SE415766B

SE415766B - ANTIBIOTICUM A 16886 I AND / OR ANTIBIOTICUM A 16886 II FOR THE FIGHT AGAINST VECTROPATHOGENIC BACTERIA

Info

Publication number: SE415766B
Application number: SE7315327A
Authority: SE
Inventors: M Gorman; C E Higgens; R Nagarajan
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1969-08-12
Filing date: 1973-11-13
Publication date: 1980-10-27
Also published as: SE384690B; ES393985A1; DE2040141B2; NO132242C; DK128017B; FI45990B; IL35065A; JPS519370B1; YU36539B; CA954809A; CH594050A5; GB1315177A; ES382658A1; JPS4945594B1; IL35065A0; BR6915079D0; RO58570A; AT297932B; CH597347A5; DK128341B

Description

10 _25 ßss ho 7315327-2 BOOOC med en färgförändring till mörkbrunt; som är mycket lösligt i vatten, något lösligt i lägre alkanoler, och olösligt i acetonitril; och som är amfotert; monoammoniumsaltet av A1688HI utmärkes vidare av fyra titrerbara grupper vid pK'a1 = h,1; pK'a2 = 5,2; pK'a3 = 9,3 och pK'ah = 10,5; har en skenbar molekylvikt av ungefär 530 bestämd utgående från titreringsdata; har den ungefärliga sammansättningen ho,26 % kol, 5,91 $ väte, 13,98 % kväve, 33,37 % syre och 7,21 % svavel; har en specifik, optisk rotation /a/D25 + 153,6° (c = 1 $, vikt/volym i vatten); och då man maler ämnet till en tablett till- sammans med mineralolja, och utsätter denna för IR-strålning erhålles följande särskiljande band i IR-spektret vid följande våglängdæg ut- tTYckta 1 Um: 3:10! 5:68! 61300 6960; 7:20! 70601 81831 9135: 9:60! >9,S5, 11,60 och 12,90 och monoammoniumsaltet av antibiotikum A16886II, utmärkes av fyra titrerbara grupper vid pK'a1 = ü,0; pK'a2 = 5,3; pK'a3 = 9,2 och pK'au = 10,5; har en skenbar molekylvikt av ungefär 528 bestämd utgående från titreringsdata; har följande ungefärliga sammansättning, nämligen 41,01 % kol, 5,6u % väte, 15,75 % kväve, 29,f3% syre och 7,0ä $ svavel; har en specifik, optisk rotation l /G/D25 + 86,20 (C = 1 %, vikt/volym i vatten), och som under samma betingelser som ovan har följande särskiljande band i sitt IR-spektrum? vid följande våglängder uttryckta i um: 3,15, 5,70, 6,30, 7,22, 7,6ü, 9105» 9oh0| 9:65 Och 111600 Antibiotikum A16886 är en svavelhaltig peptid med en amfoter molekyl. Såsom är fallet med många antibiotikumproducerande kulturer resulterar fermentation av Streptomyces clavuligerus NRRL 3585 i fram- ställningen av ett antal antibiotiska föreningar, benämnda faktorer. 10 _25 ßss ho 7315327-2 BOOOC with a color change to dark brown; which is very soluble in water, slightly soluble in lower alkanols, and insoluble in acetonitrile; and which is amphoteric; the monoammonium salt of A1688HI is further distinguished of four titratable groups at pK'a1 = h, 1; pK'a2 = 5.2; pK'a3 = 9.3 and pK'ah = 10.5; has an apparent molecular weight of about 530 determined based on titration data; has the approximate composition ho, 26% carbon, $ 5.91 hydrogen, 13.98% nitrogen, 33.37% oxygen and 7.21% sulfur; has a specific optical rotation / a / D25 + 153.6 ° (c = 1 $, weight / volume in water); and when grinding the substance into a tablet for together with mineral oil, and exposing it to IR radiation is obtained the following distinguishing bands in the IR spectrum at the following wavelength tTYckta 1 Um: 3:10! 5:68! 61300 6960; 7:20! 70601 81831 9135: 9:60! > 9, S5, 11.60 and 12.90 and the monoammonium salt of antibiotic A16886II, is characterized by four titratable groups at pK'a1 = ü, 0; pK'a2 = 5.3; pK'a3 = 9.2 and pK'au = 10.5; has an apparent molecular weight of approximately 528 determined from titration data; has the following approximate composition, namely 41.01% carbon, 5.6u% hydrogen, 15.75% nitrogen, 29, f3% oxygen and 7.0ä $ sulfur; has a specific optical rotation l / G / D25 + 86.20 (C = 1%, w / v in water), and as below the same conditions as above have the following distinctive bands in their IR spectrum? at the following wavelengths expressed in μm: 3.15, 5.70, 6.30, 7.22, 7.6ü, 9105 »9oh0 | 9:65 And 111600 Antibiotic A16886 is a sulfur-containing peptide with an amphoteric molecular. As is the case with many antibiotic-producing cultures fermentation of Streptomyces clavuligerus NRRL 3585 results in the status of a number of antibiotic compounds, named factors.

Antibiotikum A16886, som i föreliggande fall erhållits från fermentorn, omfattar två huvudsakliga antibiotiska föreningar, vilka häri benämnas A16886I och A16886II eller faktor I och faktor II. Dessutom ha mindre mängder av andra antibiotiska föreningar observerats vid vissa fer- mentationer, men, eftersom de endast föreligga i mycket små mängder, ha de icke karakteriserats. Således används det omodifierade ut- trycket "antibiotikum A16886" häri för att beteckna det antibiotikum, som erhålles från fermentorn och som i vanliga fall omfattar 1-99 % av faktorn I och 99-1 %.av faktorn II förutom andra små faktorer, var- vid den totala halten är 100 %. Följaktligen avser i efterföljande diskussion av användbarhet och användningssätt uttrycket “antibioti- kum A16886" likaledes individuella faktorer som blandningar därav, så länge som egenskaperna för de individuella faktorerna och blandningar-I na därav äro lika. to '7315327-2 Antibiotikum A16886 kan användas som sådant eller som ett salt, exempelvis ett syraadditionssalt eller ett salt med en katjon. I fall av ett salt med en katjon kan saltet antingen vara envärt eller två- värt. Det är ofta lämpligt att framställa salter direkt vid renings- förfarandet, så att nämnda antibiotikum föreligger i saltform då det separerats. Antibiotikum AT6886 har separerats på detta sätt, som monoammoniumsaltet, och av detta skäl karakteriseras antibiotikum A1688§ som monoammoniumsaltet.Antibiotic A16886, which in the present case was obtained from the fermenter, comprises two main antibiotic compounds, which are referred to herein A16886I and A16886II or factor I and factor II. Also have less amounts of other antibiotic compounds have been observed in certain mentions, but, since they exist only in very small quantities, they have not been characterized. Thus, the unmodified output is used. the term "antibiotic A16886" herein to denote the antibiotic, obtained from the fermenter and which usually comprises 1-99% of factor I and 99-1% .of factor II in addition to other small factors, at the total content is 100%. Consequently, in the following discussion of usefulness and uses the term “antibiotic kum A16886 "likewise individual factors such as mixtures thereof, so long as the properties of the individual factors and mixtures-I and hence are equal. to '7315327-2 Antibiotic A16886 can be used as such or as a salt, for example an acid addition salt or a salt with a cation. In case of a salt with a cation, the salt may be either monovalent or divalent. worth. It is often convenient to prepare salts directly at the purification point. the process, so that said antibiotic is in salt form when it separated. Antibiotic AT6886 has been separated in this way, as the monoammonium salt, and for this reason the antibiotic is characterized A1688§ as the monoammonium salt.

