SA115360697B1 - تركيبات تتعلق بتكسين دفيسيل كلوزتريديوم طفري وبطرق لصنعه - Google Patents

تركيبات تتعلق بتكسين دفيسيل كلوزتريديوم طفري وبطرق لصنعه Download PDF

Info

Publication number
SA115360697B1
SA115360697B1 SA115360697A SA115360697A SA115360697B1 SA 115360697 B1 SA115360697 B1 SA 115360697B1 SA 115360697 A SA115360697 A SA 115360697A SA 115360697 A SA115360697 A SA 115360697A SA 115360697 B1 SA115360697 B1 SA 115360697B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
toxin
difficile
polypeptide
arrangement
amino acid
Prior art date
Application number
SA115360697A
Other languages
English (en)
Inventor
سيبيل اندرسون أناليزا
ال. مينيني تري
كيت موران جوستين
جي. كيه. دونالد روبرت
يوت يانسن كاترين
إي. روبن مارك
كيه سيدهو مانيندر
جيمس فلينت ميشيل
كيه. كالين نيرندر
Original Assignee
ويث ال ال سي
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ويث ال ال سي filed Critical ويث ال ال سي
Publication of SA115360697B1 publication Critical patent/SA115360697B1/ar

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/08—Clostridium, e.g. Clostridium tetani
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/33—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Clostridium (G)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/085—Staphylococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/40—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum bacterial
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
    • C07K16/1267—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria
    • C07K16/1282—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria from Clostridium (G)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/99—Enzyme inactivation by chemical treatment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

يتعلق الاختراع بتركيبة مولدة للمناعة (immunogenic composition) تتضمن Clostridium difficile toxin A طفري و/أو Clostridium difficile toxin B طفري. يتضمن كل toxin الطفري مجال سيطرة glucosyltransferase به طفرة واحدة على الأقل ومجال سيطرة cysteine protease به طفرة واحدة على الأقل، مقارنة مع C. difficile toxin النوع البري المقابل. قد تتضمن toxins الطفرية إضافيا amino acid واحد على الأقل متقاطع الرابطة كيميائيا. في جانب آخر، يتعلق الاختراع بأجسام مضادة (antibodies) أو أجزاء رابط منه مرتبطة مع التركيبات المولدة للمناعة (immunogenic compositions) المذكورة. في جوانب إضافية، يتعلق الاختراع بترتيبات nucleotide معزول تشفر أيا مما سبق، وبطرق لاستخدام أيا من التركيبات السابقة. شكل 10.

