KR20190084991A - 피라졸로-헤테로아릴 유도체, 이의 제조 방법 및 의학적 용도 - Google Patents

피라졸로-헤테로아릴 유도체, 이의 제조 방법 및 의학적 용도 Download PDF

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KR20190084991A
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궈바오 장
춘펭 슈
키웨 후
펭 헤
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Abstract

피라졸로-헤테로아릴 유도체, 이의 제조 방법 및 의학적 용도가 개시된다. 특히, 본 발명은 일반 화학식 (I)에 나타난 바와 같은 새로운 피라졸로-헤테로아릴 유도체, 이의 제조 방법 및 이 유도체를 함유하는 약학적 조성물 및 치료제, 특히 TLR7 작용제로서의 이의 용도에 관한 것으로, 여기에서 일반 화학식 (I)의 각각의 치환기는 본 명세서에 정의되어 있다.

Description

피라졸로-헤테로아릴 유도체, 이의 제조 방법 및 의학적 용도
본 발명은 화학식 (I)의 신규한 피라졸로-헤테로아릴 유도체, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 약학적 조성물뿐만 아니라 치료제로서, 특히 TLR7 작용제로서의 이의 용도에 관한 것이다.
톨 유사 수용체(Toll-like receptor, TLR)는 선천적 면역에 관련된 중요한 단백질 분자의 한 부류이다. TLR은 대식세포 및 수지상 세포와 같은 보초 세포(sentinel cell) 상에 주로 발현되는 단일의, 막 관통형(membrane-spanning), 비-촉매성 수용체이며, 미생물에 의해 생산되는 구조적으로 보존된 분자를 인식할 수 있다. 일단 이러한 미생물이 피부 또는 장관 점막과 같은 물리적 장벽을 뚫으면, 그것들은 TLR에 의해 인식되어 면역 세포 반응을 활성화시킨다(Mahla, RS. et al., Front Immunol. 4: 248 (2013)). 병원성 미생물을 광범위하게 인식하는 면역계의 능력은 부분적으로는 톨 유사 면역수용체(TLR)의 광범위한 존재로 인한 것이다.
포유동물에는 적어도 10종의 상이한 TLR이 존재한다. 이러한 수용체 중 일부에 대한 리간드 및 상응하는 신호전달 캐스케이트가 확인되었다. TLR7은 비-자기(non-self) 핵산 검출에 특화된 세포의 엔도솜 구획에 편재된 TLR 하위군(TLR 3, 7, 8 및 9)의 구성원이다. TLR7은 ssRNA의 인식을 통해 항-바이러스 방어에 중요한 역할을 한다(Diebold S. S. et al, Science, 2004: 303, 1529-1531; 및 Lund J. M. et al, PNAS, 2004: 101, 5598-5603). TLR7은 인간에서 제한된 발현 프로파일을 가지고, 주로 B 세포와 형질세포양 수지상 세포(plasmacytoid dendritic cell, pDC)에 의해 발현되며, 단핵구에 의해서는 보다 적은 정도로 발현된다. 형질세포양 DC는 바이러스 감염에 반응하여 높은 수준의 인터페론-알파(IFNα) 및 인터페론-베타(IFNβ)를 분비하는 원발성 I형 인터페론 생성 세포인 림프 유래 수지상 세포의 독특한 집단(말초 혈액 단핵구 세포(Peripheral Blood Mononuclear Cell, PBMC)의 0.2 내지 0.8%)이다(Liu Y-J, Annu. Rev. Immunol., 2005: 23, 275-306).
흑색종, 비소세포 폐 암종, 간세포 암종, 기저세포 암종, 신장세포 암종, 골수종, 알레르기성 비염, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환(chronic obstructive pulmonary disease, COPD), 궤양성 대장염, 간 섬유증 및 HBV, 플라비바이러스과 바이러스, HCV, HPV, RSV, SARS, HIV 또는 인플루엔자와 같은 바이러스 감염과 같은 다수의 질병과 장애가 TLR 이상과 관련이 있다. 따라서, TLR 작용제의 관련 질병의 치료를 위한 용도는 매우 전도 유망하다.
TLR7과 TLR8은 상동성이 매우 높으므로, 대부분의 경우 TLR7의 리간드는 TLR8의 리간드이기도 하다. TLR8 자극은 주로 종양 괴사 인자 α(tumor necrosis factor α, TNF-α) 및 케모카인과 같은 사이토카인의 생성을 유도한다. 인터페론 α는 만성 B형 간염 또는 C형 간염 치료를 위한 주요 약물 중 하나이지만, TNF-α는 전염증성 사이토카인으로, 그것의 과다 분비는 심각한 부작용을 유발할 수 있다. 따라서, TLR7 및 TLR8에 대한 선택성은 바이러스 감염성 질병의 치료를 위한 TLR7 작용제의 개발에 매우 중요하다.
현재 WO2005025583, WO2007093901, WO2008011406, WO2009091032, WO2010077613, WO2010133882, WO2011031965 및 WO2012080730과 같은 TLR7 작용제와 관련된 특허 출원이 있다. 그러나 더욱 안전하고 더욱 치료적으로 유효한 TLR7 작용제를 계속하여 개발할 필요성은 여전하다.
상기 기술적 과제의 관점에서, 본 발명은 더 낮은 개시 농도, 더 우수한 선택성(TLR7에 대해 선택적이며, TLR8에 대해서는 활성화 효과 없음), 더욱 효과적인 활성화 효과를 가지며, 동시에 CYP에 대한 약한 억제적 효과로 인하여 더욱 안전하고 더욱 효과적인 TLR7 작용제인 약학적 화합물을 제공한다.
발명의 요약
본 발명의 목적은 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하는 것이며,
Figure pct00001
여기에서:
고리 A는 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
G는 CH 또는 N이고;
X1은 알킬렌 또는 S(O)m이고, 여기에서 알킬렌은 할로겐, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬 및 헤테로시클릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 선택적으로 치환되고;
L1은 -NR4-, -O-, -S-, -C(O)-, -C(O)-OR4, -S(O)m-, -N(R4)C(O)-, -C(O)N(R4)-, -N(R4)S(O)2-, -S(O)2N(R4)- 및 공유 결합으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
R1은 알킬, 알콕시, 할로알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기에서 알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 각각 독립적으로 알킬, 알콕시, 할로겐, 할로알킬, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, -OR5, -C(O)R5, -S(O)mR5, -NR6R7 및 -C(O)NR6R7로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 선택적으로 치환되고;
각각의 R2는 동일하거나 상이하며, 각각은 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기에서 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 각각 독립적으로 알킬, 알콕시, 할로겐, 할로알킬, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, -OR5, -C(O)R5, -S(O)mR5, -NR6R7 및 -C(O)NR6R7로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 선택적으로 치환되고;
L2는 알킬렌 또는 공유 결합이고, 여기에서 알킬렌은 알킬, 알콕시, 할로겐, 할로알킬, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, -OR5, -C(O)R5, -S(O)mR5, -NR6R7 및 -C(O)NR6R7로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 선택적으로 치환되고;
R3은 할로알킬, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, -OR5, -C(O)R5, -S(O)mR5, -NR6R7 및 -C(O)NR6R7로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기에서 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 각각 독립적으로 알킬, 알콕시, 할로겐, 할로알킬, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, -OR8, -C(O)R8, -S(O)mR8, -NR9R10 및 -C(O)NR9R10으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 선택적으로 치환되고;
R4는 수소, 알킬, 할로알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
R5는 수소, 알킬, 할로알킬, 아미노, 하이드록시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
R6 및 R7은 동일하거나 상이하고, 각각 독립적으로 수소, 알킬, 할로알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, -C(O)R8, -S(O)mR8 및 -C(O)NR9R10으로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기에서 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 각각 독립적으로 알킬, 알콕시, 할로겐, 아미노, 시아노, 니트로, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 선택적으로 치환되고;
또는, R6 및 R7은 그것들이 부착되는 질소와 함께 헤테로시클릴을 형성하고, 여기에서 헤테로시클릴은 선택적으로 하나의 질소 원자 이외에 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 또는 2개의 동일하거나 상이한 헤테로원자를 함유하고, 헤테로시클릴은 알킬, 알콕시, 할로겐, 아미노, 시아노, 니트로, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 선택적으로 치환되고;
R8은 수소, 알킬, 할로알킬, 아미노, 하이드록시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
R9 및 R10은 동일하거나 상이하고, 각각 독립적으로 수소, 알킬, 할로알킬, 아미노, 하이드록시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
n은 0, 1, 2, 3 또는 4이고; 그리고
m은 0, 1 또는 2이다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물에서, R3은 헤테로시클릴이고, 헤테로시클릴은 알킬, 알콕시, 할로겐, 아미노, 시아노, 니트로, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 선택적으로 치환된다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물에서, R3은 -NR6R7이고, R6 및 R7은 그것들이 부착되는 질소와 함께 헤테로시클릴을 형성하며, 여기에서 이 헤테로시클릴은 선택적으로 하나의 질소 원자 이외에 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 또는 2개의 동일하거나 상이한 헤테로원자를 함유하고, 헤테로시클릴은 알킬, 알콕시, 할로겐, 아미노, 시아노, 니트로, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 선택적으로 치환된다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물에서, 고리 A는 페닐 및 피리딜로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물에서, 피리딜은
Figure pct00002
및
Figure pct00003
로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물에서, X1은 알킬렌이다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (II)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이며,
Figure pct00004
여기에서 G, L1 ~ L2, R1 ~ R2, R6 ~ R7 및 n은 화학식 (I)에서 정의된 바와 같다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물에서, G는 N이다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물에서, L2는 알킬렌이다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (III)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이며,
Figure pct00005
여기에서:
s는 0, 1 또는 2이고;
L1, R1~R2 및 n은 화학식 (I)에서 정의된 바와 같다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물에서, L1은 -O-, -NR4-, -C(O)- 및 -C(O)N(R4)-로 이루어지는 군으로부터 선택되고, R4는 수소 또는 알킬이다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물에서, R1은 1개 이상의 알콕시로 선택적으로 치환된 알킬이다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물에서, 각각의 R2는 동일하거나 상이하고, 각각은 독립적으로 수소 또는 할로겐이다.
본 발명의 전형적인 화합물은 다음의 화합물 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하나, 이에 한정되지 않는다:
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
.
또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 (I-C)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것으로,
Figure pct00009
여기에서:
W는 아미노 보호기, 바람직하게는 tert-부톡시카보닐, 아세틸, 벤질, 알릴 또는 p-메톡시벤질이고;
X는 할로겐, 바람직하게는 염소이고;
고리 A, G, X1, L2, R2 ~ R3 및 n은 화학식 (I)에서 정의된 바와 같다.
화학식 (I-C)의 화합물은 다음을 포함하나, 이에 한정되지 않는다:
Figure pct00010
Figure pct00011
또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 (I-E)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것으로,
Figure pct00012
여기에서:
W는 아미노 보호기, 바람직하게는 tert-부톡시카보닐, 아세틸, 벤질, 알릴 또는 p-메톡시벤질이고;
고리 A, G, X1, L1 ~ L2, R1 ~ R3 및 n은 화학식 (I)에서 정의된 바와 같다.
화학식 (I-E)의 화합물은 다음을 포함하나, 이에 한정되지 않는다:
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
또 다른 양태에서, 본 발명은 알칼리 조건하에 화학식 (I-C)의 화합물 및 화학식 (I-D)의 화합물을 친핵성 치환 반응을 시켜 화학식 (I-E)의 화합물을 수득하는 단계를 포함하는, 화학식 (I-E)의 화합물의 제조 방법에 관한 것으로,
여기에서:
W는 아미노 보호기, 바람직하게는 tert-부톡시카보닐, 아세틸, 벤질, 알릴 또는 p-메톡시벤질이고;
X는 할로겐, 바람직하게는 염소이고;
고리 A, G, L1 ~ L2, X1, R1 ~ R3 및 n은 화학식 (I-E)에서 정의된 바와 같다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 산성 조건하에 화학식 (I-E)의 화합물의 보호기를 제거하여 화학식 (I)의 화합물을 수득하는 단계를 포함하는, 화학식 (I)의 화합물의 제조 방법에 관한 것으로,
Figure pct00017
여기에서:
W는 아미노 보호기, 바람직하게는 tert-부톡시카보닐, 아세틸, 벤질, 알릴 또는 p-메톡시벤질이고;
고리 A, G, L1 ~ L2, X1, R1 ~ R3 및 n은 화학식 (I)에서 정의된 바와 같다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 (II-B)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것으로,
Figure pct00018
여기에서:
W는 아미노 보호기, 바람직하게는 tert-부톡시카보닐, 아세틸, 벤질, 알릴 또는 p-메톡시벤질이고;
X는 할로겐, 바람직하게는 염소이고;
G, L2, R2, R6 ~ R7 및 n은 화학식 (II)에서 정의된 바와 같다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 (II-C)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것으로,
Figure pct00019
여기에서:
W는 아미노 보호기, 바람직하게는 tert-부톡시카보닐, 아세틸, 벤질, 알릴 또는 p-메톡시벤질이고;
G, L1 ~ L2, R1 ~ R2, R6 ~ R7 및 n은 화학식 (II)에 정의된 바와 같다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 알칼리 조건하에 화학식 (II-B)의 화합물 및 화학식 (I-D)의 화합물을 친핵성 치환 반응을 시켜 화학식 (II-C)의 화합물을 수득하는 단계를 포함하는, 화학식 (II-C)의 화합물의 제조 방법에 관한 것으로,
Figure pct00020
여기에서:
W는 아미노 보호기, 바람직하게는 tert-부톡시카보닐, 아세틸, 벤질, 알릴 또는 p-메톡시벤질이고;
X는 할로겐, 바람직하게는 염소이고;
G, L1 ~ L2, R1 ~ R2, R6 ~ R7 및 n은 화학식 (II)에 정의된 바와 같다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 산성 조건하에 화학식 (II-C)의 화합물의 보호기를 제거하여 화학식 (II)의 화합물을 수득하는 단계를 포함하는, 화학식 (II)의 화합물의 제조 방법에 관한 것으로,
Figure pct00021
여기에서:
W는 아미노 보호기, 바람직하게는 tert-부톡시카보닐, 아세틸, 벤질, 알릴 또는 p-메톡시벤질이고;
G, L1 ~ L2, R1 ~ R2, R6 ~ R7 및 n은 화학식 (II)에 정의된 바와 같다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 산성 조건하에 화학식 (III-C)의 화합물의 보호기를 제거하여 화학식 (III)의 화합물을 수득하는 단계를 포함하는, 화학식 (III)의 화합물의 제조 방법에 관한 것으로,
Figure pct00022
여기에서:
W는 아미노 보호기, 바람직하게는 tert-부톡시카보닐, 아세틸, 벤질, 알릴 또는 p-메톡시벤질이고;
