutiske præparater, der indeholder en eller 15 flere forbindelser med den almene formel I tillige med et passende farmaceutisk bærestof.

Præparaterne kan indgives enten oralt eller rektalt. I henseende til disse forskellige anvendelsesmåder er det farmaceutiske bærestof fortrinsvis: 20 a) et fordøjeligt tilsætningsstof til en tablet eller pille, en fordøjelig beholder, kapsel eller oblat, et fordøjeligt pulverformet fast bærestof eller et drikkeligt flydende medium i form af sirupopløsning, suspension eller eliksir eller 25 b) et basismateriale med lavt smeltepunkt, som er i stand til at frigive den aktive bestanddel til udfoldelse af dens farmakologiske funktion, hvilket basismateriale i passende form udgør en stikpille.

Medens' de ovenfor nævnte udformninger er de mest an-30 vendte, er de ikke nødvendigvis udtømmende.

De omhandlede forbindelser indgives let i form af tabletter, kapsler eller andre doser i fast form. Under hensyn til de doseringer, som anbefales nedenfor, vil det ofte være ønskværdigt at anvende præparatet i form af doser i fast form indehol-35 dende ca. 500 mg aktiv forbindelse.

Medens dosen af de smertestillende forbindelser af den almene formel I til en vis grad afhænger af administrationsvejen og af den behandlede tilstand, kan det generelt siges, at den nyt-

DK 155832 B

5 tige dosis normalt ligger i området mellem 1 g og 4 g aktivt smertestillende stof pr. dag for voksne.

Det kan være hensigtsmæssigt at bemærke, at forbindelserne med den almene formel I naturligvis kan indgives i medicin 5 og formuleres til farmaceutiske præparater til dette formål i forbindelse med andre farmakologiske bestanddele såsom f.eks. en eller flere af følgende forbindelser, nemlig N-acetyl-p-amino-phenol, codein, codeinphosphat, coffein, coffeinhydrat, butobar-biton, famprofazon, propyphenazon, chlormezanon, phenolphthalein, 10 acetylsalicyl, acetomenaphthon, orphenadrincitrat, phenobarbiton, dihydrocodeintartrat, dextropropoxyphen og psedoephedrinhydro-chlorid. Det vil forstås, at den relative frihed for hepatotoxisk virkning hos forbindelserne med den almene formel I ikke udstrækker sig til nogen overdosis af de andre bestanddele.

15 Opfindelsen skal forklares nærmere gennem nedenstående eksempler.

Gruppe I Fremstilling af derivater med den almene formel I over blandede anhydrider med den almene formel II Eksempel I Fremstilling af N-acetyl-p-aminophenyl-N1-acetyl-20 D,L-methionat (A) over det blandede anhydrid

Trin A Fremstilling af blandede anhydrider (II, hvor n = 2)

Til en blanding af 19,1 g N-acetylmethionin og 9,45 g methylchlorformiat i 200 ml chloroform sættes 21 g triethylamin dråbevis, medens temperaturen holdes under 15°C. Når tilsætnin-25 gen er fuldstændig, tilbagesvales blandingen i 15 minutter, hvorpå den får lov til at afkøles til stuetemperatur.

Trin B Omdannelse af det blandede anhydrid til methionatet (A) 15,1 g N-acetyl-p-aminophenol sættes til reaktionsproduktet fra trin A, og blandingen tilbagesvales i 1 time og 30 minut-30 ter. Blandingen henstår til afkøling til stuetemperatur, og der tilsættes 100 ml vand, hvorpå blandingen omrystes energisk, til der sker en udfældning af produktet.

Produktet filtreres fra og tørres i vakuum, hvorved man får et udbytte på 13 g N-acety1-p-aminophenyl-N'-acetyl-D,L-35 methionat, smp. 183°C.

6

DK 155832B

Grumpe II; Fremstilling af derivater med den almene formel I over p-nitrophenylsubstituerede mellemprodukter med den almene formel VIII.

1/·: se rap el 2; Fremstilling; af H-acetyl-p-aminophenyl-N1 -acetyl-D,L-5 -methionat.

Trin A: Fremstilling af n-ni trophenyl-I-T-acetyl-D,L-methionat.

En opløsning af 16,3 g I'T-acetyl-D,L-methionin i 50 ml pyridin sættes til en opløsning af 28,5 g Ms-( nitrophenyl)-sulfit i 90 ml pyridin, og den mørke blanding holdes under stuetemperatur 10 i en time. Inddampning af den mørke blanding under formindsket tryk med en temperatur under hQ°C giver en mørk olie, som opløses i 100 ml ethylacetat og vaskes først med 2M saltsyre og derpå med natri-umcarbonatopløsning og endelig med vand, hvorpå den tørres over 15 magnesiumsulfat.

Efter fjernelse af ethyla.cetatet under formindsket tryk sættes 100 ml ether til den resterende olie. Dette giver cremefarvede nåle, som fjernes og vaskes med ether og tørres ved frasugning. Udbytte 17,2 g.

20 Trin 3: Fremstilling af r-aminonhenyl-N-acetyl-D.L-methionat.

En opløsning af 5 g 4-nitrophenyl-N-acetyl-D,L-methionat i 80 ml eddikesyre sættes langsomt til en omrørt blanding af 40 g jernpulver og 180 ml varm eddikesyre, der er opvarmet på dampbad.Ef-ter en times forløb filtreres blandingen,og eddikesyreopløsningen 2b inddampes under formindsket tryk, hvorved der fås en brun gummi.