Description

— \ — تركيبات تتعلق بتكسين دفيسيل كلوزتريديوم طفري وبطرق ‎axial‏ ‎Compositions relating to a mutant clostridium difficile toxin and methods‏ ‎thereof‏ ‏الوصف الكامل خلفية الاختراع الطلب ‎Jal‏ عبارة عن طلب جزئي من الطلب السعودي رقم ‎١١77٠04977‏ المودع بتاريخ 77/05/74 ١ه‏ الموافق ‎4/7١‏ ١١٠١م‏ . © يتعلق الاختراع الحالي بتركيبات تخص ‎Clostridium difficile toxins‏ وبطرق لصنعه. إن ‎Clostridium difficile (C. difficile)‏ عبارة عن بكتريا لاهوائية موجبة الجرام ‎(Gram-positive anaerobic bacterium)‏ ملازمة لمرض المعدة والأمعاء في الآدميين. إن تكوين مستعمرات من ‎difficile‏ .© يحدث عادة في القولون إذا قلت البكتريا الطبيعية القاطنة في الأمعاء بالمعالجة مع المضادات الحيوية. إن العدوى قد تؤدي إلى إسهال مصاحب ‎٠‏ المضاد حيوي وأحيانا إلى التهاب قولوني غشائي كاذب من خلال إفراز ‎«glucosylating toxins‏ ‎A‏ صا«ها و8 ‎١( toxin‏ 2 و ‎YY.‏ كيلو دالتون؛ على الترتيب)؛ وهي العوامل السامة الأولية من ‎.C. difficile‏ إن ‎toxin B ytoxin A‏ يشفرهما موقع التولد المرضي ‎١9‏ كيلو قاعدة ‎(Paloc)‏ بواسطة الجينات ‎tedA‏ و608],؛ على التوالي. إن سلالات ‎C. difficile‏ غير المولدة للمرض مستبدل فيها ‎VO‏ هذا الموقع بترتيب بديل من ‎١١١9‏ زوج قاعدة. إن كلا من ‎A‏ 10*10 و8 ‎toxin‏ عبارة عن ‎toxins‏ خلوية قوية. إن هذه ‎proteins‏ هي ‎Bilis glucosyltransferases‏ 4 تخمد نشاط ‎GTPases‏ الصغرى من ‎i lle‏
— اذ ‎(Rho/Rac/Ras‏ يسبب التمزق الناتج في الإشارات فقد اتصالات خلية- خلية؛ خلل تنظيم الهيكل الخلوي ‎«actin‏ و/أو الموت المبرمج لينتج إسهال إفرازي غزير تصاحبه عدوى ٠ه ‎.(CDI) (Clostridium difficile infections) Clostridium difficile‏ في الحقبة الأخيرة؛ ازدادت بدرجة مأساوية أعداد وشدة تفشي ‎difficile‏ .6.2 في المستشفيات؛ أماكن التمريض» ووحدات الرعاية طويلة الأمد الأخرى. تتضمن العوامل الأساسية في هذه الزيادة نشوء سلالات مولدة للمرض مفرطة السمية؛ الاستخدام الزائد للمضادات ‎dal‏ طرق التحديد المحسنة؛ وزيادة التعرض للجراثيم المنقولة بالهواء في وحدات الرعاية الصحية. ‎AD‏ يمثل ‎vancomycin ymetronidazole‏ المعيار القياسي المقبول ‎Wa‏ للرحاية من أجل معالجة بالمضادات الحيوية لمرض مصاحب ‎(C. difficile associated C. difficile‏ ‎٠ (CDAD) disease)‏ على أية حال؛ يعاني حوالي ‎77١0‏ من المرضى المتعاطين لتلك المعالجة من تكرار العدوى بعد أول نوبة من عدوى ‎«ODI‏ ويعاني ما يصل إلى حوالي ‎٠‏ 75 من هلاء المرضى من تكرار إضافي للإصابة. إن معالجة تكرار العدوى يمثل تحديا هاما جداء وعادة ما ‎Vo‏ تحدث غالبية تكرارات العدوى خلال شهر واحد من النوبة السابقة. طبقا لذلك؛ هناك حاجة لتركيبات مولدة للمناعة و/أو علاجية وطرق لذلك تخضص ‎.C. difficile‏ الوصف العام للاختراع ‎Y.‏ يوفر الاختراع هنا هذه الأهداف وأخرى. في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع بتركيبة مولدة للمناعة ‎(immunogenic‏ ‎composition)‏ تتضمن ‎C. difficile toxin A‏ طفري. يتضمن ‎C. difficile toxin A‏ الطفري مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ به طفرة واحدة على الأقل ومجال سيطرة ‎cysteine‏
— ¢ — ‎protease‏ به طفرة واحدة على الأقل « مقارنة مع / ‎C. difficile toxin‏ النوع البري المقابل. في أحد التجسيدات؛ يكون ‎acid‏ 870100 واحد على الاقل من ‎C. difficile toxin A‏ الطفري متقاطع الرابطة كيميائيا. في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع مع ‎polypeptide‏ معزول يتضمن ترتيب 800100 ‎acid ©‏ المذكور في تعريف الترتيب رقم: ‎of‏ حيث قد لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ ‏عند الموضع ١؛‏ وحيث يتضمن ‎polypeptide‏ سلسلة جانبية ‎acid‏ 800100 واحدة على الأقل معدلة كيميائيا بواسطة ‎1-ethyl-3—(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide)‏ ‎(EDC)‏ ‏و ‎.N-Hydroxysuccinimide (NHS)‏ " في أحد التجسيدات؛ يكون ‎acid‏ 800100 واحد على الأقل من ‎C. difficile toxin‏ الطفري متقاطع الرابطة كيميائيا. في أحد التجسيدات» يكون ‎acid‏ 800100 الواحد على الأقل متقاطع الرابطة كيميائيا بواسطة ‎1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide formaldehyde‏ ‎«(EDC)‏ ‎<N-hydroxysuccinate Yo‏ أو اتحاد من ‎NHS ; EDC‏ في أحد التجسيدات؛ فإن التركيبة المولدة للمناعة يدركها جسم مضاد خاص معادل ضد ‎toxin‏ أو جزء رابط منه. في أحد التجسيدات؛ تظهر التركيبة المولدة للمناعة سمية خلوية قليلة؛ مقارنة مع ‎C. difficile toxin‏ النوع البري المقابل. ‎٠‏ في جانب آخرء يتعلق الاختراع بتركيبة مولدة للمناعة تتضمن ‎C. difficile toxin A‏ طفري؛ يتضمن مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ له تعريف الترتيب رقم: 79؛ وبه استبدال ‎amino acid‏ عند المواضع ‎«YAY 5 YAS‏ ومجال سيطرة ‎cysteine protease‏ له تعريف الترتيب رقم: ‎YY‏ به استبدال ‎acid‏ 0 عند الموضع ‎(VY OA‏ مقارنة مع
El ‏واحد على الأقل من‎ amino acid ‏النوع البري المقابل» حيث يكون‎ C. difficile toxin A ‏الطفري متقاطع الرابطة كيميائيا.‎ C. difficile toxin A
C. difficile toxin A ‏في جانب إضافي؛ يتعلق الاختراع بتركيبة مولدة للمناعة تتضمن‎ ‏واحد على الأقل من‎ 807100 acid ‏حيث يكون‎ of : ‏طفري؛ يتضمن تعريف الترتيب رقم‎ ‏الطفري متقاطع الرابطة كيميائيا.‎ C. difficile toxin A © ‏أيضاء يتعلق الاختراع بتركيبة مولدة للمناعة تتضمن تعريف الترتيب رقم:‎ AT ‏في جانب‎ ‏تعريف الترتيب رقم بلا أو تعريف الترتيب‎ le ‏؛؛ تعريف الترتيب رقم : ©)؛ تعريف الترتيب رقم‎
A ‏رقم:‎ ‎C. difficile toxin B ‏في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع بتركيبة مولدة للمناعة تتضمن‎ ‏به طفرة‎ glucosyltransferase ‏الطفري مجال سيطرة‎ C. difficile toxin 8 ‏طفري. يتضمن‎ ٠
C. ‏به طفرة واحدة على الأقل » مقارنة مع‎ cysteine protease ‏واحدة على الأقل ومجال سيطرة‎ ‏النوع البري المقابل.‎ difficile toxin 8 ‏معزول يتضمن ترتيب‎ polypeptide ‏؛ يتعلق الاختراع مع‎ BEES ‏في جانب‎ ‏المذكور في تعريف الترتيب رقم: 6 حيث قد لا يتواجد اختياريا متخلف‎ 800100 acid amino acid ‏سلسلة جانبية‎ polypeptide ‏عند الموضع ١؛ وحيث يتضمن‎ methionine Yo 1-ethyl-3~(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide) (EDC) ‏معدلة كيميائيا بواسطة‎ .N-Hydroxysuccinimide (NHS) ,
C. difficile toxin B ‏يتعلق الاختراع بتركيبة مولدة للمناعة تتضمن‎ « AT ‏في جانب‎ ‏وبه استبدال‎ FY ‏له تعريف الترتيب رقم:‎ glucosyltransferase ‏طفري؛ يتضمن مجال سيطرة‎ ‏له تعريف‎ cysteine protease ‏ومجال سيطرة‎ «YAA 5 7487 ‏عند المواضع‎ amino 8610 | ٠ ‏عند الموضع 100 مقارنة مع‎ 0 acid ‏به استبدال‎ YY ‏الترتيب رقم:‎ ‏واحد على الأقل من‎ 817100 acid ‏يكون‎ dua ‏النوع البري المقابل؛‎ ©. difficile toxin 8 ‏الطفري متقاطع الرابطة كيميائيا.‎ C. difficile toxin 8
— أ — في جانب إضافي؛ يتعلق الاختراع بتركيبة مولدة ‎de liall‏ تتضمن 8 ‎C. difficile toxin‏ طفري؛ يتضمن تعريف الترتيب رقم ‎٠:‏ حيث يكون ‎acid‏ 807100 واحد على الأقل من ‎C. difficile toxin 8‏ الطفري متقاطع الرابطة كيميائيا. في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع بتركيبة مولدة للمناعة تتضمن ‎C. difficile toxin A‏ طفري؛ يتضمن تعريف الترتيب رقم: ‎of‏ و3 ‎C. difficile toxin‏ طفري؛ يتضمن تعريف الترتيب رقم: 1 ‎Gua‏ يكون ‎amino acid‏ واحد على الأقل من كل من ‎C. difficile toxins‏ الطفرية متقاطع الرابطة كيميائيا. في جوانب إضافية؛ يتعلق الاختراع بخلية مخلقة أو نسل ‎gle‏ تتضمن ‎polynucleotide‏ يشفر أيا من ‎C. difficile toxins‏ الطفرية السابقة؛ حيث تفتقد الخلية ‎polynucleotide | ٠‏ داخلي يشفر ‎toxin‏ ‏في جانب آخرء يتعلق الاختراع بجسم مضاد أو جزء رابط جسم مضاد منه خاص بالتركيبة المولدة للمناعة التي تتضمن ‎C. difficile toxin‏ طفري. في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع بطريقة لعلاج عدوى ‎AC. difficile‏ كائن ثديي. تتضمن الطريقة إعطاء الكائن الثديي تركيبة مولدة للمناعة تتضمن ‎C. difficile toxin A‏ طفري؛ ‎Yo‏ يتضمن تعريف الترتيب رقم: ‎of‏ و3 ‎C. difficile toxin‏ طفري؛ يتضمن تعريف الترتيب ‎tad)‏ 3 حيث يكون ‎amino acid‏ واحد على الأقل من ‎JS‏ من ‎C. difficile toxins‏ الطفرية متقاطع الرابطة بواسطة ‎formaldehyde‏ ‏في جانب ‎Al‏ تتضمن طريقة علاج عدوى ‎C. (difficile‏ في ‎cals‏ تثديي ‎Uae)‏ ءِِ الكائن الثديي تركيبة مولدة للمناعة تتضمن ‎difficile toxin A‏ .© طفري؛ يتضمن ‎١‏ تعريف الترتيب رقم: ‎of‏ و3 ‎C. difficile toxin‏ طفري؛ يتضمن تعريف الترتيب رقم: ‎oT‏ حيث يكون ‎acid‏ 807100 واحد على الأقل من كل من ‎C. difficile toxins‏ الطفرية متقاطع الرابطة بواسطة ‎1-ethyl-3—(3—-dimethylaminopropyl) carbodiimide‏ و/أو ‎.N-Hydroxysuccinimide (NHS)‏
‎١ —‏ في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع بطريقة لحث استجابة مناعية لعدوى ‎C. difficile‏ في كائن تديي ¢ تتضمن الطريقة ‎Lac‏ ¢ الكائن الثديي تركيبةٌ مولدة للمناعة تتضمن ‎C. difficile toxin A‏ طفري؛ يتضمن تعريف الترتيب رقم: 4؛ و8 ‎C. difficile toxin‏ طفري؛ يتضمن تعريف الترتيب رقم: حيث يكون ‎acid‏ 801100 واحد على الأقل من كل من ‎C.‏ ‎difficile toxins ©‏ الطفرية متقاطع الرابطة بواسطة ‎formaldehyde‏ ‏في جانب ‎GAT‏ تتضمن الطريقة لحث استجابة مناعية لعدوى ‎AC. difficile‏ كائن ثديي إعطاء ‎(AN‏ الثديي تركيبة مولدة للمناعة تتضمن ‎C. difficile toxin A‏ طفري؛ يتضمن تعريف الترتيب ‎of ad)‏ و3 ‎C. difficile toxin‏ طفري؛ يتضمن تعريف الترتيب رقم: حيث يكون ‎acid‏ 80100 واحد على الأقل من كل من ‎C. difficile toxins‏ الطفرية ‎٠‏ متقاطع الرابطة بواسطة ‎1-ethyl-3—(3—-dimethylaminopropyl) carbodiimide‏ و/أو ‎.N-Hydroxysuccinimide (NHS)‏ في أحد التجسيدات؛ فإن الطرق للعلاج أو الطرق لحث استجابة مناعية تكون في كائن ثديي بحاجة لذلك. في أحد التجسيدات؛ تتضمن الطرق للعلاج أو الطرق لحث استجابة مناعية كائن ثديي ‎VO‏ أصيب من قبل بعدوى ‎difficile‏ .© متكررة. في أحد التجسيدات؛ تتضمن الطرق للعلاج أو الطرق لحث الاستجابة المناعية إعطاء التركيبة عن غير الطريق المعوي. في أحد التجسيدات؛ تتضمن الطرق للعلاج أو الطرق لحث استجابة مناعية تركيبة مولدة للمناعة تتضمن إضافيا مادة مساعدة. ‎Y.‏ في أحد التجسيدات؛ تتضمن المادة المساعدة هلام ‎aluminum hydroxide‏ و ‎-CpG oligonucleotide‏ في تجسيد آخرء تتضمن المادة المساعدة ‎JSCOMATRIX‏
م _ في أحد التجسيدات؛ يتضمن ‎polypeptide‏ المعزول سلسلة جانبية واحدة على الأقل لمتخلف ‎polypeptide «aspartic acid‏ أو سلسلة جانبية واحدة على الأقل لمتخلف ‎glutamic acid‏ من ‎polypeptide‏ معدلة ‎Wilks‏ بواسطة ‎glycine‏ ‏في أحد التجسيدات؛ يتضمن ‎polypeptide‏ المعزول رابطة متقاطعة واحدة على الأقل © بين سلسلة جانبية لمتخلف ‎acid‏ 85081116 من ‎polypeptide‏ وسلسلة جانبية لمتخلف ‎lysine‏ ‏من 7/060106ا060؛ ورابطة متقاطعة واحدة على الأقل بين سلسلة جانبية لمتخلف ‎glutamic acid‏ من ‎polypeptide‏ وسلسلة جانبية لمتخلف ‎lysine‏ من ‎polypeptide‏ ‏في أحد التجسيدات؛ يتضمن ‎polypeptide‏ المعزول جزء ‎beta—alanine‏ متصل بسلسلة جانبية لمتخلف ‎lysine‏ واحد على الأقل من ‎.polypeptide‏ ‎٠٠‏ في أحد التجسيدات؛ يتضمن ‎polypeptide‏ المعزول جزء ‎glycine‏ متصل بسلسلة جانبية لمتخلف ‎polypeptide (aspartic acid‏ أو بسلسلة جانبية لمتخلف ‎glutamic acid‏ من ‎polypeptide‏ ‏في أحد التجسيدات؛ يتضمن ‎polypeptide‏ المعزول ترتيب ‎amino acid‏ المذكور في تعريف الترتيب رقم: ‎of‏ حيث لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع ١؛‏ وحيث ‎١‏ تتصل سلسلة جانبية لمتخلف 5106لا واحد على الأقل من ‎polypeptide‏ مع جزء -5618 ‎.alanine‏ ‏في أحد التجسيدات؛ يتضمن ‎polypeptide‏ المعزول ترتيب ‎amino acid‏ المذكور في تعريف الترتيب رقم: ‎oT‏ حيث لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع ١؛‏ وحيث تتصل سلسلة جانبية لمتخلف ‎lysine‏ واحد على الأقل من ‎polypeptide‏ مع جزء -5618 ‎.alanine ٠‏ في أحد التجسيدات؛ يتضمن ‎polypeptide‏ المعزول سلسلة جانبية لمتخلف ‎Sblysine‏ ‏من ‎polypeptide‏ متصلة مع سلسلة جانبية لمتخلف ‎aspartic acid‏ أو مع سلسلة جانبية لمتخلف ‎glutamic acid‏ فلا
في أحد التجسيدات؛ يتضمن ‎polypeptide‏ المعزول سلسلة جانبية لمتخلف ‎aspartic acid‏ أو سلسلة جانبية لمتخلف 8610 ‎polypeptide glutamic‏ متصلة مع جزء glycine ‏المعزول له قيمة 5650 على الأقل حوالي‎ polypeptide ‏في أحد التجسيدات» يكون‎
‎٠٠١ 0‏ ميكروجرام/ ملليلتر.
‏في أحد الجوانب»؛ تتضمن التركيبة المولدة للمناعة ‎polypeptide‏ معزول له ترتيب ‎acid‏ 060 المذكور في تعريف الترتيب رقم: ‎of‏ حيث لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع )5 ‎polypeptide‏ معزول له ترتيب ‎amino acid‏ المذكور في تعريف الترتيب ‎Vad)‏ حيث لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏
‎٠‏ عند الموضع ‎١٠‏ وحيث تتضمن ‎polypeptides‏ سلسلة جانبية ‎amino acid‏ واحدة على الأقل معدلة كيميائيا بواسطة ‎1-ethyl-3~(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide) (EDC)‏ ‎.N-Hydroxysuccinimide (NHS) ,‏
‏في أحد التجسيدات؛ يتضمن ‎polypeptide‏ واحدة على الأقل من أي من: )1( جزء 06138-88016 واحد على الأقل متصل مع سلسلة جانبية لمتخلف ‎¢polypeptide lysine‏
‎polypeptide ‏من‎ lysine ‏(ب) رابطة متقاطعة واحدة على الأقل بين سلسلة جانبية لمتخلف‎ ٠ ‏و(ج) رابطة متقاطعة واحدة على الأقل بين سلسلة‎ taspartic acid ‏وسلسلة جانبية لمتخلف‎ glutamic acid ‏وسلسلة جانبية لمتخلف‎ polypeptide (lysine ‏جانبية لمتخلف‎
‏في أحد التجسيدات» يكون ‎polypeptide‏ المعزول له قيمة 5650 على الأقل حوالي ‎٠‏ ميكروجرام/ ملليلتر.
‏ف في أحد الجوانب»؛ تتضمن التركيبة المولدة للمناعة ‎polypeptide‏ معزول له ترتيب ‎acid‏ 060 المذكور في تعريف الترتيب رقم: ‎of‏ حيث لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع )5 ‎polypeptide‏ معزول له ترتيب ‎amino acid‏ المذكور في تعريف الترتيب ‎Vad)‏ حيث لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ ‏عند الموضع )50( حيث تتصل سلسلة جانبية لمتخلف ‎lysine‏ واحد على الأقل من تعريف
‏فلا
-١١- lysine ‏الترتيب رقم: ؛ مع جزء 0618-880106؛ و(ب) حيث تتصل سلسلة جانبية لمتخلف‎ .5618-2180106 ‏واحد على الأقل من تعريف الترتيب رقم: 7 مع جزء‎ ‏ثاني‎ lysine ‏في أحد التجسيدات؛ تتضمن التركيبة المولدة للمناعة سلسلة جانبية لمتخلف‎ ‏أو مع سلسلة‎ aspartic acid ‏من تعريف الترتيب رقم: ؛ متصلة مع سلسلة جانبية لمتخلف‎ 1 ‏ثاني من تعريف الترتيب رقم:‎ lysine ‏90187016؛ وحيث يتصل متخلف‎ acid ‏جانبية لمتخلف‎ 0 .glutamic acid ‏أو مع سلسلة جانبية لمتخلف‎ aspartic acid ‏مع سلسلة جانبية لمتخلف‎ ‏في أحد التجسيدات؛ تتضمن التركيبة المولدة للمناعة سلسلة جانبية لمتخلف‎ ‏الذي له ترتيب‎ polypeptide ‏من‎ glutamic acid ‏أو سلسلة جانبية لمتخلف‎ aspartic acid ‏حيث لا يتواجد اختياريا متخلف‎ of ‏المذكور في تعريف الترتيب رقم:‎ 60 acid glycine ‏عند الموضع )¢ متصلة مع جزء‎ methionine | ٠ ‏في أحد التجسيدات؛ تتضمن التركيبة المولدة للمناعة سلسلة جانبية لمتخلف‎ ‏الذي له ترتيب‎ polypeptide ‏من‎ glutamic acid ‏أو سلسلة جانبية لمتخلف‎ aspartic acid ‏المذكور في تعريف الترتيب رقم: 6؛ حيث لا يتواجد اختياريا متخلف‎ 60 acid glycine ‏الموضع )¢ متصلة مع جزء‎ 2ie methionine ‏المعزول له قيمة 5650 على الأقل حوالي‎ polypeptide ‏في أحد التجسيدات» يكون‎ yo ‏ميكروجرام/ ملليلتر.‎ ٠ ‏معزول له ترتيب‎ polypeptide ‏في أحد الجوانب؛ تتضمن التركيبة المولدة للمناعة‎ ‏معزول له ترتيب‎ polypeptide 5 Af ‏المذكور في تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏رابطة‎ 0 polypeptide ‏يتضمن كل‎ dua (AT ‏المذكور في تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid polypeptide ‏من‎ aspartic acid ‏متقاطعة واحدة على الأقل بين سلسلة جانبية لمتخلف‎ ٠ ‏(ب) رابطة متقاطعة واحدة على الأقل بين‎ polypeptide ‏من‎ lysine ‏وسلسلة جانبية لمتخلف‎ ‏من‎ lysine ‏وسلسلة جانبية لمتخلف‎ polypeptide (glutamic acid ‏سلسلة جانبية لمتخلف‎ ‏واحد على‎ lysine ‏(ج) جزء 0618-8186 متصل مع سلسلة جانبية لمتخلف‎ ¢polypeptide asparticacid ‏متصل مع سلسلة جانبية لمتخلف‎ glycine ‏الأقل من 7/060106ا00؛ و(د) جزء‎ ‏فلا‎
— \ \ — واحد على الأقل من ‎polypeptide‏ أو سلسلة جانبية لمتخلف ‎glutamic acid‏ واحد على الأقل من ‎polypeptide‏ ‏© شرح مختصر للرسومات. الشكل ‎١‏ 0 -(ح): اصطفاف ترتيب ‎C. difficile toxin A‏ نوع بري من السلالات 630؛ ‎toxin A 00196 20291 3‏ طفري له تعريف الترتيب رقم: ‎of‏ باستخدام معايير انقطاع التسلسل»؛ اصطفاف //51/11لا0. الشكل "(أ)-(): اصطفاف ترتيب 8 ‎C. difficile toxin‏ نوع بري من السلالات 630؛ ‎«CD196 20291 VPI10463 Ye‏ و3 ‎toxin‏ طفري له تعريف الترتيب رقم: 3 باستخدام معايير انقطاع التسلسل»؛ اصطفاف ‎LCLUSTALW‏ ‏الشكل ؟: رسم ‎Sly‏ تحديدي لسلالات ‎C. difficile‏ سالبة ‎toxin‏ النوع البري. تختبر أوساط مزرعة ‎١١“‏ سلالة ‎difficile‏ .© بواسطة ‎ELISA‏ من أجل ‎toxin A‏ كما هو موضح؛ تظهر ‎١‏ سلالات ‎toxin A‏ ولا تظهره ‎١‏ سلالات (السلالات 1351« 3232 7322 5036« ‎(VPI'11186,4811 ٠‏ الشكل ؛ 0 و(ب): نتائج ‎SDS-PAGE‏ توضح أن الطفرة الثلاثية ‎A‏ (تعريف الترتيب رقم: 4)؛ الطفرية الثنائية 8 (تعريف الترتيب رقم: 0( والطفرة الثلاثية 8 (تعريف الترتيب ‎(Vcd)‏ ‏لا تسبب 910005/816 من أجل ‎Racl RhoA GTPases‏ في اختبارات ‎glucosylation‏ ‏في المعمل مع 00058ا00-146-9ل؛ بينما أن ‎٠١‏ ميكروجرام إلى ‎١‏ نانوجرام من 8 ‎toxin‏ ‎Yo‏ نوع بري يسبب ‎glucosylate‏ من أجل 48061. الشكل #: ‎Western adi‏ يبين إخماد نشاط ‎B toxins A cysteine protease‏ طفرية (تعريفات الترتيب أرقام: ؛ و7 على التوالي)؛ مقارنة مع مراقبة أجزاء منفصلة من ‎toxins A‏ و8 نوع بري (تعريفات الترتيب أرقام: ‎١‏ و؟؛ على التوالي). انظر المثال 13.
_— \ \ _ الشكل 21 رسومات بيانية تبين أن الطفرة الثلاثية ‎toxins A‏ و8 (تعريفات الترتيب أرقام: ؛؟ و1 على التوالي) تظهر سمية خلوية متخلفة عند الاختبار عند تركيزات عالية ‎Sie)‏ حوالي ‎٠‏ ميكروجرام/ ملليلتر) بواسطة اختبار سمية خلوية في المعمل في خلايا ‎AMR-90‏ ‏الشكل 7: رسم بياني يبين أن قيم 5050 متشابهة للطفرة الثلاثية 8 ‎toxin‏ (تعريف © الترتيب رقم: 1) وللطفرة السباعية 8 ‎toxin‏ (تعريف الترتيب رقم: ‎(A‏ ‏الشكل ‎tA‏ رسم بياني يمثل النتائج من اختبارات سمية خلوية في المعمل يتم فيها رسم مستويات ‎Lily (RLUS) ATP‏ مقابل تركيزات متزايدة من الطفرة الثلاثية 100/8 (تعريف الترتيب رقم: 4؛) (اللوحة العلوية) والطفرة الثلاثية 1008 ‎Cay pes)‏ الترتيب رقم: 1( (اللوحة السفلية). إن السمية الخلوية المتخلفة من ‎A‏ 0*10؟ و8 الطفري يمكن إخمادها كليا مع أجسام مضادة معادلة ‎٠‏ تخص م 0*0 طفري (اللوحة العلويةم ‎mAbs A3-25,pAb‏ + 60-22م) و8 ‎toxin‏ طفري (اللوحة السفلية-8 ‎.(PAb‏ ‏الشكل 9: صور شكل خلية ‎IMR-90‏ عند ‎VY‏ ساعة بعد المعالجة. تبين اللوحة ‎A‏ خلايا مقارنة معالجة وهميا. تبين اللوحة 8 شكل الخلية بعد معالجة مع 1008 طفري خامد النشاط مع ‎formalin‏ (تعريف الترتيب رقم: 7). تبين اللوحة © شكل الخلية بعد معالجة مع 1008 طفري ‎Vo‏ خامد النشاط مع ‎EDC‏ (تعريف الترتيب رقم: 6). تبين اللوحة ‎D‏ شكل الخلية بعد معالجة مع ‎toxin 8‏ نوع بري (تعريف الترتيب رقم: 7). تبين اللوحة ‎E‏ شكل الخلية بعد المعالجة مع طفرة ثلاثية 1008 (تعريف الترتيب رقم: 76). تلاحظ نتائج متشابهة مع معالجات ‎TedA‏ ‏الشكل ‎٠١‏ : رسم بياني يبين عيارات جسم مضاد معادل حسب الوصف في المثال 25 (دراسة ‎.(muCdiff2010-06‏ ‎Yo‏ الشكل ‎١١‏ : رسم بياني يبين عيارات جسم مضاد معادل حسب الوصف في المثال 26 (دراسة ‎.(muCdiff2010-07‏ ‏الشكل ‎:١‏ رسم ‎Slo‏ يبين استجابات جسم مضاد معادل ضد / 10105 و8 في هامسترات بعد ؛ تحصينات حسب الوصف في المثال 27 (دراسة ‎hamC. difficile2010~‏ 02
— \ — الشكل ‎VT‏ رسم ‎Sle‏ يبين استجابات جسم مضاد معادل في هامسترات بعد تطعيم مع طفرية وجينية خامدة النشاط كيميائيا و ‎List Biological toxoids‏ حسب الوصف في المثال 27 (دراسة ‎.(hamC. difficile2010-02‏ الشكل ‎VE‏ منحنيات البقاء على قيد الحياة لعدد ؟ مجموعات محصنة من الهامسترات ‎fo}‏ مقارنةٌ مع الحيوانات المقارنة غير المحصنة حسب الوصف في المقال 28 (دراسة ‎<hamC. difficile2010-02‏ مستمرة). الشكل ‎Yo‏ رسم بياني يبين استجابة نسبية لجسم مضاد معادل ضد مستحضرات مختلفة من ‎toxins‏ طفرية ‎C. difficile‏ في هامسترات (دراسة ‎«(hamC. difficile2010-03‏ حسب الوصف في المثال 29. ‎Ya‏ الشكل 6١0)-(ب):‏ رسومات بيانية تبين استجابة نسبية لجسم مضاد معادل قوية ضد ‎toxins A‏ و8 طفرية جينية خامدة النشاط كيميائيا (تعريفات الترتيب أرقام: ‎yt‏ على التوالي) في قردة ماكاك سينومولجس حسب الوصف في المثال 30. الشكل ‎VY‏ ترتيبات ‎acid‏ 807100 لمناطق متغيرة من سلاسل خفيفة ‎(V0)‏ وثقيلة ‎(HL)‏ ‏من ‎peptide .A3-25 mAb IgE‏ الإشارة - محدد بخط بارز؛ ‎CDRs‏ - بحروف مائلة ‎١‏ وتحتها خط؛ منطقة ثابتة - بحروف ثخينة وتحتها خط (الترتيب الكامل غير مبين). الشكل ‎$V A‏ رسم بياني يبين معايرة أجسام مضادة أحادية النسخ ‎toxin A‏ منفردة في اختبار معادلة ‎toxin‏ باستخدام مستويات ‎ATP‏ (مقدرة كميا بوحدات ضوء نسبية- ‎(RLU‏ كمؤشر لحيوية الخلية. بالمقارنة مع ‎toxin‏ المقارن ‎((4XECS50)‏ فإن ‎«mAbs A80-29‏ 8065-3 860-22 و 03-25 لها تأثيرات معادلة متزايدة على ‎A‏ 0*10؟ مع التركيز لكنها ‎Yo‏ الا تصل إلى مستوى ضد ‎toxin A‏ المقارن المروجب من أرنب. إن 50-10 ‎«mAbs‏ ‎AS8-46 5 (AS6-33‏ لا تعادل ‎toxin A‏ إن المثال المقارن خلية فقط كانت له قيمة ‎.RLUs 11١4١6-١1‏ الشكل 114 تخطيط ‎A‏ مجموعات 6011006 من ‎toxin 8 mAbs‏ بواسطة ‎.BiaCore‏ vem ‏إن إضافة‎ stoxin A MAbs ‏الشكل ١٠()-(ج): الأنشطة التعاونية المعادلة لاتحادات‎ ‏تخفيفات مختلفة من أجسام مضادة معادلة 860-22 865-33 و80-29م إلى تركيزات‎ ‏بغض النظر عن التخفيف. إن كنال‎ toxin A ‏يزيد تعاونيا معادلة‎ 23-25 MAb ‏متزايدة من‎ ‏والأمثلة المقارنة خلية فقط‎ (1) 0X0, Y>) ‏موضحة‎ (4x ]050( ‏فقط‎ toxin A ‏للمثال المقارن‎ )ب("٠١ ‏حسب الوصف في الرسومات البيانية المبينة في الشكل‎ RLUS TY XY, 0-Y ‏.لها قيمة‎ © ‏(ج).‎ ٠١ ‏والشكل‎ ‏بواسطة‎ toxin 8 ‏معادلة‎ toxin 8 mAbs ‏الشكل ١؟: الأنشطة التعاونية المعادلة من‎ ‏تزداد‎ toxin 8 ‏و859-3 موضحة في الشكل ١؟(). إن معادلة‎ 860-2 «mAbs 8-6 .))ب("7١ ‏تعاونيا بعد اتحاد 88-26 مع تخفيفات 859-3 (الشكل‎ ‏يقل في المواد‎ 4801 GTPase ‏يبين أن إظهار‎ Western ‏تبقع‎ :YY ‏الشكل‎ Ya ‏إلى 976 ساعة؛ لكن ليس في‎ YE ‏من‎ (Va) ‏طفري جيني (تعريف الترتيب‎ toxin 8 ‏المستخلصة‎ ‏النوع البري (تعريف الترتيب رقم: 7). يبين الرسم البياني‎ tOXIN 8 ‏المواد المستخلصة المعالجة مع‎ ‏في المواد المستخلصة المعالجة مع 8 0«*10)؛ لكن ليس في‎ glucosylated Racl ‏أيضا أن‎ ‏المواد المستخلصة المعالجة مع 8 1010 طفري جيني.‎ ‏الشكل 7؟(ا)-(ك): رسم بياني يمثل النتائج من اختبارات سمية خلوية في المعمل مرسوم‎ Yo ic)ie ‏مقابل تركيزات متزايدة من أوساط‎ (RLUS) ATP ‏فيها بيانيا مستويات‎ ‏وتجمع مصل الهامستر («)؛10*10 خام (حصد مزرعة) من السلالة المقابلة وتجمع‎ ©. difficile ‏وتجمع‎ (List Biologicals ‏تجاري نحصل عليه من‎ toxin) ‏مصل الهامستر (©)؛ 1010 نقي‎ ‏من‎ toxins ‏خام (*)؛ مقارن؛ و1019 نقي (©#)؛ مقارن. تضاف‎ toxin ‏(لله)؛‎ fale) ‏مصل‎ ‏إلى الخلايا عند قيم 4*5050. يبين شكل ؟؟ أن تركيبة مولدة للمناعة تتضمن‎ ALG ‏السلالات‎ _ ٠ ‏حيث يخمد‎ oT ‏طفري (تعريف الترتيب رقم: ؛) و1008 طفري (تعريف الترتيب رقم:‎ TedA ‏الموصوف‎ Vo ‏29؛ الجدول‎ JE ‏على سبيل المثال؛‎ (ha (EDC ‏الطفرية مع‎ toxins ‏نشاط‎ ‏سلالة‎ ١6 ‏هناء تحث أجسام مضادة معادلة تظهر نشاط معادل ضد 107105 من على الأقل عدد‎ ‏فقط:‎ toxin ‏بالمقارنة مع المثال المقارن المقابل‎ 06. difficile ‏المختلفة التالية من‎ CDC (==) YT ‏(الشكل‎ 2007070 ¢((<) YY ‏(الشكل 77())؛ 2006017 (الشكل‎ 2007886 Yo
اج \ — 2 روالشكل ؟7؟(د))؛ 2007838 (الشكل ‎YY‏ )»—((¢ 2007886 (الشكل ١7و))؛‏ 2 رو(الشكل ؟7(ز))؛ 2004013 (الشكل ‎¢((z) YY‏ 2009141 (الشكل ‎7١7‏ (ط))؛ 42 ابالشكل ؟؟(ى))؛ 2006376 (الشكل ١(ك)).‏ الشكل 4 7: توضيح لإخماد نشاط ‎EDC/NHS‏ تمثيلي من ‎C. difficile toxins‏ طفرية؛ © يؤدي إلى ¥ أنواع ممكنة على الأقل من التعديلات: روابط متقاطعة؛ مواد مجمعة ‎«glycine‏ ‏ومواد مجمعة 5818-3181010©6. توضح اللوحة ‎A‏ الربط المتقاطع. تنشط متخلفات ‎carboxylic‏ ‏من ‎toxins‏ طفرية ثلاثية بإضافة ‎NHS EDC‏ تتفاعل ‎esters‏ النشطة مع ‎iJ amines‏ لتكوين روابط ‎amide‏ ثابتة؛ لتنتج روابط متقاطعة داخل وبين الجزيئات. توضح اللوحة 8 تكوين مواد مجمعة ‎glycine‏ بعد إخماد النشاط؛ تخمد ‎esters‏ النشطة المتبقية بإضافة ‎glycine‏ ‎٠‏ لتكوين روابط ‎amide‏ ثابتة. توضح اللوحة © تكوين مواد مجمعة ‎beta-alanine‏ يمكن أن تتفاعل ؟ جزيئات جرامية من ‎NHS‏ مع جزيء جرامي واحد من ‎EDC‏ لتكوين ‎beta—alanine‏ ‏نشط. يتفاعل هذا عندئذ مع ‎amines‏ أولية لتكوين روابط ‎Aut amide‏ الشكل ‎Yo‏ توضيح إخماد نشاط ‎EDC/NHS‏ تمثيلي من ‎C. difficile toxins‏ طفرية؛ يؤدي إلى حدوث واحد على الأقل من أنواع التعديلات التالية: (أ) روابط متقاطعة؛ (ب) مواد ‎٠‏ مجمعة ‎glycine‏ و(ج) مواد مجمعة ‎.beta-alanine‏ ‏وصف مختصر للترتيبات تعريف الترتيب رقم: ‎١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎C. difficile 630 toxin A‏ ‎(TcdA)‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ¥ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 8 ‎difficile 630 toxin‏ .© ‎(TcdB) ٠‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ؟ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 100/8 طفري له طفرة عند المواضع ‎oY AY YAo‏ كما هو مقارن مع ترتيب الترتيب رقم: ‎A‏
‎-١ -‏ تعريف الترتيب رقم: ؛ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 100/8 طفري له طفرة عند المواضع دكت ‎YAY‏ و١٠٠٠‏ كما هو مقارن مع ترتيب الترتيب رقم: 1 تعريف الترتيب رقم: © يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 طفري له طفرة عند المواضع 1 ‎(YA Ag‏ كما هو مقارن مع ترتيب الترتيب رقم: ‎Y‏ ‎o‏ تعريف الترتيب رقم: 6 يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 طفري له طفرة عند المواضع الكت ‎«YAN‏ وم 19 كما هو مقارن مع تعريف الترتيب ‎Y tad)‏ تعريف الترتيب رقم: ‎١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 100/8 طفري له طفرة عند ‎(YAY (YAO (YVY (Y14 goal gall‏ نلف 01و ‎٠٠‏ كما هو مقارن مع ترتيب الترتيب رقم: )2 ‎١‏ تعريف الترتيب رقم: ‎A‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 طفري له طفرة عند ‎(YVYY تخا١ goal gall‏ للكت الغكت )£7 كتف ‎TAA‏ كما هو مقارن مع تعريف الترتيب رقم: ‎Y‏ ‏تعريف الترتيب رقم: 4 يبين ترتيب ‎DNA‏ يشفر ‎(TcdA) C. difficile 630 toxin A‏ نوع بري. ‎Vo‏ تعريف الترتيب رقم: ‎٠١‏ يبين ترتيب ‎DNA‏ يشفر 8 ‎(TcdB) ©. difficile 630 toxin‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١١‏ يبين ترتيب ‎DNA‏ يشفر تعريف الترتيب رقم: ؟. تعريف الترتيب رقم: ‎١١‏ يبين ترتيب ‎DNA‏ يشفر تعريف الترتيب رقم: 4. تعريف الترتيب رقم: ‎١١‏ يوضح ترتيب ‎DNA‏ يشفر تعريف الترتيب رقم: #. ‎Yo‏ تعريف الترتيب رقم : ‎١٠‏ يوضح ‎DNA ul‏ يشفر تعريف الترتيب رقم ‎Joe‏ ‏تعريف الترتيب رقم: ‎V0‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎C. difficile R20291‏ ‎TcdA‏ نوع بري.
-١١/-
NO ‏يشفر تعريف الترتيب رقم:‎ DNA ‏يبين ترتيب‎ ١١ ‏تعريف الترتيب رقم:‎
C. difficile 00196 TcdA ‏لأجل‎ amino acid ‏يبين ترتيب‎ VV ‏تعريف الترتيب رقم:‎ ‏نوع بري.‎
NY ‏يشفر تعريف الترتيب رقم:‎ DNA ‏يبين ترتيب‎ YA ‏تعريف الترتيب رقم:‎
C. difficile VPI10463 ‏لأجل‎ amino acid ‏يبين ترتيب‎ ١9 ‏تعريف الترتيب رقم:‎ 0 ‏نوع بري.‎ TcdA
NA) ‏يشفر تعريف الترتيب‎ DNA ‏يبين ترتيب‎ 5٠ ‏تعريف الترتيب رقم:‎
C. difficile 820291 ‏لأجل‎ amino acid ‏يبين ترتيب‎ 7١ ‏تعريف الترتيب رقم:‎ ‏نوع بري.‎ 8
YY ‏يشفر تعريف الترتيب رقم:‎ DNA ‏يبين ترتيب‎ TY ‏تعريف الترتيب رقم:‎ ٠١
C. difficile 00196 1008 ‏لأجل‎ amino acid ‏تعريف الترتيب رقم: ؟ 7 يبين ترتيب‎ ‏نوع بري.‎
NY ‏يشفر تعريف الترتيب رقم:‎ DNA ‏يبين ترتيب‎ YE ‏تعريف الترتيب رقم:‎
C. difficile VPI10463 ‏لأجل‎ amino acid ‏يبين ترتيب‎ YO ‏تعريف الترتيب رقم:‎ ‏نوع بري.‎ 1608 ١٠
Yo ‏يشفر تعريف الترتيب رقم:‎ DNA ‏يبين ترتيب‎ YT ‏تعريف الترتيب رقم:‎
C. difficile ‏من موضع مسبب للمرض من‎ DNA ‏يبين ترتيب‎ TV ‏تعريف الترتيب رقم:‎ ‏نوع بري.‎ 03 ‏من تعريف‎ YAY ‏إلى‎ ٠١١ ‏للمتخلفات‎ 807100 acid ‏يبين ترتيب‎ YA ‏تعريف الترتيب رقم:‎ .١ ‏الترتيب رقم:‎ . ٠ (voy
م ‎-١‏ ‏تعريف الترتيب رقم: ‎YA‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ للمتخلفات ‎١‏ إلى 547 من تعريف الترتيب رقم: ‎.١‏ ‏تعريف الترتيب رقم: ‎٠‏ يبين ترتيب ‎acid‏ 807100 للمتخلفات ‎٠١١‏ إلى ‎YAY‏ من تعريف الترتيب رقم: ؟. ‎o‏ تعريف الترتيب رقم: ١؟‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ للمتخلفات ‎١‏ إلى 547 من تعريف الترتيب رقم: ؟. تعريف الترتيب رقم: ‎YY‏ يبين ترتيب ‎acid‏ 800100 للمتخلفات #547 إلى 809 من تعريف الترتيب رقم: ‎.١‏ ‏تعريف الترتيب رقم: ‎FY‏ يبين ترتيب ‎acid‏ 800100 للمتخلفات 44 #5 إلى ‎VAY‏ من تعريف ‎A‏ الترتيب ‎Y tad)‏ تعريف الترتيب رقم : ‎I‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎TcdA‏ طفرى؛ حيث قد تكون المتخلفات ١ك‏ حق4تك ‎(YAY (YAO (YVY‏ ىك ‎(£TY3‏ كف دم م تدم دمت و١٠٠٠‏ عبارة عن أى ‎.amino acid‏ تعريف الترتيب رقم : ‎YO‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎TcdB‏ طفرى؛ حيث قد تكون ‎Yo‏ المتخلفات ‎١١‏ ءاأت الكت تغكت ‎(YAMA‏ كلك لتك £1( ‎٠١‏ فم فم :ف ‎OAY‏ ‏د افكت مككت و ‎Voy‏ عبارة عن أى ‎.amino acid‏ تعريف الترتيب رقم: ‎TU‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل السلسلة الخفيفة المتغيرة من جسم مضاد متعادل من ‎mAb) C. difficile TcdA‏ 3-25م). تعريف الترتيب رقم: ‎TV‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎ALLL‏ الثقيلة المتغيرة من ‎Yo‏ جسم مضاد متعادل من ‎mAb) C. difficile TcdA‏ 3-25م). تعريف الترتيب رقم: ‎YA‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 06041 من السلسلة الخفيفة المتغيرة من جسم مضاد متعادل من ‎mAb) C. difficile TcdA‏ 3-25م).
تعريف الترتيب رقم: 9 يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎CDR2‏ من السلسلة الخفيفة المتغيرة من جسم مضاد متعادل من 7608 ‎mAb) C. difficile‏ 3-25). تعريف الترتيب رقم: ‎4٠‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎CDR3‏ من السلسلة الخفيفة المتغيرة من جسم مضاد متعادل من 7608 ‎mAb) C. difficile‏ 3-25). ‎o‏ تعريف الترتيب رقم: ‎5١‏ يبين ترتيب ‎acid‏ 800100 من ‎CDR]‏ من السلسلة الثقيلة المتغيرة من جسم مضاد متعادل من 7608 ‎((A3-25 mAb) C. difficile‏ تعريف الترتيب رقم: ‎£Y‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎CDR2‏ من السلسلة الثقيلة المتغيرة من جسم مضاد متعادل من 7608 ‎mAb) C. difficile‏ 3-25). تعريف الترتيب رقم: ؟؛ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎CDR3‏ من السلسلة الثقيلة ‎٠‏ المتغيرة من جسم مضاد متعادل من 160/8 ‎(A3-25 mAb) C. difficile‏ تعريف الترتيب رقم: 44 يبين ترتيب ‎DNA‏ يشفر تعريف الترتيب رقم: ؟. تعريف الترتيب رقم: £0 يبين ترتيب ‎DNA‏ يشفر تعريف الترتيب رقم: 4. تعريف الترتيب رقم: £7 يبين ترتيب ‎DNA‏ يشفر تعريف الترتيب رقم: 20 تعريف الترتيب رقم: 497 يبين ترتيب ‎DNA‏ يشفر تعريف الترتيب رقم: 1. ‎yo‏ تعريف الترتيب رقم: ‎$A‏ يبين ترتيب ‎oligonucleotide ODN CpG «nucleotide‏ محث لمناعة. تعريف الترتيب رقم: £9 يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎ALLL‏ الثقيلة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 7608 ‎mAb) C. difficile‏ 88-26). تعريف الترتيب رقم: ‎٠‏ © يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎peptide‏ الإشارة من السلسلة ‎Yo‏ الثقيلة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 1608 ‎.(B8-26 mAb) C. difficile‏ ‎vo‏
=« \ _ تعريف الترتيب رقم: )0 يبين ترتيب ‎JaY amino acid‏ 060141 من السلسلة الثقيلة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 7608 ‎mAb) C. difficile‏ 88-26). تعريف الترتيب رقم: ‎OY‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎CDR2‏ من السلسلة الثقيلة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 7608 ‎mAb) C. difficile‏ 88-26). 0 تعريف الترتيب رقم: ‎OF‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎CDR3‏ من السلسلة الثقيلة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 7608 ‎mAb) C. difficile‏ 88-26). تعريف الترتيب رقم: 94 يبين ترتيب ‎amino acid‏ لمنطقة ثابتة من السلسلة الثقيلة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 7608 ‎mAb) C. difficile‏ 88-26). تعريف الترتيب رقم: 00 يبين ترتيب ‎amino acid‏ من السلسلة الخفيفة المتغيرة من جسم ‎٠‏ مضاد متعادل 1608 ‎.(B8-26 mAb) C. difficile‏ تعريف الترتيب رقم: © يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎peptide‏ الإشارة من السلسلة الخفيفة المتغيرة من جسم ‎alias‏ متعادل 1608 ‎.(B8-26 mAb) C. difficile‏ تعريف الترتيب رقم: ‎OV‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 06041 من السلسلة الخفيفة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 7608 ‎mAb) C. difficile‏ 88-26). ‎Yo‏ تعريف الترتيب رقم: ‎OA‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎CDR2‏ من السلسلة الخفيفة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 7608 ‎mAb) ©. difficile‏ 88-26). تعريف الترتيب رقم: 09 يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎CDR3‏ من السلسلة الخفيفة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 7608 ‎mAb) C. difficile‏ 88-26). تعريف الترتيب رقم: ‎Te‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎ALLL‏ الثقيلة المتغيرة من ‎٠‏ جسم مضاد 1608 ‎.(B59-3 mAb) C. difficile‏ تعريف الترتيب رقم: ‎6١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎peptide‏ الإشارة من السلسلة الثقيلة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 17608 ‎mAb) C. difficile‏ 859-3). ‎vo‏
تعريف الترتيب رقم: ‎TY‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 060141 من السلسلة الثقيلة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 7608 ‎mAb) C. difficile‏ 859-3). تعريف الترتيب رقم: 17 يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎CDR2‏ من السلسلة الثقيلة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 7608 ‎mAb) C. difficile‏ 859-3). 0 تعريف الترتيب رقم: 14 يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎CDR3‏ من السلسلة الثقيلة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 7608 ‎mAb) C. difficile‏ 859-3). تعريف الترتيب رقم: 65 يبين ترتيب ‎amino acid‏ للمنطقة الثابتة من السلسلة الثقيلة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 7608 ‎mAb) C. difficile‏ 859-3). تعريف الترتيب رقم: 17 يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل السلسلة الخفيفة المتغيرة من ‎Vo‏ جسم مضاد متعادل 1608 ‎.(B59-3 mAb) C. difficile‏ تعريف الترتيب رقم: ‎TY‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎peptide‏ الإشارة من السلسلة الخفيفة المتغيرة من جسم ‎alias‏ متعادل 1608 ‎mAb) C. difficile‏ 859-3). تعريف الترتيب رقم: ‎TA‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 06041 من السلسلة الخفيفة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 7608 ‎mAb) C. difficile‏ 859-3). ‎Yo‏ تعريف الترتيب رقم: 19 يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎CDR2‏ من السلسلة الخفيفة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 7608 ‎mAb) ©. difficile‏ 859-3). تعريف الترتيب رقم: ‎Vo‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎CDR3‏ من السلسلة الثقيلة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 7608 ‎mAb) C. difficile‏ 859-3). تعريف الترتيب رقم: ‎VY‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎ALLL‏ الثقيلة المتغيرة من ‎٠‏ جسم مضاد متعادل 1608 ‎.(B9-30 mAb) C. difficile‏ تعريف الترتيب رقم: ‎VY‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎peptide‏ الإشارة من السلسلة الثقيلة المتغيرة من جسم ‎alias‏ متعادل 1608 ‎.(B9-30 mAb) C. difficile‏ ‎vo‏
تعريف الترتيب رقم: ‎YY‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 060141 من السلسلة الثقيلة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 1608 ‎mAb) C. difficile‏ 89-30). تعريف الترتيب رقم: ‎YE‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎CDR2‏ من السلسلة الثقيلة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 1608 ‎mAb) C. difficile‏ 89-30). 0 تعريف الترتيب رقم: ‎YO‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎CDR3‏ من السلسلة الثقيلة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 1608 ‎mAb) C. difficile‏ 89-30). تعريف الترتيب رقم: ‎VT‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ للمنطقة الثابتة من السلسلة الثقيلة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 1608 ‎mAb) C. difficile‏ 89-30). تعريف الترتيب رقم: ‎YY‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل السلسلة الخفيفة المتغيرة من ‎٠‏ جسم مضاد متعادل 1608 ‎mAb) C. difficile‏ 89-30). تعريف الترتيب رقم: ‎VA‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎peptide‏ الإشارة من السلسلة الخفيفة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 1608 ‎mAb) C. difficile‏ 89-30). تعريف الترتيب رقم: 79 يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 06041 من السلسلة الخفيفة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 1608 ‎mAb) C. difficile‏ 89-30). ‎Yo‏ تعريف الترتيب رقم: ‎Av‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎CDR2‏ من السلسلة الخفيفة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 1608 ‎.(B9-30 mAb) C. difficile‏ تعريف الترتيب رقم: ‎A)‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎CDR3‏ من السلسلة الخفيفة المتغيرة من جسم مضاد متعادل 1608 ‎mAb) C. difficile‏ 89-30). تعريف الترتيب رقم: ‎AY‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 8 طفري؛ حيث قد يكون ‎١‏ المتخلف عن المواضع ادف .-االك آكلاكت لغكت ‎(YAA‏ كفلكت لكك ‎(2TY‏ نكف ‎OEY‏ ‎(OAV (ott‏ .مكل امت لمكت و ‎Voy‏ عبارة عن أي ‎.amino acid‏ 61لا
— \ — تعريف الترتيب رقم: ‎AY‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 100/8 طفري له طفرة عند ‎goal gall‏ خدى ‎(YAY (YAO (YVY‏ .ىك ‎٠.١ gc‏ كما هو مقارن مع تعريف الترتيب رقم: ‎٠‏ حيث لا يوجد ‎methionine‏ عند الموضع ‎.١‏ ‏تعريف الترتيب رقم: ‎٠4‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎C. difficile toxin A‏ طفري ‎o‏ له طفرة عند المواضع ‎(YAO‏ ااا و ‎Vow‏ كما هو مقارن مع تعريف الترتيب رقم: ‎١٠‏ حيث لا يوجد ‎methionine‏ عند الموضع ‎.١‏ ‏تعريف الترتيب رقم: ‎AS‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 8 ‎C. difficile toxin‏ طفري له طفرة عند المواضع ‎(YAT (YVY (VV.‏ الت ١ك ‎cI‏ و1954 كما هو مقارن مع تعريف الترتيب رقم: 7؛ حيث لا يوجد ‎methionine‏ عند الموضع ‎.١‏ ‎AD‏ تعريف الترتيب رقم: ‎AT‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 8 ‎C. difficile toxin‏ طفري له طفرة عند المواضع 7 الاك وكا كما هو مقارن مع تعريف الترتيب رقم: ‎dua oY‏ لا يوجد ‎methionine‏ عند الموضع ‎.١‏ ‏تعريف الترتيب رقم: ‎AY‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2004013 ‎C. difficile‏ ‎TcdA‏ نوع بري. ‎Vo‏ تعريف الترتيب رقم: ‎AM‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2004111 ‎C. difficile‏ ‎TcdA‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎A‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2004118 ‎C. difficile‏ ‎TcdA‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: 90 يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2004205 ‎C. difficile‏ ‎TcdA ٠٠١‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎9١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2004206 ‎C. difficile‏ ‎TcdA‏ نوع بري.
تعريف الترتيب رقم: ‎AY‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2005022 ‎difficile‏ .©
‎TcdA‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: 97 يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2005088 ‎difficile‏ .©
‎TcdA‏ نوع بري. هه تعريف الترتيب رقم: 54 يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2005283 ‎difficile‏ .©
‎TcdA‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: 30 يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2005325 ‎difficile‏ .©
‎TcdA‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: 37 يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2005359 ‎difficile‏ .©
‎TcdA ٠‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎AY‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2006017 ‎difficile‏ .©
‎TcdA‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: 548 يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2007070 ‎difficile‏ .©
‎TcdA‏ نوع بري. ‎Vo‏ تعريف الترتيب رقم: 39 يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2007217 ‎difficile‏ .©
‎TcdA‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎٠٠١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2007302 ‎difficile‏ .©
‎TcdA‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎٠١١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2007816 ‎difficile‏ .©
‎TcdA ٠٠١‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎٠١7‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2007838 ‎C. difficile‏
‎TcdA‏ نوع بري.
‏51ل
اج \ —
تعريف الترتيب رقم: ‎٠١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2007858 ‎C. difficile‏
‎TcdA‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: 4 ‎٠١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2007886 ‎difficile‏ .©
‎TcdA‏ نوع بري. هه تعريف الترتيب رقم: ‎٠١١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2008222 ‎difficile‏ .©
‎TcdA‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: 1 ‎V+‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2009078 ‎difficile‏ .©
‎TcdA‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎٠١١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2009087 ‎difficile‏ .©
‎TcdA ٠‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎Vo A‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2009141 ‎C. difficile‏
‎TcdA‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎٠١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2009292 ‎difficile‏ .©
‎TcdA‏ نوع بري. ‎Vo‏ تعريف الترتيب رقم: ‎٠١١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2004013 ‎difficile‏ .©
‎TcdB‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١١١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2004111 ‎difficile‏ .©
‎TcdB‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١١١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2004118 ‎difficile‏ .©
‎TcdB ٠‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١١١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2004205 ‎difficile‏ .©
‎TcdB‏ نوع بري.
‏51ل
تعريف الترتيب رقم: ‎١١6‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2004206 ‎difficile‏ .©
‎TcdB‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١١١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2005022 ‎difficile‏ .©
‎TcdB‏ نوع بري. > تعريف الترتيب رقم: ‎١١76‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2005088 ‎difficile‏ .©
‎TcdB‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١١١7‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2005283 ‎difficile‏ .©
‎TcdB‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١١78‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2005325 ‎difficile‏ .©
‎TcdB Yo‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١١9‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2005359 ‎difficile‏ .©
‎TcdB‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: + ‎VY‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2006017 ‎difficile‏ .©
‎TcdB‏ نوع بري. ‎Vo‏ تعريف الترتيب رقم: ‎١١١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2006376 ‎difficile‏ .©
‎TcdB‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎VYY‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2007070 ‎difficile‏ .©
‎TcdB‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١١١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2007217 ‎difficile‏ .©
‎TcdB ٠‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ؛ ‎١"‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2007302 ‎difficile‏ .©
‎TcdB‏ نوع بري.
‏51ل
تعريف الترتيب رقم: ‎VY0‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2007816 ‎C. difficile‏
‎TcdB‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١١7‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2007838 ‎difficile‏ .©
‎TcdB‏ نوع بري. هه تعريف الترتيب رقم: ‎١١١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2007858 ‎difficile‏ .©
‎TcdB‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎VYA‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2007886 ‎difficile‏ .©
‎TcdB‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١١4‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2008222 ‎difficile‏ .©
‎TcdB Yo‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١7١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2009078 ‎difficile‏ .©
‎TcdB‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١7١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2009087 ‎difficile‏ .©
‎TcdB‏ نوع بري. ‎Vo‏ تعريف الترتيب رقم: ‎١١7‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2009141 ‎difficile‏ .©
‎TcdB‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 2009292 ‎difficile‏ .©
‎TcdB‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: 4 ‎١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎difficile 014 TcdA‏ .©
‎Yo‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎difficile 015 TcdA‏ .© نوع بري. 51ل
CYA
C. difficile 020 TcdA ‏لأجل‎ amino acid ‏يبين ترتيب‎ VT ‏تعريف الترتيب رقم:‎ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 100/8 023 ‎C. difficile‏ نوع بري. هه تعريف الترتيب رقم: ‎١78‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 100/8 027 ‎C. difficile‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١4‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 100/8 029 ‎C. difficile‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎٠6١0‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎C. difficile 046 TcdA‏ ‎٠‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎V6)‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 014 ‎C. difficile‏ ‏نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎VEY‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 015 ‎C. difficile‏ ‏نوع بري. ‎Yo‏ تعريف الترتيب رقم: ‎cpu VEY‏ ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎C. difficile 020 TcdB‏ ‏نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١4‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 023 ‎C. difficile‏ ‏نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎V£0‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 027 ‎C. difficile‏ ‎Yo‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎VET‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 029 ‎C. difficile‏ ‏نوع بري. ‏51ل ye
تعريف الترتيب رقم: ‎VEY‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎difficile 046 TcdB‏ .©
نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎VEA‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 100/8 001 ‎C. difficile‏
نوع بري. هه تعريف الترتيب رقم: ‎V£9‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 100/8 002 ‎C. difficile‏
نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١5١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 100/8 003 ‎C. difficile‏
نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١5١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎C. difficile 004 TcdA‏
‎٠‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎YOY‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎C. difficile 070 TcdA‏
‏نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎VOT‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 100/8 075 ‎C. difficile‏
‏نوع بري. ‎Vo‏ تعريف الترتيب رقم: 4 ‎١5‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 100/8 077 ‎C. difficile‏
‏نوع بري. تعريف الترتيب رقم: 100 يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎C. difficile 081 TcdA‏
‏نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١97‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 100/8 117 ‎C. difficile‏
‎Ye‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎VOY‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 100/8 131 ‎C. difficile‏
‏نوع بري.
‏51ل
ل
تعريف الترتيب رقم: ‎١578‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 001 ‎C. difficile‏
نوع بري. تعريف الترتيب رقم: 109 يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 002 ‎C. difficile‏
نوع بري. هه تعريف الترتيب رقم: ‎٠6١0‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 003 ‎C. difficile‏
نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١6١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 004 ‎C. difficile‏
نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎VY‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎C. difficile 070 TcdB‏
‎٠‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١67‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 075 ‎C. difficile‏
‏نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١64‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 077 ‎C. difficile‏
‏نوع بري. ‎Vo‏ تعريف الترتيب رقم: ‎١606‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 081 ‎C. difficile‏
‏نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١17‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 117 ‎C. difficile‏
‏نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١69‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 131 ‎C. difficile‏
‎Ye‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎VIA‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 100/8 053 ‎C. difficile‏
‏نوع بري.
‏51ل
وس
C. difficile 078 TcdA ‏لأجل‎ amino acid ‏يبين ترتيب‎ ١64 ‏تعريف الترتيب رقم:‎ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١70‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎C. difficile 087 TcdA‏ نوع بري. هه تعريف الترتيب رقم: ‎١7١‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 100/8 095 ‎C. difficile‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١77‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 100/8 126 ‎C. difficile‏ نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١77‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 053 ‎C. difficile‏ ‎٠‏ فوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١١74‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 078 ‎C. difficile‏ ‏نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١705‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 087 ‎C. difficile‏ ‏نوع بري. ‎Vo‏ تعريف الترتيب رقم: ‎١776‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 095 ‎C. difficile‏ ‏نوع بري. تعريف الترتيب رقم: ‎١١797‏ يبين ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1008 126 ‎C. difficile‏ ‏نوع بري. ‎٠‏ الوصف التفصيلي: اكتشف المخترعون بصورة مثيرة للدهشة؛ من بين أشياء ‎difficile toxin A «gal‏ .6 ر 8 ‎toxin‏ ‏طفري؛ وطرق لذلك. تتميز الطفرات؛ جزئياء بكونها مولدة للمناعة وتظهر سمية خلوية قليلة مقارنة 51لا
— \ اذ بشكل النوع البري من ‎toxin‏ المقابل. يتعلق الاختراع الحالي أيضا بأقسام مولدة للمناعة من ذلك؛ مواد مكافئة حيويا لها و ‎polynucleotides‏ معزولة تتضمن ترتيبات ‎nucleic acid‏ تشفر أيا مما سبق. إن التركيبات المولدة للمناعة الموصوفة هنا تظهر بصورة غير متوقعة القدرة على التسبب © في تكوين أجسام مضادة معادلة ضد ‎C. difficile toxins‏ وقد تكون لها القدرة على توفير حماية نشطة و/أو سلبية ضد تحدي ‎difficile‏ .. إن الأجسام المضادة الجديدة موجهة ضد ‎epitopes‏ ‏مختلفة من م (للاها و8 «أ*ها. اكتشف المخترعون إضافيا أن اتحاد اثنين على الأقل من الأجسام المضادة أحادية النسخ المعادلة يمكن أن يظهر تأثير تعاوني غير متوقع بصفة خاصة في معادلة ‎toxin A‏ و8 ‎toxin‏ في المعمل. " قد تستخدم التركيبات المخترعة الموصوفة هنا لعلاج؛ منع؛ تقليل خطورة؛ تقليل حدوث؛ تقليل شدة و/أو تأخير بداية عدوى ‎difficile‏ .نا مرض»؛ ‎calla (Uae‏ متلازمة مصاحبة ‎C.‏ ‎«difficile‏ و/أو مضاعفات لذلك في ‎AK‏ ثديي؛ مقارنة مع كائن ثديي لم تعطى له التركيبة. إضافة لذلك؛ اكتشف المخترعون خلية ‎difficile‏ .© غير جرثومية التولد مخلقة يمكن أن تظهر بدرجة ثابتة ‎difficile toxin A‏ .0 و8 ‎toxin‏ الطفري؛ وطرق جديدة لإنتاجها. ‎١‏ التركيبات المولدة للمناعة ‎(Immunogenic Compositions)‏ في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع بتركيبة مولدة للمناعة تتضمن ‎C. difficile toxin‏ طفري. يتضمن ‎C. difficile toxin‏ الطرفي ترتيب ‎amino acid‏ به طفرة واحدة على الأقل في مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ وطفرة واحدة على الأقل في مجال سيطرة ‎cysteine protease‏ مقارنة مع ‎C. difficile toxin‏ النوع البري المقابل. ‎Yo‏ يشير المصطلح "نوع بري ‎(wild-type)‏ حسب الاستخدام ‎lia‏ إلى الشكل الموجود في الطبيعة. على سبيل المثال» فإن ترتيب ‎polypeptide‏ أو ‎polynucleotide‏ نوع بري هو ترتيب موجود في كائن متعضي يمكن عزله من مصدر في الطبيعة ولا يتم تعديله بصورة متعمدة بمعالجة أدمية. يتعلق الاختراع الحالي أيضا مع ‎polynucleotides‏ معزولة تتضمن ترتيبات ‎nucleic‏ ‏0 تشفر أيا مما سبق. ‎(lil)‏ يتعلق الاختراع الحالي باستخدام أي من التركيبات السابقة
اا لعلاج؛ منع؛ تقليل خطورة»؛ تقليل حدوث؛ تقليل ‎Bad‏ و/أو تأخير بداية عدوى ‎«C. difficile‏ مرض» ‎calla CURIS‏ متلازمة؛ و/أو مضاعفات مصاحبة ‎C. difficile‏ في كائن تديي؛ مقارنة مع كائن ثديي لم تعطى له التركيبة؛ بالإضافة إلى طرق لتحضير التركيبات المذكورة. حسب الاستخدام ‎(la‏ تشير 'تركيبة مولدة للمناعة ‎"(immunogenic composition)‏ أو ‎aly ©‏ للمناعة ‎(Immunogen)‏ إلى تركيبة تحدث استجابة مناعية في كائن ثديي معطاة له التركيبة. تشير "استجابة مناعية ‎(immune response)‏ إلى حدوث استجابة مفيدة تكيفية (من خلال جسم مضاد) و/أو خلوية (من خلال خلايا 1 خاصة بمولد مضاد أو نواتج الإفراز لها) موجهة ضد 1010 ‎difficile‏ .0 في مريض متلقي. قد تكون الاستجابة المناعية تكيفية؛ خلوية؛ ‎٠‏ أو كلتهما. قد تكون الاستجابة المناعية استجابة نشطة يحثها ‎Uae)‏ ءِِ تركيبة مولدة ‎cae lial‏ مولد للمناعة. بطريقة بديلة؛ قد تكون الاستجابة المناعية استجابة سلبية يحثها إعطاء جسم مضاد أو خلايا-1 أولية. يمكن تحديد وجود استجابة مناعية تكيفية (من خلال جسم مضاد)؛ على سبيل ‎(JE‏ ‎١‏ باختبارات معتمدة على خلية معروفة في الفن؛ مثل اختبار جسم مضاد معادل» ‎ELISA‏ إلخ. إن استجابة مناعية خلوية يسببها نموذجيا وجود ‎polypeptide epitopes‏ بمصاحبة جزيئات ‎MHC‏ النوع ‎١‏ أو ‎Hg gill‏ لتنشيط خلايا مساعدة 7 + 004 و/أو خلايا 1 سامة للخلايا ‎CDS +‏ خاصة بمولد مضاد. قد تشمل الاستجابة أيضا تنشيط خلايا أحادية؛ ‎WIA‏ بلعمة كبيرة؛ خلايا ‎A (NK‏ قاعدية الصبغ؛ خلايا متفرعة ؛» خلايا نجمية؛ خلايا دبقية صغيرة؛ ‎WIA‏ حمضية ‎٠‏ الصبغ؛ أو مكونات أخرى للمناعة الفطرية. يمكن تحديد وجود استجابة مناعية تتوسطها خلية بواسطة اختبارات انقسام (خلايا ‎(CD4 + T‏ أو اختبارات ‎CTL‏ (خلية ليمفاوية ‎T‏ سامة للخلايا) معروفة في الفن. في أحد التجسيدات؛ تكون التركيبة المولدة للمناعة تركيبة لقاح. حسب الاستخدام هناء ‎OB‏ ‏"تركيبة لقاح ‎"(Vaccine composition)‏ هي تركيبة تحدث استجابة مناعية في كائن ثديي
ديو" معطاة له التركيبة. إن تركيبة اللقاح قد تحمي الكائن الثديي المحصن ضد التحدي اللاحق بواسطة عامل تحصين أو عامل نشط مناعيا بصورة عابرة. قد تكون الحماية كاملة أو جزئية من ناحية التقليل في الأعراض أو العدوى مقارنة بكائن ثديي غير ملقح تحت نفس الشروط. إن التركيبات المولدة للمناعة الموصوفة هنا عابرة النشاط» وتشير إلى وجود سمة القدرة © على التسبب في استجابة مناعية مؤثرة (مثلا؛ استجابة مناعية تكيفية) ضد 1010 تنتجه سلالة ‎gal ©. difficile‏ مختلفة عن ‎ADL‏ المشتقة منها التركيبة. على سبيل المثال؛ فإن التركيبات ‎sal gall‏ للمناعة (مثلا؛ المشتقة من 630 ‎(C. difficile‏ الموصوفة هنا قد تنتج أجسام مضادة عابرة التشاط يمكن أن ترتبط مع 10115 ناتجة بواسطة سلالات متعددة من ‎C. difficile‏ (مثلا؛ ‎toxins‏ ناتجة بواسطة ‎C. difficile R20291‏ و 1/20110463). انظرء ‎٠‏ على سبيل ‎JE (JEN‏ 37. إن النشاط العابر يدل على إمكانية الحماية العابرة لمولد المناعة البكتيري؛ والعكس صحيح. يشير المصطلح "عابرة الحماية (01055-0101801178)"” حسب الاستخدام هنا إلى قدرة الاستجابة المناعية المحثة بواسطة تركيبة مولدة للمناعة لمنع أو إخماد عدوى بواسطة سلالة بكتيرية مختلفة أو نوع من نفس الفصيلة. على سبيل المثال؛ فإن تركيبة مولدة للمناعة (مثلاء ‎Vo‏ مشتقة من 630 ‎(C. difficile‏ موصوفة هنا تحث استجابة مناعية مؤثزة في كائن ثديي لإضعاف عدوى ‎C. difficile‏ و/أو لتخفيف حدة مرض ‎C. difficile‏ تسببه ‎AD‏ بخلاف 630 (مثلاء ‎C.‏ ‎(difficile R20291‏ الكائن الثديي. تتضمن تدييات تمثيلية تحدث فيها التركيبة المولدة للمناعة أو مولد المناعة استجابة مناعية أي ثدييات؛ ‎(oi (Jie‏ هامسترات؛ حيوانات رئيسة؛ وآدميين. في تجسيد مفضل؛ تحدث ‎٠‏ التركيبة المولدة للمناعة أو مولد المناعة استجابة مناعية في آدمي معطاة له التركيبة. حسب الوصف أعلاه؛ فإن م ‎(TcdB) toxin B_ (TcdA) toxin‏ هما ‎glucosyltransferases‏ متماظلة تخمد نشاط ‎GTPases‏ صغيرة من عائلة ‎.Rho/Rac/Ras‏ ‏يعتمد تأثير ‎TedA‏ و1608 على خلايا مستهدفة لكائن ثديي على آلية متعددة الخطوة لتكوين خلوي داخلي من خلال مستقبل؛ انتقال غشاء؛ عملية تحلل بروتيني ذاتي ‎(autoproteolytic‏
اه ‎.monoglucosylation GTPases processing)‏ يعزو كثير من هذه الأنشطة الوظيفية إلى مناطق متفرقة في الترتيب الأولي من ‎toxins‏ وقد تم تصوير 10105 لتبين أن هذه الجزيئات متشابهة في البناء. إن جين النوع البري من أجل 10/8 به حوالي ‎nucleotides AVY.‏ تشفر ‎protein‏ له © وزن جزيثي مستنتج حوالي ‎٠#‏ ؟ كيلو دالتون؛ وله حوالي ‎camino acids 97٠١‏ حسب الاستخدام ‎(lia‏ يتضمن ‎C. difficile TCA‏ النوع البري ‎C. difficile TedA‏ من أي ‎C. du‏ ‎difficile‏ نوع بري. قد يتضمن 10608 ‎difficile‏ .© النوع البري ترتيب ‎difficile TcdA amino acid‏ .© نوع بري له تماثل على الأقل حوالي ‎AY TAY JA‏ ‎(Jag JAY‏ ددا 41ل ‎JAY‏ يفضل حوالي ‎JAA‏ يفضل أكثر حوالي 799 أو الأكثر ‎٠‏ تفضيلا حوالي ‎72٠٠١‏ مع تعريف الترتيب رقم: ‎١‏ (كامل الطول) عند الاصطفاف بصورة مثالية؛ مثلا بواسطة برامج ‎GAP‏ أو 8551111 باستخدام أوزان ثغرة انقطاع تسلسل. في تجسيد مفضل؛ يتضمن ‎C. difficile TedA‏ النوع البري ترتيب ‎amino acid‏ مذكور في تعريف الترتيب رقم: ‎٠‏ يصف ترتيب ‎acid‏ 0 النوع البري من أجل 18 من سلالة 630 07016 ‎C.‏ (معلئة ‎La‏ في رقم وصول ‎:GenBank‏ ‎YP_001087137.1 ١‏ و/أو 67494.1لم6). إن سلالة 630 ‎difficile‏ .© معروفة في الفن بأنها سلالة 012 .| 008-501/068. يصف تعريف الترتيب رقم: 4 جين النوع البري من أجل ‎TedA‏ من سلالة 630 ‎<C. difficile‏ المعلنة أيضا في رقم صول ‎:GenBank‏ ‎.NC_009089.1‏ ‏يتضمن مثال ‎AT‏ من ‎difficile TedA‏ .© النوع البري ترتيب ‎amino acid‏ مذكور في ‎Yo‏ تعريف الترتيب رقم: ‎V0‏ يصف ترتيب ‎amino acid‏ النوع البري من أجل ‎TedA‏ من سلالة ‎C.‏ ‎difficile 1‏ (معلنة ‎Lay‏ في رقم وصول ‎:GenBank‏ 1©_003217088.1). إن سلالة ‎Co difficile R20291‏ معروفة في الفن بكونها سلالة مفرطة السمية وسلالة ‎.PCR-ribotype 027‏ إن ترتيب ‎amino acid‏ من أجل ‎TedA‏ من سلالة ‎LC. difficile 1‏ تماثل حوالي 794 مع تعريف الترتيب رقم: ‎.١‏ يصف تعريف 61لا
#١ ‏.0؛ المعلنة‎ difficile 20291 ‏من سلالة‎ TedA ‏جين النوع البري من أجل‎ ١١ ‏الترتيب رقم:‎ ‏6-013316.1لا.‎ :GenBank ‏أيضا برقم وصول‎ amino acid ‏النوع البري ترتيب‎ C. difficile TcdA ‏يتضمن مثال إضافي من أجل‎ ‏النوع البري من‎ amino acid ‏يصف ترتيب‎ VY ‏مذكور في تعريف الترتيب رقم:‎ :GenBank ‏(معلنة أيضا في رقم وصول‎ C. difficile CD196 ‏أجل 18 من سلالة‎ 0 ‏معروفة في الفن بسلالة‎ Rs ‏سلالة من تفشي كندي حديث؛‎ CD196 ‏إن‎ .(CBA61 1 56. 1
C. difficile ‏من سلالة‎ TedA ‏من أجل‎ amino acid ‏إن ترتيب‎ .PCR-ribotype 027
TedA ‏مع‎ 79٠٠0 ‏له تمائل حوالي 7948 مع تعريف الترتيب رقم: ١؛ وله تمائل حوالي‎ 06 ‏جين النوع البري‎ YA ‏يصف تعريف الترتيب رقم:‎ LC. difficile R20291 ‏من سلالة‎ :GenBank ‏المعلنة أيضا برقم وصول‎ <C. difficile CD196 ‏من سلالة‎ TedA ‏من أجل‎ ٠ .FN538970.1 ‏النوع البري‎ ©. difficile 100/8 ‏من أجل‎ amino acid ‏تتضمن أمثلة إضافية لترتيب‎
C. ‏النوع البري من أجل 100/8 من سلالة‎ amino acid ‏يصف ترتيب‎ ٠9 ‏تعريف الترتيب رقم:‎ ‏إن ترتيب‎ .)0/63564.1 :GenBank ‏(معلنة أيضا في رقم وصول‎ difficile 03 7٠٠ ‏له تماثل حوالي‎ C. difficile VPI10463 ‏من سلالة‎ TedA ‏من أجل‎ amino acid ١٠ ‏من أجل‎ oll ‏جين النوع‎ Yo ‏يصف تعريف الترتيب رقم:‎ .١ ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ )799,( :GenBank ‏المعلنة أيضا برقم وصول‎ <C. difficile VPI10463 ‏من سلالة‎ TedA ..1 ‏من سلالة‎ TedA ‏النوع البري‎ 0... 017016 TedA ‏تتضمن أمثلة إضافية من أجل‎ ‏نوع بري يمكن الحصول عليها من:‎ C. difficile | ٠
The Centers for Disease Control and Prevention (CDC, Atlanta, GA). ‏النوع‎ 6. difficile ‏من سلالات‎ TedA ‏من أجل‎ amino acid ‏اكتشف المخترعون أن ترتيب‎ 3٠٠١ ‏يتضمن تمائل على الأقل حوالي 799,3 إلى‎ CDC ‏البري التي يمكن الحصول عليها من‎
— 7 اذ عند الاصطفاف بصورة مثلى؛ مع متخلفات ‎١ amino acid‏ إلى ‎AYY‏ من تعريف الترتيب ‎tad)‏ ‎TedA) ١‏ من 630 ‎difficile‏ .0). انظر الجدول ‎.١‏ ‏اكتشف ‎se iad)‏ أيضا أن ترتيب ‎acid‏ 800100 من أجل ‎TedA‏ من سلالات ‎difficile‏ .© النوع البري قد تتضمن ‎Bila‏ على الأقل حوالي ‎JAE JAY JAY JAY JA‏ محل ‎JAN JAY La‏ حك إلى حوالي ‎٠‏ عند الاصطفاف بصورة متلى؛ (مثلا؛ عند الاصطفاف الأمثل لترتيبات ‎ALIS‏ الطول) مع تعريف الترتيب رقم: ‎.١‏ ‏جدول ‎:١‏ سلالات ‎difficile‏ .0 النوع البري ناتجة من ‎CDC‏ والنسبة المثوية لتماثل متخلفات ‎٠-١ amino acid‏ 7+ من ‎TedA‏ من ‎C. difficile AD.‏ النوع البري المقابلة مع متخلفات ‎7١-١ amino acid‏ من تعريف الترتيب رقم: ١؛‏ عند الاصطفاف بصورة مثلى. ‎٠‏ جدول ‎:١‏ سلالات ‎C. difficile‏ من النوع البري من ‎CDC‏ ‏تعريف سلالة | النسبة ‎A hall‏ التقريبية لتماقل ‎acid | C. difficile‏ 800100 مع متخلفات ‎AYY=)‏ ‏من تعريف الترتيب رقم: ‎١‏
_ Ad A —_ طبقا لذلك» في أحد التجسيدات»؛ فإن ترتيب ‎C. difficile TcdA amino acid‏ من النوع البري يتضمن ترتيب على الأقل حوالي ‎(Onn‏ .قر ‎Yoo‏ أو ‎٠‏ متخلفات متجاورة؛ الذي يكون له تماثل بنسبة حوالي ‎(JAE JAY JAY JAY ZA‏ فو 45 2497 على ‎(JB‏ يفضل © حوالي ‎JAA‏ يفضل أكثر حوالي 799 أو الأكثر تفضيلا حوالي ‎7٠٠١0‏ مع ترتيب له طول مساوي بين المتخافات ‎١‏ إلى ‎“a‏ 9 من تعريف الترتيب رقم ‎١ H‏ عند الاصطفاف بصورة مثلى ¢ مثا بواسطة برامج ‎GAP‏ أو 8557711 باستخدام أوزان مختلفة بصورة كبيرة افتراضية. إن ‎ABA‏ ‏تتضمن السلالات الموصوفة أعلاه (مثلا؛ 1 ‎CD 1 96 ¢ R2029‏ إلخ) ‎Sl‏ المدونة في جدول
A
‏من النوع البري يتضمن‎ ©. difficile 18 ‏لأجل‎ amino acid ‏في تجسيد آخرء فإن ترتيب‎ 0٠ ‏يفضل‎ JAY) ‏على‎ 797 145 (JAE JAY JAY 41 740 ‏بنسبة حوالي‎ Sila ‏ترتيب له‎ ‏مع‎ 79٠٠0 ‏يفضل أكثر حوالي 799 أو الأكثر تفضيلا حوالي‎ JAA ‏يفضل حوالي‎ JAY ‏حوالي‎
أي ترتيب ينتقى من تعريفات الترتيب أرقام: ‎٠١-8‏ عند الاصطفاف بصورة مثلى. انظر جدول ‎.)(-١‏ ‏جدول ١-ل):‏ سلالات ‎difficile‏ .© من النوع البري
تسد الما
ب
ما إن الجين من النوع البري لأجل 1608 له حوالي ‎nucleotides ١70978‏ تشفر ‎protein‏ ‏مع وزن جزيثي استنتاجي حوالي ‎7١7٠0‏ كيلودالتون؛ له حوالي 777676 ‎acids‏ 800100. كما هو مستخدم ‎cla‏ فإن 1008 ‎C. difficile‏ من النوع البري يتضمن 10608 ‎C. difficile‏ من أي سلالة ‎difficile‏ .© من النوع البري. إن ‎difficile TodB‏ .© من النوع البري قد يتضمن ترتيب
ع 0 800100 من النوع البري له تماثل بنسبة ‎LAY 960 Mea‏ كن ‎JAE JAY‏ محل 7 247 على الأقل» يفضل حوالي ‎9A‏ يفضل أكثر حوالي 799 أو الأكثر تفضيلا حوالي ‎٠‏ مع تعريف الترتيب رقم: ‎١‏ عند الاصطفاف بصورة مثلى؛ مثلا بواسطة برامج ‎GAP‏ أو 817 باستخدام أوزان مختلفة بصورة كبيرة افتراضية. في تجسيد ‎«Junie‏ فإن ‎C. difficile‏ © 1608 من النوع البري يتضمن ترتيب ‎acid‏ 800100 مذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: 7؛ الذي يصف ترتيب ‎@mino acid‏ من النوع البري لأجل 1608 من سلالة ‎difficile‏ .6 70 (مبينة أيضا في تتابع ‎GenBank‏ رقم ‎YP_001087135.1‏ و/أو 08167492). يصسف تعريف الترتيب رقم: ‎٠١‏ جين من النوع البري لأجل 1008 من سلالة ‎difficile‏ .© 1730 المبينة أيضا في تتابع ‎GenBank‏ رقم ‎NC_009089.1‏ ‏" إن مثالا أخر من 1608 ‎C. difficile‏ من النوع البري يتضمن ترتيب ‎amino acid‏ مذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: ‎oY)‏ الذي يصف ترتيب ‎acid‏ 800100 من النوع البري لأجل 1608 من سلالة ‎R20291 C. difficile‏ (مبينة أيضا في تتابع ‎GenBank‏ رقم ‎.(CBE02479.1 4/5 YP_003217086.1‏ إن ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1608 من سلالة 0850116 ...© 420291 له ‎Jil‏ بنسبة حوالي 797 مع تعريف الترتيب رقم: ‎HY‏ إن ‎Vo‏ التعريف رقم: ‎YY‏ يصف جين من النوع البري لأجل 1008 من سلالة ‎«(R20291 C. difficile‏ المبينة أيضا في تتابع ‎GenBank‏ رقم ‎.NC_013316.1‏ ‏في مثال إضافي لأجل ‎difficile‏ .6 من النوع البري فإن 1008 يتضمن ترتيب 0 800100 مذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: ‎YY‏ الذي يصف ترتيب ‎acid‏ 8100100 من النوع البري ‎Jal‏ 1008 من سلالة ‎difficile‏ .© 00196 (المبينة أيضا في تتابع ‎GenBank‏ ‎٠‏ رقم 0_003213639.1لاو/أو 68861153.1). إن تعريف الترتيب رقم: ‎YE‏ يصف جين من النوع البري ‎Jal‏ 1008 من سلالة ‎difficile‏ .© 00196. المبينة أيضا في تتابع ‎GenBank‏ ‏رقم ‎.NC_013315.1‏ يكون لترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1608 من ‎C. difficile ibs‏ 6 تماثل بنسبة حوالي 797 مع تعريف الترتيب رقم: 7. إن أمثلة إضافية لترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎difficile TcdB‏ .© من النوع البري ‎YO‏ تتضمن تعريف الترتيب رقم: ‎(Yo‏ الذي يصف ترتيب ‎acid‏ 801100 من النوع البري لأجل 1008
— ¢ — من سلالة ‎VPI10463 C. difficile‏ (المبينة أيضا في تتابع ‎GenBank‏ رقم ‎P18177‏ و/أو 8ه ). إن ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 1608 من سلالة ‎VPI10463 ©. difficile‏ له تماثل بنسبة 770 مع تعريف الترتيب رقم: ‎LY‏ إن تعريف الترتيب رقم: ‎YT‏ يصف جين من النوع ‎(gl)‏ لأجل 1608 من سلالة ‎difficile‏ .© 70110463 المبينة أيضا في تتابع ‎GenBank‏ ‎X53138.1 4, ©‏ إن أمثلة إضافية لأجل ‎difficile TedB‏ .© من النوع البري تتضمن 58 من سلالات ‎difficile‏ .© من النوع البري يمكن الحصول عليها من ‎.(CDC, Atlanta, GA) Centers for Disease Control and Prevention‏ اكتشف المخترعون أن ترتيب ‎amino acid‏ من ‎TedB‏ من سلالات ‎Cu difficile‏ من النوع البري التي ‎Yo‏ يمكن الحصول عليها من ‎CDC‏ تتضمن تماثل بنسبة على الأقل حوالي 795 إلى ‎79٠٠0‏ عند الاصطفاف بصورة مثلى؛ مع متخلف ‎١ amino acid‏ إلى ‎487١‏ من تعريف الترتيب رقم: ‎١‏ ‎TcdB)‏ من 630 ‎difficile‏ .). انظر جدول ‎.١‏ ‏جدول ؟: سلالات ‎C. difficile‏ من النوع البري ناتجة من ‎CDC‏ والنسبة المثوية لتماثل متخلفات ‎71-١ amino 0‏ من 1608 من سلالة ‎C. difficile‏ من النوع البري الخاصة بها مع ‎١‏ متخلفات ‎71-١ amino acid‏ من تعريف الترتيب رقم: ؛ عند الاصطفاف بصورة مثلى. جدول ؟: سلالات ‎C. difficile‏ من النوع البري من ‎CDC‏ ‏تعريف سلالة | النسبة المثوية التقريبية لتماثفل ‎acid | C. difficile‏ 800100 مع متخلفات ‎87-١‏ ‏من تعريف الترتيب رقم: ؟
_ _
طبقا لذلك» في أحد التجسيدات؛ فإن ترتيب ‎amino acid‏ لأجل ‎C. difficile TcdB‏ من النوع البري يتضمن ترتيب على | لأقل حوالي ‎(Tae (Oa‏ ا ل أو ‎٠‏ متخلفات متجاورة؛ التي يكون لها ‎Bila‏ بنسبة على الأقل حوالي ‎JAY AY JAY JA‏ 44 345 1297 يفضل 0 حوالي ‎JAY‏ يفضل حوالي ‎JOA‏ يفضل أكثر حوالي 799 أو الأكثر تفضيلا حوالي ‎79٠٠0‏ مع ترتيب لله طول متساوي بين المتخلفات ‎١‏ إلى 9060 من تعريف الترتيب رقم: ؟ عند الاصطفاف بصورة مثلى؛ مثلا بواسطة برامج ‎GAP‏ أو 8551111 باستخدام أوزان مختلفة بصورة كبيرة افتراضية. إن الأمثلة تتضمن السلالات الموصوفة أعلاه ‎(R20291 Dia)‏ 00196؛ إلخ) وتلك
المدونة في جدول ‎Y‏ ‎AD‏ في تجسيد آخرء فإن ترتيب ‎amino acid‏ لأجل 18 ‎C. difficile‏ من النوع البري يتضمن ترتيب له ‎BL‏ بنسبة حوالي 40 41ل ‎JAE AY AY‏ د14 797 على الأقل؛ يفضل حوالي ‎JAY‏ يفضل حوالي ‎JAA‏ يفضل أكثر 799 أو الأكثر تفضيلا حوالي ‎7٠٠8‏ مع
_go- ‏عند الاصطفاف بصورة مثلى. انظر‎ ١37-١١١ ‏أي ترتيب ينتقى من تعريفات الترتيب أرقام:‎ .)(-7 ‏جدول‎ ‏من النوع البري‎ ©. difficile ‏جدول 7-ل(): سلالات‎ ‏تعريف الترتيب رقم:‎ cc Toxin 8
C. difficile
I ‏سد‎
تسد ‎IE‏ ‏سد امسا
A
إن الجينات ‎A Jal‏ 10005 و8 ‎(tedB 5 tedA) toxins‏ تكون جزء من الموضع الجيني ‎19.6-kb‏ (الموضع المسبب للمرض؛ ‎(Paloc‏ المتضمنة ؟ إطارات قراءة واسعة صغيرة إضافية ‎itedE 0 (ORFs)‏ و606)؛ وقد تعتبر مفيدة لحدة الفيروس. يعرف ©0810 بأنه يبقى ساكن ومحفوظ في سلالات مولدة ‎LtOXIN‏ توجد أيضا عند نفس موقع التكامل الكروموسومي في 0 كل السلالات المولدة ‎toxin‏ التي تتحلل في هذا الوقت. في السلالات غير المولدة 0*10]؛ لا يوجد الموضع المسبب للمرض (081-0©6). طبقا لهذاء تكون ميزة سلالات ‎difficile‏ .© من النوع البري الموصوفة هنا هي وجود الموضع المسبب للمرض. إن ميزة أخرى مفضلة لسلالات ‎C. difficile‏ من النوع البري الموصوفة هنا هي إنتاج كلا من 1060/8 و1608. في أحد التجسيدات؛ تكون سلالة ‎difficile‏ .0 من النوع البري هي سلالة لها موضع ‎Yo‏ مسبب للمرض لها تماثل بنسبة على الأقل حوالي ‎JAY LAY (LAY JA‏ كال محال 7 2497 يفضل حوالي ‎JAA‏ يفضل أكثر حوالي 799 أو الأكثر تفضيلا حوالي ‎7٠٠8‏ مع ‎C. difficile 630‏ أو 0110463/. إن ترتيب الموضع المسبب للمرض الإجمالي من ‎C.‏ ‎difficile VPI10463‏ يسجل في قاعدة بيانات ‎EMBL‏ مع تتابع ترتيب رقم 2092982 يعرف أيضا في تعريف الترتيب رقم: 77. إن السلالات التي يتماثل ‎Paloc Led‏ مع تلك للسلالة 5ه 70110463 المرجعية يشار إليها على أنها نوع سام صفر. إن السلالات من الأنواع السامة ‎I=‏ ‎XI=XV (IX Vi‏ و/20/111-2061 تنتج كلا من ‎TedA‏ و1608 برغم الاختلافات في جينات 7 منها. عند الطرف ‎N‏ من ‎toxins‏ يعين موضع مجال سيطرة ‎.glucosyltransferase‏ يرافق نشاط ‎glucosyltransferase‏ من ‎toxins‏ وظيفة السمية الخلوية من ‎toxins‏ بدون التقيد ‎AIL‏ ‎٠‏ أو نظرية؛ يعتقد أن نشاط ‎glucosyltransferase‏ في كلا ‎toxins‏ يحفز ‎monoglucosylation‏ من 01016005 ارتباط ‎GTP‏ صغيرة في الفصائل العليا ‎.Rho/Rac/Ras‏ بعد ‎glucosylation‏ لأجل 5 ارتباط ‎GTP‏ هذه يتم تعديل الفسيولوجيا الخلوية بشكل مثير؛ مسببة فقد في التكامل البنائي وتوزيع ممرات إرسال إشارة أساسية للخلايا العائلة المصابة بالعدوى بواسطة 10*175. إن الحافز ‎<Asp-Xaa—Asp (DXD)‏ الداخل ‎«manganese A. Yo‏
‎«(UDP) uridine diphosphate‏ والمرتبط مع ‎«glucose‏ يكون ميزة نموذجية لمجال سيطرة ‎.glucosyltransferase‏ بدون التقيد بآلية أو نظرية؛ يعتقد أن المتخلفات التي تكون حساسة للنشاط الحفازي؛ مثل حافز ‎(DXD‏ لا تختلف بين 1008 من سلالة 'تاريخية ‎"(historical)‏ ‏معروفة؛ مثل ١27؛‏ و1008 من سلالة مفرطة السمية؛ مثل 420291. يعين موضع الحافز ‎DXD ©‏ عند المتخلفات 785 إلى ‎YAY‏ من ‎C. difficile TedA‏ من النوع البري؛ طبقا لترقيم تعريف الترتيب رقم: ١؛‏ وعند المتخلفات ‎YAT‏ إلى ‎YAA‏ من 10608 ‎difficile‏ .© من النوع البري؛ طبقا لترقيم تعريف الترتيب رقم: ؟. إن نظم الحلول الحسابية التقريبية الشاملة (مثلاء برامج تحليل الترتيب) تكون معروفة في الفن وقد تستخدم لصف ترتيبين أو أكثر من ‎amino acid toxin‏ بصورة مثلى لتحديد إذا كان ‎٠‏ | 1060 متضمنا حافز ذو ميزة خاصة محددة (مثلا؛ 1700 في مجال سيطرة ‎PHC (glucosyltransferase‏ في مجال سيطرة ‎cysteine protease‏ الموصوف أدناه؛ إلخ). يقارن الترتيب (الترتيبات) المقرب بصورة مثلى مع ترتيب مرجعي خاص ‎OEY‏ تعريف الترتيب رقم: ‎TedA Jal ١‏ أو تعريف الترتيب رقم: ؟ ‎(TedB Jal‏ لتحديد وجود الحافز ذو الميزة الخاصة. إن "التقريب الأمتل ‎"(Optimal alignment)‏ يشير إلى تقريب يعطي أعلى نسبة ‎VO‏ مذوية للتماثل محققة. يمكن أن يتم هذا التقريب باستخدام برامج تحليل ترتيب معروفة. في أحد التجسيدات»؛ يستخدم تقريب ‎CLUSTAL‏ (مثل ‎(CLUSTALW‏ تحت معايير افتراضية لتماثل من النوع البري مناسبة بمقارنة ترتيب الاستقصاء مع الترتيب المرجعي. إن الترقيم النسبي لمتخلفات ‎amino acid‏ المحفوظة يعتمد على ترقيم المتخلف لترتيب ‎amino acid‏ المرجعي لتقوير إقحامات وزالات صغيرة ‎lo)‏ سيل ‎JA‏ *؟»9من ‎amino acids ٠‏ أو أقل) ضمن الترتيب المصطف. كما هو مستخدم هنا؛ فإن المصطلح '"طبقا لترقيم ‎(according to the numbering‏ 00" يشير إلى ترقيم المتخلفات من الترتيب المرجعي عند مقارنة ترتيب ‎acid‏ 801100 أو ‎polynucleotide‏ المعطى مع الترتيب المرجعي. بمعنى آخرء يصمم عدد أو الموضع المتخلف لأجل ‎polymer‏ المعطى مع مراعاة الترتيب المرجعي بدلا من الموقع العددي الفعلي للمتخلف ‎Yo‏ ضمن ترتيب ‎amino acid‏ أو ‎polynucleotide‏ المعطى.
مه على سبيل المثال؛ فإن ترتيب ‎amino acid‏ المعطى؛ مثل سلالة ‎C. difficile‏ من النوع البري مفرطة السمية؛ يمكن أن يصطف مع الترتيب المرجعي (مثلا؛ مثل ما هو لسلالة ‎C. difficile‏ من النوع البري التاريخية؛ مثلا ‎٠‏ 17) بإدخال تجويفات؛ عند الضرورة؛ للبحث عن أفضل متخلف متشابه بين الترتيبين. في هذه الحالات» برغم وجود الفجوات؛ يتم ترقيم المتخلف في © ترتيب ‎acid‏ 807100 أو ‎polynucleotide‏ المعطى مع مراعاة الترتيب المرجعي المصطف معه. كما هو مستخدم ‎cis‏ يشير "ترتيب مرجعي ‎(reference sequence)‏ إلى ترتيب محدد مستخدم كقاعدة لمقارنة الترتيب. مالم يحدد خلاف ‎cell)‏ فإن كل الإشارات هنا إلى مواضع ‎acid‏ 800100 من ‎TedA‏ تشير إلى ترقيم تعريف الترتيب رقم: ‎.١‏ مالم يحدد خلاف ذلك؛ فإن كل الإشارات إلى مواضع ‎amino‏ ‏8000 من 1608 تشير إلى ترقيم تعريف الترتيب ‎Yor)‏ ‏إن مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ من /100؛ كما هو مستخدم هناء قد يبدأ عند متخلف تمثيلي ‎٠١٠ ١‏ أو ‎٠١١‏ وقد ينتهي عند متخلف تمثيلي 547» 216؛ أو ‎YAY‏ من ‎C.‏ ‎difficile 18‏ من النوع البري؛ مثلا تعريف الترتيب رقم: ‎.١‏ قد يتحد أي أدنى موقع متخلف مع أقصى موقع متخلف بين المتخلفات ‎١‏ و 547 من 1608 لتحديد ترتيب مجال سيطرة ‎glucosyltransferase | ١‏ طالما تم إدخال منطقة حافز ‎.DXD‏ على سبيل ‎JE‏ في أحد التجسيدات؛ فإن مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ من ‎TCA‏ يتضمن تعريف الترتيب رقم: ‎(YY‏ الذي ‎Jl‏ مع المتخلفات ‎797-1١١‏ من تعريف الترتيب رقم: ‎o)‏ ويتضمن منطقة حافز ‎-DXD‏ في تجسيد آخرء فإن مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ من ‎TCdA‏ يتضمن تعريف الترتيب رقم: ‎(YA‏ الذي يتماثل مع المتخلفات )08 من تعريف الترتيب رقم: ‎.١‏ ‎٠‏ إن مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ من ‎(TedB‏ كما هو مستخدم هناء قد يبدأ عند متخلف تمثيلي ‎٠١٠ ١‏ أو ‎٠١١‏ وقد ينتهي عند متخلف تمثيلي 547» 011 أو ‎YAY‏ من ‎C.‏ ‎difficile 8‏ من النوع البري؛ مثلا تعريف الترتيب رقم: ‎BLY‏ يتحد أي أدنى موقع متخلف مع أقصى موقع متخلف بين المتخلفات ‎١‏ و5477 من 1608 لتحديد ترتيب مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ طالما تم إدخال منطقة حافز ‎.DXD‏ على سبيل ‎JE‏ في أحد © التجسيدات؛ فإن مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ من 1008 يتضمن تعريف الترتيب رقم:
-١ه-‏ الذي يتمائل مع المتخلفات ‎797-1١١‏ من تعريف الترتيب رقم: ‎oF‏ ويتضمن منطقة حافز ‎-DXD‏ في تجسيد آخرء فإن مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ من 1008 يتضمن تعريف الترتيب رقم: ‎Fe‏ الذي يتماثل مع المتخلفات )08 من تعريف الترتيب رقم: ؟. بدون التقيد بنظرية أو آلية؛ يعتقد أن الطرف لا من 71008 و/أو 8 ينشق © بعملية ‎Jas‏ 0101810 ذاتية لمجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ لنقله إلى مكان ‎Al‏ وإطلاقه في العصارة الخلوية لخلية ‎(Jalal)‏ حيث يمكن أن يتفاعل مع ‎.Rac/Ras/Rho GTPases‏ يوضح أن ‎Co difficile TedA‏ من النوع البري ينشق بين 1543 و5543. يوضح أن ‎C. difficile TcdB‏ من النوع البري ينشق بين 543 و6544. يرافق مجال سيطرة ‎cysteine protease‏ نشاط تحلل ‎protein‏ المحفز ذاتيا من ‎toxin‏ ‎٠‏ يعين موضع مجال سيطرة ‎cysteine protease‏ باتجاه مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ ‏وقد يتميز بواسطة الثلاثي الحفاني ‎«(DHC) cysteine «histidine (aspartate‏ مثلا؛ ‎D589‏ 1655 و0700 من ‎TedA‏ من النوع ‎«gull‏ و0587 11653 و0698 من 10608 من النوع البري. بدون التقيد بآلية أو نظرية؛ يعتقد أن الثلاثي الحفازي يتم الحفاظ عليه بين ‎toxin‏ ‏من السلالة "التاريخية"؛ ‎Jie‏ 7170 و1008 من ‎ADL‏ مفرطة السمية؛ ‎(ie‏ 20291». ‎yo‏ إن مجال سيطرة ‎cysteine protease‏ من ‎(TedA‏ كما هو مستخدم هناء قد يبدأ عند المتخلف التمثيلي )08 وقد ينتهي عند المتخلف التمثيلي 8504 214 ‎VTA‏ أو 17 من ‎TedA‏ من النوع البري؛ ‎Sle‏ تعريف الترتيب رقم: ‎.١‏ قد يتحد أي أدنى موقع متخلف مع أقصى موقع متخلف بين المتخلفات 547 و8095 من 160/8 من النوع البري لتحديد ترتيب مجال سيطرة ‎Wik cysteine protease‏ تم إدخال منطقة حافز ‎DHC‏ الثلاثي الحفازي. على سبيل المثال؛ ‎SY‏ أحد التجسيدات؛ فإن مجال سيطرة ‎cysteine protease‏ من 1008 يتضمن تعريف الترتيب رقم: ‎VY‏ الذي له منطقة حافز ‎DHC‏ موضوع عند المتخلفات ‎NY dV‏ و958١‏ من تعريف الترتيب رقم: 7؟؛ التي تتوافق على التوالي مع ‎D589‏ 1655 و0700 من 160/8 من النوع البري طبقا لترقيم تعريف الترتيب رقم: ‎.١‏ يتماثل تعريف الترتيب رقم: ‎TY‏ مع المتخلفات ‎OEY‏ إلى 4 من تعريف الترتيب رقم: ‎TedA ٠‏
اج إن مجال سيطرة ‎protease‏ 07/516106 من ‎(TedB‏ كما هو مستخدم هناء قد يبدأ عند المتخلف التمثيلي ‎off‏ وقد ينتهي عند المتخلف التمثيلي 801 ‎7٠٠١ veo IY‏ من 8 من النوع البري؛ ‎Sle‏ تعريف الترتيب رقم: ‎BLY‏ يتحد أي أدنى موقع متخلف مع أقصى موقع متخلف بين المتخلفات 944 و8091 من 1608 من النوع البري لتحديد ترتيب مجال سيطرة ‎cysteine protease ©‏ طالما تم إدخال منطقة حافز ‎DHC‏ الثلاثي الحفازي. على سبيل المثال؛ في ‎af‏ التجسيدات؛ فإن مجال سيطرة ‎cysteine protease‏ من 1008 يتضمن تعريف الترتيب رقم: ‎(YY‏ الذي يتضمن منطقة حافز ‎DHC‏ موضوع عند المتخلفات ‎١١9 ٠١ ctf‏ من تعريف الترتيب رقم: ‎FY‏ التي تتوافق على التوالي مع ‎C698 5 1653 (D587‏ من ‎TedB‏ من النوع البري طبقا لترقيم تعريف الترتيب رقم: ‎LY‏ يتماثل تعريف الترتيب رقم: ‎FY‏ مع المتخلفات 5440 إلى ‎VAY‏ من تعريف الترتيب رقم: ‎oY‏ 1008. في تجسيد آخرء فإن مجال سيطرة ‎cysteine protease‏ من ‎TedB‏ يتضمن متخلفات 801-544 من تعريف الترتيب رقم: ؟؛ ‎.TcdB‏
في الاختراع الحالي؛ فإن التركيبة المولدة للمناعة تتضمن ‎C. difficile toxin‏ طفري. إن المصطلح "طفري ‎(Mutant)‏ كما هو مستخدم هناء يشير إلى جزيء يظهر بناء أو ترتيب ‎١‏ يختلف عن بناء أو ترتيب النوع البري المقابل؛ ‎Sle‏ بالحصول على وصلات متقاطعة مقارنة مع بناء النوع البري المقابل و/أو بالحصول على طفرة واحدة على الأقل؛ مقارنة مع ترتيب النوع البري المقابل عند الاصطفاف ‎JAY)‏ ؛ مثلا ببرامج ‎GAP‏ أو ‎BESTFIT‏ باستخدام أوزان مختلفة بصورة كبيرة افتراضية. إن المصطلح ‎gl‏ كما هو مستخدم هنا يتضمن إضافيا جزيء يظهر خاصية وظيفية ‎glucosyltransferase Sis)‏ ملغي و/أو نشاط ‎cysteine protease‏ ملغي) تختلف
‎٠‏ | عن جزيء النوع البري المقابل. قد يستخدم ‎difficile toxin‏ .© من أي سلالات من النوع البري موصوفة أعلاه كمصدر ينتج ‎C. difficile toxin aie‏ طفري. بصورة مفضلة» يكون 630 ‎C. difficile‏ مصدرا ينتج ‎ade‏
‎C. difficile toxin‏ الطفري. إن الطفرة قد تتضمن استبدال» حذف؛ فصل أو تعديل متخلف ‎amino acid‏ نوع ‎YO‏ بري موضوع بصورة طبيعية عند هذا الموضع. بصورة مفضلة؛ تكون الطفرة استبدال ‎amino‏
-." جم 0 غير تحفظي. يدرس الاختراع الحالي أيضا ‎polynucleotides‏ المعزولة المتضمنة ترتيبات حمض نووي تشفر أي 10105 طفرية موصوفة هنا. إن استبدال ‎amino acid‏ "غير التحفظي ‎(non-conservative)‏ كما هو مستخدم هناء يشير إلى تبادل ‎acid‏ 800100 من أحد الفئات مع ‎acid‏ 80100 من فئة أخرى. طبقا للجدول ؟ التالي: ‎(L) Val (V) (Ala (A)‏ نسعا ‎Trp (W) Phe (F) Met (M) Pro (P) dle (I)‏ ‎Gln (Q) «Asn (N) «Tyr (Y) Cys (C) ¢Thr (T) «Ser (S) Gly (G)‏ ‎His (H) «Arg (R) Lys (K)‏ جدول ؟: فئات ‎amino acid‏ إن الأمثلة على استبدال ‎amino acid‏ غير التحفظي تتضمن استبدال حيث يتم استبدال متخلف ‎(Asp, D) aspartic acid‏ مع متخلف ‎A) alanine‏ ,8ل). إن أمثلة أخرى تتضمن استبدال ‎٠‏ متخلف ‎(Asp, D) aspartic acid‏ مع متخلف ‎¢(Asn, N) asparagine‏ استبدال متخلف ‎R) arginine‏ ,ونخ) ‎E) glutamic acid‏ ,ناف ‎«(Lys, K) lysine‏ و/أو ‎histidine‏ ‎(His, H)‏ مع متخلف ‎(Ala, A) alanine‏ إن الاستبدال التحفظي يشير إلى تبادل بين ‎acids‏ 800100 من نفس الفئة؛ على سبيل المثال؛ طبقا لجدول ¥
