SE415766B - Antibiotikum a 16886 i och/eller antibiotikum a 16886 ii for bekempning av vextpatogena bakterier - Google Patents

Description

10 _25 ßss ho 7315327-2 BOOOC med en färgförändring till mörkbrunt; som är mycket lösligt i vatten, något lösligt i lägre alkanoler, och olösligt i acetonitril; och som är amfotert; monoammoniumsaltet av A1688HI utmärkes vidare av fyra titrerbara grupper vid pK'a1 = h,1; pK'a2 = 5,2; pK'a3 = 9,3 och pK'ah = 10,5; har en skenbar molekylvikt av ungefär 530 bestämd utgående från titreringsdata; har den ungefärliga sammansättningen ho,26 % kol, 5,91 $ väte, 13,98 % kväve, 33,37 % syre och 7,21 % svavel; har en specifik, optisk rotation /a/D25 + 153,6° (c = 1 $, vikt/volym i vatten); och då man maler ämnet till en tablett till- sammans med mineralolja, och utsätter denna för IR-strålning erhålles följande särskiljande band i IR-spektret vid följande våglängdæg ut- tTYckta 1 Um: 3:10! 5:68! 61300 6960; 7:20! 70601 81831 9135: 9:60! >9,S5, 11,60 och 12,90 och monoammoniumsaltet av antibiotikum A16886II, utmärkes av fyra titrerbara grupper vid pK'a1 = ü,0; pK'a2 = 5,3; pK'a3 = 9,2 och pK'au = 10,5; har en skenbar molekylvikt av ungefär 528 bestämd utgående från titreringsdata; har följande ungefärliga sammansättning, nämligen 41,01 % kol, 5,6u % väte, 15,75 % kväve, 29,f3% syre och 7,0ä $ svavel; har en specifik, optisk rotation l /G/D25 + 86,20 (C = 1 %, vikt/volym i vatten), och som under samma betingelser som ovan har följande särskiljande band i sitt IR-spektrum? vid följande våglängder uttryckta i um: 3,15, 5,70, 6,30, 7,22, 7,6ü, 9105» 9oh0| 9:65 Och 111600 Antibiotikum A16886 är en svavelhaltig peptid med en amfoter molekyl. Såsom är fallet med många antibiotikumproducerande kulturer resulterar fermentation av Streptomyces clavuligerus NRRL 3585 i fram- ställningen av ett antal antibiotiska föreningar, benämnda faktorer.

Antibiotikum A16886, som i föreliggande fall erhållits från fermentorn, omfattar två huvudsakliga antibiotiska föreningar, vilka häri benämnas A16886I och A16886II eller faktor I och faktor II. Dessutom ha mindre mängder av andra antibiotiska föreningar observerats vid vissa fer- mentationer, men, eftersom de endast föreligga i mycket små mängder, ha de icke karakteriserats. Således används det omodifierade ut- trycket "antibiotikum A16886" häri för att beteckna det antibiotikum, som erhålles från fermentorn och som i vanliga fall omfattar 1-99 % av faktorn I och 99-1 %.av faktorn II förutom andra små faktorer, var- vid den totala halten är 100 %. Följaktligen avser i efterföljande diskussion av användbarhet och användningssätt uttrycket “antibioti- kum A16886" likaledes individuella faktorer som blandningar därav, så länge som egenskaperna för de individuella faktorerna och blandningar-I na därav äro lika. to '7315327-2 Antibiotikum A16886 kan användas som sådant eller som ett salt, exempelvis ett syraadditionssalt eller ett salt med en katjon. I fall av ett salt med en katjon kan saltet antingen vara envärt eller två- värt. Det är ofta lämpligt att framställa salter direkt vid renings- förfarandet, så att nämnda antibiotikum föreligger i saltform då det separerats. Antibiotikum AT6886 har separerats på detta sätt, som monoammoniumsaltet, och av detta skäl karakteriseras antibiotikum A1688§ som monoammoniumsaltet.