L1, R1 ~ R2, s 및 n은 화학식 (III)에서 정의된 바와 같다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 치료학적 유효량의 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 1종 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 TLR7 활성화를 위한 약제의 제조에 있어서, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학적 조성물의 용도에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 뎅기 바이러스(dengue virus), 황열병 바이러스(yellow fever virus), 웨스트 나일 바이러스(West Nile virus), 일본 뇌염 바이러스(Japanese encephalitis virus), 진드기 매개 뇌염 바이러스(tick-borne encephalitis virus), 쿤진 바이러스(Kunjin virus), 머레이 계곡 뇌염 바이러스(Murray Valley encephalitis virus), 세인트루이스 뇌염 바이러스(St. Louis encephalitis virus), 옴스크 출혈열 바이러스(Omsk hemorrhagic fever virus), 소 바이러스성 설사 바이러스(bovine viral disarrhea virus), 지카 바이러스(Zika virus), HIV, HBV, HCV, HPV, RSV, SARS 및 인플루엔자 바이러스(influenza virus)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 바이러스에 의해 유발되는 감염의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학적 조성물의 용도에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 흑색종, 비소세포 폐 암종, 간세포 암종, 기저세포 암종, 신장세포 암종, 골수종, 알레르기성 비염, 천식, COPD, 궤양성 대장염 및 간 섬유증의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조에 있어서, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학적 조성물의 용도에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 약제로서 사용하기 위한, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 TLR7 활성화에 사용하기 위한, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 뎅기 바이러스, 황열병 바이러스, 웨스트 나일 바이러스, 일본 뇌염 바이러스, 진드기 매개 뇌염 바이러스, 쿤진 바이러스, 머레이 계곡 뇌염 바이러스, 세인트루이스 뇌염 바이러스, 옴스크 출혈열 바이러스, 소 바이러스성 설사 바이러스, 지카 바이러스, HIV, HBV, HCV, HPV, RSV, SARS 및 인플루엔자 바이러스로 이루어지는 군으로부터 선택되는 바이러스에 의해 유발되는 감염의 치료에 사용하기 위한, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 흑색종, 비소세포 폐 암종, 간세포 암종, 기저세포 암종, 신장세포 암종, 골수종, 알레르기성 비염, 천식, COPD, 궤양성 대장염 및 간 섬유증의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 치료학적 유효량의 본 발명의 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학적 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, TLR7 활성화 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 치료학적 유효량의 본 발명의 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학적 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 뎅기 바이러스, 황열병 바이러스, 웨스트 나일 바이러스, 일본 뇌염 바이러스, 진드기 매개 뇌염 바이러스, 쿤진 바이러스, 머레이 계곡 뇌염 바이러스, 세인트루이스 뇌염 바이러스, 옴스크 출혈열 바이러스, 소 바이러스성 설사 바이러스, 지카 바이러스, HIV, HBV, HCV, HPV, RSV, SARS 및 인플루엔자 바이러스로 이루어지는 군으로부터 선택되는 바이러스에 의해 유발되는 감염의 치료 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 치료학적 유효량의 본 발명의 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학적 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 흑색종, 비소세포 폐 암종, 간세포 암종, 기저세포 암종, 신장세포 암종, 골수종, 알레르기 비염, 천식, COPD, 궤양성 대장염 및 간 섬유증의 치료 또는 예방 방법에 관한 것이다.
활성 성분을 함유하는 약학적 조성물은 경구 투여에 적합한 형태, 예를 들어 정제, 트로키, 로젠지, 수성 또는 유성 현탁액, 분산성 분말 또는 과립, 에멀젼, 경질 또는 연질 캡슐, 또는 시럽 또는 엘릭시르일 수 있다. 경구 조성물은 약학적 조성물의 제조를 위한 당해 분야의 임의의 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다. 이러한 조성물은 만족스럽고 구미에 맞는 약학적 제제를 제공하기 위하여 감미제, 향미제, 착색제 및 보존제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 성분을 함유할 수 있다. 정제는 정제의 제조에 적합한 무독성의 약학적으로 허용 가능한 부형제와의 혼합물로 활성 성분을 함유한다.
수성 현탁액은 수성 현탁액의 제조에 적합한 부형제와의 혼합물로 활성 성분을 함유한다. 수성 현탁액은 또한 에틸파라벤 또는 n-프로필파라벤과 같은 1종 이상의 보존제, 1종 이상의 착색제, 1종 이상의 향미제 및 1종 이상의 감미제를 함유할 수 있다.
유성 현탁액은 식물성 오일에 활성 성분을 현탁시킴으로써 제형화될 수 있다. 유성 현탁액은 증점제를 함유할 수 있다. 구미에 맞는 제형을 제공하기 위하여 전술된 감미제 및 향미제가 첨가될 수 있다.
분산제 또는 습윤제, 현탁제 또는 1종 이상의 보존제와 혼합된 활성 성분은 물을 첨가함으로써 수성 현탁액 제조에 적합한 분산성 분말 또는 과립으로 제조될 수 있다. 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제는 이미 상기 언급된 것들에 의해 예시되었다. 추가적인 부형제, 예컨대 감미제, 향미제 및 착색제 또한 첨가될 수 있다. 이들 조성물은 아스코르브산과 같은 항산화제를 첨가하여 보존될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 또한 수중유적형(oil-in-water) 에멀젼의 형태일 수 있다.
약학적 조성물은 멸균된 주사용 수용액의 형태일 수 있다. 활용될 수 있는 허용 가능한 비히클 및 용매는 물, 링거 용액 및 등장성 염화나트륨 용액이다. 멸균된 주사용 제형은 활성 성분이 오일 상에 용해되어 있는, 멸균된 주사용 수중유적형 마이크로-에멀젼일 수 있다. 예를 들어, 활성 성분을 대두 오일과 레시틴의 혼합물에 용해시킨 다음, 유성 용액을 물과 글리세롤의 혼합물에 첨가하고 가공하여 마이크로에멀젼이 형성된다. 주사용 용액 또는 마이크로에멀젼은 국소적인 볼러스(local bolus) 주사에 의해 환자의 혈류 내로 주입될 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 화합물의 일정한 순환 농도를 유지하도록 하는 방식으로 용액 또는 마이크로에멀젼을 투여하는 것이 유리할 수 있다. 이러한 일정한 농도를 유지하기 위하여, 연속적인 정맥 내 전달 장치가 사용될 수 있다. 이러한 장치의 예는 델텍(Deltec) CADD-PLUS. TM. 5400 정맥 내 주사 펌프이다.
약학적 조성물은 근육 내 및 피하 투여를 위한, 멸균된 주사용 수성 또는 유성 현탁액의 형태일 수 있다. 이러한 현탁액은 공지된 기술에 따라 상기 기술된 바와 같은 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제로 제형화될 수 있다. 멸균된 주사용 제형은 또한 무독성의 비경구적으로 허용 가능한 희석제 또는 용매에 제조되는 멸균된 주사용 용액 또는 현탁액일 수 있다. 나아가, 멸균된 고정유가 용매 또는 현탁 매질로서 용이하게 이용될 수 있다.
본 발명의 화합물은 직장 투여를 위한 좌제의 형태로 투여될 수 있다. 이러한 약학적 조성물은 정상 온도에서는 고체이지만 직장에서는 액체인 적합한 비자극성 부형제와 약물을 혼합하여 제조될 수 있으며, 이에 의해 직장에서 약물을 용해시켜 방출시킨다. 이러한 물질은 코코아 버터, 글리세린 젤라틴, 수소화 식물성 오일, 다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜과 폴리에틸렌 글리콜의 지방산 에스테르의 혼합물을 포함한다.
약물의 투여량은 다음의 인자를 포함하나 이에 한정되지 않는 다양한 인자에 따라 달라진다는 것이 당업자에게 잘 알려져 있다: 특정 화합물의 활성, 환자의 연령, 환자의 체중, 환자의 일반 건강, 환자의 행동, 환자의 식이, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도, 약물 조합 등. 또한, 최적의 치료, 예컨대, 치료 방식, 화학식 (I)의 화합물의 1일 용량 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 종류는 통상적인 치료 계획(regimen)에 의해 확정될 수 있다.
발명의 상세한 설명
달리 언급되지 않는 한, 명세서 및 청구범위에 사용된 용어는 아래에 기술된 의미를 갖는다.
용어 "알킬"은 1개 내지 20개 탄소 원자를 포함하는 직쇄 또는 분지쇄 기인 포화 지방족 탄화수소 기, 바람직하게는 1개 내지 12개 탄소 원자를 갖는 알킬을 지칭한다. 비제한적인 예로는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, tert-부틸, sec-부틸, n-펜틸, 1,1-디메틸프로필, 1,2-디메틸프로필, 2,2-디메틸프로필, 1-에틸프로필, 2-메틸부틸, 3-메틸부틸, n-헥실, 1-에틸-2-메틸프로필, 1,1,2-트리메틸프로필, 1,1-디메틸부틸, 1,2-디메틸부틸, 2,2-디메틸부틸, 1,3-디메틸부틸, 2-에틸부틸, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 4-메틸펜틸, 2,3-디메틸부틸, n-헵틸, 2-메틸헥실, 3-메틸헥실, 4-메틸헥실, 5-메틸헥실, 2,3-디메틸펜틸, 2,4-디메틸펜틸, 2,2-디메틸펜틸, 3,3-디메틸펜틸, 2-에틸펜틸, 3-에틸펜틸, n-옥틸, 2,3-디메틸헥실, 2,4-디메틸헥실, 2,5-디메틸헥실, 2,2-디메틸헥실, 3,3-디메틸헥실, 4,4-디메틸헥실, 2-에틸헥실, 3-에틸헥실, 4-에틸헥실, 2-메틸-2-에틸펜틸, 2-메틸-3-에틸펜틸, n-노닐, 2-메틸-2-에틸헥실, 2-메틸-3-에틸헥실, 2,2-디에틸펜틸, n-데실, 3,3-디에틸헥실, 2,2-디에틸헥실 및 이의 다양한 분지형 이성질체를 포함한다. 더욱 바람직하게는, 알킬 기는 1 내지 6개 탄소 원자를 갖는 저급 알킬이며, 비제한적인 예로는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, tert-부틸, sec-부틸, n-펜틸, 1,1-디메틸프로필, 1,2-디메틸프로필, 2,2-디메틸프로필, 1-에틸프로필, 2-메틸부틸, 3-메틸부틸, n-헥실, 1-에틸-2-메틸프로필, 1,1,2-트리메틸프로필, 1,1-디메틸부틸, 1,2-디메틸부틸, 2,2-디메틸부틸, 1,3-디메틸부틸, 2-에틸부틸, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 4-메틸펜틸, 2,3-디메틸부틸 등을 포함한다. 알킬 기는 치환 또는 비치환될 수 있다. 치환될 때, 치환기(들)는 임의의 이용 가능한 연결점(connection point)에서 치환될 수 있다. 치환기(들)는 바람직하게는 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 티올, 하이드록시, 니트로, 시아노, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알콕시, 헤테로알콕시, 시클로알킬티오, 헤테로시클릴티오, 옥소, -OR5, -C(O)R5, -S(O)mR5, -NR6R7 및 -C(O)NR6R7로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택적으로 선택되는 1종 이상의 기이다.
용어 "알킬렌"은 모(parent) 알칸의 동일한 탄소 원자 또는 두 개의 상이한 탄소 원자로부터 두 개의 수소 원자의 제거로부터 유래된 두 개의 잔기를 갖는 포화된 선형 또는 분지형 지방족 탄화수소 기를 지칭한다. 선형 또는 분지형 알킬렌은 1개 내지 20개 탄소 원자, 바람직하게는 1개 내지 12개 탄소 원자 및 더욱 바람직하게는 1개 내지 6개 탄소 원자를 갖는다. 알킬렌 기의 비제한적인 예로는 메틸렌(-CH2-), 1,1-에틸렌(-CH(CH3)-), 1,2-에틸렌(-CH2CH2)-, 1,1-프로필렌(-CH(CH2CH3)-), 1,2-프로필렌(-CH2CH(CH3)-), 1,3-프로필렌(-CH2CH2CH2-), 1,4-부틸렌(-CH2CH2CH2CH2-) 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 알킬렌 기는 치환 또는 비치환될 수 있다. 치환될 때, 치환기(들)는 임의의 이용 가능한 연결점에서 치환될 수 있다. 치환기(들)는 바람직하게는 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 티올, 하이드록시, 니트로, 시아노, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알콕시, 헤테로알콕시, 시클로알킬티오, 헤테로시클릴티오, 옥소, -OR5, -C(O)R5, -S(O)mR5, -NR6R7 및 -C(O)NR6R7로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택적으로 선택되는 1종 이상의 기이다.
용어 "알케닐"은 올레핀 분자에서의 1개 이상의 수소 원자의 제거에 의해 형성되는 탄화수소 기를 지칭한다. 알케닐 기는 치환 또는 비치환될 수 있다. 치환될 때, 치환기(들)는 바람직하게는 수소, 알킬, 알콕시, 할로겐, 할로알킬, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, -OR5, -C(O)R5, -S(O)mR5, -NR6R7 및 -C(O)NR6R7로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되는 1개 이상의 기이다.
용어 "알키닐"은 분자에 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 탄화수소 기를 지칭한다. 알키닐 기는 치환 또는 비치환될 수 있다. 치환될 때, 치환기(들)는 바람직하게는 수소, 알킬, 알콕시, 할로겐, 할로알킬, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, -OR5, -C(O)R5, -S(O)mR5, -NR6R7 및 -C(O)NR6R7로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되는 1개 이상의 기이다.
용어 "시클로알킬"은 3개 내지 20개 탄소 원자, 바람직하게는 3개 내지 12개 탄소 원자, 바람직하게는 3개 내지 10개 탄소 원자 및 더욱 바람직하게는 3개 내지 6개 탄소 원자를 갖는 포화 또는 부분 불포화된 단고리 또는 다고리 탄화수소 기를 지칭한다. 단고리 시클로알킬의 비제한적인 예로는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로펜테닐, 시클로헥실, 시클로헥세닐, 시클로헥사디에닐, 시클로헵틸, 시클로헵타트리에닐, 시클로옥틸 등을 포함한다. 다고리 시클로알킬은 스피로 고리, 융합 고리 또는 가교 고리를 갖는 시클로알킬을 포함한다.
용어 "아미노 보호기"는 분자의 다른 부분이 반응할 때 아미노기가 반응하는 것을 방지하며, 쉽게 제거될 수 있는 기를 지칭한다. 비제한적인 예로는 tert-부톡시카보닐, 아세틸, 벤질, 알릴 및 p-메톡시벤질 등을 포함한다. 이러한 기는 할로겐, 알콕시 및 니트로로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 내지 3개의 치환기에 의해 선택적으로 치환될 수 있다. 아미노 보호기는 바람직하게는 p-메톡시벤질이다.
용어 "헤테로시클릴"은 3 내지 20원 포화 또는 부분 불포화된 단고리 또는 다고리 탄화수소 치환기를 지칭하며, 여기에서 1개 이상의 고리 원자는 N, O 및 S(O)m(m은 0 내지 2의 정수임)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 헤테로 원자이지만, 고리에서 -O-O-, -O-S- 또는 -S-S-를 제외하며, 나머지 고리 원자는 탄소 원자이다. 바람직하게는, 헤테로시클릴은 3개 내지 12개 고리 원자를 가지며, 여기에서 1개 내지 4개 원자가 헤테로원자이고, 더욱 바람직하게는 3개 내지 10개 고리 원자를 가지며, 여기에서 1개 내지 4개 원자가 헤테로원자이고, 더욱 바람직하게는 5개 내지 6개 고리 원자를 가지며, 여기에서 1개 내지 3개 원자가 헤테로원자이다. 단고리 헤테로시클릴의 비제한적인 예로는 피롤리디닐, 테트라하이드로피라닐, 1,2,3,6-테트라하이드로피리딜, 피페리디닐, 피페라지닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 호모피페라지닐 등을 포함한다. 다고리 헤테로시클릴로는 스피로 고리, 융합 고리 또는 가교 고리를 갖는 헤테로시클릴을 포함한다.
헤테로시클릴의 고리는 아릴, 헤테로아릴 또는 시클로알킬의 고리에 융합될 수 있으며, 여기에서 모 구조에 결합된 고리는 헤테로시클릴이다. 비제한적인 예로는 다음을 포함한다:
Figure pct00023
.
헤테로시클릴은 선택적으로 치환 또는 비치환될 수 있다. 치환될 때, 치환기(들)는 바람직하게는 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 티올, 하이드록시, 니트로, 시아노, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알콕시, 헤테로알콕시, 시클로알킬티오, 헤테로시클릴티오, 옥소, -OR5, -C(O)R5, -S(O)mR5, -NR6R7 및 -C(O)NR6R7로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택적으로 선택되는 1개 이상의 기(들)이다.
용어 "아릴"은 콘쥬게이트된 π-전자 시스템을 갖는 6 내지 14원 모두가 탄소인 단고리 또는 다고리 융합 고리(즉, 시스템 내의 각각의 고리가 시스템 내의 또 다른 고리와 인접한 탄소 원자 쌍을 공유함)를 지칭하며, 바람직하게는 6 내지 10원 아릴, 예를 들어 페닐 및 나프틸을 지칭한다. 아릴의 고리는 헤테로아릴, 헤테로시클릴 또는 시클로알킬의 고리에 융합될 수 있으며, 여기에서 모 구조에 결합된 고리는 아릴 고리이다. 비제한적인 예로는 다음을 포함한다:
Figure pct00024
아릴은 치환 또는 비치환될 수 있다. 치환될 때, 치환기(들)는 바람직하게는 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 티올, 하이드록시, 니트로, 시아노, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알콕시, 헤테로알콕시, 시클로알킬티오, 헤테로시클릴티오, -OR5, -C(O)R5, -S(O)mR5, -NR6R7 및 -C(O)NR6R7로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택적으로 선택되는 1개 이상의 기(들)이다.