وه قد تحضر 0105 الطفرية من الاختراع بتقنيات معروفة في الفن لتحضير الطفرات؛ على سبيل المثال؛ التولد الطفري الموجه ‎ca Ball‏ التولد الطفري باستخدام مادة طفرية (مثلاء إضاءة فوق بنفسجية)؛ إلخ. بصورة مفضلة؛ يستخدم التولد الطفري الموجه للموقع. بصورة بديلة؛ قد يخلق مباشرة جزيء حمض نووي له ترتيب موضوعي. إن طرق التخليق الكيميائي تكون © معروفة في الفن. في الاختراع الحالي؛ يتضمن ‎difficile toxin‏ .© الطفري طفرة واحدة على الأقل في مجال سيطرة ‎cglucosyltransferase‏ بالنسبة إلى ‎difficile toxin‏ .© من النوع البري المقابل. في أحد التجسيدات» فإن مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ يتضمن طفرتين على الأقل. بصورة مفضلة؛ فإن الطفرة تخفض أو تبطل نشاط ‎glucosyltransferase enzyme‏ من ‎toxin | ٠‏ مقارنة مع نشاط ‎glucosyltransferase enzyme‏ من ‎C. difficile toxin‏ من النوع البري المقابل. إن متخلفات ‎acid‏ 0 التمتيلية في مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ ‏من 100/8 الذي قد يخضع لطفرة تتضمن واحدة على الأقل مما يلي؛ أو أي اتحاد منها: ‎W101‏ ‎L542 5 S541 (R462 E460 D287 D285 R272 D269‏ مقارنة مع ‎difficile TedA ١‏ .© من النوع البري؛ طبقا لترقيم تعريف الترتيب رقم: ‎.١‏ ‏إن الطفرات التمثيلية في مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ من ‎TedA‏ تتضمن واحدة على الأقل مما يلي أو أي اتحاد منها: ‎(R272A 02698 WI01A‏ 0285/8 ‎(R462A E460A 287‏ 5541/8 و5426ا مقارنة مع ‎difficile TcdA‏ .0 من النوع البري. في تجسيد مفضل؛ فإن مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ من ‎TedA‏ يتضمن طفرة ‎٠‏ 15426 مقارنة مع ‎oC. difficile TedA‏ النوع البري. في تجسيد مفضل آخرء فإن مجال سيطرة 1020578©:356ل0605او من ‎TedA‏ يتضمن طفرة ‎«D287A 5; D285A‏ مقارنة مع ‎difficile TcdA‏ .© من النوع البري. إن متخلفات ‎acid‏ 0 التمتيلية في مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ ‏من 1608 الذي قد يخضع لطفرة تتضمن واحد على الأقل مما يلي؛ أو أي اتحاد من ذلك:
ه80 ‎«(N384 D288 D286 «(R273 «D270 W102‏ 461نا ‎L543 5 (W520 K463‏ مقارنة مع 8 ‎C. difficile toxin‏ من النوع البري؛ طبقا لترقيم تعريف الترتيب رقم: 7. إن الطفرات التمثيلية في مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ من 1008 تتضمن واحدة على الأقل مما يلي؛ أو أي اتحاد منيا: ‎(R273A (D270N 0270/8 W102A‏ 0286 ‎٠‏ م288 ‎(K463E (K463A (D461R (D461A (N384A‏ 208 5/لاء 5 ‎(L543A‏ مقارنة مع 1608 ‎difficile‏ .© من النوع البري. في تجسيد مفضل؛ فإن مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ من 1608 يتضمن طفرة ‎543A‏ ا مقارنة مع 1608 ‎difficile‏ .من النوع البري. في تجسيد ‎Jade‏ أخرء فإن مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ من 1008 يتضمن طفرة ‎D286A‏ و/0288؛ مقارنة مع 10608 ‎C. difficile‏ من النوع البري. ‎Ya‏ إن أي طفرات موصوفة هنا أعلاه قد تتحد مع طفرةٍ في مجال سيطرة ‎.cysteine protease‏ في الاختراع الحالي؛ يتضمن ‎C. difficile toxin‏ الطفري طفرة واحدة على الأقل في مجال سيطرة ‎cysteine protease‏ بالنسبة إلى ‎C. difficile toxin‏ من النوع البري المقابل. بصورة مفضلة؛ فإن الطفرة تخفض أو تبطل نشاط ‎Cysteine protease‏ من ‎toxin‏ مقارنة مع نشاط ‎C. difficile toxin «cysteine protease‏ من النوع البري المقابل. ‎yo‏ إن متخلفات ‎amino acid‏ التمثيلية في مجال سيطرة ‎cysteine protease‏ من ‎TcdA‏ ‏الذي قد يخضع لطفرة تتضمن واحد على الأقل مما يلي؛ أو اتحاد من ذلك: ‎«D589 (S543‏ !)؛ ‎«C7005‏ مقارنة مع ‎difficile TedA‏ .© من النوع البري؛ طبقا لترقيم تعريف الترتيب رقم: ‎.١‏ إن الطفرات التمثيلية في مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ من ‎TedA‏ تتضمن واحدة على الأقل مما يلي؛ أو اتحاد من ذلك: ‎(S543A‏ 05898 05891 ‎«CTO0A (H655A ٠‏ مقارنة مع ‎Co difficile TedA‏ من النوع البري. في تجسيد مفضل؛ فإن مجال سيطرة ‎cysteine protease‏ من ‎TedA‏ يتضمن طفرة ‎«CT00A‏ مقارنة مع /160 ‎difficile‏ .© من النوع البري. إن متخلفات ‎amino acid‏ التمثيلية في مجال سيطرة ‎cysteine protease‏ من 10608 الذي قد يخضع لطفرة تتضمن واحد على الأقل مما يلي؛ أو أي اتحاد من ذلك: ‎(D587 «G544‏ 61لا
-1ه- ‎«C698 5 HO53‏ مقارنة مع 16058 ‎difficile‏ .© من النوع البري؛ طبقا لترقيم تعريف الترتيب رقم: ‎JY‏ إن الطفرات التمثيلية في مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ من 8 تتضمن واحدة على الأقل مما يلي؛ أو أي اتحاد من ذلك: ‎(G544A‏ 0587/8 ‎«C698A (H653A «D58TN‏ مقارنة مع 1008 ‎Co difficile‏ من النوع البري. في تجسيد © مفضل؛ فإن مجال سيطرة ‎cysteine protease‏ من 1008 يتضمن طفرة 0698/8 مقارنة مع ‎C. difficile 8‏ من النوع البري. إن متخلفات ‎amino acid‏ الإضافية في مجال سيطرة ‎cysteine protease‏ من 1608 الذي قد يخضع لطفرة تتضمن: 6600 و/أو ‎(R751‏ مقارنة مع 1008 من النوع البري. إن الطفرات التمثيلية تتضمن 66005 و/أو ‎RT51E‏ ‏طبقا لذلك» فإن ‎difficile toxin‏ .© الطفري المخترع يتضمن مجال ‎٠‏ سيطرة ‎glucosyltransferase‏ له طفرة ومجال سيطرة ‎cysteine protease‏ له طفرة؛ بالنسبة إلى ‎difficile toxin‏ .© من النوع البري المقابل. إن ‎C. difficile TedA‏ الطفري التمثيلي يتضمن مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ ‏متضمنا تعريف الترتيب رقم: 79 له استبدال ‎amino acid‏ عند المواضع ‎«YAY 5 YAO‏ ومجال سيطرة ‎cysteine protease‏ يشتمل على تعريف الترتيب رقم: ‎YY‏ له استبدال ‎amino acid Vo‏ عند الموضع ‎0A‏ )6 بالنسبة إلى / ‎difficile toxin‏ .© من النوع البري المقابل. على سبيل المثال؛ فإن ‎C. difficile TedA‏ الطفري يتضمن ترتيب ‎amino acid‏ المذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: ‎of‏ حيث لا يوجد ‎methionine‏ الابتدائي اختياريا. في تجسيد آخرء فإن ‎C. difficile toxin A‏ الطفري يتضمن ترتيب ‎acid‏ 800100 المذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: ‎AL‏ ‏9 إن الأمثلة الإضافية لأجل ‎difficile toxin A‏ .© الطفري تتضمن ترتيب ‎amino acid‏ المذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: 7؛ الذي يكون له طفرات 269/8نا ‎«D285A (R2T2A‏ 027 4608 ؛ ‎«CT00A 5 (R462A‏ مقارنة مع تعريف الترتيب رقم: ‎٠‏ حيث لا يوجد ‎Slay) methionine‏ اختياريا. في تجسيد ‎AY‏ ¢ فإن ‎C. difficile toxin A‏ الطفري يتضمن ترتيب ‎acid‏ 800100 المذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: ‎AY‏
— 7 جم إن 100/8 طفري تمثيلي ‎AT‏ يتضمن تعريف الترتيب رقم: 4 ؛ حيث قد يكون المتخلف عند الموواضع نمك ‎«YT14‏ اكاحاكت ‎(YAY (YAS‏ مح ‎OEY (OLY (08) (£TY‏ كاف ‎V+. 5100‏ أي ‎.amino acid‏ في بعض التجسيدات؛ فإن ‎C. difficile toxin‏ الطفري يظهر عملية تحلل ‎protein‏ ‏© ذاتية معطلة أو منخفضة مقارنة مع ‎difficile toxin‏ .0 من النوع البري المقابل. على سبيل المثال؛ فإن ‎C. difficile TcdA‏ الطفري قد يتضمن طفرة عند واحد من المتخلفات التالية؛ أو أي اتحاد من ذلك: ‎L542 S541‏ و/أو 3. مقارنة مع 160/8 ‎C. difficile‏ من النوع البري المقابل. بصورة مفضلة»؛ فإن ‎C. difficile TedA‏ الطفري يتضمن طفرة واحدة على الأقل من الطفرات التالية؛ أو أي اتحاد منها: ‎«S541A‏ دجلا ‎«S543A‏ مقارنة مع ‎C. difficile 1608 ٠‏ من النوع البري المقابل. إن 100/8 ‎C. difficile‏ طفري تمثيلي آخر يتضمن طفرة ‎(L542 (S541A‏ 5543 و0700؛ مقارنة مع ‎C. difficile TedA‏ من النوع البري المقابل. إن 8 ‎C. difficile toxin‏ طفري تمثيلي يتضمن مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ ‏يشتمل على تعريف الترتيب رقم: ١؟‏ له استبدال ‎amino acid‏ عند المواضع ‎YAT‏ روحت ‎Vo‏ ومجال سيطرة ‎cysteine protease‏ يشتمل على تعريف الترتيب رقم: ‎VY‏ له استبدال ‎amino acid‏ عند الموضع 00 ‎¢Y‏ بالنسبة إلى 8 ‎difficile toxin‏ .© من النوع البري المقابل. على سبيل المثال؛ فإن ‎C. difficile TedB‏ الطفري هذا يتضمن ترتيب ‎amino acid‏ المذكور مسبقا في تعريف الترتيب ‎Tad)‏ حيث لا يوجد ‎methionine‏ الابتدائي اختياريا. في تجسيد ‎AT‏ ء فإن ‎A‏ 0ه ‎C. difficile‏ الطفري يتضمن ترتيب ‎amino acid‏ المذكور مسبقا في ‎Yo‏ تعريف الترتيب ‎AT ad)‏ إن الأمثلة الإضافية لأجل ‎difficile TedB‏ .© الطفري تتضمن ترتيب ‎amino acid‏ مذكور مسبقًا في تعريف الترتيب رقم: ‎«A‏ الذي يكون له الطفرات ‎«D286A 273 (D2T0A‏ ‎D461A (D288A‏ ذوعا ‎«C698A‏ مقارنة مع تعريف الترتيب رقم: ‎LY‏ تعريف الترتيب دلا
م جم رقم: ‎A‏ حيث لا يوجد ‎methionine‏ الابتدائي اختياريا. في تجسيد آخر » فإن ‎C. difficile toxin‏ ‎A‏ الطفري يتضمن ترتيب ‎acid‏ 800100 المذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: ‎AO‏ ‏إن 1008 طفري تمثيلي آخر يتضمن تعريف الترتيب رقم: ‎(FO‏ حيث قد يكون المتخلف عند الموواضع نمك ‎«YT14‏ اكاحاكت ‎(YAY (YAS‏ مح ‎OEY (OLY (08) (£TY‏ كاف ‎V+. 5100 ©‏ أي ‎.amino acid‏ كمثال ‎AT‏ « فإن 1608 ‎difficile‏ .© الطفري قد يتضمن طفرة عند المواضع ‎OEY‏ و/أو 4 مقارنة مع ‎difficile TedB‏ ...© من النوع البري المقابل. بصورة مفضلة؛ يتضمن ‎C. difficile 8‏ الطفري طفرة ‎L543‏ و/أو 4 مقارنة مع 10608 ‎C. difficile‏ من النوع البري المقابل. بصورة مفضلة أكثرء فإن ‎C. difficile TedB‏ الطفري يتضمن طفرة ‎L543G ٠‏ و/أو 447 .؛ مقارنة مع 1608 ‎C. difficile‏ من النوع البري المقابل. إن 1608 ‎difficile‏ .© طفري تمثيلي ‎AT‏ يتضمن طفرة ‎(L543G‏ 6544/8 و0698 مقارنة مع 10608 ‎C. difficile‏ من النوع البري المقابل. في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع مع ‎polypeptide‏ معزول له طفرة عند أي موضع من متخلف ‎١ amino acid‏ إلى ‎Wha ١50٠0‏ لترقيم تعريف الترتيب رقم: ‎oY‏ لتحديد .0 ‎difficile toxin 8 | ١‏ الطفري التمثيلي. على سبيل المثال» في ‎aad‏ التجسيدات؛ يتضمن ‎polypeptide‏ المعزول طفرة بين متخلفات ‎AY 800100 acids‏ و5950 من تعريف الترتيب رقم: ". إن المواضع التمثيلية للطفرات تتضمن مواضع 9970 و9770 طبقا لترقيم تعريف الترتيب رقم: ". بصورة مفضلة»؛ تكون الطفرة بين المتخلفات ‎AY‏ و9940 عبارة عن استبدال. في أحد التجسيدات» تكون الطفرة عبارة عن استبدال غير تحفظي حيث يستبدل متخلف ‎(D)‏ 580ل و/أر ‎acid Glu )( ٠٠‏ 800100 مع متخلف ‎amino acid‏ الذي لا يتعادل عند التحميض؛ على سبيل ‎«Jt‏ (©ا) ‎ (H) 5 arginine (R) dysine‏ ©151010. إن الطفرات التمثيلية تتضمن: ‎970٠4 970“‏ ١70و‏ “76و 9764 97611 من تعريف الترتيب رقم: إل لتحديد ‎C. difficile toxin B‏ الطفري. دلا
-4ه- في جانب آخرء؛ يتعلق الاختراع مع ‎polypeptide‏ معزول له طفرة عند أي موضع من متخلف ‎١ amino acid‏ إلى ‎Wha ١50٠0‏ لترقيم تعريف الترتيب رقم: ١؛‏ لتحديد ‎C.‏ ‎difficile toxin A‏ الطفري التمثيلي. على سبيل ‎aad JU‏ التجسيدات؛ يتضمن ‎polypeptide‏ المعزول طفرة بين متخلفات ‎amino acids‏ 477 و5957 من تعريف الترتيب رقم: ‎.١ 0‏ إن المواقع التمثيلية للطفرات تتضمن مواضع ‎AVY‏ و9748 طبقا لترقيم تعريف الترتيب رقم: ‎.١‏ ‏بصورة مفضلة؛ تكون الطفرة بين المتخلفات 877 و1497 عبارة عن استبدال. في أحد التجسيدات؛ تكون الطفرة عبارة عن استبدال غير تحفظي حيث يستبدل متخلف ‎(D)‏ 80م و/أر ‎Glu (E)‏ ‎amino acid‏ مع متخلف ‎amino acid‏ الذي لا يتعادل عند التحميض» على سبيل المثال؛ ‎carginine (R) «lysine (K)‏ و (ا) ©151010. إن الطفرات التمثيلية تتضمن: ‎DIT2K‏ ‎٠‏ 09724 09721 09786 09784 097811 من تعريف الترتيب رقم: ١؛‏ لتحديد ‎C.‏ ‎difficile toxin A‏ الطفري. قد تتضمن ‎polypeptides‏ من الاختراع متخلف ‎methionine‏ ابتدائي» في بعض الحالات كنتيجة لعملية تتوسطها خلية عائل. بالاعتماد على؛ على سبيل المثال؛ خلية العائل المستخدمة في إجراء إنتاج تخليقي و/أو تخمر أو شروط نمو خلية العائل؛ يكون من المعروف في ‎vo‏ الفن أن ‎methionine‏ الطرف- ل المشفر بواسطة شفرة ابتداء الترجمة قد يزال من 6 ا بعد الترجمة في خلايا أو قد يظل ‎methionine‏ الطرف- لا موجودا في ‎polypeptide‏ المعزول. طبقا لذلك؛ في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع مع ‎POlypeptide‏ معزول يتضمن ترتيب ‎amino acid‏ المذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: ‎of‏ حيث لا يوجد ‎methionine‏ الابتدائي ‎٠‏ (عند الموضع ‎)١‏ اختياريا. في أحد التجسيدات؛ لا يوجد ‎methionine‏ الابتدائي من تعريف الترتيب رقم: 4. في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع مع ‎polypeptide‏ معزول يتضمن ترتيب ‎acid‏ 800100 المذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: 84؛ الذي يتماتل مع تعريف الترتيب رقم: ‎of‏ لكن يرجع هذا لغياب ‎methionine‏ الابتدائي. في جانب آخرء فإن ‎polypeptide‏ المعزول يتضمن ترتيب ‎acid‏ 800100 المذكور ‎YO‏ مسبقا في تعريف الترتيب رقم 7 حيث لا يوجد ‎methionine‏ الابتدائي (عند الموضع ‎)١‏ qa ‏الابتدائي من تعريف الترتيب رقم: 1. في‎ methionine ‏اختياريا. في أحد التجسيدات؛ لا يوجد‎ ‏المذكور‎ amino acid ‏معزول يتضمن ترتيب‎ polypeptide ‏أحد الجوانب»؛ يتعلق الاختراع مع‎ ‏الذي يتماثل مع تعريف الترتيب رقم: 6؛ لكن يرجع هذا لغياب‎ AT ‏مسبقا في تعريف الترتيب رقم:‎ ‏الابتدائي.‎ 0686 ° في جانب إضافي؛ يتضمن ‎polypeptide‏ المعزول ترتيب ‎acid‏ 800100 المذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم ‎oF‏ حيث لا يوجد ‎methionine‏ الابتدائي (عند الموضع ‎)١‏ اختياريا. في أحد التجسيدات؛ يتعلق الاختراع مع ‎polypeptide‏ معزول يتضمن ترتيب ‎amino acid‏ المذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: ‎AY‏ الذي يتماتل مع تعريف الترتيب رقم: ‎eV‏ لكن يرجع هذا لغياب 0068© الابتدائي. في جانب آخر ‎(liad‏ يتضمن ‎polypeptide‏ المعزول ترتيب ‎amino‏ aie) ‏الابتدائي‎ methionine ‏حيث لا يوجد‎ oA ‏المذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم‎ 800 Yo amino acid ‏المعزول ترتيب‎ polypeptide ‏اختياريا. في أحد التجسيدات؛ يتضمن‎ )١ ‏الموضع‎ ‏يرجع‎ OSA ‏الذي يتماثل مع تعريف الترتيب رقم:‎ AO ‏المذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم:‎ ‏الابتدائي.‎ methionine ‏هذا لغياب‎ ‏في أحد التجسيدات؛ يتعلق الاختراع بتركيبة مولدة للمناعة تتضمن تعريف الترتيب رقم:‎ ‏يتعلق‎ OAT ‏اختياريا. في جانب‎ )١ ‏الابتدائي (عند الموضع‎ methionine ‏حيث لا يوجد‎ 8 ٠ methionine ‏الاختراع بتركيبة مولدة للمناعة تتضمن تعريف الترتيب رقم: 3 حيث لا يوجد‎ ‏اختياريا. في جانب إضافي؛ يتعلق الاختراع بتركيبة مولدة للمناعة‎ )١ ‏الابتدائي (عند الموضع‎ )١ ‏الابتدائي (عند الموضع‎ methionine ‏حيث لا يوجد‎ oF ‏تتضمن تعريف الترتيب رقم:‎ ‏أيضاء يتعلق الاختراع بتركيبة مولدة للمناعة تتضمن تعريف الترتيب رقم:‎ AT ‏اختياريا. في جانب‎ ‏اختياريا.‎ )١ ‏الابتدائي (عند الموضع‎ methionine ‏حيث لا يوجد‎ 8 Yo
PAY ‏في جانب آخرء يتعلق الاختراع بتركيبة مولدة للمناعة تتضمن تعريف الترتيب رقم:‎ ‏في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع بتركيبة مولدة للمناعة تتضمن تعريف الترتيب رقم: 84. في أحد‎ ‏جانب آخرء‎ (LAG ‏الجوانب؛ يتعلق الاختراع بتركيبة مولدة للمناعة تتضمن تعريف الترتيب رقم:‎
AT ‏يتعلق الاختراع بتركيبة مولدة للمناعة تتضمن تعريف الترتيب رقم:‎
‏بالإضافة إلى توليد استجابة مناعية في كائن ثديي؛ يكون أيضا للتركيبات المولدة للمناعة‎ ‏من النوع البري المقابل.‎ ©. difficile toXin ‏الموصوفة هنا سمية خلوية منخفضة مقارنة مع‎ 8-7 ‏اختزال بنسبة حوالي‎ Se) ‏بصورة مفضلة؛ تكون التركيبات المولدة للمناعة آمنة ولها أدنى‎ ‏من النوع البري خاص؛‎ toxin Jal ‏وجود للسمية الخلوية؛ بالنسبة للسمية الخلوية‎ )٠١متيراغول‎ ‏للإعطاء في الكائنات الثديية.‎ © ‏يكون مصطلح السمية الخلوية مصطلح مفهوم في الفن ويشير إلى‎ clin ‏كما هو مستخدم‎ ‏موت خلية انتحارية و/أو حالة تدخل فيها وظيفة واحدة أو أكثر كيميائية حيوية أو بيولوجية لخلية‎ ‏بصورة غير طبيعية؛ مقارنة مع خلية متماثلة تحت شروط متماثلة لكن في غياب عامل السمية‎ ‏على سبيل المثال؛ في خلايا أو في كائنات ثديية ككمية العامل‎ ole ‏الخلوية. يمكن قياس السمية‎ ‏أو 5050؛ على التوالي) أو بطرق أخرى‎ EC50 ‏(أي؛‎ 75٠ ‏المطلوب لحث موت الخلية بنسبة‎ ٠ ‏معروفة في الفن.‎ ‏إن اختبارات السمية الخلوية المذكورة تكون معروفة في الفن؛ مثل اختبارات تدوير الخلية‎ .(Kuehne et al. Nature. 2010 Oct 7;467(7316):711-3 ‏(انظر؛ على سبيل المثال»‎ ‏فقد المورفولوجيا) وموت الخلاياء وتكون هذه الظاهرة‎ (Dia) ‏و1008 يسبب تدوير‎ TedA ‏إن عمل‎ .4 ‏مرئية بالفحص المجهري الخفيف. انظرء على سبيل المثال؛ شكل‎ Vo ‏تتضمن اختبارات السمية الخلوية التمثيلية الإضافية المعروفة في‎ ‏المعلم‎ Ras ‏لأجل‎ phosphor ‏متعلقة بالتصوير مع‎ glucosylation ‏الفن اختبارات‎
Busch et al., J Biol Chem. ‏هو موصوف في‎ WS) [14C]glucose ‏بواسطة اختبارات‎ ‏ويفضل في اختبار سمية خلوية معملي موصوف في‎ (1998 Jul 31;273(31):19566-72 75+ ‏الأمثلة أدناه حيث قد يشير 5050 إلى تركيز التركيبة المولدة للمناعة التي تظهر حوالي‎ ٠ ‏في الخلية؛ تفضل خلية أرومة ليفية ثنائية‎ (CPE) ‏على الأقل من تأثير مسبب المرض الخلوي‎ ‏مقارنة مع خلية متماثلة تحت‎ (ATCC CCL-186TM) ١0/490 ‏الصبغة آدمية (مثلا؛ خلية‎ ‏قد يستخدم أيضا اختبار السمية الخلوية المعملي لاختبار تركيز‎ toxin ‏شروط متماثلة في غياب‎ ‏المحث مع‎ (CPE) ‏على الأقل من تأثير مسبب المرض الخلوي‎ 75 ٠ ‏التركيبة التي تثبط حوالي‎ ‏من النوع البري في الخلية؛ تفضل خلية أرومة ليفية ثنائية الصبغة آدمية‎ ©. difficile toxin Yo nye ‏مقارنة مع خلية متماثلة تحت شروط متماثلة‎ (ATCC CCL-186TM) IMRO0 ‏خلية‎ (Si)
Doem et ‏في غياب 0*10]. إن اختبارات سمية خلوية تمثيلية إضافية تتضمن تلك الموصوفة في‎ ‏يمكن أيضا تحديد السمية الخلوية‎ .81., J Clin Microbiol. 1992 Aug;30(8):2042-6 ‏في خلايا معالجة مع 10*19. على سبيل المثال؛ قد تستخدم مادة خاضعة‎ ATP ‏بقياس مستويات‎ ‏التي تبعث لمعان يقاس‎ (Promega) CELLTITERGLO® ‏مثل‎ luciferase ‏ه تعتمد على‎ ‏كوحدة ضوء نسبية (الا). في هذا الاختبار» قد يتناسب بقاء الخلية على قيد الحياة مباشرة مع‎
RLU ‏في الخلايا أو قيم‎ ATP ‏كمية‎ ‏في أحد التجسيدات؛ تخفض السمية الخلوية للتركيبة المولدة للمناعة بواسطة على الأقل‎ ‏تيف نير‎ Arne ‏بيت نبال‎ Onan ‏بنرك‎ (Favs ‏بير‎ ١.٠١ ‏حولي‎ ‏ضعفء أو أكثر؛ مقارنة مع‎ 1500١ ‏ضعفء‎ ١40860 ‏ضعفء‎ ١76 ٠766 AREER ٠ .٠١ ‏جدول‎ (JE ‏من النوع البري المقابل. انظر؛ على سبيل‎ ©. difficile toxin -7 ‏في تجسيد آخرء يتم تخفيض السمية الخلوية لتركيبة مولدة للمناعة بعلى الأقل حوالي‎
GS ‏ويفضل أكثر بحوالي 4 - لوغاريتم١٠ أو‎ ؛٠١متيراغول‎ =F ‏يفضل أكثر بحوالي‎ ٠١ ‏لوغاريتم‎ ‏من النوع البري المقابل تحت شروط متماثلة. على سبيل المثال؛ قد يكون لأجل‎ toxin ‏بالنسبة إلى‎ ‏ملليلتر كما هو مقاس في اختبار‎ faa 9-٠١ ‏الطفري قيمة 5050 حوالي‎ ©. difficile 1608 ١٠ ‏من النوع البري‎ ©. difficile 1008 ‏مقارنة مع‎ «(CPE) ‏تأثير مسبب مرضي خلوي قياسي‎ ‏جم/ ملليلتر. انظرء على سبيل‎ ١7-٠١ ‏تمثيلي الذي قد يكون له قيمة 050 على الأقل حوالي‎ ‏و4(ب) في قسم الأمثلة أدناه.‎ (DA ((Q)Y «(DY ‏المثال؛ الجداول‎ ‏طفري قيمة‎ C. difficile toxin ‏أيضاء يكون للسمية الخلوية لأجل‎ HAT ‏في تجسيد‎ ‏ميكروجرام/‎ Yoo alll ‏ميكروجرام/‎ ٠٠١ ‏ميكروجرام/ ملليلتر؛‎ 5٠ ‏على الأقل حوالي‎ 5050 ٠٠ 1٠٠0 ‏ميكروجرام/ ملليلتر؛‎ 5٠٠0 ‏ميكروجرام/ ملليلتر؛‎ 5080 pall ‏ميكروجرام/‎ 0١0 ‏ملليلترء‎ ‏ميكروجرام/‎ 00 alle ‏ميكروجرام/ ملليلترء 8060 ميكروجرام/‎ 7٠0١0 ‏ميكروجرام/ ملليلتر؛‎ ‏ميكروجرام/ ملليلتر أو أكبرء كما هو مقاس بواسطة؛ على سبيل المثال؛ اختبار‎ ٠٠٠١ ‏ملليلتر؛‎ ‏سمية خلوية معملي؛ مثل الموصوف هنا. طبقا لذلك؛ في تجسيد مفضل؛ تكون التركيبات المولدة‎ ‏بيولوجيا للإعطاء إلى كائنات تديية.‎ did ‏للمناعة و0105 الطفرية‎ Yo
ا بدون التقيد بآلية أو نظرية؛ فإن 160/8 له طفرة ‎(D287 5 D285‏ مقارنة مع 160/8 من النوع ‎(gyal)‏ و1008 له طفرة ‎D286‏ و00288؛ مقارنة مع 1608 من النوع البري؛ يتوقع أن يكون معيب في نشاط ‎glycosyltransferase‏ ولهذا معيب في حث تأثير مسبب مرض خلوي. بالإضافة لذلك؛ يتوقع أن يكون ‎toxin‏ الذي له طفرة في الحافز ‎DHC‏ معيب في عملية تحلل ‎protein ©‏ ذاتية؛ ولهذا تكون بدون أي تأثير سام للخلايا. علاوة على ‎dis‏ اكتشف المخترعون على نحو مثير للدهشة؛ من ضمن أشياء أخرى؛ أن ‎TedA‏ الطفري التمثيلي الذي له تعريف الترتيب رقم: ؛ و1608 الطفري التمثيلي الذي له تعريف الترتيب رقم: 6 يظهران سمية خلوية بصورة غير متوقعة (وإن يكن مخفض بدرجة كبيرة من ‎C.‏ ‎difficile 630 toxins‏ من النوع البري) على الرغم من إظهار نشاط ‎glucosyltransferase‏ ‎Vs‏ مختل وظيفيا ونشاط ‎cysteine protease‏ مختل وظيفيا. بدون التقيد بآلية أو نظرية؛ يعتقد أن الطفرية تسبب السمية الخلوية من خلال آلية جديدة. بالرغم من ذلك؛ يكون ‎TedA‏ ‏الطفري التمثيلي الذي له تعريف الترتيب رقم: ؛ و1608 الطفري التمثيلي الذي له تعريف الترتيب رقم: 7 مولدين للمناعة بصورة مثيرة للدهشة. انظر الأمثلة أدناه. برغم أن تقاطع الرابطة الكيميائي لأجل 10*19 من النوع البري له احتمالية فشل في تعطيل ‎toxin Vo‏ اكتشف المخترعون إضافيا أن تقاطع الرابطة الكيميائي عند ‎acid‏ 801100 واحد على الأقل من ‎toxin‏ الطفري يخفض إضافيا السمية الخلوية لأجل ‎toxin‏ الطفري؛ بالنسبة إلى ‎toxin‏ ‏طفري متماثل مفتقر لتقاطع الرابطة الكيميائي؛ وبالنسبة إلى 10*10 من النوع البري مقابل. بصورة مفضلة؛ ينقى ‎toxin‏ الطفري قبل الاتصال مع عامل تقاطع الرابطة الكيميائي. علاوة على هذاء برغم احتمالية تبديل عوامل تقاطع الرابطة الكيميائي مع ‎epitopes‏ ‎٠‏ المفيدة؛ اكتشف المخترعون على نحو مثير للدهشة أن ‎C. difficile toxin‏ الطفري المعدل وراثيا الذي له ‎acid‏ 800100 واحد على الأقل متصل بصورة متقاطعة كيميائيا ينتج تركيبات مولدة للمناعة تستخلص أجسام مضادة متعادلة متعددة أو أجزاء مرتبطة من ذلك. طبقا ‎ela‏ تبقى 5 المصاحبة لجزيئات جسم مضاد متعادل بصورة مثيرة للدهشة بعد تقاطع الرابطة الكيميائي. 61لا
إن تقاطع الرابطة (يشار إليه أيضا بأنه 'تعطيل كيميائي ‎"(chemical inactivation)‏ أو 'تعطيل ‎(inactivation)‏ هنا) هو عملية ربط كيميائي لجزيئين أو أكثر برابطة متكافئة. إن المصطلحات "عوامل كاشفة لتقاطع الرابطة ‎(crosslinking reagents)‏ "عوامل تقاطع رابطة ‎"(crosslinking agents)‏ و مواد تقاطع رابطة (010551101665)" تشير إلى جزيئات قادرة على © التفاعل مع و/أو الارتباط كيميائيا مع مجموعات وظيفية محددة ‎amines)‏ أولية ‎sulhydryls‏ ‎carbonyls .carboxyls‏ إلخ) على ‎«polypeptides peptides‏ و/أو ‎-proteins‏ في أحد التجسيدات»؛ قد يحتوي الجزيء على نهايتين متفاعلتين أو أكثر قادرة على التفاعل مع و/أو الارتباط كيميائيا مع مجموعات وظيفية محددة ‎«carboxyls sulhydryls (il amines)‏ 80005 ؛ إلخ) على ‎«polypeptides (peptides‏ و/أو ‎proteins‏ بصورة مفضلة؛ يكون ‎Vs‏ عامل تقاطع الرابطة الكيميائي قابل للذوبان في الماء. في تجسيد مفضل ‎AT‏ يكون عامل تقاطع الرابطة الكيميائي عبارة عن وصلة متقاطعة ثنائية الوظيفية مغايرة. في تجسيد آخرء لا يكون عامل تقاطع الرابطة الكيميائي وصلة متقاطعة ثنائية الوظيفية. تكون عوامل تقاطع الرابطة الكيميائي
معروفة في الفن. في تجسيد مفضل؛ يكون عامل تقاطع الرابطة هو عامل تقاطع رابطة عديم الطول. إن ‎Vo‏ الوصلة المتقاطعة "عديمة الطول (60910ا-2600)" تشير إلى عامل تقاطع الرابطة الذي يتوسط أو ينتج وصلة متقاطعة مباشرة بين المجموعات الوظيفية لجزيئين. على سبيل المثال؛ في تقاطع الرابطة لاثنين من ‎cpolypeptides‏ فإن الوصلة المتقاطعة عديمة الطول سوف تشكل جسرء أو وصلة متقاطعة بين مجموعة ‎carboxyl‏ من سلسلة جانبية لأجل ‎acid‏ 80100 من ‎polypeptide‏ واحدء ومجموعة ‎amino‏ من ‎Al polypeptide‏ « بدون دمج مادة خارجية. إن ‎٠‏ عوامل تقاطع الرابطة عديمة الطول يمكن أن تحفزء على سبيل المثال» تشكيل وصلات ‎ester‏ ‏بين أجزاء ‎carboxyl shydroxyl‏ و/أو تشكيل روابط ©8010 بين أجزاء ‎carboxyl‏ و ‎amino‏
الأولي. إن عوامل تقاطع الرابطة الكيميائي المناسبة التمثيلية تتضمن ‎¢cformaldehyde‏ ‎carbodiimides «propionaldehyde tacetaldehyde «formalin‏ قابلة للذوبان في الماء ‎(RN=C=NR’) +٠‏ لقي تتضمن ‎1-Ethyl-3—(3-Dimethylaminopropyl)—‏
-+0- 1-Ethyl-3—(3-Dimethylaminopropyl)-Carbodiimide ‏بثاناعغ)‎ ٠206 «Hydrochloride 1-Cyclohexyl-3-(2-morpholinyl-(4-ethyl)carbodiimide metho—-p-
N,N'=, (DCC) N,N'-dicyclohexylcarbodiimide (CMC) toluenesulfonate
N-hydroxysuccinimide j ‏ومشتقات من ذنك؛‎ (DIC) diisopropylcarbodiimide ه٠‎ .UDP-dialdehyde ‏و/أو‎ ¢phenylglyoxal ¢(NHS) ‏عند تعديل‎ [EDC ‏بصورة مفضلة؛ يكون عامل تقاطع الرابطة هو‎ ‏باتصال‎ Sis) EDC ‏الطفري كيميائيا بواسطة‎ C. difficile toxin polypeptide ‏وصلة متقاطعة‎ (1) polypeptide ‏في أحد التجسيدات؛ يتضمن‎ (EDC ‏مع‎ polypeptide ‏وسلسلة‎ polypeptide ‏من‎ aspartic acid ‏واحدة على الأقل بين سلسلة جانبية من متخلف‎ ٠ ‏(ب)‎ polypeptide ‏أحد التجسيدات» يتضمن‎ ‘polypeptide ‏جانبية من متخلف 5106لاا من‎ ‏من‎ glutamic acid ‏متقاطعة واحدة على الأقل بين سلسلة جانبية من متخلف‎ Alay ‏في أحد التجسيدات؛‎ polypeptide (lysine ‏وسلسلة جانبية من متخلف‎ 6 ‏عند‎ carboxyl ‏(ج) وصلة متقاطعة واحدة على الأقل بين مجموعة‎ polypeptide ‏يتضمن‎ ‏في أحد‎ polypeptide ‏من الطرف لا من‎ amino ‏ومجموعة‎ polypeptide ‏من‎ C ‏الطرف‎ ٠ ‏(د) وصلة متقاطعة واحدة على الأقل بين مجموعة‎ polypeptide ‏التجسيدات؛ يتضمن‎ ‏من‎ lysine ‏وسلسلة جانبية من متخلف‎ polypeptide ‏عند الطرف © من‎ carboxyl ‏(ه) وصلة متقاطعة واحدة على‎ polypeptide ‏في أحد التجسيدات؛ يتضمن‎ -polypeptide ‏وسلسلة جانبية من‎ polypeptide ‏من‎ 85081106 acid ‏الأقل بين سلسلة جانبية من متخلف‎ ‏(و)‎ polypeptide ‏معزول ثان. في أحد التجسيدات؛ يتضمن‎ polypeptide (lysine ‏متخلف‎ ٠ ‏من‎ glutamic acid ‏متقاطعة واحدة على الأقل بين سلسلة جانبية من متخلف‎ Alay ‏معزول ثان. في أحد‎ polypeptide («lysine ‏جانبية من متخلف‎ Alida polypeptide ‏(ز) وصلة متقاطعة واحدة على الأقل بين مجموعة‎ polypeptide ‏التجسيدات؛ يتضمن‎ ‏من‎ N ‏ومجموعة 81170 من الطرف‎ polypeptide ‏من‎ C ‏عند الطرف‎ carboxyl ‏(ح) وصلة متقاطعة‎ polypeptide ‏معزول ثان. في أحد التجسيدات؛ يتضمن‎ polypeptide Yo فلا qt ‏وسلسلة جانبية من‎ polypeptide ‏عند الطرف © من‎ carboxyl ‏واحدة على الأقل بين مجموعة‎ ‏والشكل‎ ve ‏معزول ثان. انظرء على سبيل المثال» الشكل‎ polypeptide ‏متخلف 5106لا من‎
Yo يشير ‎polypeptide”‏ معزول ثاني ‎"(second isolated polypeptide)‏ إلى أي ‎polypeptide ©‏ معزول موجود أثناء التفاعل مع ‎EDC‏ في أحد التجسيدات» يكون ‎polypeptide‏ ‏المعزول الثاني عبارة عن ‎C. difficile toxin polypeptide‏ طفري له ترتيب متماثل ‎Jie‏ ‎polypeptide‏ المعزول الأول. في تجسيد آخرء يكون ‎polypeptide‏ المعزول الثاني عبارة عن ‎C. difficile toxin polypeptide‏ طفري له ترتيب يختلف عن ‎polypeptide‏ المعزول الأول. في أحد التجسيدات؛ يتضمن ‎polypeptide‏ تعديلين على الأقل ينتقيان من التعديلات ‎٠‏ ()-(د). في تجسيد تمثيلي؛ يتضمن ‎polypeptide‏ (أ) وصلة متقاطعة واحدة على الأقل بين سلسلة جانبية من متخلف ‎polypeptide «aspartic acid‏ وسلسلة جانبية من متخلف ‎lysine‏ من ‎polypeptide‏ و(ب) وصلة متقاطعة واحدة على الأقل بين سلسلة جانبية من متخلف ‎glutamic acid‏ من 0601106/اا00 وسلسلة جانبية من متخلف 5706لاا من 001/0601086. في تجسيد إضافي؛ يتضمن ‎polypeptide‏ ثلاث تعديلات على الأقل تنتقى من التعديلات (أ)-(د). (95 (2) «(<) ‏التعديلات (أ)‎ polypeptide ‏في تجسيد إضافي أيضاء يتضمن‎ VO (EDC ‏طفري واحد أثناء التعديل الكيميائي بواسطة‎ polypeptide ‏عند وجود أكثر من‎ ‏في أحد التجسيدات؛ تتضمن التركيبة الناتجة تعديل واحد على الأقل من أي من التعديلات (أ)-‎ ‏(ح). في أحد التجسيدات؛ تتضمن التركيبة تعديلين على الأقل ينتقيان من التعديلات (أ)-(ح). في‎ ‏تجسيد إضافي؛ تتضمن التركيبة ثلاث تعديلات على الأقل تنتقى من التعديلات (أ)-(ح). في‎ ‏تجسيد إضافي أيضا؛ تتضمن التركيبة أربعة تعديلات على الأقل تنتقى من التعديلات (أ)-(ح).‎ ٠ في تجسيد آخرء تتضمن التركيبة تعديل واحد على الأقل من كل التعديلات (أ)-(ح). في تجسيد تمثيلي؛ تتضمن التركيبة الناتجة (أ) وصلة متقاطعة واحدة على الأقل بين سلسلة جانبية من متخلف ‎polypeptide «aspartic acid‏ وسلسلة جانبية من متخلف ‎lysine‏ من ‎¢polypeptide‏ و(ب) وصلة متقاطعة واحدة على الأقل بين سلسلة جانبية من فلا
متخلف ‎acid‏ 910138116 من ‎polypeptide‏ وسلسلة جانبية من متخلف ‎lysine‏ من ‎polypeptide‏ في أحد التجسيدات؛ تتضمن التركيبة إضافيا (ج) وصلة متقاطعة واحدة على الأقل بين مجموعة ‎carboxyl‏ عند الطرف © من ‎polypeptide‏ ومجموعة ‎@MINO‏ من الطرف لاا من ‎tpolypeptide‏ و(د) وصلة متقاطعة واحدة على الأقل بين مجموعة ‎carboxyl‏ عند هه الطرف © من ‎polypeptide‏ وسلسلة جانبية من متخلف ‎polypeptide (lysine‏ في تجسيد تمثيلي آخرء تتضمن التركيبة الناتجة (ه) وصلة متقاطعة واحدة على الأقل بين سلسلة جانبية من متخلف ‎aspartic acid‏ من ‎polypeptide‏ وسلسلة جانبية من متخلف ‎polypeptide lysine‏ معزول ثان؛ (و) وصلة متقاطعة واحدة على الأقل بين سلسلة جانبية من متخلف ‎polypeptide («glutamic acid‏ وسلسلة جانبية من متخلف ‎lysine‏ من ‎polypeptide ٠‏ معزول ثان؛ (ز) وصلة متقاطعة واحدة على الأقل بين مجموعة ‎carboxyl‏ عند الطرف ‎C‏ من ‎ie sano spolypeptide‏ 811170 من الطرف ‎N‏ من ‎polypeptide‏ معزول ثان؛ و(ح) وصلة متقاطعة واحدة على الأقل بين مجموعة ‎carboxyl‏ عند الطرف © من ‎polypeptide‏ وسلسلة جانبية من متخلف ‎lysine‏ من ‎polypeptide‏ معزول ثان. في تجسيد تمثيلي إضافي؛ تتضمن التركيبة الناتجة (أ) وصلة متقاطعة واحدة على الأقل ‎Vo‏ بين سلسلة جانبية من متخلف ‎aspartic acid‏ من ‎polypeptide‏ وسلسلة جانبية من متخلف ‎lysine‏ من ‎¢polypeptide‏ (ب) وصلة متقاطعة واحدة على الأقل بين سلسلة جانبية من متخلف ‎glutamic acid‏ من ‎polypeptide‏ وسلسلة جانبية من متخلف ‎spolypeptide lysine‏ (ه) وصلة متقاطعة واحدة على الأقل بين سلسلة جانبية من متخلف ‎aspartic acid‏ من 001/6 وسلسلة جانبية من متخلف ‎polypeptide (lysine‏ معزول ثاني؛ و(و) وصلة ‎٠‏ متقاطعة واحدة على الأقل بين سلسلة جانبية من متخلف ‎glutamic acid‏ من ‎polypeptide‏ ‏وسلسلة جانبية من متخلف ‎polypeptide (lysine‏ معزول ثان. في تجسيد مفضل»؛ يتضمن عامل تقاطع الرابطة الكيميائي ‎formaldehyde‏ يفضل ‎ji‏ « عامل يتضمن ‎formaldehyde‏ في غياب 5106لاا. يمكن استخدام ‎Glycine‏ أو مركب آخر ملائم مع ‎amine‏ أولي كعامل إخماد في تفاعلات ذات تقاطع رابطة. طبقا لهذاء في تجسيد ‎Yo‏ مفضل آخر؛ يتضمن العامل الكيميائي ‎formaldehyde‏ واستخدام ‎glycine‏
-0+- في تجسيد مفضل آخر أيضاء يتضمن عامل تقاطع الرابطة الكيميائي ‎.NHS ; EDC‏ كما هو معروف في الفن؛ قد يدخل ‎NHS‏ في بروتوكولات اقتران ‎LEDC‏ مع ذلك؛ اكتشف المخترعون على نحو مثير للدهشة أن ‎NHS‏ قد يساعد في خفض إضافي للسمية الخلوية في ‎C. difficile‏ 0 الطفري؛ مقارنة مع ‎tOXIN‏ من النوع البري مقابل؛ مقارنة مع ‎tOXIN‏ طفري وراثيا؛ ومقارنة © مع 10*10 طفري وراثيا متصل بصورة متقاطعة كيميائيا بواسطة ‎hail LEDC‏ على سبيل المثال؛ مقال 22. طبقا لذلك»؛ بودون التقهد بآلية أو نظرية؛ فإن ‎toxin polypeptide‏ الطفري الذي له جزء 05618-81801086 متصل مع سلسلة جانبية من متخلف ©510/ا واحد على الأقل من ‎polypeptide‏ (مثلا؛ ناتج من تفاعل ‎toxin polypeptide‏ الطفري؛ ‎(NHS (EDC‏ قد يساعد في خفض إضافي للسمية الخلوية من ‎toxin‏ الطفري؛ مقارنة ‎Ve‏ مع؛ على سبيل ‎difficile toxin (JU)‏ .© (من النوع البري أو طفري) حيث لا يوجد جزء ‎.beta-alanine‏ ‏إن استخدام 06 و/أو ‎NHS‏ قد يتضمن أيضا استخدام ‎glycine‏ أو مركب ملائم ‎AT‏ مع ‎amine‏ أولي كعامل إخماد. قد يستخدم أي مركب له ‎amine‏ أولي كعامل ‎ala)‏ على سبيل المثال» ‎glycine methyl ester‏ و8180176. في تجسيد مفضل؛ يكون مركب الإخماد هو ‎amine Vo‏ أولي محب للماء غير ‎.polymeric‏ إن أمثلة على ‎amine‏ الأولي ‎cad)‏ للماء غير ‎polymeric‏ تتضمن؛ على سبيل المثال» سكريات ‎«amino alcohols (amino‏ ‎.-amino polyols‏ إن أمثلة محددة على ‎amine‏ الأولي المحب للماء غير ‎polymeric‏ ‏تتضمن ‎polyethylene glycol (glucamine ethanolamine (glycine‏ لأجل ‎amine‏ ‏وظيفي؛ ‎ethylene glycol oligomers‏ لأجل 686 وظيفي. ‎7٠.‏ في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع مع ‎C. difficile toxin polypeptide‏ طفري له سلسلة جانبية ‎acid‏ 807100 واحدة على الأقل معدلة كيميائيا بواسطة ‎EDC‏ و 807106 أولي محب للماء غير ‎polymeric‏ يفضل ‎glycine‏ إن المواد المجمعة ‎glycine‏ الناتجة ‎Sie)‏ من تفاعل طفرية ثلاثية معالجة مع ‎«NHS (EDC‏ ويخمد مع ‎(glycine‏ قد تساعد في خفض السمية الخلوية لأجل 10710 الطفري مقارنة مع ‎tOXIN‏ من النوع البري المقابل. فلا
-١4- ‏الطفري كيميائيا‎ C. difficile toxin polypeptide ‏في أحد التجسيدات؛ عند تعديل‎ ‏تعديل واحد على الأقل عند تعديل‎ polypeptide ‏و70106ا9» يتضمن‎ EDC ‏بواسطة‎ ‏(مثلا؛ تعديل واحد على الأقل من أي من التعديلات (أ)-(ح)‎ EDC ‏بواسطة‎ polypeptide sia ‏الموصوفة أعلاه)؛ وتعديل واحد على الأقل من التعديلات التمثيلية التالية: (ط) يتصل‎ glycine ‏(ي) يتصل جزء‎ (polypeptide ‏من‎ C ‏عند الطرف‎ carboxyl ‏مع مجموعة‎ 91/0106 © ‏و(ك) يتصل‎ ¢polypeptide ‏واحد على الأقل من‎ 85081116 acid ‏مع سلسلة جانبية من متخلف‎ ‏على‎ «hil polypeptide (glutamic acid ‏جزء 9170176 مع سلسلة جانبية من متخلف‎
Yo ‏والشكل‎ ve ‏سبيل المثال؛ الشكل‎ ‏واحد على الأقل من‎ amino acid ‏في أحد التجسيدات؛ يتصل بصورة متقاطعة كيميائيا‎ ‏واحد على الأقل‎ 800100 acid ‏الطفري و/أو يتصل بصورة متقاطعة كيميائيا‎ ©. difficile 1080 ٠ amino acid ‏الطفري. في تجسيد آخرء يتصل بصورة متقاطعة كيميائيا‎ C. difficile 1608 ‏من‎ ‏تعريف الترتيب رقم: 7؛‎ oT ‏تعريف الترتيب رقم:‎ of ‏واحد على الأقل من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏على سبيل المثال؛ قد يتصل بصورة متقاطعة كيميائيا‎ oA ‏و/أو تعريف الترتيب رقم:‎ ‏قد تشكل‎ EDC ‏مقل‎ carbodiimide ‏واحد على الأقل بواسطة عامل يتضمن‎ aspartic ‏من السلاسل الجانبية من‎ Se) ‏الحر‎ carboxyl ‏رابطة متكافئة بين‎ carbodiimides ١ ‏(مثلا؛ في السلسلة الجانبية من متخلفات‎ amino ‏ومجموعات‎ (glutamic acid ‏و/أو‎ acid ‏مستقرة.‎ amide ‏روابط‎ Jil (lysine ‏واحد على الأقل بواسطة‎ amino acid ‏قد يتصل بصورة متقاطعة كيميائيا‎ ¢ AT ‏كمثال‎ ‎amines ‏مع‎ NHS ester ‏قد تتفاعل الوصلات المتقاطعة المنشطة مع‎ NHS ‏عامل يتضمن‎ ‏عند الطرف لا من كل سلسلة ©70©000ا00 و/أو في السلسلة الجانبية من متخلفات‎ Si) ‏أولية‎ Yo .amide ‏أ5/) لإنتاج رابطة‎ 6 ‏واحد على الأقل‎ 801100 acid ‏في تجسيد آخرء قد يتصل بصورة متقاطعة كيميائيا‎ ‏و15لا. على سبيل المثال» في أحد التجسيدات؛ يتعلق الاختراع مع‎ EDC ‏بواسطة عامل يتضمن‎ ‏حيث‎ of ‏المذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏معزول له ترتيب‎ polypeptide ‏سلسلة‎ polypeptide ‏عند الموضع )¢ حيث يتضمن‎ methionine ‏لا يوجد اختياريا متخلف‎ Yo
Vm
AT ‏في تجسيد‎ NHS; EDC ‏واحدة على الأقل معدلة كيميائيا بواسطة‎ amino acid ‏جانبية‎ ‏المذكور مسبقا في تعريف‎ 800100 acid ‏معزول له ترتيب‎ polypeptide ‏يتعلق الاختراع مع‎ ‏يتضمن‎ dua) ‏عند الموضع‎ methionine ‏الترتيب رقم: 7؛ حيث لا يوجد اختياريا متخلف‎
EDC ‏واحدة على الأقل معدلة كيميائيا بواسطة‎ 80100 acid ‏سلسلة جانبية‎ polypeptide amino ‏معزول له ترتيب‎ polypeptide ‏في تجسيد آخر أيضاء يتعلق الاختراع مع‎ .NHS; © ‏تعريف الترتيب رقم:‎ AT ‏تعريف الترتيب رقم:‎ AE ‏المذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم:‎ 0 ‏يتم تعديل‎ A ‏تعريف الترتيب رقم: 7؛ أو تعريف الترتيب رقم:‎ (AS ‏تعريف الترتيب رقم:‎ AY
Vi ‏الشكل‎ (Ja ‏انظرء؛ على سبيل‎ \NHS ; EDC ‏باتصال 07/680108 مع‎ polypeptide
Yo ‏والشكل‎ ‎AD‏ عند تعديل ‎toxin polypeptide‏ 01710116 ...0 الطفري كيميائيا بواسطة (مثلا؛ بالاتصال) ‎(NHS , EDC‏ في أحد التجسيدات؛ يتضمن ‎polypeptide‏ تعديل واحد على الأقل عند تعديل ‎polypeptide‏ بواسطة ‎Did) EDC‏ تعديل واحد على الأقل من أي من التعديلات )0( )7( الموصوفة أعلاه)؛ و(ط) يتصل جزء 5618-8180106 مع سلسلة جانبية من متخلف ‎.polypeptide ‏واحد على الأقل من‎ lysine dua ‏طفري‎ C. difficile toxin polypeptide ‏يتعلق الاختراع مع‎ ¢ Al ‏في جانب‎ yo
EDC ‏واحدة على الأقل معدلة كيميائيا مع‎ amino acid ‏سلسلة جانبية‎ polypeptide ‏يتضمن‎ ‏في أحد التجسيدات؛‎ glycine ‏يفضل‎ polymeric ‏أولي محب للماء غير‎ amine 5 (NHS ‏تعديل‎ Sis) EDC ‏بواسطة‎ polypeptide ‏تعديل واحد الأقل عند تعديل‎ polypeptide ‏يتضمن‎ ‏واحد على الأقل من أي من التعديلات (أ)-(ح) الموصوفة أعلاه)؛ تعديل واحد على الأقل عند‎ ‏تعديل واحد على الأقل من أي من التعديلات‎ li) glycine ‏بواسطة‎ polypeptide ‏تعديل‎ ٠ ‏(ط)-(ك) الموصوفة أعلاه)؛ و(ط) يتصل جزء 0618-8180176 مع سلسلة جانبية من متخلف‎
Yo ‏والشكل‎ ve ‏الشكل‎ (JE ‏على سبيل‎ hail ‏واحد على الأقل من ©10م©70ا80.‎ 56 ‏طفري؛ حيث‎ C. difficile toxin polypeptide ‏في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع مع‎ ‏مع جزءٍ‎ polypeptide ‏واحد على الأقل من‎ lysine ‏تتصل السلسلة الجانبية من متخلف‎ ‏من‎ SU lysine ‏في أحد التجسيدات؛ تتصل سلسلة جانبية من متخلف‎ .beta-alanine Yo
“vy
‎polypeptide‏ مع سلسلة جانبية من متخلف ‎aspartic acid‏ و/أو مع سلسلة جانبية من متخلف ‎glutamic acid‏ إن متخلف ‎lysine‏ "الثاني" من ‎polypeptide‏ يتضمن متخلف ‎(lysine‏ ‎polypeptide‏ غير المتصل مع جزء ‎.beta-alanine‏ إن السلسلة الجانبية من ‎asparticacid‏ ‏و/أو السلسلة الجانبية من ‎glutamic acid‏ التي يتصل معها متخلف ‎lysine‏ الثاني قد تكون من ‎polypeptide ©‏ لتشكيل وصلة متقاطعة داخل الجزيء؛ أو تلك من ‎polypeptide‏ الثاني لتشكيل ‎dla‏ متقاطعة داخل الجزيء. في تجسيد آخرء تتصل سلسلة جانبية من متخلف ‎aspartic acid‏ واحد على الأقل و/أو سلسلة جانبية من متخلف ‎glutamic acid‏ واحد على الأقل من ‎polypeptide‏ مع جزء ‎glycine‏ إن متخلف ‎aspartic acid‏ و/أو متخلف
‎glutamic acid‏ المتصل مع جزء ‎glycine‏ لا يتصل أيضا مع متخلف 5106لا.
‎٠٠‏ كمثال آخر أيضا على ‎C. difficile toxin polypeptide‏ الطفري المتصل بصورة متقاطعة ‎oils‏ قد يتصل بصورة متقاطعة كيميائيا ‎amino acid‏ واحد على الأقل مع عامل يتضمن ‎formaldehyde‏ قد يتفاعل ‎formaldehyde‏ مع مجموعة 8111710 من متخلف ‎amino acid‏ الطرف لا والسلاسل الجانبية من ‎histidine (cysteine (arginine‏ و ‎lysine‏ ‏إن ‎formaldehyde‏ و9170106 قد يشكلان مادة مجمعة قاعدة ‎«Schiff‏ المرتبطة مع مجموعات
‎«asparagine ‏أولية؛ 6 ومتخلفات 17/105176 ومع متخلفات‎ N ‏طرف‎ amino Yo ‏أقل درجة.‎ tryptophan ‏و‎ <histidine (glutamine
‏يقصد بعامل تقاطع الرابطة الكيميائي خفض السمية الخلوية في ‎toxin‏ إذا كان ‎toxin‏ ‏المعالج أقل سمية ‎Og)‏ سمية أقل بنسبة حوالي ‎Aa ZY vy‏ فقال نكال نمال ‎JNO‏ ‏0 .دا ‎Yo‏ أو + ‎(ZV‏ من ‎toxin‏ غير المعالج تحت شروط ‎Allee‏ حسب القياس؛ على
‎Yo‏ سبيل المثال؛ بواسطة اختبار السمية الخلوية المعملي؛ أو بواسطة قياس السمية في حيوان.
‏بصورة مفضلة؛ فإن عامل تقاطع الرابطة الكيميائي يخفض السمية الخلوية في ‎C. difficile toxin‏ الطفري بنسبة اختزال على الأقل حوالي 7- لوغاريتم ‎٠‏ يفضل أكثر اختزال بنسبة حوالي 7- لوغاريتم١٠؛‏ ويفضل أكثر حوالي 4 - لوغاريتم١٠‏ أو ‎ish‏ بالنسبة إلى ‎toxin‏ ‏الطفري تحت شروط متماثلة لكن في غياب عامل تقاطع الرابطة الكيميائي. كما هو مقارن مع
‎toxin ‏من النوع البري؛ فإن عامل تقاطع الرابطة الكيميائي يخفض السمية الخلوية من‎ toxin Yo
الول الطفري بصورة مفضلة بنسبة اختزال حوالي © - لوغاريتم١٠»‏ نسب اختزال حوالي = لوغاريتم١٠؛‏ نسبة اختزال حوالي ‎-١7‏ لوغاريتم ١٠؛‏ نسبة اختزال حوالي 8- لوغاريتم ١٠؛‏ أو أكثر. في تجسيد مفضل آخرء فإن ‎difficile toxin‏ .© الطفري غير المنشط كيميائيا يظهر قيمة 5050 أكبر من أو على الأقل حوالي ‎٠‏ 5 ميكروجرام/ ملليلتر؛ ‎٠٠١‏ ميكروجرام/ ملليلتر» 780 ميكروجرام/ ملليلتر. 700 ميكروجرام/ ‎alle‏ 500 ميكروجرام/ ملليلتر؛ ‎5٠٠0‏ ميكروجرام/ ‎٠١ pill‏ ميكروجرام/ ملليلتر؛ ‎7٠١0‏ ميكروجرام/ ‎Ave Galle‏ ميكروجرام/ ملليلتر؛ 00 ميكروجرام/ ‎٠٠٠١ alike‏ ميكروجرام/ ملليلتر أو أكبر؛ حسب القياس بواسطة؛ على سبيل ‎(JB‏ اختبار السمية الخلوية المعملي؛ مثل الاختبار الموصوف هنا. إن شروط التفاعل ‎toxin Jay‏ الطفري مع عامل تقاطع الرابطة الكيميائي ‎٠‏ ضمن نطاق خبرة الماهر في الفن؛ وقد تختلف الشروط بالاعتماد على العامل المستخدم. مع هذاء اكتشف المخترعون على نحو مثير للداهشة شروط تفاعل مثلى لاتصال ‎C. difficile toxin polypeptide‏ الطفري مع عامل تقاطع ‎day‏ كيميائي؛ أثناء بقاء ‎epitopes‏ الوظيفية وخفض السمية الخلوية ‎toxin Jal‏ الطفري؛ مقارنة مع 10719 من النوع البري المقابل. بصورة مفضلة؛ تنتقى شروط التفاعل لاتصال 10*10 الطفري مع عامل تقاطع الرابطة؛ ‎dua‏ يكون لأجل ‎toxin‏ الطفري تركيز ‎aa‏ حوالي درت ‎Vo‏ كت دارا قر #لار ؟ مجم/ ملليلتر إلى تركيز أقصى من حوالي ‎oF‏ 7,5 7 1,5 أو ‎٠,75‏ مجم/ ملليلتر. قد تتحد أي قيمة دنيا مع أي ‎dad‏ قصوى لتحديد نطاق تركيزات مناسبة لأجل ‎toxin‏ الطفري للتفاعل. بصورة مفضلة أكثر؛ يكون لأجل ‎toxin‏ الطفري تركيز حوالي ‎V, Yom)‏ مجم/ ملليلتر للتفاعل. أ في أحد التجسيدات؛ يكون للعامل المستخدم في التفاعل تركيز أدنى حوالي ‎١‏ مللي جزيئي جرامي؛ ؟ مللي جزيني جرامي؛ ؟ مللي جزيئي جرامي؛ ؛ مللي جزيئي جرامي؛ © مللي ‎Gr‏ ‏جرامي؛ ‎٠١‏ مللي جزيني جرامي؛ ‎١5‏ مللي جزيئي جرامي؛ ‎(Ale ٠١‏ جزيني جرامي؛ ‎"٠‏ مللي جزيئي جرامي؛ ‎fe‏ مللي جزيئي جرامي؛ أو ‎*٠‏ مللي جزيئي جرامي؛ وتركيز أقصى حوالي ‎٠٠١‏ ‏ملي جزيشني جرامسي؛ ‎٠١‏ طلسي ‎(en ir‏
‎Ad —_‏ 7 _ ‎٠‏ مللي جزيئي جرامي؛ ‎7١‏ مللي جزيئي جرامي؛ ‎١‏ مللي جزيئي جرامي؛ أو ‎5٠‏ مللي جزيئي جرامي. قد تتحد أي قيمة دنيا مع أي قيمة قصوى لتحديد نطاق تركيزات مناسبة للعامل الكيميائي في التفاعل. في تجسيد مفضل حيث يتضمن العامل ‎formaldehyde‏ يفضل أن يكون التركيز ° المستخدم عبارة عن أي تركيز بين حوالي ‎A‏ مللي جزيثي جرامي إلى ‎Av‏ مللي جزيثي جرامي يفضل أكثر حوالي £0 مللي جزيئي جرامي. في تجسيد مفضل آخر حيث يتضمن العامل ‎EDC‏ ‏يفضل أن يكون التركيز المستخدم عبارة عن أي تركيز بين حوالي ‎٠,7‏ مللي جزيئي جرامي إلى حوالي ‎١١‏ مللي جزيئي جرامي؛ يفضل أكثر حوالي ؟ مللي ‎Aa‏ جرامي إلى ؟ ‎Ale‏ جزيئي ‎(da‏ الأكثر تفضيلا حوالي 7,1 مللي جزيئي جرامي. ‎Ya‏ إن أزمنة التفاعل التمثيلية التي يتصل ‎toxin Led‏ الطفري مع عامل تقاطع الرابطة الكيميائي تتنضمن ‎Aa‏ = حوالي ال لل لف لف د ‎co‏ لاف ‎VY‏ د لف ‎GEA YT‏ أو ‎Te‏ ‎cde la‏ وحد أقصى حوالي ‎١‏ يوم ال يوم + ‎٠‏ أيام لا أيام © أيام 7 أيام » ‎(Ope gd‏ يوم ‎Aa)‏ 3 أو ‎VY‏ ساعة. قد تتحد أي قيمة دنيا مع أي ‎dad‏ قصوى لتحديد نطاق أزمنة التفاعل المناسبة. في تجسيد ‎(unde‏ تجرى خطوة اتصال ‎toxin‏ الطفري مع عامل تقاطع الرابطة الكيميائي ‎٠‏ لقترةٍ من الزمن كافية لخفض السمية الخلوية لأجل ‎C. difficile toxin‏ الطفري إلى قيمة ‎EC50‏ ‏على الأقل حوالي ‎٠٠٠١‏ ميكروجرام/ ملليلتر في خلية آدمية مناسبة؛ ‎lie‏ خلايا ‎IMR-90‏ في اختبار سمية خلوية ‎lore‏ قياسي؛ مقارنة مع 10*10 الطفري المماثل في غياب عامل تقاطع الرابطة. بصورة مفضلة أكثرء يتم إجراء خطوة التفاعل لفترة تساوي على الأقل ضعفين؛ والأكثر تفضيلا ثلاثة أضعاف على الأقل أو أكثر بالنسبة للفترة الكافية لخفض السمية الخلوية في ‎toxin‏ ‎Yo‏ الطفري إلى قيمة 5050 على الأقل حوالي ‎٠٠٠١‏ ميكروجرام/ ملليلتر في خلية آدمية مناسبة. في أحد التجسيدات؛ لا يتعدى زمن التفاعل حوالي ‎VIA‏ ساعة (أو ل أيام). على سبيل المثال؛ في أحد التجسيدات حيث يتضمن العامل ‎formaldehyde‏ يفضل أن يتصل ‎toxin‏ الطفري مع عامل لمدة حوالي ‎١١‏ ساعة؛ التي توضح كفتزة تمثيلية من الزمن ‎SE‏ ‏لخفض السمية الخلوية في ‎difficile toxin‏ .6 الطفري إلى قيمة 050 على الأقل حوالي
لا ‎٠‏ ميكروجرام/ ملليلتر في خلية آدمية مناسبة؛ ‎Sie‏ خلايا 1/14-90ا؛ في اختبار سمية خلوية معملي قياسي؛ مقارنة مع ‎tOXIN‏ الطفري الممائتل في غياب عامل تقاطع الرابطة. في تجسيد مفضل ‎«ST‏ يجرى التفاعل ‎sad‏ حوالي ‎$A‏ ساعة؛ التي تساوي على الأقل حوالي ثلاثة أضعاف الفترة الكافية من زمن التفاعل. في هذا التجسيد؛ يفضل أن لا يكون زمن التفاعل أكبر من حوالي © ؟لا ساعة.
في تجسيد ‎AT‏ حيث يتضمن العامل ‎(EDC‏ يفضل أن يتصل ‎toxin‏ الطفري مع العامل ‎sad‏ حوالي نصف ساعة؛ يفضل أكثر ساعة واحدة على الأقل؛ أو الأكثر تفضيلا حوالي ساعتين. في هذا التجسيد؛ يفضل أن لا يكون زمن التفاعل أكبر من حوالي 6 ساعات.
إن الأس الهيدروجيني التمثيلي الذي يتصل عنده 10*17 الطفري مع عامل تقاطع الرابطة
‎٠‏ الكيميائي يتضمن أس هيدروجيني بحد أدنى حوالي 5,5؛ ‎VS‏ لاء أو 5,/ا؛ وأس هيدروجيني بحد أقصى حوالي در ‎GA‏ درااء ااء أو ‎LT,0‏ تتحد أي قيمة دنيا مع أي قيمة قصوى لتحديد ‎Glas‏ الأس الهيدروجيني المناسب. بصورة مفضلة. يتم التفاعل عند أس هيدروجيني 6,59 إلى ‎(V0‏ يفضل عند أس هيدروجيني 7.
‏إن درجات الحرارة التمثيلية التي يتصل عندها ‎toxin‏ الطفري مع عامل تقاطع الرابطة
‎SA ACY ACY ؛ةيوثئم*٠١‎ ae ‏الكيميائي تتضمن حد أدنى حوالي ؟"مئوية؛‎ Vo ةيوثم"7١7‎ ؛ةيوئم*7١‎ ؛ةيوئم*7١7‎ dil ‏"مثوية؛ ودرجة حرارة قصوى حوالي‎ ١ ‏قصوى لتحديد نطاق درجة حرارة‎ dad ‏5مثوية؛ أو ١٠*مثوية. قد تتحد أي قيمة دنيا مع أي‎ ‏إلى ١٠"مئوية؛ الأكثر تفضيلا‎ LACT ‏تفاعل مناسبة. بصورة مفضلة؛ يتم التفاعل عند حوالي‎ ‏عند حوالي © 7*مثوية.‎
‎Y.‏ قد تتضمن التركيبات المولدة للمناعة الموصوفة أعلاه ‎difficile toxin‏ .© طفري واحد ‎A)‏ أو 8). طبقا ‎eli‏ قد تشغل التركيبات المولدة للمناعة قوارير منتفصلة (مثلاء قارورة منفصلة للتركيبة تتضمن ‎difficile toxin A‏ .© طفري وقارورة منفصلة للتركيبة تتضمن ‎difficile toxin 8‏ .© طفري) في المستحضر أو المجموعة. قد تعتبر التركيبات المولدة للمناعة متزامنة؛ متتابعة؛ أو منفصلة الاستخدام.
VN
‏في تجسيد آخرء قد تتضمن التركيبات المولدة للمناعة الموصوفة أعلاه كلا‎
C. difficile toxin A ‏و85). قد يتحد أي اتحاد من‎ A) ‏الطفري‎ C. difficile toxins ‏من‎ ‏الطفري الموصوفين لعمل تركيبة مولدة للمناعة. طبقا لذلك؛ قد‎ ©. difficile toxin ‏الطفري و8‎ ‏قارورة منفردة تحتوي على كلا من التركيبة‎ Dla) ‏تتحد التركيبات المولدة للمناعة في قارورة منفردة‎ ‏الطفري).‎ C. difficile 1008 ‏الطفري والتركيبة المتضمنة‎ C. difficile TedA ‏المتضمنة‎ ©
C. difficile ‏الطفري و‎ C. difficile TCdA ‏بصورة مفضلة؛ تتضمن التركيبات المولدة للمناعة‎ ‏الطفري.‎ 8 ‏في أحد التجسيدات؛ تتضمن التركيبة المولدة للمناعة تعريف الترتيب‎ (JED ‏على سبيل‎ ‏واحد على‎ amino acid ‏حيث يتصل بصورة متقاطعة كيميائيا‎ oT ‏رقم: ؛ وتعريف الترتيب رقم:‎ ‏تتضمن‎ AT ‏الأقل من كل من تعريف الترتيب رقم: ؛ وتعريف الترتيب رقم: 7. في تجسيد‎ ٠
Sf ‏الطفري؛ المتضمن تعريف الترتيب رقم:‎ 6. difficile toxin A ‏التركيبة للمولدة للمناعة‎ ‏الطفري ؛ الذي يشتمل على تعريف الترتيب رقم:‎ ©. difficile toxin ‏تعريف الترتيب رقم: 7؛ و8‎ ‏واحد على‎ 807100 acid Liles ‏حيث يتصل بصورة متقاطعة‎ oA ‏أو تعريف الترتيب رقم:‎ 1 ‏الطفري.‎ ©. difficile 107105 ‏الأقل من‎ ‏تتضمن التركيبة المولدة للمناعة أي ترتيب منتقى من تعريف الترتيب‎ «AT ‏في تجسيد‎ Vo ‏وأي ترتيب منتقى من تعريف‎ AY ‏وتعريف الترتيب رقم:‎ (Af ‏تعريف الترتيب رقم:‎ of ‏رقم:‎ ‏في تجسيد آخر؛ تتضمن‎ LAO ‏وتعريف الترتيب رقم:‎ AT ‏الترتيب رقم: 7؛ تعريف الترتيب رقم:‎ ‏وتركيبة مولدة للمناعة متضمنة تعريف الترتيب‎ AE ‏التركيبة المولدة للمناعة تعريف الترتيب رقم:‎ ‏وتركيبة مولدة‎ AY ‏تجسيد آخر » تتضمن التركيبة المولدة للمناعة تعريف الترتيب رقم:‎ SAT ‏رقم:‎ ‏للمناعة متضمنة تعريف الترتيب رقم: 85. في تجسيد آخر؛ تتضمن التركيبة المولدة للمناعة‎ ٠ ‏وتعريف الترتيب‎ AT ‏تعريف الترتيب رقم:‎ (AY ‏تعريف الترتيب رقم:‎ AE ‏تعريف الترتيب رقم:‎
Ao ‏رقم:‎ ‏التركيبات المولدة للمناعة المتضمنة‎ (JU ‏يفهم أن أي تركيبة مخترعة؛ على سبيل‎ ‏الطفري؛ يمكن أن تتحد بنسب أو كميات مختلفة لتكون مؤثرة‎ toxin 8 ‏الطفري و/أو‎ toxin A ‏الطفري‎ C. difficile ‏الطفري و1608‎ C. difficile TcdA ‏قد يوجد‎ (JB ‏علاجيا. على سبيل‎ Yo ‏51لا‎
EVE
‏تجسيد آخرء على‎ SBA ‏إلى‎ ٠٠١:0١ ‏في تركيبة مولد للمناعة بنسب تتراوح من‎ ‏الطفري في تركيبة‎ C. difficile ‏الطفري و1608‎ C. difficile TCdA ‏سبيل المثال؛ قد يوجد‎ ‏إلى ١٠:0,1؛ 8: 8. في تجسيد مفضل؛ تكون النسبة‎ ٠٠١:0١ ‏للمناعة بنسب تتراوح من‎ alge ‏هي تلك التي تتضمن التركيبة عندها كمية إجمالية أكبر من 71008 الطفري من الكمية الإجمالية‎ ‏لأجل 100/8 الطفري.‎ © ‏في أحد الجوانب؛ تكون التركيبة المولدة للمناعة قادرة على ربط جسم مضاد متعادل أو‎ ‏منه. بصورة مفضلة؛ يكون الجسم المضاد المتعادل أو جزء ارتباط منه هو واحد من‎ gia ‏ربط‎ ‏الموصوف هنا أدناه. في أحد التجسيدات التمثيلية؛ تكون التركيبة المولدة للمناعة قادرة على ربط‎ ‏أو جزء‎ toxin A ‏منه؛ حيث أن الجسم المضاد ضد‎ gia ‏أو ربط‎ 10710 A ‏جسم مضاد ضد‎
YT ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ 800170 acid ‏الارتباط منه يتضمن سلسلة خفيفة متغيرة لها ترتيب‎ Ve ‏على سبيل المثال؛ قد‎ FY ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ 870170 acid ‏متغيرة لها ترتيب‎ ALE ‏وسلسلة‎ ‏تعريف‎ fof tad) ‏طفري؛ تعريف الترتيب‎ C. difficile 100/ ‏تتضمن التركيبة المولدة للمناعة‎ ‏قد تتضمن التركيبة المولدة للمناعة تعريف الترتيب رقم: 4+ أو‎ HAT ‏كمثال‎ LY ‏الترتيب رقم:‎
AY ‏تعريف الترتيب رقم:‎ ‏في تجسيد تمثيلي آخر؛ تكون التركيبة المولدة للمناعة قادرة على ربط جسم مضاد ضد‎ yo ‏أو جزء الارتباط منه‎ toxin 8 ‏أو ربط جزءٍ منه؛ حيث يكون الجسم المضاد ضد‎ toxin 8
JEN ‏متضمنا سلسلة خفيفة متغيرة من 88-26 وسلسلة ثقيلة متغيرة من 88-26. على سبيل‎ ‏أو‎ tad) ‏طفري؛ تعريف الترتيب‎ 0. difficile 1008 ‏للمناعة‎ sal gall ‏قد تتضمن التركيبة‎
AT ‏تعريف الترتيب رقم: 8. كمثال آخرء قد تتضمن التركيبة المولدة للمناعة تعريف الترتيب رقم:‎
Ao ‏أو تعريف الترتيب رقم:‎ ٠ (Recombinant cell) ‏الخلية المخلقة‎ ‏في جانب آخرء يتعلق الاختراع بخلية مخلقة أو نسل منها. في أحد التجسيدات؛‎ ‏طفري و/أو‎ ©. difficile 700/8 ‏يشفر‎ polynucleotide ‏تتضمن الخلية أو نسل منها‎ ‏طفري.‎ C. difficile TcdB ‏61لا‎
الال
في تجسيد ‎HAT‏ تتضمن الخلية المخلقة أو نسل منها ترتيب ‎nucleic acid‏ يشفر ‎polypeptide‏ له تماثل على الأقل حوالي ‎JAE JAY JAY JAY Aah‏ فخال تقال ‎JAY‏ يفضل حوالي ‎JAN‏ يفضل أكثر حوالي 799 أو الأكثر تفضيلا حوالي ‎7٠٠0‏ مع أي من تعريف الترتيب رقم: ‎of‏ تعريف الترتيب ‎Tray‏ تعريف الترتيب رقم: ‎eV‏ أو تعريف الترتيب رقم: 0 8 عند الاصطفاف بصورة ‎fie‏ ¢ مثلا بواسطة برامج ‎GAP‏ أو 8551111 باستخدام أوزان ثغرة
انقطاع تسلسل. في تجسيد ‎HAT‏ تتضمن الخلية المخلقة أو نسل منها ترتيب ‎nucleic acid‏ يشفر ‎polypeptide‏ له تماثل على الأقل حوالي ‎JAE JAY JAY JAY Aah‏ فخال تقال ‎JAY‏ يفضل حوالي ‎JAN‏ يفضل أكثر حوالي 799 أو الأكثر تفضيلا حوالي ‎7٠٠0‏ مع أي من
‎٠‏ تعريف الترتيب رقم: ‎(AE‏ تعريف الترتيب رقم: ‎(AT‏ تعريف الترتيب رقم: ‎GAY‏ أو تعريف الترتيب رقم: ‎(AS‏ عند الاصطفاف بصورة مثلى؛ مثلا بواسطة برامج ‎GAP‏ أو 85571111 باستخدام أوزان ثغرة انقطاع تسلسل.
‏في تجسيد إضافي؛ تتضمن الخلية المخلقة أو نسل منها ترتيب ‎nucleic acid‏ له ‎Jils‏ ‏على الأقل حوالي ‎(JAE JAY JAY JAY JA‏ دحال ‎JAY AAT‏ يفضل حوالي ‎JAN‏
‎OY ‏مع أي من تعريف الترتيب رقم:‎ 7٠٠١0 ‏يفضل أكثر حوالي 799 أو الأكثر تفضيلا حوالي‎ Vo ‏تعريف الترتيب رقم:‎ VE ‏تعريف الترتيب رقم:‎ VY ‏تعريف الترتيب رقم:‎ OY ‏تعريف الترتيب رقم:‎ ‏عند‎ of ‏تعريف الترتيب رقم: £0( تعريف الترتيب رقم: 57؛ أو تعريف الترتيب رقم:‎ oft ‏أو 8551111 باستخدام أوزان ثغرة انقطاع‎ GAP ‏بواسطة برامج‎ Die ¢ tie ‏الاصطفاف بصورة‎ ‏تسلسل.‎
‏ف قد تشتق الخلية المخلقة من أي خلية مفيدة في الإنتاج التخليقي من ‎«polypeptide‏ ‏الاختراع الحالي؛ ‎Ole‏ بدائي النواة أو سوي النواة. بصورة مفضلة؛ تشتق الخلية المخلقة من أي خلية مناسبة لإظهار ترتيبات ‎nucleic acid‏ متغايرة بها أكثر من حوالي 9080868 ‎Tenn‏ يفضل حوالي ‎7008١0‏ ويفضل أكثر حوالي ‎nucleotides Avr‏ أو أكثر. قد تكون خلية العائل بدائية النواة هي أي بكتريا سالبة أو موجبة الجرام. في تجسيدات تمثيلية؛ تفتقد خلية العائل بدائية النواة
‎polynucleotide Yo‏ داخلي يشفر 10710 و/أو جرثومة.
—VA— «Campylobacter, E. coli ‏تتضمن بكتريا سالبة الجرام؛ لكن بدون تحديد؛‎ «Neisseria <llyobacter (Helicobacter (Fusobacterium (Flavobacterium ‏قد تشتق الخلية‎ (JU ‏على سبيل‎ .Ureaplasma ‏و‎ «Salmonella (Pseudomonas ‏حسب الوصف في منشور طلب براءة‎ (Pseudomonas fluorescens ‏المخلقة من خلية‎ ‏المندمجة هنا بالإشارة.‎ ]770[-]7 ON] ‏الفقرات‎ 0٠001797067 ‏الاختراع الأمريكية‎ oo «Clostridium (Bacillus ‏بدون تحديد‎ Sealy all ‏تتضمن بكتريا موجبة‎ «Oceanobacillus (Lactococcus (Lactobacillus «Geobacillus Enterococcus ‏بصورة مفضلة؛ تشتق الخلية من‎ WStreptomyces «Streptococcus (Staphylococcus .C. difficile ‏خلية‎ ‏داخلي يشفر‎ polynucleotide ‏نوع بري تفتقد‎ ©. difficile ‏حدد المخترعون سلالات‎ " andl) ‏و8 داخلية السلالات‎ toxin A ‏تتضمن السلالات المفتقدة لجينات‎ WC. difficile toxin ‏المتوافرة بواسطة:‎
The American Type Culture Collection (ATCC) (Manassas, VA): C. difficile 1351 (ATCC 43593™), C. difficile 3232 (ATCC BAA-1801™), C. difficile 7322 (ATCC 43601™), C. difficile 5036 (ATCC 43603™), C. 0 difficile 4811 (ATCC 43602™), and C. difficile VPI 11186 (ATCC 700057™). ‏المخلقة من سلالة موصوفة‎ 6. difficile ‏طبقا لذلك؛ في أحد التجسيدات؛ تشتق خلية‎
C. ‏المخلقة أو نسلها من المجموعة المتكونة من‎ ©. difficile ‏بصورة مفضلة؛ تشتق خلية‎ lia ‏يفضل أكثر أن تشتق‎ .©. difficile VPI 11186 ‏و‎ ©. difficile 5036 difficile 1351 ٠ .C. difficile VPI 11186 ‏المخلقة أو نسل منها من خلية‎ C. difficile ‏خلية‎ ‏المخلقة‎ C. difficile ‏لخلية‎ (sporulation gene) ‏في تجسيد مفضل؛ فإن جين التبرعم‎ ‏أو نسل منها خامد النشاط. قد تكون الجرثومات معدية؛ مقاومة للغاية؛ وتيسر وجود‎ ‏في بيئات هوائية خارج العائل. قد تساهم الجرثومات أيضا في إحياء‎ 6. difficile ‏فلا‎
‎١ q —‏ ‎difficile‏ .© بداخل العائل أثناء العلاج المضاد للميكروبات. طبقا لذلك؛ فإن خلية ‎C. difficile‏ تفتقد جين التبرعم مفيدة لإنتاج تركيبة مولدة للمناعة أمنة للإعطا ‎s‏ للتدييات . إضافيا فإن استخدام تلك الخلايا يسهل الأمان أثناء التصنيع؛ مثلا؛ الأمان لحماية الوحدة؛ المنتجات المستقبلة؛ وفريق العمل. 2 تتضمن أمثلة على جينات تبرعم من أجل إخماد نشاط مستهدف»؛ من بين ‎(sya)‏ ‏هودمى. ‎spollE‏ عه ‎«0K 5 «0G‏ يفضل أن يكون جين ‎spo0A‏ خامد النشاط. إن طرق إخماد نشاط جين تبرعم ‎difficile‏ .0 معروفة في الفن. على سبيل المثال؛ قد يخمد نشاط جين التبرعم بإدخال مستهدف لدلالة يمكن انتقائها ‎(Jie‏ دلالة مقاومة لمضاد حيوي. انظرء على سبيل المثال؛ ‎٠‏ .ل ‎Heap et al., J Microbiol Methods. 2010 Jan;80(1):49-55; Heap et al.,‏ ‎Microbiol.
Methods, 2007 Sept; 70(3):452-464; and Underwood et al., J‏ ‎Bacteriol. 2009 Dec;191(23):7296-305.‏ انظر أيضاء على سبيل المثال» ‎WO2007/148091 (Minton et al.‏ بعنوان ‎“DNA Molecules and Methods”‏ المندمج هنا بالإشارة الكاملة من الصفحات ‎SUITE‏ ‎Vo‏ 5,58 الولايات المتحدة المقابلة ‎(US 20110124109 Al‏ الفقرات ‎JYYVIEDY YY]‏ طرق لإنتاج ‎C. difficile toxin‏ طفري ‎Method of Producing a Mutant C. difficile Toxin‏ في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع بطريقة لإنتاج ‎C. difficile toxin‏ طفري. في أحد التجسيدات؛ تتضمن الطريقة زراعة أي خلية مخلقة أو نسل منها موصوفة ‎dled‏ تحت شروط ‎٠٠‏ - مناسبة لإظهار ‎polypeptide‏ ‏في تجسيد ‎HAT‏ تتضمن الطريقة زراعة خلية مخلقة أو نسل منها تحت شروط مناسبة لإظهار ‎polynucleotide‏ يشفر ‎difficile toxin‏ .© طفري؛ حيث تتضمن الخلية ‎polynucleotide‏ الذي يشفر ‎C. difficile toxin‏ الطفري» وحيث تتضمن الطفرة مجال سيطرة
“Am ‏به‎ cysteine protease ‏به طفرة واحدة على الأقل ومجال سيطرة‎ glucosyltransferase ‏النوع البري المقابل. في أحد‎ Clostridium difficile toxin ‏مقارنة مع‎ (JAY ‏طفرة واحدة على‎ toxin ‏داخلي يشفر‎ polynucleotide ‏التجسيدات؛ تفتقد الخلية‎ ‏مخلقة أو نسل منها تحت‎ ©. difficile ‏في تجسيد إضافي؛ تتضمن الطريقة زراعة خلية‎ ‏طفري»؛ حيث تتضمن الخلية‎ C. difficile toxin ‏يشفر‎ polynucleotide ‏شروط مناسبة لإظهار‎ © ‏داخلي‎ polynucleotide ‏الطفري وتفتقد الخلية‎ C. difficile toxin ‏المشفر‎ polynucleotide .C. difficile toxin ‏يشفر‎ ‏طفري. تتضمن‎ C. difficile toxin ‏في جانب آخرء يتعلق الاختراع بطريقة لإنتاج‎ ‏مخلقة؛ حيث تفتقد‎ Escherichia coli ‏مع خلية‎ C. difficile ‏الطريقة خطوات: 0 تلامس خلية‎
E. coli ‏وخلية‎ C. difficile toxin ‏يشفر‎ ils polynucleotide ‏إلى‎ C. difficile ‏خلية‎ ٠
C. difficile ‏طفري؛ (ب) زراعة خلية‎ C. difficile toxin ‏يشفر‎ polynucleotide ‏تتضمن‎ ‏خلية‎ JE. coli ‏من خلية‎ polynucleotide Jail ‏تحت شروط مناسبة‎ BE. coli ‏وخلية‎ ‏المشفر‎ polynucleotide ‏(ج) انتقاء خلية 0171016 ...0 المشتملة على‎ «C. difficile ‏من خطوة (ج) تحت شروط مناسبة‎ ©. difficile ‏الطفري؛ (د) زراعة خلية‎ C. difficile toxin ‏الطفري.‎ C. difficile toxin Jj ‏و(ه)‎ ¢polynucleotide lly Vo ‏مغاير يشفر‎ polynucleotide ‏المخلقة‎ E. coli ‏في الطريقة المخترعة؛ تتضمن خلية‎ ‏أو‎ DNA ‏عبارة عن‎ polynucleotide ‏الطفري؛ الموصوف هنا. قد يكون‎ C. difficile toxin ‏الطفري له‎ C. difficile toxin ‏المشفر‎ polynucleotide ‏في تجسيد تمثيلي؛ يكون‎ .RNA ‏في صورة‎ codon Jaa ‏إن طرق‎ .. coli codon ‏في صورة مثلى من أجل استخدام‎ 7 ‏معروفة في الفن.‎ polynucleotide ‏مثلى من‎ Yo ‏له تماثل على‎ nucleic acid ‏ترتيب‎ polynucleotide ‏في أحد التجسيدات» يتضمن‎
AN ‏نكال‎ LAS TAN TAY NT ‏فال .اال فال مال فطل‎ Je ‏الأقل حوالي‎ ‏يشفر‎ polynucleotide ‏مع‎ 21٠٠١ ‏لأخال فقا ححا أو‎ FAT ‏كال فقال‎ JAY ‏حال‎ ‎C. ‏طفري؛ حسب الوصف أعلاه. يتضمن 001701101601106 تمثيلي يشفر‎ C. difficile TcdA
‎difficile toxin A‏ طفري تعريف الترتيب رقم: ‎VD‏ تعريف الترتيب رقم: ‎VY‏ تعريف الترتيب رقم ‎EI‏ وتعريف الترتيب رقم ‎L840:‏ ‏في تجسيد ‎aT‏ ¢ يتضمن ‎polynucleotide‏ ترتيب ‎nucleic acid‏ له تماثل على الأقل حوالي دل فال .اال فاال بغال _ مدال تال اأغال لال كمال مكحل لك ‎(Jat JAY AY 0‏ فقال ‎AA JAY LAT‏ ححا أو ‎٠‏ مع ‎polynucleotide‏ يشفر ‎C. difficile 8‏ طفري؛ حسب الوصف أعلاه. يتضمن 001701101601106 تمثيلي يشفر ‎C.‏ ‎difficile toxin 8‏ طفري تعريف الترتيب رقم: ‎Y‏ 6 تعريف الترتيب رقم: ‎VE‏ تعريف الترتيب رقم: £7 وتعريف الترتيب رقم: 97؛. في تجسيد ‎AT‏ ¢ يشفر ‎polynucleotide‏ تعريف الترتيب رقم: ‎AY‏ تعريف الترتيب رقم: ‎(AE‏ تعريف الترتيب رقم: ‎(AO‏ وتعريف الترتيب رقم: ل ‎Ya‏ في أحد التجسيدات؛ تكون خلية ‎coli‏ .5 التي تتضمن ‎polynucleotide‏ المغاير هي خلية ‎E. coli‏ تعول بدرجة 45,6 ‎polynucleotide‏ المغاير؛ الذي يشفر ‎C. difficile toxin‏ طفري. تتضمن خلايا ‎coli‏ .5 تمثيلية خلية مختارة من المجموعة المتكونة من: ‎MAX Efficiency® Stbl2™ E. coli Competent Cells (Invitrogen, Carlsbad,‏ ‎CA), One Shot® 50137" Chemically CompetentE. coli (Invitrogen,‏ ‎Carlsbad, CA), ElectroMAX™ Stbl4™ E. coli Competent Cells (Invitrogen , Yo‏ ‎and E. coli CA434.‏ في تجسيد مفضل؛ لا تكون خلية العائل النسخية ‎E.coli‏ عبار عن 01150. يفضل أكثر أن تكون خلية العائل النسخية ‎E.coli‏ هي: ‎MAX Efficiency® 510121 E. coli Competent Cell.‏ ‎Y.‏ تتضمن الطريقة المخترعة إضافيا خطوة زراعة خلية ‎C. difficile‏ وخلية ‎EL coli‏ تحت شروط مناسبة ‎polynucleotide Jail‏ من خلية ‎E. coli‏ إلى خلية ‎difficile‏ .0؛ لتنتج خلية ‎C. difficile‏ مخلقة. في تجسيد مفضل؛ تكون شروط الزراعة مناسبة ‎polynucleotide Jail‏ من خلية ‎coli‏ .© (الخلية المانحة) إلى داخل خلية ‎C. difficile‏ (الخلية المستقبلة)؛ وذلك يؤدي إلى تأصل ثابت وراثيا. ‎Evo‏
م أكثر تفضيلا؛ تكون شروط الزراعة مناسبة لاقتران بكتيري؛ معروفة في الفن. يشير "اقتران ‎"(conjugation)‏ إلى عملية خاصة ‎polynucleotide Jail‏ يحدث فيه نقل غير اتجاهي من ‎polynucleotide‏ (مثلا؛ من ‎plasmid‏ بكتريا) من خلية ‎LAS‏ (أي؛ "المانحة (00001)) إلى ‎Algal’ (ff) gal‏ (260101600)"). تشمل عملية الاقتران تلامس خلية مانحة مع خلية مستقبلة. © بصورة مفضلة؛ تكون خلية ‎E. coli‏ المانحة هي خلية 0434 ‎.E. coli‏ تتضمن شروط تمثيلية مناسبة (اقتران) ‎Jail‏ 007/01101601086 من خلية ‎E. coli‏ إلى خلية ‎C. difficile‏ نمو مزارع سائلة من ‎AC. difficile‏ حساء تشريب مخ قلب ‎(BHI; Oxoid)‏ أو حساء ‎Schaedlers‏ لاهوائي ‎.(SAB; Oxoid)‏ في تجسيد آخرء تنمو مزارع ‎C. difficile‏ صلبة على +8981 دم حديث التحضير ‎(FBA) (fresh blood agar)‏ أو ‎BHI agar‏ بصورة ‎٠‏ مفضلة؛ تنمو مزارع 0100616 ...0 عند 7١"”مثوية‏ في بيئة لاهوائية ‎ZA Sie)‏ 2لا ‎72٠‏ ‎[ana] H2 7). 5CO2‏ حجم]). في أحد التجسيدات؛ يتضمن شرط مناسب نمو ‎E. coli‏ لاهوائيا في حساء ‎(LB) Luria-Bertani‏ أو على ‎LB agar‏ عند ‎LA ACT‏ للانتقال الاقتراني من أجل 06 ..؛ يتضمن شرط تمثيلي مناسب نمو ‎coli‏ .ا لاهوائيا على /5. يمكن تضمن مضادات حيوية في الأوساط السائلة والصلبة كما هو معروف في الفن. إن أمثلة على تلك ‎١5‏ المضادات الحيوية تتضمن ‎You) cycloserine‏ ميكروجرام/ ملليلتر)ء ‎A) cefoxitin‏ ميكروجرام/ ملليلتر)؛ ‎VY, 0) chloramphenicol‏ ميكروجرام/ ملليلتر)» ‎Vo) thiamphenicol‏ ميكروجرام/ ملليلتر)؛ و ‎erythromycin‏ )© ميكروجرام/ ملليلتر). تتضمن ‎Lilia)‏ الطريقة المخترعة خطوة انتقاء خلية ‎C. difficile‏ المخلقة الناتجة التي تتضمن ‎polynucleotide‏ يشفر ‎C. difficile toxin‏ الطفري. في تجسيد تمثيلي؛ تستقبل خلية ‎C. difficile ٠‏ المخلقة ‎polynucleotide‏ المشفر ‎C. difficile toxin‏ الطفري من خلية ‎E. coli‏ المخلقة من خلال الاقتران. تتضمن ‎LAL a)‏ الطريقة المخترعة خطوة زراعة الخلية المخلقة أو نسل منها تحت شروط مناسبة لإظهار ‎polynucleotide‏ المشفر ‎C. difficile toxin‏ الطفري؛ لينتج ‎C. difficile toxin‏ طفري. تتضمن شروط مناسبة لكي تظهر خلية مخلقة لأجل ‎polynucleotide Yo‏ شروط زراعة مناسبة لنمو خلية ‎difficile‏ .؛ معروفة في الفن. على سبيل
‎A Ad —‏ — المثال؛ تتضمن شروط مناسبة زراعة ‎UNA‏ متحولة ‎ACL difficile‏ حساء تشريب قلب مخ ‎(BHI; Oxoid)‏ أو حساء ‎Schaedlers‏ لاهوائي ‎Oxoid)‏ :588). في تجسيد ‎AT‏ ¢ قد تنمو مزارع ‎difficile‏ .© صلبة على ‎FBA‏ أو ‎BHI agar‏ بصورة مفضلة؛ تنمو ‎difficile‏ .© عند ١*مئوية‏ في بيئة لاهوائية ‎ZA OEY‏ 2ل ‎7٠١‏ 002؛ و١٠79 ‎H2‏ [حجم/ حجم]). 2 في أحد التجسيدات؛ تتضمن الطريقة المبتكرة خطوة عزل ‎C. difficile toxin‏ الطفري الناتج. إن طرق ‎protein Jie‏ من ‎C. difficile‏ معروفة في الفن. في تجسيد آخرء تتضمن الطريقة خطوة تنقية ‎difficile toxin‏ .© الطفري الناتج. إن طرق ‎(polypeptide dan‏ مثل تحليل كروماتوجرافي؛ معروفة في الفن. في تجسيد تمثيلي؛ تتضمن الطريقة إضافيا خطوة تاتمس ‎Clostridium difficile toxin‏ أ الطفري المعزول مع عامل ربط متقاطع كيميائي موصوف ‎٠ Sel‏ بصورة مفضلة » يتضمن العامل ‎cethyl- 3—(3—dimethylaminopropyl) carbodiimide formaldehyde‏ اتحاد من ‎EDC‏ و45. إن شروط التفاعل التمثيلية موصوفة أعلاه وفي جزء الأمثلة أدناه. في جانب آخرء يتعلق الاختراع بتركيبة مولدة للمناعة تتضمن ‎C. difficile toxin‏ طفري موصوف هناء ناتج بأي طريقة؛ يفضل بأي من الطرق الموصوفة أعلاه. ‎Vo‏ الأجسام المضادة ‎(Antibodies)‏ ‏مما يثير الدهشة؛ تولد التركيبات المخترعة المولدة للمناعة الموصوفة أعلاه أجسام مضادة جديدة في الجسم ‎(ad)‏ مما يقترح أن التركيبات المولدة للمناعة تتضمن بناء أصلي محمي ‎Ole)‏ ‏06 مولد مضاد محمي) من ‎C. difficile toxin‏ النوع البري الخاص وأن التركيبات المولدة للمناعة تتضمن ‎epitope‏ إن الأجسام المضادة الناتجة ضد 10*19 من سلالة واحدة من .6 ‎difficile | ٠‏ قد تكون قادرة على الارتباط مع ‎toxin‏ مقابل ناتج بسلالة أخرى من ‎.C. difficile‏ بمعنى أن الأجسام المضادة والأجزاء الرابطة منها قد تكون "عابرة النشاط (0:055-1880117/8)"؛ وذلك يشير إلى القدرة على التفاعل مع ‎(SU‏ متشابهة مولدة لمضاد على ‎toxins‏ ناتجة من سلالات ‎difficile‏ .© متعددة. يتضمن النشاط العابر أيضا قدرة الجسم المضاد على التفاعل مع
CAE
‏مضاد وجسم مضاد متولد ضد‎ alse ‏أو الارتباط مع مولد مضاد لا يثير إنتاجه؛ أيء التفاعل بين‎ ‏مولد مضاد مختلف لكنه مشابه.‎ ‏في أحد الجوانب؛ اكتشف المخترعون بصورة مثيرة للدهشة أجسام مضادة أحادية النسخ لها‎ ‏.©؛ وطرق لإنتاجها. يمكن للأجسام المضادة المخترعة أن‎ difficile toxins ‏تأثير معادل على‎ ‏.©؛ تبط ارتباط‎ difficile toxin ‏تعادل سمية خلوية في المعمل لأجل‎ © ‏مع خلايا كائن تديي؛ و/أو يمكن أن تعادل السمية المعوية في الجسم الحي‎ ©. difficile toxin ‏معزولة تتضمن‎ polynucleotides ‏يتعلق الاختراع الحالي أيضا مع‎ LC. difficile toxin ‏لأجل‎ ‏يتعلق الاختراع الحالي باستخدام أي من‎ cil) ‏تشفر أيا مما سبق.‎ nucleic acid ‏ترتيبات‎ ‏التركيبات السابقة لعلاج؛ منع؛ تقليل خطورة؛ تقليل شدة؛ تقليل حدوث؛ و/أو تأخير بداية عدوى‎ ‏.©؛ و/أو مضاعفات لذلك في‎ difficile ‏متلازمة مصاحبة‎ dla (age ‏.©؛ مرض؛‎ difficile ٠ ‏كائن ثديي؛ مقارنة مع كائن ثديي لم تعطى له التركيبة؛ بالإضافة إلى طرق لتحضير التركيبات‎ ‏المذكورة.‎ ‏اكتشف المخترعون إضافيا أن اتحاد من اثنين على الأقل من الأجسام المضادة أحادية‎ ‏النسخ المعادلة يمكن أن يظهر تأثير تعاوني غير متوقع من ناحية معادلة 100/8 أو 1608. إن‎ ‏أو الأجزاء الرابطة منها قد تكون مفيدة في تثبيط عدوى‎ toxin ‏الأجسام المضادة ضد‎ ١ .C. difficile ‏يتضمن واحدة أو اثنتين على الأقل من‎ protein ‏هو‎ (antibody) ‏إن "جسم مضاد‎ ‏وواحدة أو اثنتين على الأقل‎ o(VH ‏(تختصر هنا إلى‎ (H) ‏مناطق متغيرة سلسلة ثقيلة‎ ‏يمكن إضافيا تقسيم‎ (VL ‏(تختصر هنا إلى‎ (Lb) ‏من مناطق متغيرة سلسلة خفيفة‎ ‏محددة للتكملة‎ hl wd ood ‏إلى مناطق مفرطة التغيرء‎ VL VH ‏المناطق‎ ٠ ‏(”4ا0ا)”)؛ متوزعة مع المناطق المحمية‎ "(complementarity determining regions)
CDRs; ‏إن درجة منطقة الإطار‎ (FR) "(framework regions) ‏أكثر؛ المسماة "'مناطق إطار‎ ‏محددة بدقة؛ انظر:‎
— A ‏اج‎ ‎(Kabat, E. A., et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest |,
Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH
Publication No. 91-3242, 1991, and Chothia, C. et al., J. Mol. Biol. 196:901-917, 1987). © يتضمن المصطلح "جسم مضاد ‎globulins "(antibody)‏ مناعية سليمة من الأنواع ‎IgG «IgA‏ ‎«IgE‏ ناوا ‎IgM‏ (بالإضافة إلى أنواع فرعية منها)؛ حيث قد تكون السلاسل الخفيفة في ‎globulin‏ المناعي من الأنواع ‎kappa‏ أو 1801502. قد تكون جزيئات الجسم المضاد كاملة الطول ‎Mi)‏ جسم مضاد ‎IgG]‏ أو 964ا). قد تكون الأجسام المضادة من الأنواع المماثلة العديدة». متضمنة: ‎Si) IgG‏ 61واء ‎gG2‏ ‎٠‏ 63وا ‎(IgD (IgA2 gAl (gM ((IgG4‏ أو وا. في تجسيد ‎(dante‏ يكون الجسم المضاد هو نوع مماثل 96ا؛ ‎Sk‏ 961ا. في تجسيد ‎AT‏ مفضل؛ يكون الجسم المضاد هو جسم مضاد ‎IgE‏ ‏في تجسيد ‎AT‏ ¢ يتضمن جزيء الجسم المضاد ‎(antibody molecule)‏ "جزء يربط مولد مضاد ‎"(antigen-binding fragment)‏ أو 'جزء رابط ‎(binding fragment)‏ حسب ‎١5‏ الاستخدام هناء والذي يشير إلى قسم من جسم مضاد يرتبط بصفة خاصة مع ‎C. difficile toxin‏ ‎A (SG)‏ 0«00ا). إن الجزء ‎Se cal)‏ هو جزيء لا تكون فيه واحدة أو أكثر من سلاسل ‎eid) globulin‏ كاملة الطول؛ لكنها ترتبط مع 10617 بصفة خاصة. إن أمثلة على أقسام ‎da)‏ مشتملة في المصطلح "جزء رابط ‎"(binding fragment)‏ جسم مضاد تتضمن ‎)١(‏ جزء ‎Fab‏ وهو جزء أحادي التكافؤ يتكون من مجالات سيطرة ‎VL‏ ‎٠‏ (الاء ‎)١( «CHI; CL‏ جزء ‎F(ab’)2‏ وهو جزء ثنائي التكافؤ يشمل اثنين من أجزاء ‎Fab‏ ‏متصلين بقنطرة ‎disulfide‏ عند منطقة المفصلة؛ )7( جزء ‎Fd‏ يتكون من مجالات سيطرة ‎VH‏ ‏و ‎«CHI‏ (4) جزء ‎FV‏ يتكون من مجالات سيطرة ‎VH 3 VL‏ من ذراع وحيد لجسم مضاد؛ )0( جزء ‎«(Ward et al., Nature 341:544-546, 1989) dAb‏ يتكون من مجال سيطرة 1/ا؛ فلا
_ أ ‎A‏ _ و(١)‏ منطقة محددة للتكملة ‎(CDR)‏ معزولة لها إطار كافي لتربط بصفة خاصة؛ مثلا؛ قسم رابط لمولد مضاد لمنطقة متغيرة. يمكن أن يتصل جزء رابط من منطقة متغيرة سلسلة خفيفة وجزء رابط من منطقة متغيرة سلسلة ثقيلة؛ ‎De‏ مجالي السيطرة من جزء ‎(FV‏ ا/ا ‎VHS‏ بطرق تخليقية؛ برابط مصنع يمكنهما © من أي يصبحا سلسلة ‎protein‏ واحدة تزدوج ‎Led‏ المناطق ‎VL‏ و1ا/ا لتكوين جزيئات أحادية ‎sill)‏ (تسمى ‎Fv‏ سلسلة وحيدة ‎¢(sCFV)‏ انظر؛ مثلا: ‎Bird et al. (1988) Science 242:423-426; and Huston et al. (1988) Proc.‏ ‎Natl.
Acad.
Sci.
USA 85:5879-5883).‏ إن تلك الأجسام المضادة وحيدة السلسلة مشتملة أيضا في المصطلح "جزء رابط | ‎(binding‏ ‎٠‏ | 89006010" من جسم مضاد. نحصل على أقسام الجسم المضاد هذه بتقنيات معروفة في ‎(oll‏ ‏وتحجب الأقسام للاستعمال بنفس الطريقة مثل الأجسام المضادة السليمة. حسب الاستخدام هناء فإن جسم مضاد 'يربط بصفة خاصة ‎"(specifically binds)‏ مع أو 'يخص ‎polypeptide '(specific)‏ خاص أو ‎epitope‏ على ‎polypeptide‏ الخاص هو جسم مضاد يرتبط مع ذلك ‎polypeptide‏ الخاص أو ‎epitope‏ على ‎polypeptide‏ خاص بدون ‎Vo‏ الارتباط جوهريا مع أي ‎polypeptide‏ أو ‎polypeptide epitope‏ آخر. على سبيل المثال؛ عند الإشارة إلى جزيء حيوي (مثل؛ ‎nucleic acid «protein‏ جسم مضاد؛ إلخ) 'يرتبط بصفة خاصة ‎(specifically binds)‏ مع ‎cas‏ فإن الجزيء الحيوي يرتبط مع جزيئه المستهدف ولا يرتبط بكمية هامة مع جزيئات أخرى في مجموعة مغايرة من الجزيئات تتضمن الهدف؛ حسب القياس تحت شروط محددة ‎Se)‏ شروط اختبار مناعي في حالة جسم مضاد). إن تفاعل الارتباط ‎Ye‏ بين الجسم المضاد وهدفه يحدد وجود الهدف في المجموعة المغايرة من الجزيئات. على سبيل المثال؛ يشير "ارتباط خاص ‎"(specific binding)‏ أو "يربط بصفة خاصة ‎(specifically‏ ‎"binds)‏ إلى قدرة الجسم المضاد أو جزء رابط منه على الارتباط مع ‎difficile toxin‏ .© نوع بري و/أو طفري مع انجذاب أكبر مرتين على الأقل من انجذابه لمولد مضاد غير خاص. فلا
-/- في تجسيد تمثيلي؛ يكون الجسم المضاد هو جسم مضاد هجين. يمكن إنتاج جسم مضاد هجين بتقنيات ‎DNA‏ مخلق معروفة في الفن. على سبيل المثال؛ يمكن هضم جين يشفر المنطقة ‎Fo anil)‏ من جزيء جسم مضاد أحادي النسخ فأري (أو نوع آخر) مع ‎enzymes‏ مقيدة لإزالة المنطقة المشفرة ‎Fe‏ الفأري؛ ويستبدل القسم المكافئ من الجين المشفر لمنطقة ‎Fo Ant‏ آدمية. © يمكن أيضا أن يتولد جسم ‎alias‏ هجين بتقنيات ‎DNA‏ مخلق حيث يمكن أيضا ربط ‎DNA‏ يشفر مناطق متغيرة فأرية مع ‎DNA‏ يشفر المناطق الثابتة الآدمية. في تجسيد آخر تمثيلي؛ يكون الجسم المضاد أو الجزء الرابط منه مكتسب للسمة الآدمية بطرق معروفة في الفن. على سبيل المثال؛ بمجرد الحصول على أجسام مضادة فأرية؛ يمكن استبدال ‎CDR‏ من الجسم المضاد مع ‎aud‏ على الأقل من ‎CDR‏ آدمية. يمكن أيضا توليد أجسام ‎٠‏ مضادة مكتسبة للسمة الآدمية باستبدال ترتيبات المنطقة المتغيرة ‎Fv‏ الفأرية غير المشتملة مباشرة في ربط مولد مضاد مع ترتيبات مكافئة من مناطق متغيرة ‎FV‏ آدمية. إن الطرق العامة لتوليد أجسام مضادة مكتسبة للسمة الآدمية معروفة في الفن. على سبيل المثال؛ فإن الأجسام المضادة الأحادية النسخ الموجهة إلى ‎C. difficile‏ ‎TedA‏ أو 1608 ‎difficile‏ .© يمكن أيضا إنتاجها بتقنيات قياسية؛ مثل تقنية ورم هجين؛ انظرء ‎Yo‏ مثلا: ‎(Kohler and Milstein, 1975, Nature, 256: 495-497).‏ باختصار؛ يندمج خط خلية سرمدي مع خلية ليمفاوية من كائن ثديي محصن مع ‎(C. difficile 1608 (C. difficile TcdA‏ أو ‎difficile toxin‏ .© طفري موصوف هناء وتحجب المواد الطافية من مزرعة خلايا الورم الهجين الناتجة لتحديد الورم الهجين الذي ينتج جسم ‎Yo‏ مضاد أحادي النسخ يرتبط مع 160/8 ‎difficile‏ .© أو 1608 ‎difficile‏ .0. نموذجياء يشتق خط الخلية السرمدي من نفس نوع الكائن الثديي مثل الخلايا الليمفاوية. تتحدد خلايا ورم هجين منتجة جسم مضاد أحادي النسخ من الاختراع بحجب المواد الطافية لمزرعة الورم الهجين من أجل أجسام مضادة تربط ‎difficile TedA‏ .© أو ‎difficile TedB‏ .© باستخدام اختبارء ‎ELISA Jie‏ يمكن تحضير أورام هجينة آدمية بطريقة مشابهة.
CAA
‏كبديل لإنتاج أجسام مضادة بتحصين وانتقاء؛ يمكن أيضا تحديد أجسام مضادة‎ «C. difficile 100/8 ‏مناعي اتحادية مخلقة مع‎ globulin ‏من الاختراع بحجب مكتبة‎ ‏طفري موصوف هنا. قد تكون مكتبة الجسم‎ ©. difficile toxin ‏أو‎ «C. difficile TcdB ‏على سبيل المثال. إضافة لذلك؛ تستخدم‎ (Fab ‏أو مكتبة‎ scFv ‏المضاد المخلقة هي مكتبة‎ ‏الأجسام المضادة المخترعة الموصوفة هنا في دراسات ارتباط تنافسي لتحديد أجسام مضادة‎ © ‏يمكن تحديد أجسام‎ (JED ‏أو ضد 1608 والأجزاء الرابطة منها. على سبيل‎ TedA ‏إضافية ضد‎ ‏مضادة إضافية ضد 100/8 أو ضد 1608 وأجزاء رابطة منها بحجب مكتبة جسم مضاد آدمية‎ ‏وتحديد جزيئات في المكتبة تتنافس مع الأجسام المضادة المخترعة الموصوفة هنا في اختبار‎ ‏ارتباط تنافسي.‎ ‏تتضمن أجسام مضادة يشملها الاختراع الحالي أجسام مضادة مخلقة قد تتولد‎ (Lil) Ya ‏بطرق إظهار بلعم معروفة في الفن. في طرق إظهار بلعم؛ يستخدم بلعم لإظهار مجالات سيطرة‎ ‏آدمية أو فأرية). إن بلعم يظهر‎ (OE) ‏رابطة لمولد مضاد ظاهرة من ذخيرة أو مكتبة جسم مضاد‎
C. difficile toxin ‏مجال سيطرة رابط لمولد مضاد يرتبط مع مولد مناعي موصوف هنا (مثلاء‎ ‏مضاد معلم.‎ alge ‏باستخدام‎ Ole ‏طفري) يمكن أن ينتقى أو يتحدد مع مولد مضاد؛‎ ‏يتضمن أيضا نطاق الاختراع أجسام مضادة وأجزاء رابطة منها تم فيها استبدال» حذف؛ أو‎ Vo amino ‏خاصة. بصفة خاصة؛ فإن أجسام مضادة مفضلة بها استبدالات‎ amino acids ‏إضافة‎ ‏يمكن استبدال‎ (JE ‏في منطقة الإطار؛ مثلا لتحسين الارتباط مع مولد مضاد. على سبيل‎ 0 amino acids ‏مستقبلة من سلسلة 9100110 مناعي بواسطة‎ Hla) ‏عدد قليل منتقى من متخلفات‎ ol date ‏المعطية المقابلة. تتضمن مواقع مفضلة للاستدال‎ ‏إن المعايير لانتقاء‎ .CDR ‏أو قادرة على التفاعل مع‎ (CDR ‏مجاورة لمنطقة‎ amino acid ٠ ‏من المعطية موصوفة في براءة الاختراع الأمريكية رقم 0075689 (مثلاء‎ 800100 acids ‏يكون الإطار المستقبل هو ترتيب إطار جسم مضاد آدمي مكتمل الخواص‎ BL (VTE) Y ‏الأعمدة‎ ‏أو ترتيب متفق عليه.‎ ated hei a ‏حسب الاستخدام هناء يشير "جسم مضاد معادل أو‎ ‏إلى جسم مضاد خاص أو جزء‎ "(neutralizing antibody or binding fragment thereof) +5
‎A q —‏ — رابط منه يرتبط مع مولد لمرض (مثلا؛ ‎difficile TcdA‏ .© أو 8 ) ويقلل الإصابة بالعدوى و/أو نشاط مولد لمرض (مثلا؛ يقلل السمية الخلوية) في كائن ثدي و/أو في مزرعة خلية؛ مقارنة مع ‎alse‏ المرض تحت شروط مماثلة في غياب الجسم المضاد المعادل أو الجزء الرابط منه. في أحد التجسيدات؛ يكون الجسم المضاد المعادل أو الجزء الرابط ‎aie‏ قادرا على معادلة على الأقل 2 حوالي اال قاضال ‎JAY‏ فال كال مكل حك أو أكثر من النشاط الحيوي لمولد المرض؛ مقارنة مع النشاط الحيوي لمولد المرض تحت شروط مماثلة في غياب الجسم المضاد المعادل أو الجزء الرابط منه. حسب ‎١‏ لاستخدام هنا ؛ يشير "جسم مضاد ضد ‎toxin‏ أو جزء ‎Ly‏ منه ‎"(anti-toxin antibody or binding fragment thereof)‏ إلى جسم مضاد أو جزء رابط منه ‎Ve‏ يرتبط مع ‎C. difficile toxin‏ الخاص (مثلا؛ ‎difficile toxin A‏ .© أو 8 ‎(toxin‏ على سبيل ‎(JE‏ يشير جسم مضاد ضد ‎tOXIN A‏ أو جزء رابط منه إلى جسم مضاد أو ‎ein‏ رابط ‎ale‏ يرتبط مع 160/8 . إن الأجسام المضادة أو الأجزاء الرابطة منها الموصوفة هنا قد ‎Lan‏ في أي كائن تديي؛ نوع بري و/أو طفري ¢ يتضمن» ‎Ole‏ فتئران آدميين أرانب وماعز .
‎Yo‏ عندما تكون التركيبة المولدة للمناعة الموصوفة أعلاه هي تركيبة تم إعطائها مسبقا إلى مجموعة؛ مثلا للتطعيم؛ فإن استجابة الجسم المضاد المتولدة في الكائنات يمكن استخدامها لمعادلة من نفس ‎ADL‏ ومن سلالة لا تثير إنتاج الجسم المضاد. انظرء مثلا؛ المثال 37؛ الذي يبين دراسات تتعلق بالنشاط العابرء المتولد بواسطة تركيبة مولدة للمناعة؛ بين السلالة 630 و10175 من سلالات ‎C. difficile‏ نوع بري مختلفة.
‎١‏ في أحد الجوانب يتعلق ا لاختراع بجسم مضاد أو جزء رابط منه يخص ‎-C. difficile 18‏ إن الأجسام المضادة الأحادية النسخ التي ترتبط بصفة خاصة مع 1060/8 تتضمن 65-33م؛ 60-22م؛ 80-29 و/أو يفضل» 3-25م.
‏في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع بجسم مضاد أو جزءٍ رابط منه يخغخص ‎TCA‏ من أي سلالة ‎C. difficile‏ نوع بري؛ مثل تلك الموصوفة ‎coded‏ مثلاء تعريف الترتيب رقم:
Pa ‏رابط منه يخص تركيبة مولدة للمناعة‎ oda ‏في جانب آخرء يتعلق الاختراع بجسم مضاد أو‎ .١ aie ‏موصوفة أعلاه. على سبيل المثال؛ في أحد التجسيدات؛ يخص الجسم المضاد أو جزء رابط‎ ‏تركيبة مولدة للمناعة تتضمن تعريف الترتيب رقم: ؛ أو تعريف الترتيب رقم: 7. في تجسيد آخرء‎ ‏يخص الجسم المضاد أو الجزء الرابط منه تركيبة مولدة للمناعة تتضمن تعريف الترتيب رقم: ؛ أو‎ ‏واحد على الأقل من تعريف‎ amino acid ‏حيث يرتبط بصورة متقاطعة‎ oF ‏تعريف الترتيب رقم:‎ © ‏أو اتحاد‎ (NHS (EDC formaldehyde ‏بواسطة‎ ١ ‏الترتيب رقم: ؛ أو تعريف الترتيب رقم:‎ ‏من 506 و015. في تجسيد آخرء؛ يخص الجسم المضاد أو الجزء الرابط منه تركيبة مولدة‎
AY ‏أو تعريف الترتيب رقم:‎ AE ‏للمناعة تتضمن تعريف الترتيب رقم:‎ ‏إن الأجسام المضادة أو الأجزاء الرابطة منها التي بها مناطق سلسلة ثقيلة متغيرة وسلسلة‎ ‏تحال‎ Jae (AE JAY JAY JAY J ‏خفيفة متغيرة مماثلة بنسبة على الأقل حوالي‎ ٠ ‏لمناطق‎ 79٠٠٠ ‏يفضل أكثر حوالي 794 أو الأكثر تفضيلا حوالي‎ JOA ‏يفضل حوالي‎ 79١ ‏3-25م‎ (Jandy «si 5 080-29 ‏السلسلة الثقيلة والخفيفة المتغيرة من 065-33/؛ 60-22/؛‎
TedA ‏يمكن أيضا أن ترتبط مع‎ ‏الرابط لمولد مضاد منه منطقة‎ jal) ‏في أحد التجسيدات؛ يتضمن الجسم المضاد أو‎ 315 750 ‏سلسلة ثقيلة متغيرة تتضمن ترتيب 8010 807100 مماثل على الأقل بنسبة حوالي‎ Vo
JAE JAY JAY ‏كمال كال لقال‎ TAN JAY ANT TAS A Ye LY ‏لمنطقة السلسلة الثقيلة‎ 80100 acid ‏لترتيب‎ 2٠٠١ ‏4ح أو‎ AA JAY ‏تقال‎ Jae .7١7 ‏المتغيرة من 83-25 كما هو مذكور في تعريف الترتيب رقم:‎ ‏الرابط لمولد مضاد منه منطقة سلسلة‎ gall ‏يتضمن الجسم المضاد أو‎ AT ‏في تجسيد‎ ‏فحن لان‎ Je ‏خفيفة متغيرة تتضمن ترتيب 8010 801100 مماثل على الأقل بنسبة حوالي‎ Yo
JAS JAE JAY JAY JAY ‏نكال‎ AL TAN AY TAT Ae ‏نمال‎ Ye ‏لمنطقة السلسلة الخفيفة المتغيرة من‎ amino acid ‏لترتيب‎ 2٠٠١ ‏محال 2414 أو‎ JAY ‏)م‎ ‎rad) ‏كما هو مذكور في تعريف الترتيب‎ 23-5
‎q \ —_‏ _ في جانب إضافي أيضاء يتضمن الجسم المضاد أو الجزء الرابط لمولد مضاد منه منطقة سلسلة ثقيلة متغيرة تتضمن ترتيب 8010 80100 مماثل على الأقل بنسبة حوالي 7550 15 ‎YO LY‏ بال ‎LAS‏ تال ‎AN AY‏ كل نكال لكك ‎JAY AY‏ لحك ‎Jae‏ تقال ‎AA JAY‏ 4ح أو ‎2٠٠١‏ لترتيب ‎acid‏ 80100 لمنطقة السلسلة الثقيلة © المتغيرة كما هو مذكور في تعريف الترتيب رقم: ‎(TV‏ ومنطقة سلسلة خفيفة متغيرة تتضمن ترتيب ‎amino acid‏ ممائل على الأقل بنسبة حوالي 50 فحن .اال ذال مال فال تال ااال ‎TAN‏ كمال كال ‎JAE JAY JAY JAY‏ فقال ‎AN JAY TAT‏ خخ أو لترتيب ‎amino acid‏ لمنطقة السلسلة الخفيفة المتغيرة كما هو مذكور في تعريف الترتيب رقم: 1 ‎Ya‏ في تجسيد آخرء فإن الأجسام المضادة أو الأجزاء الرابطة منها التي بها مناطق محددة للتكملة ‎(CDRs)‏ من سلاسل ثقيلة متغيرة و/أو سلاسل خفيفة متغيرة من 865-33؛ 60-22م؛ ‎ff 5 8080-9‏ « بصورة مفضلة؛ قد يرتبط أيضا 83-25 مع ‎TCA‏ توضح في جدول 4؛ ‎CDRs old‏ منطقة السلسلة الثقيلة المتغيرة من ‎A3-25‏ ‏جدول ؛: ترتيبات ‎amino acid‏ لأجل ‎CDR‏ سلسلة ثقيلة متغيرة ‎0081١ i& | A3-25‏ 610/100 ‎Eirlkshnyathfaesvkg | CDR2‏ ‎Vo‏ توضح في جدول 0 ‎CDRs laf‏ لمنطقة السلسلة الخفيفة المتغيرة من ‎A3-25‏
جدول #: ترتيبات ‎amino acid‏ لأجل ‎CDR‏ سلسلة خفيفة متغيرة ‎A3-25‏ اخفيفة 1 | ‎Rssqgslihsngntyln‏ ‏في أحد التجسيدات»؛ فإن الجسم المضاد أو جزء الارتباط منه يتضمن ترتيبات ‎amino acid‏ مناطق تحديد تكميلية لسلسة ‎(CDRs) ald‏ كما هو موضح في تعريفات الترتيب أرقام: ‎(CDR H2) 47 (CDR HI) 4١‏ و47 ‎«(CDR H3)‏ و/أو ترتيبات ‎acid‏ 801100 من ‎CDRs ©‏ سلسلة خفيفة كما هو موضح في تعريفات الترتيب أرقام: ‎(CDR ٠ (CDR L1) YA‏ )512 .¢ (3ا ‎(CDR‏ ‏في أحد التجسيدات التمثيلية؛ فإن الجسم المضاد أو جزء الارتباط منه المحدد لأجل ‎C. difficile toxin A‏ يرتبط تحديدا مع ‎epitope‏ ضمن منطقة الطرف لا من ‎TedA‏ مثلا؛ ‎epitope‏ بين ‎١*١ amino acids‏ من /100؛ طبقا لترقيم تعريف الترتيب رقم: ‎.١‏ ‎IK‏ في تجسيد مفضل؛ يحدد الجسم المضاد أو جزء الارتباط ‎aie‏ إلى ‎C. difficile toxin A‏ مرتبط تحديدا مع ‎epitope‏ ضمن منطقة الطرف ‎C‏ من ‎epitope SEs toxin A‏ بين ‎١877 amino acids‏ إلى ‎77٠١‏ من 160/8 طبقا لترقيم تعريف الترتيب رقم: ‎.١‏ إن الأمثلة تتضمن 3-25م؛ 5-33مم؛ 60-22م؛ ‎A80-29‏ ‏في تجسيد آخر أيضاء يتحدد الجسم المضاد أو جزء الارتباط منه إلى ‎Yo‏ م ‎Co difficile toxin‏ مرتبط تحديدا مع ‎epitope‏ ضمن منطقة "نقل الموضع (18051008100)" من ‎(C. difficile toxin A‏ مثلا ‎epitope‏ الذي يتضمن بصورة مفضلة المتخلفات ‎١١48-4050‏ من ‎(TCdA‏ طبقا لترقيم تعريف الترتيب رقم: ‎epitope Jiao)‏ بين ‎١١١7-1594 amino acids‏ من ‎(TedA‏ طبقا لترقيم تعريف الترتيب رقم: ‎.١‏
اس في جانب آخرء يتعلق الاختراع بجسم مضاد أو جزء الارتباط محدد لأجل ‎LC. difficile 8‏ على سبيل المثال؛ قد يتحدد الجسم المضاد أو جزء الارتباط منه لأجل 8 من أي سلالة ‎difficile‏ .© من النوع البري؛ ‎Jie‏ تلك الموصوفة أعلاه؛ ‎Die‏ مع تعريف الترتيب رقم: 7. في جانب آخرء يتعلق الاختراع بجسم مضاد أو جزء الارتباط منه محدد لتركيبة © مولدة للمناعة موصوفة أعلاه. على سبيل المثال؛ في أحد التجسيدات؛ يتحدد الجسم المضاد أو جزء الارتباط منه لتركيبة مولدة للمناعة متضمنة تعريف الترتيب رقم: 6 أو تعريف الترتيب رقم:
A
‏في تجسيد آخرء يتحدد الجسم المضاد أو جزءٍ الارتباط منه لتركيبة مولدة للمناعة متضمنة‎ amnio acid ‏حيث يرتبط بصورة متقاطعة‎ (A ‏تعريف الترتيب رقم: 6 أو تعريف الترتيب رقم:‎ formaldehyde ‏بواسطة‎ A ‏واحد على الأقل من تعريف الترتيب رقم: 7 أو تعريف الترتيب رقم:‎ ٠ ‏في تجسيد آخرء يتحدد الجسم المضاد أو جزءٍ‎ NHS ;EDC ‏أو اتحاد من‎ (NHS (EDC
A ‏تعريف الترتيب رقم:‎ AT ‏الارتباط منه لتركيبة مولدة للمناعة متضمنة تعريف الترتيب رقم:‎ ‏إن الأجسام المضادة أحادية النسخ التي ترتبط تحديدا مع 1008 تتضمن أجسام مضادة‎ ‏منتجة بواسطة نسخ 82-31؛ 85-40 870-2؛ 86-30؛ 89-30؛ 859-3؛ 560-2؛‎ ‎Vo‏ 9556-6؛ و/أو؛ يفضل؛ نسخ 88-26 الموصوفة هنا. إن الأجسام المضادة أو أجزاء الارتباط منها التي يمكن أيضا أن ترتبط مع 1008 تتضمن تلك الأجسام التي لها مناطق سلسلة ‎ALE‏ متغيرة وسلسلة خفيفة متغيرة لها نسبة تماثل على الأقل حوالي ‎(JAE JAY JAY JAY JA‏ دحال ‎JAY AAT‏ يفضل حوالي ‎JAN‏ ‏يفضل أكثر حوالي 799 أو الأكثر تفضيلا حوالي ‎7٠٠0‏ بالنسبة لمناطق سلسلة ‎ALE‏ وخفيفة ‎٠‏ متغيرة من 82-31؛ 85-40 870-2؛ 86-30؛ ‎¢B59-3 ¢B9-30‏ 8560-2؛ ‎«B56-6‏ ‏يفضل 88-26؛ 859-3؛ و/أو 89-30. في أحد التجسيدات؛ فإن الجسم المضاد أو جزء ارتباط ‎alse‏ المضاد منه يتضمن منطقة سلسلة ثقيلة متغيرة تتضمن ترتيب ‎amino acid‏ له ‎Ja‏ بنسبة على الأقل حوالي 750 15 أل ‎INO‏ نمال فال ‎JAY JAY JAY JA JAS TAN JAY JAY‏ لك ‎tVoy‏