Vissa karakteriseringar ha gjorts på blandningen av faktorerna I och II. Exempelvis har ett antal kvalitativa kemiska försök utförts med en blandning av monoammoniumsaltet av faktorn I och monoammonium- saltet av faktorn II: positiva försök eller test erhöllos med nin- hydrin, Pan Dutscher, Benedict, Molisch, Fehling, dansylklorid, jod, och ferrikloridreagens, men negativa test erhöllos med biuret och reagens enligt Sakaguchi. En blandning av monoammoniumsalterna av faktorerna I och II torkad vid rumstemperatur i vakuum över vatten- fri kalciumklorid under ungefär 15 h, uppvisade en optisk rotation /a/D25 + 110,1° (C = 1 %, vikt/volym i vatten). En blandning av mono- ammoniumsalterna av faktorerna I och II av antibiotikum A16886 är stabil vid pH 3-8 vid 6°C under 8 dygn och relativt stabil vid pH 3-8 vid 25°c under två dygn. Den biologiska aktiviteten går långsamt förlorad vid pH 3-8 vid en temperatur av 2500, varvid hälften förlo- rats efter Ä dygn.Some characterizations have been made on the mixture of factors I and II. For example, a number of qualitative chemical tests have been performed with a mixture of the monoammonium salt of factor I and the monoammonium the salt of factor II: positive trials or tests were obtained with nin- hydrin, Pan Dutscher, Benedict, Molisch, Fehling, dansyl chloride, iodine, and ferric chloride reagents, but negative tests were obtained with biuret and reagent according to Sakaguchi. A mixture of the monoammonium salts of factors I and II dried at room temperature in vacuo over water free calcium chloride for about 15 hours, showed an optical rotation / a / D25 + 110.1 ° (C = 1%, w / v in water). A mixture of mono- the ammonium salts of factors I and II of antibiotic A16886 are stable at pH 3-8 at 6 ° C for 8 days and relatively stable at pH 3-8 at 25 ° C for two days. The biological activity is slow lost at pH 3-8 at a temperature of 2500, half losing rats after Ä day.

Dessutom ha monoammoniumsalterna av faktorerna I och II separat karakteriserats, såsom omnämnts ovan. De ovannämnda värdena för den specifika, optiska rotationen för monoammoniumsalterna av antibioti- kum A16886I och A16886II äro baserade på salterna torkade vid rums- temperatur i vakuum över vattenfri kalciumklorid under ungefär 15 h.In addition, have the monoammonium salts of factors I and II separately characterized, as mentioned above. The above values for it specific optical rotation of the monoammonium salts of antibiotic A16886I and A16886II are based on the salts dried at room temperature. temperature in vacuo over anhydrous calcium chloride for about 15 hours.

Den elektrometriska titreringen genomﬁnwbs med monoammoniumsaltet av antibiotikum A16886I i en 66 %-ig dimetylformamid-vattenlösning vid ett ursprungligt pH av 6,50.The electrometric titration through ﬁ nwbs with the monoammonium salt off antibiotic A16886I in a 66% dimethylformamide aqueous solution at an initial pH of 6.50.

Elementaranalyser utfördes på monoammoniumsalterna av A16886I och A16886II torkade i vakuum vid ungefär 8000 över fosforpentoxid.Elemental analyzes were performed on the monoammonium salts of A16886I and A16886II dried in vacuo at about 8000 over phosphorus pentoxide.

Analys av monoammoniumsaltet av antibiotikum A16886I visar en metoxyl- halt av 5,02 %; närvaron av metoxylgruppen bekräftades genom ett enkelband vid 3,53 miljondelar i NMR-spektret. Ett test enligt Van Slyke för aminokväve i monoammoniumsaltet av antibiotikum A16886I visade 5,3 %.Analysis of the monoammonium salt of antibiotic A16886I shows a methoxyl- content of 5.02%; the presence of the methoxyl group was confirmed by a single bands at 3.53 parts per million in the NMR spectrum. A test according to Van Ammonia nitrogen sludge in the monoammonium salt of antibiotic A16886I showed 5.3%.

NMR-spektret för A16886I 1 D20 visade följande karakteristiska värden: 5,19 miljondelar (1H, enkelband); h,9h, ü,7Ä miljondelar ~ 40 7z1s32v~2 4 (2H, AB kvartett, J = 13 Hz) n,o-h,2 miljonaelar (1H, mu1tipe1); 3,68, 3,32 miljonaelar (2H, AB kvartett, J = 18 Hz), 3,53 miljon- delar (3H, enke1band); 2,6-2,u miljonaelar (2H, mu1cipe1); 2,1-1,6 miljondelar (HH, multipel).The NMR spectrum of A16886I 1 D20 showed the following characteristic values: 5.19 parts per million (1H, single band); h, 9h, ü, 7Ä parts per million ~ 40 7z1s32v ~ 2 4 (2H, AB quartet, J = 13 Hz) n, o-h, 2 million (1H, mu1type1); 3.68, 3.32 million (2H, AB quartet, J = 18 Hz), 3.53 million parts (3H, single band); 2.6-2 .mu million (2H, mu1cipe1); 2.1-1.6 parts per million (HH, multiple).

UV-spektret för monoammoniumsaltet av antibiotíkum A16886I 1 % 1 cm 165); cirkulär dikroism uppmättes även i H. 132) vattenhaltig lösning visar absorptionsmaxima vid 2ä2 mp (E och vid 26k mu (E 1 fm = vattenhaltig lösning och visade en positiv Cotton-effekt vid 263 mp och en negativ Cotton-effekt vid 236 mu.UV spectrum of the monoammonium salt of antibiotic A16886I 1% 1 cm 165); circular dichroism was also measured in HRS. 132) aqueous solution shows absorption maxima at 2a2 mp (E and at 26k mu (E 1 fm = aqueous solution and showed a positive Cotton effect at 263 mp and a negative Cotton effect at 236 mu.

