RU2748833C2 - Производное пиразоло-гетероарила, способ его получения и медицинское применение - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение относится к новому производному пиразоло-гетероарила, представленному общей формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, где кольцо A представляет собой фенил; G представляет собой N; X¹ представляет собой CH₂; L¹ выбран из группы, состоящей из -NR⁴-, -O-, -C(O)-, -N(R⁴)C(O)- и ковалентной связи; R¹ представляет собой C_1-6 алкил, где C_1-6 алкил необязательно замещен одним или более C_1-6 алкокси; R² представляет собой водород или галоген; L² представляет собой CH₂; R³ представляет собой 4-6-членную насыщенную моноциклическую группу, где один кольцевой атом представляет собой N; R⁴ представляет собой водород; и n равно 0 или 1. Кроме того, изобретение относится к соединению, представленному общей формулой (I-C), или его фармацевтически приемлемой соли, где W представляет собой п-метоксибензил; Х представляет собой галоген; кольцо A представляет собой фенил; G представляет собой N; X¹ представляет собой CH₂; R² представляет собой водород или галоген; L² представляет собой CH₂; R³ представляет собой 4-6-членную насыщенную моноциклическую группу, где один кольцевой атом представляет собой N; n равно 0 или 1, а также к соединению, представленному общей формулой (I-E), или его фармацевтически приемлемой соли, где W представляет собой п-метоксибензил; кольцо A представляет собой фенил; G представляет собой N; X¹ представляет собой CH₂; L¹ выбран из группы, состоящей из -NR⁴-, -O-, -C(O)-, -N(R⁴)C(O)- и ковалентной связи; R¹ представляет собой C_1-6 алкил, где C_1-6 алкил необязательно замещен одним или более C_1-6 алкокси; R² представляет собой водород или галоген; L² представляет собой CH₂; R³ представляет собой 4-6-членную насыщенную моноциклическую группу, где один кольцевой атом представляет собой N, R⁴ представляет собой водород; n равно 0 или 1. Кроме того, изобретение относится к способам получения представленных соединений, фармацевтической композиции, содержащей указанное производное, и его применению в качестве терапевтического агента, в частности в качестве агониста TLR7. Технический результат: получены и описаны новые соединения, которые могут найти свое применение в качестве терапевтического агента, в частности в качестве агониста TLR7. 8 н. и 8 з.п. ф-лы, 3 табл.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к новому производному пиразоло-гетероарила формулы (I), способу его получения и содержащей его фармацевтической композиции, а также к его применению в качестве терапевтического агента, в частности, в качестве агониста TLR7.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Толл-подобные рецепторы (TLR) представляют собой класс важных белковых молекул, участвующих во врожденном иммунитете. TLR представляют собой мономерные трансмембранные некаталитические рецепторы, обычно экспрессируемые на сторожевых клетках, таких как макрофаги и дендритные клетки, и обладают способностью распознавать структурно-консервативные молекулы, продуцируемые микробами. Как только эти микробы прорываются через физические барьеры, такие как кожа или слизистая оболочка кишечного тракта, они распознаются TLR, которые активируют клеточные иммунные ответы (Mahla, RS. et al., Front Immunol. 4: 248 (2013)). Способность иммунной системы распознавать широкий спектр патогенных микроорганизмов среди прочего обусловлена широкораспространенным присутствием толл-подобных иммунорецепторов (TLR).

Млекопитающие имеют по меньшей мере десять различных TLR. Для некоторых из этих рецепторов были идентифицированы лиганды и соответствующие сигнальные каскады. TLR7 является членом подгруппы TLR (TLR 3, 7, 8 и 9), локализованных в эндосомальном компартменте клеток, которые специализируются на обнаружении чужеродных нуклеиновых кислот. TLR7 играет ключевую роль в противовирусной защите посредством распознавания оцРНК (одноцепочечных РНК) (Diebold S. S. et al, Science, 2004: 303, 1529-1531; и Lund J. M. et al, PNAS, 2004: 101, 5598-5603). TLR7 имеет ограниченный профиль экспрессии у человека и экспрессируется преимущественно B-клетками и плазмоцитоидными дендритными клетками (пДК) и, в меньшей степени, моноцитами. Плазмоцитоидные ДК представляют собой уникальную популяцию дендритных клеток лимфоидного происхождения (0,2-0,8 % мононуклеарных клеток периферической крови (МНПК)), которые являются главными клетками, продуцирующими интерферон I типа, секретирующими большие количества интерферона-альфа (IFN-α) и интерферона-бета (IFN-β) в ответ на вирусные инфекции (Liu Y-J, Annu. Rev. Immunol., 2005: 23, 275-306).

Ряд заболеваний и расстройств связан с нарушениями в TLR, таких как меланома, немелкоклеточная карцинома легкого, гепатоцеллюлярная карцинома, базальноклеточная карцинома, почечно-клеточная карцинома, миелома, аллергический ринит, астма, хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ), язвенный колит, фиброз печени и вирусные инфекции, такие как ВГВ (вирус гепатита B), вирусы семейства Flaviviridae, ВГС (вирус гепатита C), ВПЧ (вирус папилломы человека), РСВ (респираторно-синцитиальный вирус), ТОРС (тяжелый острый респираторный синдром), ВИЧ (вирус иммунодефицита человека) или грипп. Следовательно, применение агониста TLR для лечения связанных заболеваний является очень перспективным.

Поскольку TLR7 и TLR8 являются высоко гомологичными, лиганд TLR7 в большинстве случаев также является лигандом TLR8. Стимуляция TLR8 в основном вызывает продуцирование цитокинов, таких как фактор некроза опухоли-α (TNF-α) и хемокин. Интерферон-α является одним из основных лекарственных средств для лечения хронического гепатита В или гепатита С, в то время как TNF-α является провоспалительным цитокином и его чрезмерная секреция может вызывать серьезные побочные действия. Следовательно, селективность в отношении TLR7 и TLR8 является решающей в разработке агониста TLR7 для лечения вирусных инфекционных заболеваний.

В настоящее время существуют патентные заявки, относящиеся к агонистам TLR7, такие как WO2005025583, WO2007093901, WO2008011406, WO2009091032, WO2010077613, WO2010133882, WO2011031965 и WO2012080730. Однако все еще существует необходимость в разработке агонистов TLR7, которые были бы более безопасными и более терапевтически эффективными.

В свете вышеупомянутых технических проблем в настоящем изобретении предложено фармацевтическое соединение, имеющее более низкую концентрацию начала действия, лучшую селективность (селективное к TLR7 и не оказывающее активирующего действия на TLR8), более эффективное активирующее действие и в то же время из-за слабого ингибирующего действия на CYP (цитохром Р450) являющееся более безопасным и более эффективным агонистом TLR7.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Целью настоящего изобретения является обеспечение соединения формулы (I):

или его таутомера, мезомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли,

где

кольцо A выбрано из группы, состоящей из циклоалкила, гетероциклила, арила и гетероарила;

G представляет собой СН или N;

X¹ представляет собой алкилен или S(O)_m, где алкилен необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, алкила, алкокси, галогеналкила, гидрокси, гидроксиалкила, циано, амино, нитро, циклоалкила и гетероциклила;

L¹ выбран из группы, состоящей из -NR⁴-, -O-, -S-, -C(O)-, -C(O)-OR⁴, -S(O)_m-, -N(R⁴)C(O)-, -C(O)N(R⁴)-, -N(R⁴)S(O)₂-, -S(O)₂N(R⁴)- и ковалентной связи;

R¹ выбран из группы, состоящей из алкила, алкокси, галогеналкила, алкенила, алкинила, циклоалкила, гетероциклила, арила и гетероарила, где каждый алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклил, арил и гетероарил независимо необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из алкила, алкокси, галогена, галогеналкила, гидрокси, гидроксиалкила, циано, амино, нитро, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, -OR⁵, -C(O)R⁵, -S(O)_mR⁵, -NR⁶R⁷ и -C(O)NR⁶R⁷;

каждый R² идентичны или отличаются, и каждый независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, алкила, алкокси, галогеналкила, гидрокси, гидроксиалкила, циано, амино, нитро, циклоалкила, гетероциклила, арила и гетероарила, где каждый алкил, циклоалкил, гетероциклил, арил и гетероарил независимо необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из алкила, алкокси, галогена, галогеналкила, гидрокси, гидроксиалкила, циано, амино, нитро, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, -OR⁵, -C(O)R⁵, -S(O)_mR⁵, -NR⁶R⁷ и -C(O)NR⁶R⁷;

L² представляет собой алкилен или ковалентную связь, где алкилен необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из алкила, алкокси, галогена, галогеналкила, гидрокси, гидроксиалкила, циано, амино, нитро, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, -OR⁵, -C(O)R⁵, -S(O)_mR⁵, -NR⁶R⁷ и -C(O)NR⁶R⁷;

R³ выбран из группы, состоящей из галогеналкила, гидрокси, гидроксиалкила, циано, амино, нитро, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, -OR⁵, -C(O)R⁵, -S(O)_mR⁵, -NR⁶R⁷ и -C(O)NR⁶R⁷, где каждый циклоалкил, гетероциклил, арил и гетероарил независимо необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из алкила, алкокси, галогена, галогеналкила, гидрокси, гидроксиалкила, циано, амино, нитро, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, -OR⁸, -C(O)R⁸, -S(O)_mR⁸, -NR⁹R¹⁰ и -C(O)NR⁹R¹⁰;

R⁴ выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, галогеналкила, циклоалкила, гетероциклила, арила и гетероарила;

R⁵ выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, галогеналкила, амино, гидрокси, циклоалкила, гетероциклила, арила и гетероарила;

R⁶ и R⁷ идентичны или отличаются, и каждый независимо выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, галогеналкила, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, -C(O)R⁸, -S(O)_mR⁸ и -C(O)NR⁹R¹⁰, где каждый алкил, циклоалкил, гетероциклил, арил и гетероарил независимо необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из алкила, алкокси, галогена, амино, циано, нитро, гидрокси, гидроксиалкила, циклоалкила, гетероциклила, арила и гетероарила;

или R⁶ и R⁷ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклил, который в дополнение к одному атому азота необязательно содержит один или два идентичных или отличающихся гетероатома, выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и гетероциклил необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из алкила, алкокси, галогена, амино, циано, нитро, гидрокси, гидроксиалкила, циклоалкила, гетероциклила, арила и гетероарила;

R⁸ выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, галогеналкила, амино, гидрокси, циклоалкила, гетероциклила, арила и гетероарила;

R⁹ и R¹⁰ идентичны или отличаются, и каждый независимо выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, галогеналкила, амино, гидрокси, циклоалкила, гетероциклила, арила и гетероарила;

n равно 0, 1, 2, 3 или 4; и

m равно 0, 1 или 2.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в соединении формулы (I) R³ представляет собой гетероциклил, необязательно замещенный одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из алкила, алкокси, галогена, амино, циано, нитро, гидрокси, гидроксиалкила, циклоалкила, гетероциклила, арила и гетероарила.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в соединении формулы (I) R³ представляет собой -NR⁶R⁷, и R⁶ и R⁷ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклил, который в дополнение к одному атому азота необязательно содержит один или два идентичных или отличающихся гетероатома, выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и гетероциклил необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из алкила, алкокси, галогена, амино, циано, нитро, гидрокси, гидроксиалкила, циклоалкила, гетероциклила, арила и гетероарила.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в соединении формулы (I) кольцо A выбрано из группы, состоящей из фенила и пиридила.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в соединении формулы (I) пиридил выбран из группы, состоящей из

и

.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в соединении формулы (I) Х¹ представляет собой алкилен.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (II):

или его таутомер, мезомер, рацемат, энантиомер, диастереомер, или их смесь, или его фармацевтически приемлемую соль,

где G, L¹~L², R¹~R², R⁶~R⁷ и n являются такими, как определено в формуле (I).

Предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к соединению формулы (I), где G представляет собой N.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в соединении формулы (I) L² представляет собой алкилен.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (III):

или его таутомер, мезомер, рацемат, энантиомер, диастереомер, или их смесь, или его фармацевтически приемлемую соль,

где

s равно 0, 1 или 2;

L¹, R¹~R² и n являются такими, как определено в формуле (I).

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в соединении формулы (I) L¹ выбран из группы, состоящей из -O-, -NR⁴-, -C(O)- и -C(O)N(R⁴)-, и R⁴ представляет собой водород или алкил.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в соединении формулы (I) R¹ представляет собой алкил, необязательно замещенный одним или более алкокси.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в соединении формулы (I) каждый R² идентичны или отличаются, и каждый независимо представляет собой водород или галоген.

Типичные соединения согласно настоящему изобретению включают, но не ограничиваются:

Пример №	Структура и название соединения
1
	6-бутокси-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d] пиримидин-4-амин
2
	1-(4-(азетидин-1-илметил)бензил)-6-бутокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин
3
	6-бутокси-1-(4-(пиперидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d] пиримидин-4-амин
4
	6-бутокси-1-(3-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d] пиримидин-4-амин
5
	1-(3-(азетидин-1-илметил)бензил)-6-бутокси-1H-пиразоло[3,4-d] пиримидин-4-амин
6
	6-бутокси-1-(3-(пиперидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d] пиримидин-4-амин
7
	6-(2-метоксиэтокси)-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин
8
	6-((1-метоксипропан-2-ил)окси)-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H- пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин
9
	6-бутокси-1-(3-фтор-4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d] пиримидин-4-амин
10
	N6-бутил-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d] пиримидин-4,6-диамин
11
	4-амино-N-пропил-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-карбоксамид
12
	1-(4-амино-1-(4-пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d] пиримидин-6-ил)пентан-1-он

или их таутомер, мезомер, рацемат, энантиомер, диастереомер, или их смесь, или их фармацевтически приемлемую соль.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к соединению формулы (I-C):

или его таутомеру, мезомеру, рацемату, энантиомеру, диастереомеру, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли,

где

W представляет собой аминозащитную группу, предпочтительно трет-бутоксикарбонил, ацетил, бензил, аллил или п-метоксибензил;

Х представляет собой галоген, предпочтительно хлор;

кольцо A, G, X¹, L², R²~R³ и n являются такими, как определено в формуле (I).