‎JAY (AT Jao‏ محال 4 أو ‎2٠٠١‏ بالنسبة لترتيب ‎amino acid‏ لمنطقة سلسلة ثقيلة متغيرة من 83-25 كما هو مذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: 49 .
‏في أحد التجسيدات؛ فإن الجسم المضاد أو جزء ارتباط ‎alse‏ المضاد منه يتضمن منطقة
‏سلسلة ثقيلة متغيرة تتضمن ترتيب ‎amino acid‏ له تماثئل بنسبة على الأقل حوالي 750 15
‏5 أل ‎INO‏ نمال فال ‎JAY JAY JAY JA JAS TAN JAY JAY‏ لك
‎JAY (AT Jao‏ محال 4 أو ‎2٠٠١‏ بالنسبة لترتيب ‎amino acid‏ لمنطقة سلسلة ثقيلة متغيرة من 83-25 كما هو مذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: 60.
‏في أحد التجسيدات؛ فإن الجسم المضاد أو جزء ارتباط مولد المضاد منه يتضمن منطقة
‏سلسلة ثقيلة متغيرة تتضمن ترتيب ‎amino acid‏ له ‎Ja‏ بنسبة على الأقل حوالي 750 15
‎٠٠١‏ أل ‎INO‏ نمال فال ‎JAY JAY JAY JA JAS TAN JAY JAY‏ لك
‎JAY (AT Jao‏ محال 4 أو ‎2٠٠١‏ بالنسبة لترتيب ‎amino acid‏ لمنطقة سلسلة ثقيلة متغيرة من 83-25 كما هو مذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: ‎YY‏
‏في تجسيد ‎«aT‏ فإن الجسم المضاد أو جزءٍ ارتباط مولد المضاد منه يتضمن منطقة
‏سلسلة خفيفة متغيرة تتضمن ترتيب ‎acid‏ 801100 له تماثل بنسبة على الأقل حوالي ‎Je‏ 755
‎Yo‏ اال ‎INO‏ نمال ‎JAY JAY JAY JA JAS TAN TAY AT JAS‏ لك
‏دخال ‎AA JAY (AT‏ 4 أو ‎2٠٠١‏ بالنسبة لترتيب ‎amino acid‏ لمنطقة سلسلة خفيفة متغيرة من 83-25 كما هو مذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: 00
‏في تجسيد ‎«aT‏ فإن الجسم المضاد أو جزءٍ ارتباط مولد المضاد منه يتضمن منطقة
‏سلسلة خفيفة متغيرة تتضمن ترتيب ‎acid‏ 807100 له ‎ila‏ بنسبة على الأقل حوالي ‎Je‏ 755
‎Yo‏ أل ‎INO‏ نمال فال ‎JAY JAY JAY JA JAS TAN JAY JAY‏ لك
‏دخال ‎AA JAY (AT‏ 4 أو ‎2٠٠١‏ بالنسبة لترتيب ‎amino acid‏ لمنطقة سلسلة خفيفة متغيرة من 83-25 كما هو مذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: 17.
‏في تجسيد ‎«aT‏ فإن الجسم المضاد أو جزءٍ ارتباط مولد المضاد منه يتضمن منطقة
‏سلسلة خفيفة متغيرة تتضمن ترتيب ‎acid‏ 801100 له تماثل بنسبة على الأقل حوالي ‎Je‏ 755
اج ‎q‏ _ ‎JAS Ae Yo IY‏ تال ‎AY‏ مهال ‎JAY‏ قال ‎JAY LAY JAY‏ لكل مدقأل تقال ‎(JAA LAY‏ 4 أو ‎2٠٠١‏ بالنسبة لترتيب ‎amino acid‏ لمنطقة سلسلة خفيفة متغيرة من 83-25 كما هو مذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: ‎YY‏ ‏إن ترتيب ‎acid‏ 800000 للسلسلة الثقيلة المتغيرة من الجسم المضاد المتعادل من ه ‎MAD) C. difficile TedB‏ 88-26) يكون مذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: 49. انظر جدول 5 7-ل). جدول 5 7-ل): ترتيبات ‎amino acid‏ لسلسة ثقيلة متغيرة النسخة | المنطقة ترتيب ‎amino acid‏ تعرييف الترتيب رقم: ‎MGWSCIILFLVATATGVHS | 14. peptide | 88-6‏ ةا سلسلة ثقيلة متغيرة | ‎QVQLQQPGAELVKPGA‏ £9 ‎PVKLSCKAS GYSFTSYWMN WVKQRPGRGLEWIG‏ ‎KDKATLTVDKSSSTAYIQLSSL RIDPSNSEIYYNQKF‏ ‎TSEDSAVYYCAS GHYGSIFAY WGQGTTLTVSS‏ ‎GYSFTSYWMN CDRI‏ ‎RIDPSNSEIYYNQKF CDR2‏ ‎GHYGSIFAY CDR3‏ منطقة ثابقتة 0 ‎AKTTPPSVYPLAPGNSK‏ ‎(19G1)‏
إن ترتيب ‎acid‏ 60 للسلسلة الخفيفة المتغيرة من الجسم المضاد المتعادل من ‎mAb) ©. difficile 8‏ 88-26) يكون مذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: 58. انظر جدول © 7-(ب). © جدول 5 7-(ب): ترتيبات ‎amino acid‏ لسلسة خفيفة ‎(K)‏ متغيرة النسخة | المنطقة ‎١‏ ترتيب ‎amino acid‏ تعرييف الترتيب رقم: ‎peptide B8-‏ 84 ‎MRFQVQVLGLLLLWISGAQCD‏ ‏26 مفرد سلسلة ا ‎VQITQSPSYLAASPGETITINC‏ ‎“oe‏ ب ‎SGSTLQS GIPS WYQEKPGKTNKLLLY RASKSISKYLA 1‏ تغيرة ‎RFSGSRSGTDFTLIISSLEPEDSAMYYC QQHNEYPLT‏ ‎FGAGTKLELKRADAAPTVSIFPPSSEEFQ‏ ‎RASKSISKYLA| CDRI‏ ‎SGSTLQS| CDR2‏ ‎QQHNEYPLT| CDR3‏ في أحد التجسيدات؛ يتضمن الجسم المضاد أو جزء الارتباط منه ترتيبات ‎amino acid‏ من ‎ALLL) CDRs‏ الخفيفة كما هو موضح في تعريفات الترتيب أرقام: )0 ‎HI)‏ 008) 7ه ‎«(CDR H3) oF 5 (CDR H2)‏ و/أو ترتيبات ‎amino acid‏ من ‎CDRs‏ السلسلة الخفيفة كما ‎voy‏
—qy— od (CDR L2) oA «(CDR L1) ov ‏هو موضح في تعريفات الترتيب أرقام:‎ .(CDR L3) ‏للسلسلة الثقيلة المتغيرة من الجسم المضاد المتعادل من‎ amino acid ‏إن ترتيب‎ ‏انظر‎ Te ‏يكون مذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم:‎ )859-3 mAD) C. difficile TcdB ‏جدول + 7-ل().‎ © ‏متغيرة‎ (IK) ‏لسلسة ثقيلة‎ amino acid ‏جدول 76 7-لا): ترتيبات‎ ‏تعرييف‎ amino acid ‏النسخة | المنطقة ترتيب‎
TT
Te QVQLQQPGAELVKPGASVKLS | ‏سلسلة ثقيلة متغيرة‎
CKAS GYTFTSYWMH WVKQRPGQGLEWIG
VINPSNGRSTYSEKF KTTATVTVDKSSSTAYMQL
SILTSEDSAVYYCAR AYYSTSYYAMDY WGQGTSVTVSS
‏61لا‎
منطقة ثابتة 10 ‎AKTTPPSVYPLAPGNSK‏ ‎(IgGl)‏ ‏إن ترتيب ‎amino acid‏ للسلسلة الخفيفة المتغيرة من الجسم المضاد المتعادل من ‎difficile‏ .© ‎(B59-3 mAb) TedB‏ يكون مذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: 176. انظر جدول ‎CYT‏ ‏)=( ‏0 في أحد التجسيدات؛ يتضمن الجسم المضاد أو جزء الارتباط منه ترتيبات ‎amino acid‏ من السلسلة الثقيلة كما هو موضح في تعريفات الترتيب أرقام: ‎TF (CDR HI) TY‏ ‎«(CDR H3) 4 5 (CDR H2)‏ و/أو ترتيبات ‎amino acid‏ من ‎CDRs‏ السلسلة الخفيفة كما هو موضح في تعريفات الترتيب أرقام: ‎(CDR L3) ٠١و (CDR L2) 14 (CDR L1) TA‏ إن ترتيب ‎amino acid‏ للسلسلة الثقيلة المتغيرة من الجسم المضاد المتعادل من ‎mAb) ©. difficile 1608 ٠‏ 89-30) يكون مذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: ‎.7١‏ انظر جدول ‎(YY‏ ‏جدول 7١7-ل):‏ ترتيبات ‎amino acid‏ لسلسة ثقيلة متغيرة النسخة | المنطقة ترتيب ‎amino acid‏ تعرييف الترتيب رقم: ‎MGWSCIILFLVATATGVHS | 1 peptide | 89-0‏ سلسلة ثتقيلة متغيرة | ‎QVQLQQPGAEVVKPGAPVKLS‏ ١ل‏ ‎CKAS GYPFTNYWMN WVKQRPGRGLEWIG‏ ‎RIDPSNSEIYYNQKF‏ ‎KDKATLTVDKSSSTAYIQLSSLTSEDSAVYY‏ ‎£Vo‏
‎CAS GHYGSIFAY WGQGTTLTVSS‏ و ‎GYPFTNYWMN 0081‏ ‎RIDPSNSEIYYNQKF CDR?‏ ‎GHYGSIFAY CDR3‏ منطقة 18 ‎va a‏ ‎AKTTPPSVYPLAPGNSK‏ ‎(19G1)‏ ‏إن ترتيب ‎acid‏ 60 للسلسلة الخفيفة المتغيرة من الجسم المضاد المتعادل من ‎mAb) ©. difficile TcdB‏ 89-30) يكون مذكور مسبقا في تعريف الترتيب رقم: 77. انظر جدول ‎(YY‏ ‏جدول ١7-(ب):‏ ترتيبات ‎amino acid‏ لسلسة خفيفة ‎(K)‏ متغيرة النسخة | المنطقة ترتيب ‎al amino acid‏ الترتيب رقم: ‎peptide | 89-0‏ مفرد | ‎MRFQVQVLGLLLLWISGAQCD‏ ‏سلسلة خفيفة | ‎VQITQSPSYLAASPGETITING‏ 2 تغيرة ‎RASKSISKYLA WYQEKPGKTNKLLIY re‏ ‎SGSTLQS GIPS‏ ‎RFSGSRSGTDFTLIISSLEPEDSAMYYC‏ ‎QQHNEYPLT‏ ‎FGAGTKLELKRADAAPTVSIFPPSSEEFQ‏ ‎RASKSISKYLA CDR]‏ اال
ا ‎-١‏ ‎SGSTLQS CDR?‏ ‎QQHNEYPLT CDR3‏ في أحد التجسيدات؛ يتضمن الجسم المضاد أو جزء الارتباط منه ترتيبات ‎amino acid‏ من ‎CDRs‏ السلسلة الثقيلة كما هو موضح في تعريفات الترتيب أرقام: 7 ‎VE (CDR HI)‏ ‎«(CDR H3) vo 5 (CDR H2)‏ و/أو ترتيبات ‎amino acid‏ من ‎CDRs‏ السلسلة الخفيفة كما هو موضح في تعريفات الترتيب أرقام: ‎(CDR L3) AY 5 (CDR L2) A+ (CDR LI) V4‏ 0 في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع بجسم مضاد أو جزء ارتباط منه محدد لأجل ‎difficile 8‏ .© من النوع البري من أي سلالة ‎(C. difficile‏ مثل تلك الموصوفة أعلاه؛ ‎lie‏ لتعريف الترتيب رقم: ؟. في جانب آخرء يتعلق الاختراع بجسم مضاد أو جزء ارتباط منه محدد لتركيبة مولدة للمناعة موصوفة أعلاه. على سبيل المثال» في أحد التجسيدات؛ يتحدد الجسم ‎alias‏ أو جزء الارتباط منه لتركيبة مولدة للمناعة متضمنة تعريف الترتيب رقم: 1 أو تعريف ‎Ve‏ الترتيب رقم ‎A‏ في تجسيد ‎Al‏ ¢ يتحدد الجسم مضاد أو جزء الارتباط منه لتركيبة مولدة للمناعة متضمنة تعريف الترتيب رقم :1 أو تعريف الترتيب رقم ‎Ae‏ ¢ حيث يرتبط بصورة متقاطعة ‎amino‏ ‏0 واحد على الأقل من تعريف الترتيب رقم: 6 أو تعريف الترتيب رقم: 8 بواسطة ‎(NHS (EDC (formaldehyde‏ أو اتحاد من ‎EDC‏ ر15الا.
يمكن أيضا أن ترتبط مع 71008 الأجسام ‎salad‏ أو أجزاء الارتباط منها التي لها مناطق ‎Vo‏ سلسلة ثقيلة متغيرة وسلسلة خفيفة متغيرة لها تماثل بنسبة على الأقل حوالي ‎JAY 41 AA‏ ‎(JA JAY‏ دقال 243 ‎JAY‏ يفضل حوالي ‎JAA‏ يفضل أكثر حوالي 7994 أو الأكثر تفضيلا حوالي ‎77٠٠١‏ بالنسبة إلى مناطق السلسلة الثقيلة والخفيفة المتغيرة من 82-31؛ -85
0» 870-2؛ 86-30؛ ‎¢B9-30‏ 859-3؛ 560-2؛ 556-6؛ و/أو؛ ‎(Jas‏ 88-26. في أحد التجسيدات؛ يتضمن الجسم مضاد أو ‎sia‏ ارتباط مولد المضاد منه منطقة سلسلة ‎٠‏ ثقيلة متغيرة متضمنة ترتيب ‎amino acid‏ بنسبة ‎Jia‏ على الأقل حوالي ‎AT‏ فحن ‎JY‏ ‎LAY Yo‏ مئال ‎JAY TAN TAY AT‏ كال ‎JAY JAY JAY‏ قال مك
-١.-
‎JAY Aan‏ محال 4 أو ‎2٠٠١‏ بالنسبة لترتيب ‎amino acid‏ لمنطقة سلسلة ثقيلة متغيرة
‏من 88-26 (تعريف الترتيب رقم: 89( في تجسيد ‎«HAT‏ يتضمن الجسم مضاد أو جزءٍ ارتباط ‎alge‏ المضاد منه منطقة سلسلة خفيفة متغيرة متضمنة ترتيب ‎amino acid‏ بنسبة تمائل على الأقل حوالي ‎AT‏ فحن ‎JN‏ ‎Yeo‏ يمال ‎AA TAN TAY AY JAS‏ قال ‎JA JAE JAY JAY JAY‏ ‎AY Zan‏ محال 214 أو ‎72٠٠١‏ بالنسبة لترتيب ‎amino acid‏ لمنطقة سلسلة خفيفة متغيرة
‏من 88-26 (تعريف الترتيب رقم: 00( في جانب إضافي أيضاء يتضمن الجسم مضاد أو ‎da‏ ارتباط ‎alge‏ المضاد منه منطقة سلسلة ثقيلة متغيرة متضمنة ترتيب ‎amino acid‏ بنسبة ‎ils‏ على الأقل حوالي 750 ‎Jie‏
‎JAE JAY JAY JAY ‏بال كال كال‎ AY ‏مال مدال تمل‎ Ye ‏يلال‎ ٠ ‏لمنطقة سلسلة ثقيلة‎ amino acid ‏بالنسبة لترتيب‎ 2٠٠١ ‏محال 4 أو‎ JAY (AT Jao ‏متغيرة من 88-26 (تعريف الترتيب رقم: 49)؛ ومنطقة سلسلة خفيفة متغيرة متضمنة ترتيب‎ ‏على الأقل حوالي ل فال .اال فال بال مال تال‎ Jills ‏بنسبة‎ amino acid ‏خخ أو‎ AN JAY TAT ‏فقال‎ JAE JAY JAY JAY ‏كمال كال‎ TAN ‏ااال‎
‎2٠000 ١‏ بالنسبة لترتيب ‎amino acid‏ لمنطقة سلسلة خفيفة متغيرة من 88-26 (تعريف الترتيب رقم: 00(
‏في تجسيد آخرء يمكن أيضا أن ترتبط مع 1608 الأجسام المضادة أو أجزاء الارتباط منها التي لها ‎CDRs‏ سلاسل ثقيلة متغيرة و/أو سلاسل خفيفة متغيرة من 82-31؛ 85-40 870-2؛ 86-30؛ 89-30؛ 859-3؛ 860-2؛ 856-6؛ و/أوء ‎«Juni;‏ 88-26.
‎amino acid ‏في أحد التجسيدات؛ يتضمن الجسم مضاد أو جزء الارتباط منه ترتيبات‎ Y. ‏من‎ amino acid ‏من 88-26 و/أو ترتيبات‎ (CDRs) ‏مناطق التحديد التكميلية للسلسلة التقيلة‎ .88-26 ‏السلسلة الخفيفة من‎ 05
‏في تجسيد مفضل؛ يتحدد الجسم المضاد أو جزء الارتباط منه لأجل ‎C. difficile toxin‏ 8 المرتبط تحديدا مع ‎epitope‏ ضمن منطقة الطرف لا من ‎epitope Sk toxin B‏ بين
‎٠ \ —‏ \ — ‎١-١ amino acids‏ من ‎(TdB‏ طبقا لترقيم تعريف الترتيب رقم: ؟. إن الأمثلة تتضمن 82-1؛ 85-40؛ ‎¢B8-26‏ 870-2؛ 86-30؛ و89-30. في تجسيد تمثيلي؛ يتحدد الجسم المضاد أو جزء الارتباط منه لأجل ‎difficile toxin‏ .© 8 المرتبط تحديدا مع ‎epitope‏ ضمن منطقة الطرف ‎C‏ من ‎epitope Sk toxin B‏ بين ‎YAYY amino acids ©‏ إلى ‎٠١‏ من 1008؛ طبقا لترقيم تعريف الترتيب رقم: ؟. في تجسيد آخر أيضاء فإن الجسم المضاد أو الجزء الرابط منه الذي يفص ‎C. difficile toxin B‏ يرتبط بصفة خاصة مع 60110086 في منطقة "الانتقال ‎"(translocation)‏ ‏من 8 ‎difficile toxin‏ .؛ ‎epitope Uk‏ يتضمن بدرجة مفضلة المتخلفات ‎١١78-4057‏ من ‎(TedB‏ طبقا للترقيم من تعريف الترتيب رقم: ¥¢ مثل ‎amino acids (epitope‏ 1594- ‎ V.‏ 1877 من 1008. تتضمن الأمثلة 859-3؛ ‎¢B60-2‏ و856-6. اتحادات الأجسام المضادة ‎(Combinations of antibodies)‏ يمكن إعطاء الجسم المضاد ضد 10*10 أو جزء رابط منه في اتحاد مع أجسام مضادة ‎difficile toxin ac‏ .© أخرى ‎Sis)‏ أجسام مضادة أحادية النسخ ‎gamma-globulin «sal‏ عديد النسخ) أو جزء رابط من ذلك. تتضمن اتحادات يمكن استخدامها جسم مضاد ضد ‎toxin A‏ ‎VO‏ أو جزء رابط ‎aie‏ وجسم مضاد ضد 8 ‎tOXIN‏ أو جزء رابط منه. في تجسيد ‎HAT‏ ¢ يتضمن الاتحاد جسم مضاد ضد ‎toxin A‏ أو جزء رابط منه وجسم مضاد ضد ‎toxin A‏ آخر أو جزء رابط منه. بصورة مفضلة؛ يتضمن الاتحاد جسم مضاد أحادي النسخ ضد ‎A‏ 0 معادل أو جزءٍ رابط منه وجسم مضاد أحادي النسخ ضد ‎toxin A‏ معادل آخر أو جزء رابط منه. مما يثير الدهشة؛ اكتشف المخترعون أن ذلك الاتحاد ‎Yo‏ ينتج تأثير تعاوني في معادلة السمية الخلوية من ‎toxin A‏ على سبيل ‎(JE‏ يتضمن الاتحاد اتحاد اثنين على الأقل من الأجسام المضادة الأحادية النسخ ضد ‎toxin A‏ المعادلة التالية: -3/ 5؛ ‎¢tAG0-22 ¢A65-33‏ و880-29. بصورة مفضلة أكثرء يتضمن الاتحاد جسم مضاد 83-5 وواحد على الأقل من الأجسام المضادة الأحادية النسخ ضد ‎toxin A‏ المعادلة التالية:
ا ‎١‏ ‏865-3؛ ‎¢A60-22‏ و880-29. الأكثر تفضيلا؛ يتضمن الاتحاد كل الأجسام المضادة الأربعة: 83-25؛ 265-33؛ 260-22؛ 5 ‎A80-29‏ ‏في تجسيد إضافي؛ يتضمن الاتحاد جسم مضاد ضد 8 10*10 أو جزء رابط منه وجسم ‎alas‏ ضد 8 ‎toxin‏ آخر أو جزء رابط منه. بصورة مفضلة؛ يتضمن الاتحاد جسم مضاد أحادي ‎o‏ النسخ ضد 8 0 معادل أو جزءٍ رابط منه وجسم مضاد أحادي النسخ ضد ‎toxin 8‏ معادل آخر أو جزء رابط منه. مما يثير الدهشة؛ اكتشف المخترعون أن ذلك الاتحاد ينتج تأثير تعاوني في معادلة السمية الخلوية من 8 10710. على سبيل ‎(JE‏ يتضمن الاتحاد اتحاد اثنين على الأقل من الأجسام المضادة الأحادية النسخ ‎toxin 8 aca‏ المعادلة التالية: -88 6 89-0 و859-3. الأكثر ‎Spams‏ يتضمن الاتحاد كل الأجسام المضادة الثلاثة: ‎٠‏ 98-26؛ 89-30 و859-3. في تجسيد آخر أيضاء يتضمن الاتحاد جسم ‎aca alias‏ 8 10*10 أو جزء رابط منه وجسم مضاد ضد 8 ‎AT toxin‏ أو جزء رابط منه. كما هو مذكور مسبقاء اكتشف المخترعون أن اتحاد اثنين على الأقل من الأجسام المضادة الأحادية النسخ المعادلة يمكن أن يظهر تأثير تعاوني غير متوقع في المعادلة الخاصة لأجل ‎A‏ صللاما و8 ‎toxin‏
‎Vo‏ في تجسيد آخرء يمكن صياغة عوامل الاختراع كخليط؛ أو قد تتصل كيميائيا أو جينيا بتقنيات يدركها الفن وبذلك تنتج أجسام مضادة مرتبطة تساهميا (أو أجزاء جسم مضاد مرتبطة تساهميا)؛ لها كل من خواص ربط ضد ‎toxin A‏ وضد 8 10«010. ‎Say‏ إرشاد الصياغة المتحدة بتحديد واحد أو أكثر من المعايير ‎Jie‏ الانجذاب»؛ الشراهة؛ أو الكفاية الحيوية للعامل وحده أو في اتحاد مع عامل آخر.
‎Y.‏ يفضل أن تكون تلك العلاجات الاتحادية لها نشاط علاجي إضافي و/أو تعاوني؛ مثلا؛ في تثبيط؛ منع (مثلا؛ انتكاس)؛ و/أو معالجة أمراض أو اضطرابات متعلقة ببكتريا ‎.C. difficile‏ إن إعطاء علاجات الاتحاد تلك يمكن أن يقلل جرعة العامل العلاجي ‎Ole)‏ خليط جسم مضاد أو جزء جسم مضاد؛ أو جسم مضاد أو جزء جسم مضاد ثنائي الخصوصية مندمج رابطة مقاطعة أو جينيا) المطلوبة لتحقيق التأثير المطلوب.
‎٠ —‏ \ — من المعروف أن أيا من التركيبات المخترعة؛ مثلاء جسم مضاد ضد ‎A‏ 10*10 و/أو ضد ‎toxin 8‏ أو جزء رابط منه؛ يمكن أن تتحد بنسب أو كميات مختلفة من أجل التأثير العلاجي. على سبيل المثال؛ يتواجد جسم مضاد ضد ‎toxin A‏ وضد 8 ‎toxin‏ أو جزء رابط خاص منه في تركيبة عند نسبة في نطاق من ‎Yer)‏ إلى ‎BA ٠‏ في تجسيد ‎AS‏ يتواجد الجسم © المضاد ضد ‎toxin A‏ وضد 8 ‎tOXIN‏ أو جزء رابط خاص منه في تركيبة عند نسبة في نطاق من ‎Yeon , ١‏ إلى ‎٠:٠‏ , ب لابح في جانب آخر؛ يتعلق الاختراع بطريقة لإنتاج جسم مضاد معادل ضد ‎LC. difficile TcdA‏ تتضمن الطريقة إعطاء تركيبة مولدة للمناعة حسب الوصف أعلاه إلى كاثن تديي؛ واسترجاع الجسم المضاد من الكائن الثديبي. في تجسيد ‎(Jade‏ تتضمن التركيبة ‎٠‏ المولدة للمناعة ‎difficile TedA‏ .© طفري له تعريف الترتيب رقم: ‎of‏ حيث يرتبط كيميائيا بصورة متقاطعة ‎acid‏ 800100 واحد على الأقل من 1060/8 ‎C. difficile‏ الطفري؛ يفضل بواسطة ‎formaldehyde‏ أو ‎carbodiimide‏ الام 800100010 الا3-00061)-3- الا1-810. تتضمن أجسام مضادة معادلة ضد 160/5 تمثيلية يمكن إنتاجها 65-33؛ 60-22م؛ 80-29 و/أو ‎A3-25‏ ‎Vo‏ في جانب آخر أيضاء يتعلق الاختراع بطريقة لإنتاج جسم مضاد معادل ضد ‎LC. difficile TcdB‏ تتضمن الطريقة إعطاء تركيبة ‎sal ge‏ للمناعة حسب الوصف أعلاه إلى كاثن تديي؛ واسترجاع الجسم المضاد من الكائن الثديبي. في تجسيد ‎(Jade‏ تتضمن التركيبة المولدة للمناعة 10608 ‎C. difficile‏ طفري له تعريف الترتيب رقم: 1 حيث يرتبط كيميائيا بصورة متقاطعة ‎acid‏ 800100 واحد على الأقل من 1008 ‎C. difficile‏ الطفري؛ يفضل بواسطة ‎formaldehyde ٠٠‏ أو ‎carbodiimide‏ الام 800100010 الا3-00061)-3- الا1-810. تتضمن أجسام مضادة معادلة ضد 1608 تمثيلية ‎(Sa‏ إنتاجها 82-31؛ 85-40؛ 870-2؛ 586-30؛ 89-0؛ 859-3؛ 860-2؛ 556-6؛ و/أو 88-26. المستحضرات ‎(Formulations)‏
-١.8-
C. difficile ‏قد توجد التركيبات من الاختراع الحالي (مثل؛ التركيبات المتضمنة طفرة‎ ‏تركيبات مولدة للمناعة؛ أجسام مضادة و/أو جسم مضاد يربط أجزاء منها الموصوفة هنا)‎ ctoxin ‏في تشكيلة من الأشكال. تتضمن؛ على سبيل المثال؛ أشكال جرعة شبه صلبة وصلبة؛ تحاميل؛‎ ‏للانصهار)؛ مشتتات أو‎ ALE ‏محاليل للحقن وغير‎ SE) ‏محاليل سائلة‎ Jie ‏أشكال سائلة؛‎ ‏مثل؛ شكل مسحوق مجفد؛ شكل مجفف بالتجميد؛‎ chine ‏و/أو شكل‎ liposomes ‏معلقات»‎ o ‏و/أو شكل مجفف- رغوي. بالنسبة للتحاميل» تتضمن المواد الرابطة والمواد‎ (Gilly ‏شكل مجفف‎ ‏يمكن أن تتشكل هذه‎ triglycerides ‏أو‎ polyalkylene glycols ‏الحاملة؛. على سبيل المثال»‎ ‏التحاميل من خلطات تحتوي على تركيبات مبتكرة. في تجسيد تمثيلي؛ تكون التركيبة في شكل‎
OAT ‏يكون مناسب للحل فيء أو التعليق فيء المواد الناقلة السائلة قبل الحقن. في تجسيد تمثيلي‎ «polylactide ‏أو جسيمات دقيقة؛ مثل‎ liposomes ‏تكون التركيبة مستحلبة أو مكبسلة في‎ ٠ .copolymer ‏أى‎ (polyglycolide ‏في تجسيد مفضل؛ تجفد التركيبة ويعاد تشكيلها بصورة غير منظمة قبل الاستخدام.‎ ‏في أحد التجسيدات؛ يتعلق الاختراع الحالي بتركيبات دوائية تتضمن أي من التركيبات‎ ‏.0؛ تركيبات مولدة للمناعة؛ أجسام‎ difficile toxin ‏الموصوفة هنا (مثل؛ تركيبات تتضمن طفرة‎ ‏مضادة و/أو جسم مضاد يربط أجزاء منها الموصوفة هنا)؛ تصاغ معا مع مادة حاملة مقبولة‎ ١ ‏تتضمن‎ "(Pharmaceutically acceptable carriers) ‏دوائيا. إن 'مواد حاملة مقبولة دوائيا‎ ‏أي مذيبات؛ وسط تشتيت؛ مواد تثبيت؛ مواد تخفيف؛ و/أو مثبتات أس هيدروجيني التي تكون‎ ‏مناسبة فسيولوجيا.‎ ‏نشاء‎ 018001101 «sorbitol ‏متثل‎ ccarbohydrates ‏إن مواد تثبيت تمثيلية تتضمن‎ ‏خاملة؛ مقل‎ proteins «glucose ‏و/أو‎ Jactose trehalose (sucrose (dextran ٠
Jie polysaccharides ‏جزيئات 5508 أخرى تتأيض ببطء؛ مثتل‎ Jf 5¢casein if salbumin ‏(مثل‎ copolymers ‏و‎ polyglycolic acids (polylactic acids (chitosan amino ‏إلخ)‎ «cellulose «agarose «latex ‏وظيفية‎ SEPHAROSE™ agarose
Jie) ‏وتراكمات دهنية‎ amino acid copolymers (polymeric amino acids acids
-١.- ‏إضافة لذلك؛ قد يتم توظيف هذه المواد الحاملة كعوامل حث مناعي‎ (liposomes ‏قطرات زيت أو‎ ‏مواد مساعدة).‎ Di) 7( trehalose ‏إن كميات مفضلة من‎ trehalose ‏بصورة مفضلة؛ تتضمن التركيبة‎ 7٠١ ‏إلى كحد أقصى من حوالي‎ 74 FAY IY 71 ‏بالوزن) تتضمن كحد أدنى من حوالي‎ ‏يمكن أن تتحد أي قيمة دنيا مع أي قيمة قصوى لتحديد المعدل‎ Zo ‏أو‎ AT YA JS 0 ‏يفضل أكثرء‎ trehalose 75 ‏المناسب. في أحد التجسيدات؛ تتضمن التركيبة حوالي ؟77-‎ ‏ملليلتر.‎ v0 ‏على سبيل المثال؛ لكل جرعة‎ trehalose 5 ‏إن أمثلة على مواد تخفيف مناسبة تتضمن ماء مقطر؛ محلول ملحي؛ محلول ملحي مثبت‎ ‏محاليل‎ ¢(ethanol ‏(مثل‎ alcohol glycerol ‏فسيولوجي»‎ phosphate - ‏للأس الهيدروجيني‎ ‏و/أو مادة مسوغة للتجفيد.‎ (Hanks ‏محاليل ملح متوازن‎ dextrose ‏محلول‎ Ringer ٠ phosphate ‏إن مثبتات الأس الهيدروجيني التمثيلية تتضمن مثبتات أس هيدروجيني‎ sodium ‏(مثل‎ acetate ¢(sodium phosphate (potassium phosphate Ji) «carbonate ¢histidine ¢glycine ¢(sodium succinate (fis) succinate «(acetate ammonium Ji) bicarbonate ‏و/أو‎ «Tris (tris(hydroxymethyl) aminomethane) ‏إن كميات مفضلة‎ tris ‏بصورة مفضلة؛ تتضمن التركيبة مثتبت أس هيدروجيني‎ (bicarbonate Vo ‏مللي جزيئي جرامي؛ © مللي جزيئي‎ ١ ‏تتضمن كحد أدنى حوالي‎ tris ‏من مثبت أس هيدروجيني‎
Gr ‏جرامي؛ 4 مللي جزيئي جرامي؛ + مللي‎ Fn ‏مللي‎ ١ ‏مللي جزيني جرامي؛‎ ١ ‏جرامي؛‎ ‏مللي جزيئي‎ ٠٠ ‏مللي جزيئي جرامي؛‎ ٠٠١ ‏جزيئي جرامي إلى كحد أقصى حوالي‎ ٠١ ‏جرامي؛‎ ‏مللي‎ ١١ ‏جزيني جرامي؛‎ (Ae VA ‏مللي جزيئي جرامي؛‎ ١١ ‏مللي جزيني جرامي؛‎ ٠١ ‏جرامي؛‎ ‎١١ ‏مللي جزيئي جرامي»‎ VE ‏مللي جزيئي جرامي؛‎ ١١5 ‏مللي جزيئي جرامي؛‎ ١١ ‏جزيئي جرامي؛‎ ٠ ‏مللي جزيئي جرامي. يمكن أن تتحد أي قيمة‎ ١١ ‏مللي جزيئي جرامي أو‎ ١١ ‏مللي جزيئي جرامي؛‎
A ‏دنيا مع أي قيمة قصوى لتحديد المعدل المناسب. في أحد التجسيدات؛ تتضمن التركيبة حوالي‎ ٠١ AS ‏يفضل‎ tris ‏مللي جزيئي جرامي مثبت أس هيدروجيني‎ ١١ ‏مللي جزيئي جرامي إلى‎ ‏لكل جرعة 0+ ملليلتر.‎ eB ‏مللي جزيئي جرامي مثبت أس هيدروجيني 015؛ على سبيل‎ ‏فلا‎
١ ‏في تجسيد مفضل آخر؛ تتضمن التركيبة مثبت أس هيدروجيني ©0154010. إن كميات‎ * ‏مللي جزيثي جرامي؛‎ ١ ‏تتضمن كحد أدنى حوالي‎ histidine ‏مفضلة من مثبت أس هيدروجيني‎ ١ ‏مللي جزيئي جرامي؛ 7 مللي جزيئي جرامي؛ 4 مللي جزيئي جرامي؛‎ ١ ‏مللي جزيئي جرامي؛‎ ‏مللي جزيئي جرامي»‎ ٠٠١ ‏جزيئي جرامي إلى كحد أقصى حوالي‎ lle ٠١ ‏مللي جزيئي جرامي؛‎ ‏مللي جزيئي‎ ١١ ‏مللي حزيني جرامي؛‎ ١١ ‏مللي جزيئي جرامي؛‎ ٠١ ‏مللي جزيئي جرامي؛‎ 5١ 8 ‏مللي‎ VE ‏مللي جزيني جرامي؛‎ ١١5 ‏مللي جزيئي جرامي؛‎ ١١ ‏مللي جزيني جرامي؛‎ ١١ ‏جرامي؛‎ ‏مللي جزيئي جرامي. قد‎ ١١ ‏مللي جزيئي جرامي؛ أو‎ ١١ ‏مللي جزيئي جرامي؛‎ VY ‏جزيثي جرامي؛‎ ‏تتحد أي قيمة دنيا مع أي قيمة قصوى لتحديد المعدل المناسب. في أحد التجسيدات؛ تتضمن‎ ‏مللي جزيثي جرامي مثبت أس هيدروجيني‎ ١١ ‏مللي جزيثي جرامي إلى‎ A ‏التركيبة حوالي‎ ‏على سبيل‎ chistidine ‏مللي جزيئي جرامي مثبت أس هيدروجيني‎ ٠١ isl ‏يفضل‎ chistidine ٠ ‏ملليلتر.‎ ١,5 ‏لكل جرعة‎ Ja ‏إن كميات‎ phosphate ‏تتضمن التركيبة مثبت أس هيدروجيني‎ clay) ‏في تجسيد مفضل‎ ‏مللي جزيئي جرامي؛‎ ١ ‏مفضلة من مثبت أس هيدروجيني 0005011816 تتضمن كحد أدنى حوالي‎ ١ ‏مللي جزيئي جرامي؛ 7 مللي جزيئي جرامي» 4 مللي جزيئي جرامي؛‎ ١ ‏مللي جزيئي جرامي؛‎ 5 ‏مللي جزيئي جرامي؛‎ ٠٠١ ‏مللي جزيئي جرامي إلى حد أقصى حوالي‎ ٠١ ‏_مللي جزيئي جرامي؛‎ ١5 ‏مللي جزيئي‎ ١١ ‏مللي جزيني جرامي؛‎ ١١ ‏مللي جزيئي جرامي؛‎ ٠١ ‏مللي جزيئي جرامي؛‎ ٠ ‏مللي‎ VE ‏مللي جزيني جرامي؛‎ ١١5 ‏مللي جزيئي جرامي؛‎ ١١ ‏مللي جزيني جرامي؛‎ ١١ ‏جرامي؛‎ ‏مللي جزيئي جرامي. قد‎ ١١ ‏مللي جزيئي جرامي؛ أو‎ ١١ ‏مللي جزيئي جرامي؛‎ VY ‏جزيثي جرامي؛‎ ‏تتحد أي قيمة دنيا مع أي قيمة قصوى لتحديد المعدل المناسب. في أحد التجسيدات؛ تتضمن‎ ‏مللي جزيثي جرامي مثبت أس هيدروجيني‎ ١١ ‏مللي جزيئي جرامي إلى‎ A ‏التركيبة حوالي‎ ٠ ‏على‎ phosphate ‏مللي جزيئي جرامي مثبت أس هيدروجيني‎ ٠١ ‏يفضل أكثرء‎ phosphate ‏ملليلتر.‎ vo ‏سبيل المثال؛ لكل جرعة‎ ‏سيتم اختيار الأس الهيدروجيني من مثبت الأس الهيدروجيني عموما لتثبيت المادة النشطة‎ ‏من الاختيار؛ ويمكن التحقق منها بواسطة أولئك في الفن بواسطة طرق معروفة. بصورة مفضلة؛‎ ‏سوف يكون الأس الهيدروجيني من مثبت الأس الهيدروجيني في المعدل من الأس الهيدروجيني‎ YO
“NA ‏يفضل‎ tA ‏الفسيولوجي. لذلك؛ تكون معدلات الأس الهيدروجيني المفضلة من حوالي ؟ إلى حوالي‎ ‏يفضل أكثر أيضاء من حوالي 1,5 إلى حوالي 7,5؛ ويفضل‎ 6A ‏أكثر؛ من حوالي 7 إلى حوالي‎
NY ‏إلى حوالي‎ ١7 ‏أكثر؛ عند حوالي‎ ‏في بعض التجسيدات؛ قد تتضمن التركيبة الدوائية منشط سطح. يكون أي منشط سطح‎ ‏إن منشطات سطح‎ anionic ‏أو‎ cationic (non-ionic amphoteric ‏مناسباء سواء كان‎ © «(TWEEN © (Ji) polyoxyethylene sorbitan esters ‏تمثيلية تتضمن منشطات سطح‎ ‏مشتقة‎ polyoxyethylene ‏دهنية‎ ethers ¢polysorbate 80 ‏و/أو‎ polysorbate 20 (fis
Jie «(Brij ‏و5ا816000._الا6ا0 (معروفة بأنها منشطات سطح‎ stearyl «cetyl dauryl ‏من‎ ‎t— J (Triton X 0 ¢(Brij 30) triethyleneglycol monolauryl ether «(SPANs ‏(تعرف شيوعا أنها‎ sorbitan esters ‏و‎ coctylphenoxypolyethoxyethanol ٠ ‏واتحادات من ذلك. إن‎ csorbitan monolaurate ‏و‎ (Span 85) sorbitan 11016816 ‏مثل‎ ‎(polyoxyethylene sorbitan ‏منشطات سطح مفضلة تتضمن 80 5015816لرا0م‎ .monooleate) ‏بالوزن) تتضمن كحد أدنى حوالي‎ 7) polysorbate . 80 ‏إن كميات مفضلة من‎
JN ‏ذا رد أو‎ ave ‏نيال فنك أو درك إلى حد أقصى حوالي بان‎ Ye ‏قد تتحد أي قيمة دنيا مع أي قيمة قصوى لتحديد المعدل المناسب. في أحد التجسيدات؛ تتضمن‎ polysorbate ١ ‏يفضل أكشن‎ cpolysorbate 80 7. +10 = 7+, v0 ‏التركيبة حوالي‎ .80 ‏في‎ phosphate 80 strehalose ‏في تجسيد تمثيلي؛ تتضمن التركيبة المولدة للمناعة‎ polysorbate ‏تجسيد تمثيلي آخرء تتضمن التركيبة المولدة للمناعة مثتبت أس هيدروجيني 115 و‎ ٠ histidine ‏في تجسيد تمثيلي آخرء تتضمن التركيبة المولدة للمناعة مثبت أس هيدروجيني‎ .0 ‏أيضاء تتضمن التركيبة المولدة للمناعة مثبت أس‎ AT ‏في تجسيد تمثيلي‎ .polysorbate ‏و80‎ ‎.polysorbate ‏و80‎ phosphate ‏هيدروجيني‎ ‏فلا‎
-١.4- ‏مثبت أس‎ trehalose ‏في أحد التجسيدات التمثيلية؛ تتضمن التركيبة المولدة للمناعة‎ ‏تتضمن التركيبة المولدة للمناعة‎ ¢ AT ‏في تجسيد تمثيلي‎ .polysorbate ‏و80‎ tris ‏هيدروجيني‎ ‎Al ‏في تجسيد تمثيلي‎ .polysorbate ‏و80‎ histidine ‏مثبت أس هيدروجيني‎ ctrehalose phosphate ‏مثبت أس هيدروجيني‎ trehalose ‏أيضاء تتضمن التركيبة المولدة للمناعة‎ .polysorbate ‏و80‎ © ‏قد تتضمن التركيبة الموصوفة هنا إضافيا مكونات بترول» حيوانات» خضروات» أو‎ ‏على سبيل المثال؛ زيت الفول السوداني؛ زيت الصوياء و/أو زيت معدني.‎ Lid) ‏صناعية‎ ‎.polyethylene glycol J propylene glycol (fis glycols ‏تتضمن الأمثلة‎ ‏على سبيل‎ formaldehyde Lilia) ‏في بعض التجسيدات؛ تتضمن التركيبة الدوائية‎ ‏لها تركيبة‎ formaldehyde ‏المثال؛ في تجسيد مفضل؛ فإن التركيبة الدوائية التي تتضمن إضافيا‎ Yo ‏من التركيبة المولدة للمناعة مع عامل‎ ©. difficile toxin ‏مولدة للمناعة؛ حيث قد تتصل الطفرة‎ ‏الموجود‎ formaldehyde ‏قد تتنوع الكمية من‎ formaldehyde ‏ربط متقاطع كيميائي يتضمن‎ ‏ريال‎ dng don ‏تال‎ deny ‏في التركيبة الدوائية من حد أدنى حوالي‎ ‏إلى حد أقصى‎ YAN FIN IPA ‏كنل لل‎ BY AN NY ARIS Ary A ‏كلل كبري‎ VARTA IVAN I ‏حوالي ءال كط ليل انل‎ Yo ‏أو )700 قد تتحد أي قيمة حد أدنى مع أي قيمة قصوى لتحديد المعدل‎ 2,01١ 7 formaldehyde 70.2009 ‏المناسب. في أحد التجسيدات؛ تتضمن التركيبة الدوائية حوالي‎ ‏في بعض التجسيدات البديلة؛ لا تتضمن التركيبات الدوائية الموصوفة هنا‎ ‏في تجسيد مفضل؛ يكون للتركيبة الدواثية التي لا تتضمن‎ (JB) ‏على سبيل‎ formaldehyde ‏واحد على‎ 870100 acid ‏تركيبة مولدة للمناعة؛ حيث يرتبط تقاطعيا كيميائيا‎ formaldehyde | ٠ ‏يفضل أكثرء في هذا‎ LEDC ‏بواسطة عامل يتضمن‎ C. difficile toxin ‏الأقل من الطفرة‎ ‏مع عامل ربط متقاطع كيميائي يتضمن‎ 0... 01616 toxin ‏التجسيد؛ ألا تتصل الطفرة‎ ‏كتجسيد تمثيلي آخرء فإن التركيبة الدوائية التي تكون في شكل مجفد لا‎ formaldehyde formaldehyde ‏تتضمن‎
“Ny ‏قد تتضمن التركيبات الموصوفة هنا مادة مساعدة؛ حسب الوصف أدناه.‎ 0 AT ‏في تجسيد‎ ‏إن مواد مساعدة مفضلة تزيد الاستجابة المناعية الجوهرية للجين المناعي بدون التسبب في تغيرات‎ ‏تقليدية في المولد للمناعة التي قد تؤثر في الشكل النوعي للاستجابة المناعية.‎ 3 De—-O-acylated monophosphoryl lipid A ‏إن مواد مساعدة تمثيلية تتضمن‎ ‏مثل‎ aluminum hydroxide ‏هام‎ ¢((GSK) 68 2220211 ‏(انظر‎ (MPL™) ‏هه‎ ‏أملاح 0 (مقل‎ ¢(Brenntag Biosector, Denmark) Alhydrogel ™ ‏التي قد تستخدم‎ (aluminum sulfate caluminum phosphate «aluminum hydroxide polymeric amino 95-21 3-DMP J MPL ‏مثل‎ clic ‏مع أو بدون عامل حث‎ .polylysine J polyglutamic acid ‏مثل‎ monomeric amino acids J acids
CpG is ‏حث مناعي‎ oligonucleotide ‏إن مادة مساعدة تمثيلية أخرى أيضا هي‎ Va saponin i (W02010/067262 WO 1998/040100 ‏(انظرء‎ oligonucleotide
WO ‏(انظرء‎ CpG oligonucleotide ‏حث مناعي؛ مثل‎ oligonucleotide ‏و‎ ‎«CpG oligonucleotide ‏في تجسيد مفضل؛ تكون المادة المساعدة هي‎ .))60 ‏مفضلة من‎ CpG ODN ‏تكون‎ (CpG ODN) CpG oligodeoxynucleotides ‏يفضل أكثر‎ ‏لها‎ CpG ODN ‏الفئة 8 التي تنشط بشكل مفضل الخلايا 8. في جوانب من الاختراع؛ يكون‎ vo nucleic acid ‏ترتيب‎ ‏(تعريف الترتيب‎ T*C*GH*TH*CH*GHT*TH*TH*T*T*C*G*G*T*G*CH*T*T*T*T 3° ‏من هذا الترتيب‎ CpG ODN ‏تكون‎ phosphorothioate ‏رقم: £4( حيث تشير * إلى رابطة‎ ‏في تجسيد مفضل؛‎ .WO2010/067262 ‏الذي يوصف في‎ CpG 24555 ‏معروفة أنها‎ ‏لاطالخ.‎ 096١ ‏متل‎ aluminium hydroxide ‏معا مع ملح‎ CpG 24555 ‏يستخدم‎ ٠ ‏مثل‎ (saponin ‏إن فئة إضافية من المواد المساعدة التمثيلية تتضمن مواد مساعدة‎
Aquila, «saponin J triterpene glycoside ‏(95-21؛ وهو‎ Stimulon™ ‏(معقدات حث مناعي)‎ ISCOMs ‏أو جسيمات تتولد من ذلك مثل‎ (Framingham, Mass. ‏طبقا لذلك؛ قد تصل التركيبات من الاختراع الحالي في شكل‎ (ISCOMATRIX © ‏ومادة مساعدة‎
Je ‏أو مكبسلة في مركبات‎ liposomes (CTB ‏يحتوي على‎ ISCOMS (ISCOMs vo ‏فلا‎
-١١١- ‏أو (©180106-00-91/00510-ا10)/اا00 لتشكيل كريات دقيقة لها حجم مناسب‎ acrylates ‏يشير إلى معقدات مولدة للمناعة متشكلة بين‎ “ISCOM” ‏للامتزاز. نموذجيا؛ فإن المصطلح‎ ‏خاصة)؛ ومولدات مضاد تحتوي على‎ Quil A) triterpenoid saponins ‏مثتل‎ (glycosides ‏تكون المادة المساعدة هي مادة مساعدة‎ (Jade ‏منطقة كارهة للماء. في تجسيد‎
JSCOMATRIX ©
Freund ‏ومادة مساعدة‎ GM-CSF (RC-529 ‏إن مواد مساعدة تمثيلية أخرى تتضمن‎ (IFA) ‏غير كاملة‎ Freund ‏ومادة مساعدة‎ (CFA) ‏كاملة‎ ‎N- ‏تتضمن‎ glycolipid ‏إن فئة أخرى أيضا من المواد المساعدة التمثيلية هي مماثلات‎ ‏يستبدل كل منها في‎ (N-glycosylcarbamates ;N-glycosylureas (glycosylamides .amino acid ‏متخلف السكر بواسطة‎ ٠ ‏من مواد مساعدة مختلفة. إن اتحادات‎ FST ‏تتضمن التركيبة الدوائية اثنين أو‎ ol lial ‏على‎ (JB ‏مفضلة من المواد المساعدة تتضمن أي اتحاد من مواد مساعدة؛ متضمنة؛ على سبيل‎ «CpG (ISCOMATRIX 05-21 (MPL alum ‏الأقل اثنين من المواد المساعدة التالية:‎
Alhydrogel s CpG ‏وا©2009ا0ل. إن اتحاد تمثيلي من المواد المساعدة يتضمن اتحاد من‎ ‏بطريقة بديلة؛ في أحد التجسيدات؛ تعطى التركيبة لكائن ثديي في غياب مادة مساعدة.‎ Yo ‏طرق الحقن؛‎ ie ‏يمكن إعطاء التركيبات الموصوفة هنا بواسطة أي طريقة إعطاء؛‎ ‏موضعيا في الوريد في الغشاء المخاطي + عن طريق الم تحث الجلد في الشريان في الجمجة؛‎ ‏داخل الأم الجافية؛ داخل البريتون؛ داخل الأنف؛ في العضل؛ داخل الآدمة؛ التسريب»؛ شرجيا و/أو‎ ‏تكون طريقة إعطاء التركيبة‎ emia ‏عبر الجلد للتطبيق الوقائي و/أو العلاجي. في تجسيد‎ ‏بالحقن؛ يفضل أكثرء الإعطاء في العضل. يجرى الإعطاء في العضل نموذجيا في عضلات‎ ٠ ‏الذراع أو الساق.‎ ‏يمكن إعطاء التركيبات الموصوفة هنا في اتحاد مع علاجات التي تؤثر جزئيا على الأقل‎ ‏على سبيل المثال؛ قد تعطى تركيبة من الاختراع قبل؛‎ LC. difficile ‏في منع و/أو معالجة عدوى‎ ‏مناعي‎ globulin ‏أو بعد العلاج البيولوجي؛ علاج قبل الحيوي؛ علاج مناعي (مثل‎ (re ‏بالتزامن‎
-١١"- 6. ‏في الوريد)؛ و/أو معيار مقبول من الرعاية للعلاج بالمضاد الحيوي من المرض الذي يصاحبه‎ .vancomycin ‏و/أو‎ metronidazole ‏(0/800ا0))؛ مثل‎ 6 ‏إلى كائن‎ toxin ‏و8‎ 10*10 A ‏المتعلقة بواسطة‎ Jal ‏قد تعطى تركيبة من الاختراع‎
C. ةرفط ‏قد تعطى التركيبة المولدة للمناعة المتضمنة‎ (JEN ‏ثديي في أي اتحاد. على سبيل‎ ‏قبل؛ بالتزامن مع؛ أو بعد إعطاء تركيبة مولدة للمناعة متضمنة‎ od ‏إلى كائن‎ difficile TedA ©
C. ‏على النقيض» قد تعطى التركيبة المولدة للمناعة المتضمنة طفرة‎ .). difficile 1608 ‏طفرة‎ ‏إلى كائن ثديي قبل؛ بالتزامن مع؛ أو بعد إعطاء تركيبة مولدة للمناعة متضمنة‎ difficile 58 .C. difficile TcdA ‏طفرة‎ ‏أو جزء رابط من‎ tOXIN ‏ضد‎ A ‏قد تعطى تركيبة متضمنة جسم مضاد‎ AT ‏في تجسيد‎ 10*10 ‏ضد‎ 8 alias ‏بالتزامن مع؛ أو بعد إعطاء تركيبة متضمنة جسم‎ (Jd ‏ذلك إلى كائن ثديي‎ ٠ ‏أو جزء‎ toxin ‏أو جزء رابط من ذلك. على النقيض؛ قد تعطى تركيبة متضمنة جسم مضاد 8 ضد‎ ‏ضد‎ A ‏قبل بالتزامن مع؛ أو بعد إعطاء تركيبة متضمنة جسم مضاد‎ of ‏رابط من ذلك إلى كائن‎ ‏أو جزء رابط من ذلك.‎ toxin ‏بالتزامن‎ (JB ‏في تجسيد إضافي؛ قد تعطى تركيبة من الاختراع الحالي إلى كائن ثديي‎ ‏قد تعطى مادة مساعدة قبل؛‎ (JU ‏مع أو بعد إعطاء مادة حاملة مقبولة دوائيا. على سبيل‎ VO ‏يمكن أن تعبا‎ ld ‏طبقا‎ LC. difficile toxin ‏بالتزامن مع؛ أو بعد إعطاء تركيبة متضمنة طفرة‎ ‏تركيبة من الاختراع الحالي ومادة حاملة مقبولة دوائيا في نفس القارورة أو يمكن تعبئتهما في قوارير‎ ‏منفصلة ويتم خلطهما قبل الاستخدام. يمكن صياغة التركيبات لإعطاء جرعة فردية و/أو إعطاء‎ ‏متعددة.‎ en ‏في كائن ثديي‎ ©. difficile ‏طريقة حماية و/أو علاج عدوى‎ ٠
Methods of Protecting and/or Treating C. difficile infection in a Mammal ©. difficile toxin JaY ‏في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع بطريقة لحث استجابة مناعية‎ ‏مؤثرة من تركيبةٌ موصوفة هنا للكائن‎ iS c Lac) ‏في كائن تديي . تتضمن الطريقة‎
-١٠- ©. ‏تتضمن الطريقة إعطاء كمية مؤثرة لتوليد استجابة مناعية لأجل‎ (Ji) ‏الثديي. على سبيل‎ ‏الخاص في الكائن الثديي.‎ difficile toxin ‏في تجسيد تمثيلي؛ يتعلق الاختراع بطريقة لحث استجابة مناعية من أجل‎ ‏في كائن ثديي. تتضمن الطريقة إعطاء كمية مؤثرة من تركيبة مولدة للمناعة‎ C. difficile 18 ‏تمثيلي؛ يتعلق الاختراع‎ AT ‏طفري إلى الكائن الثديي. في تجسيد‎ ©. difficile TedA ‏تتضمن‎ © ‏بطريقة لحث استجابة مناعية من أجل 58 0810016 ...© في كائن ثدي. تتضمن الطريقة‎ ‏طفري للكائن الثديي.‎ C. difficile 1008 ‏إعطاء كمية مؤثرة من تركيبة مولدة للمناعة تتضمن‎ ‏في تجسيد إضافي؛ تتضمن الطريقة إعطاء كمية مؤثرة من تركيبة مولدة للمناعة تتضمن‎
C. difficile 1608 ‏طفري وكمية مؤثرة من تركيبة مولدة للمناعة تتضمن‎ C. difficile 18 ‏طفري للكائن الثديي. في جوانب إضافية؛ تستخدم التركيبات الموصوفة هنا لعلاج؛ منع؛ تقليل‎ ٠ la ‏عرض‎ (ae «Cl difficile ‏بداية عدوى‎ pals ‏خطورة؛ تقليل شدة؛ تقليل حدوث؛ و/أو‎ ‏و/أو مضاعفات لذلك في كائن ثديي؛ مقارنة مع كائن ثديي لم‎ «C. difficile ‏متلازمة مصاحبة‎ ‏تعطى له التركيبة. تتضمن الطريقة إعطاء كمية مؤثرة من التركيبة للكائن الثدبي.‎ ‏مدركة؛ تعتمد على شدة العدوى.‎ C. difficile ‏هناك ؟ متلازمات إكلينيكية تسببها عدوى‎ (pseudomembranous colitis) ‏إن الشكل الأكثر شدة هو التهاب القولون الغشائي الكاذب‎ ve ‏الذي يتميز بإسهال غزيرء ألم في البطن؛ علامات عامة للمرض» ومظهر منظاري‎ (PMO) ‏مميز للقولون.‎ (antibiotic-associated colitis) ‏إن التهاب القولون المصاحب لمضاد حيوي‎ ‏يتميز أيضا بإسهال غزيرء ألم في البطنء وألم عند الضغط على البطن؛ علامات عامة‎ (AAC) ‏أقل شدة منها في‎ AAC ‏(مثلاء حرارة)؛ وزيادة كرات الدم البيضاء في الدم. إن إصابة الأمعاء في‎ ٠
ALE ‏والوفيات‎ nse ‏غير‎ PMC ‏إن المظهر المنظاري المميز للقولون في‎ (PMC (antibiotic-associated diarrhea) ‏أخيراء فإن الإسهال المصاحب لمضاد حيوي‎ (C. difficile associated C. difficile ‏المعروف أيضا بإسهال مصاحب‎ (AAD) ‏هو متلازمة بسيطة نسبياء؛ وتتميز بإسهال بسيط إلى متوسط؛ مع افتقاد كل‎ (CDAD) diarrhea)
-١١؟-‎ من التهاب الأمعاء الغليظة (الذي يتميز؛ مثلا؛ بألم في البطن وألم عند الضغط على البطن) والعلامات العامة للعدوى (مثلا؛ الحمى). تحدث هذه المتلازمات الثلاثة المميزة نموذجيا بمعدل حدوث متكرر متزايد. بمعنى أن ‎PMC‏ يحدث نموذجيا بمعدل أقل من ‎(AAC‏ وأن ‎AAD‏ هو الشكل الإكلينيكي الأكثر حدوثا في © المعدل نموذجيا لمرض ‎.C. difficile‏ إن المضاعفات الدائمة لعدوى ‎difficile‏ .© هي تكرار أو انتكاس ‎(papa)‏ والذي يحدث ‎Led‏ يصل إلى ‎77١0‏ في كل الحالات التي شفيت من مرض ‎difficile‏ .6. يتميز الانتكاس إكلينيكيا في شكل ‎(AAC (AAD‏ أو ‎[PMC‏ إن المرضى المصابين بالانتكاس مرة واحدة من المحتمل أكثر أن يحدث انتكاس لديهم مرة أخرى. ‎A‏ حسب الاستخدام ‎(Lin‏ تتضمن حالات عدوى ‎C. difficile‏ على سبيل المثال » عدوى ‎C. difficile‏ بسيطة بسيطة إلى متوسطة متوسطة وشديدة. قد تختلف حالة عدوى ‎difficile‏ .6 اعتمادا على وجود 5 ‎ff‏ شدة أعراض العدوى. ‏تتضمن أعراض عدوى ‎C. difficile‏ أعراض فسيولوجية؛ كيميائية ‎Ag gan‏ نسيجية و/أو سلوكية؛ على سبيل المثال؛ إسهال؛ التهاب قولوني؛ التهاب قولوني مع تقلصات؛ حمى؛ كرات دم ‎albumin adi ‏والتهاب في عينة من القولون؛ التهاب قولوني غشائي كاذب؛‎ hall ‏بيضاء في‎ ١ ‏الدم؛ تراكم كميات كبيرة من مادة مائعة في كل أنسجة الجسم؛ زيادة تكوين خلايا الدم البيضاء؛‎ ‏تعفن؛ ألم في البطن؛ الحمل بدون أعراض؛ و/أو مضاعفات وأنواع شكلية مرضية وسطية موجودة‎ ‏كمية‎ s Uae) ‏على سبيل المثال ‘ فإن‎ «lal ‏أثنا عءِِ حدوث العدوى؛ واتحادات من ذلك إلخ. طبقا‎
Gad ‏مؤثرة من التركيبات الموصوفة هنا قد؛ على سبيل المثالء تعالج؛ تمنع؛ تقلل خطورة؛ تقلل‎ ‎YL‏ تقلل معدل حدوث؛ و/أو تؤخر بداية الإسهال؛ ألم في البطن؛ التقلصات؛ الحمىء الالتهاب في عينة قولونية؛ نقص ‎aad) albumin‏ تجمع الموائع في كل أنسجة الجسم؛ زيادة كرات الدم ‎ce lag)‏ التعفن و/أو ‎dead)‏ بدون ‎combed‏ إلخ؛ مقارنة بكائن ثديي لم تعطى له التركيبة. ‏تتضمن عوامل خطورة لعدوى ‎difficile‏ .0؛ على سبيل المثال؛ استخدام موجود أو لحظي مستقبلي لمضاد للميكروبات (أي عامل مضاد للميكروبات له طيف مضاد
-ه١١-‏ للبكتريا و/أو نشاط ضد بكتريا لاهوائية مشتمل؛ متضمنا؛ على سبيل المثال مضادات حيوية شسبب تمزق ‎nl IKE‏ الحيوية الدقيقة القولونية الطبيعية؛ مثلا ‎fluoroquinolones «vancomycin metronidazole (cephalosporins (clindamycin‏ (متضمنا ‎«gatifloxacin moxifloxacin levofloxacin‏ ر ‎«linezolid «(ciprofloxacin‏ © إلخ)؛ الانسحاب المتواجد أو اللحظي المستقبلي من تعاطي ‎vancomycin si metronidazole‏ موصوف؛ دخول حالي أو لحظي مستقبلي إلى وحدة رعاية صحية (مثل مستشفى؛ وحدة رعاية مزمنة؛ إلخ) والعاملين في الرعاية الصحية؛ معالجة حالية أو لحظية مستقبلية مع مثبطات مضخة 00 مضادات ‎(H2‏ و/أو ‎cmethotrexate‏ أو اتحاد من ذلك؛ وجود أو احتمال حدوث أمراض في المعدة والأمعاء» ‎ie‏ مرض الأمعاء الالتهابي؛ جراحة أو إجراء في الماضي؛ في ‎٠‏ الحاضر أو في المستقبل اللحظي للمعدة والأمعاء الدقيقة في الكائن الثديي؛ تكرار ماضي أو حاضر لعدوى ‎C. difficile‏ و/أو ‎Nia «CDAD‏ مرضى أصيبوا من قبل بعدوى ‎C. difficile‏ و/أو ‎CDAD‏ مرة واحدة أو أكثر من مرة واحدة؛ والمرضى عند سن حوالي 15 على الأقل وأكبر من ذلك سنا. في الطرق الموصوفة هناء قد يكون الكائن ‎ofl)‏ هو أي كائن ثديي؛ على سبيل المثال؛ ‎(ghd Vo‏ هامسترات؛ حيوانات رئيسة وآدميين. في تجسيد مفضل؛ يكون الكائن الثديي آدميا. طبقا للاختراع الحالي؛ قد يتضمن الآدمي أفراد أظهروا عدوى ‎difficile‏ .0؛ مرض؛ متلازمة؛ ‎Gla‏ ‏عرض مصاحب ‎«C. difficile‏ و/أو مضاعفات لذلك؛ أفراد يظهرون حاليا عدوى ‎«C. difficile‏ مرض؛ متلازمة؛ ‎Ala‏ عرض مصاحب ‎«C. difficile‏ و/أو مضاعفات لذلك؛ وأفراد معرضين للإصابة مع عدوى ‎«C. difficile‏ مرض؛ متلازمة؛ ‎Ala‏ عرض مصاحب ‎«C. difficile‏ و/أو ‎٠٠‏ مضاعفات لذلك. تتضمن أمثلة لأفراد أظهروا أعراض عدوى ‎difficile‏ .© أفراد أظهروا أو يظهرون أعراض موصوفة أعلاه؛ أفراد أصيبوا من قبل أو لديهم عدوى ‎C. difficile‏ و/أو مرض ‎C. alias‏ ‎¢(CDAD) difficile‏ وأفراد لديهم تكرار عدوى ‎C. difficile‏ و/أو ‎.CDAD‏ ‏تتضمن أمثلة لمرضى معرضين للإصابة بعدوى ‎difficile‏ .© أفراد معرضين أو خاضعين ‎Yo‏ حاليا لاستخدام مضاد للميكروبات مخطط له؛ أفراد معرضين أو خاضعين حاليا للانسحاب من فلا
-١١1-
تناول ‎vancomycin metronidazole‏ موصوف؛ أفراد معرضين أو خاضعين ‎Wa‏ للدخول المخطط له إلى وحدة رعاية صحية (مثل مستشفى؛ وحدة رعاية مزمنة؛ إلخ) والعاملين في الرعاية الصحية؛ و/أو أفراد معرضين أو خاضعين حاليا لمعالجة مخطط لها مع مثبطات مضخة ‎(proton‏ مضادات ‎(H2‏ و/أو ‎methotrexate‏ أو اتحاد من ذلك؛ أفراد أصيبوا من قبل أو 0 خاضعين لأمراض في المعدة ‎Jie co Lael‏ مرض الأمعاء الالتهابي؛ أفراد أصيبوا من قبل أو خاضعين لجراحة أو إجراءات في المعدة والأمعاء؛ وأفراد أصيبوا من قبل أو خاضعين لتكرار عدوى ‎difficile‏ .© و/أو ‎ie «CDAD‏ مرضى أصيبوا من قبل بعدوى ‎difficile‏ .© و/أو ‎CDAD‏ مرة واحدة أو أكثر من مرة واحدة؛ أفراد عند سن حوالي ‎To‏ عام أو أكبر. إن هؤلاء
المرضى المعرضين لخطر الإصابة قد وقد لا يظهرون ‎Wa‏ أعراض عدوى ‎.C. difficile‏
‎٠١‏ في المرضى بدون أعراض؛ يمكن أن تبداً الوقاية و/أو المعالجة عند أي سن ‎Sia)‏ عند ‎Ja‏ سن ‎٠١‏ 0 أو ‎Ye‏ سنة). في أحد التجسيدات؛ على أية حال؛ ليس من الضروري أن ‎fas‏ ‏المعالجة حتى يصل المريض إلى سن على الأقل حوالي 45 00 ‎Ae vo to‏ سنة. على سبيل ‎(J‏ يمكن إعطاء التركيبات الموصوفة هنا لآدمي بدون ‎abel‏ عمره من 89-56 عام.
‏في أحد التجسيدات؛ فإن الطريقة لمنع؛ تقليل خطورة؛ تقليل شدة؛ تقليل معدل حدوث؛
‎٠‏ و/أو تأخير بداية عدوى ‎difficile‏ .©؛ مرض؛ متلازمة؛ ‎dla‏ عرض مصاحب ‎CL difficile‏ و/أو مضاعفات لذلك في كائن ثديي تتضمن إعطاء كمية مؤثرة من تركيبة موصوفة هنا لكائن ثديي بحاجة لذلك؛ كائن ثديي معرض للإصابة مع؛ و/أو كائن ثديي حساس من أجل عدوى ‎LC. difficile‏ تتضمن كمية مؤثرة؛ على سبيل المثال؛ كمية كافية لمنع؛ تقليل خطورة؛ تقليل شدة؛ تقليل معدل حدوث؛ و/أو تأخير بداية عدوى ‎«C. difficile‏ مرض؛ متلازمة؛
‎dlls ٠‏ عرض مصاحب ‎difficile‏ .© و/أو مضاعفات لذلك في كائن ‎(of‏ مقارنة بكائن ثديي لم تعطى له التركيبة. إن إعطاء كمية 3550 من التركيبات الموصوفة هنا قد؛ على سبيل المثال؛ يمنع؛ يقلل خطورة؛ يقلل شدة؛ يقلل معدل حدوث»؛ و/أو يؤخر بداية الإسهال؛ ألم البطن؛ التقلصات؛ ‎all‏ الالتهاب في عينة قولونية؛ نقص ‎albumin‏ الدم؛ تجمع الموائع في كل أنسجة الجسم؛ زيادة كرات الدم البيضاءء التعفن و/أو الحمل بدون ‎combed‏ إلخ؛ مقارنة بكائن ثديي لم
‏© تعطى له التركيبة. في تجسيد مفضل؛ تتضمن الطريقة إعطاء كمية مؤثرة من تركيبة مولدة للمناعة
-١١- ‏معرض للإصابة مع و/أو حساسا‎ (fil ‏موصوفة هنا إلى كائن ثديي بحاجة لذلك؛ ويكون الكائن‎ .C. difficile ‏للإصابة بعدوى‎ ‏بداية عدوى‎ pals ‏في تجسيد إضافي؛ تتضمن الطريقة لعلاج؛ تقليل شدة؛ و/أو‎ ‏.©؛ و/أو مضاعفات لذلك في‎ difficile ‏عرض مصاحب‎ Alla ‏متلازمة؛‎ «ay ‏.©؛‎ difficile ‏كائن ثديي إعطاء كمية مؤثرة من تركيبة موصوفة هنا للكائن الثديي الحساس من أجلء أو الذي‎ © ad ‏كمية كافية لعلاج؛ تقليل‎ lie ‏تتضمن كمية مؤثرة؛‎ .©. difficile ‏يعاني حاليا من عدوى‎ «C. difficile ‏عرض مصاحب‎ Alla ‏مرض؛ متلازمة؛‎ «C. difficile ‏و/أو تأخير بداية عدوى‎ ‏و/أو مضاعفات لذلك في كائن ثديي؛ مقارنة بكائن ثديي لم تعطى له التركيبة.‎ ©. ‏من التركيبة قد يحسن علامة أو عرض واحد على الأقل لعدوى‎ Bie ‏إن إعطاء كمية‎ ‏تلك الموصوفة أدناه. إن إعطاء كمية مؤثرة من التركيبات الموصوفة هنا‎ Jie ‏في الكائن؛‎ difficile ٠ ‏يقلل شدة و/أو يقلل معدل حدوث الإسهال؛ يقلل شدة و/أو يقلل معدل‎ (JU) ‏قد؛ على سبيل‎ ‏الدم؛ تجمع‎ albumin ‏الالتهاب في عينة قولونية؛ نقص‎ ell ‏حدوث ألم البطن؛ التقلصات؛‎ ‏إلخ؛‎ combed ‏زيادة كرات الدم البيضاء؛ التعفن و/أو الحمل بدون‎ canal) ‏الموائع في كل أنسجة‎ ‏مقارنة بكائن ثديي لم تعطى له التركيبة. اختيارياء فإن وجود أعراض» علامات؛ و/أو عوامل خطرة‎ ‏لاللعدوى يتحدد قبل بداية المعالجة. في تجسيد مفضل؛ تتضمن الطريقة إعطاء كمية مؤثرة من جسم‎ VO ‏مضاد و/أو جزء رابط منه موصوف هنا للكائن الثديي الحساس من أجل؛ أو المصاب حاليا بعدوى‎ .C. difficile ‏طبقا لذلك؛ تشير كمية مؤثرة من التركيبة إلى كمية كافية لتحقيق تأثير مطلوب (مثلا؛‎ ‏قد تختلف كمية مولد‎ (JU ‏تأثير وقائي و/أو علاجي) في طرق الاختراع الحالي. على سبيل‎
Ov ‏ميكروجرام؛‎ YO (aly asia © ‏ميكروجرام»‎ ١ ‏المناعة للإعطاء من حد أدنى حوالي‎ ٠ ‏مجم إلى‎ ١ ‏ميكروجرام؛ أو‎ ٠٠١ aha Kae ٠٠١ ‏ميكروجرام»؛‎ ٠٠١ ‏ميكروجرام»‎ VO ‏ميكروجرام»‎ ‏ميكروجرام في مرة الحقن. يمكن أن‎ ٠٠0١٠ ‏ميكروجرام»‎ 00 ane) ane ١ ‏حد أقصى حوالي‎
Yo 0٠١ ‏تتحد أي قيمة دنيا مع أي قيمة قصوى لتحديد نطاق مناسب. يستخدم نموذجيا حوالي‎ ‏ميكروجرام/ مولد المناعة لكل مرة حقن لآدمي.‎ ٠٠١ ‏أو‎ ٠
حم ‎-١‏ ‏تعتمد كمية التركيبة من الاختراع المعطاة للكائن على نوع وشدة العدوى و/أو على السمات المميزة ‎call‏ مثل الصحة العامة؛ السن؛ الجنس»؛ وزن الجسم وتحمله للعقاقير. قد تعتمد أيضا على درجة؛ شدة؛ ونوع المرض. قد تختلف أيضا الكمية المؤثرة اعتمادا على عوامل؛ ‎Jie‏ طريقة الإعطا ‎ce‏ المكان المستهدف؛ الحالة الفسيولوجية للمريض » سن المريض » ما إذا كان المريض ‎Lal ©‏ أو حيوانا؛ علاجات أخرى معطاة؛ وما إذا كانت المعالجة وقائية و/أو علاجية. سيكون الصانع الماهر قادرا على تحديد الكميات الملائمة اعتمادا على هذه العوامل وأخرى. تتضمن كمية مؤثرة جرعة مؤثرة واحدة أو جرعات مؤثرة متعددة ‎le)‏ سبيل ‎OF Jal‏ ‎F‏ ؛ جرعات؛ أو أكثر) للاستخدام في الطرق هنا. قد تحتاج الجرعات ‎sina)‏ إلى المعايرة من أجل أن يكون الأمان والفعالية في صورة مثلى. ‎Va‏ إن اتحاد كمية ومعدل إعطاء جرعة كافية لتحقيق استخدامات وقائية و/أو علاجية محدد كنظام مؤثر وقائيا أو علاجيا. في نظام وقائي و/أو علاجي؛ تعطى التركيبة نموذجيا في أكثر من جرعة واحدة حتى تحقيق استجابة مناعية كافية. نموذجيا؛ تراقب الاستجابة المناعية وتعطى جرعات متكررة إذا بدأت الاستجابة المناعية في التناقص. قد تعطى التركيبات في جرعات متعددة عبر مدة من الوقت. يمكن مراقبة المعالجة باختبار ‎V0‏ استجابة جسم مضاد؛ أو خلية-1 أو خلية-8 نشطة للعامل العلاجي ‎Se)‏ التركيبة المولدة للمناعة المتضمنة ‎difficile toxin‏ .© الطفري) مع مرور الوقت. إذا انخفض مستوى الاستجابة؛ ينصح ب عطاء ‎EN‏ تعزيزية . الأمثلة مثال 1: تحديد سلالات ‎C. difficile‏ سالبة ‎toxin‏ ‏ف لتحديد سلالات ‎C. difficile‏ تفتقد جينات ‎(By A) toxin‏ واظهار ‎toxin‏ تم اختبار ‎١١‏ ‏سلالة ‎.C. difficile‏ تختبر أوساط مزرعة ‎VY‏ سلالة ‎difficile‏ .© بواسطة ‎ELISA‏ من ‎toxin A Jal‏ أظهرت 7 سلالات ‎«C. difficile 630 «C. difficile 14797-2 :toxin A‏ ‎difficile 870 «C. difficile W1194 (C. difficile BDMS‏ .ع 1253 ‎«C. difficile‏ ‎LC. difficile 2149‏ انظر الشكل 3.
-١١4- ‏وافتقدت إلى موقع التولد المرضي كله:‎ toxin A ‏لم تظهر > سلالات‎
C. difficile 1351 (ATCC 43593™), C. difficile 3232 (ATCC BAA-1801™), ©. difficile 7322 (ATCC 43601™), ©. difficile 5036 (ATCC 43603™), © difficile 4811 (4 ATCC 3602™), and C. difficile VPI 11186 (ATCC 700057™). o ‏بالاقتران.‎ plasmid DNA ‏على أساس فعاليتها في التقاط‎ VPI 11186 ‏تم انتقاء‎ ‏متعدد المراحل باستخدام مواد أولية خارج‎ PCR ‏سلالة في اختبار‎ ١١ ‏تم اختبار نفس‎ (PaLoc; Braun et al., Gene. 1996 Nov 28:181)1-2(:29- ‏موقع التولد المرضي‎ ‏لا يكبر‎ ELISA ‏بواسطة‎ toxin A ‏سلالات سالبة‎ ١ ‏من‎ DNA ‏أن‎ PCR ‏أظهرت نتائج‎ .38.( (cdu2 ycdd3) Paloc ‏إن ترتيبات تفرع جانبي‎ .08106 (tcdA-tcdE) ‏أي جينات من‎ " ‏موجودة (البيانات غير مبينة).‎
C. difficile VPI 11186 ‏مثال 2: إخماد نشاط مسار التجرثم في‎ ‏يسهل التخمر كبير‎ C. difficile ‏إن إقصاء وظيفة تكوين الجرثومة في سلالة إنتاج‎ ‏بدون تجرثم.‎ C. difficile ‏لتوليد سلالة‎ ClosTron ‏النطاق في بيئة تصنيع آمنة. يستخدام نظام‎ ‏انظر:‎ Yo
Heap et al., J Microbiol Methods. 2009 Jul;78(1):79-85. ‏من أجل إخماد نشاط‎ ١| ‏مجموعة‎ intron ‏بإخماد نشاط جين مستهدف مع‎ ClosTron ‏يسمح نظام‎ ‏ناقصة‎ VPIT1186 ‏تخضع سلالة إنتاج‎ .58000/[ clostridial ‏إدخال موجه لمكان لجين‎ ‏ويتأكد‎ erythromycin ‏تنتقى الطفرات المقاومة‎ .ClosTron dui ‏لإخماد نشاط التجرتم‎ 7 ‏(غير مبين). تأكدت عدم قدرةٍ اثنين من النسخ المستقلة‎ PCR ‏وجود الحافظة الإدخالية بواسطة‎ ٠ ‏على تكوين جرثومات.‎ ‏و8 لإخماد نشاط وظيفة السمية الخلوية‎ toxin A ‏مثال 3: تعديل جيني لجينات‎
Evo
١١9. تصمم إطارات قراءة مفتوحة ‎(ORFs) (open reading frames)‏ لجينات ‎toxins A‏ و8 طفرية ‎ALK‏ الطول على أساس ترتيبات جينوم سلالة ‎630A‏ من أجل تكوين معتاد عند ‎Heron Biotech‏ 06ا8. ‎«hail‏ على سبيل ‎(JB‏ تعريفات الترتيب أرقام: ‎٠5-4‏ . إن المكان ‎La sil)‏ لنشاط ‎glucosyltransferase‏ المسئول عن السمية الخلوية ثم تعديله باثنتين من ٠ه‏ استبدالات ‎D285A/D28TA allelic‏ (انظر تعريف الترتيب رقم: ) من أجل م ‎doxin‏ ‏و/0286//002858 (انظر تعريف الترتيب رقم: 0( من أجل 8 ‎toxin‏ أجريت طفرة لعدد ‎Y‏ ‏05ا000 في كل ‎aspartate (D) codon‏ لتوليد 000010 من أجل ‎.alanine (A)‏ انظرء على سبيل المثال؛ تعريفات الترتيب أرقام: = ‎.١‏ إضافياء تم تشييد زوج من النواقل التي تظهر طفرية تفتقد متخلفات ‎cysteine‏ باتباع تكوين معتاد عند ‎.Blue Heron Biotech‏ تم ‎٠‏ استبدال ‎١‏ متخلفات 61/516116 من ‎toxin A‏ طفري و4 متخلفات ‎toxin 8 cysteine‏ طفري مع ©818017. تتضمن الاستبدالات ‎cysteines‏ تحفيزية من ‎protease‏ تحفيزي ذاتي ‎toxin A‏ و8. أيضاء تم إدخال طفرات خامدة عند الضرورة لإزالة أماكن ‎enzyme‏ المقيد المستخدمة لتشييد الناقل. مثال 4: ناقل إظهار ‎PMTL84121fdx‏
C. difficile ‏طفري‎ toxin ‏مضاد‎ alse ‏مستخدم لإظهار‎ plasmid ‏توشع‎ Jib ‏ينتقى‎ Yo ‏(انظر‎ Minton Lab ‏من نظام نسقي من نوع-01/1118000 مطور بواسطة‎ ‏يحتوي الناقل‎ .((Heap et al., J Microbiol Methods. 2009 Jul;78(1):79-85)
C. difficile plasmid pCD6 Gram+ ‏على سلالات‎ pMTL84121fdx ‏المختار‎ ‎plSa 810 (chloramphenicol/ thiamphenicol) ‏دلالة قابلة للانتقاء‎ replicon ‏ومكان نسخ‎ C. sporogenes feredoxin (fdx) ‏ومحث‎ tra ‏ووظيفة‎ Gram- replicon | ٠ pl5a replicon ‏تقترح البيانات التجريبية أن‎ (MCS) (multiple cloning site) ‏متعدد طرفي‎ [RS ‏بات أكبسسر‎ J PO ‏قليبل عادد الفسخ‎ ‏لأنه ينتج إظهار أكبر عن محثات أخرى مختبرة‎ fdx ‏عن البديل 00151. ينتقى المحث‎ 5. coli ‏مغاير) (البيانات غير‎ XyIR ‏أو‎ tetR ‏أو‎ ¢tcdB tcdA St) CAT ‏في تجارب مع بنيات مخبرة‎ ‎YO‏ مبينة).
AAR
PMTL84121fdx ‏المعدل في‎ toxin ORFs ‏مثال 5: نسخ‎ ‏و8 طفرية كاملة الطول‎ toxins A ‏لجينات‎ (ORFS) ‏تنسخ فرعيا إطارات قراءة مفتوحة‎ ‏لناقل‎ Bglll 5 Ndel ‏باستخدام أماكن نسخ متعدد‎ 630A ‏على أساس ترتيبات جينوم سلالة‎ ‏بواسطة مكان‎ ORFs ‏بتقنيات حيوية جزيئية قياسية. لتسهيل النسخ؛ تتفرع‎ pMTL84121fdx ‏الإيقاف.‎ codon ‏مباشرة لاحق من‎ Bll ‏البداية ومكان‎ codon ‏قريب يحتوي على‎ Ndel © ‏لتوليد طفرة ثلاثية‎ TedA ‏مثال 6: تكوين طفري موجه لمكان من أجل‎ ‏ذاتي التحفيز (أي؛‎ protease ‏التحفيزي لمجال سيطرة‎ cysteine ‏يستبدل متخلف‎ ‏في تعريفات الترتيب أرقام: ؟ 05 أي؛‎ (TedB ‏من أجل‎ C698A 5 TedA ‏من أجل‎ ©7008 ‏طفري؛‎ toxin A ‏من أجل تكوين طفري من‎ "(double mutants) ‏في كل من "الطفرات الثنائية‎
TcdA ‏إظهار‎ plasmid ‏كيلو قاعدة من‎ 7,58 Ndel-Hindlll ‏ينسخ فرعيا جزء‎ ٠ ‏في 00019 (مقطع مع المثل) ويجرى تكوين طفري موجه لمكان على هذا‎ D285A/D28TA shal ‏يعاد إدخال‎ (DNA ‏الجديدة بواسطة تحليل ترتيب‎ alleles ‏الجزيء التركيبي. بمجرد تأكيد‎ ‏المعدلة في ناقل الإظهار *«01/41118412110 لتوليد "الطفرات الثلاثية‎ Ndel-Hindlll .6 ‏أي؛ تعريف الترتيب رقم: ؛ وتعريف الترتيب رقم:‎ (triple mutants) ‏تكوين طفري موجه لمكان من أجل 1608 لتوليد طفرة ثلاثية‎ :7 Jie . 5 ‏كيلو‎ 7,79 Ndel-EcoNI ‏للتكوين الطفري من 8 10*10 طفري؛ يعدل ويعاد إدخال جزء‎ ‏غير موجود في نواقل نسخ متوافرة‎ ECONI ‏طفري. لأن مكان‎ toxin 8 plasmid ‏قاعدة من‎ ‏(محضر مع‎ pUC19 ‏كيلو قاعدة أكبر بدرجة بسيطة في‎ Y, ه٠‎ Ndel-EcoRV ‏جزء‎ Le ‏ينسخ‎ ‏كيلو‎ 7,7 Ndel-EcoNI ‏بعد التكوين الطفري؛ يستأصسل الجزء الداخلي المعدل‎ (Ndel-Smal ‏الطفري المقابل. لأن‎ toxin 8 ‏الناقل لإظهار‎ pMTL84121fdX ‏قاعدة ويستخدم لاستبدال جزء‎ - ٠ ‏الكفاية النسخية لهذه السياسة الاتجاهية اتضح أنها قليلة تماماء كانت هناك محاولة في نفس الوقت‎ ‏قاعدة.‎ HIS) 0 Dralll ‏المشتمل على استبدال‎ CO98A allele ‏لاتباع سياسة بديلة لإدخال‎ ‏أنتجت كل من السياستين على حدة المواد المخلقة المطلوبة.‎
OS ‏طفري بواسطة تكوين طفري موجه‎ tOXIN ‏مثال 8: توليد أشكال متباينة إضافية من‎
-؟؟١-‏ تم تشييد على الأقل ‎VY‏ شكل متباين من ‎C. difficile toxin‏ طفري مختلف. تم إدخال استبدالات ‎allelic‏ في أجزاء جين ‎toxin‏ طفري طرفي-لا بواسطة تكوين طفري موجه لمكان ‎Kit)‏ ©010008096). تعالج هندسيا ‎toxins‏ المخلقة للمقارنات المرجعية لتقيم مقدرة هذا النظام المعتمد على ‎plasmid‏ على توليد ‎protein‏ مكافئ كميا في النشاط الحيوي إلى ‎toxins‏ ‎oo‏ أصلية منقاة من سلالات ‎Co difficile‏ نوع بري. في هذه الحالة؛ تدخل استبدالات ‎allelic‏ ‏لاستعادة استبدالات ‎glucosyltransferase‏ الأصلية. ‎Lilia)‏ تم تشييد زوج من نواقل ‎toxin‏ ‏طفري بدون ‎cysteine‏ باتباع تخليق مضاد عند ‎.Blue Heron Biotech‏ يتضمن الاثناعشر شكل متباين من ‎C. difficile toxin A )١( toxin‏ طفري به طفرة 09 0 (تعريف الترتيب رقم: ؟)؛ ‎C. difficile toxin 8 (Y)‏ طفري به طفرة ‎D286A/D288A ٠‏ (تعريف الترتيب رقم: #)؛ )¥( ‎C. difficile toxin A‏ طفري به طفرة ‎D285A/D28TA ©7001‏ (تعريف الترتيب رقم: 4)؛ (4) 8 ‎C. difficile toxin‏ طفري به طفرة /0698) /0266//0288 (تعريف الترتيب رقم: 76)؛ )0( ‎A‏ 1010 مخلق له تعريف الترتيب رقم: ١؛‏ )7( 8 ‎toxin‏ مخلق له تعريف الترتيب رقم: ‎C. difficile toxin A (V) ¢Y‏ طفري به طفرة /0700؛ ‎C. difficile toxin 8 (A)‏ طفري به طفرة /0698)؛ )1( ‎Vo‏ م ‎C. difficile toxin‏ طفري به طفرة 5975 م0700 011695 ‎«C1407S‏ ‎C. difficile toxin 8 (V+) ¢«C2236S.C2023S C1623S‏ طفري به طفرة ‎C698A‏ ‎¢C22325 5 016875 016255 011675 705 «C824S «C5958 (C395S‏ 1( ‎C. difficile toxin A‏ طفري به طفرة ‎D287TA (D285A‏ 07008 269نا 272 ا ‎RA62A 5 E460A ٠‏ (تعريف الترتيب رقم: ‎C. difficile toxin 8 (VV) ¢(V‏ طفري به طفرة 02708 273/8 ا 0286 0288 ‎(K463A (D461A‏ 2698/8 (تعريف الترتيب رقم: ‎(A‏ ‏مثال 9: ثبات ‎WA‏ المتحولة نحصل على ‎plasmids‏ معادة الترتيب مع سلالة معملية ‎E.coli‏ 01150 شائعة ‎Yo‏ الاستخدام. على النقيض؛ فإن ‎WAN‏ المتحولة باستخدام عاثل ‎Invitrogen 500127" E. coli‏ 61لا
—y yy
تنتج مواد مخلقة ‎toxin‏ طفري كامل الطول بطيئة النمو بعد ؟ أيام من النمو عند ‎LACT‏ على أطباق ‎YO) LB chloramphenicol‏ ميكروجرام/ ملليلتر). نحصل على كفايات نسخية أقل مع سلالات ‎E. coli, 500137" E. coli‏ "8505147 خاصة؛ برغم أن هذه الخطوط ثابتة لاستبقاء 50. تنمو بعد ذلك الخلايا المتحولة في ‎agar‏ أو في مزرعة سائلة تحت انتقاء ‎chloramphenicol ©‏ عند ١7"مثوية.‏ اتضح أيضا أن استخدام أوساط ‎LB (Miller's)‏ يحسن
استعادة ونمو الخلايا المتحولة بالمقارنة مع أوساط تعتمد على ‎tryptone—soy‏ غير حيواني. مثال 10: تحول ‎C. difficile‏ مع ‎pMTL841 21fdx‏ يشفر جينات ‎toxin‏ نوع بري أو طفري
يتم أساسيا تحويل ‎difficile‏ .© بواسطة نقل اقتراني ‎E.coli‏ حسب الوصف في: ‎Heap et al., Journal of Microbiological Methods, 2009. 78(1): p. 79-85. ٠‏ يتحول ‎CA434‏ عائل ‎E. coli‏ مع ‎PMTL84121 fdx‏ يشفر جينات ‎toxin‏ نوع بري أو طفري شكل متباين. إن ‎CA434‏ عائل ‎E. coli‏ هو المادة الوسطية لتحريك إظهار ‎VPI plasmids‏ ‎iD. 11186 01‏ إنتاج ‎.C. difficile‏ إن ‎CA434‏ مشتق من 18101 ‎.E. coli‏ تحمل هذه السلالة ‎plasmid‏ اقتراني ‎Mob+ R702‏ +178 الذي يوفر مقاومة من أجل ‎Km‏ ‎Su 16 Vo‏ 6م50/5,؛ 5 ‎Hg‏ (بسبب 101831). تحضر خلايا 6434 ملائمة كيميائيا أو ملائمة كهربيا وتنتقى الخلايا المتحولة بناقل الإظهار على أطباق ‎Miller's LB CAM‏ عند ٠مثوية.‏ إن النسخ بطيئة النمو التي تظهر بعد ؟ أيام يتم التقاطها وتكبيرها في مزارع ‎LB‏ ‎chloramphenicol‏ ؟ ملليلتر ‎Sa‏ طور متعدد اللوغاريتم (حوالي ‎YE‏ ساعة» 78 ؟ دورة في الدقيقة؛ هزاز مداري عند ‎٠ ١0‏ #"مثوية) . تجمع مزارع ‎E. coli‏ بطرد مركزي قليل السرعة ) ‎Oven‏ ‎A)‏ ثقل نوعي) لتفادي تكسير القشور » ويعاد تعليق كريات الخلية برفق مع ماصة نقل واسعةٌ المسام في ‎١ PBS‏ ملليلتر. تتركز الخلايا بواسطة طرد مركزي قليل السرعة. يزال معظم ‎PBS‏ بالانقلاب ‎Ji,‏ الكريات المصرفة في ‎Sian‏ لاهوائية ويعاد تعليقها مع ‎١,7‏ ملليلتر من مزرعة ‎(C. difficile‏ ترش فوق أطباق ‎BHIS agar‏ وتترك لتنمو ‎A sad‏ ساعات أو طوال الليل. في حالة خلايا متحولة ‎A‏ 10710 طفري؛ تتحقق نتائج أفضل مع اقتران طوال الليل. تكشط دفعات الخلية في ‎٠,5‏ ‎(voy‏
-١74- ‏ويوضع )+ ملليلتر في طبق على أوساط انتقاء 81115 مدعمة مع 10 ميكروجرام/‎ PBS ‏ملليلتر‎ ‎D-cycloserine | (chloramphenicol ‏(مثيل أكثر 33 من‎ thiamphenicol ‏ملليلتر‎ ‏ساعة‎ YE-1T ‏تنقى الخلايا المتحولة التي تظهر عند‎ E.coli ‏لقتل خلايا مائحة‎ 0 ‏جديد )+ مواد مدعمة) وتختبر المزارع التالية من أجل‎ BHIS ‏لاحقا بإعادة تخطيطها على طبق‎ ‏ومخزونات بذر‎ glycerol ‏طفرية. تحضر مستحضرات دائمة‎ toxins ‏مخلقة أو‎ toxins lela) © ‏من مزارع ؟ ملليلتر‎ plasmid ‏من النسخ التي بها إظهار جيد. تحضر أيضا مستحضرات صغيرة‎ ‏(غير ضروري).‎ lysozyme ‏معدل تعالج فيه الخلايا مسبقا مع‎ Qiagen Kit ‏باستخدام إجراء‎ ‏لتحديد سلامة‎ POR ‏مستحضر صغير 0117016 ...© كجزيء تركيبي لترتيب‎ DNA ‏يستخدم‎ ‎E. coli ‏متحولة‎ WA ‏مستحضر كبير 0185010 من‎ DNA ‏يحضر‎ dha ‏النسخة. بطريقة‎ ‏ويتم ترتيبه.‎ 510127 y. مثال 11: تحليل إظهار ‎C. difficile‏ لطفرة ثلاثية من ‎toxin A‏ و8 (تعريفات الترتيب أرقام: ¢ و7؛ على التوالي) وطفرة 8 سباعية (تعريف الترتيب رقم: ‎(A‏ ‏تنمو الخلايا المتحولة إما في مزارع ‎LILY‏ (لتحليل روتيني) أو في دوارق تهوية مغطاة طرفيا (طوال مدة التجارب). تعالج عينات (؟ ‎(lle‏ بالطرد المركزي لفترة قصيرة ‎٠٠٠٠١(‏ دورة ‎Vo‏ في الدقيقة؛ ‎٠١‏ ثانية) لتركيز الخلايا: تصفق المواد الطافية وتركز ‎٠١‏ مرات ‎(Amicon-Ultra‏ ‎¢30K)‏ تسحب الكريات وتجمد عند -86*مثوية. تتفكك كريات الخلية على ثلج؛ يعاد تعليقها في مثبت أس هيدروجيني تحلل ‎١‏ ملليلتر ‎Tris=HCI)‏ أس هيدروجيني 7,5؟؛ ‎١ EDTA‏ مللي ‎Sis‏ جرامي؛ ‎(glycerol 79١5‏ وتعالج بالموجات الصوتية (دورة ‎٠١ XY‏ ثانية مع مقدمة صغيرة). تعالج ‎sale‏ التحلل بالطرد المركزي عند ؛*مثوية وتركز المواد الطافية © مرات. تتحد ‎٠‏ عينات المادة الطافية ومادة التحلل مع نفس مثبت الأس الهيدروجيني وتعالج بالحرارة ‎٠١(‏ دقائق؛ ‎٠‏ مثوية) قبل التحميل فوق هلامات ‎SDS-PAGE‏ مضاعفة ‎ZA-Y‏ 115-2061316 ‎(Invitrogen)‏ يصبغ هلام مع ‎«Coomassie‏ ويتبقع الثاني كهربيا من أجل تحليل ‎Western‏ ‏تستخدم أمصال مضادة من أرنب تخص ‎A‏ 1000 وتخص 8 ‎(Fitgerald; Toxin‏ ‎Biodesign)‏ لتحديد أشكال متباينة ‎toxin A‏ و8 طفري. يتأكد أيضا إظهار 8 ‎toxin‏ الطفري
Western ‏بتهجين تبقع‎ (A ‏السباعي (تعريف الترتيب رقم:‎ Yo
اج \ \ — مثال 12: إخماد نشاط ‎glucosyltransferase‏ من ‎toxins‏ الطفرية
إن طفرة ثنائية ‎(DM) (double mutant)‏ جينية ‎A‏ 10115 و8 (تعريفات الترتيب أرقام: ‎YF‏ و©؛ على التوالي) وطفرة ثلاثية ‎toxins A (TM) (triple mutant)‏ و8 (تعريفات الترتيب أرقام: ¢ 15« على التوالي) لا تنقل ‎14C—glucose‏ إلى ‎٠١‏ ميكروجرام من ‎(RhoA‏ ‏© 4861 و108565© 00042 في اختبارات ‎glucosylation‏ في المعمل في وجود -7ثالا ‎٠١[ 14C—glucose‏ ميكروجزيثي جرامي]؛ ‎HEPES‏ .٠ه‏ مللي جزيني ‎(sa‏ أس هيدروجيني ؟,/اء ‎٠٠١ KCI‏ مللي جزيئي جرامي؛ 1/9012 ؛ مللي جزيئي جرامي؛ 1/0012 ‎Y‏ مللي جزيئي جرامي» ‎١ DTT‏ مللي جزيئي جرامي؛ و١‏ ميكروجرام/ ملليلتر ‎BSA‏ على أية ‎Js‏ فإن الأمثلة المقارنة ‎toxin A‏ و3 نوع بري (لهما تعريفات الترتيب أرقام: ‎ARR‏ على التوالي) تنقل ‎٠‏ 140-9016058 إلى ‎GTPases‏ بفعالية عند جرعة ‎٠١ ALB‏ و١‏ نانوجرام من كل منهما (وأقل من ذلك- البيانات غير مبينة) (الشكلان 4 () و؛ (ب))؛ حتى في وجود ‎٠٠١‏ ميكروجرام من ‎toxin‏ طفري (الشكل ؛ (ب)) مما يدل على تقليل على الأقل ‎pe ٠٠٠٠٠١‏ مقارنة مع ‎toxins‏
نوع بري مقابلة. تتحدد نتائج مشابهة من أجل ‎GTPase‏ 00042 (البيانات غير مبينة. بصفة خاصة في الشكل 2 (ب)؛ يحضن ‎toxin A‏ و3 ‎toxin‏ نوع ‎١ ) ER‏ نانوجرام) أو ‎toxin A Ve‏ ثلاثي الطفرة و ‎toxin‏ ثلاثي الطفرة ‎٠٠١(‏ ميكروجرام) مع ‎RhoA GTPase‏ في وجود ‎AW UDP-14C-glucose‏ ساعتين عند + '"مثئوية. كما هو موضح؛ فإن ‎١‏ تانوجرام من 18 و1608 نوع ‎gy‏ ينقل ‎14C—glucose‏ إلى 400/8 لكن لا يقوم بذلك ‎٠٠١‏ ميكروجرام من ‎toxin A‏ ثلاثي الطفرة و8 ‎toxin‏ ثلاثي الطفرة. عند رش ‎١‏ نانوجرام من 160/8 أو 12008 نوع بري في التفاعل مع ‎٠٠١‏ ميكروجرام من ‎toxin A‏ ثلاثي الطفرة أو 8 ‎toxin‏ ثلاثي الطفرة ‎٠‏ الخاص؛ تتحدد ‎glucosylation‏ لأجل ‎<(RhOA‏ مما يدل على فقد مثبطات ‎-glucosylation‏ إن حساسية الكشف عن نشاط ‎glucosylation‏ ترسخت بأنها ‎١‏ نانوجرام من ‎toxin‏ نوع بري في خلفية أساسية من ‎٠٠١‏ ميكروجرام ‎toXin‏ طفري (نسبة ‎.)٠٠٠٠١٠ ١:١‏ تبين النتائج أن الطفرات في المكان النشط من ‎glucosyltransferase‏ في ‎toxin A‏ ثلاثي الطفرة و8 ‎toxin‏ ثلاثي الطفرة تقلل أي ‎glucosyltransferase Ll‏ يمكن قياسه (نشاط اقل من ‎٠٠٠٠٠١‏ مرة مقارنة
-1؟١-‏ بنشاط ‎toxins‏ النوع البري الخاص). تم أيضا تطوير اختبار مشابه للتقدير الكمي لنشاط ‎glucosyltransferase‏ بواسطة ترسيب ‎TCA‏ من أجل ‎.glucosylated GTPases‏ مثال 13: إخماد نشاط ‎cysteine protease‏ ذاتي التحفيز تخمد وظيفة الفصل ذاتي التحفيز في الطفرات الجينية الثلاثية ‎A‏ و8 ‎(TM)‏ (تعريفات ‎oo‏ الترتيب أرقام: ؟ و1 على التوالي) عندما تجرى طفرة لمكان فصل ‎.cysteine protease‏ كما هو موضح في الشكل ‎co‏ تنفصل ‎toxins A‏ و8 نوع بري ‎(WE)‏ (تعريفات الترتيب أرقام: ؟ 5 © على التوالي) في وجود ‎.inositol-6-phosphate‏ تنفصل أيضا ‎toxins A‏ و8 ثنائية الطفرة (تعريفات الترتيب أرقام: ؟ و*؛ على التوالي) في وجود ‎inositol-6-phosphate‏ (البيانات غير مبينة)؛ بطريقة مشابهة لتلك للنوع البري. ينفصل ‎toxin A‏ (تعريف الترتيب رقم: ؟) من ‎٠١8‏ ‎٠‏ كيلو دالتون إلى جزثين ©؛ ؟ و١٠‏ كيلو دالتون. ينفصل 8 ‎toxin‏ (تعريف الترتيب رقم: 0( من ‎٠١‏ ؟ كيل و دالقون إلى جزثئين ‎5١١‏ و17 كيلو دالقون. إن حم 5 ر8 ثلاثية الطفرة الجينية ‎(TM)‏ (تعريفات الترتيب أرقام: ‎lst‏ على التوالي) تظل غير متاثرة عند ‎YY VA‏ كيلو دالتون على الترتيب؛ ‎Sa‏ في وجود ‎inositol—‏ ‎.6-phosphate‏ انظر الشكل #. لذلك؛ يتم إخماد نشاط ‎cysteine protease‏ بتعديل جيني. ‎Vo‏ بصفة خاصة أكثر؛ في الشكل 5؛ يحضن ‎١‏ ميكروجرام من الطفرة الثلاثية ‎A‏ والطفرة الثلاثية ‎B‏ لمدة 90 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة ‎(a0 + YY)‏ في نفس الوقت مع 10608 و1608 نوع بري من ‎List Biologicals‏ يجرى تفاعل الفصل في حجم ‎٠١0‏ ميكرولتر في ‎(Tris=HCI‏ أس هيدروجيني 7,5 ‎Y DTT‏ مللي جزيئي جرامي في وجود أو غياب ‎inositol—‏ ‎AL V+) 6-phosphate‏ جزيئي جرامي من أجل ‎TedA‏ و )+ مللي جزيء جرامي من أجل ‎٠‏ | 8 160). يحمل عندئذ حجم التفاعل ‎KI‏ على 77-7 ‎tPAGE/SDS‏ تظهر حزم ‎protein‏ ‏بصباغة فضة. كما هو ‎rinse‏ ينفصل ‎Ted A‏ و1608 نوع بري إلى حزمتين من ‎protein‏ ‎EO‏ و١٠‏ كيلو دالتون و7١‏ و١‏ كيلو دالتون؛ على الترتيب» في وجود ‎inositol-6—‏ ‎.phosphate‏ لا ينفصل ‎toxin A‏ ثلاثي الطفرة و8 ‎toxin‏ ثلاثي ‎sll)‏ وذلك يؤكد أن الطفرة 7008© في ‎SMG toxin A‏ الطفرة والطفرة ‎CO98A‏ في 8 ‎toxin‏ ثلاثي الطفرة تخمدان ‎Yo‏ الفصل.
-لا؟١-‏ مثال 14: السمية الخلوية المتخلفة من ‎Toxins A‏ و8 ثلاثية الطفرة (تعريفات الترتيب أرقام: ؛ ‎Ts‏ على التوالي) تم تقييم 1076105 جينية الطفرة من أجل سميتها الخلوية باختبار سمية خلوية في المعمل في خلايا 10/890 خط خلية ليفية أولية رئوية مضاعفة الصبغيات آدمية. إن هذه الخلايا حساسة 0 لكل من ‎A‏ 1010 و8. كتجسيد بديل مفضل؛ يمكن استخدام خلايا كلية طبيعية 1/810 من ‎Cercopithecus aethiops‏ في اختبار السمية الخلوية لأنه يلاحظ أن لها حساسيات معقولة إلى ‎Bs toxin A‏ بصورة مفضلة؛ لا تستخدم خلايا سرطان غدي قولون ومستقيم أدمي 11-29 في اختبار السمية الخلوية لأنها أظهرت حساسيات قليلة بدرجة ملحوظة إلى ‎toxins‏ مقارنة بخطوط خلية ‎Vero‏ و1/0890. انظرء على سبيل ‎(JED‏ الجدول ‎١‏ أدناه. ‎٠‏ جدول ‎:١‏ حساسيات خط الخلية إلى ‎Toxins A‏ و8 * ‎eyes Tour ape‏ المت ‎a‏ ‏جمس ‏جمس ‏و ‏* يجرى اختبار سمية خلوية في المعمل بقياس ‎ATP‏ الخلوي باستخدام مادة خاضعة معتمدة على ‎(Promega, Madison, WI) CellTiter-Glo® (luciferase‏ تضاف عينات ‎toxin‏ طفري جيني أو 10*17 نوع بري مخفف بصورة متسلسلة إلى طبقات أحادية من الخلايا في أطباق مزرعة نسيج بها 97 عين. بعد الحضانة ‎٠5‏ عند 7""مئوية لمدة ‎VY‏ ساعة؛ يتم تقييم الأطباق من أجل الخلايا النشطة أيضيا بقياس مستويات ‎ATP‏ الخلوي بإضافة عامل كاشف ‎CellTiterGlo®‏ معتمد على ‎(Promega, Madison, WI) luciferase‏ الذي يولد إضاءة تظهر كوحدات إضاءة نسبية
م7" ‎-١‏ ‎.(RLUs) (relative luminescence units)‏ تبين ‎RLUS‏ كبيرة أن الخلايا حية؛ تبين ‎RLUS‏ ‏قليلة أن الخلايا غير نشطة أيضيا وخاضعة للموت. يتحدد مستوى السمية الخلوية؛ الظاهر كقيمة 0 على أنه كمية 10*10 نوع بري أو 10*10 طفرة جينية التي تسبب تقليل ‎٠‏ 75 في ‎RLUs‏ ‏مقارنة بالمستويات في أمثلة مقارنة مزرعة خلية (تفاصيل هذا الاختبار متوافرة أدناه). كما هو مبين في الشكل 1 الجداول ل( والجدول 8( فإن قيم 0 من أجل ‎TedA‏ و1608 حوالي ‎[aha gli ,7‏ ملليلتر و09 ‎je‏ نانوجرام/ ملليلتر؛ على الترتيب. إن قيم ‎EC50‏ من ‎toxin A‏ طفرة ثلاثية و8 ‎toxin‏ طفرة ثلاثية حوالي 4500 ‎fla sl‏ ملليلتر و74 نانوجرام/ ‎alle‏ على الترتيب. برغم تقليل ‎٠٠٠٠١‏ مرة تقريبا في السمية الخلوية مقارنة مع ‎tOXINS‏ نوع بري» فإن كلا من ‎toxins‏ الطفرة الجينية لا يزالان يظهران مستويات متخلفة قليلة من السمية الخلوية. يمكن
‎٠‏ إخماد هذه السمية الخلوية المتخلفة بمعادلة أجسام مضادة أحادية النسخ ضد 10*17 مما يدل على أن ذلك يخص ‎toxins‏ الطفرة الثلاثية لكنها ربما لا تخص الأنشطة الإنزيمية المعروفة من 5 نوع بري ‎glucosylation) (wt)‏ أو تحلل بروتيني ذاتي).
‏يظهر كل من 0175 نوع بري سمية خلوية في المعمل؛ وتكون كميات قليلة من ‎toxins‏ ‏كافية للتسبب في تأثيرات مختلفة على خلايا كائن ثديي مثل استدارة خلية (تأثير اعتلال خلوي أو ‎(CPE Yo‏ وفقد النشاط الأيضي (حسب القياس بمستويات ‎(ATP‏ نتيجة لذلك؛ تم تطوير اثنين من الاختبارات المعملية (اختبار ‎CPE‏ أو استدارة خلية واختبار ‎(ATP‏ لتحديد عدم وجود سمية خلوية متخلفة في مواد عقار ‎toxin‏ الطفري. تظهر النتائج كقيم ‎(EC50‏ وهي كمية ‎toxin‏ أو ‎toxin‏ ‏الطفري التي تسبب ‎)١(‏ إصابة 756 من الخلايا مع ‎CPE‏ أو (7) تقليل ‎75٠‏ في مستويات
‎ATP‏ حسب القياس مع وحدات ضوء نسبية.
‎٠‏ في اختبار ‎(CPE‏ تخفف بالتسلسل عينة من مادة العقار وتحقن مع خلايا 11/1490 وتتم المراقبة من أجل تأثير اعتلال خلوي محتمل. إن اختبار ‎CPE‏ له نظام درجي بمقدار صفر (خلايا طبيعية) إلى 4 (استدارة خلية حوالي ‎(A) er‏ ودرجة ؟ (استدارة خلية ‎(Zon Mea‏ وذلك محدد كقيمة 050 لعينة الاختبار. تستخدم هذه الطريقة لاختبار مادة عقار ‎toxin‏ طفري عند تركيز ‎٠٠‏ ميكروجرام/ ملليلتر؛ وهو التركيز الأقصى الممكن تحمله الذي يمكن اختباره في هذا
-١"4- ]050 ‏الاختبار بدون تدخل مادة بينية. نتيجة لذلك؛ لم تسجل سمية خلوية يمكن تحديدها كقيمة‎ ‏ميكروجرام/ ملليلتر.‎ ٠٠٠١ > ‏والتي تتناسب مع‎ (ATP ‏على قياس كمية إشارة الإضاءة المتولدة من‎ ATP ‏يعتمد اختبار‎ ‏عدد الخلايا النشطة أيضيا. إن التركيز الأقصى الممكن تحمله الذي يمكن اختباره في هذا الاختبار‎ ‏ميكروجرام/ ملليلتر. لذلك لم تسجل سمية خلوية يمكن كشفها في‎ ٠٠١0 ‏بدون إعاقة للاختبار حوالي‎ © ‏ميكروجرام/ ملليلتر.‎ ٠٠١> 050 ‏هذا الاختبار كقيمة‎ ‏و8 طفري على الخلايا في نفس الوقت مع أمثلة‎ 10*10 A ‏تضاف تركيزات مختلفة من‎ ‏الخلوية‎ ATP ‏مقارنة 10«*10. إن نقاط النهاية للاختبار هي حيوية الخلية المحددة بمستويات‎ ‏أو عدد‎ ATP ‏تتناسب درجة الإضاءة مع مستويات‎ (Promega) CellTiter-Glo® ‏باستخدام‎ ‏الخلايا الحية.‎ - ٠ ‏نوع بري‎ toxin A ‏لأجل‎ (EC50) (vitro cytotoxicity) ‏إن السمية الخلوية في المعمل‎ ‏بيكوجرام/ ملليلتر و9 بيكوجرام/ ملليلتر لأجل 8 10*10. إن السمية الخلوية في‎ AY ‏مقدارها‎ (WH)
VE ‏الطفري (تعريف الترتيب رقم: 4) 8100 نانوجرام/ ملليلتر‎ toxin A ‏لأجل‎ (EC50) ‏المعمل‎ ‏الطفري (تعريف الترتيب رقم: 71). برغم أن هذه القيم تمثل‎ toxin 8 ‏نانوجرام/ ملليلتر لأجل‎ ‏تقليلات 97448 و8777 مرة؛ على الترتيب؛ فقد تم اكتشاف سمية خلوية متخلفة في كل من‎ ٠ ‏الطفرية.‎ 5 ‏و8 ثلاثية الطفرة‎ toxins A ‏بطريقة أخرى؛ تقل بدرجة ملحوظة السمية الخلوية لأجل‎ ‏(تعريفات الترتيب أرقام: ؛ و7؛ على التوالي) في اختبار سمية خلوية في المعمل في خلايا‎ ‏و7؛‎ ١ ‏و8 نوع بري (تعريفات الترتيب أرقام:‎ toxins A ‏مقارنة بالسمية الخلوية لأجل‎ IMR-90 ‏الطفرة الثلاثية تظهر تقليل‎ toxins ‏على التوالي). كما هو موضح في الشكل 1 برغم أن كلا من‎ ٠ ‏مرة) مقارنة مع 10*10 نوع بريء فإن السمية الخلوية المتخلفة‎ 4٠( ‏ملحوظ في السمية الخلوية‎ ‏الطفرة الثلاثية.‎ toxins ‏تلاحظ عند تركيزات أكبر لكل من‎
م١‏ إضافة لذلك؛ فإن السمية الخلوية المتخلفة لكل ‎toxin‏ طفرة ثلاثية يمكن معادلتها كليا ‎Di)‏ تقليل في السمية على الأقل 8-76 لوغاريتم١٠؛‏ مقارنة بسمية 10710 نوع بري) بواسطة الأجسام المضادة التي تخص ‎toxin‏ انظر المثال 16( أدناه. إن اختبارات مزرعة خلية حساسة أكثر لتحديد السمية الخلوية من نماذج حيوان في الجسم 0 الحي. عند التوصيل إما في البريتون أو في الوريد في نموذج الاختبار الفأري المميت؛ فإن ‎WE‏ ‎TedA‏ له 050 حوالي ‎٠٠‏ نانوجرام ‎wt 7008 Lay ll‏ أكثر فعالية مع ‎LD50‏ حوالي > نانوجرام للفأر. على النقيضء فإن الاختبارات المعملية المعتمدة على مزرعة خلية الموصوفة أعلاه لها قيم 5050 ‎٠٠١‏ بيكوجرام/ عين من أجل ‎TedA‏ لاا و 7 بيكوجرام/ عين من أجل للا ‎.TcdB‏ ‎Jie Ys‏ 15: السمية الخلوية المتخلفة ‎Toxin 8 Jal‏ سباعي الطفرات الجينية (تعريف الترتيب رقم: ‎(A‏ ‏كما هو موضح في الشكل 7؛ فإن قيم 050 متشابهة للطفرات من ‎B‏ 10*10 ثلاتي الطفرة (تعريف الترتيب رقم: ‎Yo YA) (T‏ نانوجرام/ ملليلتر) و8 10*10 سباعي الطفرة (تعريف الترتيب رقم: ‎(A‏ )¥0,9 نانوجرام/ ملليلتر) مما يدل على أن الطفرات الإضافية الأربعة من أجل ‎١‏ تعديل ‎dla)‏ لمكان ‎glucosyltransferase‏ نشط ومكان ربط مادة خاضعة ‎GTPase‏ لا تقلل إضافيا السمية الخلوية من ‎toxins‏ الطفرة الجينية. إن قيم 5050 متشابهة أيضا لأجل 8 ‎toxin‏ ‏ثنائي الطفرة (تعريف الترتيب رقم: 0( ‎Laie‏ هي لأجل ‎toxins‏ ثلاثية وسباعية الطفرة (البيانات غير مبينة). تقترح هذه الملحوظة أن آلية السمية الخلوية لأجل ‎toxins‏ الطفرية لا تعتمد بدرجة مدهشة على آلية إدراك ‎glucosyltransferase‏ والمادة الخاضعة. ‎٠‏ مثال 16: السمية الخلوية المتخلفة لأجل ‎Toxins A‏ و8 ثلاثية الطفرة (تعريفات الترتيب أرقام: ؛ ‎og‏ على التوالي) من أجل تقييم إضافي لطبيعة السمية الخلوية المتخلفة؛. ‎toxins Lalas‏ الطفرية (تعريفات الترتيب أرقام: ؛ 15( وتحضن مع الأجسام المضادة المعادلة الخاصة بها من قبل ويضاف الخليط إلى طبقة أحادية لخلية ‎AMROQ‏
-١1١- ‏و8 الطفري (تعريفات‎ 10*10 A ‏أن السمية الخلوية المتخلفة من‎ (A ‏تبين النتائج (الشكل‎ toxin A ‏الترتيب أرقام: ؛ و7؛ على التوالي) يمكن إخمادها كليا مع أجسام مضادة معادلة تخص‎ ‏تحضن تركيزات‎ (A ‏الطفري (اللوحة السفلية؛ الشكل‎ toxin ‏و8‎ (A ‏طفري (اللوحة القمية؛ الشكل‎ ‏(اللوحة السفلية) مع أجسام مضادة من‎ toxin ‏طفري (اللوحة القمية) و8‎ 10*10 A ‏متزايدة من‎ ‏أو أجسام مضادة أحادية النسخ فأرية‎ )٠:٠١ ‏تخفيف‎ (pAb) toxin ‏أرنب عديدة النسخ ضد‎ ©
IMRO0 ‏ملليلتر) قبل الإضافة إلى خلايا‎ [IgG ‏من مخزون يحتوي على ¥ مجم‎ 50:١ ‏(تخفيف‎ ‏تضاف مادة خاضعة‎ (Ag PTY ‏عند‎ ١1/1490 ‏ساعة مع خلايا‎ YY ‏بعد معالجة الحضانة لمدة‎ ‏قياس طيفي ضوئي مع برنامج‎ 30) (RLU) ‏وتقاس وحدات الضوء النسبية‎ Cell Titer-Glo® ‏كلما كانت السمية أعلى. تتضمن‎ (Ji ATP ‏كلما كان مستوى‎ ATP ‏الإضاءة لقياس مستويات‎ ‏قيم 5050 المقابلة.‎ Jie ‏و1008 مضاف عند ؛ مرات‎ TedA ‏الأمثلة المقارنة‎ Vy ‏أو‎ glucosyltransferase ‏تقترح تقارير منشورة أن الطفرات في مجال سيطرة‎ ‏تؤدي إلى إخماد نشاط كامل للسمية. على أية حال؛ لا‎ toxins ‏ذاتي التحفيز من‎ 056 toxins ‏تتوافق بياناتنا مع هذه التقارير المنشورة ويمكن أن يعزو هذا إلى التركيزات الزائدة من‎ ‏الطفرية النقية للغاية المختبرة في دراساتنا مقارنة بمواد تحلل مزرعة خام في التقارير المنشورة؛‎
Yi Sha) ‏النقاط الزمنية الزائدة التي يلاحظ عندها استدارة خلية لخلايا معالجة مع 10*17 طفري‎ ١ ‏ساعة؛ استخدام‎ VY ‏ساعة؛ أو 97 ساعة) مقارنة بالملحوظات في أقل من‎ VY ‏ساعة؛‎ 48 dela ‏في اختبارات السمية الخلوية الحالية‎ toxins ‏خطوط خلية تظهر حساسيات أكبر بدرجة مفيدة إلى‎ ‏على النقيض من خلايا سرطان غدي قولون ومستقيم آدمي 111-29 في اختبارات السمية الخلوية‎ ‏قد‎ (glycosylation ‏المعلنة في التقارير المنشورة؛ و/أو نشاط أو عملية غير معروفة؛ بخلاف‎ ‏الطفرية.‎ toxins ‏ثقود السمية المتخلفة من‎ Yo ‏طفرة جينية‎ TOXINS ‏مثال 17: آلية سمية خلوية جديدة من‎
IMR-90 ‏الطفرة الجينية؛ تعالج خلايا‎ toxins ‏للتحري عن آلية سمية خلية متخلفة من‎ ‏طفرة جينية (تعريف الترتيب رقم: 6)؛‎ toxin 8 ‏أو‎ (Y ‏الترتيب رقم:‎ Cay pe) wit toxin 8 ‏مع‎ ‏61لا‎
-١©7-
YE ‏مع وقت المعالجة. تجمع العينات من‎ glucosylation Racl GTPase ‏وتتم دراسة‎ ‏غير‎ Rac] ‏عن‎ glucosylated Rac] ‏ساعة وتحضر مواد مستخلصة من الخلية. يتميز‎ 1 ‏مع اثنين من الأجسام المضادة من أجل 4801. يدرك‎ Western ‏بواسطة تبقع‎ 0 ‏غير‎ Racl ‏والآخر )102( يدرك فقط‎ 4861 (23A8) ‏جسم مضاد واحد كل من شكلي‎
Rac] ‏تظل مستويات‎ toxin 8 ‏بالنسبة إلى‎ «YY ‏كما هو موضح في الشكل‎ .glucosylated © ‏لغالبية 48201. إن المعالجة مع‎ glycosylation ‏الكلية بدون تغير مع مرور الوقت مع وجود‎ ‏الطفرة الجينية (تعريف الترتيب رقم: 7)؛ على صعيد آخرء يؤدي إلى تقليل ملحوظ في‎ toxin 8 ‏عند كل النقاط الزمنية.‎ glucosylated ‏غير‎ Racl ‏الكلي؛ على أية حال يكون‎ 1 ‏لكن ليس مع‎ Ah ‏الطفرة‎ toxin ‏يبين هذا أن مستوى 4801 يتأثر سلبيا بالمعالجة مع‎ ‏متشابه في الخلايا المعالجة مع‎ actin ‏فإن مستوى‎ VY ‏كما هو موضح في الشكل‎ owt toxin ٠ ‏الطفرة الوراثية ومتشابهة مع خلايا معالجة وهميا عند نقاط زمنية محددة. يبين هذا أن‎ toxin 8 ‏مشتق من‎ glucosylation ‏الطفرة الوراثية تسبب سمية خلوية بألية مختلفة عن مسار‎ 5 ‏نوع بري.‎ 07 ‏طفرة جينية‎ toxins ‏مثال 18: معالجة كيميائية لأجل‎ ‏الطفرية المعدلة جينيا تظهر تقليل لوغاريتم-؛ في النشاط السام للخلية‎ toxins ‏برغم أن‎ Yo ‏مفضلة؛ فهناك أهمية لتقليل إضافي (؟ إلى ؛ لوغاريتمات) في نشاط السمية الخلوية. تم تقييم‎ glycine ‏و‎ formaldehyde ‏اثنين من سياسات إخماد النشاط الكيميائي. تستخدم الطريقة الأولى‎ ‏الطفرية.‎ toxins ‏لإخماد نشاط‎ ‏بين‎ (imine) Schiff ‏بتكوين قاعدة‎ formaldehyde ‏يحدث إخماد نشاط بواسطة‎ ‏مع عدد من‎ Schiff ‏تتفاعل عندئذ قواعد‎ protein ‏أولية على‎ amines ‏و‎ formaldehyde ٠٠ ‏لتكوين روابط متقاطعة إما داخل‎ (Asn ‏10©؛‎ (Tyr (Trp (His <Arg) amino acid ‏متخلفات‎ ‏أو بين الجزيئات. إن هذا الربط المتقاطع يثبت بناء 0001810 ويجعله خامد النشاط. إضافياء يمكن‎ ‏لتكوين قاعدة 50011. يمكن أن تتفاعل عندئذ قاعدة‎ glycine ‏مع‎ formaldehyde ‏أن يتفاعل‎ ‏بين‎ protein—glycine ‏لتكوين روابط متقاطعة‎ amino acid ‏مع متخلفات‎ glycyl Schiff ‏الطفرة الجينية إلى أقل‎ toxins ‏نشاط السمية الخلوية من أجل‎ formaldehyde ‏الجزيئات. يقلل‎ Yo
م من حدود يمكن تحديدها (تقليل في سمية خلوية ‎AS‏ لوغاريتم١٠‏ للطفرة 8 الثلاثية (تعريف الترتيب رقم: 7( و>1 لوغاريتم ‎٠١‏ للطفرة ‎A‏ الثلاثية (تعريف الترتيب رقم: 4) ‎٠‏ على أية حال؛ يلاحظ استرجاع مع الوقت عند إجراء حضانة عند 455070 لأجل ‎toxins‏ الطفرة الثلاثية الخامدة النشاط بواسطة ‎(formaldehyde-inactivated) formaldehyde‏ (ا). إن استرجاع السمية © الخلوية يمكن منعه بإضافة كمية قليلة من ‎(A(X, Y=, 01) formaldehyde‏ محلول تخزين طفرة ثلاثية-١.‏ تستخدم طريقة أخرى معالجة مع | ‎1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)‏ ‎(NHS) N-hydroxysuccinimide/(EDC) carbodiimide‏ لتوليد ‎toxins‏ طفرية خامدة النتشاط. في هذه الطريقة؛ يتفاعل ‎EDC/NHS‏ مع مجموعات ‎carboxylic‏ على 0101610 لتكوين ‎٠‏ 516:5 نشطة. يمكن أن تتفاعل عندئذ ‎esters‏ النشطة مع ‎amines‏ أولية على ‎protein‏ ‏لتكوين روابط ‎amide‏ ثابتة. كما مع تفاعل ‎(formaldehyde‏ ينتج هذا التفاعل روابط متقاطعة داخل وبين الجزيئات. إن رابطة ‎amide‏ المتكونة بالمعالجة مع ‎EDC/NHS‏ ثابتة أكثر وغير قابلة للانعكاس من رابطة ‎imine‏ المتغيرة المتكونة بإخماد نشاط ‎formalin‏ بالإضافة إلى الروابط المتقاطعة المتكونة بتفاعل ‎esters‏ نشطة مع ‎amines‏ أولية على ‎polypeptide‏ يمكن تكوين ‎١٠‏ كل من مواد مجمعة ‎glycine‏ و0618-818010©6. بدون التقيد بآلية أو نظرية؛ تنتج مواد مجمعة 6 عند إضافة ‎glycine‏ لإخماد ‎esters‏ نشطة غير متفاعل. يتفاعل ‎amine glycine‏ مع ‎ester‏ النشط على ‎polypeptide‏ لتكوين روابط ‎amide‏ ثابتة. بدون التقيد بآلية أو نظرية تتكون مواد مجمعة ‎beta-alanine‏ بتفاعل ‎beta—alanine‏ نشط مع 5 أولية على ‎polypeptide‏ ينتج هذا التفاعل روابط ‎amide‏ ثابتة. ينتج 05618-81801086 نشط بتفاعل ؟
EDC ‏مع جزيء جرامي واحد من‎ NHS ‏جزيئات جرامية من‎ ٠ ‏لتحقيق تقليل 7-؟؛ لوغاريتم في النشاط السام للخلية مقارنة مع 101705 الطفرية المعدلة‎ ‏الطفرية خامدة النشاط كيميائيا‎ toxins ‏الأصلية)؛ فإن‎ toxins ‏لوغاريتم؛ مقارنة مع‎ A=) ‏جينيا‎ ‏ميكروجرام/ ملليلتر. بالإضافة إلى التقليل في نشاط السمية‎ ٠٠٠١> 650 ‏لابد أن تكون لها قيم‎ ‏أساسية حسب التحديد بتحلل نقطة- بقعة. حتى الآن؛ تم‎ epitopes ‏سوف يفيد استبقاء‎ dy lal) ‏تحديد عدد من شروط التفاعل التي تحقق كلا من تقليل في السمية الخلوية ومعايير إدراك‎ YO
“ve ‏تم تحضير دفعات عديدة من 107105 طفرية خامدة النشاط من أجل دراسات حيوان‎ epitope
ALE ‏و4(ب) بيانات تحليلية من دفعات تمثيلية‎ (DA ‏ولا(ب)؛ الجداول‎ (HY ‏وتبين الجداول‎ ‏غير النشطة كيميائيا أمنة ومولدة للمضادات‎ Toxin A ‏تكون طفرة‎ : 0 V ‏جدول‎ ‏الاختزال في السمية | التفاعلية مع‎ CPE ‏المعالجة‎ | toxin due ‏رقم العينة | تعريف‎ [sie 1,8 ٠٠٠١ > [Formalin | ‏(تعريف‎ TedA ‏طفرة‎ ١ ‏الترتيب رقم: 4) عالي‎ ‏.را ب عالي‎ > EDC | ‏طفرة 160/8 (تعريف‎ )4 ‏الترتيب رقم:‎ ‏كرا منخفض‎ ٠٠٠١ > [Formalin | ‏(تعريف‎ TedA ‏طفرة‎ 1 )4 ‏الترتيب رقم:‎ ‏عالي‎ ١ ١ ‏لا يوجد ٠؟ بيكوجرام/‎ | List ‏(من‎ TcdA wt ¢ iF el hi I ‏لا يوجد 4 بيكوجرام/ | غير مطبق لا يوجد‎ | List ‏(من‎ TcdB wt ‏ال ا‎ il i I ‏ميكروجرام/ | 0,£ عالي‎ ٠,8 ‏لا يوجد‎ [rTcdA TM ‏طفرة‎ 1 ‏ملليلتر‎ Genetic
L36901-79 ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ 0 ‏لم تتم منخفض‎ | Formalin Toxoid A ‏ل‎ ‏ان ل‎ i H+
—\ro- ‏غير النشطة كيميائيا آمنة ومولدة للمضادات‎ Toxin A ‏جدول 7١(ب): تكون طفرة‎
So] | ‏كم أركم تيف‎ owen ver SN (ME ‏ينة‎ ‎A65—| 60-١ A3-| AB0- | لاجما١ ‏رقم‎ mAb 33 22 25 29 | ‏سيطرة‎ 1 mAb ‏رقم‎ ‎٠١ ‎+++ | +++ ++ | +++ ++ ++ | Formalin | 3 dh ١ 1١مم‎ ‏الترتيب رقم:‎ 0
L44905- 160A +++ | AHH | FEE | HE | ‏بببد‎ ++++ EDC| ‏طفنو‎ 7 1١مم‎ ‏الترتيب رقم:‎ 0
L44166- 166 + ++ ++ ++ + +١ Formalin 3, sl 1 1١مم‎ ‏الترتيب رقم:‎ 0
Evo y=
L44905- +++ | HHH | | HE HH ++++ ‏ألا يوجد‎ TcdA wt ¢
List ‏(من‎ ‎(Bio ‏الا يوجد‎ 1608 wt
List ‏(من‎ ‎(Bio ‎+++ | HHH | AE | | Ht ++++ ‏رة ألا يوجد‎ ila 1 rTcdA ™
Genetic
L36901- 79 caja) ‏الترتيب‎ )4 ‏الرقم:‎ ‎+ ++ _ + ‏ب"‎ ١ Formalin | Toxoid A ‏ل‎
List Bio
Cia ‏اختبار تأثير الاعتلال الخلوي؛ 5050 = أدنى تركيز‎ = CPE ‏قائمة بيولوجية؛‎ = List ‏تعادلية؛‎ = neut ‏أجسام مضادة أحادية النسخ؛‎ = MAbs ‏من الخلايا السمية الخلوية؛‎ 75 ٠ ‏يبين‎ ‏عام11))‎ mutant) ‏جاتب نشط وطفرة انشقاق ("طفرة ثلاثية‎ = TM ‏لم تتم؛‎ = ND ‏غير النشطة كيميائيا أمنة ومولدة للمضادات‎ Toxin 8 ‏تكون طفرة‎ : 0 A ‏جدول‎ ‏ا ب‎ mAbs ‏السمية‎ EC50 toxin | ‏العينة‎ دلا
١ ‏ل( اا‎ [sie At ٠٠.٠١ > | Formalin 16058 ‏طفرة‎ ١ ‏عالي‎ L44905-182 ‏(تعريف الترتيب‎ ("id ‏م عالي‎ ١٠١١١. > EDC TcdB ‏طفرة‎ ¥
L34346-38A ‏(تعريف الترتيب‎ ("id ‏منخفض‎ At ٠٠.٠١ > | Formalin 16058 ‏ل طفرة‎
L44905- 1708 ‏(تعريف الترتيب‎ ("id ‏غير مطبق ألا يوجد‎ va. ‏(من ا لا يوجد‎ Teda wt ¢ ‏بيكوجرام/‎ (List Bio ‏ملليلتر‎ ‏عالي‎ ١ 95 ‏(من ا لا يوجد‎ 1608 wt o ‏بيكوجرام/‎ (List Bio ‏ملليلتر‎ ‏طفرة 8 010] © | لا يوجد 4 نانوجرام/ | 7 عالي‎ 1 ‏ملليلتر‎ TM Genetic ‏(تعريف الترتيب‎ (Vid
L34346-022 ‏الم تتم متوسط‎ Formalin Toxoid A ‏ل‎ ‎List ‏غير النشطة كيميائيا آمنة ومولدة للمضادات‎ Toxin 8 ‏جدول 8(ب): تكون طفرة‎
Evo
-١ ‏حم‎ ‎ed nd ‏ثم‎ ‎Mid—/C ‏النهايةة-لا النهاية-‎ toxin ++ ++ +++ +++ | Formalin | 1608 3, ik Cy ‏(تعرريف‎ ‏الترتيب رقم:‎ 68
L44905- 160A ++++ ++++ ++++ ++++ EDC | TcdB ‏طفرة‎ Y ‏(تعرريف‎ ‏الترتيب رقم:‎ 68
L44166- 166 +/- + ++ | Formalin | 1608 ‏طفرة‎ 01 a) ‏الترتيب رقم:‎ 68
L44905- 170A ‏مقارنات‎ ْ ‏آلا يوجد‎ 100/8 wt ¢
IF
(Bio ++++ ++++ +++ ++++ ‏لا يوجد‎ | TcdB wt 2
List ‏(من‎ ‎(Bio ‎Evo
-١“4- +++ +++ ++ ++++ ‏طفرة ا | لا يوجد‎ 1
TcdB ™
Genetic
L34346- 022 ‏تعريف‎ ‏الترتيب‎ ‎)1 ‏رقم:‎ ‎+++ +++ +++ +++ | Formalin | Toxoid B ‏ل‎ ‎List ‏اختبار تأثير الاعتلال الخلوي؛ 5050 = أدنى تركيز حيث‎ = CPE ‏قائمة بيولوجية؛‎ = List. ‏من الخلايا السمية الخلوية؛ 00/05 = أجسام مضادة أحادية النسخ؛ 0804 = متعادلة؛‎ 75 ٠ ‏يبين‎ ‏عام11))‎ mutant) ‏جاتب نشط وطفرة انشقاق ("طفرة ثلاثية‎ = TM ‏لم تتم؛‎ = ND ‏مثال 19: التنقية‎ ‏عند نهاية التخمر؛ يبرد المخمر. يسترجع ملاط الخلية بطرد مركزي مستمر ويعاد تعليقه‎ ° ‏في مثبت الأس الهيدروجيني الملائم. يتحقق تحلل لمعلق الخلية بتجانس عالي الضغط. بالنسبة‎ ‏الطفري؛ تتلبد المادة المتجانسة ويخضع المحلول المتلدن لطرد مركزي مستمر.‎ toxin A ‏إلى‎ ‏الطفري؛ تنقى المادة‎ toxin 8 ‏يرشح هذا المحلول وينقل عندئذ إلى معالجة لاحقة. بالنسبة إلى‎ ‏المتجانسة بطرد مركزي مستمرء وعندئذ تنقل لمعالجة لاحقة.‎ ‎١‏ ينقى ‎A‏ 10710 طفري (تعريف الترتيب رقم: ؛) بخطوتين من تحليل كروماتوجرافي يليهما استبدال مثبت أس هيدروجيني نهائي. تحمل مادة التحلل النقية فوق عمود تحليل كروماتوجرافي تفاعل ‎sla‏ للماء ‎(HIC) (hydrophobic interaction chromatography)‏ وينفصل ‎toxin‏ ‏الطفري المرتبط باستخدام تدرج ‎.sodium citrate‏ تحمل عندئذ المادة المجمعة للمنتج من عمود ‎HIC‏ على عمود استبدال ‎(CEX) (cation exchange) cation‏ وينفصل ‎toxin A‏ الطفري ‎١‏ المرتبط باستخدام تدرج ‎.sodium chloride‏ إن تجمع ‎CEX‏ الذي يحتوي على / ‎toxin‏ طفري
EPI