Papperskromatografi av ammoniumsaltet av antibiotikum A16886I på Whatman nr 1 papper gav ett Rf-värde av 0,ü1 i ett lösningsmedel- system av propanol, acetonitril och vatten i ett volymförhållande av 1:1§1. Bioautogram erhöllos genom att placera papperskromatogrammet på agarplattor påförda Salmonella gallinarum som testorganism. É Då monoammoniumsaltet av A16886I underkastas tunnskiktskromato- grafi på silikagelplattor i 70 %-ig vattenhaltig acetonitril med an- vändning av ett ninhydrinspray som detektor, har detta ett Rf-värde av ungefär 0,51; på cellulosaplattor i acetonitril, isopropanol, vatten (1:1:1) med användning av samma detekteringsförfarande, hade saltet ett Rf-värae{av 0,36.Paper chromatography of the ammonium salt of antibiotic A16886I on Whatman No. 1 paper gave an Rf value of 0.1 in a solvent systems of propanol, acetonitrile and water in a volume ratio of 1: 1§1. Bioautograms were obtained by placing the paper chromatogram on agar plates applied Salmonella gallinarum as a test organism. When the monoammonium salt of A16886I is subjected to thin layer chromatography. on silica gel plates in 70% aqueous acetonitrile with use of a ninhydrin spray as a detector, this has an Rf value of about 0.51; on cellulose plates in acetonitrile, isopropanol, water (1: 1: 1) using the same detection procedure, had the salt has an Rf value of 0.36.

Aminosyraanalys av ett syrahydrolysat av antibiotikum A16886I, utförd enligt Spackman-Moore-Stein, visade två ninhydrinreagerande toppar, varvid den ena eluerades identiskt med glycin (O,61 umol/mg), och den andra eluerades just före glycin och identifierades som a- -aminoadipinsyra (1,97 umol/mg).Amino acid analysis of an acid hydrolyzate of antibiotic A16886I, performed according to Spackman-Moore-Stein, showed two ninhydrin reacting peaks, one eluting identically with glycine (0.61 μmol / mg), and the other was eluted just before glycine and identified as -aminoadipic acid (1.97 μmol / mg).

Elektrometrisk titrering av monoammoniumsaltet av antibiotikum A16886II i en 66 %-ig dimetylformamid-vattenlösning vid ett ursprung- ligt pH av 7,7, avslöjade närvaron av fyra titrerbara grupper: pK'a1 = ü,U; pK'a2 = 5,7; pK'a3 = 9,6; pK'ah = 10,h. Vid liknande titrering av ett senare prov, med undantag av att detta genomfördes vid ett ursprungligt pH av 6,8, voro resp. värden Ä,O, 5,3, 9,2 och 10,5.Electrometric titration of the monoammonium salt of antibiotic A16886II in a 66% dimethylformamide aqueous solution at an original pH of 7.7, revealed the presence of four titratable groups: pK'a1 = ü, U; pK'a2 = 5.7; pK'a3 = 9.6; pK'ah = 10, h. In case of similar titration of a subsequent test, except that this was carried out at a initial pH of 6.8, were resp. values Ä, O, 5.3, 9.2 and 10.5.

Analys av monoammoniumsaltet av A16886II avslöjade icke någon metoxylhalt, och, i motsats till faktorn I, såg man icke någon signal, som kunde tillskrivas metoxylgruppen, i NMR-spektret för monoammonium- saltet av A16886II. Ett test enligt Van Slyke för aminokväve på mono- ammoniumsaltet av antibiotikum A16886II visade 5,1 %.Analysis of the monoammonium salt of A16886II did not reveal any methoxyl content, and, in contrast to factor I, no signal was seen, which could be attributed to the methoxyl group, in the NMR spectrum of monoammonium the salt of A16886II. A test according to Van Slyke for amino nitrogen on mono- the ammonium salt of antibiotic A16886II showed 5.1%.

NMR-spektret för A16886II i D20 avslöjade följande data: 5,67 miljondelar (1H, dublett, J = 5 Hz); 5,15 mi1jonde1ar (1H, dublett, J = 5 Hz); 4,90, h,68 miljøndelar (2H, AB kvartett, J = 13 Hz); 3,9-3,7 (1H, multípe1); 3,69, 3,39 (ZH, AB kvartett, J = 18 Hz); ho 7315327-2 2,6-2,3 (za, mu1:ipe1); 2,1-1,5 (än, multipel).The NMR spectrum of A16886II in D20 revealed the following data: 5.67 parts per million (1H, doublet, J = 5 Hz); 5.15 million (1H, doublet, J = 5 Hz); 4.90, h, 68 environmental parts (2H, AB quartet, J = 13 Hz); 3.9 - 3.7 (1H, multip1); 3.69, 3.39 (ZH, AB quartet, J = 18 Hz); ho 7315327-2 2.6-2.3 (za, mu1: ipe1); 2.1-1.5 (than, multiple).

UV-spektret för monoammoniumsaltet av antibiotikum A16886II i vattenhaltig lösning visar ett absorptionsmaximum vid 260 mu (E 1 cm = 148); cirkulärdikroism uppmättes även i vattenhaltig lös- ning och uppvisade positiv Cotton-effekt vid 258 mu och en negativ Cotton-effekt vid 228 mu.UV spectrum of the monoammonium salt of antibiotic A16886II i aqueous solution shows an absorption maximum at 260 mu (E 1 cm = 148); circular dichroism was also measured in aqueous solution. and showed a positive Cotton effect at 258 mu and a negative Cotton effect at 228 mu.

Papperskromatografi av monoammoniumsaltet av antibiotikum A16886II på Whatman nr 1 papper gav ett Rf-värde av 0,33 i ett lös- ningsmedelssystem av propanol, acetonitril, och vatten i ett volym- förhållande av 1:1:1. Bioautogram erhöllos genom att placera pappers- kromatogrammet på agarplattor behandlade med Salmonella gallinarum som testorganism.Paper chromatography of the monoammonium salt of antibiotic A16886II on Whatman No. 1 paper gave an Rf value of 0.33 in a solution. propanol, acetonitrile, and water in a volume ratio of 1: 1: 1. Bioautograms were obtained by placing paper the chromatogram on agar plates treated with Salmonella gallinarum as a test organism.

Då monoammoniumsaltet av A16886II underkastas tunnskiktskromato- grafi på si1ikage1p1attor,i 70 %-ig acetonitril med användning av ett ninhydrinspray eller en bioautografisk metod som detektor, har saltet ett Rf-värde av ungefär O,h2; på cellulosaplattor i aceto- nitril, isopropanol, vatten (1:1:1), med användning av samma detek- teringsförfarande, har saltet ett Rf-värde av 0,29.When the monoammonium salt of A16886II is subjected to thin layer chromatography graphics on silica plates, in 70% acetonitrile using a ninhydrin spray or a bioautographic method as a detector the salt has an Rf value of about 0.1 h2; on cellulose plates in aceto- nitrile, isopropanol, water (1: 1: 1), using the same detector The salt has an Rf value of 0.29.