Trin C; Fremstilling af N-acetyl-p-aminophenyl-Uf-acetyl-D,L--methionat.

Gummien behandles med 20 ml eddikesyreanhydrid og opbevares 30 i 15 minutter. Der tilsættes 100 ml vand, og blandingen ekstrahe-res to gange med ethylacetat. Ethylacetatopløsningen inddampes under formindsket tryk, og resten behandles med 50 ml ether og henstår. Derved fås et overtræk af hvidt fast stof på beholderens inderside samt en olie på bunden af beholderen.

35 Det faste stof (2 g) fjernes og afkrystalliseres to gange af en blanding af ethylacetat og methanol. Smp, 181°C.

7

DK 155832B

I eksempel 1 og 2 er både udgangsmaterialet og slutproduktet racemiske blandinger af D,L isomer, men det vil forstås, at ved anvendelse af den optisk aktive L-isomer som udgangsmateriale vil man få den tilsvarende L-isomer i slutproduktet.

5 I det følgende skal der gives enkeltheder vedrørende formuleringen af N-acetyl-p-aminophenyl-N'-acetyl-D^-methionat til farmaceutiske produkter.

Recept 1: Præparat i form af tabletter indeholdende både N-acetyl- -p-aminophenol og N-acetyl-p-aminophenyl-N’-acetyl-D,L- 1° -methionat.

Der fremstilles en tabletblanding ved grundig sammenblanding af følgende bestanddele.

N-acetyl-p-aminophenol .................... ..... 600,00 g M-acetyl~p-aminophenyl-N-acetyl-D,L-methionat ...... 800.00 g 15 Majsstivelse........................................ 131,48 g kaliumsorbat ....................................... 1,16 g

Talkum ............................................. 27.80 g

Stearinsyre ........................................ 5.56 g 1566.00 g

Blandingen komprimeres derpå i en gængs tabletteringsmaski-20 ne til dannelse af tabletter på 780 mg hver indeholdende 300 mg.

N-acetyl-p-aminophenol og 400 mg N-acetyl-p-aminophenylacetyl-D, lime thi onat.

Recept 2: Præparat i form af tabletter indeholdende både N-acetvl- -p-aminophenol og N-acetyl-p-aminophenyl-N♦-acetyl-D,L--methionat i kombination med andre aktive forbindelser.

25 Der fremstilles en tabletblanding ved grundig blanding af følgende bestanddele: i 8

DK 155852B

N-acetyl-p-aminophenol ......................................540 g j N-acetyl-p-aminophenyl-N’-acetyl-DjL-methionat..............720 g 2-(p-chlorphenyl)-tetrahydro-3-methyl-4N-l,3-thiazin-l,1- -dioxid ........................................ 200 g 5 Gelatine ..................... 12,60g

Majsstivelse............................................... .64.Q0g

Talkum.............................................. 42 g

Stearinsyre ......................................... 24,60g

Alginsyre .................................................. 16,20g 10 Magnesium stearat......................... 4,60g 1624.00 g

Blandingen komprimeres derpå i en gængs tableteringsmaskine til dannelse af tabletter på 812 mg, som hver indeholder 270 mg N-acetyl-p-aminophenol, 360 mg N-acetyl-p-aminophenyl-N’-acetyl--D,L~methionat og 100 mg 2-(p-chlorphenyl)-tetrahydro-3-methyl-4H-15 -1,3-thiazin-4-on-l,1-dioxid.

Recept 3: Produkt i form af tabletter.

En tabletblanding fremstilles ved grundig blanding af følgende bestanddele: Første granulering 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 N-acetyl-p-aminophenol......................................240,00 g 2 N-acetyl-p-aminophenyl-NT -acetyl-D, L-me thi onat...............320,00 g 3

Codein phosphat.............................................. 6,40 g 4

Natriumdioxyl stilfosuccinat (60%) ........................... 1,312g 5

Sorbitol .................................................... 8,40 g 6

Majsstivelse................................................ 32.00 g 7

Polyethylen glycoler ....................................... 9,60 g 8

Anden granulering.

9 vægt af granulat fra første granulering .................... .6l2.702g 10 talkum...................................................... 36,71g 11

Magnesium stearat........................................... 4,05g

Majsstivelse ................................................ 4,32g

Sorbitol ............................................... 96,44g

Findelt siliconimidoxid (200 m^/g-BET)....................... 2,89g 9

DK 155832B

Blandingen komprimeres derpå på en gængs tableteringsmaskine til dannelse af tabletter på 757 mg, som hver indeholder 300 mg N-acetyl-p-aminophenol, 400 mg N-acetyl-p-aminophenyl-N'-acetyl--D,L-methionat og 8 mg cddeinphosphat.

5 Recept 4 Præparat i form af opløselige tabletter.

Der fremstilles en tabletblanding ved grundig blanding af følgende bestanddele: N-acetyl-p-aminophenol ...................................... 300,OOg N-acetyl-p-aminophenyl-N*.acetyl-D,L-methionat .............. 400,002 10 Codeinphosphat .............................................. 8,OOg

Coffein ..................................................... 30,OOg

Sorbitol .................................................... 50,OOg

Natriumsaccharin ............................................ 10,OOg

Natriumbicarbonat ...........................................1500. OOg 15 Glutaminsyre ................................................ 0,90g natriumlaurylsulfat ......................................... 0,10g

Vandfri citronsyre .......................................... 925,OOg natriumcarbonat ............................................. 30,OOg

Magnesiumstearat............................................ 0,60g 20 Blandingen komprimeres derpå i en gængs tableteringsmaskine til dannelse af opløselige tabletter på 3.254 mg, som hver indeholder 300 mg Ν-acetyl-p-aininophenol, 400 mg N-acetyl-p-aminophenyl-acetyl-D,L-me thi onat, 8 mg codeinphosphat og 30 mg cotffein.