‏الطفري‎ toxin A ‏نقي يتم استبداله في مثبت الأس الهيدروجيني النهائي بالترشيح الثنائي. يتغير‎ ‏العقار النهائية بالترشيح الثنائي. بعد الترشيح‎ sald ‏في مثبت الأس الهيدروجيني الوسطي‎ al) ‏ميكرون قبل إخماد النشاط كيميائيا لمادة‎ ١,7 ‏الثنائي؛ ترشح المادة المحتجزة من خلال مرشح‎ ‏مستهدف عند ١-؟ مجم/ ملليلتر.‎ protein ‏عقار نهائي. إن تركيز‎ ‏طفري (تعريف الترتيب رقم: 7) بخطوتين من تحليل كروماتوجرافي يليهما‎ toXin 8 ‏ينقى‎ ‏فوق‎ All ‏استبدال مثبت أس هيدروجيني نهائي. تحمل المادة المتحللة‎ ‏الطفري المرتبط‎ toxin ‏وينفصل‎ (AEX) (anion exchange) anion ‏عمود استبدال‎ ‏إلى المادة المجمعة‎ 5000000 citrate ‏تضاف‎ .sodium chloride ‏باستخدام تدرج‎ ‏وتحمل على عمود تحليل كروماتوجرافي تفاعل صاد للماء‎ AEX ‏للمنتج من عمود‎ ‏الطفري المرتبط‎ toxin ‏(الا). يتفصل‎ (hydrophobic interaction chromatography) ٠ ‏طفري نقي‎ toxin polypeptide ‏الذي يحتوي على‎ HIC ‏يتغير تجمع‎ .sodium citrate ‏بتدرج‎ ‎toxin 8 ‏(تعريف الترتيب رقم: 7) في مثبت الأس الهيدروجيني النهائي بالترشيح الثنائي. يتغير‎ ‏الطفري النقي في مثبت الأس الهيدروجيني الوسطي لمادة العقار النهائية بالترشيح الثنائي. بعد‎ ‏ميكرون قبل إخماد النشاط كيميائيا‎ ١7 ‏الترشيح الثنائي؛ ترشح المادة المحتجزة من خلال مرشح‎ ‏مستهدف عند ١-؟ مجم/ ملليلتر.‎ protein ‏لمادة عقار نهائي. إن تركيز‎ Vo
Formaldehyde/Glycine ‏مثال 20: إخماد نشاط بواسطة‎ ls ‏و8 الطفرة الجينية (تعريفات الترتيب أرقام: ؛‎ toxins A ‏يخمد نشاط‎ (Aan ‏بعد‎ ‏مجم/‎ VY) ‏جزيئي جرامي‎ (Ale ٠ ‏ساعة عند 5؟"مثوية باستخدام‎ fA ‏على التوالي) لمدة‎ ‏في مثبت أس‎ 5 + ١ ‏يتم إخماد النشاط عند أس هيدروجيني‎ formaldehyde ‏مليلتر) من‎ Yo sodium chloride ‏مللي جزيئي جرامي؛ مثبت أس هيدروجيني‎ ٠١ phosphate ‏هيدروجيني‎ ‎glycine (hile ‏مللي جزيشي جرامي يحتوي على 40 مللي جزيء جرامي )¥ مجم/‎ Vo ‏تضبط مدة إخماد النشاط لتزيد بمقدار ؟ مرات عن المدة المطلوبة للتقليل في قيمة 8050 في‎ ١7 ‏ميكروجرام/ ملليلتر. بعد £4 ساعة؛ يقل النشاط الحيوي‎ ٠٠٠١ ‏خلايا 10/0490 إلى أكبر من‎
Evo
-١؟١-‏ إلى ‎A‏ لوغاريتم١٠‏ مقارنة مع 10*17 الأصلي. عقب حضانة لمدة ‎dels $A‏ يتغير ‎toxin‏ الطفري خامد النشاط في مثبت أس هيدروجيني مادة العقار النهائي بالترشيح الثنائي. على سبيل المثال؛ باستخدام حافظة ترشيح فاثق ‎acetate‏ 06101058 متجددة ‎٠٠١‏ كيلو دالتون؛ يتركز ‎toxin‏ خامد النشاط إلى ‎7-١‏ مجم/ ملليلتر ويتغير مثبت الأس الهيدروجيني. © مثال 21: إخماد النشاط مع ‎N—(3-Dimethylaminopropyl)-N’—ethylcarbodiimide‏ ‎(NHS) N-hydroxysuccinimide /(EDC)‏ بعد التنقية؛ يخمد نشاط ‎toxins‏ الطفرة الجينية (تعريف الترتيب رقم: ؛ وتعريف الترتيب رقم: ‎sad )١‏ ساعتين عند ©7"مئوية باستخدام ‎v0‏ مجم ‎١,5 SEDC‏ مجم ‎١115‏ لكل مجم من ‎toxin A‏ و8 طفرة جينية نقي (تقريبا ‎VT‏ مللي جزيئي جرامي و4,؟ ‎Abe‏ جزيء جرامي على ‎Ye‏ التوالي). يخمد التفاعل بإضافة ‎glycine‏ حتى تركيز نهائي ‎٠٠١‏ مللي ‎Sa‏ جرامي وتحضن التفاعلات لمدة ساعتين إضافيتين عند © 7*مثوية. يتم إخماد النشاط عند أس هيدروجيني ‎١7‏ + في مثبت أس هيدروجيني ‎٠١ phosphate‏ مللي جزيئي جرامي؛ مثبت أس هيدروجيني ‎Yoo sodium chloride‏ مللي جزيئي جرامي. تضبط مدة إخماد النشاط لكي تزيد ؟ مرات عن المدة المطلوبة لتقليل قيمة 050 في خلايا 1101490 إلى أكبر من ‎٠٠٠١‏ ميكروجرام/ ملليلتر. ‎١‏ بعد ساعتين؛ يقل النشاط الحيوي 7 إلى ‎A‏ لوغاريتم١٠‏ مقارنة مع 10719 الأصلي. عقب حضانة لمدة ؛ ساعات؛ يتغير ‎toxin‏ الطفري خامد النشاط إلى مثبت أس هيدروجيني ‎sale‏ العقار النهائي بترشيح ثنائي. على سبيل المثال؛ باستخدام حافظة ترشيح فائق ‎cellulose acetate‏ متجددة ‎٠‏ كيلو دالتون؛ يركز ‎toxin‏ خامد النشاط إلى ‎fame 7-١‏ ملليلتر ويتغير مثبت الأس الهيدروجيني. ‎٠‏ إذا لم يذكر خلاف ذلك؛ تستخدم المصطلحات التالية في جزء ‎AEN‏ للإشارة إلى تركيبة ناتجة طبقا للوصف الحالي في المثال 21: ‎toxin”‏ طفرة ثلاثتية معالج مع ‎toxin" ¢'(EDC/NHS-treated triple mutant toxin) EDC/NHS‏ طفري خامد النشاط مع ‎¢'(EDC~inactivated mutant toxin) EDC‏ 'مادة عقار ‎toxin‏ طفري ‎[A/B]‏ ‎¢'(El-mutant toxin) El- ik toxin" ¢'(mutant toxin [A/B] drug substance)‏ ‎"(EDC/NHS-triple mutant toxin) EDC/NHS-4535 syslatoxin® 8‏ على سبيل المثال؛ ‎Evo‏
-١67- ‏فإن المصطلحات التالية لها نفس المعنى: "م 07 طفرة ثلاثية معالج مع‎ ‏طفري خامد‎ toxin A" ¢'(EDC/NHS-treated triple mutant toxin A) EDC/NHS ‏طفري‎ toxin A lie ‏'مادة‎ ¢'(EDC~inactivated mutant toxin A) EDC ‏النشاط مع‎ ¢'(El-mutant toxin A) El- kl toxin A" ¢'(mutant toxin A drug substance) « Al ‏كمثال‎ (EDC/NHS-triple mutant toxin A) ‏طفرة ثلاثية-15ال0/0ناح‎ toxin ‏لظم‎ © ‏فإن المصطلحات التالية لها نفس المعنى: "8 07 طفرة ثلاثية معالج مع‎ ‏طفري خامد‎ toxin 8" ¢'(EDC/NHS-treated triple mutant toxin B) EDC/NHS ‏طفري‎ toxin B ‏'مادة عقار‎ ¢'(EDC~inactivated mutant toxin B) EDC ‏النشاط مع‎ ¢'(El-mutant toxin B) El- kl toxin 8" ¢'(mutant toxin 8 drug substance) ."(EDC/NHS-triple mutant toxin B) EDC/NHS-4535 ‏طفرة‎ toxin 8" ٠ ‏الطفري باستخدام‎ 10*10 Ble ‏الطفري ومادة‎ 1000 A ‏تصنع كل من مادة عقار‎ (VPI 11186) toxin ‏سالبة‎ C. difficile ‏تخمر سلالة‎ )١( ‏عملية دفعة؛ التي تتضمن‎ ‏الطفري الثلاثي الجيني المقابل (في وسط‎ toxin polypeptide ‏يشفر‎ plasmid ‏تحتوي على‎ (Sheffield HY YESTTM 412 ‏لا50؛ خلاصة خميرة‎ hydrolysate ‏يتضمن‎ ‎sala) ‏الطفري الجيني‎ toxin das (V) ‏وا1013000080160)؛‎ (glucose (Bioscience) ٠ ‏من مادة تحلل بدون خلية باستخدام‎ ("(drug substance intermediate) ‏الوسطية مادة عقار‎ )©( 80 ‏وتفاعل صاد للماء إلى نقاء أكبر من‎ ion ‏إجراءات تحليل كروماتوجرافي باستبدال‎ ‏التبادل‎ (£) 5 glycine ‏ثم الإخماد/ التغطية مع‎ EDC/NHS ‏إخماد نشاط كيميائي بالمعالجة مع‎ ‏مع نسيج بيني مثبت الأس الهيدروجيني النهائي.‎ ‏مثال 22: دراسات تدعم شروط إخماد النشاط والتحضير‎ Yo ‏الطفرة الجينية؛ يجرى تصميم‎ toxins ‏من أجل‎ tie ‏ليكون إخماد النشاط الكيميائي في صورة‎
DOE ‏تتضمن العوامل المختبرة في‎ (DOE) (design of experiment) ‏إحصائي للتجربة‎ .)٠١و‎ 5 ‏والزمن (الجدول‎ EDC/NHS ‏تركيز‎ (formaldehyde/glycine ‏درجة الحرارة» تركيز‎ ‏لمراقبة فقد النشاط الحيوي؛ تتحدد قيم 5050 في خلايا 10/1490. إضافياء يراقب أيضا شكل‎ ‏الذي يبين الشكل‎ ed ‏عند نقاط زمنية مختلفة بعد المعالجة. انظر الشكل‎ IMR-90 ‏الخلية لخلايا‎ Yo
Evo
عند ‎VY‏ ساعة بعد المعالجة. لتحديد التأثير على بناء ‎protein‏ يراقب إدراك ‎epitope‏ بتحليل نقطة- بقعة باستخدام مجموعة من أجسام مضادة أحادية النسخ ناشئة ضد مجال سيطرة مختلفة من ‎toxin‏ ‏جدول 4: المعايير المختبرة من أجل ‎DOE‏ 706106ا06/6ل/ا0111712106- تلاق ‎ad‏ ‏من ايم رج ‎Fo) ol‏ ‎(he fo) 0 5‏ كيز 0002100 علي ‎(om‏ ‎(leo) 60606 35‏ © جدول ‎:٠١‏ المعايير المختبرة من أجل ‎EDC/NHS DOE‏ الاق ‎ed‏ ‎cho‏ ‎Fo) son‏ كيز 1000 إمج] ‎he‏ ‎(os pe) EDC‏ ‎(on ef) 658‏ في إخماد ‎formaldehyde/glycine Lili‏ من أجل 5 طفرية ‎difficile‏ .0؛ يتم اختيار شروط التفاعل النهائية بحيث يتحقق المستوى المطلوب لتقليل النشاط السام للخلايا ‎SY)‏ + لوغاريتم١٠) ‎Laie‏ يكون إدراك ‎epitope‏ في درجة قصوى. انظر المثال 20 أعلاه. في إخماد نقاط ‎EDC/NHS‏ من أجل 5 طفرية ‎difficile‏ .؛ يتم اختيار شروط ‎٠‏ التفاعل النهائية بحيث يتحقق المستوى المطلوب لتقليل النشاط السام للخلايا (7 إلى + لوغاريتم١٠) ‎Laie‏ يكون إدراك ‎epitope‏ في درجة قصوى. انظر المثال 21 أعلاه. في تجسيد بديل؛ يخمد تفاعل ‎EDC-NHS‏ بإضافة ©818010؛ الذي يخمد التفاعل بدرجة كافية. قد يؤدي استخدام ‎alanine‏ إلى تعديل على ‎toxin protein‏ الطفري مشابه للتعديل عند
إخماد التفاعل بواسطة ©7017ا9. على سبيل المثال؛ فإن الإخماد بإضافة ‎alanine‏ قد ينتج جزء 6 على سلسلة جانبية لمتخلف ‎glutamic acid‏ و/أو ‎aspartic acid‏ من ‎toxin‏ ‏الطفري. في تجسيد ‎(hay HAT‏ يخمد تفاعل ‎EDC-NHS‏ بإضافة ‎«glycine methyl ester‏ والذي يخمد التفاعل بدرجة كافية. ‎o‏ إن إنتاج ‎C. difficile toxin BC. difficile toxin A‏ طفرة ثلاثية خامد النشاط كيميائيا تحت شروط مثلى يؤدي إلى تقليل إضافي في السمية الخلوية المتخلفة إلى مستوى لا يمكن اكتشافه ‎٠٠٠١>(‏ ميكروجرام/ ملليلتر - أعلى تركيز مختبر في اختبار ‎(CPE‏ بينما يستبقى ‎alg‏ المضاد حسب القياس بالنشاط مع الأجسام المضادة المعادلة التي تخص ‎toxin‏ ‏تظهر النتائج المبينة في الجدول ‎YA‏ تقليل على خطوات في السمية الخلوية من ‎WE toxin‏ حتى ‎toxins | ٠‏ طفرة ثلاثية معالجة مع ‎.EDC/NHS‏ يؤكد تعليم استشعاع ‎elie‏ أن ‎toxins‏ الطفرة الثلاثية (تعريفات الترتيب أرقام: ؛ ‎(Ts‏ ومواد عقار ‎tOXIN‏ طفري تظهر ارتباط مقارن مع خلايا ‎IMR-90‏ مما يقترح أن فقد السمية الخلوية ليس بسبب ارتباط قليل مع الخلايا (البيانات غير مبينة). بالمقارنة مع مادة عقار ‎A‏ 010 طفري؛ تحقق ‎ale‏ عقار 8 ‎toxin‏ الطفري اختزال أكبر في عدد المرات في السمية الخلوية؛ وذلك متطابق مع الفعالية الأكبر حوالي ‎spe 10٠0‏ الملحوظة ‎Yo‏ مع ‎TcdB‏ مقارنة مع ‎.TcdA‏ ‏جدول ‎tYA‏ ملخص السمية الخلوية ‎١ Toxin‏ العينة 00 عدد مرات الاختزال في السمية الخلوية هم ‎TedA|‏ (تعريف الترتيب رقم: ‎٠,1١ )١‏ نانوجرام/ ملليلتر ‎toxin A‏ ثلاثتي الطفرة (تعريف ‎١٠١5‏ ميكروجرام/ يأرلا الترتيب رقم: 2( ملليلتر مادة عقار ‎toxin A‏ طفري < ‎Kae Yeo‏ 9 جرام/ < ‎ee‏ .ماي ملليلتر ‎wi oi] 8‏ 0 ]2 يتل سير
١و‎ ٠85060 | ible ‏الطفرة (تعريف | 0 نانوجرام/‎ SDE toxin 8
I a lies نتائج اختبار السمية الخلوية لأجل 8 ‎toxin‏ طفري معدل بواسطة ‎EDC‏ فقط؛ أو بواسطة ‎EDC‏ ‎sulfo-NHS 4‏ تم اختبارها أيضا. انظر الجدول 79. ‎١95 ‏جدول‎ ‏العينة السمية الخلوية التعليق ‏اا = ‎(CPE) ‏4 1608 (تعريف الترتيب | ‎٠,07‏ ‏اا ل ‎«TM TedB-EDC 1‏ بدون | «<لأكى تفاعل مع ‎EDC‏ فقط ‏اا ال ‎TM TedB-EDC 2‏ بدون ‎,Av>|‏ مستحضر مضاعف ‎Ha ‏الك‎ ‎sulfo-NHS 5 EDC ‏تفاعل مع‎ ‘Yo [TM TcdB-EDC 3 ‎i I ‎٠١٠7011 TcdB-EDC 4‏ مستحضر مضاعف ‎ln ‏اا‎ ‎sulfo-NHS 5 EDC ‏تفاعل مع‎ vo.|TM 108-806 3 ‎i ‏الا‎ ‎sulfo-NHS 5 EDC ‏تفاعل مع‎ ve. | TM TcdB-EDC 4 ‎i ‏اا‎ ‏الشروط: يعدل ‎toxin B‏ طفرة ثلاثية ‎(“TM TedB”)‏ (تعريف الترتيب رقم: 1( بنسب وزن ‎tOXIN‏ ‎B ©‏ طفري:115:506ل50160-1 = 95:0,5:1,. إن هذه النسبة هي المكافئ الجزيئي الجرامي ‏(مصحح بالنسبة لوزن جزيئي أكبر من ‎(sulfo-NHS‏ لتفاعل ‎EDC/NHS‏ القياسي حسب ‏الوصف في المثال 21. لتحديد تأثير 115ل50160-1؛ تختلف نسبة ‎sulfo-NHS‏ من 0.5% إلى
‎2X‏ النسبة القياسية. تجرى تفاعلات مضاعفة في ‎x PBS‏ 1« أس هيدروجيني ‎VY‏ عند ‎Yo‏ *"منوية ‎fas,‏ بإضافة محلول ‎LEDC‏ بعد ساعتين؛ تخمد التفاعلات بإضافة ‎١ glycine‏ جزيئي جرامي؛ أس هيدروجيني 7 (تركيز نهائي ‎١١‏ جزيئي جرامي) وتحضن لمدة ساعتين إضافيتين. يزال الملح من التفاعلات المخمدة وتركز مادة عقار 8 ‎toxin‏ طفري ‎(“TM TedB-EDC”)‏ باستخدام أجهزة © 20 85010//؛ وترشح معقمة في زجاجات معقمة وتطرح للاختبار في اختبار سمية خلوية. عند نفس النسبة الجزيئية الجرامية؛ فإن ‎sulfo-NHS‏ يقلل 050 إلى حوالي ‎Yoo‏ ‏ميكروجرام/ ملليلتر مقارنة مع ‎٠٠٠١٠١>‏ ميكروجرام/ ملليلتر من أجل ‎NHS‏ حتى عند ضعف النسبة الجزيئية الجرامية؛ فإن ‎sUIfO-NHS‏ لا يبدوا مؤثرا مثل ‎NHS‏ في تقليل السمية الخلوية. انظر الجدول ‎Jo‏ ‏7" ‏جدول ‎٠‏ 7 التعديل هضم مرجعي 1608) | هضم مقارن ‎NHS‏ هضم عينة ‎Sulfo-NHS | )1608 EDC 001) EDC 004)‏ مادة مجمعة £9 ‎yo Ya‏ ‎glycine‏ ‎ov)‏ دالتون) ‎٠| beta—alanine‏ 1 صفر ‎VI +)‏ دالتون) روابط متقاطعة ‎١‏ لا ¢ و ‎VY A=)‏ دالتون)
-/ا6١-‏ ‎I EE A ECE‏ لتحديد عدد ونوع التعديلات؛ يجرى تخطيط ‎peptide‏ على عينات 8 ‎toxin‏ ثلاثي الطفرة خامدة النتشاط مع كل من ‎EDC/NHS‏ و115ل00/50110-1ا. تلتحظ في كل العينات المقادير المتشابهة من مواد مجمعة ‎«glycine‏ روابط متقاطعة و ‎.dehydroalanine‏ على أية حال في عينة ‎sulfo-NHS‏ لا يلاحظ وجود ‎.beta—alanine‏ ‏2 يخمد نشاط ‎B‏ 1010 نوع بري (تعريف الترتيب رقم: 7) باستخدام البروتوكول القياسي (انظر المثال 21)؛ 8 ‎٠5 ¢v,0:0:) NHS:EDC:toxin‏ 7"مثوية لمدة ساعتين في ‎Xx PBS‏ 1« أس هيدروجيني 7ء؛ ثم يخمد مع ‎١ glycine‏ جزيئي جرامي (تركيز نهائي ‎٠,١‏ جزيئي جرامي) ويحضن لمدة ساعتين إضافيتين. يزال الملح من العينة؛ تركز وتخضع لاختبار سمية خلوية. إن قيمة ‎EC50‏ لهذه العينة <؛ ‎YE‏ نانوجرام/ ملليلتر. ‎Ye‏ مثال 23: دراسات الاسترجاع لتحديد حدوث استرجاع مع ‎toXins‏ طفرية ‎difficile‏ 0.2.0 خامدة النشاط إما مع ‎formaldehyde/glycine‏ أو 005 ؛ تحضن عينات من ‎toxins‏ طفرية خامدة النشاط ‎V)‏ مجم/ ملليلتر) عند © 7""مثوية لمدة 1-0 أسابيع. تزال قواسم تامة كل أسبوع وتحدد ‎EC50 af‏ في خلايا ‎IMRO0O‏ إن عينة واحدة خامدة النشاط مع ‎formaldehyde/glycine‏ لا تحتوي على ‎formaldehyde Vo‏ وتحتوي على عينة واحدة 70.09 ‎formaldehyde‏ تقاس 050 باختبار ‎.CPE‏ ‏جدول ‎:١١‏ النتائج من دراسة استرجاع ‎TedA‏ خامد النشاط زمن الحضانة (أيام) ‎EC50‏ (اختبار خلية ‎(IMROO‏ ‏خامد النشاط مع ‎formalin‏ ‏يبساتاتتتسساسدون ‎E D C/N H 5 7 ve ١‏ ‎formaldehyde formaldehyde‏ صفر ‎٠‏ ميكروجرام] | ‎٠٠٠١‏ ميكروجرام] | ‎٠٠٠١‏ ميكروجرام/
“VENA ‏ميكروجرام/‎ ٠ ‏ميكروجرام/ | غير محدد‎ LF. 71١
I ‏ااه انا‎ ‏؟؟ ميكروجرام/ | غير محدد غير محدد‎ 1 vo ] eel © ‏بعد‎ .)١١ ‏متخلف؛ يلاحظ استرجاع جزئي (الجدول‎ formaldehyde ‏عند 75*مئوية في غياب‎ ‏أسابيع» يزداد النشاط السام للخلية ؟ مرات تقريبا. برغم زيادة النشاط السام للخلية؛ بعد © أسابيع لا‎ ‏الأصلي. يتم منع الاسترجاع كليا بتضمن‎ toxin ‏مقارنة مع‎ ٠١متيراغول‎ Vv ‏يزال هناك اختزال‎
EDC/NHS ‏تركيز 70,09. لا يلاحظ استرجاع في عينة خامدة النشاط مع‎ aie formalin ‏ميكروجرام/ ملليلتر‎ ٠٠٠١> ‏أسابيع؛ تظل قيم 050 عند مستوى البداية‎ ١ ‏حضانة‎ jae ‏على‎ © ‏ثلاثي الطفرة معالج مع 500/1015 (تعريف الترتيب‎ toxin A ‏لكل المجموعات الأربعة لكل من‎ ‏(تعريف الترتيب رقم: 1). على‎ EDCNHS ‏الطفرة معالج مع‎ SDE toxin By (0 ‏رقم:‎ ‎)4 ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ Fl ‏ثلاثي الطفرة المعالج مع‎ toxin A ‏النقيض» فإن قيم 5050 لأجل‎ ‏(تعريف الترتيب رقم: 76) لم تكن ثابتة وقد انخفضت إلى‎ FI ‏ثلاثي الطفرةٍ المعالج مع‎ toxin ‏و8‎ ‏بدرجة غير متوقعة؛ مما يدل على حدوث زيادة في السمية الخلية أو استرجاع‎ ALB 5050 ‏قيم‎ ٠
AY ‏لإخماد النشاط. انظر الجدول‎ ‏ميكروجرام/‎ ٠٠٠١ >( ‏بالإضافة إلى تقليل ثبات السمية الخلوية إلى مستوى غير محدد‎
JEDC ‏غير المنشطة باستخدام‎ toxins sila ‏فإن‎ (CPE ‏ملليلتر. حسب القياس بواسطة اختبار‎
FY ‏انظر جدول‎ toxin ‏متعادلة‎ mAbs ‏التي تكون أهدافا لأجل‎ Ala epitopes ‏تستبقي‎ NHS ‏نفس محددات مولد المضاد.‎ 238 toxins Fl ‏تبين طفرة‎ ١
-١58- ‏جينية واستبقاء‎ Toxins ‏من طفرة‎ NHS [EDC ‏جدول ١؟: سمية خلوية مختزلة غير نشطة‎ ‏محددات مولد مضاد هامة‎ (Rmax)b ‏الاختزال في | أقصى ارتباط‎ EC50 ‏العينة‎ ‎2 ‎1 7 ‏الخلويمة ا"‎ ‏بالنسبة إلى‎ wt toxin (logl0O)a
Ya Ya Yoo £0 VYo |As dl ‏ثلاثية ميكروجرام/‎
Alle] Ga ‏الترتيب رقم:‎ 8 ov 04 LE<| ٠... <|As il ‏ملليلتر‎ ‎Voy q¢ qu LE<| ٠... <|[As ah [eas ‏ثلاثية ميك‎ ‏ملليلتر‎ JEDC
NHS
Ya Ya Yoo ‏7,؟‎ ١ ‏طفرة 1418 نانوجرام/‎
Alle ‏ثلاثية‎ ‎a) ‏الترتيب رقم:‎ (1 ut Ty Ty At ٠٠.٠١ >١8 ‏طفرة‎ ‏ملليلتر‎ ‎(voy
‎OW —‏ \ _ طفرة 8 > ‎YA AY Ag ٠...‏ 7 ثلاثيمة |ميكروجرام/ ‎[EDC‏ ملليلتر ‎NHS‏ ‏8: تقاس السمية الخلوية باستخدام اختبار ‎CPE‏ على خلايا ‎IMRO0‏ ‏©: تتحدد القيم بواسطة تحليل ‎Biacore™‏ باستخدام ‎MADS‏ متعادلة متعددة مباشرة عند ‎toxin‏ ‎epitopes‏ غير متداخلة مختلفة ©: معدلات القيم من التجربتين ‎id 0‏ لأجل الصفوف الثلاثة الأولى» فإن ‎mAb‏ المتعادلة ‎١"‏ "7 " يفير إلى -60م ‎mAbs‏ ‎A65-33 5 880-29 (22‏ لأجل ‎toxin A‏ على التوالي. لأجل الصفوف الثلاثة السفلى؛ فإن ‎mAb‏ المتعادل ‎١" 7" ١١‏ يشير إلى 88-26 ‎(mAbs‏ 859-3 و8-56-15 لأجل ‎toxin‏ ‏8؛ على التوالي. ‎١١‏ ‎Jt‏ 24: دراسات إكلينيكية أولية للتولد المناعي تتضمن الأهداف الإكلينيكية الرئيسية الأولية اختبار تركيبات تتضمن ‎A‏ 10105 و8 طفرية ‎difficile‏ .6 في حيوانات صغيرة وحيوانات رئيسة غير آدمية (10/10). تحصن فثران وهامسترات لتحديد؛ من بين أمور أخرى, ما إذا كانت تركيبات ‎difficile‏ .6 قادرة على توليد ‎١‏ أجسام مضادة معادلة ضد ‎A‏ 10*10 و8 الطفري. تختبر مولدات المضاد لحث استجابات جسم مضاد معادل في المصل عقب سلسلة من التحصينات في الفئران» الهامسترات؛ وقردة مكاك سينومولجس. تصوغ ‎toxins‏ الطفرية الجينية و/أو خامدة النشاط كيميائيا في إما ‎fie‏ أس هيدروجيني متعادل؛ مثبت أس هيدروجيني ‎caluminum phosphate‏ أو مثبت أس هيدروجيني vey ‏كمادة مساعدة في بعض التجسيدات. تختبر عامة استجابات جسم‎ ISCOMATRIX ‏يحتوي على‎ ‏معادل بعد حوالي ؟ إلى ؛ أسابيع من كل جرعة تعزيزية أو الجرعة النهائية.‎ alias ‏يظهر اختبار معادلة 10*10 قدرة مصل مضاد على معادلة التأثير السام للخلية بسبب‎ ‏ولذلك فهو قادر على قياس النشاط الوظيفي لأجسام‎ ©. difficile 1608 ‏أو‎ C. difficile TcdA ‏على خط خلية ليفية أولية رثوية آدمية؛‎ toxin ‏مضادة موجودة في العينة. يجرى اختبار معادلة‎ © ‏على طبق دقيق‎ IMR-90 ‏حساس لكل من 120/8 و1008. باختصار؛ تنثر خلايا‎ dIMR-90 ‏العيار به 97 عين لتخدم كهدف للسمية الخلوية التي يسببها 10*10. تحلل كل عينة مصل اختبار‎ ‏و1008. تخلط تخفيفات متسلسلة ملاثئمة من‎ TedA ‏بصورة منفصلة من أجل القدرة على معادلة‎ ‏أمصال مضادة للاختبار مع تركيزات ثابتة من 100/8 أو 1008 وتحضن عند 7١7*مئوية لمدة‎ toxins ‏للسماح بحدوث معادلة لأجل‎ (CO2 75 ‏دقيقة في حضانة رطبة (77*مئوية/‎ 4 ٠ ‏بالنسبة لمراقبة الجودة؛ تتضمن كل الأطباق عينات قياسية مرجعية وعينات مقارنة تتضمن أجسام‎ ‏دقيقة؛ يضاف خليط 10*17- المصل المضاد إلى‎ 9٠0 ‏معلومة العيار. بعد‎ tOXIN ‏مضادة ضد‎ sale ‏ساعة إضافية. عقب ذلك؛ تضاف‎ YY ‏وتحضن الأطباق لمدة‎ IMR-90 ‏طبقة أحادية لخلية‎
Adenosine Triphosphate ‏إلى طبق الاختبار لتحديد مستويات‎ Cell Titer—Glo® ‏خاضعة‎ ‎(Relative ‏الموجودة في الخلايا النشطة أيضيا وتقاس وحدات إضاءة نسبية‎ (ATP) Vo ‏كبير إلى حيوية عالية للخلية؛ وتتناسب‎ ATP ‏يشير مستوى‎ (RLU) Luminescence Units) ‏بواسطة الجسم المضاد الموجود في العينة.‎ toxin ‏المستويات طرديا مع مقدار المعادلة لأجل‎ ‏مقابل قيمة التخفيف لعينة الأمصال‎ RLU ‏بيانات‎ Wily ‏بالنسبة للبيانات الإكلينيكية الأولية؛ ترسم‎ (Four— ‏مطابقة استجابة تراجع منطقي رباعي المعيار‎ Sate ‏المضادة للاختبار لتوليد‎ ‏(ا4-0). تمثل عيارات المعادلة كقيمة تخفيف العينة التي تظهر تقليل‎ Parameter Logistic) ٠ ‏في السمية الخلوية.‎ muC. difficile2010-06 ‏مثال 25: دراسة تولد مناعي في فأر:‎ ‏طفري (تعريف‎ ©. difficile toxin 8 ‏إن غرض هذه الدراسة تحديد التولد المناعي لشكلين من‎ toxin ‏الترتيب رقم: 76)؛ كل منهما خامد النشاط كيميائيا بطرق مختلفة. في هذه الدراسة؛ يستخدم‎
‎o \ —‏ \ — 8 الطفري غير المعالج (تعريف الترتيب ‎tad)‏ 1 ( (خامد النشاط جينيا وليس خامد النشاط كيميائيا) كعينة مقارنة؛ مع وبدون مادة مساعدة. تحصن مجموعات من ‎٠١‏ فثران في العضل مع ‎٠١‏ ميكروجرام من مولد مناعي طبقا للجدول"١.‏ جدول ‎:١١‏ اختبار 8 ‎toxin‏ طفري خامد النشاط كيميائيا (تعريف الترتيب رقم: 6) في فثئران = ‎toxin B ١‏ طفري خامد | ‎Yo ٠١‏ في جرعة أولية أسبوع صفرء النشاط مع ‎(Formalin‏ | ميكروجرام العضل | جرعة تعزيزية الأسابيع في ‎Act (2)AIPO4‏ ‎toxin B Y‏ طفري خامد | ‎Yo ٠١‏ في جرعة أولية أسبوع صفرء النشاط من "(ب) في | ميكروجرام العضل | جرعة تعزيزية الأسابيع ‎Act (2)AIPO4‏ ‎toxin B Y‏ طفري خامد | ‎Yo ٠١‏ في جرعة أولية أسبوع صفرء ‎Jalal)‏ جينيا بدون مادة | ميكروجرام العضل | جرعة تعزيزية الأسابيع مساعدة مم ‎toxin B ¢‏ طفري خامد | ‎Yo ٠١‏ في جرعة أولية أسبوع صفرء ‎Lal al)‏ جينيا في | ميكروجرام العضل | جرعة تعزيزية الأسابيع ‎Act (2)AIPO4‏ 0 )( إخماد نشاط كيميائي = معالجة مع ‎(Formalin/glycine‏ + )4,5 لمدة 7 أيام (ب) إخماد نشاط كيميائي = معالجة مع ‎(EDC/NHS‏ ١٠"مئوية‏ لمدة ساعتين (ج) تركيز ‎١,8 = aluminum ion‏ مجم/ ملليلتر النتائج: لا تحدث تأثيرات ضارة في ‎hall‏ عقب كل إعطاء للقاحات المرشحة. كما هو مبين في الشكل ‎Laws ٠١‏ في الفثران في كل مجموعة زيادة مفاجئة ملحوظة في الأجسام المضادة المعادلة ‎Yo‏ ضد ‎toxin B‏ بعد الجرعة الثالثة مع ‎toxins‏ الطفرية المقابلة. ‎Evo‏
‎o —‏ \ _ اعتمادا على عيارات الأسبوع ‎OY‏ يبدو أنه في الفئران يولد 8 ‎toxin‏ الطفري الخامد النشاط مع ‎EDC‏ (المجموعة ‎toxins 5 )١‏ طفرية خامدة النشاط مع ‎formalin‏ (المجموعة ‎)١‏ يولد استجابات معادلة قوية. في غياب إخماد نشاط كيميائيا 1 يولد 8 ‎toxin‏ الطفري الجيني (تعريف الترتيب ‎tad)‏ 7( استجابات © معادلة بعد جرعتين (المجموعات ‎(EF‏ الأسبوع ‎(A‏ والتي يتم تعزيزها بعد الجرعة الثالثة ‎(E-File sand)‏ الأسبوع ‎(OY‏ ‏مثال 26: دراسة تولد مناعي في فأر: ‎muC. difficile2010-07‏ إن غرض هذه الدراسة هو تحديد التولد المناعي لأجل ‎A‏ 10005 و8 طفرية ‎C.‏ ‎sada difficile‏ النشاط كيميائيا (تعريفات الترتيب أرقام: ؛ و7؛ على التوالي)؛ إما منفردة أو في ‎Ve‏ اقتران. تصاغ مولدات المناعة لكل المجموعات مع ‎aluminum phosphate‏ كمادة مساعدة. تحصن مجموعة من 0 فثران في العضل مع ‎٠١‏ ميكروجرام من مولد مناعة طبقا للجدول ‎AY‏ ‎Vo‏ ‏جدول ‎VY‏ اختبار ‎toxins A‏ و8 طفرية جينية خامدة النشاط كيميائيا (تعريفات الترتيب أرقام: ؛ و7 على التوالي) في فثران ‎i‏ ‎toxin B ١‏ طفري خامد | ‎o ٠١‏ في ‎icp‏ أولية ‎Lali‏ مع 10ا01008() | ميكروجرام العضل | أسبوع صفرء (تعريف الترتيب رقم: 6) في جرعة تعزيزية
Neg of ‏اح رج) الأسابيع‎ 004 ‏ا‎ si ‏نه‎ ‎Y‏ 8 «للما طفري خامد | ‎٠١‏ في أجرعة أولية ‎Lali‏ مع ‎EDC‏ (تعريف | ميكروجرام العضل | أسبوع صفرء الترتيب رقم: 6) في جرعة تعزيزية 004 اح رج) الأسابيع ‎of‏ ‎YY (A ‏؟ ‎gyahtoxin A‏ خامد | ‎٠١‏ في أجرعة أولية التنشاط مع ‎formalin‏ | ميكروجرام العضل | أسبوع صفرء (تعريف الترتيب رقم: ؛) من جرعة تعزيزية ‎١‏ في 0004 (ج) الأسابيع ‎of‏ ‎YY (A ‎gyahtoxin A 3‏ خامد | ‎٠١‏ في أجرعة أولية ‎Lali‏ مع ‎EDC‏ (تعريف | ميكروجرام العضل | أسبوع صفرء الترتيب رقم: ؛) في جرعة تعزيزية 004 اح رج) الأسابيع ‎of‏ ‎YY (A ‏طفرية خامدة | لكل منهما في أجرعة أولية‎ toxins A+B ‏العضل | أسبوع صفرء‎ ٠١ | ‏في‎ Formalin ‏النشاط مع‎ ‏اخ رج) ميك روجرام جرعة تعزيزية‎ 004 ‏الأسابيع ؛؛‎
YY (A ‏0 معالجة مع ‎Formalin‏ = معالجة مع ‎fOrmalin/glycine‏ لمدة يومين عند © 7"مثوية؛ ‎toxin‏ ‏الطفري غير سام للخلايا ويحتفظ بالارتباط مع كل الأجسام المضادة أحادية النسخ التي تخص ‏07 الطفري المختبرة ‏(ب) معالجة مع ‎EDC‏ = معالجة مع ‎EDC/NHS‏ لمدة ؛ ساعات عند + 7*مثوية؛ ‎toxin‏ ‏© الطفري غير سام للخلايا ويحتفظ بالارتباط مع كل الأجسام المضادة أحادية النسخ التي تخص ‏07 الطفري المختبرة ‎(vo
— 00 \ _ ‎(a)‏ تركيز 100 ‎aluminum‏ = 0 + مجم/ ملليلتر النتائج: لا توجد تأثيرات ضارة في الفئران عقب كل إعطاء للقاحات المرشحة. كما هو مبين في الشكل ‎VY)‏ بعد جرعتين من ‎tOXINS‏ طفرية جينية خامدة النشاط كيميائيا؛ يتم تعزيز الأجسام المضادة المعادلة ضد ‎toxin: A‏ (المجموعات ‎(0-F‏ إلى عيارات بين ؟ و؛ لوغاريتم١٠‏ بينما © تظل الأجسام المضادة المعادلة ‎toxin Baia‏ (المجموعات ‎ALE (0 Y=)‏ بحيث لا يمكن ‎Cai‏ عنهاء وذلك متطابق مع البيانات من الدراسة الفأرية الموصوفة أعلاه (الشكل ‎.)٠١‏ يتم تعزيز الأجسام المضادة المعادلة ضد ‎toxin B‏ إلى ‎٠-7‏ لوغاريتم ‎١٠‏ في مجموعات ‎١‏ و 5 عقب الجرعة الثالثة (عيارات الأسبوع ‎(VY‏ وتصل إلى ذروتها بعد أسبوعين من الجرعة الرابعة (عيارات الأسبوع ‎(VE‏ تزداد بدرجة بسيطة عيارات الجسم المضاد المعادلة ضد ‎A‏ 10*10 في ‎٠‏ المجموعات 9-7 بعد التحصينات الثالثة (عيارات الأسبوع ‎(VF‏ والرابعة (عيارات الأسبوع ‎(VE‏ ‏مثال 27: دراسة تولد مناعي في هامستر: ‎hamC. difficile2010-02‏ إن غرض هذه الدراسة تحديد التولد المناعي وامكانية الحماية لطفرة ثلاثية ‎difficile‏ .© و ‎toxins‏ ‎A‏ و ‎ish B‏ خامدة النفشاط كيميائيا في نموذ ‎z‏ هامستر 3 هبي سوري. يمثل نموذج الهامستر الذهبي السوري نموذج اختبار الأفضل توافرا لمحاكات ‎CDAD‏ آدمي. تستخدم ‎VO‏ في هذه الدراسة نفس دفعات ‎toxins A‏ و8 الطفرية المستخدمة في الدراسة الفأرية ‎muC.‏ ‎Ldifficile2010-07‏ كمثال ‎(lie‏ تعطى مجموعة واحدة من ‎TOXINS‏ طفرية بدون مادة مساعدة تحتوي على ‎aluminum‏ ‏تحصن مجموعة من © هامسترات ذهبية سورية في العضل مع ‎٠١‏ ميكروجرام من مولد مناعة طبقا للجدول ‎NE‏ ‎Yo‏ جدول ؟١:‏ اختبار ‎Toxins A‏ و8 طفرية خامدة النشاط كيميائيا (تعريفات الترتيب أرقام: ؛ ‎ls‏ ‏على التوالي) في هامسترات ‎(hamC. difficile2010-02)‏ لمجموعة ‏ مواد المناعة لامج ‎toxins A+B ١‏ طفرية خامدة الكل منهما ‎of‏ |3— اجرعة أولية النشاط مع ‎Vo | (Formalin‏ العضل | أسبوع صفرء
_ أ ‎o‏ \ _ (تعريفات الترتيب أرقام: 4 | ميكروجرام جرعة تعزيزية و3) في ‎(2)AIPO4‏ الأسابيع ؛؛ ‎VY (A‏ ‎toxins A+B Y‏ طفرية خامدة | لكل منهما في اجرعة أولية ‎LL‏ مع ‎V+ | Formalin‏ العضل | أسبوع صفرء (تعريفات الترتيب أرقام: 4 | ميكروجرام جرعة تعزيزية 1( في ‎PBS‏ (بدون ‎sale‏ الأسابيع ؛؛ مساعدة) ‎VY (A‏ ‎toxins A+B 1‏ طفرية خامدة | لكل منهما في اجرعة أولية التشاط مع 206رب) | ‎Vo‏ العضل | أسبوع صفرء (تعريفات الترتيب أرقام: 4 | ميكروجرام جرعة تعزيزية و3) في ‎(2)AIPO4‏ الأسابيع ؛؛ ‎VY (A‏ ‎List Biological toxoid ¢‏ الكل منهما في جرعة أولية في ‎Yo (=)Al PO4‏ العضل أسبوع صفر ٍ ميكروجرام جرعة تعزيزية . الأسابيع ‎of‏ ‎VY A‏ 0 معالجة مع ‎Formalin‏ = معالجة مع ‎fOrmalin/glycine‏ لمدة يومين عند © 7"مثوية؛ ‎toxin‏ ‏الطفري غير سام للخلايا ويحتفظ بالارتباط مع كل الأجسام المضادة أحادية النسخ التي ‎add‏ ‏07 الطفري المختبرة (ب) ‎dallas‏ مع ‎EDC‏ = معالجة مع ‎EDC/NHS‏ لمدة ؛ ساعات عند ١7*مثوية؛ ‎toxin‏ ‏© الطفري غير سام للخلايا ويحتفظ بالارتباط مع كل الأجسام المضادة أحادية النسخ التي ‎add‏ ‏07 الطفري المختبرة (ج) تركيز ‎١,8 = aluminum ion‏ مجم/ ملليلتر ‎.١‏ الحيوانات: ‎VO‏ هامستر ذهبي ‎(gsm‏ إناث؛ ‎A=‏ أسابيع من العمر/ ‎٠30-٠٠١‏ جم لكل
-/ه ‎-١‏ ‏". التلقيح: في ‎٠,٠05 (Jamal)‏ ملليلتر لكل منهم؛ ‎lida‏ للبرنامج أعلاه. تتوافر ‎toxoids‏ بواسطة ‎Process Development‏ وتصاغ في ‎sale‏ تخفيف ‎AIPO4‏ بواسطة مجموعة المستحضرات. تخدم المجموعة ‎١‏ كمجموعة مقارنة بدون مادة مساعدة. ‎LY‏ النزف: تستنزف كل الهامسترات عند الأسابيع صفرء ‎of‏ 8؛ 5 ‎VY‏ مباشرة قبل كل تحصين © 4. تحليل عينة المصل: اختبار معادلة النتائج: لا توجد ‎ET‏ ضارة بعد التحصين مع ‎tOXINS‏ الطفرية. كما هو موضح في الشكل ‎VY‏ بعد جرعة واحدة من ‎tOXINS‏ الطفرية؛ تكون استجابات المعادلة لمضاد ‎toxin A‏ بين 7-؟ لوغاريتم ‎٠١‏ لأجل ‎toxins‏ الطفرية الخامدة النشاط مع ‎formalin‏ (المجموعات ‎)7-١‏ وبين ‎EF‏ ‏لوغاريتم ‎٠‏ لأجل 5 الطفرية الخامدة النشاط مع ‎EDC‏ (المجموعة ‎(FV‏ بعد الجرعة الثانية؛ ‎Yo‏ يتم تعزيز الأجسام المضادة ضد ‎A‏ 10*10 في كل المجموعات الثلاثة. لا يبدو أن الأجسام المضادة ضد ‎tOXIN A‏ في كل المجموعات الثلاثة تزداد بعد الجرعة الثالثة. تلاحظ نتيجة مشابهة بعد التحصين الرابع؛ حيث تلاحظ زيادة في العيار في المجموعة الخامدة النشاط مع ‎formalin‏ ‏التي لا تحتوي على ‎sale‏ مساعدة ‎aluminum‏ (المجموعة ‎(Y‏ ‏إن استجابات معادلة ‎Baim‏ 10*10 لم يمكن كشفها في مجموعات ‎toxins‏ الطفرية ‎١‏ الخامدة النشاط مع ‎formalin‏ (المجموعات ١-؟)‏ وكانت مباشرة أعلى من ؟ لوغاريتم١٠‏ لأجل الطفرية الخامدة النشاط مع ‎EDC‏ (المجموعة ‎)١‏ بعد جرعة واحدة. بعد الجرعة الثانية؛ تزداد عيارات الجسم المضاد المعادل ضد 8 10710 في مجموعتي خامدة النشاط مع ‎formalin‏ ‏(المجموعات ‎)١-١‏ إلى ‎=F‏ لوغاريتم١٠‏ بينما تزداد تلك في المجموعة الخامدة النتشاط مع ‎EDC‏ (المجموعة ‎)١‏ إلى 2-4 لوغاريتم١٠.‏ بالنسبة لكل المجموعات ‎ADEN‏ تلاحظ زيادات في ‎٠‏ عيارات الجسم المضاد المعادل ‎toxin Baa‏ بعد الجرعتين الثالثة و/أو الرابعة؛ وتصل كل المجموعات إلى الذروة في العيار عند الأسبوع ‎VT‏ (بعد ‎AT‏ جرعة). انظر الشكل ‎AY‏ ‏في الشكل ‎VY‏ يقارن مستوى استجابات جسم مضاد معادل ضد ‎toxins‏ طفرية جينية خامدة النشاط كيميائيا (اللشكل ‎(VY‏ مع تلك الناتجة بواسطة ‎toxoids‏ ‎(Campbell, California) Inc. (List Biological Laboratories‏ (يشار إليها أيضا بأنها
م ‎o‏ \ — ‎“List Bio”‏ أو ‎(‘List Biologicals”‏ (أي؛ 05 مشتراة من ‎List Biological‏ ‎Laboratories‏ يتم تحضيرها بإخماد نشاط ‎formalin‏ لأجل 5 نوع بري؛ ويستخدم عامل حسب الاستخدام ‎cla‏ يشير ‎"١"‏ في الأشكال والجداول إلى معالجة ‎formalin/glycine‏ ‏5 لأجل ‎«toxins‏ يومين عند ‎(Ag 516° Yo‏ إذا لم يذكر خلاف ذلك. حسب الاستخدام ‎la‏ يشير ”اح“ في الأشكال والجداول إلى معالجة ‎EDC/NHS‏ لمدة ؛ ساعات عند ١٠*مثوية؛‏ إذا لم يذكر خلاف ذلك. في الشكل ‎AY‏ تعالج © حيوانات هامسترات مع تركيبة ‎toxin‏ الطفري الخاصة؛ بينما يعالج ‎١١‏ حيوان هامستر مع ‎toxoid‏ المشترى من ‎List Biological‏ تبين البيانات في الشكل ‎VY‏ أنه؛ في هامسترات معطاة ‎Lada‏ للجدول ‎VE‏ فإن ‎٠‏ عيارات الجسم المضاد المعادل الخاصة ضد ‎A‏ 10*10 (الشكل ‎١١‏ )(( و8 ‎toxin‏ (الشكل ٠(ب))‏ المحثة بواسطة التركيبة المولدة للمناعة المتضمنة ‎toxins‏ الطفرية الخامدة النشاط مع ‎EDC‏ بعد جرعتين تكون أعلى من عيارات الجسم المضاد المعادل الخاصة التي تسببها ‎List‏ ‎toxoids‏ 81010910815. مثال 28: دراسة تولد مناعي في هامستر: ‎C. difficile ham2010-02‏ (مستمرة) ‎Vo‏ لتحديد فعالية الحماية لأجل ‎toxins‏ الطفرية؛ تعطى أولا هامسترات محصنة؛ إلى جانبي مجموعة مقارنة من حيوانات غير محصنة؛ جرعة بالفم من مضاد حيوي ‎clindamycin‏ )+¥ مجم/ كجم) لتمزيق ‎flora‏ المعوية الطبيعية. بعد © أيام ؛ تختبر الهامسترات مع جرعة بالفم من جرثومات ‎C. difficile‏ نوع بري ‎feu ٠٠١ «630 ADL)‏ حيوان). تراقب الحيوانات يوميا لمدة ‎١‏ يوم بعد الاختبار من أجل علامات ‎(CDAD‏ والمعروفة في الهامسترات بأنها ذيل مبلل. ‎Ye‏ باستخدام نظام ‎pad‏ درجي إكلينيكي مع عدد من المعايير المختلفة؛ يتم قتل الحيوانات التي لديها ‎CDAD‏ شديد. تتضمن المعايير النشاط بعد الإثارة؛ الجفاف؛ البرازء ‎ia‏ الحرارة» والوزن» إلخ؛ وهفي معروفة في الفن. عند اليوم ١٠؛‏ تنتهي الدراسة وتقتل كل الحيوانات الحية. يبين الشكل ‎VE‏ منحنيات البقاء على قيد الحياة لكل من المجموعات الثلاثة المحصنة (المجموعات ١-؟؛‏ طبقا للجدول ‎(VE‏
‎o q —_‏ \ _ مقارنة بالحيوانات المقارنة غير المحصنة. حسيما يتضح؛ تصاب كل الحيوانات غير المحصنة بمرض ‎CDAD‏ شديد وتحتاج إلى قتلها بين الأيام ١-؟‏ بعد التجريع (البقاء على قيد الحياة صفرة). إن كلا من المجموعتين المعطاة ‎toxin‏ طفري خامد النشاط مع ‎formalin‏ لديها منحنيات بقاء على ‎ad‏ الحياة ‎ZT‏ ولا تحتاج الحيوانات إلى القتل حتى اليوم ؟ (المجموعة ‎)١‏ أو © اليوم ؛ (المجموعة 7). إن المجموعة المعطاة ‎toxin‏ طفري خامد النشاط مع ‎EDC‏ لديها منحنى بقاء على قيد الحياة ‎JA‏ ويتقل ‎١‏ (من °( حيوانات عند اليوم ‎LY‏ طيقا ‎SUA‏ فإن الهامسترات تتم حمايتها من التحدي المميت مع جرثومات ‎.C. difficile‏ مثال 29: دراسة تولد مناعي في هامستر: ‎hamC. difficile2010-03‏ تولد مناعي لأجل ‎toxins‏ طفرية ‎difficile‏ .© جينية وخامدة النشاط كيميائيا ‎Va‏ إن غرض هذه الدراسة هو تحديد التولد المناعي لأجل ‎toxins A+B‏ طفرة ثلاثية ‎difficile‏ .© بدون مادة مساعدة وطفرية خامدة النشاط كيميائيا (تعريفات الترتيب أرقام: ؛ و؛ على التوالي) في نموذج هامستر ذهبي سوري. تستخدم في هذه الدراسة نفس دفعات 10105 ‎A+B‏ الطفرية (تعريفات الترتيب أرقام: ؛ و7؛ على التوالي) المستخدمة في الدراسة الفأرية .00100 01001162010-7. كعينة ‎Ale‏ تعطى مجموعة واحدة (المجموعة ‎)١‏ محلول ملح ثابت الأس ‎Vo‏ الهيدروجيني مع ‎phosphate‏ كعلاج وهمي. تحصن مجموعات من * أو ‎٠١‏ هامسترات ذهبية سورية مع ‎alge‏ مضاد طبقا للجدول ‎Yo‏ تعطى الحيوانات ؟ جرعات. إضافياء تجرع الحيوانات كل أسبوعين. جدول ‎Vo‏ النظام التجريبي لتحصين واختبار تحمل هامستر نامج ‎١‏ علاج وهمي (مثبت أس ‎NA NA‏ هيدروجيني ‎(PBS‏ ‎toxin A+B \‏ طفري الكل منهما | ‎٠١‏ أفي العضل | جرعة أولية (تعريفات الترتيب أرقام: ؛ | ‎٠١‏ الأسووع و ‎a‏ على التوالي) ؛ خامد ميكروجرام صفر 3 ‎icp‏
AY.
YE PP Formalin ‏النشاط مع‎
OF ‏الأسابيع‎ ‎3 ‏افي العضل | جرعة أولية‎ ٠١ | ‏طفري الكل منهما‎ 0 A+B 1 ‏الأسوع‎ ٠١ | 4 ‏(تعريفات الترتيب أرقام:‎ ‏على التوالي)؛ خامد | ميكروجرام صفر؛ جرعة‎ Tg ‏تعزيزية‎ EDC ‏النشاط مع‎
OF ‏الأسابيع‎ ‎3 ‏افي العضل | جرعة أولية‎ ٠١ | ‏طفري الكل منهما‎ 0 A+B ¢ 2 ٠١ | 4 ‏(تعريفات الترتيب أرقام:‎ ‏على التوالي)؛ جيني | ميكروجرام صفر؛ جرعة‎ Tg ‏تعزيزية‎ ‎OF ‏الأسابيع‎ ‎3 ‏في مجموعة‎ 8 Jtoxin A ‏تلاحظ أجسام مضادة ضد‎ ale ‏النتائج: انظر الشكل‎ ‏بين‎ 10710 A ‏واحدة؛ يلاحظ وجود أجسام مضادة معادلة ضد‎ deja ‏العلاج الوهمي المقارنة. بعد‎ toxin ‏ومجموعات‎ )١ ‏(المجموعة‎ formalin ‏للمجموعات الخامدة النشاط مع‎ ٠١متيراغول‎ FY
EDC ‏للمجموعة الخامدة النشاط مع‎ ٠١متيراغول‎ $F ‏الطفري الجيني (المجموعة ؛) وبين‎ -7( ‏في كل من هذه المجموعات‎ toXin A ‏تزداد الأجسام المضادة المعادلة ضد‎ L(V ‏(المجموعة‎ © ‏الطفرية المقابلة (قارن العيارات عند الأسبوع ؟ إلى الأسبوع‎ toxins ‏؛) بعد التحصين الثاني مع‎ ‏الطفرية (المعطاة في الأسبوع ؛)؛ تزداد‎ toxins ‏بعد الجرعة الثالثة من‎ (Vo ‏؟ في الشكل‎ ‏مقارنة بعياراتها عند الأسبوع‎ =F ‏في المجموعات‎ 10*17 A ‏عيارات الجسم المضاد المعادل ضد‎ . ‏يمكن الكشف عن أجسام مضادة معادلة ضد 8 10*10 بعد الجرعة الثانية؛ حيث تزداد‎ Ya ‏والخامدة‎ )١ ‏(المجموعة‎ formalin ‏الخامدة النشاط مع‎ toxin 8 ‏الأجسام المضادة المعادلة ضد‎ ‏للطفرة الثلاثية‎ ٠١متيراغول‎ YoY ‏بين‎ (Js ٠١متيراغول‎ 4-7 ‏(المجموعة 7( بين‎ EDC ‏النشاط مع‎
-١١1- ‏الجينية (المجموعة ؛). عقب التحصين الثالث (الأسبوع ؛)؛ يتم تعزيز الجسم المضاد المعادل‎ formalin ‏الطفرية الخامدة النشاط مع‎ toxins ‏من أجل‎ ٠١ ‏إلى بين 4-7 لوغاريتم‎ toxin B ‏ضد‎ ‎toxins ‏من أجل‎ ٠ ‏الطفرة الجينية (المجموعة ؛) وبين 4 -© لوغاريتم‎ toxins 5 )١ ‏(المجموعة‎ ‎.)١ ‏(المجموعة‎ EDC ‏الطفرية الخامدة النشاط مع‎ ‏تلاحظ عيارات‎ (toxin 8 ‏وضد‎ toxin A ‏بالنسبة لكل من الأجسام المضادة المعادلة ضد‎ ° (£7 ‏لكل المجموعات الملقحة (المجموعات‎ (YF ‏ذروة عند الأسبوع 6 (بعد الجرعة‎
ISCOMATRIX i Alhydrogel/CpG ‏اختبار تركيبات مولدة للمناعة مع مادة مساعدة‎ ‏في الهامسترات المحصنة مع تركيبة مولدة للمناعة متضمنة 10*10 طفري خامد‎ Lay
Alhydrogel /CpG24555 ‏أو‎ (ISCOMATRIX (Alhydrogel ‏النشاط كيميائيا محضر مع‎ ‏فجائية. يلاحظ أن استجابات الذروة لمضاد‎ toxin ‏(6م0/6ل2) أمصال مضادة معادلة ضد‎ ٠ ‏مرات ومفيدة إحصائيا في المجموعات المحصنة‎ YY ‏ولمضاد 8 10*10 أكبر بمقدار‎ toxin A ‏عند المقارنة بلقاح مصاغ مع‎ ISCOMATRIX ‏أو‎ Alh/CpG ‏مع 10775 طفرية مصاغة في‎ ‏تحصن الهامسترات‎ .75 ٠. ‏الذي يبين عيارات معادلة‎ YY ‏وحده. انظر الجدول‎ Alhydrogel ‏ميكروجرام من كل من‎ ٠١ ‏المجموعة) في العضل عند صفرء 7 و؛ أسابيع مع‎ /٠١ = ‏(العدد‎ ‏ميكروجرام من‎ ٠٠١ ‏طفري مصاغة مع‎ 10*10 B lie ‏طفري ومادة‎ 10*10 A ‏عقار‎ sale Vo sAlhydrogel ‏ميكروجرام من‎ ٠٠١ + CPG 24555 ‏ميكروجرام من‎ ٠٠١ ‏ا©0209لاطلل؛ أو‎ ‏وحدات من 15000//871416. تجمع الأمصال عند كل نقطة زمنية وتحلل في اختبار معادلة‎ ٠ ‏من أجل النشاط الوظيفي مضاد 10*10. تتوافر عيارات متوسط حسابي هندسي في الجدول‎ toxin ‏عند المقارنة مع العيارات في‎ ( v, 00 >p) ‏تشير العلامة النجمية )*( إلى دلالة إحصائية‎ JY
Alhydrogel ‏مجمرعة‎ ٠ ‏التولد المناعي لمواد عقار 1017 طفري مع مادة مساعدة في هامسترات‎ VY ‏جدول‎ ‎15. ‏حار معئلة‎ 1 ‏لأسبوع‎ ios ‏الأسبوع‎ Y ‏الأسبوع‎ Y ‏ا لأسبوع الأسبوع الأسبوع‎ ١| ‏صفر‎ ‏61لا‎
-١١7- ٠5 TYYA ‏ذلا‎ AA 9 ٠١| ‏عيار‎ ‎:Alhydrogel ‎20/006 ‏عد‎ ‎YAYEEE | ASTI VYYYeR | ygi® YW ove ee :ISCOMATRIX
I
‏أ للا‎ ١", 4 YYA Yo Yo ٠١| ‏عيار‎ ‎:Alhydrogel ‎20/006 ‏عد‎ ‎AYAYV* | YoV VY *[ VEYY* ١" VY ٠١| ‏عيار‎ ‎:ISCOMATRIX ‏طفري‎ toxin ‏تم اختبار كفاية الحماية للتركيبة المولدة للمناعة المتضمنة مواد عقار‎ ‏مجم/‎ Yo) ‏بالفم‎ clindamycin ‏المصاغة مع هذه المواد المساعدة. تحصن الهامسترات وتعطى‎ ‏كجم) في الاسبوع © ويختبر تحملها طبقا للطريقة الموصوفة أعلاه. تتضمن الدراسة مجموعة‎ ‏تلاحظ زيادة الكفاية في‎ ٠. ‏مقارنة‎ ic gas ( o = ‏واحدة من هامسترات غير محصنة (العدد‎
ISCOMATRIX ‏هامسترات محصنة مع مواد عقار 10*17 طفري مساعدة مع إما 6م0/حال أى‎ © ‏الحياة 796). طبقا‎ ad ‏وحده (البقاء على‎ Alnydrogel ‏مقارنة مع‎ (ZY) «+ ‏(البقاء على قيد الحياة‎ .C. difficile ‏لذلك؛ تتم حماية الهامسترات من اختبار التحمل المميت مع جرثومات‎ ‏في مكاك سينومولجس‎ Clostridium difficile ‏مثال 30: تطعيم‎ ‏طفرية‎ tOXINS ‏إن غرض هذه الدراسة هو اختبار التولد المناعي لجرعات قليلة وكبيرة من‎ ‏في مكاك سينومولجس.‎ Formalin ‏وخامدة النشاط مع‎ EDC ‏خامدة النشاط مع‎ 0. difficile | ٠ ‏كمادة مساعدة فيما عدا المجموعة ١؛ التي‎ ISCOMATRIX® ‏الطفرية في‎ toxins ‏تحضر كل‎ . (° ‏تخدم كمجموعة مقارنة بدون مادة مساعدة (المجموعة‎ ‏تحصين قردة مكاك سينومولجس‎ NT ‏جدول‎ ‏رمج‎ ‏في |جرعة أولية‎ ٠١١ Lage ‏الكل‎ oftoxins | 8 ١
طنربةاع ميكروجرام العضل | الأسبوع صفرء ‎(ISCOMATRIX)‏ جرعة تعزيزية الأسابيع 7 4
‎toxins | A+B Y‏ لكل منهما ‎١٠٠١‏ في |جرعة أولية طنربةاع ميكروجرام العضل | الأسبوع صفرء ‎(ISCOMATRIX)‏ جرعة تعزيزية
‏الأسابيع 7 4
‎toxins | A+B 1‏ لكل منهما ‎٠١١‏ )في |جرعة أولية طغربيقةاع ميكروجرام العضل | الأسبوع صفرء ‎(ISCOMATRIX)‏ جرعة تعزيزية
‏الأسابيع 7 4
‎toxins | A+B ¢‏ لكل منهما ‎١٠٠١‏ في |جرعة أولية طغربيقةاع ميكروجرام العضل | الأسبوع صفرء ‎(ISCOMATRIX)‏ جرعة تعزيزية
‏الأسابيع 7 4 ‎toxins | A+B‏ لكل منهما ‎١٠٠١‏ في |جرعة أولية طفرية-ا (بدون ميكروجرام ‎duns‏ | الأسبوع صفرء مادة مساعدة) جرعة تعزيزية
‏الأسابيع 7 4
‏الحيوانات: ‎YO‏ قرد مكاك سينومولجس تشير العلامة النجمية؛ ”*“؛ في الشكل ‎١6‏ إلى وجود ؛ قردة سينومولجس فقط في المجموعة للأسبوع ‎OY‏ قرد سينومولجس واحد في المجموعة يتم استتزافه في النهاية عند الأسبوع ‎A‏ ‏© التلقيح: في العضل؛ 0+ ملليلتر/ الجرعة؛ عند الأسابيع صفرء ‎oY‏ و4. تحضر تركيبات ‎toxin‏ ‏طفري حسب الوصف أعلاه. تصاخ تركيبات ‎toxin‏ الطفري في 15601//871416؛ ماعدا المجموعة 0 التي تصاغ في مثبت ‎(ul‏ هيدروجيني بدون مادة مساعدة.
-١64- ‏إن القتل والاستنزاف النهائي للحيوانات‎ .١7و‎ eA 7 4 oF ‏الاستنزاف: الأسابيع -7؛ صفرء 7ء‎
A ‏عند الأسبوع‎ ©. difficile ‏يكون مع أعلى عيارات‎ protein ‏ومعادلة‎ Protein ELISA ‏تحليل عينة مصل: اختبار‎ ‏في هذه الحيوانات‎ tOXIN ‏استجابات الجسم المضاد المعادل ضد‎ ١6 ‏النتائج: يبين الشكل‎ 3-١ ‏«لله! بين‎ A ‏تكون عيارات مضاد‎ .١7و‎ 8 Tf FY ‏عند الأسابيع صفرء‎ © ‏تتعزز هذه العيارات‎ L(Y ‏لكل المجموعات الخمسة بعد جرعة واحدة (عيارات الأسبوع‎ ٠١متيراغول‎ ‏بعد كل جرعة تالية لكل مجموعة. في هذه الحيوانات؛ لا يحدث انخفاض في العيار بين الأسبوع ؟‎ ‏و؛. لكل المجموعات؛ تكون عيارات الذروة بين 4 -9 لوغاريتم١٠. عند كل النقاط الزمنية؛ فإن‎ ‏(المجموعة 0( لديها أقل عيارات؛ مما يدل على‎ ISCOMATRIX ‏المجموعة بدون مادة مساعدة‎ ‏عند تعزيز الاستجابات المناعية. تصل المجموعة المقارنة بدون مادة‎ ISCOMATRIX ‏ااستعمال‎ - ٠ ‏تماما مثلما تفعل المجموعة المحصنة‎ VY ‏مساعدة (المجموعة ©( إلى عيارات الذروة عند الأسبوع‎ ‏(المجموعة ؛)؛ تصل كل‎ EDC ‏طفرية خاصة النشاط مع‎ toxins ‏مع جرعة عالية من‎ ‏المجموعات الأخرى إلى عيارات الذروة عند الأسبوع 7؛ أسبوعين بعد آخر جرعة. تتعزز العيارات‎ ‏في كل المجموعات بعد الجرعة الثانية (النقطة الزمنية الأسبوع 3). مثلما مع الاستجابات ضد‎ ‏لا تقل عن الأسبوع ؟ إلى الأسبوع ؛. بعد الجرعة‎ toxin 8 ‏م صللماء فإن الاستجابات ضد‎ ٠٠ ‏كل‎ toxin 8 ‏تكون عيارات الجسم المضاد المعادل ضد‎ oT ‏الثالثة (النقطة الزمنية الأسبوع‎ ‏قليلة‎ formalin ‏فيما عدا في المجموعة الخامدة النتشاط مع‎ ؛٠١متيراغول‎ =F ‏المجموعات بين‎ ‏الجرعة (المجموعة ؛)؛ في كل‎ dle EDC ‏والمجموعة الخامدة النشاط مع‎ )١ ‏الجرعة (المجموعة‎ ‏لكل المجموعات‎ ١١ ‏منهما عيارات مباشرةٍ >4 لوغاريتم١٠. تلاحظ عيارات الذروة عند الأسبوع‎ ‏(المجموعة 7)؛ التي تصل إلى عيارات‎ EDC ‏فيما عدا مجموعة قليلة الجرعة الخامدة النشاط مع‎ Yo .٠١متيراغول ‏الذروة عند الأسبوع 8. لكل المجموعات عيارات ذروة >؛‎ ‏مثال 31: إنتاج الأجسام المضادة أحادية النسخ‎ ‏مشتركة في كثير من التشابه البنائي؛ فإن الأنشطة المعادلة‎ 101005 A+B ‏برغم أن‎ ‏في هذا الاختراع؛ تحددت الأجسام المضادة كثيرة‎ toxin ‏للأجسام المضادة اتضح أنها تخص‎
-١١8- ‏عديدة ومجالات سيطرة وظيفية عديدة؛ ولها انجذاب‎ epitopes ‏منفرد» وموجهة إلى‎ toxin ‏تخص‎ ‏كبير ونشاط معادل قوي تجاه 1071075 أصلية. تعزل الأجسام المضادة من الفئران المحصنة مع إما‎ ‏متوافر تجاريا أو‎ (FI) (formalin inactivated) formalin ‏طفري خامد النشاط مع‎ toxin ‏طفري كامل مخلق (تعريفات الترتيب أرقام: ؛ و1) وتصبح غير سامة بإدخال طفرات‎ toxin epitope ‏على الترتيب. يبين تخطيط‎ toxin A+B mAb ‏خاصة في مكانها التحفيزي لإنتاج‎ © ‏موجهة إلى مجال‎ (OF ‏من‎ £9) toxin A ‏ضد‎ MAD ‏للأجسام المضادة أن الغالبية العظمى من‎ toxin ‏من‎ C= dhl ‏السيطرة غير التحفيزي‎ ‏تستهدف © مجالات سيطرة من‎ 10100 Baia ‏إن الأجسام المضادة أحادية النسخ‎ ‏خاصة بالنهاية-ل (مثلا؛‎ ١ ‏هناك‎ 007 B ‏يخص‎ 15 VV ‏من إجمالي‎ protein ‏للنهاية-) (مثلا؛‎ ١ )630 ‏نوع بري؛ مثل‎ ©. difficile 1608 ‏من‎ 47-١ amino 86105 ٠ ‏نوع بري؛ مثل 630) و© لمجال سيطرة‎ C. difficile 1608 ‏من‎ 171 1-187 4 amino acids
Ji ‏نوع بري؛‎ C. difficile 1608 ‏من‎ ٠877-١744 amino acids ‏الانتقال الوسطي (مثلا؛‎ ‏طفرية (مثلا؛ تعريفات الترتيب أرقام: ؛ و1‎ 0. difficile toxins ‏إن طريقة استخدام‎ .)60 ‏المولدة‎ epitopes «JS ‏كمولدات مضاد محصنة توفر بذلك ميزة أساسية لتقديم معظم؛ إن لم يكن‎ ‏التي تميل إلى التأثير بدرجة ضارة على‎ formalin ‏لمضاد مقارنة مع عملية إخماد النشاط مع‎ ١5 ‏الطفري.‎ toxin ‏البناء المولد لمضاد من‎ ‏الذي يتضمن سلسلة خفيفة متغيرة لها ترتيب‎ (A325 toxin ‏م‎ MAb ‏مثال 32: تمييز‎ ‏من‎ 800100 acid ‏وسلسلة ثقيلة متغيرة لها ترتيب‎ VT ‏من تعريف الترتيب رقم‎ 800100 acid
VY ‏تعريف الترتيب رقم‎ ‏له أهمية خاصة لأن هذا الجسم المضاد قد تحدى كل المحاولات‎ mAb A3-25 ‏إن‎ ٠ ‏الخاص به باستخدام مجموعات التحديد النوعي‎ (1g) ‏لتحديد النوع المماثل 910510 مناعي‎ ‏باستخدام‎ western ‏وه/وا. يبين تحليل إضافي بواسطة تبقع‎ IGM ‏المتوافرة تجاريا من أجل 96ا؛‎ ‏وهذا حدث نادر في‎ dgE ‏أن 83-25 من النوع المماثل‎ 1g H ‏أمصال مضادة تخص سلسلة‎ /3- ‏ورم هجين‎ WA ‏معزول من‎ MRNA nucleotide ‏هذا إضافيا بترتيب‎ XB ‏إنتاج طاهلهه.‎
-١١1- - ‏للمناطق المتغيرة للسلسلة‎ nucleotide ‏المستنتجة من ترتيبات‎ amino acid ‏إن ترتيبات‎ .5
AV ‏و-ا من 23-25 مبينة في الشكل‎ ١١
C difficile ‏إضافي في نموذج حيوان لعدوى ومرض‎ A3-25 mAb ‏من أجل تقييم‎ ‏يتغير نوعه المماثل و١ إلى 0961| فأري بتطعيم جزيئي للمنطقة المتغيرة للسلسلة ا .ع فوق‎ ‏الفأرية طبقا للطرق المنشورة.‎ y ‏السلسلة الثقيلة‎ oo
Toxin ‏للأجسام المضادة تخص‎ Epitope ‏مثال 33: قدرة المعادلة وتخطيط‎ ‏في محاولة لتحديد أجسام مضادة وظيفية/ معادلة؛ تم تقييم كل الأجسام المضادة‎ (Lil) (CPE) sla ‏أحادية النسخ من أجل القدرة على معادلة 10105 نوع بري في اختبار تأثير اعتلال‎ ‏كمؤشر على حيوية الخلية.‎ ATP ‏قياسي أو في اختبار أكثر صرامة وكمي يعتمد على قياس‎
A65-33 «A3-25) mAb ¢ ‏تظهر‎ toxin A ‏جسم مضاد يخصض‎ ov ‏من إجمالي‎ Ve ‏مستويات متباينة من النشاط المعادل. تجرى‎ (VA ‏والشكل‎ ١١7 ‏(جدول‎ ABO-29 5 <A60-22 epitopes ‏لتخطيط‎ (HI) hemagglutination ‏وتثبيط‎ BiaCore ‏اختبارات ارتباط تنافسي‎ ‏مختلفة من‎ epitopes ‏الجسم المضاد. تدل النتائج على أن هذه الأجسام المضادة قد تستهدف‎ protein ‏من أجل تحديد إضافي لموقع أماكن الارتباط على‎ .)١١7 ‏(جدول‎ toxin A protein ‏أو نقطة- بقعة باستخدام‎ western ‏الأجسام المضادة بصورة منفردة في اختبارات تبقع‎ andl ‏يتم‎ ‏المعادلة موجهة إلى منطقة النهاية © في‎ MAD ‏أجزاء 07 معلومة الترتيبات. اتضح أن كل ؛‎ toxin ‏جسم مضاد يخص 8 10*0؛ اتضح أن 9 منها معادلة. من التسعة‎ ١١7 ‏من إجمالي‎ ‏والثلاثة الأخرى إلى مجال سيطرة الانتقال لأجل‎ N ‏المعادلة» 1 منها موجهة إلى النهاية‎ mAbs 00/5 ‏تنافسي ©8:8003؛ يمكن تقسيم‎ Lis) ‏على أساس اختبار‎ .)٠8 ‏(جدول‎ B toxin ٠ ‏كما مبين في الشكل‎ epitope ‏للأجسام المضادة أحادية النسخ المعادلة التسعة إلى ؛ مجموعات‎
Na
Toxin A MAD ‏السمات المميزة‎ :١١7 ‏جدول‎
-١ ‏-/؟‎ ‏النشاط | تايط اخصوصية | النوع‎ mAb # | ‏مجموعة‎ ‎lg ‏الارتباط | المماثل‎ | Hemagglutination | ‏المعادل‎ Epitope a il 7 lgG2a, | C ‏طرفي‎ +| A65- Y i I I 1961, ١ C ‏طرفي‎ + +| /80- 1 ‏انا اا‎ I I ‏ا‎ ‎19G1, | C ‏طرفي‎ + +| A60- ‏نالا‎ ‏اا‎ I O°
IgGl, k| ‏تحت‎ A64-6 ¢
Ni = I I 19G1, | C ‏طرفي‎ A50- il
IgGl, k| ‏تحت‎ AS6- me
I
‏المنتقى‎ Toxin 8 mAb ‏خصائص‎ YA ‏جدول‎ ‏وا‎ Silas ‏النشاط المتعادل | خصوصية الارتباط | نوع‎ | MAD ‏رقم‎ Ao gene ‏مس ساس‎ (Biacore)
ITI
B= [moe al
EC
-١ ١6 lgG1, >» ‏مجال مسيطرة‎ +| B59-3 1 0616 ‏الانتقالات‎ 860-2 ١061, Kk | ‏مجال ميطرة‎ 856-6 0616 ‏النهاية-6‎ 5812-4 061, k 814-53 061. 16 5580-3 961.» CR] 0 -| 3 ‏جديدة مع نشاط معادل زائد بدرجة ملحوظة‎ TOXIN A ‏مثال 34: تحديد اتحادات أجسام مضادة‎ ‏معادلة‎ (AB0-29 5 260-22 865-33 (A3-25) ‏الأربعة‎ toxin A mAb el ‏عند الاختبار بصورة منفردة في اختبار معادلة معتمد على‎ toxin A ‏غير كاملة أو جزئية لأجل‎ ‏هو الجسم المضاد الأكثر فعالية وان الثلاثة الأخرى لها قدرة معادلة‎ MAD A3-25 ‏75م. إن‎ /3- ‏يتحد‎ Laie ‏على أية حال؛‎ (VA ‏أقل مع 880-29 بالكاد تزيد عن القيمة الأساسية (شكل‎ 0 ‏الثلاثة الأخرى؛ يلاحظ تأثير تعاوني في المعادلة في كل الاتحادات‎ MAS ‏مع أي واحد من‎ 5 ‏الثلاثة أكبر بكثير من المحصلة الإجمالية لمعادلة الأجسام المضادة المنفردة كما مبين في شكل‎ ‏()-(ج). إضافياء تظهر كل الاتحادات الثلاثة قدرة معادلة كاملة ملحوظة طبيعيا مع أجسام‎ ٠١ toxin A ‏مضادة متعددة النسخ مضادة‎ ida sale ‏جديدة تظهر نشاط معادلة زائد بدرجة‎ Toxin 8 ‏مثال 35: تحديد اتحادات أجسام مضادة‎ Ye ‏المختلفة‎ epitope ‏من مجموعات‎ TOXIN 8 MADS ‏لاحظنا أيضا معادلة تعاونية مع‎ ‏الأكثر سيادة من‎ MAb ‏وهو‎ «Toxin 8 mAb 88-26 ‏يتحد‎ .BiaCore ‏المحددة بتحليل‎ ‏يتم تقييم الاتحادات في اختبار معادلة تخصض‎ Y ie gana ‏عديدة من‎ mAbs ‏؛ مع‎ ١ ‏المجموعة‎ ‎Aa ‏والجدول‎ 7١ ‏والنتائج مبينة في الشكل‎ toxin 8
MAbs ‏مع‎ Toxin 8 ‏معادلة‎ :V4 ‏جدول‎ VO id ‏لير‎
-١١4- we ‏شت‎ ‎a ‎38-26 + 3
0 لم يتم ‎hal‏ ‏يلاحظ التأثير المعادل التعاوني عند اتحاد 88-26 مع ‎MAD‏ مجموعة ‎Y epitope‏ (شكل ١7(ب))؛‏ لكن ليس ‎ATMAD‏ (البيانات غير مبينة). مثال 36: الحجب في المعمل بواسطة ‎MAD‏ لتركيبات ‎Toxin‏ طفري ‎ual‏ وفعالة تظهر ‎A toxins‏ و8 طفرية جينية ‎Sia)‏ تعريف الترتيب رقم: ؛ و6) من ‎C difficile‏ © متولدة بالهندسة الوراثية تظهر سمية خلوية متخلفة باستخدام اختبار سمية خلوية في المعمل. برغم أننا قد حققنا تقليل ‎Nea‏ 4لوغارتم في السمية الخلوية لكل ‎toxin‏ طفري لكل ‎difficile toxin‏ .© (جدول ١٠)؛‏ فإن إخماد النشاط الكيميائي المفضل لأجل ‎toxins‏ الطفرية؛ مثلا مع معالجة ‎formalin‏ إجراء مفضل. على أية حال؛ فإن معالجات إخماد نشاط كيميائي قد تكون ضارة وقد تؤثر بدرجة سيئة على ‎epitopes‏ الأساسية المولدة لمضاد في هذه ‎toxins‏ أو ‎toxins)‏ الطفرية. جدول ‎:٠٠‏ مقارنة السمية الخلوية في المعمل لأجل ‎Toxin WT Toxin‏ طفرة ‎AE‏ ‎sada WT toxins 4‏ النشاط مع ‎Fl) Formalin‏ من ‎«List Biological) (List Biological‏ تجاري) ‎Ted‏ المصدر/ المعالجة 200 نانوجرام/ | مقدار التقليل في ملليلتر السمية الخلوية ‎Toxin A‏ (تعريف | نوع بري ‎١ ay‏ الترتيب رقم: ‎)١‏
-١١6- ‏(تعريف الترتيب‎
I ‏ل‎ ‏تجاري‎ ‎(YF ‏الترتيب رقم:‎
AYYY ‏طفري | طفرة ثلاثية ل‎ toxin 8 )1 ‏رقم:‎ ‏لاخلا‎ ٠٠| (Formalin ‏امعالج مع‎ Toxoid B (Fl)
TE i ‏ااانا‎ ‏من أجل أن تكون العملية الحيوية في صورة مثلى؛ يجرى تصميم إحصائي للتجربة‎ ‏مجم/ ملليلتر) باستخدام معالجة‎ ١( ‏و8‎ A Ted ‏لإخماد النشاط الكيميائي للطفرة الثلاثية‎ (DOE) ‏نشاط فورمالين في صورة مثلى للطفرة الثلاثية 1060/8 ؛‎ ald) ‏و00/0015ع. ليكون‎ 07 «(V,0=1,0) pH ‏جرامي)‎ Sux ‏مللي‎ 5 0-7٠١( glycine [formalin ‏فقد نوعنا تركيزات‎ [formalin ‏فقد نوعنا تركيز‎ (TedB ‏ودرجة الحرارة (©60-7؛"مثوية). بالنسبة للطفرة الثلاثية‎ © ‏مللي جزيئي جرامي ودرجة الحرارة وام © ؟"مثوية و١ على الترتيب. إن‎ Av ‏من ؟ إلى‎ 6 formalin ‏ساعة. بالنسبة لإخماد النشاط مع‎ YE formalin ‏زمن الحضانة لكل معالجات‎ ‏المستخدمين في التفاعل.‎ glycine formalin ‏يمثل تركيز‎ YY VY ‏في جدول‎ 67 ‏مجم/ مجم من‎ Y,0 ‏إلى‎ Yo ‏من‎ EDC/NHS ‏فقد نوعنا تركيزات‎ (EDC/NHS ‏لمعالجة‎ ‏إلى 7,5 مجم/ مجم من 1608 ثلاثي الطفرة وأجريت حضانة‎ +1 Y0 ‏ثلاثي الطفرة ومن‎ 1608 ٠ ‏مللي‎ ٠١ ‏لمدة ؛ ساعات عند 7©5*مثوية. عند نهاية التفاعلات؛ يزال الملح من كل العينات في‎ ‏المعالجة من أجل سمية خلوية‎ Teds ‏تحلل‎ (anh) ‏بعد‎ .7 pH (phosphate ‏جرامي‎ Sa ‏بتحليل نقطة- بقعة. إن الهدف هو تحديد شروط المعالجة‎ epitopes ‏لأجل‎ mAb ‏متخلفة وإدراك‎ ‏ميكروجرام/ ملليلتر) بدون‎ ٠٠٠١ > 5050( ‏التي تقلل السمية الخلوية إلى المستوى المطلوب‎ ‏المعادلة (++++ أو +++). تنتج‎ MADS ada ‏المدركة بواسطة‎ epitopes ‏التأثير سلبيا على‎ ١
RAR
شروط المعالجة (المعلمة مع علامة الاختبار ””“ في الجداول ‎(YE-Y)‏ تركيبات مولدة للمناعة آمنة وفعالة بدرجة ممكنة تحتفظ بالنشاط مع ؛ ‎MADS‏ معادلة على الأقل بينما تظهر تقليل 8-7 لو١٠‏ في سمية خلوية؛ مقارنة مع سمية خلوية ‎Jal‏ 10*10 نوع بري المقابل. هناك نتائج منتقاة موضحة في الجداول ‎7١‏ إلى ‎YE‏ يبين جدول ‎YY‏ وجدول ‎YE‏ بيانات إضافية من شروط معالجة هه مختلفة على ‎toxins‏ طفرة ثلاثية والبيانات من اختبارات سمية خلوية في المعمل ومعادلة ‎toxin‏ ‏انظر أيضاء على سبيل ‎(Jia)‏ المثال 20 و21 أعلاه التي ‎jig‏ تفاصيل إضافية خاصة بشروط معالجة ربط متقاطع المفضلة لأجل ‎toxins‏ الطفرية.
Ya ‏ثلاثية غير نشطة-‎ TedA ‏المتعادل المتعلق مع طفرة‎ MAb ‏؟: السمية الخلوية وتفاعلية‎ ١ ‏جدول‎ ‎)4 ‏الترتيب رقم:‎ Cay 3) Formalin ‏(شروط تبقع؛ عدم تغيير الطبيعة)‎ MAD ‏التفاعلية مع‎ CPE | ‏شروط تفاعل‎ ‏عدم التفاعلية |ميكروجرام/ | النهاية-اا اأمجال ض النهاية-© (متعادلة)‎ مطم5-١‎ A60-| ‏-80م | 3-25م‎ | shar | ‏رقم‎ Mab ‏|مليلتر‎ Ales 33 22 29 ‏الانتقال‎ 1 ‏رقم‎ Mab
Voy ++++ | ‏اميد الجببيد‎ HHH +++ ++++ Yoo ‏مثوية‎ ‏أس‎ ‏هيدروجيني‎ ‎1,0
-١77-
‎٠‏ مللي
‏جزيثي جرامي
‏ه؟مثوية |< ‎٠...‏ الجببد ++++ يبيد ‎EN Eas‏ أس
‏هيدروجيني
‎1,0
‏5 مللي
‏جزيئي جرامي
‏0 ‏| ه؟مثوية |< ‎٠...‏ الجببد ++++ يبيد ‎EN Eas‏ ‎A‏ ‏ض هيدروجيني ‎Vo‏ ‏مللي ‏ْ جزيئي جرامي ل 5٠“مثوية‏ أ|> ‎٠...‏ |++ +++ يبيد ‎EN Eas‏ أس
‏هيدروجيني
‎1,0
‏5 مللي
‏جزيثي جرامي
‎tht | ‏الجببد‎ A | ‏يبيد‎ ++ HH ٠... >| daft ‏أس‎
‏هيدروجيني
‏م
‏5 مللي
‏جزيثي جرامي
‎EN Eas ‏يبيد‎ ++++ +++ | 75-١85 | ‏لا يوجد؛ طفرة‎ toxin A
—\VY-
I I I I I
+ +++ ++ ++ ND | FI Toxoid (List A
Biological) lo} جدول 7 ؟: السمية الخلوية 5 ‎MAD‏ المتعادل المتعلق مع طفرة ‎TedA‏ ثلاثية غير منقشطة- ‎EDC‏ ‏(تعريف الترتيب رقم: 4) شروط تفاعل ‎CPE|‏ التفاعلية مع ‎MAD‏ (شروط تبقع؛ عدم تغيير الطبيعة) عدم التفاعلية |ميكروجرام/ | النهاية-!) | مجال | ‎Caled‏ (متعادلة)
A65-| 60-١ A3-| AB0-| ‏ارقم اسيطرة‎ Sill] ‏الكيميائية على‎ 33 22 25 29| Jay) 1 TedA ‏طفرة‎ ‏رقم‎ Mab ‏الثلاثية‎ ٠١ 8مثوية |< ‎FH | ٠...‏ ++++ يبيد ‎H+ | FEE‏ ا|لجببب . »؛ ‎[oe‏ مجم؛ ؛ ساعات 0 مويق #,. |> ‎FH | ١٠...‏ ++++ يبيد ‎H+ | FEE‏ ا|لجببب مجم/ مجم ؛
V ‏ساعات‎ فلا
-١١/4- 9 مجم مجم؛ ؛ ساعات 0 +++ | ‏بببد‎ +++ | +++ ++++ HHH ٠... <| ‏©5؟مثوية‎ ‎[—=e 9 مجم؛ ؛ ساعات 0 لا يوجدء طفرة |85 ‎-١‏ ++++ ++++ يبيد ‎HHH | HHH]‏ | +++ نذا لا ل ا ا ا لا ‎(lag‏ طفرة ‎-١‏ +++ ++++ +++ ++++ +++ ++++ ‎I‏ قن ا ا ‎ND | FI Toxoid A‏ ++ ++ +++ + ‎(List‏
Biological) جدول ‎VY‏ 2 السمية الخلوية 5 ‎MAD‏ المتعادل المتعلق مع طفرة 1608 ثلاثية غير منشطة- ‎Cay a3) Formalin‏ الترتيب رقم: 7( شروط تفاعل عدم | ‎CPE‏ رقم ‎Mab‏ رقم ‎Mab‏ ‏التفاعلية الكيمياثية | (ميكروجرام/ | (النهاية-ل! (النهاية ‎mid—/C—‏ ‏على طفرة 1608 | ملليلتر) 543 — 1 ‎(aa 544 -6 (@aa‏ +++ ++ ++++ +++ ١٠١١.١. < ‏ا لمثوية أس‎ fo) ‏هيدروجيني ا‎ ‎٠‏ مللي جزيثي ‎+ ‏ساعة‎ Ye (dn ‏8 موية أس > ‎Yee‏ ++++ ++++ ++++ ++++ هيدروجيني ا ‏مللي جزيثي ‎+ ‏ساعة‎ Ye (dn ‏61لا
“\Ye-
هيدروجيني ا
‎٠‏ مللي جزيثي
‏8 مثوية أس حكن ++++ ++++ ++++ ++++ هيدروجيني ف ‎Y/Y‏
‏مللي جزيئي جرامي؛
‎ell Ye
‏لا يوجد طفرة احم ++++ ++++ ++++ ++++ ونا لك ا ‎Tl‏ ‎ND | FI Toxoid B‏ +++ +++ +++ ++ ورا ‎J I‏ جدول ؛ ؟: السمية الخلوية و ‎MAD‏ المتعادل المتعلق مع طفرة 1608 ثلاثية غير منشطة- ‎EDC‏ ‏(تعريف الترتيب رقم: 6)
‏شروط تفاعل ‎CPE|‏ رقم ‎Mab‏ رقم ‎Mab‏
‏عدم التفاعلية | (ميكروجرام/ | (النهاية-ل! (النهاية ‎mid—/C—‏
‏الكيميائية على | ملليلتر) 1-3 ‎(aa 544 - 6 (@aa‏
‏طفرة 10608 ححا 1-34 4-
‏الثلاثية ف
‏٠؟مثوية‏ اح +-+-+-+ +++ | ++++ ++++
‏54 ., مجم
‏مجم؛ ؛ ساعات
‏8 مثوية ا١٠٠‏ ++++ +++ | ++++ ++++
‎YO‏ ؛ مجم
‏مجم؛ ؛ ساعات
‎++++ ++++ | +++ ++++ ٠١٠.١ > | 0,0 ‏تمثرية‎ 0
‎fons‏ ملليلترء ؛
-١75- ‏مجم‎ 9 ‏؛‎ oy alll
V ‏ساعات‎ ‎+++ +++ +++ ++++ ٠.٠.١ <[Y,0 ‏تمثرية‎ 0
V ‏ساعات‎ ‎++++ +++ | ‏جببد‎ ++++ ve OA | ‏طفرة‎ ca ag ‏لا‎ ‎TF A = ++ +++ +++ +++ ND | FI Toxoid 8 (List
Biological) ١ ‏جدول‎ ‏(شروط تبقع؛ عدم تغيير الطبيعة)‎ MAD ‏التفاعلية مع‎ Cyto ‏اختبار‎ ْ ‏النهاية ل امجال ا النهاية- (متعادلة)‎ «CPE ¢CPE | toxin sah | ‏رقم‎ -١ 60-| 3-25| ‏اسميطرة|-80‎ 3; Mab | del. VY | ‏؛ ساعة‎ Al ‏العينة‎ ‎3 22 29 | ‏الانتقالات‎ 6 ١ ‏ميكروجرام/ | ميكروجرام/‎ | ca a) ‏رقم‎ Mab ‏ملليلتر‎ ١ رتليللم‎ | ‏الترتيب رقم:‎
Voy ‏تعريف‎ (4 ‏العينة‎ ‎ol EE ‏بببب ألببد‎ ++++ ++++ | ١٠... >| ١٠٠.١. <| L44166- EY ‏ا ا ا‎ I ‏اليه و‎
Fl ‏يبيد | +++ الجببد‎ ++++ +++] ٠... <| ٠... <|L44166- Y = ‏وه‎ ‎Fl +++ +++ | +++ +++ +++] ٠... <| ٠... <|L44166- 1 ‏ين قا لا أن ا ا ا ا‎
Fl ‏يبيد | +++ الجببد‎ +++ +++] ٠... <| ٠... <|L44166- $ ‏ا‎ I ‏وا نا تنا‎ ال0١‎
-١ ‏لال‎ + | +++ ++ | ++++ ++ ++] ١٠... <| ٠٠.١. <|L44905-
A
Fl +++ | +++ | +++ ++++ +++] ٠... <| Your <|L44166- 1
HENNE r ++ ++ ++ + +| ١٠١... > ND | L44905- ‏ل‎ ‏وه ليق ريا ل ا ا ا ا‎ aE ‏بببب الجببب+‎ ++ +++ ND| ٠٠.٠١. <|L44897- A ‏أن لا ا اا ا ا ا ا‎ ol EE ‏بببب ألببد‎ +++ ++++ ND| ٠٠.٠١. <|L44897- 9 ‏يق ا وا ال د ا ا‎ aE ‏بببب الجببب+‎ ++++ ++++ ND Yo. | |44897- Yo 72 الأنبوب رقم ١ aE ‏بببب الجببب+‎ ++++ ++++ ND| ٠٠.٠١. <|L44897- AR 72 الأنبوب رقم v aE ‏بببب الجببب+‎ +++ +++ ND| ٠٠.٠١. <|L44897- VY 72 الأنبوب رقم v aE ‏بببب الجببب+‎ ++++ +++ ND| ٠٠.٠١. <|L44897- VY 72 الأنبوب رقم ¢ aE ‏بببب الجببب+‎ ++++ +++ ND| ٠٠.٠١. <|L44897- V¢ الأنبوب رقم ال0١‎
—\VA-
I EE I A aE ‏بببب الجببب+‎ ++++ +++ ND| ٠٠.٠١. <|L44897- Vo 75 ‏الأنبوب رقم‎ + aE ‏بببب الجببب+‎ ++++ ++++ ND| ٠٠.٠١. <|L44897- 73 75 ‏الأنبوب رقم‎
Y aE ‏بببب الجببب+‎ ++++ ++++ ND| ٠٠.٠١. <|L44897- VY 75 ‏الأنبوب رقم‎
A aE ‏بببب الجببب+‎ +++ ++ ND| ٠٠.٠١. <|L44897- YA 75 ‏الأنبوب رقم‎ q aE ‏بببب الجببب+‎ ++++ ++++ ND| ٠٠.٠١. <|L44897- 5 75 ‏الأنبوب رقم‎
A aE ‏بببب الجببب+‎ ++ ++ ND| ٠٠.٠١. <|L44897- Yo. 75 ‏الأنبوب رقم‎
AR
Fl +++ | +++ | +++ ++++ ++++ VA > YY,¢ | L44897-| ١ 101 ‏(تعديل‎ ‏|سبق)‎ ال0١‎
-١4- ‏امه ا‎
Fl +++ | +++ | +++ ++++ +++ ١١4 YAY,o | L44897- [vv «101 ‏ساعتين‎ ‎Fl +++ | +++ | +++ ++++ +++ TALLY ‏ادبت‎ L44897-| YY ¢ «101
Sle la aE ‏-44897ا 7 +++ ++++ بببب الجببب+‎ 9 ١ «101 ‏ساعات‎ ‎Fl +++ | +++ | +++ ++++ ++ ٠...>|أ‎ ٠... <| L44897| vo ‏ا‎ 102 ‏ساعة‎ ‎Fl +++ | ‏الجبببيد‎ +++ +++ +] ٠...>| ٠٠.١. <|L44897-| ٠ ه١‎ «103 ‏ساعة‎ ‎Fl ++ +++] ‏بيد‎ +++ ٠... <| ٠... <|L44897-| YV ‏كلا‎ 104 ‏ساعة‎ ‎| ‏بد ابد‎ ++ ++ ٠... <| Yeou<|L44897-| YA «105 ‏ساعة‎ ٠٠
Fl +++ | +++ | +++ ++++ +++ ١... <| ٠٠.١. <|L44980-| Ya
Hr ‏نا‎ ‎Flo ‏ألجبد‎ ++ ++ ND ND ‏ا لتفاعل رقم | 86لا‎ ٠ ‏ميك روجرام/‎ ١ ‏الأسووع | ملليلتر‎ ‏صفرء‎ ‎ةيوئم#7٠©‎ ‎ال0١‎
‎A «=‏ \ — ‎١ ١‏ التفاعل رقم | 75 ‎ND ND‏ +++ بيد ‎HH]‏ ]+++ |+ ‎١‏ ميك روجرام/ الأسبوع 3 ملليلتر ‎LACYo‏ ‎vy‏ التفاعل رقم دا ‎ND ND‏ +++ بيب اليب ‎ol IEE‏ ‎١‏ ميك روجرام/ الأسبوع 31 ملليلتر ‎LACYo‏ ‎vy‏ التفاعل رقم دا ‎ND ND‏ +++ بيب اليب ‎ol IEE‏ ‎١‏ ميك روجرام/ الأسبوع 3 ملليلتر ‎LACYo‏ ‏3 التفاعل رقم ‎ND ND Yo.‏ +++ ببد الجببد ‎EE‏ ‎١‏ ميك روجرام/ الأسبوع 1% ملليلتر ‎LACYo‏ ‎Yo‏ | لتفاعل رقم ‎ND ND AVAL‏ ++++ ببب+ | ‎F| A+++ | +H‏ ‎١‏ ميك روجرام/ الأسبوع 3 ملليلتر ‎١‏ "مئوية اه التفاعل رقم دا ‎ND ND‏ +++ بيب اليب ابد ‎A‏ ميك روجرام/ الأسوع | ملليلتر ف ‎LACYo‏ ‎YTV‏ ا لتفاعل رقم | 75 ‎F| +++ | +++ | +++ ++++ ND ND‏ ‎A‏ ميك روجرام/ الأسبوع 3 ملليلتر ‎LACYo‏
-١م81-‎ ‏ببد‎ ++ ++ ++ ND ND ‏لتفاعل رقم | .علا‎ | YA ‏ل ميك روجرام/‎ ‏الأسبوع "؛ | ملليلتر‎ ةيوئم#7٠©‎ 4 ا لتفاعل رقم ‎fete ND ND Youll‏ بيد ]44+ +++ ‎Fl‏ ‏ل ميك روجرام/ الأسبوع ‎pray‏ ملليلتر + | +++] +++] +++ +++ ND ND 7500| ‏ا لتفاعل رقم‎ ٠ ‏ل ميك روجرام/‎ ‏ملليلتر‎ pred ‏الأسبوع‎ ‎ةيوئم#7٠©‎ 3 التفاعل رقم | 0 ‎Fl 4+ +444] +++ +++ ND ND VAY,‏ ل ميك روجرام/ الأسبوع ‎pray‏ ملليلتر ‎ALYY‏ 4
Fl 4+ | +444 | ‏بيد‎ ++++ ND ND YALA TXA ‏امقارن‎ £Y ‏ميكروجرام/‎ | oF ‏الأسبوع‎ + | +++ | +++ | +++ ++++ ND ND Yo | TxA ‏|مقارن‎ ¢Y ‏ميكروجرام/‎ | oF ‏الأسبوع‎ +| ‏بيد‎ ++ ++ ++ ND ND| Yeo. <|L44897-| ¢¢ ‏ميكروجرام/‎ 116-6 ‏ملليلتر‎ 5 ‏ساعة‎ +| ‏بيد‎ ++ ++ ++ ND ND| ٠.٠.٠. <|L44897-| to ‏ميكروجرام/‎ 116-7 فلا
-١87- ‏ا‎ I A A ‏ببد‎ + + + ND ND| ٠٠.١. <|L44897-| <1 [ehasSae| 116 -8 ‏ملليلتر‎ va,e ‏ساعة‎ ‎Fl H+ ++ ++ ++ ND ND| Y... <|L44897- 34 ‏اميكروجرام/‎ 1169 ‏لاد ملليلتر‎ ‏ساعة‎ ‎+| ‏أا++ب+‎ +++ +++ ++++ ++ ND| ٠٠.١. <| L44897- ‏ب‎ ‎139 ‎+| ‏أا++ب+‎ +++ +++ ++++ ++++ ND| ٠٠.١. <| L44166- 4 204 ‏الثلاثية (تعريف الترتيب‎ toxin A ‏شروط تفاعل الارتباط المتقاطع كيميائيا لأجل العينات من طفرة‎ vy ‏رقم: ¢( المشار إليها في جدول‎ ‏مللي جزيثي جرامي‎ ٠١ ؛ةيوثم"٠١ ‏الشروط:‎ NHS [EDC ‏تعدل العينات ١-؛ مع‎
EDC ‏التفاعلات بإضافة‎ fas ‏الأس الهيدروجيني ما‎ NaCl ‏مللي جزيئي جرامي‎ Yo. [MES ov ‏مضاف إلى‎ glycine ‏جزيئي جرامي‎ ١ CyB A ‏بعد ساعتين من التفاعل؛ يكون للعينات‎ © ‏تضبط التفاعلات مع‎ glycine D ‏جزيئي جرامي 9170176 كتركيز نهائي. لا يضاف للعينة‎ Ak ‏حسب التحديد‎ NHS (EDC :) :مقر ‏(تعريف الترتيب‎ toxin A ‏نسب وزن مختلفة من طفرة‎ ‏أدناه.‎ ‏-44166ا: :75:7 وزن: وزن: وزن‎ ١
V,Yo:y, vo: ‏44166-8ا:‎ 70٠ ‏أدبم :م‎ :L44166-157C 1 ‏أدبم :م‎ :L44166-157D ¢
م ‎-١‏ ‏العينة 25 دوم ‎A ٠ L44905-1‏ مللي جزيني جرامي ‎IN ٠ «(HCHO‏ مللي جزيني جرامي ‎AL 80 (glycine‏ جزيئي جرامي ‎NaPO4‏ أسه الهيدروجيني 7 ‎١‏ مجم/ ملليلتر طفرة ‎toxin‏ ‎cay jai) A‏ الترتيب رقم: ¢( ‎(Protein‏ تفاعل ‎$A‏ ساعة عند © 7"مثوية. العينة 7 ‎EDC/NHS‏ 44166-166ا تعديل ‎toxin A‏ طفري (تعريف الترتيب رقم: 4) © عند 75"مثوية في ‎٠١‏ مللي ‎Aja‏ جرامي ‎٠٠١ MES‏ مللي جزيثي ‎NaCl dha‏ أسه الهيدروجيني ©,. طفرة ‎A‏ 1010 (تعريف الترتيب رقم: 4): ‎NHS :EDC‏ = 2:1 :2,.. يبدأ التفاعل بإضافة ‎(EDC‏ بعد التفاعل بساعتين» يضاف ‎١‏ جزيئي جرامي 9176106 إلى تركيز نهائي ‎١,١ glycine‏ جزيئي جرامي ويحضن لمدة ساعتين إضافيتين. بعد هذا الوقت؛ يتم تبادل الأس الهيدروجيني للتفاعل إلى ‎PBS x ١‏ على 625 ‎.Sephadex‏ ‎٠١‏ العينة ‎Ar 144905-170/ ١‏ مللي ‎Avs‏ جرامي ‎Av (HCHO‏ مللي جزيئي جرامي ‎(glycine‏ 80 مللي ‎iia‏ جرامي ‎NaPO4‏ أسه الهيدروجيني 7 ‎١‏ مجم/ ملليلتر ‎toxin A‏ طفري (تعريف الترتيب رقم: ؛) ‎(Protein‏ التفاعل لمدة 4؛ ساعة عند © 7؟"*مثوية. يتوجه تفاعل 70 هذا عند إنتاج ارتباط متقاطع مفرط وبهذا يمكن تقلص ربط المولد المضاد بدرجة كبيرة. العينة ‎Ae VY 144897-61 A‏ جزيثي ‎Ak Ar [HCHO ha‏ جزيئي جرامي ‎(glycine Vo‏ التفاعل ‎VY sad‏ ساعة عند © 7"مثئوية. ‎(glycine‏ التفاعل ‎VY sad‏ ساعة عند © 7"مثئوية. يكون لكل التفاعلات التالية زمن تفاعل ‎YE‏ ساعة. العينة ‎L44897-T72 ٠١‏ الأنبوب رقم ‎١‏ © 7"مئوية؛ ‎Ar‏ مللي جزيئي ‎NaPi da‏ أسه ‎Yo‏ الهيدروجيني 7,0 ‎Yo‏ مللي جزيئي جرامي ‎٠١ HCHO‏ مللي جزيئي جرامي ‎glycine‏ ‏العينة ‎١١‏ 444897-72 الأنبوب رقم ‎Ae EPONA | oy‏ مللي جزيثي جرامي ‎NaPi‏ أسه الهيدروجيني 7,5 560 مللي جزيئي جرامي ‎[HCHO‏ 56 مللي جزيئي جرامي ‎glycine‏ ‎Evo‏
-86م١-‏ العينة ‎L44897-T72 ١١‏ الأنبوب رقم 7 7,5 7"مثوية؛ ‎Av‏ مللي جزيثي جرامي ‎NaPi‏ ‏أسه الهيدروجيني 7 ‎Vo‏ مللي جزيئي جرامي ‎Yo [HCHO‏ مللي جزيئي جرامي ‎glycine‏ ‏العينة ‎L44897-72 ٠‏ الأنبوب رقم م 7 مثوية ‎Ae‏ مللي جزيني جرامي ‎NaPi‏ ‏أسه الهيدروجيني 7 ‎Vo‏ مللي جزيئي جرامي ‎Yo [HCHO‏ مللي جزيئي جرامي ‎glycine‏ ‎fo]‏ العينة ‎L44897-72 ١‏ الأنبوب رقم 0 0, ‎Ae (Ay CTY‏ مللي جزيء جرامي ‎NaPi‏ ‏أسه الهيدروجيني 7 ‎Vo‏ مللي جزيئي جرامي ‎Yo [HCHO‏ مللي جزيئي جرامي ‎glycine‏ ‏العينة ‎L44897-T75 Vo‏ الأنبوب رقم > © 7"مئوية؛ ‎Av‏ مللي جزيئي ‎NaPi da‏ أسه الهيدروجيني 7,8 ‎Ae Yo‏ جزيئي جرامي ‎٠١ [HCHO‏ مللي جزيئي جرامي ‎glycine‏ ‏العينة ‎L44897-T75 ١‏ الأنبوب رقم ‎١‏ © 7"مئوية؛ ‎Ar‏ مللي جزيئي ‎NaPi da‏ أسه ‎٠‏ الهيدروجيني 7,8 560 مللي جزيئي جرامي ‎f+ [HCHO‏ مللي جزيئي جرامي ‎glycine‏ ‏العينة ‎L44897-T5 VV‏ الأنبوب رقم ‎A‏ 460 *مئوية؛ ‎Av‏ مللي جزيئي جرامي ‎NaPi‏ أسه الهيدروجيني 7,8 ‎Ae Yo‏ جزيئي جرامي ‎Ak ٠١ [HCHO‏ جزيئي جرامي ‎glycine‏ ‏العينة ‎YA‏ 44897-75ا الأنبوب رقم 9 ‎Av did‏ مللي جزيئي جرامي ‎NaPi‏ أسه الهيدروجيني 7,5 560 مللي جزيئي جرامي ‎[HCHO‏ 56 مللي جزيئي جرامي ‎glycine‏ ‎١٠‏ العينة ‎L44897-75 ٠‏ الأنبوب رقم ‎ge Yo‏ "مثوية ‎Ae‏ مللي جزيني جرامي ‎NaPi‏ ‏أسه الهيدروجيني 7,5 ‎Yo‏ مللي جزيئي جرامي ‎٠١ [HCHO‏ مللي جزيئي جرامي ‎glycine‏ ‏العينة ‎7١‏ 44897-75| الأنبوب رقم ‎١١‏ 40 "مئوية؛ ‎Av‏ مللي جزيئي جرامي ‎NaPi‏ ‎aul‏ الهيدروجيني 7,5 ‎A 5٠0‏ جزيئي ‎Je t+ HCHO dha‏ جزيئي جرامي ‎glycine‏ ‏تتفاعل العينات الثماني التالية عند ©"*مثوية للأزمنة المشار إليها في ‎Av‏ مللي جزيئي ‎٠‏ جرامي ‎NaPi‏ أسه الهيدروجيني ‎١‏ يحتوي على ‎VA‏ مللي جزيئي جرامي 16110 و16 مللي جزيئي جرامي ‎glycine‏ ‎Evo‏
-8م١-‏ العينة ‎L44897-101 7١‏ (تعديل مسبق) عينة مقارنة الزمن صفر مقارن ‎TXA‏ غير معدلة أر تتعرض إلى ‎glycine [HCHO‏ العينة ‎(L44897-101 YY‏ ساعتين العينة ‎YY‏ 44897-101؛ ؛ ساعات ‎o‏ العينة ‎١ ¢L44897-101 Ye‏ ساعات العينة ‎dell YE (L44897 102 Yo‏ العينة 776 ‎(L44897-103‏ )0 ساعة العينة ‎Ve (L44897-104 YV‏ ساعة العينة ‎٠١١ (L44897-105 YA‏ ساعة ‎٠١‏ تكون العينة ‎A (L44980-004) Ya‏ 10*10 طفري معدل ‎NHS [EDC‏ (تعريف الترتيب رقم: 4) (طفرة ‎toxin A‏ ثلاثية (تعريف الترتيب رقم: 4)-000ع). شروط التفاعل هي: 5مثوية؛ مثبت الأس الهيدروجيني هو ‎Ale ٠١‏ جزيثي جرامي ‎٠٠١ MES‏ مللي جزيئي جرامي ‎NaCl‏ أسه الهيدروجيني 1,6. طفرة ‎A‏ 10*10 ثلاثية (تعريف الترتيب رقم: 4): نّناع: ‎v0, 0) = NHS‏ وزن: وزن: وزن٠‏ يبدأ التفاعل بإضافة ‎EDC‏ بعد التفاعل بساعتين؛ ‎Vo‏ يضاف 9/0006 إلى ‎0,١‏ جزيئي جرامي تركيز ‎Sled‏ ويتفاعل إضافيا لمدة ساعتين عند 5؟مثوية. ينتهي التفاعل بإزالة الملوحة على ‎G25‏ *«5800806. إن ‎EY)‏ عشر عينة التالية والمادتين المقارنتين هي تجارب انعكاس حيث تحضن العينات عند © 7”مثوية و١؟"”مثوية.‏ التفاعل ‎Av die - ١‏ مللي جزيئي جرامي ‎NaPi‏ أسه الهيدروجيني 7؛ 560 مللي ‎Yo‏ جزيثي جرامي ‎HCHO‏ فقط (لا يوجد ‎(glycine‏ التفاعل لمدة ؛ ‎dela‏ ‏التفاعل ‎Av ile = ١‏ مللي جزيئي جرامي ‎NaPi‏ أسه الهيدروجيني 7؛ 560 مللي جزيثي جرامي ‎[HCHO‏ 560 مللي جزيئي جرامي ‎(glycine‏ التفاعل لمدة ‎YE‏ ساعة. ‎Evo‏
-١81-
التفاعل رقم ‎١‏ الأسبوع ‎of‏ 5 7"مئوية 2
تتولد العينات الأربعة اللاحقة بالتفاعل عند الأزمنة المشار إليها عند ١7”مئوية‏ في ‎Av‏ ‏مللي جزيئي جرامي ‎NaPi‏ أسه الهيدروجيني 7 ‎pia Ale 5٠0‏ جرامي ‎Ale 4٠0 [HCHO‏ جزيئي جرامي ‎glycine‏
العينة ‎L44897-139 ¢A‏ التفاعل ‎fA sad‏ ساعة عند 5 7”مثوية؛ ‎Av‏ مللي جزيئي
© جرامي ‎NaPi‏ أسه الهيدروجيني ‎5٠0 oF‏ مللي جزيئي جرامي ‎٠ [HCHO‏ 4 مللي جزيئي جرامي glycine
العينة £4 ‎L44166-204 EDC/NHS‏ تعديل طفرة ‎A‏ 10*10 (تعريف الترتيب رقم: ؛). ‎Ay 50Y0‏ مثبت أس هيدروجيني ‎PBS XY‏ أسه الهيدروجيني 7. طفرة ‎toxin A‏ (تعريف
لام ‎-١‏ ‏الترتيب رقم: 4): 00ا: ‎NHS‏ = )00,00 ,+ وزن: وزن: وزن. التفاعل لمدة ساعتين مع ‎(NHS EDC‏ ثم يضاف ‎١ glycine‏ جزيثي جرامي إلى ‎١,١‏ جزيثي جرامي تركيز نهائي والتفاعل لمدة ساعتين إضافيتين. يستبدل مثبت الأس الهيدروجيني على ‎Sephadex G25‏ إلى ‎Ye‏ مللي جزيئي جرامي ‎٠٠١ [L-histidine‏ مللي ‎San‏ جرامي ‎NaCl‏ أسه الهيدروجيني ‎Lo‏ ‎YE dsm ©‏ اختبار ‎(ECS50) Cyto‏ | التفاعلية مع ‎MAD‏ متعادل (شروط | المتفاعلات ‎Ri‏ > طفرة 8 ‎J—<|mMAb ~ 5,ImAb ~ 5,[ YY (ATP | Y¢ ¢CPE | toxin‏ تعريف العينة | ساعة ساعة (النهاية-لا 88 | ‎mAbs | mid—a lll)‏ 1-543( ©/ - 544 288 | الأربعة 8-26 2366( 9-30 56-6 59-3 ‎a I I a ١ < > L44905-‏ 86-01 | ميكروجرام/ |ميكروجرام/ طفرة 8 ‎toxin‏ | ملليلتر ملليلتر الترتيب رقم: 6 مقارن غير معالج ‎HHH | FH | HH 7 Yoo > L44905-‏ | ++++ 86-02 أميكروجرام/ |ميكروجرام/ طفرة 8 ‎toxin‏ | ملليلتر ملليلتر الترتيب رقم: 6 ‎«Rxn1‏
حم ‎-١‏ ‎١ ٠‏ "مثوية اليوم ‎١‏ ‎HHH | HH Yau < You > L44905-‏ |++ جبد ‎VE‏ ‏86-03 ميكروجرام/ |ميكروجرام/ طفرة 8 ‎toxin‏ | ملليلتر ملليلتر الترتيب رقم: 7(« ‎(Rxn1‏ ‎Yo‏ "مثوية اليوم ‎١‏ ‎You > L44905-‏ 8,7 بيد الجبببد ابد |الجبب+ 86-04 ميكروجرام/ | ميكروجرام/ طفرة 8 ‎toxin‏ | ملليلتر ملليلتر الترتيب رقم: 7(« ‎(Rxn?2‏ ‎١ ٠‏ "مثوية اليوم ‎١‏ ‎H+ | AHH Yau < You > L44905-‏ |++ جبد ‎VE‏ ‏86-05 أميكروجرام/ |ميكروجرام/ طفرة 8 ‎toxin‏ | ملليلتر ملليلتر الترتيب رقم: 7(« ‎(Rxn?2‏ ‎Yo‏ "مثوية اليوم ‎١‏ ‏كصييا ‎EE KC) BOO AT‏ دلا
حم ‎-١‏ ‏86-06 ميكروجرام/ |ميكروجرم/ طفرة 8 ‎toxin‏ | ملليلتر ملليلتر الترتيب رقم: ‎(Rxn3 ٠ (7‏ ‎١ ٠‏ "مثوية اليوم ‎١‏ ‎H+ +++ Yau > You > L44905-‏ | +++ 86-07 ميكروجرام/ |ميكروجرم/ طفرة 8 ‎toxin‏ | ملليلتر ملليلتر الترتيب رقم: ‎(Rxn3 ٠ (7‏ ‎Yo‏ "مثوية اليوم ‎١‏ ‎Yau < You > L44905-‏ يبد | الجبببد | +++ ‎mss 86-08‏ ميكروجرام/ طفرة 8 ‎toxin‏ | ملليلتر ملليلتر الترتيب رقم: 7( ‘ 11 عا ‎١ ٠‏ "مثوية اليوم 2 ‎Yeo < Yeo > L44905-‏ ++ ++ + 86-09 ميكروجرام/ |ميكروجرم/ طفرة 8 ‎toxin‏ | ملليلتر ملليلتر الترتيب رقم: 7( ‘ 11 عا ‎Yo‏ "مثوية
V4.
Lp ee
Fb | ‏|لجبببد‎ At | A+ You < You > L44905- ‏ميكروجرام/ | ميكروجرام/‎ 86-10 طفرة 8 ‎toxin‏ | ملليلتر ملليلتر الترتيب رقم: «Rxn2 «(7 ‎٠‏ مثوية ‏اليوم © ‎+ ++++ ++ You < You > L44905- ‏أ ميكروجرام/ |ميكروجرام/‎ 86-11 ‏طفرة 8 ‎toxin‏ | ملليلتر ملليلتر ‏الترتيب رقم: ‎«Rxn2 «(7 ‏2 مثوية ‏اليوم © ‎+++ | HHH ++++ You < You > L44905- ‏أميكروجرام/ |ميكروجرام/‎ 86-12 ‏طفرة 8 ‎toxin‏ | ملليلتر ملليلتر ‏الترتيب رقم: ‎«Rxn3 (7 ‎٠‏ مثوية ‏اليوم © ‎+++ | HHH ++++ You < You > L44905- ‏أميكروجرام/ |ميكروجرام/‎ 86-13 ‏طفرة 8 ‎toxin‏ | ملليلتر ملليلتر ‎Pee‏ لت ‎Evo
-١1- «Rxn3 (7 2 مثوية اليوم ©
Fb | bt | At | ‏بيد‎ You < You < L44905- ‏|ميكروجرام/‎ [haan] 86-14 طفرة 8 ‎toxin‏ | ملليلتر ملليلتر الترتيب رقم: 6 «Rxn1 ‎٠‏ مثوية ‎١7 asd ‎+ a ‏بد‎ You > You > L44905- ‏أ ميكروجرام/ |ميكروجرام/‎ 86-15 ‏طفرة 8 ‎toxin‏ | ملليلتر ملليلتر ‏الترتيب رقم: ‎6 ‎«Rxn1 ‏2 مثوية ‎١7 asd ‎Fb | ‏|جبد‎ At ‏بيد‎ You < You < L44905- ‏أميكروجرام/ |ميكروجرام/‎ 86-16 ‏طفرة 8 ‎toxin‏ | ملليلتر ملليلتر ‏الترتيب رقم: ‎«Rxn2 «(7 ‎٠‏ مثوية ‎١7 asd
I
‎Evo
-١7- 867 أ ميكروجرام/ |ميكروجرام/ طفرة 8 ‎toxin‏ | ملليلتر ملليلتر الترتيب رقم: «Rxn2 «(7 58 مثوية ١7 asd +++ | HHH +++ Yau < Yao > L44905- ‏أ ميكروجرام/ |ميكروجرام/‎ 86-18 طفرة 8 ‎toxin‏ | ملليلتر ملليلتر الترتيب رقم: 6 «Rxn3 ‎٠‏ مثوية ‎١7 asd ‎++ ++ +++ Yoo < Yoo > L44905- ‏|ميكروجرام/‎ [basses] 86-19 ‏طفرة 8 ‎toxin‏ | ملليلتر ملليلتر ‏الترتيب رقم: ‎6 ‎«Rxn3 ‏58 مثوية ‎١7 asd ‎Fb | bt | At | ‏بيد‎ Yau < Yao > L34346-
Fb | bt | At | + Yau < Yao > L34346-
TI i ‎Evo
-١8-
تجارى؛ ‎HHH | FH | HH ND ND | FI‏ | ++++ ‎Toxoid 8‏ ‎(List‏ ‎Biologicals)‏ ‎[toxin 71‏ م لا ‎HH ++| HH‏ | +++ تجاري؛ مقارن | بيكوجرام/ | بيكوجرام/ ‎(List‏ ملليلتر ملليلتر ‎Biological)‏ ‎HHH gL VY [| gL YA | toxin B‏ | ++ يبد ‎NU‏ ‏مقارن» طفري اج رم/ |اجرم ثلاثتي ‎ill lll . al vw‏ (تعري 0 الترتيب رقم: 7( شروط ‎Je ld‏ ربط متقاطع- كيميائي لعينات 8 ‎toxin‏ طفري المشار إليها في جدول 4 ؟
إن 8 ‎toxin‏ ثلاثي الطفرة (تعريف الترتيب رقم: ‎)١‏ يتقاطع الرابطة- كيميائيا ويختبر طبقا لشروط التفاعل التالية. تختبر العينات 144905-86 في تجربة تشمل ‎v‏ أشكال متباينة لتفاعل 707و ؟ من درجات حرارة حضانة. في كل يوم؛ تؤخذ ‎١‏ عينات لإجمالي ‎YA‏ عينة. إن
‎oo‏ العينة الأولى في القائمة هي المثال المقارن غير المعالج (الذي ‎Jia‏ إجماليا ‎١9‏ عينة). يتضمن
‏المثال المقارن غير المعالج ‎toxin 8 polypeptide‏ طفرة ثلاثية غير معالج (تعريف الترتيب رقم: 7(
‏التفاعل ‎١‏ (017م4ا") = ‎Av‏ مللي جزيثي جرامي ‎an Ak Av HCHO‏ جرامي ‎Ak ٠ (glycine‏ جزيئي جرامي ‎toxin 8 Protein «v pH NaPO4‏ طفرة ثلاثية (تعريف
‏أ الترتيب ‎١ (7 tad)‏ مجم/ ملليلتر
-١46- ‏مللي‎ Av glycine ‏بدون‎ (HCHO ‏جزيثي جرامي‎ Ak Av = (Rxn2") ¥ ‏التفاعل‎ ‎١ (Tad) ‏طفرة ثلاثية (تعريف الترتيب‎ toxin 8 Protein «v pH NaPO4 ‏جزيئي جرامي‎ ‏مجم/ ملليلتر‎ ‏مللي‎ Av glycine ‏بدون‎ (HCHO ‏جزيثي جرامي‎ Ak 860 = (“Rxn3") ‏التفاعل ؟‎ ١ (Tad) ‏طفرة ثلاثية (تعريف الترتيب‎ toxin 8 Protein ‏7ء‎ pH NaPO4 ‏جزيثي جرامي‎ © ‏تشمل تغطية طرفية مع‎ .Cyanoborohydride ‏ملليلتر + تغطية طرفية مع‎ [a as ‏مضافة إلى تفاعل نهائي بدون ملح‎ CNBrH4 ‏مللي جزيئي جرامي‎ A+ Cyanoborohydride ‏ساعة عند 7 7"مثوية.‎ YE ‏ومحصنة‎ ‏جرام من 8 10*10 طفرة‎ [NHS SEDC ‏جرام‎ ١,5 ‏بالنسبة لعينة /34346-30ا:‎ «MES ‏جرامي‎ SHA ‏مللي‎ Al) ‏*"منوية في‎ ٠١ ‏أ ثلاثية (تعريف الترتيب رقم : 7( » ؛ ساعات عند‎ ‏أس هيدروجيني ما‎ «NaCl ‏مللي جزيثي جرامي‎ You ‏طفرة ثلاثية‎ toxin 8 ‏جرام من‎ [NHS EDC ‏جم‎ +0 :L34346-30B ‏بالنسبة لعينة‎ ‏(تركيز نهائي جرام/‎ glycine ‏ذلك إضافة‎ Lyd Ve ‏ساعتين عند‎ oT ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ ‏مللي‎ Yo. (MES ‏مللي جزيثي جرامي‎ Yo. ‏في‎ ‘ a 4° ٠ ٠ die ‏لتر) ويحضن ساعتين إضافيتين‎
L34346-30A Jal ‏الاختلاف الوحيد بين التفاعلين من‎ .,5 pH «(NaCl ‏جزيني جرامي‎ Yo .L34346-30B ‏إلى تفاعل‎ glycine ‏هو إضافة‎ L34346-30B ‏من‎ Toxins ‏مثال 37: أجسام مضادة محثة بتركيبات مولدة للمناعة لديها القدرة على معادلة‎ ‏مختلفة‎ C. difficile ‏سلالات‎ ‏لتحديد ما إذا كانت الأجسام المضادة المحثة بالتركيبات المولدة للمناعة متضمنة مواد‎ ‏مختلفة؛ يتم ترتيب سلالات‎ toxin ‏طفري يمكن أن تعادل طيف واسع من ترتيبات‎ toxin ‏عقار‎ ٠ ‏كثيرة لتحديد درجة التباين الجيني بين السلالات المختلفة مقارنة‎ toxino ‏وأنواع‎ ribo ‏تمثل أنواع‎ ‏مفرزة من‎ tOXINS ‏الطفري. تختبر عندئذ مواد طافية من مزرعة تحتوي‎ toxin ‏بمواد عقار‎ ‏السلالات المختلفة في اختبار معادلة في المعمل باستخدام أمصال من هامسترات محصنة لتحديد‎
—V40- ‏نطاق تغطية التركيبة المولدة للمناعة ولتحديد 3508 التركيبة المولدة للمناعة على الحماية ضد‎
المتباينة من سلالات إكلينيكية دوارة في الدم. تستخدم كل من خلايا ‎HT-29‏ (خط خلية سرطان قولون) وخلايا 06-90 لاختبار تعادل ‎toxins‏ الظاهرة من سلالات ‎.CDC‏ إن خلايا 111-29 حساسة أكثر نحو /120؛ إن ‎EC50 ٠‏ من أجل ‎TedA‏ النقي في هذه الخلايا ‎٠٠١‏ بيكوجرام/ ملليلتر مقارنة مع 7,؟ بيكوجرام/ ملليلتر من أجل 1008. على صعيد آخر فإن خلايا ‎IMR-90‏ حساسة أكثر من أجل 1008؛ إن ‎EC50‏ من أجل 1008 النقي في هذه الخلايا تتراوح بين 4-» ؟ بيكوجرام/ ملليلتر مقارنة مع 9-7 بيكوجرام/ ملليلتر من أجل 100/8. تأكدت خصوصية الاختبار لكل من ‎TedA‏ ‏و1008 في خطوط الخلية هذه باستخدام كل من أجسام مضادة عديدة وأحادية النسخ تخص ‎٠‏ | 0*10]. بالنسبة للقيم المعادلة ‎«GLAAD‏ تختبر مواد ترشيح مزرعة لعدد ‎YE‏ مادة معزولة ‎CDC‏ ‏عند تركيز ؛ مرات لقيم 050 الخاصة بها. إن ثلاثة من السلالات بها مستويات ‎ALB toxin‏
جدا لاختبارها في اختبار المعادلة. ‎Juans‏ على ‎YE‏ سلالة تمثل الأنواع ‎[ribo‏ الأنواع ‎toxino‏ المختلفة التي تشمل أكثر من 5 من السلالات الدوارة في الدم من ‎difficile‏ .6 في الولايات المتحدة وكندا من ©006. من ‎VO‏ بين هذه المواد المعزولة سلالات تمثل أنواع ‎0٠ 5079 ribo‏ و78 و3 سلالات وبائية من ‎CDAD‏ في الولايات المتحدة؛ كندا والمملكة المتحدة. تمثل السلإلات 2004013 و2004118 نوع ‎YY ribo‏ ¢4 تمثل السلالة 2004111 النوع ‎٠0٠ ribo‏ والسلالات 2005088« 2005325 و2007816 تمثل نوع ‎VA ribo‏ . لتحديد درجة التباين الجيني بين المواد المعزولة الإكلينيكية المسببة للمرض والسلالة + ‎TF‏ يتم ترتيب بصورة تامة لجينات ‎tedA) toxin‏ و1608) من هذه ‎٠‏ السالالات الإكلينيكية. انظ_ر ‎PVG‏ *#؟. تصطف ترتيبسات ‎amino acid‏ لأجل 5 باستخدام ‎ClustalW‏ في ‎Megalign™ program‏ ‎(DNASTAR® Lasergene®)‏ وتحلل من أجل تماثل الترتيب. من أجل /160؛ يظهر تحليل اصطفاف جينومي أن كل المواد المعزولة الإكلينيكية والسلالة ‎TY‏ تشترك في تماثل ترتيب ‎IS amino acid‏ حوالي ‎.72٠٠0-448‏ إن القسم الطرفي © من جين ‎tedA‏ كان مختلف ‎AS‏ ‎YO‏ بدرجة كبيرة. يجرى نفس التحليل لجين ‎tedB‏ الذي يظهر اختلاف ترتيب أكبر. من الجدير بالذكر
-١7- ‏تظهر الأنماط الأكثر‎ 2007858/NAP1 funk5 ‏و‎ 2007838/NAPT7/126 ‏أن السلالات‎ —AA) C ‏والطرفية‎ (2) + oY) ‏اختلافا عن السلالة 10 في مجالات السيطرة الطرفية لا‎ ‏البيانات غير مبينة).‎ ٠ ‏من هامسترات ذهبية سورية محصنة مع‎ (HS) ‏تجمع مادة مجمعة من مصل هامستر‎ tad) ‏طفري (تعريف الترتيب رقم 4) و1608 طفري (تعريف الترتيب‎ TCAA ‏مولد مناعة يتضمن‎ © ‏المثال 29 جدول‎ (JE ‏طبقاء على سبيل‎ (EDC ‏الطفرية على‎ toxins ‏1)؛ حيث يخمد نشاط‎ ‏أن‎ Yo ‏تبين النتائج في جدول‎ aluminum phosphate ‏الموصوفين أعلاه؛ وتصاغ مع‎ (Vo ‏على الأقل من المواد الطافية المقابلة من المزرعة متعادل» في اختبار معادلة في‎ toxin 8 ‏المعمل؛ بواسطة أمصال من الهامسترات المحصنة.‎ ‏المناعي لتعادل‎ Hamster ‏وقابلية مصل‎ CDC ‏من‎ C. difficile ‏جدول 75: وصف سلالات‎ Ve ‏مختلفة‎ Toxins ‏التعادل بواسطة مصل‎ Ribo ‏النوع‎ PFGE ‏السلالة النوع‎
I ‏ل اللا‎ ‏الت‎ ‎2005283 ‎I on] ‏61لا‎
-١4/- ‏سس ااا‎ 1 - ‏منخفضة جدا لإنجاز اختبار التعادل.‎ toxin ‏تكون مستويات‎ ‏من سلالات‎ tOXIN ‏نتائج اختبار المعادلة باستخدام مستحضرات‎ YY ‏يصف الشكل‎ ‏أن الأجسام المضادة معادلة في‎ TedB ‏تبين البيانات‎ .10/08-90 WA ‏عديدة على‎ ©. difficile ‏الأمصال المضادة الهامستر قادرة على معادلة 107175 من كل الإحدى وعشرون مادة المعزولة‎ © ‏موجبة 1008. نحصل على‎ (Ted A ‏المختبرة». متضمنة سلالات مفرطة السمية وسلالة سالبة-‎
CDC ‏من‎ ©. difficile ‏سلالة مختلفة على الأقل من‎ 3 ‏تحت شروط‎ ©. difficile ‏وتزرع في أوساط مزرعة‎ (Atlanta, GA)(previously described) toxins ‏مناسبة كما معلوم في الفن وحسب الوصف أعلاه. تحلل مواد المزرعة الطافية التي تحتوي‎ ‏وتختبر بعد ذلك في‎ IMR-90 ‏على طبقات أحادية‎ (EC50) ‏المفرزة لتحديد سميتها الخلوية‎ ٠ ‏باستخدام تخفيفات من الأمصال من‎ 5050 Jie ‏اختبار معادلة قياس في المعمل عند ؛ مرات‎ ‏طفري ¢ محضرة مع‎ toxin 8 ‏طفري ومادة عقار‎ toxin A ‏هامسترات محصنة مع مادة عقار‎ ‏010010لال8. يختبر 10*10 خام ناتج من مواد مزرعة طافية لكل سلالة و1010‎ phosphate ‏مقابلة) من أجل‎ dla ‏(غير منقى من مواد‎ (List Biologicals ‏تجاري ناتج من‎ toxin) ‏باستخدام اختبار سمية خلوية في المعمل الموصوف أعلاه.‎ IMR-90 ‏سمية خلوية لخلايا‎ V0
-0م١-‏ في الأشكال ؟؟(أ)-(ك) تبين الرسومات البيانية نتائج من اختبارات سمية خلوية في المعمل (موصوفة مسبقا) المرسوم فيها بيانيا مستويات ‎(RLUS) ATP‏ مقابل تركيزات متزايدة من: أوساط مزرعة 017616 ...0 وتجمع مصل الهامستر ‎toxing(m)‏ خام وتجمع مصل الهامستر (©)؛ 1007 نقي وتجمع مصل هامستر (لله)؛ 10010 خام (*)؛ مقارن؛ ‎toxins‏ نقي ( *)؛ 0 مقارن. تضاف ‎toxins‏ من السلالات المقابلة إلى الخلايا عند ‎AXECS0 ad‏ كما مبين في الأشكال ‎YY‏ 0 -(ك)؛ تولد الهامسترات المستلمة مولد المناعة الموصوف بدرجة مدهشة أجسام مضادة معادلة تظهر نشاط معادل ضد ‎tOXINS‏ من على الأقل ‎YT‏ سلالة ‎CDC‏ المختلفة التالية من ‎difficile‏ .0؛ مقارنة مع ‎toxin‏ فقط المقابل ‎JUS‏ مقارن: 6 شكل 077))؛ 2006017 (شكل ؟؟(ب)؛ 2007070 (شكل 7(ج))؛ »© 2007302 (شكل ؟؟لد))؛ 2007838 (شكل ؟7(ه))؛ 2007886 (شكل ١7و))؛‏ ‎¢((5)YY) 2009292‏ 2004013 (شكل ؟7”(ح))؛ 2009141 (شكل ‎١‏ 7(ط))؛ 2005022 (شكل ؟"(ي))؛ 2006376 (شكل ‎(YY‏ انظر أيضا جدول ‎Yo‏ من أجل سلالات ‎C.‏ ‎difficile‏ إضافية مختبرة فيها 107175 وتتعادل بواسطة التركيبة المولدة للمناعة المتضمنة ‎ale‏ ‏عقار / ‎toxin‏ طفري ومادة عقار ‎toxin B‏ طفري محضرة في ‎.aluminum phosphate‏ ‎Vo‏ في دراسة أخرى؛ تختبر مواد طافية من مزرعة تحتوي 10105 مفرزة من سلالات ‎C. difficile‏ المختلفة )4( ‎CDC‏ ومن ‎(UK Leeds Hospital‏ في اختبار التعادل في المعمل باستخدام أمصال من هامسترات معطاة مادة ‎toxin A lie‏ طفري ومادة ‎toxin 8 lie‏ طفري؛ محضرة مع ‎LAlhydrogel‏ انظر جدول 76 من أجل النظام التجريبي. النتائج مبينة في جدول ‎A‏ وجدول ‎TA‏ ‎٠. ‏النظام التجريبي‎ YT ‏جدول‎ ‏مصل مضاد أرنب (عديد النسخ مضاد‎ :HT=29 ‏عينة الاختبار | في اختبار يستخدم خلايا‎
Toxin ‏رخ‎ (#70-CR65 (Fitzgerald Industries ‏من‎ 10610 A ‏المقارنة‎ ‎(List Biologicals ‏نوع بري من‎ TOXIN A) ‏مرجعي‎ ‎Evo
-١8- ‏في اختبار تستخدم خلايا 11/14-90: مصل مضاد أرنب (عديد النسخ مضاد‎
Toxin ‏و8‎ (#B01246R «Meridian Life Science Toxin 8 (List Biologicals ‏نوع بري من‎ 10*10 B) ‏مرجعي‎ ‏مرجعي.‎ Toxin A + HS ‏مصل‎ :HT-29 ‏أمثلة عينة مقارنة | في اختبار باستخدام خلايا‎ ‏طفري ومادة عقار 8 10610 طفري‎ 10*10 A ‏مصدر مصل احيوانات معطاة مادة عقار‎
Alhydrogel ‏مضاد هامستر | محضرة مع‎ (HS) ‏متعادلين لأجسام مضادة تحث تركيبة مولدة للمناعة متعادلة‎ Toxin ‏و8‎ Toxin :7١7 ‏جدول‎ ‎Hypervirulent ‏متضمنة سلالات‎ «CDC ‏نوع بري مختلفة من‎ C. difficile ‏من سلالات‎ ‏سلالة | النوع | النوع | النوع | طريقة كتابة أخرى | التعادل | التعادل‎
HS ‏بواسطة‎ | HS ‏بواسطة‎ Toxino | Ribo| PFGE Cdiff
HT-29) IMR-) (Toxin A 90 (Toxin B oi sso] 1] wea ‏تسم‎ ‎I 0| | 02200914 ‏م‎ ce 2a 0] 15] 0 07 620 5 || Une WAPIT [2007502 ote wr 200m07
I A Eo
I EE
0 AS ET
IE ‏تمس‎ ET om wefan ‏61لا‎
سم امسن السك كن 0 ا ‎NAP7-1 2007816‏ | 78 \ زيادة الانتشار في | نعم نعم ال انز ري ‎JH Fe I‏ 8 ا7طملا |126 وأوروبا نعم نعم مسنم ‎Wa‏ ‎-NAP1 | 2005359‏ نعم نعم ‎I‏ وا ‎Te‏ ‏© جدول ‎Toxin Bs Toxin A :YA‏ متعادلين لأجسام مضادة تحث تركيبة مولدة للمناعة متعادلة من سلالات ‎difficile‏ .© نوع بري مختلفة من أوروبا» متضمنة سلالات ‎Hypervirulent‏ ‏سلالة | النوع طريقة كتابة أخرى النوع ‎Toxin‏ | التعادل بواسطة |التعادل ‎(IMR-90) HS PFGE | Cdiff‏ |بواسطة ‎HS‏ ‎HT-29) (Toxin B‏ ‎Evo‏
-؟١-‎ pm pra nto ‏طملا نعم نعم‎ 041 2 ‏لو ا‎ ‏لكان‎
له أل اس سس تنتج سلالات ‎C. difficile‏ نوع بري من ‎.Leeds Hospital, UK‏
61لا
ال "هالا" - ‎dla‏ غير معروفة ‎(NA‏ غير قابل للتطبيق؛ سلالة لا تقدم ‎dtoxin A‏ لا تختبر في اختبار تعادل ‎toxin A‏ مثال 38: تخطيط ‎toxins Peptide‏ طفرية ثلاثية ‎EDC/NHS‏ ‎toxins jail‏ طفرية ثلاثية خامدة النشاط مع ‎(EDC/NHS‏ تجرى تجارب تخطيط ‎peptide ©‏ على ؛ مجموعات من ‎toxin A‏ طفرة ثلاثية معالج مع 00/11115ا (تعريف الترتيب رقم: ؛) و؛ مجموعات من 8 طفرة ثلاثية معالج مع ‎EDC/NHS‏ (تعريف الترتيب رقم: 6). بعد هضم ‎toxins‏ الطفرية مع ‎drypsin‏ تنفصل أجزاء ‎peptide‏ الناتجة باستخدام ‎HPLC‏ معكوس الطور. يستخدم تحليل طيف الكتلة لتحديد التعديلات التي تحدث نتيجة لعملية إخماد النشاط. بالنسبة لكل من ‎toxin A lie sale‏ طفري ومادة عقار 8 ‎toxin‏ طفري؛ تحدد أكثر من 7495 من ‎peptides ٠‏ الانتقالية النظرية. تحددت روابط متقاطعة ومواد مجمعة ‎glycine‏ (يستخدم ‎glycine‏ ‏كعامل تغطية طرفية). في كل من مادة عقار ‎toxin A‏ والطفري ومادة ‎toxin B lie‏ الطفري؛ تلاحظ أيضا مواد مجمعة ©0618-818010. بدون التقيد بآلية أو نظرية؛ يبدو أن المواد المجمعة 0618-6 تنتج من تفاعل ؟ جزيئات جرامية من ‎NHS‏ مع جزيء جرامي واحد ‎EDC‏ ‏والذي يشكل ‎beta-alanine‏ منشط مع ‎NHS‏ يمكن عندئذ أن يتفاعل هذا الجزيء مع ‎VO‏ مجموعات 1506| لتكو_وين مود مجمعلسسة ‎Vo +) 0618-68‏ دالتون). في عينات ‎B‏ 10*10 طفرة ثلاثية المعالج مع ‎(EDC/NHS‏ ‏تلاحظ أيضا مستويات ‎ALE‏ (07, جزيء جرامي/ جزيء جرامي من ‎(Protein‏ من ‎dehydroalanine‏ (-4؛ ؟ دالتون). إن ‎Dehydroalanine‏ ناتج من إزالة ‎sulfonation‏ ‏متخلف ‎Cysteine‏ يلاحظ نفس نوع ودرجة التعديل في كل الدفعات الأربعة لكل ‎toxin‏ طفري؛ ‎Yo‏ مما يدل على أن العملية تنتج منتج متوائم. يؤكد تخطيط ‎Peptide‏ (عند نطاق تغطية ترتيب أكبر من 795) وجود التعديلات. يبين جدول 74 ملخص للتعديلات. انظر أيضا الشكلين ؛ 75-7. إضافياء يزداد تباين المقاس والشحنة لمادة عقار ‎toxin A‏ طفرة ثلاثية ومادة عقار ‎toxin B‏ طفرةٌ ثلاثية؛ مقارنة مع تباين المقاس والشحنة لأجل ‎toxin A‏ الطفرة الثلاثية المقابل و8 ‎toxin‏ الطفرة الثلاثية ‎ALG‏ في غياب إخماد نشاط كيميائي. نتيجة لذلك» فإن أنماط تحليل كروماتوجرافي
‎٠ ".-‏ \ _ مقصي للمقاس ‎(SEC)‏ وتحليل كروماتوجرافي ‎(AEX) anion‏ لها ذروات عريضة نسبيا (البيانات غير مبينة). جدول ‎V4‏ ملخص التعديلات الملاحظة في طفرة مواد عقار ‎toxin‏ ‏التعديل عدد المتخلفات | إجمالي عدد | درجة التعديل الجزيفات المعدلة المتخلفات الجرامية المعدلة/ ‎protein‏ جزيء جرامي طفرة مادة عقار ‎toxin A‏ ارتباط متقاطع 7 ‎vl 76: [Asp ٠‏ ‎Glu‏ ‏جزء ‎Y,Y AEA [Asp ٠ A Glycine‏ ‎Glu‏ ‏جزء ‎RY A930 =Y Lys YYY V4 | Beta‏ ‎Alanine‏ ‏طفرة مادة عقار ‎toxin B‏ ارتباط متقاطع ‎7017-١١ [Asp Ya.
Y‏ ب ‎Glu‏ ‏جزء ‎71-٠ [Asp Ya.
YY Glycine‏ 875 ‎Glu‏ ‏جزء ‎57-١ Lys Yo \. | Beta‏ 1 ‎Alanine‏ ‏تحسب درجة التعديل بواسطة تقسيم مساحة ‎HPLC‏ من ‎peptide‏ المعدل بواسطة مساحة ٠ه ‎HPLC‏ من ‎peptide‏ الأصلي + المعدل مثال 39: إنتاج منتج عقار تحتوي التركيبة المولدة للمناعة ‎C. difficile‏ (منتج عقار) ¥ من المقومات الدوائية النشطة (مادة عقار ‎A‏ 10*10 طفري ومادة عقار ‎toxin B‏ طفري): إن منتج عقار تمثيلي هو فلا