용어 "헤테로아릴"은 O, S 및 N으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 내지 4개 헤테로원자를 갖는 5 내지 14원 헤테로방향족 시스템을 지칭한다. 헤테로아릴은 바람직하게는 5 내지 10원 헤테로아릴, 더욱 바람직하게는 5 또는 6원 헤테로아릴, 예를 들어 퓨라닐, 티에닐, 피리딜, 피롤릴, N-알킬피롤릴, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 이미다졸릴, 피라졸릴, 테트라졸릴 등이다. 헤테로아릴의 고리는 아릴, 헤테로시클릴 또는 시클로알킬의 고리에 융합될 수 있으며, 모 구조에 결합된 고리는 헤테로아릴 고리이다. 비제한적인 예로는 다음을 포함한다:
Figure pct00025
헤테로아릴은 선택적으로 치환 또는 비치환될 수 있다. 치환될 때, 치환기(들)는 바람직하게는 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 티올, 하이드록시, 니트로, 시아노, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알콕시, 헤테로알콕시, 시클로알킬티오, 헤테로시클릴티오, -OR5, -C(O)R5, -S(O)mR5, -NR6R7 및 -C(O)NR6R7로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되는 1개 이상의 기(들)이다.
용어 "알콕시"는 -O-(알킬) 또는 -O-(비치환 시클로알킬) 기를 지칭하며, 여기에서 알킬은 상기에서 정의된 바와 같다. 알콕시의 비제한적인 예로는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, 시클로프로필옥시, 시클로부틸옥시, 시클로펜틸옥시, 시클로헥실옥시를 포함한다. 알콕시는 선택적으로 치환 또는 비치환될 수 있다. 치환될 때, 치환기(들)는 바람직하게는 할로겐, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되는 1개 이상의 기(들)이다.
용어 "할로알킬"은 1개 이상의 할로겐으로 치환된 알킬기를 지칭하며, 여기에서 알킬은 상기에서 정의된 바와 같다. 용어 "하이드록시"는 -OH 기를 지칭한다.
용어 "하이드록시알킬"은 하이드록시(들)로 치환된 알킬기를 지칭하며, 여기에서 알킬은 상기에서 정의된 바와 같다.
용어 "할로겐"은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 지칭한다.
용어 "아미노"는 -NH2 기를 지칭한다.
용어 "시아노"는 -CN 기를 지칭한다.
용어 "니트로"는 -NO2 기를 지칭한다.
용어 "옥소"는 =O 기를 지칭한다.
"선택적인" 또는 "선택적으로"는 이후에 설명되는 사건 또는 상황이 발생할 수 있으나 그렇게 할 필요는 없음을 의미하며, 이러한 설명은 사건 또는 상황이 발생하거나 발생하지 않는 상황을 포함한다. 예를 들어, "알킬로 선택적으로 치환된 헤테로시클릴"은 알킬기가 존재할 수 있으나 존재할 필요는 없음을 의미하며, 이러한 설명은 알킬로 치환된 헤테로시클릴 및 알킬로 치환되지 않은 헤테로시클릴의 상황을 포함한다.
"치환된"은 상응하는 수의 치환기로 독립적으로 치환된, 기에서의 1개 이상의 수소 원자, 바람직하게는 최대 5개, 더욱 바람직하게는 1개 내지 3개의 수소 원자를 지칭한다. 치환기가 그것들의 가능한 화학적 위치에서만 존재한다는 점은 말할 필요도 없다. 당업자는 과도한 노력을 기울이지 않고 실험 또는 이론에 의해 이 치환이 가능한지 불가능한지 여부를 결정할 수 있다. 예를 들어, 자유 수소(free hydrogen) 및 (올레핀과 같은) 불포화 결합을 갖는 탄소 원자를 갖는 아미노 또는 하이드록시의 조합은 불안정할 수 있다.
"약학적 조성물"은 본원에 기술된 1종 이상의 화합물 또는 이의 생리학적으로/약학적으로 허용 가능한 염 또는 전구 약물과 기타 화학 성분, 및 생리적으로/약학적으로 허용 가능한 담체 및 부형제와 같은 다른 성분의 혼합물을 지칭한다. 약학적 조성물의 목적은 화합물의 유기체로의 투여를 용이하게 하는 것이며, 이는 생물학적 활성을 나타내도록 활성 성분의 흡수에 도움이 된다.
"약학적으로 허용 가능한 염"은 포유동물에서 안전하고 효과적이며, 원하는 생물학적 활성을 갖는 본 발명의 화합물의 염을 지칭한다.
m 및 R5 내지 R7은 화학식 (I)의 화합물에서 정의된 바와 같다.
본 발명의 화합물의 합성 방법
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 다음의 해결 수단을 사용한다:
반응식 I
본 발명의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 제조 방법은 다음 단계를 포함하며:
Figure pct00026
첫 번째 단계에서, 알칼리 조건하에 화학식 (I-A)의 화합물 및 화학식 (I-B)의 화합물을 친핵성 치환 반응을 시켜 화학식 (I-C)의 화합물을 수득하고;
두 번째 단계에서, 알칼리 조건하에 화학식 (I-C)의 화합물 및 화학식 (I-D)의 화합물을 친핵성 치환 반응을 시켜 화학식 (I-E)의 화합물을 수득하고;
세 번째 단계에서, 산성 조건하에 화학식 (I-E)의 화합물의 보호기를 제거하여 화학식 (I)의 화합물을 수득하고.
여기에서:
M은 수소 또는 금속 이온이고, 여기에서 금속 이온은 바람직하게는 나트륨 이온이고;
W는 아미노 보호기, 바람직하게는 tert-부톡시카보닐, 아세틸, 벤질, 알릴 또는 p-메톡시벤질이고;
X는 할로겐, 바람직하게는 염소이고;
고리 A, G, L1 ~ L2, X1, R1 ~ R3 및 n은 화학식 (I)에서 정의된 바와 같다.
알칼리 조건을 제공하는 시약은 유기 염기 및 무기 염기를 포함한다. 유기 염기는 트리에틸아민, N,N-디이소프로필에틸아민, n-부틸리튬, 리튬 디이소프로필아미드, 리튬 비스(트리메틸실릴)아민, 포타슘 아세테이트, 소듐 tert-부톡사이드, 포타슘 tert-부톡사이드 및 소듐 n-부톡사이드를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 무기 염기는 수소화나트륨, 인산칼륨, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 아세트산칼륨, 탄산세슘, 수산화나트륨 및 수산화리튬을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
산성 조건을 제공하는 시약은 염화수소, 1,4-디옥산 중 염화수소 용액, 트리플루오로아세트산, 포름산, 아세트산, 염산, 황산, 메탄설폰산, 질산, 인산, p-톨루엔설폰산, Me3SiCl, TMSOTf를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 반응은 바람직하게는 용매 중에서 수행된다. 사용되는 용매는 아세트산, 메탄올, 에탄올, n-부탄올, 톨루엔, 테트라하이드로퓨란, 디클로로메탄, 석유 에테르, 에틸 아세테이트, n-헥산, 디메틸 설폭사이드, 1,4-디옥산, 물 및 N,N-디메틸포름아미드를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
반응식 II
본 발명의 화학식 (II)의 화합물 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 제조 방법은 다음 단계를 포함하며:
Figure pct00027
첫 번째 단계에서, 알칼리 조건하에 화학식 (I-A)의 화합물 및 화학식 (II-A)의 화합물을 친핵성 치환 반응을 시켜 화학식 (II-B)의 화합물을 수득하고;
두 번째 단계에서, 알칼리 조건하에 화학식 (II-B)의 화합물 및 화학식 (I-D)의 화합물을 친핵성 치환 반응을 시켜 화학식 (II-C)의 화합물을 수득하고;
세 번째 단계에서, 산성 조건하에 화학식 (II-C)의 화합물의 보호기를 제거하여 화학식 (II)의 화합물을 수득하고;
여기에서:
M은 수소 또는 금속 이온이고, 여기에서 금속 이온은 바람직하게는 나트륨 이온이고;
W는 아미노 보호기, 바람직하게는 tert-부톡시카보닐, 아세틸, 벤질, 알릴 또는 p-메톡시벤질이고;
X는 할로겐, 바람직하게는 염소이고;
G, L1 ~ L2, R1 ~ R2, R6 ~ R7 및 n은 화학식 (II)에 정의된 바와 같다.
알칼리 조건을 제공하는 시약은 유기 염기 및 무기 염기를 포함한다. 유기 염기는 트리에틸아민, N,N-디이소프로필에틸아민, n-부틸리튬, 리튬 디이소프로필아미드, 리튬 비스(트리메틸실릴)아민, 아세트산칼륨, 소듐 tert-부톡사이드, 포타슘 tert-부톡사이드 및 소듐 n-부톡사이드를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 무기 염기는 수소화나트륨, 인산칼륨, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 아세트산칼륨, 탄산세슘, 수산화나트륨 및 수산화리튬을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
산성 조건을 제공하는 시약은 염화수소, 1,4-디옥산 중 염화수소 용액, 트리플루오로아세트산, 포름산, 아세트산, 염산, 황산, 메탄설폰산, 질산, 인산, p-톨루엔설폰산, Me3SiCl, TMSOTf를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 반응은 바람직하게는 용매 중에서 수행된다. 사용되는 용매는 아세트산, 메탄올, 에탄올, n-부탄올, 톨루엔, 테트라하이드로퓨란, 디클로로메탄, 석유 에테르, 에틸 아세테이트, n-헥산, 디메틸 설폭사이드, 1,4-디옥산, 물 및 N,N-디메틸포름아미드를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
반응식 III
본 발명의 화학식 (III)의 화합물 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 제조 방법은 다음 단계를 포함하며:
Figure pct00028
첫 번째 단계에서, 알칼리 조건하에 화학식 (I-A)의 화합물 및 화학식 (III-A)의 화합물을 친핵성 치환 반응을 시켜 화학식 (III-B)의 화합물을 수득하고;
두 번째 단계에서, 알칼리 조건하에 화학식 (III-B)의 화합물 및 화학식 (I-D)의 화합물을 친핵성 치환 반응을 시켜 화학식 (III-C)의 화합물을 수득하고;
세 번째 단계에서, 산성 조건하에 화학식 (III-C)의 화합물의 보호기를 제거하여 화학식 (III)의 화합물을 수득하고;
여기에서:
M은 수소 또는 금속 이온이고, 여기에서 금속 이온은 바람직하게는 나트륨 이온이고;
W는 아미노 보호기, 바람직하게는 tert-부톡시카보닐, 아세틸, 벤질, 알릴 또는 p-메톡시벤질이고;
X는 할로겐, 바람직하게는 염소이고;
L1, R1 ~ R2, s 및 n은 화학식 (III)에서 정의된 바와 같다.
알칼리 조건을 제공하는 시약은 유기 염기 및 무기 염기를 포함한다. 유기 염기는 트리에틸아민, N,N-디이소프로필에틸아민, n-부틸리튬, 리튬 디이소프로필아미드, 리튬 비스(트리메틸실릴)아민, 아세트산칼륨, 소듐 tert-부톡사이드, 포타슘 tert-부톡사이드 및 소듐 n-부톡사이드를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 무기 염기는 수소화나트륨, 인산칼륨, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 아세트산칼륨, 탄산세슘, 수산화나트륨 및 수산화리튬을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
산성 조건을 제공하는 시약은 염화수소, 1,4-디옥산 중 염화수소 용액, 트리플루오로아세트산, 포름산, 아세트산, 염산, 황산, 메탄설폰산, 질산, 인산, p-톨루엔설폰산, Me3SiCl, TMSOTf를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 반응은 바람직하게는 용매 중에서 수행된다. 사용되는 용매는 아세트산, 메탄올, 에탄올, n-부탄올, 톨루엔, 테트라하이드로퓨란, 디클로로메탄, 석유 에테르, 에틸 아세테이트, n-헥산, 디메틸 설폭사이드, 1,4-디옥산, 물 및 N,N-디메틸포름아미드를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
바람직한 구현예
본 발명은 다음 실시예를 참고하여 추가로 설명될 것이나, 실시예가 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 간주되어서는 안 된다.
실시예
화합물의 구조를 핵자기 공명(nuclear magnetic resonance, NMR) 및/또는 질량 분광분석(mass spectrometry, MS)에 의해 확인하였다. NMR 이동(δ)은 10-6(ppm)으로 제공하였다. 브루커(Bruker) AVANCE-400 기계에 의해 NMR을 결정하였다. 결정(determination)을 위한 용매는 중수소화 디메틸 설폭사이드(DMSO-d 6 ), 중수소화 클로로포름(CDCl3) 및 중수소화 메탄올(CD3OD)이었고, 내부 표준물질은 테트라메틸실란(TMS)이었다.
MS는 FINNIGAN LCQAd (High performance liquid chromatography, ESI) 질량 분광분석기(제조사: 써모(Thermo), 타입: Finnigan LCQ 어드밴티지(advantage) MAX)로 결정하였다.
고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)는 애질런트(Agilent) HPLC 1200DAD, 애질런트 HPLC 1200VWD 및 워터스(Waters) HPLC e2695-2489 고압 액체 크로마토그래프로 결정하였다.
키랄 HPLC는 애질런트 HPLC 1260 DAD 고성능 액체 크로마토그래프로 결정하였다.
고성능 액체 제조는 워터스 2767, 워터스 2767-SQ Detecor2, 시마즈(Shimadzu) LC-20AP 및 길슨(Gilson)-281 분취 크로마토그래프에서 수행하였다.
키랄 제조는 시마즈 LC-20AP 분취 크로마토그래프에서 수행하였다.
사용된 콤비플래쉬(CombiFlash) 신속 제조 장치는 콤비플래쉬 Rf200(TELEDYNE ISCO)이었다.
옌타이 황하이(Yantai Huanghai) HSGF254 또는 칭다오(Qingdao) GF254 실리카겔 플레이트를 박막 실리카겔 크로마토그래피(TLC) 플레이트로 사용하였다. TLC에 사용한 실리카겔 플레이트의 크기는 0.15 mm 내지 0.2 mm였고, 생성물 정제에 사용한 실리카겔 플레이트의 크기는 0.4 mm 내지 0.5 mm였다.
컬럼 크로마토그래피용 운반체로서 옌타이 황하이 200 내지 300 메쉬 실리카겔을 일반적으로 사용하였다.
평균 키나제 억제율 및 IC50 값을 노보스타(NovoStar) ELISA(BMG Co., 독일)로 결정하였다.
본 발명의 공지된 출발 물질은 당해 분야의 공지된 방법에 의해 제조될 수 있거나, ABCR GmbH & Co. KG, Acros Organnics, Aldrich Chemical Company, Accela ChemBio Inc., 또는 Dari chemical Company 등으로부터 구매할 수 있다.
달리 언급되지 않는 한, 반응은 아르곤 분위기 또는 질소 분위기하에서 수행하였다.
아르곤 분위기 또는 질소 분위기는 반응 플라스크에 아르곤 또는 질소 풍선(약 1 L)이 구비되어 있음을 의미한다.
수소 분위기는 반응 플라스크에 수소 풍선(약 1 L)이 구비되어 있음을 의미한다.
가압 수소화 반응은 Parr 3916EKX 수소화 기기 및 Qinglan QL-500 수소 발생기 또는 HC2-SS 수소화 기기에서 수행하였다.
수소화 반응에서, 반응 시스템은 일반적으로 진공화시키고 수소로 채웠으며, 위의 작업을 3회 반복하였다.
CEM 디스커버(Discover)-S 908860 타입 마이크로웨이브 반응기를 마이크로웨이브 반응에 사용하였다.
달리 언급되지 않는 한, 용액은 수용액을 지칭한다.
달리 언급되지 않는 한, 반응 온도는 20℃ 내지 30℃의 실온이다.
실시예에서 반응 공정은 박막 크로마토그래피(TLC)로 모니터링 하였다. 반응에 사용된 전개 용매(developing solvent), 컬럼 크로마토그래피에서의 용리 시스템 및 화합물 정제를 위한 박막 크로마토그래피의 전개 용매 시스템은 다음을 포함하였다: A: 디클로로메탄/메탄올 시스템, 및 B: n-헥산/에틸 아세테이트 시스템. 용매의 부피 비율은 화합물의 극성에 따라 조정하였고, 트리에틸아민과 같은 알칼리 시약 또는 아세트산과 같은 산성 시약이 또한 조정을 위해 소량 첨가될 수 있다.
실시예 1
6-부톡시-1-(4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
Figure pct00029
Figure pct00030
단계 1
6-클로로-N-(4-메톡시벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 1c
4,6-디클로로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 1a(120 mg, 0.63 mmol), 4-메톡시벤질아민 1b(87.1 mg, 0.63 mmol) 및 트리에틸아민(64.13 mg, 0.63 mmol)을 2 mL의 테트라하이드로퓨란에 용해시키고, 반응 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응을 정지시키고, 반응 용액을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 용리 시스템 A를 이용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 1c(140 mg, 수율: 76.1%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 290.2 [M+1]
단계 2
6-클로로-N-(4-메톡시벤질)-1-(4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 1e
화합물 1c(140 mg, 0.48 mmol), 1-(4-(클로로메틸)벤질)피롤리딘 1d(101.34 mg, 0.48 mmol, 특허 출원 "WO2002012224"에 개시된 방법에 따라 제조됨) 및 탄산칼륨(66.79 mg, 0.48 mmol)을 2 mL의 N,N-디메틸포름아미드에 용해시켰다. 실온에서 16시간 동안 교반한 후, 반응을 정지시켰다. 반응 용액을 감압 하에 농축하고, 잔류물을 용리 시스템 A를 이용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 1e(70 mg, 수율: 31.3%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 463.2 [M+1]
단계 3
6-부톡시-N-(4-메톡시벤질)-1-(4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 1f
화합물 1e(70 mg, 0.15 mmol), 소듐 n-부톡사이드(0.3 mL, 0.60 mmol) 및 1 mL의 n-부탄올을 연속하여 마이크로웨이브 튜브에 첨가하고, 160℃로 가열하고, 1.5시간 동안 교반하였다. 반응을 정지시키고, 반응 용액을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 용리 시스템 A를 이용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 1f(40 mg, 수율: 52.8%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 501.2 [M+1]
단계 4
6-부톡시-1-(4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 1