Recept 5. Præparat i form af væskeformig blanding 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Følgende bestanddele blandes sammen: 2 N-acetyl-p-aminophenol ...................................... 64,8kg 3 N-acetyl-p-aminophenyl-N' -acetyl-D, L. methionat...............106.4kg 4

Ethyl alkohol................................................. 383,OOkg 5

Propylenglycol............................................... 466,0 kg 6

Glycerol.....................................................1700, OOkg 7

Passionsfrugtsmagsstof....................................... 45, OOkg 8

Eurocol Tartrazin............................................ 0,675^g 9

Renset vand af .............................................4500.oolkg 10 hvorved der fås en blanding indeholdende 72 mg N-acetyl-p-aminophe- 11 nol og 118 mg N-acetyl-p-aminophenyl-N'-acetyl-DjL-methionat i en dosis på 5 ml af blandingen.

10

DK 155832B

I alle ovenstående recepter 1-5 er det naturligvis muligt at variere den benyttede mængde af N-acetyl-p-aminophenyl-N*-acetyl-D,L-methionat med tilsvarende justering i mængderne af de øvrige bestanddele, og i øvrigt kan noget af eller endog hele mængden af N-acetyl-5 p-aminophenyl-N*-acetyl-D,L-methionat erstattes med andre N-acetyl- aminophenyl-N’-acetylaminothioalkansyreesterderivater med den almene formel I, specielt de foretrukne forbindelser med formlerne B, C,D, E og F ovenfor, idet der atter om ønsket kan foretages passende justering af mængderne af disse forbindelser og de øvrige bestand-10 dele.

Endelig skal der nedenfor gives nogle vurderinger, som antyder friheden for uønskede bivirkninger samt de udmærkede smertestillende virkninger af en af de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser, nemlig N-acetyl'-p-aminophenyl-N*-acetyl·-D,L-15 methionat med strukturformen . A ovenfor, som derfor i det følgende bekvemt skal betegnes forbindelse A.

Vurdering af stabilitet.

Med henblik på først at vurdere stabiliteten af forbindelsen A i fordøjelseskanalen fremstilles der simulerede mave- og tarmvæsker 20 og andre forsøgsvæsker, som følger:

DK 155832 B

11

Fremstilling af simuleret mavevæske»- 0,35 g natriumchlorid, 0,5 g glycin og 94 ml M-saltsyre blandes, og rumfanget indstilles på 1000 mL med destilleret vand. Dette systems pH-værdi er ca. 1,79.

5 Fremstilling af simuleret tarmvæske.

6,1 g monokaliumphosphat og 3,9 g dinatriumhydrogenphosphat opløses i 1000ml varid. Den fremkomne opløsnings pH-værdi er 6,85.

Fremstilling af Trisbuffer.

- 0,05 M trisbuffer fremstilles ved opløsning af 6,05 g tris - 10 (hydroxymethyl)-methylamin i 1000 mL vand og indstilling af pH-værdi-en til 7,2 ved tilsætning af 0,1 M HC1.

Fremstilling af serum.

Det i forsøget benyttede serum fremstilles ved, at man tager helblod i almindelige reagensglas og inkuberer i en time ved 37°C, 15 hvorpå man centrifugerer ved 2000 omdrejninger pr. minut i 10 minutter.

Bedømmelsesmetoder.

Der fremstilles standard-opløsninger af 1 x 10"^ M forbindelse A i 0,01 ml methanol, som prøves i de simulerede mave- og tarmvæsker, 20 i trisbuffer med tilsat svinelever esterase og også i serum. Opløsningerne i forsøg indføres i 1 ml af hver af forsøgsvæskerne. Der benyttes en temperatur på 30°C til forsøgene med trisbuffer med tilsat svineleverestarase, medens der benyttes en temperatur på 37°0 til forsøg med mave- og tarmvæske og serum. Derefter henstår blan-25 dingen, og den overliggende væske anbringes på tyndtlagschromatogra-fisilicagelplader og fremkaldes i chloroform og methanol (90 : 10). Blandingen ekstraheres derpå med 5 ml chloroform, og den .chloroform-holdige blanding filtreres gennem- fasesepareringspapir, som kun tillader chloroformopløsningen at passere. Chloroformopløsningen an-30 bringes også på tyndtlagschromatografisilic&gelplader og fremkaldes i chloroform og methanol (90 : 10).

Resultater af stabilitetsvurdering.

Resultaterne af denne fremgangsmåde, udført på alle ovennævnte forsøgsvæsker, viser følgende: 35 1. Ved 30°C har tilstedeværelsen af svineleverestarase ikke nogen virkning på halvdelen af hydrolysen af forbindelsen A. Der konstateres en halveringstid på ca. 475 minutter på forbindelsen A trisbufferen.