‎٠ —‏ \ — مستحضر مجفف بالتبريد يحتوي مثبت ‎H‏ م ‎٠١ Tris‏ مللي ‎yt‏ جرامي ‎٠‏ م كرا ة, نم (وزن/ وزن) ‎20.0٠ sctrehalose dihydrate‏ (وزن/ حجم) 80 0075010816 متضمنا ‎JS‏ ‏من مادة عقار ‎toxin A‏ الطفري ومادة عقار 8 ‎toxin‏ الطفري. انظر جدول ‎fe‏ تحضر التركيبة المولدة للمناعة للحقن بإعادة تعليق اللقاح المجفف بالتبريد إما مع مادة تخفيف أو مع مادة تخفيف © تحتوي على ا©07770009ل8/. يتضمن العلاج الوهمي محلول ملح طبيعي معقم للحقن ( ‎sodium‏ ‎chloride‏ ,+ %( جدول ‎٠‏ 2 ‎I) JC‏ جرعة مولدة ‎[Alas‏ رد ‎Yeu (O00 (YO!‏ ميكروجرام من كل ‎toxin A‏ طفرة ثلاثية معالج ملليلتر مع ‎EDC/NHS‏ (تعريف الترتيب رقم: ؛ و8 ‎toxin‏ طفرة ثلاثية معالج مع 00/11/15 (تعريف الترتيب رقم: 7( مادة مثبت/ عامل تضخيم 7¢,0 ‎Trehalose dihydrate‏ (77-7) ‎[oro] Polyorbte 80 =.‏ أدوات غلق حاوية قارورة زجاجية صوانية ؟ ملليلقر ‎١9‏ ملليمتر النوع ١؛‏ ‎West - Flurotec (Blowback‏ تحضير مثبت الأس الهيدروجيني يضاف ماء للحقن (71//ا) إلى وعاء تركيب. أثناء الخلط» تضاف المواد المسوغة وتذاب حتى تصبح في محلول. يقاس الأس الهيدروجيني. عند الطلب؛ يضبط الأس الهيدروجيني إلى ‎١ 2 54‏ مع ‎(HO‏ يخفف المحلول إلى وزن ‎Ale‏ مع ‎WEI‏ ثم يرشح باستخدام مرشح ‎YY Millipore Express SHC 010‏ ,+ ميكرومتر. تؤخذ قبل الترشيح ‎Ae‏ اختزال حمل حيوي سابقة للترشيح. تؤخذ عينة من مثبت أس هيدروجيني المرشح من أجل الأوزمولالية ‎PH‏ ‏م 9 ل أ م .
مج \ _ تجمع مواد عقار 10*10 الطفري الذائبة في وعاء التحضير على أساس كميات محددة مسبقا بترتيب التحضير التالي: يضاف ‎٠‏ 75 من حجم مثبت أس هيدروجيني التخفيف المستهدف لتحقيق ‎١,7‏ مجم/ ملليلتر إلى الوعاء ‎Yl‏ ويلي ذلك إضافة ‎toxin A lie sale‏ طفري وتخلط * دقائق عند ‎١٠١٠١‏ دور في الدقيقة. تضاف عندئذ ‎sole‏ عقار 8 ‎toxin‏ طفري إلى ‎sc le gl)‏ ويخفف © المحلول إضافيا إلى نقطة تخفيف ‎١,76‏ مجم/ ملليلتر ويخلط عندئذ ‎sad‏ © دقائق أخرى عند ‎٠٠١‏ ‏دورة في الدقيقة. تزال عينة وتختبر من أجل تركيز ‎toxin‏ الطفري الكلي. يخفف المحلول إلى حجم ‎2٠‏ اعتمادا على ‎Aad‏ تركيز ‎toxin‏ الطفري في العملية ثم يخلط لمدة ‎١١‏ دقيقة عند ‎٠٠١‏ دورة في الدقيقة. تؤخذ عينة من منتج عقار المستحضر من أجل ‎pH‏ والحمل الحيوي قبل الترشيح. يرشح عندئذ ‎mite‏ العقار المحضر باستخدام ‎Millipore Express SHC XL150‏ للتخزين طوال ‎٠‏ الليل» أو يصل إلى خط تعبئة للترشيح المعقم. يصل الحجم المحضر إلى منطقة ‎RAPA‏ تؤخذ ‎Le‏ من أجل الحمل الحيوي 3 وعندئذ يرشح معقما مع ¥ من مرشحات ‎Millipore Express SHC XL150‏ في سلسلة. ‎Ley‏ الحجم المحضر في حاويات زجاجية مزالة ‎pyrogen‏ عند حجم تعبثة مستهدف ‎«VY‏ ملليلتر. تغلق بسدادة ‎Wis‏ الزجاجات ‎Amal)‏ وتحمل عندئذ فوق مجفف التبريد. تنفذ دورة التجفيف بالتبريد كما ‎dome VO‏ جدول ‎LEY)‏ عند اكتمال ‎yell‏ تعبا مرة أخرى حجة التجفيف بالتبريد مع ‎nitrogen‏ إلى 4 جوي وعندئذ تغلق كل السدادات بصورة مانعة للتسرب تماما. يزال حمل الحجرة وتغطى الزجاجات طرفيا باستخدام موائع تسرب تزال بالقلب. جدول ‎:4١‏ نقاط ضبط دورة تجفيف بالتبريد لمنج عقار ‎C. difficile‏ الخطوة درجة الحراة | الإثارة (دقائق) | النقع (دقائق) | الضغط (درجة مئوية) ص — — ‎WE PR‏ ل ‎ITY IY‏ ‎|e] ree] 9| were es‏
‎٠ h —‏ \ — تجفيف ‎Ag ACY‏ .79 1 ثانوي لت ‎JE‏ ‏تتلخص بيانات ثبات منتج العقار في جدول ‎LEY‏ تقترح البيانات أن يكون منتج العقار ثابتا فيزيائيا وكيميائيا أثناء التخزين عند ‎AY‏ لمدة ؟ شهور على الأقل أو شهر واحد على الأقل عند 5 ‎Y‏ "مئوية أو ‎٠‏ *"مثوية ‎٠.‏ تحث كلاد شرطي ا 2 لتخز بين ¢ فإن مستو ى الشوائب أ ‎we!‏ لمكتشف ‎alg‏ ‏تحليل كروماتوجرافي حجم مستثني المقاس ‎(SEC)‏ لا يتغير؛ ولا توجد تغيرات في تولد المضاد في © المعمل خلال النقاط الزمنية الأخيرة المختبرة. ‎٠١‏ ‏جدول ‎CANES‏ منتج عقار مجفد 8 ‎a‏ تشكيا منتج العقار .7 ميك روجرام/ ملليلتر طفرة ‎sale‏ عقار ‎٠٠١ (toxin A‏ ميكروجرام/ ملليلتر طفرة مادة ‎dihydrate 7 4,5 toxin 8 lac‏ 11608056 ‎٠١ (Polysorbate 80 76,01‏ مللي ‎Ayia‏ جرامي مثبت أس هيدروجيني ‎ad Tris‏ الهيدروجيني ‎Y,¢‏ ‏الاختبار ‎t‏ = صفر شهر واحد عند ا شهر واحد عند | ؟ شهور عند ‎-١‏ ‎IN YEP 4 ٠ YEP Y 5‏ "مئوية الظهور قبل ‎gy LA Sag sale)‏ |كعكة بلون اكعكة بلون أبيض | كعكة بلون أبيض التشكيل أبيض خالية | أبيض خالية |خالية جوهريا من | خالية جوهريا من ‎Evo‏
—¥.y- i Basal of ‏جوهريا من اجوهريا من مادة |مادة دقائقية‎ ‏مادة دقاثقية | دقائقية خارجية ا خارجية مرئية | خارجية مرئية‎ ‏خارجية مرئية | مرئية‎ ‏|محلول عديم | محلول عديم محلول عديم‎ sale) ‏بعد‎ sell ‏للون رائق | محلول عديم | اللون رائق‎ | EH ‏التشكيل اللون‎ ‏اللون رائق‎ ‏طفرة مادة | - طفرة مادة‎ - ١ ‏طفرة مادة | - طفرة مادة‎ - | dda de ‏التركيز‎ ‎toxin A jie | toxin A ‏احقار‎ toxin A ‏عقار‎ | toxin A ‏(ميكروجرام/ اعقار‎ AEX
Yay ٠١ yay "١١ ‏ملليلتر)‎ ‏طفرة مادة | - طفرة مادة‎ - ١ ‏طفرة مادة | - طفرة مادة‎ - toxin B ‏اعقار‎ toxin 8 ‏اعقار‎ toxin 8 lac | toxin 8 ‏عقار‎ ‎YY. YYY YYY yo
JAR ZX, A ZX, A IY, 0 >| ‏شائب بواسطة‎
JN ‏تك لا‎ :HMMS :HMMS :HMMS HMMS | ‏التمييز بواسطة‎
LY Ao AA ARIA AR SEC :Monomer :Monomer :Monomer | :Monomer
LAY AVA AYE LA
= ‏مللي جزيئي جرامي لهذه الاختبارات.‎ ٠١ NaCl ‏مجفد مع مادة تخفيف‎ DP ‏يعاد تشكيل‎ 8 ‏مثال 40: مواد تخفيف لقاح:‎ ‏جرامي كمادة تخفيف لمنتج العقار‎ Juda ‏مللي‎ Te NaCl ‏بالنسبة لمحلول الملح؛ يستخدم‎ ‏المجفف بالتبريد بدون أي مادة مساعدة لتأكيد تواتر المحلول عند إعادة التشكيل.‎ ‏متوافر تجاريا كمنتج بدرجة‎ (Brenntag) ZY "Ao" Alhydrogel ‏إن‎ :Alhydrogel ° ‏يتكون من طبقات صفحية متبلرة ثمانية الأوجه‎ Good Manufacturing Practice (GMP)
م ‎٠‏ \ — من ‎-aluminum hydroxide‏ يبين جدول ؟؛ مستحضر مادة تخفيف ‎Alhydrogel‏ تمثيلي. يمكن استخدام المستحضر التمثيلي في اتحاد مع منتج عقار موصوف أعلاه. جدول ؟؛: منطق التحضير لمادة تخفيف ‎Alhydrogel‏ ‎dd‏ ‎sale icp‏ مساعدة/ ‎5١.‏ ,6 مجم ‎Al‏ ‏مي ‎x‏ ‎٠‏ لي جزشي ‎RoC im‏ إغلاق الحاوية قارورة زجاجية صوانية ‎Y‏ ملليلتر ‎١“‏ مم النوع ‎٠‏ ‎West - Flurotec (Blowback‏ تظهر الدراسات مع مادة مساعدة ‎Alhydrogel‏ ارتباط ‎79٠٠٠0‏ لمادة عقار ‎A‏ 10*10 © طفري ومادة عقار ‎toxin B‏ طفري مع ‎١‏ مجم ‎[Al‏ ملليلتر ‎Alhydrogel‏ من ‎pH‏ 6 إلى ‎Yo‏ ‏يظهر الارتباط الأقصى لكل من مادتي العقار عند أعلى تركيز 000160 مختبر ‎Yoo)‏ ‏ميكروجرام/ ملليلتر من كل). يختبر أيضا ارتباط 02016105 مع ‎Alhydrogel‏ مع مستحضر منتج عقار مجفف بالتبريد يحتوي على ‎٠٠١‏ ميكروجرام/ ملليلتر من كل ‎sale‏ عقار و ‎Alhydrogel‏ يتراوح من ‎١759‏ إلى ‎٠٠١‏ 5 مجم/ ملليلتر ‎٠‏ يعاد تشكيل منتج العقار مع مواد تخفيف تحتوي التركيزات المختلفة من ‎Alhydrogel‏ وتقاس النسبة المثوية لكل ‎toxin‏ طفري مرتبط. تظهر كل التركيزات المختبرة من ‎Alhydrogel‏ ارتباط ‎7٠٠١‏ لمولدات المضاد. تم أيضا اختبار حركيات ‎proteins Lis)‏ مع ‎Alhydrogel‏ عند الجرعة المستهدفة من مادة عقار ‎A‏ 10*10 طفري ومادة عقار 8 ‎toxin‏ طفري ‎Yoo)‏ ميكروجرام/ ملليلتر من كل). تبين ‎١‏ النتائج أن ‎72٠0٠٠0‏ من مواد عقار ‎toxin‏ الطفري ترتبط مع ‎Alhydrogel‏ على ‎Jae‏ المدى الزمني ‎YE 1‏ ساعة.
‎٠ q —‏ \ — ‎:Alhydrogel 5 CpG 24555‏ إن 24555 ‎21-mer sa CpG‏ ‎(ODN) oligodeoxynucleotide‏ تخليقي له ترتيب ‎TCG TITTTC GGT‏ 5-106 ‎GCT 11-3‏ (تعريف الترتيب رقم ‎SA:‏ ( . يظهر مستحضر تمثيلي لاتحاد مخففات ‎CpG‏ ‎Alhydrogel 524555‏ في جدول 44 . قد يستخدم المستحضر التمثيلي في اتحاد مع منتج © العقار الموصوف أعلاه. جدول ؛ 4: مستحضر مناسب لأجل ‎sale‏ تخفيف ‎Alhydrogel [CpG‏ الكحن 00-0 ‎I)‏ ‎٠.‏ مجم ‎A‏ مجم 006 ‎ER‏ ‎cd <i‏ مالي ‎ACT or om‏ غوالق الحاوية قارورة زجاجية صلبة من النوع ‎١ ١‏ ملليمتر سعة ؟ ملليلتر, ‎West - ,Blowback‏ ‎Flurotec‏ ‎:ISCOMATRIX®‏ إن المادة المساعدة ‎ISCOMATRIX®‏ هي مادة مساعدة تعتمد على 5800010 معروفة في الفن. يتضح مستحضر تمثيلي ‎Jal‏ مستحضر المادة المساعدة ‎ISCOMATRIX®‏ في جدول ©؟؛. قد يستخدم المستحضر التمثيلي في اتحاد مع منتج العقار ‎Ye‏ الموصوف أعلاه. جدول 180 مستحضر مناسب لأجل ‎sale‏ تخفيف ‎ISCOMATRIX®‏ ‏لجنا ‎I‏ ‏الأس الهيدروجيني ثبت الأى الدروجيني
=« \ \ — > علي جني جل 059 غوالق الحاوية قارورة زجاجية صلبة من النوع ‎١‏ ‎٠‏ ماليلقر سعة ؟ ملليلقتر, ‎West - Flurotec ,Blowback‏ مثال 41: تولد مناعي لتركيبات مادة عقار ‎TOXIN‏ طفري مع مادة مساعدة ‎Alhydrogel‏ في نموذج ‎NHP‏ واثبات إكلينيكي أولي للمفهوم: تم اختبار التولد المناعي لتركيبات ‎sale‏ عقار ‎A‏ 10*10 طفري ومادة عقار 5 ‎toxin‏ ‏طفري مع مادة مساعدة ‎Alhydrogel‏ 3 1105لا بصفة خاصة مكاك سينومولجس. إن ‎NHPs‏ ‏5 محصنة عند فترة زمنية فاصلة أسبوعين (الأسبوع صفر ‎٠‏ ( مع ‎٠١‏ ميكروجرام من كل من تركيبات ‎sale‏ عقار ‎toxin A‏ طفري ومادة عقار 8 ‎toxin‏ طفري (محضرة مع ‎(Alhydrogel‏ في ‎cde all‏ تحدث فيها استجابات معادلة مضادة ‎toxin‏ قوية. انظر جدول ‎LET‏ تصل كل من استجابات معادلة مضاد ‎toxin A‏ ومضاد 8 ‎toxin‏ إلى نطاق حماية بعد التحصين الثالث وتظل في حدود أو أعلى من نطاق الحماية على الأقل خلال الأسبوع ‎HAT) YY‏ نقطة زمنية تمت ‎٠٠١‏ دراستها ). تحصن مكاك سينومولجس (العدد ‎A=‏ ( في العضل عند صفر « ‎Y‏ و 2 أسابيع مع أ ميكروجرام من كل من مادة عقار ‎toxin A‏ طفري ومادة عقار 8 10*10 طفري محضرة في ‎You‏ ‏ميكروجرام ا©007/0309/. تجمع الأمصال عند كل نقطة زمنية وتحلل في اختبار معادلة ‎toxin‏ ‏من أجل النشاط الوظيفي المضاد ‎toxin‏ تتوافر 61115 في جدول 47. إن نطاق ‎jhe‏ الحماية ‎١‏ المتوافر في الجدول يصف نطاق عيار الجسم المضاد المعادل والذي يتطابق مع تقليل ملحوظ في تكرار عدوى ‎difficile‏ .© في تجربة علاج مضاد جسم أحادي النسخ ‎Merck‏ ‏جدول 187 تولد مناعي لمادة عقار ‎TOXIN A‏ طفري ومادة عقار 8 ‎Toxin‏ طفري (محضرة في ‎Yo‏ ميكروجرام ‎(Alhydrogel‏ في قردة سينومولجس (عيار معادلة ‎(For‏ ‏مضاد ‎toxin A‏ (نطاق حماية ‎:Merck/Medarex‏ 1,117-717 من أجل مضاد ‎(toxin A‏ ات
-١١؟-‏ مضاد 8 ‎toxin‏ (نطاق حماية ‎:Merck/Medarex‏ 7 -7,177 من أجل مضاد 8 ‎(toxin‏ ‏العلاقة بين عيارات جسم مضاد حماية آدمية من تجربة علاج ‎Merck mAb‏ وعيارات محثة مع لقاح ‎Pfizer‏ مرشح في ‎NHPs‏ ‏يبدو أن دراسة الفعالية الطرر ¥ مع ‎(Lowy et al., N Merck/Medarex mAbs‏ ‎Engl J Med. 2010 Jan 21;362(3):197-205)‏ تظهر علاقة بين مستوى ‎MADS‏ ‏© المعادلة المضادة 1017 في المصل ومنع تكرار ‎.CDAD‏ بعد إعطاء ‎mAbs‏ خاصة ‎toxin‏ إلى آدميين؛ يبدو أن مستويات الجسم المضاد في المصل في مستقبلين آدميين في نطاق ‎٠١‏ إلى ‎٠‏ ميكروجرام/ ملليلتر تحمي ضد تكرار العدوى (تقليل 7976 في معدل تكرار ‎(CDAD‏ ‏تختبر تركيبات مولدة للمناعة تتضمن مواد عقار ‎toxin‏ طفري من أجل تحديد ما إذا كانت التركيبات ‎sal gall‏ للمناعة قادرة على حث استجابات جسم مضاد معادلة مؤثرة بدرجة قوية في ‎٠‏ > الأآدميين بمقارنة البيانات المنشورة من دراسة الطور ‎Merck/Medarex ١‏ مع مستويات جسم مضاد المحثة بالتركيبات المولدة للمناعة في نموذج ‎JNHP‏ يتحقق هذا باستعمال السمات المنشورة مسبقا من أجل ‎Merck/Medarex mAbs‏ لتحويل نطاق هذه الأجسام المضادة في المصل الناتج من الكائنات التي لا تظهر علامة تكرار الإصابة ‎٠٠١-١٠١١(‏ ميكروجرام/ ملليلتر) إلى عيارات معادلة ‎٠‏ 75 ومقارنة هذه العيارات ‎GUA)‏ عيار ‎(Gla‏ مع العيارات الملحوظة في ‎Vo‏ النماذج الإكلينيكية الأولية الموصوفة هنا. كما مبين في جدول £7( فإن التركيبات المولدة للمناعة المتضمنة مادة عقار / ‎toxin‏ طفري ومادة عقار 8 10*17 طفري مع مادة مساعدة ‎Alhydrogel‏ ‏تولد استجابات مناعية في ‎NHPs‏ تصل إلى "نطاق الحماية" بعد الجرعة الثالثة وتظل في هذا النطاق أو ‎Jef‏ منه خلال الأسبوع ‎FY‏ إن مستوى الأجسام المضادة المعادلة ‎toxin‏ المحث في ‎NHPs‏ بواسطة التركيبة المولدة للمناعة ‎C. difficile‏ المخترعة يمكن مقارنته على مستويات ‎Yo‏ الجسم المضاد في المصل في أفراد تجربة ‎Merck/Medarex‏ الظاهر حمايتهم من تكرار حدوث ‎.CDAD‏
-"١؟-‏ مثال 42: ‎Ag‏ مناعي لتركيبات ‎sale‏ عقار ‎Toxin‏ طفري مع مادة مساعدة ‎ISCOMATRIX‏ أو ‎(Alh/CpG) Alhydrogel/CpG 24555‏ في نموذج ‎NHP‏ ‏في ‎«(NHPs‏ يزيد كل من ‎ISCOMATRIX‏ و ‎Alh/CpG‏ بدرجة مفيدة إحصائيا عيارات معادلة ‎A alias‏ 10*10 و8 عند المقارنة مع لقاح معطى مع ‎Alnydrogel‏ وحده (جدول 497 ). 0 تحدث استجابات مضاد ‎toxin‏ أعلى من القيمة القاعدية عند نقاط زمنية مبكرة أكثر بواسطة لقاح معطى على إما ‎Alh/CpG‏ أى ‎ISCOMATRIX‏ (الأسبوع 4-7) بالمقارنة مع ‎Alhydrogel‏ ‏وحده (الأسبوع ‎(T=‏ وذلك قد يكون له تأثير هام على الحماية من تكرار ‎CDAD‏ في الآدميين. مقارنة مع ‎cAlhydrogel‏ فإن التركيبة المولدة للمناعة مع مادة مساعدة ‎AI [CpG‏ أو مع ‎ISCOMATRIX‏ تولد عيارات معادلة مضادة ‎toxin‏ تصل إلى نطاق الحماية (انظر أيضا المثال ‎١٠‏ 1 4( بسرعة أكبر وتظل تلك في حدود أو أعلى من هذا النطاق خلال الأسبوع ‎JY‏ ‏كما مبين في جدول 7؛؛ تحصن قردة سينومولجس في العضل عند الأسبوع صفرء 7 و؛ مع ‎٠١‏ ميكروجرام من كل من مادة ‎toxin A lie‏ طفري ومادة ‎toxin Ble‏ طفري ‎Spans‏ ‏في ‎Yoo‏ ميكروجرام ‎Alhydrogel‏ (العدد ‎(A=‏ أو ‎50٠‏ ميكروجرام من ‎You + CpG‏ ميكروجرام من ‎Alhydrogel‏ (العدد = ‎«(V+‏ أو £0 وحدة من ‎ISCOMATRIX‏ (العدد = ‎.)٠١‏ ‎١‏ تجمع الأمصال عند كل نقطة زمنية وتحلل في اختبار معادلة ‎toxin‏ الموصوف أعلاه من أجل النشاط الوظيفي المضاد 0*17]. إن ‎GMTs‏ مسجلة في الجداول. تشير العلامة النجمية (*) إلى دلالة إحصائية ‎)٠..5 > P)‏ عند المقارنة مع العيارات في مجموعة ا©0009/ا0ل8/. يمثل نطاق عيار الحماية نطاق عيار الجسم المضاد المعادل المتطابق مع تقليل ملحوظ في تكرار عدوى ‎C.‏ ‎difficile‏ طبقا لتجربة علاج ‎.Merck/Medarex mAb‏ ‎Yo‏ جدول 47: تولد مناعة لمواد العقار ‎toxin‏ الطفرية المساعدة في ‎١( NHPs‏ 75 معيار التعادل) مضاد ‎[Merck) toxin A‏ معدل حماية ‎11v=111 :Medarex‏ ,1 لأجل مضاد ‎(toxin A‏ مضاد ‎[Merck) toxin A‏ معدل حماية ‎:Medarex‏ 1117-1157 لأجل مضاد ‎(toxin A‏ صفر |" : 1 ‎YY yo VY‏
-؟١+-‎
YYVA YoY. | ١4 9.14 19 ‏اكد‎ ٠١| ‏معيار‎ كا اق قن ‎I‏ ل معي_ار | ‎VIVA YodAd | ٠١17| ٠٠646 ٠١‏ |ا5:.ه* | ل”* * * * * Alhydrogel
CpG +
YAVY | #14947 | ١156 ١511| YAYo | ١١١ Yo J =a *¢ * * * ISCOMATR
IX yoy. ١١7١ IA 2 ١ A ٠١١ ‏معيار‎ ا فق قا نذا قن أ ا
YVAVY | ‏الام‎ oT * 17 | 7 VY ٠١١ ‏معيار‎ * * Alhydrogel
CpG +
Yoyya [ ١٠1675 ayiy ١ *oYyo | *+ 4 ٠١ ٠١١ ‏معيار‎ * * * ISCOMATR
IX
يتم أيضا تقييم جرعة طفرة مادة العقار ‎toXin A‏ وطفرة ‎sale‏ العقار 8 ‎toxin‏ المعطاة؛ في وجود ‎ISCOMATRIX‏ أو المواد المساعدة ‎«(CpG [AID‏ على معايير جسم مضاد ضد ‎toxin‏ متعادل المتولدة في 01105. في ‎(saa)‏ الدراسات»؛ تعطى ‎NHPs‏ جرعة منخفضة ‎Vo)‏ ميكروجرام) أو مرتفعة ‎٠٠١(‏ ميكروجرام) من كل طفرة مادة عقار ‎toxin‏ مستصاغة في ‎ISCOMATRIX ©‏ تقارن الاستجابات بعد كل نقطة زمنية بعد إكساب المناعة. حسب التوضيح في جدول ‎EA‏ كانت معايير تعادل مضاد 10*17 مفاجئة في كلا مجموعات المعالجة. تكون معايير مضاد ‎toxin A‏ متكافئة تقريبا في أغلب النقاط الزمنية بين مجموعات الجرعة المنخفضة والجرعة المرتفعة بينما يكون هناك اتجاه لأن تكون معايير مضاد 8 1010 أعلى في مجموعة الجرعة المرتفعة.
-؟١-‏ جدول ‎1A‏ معايير مضاد ‎toxin‏ المتعادل في ‎NHPs‏ باتباع إكساب المناعة مع سواء ‎٠١‏ ‏ميكروجرام أو ‎٠٠١‏ ميكروجرام من كل طفرة مادة عقار ‎TOXIN‏ وطفرة مادة ‎TOXIN lie‏ معطاة مع ‎١( ISCOMATRIX‏ 75 معيار المتعادل) مضاد ‎[Merck) toxin A‏ معدل حماية ‎11v=111 :Medarex‏ ,1 لأجل مضاد ‎(toxin A‏ الأسبوع: . | الأسبوع | الأسبوع | الأسبوع | الأسبوع الأسبوع | الأسووع | الأسبوع ‎ha‏ ‏ميكروجرام: ‎٠‏ ‏معيار ‎YOY | ١١7١| 6 ١١ | ٠٠١‏ 4 لمح | ‎VAYYY‏ ‏ا اتن ترا نا قا انا معيار ‎Yuin] vv. 117 ١١ Vo ٠١| ٠١‏ الخلا ها أت اتا نا نتن لق معيار ‎Vo Veo ٠٠١‏ لل £79 اده ‎EVEY|‏ لسر ا هذا روا لتقا اذا لها حسب التوضيح في جدول ‎6A‏ يتم إكساب المناعة لقرود سينمولوجس (العدد = 0( ‎IM‏ ‏عند الأسابيع صفرء £56 مع ‎٠١‏ ميكروجرام أو ‎٠٠١‏ ميكروجرام لكل طفرة ‎sale‏ عقار ‎toxin A‏ وطفرة ‎sale‏ عقار 8 10700 المستصاغة مع ‎45U‏ من ‎ISCOMATRIX‏ تجمع الأمصال عند كل نقطة زمنية ويحلل في اختبار تعادل ‎toxin‏ لأجل نشاط مضاد ‎toxin‏ وظيفي. تدون 61/115 في الجدول. يمثل معدل معيار الحماية معدل معيار الجسم المضاد للتعادل الذي يرتبط باختزال ‎٠‏ كبير في تكرار عدوى ‎C. difficile‏ في تجربة علئاجية ‎.Medarex mAb [Merck‏ في محاولة لزيادة حركيات استجابات مضادة 8 ‎toxin‏ تحصن ‎NHPs‏ مع جرعة ثابتة من مادة عقار / 10*10 طفري ‎٠١(‏ ميكروجرام) مختلطة مع جرعة متزايدة من ‎sale‏ عقار ‎toxin‏ ‏8 طفري ‎(V4)‏ 00 أو ‎٠٠١‏ ميكروجرام) في وجود مواد مساعدة ‎ISCOMATRIX‏ أو 6 .. بغض النظر عن المادة المساعدة؛ كان هناك ميلا لمجموعات معطاة جرعات أكبر ‎V0‏ من ‎sale‏ عقار 8 010 طفري (إما ‎٠‏ © أو ‎٠٠١‏ ميكروجرام) لحث استجابات معادلة أعلى
-ه١7"-‏ مضادة 8 10*10 بالمقارنة مع جرعة ‎٠١‏ ميكروجرام من عقار 8 10*17 طفري (جدول ‎٠‏ ©؛ معلمة مع * للإشارة إلى زيادات مفيدة إحصائيا). يلاحظ هذا الميل عند معظم النقاط الزمنية بعد التحضين النهائي. على أية حال؛ في بعض الحالات؛ تظهر استجابات معادلة مضاد ‎toxin A‏ تقليل مفيد إحصائيا (معلم مع * في جدول £9( عند زيادة كمية 8 ‎toxin‏ الطفري. ° كما مبين في جدول £3 وجدول +5 تحصن ‎٠١( NHPs‏ في المجموعة) في العضل عند الأسابيع صفرء ؟ £5 مع نسب مختلفة من ‎sale‏ عقار ‎toxin A‏ طفري ومادة ‎toxin 8 lic‏ ‎٠١(‏ ميكروجرام من ‎sale‏ عقار / ‎toxin‏ ومادة عقار 8 ‎toxin‏ طفري ‎٠١(‏ ميكروجدرام من مادة عقار ‎A‏ 10*10 طفري + إما ‎0٠١‏ 00 أو ‎٠٠١‏ ميكروجرام من مادة عقار 8 ‎toxin‏ طفري؛ يشار ليها ‎:)0٠١ »)ب(٠١ :)(٠١‏ ٠*(ب)؛‏ و١٠():‏ ١٠٠(ب)‏ على الترتيب؛ في جدول 4 وجدول ‎(or ٠‏ محضرة مع ‎san; £0) ISCOMATRIX‏ الجرعة) أو مع ‎/1٠١( [AIN/CPG‏ 2 ميكروجرام/ الجرعة). يبين جدول £9 عيارات مضاد ‎A‏ 10*10. يبين جدول ‎٠5 ٠‏ عيارات مضاد 8 «ل»ها. إن ‎GMTs‏ مذكورة في الجداول. إن نطاق عيار الحماية ‎Jie‏ نطاق عيار الجسم المضاد المعادل المتطابق مع تقليل ملحوظ في تكرار عدوى ‎AC. difficile‏ تجربة علاج ‎.Merck mAb‏ الرمز *؛ يمثل تقليل مفيد إحصائيا في العيارات المعادلة ‎P)‏ > 00 ,+( مقارنة مع ‎Vo‏ مجموعة ‎:)(٠١‏ ١٠(ب).‏ رمز العلامة النجمية؛ *؛ يمثل زيادة مفيدة إحصائيا في العيارات المعادلة ‎٠65 > P)‏ ,+( مقارنة مع المجموعة ‎:)(٠١‏ ١٠(ب).‏ ض جدول $4 معايير ‎toxin alas‏ المتعادل في ‎NHPs‏ باتباع إكساب المناعة مع ‎٠١‏ ض ض ميكروجرام طفرة مادة عقار ‎Toxin A‏ متحدة مع ‎0٠0‏ + ؛ أو ‎٠٠١‏ ميكروجرام طفرة ‎sale‏ ض ض ‎Blac‏ 10700 باستخدام ‎ISCOMATRIX‏ أو 70/006 كمواد مساعدة ‎١(‏ 75 معيار ض المتدل) ض ‎[Merck) toxin A alias‏ معدل حماية ‎:Medarex‏ 1317-1577 لأجل مضاد ‎(toxin A‏ ض ‎ISCOMATRIX‏ ض = الأسبوع | الأسبوع | الأسبوع | الأسبوع | الأسبوع | الأسبوع | الأسبوع ‎Ter‏ ‎oe‏
-؟١1-‎ ¢ :10A
HELENE dno | MEYWA| YYOT[ ١11172 Yay 4.7 Ya ‏معيار‎ ‎A :10A 50B
YYAe| ‏.يك‎ 0gnd | ‏ىعد‎ 6| ٠ 7 Yo ‏معيار‎ ‎A :10A 100B ‏لا‎ 0a VIVA YodAd[ YYTIY| Yet ١7| ‏معيار‎ ‎:10A ‎10B ‎Ave ‏لتنا ل اختح | كال‎ | YVYYA 16 Yo ‏معيار‎ ‎:10A ‎50B ‎17 ‏أامتئة |5.7ه‎ ١73١| Yodo Mévo 77| ‏معيار‎ ‎:10A ‎100B ‏ميكروجرام‎ ٠١ ‏باتباع إكساب المناعة مع‎ NHPs ‏المتعادل في‎ toxin ‏معايير مضاد‎ :*٠0 ‏جدول‎ ‎Toxin 8 ‏ميكروجرام طفرةٍ مادة عقار‎ ٠٠١ ‏+2؛ أو‎ 0٠١0 ‏متحدة مع‎ TOXIN / ‏طفرة مادة عقار‎ ‏معيار التعادل)‎ 75 ١( ‏أو 6 كمواد مساعدة‎ ISCOMATRIX ‏باستخدام‎ ‎(toxin B ‏لأجل مضاد‎ Y,YYY-YYY :Medarex ‏معدل حماية‎ [Merck) toxin A ‏مضاد‎ ‏الأسبوع: الأسبوع | الأسبوع | الأسبوع | الأسبوع | الأسبوع | الأسبوع | الأسبوع‎ 0 م١111‎ ١٠4574 ayy ‏ضرق‎ yaa Yo ٠١| ‏معيار‎ ‏ها ا قن قن لتقا اانا فا‎ * فلا
-؟١١/-‎ * * * * * *
مثال 43: دراسة سمية جرعة متكررة في العضل عند الأسبوع © مع تركيبة مولدة للمناعة في قردة
سينومولوجس؛ مع فترة استشفاء ؛ أسابيع تجرى دراسة سمية جرعة متكررة في العضل في الأسبوع 5-4 مع ‎PF-06425095‏ ‏(تركيبة مولدة للمناعة تتضمن مادة ‎toxin A lie‏ ثلاثي الطفرة ومادة عقار ‎B‏ 10*10 ثلاتي © الطفرة في اتحاد مع مواد مساعدة ‎aluminum hydroxide‏ 5 24555 006) في قردة سينومولوجس لتحديد السمية الممكنة والتولد المناعي الممكن لمادة عقار ‎toxin Btoxin A‏ ثلاشي الطفرة ‎C. difficile‏ في اتحاد مع المواد المساعدة ‎aluminum hydroxide‏ ‎.CpG 24555 (PF-06425095) 5‏ يعطى 072-06425095 عند ‎١,7‏ أو ؛, »؛ مجم/ الجرعة من مادة ‎toxin A lie‏ ثلاثي الطفرة ومادة عقار ‎B‏ 10*10 ثلاثي الطفرة (مجموعات ‎٠‏ تركيبة مولدة للمناعة قليلة وعالية الجرعة؛ على ‎(fill‏ 0+ مجم ‎aluminum‏ مثل ‎c@luminum hydroxide‏ و١‏ مجم 24555 ‎CpG‏ ويعطى اتحاد المادة المساعدة وحده ‎(PF-06376915 «CpG 24555 + aluminum hydroxide)‏ في العضل لقردة سينومولجس ‎/١(‏ مجموعة) كجرعة أولية تليها " جرعات تعزيزية (الأيام ‎(VT YY 8 ١‏ تعطى مجموعة منفصلة من الحيوانات )1[ المجموعة) محلول ملح متواتر 70,9 عند 011 ‎V‏ تقريبا. ‎١5‏ _يتكون الوسط الحامل للتركيبة المولدة للمناعة من ‎٠١‏ مللي جزيئي جرامي مثبت أس هيدروجيني عند ‎.polysorbate 80 7٠,١ trehalose dihydrate /¢,0 «v.¢ pH‏ يتكون الوسط الحامل المقارن المادة المساعدة من ‎٠١‏ مللي جزيئي جرامي ‎histidine‏ مع ‎SU ٠١‏ جزيئي جرامي ‎NaCl‏ عند ‎pH‏ 5,. إن الحجم الكلي للجرعة ‎١,5‏ ملليلتر/ مرة الحقن. تعطى كل
-١١0-
الجرعات في العضلة اليسرى و/أو اليمنى رباعية الروؤس. تخضع الحيوانات المنتقاة لمراقبة بدون
جرعة ؛ أسابيع لتحديد انعكاس أي تأثيرات ملحوظة أثناء طور التجريع في الدراسة. لا توجد نتائج ضارة في هذه الدراسة. إن 707-06425095 يتم تحمله بصورة جيدة وينتج فقط تفاعل التهابي موضعي بدون دليل على سمية عامة. أثناء طور التجريع؛ تظهر زيادات © معتمدة على الجرعة من اختبار مسبق في ‎fibrinogen‏ (777,1 إلى 7,7 ‎(x‏ في الأيام ؛ ‎YAs‏ ‏و ‎protein‏ نشط ‎C‏ في الأيام ؟ ‎XY,V)‏ إلى ‎XY,¥) YA (XYV,0‏ إلى ‎globulin 5 ¢(x) + Y,0‏ ‎)774,١ TY)‏ في اليوم ‎TT‏ و/أو ‎FA‏ تظهر في المجموعات المعالجة بالتركيبة المولدة للمناعة وهي متطابقة مع الاستجابة الالتهابية المتوقعة لإعطاء تركيبة مولدة للمناعة بها مادة
مساعدة. ‎AD‏ إن الزيادات في ‎protein fibrinogen‏ نشط ‎C‏ الملحوظة في اليوم ؛ يتم استعادتها جزئيا على اليوم ‎A‏ مع زيادات في ‎fibrinogen‏ (779,1 إلى ‎(Z710,0‏ و ‎protein‏ نشط ‎C‏ ‎(X01 5 XE,0)‏ فقط في مجموعة التركيبة المولدة للمناعة عالية الجرعة. تلاحظ زيادة في ‎interleukin‏ 6-(اا) في مجموعات التركيبة المولدة للمناعة ‎ALE‏ وكبيرة الجرعة في اليوم ٠؛‏ الساعة ‎XAT) T‏ إلى ‎XIYY,Y‏ وهي قيم منفردة في اليوم ١؛‏ الساعة صفرء مستجيبة للجرعة) ‎٠‏ واليوم ‎oF‏ الساعة 3 (4,4* إلى 79,5* وهي قيم منفردة في اليوم ‎(FT‏ الساعة صفر). لا يلاحظ تغيرات في ‎cytokines‏ الأخرى (10حااء ‎Protein (IL-12‏ يمكن ‎«ia‏ مع ‎Interferon‏ ‏(10-10)؛ وعامل تحلل ورم © ‎(TNF-a)‏ إن الزيادات في هذه ‎proteins‏ للطور الحاد ‎Cytokine‏ جزء من الاستجابة الفسيولوجية الطبيعية المتوقعة لإعطاء ‎alge‏ مضاد غريب. لا توجد تغييرات مرتبطة مع 06425095 ‎PF‏ أو مرتبطة بمادة مساعدة في هذه المعايير الباثولوجية ‎٠‏ الإكلينيكية في طور الاسترجاع (لم يتم تقييم ‎cytokines‏ أثناء طور الاسترجاع). ‎(bila)‏ هناك تغيرات موضعية عند أماكن الحقن؛ لها معدل حدوث وشدة متشابهين في المجموعة المقارنة المادة المساعدة ومجموعات التركيبة المولدة للمناعة قليلة وكبيرة الجرعة؛ لذلك؛ فإنها لا تتعلق مباشرة بعقار ‎LPF-06425095‏ أثناء طور التجريع؛ تتضمن التغييرات التهاب مزمن نشط ضئيل إلى متوسط يتميز بفصل ألياف العضلة بواسطة توغلات من خلايا البلعمة الكبيرة؛ والتي دائما ما ‎YO‏ تحتوي مادة حبيبية قاعدية الصبغ (تفسر كمادة مساعدة تحتوي ‎WIA (aluminum‏ ليمفاوية؛
-١4- ‏خلايا 0185008؛ خلايا متعادلة الصبغ؛ خلايا حمضية الصبغ؛ مواد منفصلة نكروزية؛ وتورم. إن‎ ‏المادة الحبيبية قاعدية الصبغ موجودة أيضا خارج الخلايا في هذه البؤر للالتهاب المزمن النشط.‎ ‏عند نهاية طور الاسترجاع؛ يوجد التهاب مزمن ضئيل إلى متوسط وتوغل خلية أحادية النواة؛‎ ‏وتليف ضئيل. تمثل هذه الاكتشافات عند مكان الحقن استجابة التهابية موضعية للمادة المساعدة.‎ ‏تتضمن تغيرات مجهرية أخرى زيادة متوسطة للخلايا شبيهة الليمفاوية في الغدد الليمفاوية الحرقفية‎ © ‏(تصريفية) وزيادة خلوية ضئيلة في المراكز الجرثومية في الطحال ملحوظة أثناء طور التجريع في‎ ‏المجموعة المقارنة المادة المساعدة ومجموعات التركيبة المولدة للمناعة قليلة وكبيرة الجرعة. عند‎ ‏نهاية طور الاسترجاع؛ تكون هذه الاكتشافات المجهرية أقل شدة. تمثل هذه التأثيرات استجابة‎ ‏مناعية لإثارة مولدة لمضاد؛ وهي استجابة فارماكولوجية للمادة المساعدة أو 06425095-]0. لا‎
DNA ‏الاختبار في الأجسام المضادة‎ sale ‏توجد زيادة خاصة‎ ٠ ‏غير‎ (NOAEL) ‏اعتمادا على غياب الاكتشافات الضارة؛ يكون مستوى التأثير العكسي‎ ‏الملاحظ في هذه الدراسة هو مجموعة تركيبة مولدة للمناعة ذات جرعة عالية )8 ,+ مجم من طفرة‎ (PF-06425095 ‏ثلاثية/ الجرعة مثل‎ toxin 8 ‏ثلاثية وطفرة مادة عقار‎ toxin / ‏مادة عقار‎ ‏المعطاة كمرتين حقن © ملليلتر لأربع جرعات.‎ ‏موجبة المصل منقولة سلبيا إلى هامسترات:‎ NHP ‏المثال 44: فعالية أمصال‎ Yo ‏تعطى مجموعات من © هامسترات ذهبية سورية جرعة بالفم من مضاد حيوي‎ ‏تعطى الهامسترات‎ calf © ‏المعوية الطبيعية. بعد‎ flora ‏مجم/ كجم) لتمزيق‎ Yo) clindamycin ‏الحيوان» وتعطى في‎ fofu ٠٠١ YL ADL) ‏نوع بري‎ ©. difficile ‏جرعة بالفم من جرثومات‎ ‏طبقا للجدول )0 بدون التقيد بآلية أو نظرية؛ فإن أعراض المرض عقب‎ NHP ‏البريتون أمصال‎ ‏ساعة بعد إعطاء الجرثومات.‎ 5-7٠8 ‏إعطاء الجرثومات تظهر نموذجيا بداية عند حوالي‎ ٠ ‏تظهر أعلى عيار‎ NHP ‏المعطاة للهامسترات مجمعة من عينات مصل‎ NHP ‏إن أمصال‎ ‏بعد ¥ تحصينات مع مادة عقار‎ (toxin 8 ‏وأمصال مضادة‎ toxin A ‏(أمصال مضادة لأجل‎ (BAY eye goede ‏بن‎ ll) ‏طفري‎ toxin 8 lie ‏طفري ومادة‎ toxin A ‏(انظر المثال 42( الجدول £9 والجدول 00( تجمع أمصال‎ ISCOMATRIX ‏محضرة مع‎
=« \ \ _ ‎NHP‏ من نقاط زمنية عند الأسابيع 0 6 و (تحدث التحصينات عند الأسابيع صفرء £57( حسب الوصف في المثال 42. النتائج مبينة في الجداول 08-0 أدناه. يشير الرمز (+) إلى المتوسط الهندسي ‎(GM)‏ بالعلامة () والذي لا يتضمن الحيوان رقم ؛ غير مستجيب. ‎“TB”‏ ‎Jia‏ استنزاف نهائي؛ اليوم الذي يقتل فيه الحيوان» وهو غير متماتل لكل الحيوانات. 0 جدول ‎:١‏ النظام التجريبي عدد المجموعة | التركيبة المعطاة الطريقة البرنامج الحيوانات اختبار التحمل في اليوم صفر ‎NHP Jad‏ موجبة الجرعة في اليوم صفر في البريتون 'الجرحة ‎"١‏ | المصل (غير مركزة) أيام النزيف ‎ia‏ 8 في اليوم ‎١١‏ اختبار التحمل في اليوم صفر الجرحجة في اليوم ‎NHP Jad y‏ موجبة "0
Ea EET "الجرعة ‎"y‏ المصل (غير مركزة) . ايام النزيف صفر ٠ك‏ 8 في اليوم ‎١١‏ ‏جدول 27: معايير تعادل مضاد ‎A‏ 10700 في مصل هامستر باتباع جرعات ‎١‏ أو ‎PY‏ من مصل ‎NHP‏ (0 75 معيار تعادل في ‎(RLU‏
-YY\-—-
SE GM | ‏اليوم هامستر | هامستر | هامستر | هامستر | هامستر‎ ‏ا ا كاك كا أ ا‎
IE | | ES ES BET EN) IES] Eo
OYA vay 47/7 avy yoo ‏اه‎ 4 18* ‏(اليوم | (اليوم | (اليوم | (اليوم | (اليوم‎ ee
IE EY IES IE ES IE EN) IE ‏الجرعة‎ ‎6 ‏ات‎ vive | eva YMal ves | ١ ‏أليوم‎ x ‏ا انا لقنا ا ا ا‎
AY 7 ogo | ١م49|‎ gave | 4919| ١ ‏اليوم‎ ‏مكلا الل ل لل د‎ ‏(اليوم | (اليوم | (اليوم | (اليوم | (اليوم‎ (3 : 4 1 : av = ‏الداخل‎ NHP ‏مضل‎ ‎EY ‏ب ووس و‎ or (RLU ‏معيار تعادل في‎ 70+) NHP ‏مصل‎ ‎SE GM | ‏اليوم | هامستر | هامستر | هامستر | هامستر | هامستر‎ ‏ا ا تا ا كا أ ات‎ ‏الجرعة | اليوم صفر‎ ‏ذا ان ا ا ا ان اه‎ ‏خض‎ 174 2 Yio ou ov | 864 TB* ‏(اليوم | (اليوم | (اليوم | (اليوم | (اليوم‎ ee
-YYy- الجرعة | اليوم صفر \ صفر
TAY ‏هلال‎ | Tay. "7١| ١14841 asl
Hoe)
IEEE SAT ‏ا‎ IE IE ‏لكدة لقن تهنا‎
YVV vag | Vyvve ov| TAY| ag] vw. | TB ‏(اليوم | (اليوم | (اليوم | (اليوم | (اليوم‎ @| )١١ (¢ (A (4
YYIPY = ‏الداخل‎ NHP (ae ‏من‎ IP Y ‏أو‎ ١ ‏باتباع الجرعة‎ CDAD ‏جدول 10 النسبة المثوية لأجل هامسترات محمية من‎ ©
NHP ‏مصل‎ ‎١١ Va A 1 ¢ Y ‏أيام |صفر‎ geal ‏يب‎ a; ‏أ‎ ‎Eo Ee EE EE Eve I ‏ححا‎ ‎Jae ‎NHP ‎AR AR AR TA ‏امم‎ ٠.٠١١ 7٠٠١ I J ‏الجرعة‎ ‎Jae ‎NHP ‎A Placebo
م في دراسة أخرى تعطى هامستزات ذهبية سورية جرعة بالفم من مضاد حيوي ‎Yo) clindamycin‏ مجم/ كجم) لتمزيق ‎flora‏ المعوية الطبيعية. بعد © أيام؛ تعطى الهامسترات جرعة بالفم من جرثومات ‎difficile‏ .© نوع بري ‎fofu ٠٠١ IY ADL)‏ الحيوان» وتعطى في البريتون أمصال ‎NHP‏ طبقا للجدول )0 بدون التقيد بآلية أو نظرية؛ فإن أعراض المرض عقب © إعطاء الجرثومات تظهر نموذجيا بداية عند حوالي ‎58-7٠١‏ ساعة بعد إعطاء الجرثومات. تجمع أمصال ‎HP‏ لي المعطاة للهامسترات من عينات مجمعة من ‎NHPs‏ عقب ‎٠‏ ‏تحصينات مع مادة عقار ‎toxin A‏ طفري ومادة عقار 8 ‎toxin‏ طفري (النسب ‎060:٠‏ 550:10 و١٠:00٠‏ 8: 8)» محضرة مع ‎CpG 24555 5 Alhydrogel‏ (انظر المثال 42؛ الجدول £9 والجدول ‎٠‏ 5). تجمع أمصال ‎NHP‏ من نقاط زمنية عند الأسابيع © ‎VY 5 A(T‏ حسب الوصف في مثال 42 (تحصن 101105 في الأسابيع صفرء 7 و4). النتائج ‎dupe‏ في الجداول 59-057 أدناه. يتم التحري إضافيا عن الأمصال من الهامسترات لتحديد قيمة التركيز المثبط (1650)؛ والتي تتحدد باستخدام اختبار معادلة ‎toxin‏ الموصوف أعلاه. إن مستوى الأجسام المضادة المتعادلة لأجل ‎toxin‏ المحثة في الهامسترات بواسطة التركيبة المولدة للمناعة ‎difficile‏ .6 المخترعة يمكن مقارنتها مع مستويات الجسم المضاد في المصل في أفراد تجربة ‎Merck/Medarex‏ الذين تبدو حمايتهم من تكرار الإصابة مع ‎CDAD‏ ‏جدول ‎roo‏ التصميم التجريبي ‎١‏ أمصال ‎NHP‏ موجبة في | اختبار تحمل في اليوم صفر هه ا ‎Y‏ أمصال ‎NHP‏ موجبة في | بدون اختبار تحمل هه ‎I i‏ ؟ أمصال ‎NHP‏ موجبة | ‎Ve‏ ]3 | اختبار تحمل في اليوم صفر ‎I i‏ علاج وهمي في | اختبار تحمل في اليوم صفر ‎I ev |‏
—-YY¢i- جدول 107 معايير(ا) تعادل مضاد ‎A‏ 10700 في مصل هامستر باتباع الجرعات ‎١‏ أو ‎IP Y‏ من أمصال ‎NHP‏ )+70 معيار تعادل في ‎(RLU‏ ا
VY ١١١ ‏فر‎ 7 مجموع مصل ‎NHP‏ الداخل = ‎VTA‏ ‏(أ)؛ معايير تبين وسائل هندسية لكل مجموعة ‎١5 =n)‏ عند اليوم صفر لأجل مجموعة "لمختبر"؛ ‎=n‏ 5 لأجل مجموعة "غير المختبر") نطاق حماية ‎:Merck/Medarex‏ 117 - 11117 لأجل مضاد ‎toxin A‏ تشير علامة النجمة ‎TH‏ اختلاف جوهري. جدول ‎jules 20V‏ )1( تعادل مضاد ‎toxin A‏ في أمصال هامستر باتباع الجرعات ‎١‏ أو ‎PY‏ من مصل ‎NHP‏ )+70 معيار تعادل في ‎(RLU‏
— \ \ ‏اج‎ ‎EB
مجموع أمصال ‎NHP‏ الداخل = ‎١9571‏
‎of)‏ معايير تبين وسائل هندسية لكل مجموعة ‎=n)‏ 10 عند اليوم صفر لأجل مجموعة ا * ‎n J By‏ = جح لأجل > ‎de‏ "غير أ * 1 "(
‎toxin 8 ‏لأجل مضاد‎ YYYY - YYY :Merck/Medarex ‏نطاق حماية‎
‎o‏ تشير ~ يب أ 8 يب ‎x7‏ ]1[ إلى | * ال اام جوهري.
‏جدول ‎10A‏ النسبة المثوية لأجل هامسترات محمية من ‎CDAD‏ شديد باتباع الجرعة ‎IP‏ من مصل ‎NHP‏
‎١١ Ya A y ¢ Y ‏أيام العدوى اصفر‎
‏المسبقة
‏المجموعات ‎Ley Loy LoX 77| 7٠٠١| ١‏ لا لا و
‎pal Zo Placebo‏ م
‏(المجموعة ‎7٠٠٠ )١‏ جدول 109 قيم 1050 من معايير تعادل 10*10 - محدد بنسبة ‎٠‏ 75
‎(voy
650 من مضاد ‎IC50 Toxin A‏ من مضاد 8 ‎Toxin‏ ‏اليوم التالي للجرعة اليوم التالي للجرعة يف الحيوان ‎١١ 7 YOY ad‏ الحيوان اصفر ‎١|‏ ؟ 7 ‎١١‏ ‎D4 D4‏ ‎٠١١ 1-1 “1d 8 ٠١١ 1-1‏ 4 لي" ‎D10 YoY‏ ‎ ol¥Y. ٠١١ 1-3‏ امعم اده ‎AAA YY AY] ٠١١ 1-3 sd‏ الى ‎١١ 1١١‏ 1-4 ا اعم ‎You YAW YYoA N Yo 1-4] van HasY[oAN‏ ‎Ado‏ ‏لختير 1-8 ‎vad ٠.١١‏ 1-5 ا ‎*1AY] av.‏ ‎D2 D2]‏ ‎٠١١ 3-1‏ 1491 الي( 3-1 ‎0A ٠١١‏ الي( ‎D2 D2]‏ -3 أ ا ‎“od Yau ٠١١ 3-2 Sd‏ ‎YY‏ ‎ovel vay AY YIYY VY ٠١١ 3-3 Teal nax[ Aga] Yi] Ye] 3-3‏ ‎D9 DO | 1١١٠‏ ‎٠١١ 3-4‏ لضم تن ‎TWA ٠١١ 3-4 ty s|‏ احم ‎Sad VEYA AVY]‏ اال
-YYv- ١٠١ ‏ا‎ AVY Ao ‏اتح‎ YYY ٠١١ 3-5 YAY VIVYE[ AY AYY] VY 3-
YoY ‏ام‎ YVYY N ٠١١ 3-6 YAR AYgaNYY ٠١١ 3-6
D2 D2 ‏مب‎ ٠ 3-7 ‏أ مب‎ 3— ‏مي‎ ‎ONY ١٠١٠١١ ١| ٠١١ 3-8 * ‏/4ف ناكم‎ ١٠١١ 3-8
YVYY el ٠٠ ‏ا‎ ‎* ‏م‎ ٠١١ 3-9 =. vay] +. 3-9
D2 D2 ‏لب(‎ AYO ٠١١ 3-10 “ad VAY) ٠١١ 3-10 ‏متم سط متوسط‎
Yag yy ‏ان‎ Viol ‏امت‎ ٠١١ Geo YAY] ‏فده‎ ATE TTT YA ١١١ Geo 1 7 ٍّ ١1477 ١١7٠م ‏لاا بنك لحك‎ Ade] ١١ 2-1] [VV ed 9 7 ‏لأخت ا‎ ٠١١ 2-1 ١
YYOIYYY[ ٠
YYVA[ YAY] ‏تع‎ YYVYAl ava] ٠١١ 2-21 1١7١ 5 ¥ YIVYal Ve 2-
—YYA- ١68 ٠ 6 6646 ‏احم اعتمم‎ AYA ٠١١ 2-3 |1١11 ٠/١ ‏اكت‎ oA ٠١١ 2-3 ‏لام‎ YAY ٠+ ‏اناا امنا‎ YAY ‏انغلا‎ VEN ٠١١ 2-4 73 ٠ 2 AST YI 2-4 12 YTV YY]
AN ‏لكت كا‎ ١ ‏اذا‎ YoY] ٠١١ 2-5 Veg ¢ A VIVYol Yo 2- ‏اغا متوسط‎ ١ ١ 77 ‏متوسط‎ ‎VEY ‏ال الصا‎ Yeo AYA ٠١١ Geol ١77 ANY fV¥YY| VY] Geo i 7 | 0 ‏طفري:‎ Toxin ‏مثال 45: تمييز مواد عقار‎ ‏إن‎ of ‏طفري ثلاثية مبين في تعريف الترتيب رقم:‎ toxin A Jal ‏إن البناء الأولي‎ o ‏الابتداء‎ codon ‏من تعريف الترتيب رقم: ؛ ينشأ من‎ ١ ‏عند المكان‎ NH2 ‏الطرفي‎ Met ‏متخلف‎ ‏معزول (مثلا؛ انظر تعريف الترتيب‎ protein ‏وهو غير موجود في‎ VY : ‏من تعريف الترتيب رقم‎ ‏إلى تعريف‎ "¢ tad) ‏يشير "تعريف الترتيب‎ 45 JE ‏رقم: 2 4). طبقا لذلك؛ في المثال 12 إلى‎ ‏ثلاثي‎ toxin A ‏يظهر كل من‎ .)١ ‏الأولي (عند المكان‎ methionine ‏الترتيب رقم: 4 الغائب فيه‎ toxin ‏رخ‎ (Lot ‏الطفرة نقي (تعريف الترتيب رقم: 4) (مادة وسطية لمادة عقار 44993-132ا‎ ٠
Lot ‏طفري"‎ toxin A ‏(تعريف الترتيب رقم: 4) (مادة عقار‎ EDCINHS ‏ثلاثي الطفرة معالج مع‎ ‏61لا‎
‎(L44898-012‏ ترتيب طرفي - ‎NH2‏ وحيد يبدأ عند ‎SLISKEELIKLAYSI‏ (الأماكن ‎١7-١7‏ ‏من تعريف الترتيب رقم: ). إن البناء الأولي لأجل 8 ‎toxin‏ طفري ثلاثية مبين في تعريف الترتيب رقم: 1. إن متخلف ‎Met‏ الطرفي ‎NH2‏ عند المكان ‎١‏ من تعريف الترتيب رقم: ‎Lay ١‏ من ‎codon‏ الابتداء © وهو غير موجود في ‎protein‏ معزول (مثلا؛ انظر تعريف الترتيب رقم: ‎(AT‏ طبقا لذلك» في المثال 12 إلى المثال 45؛ يشير "تعريف الترتيب رقم: +” إلى تعريف الترتيب رقم: 6 الغائب فيه ‎methionine‏ الأولي ‎aie)‏ المكان ‎.)١‏ يظهر كل من ‎toxin A‏ ثلاثي الطفرة نقي (تعريف الترتيب رقم: ‎sale) (T‏ وسطية لمادة عقار 010 ‎(Lot‏ و8 ‎toxin‏ ثلاثي الطفرة معالج مع ‎EDC/NHS‏ (تعريف الترتيب رقم: 7) (مادة ‎toxin 8 lie‏ طفري" ‎(Lot L44906-153‏ ‎٠‏ ترتيب طرفي- ‎NH2‏ وحيد ‎fag‏ عند ‎SLVNRKQLEKMANVR‏ (الأماكن 17-7 من تعريف الترتيب رقم: 6). يستخدم فحص مجهري طيفي التلواني الدائري ‎(CD)‏ لتحديد بناء ثانوي وثالثي لأجل ‎toxin A‏ طفري (تعريف الترتيب رقم: ؛) ‎A lie sales‏ 10*10 طفري. يستخدم ‎Lay‏ فحص مجهري طيفي ‎CD‏ لتحديد بناء ثانوي وثالثي لأجل 8 ‎toxin‏ ثلاثي الطفرة (تعريف الترتيب رقم: ‎)١ ١‏ ومادة ‎toxin 8 Jie‏ الطفري. يستخدم أيضا فحص مجهري طيفي 60 لتحديد تأثيرات الأس الهيدروجيني الممكنة على البناء. يحلل تأثير معالجة ‎EDC‏ مع ‎toxin A‏ ثلاثي الطفرة بمقارنة بيانات 60 الناتجة ‎A lke sald‏ 0*10] الطفري مع البيانات الناتجة لأجل ‎toxin A‏ ثلاثي الطفرة. تحلل تأثيرات معالجة ‎EDC‏ على ‎toxin B‏ ثلاثي الطفرة (تعريف الترتيب رقم: 1) بمقارنة بيانات ‎CD‏ الناتجة ‎sald‏ عقار 8 10*10 طفري مع البيانات الناتجة لأجل 8 ثلاثي الطفرة. 9 نحصل على بيانات ‎UV CD‏ بعيد لمادة عقار ‎A‏ 10*10 طفري عند أس هيدروجيني مختلف. إن الأطياف المسجلة عند أس هيدروجيني 7-8 تدل على وجود نسبة كبيرة من الحلزونات ‎or‏ في البناء الثانوي؛ مما يقترح أن الهيكل الأساسي لأجل 0/56 في البريتون يتخذ هيئة محددة جيدا تسودها الحلزونات ‎C00‏
لس
نحصل أيضا على بيانات أطياف ‎UV CD‏ قريب ‎sald‏ عقار ‎A‏ 10*10 طفري. إن الإهليجية السالبة القوية بين ‎Yo‏ و00" نانومتر مؤشر على أن السلاسل الجانبية ‎aromatic‏ ‏موجودة في البيئة الصلدة ‎peal)‏ أي؛ أن ‎sale‏ عقار ‎toxin A‏ طفري لها بناء ثالثي. في الحقيقة؛ فإن السمات المميزة الناشئة من الأنواع للسلاسل الجانبية ‎aromatic‏ يمكن تمييزها في الطيف: هه كتف عند حوالي ‎fags Yao‏ واكبر ذروة سالبة عند حوالي ‎YAY‏ نانومتر بسبب امتصاص الضوء المستقطب بواسطة سلاسل جانبية ‎tryptophan‏ مرتبة؛ الذروة السالبة عند 777 نانومتر ‎Las‏ من السلاسل الجانبية ‎dyrosine‏ والأكتاف الثانوية عند ‎YY‏ و7718 نانومتر تدل على متخلفات ‎phenylalanine)‏ المساهمة في التلامسات الثالثية. توفر نتائج ‎UV‏ بعدي وقريب ‎Sah‏ ‏على أن ‎sale‏ عقار ‎toxin A‏ الطفري تستبقي ‎WK‏ بناء منثني عند الأس الهيدروجيني الفسيولوجي. ‎٠‏ إن أطياف ‎UV CD‏ بعيد وقريب المتماثلة تقريبا الملحوظة عند أس هيدروجيني ‎v=o‏ تدل على عدم حدوث تغيرات بنائية يمكن تحديدها في هذا النطاق من الأس الهيدروجيني. لا يمكن جمع بيانات ‎CD‏ عند أس هيدروجيني ؟ و4؛ لأن ‎protein‏ غير قابل للذوبان عند هذه النقاط من الأس الهيدروجيني. في مقارنة لأطياف ‎UV CD‏ بعيد وقريب ‎toxin A lie sald‏ الطفري مع تلك لأجل ‎toxin A‏ ثلاثي الطفرة» فإن أطياف كل من ‎proteins‏ متماثلة أساسيا تحت كل ‎١‏ الشروط التجريبية المدروسة؛ مما يدل على أن معالجة ‎EDC‏ ليست لها تأثيرات يمكن تحديدها على البناء الثانوي والثالثي لأجل ‎toxin A‏ ثلاثي الطفرة. إن هذه النتيجة متوافقة مع نتائج ترشيح هلام وطرد مركزي فائق تحليلي؛ التي تبين عدم وجود تغيرات يمكن تحديدها في أنصاف أقطار
ومعاملات الترسيب/ الاحتكاك؛ على التوالي. تحتوي مادة ‎toxin A lie‏ طفري (بالإضافة إلى ‎toxin A‏ ثلاثي الطفرة) ‎Yo‏ متخلف ‎tryptophan | ٠‏ منتشرة خلال الترتيب الأولي ويمكن أن تخدم كمجسات استشعاع متأصلة مألوفة. نحصل على أطياف انبعاث استشعاع ‎sald‏ عقار ‎A‏ 10*10 طفري بين 00 و00٠5‏ نانومتر كوظيفة لدرجة الحرارة. عند ‎A‏ ,45° تظهر مادة عقار ‎tOXIN A‏ الطفري طيف انبعاث استشعاع ‎tryptophan‏ عند الإثارة عند ‎YA‏ نانومتر. يلاحظ أقصى انبعاث استشعاع عند حوالي ‎YYo‏ ‏نانومتر؛ مما يدل على أن متخلفات ‎tryptophan‏ بيئة غير - قطبية؛ نموذجية للمواد الداخلية ‎Yo‏ لأجل ‎protein‏ بدلا من البيئات المائية القطبية. إن نتائج أطياف انبعاث الاستشعاع؛ إلى جانب
-١؟١‏ نتائج تجارب ‎CD‏ الموجودة في التقريرء تؤكد أن ‎sale‏ عقار ‎toxin A‏ الطفري تستبقي بناء منثني يستخدم استشعاع المجس الداخلي ‎8-anilino—1-naphtalene sulfonic acid‏ ‎(ANS)‏ لتمييز تغيرات شكلية ممكنة في ‎sale‏ عقار ‎toxin A‏ الطفري ‎Ay‏ 10*10 ثلاثي الطفرة عند وجود تغيرات في الأس الهيدروجيني. كما يتضح من النتائج؛ لاتوجد هناك أساسيا زيادة في شدة استشعاع ‎ANS‏ عند معايرة إما ‎ale‏ عقار ‎toxin A‏ طفري أو ‎pala 10*10 A‏ ثلاثية مع المجس عند أس هيدروجيني 7؛ وذلك يقترح عدم وجود أسطح صادة للماء مكشوفة مع ‎proteins‏ ‏تحت هذه الشروط. إن انتقال الأس الهيدروجيني إلى 7,7 يؤدي إلى زيادة كبيرة جدا في الإنتاجية الكمية للاستشعاع ‎ANS‏ عند الزيادة في تركيز المجس حتى تصل الإنتاجية الكمية للاستشعاع ‎٠‏ إلى تشبع ظاهر. إن هذه الزيادة في الإنتاجية الكمية لاستشعاع ‎ANS‏ تدل على أنه عند أس هيدروجيني قليل (7,1). تخضع كل من مادة عقار ‎toxin A‏ الطفري ‎toxin A‏ ثلاثي الطفرة لتغير بنائي يحثه أس هيدروجيني يكشف الأسطح الصادة للماء. تدل تلك التغيرات البنائية على أن تعديل يحتثه ‎sleds EDC‏ نشاط ‎toxin A‏ ثلاثي الطفرة لا يقيد المرونة البنائية لمادة ‎toxin lie‏ ‎A‏ الطفري (05).
‎Vo‏ يتم تقييم تأثير معالجة ‎EDC‏ على الخواص الديناميكية المائية لأجل ‎toxin A‏ ثلاثي الطفرة باستخدام تحليل كروماتوجرافي مقصي للمقاس على عمود ‎.G4000 SWXL‏ تحقن ‎sale‏ ‎toxin A lie‏ طفري ‎toxin Ay‏ ثلاثي الطفرة فوق عمود ‎SWXL‏ 64000 متزن عند أس هيدروجيني 7 ‎١‏ و©. تدل البيانات على عدم وجود اختلافات في نصف قطر ‎Stoke‏ لمادة عقار ‎toxin A‏ الطفري 5 ‎toxin A‏ طفرة ثلاثية يمكن تحديدها مع 556. لذلك؛ فإن معالجة ‎EDC‏ ‎٠١‏ الاتوثر بدرجة كبيرة على الخواص الديناميكية المائية و؛ طبقا لذلك؛ على الشكل الكلي الجزيئي
‏لأجل ‎toxin A‏ ثلاثي الطفرة. لتحليل إضافي لأجل ‎toxin A‏ طفرة ثلاثية ومادة ‎toxin A lie‏ طفري يمكن استخدام تقنية تبعثر ضوء ليزر متعدد الزاوية ‎(MALLS)‏ إن معالجة ‎toxin A‏ ثلاثي الطفرة مع ‎EDC‏ ‏يؤدي إلى توليد خليط مغاير يتكون من أنواع متعددة عديدة- وأحادية- الوحدة البنائية. يعكس ذلك
—YYY- ‏بين‎ EDC ‏التغاير إدخال عدد كبير من الروابط التساهمية بين وداخل الجزيئات يحتها‎ protein ‏الأولية لأجل‎ amines ‏و‎ carboxyls ‏ثلاثي الطفرة ومادة عقار‎ toxin A ‏توفر البيانات الناتجة سمات فيزيائية وكيميائية لأجل‎ ‏وتصف السمات الأساسية لبنائها‎ (EDC ‏ثلاثي الطفرة معالج مع‎ toxin A) ‏طفري‎ toxin A
EDC ‏ثلاثي الطفرةٍ مع‎ toxin A ‏الأوليء الثانوي, والثالثي. توضح البيانات المتولدة أن معالجة‎ © ‏الخاص به لكنها لا تؤثر على البناءات الثانوية‎ polypeptide ‏تؤدي إلى تعديل تساهمي لسلسلة‎ ‏تؤدي إلى ربط متقاطع داخل وبين الجزيئات.‎ EDC ‏إن المعالجة مع‎ protein ‏والثالثية لأجل‎ ‏طفري‎ toxin A ‏المعايير الكيميائية الحيوية والفيزيائية الحيوية الناتجة لمادة عقار‎ ٠١0 ‏يقدم جدول‎ ‏ثلاثي الطفرة).‎ toxin A ‏(بالإضافة إلى‎ ‏طفري ثلاثي‎ Toxin A ‏المعايير الكيميائية والفيزيائية الحيوية الأساسية الناتجة لأجل‎ :٠١ ‏جدول‎ ٠
Toxin A lie sale ‏(تعريف الترتيب رقم: 4) وطفرة‎ ‏ثلاثية‎ 1010 A ‏طفرة‎ ‎Toxin A ‏المعيار طفرة مادة عقار‎ )4 ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ amino ‏عدد متخلفات‎ 2709 2709 acid
SLISKEELIKLAYSI | SLISKEELIKLAYSI
Ge 17-7 ‏من | (المواضع‎ VI ‏ترتيب لا١- طرفي (المووضع‎ (8 ‏تعريف الترتيب رقم:‎ ١ (2 ‏تعريف الترتيب رقم:‎ ‏الجزيء الجرامى‎ ag ‏كيلودالتون‎ ١ ‏كيلودالتون‎ ١ 0 (AA ‏(من ترتيب‎
A ‏كيلود القون وم‎ Yeo ‏الجزى عِ الجرامى‎ at ‏كيلودالتون‎ yaa | 7 ١ ‏كيلودالتون‎ 4 (MALLS ‏(من ترتيب‎ ‏(مجم/‎ ٠,776 ‏أو‎ ٠,797 | fang) ٠,775 ‏معامل الفناء عند 786 | 1,197 أو‎
—YYY- ‏حجم جزيء جرامي‎ ‏جم‎ Ar ‏جم دالا‎ Ar ‏عند أة ألا‎ A ‏محدد‎ ‎EPONA | ٠
RT ‏ىا ةيب‎ monomer ‏معامل الترسيب/‎ 57 57 monomer ‏معدل معامل الاحتكاك‎ 2,14 2,14 )/10( [Stokes ‏نصف قطر‎ 774 ٠ر١‎ + 48 monomer
Lex) ‏أقصى استشعاع‎ ‏؟؟ نانومتر 0-4 ؟؟ نانومتر‎ 0-4 ‏ناتومتر)‎ YA. =
YVA ‏نانومتر‎ YAS [ YVA, ‏نانومتر‎ YAS | ‏أصغر طيف‎ — Lu ji ‏نانومتر نانومتر‎ uv CD ‏متوسط الإهليلجية عند‎ ٠١١7١ ‏حي ؟ الاك -. ؟ اللا حر الى‎ ‏نانومتر‎ 77/8 (YAS ‏متوسط الإهليلجية عند‎ 7 ‏حم كم لالا؟ -ة و لا‎ ‏نانومتر‎ YYY
Evo
—Yye—
AL ١7,41 ‏مثوي_ة‎ ‎(PBS) ‏غير مضاعف‎
LAL, YH0E 450, : (V, ‏أس هيدروجيني ؛‎ ‏طفري عند أس هيدروجيني‎ 10710 8 lie sald ‏بعيد‎ UV CD ‏نحصل على بيانات‎ ‏مختلف. إن الأطياف المسجلة عند أس هيدروجيني 7-8 تدل على وجود نسبة كبيرة من‎ ‏في البناء الثانوي؛ مما يقترح أن الهيكل الأساسي لأجل 0/56 في البريتون‎ or ‏الحلزونات‎ ‎C00 ‏يتخذ هيئة محددة جيدا تسودها الحلزونات‎ ‏طفري. إن‎ toxin 8 ‏عقار‎ sald ‏قريب‎ UV CD ‏نحصل أيضا على بيانات أطياف‎ 0 aromatic ‏و00" نانومتر مؤشر على أن السلاسل الجانبية‎ Yo ‏الإهليجية السالبة القوية بين‎ ‏طفري لها بناء ثالثي. في الحقيقة؛‎ toxin 8 ‏عقار‎ sale ‏أي؛ أن‎ peal) ‏موجودة في البيئة الصلدة‎ ‏يمكن تمييزها في‎ aromatic ‏فإن السمات المميزة الناشئة من الأنواع المنفردة للسلاسل الجانبية‎ ‏نأنومتر بسبب‎ VAY ‏نانومتر واكبر ذروة سالبة عند حوالي‎ Yao ‏الطيف: كتف عند حوالي‎ ‏مرتبة؛ الذروة السالبة عند‎ tryptophan ‏امتصاص الضوء المستقطب بواسطة سلاسل جانبية‎ ٠ ‏والأكتاف الثانوية عند 777 و7748 نانومتر‎ ctyrosine ‏من السلاسل الجانبية‎ Las ‏نانومتر‎ 7 ‏بعيد‎ UV ‏المساهمة في التلامسات الثالثية. توفر نتائج‎ phenylalanine ‏على متخلفات‎ Jas ‏بناء منثني بصورة مندمجة عند‎ WIS ‏الطفري تستبقي‎ toxin 8 lie sale ‏وقريب دليلا على أن‎ ‏بعيد وقريب المتشابهة جدا الملحوظة عند‎ UV CD ‏الأس الهيدروجيني الفسيولوجي. إن أطياف‎ ‏أس هيدروجيني 7-5 تدل على عدم حدوث تغيرات بنائية يمكن تحديدها في هذا النطاق من الأس‎ 5 ‏غير قابل‎ protein ‏لأن‎ of 57 ‏عند أس هيدروجيني‎ CD ‏الهيدروجيني. لا يمكن جمع بيانات‎ ‏للذوبان عند هذه النقاط من الأس الهيدروجيني.‎ ‏الطفري مع تلك لأجل‎ toxin 8 lie ‏بعيد وقريب لمادة‎ UV CD ‏في مقارنة لأطياف‎ ‏متشابهة جدا بين أس هيدروجيني * ولاء‎ proteins ‏ثلاثي الطفرة؛ فإن أطياف كل من‎ 8 ‏ليست لها تأثيرات يمكن تحديدها على البناء الثانوي والثالتي لأجل‎ EDC ‏مما يدل على أن معالجة‎ ٠ ‏إن هذه النتيجة متوافقة مع نتائج ترشيح هلام وطرد مركزي فاثق تحليلي؛ التي تبين عدم‎ protein
-Yyo- ‏على‎ Sia ‏ومعاملات الترسيب/‎ Stokes ‏وجود تغيرات يمكن تحديدها في أنصاف أقطار‎ ‏التوالي.‎ ‏منتشرة خلال الترتيب‎ tryptophan ‏متخلف‎ ١١ ‏ثلاثي الطفرة‎ 1010 B ‏عقار‎ sale ‏تحتوي‎ ‏الأولي ويمكن أن تخدم كمجسات استشعاع متأصلة مألوفة. نحصل على أطياف انبعاث استشعاع‎ ‏تظهر‎ OY ‏نانومتر كوظيفة لدرجة الحرارة. عند‎ fee 0٠0 ‏طفري بين‎ toxin 8 ‏لمادة عقار‎ © ‏نانومتر.‎ YA ‏عند الإثارة عند‎ tryptophan ‏الطفري طيف انبعاث استشعاع‎ toxin 8 ‏مادة عقار‎ ‏مما يدل على أن متخلفات‎ flags 5 ‏يلاحظ أقصى انبعاث استشعاع عند حوالي‎ ‏بدلا من البيئات‎ protein ‏في بيئة غير - قطبية؛ نموذجية للمواد الداخلية لأجل‎ tryptophan ‏عقار‎ sale ‏(انظر أعلاه)؛ تؤكد أن‎ CD ‏المائية القطبية. إن هذه النتيجة؛ إلى جانب نتائج تجارب‎ ‏الطفري تستبقي بناء منثني مدمج.‎ toxin 8 ٠ 8-anilino—1-naphtalene sulfonic acid ‏يستخدم استشعاع المجس الداخلي‎ ‏ثلاثي الطفرة‎ toxin ‏الطفري و‎ toxin Ble sale ‏لتمييز تغيرات شكلية ممكنة في‎ (ANS) ‏عند وجود تغيرات في الأس الهيدروجيني. كما يتضح من النتائج؛ لاتوجد هناك أساسيا زيادة في‎ ‏ثلاثية مع‎ pala 10*10 8 ‏طفري أو‎ toxin 8 ‏عقار‎ ale ‏عند معايرة إما‎ ANS ‏شدة استشعاع‎ proteins ‏المجس عند أس هيدروجيني 7؛ وذلك يقترح عدم وجود أسطح صادة للماء مكشوفة مع‎ Vo ‏تحت هذه الشروط. إن انتقال الأس الهيدروجيني إلى 7,7 يؤدي إلى زيادة كبيرة جدا في الإنتاجية‎ ‏طفري حتى‎ toxin 8 ‏عند الزيادة في تركيز المجس في وجود مادة عقار‎ ANS ‏الكمية للاستشعاع‎ ‏تصل الإنتاجية الكمية للاستشعاع إلى تشبع ظاهر. إن هذه الزيادة في الإنتاجية الكمية لاستشعاع‎ ‏الطفري لتغير‎ toxin 8 ‏تدل على أنه عند أس هيدروجيني قليل (7,1). تخضع مادة عقار‎ 5 ‏بنائي يحثه أس هيدروجيني يكشف الأسطح الصادة للماء. تدل تلك التغيرات البنائية على أن تعديل‎ ٠ toxin 8 lic sald ‏واخماد نشاط 8 10*10 ثلاثي الطفرة لا يقيد المرونة البنائية‎ EDC ‏يحثه‎ ‎(DS) ‏الطفري‎ ‏ثلاثي‎ 10*10 B ‏على الخواص الديناميكية المائية لأجل‎ EDC ‏يتم تقييم تأثير معالجة‎ ‏تحقن مادة‎ .G4000 SWXL ‏الطفرة باستخدام تحليل كروماتوجرافي مقصي للمقاس على عمود‎ ‏متزن عند أس‎ 64000 SWXL ‏ثلاثي الطفرة فوق عمود‎ toxin By ‏عقار 8 010! طفري‎ Yo ‏61لا‎
-م؟- هيدروجيني 7 ‎١‏ و©. تدل البيانات على عدم وجود اختلافات في نصف قطر ‎Stoke‏ لمادة عقار ‎toxin 8‏ الطفري و8 ‎toxin‏ طفرة ثلاثية يمكن تحديدها مع ‎.SEC‏ لذلك؛ فإن معالجة ‎EDC‏ ‏لاتوثر بدرجة كبيرة على الخواص الديناميكية المائية و؛ طبقا لذلك؛ على الشكل الكلي الجزيئي لأجل ‎protein‏ ‏0 لتحليل إضافي لأجل ‎toxin A‏ طفرة ثلاثية ومادة عقار 8 ‎toxin‏ طفري يمكن استخدام تقنية تبعثر ضوء ليزر متعدد الزاوية ‎(MALLS)‏ إن معالجة 8 ‎toxin‏ ثلاثي الطفرة مع ‎EDC‏ ‏يؤدي إلى توليد خليط مغاير اكثر يتكون من أنواع متعددة عديدة- وأحادية- الوحدة البنائية. يعكس ذلك التغاير إدخال عدد كبير من الروابط التساهمية بين وداخل الجزيئات يحتها ‎EDC‏ بين ‎carboxyls‏ و ‎amines‏ الأولية لأجل ‎protein‏ ‎Ya‏ توفر البيانات الناتجة سمات فيزيائية وكيميائية لأجل 8 ‎toxin‏ ثلاثي الطفرة ومادة عقار ‎toxin 8‏ طفري (5 ‎toxin‏ ثلاثي الطفرة معالج مع ‎(EDC‏ وتصف السمات الأساسية لبنائها الأولي؛ الثانوي, والثالثي. توضح البيانات المتولدة أن معالجة 8 ‎toxin‏ ثلاثي الطفرةٍ مع ‎EDC‏ ‏تؤدي إلى تعديل تساهمي لسلسلة ‎polypeptide‏ الخاص به لكنها لا تؤثر على البناءات الثانوية والثالثية لأجل ‎protein‏ إن المعالجة مع ‎EDC‏ تؤدي إلى ربط متقاطع داخل وبين الجزيئات. ‎١‏ يقدم جدول ‎١١‏ المعايير الكيميائية الحيوية والفيزيائية الحيوية الناتجة لمادة عقار 8 ‎toxin‏ طفري (بالإضافة إلى 8 ‎toxin‏ ثلاثي الطفرة). جدول ‎:1١‏ المعايير الكيميائية والفيزيائية الحيوية الأساسية الناتجة لأجل طفرة 8 ‎Toxin‏ ثلاثية (تعريف الترتيب رقم: 6) وطفرة ‎Toxin 8 lie sale‏ طفرة 8 ‎Toxin‏ ثلاثية | طفرة مادة عقار 8 ‎Toxin‏ ‏المعيار ‏(تعريف الترتيب رقم: 6) عدد متخلفات 6 م ‎amino acid‏ ‎SLVNRKQLEKMANVR ١ SLVNRKQLEKMANVR‏ 61لا
١ ‏لام‎
(المواضع ‎٠-7‏ من تعريف (المواضع 7-حا من تعريف
الترتيب رقم: 6) الترتيب رقم: 6) كتلة الجزيء الجرامي
‎١‏ *,؟ كيلودالتون ‎١,5‏ ؟ كيلودالتون (من ترتيب ‎(AA‏ ‏كتلة الجزيء الجرامي ‎Yoo | ©‏ كيلود القون وحوالي 4 مما ‎Yo‏ + و ‎Y, VW‏
‏(من ترتيب
‏4 كيلودالتون كيلودالتون ‎MALLS‏ ( معامل الفناء عند | ‎YoY‏ (مجم/ ملليلتر ( ‎١-‏
‎١٠- ‏سم‎ Y= (abil ‏ايا (مجم/‎
‎١ - ‏نانومتر سم‎ Y IN ٠ ‏حجم جزيء جرامي‎ ‏سم ¥[ جم‎ AAR ‏عند | 4 آلا سم ¥[ جم‎ A ‏محدد‎ ‎YEP Y ٠
‏الذ الك الس سم ال لقي الس سم ‎monomer‏ ‏معامل ‎Jo A‏
‎54 5 627 +1 monomer ١ ‏الاحتكاك مرك أن‎ (f/f0) an yay | ‏نصف قط‎ [Stokes
‏اي
—YYA- ‏أقصى استشعاع‎ ‏نانومتر‎ YYo ‏نانومتر‎ YYo 76١ = hex) ‏نانومتر)‎ ‏نطاقات سلبية قريبة‎
YAY YTA ‏كنك لالت‎ Ye | cYTA ‏لاك‎ (YAY ‏.كت‎ . ‏نانومتر نانومتر‎ YY ‏البنفسجية‎ ‏نطاقات سلبية بعيدة‎ ‏نانومتر‎ YYY 5 ٠ ‏نانومتر‎ YYY 5 ٠١8 | ‏من الأشعة فوق‎ ‏البنفسجية‎ ‏نقاط وسط لتحول‎ ‏غير مضاعف‎ DSC ‏ار موي سة‎ 17 LAC faa + m2, 1 a eC ٠ ‏م‎ 4 Ys PEP 0 ١ ‏و57+‎ ‏أس‎ PBS) )7 ‏هيدروجيني‎ ‏جوانب من الاختراع‎ ‏إن البنود التالية تصف تجسيدات إضافية من الاختراع:‎ ‏مذكور في تعريف الترتيب‎ amino acid ‏معزول يتضمن ترتيب‎ polypeptide :1 polypeptide ‏عند الموضع )¢ وحيث‎ methionine ‏حيث قد لا يتواجد اختياريا متخلف‎ of ‏رقم:‎ ‎1-ethyl-3—(3~ ‏واحدة على الأقل معدلة كيميائيا بواسطة‎ 8001070 acid ‏يتضمن سلسلة جانبية‎ © .N-Hydroxysuccinimide (NHS) ‏و‎ dimethylaminopropyl) carbodiimide) (EDC ‏و‎ ‏فلا‎
-4خ؟؟ ‎polypeptide :C2‏ معزول يتضمن ترتيب ‎acid‏ 060 مذكور في تعريف الترتيب رقم: ‎oT‏ حيث قد لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع ١ء؛‏ وحيث ‎polypeptide‏ يتضمن سلسلة جانبية ‎@amino acid‏ معدلة كيميائيا بواسطة ‎1-ethyl-3—(3—dimethylaminopropyl) carbodiimide) (EDC)‏ و-لا ‎.Hydroxysuccinimide (NHS) ©‏ ‎polypeptide :C3‏ المعزول طبقا للبند ‎C1‏ أو ‎«C2‏ حيث تكون سلسلة جانبية واحدة على الأقل لمتخلف ‎polypeptide «aspartic acid‏ أو سلسلة جانبية واحدة على الأقل لمتخلف ‎polypeptide glutamic acid‏ معدلة كيميائيا بواسطة ‎glycine‏ ‎polypeptide :C4‏ المعزول طبقا لأي من البنود ‎C1‏ إلى 3)؛ حيث ‎polypeptide‏ ‎٠‏ يتضمن: ‎day, 0‏ متقاطعة واحدة على ‎JAY)‏ بين سلسلة جانبية لمتخلف ‎aspartic acid‏ من ‎polypeptide‏ وسلسلة جانبية لمتخلف 5106لا من ‎¢polypeptide‏ و (ب) رابطة متقاطعة واحدة على الأقل بين سلسلة جانبية لمتخلف ‎glutamic acid‏ من ‎polypeptide‏ وسلسلة جانبية لمتخلف ‎lysine‏ من ‎polypeptide‏ ‎polypeptide :C5 yo‏ المعزول طبقا لأي من البنود ‎C1‏ إلى ‎«C4‏ حيث ‎polypeptide‏ ‏يتضمن جزء ‎beta-alanine‏ متصل مع سلسلة جانبية لمتخلف ‎lysine‏ واحد على الأقل من ‎.polypeptide‏ ‎polypeptide :C6‏ المعزول طبقا ‎(C4 2 ull‏ حيث ‎polypeptide‏ يتضمن جزء 6 متصل مع سلسلة جانبية لمتخلف ‎polypeptide aspartic acid‏ أو سلسلة جانبية ‎٠‏ لمتخلف ‎acid‏ 0016قأنااو من ‎.polypeptide‏ ‎polypeptide :C7‏ معزول يتضمن ترتيب ‎amino acid‏ مذكور في تعريف الترتيب رقم: ‎of‏ حيث قد لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع )¢ وحيث تتصل سلسلة جانبية لمتخلف ‎lysine‏ واحد على الأقل من ‎polypeptide‏ مع جزء ‎.beta—-alanine‏ ‏فلا
_ \ ¢ «=
‎polypeptide :C8‏ معزول يتضمن ترتيب ‎amino acid‏ مذكور في تعريف الترتيب رقم: 6 حيث قد لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع )¢ وحيث تتصل سلسلة جانبية لمتخلف ‎lysine‏ واحد على الأقل من ‎polypeptide‏ مع جزء ‎.beta—-alanine‏
‎polypeptide :©9‏ المعزول طبقا للبند ‎C7‏ أو 08©؛ حيث تتصل سلسلة جانبية لمتخلف
‏© 5106لا ثاني من ‎polypeptide‏ مع سلسلة جانبية لمتخلف ‎asparticacid‏ أو مع سلسلة جانبية لمتخلف ‎glutamic acid‏ ‎polypeptide :C10‏ المعزول طبقا لأي من البنود ‎CT‏ إلى 09؛ حيث تتصل سلسلة جانبية لمتخلف ‎aspartic acid‏ أو سلسلة جانبية لمتخلف ‎glutamic acid‏ من ‎polypeptide‏ ‏مع جزء ‎glycine‏ ‎polypeptide :1 Ya‏ المعزول ‎Lith‏ لأي من البنود 1© إلى ‎«C10‏ حيث يكون ‎polypeptide‏ له قيمة 5650 على الأقل حوالي ‎٠٠١‏ ميكروجرام/ ملليلتر.
‏2: تركيبة مولدة للمناعة تتضمن ‎polypeptide‏ معزول له ترتيب ‎amino acid‏ المذكور في تعريف الترتيب رقم: ‎of‏ حيث لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع )« و ‎polypeptide‏ معزول له ترتيب ‎acid‏ 0 المذكور في تعريف الترتيب
‎Yo‏ رقم ‎Te‏ حيث لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع ‎١١‏ وحيث تكون ‎polypeptides‏ لها سلسلة جانبية ‎acid‏ 80100 واحدة على الأقل معدلة كيميائيا بواسطة ‎1-ethyl-3—(3—dimethylaminopropyl) carbodiimide) (EDC)‏ و-لا ‎-Hydroxysuccinimide (NHS)‏ 3 : التركيبة المولدة للمناعة طبقا للبند ‎(C12‏ حيث ‎polypeptide‏ يتضمن واحدة ‎٠٠‏ على الأقل من أي من:
‏0 جزء 5618-8180106 واحد على الأقل متصل مع سلسلة جانبية لمتخلف ‎lysine‏ من ‎¢polypeptide‏
‏فلا
-؟4١-‎
(ب) رابطة متقاطعة واحدة على الأقل بين سلسلة جانبية لمتخلف ‎lysine‏ من ‎polypeptide‏ وسلسلة جانبية لمتخلف ‎taspartic acid‏ و
(ج) رابطة متقاطعة واحدة على الأقل بين سلسلة جانبية لمتخلف ‎lysine‏ من ‎polypeptide‏ وسلسلة جانبية لمتخلف ‎glutamic acid‏
‎C14 o‏ التركيبة المولدة للمناعة طبقا للبند ‎(C12‏ حيث يكون ‎polypeptide‏ له قيمة 0 على الأقل حوالي ‎٠٠١‏ ميكروجرام/ ملليلتر.
‏5: تركيبة مولدة للمناعة تتضمن ‎polypeptide‏ معزول له ترتيب ‎amino acid‏ المذكور في تعريف الترتيب رقم: ‎of‏ حيث لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع )« و ‎polypeptide‏ معزول له ترتيب ‎acid‏ 0 المذكور في تعريف الترتيب
‎٠‏ رقم: 7؛ حيث لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع ١؛‏ و
‏0 حيث تتصل السلسلة الجانبية لمتخلف ‎lysine‏ واحد على ‎JAY)‏ من تعريف الترتيب رقم: ؛ مع جزء ‎«beta-alanine‏ و
‏(ب) حيث تتصل السلسلة الجانبية لمتخلف ‎lysine‏ واحد على الأقل من تعريف الترتيب رقم: ‎١‏ مع جزء ‎.beta-alanine‏
‎Vo‏ 6 التركيبة المولدة للمناعة طبقا ‎(C15 andl‏ حيث تتصل السلسلة الجانبية لمتخلف ‎SB lysine‏ من تعريف الترتيب رقم: ؛ مع سلسلة جانبية لمتخلف ‎asparticacid‏ أو مع سلسلة جانبية لمتخلف ‎cglutamic acid‏ وحيث يتصل متخلف ‎lysine‏ ثاني من تعريف الترتيب رقم: 1 مع سلسلة جانبية لمتخلف ‎aspartic acid‏ أو مع سلسلة جانبية لمتخلف ‎.glutamic acid‏ 7 : التركيبة المولدة للمناعة طبقا لأي من البنود ‎C12‏ إلى 016؛ حيث تتصل سلسلة ‎٠‏ جانبية لمتخلف ‎aspartic acid‏ أو سلسلة جانبية لمتخلف ‎glutamic acid‏ من ‎polypeptide‏ ‏الذي له ترتيب ‎amino acid‏ المذكور في تعريف الترتيب رقم: ؛. حيث قد لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع )¢ مع جزء ‎glycine‏
8: التركيبة المولدة للمناعة طبقا لأي من البنود ‎C12‏ إلى 016؛ حيث تتصل سلسلة جانبية لمتخلف ‎aspartic acid‏ أو سلسلة جانبية لمتخلف ‎glutamic acid‏ من ‎polypeptide‏ ‏الذي له ترتيب ‎amino acid‏ المذكور في تعريف الترتيب رقم: ‎oT‏ حيث قد لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع )¢ مع جزء ‎glycine‏
‎o‏ 9 التركيبة المولدة للمناعة طبقا لأي من البنود ‎C12‏ إلى ‎(C18‏ حيث يكون ‎polypeptide‏ له قيمة 5650 على الأقل حوالي ‎٠٠١‏ ميكروجرام/ ملليلتر.
‎amino acid ‏معزول له ترتيب‎ polypeptide ‏تركيبة مولدة للمناعة تتضمن‎ :C20 ‏المذكور‎ amino acid ‏معزول له ترتيب‎ polypeptide ‏و‎ Af ‏المذكور في تعريف الترتيب رقم:‎ ‏يتضمن:‎ polypeptide ‏حيث كل‎ (AT ‏في تعريف الترتيب رقم؛‎
‎Va‏ (أ) رابطة متقاطعة واحدة على الأقل بين سلسلة جانبية لمتخلف ‎aspartic acid‏ من ‎polypeptide‏ وسلسلة جانبية لمتخلف ‎lysine‏ من ‎¢polypeptide‏
‏(ب) رابطة متقاطعة واحدة على الأقل بين سلسلة جانبية لمتخلف ‎glutamic acid‏ من ‎polypeptide‏ وسلسلة جانبية لمتخلف ‎lysine‏ من 801106م/017(م؛
‏(ج) جزء ‎beta—alanine‏ متصل مع سلسلة جانبية لمتخلف 5106لا واحد على الأقل من
‎¢polypeptide ١٠‏ و
‏(د) جزء ‎glycine‏ متصل مع سلسلة جانبية لمتخلف ‎aspartic acid‏ واحد على الأقل من ‎polypeptide‏ أو مع سلسلة جانبية لمتخلف ‎acid‏ 910180016 واحد على الأقل من ‎.polypeptide‏
‏1. تركيبة مولدة ‎de lial‏ تتضمن ‎Clostridium difficile toxin A‏ طفري؛ التي
‎٠‏ تتضمن مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ به طفرة واحدة على الأقل ومجال سيطرة ‎cysteine protease‏ به طفرة واحدة على ‎«Jf‏ بالنسبة إلى حم ‎Clostridium difficile toxin‏ النوع البري المقابل. ‎£voy‏
دنه 2 التركيبة طبقا ‎C2] andl‏ حيث تكون الطفرة عبارة عن استبدال ‎amino acid‏ غير تحفظي. 3 : التركيبة طبقا ‎C22 andl‏ حيث الاستبدال يتضمن استبدال ‎alanine‏ ‏4 : التركيبة طبقا لأي من البنود ‎C21‏ إلى ‎«C23‏ حيث ‎Clostridium difficile‏ م ‎toxin‏ النوع البري يتضمن ترتيب له ‎Bla‏ على الأقل 795 مع تعريف الترتيب رقم: ‎.١‏ ‏5: التركيبة طبقا للبند ‎(C24‏ حيث ‎Clostridium difficile toxin A‏ النوع البري يتضمن ترتيب له ‎Bla‏ على الأقل 7948 مع تعريف الترتيب رقم: ‎.١‏ ‏6: التركيبة طبقا للبند ‎(C25‏ حيث ‎Clostridium difficile toxin A‏ النوع البري يتضمن تعريف الترتيب رقم: ‎.١‏ ‎:C27 ٠٠١‏ التركيبة طبقا لأي من البنود ‎C21‏ إلى ‎C26‏ ؛» حيث مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ يتضمن طفرتين على الأقل. 8: التركيبة ‎Lada‏ للبند 027؛ حيث تتواجد الطفرتان على الأقل عند مواضع ‎(YAY (YAS (YVY (Y14 ¢) +) amino acid‏ حكتك كاحت تك ‎Of) (TY‏ أو 7م طبقا للترقيم من تعريف الترتيب رقم: ‎.١‏ ‎:C29 Yo‏ التركيبة طبقا لأي من البنود ‎C21‏ إلى ‎C26‏ ؛» حيث مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ يتضمن تعريف الترتيب رقم: ‎YA‏ ‎:C30‏ التركيبة طبقا للبند ‎dua «C29‏ مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ يتضمن طفرتين غير متحفظتين على الأقل موجودثين عند مواضع ‎amino acid‏ كئ ىك ‎¢<Y14‏ اكت دك لالت ‎(VTA‏ الات .دك 17 41 2؛ أو 247؛ أو أي اتحاد منهم؛ من تعريف ‎Yo‏ الترتيب ‎.Y4 tad)‏
‎:C31‏ التركيبة طبقا لأي من البنود ‎C21‏ إلى ‎C26‏ ؛» حيث مجال سيطرة ‎Cysteine protease‏ يتضمن طفرة موجودة عند المواضع 700 ‎OEY (100 OA‏ أو أي اتحادات منهم؛ ‎als‏ للترقيم من تعريف الترتيب رقم: ‎A‏ ‎:C32‏ التركيبة طبقا لأي من البنود ‎C21‏ إلى ‎C26‏ ؛» حيث مجال سيطرة ‎cysteine protease ©‏ يتضمن تعريف الترتيب رقم: ‎FY‏ ‎(C33‏ التركيبة طبقا ‎(C32 andl‏ حيث مجال سيطرة ‎cysteine protease‏ يتضمن طفرة غير متحفظة موجودة عند المواضع احخى ‎AOA YY‏ أو أي اتحادات منهم؛ ‎als‏ للترقيم من تعريف الترتيب ‎YY ad)‏ 4: التركيبة طبقا للبند ‎(C21‏ حيث ‎Clostridium difficile toxin A‏ الطفري ‎٠‏ يتضمن تعريف الترتيب رقم: 4 . 5: التركيبة طبقا للبند ‎(C21‏ حيث ‎Clostridium difficile toxin A‏ الطفري يتضمن تعريف الترتيب رقم: ‎AE‏ ‏6: التركيبة طبقا للبند ‎(C21‏ حيث ‎Clostridium difficile toxin A‏ الطفري يتضمن تعريف الترتيب رقم: 7. ‎yo‏ 7: التركيبة طبقا للبند ‎(C21‏ حيث ‎Clostridium difficile toxin A‏ الطفري يتضمن تعريف الترتيب رقم: ‎AY‏ ‏8: التركيبة طبقا لأي من البنود ‎C21‏ إلى 033؛ حيث يكون ‎acid‏ 801100 واحد على الأقل من / ‎Clostridium difficile toxin‏ الطفري متقاطع الرابطة كيميائيا. 9 : التركيبة طبقا للبند ‎(C38‏ حيث يكون ‎amino acid‏ متقاطع الرابطة كيميائيا ‎٠‏ بواسطة ‎formaldehyde‏ ‎:C40‏ التركيبة طبقا للبند ‎dua (C38‏ يكون ‎amino acid‏ متقاطع الرابطة ‎Likes‏ ‏بواسطة ‎.1-ethyl-3—(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide‏ 61لا
اج ¢ \ — 1: التركيبة طبقا للبند ‎C38‏ أو ‎«C40‏ حيث يكون ‎amino acid‏ متقاطع الرابطة كيميائيا بواسطة ‎.N-hydroxysuccinimide‏ ‏2: التركيبة طبقا لأي من البنود ‎C21‏ إلى 041؛ حيث تدرك التركيبة بواسطة جسم مضاد معادل ‎toxin A aca‏ أو جزء رابط منه. ‎:C43 °‏ 4085 مولدة للمناعة تتضمن ‎Clostridium difficile toxin A‏ طفري؛ تتضمن مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ متضمنا تعريف الترتيب رقم: 4 ؟ به استبدال ‎amino 0‏ عند المواضع ‎«YAY 5 YAS‏ ومجال سيطرة ‎cysteine protease‏ متضمنا تعريف الترتيب رقم: ‎YY‏ له استبدال ‎acid‏ 0 عند الموضع ‎(VOA‏ بالنسبة إلى ‎Clostridium difficile toxin A‏ النوع البري المقابل؛ حيث يكون ‎acid‏ 87001710 واحد على ‎٠‏ الأقل من / ‎Clostridium difficile toxin‏ الطفري متقاطع الرابطة كيميائيا . 4: تركيبة مولدة للمناعة متضمنة تعريف الترتيب رقم: ؛ أو تعريف الترتيب رقم: 7 حيث يكون ‎amino acid‏ واحد على الأقل من تعريف الترتيب رقم: ؛ أو تعريف الترتيب رقم: ‎١‏ ‏متقاطع الرابطة كيميائيا. 5: التركيبة طبقا للبند ‎C43‏ أو 044؛ حيث يكون ‎amino acid‏ الواحد على الأقل ‎١٠‏ متقاطع الرابطة بواسطة ‎formaldehyde‏ ‏6 التركيبة طبقا ‎C43 wll‏ أو 044؛ حيث يكون ‎amino acid‏ الواحد على الأقل متقاطع الرابطة بواسطة ‎.1-ethyl-3—(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide‏ 7: التركيبة طبقا للبند ‎(C43‏ 644 أو 046؛ حيث يكون ‎amino acid‏ الواحد على الأقل متقاطع الرابطة بواسطة ‎.N-hydroxysuccinimide‏ ‎٠‏ 8: التركيبة طبقا للبند ‎C43‏ أو 044؛ حيث تدرك التركيبة بواسطة جسم مضاد معادل ضد ‎toxin A‏ أو جزء رابط منه. 9: تركيبة مولدة للمناعة متضمنة تعريف الترتيب رقم: 4.
0: تركيبة مولدة للمناعة متضمنة تعريف الترتيب رقم: ‎AE‏ ‏1: تركيبة مولدة للمناعة متضمنة تعريف الترتيب رقم: 7. 2: تركيبة مولدة للمناعة متضمنة تعريف الترتيب رقم: ‎AY‏ ‏3 التركيبة طبقا لأي من البنود ‎C49‏ إلى ‎«C52‏ حيث يكون ‎amino acid‏ الواحد © على الأقل متقاطع الرابطة كيميائيا. 4 التركيبة طبقا لأي من البنود ‎C21‏ إلى 051؛ حيث تظهر التركيبة سمية خلوية منخفضة؛ بالنسبة إلى / ‎Clostridium difficile toxin‏ النوع البري المقابل. ‎polypeptide :C55‏ معزول متضمنا تعريف الترتيب رقم: ‎AE‏ ‎polypeptide :6‏ معزول متضمنا تعريف الترتيب رقم: ‎AT‏ ‎polypeptide :7 "‏ معزول متضمنا تعريف الترتيب رقم: ‎AY‏ ‎polypeptide :C58‏ معزول متضمنا تعريف الترتيب رقم: ‎AO‏ ‏9: تركيبة مولدة للمناعة متضمنة 8 ‎Clostridium difficile toxin‏ طفري؛ تتضمن مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ به طفرة واحدة على الأقل ومجال سيطرة ‎cysteine protease‏ به طفرة واحدة على الأقل» بالنسبة إلى 8 ‎Clostridium difficile toxin‏ ‎١‏ النوع البري المقابل. 0: التركيبة ‎Wh‏ للبند ‎«C59‏ حيث تكون الطفرة عبارة عن استبدال ‎amino acid‏ غير تحفظي. 1 : التركيبة طبقا ‎dua «C60 and!‏ الاستبدال يتضمن استبدال ‎alanine‏ ‏2 ؛: التركيبة طبقا لأي من البنود ‎C59‏ إلى ‎«C61‏ حيث ‎Clostridium difficile‏ ‎toxin 8 ٠‏ النوع البري يتضمن ترتيب له ‎Bila‏ على الأقل 7495 مع تعريف الترتيب رقم: 7.
—YiV- ‏النوع البري‎ Clostridium difficile toxin 8 cua (C62 ‏التركيبة طبقا للبند‎ :3 .7 ‏على الأقل 7948 مع تعريف الترتيب رقم:‎ Bla ‏يتضمن ترتيب له‎ ‏النوع البري‎ Clostridium difficile toxin 8 ‏حيث‎ «C63 ‏التركيبة طبقا للبند‎ :4
Y tad) ‏يتضمن تعريف الترتيب‎ ‏؛» حيث مجال سيطرة‎ C64 ‏إلى‎ C59 ‏التركيبة طبقا لأي من البنود‎ :C65 5 ‏يتضمن طفرتين على الأقل.‎ glucosyltransferase ‏حيث تتواجد الطفرتان على الأقل عند مواضع‎ (C65 ‏للبند‎ Lida ‏التركيبة‎ :6 ‏أو م طبقا‎ OF TY ‏لتك‎ (FAL ‏الاك‎ (YY. (YAA ‏صف تغكت‎ amino acid ‏للترقيم من تعريف الترتيب رقم: ؟.‎ ‏؛» حيث مجال سيطرة‎ C64 ‏إلى‎ C59 ‏التركيبة طبقا لأي من البنود‎ :C67 ٠٠١
FY ‏يتضمن تعريف الترتيب رقم:‎ glucosyltransferase ‏يتضمن‎ glucosyltransferase ‏مجال سيطرة‎ dua (COT ‏التركيبة طبقا للبند‎ :8 كا٠١ ‏تن لغكت‎ amino acid ‏طفرتين غير متحفظتين على الأقل موجودتين عند مواضع‎
RR ‏أو 7 )؛ من تعريف الترتيب رقم:‎ OY ‏الشف غلاف )21 لزلا‎ ‏؛» حيث مجال سيطرة‎ C64 ‏إلى‎ C59 ‏التركيبة طبقا لأي من البنود‎ :C69 Yo ‏أو أي‎ FE OAV (TOY (TAA ‏يتضمن طفرة موجودة عند المواضع‎ Cysteine protease
Yo ‏للترقيم من تعريف الترتيب رقم‎ al » ‏اتحادات منهم‎ ‏حيث مجال سيطرة‎ C64 ‏إلى‎ C59 ‏التركيبة طبقا لأي من البنود‎ :C70
FV ‏يتضمن تعريف الترتيب رقم:‎ cysteine protease ‏يتضمن طفرةٌ‎ cysteine protease ‏مجال سيطرة‎ dus «(C70 ‏::التركيبة طبقا للبند‎ 1 ٠ ‏أو أي اتحادات منهم ؛ من تعريف‎ Yoo ٠٠١ (8g ‏غير متحفظة موجودة عند المواضع د‎
TY ‏الترتيب رقم:‎ i ‏الطفري‎ Clostridium difficile toxin 8 ‏حيث‎ «C59 ‏:التركيبة طبقا للبند‎ 2
A tad) ‏يتضمن تعريف الترتيب‎ ‏الطفري‎ Clostridium difficile toxin 8 ‏حيث‎ «C59 ‏التركيبة طبقا للبند‎ 3
AT ‏يتضمن تعريف الترتيب رقم:‎ ‏الطفري‎ Clostridium difficile toxin 8 ‏حيث‎ «C59 ‏التركيبة طبقا للبند‎ : 4 °
A ‏يتضمن تعريف الترتيب رقم:‎ ‏الطفري‎ Clostridium difficile toxin 8 ‏حيث‎ «C59 ‏التركيبة طبقا للبند‎ :5
PAS ‏يتضمن تعريف الترتيب رقم:‎ ‏واحد‎ 801100 acid ‏إلى 071؛ حيث يكون‎ C59 ‏التركيبة طبقا لأي من البنود‎ :6 ‏الطفري متقاطع الرابطة كيميائيا.‎ Clostridium difficile toxin 8 ‏على الأقل من‎ ٠
Like ‏متقاطع الرابطة‎ amino acid ‏حيث يكون‎ (C76 ‏التركيبة طبقا للبند‎ : 7 formaldehyde ‏بواسطة‎ ‎Like ‏متقاطع الرابطة‎ amino acid ‏حيث يكون‎ (C76 ‏التركيبة طبقا للبند‎ :8 .1-ethyl-3—(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide ‏بواسطة‎ ‏واحد على الأقل‎ amino acid ‏حيث يكون‎ «C78 ‏أو‎ C76 ‏التركيبة طبقا للبند‎ 9 Yo .N-hydroxysuccinimide ‏متقاطع الرابطة بواسطة‎ ‏التركيبة طبقا لأي من البنود 059 إلى 079؛ حيث تدرك التركيبة بواسطة جسم‎ :0 ‏أو جزء رابط منه.‎ toxin 8 aca ‏مضاد معادل‎ ‏طفري؛‎ Clostridium difficile toxin 8 ‏تركيبة مولدة للمناعة تتضمن‎ :1 ‏متضمنا تعريف الترتيب رقم: ١؟ به استبدال‎ glucosyltransferase ‏تتضمن مجال سيطرة‎ Ye ‏متضمنا‎ cysteine protease ‏ومجال سيطرة‎ «YAA 5 YAT ‏عند المواضع‎ amino acid ‏بالنسبة إلى‎ (V00 ‏عند الموضع‎ 0 acid ‏له استبدال‎ YY ‏تعريف الترتيب رقم:‎ ‏61لا‎
‎Clostridium difficile toxin 8‏ النوع البري المقابل؛ حيث يكون ‎acid‏ 87001710 واحد على ‎Jay)‏ من 8 ‎Clostridium difficile toxin‏ الطفري متقاطع الرابطة كيميائيا.
‏2: تركيبة مولدة للمناعة متضمنة تعريف الترتيب رقم: 6 أو تعريف الترتيب رقم: ‎CA‏ ‏حيث يكون ‎amino acid‏ واحد على الأقل من تعريف الترتيب رقم: 6+ أو تعريف الترتيب رقم: ‎A‏
‏© متقاطع الرابطة كيميائيا.
‏3 التركيبة طبقا للبند ‎C81‏ أو 082؛ حيث يكون ‎amino acid‏ الواحد على الأقل متقاطع الرابطة بواسطة ‎formaldehyde‏
‏4 التركيبة طبقا للبند ‎C81‏ أو 082؛ حيث يكون ‎amino acid‏ الواحد على الأقل متقاطع الرابطة بواسطة ‎.1-ethyl-3—(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide‏
‎AD‏ 5: التركيبة طبقا للبند ‎C82 (C81‏ أو 084؛ حيث يكون ‎amino acid‏ الواحد على الأقل متقاطع الرابطة بواسطة ‎.N-hydroxysuccinimide‏
‏6 : التركيبة طبقا للبند ‎C81‏ أو 082؛ حيث تدرك التركيبة بواسطة جسم مضاد معادل ‎toxin 8 aca‏ أو جزء رابط منه.
‏7: تركيبة مولدة للمناعة متضمنة تعريف الترتيب رقم: 6.
‎AT ‏تركيبة مولدة للمناعة متضمنة تعريف الترتيب رقم:‎ :8 yo
‏9: تركيبة مولدة للمناعة متضمنة تعريف الترتيب رقم: ‎A‏
‏0: تركيبة مولدة للمناعة متضمنة تعريف الترتيب رقم: ‎AO‏
‏1 : التركيبة طبقا لأي من البنود ‎C59‏ إلى 089؛ حيث تظهر التركيبة سمية خلوية منخفضة؛ بالنسبة إلى 8 ‎Clostridium difficile toxin‏ النوع البري المقابل.
‎٠١‏ 2: تركيبة مولدة للمناعة متضمنة تعريف الترتيب رقم: ؛ وتركيبة مولدة للمناعة متضمنة تعريف الترتيب رقم: 7 حيث يكون ‎amino acid‏ واحد على الأقل من كل من تعريفات الترتيب أرقام: 4 و7 متقاطع الرابطة كيميائيا.
‎OW —‏ \ _ ‎:CO3‏ 2085 مولدة ‎do ball‏ متضمنة تعريف الترتيب رقم: 84 وتركيبة مولدة للمناعة متضمنة تعريف الترتيب رقم: ‎(AT‏ حيث يكون ‎acid‏ 800100 واحد على الأقل من كل من تعريفات الترتيب أرقام: ‎A$‏ و87 متقاطع الرابطة كيميائيا. 4 التركيبة طبقا ‎C92 wll‏ أو 093؛ حيث يكون ‎amino acid‏ الواحد على الأقل © متقاطع الرابطة بواسطة ‎formaldehyde‏ ‏5: التركيبة طبقا للبند ‎C92‏ أو 093؛ حيث يكون ‎amino acid‏ الواحد على الأقل متقاطع الرابطة بواسطة ‎.1-ethyl-3—(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide‏ 6 التركيبة طبقا للبند ‎(C92‏ 693 أو 095؛ حيث يكون ‎amino acid‏ الواحد على الأقل متقاطع الرابطة بواسطة ‎.N-hydroxysuccinimide‏ ‎:C97 Yo‏ خلية مخلقة أو نسل منها ¢ متضمنة تعريف الترتيب رقم : ‎VY‏ تعريف الترتيب رقم : ٠؛‏ تعريف الترتيب رقم ‎VY‏ تعريف الترتيب رقم ‎(YE:‏ تعريف الترتيب رقم :88( تعريف الترتيب رقم :20 تعريف الترتيب رقم ‎EAN‏ أو تعريف الترتيب رقم ‎LEV‏ ‏8: خلية مخلقة أو نسل منهاء متضمنة ترتيب ‎nucleic acid‏ يشفر تعريف الترتيب رقم : 4 تعريف الترتيب رقم ‎le‏ تعريف الترتيب رقم :لا أو تعريف الترتيب رقم ا ‎Yo‏ 9: خلية مخلقة أو نسل منها؛ متضمنة ترتيب ‎nucleic acid‏ يشفر تعريف الترتيب رقم: ‎Ag‏ ‎:C100‏ خلية مخلقة أو نسل منها؛ متضمنة ترتيب ‎nucleic acid‏ يشفر تعريف الترتيب رقم: ‎AT‏ ‏1 : خلية مخلقة أو نسل منها؛ متضمنة ترتيب ‎nucleic acid‏ يشفر تعريف الترتيب ‎١‏ رقم: ‎AY‏ ‏2: خلية مخلقة أو نسل منها؛ متضمنة ترتيب ‎nucleic acid‏ يشفر تعريف الترتيب رقم: عد ‎Evo‏
‎o \ —‏ \ — 3: خلية مخلقة من البند 697 أو 098؛ حيث تشتق الخلية المذكورة من خلية بكتيرية موجبة الجرام. 4 :الخلية المخلقة من البند ‎(COT‏ 098؛ أو 099؛ حيث تشتق الخلية من خلية ‎.Clostridium difficile‏ ° 5 : الخلية المخلقة من أي من البنود 697 إلى ‎«C104‏ حيث تفتقد الخلية ‎polynucleotide‏ داخلي ‎Laid)‏ يشفر ‎toxin‏ ‏6 الخلية طبقا لأي من البند ‎(C104‏ أو 6105 حيث تشتق الخلية من خلية ‎Clostridium difficile‏ مختارة من المجموعة المتكونة من 1351 ‎«Clostridium difficile‏ ‎Clostridium difficile (Clostridium difficile 7322 (Clostridium difficile 3232‏ ‎.Clostridium difficile VPI 11186 4 «Clostridium difficile 4811 5036 ٠‏ 7 : الخلية طبقا للبند ‎(C106‏ حيث تكون الخلية هي خلية ‎Clostridium difficile‏ ‎VPI 11186‏ 8 : الخلية طبقا للبند ‎«C106‏ أو ‎«C107‏ حيث يكون جين التبرعم ‎(sporulation‏ ‎gene)‏ لخلية ‎Clostridium difficile‏ خامد النشاط. ‎vo‏ 9 : الخلية طبقا للبند 0108؛ حيث ‎dads‏ جين التبرعم جين 5000/8 أو جين ‎.spollE‏ ‎:C110‏ طريقة لإنتاج ‎Clostridium difficile toxin‏ طفري؛ تتضمن: زراعة خلية مخلقة أو نسل منها تحت شروط مناسبة لإظهار ‎polynucleotide‏ يشفر ‎Clostridium difficile toxin‏ طفري؛ حيث تتضمن الخلية ‎polynucleotide‏ يشفر ‎difficile toxin Y.‏ 0 ا الطفري»؛ وحيث تتضمن الطفرة مجال سيطرة ‎glucosyltransferase‏ به طفرة واحدة على الأقل ومجال سيطرة ‎cysteine protease‏ به طفرة واحدة على ‎(JR‏ بالنسبة إلى ‎Clostridium difficile toxin‏ النوع البري المقابل.
‎o \ —‏ \ — 1 : الطريقة طبقا للبند ‎«C110‏ حيث تفتقد الخلية ‎polynucleotide‏ داخلي المنشأ يشفر ‎doxin‏ ‏2 الطريقة طبقا للبند ‎«C110‏ حيث أن الخلية المخلقة أو نسل منها تتضمن خلية طبقا لأي من البنود 097 إلى ‎C111‏ ‏° 3 : الطريقة طبقا للبند ‎«C110‏ تتضمن إضافيا عزل ‎Clostridium difficile‏ 07 الطفري. 4: الطريقة طبقا للبند ‎«C113‏ تتضمن إضافيا تلامس ‎Clostridium difficile‏ 0 الطفري المعزول مع ‎formaldehyde‏ ‏5 : الطريقة طبقا للبند ‎(C114‏ حيث يحدث التلامس لمدة ‎VE‏ يوم على الأكثر. ‎Va‏ 6 : الطريقة طبقا للبند ‎«C115‏ حيث يحدث التلامس لمدة ‎A‏ ساعة على الأكثر. 7 الطريقة طبقا للبند ‎«C114‏ حيث يحدث التلامس عند حوالي © ؟"مثوية. 68 : الطريقة طبقا للبند ‎«C113‏ تتضمن إضافيا تلامس ‎Clostridium difficile‏ 0 الطفري المعزول مع ‎.ethyl-3—(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide‏ 9 الطريقة طبقا للبند ‎«C118‏ حيث يحدث التلامس لمدة ‎YE‏ ساعة على الأكثر. ‎Vo‏ 0: الطريقة طبقا للبند 0120؛ حيث يحدث التلامس لمدة ؛ ساعات على الأكثر. 1 ؛: الطريقة طبقا للبند ‎«C118‏ حيث يحدث التلامس عند حوالي © ؟"مئوية. 2 الطريقة طبقا للبند ‎«C118‏ تتضمن إضافيا تلامس ‎Clostridium difficile‏ 07 الطفري المعزول مع ‎.N-hydroxysuccinimide‏ ‏3 : تركيبة مولدة للمناعة ناتجة بواسطة الطريقة طبقا لأي من البنود 6110© إلى ‎٠‏ 0122.
ارج ‎485k :C124‏ لإنتاج جسم مضاد معادل ضد ‎«Clostridium difficile toxin A‏ تتضمن إعطاء تركيبة مولدة للمناعة إلى كائن ثديي؛ تتضمن التركيبة المولدة للمناعة المذكورة تعريف الترتيب رقم: ‎dua of‏ لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع ‎din)‏ ‏يكون ‎amino acid‏ واحد على الأقل من تعريف الترتيب رقم: § متقاطع الرابطة كيميائيا بواسطة ‎«1-ethyl-3—(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide formaldehyde ٠‏ ‎(N-hydroxysuccinimide‏ أو اتحاد من ‎1-ethyl-3—(3-dimethylaminopropyl)‏ ‎<N—-hydroxysuccinimide 4 carbodiimide‏ واسترجاع الجسم المضاد من الكاثن الثديبي. 5: طريقة لإنتاج جسم مضاد معادل ضد ‎«Clostridium difficile toxin A‏ تتضمن إعطاء تركيبة مولدة للمناعة إلى ‎ALS‏ ثديي؛ تتضمن التركيبة المولدة ‎٠‏ ا للمناعة المذكورة تعريف الترتيب رقم: ‎AE‏ حيث يكون ‎acid‏ 060 واحد على الأقل من تعريف الترتيب رقم: ‎Af‏ متقاطع الرابطة ‎formaldehyde ia ss‏ ‎«N-hydroxysuccinimide .1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide‏ أو اتحاد ‎1-ethyl-3—(3—dimethylaminopropyl) carbodiimide,‏ و-لا ‎chydroxysuccinimide‏ واسترجاع الجسم المضاد من ‎EN‏ الثديي. ‎yo‏ 6 طريقة لإنتاج جسم مضاد معادل ضد 8 ‎«Clostridium difficile toxin‏ تتضمن إعطاء تركيبة مولدة للمناعة إلى كائن ثديي؛ تتضمن التركيبة المولدة للمناعة المذكورة تعريف الترتيب رقم: ‎dua oT‏ لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع ‎din)‏ ‏يكون ‎acid‏ 801100 واحد على الأقل من تعريف الترتيب رقم: 6 متقاطع الرابطة بواسطة ‎«1-ethyl-3—(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide formaldehyde‏ ‎(N-hydroxysuccinimide Y.‏ أو اتحاد من ‎1-ethyl-3—(3-dimethylaminopropyl)‏ ‎{N—-hydroxysuccinimide 4 carbodiimide‏ واسترجاع الجسم المضاد من الكاثن الثديبي. 7 : طريقة لإنتاج جسم مضاد معادل ضد ‎«Clostridium difficile toxin A‏ تتضمن إعطاء تركيبة مولدة للمناعة إلى ‎ALS‏ ثديي؛ تتضمن التركيبة المولدة للمناعة المذكورة تعريف الترتيب رقم: ‎AT‏ حيث يكون ‎acid‏ 060 واحد على ‎YO‏ الأقل من تعريف الترتيب رقم: ‎AT‏ متقاطع الرابطة بواسطة ‎formaldehyde‏ ‏61لا
وم ‎«N-hydroxysuccinimide .1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide‏ أو اتحاد ‎1-ethyl-3—(3—dimethylaminopropyl) carbodiimide,‏ و-لا ‎chydroxysuccinimide‏ واسترجاع الجسم المضاد من ‎EN‏ الثديي. 8: جسم مضاد أو جزء رابط لجسم مضاد منه يخص تركيبة مولدة للمناعة؛ تتضمن ه التركيبة المولدة للمناعة المذكورة تعريف الترتيب رقم: ؛ حيث لا يتواجد اختياريا متخلف ‎aie methionine‏ الموضع ‎١‏ أو تعريف الترتيب رقم: ‎١‏ حيث لا يتواجد اختياريا متخلف 768 عند الموضع ‎.١‏ ‏9 : الجسم المضاد أو جزءٍ رابط لجسم مضاد منه طبقا للبند ‎(C128‏ حيث يكون ‎acid‏ 200 واحد على الأقل من تعريف الترتيب رقم: ؛ حيث لا يتواجد ‎٠‏ اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع ‎»١‏ أو تعريف الترتيب رقم: ‎١‏ حيث لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع ١؛‏ متقاطع الرابطة بواسطة ‎formaldehyde‏ ‎«N-hydroxysuccinimide .1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide‏ أو اتحاد ‎1-ethyl-3—(3—dimethylaminopropyl) carbodiimide,‏ و-لا ‎.hydroxysuccinimide‏ ‎:C130 Vo‏ جسم مضاد أو جزء رابط لجسم مضاد منه يتضمن ترتيبات ‎acid‏ 800100 من مناطق محددة للتكملة ‎(CDRs) (complementarity determining regions)‏ للسلسلة الثقيلة مذكور في تعريف الترتيب رقم: ‎«(CDR HI) 4١‏ تعريف الترتيب رقم: 7 ‎(CDR H2)‏ وتعريف الترتيب رقم: ¥€ ‎«(CDR H3)‏ وترتيبات ‎amino acid‏ من ‎ALLY CDRs‏ الخفيفة كما هو موضح في تعريف الترتيب رقم: ‎(CDR L1) YA‏ تعريف الترتيب رقم: ‎Ya‏ ‎(CDR LZ) ٠‏ وتعريف الترتيب رقم: ‎(CDR L3) ٠‏ 1 :الجسم المضاد أو جزء رابط لجسم مضاد منه طبقا للبند ‎«C128‏ 0129؛ أو ‎(C130‏ حيث الجسم المضاد أو ‎ela‏ رابط لجسم مضاد منه يتضمن سلسلة ‎ALE‏ تتضمن ترتيب ‎acid‏ 800100 الموضح في تعريف الترتيب رقم: ‎(VV‏ وسلسلة خفيفة؛ تتضمن ترتيب ‎amino‏ ‏0 الموضح في تعريف الترتيب رقم: 1 7. فلا
—Yoo—
‎C132‏ تركيبة تتضمن اتحاد من اثنين أو أكثر من أجسام مضادة أو أجزاء رابطة لجسم مضاد منها مختارة من ‎UW‏ من البنود ‎C128‏ إلى 06131.
‏3: جسم ‎alias‏ أو جزء رابط لجسم مضاد منه يخص تركيبة مولدة للمناعة؛ تتضمن التركيبة المولدة للمناعة المذكورة تعريف الترتيب ‎Toad)‏ حيث لا يتواجد اختياريا متخلف
‎methionine ©‏ عند الموضع ‎١‏ أو تعريف الترتيب رقم: ‎A‏ حيث لا يتواجد اختياريا متخلف 768 عند الموضع ‎.١‏
‏4 : الجسم المضاد أو جزءٍ رابط لجسم مضاد منه طبقا للبند ‎(C133‏ حيث يكون ‎acid‏ 200 واحد على الأقل من تعريف الترتيب رقم: + حيث لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع ‎»١‏ أو تعريف الترتيب رقم: ‎A‏ حيث لا يتواجد
‏- اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع ١؛‏ متقاطع الرابطة بواسطة ‎formaldehyde‏ ‎«N-hydroxysuccinimide .1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide‏ أو اتحاد ‎1-ethyl-3—(3—dimethylaminopropyl) carbodiimide,‏ و-لا ‎.hydroxysuccinimide‏ ‏5: جسم مضاد أو جزء رابط لجسم مضاد منه يتضمن ترتيبات ‎acid‏ 800100 من ‎١‏ مناطق محددة للتكملة ‎(CDRs) (complementarity determining regions)‏ للسلسلة الثقيلة مذكور في تعريف الترتيب رقم: )0 ‎«(CDR HI)‏ تعريف الترتيب رقم: ‎(CDR H2) oY‏ وتعريف الترتيب رقم: ‎«(CDR H3) oF‏ وترتيبات ‎amino acid‏ من ‎ALLY CDRs‏ الخفيفة كما هو موضح في تعريف الترتيب رقم: ‎(CDR L1) oF‏ تعريف الترتيب رقم: 58 ‎(CDR L2)‏ وتعريف الترتيب رقم: #04 ‎(CDR L3)‏ ‎٠‏ 6: جسم مضاد أو جزء رابط لجسم مضاد منه يتضمن ترتيبات ‎acid‏ 800100 من مناطق محددة للتكملة ‎(CDRs) (complementarity determining regions)‏ للسلسلة الثقيلة مذكور في تعريف الترتيب رقم: ‎«(CDR HI) 6١‏ تعريف الترتيب رقم: 67 ‎(CDR H2)‏ وتعريف الترتيب رقم: ‎«(CDR H3) TY‏ وترتيبات ‎amino acid‏ من ‎ALLY CDRs‏ الخفيفة فلا
1ه كما هو موضح في تعريف الترتيب رقم: ‎(CDR L1) TA‏ تعريف الترتيب رقم: 15 ‎(CDR L2)‏ وتعريف الترتيب رقم: ‎(CDR L3) ١٠١‏ ‎ana :C137‏ مضاد أو جزء رابط لجسم مضاد منه يتضمن ترتيبات ‎acid‏ 800100 من مناطق محددة للتكملة ‎(CDRs) (complementarity determining regions)‏ للسلسلة © الثقيلة مذكور في تعريف الترتيب رقم: ‎«(CDR HI) VY‏ تعريف الترتيب رقم: 4 ‎(CDR H2) ١‏ وتعريف الترتيب رقم: ‎«(CDR H3) Yo‏ وترتيبات ‎amino acid‏ من ‎ALLY CDRs‏ الخفيفة كما هو موضح في تعريف الترتيب رقم: ‎(CDR L1) Va‏ تعريف الترتيب رقم: 80 ‎(CDR L2)‏ وتعريف الترتيب رقم: ‎(CDR L3) AY‏ ‎C138‏ تركيبة تتضمن اتحاد من اثنين أو أكثر من أجسام مضادة أو أجزاء رابطة لجسم ‎٠‏ مضاد منها مختارة من أيا من البنود ‎C133‏ إلى ‎.C137‏
9: طريقة لعلاج عدوى ‎Clostridium difficile‏ في ‎(A‏ ثديي؛ تتضمن إعطاء الكائن الثدي تركيبة مولدة للمناعة تتضمن تعريف الترتيب رقم: ؛ حيث لا يتواجد اختياريا متخلف 06 عند الموضع )¢ وتركيبة مولدة للمناعة تتضمن تعريف الترتيب رقم: ‎١‏ حيث لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع ‎١‏ حيث يكون ‎acid‏ 800100 واحد على formaldehyde ‏الأقل من تعريفات الترتيب أرقام: ؛ و6 متقاطع الرابطة بواسطة‎ Vo
0 : طريقة لعلاج عدوى ‎Clostridium difficile‏ في كائن ثديي؛ تتضمن إعطاء الكائن ‎ga Bl)‏ تركيبة مولدة للمناعة تتضمن تعريف الترتيب رقم: ؛ حيث لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع )¢ وتركيبة مولدة للمناعة تتضمن تعريف الترتيب رقم: 1 حيث لا يتواجد اختياريا متخلف ‎methionine‏ عند الموضع ‎١‏ حيث
+ ‏واحد على الأقل من كل من تعريف الترتيب رقم: ؛ وتعريف الترتيب رقم:‎ 807100 acid ‏يكون‎ ٠ «1-ethyl-3—(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide ‏متقاطع الرابطة بواسطة‎ 1-ethyl-3—(3-dimethylaminopropyl) ‏أو اتحاد من‎ (N-hydroxysuccinimide .N-hydroxysuccinimide 5 carbodiimide
—Yoy— ‏في كائن ثديي؛ تتضمن إعطاء‎ Clostridium difficile ‏طريقة لعلاج عدوى‎ :C141 ‏وتركيبة مولدة‎ cA ‏الكائن الثدي تركيبة مولدة للمناعة تتضمن تعريف الترتيب رقم:‎
JN ‏واحد على‎ 80100 acid ‏حيث يكون‎ (AT ‏للمناعة تتضمن تعريف الترتيب رقم:‎ ‏متقاطع الرابطة بواسطة‎ AT ‏من كل من تعريف الترتيب رقم: 84 وتعريف الترتيب رقم:‎ .N-hydroxysuccinimide ‏ى‎ 1 -ethyl-3~(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide ه٠‎ ‏كائن ثديي؛‎ Clostridium difficile Jal ‏طريقة لاحث استجابة مناعية‎ C142 ‏تتضمن إعطاء الكائن الثدي تركيبة مولدة للمناعة تتضمن تعريف الترتيب رقم: ؛ حيث لا يتواجد‎ ‏عند الموضع )¢ وتركيبة مولدة للمناعة تتضمن تعريف الترتيب‎ methionine ‏اختياريا متخلف‎ amino ‏حيث يكون‎ ٠ ‏عند الموضع‎ methionine ‏رقم: 7 حيث لا يتواجد اختياريا متخلف‎ ‏واحد على الأقل من كل من تعريف الترتيب رقم: ؛ وتعريف الترتيب رقم: 6 متقاطع الرابطة‎ 8000 ٠ formaldehyde ‏بواسطة‎ ‏في كائن ثديي؛‎ 1051101000 difficile ‏طريقة لحث استجابة مناعية لأجل‎ C143 ‏تتضمن إعطاء الكائن الثدي تركيبة مولدة للمناعة تتضمن تعريف الترتيب رقم: ؛ حيث لا يتواجد‎ ‏وتركيبة مولدة للمناعة تتضمن تعريف الترتيب‎ ١ ‏عند الموضع‎ methionine ‏اختياريا متخلف‎ amino ‏يكون‎ Sua) ‏عند الموضع‎ methionine ‏حيث لا يتواجد اختياريا متخلف‎ ١ ‏رقم:‎ Vo ‏واحد على الأقل من كل من تعريف الترتيب رقم: ؛ وتعريف الترتيب رقم: 6 متقاطع الرابطة‎ 0 ‏-لا‎ «1-ethyl-3—-(3—dimethylaminopropyl) carbodiimide ‏بواسطة‎ ‎1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) ‏أو اتحاد من‎ chydroxysuccinimide .N-hydroxysuccinimide 5 carbodiimide ‏كائن ثديي؛‎ Clostridium difficile Jal ‏استجابة مناعية‎ Gaal ‏طريقة‎ C144 Y. ‏تتضمن إعطاء الكائن الثذي تركيبة مولدة للمناعة تتضمن تعريف الترتيب رقم: 4م وتركيبة مولدة‎ ‏واحد على الأقل من كل من‎ amino acid ‏حيث يكون‎ (AT ‏للمناعة تتضمن تعريف الترتيب رقم:‎ ‏متقاطع الرابطة بواسطة -3)-3- الا1-610‎ AT ‏وتعريف الترتيب رقم:‎ AE ‏تعريف الترتيب رقم:‎ .N-hydroxysuccinimide 5 dimethylaminopropyl) carbodiimide ‏فلا‎
م ‎o‏ \ — : الطريقة طبقا لأي من البنود ‎C139‏ إلى 0144؛ حيث يكون الكائن الثديي هو كاثن ثديي بحاجة لذلك. 6 : الطريقة طبقا لأي من البنود ‎C139‏ إلى 0144؛ حيث يعاني الكائن الثديي من تكرار الإصابة بعدوى ‎.Clostridium difficile‏ ° 7 : الطريقة طبقا لأي من البنود ‎C139‏ إلى 0144؛ حيث تعطى التركيبة عن غير الطريق المعوي. 8 : الطريقة طبقا لأي من البنود ‎C139‏ إلى 0144؛ حيث تتضمن التركيبة إضافيا مادة مساعدة. 9 ؛: الطريقة طبقا للبند ‎(C148‏ حيث أن المادة المساعدة تتضمن ‎aluminum‏ ‎٠١‏ 0 : الطريقة طبقا للبند ‎(C148‏ حيث أن المادة المساعدة تتضمن هلام ‎aluminum hydroxide‏ و ‎.CpG oligonucleotide‏ 1 : الطريقة طبقا للبند ‎«C148‏ حيث أن المادة المساعدة تتضمن ‎USCOMATRIX®‏