Aminosyraanalys av ett syrahydrolysat av antibiotikum A16886II, företagen enligt Spackman-Moore-Stein, visade primärt endast en ninhydrinreagerande topp; det eluerades strax före glycin och såsom i fall av antibiotikum A16886I, identifierades det som a-aminoadipin- syra (2,1 umol/mg). Det förekom emellertid även en mycket mindre topp, som eluerades, identiskt med glycin. Ett senare prov analyserades på 'liknande sätt och uppvisade värdena 2,1 umol/mg resp. 0,13 umol/mg.Amino acid analysis of an acid hydrolyzate of antibiotic A16886II, companies according to Spackman-Moore-Stein, primarily showed only one ninhydrin reacting peak; it was eluted just before glycine and as in the case of antibiotic A16886I, it was identified as α-aminoadipine acid (2.1 μmol / mg). However, there was also a much smaller peak, which eluted, identical to glycine. A later sample was analyzed on similarly and showed the values 2.1 μmol / mg resp. 0.13 μmol / mg.

Dessutom underkastades var och en av faktorerna I och II av monoammoniumsaltet av antibiotikum A16886 papperskromatografi och tunnskiktskromatografi i ett antal andra lösningsmedelssystem med följande resultat.In addition, each of the factors I and II was subjected to the monoammonium salt of antibiotic A16886 paper chromatography and thin layer chromatography in a number of other solvent systems with following results.

Lösningsmedelsszstem Rf-värde Faktor I Faktor II Papperskromatografi Etanol, vatten (80:20) med 1,5 % natriumklorid, papper impregnerat med 1N natriumsulfat 0,38 0,33 Butanol mättad med vatten orörlig orörlig Butanol mättad med vatten plus 2 % p-toluensulfonayra 0,39 9,32 Metylisobutylketon mättad med vatten orörlig porörlig ho i7z1s3è?~2 Lösningsmedelssxstem Rf-värde Faktor I Faktor II Paggerskromatografi Metylisobutylketon mättad med vatten plus 2 $ p-toluensulfonsyra orörlig orörlig Metylisobutylketon mättad med vatten plus 2 % piperidin Orörlíg Orörliš Acetonitril orörlig orörlig Propanol, acetonitril, metanol, vatten (4:3:2:1) orörlig orörlig Propanol, p ridin, ättiksyra, vatten (15:10:3:12š 0,32 0,27 Propanol, pyridin, ättiksyra, aceto- nicril, vatten (h5;3o=9=uo=36) 0,21 o,r5 Butanol, ättiksyra, vatten (3:1:1) 0,20 0,17 _ Etylaeetat, ätfiksyra, vatten (3=1=1) 0,29 0,22 “ Propanol, vatten (70:30) 0,17 0,17 Acetonitril, vatten (70:30) 0,72 0,65 vatten, etanol, ättiksyra (7o:h2=6) 0,82 0,82 Tunnskiktskromatografí Acetonitril, vatten (7:3) på cellulosa- plattor 0,35 0,29 Antibiotikum Al6886 och dess salter uppvisa aktivitet mot växt- patogena bakterier. Således bekämpar antibiotikum A16886 och dess salter sådana växtpatogena bakteriella infektioner, såsom av bakte- rier förorsakad nedvissning, fläckar och mjöldagg.Solvent system Rf value Factor I Factor II Paper chromatography Ethanol, water (80:20) with 1.5% sodium chloride, paper impregnated with 1N sodium sulfate 0.38 0.33 Butanol saturated with water immobile immobile Butanol saturated with water plus 2% p-toluenesulfonic acid 0.39 9.32 Methyl isobutyl ketone saturated with water immobile porous ho i7z1s3è? ~ 2 Solvent system Rf value Factor I Factor II Pagger chromatography Methyl isobutyl ketone saturated with water plus 2 $ p-toluenesulfonic acid immobile immobile Methyl isobutyl ketone saturated with water plus 2% piperidine Orörlíg Orörliš Acetonitrile immobile immobile Propanol, acetonitrile, methanol, water (4: 3: 2: 1) immobile immobile Propanol, p ridin, acetic acid, water (15: 10: 3: 12š 0.32 0.27 Propanol, pyridine, acetic acid, aceto- nicrile, water (h5; 3o = 9 = uo = 36) 0.21 o, r5 Butanol, acetic acid, water (3: 1: 1) 0.20 0.17 _ Ethyl acetate, acetic acid, water (3 = 1 = 1) 0.29 0.22 “ Propanol, water (70:30) 0.17 0.17 Acetonitrile, water (70:30) 0.72 0.65 water, ethanol, acetic acid (70: h2 = 6) 0.82 0.82 Thin layer chromatography Acetonitrile, water (7: 3) on cellulose plates 0.35 0.29 Antibiotic Al6886 and its salts show activity against plant pathogenic bacteria. Thus, antibiotic A16886 and its salts such plant pathogenic bacterial infections, such as bacterial causes wilting, stains and powdery mildew.

Det exakta sätt, varpå antibíotikum A16886 eller ett salt därav appliceras på växter är icke kritiskt. Allmänt angriper organismen ifråga först bladverket, och av detta skäl föredras ofta att detta behandlas med antibíotikum A16886 eller ett salt därav. Emellertid äro antibiotikum A16886 och salter därav translokaliserade, varför anbringande även kan ske på stjälkar, blommor, frön, rötter eller andra växtdelar för erhållande av fullständig baktericid verkan i hela växten. _ Föreliggande förfarande för bekämpning av växtpatogena bakterier . innebär att en växt, som är utsatt för bakterierna, behandlas med en effektiv mängd antibiotikum A16886 eller ett salt därav. Det är icke ÄO 7315327-2 kritiskt för detta förfarande att nämnda antibiotikum används som en enda faktor, varvid var och en av faktorerna I och II kan användas enbart och ger goda resultat. Alternativt kan blandning av faktorern användas. Antibiotikum A16886 eller ett salt därav kan användas utan modifikation, men i allmänhet är det lämpligt för växtbehandlings- ändamål att använda en komposition, som omfattar antibiotikum A16886 eller ett salt därav och ett eller flera hjälpmedel. Vid framställning av dessa kompositioner kan antibiotikum A16886, eller dess salt, modi- fieras med vatten eller andra vätskeformiga bärare, organiska lös- ningsmedel, ytaktiva medel innefattande fasta ytaktiva medel, eller inerta, finfördelade fastämnen eller inerta, granulformiga fastämnen.The exact manner, then antibiotic A16886 or a salt thereof applied to plants is not critical. Generally attacks the organism in question first the foliage, and for this reason it is often preferred that this treated with antibiotic A16886 or a salt thereof. However are antibiotic A16886 and salts thereof translocated, why application can also be done on stems, flowers, seeds, roots or other plant parts for obtaining complete bactericidal action in the whole plant. _ The present method for controlling plant pathogenic bacteria. means that a plant, which is exposed to the bacteria, is treated with one effective amount of antibiotic A16886 or a salt thereof. It's not ÄO 7315327-2 critical to this process that said antibiotic be used as a single factor, each of which factors I and II can be used alone and gives good results. Alternatively, mix the factor be used. Antibiotic A16886 or a salt thereof can be used without modification, but in general it is suitable for plant treatment purpose of using a composition comprising antibiotic A16886 or a salt thereof and one or more excipients. In production of these compositions, antibiotic A16886, or its salt, may modify with water or other liquid carriers, organic solvents surfactants, including solid surfactants, or inert, finely divided solids or inert, granular solids.