화합물 1f(40 mg, 0.08 mmol) 및 2 mL의 트리플루오로아세트산을 반응 플라스크에 첨가하고, 가열 환류시키고, 24시간 동안 교반하였다. 반응을 정지시키고, 반응 용액을 감압 하에 농축하고, 1 mL의 메탄올 중 암모니아를 첨가하였다. 잔류물을 전개 용매 시스템 A를 이용한 박막 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 1(15 mg, 수율: 46.0%)을 수득하였다.
MS m/z (ESI): 381.2 [M+1]
1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 7.98 (s, 1H), 7.41 (d, 2H), 7.36 (d, 2H), 5.48 (s, 2H), 4.39 (t, 2H), 4.13 (s, 2H), 3.12-3.08 (m, 4H), 2.02-1.98 (m, 4H), 1.80-1.76 (m, 2H), 1.55-1.49 (m, 2H), 1.01 (t, 3H).
실시예 2
1-(4-(아제티딘-1-일메틸)벤질)-6-부톡시-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 2
Figure pct00031
단계 1
메틸 4-(아제티딘-1-일메틸)벤조에이트 2c
메틸 4-(브로모메틸)벤조에이트 2a(1.0 g, 4.37mmol), 아제티딘 2b(299 mg, 5.24 mmol) 및 트리에틸아민(529 mg, 5.24 mmol)을 10 mL의 테트라하이드로퓨란에 용해시키고, 반응 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 물(100 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(100 mL)로 추출하였다. 유기 상을 포화 염화나트륨 용액(100 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고 여과하였다. 여과액을 감압 하에 농축하여 미정제(crude) 표제 화합물 2c(880 mg)를 수득하였고, 이를 정제 없이 바로 다음 단계에 사용하였다.
MS m/z (ESI): 206.1 [M+1]
단계 2
4-(아제티딘-1-일메틸)페닐카비놀 2d
미정제 화합물 2c(880 mg, 0.33 mmol)를 10 mL의 디에틸 에테르에 용해시키고, 수소화 알루미늄리튬(326 mg, 8.57 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 반응 용액을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 0.3 mL의 물, 0.3 mL의 15% 수산화나트륨 용액 및 0.9 mL의 물을 연속하여 첨가하여 반응을 ?칭하였다. 반응 용액을 여과하고, 여과액을 감압 하에 농축하여 미정제 표제 화합물 2d(700 mg)를 수득하였고, 이를 정제 없이 바로 다음 단계에 사용하였다.
MS m/z (ESI): 178.3 [M+1]
단계 3
1-(4-(클로로메틸)벤질)아제티딘 2e
미정제 화합물 2d(700 mg, 3.95 mmol)를 10 mL의 디클로로메탄에 용해시키고, 염화티오닐(0.58 mL, 7.90 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 하에 농축하고, 생성된 잔류물에 포화 탄산나트륨 용액(50 mL)을 첨가하고, 디클로로메탄(100 mL x 2)으로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과하였다. 여과액을 감압 하에 농축하여 미정제 표제 화합물 2e(720 mg)를 수득하였고, 이를 정제 없이 바로 다음 단계에 사용하였다.
MS m/z (ESI): 197.2 [M+1]
단계 4
1-(4-(아제티딘-1-일메틸)벤질)-6-클로로-N-(4-메톡시벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 2f
화합물 1c(600 mg, 2.07 mmol), 미정제 화합물 2e(405 mg, 2.07 mmol) 및 탄산칼륨(286 mg, 2.07 mmol)을 10 mL의 N,N-디메틸포름아미드에 용해시키고, 반응 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 하에 농축하고, 생성된 잔류물을 용리 시스템 A를 이용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 2f(300 mg, 수율: 32.3%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 449.2 [M+1]
단계 5
1-(4-(아제티딘-1-일메틸)벤질)-6-부톡시-N-(4-메톡시벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 2g
화합물 2f(150 mg, 0.33 mmol), 소듐 n-부톡사이드(0.7 mL, 1.40 mmol) 및 2 mL의 n-부탄올을 연속하여 마이크로웨이브 튜브에 첨가하고, 160℃까지 가열하고, 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 용리 시스템 A를 이용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 2g(60 mg, 수율: 36.9%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 487.3 [M+1]
단계 6
1-(4-(아제티딘-1-일메틸)벤질)-6-부톡시-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 2
화합물 2g(60 mg, 0.12 mmol) 및 2 mL의 트리플루오로아세트산을 반응 플라스크에 첨가하고, 가열 환류시키고, 24시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 반응 혼합물에 메탄올 중 7 N 암모니아 용액(1 mL)을 첨가하고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 고성능 액체 크로마토그래피(워터스-2767, 용리 시스템: 10 mmoL/L 중탄산암모늄, 물, 아세토니트릴)로 정제하여 표제 화합물 2(15 mg, 수율: 33.2%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 367.2 [M+1]
1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 7.97 (s, 1H), 7.34-7.26 (m, 4H), 5.44 (s, 2H), 4.39 (t, 2H), 3.77 (s, 2H), 3.47 (t, 4H), 2.22-2.18 (m, 2H), 1.80-1.76 (m, 2H), 1.55-1.49 (m, 2H), 1.01 (t, 3H).
실시예 3
6-부톡시-1-(4-(피페리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 3
Figure pct00032
Figure pct00033
단계 1
1-(4-(클로로메틸)벤질)피페리딘 3b
4-(피페리딘-1-일메틸)페닐카비놀 3a(1.17 g, 5.70 mmol, "Journal of Medicinal Chemistry, 2003, 46(8), 1523-1530"에 개시된 공지된 방법에 따라 제조됨)를 20 mL의 디클로로메탄에 용해시키고, 염화티오닐(0.83 mL, 11.4mmol)을 0℃에서 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 가온하고, 감압 하에 농축하였다. 반응 혼합물에 포화 탄산나트륨 용액(50 mL)을 첨가하고, 디클로로메탄(100 mL x 2)으로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과하였다. 여과액을 감압 하에 농축하여 미정제 표제 화합물 3b(1.2 g)를 수득하였고, 이를 정제 없이 바로 다음 단계에 사용하였다.
MS m/z (ESI): 224.2 [M+1]
단계 2
6-클로로-N-(4-메톡시벤질)-1-(4-(피페리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 3c
화합물 1c(1.5 g, 5.18 mmol), 미정제 화합물 3b(1.16 g, 5.18 mmol) 및 탄산칼륨(716 mg, 5.18 mmol)을 20 mL의 N,N-디메틸포름아미드에 용해시키고, 반응 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 하에 농축하고, 생성된 잔류물을 용리 시스템 A를 이용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 3c(400 mg, 수율: 16.2%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 477.3 [M+1]
단계 3
6-부톡시-N-(4-메톡시벤질)-1-(4-(피페리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 3d
화합물 3c(100 mg, 0.21 mmol), 소듐 n-부톡사이드(0.2 mL, 0.80 mmol) 및 1 mL의 n-부탄올을 연속하여 마이크로웨이브 튜브에 첨가하고, 160℃로 가열하고, 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 용리 시스템 A를 이용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 3d(50 mg, 수율: 46.3%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 515.3 [M+1]
단계 4
6-부톡시-1-(4-(피페리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 3
화합물 3d(60 mg, 0.12 mmol) 및 2 mL의 트리플루오로아세트산을 반응 플라스크에 첨가하였다. 반응 용액을 가열 환류시키고, 24시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 반응 혼합물에 메탄올 중 7 N 암모니아 용액(1 mL)을 첨가하고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 전개 시스템 A를 이용한 박막 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 3(20 mg, 수율: 49.5%)을 수득하였다.
MS m/z (ESI): 395.3 [M+1]
1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 7.99 (s, 1H), 7.47-7.38 (m, 4H), 5.49 (s, 2H), 4.39 (t, 2H), 4.18 (s, 2H), 3.09-3.00 (m, 4H), 1.81-1.76 (m, 6H), 1.68-1.62 (m, 2H), 1.55-1.49 (m, 2H), 1.00 (t, 3H).
실시예 4
6-부톡시-1-(3-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 4
Figure pct00034
단계 1
6-클로로-N-(3-메톡시벤질)-1-(4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 4b
화합물 1c(1.0g, 3.45 mmol), 1-(3-(클로로메틸)벤질)피롤리딘 4a(724 mg, 3.45 mmol, 특허 출원 "WO2016040419"에 개시된 방법에 따라 제조됨) 및 탄산칼륨(377 mg, 3.45 mmol)을 10 mL의 N,N-디메틸포름아미드에 용해시켰다. 실온에서 16시간 동안 교반한 후, 반응을 정지시켰다. 반응 용액을 감압 하에 농축하고, 생성된 잔류물을 용리 시스템 A를 이용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 4b(300 mg, 수율: 18.7%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 463.2 [M+1]
단계 2
6-부톡시-N-(3-메톡시벤질)-1-(4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 4c
화합물 4b(300 mg, 0.65 mmol), 소듐 n-부톡사이드(1.3 mL, 2.60 mmol) 및 2 mL의 n-부탄올을 연속하여 마이크로웨이브 튜브에 첨가하고, 160℃로 가열하고, 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 용리 시스템 A를 이용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 4c(140 mg, 수율: 43.1%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 501.2 [M+1]
단계 3
6-부톡시-1-(3-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 4
화합물 4c(140 mg, 0.08 mmol) 및 2 mL의 트리플루오로아세트산을 반응 플라스크에 첨가하고, 가열 환류시키고, 24시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 반응 혼합물에 메탄올 중 7 N 암모니아 용액(1 mL)을 첨가하고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 고성능 액체 크로마토그래피(워터스-2767, 용리 시스템: 10 mmoL/L 중탄산암모늄, 물, 아세토니트릴)로 정제하여 표제 화합물 4(60 mg, 수율: 56.3%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 381.2 [M+1]
1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 7.98 (s, 1H), 7.35-725 (m, 4H), 5.47 (s, 2H), 4.39 (t, 2H), 3.81 (s, 2H), 2.76-2.70 (m, 4H), 1.98-1.93 (m, 4H), 1.79-1.76 (m, 2H), 1.55-1.50 (m, 2H), 1.01 (t, 3H).
실시예 5
1-(3-(아제티딘-1-일메틸)벤질)-6-부톡시-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 5
Figure pct00035
Figure pct00036
단계 1
메틸 3-(아제티딘-1-일메틸)벤조에이트 5b
메틸 3-(브로모메틸)벤조에이트 5a(1.0 g, 4.37mmol), 아제티딘 2b(299 mg, 5.24 mmol) 및 트리에틸아민(529 mg, 5.24 mmol)을 10 mL의 테트라하이드로퓨란에 용해시키고, 반응 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 물(100 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(100 mL)로 추출하였다. 유기 상을 포화 염화나트륨 용액(100 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고 여과하였다. 여과액을 감압 하에 농축하여 미정제 표제 화합물 5b(840 mg)를 수득하였고, 이를 정제 없이 바로 다음 단계에 사용하였다.
MS m/z (ESI): 206.1 [M+1]
단계 2
3-(아제티딘-1-일메틸)페닐카비놀 5c
미정제 화합물 5b(840 mg, 4.09 mmol)를 10 mL의 디에틸 에테르에 용해시키고, 수소화 알루미늄리튬(310 mg, 8.19 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 0.3 mL의 물, 0.3 mL의 15% 수산화나트륨 용액 및 0.9 mL의 물을 연속하여 첨가하여 반응을 ?칭하였다. 반응 용액을 여과하고, 여과액을 감압 하에 농축하여 미정제 표제 화합물 5c(700 mg)를 수득하였고, 이를 정제 없이 바로 다음 단계에 사용하였다.
MS m/z (ESI): 178.3 [M+1]
단계 3
1-(3-(클로로메틸)벤질)아제티딘 5d
미정제 화합물 5c(700 mg, 3.95 mmol)를 10 mL의 디클로로메탄에 용해시키고, 염화티오닐(0.58 mL, 7.90 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 하에 농축하고, 포화 탄산나트륨 용액(50 mL)을 첨가하고, 디클로로메탄(100 mL x 2)으로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과하였다. 여과액을 감압 하에 농축하여 미정제 표제 화합물 5d(700 mg)를 수득하였고, 이를 정제 없이 바로 다음 단계에 사용하였다.
MS m/z (ESI): 197.2 [M+1]
단계 4
1-(3-(아제티딘-1-일메틸)벤질)-6-클로로-N-(4-메톡시벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 5e
화합물 1c(300 mg, 1.04 mmol), 미정제 화합물 5d(203 mg, 1.04 mmol) 및 탄산칼륨(144 mg, 1.04 mmol)을 5 mL의 N,N-디메틸포름아미드에 용해시키고, 반응 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 하에 농축하고, 생성된 잔류물을 용리 시스템 A를 이용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 5e(30 mg, 수율: 6.5%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 449.2 [M+1]
단계 5
1-(3-(아제티딘-1-일메틸)벤질)-6-부톡시-N-(4-메톡시벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 5f
화합물 5e(50 mg, 0.11 mmol), 소듐 n-부톡사이드(0.2 mL, 0.40 mmol) 및 1 mL의 n-부탄올을 연속하여 마이크로웨이브 튜브에 첨가하고, 160℃로 가열하고, 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 전개 시스템 A를 이용한 박막 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 5f(35 mg, 수율: 64.8%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 487.3 [M+1]
단계 6
1-(3-(아제티딘-1-일메틸)벤질)-6-부톡시-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 5
화합물 5f(35 mg, 0.07 mmol) 및 1 mL의 트리플루오로아세트산을 반응 플라스크에 첨가하였다. 반응 용액을 가열 환류시키고, 24시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 반응 혼합물에 메탄올 중 7 N 암모니아 용액(1 mL)을 첨가하고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 고성능 액체 크로마토그래피(워터스-2767, 용리 시스템: 10 mmoL/L 중탄산암모늄, 물, 아세토니트릴)로 정제하여 표제 화합물 5(2.0 mg, 수율: 7.9%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 367.2 [M+1]
1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 7.98 (s, 1H), 7.30-7.28 (m, 1H), 7.22-7.19 (m, 3H), 5.45 (s, 2H), 4.39 (t, 2H), 3.60 (s, 2H), 3.28 (t, 4H), 2.12-2.09 (m, 2H), 1.80-1.76 (m, 2H), 1.55-1.49 (m, 2H), 1.00 (t, 3H).
실시예 6
6-부톡시-1-(3-(피페리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 6
Figure pct00037
단계 1
1-(3-(클로로메틸)벤질)피페리딘 6b