Claims (1)

  1. —Yo4— ‏عناصر الحماية‎ AE ‏يشتمل على تعريف الترتيب رقم:‎ polypeptide ‏تركيبة تشتمل على‎ -١ . 4 ‏على تعريف الترتيب رقم:‎ polypeptide ‏حيث يشتمل‎ ٠ ‏التركيبة طبقا لعنصر الحماية‎ -" ‏عند الموضع‎ methionine ‏حيث لا يتواجد اختياريا متخلف‎ oF ‏التركيبة طبقا لعنصر الحماية‎ -* 3 ‏وحيث يشتمل‎ THiS ‏التركيبة طبقا لعنصر الحماية )0 تشمل أيضا مثبت أس هيدروجيني‎ —¢ © ‏أيضا على جزء 05618-81801706 متصل تقاطعيا مع سلسلة جانبية لمتخلف‎ polypeptide .polypeptide ‏من‎ lysine ‏أيضا على وصلة متقاطعة بين‎ polypeptide ‏حيث يشتمل‎ of ‏التركيبة طبقا لعنصر الحماية‎ —o aspartic acid ‏سلسلة جانبية لمتخلف 5106لا ثاني من 1086م068/اا00 وسلسلة جانبية لمتخلف‎ .polypeptide ‏من‎ ٠ ‏أيضا على وصلة متقاطعة بين‎ polypeptide ‏حيث يشتمل‎ of ‏التركيبة طبقا لعنصر الحماية‎ -+ ‏من‎ glutamic acid ‏وسلسلة جانبية لمتخلف‎ polypeptide ‏ثاني من‎ lysine ‏متخلف‎
    ‎.polypeptide ‏أيضا على وصلة متقاطعة بين‎ polypeptide ‏حيث يشتمل‎ ٠ ‏التركيبة طبقا لعنصر الحماية‎ -١ ‏من‎ aspartic acid ‏وسلسلة جانبية لمتخلف‎ polypeptide lysine ‏سلسلة جانبية لمتخلف‎ Vo .polypeptide ‏أيضا على وصلة متقاطعة بين‎ polypeptide ‏حيث يشتمل‎ ١ ‏التركيبة طبقا لعنصر الحماية‎ — A ‏من‎ glutamic acid ‏وسلسلة جانبية لمتخلف‎ polypeptide ‏من‎ lysine ‏متخلف‎
    ‎.polypeptide ‎glycine ‏أيضا على جزء‎ polypeptide ‏حيث يشتمل‎ ٠ ‏التركيبة طبقا لعنصر الحماية‎ -+ .polypeptide ‏من‎ aspartic acid ‏متصل تقاطعيا مع سلسلة جانبية لمتخلف‎ glycine ‏أيضا على جزء‎ polypeptide ‏حيث يشتمل‎ ٠ ‏التركيبة طبقا لعنصر الحماية‎ -٠ .polypeptide ‏من‎ glutamic acid ‏متصل تقاطعيا مع سلسلة جانبية لمتخلف‎ ‏ثاني يشتمل على‎ polypeptide ‏التركيبة طبقا لعنصر الحماية )¢ حيث تشتمل أيضا على‎ -١١ AT ‏تعريف الترتيب رقم:‎ YO ‏فلا‎
    ٠*2 ‏الثاني على تعريف الترتيب‎ polypeptide ‏حيث يشتمل‎ VY ‏التركيبة طبقا لعنصر الحماية‎ -١ A ‏رقم:‎ ‏عند‎ methionine ‏حيث لا يتواجد اختياريا متخلف‎ VY ‏التركيبة طبقا لعنصر الحماية‎ -١٠ .١ ‏الموضع‎ ‏وحيث يشتمل‎ (THiS ‏تشمل أيضا مثبت أس هيدروجيني‎ ١٠١ ‏التركيبة طبقا لعنصر الحماية‎ -١؟‎ © ‏الثاني أيضا على جزء ©5618-818010 متصل تقاطعيا مع سلسلة جانبية لمتخلف‎ polypeptide ‏الثاني.‎ polypeptide (yx lysine ‏الثاني أيضا على وصلة‎ polypeptide ‏حيث يشتمل‎ «VE ‏لعنصر الحماية‎ Wh ‏التركيبة‎ -١ ‏وسلسلة جانبية لمتخلف‎ polypeptide ‏ثاني من‎ lysine ‏متقاطعة بين سلسلة جانبية لمتخلف‎ ‏الثاني.‎ polypeptide ‏من‎ 85681116 860 | ٠ ‏الثاني أيضا على وصلة‎ polypeptide ‏حيث يشتمل‎ «VE ‏التركيبة طبقا لعنصر الحماية‎ - glutamic acid ‏وسلسلة جانبية لمتخلف‎ polypeptide ‏متقاطعة بين متخلف 5106| ثاني من‎ ‏الثاني.‎ polypeptide ‏من‎ ‏الثاني أيضا على وصلة‎ polypeptide ‏حيث يشتمل‎ ٠١ ‏التركيبة طبقا لعنصر الحماية‎ -١ ‏وسلسلة جانبية لمتخلف‎ polypeptide «lysine ‏متقاطعة بين سلسلة جانبية لمتخلف‎ Vo ‏الثاني.‎ polypeptide ‏من‎ aspartic acid ‏الثاني أيضا على وصلة‎ polypeptide ‏حيث يشتمل‎ VY ‏التركيبة طبقا لعنصر الحماية‎ -٠8 ‏من‎ glutamic acid ‏وسلسلة جانبية لمتخلف‎ polypeptide (lysine ‏متقاطعة بين متخلف‎ ‏امم الثاني.‎ 6 ‏الثاني أيضا على جزءٍ‎ polypeptide ‏حيث يشتمل‎ ١٠١ ‏التركيبة طبقا لعنصر الحماية‎ -١١ ٠ ‏الثاني.‎ polypeptide ‏من‎ 85081116 acid ‏متصل تقاطعيا مع سلسلة جانبية لمتخلف‎ 6 sia ‏الثاني أيضا على‎ polypeptide ‏حيث يشتمل‎ ٠١ ‏التركيبة طبقا لعنصر الحماية‎ -٠١ ‏الثاني.‎ polypeptide (glutamic acid ‏متصل تقاطعيا مع سلسلة جانبية لمتخلف‎ 6 ‏على الأقل‎ EC50 ‏له قيمة‎ polypeptide ‏حيث كل‎ ٠١ ‏التركيبة طبقا لعنصر الحماية‎ -١ ‏ميكروجرام/ ملليلتر؛ كما هو مقاس بواسطة اختبار سمية خلوية في المعمل.‎ ٠٠١ ‏حوالي‎ YO ‏فلا‎
    -١+؟-‏ ‎YY‏ التركيبة طبقا لعنصر الحماية ‎٠١‏ حيث كل ‎polypeptide‏ له قيمة 5050 على الأقل حوالي ‎٠٠٠١‏ ميكروجرام/ ملليلترء كما هو مقاس بواسطة اختبار سمية خلوية في المعمل. "- التركيبة طبقا لعنصر الحماية ‎١٠‏ تشمل أيضا مثبت أس هيدروجيني ‎Tris‏ ‏؛؟- التركيبة طبقا لعنصر الحماية ٠؛‏ تشمل أيضا مثبت. © ©؟- التركيبة طبقا لعنصر الحماية )¢ ‎Jedi‏ أيضا ‎trehalose dihydrate‏ ‎YT‏ التركيبة طبقا لعنصر الحماية ‎٠‏ تشمل أيضا منشط سطح. ‎-7١‏ التركيبة طبقا لعنصر الحماية ٠؛‏ تشمل أيضا 80 ‎.polysorbate‏ ‎YA‏ — التركيبة طبقا لعنصر الحماية ٠؛‏ حيث تكون التركيبة مجفدة. 4- التركيبة طبقا لعنصر الحماية ‎VY‏ حيث تكون التركيبة مولدة للمناعة. ‎Yo‏ ١؟-‏ التركيبة طبقا لعنصر الحماية )¢ حيث التركيبة لا تتضمن ‎formaldehyde‏ ‎-١‏ التركيبة ‎Gh‏ لعنصر الحماية ‎١‏ حيث تشتمل التركيبة أيضا على مادة مساعدة. ‎YY‏ — التركيبة طبقا لعنصر الحماية ١؛‏ حيث التركيبة لا تتضمن مادة مساعدة. *؟- التركيبة طبقا لعنصر الحماية ٠؛‏ حيث تتضمن أيضا كلوريد صوديوم. ؛؟- التركيبة طبقا لعنصر الحماية ‎٠‏ حيث تتضنم التركيبة أيضا ماء. ‎Yo‏ ©*؟- تركيبة تشتمل على مثبت أس هيدر وجيني ‎polysorbate trehalose dihydrate (Tris‏ ‎polypeptide (80‏ أول يشتمل على تعريف الترتيب رقم: ‎At‏ و ‎polypeptide‏ ثاني يشتمل على تعريف الترتيب رقم: ‎dua (AT‏ يشتمل ‎polypeptide‏ الأول 4 ‎polypeptide‏ الثاني أيضا على جزء 0618-8180106 متصل تقاطعيا مع سلسلة جانبية لمتخلف ‎polypeptide lysine‏ ‎pad‏ ¢ وحيث يشتمل ‎polypeptide‏ الأول 4 ‎polypeptide‏ الثاني أيضا على جزء ‎glycine‏ ‎Yo‏ متصل تقاطعيا مع سلسلة جانبية لمتخلف ‎SG lysine‏ من ‎polypeptide‏ المعين. 11 — التركيبة طبقا لعنصر الحماية ‎Gua «Fo‏ كل ‎polypeptide‏ له قيمة 5050 على الأقل حوالي ‎٠٠٠١‏ ميكروجرام/ ملليلترء كما هو مقاس بواسطة اختبار سمية خلوية في المعمل. ‎FY‏ التركيبة طبقا لعنصر الحماية ‎(FO‏ حيث تكون التركيبة مجفدة. م؟- التركيبة طبقا لعنصر الحماية ‎(FO‏ حيث تكون التركيبة مولدة للمناعة. ‎YO‏ 4؟- التركيبة طبقا لعنصر الحماية ‎(Fo‏ حيث التركيبة لا تتضمن ‎formaldehyde‏ ‏- التركيبة طبقا لعنصر الحماية ‎Fo‏ حيث تشتمل التركيبة أيضا على مادة مساعدة.
    -7؟١؟-‏ £— التركيبة طبقا لعنصر الحماية 70( حيث التركيبة لا تتضمن مادة مساعدة.
    -+1؟- شكل ١ل)‏
    دم ‎LINLDEYNKLTTNNNENKYLOLKK‏ 15511777 15113151175 ده تو 1111017 5111لا 211511515511 م ‎MSLISKEELIKLAYSIRPRENEYKTILTNLDEYNKLTTNNNENKYLOLKE‏ ‏»0 التتاتورا 217101117117 111711 31051713 تقلا يملستو 1771117 372017167717110 نشت تبت اتن قثا فى لي لت كنا كنا ‎kok‏ كد تيا ندا اود اانا الما د اننا ا كا ‎sk‏ كذ قي الغا ‎eR‏ كنا كمد ‎Rsk‏ دنا ‎kd‏ لي كد اننا نا ‎dk‏ أن كنا كا نا اي كا ‎dd‏ د ل ا
    LNESTOVEMNKYKTSSRNRALSNLKKDI 1145371 1110131797017 ٠ LNESIDVEMNKYKTSSRNRALSNLKKDILKEVILIKNSNTSPVEENLHEV ٠ LNESIDVEMUKYKTSSRNRALSNLKKDILEKEVILIKNSNTSPVEKNLHEV ٠ LNESIDVEMNRYXKNSSRNRALSNLEKDI 17 111013175701177 +o.
    LNESIDVEMYKYKNSSRNRALSNLKKDILEEVILIKNSNTSPVEKNLEFY ٠ ‏ندا لم ات ل‎ Ark ‏انما‎ wd ‏اننا قن امد الا‎ RR EAR oe ok oh desde de dl ‏كد‎ RR ‏بن د يا تا ل ادا ندا ذا اتنا اذا دا كا أن الح ال اجا اليا‎
    WIGGEVSDIALEY 1027 0127111 16 0552 1377 ‏اا‎ 1785327 You WIGGEVSDIALEY IRCWADINAEYNTKLWYDSEAFLYNTLKRATVESSTT ‏بع‎ ‎WIGGEVSDIALEYIKQWADINAEYNIKLWYDSEAFLVNTLEKAIVESSTT Yo.
    WIGGEVSDIALEYIKQWADINAEYNIKIWYDSEAFLVNTLEKKAIVESSTT 19. WIGGEVEDTALEY TKQWADTNARYNIKLWYDSEAFLVNTLEKAIVESSTT Yo LEER ah IE ER ‏الما ان ا اننا‎ Se SE ‏اننا اند الما ايا كيدا انا اد كذ كيدا‎ Roh hE SR OE ‏اتن أ ني انا‎ SS ‏وب انب أن اننا‎
    EALQLLEBETONPOFDNMEFYRERMEF IT YDROKRFINYYKSQINKPTVPT 8 EALOLLEEEIONPOFDNMKEYKKRMEF I YDROKRF TINY YRKSQTINKETVRT ‏ف‎ ‎EALOLLEEEIQNPOFDNMKFYKKRMEF IYDROKRFINYYKSQINKETVET 7 BEALULLEEETONPOFDNMKEY KKRMEF IYDROKRF TINY YKSOQINKPTVET 7 ‏د‎ ‎EALQLLEEEIQNPOFUNMREYKKRMEFIYDROKREINYYKSQINKPTVET Yo Ahk XAT ‏قي‎ RAF RFX ALI AA hr dA hbk Yak ‏اناي ادن الي أن‎ irk hk rdkdbdddhy vk IDDTIKSHLVSEYNRDETVLESYRTNSLREINSNHG I DTRANSLPTEQEL Yo.
    IODTIKSHLVSEYNRDETVLES YRTNSLRRINSNHG IDI RANSLETEQEL Yo.
    TORT TKSHLVSEYNRDETVLES YRTNS LEK INSNHSTDTRANSLETEQEL You IDDIIKSHLVSEYNRDETLLESYRTNS LEK INSNHGIDIRANSLFTEQEL Yeu IDDITKSHLVSEYNRDETLLESYRINSLRR INSNHGIDIRANSLETEQRL ‏؟‎ ‎dk dk wk kk hd Rk ‏انها دا ا لد اد اند ال ندا‎ Rk ‏ادال اند اين كا‎ RR ‏تماد أذ ليا لقا ات ألما ان يا اغا‎ ak ‏انا أذ‎ kek ‏ذا‎
    LNIYSQELLNRGNLAAASDIVRLLALKNFGGVYLDVDMLPGTHADLERTI ٠ 1117789711588 101178 ‏تابحق 739177 اتا‎ 67150111717 1110511151 ‏ا 801175 2ق‎ 11101706177 10170461135 0151611 Ye.
    LNIYSQELLNRGNLAAASDIVRLLALKNFGGVYLDVDMLPGIHSDLFKTI Te.
    LNIYSOBLINRGNLARASDIVRLLALKNFGGVYLDVDMLEGIHSDLFKTT ‏ب‎ ‎Fok ok ok kok kd ‏نا‎ kk ck ‏تدا كي كنا‎ kok ob kk deb kk dk Rok kd ‏كبا ندا ليا ان‎ doled ‏تدا تدا‎ hb ‏ندا لد‎ de ERPSSIGLDRWEMIKLEAIMEYKRY INNYTSENFLKLDOQLREDNFRLITE Yeo.
    SEPSSIGLORWEMIKLEATMEYKKY INNYTSENFDKLDQOLRDNFRLITE Yeo.
    SEPSSIGLDRWEMIKLEATMKYKKY INNYTSENFDRKLDGQLRDNFRLITE Yo.
    PRESSIGLDRWEMIKLEATMKYKKY INNYTSENFDRLDQOLKDNFRLIIE You PRPSSTCLORWEMIKLEATMKYKKY INNYTSENPDELOQOTKDNFKLIIE You ERE REESE ‏اند تنا لمات كن دن تم الم كن أي‎ ER ER RE SEE ER dR ‏تنا تدا تنا‎ dh
    51لا
    -6١؟-‏ شكل ١(ب)‏
    SKSEKSEIFSKLENLNVSDLEIKIAFALGSVINQALTSKOGSYLTNLVIE 8 SKSFKSEIFSKLENLNVEDLETKIAPALGSVINQALTSKQESYLTNLVIE ‏نا‎ ‎SKSERSETFSKLENLNVSDLETKIAFALGSVINQALTSRQGSY LINLVIE ‏ب‎ ‎SKSEKSEIFSKLENLNVSDLEIKIAFALGSVINQALISKOGSYLTNLVIE f+ SKUEKSEIFSKLENLNVIDLEIRIAPALGSVINQALISKOGSYLINLVIE ٠ dR KR de he dd kk AR ER RR Re Ek kk Rk dk Re A sh Be ke Re RS ‏ألا الى‎ ok Re Rk
    OVENRYQOFLNQHLNPATESDNNFTDT TKI FHDSLENSATAENSMFLTRIA to.
    QVENRYOFLNQHLNPATESDNNFTDT TRI FHDSLFNSATAENSMFLTKIA £0 « GVKNRYQFLNOHINPATESDUNFTDT TRI FHDSLFNSATAENSMFLTKIA £0. QVENRYQFLNQHLNPATESDNNFTDT TKI FHDSLENSATAENSMFLTKIA fo.
    QVKNRYQFLNQHLNPATESINNFTDT TKI FHDSLENSATAENSMFLTKIA 48 EAE ‏كد كد كن ند لما انا‎ RR ‏اا كنا نا ادا لما الم أن كنا‎ ER ‏نب اين كن كنا كنا نذا الما نما أن ليا كا انا لد نذا نما لما أت كنا كنا‎
    نه 7ط ع 717 71ر2 3 لقو 271017715577573 ديع ‎DF INLOENT IER TLKASDLIEE‏ لا ‎FYLOVGFMPEARSTISLEGPGAYASAY‏ ‏مم ‎PYLOVGFMPEARSTISLSGPGAYASAYYDFINLGENTIEKTLKASDLIER‏ ‏٠م ‎PY LOVGFNPEARS TI SLEGPGAYASAYYDFINLOQENTIEKTLRKASDLIER‏ مله ‎FYLQVGFMPEARS TT SLSGPGAYASAYY DFINLOENTIEKTLKASDLIEE‏ كنا تا تنا لي انبا ‎ob‏ كا كد ثرا ‎de‏ اتا دن كن كنا انا ‎ke de ok‏ أن اننا قن ‎ak‏ كنا ‎de‏ لما اي نا ‎ob‏ كا كا ‎A ek‏ نا كنا كن كا ‎Ad vk dX kk ek‏
    عه 156833501101707 ‎KFPENNLSOLTEQE INS LWSFDQASAKYQFEKYVRDY‏ نعم ‎KFPENNLSQLTEQE INS LWSFDQAZAKYOFEKYVRDY TGESLSEDNGYDE‏ ‎TGCS LSEDNGVIE oo.‏ لاع لج عرو ‎KFPENNLSQLTEQE TNS LWSFUQASRRY‏ نعم ‎KFPENNLSOLTEQE INS LUWSFDOASAKYDFEKYVRDY TGCS LAEDNGVDE‏ ده ‎KEPENNLSQLTEQR INSLWSFDOASAKYQFEKYVRDY TGESLEEDNGVDE‏ ‎JE‏ عي عل حل جك جا ا عله جا ل ل عل جل ا ا عا علج عل عل جل عل جا جا حل عل عل جل ل عا جا عل جل جل ياك ل ا ع جل ل جا حا اد ما عا با علا
    SKNTALDKNYLLNNKI PSNNVEEAGSENYVHYTTOLOGDDT SYEATCNLE ‏بك‎ ‎NKNTALDKNYLLNNKI PSNNVEEAGSKNYVHY TTQLOGDDISYEATCNLE ‏م‎ ‎NENTALDENY LLNNET PSNNVERAGEKNYVHY TIOLQGDDTSYEATONLE te WKNTALDKVYLLNNKT PSNNVEEAGSENYVHY TTOLOGDDISYEATONLE ‏باك‎ ‎NENTALDKNYLLNNKI PSNNVEEAGSKNYVHY IT TQLOGDDI SYEATCNLE ‏م‎ ‎Seal ok hk RR EA hk RR ‏دي ا لد‎ oR Ak le ‏قد دا‎ Rk Rk WW ‏لا كنا‎ RRR ‏نا يا تنا‎ RR Re We ‏نا كن ليا كنا‎
    SKNFKNSIIIQRNMNESAKSYFLSDDGESILELNKYRIPERLRNKEKVEY 10. SKNPENST I IQRNMNESAKSY FLADDGES TLELNKYRIPERLENKERVEY 10» SKNPKNETITQRNMNESAKSYFLSDDGESTLELNKYRT PERLENKERKVKY 12 « SKNERNSTT TORNMNESAKSYFLSDDGESTLELNKYRT PERLRNKEKVEY 18 SKNPENSIIIQRNMNESAKSYFLSDDGESTLELNEYRI PERLKNKEKVEY 10+ deo oh ve dk dR Sk de de ‏ذا نبي‎ NR SR ob a ‏اذا‎ ol A ‏المت‎ dk ke ‏ايا ذا‎ RRR de ‏كيدا‎ RoR ‏ليا أو اه م ا كا اليد يم‎ hd
    بلا ‎TFIGHGKDEFNTSEFARLSVDSLSNEISSFLOTIKLDISPKNVEVNLLGE‏ ‎TFTCHOKDEFNTSEFARLIVDS LENE TSSFLOTIRLDTS FRNVEVNLLEA Vo»‏ ‎TFIGHGKDEFNTSEFARLSVDSLANEISSFLOTIKLDI APKNVEVNLLGEC Va »‏ ‎TFIGHGKDEFNTSEFARLSVDALSNET SSFLOTIKLDI SPRNVEVNLLGS Yo‏ ‎TFTCHOKDEFNTSEFARLIVDSLSNETSSFLOTIRLDI SERNVEVNLLGS Vos‏ . انا كد كنا كنا كذ ‎SCI‏ كرا ائيا اننا اننا ا ‎TE‏ كي نما ألما ‎dh he STR‏ لا انا الما اما ذا ‎dh i SEAN ARIE Sh‏ أ قدا لام اي اد د د با
    -ه'؟- شكل ١(ج)‏
    بم ‎NMESYDENVEETYPEGELLLSIMDEITETLPDVNKNE ITIGANQYEVEING‏ مع ‎MMESYDRFNVERTY PEKLLLSTMDRITSTLROVNENS TI TICGANQYREVRING‏ ‎NMESYDENVEETYPCGKLLLSIMDKITSTLPDVNENSITIGANGYEVRINE Ye.‏ ‎NMESYDENVEETYPCELLLSIMDEITSTLPDVNKDE ITIGARNQYEVRINS Yo.‏ ‎NMEFSYDENVEETY PCKLLLSIMDRITSTLRDVHRDS ITI GANQYEVRING Yeo‏ جل جل جا ا علا جل عل ع جا 2 اج عا ايا بل عل اذ عل ل جل جا ب بق عل عل عل جل جل يا ع عل عل عل ا جا جل ا جل عل عا ما جل جا عا ‎EE‏ علا لد
    EGREELLAHSGEWINKEEATIMEDLSSKEYIFFRSIDNRELEAKSRNIPGLA Avs BORKELLARSGKWINFEEAIMEDLSSKEY TFFDSTDNR LEAKSKNIPGLA Aes EGREELLAHSGEWINKEEATMSDLSSKEYIFFREIDNKLEARSENIPGLA Ave EGREELLAHSGKWINKEEATIMEDLESKEY IFFRSIDNKLKAKSENIPGLA Ass PEGRKELLAHSGKWINKEEATMEDLSSKEY I FFDS TINK LEAKSKNIPGLA Ava ‏جل جل ل جل عي مي عي عل ل عل ع ع جا عل جا ل علد ع جلت مل علا عا بل عل جل عات جه مل ما عل علد عل ا عاد ا ا ا لاطا‎ RC EE EE EEE
    غم ‎TYYERLEPVKNIT‏ لانائا 5ق 1 الت كاز لما 1 ‎SISEDIKTLLLDASVESPRTEF‏ ‎SISEDIKTLLLDASVESPDTRFIDNNLELHNTIESSIGDYIYYEKLEPVENII Aen‏ ‎STSEDIKTLLLDASVEPDTEFILNNLRLNIESSTGDY IYYEKTLEPVENTIT Ac.‏ ‎SISEDIKTLLLDASVSPOTERFILNNLELNIESSIGDY IYYERLEEVENITL Ac‏ ‎SISEDIRTLLLDASVSPDTEKFILNNLELNIESSIGDYIYYEKLERVKENIL Ac.‏ حل ل ع ‎EEE‏ عل عل عل ع ‎a‏ جل عي ع عل عل عل ا جل ا ع عل سباك علي جل اج عل ع ا جل ‎RE EEE EE EE EE EE‏
    31151 01011105711 ‏تا طق را لانت ارا الات ارتم لتر قات لتر‎ 1 3111157 5357 4. UNSIDDLIDEFNLLENVSDELYELKNLNNLDERYLISFEDISENNSTYSY 4 HNSTDDLIDEFNLLENVSDELYELKKLNNLDEEYLISFEDI SKNNSTYSY Qa HNSIDDLIDEFNLILENVEDELYELKKLNNLDERYLISFEDISKNNSTYIV ‏بي‎ ‎HNSIDDLIDEFNLLENVSDELYELKFLNNLDERYLISFEDISENNITYSY ‏ةق‎ ‎ded dd ‏ل ل ل‎ Rok sl kk ‏ل‎ sk a ak Re ek ek kh ee de ok ok ok BFINKSNGESVYVETEKEIFSRYSEHITREISTIKNSIITDVNGNLLDNT $e.
    RFEFINKSNGREEVYVETEXEIFSEYSEHITKEISTIENSTITDVNGNLLINT 4 ٠ RFEINESNGESVYVETERKEIFSKYSEHITKEISTIENSIITDVNGNLLDONT de.
    RFINKENGESVYVETEREIFSKYSEHITRKEISTIKNSIITDVHGHLLDNI ٠ REINESNGESVYVETEKEIFSEYSEHITREISTIKNS IITDVNGNLLIONT "eo. ok ok kod ‏عاج عاد بل‎ RRO ok ‏عا لد عل‎ kK hk ‏عل بل ع عل عاك‎ Rok kod ‏جا عا ع عل‎ RR Rk hk Rk Ak ‏عاد ع جل‎ x kk
    QLDHTSOQVHTLNAAFFIOSLIDYSSNKDVLNDLSTSVEVOLYAQLESTGL ١٠١١١ QLEHTSOQVNTLNAAFF IQILIDYSSHNEDVLNDLETEVEVOLYAQDLESTGL ١١٠ QLDHTSOVNTLNAAFFIQSLIDYSSNKDVLNDLETSVKVQLYAQLESTEL ١٠١٠١ OLDHTSQVNTLNAAFFIQSLIDYSSNKDVLNDLSTSVEVQLYAQLESTGL ١١١ CLOHTSOVNTLNAAFFIOELIDY SENKDVLNDLETEVEVOLYAQLESTGEL Ye en ‏بلا علا‎ del HR SE Rk RRR ERR ‏بلك جل‎ ER ‏يل ع‎ kk hh ‏عل‎ RR Rh kk kh RR Rk MTIYDSIQLVNLISNAVNDTINVIPTITECIFIVSTILDGINLGAATKEL ١٠١ NTIVDSIQLVNLISNAVNDTINVLPTITEGIPIVSTILDGINLGAATEREL ١٠١ NTEYDESIQLVNLISNAVNDTINVLPTITEGIPIVITILDGINLGAALEKEL ١٠١ NTIYDSIQLVNLISNAVNDTINVLPTITEGIFIVSTILDGINLGAATIRKEL ١٠١ NTITYDEIQLVNLISNAVHNDTINVIPTITESIRIVSTILDGINLGAATEEL ١٠ ‏عله ل بل جل اج جا جد عا عل يل ع اجا جل جا اد بل بلا بلا‎ SE ‏م جلا لا جل جا جل اجا جا ع يلي عل جلي جل اجا جل عا يل عقي عل جل جل ل جا يل عل عل علي جل ا جل‎
    AE ‏(د)‎ ١ ‏شكل‎
    LODEHDRLLEKELEARVGVLAINMSLITAATVASIVGIGAEVTIFLLPIAG ١١٠ ‏قير أباى بت قار ل ناريا 05 نام‎ 1 15 LE TAATVAS IVGIGAEVTIFLLETAG ١١١ LDEHDPLLRKELEARKVEVIATNMALSIAATVASIVGIGAEVTIFLLEIAG ١١١ ‏مها تاليا 1 ل باطقى و17 حم لاالغفق1 قا جك الال 1 قية نأي با لفط رم كاسنا طن لل اناا‎ ١١١ ‏قا قال ل قا باق بت لمارا ار ارا 110 ايا‎ TAATVASIVGIGAEVTIFLLETIAG ١١١ ‏ذم اه اد اا كا نيا الي لف نا أن أن كنا كنا لتم تي اله ألما كنا كا كد انا كرا ثم نيا ان أذ أن أن انا كا الي أن انان اا كي كنا تب يا أي ادا دا كنا أن أي ألا اي د لد ل ا‎
    ISAGIPSLVNNELIDHDEATSVVNYENHLAESKERYGPLRTEDDKILVEID 1١ ISAGIPRLVNNELT LHDEATESVVNYEFNHLSESKEYGPLETEDDRKIIVEID ١١6 ISAGIPSLVNNELILHDKATSVVRNYFNHLIESRKYGPLKTEDDRILVEID ١1١ TSAGIPSLVNNELTIDHDEATSVVNYFNHLSESKEYGPLKTEDDKILVPID 110. ISAGIPSLVNNELILHDEATSVVNYENHLSESEEYGPLETEDDKILVRID ١١5» Woodhead ‏ألما انا‎ Adel ob dh kA ‏نا لبا كن‎ TR Ak Ek Rk de ‏فى كي كنا‎ x J Ae ode de db dk Rk A ok We ‏أي كا‎ Re ‏لذ‎
    DLVISEIDFNNNSIKLGTCONTILAMEGGSGHTIVIGNIDHEFSSPIISIHIE ١٠١١ DLVISEIDFNNNSIKLGTONT LAMEGESGHTVTGN I DHFFSSEPSISEHIR 1١٠ DLVISEIDENNNIIRLGTCNILAMEGGEGHTVTGNIDHEFSSPSISSHIP ١٠5١ CLVISEIDFNNNSIRLETONTLAMECSGSGHTVTONIDHFFESPYISEHIP ١١ ١ DLVISEIDFNNNSIKLGTONILAMEGGSGHTVIGNIDHFFSSPYISSHIE 1١ ‏مل بلا ع جا جا م ع ب عل عي جل عا ب صا ل عل جلي علد جو ل يات ع علي عل جل جل م جل عي جل ع جلا عي ع عل عي ا عل عو مار مله د عا عاو عا لو عل لادان‎
    SLETYSATIGIETENLDE ‏نرج‎ IMMLENAPSRVPRWETGAVPGLRSLENDGT ١١١ SLEIYSAIGIETENLDFPSKEIMMLENAPSRVFAWETGAVEGLRSLENDGT 17 ‏د‎ ‎SLEIVSAIGIETENLDFSEKKIMMLPNAPSRVFWWETCGAVPCGLRILENDGT ١٠ SLEVYESAIGIKTENLDFSEKIMMLPNAPSRVERNWETCGAVRPGLRSLENNGT ١ ٠ SLEVYSATGIKTENLDFSKE 1 ‏خرى نت الا لبح ى ط قل عطي فا‎ 7 2613 51,5177 ١١د‎ ‏لا‎ M ook ok kok : RE TE IEE I RI aR ‏لأ‎ RL ‏او اا اا ليا‎ I ‏اي اق‎ SESE ‏بل علا + روا أن لاير اا ايد اد‎
    RLLDSIRDLYPGKEYWREYAFFRDYAITTIXKPYVYRDTNIKIELDKDTRNET ١١ ‏ل 0 ا ا ل ا ل‎ Vy ‏ل 0 ل ل‎ YY.» KLLDSTRDLYPGKFYWREEYAFFROYAITTLRPVY RED ‏اجر‎ IELDKDTRNFT Ve.
    KLLDSIRDLYPGRFYWREYAFFDYATITTLERVYEDTNTHIELDEDTENET YY ‏ب‎ ‎: EEE IO TR 2 ‏لد‎ SE IRR GEE I ARI ‏ناتف تم اله لت كنا كنا قن تن يب اتن أي أن أ‎ EE ‏كد د ف كنا تم لي كن أن كنا‎ SA
    MPTITTNEIRNKLSYSFDGAGGTYSLLLSZYPISTNINLSKDDLWIFNID ١١ MPTITTNEIRNELIYSFDGAGETYSLLLISYPISTNINLSKDDLWIFNID ١٠٠ METITINEIRNKLASYSFRGAGGTY SLLLSSYPISTNINLSKDDLWIFNID ‏د‎ ‎METITTDEIRNKLSY SFDGAGGTY SLLLSSYFISMNINLSKDDLWIFNID Ye, MPTITTDEIRNELSYSFDGAGETYSLLLSSYPTSMNINLSEDDLWIFNID ١١“ ‏لل الكل لاد رط ل لا الال لاك ا اا لل ند اد الالال . ب« اا‎
    NEVREISTENGTIRKGKLIKDVLSKIDINERNRKLIIGNOTIDFSGDIINKD YE ٠ NEVREISIENGTIKRGRLIKDVLERIDINENRLIIGNQTIDESGDIDNED ١١ NEVEEISIENGTIKRGELIKDVLSEIDINKNKLTIIGNGTIDESGDIDRED ١٠ HEVREISIENGTIRKGNLIEDVLSKIDINENKLIIGNQTIDFESGDIDNKD ١٠٠ NEVREISTIENGTIKKGNLIEDVLAKIDINKNELIIGNQTIDESGLIDNED ١و١‎ kok kook Wk kk kk ‏ندا‎ AR ‏ين أن كن‎ > ede 2 dk ok kok de dr dh ok RA ‏كد‎ de ‏اك كا‎ he Rk de Red ‏دا انا‎ Rk Ade ‏أي‎
    51لا
    "١ 1/-
    6 (١ ‏شكل‎ ‎RYIFLTCELDDEISLIIEINLVAKSYSLLLSGDENYLISNLSNIIERINT ١٠ ‏اط‎ TRLTCELDDKISLITRINLVARSY SLLLSCDERNY LI 51711/51111311 Yio RYIFLTCELDDRISLIIEINIVAKSYSLLLSGDENYLISNLSNTIEKRKINT ١ ‏مع‎ ‎RYIFLTCELDDEISLIIEINLVAKSYSLLLIGDENYLISNLENTIERINT ١: ‏لط‎ TPLTCELDDKISLITRINIVARSY SLULSCGDENY ‏لجرالا ريا‎ 131617 Yio. ‏ال عا عا اد ياد عاد ااا‎ a ‏بل ا ا جل اج عل عل جا جات ل ا جل عل يل حر مل ا اما‎ ROR ‏ع عل‎ ER ‏مل ل جل عات بل ا عل علا عل عل ع ع عل ا‎ LGLDSENITAYNYTDESNNEYPGAISKTSORSTITHYRKEDSGKNILEFYNDST Yoox LOLDSKNIAYNY TDESNNKY PGA SETSOKAT THYRKKDSKNILEFYNDET You.
    LELDSKNIAYNYTDESHNHNKYFCAISKTIOKRKSTIIHYKKDSENILEFYNDST You.
    LEGLDSENTAYNYTDESNNRYFGAISKTSQRSITHYKEDSKNILEFYNGIT You.
    LGLDSENIAYNYTDESNNKYRPCGALSETSORSTIHYKKDSKNILEFYNGST Yau ‏عا اد بلعلا‎ EE ‏لا عل جل ما عل عل بل لا عه بأ جا م يا ما‎ LEFNSEDFTABRDINVEMEDDINTITGEYYVDNNTDES IDES ISLVESENQGY ١ 5 ٠ LEFNSKDFIARDINVEMEDDINTITOEYYVDNNTDESIDESISLVAKNQY Yeo.
    LEFNSKDFTAEDINVEMEDDINTITGRYYVDNNTDKIIDFSISLVEKNQY ‏با‎ ‎LEFNSEDFTAEDINVIMEDDINTITGRYYVENNTDESIDES ISLVESENQY ١ ‏م‎ ‎LEFNSKDFIARDINVEMEDDINTITGEYYVIDNNTDESIDESISLVIKNQY Yeo.
    RET SO ge SE GR J ‏ا ا‎ i ‏ا ااي‎ Se i ‏الا‎ i J SRV i i SE Si SR RS ‏ا‎ ol ‏أ‎ I ‏ا‎ a i i ‏د‎ ‎KVNGLYLNESVYSSY LOFVENSDGHHNT SNFMNLFLDNISERWKLEFGFENT Y1 ٠ KVNGLYLNESVYSIYLDFVENSDGHHNT SNFMNLEFLDNISFRELFGEFENT YM + FVNGLYLNESVYSEYLDEVKHEDGHANTSNFMNLFLDN IS FWELEFGFENT Yr KVNGLYLNESVYSSYLOFVENSDGHHNT SNFMNLFLNNISEFRELEGEFENT Ya KVNGLYLNESVYSSYLDEVENSDGHHNTSNFMNLFLNNISFWRKLFGEFENT Y1 + Wed dk ak kek deal wb dh ‏كد الام ادا‎ ko ‏انا‎ Ye Se oe ok Rd he bh al eb ‏كن‎ Rk kev ie : kkk kk ‏ل د‎ ok kek kk NEVIDKYFTLVGKTNLGYVEFICDNNRNIDIYIFGEWKTSSSESTIFSGNG 1٠ NFVIDEYFTLVGETNLGYVEFTCODNNRNIDIYFGERKTSSSKESTIFSGHG Yo.
    NEVIDRYFTIVGKTINLGYVEFICDNNENIDIYFCEWKTSAZKSTIFSGNG ١٠١ NEVIDEYFTLVGKTNLGYVEFICDHNNRNIDIYFGERKTSSSESTIFSGNG Ye.
    NFVIDEYRTLVGRINLGYVEFICHHNENIDIYFCERKTSSSKETIFSENG Yo.
    BIRR Sb bh Ci GR SEP ‏اد‎ SR SE gE JEG ‏قر قر د‎ a Si i JET JERE SS CRE a ‏ا‎ JE ‏ا قر‎ Re th ‏در ادي اد‎ SC a RNVVVEPIYNPDTGEDISTSLDFSYEPLYGIDRYINKVLIAPDLYTSLIN ١7١ RNVVVERPIYNPDTGEDISTSLUOPSYEPLYGI DRY INKVLIAFDLYTSLIN ‏ماخ‎ ‎RNVVVEERIYNPDTGEDISTSLDESYERPLYGIDRY INKVLIAPDLYTSLIN ١١٠١ BNVVVEPIYNPDTGEDISTSLDFSYREPLYGIDRYINKVLIAPDLYTSLIN YY.» RENVVVEPIYNPDTGEDISTSLDESYEFLYGIDRY INRVLIAPDLYTSLIN 1 ‏لأ د ل ا‎ J I i NEI OI a i i El J ‏د اند‎ SRA INR i i i ir A Rl i i SECO Sd I ‏وا اا‎ INTHNYYSNEYYPEIIVINPNTPHRKEVNINLDSSSFEYRWSTEGSDEILVR Yo, IHNTNYYSNEYYPEIIVLNPNTFHEEVNINLDSSSFEYRWSTEGSDFILVE 7 ‏ب‎ ‏يلابا 17507 71175 جا 55 3ت 1 الات تراط 277 ار 1 1 فا لخو وار لاإ‎ 101 ‏تار 1ط برقا ارات الاجر اد راز ك5 ج تاملا ربت 117111 171 1 قاط الا لاطالاة ا الالا‎ ١ ‏د‎ ‎INTNYYSNEYYPEIIVLNPNTFHEEVHNINLDSSSFEYRWSTEGSDFILVE ١7 ‏مه‎ ‎1 ‏ل ل ل ل‎ SS ‏كن رد ا ا اد‎ SE ‏قي ا د‎ SI ‏و ا د كن اد دن أ ان ليه قب ايه د د ا ا ا الي ا كي لان لاد تر تر ل ل ا‎
    ذلا
    -/؟؟- شكل ١(و)‏
    بح ‎IMSNFKSE‏ لضت 01111 1 كلا ال بطو لقا نو 12 ل كوا ا الات بقارا برا ‎YLEESNKKILOKIRIKGILSNTOSFNRKMSIDFKDIKKLSLGY IMSNFESE‏ ‎YLEESNREILORIRIKGILSNTOSFNEMSIDFREDIRKLSLGY IMSNFKER YA‏ ‎YLEESNEKILOKIRIKGILANTOSIFNKMSIDFKDIRKKLSLGY IMANFKSE YA‏ ‎YLEESNKEKILQFIRIKGILSNTOSPNKMSIDRFKDIRKKLSLOY 11453171532 YA ee‏
    ‎EE‏ لل لا يلاح ل لالع دز يل لد يد يد ‎a‏ ليم يدا ++ يلال يد ‎NSENELDRDHLGFKIIDNETYYYDEDSKLVKGLININNSLEYFDPIERNL YAS,‏ ‎MOENELDRDELGEEIIDNETYYYDEDSKLVAGLININNSLFYROPIEENL YAS.‏ مق ‎NSENELDRDHLGFRKIIDNEKTYYYDEDSKLVEGLININNSLEYFDPIEFNL ١‏ ‎YAS,‏ 15511 فت لط 211111115 تلض ارم جز راتت ل[ 1 وار رط ا 115511 ‎NSENELDRDHLGEFRIIDNETYYYDEDSKELVKGLININNSLEYRDPTIESNL YAS,‏
    ‎EE Rl i ‏لاد د د لان ا در قر اله ااي اد اد لا ل‎ TI SIE Er i SRR ES SI SR St CE CE SE I i SR SR i ‏را‎ xX VITGHOTINGREYYFDINTSAALISY RI INGKEHFYFNNDEVMOLGVEKGED Yas» VICGWOTINGKEYYFDINTGAALISYRKIINGHHARYFNNDOVMOLOGVERGRD ‏برق‎ ‎VIGROTINGEEYYFDINTGAALTSYR I INGRHFYFNNDGYVMOLGVEEGPD ٠ VEIGHOTINGRRKYYFRINTGAASTSYRIINGEKHEYENNNGVMOLGVFRGED Yq, VIGHSTINGEKYYFDINTGRASTSYKIINGEHEYFNNNGVMOLGVEFKGPD Y8
    ‎Sl SE‏ ا ل ا : ا اديه و ل ل ‎SE‏ ل ل ‎SEV‏ ل ا حل حو كاي عا جارد جار جل علو ‎EERE SE‏ جا عار باو الو الاو الو لو ا مغة ح ‎GFEYFAPANTONNNIEGOAIVYOSEFPLTLNGERYYFPONDEKAVTORRIIN‏ ‎GFEYFARPANTONNNIEGQAIVYUSKEFLTLNGEEKYYFDNDSKAVTGWRIIN Yao.‏ ‎GEFEYFAPANTONNNIEGOAIVYOSKFLTLNGKKYYFDNNSRKAVTGWREIIN Yao.‏ ‎GRFEYFARPANTONNMNIEGQAIVYQSEFLTLHGREYYFPINDSKAVTGWRIIN Yaa‏ ‎GFEYFAPANTONMNIEGQAIVYUSKFLTLNGRKYYFDNDSKAVTGWRIIN Yao.‏
    ‎whose oh ob oo kkk AAR Rok dk RA eh edb hk le Rh RA Re hk x hk Re Ye ‏وي‎ ‘ Rr i ‏و لخ ا ال ل ا‎ NEKYYFNPNNATAAVGLOVIDNNEY ‏نا .الوط لط قو و8116 1 مام ع بط لا‎ NEEYYFNPNNATAAVGLOVIDNNKYYFNPDTAIISKGWOTVNGIRYYEDT ١١ NEEYYRFNPNNATAAVESLOVIDNNKYYENPDTATISKGWOTVNGSRYYEDT Yeo NEKYYFNPNNATAAVGLOVIDNNEYYFNEDTATISKGHOTVNGSREYYFDT Yous NEEYYIFNPNNATAAVGLOVIDNNEKYYEFNPDTAITSKGHOTVNGERYYEDT Ys»
    ‎ES JIE JEU gi SS TR CR IE ‏ا د ا ا‎ LE Si RE, Ti i. di SS ES ‏لا ا كد‎ Te RP SE ‏در ار ل‎ SRT Sle Se CATE ‏ا دن اق‎ ES DTATAFNGYRTIDGEHEEYFLSDOVVKIGVRESTSNGEFEYPAPANTYNENNIE 05. DTATAFNGYKTIDGKHRY FDS DOVVEIGVESTSNGTEYFARPANTYNNNIE Ys oo DT ATARNGYRKTIDGKHEY FDSDOVVKIGVESTSNGFEYFAPANTYNNRENIE Yeo.
    DTA ARNGYETIDGEEEY FLESDOVVEIGVFAGENGFEYPAPANTYNRNNIE Yeo DTATAFNGYRETIDGHHEY FDS DCVVRIGVESGSNGFEYFAPANTYNNNIE Yoo
    ‎FREI I RU ‏ا‎ ie Si ‏ا ا ادر ل‎ A ‏ا‎ fh A i SU IE ‏ان ا‎ Le MSI ‏الما ل ا كن ولا‎ Sl SE ‏و دن اه د ام ال اا ان كنا د ا‎ GOAIVYOSKFLTLNGKEYYFDNNSKAVTGHOQTIDSREYYFNTNTAERAATG YY «« GOAIVY(OSKFLTLNGERYYFDNNSEAVTGHOTIDSEKYYFNTNTAEAATE 51١ GOATVYOSKFLTLNGKKYYFDNNSKAVTGLOTIDASKKYYFNTNTARRAATE ١١ GUAIVYOSKFLTINGREYYFLNNSEKAVTGHOTIDSEKYYEFNTNTAEAATE ١ GOAIVYOSKFLTILNGERYYFDNNSKAVTSHOTIDORKYYFNTNTAEAATE Ysa
    ‎a i EE SS i i‏ دي ‎ER SE i I I SE‏ ل ‎RC EE SO SL i i SO SS‏ ل
    ‏اال
    شكل ١(ز)‏
    WOT IDGKKY YFNTNTARAATGWOTIDGREY YFNTNTATASTGY TT 7372973 ‏نأ‎ ‎HOT IDGKKY YFNTNTAEAATGHQTIDGKKYYENTNTAIASTCYTIINGKH ‏ا‎ ‎WOTIDORRYYFNTNTAERATGHOT I DERRY YFNTNTATASTCYTIINGKH Yio.
    WOT IDGKKYYFNTNTARARATGHOT I DGHREYYPNTNTS TASTY TT THGRY Yye.
    HOT TDGKRYYFNTNTABEAATGHOT I DGKKYYFNTNTEIASTGYTIINGHY Y 12.
    dood ol do ko dk dk ok de ‏كد كنا‎ hve Se kde Rk vk ‏كد‎ We ‏كن كنا ا ل تدا اين د أن دا أي‎ A : al ah SEE ‏و أ‎ : FYFNTDGIMQIGVFKGPNGFEYFAEANTDANNTIEGOATILYQNEFLTLNGE YY.» FYFNTDG IMD IGVEKGPNGFEYFAPANTDANNIEGOATLYONEFLTLNGK YY» EYFNTRGIMOTGVFRKGPNGFEYFAPANTDANNIEGOAT LYONEFLTLNGK YY ٠٠ FYFNTDGIMQIGVERKVPNGFEY FAPANTHNNNTEGOATLYONKFLTLNGE 7 PYFNTDGIMOIGVEKVPNGEFEY PAPANTHNNN IEGUAT LYQONKFLTLNGE ‏؟‎
    AA AH AR RR RR ‏انا‎ dl ‏كما ندا‎ RW ‏اند الا‎ Rk ‏كن كدا‎ dk Be ‏ب‎ . RAE hE ‏اننا كد كد ندا ادا‎ We ‏ا يا ل د ا ا‎ 101175051277311 INNKKYYFNPNNATAATHLOTINNDKYYFSYDGT YYo.
    KYYFGSDSKAVIGHRI INNKKY YFHNPNNATAATHLOTINNDRYYESYDGL YYe.
    KYYFGSDSKAVTGWRT TNNKKYYFNPNNATAATHLCTINNDRYYFSYDRGT YY eo.
    EY YFGSDSKATTGWOT I DGKKY YFNPNNATAATHLOT INNDKYYFSYDGT YY». KYYFGSDSKAITOGWOTI DOREY Y FNPNNATAATHLCTINNDRYYFSYDGT YYo.
    LEER EE SR RE ‏طلا .د ا‎ EE ‏لاد ياد ا ملو عل ا اا‎ SEE EE EE ‏مل جا جما‎ LONGYITIERNNFYFDANNESKMVIGVERGPNGFEY ‏نا 701111111560 1م72‎ LONGY IT TERNNFYFDANNESKMYTGVFKGPNGFEYFAPANTHNNNTEGD ‏ب‎ ‎LONGY TT TERNNFYFDANNESKMVTGVEKGPNGFEY FAFANTHNNNIEGQ YY.» LONGY IT TERNNEYPDANNESKMVTGVERGENGEEY FAPANTHNNNIEGG Y¥o LONGY ITIERNNFYFDANNESKMVTGYFRGPNGFEYFAPANTHNNNTIRGD ‏بن‎
    Ea I Ae Sh ‏لا‎ SS SE ‏نا كينا الأ‎ LE EIR oh SE SR ‏لاد‎ IE i ‏ول اي ادي اي اح لقا الي‎ RE Sh ‏رد نا نا‎ ATVYQNKFLTLNGEKYYFDNDSKAVTGWOT I DOREY Y FNLNTAREARTORQ Ye.
    ATVYQNRFLTLNGKKYYFONDSKAVTGHOTIDGKKY YFNLNTAEARTGHG ٠ ATVYQNKFLTLNGKKYYFDNDSKAVTGHOT LI DGKKY YFNLNTAEARTGHD ‏م‎ ‎ATVYQONKFLTLNGEKYY FDNDSKAVTGWOT TDAKEY Y FNLNTAVAVTORQ Yves AIVYONKFLTLNGEKYYFDNDSKAVTGWOTIDSKKYY FNLNTAVAVIGHQ 8
    Fok kok Ak ok ‏ألما لد ان كنا‎ kk ok dd ‏أن اننا‎ kA kodak Rokk ok dk kkk ‏كد لا نا نذا‎ ok Ko hod ok TIDGKKYYFNLNTAEAATCWOTIDGKKYYFNTNTFIASTGY TS INGKHFY Yé«. TIDGHEYYFNLNTAERATGWOTIDGKKY YENTNTFIASTGY TS INGKHFY Yé» « TIDGKKYYFNLNTAEAATGHOTIDGKKY YENTNTF TASTGY TS INGKHEY Yio TIDGEKY YENLNTAEAATGWOT IDGKRY YENTNTY TASTGY TT INGRHEY Yi.
    TIDGEKYYFNLNTAEAATGWOT IDGRRY YFNTNTY TASTCY TT INGKHEY Y§..
    KoA ‏با‎ Fk kok she ‏لذا ندا تدا نا نما ما‎ oh Sk ‏ذا ها كذا ندا نذا اننا‎ «be ‏أن لذا نذا‎ he ‏اتنا كد أن اننا يا‎ ok ‏ا الا‎ kk hed ENTDGIMOIGVFKGPNGFEY FAPANTHNNNIEGUATLYONKFLTLNGRKY Yio.
    FNTDGIMOIGVEKGPNGFEYFAPANTHNNNIEGOATLYONRFLTLNGERY Yio, FUTDGIMOIGVFRGPNGFEYFAFANTDANNIEGQATLYONKFLTLNGKKY Yio.
    FNTDGIMQIGVFKGPDGFEY FAPANTHNNNIEGOATLYQNKFLTLNGREY ‏بق ؟‎ FNTDGIMOTGVFKGPIGFEY FAPANTHNNNTEGOATLYONKFLTLNGKKY Yio.
    و م ‎Re ah i SE‏ دير ان ‎Rd i SE a SR CE‏ . وو أن كن ان ‎ok he‏ ا ا : ‎a‏ عارك أجلي اجا ع جل ا مان ايه جا ‎EEE‏
    EVO
    ولا ‎YEGSDSKAVTGLRTIDGKEYYFNTNTAVAVTGWOTINGEKEYYFNTNTSIA Yoo.‏ ‎YEGESDSKAVTGLRTIDGKKY YENTNTAVAVTGWQT INGKKYYENTNTSTIA 5‏ ‎YFGEDSKAVTGLRTIDGKKY YENTNTAVAVTGHQT INGKKYYFNTNTSIA Yous‏ ‎YRPGSDSKAVIGLRTIDGEEYYFNTNTAVAVI GWOT INGRKEYYEFNTNTYTA You.‏ ‎YEGSDSKAVTGLRTIDGKKYYFNTNTAVAVTCHOT INGKKYYENTNTY IA Yo...‏ ‎do‏ كن كد كن كن كد ‎de ob‏ انا ‎kk ok‏ كنا نذا ‎RR‏ أرما ‎A RR oR A Re‏ يد ‎ak‏ لان ‎eR‏ كنا كنا ‎RR Te dhe dh Rk RR‏ انا دا دا ‎eke‏ ‎STGYTIISGRHFYENTDGIMOIGVEKGPDGFEYFAPANTDANNIEGQATR Yoo.‏ ‎STGYTIISGRHEYENTDGIMOIGVERGEDGFEYFAPANTDANNIEGQATIR Yoo.‏ ‎STOYTIISGHEHEYENTDGIMOIGVERGPDGVEYTAPANTDANNIEGQATIR Yoo.‏ ‎STEYTIISGKHFYFNTDGIMOIGVEKGPRGEFEYFAPANTDANNIEGDATIR Yeo,‏ ‎STEYTIISGRHFYENTDGIMQIGVFKGPRGFEYFAPANTDANNIEGQAIR Yeo.‏ ون كن لف اتنا ‎ddd‏ كا لان كذ ليا نا تيا ‎dd‏ نا ند كنا ند نا ‎FEI AAI AAA EER EI FARA‏ دا كا اد ‎AA‏ لها ند اق د لا ‎YONRFLYLHDNIYYFGNNSKAATEWVTIDGNRYY FEPNTAMGANGYRTID 5‏ ‎YONRELYLHDNIYYFGNNSEAATGWVT IDGNRYYFEPNTAMGANGYRTID Yi»‏ ‎YONREFLYLHDNIYYPCGNNIKAATGRVT IDGNRYYFEFNTAMGANGYKTID 8‏ مم75 ‎YONRFLYLHDNIYYFGNDSKAATGHATIDGNRYYFEPNTAMGANGYRTID‏ ‎YONRELYLHDNIYYFGNDSKEAATGWATIDGNRYYFEPNTAMGANGYKTID 5 ٠‏ م عر يار اك عل ب عل عل عل ع ‎sk ok kk‏ لذ عل ‎dk ok dk‏ ل يل ما مل ع و عل عل عل ع مل م عا عا غلك ‎ok ok‏ عل عا علد ‎Rok‏ مات عا ‎ok she sk‏ لو علا مق ‎NENEYFRNGLPQIGVFEKGSNGFEYFAPANTDANNIEGQAIRYQNRFLHELL‏ ‎NKNEYFRNGLPOIGVFREGSNGFEYFAPANTDANNIEGQAIRYQNREFLHLL, 5‏ ‎NENEYFRNGLPOIGVFKGENGFEYFAPANTDANNIEGOATIRYONREFLHLL Yio.‏ ‎NENFYFRNGLPQIGVFKGPNGFEYFAPANTDANNIDGQATRYQONRFLHLL Yio.‏ ‎NENFYFRNGLPQIGVFKGPNGFEYFAPANTDANNIDGQAIRYONRFLHLL Yio.‏ ‎RE EE EE EE‏ ‎GHIYYPFPGRNSEAVIGWOTINGEVYYFMPDTAMARAGCGLFEIDGVIYEFFGY YV ٠‏ ‎GKIYYFPGNNSKAVTGWQOTINGKVYYFMPDTAMAARGGLFEIDGVIYEEGY YY»‏ ‎GRIYYFGNNEKAVTGWOTINGEVYYEFMPDTAMAAAGGLFEIDGVIVEEGY ١٠١‏ ‎GERIYYPGENSKAVIGWROTINSEVYYFMPDTAMARAGGLFEIDGVIYERPGY 97‏ ‎GEIYYFGNNSEAVTGWOTINSEVYYFMPDTAMARAGGLIEIDGVIYEFGY 7‏ ‎a)‏ ثيه كا كا كه كد أن أن تنا قن ريا ا نا كا كان لد ام ا ام ‎A‏ ل ل ا ‎eh kek Lx‏ كا كا كن ‎Food de de dr ede kk A‏ ‎ARAN DEVKAPGIYG‏ (تعريف الترتيب رقم: ‎(AT eh‏ ‎DGVEARGIYG‏ بأ (تعريف الترتيب رقم: 1{ ‎YVY.
    DGVEAFGIYG‏ (تعريف الترثيب ‎(VPIL10463 V8 1a;‏ ‎TVY.
    DEVEAPGLYG‏ (تعريف الترتيب رقم: 2 81 ‎ARAN DGVEAPGIYG‏ (تعريف الترتيب ‎(CD126 OY tad;‏ ما اجاج ‎Fok ok de ok dk‏
    —YVy- ‏شكل ؟()‎
    13701 ‏لالع رد قير 1ق رما لجاع با ور تووم ب هراز حو امسو لد للف‎ ٠ 527191011727 ‏الام لاط تو‎ LDALEEY ‏لعي سواط به‎ LRLKDINSLYDIYT ‏دح‎ ‎113317171 ‏لامكو عع ب مس‎ VAT LDALEE YHNMSENTVVERY 114 ‏اوضرع بص‎ 2 ٠ ‏قا لجعو عو ير موقيام توت تتا‎ LOALEEY ‏د للدم تت فوا ات ا لع 17ر5 بوجو‎ 145171501770027 10215571377757 LKLXDINSLIDIVI ‏ب‎ ‏ا‎ dk EER RR ‏ال أن دين ادا ان ان‎ Rk . FREE AAT ‏دن‎ FAVA XA AAI AAAI R FAIR A RD AIRS FRR HS, AX DIYKRSERNRALKREKEY LVTEVLELENKNL TPVESNLHF VI TGGOI ‏لبقم‎ INQRRD ‏د‎ » LT KKAGRIEALKKPERY LVI ‏را باق‎ LINN LT RYE NLA PVA I GEO INDTAINCINGWHD VY DEYKRSGHNEALKKFEEY LYTEVLELENNNLT PVERN LHF VWI CGO ‏تسوت‎ 8 DRE SGRIKALKE FREY LVTEVLELENNNLTPVERNLEF VE ISCO INDTAINCINQWED VY» DTYKKSGRNKALKKIKEY LVTEVLE LKNHNLT PVEXNLEF VIGGO INDTAINY INQWRKD ٠ ER EEE ‏ان انين اند لم لد ل ل ال‎ EE RR RIE ‏الج اي دن نا اند الم ل وين‎ EE ER ‏ب ألا اتاد ااه أغ قي ليا اود انه اقم ايد اليا ليد اليد أي‎ SRS SE
    27112071717777 515 111117732710713 FRENLEDPEFDYNEFFRERMET IY YA 005071777051127 L INT LEK TY VESAINDTLES PRENLNDPREDYNKFFRERMEIIY YA.
    VRS DY RVNY FY DENA L INT LER TVVESATNDT LES FRENLEDFRYDYNKFFRERMELIY YA» NERY NVRVEY DSNAFLINTLEKD IVESATNITLESTRENINDPRFDYNKEYREBMEL TY YA VHS DY RVNVEY DENAFLINTLRKT IVESATNDTLESFRENLNDPREDY NEF YEKRMETIY YA ‏دج‎ a ‏ذال ذا ا ال لاه الال ل ام‎ ob J SER ‏مدا‎ : dk ok RIE IE SEF 3 ‏ل‎ A SE ‏لاا‎ SE ‏لال‎ AE N ERE Ea ‏ود يه‎ DROKNFINY YRAQREENPELI IDDIVETY LANEY SER IDELNTY IERSLYKI TONSGNDY 5 ‏لسوت‎ INYYRAQREENPELT IDDIVKIY LOONEY SKE IDENT Y TERS LE ITONSGRDY YE.
    DEQKNFINY YRAQREENPELT IDDIVETYLANEYSKEIDELNTY IEESINRITONSENDY Yi » DKQKNF INYYKTOREENPDLI IDDIVEIYLSNEY SKI DELNSY TEES LINK VTENSGRIV ؟‎ DR GKNEINY YH TOREENPDLI IDDIVK IY LEREY SKDIDELNSY IES LNKVTENSGNDY ‏د ؟‎ ‏ااا وا‎ kd oxy FEE EE EOE ER FAIR RHR L FARE ‏ل و تناد ادا اناي أبن يد ال‎ REFER ‏تع لط ع م هاو لاطو الا بتاع عه 1ت‎ SALKE 7 ‏ا لقعم ضعي عه ينونه لماعي‎ ‏تدده قفتم 17و72 15ر2‎ SALKE I ‏قرع روطي وم ريو را للست‎ To RNFEEFKNCESFNLYEQELVERWRLARMASD ILRI ‏لاس‎ TGOMYLAVAMLPG IGPDLFES Fo ENFEEFROCESFRLYEQELVERWNLAAAS DI LEI SALKEVCGGVYLUVIMLPGIOPDLEES Too RNFEEFKGCESFRLYEQELVERNNLAAASDILRISALKEVGOVYLOVIMLPGTGPDLFES es EEE EEE ‏حت‎ EEE EES ERY EES EE ERE EE ‏ل‎ ‎IEKFSSVDY DFNEMTHL EAT MEY KEY IPEDS RHF DMLDEEVOSSFESVLASKEDKSETF Ys TERPS SVIVDFWEMTE LEA IMKYKEYI FEY TSEHFDMLDEEVCOSSFESVLASKSDESRIF ‏مت‎ ‎RKP SSVTVDFHEMTKLEAIMEY KEY I PRY TSEHF DMLDEEVRS SFRSVLASKSDKSEIF ‏نك‎ ‎TERRA SSVIVIFWEMYE LEA TMKYKEY I FGY TSEHFDMLDEEVGSSFRIVIASKSIESRIF ‏متا‎ ‎IEKPSSVIYDFNEMVKL EAT MEY REY I POY PSEHFDMLOBEVOSSFESVLASKEDKSETY Ys Fok chk dk EGE ‏د ادا ادا ما ند‎ ١ ‏اننا اند اندا ايا‎ dak kkk dk ‏ل ل ل ا ل ا بن د‎ FRAT ‏قر ادي ددا اند ما د يد نا ام ا ري ل ا ا ل‎ AEX ‏من‎
    دك ‎INQCLISVEDSYCANLIVEDIENRYKILNNSINPAISE‏ 713133 583351321157172 د ‎SSLEDMEASFLEVKIAFNSKGT 211061751702703 171707177 LNNSINEAISE‏ 4 عق حمقع ست عبد ‎SSLGDMEASPLEVRIAPNSKETINDGLISVEDSYOANLIVEQTENRYH I‏ م ضع معي ‎INQGLTAVRDAYCONLIVKQIENRYR I LNNS‏ ته 7721327 ات ع لتقت ‎£Y‏ ل د د ‎dk‏ رت ديا ‎ede‏ اي يا تاد يا أي قي ددا اند اد ف ‎dem‏ ل اد ‎dk Rodd kd Rk dle Rak ob‏ أن ان أ اي انم ‎Rok dk dk‏ ل ا ل ل ‎ok‏ ل ‎Fog hike‏
    011707217117273 IMARANAINGRIMMELGRYLRVG FT EDVKTTINLIGPEAYARAYGD £4» DNDENTTTRTE I DS IMARANADNGHE ‏انما‎ LOY LRVEFFPDVR TT INLSGERAVARAYOD fA.
    DRDENTCTNT FIDE TMADANATNGRFMMEL GRY LRVEFPRDVKTT INLSGREAYARAYGD £4»
    Evo
    —YvVY- ‏شكل *(ب)‎ DRCENTTTMAF IDS TMARANADNGRE FF MMELGEYIRVEFFPIVETTINLISPEAYARAYQD A ONDFNITTHAF IDS IMARARADMGREMMELGHY LRVSEPPIVETTINLSGPRAYAAAYDD ‏بذع‎ ‎ESA ‏أي د ا‎ a ‏عن‎ 2 XXX EH AF IFFT FAIL ‏كين‎ ET AIL TE AIIA TRAIT EF ‏دير د اد‎ FT FAITE XE FH ‎LLMFERGSME IHL IEADLRNFE I SRTNI 30S TEQEMAS LHS FODAFARAGFEEYKENY FE 04‏ ‎LIMFHEGAMNINLIEADLERNFEISKTNISQATEQEMASLWSFLDARAKAQFEEYRRNYFE © ¢ +‏ 248 جرع متا مجو رمعم مج دق لسعو اموه ‎LDMPKEGEMN IHL IEADLRNFEISKTNI‏ م5 ‎LIMPEEGIMNTHLIBADLRNPEISRTINISUETEQEMASIWIAFDDARARLQFERYKENYFR‏ ‏5 4 سانانا ادام ممم 112 قل 5117177305707 ‎LEN FEI‏ 2ر77 2321177 1 ال م لاك ‎OE‏ بن ‎wad‏ ليا ليا ايد ‎FL TR Fwd‏ لني أي انا اليد ‎AL‏ انيد أ أرما اند ايد اجر ألما ‎IF AAAI‏ ادي أ اند ا اق ايا ادي نيا اد ادي انيد أدج ألا ‎IAAL‏ أي اا اتنا ال ا ‎GALGEDDNLDFSQMNIVVDEEYLLEKISSLARSSERGYIHY IVOLOGDEISYEAACKLFAR ‏بدك‎ ‎GELGEDONLDPSONIVYDREYLLER I SE LARSEERGYIHY IVQLOGDEISYERACNLEAY Te GILORDDNLDFSON IVY KEY LLER ISA LARSSERGY 11171717003017 SYEARONLEAR 5 GOLGEDDNLDFSONTVVDHEEYLLEK ISS LARBSERGY IHYIVQLOGDKISYESACNLEAR Tir GSLGELDNLDESORTYVY REY LLEKI SE LARS SERSY THY IVQLOGOR ISYEARCHLFAE 3+ ARF ‏ابي كيرد ال لد د يل‎ ALATA ‏ألما‎ ALAA PF ‏امن انين أل ايد‎ ALLA LA ‏ادي أدب ندا‎ XL EAR HAITI ALRITE ‏فى أن أي أن‎ ‎TEYDEVLEQENIEDSEIAYYYNPGDSEIQEIDKYRKIPSIISDRERIKLTFIGRSEDEFNT 1h ‏لطن‎ 0517201772032 IAYYYNPCDGRIQEI DEY I PEL ISDRPEIK LT FIGHGRDEFNT 558 FEY ‏لتخا ارا قلق‎ IEDR I AY YYN PERCE IQRIDRYRI FST ISIRPRIKLTF IGHGRDEFNT 10 TRY RSV ‏ابوت رو‎ IE DS E TAY YY NEFGDSEIGEIDEYR IPS TISDREKIRLIFIGHSEDERRT 15%» 172705177050172 0357 AY YYNPCDGCEIQEI DEVX IPS I ISDRPHIKLTFIGHGRDEFNT 0 ‏ل ل ا‎ RE ‏ل ل‎ EE EE I A ‏كاد اند اله الع‎ RA ‏كاذ أن الك أن ألا لد اذا لم لما نا اذا لا‎ I ‏نذا اذا انا انمث لديا أي‎ A SE ‏انا دن اذا ادا أي اننا انا‎ RA ‏كذ‎ ‎5791701709577 SAAT DLANEDI GPUS ‏الابما لت 117277 7111701173375 ا‎ ٠“ 072231705 15715733 ‏ت‎ DEARBDT SPRITE INLLGONMF SYS 1117217 ‏رار‎ VY ‏م‎ ‎011773101751375 ‏كا 532731177773717 711171327 012320153215375 2ق‎ DIFASLDVDSLETEIETAIDLAKED I SPHSIEINLLGCRMESYSVRVERTYPGRLLLEVE YY + DIFAGLDVDALETEIETAINLARKED TS PREIBINLLGONMFS YSVNVERTY PGRLLLRYE VY. dow RAR : WF kk RA ‏ان أي‎ RR 3 ERA A ‏كا انا‎ A ER Ih I ‏لآذا دنا نا أ نا انال اذا اننا الى فا اللا : اتن أ ب د لال . أ نا ند تن‎ NR ‏ل ابلا‎ ‎DEISELMPETEODSTIVIANQYREVRINSRGREBELLDHBGRENWINKEES ITIRKDI SBEEY ‏تجح‎ VA DRISELMPSISCUSIIVEANDYEVRINSECRRELLDESGEWINKERSI IHEDTESREYISE YA, DEISELMPAISODET IVSANGYRVRINSEGRRELLDHSGENINKEESTIRDIZEREY ISTE Vi. DRVSELMPSISCDS I TVEANG YR VR INSECRRELLDUESGEWINKERS I IEDISSKEYISF YA DEVSELMPE ISOLA IVSANQYEVRINSEGRRELLUESSENINKEEST IKDISSKEY IEF YA.
    KK . HH ‏أ يدا اد اله نا‎ HAA ‏أيه جد ادا‎ PFT ‏ألما قي انا انا انا أل‎ AIAF FLAIR LA ‏اتير انح ني ألم‎ HF ‏ايد أي اما الي لي اياتب أ ايا اليه تي‎ FAAS kx ‎MPRERKITVESENLPELSTLLOEIRNNSNSEDIELEERVHMLTECEINVISNIDTQIVEER Af NEKENKITVRSENLPFELS TLLORIRNNENS SL TELEEBRKVMLTECRINVISNIDTUIVEER AL. NPKENKITVESKNLPELSTLLOE IRNNINSSDIBLERKVMLIRCEINVISNIDTQIVEER Ad NERKERETIVRKSENLPELSTLLOEIRNNSNSEDIRLERRVMLARCEINVISNIDTOVVEGR Ad. NPRENKIIVESKNLPELSTLLORIRNNENS SDT RLEEKVMLARCRINVISNIDTOVVEGR AL. WH ‏اا لي لها اا‎ RAAT FSLRIRITESIRIIE SY ‏أي لني ألما ألا‎ EPRI R EY LARLY 2 HARRIET RII Ew LR H ‏بن قد‎ ‏باق ‎IRE‏ ومججمسق 7017705773757 211710711153730 ‎IEEARNLTSUS‏ ‎PRL 275 ISDALCDLEQUNRLEDSHFISFEDISETDRGFAIRY A os‏ لطا ‎INV‏ فظ قا لتقة 2 ‎ISFELNISETDEGES IRE 1 «‏ 3117 تار وات تله ‎IS‏ 177171017777153 215217305 ببق ‎PRL IRS ISDALYDEROORELERSHF ISFERTLETREGF SIRTF‏ 232137357117711 ‎IEEAKSLTSDEINY IKNEFRLIES ISDALYDLEQUNELEESHFISFEDILETDEGFSIRE 4‏ لا لي رن كد يد انها بن لع الاب انا | لنا اننا ما لها ندا قي ا ل لا رات ند ين د ذا انا العا اتا ند د انير ل اين تنا زد اد ا ‎FA KA REIT RRE RAY 3 ERE‏
    —Yvy- ‏شكل ؟(ج)‎
    INKETGESIFVETEK 527211117 ZK IKGT IFDTIVNGELVERKVNLDTTHEVHTLN 31 INKETRESIFVETEE TIFSEYANHI TER ISKIRGT IFDTVNGELYERVNLDTTHEVNTIN 40 IMERTGRS IFVETERTIFSEYANEI TER TAR IRGTT FOTVNGELVEEVNL DT THEVNTLN 4% IDNETGESIFVETERAIFSEYANKITER ISH INC TIFDTVNGKLVENVHNLDATHEVNTLN ‏مق‎ ‎IDHETGERIEVETERAITSEYANHITEE I SKIKGT IFT VNGRLVERVHLDATREVNTLN 91. + : dak KARA ‏ا اه لاه‎ EAD H ERE EE JER ‏لتم أن ايا كا ل ا ل‎ Eh ‏ار كي أن جد الي اي اي‎ RR ‏كي لمان ان‎ a ER ‏ون د ا ل‎
    ها ‎NE SKESLONLAVAMRVOVYAQLFSTEGLNT I TDAAKVVELVITALTETID‏ راقو تقح ‎AAFFIQSLIEYNESKESLENLAVAMEVOVYAQLFSTALNTITDAARVVELVSTALIETID Ya ¥‏ ‎AAFFIQSLIEYNS KES LENLSVAMBVOVYAQLYSTSLNTITDAARVVELVSTALDETID 7 ٠‏ ‎AAFFIQSLIEYNSSEEALANLSVAMKVQVYAQLFSTCLNTITDAARVVELVSTALDETID Ye ٠‏ مك١ ‎STGLNT ITRDARKVVELVETALDRTID‏ رتور ‎AAFP ICS LIRY NS SHE SL ANLEVAMRV VY‏ لال لال لال ‎EEE IE ERR EE‏ لا ل ‎EE RCE SE‏ + 4 ةل ال 4 ‎SERRE EEE ER EE EER EE ER ER EE Ea‏ ‎LLPTLSEGLPIIATIIDGYVSLGAAIKELSETSDPLLROE IEARIGIMAVNLTTATTAIIT Yo A‏ ‎LLP LaRGLPIIAT IIDGVSLCAR IXELSETSDELLROE IEAR IS IMAVNLTTATTAIIT ١ As‏ ‎LLP LSEGLEI IAT I IDGVSLGAATIRELSETSDPLLRQEIEARISIMAVNLTTATTAIIT Yo Ay‏ ‎LLPTLOEQLEVIATIIDGVSLGAAIKELEETSDPLIRQEIEAKIGIMAVNLTAATTALIIT Yah‏ بخ ‎LEPTLSESLPVIATIIDGVSLEARAIHELSETSDPLLIRQEIEAKIGIMAVNLIAATTATIT ١‏ ‎fe dod A A‏ ا اط : ايد ادي اي أي اد الحم لي ادي اي ا اي أت اد الي ند أن أ اد اا اد لاد لديا دن ال لا لد اخ انم كي أي أ أكي أو اجن الث لاد الي لاد الف الا لا ال اين فيد مدا د اد الا ل
    SELGTASSESILLVELAGI SAS IPS LVIRELVLADKATKVVDY PERVILVETESGVITLLD YY 66 SSLGIAZGEIILLVPLAGI IACI PELVNRELVERDKADKVVOTFRAVSLVETREGVETLLD ١١ SSLGIASGESILLVPLAGL SAGIPELVNRELVLRDKATKYVDYFREVSLYETEGVETLLD 16 SSLGIARGPATLIVPILAGI SAGIFALVNNELILRDEATEVVIYESHISLARSEGARTSLD YY i. 33135125737 ‏ارت‎ 21257 SAGIFALVINELILRDEATEVVIYFSHISIATSEGAFTILD ١٠6 ‏جحل حل ددجا‎ RX IHR ‏الدج + م ل ل لال الدج ++ ل د الا‎ gwd ‏ال لج لحل يل‎
    م ؟ 3 ‎DRIMMPODDLVISETDFNNNSIVLGECEINRMEGESSHIVIDDIDEFFSARSITYREPHL‏ ‏ا 7 ل تمد مجم قط برو 3ه 16037 70 01 ار ضوع شا علط ‎MNS DVIS HCE INRMEGCSSETVIDDIDHF FEARS ITYREFHL ١6‏ 27 ل لاتقو اش ا ‎YY er‏ افق عو 7ج مق افرط موق ور 5ه 7 ‎DEIMMEPQDDLVISEIDENINS ITLGOROE‏ من ‎YY‏ لقق 00307137772 711115771617337 25127 اتج اا تاج ‎Ivy‏ ندا جنا ادي الما ألم ان اتن انين ‎YY YER‏ نر اا جد لم ان ‎ELLER‏ اد اي ‎RR . AAAI FF‏ كين ‎kk‏ لان اد ‎Sek ERR FRR NE‏
    IY BVLEVOHEELDLERDLMVLPHAFNRY ‏لالجو كا‎ PCLESLENDGTRLLDRIRDNYES ١ 6 AIYDVLEVDKERLDLEKDLMVL PRAPNRY FARE TCH TPC LARS LENDGTRLLDRIRDNYEG ١ 54 SITY VLEVOKERL DL AK DLMULPRAPNRV FANE TCH T PCLRSLENDEGTRLILDRIRDNYEG 55 SIYDVLEVOREELDLSKDLMVLPNAPNRYFAWETCHT POLARS LENDGTRLLORIRDNYES YY, STYDVLEVORERLDLSKDLMVL PNAPNRVEANETCWTPELRSLENDGTRLLDRIRDNYES YY.
    WERE EEA ‏ا ان د الاي ا ال‎ EFPIA ‏اي ادا وي اجن لدان أن أن كنا ادن ألم‎ FPF IRF FT RAI TARE RPE EEA RATER YN
    EFYWRYPAFTADALI 11 ETN IRINLDSNTRSFIVEIITTEY IREKLAYAFYGSS ١ RE YWRY PAF TAAL I TT LEERY ENT IR INLDSNTREFIVETITTEYVIREKLAYSFYSSG YY.
    EFYHRYFPAFTAVALT TIL PRYEDTNIRINLOSNTREFIVEITTTEYIRERLAYSFYSEE YTV « FF YHRY AFI ADAL TP TLR RY EDT ID INL DEN TRSFIVEVITTEY IRERLSYSFYGEG ١774 EY HRY FAR IADA LITTLE PRY ED TR IR IN LIAN TRETIVEVITTEYIRERLSYSFYGEG ١5 ‏أن الا ا لاد لاج اذا‎ TAF F ELBA ‏نيا انا انا اذا ا دا ألا آنا‎ HRSA PL ‏ف اا ايا اننا ألا ألما لا ا الجا ااه يخا ادا‎ FAL ‏اند‎ XXX ‏ليا الي ل‎ EXER ‏لذ أذ لما‎
    GTYALELEOYNMEINIELSESDVRI IDVDNVVRIVTIESDRIKEGDLIFGTILETLSIEEN ‏ند‎ ‎STYALSLEOYNMGINIELAESDVHI IDVDNVVRDVT IES DR IKKSDLIEGILITLEIREN TVA.
    GIYALSLSQYNMEINIRLSESDVHIIDVONVVRIVI IESTRIKKGDLIEGILATLAIEEN VA.
    -YVe¢- (JY ‏شكل‎ ‎GTYALSLSQYNMNINIELYENDTHVIDVDNVVRDVTIESDEIKKGDLIENILARLETEDN YA.
    GTYALSLOQYNMNIMNIELNENDTHVIDVINVVROVTIRSDEIKEGRLIENILARLATEDN YHA.
    ERE a ‏لج نا‎ EE EE IE SE EE ER ‏لدان افا ادا اها اا ند‎ EE ‏اد لد‎ PE EE ‏ننه تاتب‎ ‏اتيس 7 5و3 70335177 7187 و15 173733331737 1ت‎ ١ 6 ‏مجو لت اف 70ر10 جات ارق التاق رت ور ترق 17 اا تت‎ THINS 6 ‏ق[لارتئ 57و13 7037575751 لاقلا و 33 117371331137737 17 تا‎ YEE, KITLONHE INF SGTLNGGNGEVELTFATLEGINAVIEVOLLOARSYRVLISGELETLMANG ١5٠ RIILONHEINFSSTLNGCGHGEVS LIF I LEGINAVIEVDLLSKSYRVLISCELHTLMANS YE» EE EASE ASAE ELIE NE REE EERE EEE EERE RRA ASAE ER ‏تن تيا نبا لي ند كد كت لم د لذ‎ NHIGGRIDY IGFRSELQENIPY SFVIGEGKENGFINGITRESLFVIELPDVVLISEVYMD ١ NHIGUKIDY ISTRSELQENIFY SFVISEGHRENGT INGE TRESLEVERLPRDVVLISEVYMD ١5م‎ NH IQORIDY I SFNSELQENIPYVEIVISEGEENGT INGE TRESLEVSELPDVVLISEVYMD 12 «x NeVQUKIDY ISLNSELOENI FY SPMDDECGHERGF INCE TKECSLEVERLSDUVLISEVYMD 18 ea NEVOUKIDY ‏لزيا لحارم ل بدا ريق لانت اياي مرا قت يرا ترق اناري رمرم سرع نعط لزنا تلت لمات‎ Y8 vs *+ : +++ E NER ‏ل الدج‎ A RE SE IE SIRE SE SE SEE ‏بار للا با بلا اا لا لالم الال لمالا ل لا لد‎ DRKPEFGYYSNNLEDVEVITEDORVELILTEYYLEDDIN ‏لكي تو ار قار قال‎ IRLRSVALDES ١ ‏به‎ ‎2511535375 3 ‏لمسمسعة7 5 1فت2 امسو الاتقادة 7 اا تار الفا 710113 تتا تر‎ Ye. ‏قسصسنتو5 بت 005471 بت الات سدق تأر تأترا لالتعا 3 11ج ارا 7 تالا ارة زات لاق ترق مقط‎ Yo « 1131732817 ‏اعمط 1377 25177 297710111733377 172 17ت‎ Yo» 11817267817 ‏موت الامو 1 213770151113377 10172 2 الفا با‎ ١ ‏مق‎ ‏اي‎ EEE EEE EER EE Ed Woke wh dekh ‏نا‎ FR RAR ‏لي‎ FRE RR ‏اسان‎ ery GVAERILEFPMERKGNTINTI DA LMSFLESMN IRS IFVNFLOSNIKF ILDANFIISETTSIED YAY GVAE I LKPMNREGN TY TADS 15 LESME IRS 2171177311717 02777133125250 YAY.
    GUAR ‏ترج ار ابت‎ TTS EA LMS PLES MN I KSI FVNFLOSNIEP I ‏ومو و مت رصتقم‎ YOY.
    GVARILEFMEEESS TNT ‏قت‎ IMS PLES MN TRE IP INS LOSHTRELILDTNY ITRCTORIGS 6 GUAR LEFMRERSS TISAI MYLES MN IKE IF INS LOSHTRLILDTREL 1 36PPaIEn YY ‏اا‎ RS ook EEE RE ER RR I RR aa ok hE wo FAA Added ‏ارد يو اا يدا‎ ko Rk k FRFICORNDNIQEYPIRFNTLETNY PLY VENRDNMIVE PNY ‏رجو رت‎ ATV INESSRY YA.
    PREFICOERDRIQPYFIHFIILETNY TLYVENRONMIVEPNY DLDDICDISSTVINPSQKY YAY FEFICOENDRIQPYFIRFNTLETNY TLYVENRONMIVEENY DLODSCDIBSTVINESERY YA.
    FEFICORDNNIQPYEIRFNTLETEY TLYVEMRONMIVEENYDLDDIGDISSTVINFSQRY YA FEFICDRDNN TORY EI RENT LETEY ‏و الوه لاا‎ VERN Y ‏عه مده‎ SDISSTVINDSQRY YA ‏أي ادي لا دي دا ا‎ oy ‏ألا أبن آلغ الها لما أنه أنذا ادا اننا ندا نا كنا ما اي ا‎ AFTRA ‏اج الها اليا‎ ERA TEXTE Hy ‏ليا الها كنا أذ كد أن‎ kkk ‏اننا تن تيا كن لها‎ ‏ا 201 1 الت ااا‎ 0 177771177757777 112311770787 03568 ‏37لا‎ 5011713 117310171177177 FRVIVLDANY INERINVHINDLAIRY ١ ‏لمجقيع 10717 قور 2 جرع بد رورس مر بط 17 2217277 لاز لات بات تتلا‎ ١و]‎ ‏تحكيديان نات تلاط‎ I TS PNY ‏عم‎ IRI ‏اوور يز نر قوط يروز ورا تعر‎ TERR INININDESIRY ١ ‏بع‎ ‎LYGIDSCVNKVITEPNIYTORINITRP IVEANNTYPEVIVLDINYISEKINININBLSIRY ١:
    تند تنا نا ان ايان اما ليا ا ما اما اها اننا ‎١‏ لد ل اليا ا لم لد الي لين يد لا لد لاد اتنا ند ادا »لاد ‎EEE RS EE EERIE REE RR EE‏ ‎EDR TLANKLEFPNFSDRODVEVSEITLEFT YA‏ بار بطم 7ر017 251172 145115 ال أتوان ااا وا ‎TLANRLSFNFEOKODVEVSEIILSFT‏ تجار "رتل7 ‎YA‏ 3:387 37730077717522 ا اكيت ا رم ارا دي بات ل ااه 1537 7707 مان ‎GVRIRETNVIRSNTISDEISFNTSDEQIVIINRVISTET ١‏ 11320773705 ‎DEI IMESTOEENKVEGVRIRFTRVERSKTISDEISFNPSDEQIVRINEVIITET ١‏ 7113117353
    الاب اتاب اا لال خا + حاط ‎ees ak‏ حال د الا اج ‎RRR RR RAY‏ ج ةج +
    اج 7 \ — شكل ؟ (ه)
    كا 1677073 ‎SAL IY INDSLYYFRPPVIEN LI‏ لتفتفة 11117 3117 ارت 76137 لالط ‎YA»‏ 477171110277070 لاا 5 نرق 11111414775 ‎PSYYEDSLIGY DLSLVSLYNEREY‏ ‎POY YELGLIGY DLGLVSLYNERFY ITNNFEMMVEGLIVINDS IN YFERFFVRNNLITEEVTVE YA,‏ ‎FRY YVEGLLNY DLC LI SLY NER EY INP CMM SSL VY INDSLYY FRPP IRNLITCRTT IN YA.‏ ‎PSY YVESLLNY LG LIS LY NERY INNFGMMYSGLVY INDRLYYFRPPIENLITGETTIG YA,‏
    ER ES Pw oe wk okie 3 EEE SR ‏ل ددا اننا ال أي‎ te ‏اننا أن‎ a ‏ورد انا‎ H EERE A ‏وان نا اننا الا‎ ve 7 Sh ‏ابد‎ . 7 . x ‏الات‎ PME INGSAAS IGET I IDDRNY YFNOSGVLOTGVISTELGERYPARARTLDENLES ١ ٠8 DRY Y FRE INGAAS TORT II DNDRNY YFNQSGVLOTGVIS TRDG FRY FATANTLRENLEG YAY. ‏لالط‎ FNP INGAAS IGET I I DDENYYFNSSGVLOTOVIEATEDSFRYFAPANTLDERLES ١37 ORY YEN PLNGCAASVEET TI DCRR YY PSONAVLODGVESTEDGFEYFARADTLDENLES YAY DORYY ENF ONGGAASVEET I INGKNY YP SQNSVLOTGVFSTEDGFRY FAFADTLDENLES YAY
    EEE ‏مانن ل‎ SI ‏كدالب دان لد تن‎ : ROR RAW ‏ذا‎ . RK ‏قدا ايا ل الف‎ . x . FOR HAR KAI A KR ‏أل‎ KR KKB ‏تنا كذ اند‎ M Fok wR AR KA EAIDFTGRLIIDENIVY FODNYRGAVEWKELDGEMEY FSPETGRAFKGLNDQIGRDYRYYFE ١ ‏بخ‎ ‎EAIDFTGELI IDENIVYFODNYRGAVERKRLDGEMHYFSPETARAFRALNGIGDYRYYFR YA Ax ERIE TGRLI I DENY YPDDN YRGAVEWEELDGEMEYFEPETGRAPKGLNQIGDYHYYFN V&A, EAIRFTERLTIDENVY VY PEINYRAR TENG TLRUEVYY FATDTORAFPEGLNQIGUDREYFN Y 3A» EAIDFTGRLY IDENVY YFODNYRAATEHOTPLDDEVY VY FSTUTCRAFHGCLNQISDDREYEN YAA«
    RX ‏اخ حال ب‎ EER PIR ‏ةا‎ i ‏ا ا‎ RA REE AE NE #*#* wR ‏ل‎ ok RARE Ew A v Xk SDGVMORGFVS INDNEHY FLDSGVMEVEY TEI DGRHEFY PARNSEMD IGVERTEDGFRY FA Yo» 8 ADGVMOESFVSINDNKHY ‏15ت‎ GVMEVEY TEL DEKE YFAENGEMQIGVENTEDGFRY FA Yr Ee ATGVMOKGFVE TRONEHYFDDAGVMEVEY TEI DAKAFYFARNGEMDTAVINTEDAFRY RR 5 ‏ناب‎ ‎SDC IMORGEFVNINDETFYFPLDSSVMKSEY TEI DGRY FY PARNGEMR I GVENTADGFEYFA Yo io SG IMEEGFVHN INDE FY FODSAVMESGY TRI DGKY FY FARNGEMQIGVINTARGERYFA Yd.
    كن اد ايد أن اننا أن كم ‎RY‏ دن اتن أن ماق ادي اا ل ل ا + ‎RR‏ كنا كنا نا لان ‎A‏ اتناك تلا دنا ل ل ل د ل ا اط بل . اننا لد نا تاليا ا ‎FRE‏ ‎YY oo‏ جا ‎SYSGILNENNR IVY FDDERTAVVSWRDLEDGEKY YEDEDTARAY‏ 871512 ‎HENEDLGNRRGEETSY SGI LNFRNE IVY FDS FTAVVGHENLEDGESRYYFDEDRTARAY IG ١١‏ ‎HENEDLGNEBESEEISYSSILNFNNRKIYYFLDSTTAVVERKDLEDGSEYYFDEDTABAYIS 7‏ ‎BELEDLGREEGEALSY SGI LRFNNRIYY FOLDS PTAVVGWRDLEDGERYY FLEDTARAYIG YY vo‏ ‎HEDEDLGNEEGEALSY SGT LNFNNE I YY FODEFTAVVEHEDLEDGARYYFDELTARAYIG 7٠١‏
    Few dd ke ‏دا قدا كي دا‎ RRR ‏ايا انوا انها‎ RA ede sk Sh hd he se dO ‏ادا اننا ااي‎ dk ek ‏ايد ادا ذا لضا اب‎ ek ob oR A ‏كذ ان كي عا تيا اند د‎ LAL 190772110310173 717117777053775 53701700177 IDDNGTVRIG YY 9s LSLINDEQYYINDDSIMOVEFVTINDRVEYF SUSI IRSGVONI DENY FY IDDNGIVRIG ٠ LOL INDGOYY ‏مولا‎ IMQVEEVIINDEVEYFODSGI IESGVONIDDNY FY IDDNGIVOIS YY.
    IRI INDGRYYFNDSGIMOIGFVI INNEVFYFSDSGIVESSMONIDDNYFYIDERGLYOIS YY.
    IS TINDGRYY ENDS IMUIGFVTINNEVFYFEDEGIVEAGMONIDDNY FY TDENGLVQIS YY 0s
    FARROW oh RR IR ١ ‏أن الباق اي‎ New BAR a ‏كد‎ deh hk XN ‏كن‎ > oh AR RR kh ‏لمان ند يدا ما‎ RR 71 5 DEY RY ‏77ر1 3725و 1ط‎ 277577712737 055 176 VEOTEDGYRYPARANTVNDR I ‏ري ل لال بتري اي بانرتاج تدم بحو تار‎ PIR TOWIYDMERESD 1 ‏؟‎ ٠ 775771177222177 237307733173723 77 175 ‏الام تاحرط م الحا نحو‎ TYCOAVEYSCLVEVER VY YFEETY TIETGH I YDMERESD ٠6 VETS DA YEY 22171217117 ‏الت حقو‎ SGLVRVGEDVYYFGETY TIETENIYDMENESD 7٠
    HEE RA 6 + AERA FTA EIAXRI ‏د‎ + + +» RAF ‏دج > > » + + ل الت »+ با‎ TRAX XT I ehhh Edd ‏لاله ل‎ & xR
    —Yvi- . to ‏اج‎ ‎RY YH ‏وت مض زر ترط‎ INL IDD IR YFDRKGIMETSLISFENNKYYFNENGEMOF SY INIED YY A KY YPN PETKRACKG INL IDO IRYYFDEKG IMRTGLI SFENNNY YFRENGEMOFGYINIED YY A KYYPNPETKKACKGINLIDDIKYY PDERGIMRTGLISFENNNY VEFNENGEMOFGYINIED YYA KYY PORE TRRAYHGINVIDDIKYY FOENGIMRTIGLITFEDNHYYFNEDGIMOYSYLNIED YY A, KY YF PETKEAYRKGINVIDDIKY YFDENGIMRTGLITFEDNAYYENEDGIMOYGYLNIED YY A.
    Kd a kkk ddd EAA ks ‏.لاك خط دك‎ R rk bX ‏ا‎ hh ‏للا ال .ا د.ا لدج لخ يخ دل .لا . كه‎ ‏ولتت‎ 777117767720171 INY TGHLDLDERRYYFTDEYI YY i, MEY ‏تلد وميم تق‎ FN TI PDGF RY FAHGNT LDENFEGEI INYTOWLDLDERRYYFTDRYY YY ‏م‎ ‎KMEYFPGEDGVMO IGVINTPDG FRY FANON TL DENFESES INY TGWLDLDERRYYFTDEYI YY 46 REY PEERS IM I OVEN FDO FEY FAHON TL DENT EGES INYTEWLDLDEERYYFTDEYT YV 6 KTPYPSEDRGIMOIGVENT PDGFKY FAHONTLDENFEGESINY TGWLOLDEKRY YRTDEYT YY E+ ‏ل‎ ARE sk Rok oh RR kh ‏اجات اند‎ RR ‏لها أن‎ RR ‏اننا تا اماد أ‎ RAR RE RA RR Reh oh RR ‏ندا أ‎ kh Re ‏د‎ ‎Fg ‏ليا‎ “© A. ved PA ‏ابم‎ ONT 0 2 ‏ليحي‎ TR ‏ب و‎ (v ٠١ ‏يت 7 (تعريف الترثيب رقم::‎ AATGSVIIDGEEYYFDPRDTAQLVISE (VPIL10463 78: ‏(تعريف الترثيب رقم‎ 776 AATGEVIIDGEEYYFDPDTAQLVISE tad) ‏الترثيب‎ iy pai) YY AATGSVIIDGEEYYFDPDTAQLVISER (R2 0291 «Yh ia8, ‏حي (تعريف التزتيب‎ AATGSVIIDGEEYYFDPDTAQLVISE Wa ‏يي احم يمحي ب » ال ب‎ > me ‏اسم‎ ‎(CD196 7 ‏(تعريف الترنيب رقم:‎ 77135 AATGSVITDCEEYYFDPDTAQLVISE ‏او أي د الي لان لم كي اك ايد اند د أن لا لاد اا لأ نا‎ Sh ‏بد دنا لي الي اي ال كنا كي‎
    —-YVvV- Re J Yuen 3 Aa ْ > |B ‏دي ىا‎ ١ 2 1] EY 1] ‏ا اير‎ 3 1] 4 ‏ل‎ I I ١ KEEN T= 0 ‏د © بيه سل من‎ gw © 3 ‏را‎ ba ‏و‎ ‎ve ro 5 - SAE SE ‏سج ل‎ STE >> ‏نا‎ Ta - ro © © or > 37 owe i if 5
    —YVYA- (lj: ‏شكل‎ ‎Toxin ‏بدون‎ Toxin B DM T™ meee ‏ميكروجرام‎ Ve % +L) eer A JF ‏«ق‎ ‏شكل 4 (ب)‎ TedA 8 wi wi + + C wi TH T™ wt TM TM ‏ا‎ ‎Te ‏م : ل اا‎ 0 ‏كبلودالتون 676886 قوط »0 الب الا ل‎ 1 Rea BR hae ‏؟‎ ١ YOu [esas Toxin] ‏صكر‎ fea ١١ tas ates Van ‏ميكر وجر أم]‎ Toxin ‏[طفرة‎ ‎SH Es wl Toxin 5k (TM {voy
    —YVa- © IS NY Ted A Ted B wif 188 wi TH ايد لا مدا انا ‎ *‏ * . ينا ‎inositol‏ نا لل ‎a.‏ ‎bis TV.‏ ب سم ‎YA‏ كيلودالتون Sally ‏قا‎ Yeo-a am 2 + CL عد ا" ‎١ ١‏ لست ‎a‏ اا
    ‎.. .. ‎Ta oo ‏و‎ ‏ا ا ‏0 ا ا ‏ا ا ا ا ‏ا ا ‏ااا اا ‎EL:‏ مل لأ ا ا اا ‎eas‏ ا كيلودالتون ‎nd TN a
    ‎. = = = ‎La 1 a ‏منتجات انشقاق ‏ تحلل بروثيني ذاتي* ‏1 نوع بري ‎(TM‏ طفرة ‎Toxin‏
    EN 4 jis 5 TedA MN vo ¥ SE © ‏الم بيع‎ D0 A ‏طفرة‎ 8 ‏م خمررتحهن1 نوع بري‎ 04 Siem EEE EE EEE EE EE EEE EEE I iy SON ‏ايا‎ 4 A 414 > 3 ey A Vox ‏ف‎ BEES ‏فح وهو وس‎ ala ‏مقار ن‎ 1 - ٍْ ‏ب‎ 1 {4xFC,) Toxin A ‏جد مقازن‎ wd ‏ل‎ 1 30 = ْ 8 ‏إْ‎ ‎1 AY N . 1 8 1 ‏م عر للم‎ : xX 1 ‏إْ‎ A ‏ا‎ 8 1 SEER ES : > : ‏لحن م لد حي د ايا‎ I AY EEE NER tov ee} NR 8 ٠١ + ‏التركيز (ميكروجرام/ ملليلتر)‎ TedB M « X 3 0 & 3 A \ 1 » ‏ا ا الم ا ان ا داه‎ ‏أ‎ * X \ TN 88 R 1 ‏بي‎ hey FA SLE . 1 = EN 0 ‏طفرة 8 ثلاثية‎ © 1 i AY i oo 3 or & pi ‏إ‎ X 8 ‏نوغ بري‎ 1011 * : \ 3 ‏و هل وف‎ " Max od A 1 ‏خلية فقط‎ {Je EY LL LT : \ ] {(4xECy) Toxin ‏مقازرن‎ © 8 N bY = A ‏ميلا إ‎ He H 0 ‏مم اا‎ 8 ‏ا 3 3 صقر‎ 8 NX Tey * [SRN ¥ 0 ‏ان‎ % ١ ٠ - R . 3 a it ‏التركيز (ميكروجرام/ ملليلتر)‎
    -أ0م- شكل أ 2 ذا ‎TARY KY‏ * طفرة ثلاثية , ض 1 ض | | 5 - ا اا ' © ‎CARRY, x‏
    Ba 1 3
    : | WN aw ‏ض‎ 1
    ‎na “3 \‏ م روجو .وك ‎aaa)‏
    ‎2 A 1 je EE ‏ض‎ XN
    ‏\ 5 : دج د ‎[a J‏ ‎a‏ ابي حا د ا —_ ‎Ng‏ 37-7377 ا ض ض : " 1 - ّ| 5 -£ ~ التركيز ‎Logie‏ (ميكروجرام/ ملليلتر) حا 2 ًُ 8 :7 سيا = - ‎ETT : - - 5,0 hf % 7 RS EC 50 |‏ ‎CBD‏ ‏أل اد
    —YAY- A ‏شكل‎ ‎<> ‏د ان لحم‎ A ‏طفرة ثلاثية‎ ‏م % سك‎ ¥ . x 813:01 ‏مضا‎ PADS - 2 ‏ا الا اا ا سيق‎ Pah Wt ‏يدور‎ S05 § Thi A & ١ ‏ماكر‎ ١, vo SE ‏اله‎ me ‏لي ابد بأ‎ eerie FON ‏ب 3458 4 الا‎ RAR IR ‏ا ات اليج‎ AY 001( ‏مضا‎ PAL © = NE vA dh TAL 25+ ‏اللا‎ ‎EEE ‏ل#المععييميم‎ ou mAb (AL254A00.20) 5 x tavern ‏الدج‎ 8 x ‏دا الات‎ FAR ‏روي وقد تف‎ © 8 ‏ألا‎ ‏اج اج و .اج‎ + EY {Ab “+4 ‏مقارن مما إخلية‎ 4 3 + ‏لل جم‎ . N “ 7 ‏قط‎ Toxin ‏مقارن‎ « } a _— NS 2nd vy} 3 + ١ ” } ; “oo ‏(ميكروجرام / ملليلتر)‎ ™ A ‏تركيز‎ ‎B ‏طفرة ثلاثية‎ ‏ا‎ ‎Wem V0 SN PEE EE EE 0 ‏يا الي‎ A 1 ve N ١ Hod 8 ‏طخط‎ ES
    % . X gee ie ee lei EY . . bo 1 ‏م اج‎ Vex MN ‏فقط بدون طخ‎ TMB ‏م‎ ‏سد‎ Re B { Ye 3 } ‏مشكد‎ PAh = fa Ny TRIE 3١١ wo ‏ا‎ 28d Adit ‏مقارن‎ F ‏يل‎ Toxin ‏مقارن‎ « ‏ب‎ Sa 3 8 8 0 \ v, Yeo ‏(ميكروجرام/ ملليلتر)‎ TMB ‏تركيز‎
    م شكل ‎١‏ ‎I J‏
    ‎a .‏ ٍ ا ‎R‏ ل ل ‎oe LL‏ )=( ‎N \‏ : 8 \ ‎A on‏ ا - ‎Baia‏ ‏3 }+{ م ا ا ا ا
    ‎Bn. ٠‏ ‎Lae‏ \ ‎{voy‏
    —YAE- % ‏جه * » قو _ه‎ ‏ا الاك‎ 8A {TATSATY Yo onc ea {7 t 8) i 3 ‏الا‎ 3 + i sides + 5 % PER ive A) TR 0 * ¢ ER a] * . > * ٍ ‏؟‎ 9 » » * rs 8 3 ‏الج‎ y ‏م‎ ‎et ‏عل‎ ¥ « + ES * * ‏هب‎ * ¥ 1 ESSER > Re] £3 EERSTE al COMER CRORE hp! 1 3 S ‏للأضابيع‎ Bem ‏2ه‎ 4 BY ‏د : صسش‎ WW dae 1 ‏م‎ AY de ‏ا د :ة‎ ١ ‏مجموغة‎ ¥ A pages TAD pages As gages ٠١ ‏شكل‎
    — \ A ‏اج‎ ‎(hy ‏شكل‎ ‏بو جه فو‎ : ol ; )١ ‏ال رم‎ (AEA) 4 : wg Ba : ¢ ْ, Yasue : ANN TE ١ ; RN ‏حاب‎ * be i $= :
    : . * * ‏مم‎ * . Yun : + 4 : ; $ ‏متي‎ + 1 4 TE . ْ 2 1 EEE 1 a : & : 3 Ya “i + * ١ Re : ‏حاب‎ * : ‏يام . سما‎ LE 1 ٍْ ~ 7 : ‏لجخ م صفر‎ + aa 3 FS I 4 ‏ا ؟1 م ج صفر‎ ‏ل ٍٍ الأسابيع‎ ‏؟‎ dc SADA + ‏مجموعهة‎ 5 he pena (YY ‏شكل‎ ‏لي‎ ‎| es +. ] )774( (EATY) 4 * ‏ةوه‎ i * ‏با‎ ‎: ¢ + + 1 : ES RA FS 1 06 . en va : 3 i Ld * +. 7 You = : * * i * = NS ‏حت مح إٍْ‎ TNR ‏لح‎ wigs ‏مم سود مسو‎ 0" 0 1 ‏الأسابيع‎ Jha EA YY YE ja fA AY YE ‏ام ؛ صشر‎ # 8 ١ ‏مجموعة‎ Y ‏مجموعة‎ 2 Ac gazes
    -5م؟- كا ‎VY‏ ‎sae - Toxin A‏ SUT : NA } 0 VAY) ", \ AY) ] : ل ا : )2 ا 1 3 | oak ox ye Le - ‏م يد يبا‎ ry ‏ل ف‎ ¥ : $ > . 0 H -! $ ٠ ّ BAIT ‏ق‎ Pe ope § : 2 = ‏ض‎ “3 LI I : 8, ١ “ِ ‏المح‎ OOO ‏ا‎ : ‎YY YT ad A YY VY‏ م + صفرا ‎IY‏ م : صف ‏لمسسسيسسسيسيسيس | الممسسسسيسيسيسيسه منستسشسسشسسسسس أ لإسابيع ‏مجموعة ؟ مجموعة ؟ مجموعة ‎١‏ ‎Toxin 8‏ - مضاد ‏يم ‎YY)‏ ف 1 وا بك ىا ٍ لو 4 جو ‎(hes) LT, a‏ ادف ‎NEE‏ هال ‎OO‏
    ‎Fo.‏ لذ + ض . ! لو دولا 3 : : ْ ان : : : = ‎١‏ ممما إ + 3 ‎K‏ ‎Na | . |‏ : > او ا احا الحا ‎ANNA‏ لمحت ْ . \ ‎a‏ ‏ض ض ~ ‎١ |‏ : : : 1 : 0 إٍ ‎A]‏ ‎IY ١ dad A YY 4‏ لم ء صف ‎EA 17 ١‏ صر لي ‏م اد ساب ا اس نس ا ا الاسابيع ‎A AL gazed Y ‏مجموعة‎ ¥iic ‏مجمو‎
    —YAV- (Hy Jes ومع ع ع م م مع ةم م ةج مع ةع ع مح ةع ع مج ةع مع مج ةع مع مج ةع مع مج وو ‎Yaa onan‏ ‎JUSS ;‏ ' ب + و ووو ‏| واه ‏سوم د ‎BET‏ مم بره ‏| $ # | عار وأ 5 ‎2 ee ‏ض‎ ‎3 | «
    ‎. 0 v % 0 ١ ‎8 | : ‎> | : ‎Nie ;‏ ممم محا ‎Vo
    ‎. \ ' 1 : : ٍ ٍ ٍ : ; : : ‎Re . , . . .‏ 7 م صقر م صقر م 8 صقر الا سابيع مجم ‎Tac SADA {ac‏ مجمر عة ‎١‏ ‏شكل ‎(RY‏ ‎Cs ® |‏ ليميا مش ‎I‏ ا 1 ْ ‎١ 3 # § ٍْ‏ : ووو 3 بهم ‎CTT‏ +“ | 3 0 : ل 3 5 + و جك 0 ‎Kk‏ ‏ا :ْ 7 ‎i :‏ : 3 ‎FEES ¥ 1‏ : ٍ 0 ‎١‏ لا ‎pS‏ : 3 : + ميج ‎ES‏ ممما م .با : ‎va |‏ ‏لم *ّْ صفر م 8 صفر م 5 ‎ea‏ 1 لأسابيع ‎١ dr ‏مجمو‎ ¥ ic Ae : ic ‏مجم‎
    —YAA- 3 ‏م‎ 3 8 5 5 3 ES 3 = SF ‏لل ل عل‎ ES 5 : 31 3 Ti ia I 3 wh ‏نا‎ we Wiz Wig WIT WR 8 Be ‏ا اي‎ - * Re 0 0" 3 3 SE ‏مجم اا مجو‎ : POAT ‏مجم‎ ‏ممق« ينا‎ ١ ‏سس أ‎ ‏ا ب‎ EE 1 Ed ‏ا‎ & i 1 Fry Ha : 8 ‏ا‎ ES rd : HY odd NT | ‏اليه سا‎ L ‏الك‎ fad ‏أ لم4‎ ¥ 0 ‏يسا‎ Bo ‏عد مين‎ Na Le - 2 Ya : ! 2 Ld gE =~ 3 A ‏عن يمن + 7 0 يل حي‎ AEN ‏الاين سويت ل ةس‎ Sa 1 ‏بر لد دجت جد ا‎ 1 EN k 3 4 Ye MY es ¥ EE ES EN 4 3*١ ‏بعد العدوي‎ da ‏سم ان‎ ١ ‏كا‎
    —YAS— Yo Ka A Toxin ‏مضك‎ ‎Yar eax ‏ص ص‎ ‏تع ومع ل تت يمو‎ RE | 0 A. ‏القع‎ ‎EN | ERE ٍ +: ‏ب + ذف قد‎ 3 ‏ض‎ SEES A ‏+خو+ة‎ ‎io oq Ft
    3 1. + i i ; ‏ض‎ 1 ‏حل‎ Vee :ِ + : \ | NOON ‏لمحجمم ممحجمة‎ BOSOM ANE NNER EASIER ‏لمهي‎ 3 eee ‏صف الأسابيع‎ YY ‏؛ ؟ #صفرة ؛‎ Ray © ‏اتصفرة ؛‎ © : ١ B Toxin ‏مضا‎ ‎Yuin ea A ; (YYIYY) ْ "َ (YY) 1 } oe furs Yea 0 . . § * i (Y 3 A) 3 ' H : 4 wa ge + , ‏اا‎ ١ ‏ا تح الح‎ 5 : a Yeas 3 ‏سس‎ gb 3 ٍ Tag 2 | . ‏إٍْ‎ ‎8 ‏أ‎ Fa | + * ‏إٍْ‎ ‎3, 200000 0000CK 00000 000K NPN ad ‏مهمد دنا 4 مها‎ ْ 3 - ‏الأسابيغ‎ px TY £ Tia ‏؟‎ ¥ot AR eA 3 6 ‏تت ؟ صفر‎ 3 ‏عه‎ gana ¥ AL ‏مجمو‎ ¥ Ac gana LAr gama
    -Y&.- ‏دعل‎ A ‏مضق‎ ‏خم‎ * * ‏تق اا‎ 0 ْ: : 2 } { £1,084 en ‏بحم‎ +
    0 3 El {1 ‏ا‎ ANY .
    Ve ‏ال 5 8 اج ا .و‎ CYAN.
    Le + . {5 H rise ® & & * 1 + : 3 ] NE * Ty EY ¥ +
    * * امل ل ال * ‎h‏ * 0 ل ‎١ * * ¥ FER a #‏ به يا * # ‎wo,‏ * * دو ب ‘ ‎vo‏ ممم 3 ف وأ ب ل = مها عه * - 3 ‎nN‏ 2 4 * م ‎NE w‏ ؟ أل ٍِ ‎Rass x 3 ¥ ¥ + LE . &‏ : 4 ب : ب ما جم ‎i * XK‏ ‎i 4 N Ts‏ 2 ويج ب 1 مع ا ‎ry + 1 +‏ + 4 + 3 * 3 ب ‎N : 5 ot‏ : 0 ‎Aes YET ATTERY + TA 0a TI AST © + TAT Gee : 1 ay‏ الأسابيع ‎ie Ta —‏ محم بر + ‎ans‏ عة ‎١‏ ‏مجم ‎pda 2 he‏ 3 تج امخض حب ‎g‏ ‎teow‏ سو ء شكل 137 اي
    منة مت5 8 * * 1 اا لان الا ا . 00 1 الال 54345 اوج جوع ‎FEI‏ ‎i ! AAG . (1081‏ ربعملا : : 0 مك اخ :ْ : + * . & b rs So \ ES .
    4 . « ٍ جا اا ل ع : . ‎Fe 1 33‏ ب "م * + ® ‎H $+ % LE‏ رام راك 0 : i + * * L} * 0 ٍْ * . *ًِ oo * : + : : : : : + & ¥ TTT aa 0 ‏ل‎ 1 ٍ fig : wen Ed ++ A + i 1 + oo : wove Xi 3 : : Eo ; : x يد ‎SR.‏ اجا يب ب > ‎fa‏ ل ا | 0 | ‎v‏ ‎Ae + 4 + A RGY + 1 + AT eT TET ATT + : ade + 1 6 sy‏ الأصليع ‎Sn wo‏ 8 مجم ‎ia Jaded LAR‏ مور ‎Y da‏ مجم ‎a‏ 4 م سحا 4 .ا شكل ‎11١‏ با
    شكل ‎٠١7‏ ‏سلسلة 383 ‎FEES‏ متغيرة ‎{muk)‏ ‎IMKLPVRLLVLMFWIPGSSSDVVMTHTPLSLPVSLGDQASMSCRSSQSLIHSN‏ ‎GNTYLHWYLOKPGQSPKLLISKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEA‏ ‎EDLGVYFCSQTTYFPYTFGGGTRLEIKRADAAPTVSIFPPSS‏ ‏(تعريف الترتيب رقم: 77( سلسلة ‎AL‏ متغيرة ‎MYLGLNCVFIVFLLKGVOQSEVNLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFINY‏ ‎WMNWVRQSPEKGLEWIAEIRLKSHNYATHFAESVKGRFTISRDDSKSAVSL‏ ‎QMTNLTPEDTGIFYCTWDYYGNPAFVY WGQGTLVTVSAASIRNPQLYPLK‏ ‎PCKGTASMTLGCLVKDYFPGPVTVTWYSDSLNMSTVN‏ ‏(تعريف الترتيب رقم: ‎(VY‏
    و7 شكل ‎YA‏ ‏بحن ‎Ty «wd‏ ‎i :‏ ندم ْ ‎٠‏ 5 ججح ال انتوعد حدم و يي > وبي جين 0 = ‎*٠‏ مأطوقة ان ‎ay 5 2 1‏ ‎Fa ABG-33 ©‏ ل ري اخ #مي ‎To 0 FE‏ ‎en EER ASRGR @‏ & ‎po & a = | IE Se SR PA‏ «* اق ا ب ‎re NE SE‏ ج ‎an‏ حم 5 اد ا ‎AT‏ : ‎A85.33 *© :‏ : ال الا ب ‎١‏ د ‎Ce‏ 4 ‎Se : ARGS *‏ : مساق ‎a aa‏ الي ‎re x 8 gp‏ *#مخفضاث ‎Rb‏ ‏مضاد ‎A‏ )+ مقارن) مه ‎A 5 83 : yy Toxin A‏ ‎HRY ¥ 4‏ ل اسك 5 ‎A a‏ و جل ب ‎x ted $ SLE‏ 4 % ؟ ‎to»‏ + 1 (مقفارن لقص ‎ey‏ 4" ا كم 3 ع ‎{4xECs0‏ معايرة مشا ‎Toxin A‏ كم 3 ‎LE To.‏ إمفارن ‎Aide‏ فق ‎[RLU Ve x v0.)‏
    شكل ‎٠١‏ ‏ا لاس نبندذذداا الس ‎Le Se Epitope 8‏ ‎i RE] |‏ ب ‎Lo Epitope 4 ١‏ ‎he 0‏ : : - ا > ‎eT‏ فقا حنم م ابي ‎oF 0 \ EY‏ . ب "ع ‎ASAE A 2 oy‏ & 0 اا ‎a FY‏ ‎ARE & WV BE BEAN oe, 1‏ 3 ‎Epitope‏ ا اد ‎vA TE‏ مف ‎As‏ ‏1 | لكا 1 ا 5091 ‎Ep‏ اق ‎E H‏ 1 < / ب | ‎Dery‏ ا ‎SE SO‏ 1 ‎Nr 1‏ : لضي ‎Ne H oo WR‏ ‎H‏ ل ا إٍْ طلا ‎has‏ ‎ia Se ————— / Epitoped :‏ ‎A J { Ye. & 3 } :‏ 3 ‎١ No Ee Lk ;‏ الخ ‎Ye‏ ‎Pa aN Ne Epitope R\ ¥ RNY‏ حا حو م \ ال ‎dN‏ ‎TE J eek ) ,‏ م رخا ‎Mopes ~~ /Epitop®8.‏ / ‎ers es i 0 3 Nev —— K‏ ا 3 ‎a \ Ya. ( 7‏ = { = ب 2 ‎Pp‏ بف جا لك“ ا ب ‎H [aC SN‏ 1 } العا ‎A, J N‏ ‎aan amen‏ الت ‎ANY a‏ اي
    -ه؟؟- شكل ١٠(ب)‏ تعادل ‎Toxin A‏ بواسطة ‎mAb A3-25‏ + تخفيفات من ‎A65-33‏ ‏ل ام " ‎y « X X fol 9 PY‏ و + ‎Rabe‏ مضاد م لتخفيفات (+ مقارن) 8 5 ‎Fa‏ ‎J 3 wr‏ لب ‎gly At BR 3 . 3 Sy‏ سات حا ‎LE ae . EER 53 }‏ ‎wn‏ 3.25 خر فقط ‎id TE! a‏ د ا د سا ‎a‏ 3 8 ال اا ل اج فا ‎ER Hadi‏ د = ‎OS :‏ ل ا التي م تقد ‎١‏ ‏ب" ‎i N X‏ ا ‎I‏ د ! = ‎pos THER So EIR .‏ ‎feat‏ ا ا > 0 1 ب الل ةم .ووو & ‎A - ©‏ ا © ل الاج ‎foe io fg .‏ رن ‎Dark xv pn k 1 AI 8‏ ‎sorb a‏ ¥ ‎NE acd‏ 0 ‎vr 5 x 1 3 * + + + ki >‏ 7 + = 7 7 2 1 ‎TYAS‏ كا ‎SA‏ عورا كن ا الاك قسن ‎EN :‏ ¢ ‎sa > 5 2 Toxin AS‏ مع و جد ‎Toxin A :‏ قط ‎(AXEL gy)‏ حتت ‎A 325 CREAN‏ ‎Lad A408, *‏ ‎tVoy‏
    شكل ١؟‏ 0 ‎vo‏ أ وس لي ‎PREY 7‏ ‎Ee‏ - + ٍٍ 8 : ‎Rab #‏ مك ‎Sw A‏ : ‎Ay‏ 8 : # و ‎LATA‏ مت سس ا ا 1 ‎N { “8 8 0 3‏ إْ ‎ES Es Re NS 0" 8 AN a } ¥ 8‏ جع 0 : ‎a‏ > ‎IESE IFN‏ ا ال المت ل ا ا § ‎w Xd EX‏ المصحي ْ : ا ل = = ‎BE SU‏ »عات © الأخبوولا حش الل ل إْ ‎ET Fe)‏ = ‎pass & yy . 5% ow % #4‏ ّْ : ‎w 1 i a > N t +‏ ‎WW CLA id‏ ال 5 3 : 8 3 * * & ا م ‎I BE‏ + جء ‎h!‏ ‏"0 : الللتدالحت حب لحت ‎ag i‏ كا اس ٍْ ‎Be gy Yee ©‏ اد ا د اد ل ةا ‎SIN J‏ 3 : أ ا اي 8 . . : صقر ‎Ya 3 & 8 Y X. 0 Te «‏ ٍ ‎Sa Ea, Ta Tey YAY‏ الجا ‎٠.‏ ‏م 4خ ات د“ ‎FTIR wr TEE Wh T=‏ ‎Toxin A ©‏ = (موناطعك) ل ‎TA AAA AAA A AAA AAA RA AAA RR A AAR A AA‏ تح لاحت ‎A I~ 3 Re eevee > A A AAT‏ ‎tVoy‏
    شكل ١٠(ج)‏ ‎٠: ar ) N a‏ هيا 4 22 عها . م تعادل ‎Toxin A‏ براسطة ‎mAb A3-25‏ + تخفيفات من ‎AB80-29‏ ‎Bas ¥‏ 3 ‎N‏ اع ع ‎Do Fn A‏ بجلا ‎i” Ye‏ ‎Rabe‏ مضاد 4 لخفيفات )+ مفارن) ‎tT‏ ‎E‏ المسسيت سد : ممست سس سدسم تمي ددحت حلفي 1 > 8 : لج ‎A 3 35 W‏ + مدج 8 ‎CX seas‏ 3 وه و كر + ‎a EE CNRS 0 LO‏ الت ‎RN‏ 3 ‎ERNE‏ ا ب ب إْ . ب تت ‎A‏ لاج ا ‎Rae ec Yond‏ + ‎Ya x} +. be] a 3 Ea on NEN AEE‏ ند - د عبت ‎SE ik SU‏ # 0 م # >“ ‎RN‏ 8 رس ‎Rg‏ 1 3 ‎rl 3 A 8‏ ا لدج + و ء ف علا ‎Fs‏ ‎fig ARI ! ES‏ د بت - ‎١ ٍْ DER fe‏ ب 9 ‎ine‏ سو يي 1
    ل .حا ّ 1 جا ‎Dx oxox‏ لا ااه ْ )22 بي 1 : . . . 4 حسف د ‎F 3 fa Ya X A}‏ ا اللي ‎hS 3 N Tay, by Ya + A Xe HRCI‏ ل ا يا م سخ ‎Toxin‏ قط ) تلك ل ‎SHEE Cs om x.‏ 2 لمر جد تجاجم ‎A ANS hee BRD‏ ‎N‏ يج 1 ‎Ladd ER‏
    -١؟م-‎ )(؟١ ‏شكل‎ ‏مختلفة‎ mabs EK) ‏بواسطة مصل مرجع‎ Toxin B ‏تعادل‎ ‎A ‏ااال ني ل ب‎ . Toxin B ‏مصل مرجع‎ »* ' B59-3 « - ‏مس‎ “> ‏بير بو با‎ oc aa Dy ‏ب‎ ‎ْ EE 8860-2 » = | RY ANE BR-26 « wd ¢ Xk * ‏و‎ bed AW NX 0 we wow - ‏مقارن خلية خط اا خيلا | ع‎ + Ng he RLUSY + X ‏قرا‎ ‎| FOREN Rope NAN 8 } 5 + ‏ا جر‎ AI ‏الب ال‎ EAS ’ \REERE | hi SRT.
    RE OETA ] = ‏فقط‎ Toxin ‏مقارن‎ ‎| Ty ‏ل صقر‎ _: _: | ~ RLUs Vx ¥> ‏صفر‎ Y bd 3 A 6 Ate sl) Sina ‏تخفيفات جسم‎ ‏81لا‎
    شكل ‎(GY)‏ ‏تعافل ‎Toxin B‏ بواسطة ‎mAb‏ 38-26 + تخفيفات من 1559-3
    ٍّ ضح جو ووو ‎HN saa 3 B8-26 >‏
    NER on N As « ‏ده جا«‎ Ti (VE) 59-3 8
    ‎EAN AYA YY REGS‏ ايد ‎LER (TTA) 8693‏ ٍ وق ‎Leow ov ov oad Ws EN { ١ 0 & 1 ٠ : y ١‏ م
    ‎EEN Ca AY LL
    ‏ء 93ق8 (1 17م حب سس
    ‎Te Ne 3 3a Ti ed B ~ dae‏ ٍ تم مج
    ‎Toxin B Ou‏ فقط لا حا ‎w‏ ا بالط ‎sy x «oT»‏ ورا ‎Yoon od SES‏ ‎Ladle ou‏ مقار لي ‎a‏ 2 228% . ريق ‎rx‏ الوزرزع ‏ ' : صر 3 8 ¥ تسل تخفيفات ‎mAb‏ 88-26 (لوغاريتم ) اي
    _ Ad a= SHES Toxin 8 whe ‏شيا ريو‎ gos Rm 5 0 % 5 ‏َب جَجِجَجِجِجَجِجَجِجِجَِجِجِجِجِججم.‎ MOTE ‏احج‎ Sole YE ‏ا حة‎ Sel Rach ‏الس‎ oo 861238 Gah Rann BE ‏بيه‎ Re ‏وو‎ 18 EER a ‏يدرف توميو‎ noreglucosylated BE ‏اما‎ nt So ‏سرام ذا ا ا سينا‎ 2 Ae ‏مانا ا ل عن رع‎ aeflactin ww 1, ; 8 ‏شكل ؟؟‎ ‏دا‎
    .م شكل ‎(yr‏ ‏2007886 وأ الا ‎Tobey‏ ‎crate Ng, .‏ ‎a‏ جما اا ‎NN UR i‏ ‎Yas saan N SON “8‏ ‎AY‏
    ‏3 . ىل 3 أ = ا 8 ا ‎Dasa WW‏ 8 3 الل ‎sy jes 8 po § | SE‏ ل 4 سكل ‎A * Vey +‏ ب 54 ‎Yo 5 Tuy 0 EAN‏ ١م‏ تخفيف ‎[cs [ore‏ شكل ‎(YF‏ ‎x‏ - ‎kp} - iNT Nf‏ ‎HEY x Ye 200601 7/NAP12/15‏ ‎el ol ©‏ 3 ل وصفر > ‎X‏ ‎R‏ ‎Ny >‏ ‎i; 8 Whe : 3H 8‏
    8 .خخ م جك امس ‎RR eR X 8‏ الحلا به ‎١ N‏ الس 1 اننال ال الع ‎D NS‏ + + ده و جب وص 3 <> ‎AY‏ ب ‎AN‏ : ‎SON‏ ‎AN xX‏ ‎BA‏ ‏ل 8 لي + + يه + ‎Soe‏ ‏ب ‏ا ‎heads 3 .‏ . ‎SEN Whee‏ مله مس .جا ‎Yo‏ 4 & $ و و ا 2 ‎Sy‏ ال 0 ‎Yay ¥ Vy‏ أ 0 ا“ قية 0
    ‎٠ \ —_‏ اذ شكل ؟7(ج) ‎١ 0m 2007070/ NAP10/70‏ اذا ‎TAL‏ ‎N‏ ‎NW 1‏ : ب ب ‎i”‏ اساسا ةا 1 ‎S =i N a <‏ مدو ‎Yaw vas‏ \ ْ - ‎Ty‏ : يسا ‎ox : NS‏ ‎AY‏ 1 يا ¥ ‎EERE‏ ‏ب 8 1 ‎AN ay 8‏ ٍ 8 : ‎RY TNR‏ ا ‎SSR a‏ ين ابت : ‎i Ny Moony‏ مك ‎fs we‏ : ‎X‏ 0 مح ‎HE Ain‏ 4 1 ‎IRE‏ ل ‎Qo A‏ ; ا £ - بي ‎Tey ٠ Vay‏ 8 5-4 . جد 1 = 1 ‎Ye‏ ‎FY‏ تخصضيف شكل *ك ‎TAS, wy, 2007302/NAP11/UnK2‏
    ‎NS.‏ ‎HEE NY‏ ‎NN NN IX‏ بحا : ‎Yew enn‏ ‎Nis SRR A‏ : ‎AN x‏ : ا ‎AY Ny‏ : هريط ‎ned : bY \‏ ‎Ye‏ : د ] ‎a‏ ‏ل |[ ‎ot WN‏ ا ‎On‏ ‏6 جا |[
    لط .سا الس لي : ب § ‎ia Say * Tey x Ye‏ 0 نا 0 ‎Yay‏ ‎vo A‏ 1 1 ‎tVoy‏
    © ‏ا‎ ‎(aye ‏شكل‎ ‎1 ‏وصفر‎ x ١ ‏ذاه‎ 2007838/ NAP7/126 ! ‏رن‎ : I 8# ‏المسظة‎ 8 : NN Tol x 8 : E NN SSE 8 8 Yu ss 55 6 = AN ‏إْ‎ YY \ ‏ا >< : نيم‎ = | ‏ا‎ ‎= | % \ ٍْ EY ‏4ح ب يج عا ءا .ءات‎ ‏كذ‎ ‎| SON ‏إْ‎ bY N : hen wif “ ee New Se Ko 1 1 ‏إْ‎ REE ‏وخر د‎ SN ‏ا‎ ‏لسسع ا‎ CI ‏»سس سس مسي سس‎ ‏ال : ب‎ Ye Yay ٠ fay 0 2-4 % ‏م‎ 0 Ya dd ١ 4 ‏صفر‎ Yo x 3 ‏تخا 2007686 وه تل‎ H : ‏ان ان‎ : SET <7 ‏ا اال‎ ٠ ‏ب ٍ لكا ل ل‎ WW RY : 3 ) \ : > AY 2 : od 1 YA ed : EY bY * ; 0 : % 3 : W ‏مم ه د داج دوت‎ AY X : RY ‏إْ‎ Wy \ : ‏اس‎ Ng ْ 8 + ah = we i ةسسذ٠ا ‏اص‎ ‎1 s - ‏م‎ ‏ب م ب‎ ok ‏و سا‎ “y. 2 13 oF 0 3 tVoy
    ©, 1 0 (TT Jes ‏اب‎ ; ‏دا #صفر أ‎ ١اس‎ 2009292/ NAP1 8 ْ 8 : 8 1 ‏ا ان ااا‎ 1 ‏ا‎ ARN N § IEE EERE) = ‏د‎ N 8 - ّ NO ~ | 1 fo 1 1 ‏يا‎ ‎2 ‏لا‎ ‎ِْ 3 5 a 1 8 ‏اح‎ ‎58 588 3 AY “8 ‏اذ‎ ‎1 1 8 1 A a 1 ْ ‏سه ناك سالا‎ oii se ‏دا ق ّ| ا‎ 1 wr we ‏لجسنسيسسية :لجست سيد خا‎ 8 ‏نأ سج سق‎ ‏بِ‎ 4 - 2 Voy 0 ‏د‎ N “Yo. 2-4 a ‏الها‎ ¥ i BS ‏تخفيف‎ /1١ on (YY ‏شكل‎ ‎TRY, ١ ‏سح‎ 200 7 ; 1 N 8 : : 1 1 ‏مسل< يالا سس‎ 88 : NY 8 ‏ا‎ N |. Youve naod WWE aN Say a NY > ‏محم‎ : EN \ N rt 1 AN x > 1 ‏الي“‎ ‎= : SN : AN EY ٍ ‏إل‎ ‎i La Dasa a SN) EY AN
    : . . Rnd 1 : ‏م الا‎ lier oo ode ‏“ا عون مه‎ BE ‏الح ل‎ ١ ‏لذ صفر‎ . : ; , & / AR ٠ Tey ٠ ‏خا‎ ٠ Buy 0 ‏تت‎ R kt = . . 4 ‏ب هم‎ H ١ ‏اي‎
    مج اذ شكل ‎(BT‏ ‏200914177 م اتا 1 بذ ‎RE‏ ‏8 ٍ 1 ع ا المح : ‎Re oreo ii.‏ ل ا ل : ‎ENR RY BD RN NH‏ : ‎te ox» + = AN 2 N RN TR‏ % \ 0 | = ‎pe : 3 AY‏ ‎fed : Wy Ww‏ 8 خا : ‎N‏ 0 \ 1 ‎N‏ ال \ : ‎RY . “8‏ : ‎Sa 3‏ \ = ج اج ‎Se xox‏ ‎RY‏ 8 8“ 8 0 بيد ‎CE‏ سسا : 1 م 8 ا + : ‎"Ne Sad‏ ‎Nay 1‏ 1 1 ا : اع سي ‎oi‏ جيم سخ ‎J. see wos‏ # : ‎RNS‏ : ‎a Te. 7‏ ; : نَْ “ » 3 ُ ‎٠‏ بس © ألا ‎٠‏ %~ د ® ‎Toy‏ ‏1 تحْقيف شكل ؟؟(ي) 2/3 2 فر + ‎yy, 0m 2005022 NAP3/:‏ ؛صفر ! ‎EN‏ ‎So EEN. oll «8 al‏ > : ‎WN RY el‏ ل ا : ‎NM 8 A.‏ : ‎X RN :‏ : ‎ot 8 SGN‏ يدوو حد ' ا : ~~ لا : 2 3 ‎Oe xr aa 3 AN‏ ‎Ni‏ كلا ْ ل اللخ 8 ‎Fo x fr oss SE‏ : الات > حك جيب ‎BN‏ ب" ‎NS‏ : ‎Pp‏ = . ‎AE Yayo tay, Oy, ey, Yay,‏ ‎Pe 0" A‏ ‎tVoy‏
    و شكل ‎(YT‏ ‏006767 . ا ال
    BE Nei RYN 8 : [EEE ER wg ‏تج‎ 8 8 NY ّ 50) > ‏ا‎ RN ‏الي ا‎
    - | AY = | \ ٍ \ YN ‏حلا جار را ا ل لات‎ 8 A : A ‏تل‎ ‎: 8 SE 6 Say Wg, X : 1 : & as ss # ‏س0 لله‎ 4 << ‏رصا‎ al Ty. aE ٠١ IN . as I J ‏اي‎
    ‎Ad ٠ 7 _‏ _ شكل ‎(hye‏ ‎a 4 0 -‏ 0 ‎NOH I NT Sy‏ ‎pd CD‏ ™ 5 0 بس 8 ثم 005 ل ينا ‎Lr‏ ل كلح ها نبي ‎Tum‏ ‏ر \ ‎Lo‏ وي م التي ‎NN‏ ‏وصسلات عرضية وسلات عرضية متخلفات ‎Glas AsP‏ بين الخلية ضمن الخلية منشطة ‎NHS‏ ‏شكل ‎Yi‏ (ب) © ا م ا اب وس الوم ‎a (a 20 0 Nm, a‏ ل اي 0 الب ااا 0 . 3 ‎WJ _‏ مواد مجمعة ‎Glycine‏ ‏شكل ‎Yi‏ }={ ‎ERR‏ ‏6 إن 0 4 0 ب ا ب ‎re ™ FN‏ و ا ااي تت ني 8 0 ا ا ألم ‎TT ws‏ بيه ‎wl"‏ ‏مواد مجمعة ‎Bela-alanine‏ —_
    ‎Ad ٠ A —_‏ _ ‎ES‏ 5 & ¥ ‎KEE‏ ‎Ba SN‏ اي ا ‎HHE 1 BDO ce A Had © sod 8 ٍ‏ 3 و ل ‎eed‏ الخ : 0 7-© لخدا لسن ا "م بي بحت ممست تاها طنش ‎S‏ ل 0 مواد لمجمعة ‎Botan‏ ل ال د ‎Nl‏ ‏,| اص : ا 8 ٍ 8 ‎i‏ 8 ‎gto 3 — £ - 8‏ ‘ ا 75 ‎EEN ERAN £ oN : Fe 5 LY Sy o oe Nag‏ ‎i Ny 5 EY IRL‏ ا 1 ‎No JR‏ اها ‎RL J‏ ا ‎Sa‏ اا اال ‎RRR RR essen ie BER Ne‏ ‎WS Lo‏ ا الم اا } : ا ا ال الا ؟ 5 ...نا ‎WRN WE ER A.‏ ‎a WE‏ ا ~ 8 ل ا وصلات «راضية وسبااتت غخرضية متخلمات طيخ روات ‎Wag waa Tah.‏ متايلة بين الخلية ضمن الخلية 8 ‎essa‏ ‏> 8 وساي ل ‎TER NE‏ : 8 ) مساواة اب 0 33 ¥ لاا ااا ‎IRN‏ ‏ا ‏يا ‏مواد مجمعة ريجات
    مدة سريان هذه البراءة عشرون سنة من تاريخ إيداع الطلب وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها أو سقوطها لمخالفتها لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية صادرة عن مدينة الملك عبدالعزيز للعلوم والتقنية ؛ مكتب البراءات السعودي ص ب ‎TAT‏ الرياض 57؟؟١١‏ ¢ المملكة العربية السعودية بريد الكتروني: ‎patents @kacst.edu.sa‏
SA115360697A 2011-04-22 2012-04-21 تركيبات تتعلق بتكسين دفيسيل كلوزتريديوم طفري وبطرق لصنعه SA115360697B1 (ar)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161478474P 2011-04-22 2011-04-22
US201161478899P 2011-04-25 2011-04-25