Vissa karakteriseringar ha gjorts på blandningen av faktorerna I och II. Exempelvis har ett antal kvalitativa kemiska försök utförts med en blandning av monoammoniumsaltet av faktorn I och monoammonium- saltet av faktorn II: positiva försök eller test erhöllos med nin- hydrin, Pan Dutscher, Benedict, Molisch, Fehling, dansylklorid, jod, och ferrikloridreagens, men negativa test erhöllos med biuret och reagens enligt Sakaguchi. En blandning av monoammoniumsalterna av faktorerna I och II torkad vid rumstemperatur i vakuum över vatten- fri kalciumklorid under ungefär 15 h, uppvisade en optisk rotation /a/D25 + 110,1° (C = 1 %, vikt/volym i vatten). En blandning av mono- ammoniumsalterna av faktorerna I och II av antibiotikum A16886 är stabil vid pH 3-8 vid 6°C under 8 dygn och relativt stabil vid pH 3-8 vid 25°c under två dygn. Den biologiska aktiviteten går långsamt förlorad vid pH 3-8 vid en temperatur av 2500, varvid hälften förlo- rats efter Ä dygn.

Dessutom ha monoammoniumsalterna av faktorerna I och II separat karakteriserats, såsom omnämnts ovan. De ovannämnda värdena för den specifika, optiska rotationen för monoammoniumsalterna av antibioti- kum A16886I och A16886II äro baserade på salterna torkade vid rums- temperatur i vakuum över vattenfri kalciumklorid under ungefär 15 h.

Den elektrometriska titreringen genomfinwbs med monoammoniumsaltet av antibiotikum A16886I i en 66 %-ig dimetylformamid-vattenlösning vid ett ursprungligt pH av 6,50.

Elementaranalyser utfördes på monoammoniumsalterna av A16886I och A16886II torkade i vakuum vid ungefär 8000 över fosforpentoxid.

Analys av monoammoniumsaltet av antibiotikum A16886I visar en metoxyl- halt av 5,02 %; närvaron av metoxylgruppen bekräftades genom ett enkelband vid 3,53 miljondelar i NMR-spektret. Ett test enligt Van Slyke för aminokväve i monoammoniumsaltet av antibiotikum A16886I visade 5,3 %.

NMR-spektret för A16886I 1 D20 visade följande karakteristiska värden: 5,19 miljondelar (1H, enkelband); h,9h, ü,7Ä miljondelar ~ 40 7z1s32v~2 4 (2H, AB kvartett, J = 13 Hz) n,o-h,2 miljonaelar (1H, mu1tipe1); 3,68, 3,32 miljonaelar (2H, AB kvartett, J = 18 Hz), 3,53 miljon- delar (3H, enke1band); 2,6-2,u miljonaelar (2H, mu1cipe1); 2,1-1,6 miljondelar (HH, multipel).

UV-spektret för monoammoniumsaltet av antibiotíkum A16886I 1 % 1 cm 165); cirkulär dikroism uppmättes även i H. 132) vattenhaltig lösning visar absorptionsmaxima vid 2ä2 mp (E och vid 26k mu (E 1 fm = vattenhaltig lösning och visade en positiv Cotton-effekt vid 263 mp och en negativ Cotton-effekt vid 236 mu.

Papperskromatografi av ammoniumsaltet av antibiotikum A16886I på Whatman nr 1 papper gav ett Rf-värde av 0,ü1 i ett lösningsmedel- system av propanol, acetonitril och vatten i ett volymförhållande av 1:1§1. Bioautogram erhöllos genom att placera papperskromatogrammet på agarplattor påförda Salmonella gallinarum som testorganism. É Då monoammoniumsaltet av A16886I underkastas tunnskiktskromato- grafi på silikagelplattor i 70 %-ig vattenhaltig acetonitril med an- vändning av ett ninhydrinspray som detektor, har detta ett Rf-värde av ungefär 0,51; på cellulosaplattor i acetonitril, isopropanol, vatten (1:1:1) med användning av samma detekteringsförfarande, hade saltet ett Rf-värae{av 0,36.