Den exakta koncentrationen för antibiotikum A16886 eller ett salt därav i en sådan komposition är icke kritisk och varierar med det särskilda ändamål, för vilket kompositionen är avsedd. För anbringan- de på blad för bekämpning av typiska växtpatogena bakteriella infek- tioner ge koncentrationer av antibiotikum A16886 eller ett salt därav av från 10 miljondelar till 1000 miljondelar eller mer goda resultat.The exact concentration of antibiotic A16886 or a salt hence in such a composition is not critical and varies with it special purposes for which the composition is intended. For application on leaves for the control of typical plant pathogenic bacterial infections concentrations of antibiotic A16886 or a salt thereof of from 10 parts per million to 1000 parts per million or better results.

I fall av damm för anbringning på blad, äro föredragna koncentrationer av nämnda antibiotikum 0,1-10,0 %. _ Vid framställning av vätskeformiga kompositioner kan antibiotikum A16886 eller ett salt därav blandas med en lämplig vätska och ett . lämpligt aktivt disperserande medel för erhållande av emulgerbara koncentrat, vilka vidare kunna utspädas med vatten eller annan vätska för erhållande av sprayblandningar. Föredragna disperserande medel, som kunna användas i dessa kompositioner, innefatta de nonjoniska emulgermedlen, såsom kondensationsproduktorna av alkylenoxid med oorganiska syror, polyoxietylenderivat av sorbitanestrar, komplexa eteralkoholer och liknande. Lämpliga organiska vätskor, som kunna användas i kompositionen, innefatta petroleumoljor och destillat, toluen och syntetiska, organiska oljor. De ytaktiva, disperserande medlen användas vanligtvis i vätskeformiga kompositioner i en mängd av från 0,1 till 20 vikt-% av den sammanlagda vikten av det disper- serande medlet och den aktiva föreningen. Vid framställningen av puderkompositioner kan antibiotikum A16886 eller ett salt därav blandas med något av de finfördelade fastämnena eller granuler, som typiskt användas i kemiska kompositioner inom jordbruket.In the case of dust for application to leaves, concentrations are preferred of said antibiotic 0.1-10.0%. _ In the preparation of liquid compositions can be antibiotic A16886 or a salt thereof is mixed with a suitable liquid and a. suitable active dispersant for obtaining emulsifiable concentrates, which can be further diluted with water or other liquid for obtaining spray mixtures. Preferred dispersants, which may be used in these compositions include the nonionic ones the emulsifiers, such as the condensation products of alkylene oxide with inorganic acids, polyoxyethylene derivatives of sorbitan esters, complex ethereal alcohols and the like. Suitable organic liquids, which can used in the composition, include petroleum oils and distillates, toluene and synthetic organic oils. The surfactants, dispersants the agents are usually used in liquid compositions in an amount of from 0.1 to 20% by weight of the total weight of the dispersion agent and the active compound. In the production of powder compositions may be antibiotic A16886 or a salt thereof mixed with any of the finely divided solids or granules, which are typically used in chemical compositions in agriculture.

I enlighet med föreliggande uppfinning kan antibiotikum A16886 eller ett salt därav eller en komposition innehållande nämnda anti- biotikum eller ett salt därav anbringas på de organismer, som skola bekämpas, eller på deras växtställen, på något lämpligt sätt, exempel-l '7315327-2 vis med hjälp av handströare eller sprutanordningar. Anbringning på de ovan jord befintliga delarna av växterna kan genomföras med pulver- ströare, olika sprutanordningar och kombination av sprutanordning och ströare. Vid anbringande på blad eller lövverk bör de använda kompo- sitionerna inte innehålla några väsentliga mängder fytotoxiska ut- spädningsmedel. I större skala kunna pulvren eller vätskeformiga kom- positioner av låg volym anbringas från flygplan.In accordance with the present invention, antibiotic A16886 or a salt thereof or a composition containing said anti- bioticum or a salt thereof is applied to the organisms, which school controlled, or in their habitats, by any suitable means, Example-1 '7315327-2 by means of hand spreaders or sprayers. Placement on the above-ground parts of the plants can be carried out with powder sprinklers, various spraying devices and combination of spraying device and scatterers. When applying to leaves or foliage, they should use do not contain significant amounts of phytotoxic diluent. On a larger scale, the powders or liquid com- low volume positions are fitted from aircraft.

Följande exempel 1-6 belysa denna utföringsform av föreliggande uppfinning och göra det möjligt för fackmannen att utöva densamma.The following Examples 1-6 illustrate this embodiment of the present invention invention and enable those skilled in the art to practice the same.

I vart och ett av dessa exempel användes antibiotikum A16886 som en blandning av monoammoniumsaltet av faktorn I och monoammoniumsaltet av faktorn II.In each of these examples, antibiotic A16886 was used as one mixing the monoammonium salt of factor I and the monoammonium salt of factor II.