Соединения формулы (I-C) включают, не ограничиваются перечисленными:

Пример №	Структура и название соединения
1e
	6-хлор-N-(4-метоксибензил)-1-(4-(пирролидин-1-илметил) бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 1e
	1-(4-(азетидин-1-илметил)бензил)-6-хлор-N-(4-метоксибензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 2f
3c
	6-хлор-N-(4-метоксибензил)-1-(4-(пиперидин-1-илметил) бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 3c
4b
	6-хлор-N-(3-метоксибензил)-1-(4-(пирролидин-1-илметил) бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 4b
5e
	1-(3-(азетидин-1-илметил)бензил)-6-хлор-N-(4-метоксибензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 5e
6c
	6-хлор-N-(3-метоксибензил)-1-(4-(пиперидин-1-илметил) бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 6c
	6-хлор-1-(3-фтор-4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-N- (4-метоксибензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 9f

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к соединению формулы (I-E):

или его таутомеру, мезомеру, рацемату, энантиомеру, диастереомеру, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли,

где

W представляет собой аминозащитную группу, предпочтительно трет-бутоксикарбонил, ацетил, бензил, аллил или п-метоксибензил;

кольцо A, G, X¹, L¹~ L², R¹~R³ и n являются такими, как определено в формуле (I).

Соединения формулы (I-E) включают, не ограничиваются перечисленными:

Пример №	Структура и название соединения
	6-бутокси-N-(4-метоксибензил)-1-(4-(пирролидин-1-илметил) бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 1f
2g
	1-(4-(азетидин-1-илметил)бензил)-6-бутокси-N- (4-метоксибензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 2g
3d
	6-бутокси-N-(4-метоксибензил)-1-(4-(пиперидин-1-илметил) бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 3d
4c
	6-бутокси-N-(3-метоксибензил)-1-(4-(пирролидин-1-илметил) бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 4c
	1-(3-(азетидин-1-илметил)бензил)-6-бутокси-N- (4-метоксибензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 5f
6d
	6-бутокси-N-(3-метоксибензил)-1-(4-(пиперидин-1-илметил) бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 6d
7a
	N-(4-метоксибензил)-6-(2-метоксиэтокси)-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 7a
8a
	N-(4-метоксибензил)-6-((1-метоксипропан-2-ил) окси)-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d] пиримидин-4-амин 8a
9g
	6-бутокси-1-(3-фтор-4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-N- (4-метоксибензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 9g
10a
	N6-бутил-N4-(4-метоксибензил)-1-(4-(пирролидин-1-илметил) бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6-диамин 10a
11a
	Метил 4-((4-метоксибензил)амино)-1-(4-(пирролидин-1-илметил) бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-карбоксилат 11a
11b
	4-((4-метоксибензил)амино)-N-пропил-1- (4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d] пиримидин-6-карбоксамид 11b
12b
	1-(4-((4-метоксибензил)амино)-1-(4-(пирролидин-1-илметил) бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)пентан-1-он 12b

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способу получения соединения формулы (I-E), включающему стадию:

соединение формулы (I-C) и соединение формулы (I-D) подвергают реакции нуклеофильного замещения в щелочной среде с получением соединения формулы (I-E);

где

W представляет собой аминозащитную группу, предпочтительно трет-бутоксикарбонил, ацетил, бензил, аллил или п-метоксибензил;

Х представляет собой галоген, предпочтительно хлор;

кольцо A, G, L¹~L², X¹, R¹~R³ и n являются такими, как определено в формуле (I-E).

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способу получения соединения формулы (I), включающему стадию:

удаления защитной группы соединения формулы (I-E) в кислой среде с получением соединения формулы (I);

где

W представляет собой аминозащитную группу, предпочтительно трет-бутоксикарбонил, ацетил, бензил, аллил или п-метоксибензил;

кольцо A, G, L¹~L², X¹, R¹~R³ и n являются такими, как определено в формуле (I).

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к соединению формулы (II-B):

или его таутомеру, мезомеру, рацемату, энантиомеру, диастереомеру, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли,

где

W представляет собой аминозащитную группу, предпочтительно трет-бутоксикарбонил, ацетил, бензил, аллил или п-метоксибензил;

Х представляет собой галоген, предпочтительно хлор;

G, L², R², R⁶~R⁷ и n являются такими, как определено в формуле (II).

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к соединению формулы (II-C):

или его таутомера, мезомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли,

где

W представляет собой аминозащитную группу, предпочтительно трет-бутоксикарбонил, ацетил, бензил, аллил или п-метоксибензил;

G, L¹~L², R¹~R², R⁶~R⁷ и n являются такими, как определено в формуле (II).

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способу получения соединения формулы (II-C), включающему стадию:

соединение формулы (II-B) и соединение формулы (I-D) подвергают реакции нуклеофильного замещения в щелочной среде с получением соединения формулы (II-C);

где

W представляет собой аминозащитную группу, предпочтительно трет-бутоксикарбонил, ацетил, бензил, аллил или п-метоксибензил;

Х представляет собой галоген, предпочтительно хлор;

G, L¹~L², R¹~R², R⁶~R⁷ и n являются такими, как определено в формуле (II).

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способу получения соединения формулы (II), включающему стадию:

удаления защитной группы соединения формулы (II-C) в кислой среде с получением соединения формулы (II);

где

W представляет собой аминозащитную группу, предпочтительно трет-бутоксикарбонил, ацетил, бензил, аллил или п-метоксибензил;

G, L¹~L², R¹~R², R⁶~R⁷ и n являются такими, как определено в формуле (II).

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способу получения соединения формулы (III), включающему стадию:

удаления защитной группы соединения формулы (III-C) в кислой среде с получением соединения формулы (III);

где

W представляет собой аминозащитную группу, предпочтительно трет-бутоксикарбонил, ацетил, бензил, аллил или п-метоксибензил;

L¹, R¹~R², s и n являются такими, как определено в формуле (III).

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его таутомера, мезомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли, и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или эксципиентов.

Настоящее изобретение также относится к применению соединения формулы (I) или его таутомера, мезомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли, или содержащей их фармацевтической композиции для получения лекарственного средства для активации TLR7.

Настоящее изобретение также относится к применению соединения формулы (I) или его таутомера, мезомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли, или содержащей их фармацевтической композиции для получения лекарственного средства для лечения инфекции, вызванной вирусом, выбранным из группы, состоящей из вируса денге, вируса желтой лихорадки, вируса Западного Нила, вируса японского энцефалита, вируса клещевого энцефалита, вируса Кунджина, вируса энцефалита долины Мюррея, вируса энцефалита Сент-Луис, вируса омской геморрагической лихорадки, вируса вирусной диареи крупного рогатого скота, вируса Зика, ВИЧ, ВГВ, ВГС, ВПЧ, РСВ, ТОРС и вируса гриппа.

Настоящее изобретение также относится к применению соединения формулы (I) или его таутомера, мезомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли, или содержащей их фармацевтической композиции для получения лекарственного средства для лечения или предупреждения меланомы, немелкоклеточной карциномы легкого, гепатоцеллюлярной карциномы, базальноклеточной карциномы, почечно-клеточной карциномы, миеломы, аллергического ринита, астмы, ХОБЛ, язвенного колита и фиброза печени.

Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (I) или его таутомеру, мезомеру, рацемату, энантиомеру, диастереомеру, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли, или содержащей их фармацевтической композиции для применения в качестве лекарственного средства.

Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (I) или его таутомеру, мезомеру, рацемату, энантиомеру, диастереомеру, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли, или содержащей их фармацевтической композиции для применения для активации TLR7.

Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (I) или его таутомеру, мезомеру, рацемату, энантиомеру, диастереомеру, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли, или содержащей их фармацевтической композиции для применения для лечения инфекции, вызванной вирусом, выбранным из группы, состоящей из вируса денге, вируса желтой лихорадки, вируса Западного Нила, вируса японского энцефалита, вируса клещевого энцефалита, вируса Кунджина, вируса энцефалита долины Мюррея, вируса энцефалита Сент-Луис, вируса омской геморрагической лихорадки, вируса вирусной диареи крупного рогатого скота, вируса Зика, ВИЧ, ВГВ, ВГС, ВПЧ, РСВ, ТОРС и вируса гриппа.

Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (I) или его таутомеру, мезомеру, рацемату, энантиомеру, диастереомеру, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли, или содержащей их фармацевтической композиции для применения для лечения или предупреждения меланомы, немелкоклеточной карциномы легкого, гепатоцеллюлярной карциномы, базальноклеточной карциномы, почечно-клеточной карциномы, миеломы, аллергического ринита, астмы, ХОБЛ, язвенного колита и фиброза печени.

Настоящее изобретение также относится к способу активации TLR7, включающему введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) согласно настоящему изобретению или его таутомера, мезомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли, или содержащей их фармацевтической композиции.

Настоящее изобретение также относится к способу лечения инфекции, вызванной вирусом, выбранным из группы, состоящей из вируса денге, вируса желтой лихорадки, вируса Западного Нила, вируса японского энцефалита, вируса клещевого энцефалита, вируса Кунджина, вируса энцефалита долины Мюррея, вируса энцефалита Сент-Луис, вируса омской геморрагической лихорадки, вируса вирусной диареи крупного рогатого скота, вирус Зика, ВИЧ, ВГВ, ВГС, ВПЧ, РСВ, ТОРС и вируса гриппа, включающему введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) согласно настоящему изобретению или его таутомера, мезомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли, или содержащей их фармацевтической композиции.

Настоящее изобретение также относится к способу лечения или предупреждения меланомы, немелкоклеточной карциномы легкого, гепатоцеллюлярной карциномы, базальноклеточной карциномы, почечно-клеточной карциномы, миеломы, аллергического ринита, астмы, ХОБЛ, язвенного колита и фиброза печени, включающему введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) согласно настоящему изобретению или его таутомера, мезомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли, или содержащей их фармацевтической композиции.

Фармацевтические композиции, содержащие активный ингредиент, могут быть в форме, подходящей для перорального введения, например, форме таблетки, троше, пастилки, водной или масляной суспензии, диспергируемого порошка или гранулы, эмульсии, твердой или мягкой капсулы, или сиропа или эликсира. Композиции для перорального приема могут быть получены любым известным в данной области техники способом получения фармацевтической композиции. Такая композиция может содержать один или более ингредиентов, выбранных из группы, состоящей из подсластителей, вкусоароматических добавок, красителей и консервантов, для того чтобы обеспечить приятное лекарственное средство с привлекательным вкусом. Таблетки содержат активный ингредиент в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемыми эксципиентами, подходящими для изготовления таблеток.

Водная суспензия содержит активный ингредиент в смеси с эксципиентами, подходящими для изготовления водной суспензии. Водная суспензия также может содержать один или более консервантов, таких как этилпарабен или н-пропилпарабен, один или более красителей, одну или более вкусоароматических добавок и один или более подсластителей.

Масляная суспензия может быть приготовлена путем суспендирования активного ингредиента в растительном масле. Масляная суспензия может содержать загуститель. Для получения препарата с привлекательным вкусом могут быть добавлены вышеупомянутые подсластители и вкусоароматические добавки.

Активный ингредиент в смеси с диспергирующими или смачивающими агентами, суспендирующим агентом или одним или более консервантами может быть получен в виде диспергируемого порошка или гранулы, подходящей для приготовления водной суспензии путем добавления воды. Примеры подходящих диспергирующих или смачивающих агентов и суспендирующих агентов упомянуты выше. Также могут быть добавлены дополнительные эксципиенты, такие как подсластители, вкусоароматические добавки и красители. Эти композиции можно сохранять путем добавления антиоксиданта, такого как аскорбиновая кислота.

Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению также может быть в форме эмульсии «масло в воде».

Фармацевтическая композиция может быть в форме стерильного водного раствора для инъекций. Приемлемыми носителями и растворителями, подходящими для применения, являются вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Стерильный инъекционный препарат может представлять собой стерильную инъекционную микроэмульсию «масло в воде», в которой активный ингредиент растворен в масляной фазе. Например, активный ингредиент растворяют в смеси соевого масла и лецитина, затем масляный раствор добавляют в смесь воды и глицерина и обрабатывают для получения микроэмульсии. Инъекционный раствор или микроэмульсия могут быть введены в кровоток пациента путем местного болюсного введения. В качестве альтернативы, может быть предпочтительным введение раствора и микроэмульсии таким образом, чтобы поддерживать постоянную циркулирующую концентрацию соединения согласно настоящему изобретению. Для поддержания такой постоянной концентрации может быть использовано устройство для непрерывного внутривенного введения. Примером такого устройства является насос для внутривенных инъекций Deltec CADD-PLUS. TM. 5400.

Фармацевтическая композиция может быть в форме стерильной инъекционной водной или масляной суспензии для внутримышечного и подкожного введения. Такая суспензия может быть изготовлена с подходящими диспергирующими или смачивающими агентами и суспендирующими агентам, как описано выше, в соответствии с известными методиками. Стерильный инъекционный препарат также может представлять собой стерильный инъекционный раствор или суспензию, приготовленные в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе. Кроме того, в качестве растворителя или суспендирующей среды могут быть легко использованы стерильные жирные масла.

Соединение согласно настоящему изобретению может быть введено в форме суппозитория для ректального введения. Такие фармацевтические композиции могут быть получены путем смешивания лекарственного средства с подходящим не вызывающим раздражение эксципиентом, который является твердым при нормальной температуре, но жидким в прямой кишке, вследствие чего он плавится в прямой кишке с высвобождением лекарственного средства. Такие вещества включают масло какао, глицерин-желатин, гидрогенизированные растительные масла, смеси полиэтиленгликолей с различными молекулярными массами и сложные эфиры жирных кислот и полиэтиленгликолей.