12

DK 155832B

2, -Ved 37°C forøger tilstedeværelsen af humant serum hastigheden af hydrolysen af forbindelsen A. Ved anvendelse af serum fra to voluntører konstateres halveringstider på 140 - 150 minutter. Dette humane serums evne til at hydrolysere N-acetyl-p-aminophenyl-N’-5 -acetyl-D,L-methionat angiver tilstedeværelsen af en specifik ka talytisk faktor, som ikke findes i svineleveresterase. Hydrolyse af esteren i trisbuffer ved 37°C giver en halveringstid på 240 minutter. Dette viser en betydelig forøgelse af hastigheden fcr spontan hydrolyse ved en temperaturstigning på 7°C.

10 3. Hydrolysen af esteren i simuleret mave- og tarmvæske er meget langsom. Der konstateres halveringstider på henholdsvis 40 timer og 31»5 timer.

Vurdering af farmakologiske virkninger.

Til demonstration og undersøgelse af methabolismen og de der-15 af følgende blodniveauer for Ν'-acetyl-p-aminophenol efter indgift af forbindelsen A in vivo i sammenligning med dem, som fås ved indgift af tilsvarende mængder N-acetyl-p-aminophenol med eller uden tilblanding af methionin udføres følgende forsøg; (A) Undersøgelse af serumkoncentrationer for mus.

20 36 mus af stammen Charles Paver (18 hanner og 18 hunner) på 30 g berøves føde i 16 timer før forsøget, men får deres sædvanlige drikkevand. I grupper hver indeholdende 6 hanner og 6 hunner, modtages en dosis på 1 ml/100g legemsvægt pr. mus, oralt gennem mavesonde, af en suspension af 1% tragant af henholdsvis: 25 Gruppe X: 500 mg/kg N-cetyl-p-aminophenol

Gruppe Y: 500 mg/kg.N-acetyl-p-aminophenol plus 500 mg/kg methionin

Gruppe Z: 1073 mg/kg. forbindelse A.

En blodprøve tages ved halsoverskæring fra en han og en hun på hvert undersøgelsestidspunkt, dvs., 30 minutter, 1 time, 2 timer, 30 4 timer og 24 timer efter den orale indgift.

På tidspunkterne 30 minutter, 1 time, 2 timer og 4 timer deles hver serumprøve i tre forsøgsprøver på 0,1 ml til følgende tre bestemmelser.

Bestemmelse 1 35 Denne bestemmelse udføres efter sur hydrolyse efter en tilpas ning efter metoden Heirwegh og Pevery (Clin. Chem. (1987), 1^, (3), 215-219), som gør det muligt at udføre en bedømmelse på en lille prøve. Denne metode bestemmer N-acetyl-p-aminophenol (forkortet "NAPA') i enhver form, altså som fri NAPA konjugeret NAPA, og NAPA, • Ί 13 DK 155832 Β som er kemisk bundet i forbindelse A eller vilkårlige methaboliter', og resultaterne i tabel I nedenfor angiver således”total NAPA” som bestemt ved denne metode.

Tabel I: ’’total NAPA” i serum(p ug/ml) hos mus af stammen Charles River .

Tid efter oral indgift_50 min. 1 time 2 timer 4 timer 500 mg/kg NAPA Han 217 265 250 107 ,

Hun 556 262 147 [ 574 ;

Gennem- 277 265 199241.

snit I I

--i-:--} 500 mg/kg NAPA Han 278 236 110 | .43 ! plus Hun 402 128 70 1 36 500 mg/kg Methlonin Gennem- 340 182 ' 9& j 40 .

snit i --1-i--1-f 1075 mg/kg forbindelse Han 96 i 255 67 · 94 A Hun I 110 i 151 70 , 44 j Ί '«' ....... I ................ * { r *·

Gennem-; 105 1 193 " 69 69 ‘ snit · i ! \ i " ' .......... 1 ' 11 ' " ' 1 · ..... I 1 1 "

Disse resultater viser, at forbindelse A let hydrolyseres ved denne metode.

Bestemmelse 2:

Denne bestemmelse udføres ved direkte ekstraktion uden forudgå-5 ende hydrolyse ifølge en tilpasning af den ovennævnte metode. Denne metode konstaterer således "fri NAPA”, og resultaterne fremgår af tabel II nedenfor.

14 DK 155832B

Tabel II “fri MPA11 i serum (u.g/ml) hos mus af stammen Charles River.

Tid efter oral indgift 30 min 1 time 2 timer 4 timer .

- —---r-...........t 500 mg/kg NAPA Han 127 168 115 32 i

Hun__254 161 78 31 |

Gennemsnit 191 165 97 32

500 mg/kg NAPA Han I 215 102 44 __ MQC

plus Hun I 254 30 MQC MQC

500 mg/kg Methionin Bwlnein.l ??? j 66 ! ~ 22

snit · I

1073 mg/kg forbindelse Han 67 : 78 MQC MQC

A Hun 66 74 MQC MQC

1 1 1 1 I........- ' 1 1,1 " —— j .....

I t

Gennem- 67 76 i snit • 1 I tabel II ovenfor betyder MOC værdi under den minimalt be-stemmelige koncentration (vurderet ved 20 μg/ml).

Bestemmelse 3:

Denne bestemmelse udføres efter 16 timer inkubering i nær-5 værelse af β-glucuronidase og arylsulfatase fra saft af Helis

Pomatia og direkte ekstraktion af den frigjorte NAPA. Der udføres colorimetry efter den ovenfor angivne metode. Denne metode angiver således, hvad der her skal betegnet ”enzymatisk NAPA", indbefattet fri NAPA, og NAPA som i .hovedsagen er konjugeret til 10 glucoronider, og resultaterne fremgår af tabel III nedenfor.

Tabel III “enzym NAPA” (ug/ml) hos mus af stammen Charles River.