Exempel 1 Erwinia amylovora och Pseudomonas solanacearum, in vitro Antibiotikum Å16886 undersöktes in vitro med avseende på hämning av Erwinia amylovora och Pseudomonas solanacearum. Var och en av organismerna införlivades separat i näringsagar enligt standrad, och den erhållna agarn applicerades på ett flertal plattor och fick stelna. Behandlingen utfördes därefter, varvid olika plattor behand- lades på olika sätta Enligt ett behandlingssätt pipetterades 0,1 ml av testlösningen i var och en av två små stålcylindrar, som var placerade upprätta på en viss agaryta. Enligt ett annat sätt impreg- nerades 0,1 ml av testlösningen på var och en av två filteranalys- skivor, som placerades på en viss agaryta. Testlösningen för de båda behandlingssätten framställdes genom att upplösa den lämpliga mängden antibiotikum A16886 i glasdestillerat vatten. Resultaten, uttryckta som diametern för hämningszonen, framgå av nedanstående tabell. 731532?-2 . .wnﬁﬁëmﬂaxmkfaﬁwv ﬂowﬂﬂ EE nw >N uﬂmﬁhovmﬂou Hm .Hmnmxwvﬁw .Hwﬁhmﬂ “EE MF u xuﬁhovw wndïmxmamuﬂwm kmuvdhwﬁﬂﬂ ... N _.. . .wﬂﬁQEmSvXm>HHﬂv iwwiﬁ EE w >ü MQATHOPWCUON CN 'HÖ-Hﬂvﬂﬁmu-Hﬂ .Hw-Hbﬂmﬁv mEE W I VﬁOHHOn-W WFFHÜÜaHH-HÄÜ .Hﬂuwﬁﬂlﬁm-HÉH I dv min. www . wè _ m~:n- ^n@»»w> »mnoﬂﬂﬂpmwuv ﬂﬂonpcou munen oN|oN ¶, _* onaon . w-|nF¶ . nmaøusowﬂﬂﬁ oo- | wwwwF< on|on ß~|w_ mmnmæ ¶ . aﬁuw- nu~@v:oﬁH«a om 1 wmwwP< ..~|o~ nF|n~ . . . >_|u_ w|w nßﬂmnnowﬁﬁs ow 1 wwww.< Eﬂhdooﬁümaow .ß dHo>oH>Em .W E-...Hdmodicaom .m fmhosöﬁ Em .N . mßkrﬂxmhouﬂﬂh . . dhmhﬂﬂwﬂäoﬂmvw . . .ﬁEI w .......:wE=:.w...5ﬂ|o.N | hmawwëndﬁn ä Hﬂunmh C) f' ”730105327-2' _ Exempel 2 Pseudomonas solanacoarum. bladsurav.Example 1 Erwinia amylovora and Pseudomonas solanacearum, in vitro Antibiotic Å16886 was tested in vitro for inhibition of Erwinia amylovora and Pseudomonas solanacearum. Each and everyone of the organisms were incorporated separately into nutrient agar according to standard, and the obtained agar was applied to a plurality of plates and obtained stelna. The treatment was then performed, with different plates being treated. In one method, 0.1 ml was pipetted of the test solution in each of two small steel cylinders, which were placed upright on a certain agar surface. In another way, 0.1 ml of the test solution was applied to each of two filter assays. slices, which were placed on a certain agar surface. The test solution for both the methods of treatment were prepared by dissolving the appropriate amount antibiotic A16886 in glass distilled water. The results, expressed as the diameter of the inhibition zone, are shown in the table below. 731532? -2 . .wn ﬁﬁ ëm ﬂ axmkfa ﬁ wv ﬂ ow ﬂﬂ EE nw> N u ﬂ m ﬁ hovm ﬂ ou Hm .Hmnmxwv ﬁ w .Hw ﬁ hm ﬂ “EE MF u xu ﬁ hovw wndïmxmamu ﬂ wm kmuvdhw ﬁﬂﬂ ... N _ ... .w ﬂﬁ QEmSvXm> HH ﬂ v iwwi ﬁ EE w> ü MQATHOPWCUON CN 'HÖ-H ﬂ v ﬂﬁ mu-H ﬂ .Hw-Hb ﬂ m ﬁ v mEE W I V ﬁ OHHOn-W WFFHÜÜaHH-HÄÜ .H ﬂ uw ﬁﬂ l ﬁ m-HÉH I dv my. www. wè _ m ~: n- ^ n @ »» w> »mno ﬂﬂﬂ pmwuv ﬂﬂ onpcou munen oN | oN ¶, _ * onaon. w- | nF¶. nmaøusow ﬂﬂﬁ oo- | wwwwF < on | on ß ~ | w_ mmnmæ ¶. a ﬁ uw- nu ~ @ v: o ﬁ H «a om 1 wmwwP < .. ~ | o ~ nF | n ~. . . > _ | u_ w | w nß ﬂ mnnow ﬁﬁ s ow 1 wwww. < E ﬂ hdoo ﬁ ümaow .ß dHo> oH> Em .W E -... Hdmodicaom .m fmhosö ﬁ Em .N. mßkr ﬂ xmhou ﬂﬂ h. . dhmh ﬂﬂ w ﬂ äo ﬂ mvw. . .ﬁ EI w .......: wE = :. w ... 5 ﬂ | o.N | hmawwënd ﬁ n ä H ﬂ unmh C) f '”730105327-2' Example 2 Pseudomonas solanacoarum. bladesurav.

Antibiotikum A16886 utvärderades även in vivo för bekämpning av Pseudomonas solanacearum på tomatplantor. I detta försök till- -verkade man ett flertal vattenhaltiga kompositioner utgående från antibiotikum A16886, monoammoniumsalt, varvid kompositionerna lik- formigt innehöll 1 É etanol och 0,1 É av ett ytaktivt model (ett polyoxietylderivat av fettsyrapartialester av sorbitolanhydrid) men innehållande olika koncentrationer av antibiotikum A16886. 30 dygn gamla tomatplantor användes i detta försök, två plantor per kruka D per behandling. Plantorna i varje kruka behandlades med en av be- handlingslösningarna, fick lufttorka, och ympades därefter med ett medium, som underhöll en aktiv tillväxt av Pseudomonas solanacearum.Antibiotic A16886 was also evaluated in vivo for control of Pseudomonas solanacearum on tomato plants. In this experiment, - a number of aqueous compositions were used as a starting point antibiotic A16886, monoammonium salt, the compositions being similar formally contained 1 É of ethanol and 0.1 É of a surfactant model (a polyoxyethylene derivatives of fatty acid partial ester of sorbitol anhydride) but containing different concentrations of antibiotic A16886. 30 days old tomato plants were used in this experiment, two plants per pot D per treatment. The plants in each pot were treated with one of the the action solutions, were allowed to air dry, and then inoculated with one medium, which maintained an active growth of Pseudomonas solanacearum.

Alla plantorna höllos under 2h h i en fuktkammare¿ avlägsnades där- oftor.och höllos under 7 dygn under goda bruksbetingelser. Vid slutet av denna 7 dygns period observerades alla plantorna för att bestämma 'närvaron, och om så var fallet, graden av infektion. Resultaten fram- gå av följande tabell; sjukdomsgraden uppskattades på en skala från O till Ä, varvid 0 anger ingen bekämpning, ü representerar fullständig bekämpning,.och varvid varje planta uppskattades separat.All plants were kept for 2 hours in a humid chamber, then removed. oftor.och was kept for 7 days under good conditions of use. At the end of this 7 day period, all the plants were observed to determine 'presence, and if so, the degree of infection. The results presented go off the following table; the degree of disease was estimated on a scale from O to Ä, where 0 indicates no control, ü represents complete control, .and each plant was estimated separately.

Tabell 5 “ 3 Pseudomonas solanacearum Q --f _ Sjukdomsgrad Kontroll (1 % Et0H # 0,1 % yt- _ _ ' "" _ 0 ' I 0' aktiv: medel) A16ss6 _ uoo miljonaelar ' :i ,2+ r 3+ 116886 - zoo miljondelar .z+ _ 2+ Kontrollplantorna uppvisade en kraftig infektion orsakad av Pseudo- v 7 .Table 5 “3 Pseudomonas solanacearum Q --f _ Disease rate Control (1% EtOH # 0.1% surface- _ _ ' "" _ 0 'I 0' active: agent) A16ss6 _ uoo miljonaelar ': i, 2 + r 3+ 116886 - zoo miljondelar .z + _ 2+ The control plants showed a severe infection caused by Pseudo- v 7.

Pseudomonas glvcinia; rotneddonnning.Pseudomonas glvcinia; rooting.