Специалистам в данной области техники хорошо известно, что дозировка лекарственного средства зависит от множества факторов, включая, но не ограничиваясь, следующие факторы: активность конкретного соединения, возраст пациента, масса тела пациента, общее состояние здоровья пациента, поведение пациента, режим питания пациента, время введения, способ введения, скорость выведения, комбинация лекарственных средств и тому подобные. Кроме того, оптимальное лечение, такое как метод лечения, суточная доза соединения формулы (I) или тип его фармацевтически приемлемой соли, может подтверждаться с помощью общепринятых схем лечения.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Если не указано иное, термины, используемые в описании и формуле изобретения, имеют приведенные ниже значения.

Термин «алкил» относится к насыщенной алифатической углеводородной группе, представляющей собой группу с прямой или разветвленной цепью, содержащую от 1 до 20 атомов углерода, предпочтительно алкил, имеющий от 1 до 12 атомов углерода. Неограничивающие примеры включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, втор-бутил, н-пентил, 1,1-диметилпропил, 1,2-диметилпропил, 2,2-диметилпропил, 1-этилпропил, 2-метилбутил, 3-метилбутил, н-гексил, 1-этил-2-метилпропил, 1,1,2-триметилпропил, 1,1-диметилбутил, 1,2-диметилбутил, 2,2-диметилбутил, 1,3-диметилбутил, 2-этилбутил, 2-метилпентил, 3-метилпентил, 4-метилпентил, 2,3-диметилбутил, н-гептил, 2-метилгексил, 3-метилгексил, 4-метилгексил, 5-метилгексил, 2,3-диметилпентил, 2,4-диметилпентил, 2,2-диметилпентил, 3,3-диметилпентил, 2-этилпентил, 3-этилпентил, н-октил, 2,3-диметилгексил, 2,4-диметилгексил, 2,5-диметилгексил, 2,2-диметилгексил, 3,3-диметилгексил, 4,4-диметилгексил, 2-этилгексил, 3-этилгексил, 4-этилгексил, 2-метил-2-этилпентил, 2-метил-3-этилпентил, н-нонил, 2-метил-2-этилгексил, 2-метил-3-этилгексил, 2,2-диэтилпентил, н-децил, 3,3-диэтилгексил, 2,2-диэтилгексил и их различные разветвленные изомеры. Более предпочтительно алкильная группа представляет собой низший алкил, имеющий от 1 до 6 атомов углерода, и неограничивающие примеры включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, втор-бутил, н-пентил, 1,1-диметилпропил, 1,2-диметилпропил, 2,2-диметилпропил, 1-этилпропил, 2-метилбутил, 3-метилбутил, н-гексил, 1-этил-2-метилпропил, 1,1,2-триметилпропил, 1,1-диметилбутил, 1,2-диметилбутил, 2,2-диметилбутил, 1,3-диметилбутил, 2-этилбутил, 2-метилпентил, 3-метилпентил, 4-метилпентил, 2,3-диметилбутил и тому подобное. Алкильная группа может быть замещенной или незамещенной. В случае, если она является замещенной, замещающая(ие) группа(ы) может быть замещена в любой доступной точке присоединения. Замещающая(ие) группа(ы) предпочтительно представляет собой одну или более групп, независимо выбранных из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкилтио, алкиламино, галогена, тиола, гидрокси, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, циклоалкокси, гетероалкокси, циклоалкилтио, гетероциклилтио, оксо, -OR⁵, -C(O)R⁵, -S(O)_mR⁵, -NR⁶R⁷ и -C(O)NR⁶R⁷.

Термин «алкилен» относится к насыщенной линейной или разветвленной алифатической углеводородной группе, имеющей два остатка, полученных в результате удаления двух атомов водорода из одного и того же двух разных атомов углерода исходного алкана. Линейный или разветвленный алкилен имеет от 1 до 20 атомов углерода, предпочтительно от 1 до 12 атомов углерода и более предпочтительно от 1 до 6 атомов углерода. Неограничивающие примеры алкиленовых групп включают, но не ограничиваются перечисленными, метилен (-CH₂-), 1,1-этилен (-CH(CH₃)-), 1,2-этилен (-CH₂CH₂)-, 1,1-пропилен (-CH(CH₂CH₃)-), 1,2-пропилен (-CH₂CH(CH₃)-), 1,3-пропилен (-CH₂CH₂CH₂-), 1,4-бутилен (-CH₂CH₂CH₂CH₂-) и тому подобное. Алкиленовая группа может быть замещенной или незамещенной. В случае, если она является замещенной, замещающая(ие) группа(ы) может быть замещена в любой доступной точке присоединения. Замещающая(ие) группа(ы) предпочтительно представляет собой одну или более групп, независимо необязательно выбранных из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкилтио, алкиламино, галогена, тиола, гидрокси, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, циклоалкокси, гетероалкокси, циклоалкилтио, гетероциклилтио, оксо, -OR⁵, -C(O)R⁵, -S(O)_mR⁵, -NR⁶R⁷ и -C(O)NR⁶R⁷.

Термин «алкенил» относится к углеводородной группе, образованной удалением одного или более атомов водорода из молекулы олефина. Алкенильная группа может быть замещенной или незамещенной. В случае, если она является замещенной, замещающая(ие) группа(ы) предпочтительно представляет собой одну или более групп, независимо выбранных из группы, состоящей из водорода, алкила, алкокси, галогена, галогеналкила, гидрокси, гидроксиалкила, циано, амино, нитро, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, -OR⁵, -C(O)R⁵, -S(O)_mR⁵, -NR⁶R⁷ и -C(O)NR⁶R⁷.

Термин «алкинил» относится к углеводородной группе, молекула которой содержит тройную углерод-углеродную связь. Алкинильная группа может быть замещенной или незамещенной. В случае, если она является замещенной, замещающая(ие) группа(ы) предпочтительно представляет собой одну или более групп, независимо выбранных из группы, состоящей из водорода, алкила, алкокси, галогена, галогеналкила, гидрокси, гидроксиалкила, циано, амино, нитро, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, -OR⁵, -C(O)R⁵, -S(O)_mR⁵, -NR⁶R⁷ и -C(O)NR⁶R⁷.

Термин «циклоалкил» относится к насыщенной или частично ненасыщенной моноциклической или полициклической углеводородной группе, имеющей от 3 до 20 атомов углерода, предпочтительно от 3 до 12 атомов углерода, предпочтительно от 3 до 10 атомов углерода и более предпочтительно от 3 до 6 атомов углерода. Неограничивающие примеры моноциклического циклоалкила включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклопентенил, циклогексил, циклогексенил, циклогексадиенил, циклогептил, циклогептатриенил, циклооктил и тому подобное. Полициклический циклоалкил включает циклоалкил, имеющий спиро-кольцо, конденсированное кольцо или кольцо с внутренним мостиком.

Термин «аминозащитная группа» относится к группе, предотвращающей взаимодействие аминогруппы, когда другие части молекулы подлежат взаимодействию, и она может быть легко удалена. Неограничивающие примеры включают трет-бутоксикарбонил, ацетил, бензил, аллил и п-метоксибензил, и тому подобное. Эти группы могут быть необязательно замещены одной-тремя замещающими группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, алкокси и нитро. Аминозащитная группа предпочтительно представляет собой п-метоксибензил.

Термин «гетероциклил» относится к 3-20-членной насыщенной или частично ненасыщенной моноциклической или полициклической углеводородной замещающей группе, в которой один или более атомов кольца представляют собой гетероатомы, выбранные из группы, состоящей из N, O и S(O)_m (где m представляет собой целое число от 0 до 2), но исключая -O-O-, -O-S- или -S-S- в кольце, при этом остальные атомы кольца представляют собой атомы углерода. Предпочтительно гетероциклил имеет от 3 до 12 атомов кольца, где от 1 до 4 атомов представляют собой гетероатомы, более предпочтительно от 3 до 10 атомов кольца, где от 1 до 4 атомов представляют собой гетероатомы, и более предпочтительно от 5 до 6 атомов кольца, где от 1 до 3 атомов представляют собой гетероатомы. Неограничивающие примеры моноциклического гетероциклила включают пирролидинил, тетрагидропиранил, 1,2,3,6-тетрагидропиридил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил, тиоморфолинил, гомопиперазинил и тому подобное. Полициклический гетероциклил включает гетероциклил, имеющий спиро-кольцо, конденсированное кольцо или кольцо с внутренним мостиком.

Кольцо гетероциклила может быть конденсировано с кольцом арила, гетероарила или циклоалкила, где кольцо, связанное с исходной структурой, представляет собой гетероциклил. Неограничивающие примеры включают:

и

.

Гетероциклил может быть необязательно замещенным или незамещенным. В случае, если он является замещенным, замещающая(ие) группа(ы) предпочтительно представляет собой одну или более групп, независимо необязательно выбранных из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкилтио, алкиламино, галогена, тиола, гидрокси, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, циклоалкокси, гетероалкокси, циклоалкилтио, гетероциклилтио, оксо, -OR⁵, -C(O)R⁵, -S(O)_mR⁵, -NR⁶R⁷ и -C(O)NR⁶R⁷.

Термин «арил» относится к 6-14-членному моноциклическому или полициклическому конденсированному кольцу (т. е. каждое кольцо в системе имеет общую пару атомов углерода с другим кольцом в системе), состоящему только из атомов углерода, имеющему сопряженную π-электронную систему, предпочтительно 6-10-членному арилу, например, фенилу и нафтилу. Кольцо арила может быть конденсировано с кольцом гетероарила, гетероциклила или циклоалкила, где кольцо, связанное с исходной структурой, представляет собой кольцо арила. Неограничивающие примеры включают:

и

.

Арил может быть замещенным или незамещенным. В случае, если он является замещенным, замещающая(ие) группа(ы) предпочтительно представляет собой одну или более групп, независимо необязательно выбранных из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкилтио, алкиламино, галогена, тиола, гидрокси, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, циклоалкокси, гетероалкокси, циклоалкилтио, гетероциклилтио, -OR⁵, -C(O)R⁵, -S(O)_mR⁵, -NR⁶R⁷ и -C(O)NR⁶R⁷.

Термин «гетероарил» относится к 5-14-членной гетероароматической системе, имеющей от 1 до 4 гетероатома, выбранных из группы, состоящей из O, S и N. Гетероарил предпочтительно представляет собой 5-10-членный гетероарил, более предпочтительно 5 или 6-членный гетероарил, например, фуранил, тиенил, пиридил, пирролил, N-алкилпирролил, пиримидинил, пиразинил, пиридазинил, имидазолил, пиразолил, тетразолил и тому подобное. Кольцо гетероарила может быть конденсировано с кольцом арила, гетероциклила или циклоалкила, где кольцо, связанное с исходной структурой, представляет собой кольцо гетероарила. Неограничивающие примеры включают:

и

.

Гетероарил может быть необязательно замещенным или незамещенным. В случае, если он является замещенным, замещающая(ие) группа(ы) предпочтительно представляет собой одну или более групп, независимо выбранных из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкилтио, алкиламино, галогена, тиола, гидрокси, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, циклоалкокси, гетероалкокси, циклоалкилтио, гетероциклилтио, -OR⁵, -C(O)R⁵, -S(O)_mR⁵, -NR⁶R⁷ и -C(O)NR⁶R⁷.

Термин «алкокси» относится к группе -O-(алкил) или -O-(незамещенный циклоалкил), где алкил представляет собой такой, как определено выше. Неограничивающие примеры алкокси включают метокси, этокси, пропокси, бутокси, циклопропилокси, циклобутилокси, циклопентилокси, циклогексилокси. Алкокси может быть необязательно замещенным или незамещенным. В случае, если он является замещенным, замещающая(ие) группа(ы) предпочтительно представляет собой одну или более групп, независимо выбранных из группы, состоящей из галогена, алкила, алкокси, галогеналкила, гидрокси, гидроксиалкила, циано, амино, нитро, циклоалкила, гетероциклила, арила и гетероарила.

Термин «галогеналкил» относится к алкильной группе, замещенной одним или более атомами галогена, где алкил представляет собой такой, как определено выше. Термин «гидрокси» относится к группе -ОН.

Термин «гидроксиалкил» относится к алкильной группе, замещенной гидроксигруппой(ами), где алкил представляет собой такой, как определено выше.

Термин «галоген» относится к фтору, хлору, брому или иоду.

Термин «амино» относится к -NH₂ группе.

Термин «циано» относится к -CN группе.

Термин «нитро» относится к -NO₂ группе.

Термин «оксо» относится к =O группе.

«Необязательный» или «необязательно» означает, что описанное далее явление или обстоятельство может, но не обязательно должно, происходить, и такое описание включает ситуацию, в которой явление или обстоятельство происходит или не происходит. Например, «гетероциклил, необязательно замещенный алкилом» означает, что алкильная группа может, но не обязательно должна, присутствовать, и такое описание включает ситуацию, когда гетероциклил является замещенным алкилом, и когда гетероциклил не является замещенным алкилом.

«Замещенный» относится к одному или более атомам водорода в группе, предпочтительно до 5, более предпочтительно от 1 до 3 атомам водорода, независимо замещенным соответствующим числом заместителей. Само собой зазумеется, заместители существуют только в возможных для них химических положениях. Специалист в данной области техники способен определить, возможно или невозможно замещение с помощью экспериментов или теоретических знаний, не прилагая чрезмерных усилий. Например, комбинация амино- или гидрокси-групп, имеющих свободные атомы водорода, и атомов углерода, имеющих ненасыщенные связи (такие как олефиновые), может быть нестабильной.