Tid efter oral indgift 30 min. 1 time 2 timer 4 timer 500 mg/kg NAPA Han 221 254 241 106

Hun 392 254 146 368

Gennem- ~307 · 254 195 237 snit 500 mg/kg NAPA Han 294 192 j 97 50 plus Him 392 j 135 j 64 42 500 mg/kg Methionin Gennem- 4 , ! Ί£-, “ 77 snit 343 ! 164 I 81 46 i ---1-1--, 1073 mg/kg af forbind- Han 5 101 j 246 j 67 98 ώ A Hun_115 I 113 · 83 50

15 DK 155832B

Resultater.

Resultaterne fremgår af tabel I - III ovenfor, som kan fortolkes som følger: NAPA indgivet i sig selv giver en høj "total” eller "enzyma-5 tisk" koncentration af NAPA i serum fra de første 30 minutter at regne efter oral indgift. Koncentration aftager langsomt, men forbliver høj i indtil fire timer efter den orale indgift.

NAPA indgivet i blanding med methoinin giver de samme høje værdier for "total" eller "enzymatisk" NAPA i serum fra 30 minut-10 ter at regne, men denne koncentration aftager hurtigere, end når NAPA gives alene,hvilket viser, at methionin fremskynder elimineringen af NAPA. Forbindelse A giver imidlertid ikke den skarpe top, som iagttages 30 minutter efter indgift af methionin, skønt koncentrationen af "total" eller "enzymatisk" NAPA i serum svarer til den, 15 som fås ved blandingen af NAPA blusmethionin 1 time efter oral indgift , og derefter aftager koncentrationen af "total" eller "enzymatisk" NAPA i serum i overensstemmelse med den samme kinetik, som iagttages ovenfor i tilfælde af blandingen af NAPA plus methoinin.; Resultarne af de respektive bestemmelser for "total" NAPA 20 og "enzymatisk NAPA er praktisk taget ens for hver af de undersøgte prøver, hvilket betyder, at NAPA findes i museserum for hvert af de undersøgte stoffer, i hovedsagen i form af fri NAPA og NAPA konjugeret til glucuronider. Af alt dette kan det sluttes, at forbindelsen A giver NAPAkoncentrationer i serum hos mus, som svarer 25 til dem, som fås med en ækvimolekulær blanding af NAPA og methionin, undtagen 30 minutter efter oral indgift af stofferne, hvor den skarpe top, som iagttages med blandingen af NAPA plus methionin, er meget lavere med forbindelse A, hvilket antyder mindre fare for overdosisbeskadigelse i dette stadium.

30 (B)- Undersøgelse af serumkoncentrationerne Beagle-Hunde.

6 Beagle-hunde ( 3 hanner og 3 hunner) doceres en gang om dagen (kl. 8 hver dag) i 23 dage med forbindelsen A suspenderet i 1% tragant, som indgives · oralt gennem spiserørssonde, i mængde på enten 432 mg/kg (2 hunde, en han og en hun) eller 675 mg/kg (4 hunde, 35 2 hanner og 2 hunner). I dette tidsrum modtager hundene deres sæd vanlige foder og vand indtil kl. 16 dagen før forsøget, men fra dette tidspunkt til kl. 8 om dagen, får de ikke noget at spise, medens de modtager deres sædvanlige drikkevand. Den normale dosis 16

DK 155832B

af forbindelse A indgives imidlertid på dyrene kl. 8 på forsøgs-dagen.

Uden yderligere fodring udtages der serumprøver fra hvert dyr 2 timer, 4 timer og 6 timer efter den orale indgift af forbindelsen 5 A, altså kl. 10, kl. 12 og kl. 14 på forsøgsdagen. Efter at 6-timers- serumprøven er blevet taget, modtager dyrene deres sædvanlige foder et stykke tid, men de bringes atter til at faste i 12 timer fra kl. 20 på dagen for forsøget til kl. 8 den følgende dag, hvor den sidste 24-timers serumprøve foretages. l0 Hver prøve deles, og NAPA i hver prøveportion bestemmes i over ensstemmelse med en tilpasning af metoden ifølge Heirwegh og Fevery (Clin.Chem., (1967), 1J5, (3), 215-219) som gør det muligt at udføre bestemmelser på forsøgsprøver på 0,1 - 0,5 ml serum.

Bestemmelse 4.

Direkte bestemmelse i lighed med den i bestemmelse 2 ovenfor benyttede giver følgende resultater for "fri NAPA" i henhold til tabel IV.

Tabel IV - "total NAPA" i serum (ug/ml) i Beagle-hunde behandles i 25 dage med forbindelse A,

Tid efter oral indgift 20 af den sidste dosis af forbindelse A 2 timer 4 timer 6 timer 24 timer I I ' 432 mg/kg forbindelse A Han 104 | 84,8 73,2 11,8

Hun 104 I 115 110 30,2

Gennem- 104 j 100 g2 21,0 snit i * ...... '" 1 —.......... — '1— 1 ——.....- ..........

i 675 mg/kg forbindelse A Han 46,4 : 135 150 30,2

Han 113 170 ; 179 34,8

Hun 76,8 135 j 106 22,8

Hun 113 159 150 45,0 ......-- — -—-i I ' ......... " ♦ *

Gennem- 87 150 146 33,2 snit

Bestemmelse 5.