:Antibiotikum Al6S86 utvärderades med avseende på bekämpning av Pseudomonas glycinia med hjälp av lösningar innehållande A16886 för neddoppning av rötter. Det förelåg två sådana lösningar, varvid den ena innehöll 200 miljondelar antibiotikum A16SS6 och den andra inne- höll #00 miljondelar antibiotikum A16886. Tio dagar gamla sojabön- plantor ympades med Pseudomonas glycinia, och rötterna på alla plan- monas solanacearum. ' torna hölls under hela försöket i vattenhaltiga lösningar. Till att börja med placerades de behandlade plantorna i 50 ml lösning, en grupp av plantor i lösningen med koncentrationen 200 miljondelar, ", 11 7315327-2 en andra grupp av plantor i lösningen med koncentrationen #00 miljon- delar, en tredje grupp av plantor i vatten för att tjäna som kontroll.: Antibiotic Al6S86 was evaluated for control of Pseudomonas glycinia using solutions containing A16886 for immersion of roots. There were two such solutions, whereby the one contained 200 parts per million of the antibiotic A16SS6 and the other contained held # 00 millionths of antibiotic A16886. Ten-day-old soybean plants were inoculated with Pseudomonas glycinia, and the roots of all plants monas solanacearum. ' were maintained throughout the experiment in aqueous solutions. For to begin with, the treated plants were placed in 50 ml of solution, a group of plants in the solution with a concentration of 200 parts per million, ", 11 7315327-2 a second group of plants in the solution with the concentration # 00 million parts, a third group of plants in water to serve as a control.

Rötterna indränktes under 24 h, varvid luftning förekom under denna period. Plantorna, med rötterna fortfarande i de åtskilliga lösningarna inkuberades därefter Zü h. Därefter avlägsnades plantorna från inkuba- tionskammaren och höllos under en period av en vecka. Ned början unge- fär med inkubationsperioden och fortsättning under hela veckan till- sattes en lösning innehållande näringsmedel till rötterna för att bi- behålla plantorna i ett levande tillstånd. Vid slutet av veckan obser- verades plantorna för att bestämma graden av utveckling av Pseudomonas glycinia; sjukdomsgraden uppskattades på en skala från O till Ä, varvid 0 anger ingen bekämpning, och Ä representerar fullständig bekämpning.The roots were soaked for 24 hours, during which aeration took place period. The plants, with the roots still in the numerous solutions Zü h was then incubated. The plants were then removed from the incubator. and was held for a period of one week. Down the beginning approx. with the incubation period and continuation throughout the week a nutrient-containing solution was added to the roots to keep the plants in a living state. At the end of the week, the plants were used to determine the degree of development of Pseudomonas glycinia; the degree of disease was estimated on a scale from 0 to Ä, whereby 0 indicates no control, and Ä represents complete control.

Resultaten framgå av följande tabell. ' en 'Tabell 6 Uppskattad sjukdomsgrad för Pseudomonas glvcinia Kontroll ¿ _ - 0 A16s86 _ zoo miljondeiar 3 + A16886 - hoo miijønaeiar _ ' 2 + ' Exempel Ä šanthomonas nhaseoli var. sojensis. bladsprav.The results are shown in the following table. ' and 'Table 6 Estimated disease rate for Pseudomonas glvcinia Control ¿_ - 0 A16s86 _ zoo millionaire 3+ A16886 - hoo miijønaeiar _ '2 + 'Example Ä šanthomonas nhaseoli var. sojensis. leaf spray.

I ett första försök ympades 10 dagar gamla sojabönplantor med *Q en suspension av Xanthomonas phaseoli var. sojensis genom neddoppning av de undre bladytorna på de primära bladen. Två timmar senare spruta- des bladverkot med en lösning, varvid en grupp av de ympado plantorna behandlades med en lösning innehållande 100 miljondelar antibiotikum A16886, och en andra grupp med en lösning innehållande 500 miljondelar antibiotikum A16886, En vattenkomposition av antibiotikum A168S6 fram- ställdes med en koneentration av 353 miljondelar av en blandning av nonjoniska, vätskeformiga emulgermedel på basis av sulfonat.In a first attempt, 10-day-old soybean plants were inoculated * Q a suspension of Xanthomonas phaseoli var. sojensis by immersion of the lower leaf surfaces of the primary leaves. Two hours later leaf foliage with a solution, a group of the inoculated plants was treated with a solution containing 100 parts per million of antibiotic A16886, and a second group with a solution containing 500 parts per million antibiotic A16886, An aqueous composition of antibiotic A168S6 was given with a concentration of 353 parts per million of a mixture of nonionic, liquid sulfonate-based emulsifiers.

I ett andra försök sprutades bladverket för 10 dagar gamla sojabönplantor med en lösning innehållande antingen 100 eller 500 delar antibiotikum A16886, och två timmar senare, ympades dessa med användning av samma förfaranden, som användes i det första försöket.In a second experiment, the foliage was sprayed for 10 days old soybean plants with a solution containing either 100 or 500 parts of antibiotic A16886, and two hours later, these were inoculated with using the same procedures as in the first experiment.

Kompositionen av antibiotikum A16886 var densamma som i första för- söket.The composition of antibiotic A16886 was the same as in the first the search.

Plantbrna höllos under goda bruksbetingelser under en period av ungefär 11 dygn och observerades sedan med avseende på närvaron eller frånvaron av Xanthomonas phaseoli var. sojensis. Resultaten framgå av följande tabell, varvid sjukdomsgraden uppskattades på en skala från ; -731532?-2' fi Q e O till Ä såsom i föregående exempel.The plants were kept under good conditions of use for a period of about 11 days and was then observed for presence or the absence of Xanthomonas phaseoli var. sojensis. The results are shown by the following table, the degree of disease being estimated on a scale from ; -731532? -2 'fi Q e O to Ä as in the previous example.