Aminosyraanalys av ett syrahydrolysat av antibiotikum A16886I, utförd enligt Spackman-Moore-Stein, visade två ninhydrinreagerande toppar, varvid den ena eluerades identiskt med glycin (O,61 umol/mg), och den andra eluerades just före glycin och identifierades som a- -aminoadipinsyra (1,97 umol/mg).

Elektrometrisk titrering av monoammoniumsaltet av antibiotikum A16886II i en 66 %-ig dimetylformamid-vattenlösning vid ett ursprung- ligt pH av 7,7, avslöjade närvaron av fyra titrerbara grupper: pK'a1 = ü,U; pK'a2 = 5,7; pK'a3 = 9,6; pK'ah = 10,h. Vid liknande titrering av ett senare prov, med undantag av att detta genomfördes vid ett ursprungligt pH av 6,8, voro resp. värden Ä,O, 5,3, 9,2 och 10,5.

Analys av monoammoniumsaltet av A16886II avslöjade icke någon metoxylhalt, och, i motsats till faktorn I, såg man icke någon signal, som kunde tillskrivas metoxylgruppen, i NMR-spektret för monoammonium- saltet av A16886II. Ett test enligt Van Slyke för aminokväve på mono- ammoniumsaltet av antibiotikum A16886II visade 5,1 %.

NMR-spektret för A16886II i D20 avslöjade följande data: 5,67 miljondelar (1H, dublett, J = 5 Hz); 5,15 mi1jonde1ar (1H, dublett, J = 5 Hz); 4,90, h,68 miljøndelar (2H, AB kvartett, J = 13 Hz); 3,9-3,7 (1H, multípe1); 3,69, 3,39 (ZH, AB kvartett, J = 18 Hz); ho 7315327-2 2,6-2,3 (za, mu1:ipe1); 2,1-1,5 (än, multipel).

UV-spektret för monoammoniumsaltet av antibiotikum A16886II i vattenhaltig lösning visar ett absorptionsmaximum vid 260 mu (E 1 cm = 148); cirkulärdikroism uppmättes även i vattenhaltig lös- ning och uppvisade positiv Cotton-effekt vid 258 mu och en negativ Cotton-effekt vid 228 mu.

Papperskromatografi av monoammoniumsaltet av antibiotikum A16886II på Whatman nr 1 papper gav ett Rf-värde av 0,33 i ett lös- ningsmedelssystem av propanol, acetonitril, och vatten i ett volym- förhållande av 1:1:1. Bioautogram erhöllos genom att placera pappers- kromatogrammet på agarplattor behandlade med Salmonella gallinarum som testorganism.

Då monoammoniumsaltet av A16886II underkastas tunnskiktskromato- grafi på si1ikage1p1attor,i 70 %-ig acetonitril med användning av ett ninhydrinspray eller en bioautografisk metod som detektor, har saltet ett Rf-värde av ungefär O,h2; på cellulosaplattor i aceto- nitril, isopropanol, vatten (1:1:1), med användning av samma detek- teringsförfarande, har saltet ett Rf-värde av 0,29.

Aminosyraanalys av ett syrahydrolysat av antibiotikum A16886II, företagen enligt Spackman-Moore-Stein, visade primärt endast en ninhydrinreagerande topp; det eluerades strax före glycin och såsom i fall av antibiotikum A16886I, identifierades det som a-aminoadipin- syra (2,1 umol/mg). Det förekom emellertid även en mycket mindre topp, som eluerades, identiskt med glycin. Ett senare prov analyserades på 'liknande sätt och uppvisade värdena 2,1 umol/mg resp. 0,13 umol/mg.

Dessutom underkastades var och en av faktorerna I och II av monoammoniumsaltet av antibiotikum A16886 papperskromatografi och tunnskiktskromatografi i ett antal andra lösningsmedelssystem med följande resultat.