«Фармацевтическая композиция» относится к смеси одного или более описанных в настоящем документе соединений или их физиологически/фармацевтически приемлемых солей или пролекарств с другими химическими компонентами, и также другими компонентами, такими как физиологически/фармацевтически приемлемые носители и эксципиенты. Назначение фармацевтической композиции состоит в том, чтобы облегчить введение соединения в организм, что способствует абсорбции активного ингредиента, необходимой для проявления биологической активности.

«Фармацевтически приемлемая соль» относится к соли соединения согласно настоящему изобретению, которая является безопасной и эффективной при применении у млекопитающих и обладает желаемой биологической активностью.

m и R⁵-R⁷ представляют собой такие, как определено в соединении формулы (I).

Способ синтеза соединения согласно настоящему изобретению

Для достижения цели настоящего изобретения в нем используются следующие технические решения:

Схема I

Способ получения соединения формулы (I) согласно настоящему изобретению или его таутомера, мезомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли включает следующие стадии:

на первой стадии соединение формулы (I-A) и соединение формулы (I-B) подвергают реакции нуклеофильного замещения в щелочной среде с получением соединения формулы (I-C);

на второй стадии соединение формулы (I-C) и соединение формулы (I-D) подвергают реакции нуклеофильного замещения в щелочной среде с получением соединения формулы (I-E);

на третьей стадии защитную группу соединения формулы (I-E) удаляют в кислой среде с получением соединения формулы (I);

где

М представляет собой водород или ион металла, где ион металла предпочтительно представляет собой ион натрия;

W представляет собой аминозащитную группу, предпочтительно трет-бутоксикарбонил, ацетил, бензил, аллил или п-метоксибензил;

Х представляет собой галоген, предпочтительно хлор;

кольцо A, G, L¹~L², X¹, R¹~R³ и n являются такими, как определено в формуле (I).

Реагент, обеспечивающий щелочную среду, включает органические основания и неорганические основания. Органические основания включают, не ограничиваются перечисленным, триэтиламин, N,N-диизопропилэтиламин, н-бутиллитий, диизопропиламид лития, бис(триметилсилил)амин лития, ацетат калия, трет-бутоксид натрия, трет-бутоксид калия и н-бутоксид натрия. Неорганические основания включают, не ограничиваются перечисленным, гидрид натрия, фосфат калия, карбонат натрия, карбонат калия, ацетат калия, карбонат цезия, гидроксид натрия и гидроксид лития.

Реагент, обеспечивающий кислую среду, включает, не ограничивается перечисленным, хлористый водород, раствор хлористого водорода в 1,4-диоксане, трифторуксусную кислоту, муравьиную кислоту, уксусную кислоту, соляную кислоту, серную кислоту, метансульфоновую кислоту, азотную кислоту, ортофосфорную кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, Me₃SiCl, TMSOTf (триметилсилилтрифторметансульфонат).

Указанные выше реакции предпочтительно проводят в растворителе. Используемый растворитель включает, не ограничивается перечисленным, уксусную кислоту, метанол, этанол, н-бутанол, толуол, тетрагидрофуран, дихлорметан, петролейный эфир, этилацетат, н-гексан, диметилсульфоксид, 1,4-диоксан, воду и N,N-диметилформамид.

Схема II

Способ получения соединения формулы (II) согласно настоящему изобретению или его таутомера, мезомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли включает следующие стадии :

на первой стадии соединение формулы (I-A) и соединение формулы (II-A) подвергают реакции нуклеофильного замещения в щелочной среде с получением соединения формулы (II-B);

на второй стадии соединение формулы (II-B) и соединение формулы (I-D) подвергают реакции нуклеофильного замещения в щелочной среде с получением соединения формулы (II-C);

на третьей стадии защитную группу соединения формулы (II-C) удаляют в кислой среде с получением соединения формулы (II);

где

М представляет собой водород или ион металла, где ион металла предпочтительно представляет собой ион натрия;

W представляет собой аминозащитную группу, предпочтительно трет-бутоксикарбонил, ацетил, бензил, аллил или п-метоксибензил;

Х представляет собой галоген, предпочтительно хлор;

G, L¹~L², R¹~R², R⁶~R⁷ и n являются такими, как определено в формуле (II).

Реагент, обеспечивающий щелочную среду, включает органические основания и неорганические основания. Органические основания включают, не ограничиваются перечисленным, триэтиламин, N,N-диизопропилэтиламин, н-бутиллитий, диизопропиламид лития, бис(триметилсилил)амин лития, ацетат калия, трет-бутоксид натрия, трет-бутоксид калия и н-бутоксид натрия. Неорганические основания включают, не ограничиваются перечисленным, гидрид натрия, фосфат калия, карбонат натрия, карбонат калия, ацетат калия, карбонат цезия, гидроксид натрия и гидроксид лития.

Реагент, обеспечивающий кислую среду, включает, не ограничивается перечисленным, хлористый водород, раствор хлористого водорода в 1,4-диоксане, трифторуксусную кислоту, муравьиную кислоту, уксусную кислоту, соляную кислоту, серную кислоту, метансульфоновую кислоту, азотную кислоту, ортофосфорную кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, Me₃SiCl, TMSOTf.

Указанные выше реакции предпочтительно проводят в растворителе. Используемый растворитель включает, не ограничивается перечисленным, уксусную кислоту, метанол, этанол, н-бутанол, толуол, тетрагидрофуран, дихлорметан, петролейный эфир, этилацетат, н-гексан, диметилсульфоксид, 1,4-диоксан, воду и N,N-диметилформамид.

Схема III

Способ получения соединения формулы (III) согласно настоящему изобретению или его таутомера, мезомера, рацемата, энантиомера, диастереомера, или их смеси, или его фармацевтически приемлемой соли включает следующие стадии:

на первой стадии соединение формулы (I-A) и соединение формулы (III-A) подвергают реакции нуклеофильного замещения в щелочной среде с получением соединения формулы (III-B);

на второй стадии соединение формулы (III-B) и соединение формулы (I-D) подвергают реакции нуклеофильного замещения в щелочной среде с получением соединения формулы (III-C);

на третьей стадии защитную группу соединения формулы (III-C) удаляют в кислой среде с получением соединения формулы (III);

где

М представляет собой водород или ион металла, где ион металла предпочтительно представляет собой ион натрия;

W представляет собой аминозащитную группу, предпочтительно трет-бутоксикарбонил, ацетил, бензил, аллил или п-метоксибензил;

Х представляет собой галоген, предпочтительно хлор;

L¹, R¹~R², s и n являются такими, как определено в формуле (III).

Реагент, обеспечивающий щелочную среду, включает органические основания и неорганические основания. Органические основания включают, не ограничиваются перечисленным, триэтиламин, N,N-диизопропилэтиламин, н-бутиллитий, диизопропиламид лития, бис(триметилсилил)амин лития, ацетат калия, трет-бутоксид натрия, трет-бутоксид калия и н-бутоксид натрия. Неорганические основания включают, не ограничиваются перечисленным, гидрид натрия, фосфат калия, карбонат натрия, карбонат калия, ацетат калия, карбонат цезия, гидроксид натрия и гидроксид лития.

Реагент, обеспечивающий кислую среду, включает, не ограничивается перечисленным, хлористый водород, раствор хлористого водорода в 1,4-диоксане, трифторуксусную кислоту, муравьиную кислоту, уксусную кислоту, соляную кислоту, серную кислоту, метансульфоновую кислоту, азотную кислоту, ортофосфорную кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, Me₃SiCl, TMSOTf.

Указанные выше реакции предпочтительно проводят в растворителе. Используемый растворитель включает, не ограничивается перечисленным, уксусную кислоту, метанол, этанол, н-бутанол, толуол, тетрагидрофуран, дихлорметан, петролейный эфир, этилацетат, н-гексан, диметилсульфоксид, 1,4-диоксан, воду и N,N-диметилформамид.

ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫЕ ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

Настоящее изобретение будет дополнительно описано со ссылкой на следующие примеры, которые не следует рассматривать как ограничивающие объем настоящего изобретения.

ПРИМЕРЫ

Структуры соединений идентифицировали с помощью ядерного магнитного резонанса (ЯМР) и/или масс-спектрометрии (МС). Сдвиги ЯМР (δ) приведены в 10^-6 (ppm). ЯМР определяли на приборе Bruker AVANCE-400. Растворители для определения представляли собой дейтерированный диметилсульфоксид (ДМСО-d₆), дейтерированный хлороформ (CDCl₃) и дейтерированный метанол (CD₃OD), и внутренний стандарт представлял собой тетраметилсилан (ТМС).

МС проводили на масс-спектрометре FINNIGAN LCQAd (ESI) (производитель: Thermo, тип: Finnigan LCQ advantage MAX).

Высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) проводили на жидкостных хроматографах высокого давления Agilent HPLC 1200DAD, Agilent HPLC 1200VWD и Waters HPLC e2695-2489.

Хиральную ВЭЖХ проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе Agilent HPLC 1260 DAD.

Препаративную высокоэффективную жидкостную хроматографию проводили на препаративных хроматографах Waters 2767, Waters 2767-SQ Detecor2, Shimadzu LC-20AP и Gilson-281.

Препаративную хиральную хроматографию проводили на препаративном хроматографе Shimadzu LC-20AP.

В качестве прибора для быстрого проведения препаративной хроматографии CombiFlash использовали Combiflash Rf200 (TELEDYNE ISCO).

Силикагелевые пластины Yantai Huanghai HSGF254 или Qingdao GF254 использовали в качестве пластины для тонкослойной хроматографии (ТСХ) на силикагеле. Размер силикагелевой пластины, используемой в ТСХ, составлял от 0,15 до 0,2 мм, и размер силикагелевой пластины, используемой при очистке продукта, составлял от 0,4 мм до 0,5 мм.

В качестве носителя для колоночной хроматографии обычно использовали силикагель Yantai Huanghai от 200 до 300 меш.

Средние степени ингибирования киназы и значения IC₅₀ определяли с помощью системы для иммуноферментного анализа (ELISA) от NovoStar (BMG Co., Германия).

Известные исходные вещества согласно настоящему изобретению могут быть получены известными в данной области техники способами или могут быть приобретены у ABCR GmbH & Co. KG, Acros Organnics, Aldrich Chemical Company, Accela ChemBio Inc. или Dari chemical Company, и т. д.

Если не указано иное, реакции проводили в атмосфере аргона или атмосфере азота.

Атмосфера аргона или атмосфера азота означает, что реакционная колба оснащена баллоном с аргоном или азотом (объемом около 1 л).

Атмосфера водорода означает, что реакционная колба оснащена баллоном с водородом (объемом около 1 л).

Реакции гидрирования под давлением проводили на приборе для гидрирования Parr 3916EKX и генераторе водорода Qinglan QL-500 или приборе для гидрирования HC2-SS.

В реакциях гидрирования реакционную систему обычно вакуумировали и заполняли ее водородом, причем вышеуказанную операцию повторяли трижды.

Для реакций, проводимых под воздействием микроволнового излучения, использовали микроволновый реактор CEM Discover-S типа 908860.

Если не указано иное, раствор относится к водному раствору.

Если не указано иное, температура проведения реакции представляет собой комнатную температуру от 20 до 30 °С.

Процесс проведения реакции в примерах контролировали с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ). Проявляющий растворитель, использованный в реакциях, система элюирования в колоночной хроматографии и проявляющая система растворителей в тонкослойной хроматографии для очистки соединений включали: A: систему дихлорметан/метанол и B: систему н-гексан/этилацетат. Соотношение объемов растворителей корректировали в соответствии с полярностью соединений, и для корректировки также может быть добавлено небольшое количество щелочного реагента, такого как триэтиламин, или кислотного реагента, такого как уксусная кислота.

Пример 1

6-Бутокси-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин

Стадия 1

6-хлор-N-(4-метоксибензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 1c

4,6-Дихлор-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин 1a (120 мг, 0,63 ммоль), 4-метоксибензиламин 1b (87,1 мг, 0,63 ммоль) и триэтиламин (64,13 мг, 0,63 ммоль) растворяли в 2 мл тетрагидрофурана и перемешивали реакционный раствор при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакцию останавливали и концентрировали реакционный раствор при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с элюирующей системой A с получением указанного в заголовке соединения 1c (140 мг, выход: 76,1 %).

МС m/z (ESI): 290,2 [M+1]

Стадия 2

6-хлор-N-(4-метоксибензил)-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 1e

Соединение 1c (140 мг, 0,48 ммоль), 1-(4-(хлорметил)бензил)пирролидин 1d (101,34 мг, 0,48 ммоль, полученное способом, раскрытым в патентной заявке WO2002012224) и карбонат калия (66,79 мг, 0,48 ммоль) растворяли в 2 мл N,N-диметилформамида. После перемешивания при комнатной температуре в течение 16 часов реакцию останавливали. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с элюирующей системой A с получением указанного в заголовке соединения 1e (70 мг, выход: 31,3 %).

МС m/z (ESI): 463,2 [M+1]

Стадия 3

6-бутокси-N-(4-метоксибензил)-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 1f

Соединение 1e (70 мг, 0,15 ммоль), н-бутоксид натрия (0,3 мл, 0,60 ммоль) и 1 мл н-бутанола последовательно добавляли в пробирку для проведения реакций под воздействием микроволнового излучения, нагревали до 160 °C и перемешивали в течение 1,5 часов. Реакцию останавливали и концентрировали реакционный раствор при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с элюирующей системой A с получением указанного в заголовке соединения 1f (40 мг, выход: 52,8 %).

МС m/z (ESI): 501,2 [M+1]

Стадия 4

6-бутокси-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 1

Соединение 1f (40 мг, 0,08 ммоль) и 2 мл трифторуксусной кислоты добавляли в реакционную колбу, нагревали до появления конденсата и перемешивали в течение 24 часов. Реакцию останавливали, концентрировали реакционный раствор при пониженном давлении и добавляли к нему 1 мл раствора аммиака в метаноле. Остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с проявляющей системой растворителей A с получением указанного в заголовке соединения 1 (15 мг, выход: 46,0 %).