3-(피페리딘-1-일메틸)페닐카비놀 6a(1.7 g, 8.28 mmol, "Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2004, 12(10), 2727-2736"에 개시된 공지된 방법에 따라 제조됨)를 20 mL의 디클로로메탄에 용해시키고, 염화티오닐(1.2 mL, 16.56 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 하에 농축하고, 포화 탄산나트륨 용액(50 mL)을 첨가하고, 디클로로메탄(100 mL x 2)으로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과하였다. 여과액을 감압 하에 농축하여 미정제 표제 화합물 6b(1.7 g)를 수득하였고, 이를 정제 없이 바로 다음 단계에 사용하였다.
MS m/z (ESI): 224.2 [M+1]
단계 2
6-클로로-N-(3-메톡시벤질)-1-(4-(피페리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 6c
화합물 1c(300 mg, 1.04 mmol), 미정제 화합물 6b(232 mg, 1.04 mmol) 및 탄산칼륨(144 mg, 1.04 mmol)을 5 mL의 N,N-디메틸포름아미드에 용해시켰다. 실온에서 16시간 동안 교반한 후, 반응을 정지시켰다. 반응 용액을 감압 하에 농축하고, 생성된 잔류물을 용리 시스템 A를 이용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 6c(50 mg, 수율: 10.1%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 477.3 [M+1]
단계 3
6-부톡시-N-(3-메톡시벤질)-1-(4-(피페리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 6d
화합물 6c(50 mg, 0.10 mmol), 소듐 n-부톡사이드(0.2 mL, 0.40 mmol) 및 1 mL의 n-부탄올을 연속하여 마이크로웨이브 튜브에 첨가하고, 160℃으로 가열하고, 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 용리 시스템 A를 이용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 6d(30 mg, 수율: 55.5%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 515.3 [M+1]
단계 4
6-부톡시-1-(3-(피페리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 6
화합물 6d(30 mg, 0.06 mmol) 및 2 mL의 트리플루오로아세트산을 반응 플라스크에 첨가하고, 가열 환류시키고, 24시간 동안 교반하였다. 반응을 정지시키고, 반응 용액을 감압 하에 농축하고, 메탄올 중 7 N 암모니아 용액(1 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 감압 하에 농축하고, 잔류물을 전개 시스템 A를 이용한 박막 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 6(7.0 mg, 수율: 29.2%)을 수득하였다.
MS m/z (ESI): 395.3 [M+1]
1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 7.99 (s, 1H), 738-7.31 (m, 4H), 5.48 (s, 2H), 4.38 (t, 2H), 3.86 (s, 2H), 2.87-2.80 (m, 4H), 1.79-1.75 (m, 2H), 1.71-1.68 (m, 4H), 1.54-1.40 (m, 4H), 1.00 (t, 3H).
실시예 7
6-(2-메톡시에톡시)-1-(4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 7
Figure pct00038
단계 1
N-(4-메톡시벤질)-6-(2-메톡시에톡시)-1-(4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 7a
화합물 1e(90 mg, 0.19 mmol), 소듐 2-메톡시에탄올(0.3 mL, 0.60 mmol) 및 1 mL의 2-메톡시에탄올을 연속하여 마이크로웨이브 튜브에 첨가하고, 160℃로 가열하고, 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 용리 시스템 A를 이용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 7a(30 mg, 수율: 30.7%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 503.3 [M+1]
단계 2
6-(2-메톡시에톡시)-1-(4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 7
화합물 7a(30 mg, 0.06 mmol) 및 5 mL의 트리플루오로아세트산을 반응 플라스크에 첨가하고, 100℃로 가열하고, 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 고성능 액체 크로마토그래피(워터스-2767, 용리 시스템: 10 mmoL/L 중탄산암모늄, 물, 아세토니트릴)로 정제하여 표제 화합물 7(5 mg, 수율: 19.7%)을 수득하였다.
MS m/z (ESI)：383.2 [M+1]
1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 7.96 (s, 1H), 7.30-7.28 (d, 2H), 7.25-7.23 (d, 2H), 5.42 (s, 2H), 4.51-4.48 (t, 2H), 3.74-3.72 (t, 2H), 3.65 (s, 2H), 3.39 (s, 3H), 2.57(s, 4H), 1.81-1.78 (m, 4H).
실시예 8
6-((1-메톡시프로판-2-일)옥시)-1-(4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 8
Figure pct00039
단계 1
N-(4-메톡시벤질)-6-((1-메톡시프로판-2-일)옥시)-1-(4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 8a
화합물 1e(200 mg, 0.43 mmol), 2-메톡시-1-메틸-에톡시 나트륨(96.9 mg, 0.86 mmol) 및 5 mL의 프로필렌글리콜 메틸 에테르를 연속하여 마이크로웨이브 튜브에 첨가하고, 160℃로 가열하고, 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 용리 시스템 A를 이용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 8a(150 mg, 수율: 67.2%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 517.3 [M+1]
단계 2
6-((1-메톡시프로판-2-일)옥시)-1-(4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 8
화합물 8a(80 mg, 0.15 mmol) 및 5 mL의 트리플루오로아세트산을 반응 플라스크에 첨가하고, 80℃로 가열하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 고성능 액체 크로마토그래피(워터스-2767, 용리 시스템: 10 mmoL/L 중탄산암모늄, 물, 아세토니트릴)로 정제하여 표제 화합물 8(20 mg, 수율: 32.6%)을 수득하였다.
MS m/z (ESI)：397.2 [M+1]
1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 7.95 (s, 1H), 7.35-7.33 (d, 2H), 7.29-7.27 (d, 2H), 5.43 (m, 3H), 3.83 (s, 2H), 3.60-3.52 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 2.76(s, 4H), 1.87 (s, 4H), 1.34-1.32 (t, 3H).
실시예 9
6-부톡시-1-(3-플루오로-4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 9
Figure pct00040
단계 1
3-플루오로-4-(피롤리딘-1-일메틸)벤조니트릴 9c
4-(브로모메틸)-3-플루오로벤조니트릴 9a(1 g, 4.67 mmol), 피롤리딘 9b(332 mg, 4.67 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(1.21 g, 9.34 mmol)을 10 mL의 아세토니트릴에 용해시켰다. 2시간 동안 교반 후, 반응 용액을 감압 하에 농축하여 미정제 표제 화합물 9c(1 g)를 수득하였고, 이를 정제 없이 바로 다음 단계에 사용하였다.
MS m/z (ESI): 205.4 [M+1]
단계 2
3-플루오로-4-(피롤리딘-1-일메틸)벤조산 9d
미정제 화합물 9c(1 g, 4.9 mmol)를 5 mL의 황산, 5 mL의 물 및 10 mL의 아세트산의 혼합 용매에 용해시켰다. 90℃에서 16시간 동안 교반한 후, 반응을 정지시켰다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 잔류물에 메탄올을 첨가하고, 여과하여 불용성 물질을 제거하였다. 여과액을 감압 하에 농축하여 미정제 표제 화합물 9d(1 g)를 수득하였고, 이를 정제 없이 바로 다음 단계에 사용하였다.
MS m/z (ESI): 224.4 [M+1]
단계 3
(3-플루오로-4-(피롤리딘-1-일메틸)페닐)메탄올 9e
미정제 화합물 9d(1 g, 4.48 mmol)를 20 mL의 테트라하이드로퓨란에 용해시켰다. 반응 용액을 0℃로 냉각시키고, 수소화 알루미늄리튬(607 mg, 17.9 mmol)을 첨가하고, 3시간 동안 교반하였다. 1 mL의 물, 1 mL의 2 N 수산화나트륨 용액 및 3 mL의 물을 연속하여 첨가하여 반응을 ?칭하였다. 반응 용액을 여과하고, 여과액을 수집하고, 감압 하에 농축하여 미정제 표제 화합물 9e(820 mg)를 수득하였고, 이를 정제 없이 바로 다음 단계에 사용하였다.
MS m/z (ESI): 210.4 [M+1]
단계 4
6-클로로-1-(3-플루오로-4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-N-(4-메톡시벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 9f
미정제 화합물 9e(100 mg, 0.48 mmol), 화합물 1c(141.34 mg, 0.48 mmol) 및 트리페닐포스핀(192 mg, 0.73 mmol)을 10 mL의 1,4-디옥산에 용해시킨 다음, 디이소프로필 아조디카복실레이트(148 mg, 0.73 mmol)를 한 방울씩 첨가하였다. 반응 용액을 85℃로 가온하고, 4시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 용리 시스템 A를 이용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 9f(90 mg, 수율: 38.3%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 481.4 [M+1]
단계 5
6-부톡시-1-(3-플루오로-4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-N-(4-메톡시벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 9g
화합물 9f(90 mg, 0.19 mmol), 소듐 n-부톡사이드(18 mg, 0.18 mmol) 및 5 mL의 n-부탄올을 연속하여 마이크로웨이브 튜브에 첨가하고, 160℃로 가열하고, 1.5시간 동안 교반하였다. 반응을 정지시키고, 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 용리 시스템 A를 이용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 9g(35 mg, 수율: 36.1%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 519.5 [M+1]
단계 6
6-부톡시-1-(3-플루오로-4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 9
화합물 9g(35 mg, 0.07 mmol) 및 10 mL의 트리플루오로아세트산을 밀봉된 튜브에 첨가하고, 100℃로 가열하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응을 정지시키고, 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 고성능 액체 크로마토그래피(워터스-2767, 용리 시스템: 10 mmoL/L 중탄산암모늄, 물, 아세토니트릴)로 정제하여 표제 화합물 9(20 mg, 수율: 74.3%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 399.5 [M+1]
1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 7.97 (s, 1H), 7.37-7.33 (m, 1H), 7.07-6.99 (m, 2H), 5.42 (s, 2H), 4.38-4.35 (t, 2H), 3.68 (s, 2H), 2.56 (s, 4H), 1.79-1.73(m, 6H), 1.52-1.46 (m, 2H), 0.99-0.96 (t, 3H).
실시예 10
N 6-부틸-1-(4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4,6-디아민 10
Figure pct00041
Figure pct00042
단계 1
N 6-부틸-N 4-(4-메톡시벤질)-1-(4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4,6-디아민 10a
화합물 1e(50 mg, 0.11 mmol), n-부틸아민(23.7 mg, 0.32 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(41.9 mg, 0.32 mmol)을 연속하여 5 mL의 n-부탄올에 첨가하였다. 반응 용액을 120℃로 가온하고, 마이크로웨이브 하에 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하여 미정제 표제 화합물 10a(20 mg)를 수득하였고, 이를 정제 없이 바로 다음 단계에 사용하였다.
단계 2
N 6-부틸-1-(4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4,6-디아민 10
미정제 화합물 10a(20 mg, 0.04 mmol) 및 5 mL의 트리플루오로아세트산을 반응 플라스크에 첨가하고, 100℃로 가열하고, 밤새 교반하였다. 반응을 정지시키고, 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 고성능 액체 크로마토그래피(워터스-2767, 용리 시스템: 10 mmoL/L 중탄산암모늄, 물, 아세토니트릴)로 정제하여 표제 화합물 10(15.2 mg, 황색 고체, 수율: 62.5%)을 수득하였다.
MS m/z (ESI): 380.3 [M+1]
1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.04 (s, 1H), 7.49-7.47 (d, 2H), 7.42-7.40 (d, 2H), 5.44 (s, 2H), 4.34 (s, 2H), 3.49-3.45 (m, 4H), 3.15 (s, 2H), 2.13(s, 2H), 1.93 (s, 2H), 1.65-1.60 (m, 2H), 1.45-1.39 (m, 2H), 0.98-0.94 (t, 3H).
실시예 11
4-아미노-N-프로필-1-(4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-카복사미드 11
Figure pct00043
단계 1
메틸 4-((4-메톡시벤질)아미노)-1-(4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-카복실레이트 11a
화합물 1e(200 mg, 0.43 mmol), 아세트산 팔라듐(2.9 mg, 0.013 mmol), 4,5-비스디페닐포스피노-9,9-디메틸옥산텐(15 mg, 0.026 mmol) 및 트리에틸아민(44 mg, 0.4 mmol)을 3 mL의 n-부탄올 및 3 mL의 N,N-디메틸포름아미드에 용해시켰다. 반응 시스템을 일산화탄소로 3회 퍼지시켰다. 반응 용액을 70℃로 가온하고, 16시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 용리 시스템 A를 이용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 11a(150 mg, 수율: 71.4%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 487.5 [M+1]
단계 2
4-((4-메톡시벤질)아미노)-N-프로필-1-(4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-카복사미드 11b
화합물 11a(50 mg, 0.1 mmol) 및 n-프로필아민(12 mg, 0.2 mmol)을 연속하여 5 mL의 에탄올에 용해시켰다. 반응 용액을 밀봉된 튜브에 첨가하고, 60℃로 가온하고, 16시간 동안 교반하였다. 반응을 정지시키고, 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하여 미정제 표제 화합물 11b(20 mg)를 수득하였고, 이를 정제 없이 바로 다음 단계에 사용하였다.
단계 3
4-아미노-N-프로필-1-(4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-카복사미드 11
미정제 화합물 11b(20 mg, 0.04 mmol) 및 5 mL의 트리플루오로아세트산을 반응 플라스크에 첨가하고, 100℃로 가열하고, 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 고성능 액체 크로마토그래피(워터스-2767, 용리 시스템: 10 mmoL/L 중탄산암모늄, 물, 아세토니트릴)로 정제하여 표제 화합물 11(10 mg, 수율: 60.3%)을 수득하였다.
MS m/z (ESI): 394.5 [M+1]
1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.12 (s, 1H), 7.28 (m, 4H), 5.64 (s, 2H), 3.62 (s, 2H), 3.41-3.37 (t, 2H), 2.55-2.52 (m, 4H), 1.80-1.77 (m, 4H), 1.70-1.64 (m, 2H), 0.98-1.02 (t, 3H).
실시예 12
1-(4-아미노-1-(4-피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)펜탄-1-온 12
Figure pct00044
Figure pct00045
단계 1
4-((4-메톡시벤질)아미노)-1-(4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-카보니트릴 12a
화합물 1e(260 mg, 0.56 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(52 mg, 0.056 mmol), 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센(31 mg, 0.056 mmol), 시안화아연(99 mg, 0.84 mmol) 및 아연 분말(37 mg, 0.56 mmol)을 5 mL의 N,N-디메틸아세트아미드에 현탁시켰다. 반응 용액을 140℃로 가온하고, 아르곤 분위기하에 16시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 전개 시스템 A를 이용한 박막 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 12a(160 mg, 수율: 63%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 454.5 [M+1]