Lösningsmedelsszstem Rf-värde Faktor I Faktor II Papperskromatografi Etanol, vatten (80:20) med 1,5 % natriumklorid, papper impregnerat med 1N natriumsulfat 0,38 0,33 Butanol mättad med vatten orörlig orörlig Butanol mättad med vatten plus 2 % p-toluensulfonayra 0,39 9,32 Metylisobutylketon mättad med vatten orörlig porörlig ho i7z1s3è?~2 Lösningsmedelssxstem Rf-värde Faktor I Faktor II Paggerskromatografi Metylisobutylketon mättad med vatten plus 2 $ p-toluensulfonsyra orörlig orörlig Metylisobutylketon mättad med vatten plus 2 % piperidin Orörlíg Orörliš Acetonitril orörlig orörlig Propanol, acetonitril, metanol, vatten (4:3:2:1) orörlig orörlig Propanol, p ridin, ättiksyra, vatten (15:10:3:12š 0,32 0,27 Propanol, pyridin, ättiksyra, aceto- nicril, vatten (h5;3o=9=uo=36) 0,21 o,r5 Butanol, ättiksyra, vatten (3:1:1) 0,20 0,17 _ Etylaeetat, ätfiksyra, vatten (3=1=1) 0,29 0,22 “ Propanol, vatten (70:30) 0,17 0,17 Acetonitril, vatten (70:30) 0,72 0,65 vatten, etanol, ättiksyra (7o:h2=6) 0,82 0,82 Tunnskiktskromatografí Acetonitril, vatten (7:3) på cellulosa- plattor 0,35 0,29 Antibiotikum Al6886 och dess salter uppvisa aktivitet mot växt- patogena bakterier. Således bekämpar antibiotikum A16886 och dess salter sådana växtpatogena bakteriella infektioner, såsom av bakte- rier förorsakad nedvissning, fläckar och mjöldagg.

Det exakta sätt, varpå antibíotikum A16886 eller ett salt därav appliceras på växter är icke kritiskt. Allmänt angriper organismen ifråga först bladverket, och av detta skäl föredras ofta att detta behandlas med antibíotikum A16886 eller ett salt därav. Emellertid äro antibiotikum A16886 och salter därav translokaliserade, varför anbringande även kan ske på stjälkar, blommor, frön, rötter eller andra växtdelar för erhållande av fullständig baktericid verkan i hela växten. _ Föreliggande förfarande för bekämpning av växtpatogena bakterier . innebär att en växt, som är utsatt för bakterierna, behandlas med en effektiv mängd antibiotikum A16886 eller ett salt därav. Det är icke ÄO 7315327-2 kritiskt för detta förfarande att nämnda antibiotikum används som en enda faktor, varvid var och en av faktorerna I och II kan användas enbart och ger goda resultat. Alternativt kan blandning av faktorern användas. Antibiotikum A16886 eller ett salt därav kan användas utan modifikation, men i allmänhet är det lämpligt för växtbehandlings- ändamål att använda en komposition, som omfattar antibiotikum A16886 eller ett salt därav och ett eller flera hjälpmedel. Vid framställning av dessa kompositioner kan antibiotikum A16886, eller dess salt, modi- fieras med vatten eller andra vätskeformiga bärare, organiska lös- ningsmedel, ytaktiva medel innefattande fasta ytaktiva medel, eller inerta, finfördelade fastämnen eller inerta, granulformiga fastämnen.

Den exakta koncentrationen för antibiotikum A16886 eller ett salt därav i en sådan komposition är icke kritisk och varierar med det särskilda ändamål, för vilket kompositionen är avsedd. För anbringan- de på blad för bekämpning av typiska växtpatogena bakteriella infek- tioner ge koncentrationer av antibiotikum A16886 eller ett salt därav av från 10 miljondelar till 1000 miljondelar eller mer goda resultat.