МС m/z (ESI): 381,2 [M+1]

¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7,98 (s, 1H), 7,41 (d, 2H), 7,36 (d, 2H), 5,48 (s, 2H), 4,39 (t, 2H), 4,13 (s, 2H), 3,12-3,08 (m, 4H), 2,02-1,98 (m, 4H), 1,80-1,76 (m, 2H), 1,55-1,49 (m, 2H), 1,01 (t, 3H).

Пример 2

1-(4-(азетидин-1-илметил)бензил)-6-бутокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 2

Стадия 1

метил-4-(азетидин-1-илметил)бензоат 2c

Метил-4-(бромметил)бензоат 2a (1,0 г, 4,37 ммоль), азетидин 2b (299 мг, 5,24 ммоль) и триэтиламин (529 мг, 5,24 ммоль) растворяли в 10 мл тетрагидрофурана и перемешивали реакционный раствор при комнатной температуре в течение 16 часов. К реакционному раствору добавляли воду (100 мл) и экстрагировали его этилацетатом (100 мл). Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (100 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения 2c (880 мг), которое сразу же использовали на следующей стадии без проведения очистки.

МС m/z (ESI): 206,1 [M+1]

Стадия 2

4-(азетидин-1-илметил)фенилкарбинол 2d

Неочищенное соединение 2c (880 мг, 0,33 ммоль) растворяли в 10 мл диэтилового эфира, добавляли алюмогидрид лития (326 мг, 8,57 ммоль) при 0 °C и перемешивали реакционный раствор при 0 °C в течение 2 часов. Для остановки реакции последовательно добавляли 0,3 мл воды, 0,3 мл 15% раствора гидроксида натрия и 0,9 мл воды. Реакционный раствор фильтровали и концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения 2d (700 мг), которое сразу же использовали на следующей стадии без проведения очистки.

МС m/z (ESI): 178,3 [M+1]

Стадия 3

1-(4-(хлорметил)бензил)азетидин 2e

Неочищенное соединение 2d (700 мг, 3,95 ммоль) растворяли в 10 мл дихлорметана, добавляли тионилхлорид (0,58 мл, 7,90 ммоль) при 0 °C и перемешивали реакционный раствор при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении, добавляли к полученному остатку насыщенный раствор карбоната натрия (50 мл) и экстрагировали дихлорметаном (100 мл×2). Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения 2e (720 мг), которое сразу же использовали на следующей стадии без проведения очистки.

МС m/z (ESI): 197,2 [M+1]

Стадия 4

1-(4-(азетидин-1-илметил)бензил)-6-хлор-N-(4-метоксибензил)-1H-пиразоло[3,4-d] пиримидин-4-амин 2f

Соединение 1c (600 мг, 2,07 ммоль), неочищенное соединение 2e (405 мг, 2,07 ммоль) и карбонат калия (286 мг, 2,07 ммоль) растворяли в 10 мл N,N-диметилформамида и перемешивали реакционный раствор при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении и очищали полученный остаток с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с элюирующей системой A с получением указанного в заголовке соединения 2f (300 мг, выход: 32,3 %).

МС m/z (ESI): 449,2 [M+1]

Стадия 5

1-(4-(азетидин-1-илметил)бензил)-6-бутокси-N-(4-метоксибензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 2g

Соединение 2f (150 мг, 0,33 ммоль), н-бутоксид натрия (0,7 мл, 1,40 ммоль) и 2 мл н-бутанола последовательно добавляли в пробирку для проведения реакций под воздействием микроволнового излучения, нагревали до 160 °C и перемешивали в течение 1,5 часов. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с элюирующей системой A с получением указанного в заголовке соединения 2g (60 мг, выход: 36,9 %).

МС m/z (ESI): 487,3 [M+1]

Стадия 6

1-(4-(азетидин-1-илметил)бензил)-6-бутокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 2

Соединение 2g (60 мг, 0,12 ммоль) и 2 мл трифторуксусной кислоты добавляли в реакционную колбу, нагревали до появления конденсата и перемешивали в течение 24 часов. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. К реакционной смеси добавляли 7 Н раствор аммиака в метаноле (1 мл) и концентрировали ее при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (Waters-2767, элюирующая система: 10 ммоль/л бикарбоната аммония, вода, ацетонитрил) с получением указанного в заголовке соединения 2 (15 мг, выход: 33,2 %).

МС m/z (ESI): 367,2 [M+1]

¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7,97 (s, 1H), 7,34-7,26 (m, 4H), 5,44 (s, 2H), 4,39 (t, 2H), 3,77 (s, 2H), 3,47 (t, 4H), 2,22-2,18 (m, 2H), 1,80-1,76 (m, 2H), 1,55-1,49 (m, 2H), 1,01 (t, 3H).

Пример 3

6-бутокси-1-(4-(пиперидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 3

Стадия 1

1-(4-(хлорметил)бензил)пиперидин 3b

4-(пиперидин-1-илметил)фенилкарбинол 3a (1,17 г, 5,70 ммоль, полученный известным способом, раскрытым в “Journal of Medicinal Chemistry, 2003, 46(8), 1523-1530”) растворяли в 20 мл дихлорметана, добавляли тионилхлорид (0,83 мл, 11,4 ммоль) при 0 °C и перемешивали реакционный раствор при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционный раствор подогревали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. К реакционной смеси добавляли насыщенный раствор карбоната натрия (50 мл) и экстрагировали ее дихлорметаном (100 мл×2). Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения 3b (1,2 г), которое сразу же использовали на следующей стадии без проведения очистки.

МС m/z (ESI): 224,2 [M+1]

Стадия 2

6-хлор-N-(4-метоксибензил)-1-(4-(пиперидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 3c

Соединение 1c (1,5 г, 5,18 ммоль), неочищенное соединение 3b (1,16 г, 5,18 ммоль) и карбонат калия (716 мг, 5,18 ммоль) растворяли в 20 мл N,N-диметилформамида и реакционный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении и очищали полученный остаток с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с элюирующей системой A с получением указанного в заголовке соединения 3c (400 мг, выход: 16,2 %).

МС m/z (ESI): 477,3 [M+1]

Стадия 3

6-бутокси-N-(4-метоксибензил)-1-(4-(пиперидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 3d

Соединение 3c (100 мг, 0,21 ммоль), н-бутоксид натрия (0,2 мл, 0,80 ммоль) и 1 мл н-бутанола последовательно добавляли в пробирку для проведения реакций под воздействием микроволнового излучения, нагревали до 160 °C и перемешивали в течение 1,5 часов. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с элюирующей системой A с получением указанного в заголовке соединения 3d (50 мг, выход: 46,3 %).

МС m/z (ESI): 515,3 [M+1]

Стадия 4

6-бутокси-1-(4-(пиперидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 3

Соединение 3d (60 мг, 0,12 ммоль) и 2 мл трифторуксусной кислоты добавляли в реакционную колбу. Реакционный раствор нагревали до появления конденсата и перемешивали в течение 24 часов. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. К реакционной смеси добавляли 7 Н раствор аммиака в метаноле (1 мл) и концентрировали ее при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с проявляющей системой A с получением указанного в заголовке соединения 3 (20 мг, выход: 49,5 %).

МС m/z (ESI): 395,3 [M+1]

¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7,99 (s, 1H), 7,47-7,38 (m, 4H), 5,49 (s, 2H), 4,39 (t, 2H), 4,18 (s, 2H), 3,09-3,00 (m, 4H), 1,81-1,76 (m, 6H), 1,68-1,62 (m, 2H), 1,55-1,49 (m, 2H), 1,00 (t, 3H).

Пример 4

6-бутокси-1-(3-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 4

Стадия 1

6-хлор-N-(3-метоксибензил)-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 4b

Соединение 1c (1,0 г, 3,45 ммоль), 1-(3-(хлорметил)бензил)пирролидин 4a (724 мг, 3,45 ммоль, полученное способом, раскрытым в патентной заявке WO2016040419) и карбонат калия (377 мг, 3,45 ммоль) растворяли в 10 мл N,N-диметилформамида. После перемешивания при комнатной температуре в течение 16 часов реакцию останавливали. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении и очищали полученный остаток с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с элюирующей системой A с получением указанного в заголовке соединения 4b (300 мг, выход: 18,7 %).

МС m/z (ESI): 463,2 [M+1]

Стадия 2

6-бутокси-N-(3-метоксибензил)-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 4c

Соединение 4b (300 мг, 0,65 ммоль), н-бутоксид натрия (1,3 мл, 2,60 ммоль) и 2 мл н-бутанола последовательно добавляли в пробирку для проведения реакций под воздействием микроволнового излучения, нагревали до 160 °C и перемешивали в течение 1,5 часов. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с элюирующей системой A с получением указанного в заголовке соединения 4c (140 мг, выход: 43,1 %).

МС m/z (ESI): 501,2 [M+1]

Стадия 3

6-бутокси-1-(3-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 4

Соединение 4c (140 мг, 0,08 ммоль) и 2 мл трифторуксусной кислоты добавляли в реакционную колбу, нагревали до появления конденсата и перемешивали в течение 24 часов. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. К реакционной смеси добавляли 7 Н раствор аммиака в метаноле (1 мл) и концентрировали ее при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (Waters-2767, элюирующая система: 10 ммоль/л бикарбоната аммония, вода, ацетонитрил) с получением указанного в заголовке соединения 4 (60 мг, выход: 56,3 %).

МС m/z (ESI): 381,2 [M+1]

¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7,98 (s, 1H), 7,35-725 (m, 4H), 5,47 (s, 2H), 4,39 (t, 2H), 3,81 (s, 2H), 2,76-2,70 (m, 4H), 1,98-1,93 (m, 4H), 1,79-1,76 (m, 2H), 1,55-1,50 (m, 2H), 1,01 (t, 3H).

Пример 5

1-(3-(азетидин-1-илметил)бензил)-6-бутокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 5

Стадия 1

метил-3-(азетидин-1-илметил)бензоат 5b

Метил-3-(бромметил)бензоат 5a (1,0 г, 4,37 ммоль), азетидин 2b (299 мг, 5,24 ммоль) и триэтиламин (529 мг, 5,24 ммоль) растворяли в 10 мл тетрагидрофурана и перемешивали реакционный раствор при комнатной температуре в течение 16 часов. К реакционному раствору добавляли воду (100 мл) и экстрагировали его этилацетатом (100 мл). Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (100 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения 5b (840 мг), которое сразу же использовали на следующей стадии без проведения очистки.

МС m/z (ESI): 206,1 [M+1]

Стадия 2

3-(азетидин-1-илметил)фенилкарбинол 5c

Неочищенное соединение 5b (840 мг, 4,09 ммоль) растворяли в 10 мл диэтилового эфира, добавляли алюмогидрид лития (310 мг, 8,19 ммоль) при 0 °C и перемешивали при 0 °C в течение 2 часов. Для остановки реакции последовательно добавляли 0,3 мл воды, 0,3 мл 15% раствора гидроксида натрия и 0,9 мл воды. Реакционный раствор фильтровали и концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения 5c (700 мг), которое сразу же использовали на следующей стадии без проведения очистки.

МС m/z (ESI): 178,3 [M+1]

Стадия 3

1-(3-(хлорметил)бензил)азетидин 5d

Неочищенное соединение 5c (700 мг, 3,95 ммоль) растворяли в 10 мл дихлорметана, добавляли тионилхлорид (0,58 мл, 7,90 ммоль) при 0 °C и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении, добавляли к нему насыщенный раствор карбоната натрия (50 мл) и экстрагировали дихлорметаном (100 мл×2). Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения 5d (700 мг), которое сразу же использовали на следующей стадии без проведения очистки.

МС m/z (ESI): 197,2 [M+1]

Стадия 4

1-(3-(азетидин-1-илметил)бензил)-6-хлор-N-(4-метоксибензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 5e

Соединение 1c (300 мг, 1,04 ммоль), неочищенное соединение 5d (203 мг, 1,04 ммоль) и карбонат калия (144 мг, 1,04 ммоль) растворяли в 5 мл N,N-диметилформамида и реакционный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении и очищали полученный остаток с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с элюирующей системой A с получением указанного в заголовке соединения 5e (30 мг, выход: 6,5 %).

МС m/z (ESI): 449,2 [M+1]

Стадия 5

1-(3-(азетидин-1-илметил)бензил)-6-бутокси-N-(4-метоксибензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 5f

Соединение 5e (50 мг, 0,11 ммоль), н-бутоксид натрия (0,2 мл, 0,40 ммоль) и 1 мл н-бутанола последовательно добавляли в пробирку для проведения реакций под воздействием микроволнового излучения, нагревали до 160 °C и перемешивали в течение 1,5 часов. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с проявляющей системой A с получением указанного в заголовке соединения 5f (35 мг, выход: 64,8 %).

МС m/z (ESI): 487,3 [M+1]

Стадия 6

1-(3-(азетидин-1-илметил)бензил)-6-бутокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 5

Соединение 5f (35 мг, 0,07 ммоль) и 1 мл трифторуксусной кислоты добавляли в реакционную колбу. Реакционный раствор нагревали до появления конденсата и перемешивали в течение 24 часов. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. К реакционной смеси добавляли 7 Н раствор аммиака в метаноле (1 мл) и концентрировали ее при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (Waters-2767, элюирующая система: 10 ммоль/л бикарбоната аммония, вода, ацетонитрил) с получением указанного в заголовке соединения 5 (2,0 мг, выход: 7,9 %).

МС m/z (ESI): 367,2 [M+1]

¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7,98 (s, 1H), 7,30-7,28 (m, 1H), 7,22-7,19 (m, 3H), 5,45 (s, 2H), 4,39 (t, 2H), 3,60 (s, 2H), 3,28 (t, 4H), 2,12-2,09 (m, 2H), 1,80-1,76 (m, 2H), 1,55-1,49 (m, 2H), 1,00 (t, 3H).