단계 2
1-(4-((4-메톡시벤질)아미노)-1-(4-(피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)펜탄-1-온 12b
화합물 12a(160 mg, 0.35 mmol)를 5 mL의 테트라하이드로퓨란에 용해시킨 다음, 테트라하이드로퓨란 중 2 M 염화 n-부틸마그네슘 용액(0.9 mL, 1.77 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응 용액을 60℃로 가온하고, 아르곤 분위기하에 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 염화암모늄 수용액을 첨가하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 전개 시스템 A를 이용한 박막 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 12b(150 mg, 수율: 83%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 513.6 [M+1]
단계 3
1-(4-아미노-1-(4-피롤리딘-1-일메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)펜탄-1-온 12
화합물 12b(150 mg, 0.29 mmol)를 10 mL의 트리플루오로아세트산에 용해시켰다. 반응 용액을 밀봉된 튜브에 첨가하고, 110℃로 가열하고, 16시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 고성능 액체 크로마토그래피(워터스-2767, 용리 시스템: 10 mmoL/L 중탄산암모늄, 물, 아세토니트릴)로 정제하여 표제 화합물 12(19 mg, 수율: 17%)를 수득하였다.
MS m/z (ESI): 393.5 [M+1]
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.01 (s, 1H), 7.35-7.29 (q, 4H), 5.62 (s, 2H), 3.62 (s, 2H), 3.26 (t, 2H), 2.53 (s, 4H), 1.78 (s, 4H), 1.76-1.70 (m, 2H), 1.48-1.42 (m, 2H), 0.98 (t, 3H).
시험예 :
생물학적 분석
시험예 1. 본 발명의 화합물의 인간 TLR7에 대한 작용제 활성의 결정
HEK-BlueTM hTLR7 안정적 형질감염 세포에 의해 발현된 hTLR7 단백질에 대한 본 발명의 화합물의 활성화 효과를 다음의 실험 방법에 의해 결정하였다:
I. 실험 재료 및 기기
1. DMEM(Gibco, 10564-029),
2. 소 태아 혈청(GIBCO, 10099),
3. 페니실린-스트렙토마이신(Gibco, 15140-122),
4. 트리판 블루 용액(Sigma, T8154-100 ML),
5. 플렉스스테이션(Flexstation) 3 다기능 마이크로플레이트 판독기(Molecμlar Devices),
6. HEK-BlueTM HTLR7 세포주(InvivoGen, hkb-hTLR7),
7. HEK-Blue 검출 시약(InvivoGen, hb-det3).
II. 실험 절차
HEK-Blue 검출 건조 분말 백을 50 ml의 엔도톡신을 포함하지 않는 물에 용해시킨 다음, 용액을 37℃의 인큐베이터에 10분 동안 위치시킨 다음, 멸균 여과하여 HEK-Blue 검출 배지를 제조하였다. 화합물을 먼저 20 mM 스톡 용액으로 제형화한 다음, 순수한 DMSO로 최대 농도 6x106 nM로 희석하고, 3배 구배 희석에 의해 총 10점을 얻었다.
상기 제형화된 화합물을 우선 배지로 20배 희석한 다음, 희석된 화합물 20 μl를 각 웰에 첨가하였다. HEK-BlueTM hTLR7 세포로부터 상등액을 제거한 다음, 여기에 2 내지 5 ml의 미리 가온된 PBS를 첨가하였다. 세포를 인큐베이터에 1 내지 2분 동안 넣고, 살살 피펫팅하고, 트리판 블루 염색으로 계수하였다. 세포를 HEK-Blue 검출 배지에 재현탁시켜 농도를 2.2 x 105개 세포/ml로 조정하였다. 180 μl의 세포를 20 μl의 화합물이 첨가된 위의 96-웰 플레이트에 첨가하고, 37℃에서 6 내지 16시간 동안 배양하였다.
마이크로플레이트 판독기를 620 nm의 파장에서 판독하여 상응하는 OD 값을 얻었고, 화합물의 EC50 값을 그래프패드 프리즘(Graphpad Prism)으로 계산하였다.
인간 TLR7에 대한 본 발명의 화합물의 활성화 효과를 상기 시험에 의해 결정할 수 있었고, 얻어진 EC50 값을 표 1에 나타내었다.
본 발명의 화합물의 인간 TLR7에 대한 EC50
실시예 No. EC50 (nM) Emax (%)
1 28 100
2 64 91
3 77 91
4 166 88
6 233 91
7 180 95
8 217 104
9 128 96
10 349 79
11 335 85
12 388 78
결론: 본 발명의 화합물은 인간 TLR7에 대해 현저한 활성화 효과를 갖는다.
시험예 2. 본 발명의 화합물의 인간 TLR8에 대한 작용제 활성의 결정
HEK-BlueTM hTLR8 안정적 형질감염 세포에 의해 발현된 hTLR8 단백질에 대한 본 발명의 화합물의 활성화 효과를 다음의 실험 방법에 의해 결정하였다:
I. 실험 재료 및 기기
1. DMEM(Gibco, 10564-029),
2. 소 태아 혈청(GIBCO, 10099),
3. 페니실린-스트렙토마이신(Gibco, 15140-122),
4. 트리판 블루 용액(Sigma, T8154-100ML),
5. 플렉스스테이션(Flexstation) 3 다기능 마이크로플레이트 판독기(Molecμlar Devices),
6. HEK-BlueTM HTLR8 세포주(InvivoGen, hkb-hTLR8),
7. HEK-Blue 검출 시약(InvivoGen, hb-det3).
II. 실험 절차
HEK-Blue 검출 건조 분말 백을 50 ml의 엔도톡신을 포함하지 않는 물에 용해시킨 다음, 용액을 37℃의 인큐베이터에 10분 동안 위치시킨 후, 멸균 여과하여 HEK-Blue 검출 배지를 제조하였다. 화합물을 먼저 20 mM 스톡 용액으로 제형화한 다음, 순수한 DMSO로 최대 농도 6x106 nM로 희석하고, 3배 구배 희석에 의해 총 10점을 얻었다. 화합물을 우선 배지로 20배 희석한 다음, 희석된 화합물 20 μl를 각 웰에 첨가하였다.
HEK-BlueTM hTLR8 세포로부터 상등액을 제거한 다음, 여기에 2 내지 5 ml의 미리 가온된 PBS를 첨가하였다. 세포를 인큐베이터에 1 내지 2분 동안 넣고, 살살 피펫팅하고, 트리판 블루 염색으로 계수하였다. 세포를 HEK-Blue 검출 배지에 재현탁시켜 농도를 2.2 x 105개 세포/ml로 조정하였다. 180 μl의 세포를 20 μl의 화합물이 첨가된 상기 96-웰 플레이트에 첨가하고, 37℃에서 6 내지 16시간 동안 배양하였다.
마이크로플레이트 판독기를 620 nm의 파장에서 판독하여 상응하는 OD 값을 얻었고, 화합물의 EC50 값을 그래프패드 프리즘(Graphpad Prism)으로 계산하였다.
인간 TLR8에 대한 본 발명의 화합물의 활성화 효과를 상기 시험에 의해 결정할 수 있었고, 얻어진 EC50 값을 표 2에 나타내었다.
본 발명의 화합물의 인간 TLR8에 대한 EC50
실시예 No. EC50 (μM) Emax (%)
1 >30 8
2 >29 52
3 >24 2
4 >30 28
6 >6 35
7 >30 0
8 >30 2
10 >30 0
11 >30 0
12 >30 5
결론: 본 발명의 화합물은 인간 TLR8에 대해 어떠한 활성화 효과도 갖지 않아, 본 발명의 화합물이 TLR7에 대해 높은 선택성을 가짐을 나타낸다.
시험예 3. 말초 혈액 단핵구 세포( PBMC ) 로부터 IFN -α의 분비를 자극하는 본 발명의 화합물의 능력의 결정
PBMC로부터 IFN-α의 분비를 자극하는 본 발명의 화합물의 능력을 다음 실험 방법으로 결정하였다:
I. 실험 재료 및 기기
1. RPMI 1640(Invitrogen,11875),
2. FBS(Gibco,10099-141)
3. 페니실린-스트렙토마이신(Gibco, 15140-122),
4. 피콜-파크(Ficoll-Paque) PREMIUM(GE, 17-5442-02),
5. 트리판 블루 용액(Sigma, T8154-100 ML),
6. SepMateTM-50(Stemcell, 15460),
7. Bright-Line™ 혈액 세포 계수기(Sigma, Z359629-1EA),
8. 인간 IFN-α 키트(cisbio, 6FHIFPEB),
9. PHERAStar 다기능 마이크로플레이트 판독기(BMG，PHERAStar).
II. 실험 절차
화합물을 순수한 DMSO로 최대 농도 5 mM로 희석하고, 4배 구배 희석에 의해 총 9점을 얻었다. 그런 다음, 4 μl의 화합물을 10% FBS를 함유하는 RMPI 1640 배지 196 μl에 첨가하고, 잘 혼합하였다. 각 웰로부터 50 μl의 혼합물을 취하여 새로운 96-웰 플레이트에 첨가하였다.
모든 시약을 실온으로 평형화시켰다. 60 ml의 혈액 및 PBS+2% FBS를 250 ml 배양 플라스크에 첨가하고, 살살 피펫팅하고, 잘 혼합하여 희석하였다. 15 ml의 림프구 분리 용액 피콜-파크 PREMIUM 및 다음으로 30 ml의 희석된 혈액을 50 ml PBMC 원심분리 튜브 SepMateTM-50에 첨가하였다. 실온에서 10분 동안 혼합물을 1200 g에서 원심분리하였다. 상등액을 취한 다음, 300 g에서 8분 동안 원심분리하였다. 세포를 10% FBS를 함유하는 RMPI 1640 배지에 재현탁시키고 계수하였고, PBMC의 수를 3.33 x 106개 세포/ml로 조정하였다. 150 μl의 세포 용액을 화합물이 첨가된 플레이트에 첨가하고, 24시간 동안 5.0% CO2, 37℃의 인큐베이터에서 배양하였다.
세포 배양 플레이트를 원심분리기에 위치시키고, 실온에서 10분 동안 1200 rpm으로 원심분리하였다. 각 웰로부터 150 μl의 상등액을 취하였다. 인간 IFN-α 키트의 시약을 먼저 정상 온도로 평형화시켰다. 항-IFN-α-Eu3 +-크립테이트 콘쥬게이트 및 항-IFN-α-d2-콘쥬게이트를 키트 설명서에 따라 암소(dark)에서 제조하였고, 둘 모두를 콘쥬게이트 완충액과 1:40의 비율로 잘 혼합하였다. 그런 다음, 원심분리에 의해 얻어진 16 μl의 상등액을 각 웰에 첨가하였다. 방금 제조된 항-IFN-α-Eu3+-크립테이트 콘쥬게이트 및 항-IFN-α-d2-콘쥬게이트 2 μl를 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 진탕시키고, 잘 혼합하고, 3시간 동안 실온의 암소에서 배양하였다.
PHERAStar를 HTRF 모드로 판독하였다. 최소 검출 한계보다 적어도 3배 높은 사이토카인 수준을 자극하는 최저 화합물 농도를 사이토카인 자극 시험의 화합물의 최소 유효 농도(minimal effective concentration, MEC) 값으로 정의하였다.
PBMC로부터 IFN-α의 분비를 자극하는 본 발명의 화합물의 능력을 상기 시험에 의해 결정하였고, 얻어진 MEC 값을 표 3에 나타내었다.
PBMC로부터 IFN-α의 분비를 자극하는 본 발명의 화합물의 MEC
실시예 No. MEC (nM)
1 6
2 23
3 20
4 100
5 41
7 89
결론: PBMC로부터 IFN-α의 분비를 자극하는 활성 데이터로부터 본 발명의 화합물은 보다 낮은 유효 농도의 장점을 갖는다는 것을 알 수 있다.
시험예 4. 인간 간 마이크로솜에서 CYP3A4의 미다졸람 대사산물 부위의 효소 활성에 대한 본 발명의 화합물의 억제 효과
인간 간 마이크로솜에서 CYP3A4의 미다졸람 대사산물 부위의 효소 활성에 대한 본 발명의 화합물의 효과를 다음 실험 방법으로 결정하였다:
I. 실험 재료 및 기기
1. 인산염 완충액(PBS),
2. NADPH(Sigma N-1630),
3. 인간 간 마이크로솜(Corning Gentest),
4. ABI QTrap 4000 액체 크로마토그래프/질량 분광분석기(AB Sciex),
5. Inertsil C8-3 컬럼, 4.6 x 50 mm, 5 μm(Dikma Technologies Inc., USA),
6. CYP 프로브 기질(미다졸람/10 μM) 및 양성 대조군 억제제(케토코나졸).
II. 실험 절차
100 mM PBS 완충액을 제조한 다음, 이를 사용하여 2.5 mg/ml 마이크로솜 용액 및 5 mM NADPH 용액을 제조하였다. 5X 농도의 화합물 작업 용액(working solution)을 PBS 구배로 희석하였다(150, 50, 15, 5, 1.5, 0.15, 0.015, 0 μM). 5X 농도의 케토코나졸 작업 용액을 PBS 구배로 희석하였다(150, 50, 15, 5, 1.5, 0.15, 0.015, 0 μM). 덱스트로메토르판 작업 용액을 PBS로 50 μM의 농도로 희석하였다.
20 μl의 2.5 mg/ml 마이크로솜 용액, 20 μl의 50 μM 테스토스테론 작업 용액, 20 μl의 MgCl2 용액 및 20 μl의 화합물 작업 용액(150, 50, 15, 5, 1.5, 0.15, 0.015, 0 μM, 각 농도에 대해 상이한 반응 시스템)을 각각 취하고, 잘 혼합하였다. 양성 대조군의 경우, 화합물을 동일한 농도의 케토코나졸로 대체하였다. 5 mM NADPH 용액과 함께 혼합물을 37℃에서 5분 동안 사전 배양하였다. 5분 후, 20 μl의 NADPH를 각 웰에 첨가하고, 반응을 개시하고, 30분 동안 배양하였다. 모든 배양된 샘플은 이중으로(in duplicate) 존재하였다. 30분 후, 내부 표준물질을 함유하는 아세토니트릴 250 μl를 모든 샘플에 첨가하고, 잘 혼합하고, 800 rpm에서 10분 동안 진탕한 다음, 3700 rpm에서 10분 동안 원심분리하였다. 80 μl의 상등액을 취하고, LC-MS/MS로 분석하였다.
데이터를 그래프패드 프리즘(Graphpad Prism)으로 산출하여 CYP3A4의 미다졸람 대사산물 부위에 대한 화합물의 IC50 값을 획득하였다.
인간 간 마이크로솜에서 CYP3A4의 미다졸람 대사산물 부위에 대한 본 발명의 화합물의 IC50 값
Figure pct00046
결론: 본 발명의 화합물은 인간 간 마이크로솜에서 CYP3A4의 미다졸람 대사 부위에 대해 약한 억제 효과를 가지며, 보다 우수한 안전성을 보여주어, CYP3A4의 미다졸람 대사 부위에 기반한 대사성 약물 상호작용이 일어나지 않을 것임을 나타낸다.
시험예 5. 인간 간 마이크로솜에서 CYP2D6의 효소 활성에 대한 본 발명의 화합물의 억제 효과
인간 간 마이크로솜에서 CYP2D6의 효소 활성에 대한 본 발명의 화합물의 효과를 다음 실험 방법으로 결정하였다:
I. 실험 재료 및 기기
1. 인산염 완충액(PBS),
2. NADPH(Sigma N-1630),
3. 인간 간 마이크로솜(Corning Gentest),
4. ABI QTrap 4000 액체 크로마토그래프/질량 분광분석기(AB Sciex),
5. Inertsil C8-3 컬럼, 4.6 x 50 mm, 5 μm(Dikma Technologies Inc., USA),
6. CYP 프로브 기질(덱스트로메토르판/10 μM) 및 양성 대조군 억제제(퀴니딘).
II. 실험 절차
100 mM PBS 완충액을 제조한 다음, 이를 사용하여 2.5 mg/ml 마이크로솜 용액 및 5 mM NADPH 용액을 제조하였다. 5X 농도의 화합물 작업 용액을 PBS 구배로 희석하였다(150, 50, 15, 5, 1.5, 0.15, 0.015, 0 μM). 5X 농도의 퀴니딘 작업 용액을 PBS 구배로 희석하였다(150, 50, 15, 5, 1.5, 0.15, 0.015, 0 μM). 덱스트로메토르판 작업 용액을 PBS로 50 μM의 농도로 희석하였다.
20 μl의 2.5 mg/ml 마이크로솜 용액, 20 μl의 50 μM 테스토스테론 작업 용액, 20 μl의 MgCl2 용액 및 20 μl의 화합물 작업 용액(150, 50, 15, 5, 1.5, 0.15, 0.015, 0 μM, 각 농도에 대해 상이한 반응 시스템)을 각각 취하고, 잘 혼합하였다. 양성 대조군의 경우, 화합물을 동일한 농도의 퀴니딘으로 대체하였다. 5 mM NADPH 용액과 함께 혼합물을 37℃에서 5분 동안 사전 배양하였다. 5분 후, 20 μl의 NADPH를 각 웰에 첨가하고, 반응을 개시하고, 30분 동안 배양하였다. 모든 배양된 샘플은 이중으로(in duplicate) 존재하였다. 30분 후, 내부 표준물질을 함유하는 아세토니트릴 250 μl를 모든 샘플에 첨가하고, 잘 혼합하고, 800 rpm에서 10분 동안 진탕한 다음, 3700 rpm에서 10분 동안 원심분리하였다. 80 μl의 상등액을 취하고, LC-MS/MS로 분석하였다.
데이터를 그래프패드 프리즘(Graphpad Prism)으로 산출하여 CYP2D6의 대사산물 부위에 대한 화합물의 IC50 값을 획득하였다.
인간 간 마이크로솜에서 CYP2D6에 대한 억제가 없는 본 발명의 화합물의 IC50 값
Figure pct00047
결론: 본 발명의 화합물은 인간 간 마이크로솜에서 CYP2D6의 효소 활성에 대해 약한 억제 효과를 가지며, 더 우수한 안전성을 보여주어, CYP2D6에 기반한 대사성 약물 상호작용이 일어나지 않을 것임을 나타낸다.
시험예 6. 인간 간 마이크로솜에서 CYP3A4의 테스토스테론 대사산물 부위의 효소 활성에 대한 본 발명의 화합물의 억제 효과
인간 간 마이크로솜에서 CYP3A4의 테스토스테론 대사산물 부위의 효소 활성에 대한 본 발명의 화합물의 효과를 다음 실험 방법으로 결정하였다:
I. 실험 재료 및 기기
1. 인산염 완충액(PBS),
2. NADPH(Sigma N-1630),
3. 인간 간 마이크로솜(Corning Gentest),
4. ABI QTrap 4000 액체 크로마토그래프/질량 분광분석기(AB Sciex),
5. Inertsil C8-3 컬럼, 4.6 x 50 mm, 5 μm(Dikma Technologies Inc., USA),
6. CYP 프로브 기질(테스토스테론/10 μM) 및 양성 대조군 억제제(케토코나졸).
II. 실험 절차
100 mM PBS 완충액을 제조한 다음, 이를 사용하여 2.5 mg/ml 마이크로솜 용액 및 5 mM NADPH 용액을 제조하였다. 5X 농도의 화합물 작업 용액을 PBS 구배로 희석하였다(150, 50, 15, 5, 1.5, 0.15, 0.015, 0 μM). 5X 농도의 케토코나졸 작업 용액을 PBS 구배로 희석하였다(150, 50, 15, 5, 1.5, 0.15, 0.015, 0 μM). 덱스트로메토르판 작업 용액을 PBS로 50 μM의 농도로 희석하였다.
20 μl의 2.5 mg/ml 마이크로솜 용액, 20 μl의 50 μM 테스토스테론 작업 용액, 20 μl의 MgCl2 용액 및 20 μl의 화합물 작업 용액(150, 50, 15, 5, 1.5, 0.15, 0.015, 0 μM, 각 농도에 대해 상이한 반응 시스템)을 각각 취하고, 잘 혼합하였다. 양성 대조군의 경우, 화합물을 동일한 농도의 케토코나졸로 대체하였다. 5 mM NADPH 용액과 함께 혼합물을 37℃에서 5분 동안 사전 배양하였다. 5분 후, 20 μl의 NADPH를 각 웰에 첨가하고, 반응을 개시하고, 30분 동안 배양하였다. 모든 배양된 샘플은 이중으로(in duplicate) 존재하였다. 30분 후, 내부 표준물질을 함유하는 아세토니트릴 250 μl를 모든 샘플에 첨가하고, 잘 혼합하고, 800 rpm에서 10분 동안 진탕한 다음, 3700 rpm에서 10분 동안 원심분리하였다. 80 μl의 상등액을 취하고, LC-MS/MS로 분석하였다.
데이터를 그래프패드 프리즘(Graphpad Prism)으로 산출하여 CYP3A4의 테스토스테론 대사산물 부위에 대한 화합물의 IC50 값을 획득하였다.
인간 간 마이크로솜에서 CYP3A4의 테스토스테론 대사산물 부위에 대한 본 발명의 화합물의 IC50 값
Figure pct00048
결론: 본 발명의 화합물은 인간 간 마이크로솜에서 CYP3A4의 테스토스테론 대사산물 부위에 대해 약한 억제를 나타내며, 보다 우수한 안전성을 보여준다.