I fall av damm för anbringning på blad, äro föredragna koncentrationer av nämnda antibiotikum 0,1-10,0 %. _ Vid framställning av vätskeformiga kompositioner kan antibiotikum A16886 eller ett salt därav blandas med en lämplig vätska och ett . lämpligt aktivt disperserande medel för erhållande av emulgerbara koncentrat, vilka vidare kunna utspädas med vatten eller annan vätska för erhållande av sprayblandningar. Föredragna disperserande medel, som kunna användas i dessa kompositioner, innefatta de nonjoniska emulgermedlen, såsom kondensationsproduktorna av alkylenoxid med oorganiska syror, polyoxietylenderivat av sorbitanestrar, komplexa eteralkoholer och liknande. Lämpliga organiska vätskor, som kunna användas i kompositionen, innefatta petroleumoljor och destillat, toluen och syntetiska, organiska oljor. De ytaktiva, disperserande medlen användas vanligtvis i vätskeformiga kompositioner i en mängd av från 0,1 till 20 vikt-% av den sammanlagda vikten av det disper- serande medlet och den aktiva föreningen. Vid framställningen av puderkompositioner kan antibiotikum A16886 eller ett salt därav blandas med något av de finfördelade fastämnena eller granuler, som typiskt användas i kemiska kompositioner inom jordbruket.

I enlighet med föreliggande uppfinning kan antibiotikum A16886 eller ett salt därav eller en komposition innehållande nämnda anti- biotikum eller ett salt därav anbringas på de organismer, som skola bekämpas, eller på deras växtställen, på något lämpligt sätt, exempel-l '7315327-2 vis med hjälp av handströare eller sprutanordningar. Anbringning på de ovan jord befintliga delarna av växterna kan genomföras med pulver- ströare, olika sprutanordningar och kombination av sprutanordning och ströare. Vid anbringande på blad eller lövverk bör de använda kompo- sitionerna inte innehålla några väsentliga mängder fytotoxiska ut- spädningsmedel. I större skala kunna pulvren eller vätskeformiga kom- positioner av låg volym anbringas från flygplan.

Följande exempel 1-6 belysa denna utföringsform av föreliggande uppfinning och göra det möjligt för fackmannen att utöva densamma.

I vart och ett av dessa exempel användes antibiotikum A16886 som en blandning av monoammoniumsaltet av faktorn I och monoammoniumsaltet av faktorn II.

Exempel 1 Erwinia amylovora och Pseudomonas solanacearum, in vitro Antibiotikum Å16886 undersöktes in vitro med avseende på hämning av Erwinia amylovora och Pseudomonas solanacearum. Var och en av organismerna införlivades separat i näringsagar enligt standrad, och den erhållna agarn applicerades på ett flertal plattor och fick stelna. Behandlingen utfördes därefter, varvid olika plattor behand- lades på olika sätta Enligt ett behandlingssätt pipetterades 0,1 ml av testlösningen i var och en av två små stålcylindrar, som var placerade upprätta på en viss agaryta. Enligt ett annat sätt impreg- nerades 0,1 ml av testlösningen på var och en av två filteranalys- skivor, som placerades på en viss agaryta. Testlösningen för de båda behandlingssätten framställdes genom att upplösa den lämpliga mängden antibiotikum A16886 i glasdestillerat vatten. Resultaten, uttryckta som diametern för hämningszonen, framgå av nedanstående tabell. 731532?-2 . .wnfifiëmflaxmkfafiwv flowflfl EE nw >N uflmfihovmflou Hm .Hmnmxwvfiw .Hwfihmfl “EE MF u xufihovw wndïmxmamuflwm kmuvdhwfiflfl ... N _.. . .wflfiQEmSvXm>HHflv iwwifi EE w >ü MQATHOPWCUON CN 'HÖ-Hflvflfimu-Hfl .Hw-Hbflmfiv mEE W I VfiOHHOn-W WFFHÜÜaHH-HÄÜ .Hfluwfifllfim-HÉH I dv min. www . wè _ m~:n- ^n@»»w> »mnoflflflpmwuv flflonpcou munen oN|oN ¶, _* onaon . w-|nF¶ . nmaøusowflflfi oo- | wwwwF< on|on ß~|w_ mmnmæ ¶ . afiuw- nu~@v:ofiH«a om 1 wmwwP< ..~|o~ nF|n~ . . . >_|u_ w|w nßflmnnowfifis ow 1 wwww.< Eflhdoofiümaow .ß dHo>oH>Em .W E-...Hdmodicaom .m fmhosöfi Em .N . mßkrflxmhouflflh . . dhmhflflwfläoflmvw . . .fiEI w .......:wE=:.w...5fl|o.N | hmawwëndfin ä Hflunmh C) f' ”730105327-2' _ Exempel 2 Pseudomonas solanacoarum. bladsurav.