En bestemmelse i lighed med bestemmelse 1 ovenfor udført efter sur hydrolyse giver resultater for "total NAPA" omfattende fri NAPA, konjugeret NAPA og NAPA kemisk bundet til forbindelse A eller vil-25 kårlige metaboliter, således som det fremgår af tabel V nedenfor.

17 DK 155832B

Tabel V "fri NAPA” i serum u.g/ml) i Beagle-hunde behandlet i 23 dage med forbindelsen A.

Tid i timer efter 2 timer 4 timer 6 timer 24 timer

oral indgift af den sidste dosis af forbindelsen A

432 mg/kg forbindelse Han 30,6 13,8 7,8 MQC

A Hun 37,6 26,0 11,0_MQC

Gennem- 34,1 19,9 9,4 ; snit 111 ' '— -- I 1 " 1 »I Iijiin ......-......... —-' ' - 1

675 mg/kg af forbin- Han 11,4 j 14,6 12,6 MQC

delse A Han 37,6 36,2 15.3 ! MQC

i Hun 24,6 ' 12,8 8,2 MQC

• Hun 37,6 j 22,6 8,2_MQC

Gennem-i 27,8 21,6 11,1 snit [ (I tabel V ovenfor, angiver MQC, at værdien er mindre end den minimalt bestemmelige koncentration, som vurderes at være 4 pg/ml. Resultaterne i tabel V ovenfor viser, at forbindelsen A let 5 hi^droliseres ved denne metode.

Af de i tabellerne IV og V anførte resultater vil det ses, at NAPA fås i serumet i let bestemmelige mængder til 6 timer efter den sidste orale indgift af forbindelse A i de to former "fri NAPAH og "total NAPA" og indtil 24 timer i den ene form "total NAPA".

10 (C) Undersøgelse af smertestillende virkning hos rotter.

I overensstemmelse med den gængse teknik ifølge Randal-Selitto injiceres grupper på 12 hun-rotter Charles River på 160-170 g legemsvægt subkutant i den ene bagpote med gær og 2 timer og 30 minutter senere, medens betændelsen forekommer, indgives der oralt enten 15 N-acetyl-p-aminophenol (NAPA) eller N-acetyl-p-aminophenyl-N1-acetyl--D,L—methionat (forbindelse A) i en mængde på 1 eller 2 millimol/kg. En kontrolgruppe modtager kun tragant bærestof.

Til vurdering af virkningen af behandlingen på smertetærskelen udøves der tryk både på den injicerede bagpote og den anden 20 ikke-injicerede bagpote. Smertetærskelen noteres som det tryk, ved hvilket rotten prøver at trække poten væk, målt under anvendelse af et Ugo Basile "Analgesimeter" for begge bagpoter på hver rotte med intervaller på 1 time, 3 timer, 5 timer og 22 timer efter indgif-

18 DK 155832B

ten udtrykt som procent af smertetærskeltrykket for den indicerede ( og altså betændte ) bagpote imod den ikke-injicerede (og altså raske) bagpote.

Resultaterne (efter statistisk behandling ved t-prøve mod kon-5 trolgrupperne) fremgår af tabel VI nedenfor.

Tabel VI - urocent-smertetærskel- ved Randall-Selitte-forsøg med rotter .

\ 6 j?i ^ Tid fra indgift af undersøgt forbindelse u (tid fra injektion med gær).

<H Oij £ ~ +> g> h i .η 1 time 3 timer 5 timer 22 timer t h <d s cd (3,5 timer) (5,5 timer) (7,5 timer (24,5 ti- •h ® ! -d-H mer) bo ^ bOH b0 : ' •d £ fJH s ; S !o JB'd I i h *° S S g ; - 1 ...... i ...... ......... - , i .

Kontrol . 141 ± 3,1 42 ± 2,9 I 44 ± 4,1 42 ±3,5 1 ~ 1 .............. I —!> i NAPA 1 151 45 ± 3,5 . 48 ± 4,1 47 ± 1,7 43 +3,4 "A" 1 324 44 ± 3,8 41 ± 2,9 50 ± 4,2 50 ±2,4 NAPA 2 302 50 ± 4,2 54 ± 4,0 53 ± 3,9 54 ±4,7 P< 0,05 ’ ' »A" 2 648 53 ± 3,3 54 ± 59 ± 2,7 54 ±1,9 P <,0,02 P<0,02 P <.0,01 P <-0,01 , ' ' — · — — — · 1 i ......... — 1 1 ί ' i· .....

Resultaterne i tabel VI ovenfor viser, at N-acetyl-p-aminophenyl-N7-acetyl-D,L-methionat (forbindelse A) har en statistisk significant smertestillende virkning ved et niveau på 2 millimol/kg, som er i det mindste lige så stor som for N-acetyl-p-aminophenol (NAPA), 10 at dømme efter niveauet af den opnåede statistiske significant.

/ 19

DK 155832B

(E) Undersøgelse af akut oral toxicitet hos mus.

Albino-mus af stammen Charles River (CD-I COBS) på 20-22 g holdes nogle dage i et klimatiseret dyrehus og modtager en standarddiæt (sterilt VAR). De faster natten over før forsøget, idet d.e har 5 fri adgang til vand. Der benyttes 15 hanmus og 15 hunmus til hvert forsøg.

N-acetyl-p-aminophenol (NAPA) og N-acetyl-p-aminophenyl-I'P --acetyl-D,L-methionat (forbindelse A) indgives derefter på musene oralt som en suspension (som 0wøres kontinuerligt med en elektro-10 magnetisk omrører) i 5% gummiarabicum i et rumfang på 0,02 ml/mg enten individuelt eller på forskellig måde tilpassede blandinger og på forskellige dosisniveauer, som fremgår af tabel VII. nedenfor.