Пример 6

6-бутокси-1-(3-(пиперидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 6

Стадия 1

1-(3-(хлорметил)бензил)пиперидин 6b

3-(Пиперидин-1-илметил)фенилкарбинол 6a (1,7 г, 8,28 ммоль, полученный известным способом, раскрытым в “Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2004, 12(10), 2727-2736”) растворяли в 20 мл дихлорметана, добавляли тионилхлорид (1,2 мл, 16,56 ммоль) при 0 °C и перемешивали реакционный раствор при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении, добавляли к нему насыщенный раствор карбоната натрия (50 мл) и экстрагировали дихлорметаном (100 мл×2). Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения 6b (1,7 г), которое сразу же использовали на следующей стадии без проведения очистки.

МС m/z (ESI): 224,2 [M+1]

Стадия 2

6-хлор-N-(3-метоксибензил)-1-(4-(пиперидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 6c

Соединение 1c (300 мг, 1,04 ммоль), неочищенное соединение 6b (232 мг, 1,04 ммоль) и карбонат калия (144 мг, 1,04 ммоль) растворяли в 5 мл N,N-диметилформамида. После перемешивания при комнатной температуре в течение 16 часов реакцию останавливали. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении и очищали полученный остаток с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с элюирующей системой A с получением указанного в заголовке соединения 6c (50 мг, выход: 10,1 %).

МС m/z (ESI): 477,3 [M+1]

Стадия 3

6-бутокси-N-(3-метоксибензил)-1-(4-(пиперидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 6d

Соединение 6c (50 мг, 0,10 ммоль), н-бутоксид натрия (0,2 мл, 0,40 ммоль) и 1 мл н-бутанола последовательно добавляли в пробирку для проведения реакций под воздействием микроволнового излучения, нагревали до 160 °C и перемешивали в течение 1,5 часов. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с элюирующей системой A с получением указанного в заголовке соединения 6d (30 мг, выход: 55,5 %).

МС m/z (ESI): 515,3 [M+1]

Стадия 4

6-бутокси-1-(3-(пиперидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 6

Соединение 6d (30 мг, 0,06 ммоль) и 2 мл трифторуксусной кислоты добавляли в реакционную колбу, нагревали до появления конденсата и перемешивали в течение 24 часов. Реакцию останавливали, концентрировали реакционный раствор при пониженном давлении и добавляли к нему 7 Н раствор аммиака в метаноле (1 мл). Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении и очищали остаток с помощью тонкослойной хроматографии с проявляющей системой A с получением указанного в заголовке соединения 6 (7,0 мг, выход: 29,2 %).

МС m/z (ESI): 395,3 [M+1]

¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7,99 (s, 1H), 738-7,31 (m, 4H), 5,48 (s, 2H), 4,38 (t, 2H), 3,86 (s, 2H), 2,87-2,80 (m, 4H), 1,79-1,75 (m, 2H), 1,71-1,68 (m, 4H), 1,54-1,40 (m, 4H), 1,00 (t, 3H).

Пример 7

6-(2-метоксиэтокси)-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 7

Стадия 1

N-(4-метоксибензил)-6-(2-метоксиэтокси)-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 7a

Соединение 1e (90 мг, 0,19 ммоль), 2-метоксиэтанол натрия (0,3 мл, 0,60 ммоль) и 1 мл 2-метоксиэтанола последовательно добавляли в пробирку для проведения реакций под воздействием микроволнового излучения, нагревали до 160 °C и перемешивали в течение 1,5 часов. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с элюирующей системой A с получением указанного в заголовке соединения 7a (30 мг, выход: 30,7 %).

МС m/z (ESI): 503,3 [M+1]

Стадия 2

6-(2-метоксиэтокси)-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 7

Соединение 7a (30 мг, 0,06 ммоль) и 5 мл трифторуксусной кислоты добавляли в реакционную колбу, нагревали до 100 °C и перемешивали в течение 2 часов. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (Waters-2767, элюирующая система: 10 ммоль/л бикарбоната аммония, вода, ацетонитрил) с получением указанного в заголовке соединения 7 (5 мг, выход: 19,7 %).

МС m/z (ESI)：383,2 [M+1]

¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7,96 (s, 1H), 7,30-7,28 (d, 2H), 7,25-7,23 (d, 2H), 5,42 (s, 2H), 4,51-4,48 (t, 2H), 3,74-3,72 (t, 2H), 3,65 (s, 2H), 3,39 (s, 3H), 2,57(s, 4H), 1,81-1,78 (m, 4H).

Пример 8

6-((1-метоксипропан-2-ил)окси)-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 8

Стадия 1

N-(4-метоксибензил)-6-((1-метоксипропан-2-ил)окси)-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 8a

Соединение 1e (200 мг, 0,43 ммоль), 2-метокси-1-метилэтокси натрия (96,9 мг, 0,86 ммоль) и 5 мл метилового эфира пропиленгликоля последовательно добавляли в пробирку для проведения реакций под воздействием микроволнового излучения, нагревали до 160 °C и перемешивали в течение 1,5 часов. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с элюирующей системой A с получением указанного в заголовке соединения 8a (150 мг, выход: 67,2 %).

МС m/z (ESI): 517,3 [M+1]

Стадия 2

6-((1-метоксипропан-2-ил)окси)-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 8

Соединение 8a (80 мг, 0,15 ммоль) и 5 мл трифторуксусной кислоты добавляли в реакционную колбу, нагревали до 80 °C и перемешивали в течение 1 часа. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (Waters-2767, элюирующая система: 10 ммоль/л бикарбоната аммония, вода, ацетонитрил) с получением указанного в заголовке соединения 8 (20 мг, выход: 32,6 %).

МС m/z (ESI)：397,2 [M+1]

¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7,95 (s, 1H), 7,35-7,33 (d, 2H), 7,29-7,27 (d, 2H), 5,43 (m, 3H), 3,83 (s, 2H), 3,60-3,52 (m, 2H), 3,37 (s, 3H), 2,76(s, 4H), 1,87 (s, 4H), 1,34-1,32 (t, 3H).

Пример 9

6-бутокси-1-(3-фтор-4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 9

Стадия 1

3-фтор-4-(пирролидин-1-илметил)бензонитрил 9c

4-(Бромметил)-3-фторбензонитрил 9a (1 г, 4,67 ммоль), пирролидин 9b (332 мг, 4,67 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (1,21 г, 9,34 ммоль) растворяли в 10 мл ацетонитрила. После перемешивания в течение 2 часов реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения 9c (1 г), которое сразу же использовали на следующей стадии без проведения очистки.

МС m/z (ESI): 205,4 [M+1]

Стадия 2

3-фтор-4-(пирролидин-1-илметил)бензойная кислота 9d

Неочищенное соединение 9c (1 г, 4,9 ммоль) растворяли в смешанном растворителе, состоящем из 5 мл серной кислоты, 5 мл воды и 10 мл уксусной кислоты. После перемешивания при 90 °C в течение 16 часов реакцию останавливали. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли метанол и фильтровали его для удаления нерастворимых веществ. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения 9d (1 г), которое сразу же использовали на следующей стадии без проведения очистки.

МС m/z (ESI): 224,4 [M+1]

Стадия 3

(3-фтор-4-(пирролидин-1-илметил)фенил)метанол 9e

Неочищенное соединение 9d (1 г, 4,48 ммоль) растворяли в 20 мл тетрагидрофурана. Реакционный раствор охлаждали до 0 °C, добавляли к нему алюмогидрид лития (607 мг, 17,9 ммоль) и перемешивали в течение 3 часов. Для остановки реакции последовательно добавляли 1 мл воды, 1 мл 2 Н раствора гидроксида натрия и 3 мл воды. Реакционный раствор фильтровали, собирали фильтрат и концентрировали его при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения 9e (820 мг), которое сразу же использовали на следующей стадии без проведения очистки.

МС m/z (ESI): 210,4 [M+1]

Стадия 4

6-хлор-1-(3-фтор-4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-N-(4-метоксибензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 9f

Неочищенное соединение 9e (100 мг, 0,48 ммоль), соединение 1c (141,34 мг, 0,48 ммоль) и трифенилфосфин (192 мг, 0,73 ммоль) растворяли в 10 мл 1,4-диоксана, после чего по каплям добавляли диизопропилазодикарбоксилат (148 мг, 0,73 ммоль). Реакционный раствор подогревали до 85 °C и перемешивали в течение 4 часов. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с элюирующей системой A с получением указанного в заголовке соединения 9f (90 мг, выход: 38,3 %).

МС m/z (ESI): 481,4 [M+1]

Стадия 5

6-бутокси-1-(3-фтор-4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-N-(4-метоксибензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 9g

Соединение 9f (90 мг, 0,19 ммоль), н-бутоксид натрия (18 мг, 0,18 ммоль) и 5 мл н-бутанола последовательно добавляли в пробирку для проведения реакций под воздействием микроволнового излучения, нагревали до 160 °C и перемешивали в течение 1,5 часов. Реакцию останавливали, охлаждали реакционный раствор до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с элюирующей системой A с получением указанного в заголовке соединения 9g (35 мг, выход: 36,1 %).

МС m/z (ESI): 519,5 [M+1]

Стадия 6

6-бутокси-1-(3-фтор-4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин 9

Соединение 9g (35 мг, 0,07 ммоль) и 10 мл трифторуксусной кислоты добавляли в запаянную пробирку, нагревали до 100 °C и перемешивали в течение 1 часа. Реакцию останавливали, охлаждали реакционный раствор до комнатной температуры и концентрировали его при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (Waters-2767, элюирующая система: 10 ммоль/л бикарбоната аммония, вода, ацетонитрил) с получением указанного в заголовке соединения 9 (20 мг, выход: 74,3 %).

МС m/z (ESI): 399,5 [M+1]

¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7,97 (s, 1H), 7,37-7,33 (m, 1H), 7,07-6,99 (m, 2H), 5,42 (s, 2H), 4,38-4,35 (t, 2H), 3,68 (s, 2H), 2,56 (s, 4H), 1,79-1,73(m, 6H), 1,52-1,46 (m, 2H), 0,99-0,96 (t, 3H).

Пример 10

N⁶-бутил-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6-диамин 10

Стадия 1

N⁶-бутил-N⁴-(4-метоксибензил)-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6-диамин 10a

Соединение 1e (50 мг, 0,11 ммоль), н-бутиламин (23,7 мг, 0,32 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (41,9 мг, 0,32 ммоль) последовательно добавляли к 5 мл н-бутанола. Реакционный раствор подогревали до 120 °C и перемешивали под воздействием микроволнового излучения в течение 1 часа. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения 10a (20 мг), которое сразу же использовали на следующей стадии без проведения очистки.

Стадия 2

N⁶-бутил-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4,6-диамин 10

Неочищенное соединение 10a (20 мг, 0,04 ммоль) и 5 мл трифторуксусной кислоты добавляли в реакционную колбу, нагревали до 100 °C и перемешивали в течение ночи. Реакцию останавливали, охлаждали реакционный раствор до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с пмощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (Waters-2767, элюирующая система: 10 ммоль/л бикарбоната аммония, вода, ацетонитрил) с получением указанного в заголовке соединения 10 (15,2 мг, желтое твердое вещество, выход: 62,5 %).

МС m/z (ESI): 380,3 [M+1]

¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,04 (s, 1H), 7,49-7,47 (d, 2H), 7,42-7,40 (d, 2H), 5,44 (s, 2H), 4,34 (s, 2H), 3,49-3,45 (m, 4H), 3,15 (s, 2H), 2,13(s, 2H), 1,93 (s, 2H), 1,65-1,60 (m, 2H), 1,45-1,39 (m, 2H), 0,98-0,94 (t, 3H).

Пример 11

4-амино-N-пропил-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-карбоксамид 11

Стадия 1

метил-4-((4-метоксибензил)амино)-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-карбоксилат 11a

Соединение 1e (200 мг, 0,43 ммоль), ацетат палладия (2,9 мг, 0,013 ммоль), 4,5-бисдифенилфосфино-9,9-диметилксантен (15 мг, 0,026 ммоль) и триэтиламин (44 мг, 0,4 ммоль) растворяли в 3 мл н-бутанола и 3 мл N,N-диметилформамида. Реакционную систему трижды продували монооксидом углерода. Реакционный раствор подогревали до 70 °C и перемешивали в течение 16 часов. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с элюирующей системой A с получением указанного в заголовке соединения 11a (150 мг, выход: 71,4 %).

МС m/z (ESI): 487,5 [M+1]

Стадия 2

4-((4-метоксибензил)амино)-N-пропил-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-карбоксамид 11b

Соединение 11a (50 мг, 0,1 ммоль) и н-пропиламин (12 мг, 0,2 ммоль) последовательно растворяли в 5 мл этанола. Реакционный раствор добавляли в запаянную пробирку, подогревали до 60 °C и перемешивали в течение 16 часов. Реакцию останавливали, охлаждали реакционный раствор до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения 11b (20 мг), которое сразу же использовали на следующей стадии без проведения очистки.

Стадия 3

4-амино-N-пропил-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-карбоксамид 11

Неочищенное соединение 11b (20 мг, 0,04 ммоль) и 5 мл трифторуксусной кислоты добавляли в реакционную колбу, нагревали до 100 °C и перемешивали в течение 12 часов. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали высокоэффективной жидкостной хроматографией (Waters-2767, элюирующая система: 10 ммоль/л бикарбоната аммония, вода, ацетонитрил) с получением указанного в заголовке соединения 11 (10 мг, выход: 60,3 %).

МС m/z (ESI): 394,5 [M+1]

¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,12 (s, 1H), 7,28 (m, 4H), 5,64 (s, 2H), 3,62 (s, 2H), 3,41-3,37 (t, 2H), 2,55-2,52 (m, 4H), 1,80-1,77 (m, 4H), 1,70-1,64 (m, 2H), 0,98-1,02 (t, 3H).