Claims (24)

  1. 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00049
    .
    (여기에서:
    고리 A는 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    G는 CH 또는 N이고;
    X1은 알킬렌 또는 S(O)m이고, 여기에서 알킬렌은 할로겐, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬 및 헤테로시클릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 선택적으로 치환되고;
    L1은 -NR4-, -O-, -S-, -C(O)-, -C(O)-OR4, -S(O)m-, -N(R4)C(O)-, -C(O)N(R4)-, -N(R4)S(O)2-, -S(O)2N(R4)- 및 공유 결합으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    R1은 알킬, 알콕시, 할로알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기에서 알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 각각 독립적으로 알킬, 알콕시, 할로겐, 할로알킬, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, -OR5, -C(O)R5, -S(O)mR5, -NR6R7 및 -C(O)NR6R7로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 선택적으로 치환되고;
    각각의 R2는 동일하거나 상이하며, 각각은 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기에서 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 각각 독립적으로 알킬, 알콕시, 할로겐, 할로알킬, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, -OR5, -C(O)R5, -S(O)mR5, -NR6R7 및 -C(O)NR6R7로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 선택적으로 치환되고;
    L2는 알킬렌 또는 공유 결합이고, 여기에서 알킬렌은 알킬, 알콕시, 할로겐, 할로알킬, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, -OR5, -C(O)R5, -S(O)mR5, -NR6R7 및 -C(O)NR6R7로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 선택적으로 치환되고;
    R3은 할로알킬, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, -OR5, -C(O)R5, -S(O)mR5, -NR6R7 및 -C(O)NR6R7로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기에서 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 각각 독립적으로 알킬, 알콕시, 할로겐, 할로알킬, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, -OR8, -C(O)R8, -S(O)mR8, -NR9R10 및 -C(O)NR9R10으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 선택적으로 치환되고;
    R4는 수소, 알킬, 할로알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    R5는 수소, 알킬, 할로알킬, 아미노, 하이드록시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    R6 및 R7은 동일하거나 상이하고, 각각 독립적으로 수소, 알킬, 할로알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, -C(O)R8, -S(O)mR8 및 -C(O)NR9R10으로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기에서 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 각각 독립적으로 알킬, 알콕시, 할로겐, 아미노, 시아노, 니트로, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 선택적으로 치환되고;
    또는, R6 및 R7은 그것들이 부착되는 질소와 함께 헤테로시클릴을 형성하고, 여기에서 헤테로시클릴은 선택적으로 하나의 질소 원자 이외에 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 또는 2개의 동일하거나 상이한 헤테로원자를 함유하고, 헤테로시클릴은 알킬, 알콕시, 할로겐, 아미노, 시아노, 니트로, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 선택적으로 치환되고;
    R8은 수소, 알킬, 할로알킬, 아미노, 하이드록시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    R9 및 R10은 동일하거나 상이하고, 각각 독립적으로 수소, 알킬, 할로알킬, 아미노, 하이드록시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    n은 0, 1, 2, 3 또는 4이고; 그리고
    m은 0, 1 또는 2임).
  2. 제1항에 있어서,
    R3은 헤테로시클릴이고, 헤테로시클릴은 알킬, 알콕시, 할로겐, 아미노, 시아노, 니트로, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 선택적으로 치환된 것인, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    R3은 -NR6R7이고, R6 및 R7은 그것들이 부착되는 질소와 함께 헤테로시클릴을 형성하며, 여기에서 헤테로시클릴은 하나의 질소 원자 이외에 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 또는 2개의 동일하거나 상이한 헤테로원자를 선택적으로 함유하고, 헤테로시클릴은 알킬, 알콕시, 할로겐, 아미노, 시아노, 니트로, 하이드록시, 하이드록시알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 선택적으로 치환되는 것인, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    고리 A는 페닐인 것인, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    X1은 알킬렌인 것인, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    화학식 (II)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로,
    Figure pct00050