20

DK 155832B

Tabel VII

Forholdet mellem NAPA . N-acetyl-p- N-acetyl-p-amino- og forbindelse A -aminophenol + phenyl-N*-acetyl- (hvor begrebet forekommer) (NAPA) i mg/kg -D,L-methionat (for bindelse A) i mg/kg

Forekommer ikke her 350 + 0 (100$ NAPA) I ° i ! 350 + 77,8 450/100 700 + 155.6 1400 + 311.1 , . ' 400 + 200 400/200 800 400 1600 800 — “ 605 300/400 · 900 1200 1800 2400 i I II··· —! » I p I 11,111 ................ —I I ·ΙΊΙ

Forekommer ikke ' 0 + 2000 her (100?i> forbindelse A ^ + 4000

En kontrolgruppe, modtager kun bærestoffet af gummiarabicum på 5%. Musene iagttages i syv dage, og deres adfærdsmønster og dødelighed noteres.

Resultater.

5 Adfærden hos de mus, som er behandlet med det højeste dosisni veau for de forskellige blandinger, er det samme, som iagttages hos mus, der er behandlet med N-acetyl-p-aminophenyl-N1 acetyl-D,L-methi-onat alene i et dosisniveau på 4 g/kg og med N- acetyl-p-aminophenol alene på et dosisniveau på 1400 mg/kg. Dyrene udvikler hypotermi, 10 tremor, haleforlængelse, epitaxi og acrocyanose efterfulgt af døden.

Dyrene,som døde ved et lavere dosisniveau, udviser imidlertid ikke disse symptomer.

LD^q ved 24 timer og syv dage udregnes efter Miller og Tainters metode, idet man udtrykker LD^q for blandingen som den totale mængde 15 af N-acetyl-p-aminophenol, som indgives på dyrene, idet man antager, at al N- acetyl-p-aminophenol fra forbindelse A står til rådighed, og altså på den basis, at 100 mg N-acetyl-p-aminophenyl-N-acetyl-

21 DK 155832B

D,L-methionat giver 46,6 mg N-acetyl-p-aminophenol. De således beregnede resultater fremgår af følgende tabel VIII-;

Tabel VIII

Forholdet mellem j LD^q utrykt i N-acetyl- Forholdet for NAPA/forbindelse A -p-aminophenol (NAPA) (hidrørend^både (hvor det forekommer) mg/kg fra NAPA selv efter 24 timer efter j I 7 dage hold til methi- i onin

Forekommer ikke 730 ί 65 690 ± ^ C^.

(100% NAPA) 450/100 1000 ± 65 800 ±70 10 : 1 s 400/200 1040 +135 930 ±90 5:1 — — .........i.— .....i····—— i . —............... .......... , . . —.......... ...

300/400 1730 - 185 1500 ±115 5 : 2

Forekommer ikke (100% forbindelse A) \ 4000 >4000 0

Af de i tabel VIII ovenfor anførte resultater fremgår det klart ikke blot, at LD^0 af forbindelse A,N-<acetyl-p-aminophenyl--N’-acetyl-D,L-methionat, er adskillige gange større end værdien for det velundersøgte smertestillende NAPA, N-acetyl-p-aminophenol, 5 men yderligere at tilstedeværelsen af selv en ganske lille mængde forbindelse A i blandinger .'deraf med NAPA tilvejebringer en betydelig forøgelse af LD-^q og sådanne blandinger i sammenligning med NAPA, hvilket demonstrerer den hepatiske sikkerhed for sådanne præparater.

10 (F) Undersøgelse af akut oral toxicitet hos rotter.

Undersøgelsen udføres på grupper af 10 han-og 10 hun-albinorotter (Charles River CD-I COBS) på 80 - 100 g legemsvægt. Rotterne hol des nogle dage i et klimatiseret dyrehus og indtager en standarddiæt Off har fri adffanff til drikkevand. Wav fors«?ισ·Ρ+. Ήη'ησοσ ria +-n 22

DK 155832B

gives NAPA og forbindelse A oralt gennem spiserorssonde som suspensioner, (som omrøres kontinuerligt med en elektromagnetisk omrører) i 1% gummiarabicum i et rumfang på 2 ml/100 g legemsvægt og i dosisniveauer på 1, 2, 4 og 8 g/kg. En kontrolgruppe modtager oralt under samme forsøgsbetingelser kun 2 ml/100 g af bærestofsuspensionen. Rotterne holdes derpå under observation i 7 dage, medens deres adfærd og dødelighed iagttages.

Hvad angår deres adfærd, iagttages der ikke nogen forandring i adfærdsmønsteret hos de rotter, som er behandlet med forbindel-0 sen A, men indgift af NAPA medfører fuldstændig prostration og hypothermi hos alle rotterne ved niveauer på 2,4 og 8 g/kg 30 minutter efter indgiften. Hårrejsning og stadig rindende øjne optræder to timer efter indgiften. De første dødsfald noteres otte timer efter indgiften på niveauet på 8g/kg med convulsioner af tetanitypen, .5 epistaxi, blodtårer og acrocyanose.

Hvad angår dødeligheden iagttages der i tilfælde af forbindelse k ikke nogen dødelighed på nogle af de forskellige dosisniveauer, således som det fremgår af tabel IX nedenfor. Der noteres imidlertid kraftig dødelighed i tilfælde af NAPA, især ved de høje dosisniveau-!0 er, således som det fremgår af tabel X nedenfor.