Пример 12

1-(4-амино-1-(4-пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)пентан-1-он 12

Стадия 1

4-((4-метоксибензил)амино)-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-карбонитрил 12a

Соединение 1e (260 мг, 0,56 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладий (52 мг, 0,056 ммоль), 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен (31 мг, 0,056 ммоль), цианид цинка (99 мг, 0,84 ммоль) и цинковый порошок (37 мг, 0,56 ммоль) суспендировали в 5 мл N,N-диметилацетамида. Реакционный раствор подогревали до 140 °C и перемешивали в течение 16 часов в атмосфере аргона. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с проявляющей системой A с получением указанного в заголовке соединения 12a (160 мг, выход: 63 %).

МС m/z (ESI): 454,5 [M+1]

Стадия 2

1-(4-((4-метоксибензил)амино)-1-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)пентан-1-он 12b

Соединение 12a (160 мг, 0,35 ммоль) растворяли в 5 мл тетрагидрофурана, после чего добавляли 2 М раствор н-бутилмагний хлорида в тетрагидрофуране (0,9 мл, 1,77 ммоль) при 0 °C. Реакционный раствор подогревали до 60 °C и перемешивали в течение 2 часов в атмосфере аргона. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры, добавляли к нему водный раствор хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом. Органические фазы объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью тонкослойной хроматографии с проявляющей системой A с получением указанного в заголовке соединения 12b (150 мг, выход: 83 %).

МС m/z (ESI): 513,6 [M+1]

Стадия 3

1-(4-амино-1-(4-пирролидин-1-илметил)бензил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)пентан-1-он 12

Соединение 12b (150 мг, 0,29 ммоль) растворяли в 10 мл трифторуксусной кислоты. Реакционный раствор добавляли в запаянную пробирку, нагревали до 110 °C и перемешивали в течение 16 часов. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (Waters-2767, элюирующая система: 10 ммоль/л бикарбоната аммония, вода, ацетонитрил) с получением указанного в заголовке соединения 12 (19 мг, выход: 17 %).

МС m/z (ESI): 393,5 [M+1]

¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃): δ 8,01 (s, 1H), 7,35-7,29 (q, 4H), 5,62 (s, 2H), 3,62 (s, 2H), 3,26 (t, 2H), 2,53 (s, 4H), 1,78 (s, 4H), 1,76-1,70 (m, 2H), 1,48-1,42 (m, 2H), 0,98 (t, 3H).

Примеры исследований:

Биологический анализ

Пример исследования 1. Определение агонистической активности соединений согласно настоящему изобретению в отношении TLR7 человека

Активирующее действие соединений согласно настоящему изобретению на белок hTLR7, экспрессируемый стабильно трансфицированными клетками HEK-Blue^TM hTLR7, определяли следующим экспериментальным способом:

I. Материалы и инструменты для проведения эксперимента

1. ДМЕМ (среда Игла в модификации Дульбекко) (Gibco, 10564-029),

2. Фетальная бычья сыворотка (GIBCO, 10099),

3. Пенициллин-стрептомицин (Gibco, 15140-122),

4. Раствор трипанового синего (Sigma, T8154-100 мл),

5. Многофункциональный ридер для микропланшетов Flexstation 3 (Molecµlar Devices),

6. Линия клеток HEK-Blue^TM HTLR7 (InvivoGen, hkb-hTLR7),

7. Реагент для определения HEK-Blue (InvivoGen, hb-det3).

II. Порядок проведения эксперимента

Для приготовления среды для определения HEK-Blue пакет сухого порошка для определения HEK-Blue растворяли в 50 мл воды, не содержащей эндотоксин, после чего раствор помещали в инкубатор при 37 °C на 10 минут с последующей стерилизующей фильтрацией. Сначала готовили исходный раствор соединения концентрацией 20 мМ, затем разбавляли чистым ДМСО (диметилсульфоксид) до максимальной концентрации 6×10⁶ нМ, и путем последовательного трехкратного разбавления получали в общей сложности 10 точек.

Приготовленный выше раствор соединения сначала разбавляли в 20 раз средой, затем в каждую лунку добавляли 20 мкл разбавленного соединения. Из клеток HEK-Blue^TM hTLR7 удаляли супернатант, затем добавляли к ним 2-5 мл предварительно подогретого PBS. Клетки помещали в инкубатор на 1-2 минуты, осторожно отмеряли пипеткой и подсчитывали с помощью окрашивания трипановым синим. Клетки повторно суспендировали в среде для определения HEK-Blue, чтобы довести концентрацию до 2,2×10⁵ клеток/мл. 180 мкл клеток добавляли в вышеупомянутый 96-луночный планшет, содержащий 20 мкл соединений, и инкубировали при 37 °С в течение 6-16 часов.

Проводили считывание в ридере для микропланшетов при длине волны 620 нм с получением соответствующих значений OD (оптической плотности) и рассчитывали значения EC₅₀ соединений с помощью Graphpad Prism.

Активирующее действие соединений согласно настоящему изобретению на TLR7 человека определяли с помощью вышеуказанного теста, и полученные значения EC₅₀ представлены в таблице 1.

Таблица 1. EC₅₀ соединений согласно настоящему изобретению в отношении TLR7 человека

Пример №	EC50 (нМ)	Emax (%)
1	28	100
2	64	91
3	77	91
4	166	88
6	233	91
7	180	95
8	217	104
9	128	96
10	349	79
11	335	85
12	388	78

Вывод: соединения согласно настоящему изобретению оказывают значительное активирующее действие на TLR7 человека.

Пример исследования 2. Определение агонистической активности соединений согласно настоящему изобретению в отношении TLR8 человека

Активирующее действие соединений согласно настоящему изобретению на белок hTLR8, экспрессируемый стабильно трансфицированными клетками HEK-Blue^TM hTLR8, определяли следующим экспериментальным способом:

I. Материалы и инструменты для проведения эксперимента

1. ДМЕМ (Gibco, 10564-029),

2. Фетальная бычья сыворотка (GIBCO, 10099),

3. Пенициллин-стрептомицин (Gibco, 15140-122),

4. Раствор трипанового синего (Sigma, T8154-100 мл),

5. Многофункциональный ридер для микропланшетов Flexstation 3 (Molecµlar Devices),

6. Линия клеток HEK-Blue^TM HTLR8 (InvivoGen, hkb-hTLR8),

7. Реагент для определения HEK-Blue (InvivoGen, hb-det3).

II. Порядок проведения эксперимента

Для приготовления среды для определения HEK-Blue пакет сухого порошка для определения HEK-Blue растворяли в 50 мл воды, не содержащей эндотоксин, после чего раствор помещали в инкубатор при 37 °C на 10 минут с последующей стерилизующей фильтрацией. Сначала готовили исходный раствор соединения концентрацией 20 мМ, затем разбавляли чистым ДМСО до максимальной концентрации 6×10⁶ нМ, и путем последовательного трехкратного разбавления получали в общей сложности 10 точек. Соединение сначала разбавляли в 20 раз средой, затем в каждую лунку добавляли 20 мкл разбавленного соединения.

Из клеток HEK-Blue^TM hTLR8 удаляли супернатант, затем добавляли к ним 2-5 мл предварительно подогретого PBS. Клетки помещали в инкубатор на 1-2 минуты, осторожно отмеряли пипеткой и подсчитывали с помощью окрашивания трипановым синим. Клетки повторно суспендировали в среде для определения HEK-Blue, чтобы довести концентрацию до 2,2×10⁵ клеток/мл. 180 мкл клеток добавляли в вышеупомянутый 96-луночный планшет, содержащий 20 мкл соединений, и инкубировали при 37 °С в течение 6-16 часов.

Проводили считывание в ридере для микропланшетов при длине волны 620 нм с получением соответствующих значений OD и рассчитывали значения EC₅₀ соединений с помощью Graphpad Prism.

Активирующее действие соединений согласно настоящему изобретению на TLR8 человека определяли с помощью вышеуказанного теста, и полученные значения EC₅₀ представлены в таблице 2.

Таблица 2. EC₅₀ соединений согласно настоящему изобретению в отношении TLR8 человека

Пример №	EC50 (мкМ)	Emax (%)
1	больше 30	8
2	больше 29	52
3	больше 24	2
4	больше 30	28
6	больше 6	35
7	больше 30	0
8	больше 30	2
10	больше 30	0
11	больше 30	0
12	больше 30	5

Вывод: соединения согласно настоящему изобретению не оказывают активирующего действия на TLR8 человека, что указывает на то, что соединения согласно настоящему изобретению обладают высокой селективностью в отношении TLR7.

Пример исследования 3. Определение способности соединений согласно настоящему изобретению стимулировать секрецию IFN-α из мононуклеарных клеток периферической крови (МНПК)

Способность соединений согласно настоящему изобретению стимулировать секрецию IFN-α из МНПК определяли следующим экспериментальным способом:

I. Материалы и инструменты для проведения эксперимента

1. RPMI 1640 (Invitrogen, 11875),

2. FBS (фетальная бычья сыворотка) (Gibco, 10099-141)

3. Пенициллин-стрептомицин (Gibco, 15140-122),

4. Ficoll-Paque PREMIUM (GE, 17-5442-02),

5. Раствор трипанового синего (Sigma, T8154-100 мл),

6. SepMateTM-50 (Stemcell, 15460),

7. Счетчик форменных элементов крови Bright-Line™ (Sigma, Z359629-1EA),

8. Набор IFN-α человека (cisbio, 6FHIFPEB),

9. Многофункциональный ридер для микропланшетов PHERAStar (BMG, PHERAStar).

II. Порядок проведения эксперимента

Соединение разбавляли чистым ДМСО до максимальной концентрации 5 мМ, и путем последовательного 4-кратного разбавления получали в общей сложности 9 точек. Затем 4 мкл соединения добавляли к 196 мкл среды RMPI 1640, содержащей 10% FBS, и хорошо перемешивали. Из каждой лунки отбирали 50 мкл смеси и добавляли в новый 96-луночный планшет.

Все реагенты выдерживали до достижения ими комнатной температуры. 60 мл крови и PBS + 2% FBS добавляли в колбу для культур объемом 250 мл, осторожно отмеряя пипеткой, хорошо перемешивали и разбавляли. 15 мл раствора для отделения лимфоцитов Ficoll-Paque PREMIUM и затем 30 мл разбавленной крови добавляли в пробирку для центрифугирования для выделения МНПК SepMateTM-50 объемом 50 мл. Смесь центрифугировали при 1200 g в течение 10 минут при комнатной температуре. Супернатант отбирали и затем центрифугировали при 300 g в течение 8 минут. Клетки повторно суспендировали в среде RMPI 1640, содержащей 10% FBS, и подсчитывали, и доводили количество МНПК до 3,33×10⁶ клеток/мл. 150 мкл раствора клеток добавляли в планшет, содержащий соединения, и инкубировали в инкубаторе при 37 °С в 5,0% CO₂ в течение 24 часов.

Планшет для культур клеток помещали в центрифугу и центрифугировали при 1200 об/мин в течение 10 минут при комнатной температуре. Из каждой лунки отбирали 150 мкл супернатанта. Реагенты в наборе IFN-α человека сначала выдерживали до достижения ими нормальной температуры. В темноте готовили конъюгат антитела к IFN-α и криптата Eu³⁺ и конъюгат антитела к IFN-α и d2 согласно инструкциям из набора, и хорошо перемешивали оба конъюгата с буфером для конъюгата в соотношении 1:40. Затем в каждую лунку добавляли 16 мкл супернатанта, полученного в результате центрифугирования. Затем в каждую лунку добавляли 2 мкл свежеприготовленного конъюгата антитела к IFN-α и криптата Eu³⁺ и конъюгата антитела IFN-α и d2. Планшет встряхивали и хорошо перемешивали, и инкубировали в темноте при комнатной температуре в течение 3 часов.

Осуществляли считывание с помощью PHERAStar в режиме HTRF (гомогенной разрешенной по времени флуоресценции). Самую низкую концентрацию соединения, стимулирующую уровень цитокинов, по меньшей мере в 3 раза превышающий минимальный предел обнаружения, устанавливали как значение минимальной эффективной концентрации (МЭК) соединения в тесте на стимуляцию цитокинов.

Способность соединений согласно настоящему изобретению стимулировать секрецию IFN-α из МНПК определяли с помощью вышеуказанного теста, и полученные значения МЭК представлены в таблице 3.

Таблица 3. МЭК соединений согласно настоящему изобретению для стимуляции секреции IFN-α из МНПК

Пример №	МЭК (нМ)
1	6
2	23
3	20
4	100
5	41
7	89

Вывод: Из данных по активности стимуляции секреции IFN-α из МНПК можно увидеть, что соединения согласно настоящему изобретению обладают преимуществом более низкой эффективной концентрации.

Пример исследования 4. Ингибирующее действие соединений согласно настоящему изобретению на ферментативную активность сайта метаболизма мидазолама CYP3A4 в микросомах печени человека

Действие соединений согласно настоящему изобретению на ферментативную активность сайта метаболизма мидазолама CYP3A4 в микросомах печени человека определяли следующим экспериментальным способом:

I. Материалы и инструменты для проведения эксперимента

1. Фосфатный буфер (PBS),

2. НАДФН (никотинамидадениндинуклеотидфосфат в восстановленной форме) (Sigma N-1630),

3. Микросомы печени человека (Corning Gentest),

4. Жидкостный хроматограф/масс-спектрометр ABI QTrap 4000 (AB Sciex),

5. Колонка Inertsil C8-3, 4,6×50 мм, 5 мкм (Dikma Technologies Inc., США),

6. Маркерный субстрат CYP (мидазолам/10 мкМ) и ингибитор положительного контроля (кетоконазол).