Antibiotikum A16886 utvärderades även in vivo för bekämpning av Pseudomonas solanacearum på tomatplantor. I detta försök till- -verkade man ett flertal vattenhaltiga kompositioner utgående från antibiotikum A16886, monoammoniumsalt, varvid kompositionerna lik- formigt innehöll 1 É etanol och 0,1 É av ett ytaktivt model (ett polyoxietylderivat av fettsyrapartialester av sorbitolanhydrid) men innehållande olika koncentrationer av antibiotikum A16886. 30 dygn gamla tomatplantor användes i detta försök, två plantor per kruka D per behandling. Plantorna i varje kruka behandlades med en av be- handlingslösningarna, fick lufttorka, och ympades därefter med ett medium, som underhöll en aktiv tillväxt av Pseudomonas solanacearum.

Alla plantorna höllos under 2h h i en fuktkammare¿ avlägsnades där- oftor.och höllos under 7 dygn under goda bruksbetingelser. Vid slutet av denna 7 dygns period observerades alla plantorna för att bestämma 'närvaron, och om så var fallet, graden av infektion. Resultaten fram- gå av följande tabell; sjukdomsgraden uppskattades på en skala från O till Ä, varvid 0 anger ingen bekämpning, ü representerar fullständig bekämpning,.och varvid varje planta uppskattades separat.

Tabell 5 “ 3 Pseudomonas solanacearum Q --f _ Sjukdomsgrad Kontroll (1 % Et0H # 0,1 % yt- _ _ ' "" _ 0 ' I 0' aktiv: medel) A16ss6 _ uoo miljonaelar ' :i ,2+ r 3+ 116886 - zoo miljondelar .z+ _ 2+ Kontrollplantorna uppvisade en kraftig infektion orsakad av Pseudo- v 7 .

Pseudomonas glvcinia; rotneddonnning.

:Antibiotikum Al6S86 utvärderades med avseende på bekämpning av Pseudomonas glycinia med hjälp av lösningar innehållande A16886 för neddoppning av rötter. Det förelåg två sådana lösningar, varvid den ena innehöll 200 miljondelar antibiotikum A16SS6 och den andra inne- höll #00 miljondelar antibiotikum A16886. Tio dagar gamla sojabön- plantor ympades med Pseudomonas glycinia, och rötterna på alla plan- monas solanacearum. ' torna hölls under hela försöket i vattenhaltiga lösningar. Till att börja med placerades de behandlade plantorna i 50 ml lösning, en grupp av plantor i lösningen med koncentrationen 200 miljondelar, ", 11 7315327-2 en andra grupp av plantor i lösningen med koncentrationen #00 miljon- delar, en tredje grupp av plantor i vatten för att tjäna som kontroll.

Rötterna indränktes under 24 h, varvid luftning förekom under denna period. Plantorna, med rötterna fortfarande i de åtskilliga lösningarna inkuberades därefter Zü h. Därefter avlägsnades plantorna från inkuba- tionskammaren och höllos under en period av en vecka. Ned början unge- fär med inkubationsperioden och fortsättning under hela veckan till- sattes en lösning innehållande näringsmedel till rötterna för att bi- behålla plantorna i ett levande tillstånd. Vid slutet av veckan obser- verades plantorna för att bestämma graden av utveckling av Pseudomonas glycinia; sjukdomsgraden uppskattades på en skala från O till Ä, varvid 0 anger ingen bekämpning, och Ä representerar fullständig bekämpning.