Tabell Z Sjukdomsgrad per behandlad grupp av " plantor _ Xanthomonns nhaseoli var. sojensis ~ Ympning därefter Sprutning därefter snrutninq Xmpninf Kontrol (endast vatten) 0 ' O Kontroll (vatten plus blandning av emulger~ medel) _ - 0 O A168S6 - 100 miljOndelar 2 Ä A16S86 - 500 miljondelar 3+ , 4 Exemoel § Pseudomonas faseolieola, bladsnray._ _ Alla ytor på Å0 dagar gamla röda rosenbönplantor sprayades med en vattenhaltig komposition innehållande #00 miljondelar antibiotikum A16886 een 0,1 $ avïett ytaktivt medel (ett pólyoxieﬁylenderivat av en fettsyrapartialester av sorbitolanhydrid). De sprutade plantorna fick torka och ympades därefter med Pseudomonas phaseolicola; ympning genomfördes genom att i vatten neddoppa den undre bladytan av var och en av de första och andra trehövdade bladen med en vattenhaltig bak- teriell suspension vid 30 % ljustransmission på en Bausch och Lomb Spectronie 20. Plantorna höllos därefter i en fuktkammare under Zä h, _ avlägsnades därefter'och höllos under goda bruksbetingelser under 14 dygn. Vid slutet av denna period observerades alla plantorna; i den behandlade gruppen av plantor förelåg,en moderat bekämpning av Pseu- domonas phaseoeicola, medan i kontrollgruppen det förekom en kraftig utveckling av sjukddmen.Table Z Disease rate per treated group of "plantor _ Xanthomonns nhaseoli var. sojensis ~ Inoculation then Injection afterwards snrutninq Xmpninf Control (water only) 0 'O Control (water plus mixture of emulsions ~ means) _ - 0 O A168S6 - 100 millionParts 2 Ä A16S86 - 500 million parts 3+, 4 Exemoel § Pseudomonas phase oil, leaf spray._ _ All surfaces of Å0 days old red rose bean plants were sprayed with an aqueous composition containing # 00 parts per million of antibiotic A16886 is a 0.1% aviet surfactant (a polyoxy-ylene derivative of a fatty acid partial ester of sorbitol anhydride). They sprayed the plants allowed to dry and then inoculated with Pseudomonas phaseolicola; inoculation was performed by immersing in water the lower leaf surface of each one of the first and second three-headed leaves with an aqueous background terial suspension at 30% light transmission on a Bausch and Lomb Spectronie 20. The plants were then kept in a humid chamber under Zä h, was subsequently removed and kept under good conditions of use for 14 days day. At the end of this period, all the plants were observed; in it treated group of plants was present, a moderate control of Pseu- domonas phaseoeicola, while in the control group there was a strong development of the disease.

Exemoel_6 _Pseudömonas solanacearum, separat bladsorav eller stjälksprav.Exemoel_6 Pseudömonas solanacearum, separate leaf or stem stalk.

:Antibiotikum Ä16886 blandades i vatten med användning av en blandning av två nonjoniska, vätskeformiga emulgermedel på sulfonat- bas för erhållande av två behandlingslösningar, varvid den ena inne- höll 100 miljondelar A16886, den andra innehöll #00 miljondelar anti- biotikum A16886 och var och en innehöll 353 miljondelar av emulgator- blandningen. Grupper om 28 dagar gamla tomatplantor anvähdes; vid ett av försöken anbringades lösningen på stjälkarna enbart, och i det andra försöket anbragtes lösningen på bladen endast. 2 h efter behandling med användning av vardera metoden ympades plantorna genom att_insdtta tandpetare neddoppade i en buljongkultur av Pseudomonas solanacearum i 1š '7315327-2 13 stjälken vid hjärtbladen. Plantorna höllos under goda bruksbetingolser under 10 dygn och observerades dürnftor för att bestämma bokämpníng av sjukdomen. Resultaten, på en skala av 0-N, varvid 0 indikerar ingen bekämpning och Å indikerar fullständig bekämpning, voro följande.: Antibiotic Ä16886 was mixed in water using a mixture of two nonionic liquid emulsifiers on sulfonate basis for obtaining two treatment solutions, one containing held 100 million parts of A16886, the other contained # 00 million parts of anti- biotic A16886 and each contained 353 parts per million of emulsifier the mixture. Groups of 28-day-old tomato plants were used; by one of the experiments, the solution was applied to the stems alone, and in the other experiment, the solution was applied to the leaves only. 2 hours after treatment using each method, the plants were inoculated by insertion toothpicks immersed in a broth culture of Pseudomonas solanacearum in 1š '7315327-2 13 the stem at the heart leaves. The plants were kept under good conditions of use for 10 days and dürnftor was observed to determine book control of the disease. The results, on a scale of 0-N, where 0 indicates none control and Å indicates complete control, were as follows.

Tabell 8 Kontroll (vatten plus 353 miljondelar av en blandning av emulgqr- medel A16886 - IOO miljon- delar A16886 - hoo miljon delar- _ Pseudomonas solanacearum Uppskattad sjukdomsgrad Endast Behandlade Endast Behandlade blad blad stjälkar stjälkar 0 1 O 1 3 H 3 4 h h h 4Table 8 Control (water plus 353 millionths of a mixture of emulsifier average A16886 - 100 million parts A16886 - hoo million parts- _ Pseudomonas solanacearum Estimated degree of disease Only Treated Only Treated leaf leaf stalks stalks 0 1 O 1 3 H 3 4 h h h 4

Claims

11,, PATENT REQUIREMENTS New compounds for use in controlling "pathogenic bacteria", characterized in that they consist of antibiotic A 168861 and / or antibiotic A 16886II and / or your salt thereof, wherein antibiotic A 168861 is a methoxyl-containing sulfur. - containing peptide with an amphoteric molecule and having the formula: nnz OH ocn 3 5 O on (cu2) 3 c Nu I r / HI coon ¿; -N / - -cH2-oc-Nnz Û | "coon whose monoammonium is a white matter , fluffy, amorphous solid, softening between 190 and 30,000, with a color change to dark brown; which is very soluble in water, slightly soluble in lower alkanols and insoluble in acebonitrile; which is amphoteric with Ä titratable groups at pK'a1 = ü, 1; pK'a2 = 5.3; pK'a3 = 9.3 and pK'au = 10.5; having an apparent molecular weight of about 530 as determined by titration data; having the approximate composition of 30.26% carbon, 5.91% hydrogen, 13.98 É nitrogen, 33.37 É oxygen, and 7.21% sulfur; having a specific optical rotaLion [Q] š§ + 153.5 ° (C = 1% w / v in the vat); wherein a mincralo1jeLablot thereof has the following distinct bands in its IR spectrum at the following wavelengths, expressed in / Lm 3 | 101 5vÛ8rVÜ1301 61.60; 7:20, 79501 8183: 99351 99609 9985! 11,60 and 12,90, wherein antibiotic A 1088611 is a non-methoxyl-containing sulfur-containing peptide with an amphoteric molecule and has the formula NH_ Ä o I 2 'jno, ___ M _ M /, see cn ___ m (cn2) 3 ___. c Nn I \ L__ HI .___ cn -oc-NH coon Û N "\ ç> 2 2 o coon whose ammonium salt is a viLakLigt, fluffigt, nmorft solid, which softens mollnn 190 and 30090 mod a color change to dark brown; which is very Soluble in water, slightly soluble in lower alkanols and insoluble in acoLoniLri1; amphoteric with four titratable groups at pK'a5 = Ü, O; p ('n2 = 5.3; pK'a3 = 9.2 and pK'ah = 10.5; which has an apparent molecular weight of approximately 528 determined from bitrate data; 4 415ff 766 15 son! Har (len approx. 28% oxygen and 7.0ü% sulfur, having a specific optical rotation, [QIÉS + 86.2 ° (C = 1%, w / v in water); a mineral oil tablet clear of which has the following distinguishable bands in its. spectrum at the following wavelengths, expressed in ßm: S, 15, '5.70% - 6.3o, 722, 7.614, 9.05, 9.110, 9.65 0c1111.6 (. \. BEFORE PUBLICATIONS: Sweden 198 707, 362 897 US 3,436,310