II. Порядок проведения эксперимента 

Приготовили 100 мМ раствор буфера PBS, который затем использовали для приготовления раствора микросом концентрацией 2,5 мг/мл и 5 мМ раствора НАДФH. 5-кратную концентрацию рабочего раствора соединения последовательно разбавляли PBS (150, 50, 15, 5, 1,5, 0,15, 0,015, 0 мкМ). 5-кратную концентрацию рабочего раствора кетоконазола последовательно разбавляли PBS (150, 50, 15, 5, 1,5, 0,15, 0,015, 0 мкМ). Рабочий раствор декстрометорфана разбавляли PBS до концентрации 50 мкМ.

Брали соответственно 20 мкл раствора микросом концентрацией 2,5 мг/мл, 20 мкл 50 мкМ рабочего раствора тестостерона, 20 мкл раствора MgCl₂ и 20 мкл рабочего раствора соединения (150, 50, 15, 5, 1,5, 0,15, 0,015, 0 мкМ, разные реакционные системы для каждой концентрации) и хорошо перемешивали. Для группы положительного контроля соединение заменяли на кетоконазол в той же концентрации. Смесь вместе с 5 мМ раствором НАДФH предварительно инкубировали при 37 °С в течение 5 минут. Спустя 5 минут в каждую лунку добавляли 20 мкл НАДФH, после чего начиналась реакция, и проводили инкубирование в течение 30 минут. Каждый из инкубированных образцов присутствовал в двух экземплярах. Спустя 30 минут ко всем образцам добавляли 250 мкл ацетонитрила, содержащего внутренний стандарт, хорошо перемешивали, встряхивали при 800 об/мин в течение 10 минут и затем центрифугировали при 3700 об/мин в течение 10 минут. Отбирали 80 мкл супернатанта и анализировали методом ЖХ-МС/МС.

Данные анализировали с помощью Graphpad Prism для получения значений IC₅₀ соединений в отношении сайта метаболизма мидазолама CYP3A4.

Значения IC₅₀ соединений согласно настоящему изобретению в отношении сайта метаболизма мидазолама CYP3A4 в микросомах печени человека.

Пример №	IC50 (мкМ)
1	14
2	10
3	7
4	11
6	10
7	больше 30
12	16

Вывод: соединения согласно настоящему изобретению оказывают слабое ингибирующее действие на сайт метаболизма мидазолама CYP3A4 в микросомах печени человека и демонстрируют лучшую безопасность, что указывает на то, что метаболическое взаимодействие лекарственного средства в отношении сайта метаболизма мидазолама CYP3A4 не будет происходить.

Пример исследования 5. Ингибирующее действие соединений согласно настоящему изобретению на ферментативную активность CYP2D6 в микросомах печени человека

Действие соединений согласно настоящему изобретению на ферментативную активность CYP2D6 в микросомах печени человека определяли следующим экспериментальным способом:

I. Материалы и инструменты для проведения эксперимента

1. Фосфатный буфер (PBS),

2. НАДФН (Sigma N-1630),

3. Микросомы печени человека (Corning Gentest),

4. Жидкостный хроматограф/масс-спектрометр ABI QTrap 4000 (AB Sciex),

5. Колонка Inertsil C8-3, 4,6×50 мм, 5 мкм (Dikma Technologies Inc., США),

6. Маркерный субстрат CYP (декстрометорфан/10 мкМ) и ингибитор положительного контроля (хинидин).

II. Порядок проведения эксперимента 

Приготовили 100 мМ раствор буфера PBS, который затем использовали для приготовления раствора микросом концентрацией 2,5 мг/мл и 5 мМ раствора НАДФH. 5-кратную концентрацию рабочего раствора соединения последовательно разбавляли PBS (150, 50, 15, 5, 1,5, 0,15, 0,015, 0 мкМ). 5-кратную концентрацию рабочего раствора хинидина последовательно разбавляли PBS (150, 50, 15, 5, 1,5, 0,15, 0,015, 0 мкМ). Рабочий раствор декстрометорфана разбавляли PBS до концентрации 50 мкМ.

Брали соответственно 20 мкл раствора микросом концентрацией 2,5 мг/мл, 20 мкл 50 мкМ рабочего раствора тестостерона, 20 мкл раствора MgCl₂ и 20 мкл рабочего раствора соединения (150, 50, 15, 5, 1,5, 0,15, 0,015, 0 мкМ, разные реакционные системы для каждой концентрации) и хорошо перемешивали. Для группы положительного контроля соединение заменяли на хинидин в той же концентрации. Смесь вместе с 5 мМ раствором НАДФH предварительно инкубировали при 37 °С в течение 5 минут. Спустя 5 минут в каждую лунку добавляли 20 мкл НАДФH, после чего начиналась реакция, и проводили инкубирование в течение 30 минут. Каждый из инкубированных образцов присутствовал в двух экземплярах. Спустя 30 минут ко всем образцам добавляли 250 мкл ацетонитрила, содержащего внутренний стандарт, хорошо перемешивали, встряхивали при 800 об/мин в течение 10 минут и затем центрифугировали при 3700 об/мин в течение 10 минут. Отбирали 80 мкл супернатанта и анализировали методом ЖХ-МС/МС.

Данные анализировали с помощью Graphpad Prism для получения значений IC₅₀ соединений в отношении сайта метаболизма CYP2D6.

Значения IC₅₀ соединений согласно настоящему изобретению в отношении ингибирования CYP2D6 в микросомах печени человека.

Пример №	IC50 (мкМ)
1	больше 30
2	больше 30
3	4
4	16
6	10
7	больше 30
12	16

Вывод: соединения согласно настоящему изобретению оказывают слабое ингибирующее действие на ферментативную активность CYP2D6 в микросомах печени человека и демонстрируют лучшую безопасность, что указывает на то, что метаболическое взаимодействие лекарственного средства в отношении CYP2D6, не будет происходить.

Пример исследования 6. Ингибирующее действие соединений согласно настоящему изобретению на ферментативную активность сайта метаболизма тестостерона CYP3A4 в микросомах печени человека

Действие соединений согласно настоящему изобретению на ферментативную активность сайта метаболизма тестостерона CYP3A4 в микросомах печени человека определяли следующим экспериментальным способом:

I. Материалы и инструменты для проведения эксперимента

1. Фосфатный буфер (PBS),

2. НАДФН (Sigma N-1630),

3. Микросомы печени человека (Corning Gentest),

4. Жидкостный хроматограф/масс-спектрометр ABI QTrap 4000 (AB Sciex),

5. Колонка Inertsil C8-3, 4,6×50 мм, 5 мкм (Dikma Technologies Inc., США),

6. Маркерный субстрат CYP (тестостерон/10 мкМ) и ингибитор положительного контроля (кетоконазол).

II. Порядок проведения эксперимента 

Приготовили 100 мМ раствор буфера PBS, который затем использовали для приготовления раствора микросом концентрацией 2,5 мг/мл и 5 мМ раствора НАДФH. 5-кратную концентрацию рабочего раствора соединения последовательно разбавляли PBS (150, 50, 15, 5, 1,5, 0,15, 0,015, 0 мкМ). 5-кратную концентрацию рабочего раствора кетоконазола последовательно разбавляли PBS (150, 50, 15, 5, 1,5, 0,15, 0,015, 0 мкМ). Рабочий раствор декстрометорфана разбавляли PBS до концентрации 50 мкМ.

Брали соответственно 20 мкл раствора микросом концентрацией 2,5 мг/мл, 20 мкл 50 мкМ рабочего раствора тестостерона, 20 мкл раствора MgCl₂ и 20 мкл рабочего раствора соединения (150, 50, 15, 5, 1,5, 0,15, 0,015, 0 мкМ, разные реакционные системы для каждой концентрации) и хорошо перемешивали. Для группы положительного контроля соединение заменяли на кетоконазол в той же концентрации. Смесь вместе с 5 мМ раствором НАДФH предварительно инкубировали при 37 °С в течение 5 минут. Спустя 5 минут в каждую лунку добавляли 20 мкл НАДФH, после чего начиналась реакция, и проводили инкубирование в течение 30 минут. Каждый из инкубированных образцов присутствовал в двух экземплярах. Спустя 30 минут ко всем образцам добавляли 250 мкл ацетонитрила, содержащего внутренний стандарт, хорошо перемешивали, встряхивали при 800 об/мин в течение 10 минут и затем центрифугировали при 3700 об/мин в течение 10 минут. Отбирали 80 мкл супернатанта и анализировали методом ЖХ-МС/МС.

Данные анализировали с помощью Graphpad Prism для получения значений IC₅₀ соединений в отношении сайта метаболизма тестостерона CYP3A4.

Значения IC₅₀ соединений согласно настоящему изобретению в отношении сайта метаболизма тестостерона CYP3A4 в микросомах печени человека.

Пример №	IC50 (мкМ)
1	4
2	19
3	3
4	6
6	3
7	больше 30
12	больше 30

Вывод: соединения согласно настоящему изобретению оказывают слабое ингибирующее действие на сайт метаболизма тестостерона CYP3A4 в микросомах печени человека и демонстрируют лучшую безопасность.

Claims (90)

1. Соединение формулы (I):

или его фармацевтически приемлемая соль,

где

кольцо A представляет собой фенил;

G представляет собой N;

X¹ представляет собой CH₂;

L¹ выбран из группы, состоящей из -NR⁴-, -O-, -C(O)-, -N(R⁴)C(O)- и ковалентной связи;

R¹ представляет собой C_1-6 алкил, где C_1-6 алкил необязательно замещен одним или более C_1-6 алкокси;

R² представляет собой водород или галоген;

L² представляет собой CH₂;

R³ представляет собой 4-6-членную насыщенную моноциклическую группу, где один кольцевой атом представляет собой N;

R⁴ представляет собой водород; и

n равно 0 или 1.

2. Соединение формулы (I) по п. 1, представляющее собой соединение формулы (II):

или его фармацевтически приемлемую соль,

где R⁶ и R⁷ вместе с азотом, к которому они присоединены, образуют 4-6-членный насыщенный гетероциклил;

G, L¹~L², R¹~R² и n являются такими, как определено в п. 1.

3. Соединение формулы (I) по п. 1, представляющее собой соединение формулы (III):

или его фармацевтически приемлемую соль,

где

s равно 0, 1 или 2;

L¹, R¹~R² и n являются такими, как определено в п. 1.

4. Соединение формулы (I) по п. 1, где L¹ выбран из группы, состоящей из -O-, -NR⁴-, -C(O)- и -N(R⁴)C(O)-, и R⁴ представляет собой водород.

5. Соединение формулы (I) по любому из пп. 1-4, выбранное из группы, состоящей из:

.

6. Соединение формулы (I-C):

или его фармацевтически приемлемая соль,

где

W представляет собой п-метоксибензил;

Х представляет собой галоген;

кольцо A представляет собой фенил;

G представляет собой N;

X¹ представляет собой CH₂;

R² представляет собой водород или галоген;

L² представляет собой CH₂;

R³ представляет собой 4-6-членную насыщенную моноциклическую группу, где один кольцевой атом представляет собой N;

n равно 0 или 1.

7. Соединение формулы (I-C) по п. 6, выбранное из группы, состоящей из:

.

8. Соединение формулы (I-E):

или его фармацевтически приемлемая соль,

где

W представляет собой п-метоксибензил;

кольцо A представляет собой фенил;

G представляет собой N;

X¹ представляет собой CH₂;

L¹ выбран из группы, состоящей из -NR⁴-, -O-, -C(O)-, -N(R⁴)C(O)- и ковалентной связи;

R¹ представляет собой C_1-6 алкил, где C_1-6 алкил необязательно замещен одним или более C_1-6 алкокси;

R² представляет собой водород или галоген;

L² представляет собой CH₂;

R³ представляет собой 4-6-членную насыщенную моноциклическую группу, где один кольцевой атом представляет собой N:

R⁴ представляет собой водород;

n равно 0 или 1.

9. Соединение формулы (I-E) по п. 8, выбранное из группы, состоящей из:

10. Способ получения соединения формулы (I-E) по п. 8, включающий стадию:

соединение формулы (I-C) и соединение формулы (I-D) подвергают реакции нуклеофильного замещения в щелочной среде с получением соединения формулы (I-E);

где

W представляет собой п-метоксибензил;

Х представляет собой галоген;

кольцо A, G, L¹~L², X¹, R¹~R³ и n являются такими, как определено в п. 8.

11. Способ получения соединения формулы (I) по п. 1, включающий стадию:

удаления защитной группы соединения формулы (I-E) в кислой среде с получением соединения формулы (I);

где

W представляет собой п-метоксибензил;

кольцо A, G, L¹~L², X¹, R¹~R³ и n являются такими, как определено в п. 1.

12. Фармацевтическая композиция для активации TLR7, содержащая терапевтически эффективное количество соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-5 и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или эксципиентов.

13. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-5 или фармацевтической композиции по п. 12 для получения лекарственного средства для активации толл-подобного рецептора 7 (TLR7).

14. Применение по п. 13, где лекарственное средство для активации TLR7 предназначено для лечения инфекции, вызванной вирусом, выбранным из группы, состоящей из вируса денге, вируса желтой лихорадки, вируса Западного Нила, вируса японского энцефалита, вируса клещевого энцефалита, вируса Кунджина, вируса энцефалита долины Мюррея, вируса энцефалита Сент-Луис, вируса омской геморрагической лихорадки, вируса вирусной диареи крупного рогатого скота, вируса Зика, вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), вируса гепатита B (ВГВ), вируса гепатита C (ВГС), вируса папилломы человека (ВПЧ), респираторно-синцитиального вируса человека (РСВ), тяжелого острого респираторного синдрома (ТОРС) и вируса гриппа.

15. Применение по п. 13, где лекарственное средство для активации TLR7 предназначено для лечения или предупреждения меланомы, немелкоклеточной карциномы легкого, гепатоцеллюлярной карциномы, базальноклеточной карциномы, почечно-клеточной карциномы, миеломы, аллергического ринита, астмы, хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ), язвенного колита и фиброза печени.

16. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-5 или содержащей их фармацевтической композиции по п. 12 для активации TLR7.