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA115360697B1 true SA115360697B1 (ar) 2016-04-05

Family

ID=46085103

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA112330472A SA112330472B1 (ar) 2011-04-22 2012-04-21 تركيبات تتعلق بتكسين دفيسيل كلوزتريديوم طفري وبطرق لصنعه
SA115360698A SA115360698B1 (ar) 2011-04-22 2012-04-21 تركيبات تتعلق بتكسين دفيسيل كلوزتريديوم طفري وبطرق لصنعه
SA115360697A SA115360697B1 (ar) 2011-04-22 2012-04-21 تركيبات تتعلق بتكسين دفيسيل كلوزتريديوم طفري وبطرق لصنعه

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA112330472A SA112330472B1 (ar) 2011-04-22 2012-04-21 تركيبات تتعلق بتكسين دفيسيل كلوزتريديوم طفري وبطرق لصنعه
SA115360698A SA115360698B1 (ar) 2011-04-22 2012-04-21 تركيبات تتعلق بتكسين دفيسيل كلوزتريديوم طفري وبطرق لصنعه

Country Status (29)

Country Link
US (13) US8481692B2 (ar)
EP (4) EP3505531B1 (ar)
JP (8) JP5917682B2 (ar)
KR (1) KR101667837B1 (ar)
CN (3) CN107022532B (ar)
AR (1) AR086199A1 (ar)
AU (6) AU2012245904B2 (ar)
BR (2) BR122019017005B1 (ar)
CA (1) CA2832712C (ar)
CO (1) CO6801643A2 (ar)
DK (2) DK2699587T3 (ar)
ES (3) ES2968629T3 (ar)
FI (1) FI3549949T3 (ar)
HR (2) HRP20231631T1 (ar)
HU (1) HUE047085T2 (ar)
IL (8) IL270779B1 (ar)
MX (1) MX347521B (ar)
MY (2) MY168205A (ar)
NZ (1) NZ616035A (ar)
PE (2) PE20141029A1 (ar)
PL (3) PL2699587T3 (ar)
PT (2) PT3549949T (ar)
RU (2) RU2754446C2 (ar)
SA (3) SA112330472B1 (ar)
SG (3) SG194132A1 (ar)
SI (3) SI3549949T1 (ar)
TW (6) TWI815599B (ar)
WO (1) WO2012143902A1 (ar)
ZA (1) ZA201307818B (ar)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5345532B2 (ja) * 2006-08-02 2013-11-20 ヨハネス・グーテンベルク−ウニヴェルジテート・マインツ Ｌｃｔ中毒に対する医薬品
WO2010067262A1 (en) * 2008-12-09 2010-06-17 Pfizer Inc. Immunostimulatory oligonucleotides
BR112014004896B1 (pt) 2010-09-03 2023-02-14 Valneva Usa, Inc. Polipepttdeo isolado de proteínas de toxina a e toxina b de c. difficile e usos do mesmo
PE20141029A1 (es) 2011-04-22 2014-09-04 Wyeth Llc Composiciones relacionadas con una toxina de clostridium difficile mutante y sus metodos
ES2704069T3 (es) * 2011-12-08 2019-03-14 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vacuna basada en toxinas de Clostridium difficile
AR089797A1 (es) 2012-01-27 2014-09-17 Merck Sharp & Dohme Vacunas contra clostridum difficile que comprenden toxinas recombinantes
EP3838923B1 (en) 2012-08-24 2024-05-01 The Regents of The University of California Antibodies and vaccines for use in treating ror1 cancers and inhibiting metastasis
US20140081659A1 (en) 2012-09-17 2014-03-20 Depuy Orthopaedics, Inc. Systems and methods for surgical and interventional planning, support, post-operative follow-up, and functional recovery tracking
BR122016023101B1 (pt) * 2012-10-21 2022-03-22 Pfizer Inc Polipeptídeo, composição imunogênica que o compreende, bem como célula recombinante derivada de clostridium difficile
NZ707895A (en) * 2012-11-06 2019-07-26 Bayer Pharma AG Formulation for bispecific t-cell engagers (bites)
US9493518B2 (en) * 2013-03-14 2016-11-15 National Health Research Institutes Compositions and methods for treating clostridium difficile-associated diseases
EP2968508B1 (en) 2013-03-15 2022-04-27 Sanofi Pasteur Biologics, LLC Antibodies against clostridium difficile toxins and methods of using the same
EP2988778A4 (en) * 2013-04-22 2016-12-14 Board Of Regents Of The Univ Of Oklahoma CLOSTRIDIUM DIFFICILE IMPREGENT AND METHOD OF USE
CA2915279A1 (en) 2013-06-14 2014-12-18 Sanofi Pasteur Inc. Compositions and methods of immunizing against c. difficile
US9717711B2 (en) 2014-06-16 2017-08-01 The Lauridsen Group Methods and compositions for treating Clostridium difficile associated disease
WO2016012587A1 (en) * 2014-07-25 2016-01-28 Biosynth S.R.L. Glycoconjugate vaccines comprising basic units of a molecular construct expressing built-in multiple epitopes for the formulation of a broad-spectrum vaccine against infections due to enteropathogenic bacteria
EP3256855B1 (en) * 2015-02-13 2020-10-07 Quanterix Corporation Immunoassays for diffrential detection of clostridium difficile
US11185555B2 (en) 2016-04-11 2021-11-30 Noah James Harrison Method to kill pathogenic microbes in a patient
SG11201811559WA (en) 2016-06-27 2019-01-30 Univ California Cancer treatment combinations
US20190211377A1 (en) * 2016-12-22 2019-07-11 Roche Molecular Systems, Inc. Cobra probes to detect a marker for epidemic ribotypes of clostridium difficile
WO2019064115A1 (en) * 2017-09-28 2019-04-04 Pfizer Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR GENERATING A DIFFICULT CLOSTRIDIUM IMMUNE RESPONSE
WO2020201985A1 (en) * 2019-04-01 2020-10-08 Pfizer Inc. Compositions and methods for eliciting an immune response against clostridium difficile
EP3965810A4 (en) * 2019-05-10 2023-01-25 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma CLOSTRIDIOIDES DIFFICILE TCDB VARIANTS, VACCINES AND METHOD OF USE
WO2020231930A1 (en) * 2019-05-11 2020-11-19 The Texas A&M University System Protein inhibitors of clostridium difficile toxin b
KR102376876B1 (ko) 2020-04-09 2022-03-21 대진대학교 산학협력단 무독성의 클로스트리디움 디피실 독소단백질-단편 및 이의 용도
CA3177003A1 (en) * 2020-05-06 2021-11-11 Vern L. Schramm Agents to prevent tissue damage from clostridium difficile infections by inhibition of the gut-damaging bacterial toxins tcda and tcdb
CN111755068B (zh) * 2020-06-19 2021-02-19 深圳吉因加医学检验实验室 基于测序数据识别肿瘤纯度和绝对拷贝数的方法及装置
WO2021255690A2 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Pfizer Inc. Immunogenic compositions against clostridioides (clostridium) difficile and methods thereof
WO2023175454A1 (en) 2022-03-14 2023-09-21 Pfizer Inc. Methods for producing an adjuvant
WO2023232901A1 (en) 2022-06-01 2023-12-07 Valneva Austria Gmbh Clostridium difficile vaccine

Family Cites Families (110)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS58216123A (ja) 1982-06-10 1983-12-15 Kazue Ueno 抗血清
US4689299A (en) 1982-09-30 1987-08-25 University Of Rochester Human monoclonal antibodies against bacterial toxins
US4713240A (en) 1985-04-04 1987-12-15 Research Corporation Vaccines based on insoluble supports
US5358868A (en) 1987-11-24 1994-10-25 Connaught Laboratories Limited Genetic detoxification of pertussis toxin
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5601823A (en) 1989-10-31 1997-02-11 Ophidian Pharmaceuticals, Inc. Avian antitoxins to clostridium difficle toxin A
US5919665A (en) 1989-10-31 1999-07-06 Ophidian Pharmaceuticals, Inc. Vaccine for clostridium botulinum neurotoxin
US5599539A (en) 1989-10-31 1997-02-04 Ophidian Pharmaceuticals, Inc. Therapy for clostridial botulinum toxin
US5578308A (en) 1990-02-12 1996-11-26 Capiau; Carine Glutaraldehyde and formalin detoxified bordetella toxin vaccine
US5231003A (en) 1990-05-11 1993-07-27 Cambridge Bioscience Corporation Monoclonal antibodies specific for toxin b of clostridium difficile
EP0581882B1 (en) 1991-04-22 1998-01-07 Massachusetts Health Research Institute, Inc. (Mhri) Process of screening plasma samples for effective antibody titers against respiratory viruses
US6221363B1 (en) 1991-07-11 2001-04-24 Baxter Aktiengesellschaft Vaccine for the prevention of lyme disease
WO1994022476A1 (en) 1993-03-29 1994-10-13 Pfizer Inc. Multicomponent clostridial vaccines using saponin adjuvants
JPH10505358A (ja) 1994-09-06 1998-05-26 ギャラゲン・インコーポレイテッド クロストリジウム・ディフィシル関連疾患の治療処置
HUT78048A (hu) 1994-10-24 1999-07-28 Ophidian Pharmaceuticals, Inc. A C. difficile által okozott betegség kezelésére és megelőzésére szolgáló vakcina és antitoxin
US6743430B1 (en) 1995-03-29 2004-06-01 Richard E. Parizek Multicomponent vaccine containing clostridial and non-clostridial organisms in a low dose
US5610023A (en) 1995-03-31 1997-03-11 Lee Laboratories, Inc. Method of purification of clostridium difficile toxin A and production of mono-specific antibodies
CN1195297A (zh) 1995-07-07 1998-10-07 奥拉瓦克斯有限公司 艰难梭菌毒素作为粘膜佐剂
US5919463A (en) 1995-07-07 1999-07-06 Oravax, Inc. Clostridium difficle toxins as mucosal adjuvants
JPH11510793A (ja) 1995-07-07 1999-09-21 オラバックス インク． 胃腸病に対する鼻腔内ワクチン接種
CA2232001C (en) * 1995-09-15 2002-12-10 Dale N. Gerding Methods and compositions for prevention and treatment of clostridium difficile-associated diseases
IL127935A (en) 1996-07-12 2003-06-24 First Opinion Corp Computerized medical diagnostic and treatment advice system including network access
ID21338A (id) 1996-09-30 1999-05-27 Embrex Inc Metoda untuk menghasilkan kekebalan aktif dengan vaksin gabungan
US20100267012A1 (en) 1997-11-04 2010-10-21 Bergeron Michel G Highly conserved genes and their use to generate probes and primers for detection of microorganisms
WO1998040100A1 (en) 1997-03-10 1998-09-17 Ottawa Civic Loeb Research Institute USE OF NUCLEIC ACIDS CONTAINING UNMETHYLATED CpG DINUCLEOTIDE AS AN ADJUVANT
US6299881B1 (en) 1997-03-24 2001-10-09 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Uronium salts for activating hydroxyls, carboxyls, and polysaccharides, and conjugate vaccines, immunogens, and other useful immunological reagents produced using uronium salts
US20050106157A1 (en) 1997-05-27 2005-05-19 Deckers Harm M. Immunogenic formulations comprising oil bodies
EP1000155A1 (en) 1997-06-20 2000-05-17 QUEEN MARY &amp; WESTFIELD COLLEGE Immunogenic fragments of toxin a of clostridium difficile
DE19739685A1 (de) 1997-09-10 1999-03-11 Eichel Streiber Christoph Von Monoklonale Antikörper zur Therapie und Prophylaxe von Erkrankungen durch Clostridium difficile
EP1568378B1 (en) 1997-10-20 2016-03-16 Sanofi Pasteur Biologics, LLC Immunization against Clostridium difficile disease
AU754270B2 (en) 1997-10-20 2002-11-07 Sanofi Pasteur Biologics, Llc Passive immunization against clostridium difficile disease
US6969520B2 (en) 1997-10-20 2005-11-29 Acambis Inc. Active immunization against clostridium difficile disease
JP2002542169A (ja) 1999-04-09 2002-12-10 テクラブ， インコーポレイテッド Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅに対する、組換え毒素Ａ／毒素Ｂワクチン
WO2000061761A2 (en) 1999-04-09 2000-10-19 Techlab, Inc. Recombinant clostridium toxin a protein carrier for polysaccharide conjugate vaccines
US6733760B1 (en) 1999-04-09 2004-05-11 Techlab, Inc. Recombinant toxin A/toxin B vaccine against Clostridium difficile
KR100922031B1 (ko) 1999-04-19 2009-10-19 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 백신
GB0008682D0 (en) 2000-04-07 2000-05-31 Microbiological Res Authority Transformation of clostridium difficile
MXPA02010826A (es) * 2000-05-04 2006-03-09 Harvard College Compuestos y metodos para el tratamiento y la prevencion de infeccion bacteriana.
US20050053575A1 (en) * 2001-06-20 2005-03-10 Ramot At Tel Aviv University Ltd Antigenic product displaying multiple copies of an epitope of a deposit-forming polypeptide involved in plaque-forming diseases and methods of using same
US20040029129A1 (en) * 2001-10-25 2004-02-12 Liangsu Wang Identification of essential genes in microorganisms
AU2003242024A1 (en) 2002-06-05 2003-12-22 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of constructing antibody
WO2004041857A2 (en) * 2002-06-17 2004-05-21 Ballard Jimmy D Mutant of clostridium difficile toxin b and methods of use
US20040235139A1 (en) 2002-12-23 2004-11-25 Demain Arnold L. Clostridium difficile culture and toxin production methods
ES2295836T3 (es) * 2003-03-13 2008-04-16 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Procedimiento de purificacion de citolisina bacteriana.
US20050020506A1 (en) 2003-07-25 2005-01-27 Drapeau Susan J. Crosslinked compositions comprising collagen and demineralized bone matrix, methods of making and methods of use
AU2005206951B2 (en) 2004-01-16 2010-08-19 Pfenex Inc. Expression of mammalian proteins in Pseudomonas fluorescens
NZ530709A (en) 2004-01-21 2006-07-28 Agres Ltd Improved IGA production method
CA2553946C (en) 2004-02-06 2019-02-26 University Of Massachusetts Antibodies against clostridium difficile toxins and uses thereof
GB0421083D0 (en) * 2004-09-22 2004-10-27 Glaxosmithkline Biolog Sa Purification process
EP1833510A4 (en) * 2004-12-27 2010-02-10 Progenics Pharmaceuticals Neva ORAL ADMINISTRATION ANTITOXIN ANTIBODIES AND METHODS OF MAKING AND USING THE SAME
WO2006130925A1 (en) 2005-06-10 2006-12-14 Monash University Genetic manipulation of clostridium difficile
GB0512751D0 (en) 2005-06-22 2005-07-27 Glaxo Group Ltd New adjuvant
WO2007090126A2 (en) * 2006-01-30 2007-08-09 Invitrogen Corporation Compositions and methods for detecting and quantifying toxic substances in disease states
RU2409385C2 (ru) * 2006-03-30 2011-01-20 Эмбрекс, Инк. Способ иммунизации птицы против инфекции, вызванной бактериями clostridium
US8852600B2 (en) * 2006-06-08 2014-10-07 The Rockefeller University Codon-optimized DNA molecules encoding the receptor binding domains of Clostridium difficile toxins A and B, and methods of use thereof
GB0612301D0 (en) 2006-06-21 2006-08-02 Morvus Technology Ltd DNA molecules and methods
US20080206819A1 (en) 2006-08-21 2008-08-28 Mary Tsao Intensified Perfusion Production Method
US7775167B2 (en) 2006-08-22 2010-08-17 Monsanto Technology Llc Custom planter and method of custom planting
EP2813144A1 (en) 2006-10-09 2014-12-17 Charleston Laboratories, Inc. Analgesic compositions comprising an antihistamine
US9023352B2 (en) * 2007-02-20 2015-05-05 Tufts University Methods, compositions and kits for treating a subject using a recombinant heteromultimeric neutralizing binding protein
JP5164970B2 (ja) * 2007-03-02 2013-03-21 パナソニック株式会社 音声復号装置および音声復号方法
EP2014760A1 (en) 2007-06-13 2009-01-14 CMC Biopharmaceuticals A/S A method for producing a biopolymer (e.g. polypeptide) in a continuous fermentation process
US9096638B2 (en) 2007-09-06 2015-08-04 Geneohm Sciences Canada, Inc. Detection of toxigenic strains of Clostridium difficile
SI2198007T1 (en) * 2007-09-14 2018-04-30 Sanofi Pasteur Biologics, Llc Pharmaceutical compositions containing Clostridium difficile A and B toxoids
WO2009132082A2 (en) * 2008-04-22 2009-10-29 Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. Immunogenic compositions containing ceramide and methods of use thereof
EP2288719A4 (en) 2008-05-15 2012-01-11 Univ Tufts DIFFICULT CLOSTRIDIUM DIAGNOSTIC METHODS AND METHODS AND VECTORS FOR EXPRESSION OF RECOMBINANT TOXINS
US9421251B2 (en) 2008-06-25 2016-08-23 Novartis Ag Rapid responses to delayed booster immunisations
EP2146490A1 (en) 2008-07-18 2010-01-20 Alcatel, Lucent User device for gesture based exchange of information, methods for gesture based exchange of information between a plurality of user devices, and related devices and systems
US20120020996A1 (en) 2008-08-06 2012-01-26 Jonathan Lewis Telfer Vaccines against clostridium difficile and methods of use
US9115347B2 (en) 2008-09-24 2015-08-25 Sanofi Pasteur Biologies, LLC Methods and compositions for increasing toxin production
CN102264381B (zh) 2008-10-01 2014-07-09 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) 提供对疟原虫的长效免疫应答的用于疟疾的多组分疫苗
US10369204B2 (en) * 2008-10-02 2019-08-06 Dako Denmark A/S Molecular vaccines for infectious disease
RU2011126602A (ru) 2008-12-03 2013-01-10 Берингер Ингельхайм Ветмедика Гмбх Способ получения вакцин
WO2010067262A1 (en) 2008-12-09 2010-06-17 Pfizer Inc. Immunostimulatory oligonucleotides
GB0901001D0 (en) * 2009-01-22 2009-03-04 Univ Nottingham Methods
AU2010215275B2 (en) * 2009-02-20 2016-03-31 Micropharm Limited Antibodies to Clostridium difficile toxins
CA2772400A1 (en) 2009-08-27 2011-03-17 Synaptic Research, Llc A novel protein delivery system to generate induced pluripotent stem (ips) cells or tissue-specific cells
WO2011060431A2 (en) * 2009-11-16 2011-05-19 University Of Maryland Baltimore Multivalent live vector vaccine against clostridium difficile-associated disease
JP2013512916A (ja) * 2009-12-02 2013-04-18 タフツ ユニバーシティー 免疫原としてのＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅの無毒の組換えホロトキシン
GB0921288D0 (en) * 2009-12-04 2010-01-20 Health Prot Agency Therapies for preventing or suppressing clostridium difficile infection
TW201136603A (en) * 2010-02-09 2011-11-01 Merck Sharp & Amp Dohme Corp 15-valent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate vaccine composition
CN101870978A (zh) * 2010-03-23 2010-10-27 王世霞 密码子优化的艰难梭菌外毒素a羧基端基因序列及其核酸疫苗
CA2793978C (en) 2010-03-30 2021-08-03 Pfenex Inc. High level expression of recombinant toxin proteins
US8765399B2 (en) 2010-05-18 2014-07-01 Montefiore Medical Center Cultures and protocols for diagnosis of toxigenic Clostridium difficile
BR112014004896B1 (pt) * 2010-09-03 2023-02-14 Valneva Usa, Inc. Polipepttdeo isolado de proteínas de toxina a e toxina b de c. difficile e usos do mesmo
GB201016742D0 (en) 2010-10-05 2010-11-17 Health Prot Agency Clostridium difficile antigens
US9285372B2 (en) * 2010-11-12 2016-03-15 Reflexion Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for identifying D-peptidic compounds that specifically bind target proteins
PE20141029A1 (es) 2011-04-22 2014-09-04 Wyeth Llc Composiciones relacionadas con una toxina de clostridium difficile mutante y sus metodos
HRP20231749T1 (hr) 2011-05-27 2024-03-15 Glaxosmithkline Biologicals Sa Imunogeni pripravak
WO2012166991A1 (en) * 2011-05-31 2012-12-06 The Board Of Regents Of The University Of Texas Systeem S-nitrosylation of glucosylating toxins and uses therefor
ES2704069T3 (es) 2011-12-08 2019-03-14 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vacuna basada en toxinas de Clostridium difficile
AR089797A1 (es) 2012-01-27 2014-09-17 Merck Sharp & Dohme Vacunas contra clostridum difficile que comprenden toxinas recombinantes
CN104582722A (zh) 2012-09-19 2015-04-29 诺华股份有限公司 作为疫苗的艰难梭菌多肽
BR122016023101B1 (pt) 2012-10-21 2022-03-22 Pfizer Inc Polipeptídeo, composição imunogênica que o compreende, bem como célula recombinante derivada de clostridium difficile
AU2013352034B2 (en) 2012-11-28 2018-08-02 Emergent Biosolutions Canada Inc. Antibodies against Clostridium difficile
JP6290918B2 (ja) 2012-12-05 2018-03-07 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム 免疫原性組成物
GB201223342D0 (en) 2012-12-23 2013-02-06 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
AU2014228956A1 (en) 2013-03-15 2015-10-08 Sanofi Pasteur, Inc. Toxoid, compositions and related methods
EP2968508B1 (en) 2013-03-15 2022-04-27 Sanofi Pasteur Biologics, LLC Antibodies against clostridium difficile toxins and methods of using the same
US20170165375A1 (en) 2013-04-02 2017-06-15 Stc. Unm Antibiotic protocells and related pharmaceutical formulations and methods of treatment
CA2915279A1 (en) 2013-06-14 2014-12-18 Sanofi Pasteur Inc. Compositions and methods of immunizing against c. difficile
US20160250283A1 (en) 2013-10-23 2016-09-01 The Rockefeller University Compositions and methods for prophylaxis and therapy of clostridium difficile infection
US11160855B2 (en) 2014-01-21 2021-11-02 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
KR102069988B1 (ko) 2015-11-17 2020-01-23 화이자 인코포레이티드 박테리아 세포 배양에서 폴리사카라이드를 생성하기 위한 배지 및 발효 방법
CN108697778B (zh) 2016-02-16 2023-10-03 哈佛学院院长等 病原体疫苗及其生产和使用方法
IL269258B2 (en) 2017-03-15 2023-09-01 Novavax Inc Methods and compositions for inducing immune responses against Clostridium difficile
US10577665B2 (en) 2017-09-05 2020-03-03 Mcmaster University Aptamers for clostridium difficile detection
WO2019064115A1 (en) 2017-09-28 2019-04-04 Pfizer Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR GENERATING A DIFFICULT CLOSTRIDIUM IMMUNE RESPONSE
JP6704173B2 (ja) 2019-09-26 2020-06-03 パナソニックＩｐマネジメント株式会社 開閉器及び分電盤

Also Published As

Publication number Publication date
JP2021130692A (ja) 2021-09-09
MX2013012344A (es) 2013-11-20
SI2699587T1 (sl) 2019-08-30
AU2016202903B2 (en) 2017-11-30
KR20130140206A (ko) 2013-12-23
US10774117B2 (en) 2020-09-15
NZ616035A (en) 2016-03-31
DK2699587T3 (da) 2019-08-05
US20130244307A1 (en) 2013-09-19
CO6801643A2 (es) 2013-11-29
ZA201307818B (en) 2014-06-25
FI3549949T3 (fi) 2024-01-30
JP5917682B2 (ja) 2016-05-18
AR086199A1 (es) 2013-11-27
TW202320843A (zh) 2023-06-01
RU2013145170A (ru) 2015-06-27
DK3549949T3 (da) 2023-12-18
AU2017261465B2 (en) 2018-10-04
US20190202873A1 (en) 2019-07-04
CN103619871B (zh) 2016-12-14
HUE047085T2 (hu) 2020-04-28
EP2699587A1 (en) 2014-02-26
MX347521B (es) 2017-04-27
AU2012245904A1 (en) 2013-10-17
CN103619871A (zh) 2014-03-05
AU2019246878A1 (en) 2019-10-31
CA2832712A1 (en) 2012-10-26
JP2018135345A (ja) 2018-08-30
US20170313749A1 (en) 2017-11-02
RU2754446C2 (ru) 2021-09-02
AU2012245904B2 (en) 2016-04-21
CN111647059A (zh) 2020-09-11
CA2832712C (en) 2018-08-28
RU2592686C2 (ru) 2016-07-27
WO2012143902A1 (en) 2012-10-26
JP2016117745A (ja) 2016-06-30
US20200095290A1 (en) 2020-03-26
AU2019246878B2 (en) 2020-09-10
IL245047A0 (en) 2016-05-31
SG10201602668VA (en) 2016-05-30
IL273231B (en) 2021-08-31
US8900597B2 (en) 2014-12-02
USRE46518E1 (en) 2017-08-22
IL265510B (en) 2021-05-31
IL265510A (en) 2019-05-30
US20120269841A1 (en) 2012-10-25
US20150125927A1 (en) 2015-05-07
JP2019052149A (ja) 2019-04-04
AU2020230248B2 (en) 2022-12-01
CN111647059B (zh) 2023-11-28
USRE48863E1 (en) 2021-12-28
EP3549949A1 (en) 2019-10-09
JP6892425B2 (ja) 2021-06-23
HRP20231631T1 (hr) 2024-03-15
IL228944A (en) 2017-11-30
AU2017261465A1 (en) 2017-11-30
US10597428B2 (en) 2020-03-24
EP3549949B1 (en) 2023-11-29
IL255345B (en) 2021-05-31
US20230391835A1 (en) 2023-12-07
US20150307563A1 (en) 2015-10-29
ES2969952T3 (es) 2024-05-23
US8481692B2 (en) 2013-07-09
EP3505531B1 (en) 2023-11-15
USRE48862E1 (en) 2021-12-28
JP2022126822A (ja) 2022-08-30
CN107022532B (zh) 2021-05-04
USRE46376E1 (en) 2017-04-25
IL254418A0 (en) 2017-11-30
CN107022532A (zh) 2017-08-08
JP6735784B2 (ja) 2020-08-05
TW201932481A (zh) 2019-08-16
IL254440B (en) 2019-12-31
AU2018201296A1 (en) 2018-03-15
IL273231A (en) 2020-04-30
SG10201911993UA (en) 2020-02-27
PT3549949T (pt) 2024-02-02
PE20181334A1 (es) 2018-08-21
EP4365196A2 (en) 2024-05-08
TWI671313B (zh) 2019-09-11
ES2968629T3 (es) 2024-05-13
PE20141029A1 (es) 2014-09-04
HRP20240042T1 (hr) 2024-03-29
IL270779A (en) 2020-01-30
US9745354B2 (en) 2017-08-29
KR101667837B1 (ko) 2016-10-20
TWI815599B (zh) 2023-09-11
TW202041525A (zh) 2020-11-16
SA112330472B1 (ar) 2015-11-02
PL2699587T3 (pl) 2019-12-31
BR112013027229A2 (pt) 2016-11-29
BR112013027229B1 (pt) 2020-10-27
MY168205A (en) 2018-10-15
AU2016202903A1 (en) 2016-05-26
PL3505531T3 (pl) 2024-03-11
SI3505531T1 (sl) 2024-02-29
US9187536B1 (en) 2015-11-17
TWI701257B (zh) 2020-08-11
EP3505531A1 (en) 2019-07-03
JP2017125030A (ja) 2017-07-20
IL254418B (en) 2019-12-31
JP7097478B2 (ja) 2022-07-07
TW201932480A (zh) 2019-08-16
TW201302780A (zh) 2013-01-16
JP2014514318A (ja) 2014-06-19
SI3549949T1 (sl) 2024-02-29
TWI686402B (zh) 2020-03-01
US8557548B2 (en) 2013-10-15
IL255345A0 (en) 2017-12-31
JP2018052938A (ja) 2018-04-05
RU2015154443A (ru) 2019-01-17
PT2699587T (pt) 2019-09-05
ES2742823T3 (es) 2020-02-17
TW201806967A (zh) 2018-03-01
AU2020230248A1 (en) 2020-10-01
BR122019017005B1 (pt) 2022-03-29
TWI804717B (zh) 2023-06-11
SG194132A1 (en) 2013-11-29
JP6097853B2 (ja) 2017-03-15
PL3549949T3 (pl) 2024-04-08
TWI650329B (zh) 2019-02-11
MY182429A (en) 2021-01-25
RU2015154443A3 (ar) 2019-05-22
JP6321239B2 (ja) 2018-05-09
US20130330371A1 (en) 2013-12-12
IL254440A0 (en) 2017-11-30
IL270779B1 (en) 2024-05-01
SA115360698B1 (ar) 2016-04-27
US11535652B2 (en) 2022-12-27
EP2699587B1 (en) 2019-07-03
IL228944A0 (en) 2013-12-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA115360697B1 (ar) تركيبات تتعلق بتكسين دفيسيل كلوزتريديوم طفري وبطرق لصنعه
KR102165384B1 (ko) 항-뎅기 바이러스 항체 및 이들의 용도
US10196453B2 (en) Compositions and methods for treating Clostridium difficile infection
EP3155004B1 (en) Vaccine for immunocompromised hosts