DK 155832 B

23 0.

t) T o o o oo o ooooooooo

IN

<D ί T

CC

Ti o o o o o o ooooooooo

O

G

Tj cc

Jq o o o o o o o o o o o o o o o tO LT,

H

H

cd a; ϋ to s c· C'.· O C o o o ooooooooo -P -c £ Q)

C G

O to

U G

f' c o o o o o o o o o o o o o o

K K

-p

<D

-p

•H G

0 i: Ή Ή Μ 2»' G ' c.) o o o o o o o o o o o o o o i~; cv “3 X u - - < g· £

1 -H

; ·; o O o O C O OOOOOOOOO

Pi -g CVi I—i

G

X

c" Pi E-i e t, ‘ P pr-, t-i I--1 P i c) o o: o , r:·:: c« & Pn .. & pr, O C X) 1-0 ckj =<3 O O O O O O 0 0^0 o J~ H r~i ί.-] Η Η Η Η 01 Η Η »£< Η H ►·;, G;

C r C

’-ζ P^- c*. ‘ e

IL

% r) M O to O o •H „P ,-¾ Λ-1 P·

X \ -P

l, fcn hO tO tO Ci

O C

jl-j G <f CM r-ί

24 DK 155832 B

Φ CLOOOOOOOOin O O ir, o o o

t O O O CS IN CO Η H

Η Η H

tN

Φ t > toooooooom o o ir. o o o

t O O O O .IN CO Η H

r·! Η H

ve • G;

S r O O O O O O O O in O O in O O O

tb t o ο o σ·. o- cc η h

H r~i r-ί iH

H LO.

φ t f ω r- ^ r" o o O o O O O o LO. o C in o o o

-P to O O O IN CG Η H

β H r-; H

O <!·

C

O

P Φ p tt' o o ο ο o ο ο o m o o in o o o

- t O O q Oi tN CC H H

-P r-'. H rH

G- l-L-

•P

0 P

•ri ω k - c* r t s--.

.μ !ρ o O O O O O O O LO, O O tn O O o O O O C", IN CC H r-i

-P CO rH rH iH

P <r f—»-r f- 1 G) ε

t ^ -H

H ^ O O LT, O O O O O LO, O O LO, O O O

φ <f C\ O O, OS O- CO Η H

r> c\j h α β s.

X

ptj pt, |X) pq pr, t J pi' Eli S P1) S P Η, P ., (N P j O co cO CO CO _ o o o o o oo oo , o o Η H P-I Η H ^ 0>

S

s

H

f—

H

hO tu) tp O

Λ Λ! ^ h

<£ \ \ \ N -P

1¾ hi) faD t£l tO β <· 9

'χ CQ CM HP

DK 155832B

25

Fra resultaterne i tabel IX og χ ovenfor berednes LI' for' (—· h Jj " ^ - 9L· timer o,c 7 dage for både forbindelse-.A og NAPA efter Filler o<-Teinter’s metode på logoritmenapir med følgende result« te1-·

Forbindelse A: 1,0^-, (24 timer og η dere) 8g/kg :-f.\PA : LDC;0 (24 timer) = p.l + o,r. g/kg L3V0 (7 dage) = 2,85± 0,4 g/kg f dette kan det sluttes, et forbindelse A indgive t oral+ , _l· υ g t~f.r qrabicum på COBS albinorotter viser sig langt mindre tovn, ^1¾¾ ΓΤΛΡΛ og ikke mediører nogen dødelighed i dosisniver>uer ΠΊΛ 8,·/ν.

t-i/ : · r· ·

Claims (3)

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af paracetamol derivater med den almene formel I CH.-CO-NH-/ Vo-CO-CH-(CH2)n-S-GH3 (D v—u Lh-co-ch3 hvor n er 1 eller 2, i form af D- eller L-isomeren eller en blanding deraf, kendetegnet ved, at en forbindelse med den almene formel Ila ch3 comhQ, oh (Ila) omsættes med et blandet anhydrid med den almene formel II NH-CO-CH / 5 C&,-S-(CHj -CH n (I3:) 3. n \ fl ^ CO-O-Q- CO ”/m-Ayl (hvor n har samme betydning som ovenfor, m er 0 eller 1, Q betegner enten et carbonatom eller en sulfinylgruppe, Ayl betegner en alkylgruppe med 1-20 carbonatomer, en aryl-gruppe med 6-20 carbonatomer, en alkarylgruppe med 7-20 carbonatomer eller en aralkylgruppe med 7-20 carbonatomer), eller «y-Q- o^°~~^==^~n°2 omsættes med en N-acetylamino-thioalkansyre med den almene formel IV . DK 155832 B , ^NH-CO-CH^ CH^-S-(CH_) -OH (IV) 3. n v ' CO.OH (hvor n er 1 eller 2), og at NC^-gruppen i nitroforbindel-sen reduceres til en aminogruppe og derpå acetyleres.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af N-acetyl-p-aminophenyl-N -acetyl-D,L-methionat, 5 kendetegnet ved, at N-acetyl-p-aminophenol om sættes med et blandet anhydrid af N-acetylmethionat og methylcarbonat.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af N-acetyl-p-aminophenyl-Ni-acetyl-D,L-methionat, 10 kendetegnet ved, at bis-(4-nitrophenyl)-sulfit omsættes med N-acetyl-D,L-methionat, og nitrogruppen reduceres til amino og acetyleres.