    G, L1 ~ L2, R1 ~ R2, R6 ~ R7 및 n은 제1항에서 정의된 바와 같은 것인,
    화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    G는 N인 것인, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    L2는 알킬렌인 것인, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    화학식 (III)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로,
    Figure pct00051

    s는 0, 1 또는 2이고;
    L1, R1 ~ R2 및 n은 제1항에서 정의된 바와 같은 것인,
    화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    L1은 -O-, -NR4-, -C(O)- 및 -C(O)N(R4)-로 이루어지는 군으로부터 선택되고, R4는 수소 또는 알킬인 것인, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1은 1개 이상의 알콕시로 선택적으로 치환되는 알킬인 것인, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    각각의 R2는 동일하거나 상이하고, 각각은 독립적으로 수소 또는 할로겐인 것인, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
    다음으로 이루어지는 군:
    Figure pct00052

    으로부터 선택되는 것인, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  14. 화학식 (I-C)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00053

    (여기에서:
    W는 아미노 보호기이고;
    X는 할로겐이고;
    고리 A, G, X1, L2, R2 ~ R3 및 n은 제1항에서 정의된 바와 같음).
  15. 제14항에 있어서,
    다음으로 이루어지는 군:
    Figure pct00054

    으로부터 선택되는 것인, 화학식 (I-C)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  16. 화학식 (I-E)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00055

    (여기에서:
    W는 아미노 보호기이고;
    고리 A, G, X1, L1 ~ L2, R1 ~ R3 및 n은 제1항에서 정의된 바와 같음).
  17. 제16항에 있어서,
    다음으로 이루어지는 군:
    Figure pct00056

    Figure pct00057

    으로부터 선택되는 것인, 화학식 (I-E)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  18. 알칼리 조건하에 화학식 (I-C)의 화합물 및 화학식 (I-D)의 화합물을 친핵성 치환 반응을 시켜 화학식 (I-E)의 화합물을 수득하는 단계를 포함하는, 제16항에 따른 화학식 (I-E)의 화합물의 제조 방법:
    Figure pct00058

    (여기에서:
    W는 아미노 보호기이고;
    X는 할로겐이고;
    고리 A, G, L1 ~ L2, X1, R1 ~ R3 및 n은 제16항에서 정의된 바와 같음).
  19. 산성 조건하에 화학식 (I-E)의 화합물의 보호기를 제거하여 화학식 (I)의 화합물을 수득하는 단계를 포함하는, 제1항에 따른 화학식 (I)의 화합물의 제조 방법:
    Figure pct00059

    (여기에서:
    W는 아미노 보호기이고;
    고리 A, G, L1 ~ L2, X1, R1 ~ R3 및 n은 제1항에서 정의된 바와 같음).
  20. 치료학적 유효량의 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물.
  21. TLR7 활성화를 위한 약제의 제조에 있어서, 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 제20항에 따른 약학적 조성물의 용도.
  22. 뎅기 바이러스, 황열병 바이러스, 웨스트 나일 바이러스, 일본 뇌염 바이러스, 진드기 매개 뇌염 바이러스, 쿤진 바이러스, 머레이 계곡 뇌염 바이러스, 세인트루이스 뇌염 바이러스, 옴스크 출혈열 바이러스, 소 바이러스성 설사 바이러스, 지카 바이러스, HIV, HBV, HCV, HPV, RSV, SARS 및 인플루엔자 바이러스로 이루어지는 군으로부터 선택되는 바이러스에 의해 유발되는 감염의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서, 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 제20항에 따른 약학적 조성물의 용도.
  23. 흑색종, 비소세포 폐 암종, 간세포 암종, 기저세포 암종, 신장세포 암종, 골수종, 알레르기성 비염, 천식, COPD, 궤양성 대장염 및 간 섬유증의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조에 있어서, 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 제20항에 따른 약학적 조성물의 용도.
  24. 약제로서 사용하기 위한, 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 메조머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학적 조성물.
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