Resultaten framgå av följande tabell. ' en 'Tabell 6 Uppskattad sjukdomsgrad för Pseudomonas glvcinia Kontroll ¿ _ - 0 A16s86 _ zoo miljondeiar 3 + A16886 - hoo miijønaeiar _ ' 2 + ' Exempel Ä šanthomonas nhaseoli var. sojensis. bladsprav.

I ett första försök ympades 10 dagar gamla sojabönplantor med *Q en suspension av Xanthomonas phaseoli var. sojensis genom neddoppning av de undre bladytorna på de primära bladen. Två timmar senare spruta- des bladverkot med en lösning, varvid en grupp av de ympado plantorna behandlades med en lösning innehållande 100 miljondelar antibiotikum A16886, och en andra grupp med en lösning innehållande 500 miljondelar antibiotikum A16886, En vattenkomposition av antibiotikum A168S6 fram- ställdes med en koneentration av 353 miljondelar av en blandning av nonjoniska, vätskeformiga emulgermedel på basis av sulfonat.

I ett andra försök sprutades bladverket för 10 dagar gamla sojabönplantor med en lösning innehållande antingen 100 eller 500 delar antibiotikum A16886, och två timmar senare, ympades dessa med användning av samma förfaranden, som användes i det första försöket.

Kompositionen av antibiotikum A16886 var densamma som i första för- söket.

Plantbrna höllos under goda bruksbetingelser under en period av ungefär 11 dygn och observerades sedan med avseende på närvaron eller frånvaron av Xanthomonas phaseoli var. sojensis. Resultaten framgå av följande tabell, varvid sjukdomsgraden uppskattades på en skala från ; -731532?-2' fi Q e O till Ä såsom i föregående exempel.

Tabell Z Sjukdomsgrad per behandlad grupp av " plantor _ Xanthomonns nhaseoli var. sojensis ~ Ympning därefter Sprutning därefter snrutninq Xmpninf Kontrol (endast vatten) 0 ' O Kontroll (vatten plus blandning av emulger~ medel) _ - 0 O A168S6 - 100 miljOndelar 2 Ä A16S86 - 500 miljondelar 3+ , 4 Exemoel § Pseudomonas faseolieola, bladsnray._ _ Alla ytor på Å0 dagar gamla röda rosenbönplantor sprayades med en vattenhaltig komposition innehållande #00 miljondelar antibiotikum A16886 een 0,1 $ avïett ytaktivt medel (ett pólyoxiefiylenderivat av en fettsyrapartialester av sorbitolanhydrid). De sprutade plantorna fick torka och ympades därefter med Pseudomonas phaseolicola; ympning genomfördes genom att i vatten neddoppa den undre bladytan av var och en av de första och andra trehövdade bladen med en vattenhaltig bak- teriell suspension vid 30 % ljustransmission på en Bausch och Lomb Spectronie 20. Plantorna höllos därefter i en fuktkammare under Zä h, _ avlägsnades därefter'och höllos under goda bruksbetingelser under 14 dygn. Vid slutet av denna period observerades alla plantorna; i den behandlade gruppen av plantor förelåg,en moderat bekämpning av Pseu- domonas phaseoeicola, medan i kontrollgruppen det förekom en kraftig utveckling av sjukddmen.

Exemoel_6 _Pseudömonas solanacearum, separat bladsorav eller stjälksprav.

:Antibiotikum Ä16886 blandades i vatten med användning av en blandning av två nonjoniska, vätskeformiga emulgermedel på sulfonat- bas för erhållande av två behandlingslösningar, varvid den ena inne- höll 100 miljondelar A16886, den andra innehöll #00 miljondelar anti- biotikum A16886 och var och en innehöll 353 miljondelar av emulgator- blandningen. Grupper om 28 dagar gamla tomatplantor anvähdes; vid ett av försöken anbringades lösningen på stjälkarna enbart, och i det andra försöket anbragtes lösningen på bladen endast. 2 h efter behandling med användning av vardera metoden ympades plantorna genom att_insdtta tandpetare neddoppade i en buljongkultur av Pseudomonas solanacearum i 1š '7315327-2 13 stjälken vid hjärtbladen. Plantorna höllos under goda bruksbetingolser under 10 dygn och observerades dürnftor för att bestämma bokämpníng av sjukdomen. Resultaten, på en skala av 0-N, varvid 0 indikerar ingen bekämpning och Å indikerar fullständig bekämpning, voro följande.

Tabell 8 Kontroll (vatten plus 353 miljondelar av en blandning av emulgqr- medel A16886 - IOO miljon- delar A16886 - hoo miljon delar- _ Pseudomonas solanacearum Uppskattad sjukdomsgrad Endast Behandlade Endast Behandlade blad blad stjälkar stjälkar 0 1 O 1 3 H 3 4 h h h 4

Claims (1)

11-, PATENTKRAV Nya föreningar till användning för bekämpning"av'vâXtpa- togena bakterier, k ä n n e t e c k n a d e av att de utgöres av antibiotikum A 168861 och/eller antibiotíkum A 16886II och/eller ert salt därav, varvid antibiotikum A 168861 är en metoxylhaltig svavel- haltig peptid med en amfoter molekyl och har formeln: nnz O H ocn 3 5 O on (cu2)3 c Nu I r/ H I coon ¿;-N /- -cH2-o-c-Nnz Û | " coon vars monoammoniumsnlt är ett vitakhigt, fluffigb, amorft fastämne, som mjuknnr mellan 190 och 30000, med en färgförändring till mörk- brunt; som är mycket lösligt i vatten, något lösligt i lägre alkano- ler och olösligt i acebonitril; som är amfotert med Ä titrerbara grupper vid pK'a1 = ü,1; pK'a2 = 5,3; pK'a3 = 9,3 och pK'au = 10,5; som har en skenbar molekylvikt av ungefär 530 bestämd från titre- ringsdata; som har den ungefärliga sammansättningen 30,26 % kol, 5,9l % väte, 13,98 É kväve, 33,37 É syre, och 7,21 % svavel; som har en specifik optisk rotaLion[Q]š§ + 153,5° (C = 1 % vikt/volym i vatpen); varvid cn mincralo1jeLablott därav har följande särskilj- bara band i sitt IR-spektrum vid följande våglängder, uttryckta i /Lm 3|101 5vÛ8rVÜ1301 61.60; 7:20, 79501 8183: 99351 99609 9985! 11,60 och 12,90, varvid antibiotikum A 1088611 är en icke-metoxylhal- tig svavelhaltíg peptjd med en amfotcr mulckyl och har formeln NH_ Ä o I 2' j n o , ___ M _ M/,s e cn ___m(cn2)3___.c Nn I \L__ H I .___ cn -o-c-NH coon Û N"\ç> 2 2 o coon vars ammoniumsaïl är ett viLakLigt, fluffigt, nmorft fastämne, som mjuknur mollnn 190 och 30090 mod en färgförändring till mörkbrunt; som är mycket Lößiigt i vatten, något lösligt i lägre alkanoler och olösligt i acoLoniLri1; som är amfotert med fyra titrerbara grupper vid pK'a5 = Ü,O; p('n2 = 5,3; pK'a3 = 9,2 och pK'ah = 10,5; som har en skenbar molckylvikt av ungefär 528 bestämd från bitreringsdata; 4 415ff 766 15 son! har (len ungefïirlípçn szmnnansšiLlmiršlgen LH. ,0l ß k01, 5,6!! väte, 15,75 % kväve, 29,28 % syre och 7,0ü % svavel; som har en specifik optisk rotation, [QIÉS + 86,2° (C = 1 %, vikt/volym i vatten); varvid en mineraloljetablett clärav har följande särskiljbara band i sitt . . ILR-spektrunn vid föLjande våglängder, uttryckta i ßm: S,15,' 5,70%- 6,3o, 722, 7,614, 9,05, 9,110, 9,65 0c1111,6(.\. ' ÅNFÖRDÅ PUBLIKATIONER: Sverige 198 707, 362 897 US 3 436 310